WO1984000539A1

WO1984000539A1 - Deacetyl fa-5859 and process for its preparation

Info

Publication number: WO1984000539A1
Application number: PCT/JP1982/000291
Authority: WO
Inventors: Tsuneo Kanamaru; Susumu Shinagawa; Mitsuko Asai
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1982-07-28
Filing date: 1982-07-28
Publication date: 1984-02-16
Anticipated expiration: 1985-01-28

Abstract

A novel substance, deacetyl FA-5859, represented by the formula: $(8,)$ and its salts show an excellent fatty acid decomposition-inhibiting effect and are utilized as antidiabetic agents for mammels and as biochemical reagents for studying fatty acid metabolism.

Description

明細書 Specification

デァセチル； PA- 5 8 5 9およびその製造法技術分野 Deacetyl; PA-585 9 and its manufacturing method

本発明は、優れた脂肪酸分解阻害作用を有する新規生理活性物質デァセチル _P A— 5859またはその塩、およびその製造法に関するものである。背景技術 The present invention relates to a novel physiologically active substance decetyl_PA-5859 or a salt thereof having an excellent inhibitory action on fatty acid degradation, and a method for producing the same. Background art

従来、脂肪酸分解阻害作用を有する化合物としては、 4—ペンテノン酸 f 4 - penteno ic aci d ) P. C. Hoi landら，バイオケミカル' ジャーナノレ ( Bi ochemi ca 1 Journal ) 1 3 6卷 1 5 7頁及び 1 7 3頁， 1 9 7 3年， H. S. A. Sherrattら，バイオケミカル ' ファーマコロジ一 ( Biochemi ca 1 Pharmacology ) 2 5卷 7 4 3頁， 1 9 7 6年参照 ) 〕，ノ、イボグリシン（ Hypoglycin ) 〔 H. S. A."Sherratt ら，ノくィ ■オケミカノレ ' ファーマコロジ _ ( Bi ochemica 1 Pharmacology ) 2 5 卷 7 4 3頁， 1 9 7 6年参照〕，デカノィール ' カルニチン（decanoyl. 一 (十)一 earn itine )及び 2ーブロモノルミトィ —ノレ · コェンザィム A ( 2 - bromopalmi toyl CoA) 〔 I. B. _Fr i tzら，プ σ 一ディングス • ォブ 'ザ ' ナショナル ' アカデミー · ォブ ' サイエンス ( Proceedings of the National Academy of Sc 1 ences ^U. S. A. 5 4巻 1 2 2 6頁， 1 9 6 5年参照〕などが知られている力；、毒性及び作用の点から臨床的にはィ細されていない。メチル— 2—テトラデシルグリシデ— ト及び 2—テトラデシルグリシデ一ト (methyl— 2— tetr adecyg- lycidate,2-tetradecylgl ycidate ) G. F. Tutwi ler ら，ディアベ一テス（Diabetes ) 2 8卷 2 4 2頁， 1 9 7 9年及びメソード 'ィン · ェンザィモロジ一 ( Me thods i n Enzymology ) 7 2卷 5 3 3頁, 1 9 8 1年参照〕は脂肪酸分娜且害作用を有し、且つ経口で血糖低下作用を示すことが知られている。 Conventionally, compounds having an inhibitory action on fatty acid degradation include 4-pentenoic acid f4-pentenoic acid) PC Hoi land et al., Biochemical 'Journal 1 (biochemica 1 Journal), Vol. 73, 1973, HSA Sherratt et al., Biochemical '1 Pharmacology, Vol. 25, page 743, 19776)), no, iboglycin [HSA] "Sherratt et al., Noku ■ Oke Mika Nole 'See Pharmacolology _ (Biochemica 1 Pharmacology), 25, 734, 1976), Decanoyl' carnitine (decanoyl. One (ten) one earn itine) And 2-bromopalmi toyl CoA (IB_Fritz et al., Σ ディングディング dings) • Ob 'The' National 'Academie Ob''Science (Proceedings of the National Academy of Sc 1 ences ^ USA 5 4 1 2 2 6 Clinically not considered in terms of toxicity and action, etc. Methyl-2-tetradecylglycidate and 2-tetradecylglycidite (methyl-2 — Tetr adecyg- lycidate, 2-tetradecylglycidate) GF Tutwiler et al., Diabetes 28 Vol. 2 pp. 42, 197 9 and the method of Methoths in Enzymology), Vol. 72, pp. 5 33, 1980) is a fatty acid component, has harmful effects, and orally reduces blood glucose. It is known to indicate

発明の開示 Disclosure of the invention

本発明は、新 ί¾ΐ理活性物質デァセチル FA— 5 8 5 9またはその塩、およびその製造法に関する。さらに詳しくは、本発明は (1)式 The present invention relates to a novel active substance deacetyl FA-5589, or a salt thereof, and a method for producing the same. More specifically, the present invention provides a method of formula (1)

CH₃ NH₂ CH ₃ NH ₂

CHo-N© -CH₂-C-CH₂-COO® C I ) で表わされる化合物またはその塩、および (2)式 _{CHo-N © -CH 2 -C-} CH 2 or a salt thereof -COO® CI), and (2)

CH₃ NH-C0CH₃ CH ₃ NH-C0CH ₃

CH₃ - N© -CH₂-C-CH₂-COO 、^€Θ CH ₃ -N © -CH ₂ -C-CH ₂ -COO, ^€ Θ

H CD CH ^L3, で表わされる化台物またはその塩を加水分解反応に付 Tことを特徴とする式 A compound characterized by subjecting a chemical compound represented by H CD CH ^L 3, or a salt thereof to a hydrolysis reaction T

CH₃ NH„ CH ₃ NH „

CH_G -ΝΦ -CH₂-C-CH₅,-COO^E C I ) で表わされる化合物またはその塩の製造法に関する。 The present invention relates to a method for producing a compound represented by the formula: CH _G -ΝΦ -CH ₂ -C-CH ₅ , -COO ^E CI) or a salt thereof.

本明細書においては、化合物 (I)を「生理活性物質デァセチル: FA— 5 8 5 9」と、あるいは単に Γデァセル FA— 5 8 5 9」と称することもある。また、化合物 (Π)を「生理活性物質 FA— 5 8 5 9」と、あるいは単に「F A— 5 8 5 9」と称することもある。 In the present specification, the compound (I) may be referred to as "bioactive substance deacetyl: FA-5589", or simply as didecylFA-5589. Further, the compound (II) may be referred to as “bioactive substance FA-5589” or simply as “FA-5589”.

近年、次第に増加を線ナる糖尿病及びその合併症に対して、新しい作用機作に基き、且つより有効な糖尿病治療薬の開発が期待されている。 In recent years, for diabetes and its complications that are increasing gradually, the development of new and more effective drugs for treating diabetes is expected.

すなわち、糖尿病においては、インスリン欠乏のため脂肪組織での脂肪酸の遊離が促進されるので、肝臓への脂肪酸供袷が増加し、同時に脂肪酸の分解も亢進するためケトン体の生成も上昇し、いわゆるケトン血症を呈する。また肝臓外組織ではグルコースの利用が悪く、生成したケトン体をエネルギー源としている。したがって脂肪酸の分解を阻止すれば、 In diabetes, insulin deficiency promotes the release of fatty acids in adipose tissue due to insulin deficiency, which increases the supply of fatty acids to the liver and, at the same time, increases the production of ketone bodies due to increased decomposition of fatty acids. And presents with so-called ketemia. Glucose is poorly used in extrahepatic tissues, and the ketones produced are used as an energy source. Therefore, if you stop the breakdown of fatty acids,

O PI 1 ケトン体の減少にともないダルコ—スの利用が亢進され、結果的に血糖値の低下をきたすことが期待され、脂肪酸分解の特異的阻害剤は新しい機作に基く新規糖尿病治療薬として利用しうるものと考えられる。このような事情に鑑み、本発明者らは新規糖尿病治療薬の開発を目的として、種々検索したところ、ェメリセラ属またはァスペルギルス属に属する微 - . 生物の培養物中に脂肪酸分解を阻害する物質を見い出し、これを単離したところ、該物質は新規物質であること、また優れた脂肪酸分解阻用を有することを見い出し、これを生理活性物質 F A— 5 8 5 9と称することとした。 O PI It is expected that the use of dalcoses will be enhanced with the decrease in ketones, and as a result blood sugar levels will decrease, and specific inhibitors of fatty acid degradation will be used as new drugs for the treatment of diabetes based on a new mechanism It is considered possible. In view of such circumstances, the present inventors have conducted various searches for the development of a novel therapeutic agent for diabetes and found that fatty acid degradation is inhibited in cultures of micro-organisms belonging to the genus Emelysera or Aspergillus. When a substance was found and isolated, the substance was found to be a novel substance and had an excellent inhibition of fatty acid degradation, and was designated as a physiologically active substance FA-5589. .

本発明者らは、さらに、該物質の誘導体を得る目^種々研究したところ、該生理活性物質 F A— 5 8 5 9を加水分解して得られたデァセチル体は新規物質であり、しかも顕著な脂肪酸分解阻害作用を有することを見い出し、これを生理活性物質デァセチル F A— 5 8 5 9と称するこ ' ととした。これらに基づいてさらに研究した結果、本発明を完成した。 -· すなわち本発明は、（1)化合物 (I)またはその塩および )化合物 (II)またはその塩を加水分解反応に付すことを特徴とする化合物 Π)またはその塩の製造法である。 The present inventors have further conducted various studies in order to obtain a derivative of the substance. The acetyl derivative obtained by hydrolyzing the physiologically active substance FA-5589 is a novel substance, and It has been found that it has a remarkable inhibitory effect on fatty acid degradation, and this is referred to as the physiologically active substance deacetil FA-5589. As a result of further research based on these, the present invention has been completed. -The present invention provides (1) a method for producing a compound (I) or a salt thereof, which is characterized by subjecting a compound (II) or a salt thereof to a hydrolysis reaction.

本発明の加水分解反応は、アミド結合を分解するすべての方法を適用することができる。たとえば、酸，塩基，ィオン交換樹脂などを用いることにより行なうことができる。該酸としては、たとえば硫酸，塩酸などの無機酸が挙げられ、該塩基としては、たとえば水酸化カリウム，水酸ィ匕ナトリウム，水酸化バリゥムなどが挙げられ、該イオン交換樹脂としては、たとえばダウエックスー 5 0 (ダウケミカル社製，米国），アンバ一ライト I R— 1 2 0 ( ローム ' アンド . ハース ' コンパニー社製，米国），ダイヤイオン一 S K I A , S K I B (三匕成工業株式会社製， W For the hydrolysis reaction of the present invention, any method for decomposing an amide bond can be applied. For example, it can be carried out by using an acid, a base, an ion exchange resin or the like. Examples of the acid include inorganic acids such as sulfuric acid and hydrochloric acid. Examples of the base include potassium hydroxide, sodium hydroxide, and sodium hydroxide. Are, for example, Dowex 50 (Dow Chemical Co., USA), Amberlight IR-120 (Roam 'And Haas Company', Co., USA), DIAION SKIA, SKIB (Sanjosei) Industrial Co., Ltd. W

―— 4 "― * 日本）などが挙げられる。 ――― 4 "― * Japan).

上記の酸を用いる場合には、水溶液中で該反応を行なうのが好ましく、 . また含水溶媒としてたとえば水とメタノール，ェタノ一ル，ブタノール等との混合溶媒中で行なうのが好ましい。反応は、通常約 6 0〜 2 0 0 °C、さらに好ましくは約 9 0〜： 1 2 0 °Cで、約 3 0分〜 3 0時間、さら - - に好ましくは約 3 〜 1 6時間で行なわれる。 When the above-mentioned acid is used, the reaction is preferably carried out in an aqueous solution, and more preferably in a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol or the like. The reaction is usually carried out at about 60 to 200 ° C., more preferably at about 90 to 120 ° C., for about 30 minutes to 30 hours, and more preferably about 3 to 16 hours. It is done in.

上記の塩基を用いる場合には、 7K溶液中で行なうのが好ましく、さらに含水皿、例えば水とメタノール，エタノール，ブタノ一ル等との混合溶媒中で行なうのが好ましい。該反応は、通常約 6 0 〜 2 0 0 °C、さらに好ましくは約 9 (！〜 1 2 0 °Cで、約 3 0分〜 3 0時間、さらに好ましくは約 3 〜 1 6時間で行なわれる。 When the above base is used, the reaction is preferably performed in a 7K solution, and more preferably in a water-containing dish, for example, a mixed solvent of water and methanol, ethanol, butanol, or the like. The reaction is usually carried out at about 60 to 200 ° C, more preferably at about 9 (! To 120 ° C, for about 30 minutes to 30 hours, more preferably at about 3 to 16 hours. Done in time.

上記のィオン交換樹脂を用いる場合には、原料化合物の水溶液に該ィ . ォン交換樹脂を懸濁させた状態で加温することにより行なわれる。該反応は通常約 6 0 〜 2 0 0 °C、さらに好ましくは約 9 0〜： L 2 0 °Cで約 3 -· . 0分〜 3 0時間、さらに好ましくは約 3 〜 1 6時間で行なわれる。 When the above ion exchange resin is used, the reaction is carried out by heating the ion exchange resin in a state of being suspended in an aqueous solution of the raw material compound. The reaction is usually performed at about 60 to 200 ° C., more preferably at about 90 to: at L 20 ° C., for about 3 to about 0.0 minutes to 30 hours, and more preferably at about 3 to 16 hours. It is done in.

反応液からデァセチル F A— 5 8 5 9またはその塩を'得るには、通常用いられる手段、たとえばィオン交換樹脂，吸着，濃縮，結晶化などが用いられる。反応液から目的物を採取する場合には、遊離形あるいは塩のレ、ずれでも単離できるが、塩の形で分離採取する方が容易である。 In order to obtain decetyl FA-5589 or a salt thereof from the reaction mixture, commonly used means such as ion exchange resin, adsorption, concentration, and crystallization are used. When the target product is collected from the reaction solution, it can be isolated in the free form or in the form of salt, but it is easier to separate and collect it in the form of salt.

反応終了液から目的物質を得る具体例としては、たとえば強酸性ィォン交換樹脂等を利用し、目的物質を吸着させ、例えば塩酸等を利用して溶出を行いニンヒドリン反応で Hi生を示す区分を集めること (二よつて目的物質を得ることが出来る力'、例えば塩酸による加水分解反応液からは更に簡単に反応液を減圧濃縮し過剰の塩酸を留去した後、メタノール，エタノール，ジェテルエ-テル等の溶媒を加え結晶として本物質の塩酸塩を得ることが出来る。 As a specific example of obtaining the target substance from the reaction completed solution, for example, a strongly acidic ion exchange resin is used to adsorb the target substance, and elution is performed using, for example, hydrochloric acid, etc., and the ninhydrin reaction shows Hi production. Collecting the fractions (the ability to obtain the target substance by the following method), for example, from the hydrolysis reaction solution with hydrochloric acid, the reaction solution is more easily concentrated under reduced pressure, and excess hydrochloric acid is distilled off. Add a solvent such as ethanol or jetether to form a crystal of hydrochloric acid Salt can be obtained.

このようにして、遊離または塩の形のデァセチル FA— 5 8 5 9が得ら 4 る。 In this way, the free or salt form of decetyl FA-5589 is obtained.

デァセチル F A— 5 8 5 9の塩を遊離形に変換することもできる。この方法は、たとえばイオン交換樹脂等を利用して、該塩を形成している - 酸または塩基をィオン交換樹脂に吸着させればよい。 The salt of deacetyl F A — 5859 can also be converted to the free form. In this method, an acid or a base forming the salt may be adsorbed to the ion-exchange resin by using, for example, an ion-exchange resin.

デァセチル FA— 5 8 5 9·遊離形は、塩を形成し得るので、常套手段により薬理的に許容し得る塩とすることができる。該塩を形成させる酸としては、たとえば塩酸，硫酸，硝酸，蓚酸，酢酸，コハク酸，クェン酸，フマール酸などが挙げられる。 Since the deacetyl FA-5589-free form can form a salt, it can be converted into a pharmaceutically acceptable salt by conventional means. Examples of the acid that forms the salt include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, oxalic acid, acetic acid, succinic acid, citric acid, and fumaric acid.

次に生理活性物質デァセチル _PA- 5 8 5 9の脂肪酸分解阻害能を、ラット肝臓ホモジネ—卜のミトコンドリァ画分を用い、日本生化学会編 - 「生化学実験講座」第 9卷、脂質の代謝、 7 5頁（ 1 9 7 5年東京化学同人）記載の方法、及び I. B. Fritzら、プロシ—ディングス ' ォブ ' - ザ ' ナショナル ' アカデミー 'ォブ ' サイエンス ( Proceedings of the National Academy of Sciences, U.S.A. ) 5 4卷 1 2 2 6 頁， 1 9 6 5年に記載の方法に準じて測定した。すなわち、 S D系ラット（ 7週令，雄）を 2 4時間絶食後、放血によって屠殺し、直ちに肝臓を取り出し 1 0倍量（^WZ_V)の 5mMトリス一塩酸緩衝液（ ρΗ 7· 5 )を含む 0.2 5 Μ蔗糖溶液を加え、テフロン棒付ホモゲナイザーでホモジナイズした。 6 0 0 x ^ , 2 0分間の遠心上澄みを 3 0，0 0 0 x ?， 3 0分間遠心し、生じたペレットを上記の糖溶液に、肝臓湿重量 0.2 0.5 溶液となる濃度に懸濁し、その 0.5： ^を酵素液として反応に用いた。 Next, using the mitochondrial fraction of rat liver homogenate, the bioactive substance decetyl _PA-589-59 was examined for its ability to inhibit fatty acid degradation, Metabolism, the method described on page 75 (1975 Tokyo Chemical Dojin), and IB Fritz et al., Proceedings of the National Academy of the National Academy of Sciences. of Sciences, USA) 54, Vol. 12, page 26, 1965. That, SD system rats (7 weeks old, male) after fasted for 24 hours were sacrificed by exsanguination, immediately 5mM preparative squirrel monohydrochloride buffer 1 fetches the liver 0 times ^{_{(W Z V) (ρΗ 7}} · 0.25% sucrose solution containing 5) was added and homogenized with a homogenizer with a Teflon rod. Centrifuge the supernatant at 600 x ^ for 20 minutes and centrifuge it for 30 minutes at 30 x 00 x?, And transfer the resulting pellet to the above sugar solution to a concentration that will give a liver wet weight solution of 0.2 0.5. The suspension was used and 0.5: ^ was used in the reaction as an enzyme solution.

リン酸カリゥム緩衝液 ( ρΗ 7.5 ) 3 0 mole, KC£ 3 0 0 imole, Phosphate buffer (ρΗ7.5) 3 0 mole, KC £ 30 0 imole,

MgC£₂ 3 imo 1 e , 蔗糖 1 2 0 ί mo 1 e , L—リンゴ酸 0.0 3 imole, MgC £ ₂ 3 imo 1 e, sucrose 1 2 0 ί mo 1 e, L-linkic acid 0.0 3 imole,

OMPI OMPI

/W ^WIPO ^ A T P 3 ί mo 1 e , L—カノレニチン 3 t mol e , コェンザィム A ( Co enzyme A ) 0.6 μναο 1 e , NAD 7.5 imole, 1 -¹⁴C -ノレミチン酸（ 0. 2μ Ι, 牛血清アルブミンをモル比 1 ： 5になるように添加した溶液 / W ^WIPO ^ ATP 3 ί mo 1 e, L- Kanorenichin 3 t mol e, Koenzaimu A (Co enzyme A) 0.6 μναο 1 e, NAD 7.5 imole, 1 - 14 C - Bruno Remichin acid (0. 2μ Ι, bovine serum albumin Solution added at a molar ratio of 1: 5

ρΗ 7.5 ) 0.6 imole, 水又は阻害剤を含有する水溶液 0. In ^及び酵素溶液 0.5π ^力らなる反応混液 2.5m をノヽィアミンノ、ィドロォキサイド 10 ρΗ 7.5) 0.6 imole, aqueous solution containing water or inhibitor 0. Inject 2.5 μm of reaction mixture consisting of In ^ and enzyme solution 0.5π ^ force into diaminino, hydroxide 10

- 一 X〔パッカード社製（オランダ）〕を浸した^紙をつるした密閉試験 -Seal test with hanging paper dipped in X (Packard (Netherlands))

管中に入れ、 3 7-'C、 2 0分間好気的に振盪反応した。 7 0 %過塩素酸 The tube was placed in a tube, and subjected to an aerobic shaking reaction at 37-'C for 20 minutes. 70% perchloric acid

0.⁴¾を添加して反応を止めた後した ¹⁴ CO ₂を測定することによつて活性の測定をした。該化台物デァセチル FA— 5859の阻害活性すなわち阻害剤無添加の場合に比較して分解活性を 5 0 阻害する濃度は Was measured by connexion activity measuring ¹⁴ CO ₂ was then quenched by the addition of 0. ⁴ ¾. The concentration of the inhibitory activity of the compound Deacetyl FA-5859, that is, the concentration that inhibits the decomposition activity by 50 compared to the case where no inhibitor is added, is as follows.

4〜 8 ^/^であった。 4-8 ^ / ^.

デァセチル FA— 5 8 5 9の急性毒性 LD₅₀値は、マウス静脈内注射で 4 0 O^/K^ 以上であった。 . Dasechiru FA- 5 8 5 9 Acute toxicity LD ₅₀ value of was in mice injected intravenously 4 0 O ^ / K ^ above. .

本発明のデァセチル FA— 5 8 5 9またはその塩は、たとえば脂肪酸- '. 分解阻害剤として有用である。デァセチル FA— 5 8 5 9またはその塩 The decetyl FA-5589 or a salt thereof of the present invention is useful, for example, as a fatty acid- '. Decetyl FA—5 8 5 9 or its salt

を脂肪酸分解阻害剤として用いるには、たとえば哺乳動物（例、マウス，ラット，人など）の糖尿病の治療を目的として、デァセチル Is used as a fatty acid degradation inhibitor, for example, for the treatment of diabetes in mammals (eg, mice, rats, humans, etc.).

5 9 として約 0.2ないし 2 0 0 /^を 1曰投与量として投与する。また、デァセチル — 5 8 5 9またはその塩を投与するにあたっては、常套手段によってたとえば錠剤，顆粒剤，カプセル剤，液剤などの剤型にして経口的に、またたとえば注射剤として非柽ロ的に投与することができる。 Approximately 0.2 to 200 / ^ as 5 9 is administered as 1 dose. In addition, when administering deacetyl-5-589 or a salt thereof, it is orally prepared in the form of tablets, granules, capsules, liquids and the like by conventional means, or non-permanently as an injection, for example. Can be administered.

また、本発明のデァセチル FA— 5 8 5 ⁹は、脂肪酸の代謝を解明する上での生化学的試薬として使用することができる。たとえば、デァセテル F A— 5 8 5 9を反応液中に添加することによりカルニチン欠乏状 Further, Dasechiru FA- 5 8 5 ⁹ of the present invention can be used as a biochemical reagent on you understanding the metabolism of fatty acids. For example, adding carboxine deficiency by adding

O PI WIPO 態を容易に作りうるので、脂肪酸酸化におけるカルニチンの役割をより —層明確にすることができる。また、脂肪酸酸化におけるミトコンドリァとペルオキ^ゾームとの生理的役割はほとんど明らかにされていないので、ミトコンドリアへの脂肪酸の取り込みをデァセチル 859 を添加して阻害することによって、ペルォキ i /ゾームの役割およびペルォキゾームとミトコンドリアでの酸化過程とのかかわりを明らかにすることが可能である。これらの場合、脂肪酸酸化反応で通常用いられる反応系を用いて、細胞内穎粒成分の濃度によっても異なるが、一般的にはデァセテル F A— 5 8 5 9約 0.1

〜 1 0 00 /τπ£濃度が有利に用いられる。 O PI WIPO The role of carnitine in fatty acid oxidation can be more clearly defined because it can be easily modified. Also, since the physiological roles of mitochondria and peroxosomes in fatty acid oxidation are hardly clarified, the uptake of fatty acids into mitochondria is inhibited by the addition of decetyl 859. It is possible to elucidate the role of i / somes and the relationship between peroxosomes and mitochondrial oxidation processes. In these cases, the reaction system usually used in the fatty acid oxidation reaction is used, and it varies depending on the concentration of intracellular granule components.

濃度 100 / τπτ concentrations are advantageously used.

本発明のデァセチル F Α— 5 8 5 9は、さらに有利な脂肪酸分解阻害作用を示す化合物の合成中間体としても有用な物質である。 The decetyl F-585-59 of the present invention is also a useful substance as a synthetic intermediate of a compound exhibiting an advantageous fatty acid decomposition inhibitory action.

本発明の方法において原料化合物として用いられる F A— 5 8 5 9 ( 遊離形）は、次の理化学的性質を有する。 - (aj 元素分析（％)： (五酸化リン上で、 6 0°C ， 1 0時間減圧乾燥したもの） FA-5589 (free form) used as a starting compound in the method of the present invention has the following physicochemical properties. -(aj elemental analysis (%): (dried on phosphorus pentoxide at 60 ° C for 10 hours under reduced pressure)

C 5 1. 1 6 ± 2. 0 C 5 1.16 ± 2.0

H 9. 0 6 ± 1. 0 H9.06 ± 1.0

N 1 3. 2 6 ± 1. 0 N 1 3.26 ± 1.0

(b) 分子量： 2.4〜 3.3 X 1 0² ( ¾0) ( V P 0法による） (b) molecular ^{weight: 2.4~ 3.3 X 1 0 2 (} ¾0) ( by VP 0 Method)

(cj 比旋光度：〔α〕 — 1 7. 4。± 3。（ c 二 1 , Η₂0 ) (cj Specific rotation: [α] — 17.4 ± 3 (c 21, Η ₂₀ )

(d) 紫外線吸収スぺクトル：特異吸収を示さない。 (d) Ultraviolet absorption spectrum: no specific absorption.

(e) 赤外線吸収スペクトル：〔臭化カリウム錠による吸収スペクトルの主な吸収（波数）〕 (e) Infrared absorption spectrum: [Main absorption (wave number) of absorption spectrum by potassium bromide tablet]

1660， 1590 , 1485 , 1400 , 1325, 1292 , 970, 945 (cnT¹ ) 1660, 1590, 1485, 1400, 1325, 1292, 970, 945 (cnT ¹ )

(f) 溶剤に対する溶解性： (f) Solubility in solvent:

不溶：石油ェ一テル，へキサン，ジェテルエ一テル，ベンゼン，酢酸ェチノレ，クロロホノレム Insoluble: petroleum ether, hexane, jetether ether, benzene, ethynole acetate, chlorophonolem

難溶：ピリジン，アセトン，ジメチルスルフォキシド，ジメチルホルムアミド Poorly soluble: pyridine, acetone, dimethylsulfoxide, dimethylformamide

可溶：エタノール，メタノール Soluble: ethanol, methanol

易溶 -水 Easily soluble-water

(g) 呈色反応： (g) Color reaction:

陽性：ョ—ド反応 Positive: mode reaction

陰性：グレイグ ' リーバック反応，ニンヒドリン £¾，坂口反応，モ一リツシュ試薬，エールリツヒ試薬。 Negative: Greig's Reiech reaction, ninhydrin £ ¾, Sakaguchi reaction, Moritzsch reagent, Ehrlich reagent.

( ) 塩基性，酸性，中性の区別：両性物質 () Basic, acidic, and neutral: amphoteric

(i) 物質の色：無色。 (i) Color of the substance: colorless.

FA— 5859¾、ェメリセラ属またはァスペルギルス属に属する生理活性物質 FA- 5 8 5 9生産菌を培地に培養し、培養物中に生理活性物質 F A— 5 8 5 9を生成蓄積せしめ、これを採取することにより製造することができる。 FA-5859¾, a physiologically active substance belonging to the genus Emericella or Aspergillus FA-585-9 Producing bacteria is cultured in a medium, and the physiologically active substance FA-585-9 is produced and accumulated in the culture, and collected. By doing so, it can be manufactured.

該方法で用いることができる微生物としては、ェメリセラ（Emeri- cella)属またはァスペルギルス（Aspergi Uus) 属に属し生理活性物質 FA— 5 8 5 9を^する菌であればいずれでもよい。その例としては、たとえばェメリセラ · 力ドリリネアター（ E. quadri 1 ineata), ェメリセラ · ニードランス - ノく一ル ' ァクリスタ一タ一 ( _E. nidulans var. acr i stata )，ェメリセラ · クライストミヌター ( E. cleistom- inuta、，ェメリセラ .ニードランス · バール -二― ドランス f £；. nid- ulans var, nidulans ) ，ェメリセラ ' 二一ドランス - バーノレ ' ラータ― ( E. nidulans var. lata ) ，ェメリセラ · ノレグロ一サー (^E. rugulosa) , ェメリセラ - ニードランス（E. nidulans ) ，ェメリセラ -サブラーター ( E. sub lata ) , ァスペルギルス - sp. j; 3704の属する種 ( species) などが挙げられ、さらに具体的には、ェメリセラ ' 力ドリリネアター I FO 5859，ェメリセラ ' 力ドリリネアター IFO 3091 1 ，ェメリセラ ' 力ドリリネアター I FO 3 0 9 1 2 ，ェメリセラ ' 力ドリリネァター I FO 3 0 8 5 0 ，ェメリセラ ' 力ドリリネアター I FO 3 0 8 5 1 ，ェメリセラ ' ニードランス - パール ' ァクリスタータ I FO 3 0 0 6 3 ，ェメリセラ ' ニードランス . ノくール ' ァクリスタ一タ一 I FO 3 0844, ェメリセラ ' クライストミヌター I FO 3 0 8 3 9, ェメリセラ . ニードランス . バール . 二— ドランス I FO 3 0 8 7 2, ェメリセラ . ニードランス ' バール . ラータ一 I FO 3 0 8 4 7 , ェメリセラ - ルグローサ一 I FO 8 6 2 6 ，ェメリセラ ' ルグローサ一- I F 0 8 6 2 9 ，ェメリセラ . ルグロ一サー I F 0 3 0 9 1 3 ，ェメリセラ . ノレグローサー I FO 3 0 8 5 2 ，ェメリセラ ' ノレグローサ - I F 0 3 0 8 5 3 , ェメリセラ ' 二一ドランス I FO 5 7 1 9 , ェメリセラ . ニードランス I FO 7 0 7 7 ，ェメリセラ ' 二一ドランス I FO 3 0 0 6 2 ，ェメリセラ ' サブラ一ター I F〇 3 0 9 0 6，ァスペルギルス · sp. 3 7 0 4などが挙げられる。 The microorganism that can be used in the method may be any microorganism that belongs to the genus Emericella or the genus Aspergius and that contains the physiologically active substance FA-5589. Examples are E. quadri 1 ineata, E. Seri Knee Drans-_E. Nidulans var. Acr i stata), Emelysera Christ Minuta (E. cleistom-inuta,, Emelysela. Needleans-Bar-Ni-Drance f £ ;. nid- ulans var, nidulans), Emerica Sera '21 Drance-Bahnore 'Rata (E. nidulans var. lata), Emerica Sera Nolegrosa (^ E. rugulosa), Emely Sera-Ney E. nidulans, E. sublata, Aspergillus-sp. J; species belonging to 3704, and more specifically, E. resella's Linea IFO 5859, Emery Serra's Power Liner IFO 30911, Emelisela's Power Liner IFO 30912, Emeryra's Power Liner IFO 3 0850, Emery Sera 'Power Drill Liner I FO 3 085 1, Emery Sera' Needle Lanth-Pearl 'Akry Starter I FO 3 0 6 3, Emery Serra' Needle Lance. Le Factory Agent I FO 3 0844, Emery Sera Christ Minutor I FO 3 0 8 3 9, Emery Serra, Nederlands Bar, Second Dorrance I FO 3 0 8 7 2, Emera Sera, Nederlands' Bar, Ratha IFO 3 0 8 4 7, Emeri Sera, Lugrosa I IFO 8 6 2 6, Emery Sera's Lugrosa-IF 0 8 6 9 9, Emmely Sera's Lugrocer IF 0 3 0 9 13, Emery Sera's Nore Grocer IFO 3 0 8 5 2 , Emelysera 'Noregrosa-IF 0 308 5 3, Emelysera' 21st Dance IFO 57 19, Emelysera. Needleance I FO 7 077, Emelysera '21 -drance IFO 3006, Emmelicella 'Sub-Later IF 3 0906, Aspergillus sp.

上記 I FO 5 8 5 9 , I FO 3 0 0 6 3 , I F 0 8 6 2 6 , 1 F 0 8 6 2 9 , I F 0 5 7 1 9 , I F 0 7 0 7 7および Ι ί，〇 3 0 0 6 2株は、財団法人発酵研究所（ I FO ， 5 3 2日本国大阪府大阪市淀川区十三本町 2丁目 1 7番 8 5号）に寄託され、該発酵研究所発行のリスト ' ォブ'カルチャーズ第 6版 1 9 7 8年（ Institute Fermentation, Osaka, List of Cultures, 1978， Sixth Edition ) に掲載されている。 Above I FO 5 859, I FO 3 0 6 3, IF 0 8 6 2 6, 1 F 0 8 6 2 9, IF 0 5 7 1 9, IF 0 7 0 7 7 and Ι ί, 〇 3 0 0 6 2 strains were deposited at the Fermentation Research Institute (IFO, 53-2, 18-17-85, Jusanhoncho, Yodogawa-ku, Osaka-shi, Osaka, Japan), and the Fermentation Research Institute was issued. List of 'ob' cultures, 6th edition, 1978 (Institute) Fermentation, Osaka, List of Cultures, 1978, Sixth Edition).

また、 Ιί， 0 3 0 9 1 1 , I FO 3 0 9 1 2 , I FO 3 0 8 5 Also, Ιί, 0 3 0 9 1 1, I FO 3 0 9 1 2, I FO 3 0 8 5

0 , I F O 3 0 8 5 1 , I FO 3 0 84 4 , I FO 3 0 8 39 , 0, I FO 3 0 8 5 1, I FO 3 0 84 4, I FO 3 0 8 39,

I FO 3 0 8 72 , I FO 3 08 4 7 , I FO 3 0 9 1 3 , I F I FO 3 0 8 72, I FO 3 08 4 7, I FO 3 0 9 13, IF

O 3 0 8 5 2 , I FO 3 0 8 5 3および I FO 3 0 9 0 6株は、財団法人発酵研究所（ I FO )に寄託され、該発酵研究所発行の !/サ- チ ' コミュニケ—シヨンズ .1 0 , 1 9 8 1年 ( Insti tute For . O 3 0 8 5 2, IFO 3 0 8 5 3 and IFO 3 0 9 0 6 strains have been deposited with the Fermentation Research Institute (IFO), and the! / Search Communiques .10, 1980 (Insti tute For.

Fermentation, Osaka, Research Communications, ΜΛ 0 ， 1 9 8 1 )に掲載されている。 Fermentation, Osaka, Research Communications, ΜΛ 0, 198 1).

上記微生物が発酵研究所に寄託された日を以下に示す。微生物託曰 The date on which the microorganism was deposited at the Fermentation Research Institute is shown below. Microbiological trust

F 0 5 8 5 9 昭和 2 9年（西暦 1954年） 9月 14日 F 0 5 8 5 9 Showa 29 (AD 1954) September 14

FO 3 0 9 1 1 昭和 5 5年（西暦 1980年 ) 1月 10日 FO 3 0 9 1 1 1980 (June 1980) January 10

FO 3 0 9 1 2 昭和 5 5年（西暦 1980年） 1月 1 0曰 FO 3 0 9 1 2 Showa 55 (1980 AD) January 10

FO 3 0 8 5 0 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日 FO 3 0 8 5 0 1980 (1979) July 18

FO 3 0 8 5 1 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日 FO 3 0 8 5 1 1980 (1979 AD) July 18

FO 3 0 0 6 3 昭和 5 0年 (西暦 1975年） 8月 8日 FO 3 0 0 6 3 Showa 50 (1975 AD) August 8

FO 3 0 8 4 4 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日 FO 3 0 8 4 4 1980 (1979 AD) July 18

FO 3 0 8 3 9 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日 FO 3 0 8 3 9 1980 (1979) July 18

FO 3 0 8 7 2 昭和 5 4年（西暦 1979年） 1月 9曰 FO 3 0 8 7 2 Showa 54 (1979 AD) January 9 says

FO 3 0 8 4 7 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日 FO 3 0 8 4 7 1980 (1979) July 18

FO 8 6 2 6 昭和 4 1年（西暦 1966年） 8月 29日 FO 8 6 2 6 August 1966 (Showa 41)

FO 8 6 2 9 昭和 4 1年（西暦 1966年） 8月 29日 FO 8 6 2 9 August 29, 1966

OMPI OMPI

、/ 、画 FO 3 0 9 1 3 昭和 5 5年（西暦 1980年：) 1月 1 0日 , /, Picture FO 3 0 9 1 3 Showa 55 (1980 AD): January 10

F O 3 0 8 5 2 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 18日 FO 3 0 8 5 2 Showa 54 (1979 AD) July 18

FO 3 0 8 5 3 昭和 5 4年（西暦 1979年） 7月 1 8日 FO 3 0 8 5 3 1980 (1979 AD) July 18

FO 5 7 1 9 昭和 2 8年（西暦 1953年） 4月 1 8日 FO 5 7 1 9 Showa 28 (AD 1953) April 18

FO 7 0 7 7 昭和 3 7年（西暦 1962年） 2月 3日 FO 7 0 7 7 February 1962 (Showa 37)

F 0 3 0 0 6 2 昭和 5 0年（西暦 1975年 ) 8月 8日 F 0 3 0 0 6 2 1975 (Showa 50) August 8

F O 3 0 9 0 6 昭和 5 5年（西暦 1980年） 1月 1 0曰上記微生物において、ェメリセラ ' 力ドリリネアターの菌学的性状は日本菌学会会報第 2 0卷第 4号 4 8 1頁（ 1 9 7 9年），トランスァクシヨンズ · ォブ - ザ ' ミコロジカル ' ソサエティ ' ォブ ' ジャパン FO 3 009 6 Showa 55 (1980 AD) January 10 For the above microorganisms, the mycological properties of Emelisella 'Rikidori Niater are described in the Journal of the Mycological Society of Japan, Vol. 4 8 1 (1977), Transcription Sobs-The 'Micological' Society 'Of' Japan

( Transactions of The Mvcolo -i ca 1 Society o f Japan ) vol . (Transactions of The Mvcolo -i ca 1 Society of Japan) vol.

0 , ^ , 4 8 1( 1979 )に、ェメリセラ ' ニードランス ' バール ' ァクリスタ—ターの菌学的性状は菌覃研究所研究報告第 1 2号 1 7 1頁 (昭和 5 0年西暦 1 9 7 5年），レポーッ ' ォブ 'ザ ' トツトリ · ミコ ' ロジカル . インスティテュ— 卜 ( Reports of The To ttori Myco 1- ogi acl Institute) 1 2 , 1 7 1 ( 1 9 7 5 )に、ェメリセラ ' クライストミヌタ—の菌学的性状はトランスアクションズ . ォブ · ブリテイツシュ . ミコロジカノレ . ソサィェティ ( 1 31153(：^ 0115 of The 0, ^, 481 (1979), the microbiological properties of Emerisella 'Needlans' var' acristaters were reported in the research report of the Institute of Bacteriology, No. 12, page 171, (Showa 5 1975), Reports of the Tottori Myco 1-ogi acl Institute 1 2, 1 7 1 (1 9 7 5), the mycological properties of Emeri Sera 'Kristo Minuta' are as follows: Transactions, Ob, Britain, Tsch, Mykologikanore, Societi (1 31153 (: ^ 0115 of The

Bri tish Myco logical Society) vol. 52， Α'ό.2 , 331 ( 1969) に、ェメリセラ ' ニードランス ' バール ' ニードランスの菌学的性状はコーリヤン · ジャ一ナル ' ォブ ' ミクロビォ口ジィ (Korean Journal of Microbiology ) vol. 1 8， M.2 , 1 0 4 ( 1 9 8 0 )に、ェメリセラ .二一ドランス ' バール . ラ一タ—の菌学的性状は、 K. B. (British Myco logical Society) vol. 52, Α'ό.2, 331 (1969), found that Emyelisela 'Needlance' bur Microbiological properties of Emeri Sera 21st Transcription 'Bar. Lacta' in Korean Journal of Microbiology vol. 18, M.2, 104 (1980) Is the KB

Raper, B. I. Fennell著ザ · ジ一ナス ' ォブ ' ァスペルギノレス The Genius 'Rob' Asperginoles by Raper, B. I. Fennell

REA T O PI ( The Genus of Aspergillus ) 5 0 0頁, he Williams &Wii kins C om an y, Baltimore, l 9 6 5 (二、ェメリセラ 'ノレグローサ一の菌学的性伏は日本菌学会会報第 2 0巻 4号 4 8 1頁（ 1 9 7 9 ) , トランスアクションズ ·ォブ 'ザ · ミコロジカル · ソサエティ · ォブ ' ジヤノン ( Transactions of The Myco logi cal Society ofREA TO PI (The Genus of Aspergillus) 500 pages, he Williams & Wikins Comany, Baltimore, l 965 (2. 4 No. 4 8 1 (1 9 7 9), Transactions of The Mycologistic Society of Transactions of the Mycological Society

Japan ) vol. 2 0 , i A , 4 8 1 ( 1 9 7 9 )に、ェメリセラ，ニードランスの菌学的性伏は K. B. Raper, B. I. Fennell ¾：ザ 'ジ—ナス - ァスペルギルス ( The Genus Aspergi 1 lus ) 9 5 ^, The Williams & Wi lkins Company, Baltimore, 1 9 6 5に、ェメリセラ 'サブラ―タ—の菌学的性伏は日本菌学会会報第 2 0巻第 4号， 4 8 1頁（ 1 9 7 9年），トランスアクションズ ' ォブ ·ザ ' ミコロジカル . ソサイエティ - ォブ · ジャパン ( Transactions of The Myco- 1 ogi ca 1 Society of Japan ) volume 20 , a 4 , 4 8 1( 1979 ) にそれぞれ記載の菌学的性状と同一である。 Japan) vol. 20, i A, 481 (1977), the microbiological properties of Emelysella and Need Lance are KB Raper, BI Fennell ¾: The 'Jinus-Aspergillus (The Genus Aspergi 1 lus) 9 5 ^, The Williams & Wilkins Company, Baltimore, 1989 Transactions of The Myco- 1 ogi ca 1 Society of Japan Volume 20,, a 4 and 481 (1979).

ァスペルギルス · sp. 3 7 0 4株は日本国兵庫県川西市大和町の畑 - 土壌より分離したかびで、以下の菌学的性質を有する。 Aspergillus sp. 3704 strain is a fungus isolated from the field-soil of Yamato-cho, Kawanishi-shi, Hyogo, Japan and has the following mycological properties.

生育： Growth:

1) ッアベック寒天培地 1) Seabeck agar

生育は遅く、 2 4°C ， 2週間後のコ口二—の大きさは、 1.4〜 2. 0 であった。中央がややもり上がったかたい菌叢よりなり、周辺は不規則で、寒天下に深くもぐっている。表面での生育は気菌糸が網状の拡りを呈する。黄色味を帯びた淡青緑色を呈し、古くなるにつれて淡褐色を帯びる。 The growth was slow, and the size of the mouth after 2 weeks at 24 ° C was 1.4 to 2.0. The center is composed of a slightly elevated hard flora, the periphery of which is irregular and deep under the agar. On the surface, aerial mycelia exhibit a reticulated spread. It has a pale blue-green color with a yellow tint, and becomes pale brown as it gets older.

分生子頭の数は少ない。 The number of conidial heads is small.

裏面の色は淡褐色ないし褐色を呈する。古くなると淡褐色可溶性色素を生成する。 The color of the back surface is light brown or brown. Produces a light brown soluble pigment when old.

2) 麦芽汁寒天培地 2) Wort agar medium

生育は旺盛で、 2 4°C， 2週間後のコロニーの大きさは 4.0〜 5. The growth is vigorous, and the size of colonies after 2 weeks at 24 ° C is 4.0 to 5.

0 cmであった。平坦で、周辺はうすく、やや房状に縁取られている。 0 cm. It is flat, with a thin, slightly fringed periphery.

気菌糸はまばらである。 Aerial hyphae are sparse.

分生子頭の形成は非常によく、灰色を帯びた黄緑色を呈する。 The conidium head is very well formed and has a grayish yellow-green color.

裏面は淡褐色ないし黄褐色を呈する。 The back surface is light brown to yellowish brown.

可溶性色素の形成なし。 No formation of soluble pigment.

形態： . 分生子頭：大きさは一定しないが、長さ 7 5〜 1 0 0卢，直径 2 0〜 Form:. Conidium head: The size is not fixed, but the length is 75 ~ 100 卢, the diameter is 20 ~

4 0 i ,放射伏であるがしだいに粗な円筒形を呈する。 40 i, which is a radial cylinder but has a rough cylindrical shape.

分生子柄：長さ 4 0〜 6 0 ,直径 2.0〜 4 5 ,壁面は平滑，無色，やや湾曲する。 Conidiophores: length 40-60, diameter 2.0-45, smooth, colorless, slightly curved.

頂囊：フラスコ形で頂端は平坦，直径 4.5〜 7. 5 Top: Flask-shaped, flat top, 4.5-7.5 in diameter

メトレ：円筒形， 4.5〜 6.2 2.4〜 3· 4 Meter: cylindrical, 4.5 to 6.2 2.4 to 3.4

フィアラィド：棍棒形， 45〜 6.5 X 2.0〜 3.0 Fearado: club-shaped, 45-6.5 X 2.0-3.0

分生子：球形〜だ円形，暗緑色，直径 2.5〜 3.5 Conidia: spherical to oval, dark green, 2.5 to 3.5 in diameter

以上の譜質を、宇田川俊一ほか著「菌類図鑑」（講談社， 1978年） The above-mentioned musical score is written by Shunichi Udagawa et al., "Mycological Illustration Book" (Kodansha, 1978)

1 0 0 6頁記載のァスペルギルス属かびの諸性質と照合すると、本菌株力 Sァスぺノレギノレス属（ Aspergi Uus ) に属することは明らかである。 When compared with the various properties of the fungus of the genus Aspergillus described on page 106, it is clear that the strain belongs to the genus Aspergi Uus.

上記ァスペルギルス · sp. ;½：3 7 0 4株は、財団法人発酵研究所に昭和 5 6年（西暦 1 9 8 1年） 1 1月 6日から受託番号 I F◦ 3 1 1 71 The above Aspergillus sp.; ½: 3704 strain was transferred to the Fermentation Research Institute, Inc. in 1976 (1980).

として寄託されており、また、本微生物は、日本国通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（ F R I , 3 0 5日本国茨城県筑波郡谷田部町東 1丁目 1番 3号）に昭和 5 6年（西暦 1 9 8 1年） 1 1月 1 8日から受託番号 F E RM P— 6 2 2 4として寄託されている。 The microorganism has been deposited at the Research Institute of Microorganisms and Technology (FRI, 30-5 1-3-1 Higashi, Yatabe-cho, Tsukuba-gun, Ibaraki, Japan) in 1975. 6 years (1980 1st year) 1 January 18th Deposited under accession number FE RM P—62 2 4

ェメリセラ属は分類学上ァスペルギルス属のうち完全世代が明らかになった株をまとめたものであるので、菌株の有性世代や無生世代とは無関係に F A— 5 8 5 9を生成する能力を有する菌株であれば、用いることができることは言うまでもない。 Since the genus Aspergillus is a taxonomic group of Aspergillus species whose complete generation has been revealed, FA-5589 is independent of the sexual or alive generation of the strain. It goes without saying that any strain capable of producing the strain can be used.

ェメリセラ属菌およびァスペルギルス属菌は、微生物の一般的性質として自然的にまたは変異 ¾こよって変異を起し得る。たとえば X線，ガンマ一線，紫外線等の放射線の照射、更には単胞子分離、種々の薬剤による処理または薬剤を含有する培¾±での培養、その他の手段で変異させて得られる多くの変異株、あるいは自然的に得られた突然変異株等であっても、 ί¹ A— 5 8 5 9を生産する性質を有するものはすべて F A— 5 8 5 9の製造方法に利用し得る。 E. melisella and Aspergillus can be mutated naturally or by mutation as a general property of the microorganism. For example, irradiation with radiation such as X-rays, gamma rays, ultraviolet rays, etc., isolation of single spores, treatment with various drugs or cultivation in cultures containing drugs, and many others obtained by mutation by other means even the mutant or naturally-obtained mutant strains, etc., may be utilized ί ¹ A- 5 8 5 9 all have the property of producing FA- 5 8 5 9 production method of .

F A- 5 8 5 9の製造方法の培養に用いられる培地は用いられる菌株が利用し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状でもよいが、大量を . 処理するときには液体培地を用いるのがより適当である。培地には同ィ匕し得る炭素源，消化し得る窒素源，無機物質，微量栄養素が適宜配合される。炭素源としては、たとえばブドク糖，乳糖， ^ョ糖，麦芽糖，デキストリン，でん粉，グリセリン，マンニトール，ソルビトール，油脂類（例、大豆油，オリ一ブ油，ヌカ油，ごま油，ラード油，チキン油など）、各種脂肪酸類（例、ラウリン酸，ミリスチン酸，パルミチン酸，ステアリン酸，ォレイン酸など）、窒素源としては、たとえば肉エキス，酵母エキス，酵母，大豆粉，コーン ' スチープ ' リカー，ぺブトン，綿実粉，廃糖蜜，尿素，アンモニゥム塩類（例、硫酸アンモニゥム，塩化アンモニクム，硝酸アンモニゥム，酢酸アンモニゥムなど）その fc^用いられる。さらにナトリウム，カリウム，カルシウム，マグネシゥムなどを含む塩類，鉄，マンガン，亜鉛，コバルト，ニッケルなどの金属塩類，リン酸，ホク酸などの塩類や酢酸，プ σピオン酸などの有機酸の塩類が適宜用いられる。その他、アミノ酸（例、グルタミン酸，ァスパラギン酸，ァラニン，リジン，ノくリン，メチォニン，プロリン等），ペプチド（例、ジペプチド，トリペプチド等），ビタミン類（例、 Βι , B₂ ,ニコチン酸， B ₁₂ , C等），核酸類（例、プリン，ピリミジンおよびその誘導体）等を含有させてもよい。もちろん培地の pHを調節する目的で無機または有機の酸，アル力リ類，緩衝剤等を加え、あるいは消泡の目的で油脂類，表面活性剤等の適量が添加される。 The medium used for the culture in the production method of F A-585-59 may be liquid or solid as long as it contains a nutrient source that can be used by the strain used, but a liquid medium should be used when treating large quantities. Is more appropriate. The medium is appropriately blended with a carbon source capable of diversion, a nitrogen source digestible, inorganic substances, and micronutrients. Carbon sources include, for example, sucrose, lactose, sucrose, maltose, dextrin, starch, glycerin, mannitol, sorbitol, and fats and oils (eg, soybean oil, olive oil). , Bran oil, sesame oil, lard oil, chicken oil, etc.), various fatty acids (eg, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, etc.), and nitrogen sources such as meat extract, yeast Extracts, yeast, soybean flour, corn 'steep' liquor, butane, cottonseed flour, molasses, urea, ammonium salts (eg, ammonium sulfate, ammonium chloride, ammonium nitrate, ammonium acetate, etc.). . In addition, sodium, calcium, calcium, magnesium Salts containing platinum and the like, metal salts such as iron, manganese, zinc, cobalt and nickel, salts such as phosphoric acid and boric acid, and salts of organic acids such as acetic acid and p-succinic acid are appropriately used. In addition, amino acids (eg, glutamic acid, aspartic acid, alanine, lysine, noklin, methionine, proline, etc.), peptides (eg, dipeptide, tripeptide, etc.), vitamins (eg, Βι, B ₂ , nicotinic acid, B ₁₂ , C, etc.), nucleic acids (eg, purine, pyrimidine and derivatives thereof) and the like may be contained. Of course, inorganic or organic acids, alcohols, buffers and the like are added for the purpose of adjusting the pH of the medium, or an appropriate amount of oils and fats, a surfactant and the like are added for the purpose of defoaming.

培養の手段は静置培養でも、振盪培養あるいは通気攪拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の処理には、いわゆる深部通気攪拌培養によるのが望ましいことはいうまでもない。培養の条件は培地の状態，組成，菌株の種類，培養の手段等によって一定しないのは当然であるが、それらは通常約 1 5 °C：〜 3 7°Cの温度で、初発 pfi約 3〜 8付近に選択する . のがよい。とりわけ、培養中期の温度は約 2 3 °C〜 3 2°C，また初発 The culture may be performed by static culture, shaking culture, or aeration / agitation culture. It is needless to say that so-called deep aeration and stirring culture is desirable for large-scale treatment. Naturally, the conditions for cultivation are not fixed depending on the condition of the medium, composition, type of strain, culturing method, etc., but they are usually about 15 ° C: ~ 37 ° C, and the initial pfi Select around 3 ~ 8. In particular, the temperature during the middle stage of culture is about 23 ° C to 32 ° C,

pHは約 4〜 6の条件が望ましい。培養期間も前記の諸条件により一定しないが、該生理活性物質濃度が最大となるまで培養するのがよい。これに要する時間は液体培地を用いる振盪培養または通気攪拌培養の場合は通常約 1〜 8日間程度である。 The pH is desirably about 4 to 6. The cultivation period is not fixed by the above conditions, but it is preferable to culture until the concentration of the physiologically active substance is maximized. The time required for this is usually about 1 to 8 days in the case of shaking culture using a liquid medium or aeration and stirring culture.

生成した F A— 5 8 5 9は主として培養^液中に存在するので、培養物を遠心分離あるいは過によって上澄液と菌体とに分離し、その上清液から精製するのが有利である。しかし培養物から、直接に精製することも可能である。 Since the produced FA-5589 is mainly present in the culture solution, it is advantageous to separate the culture into supernatant and bacterial cells by centrifugation or filtration, and to purify the supernatant. . However, it can also be purified directly from the culture.

さらにこの F A— 5 8 5 9を採取するには微生物が生産する代謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜利用することが出来る。たと Further, in order to collect this FA-5589, a method usually used for collecting a metabolite produced by a microorganism can be appropriately used. And

ΟΜΡΙ ΟΜΡΙ

> WIPO ATlO§ えば遠心分離によって菌体を除去したのち、その^液から一般に有効物 > WIPO ATlO§ For example, after removing the cells by centrifugation, the effective

質を分離，採取，精製する方法を用いる。 Use a method to separate, collect, and purify the quality.

すなわち適当な溶媒に対する溶解性および溶解度の差、溶液からの析 That is, differences in solubility and solubility in a suitable solvent, precipitation from solution

出法および析出速度の差、種々の吸着親和力の差、イオン交換体による Deposition method and precipitation rate difference, difference of various adsorption affinity, depending on ion exchanger

ィオン交換ク σマトグラフィ一，あるいは減圧濃縮，凍結乾燥，結晶化 Ion exchange sigma chromatography, or vacuum concentration, lyophilization, crystallization

，再結晶，乾燥などの手段が単独あるいは任意の順序に組合わせて、ま , Recrystallization, drying, etc., alone or in any order,

たは反復して利用される。 Or used repeatedly.

その一例を示すと次のとおりである。すなわち、培養終 Γ後培養液を An example is as follows. That is, after the culture,

^過し得られる液を強酸性陽イオン交換樹脂たとえばアンパ一ライト ^ Transfer the resulting solution to a strongly acidic cation exchange resin such as Ampalite.

I R- 1 2 0 ( Η+ ) 〔ローム ' アンド 'ノヽ一ス社（米国）製〕のカラ I R-120 (Η +) [Rohm 'and' News (USA)] color

ムに通過させると、 F A— 5 8 5 9は樹脂に吸着される。樹脂からの溶 When passed through the system, F A—585 9 is adsorbed on the resin. Melting from resin

出はアンモニア水，アル力リ水，あるいは鉱酸または無機塩（たとえば The source is ammonia water, alkaline water, or mineral acid or inorganic salt (for example,

食塩，塩化アンモニゥム，硫酸ソーダ，硫酸アンモニゥム）の水溶液を Aqueous solution of salt, ammonium chloride, sodium sulfate, ammonium sulfate)

使用することが出来る。ここに得られた活性物質の溶出液の脱塩にはた― とえば活性炭などの吸着剤を用い活性物質をこれに吸着せしめたのち親— 水性有機溶媒系を用いて溶出させる。親水性有機溶媒系として用いられ Can be used. For the desalting of the eluate of the active substance obtained here, for example, an active substance is adsorbed on an adsorbent such as activated carbon, and then eluted with a parent aqueous organic solvent system. Used as a hydrophilic organic solvent system

るものには、ァセトン，メチルエヂルケトン，メチルイソブチルケトン Some of these include acetone, methyl edulketone, methyl isobutyl ketone

などの低級ケトン類，メタノール，エタノール，ィソプロパノ一ル，ブ Lower ketones such as methanol, ethanol, isopropanol,

σパノール，ブタノール，ィソブタノール等の低級アルコール類の単独 Lower alcohols such as σ-panol, butanol, and isobutanol alone

または混合溶媒と水との混合溶液があげられる。また水溶性高分子物質 Alternatively, a mixed solution of a mixed solvent and water can be used. Water-soluble polymer substance

が混在している場合、これを除去するには通常用いられる分子ふるいの方 If there is a mixture of molecular sieves, use a commonly used molecular sieve

法を利用するのがよい。すなわち FA— 5 8 5 ⁹が低分子であることから、たとえばセフアデックス G— 1 0 Cファーマシア · フアイン ' ケミカル（ス It is better to use the law. That FA- 5 since 8 5 ⁹ is a small molecule, for example Sephadex G-1 0 C Pharmacia Huai emissions' Ke Michal (scan

エーデン）製〕などを用いて水溶性高分子物質を吸着させ除去すること Adsorb and remove water-soluble polymer substances using

ができる。このようにして得られた粗物質をさらに精製するには本品が __Ο ΡΙ _ 、 pd" - 7 - 両性物質であることを利用して、緩衝化したカチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーが有利に利用出来る。すなわち、担体としては強酸性カチオン交換樹脂たとえばアンバーライト I R— 1 2 0 , ダウエックス 5 0 (X2)〔ダウ ' ケミカル社（米国）製〕，ダイヤイオン SKi A C三菱化成（日本）製〕等を適当な pHたとえば pH4の緩衝液を用いて緩衝化したものを用いる。粗物質の溶液を通過せしめて樹脂に吸着後、溶出には吸着時の PH値より高い PH値の緩衝液を用いて溶出する。再度この有効区分を強酸性カチオン交換樹脂を用いて吸着'脱離を行って、脱塩後、さらに混在する不純物を除く目的で、強塩基性ァ二オン交換樹脂たとえば、ダクエックス 1 (OfT) 〔ダウ - ケミカル社 (米国）製〕のカラムを通過せしめて通過液を減圧濃縮後凍結！^を行い、得られたシロップ状物質から FA- 5 8 5 9の吸湿性結晶が得られ。 Can be. In order to further purify the crude material obtained in this way, the product can be used ___ Ο _, pd " -7-Taking advantage of the fact that it is an amphoteric substance, column chromatography using a buffered cation exchange resin can be advantageously used. That is, as a carrier, a strongly acidic cation exchange resin such as Amberlite IR-120, Dow Ex 50 (X2) [manufactured by Dow Chemical Co. (USA), Diaion SKi AC Mitsubishi Kasei (Japan)] And the like are buffered using a buffer solution having an appropriate pH, for example, pH 4. After passing through the solution of the crude substance and adsorbing to the resin, elution is performed using a buffer solution with a PH value higher than the PH value at the time of adsorption. Again, this effective category is adsorbed and desorbed using a strongly acidic cation exchange resin, and after desalting, in order to remove further contaminating impurities, a strongly basic anion exchange resin such as Daquex 1 (OfT) [ Dow-Chemical (USA)] column, concentrate the filtrate under reduced pressure, and freeze it! ^ And hygroscopic crystals of FA-585-9 were obtained from the obtained syrup-like substance.

FA- 5 8 5 9は、常套手段により薬理学的に許容し得る塩とするこ . ともできる。該塩を形成させる場合の酸としては、たとえば塩酸，硫酸 ,硝酸，蓚酸，酢酸，コハク酸，クェン酸，フマール酸などが挙げられる。 FA-585- can be converted into a pharmacologically acceptable salt by conventional means. Examples of the acid for forming the salt include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, oxalic acid, acetic acid, succinic acid, citric acid, fumaric acid and the like.

後述の参考例 2で得られた FA— ⁵ 8 5 9 (遊離体）の物理化学的性質を以下に記載する。 Physicochemical properties quality obtained in Reference Example 2 described later FA- ⁵ 8 ⁵ 9 (educt) is described below.

(a) 元素分析（％ ) (五酸化リン上で 6 0°C， 1 0時間減圧乾燥したもの）： (a) Elemental analysis (%) (dried under reduced pressure over phosphorus pentoxide at 60 ° C for 10 hours):

C 5 2. 4 8 % C 52.48%

H 9. 0 4 % H 9.04%

N 1 3. 2 5 % N13.25%

(b) 分子量 2.4〜3.3 X 1 0²(H₂O) ( VPO法による） (c) 推定分子式： C₉H₁₈N₂0₃ (b) Molecular weight 2.4-3.3 X 10 ² (H ₂ O) (by VPO method) (c) Estimated molecular formula: C ₉ H ₁₈ N ₂ 0 ₃

(d) 比旋光度：〔な〕¾一 1 7. 4° ( c = l , Η₂0) (d) Specific rotation: [N] 1 17.4 ° (c = l, Η ₂₀ )

(e) 紫外線吸収スぺクトル： 2 1 0 nm 1上に特異吸収を示さない。 (e) Ultraviolet absorption spectrum: no specific absorption at 210 nm1.

(f) 赤外線吸収スペクトル：主な吸収（波数）は次のとおりである。 (f) Infrared absorption spectrum: The main absorption (wave number) is as follows.

3420( s) , 3260( sh) , 3080(m) , 1660( s) , 1590(s) , 3420 (s), 3260 (sh), 3080 (m), 1660 (s), 1590 (s),

1485(s ) , 1400(s) , 1325(m) , 1295(m) , 1145(w) , 1485 (s), 1400 (s), 1325 (m), 1295 (m), 1145 (w),

1105(w) , 1060(w) , 970(m) , 945(m) (cm^-1) 1105 (w), 1060 (w), 970 (m), 945 (m) (cm ^-1 )

w :弱, m :中 , s :強， sh :肩 w: weak, m: medium, s: strong, sh: shoulder

第 1図（臭化力リゥム錠）参照。 See Fig. 1 (bromide pill).

(g) 溶剤に対する溶解： (g) Dissolution in solvent:

不溶：石'油ェ一テル，へキサン，ジェテルエ一テル，ベンゼン ,詐酸 Insoluble: stone oil, hexane, jetether, benzene, acid

ェチノレ，クロロホノレム Etchinore, Chloronolem

難溶：ピリジン，アセトン，ジメチルスルホキシド，ジメチルホルム Poorly soluble: pyridine, acetone, dimethylsulfoxide, dimethylform

アミド Amid

可溶：エタノール，メタノール易溶：水 Soluble: ethanol, methanol Easily soluble: water

(hj 呈色反応： (hj Color reaction:

陽性：ョ—ド反応 Positive: mode reaction

陰性：グレイグ ' リ一バック反応，ニンヒドリン試薬，坂口反応，モ Negative: Grey-Green reaction, ninhydrin reagent, Sakaguchi reaction,

—リツシュ試薬，エールリツヒ試薬 —Ritzsch reagent, Ehrlich reagent

(り塩基性，酸性，中性の区別：両性物質 (Distinction of basic, acidic and neutral: amphoteric substances

(j) 物質の色：無色 (j) Color of substance: colorless

(k) 結晶の外観：無色吸湿性結晶伏物質 (k) Crystal appearance: colorless and hygroscopic crystalline substance

(1) 核磁気共鳴スペクトル：（CD₃OD 10 θΜΗζ) 1.98 ( 3H， s ), 2.42(2H, d) , 3.19(9H, s) , 3.56C 2H, d) , 4. 7 ( 1 H , m ) (1) Nuclear magnetic resonance spectrum: (CD ₃ OD 10 θΜΗζ) 1.98 (3H, s), 2.42 (2H, d), 3.19 (9H, s), 3.56C 2H, d), 4.7 (1H) , m)

O PI O PI

、/ 一προ s ：一重線， d ：二重線， m ：多重線 , / Προ s: single line, d: double line, m: multiple line

安定性： pH 3〜pH 9の水溶液は 1 0 0°C 1 0分加熱で安定。後述の参考例 3で得られた； FA— 5 8 5 9塩酸塩の理化学的性質を以下に記す。 Stability: pH 3 to pH 9 aqueous solution is stable by heating at 100 ° C for 10 minutes. It was obtained in Reference Example 3 described below; the physicochemical properties of FA-5585-hydrochloride are described below.

(a) 元素分析（％) ： (五酸化リン上で 6 0°C , 1 0時間減圧乾燥したもの） (a) Elemental analysis (%): (dried under reduced pressure over phosphorus pentoxide at 60 ° C for 10 hours)

C ： 4 5. 2 9 % C: 45.2 9%

H ： 8. 1 8 % H: 8.18%

N ： 1 1. 2 4 % N: 1 1.2 4%

C1 ： 1 4. 3 6 % C1: 1 4.36%

(b) 推定分子式： C₉H₁₈N₂0₃ 'HC1 (b) Estimated molecular formula: C ₉ H ₁₈ N ₂ 0 ₃ 'HC1

(c) 融点： 2 1 5°C (分解） (c) Melting point: 2 15 ° C (decomposition)

(d) 比旋光度：〔a〕 ² _D ³— 2 0. 5° ( c = 1 , H₂0) (d) Specific rotation: [a] ² _D ³ — 2 0.5 ° (c = 1, H ₂ 0)

(e) 紫外線吸収スぺクトル： 2 1 0 nm以上に特異な吸収を示さない。 . (f) 赤外線吸収スペクトル：主な吸収（波数）は次のとおりである。 ― (e) Ultraviolet absorption spectrum: no specific absorption above 210 nm. (f) Infrared absorption spectrum: The main absorption (wave number) is as follows. ―

3400(m) , 3250( s) , 3190( sh) , 3045( s) , 2600〜 3400 (m), 3250 (s), 3190 (sh), 3045 (s), 2600〜

2400(w) , 1730C s) , 1660( s) , 1530(m) , 148θ( s ) , 1420(m) , 1405( s) , 1375(m) , 1290(m) , 1205(m) , 1160( s) , 1140( sh) , 1135( s ) , 1040( ) , 960 (w) , 2400 (w), 1730C s), 1660 (s), 1530 (m), 148θ (s), 1420 (m), 1405 (s), 1375 (m), 1290 (m), 1205 (m), 1160 (s), 1140 (sh), 1135 (s), 1040 (), 960 (w),

935(m) , 915(m) , 865(w) , 800(m) , 665(m) , 935 (m), 915 (m), 865 (w), 800 (m), 665 (m),

625(w) , 600( s ) , 560(w) ( cm~^l ) 625 (w), 600 (s), 560 (w) (cm ~ ^l )

( w :弱， m :中， s :強） (w: weak, m: medium, s: strong)

第 2図（臭化力リゥム錠）参照。 See Fig. 2 (bromide pill).

(g) 溶剤に対する溶解性： (g) Solubility in solvent:

不溶： 5由ェ一テノレ , へキサン，ジェチルエーテノレェチル , ク口ロホゾレム Insoluble: 5 yue tenoren, hexane, Jechiruethenore Etil, Kuguchi Lohozorem

難溶：ピリジン，アセトン，ジメチルスルフォキシド，ジメチルホル Poorly soluble: pyridine, acetone, dimethylsulfoxide, dimethylform

ムアミド Muamid

可溶：エタノール，メタノール Soluble: ethanol, methanol

易溶：水 Easily soluble: water

(h) 呈色反応： (h) Color reaction:

陽性：ョ—ド反応 Positive: mode reaction

陰性：グレイグ · リ一バック反応，ニンヒドリン試薬，坂口反応，モ Negative: Greig-Liebeck reaction, ninhydrin reagent, Sakaguchi reaction,

―リッシュ ¾ , エールリッヒ試薬 ―Rich ¾, Ehrlich reagent

(り物質の色：無色 (Color of the substance: colorless

(j) 結晶の外観：無色針状結晶 (j) Crystal appearance: colorless needle-like crystals

(k) 安定性： pH 3〜 9の水溶液は、 1 0 0°C , 1 0分加熱で安定。 (k) Stability: An aqueous solution of pH 3 to 9 is stable by heating at 100 ° C for 10 minutes.

F A- 5 8 5 9の分子式および核磁気共鳴スぺクトルでみとめられる δ 3.1 9 ppm ( 9 H , s )のシグナルからその分子中にトリメチルァ . ンモニゥム基の存在が推定され、また δ 1.9 8 ppm( 3 H， s )にァセチルのメチルプロトン（ CH。CO—） 2. 4 2 ppm( 2 H , d ) , 3. 5 6 ppm( 2 H , d )に 2組のメチレンプ σ トン（一 CH₂— χ 2 ) , δ 4.7 ppm( 1 H， m) にメチレンプロトン（一 il— ) の存在がみとめられる。またこの 2,祖のメチレンプロトンは δ 4.7 ppm のメチンプロトンとそれぞれカツプリングしていることがデカツプリングにより明らかにされ -CH₂-CH-CH₂-の部分式の存在が推定される。その分子式から力ルボン酸の存在が推定され、これは遊離体で 1 5 9 Ο στΓ¹ に、塩酸塩で From the molecular formula of F-585-59 and the signal of δ3.19 ppm (9H, s) detected in the nuclear magnetic resonance spectrum, the presence of a trimethyl ammonium group in the molecule was estimated, and δ1.98 acetyl methylproton (CH.CO—) in ppm (3H, s) 2.42 ppm (2H, d), 3.56 ppm (2H, d) The presence of methylene protons (one il—) is found at 1 ppm (CH ₂ — χ 2) and δ 4.7 ppm (1 H, m). In addition, decoupling revealed that the methylenprotons of the two ancestors were coupled with methine proton of δ 4.7 ppm, respectively, and it was clarified by decoupling that the existence of the sub-formula -CH ₂ -CH-CH ₂ -was estimated. Is done. Its presence Chikararu Bonn acid from the molecular formula is estimated, which in ¹ 5 9 Ο στΓ 1 in free form, hydrochloride salt

1 7 3 0 ""¹に C= 0の吸収がみとめられることからも明らかである。 It is also evident from the fact that absorption of C = 0 is observed in 1 7 3 0 "" ¹ .

したがって、 FA— 5 8 5 9の平面構造式として Therefore, as the plane structural formula of FA-5 8 5 9

O PI CH₃ O PI CH ₃

CO CO

CH₃ NH CH ₃ NH

CH₃-N_@-CH₂-CH-CH₂-COO^e CH ₃ -N _@ -CH ₂ -CH-CH ₂ -COO ^e

CH₃ 力；推定されるとともに、 FA— 5 8 5 ⁹は新規化合物であると判断され次に生理活性物質 FA— 5 8 5 9の脂肪酸分解阻害能の測定を、ラット肝臓ホモジネートを用い、曰本生化学会編「生化学実験講座」第 9卷脂質の代謝， 7 5頁（ 1 9 7 5年，東京化学同人）記載の方法に準じて以下に記載の方法で行った。すなわち、 S I)系ラット（ 7週令，雄）を CH ₃ force; together are estimated, FA- 5 8 5 ⁹ is measured then the physiologically active substance FA- 5 8 5 9 fatty acid degradation inhibiting ability is determined to be a new compound, using rat liver homogenate, According to the Biochemical Society of Japan, “Biochemical Experiment Course,” Vol. 9, Lipid Metabolism, page 75 (1975, Tokyo Kagaku Dojin). That is, SI) rats (7 weeks old, male)

2日間絶食後、放血によって屠殺し、直ちに肝臓を取り出し 1 0倍量 After fasting for 2 days, sacrificed by exsanguination, immediately remove liver, 10 times

( W/V ) の 5 mMトリス一塩酸緩衝液（ pH 7. 5 )を含む 0.2 5 M蔗糖溶液を加え、テフロン棒付ホモジナイザーでホモジナイズする。 . 6 0 0 g , 2 0分間の遠心上澄みを 3 0, O O O x g 3 0分間遠心し、生じたペレツトを上記の蔗糖溶液に、肝臓湿重量 0.2 g / 0.5mT溶液となる濃度に懸濁し、その 0.5m^を酵素液として反応に用いた。 A 0.25 M sucrose solution containing (W / V) 5 mM Tris-monohydrochloride buffer (pH 7.5) is added, and the mixture is homogenized with a homogenizer equipped with a Teflon rod. The supernatant was centrifuged at 600 g for 20 minutes and centrifuged at 30,000 xg for 30 minutes, and the resulting pellet was suspended in the above sucrose solution to a concentration such that the liver wet weight was 0.2 g / 0.5 mT. 0.5m ^ was used as an enzyme solution for the reaction.

リン酸カリゥム緩纖（ pH 7.5 ) 3 0卢 mole, KC1 300μ mole, AT P 3 μ mole , MgCl ₂ 3 μ mole , 蔗糖 l 2 0 μ mole， 1 -¹ パルミチン酸（ 0.1 Ci ，牛血清アルブミンをモル比 1 ： 5になるように添加した溶液 PH 7.5 ) 0.6 /" mole , L一カルニチン（ L一 carnitine 0.6 ί mole ，コェンザィム A Co enzyme A ) Q. & μ -Phosphate potassium © beam Yuru纖(pH 7.5) 3 0卢mole, KC1 300μ mole, AT P 3 μ mole, MgCl 2 3 μ mole, sucrose l 2 0 μ mole, 1 - 1 palmitic acid (0.1 Ci, Solution containing bovine serum albumin added at a molar ratio of 1: 5 PH 7.5) 0.6 / "mole, L-carnitine (L-carnitine 0.6 ム mole, Coenzyme A Coenzyme A) Q. & μ

mole , ォキサル酢酸 0.2 i mole , 水又は阻害剤を含有する水溶液 0. mole, oxalacetic acid 0.2 i mole, water or aqueous solution containing inhibitor 0.

及び酵素溶液 0.5m^から成る反応混液 3. Οπ^をハイァミンハイド口ォキサイド 1 0 — X〔パッカード社（オランダ）製〕を浸した紙をつ And a reaction mixture consisting of 0.5m ^ of the enzyme solution. 3. Put Οπ ^ into a paper impregnated with Hamine Hydride Oxide 10 — X (manufactured by Packard (Netherlands)).

,一 OMPI一るした密閉試験管中に入れ、 3 ⁷°C 2 0分間好気的に振盪反応した。 , One OMPI one Placed in a sealed test tube that was shaken reaction 3 ⁷ ° C 2 aerobically 0 minutes.

7 0 %過塩素酸 0. 4m^を添加して反応を止めた後、生成した¹⁴ C0₂ を測定することによって酵素活性の測定をした。該化合物 5 8 5 9 The reaction was stopped by the addition of 70% perchloric acid 0. 4m ^, were measured enzyme activity by measuring the generated ¹⁴ C0 _2. The compound 5 8 5 9

の阻害活性は、阻害剤無添加の場合に比較して、 2 5 0 μ / miで 1 7 Inhibitory activity at 250 μm / mi was 17 times higher than when no inhibitor was added.

¾ , 5 0 0 μ / mZで 2 5 %， 1 0 0 0 ^ g m£で 3 6 %阻害であった。 The inhibition was 25% at ¾, 500 μm / mZ, and 36% at 1000 ^ g m £.

F A - 5 8 5 9の急性毒性 L 1)₅₀値は、マウス静脈內注射で 4 0 0 ^ Acute toxicity of FA-5 859 L1) ₅₀ value is 400 ^^ by intravenous injection in mice

/ 以上であった。 / It was over.

F A - 5 8 5 9またはその塩は、たとえば脂肪酸分解且害剤として有用である。 F A— 5 8 5 9またはその塩を脂肪酸分解阻害剤として用いるには、たとえば哺乳動物（例、マウス，ラット，人など）の糖尿病の治療を目的として、 E A— 5 8 5 9 として約 0. 2ないし 2 0 0 /^を FA-585-9 or a salt thereof is useful, for example, as a fatty acid decomposer and harmful agent. To use FA-5589 or a salt thereof as a fatty acid degradation inhibitor, for example, for the treatment of diabetes in mammals (eg, mice, rats, humans, etc.), about EA-5589 is used. 0.2 to 2 0 0 / ^

1曰投与量として投与する。また、； F A— 5 8 5 9またはその塩を投与するにあたっては、常套手段によってたとえば錠剤，顆粒剤，カプセル剤，液剤などの剤型にして経口的に、またたとえば注射剤として非経口 . Administer as 1 dose. In addition, when administering FA-5589 or a salt thereof, it is orally prepared by conventional means, for example, in the form of tablets, granules, capsules, and liquids, and parenterally, for example, as an injection.

的に投与することができる。 Can be administered in a controlled manner.

また、 _^ — 5 8 5 9は、脂肪酸の代謝を解明する上での生化学的試薬として使用することができる。たとえば、 — 5 8 5 9を反応液中に添加することによってカルニチン欠乏状態を容易に作りうるので、月旨肪酸酸化におけるカルニチンの役割をよリー層明確にすることができる。 Also, _ ^ — 5859 can be used as a biochemical reagent to elucidate the metabolism of fatty acids. For example, carnitine deficiency can be easily created by adding —58559 to the reaction solution, so that the role of carnitine in lunar fatty acid oxidation can be more clearly defined.

また、脂肪酸酸化におけるミトコンドリアとペルォキシゾームとの生理的役割はほとんど明らかにされていないので、ミトコンドリァへの脂肪酸の取り込みを F A _ 5 8 5 9を添加して阻害することによって、ペルォキシゾ一ムの役割およびペルォキシゾームとミトコンドリアでの酸化過程とのかかわりを明らかにすることが可能である。これらの場合、月旨肪酸酸化反応で通常用いられる反応系を用いて、細胞内顆粒成分の濃度 Furthermore, since the physiological role of mitochondria and peroxisomes in fatty acid oxidation has not been elucidated, the uptake of fatty acids into mitochondria was inhibited by the addition of FA 5859. It is possible to elucidate the role of peroxisomes and their relationship to the oxidation process in mitochondria. In these cases, the concentration of intracellular granule components is determined using a reaction system commonly used in the luster fatty acid oxidation reaction.

OMPI OMPI

、 WIPO― によっても異なる力；、一般的には FA— 5 8 5 9約 0.5 ¾ π^〜 5 0, WIPO- Depending on the force; generally FA-5 8 5 9 about 0.5 ¾ π ^ ~ 50

/m£濃度が有利に用いられる。 A / m concentration is advantageously used.

FA— 5 8 5 9は、さらに有利な脂肪酸分解阻害作用を示す化合物の合成中間体としても有用な物質である。 FA-585-9 is also a useful substance as an intermediate for the synthesis of compounds that exhibit a more favorable inhibitory action on fatty acid degradation.

図面の簡単な説明 BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

第 1図は参考例 2で得られた生理活性物質 F A— 5 8 5 9の赤外線吸収スぺクトルを、第 2図は参考例 3.で得られた生理活性物質 FA— 5 8 5 9の塩酸塩の赤外線吸収スぺクトルをそれぞれ表わす。 Fig. 1 shows the infrared absorption spectrum of the biologically active substance FA-589 obtained in Reference Example 2, and Fig. 2 shows the biologically active substance FA-589 obtained in Reference Example 3. 59 represents the infrared absorption spectrum of the hydrochloride, respectively.

発明を実施するための最良の形態 BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION

以下に参考例および実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。なお、以下の参考例において、培地の組成物のパーセントは、重量 Z容量パ一セントを示す。 Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Reference Examples and Examples. In the following Reference Examples, the percentage of the composition of the culture medium indicates the percentage by weight Z capacity.

参考例 1. Reference example 1.

ポテト · シユークロズ寒天からなる斜面培地上に予め十分に生育し胞子を形成したェメリセラ ' 力一ドリリネアター I P 0 5 8 5 9の一白金耳を、グルコース 2.0 % , マルト一ス 3· 0 %，玍大豆粉 1.5 % , コンスチ一プリカ一 1.0 % , ポリペプトン 0.5 % ,酵母ェキス 0.3 %及び食塩 0.3 % , pH ⁶.0からなる種培養培地 5 0 Οπ^を分注滅菌した 2 容坂口フラスコに接種して、往復振盪機上、 2 8°Cで 2日間培養した。この培養液の 1.5 を、ォレイン酸 3.0 <¾ ,生大豆粉 0· 5 %，麦芽ェキス 0.5 % , ポリプぺトン 0.5 % ,酵母ェキス 0.2 % , H₂P0 0.1 % , FeS0₄- 7H₂0 0.0 5 % , MnS0₄- ηΗ₂0 0.0 5 %及び MgSO 7Η₂ 0 0.0 5 % , ρΗ 4.5からなる主培養培地 1 0 0 ^を注入，滅菌した 2 0 0 ^容醱酵槽に移植した。この主醱酵は 2 8°C ,通気（ 1 00^/min), 攪拌（ 2 0 0 r.p.m. ) して 1 1 4時間，内圧 1.0 下で培養した。同様にして得られた主醱酵液の 2バッチ分を合わせて、過によって除菌体して、 FA— 5 8 5 9を含有する培養液を得た。 Emelisella 'Richidori lineator IP 0 5 8 5 9, which had grown sufficiently on a slant medium consisting of potato and sucrose agar in advance and formed spores. Ichisu 3 · 0%,玍大bean flour 1.5%, con steel one pre mosquito one 1.0% Poripeputo down 0.5%, yeast Ekisu 0.3% and 0.3% dietary salts, pH ⁶ .0 consisting seed culture medium 5 0 Οπ ^ Was inoculated into a two-volume sterilized Sakaguchi flask and cultured on a reciprocating shaker at 28 ° C. for 2 days. 1.5 of this culture, Orei phosphate 3.0 <¾, raw soybean flour 0 - 5%, malt Ekisu 0.5%, Poripupeto down 0.5%, yeast Ekisu _{0.2%, H 2 P0 0.1%} , FeS0 4 - 7H _{_{2 0 0.0 5%, MnS0 4}} - ηΗ 2 0 0.0 5% and MgSO 7Η ₂ 0 0.0 5%, consisting Roita 4.5 injecting main culture medium 1 0 0 ^, the 2 0 0 ^ Description醱酵bath sterile transplantation did. This main fermenter was cultured at 28 ° C, aeration (100 ^ / min), stirring (200 rpm) for 114 hours under an internal pressure of 1.0. Two batches of the main fermentation broth obtained in the same manner were combined and sterilized by filtration to obtain a culture broth containing FA-5589.

参考例 2. Reference example 2.

参考例 1.で得られた培養^液のうちの 1 ² 5 ^をアンバーライト — 1 2 0 ( H十型）（ 2 0 ^ )のカラムに通し、水 4 0 ^でカラムを洗滌後 N—アンモニア水 6 0 で溶出した。溶出液を 3 0 ^まで減圧濃縮してアンモニアを留去した後、クロマトグラフィー用活性炭カラム（ 3 0 £ )に通し、 Z 6 0 ^でカラムを洗滌後、 5 0 %メタノ一ル水 9 0 で溶出した。溶出液を 1 0 ^宛分画し、有効区分フラクション; Κ5〜 6 をあつめて減圧濃縮するとシロップ伏の粗物質 2 5.5？が得られた。 1 ² 5 ^ amber Lai bets of the resulting culture ^ liquid in Reference Example 1. - 1 2 0 (H ten inch) passed through a column of (2 0 ^), water 54 0 ^ by washing the column滌Afterwards, it was eluted with 60 N-ammonia water. The eluate was concentrated under reduced pressure to 30 ^ to evaporate ammonia, passed through an activated carbon column for chromatography (30 £), washed with Z 60 ^, and then washed with 50% methanol water 90%. Eluted. The eluate was fractionated into 10 ^, fractions of effective fraction; Κ5 to 6 were collected and concentrated under reduced pressure. 25.5? was gotten.

この粗物質を Ρ Η 4.0酢酸緩衝液 ( 0.0 5 Μ ) 1 0 Οι ^に溶解し、これを pH 4.0の酢酸緩衝液（ 0.1 Μ)で緩衝化したダウエックス 5 0 x 2 ( 5 0 0 m のカラムに通した。同 ^¾液 H 4.0 I £ , pH 4.3 l.5 £ , pH 4.6 1.5 £ , pH 5.0 1.5 £を用いて順次溶出を行つ . た。溶出液を 1 0 宛分画しフラクション 3 2〜6 3を集めてアンバーライト I R— 1 2 0 ( H十型） ( 3 0 Om£) のカラムに通し、水 6 0 で洗滌後 0.5 N—アンモニア水 1.5 ^で溶出した。溶出液を 5 0 Οπ^まで減圧濃縮し、濃縮液をダウエックス 1 X 2 ( 0H"型）（ 2 0 0 に通し、水 2 0 で洗滌した。この通過液および洗滌液を合せて減圧濃縮後、凍結乾燥を行った。ここに得られたシロップ状物質を室温放置すると無色吸湿性結晶伏の FA— 5 8 5 9遊離体 1 0.7 ^が得られた。この物質の赤外線吸収スペクトルを第 1図に示す。 This crude material was dissolved in Η 4.0 acetate buffer (0.05 Μ) 10 Οι ^, and this was buffered with pH 4.0 acetate buffer (0.1 Μ) Dowex 50 x 2 (500 m Elution was carried out sequentially using the same solution H 4.0 I £, pH 4.3 l.5 £, pH 4.6 1.5 £, pH 5.0 1.5 £. The fractions 32 to 63 were collected, passed through a column of Amberlite IR-120 (H10 type) (30 Om £), washed with water 60, and eluted with 0.5 N-aqueous ammonia 1.5 ^. The eluate was concentrated under reduced pressure to 50 Οπ ^, and the concentrated solution was passed through a Dowex 1X2 (OH type) (200) and washed with water 20. The combined filtrate and the washings were subjected to reduced pressure. After concentration, the solution was freeze-dried, and the syrup-like substance obtained was left at room temperature to obtain a colorless, hygroscopic, crystalline, FA-5589-free product 10.7 ^ 1 Infrared absorption spectrum of this substance Is shown in Fig. 1. .

参考例 3. Reference example 3.

参考例 2.で得られた FA— 5 8 5 9遊離体 2 1 0 を水 1 Οπ^に溶解し氷冷しながら 1 Ν—塩酸 lmを加え減圧濃縮後エタノール 1 を加 Dissolve the free form of FA-5 859 obtained in Reference Example 2 in 1 水 π ^ water, add 1Ν-hydrochloric acid lm under ice cooling, concentrate under reduced pressure, and add ethanol 1

、 1PO えて室温に放置して得られた結晶を水，エタノールから再結晶すると無 , 1PO And recrystallized from water and ethanol

色針状晶の FA— 5 8 5 9の塩酸塩 2 2 5 が得られた。 m.p.2 1 5°C There was obtained the hydrochloride salt of FA-5585-9 as colored needles. m.p.2 15 ° C

(分解）。この物質の赤外線吸収スぺクトルを第 2図に示す。 (Disassembly). Fig. 2 shows the infrared absorption spectrum of this substance.

参考例 4. Reference example 4.

参考例 1.に記載の方法に準じ以下に示す微生物を用い培養した結果、 As a result of culturing using the microorganisms shown below according to the method described in Reference Example 1,

F A- 5 8 5 9が生産されていることを確認した。 It was confirmed that F A-585 9 was produced.

ェメリセラ * 力ドリリネアタ一 IFO 3 0 9 1 1 , メ * 力 FO FO FO FO FO

ェメリセラ * 力ドリリネアター I FO 3 0 9 1 2 ，メセラリ力リ 3 3 3 3 リ

ェメリセラ · 力ドリリネアター IFO 3 0 8 5 0 , メリリ力メ 0 FO 0

ェメセラ ' 力ドリリネアタ一 I JFO 3 0 8 5 1 ， I JFO 3 0 8 5 1,

ェメセラ ·ニードランス . パール ' ァクリスタ一ター IFO 300 63, Shemela Knee Drance Pearl 'Acrystar IFO 300 63,

ェメセラ -ニードランス · バール · ァクリスタータ一 IFO 30844, ェメセラ ' クライストミヌタ一 I FO 3 0 8 3 9 , Yeme Sera-Knee Drance Baar Akristata IFO 30844, Yeme Sera 'Christ Minute IFO 3 0 8 3 9,

ェメセラ ' ニードランス . バール ·ニードランス IFO 30872， Heme Serra 'Needlance. Bar Needleance IFO 30872,

ェメセラ .ニードランス . バール ' ラ一ター I FO 3 0 8 4 7 , ェメセリラ . ルグローサー I FO 8 6 2 6 , メ me Serra ニー ne Dorrance バー Bar 'La Iter IFO 3 0 8 4 7, メ me Selira ル Le Groser IFO 8 6 2 6,

ェメセラ · ルグローサー IFO 8 6 2 9 , Yeme Sera Legroser IFO 8 6 2 9,

ェメセラ · ルグロ一サ一 I F 0 3 0 9 1 3 , メセラ 0 F F F

ェメセラ · ルグローサー IFO 3 0 8 5 2 , ¾ノェメセラ . ルグローサー I 3 0 8 5 3 , Yemera Sera Legroser IFO 30085 2, Penomeera Sera Legroser I 3 0853,

ェメセラ '二一ドランス I FO 5 7 1 9 , Eme Sera 'Niichi Drance I FO 5 7 1 9,

ェメセラ . ニードランス I FO 7 0 7 7 , メ emera ニー Nederlands I FO 7 0 7 7,

ェメセラ · ニードランス I FO 3 0 0 6 2 , Ayme Serra Knee Drance I FO 3 0 0 6 2,

ェメリセラ · サブラーター IFO 3 0 9 0 6 , Emery Sera Sublater IFO 3 0 9 0 6,

参考例 5 ァスペルギルス sp. 3 7 0 4株（ IFO 31171 , F E RM P— Reference example 5 Aspergillus sp. 3704 strain (IFO 31171, FE RM P—

6 2 2 4 )を、参考例 1.と同様の種培養培地 5 0 0 を分注滅菌した 2 6 2 2 4) was dispensed and sterilized with the same seed culture medium 500 as in Reference Example 1.

容坂口フラスコに接匿して、往復振盪培養機上で 2 8°Cで 2日間培養した。この培養液の 1.5 を、大豆油 3.05¾ ,生大豆粉 0.5 ，麦芽ェキス 0.5 , ポリぺプトン 0.5 % ,酵母エキス 0.2 %， KHs ^ 0.1 The cells were cultured in a reciprocating shaking incubator at 28 ° C for 2 days in a closed state in a Nosakaguchi flask. 1.5 of this culture solution was soybean oil 3.05¾, raw soy flour 0.5, malt ェ ex 0.5, polyptone 0.5%, yeast extract 0.2%, KHs ^ 0.1

%， FeS0₄ - 7H₂0 0.0 5 %， MnS0₄ · nH₂0 0.0 5 ^及び MgSO_A • 7H₂0 0.0 5 ， PH 4.5からなる主培養培地 1 0 0 を注入し、滅菌した 2 0 0 容醱酵槽に移植した。この主醱酵は 2 8 ，通気（100 £ vciln. ) ,攪拌（ 20 0 r. P. m. )の条件下 1 1 4時間，内圧 1.0K$ ci で培養した。得られた培養液をF過によって除菌体すると、 FA-5859 を含有する培養液⁸ 0 が得られた。 _{_{%, FeS0 4 - 7H 2 0}} 0.0 5%, MnS0 4 · nH 2 0 0.0 5 ^ and _{_{MgSO A • 7H 2 0 0.0 5}} , by injecting a main culture medium 1 0 0 consisting of PH 4.5, 2 0 was sterilized 0 volume Transferred to fermenter. This main yeast was cultured under the conditions of 28, aeration (100 £ vciln.), And stirring (200 r. P.m.) for 114 hours at an internal pressure of 1.0 K $ ci. When the obtained culture broth was removed by filtration, culture broth ⁸⁰ containing FA-5859 was obtained.

参考例 6. Reference example 6.

参考例 5.で得られた液 8 0 を参考例 2.と同様に処理，精製し得られたシロップ状の FA— 5 8 5 9遊離体 3.1 5 を水 1 5 0m に溶解し、. 氷冷しながら N—塩酸 1 5π^を加え減圧濃縮後エタノール 1 5 0m£を加えて放置して得られた結晶を水，エタノールから再結晶すると、無色針伏晶の FA— 5 8 5 9塩酸塩 3.3 ^が得られた。 m.p.2 1 °C (分解）元素分析値 C 4 5.3 9; H 7.7 3； N 1 1.5 0； CI 1 .77 % 実施例 1. The solution 80 obtained in Reference Example 5 was treated and purified in the same manner as in Reference Example 2, and the syrup-like FA-5589-free product 3.15 obtained was dissolved in 150 m of water. After adding N-hydrochloric acid (15π ^) with ice cooling and concentrating under reduced pressure, adding ethanol (150 mL) and allowing to stand, the resulting crystal was recrystallized from water and ethanol to give a colorless needle-like FA-5585 The hydrochloride 3.3 ^ was obtained. m.p.2 1 ° C (decomposition) Elemental analysis value C45.39; H7.73; N11.50; CI 1.77% Example 1.

FA- 5 8 5 9遊離体 1.6 0 を定沸点塩酸 4 Οπ^に溶解し、 9 5°C で 1 6時間放置した。反応液を減圧濃縮し、残留物に少量の水を加えて再び減圧濃縮した。残留物にメタノールとジェチルエーテルとの混合溶媒を加え、析出する結晶をろ取した。メタノールより再結晶すると、 1. 2 0 ？のデァセチル FA— 5 8 5 9の 2塩酸塩力;得られた。 The FA-585-9 educt 1.60 was dissolved in constant boiling hydrochloric acid 4Οπ ^ and left at 95 ° C for 16 hours. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, a small amount of water was added to the residue, and the mixture was concentrated again under reduced pressure. A mixed solvent of methanol and getyl ether was added to the residue, and the precipitated crystals were collected by filtration. When recrystallized from methanol, 1.20? Decetyl FA—5 859 dihydrochloride power; obtained.

― 99 ― 99

融点 2 1 9〜2 2 0 C , C^aJ D +6.3° ( c = 1.0 ， N-AcOH) Melting point 2 19-22 C, C ^a JD + 6.3 ° (c = 1.0, N-AcOH)

_ ΟΜΡΙ. 元素分析： C₇ H₁₈0₂N₂ C 1₂ - 理論値： C 3 6. 0 5 ； H 7. 7 7 ； N 1 2. 0 1 ； C1 3 0. 4 0 % _ ΟΜΡΙ. Elemental _{_{_{analysis: C 7 H 18 0 2 N}}} 2 C 1 2 - theoretical: C 3 6. 0 5; H 7. 7 7; N 1 2. 0 1; C1 3 0. 4 0%

実測値： C 3 6. 0 9 ； H 7. 7 2 ； N 1 1. 8 1 ； C 1 2 9. 8 0 % Observed value: C36.09; H7.72; N11.81; C129.80%

吸収スぺクトル： 2 1 0 nmから 7 0 0 nm までの紫外および可視領域には特徴的な吸収は示さない。 Absorption spectrum: no characteristic absorption in the ultraviolet and visible regions from 210 nm to 700 nm.

産業上の利用可能性 Industrial applicability

生理活性物質 F A- 5 8 5 9および生理活性物質デァセチル F A— 5 8 5 9は、優れた脂肪酸分解阻害作用を有しており、該物質またはそれらの塩は、たとえばマクス，ラット，人等の哺乳動物の糖尿病治療剤として利用され、また、該物質は、脂肪酸の代謝を解明するための生化学的試薬として使用される。 The physiologically active substance F-585-9 and the physiologically active substance decetyl FA-5589 have an excellent inhibitory effect on fatty acid degradation, and the substance or a salt thereof is, for example, Max, Rat, It is used as a therapeutic agent for diabetes in mammals such as humans, and the substance is used as a biochemical reagent for elucidating the metabolism of fatty acids.

O PI O PI

Claims

Expression

Contract

Or a compound thereof represented by ^

2. Formula range

Wherein the compound represented by the formula or a salt thereof is subjected to a hydrolysis reaction.

CH ₃

A method for producing a compound represented by the formula or a salt thereof.