UA59367C2 - 2-феніл-1,2 бензисоселеназол-3(2н)-он як активний агент для лікування хвороби альцгеймера - Google Patents

Abstract

Винахід стосується фармацевтичного препарату для лікування хвороби Альцгеймера. Активною речовиною препарату є 2-феніл-1,2-бензисоселеназол-3(2Н)-он. Механізм дії препарату полягає в пригніченні нейронної токсичності, спричиненої -протеїном.

Description

Опис винаходу

Предлагаемое изобретение относится к профилактическому и/или терапевтическому фармацевтическому 2 препарату для лечения болезни Альцгеймера, которое содержит в качестве активного вещества 2-фенил-1,2-бензизоселеназол-3(2Н)-ОН; причем зто активное вещество снижаєт нейронную токсичность, которая индуцирована р-амилоидньіїм протеином.

В некоторьїх странах в качестве профилактических и/или терапевтических лекарственньїх средств для болезни Альцгеймера применяются ингибиторьі ацетилхолинстеразьі, такие, например, как физостигмин или тетрагндроаминоакридин (ТГА). Однако при зтом могло не отмечаться успеха. Бьіли также предпринять! попьїтки использования 5-НТ-антагонистов, которне действуют на нервную систему, однако механизм их действия пока полностью не вніяснен.

Патологические признаки болезни Альцгеймера включают сенильнье бляшки и накапливание РНЕ (спаренньїх скрученньїх волокон) в мозгу.

Д-Амилоидньй протейин, которьій далее обозначаєтся также АД и которьій представляет собой основную составную часть сенильньїх бляшек, является нерастворимьі!м пептидом, состоящим примерно из 40 остатков аминокислот. Бьіло установлено, что АД со своей стороньі биохимически повреждаєт нейронь! и что такой зффект вьізьіваєт в особенности свернувшийся, не растворенньй Ар.

Таким образом, бьіло желательно появление вещества, которое предупреждает и/или облегчает начальнье симптомь! сенильной деменцип типа Альцгеймера; причем зто вещество входит в состав фармацевтического препарата, которьій подавляєт отмирание нейронов под действием токсичного Ар.

Авторами данного изобретения проведеньй два исследования по разработке низкомолекулярньх соединений, которьіе в состоянии преодолеть границь! кровотока мозга и снизить нейронную токсичность Ар. с ов При зтом неожиданно бьло установлено, что 2-фенил-1,2-бензизоселеназол-3(2Н)-ОН (обозначенньй далее для сокращения как соединение А) проявляет вьідающееся соответствующее данному изобретению действие. о

Применяемое в данном изобретений соединение А ингибирует отмирание нейронов, вьізьіваемое присутствием АрД. Таким образом, согласно изобретению применение соединения А пригодно в качестве профилактического и/или терапевтического фармацевтического препарата для лечения болезни Альцгеймера. рч-

Ар бьл идентифицирован в качестве основной составной части сенильньїх бляшек, патологического симптома болезни Альцгеймера. Он состоит из 39-40 остатков аминокислот. Далее известно, что АД обладаєт іш нейротоксичньм действием и вьізьшает тем самьм отмирание клеток. Сначала бьло установлено, что «(9 отмирание РС12-клеток, вьізьіваемоє нейротоксичньім действием Ар, в присутствимй АД подавляется, если б прибавлено соединение А (збселен). Позтому следует ожидать, что соединение А представляет собой Ввідающееся профилактическое и/или терапевтическое фармацевтическое средство для лечения болезни Іс)

Альцгеймера.

Мспользованное в данном изобретений соединение А может бьть синтезировано согласно способу, описанному в японском патентном описаний (КокКоКи) Мо2-38591 (японская вьіложенная заявка (Кокаї) «

Мо57-67568).

Соединение А может бьіть представлено в различньїх формах, как, например, в виде таблеток, капсул, ші с порошков, гранулятов, сиропов и иньекций с применением известньїх технологий с использованием добавок, "з носителей, связующих, вспенивателей и растворителей. " Следующая таблица представляет примерньй состав одной таблетки:

Соединение А БОмг 1 Карбоксиметилцеллюлоза 25Мг с Крахмал Бмг

Кристаллическая целлюлоза 40мг (95) Стеарат магния 2мМг б 50 Всего 122мг "І Соединение А проявляет свое первоначально указанное действие при любом способе введения, например, при обвічном оральном применений или при перроральном применении, например, при иньекции.

В случаеє орального применения доза соединения А составляет для взрослого от 100 до 200Омг/день, предпочтительно" от 200 до 100Омг/день; причем зта доза в зависимости от клинического состояния пациента может бьіть соответственно увеличена или снижена. і) При изучений токсичности соединения А бьіли установленьі значения ГО со для мьшей и крьїс. Согласно ко опьітам изобретателя значения І О 5о для мьішей составляют х»6.810мг/кг при оральном применений и 74Омг/кг при внутрибрюшинном применении. Для крьсс установлень значения І О 5026.810мг/кг при оральном применений бо и 58Омг/кг при внутрибрюшинном применениийи. Такие значения ГО 5о указьвают на то, что соединение А безопасно.

Вследствие зтого, если мишам или крьісам вводилась большая доза соединения А, не могли наблюдаться проблематичнье побочнье зффекть!.

Данное изобретение более подробно поясняєется описанньми примерами, причем зти примерь! не 65 ограничивают данное изобретение.

Пример 1 -Д-

Действие Соединения А в качестве ингибитора индуцированного АД отмирания нейронов в присутствий Ар:

Культивированнье клетки РС12 (извлеченнье из хромаффинной опухоли крьіс) реконструировали в 100мм луночном микропланшете (полученном из гранулята), которьій бьл покрьт полилизином и содержал ЮМЕМ-среду, которая бьла смешана с 1095 РОЗ (змбриональной бьчьей сьіворотки) и 595 лошадиной сьіворотки (сигма-продукт). Другими словами, клетки РС12 (1х1097 клеток на микропланшет) виіращивали в 100мм микропланшете, покрьтом полилизином. Чтобь вьявить различие клеток РС12, клетки РС12 вьращивали семь дней в ОМЕМ-среде, содержащей 595 ЕС5, 5Онг/мл МОБ (фактора роста нервной ткани) и 190 лошадиной сьіворотки. Затем клетки РС12 бьли извлеченьй путем пикетирования и суспендировань! в 70 подходящей среде с целью получения клеточной суспензий. Клеточную суспензию вносили в каждую лунку 9б-луночного мнкропланшета, покрьтого полилизином, (1хХ107 клеток на лунку). После зтого добавляли АВ (Васпет ГРеїіпспетікаїеп Ас) так, чтобьї конечная концентрация достигала 10мкМ. Соединение А добавляли каждьй раз до достижения конечной концентрации 0,1мкнН, 1,0 или 2,5мкМ. В качестве контрольного вещества добавляли в равньїх концентрациях аналогичньім способом соединение В (Соединение А, замещенное серой, не обладающее действием, подобньмм глутатион-пероксидазе; 2-фенил-1,2-бензотиазол-3(2Н)-он; получен по способу Наттермана). Клетки культивировали 48 часов - после добавления соединения А или соединения В.

К отобранньім таким образом клеткам прибавляли МТТ-реагент (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-тетразолийбромид). Инкубирование производили в течение 4 часов, и клетки подвергали лизису. Последующая обработка производилась с использованием так назьваемого МтТТ-способа путем колориметрии на основе реакции восстановления реагента для определения жизнеспособности клеток в суспензии (Вені, С. и др., СеїЇ, 77: 817-827, 1994). ів) . ш- Ге)

ОО ОБО : 87 ге)

Соєдиненне А Соединенне В т зо Ф добавленноє вещество (мкм) |Жизнеспособность клеток (95 контроля) Т-проба (изучение) со

КЕЗКТ ПОН ПОН КОН ПО Ф з 6111000 ю

ВЕСТИ НОТ ННЯ ПОН НО х ПО НО 610

ПЕРЛИ НОСКИ ПОН ОУН НО

611761 « 4 бю з50101 ви З с 17715160 і »

Как ясно видно из Таблиць 1, отмирание нейронов вьізьівалось Ар, причем скорость отмирания не могла с бьть снижена путем добавления соегдинения В. Однако если бьло добавлено соединение А в количестве 0,1мМкМ, їмкМ или 2,5мкМ, во всех случаях отмирание нейронов значительно снижалось (Р «0,0082, Р«0,0018 і и Р«0,0001). (95) Пример 2

Фу 50 Культивированньсе клетки РС12 (извлеченнье из хромаффинной опухоли крьіс) рекультивировали на 100 мм луночном микропланшете (полученном из гранулята), которьій бьл покрьт полилизином и содержал що ОМЕМ-среду, которая бьіла смешана с 1095 РС5 и 5956 лошадиной сьіворотки (сигма-продукт). Другими словами, клетки РС12 (1х109 клеток/на микроиланшет) вьииращивали в 100мм микропланшете, покрьтом полилизином.

Чтобьї вьіявить различие клеток РС12, клетки РС12 вьіращивали семь дней в ОМЕМ-среде, содержащей 590

С, 5бОнг/мл МОБ (фактора роста нервной ткани) и 195 лошадиной сьіворотки. Затем клетки РС12 бьли

Ге! извлеченьі путем пипетирования и суспендированьі в подходящей среде с целью получения клеточной суспензии. Клеточную суспензию помещали в каждую лунку ббмм микропланшета, покрьїтого полилизином, с 96 ді лунками (1х107 клеток/на лунку). После завершения адгезии клеток производили следующую обработку.

Прилипшие клетки РС 12 распределяли в ОМЕМ-среде. Затем к клеткам бьіло добавлено 10мкМ ЗМАР и 60 2,5МКМ соєдинения А. В контрольной группе прибавляли только ЗМАР. Каждую пробу инкубировали З часа.

После зтого каждую пробу, содержащую РС12, обрабатьвали приготовленньм раствором ОСЕН-БА (дихлорфлуоресцеина-допамина) (Моіесціаг Ргобре5з, Іпс-) в ДМСО (1мг/413мл) до достижения конечной концентрации бмкМ. Пробьй затем инкубировали в течение 30 минут. Клетки удаляли с применением трипсина-зтилендиаминтетрауксусной кислотьі (ЕО-ТА) и сснова извлекали путем центрифугирования бо (1.000об/минх5мин.). Извлеченнье клетки суспендировали в ХОмкл полибутенсульфона (РВ5(-)) при охлаждений льдом. Количество внутриклеточного пероксида водорода бьіло определено проточньмм цитометром. Клеточная суспензия подвергалась РАС5 (сортировке активированньїх флуоресценцией клеток), и бьіло измерено количество окисленного пероксидом флуоресцирующего вещества, 2,7-дихлорфлуоресцеина (ОСЕН). На оснований полученньїх результатов бьіло установлено, что в случае добавки ЗМАР образование пероксида водорода бьло в 1,3-1,4 раза вьіше, чем в тех случаях, когда ЗМАР не добавлялся. Повьішенное образование пероксида водорода в результате добавки ЗМАР может бьіть отчетливо снижено путем прибавления 2,5мМкМ соединения А (Р.«0,0015). то

Влияние соединения А на пониженноеє образование пероксида водорода, бю 61171 явявих 00000000

Следует обратить внимание, что образующийся под действием АД МО ускоряеєт образование пероксида водорода. Как можно видеть из Таблицьй 2, образование пероксида водорода может бьть подавлено в удовлетворительной степени путем добавления 2.5мМКМ соединения А.

Бьіло установлено, что при болезни Альцгеймера апоптоз находится во взаймосвязи с отмиранием нейронов. Далее бьіло показано, что отмирание нейронов вьізьіваєется Ар и что нейротоксичность обусловлена с образованием пероксида водорода (Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА., 90:7951-7955, 1993). Ге)

Как описано вьіше, индуцированное Ар образование пероксида водорода отчетливо подавляется путем добавления соединения А. Позтому можно утверждать, что соединение А оказьшвает отличное профилактическое или терапевтическое действие на болезнь Альцгеймера. Предложенное согласно данному изобретению соединение А представляет собой особенно полезньій профилактический или терапевтический - препарат при сенильной деменции, в частности, при болезни Альцгеймера. (Се)

Использованньсе в данном описаний сокращения имеют следующие значения:

Полилизин - полипептид лизина с различной длиной цепи; со

ОМЕМ - среда Игла (Евдіє), модифицированная Дельбеко (Оеїрессо); (о)

ОоСЕН - 27-дихлорфлуоресцеин; , Іс)

ЕС - змбриональная бьїчья сьіворотка;

ДМСО - диметилсульфоксид;

Трипсин ЕОТА - комплексообразователь на основе зтилендиамино-тетрауксусной кислоть и

МО - окись азота. « дю Данное изобретение относится также к фармацевтическому препарату для лечения и/пли облегчения -о болезни Альцгеймера. Фармацевтический препарат согласно изобретению содержит в качестве активного с вещества 2-фенил1,2-бензизоселеназол-3(2Н)-он (обозначенньій как соединение А) в зффективном количестве :з» активность которого основана на снижений нейротоксичности, индуцированной р-амилоидиьім протеином.

Claims (2)

1. 45 Формула винаходу (Се) 1. Применение 2-фенил-1,2-бензисоселеназол-3(2Н)-она в качестве активного вещества фармацевтического с препарата для профилактики и/или лечения болезни Альцгеймера.
2. 2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что фармацевтический препарат представлен в виде таблеток, Ге) 50 капсул, порошков, гранул, сиропов или иньекций. що Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2003, М 9, 15.09.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і ря науки України. Ф) іме) 60 б5