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WO1984000539A1 - Deacetyl fa-5859 et son procede de preparation - Google Patents

Deacetyl fa-5859 et son procede de preparation Download PDF

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Publication number
WO1984000539A1
WO1984000539A1 PCT/JP1982/000291 JP8200291W WO8400539A1 WO 1984000539 A1 WO1984000539 A1 WO 1984000539A1 JP 8200291 W JP8200291 W JP 8200291W WO 8400539 A1 WO8400539 A1 WO 8400539A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
acid
reaction
salt
substance
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP1982/000291
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Tsuneo Kanamaru
Susumu Shinagawa
Mitsuko Asai
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Chemical Industries Ltd filed Critical Takeda Chemical Industries Ltd
Priority to PCT/JP1982/000291 priority Critical patent/WO1984000539A1/ja
Priority to US06/442,368 priority patent/US4521432A/en
Priority to CA000416173A priority patent/CA1190166A/en
Priority to EP82110866A priority patent/EP0080695B1/en
Priority to DE8282110866T priority patent/DE3263167D1/de
Priority to KR1019830001950A priority patent/KR900008248B1/ko
Publication of WO1984000539A1 publication Critical patent/WO1984000539A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to US06/939,152 priority patent/US4767781A/en
Priority to US07/423,555 priority patent/US4948534A/en
Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/66—Aspergillus

Definitions

  • the present invention relates to a novel physiologically active substance decetyl_PA-5859 or a salt thereof having an excellent inhibitory action on fatty acid degradation, and a method for producing the same.
  • compounds having an inhibitory action on fatty acid degradation include 4-pentenoic acid f4-pentenoic acid) PC Hoi land et al., Biochemical 'Journal 1 (biochemica 1 Journal), Vol. 73, 1973, HSA Sherratt et al., Biochemical '1 Pharmacology, Vol. 25, page 743, 19776)), no, iboglycin [HSA] "Sherratt et al., Noku ⁇ Oke Mika Nole 'See Pharmacolology _ (Biochemica 1 Pharmacology), 25, 734, 1976), Decanoyl' carnitine (decanoyl.
  • the present invention relates to a novel active substance deacetyl FA-5589, or a salt thereof, and a method for producing the same. More specifically, the present invention provides a method of formula (1)
  • the present invention relates to a method for producing a compound represented by the formula: CH G - ⁇ -CH 2 -C-CH 5 , -COO E CI) or a salt thereof.
  • the compound (I) may be referred to as “bioactive substance deacetyl: FA-5589”, or simply as didecylFA-5589. Further, the compound (II) may be referred to as “bioactive substance FA-5589” or simply as “FA-5589”.
  • insulin deficiency promotes the release of fatty acids in adipose tissue due to insulin deficiency, which increases the supply of fatty acids to the liver and, at the same time, increases the production of ketone bodies due to increased decomposition of fatty acids. And presents with so-called ketemia.
  • Glucose is poorly used in extrahepatic tissues, and the ketones produced are used as an energy source. Therefore, if you stop the breakdown of fatty acids,
  • the present inventors have further conducted various studies in order to obtain a derivative of the substance.
  • the acetyl derivative obtained by hydrolyzing the physiologically active substance FA-5589 is a novel substance, and It has been found that it has a remarkable inhibitory effect on fatty acid degradation, and this is referred to as the physiologically active substance deacetil FA-5589.
  • the present invention provides (1) a method for producing a compound (I) or a salt thereof, which is characterized by subjecting a compound (II) or a salt thereof to a hydrolysis reaction.
  • any method for decomposing an amide bond can be applied.
  • it can be carried out by using an acid, a base, an ion exchange resin or the like.
  • the acid include inorganic acids such as sulfuric acid and hydrochloric acid.
  • the base include potassium hydroxide, sodium hydroxide, and sodium hydroxide.
  • the reaction is preferably carried out in an aqueous solution, and more preferably in a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol or the like.
  • the reaction is usually carried out at about 60 to 200 ° C., more preferably at about 90 to 120 ° C., for about 30 minutes to 30 hours, and more preferably about 3 to 16 hours. It is done in.
  • the reaction is preferably performed in a 7K solution, and more preferably in a water-containing dish, for example, a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, or the like.
  • the reaction is usually carried out at about 60 to 200 ° C, more preferably at about 9 (! To 120 ° C, for about 30 minutes to 30 hours, more preferably at about 3 to 16 hours. Done in time.
  • the reaction is carried out by heating the ion exchange resin in a state of being suspended in an aqueous solution of the raw material compound.
  • the reaction is usually performed at about 60 to 200 ° C., more preferably at about 90 to: at L 20 ° C., for about 3 to about 0.0 minutes to 30 hours, and more preferably at about 3 to 16 hours. It is done in.
  • decetyl FA-5589 or a salt thereof from the reaction mixture, commonly used means such as ion exchange resin, adsorption, concentration, and crystallization are used.
  • ion exchange resin ion exchange resin
  • concentration concentration
  • crystallization ion exchange resin
  • the target product is collected from the reaction solution, it can be isolated in the free form or in the form of salt, but it is easier to separate and collect it in the form of salt.
  • a strongly acidic ion exchange resin is used to adsorb the target substance, and elution is performed using, for example, hydrochloric acid, etc., and the ninhydrin reaction shows Hi production.
  • Collecting the fractions for example, from the hydrolysis reaction solution with hydrochloric acid, the reaction solution is more easily concentrated under reduced pressure, and excess hydrochloric acid is distilled off. Add a solvent such as ethanol or jetether to form a crystal of hydrochloric acid Salt can be obtained.
  • the salt of deacetyl F A — 5859 can also be converted to the free form.
  • an acid or a base forming the salt may be adsorbed to the ion-exchange resin by using, for example, an ion-exchange resin.
  • the deacetyl FA-5589-free form can form a salt, it can be converted into a pharmaceutically acceptable salt by conventional means.
  • the acid that forms the salt include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, oxalic acid, acetic acid, succinic acid, citric acid, and fumaric acid.
  • the tube was placed in a tube, and subjected to an aerobic shaking reaction at 37-'C for 20 minutes.
  • the concentration of the inhibitory activity of the compound Deacetyl FA-5859 that is, the concentration that inhibits the decomposition activity by 50 compared to the case where no inhibitor is added, is as follows.
  • decetyl FA-5589 or a salt thereof of the present invention is useful, for example, as a fatty acid- '.
  • Is used as a fatty acid degradation inhibitor for example, for the treatment of diabetes in mammals (eg, mice, rats, humans, etc.).
  • deacetyl-5-589 or a salt thereof when administering deacetyl-5-589 or a salt thereof, it is orally prepared in the form of tablets, granules, capsules, liquids and the like by conventional means, or non-permanently as an injection, for example. Can be administered.
  • Dasechiru FA- 5 8 5 9 of the present invention can be used as a biochemical reagent on you understanding the metabolism of fatty acids. For example, adding carboxine deficiency by adding
  • the decetyl F-585-59 of the present invention is also a useful substance as a synthetic intermediate of a compound exhibiting an advantageous fatty acid decomposition inhibitory action.
  • FA-5589 (free form) used as a starting compound in the method of the present invention has the following physicochemical properties. -(aj elemental analysis (%): (dried on phosphorus pentoxide at 60 ° C for 10 hours under reduced pressure)
  • Soluble ethanol, methanol
  • Negative Greig's Reiech reaction, ninhydrin £ 3 ⁇ 4, Sakaguchi reaction, Moritzsch reagent, Ehrlich reagent.
  • FA-58593 ⁇ 4 a physiologically active substance belonging to the genus Emericella or Aspergillus FA-585-9 Producing bacteria is cultured in a medium, and the physiologically active substance FA-585-9 is produced and accumulated in the culture, and collected. By doing so, it can be manufactured.
  • the microorganism that can be used in the method may be any microorganism that belongs to the genus Emericella or the genus Aspergius and that contains the physiologically active substance FA-5589. Examples are E. quadri 1 ineata, E. Seri Knee Drans-_E. Nidulans var. Acr i stata), Emelysera Christ Minuta (E. cleistom-inuta,, Emelysela. Needleans-Bar-Ni-Drance f £ ;. nid- ulans var, nidulans), Emerica Sera '21 Drance-Bruore 'Rata (E. nidulans var.
  • E. resella's Linea IFO 5859 Emery Serra's Power Liner IFO 30911, Emelisela's Power Liner IFO 30912, Emeryra's Power Liner IFO 3 0850, Emery Sera 'Power Drill Liner I FO 3 085 1, Emery Sera' Needle Lanth-Pearl 'Akry Starter I FO 3 0 6 3, Emery Serra' Needle Lance.
  • Le Factory Agent I FO 3 0844 Emery Sera Christ Minutor I FO 3 0 8 3 9, Emery Serra, Nederlands Bar, Second Dorrance I FO 3 0 8 7 2, Emera Sera, Nederlands' Bar, Ratha IFO 3 0 8 4 7, Emeri Sera, Lugrosa I IFO 8 6 2 6, Emery Sera's Lugrosa-IF 0 8 6 9 9, Emmely Sera's Lugrocer IF 0 3 0 9 13, Emery Sera's Nore Grocer IFO 3 0 8 5 2 , Emelysera 'Noregrosa-IF 0 308 5 3, Emelysera' 21st Dance IFO 57 19, Emelysera. Needleance I FO 7 077, Emelysera '21 -drance IFO 3006, Emmelicella 'Sub-Later IF 3 0906, Aspergillus sp.
  • I FO 5 859 I FO 3 0 6 3, IF 0 8 6 2 6, 1 F 0 8 6 2 9, IF 0 5 7 1 9, IF 0 7 0 7 7 and ⁇ ⁇ , ⁇ 3 0 0 6 2 strains were deposited at the Fermentation Research Institute (IFO, 53-2, 18-17-85, Jusanhoncho, Yodogawa-ku, Osaka-shi, Osaka, Japan), and the Fermentation Research Institute was issued. List of 'ob' cultures, 6th edition, 1978 (Institute) Fermentation, Osaka, List of Cultures, 1978, Sixth Edition).
  • Emerisella 'Needlans' var' acristaters were reported in the research report of the Institute of Bacteriology, No. 12, page 171, (Showa 5 1975), Reports of the Tottori Myco 1-ogi acl Institute 1 2, 1 7 1 (1 9 7 5), the mycological properties of Emeri Sera 'Kristo Minuta' are as follows: Transactions, Ob, England, Tsch, Mykologikanore, Societi (1 31153 (: ⁇ 0115 of The
  • Emelysella and Need Lance are KB Raper, BI Fennell 3 ⁇ 4: The 'Jinus-Aspergillus (The Genus Aspergi 1 lus) 9 5 ⁇ , The Williams & Wilkins Company, Baltimore, 1989 Transactions of The Myco- 1 ogi ca 1 Society of Japan Volume 20,, a 4 and 481 (1979).
  • Aspergillus sp. 3704 strain is a fungus isolated from the field-soil of Yamato-cho, Kawanishi-shi, Hyogo, Japan and has the following mycological properties.
  • the growth was slow, and the size of the mouth after 2 weeks at 24 ° C was 1.4 to 2.0.
  • the center is composed of a slightly elevated hard flora, the periphery of which is irregular and deep under the agar.
  • aerial mycelia exhibit a reticulated spread. It has a pale blue-green color with a yellow tint, and becomes pale brown as it gets older.
  • the number of conidial heads is small.
  • the color of the back surface is light brown or brown. Produces a light brown soluble pigment when old.
  • the growth is vigorous, and the size of colonies after 2 weeks at 24 ° C is 4.0 to 5.
  • Aerial hyphae are sparse.
  • the conidium head is very well formed and has a grayish yellow-green color.
  • the back surface is light brown to yellowish brown.
  • Conidium head The size is not fixed, but the length is 75 ⁇ 100 ⁇ , the diameter is 20 ⁇
  • 40 i which is a radial cylinder but has a rough cylindrical shape.
  • Conidiophores length 40-60, diameter 2.0-45, smooth, colorless, slightly curved.
  • Fearado club-shaped, 45-6.5 X 2.0-3.0
  • Conidia spherical to oval, dark green, 2.5 to 3.5 in diameter
  • microorganism has been deposited at the Research Institute of Microorganisms and Technology (FRI, 30-5 1-3-1 Higashi, Yatabe-cho, Tsukuba-gun, Ibaraki, Japan) in 1975. 6 years (1980 1st year) 1 January 18th Deposited under accession number FE RM P—62 2 4
  • FA-5589 is independent of the sexual or alive generation of the strain. It goes without saying that any strain capable of producing the strain can be used.
  • E. melisella and Aspergillus can be mutated naturally or by mutation as a general property of the microorganism.
  • irradiation with radiation such as X-rays, gamma rays, ultraviolet rays, etc.
  • isolation of single spores, treatment with various drugs or cultivation in cultures containing drugs, and many others obtained by mutation by other means even the mutant or naturally-obtained mutant strains, etc. may be utilized ⁇ 1 A- 5 8 5 9 all have the property of producing FA- 5 8 5 9 production method of .
  • the medium used for the culture in the production method of F A-585-59 may be liquid or solid as long as it contains a nutrient source that can be used by the strain used, but a liquid medium should be used when treating large quantities. Is more appropriate.
  • the medium is appropriately blended with a carbon source capable of diversion, a nitrogen source digestible, inorganic substances, and micronutrients.
  • Carbon sources include, for example, sucrose, lactose, sucrose, maltose, dextrin, starch, glycerin, mannitol, sorbitol, and fats and oils (eg, soybean oil, olive oil).
  • fatty acids eg, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, etc.
  • nitrogen sources such as meat extract, yeast Extracts, yeast, soybean flour, corn 'steep' liquor, butane, cottonseed flour, molasses, urea, ammonium salts (eg, ammonium sulfate, ammonium chloride, ammonium nitrate, ammonium acetate, etc.).
  • sodium, calcium, calcium, magnesium Salts containing platinum and the like, metal salts such as iron, manganese, zinc, cobalt and nickel, salts such as phosphoric acid and boric acid, and salts of organic acids such as acetic acid and p-succinic acid are appropriately used.
  • amino acids eg, glutamic acid, aspartic acid, alanine, lysine, noklin, methionine, proline, etc.
  • peptides eg, dipeptide, tripeptide, etc.
  • vitamins eg, ⁇ , B 2 , nicotinic acid, B 12 , C, etc.
  • nucleic acids eg, purine, pyrimidine and derivatives thereof
  • inorganic or organic acids, alcohols, buffers and the like are added for the purpose of adjusting the pH of the medium, or an appropriate amount of oils and fats, a surfactant and the like are added for the purpose of defoaming.
  • the culture may be performed by static culture, shaking culture, or aeration / agitation culture. It is needless to say that so-called deep aeration and stirring culture is desirable for large-scale treatment.
  • the conditions for cultivation are not fixed depending on the condition of the medium, composition, type of strain, culturing method, etc., but they are usually about 15 ° C: ⁇ 37 ° C, and the initial pfi Select around 3 ⁇ 8.
  • the temperature during the middle stage of culture is about 23 ° C to 32 ° C,
  • the pH is desirably about 4 to 6.
  • the cultivation period is not fixed by the above conditions, but it is preferable to culture until the concentration of the physiologically active substance is maximized.
  • the time required for this is usually about 1 to 8 days in the case of shaking culture using a liquid medium or aeration and stirring culture.
  • the produced FA-5589 is mainly present in the culture solution, it is advantageous to separate the culture into supernatant and bacterial cells by centrifugation or filtration, and to purify the supernatant. . However, it can also be purified directly from the culture.
  • the source is ammonia water, alkaline water, or mineral acid or inorganic salt (for example,
  • an active substance is adsorbed on an adsorbent such as activated carbon, and then eluted with a parent aqueous organic solvent system.
  • an adsorbent such as activated carbon
  • Some of these include acetone, methyl edulketone, methyl isobutyl ketone
  • a strongly acidic cation exchange resin such as Amberlite IR-120, Dow Ex 50 (X2) [manufactured by Dow Chemical Co. (USA), Diaion SKi AC Mitsubishi Kasei (Japan)] And the like are buffered using a buffer solution having an appropriate pH, for example, pH 4.
  • FA-585- can be converted into a pharmacologically acceptable salt by conventional means.
  • the acid for forming the salt include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, oxalic acid, acetic acid, succinic acid, citric acid, fumaric acid and the like.
  • Negative Grey-Green reaction, ninhydrin reagent, Sakaguchi reaction,
  • Soluble ethanol, methanol
  • Negative Greig-Liebeck reaction, ninhydrin reagent, Sakaguchi reaction,
  • a 0.25 M sucrose solution containing (W / V) 5 mM Tris-monohydrochloride buffer (pH 7.5) is added, and the mixture is homogenized with a homogenizer equipped with a Teflon rod.
  • the supernatant was centrifuged at 600 g for 20 minutes and centrifuged at 30,000 xg for 30 minutes, and the resulting pellet was suspended in the above sucrose solution to a concentration such that the liver wet weight was 0.2 g / 0.5 mT.
  • 0.5m ⁇ was used as an enzyme solution for the reaction.
  • Inhibitory activity at 250 ⁇ m / mi was 17 times higher than when no inhibitor was added.
  • the inhibition was 25% at 3 ⁇ 4, 500 ⁇ m / mZ, and 36% at 1000 ⁇ g m £.
  • Acute toxicity of FA-5 859 L1) 50 value is 400 ⁇ by intravenous injection in mice
  • FA-585-9 or a salt thereof is useful, for example, as a fatty acid decomposer and harmful agent.
  • FA-5589 or a salt thereof as a fatty acid degradation inhibitor, for example, for the treatment of diabetes in mammals (eg, mice, rats, humans, etc.), about EA-5589 is used. 0.2 to 2 0 0 / ⁇
  • Administer as 1 dose when administering FA-5589 or a salt thereof, it is orally prepared by conventional means, for example, in the form of tablets, granules, capsules, and liquids, and parenterally, for example, as an injection.
  • _ ⁇ — 5859 can be used as a biochemical reagent to elucidate the metabolism of fatty acids.
  • carnitine deficiency can be easily created by adding —58559 to the reaction solution, so that the role of carnitine in lunar fatty acid oxidation can be more clearly defined.
  • a / m concentration is advantageously used.
  • FA-585-9 is also a useful substance as an intermediate for the synthesis of compounds that exhibit a more favorable inhibitory action on fatty acid degradation.
  • Fig. 1 shows the infrared absorption spectrum of the biologically active substance FA-589 obtained in Reference Example 2
  • Fig. 2 shows the biologically active substance FA-589 obtained in Reference Example 3.
  • 59 represents the infrared absorption spectrum of the hydrochloride, respectively.
  • the percentage of the composition of the culture medium indicates the percentage by weight Z capacity.
  • Ichisu 3 ⁇ 0%, ⁇ bean flour 1.5%, con steel one pre mosquito one 1.0% Poripeputo down 0.5%, yeast Ekisu 0.3% and 0.3% dietary salts, pH 6 .0 consisting seed culture medium 5 0 ⁇ ⁇ Was inoculated into a two-volume sterilized Sakaguchi flask and cultured on a reciprocating shaker at 28 ° C. for 2 days.
  • the eluate was concentrated under reduced pressure to 50 ⁇ ⁇ , and the concentrated solution was passed through a Dowex 1X2 (OH type) (200) and washed with water 20. The combined filtrate and the washings were subjected to reduced pressure. After concentration, the solution was freeze-dried, and the syrup-like substance obtained was left at room temperature to obtain a colorless, hygroscopic, crystalline, FA-5589-free product 10.7 ⁇ 1 Infrared absorption spectrum of this substance Is shown in Fig. 1. .
  • Fig. 2 shows the infrared absorption spectrum of this substance.
  • the cells were cultured in a reciprocating shaking incubator at 28 ° C for 2 days in a closed state in a Nosakaguchi flask. 1.5 of this culture solution was soybean oil 3.053 ⁇ 4, raw soy flour 0.5, malt ⁇ ex 0.5, polyptone 0.5%, yeast extract 0.2%, KHs ⁇ 0.1
  • the solution 80 obtained in Reference Example 5 was treated and purified in the same manner as in Reference Example 2, and the syrup-like FA-5589-free product 3.15 obtained was dissolved in 150 m of water. After adding N-hydrochloric acid (15 ⁇ ⁇ ) with ice cooling and concentrating under reduced pressure, adding ethanol (150 mL) and allowing to stand, the resulting crystal was recrystallized from water and ethanol to give a colorless needle-like FA-5585 The hydrochloride 3.3 ⁇ was obtained. m.p.2 1 ° C (decomposition) Elemental analysis value C45.39; H7.73; N11.50; CI 1.77% Example 1.
  • the FA-585-9 educt 1.60 was dissolved in constant boiling hydrochloric acid 4 ⁇ ⁇ and left at 95 ° C for 16 hours.
  • the reaction solution was concentrated under reduced pressure, a small amount of water was added to the residue, and the mixture was concentrated again under reduced pressure.
  • a mixed solvent of methanol and getyl ether was added to the residue, and the precipitated crystals were collected by filtration.
  • Decetyl FA—5 859 dihydrochloride power obtained.
  • Absorption spectrum no characteristic absorption in the ultraviolet and visible regions from 210 nm to 700 nm.
  • the physiologically active substance F-585-9 and the physiologically active substance decetyl FA-5589 have an excellent inhibitory effect on fatty acid degradation, and the substance or a salt thereof is, for example, Max, Rat, It is used as a therapeutic agent for diabetes in mammals such as humans, and the substance is used as a biochemical reagent for elucidating the metabolism of fatty acids.

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Description

明 細 書
デァセチル； PA- 5 8 5 9およびその製造法 技術分野
本発明は、 優れた脂肪酸分解阻害作用を有する新規生理活性物質デァ セチル _P A— 5859またはその塩、 およびその製造法に関するものである。 背景技術
従来、 脂肪酸分解阻害作用を有する化合物としては、 4—ペンテノン 酸 f 4 - penteno ic aci d ) P. C. Hoi landら ， バイオケ ミカル' ジャーナノレ ( Bi ochemi ca 1 Journal ) 1 3 6卷 1 5 7頁及び 1 7 3頁， 1 9 7 3年， H. S. A. Sherrattら ， バイオケ ミカル ' ファーマコロジ 一 ( Biochemi ca 1 Pharmacology ) 2 5卷 7 4 3頁， 1 9 7 6年参照 ) 〕 ， ノ、イボグリシン（ Hypoglycin ) 〔 H. S. A."Sherratt ら， ノくィ ■オケ ミカノレ ' ファーマコロジ _ ( Bi ochemica 1 Pharmacology ) 2 5 卷 7 4 3頁， 1 9 7 6年参照〕 ， デカノ ィール ' カルニチン （decanoyl. 一 (十)一 earn itine )及び 2ーブロモノ ル ミ ト ィ —ノレ · コェンザィム A ( 2 - bromopalmi toyl CoA) 〔 I. B. _Fr i tzら， プ σ 一ディングス • ォブ 'ザ ' ナショナル ' アカデミー · ォブ ' サイエンス ( Proceedings of the National Academy of Sc 1 ences ^U. S. A. 5 4巻 1 2 2 6頁， 1 9 6 5年参照〕などが知られている力；、 毒性及び作用の 点から臨床的にはィ細されていない。 メチル— 2—テトラデシルグリシ デ— ト及び 2—テトラデシルグリシデ一 ト (methyl— 2— tetr adecyg- lycidate,2-tetradecylgl ycidate ) G. F. Tutwi ler ら， ディア ベ一テス（Diabetes ) 2 8卷 2 4 2頁， 1 9 7 9年及びメ ソー ド 'ィ ン · ェンザィモロジ一 ( Me thods i n Enzymology ) 7 2卷 5 3 3頁, 1 9 8 1年参照〕は脂肪酸分娜且害作用を有し、 且つ経口で血糖低下作 用を示すことが知られている。
発明の開示
本発明は、 新 ί¾ΐ理活性物質デァセチル FA— 5 8 5 9またはその塩、 およびその製造法に関する。 さらに詳しくは、 本発明は (1)式
CH3 NH2
CHo-N© -CH2-C-CH2-COO® C I ) で表わされる化合物またはその塩、 および (2)式
CH3 NH-C0CH3
CH3 - N© -CH2-C-CH2-COO 、€Θ
H CD CH L3, で表わされる化台物 またはその塩 を加水分解反応に付 Tことを特徴 とする式
CH3 NH„
CHG -ΝΦ -CH2-C-CH5,-COOE C I ) で表わされる化合物またはその塩の製造法に関する。
本明細書においては、 化合物 (I)を 「生理活性物質デァセチル: FA— 5 8 5 9」 と、 あるいは単に Γデァセ ル FA— 5 8 5 9」 と称すること もある。 また、 化合物 (Π)を 「生理活性物質 FA— 5 8 5 9」 と、 あるい は単に 「F A— 5 8 5 9」 と称することもある。
近年、 次第に増加を線ナる糖尿病及びその合併症に対して、 新しい作 用機作に基き、 且つより有効な糖尿病治療薬の開発が期待されている。
すなわち、 糖尿病においては、 イ ンスリン欠乏のため脂肪組織での脂肪 酸の遊離が促進されるので、 肝臓への脂肪酸供袷が増加し、 同時に脂肪 酸の分解も亢進するためケトン体の生成も上昇し、 いわゆるケトン血症 を呈する。 また肝臓外組織ではグルコースの利用が悪く、 生成したケト ン体をエネルギー源としている。 したがって脂肪酸の分解を阻止すれば、
O PI 1 ケト ン体の減少にともないダルコ—スの利用が亢進され、 結果的に血糖 値の低下をきたすことが期待され、 脂肪酸分解の特異的阻害剤は新しい 機作に基く新規糖尿病治療薬として利用しうるものと考えられる。 この ような事情に鑑み、 本発明者らは新規糖尿病治療薬の開発を目的として、 種々検索したところ、 ェメ リセラ属またはァスペルギルス属に属する微 - . 生物の培養物中に脂肪酸分解を阻害する物質を見い出し、 これを単離し たところ、該物質は新規物質であること、 また優れた脂肪酸分解阻 用を有 することを見い出し、 これを生理活性物質 F A— 5 8 5 9と称すること とした。
本発明者らは、 さらに、 該物質の誘導体を得る目^種々研究したと ころ、 該生理活性物質 F A— 5 8 5 9を加水分解して得られたデァセチ ル体は新規物質であり、 しかも顕著な脂肪酸分解阻害作用を有すること を見い出し、 これを生理活性物質デァセチル F A— 5 8 5 9と称するこ ' ととした。 これらに基づいてさらに研究した結果、 本発明を完成した。 -· すなわち本発明は、 （1)化合物 (I)またはその塩および )化合物 (II)または その塩を加水分解反応に付すことを特徴とする化合物 Π)またはその塩の 製造法である。
本発明の加水分解反応は、アミド結合を分解するすべての方法を適用す ることができる。 たとえば、 酸，塩基， ィオン交換樹脂などを用いること により行なうことができる。 該酸としては、 たとえば硫酸，塩酸などの 無機酸が挙げられ、 該塩基としては、 たとえば水酸化カリ ウム，水酸ィ匕 ナト リウム ，水酸化バリ ゥムなどが挙げられ、 該イオン交換樹脂として は、 たとえばダウエックスー 5 0 (ダウケミカル社製，米国） ， アンバ 一ライ ト I R— 1 2 0 ( ローム ' アン ド . ハース ' コンパニー社製，米 国） ，ダイヤイオン一 S K I A , S K I B (三 匕成工業株式会社製， W
―— 4 "― * 日本）などが挙げられる。
上記の酸を用いる場合には、 水溶液中で該反応を行なうのが好ましく、 . また含水溶媒としてたとえば水とメタノール ， ェタノ一ル ， ブタノール 等との混合溶媒中で行なうのが好ましい。 反応は、 通常約 6 0〜 2 0 0 °C、 さらに好ましくは約 9 0〜： 1 2 0 °Cで、 約 3 0分〜 3 0時間、 さら - - に好ましくは約 3 〜 1 6時間で行なわれる。
上記の塩基を用いる場合には、 7K溶液中で行なうのが好ましく、 さら に含水皿、 例えば水とメタノール， エタノール ， ブタノ一ル等との混 合溶媒中で行なうのが好ましい。 該反応は、 通常約 6 0 〜 2 0 0 °C、 さ らに好ましくは約 9 (！〜 1 2 0 °Cで、 約 3 0分〜 3 0時間、 さらに好ま しくは約 3 〜 1 6時間で行なわれる。
上記のィオン交換樹脂を用いる場合には、 原料化合物の水溶液に該ィ . ォン交換樹脂を懸濁させた状態で加温することにより行なわれる。 該反 応は通常約 6 0 〜 2 0 0 °C、 さらに好ましくは約 9 0〜： L 2 0 °Cで約 3 -· . 0分〜 3 0時間、 さらに好ましくは約 3 〜 1 6時間で行なわれる。
反応液からデァセチル F A— 5 8 5 9またはその塩を'得るには、 通常 用いられる手段、 たとえばィオン交換樹脂，吸着，濃縮，結晶化などが 用いられる。 反応液から目的物を採取する場合には、 遊離形あるいは塩 のレ、ずれでも単離できるが、 塩の形で分離採取する方が容易である。
反応終了液から目的物質を得る具体例としては、 たとえば強酸性ィォ ン交換樹脂等を利用し、 目的物質を吸着させ、 例えば塩酸等を利用して 溶出を行いニンヒ ドリン反応で Hi生を示す区分を集めること (二よつて目 的物質を得ることが出来る力'、 例えば塩酸による加水分解反応液からは 更に簡単に反応液を減圧濃縮し過剰の塩酸を留去した後、 メタノ ール ， エタノール ， ジェテルエ-テル等の溶媒を加え結晶として本物質の塩酸 塩を得ることが出来る。
このようにして、 遊離または塩の形のデァセチル FA— 5 8 5 9が得 ら 4 る。
デァセチル F A— 5 8 5 9の塩を遊離形に変換することもできる。 こ の方法は、 たとえばイ オン交換樹脂等を利用して、 該塩を形成している - 酸または塩基をィオン交換樹脂に吸着させればよい。
デァセチル FA— 5 8 5 9·遊離形は、 塩を形成し得るので、 常套手段 により薬理的に許容し得る塩とすることができる。 該塩を形成させる酸 としては、 たとえば塩酸，硫酸，硝酸，蓚酸，酢酸， コハク酸， クェン 酸， フマール酸などが挙げられる。
次に生理活性物質デァセチル _PA- 5 8 5 9の脂肪酸分解阻害能を、 ラッ ト肝臓ホモジネ—卜のミ トコンドリァ画分を用い、 日本生化学会編 - 「生化学実験講座」 第 9卷、 脂質の代謝、 7 5頁（ 1 9 7 5年東京化学 同人）記載の方法、 及び I. B. Fritzら、 プロシ—ディ ングス ' ォブ ' - ザ ' ナショナル ' アカデミー 'ォブ ' サイ エンス ( Proceedings of the National Academy of Sciences, U.S.A. ) 5 4卷 1 2 2 6 頁， 1 9 6 5年に記載の方法に準じて測定した。 すなわち、 S D系ラッ ト （ 7週令，雄）を 2 4時間絶食後、 放血によって屠殺し、 直ちに肝臓 を取り出し 1 0倍量（WZV)の 5mMト リス一塩酸緩衝液（ ρΗ 7· 5 )を含 む 0.2 5 Μ蔗糖溶液を加え、 テフロン棒付ホモゲナイザーでホモジナイ ズした。 6 0 0 x ^ , 2 0分間の遠心上澄みを 3 0，0 0 0 x ?， 3 0分 間遠心し、 生じたペレッ トを上記の 糖溶液に、 肝臓湿重量 0.2 0.5 溶液となる濃度に懸濁し、 その 0.5： ^を酵素液として反応に用いた。
リ ン酸カ リ ゥム緩衝液 ( ρΗ 7.5 ) 3 0 mole, KC£ 3 0 0 imole,
MgC£2 3 imo 1 e , 蔗糖 1 2 0 ί mo 1 e , L—リ ンゴ酸 0.0 3 imole,
OMPI
/W WIPO ^ A T P 3 ί mo 1 e , L—カノレニチン 3 t mol e , コェンザィム A ( Co enzyme A ) 0.6 μναο 1 e , NAD 7.5 imole, 1 -14C -ノ レミチン酸（ 0. 2μ Ι, 牛血清アルブミ ンをモル比 1 ： 5になるように添加した溶液
ρΗ 7.5 ) 0.6 imole, 水又は阻害剤を含有する水溶液 0. In ^及び酵素 溶液 0.5π ^力 らなる反応混液 2.5m をノヽィ ア ミ ンノ、ィ ド ロォキサイ ド 10
- 一 X〔パッカード社製（オランダ） 〕を浸した^紙をつるした密閉試験
管中に入れ、 3 7-'C、 2 0分間好気的に振盪反応した。 7 0 %過塩素酸
0.4¾を添加して反応を止めた後 した 14 CO 2を測定することによ つて活性の測定をした。 該化台物デァセチル FA— 5859の阻害活性す なわち阻害剤無添加の場合に比較して分解活性を 5 0 阻害する濃度は
4〜 8 ^/^であった。
デァセチル FA— 5 8 5 9の急性毒性 LD50値は、 マウス静脈内注射 で 4 0 O^/K^ 以上であった。 .
本発明のデァセチル FA— 5 8 5 9またはその塩は、 たとえば脂肪酸- '. 分解阻害剤として有用である。 デァセチル FA— 5 8 5 9またはその塩
を脂肪酸分解阻害剤として用いるには、 たとえば哺乳動物（例、 マウス， ラッ ト ，人など）の糖尿病の治療を目的として、 デァセチル
5 9 として約 0.2ないし 2 0 0 /^を 1曰投与量として投与する。 ま た、 デァセチル — 5 8 5 9またはその塩を投与するにあたっては、 常套手段によってたとえば錠剤，顆粒剤， カプセル剤，液剤などの剤型 にして経口的に、 またたとえば注射剤として非柽ロ的に投与することが できる。
また、 本発明のデァセチル FA— 5 8 5 9は、 脂肪酸の代謝を解明す る上での生化学的試薬として使用することができる。 たとえば、 デァセ テル F A— 5 8 5 9を反応液中に添加することによりカルニチン欠乏状
O PI WIPO 態を容易に作りうるので、 脂肪酸酸化におけるカルニチンの役割をより —層明確にすることができる。 また、 脂肪酸酸化におけるミ トコン ドリ ァとペルオキ^ゾームとの生理的役割はほとんど明らかにされていない ので、 ミ ト コ ン ドリアへの脂肪酸の取り込みをデァセチル 859 を添加して阻害することによって、 ペルォキ i /ゾームの役割およびペル ォキ ゾームと ミ トコン ドリアでの酸化過程とのかかわりを明らかにす ることが可能である。 これらの場合、 脂肪酸酸化反応で通常用いられる 反応系を用いて、 細胞内穎粒成分の濃度によっても異なるが、 一般的に はデァセテル F A— 5 8 5 9約 0.1
Figure imgf000009_0001
〜 1 0 00 /τπ£濃度が有利 に用いられる。
本発明のデァセチル F Α— 5 8 5 9は、 さらに有利な脂肪酸分解阻害 作用を示す化合物の合成中間体としても有用な物質である。
本発明の方法において原料化合物として用いられる F A— 5 8 5 9 ( 遊離形）は、 次の理化学的性質を有する。 - (aj 元素分析（％)： (五酸化リン上で、 6 0°C ， 1 0時間減圧乾燥した もの）
C 5 1. 1 6 ± 2. 0
H 9. 0 6 ± 1. 0
N 1 3. 2 6 ± 1. 0
(b) 分子量： 2.4〜 3.3 X 1 02 ( ¾0) ( V P 0法による）
(cj 比旋光度： 〔α〕 — 1 7. 4。± 3。（ c 二 1 , Η20 )
(d) 紫外線吸収スぺク トル ：特異吸収を示さない。
(e) 赤外線吸収スペク トル ： 〔臭化カリ ウム錠による吸収スペク ト ルの 主な吸収（波数） 〕
1660， 1590 , 1485 , 1400 , 1325, 1292 , 970, 945 (cnT1 )
(f) 溶剤に対する溶解性：
不溶：石油ェ一テル， へキサン ， ジェテルエ一テル ， ベンゼン ，酢酸 ェチノレ ， クロロホノレム
難溶： ピリ ジン ， アセト ン ， ジメチルスルフォキシ ド ， ジメチルホル ムアミ ド
可溶： エタノ ール ， メタノール
易溶 -水
(g) 呈色反応：
陽性： ョ—ド反応
陰性： グレイグ ' リ ーバック反応， ニンヒ ドリ ン £¾，坂口反応，モ 一リ ツシュ試薬， エールリ ツヒ試薬。
( ) 塩基性，酸性，中性の区別：両性物質
(i) 物質の色：無色。
FA— 5859¾、 ェメリセラ属またはァスペルギルス属に属する生理 活性物質 FA- 5 8 5 9生産菌を培地に培養し、 培養物中に生理活性物 質 F A— 5 8 5 9を生成蓄積せしめ、 これを採取することにより製造す ることができる。
該方法で用いることができる微生物としては、 ェメ リセラ（Emeri- cella)属またはァスペルギルス （Aspergi Uus) 属に属し生理活性 物質 FA— 5 8 5 9を^する菌であればいずれでもよい。 その例とし ては、 たとえばェメ リ セラ · 力 ド リ リネアター （ E. quadri 1 ineata), ェメ リ セラ · ニー ドランス - ノく一ル ' ァク リスタ一タ一 ( _E. nidulans var. acr i stata )， ェメ リセラ · クライス ト ミヌター ( E. cleistom- inuta、 ， ェメ リ セラ .ニー ドランス · バール -二― ドランス f £；. nid- ulans var, nidulans ) ， ェメ リ セラ ' 二一 ドラ ンス - バーノレ ' ラータ― ( E. nidulans var. lata ) ，ェメ リ セラ · ノレグロ一サー (^E. rugulosa) , ェメ リ セラ - ニー ドランス （E. nidulans ) ， ェメ リセラ -サブラーター ( E. sub lata ) , ァスペルギルス - sp. j; 3704の属する種 ( species) などが挙げられ、 さらに具体的には、 ェメ リ セラ ' 力 ドリ リ ネアター I FO 5859， ェメ リ セラ ' 力 ドリ リ ネアター IFO 3091 1 ，ェメリ セラ ' 力 ドリ リネアター I FO 3 0 9 1 2 ， ェメ リ セラ ' 力 ドリ リネ ァター I FO 3 0 8 5 0 ， ェメ リ セラ ' 力 ドリ リ ネアター I FO 3 0 8 5 1 ， ェメ リ セラ ' ニー ドランス - パール ' ァク リ スタータ I FO 3 0 0 6 3 ， ェメ リ セラ ' ニー ドランス . ノくール ' ァク リ スタ一タ一 I FO 3 0844, ェメ リ セラ ' クライ ス ト ミヌター I FO 3 0 8 3 9, ェメ リ セラ . ニー ドランス . バール . 二— ドランス I FO 3 0 8 7 2, ェメ リ セラ . ニー ドランス ' バール . ラータ一 I FO 3 0 8 4 7 , ェ メ リ セラ - ルグローサ一 I FO 8 6 2 6 ， ェメ リ セラ ' ルグローサ一- I F 0 8 6 2 9 ， ェメ リ セラ . ルグロ一サー I F 0 3 0 9 1 3 ， ェ メ リ セラ . ノレグローサー I FO 3 0 8 5 2 ， ェメ リ セラ ' ノレグローサ - I F 0 3 0 8 5 3 , ェメ リ セラ ' 二一 ドラ ンス I FO 5 7 1 9 , ェメ リ セラ . ニー ドランス I FO 7 0 7 7 ， ェメ リ セラ ' 二一 ドラン ス I FO 3 0 0 6 2 ， ェメ リ セラ ' サブラ一ター I F〇 3 0 9 0 6， ァスペルギルス · sp. 3 7 0 4などが挙げられる。
上記 I FO 5 8 5 9 , I FO 3 0 0 6 3 , I F 0 8 6 2 6 , 1 F 0 8 6 2 9 , I F 0 5 7 1 9 , I F 0 7 0 7 7および Ι ί，〇 3 0 0 6 2株は、 財団法人発酵研究所（ I FO ， 5 3 2日本国大阪府大 阪市淀川区十三本町 2丁目 1 7番 8 5号）に寄託され、 該発酵研究所発 行のリス ト ' ォブ'カルチャーズ第 6版 1 9 7 8年（ Institute Fermentation, Osaka, List of Cultures, 1978， Sixth Edition ) に掲載されている。
また、 Ιί， 0 3 0 9 1 1 , I FO 3 0 9 1 2 , I FO 3 0 8 5
0 , I F O 3 0 8 5 1 , I FO 3 0 84 4 , I FO 3 0 8 39 ,
I FO 3 0 8 72 , I FO 3 08 4 7 , I FO 3 0 9 1 3 , I F
O 3 0 8 5 2 , I FO 3 0 8 5 3および I FO 3 0 9 0 6株は、 財団法人発酵研究所（ I FO )に寄託され、 該発酵研究所発行の !/サ- チ ' コミュニケ—シヨンズ .1 0 , 1 9 8 1年 ( Insti tute For .
Fermentation, Osaka, Research Communications, ΜΛ 0 ， 1 9 8 1 )に掲載されている。
上記微生物が発酵研究所に寄託された日を以下に示す。 微 生 物 託 曰
F 0 5 8 5 9 昭和 2 9年（西暦 1954年） 9月 14日
FO 3 0 9 1 1 昭和 5 5年（西暦 1980年 ) 1月 10日
FO 3 0 9 1 2 昭和 5 5年（西暦 1980年） 1月 1 0曰
FO 3 0 8 5 0 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日
FO 3 0 8 5 1 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日
FO 3 0 0 6 3 昭和 5 0年 (西暦 1975年） 8月 8日
FO 3 0 8 4 4 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日
FO 3 0 8 3 9 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日
FO 3 0 8 7 2 昭和 5 4年（西暦 1979年） 1月 9曰
FO 3 0 8 4 7 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日
FO 8 6 2 6 昭和 4 1年（西暦 1966年） 8月 29日
FO 8 6 2 9 昭和 4 1年（西暦 1966年） 8月 29日
OMPI
、/ 、 画 FO 3 0 9 1 3 昭和 5 5年（西暦 1980年：) 1月 1 0日
F O 3 0 8 5 2 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 18日
FO 3 0 8 5 3 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日
FO 5 7 1 9 昭和 2 8年（西暦 1953年） 4月 1 8日
FO 7 0 7 7 昭和 3 7年（西暦 1962年） 2月 3日
F 0 3 0 0 6 2 昭和 5 0年（西暦 1975年 ) 8月 8日
F O 3 0 9 0 6 昭和 5 5年（西暦 1980年） 1月 1 0曰 上記微生物において、 ェメ リ セラ ' 力 ドリ リ ネアターの菌学的性状は 日本菌学会会報第 2 0卷第 4号 4 8 1頁（ 1 9 7 9年） ， ト ランスァク シヨンズ · ォブ - ザ ' ミコロジカル ' ソサエティ ' ォブ ' ジャパン
( Transactions of The Mvcolo -i ca 1 Society o f Japan ) vol .
0 , ^ , 4 8 1( 1979 )に、 ェメ リ セラ ' ニー ドランス ' バール ' ァク リスタ—ターの菌学的性状は菌覃研究所研究報告第 1 2号 1 7 1頁 (昭和 5 0年西暦 1 9 7 5年） ， レポーッ ' ォブ 'ザ ' トツト リ · ミコ ' ロジカル . イ ンスティテュ— 卜 ( Reports of The To ttori Myco 1- ogi acl Institute) 1 2 , 1 7 1 ( 1 9 7 5 )に、 ェメ リ セラ ' ク ライス ト ミヌタ—の菌学的性状は ト ランスアクションズ . ォブ · ブリ テ イ ツシュ . ミ コロジカノレ . ソサィェティ ( 1 31153(：^ 0115 of The
Bri tish Myco logical Society) vol. 52， Α'ό.2 , 331 ( 1969) に、 ェメ リ セラ ' ニー ドランス ' バール ' ニー ドランスの菌学的性状は コー リヤン · ジャ一ナル ' ォブ ' ミ クロビォ口ジィ (Korean Journal of Microbiology ) vol. 1 8， M.2 , 1 0 4 ( 1 9 8 0 )に、 ェメ リ セラ .二一ドランス ' バール . ラ一タ—の菌学的性状は、 K. B.
Raper, B. I. Fennell著 ザ · ジ一ナス ' ォブ ' ァスペルギノレス
REA T O PI ( The Genus of Aspergillus ) 5 0 0頁, he Williams &Wii kins C om an y, Baltimore, l 9 6 5 (二、 ェメ リセラ 'ノレグローサ 一の菌学的性伏は日本菌学会会報第 2 0巻 4号 4 8 1頁（ 1 9 7 9 ) , トランスアクションズ ·ォブ 'ザ · ミコロジカル · ソサエティ · ォブ ' ジヤノ ン ( Transactions of The Myco logi cal Society of
Japan ) vol. 2 0 , i A , 4 8 1 ( 1 9 7 9 )に、 ェメ リセラ ，ニード ランスの菌学的性伏は K. B. Raper, B. I. Fennell ¾： ザ 'ジ—ナス - ァスペルギルス ( The Genus Aspergi 1 lus ) 9 5 ^, The Williams & Wi lkins Company, Baltimore, 1 9 6 5に、 ェメ リ セラ 'サブラ―タ—の菌学的性伏は日本菌学会会報第 2 0巻第 4号， 4 8 1頁（ 1 9 7 9年） ， ト ランスアクションズ ' ォブ ·ザ ' ミコロジカ ル . ソサイエティ - ォブ · ジャパン ( Transactions of The Myco- 1 ogi ca 1 Society of Japan ) volume 20 , a 4 , 4 8 1( 1979 ) にそれぞれ記載の菌学的性状と同一である。
ァスペルギルス · sp. 3 7 0 4株は日本国兵庫県川西市大和町の畑 - 土壌より分離したかびで、 以下の菌学的性質を有する。
生 育：
1) ッアベック寒天培地
生育は遅く、 2 4°C ， 2週間後のコ口二—の大きさは、 1.4〜 2. 0 であった。 中央がややもり上がったかたい菌叢よりなり、 周辺 は不規則で、 寒天下に深くもぐっている。 表面での生育は気菌糸が 網状の拡りを呈する。 黄色味を帯びた淡青緑色を呈し、 古くなるに つれて淡褐色を帯びる。
分生子頭の数は少ない。
裏面の色は淡褐色ないし褐色を呈する。 古くなると淡褐色可溶性色素を生成する。
2) 麦芽汁寒天培地
生育は旺盛で、 2 4°C， 2週間後のコロニーの大きさは 4.0〜 5.
0 cmであった。 平坦で、 周辺はうすく、 やや房状に縁取られている。
気菌糸はまばらである。
分生子頭の形成は非常によく、 灰色を帯びた黄緑色を呈する。
裏面は淡褐色ないし黄褐色を呈する。
可溶性色素の形成なし。
形 態： . 分生子頭：大きさは一定しないが、 長さ 7 5〜 1 0 0卢 ，直径 2 0〜
4 0 i ,放射伏であるがしだいに粗な円筒形を呈する。
分生子柄：長さ 4 0〜 6 0 ,直径 2.0〜 4 5 ,壁面は平滑，無色， やや湾曲する。
頂囊： フラスコ形で頂端は平坦，直径 4.5〜 7. 5
メ ト レ ：円筒形， 4.5〜 6.2 2.4〜 3· 4
フィアラィ ド ：棍棒形， 45〜 6.5 X 2.0〜 3.0
分生子：球形〜だ円形，暗緑色，直径 2.5〜 3.5
以上の譜 質を、 宇田川俊一ほか著「菌類図鑑」 （講談社， 1978年）
1 0 0 6頁記載のァスペルギルス属かびの諸性質と照合すると、 本菌株 力 Sァスぺノレギノレス属（ Aspergi Uus ) に属するこ とは明らかである。
上記ァスペルギルス · sp. ;½：3 7 0 4株は、 財団法人発酵研究所に昭 和 5 6年（西暦 1 9 8 1年） 1 1月 6日から受託番号 I F◦ 3 1 1 71
として寄託されており、 また、 本微生物は、 日本国通商産業省工業技術 院微生物工業技術研究所（ F R I , 3 0 5日本国茨城県筑波郡谷田部町 東 1丁目 1番 3号）に昭和 5 6年（西暦 1 9 8 1年） 1 1月 1 8日から 受託番号 F E RM P— 6 2 2 4として寄託されている。
ェメ リ セラ属は分類学上ァスペルギルス属のうち完全世代が明らかに なった株をまとめたものであるので、 菌株の有性世代や無生世代とは無 関係に F A— 5 8 5 9を生成する能力を有する菌株であれば、 用いるこ とができることは言うまでもない。
ェメ リセラ属菌およびァスペルギルス属菌は、 微生物の一般的性質と して自然的にまたは変異 ¾こよって変異を起し得る。 たとえば X線，ガ ンマ一線，紫外線等の放射線の照射、 更には単胞子分離、 種々の薬剤に よる処理または薬剤を含有する培¾±での培養、 その他の手段で変異さ せて得られる多くの変異株、 あるいは自然的に得られた突然変異株等で あっても、 ί1 A— 5 8 5 9を生産する性質を有するものはすべて F A— 5 8 5 9の製造方法に利用し得る。
F A- 5 8 5 9の製造方法の培養に用いられる培地は用いられる菌株 が利用し得る栄養源を含むものなら、 液状でも固状でもよいが、 大量を . 処理するときには液体培地を用いるのがより適当である。 培地には同ィ匕 し得る炭素源，消化し得る窒素源，無機物質，微量栄養素が適宜配合さ れる。 炭素源としては、 たとえばブドク糖，乳糖， ^ョ糖，麦芽糖，デ キス ト リ ン ，でん粉， グリ セリ ン ， マンニト ール ， ソルビ ト ール ，油脂 類（例、 大豆油， オリ一ブ油， ヌカ油， ごま油， ラード油， チキン油な ど）、 各種脂肪酸類（例、 ラウリン酸， ミ リスチン酸，パルミチン酸， ステアリン酸， ォレイ ン酸など）、 窒素源としては、 たとえば肉エキス ，酵母エキス ， 酵母，大豆粉，コーン ' スチープ ' リ カー ， ぺブト ン ，綿実粉，廃糖蜜，尿素，アンモニゥム塩類（例、 硫酸アンモニゥム ，塩化アンモニクム ，硝酸アンモニゥム ，酢酸アンモニゥムなど）その fc^用いられる。 さらにナト リ ウム ， カ リ ウム ， カルシウム ， マグネシ ゥムなどを含む塩類，鉄，マンガン，亜鉛， コバルト ，ニッケルなどの 金属塩類， リン酸，ホク酸などの塩類や酢酸， プ σピオン酸などの有機 酸の塩類が適宜用いられる。 その他、 アミノ酸（例、 グルタ ミン酸， ァ スパラギン酸， ァラニン ， リジン ， ノくリ ン ， メチォニン，プロリ ン等）， ペプチド（例、 ジペプチド ， ト リペプチド等） ， ビタ ミ ン類（例、 Βι , B2 ,ニコチン酸， B 12 , C等）， 核酸類（例、 プリ ン ， ピ リ ミジンおよ びその誘導体）等を含有させてもよい。 もちろん培地の pHを調節する 目的で無機または有機の酸，アル力リ類，緩衝剤等を加え、 あるいは消 泡の目的で油脂類，表面活性剤等の適量が添加される。
培養の手段は静置培養でも、 振盪培養あるいは通気攪拌培養法等の手 段を用いてもよい。 大量の処理には、 いわゆる深部通気攪拌培養による のが望ましいことはいうまでもない。 培養の条件は培地の状態，組成， 菌株の種類，培養の手段等によって一定しないのは当然であるが、 それ らは通常約 1 5 °C：〜 3 7°Cの温度で、 初発 pfi約 3〜 8付近に選択する . のがよい。 とりわけ、 培養中期の温度は約 2 3 °C〜 3 2°C， また初発
pHは約 4〜 6の条件が望ましい。 培養期間も前記の諸条件により一定 しないが、 該生理活性物質濃度が最大となるまで培養するのがよい。 こ れに要する時間は液体培地を用いる振盪培養または通気攪拌培養の場合 は通常約 1〜 8日間程度である。
生成した F A— 5 8 5 9は主として培養^液中に存在するので、 培養 物を遠心分離あるいは 過によって上澄液と菌体とに分離し、 その上清 液から精製するのが有利である。 しかし培養物から、 直接に精製するこ とも可能である。
さらにこの F A— 5 8 5 9を採取するには微生物が生産する代謝産物 を採取するのに通常用いられる手段を適宜利用することが出来る。 たと
ΟΜΡΙ
> WIPO ATlO§ えば遠心分離によって菌体を除去したのち、 その^液から一般に有効物
質を分離，採取，精製する方法を用いる。
すなわち適当な溶媒に対する溶解性および溶解度の差、 溶液からの析
出法および析出速度の差、 種々の吸着親和力の差、 イオン交換体による
ィオン交換ク σマ ト グラフィ一 ， あるいは減圧濃縮，凍結乾燥，結晶化
，再結晶，乾燥などの手段が単独あるいは任意の順序に組合わせて、 ま
たは反復して利用される。
その一例を示すと次のとおりである。 すなわち、 培養終 Γ後培養液を
^過し得られる 液を強酸性陽イオン交換樹脂たとえばアンパ一ライ ト
I R- 1 2 0 ( Η+ ) 〔 ローム ' アン ド 'ノヽ一ス社（米国）製〕のカラ
ムに通過させると、 F A— 5 8 5 9は樹脂に吸着される。 樹脂からの溶
出はアンモニア水， アル力リ水，あるいは鉱酸または無機塩（たとえば
食塩，塩化アンモニゥム ，硫酸ソーダ，硫酸アンモニゥム） の水溶液を
使用することが出来る。 ここに得られた活性物質の溶出液の脱塩にはた― とえば活性炭などの吸着剤を用い活性物質をこれに吸着せしめたのち親— 水性有機溶媒系を用いて溶出させる。 親水性有機溶媒系として用いられ
るものには、 ァセ ト ン ， メチルエヂルケ ト ン ， メチルイ ソブチルケ ト ン
などの低級ケ ト ン類， メタノール ， エタノール ， ィ ソプロパノ一ル ， ブ
σパノール ， ブタノール ， ィソブタノール等の低級アルコール類の単独
または混合溶媒と水との混合溶液があげられる。 また水溶性高分子物質
が混在している場合、 これを除去するには通常用いられる分子ふるいの方
法を利用するのがよい。 すなわち FA— 5 8 5 9が低分子であることから、 たとえばセフアデックス G— 1 0 Cファーマシア · フアイ ン ' ケ ミカル （ ス
エーデン）製〕などを用いて水溶性高分子物質を吸着させ除去すること
ができる。 このようにして得られた粗物質をさらに精製するには本品が __Ο ΡΙ _ 、 pd" - 7 - 両性物質であることを利用して、 緩衝化したカチオン交換樹脂を用いる カラムクロマトグラフィーが有利に利用出来る。 すなわち、 担体として は強酸性カチオン交換樹脂たとえばアンバーライ ト I R— 1 2 0 , ダウ エックス 5 0 (X2)〔ダウ ' ケ ミカル社（米国）製〕 ， ダイヤイオン SKi A C三菱化成（ 日本）製 〕等を適当な pHたとえば pH4の緩衝 液を用いて緩衝化したものを用いる。 粗物質の溶液を通過せしめて樹脂 に吸着後、 溶出には吸着時の PH値より高い PH値の緩衝液を用いて溶 出する。 再度この有効区分を強酸性カチオン交換樹脂を用いて吸着'脱 離を行って、 脱塩後、 さらに混在する不純物を除く目的で、 強塩基性ァ 二オン交換樹脂たとえば、 ダクエックス 1 (OfT) 〔ダウ - ケ ミカル社 (米国）製〕のカラムを通過せしめて通過液を減圧濃縮後凍結！^を行 い、 得られたシロップ状物質から FA- 5 8 5 9の吸湿性結晶が得られ 。
FA- 5 8 5 9は、 常套手段により薬理学的に許容し得る塩とするこ . ともできる。 該塩を形成させる場合の酸としては、 たとえば塩酸，硫酸 ,硝酸，蓚酸，酢酸， コハク酸， クェン酸， フマール酸などが挙げられ る。
後述の参考例 2で得られた FA— 5 8 5 9 (遊離体）の物理化学的性 質を以下に記載する。
(a) 元素分析（％ ) (五酸化リン上で 6 0°C， 1 0時間減圧乾燥したも の） ：
C 5 2. 4 8 %
H 9. 0 4 %
N 1 3. 2 5 %
(b) 分子量 2.4〜3.3 X 1 02(H2O) ( VPO法による） (c) 推定分子式： C9H18N203
(d) 比旋光度： 〔な〕¾一 1 7. 4° ( c = l , Η20)
(e) 紫外線吸収スぺク トル ： 2 1 0 nm 1上に特異吸収を示さない。
(f) 赤外線吸収スペク ト ル ：主な吸収（波数）は次のとおりである。
3420( s) , 3260( sh) , 3080(m) , 1660( s) , 1590(s) ,
1485(s ) , 1400(s) , 1325(m) , 1295(m) , 1145(w) ,
1105(w) , 1060(w) , 970(m) , 945(m) (cm-1)
w :弱, m :中 , s :強， sh :肩
第 1図（臭化力リゥム錠）参照。
(g) 溶剤に対する溶解 ：
不溶：石'油ェ一テル，へキサン ， ジェテルエ一テル， ベンゼン ,詐酸
ェチノレ ， クロロホノレム
難溶： ピリ ジン ， アセト ン ， ジメチルスルホキシ ド ， ジメチルホルム
ア ミ ド
可溶：エタノール ， メタノール 易溶：水
(hj 呈色反応：
陽性：ョ—ド反応
陰性： グレイ グ ' リ一バック反応， ニンヒ ド リ ン試薬，坂口反応， モ
—リツシュ試薬，エールリツヒ試薬
(り 塩基性，酸性，中性の区別：両性物質
(j) 物質の色：無色
(k) 結晶の外観：無色吸湿性結晶伏物質
(1) 核磁気共鳴スペク トル ： （CD3OD 10 θΜΗζ) 1.98 ( 3H， s ), 2.42(2H, d) , 3.19(9H, s) , 3.56C 2H, d) , 4. 7 ( 1 H , m )
O PI
、/ 一προ s ：一重線， d ：二重線， m ：多重線
安定性： pH 3〜pH 9の水溶液は 1 0 0°C 1 0分加熱で安定。 後述の参考例 3で得られた； FA— 5 8 5 9塩酸塩の理化学的性質を以 下に記す。
(a) 元素分析（％) ： (五酸化リン上で 6 0°C , 1 0時間減圧乾燥した もの）
C ： 4 5. 2 9 %
H ： 8. 1 8 %
N ： 1 1. 2 4 %
C1 ： 1 4. 3 6 %
(b) 推定分子式： C9H18N203 'HC1
(c) 融点： 2 1 5°C (分解）
(d) 比旋光度： 〔a〕 2 D 3— 2 0. 5° ( c = 1 , H20)
(e) 紫外線吸収スぺク ト ル ： 2 1 0 nm以上に特異な吸収を示さない。 . (f) 赤外線吸収スペク トル ：主な吸収（波数）は次のとおりである。 ―
3400(m) , 3250( s) , 3190( sh) , 3045( s) , 2600〜
2400(w) , 1730C s) , 1660( s) , 1530(m) , 148θ( s ) , 1420(m) , 1405( s) , 1375(m) , 1290(m) , 1205(m) , 1160( s) , 1140( sh) , 1135( s ) , 1040( ) , 960 (w) ,
935(m) , 915(m) , 865(w) , 800(m) , 665(m) ,
625(w) , 600( s ) , 560(w) ( cm~l )
( w :弱， m :中， s :強）
第 2図（臭化力リゥム錠）参照。
(g) 溶剤に対する溶解性：
不溶： 5由ェ一テノレ , へキサン ， ジェチルエーテノレ ェチル , ク口ロホゾレム
難溶： ピ リジン ， アセト ン ， ジメチルスルフォキシ ド ， ジメチルホル
ムアミ ド
可溶：エタノール，メタノール
易溶：水
(h) 呈色反応：
陽性： ョ—ド反応
陰性： グレイグ · リ一バック反応，ニンヒ ドリン試薬，坂口反応， モ
―リッシュ ¾ , エールリッヒ試薬
(り 物質の色： 無色
(j) 結晶の外観：無色針状結晶
(k) 安定性： pH 3〜 9の水溶液は、 1 0 0°C , 1 0分加熱で安定。
F A- 5 8 5 9の分子式および核磁気共鳴スぺクトルでみとめられる δ 3.1 9 ppm ( 9 H , s )のシグナルからその分子中にトリメチルァ . ンモニゥム基の存在が推定され、 また δ 1.9 8 ppm( 3 H， s )にァセ チルのメチルプロ トン（ CH。CO—） 2. 4 2 ppm( 2 H , d ) , 3. 5 6 ppm( 2 H , d )に 2組のメチレンプ σ ト ン（一 CH2— χ 2 ) , δ 4.7 ppm( 1 H， m) にメチレンプロ ト ン（一 il— ) の存在がみとめられる。 またこの 2,祖のメ チレンプロ ト ンは δ 4.7 ppm のメチンプロ ト ンとそ れぞれカツプリングしていることがデカツプリングにより明らかにされ -CH2-CH-CH2-の部分式の存在が推定される。 その分子式から力ル ボン酸の存在が推定され、 これは遊離体で 1 5 9 Ο στΓ1 に、 塩酸塩で
1 7 3 0 ""1に C= 0の吸収がみとめられることからも明らかである。
したがって、 FA— 5 8 5 9の平面構造式として
O PI CH3
CO
CH3 NH
CH3-N@-CH2-CH-CH2-COOe
CH3 力；推定されるとともに、 FA— 5 8 5 9は新規化合物であると判断され 次に生理活性物質 FA— 5 8 5 9の脂肪酸分解阻害能の測定を、 ラッ ト肝臓ホモジネートを用い、 曰本生化学会編 「生化学実験講座」 第 9卷 脂質の代謝， 7 5頁（ 1 9 7 5年，東京化学同人）記載の方法に準じて 以下に記載の方法で行った。 すなわち、 S I)系ラッ ト （ 7週令，雄）を
2日間絶食後、 放血によって屠殺し、 直ちに肝臓を取り出し 1 0倍量
( W/V ) の 5 mMト リ ス一塩酸緩衝液（ pH 7. 5 )を含む 0.2 5 M蔗 糖溶液を加え、 テフロン棒付ホモジナイザーでホモジナイ ズする。 . 6 0 0 g , 2 0分間の遠心上澄みを 3 0, O O O x g 3 0分間遠心し、 生じたペレツトを上記の蔗糖溶液に、 肝臓湿重量 0.2 g / 0.5mT溶液と なる濃度に懸濁し、 その 0.5m^を酵素液として反応に用いた。
リ ン酸カリ ゥム緩纖（ pH 7.5 ) 3 0卢 mole, KC1 300μ mole, AT P 3 μ mole , MgCl 2 3 μ mole , 蔗糖 l 2 0 μ mole， 1 -1 パル ミチン酸（ 0.1 Ci ，牛血清アルブミ ンをモル比 1 ： 5になるよ うに添加した溶液 PH 7.5 ) 0.6 /" mole , L一カルニチン （ L一 carnitine 0.6 ί mole ， コェンザィ ム A Co enzyme A ) Q. & μ
mole , ォキサル酢酸 0.2 i mole , 水又は阻害剤を含有する水溶液 0.
及び酵素溶液 0.5m^から成る反応混液 3. Οπ^をハイァミンハイ ド口 ォキサイ ド 1 0 — X〔パッカード社（ オランダ）製〕を浸した 紙をつ
,一 OMPI一 るした密閉試験管中に入れ、 3 7°C 2 0分間好気的に振盪反応した。
7 0 %過塩素酸 0. 4m^を添加して反応を止めた後、 生成した14 C02 を 測定することによって酵素活性の測定をした。 該化合物 5 8 5 9
の阻害活性は、 阻害剤無添加の場合に比較して、 2 5 0 μ / miで 1 7
¾ , 5 0 0 μ / mZで 2 5 %， 1 0 0 0 ^ g m£で 3 6 %阻害であった。
F A - 5 8 5 9の急性毒性 L 1)50値は、 マウス静脈內注射で 4 0 0 ^
/ 以上であった。
F A - 5 8 5 9またはその塩は、 たとえば脂肪酸分解且害剤として有 用である。 F A— 5 8 5 9またはその塩を脂肪酸分解阻害剤として用い るには、 たとえば哺乳動物（例、 マウス， ラッ ト ，人など）の糖尿病の 治療を目的として、 E A— 5 8 5 9 として約 0. 2ないし 2 0 0 /^を
1曰投与量として投与する。 また、 ； F A— 5 8 5 9またはその塩を投与 するにあたっては、 常套手段によってたとえば錠剤， 顆粒剤， カプセル 剤，液剤などの剤型にして経口的に、 またたとえば注射剤として非経口 .
的に投与することができる。
また、 _^ — 5 8 5 9は、 脂肪酸の代謝を解明する上での生化学的試 薬として使用することができる。 たとえば、 — 5 8 5 9を反応液中 に添加することによってカルニチン欠乏状態を容易に作りうるので、 月旨 肪酸酸化におけるカルニチンの役割をよリー層明確にすることができる。
また、 脂肪酸酸化における ミ ト コン ドリ アとペルォキシゾームとの生理 的役割はほとんど明らかにされていないので、 ミ トコンドリァへの脂肪 酸の取り込みを F A _ 5 8 5 9を添加して阻害することによって、 ペル ォキシゾ一ムの役割およびペルォキシゾームとミ トコンドリアでの酸化 過程とのかかわりを明らかにすることが可能である。 これらの場合、 月旨 肪酸酸化反応で通常用いられる反応系を用いて、 細胞内顆粒成分の濃度
OMPI
、 WIPO― によっても異なる力；、 一般的には FA— 5 8 5 9約 0.5 ¾ π^〜 5 0
/m£濃度が有利に用いられる。
FA— 5 8 5 9は、 さらに有利な脂肪酸分解阻害作用を示す化合物の 合成中間体としても有用な物質である。
図面の簡単な説明
第 1図は参考例 2で得られた生理活性物質 F A— 5 8 5 9の赤外線吸 収スぺク ト ルを、 第 2図は参考例 3.で得られた生理活性物質 FA— 5 8 5 9の塩酸塩の赤外線吸収スぺク トルをそれぞれ表わす。
発明を実施するための最良の形態
以下に参考例および実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。 なお、 以下の参考例において、 培地の組成物のパーセン トは、 重量 Z容 量パ一セントを示す。
参考例 1.
ポテト · シユークロズ寒天からなる斜面培地上に予め十分に生育し胞 子を形成したェメ リ セラ ' 力一ド リ リ ネアター I P 0 5 8 5 9の一白 金耳を、 グルコース 2.0 % , マル ト 一ス 3· 0 %，玍大豆粉 1.5 % , コン スチ一プリ カ一 1.0 % , ポリペプト ン 0.5 % ,酵母ェキス 0.3 %及び食 塩 0.3 % , pH 6.0からなる種培養培地 5 0 Οπ^を分注滅菌した 2 容 坂口フラスコに接種して、 往復振盪機上、 2 8°Cで 2日間培養した。 こ の培養液の 1.5 を、 ォレイ ン酸 3.0 <¾ ,生大豆粉 0· 5 %，麦芽ェキス 0.5 % , ポリプぺト ン 0.5 % ,酵母ェキス 0.2 % , H2P0 0.1 % , FeS04- 7H20 0.0 5 % , MnS04- ηΗ20 0.0 5 %及び MgSO 7Η2 0 0.0 5 % , ρΗ 4.5からなる主培養培地 1 0 0 ^を注入，滅菌した 2 0 0 ^容醱酵槽に移植した。 この主醱酵は 2 8°C ,通気（ 1 00^/min), 攪拌（ 2 0 0 r.p.m. ) して 1 1 4時間，内圧 1.0 下で培養した。 同様にして得られた主醱酵液の 2バッチ分を合わせて、 過によって除 菌体して、 FA— 5 8 5 9を含有する培養 液を得た。
参考例 2.
参考例 1.で得られた培養^液のうちの 1 2 5 ^をアンバーライ ト — 1 2 0 ( H十型） （ 2 0 ^ )のカラムに通し、 水 4 0 ^でカラムを洗 滌後 N—アンモニア水 6 0 で溶出した。 溶出液を 3 0 ^まで減圧濃縮 してアンモニアを留去した後、 クロマトグラフィー用活性炭カラム（ 3 0 £ )に通し、 Z 6 0 ^でカラムを洗滌後、 5 0 %メタノ一ル水 9 0 で溶出した。 溶出液を 1 0 ^宛分画し、 有効区分フラクション; Κ5〜 6 をあつめて減圧濃縮するとシロップ伏の粗物質 2 5.5？が得られた。
この粗物質を Ρ Η 4.0酢酸緩衝液 ( 0.0 5 Μ ) 1 0 Οι ^に溶解し、 これ を pH 4.0の酢酸緩衝液（ 0.1 Μ)で緩衝化したダウエックス 5 0 x 2 ( 5 0 0 m のカラムに通した。 同 ^¾液 H 4.0 I £ , pH 4.3 l.5 £ , pH 4.6 1.5 £ , pH 5.0 1.5 £を用いて順次溶出を行つ . た。 溶出液を 1 0 宛分画しフラクション 3 2〜6 3を集めてアン バーライ ト I R— 1 2 0 ( H十型） ( 3 0 Om£) のカラムに通し、 水 6 0 で洗滌後 0.5 N—アンモニア水 1.5 ^で溶出した。 溶出液を 5 0 Οπ^まで減圧濃縮し、 濃縮液をダウエックス 1 X 2 ( 0H"型）（ 2 0 0 に通し、 水 2 0 で洗滌した。 この通過液および洗滌液を合せて 減圧濃縮後、 凍結乾燥を行った。 ここに得られたシロップ状物質を室温 放置すると無色吸湿性結晶伏の FA— 5 8 5 9遊離体 1 0.7 ^が得られ た。 この物質の赤外線吸収スペク トルを第 1図に示す。
参考例 3.
参考例 2.で得られた FA— 5 8 5 9遊離体 2 1 0 を水 1 Οπ^に溶解 し氷冷しながら 1 Ν—塩酸 lmを加え減圧濃縮後エタノール 1 を加
、 1PO えて室温に放置して得られた結晶を水，エタノールから再結晶すると無
色針状晶の FA— 5 8 5 9の塩酸塩 2 2 5 が得られた。 m.p.2 1 5°C
(分解）。 この物質の赤外線吸収スぺク トルを第 2図に示す。
参考例 4.
参考例 1.に記載の方法に準じ以下に示す微生物を用い培養した結果、
F A- 5 8 5 9が生産されていることを確認した。
ェメ リ セラ * 力 ド リ リ ネアタ一 IFO 3 0 9 1 1 ,
ェメ リセラ * 力 ド リ リ ネアター I FO 3 0 9 1 2 ，
ェメ リ セラ · 力 ドリ リ ネアター IFO 3 0 8 5 0 ,
ェメ セラ ' 力 ドリ リ ネアタ一 I JFO 3 0 8 5 1 ，
ェメ セラ ·ニー ドランス . パール ' ァクリスタ一ター IFO 300 63,
ェメ セラ -ニー ドランス · バール · ァク リスタータ一 IFO 30844, ェメ セラ ' クライス ト ミヌタ一 I FO 3 0 8 3 9 ,
ェメ セラ ' ニードランス . バール ·ニー ドランス IFO 30872，
ェメ セラ .ニー ドランス . バール ' ラ一ター I FO 3 0 8 4 7 , ェメ セリラ . ルグローサー I FO 8 6 2 6 ,
ェメ セラ · ルグローサー IFO 8 6 2 9 ,
ェメ セラ · ルグロ一サ一 I F 0 3 0 9 1 3 ,
ェメ セラ · ルグローサー IFO 3 0 8 5 2 , ¾ノ ェメ セラ . ルグローサー I 3 0 8 5 3 ,
ェメ セラ '二一 ドランス I FO 5 7 1 9 ,
ェメ セラ . ニー ドランス I FO 7 0 7 7 ,
ェメ セラ · ニー ドランス I FO 3 0 0 6 2 ,
ェメ リ セラ · サブラーター IFO 3 0 9 0 6 ,
参考例 5 ァスペルギルス sp. 3 7 0 4株（ IFO 31171 , F E RM P—
6 2 2 4 )を、 参考例 1.と同様の種培養培地 5 0 0 を分注滅菌した 2
容坂口フラスコに接匿して、 往復振盪培養機上で 2 8°Cで 2日間培養 した。 この培養液の 1.5 を、 大豆油 3.05¾ ,生大豆粉 0.5 ，麦芽ェ キス 0.5 , ポリぺプトン 0.5 % ,酵母エキス 0.2 %， KHs ^ 0.1
%， FeS04 - 7H20 0.0 5 %， MnS04 · nH20 0.0 5 ^及び MgSOA • 7H20 0.0 5 ， PH 4.5からなる主培養培地 1 0 0 を注入し、 滅 菌した 2 0 0 容醱酵槽に移植した。 この主醱酵は 2 8 ，通気（100 £ vciln. ) ,攪拌（ 20 0 r. P. m. )の条件下 1 1 4時間， 内圧 1.0K$ ci で培養した。 得られた培養液をF過によって除菌体すると、 FA-5859 を含有する培養 液8 0 が得られた。
参考例 6.
参考例 5.で得られた 液 8 0 を参考例 2.と同様に処理，精製し得ら れたシロップ状の FA— 5 8 5 9遊離体 3.1 5 を水 1 5 0m に溶解し、. 氷冷しながら N—塩酸 1 5π^を加え減圧濃縮後エタノール 1 5 0m£を加 えて放置して得られた結晶を水，エタノールから再結晶すると、 無色針 伏晶の FA— 5 8 5 9塩酸塩 3.3 ^が得られた。 m.p.2 1 °C (分解） 元素分析値 C 4 5.3 9; H 7.7 3； N 1 1.5 0； CI 1 .77 % 実施例 1.
FA- 5 8 5 9遊離体 1.6 0 を定沸点塩酸 4 Οπ^に溶解し、 9 5°C で 1 6時間放置した。 反応液を減圧濃縮し、 残留物に少量の水を加えて 再び減圧濃縮した。 残留物にメタノールとジェチルエーテルとの混合溶 媒を加え、 析出する結晶をろ取した。 メタノールより再結晶すると、 1. 2 0 ？のデァセチル FA— 5 8 5 9の 2塩酸塩力;得られた。
― 99
融点 2 1 9〜2 2 0 C , CaJ D +6.3° ( c = 1.0 ， N-AcOH)
_ ΟΜΡΙ. 元素分析： C7 H1802N2 C 12 - 理論値： C 3 6. 0 5 ； H 7. 7 7 ； N 1 2. 0 1 ； C1 3 0. 4 0 %
実測値 ： C 3 6. 0 9 ； H 7. 7 2 ； N 1 1. 8 1 ； C 1 2 9. 8 0 %
吸収スぺク トル ： 2 1 0 nmから 7 0 0 nm までの紫外および可視領域 には特徴的な吸収は示さない。
産業上の利用可能性
生理活性物質 F A- 5 8 5 9および生理活性物質デァセチル F A— 5 8 5 9は、 優れた脂肪酸分解阻害作用を有しており、 該物質またはそれ らの塩は、 たとえばマクス ， ラッ ト ，人等の哺乳動物の糖尿病治療剤と して利用され、 また、 該物質は、 脂肪酸の代謝を解明するための生化学 的試薬として使用される。
O PI

Claims

式
Figure imgf000030_0001
請
で表わされる化合物またはその^
2. 式 の 範
Figure imgf000030_0002
で表わされる化合物またはその塩を加水分解反応に付すことを特徴とす る 式
CH3
Figure imgf000030_0003
で表わされる化合物またはその塩の製造法。
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Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Kagaku Daijiten Henshu Iinkai-hen "Kagaku Daijiten 3", 25 June. 1962 (26.06.62), Kyoritsu Shuppan Kabushiki Kaisha (Tokyo), P. 884, "San Amide" no "Kagakuteki Seishitsu" no ko *
Martha Windholz (Editor), "THE MERCK INDEX, NINTH EDITION" (1976) MERCK & CO., INC. (RAHWAY, N.J., U.S.A.), p. 236, 1849 *

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