TW202346576A

TW202346576A - 治療性t細胞產品

Info

Publication number: TW202346576A
Application number: TW112113710A
Authority: TW
Inventors: 鄭榮格; 佩雲張; 建榮羅
Original assignee: 新加坡商泰莎治療有限公司; 新加坡科技研究局
Priority date: 2022-04-13
Filing date: 2023-04-12
Publication date: 2023-12-01
Also published as: US20250213687A1; CN119384290A; JP2025513890A; KR20250024750A; WO2023198744A1; EP4507721A1

Abstract

揭露包含增加SERPINB9之表現或活性之修飾的免疫細胞。亦揭露包含此類細胞的組成物，以及使用此類細胞及組成物的方法。

Description

治療性T細胞產品

發明領域

本申請案主張於2022年4月13日申請之US 63/330718以及於2023年2月17日申請之US 63/446520的優先權，其內容及要素係出於所有目的各自藉由引用方式併入本文中。

本揭露係有關於分子生物學領域，更具體地係有關於細胞療法。本揭露亦係有關於醫學治療及預防方法。

發明背景

過繼細胞療法已成為各種癌症的一強大且有效治療。例如，表現CD19嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)之T細胞對抗B細胞惡性腫瘤係非常有效，且病毒特異性T細胞(virus specific T-cells, VSTs)在治療具有艾司坦氏-巴爾氏病毒(Epstein-Barr virus, EBV)相關淋巴瘤之患者及在造血幹細胞移植(hematopoietic stem cell transplant, HSCT)受體中的病毒感染方面表現出巨大潛力。

為了避免移植物抗宿主疾病(graft-vs-host disease, GVHD)或移植物排斥，大部分細胞療法係自體的。然而，許多挑戰係與此類高度個人化治療相關，因為其等係從衍生自具有癌症或遺傳性疾病之患者的細胞所產生。再者，高成本以及長「針對針(needle-to-needle)」時間限制了自體細胞療法之使用。

另一方面，現成的第三方衍生細胞(off-the-shelf third party derived cells)係用作為定點照護患者的一隨時可用療法來源，並且可克服與客製化細胞產品相關的許多挑戰。然而，對抗同種異體第三方衍生治療性細胞的不所欲宿主免疫反應限制了治療的生物可利用性及有效性。已做出努力來增加該治療性產品的持久性並且降低該治療性產品的同種異體消除，其係藉由例如表現一靶向並殺滅同種異體反應性宿主T及NK細胞之同種異體防禦受體(allogeneic defence receptor, ADR)(1, 2)、HLA分子(3)及CD52 (4, 5)之基因剔除，以及細胞包封方法以對該宿主免疫系統隱藏該治療性(6)。然而，許多此等方法對該宿主產生不良效果，諸如同種異體反應性或病原體特異性免疫細胞之消除，其可能會導致伺機型感染(opportunistic infection)。仍然強烈需要一種在不傷害宿主免疫力的情況下保護該治療性細胞的策略。

顆粒酶B (Granzyme B, GzmB)係一種絲胺酸蛋白酶，其已被描述為T細胞或自然殺手(natural killer, NK)細胞用於清除同種異體細胞或經病原體感染細胞的一關鍵細胞毒性分子(7-9)。此外，在刺激之後在該等治療性細胞內所產生之顆粒酶B (亦即內在顆粒酶B)亦係與體內恆定細胞死亡相關(Bird et al., Cell Death Differ. (2014) 21, 876-887)。GzmB切割其標靶蛋白質，諸如促細胞凋亡Bcl-2家族成員Bid或者細胞凋亡半胱天冬酶基質(例如，DNA-PK、PARP及NuMA)，以分別地造成粒線體不穩定以及半胱天冬酶活化，導致該等經靶向細胞的細胞凋亡(10, 11)。SERPINB9野生型(在本文中亦被稱為SB9(WT))藉由充當一偽基質來抑制GzmB，其與GzmB形成一穩定的共價鍵，從而阻止細胞凋亡之活化(12)。在SB9的反應性中心環(reactive centre loop, RCL)的P1位置的麩胺酸(340E)對於其對GzmB之特異性係至關重要，但是會限制其與其他涉及Fas介導細胞凋亡之半胱天冬酶的相互作用(13)。將麩胺酸取代為天冬胺酸(E340D)，形成在本文中被稱為SB9(CAS)的變異體，已顯示可擴大SB9對GzmB及Fas介導細胞凋亡兩者的抑制(13)。亦觀察到SB9野生型對活性氧物質(reactive oxygen species, ROS)敏感，且C341S及C342S之轉化導致一功能性SB9，形成在本文中被稱為SB9(ROS)的變異體，其抵抗ROS失活同時維持GzmB抑制(14)。

發明概要

在一第一態樣中，本揭露提供一種免疫細胞，其包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。特別地，本揭露提供一種免疫細胞，其係用於一藉由過繼細胞轉移之治療或預防方法，其包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。

在一些實施態樣中，該免疫細胞包含編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸。在一些實施態樣中，該編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸係一表現載體，或係包含在一表現載體中；任選地，其中該表現載體係一反轉錄病毒表現載體。在一些實施態樣中，該SERPINB9多肽包含以下或由以下所構成：SEQ ID NO：1、4、5、6或7之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1、4、5、6或7具有至少85%胺基酸序列一致性之其變異體。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係一效應免疫細胞；任選地，其中該效應免疫細胞係一T細胞或者一自然殺手(NK)細胞。

在一些實施態樣中，該免疫細胞包含編碼一嵌合抗原受體(CAR)之核酸。在一些實施態樣中，該CAR包含一抗原結合域，所述抗原結合域結合至一選自於以下之癌症相關抗原：CD30、CD19、CD20、CD22、B7H3、c-Met、ROR1R、CD4、CD7、CD38、BCMA、間皮素(Mesothelin)、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、EpCAM、LeY及PSCA；任選地，其中該CAR包含一結合至CD30之抗原結合域。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係一病毒特異性T細胞或者一經活化T細胞(activated T cell, ATC)。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係一病毒特異性T細胞。在一些實施態樣中，該病毒特異性T細胞對一選自於以下之病毒具有特異性：艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)、腺病毒、細胞巨大病毒(cytomegalovirus, CMV)、人類乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus, HPV)、流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、C型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)、人類免疫缺乏病毒(human immunodeficiency virus, HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus, LCMV)、單純疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)、BK病毒(BK virus, BKV)，或者水痘帶狀疱疹病毒(varicella zoster virus, VZV)。在一些實施態樣中，該病毒係EBV。

本揭露亦提供一種醫藥組成物，其包含根據本揭露之免疫細胞，以及一醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。

本揭露亦提供一種根據本揭露之免疫細胞或醫藥組成物，其係用於一醫學治療或預防方法。

本揭露亦提供一種根據本揭露之免疫細胞或醫藥組成物在製造用於一醫學治療或預防方法之藥物中的用途。

本揭露亦提供一種治療或預防在一主體(subject)中的一疾病或病狀的方法，其包含向一主體投予一治療上或預防上有效量之根據本揭露之免疫細胞或醫藥組成物。

本揭露亦提供一種用於降低在一細胞中的一絲胺酸蛋白酶或一半胱天冬酶之活性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。

本揭露亦提供一種用於增加一細胞對一絲胺酸蛋白酶或一半胱天冬酶之活性之抗性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。

本揭露亦提供一種用於增加一細胞對顆粒酶B之細胞殺滅之抗性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。

本揭露亦提供一種用於增加一細胞對由一死亡受體所介導之細胞凋亡之抗性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。

在根據本揭露之各種態樣的一些實施態樣中，修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性包含將編碼一SERPINB9多肽之核酸引入至該細胞中。在一些實施態樣中，該編碼一SERPINB9多肽之核酸係一表現載體，或係包含在一表現載體中；任選地，其中該表現載體係一反轉錄病毒表現載體。在一些實施態樣中，該SERPINB9多肽包含以下或由以下所構成：SEQ ID NO：1、4、5、6或7之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1、4、5、6或7具有至少85%胺基酸序列一致性之其變異體。

在一些實施態樣中，該細胞係一效應免疫細胞；任選地，其中該效應免疫細胞係一T細胞或者一自然殺手(NK)細胞。

在一些實施態樣中，該細胞包含編碼一嵌合抗原受體(CAR)之核酸。在一些實施態樣中，該CAR包含一抗原結合域，所述抗原結合域結合至一選自於以下之癌症相關抗原：CD30、CD19、CD20、CD22、B7H3、c-Met、ROR1R、CD4、CD7、CD38、BCMA、間皮素、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、EpCAM、LeY及PSCA；任選地，其中該CAR包含一結合至CD30之抗原結合域。

在一些實施態樣中，該細胞係一病毒特異性T細胞。在一些實施態樣中，該病毒特異性T細胞對一選自於以下之病毒具有特異性：艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)、腺病毒、細胞巨大病毒(CMV)、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)、流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺乏病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒(HSV)、BK病毒(BKV)，或者水痘帶狀疱疹病毒(VZV)。在一些實施態樣中，該病毒係EBV。

本揭露亦提供一種用於治療或預防一癌症的免疫細胞，其中：該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)的信號傳導域；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。

本揭露亦提供一種免疫細胞在製造用於治療或預防一癌症之藥物中的用途，其中：該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAM)的信號傳導域；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。

本揭露亦提供一種治療或預防在一主體中的一癌症的方法，其包含向一主體投予一治療上或預防上有效量之免疫細胞，其中：該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAM)的信號傳導域；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞。

本揭露亦提供一種用於治療或預防一癌症的免疫細胞，其中：該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。

本揭露亦提供一種免疫細胞在製造用於治療或預防一癌症之藥物中的用途，其中：該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。

本揭露亦提供一種治療或預防在一主體中的一癌症的方法，其包含向一主體投予一治療上或預防上有效量之免疫細胞，其中：該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。

在一些實施態樣中，該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAM)的信號傳導域。

在根據本揭露之各種態樣的一些實施態樣中，該主體(亦即該經治療/待治療主體)相對於該免疫細胞(亦即根據治療/預防該經投予/待投予免疫細胞)係同種異體的。

在根據本揭露之各種態樣的一些實施態樣中，該免疫細胞包含編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸。在一些實施態樣中，該編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸係一表現載體，或係包含在一表現載體中；任選地，其中該表現載體係一反轉錄病毒表現載體。在一些實施態樣中，該SERPINB9多肽包含以下或由以下所構成：SEQ ID NO：1、4、5、6或7之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1、4、5、6或7具有至少85%胺基酸序列一致性之其變異體。說明

本揭露係基於本發明人之意外發現，其中上調在免疫細胞中SERPINB9之表現/活性會增加其等在同種異體效應免疫細胞的存在下的持久性/存活。此被認為係在此類細胞中顆粒酶B之活性受到抑制的結果。因此，上調在細胞中SERPINB9之表現/活性，所述細胞將用於藉由過繼細胞轉移之疾病治療方法中，會增加其等在該受體主體中的持久性，特別係在同種異體移植的情況下。

在本文中顯示經修飾以上調SERPINB9之表現/活性的細胞在體外增殖/擴增至與缺乏此類修飾之等效細胞類似的程度，且當此類細胞係效應免疫細胞時，其等展現與缺乏修飾以上調SERPINB9之表現/活性之等效細胞類似的效應活性。相較於缺乏此類修飾之等效細胞，以此種方式經修飾細胞亦具有一可相比之毒性概況(亦即對一同種異體受體主體)。 SERPINB9

SERPINB9 (亦稱為細胞質抗蛋白酶3 (CAP-3/CAP3)或者肽酶抑制劑9 (PI-9)係藉由UniProt P50453所鑑定之蛋白質。人類SERPINB9具有SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列。SERPINB9係蛋白酶抑制劑絲胺酸蛋白酶抑制劑(Serpin)家族的一成員。SERPINB9係細胞毒性淋巴細胞絲胺酸蛋白酶顆粒酶B的一細胞內抑制劑。

SERPINB9之結構及功能係綜述例如於Kaiserman et al., Cell Death Differ. (2010) 17(4):586-95、Bird et al., Mol Cell Biol. (1998), 18(11):6387-98，以及Bird et al., Cell Death Differ. (2014) 21, 876-887中，其全部係藉由全文引用方式併入本文中。SERPINB9存在於細胞的細胞核及細胞質內，並且係在免疫豁免部位(例如胎盤及肺臟)、T細胞、抗原呈現細胞，以及造血幹細胞中內源性地表現。在T細胞中，已報告SERPINB9會預防經錯誤引導之顆粒酶B在免疫突觸所造成的誤殺(fratricide)。SERPINB9亦抑制絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)對抗該等產生該(等)酶之細胞的活性。亦即，SERPINB9保護經活化、表現絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之效應免疫細胞免受其等所產生之絲胺酸蛋白酶的作用，亦即SERPINB9保護細胞免受由自源性來源之絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)所造成的自溶(autolysis)。

絲胺酸蛋白酶抑制劑將一經暴露反應性中心環(RCL)呈現給其等之標靶絲胺酸蛋白酶，其然後切割在該絲胺酸蛋白酶抑制劑之兩個殘基P1與P1’之間的肽鍵。此切割會觸發在該絲胺酸蛋白酶抑制劑中的一構形變化，不可逆地將該蛋白酶困在一經共價結合複合物中。在P1周圍的殘基係有助於蛋白酶結合，且絲胺酸蛋白酶抑制劑RCLs之突變已顯示會廢止抑制及/或改變標靶特異性。

人類SERPINB9的RCL係由SEQ ID NO：1之位置334至348所形成，且係如SEQ ID NO：2所示。人類SERPINB9的P1殘基係在SEQ ID NO：1之位置340的麩胺酸殘基，且人類SERPINB9的P1’殘基係在SEQ ID NO：1之位置341的半胱胺酸殘基。

在人類SERPINB9中的該等修飾T327R及E340A已顯示會廢止SERPINB9在體外抑制顆粒酶B的能力(參見Bird et al., Mol Cell Biol. (1998), 18(11):6387-98)。該E340A修飾會移除在P1的關鍵麩胺酸殘基，且該T327R修飾會破壞絲胺酸蛋白酶抑制劑環移動性及抑制性功能所需之保守近端鉸鏈域。

亦已報告野生型SERPINB9會抑制半胱天冬酶活性(參見例如Annand et al., Biochem. J. (1999) 342(Pt 3): 655-665)。該修飾E340D已顯示會降低SERPINB9對顆粒酶B的抑制，但是會擴增其標靶特異性並增加其對抗半胱天冬酶的抑制性活性，且因此抑制Fas介導細胞凋亡(參見Bird et al., Mol Cell Biol. (1998), 18(11):6387-98)。

該等修飾C341S及C342S已顯示會降低SERPINB9的活性氧物質(ROS)介導失活，同時保留絲胺酸蛋白酶抑制活性(參見Mangan et al., J. Biol. Chem. (2016) 291(7):3626-38)。

在本說明書中，「SERPINB9」係指來自於任何物種的SERPINB9，並且包括來自於任何物種的同功型(isoforms)、片段、變異體或同源物(homologues)。

一「片段」通常係指該參考蛋白質的一部分。SERPINB9的一片段可具有10、20、30、40、50、100、150、200、250、300或350個胺基酸中之一者的最小長度，並且可具有20、30、40、50、100、150、200、250、300或350個胺基酸中之一者的最大長度。一「同功型」通常係指該參考蛋白質的一變異體，其係由與該參考蛋白質之物種相同的物種所表現。一「同源物」通常係指該參考蛋白質的一變異體，其係由與該參考蛋白質之物種不同的物種所產生。同源物包括直系同源物(orthologues)。

一「變異體」通常係指一蛋白質具有一胺基酸序列包含一或多個相對於該參考蛋白質之胺基酸序列的胺基酸取代、插入、缺失或其他修飾，但是與該參考蛋白質之胺基酸序列保留相當程度的胺基酸序列一致性(例如至少70%)。

在一些實施態樣中，該SERPINB9係來自於一哺乳類(例如一靈長類(恆河猴、食蟹猴或人類)及/或一囓齒類(例如大鼠或鼠類)SERPINB9的SERPINB9。SERPINB9的同功型、片段、變異體或同源物可任選地表徵為與來自於例如人類的一給定物種的一未成熟或成熟SERPINB9同功型的胺基酸序列具有至少70%胺基酸序列一致性，較佳地係80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者。

在一些實施態樣中，該SERPINB9係人類SERPINB9。在一些實施態樣中，該SERPINB9係食蟹猴SERPINB9。在一些實施態樣中，該SERPINB9係小鼠SERPINB9 (亦稱為「SPI6」)。

同功型、片段、變異體或同源物可任選地係功能性同功型、片段、變異體或同源物，例如具有該參考SERPINB9 (例如人類SERPINB9)的一功能性活性，如藉由一合適的針對該功能性活性(例如蛋白酶抑制(例如絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)及/或半胱胺酸蛋白酶(例如半胱天冬酶)抑制))的測定法的分析來測定。

在一些實施態樣中，SERPINB9包含與SEQ ID NO：1之胺基酸序列具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%、≥ 99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列，或由其所構成。

本揭露之態樣及實施態樣係有關於SERPINB9變異體。如在本文中所指，一「SERPINB9變異體」係指一SERPINB9，其包含一或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個中之一者)相對於一參考SERPINB9的修飾。

一「修飾」係指一相對於一參考胺基酸序列的差異。一參考胺基酸序列可以係由該編碼該相關蛋白質之基因的最常見核苷酸序列所編碼之胺基酸序列。在本文之實施態樣中(且亦更普遍地在本技術領域中)，一「修飾」亦可被稱為一「取代」或者一「突變」。

在較佳的實施方態樣中，根據本揭露之SERPINB9變異體包含與SEQ ID NO：1具有至少70%胺基酸序列一致性的胺基酸序列，並且包含一或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個中之一者)相對於SEQ ID NO：1的修飾。

一修飾典型地包含用一非一致「替代」胺基酸殘基來取代一胺基酸殘基。根據本揭露之修飾的一替代胺基酸殘基可以係一天然存在之胺基酸殘基(亦即由該遺傳密碼所編碼)，其係與在修飾前在該胺基酸序列之該相關位置之該胺基酸殘基非一致，其係選自於：丙胺酸(Ala)、精胺酸(Arg)、天冬醯胺酸(Asn)、天冬胺酸(Asp)、半胱胺酸(Cys)、麩醯胺酸(Gln)、麩胺酸(Glu)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、白胺酸(Leu)、離胺酸(Lys)、甲硫胺酸(Met)、苯丙胺酸(Phe)、脯胺酸(Pro)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)，以及纈胺酸(Val)。在一些實施態樣中，一修飾的一替代胺基酸殘基可以係一非天然存在之胺基酸殘基，亦即不同於在前句中所述那些的一胺基酸殘基。非天然存在之胺基酸殘基的實例包括正白胺酸、鳥胺酸、正纈胺酸、高絲胺酸、aib，以及其他胺基酸殘基類似物，諸如那些敘述於Ellman, et al., Meth. Enzym. 202 (1991) 301-336中。

根據本揭露之SERPINB9變異體可包含在一SERPINB9之胺基酸序列之特定位置的修飾。

在本文中，當提及人類野生型SERPINB9 (亦即具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)的一位置時，亦考量與人類野生型SERPINB9同源序列中的該相應位置。與在人類野生型SERPINB9中所鑑定那些相應位置可以藉由序列比對來鑑定，其可以例如使用諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)之序列比對軟體來進行。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9變異體包含在以下位置中之一或多者的修飾(相對於SEQ ID NO：1所編號)：340、341及342。在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含在位置340的修飾。在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含在位置341及/或342的修飾。在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含在位置340、341及/或342的修飾。

在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含340D。在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含341S。在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含342S。

在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含根據SEQ ID NO：3之胺基酸序列，其中該胺基酸序列係與SEQ ID NO：2非一致。在一些實施態樣中，一SERPINB9變異體包含根據SEQ ID NO：4之胺基酸序列或由其所構成，其中該胺基酸序列係與SEQ ID NO：1非一致。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：1、4、5、6或7之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1、4、5、6或7具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列。在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：4、5、6或7之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：4、5、6或7具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列。在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：4、5或7之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：4、5或7具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，一SERPINB9 (或者一SERPINB9變異體)包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%序列一致性中之一者的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，一SERPINB9 (或者一SERPINB9變異體)包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：4之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：4具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%序列一致性中之一者的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，一SERPINB9 (或者一SERPINB9變異體)包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：5之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：5具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%序列一致性中之一者的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，一SERPINB9 (或者一SERPINB9變異體)包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：6之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：6具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%序列一致性中之一者的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，一SERPINB9 (或者一SERPINB9變異體)包含以下或由以下所構成：具有SEQ ID NO：7之胺基酸序列的胺基酸序列，或與SEQ ID NO：7具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%或≥99%序列一致性中之一者的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9 (或者SERPINB9變異體)不包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，或不由其所構成。在一些實施態樣中，一SERPINB9包含與SEQ ID NO：1之胺基酸序列非一致的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9 (或者SERPINB9變異體)不包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列，或不由其所構成。在一些實施態樣中，一SERPINB9包含與SEQ ID NO：5之胺基酸序列非一致的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9 (或者SERPINB9變異體)不包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列，或不由其所構成。在一些實施態樣中，一SERPINB9包含與SEQ ID NO：6之胺基酸序列非一致的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9 (或者SERPINB9變異體)不包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列，或不由其所構成。在一些實施態樣中，一SERPINB9包含與SEQ ID NO：7之胺基酸序列非一致的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9 (或者SERPINB9變異體)不包含SEQ ID NO：47之胺基酸序列，或不由其所構成。在一些實施態樣中，一SERPINB9包含與SEQ ID NO：47之胺基酸序列非一致的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，在本文中所指之一胺基酸序列的一或多個胺基酸(例如SERPINB9或者一SERPINB9變異體)係經另一個胺基酸取代。一取代包含用一非一致「替代」胺基酸殘基來取代一胺基酸殘基。根據本揭露之取代的一替代胺基酸殘基可以係一天然存在之胺基酸殘基(亦即由該遺傳密碼所編碼)，其係與在該等效、未經取代胺基酸序列之該相關位置之該胺基酸殘基非一致，其係選自於：丙胺酸(Ala)、精胺酸(Arg)、天冬醯胺酸(Asn)、天冬胺酸(Asp)、半胱胺酸(Cys)、麩醯胺酸(Gln)、麩胺酸(Glu)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、白胺酸(Leu)、離胺酸(Lys)、甲硫胺酸(Met)、苯丙胺酸(Phe)、脯胺酸(Pro)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)，以及纈胺酸(Val)。在一些實施態樣中，一替代胺基酸可以係一非天然存在之胺基酸殘基，亦即不同於在前句中所述那些的一胺基酸殘基。非天然存在之胺基酸殘基的實例包括正白胺酸、鳥胺酸、正纈胺酸、高絲胺酸、aib，以及其他胺基酸殘基類似物，諸如那些敘述於Ellman et al.,Meth. Enzym. (1991) 202:301-336中。

在一些實施態樣中，一取代可以係生化上保守的。在一些實施態樣中，下表第1至5行中之一者提供一欲被取代之胺基酸，該取代的該替換胺基酸係在同一行中所提供的另一個、非一致胺基酸：

行	共有性質	胺基酸
1	疏水性	Met、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Tyr、Phe、正白胺酸
2	中性親水性	Cys、Ser、Thr、Asn、Gln
3	酸性或者帶負電	Asp、Glu
4	鹼性或者帶正電	His、Lys、Arg
5	取向影響(Orientation influencing)	Gly、Pro

作為闡明，在一些實施態樣中，其中當一Met殘基欲被取代，該替代胺基酸可選自於Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Tyr、Phe及正白胺酸。

在一些實施態樣中，在一取代中的一替代胺基酸可具有與其替代之胺基酸殘基相同的側鏈極性。在一些實施態樣中，在一取代中的一替代胺基酸可具有與其替代之胺基酸殘基相同的側鏈電荷(在pH 7.4下)：

胺基酸	側鏈極性	側鏈電荷(pH 7.4)
丙胺酸	非極性	中性
精胺酸	鹼性極性	正
天冬醯胺酸	極性	中性
天冬胺酸	酸性極性	負
半胱胺酸	非極性	中性
麩胺酸	酸性極性	負
麩醯胺酸	極性	中性
甘胺酸	非極性	中性
組胺酸	鹼性極性	正(10%) 中性(90%)
異白胺酸	非極性	中性
白胺酸	非極性	中性
離胺酸	鹼性極性	正
甲硫胺酸	非極性	中性
苯丙胺酸	非極性	中性
脯胺酸	非極性	中性
絲胺酸	極性	中性
蘇胺酸	極性	中性
色胺酸	非極性	中性
酪胺酸	極性	中性
纈胺酸	非極性	中性

亦即，在一些實施態樣中，一非極性胺基酸係經另一個、非一致的非極性胺基酸取代。在一些實施態樣中，一極性胺基酸係經另一個、非一致的極性胺基酸取代。在一些實施態樣中，一酸性極性胺基酸係經另一個、非一致的酸性極性胺基酸取代。在一些實施態樣中，一鹼性極性胺基酸係經另一個、非一致的鹼性極性胺基酸取代。在一些實施態樣中，一中性胺基酸係經另一個、非一致的中性胺基酸取代。在一些實施態樣中，一正胺基酸係經另一個、非一致的正胺基酸取代。在一些實施態樣中，一負胺基酸係經另一個、非一致的負胺基酸取代。

在一些實施態樣中，(多個)取代可以係功能上保守的。亦即，在一些實施態樣中，相較於該等效未經取代分子，該取代可能不會影響(或者可能不會實質地影響)該包含該取代之抗原結合分子的一或多個功能性性質(例如標靶結合)。

本揭露之態樣及實施態樣係有關於SERPINB9多肽。根據本揭露之SERPINB9多肽可以係根據在上文中所述之任何實施態樣之SERPINB9或SERPINB9變異體。

本揭露亦提供一融合多肽，其包含如在本文中所述之SERPINB9多肽，以及另一個所關注多肽。該SERPINB9多肽的胺基酸序列以及其他所關注多肽的胺基酸序列可被提供。

根據此類態樣及實施態樣，所關注多肽可以係一用於引導一免疫細胞之活性對抗一表現一給定標靶抗原之細胞的分子。在一些實施態樣中，一用於引導一免疫細胞之活性對抗一表現一給定標靶抗原之細胞的分子可以係一嵌合抗原受體(CAR)或者一T細胞受體(TCR)。

根據此類實施態樣，該SERPINB9多肽以及其他所關注多肽可以係藉由一連接子序列接合。在一些實施態樣中，該連接子序列可以係一可切割連接子。亦即，該連接子序列可包含能夠被切割的一胺基酸序列。例如，該連接子序列可包含一序列，其能夠充當一能夠裂解肽鍵之酶的一基質，亦即一切割位點。許多此類切割位點係分子生物學領域技術人員已知的並且可以被使用。在一些實施態樣中，該可切割連接子可包含一自動切割位點。自動切割位點無需酶處理即可自動地被切割。2A切割位點包含典型「NPGP」基序，其在「G/P」被切割。2A切割位點包括該等P2A T2A、E2A及F2A自動切割位點。一包含一2A自動切割位點之連接子序列在本文中係被稱為一2A連接子。在該等實驗實施例中所述之特定建構體使用一P2A自動切割位點(亦即在一P2A連接子中)。在該等實驗實施例中所述之特定建構體使用一T2A自動切割位點(亦即在一T2A連接子中）。

在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[SERPINB9多肽]-[其他所關注多肽]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[SERPINB9多肽]-[可切割連接子]-[其他所關注多肽]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[SERPINB9多肽]-[可切割連接子]-[CAR]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[SERPINB9多肽]-[2A連接子]-[CAR]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[SERPINB9多肽]-[2A連接子]-[CAR]-[2A連接子]-[其他所關注多肽]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[SERPINB9多肽]-[2A連接子]-[其他所關注多肽]-[2A連接子]-[CAR]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[其他所關注多肽]-[SERPINB9多肽]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[其他所關注多肽]-[可切割連接子]-[SERPINB9多肽]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[CAR]-[可切割連接子]-[SERPINB9多肽]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[CAR]-[2A連接子]-[SERPINB9多肽]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[CAR]-[2A連接子]-[SERPINB9多肽]-[2A連接子]-[其他所關注多肽]-[... ]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[CAR]-[2A連接子]-[其他關注之多肽]-[2A連接子]-[SERPINB9多肽]-[... ]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[其他所關注多肽]-[2A連接子]-[SERPINB9多肽]-[2A連接子]-[CAR]-[...]-C端。在一些實施態樣中，該融合多肽包含以下結構：N端-[...]-[其他所關注多肽]-[2A連接子]-[CAR]-[2A連接子]-[SERPINB9多肽]-[...]-C端。

如在本文中用於多肽結構之表示，「[...]」表明進一步(多個)所關注多肽/(多個)蛋白質域/(多個)區域之任選的存在。例如，在前段的該等結構中，進一步(多個)所關注多肽/(多個)蛋白質域/(多個)區域可任選地存在於該SERPINB9多肽的上游，在該融合多肽的N端之前。進一步，如在本文中用於多肽結構之表示，「-」表明一任選的連接子序列。例如，在前段的最後結構中，一連接子序列可任選地被提供在該SERPINB9多肽與該2A連接子之間。

在一些實施態樣中，根據本揭露之多肽包含與SEQ ID NO：43、44、45或46具有至少70%胺基酸序列一致性，例如≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥91%、≥92%、≥93%、≥94%、≥95%、≥96%、≥97%、≥98%、≥ 99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列，或由其所構成。用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑

本揭露之態樣及實施態樣係有關於用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑。如在本文中所使用，一「用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑」係指一用於增加SERPINB9之表現(亦即基因及/或蛋白質表現)或活性的試劑。上調SERPINB9之表現及/或活性的試劑可替代地被稱為用於增加/增強SERPINB9之表現或活性的試劑。此類試劑亦可被稱為「SERPINB9促效劑」或「SERPINB9增強劑」。

如在本文中所使用，「表現」可以係基因或蛋白質表現。基因表現涵蓋DNA至RNA的轉錄，並且可以藉由本領域技術人員已知的各種方式來測量，例如藉由定量即時PCR (qRT-PCR)或者藉由基於報導子之方法來測量mRNA之水平。類似地，蛋白質表現可以藉由本領域熟知的各種方法來測量，例如藉由基於抗體之方法，例如藉由西方墨點法、免疫組織化學、免疫細胞化學、流式細胞術、ELISA、ELISPOT，或者基於報導子之方法。

SERPINB9之表現上調的特徵在於編碼SERPINB9之RNA的水平增加，及/或SERPINB9蛋白質的水平增加，相對於在不存在此類上調的情況下的水平。類似地，SERPINB9之活性上調的特徵在於該相關活性的水平增加，相對於在不存在此類上調的情況下的水平。

因此，用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑包括增加SERPINB9之基因及/或蛋白質表現的水平的試劑，以及增加SERPINB9之活性的水平的試劑。將理解在前句中的增加係指在不存在該試劑的情況下所觀察到的SERPINB9之表現的水平，或者該相關SERPINB9活性的水平。

如在本文中所使用，SERPINB9的一「活性」可以係指抑制一蛋白酶。SERPINB9的一活性可以係抑制一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)及/或一半胱胺酸蛋白酶(例如半胱天冬酶)。抑制一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)可包含結合至及/或失活該絲胺酸蛋白酶。

在一些實施態樣中，根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑(亦即SERPINB9促效劑)展現以下性質中之一或多者：增加SERPINB9之表現(例如基因及/或蛋白質表現)；增加編碼SERPINB9之RNA的水平；增加編碼SERPINB9之核酸的轉錄；降低編碼SERPINB9之RNA的降解；增加SERPINB9蛋白質的水平；降低SERPINB9蛋白質的降解；或者增加SERPINB9活性之一相關者的水平。

將理解一給定SERPINB9促效劑可展現一個以上在前段中所述之性質。針對在前段中所述之性質，一給定SERPINB9促效劑可使用合適的測定法來評估。例如，該等測定法可以係例如體外測定法，任選地係基於細胞之測定法或無細胞之測定法。在一些實施態樣中，該等測定法可以係例如體內測定法，亦即在非人類之動物中進行。在一些實施態樣中，該等測定法可以係例如離體測定法，亦即使用從一主體獲得之細胞/組織/一器官進行。

當測定法係基於細胞之測定法時，其等可包含用一給定試劑處理細胞以測定該試劑是否展現該等所述性質中之一或多者。測定法可使用經可檢測實體標記之物種以促進其等之檢測。測定法可包含在用一系列量/濃度之給定試劑(例如一稀釋系列)個別地處理細胞之後評估該等所述性質。在此類基於細胞之測定法中所使用之該等細胞可表現SERPINB9。

用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑，其能夠增加SERPINB9之基因表現及/或增加編碼SERPINB9之RNA的水平及/或增加編碼SERPINB9之核酸的轉錄及/或降低編碼SERPINB9之RNA的降解，可使用包含檢測及/或定量編碼SERPINB9之RNA的水平的測定法來鑑定。此類測定法可包含藉由RT-qPCR、北方墨點法等等定量編碼SERPINB9之RNA，其等係本領域技術人員熟知的技術。該等方法可使用引子及/或探針來檢測及/或定量編碼SERPINB9之RNA。此類測定法可包含使體外培養之細胞與一推定SERPINB9促效劑接觸，且隨後地(例如在一適當時間段之後，亦即足以觀察到編碼SERPINB9之RNA的水平發生變化的一時間段)測量編碼SERPINB9之RNA的水平。此類測定法可進一步包含比較在經該推定SERPINB9促效劑處理細胞中編碼SERPINB9之RNA的水平與在一對照條件中所檢測到編碼SERPINB9之RNA的水平，在所述對照條件中相同類型細胞係經受相同條件，除了不是經該推定SERPINB9促效劑處理，而是未經處理，或者係經已知不會影響編碼SERPINB9之RNA的水平的一陰性對照試劑處理。

編碼SERPINB9之核酸的轉錄增加可能係促進編碼SERPINB9之DNA的轉錄所需之因子的組裝及/或活性的結果。編碼SERPINB9之RNA的降解降低可能係編碼SERPINB9之RNA的酶降解降低的結果，例如作為RNA干擾(RNAi)，及/或編碼SERPINB9之RNA的穩定性增加的結果。

在本文中，使細胞與一給定試劑(例如一推定SERPINB9促效劑)「接觸」可包含將該試劑應用至該等細胞，及/或將該試劑與該等細胞混合。在一些實施態樣中，該SERPINB9促效劑係與一或多個用於促進將該SERPINB9促效劑引入至該等細胞中，及/或用於促進該等細胞攝入該SERPINB9促效劑的進一步試劑組合提供至該等細胞。例如，在其中一SERPINB9促效劑係一或多個核酸或由其所編碼的實施態樣中，該等細胞可與該(等)核酸及一用於促進將該(等)核酸引入至該等細胞中的試劑接觸，例如藉由轉染或轉導。

用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑，其能夠增加SERPINB9 蛋白質的水平及/或降低SERPINB9蛋白質的降解及/或增加編碼SERPINB9之mRNA的轉譯，可使用包含檢測SERPINB9蛋白質的水平的測定法來鑑定，例如使用本領域技術人員熟知的技術，諸如基於抗體或報導子之方法(西方墨點法、ELISA、免疫組織/細胞化學等等)。該等方法可使用對SERPINB9具有特異性之抗體。此類測定法可包含使體外培養之細胞與一推定SERPINB9促效劑接觸，且隨後地(例如在一適當時間段之後，亦即足以觀察到SERPINB9蛋白質的水平發生變化的一時間段)測量SERPINB9蛋白質的水平。此類測定法可進一步包含比較在經該推定SERPINB9促效劑處理細胞中SERPINB9蛋白質的水平與在一對照條件中所檢測到SERPINB9蛋白質的水平，在所述對照條件中相同類型細胞係經受相同條件，除了不是經該推定SERPINB9促效劑處理，而是未經處理，或者係經已知不會影響SERPINB9蛋白質的水平的一陰性對照試劑處理。

SERPINB9蛋白質的水平增加可能係例如編碼SERPINB9之RNA的水平增加、編碼SERPINB9之RNA的轉錄後加工增加，或者SERPINB9蛋白質的降解降低的結果。

用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑，其能夠增加SERPINB9之功能的水平(例如如在上文中所述之SERPINB9之功能)，可使用包含檢測該相關功能的水平的測定法來鑑定。檢測一給定功能的水平可包含檢測及/或定量該功能之一相關者。此類測定法可包含使體外培養之細胞與一推定SERPINB9促效劑接觸，且隨後地(例如在一適當時間段之後，亦即足以觀察到該相關功能及/或其相關者的水平發生變化的一時間段)測量該相關功能及/或其相關者的水平。此類測定法可進一步包含比較在經該推定SERPINB9促效劑處理細胞中SERPINB9之功能的水平與在一對照條件中所檢測到SERPINB9之功能的水平，在所述對照條件中相同類型細胞係經受相同條件，除了不是經該推定SERPINB9促效劑處理，而是未經處理，或者係經已知不會影響SERPINB9之該相關功能的水平的一陰性對照試劑處理。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9促效劑能夠增加SERPINB9之表現(例如基因及/或蛋白質表現)/增加編碼SERPINB9之RNA的水平/增加編碼之SERPINB9之核酸的轉錄/增加SERPINB9蛋白質的水平/增加SERPINB9活性之一相關者的水平至大於在不存在該SERPINB9促效劑的情況下或者在已知不具有此類促效劑活性的一相等量對照試劑的存在下所觀察到的水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、 ≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者，在一給定測定法中。

在一些實施態樣中，根據本揭露之SERPINB9促效劑能夠降低SERPINB9蛋白質的降解/降低編碼SERPINB9之RNA的降解至小於在不存在該SERPINB9促效劑的情況下或者在已知不具有此類促效劑活性的一相等量對照試劑的存在下所觀察到的水平的1倍以下，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、 ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者，在一給定測定法中。

在一些實施態樣中，根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑係或者包含編碼SERPINB9之核酸，例如如在本文中所述。核酸及載體

本揭露提供一種或複數種編碼本揭露之(多個)多肽的核酸。例如，本揭露提供一種或複數種編碼一SERPINB9多肽的核酸。亦提供一種或複數種編碼一用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑的核酸。

在一些實施態樣中，該(等)核酸包含DNA及/或RNA或由其所構成。在一些實施態樣中，該(等)核酸可以係一個或複數個載體，或者可以係包含在一個或複數個載體中。亦即，該(等)核酸之該(等)核苷酸序列可以係包含在(多個)載體中。該用於增加SERPINB9之表現或活性的SERPINB9/試劑可以係藉由一編碼該肽/多肽之載體的轉錄以及該經轉錄RNA的隨後轉譯在一細胞內產生。

因此，本揭露亦提供一種或複數種載體，其包含根據本揭露之核酸或複數個核酸。該載體可促進該(等)包含/編碼一SERPINB9多肽之核酸的遞送。該載體可以係一表現載體，其包含用於表現包含/編碼一SERPINB9多肽之(多個)核酸所需之要素。

如在本文中所使用，一「載體」係一核酸分子，其被使用作為一將外源性核酸轉移至一細胞中的媒介物。該載體可以係一用於在該細胞中表現該核酸的載體。此類載體可包括一啟動子序列，其可操作地連接至該編碼待表現序列之核苷酸序列。一載體亦可包括一終止密碼子以及表現增強子。本領域已知的任何合適的載體、啟動子、增強子及終止密碼子可以係用於從根據本揭露之載體表現一肽或多肽。

術語「可操作地連接」可包括其中一選定核酸序列與調節性核酸序列(例如啟動子及/或增強子)係經共價連接的情況，以此一方式使核酸序列之表現係處於該調節性序列之影響或控制之下(藉此形成一表現匣)。因此，一調節性序列係可操作地連接至該選定核酸序列，如果該調節性序列能夠影響該核酸序列的轉錄。所得(多個)轉錄物可然後被轉譯成所欲(多個)肽/(多個)多肽。

合適的載體包括質體、二元載體、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(例如反轉錄病毒載體、例如γ反轉錄病毒載體(例如鼠類白血病病毒(MLV)衍生載體、例如SFG載體)、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、牛痘病毒載體及疱疹病毒載體)、基於轉位子之載體，以及人工染色體(例如酵母人工染色體)，例如如描述於Maus et al., Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225或者Morgan and Boyerinas, Biomedicines (2016) 4:9中，其兩者係藉由全文引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，該載體係一病毒載體。在一些實施態樣中，該載體係一反轉錄病毒載體。在一些實施態樣中，該載體係一MLV衍生載體。在一些實施態樣中，該載體係一SFG載體。

在一些實施態樣中，該載體可以係一真核載體，例如一包含在一真核細胞中從該載體表現核酸所需之要素的載體。在一些實施態樣中，該載體可以係一哺乳類載體，例如包含一細胞巨大病毒(CMV)或SV40啟動子以驅動表現。在一些實施態樣中，該載體包含一細胞或組織特異性啟動子，例如一免疫細胞特異性啟動子。

在一些實施態樣中，基於期望將該核酸遞送至一細胞類型/組織/器官的向性來選擇一載體。在一些實施態樣中，基於期望在一細胞類型/組織/器官中表現SERPINB9的向性來選擇一載體。例如，將該編碼一SERPINB9多肽之核酸遞送至一免疫細胞(例如一效應免疫細胞，例如一T細胞或者一NK細胞)係所欲的。

在一些實施態樣中，根據本揭露之核酸包含修飾以併入一或多個部分，其促進遞送至所關注細胞類型或組織(例如一免疫細胞)及/或被所關注細胞類型或組織(例如一免疫細胞)攝入。在一些實施態樣中，根據本揭露之核酸係連接(例如化學地綴合至)一或多個部分，其促進遞送至所關注細胞類型或組織及/或被所關注細胞類型或組織攝入。

例如，核酸之修飾及調配以促進經靶向遞送至所關注細胞類型及/或組織係描述例如於Lorenzer et al., J Control Release (2015) 203:1-15中，其係藉由全文引用方式併入本文中。該促進遞送至所關注細胞類型或組織及/或被所關注細胞類型或組織攝入的部分可選擇性地結合至所關注標靶細胞類型/組織。該部分可促進穿越所關注標靶細胞類型及/或所關注組織之細胞的細胞膜。該部分可結合至一在所關注標靶細胞類型/組織之細胞表面所表現的分子。該部分可促進所關注標靶細胞類型/組織對該核酸的內部化(例如藉由胞吞)。

在一些實施態樣中，該核酸進一步編碼另一個所關注多肽，例如一用於引導一免疫細胞之活性對抗一表現一給定標靶抗原之細胞的分子(例如一嵌合抗原受體(CAR)或者一T細胞受體(TCR))。

該核酸可包含一編碼如在本文中所述之SERPINB9多肽的核苷酸序列，以及一編碼另一個所關注多肽的核苷酸序列。該等編碼該SERPINB9多肽以及該其他所關注多肽的核苷酸序列可以係在相同的讀框中，並且可不包含被提供在該等核苷酸序列之間中的一終止密碼子。

在一些實施態樣中，根據本揭露之核酸/載體係多順反子(例如雙順反子、三順反子等等)；亦即，在一些實施態樣中，該載體編碼具有多個蛋白質編碼區域的mRNA。在一些實施態樣中，該載體係雙順反子。在一些實施態樣中，該載體包含編碼一內部核醣體進入位點(internal ribosome entry site, IRES)的核酸。在一些實施態樣中，該載體包含允許一SERPINB9多肽以及另一個所關注多肽(例如一CAR)從相同RNA轉錄物個別地轉譯的核酸。

在一些實施態樣中，該核酸編碼如在本文中所述之融合多肽，例如一包含如在本文中所述之SERPINB9多肽以及如在本文中所述之CAR的融合多肽。

根據本揭露之核酸及載體可以係以經純化或經分離形式被提供，亦即來自於其他核酸，或者天然存在之生物材料。 SERPINB9以及用於增加SERPINB9之表現/活性的試劑的應用

根據本揭露之SERPINB9多肽、根據本揭露之編碼SERPINB9多肽的(多個)核酸/(多個)載體，以及根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑可用於各種應用。

本文之實施例2.3證明，經修飾以上調SERPINB9表現/活性之免疫細胞，相較於缺乏此類修飾之等效細胞，對於同種異體反應性免疫細胞的消除較不敏感。SERPINB9之表現/活性增加似乎會保護免疫細胞對抗同種異體效應免疫細胞的細胞溶解活性，特別係顆粒酶B介導細胞溶解。

根據本揭露之SERPINB9多肽、根據本揭露之編碼SERPINB9多肽的(多個)核酸/(多個)載體，以及根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑可用於及/或在包含以下之方法中使用：增加在一細胞中SERPINB9之表現(亦即基因或蛋白質表現)的水平；降低在一細胞中一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性；降低在一細胞中一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性；增加一細胞對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性(及/或降低一細胞的敏感性)；增加一細胞對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如表現顆粒酶B之細胞；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性(及/或降低一細胞的敏感性)；降低表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如表現顆粒酶B之細胞；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅一細胞的速率；增加一細胞對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性(及/或降低一細胞的敏感性)；增加在一同種異體效應免疫細胞的存在下(例如當與同種異體效應免疫細胞共培養時)一細胞的持久性/存活/增殖；增加在一同種異體主體中一細胞的持久性/存活/增殖；降低在一主體中的同種異體移植物排斥；增加在一同種異體效應免疫細胞的存在下(例如當與同種異體效應免疫細胞共培養時)一細胞的抗癌活性；增加在一同種異體主體中一細胞的抗癌活性；或者增加在慢性抗原暴露條件下一細胞的持久性/存活/增殖。

根據前段，「降低」或「增加」可以係相對於該類型細胞通常所展現之相關性質的水平(例如一降低或增加係相對於該類型細胞之相關性質的水平的參考值)，例如在不存在使用本揭露物品之處理的情況下。在前段中所鑑定之該等性質可使用本領域技術人員已知的適當方法來評估。

在一細胞中的SERPINB9之基因表現的表現水平，以及在一細胞中的SERPINB9蛋白質的水平，可以係例如如在上文中所述來評估。

在一細胞中的一給定酶(例如一蛋白酶、一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)、半胱胺酸蛋白酶(例如一半胱天冬酶，例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)之活性的水平可以係使用一用於檢測及/或定量其活性的水平的適當測定法來評估。此類測定法可包含測量一用於該相關酶之基質的水平及/或隨時間測量該酶之活性產物的水平。該等方法可包含將一用於該酶之基質應用於細胞，並且檢測及/或定量基質及/或該基質之酶介導加工產物的水平，在一給定時間段之後。此類測定法可使用經標記物質來檢測及/或定量該基質及/或該酶之活性產物，或者可使用試劑來檢測及/或定量該基質及/或該酶之活性產物。此類測定法亦可使用比色基質或者反應產物。

作為闡明，顆粒酶B之活性可以係使用來自於Enzo Life Sciences, Inc.之顆粒酶B測定法套組(目錄編號BML-AK711-0001)來評估，其使用該比色基質IEPD-pNA。從IEPD-pNA切割該對硝基苯胺(p-nitroanilide, pNA)基團會增加在405nm的吸收，使得顆粒酶B活性可被檢測及定量。用於檢測及定量顆粒酶B活性的其他合適測定法係本領域熟知的，並且包括例如來自於Sigma-Aldrich之顆粒酶B活性測定法套組(目錄編號MAK176)。顆粒酶B活性亦可以被評估，描述例如於Bird et al., Mol Cell Biol. (1998), 18(11):6387-98中，其係藉由引用方式併入上文中。

作為進一步闡明，半胱天冬酶之活性可以係例如使用來自於Promega Corporation之半胱天冬酶-Glo測定法來評估，其使用發光半胱天冬酶基質以及螢光素酶。切割該基質會釋放胺基螢光素，其係一用於螢光素酶之基質。螢光素酶對胺基螢光素的活性導致光的產生，使得能夠檢測及定量半胱天冬酶活性。

在本文中，一「絲胺酸蛋白酶」係一切割在一多肽中的一肽鍵的酶，其中絲胺酸係用作為在該酶活性位點的親核胺基酸。「絲胺酸蛋白酶活性」係指一絲胺酸蛋白酶催化切割在一多肽中的一肽鍵。絲胺酸蛋白酶係綜述例如於Patel, Allergol. Immunopathol. (Madr). (2017) 45(6): 579-591中，其係藉由全文引用方式併入本文中。

在較佳的實施態樣中，一絲胺酸蛋白酶係一顆粒酶。顆粒酶係包含在諸如細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)及自然殺手(NK)細胞之效應免疫細胞的細胞質顆粒內的絲胺酸蛋白酶。顆粒酶係綜述例如於Chowdhury and Lieberman, Annu. Rev. Immunol. (2008) 26: 389-420中(藉由全文引用方式併入本文中)，並且包括顆粒酶A、B、H、K及M。在較佳的實施態樣中，根據本揭露之顆粒酶係顆粒酶B。因此，在一些實施態樣中，一絲胺酸蛋白酶係顆粒酶B。顆粒酶B生物學係綜述例如於Lord et al.Immunol. Rev. (2003) 193:31-38以及Trapani et al., Curr. Opin. Immunol. (2003) 15:533-43中。顆粒酶B切割在天冬胺酸殘基之後的多肽，並且藉由活化該半胱天冬酶(例如劊子手半胱天冬酶-3)來誘發細胞凋亡。人類顆粒酶B亦藉由直接地切割bid及ICAD來活化細胞死亡，分別地活化相同的粒線體及DNA損傷途徑。

在本文中，一「半胱胺酸蛋白酶」係一切割在一多肽中的一肽鍵的酶，其中半胱胺酸係用作為在該酶活性位點的親核胺基酸。「半胱胺酸蛋白酶活性」係指一半胱胺酸蛋白酶催化切割在一多肽中的一肽鍵。半胱胺酸蛋白酶係綜述例如於Verma et al., Front. Pharmacol. (2016) 7:107中，其係藉由全文引用方式併入本文中。

在較佳的實施態樣中，一半胱胺酸蛋白酶係一半胱天冬酶。半胱天冬酶係半胱胺酸依賴性天冬胺酸引導性蛋白酶，其在包括細胞凋亡及細胞焦亡之程式性細胞死亡中發揮作用。半胱天冬酶係綜述例如於Julien and Wells, Cell Death & Differentiation (2017) 24: 1380-1389中(藉由全文引用方式併入本文中)，並且包括半胱天冬酶-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7 、-8、-9、-10、-12及-14。在一些實施態樣中，根據本揭露之半胱天冬酶係一涉及細胞凋亡的半胱天冬酶，例如選自於半胱天冬酶-2、-8、-9、-10、-3、-6及-7。在一些實施態樣中，一半胱天冬酶係一起始子半胱天冬酶，例如選自於半胱天冬酶-2、-8、-9及-10。在一些實施態樣中，一半胱天冬酶係一劊子手半胱天冬酶，例如選自於半胱天冬酶-3、-6及-7。在一些實施態樣中，根據本揭露之半胱天冬酶係一涉及細胞焦亡的半胱天冬酶，例如選自於半胱天冬酶-1、-4、-5及-12。

一細胞對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/敏感性、一細胞對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性/敏感性，以及表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如表現顆粒酶B之細胞；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅一細胞的速率，可以係使用包含檢測及/或定量細胞之細胞溶解/細胞殺滅的測定法來評估。

在一些實施態樣中，該絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)可以係由其對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/敏感性正在被評估的細胞所表現。在一些實施態樣中，該絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)可以係由與其對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/敏感性正在被評估的細胞不同的細胞所表現。在一些實施態樣中，該等表現一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞相對於該細胞係同種異體的。亦即，該表現顆粒酶B之細胞可以係從一主體獲得/衍生，所述主體係不同於從其獲得/衍生該測試細胞之主體(例如一遺傳上非一致主體)。在一些實施態樣中，該等表現一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞相對於該細胞可以係自源的或者係自體的。亦即，該表現顆粒酶B之細胞可以係從一遺傳上一致主體獲得/衍生，或者從與從其獲得/衍生該測試細胞之主體相同的主體獲得/衍生。

在本文中，「由一死亡受體所介導之細胞凋亡」係指表現該死亡受體之細胞的程式性細胞死亡(亦即細胞凋亡)，由死亡受體活化所誘發。由死亡受體所介導之細胞凋亡係綜述例如於Green, Cold Spring Harb Perspect Biol. (2022) 14:a041053中，其係藉由全文引用方式併入本文中。

死亡受體屬於腫瘤壞死因子/神經生長因子超家族。其等係具有一保守細胞質死亡域(death domain, DD)之I 型跨膜蛋白質。死亡受體係在與其等之同源配體連接時被活化。在活化之後，該DD經由其等之死亡域基序促進與轉接蛋白的同型相互作用，活化該半胱天冬酶級聯並且最終致使細胞凋亡。在一些實施態樣中，該死亡受體係選自於：Fas (亦被稱為CD95及APO-1)、腫瘤壞死因子受體-1 (tumour necrosis factor receptor-1, TNFR1)、TRAIL受體-1 (亦被稱為DR4)、TRAIL受體-2 (亦被稱為DR5 )、死亡受體3 (DR3)、死亡受體6 (DR6)、神經生長因子受體(nerve growth factor receptor, NGFR)，以及外異蛋白A受體(Ectodysplasin-A receptor, EDAR)。在一些實施態樣中，該死亡受體係Fas。

在本文中，「Fas介導細胞凋亡」係指表現該Fas受體之細胞的程式性細胞死亡(亦即細胞凋亡)，由其活化所誘發。Fas介導細胞凋亡係綜述例如於Timmer et al., J. Pathol. (2002) 196(2):125-34中，其係藉由全文引用方式併入本文中。Fas介導細胞凋亡典型地涉及Fas與其配體FasL (例如在效應免疫細胞之表面表現)之交聯，活化該半胱天冬酶級聯並且最終致使細胞凋亡。

一細胞對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性/敏感性可以係使用包含檢測及/或定量由一死亡受體所介導之細胞凋亡的測定法來評估。此類測定法可包含使該等細胞與一用於活化由一死亡受體所介導之細胞凋亡的試劑接觸(例如一給定死亡受體之配體或者表現一給定死亡受體之配體的細胞)，並且檢測及/或定量該等細胞的細胞凋亡。例如，此類測定法可包含使該等細胞與一用於活化Fas介導細胞凋亡的試劑接觸(例如FasL或者表現FasL之細胞)，並且檢測及/或定量該等細胞的細胞凋亡。檢測/定量細胞凋亡可包含分析一或多個半胱天冬酶之表現或活性的水平，及/或可包含檢測及/或定量活細胞、死細胞及/或凋亡細胞。檢測/定量細胞凋亡可包含檢測及/或定量細胞凋亡的一或多個標誌物(例如磷脂醯絲胺酸(phosphatidylserine, PS)暴露、Bcl-2家族蛋白(例如Bax、Bak、Bid)活化、ROS產生、半胱天冬酶活化、粒線體膜透化或DNA片段化)。

細胞殺滅可以係例如使用綜述於Zaritskaya et al., Expert Rev Vaccines (2011), 9(6):601-616中的任何方法來研究，藉由全文引用方式併入本文中。細胞毒性之體外測定法/細胞殺滅測定法的實例包括釋放測定法，諸如 ⁵¹Cr釋放測定法、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)釋放測定法、3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)釋放測定法，以及鈣黃綠素-乙醯氧基甲基(鈣黃綠素-AM)釋放測定法。此等測定法基於檢測從經裂解細胞所釋放之因子來測量細胞殺滅。一給定效應免疫細胞類型之細胞殺滅一給定測試細胞類型可以係例如藉由共培養該等測試細胞與該等效應免疫細胞，並且在一合適時間段之後測量該等活的/死的(例如經裂解)測試細胞的數量/比例來分析。其他合適的測定法包括描述於Cerignoli et al., PLoS One. (2018) 13(3): e0193498中的xCELLigence即時細胞溶解體外效力測定法(藉由全文引用方式併入本文中)。相對於細胞殺滅的一參考水平(例如針對該細胞類型)，對表現顆粒酶B之細胞(例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性的增加，及/或對此類細胞之細胞殺滅的敏感性的降低，可以係藉由在一給定時間段之後檢測到死的(例如經裂解)測試細胞的數量/比例降低，及/或活的(例如活的、未經裂解)測試細胞的數量/比例增加來測定。

細胞殺滅一給定測試細胞類型的速率可以係藉由隨時間分析細胞溶解來測定，例如藉由在不同時間點測定經裂解及/或未經裂解測試細胞的數量/比例。例如，此類分析可以使用如描述於本文之實施例1.6中的xCELLigence系統。相對於細胞殺滅的參考速率(例如針對該細胞類型)，細胞殺滅的速率的降低可以係藉由檢測到死的(例如經裂解)測試細胞的數量/比例降低，及/或每單位時間之活的(例如活的、未經裂解)測試細胞的數量/比例增加來測定。

一給定細胞/其細胞族群的持久性/存活/增殖/擴增可以係藉由隨時間測量或監測此類細胞的數量或比例來體外評估。

細胞增殖/擴增可以係藉由分析在一段時間期間的細胞分裂或細胞數量來研究。細胞分裂可以係例如藉由併入3H-胸苷之體外分析或者藉由CFSE稀釋測定法來分析，例如如描述於Fulcher and Wong, Immunol Cell Biol (1999) 77(6): 559-564中，藉由全文引用方式併入本文中。增殖細胞亦可以係藉由一適當測定法藉由併入5-乙炔基-2’-去氧尿苷(EdU)之分析來鑑定，如描述例如於Buck et al., Biotechniques. 2008 Jun; 44(7):927-9以及Sali and Mitchison, PNAS USA 2008 Feb 19; 105(7): 2415-2420中，兩者藉由全文引用方式併入本文中。

一給定細胞類型之細胞增殖或族群擴增的水平亦可以係藉由在一或多個經定義時間點計數該相關細胞類型的數量來評估，例如在特定條件下培養之後。

持久性/存活的增加可以係藉由在一給定時間段之後檢測到活的(例如活的、未經裂解)細胞的一較大數量/比例來測定。

上述細胞殺滅測定法亦可以係用於評估在同種異體效應免疫細胞的存在下細胞的持久性/存活。例如，在同種異體效應免疫細胞的存在下，一給定測試細胞類型的持久性/存活可以係藉由共培養該等測試細胞與該等同種異體效應免疫細胞，並且在一合適時間段之後測量活的/死的(例如經裂解)測試細胞的數量/比例來分析。相對於一參考水平(例如針對該細胞類型)，持久性/存活的增加可以係藉由在一給定時間段之後檢測到死的(例如經裂解)測試細胞的數量/比例降低，及/或活的(例如活的、未經裂解)測試細胞的數量/比例增加來測定。

用於評估在同種異體效應免疫細胞的存在下的增殖/擴增/持久性/存活的合適測定法包括例如混合淋巴細胞反應(mixed lymphocyte reaction, MLR)測定法，諸如描述於本文之實施例1.5中的測定法。

根據在本文中所述之測定法，在其之後評估相關性質的水平的給定/經定義時間段可以係任何合適的時間段，以對在該(等)測試細胞與對照之間的相關性質的水平進行有意義的比較分析，在該相關測定法中。在一些實施態樣中，相關性質的水平係在達到或已達到相關性質的最大水平的一充足時間段或之後來評估，在該相關測定法中。在一些實施態樣中，該給定/經定義時間段係1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天中之一者。在一些實施態樣中，該給定/經定義時間段係3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15天中之一者。

如在本文中所使用，當一給定細胞在本文中係指相對於一參考細胞係「同種異體的」時，其係從一主體獲得/衍生，所述主體係不同於從其獲得/衍生該參考細胞之主體。因此，在前段中所指之同種異體效應免疫細胞係從一主體獲得/衍生，所述主體係不同於從其獲得/衍生該等測試細胞之主體。在一些實施態樣中，一同種異體細胞包含編碼MHC/HLA分子(例如MHC I類α及/或MHC II類分子)之MHC/HLA基因，其係與由該參考細胞之MHC/HLA基因所編碼之MHC/HLA分子(例如MHC I類α及/或MHC II類分子)非一致。

在一主體(例如一同種異體主體)中一給定細胞或細胞族群在體內的存活/持久性可以係例如使用其中細胞係經一可檢測標誌物或報導子標記、引入至該主體中，並且隨時間監測其等之存活的方法來評估。此類方法包括例如用螢火蟲螢光素酶標記細胞，並且藉由生物發光成像在不同時間點測量螢火蟲螢光素酶活性，例如在投予D-螢光素之後(例如如描述於Prescher and Contag, Curr. Opin. Chem. Biol. (2010) 14(1):80-9中，其係藉由全文引用方式併入本文中)。相對於一參考水平(例如針對該細胞類型)，持久性/存活的增加可以係藉由在一給定時間段之後檢測到在該主體中該等測試細胞的一較大數量/比例來測定。

如在本文中所使用，當一主體在本文中係指相對於一參考細胞係「同種異體的」時，該主體係一不同於從其獲得/衍生該參考細胞之主體的主體。因此，在前段中所指之同種異體主體係一不同於從其獲得/衍生該等測試細胞之主體的主體。在一些實施態樣中，一同種異體主體包含編碼MHC/HLA分子(例如MHC I類α及/或MHC II類分子)之MHC/HLA基因，其係與由該參考細胞之MHC/HLA基因所編碼之MHC/HLA分子(例如MHC I類α及/或MHC II類分子)非一致。

用於評估在一同種異體主體(亦即相對於該(等)測試細胞係同種異體的)中一給定細胞或細胞族群在體內的存活/持久性的合適測定法可以係在一代理同種異體主體中進行。一代理同種異體主體可以係藉由將同種異體免疫細胞(亦即相對於該(等)測試細胞係同種異體的)注射至一非同種異體主體中來建立，例如藉由將同種異體效應免疫細胞注射至一MHC剔除小鼠中。因此，一用於評估在一同種異體主體中一給定細胞或細胞族群在體內的存活/持久性的合適測定法可包含共輸注該給定細胞或細胞族群與同種異體免疫細胞(亦即相對於該(等)測試細胞係同種異體的)至一MHC剔除小鼠。在一些實施態樣中，在一同種異體主體(例如一代理同種異體主體)中一給定細胞或細胞族群在體內的存活/持久性可以係實質上如描述於實施例1.10及實施例4中來評估。

上述用於評估在一同種異體主體中細胞的持久性/存活/增殖的方法亦可以係用於評估在一主體中的同種異體移植物排斥。根據本揭露之SERPINB9多肽以及用於增加SERPINB9之表現或活性的其他試劑亦係有用於降低/預防移植物排斥。移植物排斥係指在移植之後一受體的免疫系統破壞經移植細胞/組織/器官。當移植物排斥係一同種異體移植時，其可被稱為同種異體移植物排斥。增加在一細胞中SERPINB9之表現或活性會賦予在該受體主體中對表現顆粒酶B之細胞(例如效應免疫細胞)的絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)介導耗乏的抗性。

一給定細胞類型或此類細胞族群的抗癌活性可以係例如藉由分析此類細胞及/或其相關者之細胞殺滅癌細胞來評估。

抗癌活性可以係例如使用測定法來檢測及/或定量細胞殺滅癌細胞來體外分析。在上文中所述之細胞殺滅測定法可以係用於評估細胞殺滅癌細胞。

例如，一給定測試細胞類型的抗癌活性可以係在同種異體效應免疫細胞的存在下藉由培養該等測試細胞與同種異體效應免疫細胞與癌細胞，並且隨時間監測活的及/或死的(例如經裂解)癌細胞的數量/比例來評估。抗癌活性的增加(例如相對於該類型細胞所展現之抗癌活性的水平在不存在使用本揭露物品之處理的情況下)可以係藉由在一給定時間段之後檢測到活的癌細胞的數量/比例降低，及/或死的(例如經裂解)癌細胞的數量/比例增加來測定。

用於評估一細胞或細胞族群的抗癌活性的合適測定法包括例如混合淋巴細胞反應(MLR)測定法。在一些實施態樣中，一細胞或細胞族群的抗癌活性可以係實質上如描述於本文之實施例1.5中來評估。

抗癌活性亦可以係例如使用測定法來檢測及/或定量在一主體中的細胞殺滅癌細胞來體內分析。

例如，一給定測試細胞類型的抗癌活性可以係使用測定法來評估，其中測試細胞係被投予至一具有一癌症之主體，並且隨時間監測癌細胞的數量/比例、癌症負荷，及/或腫瘤體積。抗癌活性的增加(例如相對於該類型細胞所展現之抗癌活性的水平，例如在不存在使用本揭露物品之處理的情況下)可以係藉由在一給定時間段之後在該主體中檢測到癌細胞的數量/比例降低、癌症負荷降低，及/或腫瘤體積降低來測定。在一些實施態樣中，此類測定法可使用經一可檢測標誌物或報導子標記之癌細胞，且體內抗癌活性可以係藉由隨時間監測該等細胞的數量/比例來評估。此類方法包括例如用螢火蟲螢光素酶標記癌細胞，並且藉由生物發光成像在不同時間點測量螢火蟲螢光素酶活性，例如在投予D-螢光素之後(例如如描述於Prescher and Contag, Curr. Opin. Chem. Biol. (2010) 14(1):80-9中，其係藉由全文引用方式併入本文中)。

在一些實施態樣中，一細胞或細胞族群的抗癌活性可以係實質上如描述於本文之實施例1.10中來評估。

在慢性抗原暴露條件下一細胞或細胞族群的持久性/存活/增殖可以係藉由將細胞暴露於連續抗原攻擊，並且隨時間或在一給定時間段之後測量或監測此類細胞的數量或比例來體外評估。例如，一給定測試細胞類型的持久性/存活可以係藉由進行該等測試細胞與癌細胞之連續共培養(例如藉由重新鋪盤測試細胞與新鮮癌細胞進行多輪腫瘤攻擊)，並且在一合適時間段之後監測活的及/或死的(例如經裂解)測試細胞的數量/比例來分析。一給定測試細胞類型的持久性/存活的增加(例如相對於該類型細胞展現的水平，例如在不存在使用本揭露物品之處理的情況下)可以係藉由在一給定時間段之後檢測到死的(例如經裂解)測試細胞的數量/比例降低，及/或活的(例如活的、未經裂解)測試細胞的數量/比例增加來測定。

在一些實施態樣中，「慢性抗原暴露條件」可以係指用一抗原或一包含/表現一抗原之細胞對該免疫細胞進行多輪刺激(例如至少2、3、4、5、6、7、8、9或10輪)，其中該免疫細胞包含一特異性受體(例如，一具有一結合至該抗原之抗原結合域的CAR，及/或一結合至一包含該抗原之肽之MHC:肽複合物的TCR)。在一些實施態樣中，「慢性抗原暴露條件」可以係指添加一抗原或一包含/表現一抗原之細胞的多個個別實例(例如至少2、3、4、5、6、7、8、9或10個實例)，其中該免疫細胞包含一特異性受體(例如，一具有一結合至該抗原之抗原結合域的CAR，及/或一結合至一包含該抗原之肽之MHC:肽複合物的TCR)，其係針對在培養物中的該等免疫細胞。在一些實施態樣中，用一抗原/添加抗原進行多輪刺激係定期進行，例如每1、2、3、4或5天。在一些實施態樣中，用一抗原/添加一抗原進行多輪刺激係定期進行，例如每2-3天。在一些實施態樣中，「抗原暴露條件」可以係指在一移植有包含/表現一抗原之一腫瘤/腫瘤細胞的體內模型中刺激該等免疫細胞，其中該免疫細胞包含一特異性受體(例如，一具有一結合至該抗原之抗原結合域的CAR，及/或一結合至一包含該抗原之肽之MHC:肽複合物的TCR)。

在一些實施態樣中，在慢性抗原暴露條件下一細胞或細胞族群的持久性/存活/增殖可以係實質上如描述於本文之實施例1.9及/或實施例1.10「活化誘發細胞死亡(Activation Induced Cell Death, AICD)模型」中來評估。

在一些實施態樣中，在根據本揭露之方法及用途中，根據本揭露之SERPINB9多肽、(多個)核酸、(多個)載體，或者用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑可增加在一細胞中SERPINB9之表現(亦即基因或蛋白質表現)的水平/增加一細胞對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/增加一細胞對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性/增加一細胞對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性/增加在一同種異體效應免疫細胞的存在下一細胞的持久性、存活或增殖/增加在一同種異體主體中一細胞的持久性、存活或增殖/增加在一同種異體效應免疫細胞的存在下一細胞的抗癌活性/增加在一同種異體主體中一細胞的抗癌活性/增加在慢性抗原暴露條件下一細胞的持久性、存活或增殖至大於該類型細胞通常所展現之相關性質的水平(例如該類型細胞之相關性質的水平的參考值，亦即在不存在使用本揭露物品之處理的情況下)的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、 ≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

在一些實施態樣中，在根據本揭露之方法及用途中，根據本揭露之SERPINB9多肽、(多個)核酸、(多個)載體，或者用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑可降低在一細胞中一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性/降低在一細胞中一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性/降低一細胞對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的敏感性/降低一細胞對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的敏感性/降低一細胞對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的敏感性/降低表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅一細胞的速率/降低在一主體中的同種異體移植物排斥至小於該類型細胞通常所展現之相關性質的水平(例如該類型細胞之相關性質的水平的參考值)的1倍以下，例如≤0.99倍，≤0.95倍，≤0.9倍，≤0.85倍，≤0.8倍，≤0.75倍，≤0.7倍，≤0.65倍，≤0.6倍，≤0.55倍，≤0.5倍，≤0.45倍， ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者。經修飾以增加SERPINB9之表現或活性的細胞

本揭露提供一種經修飾以增加SERPINB9之表現(亦即基因及/或蛋白質表現)或活性的細胞。將理解當細胞在本文中係以單數(亦即「一/該細胞」)指稱時，亦考量此類細胞之複數/族群。

一具有經增加之SERPINB9之表現(亦即基因及/或蛋白質表現)或活性的細胞的特徵在於SERPINB9之表現的水平或SERPINB9之活性的水平係大於該類型細胞通常所展現之表現/活性的水平。一具有經增加之SERPINB9之表現或活性的細胞的特徵在於SERPINB9之表現的水平或SERPINB9之活性的水平係大於該類型細胞之表現/活性的水平的參考值。

一具有經增加之SERPINB9之表現(亦即基因及/或蛋白質表現)或活性的細胞可作為如在本文中所述之處理/修飾的結果。

在一些實施態樣中，該細胞係一已經經處理/修飾以增加在該細胞中SERPINB9蛋白質的水平或活性的細胞。在一些實施態樣中，該細胞係一已經經處理/修飾以增加SERPINB9之基因及/或蛋白質表現的細胞。

本揭露提供一種包含或表現如在本文中所述之SERPINB9多肽的細胞。本揭露亦提供一種包含或表現編碼如在本文中所述之SERPINB9多肽之(多個)核酸(例如外源性核酸)的細胞。本揭露亦提供一種包含或表現編碼如在本文中所述之SERPINB9多肽之(多個)載體的細胞。

如在本文中所使用，「外源性」核酸係指對於該包含該外源性核酸之細胞而言係非內源性的核酸。該外源性核酸可能不係由從其獲得/衍生該細胞之主體的基因組所編碼。該包含外源性核酸之細胞可作為如在本文中所述之已經經修飾的結果，例如將編碼一SERPINB9多肽之(多個)核酸/(多個)載體引入至該細胞中。

在一些實施態樣中，該細胞係一其中已經引入有根據本揭露之編碼一SERPINB9多肽之(多個)核酸/(多個)載體的細胞。此類細胞的特徵在於SERPINB9之表現的水平或SERPINB9之活性的水平係大於其中尚未引入有該(等)核酸/該(等)載體的等效細胞所展現之表現/活性的水平。

在一些實施態樣中，該細胞係一已經經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞。此類細胞的特徵在於SERPINB9之表現的水平或SERPINB9之活性的水平係大於尚未經該試劑處理的等效細胞所展現之表現/活性的水平。

SERPINB9之表現的水平可以係藉由本領域技術人員熟知的合適方式來測量。 SERPINB9基因表現的水平可以係使用包含檢測及/或定量編碼SERPINB9之RNA的水平的測定法來分析。此類測定法可包含藉由RT-qPCR、北方墨點法等等來定量編碼SERPINB9之RNA。該等方法可使用引子及/或探針來檢測及/或定量編碼SERPINB9之RNA。SERPINB9蛋白質的水平可以係使用包含檢測及/或定量SERPINB9蛋白質的水平的測定法來分析。此類測定法包括例如基於抗體/報導子之方法(西方墨點法、ELISA、免疫組織/細胞化學等等)，並且可例如使用對SERPINB9具有特異性之抗體。

SERPINB9之活性的水平可以係使用一針對該活性之適當測定法來測量。此類測定法包括分析抑制一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之活性的測定法。此類測定法可包含評估一絲胺酸蛋白酶之活性，例如如描述於上文中。在一些實施態樣中，SERPINB9活性可以係如描述例如於Bird et al., Mol Cell Biol. (1998), 18(11):6387-98中來評估，其係藉由引用方式併入上文中。

在一些實施態樣中，一具有經增加之根據本揭露之SERPINB9之表現(亦即基因及/或蛋白質表現)或活性的細胞展現SERPINB9之表現的水平或活性的水平係大於該類型細胞通常所展現之表現的水平或活性的水平(例如該類型細胞之表現的水平或活性的水平的參考值)的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、 ≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

在一些實施態樣中，一包含或表現編碼根據本揭露之SERPINB9多肽之(多個)核酸(例如外源性核酸)或(多個)載體的細胞展現SERPINB9之表現的水平或SERPINB9之活性的水平係大於不包含該(等)核酸/該(等)載體的等效細胞所展現之表現的水平或活性的水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、 ≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

在一些實施態樣中，一已經經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞展現SERPINB9之表現的水平或SERPINB9之活性的水平係大於尚未經該試劑處理的等效細胞所展現之表現的水平或活性的水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、 ≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。在一些實施態樣中，一已經經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞展現SERPINB9之表現的水平係大於不包含該(等)核酸/該(等)載體的等效細胞所展現之表現的水平的1.3倍以上，例如≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者(例如如實質上如描述於實施例1.7中藉由分析來測定)。

該細胞可以係一真核細胞，例如一哺乳類細胞。該哺乳類可以係一靈長類(恆河猴、食蟹猴、非人類靈長類或人類)或者一非人類哺乳類(例如兔子、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他囓齒類(包括囓齒目的任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括母牛，例如奶牛，或者牛屬目的任何動物)、馬(包括馬科目的任何動物)、驢，以及非人類靈長類)。在較佳的實施態樣中，該細胞係一人類細胞。

在較佳的實施態樣中，該細胞係一免疫細胞。該免疫細胞可以係一造血來源之細胞，例如一嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴細胞，或者單核細胞。一淋巴細胞可以係例如一T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞或先天性淋巴樣細胞(innate lymphoid cell, ILC)，或其前驅物(例如一胸腺細胞或前B細胞)。該免疫細胞可表現一CD3多肽(例如CD3γ CD3ε CD3ζ或CD3δ)、一TCR多肽(TCRα或TCRβ)、CD27、CD28、CD4或CD8。在一些實施態樣中，該免疫細胞係一T細胞，例如一CD3+ T細胞。在一些實施態樣中，該T細胞係一CD3+、CD4+ T細胞。在一些實施態樣中，該T細胞係一CD3+、CD8+ T細胞。在一些實施態樣中，該T細胞係一T輔助細胞(TH細胞)。在一些實施態樣中，該T細胞係一細胞毒性T細胞(例如一細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL))。在一些實施態樣中，該免疫細胞係一T細胞或者一NK細胞。

在較佳的實施態樣中，該細胞係一效應免疫細胞。如在本文中所使用，一「效應免疫細胞」可以係一展現一效應功能之免疫細胞。一效應免疫細胞可以係一CD8+ T細胞、CD8+ 細胞毒性T淋巴細胞(CD8+ CTL)、CD4+ T細胞、CD4+ T輔助細胞、NK細胞、產生IFNγ之細胞、記憶T細胞、中央記憶T細胞、經歷過抗原之T細胞，或者CD45RO+ T細胞。一效應免疫細胞的特徵在於以下性質中之一或多者：顆粒酶B表現、IFNγ表現、CD107a表現、IL-2表現、TNFα表現、穿孔素表現、顆粒溶解素表現，及/或FAS配體(FASL)表現。在一些實施態樣中，根據本揭露之效應免疫細胞係一表現顆粒酶B之細胞。

一免疫細胞可以係來自於任何合適的來源。一免疫細胞可以係已經從一主體獲得/分離，例如如在本文中所述之主體。根據根據本揭露之治療性/預防性干預，一免疫細胞可以係適用於投予至一主體。根據根據本揭露之治療性/預防性干預，該細胞可以係已經從該待治療主體獲得/分離。根據根據本揭露之治療性/預防性干預，該細胞可以係已經從一不同於該待治療主體的主體獲得/分離。該細胞可以係已經從一健康主體獲得/分離，例如一已知未患有一疾病/病狀之主體。

本揭露亦提供一種用於產生根據本揭露之細胞的方法，其包含將根據本揭露之(多個)核酸或(多個)載體引入至一細胞中。在一些實施態樣中，將根據本揭露之(多個)核酸或(多個)載體引入至一細胞中包含轉化、轉染、電穿孔或轉導(例如反轉錄病毒轉導)。

轉染係有關於使用病毒感染以外之方式將核酸引入至細胞中的方法，且因此係一非病毒方法。轉染可以係藉由物理/機械方法(包括電穿孔、聲穿孔、磁轉染、基因微注射及雷射照射)或化學方法(基於脂質體或基於非脂質體)來進行。基於脂質體之轉染試劑係能夠形成帶正電荷之脂質聚集體的化學物質，其然後可以與該細胞之磷脂雙層融合以促進外來遺傳物質的進入。基於脂質體之轉染試劑的實例包括但不限於Oligofectamine®、Lipofectamine®及DharmaFECT®。非脂質體轉染試劑包括但不限於磷酸鈣、奈米顆粒、聚合物、樹枝狀聚合物及非脂質體脂質。一非脂質體轉染試劑的一實例係聚乙烯亞胺(polyethylenimine, PEI)。

電穿孔可以係例如如描述於Koh et al., Molecular Therapy - Nucleic Acids (2013) 2, e114中來進行，其係藉由全文引用方式併入本文中。

轉導係藉由一病毒或一病毒載體將核酸引入至一細胞中的方法。因此，在一些實施態樣中，該(等)核酸係/係包含在一(多個)病毒載體中，或者該(等)載體係/係一(多個)病毒載體。用病毒載體轉導免疫細胞係描述例如於Simmons and Alberola-Ila, Methods Mol Biol. (2016) 1323:99-108中，其係藉由全文引用方式併入本文中。試劑可被用於本揭露之方法中以增強轉導之效率。溴化己二甲銨(聚凝胺)係一陽離子聚合物，其常被用於改善轉導，透過中和在病毒粒子與在該細胞表面上所表現之唾液酸殘基之間的電荷互斥。常被用於增強轉導的其他試劑包括例如該等基於泊洛沙姆(poloxamer)之試劑，諸如LentiBOOST (Sirion Biotech)、Retronectin (Takara)、Vectofusin (Miltenyi Biotech)，以及SureENTRY (Qiagen)及ViraDuctin (Cell Biolabs)。

在一些實施態樣中，該等方法包含在包含含有該(等)核酸之(多個)病毒載體之細胞培養基的存在下，離心希望將根據本揭露之(多個)核酸引入至其中的該等細胞(在本領域中被稱為「離心感染(spinfection)」)。

在一些實施態樣中，該等方法額外地包含在適合該細胞表現該(等)核酸/該(等)載體的條件下培養該細胞。

用於體外/離體培養(包括生成及/或擴增)免疫細胞族群之方法係本領域技術人員熟知的。合適的培養條件(亦即細胞培養基、添加劑、刺激、溫度、氣體環境)、細胞數量、培養期，以及用於將編碼所關注多肽之核酸引入至細胞中的方法等等可以係藉由參考以下來測定，例如Hombach et al.J Immunol (2001) 167:6123-6131、Ramos et al.J. Clin. Invest. (2017) 127(9):3462-3471、WO 2021/245249 A1、WO 2021/222927 A1、WO 2021/222928 A1、WO 2021/222929 A1、WO 2015/028444 A1或WO 2016/008973 A1，其全部係藉由全文引用方式併入本文中。

方便地，根據本揭露之細胞培養物可以係維持在37℃下在一含有5% CO ₂的潮濕環境中。細胞培養物的該等細胞可以係在任何合適的密度下建立及/或維持，如可以係由本領域技術人員輕易地來測定。

細胞培養可以係在適用於該培養物之體積的任何容器中進行，例如在一細胞培養盤的孔中、細胞培養燒瓶、一生物反應器等等。在一些實施態樣中，細胞係在一生物反應器中培養，例如描述於Somerville and Dudley, Oncoimmunology (2012) 1(8):1435-1437中的一生物反應器，其係藉由全文引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，細胞係在一GRex細胞培養容器中培養，例如一GRex燒瓶或者一GRex 100生物反應器。

在一些實施態樣中，該等方法係在體外進行。本揭露亦提供藉由根據本揭露之方法所獲得或可獲得之細胞，以及當然此類細胞族群。

在一些實施態樣中，該細胞係一用於醫學治療或預防方法之細胞。一「用於醫學治療或預防方法」之細胞係指一適用於醫學治療或預防方法之細胞。此類細胞可不含有某些會使其等不適用於此類用途之試劑/污染物。

在一些實施態樣中，該細胞係一用於藉由過繼細胞轉移(ACT)之醫學治療或預防方法的細胞。過繼細胞轉移包含向一主體投予一細胞/細胞族群以治療/預防一疾病/病狀。特別地，過繼細胞轉移典型地涉及向一主體投予免疫細胞(例如T細胞)，以向該主體提供用於治療/預防該疾病/病狀之免疫細胞族群，或者以增加在該主體中此類細胞的數量。在一些實施態樣中，該等經過繼轉移之細胞包含一用於引導該等免疫細胞之活性對抗包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子，所述抗原係例如一疾病相關抗原。

過繼細胞轉移可涉及從一主體分離/獲得細胞(例如免疫細胞)，例如藉由抽取一血液樣本，其中該等細胞係從其分離。該等細胞然後典型地係經修飾及/或擴增，並且然後係被投予至相同主體(在自體/自源細胞之過繼轉移的情況下)或者至一不同主體(在同種異體細胞之過繼轉移的情況下)。該治療的目標典型地係向一主體提供具有某些所欲特徵之細胞族群，或者增加在該主體中具有此類特徵之此類細胞的頻率。

一用於藉由過繼細胞轉移之醫學治療或預防方法的細胞可包含/表現一用於引導該細胞之活性對抗一表現一給定標靶抗原之細胞的分子。

在一些實施態樣中，一細胞包含一T細胞受體(TCR)，其係用於引導該細胞之活性對抗一呈現該MHC-肽複合物之細胞，其中該TCR對該MHC-肽複合物具有特異性。在一些實施態樣中，該TCR係由從其獲得/衍生該細胞之主體的基因組所編碼。在一些實施態樣中，該TCR係由已經被引入至該細胞中的核酸所編碼。

在一些實施態樣中，一細胞包含一嵌合抗原受體(CAR)，其係用於引導該細胞之活性對抗一表現該抗原之細胞，其中該CAR對該抗原具有特異性。在一些實施態樣中，該CAR係由已經被引入至該細胞中的核酸所編碼。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係一經改造之免疫細胞，以表現一用於引導該免疫細胞之活性對抗一表現一給定標靶抗原之細胞的分子(例如，一經CAR改造之免疫細胞或者一經TCR改造之免疫細胞)，及/或係一對一疾病相關抗原具有特異性之免疫細胞(例如一對一病原體具有特異性之免疫細胞，例如一病毒特異性免疫細胞)。在一些實施態樣中，該免疫細胞係一對一疾病相關抗原具有特異性之免疫細胞，其已經被改造以表現一用於引導該免疫細胞之活性對抗一包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子。在一些實施態樣中，該免疫細胞係一病毒特異性、經CAR改造之免疫細胞。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係經改造以表現一嵌合抗原受體(CAR；亦即，該免疫細胞係經CAR改造之免疫細胞)，或者係經改造以表現一T細胞受體(TCR；亦即，該免疫細胞係經TCR改造之免疫細胞)。

經TCR改造之免疫細胞係描述例如於Zhao et al., Front. Immunol. (2021) 30;12:658753中，其係藉由全文引用方式併入本文中。經TCR改造之免疫細胞可以係經修飾以表現一對一給定MHC-肽複合物具有特異性的TCR，例如透過將核酸引入至該編碼該TCR之(多個)組成多肽的細胞中。

在一些實施態樣中，該免疫細胞包含/表現一由非內源性核酸(亦即，不是在將編碼該TCR之(多個)組成多肽之核酸引入至該細胞中之前由該細胞之基因組所編碼的核酸)所編碼之TCR。

在一些實施態樣中，根據本揭露之方法包含將以下引入至一免疫細胞中：(i)編碼一用於引導該免疫細胞之活性對抗一包含/表現一給定標靶抗原(例如一CAR或者一TCR)之細胞的分子的核酸，以及(ii)編碼一SERPINB9多肽的核酸。根據此類實施態樣，(i)及(ii)之核酸可以係同時地或依序地被引入至該細胞中。當(i)及(ii)之核酸係同時地被引入時，其等可以係以一包含(i)及(ii)兩者之核酸的核酸(例如一載體)形式被引入。或者，(i)及(ii)之核酸可以係被包含在個別的核酸中(例如在個別的載體中)。當(i)及(ii)之核酸係依序地被引入時，該等方法可包含(a)將(i)或(ii)之核酸引入至一免疫細胞中，以及(b)隨後地(例如在一經定義時間段之後，例如在12小時至14天之後，例如1至7天、2至5天，或者3至4天中之一者)，將另一個核酸(亦即未在(a)被引入至該細胞中的核酸)引入至該免疫細胞中。

一經TCR改造之免疫細胞可包含一對任何所關注MHC-肽複合物具有特異性的TCR。在一些實施態樣中，一經TCR改造之免疫細胞的TCR係對一MHC-肽複合物具有特異性，所述MHC-肽複合物包含一疾病相關抗原的肽。

透過改造以表現一對一特定MHC-肽複合物具有特異性的TCR，免疫細胞T細胞可以被引導以殺滅表現該MHC-肽複合物之細胞。一經TCR改造之T細胞與其同源MHC-肽複合物之結合會觸發細胞內信號傳導，並且結果活化該T細胞。該經活化之經TCR改造之T細胞係經刺激以分裂並且產生因子，導致殺滅該表現該MHC-肽複合物之細胞。

在一些實施態樣中，根據本揭露之細胞(亦即一包含/表現如在本文中所述之SERPINB9的細胞，或者一包含/表現編碼如在本文中所述之SERPINB9之(多個)核酸/(多個)載體的細胞)不包含一嵌合HLA附加受體(chimeric HLA Accessory Receptor, CHAR)，其係用於引導該細胞之活性對抗同種異體反應性T細胞。CHARs及表現CHAR之細胞係描述例如於US 2021/0238255 A1中，其係藉由全文引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，根據本揭露之細胞(亦即一包含/表現如在本文中所述之SERPINB9的細胞，或者一包含/表現編碼如在本文中所述之SERPINB9之(多個)核酸/(多個)載體的細胞)係尚未經修飾以包含/表現一CHAR。在一些實施態樣中，一細胞不包含編碼一CHAR之(多個)核酸(例如(多個)外源性核酸)。在一些實施態樣中，根據本揭露之方法不包含將編碼一CHAR的一(多個)核酸(例如(多個)外源性核酸)引入至一細胞中。

在一些實施態樣中，根據本揭露之細胞(亦即一包含/表現如在本文中所述之SERPINB9的細胞，或者一包含/表現編碼如在本文中所述之SERPINB9之(多個)核酸/(多個)載體的細胞)係尚未經修飾以表現或過度表現細胞FLICE抑制性蛋白質(cellular FLICE-inhibitory protein, cFLIP)或其變異體。

人類cFLIP係由UniProt O15519-1所鑑定之蛋白質。cFLIP的變異體包括與人類cFLIP之胺基酸序列具有至少70%(例如80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高)胺基酸序列一致性的多肽。在一些實施態樣中，cFLIP的一變異體可包含相對於UniProt O15519-1之取代K167R。

在一些實施態樣中，一細胞不包含編碼cFLIP或其變異體之(多個)核酸(例如(多個)外源性核酸)。在一些實施態樣中，根據本揭露之方法不包含將編碼cFLIP或其變異體的一(多個)核酸(例如(多個)外源性核酸)引入至一細胞中。

如在本文中所使用，一「疾病相關抗原」係指其存在係表明一給定疾病/疾病狀態的一抗原，或者其水平升高係與一給定疾病/疾病狀態呈正相關的一抗原。該疾病相關抗原可以係其表現係與一給定疾病之症狀之發展、進展或嚴重程度相關的一抗原。該疾病相關抗原可以係與該疾病之肇因或病理相關，或者可以係因該疾病而異常地表現。一疾病相關抗原可以係一傳染物或病原體的一抗原、一癌症相關抗原，或者一自體免疫疾病相關抗原。

在一些實施態樣中，該疾病相關抗原係一病原體的一抗原。該病原體可以係原核生物(細菌)、真核生物(例如原生動物、蠕蟲、真菌)、病毒或普里昂蛋白(prion)。在一些實施態樣中，該病原體係一細胞內病原體。在一些實施態樣中，該病原體係一病毒，例如如在上文中所述之病毒。在一些實施態樣中，該病原體係一細菌。該細菌可以係革蘭氏陽性或革蘭氏陰性。特別地，本揭露考量桿菌屬(Bacillus)、巴爾通體屬(Bartonella) 、博多氏桿菌屬(Bordetella)、疏螺旋體屬(Borrelia)、布氏桿菌屬(Brucella)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)、披衣菌屬(Chlamydia)、衣原體屬(Chlamydophila)、芽胞梭菌屬(Clostridium)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、腸球菌屬(Enterococcus)、大腸桿菌屬(Escherichia)、弗朗西斯氏菌屬(Francisella)、嗜血桿菌屬(Haemophilus)、螺旋桿菌屬(Helicobacter)、退伍軍人症桿菌屬(Legionella)、鉤端螺旋體屬(Leptospira)、李斯特菌屬(Listeria)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)、黴漿菌屬(Mycoplasma)、奈瑟氏菌屬(Neisseria)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、立克次體屬(Rickettsia)、沙門桿菌屬(Salmonella)、志賀桿菌屬(Shigella)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、螺旋體屬(Treponema)、脲原體屬(Ureaplasma)、弧菌屬(Vibrio)及耶氏桿菌屬(Yersinia)的細菌。在一些實施態樣中，該病原體係原生動物。特別地，本揭露考量內阿米巴屬(Entamoeba)、瘧原蟲屬(Plasmodium)、梨形鞭毛蟲屬(Giardia)、錐蟲屬(Trypanosoma)、利什曼原蟲屬(Leishmania)、貝諾孢子蟲屬(Besnoitia)及弓形蟲屬(Toxoplasma)的原生動物。在一些實施態樣中，該病原體係一真菌。特別地，本揭露考量念珠菌屬(Candida)、麴菌屬(Aspergillus)、芽生菌屬(Blastomyces)、球孢子菌屬(Coccidioides)、孢子絲菌屬(Sporothrix)、隱球菌屬(Cryptococcus)、組織漿菌屬(Histoplasma)、肺囊蟲屬(Pneumocystis)、葡萄穗黴屬(Stachybotrys)、根黴屬(Rhizopus)、毛黴屬(Mucor)、小克銀漢黴屬(Cunninghamella)、鱗質黴屬(Apophysomyces)、毛癬菌屬(Trichophyton)、小孢子菌屬(Microsporum)、表皮癬菌屬(Epidermophyton)、鐮胞菌屬(Fusarium)及利克次黴屬(Lichtheimia)的真菌。

在一些實施態樣中，該疾病相關抗原係一癌症相關抗原。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原係其表現係與一癌症之症狀之發展、進展或嚴重程度相關的一抗原。該癌症相關抗原可以係與該癌症之肇因或病理相關，或者可以係因該癌症而異常地表現。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原係其表現係由一癌症之細胞上調(例如在RNA及/或蛋白質水平方面)的一抗原，例如相較於可相比之非癌性細胞之表現的水平(例如衍生自相同組織/細胞類型之非癌性細胞)。

在一些實施態樣中，該癌症相關抗原可以係優先地由癌性細胞所表現，並且不由可相比之非癌性細胞(例如衍生自相同組織/細胞類型之非癌性細胞)所表現。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原可以係一經突變致癌基因或經突變腫瘤抑制基因的產物。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原可以係一過度表現細胞蛋白質的產物、由一致癌病毒所產生的一癌症抗原、一致癌胎兒(oncofetal)抗原，或者一細胞表面醣脂或醣蛋白。

癌症相關抗原係綜述於Zarour HM, DeLeo A, Finn OJ, et al.Categories of Tumor Antigens. In: Kufe DW, Pollock RE, Weichselbaum RR, et al., editors. Holland-Frei Cancer Medicine. 6th edition. Hamilton (ON): BC Decker; 2003中。癌症相關抗原包括致癌胎兒抗原：CEA、不成熟層連結蛋白受體(immature laminin receptor)、TAG-72；致癌病毒抗原，諸如HPV E6及E7；過度表現蛋白質：BING-4、鈣活化氯通道2、週期蛋白-B1、9D7、Ep-CAM、EphA3、HER2/neu、端粒酶、間皮素、SAP-1、生存素(survivin)；癌症-睪丸抗原：BAGE、CAGE、GAGE、MAGE、SAGE、XAGE、CT9、CT10、NY-ESO-1、PRAME、SSX-2；譜系限制性抗原(lineage restricted antigens)：MART1、Gp100、酪胺酸酶、TRP-1/2、MC1R、前列腺特異性抗原；經突變抗原：β-連環蛋白(β-catenin)、BRCA1/2、CDK4、CML66、纖連蛋白(fibronectin)、MART-2、p53、Ras、TGF-βRII；轉譯後改變抗原：MUC1，獨特型抗原(idiotypic antigens)：Ig、TCR。其他癌症相關抗原包括熱休克蛋白70 (heat-shock protein 70, HSP70)、熱休克蛋白90 (HSP90)、葡萄糖調節蛋白78 (glucose-regulated protein 78, GRP78)、波形蛋白(vimentin)、核仁素(nucleolin)、胎兒腺泡胰臟蛋白(feto-acinar pancreatic protein, FAPP)、鹼性磷酸酶胎盤類2 (alkaline phosphatase placental-like 2, ALPPL-2)、唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素-5 (siglec-5)、應力誘發磷蛋白1 (stress-induced phosphoprotein 1, STIP1)、蛋白質酪胺酸激酶7 (protein tyrosine kinase 7, PTK7)，以及親環蛋白B (cyclophilin B)。在一些實施態樣中，該癌症相關抗原係於Zhao and Cao, Front Immunol. 2019; 10: 2250中所述之一癌症相關抗原，其係藉由全文引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，一癌症相關抗原係選自於CD30、CD19、CD20、CD22、B7H3、c-Met、ROR1R、CD4、CD7、CD38、BCMA、間皮素、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、 EpCAM、LeY及PSCA。在一些實施態樣中，一癌症相關抗原係一由一血液惡性腫瘤之細胞所表現之抗原。在一些實施態樣中，一癌症相關抗原係選自於CD30、CD19、CD20、CD22、B7H3、c-Met、ROR1R、CD4、CD7、CD38及BCMA。在一些實施態樣中，一癌症相關抗原係一由一實體腫瘤之細胞所表現之抗原。在一些實施態樣中，一癌症相關抗原係選自於間皮素、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、EpCAM、LeY及PSCA。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係一經嵌合抗原受體(CAR)改造免疫細胞。在一些實施態樣中，該免疫細胞包含/表現一CAR。嵌合抗原受體(CARs)係重組受體分子，其提供抗原結合以及T細胞活化兩個功能。CAR結構以及改造係綜述例如於Dotti et al., Immunol Rev (2014) 257(1)中，其係藉由全文引用方式併入本文中。

表現CAR之免疫細胞可包含或表現根據本揭露之編碼一CAR之核酸。將理解一表現CAR之細胞包含其表現之CAR。亦將理解一表現編碼一CAR之核酸的細胞亦表現並包含由該核酸所編碼之CAR。

CARs包含一抗原結合域，其經由一跨膜域連接至一信號傳導域。一任選的鉸鏈或間隔子域可提供在該抗原結合域與跨膜域之間的分隔，並且可充當一撓性連接子。當由一細胞所表現時，該抗原結合域係被提供在該細胞外空間中，且該信號傳導域係細胞內。

透過改造以表現一對一特定標靶抗原具有特異性之CAR，免疫細胞(典型地係T細胞，但亦包括諸如NK細胞之其他免疫細胞)可以被引導以殺滅表現該標靶抗原之細胞。一表現CAR之T細胞(CAR-T細胞)與對其具有特異性之標靶抗原的結合會觸發細胞內信號傳導，並且結果活化該T細胞。該經活化CAR-T細胞係經刺激以分裂並且產生因子，導致殺滅該表現該標靶抗原之細胞。

該抗原結合域介導結合至該標靶抗原，其中該CAR對所述標靶抗原具有特異性。一「抗原結合域」係指一能夠結合至一標靶抗原的域。一CAR之抗原結合域可以係基於一抗體之抗原結合區域，其對該CAR所靶向之該抗原具有特異性。例如，一CAR之抗原結合域可包含一抗體之互補決定區域(complementarity-determining regions, CDRs)的胺基酸序列，其特異性地結合至該標靶抗原。一CAR之抗原結合域可包含一抗體之輕鏈及重鏈可變區域胺基酸序列或由其所構成，其特異性地結合至該標靶抗原。該抗原結合域可以係被提供作為一單鏈可變片段(single chain variable fragment, scFv)，其包含一抗體之輕鏈及重鏈可變區域胺基酸序列的序列。CARs之抗原結合域可基於其他蛋白質:蛋白質相互作用來靶向抗原，諸如配體:受體結合；例如，已經使用一基於IL-13之抗原結合域研發一靶向IL-13Rα2之CAR (參見例如Kahlon et al.2004 Cancer Res 64(24): 9160-9166)。

根據本揭露之CAR之抗原結合域可對任何抗原具有特異性，例如如在本文中所述之一疾病相關抗原。將理解一CAR之抗原結合域對一由細胞所表現之抗原具有特異性，其中係期望引導該表現CAR之細胞之活性對抗所述細胞。在一表現CAR之T細胞的實例中，該CAR可包含一抗原結合域，其結合至一由一標靶細胞所表現之抗原，其中係期望引導T細胞效應活性對抗所述標靶細胞。在較佳的實施態樣中，根據本揭露之CAR之抗原結合域結合至一癌症相關抗原。在進一步較佳的實施態樣中，根據本揭露之CAR之抗原結合域結合至CD30。

根據本揭露之抗原結合域可以係衍生自一抗體/抗體片段(例如Fv、scFv、Fab、單鏈Fab (scFab)、單域抗體(例如VhH)等等)，其係經引導對抗一疾病相關抗原，或者另一個疾病相關抗原結合分子(例如一標靶抗原結合肽或者核酸適體、配體或其他分子)。在一些實施態樣中，該抗原結合域包含一抗體的一抗體重鏈可變區域(VH)及一抗體輕鏈可變區域(VL)，其能夠特異性地結合至一疾病相關抗原。在一些實施態樣中，該能夠結合至一標靶抗原的域包含一疾病相關抗原結合肽/多肽或由其所構成，例如一肽適體、硫氧還蛋白(thioredoxin)、單抗體(monobody)、抗運載蛋白(anticalin)、孔尼茲域(Kunitz domain)、親和性多聚體(avimer)、打結素(knottin)、菲諾體(fynomer)、阿曲體(atrimer)、錨蛋白重複蛋白(DARPin)、親和抗體(affibody)、奈米抗體(nanobody)(亦即一單域抗體(sdAb))親和素(affilin)、犰狳重複蛋白(armadillo repeat protein, ArmRP)、OBody或纖連蛋白，綜述例如於Reverdatto et al., Curr Top Med Chem. 2015; 15(12): 1082-1101中，其係藉由全文引用方式併入本文中(亦參見例如Boersma et al., J Biol Chem (2011) 286:41273-85及Emanuel et al., Mabs (2011) 3:38-48)。

本揭露之CAR的抗原結合域可以係衍生自一抗體的VH及VL，其能夠特異性地結合至一疾病相關抗原。抗體通常包含六個互補決定區域CDRs；三個在該重鏈可變區域(VH)中：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，以及三個在該輕鏈可變區域(VL)中：LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3。該等六個CDRs共同定義了該抗體的互補位(paratope)，其係該抗體結合至該標靶抗原的部分。該VH區域及VL區域包含在各個CDR之任一側的框架區域(framework regions, FRs)，其為該等CDRs提供一架構。從N端至C端，VHs包含以下結構：N端-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C端；以及VLs包含以下結構：N端-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C端。

VH及VL序列可以係以任何合適形式被提供，前提係該抗原結合域可以係連接至該CAR之其他域。與本揭露之抗原結合域有關的經考量形式包括那些描述於Carter, Nat. Rev. Immunol 2006, 6: 343-357中，諸如scFv、dsFV、(scFv)2二抗體、三抗體、四抗體、Fab、微型抗體，以及F(ab)2形式。

在一些實施態樣中，該抗原結合域包含一抗體/抗體片段的CDRs，其能夠結合至一疾病相關抗原。在一些實施態樣中，該抗原結合域包含一抗體/抗體片段的VH區域及VL區域，其能夠結合至一疾病相關抗原。由一抗體的VH及VL所組成的一部分在本文中亦可被稱為一可變片段(Fv)。該VH及VL可以係被提供在相同的多肽鏈上，並且係經由一連接子序列接合；此類部分係被稱為單鏈可變片段(scFvs)。用於製備scFv之合適的連接子序列係本領域技術人員已知的，並且可包含絲胺酸及甘胺酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合域包含Fv或由其所構成，其能夠結合至一疾病相關抗原。在一些實施態樣中，該抗原結合域包含一scFv或由其所構成，其能夠結合至一疾病相關抗原。在一些實施態樣中，該抗原結合域係衍生自該疾病相關抗原的一配體。

在一些實施態樣中，根據本揭露之CAR之抗原結合域結合至CD30 (亦即係一CD30結合域)。在一些實施態樣中，根據本揭露之CAR之抗原結合域結合至CD19(亦即係一CD19結合域)。

在一些實施態樣中，該CD30結合域係衍生自一抗CD30抗體之抗原結合部分。在一些實施態樣中，根據本揭露之CD30結合域包含一抗CD30抗體之CDRs。在一些實施態樣中，根據本揭露之CD30結合域包含一抗CD30抗體的的VH及VL區域。在一些實施態樣中，根據本揭露之CD30結合域包含一scFv，其包含一抗CD30抗體的VH及VL區域。抗CD30抗體包括HRS3及HRS4 (描述例如於Hombach et al., Scand J Immunol. (1998) 48(5):497-501中)、描述於Schlapschy et al., Protein Engineering, Design and Selection (2004) 17(12): 847-860中的HRS3衍生物、BerH2 (MBL International Cat# K0145-3, RRID:AB_590975)、SGN-30 (亦稱為cAC10，描述例如於Forero-Torres et al., Br J Haematol (2009) 146:171-9中)、MDX-060 (描述例如於Ansell et al., J Clin Oncol (2007) 25:2764-9中；亦稱為5F11、伊妥木單抗(iratumumab))，以及MDX-1401 (描述例如於Cardarelli et al., Clin Cancer Res. (2009) 15(10):3376-83中)，以及描述於WO 2020/068764 A1、WO 2003/059282 A2、WO 2006/089232 A2、WO 2007/084672 A2、WO 2007/044616 A2、WO 2005/001038 A2、US 2007/166309 A1、US 2007/258987 A1、WO 2004/010957 A2及US 2005/009769 A1中的抗CD30抗體。

在一些實施態樣中，該CD19結合域係衍生自一抗CD19抗體的抗原結合部分。在一些實施態樣中，根據本揭露之CD19結合域包含一抗CD19抗體的CDRs。在一些實施態樣中，根據本揭露之CD19結合域包含一抗CD19抗體的VH及VL區域。在一些實施態樣中，根據本揭露之CD19結合域包含一scFv，其包含一抗CD19抗體的VH及VL區域。抗CD19抗體包括FMC63 (描述例如於Zola et al., Immunol Cell Biol (1991) 69:411-422中)、HD37 (描述於例如Pezzutto et al.,J Immunol (1987) 138:2793-2799中)、他法西他單抗(tafasitamab)(亦稱為MOR208或XmAB5574)，以及描述於WO 2009/054863 A2、WO 2010/053716 A1、WO 2006/089133 A2及WO 2021/173471 A1中的抗CD19抗體。

存在數種用於定義抗體CDRs及FRs的不同慣例，諸如那些描述於Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)、Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中，以及VBASE2，如描述於Retter et al., Nucl. Acids Res. (2005) 33 (suppl 1): D671-D674中。在本文中所述之抗體之VH區域及VL區域之CDRs及FRs係根據VBASE2被定義。

在一些實施態樣中，該CD30結合域包含：一併入以下CDRs之VH：具有SEQ ID NO：15之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO：16之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者中的一個或兩個或三個胺基酸係經另一個胺基酸取代；以及一併入以下CDRs之VL：具有SEQ ID NO：18之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO：19之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO：20之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者中的一個或兩個或三個胺基酸係經另一個胺基酸取代。

在一些實施態樣中，該CD30結合域包含：一VH，其包含與SEQ ID NO：21之胺基酸序列具有至少80%序列一致性(例如至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的胺基酸序列，或由其所構成；以及一VL，其包含與SEQ ID NO：22之胺基酸序列具有至少80%序列一致性(例如至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CD30結合域可包含一單鏈可變片段(scFv)或由其所構成，其包含如在本文中所述之一VH序列及一VL序列。該VH序列及VL序列可以係經共價地連接。在一些實施態樣中，該VH及該VL序列係藉由一撓性連接子序列連接，例如如在本文中所述之一撓性連接子序列。該撓性連接子序列可以係接合至該VH序列及VL序列的末端，藉此連接該等VH及VL序列。在一些實施態樣中，該VH及VL係經由一連接子序列接合，所述連接子序列包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CD30結合域包含與SEQ ID NO：24之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CD30結合域能夠結合至CD30，例如在CD30的細胞外域中。在一些實施態樣中，該CD30結合域能夠結合至被抗體HRS3結合之CD30的表位，例如在顯示於SEQ ID NO：12中根據SEQ ID NO：10所編號之人類CD30之胺基酸位置185-335之區域內(Schlapschy et al., Protein Engineering, Design and Selection (2004) 17(12): 847-860，藉由全文引用方式併入本文中)。

在一些實施態樣中，該CD19結合域包含：一併入以下CDRs之VH：具有SEQ ID NO：58之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO：59之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO：60之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者中的一個或兩個或三個胺基酸係經另一個胺基酸取代；以及一併入以下CDRs之VL：具有SEQ ID NO：61之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO：62之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO：63之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一或多者中的一個或兩個或三個胺基酸係經另一個胺基酸取代。

在一些實施態樣中，該CD19結合域包含：一VH，其包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%序列一致性(例如至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的胺基酸序列，或由其所構成；以及一VL，其包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%序列一致性(例如至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CD19結合域可包含一單鏈可變片段(scFv)或由其所構成，其包含如在本文中所述之一VH序列及一VL序列。該VH序列及VL序列可以係經共價地連接。在一些實施態樣中，該VH及該VL序列係藉由一撓性連接子序列連接，例如如在本文中所述之一撓性連接子序列。該撓性連接子序列可以係接合至該VH序列及VL序列的末端，藉此連接該等VH及VL序列。在一些實施態樣中，該VH及VL係經由一連接子序列接合，所述連接子序列包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列，或由其所構成的。

在一些實施態樣中，該CD19結合域包含與SEQ ID NO：67之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CD19結合域能夠結合至CD19，例如在CD19的細胞外域中。

在一些實施態樣中，該抗原結合域(且因此該CAR)係多特異性。「多特異性」係指該抗原結合域展現與一個以上標靶的特異性結合。在一些實施態樣中，該抗原結合域係一雙特異性抗原結合域。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含至少兩個不同的抗原結合部分(亦即至少兩個抗原結合部分，例如包含非一致VHs及VLs)。多特異性抗原結合域的個別抗原結合部分可以係例如經由連接子序列連接。該抗原結合域可結合至至少兩個、非一致標靶抗原，並且因此係至少雙特異性。術語「雙特異性」係指該抗原結合域能夠特異性地結合至至少兩個不同的抗原決定子。用於該多特異性抗原結合域/CAR的該等標靶抗原中的至少一者可以係CD30。用於該多特異性抗原結合域/CAR的該等標靶抗原中的至少一者可以係CD19。將理解根據本揭露之抗原結合域(例如一多特異性抗原結合域)包含能夠結合至該(等)標靶之抗原結合部分，其中該抗原結合域對該(等)標靶具有特異性。例如，一抗原結合域，其能夠結合至CD30以及一除了CD30之外的抗原，可包含：(i)一抗原結合部分，其能夠結合至CD30，以及(ii)一抗原結合部分，其能夠結合至一除了CD30之外的抗原。在一進一步的實例中，一抗原結合域，其能夠結合至CD19以及一除了CD19之外的抗原，可包含：(i)一抗原結合部分，其能夠結合至CD19，以及(ii)一抗原結合部分，其能夠結合至一除了CD19之外的抗原。

根據本揭露之CARs包含一跨膜域。一跨膜域係指由胺基酸序列所形成之任何三維結構，其在例如一細胞膜的一生物膜中係熱力學上穩定的。與本揭露有關，該跨膜域可以係一胺基酸序列，其跨越一表現該CAR之細胞的細胞膜。一CAR的跨膜域係被提供在該CAR的抗原結合域與信號傳導域之間。該跨膜域提供將該CAR錨定至一表現一CAR之細胞的細胞膜，其中該抗原結合域在該細胞外空間中，且信號傳導域在該細胞內。CARs之跨膜域可以係衍生自用於細胞膜結合蛋白質(例如CD28、CD8等等)之跨膜區域序列。

在本說明書通篇中，「衍生自」一參考多肽/域/胺基酸序列的多肽、域及胺基酸序列，與該參考多肽/域/胺基酸序列的胺基酸序列具有至少60%胺基酸序列一致性，較佳地係70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者。「衍生自」一參考多肽/域/胺基酸序列的多肽、域及胺基酸序列較佳地保留該參考多肽/域/胺基酸序列的功能性及/或結構性性質。

作為闡明，一衍生自CD28之細胞內域的胺基酸序列可包含與CD28之細胞內域具有60%胺基酸一致性的胺基酸序列，較佳地係70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%胺基酸序列一致性中之一者的胺基酸序列，例如如顯示於SEQ ID NO：32中。進一步，一衍生自CD28之細胞內域的胺基酸序列較佳地保留SEQ ID NO：32之胺基酸序列的功能性性質，亦即活化CD28介導信號傳導之能力。

一給定多肽或其域之胺基酸序列可以係從一核酸序列取得或測定，所述核酸序列係從本領域技術人員已知之數據庫取得。此類數據庫包括GenBank、EMBL及UniProt。

該跨膜域可包含形成一疏水性α螺旋或β-桶狀結構之胺基酸序列或由其所構成。本揭露之CAR的跨膜域的胺基酸序列可以係或者可以係衍生自一包含一跨膜域之蛋白質的跨膜域的胺基酸序列。跨膜域係記錄於數據庫中，諸如GenBank、UniProt、Swiss-Prot、TrEMBL、蛋白質資訊資源(Protein Information Resource)、蛋白質數據庫(Protein Data Bank)、Ensembl，以及InterPro，及/或可以係例如使用諸如TMHMM (Krogh et al., 2001 J Mol Biol 305: 567-580)之胺基酸序列分析工具來鑑定/預測。

在一些實施態樣中，本揭露之CAR的跨膜域的胺基酸序列可以係或者可以係衍生自一在該細胞表面表現之蛋白質的跨膜域的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該在該細胞表面表現之蛋白質係一受體或配體，例如一免疫受體或配體。在一些實施態樣中，該跨膜域的胺基酸序列可以係或者可以係衍生自以下中之一者的跨膜域的胺基酸序列：ICOS、ICOSL、CD86、CTLA-4、CD28、CD80、MHC I類α、 MHC II類α、MHC II類β、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD3-ζ、TCRα、TCRβ、CD4、CD8α、CD8β、CD40、CD40L、PD-1、PD-L1、PD-L2、4-1BB、4-1BBL、OX40、OX40L、GITR、GITRL、TIM-3、半乳糖凝集素9(Galectin 9)、LAG3、CD27、CD70、LIGHT、HVEM、TIM-4、TIM-1、ICAM1、LFA-1、LFA-3、CD2、BTLA、 CD160、LILRB4、LILRB2、VTCN1、CD2、CD48、2B4、SLAM、CD30、CD30L、DR3、TL1A、CD226、CD155、CD112及CD276。在一些實施態樣中，該跨膜係或者係衍生自CD28、CD3-ζ、CD8α、CD8β或CD4的跨膜域的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該跨膜係或者係衍生自CD28的跨膜域的胺基酸序列。

在一些實施態樣中，該跨膜域包含與SEQ ID NO：26之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該跨膜域包含與SEQ ID NO：27之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該跨膜域包含與SEQ ID NO：28之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

本揭露之嵌合抗原受體包含一信號傳導域。該信號傳導域提供用於起始在表現該CAR之細胞中的細胞內信號傳導的序列。該信號傳導域包含活化免疫細胞功能所需之胺基酸序列。該等CAR信號傳導域可包含CD3-ζ的細胞內域的胺基酸序列，其提供基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAMs)以用於該表現CAR之細胞的磷酸化及活化。包含其他含有ITAM之蛋白質之序列的信號傳導域亦已經被使用於CARs中，諸如包含FcγRI之含有ITAM之區域的域(Haynes et al., 2001 J Immunol 166(1):182-187)。包含一衍生自CD3-ζ的細胞內域的信號傳導域的CARs通常係被稱為第一代CARs。

CARs的該等信號傳導域典型地亦包含一共刺激性蛋白質的信號傳導域(例如CD28、4-1BB等等)，用於提供用於增強免疫細胞活化及效應功能所需之共刺激信號。具有一包括額外共刺激性序列之信號傳導域的CAR，通常係被稱為第二代CARs。在一些情況中，CARs係經改造以提供不同細胞內信號傳導途徑的共刺激。例如，CD28共刺激優先地活化磷脂醯肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, P13K)途徑，而4-1BB共刺激觸發信號傳導係透過TNF受體相關因子(TNF receptor associated factor, TRAF)轉接蛋白。CARs的信號傳導域因此有時含有共刺激性序列，其係衍生自一個以上共刺激性分子的信號傳導域。包含一具有多個共刺激性序列之信號傳導域的CARs，通常係被稱為第三代CARs。

該信號傳導域包含一含有ITAM之序列。一含有ITAM之序列包含一或多個基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAMs)。ITAMs包含胺基酸序列YXXL/I (SEQ ID NO：29)，其中「X」表示任何胺基酸。在含有ITAM之蛋白質中，根據SEQ ID NO：29之序列通常係經6至8個胺基酸分隔；YXXL/I(X) _6-8YXXL/I (SEQ ID NO：30)。當磷酸酯基團係藉由酪胺酸激酶被添加至一ITAM之酪胺酸殘基時，一信號傳導級聯在該細胞內被起始。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含根據SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30之胺基酸序列的一或多個複本。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含根據SEQ ID NO：30之胺基酸序列的至少1、2、3、4、5或6個複本。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含根據SEQ ID NO：30之胺基酸序列的至少1、2或3個複本。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列，其係或者其係衍生自一具有一含有ITAM之胺基酸序列之蛋白質的一含有ITAM之序列的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列，其係或者其係衍生自CD3-ζ、FcγRI、CD3ε、CD3δ、CD3γ、CD79α、CD79β、FcγRIIA、FcγRIIC、FcγRIIIA、FcγRIV或DAP12中之一者的細胞內域的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列，其係或者其係衍生自CD3-ζ的細胞內域。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一胺基酸序列，其包含與SEQ ID NO：31之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

該信號傳導域可額外地包含一或多個共刺激性序列。一共刺激性序列係一胺基酸序列，其提供本揭露之表現CAR之細胞的共刺激。共刺激促進一表現CAR之細胞在結合至該標靶抗原時的增殖及存活，並且亦可促進該表現CAR之細胞的細胞激素產生、分化、細胞毒性功能及記憶形成。T細胞共刺激之分子機制係綜述於Chen and Flies, 2013 Nat Rev Immunol 13(4):227-242中。

一共刺激性序列可以係或者可以係衍生自一共刺激性蛋白質的胺基酸序列。在一些實施態樣中，該共刺激性序列係一胺基酸序列，其係或者其係衍生自一共刺激性蛋白質的細胞內域的胺基酸序列。在該CAR與該標靶抗原結合時，該共刺激性序列向該表現CAR之細胞提供共刺激，這種共刺激將由該共刺激性蛋白質提供，在與其同源配體連接時從其衍生該共刺激性序列。作為實例，在一包含一包含一衍生自CD28之共刺激性序列之信號傳導域之CAR的情況下，結合至該標靶抗原會觸發在該表現CAR之細胞中的信號傳導，這種信號將由CD80及/或CD86與CD28之結合觸發。因此，一共刺激性序列能夠遞送該共刺激性蛋白質的該共刺激信號，從其衍生該共刺激性序列。

在一些實施態樣中，該共刺激性蛋白質可以係B7-CD28超家族的一成員(例如CD28、ICOS)，或者係TNF受體超家族的一成員(例如4-1BB、OX40、CD27、DR3、GITR、CD30、HVEM)。在一些實施態樣中，該共刺激性序列係或者係衍生自CD28、4-1BB、ICOS、CD27、OX40、HVEM、CD2、SLAM、TIM-1、CD30、GITR、DR3、CD226及LIGHT中之一者的細胞內域。在一些實施態樣中，該共刺激性序列係或者係衍生自CD28的細胞內域。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一個以上非重疊共刺激性序列。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含1、2、3、4、5或6個共刺激性序列。複數個共刺激性序列可以係以串聯方式被提供。

一給定胺基酸序列是否能夠起始由一給定共刺激性蛋白質所介導之信號傳導，可以係例如藉由分析由該共刺激性蛋白質所介導之信號傳導的一相關者來研究(例如，一因子之表現/活性，其表現/活性係因由該共刺激性蛋白質所介導之信號傳導而被上調或下調)。

共刺激性蛋白質透過數種轉導途徑上調促進細胞生長、效應功能及存活之基因的表現。例如，CD28及ICOS透過磷脂醯肌醇3激酶(PI3K)及AKT發出信號，以透過NF-κB、mTOR、NFAT及AP1/2上調促進細胞生長、效應功能及存活之基因的表現。CD28亦經由CDC42/RAC1活化AP1/2並且經由RAS活化ERK1/2，以及ICOS活化C-MAF。4-1BB、OX40及CD27募集TNF受體相關因子(TRAF)並且透過MAPK途徑以及透過PI3K發出信號。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一共刺激性序列，其係或者其係衍生自CD28。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一共刺激性序列，其包含與SEQ ID NO：32之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

Kofler et al.Mol. Ther. (2011) 19: 760-767描述一變異體CD28細胞內域，其中該lck激酶結合位點係經突變以降低在CAR連接時IL-2產生之誘發，以最小化調節性T細胞介導之CAR-T細胞活性抑制。該變異體CD28細胞內域的胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：33中。在一些實施態樣中，該信號傳導域包含一共刺激性列，其包含與SEQ ID NO：33之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該信號傳導域包含與SEQ ID NO：34之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

本揭露之嵌合抗原受體可包含一鉸鏈或間隔子區域。該鉸鏈/間隔子區域可提供在該抗原結合域與該跨膜域之間的分隔，並且可充當一撓性連接子。此類區域可以係或者包含允許該結合部分定向於不同方向的撓性域，並且可以係例如衍生自IgG的CH1-CH2鉸鏈區域。鉸鏈區域的存在、不存在及長度已經顯示會影響CAR功能(綜述例如於Dotti et al., Immunol Rev (2014) 257(1) supra中)。

在一些實施態樣中，該CAR包含一鉸鏈區域，其包含一胺基酸序列或由其所構成，所述胺基酸序列係或者係衍生自人類IgG1的CH1-CH2鉸鏈區域、一衍生自CD8α的鉸鏈區域，例如如描述於WO 2012/031744 A1中，或者一衍生自CD28的鉸鏈區域，例如如描述於WO 2011/041093 A1中。在一些實施態樣中，該CAR包含一鉸鏈區域，其係衍生自人類IgG1的CH1-CH2鉸鏈區域。在一些實施態樣中，該鉸鏈區域包含與SEQ ID NO：35或36之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CAR包含一鉸鏈區域，其包含一胺基酸序列或由其所構成，所述胺基酸序列係或者係衍生自人類IgG1的CH2-CH3區域(亦即Fc區域)。在一些實施態樣中，該鉸鏈區域包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

Hombach et al., Gene Therapy (2010) 17:1206-1213描述一變異體CH2-CH3區域，用於降低諸如單核細胞及NK細胞之表現FcγR之細胞的活化。該變異體CH2-CH3區域的胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：38中。在一些實施態樣中，該鉸鏈區域包含與SEQ ID NO：38之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該鉸鏈區域包含以下或由其所構成：一胺基酸序列，其係或者其係衍生自人類IgG1的CH1-CH2鉸鏈區域，以及一胺基酸序列，其係或者其係衍生自人類IgG1的CH2-CH3區域(亦即Fc區域)。在一些實施態樣中，該鉸鏈區域包含與SEQ ID NO：39之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

根據本揭露之CARs可包含額外(多個)胺基酸序列，亦即除了形成該抗原結合域、該任選之鉸鏈/間隔子區域、該跨膜域及該信號傳導域的那些胺基酸序列之外。該CAR可額外地包含一信號肽(亦稱為一前導序列或信號序列)。信號肽正常地係由一具有5-30個疏水性胺基酸之序列所構成，其形成一單一α螺旋。經分泌蛋白質以及在該細胞表面表現之蛋白質通常包含信號肽。信號肽對於許多蛋白質係已知，並且係記錄於諸如GenBank、UniProt及Ensembl之數據庫中，及/或可以係例如使用諸如SignalP (Petersen et al., 2011 Nature Methods 8: 785-786)或Signal-BLAST (Frank and Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)之胺基酸序列分析工具來鑑定/預測。

該信號肽可存在於該CAR的N端，並且可存在於新合成CAR中。該信號肽提供該CAR至該細胞表面的有效運輸。信號肽係藉由切割被移除，並且因此係不包含在由該細胞表面所表現之成熟CAR中。

在一些實施態樣中，該信號肽包含與SEQ ID NO：40之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CAR包含一或多個連接子序列在該等不同域(亦即該抗原結合域、鉸鏈區域、跨膜域、信號傳導域)之間。在一些實施態樣中，該CAR包含一或多個連接子序列在該等域的子序列(例如在一抗原結合域的VH與VL之間)之間。

連接子序列係本領域技術人員已知的，並且係描述例如於Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中，其係藉由全文引用方式併入本文中。在一些實施態樣中，一連接子序列可以係一撓性連接子序列。撓性連接子序列允許由該連接子序列所連接之該等胺基酸序列的相對移動。撓性連接子係本領域技術人員已知的，並且數種係鑑定於Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中。撓性連接子序列通常包含高比例的甘胺酸及/或絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，該連接子序列包含至少一個甘胺酸殘基及/或至少一個絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，該連接子序列係由甘胺酸及/或絲胺酸殘基所構成。在一些實施態樣中，該連接子序列包含至少一個甘胺酸殘基及/或至少一個絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，該連接子序列包含甘胺酸及絲胺酸殘基或由其所構成。在一些實施態樣中，該連接子序列包含序列基序G ₃S的一或多個(例如1、2、3、4、5或6個)複本(例如以串聯方式)。在一些實施態樣中，該連接子序列包含序列基序G ₄S的一或多個(例如1、2、3、4、5或6個)複本(例如以串聯方式)。在一些實施態樣中，該連接子序列具有1-2、1-3、1-4、1-5、1-10、1-15、1-20、1-25或1-30個胺基酸的長度。在一些實施態樣中，該信號肽包含與SEQ ID NO：23之胺基酸序列具有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，本揭露之CAR進一步包含一表位標籤，例如用於促進鑑定。合適的標籤係本領域熟知的，並且包括例如His (例如(His)6)、c-Myc、GST、MBP、CBP、FLAG、HA、E及C標籤。此類標籤可以係被提供在該CAR的N-端及/或C-端。

在本揭露之一些實施態樣中，本揭露之CAR包含以下或由其所構成：該抗CD30 HRS3 scFv域的一細胞外部分，其連接至衍生自人類IgG1的CH2-CH3的間隔子/鉸鏈域，CD28的跨膜域及細胞內域，以及CD3ζ的細胞內域。

在一些實施態樣中，該CAR係選自於描述於以下中之一CD30特異性CAR的一實施態樣：Hombach et al.Cancer Res. (1998) 58(6):1116-9、Hombach et al.Gene Therapy (2000) 7:1067-1075、Hombach et al.J Immunother. (1999) 22(6):473-80、Hombach et al.Cancer Res. (2001) 61:1976-1982、Hombach et al.J Immunol (2001) 167:6123-6131、Savoldo et al.Blood (2007) 110(7):2620-30、Koehler et al.Cancer Res. (2007) 67(5):2265-2273、Di Stasi et al.Blood (2009) 113(25):6392-402、Hombach et al.Gene Therapy (2010) 17:1206-1213、Chmielewski et al.Gene Therapy (2011) 18:62-72、Kofler et al.Mol. Ther. (2011) 19(4):760-767、Gilham, Abken and Pule. Trends in Mol. Med. (2012) 18(7):377-384、Chmielewski et al.Gene Therapy (2013) 20:177-186、Hombach et al.Mol. Ther. (2016) 24(8):1423-1434、Ramos et al.J. Clin. Invest. (2017) 127(9):3462-3471、WO 2021/245249 A1、WO 2021/222927 A1、WO 2021/222928 A1、WO 2021/222929 A1、WO 2015/028444 A1，或者WO 2016/008973 A1，其全部係藉由全文引用方式併入本文中。

在本揭露之一些實施態樣中，該CAR包含以下或由其所構成：一抗原結合域，其包含與SEQ ID NO：24之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成；一鉸鏈區域，其包含與SEQ ID NO：39或49之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成；一跨膜域，其包含與SEQ ID NO：26之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成；以及一信號傳導域，其包含與SEQ ID NO：34之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成。

在本揭露之一些實施態樣中，該CAR包含與SEQ ID NO：41、42、50或51之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

在一些實施態樣中，該CAR係一CD19特異性CAR。

在本揭露之一些實施態樣中，該CAR包含以下或由其所構成：一抗原結合域，其包含與SEQ ID NO：67之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成；一鉸鏈區域，其包含與SEQ ID NO：68之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成；一跨膜域，其包含與SEQ ID NO：26之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成；以及一信號傳導域，其包含與SEQ ID NO：34之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列或由其所構成。

在本揭露之一些實施態樣中，該CAR包含與SEQ ID NO：69或70之胺基酸序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列，或由其所構成。

用於產生表現CAR之免疫細胞的方法係本領域技術人員熟知的。其等通常涉及修飾免疫細胞以表現/包含一CAR，例如藉由將編碼一CAR之核酸引入至該等免疫細胞中。根據本領域技術人員熟知的方法，免疫細胞可以係經修飾以包含/表現在本文中所述之一CAR或者編碼一CAR之核酸。該等方法通常包含核酸轉移以永久(穩定)或短暫表現該經轉移核酸。該等方法可進一步包含在適合該細胞表現該CAR的條件下培養該細胞。在一些實施態樣中，培養其中已經引入編碼一CAR之核酸的細胞以擴增其等之數量的方法。

用於修飾一細胞之合適方法包括使用基因改造平台，諸如伽瑪反轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體、DNA轉染、基於轉座子之基因遞送及 RNA轉染，例如如描述於Maus et al., Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225中，藉由全文引用方式併入本文中。亦包括那些描述例如於Wang and Rivière Mol Ther Oncolytics. (2016) 3:16015中的方法，其係藉由全文引用方式併入本文中。用於將(多個)核酸/(多個)載體引入至細胞中的合適方法包括藉由轉化、轉染、電穿孔或轉導(例如反轉錄病毒轉導)將編碼一CAR之(多個)核酸或(多個)載體引入至一細胞中，例如如描述於本文中。在一些實施態樣中，根據本揭露之表現CAR之免疫細胞係實質上如描述於本文之實施例1.4中來產生。

特別地，本揭露考量根據描述於WO 2021/245249 A1、WO 2021/222927 A1、WO 2021/222928 A1及WO 2021/222929 A1中的方法來產生表現CAR之免疫細胞，其全部係藉由引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，根據本揭露之免疫細胞係一病毒特異性免疫細胞。如在本文中所使用，一「病毒特異性免疫細胞」係指一對一病毒具有特異性之免疫細胞。一病毒特異性免疫細胞表現/包含一受體(較佳地係一T細胞受體)，其能夠識別一病毒的一抗原的一肽(例如當由一MHC分子所呈現時)。由於編碼此類抗原受體之內源性核酸的表現，或者由於已經被改造以表現此類受體，該病毒特異性免疫細胞可表現/包含此類受體。該病毒特異性免疫細胞較佳地表現/包含一TCR，其對一病毒的一抗原的一肽具有特異性。

在一些實施態樣中，該免疫細胞係一病毒特異性T細胞。一病毒特異性T細胞可展現一T細胞的某些功能性性質，以回應該T細胞對其具有特異性的該病毒抗原，或者以回應一包含/表現該病毒/抗原之細胞。在一些實施態樣中，該等性質係與例如細胞毒性T細胞之效應T細胞相關的功能性性質。

在一些實施態樣中，一病毒特異性T細胞可展現以下性質中之一或多者：對一包含/表現該T細胞對其具有特異性之該病毒/該病毒抗原之細胞具有細胞毒性；增殖、IFNγ表現、CD107a表現、IL-2表現、TNFα表現、穿孔素表現、顆粒酶表現、顆粒溶解素表現，及/或FAS配體(FASL)表現，以回應用該T細胞對其具有特異性之該病毒/該病毒抗原的刺激，或者以回應暴露於一包含/表現該T細胞對其具有特異性之該病毒/該病毒抗原之細胞。

病毒特異性T細胞表現/包含一TCR，其能夠識別該T細胞對其具有特異性之該病毒抗原的一肽，當由適當的MHC分子所呈現時。病毒特異性T細胞可以係CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞。

該病毒特異性免疫細胞對其具有特異性之該病毒可以係任何病毒。例如，該病毒可以係一dsDNA病毒(例如腺病毒、疱疹病毒、痘病毒)、ssRNA病毒(例如小病毒(parvovirus))、dsRNA病毒(例如里奧病毒(reovirus))、(+)ssRNA病毒(例如小核糖核酸病毒(picornavirus)、披衣病毒(togavirus))、(-)ssRNA病毒(例如正黏液病毒(orthomyxovirus)、棒狀病毒(rhabdovirus))、ssRNA-RT病毒(例如反轉錄病毒)，或者dsDNA-RT病毒(例如嗜肝DNA病毒(hepadnavirus))。特別地，本揭露考量以下病毒：腺病毒科、疱疹病毒科、乳頭狀瘤病毒科、多瘤病毒科(polyomaviridae)、痘病毒科、嗜肝DNA病毒科、小病毒科、星狀病毒科(astroviridae)、杯狀病毒科(caliciviridae)、小核糖核酸病毒科、冠狀病毒科、黃病毒科(flaviviridae)、披衣病毒科、肝炎病毒科、反轉錄病毒科、正黏液病毒科、沙狀病毒科(arenaviridae)、布尼亞病毒科(bunyaviridae)、絲狀病毒科(filoviridae)、副黏液病毒科、棒狀病毒科，以及里奧病毒科。在一些實施態樣中，該病毒係選自於艾司坦氏-巴爾氏病毒、腺病毒、1型單純疱疹病毒、2型單純疱疹病毒、水痘-帶狀疱疹病毒、人類細胞巨大病毒、8型人類疱疹病毒、人類乳頭狀瘤病毒、BK病毒、JC病毒、天花、B型肝炎病毒、小病毒B19、人類星狀病毒、諾沃克病毒(Norwalk virus)、柯薩奇病毒(coxsackievirus)、A型肝炎病毒、脊髓灰白質炎病毒(poliovirus)、鼻病毒(rhinovirus)、嚴重急性呼吸道症候群病毒、C型肝炎病毒、黃熱病病毒、登革熱病毒(dengue virus)、西尼羅河病毒(West Nile virus)、TBE病毒、德國麻疹病毒(Rubella virus)、E型肝炎病毒、人類免疫缺乏病毒、流感病毒、拉沙病毒(lassa virus)、克里米亞剛果(Crimean-Congo)出血熱病毒、漢他病毒(Hantaan virus)、伊波拉病毒、馬堡病毒(Marburg virus)、麻疹病毒、腮腺炎病毒、副流感病毒、小核糖核酸病毒、呼吸道融合病毒(respiratory syncytial virus)、狂犬病病毒、D型肝炎病毒、輪狀病毒、環狀病毒、科蜱病毒(coltivirus)，以及班納病毒(banna virus)。

在一些實施態樣中，該病毒係選自於艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)、腺病毒、細胞巨大病毒(CMV)、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)、流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺乏病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒(HSV)、BK病毒(BKV)，或者水痘帶狀疱疹病毒(VZV)。

在一些實施態樣中，該病毒特異性免疫細胞可以係對一病毒的一肽/多肽具有特異性，所述病毒係例如選自於艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)、腺病毒、細胞巨大病毒(CMV)、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)、流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺乏病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)，或者單純疱疹病毒(HSV)。

對一病毒的一抗原具有特異性的一T細胞在本文中可被稱為一病毒特異性T細胞(VST)。對一特定病毒的一抗原具有特異性的一T細胞可被描述為對該相關病毒具有特異性；例如，對EBV的一抗原具有特異性的一T細胞可被稱為一EBV特異性T細胞，或者「EBVST」。

因此，在一些實施態樣中，該病毒特異性免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒特異性T細胞(EBVST)、腺病毒特異性T細胞(AdVST)、細胞巨大病毒特異性T細胞(CMVST)、人類乳頭狀瘤病毒(HPVST)、流感病毒特異性T細胞、麻疹病毒特異性T細胞、B型肝炎病毒特異性T細胞(HBVST)、C型肝炎病毒特異性T細胞(HCVST)、人類免疫缺乏病毒特異性T細胞(HIVST)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒特異性T細胞(LCMVST)、單純疱疹病毒特異性T細胞(HSVST)、BK病毒特異性T細胞(BKVST)，或者水痘帶狀疱疹病毒特異性T細胞(VZVST)。

在一些較佳的實施態樣中，該病毒特異性免疫細胞對一EBV抗原的一肽/多肽具有特異性。在較佳的實施態樣中，該病毒特異性免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒特異性T細胞(EBVST)。如在本文中所使用，一「EBV特異性免疫細胞」係指一對艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)具有特異性的免疫細胞。一EBV特異性免疫細胞表現/包含一受體(較佳地係一T細胞受體)，其能夠識別EBV的一抗原的一肽(例如當由一MHC分子所呈現時)。該EBV特異性免疫細胞較佳地表現/包含一TCR，其對由MHC I類所呈現的一EBV抗原的一肽具有特異性。

對EBV具有特異性的一免疫細胞可以係對任何EBV抗原具有特異性，例如在本文中所述之一EBV抗原。對EBV具有特異性之免疫細胞族群，或者一包含複數個對EBV具有特異性之免疫細胞的組成物，可包含對一或多個EBV抗原具有特異性之免疫細胞。

在一些實施態樣中，一EBV抗原係一EBV潛伏抗原，例如一III型潛伏抗原(例如EBNA1、EBNA-LP、LMP1、LMP2A、LMP2B、BARF1、EBNA2、EBNA3A、EBNA3B或EBNA3C)、一II型潛伏抗原(例如EBNA1、EBNA-LP、LMP1、LMP2A、LMP2B或BARF1)，或者一I型潛伏抗原(例如EBNA1或BARF1)。在一些實施態樣中，一EBV抗原係一EBV溶解抗原，例如一立即早期溶解抗原(例如BZLF1、BRLF1或BMRF1)、一早期溶解抗原(例如BMLF1、BMRF1、BXLF1、BALF1、BALF2、BARF1、BGLF5、BHRF1、BNLF2A、BNLF2B、BHLF1、BLLF2、BKRF4、BMRF2、FU或EBNA1-FUK)，或者一晚期溶解抗原(例如BALF4、BILF1、BILF2、BNFR1、BVRF2、BALF3、BALF5、BDLF3或gp350)。

病毒特異性免疫細胞可以係藉由本領域技術人員熟知的方法來產生。該等方法可包含，在提供適當共刺激及信號放大以造成活化及擴增的條件下，在呈現病毒抗原肽:MHC複合物之抗原呈現細胞(APCs)的存在下，培養包含具有抗原特異性受體(TCRs)之細胞的免疫細胞族群(例如免疫細胞的異質族群，例如周邊血液單核細胞；PBMCs)。該等APCs可以係經編碼或可包含/表現該病毒抗原/該(等)肽之病毒感染，並且在一MHC分子的情形下呈現該病毒抗原肽。刺激造成T細胞活化，並且促進細胞分裂(增殖)，導致對該病毒抗原具有特異性之T細胞族群生成及/或擴增。T細胞活化的方法係本領域技術人員熟知的，並且係詳細描述例如於Immunobiology, 5th Edn. Janeway CA Jr, Travers P, Walport M, et al.New York: Garland Science (2001), Chapter 8中，其係藉由全文引用方式併入本文中。

相較於在刺激前的族群，在刺激後獲得的細胞族群富集對該病毒具有特異性之T細胞(亦即在刺激後該等病毒特異性T細胞係以一經增加頻率存在於該族群中)。以此方式，對該病毒具有特異性之T細胞族群係從具有不同特異性之T細胞的一異質族群擴增/生成。對一病毒具有特異性之T細胞族群可以係從一單一T細胞藉由刺激及後續細胞分裂生成。對一病毒具有特異性之T細胞現存族群可以係藉由刺激及病毒特異性T細胞族群之細胞的後續細胞分裂擴增。

在一些實施態樣中，根據本揭露之病毒特異性免疫細胞係實質上如描述於本文之實施例1.4中來產生。

本揭露之態樣及實施態樣特別地係有關於EBV特異性免疫細胞。用於生成/擴增EBV特異性免疫細胞族群之方法係描述例如於WO 2013/088114 A1、Lapteva and Vera, Stem Cells Int. (2011): 434392、Straathof et al., Blood (2005) 105(5): 1898-1904、WO 2017/202478 A1、WO 2018/052947 A1及WO 2020/214479 A1中，其全部係藉由全文引用方式併入本文中。

特別地，本揭露考量根據描述於WO 2021/222927 A1、WO 2021/222928 A1及WO 2021/222929 A1中的方法來產生病毒特異性免疫細胞(例如EBV特異性免疫細胞)，其全部係藉由引用方式併入本文中。

本揭露之態樣及實施態樣係有關於病毒特異性、表現CAR之免疫細胞。在一些實施態樣中，該等免疫細胞係EBV特異性、表現CAR之免疫細胞。在一些實施態樣中，該等免疫細胞係病毒特異性、CD30特異性表現CAR之免疫細胞。在一些實施態樣中，該等免疫細胞係EBV特異性、CD30特異性表現CAR之免疫細胞。在一些實施態樣中，該等免疫細胞係病毒特異性、CD19特異性表現CAR之免疫細胞。在一些實施態樣中，該等免疫細胞係EBV特異性、CD19特異性表現CAR之免疫細胞。用於產生此類細胞之方法係本領域已知的，並且係描述於WO 2021/222927 A1、WO 2021/222928 A1及WO 2021/222929 A1中，其全部係藉由引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，根據本揭露之免疫細胞係一經活化T細胞(ATC)。如在本文中所使用，一「經活化T細胞」或「ATC」係指其中CD3-TCR複合物介導信號傳導係經活化的一T細胞。在一些實施態樣中，經活化T細胞具有廣泛的特異性(亦即該經活化T細胞對複數個不同的抗原具有反應性)。

在一些實施態樣中，一經活化T細胞可展現一T細胞的某些功能性性質。在一些實施態樣中，該等性質係與例如細胞毒性T細胞之效應T細胞相關的功能性性質。在一些實施態樣中，一經活化T細胞可展現以下性質中之一或多者：增殖、一或多個T細胞活化特徵性表面標誌物(例如CD25、CD71、CD26、CD27、CD28、CD30、CD154、CD40L、 CD134)的表現、生長因子(例如IL-2)表現、IFNγ表現、CD107a表現、TNFα表現、GM-CSF表現、穿孔素表現、顆粒酶表現、顆粒溶解素表現，及/或FAS配體(FASL)表現。

經活化T細胞可以係CD4+ T細胞及/或CD8+ T細胞。

經活化T細胞可以係藉由本領域技術人員熟知的方法來產生。該等方法可包含在一或多個細胞激素(例如IL-2、IL-7、IL-15)的存在下，藉由用促效劑抗CD3及促效劑抗CD28抗體刺激PBMCs，在體外非特異性地活化T細胞。在一些實施態樣中，一經活化T細胞可以係如描述於本文之實施例1.4中來生成。

在一些實施態樣中，經修飾以增加SERPINB9之表現或活性的細胞對同種異體細胞(例如同種異體T細胞)不展現毒性(亦即實質地不展現毒性)。在一些實施態樣中，經修飾以增加SERPINB9之表現或活性的細胞對同種異體T細胞不展現毒性。在一些實施態樣中，經修飾以增加SERPINB9之表現或活性的細胞對同種異體NK細胞不展現毒性。

在一些實施態樣中，「同種異體細胞」係與該等測試細胞(例如，經修飾以增加SERPINB9之表現或活性的細胞) HLA不匹配的細胞。在一些實施態樣中，「同種異體細胞」係與該等測試細胞HLA不匹配的PBMCs。在一些實施態樣中，「同種異體細胞」係與該等測試細胞HLA不匹配的同種異體反應性T細胞，例如藉由活化來自於一具有CD3及CD28之HLA不匹配供體的PBMCs而產生的同種異體反應性T細胞。在一些實施態樣中，「同種異體細胞」不包含腫瘤/疾病細胞。

如在本文中所使用，相對於一參考細胞/主體係「HLA不匹配」的細胞可以係：(i)在HLA-A、-B、-C及-DRB1具有＜8/8 (亦即0/8、1/8、2/8、3/8、4/8、5/8、6/8或7/8)的匹配；或者(ii)在HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1具有＜10/10 (亦即0/10、1/10、2/10、3/10、4/10、5/10、6/10、7/10、8/10或9/10)的匹配；或者(iii)在HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1及-DPB1具有＜12/12 (亦即0/12、1/12、2/12、3/12、4/12、5/12、6/12、7/12、8/12、9/12、10/12或11/12)的匹配。如在本文中所使用，相對於一參考細胞/主體係「HLA匹配」的細胞可以係：(i)在HLA-A、-B、-C及-DRB1具有8/8的匹配；或者(ii)在HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1具有10/10的匹配；或者(iii)在HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1及-DPB1具有12/12的匹配。

在一些實施態樣中，對一給定類型細胞(例如同種異體T細胞/NK細胞)「不展現毒性」或「實質地不展現毒性」的細胞可對該給定類型細胞展現細胞殺滅/細胞溶解/細胞毒性，其水平係類似於(例如≥0.5倍且≤2倍，例如≥0.55倍且≤1.9倍、≥0.6倍且≤1.8倍、≥0.65倍且≤1.7倍、≥0.7倍且≤1.6倍、≥0.75倍且≤1.5倍、≥0.8倍且≤1.4倍、≥0.85倍且≤1.3倍、≥0.9倍且≤1.2倍，或者≥0.95倍且≤1.1倍中之一者)或者小於(亦即＜1倍)由一參考細胞類型所展現的水平，所述參考細胞類型已知不會對該給定類型細胞殺滅/造成細胞溶解/展現細胞毒性，在相同測定法中。

殺滅同種異體細胞的水平可以係使用合適的測定法來評估。用於評估殺滅同種異體細胞的水平的合適測定法包括例如混合淋巴細胞反應(MLR)測定法，諸如描述於實施例1.5中的測定法。用於評估殺滅同種異體細胞的水平的合適測定法包括例如體內測定法，諸如描述於實施例1.10中的測定法。在一些實施態樣中，同種異體細胞或同種異體細胞亞型係藉由表現或不表現細胞標誌物CD3、CD4、CD8、HLA-A2及/或HLA-A3、TCRαβ、CD45、CD19、CD30中之一或多者來鑑定。包含/表現本揭露之多肽、核酸及載體之細胞的性質

具有經增加之SERPINB9之表現或活性的細胞(例如包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞，或者經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞)可具有以下中之一或多者：一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性降低；一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性降低；對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性增加(及/或敏感性降低)；對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性增加(及/或敏感性降低)；表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如表現顆粒酶B之細胞；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的速率降低；對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性增加(及/或敏感性降低)；類似的體外增殖/擴增(例如當單獨培養時，亦即作為一單培養物)；類似的效應活性(亦即在其中該細胞係一效應免疫細胞的實施態樣中)；在一同種異體效應免疫細胞的存在下(例如當與同種異體效應免疫細胞共培養時)的持久性/存活/增殖增加；在一同種異體主體中的持久性/存活/增殖增加；當作為一同種異體移植物投予時的排斥降低；在一同種異體效應免疫細胞的存在下(例如當與同種異體效應免疫細胞共培養時)的抗癌活性增加；在一同種異體主體中的抗癌活性增加；在慢性抗原暴露條件下的持久性/存活/增殖增加；或者一或多個免疫細胞耗竭標誌物的類似表現(亦即在其中該細胞係一效應免疫細胞的實施態樣中)。

將理解一給定細胞可展現一個以上在前段中所述之性質。根據前段，一給定性質的一「經降低」或「經增加」或「類似」水平可以係相對於該類型細胞通常所展現之相關性質的水平(例如一降低或增加係相對於該類型細胞之相關性質的水平的參考值)。對於包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞而言，根據前段，一給定性質的一「經降低」、「經增加」或「類似」水平可以係相對於不包含該(等)核酸/該(等)載體的等效細胞所展現之相關性質的水平。對於經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞而言，根據前段，一「經降低」、「經增加」或「類似」水平可以係相對於尚未經該試劑處理的等效細胞所展現之相關性質的水平。在前段中所鑑定之該等性質可以係例如如描述於上文中來評估。

相對於一參考水平，一給定性質的一「經增加」水平可以係大於該參考水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。相對於一參考水平，一給定性質的一「經降低」水平可以係小於該參考水平的1倍以下，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、 ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者。與一參考水平「類似」的一給定性質的一水平可以係該參考水平的≥0.5倍且≤2倍，例如≥0.55倍且≤1.9倍、≥0.6倍且≤1.8倍、≥0.65倍且≤1.7倍、≥0.7倍且≤1.6倍、≥0.75倍且≤1.5倍、≥0.8倍且≤1.4倍、 ≥0.85倍且≤1.3倍、≥0.9倍且≤1.2倍，或者≥0.95倍且≤1.1倍中之一者。

一效應免疫細胞的效應活性可以係使用一針對一效應活性之適當測定法來評估。在一些實施態樣中，一效應活性係選自於：對一包含/表現一抗原之細胞的細胞毒性，其中該效應免疫細胞包含一分子(例如一TCR、CAR)，用於引導該效應免疫細胞之活性對抗包含/表現此類抗原之細胞；增殖、IFNγ表現、CD107a表現、IL-2表現、TNFα表現、穿孔素表現、顆粒酶表現、顆粒溶解素表現，及/或FAS配體(FASL)表現，以回應用該抗原的刺激，其中該效應免疫細胞包含一分子(例如一TCR、CAR)，用於引導該效應免疫細胞之活性對抗包含/表現此類抗原之細胞，或者以回應包含/表現此類抗原之細胞。作為闡明，當該細胞係一包含一CAR的效應免疫細胞，其中所述CAR對CD30具有特異性時，一效應活性可以係選自於：對一包含/表現CD30之細胞的細胞毒性；增殖、IFNγ表現、CD107a表現、IL-2表現、TNFα表現、穿孔素表現、顆粒酶表現、顆粒溶解素表現，及/或FAS配體(FASL)表現，以回應用CD30的刺激，或者以回應包含/表現CD30之細胞。作為進一步的闡明，當該細胞係一包含一TCR的效應免疫細胞，其中所述TCR對一包含一EBV抗原的一肽的MHC-肽複合物具有特異性時，一效應活性可以係選自於：對一包含/表現該MHC-肽複合物之細胞的細胞毒性；增殖、IFNγ表現、CD107a表現、IL-2表現、TNFα表現、穿孔素表現、顆粒酶表現、顆粒溶解素表現，及/或FAS配體(FASL)表現，以回應用該MHC-肽複合物的刺激，或者以回應包含/表現該MHC-肽複合物之細胞。

一給定細胞(例如一效應免疫細胞)的免疫細胞耗竭標誌物的基因及/或蛋白質表現可以係如描述於本文中來評估(藉由定量即時PCR (qRT-PCR)來測量mRNA的水平、藉由基於抗體之方法，例如藉由西方墨點法、免疫組織化學、免疫細胞組織化學、流式細胞術、ELISA或ELISAPOT)。免疫細胞耗竭標誌物包括例如免疫檢查點分子(例如PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、VISTA、TIGIT及BTLA)、CD160及CD244。在較佳的實施態樣中，一免疫細胞耗竭標誌物係選自於PD-1、LAG-3及TIM-3。在一些實施態樣中，一或多個免疫細胞耗竭標誌物的細胞表面表現可以係例如藉由流式細胞術來評估。

在一些實施態樣中，一具有經增加之SERPINB9之表現或活性的細胞(例如一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞，或者一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞)具有一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性/一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性/對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的敏感性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的敏感性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的敏感性/表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的速率/當作為一同種異體移植物投予時的排斥的水平係小於該類型細胞通常所展現之相關性質的水平(例如該類型細胞之相關性質的水平的參考值)的1倍以下，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、 ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞具有一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性/一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性/對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的敏感性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的敏感性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的敏感性/表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的速率/當作為一同種異體移植物投予時的排斥的水平係小於不包含該(等)核酸/該(等)載體的等效細胞所展現之相關性質的水平的1倍以下，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、 ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞具有一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性/一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性/對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的敏感性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的敏感性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的敏感性/表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的速率/當作為一同種異體移植物投予時的排斥的水平係小於尚未經該試劑處理的等效細胞所展現之相關性質的水平的1倍以下，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、 ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一具有經增加之SERPINB9之表現或活性的細胞(例如一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞，或者一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞)具有對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性/在一同種異體效應免疫細胞的存在下的持久性、存活或增殖/在一同種異體主體中的持久性、存活或增殖/在一同種異體效應免疫細胞的存在下的抗癌活性/在一同種異體主體中的抗癌活性/在慢性抗原暴露條件下的持久性、存活或增殖的水平係大於該類型細胞通常所展現之相關性質的水平(例如該類型細胞之相關性質的水平的參考值)的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞具有對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性/在一同種異體效應免疫細胞的存在下的持久性、存活或增殖/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性/在一同種異體主體中的持久性、存活或增殖/在一同種異體效應免疫細胞的存在下的抗癌活性/在一同種異體主體中的抗癌活性/在慢性抗原暴露條件下的持久性、存活或增殖的水平係大於不包含該(等)核酸/該(等)載體的等效細胞所展現之相關性質的水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞具有對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性/在一同種異體主體中的持久性、存活或增殖/在一同種異體效應免疫細胞的存在下的抗癌活性/在一同種異體主體中的抗癌活性/在慢性抗原暴露條件下的持久性、存活或增殖的水平係大於尚未經該試劑處理的等效細胞所展現之相關性質的水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一具有經增加之SERPINB9之表現或活性的細胞(例如一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞，或者一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞)展現對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性增加(及/或敏感性降低)，以及對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性增加(及/或敏感性降低)。在一些實施態樣中，一具有經增加之SERPINB9之表現或活性的細胞(例如一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞，或者一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞)不展現對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性增加(及/或敏感性降低)。

在一些實施態樣中，一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞在一同種異體效應免疫細胞的存在下(例如當與同種異體效應免疫細胞共培養時)會存活/持久至少3天(例如至少3、4、5、6、7、8、9、10 、11、12、13、14或15天)。在一些實施態樣中，一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞在一同種異體主體中會存活/持久至少11天(例如至少11、12、13、14或15天)。

在一些實施態樣中，一具有經增加之SERPINB9之表現或活性的細胞(例如一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞，或者一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞)具有增殖或擴增的水平/一效應活性的水平/一或多個免疫細胞耗竭標誌物的表現係該類型細胞通常所展現之相關性質的水平(例如該類型細胞之相關性質的水平的參考值)的≥0.5倍且≤2倍，例如≥0.55倍且≤1.9倍、≥0.6倍且≤1.8倍、≥0.65倍且≤1.7倍、≥0.7倍且≤1.6倍、≥0.75倍且≤1.5倍、≥0.8倍且≤1.4倍、≥0.85倍且≤1.3倍、≥0.9倍且≤1.2倍、≥0.95倍且≤1.1倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一包含或表現根據本揭露之(多個)核酸/(多個)載體的細胞具有增殖或擴增的水平/一效應活性的水平/一或多個免疫細胞耗竭標誌物的表現係不包含該(等)核酸/該(等)載體的等效細胞所展現之相關性質的水平的≥0.5倍且≤2倍，例如≥0.55倍且≤1.9倍、≥0.6倍且≤1.8倍、≥0.65倍且≤1.7倍、≥0.7倍且≤1.6倍、≥0.75倍且≤1.5倍、≥0.8倍且≤1.4倍、≥0.85倍且≤1.3倍、≥0.9倍且≤1.2倍、≥0.95倍且≤1.1倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一經根據本揭露之用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理的細胞具有增殖或擴增的水平/一效應活性的水平/一或多個免疫細胞耗竭標誌物的表現係尚未經該試劑處理的等效細胞所展現之相關性質的水平的≥0.5倍且≤2倍，例如≥0.55倍且≤1.9倍、≥0.6倍且≤1.8倍、≥0.65倍且≤1.7倍、≥0.7倍且≤1.6倍、≥0.75倍且≤1.5倍、≥0.8倍且≤1.4倍、≥0.85倍且≤1.3倍、≥0.9倍且≤1.2倍、≥0.95倍且≤1.1倍中之一者，在相同測定法中。

本揭露特別地係有關於SERPINB9變異體、編碼此類SERPINB9變異體之(多個)核酸/(多個)載體，以及包含此類SERPINB9變異體/(多個)核酸/(多個)載體之細胞。在一些實施態樣中，相對於包含野生型人類SERPINB9多肽(例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)的等效細胞或者包含包含/表現編碼野生型人類SERPINB9多肽(例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)之(多個)核酸/(多個)載體的等效細胞所展現之相關性質的水平，此類細胞可具有以下中之一或多者：一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性降低；一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性降低；對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性增加(及/或敏感性降低)；對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性增加(及/或敏感性降低)；表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如表現顆粒酶B之細胞；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的速率降低；對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性增加(及/或敏感性降低)；類似的體外增殖/擴增(例如當單獨培養時，亦即作為一單培養物)；類似的效應活性(亦即在其中該細胞係一效應免疫細胞的實施態樣中)；在一同種異體效應免疫細胞的存在下(例如當與同種異體效應免疫細胞共培養時)的持久性/存活/增殖增加；在一同種異體主體中的持久性/存活/增殖增加；當作為一同種異體移植物投予時的排斥降低；在一同種異體效應免疫細胞的存在下(例如當與同種異體效應免疫細胞共培養時)的抗癌活性增加；在一同種異體主體中的抗癌活性增加；在慢性抗原暴露條件下的持久性/存活/增殖增加；或者一或多個免疫細胞耗竭標誌物的類似表現(亦即在其中該細胞係一效應免疫細胞的實施態樣中)。

將理解一給定細胞可展現一個以上在前段中所述之性質。在前段中所鑑定之該等性質可以係例如如描述於上文中來評估。

在一些實施態樣中，一包含根據本揭露之SERPINB9變異體(例如具有SEQ ID NO：5、6或7之胺基酸序列)的細胞具有一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性/一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性/對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的敏感性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的敏感性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的敏感性/表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的速率/當作為一同種異體移植物投予時的排斥的水平係小於包含野生型人類SERPINB9 (例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)之相同類型細胞所展現之相關性質的水平的1倍以下，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、 ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者，在相同測定法中。在一些實施態樣中，一包含/表現編碼根據本揭露之SERPINB9變異體(例如具有SEQ ID NO：5、6或7之胺基酸序列)之(多個)核酸/(多個)載體的細胞具有一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)的活性/一半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-1、-4、-5、-2、-3、-6、-7、-8或-10)的活性/對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的敏感性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的敏感性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的敏感性/表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的速率/當作為一同種異體移植物投予時的排斥的水平係小於包含/表現編碼野生型人類SERPINB9 (例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)之(多個)核酸/(多個)載體的相同類型細胞所展現之相關性質的水平的1倍以下，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、 ≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一包含根據本揭露之SERPINB9變異體(例如具有SEQ ID NO：5、6或7之胺基酸序列)的細胞具有對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性/在一同種異體主體中的持久性、存活或增殖/在一同種異體效應免疫細胞的存在下的抗癌活性/在一同種異體主體中的抗癌活性/在慢性抗原暴露條件下的持久性、存活或增殖的水平的大於包含野生型人類SERPINB9 (例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)之相同類型細胞所展現之相關性質的水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者，在相同測定法中。在一些實施態樣中，一包含/表現編碼根據本揭露之SERPINB9變異體(例如具有SEQ ID NO：5、6或7之胺基酸序列)之(多個)核酸/(多個)載體的細胞具有對一絲胺酸蛋白酶(例如顆粒酶B)之細胞殺滅的抗性/對表現一絲胺酸蛋白酶之細胞(例如顆粒酶B；例如效應免疫細胞)之細胞殺滅的抗性/對由一死亡受體所介導之細胞凋亡(例如Fas介導細胞凋亡)的抗性/在一同種異體主體中的持久性、存活或增殖/在一同種異體效應免疫細胞的存在下的抗癌活性/在一同種異體主體中的抗癌活性/在慢性抗原暴露條件下的持久性、存活或增殖的水平係大於包含/表現編碼野生型人類SERPINB9 (例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)之(多個)核酸/(多個)載體的相同類型細胞所展現之相關性質的水平的1倍以上，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者，在相同測定法中。

在一些實施態樣中，一包含根據本揭露之SERPINB9變異體(例如具有SEQ ID NO：5、6或7之胺基酸序列)的細胞具有增殖或擴增的水平/一效應活性的水平/一或多個免疫細胞耗竭標誌物的表現係包含野生型人類SERPINB9 (例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)之相同類型細胞所展現之相關性質的水平的≥0.5倍且≤2倍，例如≥0.55倍且≤1.9倍、≥0.6倍且≤1.8倍、≥0.65倍且≤1.7倍、≥0.7倍且≤1.6倍、≥0.75倍且≤1.5倍、≥0.8倍且≤1.4倍、≥0.85倍且≤1.3倍、≥0.9倍且≤1.2倍、≥0.95倍且≤1.1倍中之一者，在相同測定法中。在一些實施態樣中，一包含/表現編碼根據本揭露之SERPINB9變異體(例如具有SEQ ID NO：5、6或7之胺基酸序列)之(多個)核酸/(多個)載體的細胞具有增殖或擴增的水平/一效應活性的水平/一或多個免疫細胞耗竭標誌物的表現係包含/表現編碼野生型人類SERPINB9 (例如具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列)之(多個)核酸/(多個)載體的相同類型細胞所展現之相關性質的水平的≥0.5倍且≤2倍，例如≥0.55倍且≤1.9倍、≥0.6倍且≤1.8倍、≥0.65倍且≤1.7倍、≥0.7倍且≤1.6倍、≥0.75倍且≤1.5倍、≥0.8倍且≤1.4倍、≥0.85倍且≤1.3倍、≥0.9倍且≤1.2倍、≥0.95倍且≤1.1倍中之一者，在相同測定法中。特定的例示性細胞

考量以下與本揭露有關之特定的例示性細胞：

(1)一效應免疫細胞(例如一T細胞或者一NK細胞)，其包含編碼一SERPINB9多肽的外源性核酸。

(2)一效應免疫細胞(例如一T細胞或者一NK細胞)，其包含： (i)編碼一SERPINB9多肽的外源性核酸；以及 (ii)編碼一嵌合抗原受體(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受體包含一結合至CD30的抗原結合域。

(3)一效應免疫細胞(例如一T細胞或者一NK細胞)，其包含： (i)編碼一SERPINB9多肽的外源性核酸；以及 (ii) 編碼一嵌合抗原受體(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受體包含一結合至CD19的抗原結合域。

(4)一病毒特異性T細胞(例如一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞)，其包含編碼一SERPINB9多肽的外源性核酸。

(5)一病毒特異性T細胞(例如一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞)，其包含： (i)編碼一SERPINB9多肽的外源性核酸；以及 (ii) 編碼一嵌合抗原受體(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受體包含一結合至CD30的抗原結合域。

(6)一病毒特異性T細胞(例如一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞)，其包含： (i)編碼一SERPINB9多肽的外源性核酸；以及 (ii) 編碼一嵌合抗原受體(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受體包含一結合至CD19的抗原結合域。組成物

本揭露亦提供包含在本文中所述之多肽、核酸、表現載體及細胞的組成物。

在本文中所述之多肽、核酸、表現載體及細胞可以係被調配為用於治療性及/或預防性方法的醫藥組成物或藥物，並且可包含一醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。在本文中所述之多肽、核酸、表現載體及細胞可以係被調配用於診斷及/或預後應用。

本揭露之組成物可包含一或多個醫藥學上可接受之載劑(例如脂質體、微胞、微球、奈米顆粒)、稀釋劑/賦形劑(例如澱粉、纖維素、一纖維素衍生物、一多元醇、右旋糖、麥芽糊精、硬脂酸鎂)、佐劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑(例如維生素A、維生素E、維生素C、軟脂酸視網酯、硒、半胱胺酸、甲硫胺酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯)、抗氧化劑(例如維生素A、維生素E、維生素C、軟脂酸視網酯、硒)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、二氧化矽、硬脂酸、植物硬脂)、黏合劑(例如蔗糖、乳糖、澱粉、纖維素、明膠、聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone, PVP)、木糖醇、山梨醇、甘露醇)、穩定劑、助溶劑、表面活性劑(例如潤濕劑)、遮蔽劑，或者著色劑(例如氧化鈦)。

如在本文中所使用，術語「醫藥學上可接受的」涉及化合物、成分、材料、組成物、劑型等等，其在合理醫學判斷範疇內係適用於接觸所討論主體(例如一人類主體)的組織接觸而沒有過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與一合理的益處/風險比率相稱。根據本揭露之組成物的各個載劑、稀釋劑、賦形劑、佐劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、黏合劑、穩定劑、助溶劑、表面活性劑、遮蔽劑、著色劑、調味劑或甜味劑在與該調配物之其他成分相容的意義上亦必須係「可接受的」。合適的載劑、稀釋劑、賦形劑、佐劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、黏合劑、穩定劑、助溶劑、表面活性劑、遮蔽劑、著色劑、調味劑或甜味劑可以係見於標準醫藥學教科書中，例如，Remington’s ‘The Science and Practice of Pharmacy’ (Ed. A. Adejare), 23rd Edition (2020), Academic Press。

組成物可以係被調配用於局部、腸胃外、全身、腔內、靜脈內、動脈內、肌內、鞘內、眼內、結膜內、腫瘤內、皮下、皮內、鞘內、口服或經皮投予途徑。在一些實施態樣中，一醫藥組成物/藥物可以係被調配用於藉由注射或輸注來投予，或者藉由攝取來投予。

合適的調配物可包含在一無菌或等滲介質中的相關物品。藥物及醫藥組成物可以係被調配成流體形式，包括凝膠形式。流體調配物可以係被調配用於藉由注射或輸注(例如經由導管)來投予至人體或動物體的一選定區域。

在一些實施態樣中，該組成物係被調配用於注射或輸注，例如至血管或者所關注組織/器官中。

本揭露亦提供用於產生醫藥學上有用之組成物的方法，此類產生方法可包含選自於以下中之一或多個步驟：產生在本文中所述之多肽、核酸、表現載體或細胞；分離在本文中所述之多肽、核酸、表現載體或細胞；及/或將在本文中所述之多肽、核酸、表現載體或細胞與一醫藥學上可接受之載體、佐劑、賦形劑或稀釋劑混合。根據本揭露之治療性及預防性應用

該等經修飾以增加在本文中所述之SERPINB9之表現或活性的免疫細胞，以及包含此類細胞之醫藥組成物可用於治療性及/或預防性方法。

提供一種用於治療/預防在一主體中的一疾病/病狀的方法，其包含向一主體投予一治療上或預防上有效量之根據本揭露之免疫細胞或醫藥組成物。

亦提供一種根據本揭露之免疫細胞或醫藥組成物，其係用於一醫學治療/預防方法。亦提供一種根據本揭露之免疫細胞或醫藥組成物在製造用於一治療/預防一疾病/病狀之方法之藥物中的用途。

將理解該等方法通常包含將根據本揭露之免疫細胞族群投予至一主體。在一些實施態樣中，該等免疫細胞可以係以一包含此類細胞之醫藥組成物的形式被投予。

特別地，考量根據本揭露之根據本揭露之免疫細胞在藉由過繼細胞轉移(ACT)之治療/預防疾病/病狀之方法中的用途。

待治療/預防之疾病/病狀可以係任何疾病/病狀，其可從該等免疫細胞之過繼轉移獲得治療性或預防性益處。在一些實施態樣中，待藉由過繼細胞轉移治療/預防之疾病/病狀可以例如係一T細胞功能障礙病症、一癌症、一傳染性疾病，或者一自體免疫疾病。

本揭露之免疫細胞及組成物可以係被用於涉及同種異體移植之方法中，例如以治療/預防在一主體中的一疾病/病狀。

如在本文中所使用，一「同種異體移植」係指將與受體主體遺傳上非一致的細胞、組織或器官移植至受體主體。該等細胞、組織或器官可以係來自於或者可以係衍生自與受體主體遺傳上非一致的供體主體的細胞、組織或器官。同種異體移植係不同於自體移植，所述自體移植係指移植來自於/衍生自與受體主體遺傳上一致的供體主體的細胞、組織或器官。

本揭露之免疫細胞及組成物係有用於降低/預防同種異體反應性免疫反應(特別地係T及/或NK細胞介導同種異體反應性免疫反應)對同種異體移植物之有害後果的方法。本揭露之免疫細胞在過繼轉移之後對受體的T及/或NK細胞介導同種異體反應性免疫反應的敏感性較小/抗性較大，且因此在轉移之後在受體主體中展現經增強的持久性/存活，並且具有優異的治療性/預防性效果。

特別地，本揭露之免疫細胞及組成物係考量用於產生及投予「現成」材料以用於包含投予同種異體材料之治療性及預防性方法。

將理解同種異體免疫細胞之過繼轉移係同種異體移植的一種形式。在一些實施態樣中，該等免疫細胞在藉由同種異體移植之治療/預防疾病/病狀之方法中係被使用作為治療性/預防性試劑。

本揭露之免疫細胞及組成物的投予較佳地係以一「治療上有效的」或「預防上有效的」量進行，此足以對主體顯示治療性或預防性益處。投予之實際量，以及投予之速率及時程，將取決於該疾病/病狀之本質及嚴重程度以及所投予之特定物品。治療之處方，例如劑量之決定等等，係在一般從業者及其他醫學醫生之職責內，並且典型地會考慮待治療之疾病/病症、該個體主體之狀況、遞送部位、投予方法，以及從業者已知的其他因素。上述技術及方案之實例可以係見於Remington’s ‘The Science and Practice of Pharmacy’ (ed. A. Adejare), 23rd Edition (2020), Academic Press中。

可提供多個劑量。多個劑量可以係相隔一預定時間間隔，其可以係選自於以下中之一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多個小時，或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天，或者1、2、3、4、5或6個月。作為實例，可以係每7、14、21或28天(加或減3、2或1天)給藥一次。

在一些實施態樣中，該治療可進一步包含其他治療性或預防性干預，例如化學療法、免疫療法、放射療法、手術、疫苗接種及/或激素療法。此類其他治療性或預防性干預可在本揭露所涵蓋之療法之前、期間及/或之後發生，且該等其他治療性或預防性干預之遞送可經由與本揭露之療法不同的投予途徑發生。

投予可以係單獨進行或者與其他治療組合同時地或依序地進行，取決於待治療之病狀。在本文中所述之免疫細胞及組成物可以係與另一個治療性干預同時地或依序地投予。

同時投予係指將二個或多個治療性干預例如作為一含有二個活性劑之醫藥組合物(亦即以一組合製劑形式)，或者彼此緊接地且任選地經由相同投予途徑一起投予至例如相同動脈、靜脈或其他血管。

依序投予係指在投予一治療性干預之後，在一給定時間間隔之後個別投予一或多個進一步治療性干預。不要求該等療法係藉由相同途徑投予，雖然在一些實施態樣中係如此。該時間間隔可以係任何時間間隔。

免疫細胞之過繼轉移係描述例如於Kalos and June (2013), Immunity 39(1): 49-60，以及Davis et al.(2015), Cancer J. 21(6): 486-491中，其兩者係藉由全文引用方式併入本文中。本領域技術人員能夠測定用於根據本揭露之免疫細胞之過繼轉移的適當試劑及程序，例如藉由參考Dai et al., 2016 J Nat Cancer Inst 108(7): djv439，其係藉由全文引用方式併入本文中。

本揭露之態樣及實施態樣包含修飾一免疫細胞以增加SERPINB9之表現或活性。

在一些實施態樣中，該等方法包含： (a)修飾一免疫細胞以增加SERPINB9之表現或活性，以及 (b)將該經修飾免疫細胞投予至一主體。

如在上文中所解釋，此類修飾可包含用一用於增加SERPINB9之表現或活性的試劑處理一細胞。在一些實施態樣中，修飾一免疫細胞以增加SERPINB9之表現或活性包含將編碼一SERPINB9多肽之核酸引入至一免疫細胞中。

在一些實施態樣中，(a)的免疫細胞包含一用於引導該等免疫細胞之活性對抗包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子，所述抗原係例如一疾病相關抗原。

在一些實施態樣中，(a)的免疫細胞包含一TCR，其對一包含一疾病相關抗原之肽的MHC-肽複合物具有特異性。在一些實施態樣中，(a)的免疫細胞係一病毒特異性免疫細胞，例如如描述於本文中。

在一些實施態樣中，(a)的免疫細胞包含一CAR，其對一疾病相關抗原具有特異性。在一些實施態樣中，(a)的免疫細胞係一表現CAR之免疫細胞，例如如描述於本文中。

在一些實施態樣中，該等方法包含： (a)修飾一免疫細胞以包含/表現一用於引導該等免疫細胞之活性對抗包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子(例如一TCR或者一CAR)，所述抗原係例如一疾病相關抗原； (b)修飾該免疫細胞以增加SERPINB9之表現或活性，以及 (c)將該經修飾免疫細胞投予至一主體。

在一些實施態樣中，該等方法包含： (a)分離或獲得一對一病毒具有特異性之免疫細胞； (b)修飾該免疫細胞以包含/表現一用於引導該等免疫細胞之活性對抗包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子(例如一TCR或者一CAR)，所述抗原係例如一疾病相關抗原； (c)修飾該免疫細胞以增加SERPINB9之表現或活性，以及 (d)將該經修飾免疫細胞投予至一主體。

在一些實施態樣中，該等方法包含： (a)從一主體分離免疫細胞(例如PBMCs)； (b)生成/擴增對一病毒具有特異性之免疫細胞族群； (b)修飾一對一病毒具有特異性之免疫細胞以包含/表現一用於引導該等免疫細胞之活性對抗包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子(例如一TCR或者一CAR)，所述抗原係例如一疾病相關抗原； (c)修飾該對一病毒具有特異性之免疫細胞以增加SERPINB9之表現或活性，以及 (d)將該對一病毒具有特異性之經修飾免疫細胞投予至一主體。

在較佳的實施態樣中，從其衍生該(等)免疫細胞之主體係一與將細胞投予至其之主體不同的主體(亦即，過繼轉移可以係同種異體細胞)。在一些實施態樣中，從其衍生該(等)免疫細胞之主體係一與將細胞投予至其之主體相同的主體(亦即，過繼轉移可以係自體/自源細胞)。

在一些實施態樣中，修飾該對一病毒具有特異性之免疫細胞以增加SERPINB9之表現或活性，以及修飾一免疫細胞以包含/表現一用於引導該等免疫細胞之活性對抗包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子(例如一TCR或者一CAR)，所述抗原係例如一疾病相關抗原，係同時地進行，例如在其中該免疫細胞係經核酸修飾的實施態樣中，所述核酸包含一編碼一SERPINB9多肽的核苷酸序列，以及一編碼一用於引導該等免疫細胞之活性對抗包含/表現一給定標靶抗原之細胞的分子(例如一TCR或者一CAR)的核苷酸序列，所述抗原係例如一疾病相關抗原。

在一些實施態樣中，該等方法可包含以下中之一或多者：從一主體獲得一血液樣本；從一已經從一主體獲得之血液樣本分離免疫細胞(例如 PBMCs)；生成/擴增對一病毒具有特異性之免疫細胞族群(例如藉由在包含/表現該病毒之(多個)抗原/(多個)肽之細胞(例如APCs)的存在下培養PBMCs，或者藉由在經該病毒感染之細胞(例如APCs)的存在下培養PBMCs)；在體外或離體細胞培養物中培養該等對一病毒具有特異性之免疫細胞；修飾一對一病毒具有特異性之免疫細胞以表現或包含根據本揭露之CAR，或者以表現或包含一編碼根據本揭露之CAR的核酸(例如藉由用一編碼此類CAR之病毒載體，或者用一包含此類核酸之病毒載體的轉導)；在體外或離體細胞培養物中培養對一病毒具有特異性之免疫細胞，所述免疫細胞表現/包含根據本揭露之CAR，或者表現/包含一編碼根據本揭露之CAR的核酸；收集/分離對一病毒具有特異性之免疫細胞，所述免疫細胞表現/包含根據本揭露之CAR，或者表現/包含一編碼根據本揭露之CAR的核酸；將對一病毒具有特異性之免疫細胞調配成一醫藥組成物，例如藉由將該等細胞與一醫藥學上可接受之佐劑、稀釋劑或載劑混合，所述免疫細胞表現/包含根據本揭露之CAR，或者一編碼根據本揭露之CAR的核酸；將對一病毒具有特異性之免疫細胞或者一包含此類細胞之醫藥組成物投予至一主體，所述免疫細胞表現/包含根據本揭露之CAR，或者表現/包含一編碼根據本揭露之CAR的核酸。

該等治療性及/或預防性方法可有效降低一疾病/病狀的發展/進展、減輕一疾病/病狀的症狀，或者降低一疾病/病狀的病理。該等方法可有效預防該疾病/病狀的進展，例如以預防該疾病/病狀的惡化，或者減緩該疾病/病狀的發展速率。在一些實施態樣中，該等方法可致使該疾病/病狀的改善，例如降低該疾病/病狀之症狀的嚴重程度，或者降低該疾病/病狀之嚴重程度/活性的一些其他相關者。在一些實施態樣中，該等方法可預防該疾病/病狀發展至一後期階段(例如一慢性階段或轉移)。

將理解根據本揭露之表現CAR之免疫細胞的治療性及預防性用途擴展到治療/預防任何疾病/病狀，所述疾病/病狀可從表現/過度表現該CAR之該標靶抗原之細胞的數量/活性的降低中獲得治療性或預防性益處。類似地，將理解根據本揭露之病毒特異性免疫細胞的治療性及預防性用途擴展到治療/預防任何疾病/病狀，所述疾病/病狀可從經該病毒感染之細胞(或者包含/表現該病毒之一抗原)的數量/活性的降低中獲得治療性或預防性益處。

在一些實施態樣中，根據本揭露之待治療/預防之疾病/病狀係一疾病/病狀，其中病理學上涉及免疫細胞對其具有特異性之病毒。亦即，在一些實施態樣中，該疾病/病狀係一由病毒感染所造成或加劇的疾病/病狀、一其中病毒感染係一風險因子的疾病/病狀，及/或一其中病毒感染係與該疾病/病狀之發作、發展、進展，及/或嚴重程度呈正相關的疾病/病狀。

在一些實施態樣中，根據本揭露之待治療/預防之疾病/病狀，其中病理學上涉及該CAR之該標靶抗原。亦即，在一些實施態樣中，該疾病/病狀係一由該標靶抗原之表現/過度表現所造成或加劇的疾病/病狀、一其中該標靶抗原之表現/過度表現係一風險因子的疾病/病狀，及/或一其中該標靶抗原之表現/過度表現係與該疾病/病狀之發作、發展、進展、嚴重程度呈正相關的疾病/病狀。

該疾病/病狀可以係一疾病/病狀，其中病理學上涉及CD30或表現/過度表現CD30之細胞，例如一疾病/病狀，其中表現/過度表現CD30之細胞係與該疾病/病狀之發作、發展或進展，及/或該疾病/病狀之一或多個症狀之嚴重程度呈正相關，或者其中CD30表現/過度表現係該疾病/病狀之發作、發展或進展的一風險因子。

該疾病/病狀可以係一疾病/病狀，其中病理學上涉及CD19或表現/過度表現CD19之細胞，例如一疾病/病狀，其中表現/過度表現CD19之細胞係與該疾病/病狀之發作、發展或進展，及/或該疾病/病狀之一或多個症狀之嚴重程度呈正相關，或者其中CD19表現/過度表現係該疾病/病狀之發作、發展或進展的一風險因子。

根據本揭露之待治療/預防之疾病/病狀可以係一以EBV感染為特徵之疾病/病狀。例如，該疾病/病狀可以係一疾病/病狀，其中病理學上涉及EBV或經EBV感染之細胞，例如一疾病/病狀，其中EBV感染係與該疾病/病狀之發作、發展或進展，及/或該疾病/病狀之一或多個症狀之嚴重程度呈正相關，或者其中EBV感染係該疾病/病狀之發作、發展或進展的一風險因子。

該治療的目標可以係以下中之一或多者：降低該病毒載量、降低病毒陽性細胞(例如EBV陽性細胞)的數量/比例、降低表現/過度表現該CAR之該標靶抗原之細胞(例如表現CD30之細胞、表現CD19之細胞)的數量/比例、降低病毒陽性細胞(例如EBV陽性細胞)的活性、降低表現/過度表現該CAR之該標靶抗原之細胞(例如表現CD30之細胞、表現CD19之細胞)的活性、延遲/預防該疾病/病狀之症狀的發作/進展、降低該疾病/病狀之症狀的嚴重程度、降低病毒陽性細胞(例如EBV陽性細胞)的存活/生長、降低表現/過度表現該CAR之該標靶抗原之細胞(例如表現CD30之細胞、表現CD19之細胞)的存活/生長，或者增加該主體的存活。

在一些實施態樣中，可選擇一主體進行在本文中所述之治療，其係基於檢測到該病毒(例如EBV)、經該病毒(例如EBV)感染之細胞，或者表現/過度表現該CAR之該標靶抗原(例如CD30、CD19)之細胞，例如在周邊中，或者在一經該疾病/病狀所影響之器官/組織(例如一其中彰顯該疾病/病狀之症狀的器官/組織)中，或者藉由檢測到病毒陽性癌細胞(例如EBV陽性癌細胞)，或者檢測到表現/過度表現該CAR之該標靶抗原(例如CD30、CD19)之癌細胞。該疾病/病狀可影響任何組織或器官或器官系統。在一些實施態樣中，該疾病/病狀可影響數個組織/器官/器官系統。

在一些實施態樣中，可選擇一主體進行根據本揭露之療法/預防，其係基於測定到該主體係經EBV感染或者包含經EBV感染之細胞。在一些實施態樣中，可選擇一主體進行根據本揭露之療法/預防，其係基於測定到該主體包含表現/過度表現CD30之細胞，例如表現/過度表現CD30之癌細胞。在一些實施態樣中，可選擇一主體進行根據本揭露之療法/預防，其係基於測定到該主體包含表現/過度表現CD19之細胞，例如表現/過度表現CD19之癌細胞。

在一些實施態樣中，在投予對一病毒具有特異性之免疫細胞之前，所述免疫細胞表現/包含在本文中所述之CAR (或者表現/包含編碼此類CAR之核酸)，對一主體投予淋巴細胞清除化學療法。

亦即，在一些實施態樣中，根據本揭露之治療/預防一疾病/病狀的方法包含：(i)對一主體投予一淋巴細胞清除化學療法，以及(ii)隨後地投予一對一病毒具有特異性之免疫細胞，所述免疫細胞表現/包含根據本揭露之CAR，或者表現/包含一編碼根據本揭露之CAR的核酸。

如在本文中所使用，「淋巴細胞清除化學療法」係指使用一化學療法劑之治療，其導致在經投予該治療之主體中的淋巴細胞(例如T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞或先天性淋巴樣細胞(ILC)，或者其前驅物)之清除。一「淋巴細胞清除化學療法劑」係指一導致淋巴細胞之清除的化學療法劑。

淋巴細胞清除化學療法及其在藉由過繼細胞轉移之治療方法中的用途係描述例如於Klebanoff et al., Trends Immunol. (2005) 26(2):111-7以及Muranski et al., Nat Clin Pract Oncol. (2006) (12):668-81中，其兩者係藉由全文引用方式併入本文中。淋巴細胞清除化學療法的目標係清除該受體主體的內源性淋巴細胞族群。

在藉由免疫細胞之過繼轉移治療疾病的情況下，淋巴細胞清除化學療法典型地係在過繼細胞轉移之前被投予，以使該受體主體接受該等經過繼轉移之細胞。淋巴細胞清除化學療法被認為係藉由創造一許可的環境以促進經過繼轉移之細胞的持久性及活性，例如透過消除表現免疫抑制細胞激素之細胞，並且創造經過繼轉移之淋巴樣細胞之擴增及活性所需的「淋巴樣空間」。

通常用於淋巴細胞清除化學療法的化學療法劑包括例如氟達拉濱(fludarabine)、環磷醯胺、苯達莫司汀(bendamustine)及噴司他丁(pentostatin)。

在一些實施態樣中，根據本揭露之待治療/預防之疾病係一癌症。癌症可以係指任何不所欲之細胞增殖(或者任何藉由不所欲之細胞增殖彰顯的疾病)、贅瘤或腫瘤。該癌症可以係良性或惡性，並且可以係原發性或繼發性(轉移性)。一贅瘤或腫瘤可以係細胞的任何異常生長或增殖，並且可以係位於任何組織中。該癌症可以係衍生自例如以下之組織/細胞：腎上腺、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨頭、骨髓、大腦、乳房、盲腸、中樞神經系統(包括或不包括大腦)、小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如腎上皮)、膽囊、食道、神經膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺、喉、肝臟、肺臟、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱隔、腸繫膜、子宮肌層、鼻咽、網膜、口腔、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾液腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾臟、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌頭、扁桃腺、氣管、子宮、外陰及/或白血球。腫瘤可以係神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可起源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、髓母細胞瘤、腦膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤、神經纖維肉瘤、星形細胞瘤及寡樹突神經膠質瘤。非神經系統癌症/腫瘤可起源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)、何杰金氏淋巴瘤、慢性骨髓性白血病(chronic myelogenous leukemia, CML)、急性骨髓樣白血病(acute myeloid leukemia, AML)、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndrome, MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphoma, CTCL)、慢性淋巴細胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)、肝腫瘤、表皮樣癌瘤、前列腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌瘤、NSCLC、血液癌及肉瘤。

在一些實施態樣中，該癌症係選自於由以下所構成之群組：一實體癌、一血液癌、胃癌(例如胃癌瘤、胃腺癌瘤、胃腸腺癌瘤)、肝癌(肝細胞癌瘤、膽管癌瘤)、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌瘤)、口腔癌(例如口咽癌(例如口咽癌瘤)、口癌、喉癌、鼻咽癌瘤、食道癌)、結腸直腸癌(例如結腸直腸癌瘤)、結腸癌、結腸癌瘤、子宮頸癌瘤、前列腺癌、肺癌(例如NSCLC、小細胞肺癌、肺腺癌瘤、鱗狀肺細胞癌瘤)、膀胱癌、尿道上皮癌瘤、皮膚癌(例如黑色素瘤、晚期黑色素瘤)、腎細胞癌(例如腎細胞癌瘤)、卵巢癌(例如卵巢癌瘤)、間皮瘤、乳癌、腦癌(例如神經膠質母細胞瘤)、前列腺癌、胰臟癌、一骨髓樣血液惡性疾病、一淋巴母細胞血液惡性疾病、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性骨髓樣白血病(AML)、慢性骨髓樣白血病(CML)、急性淋巴母細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、胸腺瘤或多發性骨髓瘤(multiple myelom, MM)。

在一些實施態樣中，該癌症係一癌症，其中病理學上涉及免疫細胞對其具有特異性之病毒。亦即，在一些實施態樣中，該癌症係一由病毒感染所造成或加劇的癌症、一其中病毒感染係一風險因子的癌症，及/或一其中病毒感染係與該癌症之發作、發展、進展、嚴重程度或轉移呈正相關的癌症。

EBV感染涉及數種癌症，如綜述例如於Jha et al., Front Microbiol. (2016) 7:1602中，其係藉由全文引用方式併入本文中。

在一些實施態樣中，該待治療/預防之癌症係一EBV相關癌症。在一些實施態樣中，該癌症係一由EBV感染所造成或加劇的癌症、一其中EBV感染係一風險因子的癌症，及/或一其中EBV感染係與該癌症之發作、發展、進展、嚴重程度或轉移呈正相關的癌症。該癌症之特徵可在於EBV感染，例如該癌症可包含經EBV感染之細胞。此類癌症可被稱為EBV陽性癌症。

可根據本揭露被治療/預防之EBV相關癌症包括B細胞相關癌症，諸如伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、移植後淋巴增殖疾病(post-transplant lymphoproliferative disease, PTLD)、中樞神經系統淋巴瘤(CNS淋巴瘤)、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤，以及與免疫缺乏相關之EBV相關淋巴瘤(包括例如與X性聯淋巴增殖病症相關之EBV陽性淋巴瘤、與HIV感染/AIDS相關之EBV陽性淋巴瘤，以及口腔絨毛狀白斑病)，以及上皮細胞相關癌症，諸如鼻咽癌瘤(nasopharyngeal carcinoma, NPC)及胃癌瘤(gastric carcinoma, GC)。

在一些實施態樣中，該癌症係選自於淋巴瘤(例如EBV陽性淋巴瘤)、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(HNSCC；例如EBV陽性HNSCC)、鼻咽癌瘤(NPC；例如EBV陽性NPC)，以及胃癌瘤(GC；例如EBV陽性GC)。

在一些實施態樣中，該癌症係一癌症，其中病理學上涉及該CAR之該標靶抗原。亦即，在一些實施態樣中，該癌症係一由該標靶抗原之表現所造成或加劇的癌症、一其中該標靶抗原之表現係一風險因子的癌症，及/或一其中該標靶抗原之表現係與該癌症之發作、發展、進展、嚴重程度或轉移呈正相關的癌症。該癌症之特徵可在於該標靶抗原之表現，例如該癌症可包含表現該標靶抗原之細胞。此類癌症可被稱為對該標靶抗原呈陽性。

一對該標靶抗原呈「陽性」之癌症可以係一包含表現該標靶抗原(例如在細胞表面)之細胞的癌症。一對該標靶抗原呈「陽性」之癌症可過度表現該標靶抗原。該標靶抗原之過度表現可以係藉由檢測該標靶抗原之基因或蛋白質表現的水平來測定，其係大於等效非癌性細胞/非腫瘤組織之表現的水平。

在一些實施態樣中，該標靶抗原係一如在本文中所述之癌細胞抗原。在一些實施態樣中，該標靶抗原係CD30。在一些實施態樣中，該癌症係一其中病理學上涉及CD30之癌症。亦即，在一些實施態樣中，該癌症係一由CD30表現所造成或加劇的癌症、一其中CD30之表現係一風險因子的癌症，及/或一其中CD30之表現係與該癌症之發作、發展、進展、嚴重程度或轉移呈正相關的癌症。該癌症之特徵可在於CD30表現，例如該癌症可包含表現CD30之細胞。此類癌症可稱為CD30陽性癌症。

一CD30陽性癌症可以係一包含表現CD30之細胞(例如在該細胞表面表現CD30蛋白質之細胞)的癌症。一CD30陽性癌症可過度表現CD30。CD30之過度表現可以係藉由檢測CD30之基因或蛋白質表現的水平來測定，其係大於等效非癌性細胞/非腫瘤組織之表現的水平。

CD30陽性癌症係描述例如於van der Weyden et al., Blood Cancer Journal (2017) 7:e603以及Muta and Podack, Immunol Res (2013), 57(1-3):151-8中，其兩者係藉由全文引用方式併入本文中。CD30係在經活化T及B淋巴細胞的小子集上表現，並且由包括典型何杰金氏淋巴瘤及退行性大細胞淋巴瘤之各種淋巴樣贅瘤表現。CD30之可變表現亦已顯示於非特指型的周邊T細胞淋巴瘤(PTCL-NOS)、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphoma, CTCL)、結節外NK-T細胞淋巴瘤、各種B細胞非何杰金氏淋巴瘤(包括瀰漫性大B細胞淋巴瘤，特別地係EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤)，以及晚期全身性肥胖細胞增多症。CD30表現亦已經在一些非造血惡性疾病中觀測到，包括生殖細胞腫瘤以及睪丸胚胎性癌瘤。

跨膜糖蛋白CD30係腫瘤壞死因子受體超家族的一成員(Falini et al., Blood (1995) 85(1):1-14)。TNF/TNF-受體(TNF-R)超家族的成員在多個水平下協調該免疫反應，且CD30在調節正常淋巴樣細胞之功能或增殖方面發揮作用。CD30原先係被描述為一由一單株抗體Ki-1所識別之抗原，其係藉由用一HL衍生細胞株L428對小鼠進行免疫來產生(Muta and Podack, Immunol Res (2013) 57: 151-158)。CD30抗原表現已經被用於鑑定ALCL及在何杰金氏疾病中的里德-斯泰柏格氏細胞(Reed-Sternberg cells)(Falini et al., Blood (1995) 85(1):1-14)。因在該等淋巴瘤惡性細胞中具有廣泛表現，CD30因此係一用於發展基於抗體之免疫療法及細胞療法二者的潛在標靶。重要地，CD30典型地在生理條件下在正常組織上不表現，因此係明顯不存在於靜止成熟或前驅物B或T細胞上(Younes and Ansell, Semin Hematol (2016) 53: 186-189)。作為靶向CD30的一抗體-藥物綴合物本妥昔單抗維多汀(Brentuximab vedotin)最初係經批准用於治療CD30陽性HL (Adcetris®美國藥品說明書2018)。本妥昔單抗維多汀試驗之數據支持CD30作為一用於治療CD30陽性淋巴瘤之治療性標靶，雖然與其使用相關之毒性係受到關注。

何杰金氏淋巴瘤(HL)係一涉及淋巴結及淋巴系統之不常見的惡性疾病。HL的發生率係雙峰的(bimodal)，其中大部分患者診斷年齡在15歲與30歲之間，接著在55歲或以上的成年人中出現另一個峰。在2019年，估計美國將有8,110個新病例(3,540例女性及4570例男性)，以及1,000例由此疾病所致之死亡(410例女性及590例男性)(美國癌症協會2019)。基於國家癌症研究所(National Cancer Institute)之SEER資料庫中的2012-2016病例，美國小兒HL患者的HL發生率係如下：每100,000個，1-4歲：0.1個；5-9歲：0.3個；10-14歲：1.3個；15-19歲：3.3個(SEER癌症統計綜述，1975-2016年])。世界衛生組織(WHO)分類將HL分成2個主要類型：典型何杰金氏淋巴瘤(classical Hodgkin lymphoma, cHL)以及結節性淋巴細胞為主之何杰金氏淋巴瘤(nodular lymphocyte-predominant Hodgkin lymphoma, NLPHL)。在西方國家，cHL占全部HL之95%，以及NLPHL占5%(國家綜合癌症網路準則2019)。

用於具有晚期疾病之cHL患者的第一線化學療法(First-line chemotherapy)係與在70%與75%之間的治癒率相關(Karantanos et al., Blood Lymphat Cancer (2017) 7:37-52)。救助化學療法(Salvage chemotherapy)，接著自體幹細胞移植(Autologous Stem Cell Transplant, ASCT)係常用於在初級療法之後復發的患者中。令人遺憾地，多達50%的cHL患者在ASCT之後經歷疾病復發。在ASCT之後復發的患者的中位數總存活係大約二年(Alinari Blood (2016) 127:287-295)。不管侵襲性組合化學療法如何，在10%與40%之間的患者對於救助化學療法沒有反應，並且沒有隨機臨床試驗數據支持對無反應者進行ASCT。就對於救助化學療法沒有反應、在ASCT之後復發或者不是此方法之候選者的患者而言，預後係持續不樂觀並且迫切需要新的治療方法(Keudell British Journal of Haematology (2019) 184:105-112)。

儘管大部分的小兒族群(兒童、青少年及青壯年)將透過目前可用的療法被治癒，但是小部分的患者可能具有難治性(refractory)或復發性(relapsed)疾病並且需要具有可接受之安全概況及經改善之功效效益的新穎療法(Flerlage et al., Blood (2018) 132: 376-384；Kelly, Blood (2015) 126: 2452-2458；McClain and Kamdar, in UpToDate 2019；Moskowitz, ASCO Educational Book (2019) 477-486)。在童年時期經高劑量化學療法治療的HL患者通常會經歷治療相關長期後遺症，諸如心臟、肺、性腺及內分泌毒性以及二級惡性贅瘤(Castellino et al., Blood (2011) 117(6): 1806-1816)。

在一些實施態樣中，一CD30陽性癌症可以係選自於：一實體癌、一血液癌、一造血惡性疾病、何杰金氏淋巴瘤(HL)、退行性大細胞淋巴瘤(ALCL)、ALK陽性退行性T細胞淋巴瘤、ALK陰性退行性T細胞淋巴瘤、周邊T細胞淋巴瘤(例如PTCL-NOS)、T細胞白血病、T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、NK-T細胞淋巴瘤(例如結節外NK-T細胞淋巴瘤)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、B細胞非何杰金氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(例如瀰漫性大B細胞淋巴瘤-NOS)、原發性縱隔B細胞淋巴瘤、EBV陽性B細胞淋巴瘤、EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤、晚期全身性肥胖細胞增多症、一生殖細胞腫瘤，以及睪丸胚胎性癌瘤。

在一些實施態樣中，該標靶抗原係一如在本文中所述之癌細胞抗原。在一些實施態樣中，該標靶抗原係CD19。在一些實施態樣中，該癌症係一其中病理學上涉及CD19之癌症。亦即，在一些實施態樣中，該癌症係一由CD19表現所造成或加劇的癌症、一其中CD19之表現係一風險因子的癌症，及/或一其中CD19之表現係與該癌症之發作、發展、進展、嚴重程度或轉移呈正相關的癌症。該癌症之特徵可在於CD19表現，例如該癌症可包含表現CD19之細胞。此類癌症可被稱為CD19陽性癌症。

一CD19陽性癌症可以係一包含表現CD19之細胞(例如在該細胞表面表現CD19蛋白質之細胞)的癌症。一CD19陽性癌症可過度表現CD19。CD19之過度表現可以係藉由檢測CD19之基因或蛋白質表現的水平來測定，其係大於等效非癌性細胞/非腫瘤組織之表現的水平。

CD19係一屬於免疫球蛋白超家族的跨膜糖蛋白。CD19係被歸類為I型跨膜蛋白質，具有一單一跨膜域、一細胞質C端，以及細胞外N端。CD19最初係透過使用對抗CD19之抗B4單株抗體(mAb)被鑑定為人類B淋巴細胞的B4抗原。CD19在整個B細胞發育過程中表現，直到末期漿細胞分化。在幹細胞或大部分其他正常細胞類型中未見表現。CD19藉由放大磷酸肌醇-3-激酶及布魯頓氏酪胺酸激酶(Bruton's tyrosine kinase)活性來增強B細胞抗原受體信號傳導(Wang et al.,Exp Hematol Oncol (2012) 1(1): 36, Fujimoto et al.,Semin Immunol (1998) 10:267-277)，其在腫瘤細胞增殖及存活方面發揮關鍵作用(Seda et al.,Eur J Haematol (2015) 94(3):193-205)。CD19在不同的B細胞惡性疾病中廣泛地且均勻地表現，包括瀰漫性大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma, FL)，以及慢性淋巴細胞白血病(CLL)(Olejniczak et al.,Immunol Invest (2006) 35(1):93-114、Schuurman et al.,Am J Pathol (1988) 131:102-111)。

非何杰金氏淋巴瘤(NHL)係在美國最常見的癌症之一，約佔所有癌症的4%。據估計在2023年美國將有約80,550人(44,880名男性及35,670名女性)被診斷具有NHL，且約20,180人(11,780名男性及8,400名女性)將死於此癌症(美國癌症協會2023)。世界衛生組織(WHO)分類將NHL分為主要兩個群組：B細胞來源的那些以及T細胞/自然殺手(NK)細胞來源的那些。該等兩個主要群組然後係進一步被分為亞型。有關B細胞來源的那些，WHO提供進一步分類亞型：前驅物B淋巴母細胞白血病/淋巴瘤，以及周邊B細胞贅瘤(其包括該等進一步分類亞型B細胞慢性淋巴細胞白血病/小淋巴細胞淋巴瘤、B細胞前淋巴細胞白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤/免疫細胞瘤、被套細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、黏膜相關淋巴組織(mucosa-associated lymphatic tissue, MALT)型結節外邊緣區B細胞淋巴瘤、結節邊緣區B細胞淋巴瘤(±單核細胞樣B細胞)、脾臟邊緣區淋巴瘤(±絨毛狀淋巴細胞)、毛細胞白血病、漿細胞瘤/漿細胞骨髓瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)，以及伯基特氏淋巴瘤)。

在現實生活實踐及絕大多數臨床試驗中，NHL的組織學亞型已經根據其通常臨床行為大致上被分為惰性、侵略性及強侵略性群組。惰性B細胞淋巴瘤佔非何杰金氏淋巴瘤(NHL)的35至40百分比，且存活通常係以年來測量。最常見的亞型包括濾泡性淋巴瘤(FL)、慢性淋巴細胞白血病/小淋巴細胞淋巴瘤(CLL/SLL)、一部分的被套細胞淋巴瘤(MCL)病例、髓外、結節及脾臟邊緣區淋巴瘤(marginal zone lymphoma, MZL)，以及淋巴漿細胞淋巴瘤(lymphoplasmacytic lymphoma, LPL)(Swerdlow et al.,Blood (2016) 127:2375-90、Rizvi et al.,Blood (2006) 107:1255-64)。如果不進行治療，侵略性亞型會存活幾個月，但是如果適當地治療，顯著部分的患者可獲得明確的緩解及治癒。最常見的亞型係大B細胞淋巴瘤，包括退行性及原發性縱隔淋巴瘤，以及各式各樣的瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)。該等高度侵略性亞型約佔NHL病例的5百分比，且如果不進行治療，存活可能僅有幾週。然而，如果用高強度化學療法方案積極治療，治癒係可能的。

在過去幾十年中，化學療法、放射療法，以及免疫療法已經被單獨或組合使用以治療B細胞NHL。治療性結果可能因臨床行為而異，無論係惰性或侵略性，且患者可能會遭受各種模式的復發，需要後續的搶救治療。不良的預後仍然影響顯著部分的具有成熟B細胞淋巴瘤的患者，並且應構想新的治療策略以改善客觀反應及存活(Jiang et al.Expert Rev Hematol (2017) 10:405-15、Gisselbrecht et al.,Br J Haematol (2018) 182:633-43、El-Mallawany et al.,Clin Adv Hematol Oncol (2015) 13:113-23、Mei et al.,Clin Lymphoma Myeloma Leuk (2018) 18:26-33、Shanbhag et al.,CA Cancer J Clin (2018) 68:116-32、Biccler et al.,Leuk Lymphoma (2018) doi:10.1080/10428194.2018.1540044、Barth et al.,Br J Haematol (2019) doi:10.1111/bjh.15783)。

在一些實施態樣中，一CD19陽性癌症可以係選自於：非何杰金氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、被套細胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴淋巴瘤(CLL)、邊緣區B細胞淋巴瘤(MZBL)、黏膜相關淋巴組織(MALT)型結節外邊緣區B細胞淋巴瘤、結節邊緣區B細胞淋巴瘤(±單核細胞樣B細胞)、脾臟邊緣區淋巴瘤(±絨毛狀淋巴細胞)、白血病、毛細胞白血病(HCL)、毛細胞白血病變異體(HCL-v)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、費城染色體陽性ALL (Ph+ALL)及費城染色體陰性ALL (Ph-ALL)、B細胞慢性淋巴細胞白血病/小淋巴細胞淋巴瘤、B細胞前淋巴細胞白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤/免疫細胞瘤、漿細胞瘤/漿細胞骨髓瘤，以及伯基特氏淋巴瘤。

在一些實施態樣中，該癌症係選自於：一CD30陽性癌症、一CD19陽性癌症、一EBV相關癌症、一血液癌、一骨髓樣血液惡性疾病、一造血惡性疾病、一淋巴母細胞血液惡性疾病、骨髓發育不良症候群、白血病、T細胞白血病、急性骨髓樣白血病、慢性骨髓樣白血病、急性淋巴母細胞白血病、淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、B細胞非何杰金氏淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、原發性縱隔B細胞淋巴瘤、EBV相關淋巴瘤、EBV陽性B細胞淋巴瘤、EBV陽性瀰漫性大B細胞淋巴瘤、與X性聯淋巴增殖病症相關之EBV陽性淋巴瘤、與HIV感染/AIDS相關之EBV陽性淋巴瘤、口腔絨毛狀白斑病、伯基特氏淋巴瘤、移植後淋巴增殖疾病、中樞神經系統淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、ALK陽性退行性T細胞淋巴瘤、ALK陰性退行性T細胞淋巴瘤、周邊T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、NK-T細胞淋巴瘤、結節外NK-T細胞淋巴瘤、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、一實體癌、上皮細胞癌、胃癌、胃癌瘤、胃腺癌瘤、胃腸腺癌瘤、肝癌、肝細胞癌瘤、膽管癌瘤、頭頸癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、口腔癌、口咽癌、口咽癌瘤、口癌、喉癌、鼻咽癌瘤、食道癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸癌、結腸癌瘤、子宮頸癌瘤、前列腺癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌瘤、鱗狀肺細胞癌瘤、膀胱癌、尿道上皮癌瘤、皮膚癌、黑色素瘤、晚期黑色素瘤、腎細胞癌、腎細胞癌瘤、卵巢癌、卵巢癌瘤、間皮瘤、乳癌、腦癌、神經膠質母細胞瘤、前列腺癌、胰臟癌、肥胖細胞增多症、晚期全身性肥胖細胞增多症、生殖細胞腫瘤，或者睪丸胚胎性癌瘤。

在一些實施態樣中，該癌症可以係一復發性癌症。如在本文中所使用，一「復發性」癌症係指一對一治療(例如一第一線癌症療法)有反應但是隨後地例如在緩解期之後重現/進展之癌症。例如，一復發性癌症可以係一其生長/進展受一治療(例如一第一線癌症療法)抑制且隨後地生長/進展之癌症。

在一些實施態樣中，該癌症可以係一難治性癌症。如在本文中所使用，一「難治性」癌症係指一尚未對一治療(例如一第一線癌症療法)有反應之癌症。例如，一難治性癌症可以係一其生長/進展不受一治療(例如一第一線癌症療法)抑制之癌症。在一些實施態樣中，一難治性癌症可以係一癌症，其中接受癌症治療之主體對於該治療未展現部分或完全反應。

在該癌症係退行性大細胞淋巴瘤之實施態樣中，就使用化學療法、本妥昔單抗維多汀或克唑替尼(crizotinib)之治療而言，該癌症可以係復發性或難治性。在該癌症係周邊T細胞淋巴瘤之實施態樣中，就使用化學療法或本妥昔單抗維多汀之治療而言，該癌症可以係復發性或難治性。在該癌症係結節外NK-T細胞淋巴瘤之實施態樣中，就使用化學療法(有或無天冬醯胺酶)或本妥昔單抗維多汀之治療而言，該癌症可以係復發性或難治性。在該癌症係瀰漫性大B細胞淋巴瘤之實施態樣中，就使用化學療法(有或無利妥昔單抗(rituximab))或CD19 CAR-T療法之治療而言，該癌症可以係復發性或難治性。在該癌症係原發性縱隔B細胞淋巴瘤之實施態樣中，就使用化學療法、免疫檢查點抑制劑(例如PD-1抑制劑)或CD19 CAR-T療法之治療而言，該癌症可以係復發性或難治性。

根據本揭露之方法治療一癌症會達成以下治療效應中之一或多者：降低在該主體中癌細胞的數量、降低在該主體中一癌性腫瘤/病變的尺寸、抑制(例如預防或減緩)在該主體中癌細胞的生長、抑制(例如防止或減緩)在該主體中一癌性腫瘤/病變的生長、抑制(例如防止或減緩)一癌症的發展/進展(例如至一晚期，或者轉移)、降低在該主體中一癌症之症狀的嚴重程度、增加該主體的存活(例如無發展存活或總存活)、降低在該主體中癌細胞的數量或活性的一相關者，及/或降低在該主體中的癌症負荷。

可根據修訂版反應評估基準：盧加諾分類(Revised Criteria for Response Assessment: The Lugano Classification)(描述例如於Cheson et al., J Clin Oncol (2014) 32: 3059-3068中，藉由引用方式併入上文)來評估主體，以測定其等對於治療之反應。在一些實施態樣中，根據本揭露之方法治療一主體會達成以下中之一者：完全反應、部分反應，或者穩定疾病。

在一些實施態樣中，癌症治療進一步包含化學療法及/或放射療法。

化學療法及放射療法分別地係指使用一藥物治療一癌症，或者使用游離輻射治療一癌症(例如使用X射線或γ射線之放射療法)。該藥物可以係一化學實體，例如小分子醫藥物、抗生素、DNA嵌入劑、蛋白質抑制劑(例如激酶抑制劑)，或者一生物劑，例如抗體、抗體片段、適體、核酸(例如DNA、RNA)、肽、多肽，或者蛋白質。該藥物可以係被調配為一醫藥組成物或藥物。該調配物可包含一或多個藥物(例如一或多個活性劑)以及一或多個醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或載劑。

化學療法可涉及一個以上藥物的投予。取決於待治療之病狀，一藥物可以係單獨投予或者與其他治療組合同時地或依序地投予。

該化學療法可以係藉由一或多種投予途徑來投予，例如腸胃外、靜脈注射、口服、皮下、皮內或瘤內。

該化學療法可以係根據一治療方案來投予。該治療方案可以係化學療法投予的一預定時間表、計畫、流程或排程，其可以係由一醫師或醫療人員準備，並且可以係經調整以適合需要治療之患者。該治療方案可指示以下中之一或多者：向該患者投予之化學療法的類型；各個藥物或放射的劑量；在投予之間的時間間隔；各個治療的長度；任何治療假期的數量及本質等等，若存在。就一共療法而言，可提供一單一治療方案，其指示各個藥物係如何被投予。

化學療法藥物可以係選自：阿貝馬昔布(Abemaciclib)、乙酸阿比特龍(Abiraterone Acetate)、艾比西特(Abitrexate)(甲胺喋呤)、凱素(Abraxane)(太平洋紫杉醇白蛋白穩定化奈米顆粒調配物)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡替尼(Acalabrutinib)、AC-T、阿德曲斯(Adcetris)(本妥昔單抗維多汀)、ADE、阿多-曲妥珠單抗美坦新(Ado-Trastuzumab Emtansine)、阿黴素(Adriamycin)(多柔比星鹽酸鹽(doxorubicin hydrochloride))、阿法替尼二順丁烯二酸酯(Afatinib Dimaleate)、阿飛尼妥(Afinitor)(依維莫司(Everolimus))、艾克尼紮(Akynzeo)(奈妥吡坦(Netupitant)與帕洛諾司瓊鹽酸鹽(Palonosetron Hydrochloride))、阿爾達拉(Aldara)(咪喹莫特(Imiquimod))、阿地介白素(Aldesleukin)、安聖莎(Alecensa)(阿來替尼(Alectinib))、阿來替尼、阿侖單抗(Alemtuzumab)、愛甯達(Alimta)(培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium))、阿利瓊帕(Aliqopa)(考班昔布鹽酸鹽(Copanlisib Hydrochloride))、注射用愛克蘭(Alkeran)(美法侖鹽酸鹽(Melphalan Hydrochloride))、愛克蘭錠劑(美法侖)、阿樂喜(Aloxi)(帕洛諾司瓊鹽酸鹽)、阿倫布里格(Alunbrig)(布加替尼(Brigatinib))、安伯氯林(Ambochlorin)(氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、安伯洛林(Amboclorin)(氯芥苯丁酸)、胺磷汀(Amifostine)、胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿匹坦(Aprepitant)、阿可達(Aredia)(帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium))、阿麗米克斯(Arimidex)(阿那曲唑)、阿諾新(Aromasin)(依西美坦(Exemestane))、阿拉儂(Arranon)(奈拉濱(Nelarabine))、三氧化二砷(Arsenic Trioxide)、阿瑞拉(Arzerra)(奧伐木單抗(Ofatumumab))、天冬醯胺酶菊歐文氏菌(Asparaginase Erwinia chrysanthemi)、阿特珠單抗(Atezolizumab)、阿瓦斯汀(Avastin)(貝伐單抗(Bevacizumab))、阿維魯單抗(Avelumab)、阿昔卡巴坦西洛塞爾(Axicabtagene Ciloleucel)、阿西替尼(Axitinib)、阿紮胞苷(Azacitidine)、巴文西亞(Bavencio)(阿維魯單抗)、BEACOPP、貝森(Becenum)(卡莫司汀(Carmustine))、貝牛達克(Beleodaq)(貝利司他(Belinostat))、貝利司他、苯達莫司汀鹽酸鹽(Bendamustine Hydrochloride)、BEP、貝松薩(Besponsa)(英妥珠單抗奧佐米星(Inotuzumab Ozogamicin))、貝伐單抗、貝瑟羅汀(Bexarotene)、百克沙(Bexxar)(托西莫單抗(Tositumomab)與碘I 131托西莫單抗)、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU (卡莫司汀)、博萊黴素(Bleomycin)、博納吐單抗(Blinatumomab)、博啉妥(Blincyto)(博納吐單抗)、硼替佐米(Bortezomib)、伯舒立夫(Bosulif)(伯舒替尼(Bosutinib))、伯舒替尼、本妥昔單抗維多汀、布加替尼、BuMel、硫酸布他卡因(Busulfan)、白舒非(Busulfex)(硫酸布他卡因)、卡巴他賽(Cabazitaxel)、卡博米泰(Cabometyx)(卡博替尼-S-蘋果酸酯(Cabozantinib-S-Malate))、卡博替尼-S-蘋果酸酯、CAF、卡昆司(Calquence)(阿卡替尼)、坎帕斯(Campath)(阿侖單抗)、開普拓(Camptosar)(伊立替康鹽酸鹽(Irinotecan Hydrochloride))、卡培他濱(Capecitabine)、CAPOX、氟尿嘧啶霜劑(Carac)(氟尿嘧啶--局部)、卡鉑(Carboplatin)、卡鉑-紫杉醇、卡非佐米(Carfilzomib)、卡莫布瑞斯(Carmubris)(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入劑、康士得(Casodex)(比卡魯胺(Bicalutamide))、CEM、塞利替尼(Ceritinib)、柔紅黴素(Cerubidine)(道諾黴素鹽酸鹽(Daunorubicin Hydrochloride))、卉妍康(Cervarix)(重組HPV二價疫苗)、西妥昔單抗(Cetuximab)、CEV、氯芥苯丁酸、氯芥苯丁酸-普賴松(CHLORAMBUCIL-PREDNISONE)、CHOP、順鉑(Cisplatin)、克拉屈濱(Cladribine)、克拉芬(Clafen)(環磷醯胺)、氯法拉濱(Clofarabine)、克羅法萊(Clofarex)(氯法拉濱)、氯拉(Clolar)(氯法拉濱)、CMF、考比替尼(Cobimetinib)、考美曲克(Cometriq)(卡博替尼-S-蘋果酸酯)、考班昔布鹽酸鹽、COPDAC、COPP、COPP-ABV、更生黴素(Cosmegen)(放線菌素(Dactinomycin))、柯托里克(Cotellic)(考比替尼)、克唑替尼、CVP、環磷醯胺、塞夫斯(Cyfos)(異環磷醯胺)、絲蘭紮(Cyramza)(雷莫蘆單抗(Ramucirumab))、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿糖胞苷脂質體、賽德薩-U (Cytosar-U)(阿糖胞苷)、賽托克森(Cytoxan)(環磷醯胺)、達拉非尼(Dabrafenib)、達卡巴嗪(Dacarbazine)、達克金(Dacogen)(地西他濱(Decitabine))、放線菌素、達雷木單抗(Daratumumab)、達拉蘭西(Darzalex)(達雷木單抗)、達沙替尼(Dasatinib)、道諾黴素鹽酸鹽、道諾黴素鹽酸鹽與阿糖胞苷脂質體、地西他濱、去纖苷鈉(Defibrotide Sodium)、德菲特利奧(Defitelio)(去纖苷鈉)、地加瑞克(Degarelix)、地尼介白素迪夫托斯(Denileukin Diftitox)、地諾單抗(Denosumab)、德泊噻(DepoCyt)(阿糖胞苷脂質體)、地塞米松(Dexamethasone)、右雷佐生鹽酸鹽(Dexrazoxane Hydrochloride)、迪奴圖單抗(Dinutuximab)、多烯紫杉醇、多希(Doxil)(多柔比星鹽酸鹽脂質體)、多柔比星鹽酸鹽、多柔比星鹽酸鹽脂質體、Dox-SL(多柔比星鹽酸鹽脂質體)、DTIC-Dome (達卡巴嗪)、德瓦魯單抗(Durvalumab)、艾弗得士(Efudex)(氟尿嘧啶--局部)、埃立特(Elitek)(拉布立酶(Rasburicase))、艾倫斯(Ellence)(表柔比星鹽酸鹽(Epirubicin Hydrochloride))、埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)、艾洛汀(Eloxatin)(奧沙利鉑(Oxaliplatin))、艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine)、止敏吐(Emend)(阿匹坦)、艾洛替(Empliciti)(埃羅妥珠單抗)、艾那尼布甲磺酸酯(Enasidenib Mesylate)、恩雜魯胺(Enzalutamide)、表柔比星鹽酸鹽、EPOCH、艾必妥(Erbitux)(西妥昔單抗)、艾瑞布林甲磺酸酯(Eribulin Mesylate)、艾麗維吉(Erivedge)(維莫德吉(Vismodegib))、埃羅替尼鹽酸鹽(Erlotinib Hydrochloride)、歐文納茲(Erwinaze)(天冬醯胺酶菊歐文氏菌)、益護爾(Ethyol)(胺磷汀)、凡畢複(Etopophos)(依託泊苷磷酸酯(Etoposide Phosphate))、依託泊苷、依託泊苷磷酸酯、艾瓦西特(Evacet)(多柔比星鹽酸鹽脂質體)、依維莫司(Everolimus)、伊維斯他(Evista)(雷諾昔芬鹽酸鹽(Raloxifene Hydrochloride))、優維寧(Evomela)(美法侖鹽酸鹽)、依西美坦、5-FU (氟尿嘧啶注射劑)、5-FU (氟尿嘧啶--局部)、法樂通(Fareston)(托瑞米芬(Toremifene))、法瑞達克(Farydak)(帕比諾他(Panobinostat))、法洛德克斯(Faslodex)(氟維司群(Fulvestrant))、FEC、富馬樂(Femara)(來曲唑(Letrozole))、非格司亭(Filgrastim)、氟達拉(Fludara)(氟達拉濱磷酸酯)、氟達拉濱磷酸酯、氟普克斯(Fluoroplex)(氟尿嘧啶--局部)、氟尿嘧啶注射劑、氟尿嘧啶--局部、氟他胺(Flutamide)、氟萊克斯(Folex)(甲胺喋呤)、氟萊克斯PFS (甲胺喋呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-貝伐單抗、FOLFIRI-西妥昔單抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、弗洛汀(Folotyn)(普拉曲沙(Pralatrexate))、FU-LV、氟維司群、加德西(Gardasil)(重組HPV四價疫苗)、加德西9(重組HPV九價疫苗)、加澤瓦(Gazyva)(阿托珠單抗(Obinutuzumab))、吉非替尼(Gefitinib)、吉西他濱鹽酸鹽(Gemcitabine Hydrochloride)、吉西他濱-順鉑、吉西他濱-奧沙利鉑、吉妥珠單抗奧佐米星(Gemtuzumab Ozogamicin)、健擇(Gemzar)(吉西他濱鹽酸鹽)、吉諾特夫(Gilotrif)(阿法替尼二順丁烯二酸酯)、格列維克(Gleevec)(伊馬替尼甲磺酸酯(Imatinib Mesylate))、格立得(Gliadel)(卡莫司汀植入劑)、格立得粉片(卡莫司汀植入劑)、穀卡匹酶(Glucarpidase)、戈舍瑞林乙酸酯(Goserelin Acetate)、哈拉溫(Halaven)(艾瑞布林甲磺酸酯)、漢曼戈(Hemangeol)(普萘洛爾鹽酸鹽(Propranolol Hydrochloride))、赫賽汀(Herceptin)(曲妥珠單抗)、重組HPV二價疫苗、重組HPV九價疫苗、重組HPV四價疫苗、和美新(Hycamtin)(拓朴替康鹽酸鹽(Topotecan Hydrochloride))、愛治(Hydrea)(羥基脲(Hydroxyurea))、羥基脲、超-CVAD、艾博蘭斯(Ibrance)(帕博昔布(Palbociclib))、替伊莫單抗替歇坦(Ibritumomab Tiuxetan)、依魯替尼(Ibrutinib)、ICE、依克魯西格(Iclusig)(普納替尼鹽酸鹽(Ponatinib Hydrochloride))、伊達黴素(Idamycin)(伊達比星鹽酸鹽(Idarubicin Hydrochloride))、伊達比星鹽酸鹽、艾德昔布(Idelalisib)、恩西地平(Idhifa)(艾那尼布甲磺酸酯)、艾菲克斯(Ifex)(異環磷醯胺)、異環磷醯胺、匹服平(Ifosfamidum)(異環磷醯胺)、IL-2 (阿地介白素)、伊馬替尼甲磺酸酯、依布魯維卡(Imbruvica)(依魯替尼)、英飛凡(Imfinzi)(德瓦魯單抗)、咪喹莫特、安門利吉(Imlygic)(塔里穆尼拉赫韋克(Talimogene Laherparepvec))、因塔(Inlyta)(阿西替尼)、英妥珠單抗奧佐米星、重組干擾素α-2b、介白素-2 (阿地介白素)、內含子A (重組干擾素α-2b)、碘I 131托西莫單抗與托西莫單抗、伊匹單抗(Ipilimumab)、艾瑞莎(Iressa)(吉非替尼)、伊立替康鹽酸鹽、伊立替康鹽酸鹽脂質體、伊斯達斯(Istodax)(羅米地辛(Romidepsin))、伊沙匹隆(Ixabepilone)、依薩佐米檸檬酸酯(Ixazomib Citrate)、艾克斯普拉(Ixempra)(伊沙匹隆)、傑克菲(Jakafi)(盧利替尼磷酸酯(Ruxolitinib Phosphate))、JEB、傑維坦(Jevtana)(卡巴他賽)、卡德克拉(Kadcyla)(阿多-曲妥珠單抗美坦新)、可莫昔芬(Keoxifene)(雷諾昔芬鹽酸鹽)、凱望斯(Kepivance)(帕利夫明(Palifermin))、可瑞達(Keytruda)(派姆單抗(Pembrolizumab))、擊癌利(Kisqali)(瑞博昔布(Ribociclib))、金里亞(Kymriah)(替沙津魯(Tisagenlecleucel))、凱普羅里斯(Kyprolis)(卡非佐米)、蘭瑞肽乙酸酯(Lanreotide Acetate)、拉帕替尼二甲苯磺酸酯(Lapatinib Ditosylate)、拉特維(Lartruvo)(奧拉單抗(Olaratumab))、來那度胺(Lenalidomide)、樂伐替尼甲磺酸酯(Lenvatinib Mesylate)、冷韋納(Lenvima)(樂伐替尼甲磺酸酯)、來曲唑、甲醯四氫葉酸鈣(Leucovorin Calcium)、瘤可寧(Leukeran)(氯芥苯丁酸)、亮丙立德乙酸酯(Leuprolide Acetate)、祿斯得停(Leustatin)(克拉屈濱)、勒武蘭(Levulan)(胺基乙醯丙酸)、林福利嗪(Linfolizin)(氯芥苯丁酸)、力得(LipoDox)(多柔比星鹽酸鹽脂質體)、洛莫司汀(Lomustine)、朗斯弗(Lonsurf)(曲氟尿苷(Trifluridine)與替吡嘧啶鹽酸鹽(Tipiracil Hydrochloride))、盧普龍(Lupron)(亮丙立德乙酸酯)、長效盧普龍(Lupron Depot)(亮丙立德乙酸酯)、長效盧普龍-派德(Lupron Depot-Ped)(亮丙立德乙酸酯)、靈帕雜(Lynparza)(奧拉帕尼(Olaparib))、瑪奇博(Marqibo)(長春新鹼硫酸酯脂質體)、甲基苄肼(Matulane)(丙卡巴肼鹽酸鹽(Procarbazine Hydrochloride))、甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽(Mechlorethamine Hydrochloride)、甲地孕酮乙酸酯(Megestrol Acetate)、美凱尼(Mekinist)(曲美替尼(Trametinib))、美法侖、美法侖鹽酸鹽、巰基嘌呤(Mercaptopurine)、美司鈉(Mesna)、美斯萊(Mesnex)(美司鈉)、梅塞唑拉斯通(Methazolastone)(替莫唑胺(Temozolomide))、甲胺喋呤、甲胺喋呤LPF (甲胺喋呤)、溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide)、美西特(Mexate)(甲胺喋呤)、美西特-AQ (甲胺喋呤)、米哚妥林(Midostaurin)、絲裂黴素C (Mitomycin C)、米托蒽醌鹽酸鹽(Mitoxantrone Hydrochloride)、米托曲士(Mitozytrex)(絲裂黴素C)、MOPP、莫唑比(Mozobil)(普樂沙福(Plerixafor))、木斯塔根(Mustargen)(甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽)、突變黴素(Mutamycin)(絲裂黴素C)、馬利蘭(Myleran)(硫酸布他卡因)、麥洛薩(Mylosar)(阿紮胞苷)、麥羅塔(Mylotarg)(吉妥珠單抗奧佐米星)、奈米顆粒太平洋紫杉醇(太平洋紫杉醇白蛋白穩定化奈米顆粒調配物)、溫諾平(Navelbine)(長春瑞濱酒石酸酯(Vinorelbine Tartrate))、萊西單抗(Necitumumab)、奈拉濱、尼歐薩(Neosar)(環磷醯胺)、來那替尼順丁烯二酸酯(Neratinib Maleate)、樂寧克斯(Nerlynx)(來那替尼順丁烯二酸酯)、奈妥吡坦與帕洛諾司瓊鹽酸鹽、紐拉思塔(Neulasta)(派非格司亭(Pegfilgrastim))、優保津(Neupogen)(非格司亭(Filgrastim))、雷沙瓦(Nexavar)(索拉非尼甲苯磺酸酯(Sorafenib Tosylate))、尼蘭得隆(Nilandron)(尼魯胺(Nilutamide))、尼羅替尼(Nilotinib)、尼魯胺、恩萊瑞(Ninlaro)(依薩佐米檸檬酸酯)、尼拉帕尼甲苯磺酸酯單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate)、納武單抗(Nivolumab)、諾瓦得士(Nolvadex)(他莫昔芬檸檬酸酯(Tamoxifen Citrate))、乃普雷特(Nplate)(羅米司亭(Romiplostim))、阿托珠單抗、奧多唑(Odomzo)(索尼得吉(Sonidegib))、OEPA、奧伐木單抗、OFF、奧拉帕尼、奧拉單抗、高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate)、昂卡司帕(Oncaspar)(培門冬酶(Pegaspargase))、昂丹司瓊鹽酸鹽(Ondansetron Hydrochloride)、安能得(Onivyde)(伊立替康鹽酸鹽脂質體)、恩塔克(Ontak)(地尼介白素迪夫托斯)、奧普迪沃(Opdivo)(納武單抗)、OPPA、奧希替尼(Osimertinib)、奧沙利鉑、太平洋紫杉醇、太平洋紫杉醇白蛋白穩定化奈米顆粒調配物、PAD、帕博昔布、帕利夫明、帕洛諾司瓊鹽酸鹽、帕洛諾司瓊鹽酸鹽與奈妥吡坦、帕米膦酸二鈉、帕尼單抗(Panitumumab)、帕比諾他(Panobinostat)、帕拉普特(Paraplat)(卡鉑)、鉑爾定(Paraplatin)(卡鉑)、帕唑帕尼鹽酸鹽(Pazopanib Hydrochloride)、PCV、PEB、培門冬酶、派非格司亭、聚乙二醇化干擾素α-2b、PEG-內含子(聚乙二醇化干擾素α-2b)、派姆單抗、培美曲塞二鈉、帕傑它(Perjeta)(帕妥珠單抗(Pertuzumab))、帕妥珠單抗、普拉迪諾(Platinol)(順鉑)、普拉迪諾-AQ (Platinol-AQ)(順鉑)、普樂沙福、泊利度胺(Pomalidomide)、泊馬斯特(Pomalyst)(泊利度胺)、普納替尼鹽酸鹽、泊特納(Portrazza)(萊西單抗)、普拉曲沙、普賴松、丙卡巴肼鹽酸鹽、普留淨(Proleukin)(阿地介白素)、博力加(Prolia)(地諾單抗)、普若瑪塔(Promacta)(艾曲波帕乙醇胺)、普萘洛爾鹽酸鹽、普羅旺(Provenge)(西普盧塞爾-T (Sipuleucel-T))、嘌呤托(Purinethol)(巰基嘌呤)、普利坦(Purixan)(巰基嘌呤)、二氯化鐳223、雷諾昔芬鹽酸鹽、雷莫蘆單抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV)二價疫苗、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV)九價疫苗、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV)四價疫苗、重組干擾素α-2b、瑞戈非尼(Regorafenib)、雷利斯托(Relistor)(溴化甲基納曲酮)、R-EPOCH、雷利米得(Revlimid)(來那度胺)、赫瑪瑞斯(Rheumatrex)(甲胺喋呤)、瑞博昔布、R-ICE、美羅華(Rituxan)(利妥昔單抗)、美羅華海瑟拉(Rituxan Hycela)(利妥昔單抗與人類玻尿酸酶)、利妥昔單抗、利妥昔單抗與人類玻尿酸酶、羅拉吡坦鹽酸鹽(Rolapitant Hydrochloride)、羅米地辛(Romidepsin)、羅米司亭(Romiplostim)、紅比黴素(Rubidomycin)(道諾黴素鹽酸鹽)、盧布拉卡(Rubraca)(盧卡帕尼樟腦磺酸酯(Rucaparib Camsylate))、盧卡帕尼樟腦磺酸酯、盧利替尼磷酸酯、雷德帕斯(Rydapt)(米哚妥林)、司蘭索胸膜內氣霧劑(Sclerosol Intrapleural Aerosol)(滑石)、司妥昔單抗(Siltuximab)、西普盧塞爾-T、長效索馬杜林(Somatuline Depot)(蘭瑞肽乙酸酯)、索尼得吉、索拉非尼甲苯磺酸酯、斯賓塞(Sprycel)(達沙替尼)、STANFORD V、無菌滑石粉(滑石)、史特瑞陀克(Steritalc)(滑石)、斯蒂瓦加(Stivarga)(瑞戈非尼)、舒尼替尼蘋果酸酯(Sunitinib Malate)、紓癌特(Sutent)(舒尼替尼蘋果酸酯)、塞拉曲(Sylatron)(聚乙二醇化干擾素α-2b)、塞文特(Sylvant)(司妥昔單抗)、塞瑞博(Synribo)(高三尖杉酯鹼)、塔博洛得(Tabloid)(硫鳥嘌呤)、TAC、塔芬拉(Tafinlar)(達拉非尼)、泰格莎(Tagrisso)(奧希替尼)、滑石、塔里穆尼拉赫韋克、他莫昔芬檸檬酸酯、塔拉濱PFS (Tarabine PFS)(阿糖胞苷)、得舒緩(Tarceva)(埃羅替尼鹽酸鹽)、塔格瑞汀(Targretin)(貝瑟羅汀)、塔希納(Tasigna)(尼羅替尼)、紫杉醇(太平洋紫杉醇)、克癌易(Taxotere)(多烯紫杉醇)、泰聖奇(Tecentriq)(阿特珠單抗)、特莫多(Temodar)(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西羅莫司(Temsirolimus)、沙立度胺(Thalidomide)、沙洛米得(Thalomid)(沙立度胺)、硫鳥嘌呤、噻替派(Thiotepa)、替沙津魯(Tisagenlecleucel)、托拉克(Tolak)(氟尿嘧啶--局部)、拓朴替康鹽酸鹽、托瑞米芬、托瑞斯(Torisel)(替西羅莫司)、托西莫單抗與碘I 131托西莫單抗、托泰克特(Totect)(右雷佐生鹽酸鹽)、TPF、曲貝替定(Trabectedin)、曲美替尼、曲妥珠單抗、特瑞達(Treanda)(苯達莫司汀鹽酸鹽)、曲氟尿苷與替吡嘧啶鹽酸鹽、曲塞諾克斯(Trisenox)(三氧化二砷)、泰克泊(Tykerb)(拉帕替尼二甲苯磺酸酯)、優尼圖辛(Unituxin)(迪奴圖單抗)、三乙酸尿苷(Uridine Triacetate)、VAC、戊柔比星(Valrubicin)、戊斯塔爾(Valstar)(戊柔比星)、凡德他尼(Vandetanib)、VAMP、瓦魯比(Varubi)(羅拉吡坦鹽酸鹽)、維必施(Vectibix)(帕尼單抗)、VeIP、長春鹼(Velban)(長春花鹼硫酸酯)、萬珂(Velcade)(硼替佐米)、維爾薩(Velsar)(長春花鹼硫酸酯)、維羅非尼(Vemurafenib)、維耐托克(Venclexta)(維納妥拉(Venetoclax))、維納妥拉、韋爾澤尼奧(Verzenio)(阿貝馬昔布)、韋亞德(Viadur)(亮丙立德乙酸酯)、維達紮(Vidaza)(阿紮胞苷)、長春花鹼硫酸酯、文卡薩PFS (Vincasar PFS)(長春新鹼硫酸酯)、長春新鹼硫酸酯、長春新鹼硫酸酯脂質體、長春瑞濱酒石酸酯、VIP、維莫德吉、維斯托加德(Vistogard)(三乙酸尿苷)、沃納克(Voraxaze)(穀卡匹酶)、伏立諾他(Vorinostat)、維曲特(Votrient)(帕唑帕尼鹽酸鹽)、維克斯(Vyxeos)(道諾黴素鹽酸鹽與阿糖胞苷脂質體)、韋康瑞林(Wellcovorin)(甲醯四氫葉酸鈣)、夏克瑞(Xalkori)(克唑替尼)、截瘤達(Xeloda)(卡培他濱)、XELIRI、XELOX、西蓋瓦(Xgeva)(地諾單抗)、西奧弗果(Xofigo)(二氯化鐳223)、希坦迪(Xtandi)(恩雜魯胺)、易沃伊(Yervoy)(伊匹單抗)、伊斯卡他(Yescarta)(阿昔卡巴坦西洛塞爾)、翁德利斯(Yondelis)(曲貝替定)、紮爾拉普(Zaltrap)(阿柏西普(Ziv-Aflibercept))、紮爾西奧(Zarxio)(非格司亭)、則樂(Zejula)(尼拉帕尼甲苯磺酸酯單水合物)、澤波拉夫(Zelboraf)(維羅非尼)、澤娃靈(Zevalin)(替伊莫單抗替歇坦)、新內卡(Zinecard)(右雷佐生鹽酸鹽)、阿柏西普、樞複寧(Zofran)(昂丹司瓊鹽酸鹽)、諾雷德(Zoladex)(戈舍瑞林乙酸酯)、唑來膦酸(Zoledronic Acid)、佐林紮(Zolinza)(伏立諾他)、唑美塔(Zometa)(唑來膦酸)、澤利格(Zydelig)(艾德昔布)、載卡迪(Zykadia)(塞利替尼)，以及茲替伽(Zytiga)(阿比特龍乙酸酯)。

EBV感染亦涉及多種自體免疫疾病之發展/進展，諸如多發性硬化症及全身性紅斑性狼瘡(SLE；參見例如Ascherio and Munger Curr Top Microbiol Immunol. (2015);390(Pt 1):365-85)，且EBV抗原EBNA2最近已經被證明係與涉及作為SLE、多發性硬化症、類風濕性關節炎、發炎性腸疾病、1型糖尿病、幼年特發性關節炎及乳糜瀉之發展的風險因子的基因區域相關(Harley et al., Nat Genet. (2018) 50(5): 699-707)。

因此，在一些實施態樣中，根據本揭露之待治療/預防之疾病/病狀係選自於：一自體免疫疾病、SLE、多發性硬化症、類風濕性關節炎、發炎性腸疾病、1型糖尿病、幼年特發性關節炎及乳糜瀉。主體

根據本揭露之態樣之主體可以係任何動物或人類。該主體較佳地係哺乳類，更佳地係人類。該主體可以係一非人類哺乳類，但是更佳地係人類。該主體可以係雄性或雌性。該主體可以係一患者。一主體可以係已經被診斷具有一需要治療之在本文中所述之疾病或病狀，可以係疑似具有此類疾病/病狀，或者可以係處於發展/感染此類疾病/病狀的風險下。

在根據本揭露之實施態樣中，該主體較佳地係一人類主體。在一些實施態樣中，根據本揭露之治療性或預防性方法之待治療之主體係一具有在本文中所述之疾病/病狀或者處於發展在本文中所述之疾病/病狀的風險下的主體。在根據本揭露之實施態樣中，可選擇一主體進行根據本揭露之治療，基於此類疾病/病狀之某些標誌物的特徵。

就根據本揭露之干預而言，一主體可以係一同種異體主體。根據本揭露之待治療/預防之主體與從其衍生該等免疫細胞之主體可以係遺傳上非一致。根據本揭露之待治療/預防之主體相對於從其衍生該等免疫細胞之主體可以係HLA不匹配。根據本揭露之待治療/預防之主體相對於從其衍生該等免疫細胞之主體可以係HLA匹配。

根據本揭露之經投予細胞之主體相對於從其衍生該等細胞之來源可以係同種異體的/非自體的。該經投予細胞之主體可以係一與從其獲得細胞以用於產生待投予之細胞之主體不同的主體。該經投予細胞之主體與從其獲得細胞以用於產生待投予之細胞之主體可以係遺傳上非一致。

該經投予細胞之主體可包含編碼MHC/HLA分子之MHC/HLA基因，所述MHC/HLA分子與由從其獲得細胞以用於產生待投予之細胞之主體的MHC/HLA基因所編碼的MHC/HLA分子係非一致。該經投予細胞之主體可包含編碼MHC/HLA分子之MHC/HLA基因，所述MHC/HLA分子與由從其獲得細胞以用於產生待投予之細胞之主體的MHC/HLA基因所編碼的MHC/HLA分子係一致。

在一些實施態樣中，該經投予細胞之主體相對於從其獲得細胞以用於產生待投予之細胞之主體係HLA匹配。在一些實施態樣中，該經投予細胞之主體相對於從其獲得細胞以用於產生待投予之細胞之主體係接近或完全HLA匹配。

在一些實施態樣中，該主體在HLA-A、-B、-C及-DRB1具有≥4/8 (亦即4/8、5/8、6/8、7/8或8/8)的匹配。在一些實施態樣中，該主體在HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1具有≥5/10 (亦即5/10、6/10、7/10、8/10、9/10或10/10)的匹配。在一些實施態樣中，該主體在HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1及-DPB1具有 ≥6/12 (亦即6/12、7/12、8/12、9/12、10/12、11/12或12/12)的匹配。在一些實施例中，該主體在HLA-A、-B、-C及-DRB1具有8/8的匹配。在一些實施態樣中，該主體在HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1具有10/10的匹配。在一些實施態樣中，該主體在HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1及-DPB1具有12/12的匹配。序列一致性

如在本文中所使用，「序列一致性」係指在一主題序列中的核苷酸/胺基酸殘基與在一參考序列中的核苷酸/胺基酸殘基一致的百分比，在比對該等序列之後並且在必要時引入缺口以達成在該等序列之間的最大序列一致性百分比。為了測定在二個或多個胺基酸或核酸序列之間的一致性百分比之目的，成對及多個序列比對可以係以本領域技術人員已知的各種方式來達成，例如使用公開可用之電腦軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J., Bioinformatics (2005) 21, 951-960)、T-coffee (Notredame et al., J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217)、Kalign (Lassmann and Sonnhammer, BMC Bioinformatics (2005) 6,298)及MAFFT (Katoh and Standley, Molecular Biology and Evolution (2013) 30(4) 772-780)軟體。當使用此類軟體時，較佳地使用例如缺口罰分(gap penalty)及延伸罰分(extension penalty)之預設參數。

序列

SEQ ID NO:	描述	序列
1	人類SERPINB9	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVAECCMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSP
2	人類SERPINB9反應性中心環	SCFVVAECCMESGPR
3	人類SERPINB9 反應性中心環變異體CON	SCFVVAX ₁X ₂X ₃MESGPR 其中X ₁= E或D；X ₂= C或S；X ₃= C或S
4	SERPINB9變異體CON	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVAX ₁X ₂X ₃MESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSP 其中X ₁= E或D；X ₂= C或S；X ₃= C或S
5	SERPINB9 (E340D)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVADCCMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSP
6	SERPINB9 (C341S; C342S)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVAESSMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSP
7	SERPINB9 (E340D; C341S; C342S)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVADSSMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSP
8	人類CD30同功型1 (UniProt: P28908-1, v1)	MRVLLAALGLLFLGALRAFPQDRPFEDTCHGNPSHYYDKAVRRCCYRCPMGLFPTQQCPQRPTDCRKQCEPDYYLDEADRCTACVTCSRDDLVEKTPCAWNSSRVCECRPGMFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAGPVLFWVILVLVVVVGSSAFLLCHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTQLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
9	人類CD30同功型2 (UniProt: P28908-2)	MSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
10	人類CD30同功型3 (UniProt: P28908-3)	MFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAGPVLFWVILVLVVVVGSSAFLLCHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
11	人類CD30信號肽	MRVLLAALGLLFLGALRA
12	人類CD30細胞外域	FPQDRPFEDTCHGNPSHYYDKAVRRCCYRCPMGLFPTQQCPQRPTDCRKQCEPDYYLDEADRCTACVTCSRDDLVEKTPCAWNSSRVCECRPGMFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAG
13	人類CD30跨膜域	PVLFWVILVLVVVVGSSAFLL
14	人類CD30細胞質域	CHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTQLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
15	HRS3 HC-CDR1	GYTFTTYT
16	HRS3 HC-CDR2	INPSSGCS
17	HRS3 HC-CDR3	ARRADYGNYEYTWFAY
18	HRS3 LC-CDR1	QNVGTN
19	HRS3 LC-CDR2	SAS
20	HRS3 LC-CDR3	QQYHTYPLT
21	HRS3 VH	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSS
22	HRS3 VL	VIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIK
23	HRS3 scFv連接子	SGGGSGGGGSGGGGS
24	HRS3 scFv	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIK
25	HRS3表位	ATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDC
26	人類CD28跨膜域	FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV
27	人類CD3ζ跨膜域	LCYLLDGILFIYGVILTALFL
28	人類CD8α跨膜域	IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN
29	ITAM共通(consensus)	YXXL/I 其中X = 任何胺基酸
30	較大的ITAM共通	YXXL/I(X) _6-8YXXL/I 其中X = 任何胺基酸
31	人類CD3ζ細胞內域	RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
32	人類CD28細胞內域	RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS
33	具有經突變lck結合位點的人類CD28細胞內域	RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQAYAAARDFAAYRS
34	CAR信號傳導域	RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
35	人類IgG1 CH1-CH2鉸鏈區域	EPKSCDKTHTCP
36	人類IgG1 CH1-CH2鉸鏈區域 C103P變異體	EPKSPDKTHTCP
37	人類IgG1 CH2-CH3鉸鏈區域	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
38	人類IgG1 CH2-CH3鉸鏈區域變異體	PCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPK
39	CAR鉸鏈區域	EPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
40	信號肽	MDFQVQIFSFLLISASVIMSRMA
41	CD30.CAR (IgG1間隔子，缺乏信號肽)	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
42	CD30.CAR (IgG1間隔子，具有信號肽)	MDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
43	SERPINB9-P2A-CD30.CAR (IgG1間隔子)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVAECCMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSPRKRRGSGTPDPWGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPLELEMDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
44	SERPINB9 (E340D)-P2A-CD30.CAR (IgG1間隔子)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVADCCMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSPRKRRGSGTPDPWGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPLELEMDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
45	SERPINB9 (C341S; C342S)-P2A-CD30.CAR (IgG1間隔子)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVAESSMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSPRKRRGSGTPDPWGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPLELEMDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
46	SERPINB9 (E340D; C341S; C342S)-P2A-CD30.CAR (IgG1間隔子)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVADSSMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSPRKRRGSGTPDPWGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPLELEMDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
47	SERPINB9 (T327R; E340A)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGREAAAASSCFVVAACCMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSP
48	SERPINB9 (E340D)-T2A-CD30.CAR (IgG1間隔子)	METLSNASGTFAIRLLKILCQDNPSHNVFCSPVSISSALAMVLLGAKGNTATQMAQALSLNTEEDIHRAFQSLLTEVNKAGTQYLLRTANRLFGEKTCQFLSTFKESCLQFYHAELKELSFIRAAEESRKHINTWVSKKTEGKIEELLPGSSIDAETRLVLVNAIYFKGKWNEPFDETYTREMPFKINQEEQRPVQMMYQEATFKLAHVGEVRAQLLELPYARKELSLLVLLPDDGVELSTVEKSLTFEKLTAWTKPDCMKSTEVEVLLPKFKLQEDYDMESVLRHLGIVDAFQQGKADLSAMSAERDLCLSKFVHKSFVEVNEEGTEAAAASSCFVVADCCMESGPRFCADHPFLFFIRHNRANSILFCGRFSSPTRGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPLEMDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
49	4-1BB間隔子	SPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSP
50	CD30.CAR (4-1BB間隔子，具有信號肽)	MDFQVQIFSFLLISASVIMSRMAQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPASPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
51	CD30.CAR (4-1BB間隔子，不具有信號肽)	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRRRPGHDLEWIGYINPSSGCSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSSSGGGSGGGGSGGGGSVIELTQSPKFMSTSVGDRVNVTYKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIKRSDPASPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
52	人類CD19同功型1 (UniProt P15391-1, v6)	MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR
53	人類CD19同功型2 (UniProt P15391-2)	MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLAGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR
54	人類CD19信號肽	MPPPRLLFFLLFLTPMEVR
55	人類CD19細胞外域	PEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWK
56	人類CD19跨膜域	VSAVTLAYLIFCLCSLVGILHL
57	人類CD19細胞域	QRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR
58	FMC63 HC-CDR1	GVSLPDYG
59	FMC63 HC-CDR2	IWGSETT
60	FMC63 HC-CDR3	AKHYYYGGSYAMDY
61	FMC63 LC-CDR1	QDISKY
62	FMC63 LC-CDR2	HTS
63	FMC63 LC-CDR3	QQGNTLPYT
64	FMC63 VH	EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
65	FMC63 VL	DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT
66	FMC63 scFv連接子	GSTSGSGKPGSGEGSTKG
67	FMC63 scFv	DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
68	CD28鉸鏈區域	IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP
69	CD19.CAR序列(具有信號肽)	MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
70	CD19.CAR序列(不具有信號肽)	DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

***

在之前說明中或者在之後申請專利範圍中或者在附圖中所揭露特徵係以其特定形式或者以用於進行所揭露功能之方式或者以用於獲得所揭露結果之方法或程序來表達，如適當，可單獨地或者以此類特徵之任何組合使用，以用於以各種形式實現本發明。在本文中所述之例示性實施態樣係闡明性而不是限制性，且當給予本揭露時，等效的修改及變化對於本領域技術人員將係顯而易見。本揭露包括所述之態樣及較佳特徵的組合，除非此類組合明顯地不被允許或明確地被避免。

為避免任何疑問，在本文中所提供之任何理論解釋係被提供用於改善讀者的理解。本發明人不希望受到任何此等理論解釋的約束。

在本文中所使用之章節標題僅係用於組織目的，不應被解釋為限制所述之主題。

現在將參考附圖作為實例闡明本揭露之態樣及實施態樣。進一步的態樣及實施態樣對於本領域技術人員將係顯而易見。在本文中所提及之所有文件係藉由引用方式併入本文中。

貫穿本說明書，包括之後的申請專利範圍，除非上下文另有要求，否則詞語「包含(comprise)」及「包括(include)」，以及諸如「包含(comprises)」及「包含(comprising)」/「包括(includes)」及「包括(including)」的變化型將理解為暗指包括一所陳述之整數或步驟或者一組整數或步驟，但不排除任何其他的整數或步驟或者一組整數或步驟。

必須注意，除非上下文另有明確地指導，否則在說明書及所附申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包括複數的指稱。範圍在本文中可以係被表達為從「約」一個特定值、及/或至「約」另一個特定值。當此類範圍被表達時，另一個實施態樣包括從該一個特定值及/或至該另一個特定值。類似地，當值係被表達為近似值時，藉由使用先行詞「約」，將理解該特定值形成另一個實施態樣。與一數值有關的術語「約」係任選的並且係指例如+/-10%。

在本文揭露核酸序列的情況下，亦明確地考量其反向互補。

在本文中所述之方法可較佳地係在體外進行。術語「體外」旨在涵蓋使用在培養物中的細胞進行的程序，而術語「體內」旨在涵蓋使用完整多細胞生物體或在其上的程序。

實施例實施例1：材料及方法 1.1 供體

經富集白細胞分離術(leukapheresis)產物係購自於HemaCare (美國加州北嶺)，其係藉由Spectra Optia® Apheresis System CMNC收集方案從同意的健康供體收集並且冷凍在ACD-A抗凝血劑中。將冷凍的白血球採集物(leukopaks)解凍，並且使用Ficoll-Paque PLUS (Cytiva，美國麻州)藉由梯度離心萃取PBMCs。該等PBMCs係立即用於實驗，或者係以每個冷凍管有30-50 x 10 ⁶個細胞的較小等分試樣冷凍在CryoStor® CS10細胞冷凍培養基(STEMCELL Technologies，美國麻州劍橋)中。 1.2 腫瘤細胞株

何杰金氏淋巴瘤細胞株KM-H2係購自於DSMZ-德國微生物及細胞培養物保存中心(德國布倫瑞克)。急性淋巴母細胞白血病細胞株NALM6 (殖株G5)係購自於美國典型培養物保存中心(ATCC，美國維吉尼亞州)。

亦藉由Crispr基因編輯將在NALM6腫瘤細胞中的HLA I及II類依序地剔除。使用兩個靶向Beta 2微球蛋白(Beta 2 Microglobulin, B2M)的單嚮導RNA (single guide RNA, sgRNA)序列(DNA序列：CGTGAGTAAACCTGAATCTT及AAGTCAACTTCAATGTCGGA)，以及三個經Synthego設計工具設計靶向II類轉活化子(class II transactivator, CIITA)的sgRNA序列(DNA序列：AGTCGCTCACTGGTCCCACT、CCGTGGACAGTGAATCCACT及CTCTCACCGATCACTTCATC )。使用4D-Nucleofector ^®系統(Lonza，瑞士巴塞爾)將與54.9 pmol Cas9蛋白質(IDT，美國愛荷華州)複合之總共270 pmol嚮導RNAs (135 pmol及90 pmol的各個sgRNA係分別地用於B2M及CIITA ^KO)遞送至在20 µL緩衝液SF中的1 x 10 ⁶個NALM6細胞中。NALM6然後係在經RetroNectin (Takara Bio，日本滋賀縣草津市)塗覆之盤上藉由反轉錄病毒轉導被改造以表現缺乏其胞內域的經截短CD30 (truncated CD30, tCD30)。該等高tCD30、HLA ^DKO細胞(經改造NALM6)係藉由磁珠分離(Miltenyi Biotec，德國貝吉施格拉德巴赫)被純化，接著進行兩至三輪的螢光活化細胞分選(fluorescence-activated cell sorting)(FACS分選)或者殖株選擇。

如果腫瘤細胞需要表現一由藉由CMV啟動子所驅動之增強型綠螢光蛋白質-螢火蟲螢光素酶(eGFP-ffLuc)所構成之融合蛋白質，則在FACS分選或者殖株選擇之前，將該等細胞株在經RetroNectin (Takara Bio)塗覆之盤上進行反轉錄病毒轉導。該eGFP-ffLuc反轉錄病毒產生者細胞係來自於M. Suzuki博士實驗室(德州貝勒醫學院)的一友好禮物。該等細胞株係在補充有10%熱失活胎牛血清(Hyclone，Cytiva，美國)以及2 mM GlutaMAX (Gibco，Thermo Fisher Scientific，英國)的RPMI培養基中生長。該等細胞係在繼代數目20之後被丟棄。 1.3 質體建構體及反轉錄病毒載體

SB9或其衍生物係與或不與一CAR被選殖至SFG反轉錄病毒載體中。SB9及其衍生物的胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：1、5、6、7及47中。SB9或其衍生物與CAR的雙順反子形式，在兩個方向，被一弗林-豬鐵士古病毒-1 2A (P2A)連接子或者Thesa asigna病毒2A (T2A)連接子分隔，亦係在該SFG質體上生成。亦生成在C端具有一多組胺酸標籤(his標籤)的SB9。SB9及/或CAR反轉錄病毒載體係藉由使用PEIpro轉染試劑(Polyplus，法國伊爾基什)用該SFG質體短暫轉染RD114包裝細胞株(BioVec Pharma，加拿大魁北克)來產生。在轉染後48小時及72小時收穫含有反轉錄病毒的培養基，並且使用RetroX濃縮器(Takara Bio，日本滋賀縣草津市)濃縮10倍。該等反轉錄病毒係被立即使用，或者係被快速冷凍並儲存在-80°C下。 1.4 治療性細胞(移植物細胞)之生成及轉導經活化T細胞

PBMCs係在經CD3及CD28 (Biolegend，美國加州)塗覆之經非組織培養物處理之盤(JetBiofil，西班牙阿利坎特)上被活化，並且係在補充有10 ng/mL IL-7及IL-15 (均購自於R&D Systems)之CTL培養基[45%高級RPMI (Gibco，美國紐約州格蘭德艾蘭)、45%克里克氏培養基(Clicks’ medium)(FUJIFILM Irvine Scientific，美國加州聖塔安娜)、10%熱失活胎牛血清(Hyclone，Cytiva，美國)，以及2 mM GlutaMAX (Gibco, Thermo Fisher Scientific，英國]中培養。在兩天之後，使用兩個靶向TCRαβ的單嚮導RNA (sgRNA)序列(DNA序列：AGAGTCCTCTCAGCTGGTACA及GCAGTATCTGGAGTCATTGA)(Thermo Fisher Scientific，英國)剔除該T細胞受體。使用4D-Nucleofector ^®系統(Lonza，瑞士巴塞爾)將總共270 pmol嚮導RNAs (135 pmol的各個sgRNA)與37 pmol Cas9蛋白質(IDT，美國愛荷華州)一起遞送至在20 µL緩衝液P3中的1 x 10 ⁶個T細胞中。5 µg的RetroNectin係在4°C下整夜塗覆於經非組織培養物處理之24孔盤(JetBiofil)的每個孔。

為了生成表現SB9之ATCs或CAR.ATCs (使用CAR-SB9雙順反子病毒)，細胞係在經RetroNectin塗覆之盤(Takara Bio，日本滋賀縣草津市)上經SB9野生型或其衍生物或者一CAR-SB9雙順反子病毒轉導。100-300 µL的10倍濃縮反轉錄病毒係經CTL培養基稀釋至1 mL，並且係被添加至各個經RetroNectin塗覆之孔，並且係在2000 x G下離心1小時。在離心之後，移除該病毒上清液，並且將0.2 x 10 ⁶個T細胞添加至該孔。在該盤中的該等細胞係在400 x G下離心5分鐘，並且係放置在37°C培養箱中再培養5-7天(圖1，圖10A)。

細胞數量係藉由使用台盼藍(ThermoFisher Scientific)及血球計數器或NC-200 ^TM細胞計數器(Chemometec，丹麥阿勒勒)進行計數來追蹤。SB9表現係使用BD Cytofix/Cytoperm ^TM(BD Biosciences，美國)或eBioscience ^TMFoxp3/轉錄因子染色緩衝液(ThermoFisher Scientific)進行細胞內染色來分析。然後使用SB9單株抗體(7D8)(ThermoFisher Scientific)對細胞進行SB9染色。病毒特異性T細胞

PBMCs之CD45RA清除(RAD-PBMCs，任選的)係使用CD45RA MACS珠(Miltenyi Biotec，德國貝吉施格拉德巴赫)藉由陰性選擇來進行。完整PBMCs或者RAD-PBMCs係以1×10 ⁶個細胞/孔與由來自於JPT Technologies (德國柏林)之重疊肽庫(15聚體重疊11個胺基酸)所構成之病毒肽一起培養。在五天之後，細胞係在經RetroNectin塗覆之24孔盤(Takara Bio，日本滋賀縣草津市)上經SB9野生型或其衍生物與或不與CAR轉導，其係使用一混合病毒雞尾酒(SB9病毒與一CAR病毒混合)或者一SB9-CAR雙順反子病毒，根據以上說明。然後在轉導後四天，T細胞係經表現諸如CD80、CD86、4-1BB之標誌物之經輻射共刺激性細胞刺激。在七至八天之後，VSTs被收穫、冷凍或用於細胞測定法(圖2，圖12A)。VSTs係在VST培養基[47.5%高級RPMI (Gibco)、47.5%克里克氏培養基(FUJIFILM Irvine Scientific)、5%人類血小板裂解物(Sexton Biotechnologies，美國伊利諾州)以及2 mM GlutaMAX (Gibco)中生長。 NK細胞

NK細胞的製造方案係採納自以下研究(19, 20)。簡言之，使用NK細胞分離套組(Miltenyi Biotec)將NK細胞從PBMCs分離，並且在補充有500 IU/mL的IL-2以及10 ng/mL的IL-15 (均購自於R&D Systems)的NK培養基(NK MACS基礎培養基，具有10%熱失活胎牛血清以及1% NK MACS補充物(Miltenyi Biotec))中與經輻射K562 (100 Gy)共培養四天。在轉導當天，使用編碼SB9(CAS)之反轉錄病毒在經RetroNectin (Takara Bio)塗覆之24孔盤上轉導細胞，且然後培養三天。NK細胞然後係藉由在補充有100 IU/mL的IL-2以及10 ng/mL的IL-15的NK培養基中與經輻射K562細胞共培養被再次刺激。在六至八天之後，收集NK細胞以用於體外測定法。 1.5 混合淋巴細胞反應(MLR)測定法與PBMC宿主細胞之MLR

移植物T細胞係與HLA不匹配PBMCs (移植物與PBMC的比率 = 1:10-20)在CTL或VST培養基中共培養。該等共培養物係以一式兩份或一式三份設置在24孔G-rex (Wilson Wolf，美國明尼蘇達州)中在含有IL-7及IL-15 (各10 ng/mL，R&D Systems)的培養基中。該等培養物係在具有細胞激素的CTL培養基中每3至6天擴增。在各個時間點，收集各個孔中的細胞，並且使用活-死染色劑(live-dead stain)(ThermoFisher Scientific)、抗人類CD3、CD4、CD8、CD56、HLA-A2及/或HLA-A3及TCRαβ (BD Biosciences)進行染色。使用Cytek Aurora流式細胞儀(美國加州)獲取細胞，並且藉由FlowJo軟體(BD Biosciences)進行分析。與同種異體反應性宿主T細胞之MLR

為了生成同種異體反應性宿主T細胞(allo-T細胞)，從一HLA不匹配供體到該移植物供體的PBMCs係在經CD3及CD28 (Biolegend，美國加州)塗覆之經非組織培養物處理之盤(JetBiofil)上被活化，並且係在補充有10 ng/mL IL-7及IL-15 (R&D Systems)的CTL培養基中培養。如果CD30係需要被剔除，則在兩天之後進行Crispr基因編輯。使用三個經Synthego設計工具設計靶向CD30的單嚮導RNA (sgRNA)序列(DNA序列：AGGTCTGGACCGGGTAGCAC、GCTGTGTCGGGAACAGCCCT及TCGACATTCGCAGACACGGG)將CD30剔除。使用4D-Nucleofector ^®系統(Lonza，瑞士巴塞爾)將總共270 pmol嚮導RNAs (90 pmol的各個sgRNA)與37 pmol Cas9蛋白質(IDT，美國愛荷華州)一起遞送至在20 µL緩衝液P3中的1 x 10 ⁶個T細胞中。在電穿孔後兩天，任何剩餘的CD30陽性細胞係使用CD30 MACS珠(Miltenyi Biotec)藉由陰性選擇被清除。CD30 KO及清除之效率係藉由使用CD30- BerH8 (BD biosciences)以及BY88 (Biolegend)之兩個殖株對細胞進行染色來評估。使用Cytek Aurora流式細胞儀(美國加州)獲取細胞，並且藉由FlowJo軟體(BD Biosciences)進行分析。該等T細胞然後係與經輻射(30 Gy) HLA不匹配供體PBMCs以1:10的比率(引發步驟)共培養。在3天之後，該等T細胞係再次與經輻射(30 Gy) HLA不匹配供體PBMCs以1:10的比率(加強步驟)共培養。在第14天收穫Allo-T細胞(圖11A)。

移植物T細胞係與HLA不匹配WT或者CD30剔除(knockout, KO)同種異體T (allo-T)細胞(移植物與CD30 KO allo-T細胞的比率 = 1:1-4)在CTL培養基中共培養。當在表現CD30.CAR之移植物T細胞的背景下研究SB9時，係使用CD30 KO allo-T細胞。在研究其他 CARs的情況下，CAR標靶抗原如果存在於T細胞上，將會從該等allo-T細胞被剔除。該等共培養物係以一式三份設置在96孔平底經組織培養物處理之盤(Corning)中。在各個時間點，收集各個孔中的細胞，並且使用活-死染色劑(ThermoFisher Scientific)、抗人類CD3、CD4、CD8、HLA-A2及/或HLA-A3及TCRαβ (BD Biosciences)進行染色。使用Cytek Aurora流式細胞儀(美國加州)獲取細胞，並且藉由FlowJo軟體(BD Biosciences)進行分析。在腫瘤細胞的存在下的MLR (三培養)

在第0天，經改造NALM6係與CAR T細胞及HLA不匹配allo-T細胞以1:1:1-4的比率在不具有細胞激素的CTL或VST培養基中共培養(第1輪)。該等共培養物係以一式三份設置在96孔平底經組織培養物處理之盤(Corning)中。在第2天，收穫細胞，並且在將1 x 10 ⁵個經改造NALM6添加至移植物及宿主細胞之前，對該等細胞進行完整的培養基更換(第2輪)。在各個時間點，收集各個孔中的細胞，並且使用活-死染色劑(ThermoFisher Scientific)、抗人類CD3、CD4、CD8、HLA-A2及/或HLA-A3、TCRαβ、CD45、CD19、CD30 (BD Biosciences)進行染色。使用Cytek Aurora流式細胞儀(美國加州)獲取細胞，並且藉由FlowJo軟體(BD Biosciences)進行分析。

圖3顯示具有CD30剔除(KO)之同種異體T (allo-T)細胞的製造，以用作為生成不表現CAR標靶抗原之allo-T細胞的實例。 1.6 細胞毒性測定法

表現CAR之T細胞的細胞毒性係藉由xCELLigence測定法來評估，其使用細胞阻抗(cell impedance)作為xCELLigence即時細胞分析軟體(Agilent，美國加州)測量的讀數。CD30.CAR細胞毒性測定法的實例係如下描述：4 x 10 ⁴個標靶細胞(CD30陽性KM-H2細胞)係接種於96孔RTCA E-Plates的每個孔中，其係經CD40抗體(Agilent)預先塗覆。使該等標靶細胞在37°C下附著整夜。隔天，T細胞係以各種效應物與標靶的比率(E:T = 1:1及1:2)被添加，並且使共培養物在補充有10%熱失活胎牛血清(Hyclone，Cytiva，美國)以及2 mM GlutaMAX (Gibco，Thermo Fisher Scientific，英國)的RPMI培養基中培育48至72小時。 1.7 SB9過度表現之偵測

SB9表現係藉由細胞內染色以及流式分析或者藉由西方墨點法來分析。流式細胞術分析

T細胞係藉由BD Cytofix/Cytoperm ^TM(BD Biosciences，美國)被固定及透化，並且使用SB9小鼠單株抗體(7D8)(ThermoFisher Scientific)進行SB9染色。針對經組胺酸標籤SB9轉導之細胞，使用抗His小鼠單株抗體(GG11-8F3.5.1)(Miltenyi Biotec)對細胞進行染色。西方墨點法分析

細胞裂解物係藉由裂解在60-100 µL Nonidet P-40 (NP-40)細胞裂解緩衝液[1% (v/v) Nonidet P-40在50 mM Tris、pH 8.0、10 mM EDTA、1X cOmplete ^TM蛋白酶抑制劑雞尾酒中(Merck，美國紐澤西州)]中的3至5百萬個T細胞，並且使用4X Laemmli樣本緩衝液(Bio-rad，美國加州)煮沸該等樣本來製備。該等樣本係藉由十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)來解析，並且係被轉移至硝酸纖維素膜以進行免疫墨點法以及經由化學發光之可視化。使用SB9小鼠單株抗體(7D8)(ThermoFisher Scientific)探測SB9。使用iBright分析軟體(ThermoFisher Scientific)進行密度測定法分析。 1.8 EBV-反應性測定法

EBVSTs係以每孔4×10 ⁵個細胞接種於U底96孔盤(Corning，美國紐約)，且回應者細胞(responder cells)之病毒特異性活性係在1 µg/mL共刺激分子CD28及CD49d (兩者來自於BD Biosciences)的存在下在使用(1 µg/mL) EBV肽(JPT Peptide Technologies)進行刺激之後來測量。僅培養基(無肽)以及經HIV肽(JPT Peptide Technologies)處理之細胞係用作為陰性對照。在莫能菌素(monensin)及布雷菲德菌素A (brefeldin A)(BD Biosciences)的存在下培育整夜之後，T細胞係使用活-死染色劑(ThermoFisher Scientific)、CD3、CD4、CD8抗體進行染色，使用BD Cytofix/Cytoperm ^TM進行固定及透化，並且使用經APC或PE綴合之IFN-γ及TNF-α抗體(所有試劑來自於BD Biosciences)進行染色。 1.9 連續體外腫瘤細胞攻擊測定法

CAR T細胞係與腫瘤細胞(KM-H2或者經改造NALM6)以範圍為1:1-5的固定比率共培養。該等細胞係在不添加細胞激素的CTL或VST培養基中培養。每2至3天，收穫該等細胞，並且使用活/死染料(ThermoFisher Scientific)、抗人類CD3、CD4、CD8、CD45、CD30、CD19、CD45、PD-1、Tim-3 (BD Biosciences)、Lag-3 (Biolegend)及內部產生之抗HRS3或抗FMC63 (Acro Biosystems，美國德拉瓦州)抗體對一部分的細胞進行染色。使用Cytek Aurora流式細胞儀獲取細胞，並且藉由FlowJo軟體(BD Biosciences)進行分析。該等CAR T細胞係與新鮮腫瘤細胞以固定比率再次共培養，並且重複該程序，直到該等CAR T細胞無法消除腫瘤細胞。 1.10 體內測定法

NOD.Cg- Prkdc ^scid H2-K1 ^tm1BpeH2-Ab1 ^em1MvwH2-D1 ^tm1BpeIl2rg ^tm1Wjl /SzJ小鼠(NSG (MHC ^KO)，庫存號025216)之飼養對係購自於傑克森實驗室(美國緬因州)，並且係透過代養在InVivos (新加坡)飼養。所有動物實驗係在科技研究局(A*STAR，新加坡)之生物資源中心(BRC，新加坡)進行，並符合實驗動物照護及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee, IACUC)第201540號方案。雌性及雄性小鼠(8至12週齡)係用於該等實驗。同種異體排斥模型

為了建立同種異體排斥模型，NSG (MHC ^KO)小鼠係經由尾巴靜脈被注射FACS分選之2.5 x 10 ⁶個經改造NALM6或者經改造NALM6.eGFP-ffLuc。在將5 x 10 ⁶個allo-T細胞以及表現或不表現eGFP-ffLuc之CAR T細胞以固定比率(1:1)經由尾巴靜脈注射共輸注至該等小鼠中之前，允許該腫瘤建立15至18天。

針對小鼠被注射經改造NALM6.eGFP-ffLuc細胞的實驗，每週兩次，腫瘤負荷係藉由IVIS Lumina S5成像系統來測量，並且係藉由Living Image v.4.7軟體(兩者來自於美國麻州PerkinElmer)來分析。從面部靜脈所收集之血液樣本來評估移植物CAR T細胞以及宿主allo-T細胞水平，其中100-150 μL的血液係在指定時間點獲得。然後使用RBC裂解緩衝液(eBioscience，美國加州)裂解紅血球(RBC)，並且使用抗小鼠CD45、抗人類CD45、CD3 (BD Biosciences)、HLA-A2、CD19及CD30 (BioLegend)抗體對樣本進行染色，以藉由流式細胞術分析來測定CAR T細胞、allo-T細胞及腫瘤細胞的水平。使用BD FACSymphony A3流式細胞儀(美國加州)獲取細胞，並且藉由FlowJo軟體(BD Biosciences)進行分析。

針對小鼠被注射表現eGFP-ffLuc之CAR T細胞的實驗，每週3次，T細胞信號係藉由IVIS Lumina S5成像系統來量化，並且係藉由Living Image v.4.7軟體(兩者來自於PerkinElmer)進行分析。活化誘發細胞死亡(AICD)模型

NSG (MHC ^KO)小鼠係經由尾巴靜脈被注射2.5 x 10 ⁶個經選殖選擇之經改造NALM6.eGFP-ffLuc。在將10 x 10 ⁶個CD30.CAR EBVSTs經由尾巴靜脈注射輸注至該等小鼠中之前，允許該腫瘤建立15 天。每週兩次，腫瘤負荷係藉由IVIS Lumina S5成像系統來測量，並且係藉由Living Image v.4.7軟體來分析。從面部靜脈所收集之血液樣本來評估CD30.CAR EBVSTs，接著在與上述類似的程序中進行流式分析。 1.11 CD95交聯測定法

在4ºC下將稀釋於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS，Gibco)中的10 µg/mL功能性等級CD95 (APO-1/Fas)單株抗體(EOS9.1)(eBioscience、Thermo Fisher Scientific或來自於Biolegend的等效物)整夜塗覆於經組織培養物處理之白壁96孔平底盤上。經PBS處理之孔係用作為對照。隔天，使用PBS沖洗該等盤，並且以1.5 x 10 ⁵個細胞/96 孔盤之孔添加T或NK細胞。針對細胞係經一泛半胱天冬酶抑制劑處理的條件，該等細胞係在被接種於經CD95塗覆之盤之前，與0.1 mM Z-VAD-FMK在37ºC下預培育30分鐘。當該等細胞被添加後，該等盤係在400 x G下離心5分鐘，並且係放置在37°C培養箱中持續不同讀數所需的規定時間。為測定半胱天冬酶3/7活性，在45分鐘時收穫在該96孔盤上的細胞，並且使用Caspase-Glo ^®3/7測定法系統(Promega，美國威斯康辛州)進行裂解。為了測定細胞存活率，在1小時之後收穫在該96孔盤上的NK細胞以及在20小時之後收穫T細胞，並且使用CellTiter-Glo ^®細胞存活率試劑(Promega)進行裂解。在Cytation 5讀盤器(Agilent BioTek，美國佛蒙特州)上讀取發光。為了藉由流式來測定SB9(CAS)-His標籤表現，T細胞係藉由BD Cytofix/Cytoperm ^TM(BD Biosciences)被固定及透化，並且係使用抗His小鼠單株抗體(GG11-8F3.5.1)(Miltenyi)進行His染色。使用Cytek Aurora流式細胞儀獲取細胞，並且藉由FlowJo軟體(BD Biosciences)進行分析。 1.12 Luminex測定法

CD30.CAR EBVSTs (4-1BB間隔子)係與腫瘤細胞(KM-H2或經改造NALM6)以1:1固定比率共培養。該等細胞係在不添加細胞激素的VST培養基中培養。隔天，使用MILLIPLEX MAP人類高靈敏度T細胞板預混合13重免疫學多重套組(MILLIPLEX MAP Human High Sensitivity T Cell Panel Premixed 13-plex-Immunology Multiplex Kit)(目錄號：HSTCMAG28SPMX13，Merck，德國達姆斯塔特)收穫並處理澄清的上清液。細胞激素濃度係使用Luminex Flexmap 3D ^®系統及xPONENT ^®4.3u1軟體來測量，並且使用Bio-Plex Manager軟體來分析。 1.13 統計分析

圖表及統計數據係使用用於Windows的Prism 9軟體(Graphpad Software Inc.)來生成。針對所有實驗，生物重複數以及所使用之統計分析係描述於圖例中。針對在兩個群組之間的比較，使用一單尾T測試。針對在三個或更多個群組之間的比較，在適當的時候使用變異數分析(ANOVA)與Tukey或Dunnett或Holm-Šídák事後測試。實施例2：在移植物T細胞中的SerpinB9野生型過度表現會保護其等免受同種異體排斥，同時對宿主免疫細胞具有最小影響 2.1 過度表現SB9野生型之T細胞可以被製造並擴增

為了測定我們是否可以製造過度表現SB9野生型之T細胞，我們對從兩個供體所獲得之T細胞進行SB9野生型的反轉錄病毒轉導，所述SB9野生型與GFP作為一雙順反子建構體，由一弗林P2A連接子所分隔(Serpin-GFP)。經GFP轉導之T細胞係用作為對照。在製造期間(圖1)使用血球細胞計數器藉由台盼藍排除細胞計數來監測T細胞的增殖。藉由流式細胞術分析，分別地藉由GFP表現以及SB9之細胞內染色來測定轉導效率以及SB9表現。經GFP轉導之T細胞以及經serpin-GFP轉導之T細胞兩者在製造期間類似地增殖，且細胞數量在轉導後增加90-120倍(圖4A)。相較於經GFP轉導之細胞，經Serpin-GFP轉導之細胞的GFP轉導效率較低(Serpin-GFP：55-59%對上GFP：82-83%)(圖4B)，與通常觀察到雙順反子建構體具有較低轉導效率一致。針對兩個被測試之供體，SB9野生型在GFP陽性細胞中過度表現大約1.6倍(圖4C)。

為了測定SB9野生型是否亦可以在CAR T細胞中過度表現，我們用SB9野生型轉導T細胞，所述SB9野生型與CD30.CAR作為一雙順反子建構體，由一弗林P2A連接子所分隔(Serpin-CAR)。經GFP-CAR轉導之T細胞係用作為對照。針對供體1，相較於經GFP-CAR轉導之T細胞，經Serpin-CAR轉導之T細胞具有較低的增殖倍數變化(Serpin-CAR：55倍對上GFP-CAR：96倍)，但是針對供體2，其等具有類似的增殖倍數變化(~140倍)(圖5A)。針對兩個供體，相較於GFP-CAR，當使用Serpin-CAR建構體時CD30.CAR表現較低(Serpin-CAR：79-91%對上GFP-CAR：99%)(圖5B)。針對兩個被測試之供體，SB9野生型在CD30.CAR陽性細胞中過度表現大約1.2-1.5倍(圖5C)。 2.2 過度表現SB9野生型之CAR T細胞維持CAR細胞毒性

為了測定一在過度表現SB9之T細胞上的CAR是否具有功能性，我們使用xCELLigence測定法平台來測試對抗CD30陽性KM-H2標靶的CD30.CAR細胞毒性。T細胞係經GFP-CD30 CAR、Serpin-CD30.CAR，或者用作為對照之GFP轉導。為了確保表現CD30.CAR之T細胞的百分比在該等兩種條件下係類似的，我們藉由添加GFP T細胞將CD30.CAR T細胞與70%的總細胞進行正規化。針對兩個供體，CD30.CAR T細胞能夠在以E:T=2:1之共培養的48小時內殺滅＞80%的KM-H2標靶(圖6)，且無論SB9表現如何，CD30.CAR係具有功能性。 2.3 過度表現SB9野生型之T細胞被保護免受同種異體宿主排斥，對宿主T細胞及NK細胞的影響可忽略不計

為了測定過度表現SB9之T細胞是否會被保護免受同種異體排斥，因此設置混合淋巴細胞反應(MLR)測定法(圖7A及8A)。表現僅GFP或Serpin-GFP之移植物T細胞係與HLA不匹配宿主PBMCs以1:10的移植物:宿主細胞比率共培養，且細胞數量係藉由流式細胞術監測12天(圖7A)。當經GFP或Serpin-GFP轉導之移植物T細胞係單獨培養時，針對兩個被測試之供體，增殖倍數變化在培養期間係類似的(圖7B)。當宿主PBMCs被添加至該等移植物T細胞時，針對供體1，經GFP轉導之T細胞無法在第7天後增殖，針對供體2，則是無法在第3天後增殖，且移植物細胞數量係保持為低或者最終被消除(圖7C)。另一方面，分別地針對供體1及2，經Serpin-GFP轉導之移植物T細胞能夠進一步增殖直到第9天或第7天，在移植物細胞數量降低之前(圖7C)。分別地針對供體1及2，在第9天或第7天觀察到在經Serpin-GFP轉導之細胞與經GFP轉導之細胞之間有4至5倍的移植物細胞數量的最大差異(圖7C)。宿主CD3陽性T細胞持續在培養期間增殖，且NK細胞數量係類似的，無論移植物共培養與否(圖7D及圖7E)，表明過度表現SB9之移植物T細胞對宿主細胞具有最小影響。

我們進一步研究過度表現SB9之CD30.CAR T細胞是否會被保護免受同種異體排斥。經GFP-CAR或Serpin-CAR轉導之移植物T細胞係與HLA不匹配宿主CD30 KO同種異體反應性T細胞以1:2的移植物:宿主比率培養。細胞數量係藉由流式細胞術監測3天(圖8A)。當移植物T係單獨培養時，相較於經Serpin-GFP轉導之細胞，經GFP-CAR轉導之細胞具有較高的增殖(1.3至2.3倍)(圖8B)。在針對供體1的MLR設置中，經GFP-CAR轉導之T細胞係比經Serpin-CAR轉導之T細胞更快地被消除(圖8C)，且在第3天，經Serpin-CAR轉導之移植物的細胞數量係比經GFP-CAR轉導之移植物高2.3倍(圖8D)。在針對供體2的MLR設置中，經GFP-CAR轉導之T細胞沒有增殖，而經Serpin-CAR轉導之移植物在三天內增殖3.2倍(圖8C)。在第3天，針對供體2，經Serpin-CAR轉導之移植物的細胞數量係比經GFP-CAR轉導之移植物高2.3倍(圖8D)。在兩個被測試之供體的MLR設置中，與經GFP-CAR或Serpin-CAR轉導之移植物細胞共培養的宿主T細胞類似地增殖，再次表明過度表現SB9之移植物T細胞對宿主細胞具有最小影響(圖8E)。實施例3：在移植物T細胞中的SerpinB9(CAS)表現保護其等免受同種異體排斥，同時保持宿主免疫細胞不受傷害

已顯示在SB9之反應中心環(RCL)中的P1位置的麩胺酸(340E)以及在鉸鏈區域的327T的胺基酸取代會影響SB9與GzmB及其他半胱天冬酶的相互作用(13, 14)。我們有興趣研究SB9 WT (SEQ ID NO：1)以及突變體E340D (SB9(CAS)) (SEQ ID NO: 5)、C341S; C342S (SB9(ROS)) (SEQ ID NO：6)是否可以保護移植物T細胞免受同種異體排斥。先前已經描述E340A; T327R (SB9(NEG)) (SEQ ID NO：47)與GzmB具有低相互作用，並且係使用作為一陰性對照。

我們最初將研究重點放在過度表現不同形式之SB9之CD30.CAR ATCs (SB9-CD30.CAR ATCs)。首先為了檢查CAR功能是否會受到SB9過度表現的影響，我們使用xCELLigence即時細胞分析(RTCA)進行KM-H2何杰金氏淋巴瘤細胞株之殺滅測定法。相較於CD30.CAR ATC對照，SB9及其衍生物之過度表現係1.3-2.1倍(圖10B)，且CD30.CAR表現不會受到SB9過度表現的影響(圖10C及圖10D)。相較於CD30.CAR ATC對照，SB9-CD30.CAR ATCs具有類似的CAR細胞毒性及殺滅動力學(圖9A)。

為了測定SB9過度表現是否會保護CAR T細胞免受同種異體排斥，我們使用來自於6個獨立的移植物-宿主對之細胞設置體外混合淋巴細胞反應(MLR)模型。為了確保最小的移植物抗宿主反應性，我們使用Crispr基因編輯破壞TCRαβ的表面表現(TCRαβ KO T細胞)，其導致≥98%效率(圖10E)。TCRαβ KO CD30.CAR ATC移植物係與HLA不匹配宿主CD30 KO T細胞以1:1比率共培養，其被引發並加強以識別並殺滅移植物細胞(圖11A、圖11B及圖9B)。移植物及宿主細胞數量係藉由流式細胞術分析來測定，並且係每天監測持續3天。雖然在生長於單培養中的不同移植物類型中觀察到類似的擴增速率(圖9C)，但是在共培養中在3天之後，分別有中位數為82%及90%的CD30.CAR ATC及SB9(NEG)-CD30.CAR ATCs被殺滅(圖9D及圖9F)。因此，如我們所預期，SB9(NEG)對於allo-T細胞殺滅不具有任何保護性功能。類似地，SB9(ROS)-CD30.CAR ATC亦很難不受同種異體排斥的影響，並且在共培養中有中位數為76%的移植物細胞被殺滅(圖9D及圖9F)。另一方面，在所有經研究之移植物-宿主對中，SB9(WT)-及SB9(CAS)-CD30.CAR ATC可抵抗同種異體排斥(圖9D及圖9F)。值得注意的係，相較於CD30.CAR (中位數細胞死亡=82%)及SB9(NEG)-CD30.CAR ATC (中位數細胞死亡=90%)對照，SB9(CAS)-CD30.CAR ATCs (中位數細胞死亡=47%)具有顯著較低的細胞死亡。再者，宿主T細胞持續在共培養期間存活並增殖，並且未被SB9-CD30.CAR ATCs殺滅(圖9E)。此時，我們沒有持續研究SB9(ROS)，因為其不提供同種異體保護。

CD30.CAR EBVSTs已經在何杰金氏淋巴瘤之同種異體治療的臨床試驗(ClinicalTrials.gov identifier: NCT04288726)中進行測試，並且已經被證明具有高療效及低移植物抗宿主疾病(GVHD)。然而，就像其他同種異體細胞療法一樣，該等細胞在患者中缺乏持久性，且同種異體排斥可能係一原因。為了研究SB9是否可以在CD30.CAR EBVSTs中過度表現，以及過度表現是否會影響細胞表型，我們用SB9(WT)、SB9(CAS)及SB9(CAS-ROS) (SEQ ID NO : 7)轉導CD30.CAR EBVSTs，所述SB9(CAS-ROS) (SEQ ID NO : 7)係一個三重突變體(E340D; C341S; C342S)，其可併入SB9(CAS)的同種異體保護效果及SB9(ROS)的蛋白質穩定性。經不同形式之SB9轉導之CD30.CAR EBVSTs (SB9-CD30.CAR EBVSTs)具有2至10倍的SB9過度表現(供體依賴性)(圖12B及圖12C)，以及類似的CD30.CAR表現(圖12D及圖12E)。相較於CD30.CAR EBVSTs，SB9-CD30.CAR EBVSTs亦具有類似比例的EBV肽回應細胞、CD4/CD8 T細胞、記憶細胞及活化/耗竭狀態(圖12F、圖12G、圖12H、圖12I、圖12J及圖12K)。此外，在單培養中以及在用經改造NALM6或KM-H2腫瘤刺激之後的SB9增強CD30.CAR EBVSTs中，我們未觀察到細胞激素產生的差異(圖18B、圖18C及圖18D)。

為了測試SB9過度表現是否會保護CD30.CAR EBVSTs免受同種異體排斥，CD30.CAR EBVST移植物係與CD30 KO allo-T細胞以1:1-4比率共培養，其係來自於4個獨特的移植物-宿主對(圖9G)。移植物及宿主細胞數量係藉由流式細胞術分析來測定，並且係每天監測持續4天。雖然在單培養中的CD30.CAR EBVSTs類似地增殖(圖9H)，但是在共培養中分別有中位數為86%及84%的CD30.CAR EBVSTs及SB9(NEG)-CD30.CAR EBVSTs被殺滅(圖9I及圖9K)。相反地，SB9(CAS)-、SB9(CAS-ROS)-及SB9(WT)-CD30.CAR EBVSTs可抵抗宿主細胞殺滅(圖9I及圖9K)。特別地，SB9(CAS)-及SB9(CAS-ROS)-CD30.CAR EBVSTs分別地具有51%及56%的中位數細胞死亡，且相較於CD30.CAR EBVSTs及SB9(NEG)-CD30.CAR EBVSTs可顯著地抵抗同種異體排斥(圖9K)。再者，宿主T細胞持續在共培養期間存活並增殖，並且未被SB9-CD30.CAR EBVSTs殺滅(圖9J)。

為了測定SB9保護是否適用於CD30.CAR T細胞之外，我們對不表現CAR之ATCs及EBVSTs進行類似的體外MLR測定。TCRαβ KO ATCs係與HLA不匹配宿主PBMCs以1:10-20比率共培養12天(圖13A)。雖然在單培養中的TCRαβ KO ATCs類似地增殖(圖13B)，但是在共培養的第7天之後ATCs、SB9(NEG)-及SB9(ROS)-ATCs無法存活(圖13C)。相反地，SB9(WT)-及SB9(CAS)-ATCs持續存活，並且在第7-9天達到增殖高峰，然後最終被該等擴增的宿主細胞殺滅(圖13C及圖13D)。在共培養的第9天，當在5個獨立的HLA不匹配移植物-宿主對中測試時，相較於CD30.CAR EBVSTs及SB9(NEG)-ATCs，SB9(CAS)-ATCs可顯著地抵抗同種異體排斥(圖13E)。當EBVSTs係與allo-T細胞以1:1-4比率共培養時，其係來自於2個獨特的移植物-宿主對，觀察到類似的趨勢(圖13F)。SB9(CAS)-EBVSTs (平均細胞死亡=43%)能夠抵抗同種異體排斥，比NT EBVSTs (平均細胞死亡=90%)及SB9(NEG)-EBVSTs (平均細胞死亡=89%)高出~2倍(圖13H)。因此，SB9(CAS)之過度表現可能係一種保護移植物T細胞免受同種異體殺滅的策略。實施例 4：在CAR T細胞中的SerpinB9(CAS)過度表現增強其等在體外及體內同種異體排斥模型中的持久性及抗腫瘤活性

已顯示T細胞在活化時會上調SB9 (14, 15)。為了評估經活化T細胞是否會充分地上調SB9以保護其等免受同種異體排斥，或者是否係需要SB9過度表現，我們設置一個三培養物，其係在經改造NALM6腫瘤細胞的存在下由CD30.CAR EBVST移植物細胞以及CD30 KO allo-T細胞所構成，所述經改造NALM6腫瘤細胞係在第0天(第1輪)及第2天(第2輪)被添加(圖14A)。為了確保NALM6細胞不被allo-T細胞殺滅，我們藉由Crispr基因編輯進行HLA I及II類KO。此外，為了用作為CD30.CAR EBVSTs的標靶，該等NALM6細胞係被改造為過度表現經截短CD30 (圖15A)。然後該等高tCD30、HLA I及II KO細胞係藉由磁珠分離被進一步純化，接著進行螢光活化細胞分選(FACS分選)或者殖株選擇以達到＞99%的純度(圖15A)。allo-T細胞與經改造NALM6的一共培養設置顯示宿主T細胞對腫瘤具有最小殺滅(圖15B)。

在三培養的第3天，allo-T細胞殺滅了中位數為70%的經活化CD30.CAR及SB9(NEG)-CD30.CAR EBVSTs (圖14B)。另一方面，SB9(CAS)之過度表現顯著地保護移植物細胞免受同種異體排斥(~45%中位數SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs被殺滅)(圖14B)。因此，與CD30.CAR及SB9(NEG)-CD30.CAR EBVSTs不同，其僅殺滅在三培養中中位數為60%的腫瘤細胞，SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs能夠根除來自於第2輪腫瘤攻擊的經改造NALM6細胞(圖14C)。雖然SB9(WT)及SB9(CAS-ROS)亦提供保護對抗會導致經改造NALM6對照增加的同種異體殺滅，但是當與CD30.CAR及SB9(NEG)-CD30.CAR EBVSTs比較時，並未達到統計學顯著性(圖14B及圖14C)。在第1輪添加的經改造NALM6腫瘤係完全地被CD30.CAR EBVSTs消除，無論是否有SB9過度表現(數據未顯示)。再者，當使用CD19.CAR ATC及CD30.CAR ATC移植物重複該研究時，獲得類似的結果(圖15C、圖15D、圖15E、圖15F)。因此，經活化T 細胞的內源性SB9的上調係不足以使移植物細胞抵抗同種異體排斥，且SB9(CAS)之過度表現對於賦予同種異體保護係必要的。

為了測定SB9過度表現是否會保護CD30.CAR EBVSTs免受體內同種異體排斥，我們設置一同種異體排斥小鼠模型，其中CAR T細胞需要躲避同種異體排斥，同時保護小鼠對抗癌症進展。第一個模型係藉由將經改造NALM6細胞植入MHC KO NSG小鼠來設置(圖14D)。在18天之後，該等CD30 KO allo-T細胞(HLA-A2+)以及CD30.CAR EBVST.eGFP-ffLuc移植物細胞(HLA-A2-)係被經靜脈共輸注(圖14D)。經CD30.CAR EBVSTs處理之具有及不具有allo-T細胞之腫瘤攜帶小鼠係用作為同種異體移植物排斥的對照(圖16A)。當添加allo-T細胞時，測量到顯著較低的生物發光信號，表明CD30.CAR EBVSTs屈服於同種異體排斥(圖16B及圖16C)。類似地，SB9(WT)-EBVSTs係被allo-T細胞排斥(圖14E及圖14F)。另一方面，相較於CD30.CAR EBVSTs，SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs始終保持在顯著較高的水平(圖14E及圖14F)。

為了評估腫瘤控制，我們設置相同的同種異體排斥小鼠模型，但是這一輪使用經改造NALM6.eGFP-ffluc細胞，其係在移植物CAR T及宿主細胞治療之前的15天被植入(圖14G)。經CD30.CAR EBVSTs處理之不具有allo-T細胞之腫瘤攜帶小鼠係用作為腫瘤清除的一陽性對照。腫瘤負荷係藉由IVIS成像來評估，且移植物及宿主細胞數量係從由臉部靜脈所採集之血液樣本的流式細胞術分析來建立。在治療後的15天之後，我們觀察到CD30陰性腫瘤的回彈，因此實驗係在該時間點之後終止。

在不存在allo-T細胞的情況下，在所有小鼠中CD30.CAR EBVSTs持續存在並且控制預建立之腫瘤(圖16D、圖16E、圖16F及圖16G)。然而，在allo-T細胞的存在下，CD30.CAR EBVSTs被排斥並且顯示較差的腫瘤控制(圖16D、圖16E、圖16F、圖16G、圖14H、圖14J及圖14K)。SB9(WT)-CD30.CAR EBVSTs亦無法抵抗同種異體排斥(圖14H)，但是在治療後第11天顯示腫瘤消退(圖14J及圖14K)。相反地，SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs比CD30.CAR EBVSTs更能顯著抵抗同種異體排斥，並且在治療後第7天迅速地降低腫瘤負荷(圖14H、圖14J及圖14K)。值得注意的係，在輸注SB9-CD30.CAR EBVSTs之後，在周邊血液中的allo-T細胞水平並未改變(圖14I)。

總而言之，在體外及體內兩者模型中，SB9(CAS)之過度表現增強移植物T細胞對抗同種異體排斥的抗性並且改善抗腫瘤功效。此外，宿主T細胞水平不受表現SB9(CAS)之移植物T細胞之存在的影響，其暗示過度表現SB9(CAS)作為一同種異體保護方法的安全性益處。實施例 5：過度表現SerpinB9(CAS)之CAR T細胞在連續體外腫瘤細胞攻擊及一體內AICD模型期間顯示存活益處

CAR T細胞的存活及持久性亦受到慢性抗原暴露的影響，其可導致T細胞耗竭以及T細胞之活化誘發細胞死亡(16, 17)。我們接下來著手測定SB9過度表現是否會在慢性抗原暴露條件下藉由降低細胞死亡來改善CAR T細胞存活，藉由進行效應CAR ATCs (CD30.CAR及CD19.CAR ATCs)與經改造NALM6腫瘤細胞之體外連續共培養測定法(圖17A)。細胞係藉由流式細胞術每2-3天進行計數，並且在不添加細胞激素的情況下以固定的效應細胞與腫瘤細胞比率重新鋪盤。當任何一種效應細胞類型無法控制腫瘤生長時，則終止該實驗。在單培養中生長的CAR ATCs係用作為對照。

在不存在腫瘤細胞的情況下，在培養的8天期間，具有或不具有SB9過度表現之CD30.CAR ATCs的細胞數量降低，且未觀察到自體T細胞生長(圖17B及圖17F)。在腫瘤細胞的存在下，效應細胞增殖並且在第8-11天達到峰值擴增，然後細胞數量降低(圖17C及圖17G)。值得注意的係，在第8-11天觀察到SB9(CAS)-CD30.CAR ATCs具有最大擴增，比CD30.CAR ATCs及SB9(NEG)-CD30.CAR ATCs擴增多達20倍(圖17C及圖17G)。因此，相較於在7次腫瘤攻擊之後失去腫瘤控制的CD30.CAR ATCs及SB9(NEG)-CD30.CAR ATCs，SB9(CAS)-CD30.CAR ATCs具有經改善之經改造NALM6殺滅(圖17D及圖17H)。在整個實驗過程中，PD-1、Lag-3及Tim-3之表現在效應細胞之間係類似的，表明在效應細胞類型之間的耗竭/活化狀態係類似的(圖17E及圖17I)。因此，SB9(CAS)-CD30.CAR ATCs之經增強腫瘤細胞毒性可能係由於效應細胞在慢性抗原暴露下藉由抵抗細胞死亡來存活並擴增的能力，而不是該等細胞之耗竭狀態。

為了測定SB9(CAS)過度表現是否亦可以在其他CAR T細胞系統中提供存活益處，我們使用CD19.CAR ATC效應細胞重複連續共培養實驗。再次地，在單培養中未觀察到CD19.CAR ATCs的自體生長，無論是否有SB9過度表現(圖17J及圖17N)。在腫瘤細胞的存在下，在第6天亦觀察到SB9(CAS)-CD19.CAR ATCs具有最大擴增，其比CD19.CAR ATCs及SB9(NEG)-CD30.CAR ATCs擴增多達12倍(圖17K及圖17O)。相較於在5次腫瘤攻擊之後失去腫瘤控制的CD19.CAR ATCs及SB9(NEG)-CD30.CAR ATCs，SB9(CAS)-CD19.CAR ATCs具有經改善之腫瘤細胞殺滅(圖17L及圖17P)。如之前所觀察到的，在整個實驗過程中，PD-1、Lag-3及Tim-3之表現在效應細胞之間係類似的(圖17M及圖17Q)。總而言之，SB9(CAS)過度表現會增強不同的CAR T細胞在慢性抗原暴露條件下的存活並且改善腫瘤細胞殺滅。此結果亦強調在該等自體細胞療法中使用過度表現SB9(CAS)之T細胞以達到移植物細胞在患者中的較佳擴增及持久性的潛力。

另一方面，當CD30.CAR EBVSTs係在體外被使用作為效應細胞時，細胞擴增及抗腫瘤功效在效應細胞類型之間係維持類似的(圖19C)。一個可能的原因可能係在相同的慢性抗原暴露壓力條件下，相較於CAR ATCs，CD30.CAR EBVSTs對活化誘發細胞死亡(AICD)較不敏感。

為了誘發在CD30.CAR EBVSTs中的較大AICD，我們藉由在一AICD B細胞急性淋巴母細胞白血病(B-ALL)小鼠模型中增加CAR刺激來強化慢性抗原暴露壓力。此等小鼠被植入經殖株選擇之經改造NALM6細胞，以提供一致的CAR活化並且預防早期抗原逃逸。相較於同種異體排斥小鼠模型，目前的模型亦具有一較大的腫瘤負荷，在CD30.CAR EBVST治療當下(圖20)。當我們測量其等擴展及殺滅腫瘤的能力時，我們發現SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs係顯著地優於SB9(WT)-及CD30.CAR EBVSTs (圖19G、圖19H、圖19I及圖19J)。SB9(WT)-及CD30.CAR EBVSTs兩者未能控制腫瘤，且在那些治療群組中的一些小鼠必須被安樂死(圖19G及圖19H)。相反地，SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs顯著地降低在所有小鼠中的腫瘤，導致其等之存活(圖19G及圖19H)。因此，SB9(CAS)過度表現會擴大CD30.CAR EBVSTs的存活及擴增兩者，以增強其等在腫瘤細胞的慢性抗原暴露期間的性能。實施例6：SerpinB9(CAS)過度表現而非SerpinB9(WT)過度表現保護CAR T細胞免受FAS介導細胞凋亡

同種異體排斥以及活化誘發細胞死亡(AICD)係涉及GzmB及/或死亡受體之細胞凋亡途徑的結果(圖21A)(19)。雖然SB9(WT)過度表現提供一些同種異體保護及擴增益處，然而，SB9(CAS)過度表現始終導致卓越的同種異體保護及擴增。

我們接下來想要了解SB9(CAS)過度表現所提供的卓越保護，藉由研究在CD30.CAR EBVSTs中對抗Fas介導細胞凋亡的抗性。此係藉由在使用一抗CD95 (Fas)抗體處理該等細胞之後測量細胞存活率及半胱天冬酶3/7活性來完成。確實，相較於SB9(WT)-及CD30.CAR EBVSTs兩者，SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs顯示經顯著改善之細胞存活率，並且與經泛半胱天冬酶抑制劑zVAD FMK處理之對照具有類似的活細胞數量(圖21B)。我們亦證明在45分鐘時間點在經CD95處理之SB9(CAS)-CD30.CAR EBVSTs中的半胱天冬酶3/7活性的水平係SB9(WT)-及CD30.CAR EBVSTs的一半(圖21C)，雖然該活性最終會隨著時間增加至與其他條件相同的水平(數據未顯示)。

為了進一步探討在Fas介導細胞凋亡中SB9(CAS)的保護作用，我們在SB9(CAS)的C端加入一His標籤以允許藉由流式細胞術來追蹤經轉導之CD30.CAR EBVSTs。我們的數據顯示在使用抗CD95處理時，SB9(CAS)-His-標籤族群會被富集，而SB9(CAS)-His-標籤陰性族群會因為對抗Fas介導細胞毒性之抗性的增加而降低(圖21D)。作為一對照，相較於經PBS處理之細胞，經zVAD FMK處理之細胞顯示在兩個細胞族群之相對比例方面沒有變化(圖21D)。此等結果證實SB9(CAS)過度表現而不是SB9(WT)過度表現可以保護CD30.CAR EBVSTs免受Fas介導細胞凋亡，並且可以因此針對同種異體排斥及AICD提供更強而有力的保護。

此外，在過度表現SB9(CAS)之NK細胞中亦觀察到對抗Fas介導細胞凋亡之SB9(CAS)介導保護(圖22C及圖22D)。此可能有助於SB9(CAS)-NK細胞在製造程序期間的較大擴增，其係由兩個活化步驟所構成(圖22A及圖22B)。由於CD95係共享一半胱天冬酶介導細胞凋亡途徑之死亡受體之一大家族的一成員，因此SB9(CAS)可以類似地保護T細胞及NK細胞免受由此等死亡受體所觸發之細胞凋亡。

總而言之，在T細胞中的SB9或其分子衍生物之過度表現係一有希望的解決方法，用於解決潛在治癒性T細胞療法之同種異體排斥之長期存在的問題，並且改善T細胞在慢性抗原暴露下的存活。此係第一個描述在T細胞中使用SB9過度表現之同種異體保護的研究。先前已經描述在間葉幹細胞(mesenchymal stems cells, MSCs)中的SB9之過度表現，用於同種異體保護(18)，然而，尚未有其應用之研究被進一步報告。目前大多數傳遞T細胞之同種異體保護的策略涉及消除經活化之宿主免疫細胞(1, 2, 4)，其可能會導致消除病原體特異性免疫細胞並且導致伺機型感染。所揭露之策略在不損害宿主免疫力的情況下賦予該療法同種異體保護。此外，其具有廣泛應用於不同T細胞療法的潛力，其中亦包括經改造TCR或CAR之表現。參考文獻

為了更全面地描述並揭露本揭露之主題及本揭露所屬之現有技術，本文引用許多論文。以下提供此等參考文獻之完整引用。此等參考文獻中的各者的全部內容係併入本文中。

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針對標準分子生物學技術，請參見Sambrook, J., Russel, D.W. Molecular Cloning, A Laboratory Manual.3 ed. 2001, Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press。

(無)

現在將參考附圖討論闡明本揭露之原理的實施態樣及實驗。

圖1。用於產生經活化、TCR剔除(KO)細胞作為治療性移植物細胞之製程的示意圖。

圖2。用於產生病毒特異性細胞(VSTs)作為治療性移植物細胞之製程的示意圖。

圖3。用於產生CD30剔除(KO)、同種異體T (allo-T)細胞之製程的示意圖，以用作為生成不表現CAR標靶抗原之allo-T細胞的實例。

圖4A至4C。圖表及條形圖顯示來自於兩個不同供體之經GFP或Serpin-GFP轉導之T細胞的SERPINB9 (SB9)的擴增及表現。在從轉導當天開始的培養期間，T細胞的增殖倍數變化係藉由台盼藍染色(Trypan Blue staining)並使用一血球計數器計算細胞計數來測定。經轉導之T細胞係在轉導後第5天被收穫，且以總CD3陽性細胞之百分比表示之GFP表現，以及GFP陽性細胞之細胞內SB9表現(中位數螢光強度)係藉由流式細胞術來測定。(4A)細胞數量隨時間的累積倍數變化。(4B)以總CD3陽性細胞之百分比表示之GFP表現。(4C) GFP陽性細胞之細胞內SB9表現。

圖5A至5C。圖表及條形圖顯示來自於兩個不同供體之經GFP-CAR或Serpin-CAR轉導之T細胞的CD30.CAR (IgG1間隔子)的擴增、表現以及SERPINB9 (SB9)的表現。在從轉導當天開始的培養期間，T細胞的增殖倍數變化係藉由台盼藍染色並使用一血球計數器計算細胞計數來測定。經GFP轉導之T細胞係用作為對照。經轉導之T細胞係在轉導後第7天被收穫，且以總CD3陽性細胞之百分比表示之CD30.CAR表現，以及CD30.CAR陽性細胞之細胞內SB9表現(中位數螢光強度)係藉由流式細胞術來測定。(5A)細胞數量隨時間的累積倍數變化。(5B)以總CD3陽性細胞之百分比表示之CD30.CAR表現。(5C) CD30.CAR陽性細胞之細胞內SB9表現。

圖6。圖表顯示從兩個不同供體所製備之經GFP、CD30.CAR (IgG1間隔子)，或者SERPINB9及CD30.CAR (IgG1間隔子)細胞轉導之T細胞對KM-H2細胞的細胞溶解。藉由添加經GFP轉導之T細胞，將CD30.CAR陽性T細胞與70%在培養物中的總細胞進行正規化(針對GFP-CD30.CAR及Serpin-CD30.CAR條件)。經轉導之T細胞(效應細胞)係與表現CD30之KM-H2細胞(標靶細胞)以1:1及2:1的效應:標靶比率共培養，且KM-H2細胞溶解係藉由xCELLigence即時細胞分析軟體(Agilent)在48小時期間來測量。經GFP轉導之T細胞係用作為陰性對照。

圖7A至7E。示意圖及圖表顯示SERPINB9表現保護移植物T細胞免受體外免疫排斥。(7A)混合淋巴細胞反應(MLR)測定法以及所使用之建構體的示意代表圖。來自於兩個不同供體之經GFP轉導(陰性對照)或經Serpin-GFP轉導之TCR剔除(KO)移植物T細胞係與HLA不匹配宿主PBMCs以1:10細胞比率混合(PBMC混合淋巴細胞測定法)，並且在12天期間測定細胞數量。該MLR測定法係在IL-7及IL-15的存在下進行，兩者皆為10 ng/mL，且必要時擴增該等培養物。(7B)當單獨培養時移植物T細胞的細胞計數。(7C)當在該PBMC MLR中培養時移植物T細胞的細胞計數。(7D)宿主CD3陽性T細胞的細胞計數。(7E)宿主CD3陰性、CD56陽性自然殺手(NK)細胞的細胞計數。所有數據表示平均值±SD。

圖8A至8E。示意圖、圖表及條形圖顯示SERPINB9表現保護移植物CD30.CAR (IgG1間隔子) T細胞免受體外T細胞介導免疫排斥。(8A)混合淋巴細胞反應(MLR)測定法以及所使用之建構體的示意代表圖。來自於兩個不同供體之經GFP轉導(陰性對照)或經Serpin-GFP轉導之TCR剔除(KO)移植物T細胞係與經引發以識別並殺滅移植物細胞之HLA不匹配宿主的CD30 KO同種異體反應性T細胞以1:1-2細胞比率混合(CD30 KO allo-T細胞混合淋巴細胞測定法)，並且在3天期間測定細胞數量。該測定法係在10 ng/mL的IL-7及IL-15兩者的存在下進行。(8B)當單獨培養時移植物T細胞的細胞計數。(8C)當在該MLR中培養時移植物T細胞的細胞計數。(8D)在該MLR中培養3天之後移植物T細胞的細胞計數。(8E)當在該MLR中培養時宿主CD3陽性T細胞的細胞計數。所有數據表示平均值±SD。

圖9A至9K。示意圖、圖表及條形圖顯示在CD30.CAR移植物T細胞中的SB9(CAS)過度表現不會影響CAR細胞毒性功能，並且在保護移植物細胞免受同種異體排斥方面係卓越的。(9A)圖表顯示使用xCELLigence系統所測量之對KM-H2細胞的CD30.CAR (IgG1間隔子) ATC介導細胞溶解。(9B)示意圖顯示9C-9F的體外共培養設置，其中移植物TCRαβ ^KOCD30.CAR (IgG1間隔子) ATCs係與經引發以識別並殺滅移植物細胞之宿主CD30 ^KOATCs以1:1比率混合。該測定法係在10 ng/mL的IL-7及IL-15兩者的存在下進行。(9C、9D及9E)圖表顯示在單培養中生長的移植物T細胞(C)、在共培養中的移植物T細胞(D)及宿主T細胞(E)的細胞計數，其係來自於一代表性移植物-宿主對。(9F)條形圖顯示宿主介導移植物殺滅，由所計算，其中各個點代表一獨特的移植物-宿主對，且該條形圖代表中位數(n=6)。P值係藉由單因子變異數分析與Tukey事後測試來測定。*，P = 0.0189；**，P = 0.0034。(9G)示意圖顯示9H-9K的體外共培養設置，其中移植物CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs係與經引發以識別並殺滅移植物細胞之宿主CD30 ^KOATCs以1:1-4比率混合。該測定法係在10 ng/mL的IL-7及IL-15兩者的存在下進行。(9H、9I及9J)圖表顯示在單培養中生長的移植物T細胞(H)、在共培養中的移植物T細胞(I)及宿主T細胞(J)的細胞計數，其係來自於一代表性移植物-宿主對。(9K)條形圖顯示宿主介導移植物殺滅，其中各個點代表一獨特的移植物-宿主對，且該條形圖代表中位數(n=4)。選擇移植物:宿主的最小比率，其在第4天導致針對CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs之≥80%宿主介導移植物殺滅。P值係藉由單因子變異數分析與Tukey事後測試來測定。 *，P = 0.0150；**，P ＜ 0.01。

圖10A至10E。示意圖、條形圖及圖表顯示表現不同形式之SB9之TCRαβ ^KOCD30.CAR (IgG1間隔子) ATCs的製造及特徵。(10A)示意圖顯示用於生成表現不同形式之SB9之TCRαβ ^KOCD30.CAR ATCs的製造時間表，當使用編碼雙順反子建構體之反轉錄病毒(上圖)或者使用個別地編碼CAR及SB9之反轉錄病毒(下圖)轉導時。(10B)條形圖顯示藉由細胞內染色接著藉由流式細胞術分析所測量之SB9表現。(10C及10D)條形圖顯示以CD3陽性T細胞之百分比(C)以及幾何平均螢光強度(MFI)(D)表示之CD30.CAR表現。(10E)圖表顯示藉由流式細胞術分析所測量之在CD3野生型(WT) T細胞上或者在使用Crispr基因編輯進行TCRαβ ^KO基因修飾之後的T細胞上的TCRαβ表現。

圖11A至11B。示意圖及圖表顯示識別並殺滅移植物細胞(allo-T)之同種異體反應性CD30 ^KO宿主細胞的製造。(11A)示意圖顯示用於生成allo-T的製造時間表。(11B)圖表顯示allo-T細胞的CD30表現，其係藉由使用兩種不同的抗體殖株BY88及BerH8進行CD30染色以及流式細胞術分析來測定。

圖12A至12K。示意圖、SDS-PAGE及條形圖顯示表現不同形式之SB9之CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs的製造及特徵。(12A)示意圖顯示用於生成表現不同形式之SB9之CD30.CAR EBVSTs的製造時間表。(12B) SDS-PAGE分析顯示來自於一代表性供體的SB9表現，其中頂部條帶(~62kDa)表明該等在細胞質液中的預形成GzmB與SB9複合物，以及底部條帶(~43kDa)表明該功能性SB9單體。轉導係以低(10 ng/mL)或高(100 ng/mL) IL-15濃度來進行，分別地由L及H表示。(12C)條形圖顯示與CD30.CAR EBVST對照及作為一上樣對照(loading control)之鈣連伴護蛋白(calnexin)進行正規化之SB9單體的密度測定分析。(12D及12E)條形圖顯示以CD3陽性T細胞之百分比(D)以及幾何平均螢光強度(MFI)(E)表示之CD30.CAR表現，n=4個供體。(12F)條形圖顯示回應EBV肽之產生IFNγ及/或TNFα之CD3陽性T細胞的百分比，其係藉由細胞內細胞激素染色以及流式細胞術來分析，n=4個供體。(12G、12H、12I、12J及12K)條形圖顯示來自於一代表性供體之CD30.CAR EBVSTs的CD4/CD8子集(G)、記憶T細胞子集(CM：中央記憶、EM：效應記憶，以及TEMRA：表現CD45RA之T效應記憶)(H)、PD-1、Tim-3、Lag-3表現(I)、CD39表現(J)，以及CD25表現(K)的流式細胞術分析。

圖13A至13J。示意圖、圖表及條形圖顯示在非CAR移植物T細胞(ATCs及EBVSTs)中的SB9(CAS)過度表現在保護移植物細胞免受同種異體排斥方面係卓越的。(13A)示意圖顯示13B-13E的體外共培養設置，其中移植物TCRαβ ^KOATCs係與HLA不匹配宿主PBMCs以1:10-20比率混合。該測定法係在10 ng/mL的IL-7及IL-15兩者的存在下進行。(13B、13C及13D)圖表顯示在單培養中生長的移植物T細胞(B)、在共培養中的移植物T細胞(C)及宿主T及NK細胞(D)的細胞計數，其係來自於一代表性移植物-宿主對。(13E)條形圖顯示宿主介導移植物殺滅，由所計算，其中各個點代表一獨特的移植物-宿主對，且該條形圖代表中位數(n=5)。P值係藉由單因子變異數分析與Tukey事後測試來測定。**，P = 0.0016；***，P ＜ 0.001。(13F)示意圖顯示13G-13J的體外共培養設置，其中移植物EBVSTs係與經引發以識別並殺滅移植物細胞之同種異體反應性CD30 ^KO宿主ATCs以1:1-4比率混合。該測定法係在10 ng/mL的IL-7及IL-15兩者的存在下進行。(13G、13H及13I)圖表顯示在單培養中生長的移植物T細胞(G)、在共培養中的移植物T細胞(H)及宿主T細胞(I)的細胞計數，其係來自於一代表性移植物-宿主對。(13J)條形圖顯示宿主介導移植物殺滅，由所計算，其中各個點代表一獨特的移植物-宿主對，且該條形圖代表中位數(n=2)。當n ＜ 3時未進行統計。

圖14A至14K。示意圖、圖像、條形圖及圖表顯示在CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs中的SB9(CAS)過度表現會保護CD30.CAR EBVSTs免受同種異體排斥並且增強體外及體內兩者的抗腫瘤功效。(14A)示意圖顯示(B)及(C)的體外三培養設置，其中經改造NALM6 (經截短CD30陽性及HLA I及II ^KO)、移植物CD30.CAR EBVSTs係與經引發以識別並殺滅移植物細胞之宿主CD30 ^KOATCs以1:1:1-4比率混合。該測定法係在不存在細胞激素的情況下進行。(14B)條形圖顯示宿主介導移植物殺滅，由所計算，其中各個點代表一獨特的移植物-宿主對，且該條形圖代表中位數(n=5)。選擇移植物:宿主的最小比率，其在第3天導致針對CD30.CAR EBVSTs之≥60%宿主介導移植物殺滅。P值係藉由單因子變異數分析與Holm-Šídák事後測試事後測試來測定。*，P = 0.0193。(14C)條形圖顯示與在單培養中生長之腫瘤細胞進行正規化之在三培養中被殺滅之第2輪腫瘤細胞的百分比。(14D)示意圖顯示14E-14F的體內同種異體排斥模型，2.5 x 10 ⁶個經改造NALM6 (經截短CD30陽性及HLA I及II ^KO)係經靜脈內被注射至NSG (MHC ^KO)小鼠中。在18天之後，5 x 10 ⁶個表現eGFP-ffLuc之移植物CD30.CAR EBVSTs與5 x 10 ⁶個同種異體反應性宿主T細胞(allo-T)係經靜脈內被共輸注。(14E)生物發光圖像顯示藉由IVIS Lumina S5成像系統所捕獲之移植物CD30.CAR EBVST水平。(14F)圖表顯示來自於移植物CD30.CAR EBVSTs隨時間的經量化生物發光信號。(14G)示意圖顯示14H-14K的體內同種異體排斥模型，2.5 x 10 ⁶個經改造NALM6.eGFP-ffLuc係經靜脈內被注射至NSG (MHC ^KO)小鼠中，在15天之後，5 x 10 ⁶個移植物CD30.CAR EBVSTs與5 x 10 ⁶個同種異體反應性宿主T細胞(allo-T)係經靜脈內被共輸注。(14H及14I)圖表顯示在指定時間點的血液樣本的流式細胞術分析。顯示了在周邊血液中的移植物CD30.CAR EBVST細胞(H)以及宿主allo-T細胞(I)的百分比。(14J)生物發光圖像顯示藉由IVIS Lumina S5成像系統所捕獲之經改造NALM6.eGFP-ffLuc腫瘤生長。(14K)圖表顯示與在第0天的疾病水平進行正規化之來自於腫瘤細胞隨時間的經量化生物發光信號。所有體內數據的圖表表示平均值+S.D。P值係使用單因子變異數分析(K；治療後第11天)或雙因子變異數分析(F及H：P值係顯示用於比較CD30.CAR + Allo-T與SB9(CAS)-CD30.CAR + Allo-T樣本)與Dunnett’s校正多重比較來測定，其中將樣本平均值與CD30.CAR + Allo-T樣本之平均值進行比較。

圖15A至15F。圖表及條形圖顯示在CD19.CAR ATCs及CD30.CAR (4-1BB 間隔子) ATCs中的SB9(CAS)過度表現會保護其等免受同種異體排斥並且增強體外抗腫瘤功效。(15A)圖表顯示FACS分選之經改造NALM6細胞的流式細胞術分析，其過度表現經截短CD30 (tCD30)並且係被基因編輯以剔除HLA I及II類(HLA ^DKO)。(15B)條形圖顯示在經改造NALM6腫瘤細胞與宿主allo-T細胞以1:1比率的共培養設置中被宿主細胞殺滅之腫瘤細胞的百分比。(15C)圖表顯示CD19.CAR ATC移植物細胞在與經引發以識別並殺滅移植物細胞之宿主ATCs及經改造NALM6以1:1:1比率的三培養中的宿主介導移植物殺滅，由所計算。該測定法係在不存在細胞激素的情況下進行。(15D)圖表顯示CD30.CAR ATC移植物細胞在與經引發以識別並殺滅移植物細胞之宿主CD30 ^KOATCs及經改造NALM6以1:4:1比率的三培養中的宿主介導移植物殺滅。該測定法係在不存在細胞激素的情況下進行。(15E及15F)條形圖顯示在與CD19.CAR ATCs (E)或者CD30.CAR ATCs (F)的三培養之後的第3天藉由流式細胞術分析所計數的腫瘤細胞數量。

圖16A至16G。示意圖、圖像及圖表顯示移植物T細胞的體內同種異體排斥發生在投予同種異體反應性宿主T細胞時。(16A)示意圖顯示16B及16C的體內同種異體排斥模型，2.5 x 10 ⁶個經改造NALM6 (經截短CD30陽性及HLA I及II ^KO)係經靜脈內被注射至NSG (MHC ^KO)小鼠中。在18天之後，5 x 10 ⁶個表現eGFP-ffLuc之移植物CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs與或不與5 x 10 ⁶個同種異體反應性宿主T細胞(allo-T)係經靜脈內被輸注。(16B)生物發光圖像顯示藉由IVIS Lumina S5成像系統所捕獲之移植物CD30.CAR EBVST水平。(16C)圖表顯示來自於移植物CD30.CAR EBVSTs隨時間的經量化生物發光信號。(16D)示意圖顯示16E-16G的體內同種異體排斥模型，2.5 x 10 ⁶個經改造NALM6.eGFP-ffLuc係經靜脈內被注射至NSG (MHC ^KO)小鼠中，在15天之後，5 x 10 ⁶個移植物CD30.CAR EBVSTs與或不與5 x 10 ⁶個同種異體反應性宿主T細胞(allo-T)係經靜脈內被輸注。(16E)圖表顯示在指定時間點的血液樣本的流式細胞術分析。顯示了在周邊血液中的移植物CD30.CAR EBVST細胞的百分比。(16F)生物發光圖像顯示藉由IVIS Lumina S5成像系統所捕獲之經改造NALM6.eGFP-ffLuc腫瘤生長。(16G)圖表顯示與在第0天的疾病水平進行正規化之來自於腫瘤細胞隨時間的經量化生物發光信號。所有體內數據的圖表表示平均值+S.D。P值係使用雙因子變異數分析與Sidak’s校正多重比較(E)或者未配對單尾t測試(C及G；治療後第11天)來測定。

圖17A至17Q。示意圖、圖表及條形圖顯示在與腫瘤細胞連續共培養之後，SB9(CAS)過度表現會增強CD30.CAR (4-1BB間隔子)及CD19.CAR ATC擴增。(17A)示意圖顯示CAR ATCs係與經改造NALM6腫瘤細胞以1:1或1:5的固定比率體外共培養，當CD30.CAR及CD19.CAR ATCs係被分別地研究時。每2-3天，該等細胞係藉由流式細胞術進行計數，並且以固定比率與新鮮腫瘤細胞共培養重新鋪盤，並且重複該程序直到該等CAR T細胞無法消除腫瘤細胞。該實驗係在不存在細胞激素的情況下進行。(17B、17C、17F及17G)圖表顯示在單培養中(B及F)及在共培養中(C及G)生長的CD30.CAR ATCs的累積增殖倍數變化。(17D及17H)條形圖顯示在第13天藉由流式細胞術所計數之腫瘤細胞數量。(17E及17I) 條形圖顯示在共培養開始之前(第0天)以及在共培養的最後一天(第13天)在CD30.CAR ATCs上的PD-1、Tim-3及Lag-3表現。(17J、17K、17N及17O)圖表顯示在單培養中(J及N)及在共培養中(K及O)生長的CD19.CAR ATCs的累積增殖倍數變化。(17L及17P)條形圖顯示在第8天藉由流式細胞術所計數之腫瘤細胞數量。(17M及17Q)條形圖顯示在共培養開始之前(第0天)以及在共培養的最後一天(第8天)在CD19.CAR ATCs上的PD-1、Tim-3及Lag-3表現。

圖18A至18D。示意圖及條形圖顯示表現不同形式之SB9之CD30.CAR EBVSTs (4-1BB間隔子)具有及不具有CAR介導刺激的細胞激素分泌概況。(18A)示意圖顯示18B-18D的體外共培養設置，其中效應CAR T細胞係與經選殖選擇之經改造NALM6 (經截短CD30陽性及HLA I及II ^KO)或者KM-H2腫瘤細胞以1:1比率共培養。該測定法係在不存在細胞激素的情況下進行。(18B、18C及18D)條形圖顯示使用13重免疫學多重測定法套組(Merck)從在單培養中(B)或者在與經改造NALM6 (C)或KM-H2 (D)腫瘤細胞的共培養中培養24小時的細胞上清液所測量之細胞激素濃度。該等條形代表平均值+SD。

圖19A至19J。示意圖、圖表及條形圖顯示SB9(CAS)過度表現會增強CD30.CAR EBVSTs在體內的擴增及腫瘤殺滅功效。(19A)示意圖顯示CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs與經選殖選擇之經改造NALM6腫瘤細胞(表現經截短CD30陽性與HLA I及II ^KO)以1:1的固定比率的體外共培養。每2-3天，該等細胞係藉由流式細胞術進行計數，並且以固定比率與新鮮腫瘤細胞共培養重新鋪盤，並且重複該程序直到該等CAR T細胞無法消除腫瘤細胞。該實驗係在不存在細胞激素的情況下進行。(19B及19C)圖表顯示在單培養中(B)及在共培養中(C)生長的CD30.CAR EBVSTs的累積增殖倍數變化。(19D)條形圖顯示在第8天藉由流式細胞術所計數之腫瘤細胞數量。(19E)條形圖顯示在共培養開始之前(第0天)以及在共培養的最後一天(第8天)在CD30.CAR EBVSTs上的PD-1、Tim-3及Lag-3表現。從3個供體所製造之CD30.CAR EBVSTs係在體外進行測試，且結果相似。(19F)為19G-19J的體內活化誘發細胞死亡(AICD)模型的示意圖，其中2.5 x 10 ⁶個經選殖選擇之經改造NALM6係經靜脈內被注射至NSG (MHC ^KO)小鼠中。在15天之後，10 x 10 ⁶個效應CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs係經靜脈內被輸注。(19G及19H)圖像及圖表顯示藉由IVIS Lumina S5成像系統所捕獲之腫瘤生物發光(G)及其量化(H)，與第0天進行正規化。(19I)在治療後第20天的經量化腫瘤負荷(與第0天進行正規化)。該圖表表示平均值+S.D，且P值係使用單因子變異數分析與Dunnett’s校正多重比較來測定，其中將平均值與SB9(CAS)-CD30.CAR樣本之平均值進行比較。(19J)在指定時間點從面部靜脈所採集之血液樣本的流式細胞術分析顯示在周邊血液中的CD30.CAR EBVST水平。該圖表表示平均值+S.D，且P值(在CD30.CAR與SB9(CAS)-CD30.CAR樣本之間)係使用雙因子變異數分析與Dunnett’s校正多重比較來測定。

圖20。圖表顯示兩種體內模型的CD30陽性B細胞急性淋巴母細胞白血病(B-ALL)負荷，其分別地用於測試SB9介導移植物對抗同種異體排斥(同種異體排斥模型)及AICD (AICD模型)的保護作用。在基線(第0天)測量從FACS分選(同種異體排斥模型)或者選殖選擇(AICD模型)所製備之經改造NALM6.eGFP-ffLuc的生物發光信號。各個點代表一個別的小鼠。帶有誤差條的線表示平均值+SD。

圖21A至21D。示意圖、條形圖及圖表顯示SB9(CAS)而不是SB9(WT)過度表現會保護CD30.CAR EBVSTs免受Fas介導細胞凋亡。(21A)為涉及同種異體排斥及活化誘發細胞死亡(AICD)之細胞凋亡途徑的示意圖。(21B及21C)條形圖顯示在存在/不存在泛半胱天冬酶抑制劑zVAD FMK (100 µM)的情況下，在將CD30.CAR (4-1BB間隔子) EBVSTs鋪盤於經PBS或抗CD95抗體塗覆之盤上後16小時所獲取之CellTiter-Glo ^®測定法的發光測量值(B)，或者在將CD30.CAR EBVSTs鋪盤於經PBS或抗CD95抗體塗覆之盤上後45分鐘所獲取之Caspase-Glo ^®3/7 CellTiter-Glo ^®測定法的發光測量值(C)。在條形圖中的各個點代表一獨特的供體，且該等條形代表中位數(n=3-4)。P值係藉由雙因子變異數分析與Tukey事後測試來測定。**，P ＜ 0.01；****，P ＜ 0.0001。(21D)圖表顯示在存在/不存在泛半胱天冬酶抑制劑zVAD FMK的情況下，在將SB9(CAS)-His-CD30.CAR EBVSTs鋪盤於經PBS或抗CD95抗體塗覆之盤上後16小時之SB9(CAS)-His標籤表現的細胞內流式細胞術分析。研究從3個供體所製造之SB9(CAS)-His-CD30.CAR EBVSTs，並且發現具有類似的結果。

圖22A至22D。示意圖、圖表及條形圖顯示在過度表現SB9(CAS)之NK細胞中SB9(CAS)介導對抗Fas介導細胞凋亡的保護作用的評估。(22A)示意圖顯示生成過度表現SB9(CAS)之NK 細胞的製造時間表。(22B)圖表顯示非經轉導(NT)及過度表現SB9(CAS)之NK細胞在製造期間的擴增。(22C)條形圖顯示在存在/不存在泛半胱天冬酶抑制劑zVAD FMK (100 µM)的情況下，在將NK細胞鋪盤於經PBS或抗CD95抗體塗覆之盤上後1小時所獲取之CellTiter-Glo ^®測定法。(19D)圖表顯示在存在/不存在泛半胱天冬酶抑制劑zVAD FMK的情況下，在將SB9(CAS)-His NK細胞鋪盤於經PBS或抗CD95抗體塗覆之盤上後4小時之SB9(CAS)-His標籤表現的細胞內流式細胞術分析。研究從2個供體所製造之SB9(CAS)-His NK細胞，並且發現具有類似的結果。

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Claims

一種免疫細胞，其包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。
如請求項1之免疫細胞，其中該免疫細胞包含編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸。
如請求項2之免疫細胞，其中該編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸係一表現載體，或係包含在一表現載體中；任選地，其中該表現載體係一反轉錄病毒表現載體。
如請求項2或請求項3之免疫細胞，其中該SERPINB9多肽包含以下或由以下所構成：SEQ ID NO：1、4、5、6或7之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1、4、5、6或7具有至少85%胺基酸序列一致性之其變異體。
如請求項1至4中任一項之免疫細胞，其中該免疫細胞係一效應免疫細胞；任選地，其中該效應免疫細胞係一T細胞或者一自然殺手(natural killer, NK)細胞。
如請求項1至5中任一項之免疫細胞，其中該免疫細胞包含編碼一嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor, CAR)之核酸。
如請求項6之免疫細胞，其中該CAR包含一抗原結合域，所述抗原結合域結合至一選自於以下之癌症相關抗原：CD30、CD19、CD20、CD22、B7H3、c-Met、ROR1R、CD4、CD7、CD38、BCMA、間皮素(Mesothelin)、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、EpCAM、LeY及PSCA；任選地，其中該CAR包含一結合至CD30之抗原結合域。
如請求項1至7中任一項之免疫細胞，其中該免疫細胞係一病毒特異性T細胞或者一經活化T細胞(activated T cell, ATC)。
如請求項8之免疫細胞，其中該病毒特異性T細胞對一選自於以下之病毒具有特異性：艾司坦氏-巴爾氏病毒(Epstein-Barr virus, EBV)、腺病毒、細胞巨大病毒(cytomegalovirus, CMV)、人類乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus, HPV)、流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、C型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)、人類免疫缺乏病毒(human immunodeficiency virus, HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus, LCMV)、單純疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)、BK病毒(BK virus, BKV)，或者水痘帶狀疱疹病毒(varicella zoster virus, VZV)；任選地，其中該病毒係EBV。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至9中任一項之免疫細胞以及一醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。
如請求項1至9中任一項之免疫細胞或如請求項10之醫藥組成物，其係用於一醫學治療或預防方法。
一種如請求項1至9中任一項之免疫細胞或如請求項10之醫藥組成物在製造用於一醫學治療或預防方法之藥物中的用途。
一種治療或預防在一主體中的一疾病或病狀的方法，其包含向一主體投予一治療上或預防上有效量之如請求項1至9中任一項之免疫細胞或如請求項10之醫藥組成物。
一種用於降低在一細胞中的一絲胺酸蛋白酶或一半胱天冬酶之活性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。
一種用於增加一細胞對一絲胺酸蛋白酶或一半胱天冬酶之活性之抗性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。
一種用於增加一細胞對顆粒酶B之細胞殺滅之抗性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。
一種用於增加一細胞對由一死亡受體所介導之細胞凋亡之抗性的方法，其包含修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性。
如請求項14至17中任一項之方法，其中修飾該細胞以增加SERPINB9之表現或活性包含將編碼一SERPINB9多肽之核酸引入至該細胞中。
如請求項18之方法，其中該編碼一SERPINB9多肽之核酸係一表現載體，或係包含在一表現載體中；任選地，其中該表現載體係一反轉錄病毒表現載體。
如請求項18或請求項19之方法，其中該SERPINB9多肽包含以下或由以下所構成：SEQ ID NO：1、4、5、6或7之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1、4、5、6或7具有至少85%胺基酸序列一致性之其變異體。
如請求項14至20中任一項之方法，其中該細胞係一效應免疫細胞；任選地，其中該效應免疫細胞係一T細胞或者一自然殺手(NK)細胞。
如請求項14至21中任一項之方法，其中該細胞包含編碼一嵌合抗原受體(CAR)之核酸。
如請求項22之方法，其中該CAR包含一抗原結合域，所述抗原結合域結合至一選自於以下之癌症相關抗原：CD30、CD19、CD20、CD22、B7H3、c-Met、ROR1R、CD4、CD7、CD38、BCMA、間皮素、EGFR、GPC3、MUC1、HER2、GD2、CEA、EpCAM、LeY及PSCA；任選地，其中該CAR包含一結合至CD30之抗原結合域。
如請求項14至23中任一項之方法，其中該細胞係一病毒特異性T細胞。
如請求項24之方法，其中該病毒特異性T細胞對一選自於以下之病毒具有特異性：艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)、腺病毒、細胞巨大病毒(CMV)、人類乳頭狀瘤病毒(HPV)、流感病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺乏病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒(HSV)、BK病毒(BKV)，或者水痘帶狀疱疹病毒(VZV)；任選地，其中該病毒係EBV。
一種免疫細胞，其係用於治療或預防在一主體中的一癌症，其中：該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)的信號傳導域；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。
一種免疫細胞在製造用於治療或預防在一主體中之一癌症之藥物中的用途，其中：該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAM)的信號傳導域；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。
一種治療或預防在一主體中的一癌症的方法，其包含向一主體投予一治療上或預防上有效量之免疫細胞，其中：該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAM)的信號傳導域；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。
如請求項26之供使用之免疫細胞、如請求項27之用途或如請求項28之方法，其中該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞。
一種免疫細胞，其係用於治療或預防在一主體中的一癌症，其中：該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。
一種免疫細胞在製造用於治療或預防在一主體中之一癌症之藥物中的用途，其中：該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。
一種治療或預防在一主體中的一癌症的方法，其包含向一主體投予一治療上或預防上有效量之免疫細胞，其中：該免疫細胞係一病毒特異性T細胞；任選地，其中該免疫細胞係一艾司坦氏-巴爾氏病毒(EBV)特異性T細胞；以及該免疫細胞包含增加SERPINB9之表現或活性的修飾。
如請求項30之供使用之免疫細胞、如請求項31之用途或如請求項32之方法，其中該免疫細胞包含編碼一CAR之核酸，所述CAR包含：(i)一結合至CD30或CD19之抗原結合域、(ii)一跨膜域，以及(iii)一包含一基於免疫受體酪胺酸活化基序(ITAM)的信號傳導域。
如請求項26至33中任一項之供使用之免疫細胞、用途或方法，其中該主體相對於該免疫細胞係同種異體的。
如請求項26至34中任一項之供使用之免疫細胞、用途或方法，其中該免疫細胞包含編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸。
如請求項35之供使用之免疫細胞、用途或方法，其中該編碼一SERPINB9多肽之外源性核酸係一表現載體，或係包含在一表現載體中；任選地，其中該表現載體係一反轉錄病毒表現載體。
如請求項35或請求項36之供使用之免疫細胞、用途或方法，其中該SERPINB9多肽包含以下或由以下所構成：SEQ ID NO：1、4、5、6或7之胺基酸序列，或與SEQ ID NO：1、4、5、6或7具有至少85%胺基酸序列一致性之其變異體。