TW201819408A

TW201819408A - 抗ｐｄ－１抗體及組成物

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Publication number: TW201819408A
Application number: TW106139948A
Authority: TW
Inventors: 約翰藍吐; 湯姆士布昆恩; 克羅斯科佛德; 托本葛傑廷; 維克拉姆克喬樂巴蒂亞; 莫泥卡歌德; 古特羅蘭科理兒; 卡米拉佛利克
Original assignee: 丹麥商賽門弗鎮公司
Priority date: 2016-11-18
Filing date: 2017-11-17
Publication date: 2018-06-01
Also published as: CA3043141A1; US11359018B2; EP3541841A1; EP3541841B1; ES2991086T3; DK3541841T3; PH12019500923A1; AU2017361868B2; CN110214153B; WO2018091661A1; US20190367616A1; CN110214153A; JP2020503001A; TWI780083B; EA201991214A1; JP7178999B2; AU2017361868A1

Abstract

本發明係關於抗PD-1抗體和使用其等以治療與PD-1活性相關的疾病和病況(例如癌症)的方法。

Description

抗PD-1抗體及組成物

相關申請案的交互參照

本申請案根據美國臨時專利申請案62/424,163(於2016年11月18日提申，其揭示內容係以其完整內容以引用方式納入本文中)主張優先權。

序列表

本申請案含有序列表，其已經以ASCII格式電子呈送且係特此以其完整內容以引用方式併入。該序列表之電子複本(於2017年11月13日建立)名稱為022675_WO056_SL.txt且大小為99,158個數元組。

PD-1(亦以計畫性細胞死亡蛋白質1和CD279為人所知)係268個胺基酸的細胞表面受體，其屬於免疫球蛋白超家族。PD-1係T細胞調節子之CD28家族之成員且被表現在T細胞、B細胞和巨噬細胞上。其結合配體PD-L1(亦以B7同源物為人所知)和PD-L2(亦以B7-DC為人所知)。

PD-1係第I型膜蛋白質，其結構包括胞外IgV域、跨膜區和含有兩個磷酸化位置的胞內尾部。作為免疫查核點蛋白質而為人所知，PD-1起可誘發性免疫調節性受體之作用，於(例如)對抗原刺激反應的T細胞之負向調整扮演某種角色。

PD-L1對於PD-1係優越的配體。PD-L1與PD-1之結合抑制T細胞活性、減低細胞介素製造並抑制T細胞增殖。表現PD-L1的癌症細胞能夠利用此機制以通過PD-L1與PD-1受體之結合使T細胞之抗腫瘤活性失活。

鑑於其免疫反應調整性特性，已於作為免疫治療之有力目標方面(包括癌症和自體免疫疾病之治療)研究PD-1。兩種抗PD-1抗體(派姆單抗(pembrolizumab)和納武單抗(nivolumab))已於美國和歐洲被核准用於治療某些癌症。

鑑於PD-1作為免疫調節子的關鍵角色，存在有對於靶向PD-1受體以治療癌症和某些免疫系統之病症的新穎且改善的免疫治療的需求。

本發明係針對靶向PD-1的新穎重組抗體、以及包含此等抗體之一或多者的醫藥組成物、和該等抗體和醫藥組成物用於增強患者之免疫性、和用於治療源自諸如皮膚、肺臟、腸、結腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟的組織的癌症的用途。相較於用於此等癌症的目前可得的治療(包括抗體治療)，設想到本發明之抗體可提供卓越的臨床反應，無論是單獨或與另一種癌症治療劑(諸如靶向另一種免疫查核點蛋白質的抗體)組合。

於一個實施方式中，本發明提供抗PD-1抗體或其抗原結合部分，其中該抗體和以下者之任一者競爭與人類PD-1的結合、或和以下者之任一者與相同的人類PD-1之表位結合：抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413和18483。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體和以下者競爭與人類PD-1的結合：其重鏈(H)CDR1-3和輕鏈(L)CDR1-3與抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3和L-CDR1-3相同或係衍生自該等H-CDR1-3和L-CDR1-3的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體和以下者與相同的人類PD-1之表位結合：其重鏈(H)CDR1-3和輕鏈(L)CDR1-3與抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3和L-CDR1-3相同或係衍生自該等H-CDR1-3和L-CDR1-3的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體包含分別包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3胺基酸序列的H-CDR1-3。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有在胺基酸序列上與抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或184835之重鏈可變域(VH)至少90%(例如至少92%、至少95%、至少98%、或至少99%)一致的VH域。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH胺基酸序列的VH。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH胺基酸序列、和SEQ ID NO：26之重鏈恆定區胺基酸序列的重鏈(HC)。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體包含分別包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之L-CDR1-3胺基酸序列的L-CDR1-3。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有在胺基酸序列上與抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之輕鏈可變域(VL)至少90%(例如至少92%、至少95%、至少98%、或至少99%)一致的VL域。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VL胺基酸序列的VL。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有包含抗體18040、 18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VL胺基酸序列、和SEQ ID NO：28之輕鏈恆定區胺基酸序列的輕鏈(LC)。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR3和L-CDR3胺基酸序列。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之H-CDR1-3和L-CDR1-3胺基酸序列。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有在胺基酸序列上分別與抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH和VL至少90%(例如至少92%、至少95%、至少98%、或至少99%)一致的VH和VL。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之VH和VL胺基酸序列或分別由該等VH和VL胺基酸序列所組成的VH和VL。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、或18483之HC和LC胺基酸序列或分別由該等HC和LC胺基酸序列所組成的HC和LC。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有(1)包含選自由抗體 18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、和18483所組成的群組的抗體之VH胺基酸序列、和SEQ ID NO：26之重鏈恆定區胺基酸序列的HC；和(2)包含該所選抗體之VL胺基酸序列和SEQ ID NO：28之輕鏈恆定區胺基酸序列的LC。

於某些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分具有以下特性之至少一者：a)以(例如)4 x 10^-8M或更低的K_D與食蟹獼猴PD-1結合；b)以(例如)2 x 10^-8M或更低的K_D與小鼠PD-1結合；c)以3 x 10^-9M或更低的K_D與人類PD-1結合；d)於10μg/ml的濃度抑制PD-1與PD-L1的交互作用；e)於SEB全血分析中刺激IL-2製造；和f)於單向混合淋巴細胞反應分析中刺激IFN-γ製造。如此抗體之實例包括(但不限於)抗體18040、18049、18098、18113、18247、18250、18325、18366、18413、和18483(其等具有特性a)和c)-f))和抗體18201和18400(其等具有特性a)-f))。於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分具有該等特性之所有者。

於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分和抗體18366、18250、18040、18247、18113、及/或18483競爭與人類PD-1的結合。於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分和抗體12760及/或13112競爭與人類PD-1的結合。

於某些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分和派姆單抗或納武單抗不競爭與PD-1的結合。於某些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分和派姆單抗或納武單抗不與相同的表位結合。

於另一個方面，本發明提供醫藥組成物，其包含至少一種如於本文中描述的抗PD-1抗體或其抗原結合部分和醫藥上可接受的賦形劑，視需要地加上另外的治療劑，諸如抗癌症抗體治療劑。

本發明進一步提供經分離的核酸分子，其包含編碼如於本文中描述的抗PD-1抗體之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、編碼如於本文中描述的抗PD-1抗體之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或兩者。

本發明亦提供載體，其等包含如此經分離的核酸分子，其中該等載體可進一步包含表現控制序列。

本發明亦提供宿主細胞，其等包含編碼如於本文中描述的抗PD-1抗體之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、編碼如於本文中描述的抗PD-1抗體之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或兩者。

本發明亦提供用於製造如於本文中描述的抗體或其抗原結合部分的方法，其包含提供包含編碼如於本文中描述的抗PD-1抗體之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列和編碼如於本文中描述的抗PD-1抗體之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列的宿主細胞、於適用於該抗體或部分之表現的條件下培養該宿主細胞、和分離所得的抗體或部分。

本發明亦提供多專一性(例如雙專一性)結合分子，其具有本文中描述的抗PD-1抗體之結合專一性和另一種不同的抗體之結合專一性，該不同的抗體係諸如另一種抗PD-1抗體(例如如於本文中描述者)或靶向不同的蛋白質(諸如另一種免疫查核點蛋白質、癌症抗原或另一種其活性介導疾病病況(諸如癌症)的細胞表面分子)的抗體。於一些實施方式中，該多專一性(例如雙專一性)結合分子包含該抗PD-1抗體和該另外的抗體之抗原結合部分(例如六個CDR)。

本發明亦提供用於增強患者(例如人類患者)之免疫性的方法，其包含將如於本文中描述的抗PD-1抗體或其抗原結合部分、醫藥組成物、或雙專一性結合分子投予至該患者。

本發明進一步提供用於治療患者(例如人類患者)之癌症的方法，其包含將如於本文中描述的抗PD-1抗體或其抗原結合部分、醫藥組成物、或雙專一性結合分子投予至該患者。於一些實施方式中，該癌症源於選自皮膚、肺臟、腸、結腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟的組織。該癌症可係(例如)晚期或轉移性黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸鱗狀細胞癌、膀胱癌、胃癌、腎細胞癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、或霍奇金氏淋巴瘤。

以上方法之任何者可進一步包含投予(例如)化學治療劑、抗贅瘤劑、抗血管形成劑、酪胺酸激酶抑制劑、PD-1途徑抑制劑、或放射線治療。

本發明進一步提供包含如於本文中描述的抗PD-1抗體或抗原結合部分的抗體組成物之用途，其係用於製造用於治療患者之癌症及/或增強患者之免疫性的醫藥品。

本發明進一步提供如於本文中描述的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其係用於治療患者之癌症及/或增強患者之免疫性，例如於本文中描述的治療方法中。

本發明進一步提供包含如於本文中描述的抗PD-1抗體或抗原結合部分的製品，其中該製品係適用於治療患者之癌症及/或增強患者之免疫性，例如於本文中描述的治療方法中。

【發明詳述】

本發明提供新穎的抗人類PD-1抗體，其等可用於增強人類患者(諸如癌症患者)之免疫系統。除非另外陳述，用於本文中，「PD-1」係論及人類PD-1。人類PD-1多肽序列可以Uniprot登錄號Q15116 (PDCD1_HUMAN)獲得。

用於本文中，術語「抗體」(Ab)或「免疫球蛋白」(Ig)係論及包含藉由二硫鍵彼此連接的兩個重(H)鏈(約50-70kDa)和兩個輕(L)鏈(約25kDa)的四聚體。各個重鏈係由重鏈可變域(VH)和重鏈恆定區(CH)構成。各個輕鏈係由輕鏈可變域(VL)和輕鏈恆定區(CL)構成。該等VH和VL域可被進一步細分成稱為「互補性決定區」(CDR)之高度變異性區域，中間散佈著較被保留的稱為「架構區」(FR)之區域。各個VH和VL係由三個CDR(於本文中H-CDR稱呼來自重鏈的CDR；且於本文中L-CDR稱呼來自輕鏈的CDR)和四個FR構成，其等按以下順序從胺端向羧端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈或輕鏈中胺基酸編號之指定可根據IMGT^®定義(Lefranc等人，Dev Comp Immunol 27(1)：55-77(2003))；或Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest(美國國家衛生研究院，貝什斯達，MD(1987和1991))；Chothia & Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；或Chothia等人，Nature 342：878-883(1989)之定義。

術語「重組抗體」係論及一種抗體，其自包含編碼該抗體的核苷酸序列之細胞或細胞株表現，其中該(等)核苷酸序列不天然與該細胞聯結。

術語「經分離的蛋白質」、「經分離的多肽」或「經分離的抗體」係論及蛋白質、多肽或抗體，其由於其衍生之根源或來源(1)不與於其天然狀態下伴隨其的天然聯結組份聯結，(2)不含來自相同物種的其他蛋白質，(3)係由來自不同物種的細胞表現，及/或(4)不於自然中存在。因此，化學合成的或在與其所天然源自的細胞不同的細胞系統中合成的多肽會是自其天然聯結的組份「分離的」。蛋白質亦可藉由使用所屬技術領域中廣為人知的蛋白質純化技術分離而變得實質上不含天然聯結的組份。

用於本文中，術語「生殖細胞系」係論及抗體基因和基因節段之核苷酸和胺基酸序列，當其等係透過生殖細胞從親代傳遞給後代時。生殖細胞系序列與成熟B細胞中編碼抗體的核苷酸序列(其已於B細胞成熟之過程期間被重組和超突變事件改變)有區別。「利用」特殊生殖細胞系序列的抗體具有與該生殖細胞系核苷酸序列排比的或相較於與任何其他生殖細胞系核苷酸或胺基酸序列與其所指明的胺基酸序列更密切地排比的核苷酸或胺基酸序列。

術語「親和力」係論及抗原與抗體間的吸引之度量。抗體對抗原之固有吸引力典型被表現成特定抗體-抗原交互作用之結合親和力平衡常數(K_D)。當K_D係1Mm(較佳係100Nm)時，抗體被認為專一性地與抗原結合。K_D結合親和力常數可(例如)藉由表面電漿子共振(SPR)(BIAcore^TM)或生物層干涉法(Bio-Layer Interferometry)(例如使用來自IBIS Technologies的IBIS MX96 SPR系統、來自Bio-Rad的ProteOn^TM XPR36 SPR系統、或來自ForteBio的Octet^TM系統)測量。

術語「k_off」係論及特定抗體-抗原交互作用之解離速率常數。k_off解離速率常數可藉由SPR或生物層干涉法(例如使用以上所列的系統之一)測量。

術語「表位」用於本文中係論及與抗體或相關分子(諸如雙專一性結合分子)專一性結合的抗原之部分(決定子)。表位決定子一般由諸如胺基酸或碳水化合物或糖側鏈之分子的化學活性表面基團組成且一般具有特殊的三度空間結構特徵，以及特殊的電荷特徵。表位可為「線性」或「構型性」。在線性表位中，所有蛋白質(例如抗原)和交互作用分子(諸如抗體)間的交互作用之點係沿著該蛋白質之一級胺基酸序列線性發生。在構型性表位中，交互作用之點橫跨在蛋白質上於一級胺基酸序列方面彼此分開的胺基酸殘基發生。一旦抗原上所欲的表位被測定出，就有可能去使用所屬技術領域中廣為人知的技術來產生針對該表位的抗體。例如，針對線性表位的抗體可(例如)藉由使用具有該線性表位之胺基酸殘基的胜肽致免疫動物來產生。針對構型性表位的抗體可(例如)藉由使用含有該構型性表位之相關胺基酸殘基的迷你域致免疫動物來產生。針對特定表位的抗體亦可(例如)藉由使用所關注的目標分子(例如PD-1)或其相關部分致免疫動物、接著針對與該表位的結合作篩選來產生。

咸可藉由使用所屬技術領域中已知的方法(包括(不限於)競爭分析、表位分倉(epitope binning)、和丙胺酸掃描)測定抗體是否和本發明之抗PD-1抗體與相同的表位結合或競爭結合。於一些實施方式中，測試抗體和本發明之抗PD-1抗體與PD-1上的至少一個共同殘基(例如至少二、三、四、五、或六個共同殘基)結合。於進一步的實施方式中，在PD-1上的接觸殘基於測試抗體和本發明之抗PD-1抗體間係全然一致的。於一個實施方式中，允許本發明之抗PD-1抗體在飽和條件下與PD-1結合並接著測量測試抗體與PD-1結合的能力。若該測試抗體和參考抗PD-1抗體能夠同時與PD-1結合，則該測試抗體和參考抗PD-1抗體與不同的表位結合。然而，若該測試抗體無法同時與PD-1結合，則該測試抗體與和本發明之抗 PD-1抗體所結合的表位相同的表位、和該表位重疊的表位、或極接近該表位的表位結合。此實驗可使用(例如)ELISA、RIA、BIACORE^TM、SPR、生物層干涉法或流動式細胞測量術執行。為測試抗PD-1抗體是否與另一種抗PD-1抗體交叉競爭，可以雙向使用以上描述的競爭方法，即測定已知抗體是否封阻測試抗體且反之亦然。如此交叉競爭實驗可(例如)使用IBIS MX96 SPR儀器或Octet^TM系統執行。

於某些例子中，改變一或多個CDR胺基酸殘基以改善對目標表位的結合親和力亦可能係所欲的。此以「親和力成熟」為人所知且可視需要地連結人類化(例如在其中抗體之人類化導致結合專一性或親和力減低且無法單單藉由回復突變來充分改善結合專一性或親和力的情況下)執行。種種親和力成熟方法係所屬技術領域中已知的(例如由Burks等人，Proc Natl Acad Sci USA,94：412-417(1997)描述的試管內掃描飽和突變誘發方法、和Wu等人，Proc Natl Acad Sci USA 95：6037-6042(1998)之逐步試管內親和力成熟方法。

於一些實施方式中，本發明之抗體可係嵌合的、經人類化的、或完全人類的。雖然不可能精確地預測特定抗體藥物之致免疫性，非人類抗體在人類中相較於人類抗體傾向致免疫性較強。已顯示嵌合抗體(其中外源(例如囓齒類或鳥類)恆定區已以人類來源的序列置換)相較於完全外源的抗體一般致免疫性較低。治療性抗體中的趨勢係朝向經人類化或完全人類的抗體。

術語「嵌合抗體」係論及一種抗體，其包含來自兩種不同動物物種的序列。例如，嵌合抗體可含有鼠類抗體(即由鼠類抗體基因編碼的抗體，諸如自使用融合瘤技術致免疫的小鼠獲得的抗體)之可變域，該可變域與來自另一物種(例如人類、兔、或大鼠)的抗體之恆定區連結。於嵌合抗體的例子中，其非人類部分可經歷進一步改變以人類化該抗體。

術語「人類化」係論及修改完全或部分非人類來源的抗體(例如從以所關注的抗原致免疫小鼠或雞(分別地)獲得的鼠類或雞抗體、或基於如此鼠類或雞抗體的嵌合抗體)，其係藉由將某些胺基酸序列(特別是在重鏈和輕鏈之架構區(FR)和恆定區中者)以相對應人類FR和恆定區胺基酸序列置換，以避免或最小化人類患者中的抗藥物抗體反應。非人類來源的抗體因此可經人類化以減低人類抗藥物抗體反應之風險。

術語「人類抗體」係論及一種抗體，其中其可變域和恆定區序列係源自人類序列。該術語涵蓋具有源自人類基因但已經修改(例如)以減低致免疫性、增加親和力、及/或增加穩定性的序列的抗體。進一步地，該術語涵蓋在非人類細胞(其可賦予於人類細胞中係非典型的醣化)中重組製造的抗體。該術語亦涵蓋在具有人類抗體基因的基因轉殖非人類生物體(例如OmniRat^®大鼠)中製造的抗體。

用於本文中，術語抗體之「抗原結合部分」(或簡稱「抗體部分」)係論及抗體之一或多個部分或片段，其保留與抗原(例如人類PD-1、或其部分)專一性結合的能力。已顯示全長抗體之某些片段可執行該抗體之抗原結合功能。術語「抗原結合部分」內包含的結合片段之實例包括(i)Fab片段：由VL、VH、CL和CH1域所組成的單價片段；(ii)F(ab')2片段：包含二個Fab片段(其等藉由位於樞紐區的二硫橋連接)的二價片段；(iii)由VH和CH1域所組成的Fd片段；(iv)由抗體之單一臂的VL和VH域所組成的Fv片段、(v)dAb片段，其由VH域組成；和(vi)能夠與抗原專一性結合之分離的互補性決定區(CDR)。此外，雖然Fv片段之二個域(VL和VH)係由分開的基因編碼，其等可使用重組方法藉由合成性連接子連接在一起，該連接子使其等可以其中VL和VH域配對以形成單價分子(以單鏈Fv(scFv)為人所知)的單一蛋白質鏈之形式製造。亦於本發明內者係包含VH及/或VL的抗原結合分子。於VH之例子中，該分子亦可包含CH1、樞紐、CH2、或CH3區域之一或多者。如此單鏈抗體亦意欲被術語抗體之「抗原結合部分」涵蓋。單鏈抗體之其他形式(諸如雙體(diabody))亦被涵蓋。雙體係二價雙專一性抗體，其中VH和VL域係在單一多肽鏈上表現，但使用過短而無法允許在相同鏈上的該二個域間之配對的連接子，藉此強迫該等域與另一個鏈之互補域配對並產生二個抗原結合位置。

抗體部分(諸如Fab和F(ab')₂片段)可自完整抗體使用習用技術(諸如完整抗體之木瓜酵素或胃蛋白酶消化)製備。此外，抗體、抗體部分和免疫黏附分子可使用標準重組DNA技術(例如如於本文中描述者)獲得。

抗PD-1抗體之類型(同型)和亞型可藉由任何所屬技術領域中已知的方法測定。一般而言，抗體之類型和亞型可使用對抗體之特定類型和亞型有專一性的抗體測定。如此抗體係商業上可購得的。類型和亞型可藉由ELISA、西方墨漬以及其他技術測定。供選擇地，類型和亞型可藉由定序整個該等抗體之重鏈及/或輕鏈之恆定區或其部分、比較其等之胺基酸序列與免疫球蛋白之種種類型和亞型之已知胺基酸序列、和確定該等抗體之類型和亞型來測定。

當提及位於抗體序列之給定位置的特殊胺基酸殘基時，(例如)「35S」的指示係論及位置和殘基，即於此實例中指示絲胺酸殘基(S)係存在於該序列之位置35。類似地，(例如)「13Q+35S」之指示係論及位於各自位置的二個殘基。除非另加指出，本文之揭示內容中提及的所有抗體胺基酸殘基編號係該等按照IMGT^®編號格式者。

抗PD-1抗體

本發明提供針對PD-1的抗體、和其抗原結合部分。於特殊的實施方式中，於本文中揭示的抗體係人類抗體，其等係(例如)自具有人類抗體基因的基因轉殖大鼠產生。於某些實施方式中，該等人類抗體可含有某些突變，(例如)以將源自引子的突變突變回生殖細胞系序列(參見(例如)以下的「經Symplex修正的」變體序列)或以將架構區中的突變改變回最接近的V-或J-生殖細胞系之序列(參見(例如)以下的「生殖細胞系化」變體序列)。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29-31之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：1之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：1和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：32-34之胺基酸序列的抗體； f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：2和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29-34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：1之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：1和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：2和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：35-37之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：3和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：38-40之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體； g)其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：4和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：35-40之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：3和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：4和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：41-43之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：5和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：44-46之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：6之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：6和28之胺基酸序列的抗體； i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：41-46之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：6之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：5和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：6和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組，：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、47和48之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：7之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：7和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：49-51之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：8之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：8和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、47、48和49-51之胺基酸序列的抗體； j)其VH在序列上與SEQ ID NO：7之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：8之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：7和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：8和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：52-54之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：9之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：9和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：38、45和55之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：10之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：10和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：52-54和38、45和55之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：9之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：10之胺基酸序列至少90%一致的抗體； k)其VH包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：9和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：10和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、56和48之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：1之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：11和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：57、33和51之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：12之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：12和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、56和48和57、33和51之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：11之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：12之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列的抗體；和 l)其HC包含SEQ ID NO：11和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：12和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：58-60之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：13之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：13和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：57、33和34之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：14之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：14和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：58-60和57、33和34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：13之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：14之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：13和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：14和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：61、62和43之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：15和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：44-46之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：16之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：16和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：61、62和43和44-46之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：16之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：15和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：16和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組： a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：63-65之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：17之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：17和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：32-34之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：18之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：18和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：63-65和32-34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：17之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：18之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：17和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：18和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：66-68之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：19之胺基酸序列至少90% 一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：19和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：38、45和55之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：20之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：20和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：66-68和38、45和55之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：19之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：20之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：19和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：20和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：69-71之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：21之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的抗體； d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：21和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：72、45和73之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：22之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：22和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：69-71和72、45和73之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：21之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：22之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：21和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：22和28之胺基酸序列的抗體。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：74-76之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：23之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：23和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：57、33和34之胺基酸序列的抗體； f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：24之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：24和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：74-76和57、33和34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：23之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：24之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：23和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：24和28之胺基酸序列的抗體。

於其他實施方式中，該抗PD-1抗體具有在胺基酸序列上分別與抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413和18483之任一者之VH和VL至少90%一致(例如在序列上與該等抗體之任何者之VH和VL至少92%、95%、96%、97%、98%、或99%一致)的VH和VL。於一些實施方式中，該抗PD-1抗體之抗原結合部分具有該VH和VL。

於一些實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413和18483之任一者之VH和VL胺基酸序列的VH和VL。於一些實施方式中，該抗PD-1抗體之抗原結合部分具有該VH和VL。

於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分包含以下者之H-CDR1-3和L-CDR1-3胺基酸序列：a)分別為SEQ ID NO：29、30、31、32、33、和34；b)分別為SEQ ID NO：35、36、37、38、39、和40；c)分別為SEQ ID NO：41、42、43、44、45、和46；d)分別為SEQ ID NO：29、47、48、49、50、和51；e)分別為SEQ ID NO：52、53、54、38、45、和55；f)分別為SEQ ID NO：29、56、48、57、33、和51；g)分別為SEQ ID NO：58、59、60、57、33、和34；h)分別為SEQ ID NO：61、62、43、44、45、和46；i)分別為SEQ ID NO：63、64、65、32、33、和34；j)分別為SEQ ID NO：66、67、68、38、45、和55；k)分別為SEQ ID NO：69、70、71、72、45、和73：或l)分別為SEQ ID NO：74、75、76、57、33、和34。

於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分包含與以下者之胺基酸序列80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%一致的VH和VL：a)分別為SEQ ID NO：1和2；b)分別為SEQ ID NO：3和4；c)分別為SEQ ID NO：5和6；d)分別為SEQ ID NO：7和8；e)分別為SEQ ID NO：9和10； f)分別為SEQ ID NO：11和12；g)分別為SEQ ID NO：13和14；h)分別為SEQ ID NO：15和16；i)分別為SEQ ID NO：17和18；j)分別為SEQ ID NO：19和20；k)分別為SEQ ID NO：21和22；或l)分別為SEQ ID NO：23和24。

於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分包含具有以下者之胺基酸序列的VH和VL：a)分別為SEQ ID NO：1和2；b)分別為SEQ ID NO：3和4；c)分別為SEQ ID NO：5和6；d)分別為SEQ ID NO：7和8；e)分別為SEQ ID NO：9和10；f)分別為SEQ ID NO：11和12；g)分別為SEQ ID NO：13和14；h)分別為SEQ ID NO：15和16；i)分別為SEQ ID NO：17和18；j)分別為SEQ ID NO：19和20；k)分別為SEQ ID NO：21和22；或l)分別為SEQ ID NO：23和24。

於一些實施方式中，該抗PD-1抗體包含： a)具有SEQ ID NO：1和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：2和28之胺基酸序列的LC；b)具有SEQ ID NO：3和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：4和28之胺基酸序列的LC；c)具有SEQ ID NO：5和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：6和28之胺基酸序列的LC；d)具有SEQ ID NO：7和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：8和28之胺基酸序列的LC；e)具有SEQ ID NO：9和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：10和28之胺基酸序列的LC；f)具有SEQ ID NO：11和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：12和28之胺基酸序列的LC；g)具有SEQ ID NO：13和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：14和28之胺基酸序列的LC；h)具有SEQ ID NO：15和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：16和28之胺基酸序列的LC；i)具有SEQ ID NO：17和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：18和28之胺基酸序列的LC；j)具有SEQ ID NO：19和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：20和28之胺基酸序列的LC；k)具有SEQ ID NO：21和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：22和28之胺基酸序列的LC；或 l)具有SEQ ID NO：23和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：24和28之胺基酸序列的LC。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18040之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，其中位於位置35的X係S，及/或位於位置84的X係N。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列，其中位於位置40的X係A，及/或位於位置55的X係Y。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18049之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。於此實施方式中，該VL可包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中位於位置1的X係D，及/或位於位置3的X係Q。於一些實施方式中，該VL於位置1包含D且於位置3包含Q。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中位於位置53的X係S。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18098之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係E，及/或位於位置5的X係V。於一些實施方式中，該VH於位置1包含E且於位置5包含V。於某些實施方式中，該VH亦可包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列，其中位於位置13的X係Q，位於位置35的X係S，位於位置46的X係E，位於位置50的X係A，位於位置77的X係N，位於位置80的X係Y，及/或位於位置115的X係M。該VL可包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列，其中位於位置4的X係M。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18113之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列，其中位於位置64的X係V。該VL可包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，其中位於位置3的X係V，及/或位於位置4的X係M。於一些實施方式中，該VL於位置3包含V且於位置4包含M。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，其中位於位置69的X係S。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18201之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列，其中位於位置5的X係Q。於一些實施方式中，該VH亦可包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列，其中位於位置59的X係N，位於位置76的X係K，及/或位於位置83的X係L。該VL可包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列，其中位於位置1的X係A。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18247之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列，其中位於位置10的X係G，及/或位於位置16的X係G。該VL可包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係D，及/或位於位置4的X係M。於一些實施方式中，該VL於位置1包含D且於位置4包含M。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列，其中位於位置55的X係Y，及/或位於位置93的X係Y。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18250之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列，其中位於位置5的X係V。於一些實施方式中，該VH亦可包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列，其中位於位置50的X係Y，位於位置59的X係Y，及/或位於位置61的X係A。該VL可包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列，其中位於位置3的X係V，及/或位於位置4的X係M。於一些實施方式中，該VL於位置3包含V且於位置4包含M。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列，其中位於位置55的X係Y。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18325之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列，其中位於位置1的X係E，位於位置5的X係V，及/或位於位置6的X係E。於一些實施方式中，該VH於位置1包含E，於位置5包含V且於位置6包含E。於某些實施方式中，該VH亦可包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列，其中位於位置35的X係S，位於位置49的X係S，位於位置50的X係A，位於位置73的X係D，及/或位於位置78的X係T。該VL可包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列，其中位於位置1的X係D，位於位置3的X係Q，及/或位於位置4的X係M。於一些實施方式中，該VL於位置1包含D，於位置3包含Q且於位置4包含M。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18366之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列，其中位於位置1的X係E，及/或位於位置6的X係E。於一些實施方式中，該VH於位置1包含E且於位置6包含E。該VL可包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列，其中位於位置1的X係D。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列，其中位於位置40的X係A，及/或位於位置55的X係Y。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18400之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列，其中位於位置2的X係V。於某些實施方式中，該VH亦可包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列，其中位於位置43的X係G，位於位置49的X係I，位於位置59的X係N，位於位置70的X係I，及/或位於位置111的X係Q。該VL可包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列，其中位於位置1的X係A，及/或位於位置3的 X係Q。於一些實施方式中，該VL於位置1包含A且於位置3包含Q。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列，其中位於位置10的X係S。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18413之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列，其中位於位置48的X係V，及/或位於位置50的X係A。該VL可包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列，其中位於位置4的X係M。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列，其中位於位置12的X係S。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體具有分別包含抗體18483之VH和VL胺基酸序列的VH和VL，即其中其VH包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列。於此實施方式中，該VH可包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列，其中位於位置1的X係E，位於位置5的X係V，及/或位於位置6的X係E。於一些實施方式中，該VL於位置1包含E，於位置5包含V且於位置6包含E。於某些實施方式中，該VH亦可包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列，其中位於位置35的X係S。該VL可包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列，其中位於位置3的X係V。於某些實施方式中，該VL亦可包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列，其中位於位置40的X係A，及/或位於位置55的X係Y。

於某些實施方式中，該抗PD-1抗體或抗原結合部分包含選自18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、 18400、18413、和18483的抗體之H-CDR1-3和L-CDR1-3胺基酸序列，且進一步利用與所選抗體相同的重鏈及/或輕鏈生殖細胞系序列。

於某些實施方式中，該抗PD-1抗體或抗原結合部分包含選自18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413、和18483的抗體之H-CDR1-3和L-CDR1-3胺基酸序列，且進一步包含與所選抗體之架構區(FR)80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%一致的FR。

於一些實施方式中，本文中描述的抗PD-1抗體或抗原結合部分之任何者可抑制PD-L1或PD-L2或兩者與PD-1的結合。

於一些實施方式中，本文中描述的抗PD-1抗體或抗原結合部分之任何者可具有以下特性之至少一者：a)以(例如)4 x 10^-8M或更低的K_D與食蟹獼猴PD-1結合：b)以(例如)2 x 10^-8M或更低的K_D與小鼠PD-1結合；c)以3 x 10^-9M或更低的K_D與人類PD-1結合；d)於10μg/ml的濃度抑制PD-1與PD-L1的交互作用；e)於SEB全血分析中刺激IL-2製造；和f)於單向混合淋巴細胞反應分析中刺激IFN-γ製造。

於一些實施方式中，本文中描述的抗PD1抗體或抗原結合部分之任何者可以以下K_D與人類PD-1結合：5 x 10^-9M或更低、4 x 10^-9M或更低、3 x 10^-9M或更低、2 x 10^-9M或更低、1 x 10^-9M或更低、9 x 10^-10M或更低、8 x 10^-10M或更低、7 x 10^-10M或更低、6 x 10^-10M或更低、5 x 10^-10M或更低、4 x 10^-10M或更低、3 x 10^-10M或更低、2 x 10^-10M或更低、或1 x 10^-10M或更低。於某些實施方式中，該K_D係使用表面電漿子共振測定。

於一些實施方式中，本文中描述的抗PD1抗體或抗原結合部分之任何者於50、40、30、20、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1μg/ml的濃度可抑制PD-1與PD-L1的交互作用。

藉由本文中描述的方法獲得的抗PD-1抗體之類型可以另一個類型或亞型改變或轉換。於本發明之一個方面，編碼VL或VH的核酸分子係使用所屬技術領域中廣為人知的方法分離，使得其不包括編碼CL或CH的核酸序列。編碼VL或VH的核酸分子接著被操作性地分別連結至編碼CL或CH的核酸序列，形成不同的免疫球蛋白分子之類型。此可使用包含CL或CH鏈之載體或核酸分子達成，如以上描述地。例如，原來係IgM的抗PD-1抗體可被類型轉換成IgG。此外，可使用類型轉換以將一種IgG亞型變換成另一者，例如從IgG1變換成IgG2。κ輕鏈恆定區可被改變(例如)成λ輕鏈恆定區。用於製造具有所欲Ig同型的本發明之抗體的較佳方法包含以下步驟：分離編碼抗PD-1抗體之重鏈的核酸分子和編碼抗PD-1抗體之輕鏈的核酸分子，獲得該重鏈之可變域，將該重鏈之可變域與所欲同型之重鏈之恆定區連接在一起，於細胞中表現該輕鏈和該經連接的重鏈，並收集具有所欲同型的抗PD-1抗體。

本發明之抗PD-1抗體可係IgG、IgM、IgE、IgA、或IgD分子，但典型係IgG同型(例如係IgG亞型IgG1、IgG2a或IgG2b、IgG3、或IgG4)。於一個實施方式中，該抗體係IgG1。於另一個實施方式中，該抗體係IgG4。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體可於其FC區包含至少一個突變。一些不同的Fc突變係已知的，其中此等突變提供經改變的效應功能。例如，於許多例子中(例如在配體/受體交互作用係非所欲的情況下或於抗體-藥物綴合物之例子中)，減低或排除效應功能會係所欲的。

於一個實施方式中，該抗PD-1抗體於其FC區包含至少一個減低效應功能的突變。可能有利於突變以減低效應功能的Fc區胺基酸位置包括位置228、233、234和235之一或多者，其中胺基酸位置係根據IMGT編號格式編號。

於一個實施方式中，位於位置234和235的胺基酸殘基之一或二者可經突變，例如自Leu至Ala(L234A/L235A)。此等突變減低IgG1抗體之Fc區之效應功能。另外地或供選擇地，位於位置228的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Pro。於一些實施方式中，位於位置233的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Pro，位於位置234的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Val，及/或位於位置235的胺基酸殘基可經突變，例如突變成Ala。該等胺基酸位置係根據IMGT^®編號格式編號。

於一些實施方式中，於該抗體係IgG4亞型的情況下，其可包含突變S228P(即於位置228具有脯胺酸，其中該胺基酸位置係根據IMGT^®編號格式編碼)。已知此突變會減少非所欲的Fab臂交換。

於某些實施方式中，本發明之抗體或其抗原結合部分可係更大的免疫黏附分子(其藉由該抗體或抗體部分與一或多個其他蛋白質或胜肽之共價或非共價聯結形成)之部分。如此免疫黏附分子之實例包括使用鏈霉抗生物素蛋白核心區域以製造四聚體scFv分子(Kipriyanov等人， Human Antibodies and Hybridomas 6：93-101(1995))和使用半胱胺酸殘基、標誌胜肽和C端聚組胺酸標籤以製造二價與經生物素化scFv分子(Kipriyanov等人，Mol.Immunol. 31：1047-1058(1994))。其他實例包括其中來自抗體的一或多個CDR被共價或非共價地併入至分子中以使其變成專一性地與所關注的抗原結合的免疫黏著素。於如此實施方式中，該(等)CDR可被併入作為更大的多肽鏈之部分，可共價地連結至另一個多肽鏈，或可被非共價地併入。

於另一個實施方式中，可製造融合抗體或免疫黏著素，其包含連結至另一個多肽的整個本發明之抗PD-1抗體或其一部分。於某些實施方式中，僅僅該抗PD-1抗體之可變域係連結至該多肽。於某些實施方式中，抗PD-1抗體之VH域係連結至第一多肽，而抗PD-1抗體之VL域係連結至第二多肽，該第二多肽與該第一多肽聯結，其連結方式使得該VH和VL域可彼此交互作用以形成抗原結合位置。於另一個較佳的實施方式中，該VH域係藉由連接子與該VL域分開，使得該VH和VL域可彼此交互作用(例如單鏈抗體)。該VH-連接子-VL抗體接著被連結至所關注的多肽。此外，融合抗體可被創造成其中二個(或更多個)單鏈抗體係彼此連結。若想要在單一多肽鏈上創造二價或多價抗體或若想要創造雙專一性抗體，此係有用的。

為創造單鏈抗體(scFv)，編碼VH和VL的DNA片段係操作性地連結至編碼彈性連接子(例如編碼胺基酸序列(Gly4-Ser)3(SEQ ID NO：115))的另一個片段，使得該VH和VL序列可以鄰接單鏈蛋白質之形式表現，其中該VL和VH域係藉由該彈性連接子連接。參見(例如)Bird 等人，Science 242：423-426(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883(1988)；和McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)。該單鏈抗體可係單價，若僅使用單一VH和VL；二價，若使用二個VH和VL；或多價，若使用超過二個VH和VL。例如，可產生雙專一性或多價抗體，其與人類PD-1以及與另一個分子專一性地結合。

於其他實施方式中，可使用編碼抗PD-1抗體的核酸分子製備其他經修飾的抗體。例如，可使用標準分子生物技術根據本說明書之教示製備「κ體」(Ill等人，Protein Eng. 10：949-57(1997))、「微體(minibody)」(Martin等人，EMBO J. 13：5303-9(1994))、「雙體」(Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993))、或「Janusin」(Traunccker等人，EMBO J. 10：3655-3659(1991)和Traunecker等人，Int.J.Cancer(補充)7：51-52(1992))。

本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分可被衍生化或連結至另一個分子(例如另一個胜肽或蛋白質)。一般而言，該等抗體或其部分被衍生化，其方式使得PD-1結合不被該衍生化或標記不利地影響。據此，本發明之抗體和抗體部分意欲包括本文中描述的人類抗PD-1抗體之完整和經修飾形式兩者。例如，本發明之抗體或抗體部分可被功能性地連結(藉由化學偶聯、基因融合、非共價聯結或其他)至一或多個其他分子實體，諸如另一個抗體(例如雙專一性抗體或雙體)、偵測劑、醫藥劑、及/或可介導該抗體或抗體部分與另一個分子之聯結的蛋白質或胜肽(諸如鏈霉抗生物素蛋白核心區域或聚組胺酸標籤)。

一類經衍生化抗體係藉由交聯二或更多種抗體(相同類型的或不同類型的，例如以創造雙專一性抗體)製造。適合的交聯劑包括該等係異雙官能性者，其等具有二個藉由適當的間隔子(例如間-順丁烯二亞醯胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯)分開之不同的反應性基團或同雙官能性者(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)。如此連接子可得自(例如)Pierce Chemical Company，洛克福，Il。

抗PD-1抗體亦可以化學基團(諸如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基基團、或碳水化合物基團)衍生化。此等基團可能係有用於改善該抗體之生物特徵，例如以增加血清半生期。

亦可標記根據本發明的抗體。用於本文中，術語「標記」或「經標記」係論及該抗體中另一個分子之併入。於一個實施方式中，該標記係可偵測的標誌，例如併入經放射性標記的胺基酸或接附至可藉由經標誌抗生物素蛋白偵測的生物素基部分之多肽(例如含有可藉由光學或比色方法偵測的螢光標誌或酵素活性之鏈霉抗生物素蛋白)。於另一個實施方式中，該標記或標誌可係治療性的，例如藥物綴合物或毒素。種種標記多肽和糖蛋白的方法係所屬技術領域中已知的且可使用其等。用於多肽的標記之實例包括(但不限於)以下者：放射性同位素或放射性核種(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、螢光標記(例如FITC、玫瑰紅、鑭族元素燐光體)、酵素性標記(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標誌、生物素基基團、被第二報導子辨識之預決定的多肽表位(例如白胺酸拉鍊對序列、第二抗體之結合位置、金屬結合域、表位標籤)、磁性劑，諸如釓螫合物、毒素，諸如百日咳毒素、紫杉醇、細胞鬆弛素B、滅革蘭菌素D、溴化乙錠、吐根鹼、絲裂黴素、伊妥普賽(etoposide)、坦尼坡賽(tenoposide)、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙素、多柔比星(doxorubicin)、道諾黴素、二羥基炭疽菌素二酮、雙羥蒽(mitoxantrone)、光輝黴素(mithramycin)、放線菌素D、1-脫氫睪固酮、醣皮質素、普羅卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普魯泛奴洛(propranolol)、和嘌呤黴素和其等之類似物或同源物。於一些實施方式中，標記係藉由種種長度的間隔子臂接附以減少潛在的立體阻礙。

於某些實施方式中，本發明之抗體可以中性形式(包括兩性離子形式)存在或呈帶正電或帶負電物種。於一些實施方式中，該等抗體可與相對離子複合以形成醫藥上可接受的鹽。

術語「醫藥上可接受的鹽」係論及包含一或多個抗體和一或多個相對離子的複合物，其中該等相對離子係衍生自醫藥上可接受的無機和有機酸和鹼。

雙專一性結合分子

於進一步的方面，本發明提供雙專一性結合分子，其具有本文中描述的抗PD-1抗體之結合專一性和另一個抗PD-1抗體(例如另一個本文中描述的抗PD-1抗體)或靶向不同蛋白質的抗體(諸如另一個免疫查核點蛋白質、癌症抗原、或其活性介導諸如癌症的疾病狀況的另一個細胞表面分子)之結合專一性。如此雙專一性結合分子係所屬技術領域中已知的，且不同類型的雙專一性結合分子之實例係於本文之他處給出。

核酸分子和載體

本發明亦提供編碼本文中描述的抗PD-1抗體或其抗原結合部分之核酸分子和序列。於一些實施方式中，不同核酸分子編碼該抗PD-1抗體或其抗原結合部分之重鏈和輕鏈胺基酸序列。於其他實施方式中，相同的核酸分子編碼該抗PD-1抗體或其抗原結合部分之重鏈和輕鏈胺基酸序列。

除非另加具體指明，提及核苷酸序列時涵蓋其互補物。因此，提及具有特殊序列之核酸應被理解成涵蓋其具有其互補序列之互補股。於本文中提及時，術語「多核苷酸」意謂長度上至少10個鹼基的核苷酸之多聚形式，無論是核糖核苷酸或去氧核苷酸或任一類型的核苷酸之經修飾形式。該術語包括單股和雙股形式。

於以上實施方式之任何者，該等核酸分子可經分離。

於進一步的方面，本發明提供適用於表現本文中描述的抗體或其抗原結合部分之鏈之一的載體。用於本文中，術語「載體」意謂一種核酸分子，其能夠運送其已與之連結的另一種核酸。於一些實施方式中，該載體係質體，即另外的DNA節段可被連接至其中的DNA之環狀雙股片段。於一些實施方式中，該載體係病毒載體，其中另外的DNA節段可被連接至其病毒基因組中。於一些實施方式中，該載體能夠在其等被導入至其中的宿主細胞內自我複製(例如具有細菌複製起點的細菌載體和游離基因體哺乳動物載體)。於其他實施方式中，該等載體(例如非游離基因體哺乳動物載體)可在被導入至宿主細胞後併入至宿主細胞之基因組中，並藉此隨著宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠指揮其等所操作性連結的基因之表現。如此載體於本文中被稱作「重組表現載體」(或簡稱「表現載體」)。

本發明提供包含編碼本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分之重鏈、本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分之輕鏈、或本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分之重鏈和輕鏈兩者的核酸分子之載體。本發明進一步提供包含編碼融合蛋白質、經修飾抗體、其抗體片段、和探針之核酸分子的載體。

編碼本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分之重鏈及/或輕鏈的核酸分子可自任何製造如此抗體或部分的來源分離。於種種實施方式中，該等核酸分子係自表現從以人類PD-1抗原致免疫的動物分離的抗PD-1抗體的B細胞分離、或從自如此B細胞製造的永生化細胞分離。分離編碼抗體的核酸之方法係所屬技術領域中廣為人知的。可分離mRNA並將其用於製造cDNA以用於抗體基因之聚合酶連鎖反應(PCR)或cDNA選殖中。於某些實施方式中，本發明之核酸分子可被合成而非分離。

於一些實施方式中，本發明之核酸分子可包含編碼來自本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分的VH域之核苷酸序列，其符合讀框地連接至編碼來自任何來源的重鏈恆定區的核苷酸序列。類似地，本發明之核酸分子可包含編碼來自本發明之抗PD-1抗體或抗原結合部分的VL域的核苷酸序列，其符合讀框地連接至編碼來自任何來源的輕鏈恆定區的核苷酸序列。

於本發明之進一步方面，編碼該重鏈之可變域(VH)及/或輕鏈之可變域(VL)的核酸分子可被「變換」成全長抗體基因。於一個實施方式中，編碼該VH或VL域的核酸分子被變換成全長抗體基因，其係藉由分別插入至已編碼重鏈恆定(CH)或輕鏈恆定(CL)區的表現載體中，使得該VH節段在該載體內被操作性地連結至該(等)CH節段、及/或該VL節段在該載體內被操作性地連結至該CL節段。於另一個實施方式中，編碼該VH及/或VL域的核酸分子被變換成全長抗體基因，其係藉由使用標準分子生物技術將編碼VH及/或VL域的核酸分子連結(例如連接)至編碼CH及/或CL區的核酸分子。編碼全長重鏈及/或輕鏈的核酸分子可接著從至其中該等核酸分子已被導入的細胞表現且該抗PD-1抗體被分離。

可使用該等核酸分子以重組地表現大量的抗PD-1抗體。亦可使用該等核酸分子以製造嵌合抗體、雙專一性抗體、單鏈抗體、免疫黏著素、雙體、突變抗體和抗體衍生物，如於本文中描述的。

於另一個實施方式中，本發明之核酸分子被用作為用於特定抗體序列的探針或PCR引子。例如，該核酸可於診斷方法中被用作為探針或被用作為PCR引子以擴增可被使用的DNA區域(特別是)以分離編碼抗PD-1抗體的可變域之另外的核酸分子。於一些實施方式中，該等核酸分子係寡核苷酸。於一些實施方式中，該等寡核苷酸係來自所關注的抗體之重鏈和輕鏈之高度可變域。於一些實施方式中，該等寡核苷酸編碼完整的如於本文中描述的本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分之CDR之一或多者或其部分。

於另一個實施方式中，可使用該等核酸分子和載體以製造突變抗PD-1抗體。可於重鏈及/或輕鏈之可變域中突變該等抗體，例如以改變該抗體之結合特性。例如，可於CDR之一或多者中作突變以增高或減低該抗PD-1抗體之K_D、以增高或減低k_off、或以改變該抗體之結合專一性。於另一個實施方式中，於本發明之單株抗體中，於已知相較於生殖系列被改變的胺基酸殘基上作一或多個突變。可於可變域之CDR或架構區中、或於恆定區中作該等突變。於較佳的實施方式中，於可變域中作該等突變。於一些實施方式中，於本發明之抗體或其抗原結合部分之可變域之CDR或架構區中，於已知相較於生殖系列被改變的胺基酸殘基作一或多個突變。

於另一個實施方式中，突變該(等)架構區以使得所得的架構區具有相對應生殖系列基因之胺基酸序列。可於架構區或恆定區作突變以增加該抗PD-1抗體之半生期。參見(例如)PCT公開案WO 00/09560。亦可於架構區或恆定區中作突變以改變該抗體之致免疫性、及/或以提供用於與另一個分子共價或非共價結合之位置。根據本發明，單一抗體可於其可變域之CDR或架構區之任一或多者或於其恆定區具有突變。

於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分係藉由以下者表現：將編碼部分或全長輕鏈和重鏈的DNA(如以上描述地獲得的)插入至表現載體中以使得該等基因被操作性地連結至必要的表現控制序列，諸如轉錄和轉譯控制序列。表現載體包括質體、反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、植物病毒，諸如花椰菜鑲嵌病毒、菸草鑲嵌病毒、黏接質體、YAC、衍生自EBV的游離基因體、和類似者。可將該抗體編碼序列連接至載體中以使得該載體內的轉錄和轉譯控制序列發揮其等調節該抗體編碼序列之轉錄和轉譯的所欲功能。可挑選該表現載體和表現控制序列以與所使用的表現宿主細胞相容。可將該抗體輕鏈編碼序列和該抗體重鏈編碼序列插入至分開的載體中，且其等可操作性地連結至相同或不同的表現控制序列(例如啟動子)。於一個實施方式中，將該等編碼序列兩者插入至相同的表現載體中且其等可操作性地連結至相同的表現控制序列(例如共同啟動子)、至分開的相同的表現控制序列(例如啟動子)、或至不同表現控制序列(例如啟動子)。可藉由標準方法(例如該抗體基因片段和載體上的互補限制位之連接、或鈍端連接，若不存在限制位)將該等抗體編碼序列插入至該表現載體中。

方便的載體係以下者：編碼功能上完全的人類CH或CL免疫球蛋白序列、加上經工程設計以使得任何VH或VL序列可被輕易地插入和表現(如以上描述的)之適當的限制位。如此載體中之編碼HC的基因和編碼LC的基因可含有內含子序列，其會藉由穩定化相關mRNA來導致整體抗體蛋白質產量之增加。該等內含子序列兩端鄰接剪接供體和剪接受體位置，其等決定RNA剪接會於哪裡發生。內含子序列之位置可位於該抗體鏈之可變區或恆定區中、或於可變區和恆定區兩者中(當使用多個內含子時)。多腺苷酸化和轉錄終止可於該等編碼區域之下游的天然染色體位置發生。該重組表現載體亦可編碼促進該抗體鏈自宿主細胞分泌的訊息胜肽。可將該抗體鏈基因選殖入該載體中以使得該訊息胜肽被符合讀框地連結至該免疫球蛋白鏈之胺端。該訊息胜肽可係免疫球蛋白訊息胜肽或異源訊息胜肽(即來自非免疫球蛋白蛋白質的訊息胜肽)。

除了該抗體鏈基因外，本發明之重組表現載體可攜帶調節序列，其等控制該抗體鏈基因於宿主細胞中的表現。所屬技術領域中具有通常知識者會領會到該表現載體之設計(包括調節序列之挑選)可取決於諸如以下者之因子：欲轉形的宿主細胞之選擇、所欲的蛋白質之表現水平、等等。用於哺乳動物宿主細胞表現之較佳的調節序列包括指揮在哺乳動物細胞中的蛋白質之高水平表現的病毒元件，諸如衍生自以下者的啟動子及/或增強子：反轉錄病毒LTR、細胞巨大病毒(CMV)(諸如CMV啟動子/增強子)、猿猴病毒40(SV40)(諸如SV40啟動子/增強子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))、多瘤和強哺乳動物啟動子，諸如天然免疫球蛋白和肌動蛋白啟動子。關於病毒調節元件和其序列之進一步描述，參見(例如)US專利案5,168,062、4,510,245和4,968,615。用於在植物中表現抗體的方法(包括啟動子和載體之描述、以及植物之轉形)係所屬技術領域中已知的。參見(例如)US專利案6,517,529。在細菌細胞或真菌細胞(例如酵母菌細胞)中表現多肽的方法亦係所屬技術領域中廣為人知的。

除了該抗體鏈基因和調節性序列外，本發明之重組表現載體可攜帶另外的序列(諸如調節該載體在宿主細胞中的複製之序列，例如複製起點)和可篩選標記基因。可篩選標記基因促進至其中該載體已被導入的宿主細胞之篩選(參見(例如)US專利案4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，典型地，該可篩選標記基因將對藥物(諸如G418、濕黴素或胺甲喋呤)的抗性授於至其中該載體已被導入的宿主細胞。例如，可篩選標記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(其用於利用胺甲喋呤篩選/擴增dhfr-宿主細胞)、neo基因(其用於G418篩選)、和麩胺酸合成酶基因。

術語「表現控制序列」用於本文中意謂對於引起其等與之連接的編碼序列之表現和加工而言係必須的多核苷酸序列。表現控制序列包括適當的轉錄起始、終止、啟動子和增強子序列；有效的RNA加工訊息，諸如剪接和多腺苷酸化訊息；穩定細胞質mRNA的序列；增強轉譯效能的序列(即Kozak共通序列)；增強蛋白質穩定性的序列；和當所欲時，增強蛋白質分泌的序列。如此控制序列之性質基於宿主生物體變化；於原核生物中，如此控制序列一般包括啟動子、核醣體結合位置、和轉錄終止序列；於真核生物中，一般，如此控制序列包括啟動子和轉錄終止序列。術語「控制序列」係意欲(最少)包括其存在對於表現和加工而言係必須的所有組份，且亦可包括其存在係有利的其他組份，例如前導序列和融合伙伴序列。

宿主細胞和抗體和抗體組成物製造之方法

本發明之另外的方面係關於用於製造本發明之抗體組成物和抗體和其抗原結合部分的方法。本發明之此方面之一個實施方式係關於用於製造如於本文中界定的抗體的方法，其包含提供能夠表現該抗體的重組宿主細胞、在適用於該抗體之表現的條件下培養該宿主細胞、和分離所得的抗體。藉由於如此重組宿主細胞中的如此表現製造的抗體於本文中被稱作「重組抗體」。本發明亦提供如此宿主細胞之子代細胞、和由其製造的抗體。

用於本文中，術語「重組宿主細胞」(或簡稱「宿主細胞」)意謂重組表現載體已被導入至其中的細胞。本發明提供可包含(例如)如以上描述的根據本發明的載體之宿主細胞。本發明亦提供包含(例如)編碼本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、編碼本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或兩者之宿主細胞。應理解「重組宿主細胞」和「宿主細胞」不止意謂特別的主題細胞但亦意謂如此細胞之子代。因為某些修飾可由於突變或環境影響而在隨後的世代中發生，如此子代可能(實際上)與親代細胞不完全相同，但仍被包括在用於本文中的術語「宿主細胞」之範圍內。

可將編碼抗PD-1抗體的核酸分子和包含此等核酸分子的載體用於適合的哺乳動物、植物、細菌或酵母菌宿主細胞之轉染。轉形可藉由任何已知用於將多核苷酸導入至宿主細胞中的方法。用於將異源性多核苷酸導入至哺乳動物細胞中的方法係所屬技術領域中廣為人知的且包括右旋糖聚糖介導的轉染、磷酸鈣沈澱、Polybrene介導的轉染、原生質體融合、電穿孔、將多核苷酸封膠囊於脂質體中、和將DNA直接微注射至細胞核中。此外，可藉由病毒載體將核酸分子導入至哺乳動物細胞中。轉形細胞的方法係所屬技術領域中廣為人知的。參見(例如)US專利案4,399,216、4,912,040、4,740,461、和4,959,455。轉形植物細胞的方法係所屬技術領域中廣為人知的，其等包括(例如)農桿菌介導的轉形、生物彈道學轉形(biolistic transformation)、直接注射、電穿孔和病毒轉形。轉形細菌和酵母菌細胞的方法亦係所屬技術領域中廣為人知的。

可作為表現宿主得到的哺乳動物細胞株係所屬技術領域中廣為人知的且包括許多可得自美國菌種保存中心(ATCC)的永生細胞株。此等包括(特別是)中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NS0細胞、SP2細胞、HEK-293T細胞、293 Freestyle細胞(Invitrogen)、NIH-3T3細胞、HeLa細胞、嬰兒倉鼠腎臟(BHK)細胞、非洲綠猴腎臟細胞(COS)、人類肝細胞癌細胞(例如Hep G2)、A549細胞、和一些其他細胞株。特別偏好的細胞株係藉由測定哪個細胞株具有高表現水平來挑選。可使用的其他細胞株係昆蟲細胞株(諸如Sf9或Sf21細胞)。當將編碼抗體基因的重組表現載體導入至哺乳動物宿主細胞中時，該等抗體係藉由以下者製造：培養該宿主細胞一段足以允許該抗體於該等宿主細胞中的表現或(更佳地)將該抗體分泌至該宿主細胞於其中生長的培養基之時間。可自該培養基使用標準蛋白質純化方法回收抗體。植物宿主細胞包括(例如)菸草屬、擬南芥屬(Arabidopsis)、浮萍、玉米、小麥、馬鈴薯、等等。細菌宿主細胞包括大腸桿菌和鏈黴菌屬物種。酵母菌宿主細胞包括粟酒裂殖酵母菌、啤酒釀母菌和巴斯德畢赤酵母菌(Pichia pastoris)。

此外，可使用一些已知技術增強本發明之抗體或其抗原結合部分自製造細胞株的表現。例如，麩醯胺酸合成酶基因表現系統(GS系統)係用於在某些條件下增強表現的常見方法。GS系統係連結EP專利案0 216 846、0 256 055、0 323 997和0 338 841完整或部分討論。

有可能由不同細胞株或於基因轉殖動物中表現的抗體會具有彼此不同的醣化模式。然而，由本文提供的核酸分子編碼或包含本文提供之胺基酸序列的所有抗體皆係本發明之部分，無論該等抗體之醣化狀態，且更一般而言，無論轉譯後修飾存在或不存在。

醫藥組成物

本發明之另一個方面係醫藥組成物，其包含作為一個活性成分(或作為唯一的活性成分)的本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分或抗PD-1抗體組成物。該醫藥組成物可包含任何如本文中描述的抗PD-1抗體組成物或抗體或其抗原結合部分。於一些實施方式中，該等組成物係意欲用於改善、預防、及/或治療與PD-1相關的病症及/或癌症。用於本文中，與PD-1相關的或由PD-1介導的病症係論及藉由PD-1活性之調節而改善、或減緩其進展的病症、疾病或病況。於一些實施方式中，該等組成物係意欲用於活化免疫系統。於某些實施方式中，該等組成物係意欲用於改善、預防、及/或治療源於諸如皮膚、肺臟、腸、結腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟的組織的癌症。

一般而言，本發明之抗體、其抗原結合部分、和雙專一性結合分子係適用於以調配物的形式結合一或多種醫藥上可接受的賦形劑(例如如以下描述者)投予。

本發明之醫藥組成物會包含一或多種本發明之抗PD-1抗體或結合部分或雙專一性結合分子，例如一或二種抗PD-1抗體、結合部分、或雙專一性結合分子。於一個實施方式中，該組成物包含單一種本發明之抗PD-1抗體或其結合部分。

於另一個實施方式中，該醫藥組成物可包含至少一種抗PD-1抗體或其抗原結合部分，例如一種抗PD-1抗體或部分、和一或多種靶向一或多種相關的細胞表面受體(例如一或多種與癌症相關的受體)的另外的抗體。

術語「賦形劑」用於本文中係描述本發明之化合物以外的任何成分。賦形劑之選擇在很大程度上會取決於諸如以下者之因子：特殊的投予模式、賦形劑對溶解度和穩定性的效果、和劑量形式之特性。用於本文中，「醫藥上可接受的賦形劑」包括任何及所有生理上相容的溶劑、分散基質、塗層、抗細菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑、和類似者。醫藥上可接受的賦形劑之一些實例係水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇和類似者、以及其等之組合。於許多例子中，於該組成物中包括等張劑，例如糖、多元醇，諸如甘露醇、山梨醇、或氯化鈉會係較佳的。醫藥上可接受的物質之另外的實例係潤濕劑或微量的輔助物質，諸如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩衝劑，其等增加該抗體之保存期限或有效性。

本發明之醫藥組成物和用於其等之製備的方法對所屬技術領域中具有通常知識者而言會輕易地係明顯的。如此組成物和用於其等之製備的方法可於(例如)Remington’s Pharmaceutical Sciences，第19版(Mack Publishing Company,1995)中找到。醫藥組成物較佳係在GMP(良好作業規範)條件下製造。

可以散裝、呈單一單位劑量、或呈複數個單一單位劑量製備、包裝、或販售本發明之醫藥組成物。用於本文中，「單位劑量」係個別量的該醫藥組成物，其包含預決定量的活性成分。活性成分之量一般等於會被投予至一對象的活性成分之劑量或如此劑量之方便的部分(諸如(例如)如此劑量之一半或三分之一)。

所屬技術領域中所接受的任何用於投予胜肽、蛋白質或抗體的方法可被合適地利用於本發明之抗體和抗原結合部分。

本發明之醫藥組成物典型係適用於非經腸投予。用於本文中，醫藥組成物之「非經腸投予」包括任何特徵在於以下者的投予途徑：物理突破一對象之組織並透過該組織中的突破口投予該醫藥組成物，因此一般造成直接投予至血流中、至肌肉中、或至內部器官中。非經腸投予因此包括(但不限於)藉由注射該組成物、藉由透過手術切口施用該組成物、藉由透過穿透組織的非手術傷口施用該組成物、和類似者來投予醫藥組成物。特別地，設想到非經腸投予包括(但不限於)皮下、腹膜內、肌肉內、胸骨內、靜脈內、動脈內、鞘內、室內、尿道內、顱內、腫瘤內、和滑液膜內注射或輸注；和腎臟透析輸注技術。亦設想到區域性灌注。特別的實施方式包括靜脈內和皮下途徑。

適用於非經腸投予的醫藥組成物之調配物典型包含活性成分組合醫藥上可接受的載劑(諸如無菌水或無菌等張鹽水)。可以適用於大劑量投予(bolus administration)或連續投予的形式製備、包裝、或販售如此調配物。可以單位劑量形式(諸如在含有防腐劑的安瓿或多劑容器中)製備、包裝、或販售可注射調配物。用於非經腸投予的調配物包括(但不限於)懸浮液、溶液、在油性或水性媒劑中的乳劑、糊劑、和類似者。如此調配物可進一步包含一或多種另外的成分，包括(但不限於)懸浮劑、穩定劑、或分散劑。在用於非經腸投予的調配物之一個實施方式中，該活性成分係以乾燥(即粉末或粒狀)形式提供以用於在非經腸投予經復水組成物前以適合的媒劑(例如無菌無熱原水)復水。非經腸調配物亦包括水溶液，其可含有賦形劑，諸如鹽、碳水化合物和緩衝劑(較佳至3至9的pH)，但(於一些應用中)可能更適合將其等調配成無菌非水溶液或成乾燥形式以結合適合的媒劑(諸如無菌、無熱原水)使用。例示性非經腸投予形式包括在無菌水溶液(例如丙二醇或右旋糖水溶液)中的溶液或懸浮液。若所欲，可適當地緩衝如此劑量形式。其他有用的可親代投予的調配物包括該等包含呈微晶質形式、或於脂質體製劑中的活性成分者。可調配用於非經腸投予的調配物以使其等被立即及/或修飾釋放。修飾釋放調配物包括延遲、持續、脈衝、控制、靶向和程式化釋放。

例如，於一個方面，可藉由以下者製備無菌可注射溶液：將所需量的該抗PD-1抗體或其抗原結合部分、雙專一性結合分子、或抗PD-1抗體組成物及一種以上列舉的成分或其等之組合(按需要)併入適當的溶劑中，接著過濾滅菌。一般而言，分散劑係藉由以下者製備：將活性化合物併入至含有基礎分散介質和所需的來自該等以上列舉者的其他成分的無菌媒劑中。於用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末之例子中，較佳的製備方法係真空乾燥和冷凍乾燥，其產生來自其先前經無菌過濾的溶液的活性成分加上任何其他所欲成分之粉末。可藉由例如以下者維持溶液之適當的流動性：使用塗層，諸如卵燐脂、維持所需的粒子大小(於分散劑之例子中)及使用介面活性劑。可藉由以下者得到可注射組成物之延長吸收：在該組成物中包括延遲吸收的劑，例如硬脂酸鹽和明膠、及/或使用修飾釋放塗層(例如緩釋塗層)。

本發明之抗體亦可被鼻內地投予或藉由吸入投予，典型係以來自乾燥粉末吸入器的乾燥粉末(單獨、呈混合物、或呈混合的組份粒子，例如與適合的醫藥上可接受的賦形劑混合)的形式、呈有或無使用適合的推進劑的來自加壓容器、泵甫、噴霧、霧化器(較佳為使用電流體力學以製造細霧的霧化器)、或噴霧器的氣溶膠噴霧、或呈鼻滴劑。

加壓容器、泵甫、噴霧、霧化器、或噴霧器一般含有本發明之抗體之溶液或懸浮液，其包含例如適用於分散、溶解、或延長釋放活性物的劑、推進劑，作為溶劑。

於以乾燥粉末或懸浮液調配物使用之前，該藥物產品一般被微粉化至適用於藉由吸入遞送的大小(典型係小於5微米)。此可藉由任何適當的粉碎方法(諸如螺旋噴流碾磨、流體床噴射碾磨、超臨界流體加工以形成奈米粒子、高壓均質化、或噴霧乾燥)達成。

可將用於吸入器或吹入器的膠囊、泡殼(blister)和藥筒調配成含有本發明之化合物之粉末混合物、適合的粉末基底和性能修飾劑。

用於霧化器使用電流體力學以製造細霧之適合的溶液調配物可於每次致動含有適合劑量的本發明之抗體且致動體積可例如於1μL至100μL變化。

可將用於吸入/鼻內投予的調配物調配成立即及/或修飾釋放。修飾釋放調配物包括延遲、持續、脈衝、控制、靶向和程式化釋放。

於乾燥粉末吸入器和氣溶膠之例子中，劑量單位係通過遞送計量量的閥決定。典型會安排根據本發明的單位以投予定量劑量或「噴煙(puff)」的本發明之抗體。每日總劑量典型會以單劑投予或(更常)於一整天以分開的數劑投予。

亦可調配本發明之抗體和抗體部分以用於口服途徑投予。口服投予可涉及吞嚥，使得該化合物進入胃腸道、及/或頰部、舌部、或舌下投予，藉其該化合物直接自口部進入血流。

適用於口服投予的調配物包括固體、半固體和液體系統，諸如錠劑；含有多微粒(multi-particulate)或奈米微粒、液體、或粉末的軟或硬膠囊；菱形錠(包括填充液體的)；咀嚼物；凝膠；快速分散劑量形式；薄膜；卵形劑(ovule)；噴霧；和頰部/黏膜黏著貼片。

液體調配物包括懸浮液、溶液、糖漿和酏劑。可利用如此調配物作為軟或硬膠囊(例如從明膠或羥丙甲基纖維素製造)中的填料且其典型包含載劑，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纖維素、或適合的油、和一或多種乳化劑及/或懸浮劑。亦可藉由復水固體(例如從藥包(sachet))製備液體調配物。

本發明之抗體和組成物的治療用途

於一個方面，本發明之抗PD-1抗體和其抗原結合部分、抗PD-1組成物、和雙專一性結合分子可用於在有需要的人類中增強或活化免疫系統。於一些實施方式中，該患者之免疫受抑制。例如，醫師可藉由投予本發明之抗PD-1抗體、抗體結合部分、組成物、或雙專一性結合分子(單獨地或與其他治療劑組合，相繼地或同時地)促升患者自己之免疫系統之抗癌症活性。該抗PD-1抗體或部分、組成物、或雙專一性結合分子於免疫細胞中調節PD-1之活性，導致抗癌症免疫性增強。於某些實施方式中，該抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子其係用於治療癌症，例如源於諸如皮膚、肺臟、腸、結腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭和頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟的組織的癌症、和任何依賴PD-1活性及/或其中患者表現或過度表現PD1、PD-L1、及/或PD-L2的癌症或其他病況。藉由本發明之抗PD-1抗體、其抗原結合部分、抗PD-1組成物、及/或雙專一性結合分子治療的癌症可包括(例如)黑色素瘤(諸如晚期黑色素瘤、或無法切除的或轉移性黑色素瘤)、非小細胞肺癌、膀胱癌、頭頸鱗狀細胞癌、卵巢癌、結腸直腸癌、胃癌、高度微衛星不穩定性癌症、肝細胞癌、間皮瘤、Merkel氏細胞癌、神經膠瘤、多發性骨髓瘤、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、和腎細胞癌(RCC)。

於一些實施方式中，藉由本發明之抗PD-1抗體、抗原結合部分、抗PD-1組成物、及/或雙專一性結合分子治療的癌症可包括(例如)晚期或轉移性黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸鱗狀細胞癌、腎細胞癌、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、神經膠母細胞瘤、神經膠瘤、神經內分泌腫瘤、鱗狀細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、膀胱癌、上尿路癌、食道癌、胃食道連接部癌、胃癌、肝癌、結腸癌、結腸直腸癌、多發性骨髓瘤、肉瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓化生不良症候群、鼻咽癌、慢性淋巴球性白血病、急性淋巴胚細胞性白血病、小淋巴球性淋巴瘤、卵巢癌、胃腸癌、原發性腹膜癌、輸卵管癌、泌尿上皮癌、與HTLV有關的T細胞白血病/淋巴瘤、前列腺癌、生殖泌尿癌、腦脊髓膜瘤、腎上腺皮質癌、神經膠肉瘤、腎臟癌、乳癌、胰臟癌、子宮內膜癌、皮膚基底細胞癌、闌尾之癌症、膽道癌、唾腺癌、晚期Merkel氏細胞癌、泌尿學癌症、骨癌、胸部癌症、呼吸道癌症、腺樣囊狀癌、子宮頸癌、星狀細胞瘤、索脊瘤、血液學贅瘤、神經胚細胞瘤、口腔癌、皮膚鱗狀細胞癌、甲狀腺癌、卡波西氏肉瘤、肛門癌、膽囊癌、胸腺癌、子宮癌、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、間皮瘤、或固態腫瘤。該癌症可係(例如)早期、中期、晚期、或轉移階段。

於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體、抗原結合部分、組成物、及/或雙專一性結合分子可用於治療病毒及/或寄生生物感染，例如在病原體抑制宿主免疫反應的情況下。例如，該病原體可係(例如)HIV、肝炎(A、B、或C)、人類乳突瘤病毒(HPV)、淋巴球性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、腺病毒、黃病毒、ECHO病毒、鼻病毒、Coxsackie病毒、冠狀病毒、呼吸道融合病毒、腮腺炎病毒、輪狀病毒、麻疹病毒、德國麻疹病毒、小病毒、牛痘病毒、人類T細胞親淋巴性病毒(HTLV)、登革熱病毒、軟疣病毒、小兒麻痺病毒、狂犬病病毒、John Cunningham(JC)病毒、節肢足動物攜帶性病毒性腦炎病毒、猿猴免疫不全病毒(SIV)、流行性感冒、疱疹、梨形鞭毛蟲、瘧疾、利什曼原蟲、金黃色葡萄球菌、或銅綠假單胞菌。

於一些實施方式中，本發明之抗PD-1抗體、抗原結合部分、組成物、及/或雙專一性結合分子可用於治療免疫減損患者或有免疫減損之風險的患者(例如由於化學治療的或放射線治療)。

「治療(treat)」、「治療(treating)」和「治療(treatment)」係論及減輕或消除生物病症及/或其伴隨症狀之至少一者的方法。用於本文中，「減輕」疾病、病症或病況意謂減低該疾病、病症、或病況之症狀之嚴重性及/或發生頻率。此外，本文中提及「治療」時包括提及治癒性、緩和性和預防性治療。

「治療有效量」係論及所投予的治療劑之量，其會將所治療的病症之症狀之一或多者減輕至某種程度。治療有效量的抗癌症治療(例如)可導致腫瘤縮小、存活增加、癌細胞之排除、減低的疾病進展、轉移之逆轉、或其他保健專家所欲的臨床終點。

本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子可單獨投予或組合一或多種其他藥物或抗體(或呈其等之任何組合)投予。本發明之醫藥組成物、方法和用途因此亦涵蓋與其他活性劑的組合(共投予)之實施方式，如以下詳細敘述的。

用於本文中，當提及本發明之抗體和其抗原結合部分、組成物、和雙專一性結合分子以及一或多種其他治療劑時，術語「共投予」、「被共投予」和「組合」意欲意謂且係論及並包括以下者：-將本發明之抗體/抗原結合部分/抗體組成物/雙專一性結合分子及一或多種治療劑之如此組合同時投予至需要治療的患者，當如此組份被一起調配成實質上同時將該等組份釋放至該患者的單一劑量形式時，-將本發明之抗體/抗原結合部分/抗體組成物/雙專一性結合分子及一或多種治療劑之如此組合實質上同時投予至需要治療的患者，當如此組份被彼此分開地調配成實質上同時被該患者攝取的分開的劑量形式故於是該等組份被實質上同時釋放至該患者時，-將本發明之抗體/抗原結合部分/抗體組成物/雙專一性結合分子及一或多種治療劑之如此組合相繼投予至需要治療的患者，當如此組份被彼此分開地調配成被該患者在連續的時間攝取且在各投予間有實質上的時間間隔的分開的劑量形式故於是該等組份於實質上不同的時間被釋放至該患者時；和-將本發明之抗體/抗原結合部分/抗體組成物/雙專一性結合分子及一或多種治療劑之如此組合相繼投予至需要治療的患者，當如此組份被一起調配成以控制方式釋放該等組份的單一劑量形式故於是其等於相同及/ 或不同的時間被同時、連續、及/或重疊地釋放至該患者時，其中各部分可藉由相同或不同的途徑投予。

本發明之抗體和其抗原結合部分、抗體組成物、和雙專一性結合分子可在無另外的治療性治療下投予(即作為單獨的治療(單一治療))。供選擇地，使用本發明之抗體和其抗原結合部分、組成物、和雙專一性結合分子的治療可包括至少一種另外的治療性治療(組合治療)，例如另一種免疫刺激劑、抗癌症劑、抗病毒劑、或疫苗(例如腫瘤疫苗)。於一些實施方式中，該抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子可與另一種藥療法/藥物共投予或調配以用於治療癌症。該另外的治療性治療可包含(例如)化學治療劑、抗贅瘤劑、或抗血管形成劑、不同的抗癌症抗體、及/或放射性治療。

藉由組合本發明之抗體、抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子與已知會誘發癌細胞之最後分化的劑，可進一步改善功效。如此化合物可(例如)選自由以下者所組成的群組：視黃酸、反式-視黃酸、順式-視黃酸、苯丁酸鹽、神經生長因子、二甲亞碸、活性形式維生素D3、過氧化體增殖物活化性受體γ、12-O-十四醯基佛波醇13-醋酸酯、六亞甲基-雙-乙醯胺、轉形生長因子β、丁酸、環AMP、和維司力農(vesnarinone)。於一些實施方式中，該化合物係選自由視黃酸、苯丁酸鹽、全反式-視黃酸和活性形式維生素D所組成的群組。

包含本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子與至少一種其他劑(例如化學治療劑、抗贅瘤劑、或抗血管形成劑)的醫藥製品可呈供於癌症治療中同時、分開或相繼投予的組合治療的形式使用。該其他劑可藉由任何適用於治療所提及的特殊癌症的劑，例如選自由以下者所組成的群組的劑：烷化劑，例如鉑衍生物，諸如順鉑、卡鉑及/或奧沙利鉑(oxaliplatin)；植物生物鹼，例如太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇及/或愛萊諾迪肯(irinotecan)；抗腫瘤抗生素，例如多柔比星(阿德力黴素)、道諾黴素、表阿黴素(epirubicin)、艾達黴素(idarubicin)雙羥蒽、放線菌素D、博萊黴素、放線菌素、藤黃黴素(luteomycin)、及/或絲裂黴素；拓樸異構酶抑制劑，諸如拓普替康(topotecan)；及/或抗代謝物，例如氟尿嘧啶及/或其他氟嘧啶。

本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分、抗體組成物、或雙專一性結合分子亦可與諸如疫苗、細胞介素、酵素抑制劑、免疫刺激性化合物、和T細胞治療的其他抗癌症治療組合使用。於疫苗之例子中，其可(例如)係含有一或多種與所治療的癌症相關的抗原的蛋白質、胜肽或DNA疫苗、或包含樹突細胞加上抗原的疫苗。適合的細胞介素包括(例如)IL-2、IFN-γ和GM-CSF。一類具有抗癌症活性的酵素抑制劑之實例係吲哚胺-2,3-二氧酶(IDO)抑制劑，例如1-甲基-D-色胺酸(1-D-MT)。授受性T細胞治療係論及種種涉及擴展或工程設計患者自身之T細胞以辨識並攻擊其等之腫瘤的免疫治療技術。

亦設想到本發明之抗PD-1抗體或其抗原結合部分、抗體組成物、或雙專一性結合分子可連結酪胺酸激酶抑制劑用於輔助治療中。此等係合成性且主要衍生自喹唑啉的低分子量分子，其等與受體之細胞內酪胺酸激酶域交互作用並藉由競爭細胞內Mg-ATP結合位置而抑制配體誘發性受體磷酸化。

於一些實施方式中，該抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子可與包括(但不限於)調節以下者之表現或活性的劑的另一種介導免疫系統活化的藥療法/藥物組合使用：A2AR、BTLA、B7-H3、B7-H4、CTLA-4、CD27、CD28、CD40、CD55、CD73、CD122、CD137、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、CTLA-3、CEACAM(例如CEACAM-1及/或CEACAM-5)、GAL-9、GITR、HVEM、ICOS、IDO、KIR、LAIR1、LAG-3、OX40、TIGIT、TIM-3、TGFR-β、VISTA、LILRB2、CMTM6及/或2B4。於某些實施方式中，該劑係與以上分子之一結合的抗體或其抗原結合片段。於某些實施方式中，本發明之抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子可與CTLA-4抑制劑(例如抗CTLA-4抗體，諸如tremelimumab或伊匹單抗(ipilimumab))組合投予。於一個實施方式中，本發明之抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子可與伊匹單抗組合投予。

於某些方面，本發明之抗體和抗原結合部分、組成物、和雙專一性結合分子可組合另一種PD-1途徑之抑制劑投予，該抑制劑可靶向PD-1或其配體之一或多者。如此抑制劑之實例包括其他抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、和抗PD-L2抗體。於一些實施方式中，本發明之抗PD1抗體或其抗原結合部分、雙專一性抗體、或抗體組成物可與派姆單抗及/或納武單抗組合投予。

應瞭解本發明之抗體和其抗原結合部分、抗體組成物、和雙專一性結合分子可用於如本文中描述的治療方法、可用於如本文中描述的治療、及/或可用於製造用於如本文中描述的治療之醫藥品。本發明亦提供包含本文中描述的抗體和其抗原結合部分、抗體組成物、及/或雙專一性結合分子的套組和製品。

劑量和投予途徑

本發明之抗體和其抗原結合部分、組成物、和雙專一性結合分子會以對於治療所提及的病況有效的量(即以達成所欲的結果所需的劑量和時段)投予。治療有效量可根據諸如以下者之因子變化：所治療的特殊病況、患者之年齡、性別和重量、和該等抗體是否係作為單獨的治療投予或與一或多種另外的抗癌症治療組合投予。

可調整劑量攝生法以提供最適宜的所欲反應。例如，可投予單一食團、可隨時間投予數個分開的劑或可按治療狀況之急迫性所指示的成比例地減少或增加該劑。對於投予之容易性和劑量之一致性，以劑量單位形式調配非經腸組成物係特別有利的。用於本文中，劑量單位形式係論及物理上分開的單位，其適合作為用於欲治療的患者/對象之單個劑量；各單位含有經計算以產生所欲治療功效之預決定量的活性化合物加上所需的醫藥載劑。本發明之劑量單位形式之規格一般係由以下者支配且直接取決於以下者：(a)化學治療劑之獨特特徵和欲達成的特殊治療或預防功效、和(b)複合如此活性化合物以用於治療個體之敏感性的所屬技術領域中的固有限制。

因此，基於本文中提供之揭示內容，具有通常知識者會領會到劑量和給藥攝生法係根據治療技術領域中廣為人知的方法作調整。即可輕易地建立最大可容忍劑量，且亦可測定對患者提供可偵測的治療效益的有效量，且亦可測定對患者提供可偵測的治療效益所需的投予各劑之時序需求。因此，雖然本文中例示了某些劑量和投予攝生法，此等實例並不以任何方式限制於實現本發明中可提供給患者的劑量和投予攝生法。

應注意劑量值可隨著欲減輕的病況之類型和嚴重性變化，且可包括單個或多個劑。應進一步瞭解到對於任何特殊對象，應根據個體之需求和投予或監督該組成物之投予者的專業判斷隨時間調整特殊劑量攝生法，且本文中提出的劑量範圍僅係例示性且非意欲限制具體實例組成物之範圍或實現。此外，使用本發明之組成物的劑量攝生法可基於各種各樣的因子(包括疾病之類型、患者之年齡、重量、性別、醫療狀況、病況之嚴重性、投予途徑、和所利用的特殊抗體)變化。因此，該劑量攝生法可廣大地變化，但可使用標準方法例行地測定。例如，可基於藥動學或藥效學參數調整劑量，該等參數可包括臨床功效，諸如毒性效果及/或實驗室值。因此，本發明涵蓋如由具有通常知識者判定的患者內劑量升高。判定適當的劑量和攝生法於相關技術領域中係廣為人知的且一旦提供本文中揭示的教示後具有通常知識者會瞭解其被涵蓋。

設想到本發明之抗體或其抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子之適合劑量會於以下範圍內：0.1-100mg/kg，諸如約0.5-50mg/kg，例如約1-20mg/kg。該抗體、抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子可例如以以下劑量投予：至少0.25mg/kg，例如至少0.5mg/kg，諸如至少1mg/kg，例如至少1.5mg/kg，諸如至少2mg/kg，例如至少3mg/kg，諸如至少4mg/kg，例如至少5mg/kg；和例如至多達50mg/kg，諸如至多達30mg/kg，例如至多達20mg/kg，諸如至多達15mg/kg。投予正常會以適合的間隔重複，例如每週一次、每二週一次、每三週一次、或每四週一次，且會持續負責的醫師認為適當的時間，該醫師必要時可視需要增加或減少劑量。

腫瘤治療之有效量可藉由其在患者中穩定疾病進展及/或改善症狀(且較佳係逆轉疾病進展，例如藉由減小腫瘤大小)的能力測量。本發明之抗體、抗原結合部分、組成物、或雙專一性結合分子抑制癌症的能力可藉由試管內分析(例如如於實施例中描述者)以及於對人類腫瘤中的效力有預測性的適合的動物模型中評估。會挑選適合的劑量攝生法以於各個特殊狀況提供最適宜的治療的反應，例如以單一食團或以連續輸注投予，且可能調整劑量，如由各個例子之急迫性指示的。

診斷用途和組成物

本發明之抗體亦有用於診斷程序(例如試管內、活體外)。例如，該等抗體可用於偵測及/或測量來自患者的樣本(例如組織樣本、或體液樣本，諸如發炎滲出物、血液、血清、腸液、唾液、或尿液)中的PD-1水平。適合的偵測和測量方法包括免疫學方法，諸如流動式細胞測量術、酵素連結免疫吸附分析(ELISA)、化學發光分析、放射性免疫分析、和免疫組織學。本發明進一步涵蓋套組(例如診斷套組)，其包含本文中描述的抗體。

除非於本文中另加界定，連結本發明使用的科學和技術術語應具有所屬技術領域中具有通常知識者所一般瞭解的意義。以下描述例示性方法和材料，雖然於實現或測試本發明時亦可使用與該等本文中描述者類似或等同的方法和材料。若有矛盾，應以本說明書(包括定義)為準。

一般而言，連結本文中描述的細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學、分析化學、合成有機化學、醫療和醫藥化學、及蛋白質和核酸化學和雜合使用的命名法和其等之技術係該等於所屬技術領域中廣為人知且一般使用者。酵素反應和純化技術係根據製造商之說明書執行，如所屬技術領域中或如本文中描述地一般完成的。

此外，除非前後文另外要求，單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。在本說明書和實施方式通篇中，字詞「具有(have)」和「包含(comprise)」、或變體(諸如「具有(has)」、「具有(having)」、「包含(comprises)」、或「包含(comprising)」)應被理解成意指含有所陳述的整數或整數之群組但不排除任何其他整數或整數之群組。

本文中提及的所有出版品和其他文獻係以其等之整體以引用方式併入。雖然本文中引用一些文件，此引用並不構成和承認此等文件之任一者形成所屬技術領域中的一般通常知識。

為了使本發明可被更好地瞭解，提出以下實施例。此等實施例僅係用於闡明之目的且不應被解釋成以任何方式限制本發明之範圍。

圖1A-1D顯示四種展現不同的對PD-1異種同源物的反應性的抗PD-1抗體植株之表性流式細胞測量術點圖。

圖2A-2H顯示本發明之抗PD-1抗體之PD-L1與胞表現性PD-1的結合的封阻。

圖3A-3F顯示十二種抗PD-1抗體於SEB全血分析中的劑量反應曲線。

圖4A-4F顯示十二種抗PD-1抗體於MLR(單向混合淋巴細胞反應)分析中的劑量反應曲線。

圖5顯示針對所測試的抗PD-1抗體和納武單抗和派姆單抗類似物所鑑認的表位群組(表位倉(epitope bin))之概觀。以黑線連接的抗體指出交叉封阻活性。抗體係根據與其他抗PD-1抗體的競爭模式分組。Nivo：納武單抗類似物；Pembro：派姆單抗類似物。

實施例1.抗PD-1抗體庫(antibody repertoire)之產生和篩選 材料和方法

OmniRat®大鼠(Osborn等人，J Immunol.2013, 190(4)：1481-90)(一種來自OMT(Open Monoclonal Technology,Inc.)的能夠製造人類抗體的經工程設計大鼠品系)係以人類、食蟹獼猴、或小鼠PD-1抗原致免疫。抗體基因自源自該等大鼠的經單細胞分選抗體分泌性B細胞(ASC)的選殖係藉由Symplex^TM抗體發現技術(Meijer等人，J Mol Biol 2006,358(3)：764-72；US 7,749,697；WO 2008/104184)執行。

從來自經致免疫OMT大鼠的經單細胞分選B細胞製備Symplex^TM抗體文庫，對於各個經分選B細胞該文庫含有同源的VH和VL編碼對。抗體庫表現構築體編碼完全人類的免疫球蛋白，其呈IgG1形式且帶有二個已知會減低IgG1抗體之Fc區之效應功能的突變(L234A/L235A)(Hezareh等人，J Virol.75(24)：12161-8(2001))。

使用FreeStyle^TM MAX試劑(Invitrogen)，以384槽孔形式使用表現構築體轉染CHO-S細胞以展示人類、食蟹獼猴或小鼠PD-1。此外，使用編碼不相關的蛋白質人類VEGFR2的對照組載體轉染另一個細胞族群並隨後將其用作為負對照組。為允許多重篩選設置，以1x10E6個細胞每ml的密度以1：1：1的比率混合以中強度羧基螢光素琥珀醯亞胺基酯(CFSE^inter)標記的對照組細胞、以高強度CFSE(CFSE^high)標記的經cyno PD-1轉染的細胞、和未經標記的經人類PD-1-轉染的細胞。在384槽孔盤中，混合40μl的此細胞混合物與10μl的含抗體上清液，並藉由添加山羊抗人類IgG(H+L)AF647二級抗體(Molecular Probes，Cat.No.A21445)顯現與細胞結合的抗體。平行地，於類似的設置中針對與人類(CFSE^pos)和小鼠PD-1(CFSE^neg)的結合篩選抗體。使用高通量流式細胞測量術(iQue® Screener,Intellicyt)獲得樣本並使用ForeCyt^®軟體藉由作圖CFSE vs.IgG結合(AF647)分析數據。PD-1專一性初級吻合被認定為與經人類(CSFE^neg)和食蟹獼猴PD-1轉染的細胞(CFSE^high)兩者結合但不與對照組細胞(CFSE^inter)結合的抗體植株，並收集盤編號和盤座標以用於吻合挑選和隨後的序列分析。亦挑選一些於第二篩選中展現針對小鼠PD-1的另外反應性的初級吻合(CFSE^neg)以用於進一步的分析。

結果

圖1(a)-1(d)顯示展現針對PD-1異種同源物的不同反應性的四個抗體植株之代表性流式細胞測量術點圖：(a)非專一性地與CHO-S細胞結合的抗體植株，(b)僅專一性地與經人類PD-1-轉染的細胞結合的抗體植株，(c)專一性地與人類和食蟹獼猴PD-1結合的抗體植株，和(d)與此篩選中所測試的所有三種PD-1物種結合的抗體植株。

(a)、(b)、(c)和(d)之各者中上面的點圖描繪針對與人類PD-1(huPD1)和食蟹獼猴PD-1(cynoPD1)相較於負對照組細胞(neg)的結合測試抗體的第一篩選回合。下面的點圖描繪針對與小鼠PD-1(moPD1)和人類PD-1(huPD1)的結合測試抗體的第二篩選回合。x軸(水平)顯示CFSE，且y軸(垂直)顯示人類IgG結合。

實施例2.抗體序列

藉由DNA定序分析篩選吻合並抽出編碼抗體的DNA序列。定序488個展現針對人類和食蟹獼猴PD-1兩者的交叉反應性的初級吻合。此顯示該抗PD-1吻合庫含有表現140個基因簇的254個獨特抗體。個別地表現所選抗體植株並如以下描述地測試其等之功能。以下描述於試管內分析中展現功能活性的十二種抗體。該十二種抗體之VH和VL域之蛋白質序列之編號係在表1中顯示。用以選殖可變VH和VL基因的免疫球蛋白恆定區(具有L234A/L235A突變的Ig重鏈(IgHC)和Ig κ輕鏈(IgKV))之序列編號係在表2中顯示。十二種功能性抗體之CDR之序列編號係在表3中顯示。此處的CDR序列係根據針對CDR1和CDR2的IMGT®定義決定。對於重鏈和輕鏈CDR3，此處的定義包括一個位於IMGT-CDR3之胺端的額外的胺基酸殘基(Cys)。

實施例3.抗體序列中的架構突變

執行實施例2之VH和VL胺基酸序列與人類生殖細胞系序列的排比以顯示該等VH和VL序列所源自的生殖細胞系基因。表4顯示對於各個植株之VH和VL的最接近的V-和J-生殖細胞系基因之指定、以及如於以下描述的架構突變之資訊。

因為該等抗體基因係藉由RT-PCR使用Symplex^TM抗體發現技術(Mejier等人，J Mol Biol 358：764-772(2006)；WO 2005/042774)以簡併引子分離，開頭的六個胺基酸傾向有不於該抗體序列之成熟期間發生的突變。因此，此等源自引子的突變可被突變回生殖細胞系序列而無減低結合親和力的風險。此等「經Symplex修正的」變體序列中的VH和VL之數目和特殊胺基酸取代係在表4中顯示。此外，於可變域之架構區中帶有體超突變(即於VH或VL中位於CDR之外的突變)的抗體可被變回最接近的V-或J-生殖細胞系之序列。在此等「生殖細胞系化」變體序列中可被變成生殖細胞系者的抗體架構中的數目和特殊胺基酸取代亦在表4中顯示。以下者會很明顯：表4中指出的「生殖細胞系化」變體突變(參見行「生殖細胞系化變體中的VH架構突變之數目」和「生殖細胞系化變體中的VH架構突變之突變」)包括任何「經Symplex修正的」突變以及位於開頭的六個胺基酸位置之外的突變。

如以上指出的，不預期於各個VH或VL序列中於開頭的六個胺基酸的源自引子的簡併突變之改變會惡化相較於來源抗體的結合特性。因此，較佳地，本發明之抗PD-1抗體包括以下表格中指出的「經Symplex修正的」突變。

至於位於各個序列之開頭的六個胺基酸位置之外的「生殖細胞系化變體」突變，可選擇此等突變之任一或多者。測定個別突變是否對一抗體之抗原結合特性具有負面效果可藉由以下者執行：製備具有所指出的突變的生殖細胞系化變體VH和VL序列並比較該抗體之抗原結合特性與具有相對應的來源或經Symplex修正的序列的親本之抗原結合特性。若觀察到結合親和力之減低或其他改變的結合特性，變體可(例如)使用2x2 VH/VL矩陣使用各個抗體之重鏈和輕鏈之經Symplex修正的變體和生殖細胞系化變體測試，即於此例子中對於各個抗體有四種組合。此允許測定是否生殖細胞系化VH和VL序列之一者或另一者或兩者對於任何觀察到的改變的結合特性有貢獻。供選擇地或另外地，可測試其中避免單一生殖細胞系化變體突變的相對應的抗體之系列以測定影響具有所有所列突變的生殖細胞系化變體之結合的特殊突變。

表5顯示來源序列以及相對應的經Symplex修正的和生殖細胞系化變體之VH和VL序列編號。基於表5中的編號，很明顯於一些例子中於來源序列和經Symplex修正的序列間或於經Symplex修正的序列和生殖細胞系化序列間無差異。對生殖細胞系架構殘基的突變係基於IMGT定義。於所附序列表中，所得的胺基酸取代被加底線並以粗體標記。

實施例4.針對PD-L1封阻活性的抗PD-1抗體之流式細胞測量術分析

此實施例描述藉由流式細胞測量術針對PD-L1封阻活性的抗PD-1抗體之測試。

方法

於細胞分析中研究PD-L1配體封阻活性，於該分析中在CHO-S細胞上重組地表現人類PD-1，並藉由流式細胞測量術分析經R-PE(R-phycoerythrin)標記的人類PD-L1-Fc嵌合蛋白質之結合。使用Lightning-Link^® R-Phycoerythrin綴合套組(Innova Biosciences,UK)使商業上可購得的重組PD-L1-Fc嵌合蛋白質(R&D Systems,USA)與R-PE綴合。暫時轉染CHO-S細胞以表現人類PD-1。接著在冰上以50μl的20μg/ml抗PD-1抗體培養細胞，然後添加50μl大約3.4μg/ml的經R-PE標記的PD-L1-Fc(最終濃度16.4nM)並進一步培養另外20min(最終抗PD-1抗體濃度：10μg/ml)。使用與APC(別藻藍蛋白)綴合的抗人類IgG輕鏈抗體偵測結合的抗體。藉由分別偵測R-PE和APC螢光的流式細胞測量術定量PD-L1和抗PD-1抗體之結合。

結果

此競爭實驗之結果係於圖2(a)-2(h)中呈現，其中X軸(水平)顯示PD-L1結合，且Y軸(垂直)顯示人類IgG結合。所有所測試的抗PD-1抗體於10μg/ml的最終抗體濃度皆能夠抑制PD-1與PD-L1的交互作用。將PD-L1與PD-1表現性細胞於非專一性抗體之存在下的結合用作為PD-L1封阻之負對照組。此外，呈現PD-L1於非封阻性抗體之存在下的結合代表圖。

實施例5. PD-1抗體對人類和食蟹獼猴PD-1 ECD抗原的親和力之測量

此實施例展示十二種功能性抗PD-1抗體如何展現針對人類PD-1的強結合親和力，具有範圍在低nM至中pM的K_D。相同的抗體亦以範圍在中至低nM的K_D與食蟹獼猴PD-1交叉反應。抗體18201和18400亦以範圍在中或低nM的K_D與小鼠PD-1交叉反應。

方法

藉由表面電漿子共振(SPR)使用連續流微點樣器(CFM，Wasatch Microfluidics,US)組合Ibis MX96 SPR儀器(IBIS Technologies，荷蘭)執行動力學結合分析。在G-a-hu-IgG Fc SensEye® SPR感應器(Ssens BV，荷蘭)上執行表面電漿子共振成像分析。在PBS-T(1x PBS，具有0.05% Tween 20，pH 7.4)中將以IgG₁ LALA形式(即具有突變L234A/L235A)表現的抗PD-1抗體稀釋至2.5nM。使用連續流微點樣器(CFM，Wasatch Microfluidics，鹽湖城，US)將抗體點樣至G-a-hu-IgG Fc SensEye®上共15分鐘。於點樣後，將SensEye®放置在IBIS MX96生物感應器中，並使用Fix It套組(Ssens BV，荷蘭)將抗體化學固定至感應器表面。動力學分析係藉由施加動力學滴定系列(Karlsson等人，Anal.Biochem.349(1)：136-47(2006))執行，其中以2nM至100nM的漸增濃度注射單體PD-1抗原且於各個抗原注射後無施用表面再生步驟。於三個分開的實驗中測試與人類PD-1 ECD(Acro Biosystems cat.no.PD1-H52219)、小鼠PD-1 ECD(Sino Biological.cat.no.50124-M08H)和食蟹獼猴PD-1 ECD(Acro BioSystems cat.no.PD1-C5223)的結合。執行抗原締合共15分鐘並執行抗原解離共60分鐘。於25℃下執行動力學分析。於完成後，使用Scrubber 2軟體將所記錄的結合反應擬合至簡單朗謬1：1結合模式以用於結合速率(k_on或k_a)、解離速率(k_off或k_d)和親和力(K_D)常數之計算。

結果

表面電漿子共振(SPR)結果係在以下表6中顯示。大體而言，抗體有高親和力且所有所測試的抗體皆與食蟹獼猴PD-1交叉反應。抗體18201和18400亦與小鼠PD-1交叉反應，而此指出相較於其他PD-1抗體(包括參考抗體、派姆單抗和納武單抗(其等不與小鼠PD-1交叉反應))，被此二種抗體辨識的表位係獨特的。此等特性係有利的，因為其等允許該等抗體於在人類對象中測試前在非人類靈長類動物或鼠類模型中直接測試。

實施例6.抗PD-1單株抗體之試管內功能性評估

此實施例展示該十二種抗PD-1抗體於以下二種不同的功能性分析中表現如何：葡萄球菌腸毒素B(SEB)全血分析和單向混合淋巴細胞反應(MLR)。該十二種抗PD-1 mAb於經SEB處理的全血分析中刺激IL-2製造或於該單向MLR分析中刺激干擾素γ(IFN-γ)之製造的能力係如以下描述地評估。

方法

SEB係一種與第II型MHC分子和T細胞受體(TCR)之特殊Vβ區域結合並驅動T細胞之非專一性刺激的超抗原。此造成多株T細胞活化/增殖和細胞介素釋放，包括IL-2和IFN-γ。以1μg/ml將SEB加至全血，並於培養二日後，收穫上清液並藉由常規ELISA測定IL-2水平。

於單向MLR分析中，共培養自兩名不同的健康捐贈者分離的樹突細胞(DC)和CD4-陽性(CD4⁺)T細胞以誘發同種抗原專一性反應，導致細胞介素製造和T細胞活化/增殖。樹突細胞係於以20ng/ml顆粒細胞-巨噬細胞集落-刺激性因子(GM-CSF)和20ng/ml介白素-4(IL-4)培養六日時自CD14⁺單核細胞分化，並將其以1：10的比率與從來自健康捐贈者材料的周邊血液單核細胞(PBMC)分離的CD4⁺ T細胞混合。於培養5日後，收穫上清液，並使用Meso Scale電致化學發光(MSD)細胞介素分析測定IFN-γ水平。

藉由該等抗體起始濃度為50μg/ml的二倍稀釋產生劑量反應曲線。

結果

該十二種抗體於SEB全血分析和單向MLR分析中的劑量反應曲線係分別於圖3(a)-3(f)和圖4(a)-4(f)中顯示。圖上的各點代表三個重複之平均，而誤差槓代表SEM。發現該等抗體之所有者於SEB全血分析中皆會誘發IL-2製造之劑量依賴性增加且於MLR分析中皆會誘發IFN-γ製造之劑量依賴性增加。

實施例7.抗PD-1單株抗體表位分倉

此實施例闡明抗PD-1抗體如何基於成對競爭模式分組至表位倉中。屬於不同的表位倉的抗體辨識PD-1 ECD上不同的表位。

方法

藉由表面電漿子共振(SPR)分析使用使用連續流微點樣器(CFM)(Wasatch Microfluidics，US)組合IBIS MX96 SPR儀器(IBIS Technologies，荷蘭)執行成對抗體競爭之研究。在G-a-hu-IgG Fc SensEye® SPR感應器(Ssens BV，荷蘭)上執行表面電漿子共振成像分析。在含有0.05% Tween 20(PBS-T)，pH 7.0的PBS緩衝液中將總共十八種抗PD-1抗體(人類，IgG1)稀釋至10μg/mL。藉由使用連續流微點樣器點樣15分鐘使抗體被捕捉至抗Fc感應器表面上。於點樣後，將SensEye®放置於IBIS MX96生物感應器中並藉由注射30μg/mL非專一性人類IgG1封阻殘餘的抗Fc位置。使用FixIt套組(Ssens BV，荷蘭)使被捕捉的抗體綴合至該表面。於感應器製備後，使用標準三明治分析執行抗體競爭分析。在HBS-EP運作緩衝液中稀釋單價PD-1 ECD抗原(Sino Biological，中國)和並以50nM的濃度注射之並藉由抗PD-1抗體之綴合陣列捕捉之。接著。執行被在HBS-EP運作緩衝液中稀釋至100nM的該十八種PD-1抗體之各者之個別注射以建立抗體競爭模式。於各個競爭循環後，以10mM甘胺酸HCl緩衝液，pH 2.0再生感應器表面。

結果

十八種抗PD-1抗體之競爭模式係在圖5中呈現。未發現抗體12866和12807於基於細胞的分析中具有功能活性(數據未來顯示)，但包括其等，因為其等辨識對於界定其他表位倉之特徵有用的不同表位。所測試的抗PD1抗體可被分至兩個主要的非重疊表位倉。屬於表位倉1的功能性抗體皆交叉封阻彼此，且可進一步基於抗體12866和12807之封阻分至子倉中。例如，封阻mAb 12866和12807兩者的抗體被分至表位倉1C。表位倉1C包括抗體18366、18483、18113、18247、18040、和18250。表位倉1D中的抗體包括納武單抗類似物(「Nivo」)和18049且特徵在於封阻mAb 12866但非12807。屬於表位倉1E的抗體之特徵在於僅僅封阻mAb 12807。表位倉1E包括派姆單抗類似物(「Pembro」)和抗體18098、18201、18400、18413、和18325。

抗體12760和13112不封阻PD-L1和PD-L2配體，且被分至分開的表位倉2，因為其等交叉封阻彼此但不封阻來自表位倉1的抗體之任何者之結合。抗體12760和13112類似地與PD-1上不與PD-L1和PD-L2配體結合位置重疊的位置結合。

序列表

SEQ ID NO：1

於位置35的X係N或S

於位置84的X係D或N

SEQ ID NO：2

於位置1的X係E或D

於位置40的X係F或A

於位置55的X係F或Y

SEQ ID NO：3

SEQ ID NO：4

於位置1的X係E或D

於位置3的X係V或Q

於位置53的X係N或S

SEQ ID NO：5

於位置1的X係Q或E

於位置5的X係Q或V

於位置13的X係R或Q

於位置35的X係N或S

於位置46的X係V或E

於位置50的X係T或A

於位置77的X係S或N

於位置80的X係F或Y

於位置115的X係T或M

SEQ ID NO：6

於位置4的X係L或M

SEQ ID NO：7

於位置64的X係A或V

SEQ ID NO：8

於位置3的X係Q或V

於位置4的X係L或M

於位置69的X係R或S

SEQ ID NO：9

於位置5的X係V或Q

於位置59的X係T或N

於位置76的X係R或K

於位置83的X係M或L

SEQ ID NO：10

於位置1的X係D或A

SEQ ID NO：11

於位置10的X係D或G

於位置16的X係R或G

SEQ ID NO：12

於位置1的X係E或D

於位置4的X係L或M

於位置55的X係F或Y

於位置93的X係F或Y

SEQ ID NO：13

於位置5的X係Q或V

於位置50的X係H或Y

於位置59的X係D或Y

於位置61的X係V或A

SEQ ID NO：14

於位置3的X係Q或V

於位置4的X係L或M

於位置55的X係S或Y

SEQ ID NO：15

於位置1的X係Q或E

於位置5的X係Q或V

於位置6的X係Q或E

於位置35的X係N或S

於位置49的X係A或S

於位置50的X係T或A

於位置73的X係G或D

於位置78的X係M或T

SEQ ID NO：16

於位置1的X係E或D

於位置3的X係V或Q

於位置4的X係L或M

SEQ ID NO：17

於位置1的X係Q或E

於位置6的X係Q或E

SEQ ID NO：18

於位置1的X係E或D

於位置40的X係L或A

於位置55的X係F或Y

SEQ ID NO：19

於位置2的X係L或V

於位置43的X係K或G

於位置49的X係V或I

於位置59的X係S或N

於位置70的X係M或I

於位置111的X係P或Q

SEQ ID NO：20

於位置1的X係E或A

於位置3的X係V或Q

於位置10的X係P或S

SEQ ID NO：21

於位置48的X係L或V

於位置50的X係T或A

SEQ ID NO：22

於位置4的X係L或M

於位置12的X係P或S

SEQ ID NO：23

於位置1的X係Q或E

於位置5的X係Q或V

於位置6的X係Q或E

於位置35的X係N或S

SEQ ID NO：24

於位置3的X係Q或V

於位置40的X係L或A

於位置55的X係F或Y

恆定抗體序列

SEQ ID NO：25(IgHC DNA序列)

SEQ ID NO：26(IgHC蛋白質序列)

SEQ ID NO：27(IgKC DNA序列)

SEQ ID NO：28(IgKC蛋白質序列)

SEQ ID NO：29(18040/18113/18247 H-CDR1)GFTFSDYY

SEQ ID NO：30(18040 H-CDR2)ISSTGSTI

SEQ ID NO：31(18040 H-CDR3)CARATNWGSDY

SEQ ID NO：32(18040/18366 L-CDR1)QSVLYSSNNKNY

SEQ ID NO：33(18040/18247/18250/18366/18483 L-CDR2)WAS

SEQ ID NO：34(18040/18250/18366/18483 L-CDR3)CQQYYSTPYT

SEQ ID NO：35(18049 H-CDR1)GFTFSNYG

SEQ ID NO：36(18049 H-CDR2)IWYDGSDK

SEQ ID NO：37(18049 H-CDR3)CAGGGNYYGDF

SEQ ID NO：38(18049/18201/18400 L-CDR1)QGIRND

SEQ ID NO：39(18049 L-CDR2)VAS

SEQ ID NO：40(18049 L-CDR3)CLQYNSYPWT

SEQ ID NO：41(18098 H-CDR1)GFTFSSFA

SEQ ID NO：42(18098 H-CDR2)ITGGGTTS

SEQ ID NO：43(18098/18325 H-CDR3)CAKWGSWSAGAFDI

SEQ ID NO：44(18098/18325 L-CDR1)QGISSW

SEQ ID NO：45(18098/18201/18325/18400/18413 L-CDR2)AAS

SEQ ID NO：46(18098/18325 L-CDR3)CQQANSFPWT

SEQ ID NO：47(18113 H-CDR2)ISSSGSTI

SEQ ID NO：48(18113/18247 H-CDR3)CARDTNWAFDY

SEQ ID NO：49(18113 L-CDR1)QSVFYSANNKNY

SEQ ID NO：50(18113 L-CDR2)WTS

SEQ ID NO：51(18113/18247 L-CDR3)CQQFYSTPRT

SEQ ID NO：52(18201 H-CDR1)GGSISSNNW

SEQ ID NO：53(18201 H-CDR2)IYHDGTT

SEQ ID NO：54(18201 H-CDR3)CARGDWGSGAFDI

SEQ ID NO：55(18201/18400 L-CDR3)CLQDYNYPRT

SEQ ID NO：56(18247 H-CDR2)ISSSSSTI

SEQ ID NO：57(18247/18250/18483 L-CDR1)QSVFYSSNNKNY

SEQ ID NO：58(18250 H-CDR1)GFTFRDYY

SEQ ID NO：59(18250 H-CDR2)ISSSGSII

SEQ ID NO：60(18250 H-CDR3)CARDTNWALDY

SEQ ID NO：61(18325 H-CDR1)GFTFSSHV

SEQ ID NO：62(18325 H-CDR2)ISGSGVDT

SEQ ID NO：63(18366 H-CDR1)GFTFSSYW

SEQ ID NO：64(18366 H-CDR2)IKQDGSEK

SEQ ID NO：65(18366 H-CDR3)CARDTNWGFDN

SEQ ID NO：66(18400 H-CDR1)GGSISSSNW

SEQ ID NO：67(18400 H-CDR2) IFHDGTT

SEQ ID NO：68(18400 H-CDR3)CARGNWGSGALDI

SEQ ID NO：69(18413 H-CDR1)GFTFSSFV

SEQ ID NO：70(18413 H-CDR2)ISGGGGST

SEQ ID NO：71(18413 H-CDR3)CAKDWDLYYFDY

SEQ ID NO：72(18413 L-CDR1)QGISNW

SEQ ID NO：73(18413 L-CDR3)CQQANSFPLT

SEQ ID NO：74(18483 H-CDR1)GFTFSDYW

SEQ ID NO：75(18483 H-CDR2)IKEDGNEK

SEQ ID NO：76(18483 H-CDR3)CARDTNWGSDY

SEQ ID NO：77

SEQ ID NO：78

SEQ ID NO：79

SEQ ID NO：80

SEQ ID NO：81

SEQ ID NO：82

SEQ ID NO：83

SEQ ID NO：84

SEQ ID NO：85

SEQ ID NO：86

SEQ ID NO：87

SEQ ID NO：88

SEQ ID NO：89

SEQ ID NO：90

SEQ ID NO：91

SEQ ID NO：92

SEQ ID NO：93

SEQ ID NO：94

SEQ ID NO：95

SEQ ID NO：96

SEQ ID NO：97

SEQ ID NO：98

SEQ ID NO：99

SEQ ID NO：100

SEQ ID NO：101

SEQ ID NO：102

SEQ ID NO：103

SEQ ID NO：104

SEQ ID NO：105

SEQ ID NO：106

SEQ ID NO：107

SEQ ID NO：108

SEQ ID NO：109

SEQ ID NO：110

SEQ ID NO：111

SEQ ID NO：112

SEQ ID NO：113

SEQ ID NO：114

SEQ ID NO：115 GGGGSGGGGSGGGGS

<110> 賽門弗鎮公司

<120> 抗PD-1抗體及組成物

<130> 022675.WO056

<140>

<141>

<150> 62/424,163

<151> 2016-11-18

<160> 115

<170> PatentIn第3.5版

<210> 1

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (35)..(35)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 變體

<222> (84)..(84)

<223> /置換="Asn"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(117)

<223> /註釋="此序列中給出的變體殘基對於該等於注解中者對於變體位置沒有偏好"

<400> 1

<210> 2

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Asp"

<220>

<221> 變體

<222> (40)..(40)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 變體

<222> (55)..(55)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(113)

<400> 2

<210> 3

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 3

<210> 4

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Asp"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /置換="Gln"

<220>

<221> 變體

<222> (53)..(53)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(107)

<400> 4

<210> 5

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

>220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (13)..(13)

<223> /置換="Gln"

<220>

<221> 變體

<222> (35)..(35)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 變體

<222> (46)..(46)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 變體

<222> (50)..(50)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 變體

<222> (77)..(77)

<223> /置換="Asn"

<220>

<221> 變體

<222> (80)..(80)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 變體

<222> (115)..(115)

<223> /置換="Met"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(120)

<400> 5

<210> 6

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /置換="Met"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(107)

<400> 6

<210> 7

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (64)..(64)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(117)

<400> 7

<210> 8

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /置換="Met"

<220>

<221> 變體

<222> (69)..(69)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(113)

<400> 8

<210> 9

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /置換="Gln"

<220>

<221> 變體

<222> (59)..(59)

<223> /置換="Asn"

<220>

<221> 變體

<222> (76)..(76)

<223> /置換="Lys"

<220>

<221> 變體

<222> (83)..(83)

<223> /置換="Leu"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(119)

<400> 9

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(107)

<400> 10

<210> 11

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (10)..(10)

<223> /置換="Gly"

<220>

<221> 變體

<222> (16)..(16)

<223> /置換="Gly"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(117)

<400> 11

<210> 12

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Asp"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /置換="Met"

<220>

<221> 變體

<222> (55)..(55)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 變體

<222> (93)..(93)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(113)

<400> 12

<210> 13

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (50)..(50)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 變體

<222> (59)..(59)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 變體

<222> (61)..(61)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(117)

<400> 13

<210> 14

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /置換="Met"

<220>

<221> 變體

<222> (55)..(55)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(113)

<400> 14

<210> 15

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 變體

<222> (35)..(35)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 變體

<222> (49)..(49)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 變體

<222> (50)..(50)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 變體

<222> (73)..(73)

<223> /置換="Asp"

<220>

<221> 變體

<222> (78)..(78)

<223> /置換="Thr"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(120)

<400> 15

<210> 16

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Asp"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /置換="Gln"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /置換="Met"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(107)

<400> 16

<210> 17

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(117)

<400> 17

<210> 18

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Asp"

<220>

<221> 變體

<222> (40)..(40)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 變體

<222> (55)..(55)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(113)

<400> 18

<210> 19

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (2)..(2)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (43)..(43)

<223> /置換="Gly"

<220>

<221> 變體

<222> (49)..(49)

<223> /置換="Ile"

<220>

<221> 變體

<222> (59)..(59)

<223> /置換="Asn"

<220>

<221> 變體

<222> (70)..(70)

<223> /置換="Ile"

<220>

<221> 變體

<222> (111)..(111)

<223> /置換="Gln"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(119)

<400> 19

<210> 20

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /置換="Gln"

<220>

<221> 變體

<222> (10)..(10)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(107)

<400> 20

<210> 21

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (48)..(48)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (50)..(50)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(118)

<400> 21

<210> 22

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /置換="Met"

<220>

<221> 變體

<222> (12)..(12)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(107)

<400> 22

<210> 23

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /置換="Glu"

<220>

<221> 變體

<222> (35)..(35)

<223> /置換="Ser"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(117)

<400> 23

<210> 24

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /置換="Val"

<220>

<221> 變體

<222> (40)..(40)

<223> /置換="Ala"

<220>

<221> 變體

<222> (55)..(55)

<223> /置換="Tyr"

<220>

<221> 雜項_特徵

<222> (1)..(113)

<400> 24

<210> 25

<211> 990

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多核苷酸"

<400> 25

<210> 26

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 26

<210> 27

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多核苷酸"

<400> 27

<210> 28

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 28

<210> 29

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 29

<210> 30

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 30

<210> 31

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 31

<210> 32

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 32

<210> 33

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 33

<210> 34

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 34

<210> 35

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 35

<210> 36

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 36

<210> 37

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 37

<210> 38

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 38

<210> 39

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 39

<210> 40

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 40

<210> 41

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 41

<210> 42

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 42

<210> 43

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 43

<210> 44

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 44

<210> 45

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 45

<210> 46

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 46

<210> 47

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 47

<210> 48

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 48

<210> 49

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 49

<210> 50

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽" <400> 50

<210> 51

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 51

<210> 52

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 52

<210> 53

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 53

<210> 54

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 54

<210> 55

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 55

<210> 56

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 56

<210> 57

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 57

<210> 58

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 58

<210> 59

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 59

<210> 60

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 60

<210> 61

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 61

<210> 62

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 62

<210> 63

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 63

<210> 64

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 64

<210> 65

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 65

<210> 66

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 66

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 67

<210> 68

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 68

<210> 69

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 69

<210> 70

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 70

<210> 71

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 71

<210> 72

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 72

<210> 73

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 73

<210> 74

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 74

<210> 75

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 75

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的胜肽"

<400> 76

<210> 77

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 77

<210> 78

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 78

<210> 79

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 79

<210> 80

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 80

<210> 81

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 81

<210> 82

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 82

<210> 83

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 83

<210> 84

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 84

<210> 85

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 85

<210> 86

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 86

<210> 87

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 87

<210> 88

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 88

<210> 89

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 89

<210> 90

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 90

<210> 91

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 91

<210> 92

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 92

<210> 93

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

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<221> 來源

<223> /註釋="人工序列之描述：合成的多肽"

<400> 93

<210> 94

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<400> 94

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<213> 人工序列

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<400> 115

Claims

一種抗PD-1抗體或其抗原結合部分，其中該抗體和以下者競爭與人類PD-1的結合，或和以下者與相同的人類PD-1之表位結合：抗體18040、18049、18098、18113、18201、18247、18250、18325、18366、18400、18413或18483。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29-31之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：1之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：1和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：32-34之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：2和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29-34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：1之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：2之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：2 之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：1和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：2和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：35-37之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：3和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：38-40之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：4和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：35-40之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：3之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：3和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：4和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：41-43之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：5和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：44-46之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：6之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：6和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：41-46之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：5之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：6之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：5和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：6和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗 PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、47和48之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：7之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：7和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：49-51之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：8之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：8和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、47、48和49-51之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：7之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：8之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：7和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：8和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組： a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：52-54之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：9之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：9和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：38、45和55之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：10之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：10和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：52-54和38、45和55之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：9之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：10之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：9和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：10和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、56和48之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：1之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：11和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：57、33和51之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：12之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：12和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：29、56和48和57、33和51之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：11之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：12之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：11和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：12和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：58-60之胺基酸序列的抗體； b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：13之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：13和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：57、33和34之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：14之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：14和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：58-60和57、33和34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：13之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：14之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：13和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：14和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：61、62和43之胺基酸序列的抗體； b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：15和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：44-46之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：16之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：16和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：61、62和43和44-46之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：15之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：16之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：15和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：16和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：63-65之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：17之胺基酸序列至少90%一致的抗體； c)其VH包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：17和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：32-34之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：18之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：18和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：63-65和32-34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：17之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：18之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：17和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：18和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：66-68之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：19之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：19和26之胺基酸序列的抗體； e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：38、45和55之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：20之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：20和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：66-68和38、45和55之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：19之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：20之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：19和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：20和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：69-71之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：21之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：21和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：72、45和73之胺基酸序列的抗體；f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：22之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：22和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：69-71和72、45和73之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：21之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：22之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：21和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：22和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第1項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗PD-1抗體係選自由以下者所組成的群組：a)其H-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：74-76之胺基酸序列的抗體；b)其重鏈可變域(VH)在序列上與SEQ ID NO：23之胺基酸序列至少90%一致的抗體；c)其VH包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列的抗體；d)其重鏈(HC)包含SEQ ID NO：23和26之胺基酸序列的抗體；e)其L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：57、33和34之胺基酸序列的抗體； f)其輕鏈可變域(VL)在序列上與SEQ ID NO：24之胺基酸序列至少90%一致的抗體；g)其VL包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的抗體；h)其輕鏈(LC)包含SEQ ID NO：24和28之胺基酸序列的抗體；i)其H-CDR1-3和L-CDR1-3分別包含SEQ ID NO：74-76和57、33和34之胺基酸序列的抗體；j)其VH在序列上與SEQ ID NO：23之胺基酸序列至少90%一致且其VL在序列上與SEQ ID NO：24之胺基酸序列至少90%一致的抗體；k)其VH包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列且其VL包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列的抗體；和l)其HC包含SEQ ID NO：23和26之胺基酸序列且其LC包含SEQ ID NO：24和28之胺基酸序列的抗體。
根據申請專利範圍第2項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，其中：位於位置35的X係S，及/或位於位置84的X係N。
根據申請專利範圍第2或14項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係D；且視需要地其中：位於位置40的X係A，及/或位於位置55的X係Y。
根據申請專利範圍第3項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列。
根據申請專利範圍第3或16項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係D，且位於位置3的X係Q；且視需要地其中：位於位置53的X係S。
根據申請專利範圍第4項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係E，且位於位置5的X係V；且視需要地其中：位於位置13的X係Q，位於位置35的X係S，位於位置46的X係E，位於位置50的X係A，位於位置77的X係N，位於位置80的X係Y，及/或位於位置115的X係M。
根據申請專利範圍第4或18項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列，其中：位於位置4的X係M。
根據申請專利範圍第5項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列，視需要地其中：位於位置64的X係V。
根據申請專利範圍第5或20項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，其中：位於位置3的X係V，且位於位置4的X係M；且視需要地其中：位於位置69的X係S。
根據申請專利範圍第6項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列，其中：位於位置5的X係Q；且視需要地其中：位於位置59的X係N，位於位置76的X係K，及/或位於位置83的X係L。
根據申請專利範圍第6或22項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係A。
根據申請專利範圍第7項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列，視需要地其中：位於位置10的X係G，及/或位於位置16的X係G。
根據申請專利範圍第7或24項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係D，且位於位置4的X係M；且視需要地其中：位於位置55的X係Y，及/或位於位置93的X係Y。
根據申請專利範圍第8項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列，其中：位於位置5的X係V；且視需要地其中：位於位置50的X係Y，位於位置59的X係Y，及/或位於位置61的X係A。
根據申請專利範圍第8或26項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列，其中：位於位置3的X係V，且位於位置4的X係M；且視需要地其中：位於位置55的X係Y。
根據申請專利範圍第9項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係E，位於位置5的X係V，且位於位置6的X係E；且視需要地其中：位於位置35的X係S，位於位置49的X係S，位於位置50的X係A，位於位置73的X係D，及/或位於位置78的X係T。
根據申請專利範圍第9或28項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係D，位於位置3的X係Q，且位於位置4的X係M。
根據申請專利範圍第10項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係E，且位於位置6的X係E。
根據申請專利範圍第10或30項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係D；且視需要地其中：位於位置40的X係A，及/或位於位置55的X係Y。
根據申請專利範圍第11項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列，其中：位於位置2的X係V；且視需要地其中：位於位置43的X係G，位於位置49的X係I，位於位置59的X係N，位於位置70的X係I，及/或位於位置111的X係Q。
根據申請專利範圍第11或32項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係A，和位於位置3的X係Q；且視需要地其中：位於位置10的X係S。
根據申請專利範圍第12項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列，視需要地其中：位於位置48的X係V，及/或位於位置50的X係A。
根據申請專利範圍第12或34項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列，其中：位於位置4的X係M；且視需要地其中：位於位置12的X係S。
根據申請專利範圍第13項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VH包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列，其中：位於位置1的X係E，位於位置5的X係V，且位於位置6的X係E；且視需要地其中位於位置35的X係S。
根據申請專利範圍第13或36項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該VL包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列，其中：位於位置3的X係V；且視需要地其中：位於位置40的X係A，及/或位於位置55的X係Y。
一種抗PD-1抗體或其抗原結合部分，其中該抗體包含以下者之H-CDR1-3和L-CDR1-3胺基酸序列：a)分別為SEQ ID NO：29、30、31、32、33、和34； b)分別為SEQ ID NO：35、36、37、38、39、和40；c)分別為SEQ ID NO：41、42、43、44、45、和46；d)分別為SEQ ID NO：29、47、48、49、50、和51；e)分別為SEQ ID NO：52、53、54、38、45、和55；f)分別為SEQ ID NO：29、56、48、57、33、和51；g)分別為SEQ ID NO：58、59、60、57、33、和34；h)分別為SEQ ID NO：61、62、43、44、45、和46；i)分別為SEQ ID NO：63、64、65、32、33、和34；j)分別為SEQ ID NO：66、67、68、38、45、和55；k)分別為SEQ ID NO：69、70、71、72、45、和73；或l)分別為SEQ ID NO：74、75、76、57、33、和34。
一種抗PD-1抗體或其抗原結合部分，其中該抗體包含重鏈可變域和輕鏈可變域，其中該重鏈可變域和輕鏈可變域具有以下者之胺基酸序列：a)分別為SEQ ID NO：1和2；b)分別為SEQ ID NO：3和4；c)分別為SEQ ID NO：5和6；d)分別為SEQ ID NO：7和8；e)分別為SEQ ID NO：9和10；f)分別為SEQ ID NO：11和12；g)分別為SEQ ID NO：13和14；h)分別為SEQ ID NO：15和16；i)分別為SEQ ID NO：17和18； j)分別為SEQ ID NO：19和20；k)分別為SEQ ID NO：21和22；或l)分別為SEQ ID NO：23和24。
一種抗PD-1抗體，其包含：a)具有SEQ ID NO：1和26之胺基酸序列的重鏈(HC)和具有SEQ ID NO：2和28之胺基酸序列的輕鏈(LC)；b)具有SEQ ID NO：3和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：4和28之胺基酸序列的LC；c)具有SEQ ID NO：5和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：6和28之胺基酸序列的LC；d)具有SEQ ID NO：7和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：8和28之胺基酸序列的LC；e)具有SEQ ID NO：9和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：10和28之胺基酸序列的LC；f)具有SEQ ID NO：11和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：12和28之胺基酸序列的LC；g)具有SEQ ID NO：13和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：14和28之胺基酸序列的LC；h)具有SEQ ID NO：15和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：16和28之胺基酸序列的LC；i)具有SEQ ID NO：17和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：18和28之胺基酸序列的LC； j)具有SEQ ID NO：19和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：20和28之胺基酸序列的LC；k)具有SEQ ID NO：21和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：22和28之胺基酸序列的LC；或l)具有SEQ ID NO：23和26之胺基酸序列的HC和具有SEQ ID NO：24和28之胺基酸序列的LC。
根據前述申請專利範圍請求項中之任一項的抗PD-1抗體，其中該抗體係IgG同型的。
根據申請專利範圍第41項的抗PD-1抗體，其中該抗體係IgG同型IgG1亞型的。
根據申請專利範圍第42項的抗PD-1抗體，其中該抗體於其F _C區包含至少一個突變。
根據申請專利範圍第43項的抗PD-1抗體，其中該抗體於重鏈胺基酸位置228、234和235之一或多者包含突變，該等位置係根據IMGT編號方案編號。
根據申請專利範圍第44項的抗PD-1抗體，其中位於位置234和235的胺基酸殘基之一或兩者被突變成Ala，及/或其中位於位置228的胺基酸殘基被突變成Pro。
根據申請專利範圍第1-45項中之任一項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗體或部分具有以下特性之至少一者：a)以4 x 10 ^-8M或更低的K _D與食蟹獼猴PD-1結合；b)以2 x 10 ^-8M或更低的K _D與小鼠PD-1結合； c)以3 x 10 ^-9M或更低的K _D與人類PD-1結合；d)於10μg/ml的濃度抑制PD-1與PD-L1的交互作用；e)於SEB全血分析中刺激IL-2製造；和f)於單向混合淋巴細胞反應分析中刺激IFN-γ製造。
根據申請專利範圍第1-46項中之任一項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗體或部分與至少一個選自抗體18366、18250、18040、18247、18113、或18483的抗體競爭與人類PD-1的結合。
根據申請專利範圍第1-46項中之任一項的抗PD-1抗體或抗原結合部分，其中該抗體或部分與至少一個選自抗體12760和13112的抗體競爭與人類PD-1的結合。
一種醫藥組成物，其包含至少一種根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體或其抗原結合部分和醫藥上可接受的賦形劑。
根據申請專利範圍第47項的醫藥組成物，其包含一種根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體或其抗原結合部分和醫藥上可接受的賦形劑。
一種經分離的核酸分子，其包含編碼根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或編碼根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、或兩者。
一種載體，其包含根據申請專利範圍第51項的經分離的核酸分子，其中該載體進一步包含表現控制序列。
一種宿主細胞，其包含編碼根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體之重鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列、和編碼根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體之輕鏈或其抗原結合部分的核苷酸序列。
一種用於製造根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗體或抗原結合部分的方法，其包含提供根據申請專利範圍第48項的宿主細胞、於適用於該抗體或部分之表現的條件下培養該宿主細胞、和分離所得的抗體或部分。
一種雙專一性結合分子，其具有任二種不同的根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體或其抗原結合部分之結合專一性。
一種用於在有需要的患者中增強免疫性的方法，其包含將根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體或抗原結合部分、根據申請專利範圍第49或50項的醫藥組成物、或根據申請專利範圍第55項的雙專一性結合分子投予至該患者。
一種用於治療患者之癌症的方法，其包含將根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗體或抗原結合部分、根據申請專利範圍第49或50項的醫藥組成物、或根據申請專利範圍第55項的雙專一性結合分子投予至該患者。
根據申請專利範圍第57項的方法，其中該癌症源於選自由皮膚、肺臟、腸、結腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟所組成的群組的組織。
根據申請專利範圍第57項的方法，其中該癌症係選自由晚期或轉移性黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸鱗狀細胞癌、膀胱癌、胃癌、腎細胞癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、或霍奇金氏淋巴瘤所組成的群組。
根據申請專利範圍第56-59項中之任一項的方法，其進一步包含將免疫刺激劑、疫苗、化學治療劑、抗贅瘤劑、抗血管形成劑、酪胺酸激酶抑制劑、PD-1途徑抑制劑、或放射線治療投予至該患者。
一種根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗PD-1抗體或抗原結合部分之用途，其係用於製造用於增強患者之免疫性或治療患者之癌症的醫藥品。
一種根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗體或抗原結合部分或根據申請專利範圍第55項的雙專一性結合分子，其係用於增強患者之免疫性或治療患者之癌症。
根據申請專利範圍第62項的供使用的抗體或抗原結合部分或雙專一性結合分子，其中該癌症源於選自由皮膚、肺臟、腸、結腸、卵巢、腦、前列腺、腎臟、軟組織、造血系統、頭頸、肝臟、膀胱、乳房、胃、子宮和胰臟所組成的群組的組織。
根據申請專利範圍第62項的供使用的抗體或抗原結合部分或雙專一性結合分子，其中該癌症係選自由晚期或轉移性黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸鱗狀細胞癌、膀胱癌、胃癌、腎細胞癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、或霍奇金氏淋巴瘤所組成的群組。
根據申請專利範圍第62-64項中之任一項的供使用的抗體或抗原結合部分或雙專一性結合分子，其中該使用進一步包含將免疫刺激劑、疫苗、化學治療劑、抗贅瘤劑、抗血管形成劑、酪胺酸激酶抑制劑、PD-1途徑抑制劑、或放射線治療投予至該患者。
一種製品，其包含根據申請專利範圍第1-48項中之任一項的抗體或抗原結合部分或根據申請專利範圍第55項的雙專一性結合分子，其中該製品適用於增強患者之免疫性或治療患者之癌症。