WO1994014778A1

WO1994014778A1 - Derive optiquement actif de 2-nitroimidazole, son procede de production, et intermediaire pour sa production

Info

Publication number: WO1994014778A1
Application number: PCT/JP1993/001519
Authority: WO
Inventors: Toshimitsu Suzuki; Azuma Nishio
Original assignee: Pola Chemical Industries Inc
Current assignee: Pola Orbis Holdings Inc
Priority date: 1992-12-18
Filing date: 1993-10-21
Publication date: 1994-07-07
Anticipated expiration: 1995-06-18
Also published as: JP3577079B2; EP0632028B1; DK0632028T3; EP0632028A4; EP0632028A1; DE69332821T2; PT632028E; ES2199221T3; US5532380A; JP2003321459A; DE69332821D1; ATE236131T1

Description

明細書

光学活性 2—二トロイミダゾール誘導体、その製造法及びその製造中間体技術分野

本発明は腫瘍の放射線治療の際に併用する薬剤として有用な光学活性 2—二トロイミダゾール誘導体及びそれを有効成分とする放射線増感剤、該誘導体の製造法並びにその製造中間体に関する。

背景技術

次の式（5 )

で表わされる 2—ニトロイミダゾール誘導体は、.腫瘍内にある低酸素性細胞の放射線感受性を髙める作用、すなわち、優れた放射線増感作用を有し、かつ安全性が髙いため、腫瘍の放射線治療の際に併用する薬剤として有用であることが知られている（特開平 3— 2 2 3 2 5 8号公報）。

この 2—ニトロイミダゾール誘導体（ 5 ) の製造法としては以下の反応式で表わされる方法が知られている。

( 5 ) この方法は、原料化合物であるエリトリトールの 4個の氷酸基のうち、一級水酸基 2個、二級水酸基 1個の計 3個の水酸基を選択的に了シル化する工程を経るものであり、一級水酸基と二級水酸基の反応性に差異を設けるためには、低温にて反応させる必要があるが、原料化合物の溶解性が低いため、大量の溶媒を必要とする。また、この工程による生成物は、テトラ了シル化物、トリ了シル化物、ジ了シル化物、モノ了シル化物及び未反応物の混合物として得られ、目的とするトリ了シル化物のみを選択的に得るには力ラムクロマトグラフィ一等による精製が必要となる。また、この工程における単離収率が低いため、全体の収率も低いという欠点を有する。さらに、光学活性 2—二トロイミダゾール誘導体を製造するためには、 D—エリトリトールや L—エリトリトール等の高価な原料を用いなければならないという問題点を有していた。

—方、上記 2—二トロイミダゾール誘導体（ 5 ) には 2個の不斉炭素原子が存在し、その光学活性体の分離は函難であり、未だ成功した例は報告されておらず、当該光学活性体の薬理作用についても全く知られていない。

従って、本発明の目的は、 2—二トロイミダゾール誘導体（5 ) の光学活性体及びそれを有効成分とする医薬を提供することにある。

本発明の目的は、さらに、 2—ニトロイミダゾール誘導体（5 ) の新規な製造法及びその製造中間体を提供することにある。

発明の開示

本発明者らは、かかる実情に鑑み鋭意検討した結果、安価な酒石酸ジエステルを原料とし、ジォキソラン化合物を開環して得られる 2—ハロメトキシー 1， 3， 4 -トリ了シロキシブタンを中間体として経由すれば、髙収率で、工業的に有利に 2—二トロイミダゾ一ル誘導体及びその光学活性体が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、次の式（1) 〜 (4)

のいずれかで表わされる光学活性 2—二ト πイミダゾール誘導体及びこれを有効成分とする放射線増感剤に係るものである。

本発明は、さらに、次の反応式ルイス酸

:

(6) (7)

(8) (9)

5

(式中、 R R² 及び R³ は、同一又は異なって、脂肪族基又は芳香族基を示し、 Xはハロゲン原子を示す）

で表わされる 2—二トイミダゾール誘導体の製造法及びその製造中間体に係るものである。

すなわち、本発明は酒石酸ジエステル（6) より容易に製造できる 1, 3—ジォキソラン誘導体（9) に了シルハライド（10) を反応させることを特徴とする 2—ハロメトキシ一 1， 3, 4—トリ了シロキシブタン誘導体（11) の製造法に係るものである。

― A― また、本発明は当該 2—ハロメトキシー 1， 3, 4—トリァシロキシブタン誘導体（1 1) に 2—二トロイミダゾールを反応させることを特徴とする 2—ニト σィミダゾール誘導体（1 2) の製造法に係るものである。

さらに本発明は 2—ハロメトキシー 1, 3, 4—トリァシロキシブタン誘導体 (1 1) に 2—二トロイミダゾールを反応させ、得られた化合物 (1 2) を脱了シル化することを特徴とする 2—二トロイミダゾール誘導体（5) の製造法に係るものである。

発明を実施するための最良の形態

以下、上記反応式に従って、本発明を説明する。

上記反応式において、 R R²及び R³ で示される脂肪族基としては、炭素数 1〜 2 4の直鎖、分岐鎖若しくは環状のアルキル又はアルケニル基が挙げられる。その具体例としてはメチル基、ェチル基、 n—プピル基、イソプロピル基、 ΤΊ—ブチル基、イソブチル基、 n—ォクチル基、パルミチル基等が挙げられる。また、芳香族基としては、フヱニル基、ナフチル基等が挙げられる。また、 Xで示されるハ IDゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子が挙げられる。

まず、化合物 (6) から化合物（7) を得る反応は、化合物 (6) とジメトキシメタンの混合物に、室温又は加温下、五酸化リンを少量ずつ添加することにより行なうのが好ましい。

化合物（7) から化合物（8) を得る反応は、化合物（7) にルイス酸を反応させて閉環させる反応である。化合物（7) に反応させるルイス酸としては、三フッ化ホウ素、三フッ化ホウ素エーテラート、無水塩化亜鉛、無水塩化アルミ二ゥム、無水塩化スズ等が挙げられる。化合物（7) とルイス酸との反応は、化合物（7) に触媒量から等量のルイス酸を加え、室温又は加温下に攪拌すればよい。なお、化合物（6) とジメトキシメタンの反応において、五酸化リンの作用により一部閉環反応が生起し、 1, 3—ジォキソラン誘導体（8) が生成するまで進行するが、これを分離することなくそのままルイス酸を加えて閉環反応を完了させることができる。

一般に、ジオールの閉環を 1, 3—ジォキソラン環へ誘導するには、パラホルムアルデヒド、 1 , 3 , 5—トリオキサン等が用いられるが、化合物（6 ) の場合、これらの試薬を用いてもほとんど 1 , 3—ジォキソラン環が形成されないか又は収率が非常に低い。しかし、上記方法によれば化合物（6 ) から 3—ジォキソラン誘導体（8 ) が 9 0 %以上の髙収率で得られる。

化合物（8 ) から化合物（9 ) を得る反応は、化合物（8 ) を還元した後、脂肪族若しくは芳香族の力ルポン酸又はその反応性誘導体を反応させることにより行なうことができる。

還元反応は、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤を用いるのが好ましい。また、脂肪族カルボン酸又は芳香族カルボン酸の反応性誘導体としては酸ハライド、酸無水物等が挙げられる。ァシル化反応は、常法に従い、例えばピリジン等の塩基の存在下、室温から加温下に行なうのが好ましい。

得られた 1 , 3—ジォキソラン誘導体（9 ) とァシルハライド（1 0 ) との反応は、無触媒下でも、ルイス酸の存在下に行なうこともできる。また無溶媒下でも、溶媒中で行なってもよい。溶媒としては、ベンゼン、トルエン、クロ口ホル厶、ジクロルメタン、酢酸ェチル、ァセトニトリル等を用いることができ、ルイス酸としては無水塩化亜鉛、無水臭化亜鉛、塩化第二スズ、無水塩化アルミニゥム等を用いることができる。反応温度は、一 3 0〜1 0 0でで行なわれるが、通常は発熱反応であるため、水冷下に行なうのが望ましい。

得られた 2—ハロメトヰシ一 1 , 3 , 4—トリ了シロキシブタン誘導体（1 1 ) と 2—二トロイミダゾールとの反応は塩基の存在下に行なうことが好ましい。用いられる塩基としては、炭酸ナトリゥ 'ム、炭酸水素ナトリウム、炭酸力リウム、炭酸水素力リゥム、炭酸セシゥム、水素化ナトリゥム等の無機塩基；トリェチルァミン、ピリジン、トリプチルァミン等の有機塩基が挙げられる。反応は、通常、有機溶媒中で行なわれ、用いられる溶媒としてはメタノール、エタノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の極性溶媒が挙げられる。反応温度は、低温にしても加熱してもよいが、室温が好ましい。

化合物（1 2 ) の脱ァシル化は常法により行なうことができ、当該脱ァシル化反応により、放射線増感剤として有用な化合物 (5) が得られる。

脱ァシル化は、例えばナトリウ厶アルコラ一トを舍む無水アルコール中、あるいはアンモニアガスを飽和させた無水アルコール中で、 0 〜室温にて数時間〜

—夜処理する方法、又は含水アルコ一ル中、トリェチル了ミン、ピリジン等の有機塩基中で室温〜 80 tにて処理する方法等が行なわれる。

前記の反応において、反応終了後、目的物は常法に従い反応液から分雛精製される。例えば反 E液を濃縮し、結晶化させるか、抽出洗浄後濃縮し、残留物をク口マトグラフィ一等によって分雜精製すれば目的物が得られる。

本発明の反応において、原料である化合物（6) として光学活性体を用いれば、立体配置の保持された化合物（7) 、（8) 、（9) 、（11) 、（12) 及び (5) が得られる。

なお、一般式（11) において、 R¹ 及び R² がそれぞれ脂肪族基 R¹ '及 R² 'である下記一般式（11 a) の化合物は文献未記載の新規化合物である。

本発明の光学活性 2—二トロイミダゾール誘導体のうち、式（1) で表わされる化合物は、例えば光学活性な酒石酸ジエステルを出発原料として用い、次の反応式に従って製造される。ルイス

(6' ) (7' )

OH

(8' ) (8' ) NO'

(9' ) (9" )

(式中、 R R²及び R³ はそれぞれ前記と同義である）

すなわち、 D— （一）一酒石酸ジエステル（6' ) に、五酸化リンの存在下、ジメトキシメタンを反応させて化合物（7' ) を得、次いでこれにルイス酸を反応させることにより閉環し、 1， 3—ジォキソラン誘導体（8' ) とする。 1,

』

3—ジォキソラン誘導体（8' ) を還元後、了シル化することに NHより化合物 (9' ) を得、これにルイス酸の存在下に酸無水物を反応させることにより化合物（9 ) を得る _α化合物（9" ) に 2—二トロイミダゾールを反応させて化合物（12' ) を得、これを脱ァシル化すれば RR体（1) が得られる。

^下、上記反応式に従い、各工程について説明する。

D— (-) 一酒石酸ジエステル（6' ) から化合物（7' ) を得る反応は、 D 一（一）一酒石酸ジエステル（6' ) とジメトキシメ'タンの混合物に、室温又は加温下、五酸化リンを少量ずつ添加することにより行なうのが好ましい。

化合物（7' ) から 1， 3—ジォキソラン誘導体（8' ) を得る反応は、化合物（7' ) にルイス酸を反応させて閉環させる反応である。化合物 ( ) に反応させるルイス酸としては、三フッ化ホウ素、三フッ化ホウ素エーテラート、無水塩化亜鉛、無水塩化アルミニウム、無水塩化スズ等が挙げられる。化合物 ( 7 ' ) とルイス酸との反応は、化合物（7 ' ) に触媒量から等量のルイス酸を加え、室温又は加温下に攪拌すればよい。なお、 D— （一）一酒石酸ジエステル

( 6 ' ) とジメトキシメタンとの反応において五酸化リンの作用により一部閉環反応が生起し、 1 , 3—ジォキソラン誘導体（8 ' ) が生成するまで進行するが、これを分離することなくそのままルイス酸を加えて閉環反応を完了させることができる。

1， 3—ジォキソラン誘導体（8 ' ) から化合物（9 ' ) を得る反応は、 1 , 3—ジォキソラン誘導体（8 ' ) を還元して化合物（8 " ) を得、これに脂肪酸無水物を反応させることにより行なう。

還元反応は、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤を用いるのが好ましい。また、脂肪酸無水物によるァシル化反応は、常法に従い、例えばピリジン等の塩基の存在下、室温から加温下に行なうのが好ましい。化合物（9 ' ) と酸無水物との反応は、ルイス酸の存在下に行なう。ルイス酸としては、無氷塩化亜鉛、無水臭化亜鉛、塩化第二スズ、無水塩化アルミニウム等を用いることができる。反応は無溶媒下又は溶媒中のいずれで行なつてもよく、溶媒としては、ベンゼン、トルエン、クロ口ホルム、ジクロルメタン、酢酸ェチル、了セトニトリル等を用いることができる。反応温度は低温にしても加熱してもよいが、通常室温が好ましい。

得られる化合物（9 ) と 2—二トロイミダゾールとの反応は、酸触媒の存在下、減圧しながらこれらの化合物を溶融することにより行なう。ここで用いる酸' 触媒としては、例えばパラトルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、トリクロル酢酸等のプロトン酸や無水塩化亜鉛、'無水塩化アルミニウム、無水塩化第二鋦等のルイス酸が挙げられる。化合物（9 ) と 2—二トロイミダゾールの使用割合は任意に定めることができるが、通常は前者を等モルな (/ヽし小過剰用いるのがよい。反応温度は通常 5 0〜1 5 が好ましく、また反応時間は反応試薬、溶媒、温度、酸触媒等によって異なるが、通常は 3 0分〜 6時間が好ましい。

化合物（1 2 ' ) の脱ァシル化は、例えばナトリウムアルコラートを含む無水アルコール中、あるいは了ンモニ了ガスを飽和させた無水了ルコール中で、ないし室温にて数時間ないし一夜処理する方法、又は含水アルコール中、トリエチルァミン、ピリジン等の有機塩基中で、室温ないし加温下、加水分解する方法等により行なう。アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコールが好ましい。

本発明の光学活性 2—二トロイミダゾール誘導体のうち、式（2 ) で表わされる化合物は、前記反応式において出発原料として D— (—）一酒石酸ジエステル ( 6 ' ) の代わりに L— (+) —酒石酸ジエステルを用いて同様の反応を行なうことにより製造される。

また、光学活性 2—二トロイミダゾール誘導体のうち、式（3 ) で表わされる化合物及び式（4 ) で表わされる化合物は、前記反応式において出発原料として D - (一）一酒石酸ジエステル（6 ' ) の代わりに m e s 0 —酒石酸ジエステルを用いて同様の反応を行なうことにより、あるいは特開平 1— 1 1 0 6 7 5号公報記載の方法により得られたラセミ 2—二トロイミダゾール誘導体（5 ) の 3個の水酸基をベンゾィル化し、得られたトリベンゾエート体を光学分割した後、脱ベンゾィル化することにより製造することができる。

ラセミ 2—二トロイミダゾール誘導体（5 ) のベンゾィル化は、例えばピリジンのような塩基の存在下、塩化べンゾィルを作用させ室温にて攪拌すれば髙収率で反応は進行する。ここで得られるラセミトリベンゾェ一ト体はキラルカラムを用いた HPLCにて光学分割され、光学活性なトリベンゾエート体が得られる。脱べンゾィル化は、トリェチル了ミン等の有機塩基を用いて、含水アルコール中.、室温で加水分解する方法等により行なうことができる。

前記の反応において、反応終了後、目的物を常法に従い反応液から分離精製する。例えば反応液を抽出し、洗浄後濃縮し、残留物をクロマトグラフィー等によつて分雜精製することにより目的物を得ることができる。

かくして得られる本発明化合物（1 ) 〜（4 ) は、後記試験例に示すように毒性が低く、かつィンビポ及びィンビトロのいずれにおいても優れた放射線増感作用を有し、腫瘍の放射線療法における放射線増感剤として有用である。

本発明の放射線増感剤は、患者に放射線を照射する 5分ないし 5時間前に投与するのが好ましく、投与は経口あるいは非経口によって行なわれる。製剤は、賦形剤、安定剤、保存剤、緩衝剤などの適当な添加剤を加えた形で、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、坐剤、又は注射剤とする。投与量は、年齢、腫瘍の発生部位、種類、症状等によって異なるが、通常 0. 2〜5. OgZm²体表が好ましい。

実施例

以下に実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例 1

(S, S) 一ビス（0—メトキシメチル）酒石酸ジェチルの合成：

D- (一）一酒石酸ジェチル 25. 76 gをジメトキシメタン 5 Om£に完全に混合溶解した。室温下、攪拌しながら五酸化リンを少量ずつ添加し反応させた。反応の進行を TLC (展開溶媒； CHC 1₃ : CH₃〇H= 1 9 ： 1、検出；ヨウ素）でチヱックし、 1¾ 値0. 88に単一スポットになるまで五酸化リンを添加した。反応終了後、反応液を分液ロートに移し、酢酸ェチル：ベンゼン =5 ： 1 の混合溶液 7 0 Om£にて抽出した。水、飽和塩化ナトリウム氷溶液で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、攄過後溶媒をエバポレーターにて留去し、標題化合物をオイル状物質として得た。

MS : 294( ⁺)

NMR(CDCla) 6：

1.30 (6H, t, -0CH₂CH3 2).

4.16-4.30 (4H, m, - OC H₃x2)、

4.66-4.79 (6H, m, >CH0- 2及び一 O y)CH₃ x 2)

実施例 2

(4 S, 5 S) —4, 5—ビス（エトキシカルボニル）一1, 3—ジォキソランの合成：

実施例 1で得た（S, S) —ビス（0—メトキシメチル）酒石酸ジェチル 30. 07 gにベンゼン 300m£を加え溶解した中に、三フッ化ホウ素エーテラート 16. 12 gを加え室温にて攪拌し、反応させた。一晩反応させた後、酢酸ェチル 500m£を加え抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。その後、水及び飽和塩化ナトリウム水溶液洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。濾過後、溶媒を留去した。このものは、このまま次の反応に用いることができるが、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製すると、無色透明オイルとして標題化合物がほぼ定量的に得られた。

S:218( ⁺)

N R(CDC1₃)<5：

1.3K6H, t, - CH₂ x2)、

4.26 (4H, q, - CH₃x2)、

4.76 (2H, s, >C -x2)、

5.26 (2H, s， -OCH2O- 2)

実施例 3

(4 R, 5R) -4, 5—ビス（ヒドロキシメチル）一 1, 3—ジォキソランの合成：

水素化リチウムアルミニウム 25. 75 gにジェチルエーテル 30 Omlを加え加熱し還流させた。そこへ、実施例 2で得た（4 S, 5 S) 一 4, 5—ビス（ェトヰシカルボニル）一 1, 3—ジォキソラン 130. 46 gをエーテル 100m£ に溶かしたものを徐々に滴下した。滴下終了後、約 1時間還流を続け反応させた。放冷冷却後、氷冷下徐々に水 30 m£を加え過剰の水素化リチウム了ルミ二ゥムを分解した。次いで 4 N水酸化ナトリウム水溶液 30m£、水 90m£を滴下した。反応混合物を吸引濾過し、沈澱部分を約 6 のエタノールとジォキサンの混合液

1000 mre抽出し、吸引濾過を行なった。この操作を 3回繰り返した。濾液はエバポレーターで濃縮し、粗製の（4R, 5 R) -4, 5—ビス（ヒドロキシメチル）一 1, 3—ジォキソランを得た。

実施例 4

(4 R, 5R) -4, 5—ビス（ァセトキシメチル）一 1, 3—ジォキソランの合成：

実施例 3で得た粗製の（4R， 5R) —4, 5—ビス（ヒドロキシメチル）一 1， 3—ジォキソランをピリジン 30 Om^こ溶解し、水冷下過剰の無水酢酸 150 gを加え、室温下約 16時間攪拌し、反応させた。氷浴で冷却しながら、過剰の無水酢酸を分解するためエタノール 2 Omgを少量ずつ滴下した。エバポレ一ターで濃縮後、酢酸ェチル 500m£を加え抽出し水で洗淨しエバポレーターで溶媒を留去した。このまま次の反応に用いることもできるが、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（n «キサン：酢酸ェチルで溶出）で精製し淡黄色オイルとして（4R, 5 R) -4, 5—ビス（ァセトキシメチル）一 1, 3—ジォキソラン 79. 29 gを得た。

MS： 218 ( ⁺)

N R(CDC1₃) d：

2.1K6H, s，— C0CH₃x2)、

4.00-4.04 (2H, m， >CH0- 2).

4.21-4.謂， d, - 0C0-x2)、

5.06 (2H， s， -DCH2O-)

実施例 5

(2 R, 3 R) —2—ブ nモメトキシー 1, 3, 4—トリ了セトキシブタンの合成：

臭化ァセチル 25. 0g、実施例 4で得た（4R， 5R) — 4, 5—ビス（了セトキシメチル）一 1, 3—ジォキソラン 42. 0 gを氷冷下混合攪拌し、無水塩化亜鉛 1. 0gを加えた。 30分間反応させた後、氷氷浴を外し、さらに 1時間室温下に攪拌し反応させた。反応終了後ベンゼン 50 を加え不溶物を濾別し、低温下（室温以下).でベンゼンをエバポレーターで留去した。反応物の NMR測定では原料のピークは全く認められず、定量的に開環しており、標題化合物が生成していることが認められた。

刚 R(CDC1₃) δ：

2.0-2.2 (9Η, -C0CHaX3).

4.0-4.4(5H， -CH2OACX2, >CH0CH₂-).

5.3QH, >C C0- )、

5.7-5.8 (2H, -OCHaBr)

実施例 6

(Γ R, 2' R) 一 1一〔（ —了セトキシメチルー 2' , 3' —ジ了セトキシ）プ σポキシ〕メチル一 2—二ト ϋイミダゾ一ルの合成：

実施例 5で得た粗製の（2 R, 3 R) —2—プロモノトキシ一 1, 3, 4 - h リアセトキシブタン全量に、 2—ニトロイミダゾール 21. 5g、トリェチルァミン 20. 0 gのジメチルホルムアミド 50m£溶液を加えると発熱して反応しトリエチルァミン臭素酸塩の白色沈澱を生じた。反応温度が 40tを超えないように冷却した。室温下さらに数時間攪捽し、反応させた。生成した臭素酸塩を吸引濾過し、沈澱物を酢酸ェチルで洗浄した。濾液と洗浄液を一つにし、エバポレーターで濃縮した。ジメチルホルムアミドをほとんど留去した後酢酸ェチルを加えて抽出した。酢酸ェチル層を飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液で 2—ニトロイミダゾ―ルの黄色液の生成がなくなるまで充分洗浄した。水洗後、乾燥、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：酢酸ェチル = 9 ： 1で溶出）で精製し標題化合物 49. 7 g (収率 70. 0%) を得た。

MS :37304+)

NMR(CDC1₃)5：

2.0-2.2 (9H, -C0CH3 3).

4.0-4.4 (5H, m, -COCO- x 2, >CHQCH₂-)、

5.1- 5.2 (1H, m, >CH0C0-).

5.8-6. K2H, nq, -DCHsNiil)).

7.2— 7.3 (dx 2,環プロトン）

実施例 7

(Γ R, R) — 1一〔 (2' , 3' ージヒドロキシー 1' —ヒドロキシメチル）プロボキシ〕メチル一2—二トロイミダゾ一ルの合成：

実施例 6で得た（Γ R, 2' R) -1 - [ (Γ —了セトキシメチル一 2' ， 3' —ジァセトキシ）プロボキシ〕メチルー 2—ニト口イミダゾール 1 1. 58 gをメタノール 100m£に溶解し室温下に攪拌した。トリエチルアミン 10m£、水 20m£を加え、攪拌を続け加水分解した。 TLC (展開溶媒；クロロホルム：メタノール =9 ： 1、検出； 11¥吸収）で反応完了をチヱックした後、エバポレ一ターで溶媒を留去し、結晶化させた。エタノールから再結晶し、黄白色柱状晶として標題化合物 4. 30 gを得た。融点： 99〜： L01. .

S(m/e)： 248 ( +l)

N R(DMSO) δ：

3.25-3.33 (2H, ra, -CH (OH) CM) .

3.39-3.64 (4H, m, - (： 2及び- CH (0CH₂-) CH2OH)、

4.46 (1H, t, -CH(0H)CH₂0H).

4.59 (1H, d, -圆且) -)、

4.64 (1H, t, -CH(0CH₂-)CH₂0H).

5.88(2H, nq,— CH₂N (環)）、

7.21.(1H, s，環プロトン)、

7..83(lH，s,環プロトン）

IRicm-¹) ： 3385 (0H), 1540 (N0₂), 1370 (N0₂)

旋光度： [α]¾⁵ =-12.09° (c=l.0, eOH)

0] =—9.2。 (C=2.0, H2O)

実施例 8

(2 RS, 3 SR) 一 2—ァセトキシ一 3—ブ σモメトキシ一 1, 4—ジベンゾィルォキシブタンの合成：

(4RS, 5 SR) -4, 5—ビス（ペンゾィルォキシメチル）一1, 3—ジォキソラン 34. 2 g、臭化ァセチルを氷冷下攪拌混合させた。臭化亜鉛 1. 0 gを加えさらに反応させた。氷氷浴を取り除いたのち、ジクロルメタン 50ηι£を加え室温下に攪拌し反応させた。 2時間反応させた後不溶物を濾別し、低温（室温以下）下にエバポレーターで濃縮し、標題化合物を得た。

固 R(CDC1₃) δ：

4.0-4.7 (5Η, m， -CHaOBz x 2， >CH0CH₂)、

5. QH, m, >CH0C0-).

5.7(2H, s, -QCHsBr).

7.2-8.K10H, m,芳香族）

実施例 9

(Γ S, S) —1— 〔 (Γ —ァセトキシメチルー 2' , 3' ージァセトキシ）プロボキシ〕メチル一 2—二トロイミダゾールの合成：

( 2 S, 3 S) — 2—ブロモメトキシ一 1 , 3, 4—トリ了セトキシブタン 17. 0 g、 2—二トロイミダゾ一ル 5. 7 g、炭酸カリウム 8. 8g、ェチルアルコール 100m£を混合し、室温下に一昼夜攪拌し反応させた。不溶物を濾過後エバポレーターにて濃縮し、酢酸ェチル 100m£を加えて攪拌混合した。不溶分を濾別し、濾液を飽和炭酸氷素ナトリゥム水溶液で 2—二トロイミダゾールの黄色溶液がなくなるまで充分に洗净した。水洗後乾燥しエバポレータ一で溶媒を留去した。シリカゲルカラムを用いて精製（ベンゼン：酢酸ェチル =9 ： 1で溶出）し、標題化合物を 7. 9 g (収率 43. 0%) 得た。

S: 373(M⁺)

NMR(CDC1₃) δ：

2.0-2.2(9H,sX3, -C0CHaX3).

4.0- 4.4 (5H, m, -CHaOCO- 2, >CHDCH₂-) 、

5.1- 5.2 (1H, m, -CH-0C0-).

5.8-6. K2H, nq, - 0 曙)）、

7.2 - 7.3(dx2,環プロトン）

実施例 10

(Γ S, V S) — 1一〔 (2' , 3' 一ジヒド aキシ一 1' —ヒドロキシメチル）プロポキシ〕メチル一 2—ニトロイミダゾールの合成：

実施例 9で得た（Γ S, 2' S) -1 - C (Γ —了セトキシメチルー 2' , 3' —ジァセトキシ）プロボキシ〕メチル一2—二トロイミダゾール 68. 9 g をメタノール 200m£に混合溶解した。トリエチルアミン 100 gを加え、室温下に攪拌した。水 30» ^を加え一昼夜攪拌して反応させ加水分解した。 TLC

(酢酸ェチル展開 UV検出）でチェックし、反応が完結したことを確認後エバポレーターで濃縮した。濃縮液にイソプロパノール、トルエンを加えて濃縮を繰り返し、完全に生成した酢酸及びトリエチルアミンを留去した。エタノール 50m£ を加えて溶解し、グラスフィルタ一で濾別した後種結晶を加えて結晶化させ、濾別後、乾燥して淡黄色結晶として標題化合物 26. 2 g (収率 57. 0%) を得融点： 97〜98

S : 248(M⁺)

NMR(DMSO) 6 ：

3.2-3.7鼠 m, -CH2OH 2， >CH0- 2)、

4.50 (1H, t， -CH₂0H).

4.6-4.7 (2H, m， -CH₂0HRC >CH0H).

5.85 (2H, nq, - 0C|yK環)）、

7.18aH,d,環プトン)、

7.80(lH,d，環プロトン)

旋光度'：

（c=1.0,CH₃0H)

, [α]ο° =+9.4° (c=2.0, H₂Q)

光学純度： 99.5%ee

元素分析

実測値 (%) ： C;16.93 H;38.88 N;5.35

計算値 {%) ： C;17.00 H;38.87 N;5.30

実施例 1 1

(2 R, 3 R) — 2—了セトキシメトキシー 1, 3， 4一トリァセトキシブタンの合成：

実施例 4で得た（4 R, 5 R) -4, 5—ビス（ァセトキシメチル）一 1, 3 —ジォキソラン 7 0. 1 2 gに無水酢酸 1 0 0m£を加え、室温下に混合溶解した。無水塩化亜鉛 3. 0 5 g、氷酢酸 1 を加え一晩攪拌を続けた。酢酸ェチル 7 0 0m£を加え抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液にて中和分解した。水、次いで飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥、濾過、溶媒留去を行ない、赤茶色ォィルとして標題化合物 9 9. 48 gを得た。

MS : 3200Π

NMR(CDC1₃) δ ：

2.07 (3Η, s， -COCH3).

2.0K3H, s, -C0CH₃)、 2.12(3H, s, -COCHs).

4.04-4.38 (5H, m, -CH2OCO x 2及び〉 C )CH₂- )、

5.21-5.27 (1H, m, >CHDC0-),

実施例 12

(2 R, 3R) —ビス（0—メトキシメチル）酒石酸ジェチルの合成：

L- (+) 一酒石酸ジェチル 20. 6 gをジメトキシメタン 60. 8gに完全に混合溶解した。室温下に攪拌しながら五酸化リンを少量ずつ添加し反応させた。反応の進行を TLC (展開溶媒；ベンゼン：酢酸ェチル =3 ： 2、検出；ヨウ素）でチユックし R f値 0. 63にワンスポッ卜になるまで五酸化リンを添加した。反応終了後上澄み液を分液ロートに移し、酢酸ェチル 20 を加えて抽出した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで水で数回洗浄後、乾煶し、エバポレータ一にて濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（溶雜液：ベンゼン）し、標題化合物 23. 7 g (収率 80. 8%) を得た。

MS： 29 ( ⁺)

NMR(CDC1₃)5：

1.32 (6H, t， -CH3X2).

3.35 (6H, s， -OCH3X2).

4.25 (4H, m, - CH₃x 、

4.6-4.9 (6H, m, - OC^OCHaXS及び〉 C 0CH₂- x2)

実施例 13

(4 R, 5R) — 4， 5—ビス（エトキシカルボニル）一1， 3—ジォキソランの合成：

実施例 12で得た（2R, 3R) —ビス（0—メトキシメチル）酒石酸ジェチル 2 3. 7 gをベンゼン 5 0m£に溶解した。三フッ化ホウ素エーテラ一ト 11. 5 gを加え攪拌し反応させた。室温下に一晩反応させた後分液ロートに移し、酢酸ェチル 200m£を加え抽出した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和後、水洗、乾燥後エバポレーターにて濃縮した。このままでも次の反応に用いることができるが、シリカゲルカラムを用いて、ベンゼンで溶出させて精製し、標題化合物 1 7. 6 g (収率 99. 8%) を得た。

MS: 218(M⁺)

NMR(CDC1₃) d ：

1.35 (6H, t, -CH₂CH3X2).

4.30(4H, q， -CH2CH3X2).

4.75 (2H, s， >CH0- 2).

実施例 1 4

(4 S, 5 S) —4, 5—ビス（ヒドロキシメチル）一 1, 3—ジォキソランの合成：

水素化リチウムアルミニウム 43. 6 1 gにテトラヒド σフラン 30 を氷冷しながら滴下した。実施例 1 3で得た（4 R, 5 R) -4, 5—ビス（ェトキシカルボ二ル）一 1, 3—ジォキソラン 1 2 5. 3 gをテトラヒドロフラン 200m£に溶解したものを氷冷下に激しく攪拌しながら滴下し、反応させた。滴下終了後、還流下に 1時間反応させた。次いで氷冷下に水を一滴ずつ加え過剰の水素化リチウムアルミニウムを分解した。 4モルの水酸化ナトリウム 0. 5 mを滴下した後 30分間攪拌し、吸引濾過した。沈澱部分にエタノール 700m£ を加え、 60〜7 0 :に加温、攪拌、吸引攄過を 3回くり返した。全部の濾液を集めてエバポレーターにて濃縮し、粗製の標題化合物を得た。

実施例 1 5

(4 S, 5 S) -4, 5—ビス（了セトキシメチル）一 1, 3—ジォキソランの合成：

実施例 1 4で得た粗製の（4 S, 5 S) -4, 5—ビス（ヒドキシメチル）一 1 , 3—ジォキソランにピリジン 200 を加え溶解させた。過剰の無水酢酸 200 gを水冷下に滴下し、反応させた。数時間反応後エチルアルコールを滴下し、過剰の無水酢酸を分解した。反応混合物をエバポレーターにて濃縮し、ほとんどのピリジンを留去した。濃縮液に齚酸ェチル 500 を加えて抽出した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで水で洗浄後、乾燥し、ヱバポレーターにて濃縮した。濃縮物をシリカゲルカラムクマトグラフィー（ベンゼン：酢酸ェチル =9 ： 1で溶出）で精製し、無色液体として標題化合物を 9 0. 0 g得た。

MS： 218 (M⁺)

NMR(CDC1₃) δ ：

4.02 (2Η, ra， >CH0-x2),

4.25 (4H, m, -C^CO-xg

実施例 1 6

(2 S, 3 S) — 2—ァセトキシメトキシー 1, 3, 4—トリァセトキシブタンの合成：

実施例 1 5で得た（4 S, 5 S) -4. 5—ビス（ァセトキシメチル）一 1， 3—ジォキソラン 6 1. 0 gに無水酢酸 1 0 0. 2 g、氷酢酸 1 1. 8 gを加え、混合溶解した。無水塩化亜鉛 3. 4 gを加え攙捭を続けると塩化亜鉛は徐々に溶け黄色溶液が茶褐色になった。一晩反応後、酢酸ェチル 5 0 0m£を入れた分液口一トに反応液を注ぎ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え中和し分解した。水洗乾燥後エバポレーターにて濃縮した。未分解の無水酢酸はケミ力ルポンプにて留去し黄色油状物として標題化合物 9 1. 9 g (収率 8 7. 1% ) を得た。

MS： 320 ( ⁺)

NMR(CDC1₃) 6 ：

2.05-2.15(12H,s 4,CH3C0- 4)

4.1-4.4 (5H， m, -CH2O- x 2， >CH0CH₂-)、

5.25 (1H, m， >CH0C0-),

実施例 1 7

(2 RS, 3 SR) —ビス（0—メトキシメチル）酒石酸ジェチルの合成： me s 0—酒石酸ジェチル 2 0. 6 gをジメトキシメタンに完全に混合溶解した。室温下に攪拌しながら五酸化リンを少量ずつ添加し反応させた。反応の進行を TLC (展開溶媒：ベンゼン：酢酸ェチル =3 ： 2、検出；ヨウ素）でチヱックし、 R f値 0. 6 2にワンスポットになるまで五酸化リンを添加した。反応終了後、反応液を分液ロートに移し、酢酸ェチル 200m£にて抽出した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、腿後溶媒をエバポレータ一にて留去し、標題化合物をオイル状物質として得た。

MS： 294 OH

NMR(CDC1₃)5：

1.35鼠 t， -OCH2CH3 2).

4.1-4.4 (4H, m， - CH₃x2)、

4.6-4.9 (6H, m，

x 2)

実施例 18

(4 RS, 5 SR) -4, 5—ビス（エトキシカルボ二ル）一 1, 3—ジォキソランの合成：

実施例 17で得た（2RS, 3SR) —ビス（0—メトキシメチル）酒石酸ジェチル 29. 4 gにベンゼン 10 Om£を加え溶解した中に、三フッ化ホウ素エーテラート 14. 2 gを加え室温にて攪拌し反応させた。一晩反応させた後、酌酸ェチル 20 Om£を加え抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。その後、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。濾過後、溶媒留去した。このものは、このまま次の反応に用いることができるが、シリカゲルカラムクロマトグラフィ一にて精製し、無色透明オイルとして標題化合物をほぼ定量的に得た _c MS： 218 (M⁺)

匪 R(CDC1₃) 6：

1.35 (6H, t, -CH₂C]^x2)、

4.25(4H， q, -CM ₃x2).

4.80 (2H, s, >CH0-x2).

5.2QH, s， -0CH₂0-).

実施例 19

(4 RS, 5 SR) -4, 5—ビス（ヒド口キシメチル）一1, 3—ジォキソランの合成：水素化リチウムアルミニウム 11. 4gにテトラヒドロフラン 10 Οπώを加え加熱し還流させた。そこへ実施例 18で得た（4 RS, 5 SR) -4, 5—ビス (エトキシカルボニル）一 1, 3—ジォキソラン 21. 8gをテトラヒドロフラン 30m£に溶かしたものを徐々に滴下した。滴下終了後、約 1時間還流を続け反応させた。放冷冷却後、氷冷下徐々に水 30m£を加え過剰の水素化リチウム了ルミニゥムを分解し次いで 4 N水酸化ナトリウム水溶液 30m^、水 90m£を滴下した。反応混合物を吸引濾過し、沈殿部分を約 6 のエタノールとジォキサンの混合液 1000m£で抽出し、吸引濾過を行なった。この操作を 3回繰り返した。濾液はヱバポレーターで濃縮し、粗製の標題化合物を得た。

実施例 20

(4 RS, 5 SR) -4, 5—ビス（ァセトキシメチル）一1, 3—ジォキソランの合成：

実施例 19で得た（4RS， 5 SR) — 4, 5—ビス（ヒド σキシメチル）一 1, 3—ジォキソランをピリジン 1 00m£に溶解し、水冷下過剰の無水酢酸 30. 6 gを加え、室温下約 4時間攪拌し反応させた。氷浴で冷却しながら、過剰の無水酢酸を分解するためエタノール 10m£を少量ずつ滴下した。エバポレーターで濃縮後、酢酸ェチル 300m£を加え抽出し水で洗浄しエバポレーターで溶媒を留去した。このものは、このまま次の反応に用いることもできるが、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：酢酸ェチル =95 ： 5で溶出）で精製し、淡黄色オイルとして標題化合物 18. 5 g (収率 85. 0%) を得た。

S:218(M⁺)

圖 R(CDC1₃) δ：

4.1-4.2 (2Η, m, >CH0-x2).

4.3-4.4 (4H, d, -CH₂DC0 2).

4.9(1H， s, -0CH₂0-).

5.2QH, s, -0CH₂0-)

実施例 21

(2 RS, 3 SR) —2—ァセトキシメトキシー 1, 3, 4—トリ了セトキシブタンの合成：

実施例 20で得た（4RS, 5 SR) — 4, 5—ビス（了セトキシメチル）一 1, 3—ジォキソラン 12. 2 gに無水酢酸 2 Ora£を加え、室温にて混合溶解した。無水塩化亜鉛 0. 7 g、氷酢酸 2 m£を加え一晩攪拌を続け酢酸ェチル 300 m£を加え抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液にて中和し分解した。次いで水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥、濾過、溶媒留去を行ない、標題化合物 19. 0 g (収率 92. 0%) を得た。

MS： 320 (M⁺)

圆 R(CDC1₃) δ ：

2.08 (3Η, s, -COCHa)^

2.09 (3H, s, -CQCHa)

2.10 (3H, s, -COCHa).

4.1-4.5 (5H, m， - C]^[ x2及び >C CH₂-)、

5.1一 5.2(1H, m， >C - CO -)、

5.32 (2H, q， -OCH2O-)

実施例 2 2

(Γ RS, SR) 一 1一〔 (Γ ーァセトキシメチル一 2' , 3' —ジ了セトキシ）プロポキシ〕メチルー 2—二トロイミダゾールの合成：

実施例 21で得た（2RS, 3 SR) —2—了セトキシメトキシ一 1， 3, 4 一トリァセトキシブタン 23. 8 gに 2—二トロイミダゾール 8. 4g、触媒量のパラトルエンスルホン酸 0. 2 gを加え、反応中に生成する酢酸を除くために了スピレーターで吸引しながら徐々に加熱攪拌した。油浴の温度が 8 0〜9 0で位から酢酸が留去し始め、 1 4 位でほぽ留去し終わり反応が終了する。放冷後、 1 0 0？ ^を加え抽出し、飽和炭酸水素ナトリゥム水溶液で洗液の 2—二ト π ィミダゾールの黄色が消えるまで充分洗浄した。次いで水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、濾過、溶媒留去を行なった。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：酢酸ェチル =9 ： 1) にて精製し、標題化合物を淡黄色ォィルとして 13. 8 g (収率 50. 0%) 得た。 MS： 373 ( ⁺)

N R(CDC1₃) δ ：

2.03 (3H, s, -CHa)

2.08 (3H, s， -M

3.95-4.50 (5H, m, -Cjy)COx2及び〉 ( CH₂ -)、

5.05-5.15 (1H, m, >CH0C0-). '

7.20(111，3,環プロトン)、

7.30 (1H, s,環プロトン）

実施例 23

( RS， 1' SR) —1— 〔 (2' , 3' —ジヒドロキシー —ヒドロキシメチル）プロボキシ〕メチル一 2—二ト口イミダゾ一ルの合成：

実施例 22で得た（Γ RS, 2' SR) — 1一〔（Γ —ァセトキシメチル — 2' , 3' —ジァセトキシ）プロボキシ〕メチル一 2—ニトロイミダゾール 6. 9 gをメタノール 3 0m£に溶解し室温にて攪拌した。トリェチルァミン 1 0 ra£及び水 5m£を加え、攪拌を続け加水分解した。 TLC (展開溶媒；酢酸ェチル, 検出； UV吸収）で反応完了をチユックした後、エバポレーターで溶媒を留去し結晶化させた。ェタノールから再結晶し、淡黄色結晶として標題化合物 2. 6 g (収率 5 7. 0%) を得た。

融点： 136.0〜137. O :

MS : (m/e) ： 284 (M+l)

N R(DMSO) δ ：

3.15-3.70 (6Η, m, -CH (OH) CH2OH, -CHx 2及び- CH (0CH₂-) CH2OH)、

4.40 (1H, t， -CH(0H)CH₂0H).

4.75 (1H, d-CH(OH)-).

4.65 (1H, t, -CH(0CH₂-) CH₂0H),

5.85 (2H, s， - 0 嶋）、

7.15(lH,s,環プ n トン)、 7.80(lH,s，環プロトン）

IRicm-^^SSSiOH), 1540 (N0₂), 1370 (N0₂)

実施例 24

(Γ R, r s) / (r s, r R) — I— 〔（r —ベンゾィルォキシメチルー 2' , 3' ージベンゾィルォキシ）プロボキシ〕メチル一2—二トロイミダゾ一ルの合成及び光学分割：

実施例 23で得た（1' RS, 2' SR) -1 - C (2' , 3' —ジヒドロキシー 1' —ヒド αキシメチル）プ ϋポキシ〕メチル一 2—二トロイミダゾ一ル

4. 59gにピリジン 100m£を加え水浴下に攪拌し、塩化ベンゾィル 10m£を滴下した。約一昼夜攪拌した後溶媒をエバポレーターにて留去し、酢酸ェチル Z ベンゼン（4/1) の混合液 50 Omgを加え抽出した。水、 d—塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム、水及び飽和塩化ナトリゥムにて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、濾過、溶媒留去を行なった。シリカゲルカラムクロマトグラフィー

(ベンゼン：酢酸工チル）にて精製し、定量的に標題化合物を淡黄色オイルとしし ¼/^0

得られた標題化合物はキラルカラム（AS 0. 60x2. 5L) を用いた HP LCにて光学分割し、光学活性体（式（3) 及び式（4) の化合物のトリベンゾエート体）を単離した。

MS： 559 (M⁺)

N R(CDC1₃)5：

3.42-4.85 (5H, m, - C ]C0x2及び- (^((]CH₂ -) CH₂- )、

5.68-5.73 (1H, m, -CH(0C0-)CH₂-).

5.95-6.07 (2H, nq, - 0CH₂N (環)）、

7.00 (1H, d，ィミダゾール環プロトン）、

7.27 (1H, d,ィミダゾ一ル環プロトン）、

7.39- 7.48(6H,m,m-ベンゼン環プロトン）、

7.53- 7.62(3H，m，p-ベンゼン環プロトン）、

7.93-8.02 (6H, m, o -ベンゼン環プロトン）

実施例 25 (1' R, ' S) / (Γ S, V R) —1— C (2' , 3' ージヒドロキシ一 1' —ヒドロキシメチル）プロボキシ〕メチルー 2—ニトロイミダゾ一ルの合成：

実施例 24で光学分割した（Γ R, 2' S) Z ( S. 2' R) — 1一 [ (Γ 一^？ンゾィルォキシメチルー 2' , 3' ージベンゾィルォキシ）プロボキシ〕メチル一2—二トロイミダゾールの片方 15. 99 gをエタノール 150 m£と酢酸ェチル 1 Ora£に溶かし室温下に攪拌した。水 50m£、トリエチルァミン 15m£を加え、攪拌を続け加水分解した。 TLC (展開溶媒；クロ口ホルム：メタノール =19 : 1) にて反応終了をチェックした後、エバポレーターで溶媒を留去し結晶化させた。また、同様に光学分割した他方も同様に処理して結晶化させた。これらをそれぞれエタノールにて再結晶を行ない、白色針状晶として標題化合物を得た。

融点： 129〜 5*C

S:248(M+1)

NMR(DMSO) δ：

3.16-3.63 (6Η, m, >CH0- x 2及び— Cj^OH x 2)、

4.22 (1H, t, -CH(0H)CH₂0H).

4.95 (1H, t, -CH(0CH₂-)CH₂0H).

4.68UH, d, -CH0H-).

5.83 (2H, nq, -ΟΜ(ίΙ)).

7.19 aH，d,環プロトン)、

7.78aH,d，環プロトン）

,20

旋光度：（1' 2' S*) 体 [ ] D = + 4.7° (c=2, H₂Q)

(Γ S*. 2' R*) 体 -4.5° (c=2, H₂0)

IR(cm- ^^SISOIH), 1545 (N0₂), 1365 (N0₂)

試験例 1 (インビト口における低酸素性細胞増感効果）

SR— RSラセミ体は特開平 3— 223258号に示すようにミソニダゾールと同程度の低酸素性細胞放射線増感効果を有していることが知られている。本発明の光学活性体が、ラセミ体に比しどの程度の低酸素性細胞増感効果を有しているかィンビトロの了ッセ一で調べた。

すなわち、 Ba 1 b/cマウス由来の乳ガン細胞 EMT6ZKUを用いて放射線増感効果を検討した。すなわち、最終濃度が ImMになるように被験化合物を加えた 4 X I 0⁵個 Zm£の濃度の EMT6ZKU細胞の MEM懸濁液を、 5%C0₂ 含有の窒素ガス気流下、室温で 1時間軽く振とうして低酸素性細胞懸濁液を得たこれに対してガンマ線照射を行ない、コロニー形成法により、線量一生存率曲線を求めた。この線量一生存率曲線より被験化合物無添加時の低酸素性細胞の生存率を 1 %下げる放射線量を、被験化合物添加時の低酸素性細胞の生存率を 1 %下げさせる放射線量で除した値を求めて増感率とした。結果を表 1に示す。

表 1

表 1に示す結果より明らかなように本発明の光学活性化合物はラセミ体と同程度に優れた低酸素性細胞増感効果を有しており、癌放射線治療に有益である。試験例 2 (ィンビボーインビト πでの低酸素性細胞放射線増感効果）

ィンビボーインビトロ系でも同様に低酸素性細胞放射線増感効果を RS— SR ラセミ体を対照として調べた。すなわち、 EMT6ZKU担癌 Ba 1 b/cマウスを用いて、ィンビボーインビト π法による低酸素性細胞放射線増感効果を検討した。各被験物質は 20 OmgZkg投与し、投与後 30分にガンマ線を 2 OGy照射し、癌を取り出してトリブシン処理を行ない、細胞浮遊液を作り、コロニー形成法により生存率を求めた。対照には、生理食塩水を投与した。結果を表 2に示す。表 2 検体低酸素性細胞生存率（％) 非照射生理食塩水投与 36.21

照射生理食塩水投与 0.81

SR— R Sラセミ体 0.08

S S体 0.07

RR体 0.07

SR体， R S体のうち旋光度（+) のもの 0.08

SR体， R S体のうち旋光度（一）のもの 0.08 表 2に示す結果より明らかなように、本発明の光学活性化合物はラセミ体と同程度の低酸素性細胞放射線増感効果を示した。従って、本発明化合物は癌放射線治療に有益であることがわかる。

試験例 3 (溶解性試験）

S S体， RR体， SR体， R S体， SR— RSラセミ体について水及び生理食塩水に対する溶解度を調べた。結果を表 3に示す。

表 3

表 3に示す結果より明らかなように、 S S体， RR体， SR体及び R S体はいずれも SR— R Sラセミ体に比し著しく溶解度が増していることがわかる。このことは、一回の投与量が多く、しかも想定される最も好ましい剤型が注射剤である低酸素性細胞放射線増感剤にとつて水性担体量を著しく減少させることができるという意味で非常に有益である。

試験例 4 (ォクタノールーリン酸塩緩衝液分配係数の決定）神経組織への配向の度合いの 1つの指標であるォクタノ一ルーリン酸塩緩衝液平衡系における分配係数を求めた。すなわち、各サンプルのォクタノールに対する溶解度の 1. 4倍量と 0. 7倍量を正確に量りとり、これらに日本薬局方に定める 0. 2モルリン酸塩緩衝液（PH 7. 4) 1 0m£とォクタノール 1 0m£とをそれぞれに加え、遮光下 20 :で 24時間振とうし、ォクタノール相とリン酸塩相を分液し、それぞれの相の吸光度を測定し、その比より、ォクタノールに対する溶解度の 1. 4倍量における分配係数と 0. 7倍量における分配係数を求めた。これらの分配係数を平均してその試料の分配係数とした。結果を表 4に示す。表 4

肃

表 4に示す結果より明らかなように、光学活性体のうち S S体及び R R体はォクタノール相へ配向しにくく、従って神経毒の発現もしにくいことがわかる。試験例 5 (急性毒性試験）

生後 5週の I CR系雄性マウスを用い、生理食塩液又は 1 0%DMSOを含む生理食塩液に溶解した化合物を静脈内又は腹腔内投与し、投与後 1 4日間にわたり観察し、 5 0%致死率（LD₅D/M) を求めた。結果を表 5に示す。

表 5

本発明化合物 (1) 6, 000

本発明化合物 (2) 6, 000

本発明化合物 (3) 5， 900

本発明化合物 (4) 5,900 試験例 6 (急性毒性試験）

5週齢雄性 I C Rマウス（2 5 g— 3 0 g ) を各群 5匹用いて、急性毒性を調ベた。検体は生理食塩水に溶かし、尾静脈より投与した。生死の判定は投与後 1 4日に行なった。結果は死亡例数 Z実験動物数で表わし、表 6に示す。

表 6

表 6に示す結果より明らかなよ όに、光学活性体のうち S S体は他よりもさらに優れた安全性を有していることがわかる。

試験例 7 (急性毒性試験）

S R— R Sラセミ体と S S体についてビーグル犬に対する 5 0 O mg静脈注射による毒性の発現について調べた。結果を表 7に示す。

表 7

表 7に示す結果より明らかなように、 S S体は、ラセミ体に比し、神経毒性の発現が著しく抑制されていることがわかる。

産業上の利用可能性

本発明によれば、安価な酒石酸ジエステルを原料として髙収率で髙純度の光学活性 2—二トロイミダゾ一ル誘導体を製造することができる。ここに、得られる 2—二トロイミダゾールは優れた放射線増感作用を有し、かつ安全性が髙いことから、各種腫瘍を放射線治療する際に併用薬として好適に使用される。