TW322418B - Feed additive and use thereof for inactivation of mycotoxins and process for preparation of a feed - Google Patents

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^3¾修正 補充 五、發明説明（3 ) 本發明係有闞一種用於動物飼料或動物消化系統中使 徽菌毒素去活化之飼料添加劑，其中飼料含有由有機照所 產生之酵素製劑，有機照係選自植物、细菌、酵母菌或原 生動物之組群，酵素製劑最為1000公斤飼料含0.1至3公斤 。本發明進一步有關在動物飼料或動物消化系统中使嫌菌 毒素去活化之飼料添加劑之用途•及製備含此飼料添加劑 之飼料的方法。 由EP-A 0 257 996，已知飼料預混合物及其製造方法 ，其飼料預混合物中除含有生理上可接受之載體如穀物粉 外•尚含有一種或多稱添加之酵素。EP-A 0 286 056則揭 示飼料混合物及處理飼料原料之方法，其飼料含有添加之 酵素製劑。此二已知飼料混合物基本上均含有添加之澱粉 SS，因為幼年之動物缺乏此類分解穀類之酵素，尤其是幼 豬。 又，從AT-PS 397 756知一飼料添加劑之例，其含有 具巨大内部表面積之無機物質，例如矽酸鹽或沸石，及有 機雜環聚合物以吸附毒素。 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印裝 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 嫌菌毒素係黴菌之毒性代謝產物*為飼料工業及家畜 繁殖業無法遴免之問題，且已認定其為高度造成家畜產仔 及育種性能損失之因素。因此，長久Μ來使用許多方法Μ 避免徽菌毒素餵養至動物體内或是將餵養至動物髖内的徽 菌毒素予Μ去活化| Κ避免嫌菌毒素在動物體内之危害。 作如此首試之原因為黴菌毒素分子具有髙化學反應性之官 能基。此高化學反應性對其毒性作用，扮演中心角色，因 本紙張尺度遥用中國國家梂準（CNS > Α4規格（210Χ2.97公釐） 3 9 1192

322418 A7 B7 經濟部中央梂準局貞工消費合作社印製 五、 發明説明（4 ) 1 1 為 這 些 官 能 基 與 生 物 體 内 重 要 分 子 如 核 酸 、 酵 素 以 及 细 胞 1 m 之 脂 質 等 發 生 反 應 0 1 至 巨 月 為 止 » 嫌 菌 毒 素 去 活 化 的 方 法 包 括 物 理 方 法 » /-N 請 先 Γ 例 如 : 嫌 菌 毒 素 之 萃 取 加 熱 、 昭 射 及 吸 附 ， Μ 及 化 學 方 閲 讀 —丨 背 法 $ 例 如 ; Μ 酸 m 及 各 種 氧 化 劑 處 理 0 在 這 些 不 同 已 知 Sj 之 1 注 1 方 法 中 9 吸 附 為 最 佳 之 實 用 方 法 〇 吸 附 方 法 一 般 是 添 加 大 意 事 1 項 | 最 吸 附 劑 來 達 成 例 如 添 加 黏 土 % 活 性 碳 或 聚 合 物 〇 Μ 吸 附 方 法 使 所 有 徽 菌 毒 素 完 全 去 活 化 或 固 定 於 吸 附 劑 上 當 然 寫 本 頁 裝 1 是 不 可 能 此 乃 因 為 吸 附 m 作 用 模 式 之 關 係 〇 吸 附 功 能 基 1 | 本 上 是 在 吸 附 劑 表 面 形 成 水合被 覆 層 之 形 成 使 掻 性 分 子 1 I 因 凡 得 瓦 力 而 聚 集 在 其 上 0 此 種 方 式 至 百 前 為 止 可 令 I 1 訂 人 滿 意 地 使 極 性 嫌 菌 毒 素 如 黃 麴 毒 素 去 活 性 ; 但 對 於 較 弱 1 I 極 性 官 能 基 之 嫌 菌 毒 素 卻 無 法 充 分 地 固 定 於 吸 附 劑 上 因 1 1 而 使 此 類 菌 毒 素 不 可 能 被 先 刖 技 转 之 吸 附 方 法 充 分 去 化 活 1 1 1 〇 因 此 本 發 明 巨 的 為 提 供 飼 料 添 加 劑 特 別 是 含 有 選 一1 1 | 白 植 物 细 菌 酵 母 菌 或 原 生 動 物 之 組 群 的 有 機 照 之 酵 素 1 製 劑 者 Μ 使 動 物 飼 料 中 或 動 物 消 化 系 铳 中 之 m m 毒 素 去 1 活 化 〇 此 添 加 劑 可 使 常 出 現 於 飼 料 中 之 徽 菌 毒 素 被 吸 附 及 至 少 部 分 降 解 > 因 此 可 防 止 因 飼 料 中 嫌 菌 毒 素 所 引 起 之 不 1 1 利 影 響 〇 1 本 發 明 之 另 一 g 的 為 飼 料 添 加 劑 之 用 途 * 此 用 途 係 使 1 I 出 現 在 飼 料 或 動 物 消 化 系 铳 中 的 嫌 菌 毒 素 去 活 化 y Μ m 免 1 I 家 畜 繁 殖 育 種 業 之 損 失 〇 1 1 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 9 119 2 *„^4- 疼正 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 五、發明説明（ 5 ) 一一 為 解 決 此 一 問 題 $ 本 發 明 用 於 動 物 m 料 或 動 物 消 化 系 铳 中 使 撇 菌 毒 素 去 活 化 之 飼 料 添 加 劑 係 含 有 有 機 體 產 生 之 酵 素 製 m 9 此 有 櫬 Η 為 選 白 植 物 Λ 细 菌 、 酵 母 菌 或 原 生 動 物 之 組 群 « 酵 素 製 劑 量 為 每 1 000 公 斤 飼 料 含 0 . 1至3公 斤 9 產 生 m 素 之 有 拥 體 乃 m 白 能 夠 產 生 環 氧 m 及 / 或 内 _ m 之 組 群 〇 因 為 產 生 m 之 有 機 體 係 m 白 能 產 生 環 氧 酶 及 / 或 内 m m 之 姐 群 因 此 能 使 具 高 化 學 反 應 性 且 高 毒 性 之 廣 泛 出 現 於 m 料 中 的 徽 菌 毒 素 藉 由 m 料 添 加 劑 中 之 酵 素 製 劑 而 降 解 及 / 或 化 學 轉 換 成 較 低 毒 性 或 非 毒 素 性 之 化 合 物 0 由 此 ， 可 顬 著 地 降 低 其 毒 性 〇 特 別 是 所 使 用 之 酵 素 製 m 係 利 用 有 櫬 邇 之 纯 菌 種 所 產 生 > 該 有 檐 體 可 藉 已 知 方 法 或 依 其 磨 當 成 長 條 件 而 產 生 瑁 氧 m 及 / 或 內 _ m 〇 其 後 逭 些 增 殖 純 菌 種 的 细 胞 可 藉 已 知 方 法 去 活 化 而 製 得 酵 素 製 βι 由 於 酵 素 未 被 改 變 * 因 此 未 遭 破 壞 Ο 其 後 可 直 接 將 去 活 化 的 细 胞 與 m 料 混 合 或 是 將 瑄 些 细 胞 的 纯 或 粗 萃 取 物 與 飼 料 混 合 〇 依 據 較 佳 實 施 例 % 係 使 用 環 氧 酶 及 / 或 內 m m 〇 酵 素 或 酵 素 製 m 具 有 使 化 學 性 霣 不 同 之 各 類 徽 菌 毒 素 降 解 或 化 性 改 變 之 優 點 〇 其 原 因 為 許 多 徽 菌 骞 素 為 含 氧 之 雜 環 烴 其 中 1 氧 在 這 些 環 中 常 環 氣 化 物 或 内 m 之 形 式 鐽 m 〇 使 用 之 環 氧 m 靨 水 解 m t 可 將 撇 菌 毒 素 之 環 氧 化 物 環 m 裂 而 形 成 兩 個 羥 基 > 此 羥 基 可 被 動 物 髓 輕 易 降 解 使 用 之 内 m m 可 藉 類 似 之 方 式 作 用 〇 為 達 到 此 效 果 ， 可 在 作 為 粗 飼 料 之 JUU 月 將 飼 料 > 本 發 明 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)| 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 5 (修正頁） 91192

A7 B7五、發明説明（6 )飼料添加_及水調成微酸性或中性pH值，使徽菌毒素進行 部分之降解。要留意的是不要使飼料浦I粉料太酸，以免對 菌劑 «製 ’ 素 時酵 此加 。 添 題藉 問可 康， 健量 致能 導之 或外 響額 影應 良供 不需 有不 憤好 習最 食解一 飲降之 的之物 物素 動毒 得 獲 動而 至作 養要 餵需 般若 搡。 一 成 單達 之而 合 合 混混 勻水 均的 靠值 丨 Η 中 Ρ 料當 飼缠 之至 境調 環與 統可 系 ， 明 發 本 據 根 a S λίκ 母 酵 生 地 是株 別菌 特母 ’ 酵 物 〇 取物 萃取 之萃 株的 MS) «1 母 Γ 酵1U 用el 使t 是es 好yc 較0 菌不 母全 酵完 〇 為 一 作 之上 群業 組工 要料 里飼 之在 素且 酵’ 得 _ 獲解 為水 , 種 菌各 別之 特量 之髙 菌極 母生 酵產 為可 的在 基可 内母 及酵 基生 氧地 環用 括使 包是 使好 來較 用 。 可解 亦降 株地 菌全 母完 酵而 的速 用快 使素 的毒 目菌 同徽 烯 Ϊ 鼸2 之形 孢Τ-母， 蟠是酵裂 單別生賺 成特地瓖 達，著物 下解藉化 態裂。氧 狀之等環 然} 酵之 自esM素 之en刀毒 道ec鐮菌 腸 0 物1<氧上 動tr脫使 二 的 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝-

*1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 麵， 加物 飼或 斤然 動素 於赛 t 腐«化獲好用0.造爾 ho雪述羥為較其科人物 素 添成 及 Μ 性 素可毒 ί 毒是無 物-2別而 合-Τ特謝 化'Η,代 鼷1加可 添 料0 明 發 本 料0 性 化 活 去 之 能 可 大 最 0 有 物具 合得 碥公 性00 孔10 多是 之別 造特 人， 或斤 然公 天 之 積0. 面料 表蚵 部斤 内 公 大00 有10 具每 外為 另量 至 至 天應 之對 積在 面保 表確 部可 内 _ 大加 有添 具料 與飼 劑的 製成 素而 酵合 藉混 。 物 斤礦 公性 孔 多 道 腸 素 毒 菌 徽 性 極 是 其 尤 ^rv 菌劑 II製 之素 上酵 面被 表或 料上 飼質 有物 所礦 將在 中附 體吸 媒— 性 水 之 值 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 6 (修正頁） 91192

A 322418 A7 B7 年 7] 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、* 發明説明（ ? ) 1 I 降 解 或 化 學 轉 換 0 具 有 大 内 部 表 面 積 之 天 然 或 人 造 多 孔 性 1 1 I 碥 物 存 在 之 另 一 優 點 為 可 將 嫌 菌 毒 素 吸 附 在 礦 物 質 表 面 9 1 1 而 易 於 被 酵 素 製 劑 分 解 〇 ^^ 1 請 I 依 據 本 發 明 較 好 是 使 用 具 有 累 積 细 孔 容 積 為 0 . 0 5至 先 閲 1 讀 4c·3 /g 特 別 是 0 . 5至2 .5 C B 3/ g的砂滿土 、沸石 2 -及3 背 1 1 之 1 層 黏 土 礦 或 其 混 合 物 作 為 天 然 或 人 造 之 具 有 大 内 部 表 面 積 注 意 重 1 | 之 多 孔 性 礦 物 其 表 面 pH 值為4 • 5至 7 . 5 〇 累 積 畑 孔 容 積 Ψ 項 再 1 — 0 . 05至 4 c 3 /8 * 特 別 是 0 . 5至2 .5 C π 3/ g 的 矽 m 土 沸 石 及 % 本 裝 | 層 狀 黏 土 礦 物 或 其 混 合 物 能 很 有 效 率 地 吸 附 嫌 菌 毒 素 因 頁 1 1 此 能 大 輻 度 地 達 到 去 活 化 效 果 〇 此 類 礦 物 較 佳 為 孔 徑 1 0 n a 1 1 至 1 jU ID 且 表 面 pH值 為 4 . 5至7 .5 〇 此 類 礦 物 可 藉 已 知 方 法 製 1 1 備 其 中 較 好 是 使 此 礦 物 在 沒 有 任 何 混 煉 劑 存 在 下 於 大 訂 1 約 80 0C 至 900t： 煅 燒 藉 此 可 達 到 具 有 均 勻 之 表 面 细 孔 结 1 I 構 0 例 如 可 使 用 8 0¾ Chin 0 P t I 1 〇 i i t h e 及 20 r〇 白 雲 母 f 1 ! 80 % 菱 沸 石 及 20 % 白 雲 母 〇 75% C 1 in op t i 1 i t h e 及 2 5 % 髙 1 X 嶺 土 或 85 % 菱 沸 石 及 15 % 高 嶺 土 之 礦 物 混 合 物 〇 V. , 1 使 用 於 動 物 飼 料 或 動 物 消 化 糸 統 中 使 嫌 菌 毒 素 去 活 化 1 1 之 本 發 明 阏 料 添 加 劑 9 其 特 激 為 含 有 1 至 65重 最 % 特 別 1 1 是 5至5 0重量货 (之酵素製劑· 及99至35重量》 ;， 特別是95 1 I 至 50重 量 % 之 具 有 大 内 部 表 面 積 之 天 然 或 人 造 多 孔 性 礦 物 1 I 所 組 成 0 賴 著 使 用 相 當 大 量 t 即 1至65重量》 r ， 特別是5至 1 1 I 50重 量 % 9 之 酵 素 製 劑 以 確 保 飼 料 中 所 有 可 降 解 之 徽 菌 毒 1 1 1 素 可 大 輻 降 解 〇 另 一 方 面 9 由 於 具 有 大 内 部 表 面 積 天 然 或 1 1 人 造 多 孔 性 礦 物 之 存 在 9 可 使 不 被 化 學 降 解 的 黴 菌 毒 素 被 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS } A4说格（210X297公釐） 7 9 1192 S22418 A7 B7 牴」.3Π 餘止 年月（3 ' i •二 Π〉- ί — 伽凡丨 五、發明説明（8 ) 這些礦物束缚在表面上，因此不會被代謝而顯示出對動物 的危害，酵素製劑輿天然或人造多孔性材料混合時，最好 使酵素製劑之活性調整為環氣_活性為470 -600 IU/g ,及 内酯》活性為2 8 0 - 4 0 0 IU / g。 依據本發明之飼料添加劑，含有或不含具有大内部表 面積之天然或人造多孔性礦物，均可使用於飼料中或動物 消化条统中使徽菌毒素，待別是黃教毒素、T-2毒素、脱 氧雪腐鐮刀菌醇、雪腐鐮刀菌酵（nival eno丨e)、玉米烯銅 、單乙曄氣基醭草鐮刀菌醇、H-T-2毒素、籠孢菌素、杆 孢菌素、塞査毒素（satratoxine)、酒種菊薗酵（ baccharinole)、木嫌g醇、二乙酵氣基朦草嫌刀_醇、 夫莫尼菌素（fuionisine)、棕麹徽毒素、串珠鐮刀菌素、 鐮刀烯酮-X及扁虫菌素等予以去活化。 經濟部中央標準局員工消费合作社印裝 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 因為可被本發明之酵素製造降解之徽菌毒素種類廣泛 ,本發明之飼料添加劑對於從飼料中移除毒性物質相當有 利及有效。藉著使用此飼料添加剤可確保被徽菌毒素高度 污染的飼料不會呈現出危害家畜之作用。甚且，可使僅受 破碎、乾燥或其他處理以加強耐久性之飼料，尤其是自然 作物，在舆本發明之飼料添加劑混合後，可直接或舆調成 微酸性pH值之水調理後餌養家畜。不必檐心，也不必經科 學中心進一步檢驗。 本發明亦有蘭飼料製備之方法，其中，任意經粉碎及 /或乾燥之作物與本發明之飼料添加劑及水混合，加酸調 成pH值1至4.5以適合反應，在15至40t：下携拌3至30分鐘 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 8 經濟部中央揉準局貝工消费合作社印製 A7 B7 -4·#0 修正 日 .士.'K K, 五、發明説明（ 9 ) 再 於 調 整 pH值 至 適 於 作 飼 料 後 去 除 液 體 成 份 « 然 後 以 暖 空 氣 潦 進 行 乾 煉 〇 pH值 之 調 整 或 酸 化 可 使 用 藥 理 上 可 接 受 的 酸 » 特 別 是 鹽 酸 乙 酸 等 0 其 中 ， 最 好 將 pH值 調 在 1 至 4 . 5 之 間 » Μ 使 包 含 在 阏 料 中 之 徽 菌 毒 素 快 速 地 去 活 化 〇 依 據 本 發 明 溫 度 範 匾 宜 調 至 15 Ό 至 40 t： 之 間 $ 例 如 從 室 溫 調 至 體 溫 時 間 為 3 至 30分鐘 之 範 圍 以 達 到 徽 菌 毒 素 之 幾 乎 完 全 去 活 化 〇 因 上 述 具 有 很 酸 之 pH範 圍 的 阏 料 不 能 直 接 餵 養 動 物 因 此 在 去 活 化 作 用 後 應 >λ 氫 氧 化 納 、 碳 酸 氫 納 碳 酸 納 等 中 和 成 微 酸 或 中 性 pH值 〇 接 著 » 飼 料 在 除 去 液 體 成 份 後 以 暖 空 氣 流 進 行 乾 煉 而 得 不 含 嫌 菌 毒 素 且 可 長 期 貯 存 之 飼 料 〇 最 好 是 在 飼 料 濕 粉 料 乾 煉 刖 使 用 已 知 方 法 壓 成 顆 粒 較 佳 〇 作 成 顆 粒 可 同 時 藉 良 好 之 貯 存 及 運 輸 減 少 飼 料 養 份 之 氧 化 0 本 發 明 進 一 步 以 下 列 實 例 說 明 0 例 闋 本 發 明 飼 料 添 加 m 對 嫌 Μ m 素 臨 床 效 果 研 究 飼 料 添 加 劑 60重 量 % 之 含 有 環 氧 m 及 内 酷 m 之 酵 母 菌 製 劑 1 〇重 量 % 之 高 嶺 土 30重 量 % 之 C 1 in 0 P t 1 1 〇 1 i t h e 0 選 擇 48隻 m 雄 性 幼 豬 作 此 試 驗 t 平 均 起 始 重 量 8 . 1 6公 斤 9 變 異 係 數 為 20 .83¾ > 平 均 豬 龄 為 28 .6天 比 較 用 之 幼 豬 遵 白 各 試 驗 階 段 0 在 整 個 試 驗 過 程 中 » 豬 圈 內 之 溫 度 及 濕 度 均 作 適 當 控 制 0 ---------1'#-- -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Μ规格（210X297公釐） 9 91192 訂 322418 A7 B7

五、發明説明（10) 將三俚不同含量之嫌菌毒素及兩種不同型態之徽菌毒 素之膳食餵養動物。個試驗組亦同時供應本發明飼料添加 劑。一試驗組不供應嫌菌毒素也不供應本發明飼料添加劑 阏料基本上含有大豆、黍及奶粉，一天給食4至5次。 水為自由子式給予。徽菌毒素溶於乙醇*然後與少量食物 混合，依下列之施用量與飼料混合，各組示於表1 ，其中 供懕同量黴菌毒素之兩組幼豬為同龄及同源。 表1 :餵養不同含量之擞菌毒素與有或無補充飼料添加劑 之試驗組 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉準局員工消費合作社印製 T-2 毒 素 飼料 添加劑 +黃 麴 毒素 1 0 . 3 p p + 0.1 Ρ Ρ Β 0 k g / t 2 0 . 5 p p m + 0.1 Ρ Ρ臟 0 k g / t 3 1 . 0 P P + 0.1 Ρ Ρ Β 0 k g / t 4 0 · 3 p p 醒 + 0.1 ppm 2 kg / t 5 0 . 5 ρ ρ η + 0.1 ρ ρ B 2 k g / t 6 1 . 0 ρ ρ κ + 0,1 P P S 2 k g / t 7 0 * 0 Ρ Ρ Β + 0.0 PPffl 2 k g / t 8 0 . 0 Ρ Ρ η + 0.0 ppm 0 k g / t 親察之參 數 為體 重、 飼料攝取量、平均每日增加： 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS )八4規格（210X297公釐） 10 9 1192

B7五、發明説明（1 1 ) 及飼科轉化率。 各參數结果示於表2。 复2·;— 8個試驗組之平均飼料攝取量，平均每日增加體重 及飼料轉化率。 組別 平均 飼料攝取量 每日增加髏重 飼料轉化率 1 904 453 1.99 2 909 455 1.99 3 796 47 1 1.69. 4 916 530 1.73 5 910 487 1.86 6 818 492 1.66 7 922 5 20# 1.77 8 899 509 1.77 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装. 訂 經濟部中央揉準局貝工消費合作社印製 *去除一昏睡動物作為校正。 臨床評估： 第1組（0.3ppm T-2毒素+0.1ppm黃麴毒素Βι及0.0公斤 飼料添加劑）： 輕微结合膜炎，身體狀況及皮虜正常，飼料攝取量略 減。 第2組（0.5ppm ΐ-2毒素+ 0.1PP·黃麴毒素Βι及0.0公斤 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 91192 A7 B7 、經濟部中央梂準局員工消費合作社印裝 五、發明説明（ 12 ) 飼 料 添 加 劑 ): 無 可 懷 疑 地 具 嚴 重 之 眼 睛 唇 及 □ 鼻部 之 剌 激 性 發 炎 ， 身 體 狀 況 正 常 t 食 慾 減 退 〇 第 3组（ 1 . 0 p P B Τ -2 毒 素 + 0 .1 Ρ Ρ 黃典毒素Β 1及C .0公 斤 飼 料 添 加 91 ): 所 有 幼 豬 呈 現 眼 睛 唇 及 □ 鼻 部 及頸 側 部 及 胸 部 之 剌 激 性 發 炎 〇 所 有 幼 豬 在 第 二 個 星 期 開 始圼 現 肚 子 脹 氣 及 嚴 重 食 慾 減 退 〇 一 隻 幼 豬 在 第 12天 喔 吐 0 第4及 5 组（0 . 3 p Ρ 或 0 . 5 ρ Ρ Β Τ -2 毒 素 + 0.1 Ρ Ρ Β 黃 麴 毒 素 Β 1 及 2公斤飼料添加劑） • 呈 現 结 合 膜 炎 及 皮 虜 剌 激 性 發 炎 之 輕微 症 狀 飼 料 攝 取 量 及 身 體 狀 況 可 視 為 正 常 0 第 6組（ 1 . Op P IB Τ -2 毒 素 + 0 .1 Ρ Ρ κ黃麴毒素Β 1及2公 斤 飼 料 添 加 劑 ): 6隻中的2 隻 幼 豬 僅 呈 現 輕 微 结 合 膜 炎， 所 有 其 他 觀 察 值 均 在 正 常 範 圍 0 第 7 組（0. Op P m Τ -2 毒 素 + 0 .0 Ρ Ρ Β黃麴毒素Β ΐ及2公 斤 飼 料 添 加 m ): 及 第 8組（0. Op Ρ η ΐ -2 毒 素 + 0 .0 Ρ Ρ Β黃麴毒素Β ΐ及0 .0公 斤 飼 料 添 加 劑 )(比 較 ): 幼 豬 健 康 ο 由 上 述 評 估 可 知 » 本 發 明 添 加 劑 對 飼料 攝 取 量 9 每 曰 增 加 體 重 及 飼 料 轉 化 率 等 在 三 種 劑 量 情 形下 均 顯 示 具 有 正 面 影 響 0 與 經 m 料 添 加 劑 處 理 之 各 組 比 較- 未 處 理 組 顯 著 呈 現 更 嚴 重 之 嫌 菌 毒 素 臨 床 症 狀 〇 上 述 試驗 之 覼 察 參 數 及 臨 床 结 果 顯 示 本 發 明 飼 料 添 加 劑 對 於 Τ- 2毒 素 及 黃 麴 毒 素 之 毒 性 傷 害 具 有 明 顯 的 保 護 效 果 〇 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4规格（21 ΟΧ 297公釐） 12 9 1192

Α7 η3:修正 五、發明説明（13) 試除例1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 此試驗之目的係為顯示各種鐮刀属嫌菌毒素之混合物 於產蛋鵝之蛋產量及蛋品質之影響，以及飼料添加劑s之 補償效果（conpensative effect)。 材料及方法 此試驗分三組，每組有50隻產蛋鵝及必需數目之雄鵝 。此等鵝之平均體重為5kg。表3示有試驗設計。 表3:各組中鎌刀羼嫌菌毒素劑量及飼料添加劑補充量之 試驗設計 组別 鐮刀臑嫌菌毒素 mg/kg 想重/天 飼料添加劑 g/kg飼料 I 0.1 0 I 0.1 2.5 畺 0 2.5 、經濟部中央梂準局貝工消費合作社印製 將緻菌毒素溶解於4π丨丙二酵中，經由胃管注射至此 等鵝中。每天收集蛋及每遇將蛋送至孵蛋場。 结果 蛋產量之數據示於表4。 9 1192 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 五、發明説明（i4) 表4:實驗期間之蛋產量 月份 第I組 第I組 第1组 一月 404 418 310 二月 308 374 421 三月 350 424 446 四月 306 322 379 五月 112 98 99 總量 1480 1636 1655 Μ對照姐之％表示 89.0 98.9 100.0 ^1- —m^i 1- I -·1 - - I -- - I- - 1^1 n (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) *飼料添加劑：含有環氧_及內_费之酵母菌製劑。 表5綜述孵化结果。應注意到在某些情形下，由於輸 送櫬器之問題，蛋未遞送至孵蛋機。此即為所生產之蛋數 大於孵蛋機所給之蛋數之理由。 表5 :孵化结果 、 經濟部中央搮準局貝工消费合作社印策 步驟 第I姐 第I組 第Κ組 置入孵蛋機中 123 1 1321 1388 胚胎 982 1114 1194 孵化％ 79.7 84.3 86 Μ對照组之％表示 82.2 93.3 100 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 322418 A7 B7

經濟部中央揉準局貝工消费合作社印裝 五、發明説明（1S) MO.lug/kgSI重/天之_刀羼緻菌毒素處理之结果， 發現減少約10¾之蛋產量。此減少之情形幾乎因添加2.5 kg之飼料添加劑而消除。 依據表5，藉由使用飼料添加劑之處理，可改善蛋品 質，因而顯著改善孵化结果。 在蛋產量方面，可藉由每噸阏料添加2.5kg飼料添加 劑而完全補償因注射O.lmg鐮刀屬徽菌毒素/ kg體重所致之 蛋量減產。 孵化结果亦可因飼料添加劑而顯著改菩。 结―盖 據上结論可知阏料添加劑顯示對於每公斤體重之0.1 mg鐮刀羼級菌毒素於難鵝之蛋產量及蛋孵化率上負面影響 之保護效果。 試驗例2 :黴菌毒素去法化之試管內試驗 動物之胃腸道是此種異生物進入體内之主要途徑，下 列研究之目的，係研究在類似於自然狀況之系統下，嫌菌 毒素去活化劑於胃腸液中之行為。 I科：

Extrelute(=整體 isolute吸著劑（Bulk Isolute Sorbent, 1ST))

Mycosep管柱 #227 擞菌毒素-玉米烯嗣（Zearalenone)及脫氧雪腐鐮刀菌醇（ deoxynivalenol) (σ )之標準品 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装- 訂 本紙張尺度逋用中國國家橾準（CNS > Α4規格（210X297公釐） 15 9 1192

' 經濟部中央梂準局貝工消費合作社印装 322418 A7 B7 五、發明説明（1 6 ) 試驗例：環氧0S與内酷as之1:1混合物 乙酸乙,p.a.(J.B.Baker) 乙腈 HPLC级（J · B . Baker ) 方法： 培養 •將胃液及腸液離心（10分鐘，10,000轉/分鐘）、遇濾及 調整胃液之pH值至PH3及腸液pH值至PH6。 •將徽菌毒素各加入胃液及腸液使成1.5pp·。 •將0.2s試驗劑與20ml之經添加嫌菌毒素之胃液或腸液於 25·1 pyrex燒瓶中混合。於37t：搖晃胃液1小時及腸液3 小時。 ♦與此實驗同時地，培養不含試驗劑之樣品作為空白。 •培養後，將樣品離心（10分鐘，4000轉/分鐘）及過濾。 提纯及定量： 1 .乇米铺_ (恃宙夕_刀鼷撇菌畜表） •於 extrelute管中填人 7b1 extrelute。 •移送2n丨樣品（兩倍用於吸收樣品及3倍用於盲值）。 •K20b1乙酸乙酯洗提15分鐘，揮發乾煉洗提液。 •將殘餘物溶解於2ml乙酸乙酯。授拌0.5分鐘及移轉1.8 ml至srew燒瓶，及於氮氣流下乾煉。 •將殘餘物溶解於300W.il HPLC移動相中，攢拌0.5分鐘 及在£?口6^〇「{管中以10,000轉/分鐘離心5分鐘。 ♦將殘餘物移至HPLC管式瓶。 定量： (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家橾準（'CNS ) A4規格（210X297公釐） 16 9 1192 Α7 Β7 "δΓΤ'3'Ti 年月β 條 χϊ 五、發明説明（17) 使用 Η P L C Η P 1 0 9 0 ( H e w 1 e 11 P a c k a r d )備有 0 D S Hypersil 管（lOOnmX 2.1m·; 5« b)及蛮光偵测器（ H e w 1 e 11 e P a c k a r d , Η P 1 Ο 4 6 A型）M高效能液相層析方法定 量玉米烯酮。 移動相：

A ： H2O B :乙腈 流速： 0.5b1 nin_1 注射體積：20 « ϋ 程序： isocratic 40窵八及60宄8 進行時間：1 0 i η 波長： 2 7 4 η 2. 脸氬雪腐·ΠΜ_(Ι)Πΐη (特亩夕镰71鼷》Μ塞素） M Mycosep#227管柱提純： ♦滴加2·1之各樣品於試管中，添加8·1乙腈（及20ι«1乙酸 至腸液樣品中）及短暫撹拌。 •媛慢推動Myc〇sep<t227管柱，直到得到4b1提纯樣品為止 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 裝- 訂 經濟部中央標準局員工消费合作社印聚 •將4·1純化樣品移至srev -燒瓶中，並於N2下乾煉。 ♦將殘餘物於300w HPLC移動相中溶解，攪拌0.5ain並 在 Eppendorf管中以 10,000 轉 / nin 離心 5nin。 •移至HPLC管式瓶中。 定量： 使用 Η P L C Η P 1 0 9 0 ( H e w 1 e 11 e P a c k a r d)備有 0 D S Hypersil管（IOOibbX 2.1mm, m)W高效能液體層析方法 17 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4说格（210X 297公釐） 91192 • 86. 4. 3ΐΓήΕ A7 B7 -1. .J JT.X一 > 月 a ι:> 補 五、發明説明（18) 定量脫氧雪腐鐮刀菌酵。 (锖先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 移動相： A: 85H20+10甲酵 B ：乙腈 流速： 0.4·1 Bin-1

注射體積：20 w A

梯度： 0-3.5nin: 97.5A+2.5%B

3.5- 7. Ob in:增加至 5¾ B

7.0- 10·0·ίη: 9 5¾ A + 5 * B

10.0- 12.5nin:增加至 10%B 12.5- 17.5·ίη:減至 2.5¾ B 進行時間：1 7 . 5 i n 波長： =220n丨 结果祖討論： 第1圈為使用試驗劑試管内處理前之樣品之高效能液 體層析（HPLC)圖。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 第2圖顯示D0H,所謂D0M-1,在試管內試驗與試驗劑 經酵素培着後之去環氧新陳代謝產物。第2圖又顯示ΖΕΑ不 存在，證明其分解。 分解產物由於其分子结構改變而無法KHPLC方法偵測 〇 第3圖顯示在酒酵母菌微量抗體盤試驗（ nicrotiterplate assay)(標準毒性試驗）中，D0H之毒性 活性之成長抑制效應，對照於其去環氧新陳代謝產物之不 存在之成長抑制效應。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 9 1192 18 A7 B7 五、發明説明（19) 第4圈顯示上述毒性試驗中培養實驗期間之剰餘毒性， 制 抑 長 成 ¾ M 度 濟 始 起 Η ο D 之 同 不 種 兩 有性 寺毒 時 ο 餘 為剰 間該 時定 在界 明 說 要 簡 式 la 第第 圔 ΊΧ 圖 2 之 \JX 物 〇 產 圖謝 析代 層 陳 合新 混氧 之環 嗣去 烯之 米0H 玉(D 與-1 N Μ ο ο D D 為為 層 圖 析 為 圖 3 之 菌 母 酵 酒 於 對 物 產 謝 代 陳 新 氧 環 去 。 其驗 與試 0H性 J毒 之 性 第活 性 毒 毒 餘 剩 之 驗 試 性 毒 之 菌 母 酵 酒 後 養 培 内 管 試 為 團 4 第 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装. 性 訂 經濟部中央揉準局負工消费合作社印製 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4*L格（210X297公釐〉

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Claims (1)

1. 3 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 ^22418 86· 年 8. 19 H3 / \ ίΐ- 1 第841 1 1 1 448虢専利申請！ 申請專利範園修正本 (86年8月 19 B ) 1 . .一 種 用 於 動 物 飼 料 或 動 物 消 化 系 統 中 使 撇 菌 毒 素 去 活 化 之 m 料 添 加 m $ 其 中 該 飼 料 添 加 m 含 有 由 去 活 化 之 可 產 生 酵 素 的 酵 母 菌 纯 菌 培 着 之 粗 萃 取 物 所 形 成 之 酵 素 製 m • 該 酵 素 製 劑 之 量 為 每 1 000 公 斤 m 料 0 . 1至3公 斤 f 其 中 該 可 產 生 酵 素 之 酵 母 菌 之 去 活 化 培 養 基 含 有 環 氧 m 及 内 m m 且 該 可 產 生 酵 素 之 酵 母 菌 為 選 白 可 產 生 環 氧 _ 內 醮 m 或 環 氧 m 與 内 m m 者 〇 2 . 如 申 請 専 利 範 围 第 1 項 之 m 料 添 加 劑 9 其 中 係 使 用* 酵 母 菌 株 之 萃 取 物 作 為 酵 素 製 m 者 〇 3 . 如 申 請 專 利 範 園 第 1 項 之 飼 料 添 加 劑 f 其 中 t 係 使 用 地 生 酵 母 (S a c c h a r 0 1 y c e s t el 1 U Γ 1 S : 之 萃 取 物 作 為 酵 素 製 劑 者 〇 4 . 如 謫 專 利 範 第 1 項 之 m 料 添 加 m 9 其 中 另 外 含 有 具 有 大 内 部 表 面 積 之 天 然 或 人 造 多 孔 性 礦 物 者 其 含 量 為 每 1 0 0 0 公 斤 飼 料 0 . 5至8公 斤 〇 5 . 如 申 請 専 利 範 園 第 4 項 之 飼 料 添 加 劑 $ 其 中 9 另 外 含 有 具 有 大 内 部 表 面 積 之 天 然 或 人 造 多 孔 性 礦 物 者 9 其 含 量 為 每 1 000 公 斤 飼 料 0 . 7至4公 斤 者 〇 6 . 如 申 請 專 利 範 画 第 4 項 之 m 料 添 加 m 其 中 9 係 使 用 具 有 累 積 细 孔 容 積 為 0 . 0 5至 4 c 3 / g 之 矽 m 土 沸 石 、 2- 及 3- 層 黏 土 m 物 或 其 混 合 物 作 為 具 有 大 内 部 表 面 積 之 天 然 或 人 造 多 孔 性 礦 物 t 且 其 表 面 pH 值 為 4 . 5至7 .5 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS )A4規格（210X 297公釐) H3_ 者。 7. 如申請專利範園第6項之飼料添加劑，其中，係使用 具有累積细孔容積為0.5至2.5ci3/g之矽滿土、沸石 、2-及3-層黏土礦物或其混合物作為具有大內部表面 積之天然或人造多孔性確物，且其表面pH值為4.5至 7 . 5者。 8. 如申誚専利範麵第1項之飼料添加鑲，其中，該阏料 添加劑又包含天然或具有大内部表面積之天然或人造 多孔礦物，比例為1至65重量*之酵素製鑲及99至35 重量X之具有大內部表面積之天然或人造多孔礦物。 9. 如申請専利範圃第8項之蚵料添加ffl,其中，該飼料 添加劑係5至50重量％之酵素製劑及95至50重量％之 具有大內部表面積之天然或人造多孔性礦物之比例。 10. 如申謫專利範國第1、2、3、4、5或6項之飼料添加謂 ,係用於使飼料中或動物消化系铳中之鐮刀鼷*菌赛 素及黃麴毒素失去活性。 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 11. 一種製備飼料之方法，其中，得随意經粉碎及/或乾 煉之作物與如申請專利範圃第1、2、3、4、5或6項之 飼料添加劑及水混合，經加酸調整pH為1至4.5以缠合 反應，於15至40¾下攪拌3至30分鐘，再調整pH值使 適於作為飼料，然後去除液體成份並K暖空氣流進行 乾埭。 12. 如申請專利範圃第11項之方法，其中，阏料濕粉料係 在進行乾嫌之前以已知方法壓成顆粒者。 13. 如申講専利範圍第10項之飼料添加劑，其中該鐮刀臑 徽菌毒素為T-2毒素、脫氧雪腐鐮刀菌酵、及玉米烯 m。_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公董） 2