TWI335919B - Novel pyrazolopyrimidines as cyclin dependent kinase inhibitors - Google Patents

Description

1335919 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明有關可作為蛋白質激酶抑制劑之p比57坐并[1，5-a] p密 淀化合物、含此化合物之醫藥組合物、及使用此化合物或 醫藥組合物治療例如癌症、發炎、關節炎、病毒疾病、神 經退化疾病如阿茲海默氏（Alzheimer's)疾病、心臟血管疾病 及真菌疾病之治療方法。本申請案主張2002年9月4日申請 之美國專利臨時申請號60/407,999之優先權。 【先前技術】 週期素依賴性激酶（CDKs)為絲胺酸/蘇胺酸蛋白質激 酶，其為細胞週期及細胞增殖背後之驅動力。個別CDK's 如 CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6及 CDK7、 CDK8及類似物在細胞週期漸進中扮演不同角色且可歸類 為G卜S或G2M期酵素。非控制之增殖作用為癌細胞之檢驗 印記且在許多重要實心瘤中高頻率發生CDK功能錯調節。 CDK2及CDK4由於其活性在廣泛種類之人類癌症中經常錯 調節而特別受到注意。CDK2活性對細胞週期由G1漸進至S 期而言為必須者，且CDK2為G1檢核點之重要成分之一。檢 核點作用為維持細胞週期事件之適當順序且使細胞對傷害 或對增殖訊號反應，同時在癌細胞中喪失適當之檢核點控 制造成腫瘤形成。該CDK2路徑以腫瘤抑制劑功能（如p52、 RB及p27)及癌基因活化作用（週期素E)之程度影響腫瘤形 成。許多報導已證明CDK2之輔活化劑（週期素E)及抑制劑 (p27)兩者分別於乳癌、結腸炎、非小細胞肺癌、胃癌、前 87253 1335919 列腺癌、膀胱癌、非-荷葛金（non-Hodgkin's)淋巴癌、印巢 癌及其他癌症中過度表現或表現不足。它們的改變表現已 顯示與增加之CDK2活性量及不良之總存活率有關。此觀察 使CDK2及其調節路徑為近年來發展之必要標的，數種腺苷 5·-三磷酸酯（ATP)競爭性小有機分子以及肽於文獻中已報 , 導作為有潛力治療癌症之〇0尺抑制劑。1^6,413,974第1襴 第23行-第15欄第10行提供對各種CDKs及其與各種癌症關 聯性之良好描述。

CDK抑制劑為已知。例如黃素比多醇（flavopiridol)(式I) 為目前經歷人類臨床試驗之非選擇性CDK抑制劑。A. M.

Sanderowicz等人，J. Clin. Oncol. (1998)16, 2986-2999。 ch3

其他已知之CDKs抑制劑包含例如歐樂姆辛（olomoucine) (J Vesely等人，Eur. J. Biochem.，（1994) 224, 771-786)及羅可 維汀（roscovitine)(I· Meijer等人，Eur. J. Biochem·，（1997) 243, 527- 536)。113 6,107,305描述某種吡唑并[3,4吨]吡啶化 合物為CDK抑制劑《該305專利之例舉化合物具有式Π : 87253 1335919

K.S. Kim等人，J_ Med. Chem. 4^(2002) 3905-3927及WO 02/10162揭示某種胺基噻唑化合物為CDK抑制劑。

吡唑并嘧啶為已知。例如WO 92/18504、WO 02/50079、 WO 95/35298、WO 02/40485、EP 94304104.6、EP 0628559(相 當於 US 專利 5,602，136; 5,602，137 及 5,571，813)、US 6,383,790' Chem. Pharm. Bull., (1999) 47 928> J. Med. Chem., (1997) 20., 296 ' J. Med. Chem., (1976) 12_517及Chem. Pharm. Bull., (1962) \0^ 620揭示各種p比吨并π密症。

仍需要一種新穎化合物、調配物、治療方法以治療與 CDKs有關之疾病及失調。因此，本發明之目的係提供一種 可用以治療或預防或舒緩此疾病及失調之化合物。 【發明内容】 許多具體例中，本發明提供作為週期素依賴性激酶之抑 制劑之新一類吡唑并[1，5-a]嘧啶化合物、製備此化合物之 方法、含一或多種此化合物之醫藥組合物、製備包括一或 多種此化合物之醫藥調配物之方法、及使用此化合物或醫 藥組合物治療、預防、抑制或舒缓與CDKs有關之一或多種 疾病之方法。 87253 -9- 1335919 一方面’本發明揭示一種化合物、或該化合物之醫藥可 接受性鹽或溶劑化物，該化合物具有式III所示一般結構.

式III 其中： Q為-S(〇2)_或-C(0)-; R為芳基或雜芳基’其中該芳基或雜芳基可為未經取代或 視情況獨立經一或多個可相同或不同之基團取代，各基圏 獨立選自由 li 素、CN、-OR5、SR5、-s(o2)R6、-S(02；)NR5R6、 -NR5R6、-C(0)NR5R6、CF3、烷基、芳基及〇(：|73所組成之组 R2係選自 CN、NR5R6、-C(〇2)R6、-C(0)NR5R6、-OR6、-SR6 ' -S(02)R7、-S(02)NR5R6、-N(R5)S(02)R7、_N(R5)C(0)R7及 -N(R5)C(0)NR5R6 ;炔基、雜芳基、CF3、雜環基、炔基烷 基、環烷基、經1 -6個可相同或不同且獨立選自後述R9基所 示之R9基取代之烷基、 HCH2)m-N[^N—R8

芳 ^-Ν' /N - R8

87253 -10- 1335919 R3係選自_下列所組成之組群：Η、鹵素、-NR5R6、 -C(0)NR5R6、烷基、炔基、環烷基、芳基、芳基烷基、雜 環基、雜環基燒基、雜芳基及雜芳基烷基、

其中R3之該院基、環燒基、芳基、芳基燒基、雜環基、雜 環基烷基、雜芳基及雜芳基烷基及對上述R3剛顯示之結構 之雜環基團各可經或視情況可獨立經一或多個可相同或不 同之基團取代，各基團獨立選自下列所組成之组群：鹵素、 烷基、芳基、環烷基、CF3、CN、-〇CF3、_(CR4R5)n〇R5、 -OR5、-NR5R6、-(CR4R5)nNR5R6、_c(〇2)r5、_c(〇)r5 \c(〇) NR5R6、-SR6、-S(02)R6、-S(〇2)NR5R6、-N(R5)s(〇2)R7、_n(r5) C(0)R7及-N(R5)C(0)NR5R6 ; R4為H、鹵基或燒基； R5為H或烷基； R係選自由Η、燒基、芳基、芳基燒基、環燒基、雜環基、 雜環基㈣、料基及㈣錢顧組成之料，其中該 烷基、芳I、芳基烷基、環貌基、雜環基' 雜環基燒基、 雜芳基及雜芳基燒基可為未經取代或视情況經—或多個可 87253 -11- 1335919 相同或不同之基團取代，各基團獨立選自下列所組成之組 群：鹵素、烷基 '芳基、環烷基、雜環基烷基、CF3、〇CF3、 CN、-〇R5、_NR5Rl。、_N(R5)B〇c、_(CR4R5)n〇R5、_c(〇〇r5、 -C(0)R5、_C(〇)NR5Rl。、_S〇3h、_SR1Q、-S(〇2)R7、_s(〇2) NR5R10、_N(R5)S(〇2)R7、_n(r5)c(〇)r7& _n(r5)c(〇)nr5r10 ;

RlG係選自由H、烷基、芳基、芳基烷基、環烷基、雜環 基 '雜環基烷基、雜芳基及雜芳基烷基所組成之組群，其

中該烷基、芳基、芳基烷基、環烷基、雜環基、雜環基烷 基、雜芳基及雜芳基烧基可為未經取代或視情況經一或多 個可相同或不同之基團取代，各基團獨立選自下列所組成 义组群：_素、烷基、芳基、環烷基、雜環基烷基、cF3、 〇CF3、CN、-0R5、_NR4R5、_n(r5)b〇c、_(CR4R5)n〇R5、 -c(o2)R5、.c(0)NR4r5、_c(0)r5、_s〇3h、_sr5、_s(〇2)r7、 •s(〇2)nr4r5、-N(R5)S(〇2)R7、-n(r5)c(o)r7及-n(r5)c(o) NR4r5 ;

或視情況（i)基團_NR5R10中之R5及Rio或（ii)基團_NR5R6中 之R及R6可一起形成環烷基或雜環基基團，該環烷基或雜 %基基團各為未經取代或視情況獨立經一或多個R9基取 代； R係選自由烷基、環烷基、芳基、雜芳基、芳基烷基及 雜:y基烷基所組成之組群，其中該烷基、環烷基、雜芳基 燒基、芳基、雜芳基及芳基烷基可為未經取代或視情況獨 儿經一或多個可相同或不同之基團取代，各基團獨立選自 下歹〗所組成之組群：卣素、烷基、芳基、環烷基、cf3、ocf3、 87253 -12- 1335919 CN、-OR5、_NR5Ri。、_CH2〇r5、c(〇2)r5、c(〇)nr5r10、 -C(0)R5、-SR1。、-S(02)R10、-S(02)NR5R10、-N(R5)S(02)R10、 _n(r5)c(〇)R1()及-n(r5)c(o)nr5r10 ; R8係選自由 R6、-c(o)NR5R10、-s(o2)NR5R10、_c(o)R7及 -S(〇2)R7所組成之組群； r9係選自齒素、CN、-nr5r10、_c(o2)r6、-c(o)NR5R10、 -OR6、-SR6、-S(〇2)R7、_s(〇2)NR5Rl。、_n(r5)s(〇2)r7、 -n(r5)c(o)r7及 _N(R5)C(0)NR5R10 ; m為0至4 ;及 n為1至4。 式III化合物可作為蛋白酶激酶抑制劑且可用以治療及預 防增殖性疾病例如癌症、發炎及關節炎。其亦可用於治療 神經退化疾病如阿茲海默氏（Alzheimer，s)疾病、心臟血管疾 病、病毒疾病及真菌疾病。 【實施方式】 一具體例中，本發明揭示由結構式III所示之吡唑并[1，5-a] 嘧啶化合物，或其醫藥可接受性鹽或溶劑化物，其中各種 基團如前述定義。 另一具體例中，R係選自由苯基、萘基、2_吡啶基、4_吡 啶基、3-吡啶基、4_吡啶基_N_氧離子、3_吡啶基_N_氧離子、 i，3_嘧唑-2_基、嘧啶_5_基、吡畊_3_基及嗒畊基所組成之 組群。 另一具體例中，R2為CF3、CN、環烷基、_〇r6、-C(〇)〇r4、 -CH2〇R6、芳基或雜芳基。 87253 -13· 1335919 另一具體卹中，R3為H、烷基、未經取代之芳基、未經取 代之雜芳基、經一或多個選自由鹵素、CN、_〇r5、CF3、 -OCF3、低碳烷基及環烷基所組成之組群之基圏取代之芳 基、雜環基、經一或多個選自由鹵素、Cn、-〇R5、CF3、 -OCF3、燒基及環烷基所組成之組群之基團取代之雜芳基、

另—具體例中，R4為Η或低碳烷基。 另一具體例中，R5為Η或低碳烷基。 另—具體例中，m為0至2 » 另—具體例中，η為1或2。 又—具體例中，R係選自由苯基、2-吡啶基、4-吡啶基、 -吨呢基、4-吡啶基-Ν-氧離子、3-吡啶基-Ν-氧離子、1，3-**塞嗅·2·基及嘧啶-5-基所組成之組群。 又—具體例中，R2為CF3、CN或環烷基。 又—具體例中，R3為Η、低碳燒基、環垸基、c(0)0R4或 其中各該炫·基及芳基為未經取代或視情況獨立經一 或夕個可相同或不同之基團取代，各基團獨立選自由F、

Cl \ rs ' CF〗、低碳烷基、甲氧基及CN所組成之組群，或R3 為 8?253 . -14- 1335919

又一具體例中，R4為Η。 又一具體例中，R5為Η。 又一具體例中，m為0。 又一具體例中，R為2-p比淀基、3-p比淀基、4-p比淀基、4-吡啶基-N-氧化物或3-吡啶基-N-氧化物。 又一具體例中，R2為環丙基、環丁基或環戊基。 又一具體例中，R3為甲基、乙基、異丙基、第三丁基、 雜芳基、C1、未經取代之苯基、經一或多個選自由ρ、Br、 Cl、〇Me、CH3及CF3所組成之組群之基團取代之苯基、

又一具體例中，R3為

又一具體例中，R8為（CH2)n〇H或（CH2)n〇CH3，其中n為1 或2。 又—具體例中，R3為呋喃基。 本發明化合物群示於表1。 87253 -15- 1335919

87253 -16- 1335919

S7253 -17- 1335919

上述及整個揭示中所用 應了解為具有下列意義： 之下列名詞除非另有說明 否則 病患"包含人類及動物。 "哺乳類"意指人類及其他哺乳類動物。 "燒基"意指可為直鏈或分支且在鏈中包括約1至約2〇個 碳原子之脂族烴基。較佳之烷基在鏈中含約1至約12個破原 子。更佳之烷基在鏈中含約1至約6個碳原子。分支意指一 或多個低碳烷基如甲基'乙基或丙基鍵結至直鏈烷基鏈 上。”低碳烷基"意指鏈中含约1至约6個碳原子且可為直鏈 或分支之基。”經取代娱*基”意指該烷基可經一或多個可相 同或不同之取代基取代，各取代基係獨立選自由卣基、燒 基、芳基、環烷基 '氰基、羥基、燒氧基、烷硫基、胺基、 87253 -18 - 1335919 -nh(烷基）、_NH(環烷基）、_N(烷基h、羧基及-c(〇)〇_烷基 所組成之組群。適宜烷基之非限制性實例包含甲基、乙基、 正丙基、異丙基及第三丁基。 ’’炔基”意指含至少一個碳-碳參鍵且可為直鏈或分支且在 鏈中包括約2至約15㈣原子之脂族烴基。較佳之块基在鏈 中八有，2至约12個碳原子；且更好鏈中含約2至約4個碳原 子。分支意指-或多個低碳燒基如曱&、乙基或丙基鍵結 至直鏈炔基鏈上《"低碳炔基”意指鏈中約2至約6個碳原子 且可為直鏈或分支之基。適宜炔基之非限制性實例包含乙 立土丙块基、2_ 丁炔基及3'甲基丁炔基。"經取代炔基" 意指炔基可經一或多個可相同或不同之取代基取代，各取 代基係獨立選自由貌基、芳基及環燒基所組成之組群。 芳土意扣包括約6至約14個碳原子、較好約6至約1〇個 碳原子之芳族單環或多環系統。料基可視情況經一或多 個可相同或不同且如本文定義之”環系統取代基••所取代。 適宜芳基之非限制性實例包含苯基及萘基。 雜方基"意指包括約5至約14個環原予 '較好約5至約 個環原子且其中—或多個環原子為非碳之元㈣如氮、氧 或硫（早獨或組合狀況之芳族單環或多環系統。較好雜芳 基含約5至約6個環原子。該”雜芳基，，可視情況經一或多個 可相同或不同且如本文定義之”環系統取代基"取代。雜芳 基命名前之字首氮雜、氧雜或硫雜分別意指存在有至少一 個^氧或硫料作為環原子。雜芳基之氮原子可視情況 乳十應ϋ化物。適宜雜芳基之非限制性實例包含 87253 •19- 1335919 吡啶基、吡畊基、呋喃基、p塞吩基、嘧啶基、異巧唾基、 異雀咏基、1^号σ坐基、p塞峻基、p比唑基、吱咕基、峨p各基、 三吐基、1，2,4-邊二吐基、p比畊基、塔畊基、唆„号琳基、酉太 畊基、咪唑并[l，2-a]吡啶基、咪唑并[2，l-b]噻唑基、苯并嗅 咭基、丨味基、氮雜丨嗓基、苯并咪吐基、苯并p塞吩基、 喹啉基、咪唑基、嘧吩并吡啶基、喳唑啉基、毯吩并喃唆 基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、異喹啉基、苯并氮雜 Θ] 11朵基、1，2,4-三ρ井基、苯并p塞峻基等。 "芳烷基"或"芳基烷基"意指芳基-烷基_，其中芳基及烷基 如如述。較佳之方纟元基包括低碳捉基。適宜芳燒基之非限 制實例包含苄基、2 -苯乙基及萘基甲基。經由燒基與母基 團键結。 "烷基芳基"意指烷基-芳基_，其中烷基及芳基如前述。較 佳之烷基芳基包括低碳烷基。適宜烷基芳基之非限制實例 為肀+基。經由芳基與母基图鍵結。 "環烷基"意指包括約3至約1 〇個碳原子，較好約5至約j 〇 個碳原子之非芳族單-或多環系統。較佳之環烷基環含有約 5至約7個環原子。環烷基可視情況經一或多個”環系統取代 基''取代，其可相同或不同且如前述定義。適宜單環環烷基 之非限制實例包含環丙基、環戊基、環己基、環庚基等。 適宜多環環烷基之非限制實例包含丨_十氫萘基、原冰片 基、金剛垸基等。 "齒素"意指敦、氯、漠或破。較佳為孰、氣及漠。 衣系統取代基"意指附接至芳族或非芳族環系統之取代 87253 *20- 1335919 基，其可置換在例如環系統所提供之氮上。環系統取代基 可相同或不同，各獨立選自由芳基、雜芳基、芳燒基、二 基方基、雜芳燒基、燒基雜芳基、幾基、經基燒基、燒氧 基、芳氧基、芳烷氧基、醯基、芳醯基、卣基、硝基、氰 基幾基、燒氧基幾基、芳氧基幾基、芳貌氧基幾基、燒 基續騷基、芳基伽基、雜芳基續醯基、貌硫基、芳硫基、 雜芳硫基、芳烷硫基、雜芳烷硫基、環烷基、雜環基、 HN-、γ,γ2Ν_燒基…YiY2NC⑼_及以则2-(其中L 及γ2可相同或不同且獨立選自由氣、燒基 '芳基及芳燒基 所組成之組群）所組成之組群。 "雜環基|，意指包括約3至約職環原予，較好約5至賴 I:環原子之非芳族飽和單環或多環系統，其中環㈣卜 1广=子為碳以外之元素’例如氮、氧或硫(單獨或組 :衣系統中不存在相鄰氧及/或硫原子。較佳之雜環基含 雜分別意Γ個^原子。雜環基名稱之字首氮雜、氧雜或硫 其^ <1至少存在有氮、氧或硫原子作為環原子。雜環 ^CB、任何.可以輕保護方式存在例如·Ν(Β〇(°、 八z、N(T〇S)基等；此經保護基團亦視為本發明之一部 刀。茲雜環基可視情況經— 其 次夕個3衣系統取代基"取代， 二7氧化1不同且如本文定義。雜環基之氮或硫原子可視 清虱化成對應之N-氧化物、s負 , S虱化物或S，S-二氧化物。適 且早銥雜％基環之非限制 畊基、嗎ϋ i 1匕3底哫基、吡咯啶基、哌 开土馬啉基、硫嗎啉基、嘍唑啶其卜 氫吱喃基、四氫喧吩基等。…4--乳環己基、四 87253 -21. 1335919 需注意本發明之含雜原子之環系統中，在相鄰於N、0或 S之碳原子上無羥基且在相鄰其他雜原子之碳上無Ν或S 基。因此，例如，下列環中：

-ΟΗ基不直接連結至標記為2及5之碳上。 ”炔基烷基”意指炔基-烷基-，其中炔基及烷基如前述。較 佳之炔基含有低碳炔基及低碳烷基。經由烷基键結至母基 團上。適宜炔基烷基之非限制實例包含炔丙基甲基》 "雜芳烷基"意指雜芳基-烷基-，其中該雜芳基及烷基如前 述。較佳之雜芳烷基含有低碳烷基。適宜芳烷基之非限制 實例包含吡啶基曱基及喹啉-3-基曱基。經烷基键結至母基 團上。 ”羥基烷基”意指ΗΟ-烷基-，其中烷基如前述。較佳之羥 基烷基含低碳烷基。適宜羥基烷基之非限制實例包含羥基 甲基及2-羥基乙基。 "醯基"意指H-C(O)-、烷基-C(O)-或環烷基-C(O)-基，其 中各種基如前述。經由該羰基鍵結至母基團。較佳之醯基 含低碳烷基。適宜醯基之非限制實例包含曱醯基、乙醯基 及丙酿基。 "芳醯基”意指芳基-c(o)-基，其中芳基如前述。經由該羰 基键結至母基團。適宜芳醯基之非限制實例包含苯甲醯基 87253 -22- 1335919 及1-萘甲醯基。 "烷氧基"意指烷基-〇-基，其中烷基如前述。適宜烷氧基 之非限制實例包含甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基 及正丁氧基。係經該醚氧鍵結至母基團。 "芳氧基"意指芳基-〇-基，其中芳基如前述。適宜芳氧基 之非限制實例包含苯氧基及莕氧基。係經由該醚氧鍵結至 母基圑。 "芳烷氧基”意指芳烷基-0-基，其中芳烷基如前述。適宜 芳烷氧基之非限制實例包含苄氧基及1-或2-莕基曱氧基。係 經由醚氧键結至母基團。 ”烷硫基"意指烷基-S-基，其中烷基如前述。適宜烷硫基 之非限制實例包含甲硫基及乙硫基。係經由該硫鍵結至母 基團。 "芳硫基"意指芳基-S-基，其中芳基如前述。適宜芳硫基 之非限制實例包含苯硫基及萘硫基。係經由該硫鍵結至母 基團。 ”芳烷硫基”意指芳烷基-S-基，其中芳烷基如前述。適宜 芳烷硫基之非限制實例為苄硫基。係經由該硫鍵結至母基 團。 ”烷氧基羰基"意指烷基-0-C0-基。適宜烷氧基羰基之非 限制實例包含甲氧基羰基及乙氧基羰基。係經由該羰基鍵 結至母基團。 ”芳氧基羰基”意指芳基-O-C(o)-基。適宜芳氧基羰基之非 限制實例包含苯氧基羰基及莕氧基羰基。係經由該羰基键 87253 -23- 1335919 結至母基團。 ”芳烷氧基羰基”意指芳烷基-〇-c(o)-基。適宜芳烷氧基羰 基之非限制實例為芊氧基羰基。係經由該羰基鍵結至母基 團。 "烷基磺醯基"意指烷基-s(o2)-基。較佳之基為其中烷基 為低碳烷基者。係經由該磺醯基鍵結至母基團。

”芳基磺醯基”意指芳基-s(o2)-基。係經由該磺醯基鍵結 至母基團。 ”經取代”意指在所指定之原子上之一或多個氫經選自所 示基置換，但在既有環境下不超過所指定原子之正常價 數，且該取代產生穩定化合物。適宜取代基及/或變數之組 合若可導致穩定化合物則均可行。”安定化合物”或"安定結 構"意指化合物充分穩定而可自反應混合物單離至可用程 度之純度並調配成有效之治療劑。 "視情況經取代”意指經特定基、殘基或基團之視情況取

代。 需了解說明書、反應圖、實例及表中之具未滿足價數之 任何雜原子係假設具有氫原子以滿足該價數。 當化合物中之官能基稱為"經保護"時，此意指該基為經 改質態以在化合物進行反應時，排除在所保護位置上不需 要之副反應。適宜保護基將可由熟知本技藝者所了解且可 參考標準教科書如T. W. Greene等人，有機合成之保護基 (1991), Wiley,紐約。

當任何變數（如芳基、雜環基，R2等）在任何構成或式III 87253 -24- 1335919 中出現一 /入以上時，其各次出現之定義在每一次其他出現 時各有其獨立之定義。 口本又所用（"組合物”欲包含包括特定量之特定成分之產 -以及直接或間接源自組合特定量之特定成分之任何產 物。 本發明化合物之前藥及溶劑化物亦包含於本文。本文所 用之則藥代表為藥物前驅物且在對個體投藥後經代謝或 化學過程歷經化學轉換產生式m化合物或其鹽及/或溶劑 化物之化合物。fllj藥之討論見於了出即咖及乂 Stella，A C S. 研系列之作為新穎遞送系統之前藥（1987)H及藥物設 計中之生物可逆载劑，（1987)EdwardB.Roche編輯，美國醫 藥協會及派拉蒙出版社，兩者均併於本文供參考。 落劑化物”意指本發明化合物與一或多種溶劑分子之物 理結合。此物理結合包含變化程度之離子及共價鍵結，包 口氫鍵《些例中，落劑化物在例如一或多種溶劑分子併 入結晶固體之晶格時，將可單離。"溶劑化物"包含溶液相 及可单離溶劑化物兩者。適宜溶劑化物之非限制實例包含 乙醇鹽、甲醇鹽等。"水合物"為其中溶劑分子為H2〇之溶劑 化物。 有效量或療有效量I意欲描述本發明化合物或組合 物有效抑制CDK(S)且因此可產生所需治療、舒緩、抑制或 預防效果之量。 式III化合物可形成鹽，其亦在本發明範圍内。有關本文 之式III化合物應了解有關其鹽類，除非另有說明。本文所 •25· 87253 1335919 ' (’’員）代表與我機及/或有機酸形成之酸性鹽以及與 ’’’、機及/或有機驗形成之驗性鹽。此外，當式III化合物同時 含有驗性基1¾如（但不限於）Μ或咪錢酸性基團如（但不 、、）卷'酸時，可开）成兩性離子（"内鹽"）且包含在本文所用 t鹽（類）"名詞中。以醫藥可接受性（亦即非毒性生理可接 又）鹽心佳’但亦可使用其他鹽。式ΙΠ化合物之鹽可例如藉 式III化合物與某量之酸或鹼，例如等當量之酸或鹼，在介 負々其中鹽可机;殿之介質中或在水性介質中反應，接著滚 乾而形成。 例舉之酸加成鹽包含乙酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、 奉％酸鹽、瓴酸氳鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦 酸鹽、樟腦磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、 氫琪酸鹽、乳酸鹽、順τ缔二酸鹽、甲㈣酸鹽、茶橫酸 鹽、硝酸鹽、草酸鹽、嶙酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、丁二 酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽、甲苯磺酸鹽等。 此外，瓜被視為適合自驗性醫藥化合物形成醫藥可接受 性鹽之酸討論於例如s. Berge等人，醫藥科學期刊（1977) Min 1-19 ; P. Gould,國際醫藥期刊（1986)11 2〇1217 ; Anderson等人，醫藥化學實務（丨996)，學院出版社，紐約；及橘 皮書（食品藥物管理局，華盛頓D.C.之網站）。該等揭示併入 本文供參考。 例舉之驗性鹽包含銨鹽、鹼金屬鹽如鈉 '鋰及_鹽、鹼 土金屬鹽如齊及鎮鹽、與有機驗（例如有機胺）如二環己基 胺、第二丁基胺之鹽、及與胺基酸如精胺酸、離胺酸等之 87253 -26- 1335919 鹽。驗性含氮基可以例如低碳燒基齒（如甲基、乙基、及丁 基氯化物、溴化物及碘化物）、硫酸二烷酯（如硫酸二甲酯、 一乙酯及二丁酯）、長鏈鹵化物（如癸基、月桂基、及硬脂基 氯化物、溴化物及碘化物）、芳烷基齒化物（如苄基及苯乙基 溴化物）等予以四級化。 所有此酸鹽及鹼鹽欲在本發明範圍内之醫藥可接受性鹽 且所有酸及鹼鹽被視為均等於游離態之本發明目的之對應 化合物。 式III化合物及其鹽、溶劑化物及前藥可存在為其互變體 (例如醯胺或亞胺基醚>所有此互變態在本文中為本發明2 一部分。

異構物等）例如因各種取代基之不對稱碳而存在之異構物

地應用於本發明化合物之對映異構物 異構物、互變體、位置異構物、消旋 化物及前藥。 〕1974命名法所定義 "前藥"等名詞欲同等 、立體異構物、旋轉 消旋物或前藥之鹽、落劑 87253 -27- 1335919 本發明化合物具有藥理性質；尤其，式m化合物可能為 蛋白質激酶如週期素依賴性激酶（CDKs)例如CDC2 (CDK1)、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7及 CDK8之

抑制劑。式III之新穎化合物預期可用於治療增殖性疾病如 癌症、自動免疫疾病、病毒疾病、真菌疾病、神經學/神經 退化失調、關節炎、發炎、抗-增殖（如眼睛視網膜病）、神 經7L、禿髮及心臟血管疾病◊該等疾病及失調許多列於前 面引述之US 6，413,974’其揭示併於本文供參考。 更詳言之，式III化合物可用於治療各種癌症，包含（但不 限於）下列：癌瘤包含（但不限於）膀胱癌、乳癌、結腸癌、 腎癌肝癌、肺癌（包含小細胞肺癌）、食道癌、膽囊癌、卵 巢癌、胰癌 '胃癌、頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌及皮膚癌（包 含鱗狀細胞癌）；

淋巴樣系之造血腫瘤，包含白血癌、急性淋巴白血癌、 急性淋巴胚細胞白血癌、B-細胞淋巴癌、τ-細胞淋巴癌、 霍金氏（Hodgkins)淋巴癌、非霍金氏淋巴癌、髮細胞淋巴癌 及布克特氏（Burkett’s)淋巴癌； 骨髓系之造血腫瘤，包含急性及慢性骨髓性白血癌、脊 髓發育不良徵候群及前骨髓細胞白血癌； 間葉源腫瘤，包含纖維肉瘤及橫紋肌肉瘤； 中樞及末梢神經系統之腫瘤，包含星細胞瘤、神經母細 胞瘤、神經膠瘤及神經鞘瘤；及 其他腫瘤，包含黑色瘤、精細胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、 外生性色素顒瘤、keratoctanthoma、甲狀腺卵胞癌及卡波西 87253 •28- 1335919 氏（Kaposi's)肉瘤。 由於CDKs —般在調節細胞增殖上之主要角色，因此抑制 劑可作為可逆之制細胞劑，其可用於治療具有異常細胞增 殖特徵4任何疾病，如良性前列腺肥大、家族性腺瘤息肉 病、神經纖維瘤、動脈硬化、肺纖維化、關節炎、牛皮癖、 絲球體腎炎、血管造型術或血管手術後之再阻塞、肥大瘢 形成、發炎性腸疾病、移植排斥、内毒素休克及真菌感染。

式III化合物亦可用於治療阿茲海默氏疾病，如最近發現 CDK5與腦脊髓（tau)蛋白質之磷醯化有關所教示（生物化學 期刊（1995)111，741-749)。 式III化合物可誘發或抑制細胞凋亡。細胞凋亡反應為各 種人類疾病之異常現象。式ΙΠ化合物作為細胞凋亡之調節 劑將可用以治療癌症（包含但不限於前述類型者）、病毒感染 (包含但不限於疱疹病毒、痘病毒、非洲淋巴細胞瘤病毒、 Sindbis病毒及腺病毒）、預防HIV_感染之個體之AIDS發展、 自動免疫疾病（包含但不限於全身性狼瘡、紅斑、自動免疫 調節之絲球體腎炎、風濕性關節炎、牛皮癣、發炎性腸疾 病及自動免疫糖尿病）、神經退化疾病（包含但不限於阿茲海 默氏疾病、AIDS-相關痴呆、帕金森氏（parkinson's)疾病、 肌萎縮性側索硬化、色素性視網膜癌、脊肌肉萎縮及小腦 退化）、脊髓發育不良徵候群、成血不全性貧血 '與心肌梗 塞有關之缺血性損傷’中風及再灌注損傷、節律不整、動 脈硬化、毒素誘發或酒精相關性肝疾病、血液學疾病（包含 但不限於慢性貧血及成血不全性貧血）、肌肉骨骼系統之退 87253 •29- 1335919 化疾病（包含但不限於骨質疏鬆症及關節炎）、阿斯匹靈敏感 性鼻竇炎、囊腫纖維化、多發性硬化、腎疾病及癌疼痛。 式III化合物作為CDKs抑制劑可調節細胞RNA及DNA合 成量。該等藥劑因此可用於治療病毒感染（包含但不限於 HIV、人類乳頭狀瘤病毒、癌療病毒、痘病毒、非洲淋巴細 胞瘤病毒、Sindbis病毒及腺病毒）。 式III化合物亦可用於化學預防癌症。化學預防定義為藉 阻斷起始之突變事件或藉阻斷已被傷害之惡性瘤細胞前之 發展而抑制侵入性癌發展或抑制腫瘤復發。 式III化合物亦可用以抑制腫瘤血管形成及遷移。 式III化合物亦可作為其他蛋白質激酶如蛋白質激酶C、 her2、rafl、MEK1、MAP 激酉每、EGF受體、PDGF受體、IGF 受體、PI3激酶、wee 1激酶、Src、Abl之抑制劑且因此可有 效治療與其他蛋白質激酶有關之疾病。 本發明另一目的係治療患有受CDKs調節之疾病或病況 之哺乳類（如人類）之方法，係對該哺乳類投與治療有效量之 至少一種式III化合物或該化合物之醫藥可接受性鹽或溶劑 化物。 式III彳匕合物之較佳劑量約0.001至500毫克/公斤體重/ 天。特佳之劑量約0.01至25毫克/公斤體重/天之式III化合物 或該化合物之醫藥可接受性鹽或溶劑化物。 本發明化合物亦可與一或多種抗癌症療法如放射療法及 /或一或多種抗癌劑組合（一起或依序投予）投藥，該抗癌劑 係選自制細胞劑、細胞毒素劑（例如但不限於DN A相互作用 87253 -30- 1335919

藥劑（如順氣胺鉑或多索鹵賓（doxorubicin)));坦燒（taxanes) (如坦羅特（taxotere)、坦醇（taxol));拓樸異構酶II抑制劑（如 依托嘧（etoposide));拓樸異構酶I抑制劑（如艾諾泰肯 (irinotecan)(或 CPT-11)、肯托斯塔（camptostar)或托譜泰肯 (topotecan));小管相互作用劑（如帕克利坦（paclitaxel)、多 p塞坦（docetaxel)或艾譜卩塞酮（epothilones));荷爾蒙劑（如坦墨 希分（tamoxifen));胸腺嘧啶脫氧核：y：酸合成酶抑制劑（如5-氟尿p密淀）；抗-代謝劑（如胺甲喋+ (methoxtrexate));燒化 劑（如泰默醯胺（temozolomide)(TEMODARTM 購自 Schering-Plough公司，Kenilworth，紐澤西州）、環磷醯胺）；法呢基 蛋白質轉移酶抑制劑（如 SARASARtm(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氫-5H-苯并[5,6]環庚并[l，2-b]吡啶-11-基 -]-卜哌啶基]-2-氧代乙基]-1-哌啶羧醯胺）或SCH 66336購自

Schering-Plough公司，Kenilworth，紐澤西州）、替普法尼

(tipifarnib)(Zarnestra®或 R115777，購自 Janssen醫藥公司）、 L778,123 (法呢基蛋白質轉移酶抑制劑，講自Merck公司，白 宮區，紐澤西州），BMS 214662(法呢基蛋白質轉移酶抑制 劑，購自 Bristol-Myers Squibb醫藥公司，Princeton，la 澤西 州）、訊號傳導抑制劑（如愛利沙（Iressa)(購自Astra Zeneca 醫藥公司，英國）、塔希瓦（Tarceva) (EGFR激酶抑制劑）、對 EGFR之抗體（如C225)、GLEEVECTM(C-abl激酶抑制劑，購 自Novartis醫藥公司，East Hanover，紐澤西州）、干擾素如干 擾酮（intron)(麟自 Schering-Plough公司）、Peg-干擾酮（Peg-Intron)(購自Schering-Plough公司）、荷爾蒙治療組合、芳族 87253 •31 - 1335919 酶組合、ara-C、阿霉素（adriamycin)、胞色燒（cytoxan)及葛 希塔賓（gemcitabine)。

其他抗癌劑（亦稱為抗贅瘤劑），包含（但不限於）尿嘧啶氮 芥、氮芥（Chlormethine)、艾法驢胺（Ifosfamide)、美法命 (Melphalan)、苯丁 酸氮芥（Chlorambucil)、柏溴燒 (Pipobroman)、曲他胺（Triethylenemelamine)、三伸乙基硫代 鱗趨胺（Triethylenethiophosphoramine)、馬利蘭（Busulfan)、 卡默斯；丁（Carmustine)、羅姆斯；丁（Lomustine)、斯特咬辛 (Streptozocin)、達卡貝 p井（Dacarbazine)、亂索利淀 (Floxuridine)、《»塞塔賓（Cytarabine)、6-氫硫基嘌呤、6-硫代 胍、鱗酸氟達賓（Fludarabine phosphate)、〃号利銘 (oxaliplatin)、雷可瓦寧（leucovirin)、哼利鉑（ELOXATIN™， 購自Sanofi-Synthelabo醫藥公司，法國）、分妥斯達汀 (Pentostatine)、長春驗、長春新驗、長春地辛（Vindesine)、 平陽黴素（Bleomycin)、更生黴素（Dactinomycin)、柔紅黴素 (Daunorubicin)、多索鹵賓（Doxorubicin)、艾比鹵賓 (Epirubicin)、艾達鹵賓（Idarubicin)、光輝黴素（Mithramycin) 、去氧助間型黴素（Deoxycoformycin)、絲裂黴素-C (Mitomycin-C)、L-天門冬 Si 胺酶、替尼泊（Teniposide) 17 a -乙炔基雌二醇、已烯雌驗、睪酮、潑尼松（Prednisone)、氟 曱睪酮（Fluoxymesterone)、 多莫斯坦自同丙酸鹽 (Dromostanolone propionate)、睪内酉旨（Testolactone)、曱地孕 酮乙酸鹽（Megestrolacetate)、甲基潑尼松、甲基睪丸酮、強 的松（Prednisolone)、鼻浪花（Triamcinolone)、氯缔雌醚 87253 -32- 1335919 (Chlorotrianisene)、經孕酮（Hydroxyprogesterone)、胺鹵米 特（Aminoglutethimide)、雌莫斯 ί丁（Estramustine)、甲經孕酮 乙酸鹽（Medroxyprogesteroneacetate)、利普胺（Leuprolide)、 福特胺（Flutamide)、托瑞米分（Toremifene)、高瑞林 (goserelin)、順氯胺舶、碳胺銘（Carboplatin)、經基尿素、 胺沙林（Amsacrine)、普卡貝p井（Procarbazine)、米多坦 (Mitotane)、米托山酮（Mitoxantrone)、左米梭（Levamisole)、

納瓦賓（Navelbene)、胺斯塔峻（Anastrazole)、雷拔吐 (Letrazole)、卡配烯塔賓（Capecitabine)、雷羅色分 (Reloxafine)、多羅 p塞分（Droloxafine)或六甲蜜胺。

若調配為固定劑量，此組合產物利用本文所述劑量範目 内之本發明化合物及其他在其劑量範圍内之醫藥活性劑。 例如，CDC2抑制劑歐樂姆辛（olomucine)已發現與已知之細 胞毒素劑在誘發細胞凋亡中有相乘作用（細胞科學期予】 (1995) 1M，2897)。式III化合物與已知抗癌劑或細胞毒素劑 當不適合調配在一起時，可依序投藥。本發明不限於依序 投藥；式III化合物可在已知抗癌劑或細胞毒素劑投藥前後 投藥。例如，週期素依賴性激酶抑制劑黃素比多醇 (flavopiridol)之細胞毒素活性受抗癌劑投藥順序之影響。 Cancer Reaearch, (1997) 51, 3375。此技術為熟知本技藝者 以及參予之醫師所悉知。 據此，本發明一目的係包含組合物，其包括某量之至少 一種式III化合物或其醫藥可接受性鹽或溶劑化物及某量t 一或多種抗癌療法及選自上述之抗癌劑，其中化合物/治療 87253 -33· 1335919 之量導致所需之治療效果。 本發明化合物之醫藥性質可藉數種藥理分析確認。後逑 此例舉之藥理分析已利用本發明化合物及其鹽進行。， 本發明又有關醫藥組合物，其包括至少一種式m化合物 或該化合物之醫藥可接受性鹽或溶劑化物及至少一種醫藥 可接受性載劑。 就自本發明所述化合物製備醫藥組合物而言，惰性之醫 藥可接爻性載劑可為固體或液體。固體劑型包含粉劑、錠 劑、可分散顆粒劑、膠囊、藥囊及栓劑。該粉劑及錠劑可 包括約5至約95%活性成分。適宜之固體載劑為本技藝已 知，例如碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖或乳糖。錠劑、粉 劑藥囊及膠囊可使用為適合經口投藥之固體劑型。醫藥

可接又性載劑及製造各種組合物之方法實例可見於A

Gennar〇(編輯），雷明頓藥理科學第18版（1990), Mack出版公 司’ Easton,賓州。 液態製劑包含溶液、懸浮液及乳液。實例可述及水或水_ 丙一醇溶液用以非經腸道注射或添加甜味劑及霧濁劑供口 服溶液、懸浮液及乳液。液態製劑亦可包含鼻内投藥之溶 液。 適用於吸入之氣溶膠製劑可包含溶液及粉劑固體，其可 與醫藥可接受性載劑如惰性壓縮氣體如氮氣組合。 亦包含固態製劑’其在欲使用前才轉化成液體劑型供口 服或非經腸道投藥。此液態劑型包含溶液、懸浮液及乳液。 本發明化合物亦可經皮遞送。該經皮組合物可製成乳 87253 •34· 1335919 質或儲存形式之 霜、乳劑、氣溶膠及/或乳液且可包含於基 案二皮貼片中，如本領域就本目的所習知本 本發明化合物亦可經皮下遞送。 較好該化合物口服投藥。 ，成酋梁祖贫物主早伍劑型。此 分成含適當量活性成分之式一大小劑 該U ^ 之有效量。 …達到所需目的 單位製劑中活性化合物之量可自 ,· 曰、，々克至約100毫克， 較好約1毫克至約50毫克，更好自約！毫 毛兄主约25愛启之間 變化或調整，依據特定用途而定。 所用確實劑量可视病患需求及欲治療病況之嚴重度而 定。對特定狀況決定適當劑量療程在本領域熟知範園二 為便利起見，總、曰劑量可分成數次且如所需在—天内分次 投藥。 本發明化合物及/或其醫藥可接受性鹽之投藥量及次數 將可依據臨床醫師考慮如病患年齡、病況及大小以及欲治 療病徵嚴重性等因素而調整。對口服投藥之典型推薦日劑 量可自約1¾克/天至約5〇〇毫克/天間之範圍，較好丨毫克/天 至200¾克/天’分兩次至四次投藥。 本發明另一目的係包括醫藥有效量之至少一種式m化合 物或該化合物之醫藥可接受性鹽或溶劑化物及醫藥可接受 性載劑 '載體或稀釋劑之套組。 本發明另一目的係包括有效量之至少一種式m化合物或 該化合物之醫藥可接受性鹽或溶劑化物及至少一種上逑抗 87253 -35- 1335919 癌療法及/或抗癌劑之套組，其中該兩種或多種成分之量導 致所需治療效果。 本文揭示之發明由下列製劑及實例加以舉例，但非用以限 制本發明。其他機制路徑及類似結構將為本技藝者所悉知。 當提出 NMR數據時，在Varian VXR-200(200 ΜΗζ/Η)、 Varian Gemini-300(300 MHz)或 XL-400(400 MHz)上獲得屯 光譜並以自Me4Si之下磁場ppm數表示，括弧内為質子數、 多重峰及偶合常數（赫茲，Hz)。當報導LC/MS數據時，使用 應用生物系統八？1-100質譜儀及島津30^-10入[(：管柱進行 分析：Altech鉑C18，3微米，33毫米x7毫米ID ;梯度流速： 0 分鐘-10% CH3CN、5 分鐘-95% CH3CN ' 7 分鐘-95% CH3CN、7.5分鐘-10% CH3CN、9分鐘-停止。提供駐留時間 及所觀察之母離子。 下列溶劑及試劑可藉其縮寫表示於括弧内：

薄層層析：TLC 二氣甲烷：CH2C12 乙酸乙酯：AcOEt或EtOAc 甲醇：MeOH 三氟乙酸：TFA 三乙胺：Et3N或TEA 丁氧基羰基：n-Boc或Boc 核磁共振分光計：NMR 液體層析質譜儀：LCMS 高解析質譜儀：HRMS 87253 • 36- 1335919 毫升：mL 笔莫耳：mmol 微升：μΐ 克：g 寬克：mg

室溫或rt(周圍）：約25°C N-溴丁二醯亞胺：nBS N-氯丁二醯亞胺：NCS 通常本發明所述化合物可經下述一般路徑製備。以第三 丁醇卸及甲酸乙酯處理起始物腈（反應圖1)獲得中間物烯醇 2，其以聯胺處理獲得所需3_胺基吡唑。號數3之化合物與 唬數5之適當官能基化酮酯縮合獲得吡啶酮6，如反應圖3所 不此一般路徑中所用之酮基酯為市售或可如反應圖2所說 明般製得。 反應圖1 KOtBu HC〇C02Et R2

ΌΗ 2 n2h4

R1 N \ H 3 號數7之氯化物可藉p〇Ch處理峨咬㈣而製備。當以等於 H:此位置之取代對號數9之化合物而言，可能藉親電子性 鹵化、醯化及各種其他親電子性芳族取代作用進行。 87253 -37- 1335919 反應、圖2

N7-胺基官能基之併人可經由號數9之化合物與氨反應而 置換該氯化物（反應圖3)。以適當之經取代醯氣或績醯氯予 以醯化獲得號數10之所需化合物 及應圖3

R2 2.+ RCOCI 或 rso2ci

R3 R4 R 1. nh3 當號數6之化合物中R3 = 〇Et，則號數12之二氯化物易藉反 應圖4所述般製備。7-氯化物之選擇性置換可獲得號數13之 化合物，其可易於轉化成號數14之產物。 87253 -38- 1335919 反應圖4

製備例1 : V"

VN Η 步驟A :

CN Ο 依循德國專利DE 19834047A1第19頁之程序。於 KOtBu(6.17克，0.055莫耳）之無水THF(40毫升）溶液中，滴 加環丙基乙腈（2.0克，0.025毫莫耳）及甲酸乙酯（4.07克， 0.055毫莫耳）之無水THF(4毫升）溶液。立即形成沉澱。此混 合物攪拌12小時。在真空下濃縮且殘留物與Et2O(50毫升） 87253 -39- 1335919 攪拌。傾析且所得殘留物以玢2〇(2以〇毫升）洗滌且真空自殘

留物移除Et2〇。殘留物溶於冷卻之H2〇(2〇毫升）中並以12N HC1調整至PH 4-5。混合物以CH2C12(2x50毫升）萃取。合併 有機層，以MgS〇4脫水並真空濃縮獲得褐色液體之醛。 步驟B ：

製備例1步驟A之產物（2.12克，〇.〇195莫耳）、NH2NH2.H2〇 (1.95克，0.039莫耳）及1.8克（0.029莫耳）冰醋酸（18克，〇〇29 莫耳）溶於EtOH(10毫升）中。回流6小時並真空濃縮。殘留 物於CH2C12 (15〇毫升）中撥拌且以！ N Na〇H調整至。有機 層以食鹽水洗滌，以MgSCU脫水並真空濃縮，獲得蠟質橘 色固體產物。 製備例H : 基本上同製備例1所述程序，僅以表2欄2所示之腈替代， 獲得表2攔3之化合物： 表2 製備例 欄2 襴3 2 /—CN 〇 °wNH2 VN Η 87253 •40-

1335919 所述般進行。因此，於二異丙基醯胺鋰之THF攪拌溶液中 在-65至-70°C滴加剛蒸餾之乙酸乙酯。所得溶液攪拌3〇分鐘 且以THF溶液添加醯氯。反應混合物在_65i_7〇〇c攪拌3〇分 鐘接著藉添加1 N HC1溶液終止《所得兩相混合物溫至周圍 溫度。所得混合物以EtOAc( 1 〇〇毫升）稀釋且收集有機層。 水層以EtOAc( 100毫升）萃取。合併有機層，以食鹽水洗滌， 脫水（NajO4)並真空濃縮’獲得粗製冷-酮基酯，其用於隨 後縮合反應。 製備例5 -1 0 基本上同製備例4所述程序，僅以表3欄2所示之醯氣替 代，獲得表3欄3之/3-酮基酯： 87253 -41 - 1335919 表3

製備例11 ：

R 义

OH

OEt 於酸之THF溶液中添加Et3N，接著在-20至-30°C添加氯甲 酸異丁酯。混合物在-20至-30°C攪拌30分鐘後，在氬氣中濾 除三乙胺鹽酸鹽，且濾液添加至-65至-70°C之LDA-EtOAc 87253 -42 - 1335919 反應混合物（如方法A所述般製備）中。添加1 N HC1後’接著 例行操作反應混合物並蒸發溶劑’單離粗製之^ _酮基酯。 該粗製物質用於隨後縮合反應。 製備例12-14 基本上同製備例11所述相同條件’僅以表4欄2所示之羧 酸替代，獲得表4欄3之化合物： 表4

製備例 襴2 欄3 數據 12 〇Λι Ο ο 產率=" MH+ =199 13 CbzN^J 0 0 ^AOEt CbzN^J 產率=99 MH+ = 334 14 〇 CbzN^j^CI 0 ο CbzN^j^^^OEt 產率=99 MH+ = 334 3-胺基吡唑（2.0克，24.07毫莫耳）及苯甲醯基乙酸乙酯 (4.58毫升，1.1當量）之AcOH(15毫升）溶液回流加熱3小時。 反應混合物冷卻至室溫並真空濃縮。所得固體以Et0Ac稀釋 並過濾獲得白色固體（2.04克，40%產率）。 -43- 87253 1335919 製備例16-37 ： 基本上同製備例15所述相同程序，僅以表5欄2所示之胺 基吡唑及表5欄3所示之酯替代，獲得表5欄4之化合物： 表5 製備例 襴2 欄3 攔4 16 nh2 fi Η ^X} 0 17 νη2 Η 0 18 νη2 κ Ο 0 cf3 cf3 0 19 νη2 ίί 0 ο ^^^0 八 ch3 0 20 νη2 fi V Η 0 0 八 ch3 0 21 V" Η 0 0 八 ch3 0 87253 -44- 1335919

87253 -45 · 1335919

29 ΝΗο Et〇2〇x y V：N H Et〇2C H 0 30 nh2 H 0 0 〇r^OEt 〇 31 NH〇 A H 〇 32 NH〇 A H Ω 33 NH〇 、N H O 0 Cb，N J Cbz、q OH 34 久 nh2 |t：n K 0 0 rr^Et Cbz'r〇 P OH 35 NH〇 H o o Cbz、N^A_A〇Et Cbz OH 36 A ,nh2 Ikn 0 0 c^qAAob Cbz OH -46- 87253 1335919

苯f驢基乙酸乙酯（1·76毫升，1.1當量）及3-胺基_4_氰基 吡唑（1.0克’ 9.25毫莫耳）之acOH(5.0毫升）及h2〇(1〇毫升） 回流加熱72小時。所得溶液冷卻至室溫，真空濃縮，並以

EtOAc稀釋。過濾所得沉澱，以Et〇Ac洗滌且真空乾燥（〇.47 克，21 %產率）。 製備例39 ：

〇 依循US專利3,907,799之程序。鈉（2.3克，2當量）逐次添加 至EtOH(150毫升）中。當鈉完全溶解時，添加3_胺基吡唑（4 2 克，0.05莫耳）及丙二酸二乙酯（8 7克，M當量）且所得溶液 加熱回流3小時。所得懸浮液冷卻至室溫並過濾。將濾餅溶 在HzO中，以濃HC1調整pH至卜2,並過濾所得固體，以水（10〇 笔升）洗滌及真空乾燥獲得白色固體（4·75克，63%產率）。 87253 • 47- 1335919 製備例40-41 : 基本上同製備例3 9所述相同程序，僅以表6欄2所示之化 合物替代，獲得表6欄3之化合物： 表6

製備例15所製備之化合物（ι·〇克，4.73毫莫耳）之p〇ci3(5 毫升）及峨咬（0.25毫升）溶液在室溫攪拌3天。所得漿液以 Eh〇稀釋，過濾且固體殘留物以价…洗滌。合併之玢2〇洗液 冷卻至0°C並以冰處理。當發生激烈反應停止後，所得混合 物以HzO稀釋，分離且水層以Et2〇萃取。合併之有機相以Η》 及飽和NaCl洗滌，以NajO4脫水，過濾及濃縮，獲得淡黃 色固體（0.86克，79%產率）。LCMS: MH+ =230。 87253 -48- 1335919 製備例43-65 基本上同製備例42所述相同程序，僅以表7欄2所示之化 合物替代，獲得表7欄3之化合物： 表7

87253 -49- 1335919

87253 50- 1335919

產率=45% LCMS: MH+ 236 產率=30% LCMS: MH+=295 產率=:98% LCMS: MH+=244 產率=96 MH+=371 產率=:99 MH+=371 -51 - 87253 1335919

製備例66 ：

於製備例42之化合物（1·0克，4.35毫莫耳）之014?(6毫升） 溶液中添加P0C13(1.24毫升，3.05當量）且所得混合物在室溫 攪拌隔夜。反應混合物冷卻至0°C並藉添加冰捕捉過量之 P0C13。所得溶液以1 N NaOH中和，以H20稀釋並以CH2C12 萃取。合併之有機層以Na2S04脫水，過濾並真空濃縮。粗 產物藉快速層析純化使用5% MeOH之CH2C12溶液作為溶離 液（0.95克，85%產率）。LCMS: MH+=258。 製備例67 :

87253 -52- 1335919 於PPh3(4.07克，4.0當量）及CBr4(2 57克，2 〇當量）之 CH2C12(75毫升）之0 C溶液中添加製備例i 68製備之化合物 (1.0克，3.88毫莫耳）。所得溶液在〇〇c攪拌i小時並減壓濃 縮。殘留物藉快速層析純化使用20% EtOAc之己烷溶液作為 溶離液（1.07克’ 67%產率）。 製備例68 :

P0C13(62^升）在氮氣下冷卻至及添加二甲基苯胺 (11.4克，2.8當量）及製備例39製備之化合物（4 75克，〇.〇32 莫耳）。反應混合物溫至60。(：並攪拌隔夜。反應混合物冷卻 至30 C並減壓蒸除POCI3。殘留物溶於CH2Cl2(3〇〇毫升）並倒 入冰上。攪拌15分鐘後，混合物之pH以固體NaHC〇3調整至 7-8。分離層且有機層以H2〇(3x2〇〇毫升）洗滌，以“㈡…脫 水，過濾並濃縮。粗產物藉快速層析純化使用5〇:5〇 CH2C12: 己烷/谷液作為溶離液，溶離該二甲基苯胺。溶離液接著改 變成75:25 CH2C12:己烷以溶離所需產物（4 58克，77%產 率）。MS MH+ =188。 製備例6Q-70 基本上同製備例68所述相同程序，僅以表8欄2所示之化 合物替代，獲得表8欄3之化合物： 87253 -53- 1335919 表8

製備例71 ：

製備例42所製備之化合物（0.10克，0.435毫莫耳）之 CH3CN(3毫升）溶液以NBS(0.085克，1.1當量）處理。反應混 合物在室溫攪拌1小時且減壓濃縮。粗產物藉快速層析純化 使用20% EtOAc之己烷溶液作為溶離液（0.13克，100%產 率）。LCMS:MH+ =308。 製備例72-90 基本上同製備例71所述相同程序，使用NBS或NIS並以表 9欄2所示之化合物替代，獲得表9欄3之化合物： 表9 製備例 欄2 欄3 數據 72 LCMS: MH+=357 π c\ 87253 -54- 1335919

87253 -55- 1335919

87253 56-

1335919 製備例7i製備之化合物α〇8克，10.0毫莫耳）、2 〇mnh3 之2-丙醇（50毫升，100.0毫莫耳）及37%NH3水溶液（1〇 〇毫升） 在歡閉壓力容器中在50 C檀拌1天。蒸發溶劑且粗產物藉快 速層析純化使用3 :1 CHzClyEtOAc作為溶離液。獲得淡黃色 固體（2.30克，80%)。1^]\48:]^+=289。 製備例92-101 : 基本上同製備例91所述相同程序，僅以表1〇欄2所示之化 合物替代，獲得表1 〇欄3之化合物： 表10

87253 -57- 1335919

87253 -58-

1335919 備例102 :

製備例95所製備之化合物（0.50毫莫耳）及DMAP(0.66毫 升）之無水一1*号燒（1〇毫升）混合物在25°C及N2下攪拌，接著 添加Boc2〇(1.2〇毫莫耳）且混合物在25。〇攪拌2〇小時。反應 混合物倒入飽和NaHC03水溶液（100毫升）中並以 CH2Cl2(3x30毫升）萃取。合併之萃取液以Na2S04脫水，過濾 且蒸發溶劑。殘留物藉快速層析純化，獲得所需產物。 製備例· 基本上同製備例102所述相同程序，僅以表11攔2所示之 化合物替代，獲得表11欄3之化合物： 87253 -59· 1335919 表η

製備例107 :

製備例102所製備之化合物（1.00毫莫耳）、三乙基（三氟甲 基）矽烷（3.60毫莫耳）、氟化鉀（3.60毫莫耳）及€：111(4.46毫莫 耳）在無水DMF(4毫升）中之混合物於密閉壓力容器中在80 -60- 87253 1335919 。(：攪拌72小時。添加CH2C12(80毫升）且混合物經矽藻土過 滤。蒸發溶劑且殘留物藉快速層析純化，獲得所需產物。 製借例108-109 : 基本上同製備例107所述相同程序’僅以表12欄2所示之 化合物替代，獲得表12欄3之化合物： 表12

Μ備例110 :

於製備例106所製備之化合物（0.21毫莫耳）之THF(4.0毫 升）之-78°C溶液中，在_78°C添加nBuLi(2.16 Μ之己燒’ 5.0 當量）。反應混合物在-78°C攪拌2小時，以ΗζΟ驟冷’溫至 室溫且以EtOAc萃取。合併之有機層以Na2S04脫水，過濾 並減壓濃縮。粗產物藉製備性TLC純化獲得所需產物。 Μ備例111 : -61- 87253 1335919

在〇 °C及N2下添加TFA至製備例1 〇7劁 /^備<化合物之無水 ci^ci2攪拌溶液中。混合物在(rc攪拌1〇分鐘接著在25。〇攪 拌2小時，倒入1〇% Na2C03水溶液（5〇毫升）中，以CH2Cl2 (3x15毫升）萃取，以NaJO4脫水並過濾。蒸發溶劑且殘留物 藉快速層析純化，獲得所需產物。 製備例112-114 : 基本上同製備例111所述相同程序，僅以表13欄2所示之 化合物替代，獲得表13欄3之化合物： 表13

87253 -62- 1335919

製備例92所製備之產物（1〇當量）、異癸驗酿氣鹽酸鹽㈤ 當量）及㈣（2.5當量）在CH2Cl2中檀掉24小#。反應混合物 以飽和稀釋並以CH2Cl2萃取。合併之有機物以 Na2S〇4脫水’過滤m粗產物藉快速層析純化。 基本上同實例1所述相同程序， 僅以表14欄2所示之化合 物替代’製備表14欄3之化合物：

87253 -63- 1335919

87253 ·64· 1335919

實例12 :

製備例107之化合物（1 ·0當量）、4_ ?比淀基橫酿氯鹽酸鹽 (1.1當量）及吡啶（2.5當量）於CHfl2中攪拌24小時。反應混 • 65· 87253 1335919 合物以飽和NaHC03稀釋並以CH2C12萃取。合併之有機相以 Na2S〇4脫水，過濾、並濃縮。粗產物藉快速層析純化。 f 例 13-22 : 基本上同實例12所述相同程序，僅以表15欄2所示之化合 物替代，製備表15欄3之化合物： 表15

87253 • 66- 1335919 87253

-67- 1335919

實例23 :

步驟A : 於實例6製備之化合物之二呤烷/DipEA(2 5/1 〇)溶液中在 rt滴加環戊胺（1.2當量所得溶液回流攪拌16小時，冷卻至 rt並減壓;辰縮。粗物質藉製備性薄層層析（8χ1 〇〇〇 μΜ)純化。 步騾Β : 之CH^Cl2溶液中在滴加 於實例23步驟Α製備之化合物 87253 -68· 1335919 TFA(5當I)。所得溶液在η攪拌以小時並減壓濃縮。粗物質 再♦於CHaCU中且有機層依序以飽和NaHC〇3水溶液（2χ2毫 升）及食鹽水（1x2笔升）洗牙条。有機層脫水，過滤並 減壓濃縮。粗物質藉製備性薄層層析（8χ誦_純化。 實例24-3 3 : 基本上同實例23所述相同程 %序’僅以表16欄2所示之化合 物替代，製備表16欄3之化合物. ij_6

87253 69. 1335919

87253 -70- 1335919

於貫例1 〇製備之化合物之無水乙腈溶液中在周圍溫度滴 加TMSI(4當量）。10分鐘後真空移除乙腈。所得黃色泡沫以 2N HC1溶液（7毫升）處理接著立即以Et2〇(5x)洗滌。水相之 -71- 87253 1335919 PH以50% NaOH(aq)調整至10且藉NaCi⑷使溶液飽和以單 離產物，接著以CH2C12(5x)萃取，獲得所欲產物。 复复35-37 : 基本上同實例34所述相同程序，僅以表17攔2所示之化合 物替代，製備表17欄3之化合物：

Mdl

對本發明化合物之分析可以卞述進行。 8^253 -72- 1335919 &_病毒架構：週期素E藉PCR選殖入pVL1393(Pharmingen， La J〇ua，加州y，而在胺基端添加5個組胺殘基而在錄樹脂上 純化。表現之蛋白質約為45 kDa。CDK2藉PCR選殖入pVL 1393，而在羧基端添加凝血素抗原決定基tag(YDVI>DYAS) 。表現之蛋白質大小約為34 kDa。

酵棄_ i告:表現週期素E及CDK2之重組桿病毒以相等多 價感染力（M〇I=5)共同感染至SF9細胞中48小時。藉1000 離心1 〇小時收取細胞，接著粒片在冰上於5倍粒片體積 之含 50 mM Tris pH 8.0、150 mM NaCl、1% NP40、ImM DTT 及蛋白酶抑制劑（Roche診斷GmbH，Mannheim，德國）之溶胞 緩衝液中溶胞3〇分鍾。溶胞物在15000 RPM旋轉10分鐘且保 留上澄液。5毫升鍊珠粒（對一升SF9細胞而言）以溶胞缓衝 液（Qiagen GmbH，德國）洗蘇3次。於桿病毒上澄液中添加咪 吨至終濃度20 mM，接著以鎳珠粒在4°C培育45分鐘。蛋白 質以含250 mM咪唑之溶胞缓衝液溶洗。溶離液於2升含50 mM Tris pH 8.0、1 mM DTT、10 mM MgCh、100 uM原訊酸 鈉及20%甘油脂激酶緩衝液中滲析隔夜。酵素整份在-70°C 儲存。 體外激酶分析：於低蛋白質結合之96-洞盤（Corning公 司，Corning，紐約）中進行週期素E/CDK2激酶分析。酵素 於含 50 mM Tris pH 8.0、10 mM MgCh、1 mM DTT 及 0.1 mM 原釩酸鈉之激酶緩衝液中稀釋至終濃度50微克/毫升。該等 反應中所用之受質為衍生自Histone H1(購自Amersham，英 國）之生物素化之肽。該受質在冰上解凍並於激酶緩衝液中 87253 • 73- 1335919 稀釋至2 μΜ。化合物於10% DMSO中稀釋至所需濃度。對 各激酶反應而言，使20微升50微克/毫升之酵素溶液（1微克 酵素）及20微升2 μΜ受質溶液混合，接著於各洞中與1〇微升

稀釋化合物混合供測試。激酶反應藉添加50微升2 μΜ ΑΤΡ 及0.1 μ(：ί之33Ρ-ΑΤΡ(購自Amersham，英國）起始。反應在室 溫進行1小時。反應藉添加200微升含0.1 % Triton X-1〇〇、1 mM ATP、5 mM EDTA及5毫克/毫升鏈黴肽塗佈之SPA珠粒 (賭自Amersham，英國）之終止緩衝液停止15分鐘。該SPA珠 粒接著使用Filtermate環球收取機（Packard/Perkin Elmer生 命科學公司）捕捉至96-洞GF/B過滤盤（Packard/Perkin Elmer 生命科學公司）上。藉2 M NaCl洗滌該珠粒2次接著以含1% 磷酸之2 M NaCl洗滌2次而消除非專一訊號》接著使用 TopCount 96洞液體閃燦計數器（購自Packard/Perkin Elmer生 命科學公司）測量放射活性訊號。

測定：自所產生之抑制數據（各重複2次）自8個連續稀 釋抑制化合物之點繪製劑量-相關曲線。化合物濃度相對％ 激酶活性（藉經處理樣品之CPM除以未經處理樣品之CPM 所計算）作圖。為了產生IC5G值，接著將劑量相關曲線套入 標準S型曲線並藉非線性回歸分析衍生IC5〇值。 雖然本發明已藉上述特定具體例加以描述，但對熟知本 技藝者而言之許多選擇、改質及其他變化將為易於推知 者。所有該等選擇、改質及其他變化欲落入本發明之精神 及範圍内。 87253 -74-

Claims (1)

1335919

Ά 第092124328號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(99年9月) 拾、申請專利範圍·· 示之化合物 種下列結構式所

其中： R為苯基、吡啶基或吡啶基氧離子； R2係選自CN ; 执A . 2·6炔基、CF3、或（：3<8環烷基、 R係選自由下列所組成《. 取心、、見砰·南素、_NR5R6、C】 烧基、C3·8環烧基、苯基'。夫喃基、。塞吩基'

其中R·之6亥本基視情況可經_ ^ ^ , 3夕個可相同或不同之基 團取代’各基團獨立選自下列 、曰卜幻所組成之組群：鹵素、c丨_C6 烷基、CF3、及-OR5 ; R4為Η、鹵基或(^_6烷基； R5為Η或Ck烷基； R係選自由CN6院基及C3_8m烧基所組成之組群，其中 該烷基及環烷基可為未經取代或視 -OR5基團取代； 情況經一或多個 R8 係 R6 ; 87253-990901.doc m為0至4 ;及 η為1至4。 如申請專利範圍第i項之化合物，其中⑽選自由苯基、 h比咬基、4-峨咬基、3★定基、4_吨啶基善氧離子、3_叶匕 咬基-N-氧離子所組成之組群； R2為 CF3、CN、C3.8環烷基、； R3為未經取代之苯基、未經取代之㈣基㈣基、 經一或多個選自由齒素、-OR5、CF3所組成之組群之基 團取代之苯基、 r8Oi」 i R4為Η、鹵基或Cl-6烷基； R5為Η或cN6烷基。 .如申吻專利範圍第2項之化合物，其中R係選自由苯基、

2吡疋基、4-吡啶基、3_吡啶基、4_吡啶基氧離子、3-吡 咬基-N-氧離子所組成之組群。 4.如申1專利範圍第2項之化合物，其中R2為CF3、CN或C3-8 環烷基。 5.如申請專利範圍第2項之化合物，其中r3為^ 6烷基、c38 環烧基或笨基’其中該苯基為未經取代或視情況獨立經 一或多個可相同或不同之基團取代，各基團獨立選自由 F、C1 ' Br、CF3、Cw烷基、曱氧基或R3為 87253-990901.doc •2- 6·如申請專利範圍第2項之化合物，其中R4為Η。 7. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R5為Η。 8. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R為2-吡啶基。 9·如申請專利範圍第2項之化合物，其中R為3-吡啶基。 1〇.如申請專利範圍第2項之化合物，其中R為4-吡啶基。 U.如申請專利範圍第2項之化合物，其中R為4-吡啶基之Ν-氧離子或3_吡啶基之N-氧離子。 12·如申請專利範圍第4項之化合物，其中該R2為CF3。 如申請專利範圍第4項之化合物，其中該R2為cN。 14.如申請專利範圍第4項之化合物，其中R2為Gy環烷基。 15·如申請專利範圍第14項之化合物，其中R2為環丙基、環 丁基、環戊基或環己基。 16. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中尺3為(：1_6烷基或苯 基。 17. 如申請專利範圍第16項之化合物，其中該ci 6烷基為甲 基、乙基、異丙基或第三丁基。 18. 如申請專利範圍第17項之化合物，其中R3為第三丁基。 19·如申請專利範圍第2項之化合物，其中R3為C1、未經取代 之笨基、經一或多個選自由F、Br、Cl、OMe、CH3及CF3 所組成之組群之基團取代之苯基、呋喃基、噻吩基、 87253-990901.doc 1335919 R8

或 Ί 20.如申請專利範圍第14項之化合物，其中R3為

或 V71-2 Ί 21. 如申請專利範圍第15項之化合物，其中R8為（CH2)nOH或 (CH2)nOCH3，其中 η為 1或 2。 22. 如請求項1之化合物，其係選自由下列所組成之組群’

ΗΝ、

Ν>

ΗΝ

N〜

N

HU

Ν

ΗΝ、

87253-990901.doc -4- 1335919

87253-990901.doc 1335919

23.如請求項1之化合物，其係選自由下列所組成之組群，

87253-990901.doc 1335919

或其醫藥可接受性鹽或溶劑化物。 24. —種醫藥組合物，包括治療有效量之至少一種如申請專 利範圍第1項之化合物以及至少一種醫藥可接受性載劑。 25. 如申請專利範圍第1項之化合物，係呈單離及純化態。 87253-990901.doc