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TW202319058A - 用於抑制細胞中補體因子b (cfb) 之表現的核酸 - Google Patents

用於抑制細胞中補體因子b (cfb) 之表現的核酸 Download PDF

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TW202319058A
TW202319058A TW111133404A TW111133404A TW202319058A TW 202319058 A TW202319058 A TW 202319058A TW 111133404 A TW111133404 A TW 111133404A TW 111133404 A TW111133404 A TW 111133404A TW 202319058 A TW202319058 A TW 202319058A
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西比樂 達梅斯
艾略特 莫里森
維瑞納 奧米樂
提摩 喬涵森
史戴芬 芮司真
史蒂芬 舒伯特
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德商賽倫斯治療有限責任公司
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Abstract

本發明係關於干擾補體因子B (complement factor B；CFB)基因表現或抑制其表現之核酸產物。該等核酸較佳用於預防或治療補體相關疾病、病症或症候群，尤其是C3腎絲球病變(C3 glomerulopathy；C3G)、陣發性夜間血紅素尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria；PNH)、非典型溶血性尿毒性症候群(atypical hemolytic uremic syndrome；aHUS)、狼瘡性腎炎、IgA腎病(IgA nephropathy；IgA N)、重症肌無力(myasthenia gravis；MG)及原發性膜性腎病。

Description

用於抑制細胞中補體因子B　(CFB)　之表現的核酸
本發明係關於干擾或抑制補體因子B (CFB)基因表現之核酸產物。其進一步關於此類抑制之治療用途，諸如用於治療與體內補體路徑(尤其替代路徑)失調及/或CFB之過度活化或異位表現或定位或積聚相關之疾病及病症。
雙股RNA (dsRNA)能夠經由互補鹼基配對與所表現之mRNA結合已表明可藉由一種被稱為「RNA干擾(RNAi)」之機制阻斷基因表現(Fire等人, 1998, Nature. 1998年2月19日;391(6669):806-11及Elbashir等人, 2001, Nature. 2001年5月24日;411(6836):494-8)。短dsRNA在許多生物體，包括脊椎動物中引導基因特異性的轉錄後緘默，且已成為用於研究基因功能之有用工具。RNAi係由RNA誘導之緘默複合體(RISC)，一種降解信使RNA之序列特異性多組分核酸酶介導，該等信使RNA與負載至RISC複合體中之緘默觸發子充分互補或同源。諸如siRNA、反義RNA及微小RNA之干擾RNA為寡核苷酸，其藉由基因緘默來阻止蛋白質形成，亦即經由降解mRNA分子來抑制蛋白質之基因轉譯。基因緘默劑對於醫學中之治療應用變得愈來愈重要。
根據Watts及Corey在Journal of Pathology (2012；第226卷，第365-379頁)中所說，有演算法可以用於設計核酸緘默觸發子，但所有此等演算法均有嚴重的侷限性。可能需要各種實驗方法來識別強效siRNA，因為演算法不考慮諸如目標mRNA之三級結構或RNA結合蛋白之參與等因素。因此，發現具有最小脫靶效應的強效核酸緘默觸發子係一個複雜的過程。為了此等高度帶電分子的醫藥開發，有必要使其可以經濟地合成，分佈於目標組織，進入細胞且在可接受的毒性限值內發揮作用。
補體系統或路徑為宿主防禦侵入病原體之先天免疫系統的一部分。其主要由血流中許多以前驅體形式循環之蛋白質組成。形成補體系統之大部分蛋白質，包括補體組分蛋白C3 (在本文中亦簡稱為C3)，主要地在肝中由肝細胞合成且分泌至血流中。該系統之活化引起發炎反應，產生吞噬細胞吸引及助噬素作用，且因此導致對病原體、免疫複合體及細胞碎片之清除(Janeway's Immunobiology第9版)。補體系統由3條路徑(經典、瘦素及替代路徑)組成，其均彙聚於形成所謂補體組分3轉化酶複合體。此等酶複合體使補體組分C3蛋白裂解成C3a及C3b。一旦裂解，C3b形成複合體之一部分，該複合體又將C5裂解成C5a及C5b。在裂解後，C5b為主要補體路徑效應子，亦即膜攻擊複合體之關鍵組分之一。因此，C3為補體系統活化路徑之關鍵組分。
補體因子B (CFB或「因子B」)參與替代路徑之活化。CFB與C3b之結合(例如在細胞表面上)使得CFB對因子D裂解敏感，形成絲胺酸蛋白酶C3Bb，該蛋白酶自身為C3轉化酶，引起用於C3活化之放大環路。CFB主要在肝中合成且在若干肝外部位以低含量合成。
若干疾病與補體路徑之異常獲得性或遺傳活化以及與C3異常或過度表現相關。此等疾病中有C3腎絲球病變(CFBG)、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、免疫複合體介導之絲球體腎炎(IC介導之GN)、感染後絲球體腎炎(PIGN)、全身性紅斑性狼瘡症、狼瘡性腎炎(LN；SLE之腎併發症)、局部缺血/再灌注損傷及IgA腎病(IgA N；綜述於Ricklin等人, Nephrology, 2016及其他文獻中)。大部分此等疾病與腎臟相關，因為此器官獨特地對補體誘導之損傷敏感。然而，其他器官之疾病亦已知與補體功能異常相關，諸如年齡相關之黃斑部變性(AMD)、類風濕性關節炎(RA)、抗嗜中性白血球細胞質自體抗體相關之血管炎(ANCA-AV)、生物菌失調性牙周病(dysbiotic periodontal disease)、瘧疾貧血、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)及敗血症。
當前僅存在極少的針對補體系統介導之疾病、病症及症候群之治療。單株人類化抗體艾庫組單抗(Eculizumab)為其中之一。已知其結合補體蛋白C5，由此在補體級聯結束時阻斷膜攻擊複合體(Hillmen等人, 2006 NEJM)。然而，僅一小類患有上列疾病之患者對艾庫組單抗療法起反應。因此，存在對醫學治療補體介導或相關之疾病的高度未滿足之需求。C3為補體路徑活化中的關鍵因子。因此，對於許多補體介導之疾病，抑制參與C3活化之因子，諸如CFB之表現展現出有前景的治療策略。已提議，例如經由反義寡核苷酸或小分子抑制劑，靶向CFB表現或活性作為針對各種補體介導之病狀，包括AMD (Grossman等人, Molecular Vision 2017; 23:561-571)及狼瘡性腎炎(Grossman等人, Immunobiology 2016; 221:701-708)的潛在治療策略。
WO200404554、WO2007089375、WO2015089368、WO2019027015、WO2019089922及WO2021222549描述雙股siRNA，WO2015038939、WO2015168635描述靶向CFB之單股反義寡核苷酸(=ASO)。
本發明之一個態樣為一種用於抑制組分因子B (CFB)表現之雙股核酸，其中該核酸包含第一股及第二股，其中該第一股序列之未經修飾之等效物包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表5a中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸。
第一股序列之未經修飾之等效物可例如包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表1中所列之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸。
本文中所描述之核酸因此為能夠較佳在細胞中抑制CFB表現之雙股核酸，且可例如在相關診斷或治療方法中用作治療劑或診斷劑。核酸包含第一股及第二股或由其組成，且第一股通常包含與CFB mRNA充分互補的序列以便介導RNA干擾。
一個態樣係關於一種組合物，該組合物包含如本文所揭示之核酸、及溶劑(較佳水)、及/或遞送媒劑、及/或生理學上可接受之賦形劑、及/或載劑、及/或鹽、及/或稀釋劑、及/或緩衝劑、及/或防腐劑。
一個態樣係關於一種組合物，該組合物包含如本文所揭示之核酸及另一治療劑，該治療劑選自例如寡核苷酸、小分子、單株抗體、多株抗體及肽。
一個態樣係關於一種如本文所揭示之核酸或包含該核酸之組合物，其用作例如相關方法中之治療劑或診斷劑。
一個態樣係關於一種如本文所揭示之核酸或包含該核酸之組合物，其用於預防或治療疾病、病症或症候群。
一個態樣係關於一種如本文所揭示之核酸或包含該核酸之組合物在預防或治療疾病、病症或症候群中之用途。
一個態樣係關於一種如本文所揭示之核酸或包含該核酸之組合物的用途，其用於製備用以預防或治療疾病、病症或症候群之藥劑。
一個態樣係關於一種預防或治療疾病、病症或症候群之方法，其包含向需要治療之個體投與醫藥學上有效劑量或量之如本文所揭示之核酸或包含該核酸之組合物，較佳地其中該核酸或組合物經皮下、靜脈內或經口、經直腸、經肺、肌肉內或腹膜內投與來向個體投與。
本發明係關於一種核酸及其組合物，該核酸為雙股且包含與CFB之表現RNA轉錄物同源的序列。此等核酸、其結合物及包含其之組合物可用於預防及治療多種需要降低CFB基因產物之表現的疾病、病症及症候群。
本發明之第一態樣為較佳在細胞中抑制CFB表現之雙股核酸，其中該核酸包含第一股及第二股，其中該第一股序列之未經修飾之等效物包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表5a中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸。此等核酸尤其具有在與臨床前及臨床研發相關之各種物種中具有活性及/或具有很少相關的脫靶效應的優點。具有很少相關的脫靶效應意謂核酸特異性地抑制預期目標且不顯著抑制其他基因，或僅以治療學上可接受之含量抑制一種或少數其他基因。
例如，第一股序列之未經修飾之等效物可包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表1中所列之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸。
較佳地，第一股序列之未經修飾之等效物包含至少16個、更佳至少17個、又更佳至少18個且最佳所有19個核苷酸之序列，該序列與表5a中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸、較佳相差不超過2個核苷酸、更佳相差不超過1個核苷酸且最佳不相差任何核苷酸。
舉例而言，第一股序列之未經修飾之等效物可包含至少16個、更佳至少17個、又更佳至少18個且最佳所有19個核苷酸之序列，該序列與表1中所列之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸、較佳不超過2個核苷酸、更佳不超過1個核苷酸且最佳不相差任何核苷酸。
較佳地，核酸之第一股序列之未經修飾之等效物由表5a中所示之第一股序列中之一者組成。然而，該序列可藉由不改變核苷酸之屬性的多種核酸修飾來修飾。例如，核酸之主鏈或糖殘基之修飾不改變核苷酸之屬性，因為鹼基本身保持與參考序列中相同。
舉例而言，核酸之第一股序列之未經修飾之等效物可由表1中所示之第一股序列中之一者組成，其視情況藉由該等核酸修飾中之一或多者修飾。
包含根據本文中之參考序列之序列的核酸意謂核酸包含按如參考序列中所定義之次序的連續核苷酸序列。
當在本文中參考包含核苷酸或由核苷酸組成之參考序列時，此參考不限於具有未經修飾之核苷酸的序列。相同參考亦涵蓋相同核苷酸序列，其中一個、若干個(諸如，兩個、三個、四個、五個、六個、七個或更多個，包括所有的)核苷酸藉由修飾，諸如2'-OMe、2'-F、配位體、連接子、3'端或5'端修飾或任何其他修飾來修飾。其亦指其中兩個或更多個核苷酸藉由天然磷酸二酯鍵或藉由任何其他鍵，諸如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯鍵彼此連接的序列。
雙股核酸為一種核酸，其中第一股與第二股在其長度之至少一部分上彼此雜交，且因此能夠在生理條件下，諸如在PBS中在37℃下以各股1 μM之濃度形成雙螺旋區。第一股與第二股較佳能夠彼此雜交，且因此在至少15個核苷酸，較佳16、17、18或19個核苷酸之區域上形成雙螺旋區。此雙螺旋區包含兩股之間的核苷酸鹼基配對，較佳基於沃森-克里克(Watson-Crick)鹼基配對及/或擺動鹼基配對(諸如GU鹼基配對)。雙螺旋區內之兩股之所有核苷酸不必彼此鹼基配對以形成雙螺旋區。兩個股之核苷酸序列之間的某一數目個錯配、缺失或插入為可接受的。第一或第二股之任一端上的懸垂物或雙股核酸之任一端處之未配對核苷酸亦為可能的。雙股核酸較佳為在生理條件下穩定的雙股核酸，且例如在各股濃度為1 μM之PBS中，較佳具有45℃或更高、較佳50℃或更高、且更佳55℃或更高之熔融溫度(Tm)。
在生理條件下穩定的雙股核酸為例如在各股濃度為1 μM之PBS中具有45℃或更高、較佳50℃或更高且更佳55℃或更高之Tm的雙股核酸。
第一股及第二股較佳能夠在i)其長度之至少一部分；較佳其長度之至少15個核苷酸；ii)第一股之整個長度；iii)第二股之整個長度；或iv)第一股與第二股之整個長度上，形成雙螺旋區(亦即彼此互補)。股在某一長度上彼此互補意謂股能夠經由沃森-克里克或擺動鹼基配對在彼長度上彼此鹼基配對。該長度之各核苷酸未必必須能夠在整個給定長度上與另一股中之其對應物鹼基配對，只要可在生理條件下形成穩定雙股核苷酸即可。然而，在某些實施例中，若該長度之各核苷酸可在整個給定長度上與其在另一股中之對應物鹼基配對，則為較佳的。
在siRNA之情況下第一股與目標序列之間或第一股與第二股之間可容忍一定數目之錯配、缺失或插入，且在某些情況下甚至具有增加RNA干擾(例如抑制)活性之潛力。
根據本發明之核酸之抑制活性依賴於在第一股之全部或一部分與目標核酸之一部分之間形成雙螺旋區。與第一股形成雙螺旋區之目標核酸部分(定義為以形成於第一股與目標序列之間的第一鹼基對開始且以形成於第一股與目標序列之間(包括端點)的最後一個鹼基對結束)為目標核酸序列或簡言之為目標序列。形成於第一股與第二股之間的雙螺旋區不必與形成於第一股與目標序列之間的雙螺旋區相同。亦即，第二股可具有不同於目標序列之序列；然而，至少在生理條件下第一股必須能夠與第二股及目標序列兩者形成雙螺旋結構。
第一股與目標序列之間的互補可為完美的(亦即，相比於目標序列，在第一股中無核苷酸錯配或插入或缺失之100%一致性)。
第一股與目標序列之間的互補可能不完美。互補性可為約70%至約100%。更特定言之，互補性可為至少70%、80%、85%、90%或95%及中間值。
目標序列之第一股與互補序列之間的一致性可在約75%至約100%範圍內。更特定言之，互補性可為至少75%、80%、85%、90%或95%及中間值，其限制條件為核酸能夠降低或抑制CFB表現。
在第一股與目標序列之間具有小於100%互補性的核酸可能夠使CFB表現降低至與在第一股與目標序列之間具有完美互補性的核酸相同的含量。替代地，其能夠將CFB表現降低至某一含量，使得為藉由具有完美互補性之核酸達成之降低含量的15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%。
本發明之核酸可為以下核酸，其中： (a)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與表5a之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與表5a之第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸的序列； (c)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與表5a之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過1個核苷酸的序列； (d)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應的序列； (e)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應的序列； (f)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應的序列； (g)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應的序列； (h)    第一股序列之未經修飾之等效物包含表5a之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含對應第二股序列之序列； (i)    第一股序列之未經修飾之等效物由表5a之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物由對應第二股序列之序列組成； (j)    第一股序列之未經修飾之等效物基本上由具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物基本上由具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列組成； (k)    第一股序列之未經修飾之等效物由與來自具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中第一股序列之該未經修飾之等效物進一步由具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成， 且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (l)    第一股序列之未經修飾之等效物由與來自具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中第一股序列之該未經修飾之等效物進一步由具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 其中第一股序列之該未經修飾之等效物由與SEQ ID NO. 758之CFB轉錄物互補的長度為17-25個核苷酸、較佳長度為18-24個核苷酸之連續區域組成；及 視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表5a中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (m)   以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者的第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物存在於單股上，其中第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物能夠彼此雜交，且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸；或 (n)    以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者的第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物係在兩個單獨股上，該等未經修飾之等效物能夠彼此雜交，且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸。
舉例而言，本發明之核酸可為以下核酸，其中： (a)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與表1之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與表1之第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸的序列； (c)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與表1之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過1個核苷酸的序列； (d)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應的序列； (e)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應的序列； (f)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應的序列； (g)    第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應的序列； (h)    第一股序列之未經修飾之等效物包含表1之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含對應第二股序列之序列； (i)    第一股序列之未經修飾之等效物由表1之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物由對應第二股序列之序列組成； (j)    第一股序列之未經修飾之等效物基本上由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物基本上由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列組成； (k)    第一股序列之未經修飾之等效物由與來自具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中第一股序列之該未經修飾之等效物進一步由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成， 且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表1中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (l)    第一股序列之未經修飾之等效物由與來自具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中第一股序列之該未經修飾之等效物進一步由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 其中第一股序列之該未經修飾之等效物由與SEQ ID NO. 758之CFB轉錄物互補的長度為17-25個核苷酸、較佳長度為18-24個核苷酸之連續區域組成；及 視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表1中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (m)   以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者的第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物存在於單股上，其中第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物能夠彼此雜交，且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸；或 (n)    以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者的第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物係在兩個單獨股上，該等未經修飾之等效物能夠彼此雜交，且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸。
視具體情況而定，「對應」第二股意謂第二股存在於與表5a、5b或表5c中之給定第一股相同的雙螺旋體中或列為表1或表2中之對應第二股序列。換言之，第一股及其對應第二股分別表示為在表5a、5b或表5c中具有給定雙螺旋體ID或在表1及表2中如此描述的雙螺旋體之「A股」及「B股」。 表 1 ：
第一股序列 (SEQ ID No.) 對應第二股序列 (SEQ ID No.)
57 58
71 72
295 296
201 202
47 48
319 320
249 250
721 48
295 296
722 202
723 72
724 58
在一個態樣中，若第一股之5'-大部分核苷酸為除A或U外之核苷酸，則此核苷酸經A或U置換。較佳地，若第一股之5'-大部分核苷酸為除U外之核苷酸，則此核苷酸經U置換，且更佳經具有5'乙烯基膦酸酯之U置換。
在可比實驗中，當本發明之核酸不包含參考第一股及/或第二股序列(如例如表1、2、5a、5b或5c中所給出)之完整序列，或一或兩股與對應參考序列相差一、二或三個核苷酸時，此核酸相比於包含完整第一股及第二股參考序列的對應核酸之抑制活性，較佳保留至少30%、更佳至少50%、更佳至少70%、更佳至少80%、甚至更佳至少90%、又更佳至少95%且最佳至少100%的CFB抑制活性。
能夠在生理條件下雜交之核酸係能夠在股中之至少一部分相對核苷酸之間形成鹼基對(較佳沃森-克里克或擺動鹼基對)以便形成至少雙螺旋區的核酸。此類雙股核酸在生理條件下較佳為穩定雙股核酸(例如在PBS中在37℃下以各股1 μM之濃度)，此意謂在此類條件下，兩個股保持彼此雜交。雙股核苷酸之Tm較佳為45℃或更高，較佳50℃或更高，且更佳55℃或更高。
本發明之一個態樣係關於用於抑制CFB表現之核酸，其中核酸包含具有至少15個、較佳至少16個、更佳至少17個、又更佳至少18個且最佳所有核苷酸之第一序列，其與來自表5a或表1之第一股未經修飾之等效序列中之任一者相差不超過3個核苷酸、較佳不超過2個核苷酸、更佳不超過1個核苷酸且最佳不相差任何核苷酸，該第一序列能夠在生理條件下與目標基因轉錄物(諸如mRNA)雜交。較佳地，核酸進一步包含具有至少15個、較佳至少16個、更佳至少17個、又更佳至少18個且最佳所有核苷酸之第二序列，其與來自表5a或表1之對應第二股未經修飾之等效序列中之任一者相差不超過3個核苷酸、較佳不超過2個核苷酸、更佳不超過1個核苷酸且最佳不相差任何核苷酸，該第二序列能夠在生理條件下與第一序列雜交，且較佳地，核酸係能夠經由RNAi路徑抑制CFB表現的siRNA。
一個態樣係關於如表5a、5b或5c中所揭示之任何雙股核酸，其各自可由給定雙螺旋體ID提及，較佳用於抑制CFB之表現，其限制條件為雙股核酸能夠抑制CFB之表現。此等核酸均為siRNA。一些(表5a)由未經修飾之核苷酸序列構成。其他(表5b)包含各種核苷酸及/或主鏈修飾。另一者(表5c)為包含GalNAc部分之結合物，該等GalNAc部分可特異性地靶向具有GalNAc受體之細胞，諸如肝細胞。
一個態樣係關於較佳在細胞中能夠抑制CFB表現之雙股核酸，其例如在相關治療或診斷方法中用作治療劑或診斷劑，其中核酸較佳包含第一股及第二股或由其組成，且較佳地其中第一股包含與CFB mRNA充分互補以介導RNA干擾之序列。
本文所描述之核酸可能夠抑制CFB之表現。抑制可為完全的，亦即剩餘0%表現。CFB表現之抑制可為部分的，亦即其可為在不存在本發明核酸之情況下的CFB表現量的15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更高或中間值之抑制。抑制之含量可藉由比較經處理之樣品與未經處理之樣品或用對照(諸如不靶向CFB之siRNA)處理之樣品來量測。抑制可藉由量測CFB mRNA及/或蛋白質含量或與CFB存在或活性相關之生物標記或指標物的含量來量測。可在可能已在活體外用本文所描述之核酸處理的細胞中量測。替代地或另外，抑制可在細胞(諸如肝細胞)或組織(諸如肝臟組織)或器官(諸如肝臟)中或在體液(諸如血液、血清、淋巴)中或獲自先前用本文中所揭示之核酸治療之個體的任何其他身體部分或流體中量測。較佳地，藉由比較在理想條件(參見適當濃度及條件之實例)下，在用本文揭示之雙股RNA進行24或48小時活體外處理後，表現CFB之細胞中量測的CFB mRNA含量，與在相同條件下用對照雙股RNA進行處理或模擬處理之對照細胞中量測的CFB mRNA含量，來測定CFB表現之抑制。
本發明之一個態樣係關於一種核酸，其中第一股及第二股存在於環繞之核酸之單股上，使得第一股及第二股能夠彼此雜交且由此與雙螺旋區形成雙股核酸。
較佳地，核酸之第一股及第二股為單獨股。兩個單獨股之長度較佳各自為17-25個核苷酸，長度更佳為18-25個核苷酸。兩股可具有相同或不同長度。第一股之長度可為17-25個核苷酸，較佳其長度可為18-24個核苷酸，其長度可為18、19、20、21、22、23或24個核苷酸。最佳地，第一股之長度為19個核苷酸。第二股之長度可獨立地為17-25個核苷酸，較佳地，其長度可為18-24個核苷酸，其長度可為18、19、20、21、22、23或24個核苷酸。更佳地，第二股之長度為18或19或20個核苷酸，且最佳地，其長度為19個核苷酸。
較佳地，核酸之第一股及第二股形成長度為17-25個核苷酸之雙螺旋區。更佳地，雙螺旋區之長度為18-24個核苷酸。雙螺旋區之長度可為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸。在最佳實施例中，雙螺旋區之長度為18或19個核苷酸。雙螺旋區在本文中定義為且包括與第二股之核苷酸成鹼基對的第一股之5'-大部分核苷酸至與第二股之核苷酸成鹼基對的第一股之3'-大部分核苷酸的區域。雙螺旋區可包含未與另一股中之核苷酸鹼基配對的任一或兩股中之核苷酸。其可在第一股及/或第二股上包含一個、兩個、三個或四個此類核苷酸。然而，較佳地，雙螺旋區由17-25個連續核苷酸鹼基對組成。換言之，其在兩股上較佳包含17-25個連續核苷酸，所有鹼基與另一股中之核苷酸配對。更佳地，雙螺旋區由18或19個，最佳18個連續核苷酸鹼基對組成。
在本文所揭示之各實施例中，核酸可在兩端處鈍端；在一端處具有懸垂物且在另一端處具有鈍端；或在兩端處具有懸垂物。
核酸可在一端處具有懸垂物且在另一端處具有鈍端。核酸可在兩端處具有懸垂物。核酸可在兩端處為鈍端。核酸可在第一股之5'端及第二股之3'端或在第一股之3'端及第二股之5'端處為鈍端。
核酸可在3'端或5'端處包含懸垂物。核酸可在第一股上具有3'懸垂物。核酸可在第二股上具有3'懸垂物。核酸可在第一股上具有5'懸垂物。核酸可在第二股上具有5'懸垂物。核酸可在第一股之5'端及3'端處具有懸垂物。核酸可在第二股之5'端及3'端處具有懸垂物。核酸可在第一股上具有5'懸垂物且在第二股上具有3'懸垂物。核酸可在第一股上具有3'懸垂物且在第二股上具有5'懸垂物。核酸可在第一股上具有3'懸垂物且在第二股上具有3'懸垂物。核酸可在第一股上具有5'懸垂物且在第二股上具有5'懸垂物。
第二股或第一股之3'端或5'端處之懸垂物可由長度為1、2、3、4及5個核苷酸組成。視情況，懸垂物可由1或2個核苷酸組成，其可經修飾或可不經修飾。
在一個實施例中，第一股之5'端係一個、兩個或三個核苷酸，較佳一個核苷酸之單股懸垂物。
較佳地，核酸為siRNA。siRNA為能夠經由RNA干擾(RNAi)路徑抑制目標基因表現之短干擾或短緘默RNA。抑制經由轉錄後目標基因之mRNA轉錄物之靶向降解發生。siRNA形成RISC複合體之一部分。RISC複合體藉由第一(反義)股與目標序列之序列互補而特異性靶向目標RNA。
較佳地，核酸介導RNA干擾(RNAi)。較佳地，核酸以至少50%抑制、更佳至少70%、更佳至少80%、甚至更佳至少90%、又更佳至少95%且最佳100%抑制之功效介導RNA干擾。在可比實驗中，抑制功效較佳藉由比較用CFB特異性siRNA處理之細胞，諸如肝細胞中之CFB mRNA含量，與用對照處理之細胞中之CFB mRNA含量來量測。對照可為用靶向siRNA或不靶向siRNA之非CFB處理。核酸或至少核酸之第一股因此較佳能夠併入至RISC複合體中。因此，核酸或至少核酸之第一股因此能夠將RISC複合體引導至特定目標RNA，核酸或至少核酸之第一股與該特定目標RNA至少部分互補。RISC複合體隨後特異性裂解此目標RNA且因此導致抑制RNA來源基因的表現。
核酸修飾本文所論述之核酸包括未經修飾之RNA以及已經修飾例如以改良功效或穩定性之RNA。未經修飾之RNA係指核酸之組分(亦即糖、鹼基及磷酸酯部分)與自然界中存在之組分(例如人類體內天然存在之組分)相同或基本上相同的分子。如本文所用，術語「經修飾之核苷酸」係指其中核苷酸之組分中之一或多者(亦即糖、鹼基及磷酸酯部分)不同於自然界中存在之核苷酸的核苷酸。在某些情況下，術語「經修飾之核苷酸」亦指作為術語嚴格意義上之核苷酸的分子，因為其缺乏或取代核苷酸之必要組分(諸如糖、鹼基或磷酸酯部分)。包含此類經修飾之核苷酸的核酸仍應理解為核酸，即使核酸之核苷酸中之一或多者已經經修飾之核苷酸置換，該經修飾之核苷酸缺少或具有核苷酸之必要組分之取代。
本發明之核酸之修飾一般提供一種克服潛在限制之強力工具，該等可能限制包括但不限於天然RNA分子固有之活體外及活體內穩定性及生物可用性。根據本發明之核酸可藉由化學修飾來修飾。經修飾之核酸亦可最小化在人體內誘導干擾素活性之可能性。修飾可進一步增強核酸對目標細胞之功能性遞送。本發明之經修飾之核酸可包含第一股或第二股中之任一者或兩者的一或多種經化學修飾之核糖核苷酸。核糖核苷酸可包含鹼基、糖或磷酸酯部分之化學修飾。核糖核酸可藉由用核酸或鹼基之類似物取代或插入來修飾。
在本發明之說明書通篇中，「相同或共同修飾」意謂對任何核苷酸之相同修飾，其為經諸如甲基(2'-OMe)或氟基(2'-F)之基團修飾的A、G、C或U。舉例而言，2'-F-dU、2'-F-dA、2'-F-dC、2'-F-dG皆被視為與2'-OMe-rU、2'-OMe-rA；2'-OMe-rC；2'-OMe-rG經相同或共同修飾。相比之下，2'-F修飾為相比於2'-OMe修飾不同的修飾。
較佳地，核酸之第一及/或第二股之至少一個核苷酸為經修飾之核苷酸，較佳為非天然存在之核苷酸，諸如較佳為2'-F修飾之核苷酸。
經修飾之核苷酸可為具有糖基團修飾之核苷酸。2'羥基(OH)可經多個不同「氧基」或「去氧基」取代基修飾或置換。
「氧基」-2'羥基修飾之實例包括烷氧基或芳氧基(OR，例如R═H、烷基(諸如甲基)、環烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或糖)；聚乙二醇(PEG)、O(CH 2CH 2O) nCH 2CH 2OR；「鎖定」核酸(LNA)，其中2'羥基例如藉由亞甲基橋與相同核糖糖之4'碳連接；O-胺(胺=NH 2、烷基胺基、二烷基胺基、雜環基、芳基胺基、二芳基胺基、雜芳基胺基或二雜芳基胺基、乙二胺或聚胺基)及胺基烷氧基、O(CH 2) n胺(例如，胺=NH 2、烷基胺基、二烷基胺基、雜環基、芳基胺基、二芳基胺基、雜芳基胺基或二雜芳基胺基、乙二胺或聚胺基)。
「去氧基」修飾包括氫、鹵素、胺基(例如，NH 2、烷基胺基、二烷基胺基、雜環基、芳基胺基、二芳基胺基、雜芳基胺基、二雜芳基胺基或胺基酸)；NH(CH 2CH 2NH) nCH 2CH 2-胺(胺=NH 2、烷基胺基、二烷基胺基、雜環基、芳基胺基、二芳基胺基、雜芳基胺基或二雜芳基胺基)、-NHC(O)R (R=烷基、環烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或糖)、氰基；巰基；烷基-硫基-烷基；硫代烷氧基；及烷基、環烷基、芳基、烯基及炔基，其可視情況經例如胺基官能基取代。某些實施例之其他取代基包括2'-甲氧基乙基、2'-OCH 3、2'-O-烯丙基、2'-C-烯丙基及2'-氟。
糖基亦可含有一或多個碳，其具有與核糖中之對應碳相反的立體化學構型。因此，經修飾之核苷酸可含有糖，諸如阿拉伯糖。
經修飾之核苷酸亦可包括「無鹼基」糖，其在C-1'處缺乏核鹼基。此等無鹼基糖可進一步含有在組成性糖原子中之一或多者處的修飾。
2'修飾可與一或多個磷酸酯核苷間連接子修飾(例如，硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯)組合使用。
本發明之核酸之一或多個核苷酸可經修飾。核酸可包含至少一個經修飾之核苷酸。經修飾之核苷酸可在第一股中。經修飾之核苷酸可在第二股中。經修飾之核苷酸可在雙螺旋區中。經修飾之核苷酸可在雙螺旋區外部，亦即，在單股區中。經修飾之核苷酸可在第一股上且可在雙螺旋區外部。經修飾之核苷酸可在第二股上且可在雙螺旋區外部。第一股之3'-末端核苷酸可為經修飾之核苷酸。第二股之3'-末端核苷酸可為經修飾之核苷酸。第一股之5'-末端核苷酸可為經修飾之核苷酸。第二股之5'-末端核苷酸可為經修飾之核苷酸。
本發明之核酸可具有1個經修飾之核苷酸或本發明之核酸可具有約2-4個經修飾之核苷酸，或核酸可具有約4-6個經修飾之核苷酸、約6-8個經修飾之核苷酸、約8-10個經修飾之核苷酸、約10-12個經修飾之核苷酸、約12-14個經修飾之核苷酸、約14-16個經修飾之核苷酸、約16-18個經修飾之核苷酸、約18-20經修飾之核苷酸、約20-22經修飾之核苷酸、約22-24個經修飾之核苷酸、約24-26個經修飾之核苷酸或約26-28個經修飾之核苷酸。在各種情況下，包含該等經修飾之核苷酸的核酸相比於相同但不含該等經修飾之核苷酸的核酸保留其活性之至少50%，或反之亦然。核酸相比於相同但不含該等經修飾之核苷酸的核酸可保留其活性之55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%及中間值，或可具有不含該等經修飾之核苷酸的相同核酸的超過100%活性。
經修飾之核苷酸可為嘌呤或嘧啶。至少一半嘌呤可經修飾。至少一半嘧啶可經修飾。所有嘌呤可經修飾。所有嘧啶可經修飾。經修飾之核苷酸可選自由以下組成之群：3'末端去氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基(2'-OMe)修飾之核苷酸、2'修飾之核苷酸、2'去氧修飾之核苷酸、鎖定核苷酸、無鹼基核苷酸、2'胺基修飾之核苷酸、2'烷基修飾之核苷酸、2'-去氧-2'-氟(2'-F)修飾之核苷酸、N-𠰌啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含核苷酸之非天然鹼基、包含5'-硫代磷酸基團之核苷酸，包含5'磷酸酯或5'磷酸酯模擬物之核苷酸及連接至膽固醇衍生物或十二烷酸雙癸醯胺基團之末端核苷酸。
核酸可包含包含有修飾鹼基之核苷酸，其中該鹼基選自2-胺基腺苷、2,6-二胺基嘌呤、肌苷、吡啶-4-酮、吡啶-2-酮、苯基、假尿嘧啶、2,4,6-三甲氧基苯、3-甲基尿嘧啶、二氫尿苷、萘基、胺基苯基、5-烷基胞苷(例如，5-甲基胞苷)、5-烷基尿苷(例如，核糖胸苷)、5-鹵代尿苷(例如，5-溴尿苷)、6-氮雜嘧啶、6-烷基嘧啶(例如，6-甲基尿苷)、丙炔、Q核苷(quesosine)、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、懷俄丁苷(wybutosine)、懷丁氧苷(wybutoxosine)、4-乙醯基胞苷、5-(羧基羥甲基)尿苷、5'-羧甲基胺基甲基-2-硫代尿苷、5-羧甲基胺甲基尿苷、β-D-半乳糖苷基Q核苷、1-甲基腺苷、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鳥苷、3-甲基胞苷、2-甲基腺苷、2-甲基鳥苷、N6-甲基腺苷、7-甲基鳥苷、5-甲氧基胺基甲基-2-硫代尿苷、5-甲基胺基甲基尿苷、5-甲基羰基甲基尿苷、5-甲基氧基尿苷、5-甲基-2-硫代尿苷、2-甲基硫基-N6-異戊烯基腺苷、β-D-甘露糖苷基Q核苷、尿苷-5-氧乙酸及2-硫代胞苷。
本文中所描述且在核酸內出現之許多修飾將在多核苷酸分子內重複，諸如鹼基或磷酸酯部分或磷酸酯部分之非連接O之修飾。在一些情況下，修飾會發生於聚核苷酸中之所有可能位置/核苷酸處，但在許多情況下不會發生。修飾可僅出現在3'或5'末端位置，可僅出現在末端區域，諸如末端核苷酸上的位置或股之最後2、3、4、5或10個核苷酸中。修飾可出現在雙股區、單股區或其兩者中。修飾可僅在本發明之核酸之雙股區中進行，或可僅在本發明之核酸之單股區中進行。非連接O位置處之硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修飾可僅出現在一個或兩個末端處，可僅出現在末端區域中，例如在末端核苷酸上的位置或在股之最後2、3、4或5個核苷酸中，或可出現在雙螺旋體中及/或單股區中，尤其在末端。5'端及/或3'端可為磷酸化的。
本發明之核酸之穩定性可藉由在懸垂物中包括特定鹼基或藉由在單股懸垂物中包括經修飾之核苷酸，例如在5'或3'懸垂物中或在兩者中增加。嘌呤核苷酸可包括於懸垂物中。可修飾3'或5'懸垂物中之所有或一些鹼基。修飾可包括使用在核糖糖之2' OH基團的修飾，使用去氧核糖核苷酸代替核糖核苷酸，以及在磷酸酯基中之修飾，諸如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修飾。懸垂物無需與目標序列同源。
核酸酶可水解核酸磷酸二酯鍵。然而，對核酸之化學修飾可賦予改良之特性，且可使寡核苷酸對核酸酶更穩定。
如本文所用，經修飾之核酸可包括以下中之一或多者： (i)    改變，例如置換非連接磷酸酯氧中之一或兩者及/或連接磷酸酯氧中之一或多者(即使在本發明之核酸的5'及3'末端亦稱為連接)； (ii)   改變，例如，置換核糖糖之組分，例如，核糖糖上的2'羥基； (iii)  用「去磷」連接子置換磷酸酯部分； (iv)   修飾或置換天然存在之鹼基； (v)    置換或修飾核糖-磷酸酯主鏈；及 (vi)   第一股及/或第二股之3'端或5'端的修飾，例如，末端磷酸酯基之移除、修飾或置換或部分(例如經螢光標記之部分)與一或兩股之3'或5'端的結合。
術語「置換」、「修飾」及「改變」指示與天然存在之分子不同。
特定修飾更詳細地論述於下文中。
核酸可在第二及/或第一股上包含一或多個經修飾之核苷酸。交替核苷酸可經修飾以形成經修飾之核苷酸。
如本文所述，「交替」意謂以規則方式一個接一個地出現。換言之，交替意謂依次重複出現。例如，若一個核苷酸經修飾，則下一連續核苷酸未經修飾，且以下連續核苷酸經修飾等。可用第一修飾來修飾一個核苷酸，可用第二修飾來修飾下一個連續核苷酸，且用第一修飾來修飾後面的連續核苷酸，諸如此類，其中第一及第二修飾係不同的。
本發明之一些代表性經修飾核酸序列展示於實例中。此等實例意欲為代表性的且不為限制性的。
在核酸之一個態樣中，第一股之至少核苷酸2及14較佳藉由第一共同修飾來修飾，該等核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。第一修飾較佳地為2'-F。
在一個態樣中，第一股之至少一個、若干個或較佳所有偶數核苷酸較佳藉由第一共同修飾來修飾，該等核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。第一修飾較佳地為2'-F。
在一個態樣中，第一股之至少一個、若干個或較佳所有奇數編號的核苷酸經修飾，該等核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。較佳地，其藉由第二修飾來修飾。若核酸亦包含第一修飾，例如第一股之核苷酸2及14或所有偶數核苷酸之第一修飾，則此第二修飾較佳不同於第一修飾。第一修飾較佳為與2'-OH基團、或鎖定核酸(LNA)、或解鎖核酸(UNA)或2'-氟阿拉伯核酸(FANA)修飾具有相同大小或體積更小的任何2'核糖修飾。與2'-OH基團大小相同或體積更小之2'核糖修飾例如可為2'-F、2'-H、2'-鹵基或2'-NH 2。第二修飾較佳為體積大於2'-OH基團之任何2'核糖修飾。體積大於2'-OH基團之2'核糖修飾例如可為2'-OMe、2'-O-MOE (2'-O-甲氧基乙基)、2'-O-烯丙基或2'-O-烷基，其限制條件為在類似條件下，該核酸能夠在不進行修飾之情況下將目標基因的表現降低至至少與不具有修飾之相同核酸至少相同的程度。第一修飾較佳為2'-F及/或第二修飾較佳為2'-OMe。
在本發明之上下文中，取代基(諸如2'核糖修飾)之大小或體積較佳量測為凡得瓦爾體積(van der Waals volume)形式。
在一個態樣中，在與第一股之偶數核苷酸對應的位置中之第二股之至少一個、若干個或較佳所有核苷酸經修飾，較佳藉由第三修飾來修飾。較佳地，在相同核酸中，第一股之核苷酸2及14或所有偶數核苷酸用第一修飾來修飾。另外或替代地，第一股之奇數核苷酸經第二修飾來修飾。較佳地，第三修飾不同於第一修飾及/或第三修飾與第二修飾相同。第一修飾較佳為與2'-OH基團、或鎖定核酸(LNA)、或解鎖核酸(UNA)或2'-氟阿拉伯核酸(FANA)修飾具有相同大小或體積更小的任何2'核糖修飾。與2'-OH基團大小相同或體積更小之2'核糖修飾例如可為2'-F、2'-H、2'-鹵基或2'-NH 2。第二及/或第三修飾較佳為體積大於2'-OH基團之任何2'核糖修飾。體積大於2'-OH基團之2'核糖修飾例如可為2'-OMe、2'-O-MOE (2'-O-甲氧基乙基)、2'-O-烯丙基或2'-O-烷基，其限制條件為在類似條件下，該核酸能夠在不進行修飾之情況下將目標基因的表現降低至至少與不具有修飾之相同核酸至少相同的程度。第一修飾較佳為2'-F及/或第二及/或第三修飾較佳為2'-OMe。第一股上之核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。
位於例如與第一股之偶數核苷酸對應的位置中的第二股之核苷酸為與第一股之偶數核苷酸鹼基配對的第二股之核苷酸。
在一個態樣中，在與第一股之奇數核苷酸對應的位置中之第二股之至少一個、若干個或較佳所有核苷酸經修飾，較佳藉由第四修飾來修飾。較佳地，在相同核酸中，第一股之核苷酸2及14或所有偶數核苷酸用第一修飾來修飾。另外或替代地，第一股之奇數核苷酸經第二修飾來修飾。另外或替代地，與第一股之偶數核苷酸對應之位置中的第二股之所有核苷酸均經第三修飾來修飾。第四修飾較佳不同於第二修飾且較佳地不同於第三修飾，且第四修飾較佳與第一修飾相同。第一及/或第四修飾較佳為與2'-OH基團、或鎖定核酸(LNA)、或解鎖核酸(UNA)或2'-氟阿拉伯核酸(FANA)修飾具有相同大小或體積更小的任何2'核糖修飾。與2'-OH基團大小相同或體積更小之2'核糖修飾例如可為2'-F、2'-H、2'-鹵基或2'-NH 2。第二及/或第三修飾較佳為體積大於2'-OH基團之任何2'核糖修飾。體積大於2'-OH基團之2'核糖修飾例如可為2'-OMe、2'-O-MOE (2'-O-甲氧基乙基)、2'-O-烯丙基或2'-O-烷基，其限制條件為在類似條件下，該核酸能夠在不進行修飾之情況下將目標基因的表現降低至至少與不具有修飾之相同核酸至少相同的程度。第一及/或第四修飾較佳為2'-OMe修飾及/或第二及/或第三修飾較佳為2'-F修飾。第一股上之核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。
在核酸之一個態樣中，與第一股之核苷酸11或核苷酸13或核苷酸11及13或核苷酸11-13對應之位置中的第二股之核苷酸/核苷酸藉由第四修飾來修飾。較佳地，除與第一股之核苷酸11或核苷酸13或核苷酸11及13或核苷酸11-13對應之位置中的核苷酸/核苷酸外的第二股之所有核苷酸藉由第三修飾來修飾。較佳地，在相同核酸中，第一股之核苷酸2及14或所有偶數核苷酸用第一修飾來修飾。另外或替代地，第一股之奇數核苷酸經第二修飾來修飾。第四修飾較佳不同於第二修飾且較佳地不同於第三修飾，且第四修飾較佳與第一修飾相同。第一及/或第四修飾較佳為與2'-OH基團、或鎖定核酸(LNA)、或解鎖核酸(UNA)或2'-氟阿拉伯核酸(FANA)修飾具有相同大小或體積更小的任何2'核糖修飾。與2'-OH基團大小相同或體積更小之2'核糖修飾例如可為2'-F、2'-H、2'-鹵基或2'-NH 2。第二及/或第三修飾較佳為體積大於2'-OH基團之任何2'核糖修飾。體積大於2'-OH基團之2'核糖修飾例如可為2'-OMe、2'-O-MOE (2'-O-甲氧基乙基)、2'-O-烯丙基或2'-O-烷基，其限制條件為在類似條件下，該核酸能夠在不進行修飾之情況下將目標基因的表現降低至至少與不具有修飾之相同核酸至少相同的程度。第一及/或第四修飾較佳為2'-OMe修飾及/或第二及/或第三修飾較佳為2'-F修飾。第一股上之核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。
在核酸之一個態樣中，第一股之所有偶數核苷酸藉由第一修飾來修飾，第一股之所有奇數核苷酸藉由第二修飾來修飾，在與第一股之偶數核苷酸對應的位置中之第二股之所有核苷酸藉由第三修飾來修飾，在與第一股之奇數核苷酸對應的位置中之第二股之所有核苷酸藉由第四修飾來修飾，其中第一及/或第四修飾為2'-F及/或第二及/或第三修飾為2'-OMe。
在核酸之一個態樣中，第一股之所有偶數核苷酸藉由第一修飾來修飾，第一股之所有奇數核苷酸藉由第二修飾來修飾，在與第一股之核苷酸11-13對應之位置中的第二股之所有核苷酸藉由第四修飾來修飾，除與第一股之核苷酸11-13對應之核苷酸外的第二股之所有核苷酸藉由第三修飾來修飾，其中第一及第四修飾為2'-F及第二及第三修飾為2'-OMe。在此態樣之一個實施例中，第二股之3'末端核苷酸為反向RNA核苷酸(亦即，核苷酸經由其3'碳而非經由通常情況下通過其5'碳連接到股的3'端)。當第二股之3'末端核苷酸為反向RNA核苷酸時，反向RNA核苷酸較佳為未經修飾之核苷酸，意義在於其不包含相比於天然核苷酸對應物之任何修飾。特定言之，反向RNA核苷酸較佳為2'-OH核苷酸。較佳地，在此態樣中，當第二股之3'末端核苷酸為反向RNA核苷酸時，核酸至少在包含第一股之5'端的末端處為鈍端。
本發明之一個態樣為如本文中所揭示之用於抑制較佳細胞中之CFB基因之表現的核酸，其中該第一股包括複數個位置處之經修飾之核苷酸或未經修飾之核苷酸以便於藉由RISC處理核酸。
在一個態樣中，「便於藉由RISC處理」意謂核酸可由RISC處理，例如，存在之任何修飾將准許核酸由RISC處理，且較佳地，將有益於由RISC處理，適當地使得可發生siRNA活性。
一種如本文所揭示之核酸，其中第一股之5'端的位置2及14處的核苷酸未經2'OMe修飾，且與第一股之位置11或位置13或位置11及13或位置11、12及13對應的第二股上之核苷酸/核苷酸未經2'-OMe修飾(換言之，其未經修飾或經除2'-OMe以外的修飾來修飾)。
在一個態樣中，第二股上與第一股之位置13對應的核苷酸為與第一股之位置13 (自5'端)形成鹼基對的核苷酸。
在一個態樣中，第二股上與第一股之位置11對應的核苷酸為與第一股之位置11 (自5'端)形成鹼基對的核苷酸。
在一個態樣中，第二股上與第一股之位置12對應的核苷酸為與第一股之位置12 (自5'端)形成鹼基對的核苷酸。
例如，在雙股及鈍端之19-mer核酸中，第一股之位置13 (自5'端)與第二股之位置7 (自5'端)配對。第一股之位置11 (自5'端)將與第二股之位置9 (自5'端)配對。此命名法可應用於第二股之其他位置。
在一個態樣中，在部分互補之第一股及第二股的情況下，若第二股上之核苷酸「對應於」第一股上之位置為存在錯配的位置，則該位置不一定形成鹼基對，但命名法原理仍適用。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中第一股之5'端的位置2及14處的核苷酸未經2'-OMe修飾，且與第一股之位置11或13或11及13或11-13對應之第二股上之核苷酸經2'-F修飾。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中第一股之5'端的位置2及14處的核苷酸經2'-F修飾，且與第一股之位置11或13或11及13或11-13對應之第二股上之核苷酸經2'-OMe修飾。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中第一股之5'端的位置2及14處的核苷酸2'-F修飾，且與第一股之位置11或13或11及13或11-13對應之第二股上之核苷酸經2'-F修飾。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中超過50%之第一及/或第二股之核苷酸包含2'-OMe修飾，諸如超過55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%或更高之第一及/或第二股包含2'-OMe修飾，較佳量測為第一及第二股兩者之總核苷酸之百分比形式。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中第一及/或第二股之超過50%的核苷酸包含天然存在之RNA修飾，諸如其中超過55%、60%、65%、70%、75%、80%或85%或更高之第一及/或第二股包含此類修飾，較佳量測為第一及第二股兩者之總核苷酸的百分比形式。適合的天然存在之修飾包括以及2'-OMe，其他2'糖修飾，尤其2'-H修飾，產生DNA核苷酸。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其包含不超過20%，諸如不超過15%，諸如不超過10%的在第一及/或第二股上具有不為2'-OMe修飾之2'修飾的核苷酸，較佳呈第一及第二股兩者之總核苷酸之百分比形式。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中第一及/或第二股中具有不為2'-OMe修飾的2'-修飾之核苷酸之數目不超過7個、更佳不超過5個且最佳不超過3個。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其包含在第一及/或第二股上不超過20% (諸如不超過15%或不超過10%) 2'-F修飾，較佳呈兩股之總核苷酸之百分比形式。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中第一股及/或第二股中具有2'-F修飾之核苷酸之數目不超過7個、更佳不超過5個且最佳不超過3個。
一個態樣為如本文所揭示之核酸，其中除第一股之5'端的位置2及14及對應於第一股之位置11或13或11及13或11-13之第二股上的核苷酸以外，其中所有核苷酸經2'-OMe修飾。較佳地，未經2'-OMe修飾之核苷酸在2'位置處經氟修飾(2'-F修飾)。
在某些實施例中，較佳態樣為如本文所揭示之核酸，其中核酸之所有核苷酸在糖之2'位置處經修飾。較佳地，此等核苷酸經2'-F修飾來修飾，其中修飾不為2'-OMe修飾。
在一個態樣中，核酸在第一股上經修飾而具有交替的2'-OMe修飾及2-F修飾，且位置2及14 (始於5'端)經2'-F修飾。較佳地，第二股在與第一股之位置11、或13、或11及13、或11-13對應的第二股上之核苷酸處經2'-F修飾來修飾。較佳地，第二股在互補(雙股)區之第一位置開始自3'端起計數的位置11-13處經2'-F修飾來修飾，且其餘修飾為天然存在之修飾，較佳為2'-OMe。互補區至少在此情況下開始於第二股之在第一股中具有對應核苷酸之第一位置，不管兩個核苷酸是否能夠彼此鹼基配對。
在核酸之一個態樣中，第一股及第二股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。
如本文所述，術語「奇數編號」意謂不可被二除盡的數字。奇數之實例為1、3、5、7、9、11等。如本文所述，術語「偶數編號」意謂可被二整除的數字。偶數之實例為2、4、6、8、10、12、14等。
除非另外特定說明，否則在本文中，第一股之核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續地編號。第二股之核苷酸以第二股之3'端處之核苷酸編號1開始連續編號。
第一及/或第二股上之一或多個核苷酸可經修飾以形成經修飾之核苷酸。第一股之奇數核苷酸中之一或多者可經修飾。第一股之偶數核苷酸中之一或多者可藉由至少第二修飾來修飾，其中至少第二修飾不同於一或多種奇數核苷酸上之修飾。一或多個經修飾之偶數編號的核苷酸中之至少一者可與一或多個經修飾之奇數編號的核苷酸中之至少一者相鄰。
第一股中之複數個奇數核苷酸可在本發明之核酸中修飾。第一股中之複數個偶數核苷酸可藉由第二修飾來修飾。第一股可包含相鄰核苷酸，其藉由共同修飾來修飾。第一股亦可包含藉由第二不同修飾來修飾之相鄰核苷酸(亦即，第一股可包含彼此相鄰且藉由第一修飾來修飾之核苷酸以及與彼此相鄰且藉由不同於第一修飾之第二修飾來修飾之其他核苷酸)。
第二股之奇數核苷酸中的一或多者(其中該等核苷酸以第二股之3'端處之核苷酸編號1開始連續編號)可藉由不同於第一股上之奇數核苷酸之修飾的修飾來進行修飾(其中該等核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號)及/或第二股之偶數核苷酸中的一或多者可藉由與第一股之奇數核苷酸之相同的修飾來進行修飾。第二股之一或多個經修飾之偶數編號的核苷酸中之至少一者可與一或多個經修飾之奇數編號的核苷酸相鄰。第二股之複數個奇數核苷酸可藉由共同修飾來修飾及/或複數個偶數核苷酸可藉由存在於第一股奇數核苷酸上的相同修飾來修飾。第二股上之複數個奇數核苷酸可藉由不同於第一股奇數核苷酸之修飾的修飾來進行修飾。
第二股可包含藉由共同修飾來修飾之相鄰核苷酸，該共同修飾可為不同於第一股之奇數核苷酸之修飾的修飾。
在本發明之核酸之一些態樣中，第一股中之奇數核苷酸中之各者及第二股中之偶數核苷酸中之各者可經共同修飾來進行修飾，且偶數核苷酸中之各者可在第一股中經不同修飾來進行修飾，且奇數核苷酸中之各者可在第二股中經不同修飾來進行修飾。
本發明之核酸可使第一股之經修飾之核苷酸相對於第二股之未經修飾或不同修飾之核苷酸移位至少一個核苷酸。
在某些態樣中，奇數核苷酸中之一或多者或各者可在第一股中經修飾，且偶數核苷酸中之一或多者或各者可在第二股中經修飾。任一股或兩股上交替核苷酸中之一或多者或各者可藉由第二修飾來修飾。偶數核苷酸中之一或多者或各者可在第一股中經修飾，且偶數核苷酸中之一或多者或各者可在第二股中經修飾。任一股或兩股上交替核苷酸中之一或多者或各者可藉由第二修飾來修飾。奇數核苷酸中之一或多者或各者可在第一股中經修飾，且奇數核苷酸中之一或多者可在第二股中藉由共同修飾來修飾。任一股或兩股上交替核苷酸中之一或多者或各者可藉由第二修飾來修飾。偶數核苷酸中之一或多者或各者可在第一股中經修飾，且奇數核苷酸中之一或多者可在第二股中藉由共同修飾來修飾。任一股或兩股上交替核苷酸中之一或多者或各者可藉由第二修飾來修飾。
本發明之核酸可包含單股或雙股構築體，該構築體包含在一股或兩股中之至少兩個交替修飾區。此等交替區可包含至多約12個核苷酸，但較佳包含約3至約10個核苷酸。交替核苷酸之區域可位於本發明之核酸之一股或兩股的末端。核酸可在末端中之各者(3'及5')處包含4至約10個核苷酸之交替核苷酸，且此等區域可由約5至約12個連續未經修飾或不同或共同修飾之核苷酸間隔開。
第一股之奇數核苷酸可經修飾且偶數核苷酸可經第二修飾來修飾。第二股可包含經共同修飾來修飾之相鄰核苷酸，該共同修飾可與第一股之奇數核苷酸的修飾相同。第二股之一或多個核苷酸亦可用第二修飾來修飾。具有第二修飾之一或多個核苷酸可彼此鄰接且與具有與第一股之奇數核苷酸的修飾相同之修飾的核苷酸相鄰。第一股亦可在3'端及5'端處之兩個核苷酸之間包含硫代磷酸酯鍵或在3'端處之兩個核苷酸之間包含二硫代磷酸酯鍵。第二股可在5'端之兩個核苷酸之間包含硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯鍵。第二股亦可在5'端與配位體結合。
本發明之核酸可包含第一股，該第一股包含經共同修飾來修飾之相鄰核苷酸。一或多個此類核苷酸可與一或多個可經第二修飾來修飾之核苷酸相鄰。具有第二修飾之一或多個核苷酸可為相鄰的。第二股可包含經共同修飾來修飾之相鄰核苷酸，該共同修飾可與第一股之一或多個核苷酸之修飾中之一者相同。第二股之一或多個核苷酸亦可用第二修飾來修飾。具有第二修飾之一或多個核苷酸可為相鄰的。第一股亦可在3'端及5'端處之兩個核苷酸之間包含硫代磷酸酯鍵或在3'端處之兩個核苷酸之間包含二硫代磷酸酯鍵。第二股可在3'端處之兩個核苷酸之間包含硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯鍵。第二股亦可在5'端與配位體結合。
第一股上自5'至3'及第二股上自3'至5'編號之核苷酸1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23及25可藉由第一股上之修飾來修飾。編號2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22及24之核苷酸可藉由第一股上之第二修飾來進行修飾。編號1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23之核苷酸可藉由第二股上之修飾來進行修飾。編號2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22及24之核苷酸可藉由第二股上之第二修飾來進行修飾。為了本發明之核酸，核苷酸在第一股上之自5'至3'編號且在第二股上之自3'至5'編號。
編號2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22及24之核苷酸可藉由第一股上之修飾來進行修飾。編號1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23之核苷酸可藉由第一股上之第二修飾來進行修飾。編號1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23之核苷酸可藉由第二股上之修飾來進行修飾。編號2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22及24之核苷酸可藉由第二股上之第二修飾來進行修飾。
明顯地，若第一及/或第二股長度比25個核苷酸短，諸如長度為19個核苷酸，則不存在待修飾之編號為20、21、22、23、24及25的核苷酸。因此，熟習此項技術者理解以上描述適用於較短股。
第一股上之一或多個經修飾之核苷酸可與第二股上具有共同修飾之經修飾之核苷酸配對。第一股上之一或多個經修飾之核苷酸可與第二股上具有不同修飾之經修飾之核苷酸配對。第一股上之一或多個經修飾之核苷酸可與第二股上之未經修飾之核苷酸配對。第二股上之一或多個經修飾之核苷酸可與第一股上之未經修飾之核苷酸配對。換言之，交替核苷酸可在兩股上比對，諸如，第二股之交替區中之所有修飾與第一股中之相同修飾配對，或可替代地修飾可偏移一個核苷酸，其中一股之交替區中的共同修飾與另一股中之不同修飾(亦即，第二或進一步修飾)配對。另一選項為在各股中具有不同修飾。
第一股上之修飾可相對於第二股上之經修飾之核苷酸移位一個核苷酸，使得共同經修飾之核苷酸不彼此配對。
該修飾及/或該等修飾可各自且單獨地選自由以下組成之群：3'末端去氧胸腺嘧啶、2'-OMe、2'去氧修飾、2'胺基修飾、2'烷基修飾、N-𠰌啉基修飾、胺基磷酸酯修飾、5'-硫代磷酸酯基修飾、5'磷酸酯或5'磷酸酯模擬物修飾及膽固醇基衍生物或十二烷酸雙癸醯胺基團修飾及/或可為任一鎖定核苷酸、無鹼基核苷酸或包含非天然鹼基之核苷酸的經修飾之核苷酸。
至少一個修飾可為2'-OMe及/或至少一個修飾可為2'-F。如本文所描述之進一步修飾可存在於第一股及/或第二股上。
本發明之核酸可在股末端中之一或多者處包含反向RNA核苷酸。此類反向核苷酸向核酸提供穩定性。較佳地，核酸在第一及/或第二股之3'端處及/或在第二股之5'端處包含至少一個反向核苷酸。更佳地，核酸在第二股之3'端處包含反向核苷酸。最佳地，核酸在第二股之3'端處包含反向RNA核苷酸且此核苷酸較佳為反向A。反向核苷酸為經由其3'碳而非如通常情況下經由其5'碳連接至核酸之3'端的核苷酸，或為經由其5'碳而非如通常情況下經由其3'碳連接至核酸之5'端的核苷酸。反向核苷酸較佳存在於股之末端處，而非作為懸垂物，但與另一股中之對應核苷酸相對。因此，核酸在包含反向RNA核苷酸之末端處較佳為鈍端。存在於股末端之反向RNA核苷酸較佳意謂股之此末端之最後一個核苷酸為反向RNA核苷酸。具有此類核苷酸之核酸為穩定的且易於合成。反向RNA核苷酸較佳為未經修飾之核苷酸，意義在於其與天然核苷酸對應物相比不包含任何修飾。特定言之，反向RNA核苷酸較佳為2'-OH核苷酸。
本發明之核酸可包含一或多個在2'位置處經2'-H修飾之核苷酸，且因此在核酸內具有DNA核苷酸。本發明之核酸可包含自第一股之5'端計數的第一股之位置2及/或14處的DNA核苷酸。核酸可包含位於第二股上對應於第一股之位置11、或13、或11及13、或11-13的DNA核苷酸。
在一個態樣中，每個本發明之核酸不存在超過一個DNA核苷酸。
本發明之核酸可包含一或多個LNA核苷酸。本發明之核酸可包含自第一股之5'端計數的第一股之位置2及/或14處的LNA核苷酸。核酸可包含第二股上對應於第一股之位置11、或13、或11及13、或11-13的LNA。
本發明之一些代表性經修飾核酸序列展示於實例中。此等實例意欲為代表性的且不為限制性的。
在某些較佳實施例中，核酸可包含第一修飾及第二或進一步修飾，其各自且獨立地選自包含2'-OMe修飾及2'-F修飾之群。核酸可包含修飾，該修飾為2'-OMe，其可為第一修飾；及第二修飾，其為2'-F。本發明之核酸亦可包括硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修飾及/或去氧修飾，其可存在於各股或兩股之末端2或3個核苷酸中或其之間。
在核酸之一個態樣中，第一及/或第二股之至少一個核苷酸為經修飾之核苷酸，其中若該第一股包含至少一個經修飾之核苷酸： (i)    第一股之核苷酸2及14中之至少一者或兩者藉由第一修飾來修飾；及/或 (ii)   第一股之至少一個、若干個或所有偶數核苷酸藉由第一修飾來修飾；及/或 (iii)  第一股之至少一個、若干個或所有奇數核苷酸藉由第二修飾來修飾；及/或 其中若第二股包含至少一個經修飾之核苷酸： (iv)   與第一股之偶數核苷酸對應之位置中的第二股之至少一個、若干個或所有核苷酸藉由第三修飾來修飾；及/或 (v)    與第一股之奇數核苷酸對應之位置中的第二股之至少一個、若干個或所有核苷酸藉由第四修飾來修飾；及/或 (vi)   除與第一股之核苷酸11或核苷酸13或核苷酸11及13或核苷酸11-13對應之位置外的第二股之至少一個、若干個或所有核苷酸藉由第四修飾來修飾；及/或 (vii)  除與第一股之核苷酸11或核苷酸13或核苷酸11及13或核苷酸11-13對應之位置外的第二股之至少一個、若干個或所有核苷酸藉由第三修飾來修飾；及/或 其中第一股上之核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號； 其中該等修飾較佳為以下中之至少一者： (a)    第一修飾較佳不同於第二修飾及第三修飾； (b)    第一修飾較佳地與第四修飾相同； (c)    第二及第三修飾較佳為相同修飾； (d)    第一修飾較佳為2'-F修飾； (e)    第二修飾較佳為2'-OMe修飾； (f)    第三修飾較佳為2'-OMe修飾；及/或 (g)    第四修飾較佳為2'-F修飾；及 其中視情況，核酸與配位體結合。
一個態樣為用於較佳在細胞中抑制CFB表現之雙股核酸，其中核酸包含第一股及第二股，其中第一股序列之未經修飾之等效物包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表5a中或表1中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸，其中第一股之所有偶數核苷酸藉由第一修飾來修飾，第一股之所有奇數核苷酸藉由第二修飾來修飾，在與第一股之偶數核苷酸對應的位置中之第二股之所有核苷酸藉由第三修飾來修飾，在與第一股之奇數核苷酸對應的位置中之第二股之所有核苷酸藉由第四修飾來修飾，其中第一及第四修飾為2'-F，且第二及第三修飾為2'-OMe。
一個態樣為用於較佳在細胞中抑制CFB表現之雙股核酸，其中核酸包含第一股及第二股，其中第一股序列之未經修飾之等效物包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表5a中或表1中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸，其中第一股之所有偶數核苷酸藉由第一修飾來修飾，第一股之所有奇數核苷酸藉由第二修飾來修飾，在與第一股之核苷酸11-13對應的位置中之第二股之所有核苷酸藉由第四修飾來修飾，除與第一股之核苷酸11-13對應的核苷酸以外之第二股之所有核苷酸藉由第三修飾來修飾，其中第一及第四修飾為2'-F，且第二及第三修飾為2'-OMe。
寡核苷酸之3'及5'端可經修飾。此類修飾可在分子之3'端或5'端或兩個末端處。其可包括修飾或置換整個末端磷酸酯或磷酸酯基之原子中之一或多者。例如，寡核苷酸之3'及/或5'端可與其他功能性分子實體結合，諸如標記部分，例如螢光團(例如，芘、TAMRA、螢光素、Cy3或Cy5染料)或保護基(基於例如硫、矽、硼或酯)。功能性分子實體可經由磷酸酯基及/或連接子連接至糖。連接子之末端原子可連接至或置換磷酸酯基或糖之C-3'或C-5' O、N、S或C基團的連接原子。替代地，連接子可連接至或置換核苷酸替代物(例如PNA)之末端原子。此等間隔子或連接子可包括例如-(CH 2) n-、-(CH 2) nN-、-(CH 2) nO-、-(CH 2) nS-、-(CH 2CH 2O) nCH 2CH 2O- (例如n=3或6)、無鹼基糖、醯胺、羧基、胺、氧胺、氧亞胺、硫醚、二硫鍵、硫脲、磺醯胺或N-𠰌啉基，或生物素及螢光素試劑。3'端可為-OH基團。
末端修飾之其他實例包括染料、插入劑(例如，吖啶)、交聯劑(例如，補骨脂素、絲裂黴素C)、卟啉(TPPC4、德卟啉(texaphyrin)、賽卟啉(Sapphyrin))、多環芳烴(例如，啡𠯤、二氫啡𠯤)、人工核酸內切酶、EDTA、親脂性載劑(例如，膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睾酮、1,3-雙-O(十六烷基)甘油、香葉基氧基己基、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七烷基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、O3-(油醯基)石膽酸、O3-(油醯基)膽烯酸、二甲氧基三苯甲基或啡㗁𠯤)及肽結合物(例如，觸角足肽(antennapedia peptide)、Tat肽)、烷基化劑、磷酸酯、胺基、巰基、PEG (例如，PEG-40K)、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代烷基、放射性標記物、酶、半抗原(例如，生物素)、轉運/吸收促進劑(例如，阿司匹林、維生素E、葉酸)、合成核糖核酸酶(例如，咪唑、雙咪唑、組胺、咪唑簇、吖啶-咪唑結合物、四氮雜大環之Eu3+錯合物)。
末端修飾亦可用於監測分佈，且在此類情況下，待添加之基團可包括螢光團，例如螢光素或Alexa染料。末端修飾亦可用於增強攝取，對此適用之修飾包括膽固醇。末端修飾亦可適用於將RNA劑交聯至另一部分。
出於多種原因可添加末端修飾，包括調節活性或調節對降解之抗性。可用於調節活性之末端修飾包括用磷酸酯或磷酸酯類似物修飾5'端。第一股或第二股上之本發明核酸可為5'磷酸化或在5'引發端包括磷醯基類似物。5'-磷酸酯修飾包括與RISC介導之基因緘默相容的彼等修飾。適合的修飾包括：5'-單磷酸酯((HO) 2(O)P-O-5')；5'-二磷酸酯((HO) 2(O)P-O-P(HO)(O)-O-5')；5'-三磷酸酯((HO) 2(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5')；5'-鳥苷帽(7-甲基化或非甲基化) (7m-G-O-5'-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5')；5'-腺苷帽(Appp)及任何經修飾或未經修飾之核苷酸帽結構(N-O-5'-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5')；5'-單硫代磷酸酯(硫代磷酸酯；(HO) 2(S)P-O-5')；5'-單-二硫代磷酸酯(二硫代磷酸酯；(HO)(HS)(S)P-O-5')、5'-硫代磷酸酯((HO) 2(O)P-S-5')；經氧/硫置換之單磷酸酯之任何其他組合、二磷酸酯及三磷酸酯(例如5'-α-硫代三磷酸酯、5'-γ-硫代三磷酸酯等)、5'-胺基磷酸酯((HO) 2(O)P-NH-5'、(HO)(NH 2)(O)P-O-5')、5'-烷基膦酸酯(烷基=甲基、乙基、異丙基、丙基等，例如RP(OH)(O)-O-5'- (其中R為烷基))、(OH) 2(O)P-5'-CH 2-)、5'乙烯基膦酸酯、5'-烷基醚膦酸酯(烷基醚=甲氧基甲基(MeOCH 2-)、乙氧基甲基等，例如RP(OH)(O)-O-5'- (其中R為烷基醚))。
某些部分可連接至第一股或第二股之5'端。此等包括無鹼基核糖部分、無鹼基去氧核糖部分、修飾無鹼基核糖及無鹼基去氧核糖部分，包括2'-O烷基修飾；反向無鹼基核糖及無鹼基去氧核糖部分及其修飾、C6-亞胺基-Pi；鏡面核苷酸，包括L-DNA及L-RNA；5'OMe核苷酸；及核苷酸類似物，包括4',5'-亞甲基核苷酸；1-(β-D-赤呋喃醣基)核苷酸；4'-硫代核苷酸、碳環核苷酸；磷酸5'-胺基-烷酯；磷酸1,3-二胺基-2-丙酯、磷酸3-胺基丙酯；磷酸6-胺基己酯；磷酸12-胺基十二烷酯；磷酸羥丙酯；1,5-無水己糖醇核苷酸；α-核苷酸；蘇-呋喃戊醣基核苷酸；非環狀3',4'-開環核苷酸；3,4-二羥丁基核苷酸；3,5-二羥基戊基核苷酸、5'-5'-反向無鹼基部分；1,4-丁二醇磷酸酯；5'-胺基；及橋接或非橋接甲基膦酸酯及5'-巰基部分。
在本文所描述之各序列中，C-末端「-OH」部分可經C-末端「-NH 2」部分取代，且反之亦然。
本發明亦提供根據本文所描述之本發明任何態樣之核酸，其中第一股在其5'端處具有末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸。此末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸較佳藉由磷酸二酯鍵連接於第一股中之第二核苷酸。較佳地，末端5' (E)-乙烯基膦酸酯(「vp」)核苷酸係尿苷(「vp-U」)。
核酸之第一股可包含式(I)： (vp)-N (po)[N (po)] n-  (I) 其中『(vp)-』為5' (E)-乙烯基膦酸酯，『N』為核苷酸，『po』為磷酸二酯鍵，且n為1至(第一股中核苷酸之總數-2)，較佳地其中n為1至(第一股中核苷酸之總數-3)，更佳地其中n為1至(第一股-4中核苷酸之總數)。
較佳地，末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸為RNA核苷酸，較佳為(vp)-U。
末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸為如下核苷酸，其中5'-端處之天然磷酸酯基已經E-乙烯基膦酸酯置換，其中5'磷酸化股之末端核苷酸的橋接5'-氧原子經甲炔基(CH=)基團置換：
Figure 02_image001
5' (E)-乙烯基膦酸酯為5'磷酸酯模擬物。生物學模擬物為能夠進行與所模擬之原始分子相同的功能且在結構上極類似於所模擬之原始分子的分子。在本發明之上下文中，5' (E)-乙烯基膦酸酯模擬標準5'磷酸酯之功能，例如實現有效RISC負載。另外，由於其略微改變之結構，5' (E)乙烯基膦酸酯能夠藉由保護5'-端核苷酸免於由諸如磷酸酶之酶去磷酸化而使其穩定。
在一個態樣中，第一股在其5'端處具有末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸，末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸藉由磷酸二酯鍵連接於第一股中之第二核苷酸，且第一股包含a)超過1個磷酸二酯鍵；b)在至少末端三個5'核苷酸之間的磷酸二酯鍵，及/或c)在至少末端四個5'核苷酸之間的磷酸二酯鍵。
在一個態樣中，核酸之第一股及/或第二股包含兩個核苷酸之間的至少一個硫代磷酸酯(ps)及/或至少一個二硫代磷酸酯(ps2)鍵。
在一個態樣中，核酸之第一股及/或第二股包含超過一個硫代磷酸酯及/或超過一個二硫代磷酸酯鍵。
在一個態樣中，核酸之第一股及/或第二股包含末端兩個3'核苷酸之間的硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯鍵，或末端三個3'核苷酸之間的硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯鍵。較佳地，第一股及/或第二股中之其他核苷酸之間的鍵為磷酸二酯鍵。
在一個態樣中，核酸之第一股及/或第二股包含末端兩個5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵，或末端三個5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵。
在一個態樣中，本發明之核酸包含對第一及/或第二股之末端中之一或多者的一或多個硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修飾。視情況，第一股之各末端或任一末端可包含一個或兩個或三個硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修飾之核苷酸(核苷間鍵)。視情況，第二股之各末端或任一末端可包含一個或兩個或三個硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修飾之核苷酸(核苷間鍵)。
在一個態樣中，核酸包含在第一及/或第二股之末端兩個或三個3'核苷酸及/或5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵。較佳地，核酸在第一股及第二股之末端三個3'核苷酸及末端三個5'核苷酸中之各者之間包含硫代磷酸酯鍵。較佳地，第一股及/或第二股之核苷酸之間的所有剩餘鍵為磷酸二酯鍵。
在一個態樣中，核酸包含第一股之3'端的兩個、三個或四個末端核苷酸中之各者之間的二硫代磷酸酯鍵，及/或包含第二股之3'端的兩個、三個或四個末端核苷酸中之各者之間的二硫代磷酸酯鍵及/或第二股之5'端的兩個、三個或四個末端核苷酸中之各者之間的二硫代磷酸酯鍵，且包含除第一股之5'端的兩個、三個或四個末端核苷酸之間的二硫代磷酸酯鍵以外的鍵。
在一個態樣中，核酸包含在第一股及第二股之末端三個3'核苷酸及末端三個5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵。較佳地，第一股及/或第二股之核苷酸之間的所有剩餘鍵為磷酸二酯鍵。
在一個態樣中，核酸： (i)    具有在第一股之末端三個3'核苷酸與末端三個5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵； (ii)   在第二股之3'端核苷酸或5'端核苷酸上與三觸角配位體結合； (iii)  在與結合於該三觸角配位體之末端相對的末端處與第二股之末端三個核苷酸之間具有硫代磷酸酯鍵；及 (iv)   視情況，第一股及/或第二股之核苷酸之間的所有剩餘鍵為磷酸二酯鍵。
在一個態樣中，核酸： (i)    在第一股之5'端處具有末端5'(E)-乙烯基膦酸酯核苷酸； (ii)   具有在第一及第二股上之末端三個3'核苷酸之間的及在第二股上之末端三個5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵，或其具有在第一及第二股上之末端兩個3'核苷酸之間的及在第二股上之末端兩個5'核苷酸之間的二硫代磷酸酯鍵；及 (iii)  視情況，第一股及/或第二股之核苷酸之間的所有剩餘鍵為磷酸二酯鍵。
在一個態樣中，核酸在第一股之5'端處具有末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸，且在第一股上之末端三個3'核苷酸之間及在第二股上之末端三個3'核苷酸之間具有硫代磷酸酯鍵；且視情況第一及/或第二股之核苷酸之間的所有剩餘鍵為磷酸二酯鍵。
與在同一位置中包含硫代磷酸酯之分子相比，在本發明之核酸中使用二硫代磷酸酯鍵減少核酸分子群之立體化學的變化。硫代磷酸酯鍵引入對掌性中心，且難以控制哪些非連接氧取代硫。使用二硫代磷酸酯確保在彼鍵中不存在對掌性中心，且因此視核酸分子中使用之二硫代磷酸酯及硫代磷酸酯鍵之數目而定，減少或消除核酸分子群中之任何變化。
在一個態樣中，核酸包含在第一股之3'端處之兩個末端核苷酸之間的二硫代磷酸酯鍵，及在第二股之3'端處之兩個末端核苷酸之間的二硫代磷酸酯鍵，及位於第二股之5'端處之兩個末端核苷酸之間的二硫代磷酸酯鍵，且包含除第一股之5'端處之兩個、三個或四個末端核苷酸之間的二硫代磷酸酯鍵以外的鍵。較佳地，第一股在其5'端處具有末端5'(E)-乙烯基膦酸酯核苷酸。此末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸較佳藉由磷酸二酯鍵連接於第一股中之第二核苷酸。較佳地，除第一股之3'端之兩個末端核苷酸之間的鍵及第二股之3'端及5'端之兩個末端核苷酸之間的鍵以外的兩個股之核苷酸之間的所有鍵為磷酸二酯鍵。
在一個態樣中，當末端不存在二硫代磷酸酯鍵時，核酸包含在第一股上之三個末端3'核苷酸中之各者之間及/或三個末端5'核苷酸中之各者之間，及/或在第二股上之三個末端3'核苷酸中之各者之間及/或三個末端5'核苷酸中之各者之間的硫代磷酸酯鍵。末端處不存在之二硫代磷酸酯鍵意謂所討論之核酸末端之兩個末端核苷酸之間，或較佳地三個末端核苷酸之間的鍵為除二硫代磷酸酯鍵以外的鍵。
在一個態樣中，除第一股之3'端處之兩個末端核苷酸之間的鍵及第二股之3'端及5'端處之兩個末端核苷酸之間的鍵以外的兩股之核苷酸之間的核酸的所有鍵為磷酸二酯鍵。
其他磷酸酯鍵修飾為可能的。
磷酸酯連接子亦可藉由用氮(橋接胺基磷酸酯)、硫(橋接硫代磷酸酯)及碳(橋接亞甲基膦酸酯)置換連接氧而經修飾。置換可在末端氧處進行。非連接氧經氮置換為可能的。
磷酸酯基亦可單獨地經非含磷接頭置換。
可置換磷酸酯基之部分之實例包括矽氧烷、碳酸酯、羧基甲基、胺基甲酸酯、醯胺、硫醚、環氧乙烷連接子、磺酸酯、磺醯胺、硫代甲酸酯、甲縮醛、肟、亞甲基亞胺基、亞甲基甲基亞胺基、亞甲基肼、亞甲基二甲基肼及亞甲基氧基甲基亞胺基。在某些實施例中，置換可包括亞甲基羰基胺基及亞甲基甲基亞胺基。
磷酸酯連接子及核糖糖可經耐核酸酶核苷酸置換。實例包括N-𠰌啉基、環丁基、吡咯啶及肽核酸(PNA)核苷代替物。在某些實施例中，可使用PNA代替物。
在一個態樣中，較佳為siRNA、較佳經由RNAi且較佳在細胞中抑制CFB之表現的核酸包含以下中之一或多者或全部： (i)    經修飾之核苷酸； (ii)   除在第一股之5'端位置2及14處的2'-OMe修飾之核苷酸以外的經修飾之核苷酸，較佳2'-F修飾之核苷酸； (iii)  自第一股5'端之一個開始編號之第一股的奇數核苷酸中之各者為2'-OMe修飾之核苷酸； (iv)   自第一股5'端之一個開始編號之第一股的偶數核苷酸中之各者為2'-F修飾之核苷酸； (v)    與第一股之位置11及/或13或11-13對應的第二股核苷酸藉由除2'-OMe修飾以外的修飾來修飾，較佳地其中此等位置中之一者或兩者或全部包含2'-F修飾； (vi)   反向核苷酸，較佳地在第二股之3'端處之3'-3'鍵； (vii)  一或多個硫代磷酸酯鍵； (viii) 一或多個二硫代磷酸酯鍵；及/或 (ix)   第一股在其5'端處具有末端5'(E)-乙烯基膦酸酯核苷酸，在此情況下，末端5'(E)-乙烯基膦酸酯核苷酸較佳為尿苷且較佳藉由磷酸二酯鍵連接於第一股中之第二核苷酸。
本發明之核酸可包含第一股及第二股，其中第一股序列包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表5b中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸。
本發明之核酸可為以下核酸，其中： (a)    第一股序列包含與表5b之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)    第一股序列包含與表5b之第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸之序列； (c)    第一股序列包含與表5b之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過1個核苷酸之序列； (d)    第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應之序列； (e)    第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應之序列； (f)    第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應之序列； (g)    第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應之序列； (h)    第一股序列包含表5b之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列包含對應第二股序列之序列； (i)    第一股序列由表5b之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列由對應第二股序列之序列組成； (j)    第一股序列基本上由具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列基本上由具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列組成；或 (k)    第一股序列由與來自具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中該第一股序列進一步由具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 視情況其中第二股序列包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (l)    第一股序列由與來自具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中該第一股序列進一步由具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 其中該第一股序列由長度為17-25個核苷酸、較佳長度為18-24個核苷酸之連續區域組成，與SEQ ID NO. 758之CFB轉錄物互補，及 視情況其中第二股序列包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表5b中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (m)   以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者之第一股及第二股存在於單股上，其中第一股及第二股能夠彼此雜交且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區之雙股核酸；或 (n)    以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者之第一股及第二股位於兩個單獨股上，該等單獨股能夠彼此雜交且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸。
本發明之核酸可包含第一股及第二股，其中第一股序列包含至少15個核苷酸之序列，該序列與表2中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸。
舉例而言，本發明之核酸可為以下核酸，其中： (a)    第一股序列包含與表2之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)    第一股序列包含與表2之第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸之序列； (c)    第一股序列包含與表2之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過1個核苷酸之序列； (d)    第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應之序列； (e)    第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應之序列； (f)    第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應之序列； (g)    第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應之序列； (h)    第一股序列包含表2之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列包含對應第二股序列之序列； (i)    第一股序列由表2之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列由對應第二股序列之序列組成； (j)    第一股序列基本上由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列基本上由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列組成；或 (k)    第一股序列由與來自具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中該第一股序列進一步由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 視情況其中第二股序列包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表2中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (l)    第一股序列由與來自具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中該第一股序列進一步由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 其中該第一股序列由長度為17-25個核苷酸、較佳長度為18-24個核苷酸之連續區域組成，與SEQ ID NO. 758之CFB轉錄物互補，及 視情況其中第二股序列包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表2中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (m)   以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者之第一股及第二股存在於單股上，其中第一股及第二股能夠彼此雜交且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區之雙股核酸；或 (n)    以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者之第一股及第二股位於兩個單獨股上，該等單獨股能夠彼此雜交且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸。 表 2 ：
第一股序列 (SEQ ID No.) 第二股序列 (SEQ ID No.)
417 725
431 726
655 728
561 729
407 730
679 733
609 739
740 730
741 728
742 729
746 726
750 725
740 759
742 760
核酸之所有特徵可與本文所揭示之本發明之所有其他態樣組合。
異源部分本發明之核酸可與異源部分結合。異源部分係不為能夠抑制CFB表現之核酸分子的任何部分。異源部分可為或可包含肽(或多肽)、醣(或多醣)、脂質、不同核酸或任何其他適合分子。
任何給定核酸可與複數個異源部分結合，該等異源部分可相同或不同。
個別異源部分可自身包含一或多個功能性部分(諸如如下文更詳細地描述之靶向劑)，該一或多個功能部分各自視情況經由連接子與核酸共價結合。
異源部分或其功能組分可用以例如調節生物可用性或藥物動力學。舉例而言，其可增加活體內半衰期。
替代地，異源部分(或其功能組分)可包含靶向劑。活體內有效遞送寡核苷酸，尤其本發明之雙股核酸遞送至細胞中係重要的且需要特異性靶向且實質性保護其免於細胞外環境，尤其血清蛋白質。一種達成特異性靶向之方法為使靶向劑與核酸結合，其中該靶向劑幫助使核酸靶向目標細胞，該目標細胞具有與靶向劑結合之細胞表面受體。
在此情形下，術語「受體」用以包括能夠結合於靶向劑之目標細胞表面上的任何分子，且不應被視為暗示細胞表面受體之任何特定功能。靶向劑可被視為細胞表面受體之「配位體」。術語「靶向劑」及「配位體」可互換使用。再次，此術語不應被視為暗示靶向劑或細胞表面受體之任何特定功能，或除一者結合於另一者之能力以外的兩個分子之間的任何特定關係。
因此，靶向劑可為對所選受體具有親和力之任何部分。其可為例如親和蛋白質(諸如對所選受體具有親和力之抗體或其片段)、適體或任何其他適合之部分。在一些實施例中，靶向劑可為受體之生理配位體。
靶向劑與受體之間的結合可促進目標細胞，例如經由受體之內化或任何其他適合機制，攝取結合核酸。因此，所需受體分子之適當配位體可用作靶向劑以便使目標細胞藉由諸如不同受體介導之內飲作用路徑或功能上類似之過程的機制攝取結合核酸。在其他實施例中，可藉由除受體介導之內飲作用以外之機制介導核酸內化至目標細胞中之配位體可替代地與本發明之核酸結合以用於細胞或組織特異性靶向。
介導受體介導之內飲作用之配位體的一個實例為本文所述之GalNAc部分，其對去唾液酸糖蛋白受體複合體(asialoglycoprotein receptor complex；ASGP-R)具有高親和力。ASGP-R複合體係由不同比率之膜ASGR1及ASGR2受體之多聚體構成，它們在肝細胞上具有高度豐富。使用三觸角簇糖苷作為結合配位體之第一揭示內容中之一者在美國專利第US 5,885,968號中。具有三個GalNAc配位體且包含磷酸酯基之結合物已知且描述於Dubber等人(Bioconjug. Chem. 2003 1月-2月;14(1):239-46)中。ASGP-R複合體顯示對N-乙醯基-D-半乳糖胺(GalNAc)之親和力比對D-Gal高50倍。
ASGP-R複合體特異性識別糖基化蛋白質或其他寡醣之末端β-半乳糖苷生物次單元(Weigel, P.H.等人, Biochim. Biophys. Acta. 2002年9月19日;1572(2-3):341-63)且可用於藉由半乳糖或半乳胺糖與原料藥之共價偶合將藥物遞送至表現受體複合體之肝臟肝細胞(Ishibashi,S.等人, J Biol. Chem. 1994年11月11日;269(45):27803-6)。此外，結合親和力可藉由多價作用顯著增加，此是藉由重複靶向部分來達成的(Biessen EA等人, J Med Chem. 1995年4月28日;38(9):1538-46)。
ASGP-R複合體為用於將含有末端β-半乳糖苷之醣蛋白主動攝取至細胞之核內體的介體。因此，ASGPR高度適用於將與此類配位體結合之候選藥物，例如將核酸靶向遞送至表現受體之細胞中(Akinc等人, Mol Ther. 2010年7月;18(7):1357-64)。
更一般而言，配位體可包含經選擇對標目標細胞上之至少一種類型之受體具有親和力的醣。尤其，受體位於哺乳動物肝細胞之表面上，例如上述肝去唾液酸醣蛋白受體複合體(ASGP-R)。
醣可選自N-乙醯基半乳胺糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡糖胺及海藻糖。醣可為N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)。異源部分可包含複數種此類醣，例如兩種或尤其三種此類醣，例如三種GalNAc基團。
異源部分可因此包含(i)一或多種功能組分及(ii)連接子，其中連接子使功能組分與如任何前述態樣中所定義之核酸結合。連接子可為單價結構或二價或三價或四價分支鏈結構。核苷酸可如本文所定義經修飾。
因此，功能組分可為配位體(或靶向劑)。在存在多個功能組件之情況下，該等功能組件可相同或不同。在功能組分為配位體之情況下，功能組分可為醣，且可因此為(或包含) GalNAc。
在一個態樣中，核酸與包含式(II)化合物之異源部分結合： [S-X 1-P-X 2] 3-A-X 3-   (II) 其中： S表示功能組分，例如配位體，諸如醣，較佳地其中醣為N-乙醯基半乳胺糖； X 1表示C 3-C 6伸烷基或(-CH 2-CH 2-O) m(-CH 2) 2-，其中m為1、2或3； P為磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳為硫代磷酸酯； X 2為伸烷基或式(-CH 2) n-O-CH 2-之伸烷基醚，其中n=1-6； A為分支單元； X 3表示橋接單元； 其中根據本發明之核酸經由磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳硫代磷酸酯結合至X 3。
在式(II)中，分支單元「A」較佳分支成三個，以便適應三個醣配位體。分支單元較佳共價連接於配位體及核酸之其餘繫栓部分。分支單元可包含分支鏈脂族基團，該分支鏈脂族基團包含選自烷基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥胺基之基團。分支單元可包含選自烷基及醚基之基團。
分支單元A可具有選自以下之結構：
Figure 02_image003
其中各A 1獨立地表示O、S、C=O或NH；且各n獨立地表示1至20之整數。
分支單元可具有選自以下之結構：
Figure 02_image005
其中各A 1獨立地表示O、S、C=O或NH；且各n獨立地表示1至20之整數。
分支單元可具有選自以下之結構：
Figure 02_image007
其中A 1為O、S、C=O或NH；且各n獨立地表示1至20之整數。
分支單元可具有以下結構：
Figure 02_image009
。
分支單元可具有以下結構：
Figure 02_image011
。
分支單元可具有以下結構：
Figure 02_image013
。
替代地，分支單元A可具有選自以下之結構：
Figure 02_image015
， 其中： R1為氫或C1-C10伸烷基； 且R2為C1-C10伸烷基。
視情況，分支單元僅由碳原子組成。
「X 3」部分為橋接單元。橋接單元為線性的且共價鍵結至分支單元及核酸。
X 3可係選自-C 1-C 20伸烷基-、-C 2-C 20伸烯基-、式-(C 1-C 20伸烷基)-O-(C 1-C 20伸烷基)-之伸烷基醚、-C(O)-C 1-C 20伸烷基-、-C 0-C 4伸烷基(Cy)C 0-C 4伸烷基-，其中Cy表示經取代或未經取代之5或6員環伸烷基、伸芳基、伸雜環基或伸雜芳基環、-C 1-C 4伸烷基-NHC(O)-C 1-C 4伸烷基-、-C 1-C 4伸烷基-C(O)NH-C 1-C 4伸烷基-、-C 1-C 4伸烷基-SC(O)-C 1-C 4伸烷基-、-C 1-C 4伸烷基-C(O)S-C 1-C 4伸烷基-、-C 1-C 4伸烷基-OC(O)-C 1-C 4伸烷基-、-C 1-C 4伸烷基-C(O)O-C 1-C 4伸烷基-及-C 1-C 6伸烷基-S-S-C 1-C 6伸烷基-。
X 3可為式-(C 1-C 20伸烷基)-O-(C 1-C 20伸烷基)-之伸烷基醚。X 3可為式-(C 1-C 20伸烷基)-O-(C 4-C 20伸烷基)-之伸烷基醚，其中該(C 4-C 20伸烷基)連接至Z。X 3可選自由以下組成之群：-CH 2-O-C 3H 6-、-CH 2-O-C 4H 8-、-CH 2-O-C 6H 12-及-CH 2-O-C 8H 16-，尤其-CH 2-O-C 4H 8-、-CH 2-O-C 6H 12-及-CH 2-O-C 8H 16-，其中在各種情況下，-CH 2-基團連接至A。
在一個態樣中，核酸與式(III)之異源部分結合： [S-X 1-P-X 2] 3-A-X 3-   (III) 其中： S表示功能組分，例如配位體，諸如醣，較佳GalNAc； X 1表示C 3-C 6伸烷基或(-CH 2-CH 2-O) m(-CH 2) 2-，其中m為1、2或3； P為磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳為硫代磷酸酯； X 2為C 1-C 8伸烷基； A係選自以下之分支單元：
Figure 02_image017
X 3為橋接單元； 其中根據本發明之核酸經由磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳硫代磷酸酯結合至X 3。
分支單元A可具有以下結構：
Figure 02_image019
。
分支單元A可具有以下結構：
Figure 02_image021
，其中X 3連接至氮原子。
X 3可為C 1-C 20伸烷基。較佳地，X 3係選自由以下組成之群：-C 3H 6-、-C 4H 8-、-C 6H 12-及-C 8H 16，尤其-C 4H 8-、-C 6H 12-及-C 8H 16-。
在一個態樣中，核酸與包含式(IV)化合物之配位體結合： [S-X 1-P-X 2] 3-A-X 3- (IV) 其中： S表示功能組分，例如配位體，諸如醣，較佳GalNAc； X 1表示C 3-C 6伸烷基或(-CH 2-CH 2-O) m(-CH 2) 2-，其中m為1、2或3； P為磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳為硫代磷酸酯； X 2為式-C 3H 6-O-CH 2-之伸烷基醚； A為分支單元； X 3係選自由以下組成之群的式的伸烷基醚：-CH 2-O-CH 2-、-CH 2-O-C 2H 4-、-CH 2-O-C 3H 6-、-CH 2-O-C 4H 8-、-CH 2-O-C 5H 10-、-CH 2-O-C 6H 12-、-CH 2-O-C 7H 14-及-CH 2-O-C 8H 16-，其中在各種情況下，-CH 2-基團連接至A， 且其中X 3藉由磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳硫代磷酸酯結合至根據本發明之核酸。
分支單元可包含碳。較佳地，分支單元為碳。
X 3可選自由以下組成之群：-CH 2-O-C 4H 8-、-CH 2-O-C 5H 10-、-CH 2-O-C 6H 12-、-CH 2-O-C 7H 14-及-CH 2-O-C 8H 16-。較佳地，X 3係選自由以下組成之群：-CH 2-O-C 4H 8-、-CH 2-O-C 6H 12-及-CH 2-O-C 8H 16。
X 1可為(-CH 2-CH 2-O)(-CH 2) 2-。X 1可為(-CH 2-CH 2-O) 2(-CH 2) 2-。X 1可為(-CH 2-CH 2-O) 3(-CH 2) 2-。較佳地，X 1為(-CH 2-CH 2-O) 2(-CH 2) 2-。替代地，X 1表示C 3-C 6伸烷基。X 1可為丙二醇。X 1可為伸丁基。X 1可為伸戊基。X 1可為伸己基。較佳地，烷基為直鏈伸烷基。尤其，X 1可為伸丁基。
X 2表示式-C 3H 6-O-CH 2-伸烷基醚，亦即C 3烷氧基亞甲基，或-CH 2CH 2CH 2OCH 2-。
對於以上態樣中之任一者，當P表示經修飾之磷酸酯基時，P可由以下表示：
Figure 02_image023
其中Y 1及Y 2各自獨立地表示=O、=S、-O-、-OH、-SH、-BH 3、-OCH 2CO 2、-OCH 2CO 2R x、-OCH 2C(S)OR x及-OR x，其中R x表示C 1-C 6烷基且其中
Figure 02_image025
指示與化合物之其餘部分之連接。
經修飾之磷酸酯意謂其中非連接氧中之一或多者經置換之磷酸酯基。經修飾之磷酸酯基的實例包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、硼烷磷酸酯、硼烷磷酸酯、氫膦酸酯、胺基磷酸酯、烷基或芳基膦酸酯及磷酸三酯。二硫代磷酸酯具有經硫置換之兩個非連接氧。磷酸酯基中之一個、各個或兩個非連接氧可獨立地為S、Se、B、C、H、N或OR (R為烷基或芳基)中之任一者。
磷酸酯亦可藉由用氮(橋接胺基磷酸酯)、硫(橋接硫代磷酸酯)及碳(橋接亞甲基膦酸酯)置換連接氧而經修飾。置換可在末端氧處進行。非連接氧經氮置換為可能的。
例如，Y 1可表示-OH，且Y 2可表示=O或=S；或 Y 1可表示-O-，且Y 2可表示=O或=S； Y 1可表示=O，且Y 2可表示-CH 3、-SH、-OR x或-BH 3Y 1可表示=S，且Y 2可表示-CH 3、OR x或-SH。
熟習此項技術者應理解，在某些情況下，Y 1與Y 2之間將存在離域。
較佳地，經修飾之磷酸酯基為硫代磷酸酯基。硫代磷酸酯基包括二硫代磷酸酯(亦即，其中Y 1表示=S且Y 2表示-S -)及單硫代磷酸酯(亦即，其中Y 1表示-O -且Y 2表示=S，或其中Y 1表示=O且Y 2表示-S -)。較佳地，P為單硫代磷酸酯。本發明人已發現，具有硫代磷酸酯基置換磷酸酯基之結合物具有改良的活體內效力及作用持續時間。
P亦可為乙基磷酸酯(亦即，其中Y 1表示=O且Y 2表示OCH 2CH 3)。
配位體，例如醣，可經選擇對目標細胞上至少一種類型之受體具有親和力。尤其，受體位於哺乳動物肝細胞之表面上，例如肝去唾液酸醣蛋白受體複合體(ASGP-R)。
對於以上或以下態樣中之任一者，醣可選自具有半乳胺糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡糖胺及果糖中之一或多者的N-乙醯基。通常，待用於本發明中之配位體可包括N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)。較佳地，本發明化合物可具有3個配位體，該等配位體將各自較佳包括N-乙醯基半乳胺糖。
「GalNAc」係指2-(乙醯基胺基)-2-去氧-D-半乳哌喃糖，在文獻中通常稱為N-乙醯基半乳胺糖。參考「GalNAc」或「N-乙醯基半乳胺糖」包括以下兩者：β-形式：2-(乙醯基胺基)-2-去氧-β-D-半乳哌喃糖，及α-形式：2-(乙醯基胺基)-2-去氧-α-D-半乳哌喃糖。在某些實施例中，β-形式：2-(乙醯基胺基)-2-去氧-β-D-半乳哌喃糖，及α-形式：2-(乙醯基胺基)-2-去氧-α-D-半乳哌喃糖兩者可互換使用。較佳地，本發明化合物包含β形式2-(乙醯胺基)-2-去氧-β-D-半乳哌喃醣。
Figure 02_image027
2-(乙醯基胺基)-2-去氧-D-半乳哌喃糖
Figure 02_image029
2-(乙醯基胺基)-2-去氧-β-D-半乳哌喃糖
Figure 02_image031
2-(乙醯基胺基)-2-去氧-α-D-半乳哌喃糖
在一個態樣中，核酸為結合核酸，其中核酸與具有以下結構中之一者的異源部分結合，該等結構為了易於參考可被稱為「三觸角配位體」：
Figure 02_image033
Figure 02_image035
Figure 02_image037
Figure 02_image039
Figure 02_image041
其中Z為如本文所定義之任何核酸。在某些實施例中，異源部分(「三觸角配位體」)結合至Z之第二(有義)股(其在表5a、5b、5c中亦稱為股「B」)之5'端。
在某些實施例中，核酸Z經由磷酸酯或硫代磷酸酯基與三觸角配位體結合，該磷酸酯或硫代磷酸酯基將三觸角配位體連接至該核酸Z之末端核苷酸的糖之3'或5'位置，尤其連接至核糖之3'或5'位置。
在某些實施例中，異源部分(「三觸角配位體」)結合至Z之第二(有義)股(其在表5a、5b、5c中亦稱為股「B」)之末端核苷酸之核糖的3'位置。
在其他實施例中，異源部分(「三觸角配位體」)結合至Z之第二(有義)股(其在表5a、5b、5c中亦稱為股「B」)之末端核苷酸之核糖的5'位置。
在其他實施例中，異源部分(「三觸角配位體」)結合至Z之第一(反義)股(其在表5a、5b、5c中亦稱為股「A」)之末端核苷酸之核糖的3'位置。
較佳地，核酸為結合核酸，其中該核酸與具有以下結構之一的三觸角配位體結合：
Figure 02_image043
其中Z為如本文所定義之任何核酸。較佳地，異源部分(「三觸角配位體」)結合至Z之第二(有義)股(其在表5a、5b、5c中亦稱為股「B」)之5'端。 在一較佳實施例中，核酸Z經由磷酸酯或硫代磷酸酯基與三觸角配位體結合，該磷酸酯或硫代磷酸酯基將三觸角配位體連接至該核酸Z之末端核苷酸之核糖的3'或5'位置。
較佳地，「三觸角配位體」結合至Z之第二(有義)股(其在表5a、5b、5c中亦稱為股「B」)之末端核苷酸之核糖的5'位置。
式(II)、(III)或(IV)之異源部分或本文所揭示之三觸角配位體中之任一者可連接在第一(反義)股之3'-端及/或第二(有義)股之3'及/或5'端中之任一者處。核酸可包含超過一個式(II)、(III)或(IV)之異源部分或本文所揭示之三觸角配位體中之任一者。然而，由於單一此類部分足以將核酸高效靶向目標細胞，所以本文所揭示之式(II)、(III)或(IV)之單一異源部分或三觸角配位體中之任一者為較佳的。較佳地，在該情況下，在與配位體連接之核酸之末端的至少最後兩個，較佳至少最後三個，且更佳至少最後四個核苷酸藉由磷酸二酯鍵連接。
較佳地，第一(反義)股之5'-端不連接至異源部分，因為此位置之連接可能潛在地干擾核酸之生物活性。
在股之5'端處具有單一異源部分(例如，式(II)、(III)或(IV)或本文所揭示之三觸角配位體中之任一者)之核酸比在3'端處具有相同基團之相同核酸更容易且因此更便宜地合成。因此較佳地，單一異源部分(例如，式(II)、(III)或(IV)中之任一者或本文所揭示之三觸角配位體中之任一者的異源部分)共價連接至(結合至)核酸之第二股的5'端。
在一個態樣中，核酸之第一股為式(V)化合物：
Figure 02_image045
其中b較佳為0或1；及 第二股為式(VI)化合物：
Figure 02_image047
； 其中： c及d獨立地較佳為0或1； Z 1及Z 2分別為核酸之第一及第二股； Y獨立地為O或S； n獨立地為0、1、2或3；及 L 1為連接有配位體之連接子，其中L 1在式(V)及(VI)中相同或不同，且當L 1在同一式內存在超過一次時，在式(V)及(VI)內相同或不同，其中L 1較佳具有式(VII)； 且其中b+c+d較佳為2或3。
較佳地，式(V)及(VI)中之L 1具有式(VII)：
Figure 02_image049
其中： L係選自包含以下或較佳由以下組成之群： -(CH 2) r-C(O)-，其中r = 2-12； -(CH 2-CH 2-O) s-CH 2-C(O)-，其中s = 1-5； -(CH 2) t-CO-NH-(CH 2) t-NH-C(O)-，其中t獨立地為1-5； -(CH 2) u-CO-NH-(CH 2) u-C(O)-，其中u獨立地為1-5；及 -(CH 2) v-NH-C(O)-，其中v為2-12；及 其中末端C(O) (若存在)連接至式(VII)之X，或若X不存在，則連接至式(VII)之W 1，或若W 1不存在，則連接至式(VII)之V； W 1、W 3及W 5獨立地不存在或選自包含以下或較佳由以下組成之群： -(CH 2) r-，其中r = 1-7； -(CH 2) s-O-(CH 2) s-，其中s獨立地為0-5； -(CH 2) t-S-(CH 2) t-，其中t獨立地為0-5； X不存在或係選自包含以下或較佳由以下組成之群：NH、NCH 3或NC 2H 5； V係選自包含以下或較佳由以下組成之群： CH、N、
Figure 02_image051
； 其中B (若存在)為經修飾或天然核鹼基。
在一個態樣中，第一股為式(VIII)化合物
Figure 02_image053
其中b較佳為0或1；及 第二股為式(IX)化合物：
Figure 02_image055
； 其中c及d獨立地較佳為0或1； 其中： Z 1及Z 2分別為核酸之第一及第二股； Y獨立地為O或S； R 1為H或甲基； n較佳獨立地為0、1、2或3；及 L在式(VIII)及(IX)中相同或不同，且當L在同一式內存在超過一次時，在式(VIII)及(IX)內相同或不同，且係選自包含以下或較佳由以下組成之群： -(CH 2) r-C(O)-，其中r = 2-12； -(CH 2-CH 2-O) s-CH 2-C(O)-，其中s = 1-5； -(CH 2) t-CO-NH-(CH 2) t-NH-C(O)-，其中t獨立地為1-5； -(CH 2) u-CO-NH-(CH 2) u-C(O)-，其中u獨立地為1-5；及 -(CH 2) v-NH-C(O)-，其中v為2-12；及 其中末端C(O) (若存在)連接至NH基團(為連接子的，而非靶向配位體的)； 且其中b+c+d較佳為2或3。
在一個態樣中，核酸之第一股為式(X)化合物：
Figure 02_image057
其中b較佳為0或1；及 第二股為式(XI)化合物：
Figure 02_image059
； 其中： c及d獨立地較佳為0或1； Z 1及Z 2分別為核酸之第一及第二RNA股； Y獨立地為O或S； n較佳獨立地為0、1、2或3；及 L 2在式(X)與(XI)中相同或不同且在由b、c及d加括號之部分中相同或不同，且係選自包含以下或較佳由以下組成之群：
Figure 02_image061
；或 n為0且L 2為：
Figure 02_image063
且末端OH基團不存在，使得形成以下部分：
Figure 02_image065
； 其中： F為飽和分支鏈或非分支鏈(諸如非分支鏈) C 1-8烷基(例如C 1-6烷基)鏈，其中碳原子中之一者視情況經氧原子置換，其限制條件為該氧原子與另一雜原子(例如O或N原子)分隔開至少2個碳原子；L在式(X)及式(XI)中相同或不同，且係選自包含以下或較佳由以下組成之群： -(CH 2) r-C(O)-，其中r = 2-12； -(CH 2-CH 2-O) s-CH 2-C(O)-，其中s = 1-5； -(CH 2) t-CO-NH-(CH 2) t-NH-C(O)-，其中t獨立地為1-5； -(CH 2) u-CO-NH-(CH 2) u-C(O)-，其中u獨立地為1-5；及 -(CH 2) v-NH-C(O)-，其中v為2-12；及 其中末端C(O) (若存在)連接至NH基團(為連接子的，而非靶向配位體的)； 且其中b+c+d較佳為2或3。
在一個態樣中，在式(V)及(VI)或(VIII)及(IX)或(X)及(XI)之核酸中之任一者中，b為0，c為1且d為1；b為1，c為0且d為1；b為1，c為1且d為0；或b為1，c為1且d為1。較佳地，b為0，c為1且d為1；b為1，c為0且d為1；或b為1，c為1且d為1。最佳地，b為0，c為1且d為1。
在一個態樣中，式(V)及(VI)或(VIII)及(IX)或(X)及(XI)之核酸中之任一者中，Y為O。在另一態樣中，Y為S。在一較佳態樣中，Y在式中之不同位置中獨立地選自O或S。
在一個態樣中，在式(VIII)及(IX)之核酸中之任一者中，R 1為H或甲基。在一個態樣中，R 1為H。在另一態樣中，R 1為甲基。
在一個態樣中，n在式(V)及(VI)或(VIII)及(IX)或(X)及(XI)之核酸中之任一者中為0、1、2或3。n較佳為0。
式(X)及(XI)之核酸中之任一者中的F部分之實例包括(CH 2) 1-6，例如(CH 2) 1-4，例如CH 2、(CH 2) 4、(CH 2) 5或(CH 2) 6或CH 2O(CH 2) 2-3，例如CH 2O(CH 2)CH 3。
在一個態樣中，式(X)及(XI)中之L 2為：
Figure 02_image067
。
在一個態樣中，L 2為：
Figure 02_image069
。
在一個態樣中，L 2為：
Figure 02_image071
。
在一個態樣中，L 2為：
Figure 02_image073
。
在一個態樣中，n為0且L 2為：
Figure 02_image075
且末端OH基團不存在，使得形成以下部分：
Figure 02_image077
； 其中Y為O或S。
在一個態樣中，式(V)及(VI)或(VIII)及(IX)或(X)及(XI)之核酸中之L係選自包含以下或較佳由以下組成之群： -(CH 2) r-C(O)-，其中r = 2-12； -(CH 2-CH 2-O) s-CH 2-C(O)-，其中s = 1-5； -(CH 2) t-CO-NH-(CH 2) t-NH-C(O)-，其中t獨立地為1-5； -(CH 2) u-CO-NH-(CH 2) u-C(O)-，其中u獨立地為1-5；及 -(CH 2) v-NH-C(O)-，其中v為2-12； 其中末端C(O)連接至NH基團。
較佳地，L為-(CH 2) r-C(O)-，其中r=2-12，更佳地r=2-6，甚至更佳地，r=4或6，例如4。
較佳地，L為：
Figure 02_image079
。
在由b、c及d加括號之部分內，式(X)及(XI)之核酸中之L 2通常相同。在由b、c及d加括號之部分之間，L 2可相同或不同。在一實施例中，由c加括號之部分中之L 2與由d加括號之部分中之L 2相同。在一實施例中，由c加括號之部分中之L 2與由d加括號之部分中之L 2不相同。在一實施例中，由b、c及d加括號之部分中之L 2相同，例如當連接子部分為絲胺醇衍生之連接子部分時。
絲胺醇衍生之連接子部分可基於任何立體化學之絲胺醇，亦即衍生自L-絲胺酸異構體、D-絲胺酸異構體、外消旋絲胺酸或其他異構體組合。在本發明之一較佳態樣中，絲胺醇-GalNAc部分(SerGN)具有以下立體化學：
Figure 02_image081
亦即係基於衍生自L-絲胺酸異構體之(S)-絲胺醇-胺基酸酯或(S)-絲胺醇丁二酸酯固體負載之建構嵌段。
在一較佳態樣中，核酸之第一股為式(VIII)化合物，且核酸之第二股為式(IX)化合物，其中： b為0； c及d為1， n為0， Z 1及Z 2分別為核酸之第一及第二股， Y為S， R 1為H，及 L為-(CH 2) 4-C(O)-，其中L之末端C(O)連接至連接子之N原子(亦即，不為靶向配位體之可能N原子)。
在另一較佳態樣中，核酸之第一股為式(V)化合物，且核酸之第二股為式(VI)化合物，其中： b為0， c及d為1， n為0， Z 1及Z 2分別為核酸之第一及第二股， Y為S， L 1具有式(VII)，其中： W 1為-CH 2-O-(CH 2) 3-， W 3為-CH 2-， W 5不存在， V為CH， X為NH，及 L為-(CH 2) 4-C(O)-，其中L之末端C(O)連接至式(VII)中X之N原子。
在另一較佳態樣中，核酸之第一股為式(V)化合物，且核酸之第二股為式(VI)化合物，其中： b為0， c及d為1， n為0， Z 1及Z 2分別為核酸之第一及第二股， Y為S， L 1具有式(VII)，其中： W 1、W 3及W 5不存在， V為
Figure 02_image083
， X不存在，及 L為-(CH 2) 4-C(O)-NH-(CH 2) 5-C(O)-，其中L之末端C(O)連接至式(VII)中V之N原子。
在一個態樣中，核酸與具有以下結構之三觸角配位體結合：
Figure 02_image085
其中核酸經由與a)第二股之5'端處之最後的核苷酸；b)第二股之3'端處之最後的核苷酸；或c)第一股之3'端處之最後的核苷酸連接的配位體之磷酸酯基而與三觸角配位體結合。
在核酸之一個態樣中，由具有配位體之核酸靶向之細胞為肝細胞。
在以上配位體中之任一者(其中存在GalNAc)中，GalNAc可經任何其他靶向配位體取代，諸如本文中提及之彼等者，尤其甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡糖胺及海藻糖。
在一個態樣中，核酸與包含脂質，且更佳膽固醇之異源部分結合。
在一個態樣中，用於抑制補體因子B (CFB)表現之雙股核酸為表5c中所示之雙螺旋體中之一者，其可藉由其雙螺旋體ID編號指代。
在一個較佳態樣中，用於抑制補體因子B (CFB)表現之雙股核酸為具有由表5c中所示之以下雙螺旋體ID中之一者定義的結構之雙螺旋體：EV2181、EV2182、EV2184、EV2185、EV2186、EV2189、EV2195、EV2196、EV2197、EV2198、EV2201、EV2204。
在一個較佳態樣中，用於抑制補體因子B (CFB)表現之雙股核酸為如下核酸，其中第一股序列包含(vp)-mU fC mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU (SEQ ID No. 740)，且視情況其中第二股序列包含 [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mU mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU (SEQ ID No: 730)。 在一個較佳態樣中，用於抑制補體因子B (CFB)表現之雙股核酸為如下核酸，其中第一股序列由(vp)-mU fC mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU (SEQ ID No. 740)組成，且視情況其中第二股序列由以下組成： [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mU mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU (SEQ ID No: 730)。
在一個較佳態樣中，用於抑制補體因子B (CFB)表現之雙股核酸為如下核酸，其中第一股序列包含(vp)-mU fU mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA (ps) fC (ps) mA (SEQ ID No. 742)，且視情況其中第二股序列包含 [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mG mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU (ps) mA (ps) mU (SEQ ID No: 729)。
在一個較佳態樣中，用於抑制補體因子B (CFB)表現之雙股核酸為如下核酸，其中第一股序列由(vp)-mU fU mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA (ps) fC (ps) mA (SEQ ID No. 742)組成，且視情況其中第二股序列由以下組成： [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mG mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU (ps) mA (ps) mU (SEQ ID No: 729)。
組合物、用途及方法本發明亦提供包含本發明之核酸之組合物。核酸及組合物可單獨或與其他藥劑組合用作治療劑或診斷劑。例如，本發明之一或多種核酸可與遞送媒劑(例如脂質體)及/或賦形劑(諸如載劑、稀釋劑)組合。亦可添加其他試劑，諸如防腐劑及穩定劑。本發明之核酸中之任一者之醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物同樣在本發明之範疇內。遞送核酸之方法為此項技術中已知的且在熟習此項技術者之知識範圍內。 本文中所揭示之組合物尤其為醫藥組合物。此類組合物適用於向個體投與。
在一個態樣中，組合物包含本文中所揭示之核酸或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，及溶劑(較佳水)及/或遞送媒劑及/或生理學上可接受之賦形劑及/或載劑及/或鹽及/或稀釋劑及/或緩衝劑及/或防腐劑。
醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑包括在適用於經口、經直腸、經鼻或非經腸(包括皮下、肌內、靜脈內、皮內及經皮)投與之調配物中使用的彼等醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。調配物可宜以單位劑型呈現且可利用藥劑學技術中熟知之任何方法來製備。皮下或經皮投與模式可尤其適合於本文所描述之化合物。
本發明之核酸的預防或治療有效量將視投與途徑、所治療哺乳動物類型及所考慮的特定哺乳動物之物理特徵而定。決定此量之此等因素及其關係為醫學技術中熟習從業者所熟知。此量及投與方法可經調適以獲得最佳功效且可視熟習醫學技術者所熟知之因素而定，諸如體重、膳食、同時用藥情況及其他因素。最適合於人類使用之劑量大小及給藥方案可藉由本發明所獲得的結果來指導且可在恰當設計的臨床試驗中確認。
有效劑量及治療方案可藉由習知手段確定，開始在實驗動物中使用低劑量，且隨後增加劑量，同時監測效果，且同樣系統地改變給藥方案。當針對既定個體確定最佳劑量時，臨床醫師可考慮許多因素。此類考慮因素為熟習此項技術者所知。
本發明之核酸或其鹽可調配為經製備用於儲存或投與之醫藥組合物，該等醫藥組成物通常包含預防或治療有效量之本發明核酸或其鹽及含其之醫藥學上可接受之載劑。
本發明之核酸或結合核酸亦可與其他治療化合物組合投與，例如以組合單位劑量形式分開或同時投與。本發明亦包括一種組合物，其包含一或多種根據本發明之核酸於生理學/醫藥學上可接受之賦形劑中，諸如穩定劑、防腐劑、稀釋劑、緩衝劑及其類似物。
在一個態樣中，組合物包含本文所揭示之核酸及另一種選自包含以下之群的治療劑：寡核苷酸、小分子、單株抗體、多株抗體及肽。較佳地，另一治療劑為靶向、較佳抑制CFB，或另一免疫系統元件(諸如蛋白質)，或更特定言之補體路徑之表現或活性的藥劑。較佳地，另一治療劑為以下之一：a)抑制補體路徑之組分中之一者，較佳CFB、C3、C5或其次單元或蛋白水解裂解產物之一的表現或活性的肽；b)在生理條件下特異性結合至補體路徑之組分中之一者，較佳CFB、C3、C5或其次單元或蛋白水解裂解產物中之一者的抗體；c)艾庫組單抗或其抗原結合衍生物。
艾庫組單抗為一種人類化單株抗體，其特異性結合於補體組分C5且以商標名SOLIRIS®商業化。其以高親和力特異性結合補體組分C5且抑制C5裂解成C5a及C5b。抗體例如描述於專利EP 0 758 904 B1及其家族成員中。
在某些實施例中，具有不同序列之兩種或更多種本發明核酸可同時或依序投與。
在另一態樣中，本發明提供一種組合物，例如醫藥組合物，其包含本發明之不同核酸中之一者或其組合及至少一種醫藥學上可接受之載劑。
本發明之治療劑及組合物的劑量含量可由熟習此項技術者藉由實驗確定。在一個態樣中，單位劑量可含有約0.01 mg/kg與約100 mg/kg體重之間的核酸或結合核酸。替代地，劑量可為10 mg/kg至25 mg/kg體重、或1 mg/kg至10 mg/kg體重、或0.05 mg/kg至5 mg/kg體重、或0.1 mg/kg至5 mg/kg體重、或0.1 mg/kg至1 mg/kg體重、或0.1 mg/kg至0.5 mg/kg體重、或0.5 mg/kg至1 mg/kg體重。替代地，劑量可為約0.5 mg/kg至約10 mg/kg體重、或約0.6 mg/kg至約8 mg/kg體重、或約0.7 mg/kg至約7 mg/kg體重、或約0.8 mg/kg至約6 mg/kg體重、或約0.9 mg/kg至約5.5 mg/kg體重、或約1 mg/kg至約5 mg/kg體重、或約1 mg/kg體重、或約3 mg/kg體重、或約5 mg/kg體重，其中「約」為與指示值至多30%，較佳至多20%，更佳至多10%，又更佳至多5%，且最佳0%之偏差。劑量含量亦可經由其他參數，諸如體表面積來計算。
此等核酸之劑量單位較佳包含約1 mg/kg至約5 mg/kg體重、或約1 mg/kg至約3 mg/kg體重、或約1 mg/kg體重、或約3 mg/kg體重、或約5 mg/kg體重。在可比條件下，相比於未用核酸治療或用對照核酸治療之對照，經單位劑量之核酸治療之個體的肝臟中之CFB mRNA含量及/或血漿或血液中之CFB蛋白質含量較佳在最大作用時間點降低至少30%、至少40%、至少50%、至少60%或至少70%。
投與之劑量及頻率可視治療是否為治療性或防治性(例如預防性)而變化，且可在治療過程期間加以調整。在某些防治性應用中，在長時間段內，在相對不頻繁之間隔時間投與相對低之劑量。一些個體可在其壽命內繼續接受治療。在某些治療性應用中，有時需要以相對短之間隔投與相對高之劑量，直至疾病之進展減輕，或直至患者展示疾病之症狀部分或完全改善。其後，可將患者切換為適合的防治性給藥方案。
本發明之核酸單獨或與本發明之醫藥組合物中之一或多種其他活性成分組合之實際劑量含量可變化，以便獲得能有效的活性成分之量，以達成特定患者期望治療反應、組合物及投與模式，而不會對個體或患者產生有害副作用。所選劑量含量將視多種藥物動力學因素而定，該等因素包括所採用之特定核酸或組合物的活性；投與途徑；投與時間；待採用之特定核酸之排泄速率；治療持續時間；與所採用之特定組合物組合的其他藥物、化合物及/或材料；待治療患者之年齡、性別、體重、病狀、一般健康狀況及先前病史；及醫學技術中熟知之類似因素。
醫藥組合物可為無菌可注射水性懸浮液或溶液，或呈凍乾形式。
醫藥組合物可呈單位劑型形式。在此類形式中，將組合物分成含有適當量之活性組分之單位劑量。單位劑型可為封裝製劑，該封裝含有離散量之製劑，例如，小包錠劑、膠囊及小瓶或安瓿中之粉末。單位劑型亦可為膠囊、扁囊劑或錠劑自身，或其可為適當數量之此等封裝形式中之任一者。其可以單次劑量可注射形式提供，例如，呈筆筒形式。組合物可經調配用於任何合適的投與途徑及手段。
本發明之治療劑及醫藥組合物可以醫藥學上有效劑量向哺乳動物個體投與。哺乳動物可選自人類、非人類靈長類動物、猴或原猴、犬、貓、馬、牛、豬、山羊、綿羊、小鼠、大鼠、倉鼠、刺蝟及天竺鼠或其他相關性物種。在此基礎上，如本文所用，「CFB」表示任一上述物種中之核酸或蛋白質(若在其中天然或人工地表現)，但較佳此措辭表示人類核酸或蛋白質。
本發明之醫藥組合物可單獨或與一或多種其他治療劑或診斷劑組合投與。組合療法可包括本發明之核酸與至少一種其他治療劑組合，該治療劑基於待治療之特定患者、疾病或病狀選擇。其他此類藥劑之實例尤其包括治療活性小分子或多肽、單鏈抗體、經典抗體或其片段或調節一或多種其他基因之基因表現的核酸分子及可補充或以其他方式有益於治療性或防治性治療方案的類似調節治療劑。
醫藥組合物在製造及儲存條件下通常無菌且穩定。組合物可調配為溶液、微乳液、脂質體或適合於較高藥物濃度之其他有序結構。載劑可為含有例如水、醇(諸如乙醇)、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇)或任何適合混合物之溶劑或分散介質。可藉由使用包衣諸如卵磷脂、藉由維持就分散液而言所需粒度及藉由使用根據此項技術中熟知之調配化學方法的界面活性劑來維持適當的流動性。在某些實施例中，等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化鈉可在組合物中合乎需要。可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中包括延遲吸收劑(例如單硬脂酸鹽及明膠)來達成。
本發明之一個態樣為本文所揭示之核酸或組合物，其用作治療劑。核酸或組合物較佳用於預防或治療疾病、病症或症候群。
本發明提供一種核酸，其單獨地或在醫藥組合物中與一或多種額外治療劑組合用於治療或預防對CFB表現之抑制起反應的病狀、疾病及病症。
本發明之一個態樣為如本文所揭示之核酸或組合物在預防或治療疾病、病症或症候群中之用途。
本發明之核酸及醫藥組合物可用於治療多種病狀、病症或疾病。用本發明之核酸治療較佳引起活體內CFB耗乏，較佳在肝臟中及/或在血液中CFB耗乏。因此，本發明之核酸及包含其之組合物將適用於治療多種病理性病症之方法，其中抑制CFB表現可為有益的。本發明提供用於治療疾病、病症或症候群之方法，其包含向有需要之個體投與預防或治療有效量之本發明之核酸的步驟。
因此，本發明提供預防或治療疾病、病症或症候群之方法，該方法包含向有需要之個體(例如患者)投與治療有效量之核酸或包含本發明之核酸的醫藥組合物的步驟。
最理想的治療有效量為將產生特定治療之所需功效的量，該特定治療由熟習此項技術者針對有需要之給定個體選擇。此量將視熟習此項技術者所理解之各種因素而變化，包括但不限於治療化合物之特徵(包括活性、藥物動力學、藥效動力學及生物可用性)、個體之生理條件(包括年齡、性別、疾病類型及階段、一般身體條件、對給定劑量之反應性及藥物類型)、調配物中之一或多種醫藥學上可接受之載劑的性質及投與途徑。熟習臨床及藥理學技術之技術者將能夠經由實驗確定治療有效量，即藉由監測個體對投與化合物之反應且相應地調節劑量。參見例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy 第21版, Univ. of Sciences in Philadelphia (USIP), Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA, 2005。
在某些實施例中，本發明之核酸及醫藥組合物可用於治療或預防疾病、病症或症候群。
在某些實施例中，本發明提供用於預防或治療哺乳動物個體(諸如人類)之疾病、病症或症候群的方法，該方法包含向有需要之個體投與預防或治療有效量之如本文所揭示之核酸的步驟。
「治療有效劑量」之本發明之核酸可使得疾病症狀之嚴重程度降低、無疾病症狀期之頻率或持續時間增加或預防疾病病痛所致之損傷或失能。
本發明之核酸可有益於治療或診斷可使用本文所描述之方法診斷或治療之疾病、病症或症候群。亦認為其他疾病、病症或症候群之治療及診斷屬於本發明之範疇內。
本發明之一個態樣為一種預防或治療疾病、病症或症候群之方法，其包含向需要治療之個體投與醫藥學上有效劑量或量之本文所揭示之核酸或組合物，較佳地其中經皮下、靜脈內或經口、經直腸、經肺、肌肉內或腹膜內投與來向個體投與核酸或組合物。較佳地，其經皮下投與。
相關疾病、病症或症候群較佳為補體介導之疾病、病症或症候群或與補體路徑相關之疾病病症或症候群，且尤其為替代補體路徑。
該疾病、病症或症候群通常與補體路徑(尤其替代路徑)之異常活化及/或過度活化(超活化)及/或CFB或補體組分C3之過度表現或異位表現或定位或積聚相關。涉及C3積聚之疾病的一個實例為C3腎絲球病變(C3G)。在此疾病中，CFB積聚於腎臟腎小球中。補體路徑之異常或過度活化可具有遺傳原因或可為獲得性的。
疾病、病症或症候群可a)選自包含以下，且較佳由以下組成之群：C3腎絲球病變(C3G)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、狼瘡性腎炎、IgA腎病(IgA N)、重症肌無力(MG)、原發性膜性腎病、免疫複合體介導之絲球體腎炎(IC介導之GN)、感染後絲球體腎炎(PIGN)、全身性紅斑狼瘡(SLE)、局部缺血/再灌注損傷、年齡相關之黃斑部變性(AMD)、類風濕性關節炎(RA)、抗嗜中性白血球細胞質自體抗體相關之血管炎(ANCA-AV)、生物菌失調性牙周病、瘧疾貧血、視神經脊髓炎、HCT後/實體器官移植(TMA)、格-巴二氏症候群(Guillain-Barré syndrome)、膜性絲球體腎炎、栓塞性血小板減少性紫癲病及敗血症；或b)選自包含以下或較佳由以下組成之群：C3腎絲球病變(C3G)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、狼瘡性腎炎、IgA腎病(IgA N)及原發性膜性腎病；或c)選自包含以下或較佳由以下組成之群：C3腎絲球病變(C3G)、抗嗜中性白血球細胞質自體抗體相關之血管炎(ANCA-AV)、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、重症肌無力(MG)、IgA腎病(IgA N)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)；d)選自包含以下或較佳由以下組成之群：C3腎絲球病變(C3G)、重症肌無力(MG)、視神經脊髓炎、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、抗嗜中性白血球細胞質自體抗體相關之血管炎(ANCA-AV)、IgA腎病(IgA N)、HCT後/實體器官移植(TMA)、格-巴二氏症候群、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、膜性絲球體腎炎、狼瘡性腎炎及栓塞性血小板減少性紫癲病；e) C3腎絲球病變(C3G)及IgA腎病(IgA N)；或f)其為C3腎絲球病變(C3G)。待用根據本發明之核酸或組合物治療之個體較佳為受此等疾病、病症或症候群中之一者感染或處於受其感染之風險下的個體。
本文所揭示之核酸或組合物可用於包含每週一次或兩次、每週、每兩週、每三週、每四週、每五週、每六週、每七週、每八週、每九週、每十週、每十一週、每十二週、每三個月、每四個月、每五個月、每六個月或以不同給藥頻率(諸如上述間隔的組合)之方案中。核酸或組合物可經皮下、靜脈內或使用任何其他應用途徑，諸如經口、經直腸、經肺或腹膜內使用。較佳地，其經皮下使用。
相比於未經處理細胞及/或個體，在用如本文所揭示之核酸或組合物處理或接受如本文所揭示之核酸或組合物的細胞及/或個體中，CFB表現可被抑制的範圍為15%至100%，但至少約30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或100%或中間值。抑制之含量可允許治療與CFB表現或過度表現或補體過度活化相關之疾病，或可用以進一步研究CFB基因產物之功能及生理作用。抑制之含量較佳在經核酸或組合物治療之個體之肝臟中或血液中或腎臟中，較佳在血液中量測。
一個態樣為如本文所揭示之核酸或組合物在製造用於治療疾病、病症或症候群之藥劑中的用途，該等疾病、病症或症候群為諸如如上所列之疾病、病症或症候群，或與CFB含量升高相關之其他病變，較佳血液中或在腎臟中之病變，或補體路徑之過度活化；或需要抑制CFB表現之其他治療方法。藥物為醫藥組合物。
本發明之核酸及其醫藥學上可接受之鹽及溶劑合物中之各者構成本發明之個別實施例。
本發明亦包括一種預防或治療疾病、病症或症候群(諸如上文所列之彼等疾病、病症或症候群)的方法，其包含向有需要之個體投與包含如本文所述之核酸或組合物的組合物。核酸或組合物可例如以包含每週兩次、每週一次、每兩週、每三週、每四週、每五週、每六週、每七週或每八週至十二週或更多週治療之方案或以不同給藥頻率(諸如上述間隔的組合)之方案投與。核酸或結合核酸可皮下或靜脈內，或其他應用途徑，諸如經口、經直腸或腹膜內使用。
本發明之核酸可藉由此項技術中已知之任何適當投與路徑進行投與，包括但不限於氣霧劑、經腸、經鼻、經眼、經口、非經腸、經直腸、經陰道或經皮(例如，局部投與乳膏、凝膠或軟膏，或藉助於經皮貼片)。「非經腸投與」典型地與在預期作用部位注射或與預期作用部位連通有關，包括眶下、輸注、動脈內、囊內、心內、皮內、肌肉內、腹膜內、肺內、脊椎內、胸骨內、鞘內、子宮內、靜脈內、蛛膜下、囊內、皮下、經黏膜或經氣管投與。
使用核酸之化學修飾模式賦予血清中之核酸酶穩定性，且使例如皮下施用途徑可行。
用於皮內或皮下施用之溶液或懸浮液通常包括以下中之一或多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液、不揮發性油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及/或張力調節劑，諸如氯化鈉或右旋糖。pH可用酸或鹼調節，諸如鹽酸或氫氧化鈉，或具有檸檬酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽及其類似物之緩衝劑。此類製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。
無菌可注射溶液可藉由將所需量之核酸併入具有一種或上述成分之組合的適當溶劑中，繼之以滅菌微過濾來製備。分散液可藉由將活性化合物併入至含有分散介質及視情況存在之其他成分(諸如上述之彼等成分)的無菌媒劑中來製備。在無菌粉末用於製備無菌可注射溶液之情況下，製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥(凍乾)，其自其無菌過濾溶液產生活性成分以及任何額外所需成分之粉末。
當藉由例如靜脈內、皮膚或皮下注射投與預防或治療有效量之本發明之核酸時，核酸將呈無熱原質、非經腸可接受之水溶液形式。考慮適當pH、等張性、穩定性及其類似者，用於製備非經腸可接受之溶液之方法屬於此項技術內。用於靜脈內、皮膚或皮下注射之組合物除核酸外，亦可含有等張媒劑，諸如氯化鈉注射液、林格氏注射液、右旋糖注射液、右旋糖及氯化鈉注射液、乳酸林格氏注射液或此項技術中已知之其他媒劑。本發明之醫藥組合物亦可含有穩定劑、防腐劑、緩衝劑、抗氧化劑或熟習此項技術者已知之其他添加劑。
可與載劑材料組合以產生單一劑型之核酸的量將視多種因素而變化，包括所治療之個體及特定投與模式。一般而言，組合物的量將在特定情形下產生適當治療效果。一般而言，以百分比計，此量通常在約0.01%至約99%之核酸、約0.1%至約70%之核酸或約1%至約30%之核酸與醫藥學上可接受之載劑組合的範圍內。
核酸可與將保護化合物免於快速釋放之載劑一起製備，該等載劑諸如控制釋放調配物，包括植入物、經皮貼片及微膠囊化遞送系統。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。許多用於製備此類調配物之方法已獲得專利或為熟習此項技術者所熟知。參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson編, Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。
可調節給藥方案以提供最佳所需響應(例如治療響應)。例如，可投與劑量，可隨時間投與若干分次劑量，或可依治療情況(在各情況下)之特定環境所指示按比例減少或增加劑量。當向個體或患者投與時，就投與之容易性及劑量之均勻性而言，將非經腸組合物調配成單位劑型尤其有利。如本文所用，單位劑型係指適用作所治療之個體之單位劑量的物理離散單元；各單元含有經計算以產生所要治療效果之預定量之活性化合物。本發明之單位劑型之規格視活性化合物之特定特徵及欲達成之特定治療或預防效果及任何個別患者之治療及敏感性而定。
本發明之核酸或組合物可使用此項技術中之常規方法產生，包括化學合成，諸如固相化學合成。
本發明之核酸或組合物可與此項技術中已知之多種醫療裝置中之一或多者一起投與。例如，在一個實施例中，本發明之核酸可與無針皮下注射裝置一起投與。適用於本發明之熟知植入物及模組之實例為此項技術中的，包括例如用於控制速率遞送之可植入微輸注泵；用於經由皮膚投與之裝置；用於以精確輸注速率遞送之輸注泵；用於連續藥物遞送之變流可植入輸注裝置；及滲透藥物遞送系統。此等及其他此類植入物、遞送系統及模組為熟習此項技術者已知的。
在某些實施例中，本發明之核酸或組合物可經調配以確保活體內所需分佈。為使本發明之治療化合物或組合物靶向特定活體內位置，其可例如在脂質體中調配，該等脂質體可包含選擇性輸送至特定細胞或器官中之一或多個部分，由此增強靶向藥物遞送。
本發明之特徵在於在分子及組織定向遞送含量中的高特異性。本發明之核酸之序列對其目標具有高度特異性，意謂其並不抑制未經設計以用於靶向的基因之表現，或僅最低限度地抑制未經設計以用於靶向的基因之表現，及/或僅抑制低數量未經設計以用於靶向的基因之表現。當核酸連接至由特定細胞類型特異性識別且內化之配位體時，可實現更高含量的特異性。例如，當核酸連接至包含GalNAc部分之配位體時，其由肝細胞特異性識別及內化。此導致核酸僅在由其所連接之配位體靶向之細胞中抑制其目標的表現。此兩種特異性含量潛在地賦予比當前可獲得之治療更好的安全概況。在某些實施例中，本發明因此提供本發明之核酸，該核酸連接至包含一或多個GalNAc部分之配位體，或包含一或多個賦予核酸之細胞類型或組織特異性內化的其他部分，由此賦予藉由RNA干擾之目標基因減弱的額外特異性。
如本文中所描述之核酸可與脂質體形式之脂質一起調配。此類調配物可在此項技術中描述為脂複合體。具有脂質/脂質體之組合物可用於輔助將本發明之核酸遞送至目標細胞。本文中描述之脂質遞送系統可用作結合配位體之替代物。當使用具有脂質遞送系統或具有配位體結合物遞送系統之本發明之核酸時，可存在本文中所描述之修飾。
此類脂複合體可包含脂質組合物，其包含： i) 陽離子脂質或其醫藥學上可接受之鹽； ii) 類固醇； iii) 磷脂醯乙醇胺磷脂；及/或 iv) 聚乙二醇化脂質。
陽離子脂質可為胺基陽離子脂質。
陽離子脂質可具有式(XII)：
Figure 02_image087
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： X表示O、S或NH； R 1及R 2各自獨立地表示具有一或多個雙鍵之C 4-C 22直鏈或分支鏈烷基鏈或C 4-C 22直鏈或分支鏈烯基鏈，其中烷基或烯基鏈視情況含有中間酯、醯胺或二硫鍵； 當X表示S或NH時，R 3及R 4各自獨立地表示氫、甲基、乙基、單胺或多胺部分，或R 3及R 4一起形成雜環； 當X表示O時，R3及R4各自獨立地表示氫、甲基、乙基、單胺或多胺部分，或R 3及R 4一起形成雜環，或R 3表示氫且R 4表示C(NH)(NH 2)。
陽離子脂質可具有式(XIII)：
Figure 02_image089
或一種其醫藥學上可接受之鹽。
陽離子脂質可具有式(XIV)：
Figure 02_image091
或一種其醫藥學上可接受之鹽。
陽離子脂質組分之含量可為組合物之總脂質含量的約55 mol%至約65 mol%。陽離子脂質組分尤其為組合物之總脂質含量的約59 mol%。
組合物可進一步包含類固醇。類固醇可為膽固醇。類固醇之含量可為脂質組合物之總脂質含量的約26 mol%至約35 mol%。更具體言之，類固醇之含量可為脂質組合物之總脂質含量的約30 mol%。
磷脂醯乙醇胺磷脂可選自由以下組成之群：1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPhyPE)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、1,2-二月桂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DLPE)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DMPE)、1,2-二軟脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE)、1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DLoPE)、1-軟脂醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(POPE)、1,2-二芥醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DEPE)、1,2-二角鯊烯醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSQPE)及1-硬脂醯基-2-亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(SLPE)。磷脂之含量可為組合物之總脂質含量的約10 mol%。
聚乙二醇化脂質可選自由以下組成之群：1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油、甲氧基聚乙二醇(DMG-PEG)及C16-神經醯胺-PEG。聚乙二醇化脂質之含量可為組合物之總脂質含量的約1至5 mol%。
組合物中陽離子脂質組分之含量可為脂質組合物之總脂質含量的約55 mol%至約65 mol%，較佳脂質組合物之總脂質含量的約59 mol%。
組合物可具有選自以下i):ii):iii):iv)之組分莫耳比：55:34:10:1；56:33:10:1；57:32:10:1；58:31:10:1；59:30:10:1；60:29:10:1；61:28:10:1；62:27:10:1；63:26:10:1；64:25:10:1；及65:24:10:1。
組合物可包含具有以下結構之陽離子脂質：
Figure 02_image093
具有以下結構之類固醇：
Figure 02_image095
具有以下結構之磷脂醯乙醇胺磷脂
Figure 02_image097
及具有以下結構之聚乙二醇化脂質
Figure 02_image099
中性脂質體組合物可由例如二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)或二軟脂醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)形成。陰離子脂質體組合物可由二肉豆蔻醯基磷脂醯甘油形成，而陰離子促融脂質體可由二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)形成。另一類型之脂質體組合物由磷脂醯膽鹼(PC) (諸如大豆PC及蛋PC)形成。另一類型由磷脂及/或磷脂醯膽鹼及/或膽固醇之混合物形成。
帶正電之合成陽離子脂質N-[1-(2,3-二油烯基氧基)丙基]-N,N,N-三甲氯化銨(DOTMA)可用於形成小型脂質體，該等脂質體自發地與核酸相互作用以形成能夠與組織培養細胞之細胞膜之帶負電脂質融合的脂質-核酸複合體。DOTMA類似物亦可用於形成脂質體。
本文中所描述之脂質之衍生物及類似物亦可用於形成脂質體。
含有核酸之脂質體可藉由多種方法製備。在一個實例中，脂質體之脂質組分溶解於清潔劑中以使得由脂質組分形成微胞。舉例而言，脂質組分可為兩性陽離子脂質或脂質結合物。清潔劑可具有高臨界微胞濃度且可為非離子性的。例示性清潔劑包括膽酸鹽、CHAPS、辛基葡糖苷、去氧膽酸鹽及月桂醯基肌胺酸。隨後將核酸製劑添加至包括脂質組分之微胞中。脂質上之陽離子基團與核酸相互作用且在核酸周圍縮合以形成脂質體。在縮合後，例如藉由透析移除清潔劑，以產生核酸之脂質體製劑。
必要時，可在縮合反應期間添加幫助縮合之載劑化合物，例如藉由受控添加。舉例而言，載體化合物可為除核酸以外的聚合物(例如精胺或亞精胺)。亦可調節pH以促進縮合。
本發明之核酸調配物可包括界面活性劑。在一個實施例中，核酸調配為包括界面活性劑之乳液。
未電離之界面活性劑係非離子型界面活性劑。實例包括非離子酯，諸如乙二醇酯、丙二醇酯、甘油酯等；非離子烷醇醯胺；及醚，諸如脂肪醇乙氧化物、丙氧基化醇及乙氧基化/丙氧基化嵌段聚合物。
當溶解或分散於水中時攜帶負電荷之界面活性劑為陰離子界面活性劑。實例包括羧酸鹽，諸如皂類；醯基乳酸酯；胺基酸之醯胺；硫酸酯，諸如硫酸烷基酯及硫酸乙氧基化烷基酯；磺酸酯，諸如苯磺酸烷基酯、醯基羥乙基磺酸酯、醯基牛磺酸酯及磺基丁二酸酯；及磷酸酯。
當溶解或分散於水中時攜帶正電荷之界面活性劑為陽離子界面活性劑。實例包括四級銨鹽及乙氧化胺。
能力攜帶正電荷或負電荷之的界面活性劑為兩性界面活性劑。實例包括丙烯酸衍生物、經取代之烷基醯胺、N-烷基甜菜鹼及磷脂。
「微胞」在本文中定義為特定類型之分子總成，其中兩性分子以球形結構排列使得分子之所有疏水性部分向內引導，保留親水性部分與周圍水相接觸。若環境為疏水性的，則存在相反配置。微胞可藉由混合核酸之水溶液、鹼金屬烷基硫酸鹽及至少一種微胞形成化合物來形成。
例示性微胞形成化合物包括卵磷脂、玻尿酸、玻尿酸之醫藥學上可接受之鹽、乙醇酸、乳酸、甘菊提取物、胡瓜提取物、油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸、單烯醛、單油酸酯、單月桂酸酯、琉璃苣油、月見草油、薄荷醇、三羥基側氧基膽鹼基甘胺酸及其醫藥學上可接受之鹽、甘油、聚甘油、離胺酸、聚離胺酸、三油酸甘油酯、聚氧乙烯醚及其類似物、聚醚醇烷基醚及其類似物、鵝去氧膽酸鹽、去氧膽酸鹽及其混合物。
酚及/或間甲酚可添加至混合微胞組合物以當作穩定劑及防腐劑。可添加諸如丙三醇之等張劑。
核酸製劑可併入諸如微粒之粒子中。微粒可藉由噴霧乾燥、凍乾、蒸發、流化床乾燥、真空乾燥或此等方法之組合產生。
定義如本文所用，術語相對於基因表現而言「抑制」、「下調」或「降低」意謂基因之表現或編碼一或多種蛋白質或蛋白質亞單位(例如mRNA)之RNA分子或等效RNA分子之含量或一或多種蛋白質或蛋白質亞單位之活性降低至低於在不存在本發明之核酸或結合核酸的情況下所觀測到的含量或與使用與人類轉錄物無已知同源性的siRNA分子獲得的含量相比(本文稱為非緘默對照)。此類對照可以類似於本發明之分子的方式結合及修飾且藉由相同途徑遞送至目標細胞中。用本發明之核酸處理後的表現可降低至95%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、15%、10%、5%或0%或降低至中間值，或低於在無核酸或結合核酸存在下觀察到的表現。表現可在施加核酸之細胞中量測。替代地，尤其若向個體投與核酸，則可在不同細胞組中或在組織或器官中或在體液(諸如血液或血漿)中量測含量。較佳地在已選擇之條件下量測抑制之含量，此係因為該等條件展示在用核酸活體外處理之細胞中核酸對目標mRNA含量之最大影響。可例如在用在0.038 nM-10 µM之間，較佳0.5 nM、1 nM、10 nM或100 nM之濃度的核酸處理24小時或48小時後量測抑制之含量。此等條件對於不同核酸序列或對於不同類型之核酸可為不同的，諸如對於未經修飾或經修飾或與配位體結合之核酸為不同的。用於測定抑制之含量之適合條件之實例描述於實例中。 核酸意指包含兩股的核酸，其能夠干擾基因表現，該等股包含核苷酸。抑制可為完全或部分的且以靶向方式引起基因表現之下調。核酸包含兩個獨立的多核苷酸股；第一股，其亦可為引導股；及第二股，其亦可為隨從股。第一股及第二股可為相同多核苷酸分子之一部分，該多核苷酸分子具有自互補性，可『摺疊』形成雙股分子。核酸可為siRNA分子。
核酸可包含核糖核苷酸、經修飾之核糖核苷酸、去氧核苷酸、去氧核糖核苷酸或能夠模仿核苷酸之核苷酸類似物非核苷酸，以便它們可與基於目標序列或互補股上的相應鹼基『配對』。核酸可進一步包含由第一股之全部或一部分(此項技術中亦稱為引導股)及第二股之全部或一部分(此項技術中亦稱為隨從股)形成的雙股核酸部分或雙螺旋區。雙螺旋區定義為以形成於第一股與第二股之間的第一鹼基對開始且以形成於第一股與第二股之間(包括端點)的最後鹼基對結束。
雙螺旋區意謂藉由沃森-克里克鹼基配對或允許寡核苷酸股之間的雙螺旋體互補或實質上互補的任何其他方式與彼此形成鹼基對的兩個互補或實質上互補的寡核苷酸中之區域。例如，具有21個核苷酸單元之寡核苷酸股可與具有21個核苷酸單元之另一寡核苷酸鹼基配對，各股上僅19個核苷酸為互補或實質上互補的，使得「雙螺旋區」由19個鹼基對組成。其餘鹼基對可以5'及3'懸垂物之形式存在，或以單股區之形式存在。此外，在雙螺旋區內，不需要100%互補；在雙螺旋區內可允許實質性互補。實質上互補係指在股之間的互補，使得其能夠在生物條件下退火。憑經驗確定兩股是否能夠在生物條件下退火之技術為此項技術中所熟知。替代地，兩股可在生物條件下合成且相加在一起以確定其是否彼此退火。形成至少一個雙螺旋區之第一股及第二股之部分可完全互補且至少部分彼此互補。視核酸之長度而定，未必需要第一股與第二股之間在鹼基互補方面之完美匹配。然而，第一股與第二股必須能夠在生理條件下雜交。
如本文所用，術語「非配對核苷酸類似物」意謂包括非鹼基配對部分的核苷酸類似物，該非鹼基配對部分包括但不限於：6-去胺基腺苷(Nebularine)、4-Me-吲哚、3-硝基吡咯、5-硝基吲哚、Ds、Pa、N3-Me核糖U、N3-Me核糖T、N3-Me dC、N3-Me-dT、N1-Me-dG、N1-Me-dA、N3-乙基-dC及N3-Me dC。在一些實施例中，非鹼基配對核苷酸類似物為核糖核苷酸。在其他實施例中，其為去氧核糖核苷酸。
如本文所用，術語「末端官能基」包括但不限於鹵素、醇、胺、羧酸、酯、醯胺、醛、酮及醚基。
如本文所用，「懸垂物」具有其在此項技術中之正常及慣用意義，亦即延伸超出雙股核酸中之互補股之末端核苷酸的核酸之單股部分。術語「鈍端」包括雙股核酸，其中兩股皆在同一位置終止，無論末端核苷酸是否鹼基配對。鈍端處之第一股及第二股的末端核苷酸可為鹼基配對的。鈍端處之第一股及第二股的末端核苷酸可不配對。鈍端處之第一股及第二股的末端兩個核苷酸可為鹼基配對的。鈍端處之第一股及第二股的末端兩個核苷酸可不配對。
術語「絲胺醇衍生之連接子部分」意謂包含以下結構之連接子部分：
Figure 02_image101
該結構之O原子通常連接至RNA股且N原子通常連接至靶向配位體。
術語「患者(patient)」、「個體(subject)」及「個人(individual)」可互換使用且係指人類或非人類動物。此等術語包括哺乳動物，諸如人類、靈長類動物、家畜動物(例如牛科動物、豬科動物)、伴侶動物(例如犬科動物、貓科動物)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。
如本文所用，「治療(treating)」或「治療(treatment)」及其文法變體係指用於獲得有益或所要結果之方法。術語可指減緩病狀、病症或疾病之發作或發展速率，減少或緩解與其相關之症狀，產生病狀之完全或部分消退，或以上中之任一者之某一組合。出於本發明之目的，有益或所要臨床結果包括但不限於降低或緩解症狀、減輕疾病程度、使疾病狀態穩定(亦即不惡化)、延緩或減緩疾病惡化、改善或緩和疾病狀態及緩解(無論部分或完全)，無論可偵測或不可偵測。「治療」亦可意謂相對於在未接受治療之情況下的預期存活時間延長存活期。因此，需要治療之個體(例如人類)可為已罹患所討論之疾病或病症的個體。術語「治療」包括與未進行治療相比抑制或降低病理狀態或症狀之嚴重度增加，且無需意謂暗示使相關疾病、病症或病狀完全停止。
如本文所用，術語「預防」及其文法變體係指一種用於抑制或預防病狀、疾病或病症之發展、進展或發作次數或發作率的方法，且可關於病變及/或症狀。為達成本發明之目的，有利的或所需的臨床結果包括但不限於預防、抑制或減緩疾病之症狀、進程或發展，無論可偵測或不可偵測。因此，需要預防之個體可為尚未罹患所討論之疾病或病症之個體。術語「預防」包括與未進行治療相比減緩疾病發作，且無需意謂暗示永久性預防相關疾病、病症或病狀。因此，在某些情形下，病狀之「預防」可係指降低罹患病狀的風險，或預防、抑制或延遲與病狀相關之症狀之發展。應理解，預防可視為治療或療法。
如本文所用，「有效量」、「預防有效量」、「治療有效量」或「有效劑量」為組合物(例如治療性組合物或藥劑)在個體中產生至少一種所需治療效果(諸如預防或治療目標病狀或有利地緩解與病狀相關之症狀)之量。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指對接受所討論之鹽之投與的患者或個體無害的鹽。其可為例如選自酸加成鹽及鹼性鹽之鹽。酸加成鹽之實例包括氯化物鹽、檸檬酸鹽及乙酸鹽。鹼性鹽之實例包括鹽，其中陽離子選自鹼金屬陽離子，諸如鈉或鉀離子；鹼土金屬陽離子，諸如鈣或鎂離子；及經取代之銨離子，諸如型N(R 1)(R 2)(R 3)(R 4) +之離子，其中R 1、R 2、R 3及R 4將獨立地通常表示氫，視情況經取代之C1-6-烷基或視情況經取代之C2-6-烯基。相關C1-6烷基之實例包括甲基、乙基、1-丙基及2-丙基。可能相關的C2-6烯基之實例包括乙烯基、1-丙烯基及2-丙烯基。醫藥學上可接受之鹽之其他實例描述於「Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology」, 第3版, James Swarbrick (編), Informa Healthcare USA (Inc.), NY, USA, 2007中的「Remington's Pharmaceutical Sciences」, 第17版, Alfonso R.Gennaro (編), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985(及其較新的版本)中，及J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977)中。「醫藥學上可接受之鹽」定性保持母體化合物之所需生物活性，而不相對於化合物賦予任何非所需作用。醫藥學上可接受之鹽之實例包括酸加成鹽及鹼加成鹽。酸加成鹽包括衍生於無毒無機酸之鹽，諸如鹽酸、硝酸、亞磷酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸及其類似物；或衍生於無毒有機酸之鹽，諸如脂族單甲酸及脂族二甲酸、經苯基取代之烷酸、羥基烷酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸及其類似物。鹼加成鹽包括衍生於鹼土金屬之鹽，諸如鈉、鉀、鎂、鈣及其類似物；以及衍生於無毒有機胺之鹽，諸如N,N'-二苯甲基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因(procaine)及其類似物。
術語「醫藥學上可接受之載劑」包括標準醫藥學載劑中之任一者。用於治療性用途之醫藥學上可接受之載劑在醫藥領域中為熟知的，且描述於例如Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro編 1985)中。例如，可在略微酸性或生理pH下使用無菌鹽水及磷酸鹽緩衝鹽水。例示性pH緩衝劑包括磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、參(羥基甲基)胺基甲烷(TRIS)、N-參(羥基甲基)甲基-3-胺基丙磺酸(TAPS)、碳酸氫銨、二乙醇胺、組胺酸(其為較佳的緩衝劑)、精胺酸、離胺酸或乙酸鹽或其混合物。該術語進一步涵蓋美國藥典(US Pharmacopeia)中列舉之用於動物(包括人類)之任何藥劑。「醫藥學上可接受之載劑」包括任何及所有生理學上可接受，亦即相容溶劑、分散液介質、包衣、抗微生物劑、等張劑及吸收延遲劑及其類似物。在某些實施例中，載劑適用於靜脈內、肌內、皮下、非經腸、脊髓或表皮投與(例如藉由注射或輸注)。視選擇之投與途徑而定，核酸包覆在一或多種材料中，旨在保護化合物免受酸及其他天然失活條件的作用，當藉由特定投與途徑投與個體時，核酸可能暴露在此等條件下。
在本發明之情形下，術語「溶劑合物」係指溶質(在此情況下，根據本發明之核酸化合物或其醫藥學上可接受之鹽)與溶劑之間形成的既定化學計量之複合體。在此方面，溶劑可為例如水或另一醫藥學上可接受之(通常)小型分子有機物質，諸如(但不限於)乙酸或乳酸。當所討論之溶劑為水時，此類溶劑合物通常稱為水合物。
現將參考以下非限制性圖式及實例描述本發明。
附圖說明 圖 1展示在與以PPIB mRNA正規化的GalNAc結合之siRNA一起培育後，初生食蟹獼猴肝細胞中的相對CFB mRNA表現。ut表示未經處理細胞中之目標表現，且Ctr表示與非靶向對照siRNA一起培育後的目標表現。 圖 2展示在與以PPIB mRNA正規化的GalNac結合之siRNA一起培育後，初生人類肝細胞中的相對CFB mRNA表現。ut表示未經處理細胞中之目標表現，且Ctr表示與非靶向對照siRNA一起培育後的目標表現。 圖 3展示在與以APOB mRNA正規化的siRNA GalNAc結合物一起培育後，初生鼠類肝細胞中的相對CFB mRNA表現。ut表示未經處理細胞中之目標表現，且Ctr表示與非靶向對照siRNA一起培育後的目標表現。 圖 4展示初生小鼠(A)、人類(B)及食蟹獼猴(C)肝細胞中，在與以ApoB (A)或PPIB (B、C) mRNA正規化的GalNAc結合之siRNA一起培育後的相對CFB mRNA表現。 圖 5A展示在單次給藥1或5 mg/kg GalNAc結合之siRNA EV2184、EV2185、EV2187、EV2188及EV2195之後14天，鼠類肝臟中之相對CFB mRNA表現%。給與PBS的一組當作對照。資料在條形圖中展示為平均值±SD (每組n=5)。 圖 5B展示在單次給藥1或5 mg/kg GalNAc結合之siRNA EV2184、EV2197、EV2185及EV2200之後21天及42天，鼠類肝臟中之相對CFB mRNA表現%。給與PBS的一組當作對照。資料在條形圖中展示為平均值±SD (每組n=4)。 圖 6展示在單次皮下給藥GalNAc結合之siRNA EV2196、EV2204及EV2198之後4週及8週時CFB mRNA降低。
實例 實例 1HepG2細胞之活體外研究展示在轉染0.5 nM及10 nM siRNA後，經測試之siRNA的CFB減弱功效。
在HepG2細胞中轉染0.5或10 nM siRNA後，測定siRNA EV2001-EV2180 (表5b)之CFB減弱功效。結果描繪於下表3中。在減弱之後，剩餘CFB含量在10 nM下係在6%至84%範圍內，在0.5 nM下係在14%與95%之間。在10 nM下，最強效siRNA為EV2160、EV2159、EV2167、EV2050、EV2036、EV2101及EV2042。
對於用siRNA轉染HepG2細胞，在96孔組織培養盤(TPP, 目錄號92096, Switzerland)中以15,000個細胞/孔之密度接種細胞。接種前即刻根據製造商說明書，用Lipofectamine RNAiMax (Invitrogen/Life Technologies, 目錄號13778-500, Germany)進行siRNA轉染。使用CFB siRNA分別以10 nM及0.5 nM一式三份進行雙劑量篩選，其中亂序siRNA及靶向螢光素酶之siRNA作為非特異性對照。在與siRNA一起培育24小時之後，將培養基移除，且將細胞溶解於250 µl之溶解緩衝液(InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec, 目錄號7061300400, Germany))中，且隨後在-80℃下冷凍。使用InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec, 目錄號7061300400, Germany)分離RNA。使用CFB及PPIB特異性引子探針組及Takyon™ One-Step Low Rox Probe 5X MasterMix dTTP在來自Applied Biosystems的QuantStudio6裝置上以單重(single-plex)384孔格式進行RT-qPCR。使用△△Ct法計算表現差異，且測定以管家基因PPIB正規化的CFB之相對表現。結果表示為表3中siRNA轉染之後的剩餘CFB mRNA%。
雙螺旋體 在10 nM 下之 剩餘mRNA% 在0.5 nM 下之 剩餘mRNA%
平均值 SD 平均值 SD
EV2001 40.6 3.3 84.7 10.1
EV2002 16.4 5.0 62.2 7.1
EV2003 32.6 5.2 87.9 2.9
EV2004 34.3 7.5 79.5 3.5
EV2005 8.9 2.0 32.9 4.3
EV2006 12.4 4.8 53.3 14.2
EV2007 38.7 6.6 75.3 6.1
EV2008 12.1 3.4 36.4 3.7
EV2009 13.3 2.3 39.8 0.3
EV2010 9.4 2.5 31.0 9.5
EV2011 12.1 0.6 28.2 7.1
EV2012 10.4 1.8 34.2 12.9
EV2013 12.0 3.4 46.3 12.2
EV2014 76.2 5.6 91.5 7.2
EV2015 20.6 3.6 72.8 6.8
EV2016 14.0 4.6 48.1 2.8
EV2017 8.1 0.7 32.5 8.2
EV2018 12.6 1.2 28.7 4.8
EV2019 13.2 1.8 44.9 4.0
EV2020 11.3 1.3 35.4 2.6
EV2021 36.6 3.7 82.6 6.4
EV2022 8.8 1.9 29.7 1.6
EV2023 12.4 0.8 31.7 1.8
EV2024 9.1 0.6 24.3 1.9
EV2025 18.2 0.4 70.9 9.6
EV2026 9.3 1.8 31.4 7.2
EV2027 13.6 2.9 45.4 5.6
EV2028 13.8 2.2 55.7 3.4
EV2029 9.9 1.8 23.2 3.8
EV2030 12.6 2.1 53.7 3.6
EV2031 10.8 1.3 32.3 4.1
EV2032 10.8 3.4 43.5 4.1
EV2033 21.7 2.6 61.7 2.8
EV2034 15.3 2.9 54.3 3.4
EV2035 16.8 3.0 46.3 5.9
EV2036 7.2 2.3 15.5 1.6
EV2037 29.6 1.9 75.2 4.8
EV2038 11.2 3.5 34.3 5.2
EV2039 32.9 2.3 76.2 5.4
EV2040 8.5 2.2 24.6 3.8
EV2041 9.8 1.0 23.7 3.2
EV2042 7.8 2.2 41.1 11.9
EV2043 60.6 8.8 86.7 5.6
EV2044 9.8 1.2 26.8 2.3
EV2045 15.9 4.5 58.4 6.4
EV2046 9.5 4.4 33.0 6.8
EV2047 11.6 1.5 18.5 2.3
EV2048 9.3 1.6 17.9 1.7
EV2049 9.8 2.0 26.7 1.3
EV2050 7.2 0.5 13.6 1.4
EV2051 12.9 1.4 34.2 9.3
EV2052 23.2 2.9 46.0 7.6
EV2053 17.3 2.0 48.0 6.2
EV2054 23.9 1.3 77.8 7.3
EV2055 37.2 0.9 83.3 9.4
EV2056 52.6 4.9 77.6 4.4
EV2057 49.0 2.9 89.4 6.5
EV2058 54.1 3.8 81.9 8.3
EV2059 38.0 3.2 86.9 2.8
EV2060 50.9 8.5 93.5 2.0
EV2061 53.6 7.6 94.7 2.6
EV2062 29.1 6.8 82.7 2.1
EV2063 19.3 2.6 52.8 7.7
EV2064 45.5 2.2 82.0 3.4
EV2065 15.4 1.8 62.0 5.7
EV2066 15.6 4.1 42.0 4.8
EV2067 49.9 1.8 89.6 4.4
EV2068 70.2 5.4 93.9 8.7
EV2069 26.7 3.0 64.2 2.6
EV2070 15.4 3.4 54.1 3.7
EV2071 23.9 0.3 60.5 6.8
EV2072 22.1 5.0 76.3 7.7
EV2073 15.2 3.7 51.4 8.9
EV2074 18.3 1.6 44.2 5.0
EV2075 27.0 4.6 66.8 7.6
EV2076 19.7 2.3 43.7 7.5
EV2077 28.0 5.6 68.9 6.0
EV2078 41.5 4.3 78.3 4.4
EV2079 40.5 0.9 82.4 1.7
EV2080 31.5 1.5 75.3 6.1
EV2081 15.3 3.0 27.8 2.1
EV2082 16.8 1.4 45.0 6.9
EV2083 26.3 6.1 64.8 3.3
EV2084 17.9 2.8 38.9 7.7
EV2085 31.8 1.0 65.6 7.9
EV2086 19.3 2.6 37.7 4.1
EV2087 15.2 1.0 39.3 6.8
EV2088 20.9 2.8 43.8 5.2
EV2089 20.1 1.2 39.0 9.0
EV2090 20.8 3.7 57.5 10.1
EV2091 28.4 5.5 72.8 10.2
EV2092 51.7 6.9 76.7 3.4
EV2093 28.2 1.4 75.5 2.3
EV2094 24.3 5.5 66.1 4.3
EV2095 10.9 3.1 35.3 11.4
EV2096 21.6 4.8 63.1 7.8
EV2097 20.1 2.6 45.7 10.6
EV2098 18.9 2.0 55.8 10.2
EV2099 13.1 2.2 38.6 8.2
EV2100 12.2 0.5 23.0 3.5
EV2101 7.5 0.2 17.4 1.5
EV2102 9.3 0.5 51.3 8.4
EV2103 16.7 1.3 42.6 5.8
EV2104 11.4 0.1 48.0 6.8
EV2105 9.1 1.0 23.4 1.5
EV2106 9.0 0.9 28.0 6.1
EV2107 7.8 1.2 20.7 1.1
EV2108 10.6 1.1 29.1 3.1
EV2109 38.3 8.7 93.7 6.7
EV2110 9.7 0.8 35.7 6.3
EV2111 29.7 3.4 73.6 6.6
EV2112 17.1 1.0 47.5 7.7
EV2113 18.4 1.8 61.8 9.7
EV2114 12.4 0.5 32.2 0.5
EV2115 14.4 1.4 37.4 0.8
EV2116 24.4 2.8 46.6 6.9
EV2117 8.1 2.9 48.9 4.9
EV2118 19.4 1.1 55.1 2.5
EV2119 42.8 5.6 94.3 7.5
EV2120 40.5 2.8 92.1 6.0
EV2121 18.5 0.8 70.9 1.2
EV2122 26.4 1.2 75.8 5.2
EV2123 31.2 2.1 62.8 4.8
EV2124 22.0 3.4 71.3 3.3
EV2125 9.9 0.7 29.1 5.4
EV2126 15.5 3.4 49.8 5.5
EV2127 21.7 2.8 75.5 8.0
EV2128 17.6 0.4 49.1 1.0
EV2129 23.5 3.2 57.7 4.2
EV2130 21.6 1.4 66.7 4.1
EV2131 20.4 2.0 46.0 2.0
EV2132 60.1 3.3 91.2 4.4
EV2133 15.4 6.7 35.2 3.5
EV2134 12.8 2.3 53.1 5.9
EV2135 15.4 6.7 39.7 3.9
EV2136 52.7 7.1 81.8 3.2
EV2137 15.0 2.7 40.8 6.7
EV2138 14.8 3.1 52.1 7.2
EV2139 17.2 2.8 46.0 3.4
EV2140 48.1 1.2 83.5 2.1
EV2141 12.3 0.8 35.6 7.4
EV2142 10.8 1.8 29.9 6.8
EV2143 13.4 3.0 22.0 5.3
EV2144 13.6 3.7 22.0 6.3
EV2145 21.4 4.1 19.3 4.5
EV2146 16.7 4.3 32.7 5.4
EV2147 13.3 3.2 22.8 2.7
EV2148 14.1 4.4 14.6 2.1
EV2149 11.7 5.1 22.5 2.8
EV2150 22.0 1.0 66.3 3.9
EV2151 75.6 6.3 87.6 4.5
EV2152 27.9 12.0 55.6 1.3
EV2153 59.5 9.8 93.3 2.3
EV2154 30.4 7.8 72.3 6.7
EV2155 33.7 6.7 80.0 4.9
EV2156 11.2 5.1 38.0 3.8
EV2157 21.7 5.6 40.4 5.9
EV2158 13.3 4.8 40.1 6.3
EV2159 6.8 1.8 18.7 6.9
EV2160 6.1 1.4 21.0 5.1
EV2161 20.7 2.8 65.5 11.6
EV2162 83.9 2.7 93.8 1.5
EV2163 12.7 0.7 52.2 8.7
EV2164 11.2 1.4 46.1 12.3
EV2165 16.2 4.2 54.8 12.1
EV2166 26.8 4.0 79.2 2.9
EV2167 7.1 2.1 32.3 2.9
EV2168 14.6 6.9 63.4 6.8
EV2169 20.4 1.0 88.4 2.5
EV2170 11.1 1.1 30.5 6.8
EV2171 13.4 2.4 38.6 6.0
EV2172 14.3 2.0 54.0 5.8
EV2173 16.2 2.6 26.6 2.0
EV2174 52.9 3.7 74.6 8.0
EV2175 12.0 3.4 23.6 2.7
EV2176 14.1 5.3 51.7 6.5
EV2177 20.6 6.3 46.0 2.9
EV2178 16.6 1.9 51.7 9.1
EV2179 30.5 3.5 76.7 9.8
EV2180 84.3 3.9 86.4 6.4
表 3：靶向CFB之siRNA的雙劑量篩選(10 nM及0.5 nM)之結果.
形成siRNA雙螺旋體中之各者的單股之屬性以及其序列及修飾見於本說明書結尾之表格中。
實例 2初生食蟹獼猴肝細胞中之活體外研究展示，經測試之siRNA-GalNAc結合物之CFB減弱功效。
在與GalNAc siRNA結合物以100 nM、10 nM、1 nM、0.1 nM及0.01 nM一起培育後，評定CFB mRNA之表現。siRNA結合物列於表5c中。管家基因PPIB之mRNA含量當作對照。
為測試初生食蟹獼猴肝細胞中GalNac結合之siRNA對CFB之減弱功效，在膠原蛋白塗佈之96孔盤(Life Technologies)上接種45,000個細胞/孔(供應商：Life Technologies及Primacyt)。在接種後立即添加濃度介於100 nM與0.01 nM之間的siRNA。處理後24小時，使用InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec)裂解細胞。使用針對CFB及PPIB之mRNA特異性引子及探針進行RT-qPCR。使用△△Ct法計算表現差異，且測定以管家基因PPIB正規化的CFB之相對表現。結果表示為CFB與PPIB mRNA相對於未經處理之含量之比率且可見於圖1中。
對所有經測試之GalNAc結合物均觀測到CFB mRNA之劑量依賴性減弱，其中對EV2181、EV2182、EV2185、EV2186、EV2190及EV2195觀測到最強劑量依賴性目標減弱。
實例 3初生人類肝細胞之活體外研究展示，經測試之siRNA-GalNAc結合物之CFB減弱功效。
在與GalNAc siRNA結合物以100 nM、20 nM、4 nM、0.8 nM及0.16 nM一起培育後，評定CFB mRNA之表現。經測試之siRNA結合物列於表5c中。管家基因PPIB之mRNA含量當作對照。
為測試初生人類肝細胞中GalNAc結合之siRNA對CFB之減弱功效，在膠原蛋白塗佈之96孔盤(Life technologies)上接種35000個細胞/孔(供應商：Life technologies)。在接種後立即添加濃度介於100 nM與0.16 nM之間的siRNA。處理後24小時，使用InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec)裂解細胞。使用針對CFB及PPIB之mRNA特異性引子及探針進行RT-qPCR。使用△△Ct法計算表現差異，且CFB之相對表現以管家基因PPIB之表現正規化。結果表示為CFB與PPIB mRNA相對於未經處理之含量之比率並可見於圖2中。
對所有經測試之GalNAc結合物均觀測到CFB mRNA之劑量依賴性減弱，對EV2181、EV2182、EV2184、EV2185、EV2186、EV2190及EV2193觀測到最強劑量依賴性目標減弱。
實例 4初生小鼠肝細胞之活體外研究展示經測試之siRNA-GalNAc結合物之CFB減弱功效。
在與GalNAc siRNA結合物以100 nM、10 nM、1 nM、0.1 nM及0.01 nM一起培育後，評定CFB mRNA之表現。siRNA結合物列於表5c中。管家基因ApoB之mRNA含量當作對照。
為測試在初生小鼠肝細胞中GalNAc結合之siRNA對CFB的減弱功效，在膠原蛋白塗佈之96孔盤(Life Technologies)上接種25,000個細胞/孔(供應商：Life Technologies及Primacyt))。在接種後立即添加濃度介於100 nM與0.01 nM之間的siRNA。處理後24小時，使用InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec)裂解細胞。使用針對CFB及ApoB之mRNA特異性引子及探針進行qPCR。使用△△Ct法計算表現差異，且CFB之相對表現以管家基因ApoB之表現正規化。結果表示為CFB與ApoB mRNA相對於未經處理之含量之比率並可見於圖3中。
對所有經測試之GalNAc結合物觀測到CFB mRNA之劑量依賴性減弱，對EV2184、EV2185及EV2188觀測到最強劑量依賴性目標減弱。
實例 5初生小鼠、人類及食蟹獼猴肝細胞中之活體外研究展示，經測試之siRNA-GalNAc結合物之CFB減弱功效。
在與GalNAc siRNA結合物EV2196、EV2197、EV2198、EV2199、EV2200、EV2201、EV2202、EV2203、EV2204、EV2205及EV2206一起培育後的CFB mRNA之表現
siRNA結合物列於表5c中。管家基因PPIB (食蟹獼猴及人類細胞)或APOB (小鼠細胞)之mRNA含量當作對照。
分別以25,000、30,000或40,000個細胞/孔之密度將小鼠、人類或食蟹獼猴初生肝細胞接種於膠原蛋白I塗佈之96孔盤中。在接種於先前確定之培養基中之後立即添加GalNAc結合之siRNA至100 nM至0.01 nM之最終siRNA濃度。接著在37℃下在5% CO 2氛圍中培育培養盤24小時。隨後，裂解細胞且使用InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec)分離RNA。將十微升RNA溶液藉由用CFB及PPIB或ApoB之擴增子組/序列進行反轉錄定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)用於基因表現分析。藉由使用比較CT法，亦稱為2 -△△Ct法，計算資料。
所有經測試之GalNAc結合之siRNA均濃度依賴性地降低CFB mRNA表現。
結果展示於圖4中，其中圖(A)、(B)及(C)分別展示初生小鼠(A)、人類(B)及食蟹獼猴(C)肝細胞中之相對CFB mRNA表現。
實例 6活體內研究展示在不同時間點單次皮下給藥1或5 mg/kg GalNAc結合之siRNA後，鼠類肝臟組織中的CFB mRNA之減弱。
siRNA結合物列於表5c中。管家基因ACTB之mRNA含量當作管家基因對照。
年齡為8週之雄性C57BL/6小鼠自Janvier, France獲得。根據德國動物保護法倫理準則(ethical guidelines of the German Protection of Animals Act) 2013年7月之版本進行動物實驗。將小鼠根據體重隨機分組，每組4或5隻小鼠。在研究第0天，動物接受單次皮下給藥1或5 mg/kg溶解於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之siRNA或僅PBS作為對照。在研究期間監測小鼠之存活力、體重及行為，無病理性發現。
在第14天(圖5A)或在第21天及第42天(圖5B)，終止研究，使動物安樂死，且將肝樣品速凍且儲存於-80℃下直至進一步分析。總體而言，為了分析，根據製造商說明書用RNeasy纖維組織微型套組(QIAGEN, Venlo, Netherlands)製備總RNA。為了評定經分離RNA之完整性，使用2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, USA)進行自動化電泳。每次反應一百奈克總RNA用於RT-qPCR，其中擴增子組對小鼠CFB及 ACTB具有特異性。
使用△△Ct法計算表現差異，且將以PBS正規化之CFB相對於管家基因ACTB之相對表現用於比較不同siRNA。EV2184、EV2185、EV2187、EV2188及EV2195誘導肝臟CFB mRNA之劑量依賴性減弱。使用EV2184、EV2187及EV2188，以5 mg/kg siRNA，在14天之後觀測到達成之最大減弱，分別為90%、89%及87% (圖5A)。
第二實驗中之siRNA結合物EV2184、EV2197、EV2185及EV2200亦誘導肝臟CFB mRNA之劑量依賴性減弱。使用siRNA EV2197及EV2200，以5 mg/kg siRNA，在21天之後，觀測到達成之最大減弱(分別為94%及88%)。使用EV2197及EV2200，以5 mg/kg siRNA，在42天後達成之最大減弱分別為88%及77% (圖5B)。
實例 7(vp)-mU-phos之合成如以下中所描述進行：Prakash, Nucleic Acids Res. 2015, 43(6), 2993-3011及Haraszti, Nucleic Acids Res. 2017, 45(13), 7581-7592。可如WO2017/174657中所描述進行ST41 (ST41-phos)以及ST23 (ST23-phos)之胺基亞磷酸酯衍生物之合成。如Caruthers, J. Org. Chem. 1996, 61, 4272-4281中所述進行硫代胺基亞磷酸酯之合成。
實例 8根據下文所描述且熟習此項技術者已知之方法合成示例性化合物。藉由應用胺基亞磷酸酯方法之固相合成進行寡核苷酸鏈及連接子建構嵌段之組裝。
下游裂解、脫除保護基及純化遵循在此項技術中熟知之標準程序進行。
使用市售2'O-甲基RNA及2'氟-2'去氧基RNA鹼基負載之CPG固態支撐物及胺基亞磷酸酯(所有標準保護，ChemGenes，LinkTech)在AKTA oligopilot 10上進行寡核苷酸合成。
輔助試劑購自EMP Biotech及Biosolve。使用0.1 M胺基亞磷酸酯於無水乙腈(＜20 ppm H 2O)中之溶液進行合成，且使用苯甲硫基四唑(BTT)作為活化劑(0.3 M於乙腈中)。偶合時間為10分鐘。若使用硫代胺基亞磷酸酯引入二硫代磷酸酯鍵(PS2)，則進行歷經60分鐘之重複偶合洗滌循環。應用Cap/OX/Cap或Cap/Thio/Cap循環(Cap：Ac 2O/NMI/二甲基吡啶/乙腈，氧化劑：0.05 M I 2於吡啶/H 2O中)。在乙腈(Link technologies)中使用市售硫醇化試劑50 mM EDITH引入硫代磷酸酯及二硫代磷酸酯。DMT裂解藉由用含3%二氯乙酸之甲苯處理來達成。在完成程式化合成循環後，進行二乙胺(DEA)洗滌。所有寡核苷酸以無DMT(DMT-off)模式合成。
藉由連續偶合分支三倍體胺基酸酯(branching trebler amidite)衍生物(C4XLT-phos)，接著GalNAc胺基酸酯(ST23-phos)來引入三觸角GalNAc簇(Tri-antennary GalNAc cluster)(ST23/ST41)。(vp)-mU部分之連接藉由在最後合成循環中使用(vp)-mU-phos來達成。(vp)-mU-phos不提供適合於進一步合成延長的羥基，且因此不具有DMT-基團。因此(vp)-mU-phos之偶合導致合成終止。
為移除掩蔽乙烯基膦酸酯的甲酯，將攜帶充分組裝之寡核苷酸的CPG減壓乾燥，且轉移至裝配有圓盤熔塊(Carl Roth GmbH)之用於固相肽合成之20 ml PP注射器反應器中。隨後在室溫下使CPG與250 µL TMSBr及177 µL吡啶於CH 2Cl 2(0.5 ml/µmol固態支撐物結合之寡核苷酸)中之溶液接觸，且用Luer蓋密封反應器。反應容器經2×15分鐘之時段略微攪動，丟棄過量試劑，且用10 ml乙腈洗滌殘餘CPG 2次。其他下游處理並未改變任何其他示例性化合物。
在室溫下在90分鐘內藉由40%甲胺水溶液處理(若存在二硫代磷酸酯鍵，則在20 mM DTT存在下)，將單股自CPG上裂解下來。所得粗寡核苷酸藉由離子交換層析(Resource Q，6 ml，GE Healthcare)在AKTA Pure HPLC系統上使用氯化鈉梯度純化。將含有產物之溶離份彙集，在尺寸排阻管柱(Zetadex，EMP Biotech)上去鹽，且凍乾直至進一步使用。
所有最終單股產物藉由AEX-HPLC分析以證明其純度。各別單股產物之屬性藉由LC-MS分析證明。
實例 9將個別單股以60 OD/ml之濃度溶解於H 2O中。兩個個別寡核苷酸溶液一起添加於反應容器中。為了更容易地反應監測，進行滴定。如藉由260 nm下之UV吸收所測定，第一股相比於第二股過量添加25%。將反應混合物加熱至80℃持續5分鐘且接著緩慢冷卻至室溫。藉由離子成對逆相HPLC監測雙股形成。自殘餘單股之UV面積計算所需量之第二股，且將其添加至反應混合物中。將反應物再次加熱至80℃且緩慢冷卻至室溫。重複此程序直至偵測到小於10%之殘餘單股。
實例 10HepG2細胞之活體外研究展示在轉染20、4、0.8、0.16或0.032 nM siRNA後，經測試之siRNA的 CFB減弱功效。
在HepG2細胞中轉染20、4、0.8或0.16 nM siRNA後，測定所選siRNA的 CFB減弱功效(表5b)。結果描繪於下表6中。在20 nM下，減弱後剩餘 CFB含量達到32%之最小值，且在4 nM下達到43%之最小值。
對於用siRNA轉染HepG2細胞，在96孔組織培養盤(TPP, 目錄號92096, Switzerland)中以40,000個細胞/孔之密度接種細胞。接種前即刻根據製造商說明書，用Lipofectamine RNAiMax (Invitrogen/Life Technologies, 目錄號13778-500, Germany)進行siRNA轉染。用CFB siRNA分別以20、4、0.8、0.16或0.032 nM一式三份進行劑量反應篩選，其中亂序siRNA及靶向螢光素酶之siRNA作為非特異性對照。與siRNA一起培育24小時後，移除培養基，且在250 µL溶解緩衝液(InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec, 目錄號7061300400, Germany))中溶解細胞，且隨後在-80℃下冷凍。使用InviTrap RNA細胞HTS96套組/C (Stratec, 目錄號7061300400, Germany)分離RNA。使用CFB及PPIB特異性引子探針組及Takyon™ One-Step Low Rox Probe 5X MasterMix dTTP在來自Applied Biosystems的QuantStudio6裝置上以單重384孔格式進行RT-qPCR。使用△△Ct法計算表現差異，且測定以管家基因 PPIB正規化的 CFB之相對表現。結果表示為表6中siRNA轉染後的剩餘 CFBmRNA%。 表 6 ：靶向CFB之siRNA的劑量反應篩選(20、4、0.8、0.16、0.032 nM)之結果。
形成siRNA雙螺旋體中之各者的單股之身分以及其序列及修飾見於表5b中。
雙螺旋體 濃度 (nM) 剩餘 mRNA%
平均值 SD
EV2211 20 32 1
4 43 3
0.8 52 9
0.16 63 9
0.032 70 4
   EV2212 20 34 3
4 49 8
0.8 59 10
0.16 66 6
0.032 85 6
實例 11活體內研究展示非人類靈長類動物中CFB mRNA之減弱(NHP)。
此實驗之目標為活體內測定非人類靈長類動物(NHP)中之靶向CFB之siRNA GalNAc結合物之mRNA減弱功效。
將目的培育之食蟹獼猴(24至48月齡，雄性及雌性)分配至不同處理組(每組4個動物)。在第1天，各組藉由皮下注射用每公斤體重3 mg GalNAc siRNA之單次劑量處理，而對照動物藉由皮下注射接受媒劑、0.9%鹽水。給藥前，4週之後及8週之後，肝臟樣品藉由存活的活組織切片檢查自各動物收集且快速冷凍。自肝臟樣品中提取RNA，且藉由Taqman qRT-PCR測定CFB及ApoB mRNA含量。將針對CFB mRNA所獲得的值以針對管家基因Apo B所產生的值正規化。各個體之給藥前時間點處相對於ApoB表現的CFB mRNA表現設定為1倍目標基因表現。 GalNAc結合之siRNA EV2196、EV2204及EV2198的單次皮下給藥後4及8週CFB mRNA降低的結果展示於圖6中。在用EV2196單次治療之後4週收集之食蟹獼猴之肝臟組織中的CFB含量平均降低61%，且在8週之後降低55%。在用EV2204單次治療之後4週收集之食蟹獼猴之肝臟組織中的CFB含量平均降低22%，且在8週後未觀測到降低。在用EV2198單次治療之後4週收集之食蟹獼猴之肝臟組織中的CFB含量平均降低57%且在8週後降低32%。
陳述以下陳述表示本發明之態樣。 1. 一種用於抑制補體因子B (CFB)表現之雙股核酸，其中核酸包含第一股及第二股，其中第一股序列之未經修飾之等效物包含至少15個核苷酸之序列，序列與表5a或表1中所示之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸。 2. 如陳述項1之核酸，其中第一股與第二股係單獨股，且長度各自為18-25個核苷酸。 3. 如陳述項1或陳述項2之核酸，其中第一股與第二股形成長度為17-25個核苷酸之雙螺旋區。 4. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中雙螺旋區由17-25個連續核苷酸鹼基對組成。 5. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中該核酸： a)在兩端處為鈍端； b)在一端處具有懸垂物且在另一端處具有鈍端；或 c)在兩端處具有懸垂物。 6. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中核酸為siRNA。 7. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中核酸介導RNA干擾。 8. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中： (a)第一股序列之未經修飾之等效物包含與表5a之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)第一股序列之未經修飾之等效物包含與表5a之等第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸的序列； (c)第一股序列之未經修飾之等效物包含與表5a之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過1個核苷酸的序列； (d)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應的序列； (e)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應的序列； (f)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應的序列； (g)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表5a之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應的序列； (h)第一股序列之未經修飾之等效物包含表5a之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含對應第二股序列之序列；或 (i)第一股序列之未經修飾之等效物由表5a之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物由對應第二股序列之序列組成。 9. 如陳述項8之核酸，其中： (a)第一股序列之未經修飾之等效物包含與表1之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)第一股序列之未經修飾之等效物包含與表1之第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸的序列； (c)第一股序列之未經修飾之等效物包含與表1之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與對應第二股序列相差不超過1個核苷酸的序列； (d)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應的序列； (e)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應的序列； (f)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應的序列； (g)第一股序列之未經修飾之等效物包含與來自表1之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應的序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應的序列； (h)第一股序列之未經修飾之等效物包含表1之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含對應第二股序列之序列； (i)第一股序列之未經修飾之等效物由表1之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物由對應第二股序列之序列組成； (j)第一股序列之未經修飾之等效物基本上由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物基本上由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列組成； (k)第一股序列之未經修飾之等效物由與來自具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中第一股序列之該未經修飾之等效物進一步由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成， 且視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表1中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (l)第一股序列之未經修飾之等效物由與來自具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中第一股序列之該未經修飾之等效物進一步由具有表1中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 其中第一股序列之該未經修飾之等效物由與SEQ ID NO. 758之CFB轉錄物互補的長度為17-25個核苷酸、較佳長度為18-24個核苷酸之連續區域組成；及 視情況其中第二股序列之未經修飾之等效物包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表1中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (m)以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者的第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物存在於單股上，其中第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物能夠彼此雜交，且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸；或 (n)以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者的第一股之未經修飾之等效物及第二股之未經修飾之等效物係在兩個單獨股上，該等未經修飾之等效物能夠彼此雜交，且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸。 10. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中第一及/或第二股之至少一個核苷酸為經修飾之核苷酸。 11. 如陳述項10之核酸，其中至少第一股之核苷酸2及14藉由第一修飾來修飾，該等核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。 12 如陳述項10或陳述項11之核酸，其中第一股之偶數核苷酸中之各者藉由第一修飾來修飾，該等核苷酸以第一股之5'端處之核苷酸編號1開始連續編號。 13. 如陳述項11或陳述項12之核酸，其中第一股之奇數核苷酸藉由第二修飾來修飾，其中第二修飾不同於第一修飾。 14. 如陳述項11至13中任一項之核酸，其中在與第一股之偶數核苷酸對應的位置中之第二股之核苷酸藉由第三修飾來修飾，其中第三修飾不同於第一修飾。 15. 如陳述項11至14中任一項之核酸，其中在與第一股之奇數核苷酸對應的位置中之第二股之所有核苷酸藉由第四修飾來修飾，其中當存在第二及/或第三修飾時，第四修飾不同於第二修飾且不同於第三修飾。 16. 如陳述項11至13中任一項之核酸，其中與第一股之核苷酸11或核苷酸13或核苷酸11及13或核苷酸11-13對應之位置中的第二股之核苷酸/核苷酸藉由第四修飾來修飾，且較佳地其中未藉由第四修飾來修飾之第二股之核苷酸藉由第三修飾來修飾。 17. 如陳述項11至16中任一項之核酸，其中若第一修飾與第四修飾均存在於核酸中，則兩個修飾相同，且較佳地其中若第二修飾與第三修飾均存在於核酸中，則兩個修飾相同。 18. 如陳述項11至17中任一項之核酸，其中第一修飾為2'-F修飾；第二修飾若存在於核酸中，則較佳為2'-OMe修飾；第三修飾若存在於核酸中，則較佳為2'-OMe修飾；且第四修飾若存在於核酸中，則較佳為2'-F修飾。 19. 如陳述項10至18中任一項之核酸，其中第一股及第二股之各核苷酸為經修飾之核苷酸。 20. 如陳述項10至18中任一項之核酸，其中第一股在其5'端處具有末端5'(E)-乙烯基膦酸酯核苷酸，且其中末端5'(E)-乙烯基膦酸酯核苷酸較佳藉由磷酸二酯鍵連接於第一股中之第二核苷酸。 21. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中核酸包含在第一及/或第二股之末端兩個或三個3'核苷酸及/或5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵，且較佳地其中其餘核苷酸之間的鍵為磷酸二酯鍵。 22. 如陳述項1至20中任一項之核酸，其包含該第一股之3'端的兩個、三個或四個末端核苷酸中之各者之間的二硫代磷酸酯鍵，及/或包含該第二股之3'端的兩個、三個或四個末端核苷酸中之各者之間的二硫代磷酸酯鍵及/或該第二股之5'端的兩個、三個或四個末端核苷酸中之各者之間的二硫代磷酸酯鍵，且包含除該第一股之5'端的兩個、三個或四個末端核苷酸之間的二硫代磷酸酯鍵以外的鍵。 23. 如陳述項22之核酸，其中當末端不存在二硫代磷酸酯鍵時，核酸包含在第一股上之三個末端3'核苷酸中之各者之間及/或三個末端5'核苷酸中之各者之間，及/或在第二股上之三個末端3'核苷酸中之各者之間及/或三個末端5'核苷酸中之各者之間的硫代磷酸酯鍵。 24. 如陳述項22之核酸，其中除第一股之3'端之兩個末端核苷酸之間的鍵及第二股之3'端及5'端之兩個末端核苷酸之間的鍵以外的兩個股之核苷酸之間的所有鍵為磷酸二酯鍵。 25. 如陳述項10至24中任一項之核酸，其中： (a)第一股序列包含與表5b之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)第一股序列包含與表5b之第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸之序列； (c)第一股序列包含與表5b之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與相應第二股序列相差不超過1個核苷酸之序列； (d)第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應之序列； (e)第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應之序列； (f)第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應之序列； (g)第一股序列包含與來自表5b之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應之序列； (h)第一股序列包含表5b之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列包含對應第二股序列之序列；或 (i)第一股序列由表5b之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列由對應第二股序列之序列組成。 26. 如陳述項25之核酸，其中： (a)第一股序列包含與表2之第一股序列中之任一者相差不超過3個核苷酸的序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過3個核苷酸的序列； (b)第一股序列包含與表2之第一股序列中之任一者相差不超過2個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與對應第二股序列相差不超過2個核苷酸之序列； (c)第一股序列包含與表2之第一股序列中之任一者相差不超過1個核苷酸之序列，且視情況其中第二股序列包含與相應第二股序列相差不超過1個核苷酸之序列； (d)第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至17對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至17對應之序列； (e)第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至18對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至18對應之序列； (f)第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸2至19對應之序列； (g)第一股序列包含與來自表2之第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸2至19對應之序列，且視情況其中第二股序列包含與來自對應第二股序列之5'端的核苷酸1至18對應之序列； (h)第一股序列包含表2之第一股序列中之任一者之序列，且視情況其中第二股序列包含對應第二股序列之序列； (i)第一股序列由表2之第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列由對應第二股序列之序列組成； (j)第一股序列基本上由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者組成，且視情況其中第二股序列基本上由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列組成；或 (k)第一股序列由與來自具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中該第一股序列進一步由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 視情況其中第二股序列包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表2中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (l)第一股序列由與來自具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之5'端的核苷酸1至19對應的序列組成， 其中該第一股序列進一步由具有表2中所示之給定SEQ ID No.的第一股序列中之任一者之3'端處的1個(自5'端起計數之核苷酸20)、2個(核苷酸20及21)、3個(核苷酸20、21及22)、4個(核苷酸20、21、22及23)、5個(核苷酸20、21、22、23及24)或6個(核苷酸20、21、22、23、24及25)額外核苷酸組成，及 其中該第一股序列由長度為17-25個核苷酸、較佳長度為18-24個核苷酸之連續區域組成，與SEQ ID NO. 758之CFB轉錄物互補，及 視情況其中第二股序列包含以下或基本上由以下組成或由以下組成：具有表2中所示之給定SEQ ID No.的對應第二股序列之序列； (m)以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者之第一股及第二股存在於單股上，其中第一股及第二股能夠彼此雜交且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區之雙股核酸；或 (n)以上子部分(a)至(l)之核酸分子中之任一者之第一股及第二股位於兩個單獨股上，該等單獨股能夠彼此雜交且由此形成具有長度為17、18、19、20、21、22、23、24或25個核苷酸之雙螺旋區的雙股核酸。 27. 如前述陳述項中任一項之核酸，其中核酸與異源部分結合。 28. 如陳述項27之核酸，其中該異源部分包含(i)一或多個N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)部分或其衍生物，及(ii)連接子，其中該連接子將該至少一個GalNAc部分或其衍生物與該核酸結合。 29. 如陳述項27或陳述項28之核酸，其中核酸與包含式(II)化合物之異源部分結合： [S-X 1-P-X 2] 3-A-X 3-  (II) 其中： S表示功能組分，例如配位體，諸如醣，較佳地其中醣為N-乙醯基半乳胺糖； X 1表示C 3-C 6伸烷基或(-CH 2-CH 2-O) m(-CH 2) 2-，其中m為1、2或3； P為磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳為硫代磷酸酯； X 2為伸烷基或式(-CH 2) n-O-CH 2-之伸烷基醚，其中n=1-6； A為分支單元； X 3表示橋接單元； 其中如陳述項1至27中任一項之核酸經由磷酸酯或經修飾之磷酸酯，較佳硫代磷酸酯與X 3結合。 30. 如陳述項27至29中任一項之核酸，其中核酸之第一股為式(V)化合物：
Figure 02_image103
其中b為0或1；及 其中第二股為式(VI)化合物：
Figure 02_image105
； 其中： c及d獨立地為0或1； Z 1及Z 2分別為核酸之第一及第二股； Y獨立地為O或S； n獨立地為0、1、2或3；及 L 1為連接有配位體之連接子，其中L 1在式(V)及(VI)中相同或不同，且當L 1在同一式內存在超過一次時，在式(V)及(VI)內相同或不同； 且其中b+c+d為2或3。 31. 如陳述項27至30中任一項之核酸，其為表5c中所示之雙螺旋體中之一者。 32. 一種組合物，其包含如前述陳述項中任一項之核酸、及溶劑、及/或遞送媒劑、及/或生理學上可接受之賦形劑、及/或載劑、及/或鹽、及/或稀釋劑、及/或緩衝劑、及/或防腐劑。 33. 一種組合物，其包含如陳述項1至31中任一項之核酸及另一種選自包含以下之群的治療劑：寡核苷酸、小分子、單株抗體、多株抗體及肽。 34. 如陳述項1至31中任一項之核酸或如陳述項32或33之組合物，其用作治療劑。 35. 如陳述項1至31中任一項之核酸或如陳述項32或33之組合物，其用於預防或治療疾病、病症或症候群。 36. 如陳述項35之核酸或組合物，其中疾病、病症或症候群為補體介導之疾病、病症或症候群。 37. 如陳述項35或36之核酸或組合物，其中疾病、病症或症候群與補體路徑異常活化或過度活化及/或CFB之過度表現或異位表現或定位或積聚相關。 38. 如陳述項35至37中任一項之核酸或組合物，其中疾病、病症或症候群係： a)選自包含以下之群：C3腎絲球病變(C3G)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、狼瘡性腎炎、IgA腎病(IgA N)、重症肌無力(MG)、原發性膜性腎病、免疫複合體介導之絲球體腎炎(IC介導之GN)、感染後絲球體腎炎(PIGN)、全身性紅斑狼瘡(SLE)、局部缺血/再灌注損傷、年齡相關之黃斑部變性(AMD)、類風濕性關節炎(RA)、抗嗜中性白血球細胞質自體抗體相關之血管炎(ANCA-AV)、生物菌失調性牙周病、瘧疾貧血、視神經脊髓炎、HCT後/實體器官移植(TMA)、格-巴二氏症候群(Guillain-Barré syndrome)、膜性絲球體腎炎、栓塞性血小板減少性紫癲病及敗血症； b)選自包含以下之群：C3腎絲球病變(C3G)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、狼瘡性腎炎、IgA腎病(IgA N)及原發性膜性腎病； c)選自包含以下之群：C3腎絲球病變(C3G)、抗嗜中性白血球細胞質自體抗體相關之血管炎(ANCA-AV)、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、重症肌無力(MG)、IgA腎病(IgA N)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)； d)選自包含以下之群：C3腎絲球病變(C3G)、重症肌無力(MG)、視神經脊髓炎、非典型溶血性尿毒性症候群(aHUS)、抗嗜中性白血球細胞質自體抗體相關之血管炎(ANCA-AV)、IgA腎病(IgA N)、HCT後/實體器官移植(TMA)、格-巴二氏症候群、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、膜性絲球體腎炎、狼瘡性腎炎及栓塞性血小板減少性紫癲病 e)選自包含以下之群：C3腎絲球病變(C3G)及IgA腎病(IgA N)；或 f) C3腎絲球病變(C3G)。 39. 一種如陳述項1至31中任一項之核酸或如陳述項32或33之組合物的用途，其用於製備用於預防或治療疾病、病症或症候群之藥物。 40. 一種預防或治療疾病、病症或症候群之方法，其包含向需要治療之個體投與醫藥學上有效劑量之陳述項1至31中任一項之核酸或陳述項23或33之組合物，較佳地其中核酸或組合物經皮下、靜脈內或經口、經直腸或腹膜內投與來向個體投與。 彙總縮寫表 - 表 4
縮寫 含義
mA, mU, mC, mG 2'-O-甲基RNA核苷酸
2'-OMe 2'-O-甲基修飾
fA, fU, fC, fG 2'去氧-2'-F RNA核苷酸
2'-F 2'-氟修飾
(ps) 硫代磷酸酯
(ps2) 二硫代磷酸酯
(vp) 乙烯基-(E)-膦酸酯
(vp)-mU
Figure 02_image107
(vp)-mU-磷
Figure 02_image109
ivA, ivC, ivU, ivG 反向RNA (3'-3')核苷酸
ST23
Figure 02_image111
ST23-磷
Figure 02_image113
ST41 (或C4XLT)
Figure 02_image115
ST41-磷(或C4XLT-磷)
Figure 02_image117
Ser(GN) (當在鏈末端時，O---中之一者為OH)
Figure 02_image119
[ST23 (ps)]3 ST41 (ps)
Figure 02_image121
[ST23]3 ST41
Figure 02_image123
如以上縮寫表中所示之縮寫可用於本文中。縮寫之清單可能並非詳盡的且可在整個此文件中發現其他縮寫及其含義。
彙總序列表 表 5a- 未經修飾之雙螺旋體
雙螺旋體 ID 股名稱 (*) 序列 (5 ' à 3 ' ) SEQ ID No.
SX001 SX001-A CUAGACCUGGUCACAUUCC 1
SX001 SX001-B GGAAUGUGACCAGGUCUAG 2
SX002 SX002-A UCCAAGCUGAAACUCCAGA 3
SX002 SX002-B UCUGGAGUUUCAGCUUGGA 4
SX003 SX003-A UGUCCAAGCUGAAACUCCA 5
SX003 SX003-B UGGAGUUUCAGCUUGGACA 6
SX004 SX004-A GUGUCCAAGCUGAAACUCC 7
SX004 SX004-B GGAGUUUCAGCUUGGACAC 8
SX005 SX005-A CAAGAUAAAGGGCAUCAGG 9
SX005 SX005-B CCUGAUGCCCUUUAUCUUG 10
SX006 SX006-A GUAUUCCCCGUUCUCGAAG 11
SX006 SX006-B CUUCGAGAACGGGGAAUAC 12
SX007 SX007-A ACCUUCCUUGUGCCAAUGG 13
SX007 SX007-B CCAUUGGCACAAGGAAGGU 14
SX008 SX008-A GAAAGCUUCGGCCACCUCU 15
SX008 SX008-B AGAGGUGGCCGAAGCUUUC 16
SX009 SX009-A AUGUUCAUGGAGCCUGAAG 17
SX009 SX009-B CUUCAGGCUCCAUGAACAU 18
SX010 SX010-A UAGAUGUUCAUGGAGCCUG 19
SX010 SX010-B CAGGCUCCAUGAACAUCUA 20
SX011 SX011-A AUUAAGUUGACUAGACACU 21
SX011 SX011-B AGUGUCUAGUCAACUUAAU 22
SX012 SX012-A CAAUUAAGUUGACUAGACA 23
SX012 SX012-B UGUCUAGUCAACUUAAUUG 24
SX013 SX013-A CUCAAUUAAGUUGACUAGA 25
SX013 SX013-B UCUAGUCAACUUAAUUGAG 26
SX014 SX014-A UUCUCAAUUAAGUUGACUA 27
SX014 SX014-B UAGUCAACUUAAUUGAGAA 28
SX015 SX015-A UUCGUGACCCAGUCUGCAU 29
SX015 SX015-B AUGCAGACUGGGUCACGAA 30
SX016 SX016-A UCAUGCUGUACACUGCCUG 31
SX016 SX016-B CAGGCAGUGUACAGCAUGA 32
SX017 SX017-A UCAUCAAUGACAGUAAUUG 33
SX017 SX017-B CAAUUACUGUCAUUGAUGA 34
SX018 SX018-A AAACACAUAGACAUCCAGA 35
SX018 SX018-B UCUGGAUGUCUAUGUGUUU 36
SX019 SX019-A AAAGCAUUGAUGUUCACUU 37
SX019 SX019-B AAGUGAACAUCAAUGCUUU 38
SX020 SX020-A CUUGACUUUGAACACAUGU 39
SX020 SX020-B ACAUGUGUUCAAAGUCAAG 40
SX021 SX021-A GUCAUAAAAUUCAGGAAUU 41
SX021 SX021-B AAUUCCUGAAUUUUAUGAC 42
SX022 SX022-A AUAGUCAUAAAAUUCAGGA 43
SX022 SX022-B UCCUGAAUUUUAUGACUAU 44
SX023 SX023-A AGACAAAUGGGCCUGAUAG 45
SX023 SX023-B CUAUCAGGCCCAUUUGUCU 46
SX024 SX024-A ACACAAACAGAGCUUUGAU 47
SX024 SX024-B AUCAAAGCUCUGUUUGUGU 48
SX025 SX025-A GGCAUAUUGAGCAUCUCUC 49
SX025 SX025-B GAGAGAUGCUCAAUAUGCC 50
SX026 SX026-A AUGUCCUUGACUUUGUCAU 51
SX026 SX026-B AUGACAAAGUCAAGGACAU 52
SX027 SX027-A AAGUAUUGGGGUCAGCAUA 53
SX027 SX027-B UAUGCUGACCCCAAUACUU 54
SX028 SX028-A UGAACUAUCAAGGGGCCGC 55
SX028 SX028-B GCGGCCCCUUGAUAGUUCA 56
SX029 SX029-A AAUGAAACGACUUCUCUUG 57
SX029 SX029-B CAAGAGAAGUCGUUUCAUU 58
SX030 SX030-A UGAAUGAAACGACUUCUCU 59
SX030 SX030-B AGAGAAGUCGUUUCAUUCA 60
SX031 SX031-A ACUUGAAUGAAACGACUUC 61
SX031 SX031-B GAAGUCGUUUCAUUCAAGU 62
SX032 SX032-A ACCAACUUGAAUGAAACGA 63
SX032 SX032-B UCGUUUCAUUCAAGUUGGU 64
SX033 SX033-A UGUGAAAGUCUCGGGCGUG 65
SX033 SX033-B CACGCCCGAGACUUUCACA 66
SX034 SX034-A UGUUUUAAUUCAAUCCCAC 67
SX034 SX034-B GUGGGAUUGAAUUAAAACA 68
SX035 SX035-A CAGCUGUUUUAAUUCAAUC 69
SX035 SX035-B GAUUGAAUUAAAACAGCUG 70
SX036 SX036-A GUUGUCGCAGCUGUUUUAA 71
SX036 SX036-B UUAAAACAGCUGCGACAAC 72
SX037 SX037-A CACUAGACCAUAUCUUGGC 73
SX037 SX037-B GCCAAGAUAUGGUCUAGUG 74
SX038 SX038-A UGUCACUAGACCAUAUCUU 75
SX038 SX038-B AAGAUAUGGUCUAGUGACA 76
SX039 SX039-A UUCUUGGUGUUAGUCCCUG 77
SX039 SX039-B CAGGGACUAACACCAAGAA 78
SX040 SX040-A UCAGUCAUGAGGAUGAUGA 79
SX040 SX040-B UCAUCAUCCUCAUGACUGA 80
SX041 SX041-A GAUUACACCAACUUGAAUG 81
SX041 SX041-B CAUUCAAGUUGGUGUAAUC 82
SX042 SX042-A UUGUAGUAGGGAGACCGGG 83
SX042 SX042-B CCCGGUCUCCCUACUACAA 84
SX043 SX043-A UCCAAGAGCCACCUUCCUG 85
SX043 SX043-B CAGGAAGGUGGCUCUUGGA 86
SX044 SX044-A UCGUACAUGAAGGAGUCUU 87
SX044 SX044-B AAGACUCCUUCAUGUACGA 88
SX045 SX045-A CUCUUGAGGGGUGUCGUAC 89
SX045 SX045-B GUACGACACCCCUCAAGAG 90
SX046 SX046-A UUGGCUCCUGUGAAGUUGC 91
SX046 SX046-B GCAACUUCACAGGAGCCAA 92
SX047 SX047-A AUAACUUGCCACCUUCUCA 93
SX047 SX047-B UGAGAAGGUGGCAAGUUAU 94
SX048 SX048-A AGCCAAAGCAUUGAUGUUC 95
SX048 SX048-B GAACAUCAAUGCUUUGGCU 96
SX049 SX049-A GAAGCCAAAGCAUUGAUGU 97
SX049 SX049-B ACAUCAAUGCUUUGGCUUC 98
SX050 SX050-A GAACACAUGUUGCUCAUUG 99
SX050 SX050-B CAAUGAGCAACAUGUGUUC 100
SX051 SX051-A GCCGCCUUUGAUCUCUACC 101
SX051 SX051-B GGUAGAGAUCAAAGGCGGC 102
SX052 SX052-A GAGCCGCCUUUGAUCUCUA 103
SX052 SX052-B UAGAGAUCAAAGGCGGCUC 104
SX053 SX053-A AAGGAGCCGCCUUUGAUCU 105
SX053 SX053-B AGAUCAAAGGCGGCUCCUU 106
SX054 SX054-A GGAAGGAGCCGCCUUUGAU 107
SX054 SX054-B AUCAAAGGCGGCUCCUUCC 108
SX055 SX055-A GGGUAGAAGCCAGAAGGAC 109
SX055 SX055-B GUCCUUCUGGCUUCUACCC 110
SX056 SX056-A CAGAGCCCCGGAGAGUGUA 111
SX056 SX056-B UACACUCUCCGGGGCUCUG 112
SX057 SX057-A UUGGCAGGUGCGAUUGGCA 113
SX057 SX057-B UGCCAAUCGCACCUGCCAA 114
SX058 SX058-A AUUCACUUGGCAGGUGCGA 115
SX058 SX058-B UCGCACCUGCCAAGUGAAU 116
SX059 SX059-A CCAUUCACUUGGCAGGUGC 117
SX059 SX059-B GCACCUGCCAAGUGAAUGG 118
SX060 SX060-A CCCACCUUCCUUGUGCCAA 119
SX060 SX060-B UUGGCACAAGGAAGGUGGG 120
SX061 SX061-A UCUUCAAGGCGGUACUGGC 121
SX061 SX061-B GCCAGUACCGCCUUGAAGA 122
SX062 SX062-A GUCUUCAAGGCGGUACUGG 123
SX062 SX062-B CCAGUACCGCCUUGAAGAC 124
SX063 SX063-A ACAUGAAGGAGUCUUGGCA 125
SX063 SX063-B UGCCAAGACUCCUUCAUGU 126
SX064 SX064-A UUCGGCCACCUCUUGAGGG 127
SX064 SX064-B CCCUCAAGAGGUGGCCGAA 128
SX065 SX065-A CUUCUAUGGUCUCUGUCAG 129
SX065 SX065-B CUGACAGAGACCAUAGAAG 130
SX066 SX066-A AUCCUCAGCAUCGACUCCU 131
SX066 SX066-B AGGAGUCGAUGCUGAGGAU 132
SX067 SX067-A CCCAUCCUCAGCAUCGACU 133
SX067 SX067-B AGUCGAUGCUGAGGAUGGG 134
SX068 SX068-A GUGCCCAUCCUCAGCAUCG 135
SX068 SX068-B CGAUGCUGAGGAUGGGCAC 136
SX069 SX069-A UAGCACCAGGUAGAUGUUC 137
SX069 SX069-B GAACAUCUACCUGGUGCUA 138
SX070 SX070-A UCUAGCACCAGGUAGAUGU 139
SX070 SX070-B ACAUCUACCUGGUGCUAGA 140
SX071 SX071-A UCCAUCUAGCACCAGGUAG 141
SX071 SX071-B CUACCUGGUGCUAGAUGGA 142
SX072 SX072-A GAUCCAUCUAGCACCAGGU 143
SX072 SX072-B ACCUGGUGCUAGAUGGAUC 144
SX073 SX073-A UGAUCCAUCUAGCACCAGG 145
SX073 SX073-B CCUGGUGCUAGAUGGAUCA 146
SX074 SX074-A GUCUGAUCCAUCUAGCACC 147
SX074 SX074-B GGUGCUAGAUGGAUCAGAC 148
SX075 SX075-A UGUCUGAUCCAUCUAGCAC 149
SX075 SX075-B GUGCUAGAUGGAUCAGACA 150
SX076 SX076-A GCUGUCUGAUCCAUCUAGC 151
SX076 SX076-B GCUAGAUGGAUCAGACAGC 152
SX077 SX077-A AUGCUGUCUGAUCCAUCUA 153
SX077 SX077-B UAGAUGGAUCAGACAGCAU 154
SX078 SX078-A CAAUGCUGUCUGAUCCAUC 155
SX078 SX078-B GAUGGAUCAGACAGCAUUG 156
SX079 SX079-A CCAAUGCUGUCUGAUCCAU 157
SX079 SX079-B AUGGAUCAGACAGCAUUGG 158
SX080 SX080-A CCUGUGAAGUUGCUGGCCC 159
SX080 SX080-B GGGCCAGCAACUUCACAGG 160
SX081 SX081-A UAACUUGCCACCUUCUCAA 161
SX081 SX081-B UUGAGAAGGUGGCAAGUUA 162
SX082 SX082-A UGGCAUAUGUCACUAGACC 163
SX082 SX082-B GGUCUAGUGACAUAUGCCA 164
SX083 SX083-A UGGUCUUCAUAAUUGAUUU 165
SX083 SX083-B AAAUCAAUUAUGAAGACCA 166
SX084 SX084-A GUGGUCUUCAUAAUUGAUU 167
SX084 SX084-B AAUCAAUUAUGAAGACCAC 168
SX085 SX085-A UUGUGGUCUUCAUAAUUGA 169
SX085 SX085-B UCAAUUAUGAAGACCACAA 170
SX086 SX086-A UCAACUUGUGGUCUUCAUA 171
SX086 SX086-B UAUGAAGACCACAAGUUGA 172
SX087 SX087-A CUUCAACUUGUGGUCUUCA 173
SX087 SX087-B UGAAGACCACAAGUUGAAG 174
SX088 SX088-A ACUUCAACUUGUGGUCUUC 175
SX088 SX088-B GAAGACCACAAGUUGAAGU 176
SX089 SX089-A UGGUGUUAGUCCCUGACUU 177
SX089 SX089-B AAGUCAGGGACUAACACCA 178
SX090 SX090-A UCUUGGUGUUAGUCCCUGA 179
SX090 SX090-B UCAGGGACUAACACCAAGA 180
SX091 SX091-A AUGAUGACAUGGCGGGUGC 181
SX091 SX091-B GCACCCGCCAUGUCAUCAU 182
SX092 SX092-A GGAUGAUGACAUGGCGGGU 183
SX092 SX092-B ACCCGCCAUGUCAUCAUCC 184
SX093 SX093-A AGGAUGAUGACAUGGCGGG 185
SX093 SX093-B CCCGCCAUGUCAUCAUCCU 186
SX094 SX094-A UGUGCAAUCCAUCAGUCAU 187
SX094 SX094-B AUGACUGAUGGAUUGCACA 188
SX095 SX095-A UGUUGUGCAAUCCAUCAGU 189
SX095 SX095-B ACUGAUGGAUUGCACAACA 190
SX096 SX096-A CCAUGUUGUGCAAUCCAUC 191
SX096 SX096-B GAUGGAUUGCACAACAUGG 192
SX097 SX097-A ACAUCCAGAUAAUCCUCCC 193
SX097 SX097-B GGGAGGAUUAUCUGGAUGU 194
SX098 SX098-A ACCCCAAACACAUAGACAU 195
SX098 SX098-B AUGUCUAUGUGUUUGGGGU 196
SX099 SX099-A ACACAUGUUGCUCAUUGUC 197
SX099 SX099-B GACAAUGAGCAACAUGUGU 198
SX100 SX100-A AUCCUUGACUUUGAACACA 199
SX100 SX100-B UGUGUUCAAAGUCAAGGAU 200
SX101 SX101-A AUAUCCUUGACUUUGAACA 201
SX101 SX101-B UGUUCAAAGUCAAGGAUAU 202
SX102 SX102-A UUCCAUAUCCUUGACUUUG 203
SX102 SX102-B CAAAGUCAAGGAUAUGGAA 204
SX103 SX103-A GUUUUCCAUAUCCUUGACU 205
SX103 SX103-B AGUCAAGGAUAUGGAAAAC 206
SX104 SX104-A AGGUUUUCCAUAUCCUUGA 207
SX104 SX104-B UCAAGGAUAUGGAAAACCU 208
SX105 SX105-A AUCAUUUGGUAGAAAACAU 209
SX105 SX105-B AUGUUUUCUACCAAAUGAU 210
SX106 SX106-A GAUCAUUUGGUAGAAAACA 211
SX106 SX106-B UGUUUUCUACCAAAUGAUC 212
SX107 SX107-A UCAUCGAUCAUUUGGUAGA 213
SX107 SX107-B UCUACCAAAUGAUCGAUGA 214
SX108 SX108-A AUGCCACAGAGACUCAGAG 215
SX108 SX108-B CUCUGAGUCUCUGUGGCAU 216
SX109 SX109-A ACCAUGCCACAGAGACUCA 217
SX109 SX109-B UGAGUCUCUGUGGCAUGGU 218
SX110 SX110-A AACCAUGCCACAGAGACUC 219
SX110 SX110-B GAGUCUCUGUGGCAUGGUU 220
SX111 SX111-A CAAACCAUGCCACAGAGAC 221
SX111 SX111-B GUCUCUGUGGCAUGGUUUG 222
SX112 SX112-A UCCCAAACCAUGCCACAGA 223
SX112 SX112-B UCUGUGGCAUGGUUUGGGA 224
SX113 SX113-A UCUUGGCCUGCCAUGGUUG 225
SX113 SX113-B CAACCAUGGCAGGCCAAGA 226
SX114 SX114-A AGAUCUUGGCCUGCCAUGG 227
SX114 SX114-B CCAUGGCAGGCCAAGAUCU 228
SX115 SX115-A UGAGAUCUUGGCCUGCCAU 229
SX115 SX115-B AUGGCAGGCCAAGAUCUCA 230
SX116 SX116-A ACUGAGAUCUUGGCCUGCC 231
SX116 SX116-B GGCAGGCCAAGAUCUCAGU 232
SX117 SX117-A CGAAUGACUGAGAUCUUGG 233
SX117 SX117-B CCAAGAUCUCAGUCAUUCG 234
SX118 SX118-A GGGCGAAUGACUGAGAUCU 235
SX118 SX118-B AGAUCUCAGUCAUUCGCCC 236
SX119 SX119-A CAAAGUACUCAGACACCAC 237
SX119 SX119-B GUGGUGUCUGAGUACUUUG 238
SX120 SX120-A ACAAAGUACUCAGACACCA 239
SX120 SX120-B UGGUGUCUGAGUACUUUGU 240
SX121 SX121-A GCACAAAGUACUCAGACAC 241
SX121 SX121-B GUGUCUGAGUACUUUGUGC 242
SX122 SX122-A CAGCACAAAGUACUCAGAC 243
SX122 SX122-B GUCUGAGUACUUUGUGCUG 244
SX123 SX123-A AUGGGCCUGAUAGUCUGGC 245
SX123 SX123-B GCCAGACUAUCAGGCCCAU 246
SX124 SX124-A GUGCAGGGGAGACAAAUGG 247
SX124 SX124-B CCAUUUGUCUCCCCUGCAC 248
SX125 SX125-A AAACAGAGCUUUGAUAUCC 249
SX125 SX125-B GGAUAUCAAAGCUCUGUUU 250
SX126 SX126-A ACAAACAGAGCUUUGAUAU 251
SX126 SX126-B AUAUCAAAGCUCUGUUUGU 252
SX127 SX127-A GACACAAACAGAGCUUUGA 253
SX127 SX127-B UCAAAGCUCUGUUUGUGUC 254
SX128 SX128-A AUGUAGACCUCCUUCCGAG 255
SX128 SX128-B CUCGGAAGGAGGUCUACAU 256
SX129 SX129-A GAUGUAGACCUCCUUCCGA 257
SX129 SX129-B UCGGAAGGAGGUCUACAUC 258
SX130 SX130-A UCUUGAUGUAGACCUCCUU 259
SX130 SX130-B AAGGAGGUCUACAUCAAGA 260
SX131 SX131-A AUUCUUGAUGUAGACCUCC 261
SX131 SX131-B GGAGGUCUACAUCAAGAAU 262
SX132 SX132-A CCCAUUCUUGAUGUAGACC 263
SX132 SX132-B GGUCUACAUCAAGAAUGGG 264
SX133 SX133-A UCCCCAUUCUUGAUGUAGA 265
SX133 SX133-B UCUACAUCAAGAAUGGGGA 266
SX134 SX134-A CUUAUCCCCAUUCUUGAUG 267
SX134 SX134-B CAUCAAGAAUGGGGAUAAG 268
SX135 SX135-A AUUGGGGUCAGCAUAGGGA 269
SX135 SX135-B UCCCUAUGCUGACCCCAAU 270
SX136 SX136-A GUAUUGGGGUCAGCAUAGG 271
SX136 SX136-B CCUAUGCUGACCCCAAUAC 272
SX137 SX137-A UACACCAACUUGAAUGAAA 273
SX137 SX137-B UUUCAUUCAAGUUGGUGUA 274
SX138 SX138-A UCCACUACUCCCCAGCUGA 275
SX138 SX138-B UCAGCUGGGGAGUAGUGGA 276
SX139 SX139-A ACAUCCACUACUCCCCAGC 277
SX139 SX139-B GCUGGGGAGUAGUGGAUGU 278
SX140 SX140-A GCAGACAUCCACUACUCCC 279
SX140 SX140-B GGGAGUAGUGGAUGUCUGC 280
SX141 SX141-A UUUGCAGACAUCCACUACU 281
SX141 SX141-B AGUAGUGGAUGUCUGCAAA 282
SX142 SX142-A ACCCAAAUCCUCAUCUUGG 283
SX142 SX142-B CCAAGAUGAGGAUUUGGGU 284
SX143 SX143-A AACCCAAAUCCUCAUCUUG 285
SX143 SX143-B CAAGAUGAGGAUUUGGGUU 286
SX144 SX144-A AAACCCAAAUCCUCAUCUU 287
SX144 SX144-B AAGAUGAGGAUUUGGGUUU 288
SX145 SX145-A AAAACCCAAAUCCUCAUCU 289
SX145 SX145-B AGAUGAGGAUUUGGGUUUU 290
SX146 SX146-A GAAAACCCAAAUCCUCAUC 291
SX146 SX146-B GAUGAGGAUUUGGGUUUUC 292
SX147 SX147-A UAGAAAACCCAAAUCCUCA 293
SX147 SX147-B UGAGGAUUUGGGUUUUCUA 294
SX148 SX148-A UUAUAGAAAACCCAAAUCC 295
SX148 SX148-B GGAUUUGGGUUUUCUAUAA 296
SX149 SX149-A UUGGAGAAGUCGGAAGGAG 297
SX149 SX149-B CUCCUUCCGACUUCUCCAA 298
SX150 SX150-A GUCUGCACAGGGUACGGGU 299
SX150 SX150-B ACCCGUACCCUGUGCAGAC 300
SX151 SX151-A UACAUGAAGGAGUCUUGGC 301
SX151 SX151-B GCCAAGACUCCUUCAUGUA 302
SX152 SX152-A GUGUUAGUCCCUGACUUCA 303
SX152 SX152-B UGAAGUCAGGGACUAACAC 304
SX153 SX153-A CCCAUGUUGUGCAAUCCAU 305
SX153 SX153-B AUGGAUUGCACAACAUGGG 306
SX154 SX154-A AUCUUGGCCUGCCAUGGUU 307
SX154 SX154-B AACCAUGGCAGGCCAAGAU 308
SX155 SX155-A GAGAUCUUGGCCUGCCAUG 309
SX155 SX155-B CAUGGCAGGCCAAGAUCUC 310
SX156 SX156-A AGACACAAACAGAGCUUUG 311
SX156 SX156-B CAAAGCUCUGUUUGUGUCU 312
SX157 SX157-A UAUUGGGGUCAGCAUAGGG 313
SX157 SX157-B CCCUAUGCUGACCCCAAUA 314
SX158 SX158-A UACGUGUCUGCACAGGGUA 315
SX158 SX158-B UACCCUGUGCAGACACGUA 316
SX159 SX159-A GUGGAAAGAGAUCUCAUCA 317
SX159 SX159-B UGAUGAGAUCUCUUUCCAC 318
SX160 SX160-A ACCGUCAUAGCAGUGGAAA 319
SX160 SX160-B UUUCCACUGCUAUGACGGU 320
SX161 SX161-A UGGUAGGUGACGCUGUCUU 321
SX161 SX161-B AAGACAGCGUCACCUACCA 322
SX162 SX162-A ACCUUCCUGACACGUUCGC 323
SX162 SX162-B GCGAACGUGUCAGGAAGGU 324
SX163 SX163-A AGCAUCGACUCCUUCUAUG 325
SX163 SX163-B CAUAGAAGGAGUCGAUGCU 326
SX164 SX164-A ACCAUAACUUGCCACCUUC 327
SX164 SX164-B GAAGGUGGCAAGUUAUGGU 328
SX165 SX165-A AUGACAUGGCGGGUGCGGU 329
SX165 SX165-B ACCGCACCCGCCAUGUCAU 330
SX166 SX166-A GACAGUAAUUGGGUCCCCG 331
SX166 SX166-B CGGGGACCCAAUUACUGUC 332
SX167 SX167-A AACACAUAGACAUCCAGAU 333
SX167 SX167-B AUCUGGAUGUCUAUGUGUU 334
SX168 SX168-A GCAUUGAUGUUCACUUGGU 335
SX168 SX168-B ACCAAGUGAACAUCAAUGC 336
SX169 SX169-A CACAUGUUGCUCAUUGUCU 337
SX169 SX169-B AGACAAUGAGCAACAUGUG 338
SX170 SX170-A AGACUCAGAGACUGGCUUU 339
SX170 SX170-B AAAGCCAGUCUCUGAGUCU 340
SX171 SX171-A GUGUUCCCAAACCAUGCCA 341
SX171 SX171-B UGGCAUGGUUUGGGAACAC 342
SX172 SX172-A GUUGCUUGUGGUAAUCGGU 343
SX172 SX172-B ACCGAUUACCACAAGCAAC 344
SX173 SX173-A AACGUCAUAGUCAUAAAAU 345
SX173 SX173-B AUUUUAUGACUAUGACGUU 346
SX174 SX174-A ACAAAUGGGCCUGAUAGUC 347
SX174 SX174-B GACUAUCAGGCCCAUUUGU 348
SX175 SX175-A UCAAAGCUCGAGUUGUUCC 349
SX175 SX175-B GGAACAACUCGAGCUUUGA 350
SX176 SX176-A UGUUGCUGGCAAGUGGUAG 351
SX176 SX176-B CUACCACUUGCCAGCAACA 352
SX177 SX177-A AUAGCCUGGGGCAUAUUGA 353
SX177 SX177-B UCAAUAUGCCCCAGGCUAU 354
SX178 SX178-A UACAAAGGAACCGAGGGGU 355
SX178 SX178-B ACCCCUCGGUUCCUUUGUA 356
SX179 SX179-A CUUUUGCCGCUUCUGGUUU 357
SX179 SX179-B AAACCAGAAGCGGCAAAAG 358
SX180 SX180-A GUCUUGGCAGGAAGGCUCC 359
SX180 SX180-B GGAGCCUUCCUGCCAAGAC 360
SX181 SX181-A UCACAAACAGAGCUUUGAU 721
SX181 SX024-B AUCAAAGCUCUGUUUGUGU 48
SX182 SX182-A UUAUCCUUGACUUUGAACA 722
SX182 SX101-B UGUUCAAAGUCAAGGAUAU 202
SX183 SX183-A UUUGUCGCAGCUGUUUUAA 723
SX183 SX036-B UUAAAACAGCUGCGACAAC 72
SX184 SX184-A UAUGAAACGACUUCUCUUG 724
SX184 SX029-B CAAGAGAAGUCGUUUCAUU 58
表5b中所列之雙螺旋體具有如所示之各種修飾，關於所用縮寫之解釋參考表4。適當時，亦指示表5a之等效未經修飾之股之序列。 表 5b- 經修飾之雙螺旋體
雙螺旋體 ID 股名稱 (*) 序列 (5 ' à 3 ' ) SEQ ID No. 未經修飾之等效SEQ ID No.
EV2001 EV2001-A mC (ps) fU (ps) mA fG mA fC mC fU mG fG mU fC mA fC mA fU mU (ps) fC (ps) mC 361 1
EV2001 EV2001-B mG (ps) mG (ps) mA mA mU mG fU fG fA mC mC mA mG mG mU mC mU (ps) mA (ps) mG 362 2
EV2002 EV2002-A mU (ps) fC (ps) mC fA mA fG mC fU mG fA mA fA mC fU mC fC mA (ps) fG (ps) mA 363 3
EV2002 EV2002-B mU (ps) mC (ps) mU mG mG mA fG fU fU mU mC mA mG mC mU mU mG (ps) mG (ps) mA 364 4
EV2003 EV2003-A mU (ps) fG (ps) mU fC mC fA mA fG mC fU mG fA mA fA mC fU mC (ps) fC (ps) mA 365 5
EV2003 EV2003-B mU (ps) mG (ps) mG mA mG mU fU fU fC mA mG mC mU mU mG mG mA (ps) mC (ps) mA 366 6
EV2004 EV2004-A mG (ps) fU (ps) mG fU mC fC mA fA mG fC mU fG mA fA mA fC mU (ps) fC (ps) mC 367 7
EV2004 EV2004-B mG (ps) mG (ps) mA mG mU mU fU fC fA mG mC mU mU mG mG mA mC (ps) mA (ps) mC 368 8
EV2005 EV2005-A mC (ps) fA (ps) mA fG mA fU mA fA mA fG mG fG mC fA mU fC mA (ps) fG (ps) mG 369 9
EV2005 EV2005-B mC (ps) mC (ps) mU mG mA mU fG fC fC mC mU mU mU mA mU mC mU (ps) mU (ps) mG 370 10
EV2006 EV2006-A mG (ps) fU (ps) mA fU mU fC mC fC mC fG mU fU mC fU mC fG mA (ps) fA (ps) mG 371 11
EV2006 EV2006-B mC (ps) mU (ps) mU mC mG mA fG fA fA mC mG mG mG mG mA mA mU (ps) mA (ps) mC 372 12
EV2007 EV2007-A mA (ps) fC (ps) mC fU mU fC mC fU mU fG mU fG mC fC mA fA mU (ps) fG (ps) mG 373 13
EV2007 EV2007-B mC (ps) mC (ps) mA mU mU mG fG fC fA mC mA mA mG mG mA mA mG (ps) mG (ps) mU 374 14
EV2008 EV2008-A mG (ps) fA (ps) mA fA mG fC mU fU mC fG mG fC mC fA mC fC mU (ps) fC (ps) mU 375 15
EV2008 EV2008-B mA (ps) mG (ps) mA mG mG mU fG fG fC mC mG mA mA mG mC mU mU (ps) mU (ps) mC 376 16
EV2009 EV2009-A mA (ps) fU (ps) mG fU mU fC mA fU mG fG mA fG mC fC mU fG mA (ps) fA (ps) mG 377 17
EV2009 EV2009-B mC (ps) mU (ps) mU mC mA mG fG fC fU mC mC mA mU mG mA mA mC (ps) mA (ps) mU 378 18
EV2010 EV2010-A mU (ps) fA (ps) mG fA mU fG mU fU mC fA mU fG mG fA mG fC mC (ps) fU (ps) mG 379 19
EV2010 EV2010-B mC (ps) mA (ps) mG mG mC mU fC fC fA mU mG mA mA mC mA mU mC (ps) mU (ps) mA 380 20
EV2011 EV2011-A mA (ps) fU (ps) mU fA mA fG mU fU mG fA mC fU mA fG mA fC mA (ps) fC (ps) mU 381 21
EV2011 EV2011-B mA (ps) mG (ps) mU mG mU mC fU fA fG mU mC mA mA mC mU mU mA (ps) mA (ps) mU 382 22
EV2012 EV2012-A mC (ps) fA (ps) mA fU mU fA mA fG mU fU mG fA mC fU mA fG mA (ps) fC (ps) mA 383 23
EV2012 EV2012-B mU (ps) mG (ps) mU mC mU mA fG fU fC mA mA mC mU mU mA mA mU (ps) mU (ps) mG 384 24
EV2013 EV2013-A mC (ps) fU (ps) mC fA mA fU mU fA mA fG mU fU mG fA mC fU mA (ps) fG (ps) mA 385 25
EV2013 EV2013-B mU (ps) mC (ps) mU mA mG mU fC fA fA mC mU mU mA mA mU mU mG (ps) mA (ps) mG 386 26
EV2014 EV2014-A mU (ps) fU (ps) mC fU mC fA mA fU mU fA mA fG mU fU mG fA mC (ps) fU (ps) mA 387 27
EV2014 EV2014-B mU (ps) mA (ps) mG mU mC mA fA fC fU mU mA mA mU mU mG mA mG (ps) mA (ps) mA 388 28
EV2015 EV2015-A mU (ps) fU (ps) mC fG mU fG mA fC mC fC mA fG mU fC mU fG mC (ps) fA (ps) mU 389 29
EV2015 EV2015-B mA (ps) mU (ps) mG mC mA mG fA fC fU mG mG mG mU mC mA mC mG (ps) mA (ps) mA 390 30
EV2016 EV2016-A mU (ps) fC (ps) mA fU mG fC mU fG mU fA mC fA mC fU mG fC mC (ps) fU (ps) mG 391 31
EV2016 EV2016-B mC (ps) mA (ps) mG mG mC mA fG fU fG mU mA mC mA mG mC mA mU (ps) mG (ps) mA 392 32
EV2017 EV2017-A mU (ps) fC (ps) mA fU mC fA mA fU mG fA mC fA mG fU mA fA mU (ps) fU (ps) mG 393 33
EV2017 EV2017-B mC (ps) mA (ps) mA mU mU mA fC fU fG mU mC mA mU mU mG mA mU (ps) mG (ps) mA 394 34
EV2018 EV2018-A mA (ps) fA (ps) mA fC mA fC mA fU mA fG mA fC mA fU mC fC mA (ps) fG (ps) mA 395 35
EV2018 EV2018-B mU (ps) mC (ps) mU mG mG mA fU fG fU mC mU mA mU mG mU mG mU (ps) mU (ps) mU 396 36
EV2019 EV2019-A mA (ps) fA (ps) mA fG mC fA mU fU mG fA mU fG mU fU mC fA mC (ps) fU (ps) mU 397 37
EV2019 EV2019-B mA (ps) mA (ps) mG mU mG mA fA fC fA mU mC mA mA mU mG mC mU (ps) mU (ps) mU 398 38
EV2020 EV2020-A mC (ps) fU (ps) mU fG mA fC mU fU mU fG mA fA mC fA mC fA mU (ps) fG (ps) mU 399 39
EV2020 EV2020-B mA (ps) mC (ps) mA mU mG mU fG fU fU mC mA mA mA mG mU mC mA (ps) mA (ps) mG 400 40
EV2021 EV2021-A mG (ps) fU (ps) mC fA mU fA mA fA mA fU mU fC mA fG mG fA mA (ps) fU (ps) mU 401 41
EV2021 EV2021-B mA (ps) mA (ps) mU mU mC mC fU fG fA mA mU mU mU mU mA mU mG (ps) mA (ps) mC 402 42
EV2022 EV2022-A mA (ps) fU (ps) mA fG mU fC mA fU mA fA mA fA mU fU mC fA mG (ps) fG (ps) mA 403 43
EV2022 EV2022-B mU (ps) mC (ps) mC mU mG mA fA fU fU mU mU mA mU mG mA mC mU (ps) mA (ps) mU 404 44
EV2023 EV2023-A mA (ps) fG (ps) mA fC mA fA mA fU mG fG mG fC mC fU mG fA mU (ps) fA (ps) mG 405 45
EV2023 EV2023-B mC (ps) mU (ps) mA mU mC mA fG fG fC mC mC mA mU mU mU mG mU (ps) mC (ps) mU 406 46
EV2024 EV2024-A mA (ps) fC (ps) mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU 407 47
EV2024 EV2024-B mA (ps) mU (ps) mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU 408 48
EV2025 EV2025-A mG (ps) fG (ps) mC fA mU fA mU fU mG fA mG fC mA fU mC fU mC (ps) fU (ps) mC 409 49
EV2025 EV2025-B mG (ps) mA (ps) mG mA mG mA fU fG fC mU mC mA mA mU mA mU mG (ps) mC (ps) mC 410 50
EV2026 EV2026-A mA (ps) fU (ps) mG fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fU mC (ps) fA (ps) mU 411 51
EV2026 EV2026-B mA (ps) mU (ps) mG mA mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mC (ps) mA (ps) mU 412 52
EV2027 EV2027-A mA (ps) fA (ps) mG fU mA fU mU fG mG fG mG fU mC fA mG fC mA (ps) fU (ps) mA 413 53
EV2027 EV2027-B mU (ps) mA (ps) mU mG mC mU fG fA fC mC mC mC mA mA mU mA mC (ps) mU (ps) mU 414 54
EV2028 EV2028-A mU (ps) fG (ps) mA fA mC fU mA fU mC fA mA fG mG fG mG fC mC (ps) fG (ps) mC 415 55
EV2028 EV2028-B mG (ps) mC (ps) mG mG mC mC fC fC fU mU mG mA mU mA mG mU mU (ps) mC (ps) mA 416 56
EV2029 EV2029-A mA (ps) fA (ps) mU fG mA fA mA fC mG fA mC fU mU fC mU fC mU (ps) fU (ps) mG 417 57
EV2029 EV2029-B mC (ps) mA (ps) mA mG mA mG fA fA fG mU mC mG mU mU mU mC mA (ps) mU (ps) mU 418 58
EV2030 EV2030-A mU (ps) fG (ps) mA fA mU fG mA fA mA fC mG fA mC fU mU fC mU (ps) fC (ps) mU 419 59
EV2030 EV2030-B mA (ps) mG (ps) mA mG mA mA fG fU fC mG mU mU mU mC mA mU mU (ps) mC (ps) mA 420 60
EV2031 EV2031-A mA (ps) fC (ps) mU fU mG fA mA fU mG fA mA fA mC fG mA fC mU (ps) fU (ps) mC 421 61
EV2031 EV2031-B mG (ps) mA (ps) mA mG mU mC fG fU fU mU mC mA mU mU mC mA mA (ps) mG (ps) mU 422 62
EV2032 EV2032-A mA (ps) fC (ps) mC fA mA fC mU fU mG fA mA fU mG fA mA fA mC (ps) fG (ps) mA 423 63
EV2032 EV2032-B mU (ps) mC (ps) mG mU mU mU fC fA fU mU mC mA mA mG mU mU mG (ps) mG (ps) mU 424 64
EV2033 EV2033-A mU (ps) fG (ps) mU fG mA fA mA fG mU fC mU fC mG fG mG fC mG (ps) fU (ps) mG 425 65
EV2033 EV2033-B mC (ps) mA (ps) mC mG mC mC fC fG fA mG mA mC mU mU mU mC mA (ps) mC (ps) mA 426 66
EV2034 EV2034-A mU (ps) fG (ps) mU fU mU fU mA fA mU fU mC fA mA fU mC fC mC (ps) fA (ps) mC 427 67
EV2034 EV2034-B mG (ps) mU (ps) mG mG mG mA fU fU fG mA mA mU mU mA mA mA mA (ps) mC (ps) mA 428 68
EV2035 EV2035-A mC (ps) fA (ps) mG fC mU fG mU fU mU fU mA fA mU fU mC fA mA (ps) fU (ps) mC 429 69
EV2035 EV2035-B mG (ps) mA (ps) mU mU mG mA fA fU fU mA mA mA mA mC mA mG mC (ps) mU (ps) mG 430 70
EV2036 EV2036-A mG (ps) fU (ps) mU fG mU fC mG fC mA fG mC fU mG fU mU fU mU (ps) fA (ps) mA 431 71
EV2036 EV2036-B mU (ps) mU (ps) mA mA mA mA fC fA fG mC mU mG mC mG mA mC mA (ps) mA (ps) mC 432 72
EV2037 EV2037-A mC (ps) fA (ps) mC fU mA fG mA fC mC fA mU fA mU fC mU fU mG (ps) fG (ps) mC 433 73
EV2037 EV2037-B mG (ps) mC (ps) mC mA mA mG fA fU fA mU mG mG mU mC mU mA mG (ps) mU (ps) mG 434 74
EV2038 EV2038-A mU (ps) fG (ps) mU fC mA fC mU fA mG fA mC fC mA fU mA fU mC (ps) fU (ps) mU 435 75
EV2038 EV2038-B mA (ps) mA (ps) mG mA mU mA fU fG fG mU mC mU mA mG mU mG mA (ps) mC (ps) mA 436 76
EV2039 EV2039-A mU (ps) fU (ps) mC fU mU fG mG fU mG fU mU fA mG fU mC fC mC (ps) fU (ps) mG 437 77
EV2039 EV2039-B mC (ps) mA (ps) mG mG mG mA fC fU fA mA mC mA mC mC mA mA mG (ps) mA (ps) mA 438 78
EV2040 EV2040-A mU (ps) fC (ps) mA fG mU fC mA fU mG fA mG fG mA fU mG fA mU (ps) fG (ps) mA 439 79
EV2040 EV2040-B mU (ps) mC (ps) mA mU mC mA fU fC fC mU mC mA mU mG mA mC mU (ps) mG (ps) mA 440 80
EV2041 EV2041-A mG (ps) fA (ps) mU fU mA fC mA fC mC fA mA fC mU fU mG fA mA (ps) fU (ps) mG 441 81
EV2041 EV2041-B mC (ps) mA (ps) mU mU mC mA fA fG fU mU mG mG mU mG mU mA mA (ps) mU (ps) mC 442 82
EV2042 EV2042-A mU (ps) fU (ps) mG fU mA fG mU fA mG fG mG fA mG fA mC fC mG (ps) fG (ps) mG 443 83
EV2042 EV2042-B mC (ps) mC (ps) mC mG mG mU fC fU fC mC mC mU mA mC mU mA mC (ps) mA (ps) mA 444 84
EV2043 EV2043-A mU (ps) fC (ps) mC fA mA fG mA fG mC fC mA fC mC fU mU fC mC (ps) fU (ps) mG 445 85
EV2043 EV2043-B mC (ps) mA (ps) mG mG mA mA fG fG fU mG mG mC mU mC mU mU mG (ps) mG (ps) mA 446 86
EV2044 EV2044-A mU (ps) fC (ps) mG fU mA fC mA fU mG fA mA fG mG fA mG fU mC (ps) fU (ps) mU 447 87
EV2044 EV2044-B mA (ps) mA (ps) mG mA mC mU fC fC fU mU mC mA mU mG mU mA mC (ps) mG (ps) mA 448 88
EV2045 EV2045-A mC (ps) fU (ps) mC fU mU fG mA fG mG fG mG fU mG fU mC fG mU (ps) fA (ps) mC 449 89
EV2045 EV2045-B mG (ps) mU (ps) mA mC mG mA fC fA fC mC mC mC mU mC mA mA mG (ps) mA (ps) mG 450 90
EV2046 EV2046-A mU (ps) fU (ps) mG fG mC fU mC fC mU fG mU fG mA fA mG fU mU (ps) fG (ps) mC 451 91
EV2046 EV2046-B mG (ps) mC (ps) mA mA mC mU fU fC fA mC mA mG mG mA mG mC mC (ps) mA (ps) mA 452 92
EV2047 EV2047-A mA (ps) fU (ps) mA fA mC fU mU fG mC fC mA fC mC fU mU fC mU (ps) fC (ps) mA 453 93
EV2047 EV2047-B mU (ps) mG (ps) mA mG mA mA fG fG fU mG mG mC mA mA mG mU mU (ps) mA (ps) mU 454 94
EV2048 EV2048-A mA (ps) fG (ps) mC fC mA fA mA fG mC fA mU fU mG fA mU fG mU (ps) fU (ps) mC 455 95
EV2048 EV2048-B mG (ps) mA (ps) mA mC mA mU fC fA fA mU mG mC mU mU mU mG mG (ps) mC (ps) mU 456 96
EV2049 EV2049-A mG (ps) fA (ps) mA fG mC fC mA fA mA fG mC fA mU fU mG fA mU (ps) fG (ps) mU 457 97
EV2049 EV2049-B mA (ps) mC (ps) mA mU mC mA fA fU fG mC mU mU mU mG mG mC mU (ps) mU (ps) mC 458 98
EV2050 EV2050-A mG (ps) fA (ps) mA fC mA fC mA fU mG fU mU fG mC fU mC fA mU (ps) fU (ps) mG 459 99
EV2050 EV2050-B mC (ps) mA (ps) mA mU mG mA fG fC fA mA mC mA mU mG mU mG mU (ps) mU (ps) mC 460 100
EV2051 EV2051-A mG (ps) fC (ps) mC fG mC fC mU fU mU fG mA fU mC fU mC fU mA (ps) fC (ps) mC 461 101
EV2051 EV2051-B mG (ps) mG (ps) mU mA mG mA fG fA fU mC mA mA mA mG mG mC mG (ps) mG (ps) mC 462 102
EV2052 EV2052-A mG (ps) fA (ps) mG fC mC fG mC fC mU fU mU fG mA fU mC fU mC (ps) fU (ps) mA 463 103
EV2052 EV2052-B mU (ps) mA (ps) mG mA mG mA fU fC fA mA mA mG mG mC mG mG mC (ps) mU (ps) mC 464 104
EV2053 EV2053-A mA (ps) fA (ps) mG fG mA fG mC fC mG fC mC fU mU fU mG fA mU (ps) fC (ps) mU 465 105
EV2053 EV2053-B mA (ps) mG (ps) mA mU mC mA fA fA fG mG mC mG mG mC mU mC mC (ps) mU (ps) mU 466 106
EV2054 EV2054-A mG (ps) fG (ps) mA fA mG fG mA fG mC fC mG fC mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU 467 107
EV2054 EV2054-B mA (ps) mU (ps) mC mA mA mA fG fG fC mG mG mC mU mC mC mU mU (ps) mC (ps) mC 468 108
EV2055 EV2055-A mG (ps) fG (ps) mG fU mA fG mA fA mG fC mC fA mG fA mA fG mG (ps) fA (ps) mC 469 109
EV2055 EV2055-B mG (ps) mU (ps) mC mC mU mU fC fU fG mG mC mU mU mC mU mA mC (ps) mC (ps) mC 470 110
EV2056 EV2056-A mC (ps) fA (ps) mG fA mG fC mC fC mC fG mG fA mG fA mG fU mG (ps) fU (ps) mA 471 111
EV2056 EV2056-B mU (ps) mA (ps) mC mA mC mU fC fU fC mC mG mG mG mG mC mU mC (ps) mU (ps) mG 472 112
EV2057 EV2057-A mU (ps) fU (ps) mG fG mC fA mG fG mU fG mC fG mA fU mU fG mG (ps) fC (ps) mA 473 113
EV2057 EV2057-B mU (ps) mG (ps) mC mC mA mA fU fC fG mC mA mC mC mU mG mC mC (ps) mA (ps) mA 474 114
EV2058 EV2058-A mA (ps) fU (ps) mU fC mA fC mU fU mG fG mC fA mG fG mU fG mC (ps) fG (ps) mA 475 115
EV2058 EV2058-B mU (ps) mC (ps) mG mC mA mC fC fU fG mC mC mA mA mG mU mG mA (ps) mA (ps) mU 476 116
EV2059 EV2059-A mC (ps) fC (ps) mA fU mU fC mA fC mU fU mG fG mC fA mG fG mU (ps) fG (ps) mC 477 117
EV2059 EV2059-B mG (ps) mC (ps) mA mC mC mU fG fC fC mA mA mG mU mG mA mA mU (ps) mG (ps) mG 478 118
EV2060 EV2060-A mC (ps) fC (ps) mC fA mC fC mU fU mC fC mU fU mG fU mG fC mC (ps) fA (ps) mA 479 119
EV2060 EV2060-B mU (ps) mU (ps) mG mG mC mA fC fA fA mG mG mA mA mG mG mU mG (ps) mG (ps) mG 480 120
EV2061 EV2061-A mU (ps) fC (ps) mU fU mC fA mA fG mG fC mG fG mU fA mC fU mG (ps) fG (ps) mC 481 121
EV2061 EV2061-B mG (ps) mC (ps) mC mA mG mU fA fC fC mG mC mC mU mU mG mA mA (ps) mG (ps) mA 482 122
EV2062 EV2062-A mG (ps) fU (ps) mC fU mU fC mA fA mG fG mC fG mG fU mA fC mU (ps) fG (ps) mG 483 123
EV2062 EV2062-B mC (ps) mC (ps) mA mG mU mA fC fC fG mC mC mU mU mG mA mA mG (ps) mA (ps) mC 484 124
EV2063 EV2063-A mA (ps) fC (ps) mA fU mG fA mA fG mG fA mG fU mC fU mU fG mG (ps) fC (ps) mA 485 125
EV2063 EV2063-B mU (ps) mG (ps) mC mC mA mA fG fA fC mU mC mC mU mU mC mA mU (ps) mG (ps) mU 486 126
EV2064 EV2064-A mU (ps) fU (ps) mC fG mG fC mC fA mC fC mU fC mU fU mG fA mG (ps) fG (ps) mG 487 127
EV2064 EV2064-B mC (ps) mC (ps) mC mU mC mA fA fG fA mG mG mU mG mG mC mC mG (ps) mA (ps) mA 488 128
EV2065 EV2065-A mC (ps) fU (ps) mU fC mU fA mU fG mG fU mC fU mC fU mG fU mC (ps) fA (ps) mG 489 129
EV2065 EV2065-B mC (ps) mU (ps) mG mA mC mA fG fA fG mA mC mC mA mU mA mG mA (ps) mA (ps) mG 490 130
EV2066 EV2066-A mA (ps) fU (ps) mC fC mU fC mA fG mC fA mU fC mG fA mC fU mC (ps) fC (ps) mU 491 131
EV2066 EV2066-B mA (ps) mG (ps) mG mA mG mU fC fG fA mU mG mC mU mG mA mG mG (ps) mA (ps) mU 492 132
EV2067 EV2067-A mC (ps) fC (ps) mC fA mU fC mC fU mC fA mG fC mA fU mC fG mA (ps) fC (ps) mU 493 133
EV2067 EV2067-B mA (ps) mG (ps) mU mC mG mA fU fG fC mU mG mA mG mG mA mU mG (ps) mG (ps) mG 494 134
EV2068 EV2068-A mG (ps) fU (ps) mG fC mC fC mA fU mC fC mU fC mA fG mC fA mU (ps) fC (ps) mG 495 135
EV2068 EV2068-B mC (ps) mG (ps) mA mU mG mC fU fG fA mG mG mA mU mG mG mG mC (ps) mA (ps) mC 496 136
EV2069 EV2069-A mU (ps) fA (ps) mG fC mA fC mC fA mG fG mU fA mG fA mU fG mU (ps) fU (ps) mC 497 137
EV2069 EV2069-B mG (ps) mA (ps) mA mC mA mU fC fU fA mC mC mU mG mG mU mG mC (ps) mU (ps) mA 498 138
EV2070 EV2070-A mU (ps) fC (ps) mU fA mG fC mA fC mC fA mG fG mU fA mG fA mU (ps) fG (ps) mU 499 139
EV2070 EV2070-B mA (ps) mC (ps) mA mU mC mU fA fC fC mU mG mG mU mG mC mU mA (ps) mG (ps) mA 500 140
EV2071 EV2071-A mU (ps) fC (ps) mC fA mU fC mU fA mG fC mA fC mC fA mG fG mU (ps) fA (ps) mG 501 141
EV2071 EV2071-B mC (ps) mU (ps) mA mC mC mU fG fG fU mG mC mU mA mG mA mU mG (ps) mG (ps) mA 502 142
EV2072 EV2072-A mG (ps) fA (ps) mU fC mC fA mU fC mU fA mG fC mA fC mC fA mG (ps) fG (ps) mU 503 143
EV2072 EV2072-B mA (ps) mC (ps) mC mU mG mG fU fG fC mU mA mG mA mU mG mG mA (ps) mU (ps) mC 504 144
EV2073 EV2073-A mU (ps) fG (ps) mA fU mC fC mA fU mC fU mA fG mC fA mC fC mA (ps) fG (ps) mG 505 145
EV2073 EV2073-B mC (ps) mC (ps) mU mG mG mU fG fC fU mA mG mA mU mG mG mA mU (ps) mC (ps) mA 506 146
EV2074 EV2074-A mG (ps) fU (ps) mC fU mG fA mU fC mC fA mU fC mU fA mG fC mA (ps) fC (ps) mC 507 147
EV2074 EV2074-B mG (ps) mG (ps) mU mG mC mU fA fG fA mU mG mG mA mU mC mA mG (ps) mA (ps) mC 508 148
EV2075 EV2075-A mU (ps) fG (ps) mU fC mU fG mA fU mC fC mA fU mC fU mA fG mC (ps) fA (ps) mC 509 149
EV2075 EV2075-B mG (ps) mU (ps) mG mC mU mA fG fA fU mG mG mA mU mC mA mG mA (ps) mC (ps) mA 510 150
EV2076 EV2076-A mG (ps) fC (ps) mU fG mU fC mU fG mA fU mC fC mA fU mC fU mA (ps) fG (ps) mC 511 151
EV2076 EV2076-B mG (ps) mC (ps) mU mA mG mA fU fG fG mA mU mC mA mG mA mC mA (ps) mG (ps) mC 512 152
EV2077 EV2077-A mA (ps) fU (ps) mG fC mU fG mU fC mU fG mA fU mC fC mA fU mC (ps) fU (ps) mA 513 153
EV2077 EV2077-B mU (ps) mA (ps) mG mA mU mG fG fA fU mC mA mG mA mC mA mG mC (ps) mA (ps) mU 514 154
EV2078 EV2078-A mC (ps) fA (ps) mA fU mG fC mU fG mU fC mU fG mA fU mC fC mA (ps) fU (ps) mC 515 155
EV2078 EV2078-B mG (ps) mA (ps) mU mG mG mA fU fC fA mG mA mC mA mG mC mA mU (ps) mU (ps) mG 516 156
EV2079 EV2079-A mC (ps) fC (ps) mA fA mU fG mC fU mG fU mC fU mG fA mU fC mC (ps) fA (ps) mU 517 157
EV2079 EV2079-B mA (ps) mU (ps) mG mG mA mU fC fA fG mA mC mA mG mC mA mU mU (ps) mG (ps) mG 518 158
EV2080 EV2080-A mC (ps) fC (ps) mU fG mU fG mA fA mG fU mU fG mC fU mG fG mC (ps) fC (ps) mC 519 159
EV2080 EV2080-B mG (ps) mG (ps) mG mC mC mA fG fC fA mA mC mU mU mC mA mC mA (ps) mG (ps) mG 520 160
EV2081 EV2081-A mU (ps) fA (ps) mA fC mU fU mG fC mC fA mC fC mU fU mC fU mC (ps) fA (ps) mA 521 161
EV2081 EV2081-B mU (ps) mU (ps) mG mA mG mA fA fG fG mU mG mG mC mA mA mG mU (ps) mU (ps) mA 522 162
EV2082 EV2082-A mU (ps) fG (ps) mG fC mA fU mA fU mG fU mC fA mC fU mA fG mA (ps) fC (ps) mC 523 163
EV2082 EV2082-B mG (ps) mG (ps) mU mC mU mA fG fU fG mA mC mA mU mA mU mG mC (ps) mC (ps) mA 524 164
EV2083 EV2083-A mU (ps) fG (ps) mG fU mC fU mU fC mA fU mA fA mU fU mG fA mU (ps) fU (ps) mU 525 165
EV2083 EV2083-B mA (ps) mA (ps) mA mU mC mA fA fU fU mA mU mG mA mA mG mA mC (ps) mC (ps) mA 526 166
EV2084 EV2084-A mG (ps) fU (ps) mG fG mU fC mU fU mC fA mU fA mA fU mU fG mA (ps) fU (ps) mU 527 167
EV2084 EV2084-B mA (ps) mA (ps) mU mC mA mA fU fU fA mU mG mA mA mG mA mC mC (ps) mA (ps) mC 528 168
EV2085 EV2085-A mU (ps) fU (ps) mG fU mG fG mU fC mU fU mC fA mU fA mA fU mU (ps) fG (ps) mA 529 169
EV2085 EV2085-B mU (ps) mC (ps) mA mA mU mU fA fU fG mA mA mG mA mC mC mA mC (ps) mA (ps) mA 530 170
EV2086 EV2086-A mU (ps) fC (ps) mA fA mC fU mU fG mU fG mG fU mC fU mU fC mA (ps) fU (ps) mA 531 171
EV2086 EV2086-B mU (ps) mA (ps) mU mG mA mA fG fA fC mC mA mC mA mA mG mU mU (ps) mG (ps) mA 532 172
EV2087 EV2087-A mC (ps) fU (ps) mU fC mA fA mC fU mU fG mU fG mG fU mC fU mU (ps) fC (ps) mA 533 173
EV2087 EV2087-B mU (ps) mG (ps) mA mA mG mA fC fC fA mC mA mA mG mU mU mG mA (ps) mA (ps) mG 534 174
EV2088 EV2088-A mA (ps) fC (ps) mU fU mC fA mA fC mU fU mG fU mG fG mU fC mU (ps) fU (ps) mC 535 175
EV2088 EV2088-B mG (ps) mA (ps) mA mG mA mC fC fA fC mA mA mG mU mU mG mA mA (ps) mG (ps) mU 536 176
EV2089 EV2089-A mU (ps) fG (ps) mG fU mG fU mU fA mG fU mC fC mC fU mG fA mC (ps) fU (ps) mU 537 177
EV2089 EV2089-B mA (ps) mA (ps) mG mU mC mA fG fG fG mA mC mU mA mA mC mA mC (ps) mC (ps) mA 538 178
EV2090 EV2090-A mU (ps) fC (ps) mU fU mG fG mU fG mU fU mA fG mU fC mC fC mU (ps) fG (ps) mA 539 179
EV2090 EV2090-B mU (ps) mC (ps) mA mG mG mG fA fC fU mA mA mC mA mC mC mA mA (ps) mG (ps) mA 540 180
EV2091 EV2091-A mA (ps) fU (ps) mG fA mU fG mA fC mA fU mG fG mC fG mG fG mU (ps) fG (ps) mC 541 181
EV2091 EV2091-B mG (ps) mC (ps) mA mC mC mC fG fC fC mA mU mG mU mC mA mU mC (ps) mA (ps) mU 542 182
EV2092 EV2092-A mG (ps) fG (ps) mA fU mG fA mU fG mA fC mA fU mG fG mC fG mG (ps) fG (ps) mU 543 183
EV2092 EV2092-B mA (ps) mC (ps) mC mC mG mC fC fA fU mG mU mC mA mU mC mA mU (ps) mC (ps) mC 544 184
EV2093 EV2093-A mA (ps) fG (ps) mG fA mU fG mA fU mG fA mC fA mU fG mG fC mG (ps) fG (ps) mG 545 185
EV2093 EV2093-B mC (ps) mC (ps) mC mG mC mC fA fU fG mU mC mA mU mC mA mU mC (ps) mC (ps) mU 546 186
EV2094 EV2094-A mU (ps) fG (ps) mU fG mC fA mA fU mC fC mA fU mC fA mG fU mC (ps) fA (ps) mU 547 187
EV2094 EV2094-B mA (ps) mU (ps) mG mA mC mU fG fA fU mG mG mA mU mU mG mC mA (ps) mC (ps) mA 548 188
EV2095 EV2095-A mU (ps) fG (ps) mU fU mG fU mG fC mA fA mU fC mC fA mU fC mA (ps) fG (ps) mU 549 189
EV2095 EV2095-B mA (ps) mC (ps) mU mG mA mU fG fG fA mU mU mG mC mA mC mA mA (ps) mC (ps) mA 550 190
EV2096 EV2096-A mC (ps) fC (ps) mA fU mG fU mU fG mU fG mC fA mA fU mC fC mA (ps) fU (ps) mC 551 191
EV2096 EV2096-B mG (ps) mA (ps) mU mG mG mA fU fU fG mC mA mC mA mA mC mA mU (ps) mG (ps) mG 552 192
EV2097 EV2097-A mA (ps) fC (ps) mA fU mC fC mA fG mA fU mA fA mU fC mC fU mC (ps) fC (ps) mC 553 193
EV2097 EV2097-B mG (ps) mG (ps) mG mA mG mG fA fU fU mA mU mC mU mG mG mA mU (ps) mG (ps) mU 554 194
EV2098 EV2098-A mA (ps) fC (ps) mC fC mC fA mA fA mC fA mC fA mU fA mG fA mC (ps) fA (ps) mU 555 195
EV2098 EV2098-B mA (ps) mU (ps) mG mU mC mU fA fU fG mU mG mU mU mU mG mG mG (ps) mG (ps) mU 556 196
EV2099 EV2099-A mA (ps) fC (ps) mA fC mA fU mG fU mU fG mC fU mC fA mU fU mG (ps) fU (ps) mC 557 197
EV2099 EV2099-B mG (ps) mA (ps) mC mA mA mU fG fA fG mC mA mA mC mA mU mG mU (ps) mG (ps) mU 558 198
EV2100 EV2100-A mA (ps) fU (ps) mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA fC mA (ps) fC (ps) mA 559 199
EV2100 EV2100-B mU (ps) mG (ps) mU mG mU mU fC fA fA mA mG mU mC mA mA mG mG (ps) mA (ps) mU 560 200
EV2101 EV2101-A mA (ps) fU (ps) mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA (ps) fC (ps) mA 561 201
EV2101 EV2101-B mU (ps) mG (ps) mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU (ps) mA (ps) mU 562 202
EV2102 EV2102-A mU (ps) fU (ps) mC fC mA fU mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU (ps) fU (ps) mG 563 203
EV2102 EV2102-B mC (ps) mA (ps) mA mA mG mU fC fA fA mG mG mA mU mA mU mG mG (ps) mA (ps) mA 564 204
EV2103 EV2103-A mG (ps) fU (ps) mU fU mU fC mC fA mU fA mU fC mC fU mU fG mA (ps) fC (ps) mU 565 205
EV2103 EV2103-B mA (ps) mG (ps) mU mC mA mA fG fG fA mU mA mU mG mG mA mA mA (ps) mA (ps) mC 566 206
EV2104 EV2104-A mA (ps) fG (ps) mG fU mU fU mU fC mC fA mU fA mU fC mC fU mU (ps) fG (ps) mA 567 207
EV2104 EV2104-B mU (ps) mC (ps) mA mA mG mG fA fU fA mU mG mG mA mA mA mA mC (ps) mC (ps) mU 568 208
EV2105 EV2105-A mA (ps) fU (ps) mC fA mU fU mU fG mG fU mA fG mA fA mA fA mC (ps) fA (ps) mU 569 209
EV2105 EV2105-B mA (ps) mU (ps) mG mU mU mU fU fC fU mA mC mC mA mA mA mU mG (ps) mA (ps) mU 570 210
EV2106 EV2106-A mG (ps) fA (ps) mU fC mA fU mU fU mG fG mU fA mG fA mA fA mA (ps) fC (ps) mA 571 211
EV2106 EV2106-B mU (ps) mG (ps) mU mU mU mU fC fU fA mC mC mA mA mA mU mG mA (ps) mU (ps) mC 572 212
EV2107 EV2107-A mU (ps) fC (ps) mA fU mC fG mA fU mC fA mU fU mU fG mG fU mA (ps) fG (ps) mA 573 213
EV2107 EV2107-B mU (ps) mC (ps) mU mA mC mC fA fA fA mU mG mA mU mC mG mA mU (ps) mG (ps) mA 574 214
EV2108 EV2108-A mA (ps) fU (ps) mG fC mC fA mC fA mG fA mG fA mC fU mC fA mG (ps) fA (ps) mG 575 215
EV2108 EV2108-B mC (ps) mU (ps) mC mU mG mA fG fU fC mU mC mU mG mU mG mG mC (ps) mA (ps) mU 576 216
EV2109 EV2109-A mA (ps) fC (ps) mC fA mU fG mC fC mA fC mA fG mA fG mA fC mU (ps) fC (ps) mA 577 217
EV2109 EV2109-B mU (ps) mG (ps) mA mG mU mC fU fC fU mG mU mG mG mC mA mU mG (ps) mG (ps) mU 578 218
EV2110 EV2110-A mA (ps) fA (ps) mC fC mA fU mG fC mC fA mC fA mG fA mG fA mC (ps) fU (ps) mC 579 219
EV2110 EV2110-B mG (ps) mA (ps) mG mU mC mU fC fU fG mU mG mG mC mA mU mG mG (ps) mU (ps) mU 580 220
EV2111 EV2111-A mC (ps) fA (ps) mA fA mC fC mA fU mG fC mC fA mC fA mG fA mG (ps) fA (ps) mC 581 221
EV2111 EV2111-B mG (ps) mU (ps) mC mU mC mU fG fU fG mG mC mA mU mG mG mU mU (ps) mU (ps) mG 582 222
EV2112 EV2112-A mU (ps) fC (ps) mC fC mA fA mA fC mC fA mU fG mC fC mA fC mA (ps) fG (ps) mA 583 223
EV2112 EV2112-B mU (ps) mC (ps) mU mG mU mG fG fC fA mU mG mG mU mU mU mG mG (ps) mG (ps) mA 584 224
EV2113 EV2113-A mU (ps) fC (ps) mU fU mG fG mC fC mU fG mC fC mA fU mG fG mU (ps) fU (ps) mG 585 225
EV2113 EV2113-B mC (ps) mA (ps) mA mC mC mA fU fG fG mC mA mG mG mC mC mA mA (ps) mG (ps) mA 586 226
EV2114 EV2114-A mA (ps) fG (ps) mA fU mC fU mU fG mG fC mC fU mG fC mC fA mU (ps) fG (ps) mG 587 227
EV2114 EV2114-B mC (ps) mC (ps) mA mU mG mG fC fA fG mG mC mC mA mA mG mA mU (ps) mC (ps) mU 588 228
EV2115 EV2115-A mU (ps) fG (ps) mA fG mA fU mC fU mU fG mG fC mC fU mG fC mC (ps) fA (ps) mU 589 229
EV2115 EV2115-B mA (ps) mU (ps) mG mG mC mA fG fG fC mC mA mA mG mA mU mC mU (ps) mC (ps) mA 590 230
EV2116 EV2116-A mA (ps) fC (ps) mU fG mA fG mA fU mC fU mU fG mG fC mC fU mG (ps) fC (ps) mC 591 231
EV2116 EV2116-B mG (ps) mG (ps) mC mA mG mG fC fC fA mA mG mA mU mC mU mC mA (ps) mG (ps) mU 592 232
EV2117 EV2117-A mC (ps) fG (ps) mA fA mU fG mA fC mU fG mA fG mA fU mC fU mU (ps) fG (ps) mG 593 233
EV2117 EV2117-B mC (ps) mC (ps) mA mA mG mA fU fC fU mC mA mG mU mC mA mU mU (ps) mC (ps) mG 594 234
EV2118 EV2118-A mG (ps) fG (ps) mG fC mG fA mA fU mG fA mC fU mG fA mG fA mU (ps) fC (ps) mU 595 235
EV2118 EV2118-B mA (ps) mG (ps) mA mU mC mU fC fA fG mU mC mA mU mU mC mG mC (ps) mC (ps) mC 596 236
EV2119 EV2119-A mC (ps) fA (ps) mA fA mG fU mA fC mU fC mA fG mA fC mA fC mC (ps) fA (ps) mC 597 237
EV2119 EV2119-B mG (ps) mU (ps) mG mG mU mG fU fC fU mG mA mG mU mA mC mU mU (ps) mU (ps) mG 598 238
EV2120 EV2120-A mA (ps) fC (ps) mA fA mA fG mU fA mC fU mC fA mG fA mC fA mC (ps) fC (ps) mA 599 239
EV2120 EV2120-B mU (ps) mG (ps) mG mU mG mU fC fU fG mA mG mU mA mC mU mU mU (ps) mG (ps) mU 600 240
EV2121 EV2121-A mG (ps) fC (ps) mA fC mA fA mA fG mU fA mC fU mC fA mG fA mC (ps) fA (ps) mC 601 241
EV2121 EV2121-B mG (ps) mU (ps) mG mU mC mU fG fA fG mU mA mC mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mC 602 242
EV2122 EV2122-A mC (ps) fA (ps) mG fC mA fC mA fA mA fG mU fA mC fU mC fA mG (ps) fA (ps) mC 603 243
EV2122 EV2122-B mG (ps) mU (ps) mC mU mG mA fG fU fA mC mU mU mU mG mU mG mC (ps) mU (ps) mG 604 244
EV2123 EV2123-A mA (ps) fU (ps) mG fG mG fC mC fU mG fA mU fA mG fU mC fU mG (ps) fG (ps) mC 605 245
EV2123 EV2123-B mG (ps) mC (ps) mC mA mG mA fC fU fA mU mC mA mG mG mC mC mC (ps) mA (ps) mU 606 246
EV2124 EV2124-A mG (ps) fU (ps) mG fC mA fG mG fG mG fA mG fA mC fA mA fA mU (ps) fG (ps) mG 607 247
EV2124 EV2124-B mC (ps) mC (ps) mA mU mU mU fG fU fC mU mC mC mC mC mU mG mC (ps) mA (ps) mC 608 248
EV2125 EV2125-A mA (ps) fA (ps) mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG fA mU fA mU (ps) fC (ps) mC 609 249
EV2125 EV2125-B mG (ps) mG (ps) mA mU mA mU fC fA fA mA mG mC mU mC mU mG mU (ps) mU (ps) mU 610 250
EV2126 EV2126-A mA (ps) fC (ps) mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG fA mU (ps) fA (ps) mU 611 251
EV2126 EV2126-B mA (ps) mU (ps) mA mU mC mA fA fA fG mC mU mC mU mG mU mU mU (ps) mG (ps) mU 612 252
EV2127 EV2127-A mG (ps) fA (ps) mC fA mC fA mA fA mC fA mG fA mG fC mU fU mU (ps) fG (ps) mA 613 253
EV2127 EV2127-B mU (ps) mC (ps) mA mA mA mG fC fU fC mU mG mU mU mU mG mU mG (ps) mU (ps) mC 614 254
EV2128 EV2128-A mA (ps) fU (ps) mG fU mA fG mA fC mC fU mC fC mU fU mC fC mG (ps) fA (ps) mG 615 255
EV2128 EV2128-B mC (ps) mU (ps) mC mG mG mA fA fG fG mA mG mG mU mC mU mA mC (ps) mA (ps) mU 616 256
EV2129 EV2129-A mG (ps) fA (ps) mU fG mU fA mG fA mC fC mU fC mC fU mU fC mC (ps) fG (ps) mA 617 257
EV2129 EV2129-B mU (ps) mC (ps) mG mG mA mA fG fG fA mG mG mU mC mU mA mC mA (ps) mU (ps) mC 618 258
EV2130 EV2130-A mU (ps) fC (ps) mU fU mG fA mU fG mU fA mG fA mC fC mU fC mC (ps) fU (ps) mU 619 259
EV2130 EV2130-B mA (ps) mA (ps) mG mG mA mG fG fU fC mU mA mC mA mU mC mA mA (ps) mG (ps) mA 620 260
EV2131 EV2131-A mA (ps) fU (ps) mU fC mU fU mG fA mU fG mU fA mG fA mC fC mU (ps) fC (ps) mC 621 261
EV2131 EV2131-B mG (ps) mG (ps) mA mG mG mU fC fU fA mC mA mU mC mA mA mG mA (ps) mA (ps) mU 622 262
EV2132 EV2132-A mC (ps) fC (ps) mC fA mU fU mC fU mU fG mA fU mG fU mA fG mA (ps) fC (ps) mC 623 263
EV2132 EV2132-B mG (ps) mG (ps) mU mC mU mA fC fA fU mC mA mA mG mA mA mU mG (ps) mG (ps) mG 624 264
EV2133 EV2133-A mU (ps) fC (ps) mC fC mC fA mU fU mC fU mU fG mA fU mG fU mA (ps) fG (ps) mA 625 265
EV2133 EV2133-B mU (ps) mC (ps) mU mA mC mA fU fC fA mA mG mA mA mU mG mG mG (ps) mG (ps) mA 626 266
EV2134 EV2134-A mC (ps) fU (ps) mU fA mU fC mC fC mC fA mU fU mC fU mU fG mA (ps) fU (ps) mG 627 267
EV2134 EV2134-B mC (ps) mA (ps) mU mC mA mA fG fA fA mU mG mG mG mG mA mU mA (ps) mA (ps) mG 628 268
EV2135 EV2135-A mA (ps) fU (ps) mU fG mG fG mG fU mC fA mG fC mA fU mA fG mG (ps) fG (ps) mA 629 269
EV2135 EV2135-B mU (ps) mC (ps) mC mC mU mA fU fG fC mU mG mA mC mC mC mC mA (ps) mA (ps) mU 630 270
EV2136 EV2136-A mG (ps) fU (ps) mA fU mU fG mG fG mG fU mC fA mG fC mA fU mA (ps) fG (ps) mG 631 271
EV2136 EV2136-B mC (ps) mC (ps) mU mA mU mG fC fU fG mA mC mC mC mC mA mA mU (ps) mA (ps) mC 632 272
EV2137 EV2137-A mU (ps) fA (ps) mC fA mC fC mA fA mC fU mU fG mA fA mU fG mA (ps) fA (ps) mA 633 273
EV2137 EV2137-B mU (ps) mU (ps) mU mC mA mU fU fC fA mA mG mU mU mG mG mU mG (ps) mU (ps) mA 634 274
EV2138 EV2138-A mU (ps) fC (ps) mC fA mC fU mA fC mU fC mC fC mC fA mG fC mU (ps) fG (ps) mA 635 275
EV2138 EV2138-B mU (ps) mC (ps) mA mG mC mU fG fG fG mG mA mG mU mA mG mU mG (ps) mG (ps) mA 636 276
EV2139 EV2139-A mA (ps) fC (ps) mA fU mC fC mA fC mU fA mC fU mC fC mC fC mA (ps) fG (ps) mC 637 277
EV2139 EV2139-B mG (ps) mC (ps) mU mG mG mG fG fA fG mU mA mG mU mG mG mA mU (ps) mG (ps) mU 638 278
EV2140 EV2140-A mG (ps) fC (ps) mA fG mA fC mA fU mC fC mA fC mU fA mC fU mC (ps) fC (ps) mC 639 279
EV2140 EV2140-B mG (ps) mG (ps) mG mA mG mU fA fG fU mG mG mA mU mG mU mC mU (ps) mG (ps) mC 640 280
EV2141 EV2141-A mU (ps) fU (ps) mU fG mC fA mG fA mC fA mU fC mC fA mC fU mA (ps) fC (ps) mU 641 281
EV2141 EV2141-B mA (ps) mG (ps) mU mA mG mU fG fG fA mU mG mU mC mU mG mC mA (ps) mA (ps) mA 642 282
EV2142 EV2142-A mA (ps) fC (ps) mC fC mA fA mA fU mC fC mU fC mA fU mC fU mU (ps) fG (ps) mG 643 283
EV2142 EV2142-B mC (ps) mC (ps) mA mA mG mA fU fG fA mG mG mA mU mU mU mG mG (ps) mG (ps) mU 644 284
EV2143 EV2143-A mA (ps) fA (ps) mC fC mC fA mA fA mU fC mC fU mC fA mU fC mU (ps) fU (ps) mG 645 285
EV2143 EV2143-B mC (ps) mA (ps) mA mG mA mU fG fA fG mG mA mU mU mU mG mG mG (ps) mU (ps) mU 646 286
EV2144 EV2144-A mA (ps) fA (ps) mA fC mC fC mA fA mA fU mC fC mU fC mA fU mC (ps) fU (ps) mU 647 287
EV2144 EV2144-B mA (ps) mA (ps) mG mA mU mG fA fG fG mA mU mU mU mG mG mG mU (ps) mU (ps) mU 648 288
EV2145 EV2145-A mA (ps) fA (ps) mA fA mC fC mC fA mA fA mU fC mC fU mC fA mU (ps) fC (ps) mU 649 289
EV2145 EV2145-B mA (ps) mG (ps) mA mU mG mA fG fG fA mU mU mU mG mG mG mU mU (ps) mU (ps) mU 650 290
EV2146 EV2146-A mG (ps) fA (ps) mA fA mA fC mC fC mA fA mA fU mC fC mU fC mA (ps) fU (ps) mC 651 291
EV2146 EV2146-B mG (ps) mA (ps) mU mG mA mG fG fA fU mU mU mG mG mG mU mU mU (ps) mU (ps) mC 652 292
EV2147 EV2147-A mU (ps) fA (ps) mG fA mA fA mA fC mC fC mA fA mA fU mC fC mU (ps) fC (ps) mA 653 293
EV2147 EV2147-B mU (ps) mG (ps) mA mG mG mA fU fU fU mG mG mG mU mU mU mU mC (ps) mU (ps) mA 654 294
EV2148 EV2148-A mU (ps) fU (ps) mA fU mA fG mA fA mA fA mC fC mC fA mA fA mU (ps) fC (ps) mC 655 295
EV2148 EV2148-B mG (ps) mG (ps) mA mU mU mU fG fG fG mU mU mU mU mC mU mA mU (ps) mA (ps) mA 656 296
EV2149 EV2149-A mU (ps) fU (ps) mG fG mA fG mA fA mG fU mC fG mG fA mA fG mG (ps) fA (ps) mG 657 297
EV2149 EV2149-B mC (ps) mU (ps) mC mC mU mU fC fC fG mA mC mU mU mC mU mC mC (ps) mA (ps) mA 658 298
EV2150 EV2150-A mG (ps) fU (ps) mC fU mG fC mA fC mA fG mG fG mU fA mC fG mG (ps) fG (ps) mU 659 299
EV2150 EV2150-B mA (ps) mC (ps) mC mC mG mU fA fC fC mC mU mG mU mG mC mA mG (ps) mA (ps) mC 660 300
EV2151 EV2151-A mU (ps) fA (ps) mC fA mU fG mA fA mG fG mA fG mU fC mU fU mG (ps) fG (ps) mC 661 301
EV2151 EV2151-B mG (ps) mC (ps) mC mA mA mG fA fC fU mC mC mU mU mC mA mU mG (ps) mU (ps) mA 662 302
EV2152 EV2152-A mG (ps) fU (ps) mG fU mU fA mG fU mC fC mC fU mG fA mC fU mU (ps) fC (ps) mA 663 303
EV2152 EV2152-B mU (ps) mG (ps) mA mA mG mU fC fA fG mG mG mA mC mU mA mA mC (ps) mA (ps) mC 664 304
EV2153 EV2153-A mC (ps) fC (ps) mC fA mU fG mU fU mG fU mG fC mA fA mU fC mC (ps) fA (ps) mU 665 305
EV2153 EV2153-B mA (ps) mU (ps) mG mG mA mU fU fG fC mA mC mA mA mC mA mU mG (ps) mG (ps) mG 666 306
EV2154 EV2154-A mA (ps) fU (ps) mC fU mU fG mG fC mC fU mG fC mC fA mU fG mG (ps) fU (ps) mU 667 307
EV2154 EV2154-B mA (ps) mA (ps) mC mC mA mU fG fG fC mA mG mG mC mC mA mA mG (ps) mA (ps) mU 668 308
EV2155 EV2155-A mG (ps) fA (ps) mG fA mU fC mU fU mG fG mC fC mU fG mC fC mA (ps) fU (ps) mG 669 309
EV2155 EV2155-B mC (ps) mA (ps) mU mG mG mC fA fG fG mC mC mA mA mG mA mU mC (ps) mU (ps) mC 670 310
EV2156 EV2156-A mA (ps) fG (ps) mA fC mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU (ps) fU (ps) mG 671 311
EV2156 EV2156-B mC (ps) mA (ps) mA mA mG mC fU fC fU mG mU mU mU mG mU mG mU (ps) mC (ps) mU 672 312
EV2157 EV2157-A mU (ps) fA (ps) mU fU mG fG mG fG mU fC mA fG mC fA mU fA mG (ps) fG (ps) mG 673 313
EV2157 EV2157-B mC (ps) mC (ps) mC mU mA mU fG fC fU mG mA mC mC mC mC mA mA (ps) mU (ps) mA 674 314
EV2158 EV2158-A mU (ps) fA (ps) mC fG mU fG mU fC mU fG mC fA mC fA mG fG mG (ps) fU (ps) mA 675 315
EV2158 EV2158-B mU (ps) mA (ps) mC mC mC mU fG fU fG mC mA mG mA mC mA mC mG (ps) mU (ps) mA 676 316
EV2159 EV2159-A mG (ps) fU (ps) mG fG mA fA mA fG mA fG mA fU mC fU mC fA mU (ps) fC (ps) mA 677 317
EV2159 EV2159-B mU (ps) mG (ps) mA mU mG mA fG fA fU mC mU mC mU mU mU mC mC (ps) mA (ps) mC 678 318
EV2160 EV2160-A mA (ps) fC (ps) mC fG mU fC mA fU mA fG mC fA mG fU mG fG mA (ps) fA (ps) mA 679 319
EV2160 EV2160-B mU (ps) mU (ps) mU mC mC mA fC fU fG mC mU mA mU mG mA mC mG (ps) mG (ps) mU 680 320
EV2161 EV2161-A mU (ps) fG (ps) mG fU mA fG mG fU mG fA mC fG mC fU mG fU mC (ps) fU (ps) mU 681 321
EV2161 EV2161-B mA (ps) mA (ps) mG mA mC mA fG fC fG mU mC mA mC mC mU mA mC (ps) mC (ps) mA 682 322
EV2162 EV2162-A mA (ps) fC (ps) mC fU mU fC mC fU mG fA mC fA mC fG mU fU mC (ps) fG (ps) mC 683 323
EV2162 EV2162-B mG (ps) mC (ps) mG mA mA mC fG fU fG mU mC mA mG mG mA mA mG (ps) mG (ps) mU 684 324
EV2163 EV2163-A mA (ps) fG (ps) mC fA mU fC mG fA mC fU mC fC mU fU mC fU mA (ps) fU (ps) mG 685 325
EV2163 EV2163-B mC (ps) mA (ps) mU mA mG mA fA fG fG mA mG mU mC mG mA mU mG (ps) mC (ps) mU 686 326
EV2164 EV2164-A mA (ps) fC (ps) mC fA mU fA mA fC mU fU mG fC mC fA mC fC mU (ps) fU (ps) mC 687 327
EV2164 EV2164-B mG (ps) mA (ps) mA mG mG mU fG fG fC mA mA mG mU mU mA mU mG (ps) mG (ps) mU 688 328
EV2165 EV2165-A mA (ps) fU (ps) mG fA mC fA mU fG mG fC mG fG mG fU mG fC mG (ps) fG (ps) mU 689 329
EV2165 EV2165-B mA (ps) mC (ps) mC mG mC mA fC fC fC mG mC mC mA mU mG mU mC (ps) mA (ps) mU 690 330
EV2166 EV2166-A mG (ps) fA (ps) mC fA mG fU mA fA mU fU mG fG mG fU mC fC mC (ps) fC (ps) mG 691 331
EV2166 EV2166-B mC (ps) mG (ps) mG mG mG mA fC fC fC mA mA mU mU mA mC mU mG (ps) mU (ps) mC 692 332
EV2167 EV2167-A mA (ps) fA (ps) mC fA mC fA mU fA mG fA mC fA mU fC mC fA mG (ps) fA (ps) mU 693 333
EV2167 EV2167-B mA (ps) mU (ps) mC mU mG mG fA fU fG mU mC mU mA mU mG mU mG (ps) mU (ps) mU 694 334
EV2168 EV2168-A mG (ps) fC (ps) mA fU mU fG mA fU mG fU mU fC mA fC mU fU mG (ps) fG (ps) mU 695 335
EV2168 EV2168-B mA (ps) mC (ps) mC mA mA mG fU fG fA mA mC mA mU mC mA mA mU (ps) mG (ps) mC 696 336
EV2169 EV2169-A mC (ps) fA (ps) mC fA mU fG mU fU mG fC mU fC mA fU mU fG mU (ps) fC (ps) mU 697 337
EV2169 EV2169-B mA (ps) mG (ps) mA mC mA mA fU fG fA mG mC mA mA mC mA mU mG (ps) mU (ps) mG 698 338
EV2170 EV2170-A mA (ps) fG (ps) mA fC mU fC mA fG mA fG mA fC mU fG mG fC mU (ps) fU (ps) mU 699 339
EV2170 EV2170-B mA (ps) mA (ps) mA mG mC mC fA fG fU mC mU mC mU mG mA mG mU (ps) mC (ps) mU 700 340
EV2171 EV2171-A mG (ps) fU (ps) mG fU mU fC mC fC mA fA mA fC mC fA mU fG mC (ps) fC (ps) mA 701 341
EV2171 EV2171-B mU (ps) mG (ps) mG mC mA mU fG fG fU mU mU mG mG mG mA mA mC (ps) mA (ps) mC 702 342
EV2172 EV2172-A mG (ps) fU (ps) mU fG mC fU mU fG mU fG mG fU mA fA mU fC mG (ps) fG (ps) mU 703 343
EV2172 EV2172-B mA (ps) mC (ps) mC mG mA mU fU fA fC mC mA mC mA mA mG mC mA (ps) mA (ps) mC 704 344
EV2173 EV2173-A mA (ps) fA (ps) mC fG mU fC mA fU mA fG mU fC mA fU mA fA mA (ps) fA (ps) mU 705 345
EV2173 EV2173-B mA (ps) mU (ps) mU mU mU mA fU fG fA mC mU mA mU mG mA mC mG (ps) mU (ps) mU 706 346
EV2174 EV2174-A mA (ps) fC (ps) mA fA mA fU mG fG mG fC mC fU mG fA mU fA mG (ps) fU (ps) mC 707 347
EV2174 EV2174-B mG (ps) mA (ps) mC mU mA mU fC fA fG mG mC mC mC mA mU mU mU (ps) mG (ps) mU 708 348
EV2175 EV2175-A mU (ps) fC (ps) mA fA mA fG mC fU mC fG mA fG mU fU mG fU mU (ps) fC (ps) mC 709 349
EV2175 EV2175-B mG (ps) mG (ps) mA mA mC mA fA fC fU mC mG mA mG mC mU mU mU (ps) mG (ps) mA 710 350
EV2176 EV2176-A mU (ps) fG (ps) mU fU mG fC mU fG mG fC mA fA mG fU mG fG mU (ps) fA (ps) mG 711 351
EV2176 EV2176-B mC (ps) mU (ps) mA mC mC mA fC fU fU mG mC mC mA mG mC mA mA (ps) mC (ps) mA 712 352
EV2177 EV2177-A mA (ps) fU (ps) mA fG mC fC mU fG mG fG mG fC mA fU mA fU mU (ps) fG (ps) mA 713 353
EV2177 EV2177-B mU (ps) mC (ps) mA mA mU mA fU fG fC mC mC mC mA mG mG mC mU (ps) mA (ps) mU 714 354
EV2178 EV2178-A mU (ps) fA (ps) mC fA mA fA mG fG mA fA mC fC mG fA mG fG mG (ps) fG (ps) mU 715 355
EV2178 EV2178-B mA (ps) mC (ps) mC mC mC mU fC fG fG mU mU mC mC mU mU mU mG (ps) mU (ps) mA 716 356
EV2179 EV2179-A mC (ps) fU (ps) mU fU mU fG mC fC mG fC mU fU mC fU mG fG mU (ps) fU (ps) mU 717 357
EV2179 EV2179-B mA (ps) mA (ps) mA mC mC mA fG fA fA mG mC mG mG mC mA mA mA (ps) mA (ps) mG 718 358
EV2180 EV2180-A mG (ps) fU (ps) mC fU mU fG mG fC mA fG mG fA mA fG mG fC mU (ps) fC (ps) mC 719 359
EV2180 EV2180-B mG (ps) mG (ps) mA mG mC mC fU fU fC mC mU mG mC mC mA mA mG (ps) mA (ps) mC 720 360
EV2207 EV2207-A mU (ps) fC (ps) mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU 754 721
EV2207 EV2024-B mA (ps) mU (ps) mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU 408 48
EV2208 EV2208-A mU (ps) fU (ps) mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA (ps) fC (ps) mA 755 722
EV2208 EV2101-B mU (ps) mG (ps) mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU (ps) mA (ps) mU 562 202
EV2209 EV2209-A mU (ps) fU (ps) mU fG mU fC mG fC mA fG mC fU mG fU mU fU mU (ps) fA (ps) mA 756 723
EV2209 EV2036-B mU (ps) mU (ps) mA mA mA mA fC fA fG mC mU mG mC mG mA mC mA (ps) mA (ps) mC 432 72
EV2210 EV2210-A mU (ps) fA (ps) mU fG mA fA mA fC mG fA mC fU mU fC mU fC mU (ps) fU (ps) mG 757 724
EV2210 EV2029-B mC (ps) mA (ps) mA mG mA mG fA fA fG mU mC mG mU mU mU mC mA (ps) mU (ps) mU 418 58
EV2211 EV2196-A (vp)-mU fC mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU 740 721
EV2211 EV2211-B mA mU mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU 759 48
EV2212 EV2198-A (vp)-mU fU mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA (ps) fC (ps) mA 742 722
EV2212 EV2212-B mU mG mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU (ps) mA (ps) mU 760 202
*：A=第1股；B=第2股
表5c中所列之結合雙螺旋體具有如所示之各種修飾，關於所用縮寫之解釋參考表4。適當時，亦指示表5a之等效未經修飾之股之序列。 表 5c- 結合雙螺旋體
雙螺旋體 ID 股名稱 (*) 序列 (5 ' à 3 ' ) SEQ ID No. 未經修飾之等效SEQ ID No.
EV2181 EV2029-A mA (ps) fA (ps) mU fG mA fA mA fC mG fA mC fU mU fC mU fC mU (ps) fU (ps) mG 417 57
EV2181 EV2181-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mC mA mA mG mA mG fA fA fG mU mC mG mU mU mU mC mA (ps) mU (ps) mU 725 58
EV2182 EV2036-A mG (ps) fU (ps) mU fG mU fC mG fC mA fG mC fU mG fU mU fU mU (ps) fA (ps) mA 431 71
EV2182 EV2182-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mU mA mA mA mA fC fA fG mC mU mG mC mG mA mC mA (ps) mA (ps) mC 726 72
EV2183 EV2050-A mG (ps) fA (ps) mA fC mA fC mA fU mG fU mU fG mC fU mC fA mU (ps) fU (ps) mG 459 99
EV2183 EV2183-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mC mA mA mU mG mA fG fC fA mA mC mA mU mG mU mG mU (ps) mU (ps) mC 727 100
EV2184 EV2148-A mU (ps) fU (ps) mA fU mA fG mA fA mA fA mC fC mC fA mA fA mU (ps) fC (ps) mC 655 295
EV2184 EV2184-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mG mG mA mU mU mU fG fG fG mU mU mU mU mC mU mA mU (ps) mA (ps) mA 728 296
EV2185 EV2101-A mA (ps) fU (ps) mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA (ps) fC (ps) mA 561 201
EV2185 EV2185-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mG mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU (ps) mA (ps) mU 729 202
EV2186 EV2024-A mA (ps) fC (ps) mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU 407 47
EV2186 EV2186-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mU mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU 730 48
EV2187 EV2108-A mA (ps) fU (ps) mG fC mC fA mC fA mG fA mG fA mC fU mC fA mG (ps) fA (ps) mG 575 215
EV2187 EV2187-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mC mU mC mU mG mA fG fU fC mU mC mU mG mU mG mG mC (ps) mA (ps) mU 731 216
EV2188 EV2144-A mA (ps) fA (ps) mA fC mC fC mA fA mA fU mC fC mU fC mA fU mC (ps) fU (ps) mU 647 287
EV2188 EV2188-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mA mG mA mU mG fA fG fG mA mU mU mU mG mG mG mU (ps) mU (ps) mU 732 288
EV2189 EV2160-A mA (ps) fC (ps) mC fG mU fC mA fU mA fG mC fA mG fU mG fG mA (ps) fA (ps) mA 679 319
EV2189 EV2189-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mU mU mC mC mA fC fU fG mC mU mA mU mG mA mC mG (ps) mG (ps) mU 733 320
EV2190 EV2047-A mA (ps) fU (ps) mA fA mC fU mU fG mC fC mA fC mC fU mU fC mU (ps) fC (ps) mA 453 93
EV2190 EV2190-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mG mA mG mA mA fG fG fU mG mG mC mA mA mG mU mU (ps) mA (ps) mU 734 94
EV2191 EV2048-A mA (ps) fG (ps) mC fC mA fA mA fG mC fA mU fU mG fA mU fG mU (ps) fU (ps) mC 455 95
EV2191 EV2191-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mG mA mA mC mA mU fC fA fA mU mG mC mU mU mU mG mG (ps) mC (ps) mU 735 96
EV2192 EV2159-A mG (ps) fU (ps) mG fG mA fA mA fG mA fG mA fU mC fU mC fA mU (ps) fC (ps) mA 677 317
EV2192 EV2192-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mG mA mU mG mA fG fA fU mC mU mC mU mU mU mC mC (ps) mA (ps) mC 736 318
EV2193 EV2141-A mU (ps) fU (ps) mU fG mC fA mG fA mC fA mU fC mC fA mC fU mA (ps) fC (ps) mU 641 281
EV2193 EV2193-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mG mU mA mG mU fG fG fA mU mG mU mC mU mG mC mA (ps) mA (ps) mA 737 282
EV2194 EV2167-A mA (ps) fA (ps) mC fA mC fA mU fA mG fA mC fA mU fC mC fA mG (ps) fA (ps) mU 693 333
EV2194 EV2194-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mU mC mU mG mG fA fU fG mU mC mU mA mU mG mU mG (ps) mU (ps) mU 738 334
EV2195 EV2125-A mA (ps) fA (ps) mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG fA mU fA mU (ps) fC (ps) mC 609 249
EV2195 EV2195-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mG mG mA mU mA mU fC fA fA mA mG mC mU mC mU mG mU (ps) mU (ps) mU 739 250
EV2196 EV2196-A (vp)-mU fC mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU 740 721
EV2196 EV2186-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mU mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU 730 48
EV2197 EV2197-A (vp)-mU fU mA fU mA fG mA fA mA fA mC fC mC fA mA fA mU (ps) fC (ps) mC 741 295
EV2197 EV2184-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mG mG mA mU mU mU fG fG fG mU mU mU mU mC mU mA mU (ps) mA (ps) mA 728 296
EV2198 EV2198-A (vp)-mU fU mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA (ps) fC (ps) mA 742 722
EV2198 EV2185-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mG mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU (ps) mA (ps) mU 729 202
EV2199 EV2199-A mA (ps) fU (ps) mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA fC (ps2) mA 743 201
EV2199 EV2199-B [ST23]3 ST41 mU (ps2) mG mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU mA (ps2) mU 744 202
EV2200 EV2200-A (vp)-mU fU mA fU mC fC mU fU mG fA mC fU mU fU mG fA mA fC (ps2) mA 745 722
EV2200 EV2199-B [ST23]3 ST41 mU (ps2) mG mU mU mC mA fA fA fG mU mC mA mA mG mG mA mU mA (ps2) mU 744 202
EV2201 EV2201-A (vp)-mU fU mU fG mU fC mG fC mA fG mC fU mG fU mU fU mU (ps) fA (ps) mA 746 723
EV2201 EV2182-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mU mU mA mA mA mA fC fA fG mC mU mG mC mG mA mC mA (ps) mA (ps) mC 726 72
EV2202 EV2202-A mG (ps) fU (ps) mU fG mU fC mG fC mA fG mC fU mG fU mU fU mU fA (ps2) mA 747 71
EV2202 EV2202-B [ST23]3 ST41 mU (ps2) mU mA mA mA mA fC fA fG mC mU mG mC mG mA mC mA mA (ps2) mC 748 72
EV2203 EV2203-A (vp)-mU fU mU fG mU fC mG fC mA fG mC fU mG fU mU fU mU fA (ps2) mA 749 723
EV2203 EV2202-B [ST23]3 ST41 mU (ps2) mU mA mA mA mA fC fA fG mC mU mG mC mG mA mC mA mA (ps2) mC 748 72
EV2204 EV2204-A (vp)-mU fA mU fG mA fA mA fC mG fA mC fU mU fC mU fC mU (ps) fU (ps) mG 750 724
EV2204 EV2181-B [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mC mA mA mG mA mG fA fA fG mU mC mG mU mU mU mC mA (ps) mU (ps) mU 725 58
EV2205 EV2205-A mA (ps) fA (ps) mU fG mA fA mA fC mG fA mC fU mU fC mU fC mU fU (ps2) mG 751 57
EV2205 EV2205-B [ST23]3 ST41 mC (ps2) mA mA mG mA mG fA fA fG mU mC mG mU mU mU mC mA mU (ps2) mU 752 58
EV2206 EV2206-A (vp)-mU fA mU fG mA fA mA fC mG fA mC fU mU fC mU fC mU fU (ps2) mG 753 724
EV2206 EV2205-B [ST23]3 ST41 mC (ps2) mA mA mG mA mG fA fA fG mU mC mG mU mU mU mC mA mU (ps2) mU 752 58
*：A=第1股；B=第2股 SEQ ID No. 758＞NM_001710.6智人補體因子B (CFB)，mRNA
Figure 02_image125
圖 1展示在與以PPIB mRNA正規化的GalNAc結合之siRNA一起培育後，初生食蟹獼猴肝細胞中的相對CFB mRNA表現。ut表示未經處理細胞中之目標表現，且Ctr表示與非靶向對照siRNA一起培育後的目標表現。 圖 2展示在與以PPIB mRNA正規化的GalNac結合之siRNA一起培育後，初生人類肝細胞中的相對CFB mRNA表現。ut表示未經處理細胞中之目標表現，且Ctr表示與非靶向對照siRNA一起培育後的目標表現。 圖 3展示在與以APOB mRNA正規化的siRNA GalNAc結合物一起培育後，初生鼠類肝細胞中的相對CFB mRNA表現。ut表示未經處理細胞中之目標表現，且Ctr表示與非靶向對照siRNA一起培育後的目標表現。 圖 4展示初生小鼠(A)、人類(B)及食蟹獼猴(C)肝細胞中，在與以ApoB (A)或PPIB (B、C) mRNA正規化的GalNAc結合之siRNA一起培育後的相對CFB mRNA表現。 圖 5A展示在單次給藥1或5 mg/kg GalNAc結合之siRNA EV2184、EV2185、EV2187、EV2188及EV2195之後14天，鼠類肝臟中之相對CFB mRNA表現%。給與PBS的一組當作對照。資料在條形圖中展示為平均值±SD (每組n=5)。 圖 5B展示在單次給藥1或5 mg/kg GalNAc結合之siRNA EV2184、EV2197、EV2185及EV2200之後21天及42天，鼠類肝臟中之相對CFB mRNA表現%。給與PBS的一組當作對照。資料在條形圖中展示為平均值±SD (每組n=4)。 圖 6展示在單次皮下給藥GalNAc結合之siRNA EV2196、EV2204及EV2198之後4週及8週時CFB mRNA降低。
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Claims (15)

  1. 一種用於抑制補體因子B (complement factor B；CFB)表現之雙股核酸，其中該核酸包含第一股及第二股，其中該第一股序列之未經修飾等效物包含來自SEQ ID No. 721、57、71、295、201、47、319、249、295、722、723、724之第一股序列中之任一者的序列。
  2. 如請求項1之核酸，其中該第二股序列之未經修飾等效物包含來自48、58、72、296、202、48、320、250、296、202、72、58之對應第二股序列中之任一者的序列。
  3. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該第一股與該第二股形成長度為17至25個核苷酸之雙螺旋區。
  4. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該核酸介導RNA干擾。
  5. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該第一股序列包含SEQ ID No. 721，且其中該第二股包含SEQ ID No: 48。
  6. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該第一股序列由SEQ ID No. 721組成，且視情況其中該第二股由SEQ ID No. 48組成。
  7. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該第一股及/或該第二股之至少一個核苷酸為經修飾之核苷酸。
  8. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該第一股在其5'端處具有末端5' (E)-乙烯基膦酸酯核苷酸。
  9. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該核酸包含介於該第一股及/或該第二股之末端兩個或三個3'核苷酸及/或5'核苷酸之間的硫代磷酸酯鍵，且較佳地其中其餘核苷酸之間的鍵為磷酸二酯鍵。
  10. 如請求項1至5中任一項或如請求項7至9中任一項之核酸，其中該第一股序列包含 (vp)-mU fC mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU (SEQ ID No. 740)，且視情況其中該第二股序列包含 mA mU mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU (SEQ ID No. 759)。
  11. 如前述請求項中任一項之核酸，其中該核酸與異源部分結合。
  12. 如請求項11之核酸，其中該異源部分包含(i)一或多個N-乙醯基半乳胺糖(N-acetyl galactosamine；GalNAc)部分或其衍生物，及(ii)連接子，其中該連接子將該至少一個GalNAc部分或其衍生物與該核酸結合。
  13. 如請求項11或12之核酸，其中該第一股序列包含 (vp)-mU fC mA fC mA fA mA fC mA fG mA fG mC fU mU fU mG (ps) fA (ps) mU (SEQ ID No. 740)，且視情況其中該第二股序列包含 [ST23(ps)]3 ST41 (ps) mA mU mC mA mA mA fG fC fU mC mU mG mU mU mU mG mU (ps) mG (ps) mU (SEQ ID No. 730)。
  14. 一種組合物，其包含如前述請求項中任一項之核酸、及溶劑、及/或遞送媒劑、及/或生理學上可接受之賦形劑、及/或載劑、及/或鹽、及/或稀釋劑、及/或緩衝劑、及/或防腐劑、及/或另一種選自包含以下之群的治療劑：寡核苷酸、小分子、單株抗體、多株抗體及肽。
  15. 如請求項1至13中任一項之核酸或如請求項14之組合物，其用作治療劑。
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