TWI333956B - Modified fluorinated nucleoside analogues and the preparation and uses thereof - Google Patents

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1333956 九、發明說明： * 【發明所屬之技術領域】 本發明包括具有天然点-D組態之（2’R)-2’-脫氧-2'-氟基-2’-C-曱 基核苷，及治療旁病##感染尤其是C型肝炎病毒（HCV)之 方法。 【先前技術】 C型肝炎病毒（HCV)感染為一項主要健康問題，其係在據 估計為世界人口之2-15%之大量數目受感染個人中導致慢性 肝病，譬如肝硬化與肝細胞癌。根據美國疾病防治中心， 單獨在美國，估計有4百50萬位受感染人。根據世界衛生組 織，全世界有超過2億受感染個人，其中每年至少3至4百萬 人受感染。一旦受感染，約20%人會消除病毒，但其餘可能 在彼等之餘生潛伏HCV。十至二十百分比之以慢性方式感染 之個人最後會發展破壞肝臟之肝硬化或癌症。病毒疾病係 藉由受污染之血液與血液產物、受污染之針頭，以非經腸 方式傳染，或以性方式及以垂直方式從受感染母親或帶菌 母親傳染給其子孫。現行HCV感染之治療，其係受限於以單 獨重組干擾素或併用核苷類似物三唑核苷之免疫療法， 由於抗藥性迅速地發展，故具有有限之臨床利益。再者， 對於HCV沒有已建立之疫苗。因此，迫切需要有效對抗慢性 HCV感染之經改良治療劑。 HCV病毒粒子為有包膜之正股鏈RNA病毒，具有約9600個 鹼基之單一寡核糖核苷酸基因組順序，其係使約3,010個胺 基酸之多蛋白編碼。HCV基因之蛋白質產物包括結構蛋白質 92848 1333956 C、El及E2，與非結構蛋白質NS2 ' NS3、NS4A與NS4B及NS5A 與NS5B。咸認非結構(NS)蛋白質係提供病毒複製之催化手段 。NS3蛋白酶會釋出NS5B ’其係為得自多蛋白鏈之RNA依存 性RNA聚合酶。HCVNS5B聚合酶係為雙股RNA自HCV之複製 循環中充作模板之單股病毒RNA合成所需。因此，NS5B聚 合酶被認為是HCV複製複合物中之一種必要成份(K. Ishi等人， "C型肝炎病毒NS5B蛋白質之表現：其抓八聚合酶活性與RNA 結合之特徵表現，"丑29 : 1227-1235 (1999) ; V. Lohmann 等 人，"C型肝炎病毒之NS5B RNA依存性RNA聚合酶之生物化學 與動力學分析"，阶249 : 108-118 (1998))。HCVNS5B 聚合酶 之抑制會阻止雙股HCVRNA形成，因此構成發展HCV專一抗 病毒療法之吸引人途徑。 HCV係歸屬於共有許多共同特徵之遠為較大病毒族群。 黃病毒科病毒 黃病毒科病毒包含至少三種獨特種屬：邊疬毒，其會在牛 與豬中造成疾病；#妨#，其係為疾病譬如登革熱與黃熱 病之主要原因；及妤病4，其單獨成員為HCV »黃病毒屬包 含超過68個成員，其係以血清學關聯性為基礎分組（Calisher 等人，J· Ge«. Hro/, 1993, 70, 37-43)。臨床徵候會改變，且包括發 熱、腦炎及出血熱（Fie/ώ成滅毒學，編輯者：Fields, B. N·, Knipe, D. Μ·及 Howley，Ρ· Μ.，Lippincott-Raven 出版社，Philadelphia, PA, 1996,第31章，931-959)。與人類疾病有關聯之全球關切之黃病 毒’包括登革熱出血熱病毒（DHF)、黃熱病病毒、休克徵候 誤及日本腦炎病毒（Halstead, S. B.，/«/eci. Dh·，1984, 6, 251-264 ; 92848 1333956

Halstead, S. B., Science, 239 ： 476-481, 1988 ； Monath T.P., New Eng. J. Med, 1988,319,641-643)。 瘟病毒屬包括牛病毒腹瀉病毒(BVDV)、古典豬熱病毒(CSFV ，亦稱為豬瘟病毒）及綿羊之邊地病病毒（BDV) (Moennig，V.等 人，A/v. Wr. 1992, 41，53-98)。馴養家畜（牛、豬及綿羊）之瘟 病毒感染會造成全世界可觀之經濟損失。BVDV會在牛隻中 造成黏膜疾病，並對家畜工業具顯著經濟重要性（Meyers，G. 與 Thiel，H.J.，病毒研究上之進展，1996,47, 53-118; Moennig V.等人， Adv. Vir. Res· 1992, 41，53-98)。人類痕病毒尚未如動物痕病毒一 樣被廣泛地特徵鑒定。但是，血清學測量顯示在人類中之 相當大量痕病毒曝露。 瘟病毒與肝病毒係為黃病毒科内之密切相關病毒組群。在 此族群中之其他密切相關病毒，包括GB病毒A、似GB病毒 A劑、GB病毒-B及GB病毒-C (亦稱為G型肝炎病毒，HGV)。 肝病毒（C型肝炎病毒；HCV)包括多種密切相關但基因型上 可辨別之會感染人類之病毒。有至少6種HCV基因型，及超 過50種亞型。由於痕病毒與肝病毒間之類似性，結合肝病 毒未能有效地在細胞培養物中生長之能力，故牛病毒腹瀉 病毒(BVDV)經常係作為研究HCV病毒之替代品使用。 癌·病毒與肝病毒之基因組建極為類似。此等正股鏈RNA病 毒具有單一大開放譯讀骨架（ORF)，使病毒複製所必須之所 有病毒蛋白質編碼。此等蛋白質係以多蛋白表現，其係藉 由細胞與病毒兩者所編碼之蛋白酶，以共轉譯及轉譯後方 式處理，以產生成熟病毒蛋白質。負責病毒基因組RNA複製 92848 1333956 之婷毒鲞白質，榡位於大約羧基末端内。ORF之三分之二係 被稱為非結構(NS)蛋白質。瘟病毒與肝病毒之〇RF之非結構 蛋白質部份之基因組建與多蛋白處理，係極為類似。對於 瘟病毒與肝病毒兩者，成熟非結構(NS)蛋白質，以從非結構 蛋白質密碼區域之胺基末端至ORF之羧基末端之順序，係包 括 p7, NS2, NS3, NS4A，NS4B，NS5A 及 NS5B。

瘟病毒與肝病毒之NS蛋白質係共有專一蛋白質功能之特 徵性順序功能部位。例如，在兩種組群中病毒之NS3蛋白質 ，係具有絲胺酸蛋白酶與解螺旋酶之特徵性胺基酸順序主 體（Gorbalenya 等人（1988)iVa/Mre333 : 22 ; Bazan 與 Fletterick(1989) Piro/ogy 171 : 637-639 ; Gorbalenya 等人（1989) 17. 3889-3897)。同樣地，瘟病毒與肝病毒之NS5B蛋白質具有RNA 導引RNA聚合酶之特徵性主體（Koonin，E.V.與Doljia，V.V. (1993) Crir. Rev. Biochem. Molec. Biol. 28 ·· 375-430)。

瘟病毒與肝病毒之NS蛋白質在病毒生命期中之實際角色 與功能，係為直接類似。在此兩種情況中，NS3絲胺酸蛋白 酶係負貴ORF中其位置下游之多蛋白先質之所有蛋白分解處 理（Wiskerchen 與 Collett (1991) Pio/ogy 184 : 341-350 ; Bartenschlager 等 人（1993)«/· 67: 3835-3844; Eckart 等人（1993) 所

Coww· 192: 399-406; Grakoui 等人（1993)«/· 67: 2832-2843; Grakoui 等人（1993)90 : 10583-10587 ; Hijikata 等人 (1993)/ 阶σ/· 67 : 4665-4675 ; Tome 等人（1993)/ Ww/. 67 : 4017-4026) 。NS4A蛋白質在此兩種情況中，係充作與NS3絲胺酸蛋白酶 之輔因子（Bartenschlager 等人（1994)/ 巧ra/. 68 : 5045-5055 ; Failla 等 92848 1333956 人 Q994) /· 68 : 3753-3760 ; Xu 等人（1997)·/ 阶£?/. 71 : 5312-5322)

。兩種病毒之NS3蛋白質亦充作解螺旋酶（Kim等人（1995) 历Comm. 215 : 160-166 ; Jin 與 Peterson (1995) 5^?c/iew·历〇/?/^.,323 : 47-53 ; Warrener 與 Collett (1995)/· Ρϊ/ό/· 69 : 1720-1726)。最後，瘟病毒與肝病毒之NS5B蛋白質具有所預 測之RNA導引之RNA聚合酶活性（Behrens等人（1996) ΕΜΒΟ. 15 : 12-22 ； Lechmann ψ A (1997)/ Virol. 71 ： 8416-8428 ； Yuan ψ A (1997) Biochem. Biophys. Res. Comm. 232 ： 231-235 i Hagedom, PCT WO 97/12033 ;Zhong 等人（1998) J.Ww/. 72.9365-9369) » 以干擾素治療HCV感染

干擾素(IFN)已可市購而得以治療慢性肝炎，達幾乎十年。 IFN為免疫細胞回應病毒感染所產生之糖蛋白。IFN會抑制 多種病毒之複製，包括HCV，且當作為C型肝炎感染之單獨 治療使用時，IFN可在某些情況中壓抑血清HCV-RNA至不可 測得之含量。此外，IFN可使血清轉胺酶含量正常化《很不 幸地，IFN之作用是暫時性的，且持續回應僅在8% -9%以慢 性方式被HCV感染之病患中出現（Gary L. Davis.胃腸病學18 : S104-S114,2000)。但是，大部份病患在忍受干擾素治療上具 困難性，其會造成嚴重流行性感冒狀病徵、體重減輕及精 力與耐力之缺乏。

多項專利揭示黃病毒科，包括HCV，與使用干擾素為基礎 之療法之治療。例如’頒予Blatt寺人之美國專利5,980,884揭 示使用同感干擾素再治療罹患HCV之病患之方法。頒予Bazer 等人之美國專利5,942,223揭示使用羊或牛干擾素-τ之抗-HCV 92848 • 10- 1333956

療涛。頒予Alber等人之美國專利5,928,636揭示間白血球活素_ 12與干擾素α用於治療傳染性疾病包括HCV之組合療法。頒 予Chretien等人之美國專利5,849,696揭示胸腺素單獨或併用干 擾素治療HCV之用途。頒予Valtuena等人之美國專利5,830,455 揭示採用干擾素與自由基清除劑之組合HCV療法。頒予 Imakawa之美國專利5,738,845揭示人類干擾素τ蛋白質治療 HCV之用途。其他干擾素為基礎之HCV治療法，係揭示於頒 予Testa等人之美國專利5,676,942，頒予Blatt等人之美國專利 5,372,808，及美國專利5,849,696中。多項專利亦揭示干擾素之 經PEG化形式，譬如頒予Hoffinann-La Roche之美國專利5,747,646 、5,792,834 及 5,834,594 ;頒予 Enzon 之 PCT 公報 w〇 99/32139 與 WO 99/32140 ;頒予 Schering 之 WO 95/13090 與美國專利 5,738,846 及 5,711，944 ;及頒予Glue等人之美國專利5,908,621 »

干擾素a-2a與干擾素<2-2b目前被許可作為治療HCV之單一 療法。ROFERON®-A(Roche)為干擾素a-2a之重組形式。 PEGASYS® (Roche)為干擾素a-2a之經PEG化（意即經聚乙二醇改 質）形式。INTRON® A (Schering公司）為干擾素a_2b之重組形式 ，而PEG-INTRON® (Schering公司）為干擾素a-2b之經PEG化形式。 干擾素α以及干擾素/3、τ、τ及ω之其他形式，目前正 在關於治療HCV之臨床發展中。例如，InterMune之INFERGEN (干擾素 alphacon-1)、Viragen 之 OMNIFERON (天然干擾素）、人 類基因组科學公司之ALBUFERON、Ares-Serono之REBIF (干擾 素点-la)、BioMedicine之ω干擾素、黃熱病毒生物科技公司之 口服干擾素α，及InterMune之干擾素τ、干擾素r及干擾素 92848 -11 - 1333956 τΆ，乌在發展Ψ。 三唑核嘗 三唑核嘗（1-/3-D-呋喃核糖基·1-1，2,4-三唑-3-羧醯胺）為一種合 成、非干擾素引致之廣效抗病毒核苷類似物，以商標名病 毒嗅（Virazole)銷售（Merck索引，第11版，編輯者：Budavari，S.， Merck 公司，Rahway，NJ，第 1304 頁，1989) » 美國專利 3,798,209 與 RE29,835揭示並請求三唑核苷。三唑核苷係於結構上類似鳥 嘌呤核糖甞，並具有抵抗數種DNA與RNA病毒之活體外活性 ，包括黃病毒科(Gary L. Davis.夏廣;^學 118 : 5104-5114, 2000)。 三唑核苷會在40%病患中使血清轉胺酶含量降至正常，但 其不會使HCV-RNA之血清含量下降（Gary L. Davis，2000)。因此 ，單獨之三唑核苷無法有效降低病毒RNA含量。此外，三唑 核：y：具有顯著之毒性，且已知會引致貧血。三唑核苷未被 許可用於抵抗HCV之單一療法。其已被許可併用干擾素a-2a 或干擾素〇:-2b以治療HCV。 三唑核苷為一種已知肌苷單磷酸鹽脫氫酶抑制劑’其在 HCV複製子系統中未具有專一抗HCV活性（Stuyver等人，病毒 學虏办，2003, 77, 10689-10694)。 干擾素與三唑核穿之組合 對於慢性C型肝炎之護理之現行標準，係為具有心干擾素 與三唑核苷之組合療法。干擾素與三唑核甞用於治療HCV感 染之組合，已被報告有效治療干擾素無效病患（Battaglia，Α·Μ· 等人，34 : 487-494, 2000) ’ 以及治療當組織學 疾病存在時之病患（Berenguer，Μ.等人77ier. 3(補充3) : 125- 92848 1333956

136, 1998)。研.究已顯示較多患有C型肝炎之病患會對PEG化 之干擾素-α /三唑核甞組合療法回應，勝於對與未經PEG 化之干擾素α之組合療法。但是，與單一療法一樣，顯著 副作用會在組合療法期間發展，包括溶血、流行性感冒狀 病徵、貧血及疲勞（Gary L. Davis, 2000)。具有PEG-INTRON® (PEG 干擾素a-2b)與REBETOL® (三唑核甞，美國藥典）膠囊之組合 療法，可得自Schering公司。REBETOL® (Schering公司）亦已被 許可與INTRON® A (干擾素〇：-2b，重組體，Schering公司）併用 。Roche 之 PEGASYS® (經 PEG 化之干擾素 a-2a)與 COPEGUS® (三 嗤核答）以及Three River醫藥之Ribosphere®，亦被許可用於治療 HCV。

Schering 公司之 PCT 公報 WO 99/59621、WO 00/37110、WO 01/81359 、WO 02/32414及WO 03/024461揭示經PEG化之干擾素α與三唑 核脊組合療法用於治療HCV之用途。Hoffinann-La Roche公司之 PCT 公報 WO 99/15194、WO 99/64016 及 W0 00/24355 亦揭示經 PEG 化之干擾素α與三唑核苷組合療法用於治療HCV之用途。 治療黃病毒科感染之其他方法 對於#病#稃感染尤其是C型肝炎之新穎抗病毒劑之發展 ，目前正進行中。HCV-衍生酵素之專一抑制劑，譬如蛋白 酶、解螺旋酶及聚合酶抑制劑，正被發展。抑制HCV複製中 其他步驟之藥物亦在發展中，例如阻斷HCV抗原自RNA產生 之藥物（IRES抑制劑）、阻止HCV蛋白質正常處理之藥物（糖 基化作用之抑制劑）、阻斷HCV進入細胞中之藥物（經由阻斷 其受體），及非專一性細胞保護劑，其係阻斷因病毒感染所 92848 -13· 1333956 造味之“胞損傷。再者，分子途徑亦被發展用以治療c型肝 炎，例如，核糖酵素，其係為分解專一病毒RNA分子之酵素 ，該分子為反有意義寡核甞酸，其係為DNA之小互補鏈段 ，結合至病毒RNA，並抑制病毒複製，且RNA干擾技術係於 研究中（Bymock等人，犮疬#化學次必荸#法，11 : 2 ; 79-95 (2000) ;De Francesco 等人在技;# 毒琢完，58 : 1-16 (2003)中；及 Kronke 等人，/·阶从，78 : 3436-3446 (2004)。 牛病毒腹瀉病毒(BVDV)係為歸屬於責滅毒存之痙病毒，並 已被使用作為潛在抗病毒劑之活體外測試之替代品。雖然 抵抗BVDV之活性可暗示抵抗其他黃病毒之活性，但化合物 經常可能不具抵抗BVDV之活性，而具抵抗另一種黃病毒之 活性。Sommadossi與La Colla已揭發（"治療黃病毒與痕病毒之 方法與組合物”,PCT WO 01/92282)含有甲基於21 ”向上"位置處 之核糖核苷，具有抵抗BVDV之活性。但是，不清楚此等化 合物是否可抑制其他黃病毒，包括細胞培養物中之HCV或在 HCVNS5B含量下。令人感興趣的是，雖然此公報揭示極多 種2’-甲基-2’-X-核糖核甞之化合物，其中X為自素，但氟卻未 被考慮。再者，導致核苷在2' ”向下"位置處被函化之合成途 徑，並未由此等發明人說明。 登革熱病毒（DENV)為登革熱出血熱（DHF)之病因劑。根據 世界衛生組織（WHO)，世界人口之五分之二目前正處於被此 病毒感染之危險下。估計每年500,000件DHF病例需要住院， 其中兒童死亡率為5%。

West Nile病毒（WNV)，一種先前已知僅存在於熱帶間區域之 92848 -14- 1333956 黃痛毒，已於近年來在歐洲與北美之溫帶地區中浮現’呈 現對公共衛生之威脅。WNV感染之最嚴重表象係為人類中 之致死腦炎。在紐約市之爆發及在美國南方之偶發事件， 自1999起已被報告。 目前無HCV、登革熱病毒（DENV)或WestNile病毒感染之預 防治療。目前經許可之療法，其僅針對HCV存在，是有限的 。已被確認為具抵抗C型肝炎黃病毒活性之抗病毒劑之實例 包括： 1)蛋白酶抑制劑： 受質為基礎之NS3蛋白酶抑制劑（Attwood等人，PCT WO 98/22496,1998 ; Attwood等人，犮痞毒必學輿允荸#法1999,10, 259-273 ; Attwood等人，胺基酸衍生物作為抗病毒劑之製備與 用途，德國專利公報DE 19914474 ; Tung等人，絲胺酸蛋白酶特 別是C塑肝炎病毒NS3蛋白酶之抑制劑，PCTW098/17679) ’包 括α酮醯胺類與肼基脲類，與在親電子基團中末端化夂抑 制劑，譬如二羥基硼烷或膦酸鹽（Llinas-Brunet等人，C型肝炎 抑制劑肽類似物，PCT WO 99/07734)，正被研究中。 非受質為基礎之NS3蛋白酶抑制劑，譬如2,4,6-三羥基-3-梢 基-苯甲醯胺衍生物（Sudo K.等人，立#必學輿至##理砑兖述 銨，1997, 238, 643-647 ; SudoK.等人，犮學斿化##法， 1998,9，186)，包括RD3-4082與RD3-4078，前者係在醯胺上被14 碳鏈取代，而後者具有對·苯氧基苯基，亦正被研究中。 SCH68631，一種菲醌，為HCV蛋白酶抑制劑（ChuM.等人， Tetrahedron Letters 3 7 : 7229-7232,1996)。於相同作者之另一項實 92848 -15- 1333956

例t，自真菌灰##霉單離之SCH 351633，係經確認為蛋白 酶抑制劍（Chu M.等人，Bioorganic and Medicina! Chemistry Letters 9 : 1949-1952)。抵抗HCVNS3蛋白酶之毫微莫耳濃度功效，已經 藉由以巨分子也葛林c (eglin c)為基礎之選擇性抑制劑之設計 而達成。自水經單離之也葛林c係為數種絲胺酸蛋白酶之有 效抑制劑，譬如灰色鏈霉菌蛋白酶A與B、α-胰凝乳蛋白酶 原、糜蛋白酶及枯草桿菌蛋白酶（QasimM.A.等人，至#化學36 :1598-1607,1997)。

數件美國專利係揭示用於治療HCV之蛋白酶抑制劑。例如 ，頒予Spruce等人之美國專利6,004,933揭示一種用於抑制HCV 内肽酶2之半胱胺酸蛋白酶抑制劑。頒予Zhang等人之美國專 利5,990,276揭示C型肝炎病毒NS3蛋白酶之合成抑制劑。該抑 制劑係為NS3蛋白酶之受質或NS4A辅因子之受質之亞順序。 限制酵素治療HCV之用途，係揭示於頒予Reyes等人之美國 專利5,538,865中。作為HCV之NS3絲胺酸蛋白酶抑制劑之肽， 係揭示於頒予Corvas國際公司之WO 02/008251，及頒予Schering 公司之WO 02/08187與WO 02/008256中。HCV抑制劑三肽係揭示 於頒予 Boehringerlngelheim 之美國專利 6,534,523、6,410,531 及 6,420,380，與頒予 Bristol Myers Squibb 之 WO 02/060926 中。作為 HCV 之NS3絲胺酸蛋白酶抑制劑之二芳基肽，係揭示於頒予 Schering公司之WO 02/48172中。作為HCV之NS3絲胺酸蛋白酶 抑制劑之四氫咪峻酮，係揭示於頒予Schering公司之 WO 02/08198，與頒予 Bristol Myers Squibb 之 WO 02/48157 中。頒予

Vertex 醫藥之 WO 98/17679 與頒予 Bristol Myers Squibb 之 WO 02/48116 92848 -16 - 1333956 ，亦揭示HCV蛋白酶抑制劑。 2) 嘍唑啶衍生物，其在逆相HPLC檢測中，顯示與NS3/4A融 合蛋白質及NS5A/5B受質之有關聯抑制（Sudo K.等人，#疬#砑 宏，1996,32,9-18)，尤其是化合物RD-1-6250，其具有被長烷基 鏈取代之稠合桂皮醯基部份基團，RD4 6205及RD4 6193 ; 3) 噻唑啶與苯甲醯苯胺，其係在KakiuchiN.等人，故m421， 217-220 ; Takeshita N.等人，分# 立 # 必荸 1997, 247, 242-246 中確認；

4) 菲醌，其在SDS-PAGE與放射自顯術檢測中具有抵抗蛋白酶 之活性，單離自鏈球菌溶血素屬Sch 68631之發酵培養物培養 基（Chu M_ 等人，1996, 37, 7229-7232)，及 Sch 351633 ，單離自真菌灰黃青霉，其係在閃燦親近檢測中展示活性 (ChuM.等人，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9, Ί949-Ί952).， 5) 解螺旋酶抑制劑（Diana G.D.等人，治療C型肝炎之化合物、 組合物及方法，美國專利5,633,358 ; Diana G.D.等人，治療C型肝

炎之六氫吡啶衍生物、其醫藥組合物及其用途，PCT WO

97/36554)； 6)核芬酸聚合酶抑制劑與支霉黏毒(Ferrari R·等人，病毒學期刊， 1999,73,1649-1654)及天然產物淺藍菌素（Lohmann V.等人，病毒 學，1998,249,108-118); 7)反有意義偶磷基硫代酸酯寡脫氧核苷酸（S-ODN)，其係與 病毒5'非編碼用區域（NCR)中之順序伸長互補（AltM.等人， ifepaio/ogy, 1995, 22, 707-717)，或核嘗酸 326-348，其包含 NCR 之 3' 末端，及核苷酸371-388 ’位於HCV RNA之核心密碼區域（Alt M. 等人，斿毒學襠案，1997, 142, 589-599 ; Galderisi U•等人，鈿應兰湮 92848 •17· 1333956 1999, 181,251-257)； 8) IRES依存性轉譯之抑制劑（IkedaN.等人，預防與治療C型肝 炎之藥劑，日本專利公報JP-8268890 ; Kai Y.等人，病毒疾病之 預防與治療，日本專利公報JP-101 01591);

9) 核糖酵素，譬如核酸酶抵抗性核糖酵素（Maccjak, D. J.等人， i/epflio/ogy, 1999, 30,摘要995)，與在頒予Barber等人之美國專利 6,043,077，及頒予Draper等人之美國專利5,869,253與5,610,054中 所揭示者； 10) 核嘗類似物亦已針對黃病毒科感染之治療而發展。

Idenix醫藥公司在國際公報WO 01/90121與WO 01/92282中，揭

示某些分枝狀核苷於黃病毒（包括HCV)與瘟病毒治療上之用 途。明確言之，一種在人類及其他宿主動物中治療C型肝炎 病毒感染（與黃病毒及瘟病毒）之方法，係揭示於該Idenix公 報中，其包括投予有效量之生物活性1'，2’，3’或4’-分枝狀石-D或 分L核苷，或其藥學上可接受之鹽或衍生物，無論單獨或併 用另一種抗病毒劑投藥，視情況在藥學上可接受之載劑中。 2004年1月8日公告之頒予Idenix之WO 2004/002422，係揭示 用於治療黃病毒感染之2·-甲基核甞族群。2004年1月8曰公 告之頒予Idenix之WO 2004/002999，係揭示一系列l'，2’J或4’分 枝核甞之2'或3’前體藥物，用於治療黃病毒感染’包括HCV 感染。 揭示某些核誓類似物治療C型肝炎病毒感染之用途之其他 專利申請案，包括：PCT/CAOO/01316(WO 01/32153 ; 2000 年 11 月 3 日提出申請）與 PCT/CAOI/00197 (WO 01/60315 ; 2001 年 2 月 19 92848 -18- 1333956 日操出申請），由BioChem Pharma公司（目前為Shire Biochem公司） 提出申請；PCT/USO2/01531 (WO02/057425 ; 2002 年 1 月 18 日提出 申請）與 PCT/U502/03086(W002/057287 ; 2002 年 1 月 18 曰提出申 請），由 Merck 公司提出申請；PCT/EPOT/09633 (WO 02/18404 ; 2001 年8月21日公告）’由Roche提出申請，以及PCT公報WO 01/79246 (2001年4月13日提出申請）、W002/32920(2001年10月18日提 出申請）及 WO02/48165，由 Pharmasset 公司。

頒予Merck公司之WO 2004/007512揭示多種核甞化合物，其 係被揭示作為RNA依存性RNA病毒聚合酶之抑制劑。此公報 中所揭示之核苷主要為2’·甲基-2'-羥基取代之核苷。2002年7 月25日公告之頒予Merck等人之WO 02/057287，係揭示大種類 之2'-曱基-2'-經基取代之密淀衍生核答。頒予Merck等人之 WO 2004/009020揭示一系列硫基核：y：衍生物，其係作為RNA依 存性RNA病毒聚合酶之抑制劑《頒予Merck等人之WO 03/105770 揭示一系列碳環族核甞衍生物，其可用於治療HCV感染。

頒予Emory大學之PCT公報WO 99/43691，其標題為"2，-氟基 核苷” ’揭示某些之-氟基核苷治療HCV之用途。頒予Emory大 學之美國專利6,348,587，其標題為"2，-氟基核苷"，揭示可用 於治療B型肝炎、HCV、HIV及異常細胞增生之2，-氟基核苷 族群。2'取代係被揭示為無論是在"向上"或"向下"位置上》 Eldmp等人（口述會期V，C型肝炎病毒，黃病毒科；第16屆抗 病毒研究國際會議（2003年4月27日，Savannah，Ga·))描述抑制 HCV之2'-改質核甞之結構活性關係。

Bhat等人（口述會期v，C型肝炎病毒，黃病毒科；第16屆抗 92848 -19- 1333956 病毒研究國際會議（2003年4月27日，Savannah, Ga.) ; p A75)係描 述核嘗類似物之合成與藥物動力學性質，其係作為HCV RNA 複製之可能抑制劑。作者報告2'-改質之核苷在以細胞為基礎 之複製子檢測中証實有效抑制活性。

Olsen等人（口述會期V，C型肝炎病毒，黃病毒科；第丨6屆抗 病毒研究國際會議(2003年4月27日，Savannah，Ga·) ρ A76)亦描述 2·-改質核甞對於HCVRNA複製之作用。

11) 其他種種化合物，包括1-胺基-燒基環己燒（頒予Gold等人 之美國專利6,034，134)、烷基脂質（頒予Chojkier等人之美國專 利5,922,757)、維生素E及其他抗氧化劑（頒予Chojkier等人之美 國專利5,922,757)、角鯊烯、金剛胺、膽汁酸（頒予〇2也等人 之美國專利5,846,964)、N-(膦酸基乙醯基）-L-天門冬胺酸（頒予 Diana等人之美國專利5,830,905)、苯二羧醯胺（頒予Diana等人 之美國專利5,633,388)、聚腺'衍生物（頒予Wang等人之美 國專利5,496,546)、2,3-二脫氧肌替（頒予Yarchoan等人之美國專 利5,026,687)、苯并咪唑（頒予Colacino等人之美國專利5,891,874) 、植物萃液（頒予Tsai等人之美國專利5,837,257，頒予Omer等 人之美國專利5,725,859，及美國專利6,056,961)，及六氫吡啶 (頒予Diana等人之美國專利5,830,905)。 12) 目前在治療C型肝炎病毒感染之臨証前或臨床發展上之 其他化合物，包括：Schering-Plough之間白血球活素-10、 Intemeuron 之 IP-S01、Vertex 之 Merimebodib (VX-497)、Endo Labs Solvay 之 AMANTADINE® (金剛烷胺）' RPI 之 HEPTAZYME®、Idun Pharma. 之 IDN-6556、XTL.之 XTL-002、Chiron 之 HCV/MFS9、NABI 之 92848 -20- 1333956 CIVACIR®(C 型肝炎免疫球蛋白）、ICN/Ribapharm 之 LEVOVIRIN® 、ICN/Ribapharm 之 VIRAMIDINE®、SciClone 之 ZADAXIN®(胸腺素 α-1)、SciClone之胸腺素加上經PEG化之干擾素、Maxim之 CEPLENE® (組織胺二鹽酸鹽）、Vertex/Eli Lilly 之 VX 950 / LY 570310 、Isis 醫藥 / Elan 之 ISIS 14803、Idun 醫藥公司之 IDN-6556、 AKROS Pharma 之 JTK 003、Boehringerlngelheim 之 BILN-2061、Roche 之 CellCept (分枝酌酸莫非替(mycophenolate mofetil))，Tularik 之 T67 ，為/5-微管蛋白抑制劑，Innogenetics針對E2之治療疫苗、 Fujisawa保健公司之FK788、ldB 1016 (Siliphos，口服水飛薊素-鱗 脂酿膽驗植物染色體）、Viro Pharma/Wyeth之RNA複製抑制劑 (VP50406)、Intercell 之治療疫苗、Epimmune/Genencor 之治療疫苗 、Anadys 之 IRES 抑制劑、Anadys 之 ANA 245 與 ANA 246、Avant 之免疫療法（Therapore)、Corvas/SChering之蛋白酶抑制劑、Vertex 之解螺旋酶抑制劑、Trimeris之融合抑制劑、CellExSys之T細 胞療法、Biocryst之聚合酶抑制劑、;PTC治療劑公司之標的RNA 化學、Immtech公司之二陽離子、Agouron之蛋白酶抑制劑、 Chiron/Medivir之蛋白酶抑制劑、AVI BioPharma之反有意義療法 、Hybridon之反有意義療法、Aethlon醫藥之血純化劑、Merix 之治療疫苗、Bristol-Myers Squibb/Axys之蛋白酶抑制劑，Tripep 之Chron-VacC，為治療疫苗，United治療劑公司之UT 231 B， Genelabs技術公司之蛋白酶、解螺旋酶及聚合酶抑制劑， Immusol 之 IRES 抑制劑、Rigel 醫藥之 R803 、InterMune 之 INFERGEN®(干擾素 alphacon-1)、Viragen 之 〇MNIFERON®(天然干 擾素）、人類基因組科學公司之ALBUFERON®、Ares-Serono之 92848 -21 - 1333956 REBIFR®(干擾素y5-la)、BioMedicine之ω干擾素、黃熱病毒生 物科技公司之口服干擾素a，InterMune之干擾素7、干擾素 r及干擾素r-lb。Rigel醫藥正在發展非核苷HCV聚合酶抑制 劑R803，其顯示作為與IFN及三唑核甞增效之希望。 13)數種研究藥物之摘要，包括數種上文所討論者，其目前 處於發展用於治療HCV之各種階段，係摘錄於下文：

藥物 機制/標的 公司 美國情況 BILN-2061 NS3絲胺酸-蛋白酶 抑制劑 Boehringer Ingelheim 階段Π ISIS 14803 反有意義/ 阻止RNA之轉譯 ISIS/Elan 階段II 維拉p密淀 (Viramidine) 三唑核甞之前體藥物 Ribapharm 階段II NM283 HCV RNA聚合酶 抑制劑 Idenix 階段ΙΙ/ΙΠ VX-497 IMPDH抑制劑 Vertex 階段Ι/Π JKT-003 HCVRNA聚合酶之 抑制劑 日本 Tobacco/Akros 階段Ι/ΙΙ 列弗維林 (Levovirin) L-三唑核铝類似物 Ribapharm/Roche 階段Ι/ΙΙ Isatoribine; ANA245 與TLR7受體交互作 用之核甞類似物 Anadys 階段I Albuferon 免疫調制劑 人類基因組科學 階段I Peg-Infergen 免疫調制劑 Intermune 階段I VX-950 HCVNS3-4A蛋白酶 之抑制劑 Vertex 臨註前 SCH6 HCVNS3-4A蛋白酶 之抑制劑 Schering Plough 臨註前 R803 HCVRNA聚合酶之 抑制劑 Rigel 階段I 92848 • 22· 1333956

HCV-086 ViroPharmaAVyeth 階段I R1479 HCV RNA聚合酶之 抑制劑 Roche 階段I 核甞前體藥物已在先前被描述用於治療其他肝炎形式。頒 予Idenix醫藥之W0 00/09531與W0 01/96353，揭示用於治療HBV 之2'-脫氧-沒-L-核替及其3'-前體藥物。頒予Beauchamp之美國專 利4,957,924揭示阿環維爾（acyclovir)之各種治療酉旨類。 在明白HCV感染已達到全世界流行程度，且對於受感染之 病患具有悲劇作用之事實後，仍存有一項提供治療C型肝炎 而對宿主具低毒性之新穎有效藥劑之強烈需求。 再者，在其他黃病毒科感染之上升威脅下，仍存有一項提 供對宿主具低毒性之新穎有效藥劑之強烈需求。 【發明内容】 C型肝炎病毒（HCV)、登革熱病毒（DENV)或WestNile病毒 (WNV)感染，目前無任何預防治療，且目前許可之療法是有 限的，其僅針對HCV存在。針對治療標準之進化，醫藥化合 物之設計與發展是必須的，尤其是與其他經許可及研究之 f斿毒存（特別是HCV)治療劑一起增效者，包括更有效之組 合療法。 本發明係提供（2’R)-2'-脫氧-2'-氟基-2'-C-甲基核苷（沒-D或yg-L) ，或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物，及此種化合物治 療被病毒感染之宿主之用途，該病毒係歸屬於#為#存族 群，包括C型肝炎、West Nile病毒及黃熱病病毒。此外，本 發明之核苷顯示活性地抵抗鼻病毒。鼻病毒（RV)為小（30毫 微米）無包膜病毒，其在廿面體（20-面）衣殼内含有單股核糖 92848 -23- 1333956 核酸（RNA)基因組。RV係歸屬於.細V、#潜#鑀斿#存族群， 其包括腸道病毒（灰質炎病毒、柯薩奇病毒組群A與B、Echo 病毒、編號腸道病毒）與肝病毒（A型肝炎病毒）種屬。目前 大約有101種血清型經確認。鼻病毒最常與一般感冒、鼻咽 炎、格魯布、肺炎、中耳炎及氣喘惡化有關聯。 本發明人已令人意外地發現本發明/3-D或石-L核：y：上之2'取 代，會賦予對C型肝炎病毒之較大專一性，以及在對宿主投 藥後，顯示較低毒性。本發明亦包括一種治療黃病毒科感 染與鼻病毒感染之方法，該黃病毒科包括C型肝炎病毒、 West Nile病毒及黃熱病病毒，此方法包括投予抗病毒上有效 量之本文中所揭示之Θ-D或沒-L核甞，或其藥學上可接受之 鹽或前體藥物，視情況在藥學上可接受之載劑或稀釋劑中 ，視情況併用另一種有效抗病毒劑或與其交替。 本發明之核苷擁有獨特性質，其具有對C型肝炎病毒之較 大專一性，及在培養物中或當被投予動物時之較低毒性。 對於上述之一項潛在但非限制性原因是，核糖環上之2'-氟 基取代之存在。例如，頒予Schinazi等人之美國專利6,348,587 ，揭示可用於治療C型肝炎病毒感染之1氟基核苷化合物族 群。對照上而言，2'-甲基取代，譬如在2'-C-曱基胞嘧啶核甞 中所發現者，如頒予Idenix之W0 2004/02999中所示，其中在核 苷環上，於2'位置處之2'-甲基取代，並未對C型肝炎專一。 因此，於一方面，抗病毒有效核甞係為以下通式（2'R)-2'_脫 氧-2’-氟基-2'-C-甲基核钻（分D或/3-L)，或其藥學上可接受之鹽 或其前體藥物： 92848 -24- 1333956

其中 ⑻鹼基為天然生成或經改質之嘌呤或嘧啶鹼基； ⑼ X 為 0、s、CH2、Se、NH、N_ 烷基、CHW (R^S 或外消 旋）' C(W)2，其中 W 為 F、Cl、Br 或 I ;

(c) R1與r7係獨立為η，磷酸鹽，包括5'-單磷酸鹽、二磷 酸鹽、三磷酸鹽或被安定化之磷酸鹽前體藥物，Η-膦酸 鹽’包括被安定化之Η-膦酸鹽，醯基，包括視情況經取 代之苯基與低碳酿基，燒基，包括低竣燒基，〇_取代之 羧基烷胺基或其肽衍生物，磺酸酯，包括烷基或芳烷基 磺醯基，包括甲烷磺醯基與芊基，其中苯基係視情況經 取代，脂質，包括磷脂，L或D-胺基酸、碳水化合物、 肽、膽固醇，或其他藥學上可接受之脫離基，當於活體 内投藥時，其能夠提供一種化合物，其中R1為Η或磷酸 鹽；R2為0Η或磷酸鹽；R1與R2或R7亦可和環狀磷酸根基 團連結；且 (d) R2與R2’係獨立為Η、Ch烷基、C1M烯基、（^_4炔基 、乙烯基、N3、CN、Cl、Br、F、I、N02、（:(0)0((^.4烷 基）、<：(0)0((：1-4烷基）、（：(0)0(0：1-4炔基）、（：(0)0((：1-4晞基） 、CKCm醯基）、0(0卜4烷基）、0((ν4烯基）、SAq醯基） 、s(cv4烷基）、s(Ci-4炔基）、scc^烯基）、socc^醯基） 'SCXCu 烷基）、SCKCh 炔基）、SCKCh 烯基）、so2(c卜 4 醯 92848 • 25- 1333956

基）、SCMC^烷基）、SCMCh炔基）、so2(Ch烯基）、C^SCCh 醯基）、〇33(Α_4 烷基）、ΟΘΑμ 烯基）、NH2、ΝΗΑμ 烷 基）、ΝΗ((ν4 締基）、ΝΗ((ν4 炔基）、NHCCh 醯基）、Ν((ν4 炫•基）2、N(C〗-18酿基）2 ’其中燒基、块基、烯基及乙晞基 係視情況被N3、CN、一至三個鹵素（Cl，Br, F，I)、N02、 C(0)0(C卜4烷基）、C(0)0((V4烷基）、（:(0)0((^.4 炔基）、 (XOXXCm 烯基）、0((ν4 醯基）、0((V4 烷基）、〇((ν4 烯基） 、scCm醯基）、s(Ci-4烷基）、scCh炔基）、s(cv4烯基）、 SO(C 卜 4 醯基）、SO((V4烷基）、SCKCh 決基）、SC^Cm烯基） 、SCMCh 醯基）、SC^Cu 烷基）、S02(C 卜 4 炔基）、SCMCm 烯基）、醯基）、033((ν4 烷基）、OsSAm 烯基）、 ΝΗ2、ΝΗ((ν4烷基）、NHCh烯基）、NHCh炔基）、NHCh 醯基）、N(Ch烷基）2、N(CV4醯基）2取代，R2與R2’可一起 形成乙烯基，視情況被一或兩個N3、CN、Cl、Br、F、I 、N02取代；OR7，且

(e) R6為視情況經取代之烷基（包括低碳烷基）、氰基（CN) 、ch3、och3、〇CH2CH3、羥甲基（CH2OH)、氟基甲基(ch2f) 、疊氮基（N3)、CHCN、CH2N3、CH2NH2、CH2NHCH3、 CH2N(CH3)2、炔類（視情況經取代）或氟基》 於本發明之各方面，鹼基可選自

92848 -26- 1333956 本發明之各方面亦包括醫藥組合物，其包含本文中所述之 任何（2ΊΙ)-2'_脫氧-2’-氟基-2'-C-甲基核棼（/3-D或yS-L)，或其藥學 上可接受之鹽或其前體藥物，及藥學上可接受之載劑。 於各方面，本發明亦提供治療或預防C型肝炎病毒感染、· West Nile病毒感染、黃熱病病毒感染或鼻病毒感染之方法， 其包括對宿主投予抗病毒有效量之本文中所揭示之（2'R)-2’_脫 氧-2'-氟基-2'-C-甲基核铝。本發明亦包括治療或預防#斿毒 科感染之方法，該病毒包括肝病毒屬（HCV)、瘟病毒屬（BVDV 、CSFV、BDV)或黃病毒屬（登革熱病毒、日本腦炎病毒（包 括West Nile病毒）及黃熱病病毒）之所有成員。 於各方面，（2’R)-2'_脫氧-2'-氟基-2’-C-甲基点-D-核苷，當在適 當細胞為基礎之檢測中測試時，具有EC5〇(達成50%抑制之 有效濃度）低於15微莫耳濃度，且更特定言之，係低於10或 5微莫耳濃度。於其他方面，核苷係為對掌異構上富含。 本發明亦提供在宿主中治療或預防C型肝炎病毒感染、 West Nile病毒感染、黃熱病病毒感染或鼻病毒感染之方法， 其包括投予有效量之本文中所揭示之（2’R)-2'-脫氧-2'-氟基-2’-C-甲基核苷（片D或/3-L)，或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物 ，併用一或多種其他有效抗病毒劑或與其交替，視情況在 其藥學上可接受之載劑或稀釋劑中，如本文中所述。可與 本文中所揭示化合物合併使用之抗病毒劑類型或其前體藥 物之非限制性實例，包括但不限於：干擾素，包括干擾素α 2a、干擾素a2b、經PEG化之干擾素、干擾素yS、干擾素7" 、干擾素r及干擾素ω ;間白血球活素，包括間白血球活 92848 -28- 1333956 素10與間白血球活素12;三唑核苷；干擾素併用三唑核苷； 蛋白酶抑制劑，包括NS3抑制劑；解螺旋酶抑制劑；聚合酶 抑制劑；支霉黏毒；IRES抑制劑；與反有意義寡核甞酸； 遠峻咬衍生物，·苯甲醯苯胺、核糖酵素；另一種核苷、核 菩前體藥物或核苷衍生物；丨_胺基_烷基環己烷；抗氧化劑 ’包括維生素E ;角鯊烯；金剛胺；膽汁酸；N_(膦酸基乙醯 基）-L-天門冬胺酸；苯二羧醯胺；聚腺甞酸；苯并咪唑；胸

腺素；々微管蛋白抑制劑；預防疫苗；水飛薊素_磷脂醯膽 鹼植物染色體；及霉菌酚鹽。 下述非限制性方面係說明獲得本發明核甞之一些一般操作 法。明確言之，本發明核苷之合成可藉由兩種一般方式中 之任一種達成： 1)使適當改質之碳水化合物結構單位烷基化，隨後氟化， 接著偶合，以形成本發明之核苷（圖式υ，或 )進行糖基化作用以形成核#，接著是本發明預形成核菩 之健基化作用與說化作用（圖式2)。

此外，相應於本發明化合物之L_對掌異構物，可按照相同 般方法（圖式1或2)，以其相應之L_碳水化合物社 核糾對掌異構物作為起始物質開始而製成。π 因此，本發明包括至少下列一般特徵： ⑻所揭示通式之帥與奸核嘗，或其藥學上可接受之 或其如體藥物，如本文中所述； ⑼製備所揭示通式之仲與奸核^:或其藥學上可接& 鹽或其前體藥物之方法，如本文中所述； 又 92848 •29· 1333956 (c) 醫藥組合物，其包含所揭示通式之/3-D或占-L核：y：，或 其藥學上可接受之鹽或其前體藥物，在藥學上可接受 之載劑或稀釋劑中，如本文中所述，以在宿主中治療 或預防病毒感染；

(d) 醫藥組合物，其包含所揭示通式之/3-D或分L核苷，或 其藥學上可接受之鹽或其前體藥物，且併用一或多種 其他有效抗病毒劑，視情況在藥學上可接受之載劑或 稀釋劑中，如本文中所述，以在宿主中治療或預防病 毒感染； (e) 在宿主中治療或預防旁斿##感染與鼻病毒感染之方 法，該黃病毒科包括C型肝炎病毒、West Nile病毒及黃 熱病病毒，其包括投予有效量之所揭示通式之/5-D或 冷-l核：y：，或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物，視 情況在藥學上可接受之載劑或稀釋劑中，如本文中所述；

(f) 在宿主中治療或預防#病#科感染與鼻病毒感染之方 法，該黃病毒科包括C型肝炎病毒、West Nile病毒及黃 熱病病毒，其包括投予有效量之所揭示通式之yS-D或 /3-L核苷，或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物，併 用一或多種其他有效抗病毒劑或與其交替，視情況在 藥學上可接受之載劑或稀釋劑中，如本文中所述； (g) 所揭示通式之石-D或分L核：y：或其藥學上可接受之鹽或 其前體藥物，視情況在如本文中所述之藥學上可接受 載劑中，於宿主中治療或預防資疬##感染與鼻病毒 感染之用途，該黃病毒科包括C型肝炎病毒、West Nile 92848 -30- 1333956 病毒及黃熱病病毒； (h) 所揭示通式之片D或0-L核甞或其藥學上可接受之鹽或 其前體藥物，併用或一或多種其他有效抗病毒劑或與 其交替，視情況在如本文中所述之藥學上可接受載劑 中，於宿主中治療或預防黃病毒科感染與鼻病毒感染 之用途，該黃病毒科包括C型肝炎病毒、West Nile病毒 及黃熱病病毒；

(i) 所揭示通式之/3-D或/3-L核甞或其藥學上可接受之鹽或 其前體藥物，視情況在如本文中所述之藥學上可接受 載劑中，於藥劑製造上之用途，該藥劑係在宿主中治 療或預防黃病毒科感染與鼻病毒感染，該黃病毒科包 括C型肝炎病毒、West Nile病毒及黃熱病病毒；

①所揭示通式之尽D或/5-L核甞或其藥學上可接受之鹽或 其前體藥物，併用或一或多種其他有效抗病毒劑或與 其交替，視情況在如本文中所述之藥學上可接受載劑 中，於藥劑製造上之用途，該藥劑係在宿主中治療或 預防黃病毒科感染與鼻病毒感染，該黃病毒科包括C 型肝炎病毒、West Nile病毒及黃熱病病毒； (k)所揭示通式之/5-D或y5-L核苷或其藥學上可接受之鹽或 其前體藥物，視情況在如本文中所述之藥學上可接受 載劑或稀釋劑中，於醫藥療法上之用途，意即作為抗 病毒劑，例如治療或預防黃病毒科感染與鼻病毒感染 ，該黃病毒包括C型肝炎病毒、West Nile病毒及黃熱病 病毒； 92848 -31 - 1333956 ①所揭示如本文中所述之通式尽D或0_L核苷或其藥學上 可接受之鹽或其前體藥物於醫藥療法上之用途，意即 作為抗病毒劑，併用一或多種其他有效治療劑（意即另 一種抗病毒劑）或與其交替，視情況在如本文中所述之 藥學上可接受載劑或稀釋劑中，例如在宿主中治療或 預防黃病毒科感染與鼻病毒感染，該黃病毒科包括c 型肝炎病毒、West Nile病毒及黃熱病病毒。 現在，詳細描述本發明之不同具體實施例。當使用於此處 之說明文與隨後之整個申請專利範圍中時，除非内文另有 清楚地指述，否則，，—種"、，，—個"及"該，，之意義係包括複 數指稱。而且，當使用於此處之說明文與隨後之整個申請 專利範圍中時’除㈣文另有清楚地指述，否則,,在於"係 包括"在其中”與"在其上"。 於本專利說明書中所使用之術語，一般具有其在此項技藝 中，在本發明之内文中’及在其中使用各術語之特定内文 中之-般意義。用以描述本發明之某些術語係於下文或本 專利說明書中之別處討给，a , 衩4順以對執行者提供關於描述本發 明之組合物與方法及如何製造與使用彼等之其他指示。為 万便起見’可使某些術語醒目’例如使用斜體及/或引號 。醒目之利用不影響術語之範圍_;術語之範園與意 義在相同内又中係為相@，無論其是否醒目。應明瞭的是 ，相同事物可以一種以上之方古 万式訴說。因此，替代語言與 同我字可用於本文中所討给士权 B任—個或多個術語，而非欲 92848 -32- 1333956 加諸任何特殊意義於無論一術語是否在 .外人甲咩盡地說明 或时^。某些術語之同義字係被提供。一或多種同義字之 列舉，並未排除其他同義字之使用。實例在本專利說明書 中任何位置之使用，包括本文中所討論之任何術語之實例 i係僅為說明性，而絕非限制本發明或任何所舉例術語之 範園與意義。同樣地’本發明並不限於本專利 \ 予之各種具體實施例》 曰 於本文中使用之”約，，或”大約”，一般係意謂在所予數值 或範圍之烈百纽内，較佳為㈣分比内，且更佳為$百分 比内。本又所予以數字表示之量為大約數，意謂若並未明 確地敘述，則可意謂"約”或"大約"術語。 本發明係提供叫2，·脫氧-2ι_氟基·2，心甲基核芬及其藥學上 可接受之鹽與前體藥物，其係、在宿主中治療c型肝炎病毒威 染、Wes通e病毒㈣、黃熱病病毒感染或鼻病毒感染。 」斤揭示之化合物或其藥學上可接受之衍生物或鹽或含有此 等化合物之藥皋上可垃為^

了接爻乏配万，可使用於預防與治療HCV 感染°此外，此等化合物或配方可以預防方式使用，以在 抗-HCV抗原陽性或已曝露至hcv之個人中，預防或減緩臨 床疾病之進展。 、；文中所揭示之化合物可藉由與適當酯化劑例如齒化醯 :酐反應：而被轉化成藥學上可接受之醋。化合物或其藥 可接又之衍生物可以習用方式，例如經由以適當鹼處 而被轉化成其藥學上可接受之鹽。化合物之醋或鹽可 例如藉由7jC解作用，被轉化成母體化合物。 92848 •33· 1333956 定義 "獨立地"一詞係於本文中用以表示獨立施用之變數 地隨著各施用而改變β因此，在化合物中，譬如圯咖广 其中Ra係"獨立為碳或氮"，兩個Μ皆為碳，兩個Ra可皆為 氮，或一個Ra可為碳，而另一個Ra為氮。 於本又中使用之"對掌異構上純"或，，對掌異構上富含"兩 術語’係指核:¾•組合物’其包含至少大約95%，且較佳為大 約97%、98%、99%或職該㈣之單—對掌異構物。 於本又中使用之"實質上不含"或”實質上不存在"兩術語 ，係指核甞組合物，其包含至少85或9〇重量％，較佳為％ 至98重量％ ’且又更佳為99至！⑻重量％該核|所指稱之對 掌異構物。於一項較佳具體實施例中，在本發明之方法與 化合物中，化合物係實質上不含對掌異構物。 同樣地，"經單離”一詞係指核苷組合物，其包含至少幻或 9〇重量％，較佳為95至98重量％，且又更佳為99至1〇〇重量 %核甞’其餘部份包含其他化學物種或對掌異構物。 於本文中使用之"烷基"一詞，除非另有指明，否則係指飽 和直鍵、为枝狀或ί衣狀，一級、一級或三級煙，典型上為Ci 至<：10,且明確言之，包括甲基、三氟甲基、乙基、丙基、 異丙基、環丙基、丁基、異丁基、第三-丁基、戊基、環戊 基、異戊基、新戊基、己基、異己基、環己基、環己基甲 基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基及2,3-二甲基丁基。此術語 包括經取代與未經取代之燒基兩者。燒基可視情況被一或 多個部份基團取代’取代基選自包括羥基、胺基、烷胺基 92848 -34- 1333956 、芳胺基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸鹽 、膦酸、磷酸鹽或膦酸鹽，或不會抑制此化合物藥理學活 性i任何其他可用7能基，無論是未經保護絲保護，按 而要而足，如熟碏此藝者所已知，例如在^ Greene與 P.G_M. Wuts，"有機合成之保護基，，第3版，J〇hn& s〇ns，1999 中所陳述者，其係據此併於本文供參考。 於本又中使用4 "低碳烷基” 一詞，除非另有指明，否則係 才曰Ci至C4飽和直鏈、分枝狀或若適當則為環狀（例如環丙基） 烷基，包括經取代與未經取代形式兩者。除非本申請案中 另有明確述及，否則當燒基為適當部份基圏時，低竣燒基 為較佳。同樣地，當烷基或低碳烷基為適當部份基團時， 未經取代之烷基或低碳烷基為較佳。 烷胺基"或"芳胺基"兩術語，係指個別具有一或兩個烷 基或芳基取代基之胺基。 於本文中使用之"經保護” 一詞，除非另有定義，否則係指 被添加至氧、氮或磷原子中，以防止其進一步反應或供其 他目的用之基團。極多種氧與氮保護基係為熟諳有機合成 技蟄者所已知。非限制性實例包括：C(〇)·烷基、c(〇)ph、C(〇) 芳基、CH3 ' CHr烧基、CHr稀基' CH2ph、Ch2_芳基 ' CH2〇 烷基、ch20-芳基、S02·烷基、S〇2·芳基、第三_丁基二甲基 矽烷基、第三·丁基二苯基矽烷基及四異丙基二亞 矽氧烷基）。 於本文中使用之”芳基"一詞，除非另有指明，否則係指苯 基、聯苯基或萘基，且較佳為苯基。此術語包括經取代與 92848 -35· 1333956 未經取代之部份基團。芳基可被一或多個部份基團取代， 取代基選自包括羥基、胺基、烷胺基' 芳胺基、烷氧基、 芳氧基、硝基、氰基、續酸、硫酸鹽、膦酸、鱗酸鹽或膦 酸鹽’供論是未經保護或經保護，按需要而定，如熟諳此 藝者所已知，例如在T.W. Greene與P.G.M. Wuts,"有機合成之保 護基"，弟3版，John Wiley & Sons, 1999中所陳述者。 ” 芳基"或"垸基芳基"兩術語，係指具有芳基取代基之 烷基。"芳烷基”或"芳基烷基"兩術語，係指具有烷基取代 基之芳基。 於本文中使用之”由基”一詞，包括氯基、溴基、碘基及氟 基。 "醯基"一詞係指羧酸酯’其中酯基之非羰基部份基團係選 自直鏈、分枝狀或環狀烷基或低碳烷基，烷氧烷基，包括 甲乳基甲基’芳燒基’包括字基’芳氧基燒基，譬如苯氧 基甲基，芳基’包括苯基，視情況被鹵素（F，Cl，Br, I)、q至C4 烷基或Q至C4烷氧基取代，磺酸酯類，譬如烷基或芳烷基 績醯基’包括甲燒續醯基，單、二或三鱗酸酯，三苯甲基 或單甲氧基三苯甲基、經取代之苄基、三院基碎垸基（例如 二曱基-第三-丁基矽烷基）或二苯曱基矽烷基。酯類中之芳 基最適宜係包含苯基。 "低碳醯基"一詞係指其中非羰基部份基團為低碳烷基之醯 基。 "嘌呤"或"嘧啶"鹼基兩術語，包括但不限於腺嘌呤、N6-烷基嘌呤、N6-醯基嘌呤（其中醯基為C(0)(燒基、芳基、烷基 92848 -36- 1333956 方基或芳烷基））、N6-爷基嘌呤、N6_卣基嘌呤、N6_乙晞基嘌 7 N -乙炔性嘌呤、N6-醯基嘌呤、N6_輕烷基嘌呤、N6_烯 丙基胺基嗓呤、N6-硫基烯丙基嘌呤、n2_燒基嗓呤、n2_燒基 •6·硫基4♦、胸腺_、胞、5氣基胞㈣、5_甲基胞 11密呢、6-氮喊咬，包括6-氮胞„密啶、2_及/或4_鏡基σ密啶、尿 嘧啶，5-卣基尿嘧啶，包括5_氟尿嘧啶，C5_烷基嘧啶、a—爷 基嘧啶、C5-自基嘧啶、C5_乙烯基嘧啶、乙炔性嘧啶、 醯基嘧啶、C5·羥烷基嘌呤、C5_醯胺基嘧啶、氰基嘧啶、 c5-琪基嘧啶、c6-碘基嘧啶、C5_Br_乙晞基嘧啶、c6_Br_乙晞 基嘧啶、C5-硝基嘧啶、c5·胺基“密啶、π·燒基嗓呤、n2_燒 基-6-硫基嘌呤、5-氮胞嘧啶核苷基、5_氮尿嘧啶、三唑并吡 免基、咪唆并晚哫基、吡咯并嘧啶基及吡唑并嘧啶基。嘌 吟驗基包括但不限於鳥嗓呤、腺嗓呤、次黃嗓呤、2,6_二胺 基嘌呤及6-氯基嘌呤。鹼基上之官能性氧與氮基團可經保護 ’按需要或想要而定。適當保護基係為熟諳此藝者所習知 ，且包括三甲基矽烷基、二甲基己基矽烷基、第三_丁基二 甲基矽基與第三-丁基二苯基碎燒基、三苯甲基、燒基及 醯基’譬如乙醯基與丙醯基、甲.燒磺醯基與對_曱苯磺醯基。 "醯基”或'Ό-連結之酯"兩術語係指式c(〇)R'基團，其中R， 為直鏈、分枝狀或環狀烷基（包括低碳烷基），胺基酸，芳 基，包括苯基，芳燒基，包括宇基，燒氧燒基，包括甲氧 基甲基’芳氧基烷基，譬如苯氧基甲基；或經取代之烷基 (包括低碳烷基）’芳基，包括苯基，視情況被氯基、溴基 、氟基、蛾基、q至C4燒基或Q至c4貌氧基取代，續酸酯類 92848 -37- 1333956 ，譬如烷基或芳烷基磺醯基，包括甲烷磺醯基，單、二或 二鱗酸醋’三苯曱基或單甲氧基_三苯甲基，經取代之芊基 、烷芳基，芳烷基，包括苄基，烷氧基烷基，包括甲氧基 曱基，芳氧基烷基，譬如苯氧基甲基。酯類中之芳基最適 苴係包括苯基。特定言之，醯基包括乙醯基、三氟乙醯基 、甲基乙醯基、環丙基乙醯基、環丙基羧基、丙醯基、丁 醯基、己醯基、庚醯基、辛醯基、新_庚醯基、苯乙醯基、2_ 乙醯氧基-2-苯乙醯基、二苯基乙醯基、α_曱氧基_α_三氟甲 基-苯乙醯基、溴基乙醯基、2·硝基·苯乙醯基、4_氯·苯乙醯 基、2-氯基-2,2-二苯基乙醯基、2-氯基-2-苯乙醯基、三甲基乙 醯基、氯基二氟乙酿基、全氟乙酿基、氟基乙酿基、溴基 二氟乙醯基、甲氧基乙醯基、2-嘧吩乙醯基、氣基磺醯基乙 酿基、3-甲氧苯基乙酿基、苯氧基乙酿基、第三_丁基乙酿 基、二氯基乙醯基、單氯-乙醯基、二氯乙醯基、7Η·十二氟· 庚醯基、全氟-庚醯基、7Η-十二-氟基庚醯基、7-氯基十二氟_ 庚酸基、7-氯-十二氟-庚醯基、7Η·十二氟基庚醯基、7Η•十二 -敗基庚酿基、九-氟基-3,6-二氧-庚酿基、九氟_3,6_二氧庚酿基 、全氟庚醯基、甲氧苯甲醯基、甲基3-胺基-5-苯基嘍吩-2-叛 基、3,6-二氯-2-甲氧基-苯甲醯基、4-(1，1，2,2-四氟-乙氧基）-苯甲 醯基、2-溴-丙醯基、〇>胺基癸醯基、癸醯基、Ν·十五醯基、 硬脂基、3-環戊基-丙醯基、1-苯-致基、〇_乙醯基苯乙醇基、 三曱基乙醯基乙醯基、1-金剛烷-羧基、環己烷-羧基、2,6_吡 啶二羧基、環丙烷-羧基、環丁烷-幾基、全氟環己基羧基、 4-甲基苯甲醯基、氯基曱基異噚唑基羰基、全氟環己基羧基 92848 -38· 1333956 、巴且基、1-甲基-lH-p?丨嗤-3-幾基、2-丙烯基、異戊驢基、1 四虱p比嘻羰基、4-苯基苯甲酿基。當使用醯基一詞時，其係 意謂成為乙醯基、三氟乙醯基、甲基乙醯基、環丙基乙臨 基、丙醯基、丁醯基、己醯基、庚醯基、辛酿基、新-庚醯 基、苯乙醯基、二苯基乙醯基、三氟甲基-苯乙醯基、溴基 乙酿基、4-氯-苯乙醯基、2-氯基-2,2-二苯基乙醯基、2_氯基_2_ 苯乙醢基、三甲基乙醯基、氯基二氟乙醯基、全氟乙醯基 '氟基乙醯基、溴基二氟乙醯基、2-嘧吩乙醯基、第三_丁 基乙醯基、三氯基乙醯基、單氯_乙醯基、二氯乙醯基、甲 氧苯甲醯基、2-溴-丙醯基、癸醯基、N_+五醯基、硬脂基、 3-環戊基-丙醯基、1-苯-羧基、三甲基乙醯基乙醯基、丨_金剛 烷-羧基、環己烷-羧基、2,6-吡啶二羧基、環丙烷_羧基、環 丁烷-幾基、4-甲基苯甲醯基 '巴豆基、丨_甲基吲唑-3•幾 基、2-丙晞基、異戊醯基、4-苯基苯曱醯基之特定與獨立揭 示内容。 "胺基酸"一詞包括天然生成與合成之〇： '沒、^或5胺基 酸，且包括但不限於蛋白質中所發現之胺基酸，意即甘胺 酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、苯 丙胺酸、色胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、 酪胺酸、天冬素、麩醯胺、天冬胺酸鹽、麩胺酸鹽、離胺 酸、精胺酸及組胺酸。於一項較佳具體實施例中，胺基酸 係呈L-組態。或者，胺基酸可為丙胺醯基、纈胺醯基、白 胺醯基、異白胺醯基、脯胺醯基、苯基丙胺醯基、色胺酿 基、甲硫胺醢基、甘胺醯基、絲胺醯基、蘇胺醯基、半胱 92848 -39- 1333956 胺醯基、酪胺醯基、天門冬醯胺醯基 '麩醯胺醯基、天門 冬胺醯基、戊二醯基、離胺醯基、精胺醯基、組胺醯基、分 丙胺醯基、/?-纈胺酸、/9-白胺醯基、片異白胺醯基、分脯胺 醯基、/5-苯基丙胺醯基、分色胺醯基、/5-甲硫胺醯基、/3-甘 胺酿基、yS-絲胺酿基、yS-蘇胺酿基、/3-半胱胺酿基、尽赂胺 醯基、；S-天門冬醯胺醯基、石-麩醯胺醯基、沒-天門冬胺醯基 ' /5-戊二醯基、床離胺醯基、分精胺醯基或尽組胺醯基之衍 生物。當使用胺基酸一詞時，其係被認為是各下者之特定 與獨立揭示内容，呈D與L-組態之α、泠、7或（5甘胺酸、 丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺 酸、色胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、酪胺 酸、天冬素、麵酿胺、天冬胺酸鹽、麵胺酸鹽、離胺酸、 精胺酸及組胺酸之酯類。 於本文中使用之”宿主"一詞，係指其中病毒可複製之單細 胞或多細胞生物體，包括細胞系與動物，且較佳為人類。 或者，宿主可帶有一部份病毒基因組，其複製或功能可藉 由本發明化合物改變。宿主一詞係明確地指稱受感染之細 胞、以全部或部份病毒基因組轉染之細胞，及動物，特別 是靈長類動物與人類。在本發明之大部份動物應用中，該 宿主為人類病患。但是，在某些適應徵中，本發明顯然預 期獸醫應用。 ' 藥學上可接受之鹽或前體藥物”一詞係使用於整個本專利 說明書中，以描述化合物之任何藥學上可接受形式（譬如酯 、磷酸醋、醋之鹽或相關基團），其在投予病患時係提供= 92848 -40-

JO :=物。藥學上可接受之鹽，包括衍生自藥學A <播機或有機鹼與酸者。备 又 如舞與麵，驗土金屬 二’包括衍生自驗金屬，譬 :知：：多其他酸類。藥學上可接受之前體藥物，係指在 ’工生物代謝’例如水解或氧化’以形成本發明化合 2化合物。前體藥物之典型實例，包括在活性化合物之 份基團上具有生物學上不安定保護基之化合物。 則體樂物包括一些化合物，纟可被氧化、還原、胺化、脫 胺化、羥基化、脫羥基化、轉、去水解、烷基化、脫燒 鯰基化、脫醯基化、磷醯基化、脫磷醯基化，以產 生活性化合物。 I.活性化合物及其生理學上可接受之衍生物與鹽 本發明係提供以下結構之（2,R)_2，_脫氧_2,_氣基_2,_c_甲基核誓 ’或其藥學_h可接受之鹽或其前體藥物：

其中驗基係指天然生成或經改質之嘌呤或嘧啶鹼基； X 為 0、S、CH2、Se、NH、N-烷基、CHW ' C(W)2， 其中W為F、Cl、Br或I ; R1與R7係獨立為Η ’磷酸鹽，包括單磷酸鹽、二磷酸 鹽、三磷酸鹽或被安定化之磷酸鹽前體藥物，Η-膦 酸鹽，包括被安定化之Η-膦酸鹽，醯基，包括視情 92848 1333956

況經取代之苯基與低碳醯基，烷基，包括低碳烷基 、〇-取代之羧基烷胺基或其肽衍生物，績酸鹽，包 括虎基或芳燒基橫酿基，包括甲燒績酿基與字基， 其中苯基係視情況經取代，脂質’包括鱗脂，L或D-胺基酸、碳水化合物、肽、膽固醇，或其他藥學上 可接受之脫離基，當在活體内投藥時，其能夠提供 一種化合物，其中R1為Η或磷酸鹽；R2為〇H或鱗酸 鹽；R1與R2或R7亦可和環狀嶙酸根基團連結；且 R2與R2’係獨立為Η、（V4烷基、Cu晞基、Cl_4炔基、 乙稀基、N3、CN、Cl、Br、F、I、N02、¢:(0)0((^.4 烷基）、¢(0)0((^ .4 烷基）、（:(0)0((^ _4 炔基）、¢:(0)0((^ - 4 缔基）、〇% - 4 醯基）、0(Ci _4 燒基）、0((^-4稀基）、S(Ci - 4 醯基）、S(Ci —4烷基）、S% -4 炔基）、SCCi -4 晞基）、SO% _4 醯基）、SCKCh烷基）、SCKCh炔基）、SOCCh烯基） 、S〇2 (Cl - 4 酿基）、S〇2 (Cl - 4 挺基）、S〇2 (Ci - 4 块基）' S〇2 (Cl - 4 稀基）、〇3 S(Ci - 4 酿基）、〇3 Sfi - 4 燒基）、 033((ν4烯基）、NH2、NHAm烷基）、ΝΗ((ν4 烯基） 、NHCh炔基）'NHCCh醯基）、ΝΑμ烷基）2、n(c卜18 醯基）2，其中烷基、炔基、晞基及乙烯基係視情況 被 N3、CN、一至三個卤素（Cl，Br, F，I)、N02、C(0)0(Ch 烷基）、（：(0)0((：〗_ 4 烷基）、0(0)0((^ _ 4 炔基）、CXOPA - 4 烯基）、Ο% _4 醯基）、0% _4烷基）、CKC! -4 烯基）、s% _4 醯基hSfH烷基hSCH炔基）、S(Ch烯基kSCKCH 醯基）、SOCCh烷基）、S0(Ch決基）、S0(CV4烯基） 92848 -42· 1333956 、SCMCh醯基）、SOJCh烷基）、8〇2((^-4炔基）、 SCMCu烯基）、OsSd*醯基）、〇3δ((ν4烷基）' C^SCCw烯基）、ΝΗ2、NH(Ci-4烷基）、N^Ch烯基） 、NHCh 炔基）、NHCh 醯基）、N(Ci-4 烷基）2、NCh 醯基）2、OR7取代，R2與R2’可連結在一起而形成乙 締基，視情況被一或兩個N3、CN、Cl、Br、F、I 、N02取代；且 R6為視情況經取代之烷基（包括低碳烷基）、氰基（CN) 、CH3、OCH3、OCH2CH3、羥甲基（CH2OH)、氟基甲 基（CH2F)、疊氮基（N3)、CHCN、CH2N3、CH2NH2、 CH2NHCH3 ' CH2N(CH3)2、块類（視情況經取代）或氟 基。 於第二項具體實施例中，係提供以下結構之（2，R)_2，-脫氧-2，-氟基-2'-C-甲基核誓或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物：

其中鹼基、R1、R2、R2’、R6及R7均如上文定義。 第二項具體實施例係提供以下結構之（2'R)-2'-脫氧-2'-氟基-2 C-甲基核菩或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物：

如上文定義，且 其中 X、R1、R2、R2’、R^R7 均 92848 1333956

其中鹼基係選自 R4

(b) ⑻ R3、R4、R5、R6及Y均如上文定 且其中R1、R2、R2， 義。 第五項具體實施例係提供以下結構之（2，R)_2,_脫氧_2，_氟基 C-甲基核:¾:或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物：

其中鹼基係指天然生成或經改質之嘌呤或嘧啶鹼基； R7係獨立為Η，磷酸鹽，包括單磷酸鹽、二磷酸鹽、 二磷酸鹽或被安定化之磷酸鹽前體藥物，Η_膦酸鹽 ,’包括被安定化之Η-膦酸鹽，醯基，包括視情況經 取代之苯基與低碳醯基，烷基，包括低碳烷基' 取代之幾基燒胺基或其肽衍生物，績酸鹽，包括燒 基或芳烷基磺醯基’包括甲烷磺醯基與爷基，其中 苯基係視情況經取代’脂質，包括磷脂，L或以胺 基酸、碳水化合物、肽、膽固醇，或其他藥學上可 92848 45· 接文《脫離基’當於活體内投藥時，其能夠提供一 種化合物，其中Rl或R7係獨立為H或磷酸鹽；R1與R7 亦可和J衣狀磷酸根基團連結；且 其中X與R1均如上文定義。 及在第”員具體實施例中’係提供以下結構之(2，R)-2，-脫氧_2,_ 氟基2 C-甲基核苷或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物：

中鹼基係指天然生成或經改質之嘌呤或嘧啶鹼基， 且 ， 其中R1與R7均如上文定義。 弟七項具體實施例係提供以下結構之（2，R)-2，-脫氧·2，-氟基_2 C-甲基核芬或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物："

N 、R5 且其中 X、γ、Rl、R3、R4 R4

92848 -46- 1333956 在第八項具體實施例中，係提供以下結構之(2,r)_2•脫氧^ 氟基-2，-C·甲基核菩或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物：

且其中¥、“3、“5、心，均如上文定義。 第九項具體實施㈣提供以下結構之㈣_2，_脫氧·2，·氣基^ c-甲基核#或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物：

且其中X係如上文定義 為Η，R4為NH2或〇H R1為 Η，R2 為 OH，R2、H， 且R6為Η。 R3 在第十項具體實施例中 係提供以下結構之（2'R)-2，·脫氧 -2'- 92848 •47- 氟基-2，-C-甲基核苷或其 藥學上可接受之鹽或其前體藥物:

其中驗基為：

且其中 R1為 H，R2為0H，R2,為 H，R3為 H，RUNH2 OH，且 r6 為 η。 弟十貝具體實施例係提供以下結構之(2ir)_2，_脫氧_2，_氣^ 兄甲基料或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物： 其中鹼基為：

且其中X係如上文定義，R1為H，R3為H，R4為NH2或0H ，R6為Η，且R7為η。 在第十—項具體貫施例中，係提供以下結構之(2，r)_2._脫氧. 92848 -48·

CH, 上可接受之鹽或其前體藥物 R10、 鹼基 其中鹼基為：

μ且其中Ri為11，圮為11，114為即2或〇11，且117為11。 弟十二項具體實施例係提供以下結構之（2，R)-2，-脫氧_2，_氟基-2-C-甲基核善或其藥學上可接受之鹽或其前體藥物： nh2 Cl

HO F 在第十四員具m貫施例中，係藉由以下結構提供（2，R)_2，_脫 氧-2’-氟基-2'-C-甲基核甞，其藥學上可接受之鹽或產物：

CI

<fxS R10 N 八 β r6^U^Lh3 其中X、R1、R6及R7均如上文定義。 92848 -49- 1333956 在十五項具體實施例中， 2Ί ^ 2' Γ Ψ ^ - .、猎由以下結構提供（2，R)-2，-脫氧 2-齓基-2-C-甲基核甘，其藥 j接文<鹽或產物：

N 其中Rl、R6及R7均如上文定義。

在第十六項具體實施例中，

备丨1 ‘、错由以下結構提供（2丨R)-2'-J 乳-2·氣基·2Π基料，其·切接受之鹽或產物：

在弟十七項具體實施例中，作 .r . ^ ^ 係藉由以下結構提供（2,R)- 巩--軋基-2-C-甲基核I，其藥

于工】接文疋鹽或產物：

其中X與R1均如上文定義。 在弟十八項具體貫施例中，作获a ，、精由以下結構提供（2，R)-2,-朋 乳虱基_2心甲基核甘，其藥學上可垃奐、 予丄j接文《鹽或產物： 92848 •50· 1333956 ο

在第十九項具體實施例中，係藉由以下結構提供（2'R)-2'_脫 氧-2’-氟基-2'-C-甲基核苷，其藥學上可接受之鹽或產物：

其中X與R1均如上文定義。 在第二十項具體實施例中，係藉由以下結構提供（2’R)-2’_脫 氧-21-氟基-2'-C-甲基核苷，其藥學上可接受之鹽或產物：

HO F

本發明亦意欲涵蓋本發明核苷化合物之5'-羥基之5'-三磷酸 鹽三磷酸酯衍生物，其具有下列一般結構式：

92848 -51- 1333956 其中鹼基、乂、尺2、112’及116均如上文定義。 本發明化合物亦意欲包括三磷酸自旨之藥學上可接受鹽，以 及下列個別結構式之5'-二磷酸鹽與5'-單磷酸酯衍生物之藥 學上可接受鹽。

其中鹼基、又、112、112’及116均如上文定義。 磷酸衍生物之進一步非限制性實例係為下文所示之本發明 核苷：

92848 -52- 1333956 Ηο ο I Η ΟΗΡΙΟ Iο I Η ΟΗΡΙΟ Ηο _ Η ΟΗΡΙΟ Iο I Η ΟΝΡΙΟ _ο I Η ΟΗΡΙΟ ίί 〇 ιι

ΗΟ-Ρ-Ο-Ρ-Ο I I OH OH Ο

II ΗΟ-Ρ-Ο

I

OH 92848

〇II

οII

οII ΗΟ-Ρ-Ο-Ρ-Ο-Ρ-I I I OH OH ΟΗ 1333956

本發明亦意欲涵蓋的是，任何磷酸鹽核苷衍生物可包括5’-(S-醯基-2-硫基乙基）磷酸鹽或5’-單磷酸鹽之”SATE"單或二-酯 衍生物。 替代具體實施例亦意欲被涵蓋在内，其中磷酸鹽核甞衍生 物上之N-4胺基可被Η、F、Cl、Br或I置換。 其他具體實施例包括如本文中更詳細描述之3'及/或5'前 體藥物。 在各種具體實施例中，氟化衍生物係為較佳。由於氟之大 小（H之凡得瓦半徑為1.20 A，而F為1.35A)，故氟係被視為與 氫”同配”。但是，氟之原子量（18.998)與陰電性（4.0 [Pauling之 等級]，4.000 [Sanderson 之等級])，係比氫（2.1 [Pauling]，2.592 [Sanderson])較為類似氧（3.5 [Pauling]，3.654 [Sanderson])(March J.， ”高等有機化學：反應、機制及結構"第三版，1985,第14頁， Wiley Interscience, New York)。已知氟能夠形成氫鍵，但與經基 不同（其可充作質子受體與質子供體兩者），氟僅充作質子 92848 -54- 1333956 受體。另一方面，21-氟-核糖核菩可被視為核糖核苷與脫氧 核甞兩者之類似物。相較於被宿主抓入聚合酶，其可在三磷 酸鹽層次下，更良好地被病毒RNA聚合酶所辨識，因此選擇 性地抑制病毒酵素。 II.藥學上可接受之鹽與前體藥物 在化合物為足夠鹼性或酸性以形成安定無毒性酸或鹼鹽之 情況中，化合物可適當地以藥學上可接受之鹽投藥。藥學 ^可接受之鹽包括衍生自藥學上可接受之無機或有機驗與 酸者《適當鹽包括衍生自鹼金屬，譬如鉀與鈉，鹼土金屬 ，譬如鈣與鎂，伴隨著醫藥技藝上習知之許多其他酸類。 特定言之，藥學上可接受鹽之實例為以酸料之有機酸加 成鹽，其係形成生理學上可接受之陰離子，例如甲苯磺酸 根、甲烷磺酸根、醋酸根、檸檬酸根、两二 根、號辑酸根、苯甲酸根、抗壞血酸根…同基戊= 及甘油基磷酸根。亦可形成適當無機鹽，包括硫酸鹽、 硝酸鹽、重碳酸鹽及碳酸鹽。 藥予上可接受之鹽，可使用此項技藝中所習知之標準程序 獲得’例如經由使足夠鹼性之化合物，譬如胺，與能提供 生理予上可接受陰離子之適當酸反應。亦可製成羧酸類之 鹼金屬（例如鈉、鉀或鋰）或鹼土金屬（例如鈣）鹽。 本文中所述之任何核菩可以核答酸前體藥物㈣，以增加 ’舌性、生物利用率、安定性，或者改變核铝之性質。多種 核苷酸前體藥物配位體係為已知。一般而纟，核铝之單、 二或三磷酸鹽之烷基化作用、醯化作用或其他親脂性改質 92848 -55- 1333956 ，將會增加核苷酸之安定性。可置換磷酸根部份基團上之 一或多個氫之取代基實例，係為烷基、芳基、類固醇、碳 水化合物，包括糖類、1，2-二醯基甘油及醇類。許多係描述 於 R. Jones 與 N. Bischofberger，抗病毒研究，27 (1995) 1-17 中。此等 中之任一個可與所揭示之核甞合併使用，以達成所要之作 用。

活性核苷亦可以5'-磷醯基醚脂質或5'-醚脂質提供，如在下 列參考資料中所揭示者，其係併於本文供參考：Kucera, L.S.， Ν· Iyer，Ε· Leake, A. Raben，ModestE.K·，D.L.W.及 C. Piantadosi. 1990. ” 新 穎細胞膜-交互作用醚脂質類似物，其會抑制傳染性mv-i生 產，並引致缺陷病毒形成·” Z/ww. 你〇 6 : 491-501

；Piantadosi, C., J. Marasco C.J., S.L. Morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, C.A. Wallen，S. Piantadosi 及 E.J. Modest. 1991."抗HIV活性之新穎醚脂質核苷共軛物之合成與 評估J· Med. CAem. 34 : 1408. 1414 ; Hosteller, K.Y.，D.D. Richman，D.A. Carson，L.M. Stuhmiller，G.M.T. van Wijk 及 H. van den Bosch. 1992."藉由 脫氧胸腺嘧啶核苷二磷酸鹽二肉豆蔻醯基甘油，3'-脫氧 胸腺嘧啶核甞之一種脂質前體藥物，大為提高之抑制人類 免疫不全病毒類型1在CEM與HT4-6C細胞中之複製如治

Agents Chemother. 36 '· 2025.2029 ； Hosetler, K.Y., L.M. Stuhmiller, H.B. Lenting, H. van den Bosch 及 D.D· Richman, 1990."疊氮基胸嘗及其他 抗病毒核甞之磷脂類似物之合成與抗反轉錄酶病毒活性.·· J· Biol. Chem. 265 : 6ΊΛ27。 揭示可以共價方式併入核苷中之適當親脂性取代基（較佳 92848 -56- 1333956 係在核钻之5，-0H位置處）或親脂性製劑之美國專利，其非限 制性實例包括美國專利 5，149,794 ; 5，194,654 ; 5,223,263 ; 5,256,641 ;5,411，947; 5,463,092; 5,543,389; 5,543,390; 5,543,391;及 5,554,728 ’其全部均併於本文供參考。揭示可連接至本發明核甞之 親脂性取代基或親脂性製劑之國外專利申請案，包括W0 89/02733, WO 90/00555, WO 91/16920, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO 96/15132, EP 0 350 287, EP 93917054.4 及 WO 91/19721 » ΙΠ.醫藥組合物 以本文所揭示之/S-D或/5-L化合物或其藥學上可接受之鹽 或前體藥物為基礎之醫藥組合物，可以治療上有效量製成 ’以治癌旁;^毒存感染，包括C型肝炎病毒、"West Nile病毒 、黃熱病病毒，與鼻病毒感染’視情況併用藥學上可接受 之添加劑、載劑或賦形劑。治療上有效量可隨著待治療之 感染或症狀、其嚴重性、所採用之治療服用法、所使用藥 劑之藥物動力學以及被治療之病患而改變。 根據本發明之一方面，根據本發明之化合物較佳係經調配 在與藥學上可接受載劑之混合物中。一般而言，較佳係以 可以口服投藥形式投予醫藥組合物’但配方可經由非經腸 、靜脈内、肌内、經皮、面頰、皮下、栓劑或其他途徑投 藥。靜脈内與肌内配方較佳係在無菌鹽水中投藥。一般熟 諳此藝者可在本專利說明書之陳述内容中修改配方’以提 供特定投藥途徑用之許多配方，而不會使得本發明之組合 物不安定或危害其治療活性。特定言之，例如’使得所要 化合物較可溶於水或其他媒劑中之修正，可容易地藉由例 92848 • 57· 上333956 行修正（鹽配方、酯化作用等）而達成β 在某些醫藥劑型中，化合物之前體藥物形式係為較佳，尤 其是包括本發明化合物之醯基化（乙醯化或其他）與醚衍生 物、磷酸酯及各種鹽形式。一般熟諳此藝者將明瞭如何容 易地將本發明化合物改質成前體藥物形式，以幫助活性化 合物之傳輸至宿主生物體或病患内之標的位置。技師亦將 在合適之情況了’利时體藥物形式之有利藥物動力學參 數’將所要之化合物傳輸至宿主生物體或病患内之標的位 置以使化5物在治療男滅##感染包括c型肝炎病毒、

WestNile病毒、黃熱病病毒與鼻病毒感染上所意欲之作用達 到最大程度。

被包含在根據本發明具治療活性配方中之化合物量，係為 也療感染或絲之有效量，在較佳具體實施例中為旁喊毒 =染’包括c型肝炎病毒、WestNile病毒、黃熱病病毒， 八π病母感染。一般而言，本發明化合物在醫藥劑型中之 療有效里通常範圍為約50毫克至约2,〇〇〇毫克或較多 一、斤使用之化合物、被治療之症狀或感染及投藥途徑而 &對本發明疋目的而言，根據本發明組合物之預防上或 阻止上有效量 同濃度範圍内 係落在如上文關於治療上有效量所述之相 且通常係與治療上有效量相同。 、舌陡化口物<投藥，可涵蓋從連續（靜脈内滴注）至每天數 人口服投藥(例如每曰四次、每曰兩次等)之範圍，並可包

括口服、局部、非β nB 邪，·！腸、肌内、靜脈内、皮下、經皮（其可 包括渗透提向劑、、品α J面頰及栓劑投藥，伴隨著其他投藥途徑 92848 -58- 1333956 。經腸溶劑塗覆之口服片劑亦可用以提高來自口服投藥途 控之化合物之生物利用率與安定性^最有效劑型係依所選 擇特定藥劑之藥物動力學，以及病患中疾病之嚴重性而定 。口服劑型係為特佳，因為易於投藥與有希望之有利病患 順應性。 為製備根據本發明之醫藥組合物，較佳係將治療上有效量 之一或多種根據本發明之化合物’根據習用醫藥摻配技術 ，與藥學上可接受之載劑混合，以製造劑量。載劑可採取 極多種形式’依所要投藥之製劑形式而定，例如口服或非 經腸。在呈口服劑型之醫藥組合物製備上，可使用任何常 用醫藥媒質。因此，對於液體口服製劑，譬如懸浮液、酏 劑及溶液’可使用適當載劑與添加劑，包括水、二醇類、 油類、醇類、矯味劑、防腐劑、著色劑等。對於固體口服 製劑，譬如粉末、片劑、膠囊，及對於固體製劑，譬如栓 劑，可使用適當載劑與添加劑，包括澱粉，糖載劑，譬如 右旋糖、甘露醇、乳糖及相關載劑，稀釋劑、粒化劑、潤 滑劑、黏合劑、崩解劑等。#需要，可將片劑或膠囊藉標 準技術經腸溶劑塗覆，供持續釋出。此等劑型之利用可顯 著地衝擊化合物在病患中之生物利用率。 對於非經腸配方，載劑通常包括無菌水或氣化納溶液，惟 其他成份’包括輔助分散者’亦可被包含在内。在無菌水 欲被使用並保持為盖菌乏格.卞丁 ,. ”、因义滑况下’組合物與載劑亦必須經 殺菌。亦可製備可注射縣淫治，认& + 釘心汗及，於此種情況中，可採用適 當液體載劑、懸浮劑及其類似物。 92848 •59- 1333956 微脂粒懸浮體（包括以病毒抗原為標的之微脂粒）亦可藉習 用方法製成，以製造藥學上可接受之載劑。這可適於傳輸 根據本發明核甞化合物之自由態核苷、醯基核甞或磷酸酯 前體藥物形式。 於根據本發明之特佳具體實施例中，係使用化合物與組合 物以治療、預防或延遲黃病毒科感染，包括c型肝炎病毒、 West Nile病毒、黃熱病病毒，與鼻病毒感染之展開。本發明 化合物較佳係以經口方式投藥，但可以非經腸方式、以局 部方式或以栓劑形式投藥。 根據本發明之化合物，由於其在某些情況中對宿主細胞之 低毒性，故可有利地以預防方式採用，以預防黃病毒科感 染，包括C型肝炎病毒、WestNile病毒、黃熱病病毒，與鼻 病毒感染，或預防與病毒感染或症狀有關聯之臨床徵候之 發生。因此，本發明亦涵蓋預防治療病毒感染與鼻病毒感 染之方法，且特別是黃病毒科感染，包括C型肝炎病毒、 WestNile病毒、黃熱病病毒。在此方面，根據本發明，本發 明組合物係用以預防或延遲黃病毒科感染，包括C型肝炎病 毒、West Nile病毒、黃熱病病毒，與鼻病毒感染之展開。此 預防方法包括對於需要此種治療或處於發展病毒或症狀危 險下之病患，投予一數量之根據本發明化合物，以有效減 輕、預防或延遲病毒感染或症狀之展開。在根據本發明之 預防治療上，所使用之抗病毒化合物較佳應為毒性低，且 較佳為對病患無毒性。在本發明之此方面，所使用之化合 物特佳應為最高有效抵抗病毒或症狀，且應顯示對病患之 92848 -60- 956 最低毒性。在黃病刹-咸选 > ^病母科感染’包括c型肝炎病毒、 黃熱病病毒，與鼻病毒感染之情況中，可用以： =寺疾病狀態之根據本發明化合物，可在與預防劑對^ 療處理相同之劑量範圍内投予(意即約25〇 克： 較多，對口服劑型，每天一至一、 问違1克或 u至四次），以預防病毒感染之增 ，或紅長病毒感染之展開，其係以臨床徵候顯示。 此外，根據本發明之化合物可與一或多種抗病毒劑合併， 或與其交替投藥，包括本發明之其他化合物。某些㈣本 發明之化合物可經由降低其他化合物之新陳代謝作用、降 解代謝或失活，有效提高某些根據本發明藥劑之生物學活 性，及因此被共同投藥，以達此意欲之作用。 IV·立體異構現象與多晶型現象 應月，瞭本發明之核嘗具有數個對掌中心，且可以光學活性 與外消旋形式存在與單離一些化合物可顯示多晶型現象 。應明瞭的是’本發明係涵蓋本發明化合物之任何外消旋 γ光學活性、非對映異構、多晶型或立體異構形式或其混 合物，其具有本文中所述之有用性質。此項技藝中習知如 何製備光學活性形式（例如經由外消旋形式之解析，藉再結 曰9技術’經由從光學活性起始物質合成，藉由對掌性合成 ，或使用對掌固定相藉層析分離）。 核嘗〈碳係為對掌性’其非氫取代基（個別為鹼基與CHOR 基團）關於糖環系統，可為無論是順式（於同一側）或反式（於 相反側）°因此’四種光學異構物係以下列組態表示（當使 糖部份基團定向呈水平面’以致使氧原子在背後時）：順式 92848 1333956 (其中兩個基團皆"向上，，’其係相應於天然生成之仲核答 組態）、順式（其中兩個基團皆”向下”，其係為非天狄生成 之壯組態卜反式（其中C2，取代基，|向上,，，而以，取代基"向 下")及反式(其中C2,取代基，，向下"，而C4,取代基"向上")。 ’•D-核t係為呈天'然組態之順式核芬，而"l姻,,係為呈非 天然生成組態之順式核芬。 .同樣地’大部份胺基酸係為對掌性(稱為…，其 掌異構物係為天蚨生成乏彡能、

在。 ，、生成K幻，且可以個別對掌異構物存 ’于光子活性物質〈方法’其實例係為此項技 並包括至少下列。 1 其中個別對掌異構物之巨觀結晶係以 手動万式分離之技術。若個別對掌異構物之結晶存在 ，意即物質為堆集體，且結晶為目视上顯著，則可使 用此項技術； 其中個別對掌異構物係藉以個別地自 外消旋物之溶液結晶之技術，只有在後者為固態之堆 集體才可能； 其中外消旋物之部份或完全分離係由於對掌 異構物與酵素之不同反應速率所致之技術； 其中合成之至少—個步㈣利用酵素 反應，以獲得所要對掌異構物之對掌異構上純或富含 合成先質之合成技術； Θ 其中所要之對掌異構物係於產生產物 92848 -62- I不對稱性（意即對掌性）之條件下，自非對掌性先質 。成之合成技術’其可使用對掌性觸 劑達成； 手丨王稀助 vi)缝妓麵ia-其中外消旋化合物係輿對掌異構上 純試劑(對掌性輔助劑)反應之技術，該試劑合使 =異構物轉化成非對映異構物。然後，將；形成之 士映異構物藉層析或結晶化作用分離，此係由於其 2在較顯著之結構差異所致，且稍後移除對掌性辅助 4 ’以獲得所要之對掌異構物； ^一種技術，其中得自外消旋 =W異構物會達成平衡’而產生優勢物種 二斤要對掌異構物之非對映異構物溶液中，或其中非 亂此平銜構物《優先結晶化作用會擾 1此千衡，以致最後原則上所有物質均自所要之對掌 異構物，被轉化成結晶性非對 陝異構物。然後，所要 子旱異構物係自非對映異構物釋出； 此項技術係指外消旋物之部份或完全解 2達成（或經部份解析之化合物之進-步解析）’此 掌異構物與對掌性、非外消旋試劑或觸媒， 於動力學條件下之不相等反應速率所致； 料之對掌異 物貝且其中立體化學完整 性在合成期間内不會或僅被最小 X)對掌性潘w析法並由从，， m ’、卜消旋物之對掌異構物係由於 ·«· 92848 '疋相之不同交互作用，而在液體流動相中被分 離之技術。固定相可由對掌性物質製成，或流動相可 含：另-種對掌性物質，以激起不同交互作用； )^ Ji-ikiijUiji.-其中外消旋物係被揮發，且對掌異 ^係由於其在氣態流動才目中，肖含有固定非外消旋 ’ ¥ &吸附劑相之管柱之不同交互作用而被分離之技 術；

其中料異構物係由於對掌異構米 疋優先溶解於特定對掌性溶劑中而被分離之技術； 其巾係將外消旋物放置而與殘 =壁接觸之技術。該障壁典型上係將_可互混试 把刀離’—種含有外消旋物，且驅動力譬如濃度或魔 力差會造成優先輸送越過薄膜障壁。分離係由於薄膜 《非外消旋對掌本性所發生，其允許外消旋物中只有 一種對掌異構物通過。

對掌〖生層析，&純擬移動床層析，係使料且 施例中：極多種對掌固定相係為市購可得。 一貫 明，It丨!^中所述之化合物含有稀烴雙鍵，且除非另有指 ，、j係意謂包括E與z幾何異構物。 此外’一邵份本文中所述之核謀可以互變異構物存在，座 :=缔醇互變異構物。個別互變異構物以及其混合物係 思"？涵盍在如下文所示之本發明化合物内。 ’、 (雖·脫氧·2，_氟基-2.-C-甲基胞嘧啶核苷： 92848 • 64 - 1333956

(2'R)-2'_脫氧-2’-氟基-21-C-甲基鳥嘌呤核糖:y：:

NH

Ο 0 OH

Ο

OH

(2'R)-2-胺基-2’-脫氧-2’-氟基-2’-C-甲基腺誓：

於上述各實例中，第一個描畫之結構係為較佳形式。 V.前體藥物與衍生物 活性化合物可以任何鹽或前體藥物投藥，其在對接受者投 藥時，能夠直接或間接提供母體化合物，或本身展示活性 92848 -65- 1333956 。非限制性實例為藥學上可接受之鹽（或者稱為”生理學上 可接^鹽”)’及-種化合物，其已在5，_位置處或在嘻呤或 Μ驗基上，被燒基化、酿基化或以其他方式改質卜種 藥學上可接受之前體藥物"類型）。再者，改質可影響化合 〈物學活性，在-些情況巾，增加優於母體化合物之 活性。這可根據本文所述之方法或熟諳此藝者已…他 万法’容易地經由製備鹽或前體藥物，並測試其抗病毒活 性而評估。 可接香之睡 φ 在其中化合物為足夠驗性或酸性以形成安定無毒性酸或驗 鹽之情況中，化合物可適當地以藥學上可接受之鹽投藥。 藥學上可接受鹽之實例為藉由添加酸而形成之有機酸加成 鹽，其係形成生理學上可接受之陰離子，例如甲苯磺酸根 、甲烷磺酸根、醋酸根、檸檬酸根、丙二酸根、酒石酸根 琥珀酸根、苯甲酸根、抗壞血酸根、a_酮基戊二酸根、a_ 甘油磷酸根、甲酸根、反丁埽二酸根、丙酸根、乙醇酸根 I 、乳酸根、丙酮酸根、草酸根、順丁埽二酸根及柳酸根。 亦可形成適當無機鹽’包括硫酸鹽、硝酸鹽、重碳酸鹽、 碳酸鹽、氫溴酸鹽及磷酸。於一項較佳具體實施例中，該 鹽為單-或二-鹽酸鹽。 藥學上可接受之鹽’可使用此項技藝中所習知之標準程序 獲得，例如經由使足夠鹼性之化合物，譬如胺，與能提供 生理學上可接受陰離子之適當酸反應。叛酸類之驗金屬（例 如麵、鉀或鐘）或鹼土金屬（例如鈣）鹽亦可製造。於一項具 92848 -66- 1333956 體實施例中，該鹽為化合物之鹽酸鹽、氫溴酸鹽或曱烷磺 酸鹽。於另一項具體實施例中，藥學上可接受之鹽為二鹽 酸鹽、二氫溴酸鹽或二甲烷磺酸鹽。 核苷酸前體藥物配方 本文中所述之核苷可以核苷酸前體藥物投藥，以增加活性 、生物利用率、安定性，或者改變核苷之性質。多種核甞 酸前體藥物配位體係為已知。一般而言，核甞之單-、二-或三磷酸鹽之烷基化作用、醯化作用或其他親脂性改質， 會降低極性，並允許通達至細胞中。可置換鱗酸根部份基 團上之一或多個氫之取代基，其實例為烷基、芳基、類固 醇、碳水化合物，包括糖類，1,2-二醯基甘油及醇類。許多 係被描述於 R. Jones 與 N. Bisehoferger，抗病毒研究，1995, 27 : 1-17 中。任何此等可併用所揭示之核苷，以達成所要之作用。 於一項替代具體實施例中，核甞係以膦酸鹽或SATE衍生 物傳輸。 活性核苷亦可以2'-，3'-及/或5'-磷醯基醚脂質或2'-, 3'-及/ 或5'-醚脂質提供。非限制性實例係經描述，包括下列參考 資料，其係併於本文供參考：Kucera，L.S., N. Iyer, E. Leake, A. Raben， Modest E.K.，D.L.W.及 C. Piantadosi. 1990,"新穎薄膜-交互作用醚脂 質類似物，其會抑制傳染性HIV-1生產，並引致缺陷病毒形 成.” AIDS Res. Hum. Retro Viruses 6 : 491-501 ; Piantadosi, C.，J. Marasco C.J., S.L. Moiris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, CA. Wallen, S. Piantadosi 及 E.J. Modest. 1991，” 抗-HIV 活 性之新穎酸脂質核苷共輛物之合成與評估J. Med Chem. 34 : 92848 -67- 1333956 1408.1414 ； Hosteller, K.Y., D.D. Richman, D.A. Carson, L.M. Stuhmiller, G_M. T. van Wijk 及 H. van den Bosch. 1992,"藉由 3’-脫氧胸腺 口密淀二 磷酸鹽二肉豆蔻醯基甘油，一種3-脫氧胸腺嘧啶之脂質前體 藥物，大為提高之抑制人類免疫不全病毒類型1在CEM與

HT4-6C 細胞中之複製·" Antlnzicrob. Agents Chemother. 36 : 2025.2029 ;Hosetler，K.Y·，L.M. Stuhmiller，H.B. Lenting，H. van den Bosch 及 D.D. Richman, 1990,"疊氮基胸：y：及其他抗病毒核：y：之磷脂類似物之 合成與抗反轉錄酶病毒活性.n J. Biol. Chem. 265 : 61127。

揭示可以共價方式併入核：y：中之適當親脂性取代基（較佳 係在核苷之2'-，3'-及/或5’-OH位置）或親脂性製劑之美國專利 ，其非限制性實例包括美國專利5，149,794 (1992年9月22日， Yatvin 等人）；5，194,654 (1993 年 3 月 16 日，Hostetler 等人）；5,223,263 (1993 年 6 月 29 曰，Hostetler 等人）；5,256,641 (1993 年 10 月 26 曰， Yatvin 等人）；5,411，947 (1995 年 5 月 2 曰，Hostetler 等人）；5,463,092 (1995 年 10 月 31 日，Hostetler 等人）；5,543,389 (1996 年 8 月 6 日， Yatvin 等人）；5,543,390 (1996 年 8 月 6 曰，Yatvin 等人）；5,543,391 (1996 年 8 月 6 日，Yatvin 等人）；及 5,554,728 (1996 年 9 月 10 日，Basava 等人），其全部均併於本文供參考。揭示可連接至本發明核 苷之親脂性取代基或親脂性製劑之外國專利申請案，包括 WO 89/02733, WO 90/00555, WO 91/16920, WO 91/18914, W0 93/00910, WO 94/26273, WO 96/15132, EP 0350287, EP 93917054.4 及 WO 91/19721。 亦提供芳基酯類，尤其是苯基酯類。非限制性實例係揭示 於 DeLambert 等人，J. Med. Chem. 37 : 498 (1994)中。亦提供含有對 磷酸鹽為鄰位之叛酸酯之苯基酯類。Khaninei與Torrence, 92848 • 68 - 1333956 J. Med. Chem. ; 39 : 41094115 (1996)。特定言之，係提供苄基酯 類，其會產生母體化合物，在一些情況中，使用鄰位或對 位之取代基，以加速水解作用。此種前體藥物之實例係由 Mitchell 等人，J_ Chem_ Soc. Perkin Trans. 12345 (1992) ; Brook 等人 WO 91/19721 ;及 Glazier 等人 WO 91/19721 描述。 亦提供環狀與非環狀膦酸酯類。非限制性實例係揭示於 Hunston 等人，J. Med. Chem. 27 : 440-444 (1984)與 Starrett 等人，J. Med. Chem. 37: 1857-1864(1994)中。此外，係提供環狀3，，5'-麟酸酯。 非限制性實例係揭示於Meier等人，J. Med. Chem. 22: 811-815 (1979) 中。亦提供環狀Γ,3'-丙基膦酸酯與磷酸酯，譬如含有稠合芳 基環者，意即環柳基 S旨（Meier 等人，所Mei/. C/iew. Zeii. 7 : 99-104 (1997))。亦提供單磷酸鹽之未經取代環狀l'，3·-丙基酯類 (Farquhar 等人，《/·她d CAem. 26 : 1153 (1983) ; Farquhar 等人，《/·^^/· CAem. 28 : 1358 (1985)) »此外，係提供在C-Γ處被三甲基乙醯 基氧基甲氧基取代之環狀1'，3’-丙基酯類（Freed等人，5/ocAew. /tarmac· 38 : 3193 (1989) ; Biller 等人，美國專利 5,157,027)。 已知環狀磷醯胺酸酯會在活體内，藉由氧化機制分裂。因 此’於本發明之一項具體實施例中，係提供多種經取代之1',3' 丙基環狀鱗酿胺酸醋。非限制性實例係由Zon, /Vogrm Med. C/iem· 19,1205 (1982)揭示。此外，係提供多種2'-與3,取代之前 酯。2'-取代基包括甲基、二甲基、溴基、三氟曱基、氯基、 羥基及甲氧基；3'·取代基包括苯基、曱基、三氟甲基、乙 基、丙基、異-丙基及環己基。亦提供多種Γ-取代之類似物。 亦提供含磷化合物之環狀酯類〇非限制性實例係描述於下 92848 -69. 1333956 •磷酸之二與三酯’如在Nifantyev等人，磷、硫、矽及相 關元素 113 : 1 (1996) ; Wijnberg 等人，ep-180276 A1 中所報告 者；· •磷（III)酸酯類。Kryuchkov 等人，Izy. Akad. Nauk SSSR，Ser. Khim. 6 : 1244 (1987)。一部份化合物係被請求可用於L-Dopa先 質之不對稱合成。Sylvain等人，DE3S 12781 A1 ; •磷酿胺酸醋。Shili 等人，Bull. Inst. Chem. Acad. Sin，41 : 9 (1994) ;Edmundson 等人，J. Chem. Res. Synop. 5 : 122 (1989);及 •膦酸鹽。Neidlein 等人，Heterocycles 35: 1185 (1993)。 N4-醯基前體藥物 本發明亦提供N4·醯基前體藥物。（2’R)H2'-C-甲基胞嘧啶 核苷之N4-醯基衍生物之非限制性實例係示於下文：

〇

NH 丄 OR 其中R可為如本文中所述之任何醯基。 本發明亦意欲涵蓋其他具體實施例，其中（2ΊΙ)-2·-脫氧-2’-氟 基-2'-C-甲基核甞（/3-D或泠L)之前體藥物包括在3'及/或5·位 置之生物學上可分裂部份基團。較佳部份基團為天然或合 成D或L胺基酸酯類，包括D或L-異纈草胺醯基，惟較佳為L-胺基酸酯類，譬如L-異纈草胺醯基，與烷基酯類，包括乙 醯基。因此，本發明係明確地包括（2'R)-2'_脫氧-2’-氟基-2’-C-甲 92848 •70- 1333956

基核苷（分D或分L)核：y：之3'-L或D-胺基酸酯與3，，5，_l或D_二胺 基酸酯，較佳為具有任何所要之嘌呤或嘧啶鹼基之1_胺基 酸，其中母體藥物視情況具有EC：5 〇低於15微莫耳濃度，且又 更佳係低於10微莫耳濃度；具有任何所要之嘌呤或嘧啶鹼 基之（2’R)-2，-脫氧-2·-氟基-2，-C-甲基核贫（/5_D或㈣之3,·(燒基或 万基）醋或3’，5’-L-二（烷基或芳基）酯，其中母體藥物視情況具 有EG G低於1〇或15微莫耳濃度；及（2，r)_2，_脫氧_2,-氟基κ甲 基核答⑽或叫之3|，5L二醋之前體藥物，其中（i)3•醋為胺 基酸酉旨，而5'-酯為燒基或芳基酉旨；⑻兩種g旨均$胺基㈣ 類：㈣兩種酉旨係獨立為燒基或芳基酉旨類；及（ιν)3，醋係獨立 為烷基或芳基酯，而5，_酯為胺基酸酯’其中母體藥物視情況 具有EC”低於1〇或15微莫耳濃度。

VI.组合或交替療法 落在本發明内之前體藥物之非限制性實例為：

产療、抑制、以施例中’對於本文中所述任㈣毒感染 :可盘另―、防止及/或預防’活性化合物或其衍生物 了在二種抗病毒劑合併，或與其交替投藥。-般而 …m兩種或多種藥劑之有效劑量係一起投 92848 •71- 1J33956 ’而在交替療法期間，各藥 ㈣+ 係連續投予。劑 名、甘 失活及排泄速率，以及熟諳此蓺者已 知乏其他因辛而定。扁，、立 凡》賓*〇 症狀之、，、 ^意的是，劑量值亦隨著欲被減輕 言^性作改變。更應明瞭的是’對任何特定病患而 :…m法與時間表應根據個別需求及執行或管 ”"投藥人員之專業判斷，隨著時間調整。 主t明瞭黃病毒、痙病毒或卿之抗藥性變種，可在以抗病

母r長期治療後浮現。抗藥性最典型上係藉由基因之突 t生、’該基因係對用於病毒複製中之酵素編碼。抵抗病 :心染疋藥物功效可經由併用第二種及可能之第三種抗病 母化合物或與其交替，投予化合物，而被延長、增強或恢 復’該第三種抗病毒化合物會引致與主要成份藥物所造成 :不同〈突變型。或者’藥物之藥物動力帛、生物分佈或 其他參數，可藉由此種組合或交替療法而&變。一般而言 組合療法典型上係優於交替療法，因其會對病毒引致多 重同時壓力。

例如’熟諸此藝者將明瞭任何抗病毒藥物或療法可與本發 月疋任何核：y：合併或交替使用。發明背景中所述之任何病 母冶療法可與本專利說明書中所述之化合物合併或交替使 用。可與本文中所揭示之化合物併用之抗病毒劑類型或其 前體藥物，其非限制性實例包括：干擾素，包括干擾素a2a 、干擾素a2b、經pEG化之干擾素、干擾素0、干擾素r、 干擾素Γ及干擾素ω ;間白血球活素，包括間白血球活素1〇 與間白血球活素12 ;三唑核苷；干擾素α或經PEG化之干擾 92848 •72· 1333956 素α，且併用三峻核嘗或列弗維林（Levovirin);列弗維林 (Levovirin);蛋白酶抑制劑，包括NS3抑制劑、NS3-4A抑制劑 ;解螺旋酶抑制劑；聚合酶抑制劑，包括HCV RNA聚合酶與 NS5B聚合酶抑制劑；支霉黏毒；IRES抑制劑；及反有意義 寡核苷酸；噻唑啶衍生物；苯甲醯苯胺核糖酵素；另一種 核#、核甞前體藥物或核甞衍生物；1-胺基-烷基環己烷；

抗氧化劑，包括維生素E ;角鯊烯；金剛胺；膽汁酸；N-(膦 酸基乙醯基）-L-天門冬胺酸；苯二羧醯胺；聚腺：y：酸；苯并 咪唑；胸腺素；/3微管蛋白抑制劑；預防疫苗；免疫調制 劑，IMPDH抑制劑；水飛薊素-磷脂醯膽驗植物染色體；及 霉菌酚鹽。

上述藥物類型或其前體藥物之進一步非限制性實例，包括 :阿環維爾（acyclovir)(ACV)、建西環維爾（ganciclovir)(GCV 或 DHPG) 及其前體藥物（例如異纈草胺醯基-建西環維爾）、E-5-(2-溴基 乙稀基）-2'-脫氧脲嘧啶核甞（BVDU)、（E)-5-乙烯基-1- yS-D-阿拉 伯糖基尿嘧啶（VaraU)、（E)-5-(2-溴基乙烯基）-1- 石-D-阿拉伯糖基 尿π密淀（BV-araU)、1-(2-脫乳-2-氣-/5-D-阿拉伯糖基）-5-破基胞p密 啶（D-FIAC)、1-(2-脫氧-2-氟-/3-L-阿拉伯糖基）-5-甲基尿嘧啶（L-FMAU或可列五定（clevudine))、（S)-9-(3-羥基-2-膦酸基甲氧基丙 基）腺嘌呤[(S)-HPMPA]、（S)-9-(3-羥基-2-膦酸基甲氧基丙基）-2,6-二胺基嘌呤[(S)-HPMPDAP]、（S)-l-(3-羥基-2-膦酸基-曱氧基丙基） 胞嘧啶[(S)-HPMPC 或西多非爾（cidofivir)]及（2S，4S)-l-[2-(羥甲基）-1,3-二氧伍圜-4-基]-5-破代尿p密淀(L-5-IoddU)、安替卡伐（entecavir) 、拉米五定（lamivudine)(3TC)、LdT、LdC、天諾弗伐（tenofovir) 92848 -73- 1333956 及阿迪弗伐（adefovir)，2-經甲基-5-(5-氟基胞嘧啶-1-基）-l，3-氧硫 伍圜之㈠-對掌異構物（(-)-FTC) ; 2-羥甲基-5-(胞嘧啶-1-基）-1,3-氧 硫伍圜之（-)-對掌異構物（3TC);卡巴維爾（carbovir)、阿環維爾 (acyclovir)、發西環維爾（famciclovir)、片西環維爾（penciclovir)、 AZT、DDI、DDC、L-㈠-FMAU、D4T、安多梭伐（amdoxovir)、 逆些特（Reverset)、拉西伐（Racivir)、阿巴卡伐（abacavir)、L-DDA 磷酸鹽前體藥物及/5-D-二氧伍圜基-6-氯基嘌呤（ACP)，非核 甞 RT 抑制劑，譬如聶伯拉平（nevirapine)、MKC-442、DMP-226 (沙斯提法（sustiva))，蛋白酶抑制劑，譬如因地那伯（indinavir) 、沙昆那伯（saquinavir)、卡列特拉（Kaletra)、阿塔那伯（atazanavir) :及抗-HIV化合物，譬如BILN-2061、ISIS 14803 ;維拉嘧啶 (viramidine)、NM 283、VX-497、JKT-003、列弗維林（levovirin)、 愛沙利賓（isatoribine)、阿布非隆(albuferon)、PEG-干擾原（infergen) 、VX-950、R803、HCV-086、R1479 及 DMP45。 罄藥組合物 宿主，包括人類，被痙病毒、黃病毒、HCV感染或本文中 所述之任何其他症狀感染，或經過RNA依存性RNA病毒聚合 酶複製之另一種生物體’或對於治療本文中所述之任何其 他病症，可於藥學上可接受之載劑或稀釋劑存在下’藉由 對該病患投予有效量之活性化合物或藥學上可接受之前體 藥物或其鹽而經治療。活性物質可藉任何適當途徑投藥’ 例如口服、非經腸、靜脈内方式、皮内方式、皮下方式或 局部方式，呈液體或固體形式。 化合物對於黃病毒科感染’包括C型肝炎病毒、West Nile病 92848 -74- 1333956 毒及黃熱病病毒，與鼻病毒感染之較佳劑量，係在每天一 至四次，約50至約2000毫克之範圍内。可使用較低劑量，且 因此範圍可包含每天一至四次504,000毫克。藥學上可接受 之鹽與如體藥物之有效劑量範圍，可以欲被傳輸之母體核 嘗重量為基準計算而得《若鹽或前體藥物本身展示活性， 則有效劑量可按上述使用鹽或前體藥物之重量，或藉由熟 諳此藝者已知之其他方式估計。 化合物可合宜地以任何適當單位劑型投藥，包括但不限於 每單位劑型含有25至3000毫克，較佳為50至2000毫克活性成 份者。50-1000毫克之口服劑量通常係為合宜，包括呈5〇, 1〇〇 2〇〇 250, 300,400, 500, 600, 700, 800, 900 或 1〇〇〇 毫克之一或多重劑量形 式。亦意欲涵蓋者為0.1-50毫克或〇·ι_2〇毫克或〇丨_1〇 〇毫克之 劑量。再者’較低劑量可在藉由非口腔途徑投藥之情況中 利用’例如藉由注射或吸入。 理想上，應投予活性成份以達成活性化合物之學值血聚濃 度（cmax)為約5.0至70 yM，較佳為約5.0至15 。這可例如 藉由靜脈内注射0.1至5%活性成份溶液，視情況在鹽水中， 或以活性成份之大丸劑投藥而達成。 活性化合物在藥物組合物中之濃度係依藥物之吸收、失活 及排泄速率，以及熟諳此藝者已知之其他因素而定。應注 意的是，劑量值亦隨著欲被減輕症狀之嚴重性作改變。更 應明瞭的是，對任何特定病患而言，特定劑量服用法應根 據個別需求及執行或管理組合物投藥人員之專業判斷，隨 著時間調整，且本文所提出之濃度範圍僅為舉例而已，並 92848 -75- 1333956 不意欲限制所請求組合物之範圍或實施。活性成份可同時 投藥’或可被區分成許多欲在不同時間間隔下投藥之較小 劑量。 活性化合物之較佳投藥模式為口服。口服組合物一般係包 含惰性稀釋劑或可食用載劑。其可被包封在明膠膠囊中， 或壓縮成片劑。為達成口服治療投藥之目的，可將活性化 合物與賦形劑一起摻入，並以片劑、錠劑或膠囊形式使用

°藥學上可相容黏合劑及/或佐劑物質可被包含作為组合 物之一部份。

片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可含有任何下列成份或類似，丨 質之化合物：黏合劑，譬如微晶性纖維素、西黃蓍樹膠^ 明膠；賦形劑，譬如澱粉或乳糖，崩解劑，譬如海藻酸、Primes 或玉米澱粉；潤滑劑，譬如硬脂酸鎂或Ster〇tes;助流劑，, 如膠態二氧化矽；增甜劑，譬如蔗糖或糖精；或調味劑 譬如薄荷、柳酸甲醋或橘子矯味劑。當劑量單位形式為丹 囊時其除了上逑類型之物質以外，可含有液體載劑" 如脂防油。此外，劑量單位形式可含有修改劑量單位物安 形式之各種其他物f，例如塗料、糖、蟲膠或其他腸溶劑 化合物可以_、懸浮液、糖漿、扁片、口香糖或其㈣ :之成份投藥。糖聚除了活性化合物以外，可含有薦則 為増甜劑，以及某些防腐劑、染料及著色劑與香料。 化合物或其藥學上可拉為；— , 接又乙刖姐樂物或鹽，亦可與不合养 害所要作用之其他活性物 人，座如m w 无所要作用之物質渴 素、抗真菌劑、消炎劑或其他抗病毒劑，， 92848 •76· 1333956

括其他核苷化合物。用於非經腸、皮内、皮下或局部應用 之’谷液或懸浮液，可包含下列成份：無菌稀釋劑，譬如注 射用水、鹽水溶液、不揮發油、聚乙二醇、甘油、丙二醇 或其他合成溶劑；抗細菌劑，譬如苄醇或對經基苯甲酸甲 s曰# ’仏氧化劑’譬如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑， 譬如乙二胺四醋酸；緩衝劑，譬如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷 酸鹽，及調整滲透性之作用劑，譬如氯化鈉或右旋糖。非 經腸製劑可被密封在安瓿瓶、用後即棄注射器或由玻璃或 塑膠製成之多重劑量小破瓶中。 若以靜脈内方式投藥，則較佳載劑為生理食鹽水或鱗酸鹽 緩衝之鹽水(PBS)。 於員較佳具體實施例中，活性化合物係與載劑一起製備 ’涊載劑將保護化合物以防止快速自身體排除，譬如受控 釋出配方，包括植入物與微包膠傳輸系統。可使用生物可 降解生物可相谷之聚合體，譬如乙埽醋酸乙缔酯、聚酐

㉚4乙醇酸、膠原、聚原酸酯及聚乳酸。關於製備此種 配方之方法係為熟繒此藝者所顯而易見。此等物質亦可市 購得自Alza公司。 受感染細胞為標的之微脂粒，與對 微脂粒懸浮體（包括以 揭毒抗原之單株抗體）亦較佳作為藥學上可接受之載劑。其 可根據熟諳此藝者已知之方法製備。例如，微脂粒配方可 ’‘由使適田^質（譬如硬脂醯基鱗脂臨乙醇胺、硬脂釀基鱗 月曰鲨膽鹼化生四缔醯基磷脂醯膽鹼及膽固醇）溶於無機溶 劑中，然後使其蒸發，留下乾燥脂質之薄膜於容器表面上 92848 -77- 1333956 而製成。接著，將活性化合物或其單磷酸鹽、二磷酸鹽及 /或三磷酸鹽衍生物之水溶液引進容器中。然後，以手使 容器旋渦打轉，以自容器側面移除脂質物質，並使脂質聚 集體分散，於是形成微脂粒懸浮體。 νπ. 生物學方法 候選化合物在Huh7細胞中以HCV禎製子系統之抗病真測試 潛伏HCV複製子之Huh7細胞可在含有10%牛胎兒血清、IX 非必須胺基酸、Pen-Strep-Glu (個別為100個單位/升、100微 克/升及2.92毫克/升）及500至1000微克/毫升G418之 DMEM培養基（高葡萄糖，無丙酮酸鹽）中培養。抗病毒篩選 檢測可在未具有G418之相同培養基中，按下述進行：為保 持細胞在對數生長階段，使細胞於低密度下，例如每井1000 個細胞，接種在96-井板中。於接種細胞後，立即添加待測 化合物，並在培養器中，於37°C下，培養3至7天期間。然 後移除培養基，並製備細胞，以供全核酸萃取（包括複製子 RNA與宿主RNA)用。接著，可使複製子RNA在Q-RT-PCR擬案 中放大，並據此進行定量。與未經處理之對照物比較，於 複製子HCVRNA含量上所發現之差異，係為表現待測化合物 之抗病毒功效之一種方式。 於另一種典型設定中，化合物可降低病毒RNA聚合酶活性 ，但並非宿主RNA聚合酶活性。因此，rRNA或/5-肌動蛋白 mRNA (或任何其他宿主RNA片段）之定量，以及與非藥物對 照組RNA含量之比較，係為待測化合物對細胞RNA聚合酶之 抑制作用之相對度量法。 92848 -78· 1333956 為活性三磷酩鹽之磷醯化檢通丨 為測定化合物之細胞新陳代謝，Huh_7細胞係得自美國培 養物類型收集處（Rockville，MD)，且於225平方公分組織培養 燒瓶中’在補充非必須胺基酸、1%青霉素-鏈霉素之最低必 須培養基中生長。每三天更新培養基，並使細胞一週繼代 培養一次。在以1〇分鐘曝露至30毫升胰蛋白酶_EDTA而脫離 黏連單層，並以培養基連續洗滌三次之後，使匯合Huh_7細 胞於每井2.5 xlO6個細胞密度下’接種在6_井板中，並曝露至 10 ^ [3Η]標識之活性化合物（500 dpm/pmol)，歷經特定時期。 將細胞保持在3rt及5%C〇2大氣下。在經選擇之時間點下’ 將細胞以冰冷磷酸鹽緩衝之鹽水（PBS)洗滌三次。萃取胞内 活性化合物及其個別新陳代謝產物，其方式是使細胞丸粒 於-2〇°C下，以60%甲醇培養過夜，接著以另外2〇微升冷甲醇 ，在冰浴中萃取一小時。然後，將萃液合併，於溫和過濾 空氣流下乾燥，並在_20。(：下儲存直到HPLC分析為止。 ΆΜΛΜ±Λ之生物利用率烚制 在研究起始之前1週内，將慢性靜脈導管與皮下靜脈入口 (VAP)以手術方式植入獮猴屬猴子中，〃冑助血液收集，並 進行身體檢查，包括血液學與血清化學評估，且記錄體重 。每隻猴子（總計六隻）係接受大約25〇//Ci之3 Η標識之化合 物’併用各劑量之活性化合物’在1〇毫克/公斤之劑量程 度下’在5毫克/毫升之劑量濃度下，無論是經由靜脈内大 丸劑(3隻猴子，靜脈内），或經由口腔灌食法(3隻猴予，口 服）。在服藥之前，將各服藥注射器稱重，以重量分析方式 92848 •79· 1333956 測定所投予之配方量。 尿液試樣係在指定間隔（服藥前大約

導管程序應不可行，則自末梢血管收集。 。血液與尿液試樣 係分析最高濃度(c最大值）、當達成最高濃度時之時間(τ最大值) 、曲線下方之面積(AUC)、劑量濃度之半生期(τ1/2)、清除率 (CL)、穩定狀態體積與分佈（Vss)及生物利用率 骨髓喜性檢測 人類骨髓細胞係收集自正常健康志願者，並藉Fic〇11Hypaque 梯度離心，分離單核細胞群集，按先前由s〇_d〇ssiJ_p, CarlisleR. ”3'-登氮基-3'-脫氧胸腺嘧啶核：y：與9_(丨，3_二羥基_2_丙 氧基甲基）鳥嘌呤在活體外對於正常人類造血原始粒子細胞 之毒性"，抗微生物劑與化學療法1987 ; 31 : 452 454 ;與

Sommadossi J-P，Schinazi RF Chu CK，Xie M-Y. "2’，3'_ 二脫氧-3'-硫胞嘧 啶核苷之㈠-與（+)-對掌異構物在正常人類骨髓原始粒子細胞 中細胞毒性之比較"，生化藥理學1992 ; 44 : 192M925所述。對 於CFU-GM與BFU-E之培養物檢測，係使用雙層軟性瓊脂或甲 基纖維素方法進行。藥物係在組織培養基中稀釋，並過滤 。於37°C下，在空氣中之5% C02潮濕氣層内14至18天後，大 於50個細胞之菌落係使用倒置顯微鏡計數。其結果係以藥 物存在下’與溶劑對照培養物比較之菌落形成之抑制百分 比呈現。 粒線體喜性檢測 92848 •80- 1333956 將五十微升2X藥物稀釋液添加至96井板之每井中。”無藥 物"（僅培養基）對照組係用以測定最大量之所製成粒線體 DNA與核蛋白體DNA。3TC @ 10 係作為負對照組使用， 而ddC @ 10 係作為毒性對照組使用。核蛋白體DNA含量 係用以測定對粒線體之專一毒性或一般細胞毒性。將HepG2 細胞（5,000個細胞/井，在50微升下）添加至板中。使板於37 °C下，在潮濕5% C02大氣中培養7天。於培養後，移除上層 清液，並儲存，以進行乳酸定量，並按RNeasy 96手冊（1999年 2月），第22-23頁中所述，自細胞萃取總DNA。未進行任何DNA 消化，因此係萃取總RNA與DNA。 使已萃取之DNA放大，並對各試樣測定粒線體DNA與核蛋 白體DNA上之改變。對核蛋白體DNA正規化之粒線體DNA相 對於對照組之折疊差異係經計算。 乳酸定量係藉由D-乳酸/ L-乳酸測試套件（Boehringer Mannheim/R-Biopharm/Roche)進行。按製造商說明書中所述，已 發現對各試樣所製成乳酸之總量，以及乳酸生產上之折疊 改變（乳酸％ / rDNA% )。 細胞毒性檢測 將50微升2X藥物稀釋液添加至96井板之每井中。藥物之 最後濃度係涵蓋從1至100 /zM之範圍。"無藥物僅培養基） 對照組係用以測定最小吸光率數值，且"僅細胞+培養基π對 照組係用於最大吸光率數值。亦使用溶劑對照組。然後， 添加細胞（ΡΒΜ : 5 X 104個細胞/井；CEM : 2.5 X 103個細胞/ 井；Vero, HepG2, Huh-7及無性繁殖系A : 5 X 103個細胞/井）， 92848 • 81 · 1333956 並於37°C下’在潮濕5% C02大氣中，培養3-5天（PBM : 5天； CEM : 3天，所有其他：4天）。於培養後，將2〇微升MTS染 料自細胞滴定含水單溶液細胞增生檢測，添加至各井中， 並使板再培養2-4小時。然後，於ELISA板讀取器上讀取吸光 率（490毫微米）’使用僅培養基/無細胞井作為空白試驗。 發現抑制百分比，並用以計算CC5〇。 老鼠中之活體内毒性 活體内毒性亦在對雌性瑞士老鼠注射本發明中所揭示之各 種核苷後測定。腹膜腔内注射係於第0天、第1天、第2天、 第3天及第5天給予不同劑量之特定核：y：。將另外之動物以 媒劑注射，作為對照組。在此等研究中，各服藥組群含有5_ 10隻老鼠。各老鼠之平均重量改變係經度量，作為化合物 之毒性跡象。 (BVDV)產率降低檢測 使Madin-Darby牛腎臟(MDBK)細胞在補充1〇%馬血清與ι〇〇微 克/毫升青霉素-鏈霉素之Dulbecco氏變性Eagle培養基中生長 。使細胞於5 X 103個細胞/井下，接種在96-井板中，並於37 °C下，在潮濕5% C〇2大氣中培養72小時。使細胞在10·2之病 毒稀釋下’被無論是細胞病變(NADL菌種）或非細胞病變（sd-1菌種）BVDV感染，並培養45分鐘。將細胞單層以培養基洗 條二次。含新培養基之待測化合物在劑量回應濃度中或三 吱核：y： ’作為正對照組，係被添加至培養物中，並將未含 有藥物之培養基添加至無藥物對照組中。於培養72小時後 ’收集上層清液，並使用QIAmp病毒RNA微小型套件 92848 -82- 1333956 (Qiagen，CA)萃取病毒rna。病毒負載係藉由q_rt_pcr，使用 對無論是NADL或SD-1 (1)為專一之引物測定。 νίπ.合成擬案 下述非限制性具體實施例係說明獲得本發明核替之一些一 般操作法。製備本發明化合物之兩種代表性一般方法係在 圖式1與2中概述，同時此等一般方法之更特殊實例係在圖 式3(實例1)、圖式4(實例2)、圖式5(實例3)及圖式6(實例4) 中提供。圖式1表示一般化方法，自（2R)2_脫氧_2·，基冬氟· 碳水化合物開始，並藉由與核鹼之縮合，形成本發明核苷 。圖式2係自預成形視情況在c_4，處經取代之嘌呤或嘧啶核 嘗開始’並建構本發明之^部）甲基氟基核#。雖然此等圖 式係說明通式（I)與（Π)之本發明化合物之合成，其中有呋喃 糖環呈仲核組態中，但這並非意欲以任何 明範圍之限制，且其不應被如此解釋。熟諳核 合成技藝者’將易於明瞭下述製備程序之條件與方法之已 知變型及核鹼（已知操作’可用以製備本發明之此等及其 他化合物。此外’相應於本發明化合物之l•對掌異 按照相同方法製備，以作A ^ " 作為起始物質之相應L-碳水化入你 结構單位或核甞L-對掌異構物開始。 σ 1.核鹼以適當經改質糖之糖基化作用 ΜΛ1 92848 -83-

1-3

Pg =保護基 R =低碳烷基、醯基、甲烷磺醯基、苯曱醯基 龄基=如本文中定義

1-6

:式1中 < 步驟1係利用適當烷基化劑，譬如甲基鋰、 、:鋁或漠化甲基鍰，在無水溶劑中，譬如四氫咬喃（τ] β，或醚引進2-甲基。化合物1-1至1-4可為純粹0： 混合：二J，3 f “與点異頭物兩者而呈任何比例之異

^ J 。但是，結構1-1之較佳異頭組態為沒。 步驟2係將氟原予引 由將三級醇心基⑼料之2_位置處。這可 氟化硫_)一二==，譬如(二乙胺基: 喃、氣仿、_ # π 在."、水非質子性溶劑譬如四ϋ 二二Si:::苯:處理而達成。此立_ "向上’，(或阿拉伯呋喃糖旬開J自，構w中之C烟 3中之C-2氟係"向下”。 在中間物呋喃核糖核$ 92848 -84- 1333956 於步驟3中，可使選用之保護基（pg)去除保護，並再保護 成更適於其餘操作之基團（T.w. Greene與RG.M. Wuts，"有機合成 之保護基"，第3版，John Wiley & Sons，1999)。例如，苄基醚類（Bn) 可能難以在經保護之核苷1-5中移除，而可被去除保護，並 被更容易自結構類型1_5之核：y：移除之基團置換。再者，異 頭位置（C-1)亦可視情況被操作成與核鹼偶合反應（步驟4)之 適當基團《關於異頭操作之數種方法，對熟諳核甞合成技 藝者而言是已建立的。一些非限制性實例係經由將烷基呋 喃糖％ (1-3 ’ R =烷基）以醋酸酐、醋酸及催化量之硫酸（乙醯 刀解）之混合物處理，以提供結構，其中r = Ac，具有選 用心保護基。1-3中之烷基亦可被轉化成醋酸鹽、苯曱酸鹽 、甲烷磺酸鹽、曱苯磺酸鹽、三氟甲烷磺酸鹽或甲苯磺酸 鹽’例如經由首先使1_〇烷基水解成丨_羥基，利用礦酸，包 括但不限於硫酸、鹽酸及氫溴酸，或有機酸，包括但不限 於二氟醋酸、醋酸及甲酸（於環境溫度或高溫下）。然後， 可使還原糖’經由以氯化乙醯、醋酸酐、氯化苯甲醯、苯 | 甲酐、氯化曱烷磺醯、三氟甲烷磺酐、氯化三氟甲烷磺醯 或氯化甲苯磺醯，於適當鹼存在下處理，譬如三乙胺、吡 呢或二甲胺基p比啶，而被轉化成所要之碳水化合物。 核甘鍵結係以下述方式建構，以適當全矽烷基化核鹼處理 中間物1-3或1-4 ’於路易士酸譬如四氯化錫、四氯化鈦、三 氟甲烷磺酸三甲基矽烷酯或汞（II)試劑（HgO/HgBr2)存在下， 通常於高溫下，在非質子性溶劑中，譬如甲苯 '乙腈、笨 ，或任何或所有此等溶劑之混合物。 92848 -85 - 1333956 於經保護核甞或結構式1-5中之選用保護基，可按照已建 立之去除保護操作作分裂（T_W. Greene與RG.M. Wuts，"有機合成 之保護基"，第 3 版，John Wiley & Sons，1999)。 2.預成形核苷之改質

預成形之核苷 圖式2

Pg =保護基 鹼基=如本文中定義（視情況經保護) X =如本文中定義 R6 =如本文中定義 92848 -86· 1333956 供此方法用之起始物質為經適當取代之嘌呤或嘧啶核I， 具有2，·〇Η與2，·Η。此核嘗可講得或可藉任何已知方式製成， 包括標準偶合技術。此核答可視，清況以適當保護基保護， 較佳係以醯基或矽烷基.，藉由熟諳此藝者所習知之方法， 如由T.W.Greene與RG.M.Wuts，"有機合成之保護基"，第3版，

John Wiley & Sons，1999 所陳述者。 ’ 然後，可使鳴呤或喊咬核誓於2，_位置處，以適當氧化劑， 在可相容溶劑中，於適當溫度下氧化，而產生2,_改質之核苷 。可此氧化劑為二甲亞砜、三氟醋酸酐或醋酸酐之混合物 (Swem/Moffat氧化作用），三氧化|或其他絡酸鹽試劑，〇咖 Martin過碘烷，或藉由四氧化釕/過碘酸鈉。 接者，使視情況經保護之核芬2，_嗣，使用燒基化劑，譬如 曱基鋰、Z甲基鋁、溴化甲基鎂或類似試劑，在無水溶劑 中，譬如四氫呋喃(THF)、氯仿或乙醚，通常在低於屹之溫 度下烷基化。結構式2-3化合物較佳係具有2,(s)或2,_甲基"向 下”、2，-0H "向上"組態。 可使、”σ構2·3之核:¾:去除保護，並以多種保護基再保護， 對於鹼，係為譬如〇_醯基（烷基或芳基）、〇_磺醯基或队醯 基（燒基或芳基）。此選用再保護步驟不必受限於充作化學 保漠基之保漠基。其他保護基，譬如6與個碳單位間之長 鏈酿基或胺基酸，可被獨立引進核驗或糖上。保護基可充 作活性物質之前體藥物。 步驟5係在預成形核答之2ι位置處引進氣原子。這可經由 將三級醇2-4以市購可得之乳化試劑，譬如（二乙胺基）三氟 92848 •87- 1333956 化硫（DAST)或Deoxofluor，在盔k韭睹 仏...、爪I戶質予性溶嬖 、氯仿、二氯甲烷或甲苯中處理而達 ^喃 以2,位置組態之反轉進行。意即，自結構2_4 =係 向上•（或阿拉伯核苷）開始，在中間物 土 為"向下、結構2-4核答之絕對組態為（2,s)，而結2 = 之絕對組態為（2，R)。 核答 接著，可使結構類型2-5之核菩藉由熟讀此藝者所習知、 方法去除保護，如由T.w. Greene與P.G.M. Wuts "；#祕人上 ^ ，$才幾合成之保 I蒦基，弟3版，John Wiley & Sons，1999所陳述者。 下述實施例係提供本發明方法之進一步瞭解，且進—步 例說明上述圖式1與2中之一般實例。此等實例係為說明舉 的，而非意欲限制本發明之範圍。等效、類似或適當溶= 、試劑或反應條件可在未偏離此方法之一般範圍下，用以 取代此等特定溶劑、上述試劑或反應條件。 【實施方式】 實例 實例1 (2’R)-2’-脫氡-γ-氤基-γ-C-甲基胞嘧啶核誓自碳水化合物開始之 合成 圖式3 92848 -88 · 1333956

3-1(主要為/δ)

3-3 ΝΗΒζ

3-4 3-5

Βζ = C(0)Ph Bn = CH2Ph 步驟1 :使化合物3-1 (7.7克，0.022毫莫耳）溶於無水乙醚中 ，並冷卻至-78°C。於此溶液中，添加MeLi (30毫升，1.6 Μ， 在乙醚中）。於反應完成後，以氯化銨（1 Μ，65毫升）處理混 合物，並分離有機相，脫水乾燥（Na2 S04)，過滤，及濃縮至 乾涸。矽膠層析，接著自乙醚-己烷結晶，提供純化合物3-2 (6.31 克）。 1H NMR (400 MHz, CDC13 )： δ 1.40 (s, 3Η), 3.41 (s, 3H), 3.49 (dd, 1H, J = 10.3, 6.89 Hz), 3.57 (dd, 1H, J = 10.3, 3.88 Hz), 3.84 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 4.03 (m, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.58 (m, 3H), 4.83 (d, 1H, J = 11.6 Hz), 7.31-7.36 (m, 10H)； 13CNMR(100MHz,CDC13)： δ 18.4,55.4,72.2,73.4,79.5,80.2,84.7, 107.4, 127.7, 127.8, 127.83, 128.5, 138.2, 138.3. 92848 • 89· 1333956 免帮2 :使化合物3_2溶於CH2 Cl2中，並以DAST (4.0毫升，30.3 毫莫耳）在室溫下處理。將此溶液於室溫下攪拌過夜。將如 此獲得之混合物倒入飽和NaHC03 (1〇〇毫升）中，並以飽和 NaHC〇3 (lx 15毫升）洗滌。將有機層以常用方式進一步處理 。矽膠層析（1 : 5 EtOAc-己烷）’獲得粗製化合物3_3 (0 671克） ，其係足夠純，以供下一步驟使用。iHNMR(4〇〇MHz，CDCl3) ：5 1.43 (d, 3H, J = 22.8 Hz), 3.35 (s, 3H), 3.49 (dd, 1H, J = 10.5, 5.4 Hz), 3.55 (dd, 1H, J = 10.5, 4.1 Hz), 3.87 (dd, 1H, J = 23.5, 7.5 Hz), 4.26 (m, 1H), 4.56 (d, 2H, J = 6.9 Hz), 4.66 (d, 2H, J = 8.2 Hz), 4.72 (d, 1H, J = 10.8 Hz), 7.29 -7.36 (m, 10H)； 13 C NMR (100 MHz, CDC13): 5 17.0 (d, J = 24.4 Hz), 55.2, 77.1, 73.4, 73.8, 77.3, 80.3, 81.2 (d, J = 16 Hz), 99.7 (d, J = 178.9 Hz), 106.8 (d, J = 32.0Hz), 127.7, 127.8, 128.1, 128.3, 128.5, 128.6, 137.8, 138.3 ； 1 9 F NMR (100 MHz, CDC13 ) ： δ -8.2 (m, IF). 吏踢3:使化合物3-3 (0·39克，1.1毫莫耳）溶於i: 2 EtOH-EtOAc 中’並以Pd/C (〜0.1克）與環己烯（〜1毫升）處理。將混合物加 熱至回流過夜’然後經過碎藻土過滤。在真空中移除溶劑 ’並使殘留物落於p比淀（〜5毫升）中。於此溶液中添加氯化苯 甲酿（0.22毫升，1.83毫莫耳）’並將混合物在室溫下攪拌過 夜。於真空中移除吡啶，並使殘留物在CH2Cl2與飽和NaHC〇3 (10.0毫升）之間作分液處理。使有機相脫水乾燥s〇4)，過 濾，並使溶液濃縮至乾涸。管柱層析，提供0.350克純化合 物 3·4。1H NMR (400 MHz, CDC13) : 6 1.53 (d，3H，J = 22.4 Hz), 3.39 (s, 3H), 4.46 (dd, 1H, J = 11.6, 4.7 Hz), 4.58 (m, 1H), 4.65 (dd, 1H, J = 11.6, 3.9 Hz), 4.87 (d, 1H, J = 9.9 Hz), 5.64 (dd, 2H, J = 24.1, 7.8 Hz), 7.29-7.36 (m, 92848 -90· 1333956 10H) ; 19 F NMR (100 MH2, CDCl3) : 5 -7.5 (m，IF). 免遵_1L將雙（三甲基矽烷基)-N-苯甲醯基胞嘧啶（0.28克，0.77 毫莫耳）與化合物3-4 (0.20克，0.5毫莫耳）在1,2二氯乙烷(2毫 升）與曱苯（2毫升）中之溶液，以TMSOTf (0.15毫升，0.77毫莫 耳）處理。當藉TLC判斷，大部份起始物質已消失後，使溶 液冷卻至室溫，以水（1 X 5毫升）、鹽水（1 X 5毫升）洗條，脫 水乾燥（NaaSO4)，過濾，及濃縮至乾涸。急驟式層析，接著 自CH2 (¾ -己燒結晶’獲得化合物3-5 (68毫克）。熔點241°C ; 1H NMR (400 MHz，CDC13 ) : δ 1.49 (d, 3Η, J = 22.4 Hz), 4.64 (dd, 1H, J = 12.9, 3.4 Hz), 4.73 (app d, 1H, J = 9.5 Hz), 4.89 (dd, 1H, J = 12.7, 2.2 Hz), 5.56 (dd, 1H, J = 20.7, 8.6 Hz), 6.52 (d, 1H, J = 15.9 Hz), 7.38-7.67 (m, 10H), 7.89 (d, 2H, J = 6.9 Hz), 8.07-8.11 (m, 5H), 8.67 (s, 1H) ； 19 F NMR (100 MHz, CDC13)： d 2.85 (m, IF). 步驟S :使化合物3-5 (40毫克，0.05毫莫耳）溶於甲醇性氨中 ，並在室溫下攪拌48小時。使溶液濃縮至乾涸，並層析⑶〇2) ，以1 : 4 EtOH-CH/l2溶離。產量為約12毫克純（2，R)-2，-脫氧-2，-氟基-2'-C-甲基胞嘧啶核苷 3-6。1H NMR (400 MHz，DMSO-d6) : 5 1.16 (d, 3H, J = 22.0 Hz), 3.61 (dd, 1H, J = 11.6, 5.2 Hz), 3.60-3.83 (m, 3H, J = 10_5, 5.4 Hz)，5.24 (s，1H，可與 D2 O 交換），5.59 (s，1H，可與 D2 〇 交換）, 5.71 (d，1H，J = 7.3 Hz)，6·08 (d，1H，J = 19.0 Hz)，7.24 (d，1H，J = 17.7 Hz，可 與 D2 O 交換），7.87 (dlH) ; 19F NMR (100 MHz, DMSO-d6) : <5 4.13 (m， IF). 實例2 (TR)-2'_脫氧-T-氟基-2’-C-甲基胞嘧啶核苷自胞嘧啶核誓 92848 •91 - 1333956 開始之合成 圖式4

TIDPS = 1，3-(1，1，3,3_四異丙基二亞矽氧烷基） 步騾1 :於胞嘧啶核甞（100克’ 0.411莫耳）在DMF (2.06升）中 之懸浮液内，添加苯曱酐（102.4克，0.452莫耳）。將混合物於 室溫下攪拌20小時。於真空中移除DMF，並以乙醚研製殘 留物。藉抽氣過滤收集所形成之固體，並以乙醚(2 X 200毫升） 洗滌。於室溫下’在真空中進一步乾燥，獲得N4苯曱醯胺（140.6 92S4E • 92· 1333956 克，98.3% )。使一部份此物質（139 3克，〇.4〇1莫耳）溶於無水 吡啶（1.2升）中，並在室溫下，以13,二氯_丨山3,3四異丙基-二 I氧烷（14i.4毫升，α441莫耳）處理。將溶液於室溫下攪拌過 夜。使混合物於真空中濃縮至幾乎乾涸，並與甲苯（3χ2⑻毫 升）共蒸發。將殘留物以EtOAc(1.8升）處理，並#HC1(2x2〇〇 毫升，0.05N)、NaHC〇3(5%，2x400毫升）洗滌。將有機層洗 滌，脫水乾燥(NaJO4)，過濾，及蒸發至乾涸。化合物4_1 (2565 克’ >100% )係以白色泡沫物單離，並使用之而無需進一步 純化。 免翌吏化合物4-1 (236.5克，0.40莫耳）溶於無水THF (1 22 升）中。添加無水DMSO(180.8毫升，2.1莫耳），並使所形成之 溶液冷卻至_2(TC與-I5<t之間。於45分鐘内，逐滴添加三氟 醋酸酐（90.6毫升，〇_64莫耳），並將溶液在_2(rc與_irc之間 擾拌2小時’然後’於2〇分鐘内’添加無水三乙胺（223 5毫升 ’ 莫耳）。使含有酮之粗製反應物4-2溶於EtOAc (500毫升） 中’並將所形成之溶液以H2〇(3x400毫升）洗滌，脫水乾燥 (NhSO4) ’及在真空中移除溶劑，而得黃色固體，使其在石夕 膠管柱上純化，以己烷中之EtzO (0-60% )之階式梯度液，接 著以己燒中之EtOAc (50-100% )之階式梯度液溶離。使如此獲 得之粗製酮（〜192克）自石油醚結晶，而得酮4-2 (138.91克，57.5 %胞嘧啶核苷）’為白色固體，與22克未反應之起始物質^ ’為黃色固體》 童螺3·:使化合物4-2 (48.57克，8.26毫莫耳）溶於無水曱苯(〜4〇〇 毫升）中，並在真空中移除溶劑，且排除水份。然後，使殘 92848 -93- 1333956 留物於真空中再進一步乾燥（油泵）2小時 。使殘留泡沫物在

升）。於溫熱至室溫後，將混合物以Η2〇(2χ5〇〇毫升）洗滌， 脫水乾燥（Na2S〇4)，接著濃縮至乾洇，而得褐色泡沫物（~6〇 克，>100%) 〇 反應係使用37.62克與56.4克化合物4-2再進行兩次。使合併 之粗產物（128.0克，0.212莫耳）溶於THF (128升）中，並以濃 HOAc (23毫升，0.402莫耳）處理。於此溶液中，添加ΤΒΑρ (3科〇 毫升，1M在THF中）。將溶液於室溫下攪拌〇乃小時，並將 混合物以矽膠（750克）處理，及濃縮至乾涸。將粉末放置在 裝填¢:¾¾之矽膠管柱中。以丨：7 Et〇H_CH2C12溶離，獲得暗 蠟狀固體，使其預吸附於矽膠（3〇〇克）上，並以前述方式層 析。單離化合物4-3 (46_4克，53.0% 4-2)，為灰白色固體。 1HNMR (DMSO-d6): (5 1.20 (s, 3H，CH3 )，3.62-3.69 (m，2H)，3.73-3.78 (m， 2H), 5.19 (t, 1H, J = 5.4 Hz, OH-5'), 5.25 (s, 1H, OH-2'), 5.52 (d, 1H, J = 5.〇 Hz, OH-3'), 5.99 (s, 1H, H-l'), 7.32 (d, 1H, J = 5.8 Hz), 7.50 ( Wt, 2H, J = 7.7 hz), 7.62 (Ψt, 1H, J = 7.3 Hz), 8.00 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 6.9 Hz), 11.22(s，lH，NH).對(：17Η19Ν306 ·〇.5Η20 之分析計算值：C,5513 ;Η, 5.44; Ν，11_35·實測值：C，55.21 ; H，5.47; N，11.33. 步驟4 ·使化合物4-3 (46.0克，0.13莫耳）溶於無水p比徒中， 並在真空中濃縮至乾涸。使所形成之漿液在氬氣下溶於無 92848 -94- 1333956 水吡啶中，並冷卻至o°c，及攪拌。將褐色溶液以氯化苯甲 醯（30毫升’ 0.250莫耳）逐滴處理1〇分鐘。移除冰浴，並持續 攪拌1.5小時’其中TLC顯示無殘留之起始物質。藉由添加水 (5毫升）使混合物淬滅，並濃縮至乾涸。使殘留物溶於最少 量之CH2C12中，並以飽和NaHC03(lx500毫升）及Η20(1χ500毫 升）洗滌。使有機相脫水乾燥（Na2S04)，並過濾，濃縮至乾 涸’及在矽膠上層析，以EtOAc-己烷（25-60% )之階式梯度液 溶離，提供化合物4-4 ’為黃色泡沫物（48.5克，67% )。 1 H NMR (CDC13 ) ： (5 1.64 (s, 3H, CH3), 4.50 (M1HH-4), 4.78-4.85 (m, 2H, H-5',5a'), 5.50 (d, 1H, J = 3.4 Hz, H-3*), 6.42 (s, 1H, Η-Γ), 7.44-7.54 (m, 7H,

Ar), 7.57-7.66 (m, 3H, Ar), 7.94 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 8.05-8.09 (m, 4H, Ar), 8.21 (d，1H，J = 7.3 Hz).對 C3 丨 H27N3 08 之分析計算值：C，65.37 ; H，4.78; N，7.38.實測值：C，65.59 ; Η，4·79; N，7.16. 堂雄S :使化合物4-4 (7.50克，0.013莫耳）在氬氣下溶於無水 甲苯（150毫升）中’並冷卻至_20。〇。慢慢添加DASt (2.5毫升 ’ 18.9毫莫耳），且於添加完成後移除冰浴。持續攪拌1小時 ，並將混合物倒入飽和NaHC03 (100毫升）中，及洗滌，直到 氣體停止釋出為止。使有機相脫水乾燥（Na2S〇4)，濃縮，並 藉矽膠層析純化，以1 : 1 EtOAc-己烷溶離。產量為L22克（16.3 %)純 4-5，為白色固體。熔點241°C (CH2C12-己烷）；iHNMRCCDClJ :5 1.49 (d, 3H, J = 22.4 Hz, CH3 ), 4.64 (dd, 1H, J = 3.44, 12.9 Hz, H-5'), 4.73 (d31H, J = 9.5 Hz, H-4'), 4.90 (dd, 1H, J = 2.4, 12.7 Hz, H-5a'), 5.56 (dd, 1H, J = 8.6,20.7 Hz, H-3'), 6.52 (d, 1H, J = 18.0 Hz, H-l'), 7.47-7.57 (m, 7H, At), 7.62-7.71 (m, 3H, Ar), 7.89 (d, 2H, J = 6.9 Hz), 8.07-8.11 (m, 5H, Ar), 92848 -95· 1333956 8.67 (bs，1Η，ΝΉ).19 F NMR (CDC13): (5 3.3 (m)·對C3 i H2 6 FN3 07 · 0.7 Η2 Ο 之分析計算值·· C, 63.74; H，4·72 ; N, 7.20.實測值：C，63.71; H, 4.54 ；N,7.20.

步驟6 :使化合物4-5 (6.30克，0.011莫耳）懸浮於甲醇性氣 (約7N，150毫升）中，並在室溫下攪摔過夜。於真空中移除 溶劑，與甲醇（1 X 20毫升）共蒸發，並預吸附至矽膠上。將 白色粉末放置於矽膠管柱（裝填CHC13)上，並將管柱以CHC13 中之9% EtOH，然後以CHC13中之17% EtOH，及最後以25% EtOH 溶離。使含有產物之溶離份濃縮，經過0.4微米圓盤過濾， 及自水凍乾，提供化合物4-6，2.18克（76%)。iHNMRpMSO-A) :(5 1.17 (d，3H，J = 22.3 Hz, CH3 )，3.63 (dd，1H，J = 2.7, 13.7 Hz，H-5’)， 3.70-3.84 (m, 3H, H-3', H-4', H-5a'), 5.24 (app s, 1H, OH-3'), 5.60 (d, 1H, J = 5.4 Hz, H-5'), 5.74 (d, 1H, J = 7.71 Hz, H-5), 6.07 (d, 1H, J = 18.9 Hz, H-l'),

7.31 (s, 1H,NH2), 7.42(s, 1H,NH2), 7.90 (d, 1H, J = 7.3Hz, H-6). 19FNMR(DMSO-d6) : 5 2.60(m).對 C10H14FN3O4 ·1.4Η20 之分析 計算值：C，44.22 ; H，5.95 ; N, 14.77.實測值：C，42.24 ; Η, 5.63 ; N，14.54.經由溶解於水（2毫升）中，並以1 M HC1調整pH值至大 約3·0，使化合物4-6 (0.10克，0.386毫莫耳）轉化成其鹽酸鹽， 於真空中移除水，並使殘留物自EtOH水溶液結晶，而得4-6 ，為其鹽酸鹽（71.0毫克）。熔點243°C (分解）；iHNMRpMSO-A) :(5 1.29 (d，3H，J = 22.6 Hz, CH3 )，3.65 (dd，1H，J = 2.3,12·7 Hz，H-5，)， 3.76-3.90 (m, 3H} H-3'} H-4', H-5a'), 5.96 (d, 1H, J = 17.3 Hz, H-l'), 6.15 (d, 1H, J = 7.9 Hz, H-5), 8.33 (d, 1H, J = 7.9 Hz, H-6), 8.69 (s, 1.5H, NH), 9.7B (s, 1.5H, NH)_ 19FNMR(DMSO-d6) : 5 1.69(m)·對 C10H14FN3O4 · HC1 之分 92848 •96· 1333956 析計算值：C，40.62 ; H，5.11 ; N，14.21.實測值：C, 40.80 ; Η, 5.09 ；Ν, 14.23. 實例3 (2’R)-6-氣基-2’-脫氧-21-氟基-r-C-甲基嘌呤自6-氯基嘌呤核糖核 替開始之合成 圖式5

Cl Cl CI

6-氯基嘌呤核糖核甞

5-5 5-6 TIDPS = 1,3-(1，1,3,3-四異丙基二亞矽氧烷基） 92848 -97- 1333956 免歷使核菩，6-氯基嘌呤核糖核苷（318克，11〇9毫莫 耳）溶於無水吡啶（300毫升）中，並以1>3_二氯_丨山3,3_四異丙基_ 二矽氧烷（4.08毫升，12.75毫莫耳）於〇它及氬大氣下逐滴處理 。使溶液升溫至室溫，並攪拌過夜。在真空中使混合物濃 縮至幾乎乾涸，溶於最少量之氣仿中，並以Ηα (1〇〇毫升，〇 〇5 N) 與NaHC〇3(5%，100毫升）洗滌。使有機層脫水乾燥 ，過濾，並蒸發至乾涸，而得化合物54，為琥珀色玻璃（61〇 克’ >100%)，使用之而無需進一步純化。ihnmr(CDCi3): δ 1.01-1.13 (m, 24H), 4.03-4.18 (m, 3H), 4.58 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 5.01 (m, 1H), 6.07 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.71 (s, 1H). 免螺2 :使化合物5·1 (7.13克，13.47毫莫耳）溶於無水THF (35 毫升）中。添加無水DMSO (5.11毫升，72.06毫莫耳），並使所 形成之溶液冷卻至-2(TC與-15°C之間。於45分鐘内逐滴添加 三氟醋酸酐（3.06毫升’ 21.69毫莫耳），並將溶液在-2(TC與 •15°C之間攪拌2小時，然後，在20分鐘内，添加無水三乙胺 (8_08毫升，57.92毫莫耳）。使含有酮5-2之粗製反應物溶於Et2〇 (25毫升）中’並將所形成之溶液以h2〇 (2 X 50毫升）洗滌，脫 水乾燥（NajSO4)，及在真空中移除溶劑，而得黃色固體，使 其在矽膠管柱上純化，以0-50%石油醚-乙醚之逐步階式梯 度液溶離，提供化合物5-2，為具有其相應之孿二醇之混合 物。使此玻璃物質溶於CH2C12中，並在過量MgS04上攪拌36 小時。使不含孿二醇之混合物過濾，並蒸發至乾涸，獲得 化合物5-2，為琥珀色玻璃（7.0克，97% )。iHNMR^CDCl〗）： δ 1.01-1.13 (m, 24H), 4.09-4.22 (m, 3H), 5.55 (d, 1H, J = 9.6 Hz), 5.80 (s, 1H), 92848 • 98- 1333956 8.19(s, 1H), 8.61 (s, 1H). 竞_輝3:使化合物5-2(7.0克，13.26毫莫耳）在無水四氫呋喃（45 窀升）中之溶液冷卻至-78°C，並於氬大氣下攪拌。於此溶液 中，在30分鐘期間内，逐滴添加溴化曱基鎂（15 85毫升，3 〇 μ ，在乙醚中）。於-78。(：下再攪拌3小時後，藉由小心添加工河 NI^Cl水溶液（50.0毫升）使反應淬滅。溫熱至室溫後，將混合 物以H2〇(2x500毫升）洗滌，脫水乾燥，及濃縮至乾 涸’而得褐色泡沫物（3.8克），使其溶於四氫呋喃（5〇毫升）中 ，並以TBAF溶液（18.9毫升’ 1M溶液，在thf中）與冰醋酸(0.85 毫升）在室溫下處理’將溶液於室溫下攪拌2小時，濃縮至 乾涸’及藉矽膠層析純化’而得化合物5_3 (2 〇克，5〇% )。 t驟4 :使化合物5_3 (0.491克’ 1.63毫莫耳）溶於吡啶（3毫升） 中，並在至溫下以醋酸肝（0.38毫升，4.08毫升）處理。將溶 液於室溫下攪拌2小時，在此段時間後，使溶液濃縮至乾涸 ’並以乙醚（10毫升）與水（5毫升）處理。將有機層再以水 (2x10毫升）洗滌，脫水乾燥（Nadoj，過濾，及蒸發至乾酒 ’獲得化合物 5·4，為泡沐物（0.450 克，91.0% )。1 H NMR (CDC13) ：(5 1.39 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 4.27 (m, 1H), 4.49 (dd, 1H, J = 4.2, 11.9 Hz), 4.57 (dd, 1H, J = 6.16, 11.9 Hz), 5.14 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 6.25 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.75 (s, 1H). 童驟5:使化合物5_4(〇.1〇〇克，0.259毫莫耳）在氬氣下溶於 無水甲苯（3_0毫升）中，並冷卻至_2(rc。慢慢添加DAST (〇 2毫 升’ 1.55毫莫耳），並於添加完成後移除冰浴。持續攪拌1小 時’並將混合物倒入飽和NaHC〇3(100毫升）中，及洗滌，直 92848 -99· 1333956 到氣體停止釋出為止。使有機相脫水乾燥^七8〇4)，濃縮， 並藉碎膠層析純化’以30%Et2〇-石油醚溶離，獲得純5_5(〇.〇28 克 ’ 27.9%)。iHNMR(CDCl3): 5 l.24(d，3H，J = 22.8Hz) 22〇(s 3H)， 2·22 (s，3H)，4.41-4.55 (m，3H)，4.47 (dd，1H，J = 9.2,22.0 Hz)，6,37 (d，1H J = 17.6 Hz), 8.45 (s, 1H), 8.82 (s, 1H). 吏_驟.6:使化合物5-5(0.018克，0.047毫莫耳）溶於甲醇（5亳 升）中，並以曱醇鈉（3.6毫克，0.67毫莫耳）在曱醇（5毫升）中 之溶液處理。將溶液於室溫下攪拌1小時，以濃醋酸中和， 並在碎膠上層析，以EtaO /甲醇（0-5% )之階式梯度液溶離， 而得化合物 5-6(0.010 克，70.9% )。1H NMR (CDC13): 3 123 (d % J = 22.4 Hz), 4.04 (dd, 1H, J = 2.11, 12.5 Hz), 4.17 (dd, 1H, J = i.5> 9 2 Hz) 4.25 (dd, 1H, J = 1.9, 12.3 Hz), 4.61 (dd3 1H, J = 9.2, 22.3 Hz), 6.37 (d, 1H J -17.3 Hz), 8.70 (s, 1H), 8.78 (s, 1H). 實例4 (2R)-2'-脫氧-2’-氟基-2’-C-甲基腺芬自（2’R)-6-氯基-2’-脫氧_2，_氣基 2'-C-甲基哼呤開始之合成 囷式6

堂驟1 :使化合物5-5 (0.100克，〇·26毫莫耳）在耐壓管中， 92848 -100· 1333956 甲醇性氨（約7 N，25毫升）’於80°C下一起加熱12小時。使 粗製反應物預吸附至矽膠上，並藉管柱層析純化，以恥〇_ MeOH (0-5% )之階式梯度液溶離。經由使化合物溶於最少量 之乙醇中，並以0.5毫升0.6MHC1溶液處理溶液，使不純產物 轉化成其鹽酸鹽。濃縮至幾乎乾涸，獲得化合物64，為灰 白色結晶（0.020 克，24.2% )。1H NMR (CD3OD): <5 1.19 (d, 3H，J = 22 3

Hz), 3.88 (dd, 1H, J = 2.7, 12.7 Hz), 4.06 (dd, 1H, J = 2.1, 12.5 Hz), 4.11 (app d, 1H, J = 9.2 Hz), 4.35 (dd, 1H, J = 9.4, 24.5 Hz), 6.35 (d, 1H, J = 16.5 Hz), 8.43 (s，1H)，8.85 (s，1H). 實例5 (2R)-2’-脫氧~T-氟基-2’-C-曱基胞n密咬核嘗之抗病毒活性 ijgy複製子姶消丨 化合物之抗黃病毒活性係按Stuyver等人所述測定（"在培養 物中阻斷牛病毒腹瀉與C型肝炎病毒複製之核糖核甞類似物 "，抗微生物劑與化學療法47 : 244-254 (2003)) »使化合物溶於 DMSO中，並在範圍從3至1〇〇 之最後濃度下，添加至培 養基中。4天培養造成複製子HCV RNA之劑量依存性降低（圖 M)。複製子RNA之1-對數降低（或肊⑼值）係在大約2·5 _下 達成。度量rRNA之降低係獲得對於細胞聚合酶之抑制作用 <指標。自抗病毒值扣除此細胞毒性值，造成治療指數線 與EC"值。以此等計算值為基礎，獲得平均ECm值，對細胞 毒性校正，為大約2.5^圖ία顯示複製子HCVRNA之劑量 依存性降低，以使用（2，R)_2L脫氧_2ι_氟基_2,_c_曱基胞嘧啶核苷 <治療為基準。病毒降低係與細胞RNA含量（核蛋白體⑽八) 92848 -101· 1333956 之降低比較，以獲得治療指數值。EC"表示（2ΊΙ)·2,脫氧·2,氟 基-2_-C-甲基胞嘧啶核苷之劑量依存性投藥後96小時之9〇%有 效k度。圖1B顯示以5與25 //M治療後，在複製子HCV抓八 上高達7天之長期降低。 (2’R)-2i-脫氧-2’-氟基_2’-C-甲基胞嘧啶核苷在複製子系統中之 活性，係摘錄於表1中。對於（2，r)_2，_脫氧_2，_氟基·2·_&甲基胞 嘧啶核苷以及2’-C-甲基胞嘧啶核苷與2，_c_甲基腺菩之EC"值 ，係顯示對於三種個別複製子無性繁殖系（Hcv_wt(野生9=) 、9-13及21-5)，以及兩種其他無性繁殖系（S282t與。 ㈣-2’-脫氧_2’_氟基_2’d基胞㈣核#對於複製子無性繁殖 系之EQo值，係在丨.6至4.6 之範圍内。對照上而言κ· 甲基胞嘴呢核#之ec90值係在6·6_374 "Μ之範園@。令人感 興趣的是，兄甲基料之％。值㈣於叫2,_脫氧:氣^ ^甲基胞Μ核芬。_，-脫氧_2，_氟基曱基胞喃淀核 椒〇甲基胞㈣核答在其他複製子測試中 於表2中。 货、不 合酶檢测 表3顯示（2丨R)-2，-脫氧_2丨_氟甚 虱基-2-C-甲基胞嘧啶核苷_5,_三 ^(ΤΡ)在麵聚合酶檢測中之功效。測得抑制 1.7至7.7 _之範圍内。 /0你在 毒性 關於叫2，·脫氧.2，·氣基邮甲基胞錢核芬主 性檢測之毒性數據摘述，係示於表6與7中。表'^母 測中，缺乏（2，R)-2，-脫氧_2ι·氟 -不此項檢 氟基-2-C-甲基胞嘧啶核苷與2,心甲 92848 1333956 基胞喊淀核荅對於粒線體DNA合成之作用，及缺乏對於乳 酸增加之作用。結果証實（2，R)-2，-脫氧-2，-氟基_2，_c_〒基胞嘧啶 核芬毒性之相對缺乏》表6顯示各種細胞系（無性繁殖系 A，Huh7’ HepG2, MDBK，PBM，CEM，Vero, MRC-5)中之細胞毒性分析 。細胞毒性濃度50% (CC^)在對（2，R)-2，-脫氧_2，_氟基_2,_c_甲基 胞嘧啶核站以及2，-C-曱基胞嘧啶核苷測試之所有無性繁殖系 中，係大於75-100 /zM。對照上而言，係為2LC_甲基腺苷之相 對毒性。 經測試之核苷類似物對人類骨髓細胞之作用，係被描述於 表9中。正如所示，當與2l甲基胞嘧啶核甞或比較時，2,_ 甲基-2’-氟基胞嘧啶核苷之1(：5〇值係顯著較高（98 2，bfu_e)與 (93.9，CFU-GM)。結果証實，與其他核苷化合物比較，2，_甲 基-2’-氟基胞嘧啶核苷係顯著地較少毒性。 動物研貪 圖2描繪雌性瑞士老鼠活體内（2，R)_2,_脫氧_2，_氟基_2,_c_甲基 胞嘧啶核苷在各種劑量下毒性分析之平均重量改變。腹 膜腔内注射係在第〇天至50天，給予3 3、1〇、33、1〇〇毫克 /公斤。各服藥組群含有5隻老鼠，且在30天研究期間沒有 老鼠死亡。未在老鼠中發現顯著毒性。 圖3與表6係摘錄（2'R)-2，··脫氧_2，_氟基-2，-C-甲基胞嘧啶核苷在 L /可猴中之藥物動力學參數，其係被給予口服單一劑量（Μ.〗 耄克/公斤）（表6，圖3)或靜脈内劑量（圖3)之（2'r)_2，_脫氧_2L 氟基-2'-C-曱基胞p密淀核答。 其他抗病毒活性 92848 1333956 (2R)-2-脫氧_2’_氟基-2’-C-甲基胞嘧啶核甞之抗病毒活性範圍 之摘錄，係示於表4中。表中顯示除了 Hcv病毒以外，（2，R)_2i_ 脫氧-2’-氟基-2，·〇甲基胞嘧啶核苷顯示抵抗鼻病毒、WestNiIe 病毒、黃熱病病毒及登革熱病毒之活性。 表5顯示（2R)-2'_脫氧-21-氟基-2'-C-甲基胞p密唆核答對於jjcv 替代模式BVDV，以及其他病毒，包括pjjv、jjgv及冠狀病 毒，缺少活性。對照上而言，2'-C-甲基胞嘧啶核甞與2'-C-甲 基腺苷在HCV替代模式BVDV中，顯示較大活性。此等結果 顯示需要篩檢此一系列抵抗HCV複製子系統對替代HCV系統 之化合物。 表1 · (2’R)-2，-脫氧-2’-氟基-2’-C-甲基胞响咬核：y：抗jjCV複製子 活性之摘錄* 複製子 2，-C_甲基 胞嘧啶核苷 (2’R)-2'-脫氧-2·-氟基-2'-C-甲基 胞嘧啶核苷 AC-甲基腺苷 HCV-WT lb 4.6± 2.0 21·9±4.3 S282T mut. lb 30.7± 11.7 37.4± 12.1 9-13(亞基因組） 21-5(全長） 4.6± 2.3 1.6±0.7 *數值表示EC9〇( ；〇M) 92848 13.0 2.1 ±0.27 >100 0.7 6.6 0.6 1333956 表2 : (2’R)-2’_脫氧-2’-氟基-2’-C-甲基胞嘧啶核甞與2’-C-甲基胞 嘧啶核甞在其他複製子中之活性 (2'R)-2'_脫氧-2^ 氟基-2’-C-甲基胞p密淀核嘗 2'-C-甲基胞嘧啶核甞 複製子 ec9〇 IC90 ec90 IC90 (fM) (^M) (μΜ) ("Μ) GAPDH MTT GAPDH MTT lb (Ntat) 3.8 >100 >100 27.2 >100 >100 lb (Btat) 11.5 >100 >100 31.1 >100 >100 la (pplaSI-7) 34.7 >100 >100 35.0 >100 >100 表3: HCVlbNS5B 聚合酶檢測（IC5〇，

(2’1〇-2’-脫氧-2·-氟基-2'-C_曱基 胞p密淀核嘗TP 2’-C- T基胞嘧 啶核苷TP 2’-C-甲基腺甞 TP 野生型NS5B 1.7±0.4a 6.0±0.5 20·6± 5.2 7.7± 1.2b S282T 2.0a 26·9± 5·5 >100 8.3±2.4C a數值係使用第1批測得；b數值係使用第2與3批測得；及1 數值係使用第2批測得。 表4 : (2’R)-2’_脫氧-2’-氟基-2’-C-甲基胞嘧啶核苷抗病毒活性之 摘錄 病毒 細胞 EC50，CPE (^M) EC50，Nf (//M) CC50，CPE CC50，Nr3 (_ West Nile Vero 32 12 >100 32 登革熱 類型2 Vero 32/55 >100/>100 >100 >100 黃熱病 Vero 19/3.2 32/12 >100 >100 92848 -105- 1333956 A型流感 (H1N1) MDCK >100 >100 >100 >100 A型流感 (H3N2) MDCK >100 >100 >100 >100 B型流感 MDCK >100 >100 >100 >100 鼻病毒 類型2 KB 25 20 >100 >100 VEE Vero >100 >100 >100 >100 • SARSCoV Vero >100 >100 >100 >100 aNR=中性紅色。 表5 : (2’R)-2’_脫氧-2f-氟基-2’-C-甲基胞嘧啶核甞抗病毒活性之 $ 摘錄 病毒 (2甘)-2^脫氧-2匕 氣基-2'-C-曱基 胞p密咬核嘗 (EC90，//Μ) 2'-C-甲基 胞嘧啶核苷 (EC90，_) 2’-C-甲基腺苷 (EC90，⑽） BVDVncp >22 0.5 1.2 BVDVcp >100 2 1.5 RSV >100 >100 >100 HIVa >100 ND ND HBV >10 >10 ND 冠狀病毒229E >100 ND ND ND =未測得。 92848 106- 1333956 表6:細胞毒性研究 細胞系 (2'R)-2’-脫氧-2·-氣基-2'-C-甲基 胞p密淀核嘗 CC5〇 > μΜ 2'-0甲基胞嘧 淀核嘗CC5 〇 ’ μΜ 2’-C-甲基腺苷 CC5〇 > μΜ 無性繁殖系A >100 >100 37 Huh7 >100 >100 30 HepG2 75 >100 58 MDBK >100 >100 PBM >100 CEM >100 Vero >100 MRC-5 >100 a使用MTS檢測所測得之結果。 表7 :粒線體毒性研究

化合物 mtDNA 合成(IC5。，/zM) 乳酸增加 (2’R)-2’_脫氧-2’-氟基-ΤΟ- 曱基胞 ρ密咬 核嘗 >25 無作用2 33_ 2’-C-甲基胞嘧啶核苷 >25 無作用g 33/iM

表8 : (2fR)-2’_脫氧-2’-氟基_2’-C-曱基胞嘧啶核甞在恒河猴中， 於33.3毫克/公斤下單一口服劑量後之初步PK參數 參數 單位 平均值土 SD c最大值 μΜ 9.6±2.7 τ最大值 小時 2± 1 AUC〇 -最後 44.2±22.2 T1/2 小時 3.9±0.1 生物利用率 F% 21±11 92848 -107- 1333956 表9.核:¾:類似物對於人類骨髓細胞之作用 化合物類似物） BFU-E CFU-GM ic50(靡） 2·-氟基-2'-C-甲基胞嘧啶核甞 98.2 93.9 2'-C-甲基胞嘧啶核甞 20.1 13.2 AZT 0.08 0.95 【圖式簡單說明】 圖1為複製子HCV RNA之劑量依存性降低之圖形描繪，以 使用分D-(2’R)-2，-脫氧-2，-氟基-2i-C-甲基胞嘧啶核苷之治療為基 _ 準。（A):病毒降低係與細胞rna含量（核蛋白體之降低 作比較’以獲得治療指數值。表示（2,r)_2’_脫氧_2'-氟基甲 基胞嘧啶核甞之劑量依存性投藥後96小時之有效濃度9〇%之 EC9Q，係被測得為5 μΜ。（B) : HCVRNA係在以25 /zM治療之 後’於劑量依存上顯著地降低，歷經7天。 圖2描繪雌性瑞士老鼠於各種劑量下之分D_(2，R)_2，_脫氧_2,-氟 基-2'-C-甲基胞嘧啶核苷毒性研究中之平均重量改變^腹 膜腔内注射係於第〇天至50天，給予3·3、10、33、1〇〇毫克/ φ 公斤。各服藥組群含有5隻老鼠，且在30天研究期間沒有老 鼠死亡。 圖3描繪分D-(2，R)-2，-脫氧-2·-氟基-2，-C-甲基胞嘧啶核苷在恒河 猴中之藥物動力學，其係給予口服之單一劑量（33.3毫克/公 斤）或靜脈内劑量之/5-D-(2'R)-2，-脫氧_2，-氟基-2'-C-甲基胞嘧啶核 -+Λ- 甘0 92848 -108-

Claims (1)

1333956 第093112913號專利申請案 _— 中文申請專利範圍替換本("年8月）^年^尸十、申請專利範圍： L_ „ .… y E:丨二: 厂〜 」L 一種下式（2·Λ)-2'-脫氧_2，·氟基_2，_c_甲基核甞（p D或 β-L)’或其藥學上可接受鹽： Base

R1。 其中該驗基為具下式之喊。定驗基；

X為0 ; R及R係獨立為Η、單磷酸鹽、二磷酸鹽、三磷酸鹽、 Η-膦酸鹽、G-Cio院基、Ci-Cio烧基續Si基、經（^-〇10燒 基取代之苯基磺醯基、經C1_C1()烷基取代之二苯基磺醯基 或經CVCh)院基取代之萘基續醯基；且 R3為H，而R4為NH2或OH。 2. 根據申請專利範圍第1項之（2，i〇-2'_脫氧-2，-氟基-2，-C-甲 基核苷’或其藥學上可接受鹽，其中R7為Η，且R1為單填 酸鹽、二構酸鹽或三碟酸鹽。 3. 根據申請專利範圍第1項之（2’Λ)-2，-脫氧-2，-氟基-2，-C-甲 基核苷，或其藥學上可接受鹽，其中R7為Η，且R1為二鱗 酸鹽或三磷酸鹽。 4. 根據申請專利範圍第1項之（2·/〇_2·-脫氧-2·-氟基-2，-C-曱 92848-990820.doc 1333956 基核芬’或其藥學上可接受鹽，其中R1為Η，且尺1為— 酸鹽。 ％ 5'根據申請專利範圍第1項之（2'7?)-2，-脫氧-2，-氟基-2·、Γ> L、甲 基核贫’或其藥學上可接受鹽，其中Ri及R1為Η。 6.根據申請專利範圍第！項之（2,幻_2,_脫氧_2，_氟基_2，<、甲 基核甞，或其藥學上可接受鹽，其具下式

8. 一種醫藥組合物，其含有如申請專利範圍第1項之核菇， 或其藥學上可接受鹽及其醫藥上可接受之載劑。 9. 根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該如申請專 利範圍第1項之核苷為如申請專利範圍第2項之核嘗。 1 〇·根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該如申請專 92848-990820.doc

1 .根據申請專利範圍第1項之（2，及)_2,_脫氧_2，-氟基_2，_c_甲 基核甞，或其藥學上可接受鹽，其具下式 1333956 利範圍第1項之核苷為如申請專利範圍第3項之核甞。 Π·根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該如申請專 利範圍第1項之核苷為如申請專利範圍第4項之核苷。 12. 根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該如申請專 利範圍第1項之核苷為如申請專利範圍第5項之核荅。 13. 根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該如申請專 利範圍第1項之核甞為如申請專利範圍第6項之核苷。 14. 根據申請專利範圍第8項之醫藥組合物，其中該如申請專 利範圍第1項之核铱為如申請專利範圍第7項之核苷。 15. 種製備如申請專利範圍第1項之核苷之方法，其包括以 具下式之化合物使嘧啶糖基化：

其中尺為匚广^烷基、醯基、苯甲醯基或甲烷磺醯基； 且Pg係選自C(0)-Cl-ClG烧基、C(〇)苯基、c(〇)二苯基、 C(o)萘基、CVCw烷基、c2-c6烯基、CH2苯基、CH2-二苯 基、CH2-茶基、CHaO-Ci-Cn)烧基、ch20-苯基、ch20_ 二苯基、CH20-茶基、SCVCVCw院基、S〇2_苯基、s〇2_ 二苯基、S〇2_莕基、廣·丁基二甲基矽烷基及農三丁基 二苯基矽烷基，或兩個Pg —起形成1，3_(1，1，3,3_四異丙基 二亞矽氧烷基）。 16. —種製備如申請專利範圍第丨項之核甞之方法，其包括使 92848-990820.doc 1333956 具下式之化合物選擇性去保護：

Pg〇 F 鹼基 PgO 其中鹼基如申請專利範圍第1項所定義，且 Pg係選自C(〇)-Ci-C1()烷基、C(〇)苯基、C(〇)二苯基、 c(〇)莕基、eve〗。烷基、C2-C6烯基、ch2苯基、CH2-二苯 基、CH2-茶基、CHsO-CVC,。烷基、ch20-苯基、CH20-二苯基、CH2〇-萘基、SOrCVCio烷基、s〇2-苯基、S〇2-二苯基、S〇2_莕基、茗三-丁基二曱基矽烷基及|三_ 丁基 二笨基矽烷基，或兩個Pg —起形成^^^^四異丙基 一亞碎氧烧基）。 I7· 一種微脂體組合物，其含有含如申請專利範圍第丨項之4 站之微脂體，及視情況存在之醫藥上可接受之載劑。 18. 根據申請專利範圍第17項之微脂體组合物，其中該如t 凊專利範圍第i項之核钻為 19. 根據申請專利範圍第17JS 專_例之核芬 請專利r阁之微脂體組合物，其中該如， a第1項之核苷為如申請專利範圍第7項之核菩 92848-990820.doc