TWI362941B - Methods for effecting regression of tumoer mass and size in a metastasized tumor - Google Patents

Description

1362941 九、發明說明： 相關申請案 第60/561,741號（申請曰 其全部内容以引用方式納 本發明主張美國臨時申請案 2004年4月12曰）之優先權 入本文中。 發明背景 【發明所屬之技術領域】 本發明-般是有關於藉由投予有效抑制血管生成的量 之凝血酶抑制劑而抑制患者的血管生成之方法，以及有關 二藉由單獨投予凝血酶抑制劑或共同投予凝血酶抑制劑及 抗癌或細胞毒性作用劑而治療導源於不受控制的細胞増生 之疾病狀態。具體而言，用於本發明方法中的凝血酶抑制 劑是水經素。

【先前技術】 循環系統在營養、蛋白質、荷爾蒙及其他維持生命所 必需的重要分子之運送中’扮演重要的角色。形成錯綜複 雜的路徑網路之血管’代表循環系統之不可或缺的成份。 在哺乳動物中，血管腔室的内表面是由内皮細胞所組成。 這些内皮細胞提供腔室表面平滑及低阻抗的性質。對於血 液及血液組成份的自由流動及運送而言是關鍵的，血管的 平滑及非黏著性内表面’可增加流體流動的容易性.。如果 沒有平滑的内表面，血管將由於形成栓子或在内壁上的 5 1362941 黏端”位置形成其他阻礙而變得阻塞。完全或甚至部份 的的血管阻礙，將引起血流的限制，因此而連累由血管服 務的活組織之存活力。因此，内皮細胞代表著血管的重要 結構成份，並也提供血管平滑的内表面。

在活體内血管的形成是為反應刺激而發生，係以特化 生長因子的形式而提供。這些生長因子誘發已存在於血管 中的細胞之有絲分裂。新的細胞可取代鄰近受損的細胞， 或是新的細胞可自我安排，以形成新的血管。從内皮細胞 長成血管的過程，稱為“血管生成”，在所有的特徵中， 血官生成尤其導致組織的血管化。 凝血酶可能在腫瘤移轉及血管生成中扮演重要的角 色。一般而言，對於腫瘤生長到大於數公釐的直徑，血管 内皮就必須增生並形成泡壁，以提供在腫瘤團塊内部的細 胞之循環及營養。凝血酶很可能藉由其誘發内皮細胞增生 的能力而使這個過程變成可能。此外，凝▲酶也已顯示可 破壞對於避免細胞及血漿因子離開或進入微血管是重要之 正常的細胞間内皮細胞接觸。目前凝血酶可藉由破壞這些 接觸而增加移轉的假設’是由顯示降低的抗·凝血酶ιπ水 平（其可從血漿中移除凝血酶及其他蛋白酶）及增加的腫 瘤移轉間之關連性的研究而支持。 單一細胞，該單一細胞已以使其脫離 癌細胞係衍生 限制正常細胞繁殖的生化控制之方式而突變。—旦細胞盔 法對生長抑制劑正常反應的話’它就會開始增生。然而， 當生長的腫瘤達到特定直徑的話，簡單的擴散進及出腫瘤 6 1J62941 .且織已不再能滿足供應氧氣及養分以及移除廢棄物。進— ^的生長係取決於金管生成（也就是，新血管從既存的血 官床中形成），以及小腫瘤必須製造可刺激血管生長的因 子。因此’血管生長的抑制’接著會導致惡性細胞及瘤新 生細胞的增生之減少。

c細ey等人，⑽15:1341 ( 1978 )已假設高親和力 的細胞表面凝金酶受體可能涉及腫瘤移轉及血管生成。例 士研九已顯示，凝血酶受體可作為組織型血纖維蛋白溶 酶原激活劑（一種從移轉的腫瘤細胞所分泌的分子）之結 。。卩位。此外，其他的研究也顯示組織型血纖維蛋白溶酶 $激活劑涉及移轉及Α管生成。因此，許多血纖維蛋白溶 酶原激活劑的作用，可經由其與細胞表面的凝血酶受體之 父互作用而調節。Carney等人因此提出了凝血酶受體的刺 激可用於促進腫瘤移轉，而受體的抑制將減少移轉的活 性。 血管生成已變成是促進了解組織如何生長的核心議 題。如上所述，内皮細胞的增生不僅是希望的，而且對於 進订許多生理過程也是必要的，例如，組織及器官在胚胎 中的形成。然而，在其他内文中，血管生成可能對於生物 體的整體健康是有害的。例如，血管生成可藉由使腫瘤血 管化，而使得腫瘤生長及移轉是可能的，藉此可提供腫瘤 維持腫瘤生長所必需的血液及養分，以及提供腫瘤細胞可 遷移至身體遠端部份的途徑（F〇ikman，以心46(2): 467-4 73 ( 1986) ) ^接著，無疑地，血管生成的預防及減 7 1362941 乂可此疋療部份症狀及疾病之所需目標4針對化合物 測试其可抑制或減少血管生成的能力。血管内皮生長因子 ( 種可選擇性誘發血管内皮細胞有絲分裂的蛋 白貝）之抑制劑已被研究。例如，#人的美國專利 第6,284,75 1號，說明利用蛋白質激酶c的石異構酶之抑 制d以對柷血官内皮生長因子的作用。也已有報導指出 才Γ生素（例如，米諾環素）可抑制血管生成。有些研究人 員已報導私出’在投予米諾環素併用放射性或化學治療之 後’腫瘤生長的抑制以及移轉的腫瘤數目之減少。參見， τ讓w 等人，cwer 細· 51(2):672-675 (i99i)，以 及 icher CWv 細 52(23) : 67〇2·67〇4( 1992)。 =人的美國專Μ 5,843,925號，制在投予特定去氧四 %素之後血管生成的抑制。然而，許多這些抑制血管生成 的化合物僅在活體外測試其抗增生的活性。 仍有需要鑑定可作為血管生成抑制劑的其他化 合物》 【發明内容】 發明概述 本·is明乂供治療由不相要及又為批在|丨从上μ 欣 个心要及不爻控制的血管生成而調 郎的疾病及程_之_方、，土 η / 去及組成物，係將包括凝血酶抑制劑 的組成物，以足夠抑制&您丄丄 〜〜 疋列抑制血官生成的劑量，投予具有不想要 吐官生成之患者。在—㈣U t > 疾病有關1別地，本發明提供—種治療患者的血管生 8 成依賴性癌症之 ^ ^ 万法°本發明是特別有效於治療或抑制腫 瘤的生長。例如 ^ 將脫硫水經素（desulphatohirudin )投 予具有前血管化炉絲 移轉腫瘤的人類或動物，可避免這些腫瘤 的生長及擴展。 本發明提供_、，A i 1 ^ 、Μ療由不心要及不受控制的血管生成而調 ;、病及過程之方法及組成物，係將包括水經素的組成 、足夠抑制血管生成的劑量，投予具有不想要的血管 成之心者。特別地，本發明提供-種治療患者的血管生 、、賴性癌症以及治癒患者的血管生成依賴性癌症之方 法。在-具體實例中，血管生成是細胞增生疾病有關。 Μ本發明提供治療由不想要及不受控制的血管生成而調 々的疾病及過&之方法及組成物’係將包括脫硫水經素的 ，，且，物，以足夠抑制血管生成的劑量投予具有不想要的 :官生成之患者。特別&，本發明提供一種治療患者的血 官生成依賴性m及治癒患者的血管生絲賴性癌症之 在具體實例中，血管生成是細胞增生疾病有關。 本發明提供治療癌症之方法及組成物，係將包括共同 投予的脫硫水蛭素及細胞毒性或抗癌作用劑的組成物投予 患者。本發明是特別有效於治療或抑制腫瘤的生長。例如， 將脫硫水蛭素投予具有前血管化移轉腫瘤的人類或動物， 可避免這些腫瘤的生長及擴展。 本發明的另一形態係提供治療癌症之方法及組成物， 係將包括共同投予的脫硫水蛭素及細胞毒性或抗癌作用劑 的組成物投予患者。 1362941 * 本發明更提供醫藥調配物以治療需要抗血管生成或抗 癌治療的患者’其中調配物是由醫藥上可接受的溶劑、醫 藥上可接受的載劑及脫硫水蛭素，以有效於抑制血管生成 的量而組成。溶劑可以是水溶性或非水溶性的溶劑，以及 '也可以是有機或無機的溶劑。溶劑可包裝在分離的容器 中，並可在投予之前加到脫硫水蛭素❶脫硫水蛭素可調配 成凍晶的乾燥粉末。在另一具體實例中，調配物更包括磷 酸鉀。在另一具體實例中’調配物更包括糖類。在另一具 9體實例中，調配物更包括二價或三價的金屬離子。 【實施方式】 發明詳述

本發明提供治療由不想要及不受控制的血管生成而調 節的疾病及過程之方法及組成物’係將包括凝血酶抑制劑 的醫藥組成物，以足夠抑制血管生成的劑量，投予具有 想要的血管生成之患者。在一具體實例中，血管生成是細 胞增生疾病有關。特別地，本發明提供一種治療患者的血 管生成依賴性癌症之m包括將脫硫水料^戴西水 蛭素（desirudin )單獨投予或作為化學治療的佐劑。 名詞“細胞增生疾病’，#望是指特徵為不想要的細胞 增殖之任何病症。包括的病症例如瘤新生、癌症及腫瘤。 “細胞增生疾病”也包括非癌性病症，例如，良性里 瘤、良性前列腺增殖、牛皮癖以及發生在表皮層内料他 細胞生長。 他 1362941 “癌症”是指血管生成依賴性的癌症及腫瘤，也就是， 需要它們的生長（體積及/或質量的擴展）（以血液供應它 們的血管數目及密度之增加）的腫瘤。 此處所使用的名詞“治療”是指減少症狀的嚴重性及/ 或頻率、消除症狀及/或根本原因、預防症狀的發生及/或 它們的根本原因、以及改善或矯正傷害。因此，例如“治 療患者涉及到藉由抑制或引起症狀或疾病的退化，而在 易受影響的個體中預防特別的症狀或不利的生理事件以及 •治療臨床症候的個體1此，例如，本發明“治療，，需要 抗血官生成治療的患者，包括在臨床症候的個體中預防對 於抗血官生成治療有反應的病症、疾病或症狀，以及治療 對於抗血官生成治療有反應的病症、疾病或症狀。 退化是指減少減少腫瘤質量及大小。 此處所使用的“患者”是指哺乳動物，較佳是人類， 可文益於本發明醫藥調配物及方法的個體。對於可受益於 •本發明所說明的醫藥調配物及方法之哺乳動物類型，並沒 有限制。 ' 此處所使用的名詞“有效量，，或“治療有效量，，的作 用劑’“是指足夠量的作用劑，以提供所要的治療效果。此 外，有效抑制企管生成量”的作用劑是足夠量的作用 劑，以至少部份地抑制血管生成。當然，不想要的效果（例 如’副作用），有時會伴隨著所要的治療效果而出現；因 此，醫師會平衡潛在的利益與潛在的危險，以決定什麼是 適合的“有效量，，。如同以下將指出的，所需的確實量將 1362941 % .在個體之間改變，取決於個體的物種、年齡及一般症狀、 投予模式等等。因此，不可能指明確實的“有效量，，。然 而丄在任何個別例子中，適當的“有效量，，或“有效抑制 血管生成量”可由—般熟悉於此技藝者僅利用例行的實驗 而決定。 I ·醫藥調配物： 本發明的一種形態係提供治療需要抗血管生成治療的 患^之醫藥調配物，其包括有效於抑制血管生成的量的凝 •血酶抑制劑以及醫藥上可接受的載劑。 A.活性作用劑： 過去幾年’編碼水蛭素變異物的cDNAs及合成基因， 已被選殖並在微生物宿主中表現，例如但並不限於，大腸 桿菌及酵母菌。在酵母菌（釀酒酵母（ arev⑷以），品系τγ 1456 )中的表現產物，於Tyf63處 缺少硫酸單酯基一並且因此命名為“脫硫水蛭素，，_它們 經證明顯示出與天然、硫酸化的水蛭素大約相同的生物活 性。脫硫水蛭素變異物HV丨已在大腸桿菌（歐洲專利第 15 8564及168342號）及釀酒酵母（歐洲專利第168342、 200655、225633、252854 及 341215 號）中表現。同樣地， 脫硫水經素HV2也已在大腸桿菌（歐洲專利第158564號） 及釀酒酵母（歐洲專利第200655號，PCT申請案86/01224 號）令表現’以及脫-(Val)2-脫硫水蛭素已在大腸桿菌（歐 洲專利第158986號）中表現。 根據本發明，名詞“水蛭素”希望包括分別說明於文 12 1362941 加以 技藝中熟知的方法而製備（例如，位置專—突變 選殖’並且在微生物宿主中表現（㈣，大腸桿菌及釀酒 酵母）。 可選擇地，可用於本發明的水蛭素是水蛭素片段（也 就是，具有至少最後8個羧基端胺基酸的水蛭素，例如， 由水蛭素中已知序列的最後羧基端胺基酸所組成片段）、 水虫至素的生物合成類似物（例如’具有1〇到12個胺基酸 的類似物，部份胺基酸是市售的）、蛋白質NAPc2及以低 分子里胜狀為基礎的凝血酿抑制劑。 較佳的凝血酶抑制劑包括以低分子量胜肽為基礎的凝 血酶抑制劑。名詞“以低分子量胜肽為基礎的凝血酶抑制 劑”將可由在此技藝中之人士所完全了解，包括具有丨到 4個胜肽連結及/或具有分子量低於1〇〇〇的凝血酶抑制劑， 並且包括 5兒明於 Claesson 在 Blood Coagul. Fibrin.( 1994)，

5 · 4 1 1的回顧論文之凝血酶抑制劑，以及揭露於美國專利 第4,346,〇78號；國際專利申請案w〇 93/1 1 152、WO 95/23609、W0 95/35309、W0 96/25426、W0 94/29336、 WO 93/1 8060 及 W0 95/01 168 ;以及歐洲專利第.648 780、 468 231、559 046、641 779、1 85 390、526 877、542 525、 195 212、362 002、3(54 344、530 167、293 881 ' 686 642 ' 669 317及601 459之凝血酶抑制劑。

較佳之以低分子量胜肽為基礎的凝血酶抑制劑，包括 已知合稱為“凝血酶原抑制劑（gatrans)，，者。可提及的 特定凝血酶原抑制劑包括HOoc — CH2- (R)Cha-Pic-Nag-H 17 1362941 石更脂酸、蘋果酸、洒石醅、•墙，^ ^ /S石馱抗壞血酸及檸檬酸。然而，因 為用於本發明的化合物在多胺基酸殘基中也包含游離的叛 基（緩基可提供完整的胜肽酸的特性），因此，它們也可 以是與無機或有機驗的鹽之形式，例如，納、奸、舞或錢 鹽，或衍生自氨的敍鹽或藥理學上可接受的含有機氮驗。 然而，因為它們在相同時間包含游離鍵基及游離胺基，因 此，它們也可以是内鹽的形式。藥理學上可接受的鹽是較 佳的。“醫藥上可接受的鹽”是保留特定化合物的游離酸 及驗之生物有效性之鹽，並且非斗机々甘a 五且非生物或其他所不想要的 鹽° 在開發含有水蛭素的劑型之問題係水蛭素是它在水溶 液中及粉末形式之差的穩定性。當水虫至素藉由層析方法分 析時（例如，反向-高效能液相層析（Rp_HpLc)、m〇n 方法或PROPAX方法）’可觀察到差的穩定性。 RP-HPLC 方法··使用 Tipu ^ A ^ 使用 L]Chr〇CART 125-4 管柱（Merck

LiChrospher 100 RP-ig « ,, \ ^ 8 。溶劑Λ是0.5%醋酸銨於 乙腈/水中（10 : 9〇)(體藉.骑拉、 、體積.體積）；溶劑Β是〇 5%醋 酸銨於乙腈/水中（25 : 75)。沖β卢。 ； 斤知:疋在45 c，利用0.5毫 升/分鐘的流速而進行。-^ ^ β 丁 —几沖提是一種線性梯度，在時間 0時以23%的溶劑Β開妒，廿产\ 闻始，並在24分鐘後達到46%的溶 劑Β。在70%的溶劑β中9八# β ^ 中2分釦之後，將管柱在23%的 溶劑Β中平衡7分鐘。 MONO Q方法：水歧喜 — 至素的穩疋性可藉由FPLC (細顆 粒蛋白質液相層析），利用M_ γ &狂I i υ // in顆粒大 19 1362941

小’ 5.0x50公釐，購自Pharmacia)而分析。該方法是由 Ciba-Geigy，Basel所開發。溶劑A是50 mM的甲酸敍於 水中（pH 4_5)，以及溶劑B是50 mM的曱酸銨於水中（pH 3·5 )，沖提是在室溫（22°C )，利用1.4毫升/分鐘的流速 而進行。對於前5分鐘的二元沖提是20% B的固定流動， 然後是10分鐘從20%B至75%B的線性梯度，以及2分 鐘的100% B ’之後’將管柱在開始狀態的20% B平衡2 分鐘。 PROPAC方法：也可使用最近發表用於水虫至素分析的 方法（Tuong A.等人，“重組水經素的去醯胺化形式之特 徵” ，Biochemistry 31 : 8291-8299 ( 1992))。在這個方 法中，係使用Dionex之propac pAl陰離子交換管柱（直 徑 250x4 公釐）。溶劑 a 是 2〇 mM 的 Tds-HCl ( PH 7.0 )， 以及溶劑B是0.5 Μ的氯化鈉於A中。在28%定組成沖提 5分鐘，然後以1.3毫升/分鐘的流速，在6〇分鐘内進行從 28%B至54%B的線性梯度。 磷酸鉀可用於增加水蛭素的穩定性（美國專利第 6,436,901 B1號卜因此’本發明的―個具體實例提供冷 ;東乾燥的醫藥組成物’纟包括水絰素 '鱗酸卸及糖類。本 發明之冷；東乾無的組成物可获 乂初J稭由形成成分的水溶液，然後 將其以傳統方式冷凍乾燥而製造。 墙酸钟較佳是構酸氫二鉀。它可以〇1 i 〇5的莫耳 /辰度“疋0.1 i 〇.3的莫耳濃度，而在冷凍乾燥前使 用於溶液中。 20 適合的播類包 、 蔗糖、山梨糖醇、但並不限於’甘露糖醇、海藻糖、 較佳的糖類是果糖、葡萄糖' 麥芽糖、乳糖及葡聚糖。 之糖量，可以β路糖醇及海蒸糖。在冷凌乾燥前的溶液中 的遭度，較戶Γ例如用以製造從5至㈣（重量/體積） 冷“1:: 5至2〇%(重量/體積）。 之PH可以是°從合液較佳疋等張的。冷凍乾燥前的溶液 至8。如果 ^10’較佳是從6至9,以及最佳是從㈠ 的溶液令，例如：舌1將#檬酸緩衝液加到冷凍乾燥前 以是從〇 !至藉由加入檸檬酸。檸檬酸的莫耳濃度可 .至〇.5，較佳是從（M至〇.3。 在冷凌乾燥前的溶液中之曲 至5〇〇毫克/毫升h 素的》辰度，可以是從（Μ 笔升，較佳是從20至25〇毫克/毫升。 此外：：產：的產物是長時間穩定的’而不需要冷凌保存。 穩定的二在：於水之後’所得的溶液也是長時間 性佳。 …的穩定性是不如冷，東乾燥粉末的穩定 造椁溶解冷;東乾燥的產物所製得的溶液，可用於製 統二二了填的雙虹吸注射器或多次投予的系 合液虽然也可立即用於投予。 本發㈣的化合物可以是“醫藥上可接受的前藥物 n也就是’化合物可在生理條件下或藉由溶劑解反應 :轉換成特定化合物或該化合物之醫藥上可接受的鹽。i 樂物可利用在此技藝中已知的例行技術而鑑定。各種妒I 的前藥物是在此技藝中已知的。該等前藥物衍生物的二 21 1362941 可參見’例如’ a) 前藥物之設計”，H. Bundgaard編輯 (Elsevier ’ 1985 )及“酵素學方法”，第42卷，第3〇9· 3 96頁’ K_ Widder等人編輯（大學出版，1985) ;t)) “藥 物6又&十及開發之教科書” ，Krogsgaard-Larsen及H. Bundgaard編輯，第5章，“前藥物之設計及應用”，η Bundgaard，第 113-191 頁（1991) ; c) H.Bundgaard，

DwgPWv. hw.8: K38U992 ) ; d)H Bundgaard 等人， 丄 PAarm•如..77: 285 ( 1988 );以及 e) N.Kakeya 等人， 5m//· 32 : 692 ( 1984)，其每一篇都具體地 以引用方式納入本文中。 在調配物中之脫硫水蛭素的量較佳是相當低的、有效 的單一單位劑量，其可在一段期間内重複投予，例如，在 數曰、數週或數月的期間内。當然，在任何單位劑量中的 貫際量以及投予時程，將取決於許多因素而定，例如，患 者以及對於抑制血管生成的反應之症狀、疾病或病症之類 型。然而，脫硫水蛭素的量是可有效於抑制血管生成，但 不足以藉由直接的細胞毒性機轉而引起實質細胞死亡的 里，相對於因為抑制血管生成所造成的細胞死亡。在脫硫 水蛭素的内容令，戶斤需的量係至少部分地抑制新血管的： 較佳地，脫硫水蛭素之有效抑制血管生成的量，代表 從約〇·咖毫克至約·毫克的脫硫水經素/公斤體重的 患者’更佳是從約（).〇_毫克至約12G亳克的脫硫水虫至素 /公斤體重的患者’還要更佳是從約〇〇〇〇ι毫克至約b毫 22 1362941 克的脫硫水蛭素/公斤體重的患者，還要更佳是從約Ο 5毫 克至約15毫克的脫硫水蛭素/公斤體重的患者，以及最佳 是從約1毫克至約13毫克的脫硫水經素/公斤體重的患者。 在體重百分比方面’調配物較佳將包括從約〇 〇〇〇 1重量％ 至約1 0重量％的量之脫硫水經素，更佳是從約〇.〇〇 1重量 %至約1重量％，以及最佳是從約〇, 〇 1重量％至約〇 5重 量％。 Β.溶劑： 為了將化合物或其醫藥上可接受的鹽或活體内可切割 的前藥物，用於哺乳動物（包括人類）的治療性治療（包 括預防性治療），通常根據標準的醫藥實務而將其調配成 醫藥組成物。本發明的具體實例係提供醫藥組成物，其包 括脫硫水蛭素或脫硫水蛭素變異物，或其醫藥上可接受的 鹽或活體内可切割的前藥物，如之前有關醫藥上可接受的 溶劑或載劑之定義。“醫藥上可接受的，，溶劑或載劑是指 由非生物或其他不想要的物質所組成的醫藥載體，也就 是，該物質可伴隨脫硫水蛭素投予個體，而不會引起任何 不想要的生物作用’或以有害的方式與其中所包含的醫藥 調配物之任何其他成分交互作用。 適合的溶劑包括，但並不限於，醇類，例如，一元醇 例如，丨-丁醇、2-丁醇、3·甲基·i•丁醇、2_甲基_丨_丙醇 乙醇，以及多元醇，例如，聚乙二醇；乙醚；甲酸乙酯 乙酸乙酯；乙酸甲酯；乙酸異丁酯；乙酸異丙酯；曱基乙 基酮’二曱基乙醢胺（DMA ) ; ι，ΐ-二甲氧基曱燒；22 23 1362941 二曱氧基丙烷；二甲基亞碾（dmso )等等。溶劑可以是 有機溶液或無機溶劑。此外’溶劑也可以是水溶性戍非水 溶性的。如同一般熟悉於此技藝者將易於理解者，溶劑的 選擇將取決於所要的溶解度、脫硫水蛭素的本質以及所要 的釋放特性而定。 存在於調配物中的溶劑的量’將根據腫瘤類型（硬塊 或軟性）、脫硫水蛭素的溶解度、所選擇的溶劑所要的調 配物形式（例如，溶液、懸浮液等）而改變。—般熟系於 此技藝者可例行地考量該等因素’以決定在醫藥調配物中 之溶劑的適合量。因此’包含在醫藥調配物中之溶劑的量， 可由在此技藝中之人士無須過度實驗即可建立。在一具體 貫例中，包含在調配物中之溶劑的量，是從約〇 〇 1體積％ 至約50體積％ (體積/體積）的調配物。 在一具體實例中，將脫硫水蛭素（視需要併用溶劑） 加到載劑中，也就是溶液，例如但並不限於，氯化鈉溶液 (例如，生理食鹽水）、葡萄糖溶液、乳酸林格氏（Ringer，s) 溶液、水或其混合物》載劑可包括賦形劑及其他添加物， 例如，稀釋劑、清潔劑、色劑、溼潤及乳化劑、pH緩衝劑、 防腐劑"。脫硫水蛭素、溶劑以及任何其他的成份，都 可加到載劑並且混合。 C ·調配物： 本發明的醫藥調配物並不限於所使用的特定形式。本 發明之較佳傳遞形式的非限定列舉，包括溶液、懸浮液、 分散液、乳液以及控制釋放調配物（例如，微球體）^對 24 1362941 於全身性的投h溶液及懸浮液是較佳的。對於局部的投 予，任何的傳遞形式（例如，溶液、懸浮液、分散液、乳 液或微球體）都可使用。 -般而言，醫藥調配物可包括一種或多種的其他成份。 其他成份包括’例士。，抗微生物劑 ' 緩衝液、抗氧化 劑、張力調整劑以及清潔劑。抗微生物劑是用於阻斷微生 ，的^長’特別是在多劑量的調配物巾（也就是，用於多 =劑罝小瓶的調配物）。適合的抗微生物劑包括硝酸苯采、 爪柳水、氣化笨銨松寧、苯扎氣銨、酚、曱、# ^ 甘 听、氣丁醇及

且。物。緩衝液主要是用於穩定溶液，以對抗導源於調 -己物=改變所造成可能的化學降解作用。適合的緩衝液 包括檸檬酸鹽、醋酸鹽及磷酸鹽。抗氧化劑是用於保存， 因為許多藥物易受經由氧化作用的降解而影響。抗氧=劑 的例子包括亞硫酸氫鈉、丙酮亞硫酸氫鈉、甲醛鈉 '次碚 西夂鹽、硫脲、抗壞血酸、乙二胺四乙酸的鈉鹽，以及儲存 在惰性氣體中（例如’ t氣）。張力調整劑是用於控制張 力’以確保所得的調配物不是過度低張或高張，才目較於生、 理狀態。張力作用劑的例子包括電解質（例如，氣化鈉） 以及單糖或雙糖（例如’葡萄糖用於單糖）。清潔劑的例 2包括，例如，陰離子性清潔劑；非離子性清潔劑，例如， 聚氧乙基化的山梨聚糖（可在ICI化學公司的“TWeentm” ，名稱下購得）；〇^梨聚糖醋；聚山梨酸醋；聚氧乙烯趟 ^列如’可在聯合碳化物公司的“™Τ0ΝΤΜ”之名稱下講 侍，中郡，密西根州）；陽離子性及兩性離子清潔劑；以 25 1362941 及其組合物。 非活性作用劑的其他成份的量，將根據所選擇的溶劑、 所要的調配物形式以及其他因素而改變。一 汽 a 1 奴熟悉於此技 體積％的總調 1可例行地考量該等因素。^ ’任何特定的其他成份 的量，可由在此技藝中之人士無須過度實驗即可建立。通 承，任何該等成份的量，較佳是不超過J 〇 配物。 本發明的組成物可以是適合於口服使用的形式（例如， 鍵劑、菱形鍵、硬或軟勝囊、水溶性或油性懸浮液、乳液、 可分散的粉末或顆粒、糖漿或萬能藥）；適合於局部使用 的形式（例如，乳霜、油音 好皦七 ，由貧、凝膠或水溶性或油性溶液或 懸洋液）；適合於吸入投予的彳 杈予的形式（例如，細微分割的粉 末或液態氣溶膠）；適合於吹 、《耵人氣投予的形式（例如，細微 分割的粉末）；或適合於北 、Q π非腸月道投予的形式（例如，無 菌水溶性或油性溶液以用 Λ用於靜脈内、皮下或肌肉内給藥， 或栓劑以用於直腸給筚、 ’ 樂）例如，希望用於口服使用的組 成物可包含，例如，—鞴 種次夕種色劑、甘味劑、香味劑及/ 或防腐劑。 用於錠劑調配物夕4L # 的醬樂上可接受的賦形劑包 括’例如，惰性稀釋劑 ^ 幻例如，乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或 碳酸鈣；粒化劑及崩散魯 ,., 切’例如’玉米澱粉或藻酸；黏結 劑，例如，激粉；淵、來 π冽，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑 石，防腐劑’例如，料〜 t -¾基苯甲酸乙酯或對-羥基苯甲酸

丙酯；以及抗氧化劑，彻上 一 么土本T 】如，抗壞血酸。錠劑調配物可以 26 1362941 是未包膜或包膜的，以修飾它們的崩散性以及後續活性成 份在胃腸道内的吸收’或改善它們的穩定性及/或外觀，在 任一例子中，都可使用傳統的包膜劑以及在此技藝中熟知 的方法。 用於口服使用的組成物可以是硬明膠膠囊的形式，其 中活性成份係混合惰性固體稀釋劑（例如，碳酸鈣、磷酸 鈣或而嶺土），或是軟明膠膠囊的形式，其中活性成份係 混合水或油（例如，花生油、液態石蠟或橄欖油）。 水溶性懸浮液一般包含細微粉末形式的活性成份，併 用一種或多種的懸浮劑，例如，m甲基纖維素納、甲基纖 雉素、搜丙基甲基纖維素、藻酸納、聚乙賴洛貌綱、特 拉加康斯膠及阿拉伯膠；分散劑或溼潤劑，例如，卵磷脂 ,烯化氧與脂肪酸的縮合產物（例如，硬脂酸聚氧乙稀 酯）、或乙稀化氧與長鏈脂肪醇的縮合產物（例如，十七 ::烯氧十六烧醇）、或乙稀化氧與衍生自脂肪酸及己糖 、部份醋之縮合產物（例如，單油酸聚氧乙稀山梨糖醇 ^ ^城氧與衍生自㈣酸及己糖料的部份醋之 字^例如’單油酸聚乙稀山梨糖醇s旨）。水溶性懸 /之可包含-種或多種的防腐劑（例如 ::或Γ基苯甲_)、抗氧化劑(例如二 色1香味劑及/或甘味劑(例如，薦糖'糖精或阿 。 油性懸浮液可藉由將活性成份懸浮於） =油、橄欖油、芝麻油或椰子油）或礦物油心如液 心幻中而調配。油性懸浮液也可包含增稍劑，例如， 27 1362941 蜜蝶、硬錢或錄醇。可加人以上列舉的甘味劑及香味劑， 以提供使人愉快的口服製劑。這些組成物可藉由加入抗氧 化劑（例如，抗壞血酸）而保存β 適合於藉由加入水而製備水溶性懸浮液之可分散的粉 末及顆粒’ -般包含活性成份以及分散劑或涯潤劑、懸浮 劑以及一種或多種的防腐劑。商Α ^ H 週σ的分散劑或溼潤劑及懸 浮劑已如上述所例示。也可存在其他的賦形劑，例如，甘 味劑、香味劑及色劑。 本發明的醫藥組成物也可县 、 也J以疋油-於-水乳液的形式。 油相可以是植物油（例如撤 撖欖油或花生油）或礦物油（例 如，液態石纖）或這些任何的混合物。適合的乳化劑可以 然存在的膠（例如，阿拉伯膠或特拉加康斯 勝卜天然存在的鱗脂（例如，黃豆 '"脂）、衍生自 或部份醋（例如，單油酸山梨聚糖 -日）及该〇份醋與乙烯化氧的縮合產物（例如，單油酸 聚氧乙烯山梨聚糖酯）。乳 礼液也可包含甘味劑、香味劑及 防腐劑。 个久 糖衆及萬能藥可與甘味劑一 一 不d 起调配（例如，甘油、丙 二醇、山梨糖醇、阿斯巴甜或嚴糖），並 劑、防腐齊卜香味劑及/或色劑。 ^鎮痛 醫藥組成物也可以a益鈷叮a ^ ^ .. ^ ，’、卤可注射的水溶性或油性縣浮 液之形式，其可根據已知 〜、汙 J乃沄，利用如上所述 — 多種適合的分散劑或溼潤劑 種或 的製劑也可以是在蛊毒性田 ’主射 疋U生月腸道可接受的稀釋劑或溶劑中 28 1362941 ^菌可注射的溶液或懸浮液，例如，在ΐ 3·丁二醇中之 配物可藉由將活性成份與適合的非刺激性賦形 J此δ而製備，該賦 時是液#斗㈣㈣在υ相體，但在直腸溫度 的賦因此將在直腸令融化以釋放出藥物。適合 的賦形劑包括，例如，可可油及聚乙二醇。 :部調配物(例如’乳霜、油膏 '凝膠以及水溶性或 冷液或懸子液）一般可藉由將活性成份與傳統、局部 可接党的載劑或稀釋劑，利用在 調配而獲得。 ^中熟知的傳統方法 :由吹、入投予的組成物可以是細微分割的粉末之形 I勺括DD :平句直“列如3°微米或更小的顆粒，粉末本 = 活性成份，或以-種或多種生理上可接受的 二(例如，乳糖）所稀釋之活性成份。接著將用於吹人 的如末方便地保留在膠囊中，其包含，例如，！至$ 的活性成份以與加速吸八裝置-起使用，例如，用於吹入 已知的作用劑色甘醆納。 藉由吸入投予的組成物可以是安排用以分散活性成份 之傳統加壓的氣溶膠形式’為包含細微分割的固體或液體 小滴之氣溶膠。可使用傳統的氣溶膠推進劑例如 性氟化的碳氫化合物或碳氫化合物，以及氣溶膠裝 統地安排，以分散計量的活性成份。 對於調配物的進一步資訊’參見综合醫藥化學（Corw· Hansch;編輯部主席；Pergam〇n出版，i99〇)第5卷中： 29 1362941 第25.2早’其具體地以引用方式納入本文中。 本發明併用一種或多種賦形劑以製造單一劑型之化合 物的置’將根據被治療的宿主以及特定的投予途徑而必要 地改逢。例如，希望用於口服投予人類的調配物可包含， 攸〇.5耄克至2克的脫硫水經素，並與適當及方便 里的賦形劑混合’該賦形劑可從約5重量％改變至98重 里/6的總組成物。劑量單位劑型一般將包含約丨毫克至約

50〇毫克的活性成份。對於投予途徑及劑量療程的進一步 資訊參見綜合醫藥化學（Corwin Hansch ;編輯部主席；

Pergam〇n出版，1990 )第5卷中的第25.3章，其具體地 以引用方式納入本文中。 本發明的醫藥調配物可以是持續釋放的調配物。此處 所使用白勺；g @才寺續釋放，，是指可在一段延長的期間提供 藥物的逐漸釋放之藥物調配物，較佳（但不必然）會在一 段延長的期間，於所要的部位導致實質上一致的藥物水 平也就疋，調配物將在一段延長的期間釋放出脫硫水蛭 素，相較於立即釋放或非持續釋放的調配物而言。例如， 在具體貝例令，本發明的醫藥調配物可在約4小時至約 24小時的期間釋放出脫硫水虫至素。

配物一般包括一 種或多種成份，其設計 用以減緩或控制脫硫水經素在—段期間的釋放。本發明並 不限於用於達成持續釋放的特定化合物，只要該成份或該 等成份是醫藥上可接受的即可。較佳的持續釋放成份包括 多at類、多si的鹽類、多酿的鄉诂μ _ _ _ ，,Λ. 30 1362941 維素、凝膠'二氧化發、微 捭鋒釋, 其組合物。特別較佳地， 持，-只釋放的成伤疋多醣類。通入夕 、I〇的多錄類之例子包括，俱 並不限於，幾丁質（聚_N 匕括 ^ ,, 醖基-D-葡萄糖胺）、幾丁聚 酶（去乙醯化的幾丁質）月坌 ^ ，、··。物。這些載劑的衍生物 也涵盍在内’包括，例如，拉 _ 藉由加入或移除糖分子所形成 的何生物（也就是，藉由烊 曰、 由增加或減少载劑的重量平均分手 量）。在一具體實例中，載劑呈 戰劑，、有约500道耳吞至約1〇〇,〇〇〇 道耳吞的重量平均分子量，赖枯β 丁里較佳疋約1〇,〇〇〇道耳吞至約 60,000道耳吞的重量平均分子量。 提供持續釋放的成份可共價鍵結到脫硫水虫至素，藉此 提供持續釋放的連結物。例如，可將幾丁f共價結合到脫 硫水經素。用於製造這些連結物的方法是在此技藝中之人 士所熟知的，並且詳細說明於適當的内文及文獻中。 提供持續釋放的成份的量，將取決於許多因素，例如， 凋配物是否希望包含單一劑量或多劑量，以及所得的調配 物之可注射性（例如，黏度）。此外，成份的量也應在醫 藥調配物將投予的標的區域之環境方面加以考慮。例如， 希望低密度的器官（例如’前列腺、腦及膀胱）接受低密 度的調配物，而緻密組織（例如，硬塊腫瘤及乳房腫瘤） 則接受高黏度的醫藥調配物。一般熟悉於此技藝者可例行 地考量這些及其他因素，以提供持續釋放的調配物。 一般而言，持續釋放成份在調配物中的總量’較佳是 在約0·0 1 %重量/體積至約50 %重量/體積的總調配物之 間。特別較佳地，生物可相容的載劑是以從約0.5 %重量/ 31 1362941 體積至約30%重量/體積的量而存在。 工1·治療方法： 本發明也提供在需要的患者中抑制血管生成 有效抑制血管生成量的脫硫水坦素投予患者4 疋用於治療患有可藉由至少部份抑制 的病症、疾病或症狀之患者。一般而* :而/口療 X . „ 。患有瘤新生疾症 (也就疋，細胞增生疾病）的患者， 、 ΛΛ ZU 可’ 了文盈於投予本發明

的組成物。一般而言，細胞增生 θ王疾病不僅包括肉瘤、癌、 淋巴瘤及惡性黑色素瘤，而且還包 ^丄 遏包括非癌性黑色素瘤及盆 他由快速分裂的細胞所引起之良性生長。 、 適用於本發明的細胞增生疾病之非限定的例子，包括 腎上腺皮質癌、膀胱癌 '骨癌、腦癌、乳癌、子宮頸癌、 結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、膽囊 癌、胃癌、頭頸癌、喉頭癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤骨 髓增生病症（例如’骨騎癌）、頸癌、非黑色素瘤皮膚癌、 卵巢癌 '前列腺癌、胰臟癌、直腸癌以及睪丸癌。特別適 合於本發明治療的疾病，包括選自由腦癌、膀胱癌、乳癌、 結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、頭頸癌、肝癌、肺癌、黑 色素瘤、前列腺癌及卵巢癌所組成的族群中之疾病。 此外，也包括在本發明範疇内的是共同投予脫硫水蛭 素以及抗癌藥或細胞毒性作用劑。該等作用劑適合地包 括，但並不限於，抗代謝物（例如，5_氟尿嘧啶、胺曱碟 呤、氟達拉濱）、抗微小管作用劑（例如，長春新鹼、長 春花鹼、紫杉烷類，例如，太平洋紫杉醇、杜西紫杉醇）' 32 1362941 烷基化作用劑（例如，環膦醯胺、苯丙胺酸氮芥、生物氯 乙基亞硝基脲、羥基脲）'鉑作用劑（例如，順鉑、卡鉑、 奥沙立鉑、JM-216、CI-973 ) '憩環類（例如，多柔比星、 尔紅黴素）、抗生素（例如，絲裂黴素、伊達比星、亞德 里亞黴素、道諾黴素）、拓普異構酶抑制劑（例如，依託 泊穿、普特赛辛）或任何其他的細胞毒性作用劑（雌莫司 汀磷酸鹽、潑尼莫司汀）。可預期的是用於結合各種抗 癌藥物的脫硫水蛭素，可對癌細胞引起明顯增強的細胞毒 性作用，因此可提供增加的治療效果。特別地，明顯增加 的生長抑制作用可利用較低濃度的抗癌藥物而獲得，相較 於單獨使用的藥物之治療療程。因此，有可能提供一種治 療，其中與抗癌藥物有關的不利副作用比起單獨以較大劑 里使用的抗癌藥物，是更為減少的。這些共同投予的抗癌 作用劑之可能的劑量範圍，是約〇.丨至2〇毫克/公斤/天。 名硐共同投予是指任何的投予途徑，其中將兩種 或^種作用劑（也就是，脫硫水蛭素及一種或多種的其他 抗癌或細胞毒性作用劑）投予到患者或個體。例如，作用 劑可以一起投予，或在彼此之前或之後投予。作用劑可藉 由不同途徑而投予，例如，一種作用劑可藉由靜脈内投予，s 而第二種作用劑暑抓鹵向、抵咖士： n D„ _

可直接跟隨在另一作用劑的投予之後， 丁甲，一種作用劑 或作用劑可插入地 33 給予’也就是，一種作用剜讦六 . 作用了在—個時間給予，然後在收 時間給予另—作用㉟，通常是在-週内。適合的共同 投予療程的例子，_硫核素從第Q 5i 7天投予之 後再投予細胞毒性作用劑。

、根據本發明’將本發明的治療組成物投予患者之適合 2 ’包括任何適合於將組成物傳遞至患者之活體内投予 途徑。較佳的投予途徑對於在此技藝中之人士將是顯而易 見^取/夬於要預防或治療的病症類型及/或標的細胞族群 几定車又佳的活體内投予方法包括，但並不限於，靜脈内 技予腹膜内才又予、肌肉内投予、節内投予、心臟内投予、 動脈内投予（例如，投予至頸動脈）、皮下投予、經 遞、導管内投予、關節内投予、室内投予、吸人（例如， 氣溶膠）、顱内、脊柱内、眼内、鼻内 口服、氣管、直 腸、局部、陰道、尿道、肺部投予' 導管注入以及直接注 射至組織。

非腸胃道的投予可以許多方式進行，但較佳地，使用 射器導管或類似裝置，用於達成此處所說明的調配物 之非腸胃道投予。調配物可全身性地注射，使得脫硫水蛭 素貝質上在整個完整的血管中移動。 此外’也可將調配物局部注射至標的位置，也就是， 注射至身體中希望抑制血管生成的特定部份。經由注射而 局部投予的優點是’它可限制或避免整個身體暴露至脫硫 水經素。必須注意的是，在本發明内文中，名詞“局部投 予 包括區域性的投予’例如，將調配物經由傳遞到供廯 34 1362941 該部份的血管’直接投予至身體的_部份。局部傳遞可以 是直接的，也就是，腫瘤内傳遞。局部傳遞也可以是幾乎 直接的’也就是，損傷内或腹膜内傳遞，也就是，至 足夠接近腫瘤的區使得脫硫水蛭素可顯示所要的藥理 活性。因A ’當需要局部傳遞時，醫藥調配物較佳是損傷 内、腫瘤内或腹膜内傳遞。 藉由此處所說明的醫藥調配物之局部傳遞，希望更高

濃度的脫硫水蛭素可俘囪尤栌从^A^ 侏留在裇的位置◎對於高濃度直接傳 遞至標的位置，有許客福jL· . ，汗夕優點。首先，由於脫硫水蛭素是被 限制在小範圍H，對於患者有較小的潛在毒性，因為 僅有最少的全身性暴露。其次，藥物的功效被改善，因為 標的位置是暴露在較高濃度的藥物。第三，相當快的傳遞 確保了藥物的溶解度，以及脫硫水蛭素在到達標的位置之 前的幾乎沒有或沒有降冑。“，該方法是相當非侵入性 的，廷對於無法切除的腫瘤（例如，腦腫瘤、肝腫瘤及前 列腺腫瘤）是理想的。 對於局部投予，較佳地，本發明的醫藥調配物是在電 腦斷層掃描（CT )、超音波或類似方法的協助下，而引導 至祆的區域，以確保正確的放置。一旦投予一開始的劑量， 則患者可立即或在一段時間之後給予其他劑量^ 一旦考慮 了病症、症狀或疾病的特性、患者的強度、調配物之預期 效果等，這槔的給藥時程是易於由一般熟悉於此技藝者所 決定。 备然’所投予的脫硫水蛭素的量，將取決於被治療的 35 個體、個體的體重、投予的方式以及開給處方的醫師之判 斷。然：，所投予的脫硫水蛭素的量，將是有效抑制血管 生成的量。較佳地，脫硫水蛭素是以從約〇〇〇〇丨毫克/公 斤至約200毫克/公斤（每公斤患者體重的藥物毫克幻的 量而投予，更佳是從約0.0001毫克/公斤至12〇毫克/公斤， 還要更佳是從約0.0001毫克/公斤至約15毫克/公斤，仍要 更佳是從約0.5毫克/公斤至15毫克/公斤，以及最佳是從

約1毫克/公斤至13毫克/公斤。根據患者的反應，可投予 這個範圍内的其他劑量。 對於脫硫水虫至素的治療或預防目的之劑量大小，將根 據病症的特性及嚴重性、動物或患者的年齡及性別、以及 投予的途徑，根據熟知的醫藥原理而自然改變。例如，該 :法可包括至少一種每小時投予、每日投予、每週投予或 母月投予一種或多種此處所說明的組成物。

在整個申請案中，各項專利是以號媽方式引用，以及 出版物是以作者及日期的方式引用。這些專利及出版物的 …P内今特此以引用方式納入本申請案中，卩便夠完整地 。兒明此技藝之狀態’如同在此技藝中之人士在此處所說明 及主張的本發明日所知道者。 上述說明僅應認為係解釋本發明的原理。此外，由於 許多修飾及改變對於在此技藝中之人士將可易於產生，因 此，並不希望將本發明限制在如上述之精確解釋及方法。 因此，所有適合的修飾及等同物都可訴諸為落入本發明如 後述申請專利範圍所定義之範疇。當用於本說明書及後述 36 1362941 的申6眚專利範圍時，女车‘‘勹紅, .. 7 又子包括（comprise、comprising) 3 lnC Ude、including、includes” 希望是具體指明所 提的特徵、整數、成份或夕漭之存在，但它們並無排除一 種或多種其他的特徵、整黎，成 γ驟或其知群之存在 或加入。 【圖式簡單說明】

【主要元件符號說明j #»*> 37 1362941 <110> <120> <130> <150> <151> <16〇> <170> <210> <211> <212> <213>. #<220> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> 序列表 峽谷製藥公司 游承德 用於控制血管生成及細胞增生的方法

M/44308 PCT 60/561,741 2004-04-12 19

Patentln 第 3.3 版 1 62

PRT 人工 合成的多胜肽 其他特徵 (27)..(62) a)在27、36及47的Xaa各自是LyS， 是 G]u-Tyr-Leu-Gln 在51的Xaa是His， 以及在62的Xaa <220> <221> <222> <223> *<220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> 其他特徵 ^27^..062)b)在27的Xaa是lle或Glu ’以及在36、47、51及62的Xaa是如a)之定義 其他特徵 ¢27)..(62) c) 在36的Xaa是lie或Glu ’以及在27、47、51及62的Xaa是如a)之定義 其他特徵 (27)..(62)d) 在47的Xaa是ne或Glu ’以及在27、36、51.及62的Xaa是如a)之定義， 其他特徵 ¢27)..(62)e) 在51的Xaa是Leu或Asp，以及在27、36、47及62的Xaa是如a)之定義，或 <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> 其他特徵 (27)..(62) fl)及β)，其中 其他特徵. (27)..(62) fl )在 62 的 Xaa 是選自由 Glu-Tyr、Glu-Tyr-Leu、Glu-Asp-Leu-Gln、 Glu-Glu-Leu-Gln ' Glu_Tyr-Lys-Arg、Glu-Asp-Lys-Arg、Glu-Lys-Leu-Gln ' Ser-Phe-Arg-Tyr、Trp-Glu-Leu-Arg、Glu-Tyr-Leu-Gln-Pro 及 Glu-Tyr-Leu-Gln-Arg 所組成的族群中， 第1頁 1362941 J昼S其他特徵 <222> (27)..(62) <223> β)在27、36、47及51的Xaa是如a)之定義。 <400> 1 val val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 15 10 15

Glu Gly Ser Asn val Cys Gly Gin Gly Asn Xaa Cys lie Leu Gly Ser 20 25 30

Asp Gly Glu xaa Asn Gin Cys val Thr Gly Glu Gly Thr Pro xaa Pro 35 40 45

Gin Ser xaa Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu lie Pro Glu Xaa 50 55 60 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的多胜肽 <400> 2 Glu Tyr Leu Gin 1 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的多胜肽 <400> 3

Glu Asp Leu Gin 1 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成的多胜肽 <400> 4

Glu Glu Leu Gin 1 <210> 5 第2頁 1362941

<211> 4 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的多胜欣 <400> 5 Glu Tyr Lys Arg 1 <210> 6 <211> 4 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的多胜狀 <400> 6 Glu Asp Lys Arg 1 <210> 7 <211> 4 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的多胜肽 <400> 7 Glu Lys Leu Gin 1 <210> 8 <211> 4 <212> PRT <213> 人工 <223>合成的多胜肽 <400> 8

Ser Phe Arg Tyr <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> 人工 <223> 合成的多胜肽 <400> 9

Trp Glu Leu Arg 第3頁 11 5 PRT 人工 合成的多胜肽 1362941 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> 人工 " <220> <223>合成的多胜肽 <400> 10

Glu Tyr Leu Gin Pro 1 5 <210> <211> <212> <213> t<220> <223> <400> 11

Glu Tyr Leu Gin Arg 1 5 <210> 12 <211> 65 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的多胜肽 <400> 12

Leu Thr Tyr Thr ^^Glu Asp Gin

Gly ser Asn 20

Gly Glu Lys 35

Ser Hi s Asn 50

Asp cys 5 val cys Asn Gin Asp Gly

Thr Gly Cys Asp 55

Glu Ser Gly Gin 10

Asn Leu Cys Leu Cys 15

Gin Gly Asn Lys 25 val Thr Gly Glu 40

Phe Glu Glu lie

Cys lie Leu Gly Ser BO

Gly Thr pro Lys Pro 45

Pro Glu Glu Tyr Leu 60

Gin 65 <210> 13 <211> 65 <212> PRT <213> 人工 <220> <223>合成的多胜肽 第4頁 1362941 <221>其他特徵 <222> (47)..C63) <223> a)在 47 的 Xaa 是 Asn，以及在 63 的 Xaa 是 Tyr， <220> ^ <221>其他特徵 <222> Γ47)..(63) <223> b)在 47 Xaa 是 Lys、Arg 或 His ’ 以友在 63 的 Xaa 是 Tyr，或 <220> <221> 其他特徵 <222> (47)..Cbi) <223> Ο在47的又aa是Asn，以及在63的Xaa是Glu或Asp。 <400> 13 lie Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys • 15 10 15

Glu Gly ser Asn val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys lie Leu Gly Ser 20 25 30

Asn Gly Lys Gly Asn Gin cys val Thr Gly Glu Gly Thr Pro xaa Pro 35 40 45

Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu lie Pro Glu Glu Xaa Leu 50 55 60

Gin 65 <210> 14 <211> 65 <212> PRT <213> 人工 l<220> f<223> 合成的多胜肽 <400> 14 val Val Tyr Thr asd Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu cys 1 5 10 15

Glu Gly Ser Asn val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys lie Leu Gly Ser 20 25 30

Asn Gly Lys Gly Asn Gin Cys val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Asn Pro 35 40 45

Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu lie Pro Glu Glu Tyr Leu 50 55 60

Gin 65 第5頁 1362941 <210> 15 <211> 66 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成的多胜肽 <400> 15 lie Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 15 10 15

Glu Gly Ser Asn val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys lie Leu Gly Ser 20 25 30 i Gin Gly Lys Asp Asn Gin Cys val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro ^ 35 40 45

Gin Ser His Asn Gin Gly Asp Phe Glu Pro lie Pro Glu Asp Ala Tyr 50 55 60

Asp Glu 65 <210> 16 <211> 4 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的多胜肽 <400> 16

Glu Tyr Leu Gin ^<210> 17 <211> 65 <212> PRT <213>人工 <220> <223>合成的多胜肽 <400> 17

Leu Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 15 10 15

Glu Gly Ser Asn val Cys Gly Gin Gly Asn Lys Cys lie Leu Gly Ser 20 25 30

Asp Gly Glu Lys Asn Gin Cys val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro 35 40 45 第6頁 1362941

Gin Ser His Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu lie Pro Glu Glu Tyr Leu 50 55 60

Gin 65 <210> 18 <211> 19 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的胜肽 <400> 18

Phe Pro Arg Pro Gly Gly Gly Gly Asn Gly Asp Phe Glu Glu lie Pro 15 10 15

Glu Tyr Leu <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213> 人工 <220> <223> 合成的胜肽 <400> 19 Phe Pro Arg Pro Gi 第7頁

Claims (1)

1362941 ，年"月，η日修正本申請專利範圍1 1 · 一種脫硫水虫至素（desulphatohirudin )變異物的用 月丨 公告本 W 其係用於製造在個體的轉移腫瘤中造成腫瘤質量及大小退 化的醫藥品，其中該脫硫水蛭素變異物係選自由以下組成 之群： a) SEQ ID NO: 1，其中在27、36及47的個別為 Lys，在51的xaa為His且在62_65的Xaa為肽殘基 GlU-Tyr-LeU-Gln(SEQIDN0:2)，在 66 之 Xaa 不存在， b) SEQ ID NO: 1，其中在27的Xaa為Ile或Giu且在 36、47、51及62-66的Xaa係如a) ♦所定義， c) SEQIDNO: 1，其中在36的Xaa為Ile或Glu且在 27、47、51及62-66的Xaa係如a)中所定義， d) SEQ ID NO: 1，其中在47的Xaa為以或㈣且在 27、36、51及62-66的Xaa如a)中所定義，及 e) SEQ ID NO: i，其中在51的Xaa為^或Μρ且在 27、36、47及62-66的Xaa係如a)1^所定義， 且其中該轉移腫瘤係選自由以下組成之群：腎上腺皮 質癌、子宮頸癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、 膽囊癌、胃癌、頭頸癌、喉癌、肝癌、骨髓增生性病症、 頸癌、非黑色素瘤皮膚癌、#巢癌、胰臟癌及睪丸癌。 2.如申請專利範圍第Μ之用途，其中該脫硫水經素變 異物為SEQmNO」，其中在27、36及47的^個別為 LyS，在51的Xaa為His且在62_65的Xaa為狀殘基 ，在“之^ 不存在。 1 1362941 11月0曰替換ΐ] 3. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該醫藥品係經由 注射投予。 4. 如申請專利範圍第3項之用途，其中該醫藥品係全身 性注射。 5_如申請專利範圍第3項之用途，其中該醫藥品係局部 注射。 6_如申請專利範圍第1項之用途’其中該醫藥品係與細 胞毒性作用劑共同投予，該細胞毒性作用劑包含選自由多 ^ 柔比星與柔紅黴素所組成之群的戀環類且該共同投予與單 獨投予該細胞毒性作用劑相比產生增加的治療作用。 7. 如申請專利範圍第丨項之用途，其中該醫藥品進一步 包含磷酸狎。 8. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該醫藥品進一步 包含二價或三價金屬離子。 9. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該醫藥品進一步 包含糖。 1 0 ·如申请專利範圍第1項之用途，其中該醫藥品於活 體内提供持續釋放特性。 Π.如申請專利範圍第1至1〇項中任一項之用途，其中 該轉移腫瘤為胰臟癌。 12. 如申晴專利範圍第1至1〇項中任一項之用途，其中 該脫硫水蛭素變異物係聚乙二醇化（pEGylated )。 13. 如申§青專利範圍第1至1〇項中任一項之用途，其中 該脫硫水經素變異物係聚乙二醇化且該醫藥品係以腫瘤内 2 1362941 注射投予。 11月丨日修正替換貢|

36

14. 一種用於在個體的轉移腫 退化之醫藥組成物，其包含有效 群的脫硫水蛭素變異物： '瘤中造成腫瘤質量及大小 量的選自由以下所組成之 a) SEQ ID NO: 1 ’ 其中在 27 7 36及47的Xaa個別為 Lys，在51的Xaa為His且在6) ^ 丄 你62-65的xaa為肽殘基 Glu-Tyr-Leu-Gln ( SEQ ID Ν〇· 2 Ί 士V iN^·㈠，在66之Xaa不存在， b) SEQ ID NO: 1，其中在 27 的 v , 牡〇的Xaa為lie或Glu且在 47、5 1及62_66的Xaa係如a)中所定義， c) S E Q ID N 0: 1，立中 A 飞 & 沾 v /、T在36的Xaa為Ile或Glu且在 47、5 1及62-66的Xaa係如a)中所定義， d) SEQIDNO: i ’其中在47的如為ne或⑽且在 36、51及62-66的Xaa如a)中所定義，及 e) SEQIDNO:1，其中在51的^為^或Asp且在 36、47及62-66的Xaa係如a)中所定義， 27 27 27 且其中該轉移腫瘤係選自由以下組成之群：腎上腺皮 質癌、子宮頸癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、 膽囊癌、胃癌、頭頸癌、喉癌、肝癌、骨髓増生性病症、 頸癌、非黑色素瘤皮膚癌、卵巢癌、胰臟癌及睪丸癌。 15.如申請專利範圍第14項之醫藥組成物，其中該脫硫 水虫至素變異物為SEq ID N〇.卜其中在27、36及47的Xaa 個別為Lys，在5丨的Xaa為His且在62·65的Xaa為肽殘 基 Glu-Tyr-Leu-Gln ( SEQ ID NO: 2)，在 66 之 Xaa 不存 在。 3 1562941 |ϊ〇〇年11月〇曰修正替 6’如申明專利範圍第14項之醫藥組成物，其中該醫藥 組成物係經由注射投予。 17. 如申請專利範圍第16項之醫藥組成物，其中該醫藥 組成物係全身性注射。 18. 如申請專利範圍第16項之醫藥組成物，其中該醫藥 組成物係局部注射。 19. 如申請專利範圍第14項之醫藥組成物，其中該醫藥 組^物係、與細胞毒性作用劑共同投予，該細胞毒性作用劑 匕s k自由多柔比星與柔紅黴素所組成之群的憩環類且該 共同投予與單獨投予該細胞毒性作用劑相比產生增加的治 療作用。 20. 如申請專利範圍第14項之醫藥組成物，其中該醫藥 組成物進一步包含磷酸鉀。 、21·如申請專利範圍第14項之醫藥組成物，其中該醫藥 組成物進一步包含二價或三價金屬離子。 22. 如申請專利範圍第14項之醫藥組成物，其中該醫藥 組成物進一步包含糖。 23. 如申請專利範圍第14項之醫藥組成物，其中該醫藥 組成物於活體内提供持續釋放特性。 24. 如申請專利範圍第14至23項中任—項之醫藥組成 物’其中該轉移腫瘤為胰臟癌。 25. 如申請專利範圍第14至23項中任—項之醫藥組成 物，其令該脫硫水蛭素變異物係聚乙二醇化。 26. 如申請專利範圍第14至23項中任—項之醫藥組成 4 1362941 乂 |100年11月0 日修正替換頁 t 物，其中該脫硫水蛭素變異物係聚乙二醇化且該醫藥組成 > 物係以腫瘤内注射投予。 Η•一、圖式：