TW201906820A - 致癌抑制劑 - Google Patents

Abstract

本發明的目的是提供一種沒有副作用，經口投與而具有優異效果的致癌抑制劑。

本發明之含有乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽做為有效成分的致癌抑制劑，由於顯示息肉形成抑制作用及細胞增殖抑制作用，且沒有副作用並且安全性高，故做為預防癌的發生或進展且抑制癌的復發或轉移更且顯示治療效果的藥劑或營養補充品等食品有用性非常高者。

Description

致癌抑制劑

本發明是關於乙內醯脲(hydantoin)衍生物或其在藥學上可容許的鹽的新穎的醫藥用途者，具體而言是關於一種致癌抑制劑，其係含有至少1種乙內醯脲衍生物及其在藥學上可容許的鹽做為有效成分。

由於世界性的社會的高齡化、飲食生活的歐美化、抽菸習慣等為主因，預料日本以及世界的癌患者數今後也會繼續增加。依據世界衛生組織(WHO)彙整的「世界癌報告書2014」，世界的癌患者數，由2012年時的1400萬人，每年繼續增加，推測在2025年達1900萬人，在2035年達2400萬人。另一方面，在癌的治療上，有使用外科療法、放射線療法、化學療法、溫熱療法、免疫療法、光線力學療法等各種各樣的治療法，但尚未有對任一種癌都可完全治癒的治療法的存在。以為癌治療順利進行，但在外科手術的情況時未能切除乾淨的癌細胞，在化學療法或放射線療法等的情況時一旦縮小的癌細胞，再度在同一或附近的部位有增殖的情況(以下稱為「復發」。)。又，與原來的部位不同的部位有相同的癌出現的情況(以下稱為「轉 移」。)。由於這些原因，要把所有的癌完全治好，現在是不可能的狀況。因此，在醫療現場特別是對於防止使癌的治療困難的復發及轉移的有效的手段的出現有強烈的期待。

由以上所述，近年來，在癌發生後的治療之外，預防癌的發生，或減低癌的發生的可能性的致癌抑制的觀點受重視。最為眾知的致癌抑制手段是，禁菸及飲食的改善等的生活習慣的重新檢討。例如，1996年哈佛大學的癌預防中心發表的美國人的癌死亡的原因是，抽菸為30%，飲食也同樣是30%。另一方面，積極服用維他命劑及藥劑等的化學預防(chemoprevention)的有用性受檢討。做為化學預防的對象而言，有罹癌可能性高的高危險性組，例如可列舉抽菸者、遺傳性的或職業性的罹癌可能性高的人，有大腸息肉等的前癌病變的人，暫時完成癌治療的人等。對這種化學預防，證明其有效性是當然，副作用的危險性低，是其被採用的條件。又，化學預防如果可能做到在日常生活中可以輕易的服用或經口攝取的藥劑或食品(例如，營養補充品或健康食品等)的話，非常簡便而為理想。能實現優異的癌化學預防，則對於疑慮癌的發生者，害怕癌的復發、轉移的患者，會是偉大的福音是不容置疑的。又，癌化學預防的普及，大大的提高癌的治療成績(延命效果)，並迴避重複的手術，不需要高額的抗癌劑的處方等而減低醫療費用，癌患者可以繼續就業而可貢獻於抑制社會性的損失。

在用於癌化學預防的藥劑開發上，老藥新用(Drug repositioning)的想法受到注目。老藥新用就是指，由已經確立或確認對於人的安全性及體內動態等既有的藥或在開發中的藥，要找出以往所知的藥效以外的新的藥效，將其連繫於實用化的研究手法。市售的對於人的使用有實績，及確認在臨床試驗的安全性及體內動態的「可靠性」，及有可使用的許多既有的數據的「低成本性」為藥劑開發上的最大的優點。

由於以往在世界中進行的癌的研究，對於致癌初期的相關因子，該等因子所相關的重要的信號傳遞途徑，也有許多受到解明。做為與信號傳遞途徑的關連性高的前癌症狀而言，可舉「炎症」，「氧化壓力」及「未分化性的維持」，這些是經受到某特定的轉錄因子的轉錄調節為其特徵。因此，可想由調控這些轉錄調節有連繫於致癌抑制的可能性，對於抗炎症物質或抗氧化物質成為致癌抑制劑的候選物質有期待。實際上，以往國際癌症研究機構(IARC)，對於蘇琳達克(sulindac)、吲哚美辛(indomethacin)等抗炎症劑，β-胡蘿蔔素、維他命A酸等抗氧化劑，評估其癌預防效果的有無。但是，遺憾的是，在這些受評估的物質中，在現時點，幾乎沒有具備充分的癌預防效果的科學的根據者。

本發明致癌抑制劑的有效成分的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽(以下也稱為「本化合物」。又，在本申請案中，單稱為「化合物」時，也有包含其在 藥學上可容許的鹽的情況。)，在本申請案的申請人的日本臟器製藥股份公司發現其有做為植物生長調整作用的新穎物質者。由在其後的研究，報告本化合物具有血糖降低作用及脂質降低作用等藥理作用，並且低毒性而幾乎沒有副作用(日本特開昭57-114578號、日本特開昭60-188373號、日本特開昭61-122275號、日本特開昭62-45525號、日本特開昭62-14號、日本特開平1-75473號、日本特開平1-299276號公報等)。又，關於本化合物的另外一個醫藥用途，也有做為尿毒症毒素降低劑(日本特開平3-72463號公報)，難治性血管炎治療劑(日本特開2000-212083號公報，低白蛋白血症改善劑(日本特開2002-241283號公報)，慢性腎臟病的進行抑制或改善劑(國際公開WO2015/129750號公報))的專利申請，有揭示其效果。

又，本化合物是在做為慢性腎臟病治療藥而開發的臨床試驗中，確認對於人有高的安全性。

此外，在專利文獻1，有揭示本化合物有用於做為活性氧、自由基消除劑。如上所述，已知抗氧化物質對致癌抑制有可能成為有效。但是，實際上，並不是抗氧化物質就一定顯示致癌抑制效果，現狀是只有一部分的抗氧化物質被確認有致癌抑制效果。又，顯現致癌抑制效果的抗氧化物質中，也有已知不是依據其抗氧化作用，而是由抗炎症作用或酶抑制作用而顯現致癌抑制效果者。這種抗氧化物質，在上述的「炎症」，「氧化壓力」及「未分化性的維持」的前癌症狀中，被認為不是「氧化壓力」，而 是關與「炎症」或「未分化性的維持」，而抑制由前癌症狀進展為癌的。

在專利文獻1中，對於本化合物具有致癌抑制效果的事並無任何記述或提示。如上所述，已知做為所謂抗氧化劑的物質，也不一定顯現致癌抑制效果。又，抗氧化劑以外也有抗炎症劑或酶抑制劑等的各種各樣的物質有可能成為致癌抑制劑的候選物質，該物質實際上具有致癌抑制效果，加之其可經口投與或攝取，副作用危險性低的物質，是非常稀有的事。本化合物是如後述，有可能成為具有滿足如上所述的好幾種條件的優異的致癌抑制劑i。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特開平9-227377號公報

本發明的目的是提供一種致癌抑制劑，其係具有包括癌的初發、復發、轉移，預防癌的發生或降低發生的可能性(機率)的(在本申請案中稱為「致癌抑制」。)效果，並且副作用風險低，可以經口投與或攝取。本發明致癌抑制劑，特別是對致癌風險高的人，及對在癌的治療中或治療後的患者投與或攝取，而可抑制癌的發生、復發或轉移。做為其劑形而言，可服用(經口投與)的藥劑或可 經口攝取的補充劑等食品為最佳。

本發明者等，對於癌的化學預防劑在精心反覆研究。這一次，使用下述通式(I)代表的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽(本化合物)，對家族性大腸腺瘤性息肉症模式的Min小鼠實施經口投與的藥理試驗的結果，確認本化合物抑制在腸管上皮黏膜組織及其息肉部位的細胞增殖關連因子c-Myc、CDK-4及周期蛋白D1的表現，於該息肉部位抑制細胞增殖能力。又，也確認在該Min小鼠的腸管上皮黏膜組織中的抗氧化關連因子Gpx2的表現受到促進。另一方面，本化合物將在處置自由基產生劑的過氧化氫(H₂O₂)時在人的大腸癌細胞HCT-116產生的活性氧種類(Reactive Oxygen Species,ROS)加以消除，確認在Keap1-Nrf2途徑的轉錄調節系帶來變化。由這些事情，本發明者等經由實驗確認本化合物具有優異的致癌抑制作用。

另一方面，本化合物在過去的研究中，對於大鼠及狗等的動物是當然的，對於人的安全性也有確認，符合做為癌化學預防劑應受重視的副作用的風險低的條件。再者，在以往做為ROS消除劑而確認其有用性者中，做為劑形只有靜脈注射劑用者存在，但由於本化合物在經口投與中顯現有效的作用，在投與、攝取之點為便利性格外高者。由這樣的事情，本發明的致癌抑制劑，不只是做為醫藥品，也有做為食品(健康食品、營養補充品等)使用的可 能性。又，本發明的致癌抑制劑，不只是對人，也可對動物(尤其是哺乳動物)使用，本發明致癌抑制劑是不限於人用者。由以上的事情，本發明者等發現本化合物可成為優異的致癌抑制劑，而完成本發明。即，本發明是關於如以下所述事項者，但並不受這些的任何限定。

(1)致癌抑制劑，其係含有下述通式(I)代表的乙內醯脲衍生物及其在藥學上可容許的鹽的至少一種做為有效成分。

[式中，R₁及R₂各自相同或不相同，表示氫，烷基，環烷基或可經1或2個鹵素、硝基、烷基或烷氧基取代的苄基，X及Y各自相同或不相同，表示氫、羧基、烷基或烷氧基。]

(2)如前述(1)所述的致癌抑制劑，其中的R₁及R₂各自相同或不相同，表示氫或碳數1至3的烷基，X及Y各自相同或不相同，表示氫、羧基或碳數1至3的烷氧基。

(3)如前述(1)或(2)所述的致癌抑制劑，其中的R₁是碳數1至3的烷基，R₂是氫。

(4)如前述(1)至(3)的任一者所述的致癌抑制劑，其中的R₁是碳數1至2的烷基，R₂是氫。

(5)如前述(1)至(4)的任一者所述的致癌抑制劑，其中 的R₁是甲基，R₂是氫。

(6)如前述(1)至(5)的任一者所述的致癌抑制劑，其中的X及Y之一者為氫，另一者為羧基。

(7)如前述(1)至(6)的任一者所述的致癌抑制劑，其致癌抑制係由息肉形成抑制所致者。

(8)前述(1)至(7)的任一者所述的致癌抑制劑，其致癌抑制係由抗氧化關連因子的表現調控所致者。

(9)如前述(8)所述的致癌抑制劑，其致癌抑制係由Gpx2的表現促進所致者。

(10)如前述(1)至(9)的任一者所述的致癌抑制劑，其致癌抑制係由ROS的消除所致者。

(11)前述(1)至(10)的任一者所述的致癌抑制劑，其致癌抑制係由細胞增殖關連因子的表現調控所致者。

(12)如前述(11)所述的致癌抑制劑，其致癌抑制係由c-Myc、CDK4或周期蛋白D1的表現抑制所致者。

(13)如前述(1)至(12)的任一者所述的致癌抑制劑，其係消化管癌的致癌抑制劑。

(14)如前述(13)所述的致癌抑制劑，其係大腸癌的致癌抑制劑。

(15)如前述(1)至(14)的任一者所述的致癌抑制劑，其係醫藥組成物。

(16)如前述(15)所述的致癌抑制劑，其係經口劑。

(17)如前述(15)所述的致癌抑制劑，其係注射劑。

(18)如前述(1)至(14)的任一者所述的致癌抑制劑，其 係食品組成物。

(19)如前述(18)所述的致癌抑制劑，其係健康食品或營養補充品。

(20)致癌抑制方法，其係包含將前述(1)至(6)的任一者所述的乙內醯脲衍生物及其在藥學上可容許的鹽的至少一種的有效量，對有其需要的對象投與。

(21)如前述(20)所述的致癌抑制方法，其致癌抑制係由息肉形成抑制所致者。

(22)如前述(20)或(21)所述的致癌抑制方法，其致癌抑制係由抗氧化關連因子的表現調控所致者。

(23)如前述(22)所述的致癌抑制方法，其致癌抑制係由Gpx2的表現促進所致者。

(24)如前述(20)至(23)的任一者所述的致癌抑制方法，其致癌抑制係由ROS的消除所致者。

(25)如前述(20)至(24)的任一者所述的致癌抑制方法，其致癌抑制係由細胞增殖關連因子的表現調控所致者。

(26)如前述(25)所述的致癌抑制方法，其致癌抑制係由c-Myc、CDK4或周期蛋白D1的表現抑制所致者。

(27)如前述(20)至(26)的任一者所述的致癌抑制方法，其係抑制消化管癌的發生。

(28)如前述(27)所述的致癌抑制方法，其係抑制大腸癌的發生。

(29)如前述(20)至(28)的任一者所述的致癌抑制方法，其係投與包含乙內醯脲衍生物及其在藥學上可容許的鹽的 至少一種的醫藥組成物。

(30)如前述(29)所述的致癌抑制方法，其中的醫藥組成物係為經口劑。

(31)如前述(29)所述的致癌抑制方法，其中的醫藥組成物係為注射劑。

(32)如前述(20)至(28)的任一者所述的致癌抑制方法，其係投與包含乙內醯脲衍生物及其在藥學上可容許的鹽的至少一種的食品組成物。

(33)如前述(32)所述的致癌抑制方法，其中的食品組成物係為健康食品或營養補充品。

(34)如前述(1)至(6)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其係用於致癌抑制。

(35)如前述(34)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其致癌抑制係由息肉形成抑制所致者。

(36)如前述(34)或(35)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其致癌抑制係由抗氧化關連因子的表現調控所致者。

(37)如前述(36)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其致癌抑制係由Gpx2的表現促進所致者。

(38)如前述(34)至(37)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其致癌抑制係由ROS的消除所致者。

(39)如前述(34)至(38)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其致癌抑制係由細胞增殖關 連因子的表現調控所致者。

(40)如前述(39)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其致癌抑制係由c-Myc、CDK4或周期蛋白D1的表現抑制所致者。

(41)如前述(34)至(40)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其係抑制消化管癌的發生。

(42)如前述(41)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其係抑制大腸癌的發生。

(43)如前述(34)至(42)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其係醫藥組成物。

(44)如前述(43)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽醫藥組成物，該醫藥組成物係經口劑。

(45)如前述(43)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，該醫藥組成物係注射劑。

(46)如前述(34)至(42)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其係食品組成物。

(47)如前述(46)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽，其食品組成物係健康食品或營養補充品。

(48)如前述(1)至(6)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其係用於製造致癌抑制劑。

(49)如前述(48)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制係由息肉形成抑制所致者。

(50)如前述(48)或(49)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制係由抗氧化關連因子的表現調控所致者。

(51)如前述(50)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制係由Gpx2的表現促進所致者。

(52)如前述(48)至(51)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制係由ROS的消除所致者。

(53)如前述(48)至(52)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制係由細胞增殖關連因子的表現調控所致者。

(54)如前述(53)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制係由c-Myc、CDK4或周期蛋白D1的表現抑制所致者。

(55)如前述(48)至(54)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其係為消化管癌的致癌抑制劑。

(56)如前述(55)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其係為大腸癌的致癌抑制劑。

(57)如前述(48)至(56)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制劑係為醫藥組成物。

(58)如前述(57)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上 可容許的鹽的使用，其醫藥組成物係為經口劑。

(59)如前述(57)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其醫藥組成物係為注射劑。

(60)如前述(48)至(56)的任一者所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其致癌抑制劑係為食品組成物。

(61)如前述(60)所述的乙內醯脲衍生物或其在藥學上可容許的鹽的使用，其食品組成物係為健康食品或營養補充品。

本化合物，在後述的藥理試驗中，對息肉形成及細胞增殖關連因子的表現顯示優異的抑制效果。又，本化合物的安全性非常高，由經口投與或攝取而顯示效果，可以成為以醫藥品或食品的劑型而可做化學預防的，有用性極高的致癌抑制劑者。

第1圖是表示在對照組與1000ppm被驗物質投與組的小鼠小腸黏膜的息肉部位中PCNA免疫染色的結果的光學顯微鏡照片。

本發明是關於致癌抑制劑，其含有下述通式(I)代表的乙內醯脲衍生物及其在藥學上可容許的鹽的至少一種做為有效成分。

[式中，R₁及R₂各自相同或不相同，代表氫、烷基、環烷基或可經1或2個鹵素、硝基、烷基或烷氧基取代的苄基，X及Y各自相同或不相同，代表氫、羧基、烷基或烷氧基。]

在前述通式(I)的取代基中，烷基可為任一者，但佳者是代表甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、戊基、異戊基、新戊基、三級戊基、己基、異己基、庚基、異庚基、辛基、異辛基、壬基、異壬基、癸基、異癸基、硬脂基等碳數1至20的直鏈狀或支鏈狀的烷基，較佳者是代表碳數1至6的直鏈狀或支鏈狀的烷基，更佳者是代表碳數1至3的直鏈狀或支鏈狀的烷基。

在前述通式(I)的取代基中，環烷基可為任一者，但佳者是代表環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基等碳數3至8的環烷基，較佳者是代表碳數5或6的環烷基。

在前述通式(I)的取代基中，烷氧基可為任一者，但佳者是代表甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基等碳數1至6的直鏈狀或支鏈狀的烷氧基，較佳者 是代表碳數1至3的直鏈狀或支鏈狀的烷基。

在前述通式(I)的取代基中，鹵素可為任一者，但佳者是代表氟、氯、溴、碘等。

本化合物的一般性的製造方法及製造例，揭示在日本特開昭61-122275號公報及日本特開昭62-145068號公報等所揭示。以下呈示本化合物的例。以下，稱呼各分別的化合物時，使用化合物編號。

乙內醯脲[化合物1]

1-甲基乙內醯脲[化合物2]

3-甲基乙內醯脲[化合物3]

1-乙基乙內醯脲[化合物4]

1-丙基乙內醯脲[化合物5]

1-丁基乙內醯脲[化合物6]

1-三級丁基乙內醯脲[化合物7]

1-己基乙內醯脲[化合物8]

1-(1,3-二甲基丁基)乙內醯脲[化合物9]

1-癸基乙內醯脲[化合物10]

1-硬脂基乙內醯脲[化合物11]

1,3-二甲基乙內醯脲[化合物12]

1,5-二甲基乙內醯脲[化合物13]

3,5-二甲基乙內醯脲[化合物14]

1-環戊基乙內醯脲[化合物15]

1-環己基乙內醯脲[化合物16]

1-環己基-3-甲基乙內醯脲[化合物17]

3-環己基乙內醯脲[化合物18]

1,3-二環己基乙內醯脲[化合物19]

5-羥基乙內醯脲[化合物20]

5-羥基-1-甲基乙內醯脲[化合物21]

5-羥基-3-甲基乙內醯脲[化合物22]

5-羥基-1-乙基乙內醯脲[化合物23]

5-羥基-1-丙基乙內醯脲[化合物24]

5-羥基-1-丁基乙內醯脲[化合物25]

5-羥基-1-三級丁基乙內醯脲[化合物26]

5-羥基-1-己基乙內醯脲[化合物27]

5-羥基-1-(1,3二甲基丁基)乙內醯脲[化合物28]

5-羥基-1-癸基乙內醯脲[化合物29]

5-羥基-1-硬脂基乙內醯脲[化合物30]

5-羥基-1-環戊基乙內醯脲[化合物31]

5-羥基-1-環己基乙內醯脲[化合物32]

5-羥基-1-環己基-3-甲基乙內醯脲[化合物33]

5-羥基-1,3-二甲基乙內醯脲[化合物34]

5-羥基-1,5-二甲基乙內醯脲[化合物35]

5-羥基-3,5-二甲基乙內醯脲[化合物36]

5-羥基-1,3-二環己基乙內醯脲[化合物37]

5-甲氧基乙內醯脲[化合物38]

5-甲氧基-1-甲基乙內醯脲[化合物39]

5-甲氧基-3-甲基乙內醯脲[化合物40]

5-甲氧基-1-乙基乙內醯脲[化合物41]

5-甲氧基-1-丙基乙內醯脲[化合物42]

5-甲氧基-1-丁基乙內醯脲[化合物43]

5-甲氧基-1-環己基乙內醯脲[化合物44]

5-甲氧基-3-環己基乙內醯脲[化合物45]

5-乙氧基乙內醯脲[化合物46]

5-乙氧基-1-甲基乙內醯脲[化合物47]

5-乙氧基-3-甲基乙內醯脲[化合物48]

5-乙氧基-1-乙基乙內醯脲[化合物49]

5-乙氧基-1-丙基乙內醯脲[化合物50]

5-乙氧基-1-丁基乙內醯脲[化合物51]

5-丙氧基乙內醯脲[化合物52]

5-丙氧基-1-甲基乙內醯脲[化合物53]

5-丙氧基-3-甲基乙內醯脲[化合物54]

5-丙氧基-1-乙基乙內醯脲[化合物55]

5-丙氧基-1-丙基乙內醯脲[化合物56]

5-丙氧基-1-丁基乙內醯脲[化合物57]

5-丁氧基乙內醯脲[化合物58]

5-丁氧基-1-甲基乙內醯脲[化合物59]

5-丁氧基-3-甲基乙內醯脲[化合物60]

5-三級丁氧基乙內醯脲[化合物61]

5-三級丁氧基-1-甲基乙內醯脲[化合物62]

5-三級丁氧基-3-丁基乙內醯脲[化合物63]

5-羥基-1-苄基乙內醯脲[化合物64]

5-羥基-1-(2-氟苄基)乙內醯脲[化合物65]

5-羥基-1-(3-氟苄基)乙內醯脲[化合物66]

5-羥基-1-(4-氟苄基)乙內醯脲[化合物67]

5-羥基-1-(2-氯苄基)乙內醯脲[化合物68]

5-羥基-1-(4-氯苄基)乙內醯脲[化合物69]

5-羥基-1-(4-溴苄基)乙內醯脲[化合物70]

5-羥基-1-(3-硝基苄基)乙內醯脲[化合物71]

5-羥基-1-(4-硝基苄基)乙內醯脲[化合物72]

5-羥基-1-(2-甲基苄基)乙內醯脲[化合物73]

5-羥基-1-(3-甲基苄基)乙內醯脲[化合物74]

5-羥基-1-(4-甲基苄基)乙內醯脲[化合物75]

5-羥基-1-(2-甲氧基苄基)乙內醯脲[化合物76]

5-羥基-1-(3-甲氧基苄基)乙內醯脲[化合物77]

5-羥基-1-(4-甲氧基苄基)乙內醯脲[化合物78]

5-羥基-1-(3,4-二甲氧基苄基)乙內醯脲[化合物79]

5-羥基-1-(3,4-二氯苄基)乙內醯脲[化合物80]

本化合物包含前述通式(I)代表的鹽，例如可舉與鹽酸、硫酸、硝酸、溴化氫酸、磷酸、過氯酸、硫氰酸、硼酸、甲酸、乙酸、鹵乙酸、丙酸、乙醇酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、葡萄糖酸、乳酸，丙二酸、富馬酸、鄰胺苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、對甲苯磺酸、萘磺酸、對 胺苯磺酸等酸的加成鹽，或與鈉、鉀等鹼金屬，鈣、鎂、鋇等鹼土金屬或鋁、鋅等金屬的鹽等。該等的鹽是可依照公知的方法由遊離的乙內醯脲衍生物製造，或可相互變換。

在本化合物中如有順-反體、光學異構體、配位異構體等立體異構體存在時，或有水合物或錯合物的狀態存在時，本發明都包含任一種的立體異構體、水合物、錯合物。例如，本化合物的5-羥基-1-甲基乙內醯脲的乙內醯脲環的5位是不對稱碳所以有光學異構體的存在，有S體及R體的2種的鏡像異構物，本發明包含該等S體、R體及其等的混合物。再者，本化合物的5-羥基-1-甲基乙內醯脲已知有I型及II型的結晶多形種的存在，本化合物也包含這些結晶在內，包含可形成的各種的結晶形(結晶多形)。

本化合物可以與適當的醫藥用的載體或稀釋劑適宜組合而做為醫藥。錠劑、膠囊劑、粉末劑、液劑等經口劑之外，依所求也可做為皮下、靜脈內、肌肉內、直腸內、鼻腔內投與用的非經口劑而製劑化。但是，如上述，本發明做為致癌抑制劑而投與、攝取時，劑型是經口劑為佳。

在處方時，將本化合物可以其在藥學上可容許的鹽的形使用，可將本化合物單獨或適宜組合而使用，又，也可與其他的醫藥活性成分製成調配劑。

做為經口劑而言，單獨或與適當的添加劑， 例如乳糖、甘露糖醇、玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、檸檬酸鈣等慣用的賦形劑一起，結晶纖維素、羥丙基纖維素等纖維素衍生物，阿拉伯樹膠、玉米澱粉、明膠等黏合劑，玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、羧基甲基纖維素鈣等崩壞劑，滑石、硬脂酸鎂等潤滑劑，其他增量劑，濕潤化劑，緩衝劑，保存劑，香料等適宜組合而可製成錠劑、散劑、顆粒劑或膠囊劑。

做為注射劑而言，可製成注射用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄糖注射液等的水性溶劑，或製成植物油、合成脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸酯、丙二醇等的非水性溶劑的溶液、懸液或乳化液，必要時也可適宜添加溶解佐劑、等張化劑、懸浮劑、乳化劑、安定劑、保存劑等通常被使用的添加劑。

再者視疾病的種類及患者，而可製劑化成對其治療最適的上述以外的劑型，漿劑、栓劑、吸入劑、氣膠劑、點眼劑，外用劑(軟膏劑、凝膠劑、貼附劑等)等。

又，本化合物本身或與其他的成分的混合，也可製成健康食品、營養補充品而使用。要混合的其他的成分而言，如由混合不會變性者則沒有特別的限定，可舉食品及飲料等。食品及飲料而言並無特別的限制，例如可舉巧克力、口香糖、優酪、清涼飲料、咖啡、紅茶、酒精飲料、餅乾、麵包、果凍等。

在食品或飲料的製造中，必要時而可添加種種的物質。例如可舉蔗糖、果糖、葡萄糖等糖類，木醣 醇、赤藻糖醇等糖醇，胺基酸、檸檬酸、乳酸、蘋果酸、類黃酮、兒茶素等抗氧化物質之外，明膠、維他命類、色素、香料、鈣劑、脂肪酸甘油酯、果膠等，在食品的通常的製造上被使用的任意的物質可適宜調配而使用。

本發明致癌抑制劑，不只是對沒有發症癌的人的預防，對癌治療後的復發預防，及在癌治療中的人的轉移預防為有用。例如，做為本發明致癌抑制劑的投與的對象而言，罹癌可能性高的高風險群，例如可舉抽菸者，遺傳上及職業上罹癌可能性高的人，有大腸息肉等的前癌病變的人，暫時完成癌治療的人等。

做為本發明致癌抑制劑的適用範圍而言，各種惡性及良性腫瘤，例如，黑色素瘤、淋巴瘤、消化器癌、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌(直腸癌及結腸癌)、尿管瘤、膽囊癌、膽管癌、乳癌、肝臟癌、胰臟癌、睾丸瘤、上顎癌、舌癌、口唇癌、口腔癌、咽頭癌、卵巢癌、子宮癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腦瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、血管瘤、白血病、真性多血症、神經母細胞瘤、網膜母細胞瘤、骨髓瘤、膀胱瘤、肉瘤、骨肉瘤、皮膚癌、基底細胞癌、皮膚附屬器癌，皮膚轉移癌，皮膚黑色素瘤等，尤其是對大腸癌(直腸癌及結腸癌)等的抑制有效。又，本發明的致癌抑制劑，不只是惡性腫瘤，對良性腫瘤的預防也呈現效果。

本發明致癌抑制劑，對人是當然，對其他的動物，尤其是也有於已知會發生癌的所有哺乳動物(例如， 小鼠、大鼠、豬、狐、貓、兔、狗、牛、馬、羊、猴等)，做為醫藥品或食品，也可對這些動物投與或攝取。

本化合物的理想的投與量，隨投與對象、劑型、投與方法、投與期間等而改變，但要得到所求的效果，則一般而言對人時，對成人將有效成分量1日1至10000mg，佳者是50至5000mg，較佳者是100至3000mg可經口投與。非經口投與(例如注射劑)的情況則比一般性的經口投與較少量而可期待效果，例如可認為前述的經口投與量的3至10分之1的用量程度就足夠。

[實施例]

其次舉實施例具體的說明本發明，但本發明並不受其任何限定。

試驗例1：腸管息肉形成的評估

(1)實驗動物的編組及被驗物質的投與

做為實驗動物，使用家族性大腸腺瘤症模式的C57BL/6-Apc^Min/+小鼠(Min小鼠)。Min小鼠是Apc(Adenomatous polyposis coli)基因變異小鼠，確認有經時性的息肉數的增加。又，Min小鼠已知發症脂質異常症，並在高氧化壓力狀態。將5週齡的雄性Min小鼠，在設定溫度24±2℃，濕度55%，明暗週期12小時的實驗室內，在塑膠籠(235×325×170H mm)每籠培養最多6隻使其馴化。又，過濾水、基礎飼料(AIN-76A：日本CLEA股份公司)是任其自由攝取。

實驗動物是設定每1組為10隻，使各組的體重為一定，隨機分配為對照組、500ppm被驗物質投與組及1000ppm被驗物質投與組。在對照組只投與基礎飼料，在500ppm被驗物質投與組及1000ppm被檢物質投與組各分別將500及1000ppm濃度的被驗物質(化合物21)的混餌飼料投與8週。在投與期間各組間沒有看到顯著的攝餌量差及體重差，在500ppm被驗物質投與組及1000ppm被驗物質投與組的被驗物質的1日攝取量是各分別算出為1.5mg及3mg。

(2)腸管息肉數的測定

各組小鼠在13週齡時在麻醉下屠殺，剖腹後，摘出腸管以福馬林固定。小腸是分成近位部(由胃的幽門長約4cm的部分；十二指腸)，中位部及遠位部，加計大腸在內的4部分使用立體顯微鏡計測息肉數，算出各組的平均值。結果的一例示於第1表。

又，小腸近位部的息肉部位及沒有形成息肉的部位(以下稱為「非息肉部位」。)的黏膜是在解剖時摘出並刮淨(scrape)，在試驗例2及3使用之前在-80℃下冷凍保存。

如第1表所示，500ppm被驗物質投與組及1000ppm被驗物質投與組與對照組比較，息肉的總數都減少約17%，小腸中位部的息肉數是各分別減少約37%及29%。如此，本化合物顯示優異的息肉形成抑制效果。

試驗例2：在腸管黏膜的息肉部位中細胞增殖能的評估

將由在試驗例1摘出的對照組及1000ppm被驗物質投與組的小鼠小腸黏膜的息肉部位調製的福馬林固定石蠟包埋切片，在二甲苯浸漬5分鐘×3次去除石蠟。其後，在99.5%酒精浸漬5分鐘×3次，增加親水性後，在蒸餾水浸漬10分鐘。其次，將本切片以含有0.3%過氧化氫的甲醇溶液浸漬30分鐘，實施內因性過氧化酶的去活化處理。再者，對本切片添加含有2%馬血清的0.3%Triton[登錄商標]X-100溶液(含有0.3%Triton的磷酸緩衝生理食鹽水(PBS))1mL，實施阻隔(blocking)30分鐘。

在本切片添加稀釋100倍的抗小鼠增殖細胞核抗原(PCNA)抗體(Calbiochem[登錄商標])，在4℃實施 1次抗體反應1夜。以PBS清洗5分鐘×3次後，做為2次抗體，使用生物素標誌抗小鼠IgG抗體(H+L)(Vector Laboratories公司)，實施標誌2次抗體反應，其後，以PBS清洗5分鐘×3次。染色是以3,3’-二胺基聯苯胺(DAB)液及過氧化氫實施。又，對比染色(核染色)是以蘇木色素(hematoxilin)實施。核染色後，以蒸餾水清洗而停止反應，以100%乙醇處理5分鐘×3次後，以二甲苯處理3次，而封閉。使用光學顯微鏡比較觀察對照組與1000ppm被驗物質投與組的玻片的陽性反應。又，算出各組的顯微鏡視野內的PCNA抗體陽性細胞數對全細胞數的比率。結果的一例示於第1圖及第2表。

PCNA是在細胞週期的G1期(Gap1：DNA合成準備期)後期起至S期(Synthesis：DNA合成期)表現的細胞增殖關連蛋白質，稱為所謂細胞增殖標誌(cell proliferation marker)。細胞增殖標誌的表現越高，表示增殖能力越盛，可認為惡性度也變高。在本試驗中，將由試驗例1的對照組及1000ppm被驗物質投與組的小鼠摘出的小腸息肉部位黏膜的PCNA抗體陽性細胞數測定的結果， 如在第1圖及第2表所示，與對照組比較，在1000ppm被驗物質投與組中，染成茶色(第1圖中是深灰色)的PCNA抗體陽性細胞有減少。又，呈現淡紫色(在第1圖是淡灰色)的是核染色的細胞。由此，可確認本化合物是對增殖能亢進的細胞，顯現增殖抑制效果。

試驗例3：在腸管黏膜及息肉部位中細胞增殖關連因子的表現程度的評估

(1)由腸管息肉部位及非息肉部位的mRNA萃取及cDNA的合成

在試驗例1刮淨的對照組及1000ppm被驗物質投與組的小鼠小腸黏膜的息肉部位及非息肉部位，添加DNAse(Invitrogen公司)處理的500μL的TRIsol(Invitrogen公司)，添加、混合100μL的氯仿後，離心(12000rpm，2分鐘)，回收上清液。在回收的上清液，添加250μL的乙醇，使用管柱(QIAGEN公司)萃取、精製RNA。

cDNA是使用高通量cDNA逆轉錄試劑盒(High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits，Applied Biosystems公司)，由1μg的總RNA製作。

又，PCR反應液是使用cDNA及SYBR綠色螢光染料實時PCR反應混合液(SYBR Green Realtime PCR Master Mix，東洋紡績股份公司)，調製總量成為20μL。

(2)增殖關連因子表現程度的評估

使用由在上述(1)萃取的總RNA合成cDNA，將細胞增殖關連因子[c-Myc、CDK4及cyclinD1]的mRNA表現量以即時聚合酶鏈鎖反應法(realtime-PCR法)測定。又，對於息肉部位，則只測定c-Myc的mRNA表現量。

做為各細胞增殖關連因子的PCR引子(primer)，而使用c-Myc[前置：GCCCGCGCCCAGACAGGATA(序列編號1)，反置：GCGGCGGCGGAGAGGA(序列編號2)]，CDK4[前置：ATGGCTGCCACTCGATATGAA(序列編號3)，反置：TGCTCCTCCATTAGGAACTCTC(序列編號4)]及周期蛋白D1[前置：TGACTGCCGAGAAGTTGTGC(序列編號5)，反置：CTCATCCGCCTCTGGCATT(序列編號6)]。又，即時聚合酶鏈鎖反應(realtime-PCR)裝置是使用MJ Research DNA Engine OPTICON 2 System(MJ Research公司)。PCR反應是，在94℃加熱15分鐘，將cDNA直線化後，將熱變性(heat denaturation，94℃，20秒鐘)、退火(annealing，60℃，30秒鐘)及伸長反應(elongation reaction，72℃，30秒鐘)的製程實施總計39週期。將所得的各測定值以內部標準的甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase，GAPDH)基因的測定值除而算出相對量。繼而，將1000ppm被驗物質投與組的相對量以對照組的相對量除，算出對於對照組的1000ppm被驗物質投與組的各基因表現量比(各組n=3)。結果的一例示於第3表及第4表。

如在第3表及第4表所示，本化合物在Min小鼠的小腸息肉部位及非息肉部位，都抑制細胞增殖關連因子的表現。由此，確認本化合物是藉由抑制細胞增殖關連因子的表現，而抑制致癌過程中的細胞的增殖。

試驗例4：本化合物的安全性的評估

(1)試驗方法

以健康無病的成人男性(21歳至24歳)的8例(被驗物質投與6例，安慰劑投與2例)做為對象，將本化合物重複經口投與，評估安全性。被驗物質(化合物21)，以1次400mg的用量，投與的第1日及第7日是1日1次在早上空腹時， 投與第2日至第6日是1日3次在空腹時(9時、14時、19時)，各分別與150mL的水一起經口投與(投與次數計17次)。

(2)結果

對任一的症例，沒有可懷疑與本化合物有關連的臨床症狀，血壓、脈搏、體溫、血液學的檢查、血液生物化學的檢查及尿檢查，都沒有看到可懷疑與本化合物有關連的異常變動。

[產業上的利用可能性]

本發明致癌抑制劑，在藥理試驗中，對息肉形成及細胞增殖關連因子的表現顯示優異的抑制效果。並且，本發明致癌抑制劑，安全性非常高，又由經口投與可顯現效果，對於有癌的發生、復發、轉移的風險的人及其他的動物做為醫藥品或食品等而可利用的化學預防劑，有用性極高。

<110> 國立研究開發法人國立癌症研究中心日商日本臟器製藥股份有限公司

<120> 致癌抑制劑

<130> PC-494

<160> 6

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<220>

<223> 發明人：武藤倫弘；黒川友理給；藤井元；宮本真吾

<400> 1

<210> 2

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 2

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 3

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 4

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 5

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引子

<400> 6

Claims (10)

1. 一種致癌抑制劑，其係含有下述通式(I)代表的乙內醯脈衍生物及其在藥學上可容許的鹽的至少一種做為有效成分， 式中，R ₁及R ₂各自相同或不相同，代表氫、烷基、環烷基或可經1或2個鹵素、硝基、烷基或烷氧基取代的苄基，X及Y各自相同或不相同，代表氫、羧基、烷基或烷氧基。
2. 如申請專利範圍第1項所述的致癌抑制劑，其中，R ₁及R ₂各自相同或不相同，代表氫或碳數1至3的烷基，X及Y各自相同或不相同，代表氫、羧基或碳數1至3的烷氧基。
3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述的致癌抑制劑，其中，R ₁是碳數1至3的烷基，R ₂是氫。
4. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述的致癌抑制劑，其中，X及Y之一者是氫，另一者是羧基。
5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項所述的致癌抑制劑，其中，致癌抑制係由細胞增殖關連因子的表現調控所致者。
6. 如申請專利範圍第5項所述的致癌抑制劑，其中，致癌抑制係由c-Myc、CDK4或周期蛋白D1的表現抑制所致者。
7. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項所述的致癌抑制劑，其為醫藥組成物。
8. 如申請專利範圍第7項所述的致癌抑制劑，其為經口劑。
9. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項所述的致癌抑制劑，其為食品組成物。
10. 如申請專利範圍第9項所述的致癌抑制劑，其為健康食品或營養補充品。