WO1992015527A1 - Potassium cristallin de phosphate thionicotinamide-adenine dinucleotide et procede de production - Google Patents
Potassium cristallin de phosphate thionicotinamide-adenine dinucleotide et procede de production Download PDFInfo
- Publication number
- WO1992015527A1 WO1992015527A1 PCT/JP1992/000260 JP9200260W WO9215527A1 WO 1992015527 A1 WO1992015527 A1 WO 1992015527A1 JP 9200260 W JP9200260 W JP 9200260W WO 9215527 A1 WO9215527 A1 WO 9215527A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- thio
- salt
- nadp
- thionicotinamide
- nad
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
- C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide
Definitions
- the present invention relates to crystalline potassium nicotinamide doadenine dinucleotide phosphate (hereinafter referred to as thio NAD P ⁇ K salt) and a method for producing the same.
- thio-NADP-Na salt sodium salt of amorphous thio-NADP
- the crystalline thio NAD P ⁇ K salt of the present invention has no hygroscopicity and does not deliquesce in the air, so it is extremely useful for applications such as research reagents and diagnostic agents.
- thionicotinamide doadenine dinucleotide phosphate (hereinafter referred to as thioNADP) is a non-natural substance, but ⁇ -nicotinamide doadenine dinucleotide phosphate (hereinafter, referred to as a kind of in vivo redox coenzyme).
- thioNADP ⁇ -nicotinamide doadenine dinucleotide phosphate
- 3-NADP 3-NADP
- Thio-NADP is very useful in the enzymatic analysis of enzyme activity measurement and substrate concentration analysis for clinical diagnostics because of its sensitivity compared to
- NAD nuclei in the presence of Oxidase catalyzes the formation of thio-NAD P, purifies it with a Dowex column, recovers it as an alcohol precipitate, and vacuum-drys thio-NAD P.
- Oxidase EC 3.2.2.5
- a method for obtaining the same is known [Japanese Patent Publication No. 47-14919, Biochemistry 1, 1015-017 (1963) 3].
- the thio-NADP'Na salt obtained here is amorphous and deemed to be hygroscopic and deliquesces when exposed to air.Therefore, special treatments such as air removal and storage are required for storage and transport. It required cooling at 30 ° C.
- NADP ⁇ Na salt did not crystallize even after crystallization treatment, was amorphous, had remarkable hygroscopicity, and was difficult to store.
- the present inventors have conducted research on the long-term storage properties of thio-NADP, and have found that when thio-NADP is converted into a potassium salt and crystallized, it has almost no hygroscopicity and can be stored for a long time.
- the present invention relates to a crystalline thio NADP ⁇ K salt and a method for producing the same. This is the first time that the present invention has been crystallized using thionadop as a potassium salt. ; Crystalline Chio NAD P ⁇ K salt of the present invention as compared to conventional amorphous product is stable not contain any inhibitors of high purity, moreover has many advantages that are not hygroscopic.
- thione NADP in the form of a free acid or salt is converted to an aqueous solution of potassium salt, and the pH is adjusted to 5.5 to 5.0, preferably PH2.0, and the water-soluble organic solvent is thione. It is advisable to add the NAD P ⁇ K aqueous solution until it begins to become cloudy, leave it under cooling, and separate the crystals after the crystallization of the thio NAD P ⁇ K salt is completed.
- the hydrophilic organic solvent methanol is preferably used in an amount of 0.1 to 2.0 times, preferably 0.3 to 1.0 times the amount of the thionadpk solution at a constant temperature, preferably.
- the operation is carried out at room temperature until crystallization starts, and it is preferable to lower the temperature to 0 to 4 ° C. and leave the mixture for 1 to 30 hours for the sufficient crystallization of the thio NAD P ⁇ K salt.
- the concentration of the aqueous solution of thio NAD P ⁇ K is 2 to 50%, preferably 10 to 20%.
- hydrophilic solvent used in the present invention examples include lower alkynols such as methanol, ethanol and propanol, lower ketones such as acetone, ethers such as dioxane and mixtures thereof.
- the crystallization time ends between 2 and 24 hours after the start of crystallization.
- the crystallization is accelerated by the addition of germs, and the crystallization time is shortened.
- the crystalline thionaDP ⁇ K salt obtained by the present invention Compared to the amorphous NAD P ⁇ Na salt produced by the method, it has the characteristics of being less durable, containing no inhibitor, having high stability and not being hygroscopic.
- Amorphous thio NAD PNa salt powder 2 Og is dissolved in 60 ml of deionized water, converted to the free acid form through a cation exchange resin (Dowex 50), and diluted with dilute KOH solution to pH 2. Adjust to 0. Add the powder to this solution so that the potassium chloride concentration is 0.1 M, and make up to 100 ml with deionized water. When about 80 ml of methanol is added with stirring at room temperature, the solution becomes slightly turbid. After about 20 minutes, crystallization of thio N, AD P ⁇ K salts begins. Place the mixture in a refrigerator at 2-4 ° C to complete the crystals of Thio NAD PK salt. After about 18 hours, the crystals are filtered off with suction, washed with cooled 75% methanol and a little 100% methanol and dried in vacuo. The yield was about 17 g of crystalline thio NADP ⁇ K salt.
- the thio NAD P is converted into a potassium salt and crystallized, so that it has no hygroscopicity and does not deliquesce even when exposed to air, and enables long-term storage of thio NAD P. .
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
明 細 書 発明の名称
結晶性チォニコチンアミ ドーアデニンジヌクレオチド燐酸力 リゥム塩及びその製造法 産業上の利用分野
本発明は、 結晶性チォニコチンアミ ドーアデニンジヌクレオチド 燐酸カリウム塩 （以下、 チォー NAD P · K塩という） 及びその製 法に関する。
従来、 知られている非結晶性チォー N A D Pナトリウム塩 （以下. チォー N A D P · N a塩という） は吸湿性が著じるしく、 空気にふ れて潮解してしまうので保存がきわめて困難であった。
本発明の結晶性チォー NAD P · K塩は吸湿性がなく、 空気にふ れて潮解することもないので、 研究試薬、 診断薬等の用途にきわめ て有用である。
従来の技術
一般に、 チォニコチンアミ ドーアデニンジヌクレオチド燐酸 （以 下、 チォー NAD Pという） は非天然性の物質でありながら、 生体 内酸化還元補酵素の一種である β—ニコチンアミ ドーアデニンジヌ クレオチド燐酸 （以下、 /3— NADPとして示す） と同程度の補酵 素活性を有することが知られており、 近年その性質を利用して生化 学および生理学の研究試薬としてのみならず、 臨床診断薬等の医薬 としての用途も開発されている。 又チォー NAD Pは臨床診断学の ための酵素活性測定及び基質濃度分析における酵素的分析法におい て、 |3— NAD Pよリ感度の面および還元型チォー NADPが有色 である点などで非常に有利であることから、 チォー N A D Pに対し て純度を高め、 安定性を増すことが要求されるのである。
従来、 チォニコチンアミ ドと |3— NAD P存在下で NADヌクレ
オシダ一ゼ （E C 3. 2. 2. 5) の触媒作用によって、 チォー N AD Pを生成させ、 ダウエックスカラムにて精製後、 アルコール沈 簾物として回収し、 真空乾燥にてチォ一 NAD Pを得る方法が知ら れている 〔特公昭 4 7— 149 19、 バイオケミストリ一 ， 1 0 1 5- 1 01 7 (1 963) 3 。
しかしながら、 ここに得られるチォー NADP ' N a塩は無定形 で吸湿性にとみ、 空気に触れると潮解してしまうので貯蔵や輪送の 際には特別な処置、 例えば空気除去、 一 20〜一 30°C保冷を必要 としていた。
発明が解決しょうとする課題
上記チ才一 NADP · N a塩においては、 結晶化処理をしても結 晶することはなく、 無定形であって、 吸湿性が著じるしく、 保存困 難なものであった。
課題を解決するための手段
本発明者らは、 チォー NADPの長期保存性を求めて研究した結 果、 チォー NAD Pをカリウム塩とし、 結晶化したところ、 ほとん ど吸湿性がなく、 長期間保存できることを知ったのである。
本発明は結晶性チォー NADP · K塩及びその製法に関するもの である。 チォー NAD Pをカリウム塩として、 これを結晶化したの は本発明がはじめてである。
; 本発明の結晶性チォー NAD P · K塩は従来公知の無定形生成物 に比べて、 高純度で阻害剤を全く含まず安定であり、 しかも吸湿性 ではないという多くの利点を有する。
本発明においては、 遊離酸又は塩の形状のチォー NAD Pをカリ ゥム塩の水溶液に変換し、 p H l . 5〜5. 0、 好ましくは P H 2. 0とし、 水溶性有機溶媒をチォー NAD P · K水溶液が濁り始める まで加え、 冷却下、 放置し、 チォー NAD P · K塩の結晶化が終了 した後、 結晶を分離するのがよい。 親水性有機溶剤として好ましく はメタノールをチォー NAD P · K溶液に対して 0. 1 5〜2. 0 倍量、 好ましくは 0. 3〜 1. 0倍量を使用し、 一定温度、 好まし くは室温で結晶化が始まるまで操作し、 引続きチォー NAD P · K 塩の充分な結晶化のために、 好ましくは 0〜4 °Cまで下げ、 1〜3 0時間放置するのがよい。 結晶化操作前のチォー NAD P · K水溶 液は濃度 2〜50 %、 好ましくは 1 0〜20 %とするのがよい。
本発明に用いる親水性溶剤の例としては、 メタノール、 エタノー ル、 プロパノールなどの低級アル力ノール、 アセトンなどの低級ケ トンやジォキサンなどのエーテル及びこれらの混合物である。
普通、 結晶化時間は結晶開始後 2〜24時間で終結する。 芽晶の 添加により結晶化は促進され、 結晶化時間は短くなる。
» 本発明により得られた結晶性チォー NADP · K塩は通常の沈澱
方法によって製造される無定形のチ才ー NAD P · N a塩に比べて、 髙鈍度で阻害剤を全く含まず、 安定性が高く しかも吸湿性でないと いう特徴を有する。
次に、 本発明の実施例について述べる。
実施例 1
無定形のチォー NAD P · N a塩粉末 2 O gを脱イオン水 60 m 1に溶解し、 陽イオン交換樹脂 （ダウエックス 5 0) を通して遊離 酸型に変換し、 希 K O H溶液で P H 2. 0に調整する。 この溶液に 塩化カリウム濃度が 0. 1 Mになるように粉末を添加し、 脱イオン 水で 1 00 m 1にする。 室温で撹拌しながらメタノール約 8 0 m 1 を添加すると溶液は僅かに濁る。 約 20分後にチォー N、AD P · K 塩の結晶化が始まる。 チォー NAD P · K塩の結晶を完全にするた めに混合物を 2〜4°Cの冷蔵庫中に入れる。 約 1 8時間後結晶物を 吸引濾過し、 冷却した 7 5 %メタノ一ル及び 1 0 0 %メタノール若 干量で洗浄し、 真空中で乾燥する。 収量は、 結晶性チォー NADP · K塩約 1 7 gであった。
実施例 2
1 0 %のチォー NAD P · K塩溶液 1 00 m l を室温で撹拌後ァ セトン約 20 m 1 を加えると溶液は濁る。 ここに芽晶を少量加え撹 拌すると 3 0分位で結晶化が始まる。 チォー NAD P · K塩の結晶
を完全にするために混合液を 0〜4 °Cの冷蔵庫中に入れる。 約 1 8 時間後結晶物を吸引濾過し、 ついで冷却した 75 %メタノール及び 1 00 %メタノール若干量で洗浄し、 真空中で乾燥する。 収量はチ ォー NAD P · K塩約 8 gであった。
発明の効果
本発明では、 チォー NAD Pをカリウム塩とし、 結晶化すること により、 吸湿性がなく、 空気にふれても潮解することのないものと し、 チォー NAD Pの長期間保存を可能としたのである。
Claims
1 . 結晶性チォニコチンァミ ドーアデニンジヌクレオチド燐 酸力リゥム塩。
2 . チォニコチンアミ ドーアデニンジヌクレオチド燐酸力リ ゥム塩の水溶液に親水性有機溶剤を加え、 結晶化を行い、 ついで結 晶を単離することを特徴とする結晶性チォニコチンアミ ドーアデ二 ンジヌクレオチド燐酸力リゥム塩の製法。
3 . ρ Η 1 . 5〜5 . 0で、 2〜 5 0 %のチォニコチンアミ ドーアデニンジヌクレオチド燐酸水溶液を使用することを特徴とす る請求項 2に記載の方法。
4 . 水溶性水性有機溶剤としてアル力ノール、 ケトン又はェ 一テル又はこれらの混合物を使用することを特徴とする請求項 2又 は請求項 3に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/945,989 US5480982A (en) | 1991-03-05 | 1992-03-05 | Crystalline potassium salt of thinonicotinamide adenine dinucleotide phosphate |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3/123182 | 1991-03-05 | ||
| JP03123182A JP3081016B2 (ja) | 1991-03-05 | 1991-03-05 | 結晶性チオニコチンアミド−アデニンジヌクレオ チド燐酸カリウム塩及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| WO1992015527A1 true WO1992015527A1 (fr) | 1992-09-17 |
Family
ID=14854222
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PCT/JP1992/000260 Ceased WO1992015527A1 (fr) | 1991-03-05 | 1992-03-05 | Potassium cristallin de phosphate thionicotinamide-adenine dinucleotide et procede de production |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5480982A (ja) |
| EP (1) | EP0533940A4 (ja) |
| JP (1) | JP3081016B2 (ja) |
| WO (1) | WO1992015527A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100395256C (zh) * | 2006-06-12 | 2008-06-18 | 南京工业大学 | 一种5’-核苷一磷酸钠盐的结晶方法 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7083950B2 (en) * | 1998-09-25 | 2006-08-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity fusion proteins and therapeutic and diagnostic methods for use |
| JP2000117550A (ja) | 1998-10-16 | 2000-04-25 | Asutekku:Kk | 細穴放電加工用パイプ電極交換方法および装置 |
| US20030228621A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-11 | Yong Qin | Common ligand universal enzyme assay and compositions for use therein |
| US20120040387A1 (en) * | 2009-01-19 | 2012-02-16 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Method and reagent for measuring mevalonic acid, 3-hydroxymethylglutaryl coenzyme a, and coenzyme a |
| CN114249787A (zh) * | 2020-09-22 | 2022-03-29 | 尚科生物医药（上海）有限公司 | 无定型的氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4714919B1 (ja) * | 1969-03-25 | 1972-05-04 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2704109A1 (de) * | 1977-02-01 | 1978-08-10 | Boehringer Mannheim Gmbh | Kristallines kaliumsalz von beta-nicotinamid-adenindinucleotid- phosphorsaeure und verfahren zu seiner herstellung |
-
1991
- 1991-03-05 JP JP03123182A patent/JP3081016B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-03-05 US US07/945,989 patent/US5480982A/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-03-05 WO PCT/JP1992/000260 patent/WO1992015527A1/ja not_active Ceased
- 1992-03-05 EP EP19920905968 patent/EP0533940A4/en not_active Ceased
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4714919B1 (ja) * | 1969-03-25 | 1972-05-04 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| See also references of EP0533940A4 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100395256C (zh) * | 2006-06-12 | 2008-06-18 | 南京工业大学 | 一种5’-核苷一磷酸钠盐的结晶方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0533940A4 (en) | 1993-05-05 |
| EP0533940A1 (en) | 1993-03-31 |
| JP3081016B2 (ja) | 2000-08-28 |
| US5480982A (en) | 1996-01-02 |
| JPH0565292A (ja) | 1993-03-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schmid | Direct-reacting bilirubin, bilirubin glucuronide, in serum, bile, and urine | |
| US4394449A (en) | Stabilization of coenzymes in aqueous solution | |
| Krakow et al. | Some stereospecificity studies with tritiated pyridine nucleotides | |
| JPH01211595A (ja) | 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体、その製法及びＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性測定用試薬への利用 | |
| WO1992015527A1 (fr) | Potassium cristallin de phosphate thionicotinamide-adenine dinucleotide et procede de production | |
| JP2722874B2 (ja) | 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体及びこれを基質に用いたＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性測定法 | |
| US20090118540A1 (en) | Method For Producing Pyruvic Acid | |
| US7485705B2 (en) | Water-soluble tetrazolium compounds | |
| GB2085884A (en) | Crystals of beta -nicotinamide- adenine-dinucleotide and process for preparing the same | |
| US4148994A (en) | Crystalline metal salts of β-nicotinamide-adenine-dinucleotide | |
| US4151349A (en) | Crystalline potassium salt of β-nicotinamide adenine dinucleotide phosphoric acid and method for its preparation | |
| JP2819258B2 (ja) | 新規水溶性テトラゾリウム塩化合物 | |
| JPS6031819B2 (ja) | 新規コリン誘導体 | |
| CS236751B2 (en) | Processing of substrates for determining of alpha-amylase | |
| JP3016647B2 (ja) | Ｌ−セリン溶液の調製法 | |
| JPS5854800B2 (ja) | コリン誘導体を用いるコリンエステラ−ゼ活性測定法 | |
| JP2656065B2 (ja) | 酵素活性測定方法 | |
| JPS5939B2 (ja) | 高純度アデノシントリリン酸の製法 | |
| JPS6032795A (ja) | ホスホジエステラ−ゼ１の活性測定用の新規な基質 | |
| JPS5995900A (ja) | 測定用組成物 | |
| JPH01112999A (ja) | グルコース測定用組成物 | |
| JPH01139594A (ja) | 同位元素標識３，４：５，６−ジ−ｏ−イソプロピリデン−ｄ−グルコノニトリルの製造方法 | |
| JPS5944301B2 (ja) | β−フルオロアスパラギン酸およびその製法 | |
| Wagner et al. | [102] α-Keto-β-hydroxy acid reductase (Neurospora crassa) | |
| JPS5810385B2 (ja) | テトラゾリウム塩化合物およびその化合物を用いる脱水素酵素の吸光光度定量法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AK | Designated states |
Kind code of ref document: A1 Designated state(s): US |
|
| AL | Designated countries for regional patents |
Kind code of ref document: A1 Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IT LU MC NL SE |
|
| WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 1992905968 Country of ref document: EP |
|
| CFP | Corrected version of a pamphlet front page | ||
| CR1 | Correction of entry in section i |
Free format text: PAT.BUL.24/92 UNDER INID (51) "IPC" REPLACE "C01H 21/02" BY "C07H 21/02" |
|
| WWP | Wipo information: published in national office |
Ref document number: 1992905968 Country of ref document: EP |
|
| WWR | Wipo information: refused in national office |
Ref document number: 1992905968 Country of ref document: EP |
|
| WWW | Wipo information: withdrawn in national office |
Ref document number: 1992905968 Country of ref document: EP |