TW201819398A

TW201819398A - 治療性肽

Info

Publication number: TW201819398A
Application number: TW106133165A
Authority: TW
Inventors: 肯尼Ｃ康帝; 肯特Ｋ官史黛夫; 雷米梅根; 溫蒂羅; 永妗姚; 亮禎顏
Original assignee: 美商寇峇有限公司
Priority date: 2016-09-28
Filing date: 2017-09-27
Publication date: 2018-06-01
Also published as: AU2017336440A1; WO2018064098A1; US20210363187A1; US11111271B2; CN110072883A; AU2017336440B2; CA3038292A1; US11332497B2; IL265463A; US20220242912A1; MX392374B; EP3519431A1; KR20190057110A; MX2019003567A; US20200181197A1; JP2020501514A; US11753445B2; JP7035033B2

Abstract

在此所提供係肽及肽類似物、以及治療代謝疾病(例如，肥胖病、糖尿病)之方法、治療癌症之方法、治療肝病之方法、以及調節脂肪酸代謝之方法。

Description

治療性肽

[以引用方式併入以電子方式提交之材料]

與本說明書同時呈送且具有如下標識之電腦可讀取核苷酸/氨基酸序列表之全部內容以引用方式併入本案中：2017年9月21日創建且檔案名為「51155A_SeqListing.txt」之124,437位元組ACII(文字)檔案。

在2011年至2014年期間，美國20歲或更大年齡之成年人中，三分之一以上者肥胖(Ogden et al.,Prevalence of Obesity Among Adults and Youth：United States,2011-2014，NCHS Data Brief,No.219(November 2015))。在該時間段內，美國兒童(2歲至19歲)中之肥胖發生率係17%。(上文之Ogden，2015)。肥胖係發生許多健康問題之危險因素，此等健康問題包含：代謝症候群、胰島素抗性、2型糖尿病、脂肪性肝疾病、心血管疾病、阻塞性睡眠呼吸中止症、中風、高血壓、骨關節炎、生殖問題、以及癌症(美國國家心臟、肺及血液研究所(National Heart,Lung,and Blood Institute)之文獻：http：//www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/obe/risks)。

糖尿病係與肥胖有關之疾病，在2010年，糖尿病係美國第七大致死原因。在2012年，9.3%之美國人口(或2910萬人)患有糖尿病，並且估計美國接近208,000名兒童被診斷患有糖尿病。每年美國有140萬人被診斷患有糖尿病。糖尿病與幾種併發症及複合病變疾病有關，包含：低血糖症、高血壓、血脂異常症、心血管疾病、中風、失明、糖尿病視網膜病變、腎臟病、以及截肢。根據美國糖尿病協會(American Diabetes Association)，美國2012年診斷之糖尿病總成本估計達2450億美元(Diabetes Care 36：1033-1046(April 2013))。該成本突出說明了糖尿病對美國社會造成之可觀負擔。

儘管在2000年至2015年期間，美國食品與藥品管理局(U.S.Food and Drug Administration)批准了35種以上之藥物，然而仍需要提供更佳之肥胖症及糖尿病療法。

非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)係過量脂肪在肝中以甘油三酯(脂肪變性)之形式積累之疾病。在美國，NAFLD係慢性肝病最常見之形式，感染人數多達8000萬人，特別係40多歲及50多歲者。除了與肝有關之發病率及死亡率外，愈來愈多之證據表明NAFLD係一種多系統疾病，增大了2型糖尿病、心血管疾病以及心臟病、癌症及慢性腎臟病之風險。儘管NAFLD患者中之大多數死亡可歸因於心血管疾病，然而美國多達1500萬人亦患有肝細胞損傷及炎症，此為一種稱為非酒精性脂肪性肝炎(Non-Alcoholic SteatoHepatitis，NASH)之疾病。NASH最常發生於中年人及超重或肥胖者中，在美國屬於肝硬化之主要原因之一，並且預料於2030年前將成為肝移植之最常見適應症。當前尚無治療NASH之批准藥物。

本揭露提供肽及肽類似物及其在治療與NASH、體重、血糖水準及脂肪量有關之疾病(例如，代謝疾病，包含肥胖症、脂肪性肝病及糖尿病)之方法中之用途。

在示例性實施例中，本揭露之肽包含式I之氨基酸序列：X¹-Q-E-X²-X³-Y-I-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I)(SEQ ID NO：1)

或其在藥學上可接受之鹽；其中X¹空缺，或若存在，則係X⁷-RW-，其中X⁷空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X²及X³分別獨立地係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X⁴及X⁵分別獨立地係具有非極性側鏈之氨基酸；X⁶空缺，或若存在，則係-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中X⁸空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈之氨基酸，並且X⁹係具有非極性側鏈之氨基酸；條件係肽不為如下中之任一者：MRWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：2)；MRWQEMGYIFYFRKLR(SEQ ID NO：316)；MGWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：317)；及/或MGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：318)。

在某些示例性實施例中，肽包含在實施方式中闡述之式II或式III之氨基酸序列。

在示例性實施例中，分離出式I、式II及/或式III之肽。

在示例性實施例中，該肽包含選自如下之肽序列之修飾：MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)； MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；以及MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；其中修飾包含利用選自下列之另一個氨基酸、或者其在藥學上可接受之鹽來置換肽中之至少一個氨基酸：(i)具有D構型之氨基酸；及(ii)非天然存在之氨基酸殘基。

在示例性實施例中，將該肽與賦形劑配製成提供一藥用組成物，該藥用組成物能夠用於治療患者之疾病或另一種內科疾病。

在示例性實施例中，該肽包含式I之氨基酸序列或其在藥學上可接受之鹽，其中X¹空缺，或若存在，則係X⁷-RW-，其中X⁷空缺，或若存在，則選自：D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、 (dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X²及X³分別獨立地選自：D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X⁴及X⁵分別獨立地選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X⁶空缺，或若存在，則係-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中X⁸空缺，或若存在，則選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)並且X⁹選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M或(dM)。

在示例性實施例中，該肽包含式I之氨基酸序列或其在藥學上可接受之鹽，其中X¹空缺，或若存在，則係X⁷-RW-，其中X⁷空缺，或若存在，則係M或E；X²係M、A或E；X³係G、N或Q；X⁴係F或A；X⁵係P或A；X⁶空缺，或若存在，則係-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中X⁸空缺，或若存在，則係R或A並且X⁹選自K、A、(dA)、N及Q。

在示例性實施例中，該肽包含選自由如下組成之組中之序列及其在藥學上可接受之鹽：MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：210)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)； MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(a)RWQE(SEQ ID NO：294)、(b)YIFY(SEQ ID NO：295)、或(c)RWQE(SEQ ID NO：294)及YIFY(SEQ ID NO：295)二者，其中該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之游離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。

在示例性實施例中，該肽或肽類似物係C-末端酸或醯胺，或係其N乙醯基衍生物。

在示例性實施例中，該肽或肽衍生物係PEG、乙醯基、生物素或其脂肪酸衍生物。在示例性實施例中，肽衍生物包含：PEG600、乙醯基、生物素或棕櫚基。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)具有一個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。在示例性實施例中，具有一個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列包含：XIFY(SEQ ID NO：300)、YXFY(SEQ ID NO：301)、YIXY(SEQ ID NO：302)、或YIFX(SEQ ID NO：303)，其中X係任意氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物在部分(A)與部分(B)之間包含一個、二個、三個或更多個氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸之水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)具有二個氨基酸修飾之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)具有二個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQE(SEQ ID NO：294)及YIAE(SEQ ID NO：308)或EIFE(SEQ ID NO：309)之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)截短形式之YIFY(SEQ ID NO：295)。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)YI或YIF。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物在部分(A)與部分(B)之間包含一個、二個、三個或更多個氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸之水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，該肽或肽類似物包含：(A)YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列及(B)具有一個氨基酸置換之RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列。在示例性實施例中，具有一個氨基酸置換之RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列包含：XWQE(SEQ ID NO：304)、RXQE(SEQ ID NO：305)、RWXE(SEQ ID NO：306)、或RWQX(SEQ ID NO：307)，其中X係任意氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物在部分(A)與部分(B)之間包含一個、二個、三個或更多個氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸之水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQEX¹X²YIFY(SEQ ID NO：319)之氨基酸序列，其中X¹及X²分別獨立地係任意氨基酸。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQEX¹X²X³IFY(SEQ ID NO：320)、RWQEX¹X²YX³FY(SEQ ID NO：321)、RWQEX¹X²YIX³Y(SEQ ID NO：322)或RWQEX¹X²YIFX³(SEQ ID NO：323)之氨基酸序列，其中X¹、X²及X³分別獨立地係任意氨基酸。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：SEQ ID NO：1、3-41、43-76、以及79-293、310-315、319-323及354-377之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：表1所列之結構及/或氨基酸序列。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物不為由如下氨基酸序列組成之肽中之任一者：MRWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：2)、MRWQEMGYIFYFRKLR(SEQ ID NO：316)、MGWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：317)、或MGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：318)。

在某些實施例中，在此揭露之肽包含與氨基酸序列SEQ ID NO：11、17、18、19、21、45、149、172、208、210、211、213、217、219、 217及241中之任一者具有至少66%之序列同一性之序列。在某些實施例中，同一性百分率選自例如與給定序列所具有之至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%、或更高之序列同一性。在某些實施例中，同一性百分率在例如約65%至約70%、約70%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%、或約90%至約95%；在約70%與約80%之間、約80%與約90%之間以及約90%與約99%之間之序列同一性之範圍內。

在某些實施例中，該肽包含與氨基酸序列SEQ ID NO：11、17、18、19、21、45、149、172、208、210、211、213、217、219、217及241中之任一者具有至少66%之序列同一性之序列。在某些實施例中，同一性百分率選自與給定序列所具有之例如至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%、或更高之序列同一性。在某些實施例中，同一性百分率在例如約65%至約70%、約70%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%、或約90%至約95%；在約70%與約80%之間、約80%與約90%之間以及約90%與約99%之間之序列同一性之範圍內，但不包含SEQ ID NO：2、42、77-78、316-318、或328-349中描述之序列。

本揭露更提供包含本揭露之任一或多種肽或肽類似物及異源部分之綴合物。

此外，本揭露更提供一種包含核苷酸序列之核酸，該核苷酸序列對本揭露之任一或多種肽或肽類似物進行編碼。此外，在此提供一種包含本揭露之核酸之表達載體。本揭露提供一種包含核酸或表達載體之宿主細胞。

另外，本揭露提供一種包含肽、肽類似物、綴合物、核酸、表達載體、宿主細胞、或其組合以及運載體、賦形劑或稀釋劑之組成物。在示例性態樣中，該組成物係藥用組成物。在示例性態樣中，本揭露之藥用組成物包含式I之包含SEQ ID NO：1、3-41、43-76、以及79-293、310-315、319-323及354-377之氨基酸序列之氨基酸序列、在此描述之其類似物及衍生物以及在藥學上可接受之賦形劑。

作為附加實施例，本揭露亦包含組成物，該組成物包含在此描述之二或更多種肽或肽類似物(或綴合物、核酸、表達載體等等)之混合物，更視情況包含賦形劑或運載體。

此外，本揭露提供包含肽、肽類似物、綴合物、核酸、表達載體、宿主細胞或其組合之有關制劑盒。

本揭露提供一種用於生產肽或肽類似物之方法。在示例性實施例中，該方法包含：(i)使第一氨基酸與第二氨基酸反應，以在第一氨基酸與第二氨基酸之間形成共價聯接(covalent linkage)，其中第一氨基酸或第二氨基酸視情況附接至另一個氨基酸；以及(ii)重複反應步驟(i)，藉此產生肽或肽類似物。

在不局限於某些理論之情況下，本揭露之肽及肽類似物非常適合作為治療劑。在此提供之資料支援在治療與遊離脂肪酸、體重、血糖水準、脂質分佈以及脂肪量有關之疾病、失調症或內科疾病中使用此種肽及肽類似物。

因此，本揭露提供一種用於調節需要其之受試者之脂肪酸代謝之方法，該方法包含以有效調節脂肪酸代謝之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體或宿主細胞。

本揭露亦提供一種用於治療需要其之受試者之代謝疾病之方法，該方法包含以有效治療代謝疾病之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體或宿主細胞。

此外，在不局限於某些理論之情況下，鑒於某些代謝疾病狀態與肝有關或關聯，因此本揭露之肽及肽類似物非常適合治療包含但並不局限於NAFLD及NASH之肝病。因此，本揭露亦提供一種用於治療需要其之受試者之肝病之方法，該方法包含以有效治療肝病之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

本揭露亦提供一種用於治療需要其之受試者之癌症之方法，該方法包含以有效治療癌症之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

本揭露亦提供一種用於治療需要其之受試者之肥胖症或過高體重之方法，該方法包含以有效治療肥胖症或過高體重之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

本揭露亦提供一種用於治療需要其之受試者之中風之方法，該方法包含以有效治療中風之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

本揭露亦提供了一種用於治療需要其之受試者之心血管疾病之方法，該方法包含以有效治療心血管疾病之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

本揭露亦提供一種用於治療需要其之受試者之阻塞性睡眠呼吸中止症之方法，該方法包含以有效治療阻塞性睡眠呼吸中止症之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

本揭露亦提供了一種用於治療需要其之受試者之高血壓之方法，該方法包含以有效治療高血壓之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

本揭露亦提供了一種用於調節(包含降低)脂肪酸(例如，遊離脂肪酸)在一或多個脂肪細胞中之水準之方法，該方法包含使本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞以有效降低該水準之量接觸該(等)脂肪細胞。在某些變型例中，在體外，例如在細胞培養中執行該方法。在某些變型例中，在體內，例如藉由對需要其之一受試者施用該材料執行該方法。

本揭露亦提供一種用於調節(包含降低)受試者之血液或血清葡萄糖及/或血清甘油三酯之水準之方法，該方法包含以有效降低血液/血清葡萄糖之量對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

對於在此描述之與使用核酸及載體有關之實施例，該方法可以包含在體外或體內轉化或轉染細胞。

在此描述為方法之本發明之態樣亦可被描述為「用途」，並且所有該等用途皆被視為本發明之態樣。同樣，作為另外一種選擇，在此描述為具有「用途」之組成物能夠被描述為使用過程或使用方法，該使用過程或使用方法被視為本發明之態樣。舉例而言，在此描述為一種治療疾病或狀況之方法之實施例亦應被理解為包含與利用試劑或物質治療疾病或狀況、或利用製造藥劑物之物質治療疾病或狀況有關之實施例。

在此將本發明之態樣描述為出於某些目的利用二或更多種試劑之組合(或利用試劑之組合)進行治療之方法。本發明之有關態樣包含：二或更多種試劑混合之組成物；以及二或更多種試劑例如以單位劑量製劑之形式封裝在一起而不混合之試劑盒。

貫穿本說明書所提及之「一個實施例」、「某些實施例」或「實施例」意指結合實施例描述之某些特徵、結構或特性包含於本揭露之至少一個實施例中。在此描述之某些特徵、結構或特性可以任意適當方式組合，並且所有該等組合皆被視為本發明之態樣。

除非另有說明，否則利用序數詞「第一」、「第二」、「第三」等來描述共同物件僅指涉及類似物件之不同情形，而不旨在暗示如此描述之物件在時間上、空間上、排序上或以任何其他方式一定處於給定序列中。

作為附加態樣，本發明包含範圍在任何方面較以上具體段落或原始申請專利範圍所限定之變型例窄之本發明之所有實施例。舉例而言，對於描述為屬(genus)或集(set)之本發明之某些態樣，應理解屬或集中之每個成員分別係本發明之態樣。同樣，每個單獨子集旨在作為本發明之態樣。舉例而言，若本發明之態樣被描述為自由1、2、3及4組成之組中選擇之成員，則子組(例如，自{1,2,3}或{1,2,4}或{2,3,4}或{1,2}或{1,3}或{1,4}或{2,3}或{2,4}或{3,4}中選擇之成員)被視為本發明之態樣或變型例並且每個單獨種{1}或{2}或{3}或{4}被視為本發明之態樣或變型例。同樣，若本發明之態樣被表征為範圍，或於範圍(例如，溫度範圍)內可適用，則整個子範圍被視為本發明之態樣或變型例。

本說明書之發明名稱係為便於讀者理解，而不旨在係為限制性的。根據實施方式及/或圖式及/或原始申請專利範圍，本發明之附加態樣、實施例及變型例將顯而易見。在此，原始申請專利範圍以引用方式併入發明內容中。

儘管申請者編寫了在此描述之本發明之整個範圍，然而申請者并不旨在要求保護其他現有技術成果中描述之主題。因此，若專利局、法庭、或其他實體或個體使申請者注意到法定現有技術在申請專利範圍之範圍內，則申請者保留基於適用之專利法行使修訂權之權利，藉以重新限定該申請專利範圍之主題，以自該申請專利範圍之範圍中具體排除該法定現有技術或法定現有技術之顯而易見或非創造性之變型例。由進行此種修訂之申請專利範圍限定之本發明之變型例亦旨在作為本發明之態樣。

【詳述】 定義

在描述並且要求保護本發明時，將根據下面闡述之定義使用下面之術語。

術語「肽」指包含藉由肽鍵互相連結之二或更多個氨基酸殘基之分子。該等術語涉及例如天然蛋白及人造蛋白、蛋白片段及蛋白序列之多肽類似物(諸如，突變蛋白、變體、以及融合蛋白)以及轉譯後的、或共價的或非共價的修飾肽。肽可以係為單體或聚合體。在某些實施例中，「肽」係其α碳可以藉由肽鍵聯接之氨基酸之鏈。因此，位於鏈之一端(氨基末端)處之末端氨基酸具有一遊離氨基基團，而位於鏈之另一端(羧基末端)處之末端氨基酸具有一遊離羧基基團。在此使用之術語「氨基終端(terminus)」(簡稱N終端)指位於肽之氨基末端處之氨基酸上之遊離α氨基基團或指位於該肽內之任何其他部位處之氨基酸之α氨基基團(當參與至肽鍵中時為亞氨基基團)。類似地，術語「羧基終端」指肽之羧基終端上之遊離羧基基團或位於該肽內之任何其他部位處之氨基酸之羧基基團。肽實質上亦包含任意聚氨基酸，該聚氨基酸包含但並不局限於不藉由醯胺鍵而是藉由醚連結之模擬肽，諸如氨基酸。

術語「治療性肽」指具有一或多種治療活性及/或生物活性之肽或其片段或變體。

在此使用之術語「類似物」或「肽類似物」描述了一種包含諸如但並不局限於如下之一或多種氨基酸修飾之肽：利用任意天然或非天然氨基酸、合成氨基酸或擬肽對任意一個氨基酸殘基進行置換及/或一或多個刪減及/或一或多個添加、及/或在任意可用位置處將取代基附接至天然或非天然氨基酸、合成氨基酸或擬肽中之任一者。氨基酸殘基之添加或刪減能夠發生於肽之N-末端處及/或肽之C-末端處。

在某些實施例中，類似物具有1、2、3、4或5個此種修飾。在某些實施例中，類似物保留原始肽之生物活性。在某些實施例中，類似物係原始肽之競爭性或非競爭性抑制劑。

利用標準的一個字母或三個字母之縮寫表示肽序列。除非另有說明，否則肽序列在左側處具有其氨基終端，而在右側處具有其羧基終端。肽之某些段可由諸如氨基酸3至6等氨基酸殘基編號或由位於該位點處之實際殘基(諸如Met3至Gly6)指定。一某些肽序列亦能夠藉由解釋其與參考序列有何不同來描述。

在此使用之術語「天然氨基酸」指選自由以下組成之組中之氨基酸(利用括弧內之常用三個字母編碼及一個字母編碼)：甘氨酸(Gly & G)、脯氨酸(Pro & P)、丙氨酸(Ala & A)、纈氨酸(Val & V)、亮氨酸(Leu & L)、異亮氨酸(Ile & I)、蛋氨酸(Met & M)、半胱氨酸(Cys & C)、苯丙氨酸(Phe & F)、酪氨酸(Tyr & Y)、色氨酸(Trp & W)、組氨酸(His & H)、賴氨酸(Lys & K)、精氨酸(Arg & R)、穀氨醯胺(Gin & Q)、天冬醯胺(Asn & N)、谷氨酸(Glu & E)、天冬氨酸(Asp & D)、絲氨酸(Ser & S)及蘇氨酸(Thr & T)。若在本說明書中之任何地方提及包含或不包含G、P、A、V、L、I、M、C、F、Y、H、K、R、Q、N、E、D、S或T之肽、肽之類似物或衍生物，皆指氨基酸，而無需進一步指明。若無另外說明，則利用大寫字母中之單個字母代碼表示之氨基酸指L異構型。然而，若大寫字母中之單個字母代碼指定之氨基酸前面有小寫字母「d」並且在括弧中，諸如，「(dD)」及「(dE)」，則該氨基酸用作/用為其D異構型。舉例而言，「(dD)」指D或天冬氨酸之D異構體，「(dA)」指A或丙氨酸之D異構體，而「(dE)」指E之或谷氨酸之D異構體。在某些情形中，氨基酸之D異構體由後面跟著由其三個字母代碼指定之氨基酸之「D-」標識。因此，舉例而言，「D-Ala」指丙氨酸之D異構體，「D-Asp」指天冬氨酸之D異構體，而「D-Glu」指谷氨酸之D異構體。前面定義之該等D型及其他非保守性氨基酸置換包含於非天然氨基酸之定義中。

若由於打字錯誤而與通常使用之代碼有偏差，則運用通常使用之代碼。存在於肽中之氨基酸較佳地係能夠由核酸進行編碼之氨基酸。由上面之實例顯而易見，氨基酸殘基可以由其全稱、其一個字母編碼及/或其三個字母編碼識別。此三種方式完全等價。

在此使用之術語「帶電荷氨基酸」或「帶電荷殘基」指一種包含在處於生理pH值之水溶液中帶負電荷(即，去質子化)或帶正電荷(即，質子化)之側鏈之氨基酸。舉例而言，帶負電荷氨基酸包含：天冬氨酸、谷氨酸、磺基丙氨酸、同型磺基丙氨酸及同型谷氨酸，而帶正電荷氨基酸包含：精氨酸、賴氨酸及組氨酸。帶電荷氨基酸包含：20個編碼氨基酸中之帶電荷氨基酸及非典型或非天然存在或未編碼之氨基酸。

在此使用之術語「酸性氨基酸」指包含第二酸性部分(除了氨基酸之羧酸之外)之氨基酸，該第二酸性部分包含例如羧酸或者磺酸基團。

在此使用之術語「醯化氨基酸」指一種包含對於天然存在之氨基酸並非原有之醯基團之氨基酸，而無論其產生方式如何(例如，將氨基酸插入肽中之前進行醯化，或插入肽中之後進行醯化)。

在此使用之術語「烷化氨基酸」指一種包含對於天然存在之氨基酸並非原有之烷基團之氨基酸，而無論其產生方式如何。因此，本揭露之醯化氨基酸及烷化氨基酸係未編碼氨基酸。

熟習此項技術者將能夠利用在此描述之包含脂肪酸代謝及其他代謝測定在內之材料及方法(諸如合成技術及活性測定)而確定如在此所述之肽之活性變體。見實例小節。在某些實施例中，熟習此項技術者可藉由靶向對於活性而言未被認定為重要之區而在不破壞活性之情況下識別分子之可被改變之適當區域。在其他實施例中，熟習此項技術者能夠識別在類似肽之間保留之分子之殘基或部分(諸如，在此描述之具有類似調節活性之肽)。在其他實施例中，即使對於生物活性或對於結構而言重要之區域亦可發生保守氨基酸置換，仍不破壞生物活性或不對肽結構產生負面影響。

此外，熟習此項技術者能夠審查結構-功能研究，以辨別對活性或結構而言重要之類似肽中之殘基。根據此種比較，熟習此項技術者能夠對應類似肽中對於活性或者結構而言重要之氨基酸殘基來預測一肽中之氨基酸殘基之重要性。熟習此項技術者可以選擇利用化學性質類似之氨基酸置換該等被預測為重要的氨基酸殘基。

熟習此項技術者亦能夠分析三維結構及與類似肽中之該結構有關之氨基酸序列。根據此種資訊，熟習此項技術者可關於其三維結構預測肽之氨基酸殘基之比對。在某些實施例中，熟習此項技術者可選擇不對所預測處於該肽表面上之氨基酸殘基作自由基改變，乃因此種殘基可涉及與其他分子之重要相互作用。另外，熟習此項技術者可產生在每個所需之氨基酸殘基處含有單個氨基酸置換之測試變體。然後，利用熟習此項技術者習知之活性測定能夠篩選該變體。此種變體可用於收集關於合適變體之資訊。舉例而言，若人們發現對某些氨基酸殘基之改變導致活性被破壞、不希望地降低、或不合適，則能夠避免具有此種改變之變體。換言之，基於自此種常規實驗收集之資訊，熟習此項技術者能夠輕而易舉地確定應當單獨地或者與其他變異相結合地避免進一步置換之氨基酸。

在此使用之術語「衍生物」指一種化學修飾肽，其中一或多個取代基或部分已共價附接至該化學修飾肽。因此，包含此種取代基或者部分之衍生物將為「衍生化」肽或「衍生化」類似物。該術語亦可以指含有一或多個通常不為肽分子之一部分之化學部分之肽，該等化學部分例如為游離羧基基團之酯及醯胺、游離氨基基團之醯基及烷基衍生物、游離羥基基團之磷酸酯及醚。可以藉由使肽之靶向氨基酸殘基與能夠與所選擇之側鏈或者末端殘基發生反應之一有機衍生化劑發生反應，將此種修飾引入該分子。較佳化學衍生物包含已經磷酸化、C-末端醯胺化或N-末端乙醯化之肽。該術語亦可以指在此使用之肽，其可以藉由此項技術中習知之方式利用作為側鏈出現於殘基上或N-末端或C-末端基團上之官能團製備並且只要其保持在藥學上可接受(即，其不破壞肽之活性、在含有其之組成物上不具有毒性並且不對其抗原性有不利影響)，便包含在本文中。該等衍生物可以例如包含：羧基基團之脂肪族酯、藉由與氨或與伯胺或仲胺發生反應而產生之羧基基團之醯胺、藉由與醯基部分(例如，烷醯基基團或碳環芳基醯基團)發生反應而形成之氨基酸殘基之游離氨基基團之N-醯基衍生物或藉由與醯基部分發生反應而形成之游離羥基(例如，絲氨醯基殘基或蘇氨醯基殘基)之O-醯基衍生物。

一種經修飾之氨基酸殘基係一種氨基酸殘基，其中藉由利用不同基團或鍵進行刪減、添加、或替換來修飾其任一基團或鍵，只要保持氨基酸殘基之功能或若功能發生變化(例如，利用經取代之苯丙氨酸替換酪氨酸)，則只要該修飾不損害含有修飾殘基之肽之活性即可。

在此使用之術語「取代基」指鍵合至、特別是共價鍵合至氨基酸殘基(特別是氨基酸殘基上之任一可用位置)之任一合適部分。通常，該合適部分係化學部分。

術語「脂肪酸」指具有4至28個碳原子之脂肪族單羧酸，其較佳為無側鏈的，並且其可以為飽和的或非飽和的。在本揭露中，包含10至16個氨基酸之脂肪酸係較佳的。

術語「脂肪二酸」指如上定義但在ω位具有一附加羧酸基團之脂肪酸。因此，脂肪二酸係二羧酸。在本揭露中，包含14至20個氨基酸之脂肪酸係較佳的。

在此術語「序列同一性百分率」與術語「同一性百分率」可互換地使用，並且其指當利用序列比對程式比對時，二或更多個肽序列之間之氨基酸序列同一性之水準或二或更多個核苷酸序列之間之核苷酸序列同一性之水準。舉例而言，在此使用之80%同一性指由定義之演算法確定相同內容為80%之序列同一性，並且指給定序列與另一個長度之另一個序列具有至少80%之同一性。

在此術語「序列同源性百分率」與術語「同源性百分率」可互換地使用，並且其指當利用序列比對程式比對時，二或更多個肽序列之間之氨基酸序列同源性之水準或二或更多個核苷酸序列之間之核苷酸序列同源性之水準。舉例而言，在此使用之80%同源性指由定義之演算法確定相同內容為80%之序列同源性，並且因此，給定序列之同源性在該給定序列之長度內具有大於80%之序列同源性。

能夠用於確定二個序列之間之同一性或同源性程度之示例性電腦程式包含但並不局限於公眾藉由網際網路在NCBI網站可獲得之一系列BLAST程式，例如，BLASTN、BLASTX以及TBLASTX、BLASTP及TBLASTN。此外請參見Altschul et al.,1990,J.Mol.Biol.215：403-10(特參考發布之默認設置，即，參數w=4、t=17)及Altschul et al.,1997,Nucleic Acids Res.,25：3389-3402。當相對於GenBank蛋白序列資料庫及其他公共資料庫中之氨基酸序列來評估給定氨基酸序列時，通常利用BLASTP程式執行序列搜索。較佳地利用BLASTX程式針對GenBank蛋白序列資料庫及其他公共資料庫中之氨基酸序列搜索在所有閱讀框中已轉譯之核酸序列。BLASTP及BLASTX二者皆利用缺口開放罰分為11.0而缺口延伸罰分為1.0之默認參數運行，並且皆採用BLOSUM-62矩陣(Id)。除了計算序列同一性百分率，BLAST演算法亦對二個序列之間之相似性執行統計分析(請參見，例如，Karlin & Altschul,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA,90：5873-5787(1993))。BLAST演算法所提供之一個相似性量測為最小和概率(smallest sum probability(P(N)))，其提供二個核苷酸序列或氨基酸序列之間偶然發生匹配之概率指示。

在此使用之肽之「治療有效量」指當依據所揭露並且要求保護之方法對受試者施用時影響生物活性，諸如降低游離脂肪酸水準、血清甘油三酯水準、血糖水準、體重、脂肪量或調節脂肪酸代謝。

術語「治療」、「施治」及「療法」指獲得有益或所需臨床效果之方式。此外，在此提及「療法」包含提及治愈療法、姑息療法及預防療法。術語「施治」指抑制、預防或阻止病理特徵(疾病、失調或症狀)之發展或進展及/或使得病理特徵減輕、緩解或消退。熟習此項技術者將理解能夠利用各種方法及測定來評估病理特徵之發展，並且類似地，可以利用各種方法及測定來評估病理特徵之減輕、緩解或消退。

術語「改善細胞存活」指與對照者(例如，與缺少療法之相同條件下存活之細胞之數量)相比，給定條件下存活細胞之數量增加。條件可為在體外、在體內、間接體內或在原位。能夠將經改善的細胞存活表達為比較值，例如，若細胞存活改善2倍，則有兩倍細胞存活。經改善的細胞存活可起因於細胞凋亡之減少、細胞壽命之增加或細胞功能及條件之改善。

為了清楚起見，術語「指示」意在除了其通常理解之定義外，亦包含監管機構批准標籤上之信息。

在此及所附申請專利範圍所使用之單數形式「一」、「或」及「該」包含複數指示物，除非上下文另外明確指出。應當理解，在此描述之揭露之態樣及變型例包含由及/或「基本上」由態樣及變型例「組成」。

在此使用之術語「約」指比陳述之值或值區間大或小10%，而不旨在只對該較寬之定義指定值或值區間。前面存在術語「約」之每個值及值區間亦旨在涵蓋所陳述之絕對值或值區間之實施例。

在此使用之術語「預防」指防止疾病、紊亂或症狀發生於有發病危險但尚未診斷有病之受試者。人口研究中能夠論證預防(及有效預防之劑量)。舉例而言，有效預防給定疾病或內科疾病之量係相對於未治療之對照人口，有效降低治療之人口中之發生率之量。

在此使用之術語「受試者」包含哺乳動物，較佳地包含遭受病理特徵之任何年齡之人。較佳地，此術語涵蓋有發生病理特徵風險之個體。

肽

本揭露提供降低脂肪細胞中之游離脂肪酸水準之肽及肽類似物。有利地，本揭露之肽及肽類似物在血漿中展示出足夠的穩定性，如在此所作之進一步論述。

在示例性實施例中，本揭露之肽包含式1之氨基酸序列或其在藥學上可接受之鹽：X¹-Q-E-X²-X³-Y-I-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I)(SEQ ID NO：1)

其中X¹空缺，或若存在，則為X⁷-RW-，其中X⁷空缺，或若存在，則為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X²及X³分別獨立地係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X⁴及X⁵分別獨立地係具有非極性側鏈之氨基酸；X⁶空缺，或若存在，則為-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中X⁸空缺，或若存在，則為具有非極性側鏈之氨基酸，並且X⁹係具有非極性側鏈之氨基酸；條件為肽不為如下中之任一者：MRWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：2)；MRWQEMGYIFYFRKLR(SEQ ID NO：316)；MGWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：317)；及/或MGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：318)。

在示例性實施例中，本揭露之肽包含式II之氨基酸序列：X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-Q-E-X²⁰-X²¹-Y-I-X²²-Y-X²³-X²⁴-X²⁵ (II)(SEQ ID NO：378)

其中X¹⁷空缺，或若存在，則為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X¹⁸空缺，或若存在，則為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X¹⁹空缺，或若存在，則為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X²⁰為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X²¹為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X²²為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X²³為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X²⁴為具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；及X²⁵空缺，或若存在，則選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸、-LKR、-KLX²⁶、-X²⁷LR、-KX²⁸R、-RX²⁹R及-KRX³⁰；其中X²⁶空缺，或若存在，則選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；其中X²⁷選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；其中X²⁸選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；其中X²⁹選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；且其中X³⁰空缺，或若存在，則選自具有非極性側鏈之氨基酸；條件為該肽不為由SEQ ID NO：2、42、77、78、316至318及328至349之氨基酸序列中之任一者組成之肽；條件還有若X¹⁹空缺，則X¹⁷及X¹⁸空缺；並且條件還有若X¹⁸空缺，則X¹⁷空缺；以及或其C-末端酸或醯胺、或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽。

在示例性實施例中，該肽包含式II之氨基酸序列，其中X¹⁷空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、Nle、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X¹⁸空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M 及(dM)；X¹⁹空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X²⁰選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X²¹選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X²²選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X²³選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X²⁴空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；及X²⁵空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M、(dM)、-LKR、-KLX²⁶、-X²⁷LR、-KX²⁸R、-RX²⁹R及-KRX³⁰；其中X²⁶空缺，或若存在，則選自-RE、D、(dD)、E、(dE)、K、 (dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；其中X²⁷選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；其中X²⁸選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；其中X²⁹選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；及其中X³⁰空缺，或若存在，則選自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；或其C-末端酸或醯胺、或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽。

在示例性實施例中，該肽包含式II之氨基酸序列，其中X¹⁷空缺，或若存在，則係M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X¹⁸空缺，或若存在，則係R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X¹⁹空缺，或若存在，則係W、A、(dA)、G、或E；X²⁰係Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X²¹係G、N、Q、(dA)或A；X²²係F、G、E、(dA)或A；X²³係P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A；X²⁴空缺，或若存在，則係R、G、D、L、K、E、(dA)或A；及X²⁵空缺，或若存在，則選自-K、-R、N、Q、(dA)、-KL、-KR、-R(Da)、-KLR、-K(Ac)LR、-K(cyc)LR、-ALR、-(dA)LR、-GLR、-ELR、 -NLR、-QLR、-KAR、-K(dA)R、-KGR、-KER、-KLA、-KL(dA)、-KLD、-KLE、-KLG、-KLK、-RKR、-RLR、-LKR、-KRL、及-KLRE；其C-末端酸或醯胺、或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽。

在示例性實施例中，本揭露之肽包含式III之氨基酸序列：X³¹-X³²-X³³-X³⁴-X³⁵-X³⁶-X³⁷-X³⁸-X³⁹-X⁴⁰-X⁴¹-X⁴²-X⁴³-X⁴⁴-X⁴⁵-X⁴⁶-X⁴⁷(III)(SEQ ID NO：379)

其中X³¹空缺，或若存在，則係M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X³²空缺，或若存在，則係R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X³³空缺，或若存在，則係W、A、(dA)、G、或E；X³⁴係Q、G、A、(dA)、Ecyc、N或E；X³⁵係E、Ecyc、D、G、(dA)或A；X³⁶係Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X³⁷係G、N、Q、(dA)或A；X³⁸係Y、G、E、(dA)或A；X³⁹係I、G、E、(dA)或A；X⁴⁰係F、G、E、(dA)或A；X⁴¹係Y、G、E、(dA)或A；X⁴²空缺，或若存在，則係P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A；X⁴³空缺，或若存在，則係R、G、D、L、K、E、(dA)或A；X⁴⁴空缺，或若存在，則係K、K-Ac、G、R、L、Q、N、Kcyc、E、(dA)或A；X⁴⁵空缺，或若存在，則係L、G、R、K、Deg、E、(dA)或A；X⁴⁶空缺，或若存在，則係R、D、E、L、K、G、(dA)或A；及X⁴⁷空缺，或若存在，則係E；條件為該肽係其中該肽不為由SEQ ID NO：2、42、77、78、316至318、及328至349之氨基酸序列中之任一者組成之肽；條件還有若X³³空缺，則X³¹及X³²空缺；條件還有若X³²空缺，則X³¹空缺；條件還有若X⁴²空缺，則X⁴⁷、X⁴⁶、 X⁴⁵、X⁴⁴、及X⁴³空缺；條件還有若X⁴³空缺，則X⁴⁷、X⁴⁶、X⁴⁵、及X⁴⁴空缺；條件還有若X⁴⁴空缺，則X⁴⁷、X⁴⁶、及X⁴⁵空缺；條件還有若X⁴⁵空缺，則X⁴⁷及X⁴⁶空缺；並且條件還有若X⁴⁶空缺，則X⁴⁷空缺；以及或其C-末端酸或醯胺，或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽。

在示例性實施例中，該肽包含式III之氨基酸序列，其中X³⁴係Q；X³⁵係E；X³⁶係M；X³⁷係G；X³⁸係Y；X³⁹係I；X⁴⁰係F；X⁴¹係Y；X⁴²係P；X⁴³係R；X⁴⁴空缺，或若存在，則係K；X⁴⁵空缺，或若存在，則係L；X⁴⁶空缺，或若存在，則係R；並且X⁴⁷空缺；其C-末端酸或醯胺、或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽。

在示例性實施例中，分離出式I至式III之肽。

在示例性實施例中，該肽包含對選自如下之肽序列之修飾：MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：210)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)； MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；其中修飾包含用選自下列之另一個氨基酸、或其在藥學上可接受之鹽來置換肽中之至少一個氨基酸：(i)具有D構型之氨基酸；及(ii)非天然存在之氨基酸殘基。

在示例性實施例中，該肽與賦形劑配製成提供藥用組成物，該藥用組成物能夠用於治療患者之疾病或另一種內科疾病。

在示例性實施例中，該肽包含式1之氨基酸序列或其在藥學上可接受之鹽，其中X¹空缺，或若存在，則係X⁷-RW-，其中X⁷空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X²及X³分別獨立地選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X⁴及X⁵分別獨立地選自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dE)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X⁶空缺，或若存在，則係-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中X⁸空缺，或若存在，則選自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)並且X⁹選自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)。

在示例性實施例中，該肽包含式1之氨基酸序列或其在藥學上可接受之鹽，其中X¹空缺，或若存在，則係X⁷-RW-，其中X⁷空缺，或若存在，則係M或E；X²係M、A或E；X³係G、N或Q；X⁴係F或A；X⁵係P或A；X⁶空缺，或若存在，則係-KL-X⁸或-X⁹-LR，其中X⁸空缺，或若存在，則係R或A並且X⁹選自K、A、(dA)、N及Q。

在示例性實施例中，該肽包含選自由以下組成之組中之序列及其在藥學上可接受之鹽：MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：210)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(a)RWQE(SEQ ID NO：294)、(b)YIFY(SEQ ID NO：295)、或(c)RWQE(SEQ ID NO：294)及YIFY(SEQ ID NO：295)二者，其中該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之游離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物包含直接位於SEQ ID NO：294之Arg之N-末端或直接位於SEQ ID NO：294之Glu之C-末端之Met。在示例性實施例中，該肽或肽類似物包含MRWQE(SEQ ID NO：350)、RWQEM(SEQ ID NO：351)、或MRWQEM(SEQ ID NO：352)。在示例性實施例中，該肽或肽類似物包含直接位於SEQ ID NO：295之第一氨基酸之N-末端之Gly、直接位於SEQ ID NO：295之最後氨基酸之C-末端之Pro，或包含GYIFYP(SEQ ID NO：353)。在示例性實施例中，該肽或肽類似物包含YIFYPR(SEQ ID NO：296)、YIFYPRK(SEQ ID NO：297)、YIFYPRKL(SEQ ID NO：298)、或YIFYPRKLR(SEQ ID NO：299)。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)具有一個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。在示例性實施例中，具有一個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列包含：XIFY(SEQ ID NO：300)、YXFY(SEQ ID NO：301)、YIXY(SEQ ID NO：302)、或YIFX(SEQ ID NO：303)，其中X係任意氨基酸。在示例性實施例中，SEQ ID NO：300至303中之任一者之X係小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。在示例性實施例中，SEQ ID NO：300至303中之任一者之X選自由Ala、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸之水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)具有二個氨基酸修飾之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及(B)具有二個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQE(SEQ ID NO：294)及YIAE(SEQ ID NO：308)或EIFE(SEQ ID NO：309)之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及YI或YIF。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸之水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，該肽或肽類似物包含：(A)YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列及(B)具有一個氨基酸置換之RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列。在示例性實施例中，具有一個氨基酸置換之RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列包含：XWQE(SEQ ID NO：304)、RXQE(SEQ ID NO：305)、RWXE(SEQ ID NO：306)、或RWQX(SEQ ID NO：307)，其中X 係任意氨基酸。在示例性實施例中，X係脂肪族氨基酸或帶電荷氨基酸。在示例性態樣中，當該肽或肽類似物包含XWQE(SEQ ID NO：304)時，X選自由Ala、Gly、Asp、Lys、Aib、(dA)、Glu組成之組中。在示例性態樣中，當該肽或肽類似物包含RXQE(SEQ ID NO：305)時，X選自由Ala、Gly、(dA)、Glu組成之組中。在示例性態樣中，當該肽或肽類似物包含RWXE(SEQ ID NO：306)時，X選自由Gln、Ala、Glu、Gly、Asn、(dA)組成之組中。在示例性態樣中，當該肽或肽類似物包含RWQX(SEQ ID NO：307)時，X選自由Glu、Ala、Gly、Asp、(dA)組成之組中。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸之水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含RWQEX¹X²YIFY(SEQ ID NO：319)之氨基酸序列，其中X¹及X²分別獨立地係任意氨基酸。在示例性態樣中，X¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、及Cys組成之組中。在示例性態樣中，X²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性態樣中，-X¹X²-係Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、 (dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn、或Glu-Gln。在示例性態樣中，該肽或肽類似物不由序列SEQ ID NO：2組成。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)在部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含RWQEX⁴⁸X⁴⁹X⁵⁰IFY(SEQ ID NO：373)之氨基酸序列，其中X⁴⁸、X⁴⁹及X⁵⁰別獨立地係任意氨基酸。在示例性態樣中，X⁴⁸選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X⁴⁸選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu，及Cys組成之組中。在示例性態樣中，X⁴⁹選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X⁴⁹選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性態樣中，X⁵⁰選自由Ala、Gly、(dA)、及Glu及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X⁵⁰選自由Ala、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性態樣中，該肽或肽類似物不由序列SEQ ID NO：2組成。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60 分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQEX¹X²X³IFY(SEQ ID NO：320)、RWQEX¹X²YX³FY(SEQ ID NO：321)、RWQEX¹X²YIX³Y(SEQ ID NO：322)或RWQEX¹X²YIFX³(SEQ ID NO：323)之氨基酸序列，其中X分別獨立地係任意氨基酸。在示例性態樣中，X¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、及Cys組成之組中。在示例性態樣中，X²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性態樣中，-X¹X²-係Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn、或Glu-Gln。在示例性實施例中，X³係小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。在示例性實施例中，X³選自由Ala、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含：RWQEX⁴⁸X⁴⁹X⁵⁰IFY(SEQ ID NO：373)、RWQEX⁴⁸X⁴⁹YX⁵¹FY(SEQ ID NO： 374)、RWQEX⁴⁸X⁴⁹YIX⁵²Y(SEQ ID NO：375)或RWQEX⁴⁸X⁴⁹YIFX⁵³(SEQ ID NO：376)之氨基酸序列，其中X⁴⁸、X⁴⁹、X⁵⁰、X⁵¹、X⁵²及X⁵³分別獨立地係任意氨基酸。在示例性實施例中，本揭露之該肽或肽類似物包含SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含表1所列之結構及/或氨基酸序列。在示例性態樣中，X⁴⁸選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X⁴⁸選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、及Cys組成之組中。在示例性態樣中，X⁴⁹選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物組成之組中。在示例性態樣中，X⁴⁹選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性態樣中，-X⁴⁸X⁴⁹-係Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn、或Glu-Gln。在示例性實施例中，X⁵⁰、X⁵¹、X⁵²及X⁵³分別係小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。在示例性實施例中，X⁵⁰、X⁵¹、X⁵²及X⁵³分別選自由Ala、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

在本揭露之每個實施例中，該肽不為由以下氨基酸序列組成之肽：MRWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：2)；MRWQEMGYIFYFRKLR (SEQ ID NO：316)；MGWQEMGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：317)；或MGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：318)。在本揭露之每個實施例中，該肽亦不為由SEQ ID NO：42、77、78、328至349之氨基酸序列中之任一者組成之肽。此外，在示例性實施例中，本揭露之肽不為自然存在之肽。在示例性態樣中，該肽不為由SEQ ID NO：328至349之氨基酸序列中之任一者組成之肽。在其他示例性實施例中，該肽不包含上述序列中之任一者。本發明之肽實施例不包含下列文獻中之氨基酸序列具體描述之肽：美國專利申請公佈No.2014/0296139、國際專利申請公佈號WO01/76532、及Lee et al.,Cell Metabolism 21：443-454(2015)，分別以引用方式併入該等文獻對肽及肽序列之揭露。

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含表1所列之氨基酸序列。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

肽或肽類似物包含、基本上由、或由SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者組成，或包含、基本上由、或由與SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377其中之一具有至少或約75%、至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、或至少或約95%之序列同一性之序列組成。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性態樣中，該肽或肽類似物包含、基本上由、或由具有1個、2個、3個或4個氨基酸置換之SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者之序列組成。在示例性態樣中，該肽或肽類似物包含、基本上由、或由具有一或二個氨基酸置換之SEQ ID NO：1、3-41、43-76、及79-293、310-315、319-323及354-377中之任一者之序列組成。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。在示例性態樣中，該肽或肽類似物包含、基本上由、或由SEQ ID NO：11、17至19、21、32、45、148、172、208、210、211、213、219、及241中之任一者組成，或包含、基本上由、或由與SEQ ID NO：11、17-19、21、32、45、148、172、208、210、211、213、219、及241其中之一具有至少或約75%、至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、或至少或約95%之序列同一性之序列組成。在示例性實施例中，該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度。在示例性實施例中，該肽或肽類似物之部分(A)位於部分(B)之N-末端，存在0至10個中間氨基酸，特別是存在1個、2個、3個、4個或5個中間氨基酸。在示例性實施例中，該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。

生物活性

在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物降低脂肪細胞(例如，人原代脂肪細胞)中之游離脂肪酸水準。在示例性態樣中，相對於對照者，游離脂肪酸水準降低至少或約5%。在示例性態樣中，相對於對照者，游離脂肪酸水準降低至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%。在示例性態樣中，相對於對照者，游離脂肪酸水準降低90%以上。在示例性態樣中，相對於由MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)達成或與MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)相關聯地達成之程度，本揭露之肽或肽類似物將脂肪細胞(例如，人原代脂肪細胞)中之游離脂肪酸水準降低至更佳程度。在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物將脂肪細胞(例如，人原代脂肪細胞)中之游離脂肪酸水準降低至為至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%之程度，低於由MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)所致或與MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)相關聯地所致之降低。已知測定脂肪細胞中之游離脂肪酸水準之合適方法，在此在實例2至5及17中描述其一些示例性方法。在示例性態樣中，在利用實例2至5及17其中之一描述之方法測定時，本揭露之肽或肽類似物降低脂肪細胞(例如，人原代脂肪細胞)中之游離脂肪酸水準。在示例性態樣中，在利用實例2至5及17其中之一描述之單一劑量測定法測定時，本揭露之肽或肽類似物降低脂肪細胞(例如，人原代脂肪細胞)中之游離脂肪酸水準。

在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物降低哺乳動物(例如，DIO小鼠、人)之體重、血糖水準及/或脂肪量。在示例性態樣中，對於哺乳動物，相對於對照者，將體重、血糖水準及/或脂肪量降低了至少或約5%。在示例性態樣中，對於哺乳動物，相對於對照者，將體重、血糖水準及/或脂肪量降低了至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%。在示例性態樣中，相對於由MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)達成或與MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)相關聯地達成之程度，本揭露之肽或肽類似物將哺乳動物(例如，DIO小鼠、人)之體重、血糖水準及/或脂肪量降低至更佳程度。在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物將哺乳動物(例如，DIO小鼠、人)之體重、血糖水準及/或脂肪量降低至為至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%之程度，低於由MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)所致或與MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)相關聯地所致之降低。在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物降低血清甘油三酯水準及/或血清中肝損傷之酶標誌物(例如，AST、ALT)水準。在示例性態樣中，對於哺乳動物，相對於對照者，將血清甘油三酯水準及/或血清中肝損傷之酶標誌物(例如，AST、ALT)水準降低了至少或約5%。在示例性態樣中，對於哺乳動物，相對於對照者，將血清甘油三酯水準及/或血清中肝損傷之酶標誌物(例如，AST、ALT)水準降低了至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%。在示例性態樣中，對於哺乳動物，相對於對照者，將血清甘油三酯水準及/或血清中肝損傷之酶標誌物(例如，AST、ALT)水準降低了90%以上。在示例性態樣中，相對於由MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)達成或與MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)相關聯地達成之程度，本揭露之肽或肽類似物將血清甘油三酯水準及/或血清中肝損傷之酶標誌物(例如，AST、ALT)水準降低至更佳程度。在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物將血清甘油三酯水準及/或血清中肝損傷之酶標誌物(例如，AST、ALT)水準降低至為至少或約10%、至少或約20%、至少或約30%、至少或約40%、至少或約50%、至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、至少或約90%之程度，低於由MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)所致或與MOTS-c肽(例如，由SEQ ID NO：2組成之肽)相關聯地所致之降低。在此項技術中已知測定哺乳動物之體重、血糖水準、脂肪量、血清甘油三酯水準、及血清中肝損傷之酶標誌物水準之合適方法，在此在實例6至9及18至20中描述其一些示例性方法。在示例性態樣中，在利用實例6至9及18至20其中之一描述之方法測定時，例如以15毫克/千克/劑之劑量每天皮下注射或腹膜內注射一次或兩次連續注射10天(實例6)，以15毫克/千克/劑之劑量以適當路線每天注射兩次連續注射21天(實例7)，以5毫克/千克/劑之劑量以適當路線每天注射一次連續注射21天(實例8)，以15毫克/千克/劑之劑量以適當路線每天注射兩次連續注射21天(實例9)，本揭露之肽或肽類似物降低哺乳動物(例如，DIO小鼠、人)之體重、血糖水準、及/或脂肪量。

在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘。換言之，在37攝氏度在小鼠血漿中溫育60分鐘後，該肽或肽類似物之起始測定量之至少10%呈現完整狀態(例如，不降解、不分解等)。在示例性態樣中，在37攝氏度下在血漿中，該肽或肽類似物呈現至少20%之穩定性、至少或約30%之穩定性、至少或約40%之穩定性、至少或約50%之穩定性、至少或約60%之穩定性、至少或約70%之穩定性、至少或約80%之穩定性、或至少或約90%之穩定性達60分鐘。在此項技術中已知測定肽在血漿(包含小鼠血漿)中之穩定性之合適方法，在此在實例14至16中描述其一些示例性方法。在示例性態樣中，在利用實例14至16其中之一描述之方法測定時，本揭露之肽或肽類似物在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘。在示例性態樣中，在利用實例14中描述之單一肽劑量/濃度測定法測定時，本揭露之肽或肽類似物在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘。

肽長度

在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物係包含經由肽鍵或其他共價聯接連結之至少4個氨基酸之肽或肽類似物，如在此所述。在示例性態樣中，該肽或肽類似物具有約4個至約50個氨基酸之長度。在此，針對肽具體設想4至50個氨基酸之全部整數子區間。在示例性態樣中，該肽或肽類似物具有約5個至約50個氨基酸之長度、約5個至約30個氨基酸之長度、約5個至約25個氨基酸之長度、或約5個至約20個氨基酸之長度。在示例性態樣中，該肽或肽類似物具有約6個至約35個氨基酸之長度、約7個至約30個氨基酸之長度、約6個至約25個氨基酸之長度、或約6個至約20個氨基酸之長度。在示例性態樣中，該肽或肽類似物具有約7個至約35個氨基酸之長度、約7個至約30個氨基酸之長度、約7個至約25個氨基酸之長度、或約7個至約20個氨基酸之長度。在示例性態樣中，該肽或肽類似物具有約8個至約35個氨基酸之長度、約8個至約30個氨基酸之長度、約8個至約25個氨基酸之長度、或約8個至約20個氨基酸之長度。在示例性態樣中，該肽具有約8個至約17個或18個或約9個至約16個或17個氨基酸之長度。在示例性態樣中，該肽具有約10個至約17個或約12個至約16個或17個或約14個至約16個氨基酸之長度。在某些實施例中，該肽係5-mer、6-mer、7-mer、8-mer、9-mer、10-mer、11-mer、12-mer、13-mer、14-mer、15-mer、16-mer、17-mer、18-mer、19-mer、或20-mer。

肽修飾

本揭露之肽包含已以任何方式及出於任何原因修飾以例如：(1)降低蛋白水解之敏感性、(2)改變結合親和力、及(3)賦予或修改其他物理化學性質或功能性之肽。例如，可以在序列中進行單個或多個氨基酸置換(例如，等同、保守或非保守置換、刪減或添加)。在示例性態樣中，本揭露之肽或肽類似物包含表1所列序列或其修飾序列。在本揭露之示例性實施例中，該肽或肽類似物被脂化(例如，豆蔻醯化(myritoylated)、棕櫚醯化、聯接至C₇-C₂₀脂質部分)、糖基化、醯胺化、羧化、磷酸化、酯化、醯化、乙醯化、環化、聚乙二醇化(例如，聯接至5至20kDa PEG、聯接至5kDa PEG、12kDa PEG、20kDa PEG)為或轉化為酸加成鹽及/或視情況二聚化或聚合、或共軛，如在此所做之進一步描述。大小為200至4600分子質量(mol wt)之PEG亦可用於修飾本發明之肽。線狀、分支狀及星狀幾何結構之PEG亦可用於修飾本發明之肽。PEG600亦被稱為PEG12。在本揭露之示例性實施例中，該肽或肽類似物在N-終端處乙醯化、在C-終端處醯胺化、及/或在Tyr殘基上磷酸化。在示例性態樣中，該肽或肽類似物在N-終端或內殘基之側鏈處聯接至脂質部分。在示例性態樣中，該肽或肽類似物直接聯接至脂質部分。在示例性態樣中，該肽或肽類似物間接聯接至脂質部分。舉例而言，該脂質部分可經由接頭附接至肽。該接頭可以係氨基酸。在示例性態樣中，脂質部分經由視情況藉由ε胺附接之Glu殘基而附接至該肽或肽類似物之Lys殘基。本發明之修飾肽之實例見表1。

某些實施例之肽較佳地係為線型的，然而，應當理解，在環化不嚴重干擾肽特性之情況下，亦能夠採用環型之肽，並將環型之肽設想為本揭露之實施例。

在示例性態樣中，該肽或肽類似物被環化。舉例而言，該肽或肽類似物包含二個Cys殘基，該等Cys殘基之硫原子參與形成二硫橋。在示例性態樣中，該肽或肽類似物包含作為末端殘基之Cys殘基。例如， Jackson et al.,J.Am.Chem.Soc.113：9391-9392(1991)及Rudinger and Jost,Experientia 20：570-571(1964)中描述了利用二硫橋或硫基環化修飾肽之合適方法。

作為另外一種選擇，能夠藉由肽環化之其他方式使該肽或肽類似物穩定化，在Davies,J.Peptide.Sci.9：471-501(2003)中回顧了該等方式。該肽或肽類似物能夠藉由形成醯胺橋、硫醚橋、硫酯橋、尿素橋、氨基甲酸酯橋、磺胺橋、內醯胺橋、內酯橋等而穩定。舉例而言，硫酯橋能夠形成於C-終端與Cys殘基之側鏈之間。作為另外一種選擇，硫酯能夠藉由具有巰基之氨基酸(Cys)及具有羧酸之氨基酸(例如，Asp、Glu)之側鏈形成。在另一種方法中，諸如二羧酸(例如，軟木酸(辛二酸))等交聯劑能夠在氨基酸側鏈之二個官能基團(諸如游離氨基、羥基、巰基基團及其組合)之間引入聯接。在示例性實施例中，該肽或肽類似物能夠藉由內醯胺橋環化。能夠形成內醯胺橋之氨基酸對之實例包含但並不局限於：鳥氨酸(Orn)及Glu、Lys及Asp、Lys及Glu、高賴氨酸及Asp、Orn及同型谷氨酸、4-氨基Phe及Asp、高賴氨酸及Glu、Lys及同型谷氨酸、及4-氨基Phe及Glu。在示例性實施例中，該肽或肽類似物能夠藉由內酯橋環化。能夠形成內酯橋之氨基酸對之實例包含但並不局限於Homoser-Homoglu、Tyr及Glu、及Tyr及Asp。

在示例性實施例中，該肽或肽類似物包含、基本上由、或由表1所列序列組成。在本揭露之替代實施例中，該肽或肽類似物包含、基本上由、或由相對於表1所列序列之修飾序列組成。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含與表1所列氨基酸序列中之任一者具有至少50 %之序列同一性之氨基酸序列。在示例性實施例中，本揭露之肽或肽類似物包含與表1所列氨基酸序列中之任一者具有至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%之或具有大於90%之序列同一性之氨基酸序列。在示例性態樣中，該肽或肽類似物包含、基本上由、或由相對於表1所列序列之修飾序列組成，其中該肽或肽類似物包含、基本上由、或由表1所列、具有一或多個(例如，2個、3個或4個)氨基酸置換之序列組成。在示例性態樣中，該氨基酸置換為保守氨基酸置換或等同氨基酸置換。

保守氨基酸置換指利用具有類似性質(例如，大小、電荷、疏水性、親水性及/或芳香性)之功能類似之氨基酸來置換肽中之氨基酸。分別含有互相作為保守置換之氨基酸之下面6組列於表2中。

此外，在本文中採用之術語「等同氨基酸置換」之意義中，在一個實施例中，下面在此指出之氨基酸之組中，一種氨基酸可以置換另一種氨基酸：具有極性側鏈之氨基酸 Asp、Glu、Lys、Arg、His、Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr、及Cys

具有小非極性殘基或微小極性殘基之氨基酸 Ala、Ser、Thr、Pro、Gly

具有非極性側鏈之氨基酸 Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Pro、及Met

具有大脂肪族非極性殘基之氨基酸 Met、Leu、Ile、Val、Cys、正亮氨酸(Nle)、同型半胱氨酸

具有脂肪族側鏈之氨基酸 Gly、Ala、Val、Leu、Ile

具有環狀側鏈之氨基酸 Phe、Tyr、Trp、His、Pro

具有芳香族側鏈之氨基酸 Phe、Tyr、Trp

具有酸性側鏈之氨基酸 Asp、Glu

具有鹼性側鏈之氨基酸 Lys、Arg、His

具有醯胺側鏈之氨基酸 Asn、Gln

具有羥基側鏈之氨基酸 Ser、Thr

具有含硫側鏈之氨基酸 Cys、Met

中性弱疏水性氨基酸 Pro、Ala、Gly、Ser、Thr

親水性酸性氨基酸 Gln、Asn、Glu、Asp

疏水性氨基酸 Leu、Ile、Val

其他氨基酸置換列於表3中。

在示例性實施例中，該氨基酸置換不為保守氨基酸置換，例如，係非保守氨基酸置換。此類通常包含相應D-氨基酸、高氨基酸、N-烷基氨基酸、β氨基酸及其他非天然氨基酸。非保守氨基酸置換仍落入上面對等同氨基酸置換[例如，極性、非極性等]認定之描述中。「非保守氨基酸置換」亦指該等類其中之一之成員置換另一類中之成員。在執行此類變更時，根據某些實施例，可以考量氨基酸之親水指數。已基於氨基酸之疏水特性及電荷特性對每個氨基酸指定了親水指數。該等氨基酸及親水指數係：異亮氨酸(+4.5)；纈氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；蛋氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；蘇氨酸(-0.7)；絲氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；組氨酸(-3.2)；谷氨酸酯(-3.5)；穀氨醯胺(-3.5)；天冬氨酸酯(-3.5)；天冬醯胺(-3.5)；賴氨酸(-3.9)；及精氨酸(-4.5)。在此項技術中已了解親水氨基酸指數在為蛋白提供相互作用生物學功能中之重要性(請參見，例如，Kyte et al.,1982,J.Mol.Biol.157：105-131)。已知某些氨基酸可以置換具有類似親水指數或得分之其他氨基酸，並且仍保持類似生物活性。在基於親水指數進行變更時，在某些實施例中，包含親水指數在±2內之氨基酸置換。在某些實施例中，包含親水指數在±1內之氨基酸置換，並且在某些實施例中，包含親水指數在±0.5內之氨基酸置換。在此項技術中亦了解，特別是當生物功能蛋白或由此產生之肽旨在用於免疫實施例中時，基於親水性能夠有效執行類似氨基酸之置換，如在此所揭露。在某些實施例中，蛋白之最大局部平均親水性受其相鄰氨基酸之親水性支配，與其免疫原性及抗原性(即，與該蛋白之生物特性)相關。對該等氨基酸殘基已指定以下親水性值：精氨酸(+3.0)；賴氨酸(+3.0)；天冬氨酸酯(+3.0.+-.1)；谷氨酸酯(+3.0.+-.1)；絲氨酸(+0.3)；天冬醯胺(+0.2)；穀氨醯胺(+0.2)；甘氨酸(0)；蘇氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5.+-.1)；丙氨酸(-0.5)；組氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；蛋氨酸(-1.3)；纈氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；異亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)及色氨酸(-3.4)。在基於類似親水性值進行變更時，在某些實施例中，包含親水性值在±2內之氨基酸置換，在某些實施例中，包含親水性值在±1內之氨基酸置換，並且在某些實施例中，包含親水性值在±0.5內之氨基酸置換。

以下給出非保守性氨基酸之實例。

丙氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：D-丙氨酸[Dala，(dA)，a]、N-乙醯基-3-(3,4-二甲氧基苯基)-D-丙氨酸、N-Me-D-Ala-OH、N-Me-Ala-OH、H-β-Ala-β-萘、L-(-)-2-氨基-3-脲基丙酸、(R)-(+)-α-烯丙基丙氨酸、(S)-(-)-α-烯丙基丙氨酸、D-2-氨基丁酸、L-2-氨基丁酸、DL-2-氨基丁酸、2-氨基異丁酸、α-氨基異丁酸、(S)-(+)-2-氨基-4-苯基丁酸乙酯、苄基α-氨基異丁酸酯(Benzyl α-aminoisobutyrate)、Abu-OH、Aib-OH、β-(9-蒽基)-Ala-OH、β-(3-苯并噻吩基)-Ala-OH、β-(3-苯并噻吩基)-D-Ala-OH、Cha-OH、Cha-OMe、β-(2-呋喃基)-Ala-OH、β-(2-呋喃基)-D-Ala-OH、β-碘-Ala-OBzl、β-碘-D-Ala-OBzl、3-碘-D-Ala-OMe、β-碘-Ala-OMe、1-Nal-OH、D-1-Nal-OH、2-Nal-OH、D-2-Nal-OH、(R)-3-(2-萘基)-β-Ala-OH、(S)-3-(2-萘基)-β-Ala-OH、β-苯基-Phe-OH、3-(2-吡啶基)-Ala-OH、3-(3-吡啶基)-Ala-OH、3-(3-吡啶基)-D-Ala-OH、(S)-3-(3-吡啶基)-β-Ala-OH、3-(4-吡啶基)-Ala-OH、3-(4-吡啶基)-D-Ala-OH、β-(2-喹啉基)-Ala-OH、3-(2-喹啉基)-DL-Ala-OH、3-(3-喹啉基)-DL-Ala-OH、3-(2-喹噁啉基)-DL-Ala-OH、β-(4-噻唑基)-Ala-OH、β-(2-噻吩基)-Ala-OH、β-(2-噻吩基)-D-Ala-OH、β-(3-噻吩基)-Ala-OH、β-(3-噻吩基)-D-Ala-OH、3-氯-D-丙氨酸甲酯、N-[(4-氯苯基)磺醯基]-β-丙氨酸、3-環己基-D-丙氨酸、3-環戊基-DL-丙氨酸、(-)-3-(3,4-二羥基苯基)-2-甲基-L-丙氨酸、3,3-二苯基-D-丙氨酸、3,3-二苯基-L-丙氨酸、N-[(S)-(+)-1-(乙氧甲醯基)-3-苯基丙基]-L-丙氨酸、N-[1-(S)-(+)-乙氧甲醯基-3-苯基丙基]-L-丙氨醯羧基酸酐、N-(3-氟苄基)丙氨酸、N-(3-吲哚基乙醯基)-L-丙氨酸、甲基(RS)-2-(氨甲基)-3-苯基丙酸酯、3-(2-Oxo-1,2-二氫-4-喹啉基)丙氨酸、3-(1-吡唑基)-L-丙氨酸、3-(2-吡啶基)-D-丙氨酸、3-(2-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(4-吡啶基)-D-丙氨酸、3-(4-吡啶基)-L-丙氨酸、3-(2-喹啉基)-DL-丙氨酸、3-(4-喹啉基)-DL-丙氨酸、D-苯乙烯基丙氨酸、L-苯乙烯基丙氨酸、3-(2-噻吩基)-L-丙氨酸、3-(2-噻吩基)-DL-丙氨酸、3-(2-噻吩基)-DL-丙氨酸、3,3,3-三氟-DL-丙氨酸、N-甲基-L-丙氨酸、3-脲基丙酸、Aib-OH、Cha-OH、脫氫-Ala-OMe、脫氫-Ala-OH、D-2-Nal-OH、β-Ala-ONp、β-Homoala-OH、β-D-Homoala-OH、β-丙氨酸、β-丙氨酸乙酯、β-丙氨酸甲酯、(S)-二苯基-β-Homoala-OH、(R)-4-(4-吡啶基)-β-Homoala-OH、(S)-4-(4-吡啶基)-β-Homoala-OH、β-Ala-OH、(S)-二苯基-β-Homoala-OH、L-β-高丙氨酸、(R)-4-(3-吡啶基)-β-Homoala-OH、α-甲基-α-萘基丙氨酸[Manap]、N-甲基-環己基丙氨酸[Nmchexa]、環己基丙氨酸[Chexa]、N-甲基-環戊基丙氨酸[Nmcpen]、環戊基丙氨酸[Cpen]、N-甲基-α-萘基丙氨酸[Nmanap]、α-萘基丙氨酸[Anap]、L-N-甲基丙氨酸[Nmala]、D-N- 甲基丙氨酸[Dnmala]、α-甲基-環己基丙氨酸[Mchexa]、α-甲基-環戊基丙烯酸[Mcpen]。每種可能性代表單獨的實施例。

精氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：高精氨酸(hArg)、N-甲基精氨酸(NMeArg)、瓜氨酸、2-氨基-3-胍基丙酸、N-亞胺乙基-L-鳥氨酸、Nω-單甲基-L-精氨酸、Nω-硝基-L-精氨酸、D-精氨酸、2-氨基-3-脲基丙酸、Nω,ω-二甲基-L-精氨酸、Nω-硝基-D-精氨酸、L-α-甲基精氨酸[Marg]、D-α-甲基精氨酸[Dmarg]、L-N-甲基精氨酸[Nmarg]、D-N-甲基精氨酸[Dnmarg]、β-Homoarg-OH、L-高精氨酸、N-(3-胍基丙基)甘氨酸[Narg]、及D-精氨酸[Darg，(dR)，r]。每種可能性代表單獨的實施例。

天冬醯胺非保守氨基酸之非限制性實例有：L-α-甲基天冬醯胺[Masn]、D-α-甲基天冬醯胺[Dmasn]、L-N-甲基天冬醯胺[Nmasn]、D-N-甲基天冬醯胺[Dnmasn]、N-(氨甲醯甲基)甘氨酸[Nasn]及D-天冬醯胺[Dasn，(dN)，n]。每種可能性代表單獨的實施例。

天冬氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：L-α-甲基天冬氨酸酯[Masp]、D-α-甲基天冬氨酸酯[Dmasp]、L-N-甲基天冬氨酸[Nmasp]、D-N-甲基天冬氨酸酯[Dnmasp]、N-(羧甲基)甘氨酸[Nasp]及D-天冬氨酸[Dasp，(dD)，d]。每種可能性代表單獨的實施例。

半胱氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：L-磺基丙氨酸、L-半胱亞磺酸、D-乙硫氨酸、S-(2-噻唑基)-L-半胱氨酸、DL-同型半胱氨酸、L-同型半胱氨酸、L-高半胱氨酸、L-α-甲基半胱氨酸[Mcys]、D-α-甲基半胱氨酸[Dmcys]、L-N-甲基半胱氨酸[Nmcys]、D-N-甲基半胱氨酸[Dnmcys]、N-(巰甲基)甘氨酸[Ncys]及D-半胱氨酸[Dcys，(dC)，c]。每種可能性代表單獨的實施例。

谷氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：γ-羧基-DL-谷氨酸、4-氟-DL-谷氨酸、β-谷氨酸、L-β-同型谷氨酸、L-α-甲基谷氨酸酯[Mglu]、D-α-甲基谷氨酸[Dmglu]、L-N-甲基谷氨酸[Nmglu]、D-N-甲基谷氨酸酯[Dnmglu]、N-(2-羧乙基)甘氨酸[Nglu]、及D-谷氨酸[Dglu，(dE)，e]。每種可能性代表單獨的實施例。

穀氨醯胺非保守氨基酸之非限制性實例有：Cit-OH、D-瓜氨酸、巰基-L-瓜氨酸、β-Gln-OH、L-β-同型穀氨醯胺、L-α-甲基穀氨醯胺[Mgln]、D-α-甲基穀氨醯胺[Dmgln]、L-N-甲基穀氨醯胺[Nmgln]、D-N-甲基穀氨醯胺[Dnmgln]、N-(2-氨基甲醯基乙基)甘氨酸[Ngln]、及D-穀氨醯胺[Dgln，(dQ)，q]。每種可能性代表單獨的實施例。

甘氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：tBu-Gly-OH、D-烯丙基甘氨酸、N-[二(甲硫基)亞甲基]甘氨酸甲基酯、Chg-OH、D-Chg-OH、D-環丙基甘氨酸、L-環丙基甘氨酸、(R)-4-氟苯基甘氨酸、(S)-4-氟苯基甘氨酸、亞氨基二乙酸、(2-茚滿基)-Gly-OH、(±)-α-膦醯基甘氨酸三甲酯、D-炔丙基甘氨酸、炔丙基-Gly-OH、(R)-2-噻吩基甘氨酸、(S)-2-噻吩基甘氨酸、(R)-3-噻吩基甘氨酸、(S)-3-噻吩基甘氨酸、2-(4-三氟甲基-苯基)-DL-甘氨酸、(2S,3R,4S)-α-(羧基環丙基)甘氨酸、N-(氯乙醯基)甘氨酸乙酯、(S)-(+)-2-氯苯基甘氨酸甲酯、N-(2-氯苯基)-N-(甲磺醯基)甘氨酸、D-α-環己基甘氨酸、L-α-環丙基甘氨酸、Di-第三丁基-亞氨基二羧酸酯、乙醯氨基氰乙酸乙酯、N-(2-氟苯基)-N-(甲磺醯基)甘氨酸、N-(4-氟苯基)-N-(甲磺醯基)甘氨酸、N-(2-亞糠基乙醯基)甘氨酸甲酯、N-(2-糠醯基)甘氨酸、N-(2-羥乙基)亞氨基二乙酸、N-(4-羥基苯基)甘氨酸、亞氨基二乙酸、N-月桂醯肌氨酸鈉鹽、L-α-新戊基甘氨酸、N-(膦醯基甲基)甘氨酸、D-炔丙基甘氨酸、L-C-炔丙基甘氨酸、肌氨酸、N,N-二甲基甘氨酸、N,N-二甲基甘氨酸乙酯、D-Chg-OH、α-膦醯基甘氨酸三甲酯、N-環丁基甘氨酸[Ncbut]、L-α-甲基乙基甘氨酸[Metg]、N-環庚基甘氨酸[Nchep]、L-α-甲基-i-丁基甘氨酸[Mtbug]、N-甲基甘氨酸[Nmgly]、L-N-甲基-乙基甘氨酸[Nmetg]、L-乙基甘氨酸[Etg]、α,α-二乙基甘氨酸[Deg]、L-N-甲基-第三丁基甘氨酸[Nmtbug]、L-t-丁基甘氨酸[Tbug]、N-環己基甘氨酸[Nchex]、N-環癸基甘氨酸[Ncdec]、N-環十二烷基甘氨酸[Ncdod]、N-環辛基甘氨酸[Ncoct]、N-環丙基甘氨酸[Ncpro]、N-環十一烷基甘氨酸[Ncund]、N-(2-氨基乙基)甘氨酸[Naeg]、N-(N-(2,2-二苯基乙基)二苯基乙基)甘氨酸[Nnbhm]、N-(2,2-氨甲醯甲基-甘氨酸[Nbhm]、N-(N-(3,3-二苯基丙基)二苯基丙基)甘氨酸[Nnbhe]及N-(3,3-氨甲醯甲基-甘氨酸[Nbhe]。每種可能性代表單獨的實施例。

組氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：L-α-甲基組氨酸[Mhis]、D-α-甲基組氨酸[Dmhis]、L-N-甲基組氨酸[Nmhis]、D-N-甲基組氨酸[Dnmhis]、N-(咪唑基乙基)甘氨酸[Nhis]、及D-組氨酸[Dhis，(dH)，h]。每種可能性代表單獨的實施例。

異亮氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：N-甲基-L-異亮氨酸[Nmile]、N-(3-吲哚基乙醯基)-L-異亮氨酸、別異亮氨酸、D-別異亮氨酸、L-β-高異亮氨酸、L-α-甲基異亮氨酸[Mile]、D-α-甲基異亮氨酸[Dmile]、D-N-甲基異亮氨酸[Dnmile]、N-(1-甲基丙基)甘氨酸[Nile]、及D-異亮氨酸[Dile，(dD)，i]。每種可能性代表單獨的實施例。

亮氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：D-亮氨酸[Dleu，(dL)，l]、環亮氨酸、DL-亮氨酸、N-甲醯基-Leu-OH、D-第三亮氨酸、L-第三亮氨酸、DL-第三亮氨酸、L-第三亮氨酸甲酯、5,5,5-三氟-DL-亮氨酸、D-β-Leu-OH、L-β-亮氨酸、DL-β-亮氨酸、L-β-高亮氨酸、DL-β-高亮氨酸、L-N-甲基-亮氨酸[Nmleu]、D-N-甲基-亮氨酸[Dnmleu]、L-α-甲基-亮氨酸[Mleu]、D-α-甲基-亮氨酸[Dmleu]、N-(2-甲基丙基)甘氨酸[Nleu]、D-亮氨酸[Dleu，l]、D-正亮氨酸、L-正亮氨酸、DL-正亮氨酸、L-N-甲基正亮氨酸[Nmnle]及L-正亮氨酸[Nle]。每種可能性代表單獨的實施例。

賴氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：DL-5-羥基賴氨酸、(5R)-5-羥基-L-賴氨酸、β-Lys-OH、L-β-高賴氨酸、L-α-甲基-賴氨酸[Mlys]、D-α-甲基-賴氨酸[Dmlys]、L-N-甲基-賴氨酸[Nmlys]、D-N-甲基-賴氨酸[Dnmlys]、N-(4-氨基丁基)甘氨酸[Nlys]、及D-賴氨酸[Dlys，(dK)，k]。每種可能性代表單獨的實施例。

蛋氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：L-β-高蛋氨酸、DL-β-高蛋氨酸、L-α-甲基蛋氨酸[Mmet]、D-α-甲基蛋氨酸[Dmmet]、L-N-甲基蛋氨酸[Nmmet]、D-N-甲基蛋氨酸[Dnmmet]、N-(2-甲硫基乙基)甘氨酸[Nmet]、及D-蛋氨酸[Dmet，(dM)，m]。每種可能性代表單獨的實施例。

苯丙氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：N-乙醯基-2-氟-DL-苯丙氨酸、N-乙醯基-4-氟-DL-苯丙氨酸、4-氨基-L-苯丙氨酸、3-[3,4-雙(三氟甲基)苯基]-L-丙氨酸、Bpa-OH、D-Bpa-OH、4-第三丁基-Phe-OH、4-第三丁基-D-Phe-OH、4-(氨基)-L-苯丙氨酸、rac-β²-高苯丙氨酸、2-甲氧基-L-苯丙氨酸、(S)-4-甲氧基-β-Phe-OH、2-硝基-L-苯丙氨酸、五氟-D-苯丙氨酸、五氟-L-苯丙氨酸、Phe(4-Br)-OH、D-Phe(4-Br)-OH、Phe(2-CF₃)-OH、D-Phe(2-CF₃)-OH、Phe(3-CF₃)-OH、D-Phe(3-CF₃)-OH、Phe(4-CF₃)-OH、D-Phe(4-CF₃)-OH、Phe(2-Cl)-OH、D-Phe(2-Cl)-OH、Phe(2,4-Cl₂)-OH、D-Phe(2,4-Cl₂)-OH、D-Phe(3-Cl)-OH、Phe(3,4-Cl₂)-OH、Phe(4-Cl)-OH、D-Phe(4-Cl)-OH、Phe(2-CN)-OH、D-Phe(2-CN)-OH、D-Phe(3-CN)-OH、Phe(4-CN)-OH、D-Phe(4-CN)-OH、Phe(2-Me)-OH、D-Phe(2-Me)-OH、Phe(3-Me)-OH、D-Phe(3-Me)-OH、Phe(4-Me)-OH、Phe(4-NH₂)-OH、Phe(4-NO₂)-OH、Phe(2-F)-OH、D-Phe(2-F)-OH、Phe(3-F)-OH、D-Phe(3-F)-OH、Phe(3,4-F₂)-OH、D-Phe(3,4-F₂)-OH、Phe(3,5-F₂)-OH、Phe(4-F)-OH、D-Phe(4-F)-OH、Phe(4-I)-OH、D-3,4,5-三氟苯丙氨酸、對溴-DL-苯丙氨酸、4-溴-L-苯丙氨酸、β-苯基-D-苯丙氨酸、4-氯-L-苯丙氨酸、DL-2,3-二氟苯丙氨酸、DL-3,5-二氟苯丙氨酸、3,4-二羥基-L-苯丙氨酸、3-(3,4-二甲氧基苯基)-L-丙氨酸、N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-2-甲氧基-L-苯丙氨酸、o-氟-DL-苯丙氨酸、m-氟-L-苯丙氨酸、m-氟-DL-苯丙氨酸、p-氟-L-苯丙氨酸、p-氟-DL-苯丙氨酸、4-氟-D-苯丙氨酸、2-氟-L-苯丙氨酸甲酯、p-氟-DL-Phe-OMe、D-3-溴苯丙氨酸、D-4-溴苯丙氨酸、L-β-(6-氯-4-吡啶基)丙氨酸、D-3,5-二氟苯丙氨酸、L-3-氟苯丙氨酸、L-4-氟苯丙氨酸、L-β-(1H-5-吲哚基)丙氨酸、2-硝基-L-苯丙氨酸、五氟-L-苯丙氨酸、phe(3-br)-oh、Phe(4-Br)-OH、Phe(2-CF₃)-OH、D-Phe(2-CF₃)-OH、Phe(3-CF₃)-OH、D-Phe(3-CF₃)-OH、Phe(4-CF₃)-OH、D-Phe(4-CF₃)-OH、Phe(2-Cl)-OH、D-Phe(2-Cl)-OH、Phe(2,4-Cl₂)-OH、D-Phe(2,4-Cl₂)-OH、Phe(3,4-Cl₂)-OH、D-Phe(3,4-Cl₂)-OH、Phe(4-Cl)-OH、D-Phe(4-Cl)-OH、 Phe(2-CN)-OH、D-Phe(2-CN)-OH、D-Phe(3-CN)-OH、Phe(4-CN)-OH、Phe(2-Me)-OH、Phe(3-Me)-OH、D-Phe(3-Me)-OH、Phe(4-NO₂)-OH、D-Phe(4-NO₂)-OH、D-Phe(2-F)-OH、Phe(3-F)-OH、D-Phe(3-F)-OH、Phe(3,4-F₂)-OH、Phe(3,5-F₂)-OH、D-Phe(4-F)-OH、Phe(4-I)-OH、D-Phe(4-I)-OH、4-(膦醯甲基)-Phe-OH、L-4-三氟甲基苯丙氨酸、3,4,5-三氟-D-苯丙氨酸、L-3,4,5-三氟苯丙氨酸、6-羥基-DL-DOPA、4-(羥甲基)-D-苯丙氨酸、N-(3-吲哚基乙醯基)-L-苯丙氨酸、p-碘-D-苯丙氨酸、4-碘-L-苯丙氨酸、α-甲基-D-苯丙氨酸、α-甲基-L-苯丙氨酸、α-甲基-DL-苯丙氨酸、α-甲基-DL-苯丙氨酸甲酯、4-硝基-D-苯丙氨酸、4-硝基-L-苯丙氨酸、4-硝基-DL-苯丙氨酸、(S)-(+)-4-硝基苯丙氨酸甲酯、2-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸、2-(三氟甲基)-L-苯丙氨酸、3-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸、3-(三氟甲基)-L-苯丙氨酸、4-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸、3,3',5-三碘-L-甲狀腺原氨酸、(R)-4-溴-β-Phe-OH N-乙醯基-DL-β-苯丙氨酸、(S)-4-溴-β-Phe-OH、(R)-4-氯-β-Homophe-OH、(S)-4-氯-β-Homophe-OH、(R)-4-氯-β-Phe-OH、(S)-4-氯-β-Phe-OH、(S)-2-氰基-β-Homophe-OH、(R)-4-氰基-β-Homophe-OH、(S)-4-氰基-β-Homophe-OH、(R)-3-氰基-β-Phe-OH、(R)-4-氰基-β-Phe-OH、(S)-4-氰基-β-Phe-OH、(R)-3,4-二甲氧基-β-Phe-OH、(S)-3,4-二甲氧基-β-Phe-OH、(R)-4-氟-β-Phe-OH、(S)-4-氟-β-Phe-OH、(S)-4-碘-β-Homophe-OH、(S)-3-氰基-β-Homophe-OH、(S)-3,4-二氟-β-Homophe-OH、(R)-4-氟-β-Homophe-OH、(S)-β2-高苯丙氨酸、(R)-3-甲氧基-β-Phe-OH、(S)-3-甲氧基-β-Phe-OH、(R)-4-甲氧基-β-Phe-OH、(S)-4-甲基-β-Homophe-OH、(R)-2-甲基-β-Phe-OH、(S)-2-甲基-β-Phe-OH、(R)-3-甲基-β-Phe-OH、(S)-3-甲基-β-Phe-OH、(R)-4-甲基 -β-Phe-OH、(S)-4-甲基-β-Phe-OH、β-Phe-OH、D-β-Phe-OH、(S)-2-(三氟甲基)-β-Homophe-OH、(S)-2-(三氟甲基)-β-Homophe-OH、(S)-3-(三氟甲基)-β-Homophe-OH、(R)-4-(三氟甲基)-β-Homophe-OH、(S)-2-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(R)-3-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(S)-3-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(R)-4-(三氟甲基)-β-Phe-OH、(S)-4-(三氟甲基)-β-Phe-OH、β-Homophe-OH、D-β-Homophe-OH、(S)-2-甲基-β-Homophe-OH、(S)-3-甲基-β-Homophe-OH、β-Phe-OH、β-D-Phe-OH、(S)-3-(三氟甲基)-β-Homophe-OH、L-β-高苯丙氨酸、DL-β-高苯丙氨酸、DL-β-苯丙氨酸、DL-高苯丙氨酸甲酯、D-高苯丙氨酸、L-高苯丙氨酸、DL-高苯丙氨酸、D-高苯丙氨酸乙酯、(R)-β²-高苯丙氨酸、L-α-甲基-高苯丙氨酸[Mhphe]、L-α-甲基苯丙氨酸[Mphe]、D-a-甲基苯丙氨酸[Dmphe]、L-N-甲基-高苯丙氨酸[Nm phe]、L-高苯丙氨酸[Hphe]、L-N-甲基苯丙氨酸[Nmphe]、D-N-甲基苯丙氨酸[Dnmphe]、N-苄基甘氨酸[Nphe]及D-苯丙氨酸[Dphe，(dF)，f]。每種可能性代表單獨的實施例。

脯氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：高脯氨酸(hPro)、(4-羥基)Pro(4HyP)、(3-羥基)Pro(3HyP)、γ-苄基-脯氨酸、γ-(2-氟-苄基)-脯氨酸、γ-(3-氟-苄基)-脯氨酸、γ-(4-氟-苄基)-脯氨酸、γ-(2-氯-苄基)-脯氨酸、γ-(3-氯-苄基)-脯氨酸、γ-(4-氯-苄基)-脯氨酸、γ-(2-溴-苄基)-脯氨酸、γ-(3-溴-苄基)-脯氨酸、γ-(4-溴-苄基)-脯氨酸、γ-(2-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(2-硝基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-硝基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-硝基-苄基)-脯氨酸、γ-(1-萘基甲基)-脯氨酸、γ-(2-萘基甲基)-脯氨酸、γ-(2,4-二氯-苄基)-脯氨酸、γ-(3,4-二氯-苄基)-脯氨酸、γ-(3,4-二氟-苄基)-脯氨酸、γ-(2-三氟-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-三氟-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-三氟-甲基-苄基)-脯氨酸、γ-(2-氰基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-氰基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-氰基-苄基)-脯氨酸、γ-(2-碘-苄基)-脯氨酸、γ-(3-碘-苄基)-脯氨酸、γ-(4-碘-苄基)-脯氨酸、γ-(3-苯基-烯丙基-苄基)-脯氨酸、γ-(3-苯基-丙基-苄基)-脯氨酸、γ-(4-第三丁基-苄基)-脯氨酸、γ-二苯甲基-脯氨酸、γ-(4-聯苯基-甲基)-脯氨酸、γ-(4-噻唑基-甲基)-脯氨酸、γ-(3-苯并噻吩基-甲基)-脯氨酸、γ-(2-噻吩基-甲基)-脯氨酸、γ-(3-噻吩基-甲基)-脯氨酸、γ-(2-呋喃基-甲基)-脯氨酸、γ-(2-吡啶基-甲基)-脯氨酸、γ-(3-吡啶基-甲基)-脯氨酸、γ-(4-吡啶基-甲基)-脯氨酸、γ-烯丙基-脯氨酸、γ-丙炔基-脯氨酸、α-經修飾脯氨酸殘基、六氫吡啶羧酸、氮雜環丁烷-3-羧酸、L-β-高脯氨酸、L-β³-高脯氨酸、L-β-高羥脯氨酸、羥基脯氨酸[Hyp]、L- -甲基脯氨酸[Mpro]、D- -甲基脯氨酸[Dmpro]、L-N-甲基脯氨酸[Nmpro]、D-N-甲基脯氨酸[Dnmpro]、及D-脯氨酸[Dpro，(dP)，p]。每種可能性代表單獨的實施例。

絲氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：(2R,3S)-3-苯基異絲氨酸、D-環絲氨酸、L-異絲氨酸、DL-異絲氨酸、DL-3-苯基絲氨酸、L-β-高絲氨酸、D-高絲氨酸、D-高絲氨酸、L-3-高絲氨酸、L-高絲氨酸、L-α-甲基絲氨酸[Mser]、D-α-甲基絲氨酸[Dmser]、L-N-甲基絲氨酸[Nmser]、D-N-甲基絲氨酸[Dnmser]、D-絲氨酸[Dser，(dS)，s]、N-(羥甲基)甘氨酸[Nser]及磷酸絲氨酸[pSer]。每種可能性代表單獨的實施例。

蘇氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：L-別蘇氨酸、D-甲狀腺素、L-β-高蘇氨酸、L-α-甲基蘇氨酸[Mthr]、D-α-甲基蘇氨酸[Dmthr]、L-N-甲基蘇氨酸[Nmthr]、D-N-甲基蘇氨酸[Dnmthr]、D-蘇氨酸[Dthr，(dT)，t]、N-(1-羥乙基)甘氨酸[Nthr]及磷酸蘇氨酸[pThr]。每種可能性代表單獨的實施例。

色氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：5-氟-L-色氨酸、5-氟-DL-色氨酸、5-羥基-L-色氨酸、5-甲氧基-DL-色氨酸、L-N-甲基色氨酸、5-甲基-DL-色氨酸、H-Tpi-OMe.β-Homotrp-OMe、L-β-高色氨酸、L-α-甲基色氨酸[Mtrp]、D-α-甲基色氨酸[Dmtrp]、L-N-甲基色氨酸[Nmtrp]、D-N-甲基色氨酸[Dnmtrp]、N-(3-吲哚基乙基)甘氨酸[Nhtrp]、D-色氨酸[Dtrp，(dW)，w]。每種可能性代表單獨的實施例。

酪氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：3,5二碘酪氨酸(3,5-dITyr)、3,5二溴酪氨酸(3,5-dBTyr)、高酪氨酸、D-酪氨酸、3-氨基-L-酪氨酸、3-氨基-D-酪氨酸、3-碘-L-酪氨酸、3-碘-D-酪氨酸、3-甲氧基-L-酪氨酸、3-甲氧基-D-酪氨酸、L-甲狀腺素、D-甲狀腺素、L-甲狀腺原氨酸、D-甲狀腺原氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-甲基-D-酪氨酸、D-甲狀腺原氨酸、O-乙基-L-酪氨酸、O-乙基-D-酪氨酸、3,5,3'-三碘-L-甲狀腺原氨酸、3,5,3'-三碘-D-甲狀腺原氨酸、3,5-二碘-L-甲狀腺原氨酸、3,5-二碘-D-甲狀腺原氨酸、D-間酪氨酸、L-間酪氨酸、D-鄰酪氨酸、L-鄰酪氨酸、苯丙氨酸、經置換苯丙氨酸、N-硝基苯丙氨酸、p-硝基苯丙氨酸、3-氯-Dtyr-oh、Tyr(3,5-diI)、3-氯-L-酪氨酸、Tyr(3-NO₂)-OH、Tyr(3,5-diI)-OH、N-Me-Tyr-OH、α-甲基-DL-酪氨酸、3-硝基-L-酪氨酸、DL-o-酪氨酸、β-Homotyr-OH、(R)-β-Tyr-OH、(S)-β-Tyr-OH、L-α-甲基酪氨酸[Mtyr]、D-α-甲基酪氨酸[Dmtyr]、L-N-甲基酪氨酸[Nmtyr]、D-N-甲基酪氨酸[Dnmtyr]、D-酪氨酸[Dtyr，(dY)，y]、O-甲基-酪氨酸、及磷酸酪氨酸[pTyr]。每種可能性代表單獨的實施例。

纈氨酸非保守氨基酸之非限制性實例有：3-氟-DL-纈氨酸、4,4,4,4',4',4'-六氟-DL-纈氨酸、D-纈氨酸[Dval，(dV)，v]、N-Me-Val-OH[Nmval]、N-Me-Val-OH、L-α-甲基纈氨酸[Mval]、D-α-甲基纈氨酸[Dmval]、(R)-(+)-α-甲基纈氨酸、(S)-(-)-α-甲基纈氨酸及D-N-甲基纈氨酸[Dnmval]。每種可能性代表單獨的實施例。

可以置換為非保守替換之其他非天然氨基酸包含：鳥氨酸及其修飾：D-鳥氨酸[Dorn]、L-鳥氨酸[Orn]、DL-鳥氨酸、L-α-甲基鳥氨酸[Morn]、D-α-甲基鳥氨酸[Dmorn]、L-N-甲基鳥氨酸[Nmorn]、D-N-甲基鳥氨酸[Dnmorn]及N-(3-氨基丙基)甘氨酸[Norn]。每種可能性代表單獨的實施例。

脂環族氨基酸：L-2,4-二氨基丁酸、L-2,3-二氨基丙酸、N-Me-Aib-OH、(R)-2-(氨基)-5-己炔酸、哌啶-2-羧酸、氨基降冰片基-羧酸酯[Norb]、α-氨基丁酸[Abu]、氨基環丙烷-羧酸酯[Cpro]、(順)-3-氨基二環[2.2.1]庚烷-2-羧酸、exo-順-3-氨基二環[2.2.1]庚-5-烯-2-羧酸、1-氨基-1-環丁烷羧酸、順-2-氨基環庚烷羧酸、1-氨基環己烷羧酸、順-2-氨基環己烷羧酸、反-2-氨基環己烷羧酸、順-6-氨基-3-環己烯-1-羧酸、2-(1-氨基環己基)乙酸、順-2-氨基-1-環辛烷羧酸、順-2-氨基-3-環辛烯-1-羧酸、(1R,2S)-(-)-2-氨基-1-環戊烷羧酸、(1S,2R)-(+)-2-氨基-1-環戊烷羧酸、順-2-氨基-1-環戊烷羧酸、2-(1-氨基環戊基)乙酸、順-2-氨基-2-甲基環己烷羧酸、順-2-氨基-2-甲基環戊烷羧酸、3-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸、3-氮雜環丁烷羧酸、amchc-oh、1-氨基環丁烷羧酸、1-(氨基)環己烷羧酸、順-2-(氨基)-環己烷羧酸、反-2-(氨基)-環己烷羧酸、順-4-(氨基)環己烷羧酸、反-4-(氨基)環己烷羧酸、(±)-順 -2-(氨基)-3-環己烯-1-羧酸、(±)-順-6-(氨基)-3-環己烯-1-羧酸、2-(1-氨基環己基)乙酸、順-[4-(氨基)環己基]乙酸、1-(氨基)環戊烷羧酸、(±)-順-2-(氨基)環戊烷羧酸、(1R,4S)-(+)-4-(氨基)-2-環戊烯-1-羧酸、(±)-順-2-(氨基)-3-環戊烯-1-羧酸、2-(1-氨基環戊基)乙酸、1-(氨基)環丙烷羧酸、乙基1-氨基環丙烷羧酸酯、1,2-反-achec-oh、1-(氨基)環丁烷羧酸、1-(氨基)環己烷羧酸、順-2-(氨基)-環己烷羧酸、反-2-(氨基)環己烷羧酸、順-4-(氨基)環己烷羧酸、反-4-(氨基)環己烷羧酸、順-[4-(氨基)環己基]乙酸、1-(氨基)環戊烷羧酸、(1R,4S)-(+)-4-(氨基)-2-環戊烯-1-羧酸、(1S,4R)-(-)-4-(氨基)-2-環戊烯-1-羧酸、1-(氨基)環丙烷羧酸、反-4-(氨基甲基)環己烷羧酸、β-Dab-OH、3-氨基-3-(3-溴苯基)丙酸、3-氨基丁酸、順-2-氨基-3-環戊烯-1-羧酸、DL-3-氨基異丁酸、(R)-3-氨基-2-苯基丙酸、(±)-3-(氨基)-4-(4-聯苯基)丁酸、順-3-(氨基)環己烷羧酸、(1S,3R)-(+)-3-(氨基)環戊烷羧酸、(2R,3R)-3-(氨基)-2-羥基-4-苯基丁酸、(2S,3R)-3-(氨基)-2-羥基-4-苯基丁酸、2-(氨基甲基)苯基乙酸、(R)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(S)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(R)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(S)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(R)-3-(氨基)-5-苯基戊酸、(R)-3-(氨基)-2-苯基丙酸、乙基3-(苄氨基)丙酸酯、順-3-(氨基)環己烷羧酸、(S)-3-(氨基)-5-己烯酸、(R)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(S)-3-(氨基)-2-甲基丙酸、(R)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(S)-3-(氨基)-4-(2-萘基)丁酸、(R)-(-)-吡咯烷-3-羧酸、(S)-(+)-吡咯烷-3-羧酸、N-甲基-γ-氨基丁酸酯[Nmgabu]、γ-氨基丁酸[Gabu]、N-甲基-α-氨基-α-丁酸甲酯[Nmaabu]、α-氨基-α-丁酸甲酯[Aabu]、N-甲基-α-氨基異丁酸酯[Nmaib]、α-氨基異丁酸[Aib]、α-甲基-y-氨基丁酸酯[Mgabu]。每種可能性代表單獨的實施例。

苯基甘氨酸及其修飾：Phg-OH、D-Phg-OH、2-(哌嗪子基)-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙酸、2-(哌嗪子基)-2-(2-氟苯基)乙酸、2-(4-哌嗪子基)-2-(3-氟苯基)乙酸、2-(4-哌嗪子基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酸、2-(4-哌嗪子基)-2-(3-吡啶基)乙酸、2-(4-哌嗪子基)-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙酸、L-(+)-2-氯苯基甘氨酸、(±)-2-氯苯基甘氨酸、(±)-4-氯苯基甘氨酸、(R)-(-)-2-(2,5-二羥苯基)甘氨酸、(R)-(-)-N-(3,5-二硝基苯甲醯基)-α-苯基甘氨酸、(S)-(+)-N-(3,5-二硝基苯甲醯基)-α-苯基甘氨酸、2,2-二苯基甘氨酸、2-氟-DL-α-苯基甘氨酸、4-氟-D-α-苯基甘氨酸、4-羥基-D-苯基甘氨酸、4-羥基-L-苯基甘氨酸、2-苯基甘氨酸、D-(-)-α-苯基甘氨酸、D-(-)-α-苯基甘氨酸、DL-α-苯基甘氨酸、L-(+)-α-苯基甘氨酸、N-苯基甘氨酸、(R)-(-)-2-苯基甘氨酸甲酯、(S)-(+)-2-苯基甘氨酸甲酯、2-苯胺基乙腈鹽酸化物(2-Phenylglycinonitrile hydrochloride)、α-苯胺基乙腈(α-Phenylglycinonitrile)、3-(三氟甲基)-DL-苯基甘氨酸、及4-(三氟甲基)-L-苯基甘氨酸。每種可能性代表單獨的實施例。

青黴胺及其修飾：N-乙醯基-D-青黴胺、D-青黴胺、L-青黴胺[Pen],DL-青黴胺、α-甲基青黴胺[Mpen]、N-甲基青黴胺[Nmpen]。每種可能性代表單獨的實施例。

β-高吡咯烷。每種可能性代表單獨的實施例。

芳香族氨基酸：3-乙醯氨基苯甲酸、4-乙醯氨基苯甲酸、4-乙醯氨基-2-甲基苯甲酸、N-乙醯基鄰氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸鹽酸化物、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、2-氨基二苯甲酮-2'-羧酸、2-氨基-4-溴苯甲酸、2-氨基-5-溴苯甲酸、3-氨基-2-溴苯甲酸、3-氨基-4-溴苯甲酸、3-氨基-5-溴苯甲酸、4-氨基-3-溴苯甲酸、5-氨基-2-溴苯甲酸、2-氨基-3-溴-5-甲基苯甲酸、2-氨基-3-氯苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸、2-氨基-5-氯苯甲酸、2-氨基-5-氯苯甲酸、2-氨基-6-氯苯甲酸、3-氨基-2-氯苯甲酸、3-氨基-4-氯苯甲酸、4-氨基-2-氯苯甲酸、4-氨基-3-氯苯甲酸、5-氨基-2-氯苯甲酸、5-氨基-2-氯苯甲酸、4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸、2-氨基-5-氯-3-甲基苯甲酸、3-氨基-2,5-二氯苯甲酸、4-氨基-3,5-二氯苯甲酸、2-氨基-4,5-二甲氧基苯甲酸、4-(2-氨基乙基)苯甲酸鹽酸化物、2-氨基-4-氟苯甲酸、2-氨基-5-氟苯甲酸、2-氨基-6-氟苯甲酸、4-氨基-2-氟苯甲酸、2-氨基-5-羥基苯甲酸、3-氨基-4-羥基苯甲酸、4-氨基-3-羥基苯甲酸、2-氨基-5-碘苯甲酸、5-氨基間苯二甲酸、2-氨基-3-甲氧基苯甲酸、2-氨基-4-甲氧基苯甲酸、2-氨基-5-甲氧基苯甲酸、3-氨基-2-甲氧基苯甲酸、3-氨基-4-甲氧基苯甲酸、3-氨基-5-甲氧基苯甲酸、4-氨基-2-甲氧基苯甲酸、4-氨基-3-甲氧基苯甲酸、5-氨基-2-甲氧基苯甲酸、2-氨基-3-甲基苯甲酸、2-氨基-5-甲基苯甲酸、2-氨基-6-甲基苯甲酸、3-(氨基甲基)苯甲酸、3-氨基-2-甲基苯甲酸、3-氨基-4-甲基苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、4-氨基-2-甲基苯甲酸、4-氨基-3-甲基苯甲酸、5-氨基-2-甲基苯甲酸、3-氨基-2-萘甲酸、6-氨基-2-萘甲酸、2-氨基-3-硝基苯甲酸、2-氨基-5-硝基苯甲酸、2-氨基-5-硝基苯甲酸、4-氨基-3-硝基苯甲酸、5-氨基-2-硝基苯甲酸、3-(4-氨基苯基)丙酸、3-氨基鄰苯二甲酸、4-氨基鄰苯二甲酸、3-氨基水楊酸、4-氨基水楊酸、5-氨基水楊酸、5-氨基水楊酸、2-氨基對苯二甲酸、2-氨基-3,4,5,6-四氟苯甲酸、4-氨基-2,3,5,6-四氟苯甲酸、(R)-2-氨基-1,2,3,4-四氫萘-2-羧酸、(S)-2-氨基-1,2,3,4-四氫-2-萘羧酸、2-氨基-3-(三氟甲基)苯甲酸、2-氨基-3-(三氟甲基)苯甲酸、3-氨基-5-(三氟甲基)苯甲酸、5-氨基-2,4,6-三碘間苯二甲酸、2-氨基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸、2-苯胺基苯基乙酸、2-Abz-OH、3-Abz-OH、4-Abz-OH、2-(氨基甲基)苯甲酸、3-(氨基甲基)苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、第三丁基2-氨基苯甲酸酯、第三丁基3-氨基苯甲酸酯、第三丁基4-氨基苯甲酸酯、4-(丁基氨基)苯甲酸、2,3-二氨基苯甲酸、3,4-二氨基苯甲酸、3,5-二氨基苯甲酸、3,5-二氨基苯甲酸、3,5-二氯鄰氨基苯甲酸、4-(二乙基胺基)苯甲酸、4,5-二氟鄰氨基苯甲酸、4-(二甲基氨基)苯甲酸、4-(二甲基氨基)苯甲酸、3,5-二甲基鄰氨基苯甲酸、5-氟-2-甲氧基苯甲酸、2-Abz-OH、3-Abz-OH、4-Abz-OH、3-(氨基甲基)苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、4-(2-肼基)苯甲酸、3-羥基鄰氨基苯甲酸、3-羥基鄰氨基苯甲酸、3-氨基苯甲酸甲酯、3-(甲基氨基)苯甲酸、4-(甲基氨基)苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸甲酯、2-氨基-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯、4-硝基鄰氨基苯甲酸、N-苯基鄰氨基苯甲酸、N-苯基鄰氨基苯甲酸、及4-氨基水楊酸鈉。每種可能性代表單獨的實施例。

其他氨基酸：(S)-α-氨基-γ-丁內酯、DL-2-氨基辛酸、7-氨基頭孢烷酸、4-氨基肉桂酸、(S)-(+)-α-氨基環己烷丙酸、(R)-氨基-(4-羥基苯基)乙酸甲酯、5-氨基乙醯丙酸、4-氨基-煙酸、3-氨基苯基乙酸、4-氨基苯基乙酸、2-氨基-2-苯基丁酸、4-(4-氨基苯基)丁酸、2-(4-氨基苯基硫代)乙酸、DL-α-氨基-2-噻吩乙酸、5-氨基戊酸、8-苄基(S)-2-氨基辛烷二酸酯(8-Benzyl(S)-2-aminooctanedioate)、4-(氨基)-1-甲基吡咯-2-羧酸、4-(氨基)四氫噻喃-4-羧酸、(1R,3S,4S)-2-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-3-羧酸、L-氮雜環丁烷-2-羧酸、氮雜環丁烷-3-羧酸、4-(氨基)哌啶-4-羧酸、二氨基苯甲酸、Inp-OH、 (R)-Nip-OH、(S)-4-氧代哌啶-2-羧酸、2-(4-哌嗪子基)-2-(4-氟苯基)乙酸、2-(4-哌嗪子基)-2-苯基乙酸、4-哌啶乙醛、4-哌啶基乙酸、(-)-L-硫代脯氨酸、Tle-OH、3-哌啶羧酸、L-(+)-刀豆氨酸、(±)-肉堿、苯丁酸氮芥、2,6-二氨基庚二酸、中-2,3-二氨基丁二酸、4-(二甲胺基)肉桂酸、4-(二甲胺基)苯基乙酸、(S)-N-Boc-哌啶-3-羧酸乙酯、哌嗪子基乙酸乙酯(ethyl-piperazinoacetate)、4-[2-(氨基)乙基]哌嗪-1-基乙酸、(R)-4-(氨基)-5-苯基戊酸、(S)-氮雜環丁烷-2-羧酸、氮雜環丁烷-3-羧酸、四氫煙酸、Inp-OH、(R)-Nip-OH、DL-Nip-OH、4-苯基-哌啶-4-羧酸、1-哌嗪乙酸、4-哌啶乙酸、(R)-哌啶-2-羧酸、(S)-哌啶-2-羧酸、(S)-1,2,3,4-四氫去甲哈爾滿-3-羧酸((S)-1,2,3,4-tetrahydronorharmane-3-carboxylic acid)、Tic-OH、D-Tic-OH、亞氨基二乙酸、二氫吲哚-2-羧酸、DL-犬尿氨酸(DL-Kynurenine)、L-氮丙啶-2-羧酸酯、4-氨基丁酸甲酯、(S)-2-哌嗪羧酸、2-(1-哌嗪基)乙酸、(R)-(-)-3-哌啶羧酸、2-吡咯烷酮-5-羧酸、(R)-(+)-2-吡咯烷酮-5-羧酸、(R)-1,2,3,4-四氫-3-異喹啉羧酸、(S)-1,2,3,4-四氫-3-異喹啉羧酸、L-4-噻唑烷羧酸、(4R)-(-)-2-硫代-4-噻唑烷羧酸、肼基乙酸、及3,3',5-三碘-L-甲狀腺原氨酸。每種可能性代表單獨的實施例。

在某些實施例中，該肽或肽類似物在1位或2位處或1位及2位二者處包含使肽對肽酶裂解達成抗性之氨基酸。在某些實施例中，該肽或肽類似物在1位處包含選自由如下組成之組中之氨基酸：D-組氨酸、脫氨基組氨酸、羥基組氨酸、乙醯基-組氨酸、高組氨酸、N-甲基組氨酸、α-甲基組氨酸、咪唑乙酸、或α,α-二甲基咪唑乙酸(DMIA)。在某些實施例中，該肽或肽類似物在2位處包含選自由如下組成之組中之氨基酸：D-絲氨酸、D-丙氨酸、纈氨酸、甘氨酸、N-甲基絲氨酸、N-甲基丙氨酸、或α，氨基異丁酸。在某些實施例中，該肽或肽類似物在2位處包含使該肽或肽類似物對肽酶達成抗性之氨基酸，並且使該肽或肽類似物對肽酶達成抗性之氨基酸不為D絲氨酸。在某些實施例中，該共價鍵係分子內橋而非內醯胺橋。舉例而言，合適之共價鍵合方法包含烯烴複分解反應、基於羊毛硫氨酸之環化、二硫橋或經修飾含硫橋形成、α,ω-二氨基烷接臂之使用、金屬原子橋之形成、及肽環化之其他方式中之任一者或多者。

在某些實施例中，利用將帶電荷氨基酸引入類似物之C-末端部之氨基酸置換及/或添加來修飾肽或肽類似物。在某些實施例中，此種修飾增強穩定性及溶解度。在此使用之術語「帶電荷氨基酸」或「帶電荷殘基」指包含在生理pH之水溶液中帶負電荷(即，去質子化)或帶正電荷(即，質子化)之側鏈之氨基酸。在某些態樣中，該等引入帶電荷氨基酸修飾之氨基酸置換及/或添加可以處於C-末端位。在某些實施例中，在C-末端位可以引入一個、二個或三個(並且在某些情形中，超過三個)帶電荷氨基酸。在示例性實施例中，一個、二個或全部帶電荷氨基酸可以帶負電荷。某些實施例中之帶負電荷氨基酸係天冬氨酸、谷氨酸、磺基丙氨酸、高磺基丙氨酸或高谷氨酸。在某些態樣中，該等修飾提高溶解度。

依據某些實施例，在此揭露之肽或肽類似物可以藉由一或二個氨基酸殘基對C-終端之截短而被修飾。就此而言，示例性態樣中之肽或肽類似物包含視情況利用在此描述之任一添加修飾藉由一或二個氨基酸殘基在C-終端處截短之SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者之序列。

在某些實施例中，該肽包含其中C-末端氨基酸之羧酸由電中性基團(諸如，醯胺或酯)替換之SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者之修飾序列。因此，在某些實施例中，該肽係醯胺化肽，俾使C-末端殘基包含代替氨基酸之α羧酸酯之醯胺。在此使用的對肽或類似物的一般提及旨在涵蓋具有修飾氨基終端、修飾羧基終端、或氨基終端及羧基終端二者之修飾之肽。舉例而言，包含代替末端羧酸之醯胺基團之氨基酸鏈旨在由指定標準氨基酸之氨基酸序列涵蓋。

依據某些實施例，可藉由至少一個氨基酸殘基上之綴合來修飾在此揭露之肽。就此而言，示例性態樣中之肽包含與異源部分綴合之SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323、及354至377中之任一者之序列，如在此所述。

肽類似物

本揭露提供諸如但並不局限於擬肽化合物(peptidomimetic compound)等之肽類似物，其可以改善穩定性及細胞滲透性。在示例性實施例中，擬肽化合物包含依據SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者之序列，其中該肽中之一或多個肽鍵(-CO-NH-)例如由如下置換：N-甲基化醯胺鍵(-N(CH3)-CO-)、酯鍵(-C(=0)-0-)、南五味子酮鍵(ketomethylene bond)(-CO-CH₂-)、亞硫醯基亞甲鍵(-S(=0)-CH₂-),α-氮雜鍵(-NH-N(R)-CO-)，其中R係任一烷基(例如，甲基)、胺鍵(-CH₂-NH-)、硫醚鍵(-CH₂-S-)、伸乙基鍵(-CH₂-CH₂-)，羥基伸乙基鍵(-CH(OH)-CH₂-)、硫代醯胺鍵(-CS-NH-)、烯雙鍵(-CH=CH-)、氟化烯雙鍵(-CF=CH-)、或反醯胺鍵(-NH-CO-)、肽衍生物(-N(R^x)-CH₂-CO-)，其中R^x係天然地存在於碳原子上之「正態」側鏈。該等修飾能夠發生於沿肽鏈之鍵中之任一者處並且甚至同時發生於幾個(2至3)鍵處。

在示例性態樣中，該肽類似物係擬肽(peptidomimetic)。擬肽及其製造方法係此項技術中已知的。例如，請參見Advances in Amino Acid Mimetics and Peptidomimetics,Volumes 1及2,ed.,Abell,A.,JAI Press Inc.,Greenwich,CT,2006。在示例性態樣中，擬肽係包含D異構體氨基酸之D肽之擬肽。在示例性態樣中，擬肽係其中氨基酸之側鏈連接至肽骨架之α氮原子上之類肽(peptoid)。製造類肽之方法係此項技術中已知的。例如，請參見Zuckermann et al.,JACS 114(26)：10646-10647(1992)及Design,Synthesis,and Evaluation of Novel Peptoids,Fowler,Sarah,University of Wisconsin-Madison,2008。在某些態樣中，擬肽係包含使其氨基基團鍵合至β碳而非α碳之β氨基酸之β肽。製造β肽之方法係此項技術中已知的。例如，請參見Seebach et al.,Helvetica Chimica Acta 79(4)：913-941(1996)。

綴合物

本揭露更提供在此描述之綴合、聯接、橋接、鄰接、或鍵合至異源部分之肽或肽類似物。因此，本揭露提供包含一或多個在此描述之肽或肽類似物及異源部分之綴合物。在此使用之「異源部分」與術語「綴合物部分」同義，並且指與在此描述之肽不同之任意分子(化學或生物化學、天然存在或未編碼)。能夠聯接至在此描述之肽或肽類似物中之任一者之示例性綴合物部分包含但不局限於：異源肽或多肽(例如，包含血漿蛋白)、靶向劑、免疫球蛋白或其部分(例如，可變區、CDR、或Fc區)、諸如放射性同位素標記物、螢光團標記物或酶標記物等診斷標記物、包含水溶性聚合物之聚合物、或其他治療劑或診斷劑。在某些實施例中，提供包含肽及血漿蛋白之綴合物，其中血漿蛋白選自由如下組成之組中：白蛋白、轉鐵蛋白、纖維蛋白原及球蛋白。在某些實施例中，綴合物之血漿蛋白部分係白蛋白或轉鐵蛋白。

在某些實施例中，該綴合物包含在此描述之一或多個肽或肽類似物及如下中之一者或多者：不同肽(與在此描述之肽有異)、多肽、核酸分子、抗體或其片段、聚合物、量子點、小分子、毒素、診斷劑、碳水化合物、或氨基酸。

在某些實施例中，異源部分係聚合物。在某些實施例中，該聚合物選自由如下組成之組中：聚醯胺；聚碳酸酯；聚烯烴(polyalkylenes)及其衍生物，包含：聚亞烷基二醇、聚環氧烷烴、聚對苯二甲酸亞烷基酯；丙烯酸酯與甲基丙烯酸酯之聚合物，該聚合物包含聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、甲(基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸酯)、聚(甲基丙烯酸十二酯)、聚(甲基丙烯酸苯基酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)、及聚(丙烯酸十八酯)；聚乙烯基聚合物，該聚乙烯基聚合物包含：聚乙烯醇、聚乙烯基醚、聚乙烯基酯、聚鹵乙烯(polyvinyl halide)、聚(醋酸乙烯酯)、及聚乙烯吡咯烷酮；聚乙交酯；聚矽氧烷；聚氨酯及其共聚物；纖維素，該纖維素包含：烷基纖維素、羥烷基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丁基甲基纖維素、乙酸纖維素、丙酸纖維素、乙酸丁酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、羧基乙基纖維素、三乙酸纖維素、及硫酸鈉鹽纖維素；聚丙烯；聚乙烯，該聚乙烯包含：聚(乙二醇)、聚(氧化乙烯)、及聚(對苯二甲酸乙二醇酯)；及聚苯乙烯。在某些態樣中，聚合物係可生物降解聚合物，包含：合成可生物降解聚合物(例如，乳酸與乙醇酸之聚合物、聚酐、聚(鄰)酯、聚氨酯、聚(布丁酸)(poly(butic acid))、聚(戊酸)、及聚(丙交酯共己內酯))、及天然可生物降解聚合物(例如，包含葡聚糖及纖維素之藻酸鹽及其他多糖、膠原、及其化學衍生物(例如，烷基、亞烷基等化學基團之置換、添加；羥基化；氧化；及熟習此項技術者常規執行之其他修飾)、白蛋白及其他親水性蛋白(例如，玉米蛋白及其他醇溶穀蛋白與疏水性蛋白))、及其任意共聚物或混合物。概言之，該等材料藉由酶水解或在體內暴露在水中而腐蝕表面或大部分從而降解。在某些態樣中，聚合物有：生物粘附聚合物，諸如H.S.Sawhney,C.P.Pathak and J.A.Hubbell in Macromolecules,1993,26,581-587描述之生物可腐蝕水凝膠，在此併入其教示內容；聚透明質酸；酪蛋白；明膠；明膠蛋白；聚酐；聚丙烯酸；藻酸鹽；殼聚糖；聚(甲基丙烯酸甲酯)；聚(甲基丙烯酸乙酯)；聚(甲基丙烯酸丁酯)；聚(甲基丙烯酸異丁酯)；聚(甲基丙烯酸己酯)；聚(甲基丙烯酸異癸酯)；聚(甲基丙烯酸十二酯)；聚(甲基丙烯酸苯基酯)；聚(丙烯酸甲酯)；聚(丙烯酸異丙酯)；聚(丙烯酸異丁酯)；及聚(丙烯酸十八酯)。

在某些實施例中，該聚合物係水溶性聚合物或親水性聚合物。在此在「親水性部分」中進一步描述親水性聚合物。合適之水溶性聚合物係此項技術中已知的，並且其包含例如：聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素(HPC；Klucel)、羥丙基甲基纖維素(HPMC；Methocel)、硝酸纖維素、羥丙基乙基纖維素、羥丙基丁基纖維素、羥丙基戊基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素(Ethocel)、羥乙基纖維素、各種烷基纖維素及羥烷基纖維素、各種纖維素醚、乙酸纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、乙酸乙烯酯/丁烯酸共聚物、聚羥烷基甲基丙烯酸酯、羥甲基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、馬來酐/甲基乙烯基醚共聚物、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉及聚丙烯酸鈣、聚丙烯酸、酸性羧基聚合物、羧基聚亞甲基、羧基乙烯基聚合物、聚氧化乙烯聚氧化丙烯共聚物、聚甲基乙烯基醚馬來酐共聚物(polymethylvinylether co-maleic anhydride)、羧基甲醯胺、甲基丙烯酸鉀二乙烯苯共聚物、聚氧化伸乙基二醇、聚環氧乙烷、及其衍生物、鹽及組合。在某些實施例中，該聚合物係聚亞烷基二醇，包含例如聚乙二醇(PEG)。

在某些實施例中，異源部分係碳水化合物。在某些實施例中，該碳水化合物係單糖(例如，葡萄糖、半乳糖、果糖)、二糖(例如、蔗糖、乳糖、麥芽糖)、寡糖(例如，棉籽糖、水蘇糖)、多糖(澱粉、澱粉酶、支鏈澱粉、纖維素、殼多糖、胼胝質、海帶多糖、木聚糖、甘露多糖、岩藻多糖、或半乳甘露多糖)。

在某些實施例中，該異源部分係脂質。在某些實施例中，該脂質係：脂肪酸、類花生酸、前列腺素、白三烯、血栓素、N-醯基-乙醇胺、甘油脂(例如，單置換甘油、二置換甘油、三置換甘油)、甘油磷脂(例如，磷脂醯膽鹼、磷脂醯肌醇、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲氨酸)、鞘脂(例如，鞘氨醇、神經醯胺)、固醇脂質(例如，類固醇、膽固醇)、戊烯醇脂質(prenol lipid)、糖脂(saccharolipid)、或聚酮化合物、油、蠟、膽固醇、固醇、脂溶性維生素、單酸甘油酯、二脂酸甘油酯、三酸甘油酯、或磷脂。

在某些實施例中，該異源部分藉由非共價鍵合或共價鍵合附接至本揭露之肽或肽類似物。在某些態樣中，該異源部分藉由接頭附接至本揭露之肽或肽類似物。聯接能夠藉由共價化學鍵、諸如靜電、氫、離子、範德瓦耳斯(van der Waals)、或疏水或親水相互作用等物理力而實現。可以採用多種非共價耦合系統，包含：生物素-親和素、配體/受體、酶/基質、核酸/核酸鍵合蛋白(nucleic acid binding protein)、脂質/脂質鍵合蛋白(lipid binding protein)、細胞粘附分子配偶體；或其互相具有親和勢之任意鍵合配偶體或片段。某些實施例中之肽或肽類似物藉由使類似物之靶向氨基酸殘基與有機衍生化藥劑發生反應由直接共價聯接聯接至綴合物部分，該有機衍生化藥劑能夠與該等靶向氨基酸之選擇側鏈或N-末端殘基或C-末端殘基發生反應。類似物或綴合物部分上之活性基團包含例如：醛、氨基、酯、巰基、α-鹵代乙醯基、馬來醯亞胺基或肼基基團。衍生化劑包含例如：馬來醯亞胺基苯甲醯磺基琥珀醯亞胺酯(maleimidobenzoylsulfosuccinimide ester)(藉由半胱氨酸殘基綴合)、N-羥基琥珀醯亞胺(N-hydroxysuccinimide)(藉由賴氨酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐或此項技術中已知之其他藥劑。作為另外一種選擇，綴合物部分能夠藉由諸如多糖或多肽運載體等中間運載體間接地聯接至類似物。多糖運載體之示例包含氨基葡聚糖。合適的多肽運載體之實例包含：聚賴氨酸、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、其共聚物、及該等氨基酸與例如絲氨酸等其他氨基酸之混合聚合物，以對獲得之裝載運載體賦予所需之溶解性。半胱氨醯基殘基最常與諸如氯乙酸、氯乙醯胺等α-鹵代乙酸鹽(及相應胺)發生反應，以給出羧甲基衍生物或羧基醯胺甲基(carboxyamidomethyl)衍生物。半胱氨醯基殘基亦可以藉由與溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-亞氨基甲醯)丙酸(alpha-bromo-β-(5-imidozoyl)propionic acid)、氯乙醯磷酸鹽(chloroacetyl phosphate)、N-烷基馬來醯亞胺、3-硝基-2-吡啶基二硫基、甲基2-吡啶基二硫基、對氯汞苯甲酸、2-氯汞-4-硝基苯酚、或氯-7-硝基苯并-2-1,3-噁二唑發生反應而被衍生化。組氨醯基殘基可以藉由在5.5至7.0之pH下與焦碳酸二乙酯發生反應而被衍生化，乃因此藥劑對組氨醯基側鏈比較有效。對溴苯甲醯甲基溴亦為有用的；該反應較佳地在6.0之pH下在0.1M之二甲胂酸鈉中進行。賴氨醯基末端殘基及氨基末端殘基可以與琥珀酸酐或其他羧酸酐發生反應。利用該等藥劑之衍生化具有反轉賴氨基殘基之電荷之效果。用於使含α氨基之殘基衍生化之其他合適之反應藥劑包含亞氨基酯，諸如，甲基皮考啉亞氨酸酯(methyl picolinimidate)、吡哆醛磷酸鹽(pyridoxal phosphate)、吡哆醛、氯氫硼酸鹽(chloroborohydride)、三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid)、O-甲基異脲、2,4-戊二酮、及與乙醛酸之轉氨酶催化反應。精氨醯基殘基可藉由與一或幾個傳統反應藥劑發生反應來修飾，其中反應藥劑包含：苯基乙二醛、2,3-丁二酮、1,2-環己二酮、及茚三酮。精氨酸殘基之衍生化要求該反應在鹼性條件下進行，此乃因胍官能基團之高pKa。此外，該等反應藥劑可以與賴氨酸及精氨酸ε氨基基團發生反應。可對酪氨醯殘基進行專門修飾，特別感興趣的是藉由與芳香族重氮化合物或四硝基甲烷發生反應而將光譜標記物引入酪氨醯殘基中。最常見的是利用N-乙醯基咪唑及四硝基甲烷分別形成O-乙醯基酪氨醯種類及3-硝基衍生物。可藉由與碳二亞胺(R-N=C=N-R')發生反應選擇性地修飾羧基端基團(天冬氨醯基或穀氨醯基)，其中R及R'為不同的烷基基團，諸如1-環己基-3-(2-嗎啉基-4-乙基)碳二亞胺或1-乙基-3-(4-氮雜-4,4-二甲基戊基)碳二亞胺。此外，天冬氨醯殘基及穀氨醯殘基可藉由與銨離子發生反應而轉換為天冬醯胺醯基殘基及穀氨醯胺醯基殘基。其他修飾包含：脯氨酸及賴氨酸之羥基化；絲氨醯基殘基或蘇氨醯基殘基之羥基基團之磷酸化；賴氨酸、精氨酸及組氨酸側鏈之α氨基基團之甲基化(T.E.Creighton,Proteins：Structure and Molecular Properties,W.H.Freeman & Co.,San Francisco,pp.79-86(1983))；天冬醯氨或穀氨醯胺之去醯胺化；N-末端胺之乙醯化；及/或C-末端羧酸基團之醯胺化或酯化。另一種共價修飾涉及糖苷與肽或肽類似物之化學耦合或酶耦合。(各)糖可以附接至：(a)精氨酸及組氨酸；(b)游離羧基基團；(c)游離硫氫基基團(free sulfhydryl group)，諸如半胱氨酸之游離硫氫基基團；(d)游離羥基基團，諸如絲氨酸、蘇氨酸或羥基脯氨酸之游離羥基基團；(e)芳香族殘基，諸如酪氨酸或色氨酸之芳香族殘基；或(f)穀氨醯胺之氨基基團。1987年9月11日公開之WO87/05330中及Aplin and Wriston,CRC Crit.Rev.Biochem.,pp.259-306(1981)中描述了該等方法。在某些實施例中，藉由肽之氨基酸側鏈與異源部分之間之共價聯接將該肽或肽類似物綴合至異源部分。在某些態樣中，共價聯接至異源部分之氨基酸(例如，包含異源部分之氨基酸)為：Cys、Lys、Orn、高-Cys、或Ac-Phe，並且氨基酸之側鏈共價鍵合至異源部分。在某些實施例中，綴合物包含使肽或肽類似物連結至異源部分之接頭。在某些態樣中，該接頭包含1至約60個、或1至30個原子或更長、2至5個原子、2至10個原子、5至10個原子或10至20個原子長之原子鏈。在某些實施例中，鏈原子可以全為碳原子。在某些實施例中，接頭之骨架中之鏈原子可以選自由C、O、N、及S組成之組中。可以依據其希望之溶解性(親水性)選擇鏈原子及接頭，以提供更可溶之綴合物。在某些實施例中，接頭提供經受目標組織或器官或細胞中存在之酶或其他觸媒或水解條件裂解之官能基團。在某些實施例中，接頭之長度足夠長以減小可能之空間位阻。若該接頭係共價鍵或肽鍵並且綴合物係多肽，則整個綴合物能夠為融合蛋白。此種肽接頭可以係任意長度。示例性接頭可以具有約1至50個氨基酸之長度，5至50個、3至5個、5至10個、5至15個、或10至30個氨基酸之長度。作為另外一種選擇，此種融合蛋白可以由此項技術中具有通常知識者已知之重組遺傳工程方法而產生。

在示例性實施例中，該肽或肽類似物綴合至非天然存在之人體肽(humanin)之類似物。在示例性態樣中，該肽或肽類似物在N-終端或C-終端綴合至人體肽之類似物HNG17，HNG17係具有S→G置換之人體肽之17-mer之截短類似物。在示例性態樣中，該肽或肽類似物在N-終端或C-終端綴合至人體肽類似物HNG，HNG係具有S→G置換之人體肽之24-mer之截短類似物。本揭露提供包含聯接至人體肽類似物之肽或肽類似物之綴合物作為SEQ ID NO：98至102。

在某些實施例中，該肽或肽類似物可以綴合(例如，融合)至免疫球蛋白或其部分(例如，可變區、CDR、或Fc區)。已知類型之免疫球蛋白(Ig)包含：IgG、IgA、IgE、IgD或IgM。Fc區係Ig重鏈之C-末端區，其負責結合至Fc受體，該Fc受體實現諸如循環利用(其結果為延長半衰期)、抗體依賴性細胞介導細胞毒性(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity；ADCC)及補體依賴性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity；CDC)等活動。例如，依據某些定義，人IgG重鏈Fc區自該重鏈之Cys226伸向其C-終端。「鉸鏈區」通常自人IgG1之Glu216延伸至Pro230(藉由使參與半胱氨酸鍵合之半胱氨酸對準，其他IgG同種型之鉸鏈區可與IgG1序列對準)。IgG之Fc區包含二個恒定結構域CH2及CH3。人IgG之Fc區之CH2結構域通常自氨基酸231延伸至氨基酸341。人IgG之Fc區之CH3結構域通常自氨基酸342延伸至447。對氨基酸所做之對免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或區編號之參考全部基於Kabat et al.1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Public Health,Bethesda,Md。在有關實施例中，Fc區可以包含來自免疫球蛋白重鏈的除CH1之外之一或多個原有的或修飾的恒定區，例如，IgG及IgA之CH2區及CH3區、或IgE之CH3區及CH4區。合適的綴合物部分包含免疫球蛋白序列之包含FcRn鍵合位點之部分。FcRn為補救受體，其負責循環利用免疫球蛋白並且使其返回血液循環中。已經基於X射線晶體學(Burmeister et al.1994,Nature 372：379)描述了IgG之Fc部分之結合至FcRn受體之區。Fc與FcRn之主接觸區域接近CH2及CH3結構域之結(junction)。Fc-FcRn接觸皆位於單個Ig重鏈內。主接觸位點包含CH2結構域之氨基酸殘基248、250至257、272、285、288、290至291、308至311、及314以及CH3結構域之氨基酸殘基385至387、428、及433至436。某些綴合物部分可以包含亦可以不包含(各)FcγR結合位點。FcγR負責 ADCC及CDC。Fc區內與FcγR直接接觸之位置實例為氨基酸234至239(低級鉸鏈區)、氨基酸265至269(B/C環)、氨基酸297至299(C'/E環)、及氨基酸327至332(F/G)環(Sondermann et al.,Nature 406：267-273,2000)。IgE之低級鉸鏈區亦已涉及於FcRI結合中(Henry,et al.,Biochemistry 36,15568-15578,1997)。Lewis等(J Immunol.175：6694-701,2005)描述了IgA受體結合中涉及之殘基。Sayers等(J Biol Chem.279(34)：35320-5,2004)描述了IgE受體結合中涉及之氨基酸殘基。可以對免疫球蛋白之Fc區進行氨基酸修飾。此種變體Fc區包含Fc區之CH3結構域中之至少一個氨基酸修飾(殘基342至447)及/或Fc區之CH2結構域中之至少一個氨基酸修飾(殘基231至341)。被認為對FcRn賦予升高之親和性之突變包含T256A、T307A、E380A、及N434A(Shields et al.2001,J.Biol.Chem.276：6591)。其他突變可以在不顯著降低FcRn之親和性之情況下降低Fc區與FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、及/或FcγRIIIA之結合。例如，利用Ala或另一個氨基酸來置換Fc區之297位處之Asn會移除高度保守之N糖基化位點，並且既可使得與FcγRs之結合降低，又可使得免疫原性降低同時伴隨Fc區之半衰期延長(Routledge et al.1995,Transplantation 60：847；Friend et al.1999,Transplantation 68：1632；Shields et al.1995,J.Biol.Chem.276：6591)。在IgG1之233至236位已經進行了降低與FcγRs之結合之氨基酸修飾(Ward and Ghetie 1995,Therapeutic Immunology 2：77 and Armour et al.1999,Eur.J.Immunol.29：2613)。在美國專利No.7,355,008及7,381,408中描述了一些示例性氨基酸修飾，在此以引用之方式整體併入各該美國專利。在某些實施例中，在此描述之肽或肽類似物插入免疫球蛋白分子內之環區內。在其他實施例中，在此描述之肽或肽類似物替換免疫球蛋白分子內之環區之一或多個氨基酸。

能夠進一步修飾在此描述之肽或肽類似物，以在保持生物活性之同時，改善其在生理pH下之水溶液中之溶解性及穩定性。在用於使蛋白與活化聚合物分子發生反應之任意適當條件下，能夠將諸如PEG基團等親水性部分附接至該類似物。能夠採用此項技術中已知之任何方式，包含藉由PEG部分上之反應性基團(例如，醛、氨基、酯、巰、α-鹵代乙醯、馬來醯亞胺基或肼基基團)至目標化合物上之反應性基團(例如，醛、氨基、酯、巰、α-鹵代乙醯、馬來醯亞胺基或肼基基團)之醯化、還原性烷基化、Michael加成、巰基烷基化或其他化學選擇性綴合/聯結(ligation)方法。能夠用於將水溶性聚合物聯接至一或多個蛋白之活化基團包含但並不局限於：碸、馬來醯亞胺、硫氫基(sulfhydryl)、巰基、三氟甲磺酸、三氟乙磺酸(tresylate)、氮丙啶(azidirine)、環氧乙烷、5-吡啶基、及α-鹵代醯基(α-halogenated acyl)基團(例如，α-碘乙酸、α-溴乙酸、α-氯乙酸)。若藉由還原性烷基化附接至類似物，則所選之聚合物應當具有單個反應性醛，使得聚合度受控。例如，請參見Kinstler et al.,Adv.Drug.Delivery Rev.54：477-485(2002)；Roberts et al.,Adv.Drug Delivery Rev.54：459-476(2002)；及Zalipsky et al.,Adv.Drug Delivery Rev.16：157-182(1995)。在某些態樣中，具有巰基之肽或肽類似物之氨基酸殘基由諸如PEG等親水性部分修飾。在某些實施例中，在Michael加成反應中，巰基由馬來醯亞胺活化PEG修飾，以獲得包含硫醚聯接之PEG化類似物。在某些實施例中，在親核置換反應中，巰基由鹵代乙醯基活化PEG修飾，以獲得包含包含硫醚聯接之PEG化類似物。合適的親水性部分包含：聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇(polyoxyethylated polyols)(例如，POG)、聚氧乙烯化山梨糖醇、聚氧乙烯化葡萄糖、聚氧乙烯化甘油(POG)、聚氧化烯、聚乙二醇丙醛(polyethylene glycol propionaldehyde)、乙二醇(ethylene glycol)/丙二醇(propylene glycol)之共聚物、單甲氧基聚乙二醇(monomethoxy-polyethylene glycol)、單-(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇、羧甲基纖維素、聚縮醛、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚(.β.-氨基酸)(均聚物或無規共聚物)、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙烯乙二醇均聚物(PPG)及其他聚環氧烷(polyakylene oxide)、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、結腸酸(colonic acid)或其他多糖聚合物、Ficoll或葡聚糖及其混合物。葡聚糖係主要由α1-6聯接來聯接之葡萄糖亞基之多糖聚合物。葡聚糖有許多分子量區間，例如，約1kD至約100kD，或自約5、10、15或20kD至約20、30、40、50、60、70、80或90kD。可以設想線狀或分支狀聚合物。作為結果的綴合物製備基本上可以呈單分散或多分散，並且每個類似物可以具有約0.5、0.7、1、1.2、1.5或2個聚合物部分。

在某些實施例中，該肽或肽類似物經肽或肽類似物之氨基酸側鏈與親水性部分之間之共價聯接而綴合至該親水性部分。在某些實施例中，該肽或肽類似物經氨基酸側鏈、C-末端延伸內之位置、或C-末端氨基酸、或該等位置之組合而綴合至親水性部分。在某些態樣中，共價聯接至親水性部分之氨基酸(例如，包含親水性部分之氨基酸)係Cys、Lys、Orn、homo-Cys、或Ac-Phe，並且氨基酸之側鏈共價鍵合至親水性部分(例如， PEG)。在某些實施例中，本揭露之綴合物包含融合至能夠形成類似於化學PEG(例如，重組PEG(rPEG)分子)之延伸構象之附加類似物之肽或肽類似物，諸如國際專利申請公開No.WO2009/023270及美國專利申請公開No.US20080286808中描述者。某些態樣中之rPEG分子為包含甘氨酸、絲氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、或脯氨酸其中之一或多者之多肽。在某些態樣中，rPEG為均聚物，例如，聚-甘氨酸、聚-絲氨酸、聚-谷氨酸、聚-天冬氨酸、聚-丙氨酸或聚-脯氨酸。在其他實施例中，rPEG包含兩種類型之重複氨基酸，例如，聚(Gly-Ser)、聚(Gly-Glu)、聚(Gly-Ala)、聚(Gly-Asp)、聚(Gly-Pro)、聚(Ser-Glu)、等等。在某些態樣中，rPEG包含三種不同類型之氨基酸，例如，聚(Gly-Ser-Glu)。在一些具體態樣中，rPEG延長肽或肽類似物之半衰期。在某些態樣中，rPEG包含淨正電荷或淨負電荷。在某些態樣中，rPEG缺少二級結構。在某些實施例中，rPEG具有大於或等於10個氨基酸之長度，並且在某些實施例中，具有約40至50個氨基酸之長度。在某些態樣中，附加肽經由肽鍵或蛋白酶裂解位點融合至本揭露之肽或肽類似物之N-終端或C-終端，或插入本揭露之肽或肽類似物之環內。在某些態樣中，rPEG包含親和標籤，或聯接至大於5kDa之PEG。在某些實施例中，rPEG對本揭露之肽或肽類似物賦予增大之流體動力學半徑、血清半衰期、蛋白酶抗性、或溶解度，並且在某些態樣中，對類似物賦予降低之免疫原性。

視情況具有在此描述之綴合物中之任一者、包含表1所列序列(SEQ ID NO：3至293及354至377)之肽或肽類似物被設想為實施例。

本揭露更提供在此揭露之肽或肽類似物之包含同多聚體或異多聚體或同二聚體或異二聚體之多聚體或二聚體。利用熟習此項技術者已知之標準聯接劑及流程，能夠使二或更多個肽或肽類似物聯接在一起。舉例而言，特別是對於已經利用半胱氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、高半胱氨酸、或乙醯基苯丙氨酸殘基置換之類似物而言，藉由利用雙官能團巰基交聯接頭及雙官能團胺交聯接頭，能夠在二個肽或肽類似物之間形成二聚體。該二聚體能夠為同二聚體，或作為另外一種選擇，亦能夠為異二聚體。在某些實施例中，連接二個(或更多個)肽或肽類似物之接頭係PEG，例如，5kDa PEG、20kDa PEG。在某些實施例中，接頭係二硫鍵。例如，二聚體中之每個單體可以包含Cys殘基(例如，末端Cys或位於內部之Cys)，並且每個Cys殘基之硫原子參與到二硫鍵之形成中。在某些態樣中，藉由末端氨基酸(例如，N-末端或C-末端)、內部氨基酸、或至少一個單體之末端氨基酸及至少另一個單體之內部氨基酸，可以連接單體。在某些具體態樣中，單體不藉由N-末端氨基酸連接。在某些態樣中，多聚體之單體可以其中每個單體之C-末端氨基酸可附接在一起之「尾-對-尾」取向附接在一起。

依據某些實施例，包含在此描述之肽或肽類似物中之任一者之綴合物綴合至異源部分，以延長半衰期或增加細胞滲透。例如，半衰期延長之部分可以係肽或蛋白，並且該綴合物係融合蛋白或嵌合多肽。作為另外一種選擇，半衰期延長部分可以係聚合物，例如，聚乙二醇。本揭露更提供包含在此描述之肽及類似物中之任一者之二聚體及多聚體。

此項技術中已知之便於主動地或被動地增強肽進入細胞中之滲透性之任意異源部分可以用於與肽核綴合。非限制性實例包含：疏水部分，諸如脂肪酸、類固醇及龐大芳香族或脂族化合物；可具有細胞膜受體或運載體之部分，諸如類固醇、維他命及糖、天然的及非天然的氨基酸及轉運肽。依據較佳實施例，疏水部分係脂質部分或氨基酸部分。滲透性增強部分可以直接地或藉由間隔基或接頭連接至肽部分內之任何位置，較佳地連接至肽部分之氨基終端。較佳地，疏水部分可以包含脂質部分或氨基酸部分。依據某些具體實施例，疏水部分選自由如下組成之組中：磷脂質、類固醇、鞘胺醇、神經醯胺、辛基甘氨酸、2-環己基丙氨酸、苯甲醯基苯丙氨酸(benzolylphenylalanine)、丙醯基(propionoyl)(C₃)；丁醯基(C₄)；戊醯基(C₅)；己醯基(C₆)；庚醯基(C₇)；辛醯基(C₈)；壬醯基(C₉)；癸醯基(C₁₀)；十一碳醯基(Cn)；月桂醯基(C₁₂)；十三碳醯基(C₁₃)；肉豆蔻醯基(C₁₄)；十五碳醯基(C₁₅)；棕櫚醯基(C₁₆)；phtanoyl((CH₃)₄)；十七碳醯基(C₁₆)；硬脂醯基(C₁₈)；十九碳醯基(C₁₉)；花生醯基(arachidoyl)(C₂₀)；二十一碳醯基(heniecosanoyl)(C₂₁)；山萮醯基(C₂₂)；二十三碳醯基(trucisanoyl)(C₂₃)；及二十四碳醯基(lignoceroyl)(C₂₄)；其中所述疏水部分以醯胺鍵、硫氫基(sulfhydryl)、胺、醇、酚基或碳-碳鍵連接至所述嵌合多肽。可以使用之脂質部分之其他實例包含：脂質體(Lipofectamine)、Transfectace、Transfectam、細胞轉染劑(Cytofectin)、DMRIE、DLRIE、GAP-DLRIE、DOTAP、DOPE、DMEAP、DODMP、DOPC、DDAB、DOSPA、EDLPC、EDMPC、DPH、TMADPH、CTAB、賴氨醯-PE、DC-Cho、-丙氨醯膽固醇；DCGS、DPPES、DCPE、DMAP、DMPE、DOGS、DOHME、DPEPC、普朗尼克(Pluronic)、吐溫(Tween)、BRIJ、縮醛磷脂(plasmalogen)、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯膽鹼、甘油-3-乙基磷脂醯膽鹼、二甲基銨丙烷(dimethyl ammonium propane)、三甲基銨丙烷、二乙基銨丙烷、三乙基銨丙烷、二甲基雙十八烷基溴化銨、鞘脂、鞘磷脂、溶血脂(lysolipid)、糖脂、硫苷脂(sulfatide)、鞘糖脂、膽固醇、膽固醇酯、膽固醇鹽、油、N-琥珀醯基二油醯基磷脂醯乙醇胺(N-succinyldioleoylphosphatidylethanolamine)、1,2-二油醯基-sn-甘油、1,3-二棕櫚醯基-2-琥珀醯基甘油、1,2-二棕櫚醯基-sn-3-琥珀醯基甘油、1-十六烷基-2-棕櫚醯基甘油基磷脂醯乙醇胺(1-hexadecyl-2-palmitoylglycerophosphatidylethanolamine)、棕櫚醯基高半胱氨酸、N,N'-雙(十二烷基氨基羰基亞甲基)-N,N'-雙((-N,N,N-三甲基銨甲基-氨基羰基亞甲基)乙二胺四碘化物；N,N"-雙(十六烷基氨基羰基亞甲基)-N,N',N"-三((-N,N,N-三甲基銨-乙基氨基羰基亞甲基二亞乙基三胺六碘化物；N,N'-雙(十二烷基氨基羰基亞甲基)-N,N"-雙((-N,N,N-三甲基銨乙基氨基羰基亞甲基)亞環己基-1,4-二胺四碘化物；1,7,7-四-((-N,N,N,N-四甲基銨甲基氨基-羰基亞甲基)-3-十六烷基氨基羰基-亞甲基-1,3,7-三氮雜庚烷七碘化物；N,N,N',N'-四((-N,N,N-三甲基銨-乙基氨基羰基亞甲基)-N'-(1,2-二油醯基甘油基-3-磷醯乙醇氨基羰基亞甲基)二亞乙基三胺四碘化物；二油醯基磷脂醯乙醇胺、脂肪酸、溶血脂(lysolipid)、磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲氨酸、磷脂醯甘油、磷脂醯肌醇、鞘脂、糖脂(glycolipid)、類脂肪(glucolipid)、硫苷脂、鞘糖脂、磷脂酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生四烯酸、油酸、攜帶聚合物之脂質、攜帶磺化糖之脂質、膽固醇、生育酚半琥珀酸酯(tocopherol hemisuccinate)、具有醚聯接脂肪酸之脂質、具有酯聯接脂肪酸之脂質、聚合脂質、磷酸二乙醯酯、硬脂胺，心磷脂、具有6至8個碳長度之脂肪酸之磷脂、具有不對稱醯基鏈之磷脂、6-(5-膽甾烯-3b-基氧基)-1- 硫代-b-D-半乳糖苷(6-(5-cholesten-3b-yloxy)-1-thio-b-D-galactopyranoside)、二半乳糖基二甘油酯(digalactosyldiglyceride)、6-(5-膽甾烯-3b-基氧基)己基-6-氨基-6-去氧基-1-硫代-b-D-半乳糖苷、6-(5-膽甾烯-3b-基氧基)己基-6-氨基-6-去氧基-1-硫代-a-D-吡喃甘露糖苷、12-(((7'-二乙基氨基-香豆素-3-基)羰基)甲基氨基)-十八烷酸；N-[12-(((7'-二乙基氨基香豆素-3-基)羰基)甲基-氨基)十八碳醯基]-2-氨基棕櫚酸；膽甾醇基)4'-三甲基-銨)丁酸酯；N-琥珀醯基二油醯基-磷脂醯乙醇胺；1,2-二油醯基-sn-甘油；1,2-二棕櫚醯基-3-琥珀醯基-甘油(1,2-dipalmitoyl-3-succinyl-glycerol)；1,3-二棕櫚醯基-2-琥珀醯基甘油、1-十六烷基-2-棕櫚醯基甘油基-磷酸乙醇胺；及棕櫚醯基高半胱氨酸。

在此揭露之肽或肽類似物可以綴合至使綴合物起前藥作用之一或多個異源部分。例如，美國專利No.8,969,288及美國專利公開2016/0058881揭露之與N-氨基酸有關之部分能夠綴合至在此揭露之肽或肽類似物，並且此種綴合物包含於該揭露中。

依據某些實施例，該肽或肽類似物可以附接(共價地或非共價地)至滲透劑。在此使用之片語「滲透劑」指增強任意附接肽穿過細胞膜之轉移之藥劑。通常，基於肽之滲透劑具有含有諸如賴氨酸或精氨酸等高相對豐度帶正電荷氨基酸之氨基酸組成物，或具有以交替方式含有極性/帶電荷氨基酸及非極性疏水性氨基酸之序列。作為非限制性實例，為了增強胞內滲透，可以使用細胞滲透肽(cell penetrating peptide；CPP)序列。CPP可以包含HIV TAT蛋白之短的及長的蛋白轉導域(PTD)，例如，諸如YARAAARQARA(SEQ ID NO：324)、YGRKKRR(SEQ ID NO：325)、YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：326)、或RRQRR(SEQ ID NO：327)。然而，本揭露並不局限於此，並且可以使用熟習此項技術者已知之任意合適滲透劑。增強細胞滲透之另一種方法係藉N-末端十四烷醯化(myristoilation)。在此蛋白修飾中，十四醯基基團(由十四烷酸衍生)藉由醯胺鍵共價地附接至肽或肽類似物之N-末端氨基酸之α氨基基團。

依據某些實施例，對肽或肽類似物進行修飾以包含持續時間增強部分。該持續時間增強部分能夠為水溶性聚合物或長鏈脂族基團。在某些實施例中，複數個持續時間增強部分可以附接至肽或肽類似物，在此種情況下，至每個持續時間增強部分之每個接頭獨立地選自在此描述之接頭。

依據某些實施例，修飾(例如，醯化)該肽或肽類似物之氨基終端。依據附加實施例，修飾羧基終端，例如，可以醯化、醯胺化、還原或酯化該羧基終端。依據某些實施例，該肽或肽類似物包含醯化氨基酸(例如，未編碼醯化氨基酸(例如，包含對天然存在之氨基酸非原有之醯基基團之氨基酸))。依據一個實施例，出於延長循環中之半衰期及/或延遲動作的開始及/或延長動作之持續時間及/或改善對蛋白酶之抗性的目的，該肽或肽類似物包含藉由酯、硫酯、或醯胺鍵附接至該肽或肽類似物之醯基基團。能夠在該肽或肽類似物內之任意位置進行醯化(例如，C-終端處之氨基酸)，條件係若不增強活性，則保持活性。某些實施例中之肽能夠在其中聯接親水性部分之相同氨基酸位置處或在不同氨基酸位置處醯化。醯基基團能夠共價地直接聯接至該肽或肽類似物之氨基酸，亦能夠藉由間隔基間接地聯接至該肽之氨基酸，其中該間隔基位於該肽之氨基酸與醯基基團之間。

在某些具體態樣中，藉由直接醯化該肽之氨基酸之側鏈之胺、羥基、或巰基來修飾該肽或肽類似物，以包含醯基基團。就此而言，醯化肽能夠包含被修飾而包含醯基基團之SEQ ID NO：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者之氨基酸序列。

在某些實施例中，該肽或肽類似物包含位於該類似物與醯基基團之間之間隔基。在某些實施例中，該肽或肽類似物共價地結合至該間隔基，該間隔基共價地結合至醯基基團。在某些實施例中，該間隔基係包含側鏈胺、羥基或巰基之氨基酸，或係包含具有側鏈胺、羥基或巰基之氨基酸之二肽或三肽。該附接有間隔基之氨基酸能夠為包含允許聯接至該間隔基之部分之任意氨基酸(例如，單或雙α置換氨基酸)。例如，包含側鏈NH₂、-OH、或-COOH(例如，Lys、Orn、Ser、Asp、或Glu)之氨基酸係合適的。在某些實施例中，該間隔基係包含側鏈胺、羥基或巰基之氨基酸，或係包含具有側鏈胺、羥基或巰基之氨基酸之二肽或三肽。當藉由間隔基之氨基發生醯化時，醯化能夠藉由氨基酸之α胺或側鏈胺發生。在醯化α胺的情形中，間隔基之氨基酸能夠為任意氨基酸。例如，間隔基之氨基酸能夠為疏水性氨基酸，例如，Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸、及8-氨基辛酸。作為另外一種選擇，該間隔基之氨基酸能夠為酸性殘基，例如，Asp、Glu、高谷氨酸、高半胱磺酸、半胱磺酸、α-谷氨酸。在其中間隔基之氨基酸之側鏈胺被醯化之情形中，間隔基之氨基酸係包含側鏈胺之氨基酸。在此種情形中，可醯化該間隔基之氨基酸之α胺及側鏈胺二者，使得該肽或肽類似物被二醯化。實施例包含此種二醯化分子。當藉由間隔基之羥基基團發生醯化時，二肽或三肽之氨基酸或氨基酸其中之一能夠為Ser。當藉由間隔基之巰基基團發生醯化時，二肽或三肽之氨基酸或氨基酸其中之一能夠為Cys。在某些實施例中，間隔基係親水性雙官能團間隔基。在某些實施例中，該親水性雙官能團間隔基包含二或更多個反應性基團，例如，胺、羥基、巰基、及羧基基團或其任意組合。在某些實施例中，親水性雙官能團間隔基包含羥基基團及羧酸酯。在其他實施例中，親水性雙官能團間隔基包含胺基基團及羧酸酯。在其他實施例中，親水性雙官能團間隔基包含巰基基團及羧酸酯。

在某些實施例中，間隔基包含氨基聚(烷氧基)羧酸酯。就此而言，間隔基能夠包含例如NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH，其中m係1至6中之任意整數，並且n係2至12中之任意整數，諸如，例如，8-氨基-3,6-二氧雜辛酸，其由Peptides International,Inc.(肯塔基州，路易斯維爾)市售。在某些實施例中，間隔基係疏水性雙官能團間隔基。疏水性雙官能團間隔基是此項技術中已知的。請參見例如Bioconjugate Techniques,G.T.Hermanson(Academic Press,San Diego,Calif.,1996)，其以引用方式全文併入本案中。在某些實施例中，疏水性雙官能團間隔基包含二或更多個反應性基團，例如，胺、羥基、巰基及羧基基團或其組合。在某些實施例中，疏水性雙官能團間隔基包含羥基基團及羧酸酯。在其他實施例中，疏水性雙官能團間隔基包含胺基基團及羧酸酯。在其他實施例中，疏水性雙官能團間隔基包含巰基基團及羧酸酯。包含羧酸酯及羥基基團或巰基基團之合適疏水性雙官能團間隔基係此項技術中已知的，並且包含例如8-羥基辛酸(8-hydroxyoctanoic acid)及8-巰基辛酸(8-mercaptooctanoic acid)。在某些實施例中，雙官能團間隔基不為在羧酸酯基團之間包含1至7個碳原子之非分支化亞甲基之二羧酸。在某些實施例中，雙官能團間隔基係在羧酸酯基團之間包含1至7個碳原子之非分支化亞甲基之二羧酸。在某些具體實施例中之間隔基(例如，氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能團間隔基、或疏水性雙官能團間隔基)具有3至10個原子(例如，6至10個原子(例如，6、7、8、9、或10個原子))之長度。在更具體之實施例中，間隔基具有約3至10個原子(例如，6至10個原子)之長度，並且醯基基團具有C₁₂至C₁₈脂肪醯基基團(例如，C₁₄脂肪醯基基團、C₁₆脂肪醯基基團)，使得間隔基及醯基基團之總長度為14至28個原子，例如，約14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28個原子。在某些實施例中，間隔基及醯基基團之長度為17至28(例如，19至26、19至21)個原子。依據上述某些實施例，雙官能團間隔基能夠為包含長度為3至10個原子之氨基酸骨架(例如，6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸、及8-氨基辛酸)之合成的或天然存在之氨基酸(包含但不局限於在此描述之氨基酸中之任一者)。作為另外一種選擇，間隔基能夠為具有長度為3至10個原子(例如，6至10個原子)之肽骨架之二肽或三肽間隔基。該二肽或三肽間隔基之每個氨基酸能夠與該二肽或三肽之其他(各)氨基酸相同或不同，並且能夠獨立地係選自由如下組成之組中：天然存在的或編碼的氨基酸及/或未編碼的或非天然存在的氨基酸，包含例如天然存在的氨基酸(Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp、Tyr)之D或L異構體中之任一者，或選自由如下組成之組中之非天然存在的或未編碼的氨基酸之任意D或L異構體：β-丙氨酸(β-Ala)、N-α-甲基-丙氨酸(Me-Ala)、氨基丁酸(Abu)、γ-氨基丁酸(7-Abu)、氨基己酸(ε-Ahx)、氨基異丁酸(Aib)、氨基甲基吡咯羧酸(aminomethylpyrrole carboxylic acid)、氨基哌啶羧酸、氨基絲氨酸(aminoserine)(Ams)、氨基四氫吡喃-4-羧酸、精氨酸N-甲氧基-N-甲基醯胺、β-天冬氨酸(β-Asp)、氮雜環丁烷羧酸、3-(2-苯并噻唑基)丙氨酸、α-第三丁基甘氨酸、2-氨基-5-脲基-n-戊酸(瓜氨酸，Cit)、β-環己基丙氨酸(Cha)、乙醯氨甲基-半胱氨酸、二氨基丁酸(Dab)、二氨基丙酸(Dpr)、二羥苯丙氨酸(DOPA)、二甲基噻唑烷(dimethylthiazolidine)(DMTA)、γ-谷氨酸(γ-Glu)、高絲氨酸(Hse)、羥基脯氨酸(Hyp)、異亮氨酸N-甲氧基-N-甲基醯胺、甲基-異亮氨酸(MeIle)、異哌啶甲酸(Isn)、甲基-亮氨酸(MeLeu)、甲基-賴氨酸、二甲基-賴氨酸、三甲基-賴氨酸、亞甲基脯氨酸、蛋氨酸亞碸(methionine-sulfoxide)(Met(O))、蛋氨酸碸(methionine-sulfone)(Met(O₂))、正亮氨酸(Nle)、甲基-正亮氨酸(Me-Nle)、正纈氨酸(Nva)、鳥氨酸(Orn)、對氨基苯甲酸(PABA)、青黴胺(Pen)、甲基苯丙氨酸(MePhe)、4-氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))、4-氟苯丙氨酸(Phe(4-F))、4-硝基苯丙氨酸(Phe(4-NO₂))、4-氰基苯丙氨酸(Phe(4-CN))、苯甘氨酸(Phg)、哌啶基丙氨酸、哌啶基甘氨酸、3,4-脫氫脯氨酸、吡咯烷酮丙氨酸(pyrrolidinylalanine)、肌氨酸(Sar)、硒代半胱氨酸(Sec)、O-苄基-磷酸絲氨酸、4-氨基-3-羥基-6-甲基庚酸(Sta)、4-氨基-5-環己基-3-羥基戊酸(ACHPA)、4-氨基-3-羥基-5-苯基戊酸(AHPPA)、1,2,3,4,-四氫-異喹啉-3-羧酸(Tic)、四氫吡喃甘氨酸、噻吩基丙氨酸(Thi)、O-苄基-磷酸酪氨酸、O-磷酸酪氨酸、甲氧基酪氨酸、乙氧基酪氨酸、O-(雙-二甲氨基-膦醯基)-酪氨酸、硫酸化酪氨酸四丁基胺(tyrosine sulfate tetrabutylamine)、甲基-纈氨酸(MeVal)、及烷基化3-巰基丙酸。在某些實施例中，該間隔基包含總負電荷，例如，包含一或二個帶負電荷氨基酸。在某些實施例中，二肽不為一般結構A-B之二肽中之任一者，其中A選自由如下組成之組中：Gly、Gln、Ala、Arg、Asp、Asn、Ile、Leu、Val、Phe、及Pro，其中B選自由如下組成之組中：Lys、His、Trp。在某些實施例中，二肽間隔基選自由如下組成之組中：Ala-Ala、β-Ala-β-Ala、Leu-Leu、Pro-Pro、γ-氨基丁酸-γ-氨基丁酸、Glu-Glu、及γ-Glu-γ-Glu。

藉由胺、羥基及巰基之肽醯化之合適方法係此項技術中已知的。例如，請參見Miller,Biochem Biophys Res Commun 218：377-382(1996)；Shimohigashi and Stammer,Int J Pept Protein Res 19：54-62(1982)；及Previero et al.,Biochim Biophys Acta 263：7-13(1972)(了解藉由羥基進行醯化之方法)；及San and Silvius,J Pept Res 66：169-180(2005)(了解藉由巰基進行醯化之方法)；Bioconjugate Chem.“Chemical Modifications of Proteins：History and Applications”pages 1,2-12(1990)；Hashimoto et al.,Pharmaceutical Res.“Synthesis of Palmitoyl Derivatives of Insulin and their Biological Activity”Vol.6,No：2 pp.171-176(1989)。醯化氨基酸之醯基基團能夠為任意大小(例如，任意長度之碳鏈)，並且能夠為直線狀或分支狀。在某些具體實施例中，醯基基團為C₄至C₃₀脂肪酸。舉例而言，醯基基團能夠為C₄脂肪酸、C₆脂肪酸、C₈脂肪酸、C₁₀脂肪酸、C₁₂脂肪酸、C₁₄脂肪酸、C₁₆脂肪酸、C₁₈脂肪酸、C₂₀脂肪酸、C₂₂脂肪酸、C₂₄脂肪酸、C₂₆脂肪酸、C₂₈脂肪酸、或C₃₀脂肪酸中之任一者。在某些實施例中，醯基基團為C₈至C₂₀脂肪酸，例如，C₁₄脂肪酸或C₁₆脂肪酸。在替代實施例中，醯基基團係膽汁酸。膽汁酸能夠為任意合適膽汁酸，包含但並不局限於：膽酸、鵝去氧膽酸(chenodeoxycholic acid)、去氧膽酸、石膽酸、牛磺膽酸、甘氨膽酸(glycocholic acid)、及膽固醇酸(cholesterol acid)。在某些實施例中，該肽或肽類似物包含藉由對該肽或肽類似物上之長鏈烷醯化獲得之醯化氨基酸。在具體態樣中，長鏈烷包含與該肽或肽類似物之羧基基團或其活化形式發生反應之胺、羥基或巰基基團(例如，十八烷基胺(octadecylamine)、十四烷醇(tetradecanol)、及十六烷硫醇(hexadecanethiol))。該肽或肽類似物之羧基基團或其活化形式能夠為該肽之氨基酸(例如，谷氨酸、天冬氨酸)之側鏈之一部分，抑或能夠為類似物骨架之一部分。在某些實施例中，藉由附接至該肽或肽類似物之間隔基醯化長鏈烷來修飾該肽或肽類似物，以包含醯基基團。在具體態樣中，長鏈烷包含與間隔基之羧基基團或其活化形式發生反應之胺、羥基或巰基基團。在此描述了包含羧基基團或其活化形式之合適間隔基，並且該合適間隔基包含例如雙官能團間隔基，例如，氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能團間隔基及疏水性雙官能團間隔基。

在此使用之術語羧基基團之「活化形式」指具有通式R(C=O)X^a之羧基基團，其中X^a為離去基團，並且R係肽或間隔基。例如，羧基基團之活化形式可以包含但並不局限於：醯氯、酸酐、及酯。在某些實施例中，活化羧基基團係具有N-羥基琥珀醯亞胺酯(NHS)離去基團之酯。

關於該等其中由肽或間隔基醯化長鏈烷之態樣，該長鏈烷可以為任意大小，並且能夠包含任意長度之碳鏈。該長鏈烷能夠為直線狀或分支狀。在某些態樣中，該長鏈烷為C₄至C₃₀烷。例如，長鏈烷能夠為C₄烷、C₆烷、C₈烷、C₁₀烷、C₁₂烷、C₁₄烷、C₁₆烷、C₁₈烷、C₂₀烷、C₂₂烷、C₂₄烷、C₂₆烷、C₂₈烷、或C₃₀烷中之任一者。在某些實施例中，該長鏈烷包含：C₈至C₂₀烷，例如，C₁₄烷、C₁₆烷、或C₁₈烷。

此外，在某些實施例中，利用膽固醇酸來醯化肽或肽類似物之胺、羥基或巰基。在具體實施例中，該肽或肽類似物藉由烷基化des-氨基Cys間隔基(即，烷基化3-巰基丙酸間隔基)聯接至膽固醇酸。該烷基化des-氨基Cys間隔基能夠為例如包含十二甘醇(dodecaethylene glycol)部分之des-氨基Cys間隔基。

能夠進一步修飾在此描述之該肽或肽類似物，以包含親水性部分。在某些具體實施例中，親水性部分能夠包含聚乙二醇(PEG)鏈。能夠藉由任何合適方式(諸如，在此描述之方法中之任一者)實現併入親水性部分。就此而言，醯化肽能夠為包含在此描述之修飾中之任一者之SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323、及354至377中之任一者，其中至少一個氨基酸包含醯基基團，並且至少一個氨基酸共價地鍵合至親水性部分(例如，PEG)。在某些實施例中，藉由包含Cys、Lys、Orn、homo-Cys、或Ac-Phe之間隔基附接醯基基團，並且在Cys殘基處併入親水性部分。

作為另外一種選擇，該肽或肽類似物能夠包含間隔基，其中該間隔基既被醯化又被修飾，以包含親水性部分。合適間隔基之非限制性實例包含間隔基，該間隔基包含一或多個選自由如下組成之組中之氨基酸：Cys、Lys、Orn、homo-Cys、及Ac-Phe。

依據某些實施例，該肽或肽類似物包含烷基化氨基酸(例如，未編碼烷基化氨基酸(例如，包含對天然存在的氨基酸非原有之烷基基團之氨基酸))。能夠在該肽或肽類似物內之任意位置實現烷基化，該等位置包含在此描述為醯化位點之任意位置，包含但並不局限於任意氨基酸位置、C-末端延伸內之位置處，或C-終端處，條件係保持生物活性。烷基基團能夠直接地共價地聯接至該肽或肽類似物之氨基酸，抑或能夠藉由間隔基間接地聯接至該肽或肽類似物之氨基酸，其中該間隔基位於肽之氨基酸與烷基基團之間。可以在聯接親水性部分之相同氨基酸位置處，抑或可以在不同氨基酸位置處對該肽或肽類似物進行烷基化。在具體態樣中，藉由直接烷基化該肽之氨基酸之側鏈之胺、羥基或巰基，可以修飾該肽或肽類似物以包含烷基基團。就此而言，烷基化肽能夠包含有至少一個氨基酸被修飾為包含側鏈胺、羥基或巰基之任一氨基酸之氨基酸序列。在另一些其他實施例中，包含側鏈胺、羥基或巰基之氨基酸係雙置換氨基酸。在某些實施例中，烷基化肽包含位於肽與烷基基團之間之間隔基。在某些實施例中，該肽或肽類似物共價地結合至間隔基，該間隔基共價地結合至烷基基團。在某些示例性實施例中，藉由烷基化間隔基之胺、羥基或巰基來修飾該肽，以包含烷基基團，該間隔基附接至氨基酸之側鏈。附接有間隔基之氨基酸能夠為包含允許聯接至該間隔基之部分之任意氨基酸。例如，包含側鏈NH₂、-OH、或-COOH(例如，Lys、Orn、Ser、Asp、或Glu)之氨基酸係合適的。在某些實施例中，間隔基係包含側鏈胺、羥基或巰基之氨基酸，或係包含具有側鏈胺、羥基或巰基之氨基酸之二肽或三肽。當藉由間隔基之胺基基團發生烷基化時，能夠藉由氨基酸之α胺或側鏈胺發生烷基化。在其中烷基化α胺之情形中，間隔基之氨基酸能夠為任意氨基酸。例如，間隔基之氨基酸能夠為疏水性氨基酸，例如，Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Met、Phe、Tyr、6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸、及8-氨基辛酸。作為另外一種選擇，間隔基之氨基酸能夠為酸性殘基，例如，Asp及Glu，條件係烷基化發生於酸性殘基之α胺上。在其中烷基化間隔基之氨基酸之側鏈胺之情形中，間隔基之氨基酸為包含側鏈胺之氨基酸，例如，式I之氨基酸(例如，Lys或Orn)。在此種情形中，可既對間隔基之氨基酸之α胺又可對其側鏈胺烷基化，使得該肽或肽類似物被雙烷基化。實施例包含此種雙烷基化之分子。當藉由間隔基之羥基基團發生烷基化時，該氨基酸能夠為Ser。當藉由間隔基之巰基基團發生烷基化時，該氨基酸能夠為Cys。在某些實施例中，間隔基係親水性雙官能團間隔基。在某些實施例中，親水性雙官能團間隔基包含二或更多個反應性基團，例如，胺、羥基、巰基、及羧基基團或其任意組合。在某些實施例中，親水性雙官能團間隔基包含羥基基團及羧酸酯。在其他實施例中，親水性雙官能團間隔基包含胺基基團及羧酸酯。在其他實施例中，親水性雙官能團間隔基包含巰基基團及羧酸酯。在具體實施例中，間隔基包含氨基聚(烷氧基)羧酸酯。就此而言，間隔基能夠包含例如NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH，其中m係1至6中之任意整數，並且n係2至12中之任一整數，諸如，例如，8-氨基-3,6-二氧雜辛酸，其由Peptides International,Inc.(肯塔基州，路易斯維爾)市售。包含羧酸酯及羥基基團或巰基基團之合適疏水性雙官能團間隔基係此項技術中已知的，並且包含例如8-羥基辛酸及8-巰基辛酸。某些具體實施例中之間隔基(例如，氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能團間隔基、或疏水性雙官能團間隔基)具有3至10個原子(例如，6至10個原子(例如，6、7、8、9、或10個原子))之長度。在更具體之實施例中，間隔基具有約3至10個原子(例如，6至10個原子)之長度，並且烷基係C₁₂至C₁₈烷基基團(例如C₁₄烷基基團、C₁₆烷基基團)，使得間隔基及烷基基團之總長度為14至28個原子，例如，約14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28個原子。在某些實施例中，間隔基及烷基之長度為17至28(例如，19至26、19至21)個原子。依據上述某些實施例，雙官能團間隔基能夠為包含長度為3至10個原子之氨基酸骨架(例如，6-氨基己酸、5-氨基戊酸、7-氨基庚酸、及8-氨基辛酸)之合成的或非天然存在的或未編碼之氨基酸。作為另外一種選擇，間隔基能夠為具有長度為3至10個原子(例如，6至10個原子)之肽骨架之二肽或三肽間隔基。該二肽或三肽間隔基能夠由天然存在的或編碼的及/或未編碼的或非天然存在的氨基酸組成，包含例如在此講述之氨基酸中之任一者。在某些實施例中，該間隔基包含總負電荷，例如，包含一或二個帶負電荷氨基酸。在某些實施例中，二肽間隔基選自由如下組成之組中：Ala-Ala、β-Ala-β-Ala、Leu-Leu、Pro-Pro、γ-氨基丁酸-γ-氨基丁酸、及γ-Glu-γ-Glu。藉由胺、羥基及巰基之肽烷基化之合適方法係此項技術中已知的。例如，能夠利用威廉遜醚合成法(Williamson ether synthesis)在肽之羥基基團與烷基基團之間形成醚聯接。另外，具有烷基鹵之肽或肽類似物之親核置換反應能夠產生醚、硫醚、或氨基聯接中之任一者。烷基化之肽或肽類似物之烷基基團能夠為任意大小(例如，任意長度之碳鏈)，並且能夠為直線狀或分支狀。在某些實施例中，該烷基基團為C₄至C₃₀烷基。例如，該烷基能夠為C₄烷基、C₆烷基、 C₈烷基、C₁₀烷基、C₁₂烷基、C₁₄烷基、C₁₆烷基、C₁₈烷基、C₂₀烷基、C₂₂烷基、C₂₄烷基、C₂₆烷基、C₂₈烷基、或C₃₀烷基中之任一者。在某些實施例中，該烷基基團為C₈至C₂₀烷基，例如，C₁₄烷基或C₁₆烷基。在本揭露之某些實施例中，藉由使親核長鏈烷與該肽或肽類似物發生反應而使該肽或肽類似物包含烷基化氨基酸，其中該肽或肽類似物包含適合親核置換之離去基團。在具體態樣中，長鏈烷之親核基團包含胺、羥基或巰基(例如，十八烷基胺、十四烷醇、及十六烷硫醇)。該肽或肽類似物之離去基團能夠為氨基酸側鏈之一部分，亦能夠為肽骨架之一部分。合適的離去基團包含例如N-羥基琥珀醯亞胺、鹵素、及磺酸酯。在某些實施例中，藉由使親核、長鏈烷與附接至該肽或肽類似物之間隔基發生反應來修飾該肽或肽類似物，以包含烷基基團，其中該間隔基包含離去基團。在具體態樣中，該長鏈烷包含胺、羥基、或巰基基團。在某些實施例中，包含該離去基團之間隔基能夠為在此討論之任意間隔基，例如，進一步包含合適離去基團之氨基酸、二肽、三肽、親水性雙官能團間隔基及疏水性雙官能團間隔基。關於本揭露之其中由該肽或間隔基烷基化長鏈烷之該等態樣，該長鏈烷可以為任意大小，並且能夠包含任意長度之碳鏈。該長鏈烷能夠為直線狀或分支狀。在某些態樣中，該長鏈烷為C₄至C₃₀烷。例如，長鏈烷能夠為C₄烷、C₆烷、C₈烷、C₁₀烷、C₁₂烷、C₁₄烷、C₁₆烷、C₁₈烷、C₂₀烷、C₂₂烷、C₂₄烷、C₂₆烷、C₂₈烷、或C₃₀烷中之任一者。在某些實施例中，該長鏈烷包含：C₈至C₂₀烷，例如，C₁₄烷、C₁₆烷、或C₁₈烷。此外，在某些實施例中，烷基化能夠發生於該肽與膽固醇部分之間。例如，膽固醇之羥基基團能夠代替長鏈烷上之離去基團，以形成膽固醇-肽產物。能夠進一步修飾在此揭露之烷基化肽，以包含親水性部分。在某些具體實施例中，親水性部分能夠包含聚乙二醇(PEG)鏈。能夠藉由任何合適方式(諸如，在此描述之方法中之任一者)實現併入親水性部分。作為另外一種選擇，該烷基化肽能夠包含間隔基，其中該間隔基既被烷基化又被修飾，以包含親水性部分。合適間隔基之非限制性實例包含間隔基，該間隔基包含選自由如下組成之組中之一或多個氨基酸：Cys、Lys、Orn、homo-Cys、或Ac-Phe。

製造肽及肽類似物之方法

以各種方式製造在此揭露之肽及肽類似物，該等方式包含但並不局限於實例1中描述之方法中之任一者。例如，N.Leo Benoiton,Chemistry of Peptide Synthesis CRC Press,Boca Raton,FL,2006；Merrifield,J.Am.Chem.Soc,85,2149(1963)；Davis et al.,Biochem.Intl.,10,394-414(1985)；Larsen et al.,J.Am.Chem.Soc,115,6247(1993)；Smith et al.,J.Peptide Protein Res.,44,183(1994)；O'Donnell et al.,J.Am.Chem.Soc,118,6070(1996)；Stewart and Young,Solid Phase Peptide Synthesis,Freeman (1969)；Finn et al.,The Proteins,3 ed.,vol.2,pp.105-253(1976)；Erickson et al.,The Proteins,3^rd ed.,vol.2,pp.257-527(1976)；及Chan et al.,Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis,Oxford University Press,Oxford,United Kingdom,2005中描述了新合成肽之合適方法。本揭露設想合成肽。製造肽之方法本身即為本發明之實施例。因此，本揭露提供一種產生肽或肽類似物之方法。在示例性實施例中，該方法包含(i)使第一氨基酸與第二氨基酸發生反應，以在第一氨基酸與第二氨基酸之間形成共價聯接，其中第一氨基酸或第二氨基酸視情況附接至另一個氨基酸；及(ii)重複(i)之反應步驟，藉此產生肽或肽類似物。在示例性態樣中，該方法包含固相合成之一或多個步驟。在示例性態樣中，該方法包含在實例1中描述之一或多個步驟。

作為另外一種選擇，藉由將編碼肽之核酸引入宿主細胞內，能夠重組表達該肽，可培養該宿主細胞，以利用標準重組方法表達該肽。例如，請參見Sambrook et al.,Molecular Cloning：A Laboratory Manual.3rd ed.,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y.2001；及Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons,N.Y.,1994。此種肽可自培養基或細胞沉澱(cell pellet)中純化。

在某些實施例中，能夠分離本揭露之肽。在某些實施例中，可純化本揭露之肽。應當理解「純度」為相對術語，並且不一定將其看作絕對純度或絕對富集或絕對選擇。在某些態樣中，該純度為至少或約50%，為至少或約60%、至少或約70%、至少或約80%、或至少或約90%(例如，至少或約91%、至少或約92%、至少或約93%、至少或約94%、至少或約95%、至少或約96%、至少或約97%、至少或約98%、至少或約99%或接近100%)。

在某些實施例中，諸如Genscript(Piscataway,NJ)、New England Peptide(Gardner,MA)、及CPC Scientific(Sunnyvale,CA)、Peptide Technologies Corp.(Gaithersburg,Md.)、及Multiple Peptide Systems(San Diego,Calif.)等公司能夠在商業上合成在此揭露之肽。就此而言，該肽能夠合成、重組、分離、及/或純化。

核酸

在此提供了包含對在此描述之肽或綴合物(包含其肽類似物)中之任一者進行編碼之核苷酸序列之核酸。該核酸能夠包含編碼肽、或其類似物或綴合物中之任一者之任意核苷酸序列。

在此使用之「核酸」包含「多核苷酸」、「寡核苷酸」、及「核酸分子」，並且一般地指DNA或RNA之聚合物，其能夠為自天然源合成或獲取(例如，分離及/或純化)之單鏈或雙鏈，其能夠含有天然的、非天然的或改變的核苷酸，並且其能夠含有天然的、非天然的或改變的核苷酸間聯接，諸如氨基磷酸酯聯接或硫代磷酸酯聯接，代替未經修飾的寡核苷酸之核苷酸之間存在之磷酸二酯。在某些實施例中，該核酸不包含任何插入、刪減、反轉、及/或置換。在其他實施例中，該核酸包含一或多個插入、刪減、反轉、及/或置換。

在某些態樣中，本揭露之核酸為重組的。在此使用之術語「重組」指(i)藉由使天然或合成核酸片段與能夠在活細胞中複製之核酸分子連結，在活細胞外構造之分子，或(ii)複製上述(i)中描述之分子獲得之分子。出於此目的，該複製能夠為體外複製或體內複製。

某些態樣中之核酸為利用此項技術中已知之流程基於化學合成及/或酶促聯結反應構造。例如，請參見Sambrook et al.,supra；及Ausubel et al.,supra。例如，利用天然存在之核苷酸或用於提高分子之生物穩定性或用於提高雜交時形成之雙重構造(例如，硫代磷酸酯衍生物及吖啶置換核苷酸)之物理穩定性之各種修飾核苷酸，能夠化學合成核酸。能夠用於產生核酸之修飾核苷酸之實例包含但並不局限於：5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶(5-chIorouracil)、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙醯基胞嘧啶(4-acetylcytosine)、5-羧基羥甲基尿嘧啶(5-(carboxyhydroxymethyl)uracil)、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫代尿苷(5-carboxymethylaminomethyl-2-thiouridme)、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、β-D-半乳糖Q核苷(beta-D-galactosylqueosine)、肌苷、N⁶-異戊烯基腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N-經取代腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶(5-methylammomethyluracil)、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷、5'-甲氧基羥甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N⁶-異戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-羥基乙酸(v)(uracil-5-oxyacetic acid(v))、wybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷(queosine)、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-羥基乙酸甲基酯、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、及2,6-二氨基嘌呤。作為另外一種選擇，能夠自諸如Macromolecular Resources(Fort Collins,CO)及Synthegen(Houston,TX)等公司購買本發明之一或多種核酸。

表達載體

某些態樣中之本揭露之核酸併入表達載體內。就此而言，本揭露提供包含本揭露之核酸中之任一者之表達載體。出於此目的，術語「表達載體」指轉基因寡核苷酸或多核苷酸構建體，當該構建體包含編碼mRNA、蛋白、多肽或肽之核苷酸序列時，該構建體允許宿主細胞表達 mRNA、蛋白、多肽或肽，並且該載體在足以在細胞內表達mRNA、蛋白、多肽或肽之條件下與細胞接觸。本揭露之載體整體不是天然存在的。然而，該載體之部分能夠天然地存在。本揭露之表達載體可以包含任何類型之核苷酸，包含但並不局限於DNA及RNA，其可以為單鏈的或雙鏈的、合成的或部分地自自然源獲得的，並且其能夠含有天然的、非天然的或改變的核苷酸。該表達載體可以包含天然存在的或非天然存在的核苷酸間聯接，或者此兩種類型之聯接。在某些態樣中，改變之核苷酸或非天然存在之核苷酸間聯接並不妨礙該載體之轉錄或複製。

本揭露之表達載體能夠為任意合適的表達載體，並且能夠用於轉化或轉染任意合適宿主。合適載體包含用於傳播及擴展或用於表達或既用於傳播及擴展又用於表達的載體，諸如質粒及病毒。該載體能夠選自由如下組成之組中：pUC系列(Fermentas Life Sciences)、pBluescript系列(Stratagene,LaJoIIa,CA)、pET系列(Novagen,Madison,WI)、pGEX系列(Pharmacia Biotech,Uppsala,Sweden)、及pEX系列(Clontech,Palo Alto,CA)。亦能夠使用諸如λGTIO、λGTl 1、λZapII(Stratagene)、λEMBL4、及λNMl 149等噬菌體載體。植物表達載體之實例包含：pBIO1、pBI101.2、pBI101.3、pBI121及pBIN19(Clontech)。動物表達載體之實例包含：pEUK-Cl、pMAM及pMAMneo(Clontech)。在某些態樣中，重組表達載體係病毒載體，例如，逆轉錄病毒載體。

利用例如Sambrook et al.,supra及Ausubel et al.,supra描述之標準重組DNA技術，能夠製備本揭露之表達載體。能夠製備環狀或直線狀之表達載體之構建體，以在原核或真核宿主細胞中含有複製系統功能。複製系統能夠來源於例如CoIE1、2μ質粒、λ、SV40、牛乳頭瘤病毒等。

在某些態樣中，該表達載體包含調控序列，諸如，轉錄及轉譯起始密碼及終止密碼子，此為在適當時並且考量到該載體係基於DNA還是基於RNA而將該載體引入其內之此類宿主(例如，細菌、真菌、植物、或動物)特有。

該表達載體可以包含一或多種允許選擇轉化或轉染宿主之標誌物基因。標誌物基因包含：抗微生物劑抗性，例如，對抗生素、重金屬等之抗性；營養缺陷宿主中之互補，以提供原營養等。本揭露之表達載體之合適標誌物基因包含例如：新黴素/G418抗性基因、潮黴素抗性基因(hygromycin resistance genes)、組氨醇抗性基因、四環素抗性基因、及氨苄青黴素抗性基因。

該表達載體能夠包含原有或非原有啟動子，該原有或非原有啟動子可操作地聯接至編碼肽之核苷酸序列，或可操作地聯接至與編碼該肽之核苷酸序列互補或雜交之核苷酸序列。選擇例如強、弱、誘導型、組織特異性型、及發育特異型等啟動子在此項技術中具有通常知識者所理解之範圍內。類似地，使核苷酸序列與啟動子組合亦在熟習此項技術者所理解之範圍內。啟動子能夠為非病毒啟動子或病毒啟動子，例如，巨細胞病毒(CMV)啟動子、SV40啟動子、RSV啟動子、及鼠科動物幹細胞病毒之長末端重複區(long-terminal repeat)中存在之啟動子。

本揭露之表達載體可以用於暫態表達、穩定表達，或用於此二者。此外，可以使該表達載體用於組成型表達或誘導表達。另外，可以使該表達載體包含自殺基因。在此使用之術語「自殺基因」指使表達該自殺基因之細胞死亡之基因。某些態樣中之自殺基因係使表達該基因之細胞對藥劑(例如，藥)具有敏感性，並且當該細胞接觸或暴露於該藥劑中時使該細胞死亡之基因。自殺基因係此項技術中已知的(例如，請參見Suicide Gene Therapy：Methods and Reviews.Springer,Caroline J.(Cancer Research UK Centre for Cancer Therapeutics at the Institute of Cancer Research,Sutton,Surrey,UK),Humana Press,2004)，並且包含例如：單純皰疹病毒(HSV)胸苷激酶(TK)基因、胞嘧啶脫氨酶(cytosine daminase)、嘌呤核苷磷酸化酶、及硝基還原酶。

宿主細胞

本揭露提供包含在此描述之核酸或表達載體之宿主細胞。在此使用之術語「宿主細胞」指能夠含有本揭露之表達載體之任意類型之細胞。某些態樣中之宿主細胞係真核細胞，例如，植物、動物、真菌、或藻類，抑或能夠為原核細胞，例如，細菌或原生動物。某些態樣中之宿主細胞係培養細胞或原代細胞(primary cell)，即，直接自生物體(例如，人)分離。某些態樣中之宿主細胞係貼壁細胞或懸浮細胞，即，懸浮生長的細胞。合適的宿主細胞係此項技術中已知的，並且包含例如：DH5α大腸桿菌(DH5α E.coli)細胞、中國倉鼠卵巢細胞、猴子維洛細胞(monkey VERO cells)、COS細胞、HEK293細胞等等。出於擴增或複製該表達載體之目的，某些態樣中之宿主細胞係原核細胞，例如，DH5α細胞。出於產生肽之目的，某些態樣中之宿主細胞係哺乳動物細胞，例如，人細胞。該宿主細胞可以係任意類型之細胞，能夠源自任意類型之組織，並且可處於任何發育階段。

本發明亦提供包含在此描述之至少一個宿主細胞之細胞群。某些態樣中之細胞群為除了至少一個不包含核酸或表達載體中之任一者之其他細胞以外，還包含具有在此描述之核酸或表達載體中之任一者之宿主細胞之異質群體。作為另外一種選擇，在某些態樣中，細胞群基本上係同質群體，該群體主要包含具有表達載體之宿主細胞(例如，基本上由該等宿主細胞組成)。某些態樣中之該群體為克隆細胞群，該群體之所有細胞為包含表達載體之單一宿主細胞之克隆，使得該群體之所有細胞包含表達載體。在本發明之一個實施例中，該細胞群係包含具有在此描述之核酸或表達載體之宿主細胞之克隆群體。

藥用組成物及配製劑

在此提供包含肽、肽類似物、綴合物、核酸、表達載體、宿主細胞或其組合、及運載體、賦形劑、或稀釋劑之組成物。在示例性態樣中，該組成物為藥用組成物。「藥用組成物」指適合在動物或人身上藥用之組成物。藥用組成物包含在藥理上及/或治療上有效量之活性劑及在藥學上可接受之賦形劑或運載體。熟習此項技術者將容易了解藥用組成物及其製備方法。該等組成物及其製備方法例如可見於：Remington's Pharmaceutical Sciences,19th Edition(Mack Publishing Company,1995)。藥用組成物一般地配製為無菌、基本上等滲，並且完全符合美國食品與藥品管理局之GMP規定。該術語亦涵蓋美國藥典中列明之用於動物(包含人)之藥劑中之任一者。Remington's Pharmaceutical Sciences,21st Ed.2005,Mack Publishing Co,Easton中描述了合適的藥用運載體及配製劑。「藥學上可接受之運載體」或「藥學上可接受之賦形劑」指當施用於動物或人時不產生不良變態反應或其他不適反應之組成物。在此使用之「藥學上可接受之運載體」或「藥學上可接受之賦形劑」包含生理性相容之溶劑、分散介質、包衣(coating)、抗菌劑及抗真菌劑、等滲劑及延遲吸收劑等等中之任一者或全部。藥學上可接受之賦形劑之某些實例係水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等及其組合。在許多情況中，賦形劑包含等滲劑，例如，該組成物中之糖、諸如甘露醇、山梨醇等多元醇或氯化鈉。藥學上可接受之賦形劑之附加實例係濕潤劑或諸如濕潤劑或乳化劑等少量輔助物質、防腐劑或緩衝劑，其增強肽之保質期或效力。

示例性態樣中之藥用組成物包含藥學上可接受之任何成分，包含例如：酸化劑、添加劑、吸附劑、氣霧劑推進劑、空氣替換劑、鹼化劑、防結塊劑、抗凝劑、微生物防腐劑、抗氧化劑、防腐劑(antiseptic)、鹼、粘結劑、緩衝劑、螯合劑(chelating agents)、包衣劑、著色劑、乾燥劑、洗滌劑、稀釋劑、消毒劑、崩解劑、分散劑、溶解增強劑、染料、潤滑物(emollient)、乳化劑、乳化穩定劑、填充劑、成膜劑、風味增強劑、矯味劑(flavoring agent)、流動增強劑(flow enhancer)、膠凝劑、粒化劑、致濕劑、潤滑劑、粘膜粘合劑(mucoadhesive)、軟膏基質(ointment base)、軟膏(ointment)、油脂運輸體(oleaginous vehicle)、有機鹼、錠劑基質、顏料、增塑劑、拋光劑、防腐劑、隱蔽劑(sequestering agent)、皮膚滲透劑、增溶劑、溶劑、穩定劑、栓劑基質、表面活性劑、表面活性物質、懸浮劑、甜味劑、治療劑、增稠劑、張性劑、毒性劑(toxicity agent)、增粘劑、吸水劑、水混溶共溶劑(water-miscible cosolvent)、水軟化劑、或濕潤劑。

在某些實施例中，上述(各)組分可以諸如例如至少A之任意濃度存在於藥用組成物中，其中A係0.0001% w/v、0.001% w/v、0.01% w/v、0.1% w/v、1% w/v、2% w/v、5% w/v、10% w/v、20% w/v、30% w/v、40% w/v、50% w/v、60% w/v、70% w/v、80% w/v、或90% w/v。在某些實施例中，上述(各)組分可以諸如例如至多B之任意濃度存在於藥用組成物中，其中B係90% w/v、80% w/v、70% w/v、60% w/v、50% w/v、40% w/v、30% w/v、20% w/v、10% w/v、5% w/v、2% w/v、1% w/v、0.1% w/v、0.001% w/v、或0.0001%。在其他實施例中，上述(各)組分可以諸如例如約A至約B之任意濃度存在於藥用組成物中。在某些實施例中，A係0.0001%，而B係90%。

在某些實施例中，該藥用組成物以適合對患者施用之純度水準包含在此揭露之肽或肽類似物中之任一者。在某些實施例中，該類似物具有至少約90%、較佳地高於約95%、更佳地高於約99%之純度水準、及藥學上可接受之稀釋劑、運載體或賦形劑。在示例性態樣中，該藥用組成物係無菌的。

可以配製該藥用組成物，以達成生理相容pH。在某些實施例中，基於施用之配製劑及施用途徑，藥用組成物之pH可以為至少2或至少3或至少4或至少5、或至少6、或至少7、或至少8。在某些實施例中，藥用組成物之pH可以為3至9。

在實施例中，可以藉由基因療法作為核苷酸等同物施用肽。在一個實施例中，與肽有關之多核苷酸編碼於可自腺伴隨病毒(AAV)衍生之質粒或載體中。AAV可以係重組AAV病毒，並且可以包含殼體血清型(capsid serotype)，諸如但並不局限於：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV9.47、AAV9(hu14)、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAV-DJ、及AAV-DJ8。作為非限制性實例，該重組AAV病毒之殼體為AAV2。作為非限制性實例，該重組AAV病毒之殼體為AAVrh10。作為非限制性實例，該重組AAV病毒之殼體為AAV9(hu14)。作為非限制性實例，該重組AAV病毒之殼體為AAV-DJ。作為非限制性實例，該重組AAV病毒之殼體為AAV9.47。作為非限制性實例，該重組AAV病毒之殼體為AAV-DJ8。實施例包含SEQ ID No：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377之核苷酸等同物。

熟習此項技術者可明白靶細胞可以要求具體的啟動子，包含但並不局限於具有種屬特異性、誘導性、組織特異性或細胞週期特異性之啟動子，請參見Parr et al,Nat.Med.3：1145-9(1997)；其全部內容以引用方式併入本案中。

在此使用之術語「載體」係轉運、轉導或以其他方式用作諸如本發明之多核苷酸等異源分子之載體之任意分子或部分。「病毒載體」係包含一或多個多核苷酸區之載體，該(等)多核苷酸區編碼或包含感興趣有效載荷分子，例如編碼多肽或多個多肽之轉基因、多核苷酸。本發明之病毒載體可重組地產生，並且可以基於腺伴隨病毒(AAV)親本序列或參照序列。可用於本發明中之血清型包含由如下產生之血清型中之任一者：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV9.47、AAV9(hu14)、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh1O、 AAV-DJ、及AAV-DJ8。

在一個實施例中，可用於本發明中之血清型可以係AAV-DJ8。為了移除肝素結合結構域(heparin binding domain；HBD)，AAV-DJ8之氨基酸序列可以包含二或更多種突變。作為非限制性實例，在美國專利No.7,588,772中描述為SEQ ID NO：1之AAV-DJ序列可以包含兩種突變：(1)R587Q，其中位於氨基酸587處之精氨酸(R；arg)變更為穀氨醯胺(Q；gln)；及(2)R590T，其中位於氨基酸590處之精氨酸(R；arg)變更為蘇氨酸(T；thr)，在此將該美國專利之全部內容以引用方式併入本案中。作為另一個非限制性實例，可以包含三種突變：(1)K406R，其中位於氨基酸406處之賴氨酸(K；lys)變更為精氨酸(R；arg)；(2)R587Q，其中位於氨基酸587處之精氨酸(R；arg)變更為穀氨醯胺(Q；gln)；及(3)R590T，其中位於氨基酸590處之精氨酸(R；arg)變更為蘇氨酸(T；thr)。

AAV載體亦可以包含自補AAV載體(scAAVs)。scAAV載體含有兩種DNA鏈，此兩種DNA鏈一起退火，以形成雙鏈DNA。藉由跳過第二鏈合成，scAAV便能夠在細胞中迅速表達。

在一個實施例中，該藥用組成物包含重組腺伴隨病毒(AAV)載體，該重組腺伴隨病毒載體包含AAV殼體及AAV載體基因組。AAV載體基因組可以包含至少一種在此描述之與肽有關之多核苷酸，諸如但並不局限於：SEQ ID NO：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377或與其具有至少95%同一性之變體。該藥用組成物中之重組AAV載體可以有至少70%含有AAV載體基因組。

在一個實施例中，該藥用組成物包含重組腺伴隨病毒 (AAV)載體，該重組腺伴隨病毒載體包含AAV殼體及AAV載體基因組。AAV載體基因組可以包含至少一種在此描述之與肽有關之多核苷酸，諸如但並不局限於：SEQ ID NO：1、3至41、43至76、79至293、310至315、319至323及354至377或與其具有至少95%同一性之變體及附加N-末端脯氨酸。該藥用組成物中之重組AAV載體可以有至少70%含有AAV載體基因組。

在一個實施例中，可以利用歐洲專利申請No.EP1857552中描述之投送AAV病毒體之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該歐洲專利申請之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用歐洲專利申請No.EP2678433中描述之利用AAV載體投送蛋白之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該歐洲專利申請之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用美國專利No.US 5858351中描述之利用AAV載體投送DNA分子之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該美國專利之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用美國專利No.US 6211 163中描述之用於向血流投送DNA之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該美國專利之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用美國專利No.US 6325998中描述之投送AAV病毒體之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該美國專利之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用美國專利No.US 7588757中描述之用於將有效載荷投送至中樞神經系統之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該美國專利之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用美國專利No.US 8283151中描述之投送有效載荷之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該美國專利之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用國際專利申請公開No.WO2001089583中描述之利用谷氨酸脫羧酶(GAD)投送有效載荷之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該國際專利申請公開之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用國際專利申請公開No.WO2012057363中描述之將有效載荷投送至神經細胞之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該國際專利申請公開之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用美國專利No.9585971中描述之將有效載荷投送至細胞之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體，在此將該美國專利之全部內容以引用方式併入本案中。

在一個實施例中，可以利用Deverman et al.Nature Biotechnology,34,204-09(2016)中描述之將有效載荷投送至細胞之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體。

在一個實施例中，可以利用在US7198951[腺伴隨病毒(AAV)血清型9序列、含有其之載體及其用途]、US 9217155[新型AAV 之分離及其用途]、WO2011126808[藥理學誘導轉基因消融系統]、US6015709[轉錄激活因子、與其有關之組成物及用途]、US7094604[假型重組AAV病毒體之生產]、WO2016126993[抗tau構建體]、US7094604[重組AAV殼體蛋白]、US8,292,769[禽腺伴隨病毒(aaav)及其用途]、US9102949[CNS靶向aav載體及其使用方法]、US20160120960[腺伴隨病毒介導基因轉移至中樞神經系統]、WO2016073693[用於治療帕金森病之AADC多核苷酸]、WO2015168666[用於視網膜及CNS基因療法之AAV載體]、US20090117156[A型尼曼-皮克病之基因療法]或WO2005120581[神經代謝失調之基因療法]中描述之投送AAV病毒體之方法施用或投送包含與肽有關之多核苷酸之病毒載體。

在此描述之病毒載體之藥用組成物可由生物利用度、治療視窗及/或分佈容積中之一或多者表征。

在某些實施例中，本發明之與肽有關之核苷酸及/或與肽有關之核苷酸組成物可以與裝置組合，塗敷於裝置上或嵌入裝置內。裝置可以包含但並不局限於：支架、幫浦、及/或其他可植入治療裝置。此外，可以在受試者正在使用壓迫裝置，諸如但並不局限於減少在受試者體內形成深靜脈血栓(DVT)之機會之壓迫裝置時，將與肽有關之核苷酸及/或與肽有關之核苷酸組成物投送至受試者。本發明提供裝置，該裝置可併入編碼一或多個與肽有關之多核苷酸有效載荷分子之病毒載體。該等裝置以穩定配製劑含有可立即投送至諸如人患者等需要其之受試者之病毒載體。

可以採用用於施用之裝置，依據在此教導之單劑量、多劑量或分次劑量制度，投送包含本發明之與肽有關之核苷酸之病毒載體。

腦施用

在本發明之某些實施例中，將本發明之肽或組成物投送至CNS可以藉由系統性投送注入CSF路徑內、或直接注入腦內，並且在某些實施例中，對於該等途徑中之任一者，配製本發明之組成物。在一個實施例中，為了在CNS內具有靶向作用，藉由系統性或直接施用至CNS內，施用本發明之組成物，並且在某些實施例中，利用該等途徑中之任一者配製本發明之組成物。在一個實施例中，對於腦特異性投送，配製在此所述之組成物，並且在某些實施例中，對於該等途徑中之任一者，配製本發明之組成物。在一個實施例中，對腦投送藥之策略包含滲透性及化學性開放血腦屏障(blood-brain barrier；BBB)及使用控制分子滲入血腦屏障內皮中之轉運或運載系統、酶及受體，並且在某些實施例中，對於該等途徑中之任一者，配製本發明之組成物。在另一個實施例中，受體介導轉胞吞(receptor-mediated transcytosis)能夠穿過BBB轉運肽及蛋白，並且在某些實施例中，對於該等途徑中之任一者，配製本發明之組成物。在其他實施例中，對腦投送藥之策略涉及繞過BBB，並且在某些實施例中，對於該等途徑中之任一者，配製本發明之組成物。在某些實施例中，各種藥理劑用於開放BBB，並且在某些實施例中，對於該等途徑中之任一者，配製本發明之組成物。在另一個實施例中，施用途徑可以指向與受神經變性疾病影響之器官或系統不同之器官或系統。例如，可以在腸外施用化合物，以治療神經變性疾病。因此，熟習此項技術者將理解，本發明提供利用在此所列途徑中之任一者及使CNS利用該等材料之任意途徑，採用適合施用之各種劑量形式。

藥學上可接受之鹽

本揭露更提供在此描述之肽或肽類似物在藥學上可接受之鹽。在此使用之術語「藥學上可接受之鹽」指保持親本肽之生物活性、並且不為生物學或其他方面不可取之肽之鹽。在此揭露之諸多肽能夠藉由氨基及/或羧基基團或與其類似之基團之存在而形成酸及/鹼鹽。藥學上可接受之鹼加成鹽能夠由無機鹼及有機鹼製備。僅作為實例，自無機鹼衍生之鹽包含鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽及鎂鹽。自有機鹼衍生之鹽包含但並不局限於第一、第二、及第三胺鹽。

藥學上可接受之酸加成鹽可以由無機酸及有機酸製備。代表性之酸加成鹽包含但並不局限於：乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽(羥乙磺酸鹽(isothionate))、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸酯、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽、及十一酸鹽(undecanoate)。自無機酸衍生之鹽包含：鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。自有機酸衍生之鹽包含：乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸、等等。能夠用於形成藥學上可接受之酸加成鹽之酸之實例包含例如：無機酸，例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、及磷酸；及有機酸，例如，草酸、馬來酸、琥珀酸、及檸檬酸。

亦能夠在水楊酸源之最終分離及純化時，或藉由使含羧酸部分與合適的鹼(諸如藥學上可接受之金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽、或碳酸氫鹽)發生反應、或與氨或有機第一胺、有機第二胺、或有機第三胺發生反應，在原位製備鹼加成鹽。藥學上可接受之鹽包含但並不局限於：基於鹼金屬或鹼土金屬(諸如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂及鋁鹽等)之陽離子；及包含銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、三乙基、二乙基銨、及乙基銨等等之無毒第四氨陽離子及胺陽離子。用於形成鹼加成鹽之其他代表性有機胺包含例如：乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪、等等。自有機鹼衍生之鹽包含但並不局限於：第一、第二、及第三胺鹽。

此外，含鹼性氮之基團能夠由本揭露之類似物季化為諸如甲基、乙基、丙基、及丁基之氯化物、溴化物以及碘化物等低級烷基鹵化物；諸如癸基、十二烷基、十四烷基、及硬脂醯之氯化物、溴化物以及碘化物等長鏈鹵化物；如苄基及苯乙基溴化物等芳烷基鹵化物等等。因此，獲得水溶性或油溶性或可分散之產物。

可以方便地或希望製備、純化及/或處理肽之相應溶劑合物。在此使用之術語「溶劑合物」在傳統意義上指溶質(例如，肽、肽鹽)與溶劑之絡合物。若該溶劑係水，則可以方便地將該溶劑合物稱為水合物，例如，一水合物、二水合物、三水合物、等等。除非另有說明，否則對特定肽之提及亦包含其溶劑合物形式及水合物形式。

在此使用之「共-結晶體」或「共-結晶鹽」指在室溫下由二或更多種獨特固體組成之結晶材料，每種獨特固體分別具有相異物理特性，諸如結構、熔點、及熔融熱、吸濕性、溶解性、及穩定性。共結晶體或共結晶鹽能夠依據實質上已知之共結晶方法產生。術語共-結晶體(或共結晶體)或共-結晶鹽亦指其中存在諸如式I之肽等一或多個宿主API(活性藥用成分)分子及一或多個客體(或共形成體(co-former))分子之多元系統。

施用途徑、劑量及給藥方案

藥用組成物通常適合腸外施用。在此使用之藥用組成物之「腸外施用」包含由受試者之組織之物理裂口表征之任意施用途徑及經組織中之裂口施用藥用組成物，因此，一般結果係直接施入血流中、肌肉中或內部器官中。因此，腸外施用包含但並不局限於：藉由注射該組成物施用藥用組成物；藉由外科切口施敷該組成物；藉由組織穿透非手術創傷施敷該組成物；等等。具體而言，設想腸外施用包含但並不局限於：皮下注射、腹膜內注射、肌內注射、胸骨內注射、靜脈內注射、動脈內注射、鞘內注射、心室內注射、尿道內注射、顱內注射、滑膜內注射或輸注；或腎透析輸注技術。

在各種實施例中，該肽與藥學上可接受之賦形劑混合，以形成藥用組成物，能夠藉由口服或藉由靜脈內注射、肌內注射、皮下注射、腹膜內注射、經皮注射、動脈內注射、胸骨內注射、鞘內注射、心室內注射、尿道內注射、顱內注射、滑膜內注射或藉由輸注對受試者系統性地施用該藥用組成物。該藥用組成物較佳地含有至少一種在自然界中不存在之組分。

適合腸外施用之藥用組成物之配製劑一般典型地包含與藥學上可接受之賦形劑組合之活性成分，諸如無菌水或無菌等滲鹽水。可以以適合推注施用或連續施用之形式製備、封裝或銷售此種配製劑。可以單位劑量形式(諸如在安瓿中或在含有防腐劑之多劑容器中之形式)製備、封裝或銷售可注射的配製劑。腸外施用之配製劑包含但並不局限於：懸浮液、溶液、油性或水性運輸體中之乳劑、糊劑等等。此種配製劑可更包含一或多種包含但並不局限於懸浮劑、穩定劑、或分散劑之附加成分。在用於腸外施用之配製劑之一個實施例中，以乾燥(即，粉末或顆粒)形式提供活性成分，以在腸外施用該重構組成物之前，與合適的運輸體(例如，無菌無熱原水(sterile pyrogen-free water))重構。腸外施用配製劑亦包含水溶液，該水溶液可以含有諸如鹽、碳水化合物及緩衝劑(較佳地，具有3至9之pH)等運載體，然而，對於某些應用，可將其更適當地配製為無菌非水溶液或乾燥形式，以結合諸如無菌無熱原水等合適的運輸體使用。示例性腸外施用形式包含溶液或無菌水溶液中之懸浮液，例如，丙二醇水溶液或右旋糖(dextrose)溶液。若需要，可適當地緩衝此種劑量形式。有用的其他腸外施用配製劑包含以微晶形式或脂質體製劑形式包含活性成分之配製劑。可以將腸外施用配製劑配製為立即釋放及/或緩釋。緩釋配製劑包含延遲釋放劑、持續釋放劑、脈衝釋放劑、受控釋放劑、靶向釋放劑及程式化釋放劑。

本揭露包含組成物及經皮或局部投送方法，以在局部作用於施敷點處，或在進入身體血液循環後系統性地作用。在該等系統中，利用諸如以軟膏劑等形式直接局部施敷物質或藥之技術，或藉由粘附具有保持藥(或其他物質)並且以時間可控方式對皮膚釋放藥(或其他物質)之貯主等之貼片(patch)，可以達成投送。關於局部施用，該組成物能夠處於乳劑、洗劑、凝膠、乳膏、果凍、溶液、懸浮液、軟膏、及經皮貼片之形式。某些局部投送組成物可以含有多烯基磷脂醯膽鹼(polyenylphosphatidylcholine)(在此簡稱為「PPC」)。在某些情況下，PPC能夠用於增強表皮滲透。在此使用之術語「多烯基磷脂醯膽鹼」指承載二種脂肪酸部分之任意磷脂醯膽鹼，其中該二種脂肪酸中之至少一者係在其結構中具有至少二個雙鍵之非飽和脂肪酸，諸如，亞油酸(linoleic acid)。此種局部配製劑可以包含：一或多種乳化劑、一或多種表面活性劑、一或多種聚乙二醇、一或多種卵磷脂(lecithin)、一或多種脂肪酸酯或一或多種經皮滲透增強劑。製備能夠包含無菌水溶液或非水溶液、懸浮液及乳液，在某些實施例中，其能夠與受試者之血液等滲。非水溶劑之實例為：聚丙二醇；聚乙二醇；諸如橄欖油、芝麻油、椰子油、花生油、花生油、礦物油等植物油；諸如油酸乙酯等有機酯；或包含合成單甘油酯或二甘油酯之不揮發油。水溶劑包含水、酒精溶液/水溶液、乳液或懸浮液、包含鹽水及緩衝介質。腸外運輸體包含氯化鈉溶液、1,3-丁二醇、林格氏右旋糖(Ringer's dextrose)、右旋糖及氯化鈉、乳酸林格氏油或不揮發油。靜脈內運輸體包含液體及營養補充劑、電介質補充劑(諸如基於林格氏右旋糖之電介質補充劑)、等等。亦可以存在防腐劑及其他添加劑，諸如，例如，抗微生物劑 (antimicrobial)、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體等。

例如，在一個態樣中，可藉由根據要求在具有上面列舉之成分中之一者或組合之適當溶劑中併入要求數量之肽，然後過濾殺菌來製備無菌注射液。一般而言，藉由將活性肽併入含有鹼性分散介質及上面所列成分中之其他要求成分之無菌運輸體內來製備分散劑。關於用於製備無菌注射液之無菌粉末，諸如真空乾燥及冷凍乾燥等製備方法由其前面之無菌過濾溶液生產活性成分及任意附加所需成分之粉末。例如，利用諸如卵磷脂之包衣，藉由在分散之情況下保持要求之顆粒大小，並且利用表面活性劑，能夠保持溶液之適當流動性。藉由在該組成物中包含延遲吸收之藥劑，例如，單硬脂酸鹽及明膠，能夠產生可注射組成物之延長吸收。在各種實施例中，利用市售之一次性注射裝置，施用該可注射組成物。

該腸外施用配製劑能夠以諸如安瓿或小瓶等單位劑量或多劑量密封容器之形式存在，並且能夠在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在使用之前立即添加例如水等無菌液體賦形劑來進行注射。即時注射溶液及懸浮液能夠由此項技術中已知類型之無菌粉末、顆粒劑及片劑製備。可注射配製劑符合本揭露。對用於可注射組成物之有效藥用賦形劑之技術要求為熟習此項技術者眾所習知(請參見例如，Pharmaceutics and Pharmacy Practice,J.B.Lippincott Company,Philadelphia,Pa.,Banker and Chalmers,eds.,pages 238-250(1982)，及ASHP Handbook on Injectable Drugs,Toissel,4th ed.,pages 622-630(1986))。

此外，藉由與諸如乳化基質或水溶性基質等各種基質進行混合，能夠將本揭露之肽製成栓劑供直腸施用。適合陰道施用之配製劑能夠以陰道栓、陰道塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫、或除了活性成分以外亦含有此種此項技術中已知適當之運載體之噴射制方之形式提供。

熟習此項技術者將理解，除了上述藥用組成物以外，本揭露之肽亦能夠配製為包結絡合物(inclusion complex)，諸如，環糊精包結絡合物、或脂質體。

通常能夠以來自乾粉末吸入器之乾粉末(單獨地、或作為混合物、或作為混合組分顆粒，例如，與合適之藥學上可接受之運載體混合)之形式，在使用合適推進劑或不使用合適推進劑之情況下，作為來自壓力容器、幫浦、噴射器、霧化器(較佳地為利用電流體力學產生細微氣霧之霧化器)、或噴霧器(nebulizer)之噴霧噴射、或作為滴鼻劑，藉由滴鼻或吸入方式施用該肽。壓力容器、幫浦、噴射器、霧化器或噴霧器通常含有包含例如合適分散劑、溶解劑或活性延長釋放劑、作為溶劑之推進劑之肽之溶液或懸浮液。在用於乾粉末或懸浮液配製劑中之前，通常將藥產品微粉化為適合吸入投送之大小(通常小於5微米)。此可以藉由任意適當粉碎方法達成，諸如，螺旋噴射研磨(spiral jet milling)、流化床噴射研磨(fluid bed jet milling)、形成奈米顆粒之超臨界流體加工、高壓均質化、或噴霧乾燥。可以將用於吸入器或注氣器中之膠囊，泡罩及料盒配製成含有肽、合適粉末基質及性能修飾劑之粉末混合物。為了吸入/鼻內施用，可以將諸如薄荷醇及左旋薄荷醇等合適香料或諸如糖精或糖精鈉等甜味劑添加至該等配製劑中。可以將用於吸入/鼻內施用之配製劑配製為立即釋放及/或緩釋。緩釋配製劑包含延遲釋放劑、持續釋放劑、脈衝釋放劑、受控釋放劑、靶向釋放劑及程式化釋放劑。關於乾粉末吸入器及氣溶膠，利用投送計量量之閥，確定劑量單位。通常設定單位，以施用計量劑量之肽或一「股(puff)」肽。通常以單劑量，更通常地，全天以分劑量，施用每日總劑量。

劑量

因此，基於在此提供之揭露，熟習此項技術者將理解，依據治療技術領域內眾所習知之方法調節劑量及給藥方案。亦即，能夠容易地建立最大可耐受劑量，並且亦可以確定提供可偵測治療益處之有效量，亦能夠確定施用每個藥劑之時間要求，從而對受試者提供可偵測治療益處。因此，儘管在此舉例說明了某些劑量及施用方案，但該等實例不以任何方式限制在實施本揭露時可對受試者提供之劑量及施用方案。

請注意，劑量值可以隨要治療之疾病之類型及嚴重程度而變，並且可以包含單劑量或多劑量。更應理解，對於任一特定受試者，應當依據個體之需要及施用該組成物或監督施用該組成物之人之專業判斷來隨時間調節具體劑量方案，並且更應理解，在此闡述之劑量區間僅為示例性的，並且不旨在限制要求保護之組成物之範圍或實施。此外，本揭露之組成物之劑量方案可基於各種因素，包含受試者之疾病類型、年齡、體重、性別、醫療條件、疾病之嚴重程度、施用途徑、及採用之具體肽。因此，劑量方案能夠寬廣變化，但能夠利用標準方法常規確定。例如，可基於藥代動力學參數或藥效學參數調節劑量，藥代動力學參數或藥效學參數可包含諸如毒性效果之臨床效果及/或實驗值。因此，本揭露涵蓋受試者體內劑量遞增(dose-escalation)，如熟習此項技術者所確定。確定適當劑量及方案在有關技術領域內眾所習知，並且提供了在此揭露之教導後，熟習此項技術者應當明白并完成該適當劑量及方案確定。

本揭露之肽之劑量亦由施用本揭露之具體肽可能伴隨之任意副作用之存在、性質及程度確定。通常，主治醫師將考量到各種因素，諸如，年齡、體重、總體健康、飲食、性別、要施用之本揭露之肽、施用途徑、及被治療之疾病之嚴重程度，判定用其治療每個個體患者之本揭露之肽之劑量。作為實例而不旨在限制，本揭露之肽之劑量能夠為約0.0001至約100mg/kg受治療之受試者體重/天、約0.001至約10mg/kg體重/天、或約0.01mg至約1mg/kg體重/天。能夠以諸如1至3劑量之一或多個劑量施用該肽。

在各種實施例中，基於受試者需要及耐受之劑量及頻率，執行一次或多次施用該藥用組成物。在任何情況下，該組成物皆應當提供足夠數量之至少一種在此揭露之肽，從而有效治療受試者。能夠一次性施用該劑量，亦可以週期性施敷該劑量，直至達成治療效果，或直至因副作用而終止療法。

施用肽藥用組成物之給藥頻率取決於療法之性質及要治療之具體疾病。對於肽，可每日施用一次、二次、三次或四次。以肽之有效治療量治療受試者能夠包含單次治療，或較佳地，能夠包含一系列治療。在較佳實例中，每日、每週一次或兩週一次地以肽治療受試者。

組合療法

根據另一個實施例，與其他已知之治療劑共同施用或共同配製該肽。依據本揭露之又一個態樣，在此提供組合治療，該組合治療包含在同時地、順序地或獨立地施用選自如下中之一或多種下列藥劑之情況下，視情況與藥學上可接受之稀釋劑或運載體一起施用藥理學上有效量之依據本揭露之肽或肽類似物或其在藥學上可接受之鹽：(1)胰島素及胰島素類似物；(2)胰島素促分泌劑，包含磺醯脲(例如，格列吡嗪(glipizide))及餐時葡萄糖調節劑(有時稱為「短效促分泌劑」)，諸如美格列脲(meglitinides)(例如，瑞格列奈(repaglinide)及那格列奈(nateglinide))；(3)改善降糖作用之藥劑，例如，二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制劑(例如，維格列汀(vildagliptin)、薩格列汀(saxagliptin)、及西他列汀(sitagliptin))，及胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)激動劑(例如，依森泰德(exenatide))；(4)胰島素敏化劑，包含過氧化物酶體增值體活化之受體γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma)(PPARy)激動劑，諸如噻唑烷二酮類(例如，吡格列酮(pioglitazone)及羅格列酮(rosiglitazone))，及具有PPARα、γ及△活性之任意組合之藥劑；(5)調整肝葡萄糖均衡之藥劑，例如，雙胍(biguanides)(例如，二甲雙胍)、果糖1,6-二磷酸酶抑制劑、糖原磷酸化酶抑制劑(glycogen phopsphorylase inhibitor)、糖原合成酶激酶、及葡萄糖激酶活化劑；(6)用於減少/減緩自腸內吸收葡萄糖之藥劑，諸如，α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如，米格列醇(miglitol)及阿卡波糖(acarbose))；及(7)對抗胰高血糖素之作用或降低胰高血糖素之分泌之藥劑，諸如，胰澱素類似物(例如，普蘭林肽)；(7[原文如此])防止腎重吸收葡萄糖之藥劑，諸如，鈉依賴性葡萄糖轉運蛋白2(SGLT-2)抑制劑(例如，達格列嗪(dapagliflozin))；(8)用於治療長期高血糖症之併發症之藥劑，諸如，醛糖還原酶抑制劑(例如，依帕司他(epalrestat)及雷尼司他(ranirestat))；及用於治療與微血管病有關之併發症之藥劑；(9)抗血脂異常之藥劑，諸如，HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀類藥物(statins)，例如，羅蘇伐他汀)及其他降膽固醇藥劑；PPARa激動劑(貝特類藥(fibrates)，例如，吉非羅齊(gemfibrozil)及非諾貝特(fenofibrate))；膽汁酸多價螯合劑(例如，考來烯胺(cholestyramine))；(10)膽固醇吸收抑制劑(例如，植物固醇(即，植物甾醇)，合成抑制劑)；膽固醇酯轉移蛋白(CETP)抑制劑；回腸膽汁酸轉運系統之抑制劑(I BAT抑制劑)；膽汁酸結合樹脂；煙酸(niacin)及其類似物；抗氧化物，諸如，普羅布考(probucol)；及ω-3脂肪酸；(11)抗高血壓藥劑，包含腎上腺素受體拮抗劑，諸如β阻斷劑(例如，氨醯心安(atenolol))、α阻斷劑(例如，多沙唑嗪)，及混合之α/β阻斷劑(例如，拉貝洛爾(labetalol))；腎上腺素受體激動劑，包含α-2激動劑(例如，可樂定(clonidine))；血管緊張素轉換酶(ACE)抑制劑(例如，賴諾普利)、鈣通道阻斷劑，諸如，二氫吡啶(例如，硝苯地平)、苯烷胺類(例如，維拉帕米)，及苯噻嗪類(benzothiazepines)(例如，地爾硫卓(diltiazem))；血管緊張素II受體拮抗劑(例如，坎地沙坦)；醛固酮受體拮抗劑(例如，依普利酮)：中樞擬腎上腺素藥，諸如中樞α激動劑(例如，可樂定)；及利尿劑(例如，呋塞米)；(12)止血調節劑，包含抗血栓藥，諸如纖溶活化劑：凝血酶拮抗劑(thrombin antagonist)；VIIa因數抑制劑；抗凝血劑，諸如，維他命K拮抗劑(例如，華法林(warfarin))、肝素及其低分子量類似物、Xa因數抑制劑、及直接凝血酶抑制劑(例如，阿加曲班)；抗血小板劑，諸如，環氧合酶抑制劑(例如，阿司匹林)、二磷酸腺甙(ADP)受體抑制劑(例如，氯吡格雷)、磷酸二酯酶抑制劑(例如，西洛他唑)、糖蛋白I IB/I I A抑制劑(例如，替羅非班)、及腺苷再攝取抑制劑(例如，雙嘧達莫)；(14)抗肥胖劑，諸如，食欲抑制劑(例如，麻黃素)，包含去甲腎上腺素能劑(noradrenergic agents)(例如，芬特明)及血清素作用劑(例如，西布曲明)、胰脂肪酶抑制劑(例如，奧利司他)、微粒體轉移蛋白(MTP)調節劑、二醯基甘油轉移酶(diacyl glycerolacyltransferase)(DGAT)抑制劑、及大麻素(CB1)受體拮抗劑(例如，利莫那班)；(15)攝食行為改良劑，諸如食欲素受體調節劑及黑色素濃縮激素(MCH)調節劑；(16)胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體調節劑；(17)神經肽Y(NPY)/NPY受體調節劑；(18)丙酮酸鹽脫氫酶激酶(PDK)調節劑；(19)血清素受體調節劑；(20)瘦素/瘦素受體調節劑；(21)胃飢餓素/胃飢餓素受體調節劑；或(22)單胺輸送調節劑(monoamine transmission-modulating agent)，諸如選擇性血清素再攝取抑制劑(SSRI)(例如，氟西汀)、去甲腎上腺素(noradrenaline)再攝取抑制劑(NARI)、去甲腎上腺素-血清素再攝取抑制劑(SNRI)、三單胺再攝取阻斷劑(例如，特索芬辛)、及單胺氧化酶抑制劑(MAOI)(例如，托洛沙酮(toloxatone)及阿米夫胺(amiflamine))、或其藥學上可接受之鹽、其溶劑合物、其此種鹽之溶劑合物或其前藥，視情況與藥學上可接受之運載體一起用於需要此種醫療治療之哺乳動物，諸如人。

依據另一個實施例，肽與其他已知之治療劑共同施用或共同配製，用於治療NASH。依據本揭露之又一個態樣，在此提供組合治療，包含在同時地、順序地或獨立地施用選自如下中之一或多種下列藥劑之情況下，視情況與藥學上可接受之稀釋劑或運載體一起施用藥理學上有效量之依據本揭露之肽或肽類似物或其在藥學上可接受之鹽：(miR-103/107拮抗劑、FXR激動劑、半乳凝素-1/3激動劑、ACC抑制劑、CB-1抑制劑、Ketohexakinase抑制劑、PDE4抑制劑、PPARγ激動劑、A3AR激動劑、PDE抑制劑、fluoroketolide、mTOT胰島素敏化劑、半胱天冬酶抑制劑、瘦素類似物、半乳凝素-1/3激動劑、SCD1抑制劑、PPARαδ激動劑、LOXL2抗體、ASK1抑制劑、11β-HSD1抑制劑、PPARαδγ激動劑、THR-β激動劑、醛固酮抑制劑、FGF-19類似物、SBAT抑制劑、CCR2/CCR5抑制劑、GLP-1激動劑、及PPARαγ激動劑)。亦設想與下列化合物一起之組合作為本發明之實施例：阿斯特拉(Astra)ZenecA AZD4076、Enanta EDP-305、半乳凝素療法GR-MD-02、吉卡賓(gemcabene)、吉利德(Gilead)GS-0976、吉利德GS-9674、默克(Merck)MK-4074、吡格列酮、輝瑞(Pfizer)PF-06835919、輝瑞CP-945598、安斯泰來(Astellas)ASP9831、勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)BI 1467335、施貴寶(Bristol Myers Squibb)BMS-986036、文迪雅(avandia)、二甲雙胍、洛沙坦(losartan)、Can-Fite CF102、己酮可可鹼、索利黴素、Cirius MSDC-0602K、恩利卡生(emricasan)、珂尼蒂思(Conatus)IDN-6556、美曲普汀、aramchol、Genfit GFT505、simtuzumab、吉利德GS-4997、吉利德GS-9450、羅氏(Roche)TRO19622、羅氏RO5093151、Immuron IMM-124E、奧貝膽酸、Inventiva IVA337、Madrigal MGL-3196、MN-001、三菱田邊(Mitsubishi Tanabe)MT-3995、Mochida EPA-E、NGM生物製藥NGM282、諾華(Novartis)LMB763、諾華LJN452、夏爾(Shire)SHP626、cenicriviroc、利拉魯肽、及saroglitazar。

與肥胖關聯之併發症-單一療法或組合療法

例如，除了超重或肥胖，受試者或患者可更具有超重或肥胖有關之併發症，即，與超重或肥胖關聯、由其加重之或因其突發之病及其他不利健康之疾病。在此設想本發明所揭露之肽，其單獨與前面所示用於治療與超重或肥胖有關之疾病之至少一種其他藥劑組合施用。

例如，II型糖尿病與肥胖關聯。II型糖尿病之某些併發症，例如，殘疾及早逝能夠藉由持續體重減輕得以預防、改善或消除(Astrup,A.Pub Health Nutr(2001)4：499-5 15)。為治療II型糖尿病施用之藥劑包含磺脲類(例如，氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲)；氯茴苯酸類(例如，瑞格列奈及那格列奈)；雙胍類(例如，二甲雙胍)；噻唑烷二酮類(羅格列酮、曲格列酮及吡格列酮)；二肽基肽酶-4抑制劑(例如，西他列汀(sitagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、及薩格列汀(saxagliptin))；胰高血糖素樣肽-1擬似物(例如，依森泰德(Exenatide)及利拉魯肽(Liraglutide))；及α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖及米格列醇)。

已經將心臟失調及疾病例如高血壓、血脂異常、缺血性心臟病、心肌病、心肌梗塞、中風、靜脈血栓栓塞疾病及肺動脈高壓與超重或肥胖聯繫起來。例如，已經將高血壓與肥胖聯繫起來，乃因過量脂肪組織分泌藉由腎來作用之物質而導致高血壓。另外，因肥胖而一般存在較高量之胰島素產生(因過量之脂肪組織)並且此過量之胰島素亦升高血壓。高血壓之主要治療選擇在於體重減輕。為治療高血壓施用之藥劑包含：氯噻酮；氫氯噻嗪；吲達帕胺、美托拉宗；髓袢利尿劑(例如，布美他尼、依他尼酸、呋塞米、呋喃苯胺酸、托拉塞米)；保鉀利尿藥(例如，鹽酸阿米洛利、苯甲醯胺(benzamil)、螺內酯及氨苯蝶啶)；外周藥(例如，利血平)；中樞α-激動劑(例如，鹽酸可樂定、胍那苄醋酸鹽、鹽酸胍法辛及甲基多巴)；α-阻滯劑(例如，甲磺酸多沙唑嗪、鹽酸哌唑嗪及鹽酸特拉唑嗪)；β-阻滯劑(例如，醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、富馬酸比索洛爾、鹽酸卡替洛爾、酒石酸美托洛爾、琥珀酸美托洛爾、納多洛爾、硫酸噴布洛爾、吲哚洛爾、鹽酸普萘洛爾及馬來酸噻嗎洛爾)；複合α-及β-阻滯劑(例如，卡維地洛及鹽酸拉貝洛爾)；直接血管擴張劑(例如，鹽酸肼苯噠嗪及米諾地爾)；鈣拮抗劑(例如，鹽酸地爾硫卓及鹽酸維拉帕米)；二氫吡啶類(例如，苯磺酸氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平及尼索地平)；ACE抑制劑(鹽酸貝那普利、卡托普利、馬來酸依那普利、福辛普利鈉、賴諾普利、莫昔普利、鹽酸喹那普利、雷米普利、群多普利)；血管緊張素II受體阻滯劑(例如，氯沙坦鉀、纈沙坦及厄貝沙坦)；腎素抑制劑(例如，阿利吉侖)；及其組合。以此項技術中已知之方案及劑量施用該等化合物。

Carr等人(The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism(2004)Vol.89，No.6 2601-2607)討論了超重或肥胖與血脂異常之間之關聯性。血脂異常典型地用他汀類藥物治療。他汀類藥物HMG-CoA還原酶抑制劑減緩受試者膽固醇產生及/或自動脈中除去膽固醇累積。他汀類藥物包含美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、velostatin、二氫康帕丁(dihydrocompactin)、氟伐他汀、阿托伐他汀、達伐他汀、carvastatin、克伐他汀、bevastatin、cefvastatin、瑞舒伐他汀、匹伐他汀及格侖伐地汀。以此項技術中已知之方案及劑量施用該等化合物。Eckel (Circulation(1997)96：3248-3250)討論了超重或肥胖與缺血性心臟病之間之關聯性。為治療缺血性心臟病施用之藥劑包含他汀類藥物、硝酸鹽類(例如，硝酸異山梨酯及單硝酸異山梨酯)、β-阻滯劑及鈣通道拮抗劑。以此項技術中已知之方案及劑量施用該等化合物。

Wong等(Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine(2007)4：436-443)討論了超重或肥胖與心肌病之間之關聯性。為治療心肌病施用之藥劑包含正性肌力藥劑(例如，地高辛)、利尿藥(例如，呋塞米)、ACE抑制劑、鈣拮抗劑、抗心律不齊藥劑(例如，索他洛爾、胺碘酮及丙吡胺)及β-阻滯劑。以此項技術中已知之方案及劑量施用該等化合物。Yusef等人(Lancet(2005)366(9497)：1640-1649)討論了超重或肥胖與心肌梗塞之間之關聯性。為治療心肌梗塞施用之藥劑包含ACE抑制劑、血管緊張素II受體阻滯劑、直接血管擴張劑、β-阻滯劑、抗心律不齊藥劑及血栓溶解劑(例如，阿替普酶、Retaplase、替奈普酶、阿尼普酶及尿激酶)。以此項技術中已知之方案及劑量施用該等化合物。

Suk等人(Stroke(2003)34：1586-1592)討論了超重或肥胖與中風之間之關聯性。為治療中風施用之藥劑包含抗血小板劑(例如，阿司匹林、氯吡格雷、雙嘧達莫及噻氯匹定)、抗凝血劑(例如，肝素)及血栓溶解劑。Stein等人(The American Journal of Medicine(2005)18(9)：978-980)討論了超重或肥胖與靜脈血栓栓塞疾病之間之關聯性。為治療靜脈血栓栓塞疾病施用之藥劑包含抗血小板劑、抗凝血劑及血栓溶解劑。Sztrymf等人(Rev Pneumol Clin(2002)58(2)：104-10)討論了超重或肥胖與肺動脈高壓之間之關聯性。為治療肺動脈高壓施用之藥劑包含正性肌力藥、抗凝血劑、利尿藥、鉀(例如，K-dur)、血管擴張劑(例如，硝苯地平及地爾硫卓)、波生坦、依前列醇及西地那非。已經將諸如肥胖-通氣不足綜合征、哮喘及阻塞性睡眠呼吸中止症等呼吸失調及疾病與超重或肥胖聯繫起來。Elamin(Chest(2004)125：1972-1974)討論了超重或肥胖與哮喘之間之關聯性。為治療哮喘施用之藥劑包含支氣管擴張藥、抗炎藥、白三烯阻滯劑及抗-Ige劑。某些哮喘藥劑包含紮魯司特、氟尼縮松、曲安西龍、倍氯米松、特普他林、氟替卡松、福莫特羅、倍氯米松、沙美特羅、茶鹼及左旋沙丁胺醇(Xopenex)。

Kessler等人(Eur Respir J(1996)9：787-794)討論了超重或肥胖與阻塞性睡眠呼吸中止症之間之關聯性。為治療阻塞性睡眠呼吸中止症施用之藥劑包含莫達非尼及安非他命。

已經將諸如非酒精性脂肪肝病等肝功能障礙及疾病與超重或肥胖聯繫起來。Tolman等人(Ther Clin Risk Manag(2007)6：1153-1163)討論了超重或肥胖與非酒精性脂肪肝病之間之關聯性。為治療非酒精性脂肪肝病施用之藥劑包含抗氧化劑(例如，維生素E及C)、胰島素敏化劑(二甲雙胍、吡格列酮、羅格列酮及甜菜鹼)、肝保護劑及降脂劑。

已經將諸如背痛及承重關節之骨關節炎等骨骼病症及疾病與超重或肥胖聯繫起來，van Saase(J Rheumatol(1988)15(7)：1152-1158)討論了超重或肥胖與承重關節之骨關節炎之間之關聯性。為治療承重關節之骨關節炎施用之藥劑包含撲熱息痛、非甾族抗炎劑(例如，布洛芬、依託度酸、奧沙普秦、萘普生、雙氯芬酸及萘丁美酮)、COX-2抑制劑(例如，塞來昔布(Celecoxib))、甾族化合物、補藥(例如，葡糖胺及硫酸軟骨素) 及人工關節液。

已經將諸如普-威綜合征及多囊卵巢綜合征等代謝性病症及疾病與超重或肥胖聯繫起來。Cassidy(Journal of Medical Genetics(1997)34：917-923)討論了超重或肥胖與普-威綜合征之間之關聯性。為治療普-威綜合征施用之藥劑包含人體生長激素(HGH)、促生長素(somatropin)及體重減輕劑(例如，奧利司他、西布曲明、去氧麻黃鹼、酚特明(Ionamin)、苯丁胺(Phentermine)、安非他酮、安非拉酮、苯甲曲秦、苄非他明及妥泰)。

Hoeger(Obstetrics and Gynecology Clinics of North America(2001)28(1)：85-97)討論了超重或肥胖與多囊卵巢綜合征之間之關聯性。為治療多囊卵巢綜合征施用之藥劑包含胰島素敏化劑、合成雌激素及孕酮之組合、螺內酯、依氟鳥氨酸及氯米芬。已經將諸如性功能障礙、勃起功能障礙、不育、產科併發症及胎兒異常等生殖病症及疾病與超重或肥胖聯繫起來。Larsen等人(Int JObes(Lond)(2007)8：1189-1198)討論了超重或肥胖與性功能障礙之間之關聯性。Chung等人(Eur Urol(1999)36(1)：68-70)討論了超重或肥胖與勃起功能障礙之間之關聯性。為治療勃起功能障礙施用之藥劑包含磷酸二酯酶抑制劑(例如，他達拉非、枸櫞酸西地那非及伐地那非)、前列腺素E類似物(例如，前列地爾)、生物鹼類(例如，育亨賓)及睾酮。Pasquali等人(Hum Reprod(1997)1：82-87)討論了超重或肥胖與不育之間之關聯性。為治療不育施用之藥劑包含氯米芬、克羅米芬、溴隱亭、促性腺素釋放素(GnRH)、GnRH激動劑、GnRH拮抗劑、他莫昔芬/諾瓦得士、促性腺素類、人絨毛膜促性腺素(HCG)、人絕經期促性腺素(HmG)、孕酮、重組濾泡刺激激素(FSH)、尿促卵泡素、肝素、促卵泡素α及促卵泡素β。

Weiss等人(American Journal of Obstetrics and Gynecology(2004)190(4)：1091-1097)討論了超重或肥胖與產科併發症之間之關聯性。為治療產科併發症施用之藥劑包含鹽酸布比卡因、地諾前列酮PGE2、哌替啶HCl、亞鐵化合物-葉酸-500/益補力-葉酸-500、哌替啶、馬來酸甲麥角新鹼、羅哌卡因HCl、納布啡HCl、羥嗎啡酮HCl、縮宮素、地諾前列酮、利托君、氫溴酸東莨菪鹼、枸櫞酸舒芬太尼及催產藥。

已經將諸如與體重關聯之抑鬱及焦慮等精神病症及疾病與超重或肥胖聯繫起來。Dixson等人(Arch Intern Med(2003)163：2058-2065)討論了超重或肥胖與抑鬱之間之關聯性。為治療抑鬱施用之藥物包含血清素再攝取抑制劑(例如，氟西汀、依地普侖、西酞普蘭、帕羅西汀、舍曲林及文拉法辛)；三環抗抑鬱藥(例如，阿米替林、阿莫沙平、氯米帕明、地昔帕明、鹽酸度硫平、多塞平、丙米嗪、伊普吲哚、洛非帕明、去甲替林、奧匹哌醇、普羅替林及曲米帕明)；單胺氧化酶抑制劑(例如，異卡波肼、嗎氯貝胺、苯乙肼、反苯環丙胺、司來吉蘭、雷沙吉蘭、尼亞拉胺、異丙煙肼、異丙氯肼、托洛沙酮、利奈唑胺、二烯內酯卡瓦內酯去甲氧基麻醉椒素(Dienolide kavapyrone desmethoxyyangonin)及右旋安非他命)；精神興奮劑(例如，苯丙胺、去氧麻黃鹼、哌甲酯及檳榔鹼)；抗精神病藥(例如，丁醯苯、吩噻嗪類、硫雜蒽類、氯氮平、奧氮平、利培酮、喹硫平、齊拉西酮、氨磺必利、帕潘立酮、氟西汀、丁苯那嗪及大麻二酚)；及情緒穩定劑(例如，碳酸鋰、丙戊酸、雙丙戊酸鈉、丙戊酸鈉、拉莫三嗪、卡馬西平、加巴噴丁、奧凱西平及托吡酯)。

Simon等人(Archives of General Psychiatry(2006)63(7)：824-830)討論了超重或肥胖與焦慮之間之關聯性。為治療焦慮施用之藥劑包含血清素再攝取抑制劑、情緒穩定劑、苯二氮卓類(benzodiazepines)(例如，阿普唑侖、氯硝西泮、地西泮及蘿拉西泮)、三環抗抑鬱藥、單胺氧化酶抑制劑及β-阻滯劑。

本發明之另一個態樣提供促進並維持受試者體重減輕之方法，該方法包含：對受試者施用有效達成受試者體重減輕之量之本揭露之化合物；並且施用治療有效量之不同體重減輕劑(Weight loss agent)以維持受試者減輕之體重。體重減輕劑包含血清素及去甲腎上腺素能再攝取抑制劑；去甲腎上腺素能再攝取抑制劑；選擇性血清素再攝取抑制劑；及腸脂酶抑制劑。具體的體重減輕劑包含利拉魯肽、奧利司他、西布曲明、去氧麻黃鹼、酚特明(Ionamin)、苯丁胺(Phentermine)、安非他酮、安非拉酮、苯甲曲秦、苄非他明、溴隱亭、氯卡色林、托吡酯、或藉由阻滯胃飢餓素之作用、抑制二醯基甘油醯基轉移酶1(DGAT1)之活性、抑制硬脂醯基CoA脫氫酶1(SCD1)之活性、抑制神經肽Y受體1之功能、活化神經肽Y受體2或4之功能、或抑制鈉葡糖轉運蛋白1或2之活性而用於調節進食之藥劑。以此項技術中已知之方案及劑量施用該等化合物。

治療方法

在此給出之資料表明本揭露之肽降低脂肪細胞中之游離脂肪酸水準、並且支援利用此種肽降低需要其之哺乳動物之體重、血糖水準、及/或脂肪量之能力。在此給出之資料亦表明此種肽在血漿中之穩定性並且支持其用作適合對哺乳動物施用之治療肽。因此，本揭露提供用於治療與體重、血糖水準及脂肪量有關之疾病(例如包含肥胖、脂肪肝病及糖尿病之代謝疾病)之方法。

在不局限於特定理論之情況下，利用肽治療脂肪細胞後，細胞培養基中之游離脂肪酸(FFA)表明對細胞脂質或脂肪酸水準調節中涉及之路徑之調整。培養基中脂肪酸水準之降低可起因於多種處理，包含但並不局限於：抑制訊號路徑；減少細胞脂肪生成；減少脂解；或增加脂肪酸氧化。對游離脂肪酸之淨濃度有效之肽能夠用於治療代謝病症。因此，本揭露提供一種調節需要其之受試者之脂肪酸代謝之方法，該方法包含：以有效調節脂肪酸代謝之量，對該受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。在示例性態樣中，該方法係一種提高需要其之受試者之脂肪酸代謝之方法。本揭露亦提供一種調節細胞中之脂肪酸代謝之方法，該方法包含以有效調節脂肪酸代謝之量，使本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞接觸細胞。在示例性態樣中，該方法係提高細胞中之脂肪酸代謝之方法。

脂肪代謝失調係以脂肪組織(體脂肪)選擇性地自身體各部位消失及/或過量脂肪在其他區域累積為特徵之常見病症名稱。諸如臉部等一個區域之局部脂肪消失被稱為皮下脂肪萎縮。脂肪消失之程度能夠介於身體一部分上之非常小區域與接近整個身體皆缺少脂肪組織之間。此外，患者可能患有嚴重代謝併發症，或僅有容貌問題。與嚴重脂肪消失關聯之脂肪代謝障礙可導致與胰島素抗性有關之代謝併發症，諸如糖尿病、血清甘油三酯高及脂肪肝(肝脂肪變性)。脂肪代謝障礙可以係先天性的(諸如，家族性部分脂肪代謝障礙或Beradinelli-Seip綜合征)，亦可以係獲得性的(例如，與各種類型之病或藥關聯)。獲得性脂肪代謝障礙由藥物治療、自身免疫機制導致，亦可以係特發的。獲得性脂肪代謝障礙包含可由高效抗逆轉錄病毒療法(HAART)誘發之HIV-感染患者(LD-HIV)中之脂肪代謝障礙；獲得性全身脂肪代謝障礙(AGL)；獲得性部分脂肪代謝障礙(APL)；及局部脂肪代謝障礙。獲得性脂肪代謝障礙無直接基因基礎。依據某些實施例，本發明提供一種減輕、改善或預防脂肪代謝障礙之方法。

肽可用於治療與由異常之血糖水準、活性氧(ROS)及/或游離脂肪酸(FFA)表明之不均衡代謝狀態關聯之疾病。良好代謝狀態被定義為均衡的能量穩態，其特徵在於與健康受試者具有等同之血糖水準、ROS及FFA(在健康人口之平均水準區間內)。因此，在此使用之不良代謝狀態指血糖水準、ROS及/或FFA異常，即，相較於在健康對照受試者中之相應水準發生顯著變化(例如，由醫師或熟習此項技術者評估)。在某些實施例中，術語不良代謝狀態指相較於健康對照受試者中之相應水準，血糖水準、ROS及/或FFA顯著增強(例如，由醫師或熟習此項技術者評估)。不良代謝狀態可起因於可涉及葡萄糖(碳水化合物)及/或脂肪酸氧化路徑之異常代謝。當涉及脂肪酸氧化路徑之紊亂時，不良代謝狀態通常表現為相較於健康對照受試者顯著增強之血液ROS水準及/或異常血液FFA水準。該等紊亂亦可表現為升高之血液氧化低密度脂蛋白(LDL)水準。當涉及葡萄糖代謝紊亂時，相較於健康對照受試者，血糖水準通常顯著增強。如在此使用之，顯著增強之血糖水準未超過不均衡血糖控制之臨限值之患者將被定義為具有不良代謝狀態，若所述增強伴有異常血液ROS及/或FFA值，如在此所述。在此項技術中已知，所述醫師或熟習此項技術者亦可以考量到能量攝入及各種能量消耗及利用參數來評估不均衡代謝狀態。例如，在無限制之情況下，可評估以下參數來確定受試者之代謝狀態：細胞水準上之參數，諸如細胞(例如，血小板)ATP產生及細胞氧化；及全身水準上之參數，諸如呼吸商(RQ)。例如，藉由在健康人與有病患者之間比較該等參數之相對比值，熟習此項技術者可相較於健康對照組評估受試者之代謝狀態。受慢性代謝病症及/或炎性病症困擾而未由適當治療方案進行適宜治療或均衡之患者可存在不良代謝狀況。

因此，本揭露提供一種對需要其之受試者治療代謝疾病之方法，該方法包含以有效治療代謝疾病之量，對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

術語「代謝疾病」或「代謝病症」指其中發生代謝錯誤、代謝不均衡、或次佳代謝之一組鑒別病症，其可涉及葡萄糖(碳水化合物)、脂肪酸及/或蛋白氧化路徑。因此，當不均衡時，相較於健康對照受試者之相應水準，該等病症典型地表現為由異常血糖水準、ROS及/或FFA表徵之不良代謝狀態，如在此所述。該等病症包含糖尿病及與營養不均衡或內分泌不均衡關聯之病症，對此不進行限制。

不良代謝狀態亦可因慢性炎性病症而發生，其中未解決之不均衡炎症過程伴隨繼發性代謝併發症，該等繼發性代謝併發症相較於健康對照受試者之相應水準表現為異常血糖水準、ROS及/或FFA。該等病症之非限制性實例為膿毒病及自身免疫病。

X綜合征(或代謝綜合征)代表一組與脂肪在腹腔中之累積關聯之跡象及症狀。此種脂肪分佈形式往往發生於中年人中，並且通常可見為啤酒肚或啤酒腹。X綜合征以多種病症為特徵，該等病症包含痛風、糖代謝異常(對糖尿病之易感性提高)、血壓升高及血膽固醇水準升高。有X綜合征之人患心臟病之風險高。在血清或血漿胰島素/葡萄糖水準比、脂質、尿酸水準、血管生理及凝血因子不均衡方面，美國臨床內分泌醫師學會(American Association of Clinical Endocrinologists)將X綜合征定義為一組代謝異常現象。因此，在此使用之術語「X綜合征」指以確定診斷出下列中之至少二種為特徵之疾病：非胰島素依賴性糖尿病(Non-insulin-dependent diabetes)、血壓高於被認為正常之水準、胰島素水準高於被認為正常之水準、血脂異常及肥胖。

肽在以下代謝疾病中有用：

(a)預防及/或治療所有形式之糖尿病，諸如，高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、1型糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病、MODY(青春晚期糖尿病(maturity onset diabetes of the young))、妊娠糖尿病、及/或HbAlC減少；

(b)延遲或預防糖尿病進展，諸如2型糖尿病之進展，延遲葡萄糖耐量降低(IGT)進展至需要胰島素之2型糖尿病，延遲或預防胰島素耐受，及/或延遲不需要胰島素之2型糖尿病進展至需要胰島素之2型糖尿病；

(c)改善β細胞功能，諸如減少β細胞凋亡，提高β細胞功能及/或β細胞量，及/或恢復對β-細胞之葡萄糖敏感性；

(d)預防及/或治療認知障礙及/或神經退行性病症，諸如，阿爾茨海默病、帕金森病及/或多發性硬化症；

(e)例如，藉由減少食品攝入、降低體重、抑制食欲、誘導飽腹感，預防及/或治療飲食失調，諸如肥胖；治療或預防由施用抗精神病藥物或類固醇引起之暴食症、易餓病、及/或肥胖；減少胃運動；延遲胃排空；增加體力活動；及/或預防及/或治療與肥胖之複合病變，諸如，骨關節炎及/或小便失禁；

(f)預防及/或治療糖尿病併發症，諸如，血管病；神經病、包含周圍神經病；腎病；及/或視網膜病；

(g)改善脂質參數，諸如，預防及/或治療血脂異常；降低總血脂；提高HDL；降低密度小之LDL；降低VLDL；降低甘油三脂；降低膽固醇；降低人體中血漿脂蛋白水準a(Lp(a))；抑制在體外及/或體內產生載脂蛋白a(apo(a))；

(h)預防及/或治療心血管疾病，諸如，X綜合征、動脈粥樣硬化、心肌梗死、冠心病、再灌注損傷、中風、缺氧、腦缺血、早期心臟病及早期心血管病、左室肥厚、冠狀動脈疾病、高血壓、原發性高血壓、高血壓急症、心肌症、心功能不全、鍛煉不耐受、急性及/慢性心力衰竭、心律不齊、心律不整、昏厥、心絞痛、心臟轉流及/或支架閉塞、間歇性跛行(硬化閉塞症)、舒張期功能障礙及/或收縮功能障礙；及/或血壓降低，諸如，收縮壓降低。

(i)預防及/或治療胃腸病，諸如，炎症性腸病、短腸綜合征、或節段性回腸炎或結腸炎；消化不良及/或胃潰瘍；及/或炎症、諸如，牛皮癬、銀屑病關節炎、類風濕性關節炎及/或全身性紅斑狼瘡。

(j)預防及/或治療危重病，諸如，治療危重患者、多腎病危重病(CIPNP) 患者、及/或潛在CIPNP患者；預防危重病或CIPNT發展；預防、治療及/或治癒患者之全身炎症反應綜合征(SIRS)；預防或降低住院治療患者遭受菌血症、敗血症及/或敗血性休克之可能性；及/或使具有危重病之重症監護患者之血糖穩定、胰島素均衡及視情況代謝穩定；

(k)預防及/或治療多囊卵巢綜合征(PCOS)；

(l)預防及/或治療腦部疾病，諸如，腦缺血、腦內出血、及/或顱腦損傷；

(m)預防及/或治療睡眠呼吸中止症；

(n)預防及/或治療濫用，諸如，酒精濫用及/或藥物濫用；

(o)預防或治療脂肪肝疾病，包含但並不局限於脂肪肝病(FLD)、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、及非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；及/或

(p)治療胞內生產活性氧類(ROS)。

在又一個態樣中，在此提供藉由對需要治療之患者施用有效量之肽來治療糖尿病及/或與糖尿病有關之併發症之方法。有利地，用於依據在此提供之方法治療糖尿病及/或有關併發症之肽對胰腺β細胞具有抗凋亡活性並且/或模擬其增殖，使得施用該肽提高產生β細胞之胰島素之數量及患者產生胰島素之水準。

肝病

本揭露亦提供治療需要其之受試者之肝病之方法，該方法包含以有效治療肝病之量，對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。

在某些實施例中，該疾病或內科疾病係非酒精性脂肪肝(NAFLD)。NAFLD指自單純性脂肪肝(脂肪變性)、至非酒精性脂肪肝炎(NASH)、至肝硬化(不可逆之晚期肝瘢痕化)之一大系列肝病。NAFLD之所有階段皆相同地在肝臟細胞(肝細胞)中累積脂肪(脂肪浸潤)。單純性脂肪肝係某些類型之脂肪、甘油三酯在肝細胞中異常累積，而無炎症或瘢痕。在NASH中，脂肪累積與肝之炎症(肝炎)及瘢痕化(纖維化)之變化程度關聯。炎性細胞能夠破壞肝細胞(肝細胞壞死)。在術語「脂肪性肝炎(steatohepatitis)」及「脂肪壞死(steatonecrosis)」中，脂肪性(steato)指脂肪浸潤，肝炎(hepatitis)指肝臟中之炎症，而壞死(necrosis)指被破壞之肝細胞。NASH能夠最終導致肝瘢痕化(纖維化)，並且然後不可逆晚期瘢痕化(肝硬化)。由NASH導致之肝硬化係NAFLD系列中最後且最嚴重之階段。(Mendler,Michel,“Fatty Liver：Nonalcoholic Fatty Liver Disease(NAFLD)and Nonalcoholic Steatohepatitis(NASH),”ed.Schoenfield,Leslie J.,MedicineNet.com,August 29,2005)。

酒精性肝病或酒精緻肝病包含與過量消費酒精有關或由過量消費酒精導致之病理上不同之三種肝病：脂肪肝(脂肪變性)、慢性或急性肝炎、及肝硬化。酒精性肝炎之範圍自僅由異常實驗室測試指出存在疾病之輕度肝炎至具有以下併發症之嚴重肝功能障礙：諸如黃疸(膽紅素滯留產生之黃皮)、肝性腦病(肝功能衰竭導致之神經機能障礙)、腹水(腹腔內之液體累積)、出血性食管曲張(食管中之靜脈曲張)、異常凝血、及昏迷。在組織學上，酒精性肝炎之表現特徵為具有氣球樣變性之肝細胞，嗜中性粒細胞並且有時馬婁裡小體有炎症(細胞中間絲蛋白異常積聚)。在解剖學方面，肝硬化以結節在肝中與纖維化結合廣泛擴展為特徵。(Worman,Howard J.,“Alcoholic Liver Disease”,Columbia University Medical Center website)。

在不局限於任一特定理論之情況下，在此描述之肽或肽類似物用於治療酒精性肝病、NAFLD或其任何階段，包含例如：脂肪變性、脂肪性肝炎、肝炎、肝臟炎症、NASH、肝硬化、或其併發症。因此，本揭露提供對受試者預防或治療酒精性肝病、NAFLD或其任何階段之方法，該方法包含以有效預防或治療酒精性肝病、NAFLD或其任何階段之量對受試者提供在此描述之肽或肽類似物。該等治療方法包含減少如下中之一者、二者、三者或更多者：肝脂肪含量、肝硬化之發病率或進展、肝細胞性肝癌之發病率、炎症跡象、例如，異常肝酶水準(例如，天冬氨酸轉氨酶AST及/或丙氨酸轉氨酶ALT、或LDH)、升高的血清鐵蛋白、升高的血清膽紅素、及/或纖維化跡象，例如，升高的TGF-β水準。在示例性實施例中，該肽或肽類似物用於治療其已經進展至超出單純性脂肪肝(脂肪變性)並且呈現炎症或肝炎跡象之患者。該等方法可以實現例如降低AST及/或ALT水準。

癌症治療

在某些實施例中，該肽具有抗癌活性。例如，在某些態樣中，該肽對諸如但並不局限於如下之癌細胞具有促凋亡活性：前列腺癌細胞及/或乳腺癌細胞。在又一個態樣中，該肽對諸如但並不局限於如下之癌細胞具有抗增殖活性：前列腺癌細胞及/或乳腺癌細胞。

本揭露亦提供對需要其之受試者治療癌症之方法，該方法包含以有效治療癌症之量，對受試者施用本揭露之肽或肽類似物、綴合物、核酸、重組表達載體、或宿主細胞。本揭露亦包含治療癌症之方法，該方法包含對需要治療之受試者施用有效量之肽或其變體。在此提供之肽產生各種抗癌效果並且能夠用於治療廣泛之癌症及其他增殖病症。在此提供之肽能夠具有各種抗癌活性，諸如但並不局限於：誘導癌細胞凋亡、抑制腫瘤血管發生、抑制腫瘤轉移、調節細胞週期、抑制癌細胞增殖、促進腫瘤細胞分化、抑制活性氧類之產生及/或免受活性氧類影響、及增強抗逆性。「癌症」一般地指以不可控異常細胞生長及增殖為特徵之疾病。「腫瘤」或「瘤形成」係由過多、不可控並且進展之細胞分裂導致之異常數量之組織。在此描述之方法可用於治療任何類型之癌症及增殖性病症，包含但並不局限於：癌、肉瘤、軟組織肉瘤、淋巴瘤、血液癌、白血病、生殖細胞腫瘤、及無固體瘤之癌(例如，血細胞生成癌)。在各種態樣中，該肽能夠用於治療源自及/或影響任何組織之癌及/或腫瘤，該任何組織包含但並不局限於：肺、乳房、上皮、大腸、直腸、睾丸、膀胱、甲狀腺、膽囊、膽管、膽道、前列腺、結腸、胃、食道、胰腺、肝臟、腎臟、子宮、子宮頸、卵巢、及腦組織。該肽可治療之具體癌症之非限制性實例包含但並不局限於：急性淋巴細胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、慢性粒細胞性白血病(chronic myelogenous leukemia)、腎上腺皮質癌、愛滋病相關淋巴瘤、肛門癌、星形細胞瘤、大腦基底細胞癌、膽道癌、肝外膀胱癌(extrahepatic bladder cancer)、膀胱癌、骨癌、骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤、腦幹膠質瘤、腦瘤、腦幹膠質瘤、腦星形細胞瘤/惡性膠質瘤、室管膜瘤、成神經管細胞瘤、始神經外胚葉腫瘤、視覺通路及下丘腦神經膠質瘤、乳腺癌、男性支氣管腺瘤/良性腫瘤、伯基特淋巴瘤、類癌瘤、未知原發性中樞神經系統淋巴瘤之胃腸道癌、宮頸癌、慢性淋巴細胞白血病、慢性粒細胞白血病、慢性骨髓增殖性疾病、結腸癌、大腸癌、皮膚t細胞淋巴瘤、蕈樣肉芽腫及塞紮裡綜合征、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤文系列腫瘤(Ewing's family tumors)、生殖細胞腫瘤、肝外膽管癌、眼球癌、眼內黑色素瘤、視網膜母細胞瘤、膽囊癌、胃部(胃)癌、胃腸類癌腫瘤、卵巢妊娠(ovarian gestational)、滋養細胞腫瘤、膠質瘤、下丘腦皮膚癌(黑色素瘤)、皮膚癌(非黑色素瘤)、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、隱性原發性之鱗狀頸部癌、轉移性胃(胃部)癌、胃(胃部)癌、t-細胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲狀腺癌、腎盂之移行細胞癌、輸尿管滋養細胞腫瘤、移行細胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉瘤、陰道癌、下丘腦膠質瘤、外陰癌、沃登斯通(Waldenstrom)大球蛋白血症、威爾姆斯(Wilms)腫瘤、毛細胞白血病、頭頸癌、肝細胞(肝)癌、霍奇金氏(Hodgkin)淋巴瘤、下嚥癌、胰島細胞癌(內分泌胰腺)、卡波西(Kaposi)肉瘤、腎(腎細胞)癌、腎癌、喉癌、毛細胞唇及口腔癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞淋巴瘤、伯基特(Burkitt)淋巴瘤、皮膚t細胞、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、骨/骨肉瘤成神經管細胞瘤之沃登斯通惡性纖維組織細胞瘤、眼內(眼)梅克爾細胞癌、間皮瘤、惡性間皮瘤、隱性原發性多發性內分泌腺瘤綜合征之轉移性鱗狀頸部癌、多發性骨髓瘤/漿細胞腫瘤、蕈樣肉芽腫骨髓增生異常綜合征、骨髓增生異常/骨髓增殖性病、骨髓性白血病、多發性骨髓增殖性疾病、慢性鼻腔及鼻竇癌、鼻咽癌、胸膜肺母細胞瘤、骨之骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤、嗜鉻細胞瘤、松果體母細胞瘤、及始神經外胚葉腫瘤。在某些較佳態樣中，癌係乳腺癌。在某些較佳態樣中，癌係前列腺癌。

在某些態樣中，依據在此提供之方法施用肽增強所建立之癌症療法之效果。在又一個態樣中，依據在此提供之方法施用肽增強諸如放療或化療等另一種癌症療法之抗癌活性。在某些態樣中，在此提供用於誘導癌細胞及/或腫瘤細胞中之細胞死亡之方法，該方法包含以有效誘導癌細胞死亡及/或腫瘤細胞死亡之量施用在此描述之肽。

在某些實施例中，該肽具有一或多種細胞保護(cell protective)活性或細胞保護(cytoprotective)活性。例如，在某些態樣中，該肽能夠防止細胞破壞、改善細胞存活、及/或增強對諸如但並不局限於熱休克、血清剝奪(serum withdrawal)、化療及/或放療等環境壓力之耐受。

在某些態樣中，依據在此提供之方法施用肽降低所建立之癌症療法之副作用。

進一步較佳之藥學用途包含治療或預防：退行性疾病，諸如阿爾茲海默症等特別神經退行性病症、帕金森病、亨廷頓氏舞蹈病(Huntington)、例如脊髓小腦性共濟失調等共濟失調、肯尼迪(Kennedy)病、強直性肌營養不良、路易體癡呆、多系統萎縮、肌萎縮性脊髓側索硬化症、原發性側索硬化症、脊髓性肌萎縮、例如Creutzfeldt-Jacob病等朊病毒關聯病(prion-associated disease)、多發性硬化、毛細血管擴張、貝敦氏(Batten)病、皮質基底節變性、皮質基底節變性、脊髓亞急性聯合變性、脊髓癆、泰-薩二氏(Tay-Sachs)病、中毒性腦病、嬰兒雷夫敘姆(Refsum) 病、雷夫敘姆病、神經棘紅細胞增多症、尼曼-匹克(Niemann-Pick)病、萊姆(Lyme)病、馬查多-約瑟夫(Machado-Joseph)病、山德霍夫氏(Sandhoff)病、Shy-Drager綜合征、刺猬搖擺(wobbly hedgehog)綜合征、蛋白疾病(proteopathy)、腦β澱粉樣腦血管病、青光眼中之視網膜神經節細胞變性、共核蛋白病、tau病(tauopathies)、額顳葉變性(FTLD)、癡呆、cadasil綜合征、伴有澱粉樣變性之遺傳性腦出血、亞歷山大(Alexander)病、seipinopathies病、家族性澱粉樣變性神經病、老年人系統性澱粉樣變serpinopathies病、輕鏈(AL)澱粉樣變性(原發全身性澱粉樣變性)、重鏈(AH)澱粉樣變性、繼發性(AA)澱粉樣變性、主動脈瓣內側澱粉樣變性、ApoAI澱粉樣變性、ApoAII澱粉樣變性、ApoAIV澱粉樣變性、Finnish型家族性澱粉樣變性(FAF)、溶菌酶澱粉樣變性、纖維蛋白原澱粉樣變性、Dialysis澱粉樣變性、包涵體肌炎/肌病、白內障、伴有視紫紅質基因突變之視網膜色素變性、甲狀腺髓樣癌、心臟心房澱粉樣變性、垂體催乳素瘤、遺傳性格子狀角膜營養不良、扁平苔癬澱粉樣變性、馬洛里小體、角膜乳鐵蛋白澱粉樣變性、肺泡蛋白沉積症、牙源性(Pindborg)澱粉樣腫瘤、囊性纖維化、鐮狀細胞病或危重病性肌病(CIM)。在不局限於特定理論之情況下，可以認為，在此提供之肽具有能夠修復及/或預防神經細胞及/或其他類型細胞之神經退行性損傷之一或多種活性。依據在此提供之方法可治療之「神經退行性疾病」係例如由神經細胞死亡(凋亡)而導致神經元變性及/或消失之進行性疾病。神經退行性疾病之實例包含但並不局限於：腦退行性疾病(例如，阿爾茨海默病(AD)、帕金森病、進行性核上性麻痹、及亨廷頓式舞蹈病(HD))、及脊柱退行性疾病/運動神經元退行性疾病(例如，肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、(SMA：霍夫曼(Werdnig-Hoffmann)病或Kugelberg-Welander綜合征)、脊髓小腦性共濟失調、延髓肌肉萎縮(BSMA；Kennedy-Alter-Sung綜合征))。「運動神經元退行性疾病」係以控制身體運動之上下運動神經元之進行性、逆行性病症為特徵之神經退行性疾病。在又一些態樣中，該肽及其組成物對改善由運動神經元退行性疾病導致之疾病亦為有效的，該等疾病為諸如，肌肉萎縮、肌無力、球麻痹(面部、咽部、及舌頭之肌肉萎縮或肌無力，及由此導致之失語症或吞咽困難)、肌顫、及呼吸障礙。

其他用途包含預防及治療與線粒體功能障礙關聯之病或疾病。線粒體作為代謝過程之中心涉及能量產生、程式性細胞死亡及活性氧類物(ROS)生成。傳統上，線粒體被看作「終端(end)功能」細胞器，接收並且處理大量細胞訊號，以調節能量產生及細胞死亡。該肽及肽類似物及其藥用配製劑能夠用於治療與線粒體功能障礙關聯之各種與年齡有關之疾病。此外，其已經表現出在體外及體內以各種方式影響代謝過程，諸如，線粒體呼吸、葡萄糖轉運、葡萄糖利用、糖解、胰島素調節及細胞增殖/存活。線粒體功能障礙與如下關聯但並不局限於如下：代謝障礙、神經退行性疾病、慢性炎症疾病、及衰老疾病。某些線粒體疾病起因於線粒體基因組中之突變或刪減。線粒體以較其宿主細胞快之轉換率進行分裂及增殖，並且其複製在核基因組控制下進行。若細胞中臨限值比例之線粒體有缺陷，並且若組織中臨限值比例之此種細胞具有缺陷線粒體，則組織或器官功能障礙之症狀能夠顯現。特別是，能夠影響任何組織，並且基於不同組織涉及之程度，可以呈現出大量各種症狀。除了涉及遺傳缺陷線粒體之先天失常以外，獲得性線粒體功能障礙導致各種疾病，特別是與諸如帕金森病、阿爾茨海默病及亨廷頓氏舞蹈病等老年病關聯之神經退行性疾病。線粒體DNA中之體細胞突變之發生率隨年齡指數地升高；減弱之呼吸鏈活性普遍存在於老年人中。神經元興奮毒性損害亦暗含線粒體功能障礙，諸如與癲癇或局部缺血關聯之損害。與線粒體功能障礙關聯之其他病症包含慢性炎症病症及代謝病症。

具有細胞保護功能之肽具有延長細胞在培養中之生存力之潛在用途。該等肽用於製造生物產品，包含蛋白、抗體等等。本揭露概言之涉及用於調節細胞培養物之一或多種特性之肽及過程，該細胞培養物包含諸如CHO細胞培養物等哺乳動物細胞培養物或大腸桿菌細胞培養物。在一個實施例中，提供了一種方法，該方法包含：提高在表達重組蛋白之哺乳動物細胞培養物中之單位生產率，包含在培養基中建立哺乳動物細胞培養物；藉由使細胞培養物與包含肽之培養基接觸，提高細胞生長生存力；及藉由使培養物與包含肽之培養基接觸，保持細胞培養物。

製劑盒

本揭露之肽或肽類似物能夠依據一個實施例作為製劑盒之一部分提供。由此，在某些實施例中，提供用於對需要其之患者施用肽或肽類似物之製劑盒，其中該製劑盒包含在此描述之肽。

在一個實施例中，對製劑盒提供用於對患者施用組成物之裝置，例如，注入器針頭、筆式裝置、噴射注射器、或另一種無針注射器。作為另外一種選擇或此外，製劑盒可以包含一或多個容器，例如，小瓶、管、瓶子、單室式或多室式預充注入器、料盒、輸注幫浦(在外部或可植入)、噴射注射器、預充筆式裝置等，其視情況以凍乾或水溶液形式含有肽。某些實施例中之製劑盒包含使用說明書。依據一個實施例，製劑盒之裝置係噴霧分配裝置，其中該組成物預封裝於噴霧裝置內。在另一個實施例中，製劑盒包含注入器及針頭，並且在一個實施例中，無菌組成物預封裝於該注入器內。

給出下面之實例僅用於說明本發明，而不以任何方式限制其範圍。

實例

在下面之實例中，測試肽參考對應於表1(參見附錄)中所列者之唯一SEQ ID NO：並且與此一起提交序列表。

實例1

此實例示範合成本揭露之肽或肽類似物之示例性方法。

除非另有說明，否則利用t-Boc或Fmoc化學法或其他成熟技術，利用與下面描述之方法類似之方法，在適當樹脂上經由固相合成製備肽(請參見，例如：Stewart and Young,Solid Phase Peptide Synthesis,Pierce Chemical Co.,Rockford,III.,1984；E.Atherton and R.C.Sheppard,Solid Phase Peptide Synthesis.A Practical Approach,Oxford-IRL Press,New York,1989；Greene and Wuts,"Protective Groups in Organic Synthesis",John Wiley & Sons,1999,Florencio Zaragoza Dorwald,"Organic Synthesis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH,2000以及"Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis",Edited by W.C.Chan and P.D.White,Oxford University Press,2000)。

固相合成藉由將帶羥基終端之N-末端保護氨基酸附接至承載可裂解接頭之惰性固相支援體來啟動。該固相支持體能夠為允許耦合起始氨基酸之任意聚合物，該起始氨基酸例如為其中羧基團(或Rink樹脂之甲醯胺)與樹脂之聯接對酸敏感(當採用Fmoc策略時)之Pam樹脂、三苯甲基樹脂(trityl resin)、氯三苯甲基樹脂(chlorotrityl resin)、Wang樹脂、或Rink樹脂。在肽合成時，在用於對α氨基基團進行去保護之條件下，該聚合物支持體穩定。第一氨基酸耦合至固體支持體後，去除該氨基酸之α氨基保護基團。然後，利用例如以下適當醯胺耦合試劑使餘下之保護氨基酸以肽序列表示之順序一個接一個耦合：BOP(苯并三唑-1-yl-氧基-三-(二甲基氨基)-磷鎓)、HBTU(2-(1 H-苯并三唑-1-yl)-1,1,3,3-四甲基-脲鎓)、HATU(O-(7-氮雜苯并三唑-1-yl-氧基-三-(二甲基氨基)-磷鎓)或DIC(N,N'-二異丙基碳二亞胺)/HOBt(1-羥基苯并三唑)，其中BOP、HBTU及HATU與第三胺鹼一起使用。作為另外一種選擇，能夠使釋放之N-終端與氨基酸外之其他基團(例如，羧酸等)官能化。通常，氨基酸之反應性側鏈基團由合適的阻斷基團保護。將所需肽已完成組裝後，去除該等保護基團。在相同的條件下，在自樹脂裂解所需之產物的同時去除該等保護基團。保護基團及引入該保護基團之流程可見於：Protective Groups in Organic Synthesis,3d ed.,Greene,T.W.and Wuts,P.G.M.,Wiley & Sons(New York：1999)。在某些情況下，可能希望具有在其他側鏈保護基團保持完好時能夠被選擇性地去除的側鏈保護基團。在此種情況下，能夠選擇性地官能化該釋放官能。例如，賴氨酸可由對非常親核之鹼不穩定之ivDde保護基團保護(S.R.Chhabra et al.,Tetrahedron Lett.39,(1998),1603)，例如二甲基甲醯胺(DMF)中之4%肼。因此，若N-末端氨基團及全部側鏈官能團由酸不穩定保護基團保護，則利用DMF中之4%肼能夠選擇性地去除ivDde([1-(4,4-二甲基-2,6-二氧環己烯-1-亞基)-3-甲基丁基)(([1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidene)-3-methylbutyl))基團，然後例如藉由醯化能夠進一步修飾相應游離胺基基團。作為另外一種選擇，賴氨酸能夠耦合至保護氨基酸，然後可對此氨基酸之氨基去保護，藉此獲得能夠被醯化或附接至另一些氨基酸之另一個游離氨基基團。最後，自樹脂裂解該肽。此能夠利用HF或King雞尾酒(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields,Int.J.Peptide Protein Res.36,1990,255-266)達成。然後，若需要，則藉由層析法(例如，製備的RP-HPLC)純化原材料。

可以產生包含非天然氨基酸及/或共價附加N末端模擬單肽或二肽之該等肽、類似物或衍生物，如實驗部分所描述，或參見例如：Hodgson et al："The synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids",and Chemical Society Reviews,vol.33,no.7(2004),p.422-430。

依據下面提及之肽合成製備肽，並且能夠與以下提及之合成類似地製備表1所列序列，除非另有說明。

肽合成之一種方法係在基於微波之自由(Liberty)肽合成機(CEM Corp.,North Carolina)上應用Fmor化學法。該樹脂係載量為約0.25mmol/g之Tentagel S RAM或載量為約0.43mmol/g之PAL-ChemMatrix或載量為0.5至0.75mmol/g之PAL AM母料(matrix)。耦合化學法為採用 0.3M及6至8倍莫耳過量之氨基酸溶液於NMP或DMF中之DIC/HOAt或DIC/Oxyma。耦合條件為最高70℃下5分鐘。去保護為在最高70℃下利用NMP中之10%哌啶。所採用之保護氨基酸為標準Fmoc氨基酸(由例如Anaspec或Novabiochem或Protein Technologies提供)。

肽合成之另一種方法係在Prelude肽合成機(Protein Technologies,Arizona)上應用Fmoc化學法。樹脂為載量為約0.25mmol/g之Tentagel S RAM或載量為約0.43mmol/g之PAL-ChemMatrix或載量為0.5至0.75mmol/g之PAL AM。耦合化學法為採用0.3M及6至8倍莫耳過量之氨基酸溶液於NMP或DMF中之DIC/HOAt或DIC/Oxyma。耦合條件為在室溫下單耦合或雙重耦合1小時或2小時。去保護為利用NMP中之20%哌啶。所採用之保護氨基酸為標準Fmoc氨基酸(由例如Anaspec或Novabiochem或Protein Technologies提供)。諸如利用半製備型(semipreparative)HPLC在由5um或7um之C-18矽石封裝之20mm x 250mm之柱上純化粗肽。將肽溶液藉由幫浦送至HPLC柱上，並且將沉澱的肽溶解於5ml 50%乙酸水中，並且利用H₂O將其稀釋至20ml，並且注射至柱上，然後在40℃下在50分鐘內，以10ml/min的速率在0.1% TFA中以40至60% CH₃CN之梯度對其進行洗脫。收集含肽之餾分。用水稀釋該洗脫液後，凍乾該純化肽。

在此描述之具有C-末端醯胺之全部肽由與下面描述之方法類似之方法製備，除非另有說明。MBHA樹脂(肽合成時，使用4-甲基二苯甲基胺聚苯乙烯樹脂。MBHA樹脂，100-180目，1% DVB交聯聚苯乙烯；載量0.7-1.0mmol/g)、Boc保護之氨基酸及Fmoc保護之氨基酸能夠購自 Midwest Biotech。在應用生物系統(Applied Biosystem)430A肽合成機上利用Boc保護之氨基酸進行固相肽合成。利用Applied Biosystems Model 433肽合成機進行Fmoc保護氨基酸合成。

利用Applied Biosystem Model 430A肽合成機執行肽之合成。藉由將氨基酸順序地加入含有2mmol Boc保護氨基酸之料盒中，構建合成肽。具體而言，利用Boc DEPBT活化之單耦合執行該合成。在耦合步驟結束時，利用TFA處理肽基樹脂，以去除N-末端Boc保護基團。利用DMF重複清洗，並且對於所需數量之耦合步驟，重複此重複循環。組裝之後，藉由20%吡啶處理來去除側鏈保護Fmoc，並且利用DIC進行醯化。利用DCM乾燥整個合成結束時之肽基樹脂，並且利用無水HF自該樹脂裂解肽。利用無水HF處理肽基樹脂，並且此通常產生接近350mg(~50%生產率)之去保護粗肽。具體而言，將肽基樹脂(30mg至200mg)置於氟化氫(HF)反應容槽中進行裂解。將500μL之對甲酚加入該容槽中，作為碳正離子捕捉劑。將該容槽附接至HF系統，並且浸在甲醇/乾冰混合物中。利用真空幫浦抽空該容槽，並且10ml之HF餾出進入該容槽。在0℃下，將肽基樹脂及HF之此種反應混合物攪拌1小時，然後形成真空，並且迅速抽空HF(10至15分鐘)。小心地卸下該容槽，並且注入接近35ml之乙醚，以沉澱肽，並且提取對甲酚及由HF處理產生之小分子有機保護基團。利用Teflon過濾器過濾此混合物，並且重複兩次，以去除全部過量甲酚。廢棄該濾出液。將沉澱的肽溶解於接近20ml之10%乙酸(aq)中。收集含有所需肽之濾出液，並且對該濾出液進行凍乾。

實例2

該實例證明示例性肽對所培養小鼠脂肪細胞中之游離脂肪酸水準之影響。

將Mouse 3T3-L1細胞以每孔1,000至20,000個細胞之密度接種於96-孔板、48-孔板或24-孔板上之前脂肪細胞培養基中(Zen-Bio,Durham,NC)，並在37℃下，在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中生長至覆蓋培養基。在覆蓋培養基兩天后，將細胞置於脂肪細胞分化培養基(Adipocyte Differentiation Medium)(Zen-Bio,Durham,NC)中，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再培養3天。然後，利用脂肪細胞維持培養基(Adipocyte Maintenance Medium)(Zen-Bio)代替該培養基，並且在每隔一天替換部分培養基之情況下，使細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再維持9至14天。經過12至17天之分化，以25μM之最後濃度加入測試肽，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中在脂肪細胞維持培養基中溫育18至20小時。18小時至20小時後，將該培養基與含有測試肽之新鮮脂肪細胞維持培養基進行交換，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中溫育1小時。1小時後，將培養基與含有異丙腎上腺素(1nM)(加入除未被處理之對照組之外之全部樣品中)及測試肽之測定緩衝液(Zen-Bio)進行交換。細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再溫育3小時。利用游離脂肪酸測定製劑盒(Zen-Bio)，依據該製造商關於板式讀數器(plate reader)(540nm)之使用說明書，確定培養基中游離脂肪酸之濃度。

對未處理之背景校正吸收度值，並且相對於異丙腎上腺素處理之細胞表達該等吸收度值。將單獨利用異丙腎上腺素(1nM)進行之處理用作游離脂肪酸水準刺激對照組。異丙腎上腺素對照組之相對標準差<10%。胰島素用作用於降低游離脂肪酸水準之高效陽性對照組。胰島素(100nM)處理之游離脂肪酸水準<異丙腎上腺素對照值之5%。結果示於表4中。

實例3

該實例證明示例性肽對所培養小鼠脂肪細胞中游離脂肪酸水準之影響。

將Mouse 3T3-L1細胞以每孔1,000至20,000個細胞之密度接種於96-孔板、48-孔板或24-孔板上之前脂肪細胞培養基中(Zen-Bio,Durham,NC)，並在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中生長至覆蓋培養基。在覆蓋培養基兩天后，將細胞置於脂肪細胞分化培養基(Zen-Bio,Durham,NC)中，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再培養3天。然後，利用脂肪細胞維持培養基(Zen-Bio)代替該培養基，並且在每隔一天替換部分培養基之情況下，使細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再維持9至14天。經過12至17天之分化，以25μM之最後濃度加入測試肽，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中，在脂肪細胞維持培養基中溫育18至20小時。18小時至20小時後，將該培養基與含有測試肽之新鮮脂肪細胞維持培養基進行交換，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中溫育1小時。1小時後，將培養基與含有毛喉素(forskolin)(1nM)(加入除未被處理之對照組之外之全部樣品中)及測試肽之測定緩衝液(Zen-Bio)進行交換。細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再溫育3小時。利用游離脂肪酸測定製劑盒(Zen-Bio)，依據該製造商關於板式讀數器(540nm)之使用說明書，確定游離脂肪酸在培養基中之濃度。對未處理之背景校正吸收度值，並且相對於毛喉素處理之細胞表達該等吸收度值。將單獨利用毛喉素(1μM)進行之處理用作游離脂肪酸水準刺激對照組。毛喉素對照組之相對標準差<10%。胰島素用作用於降低游離脂肪酸水準之高效陽性對照組。胰島素(100nM)處理之游離脂肪酸水準<毛喉素對照值之9%。結果示於表5中。

實例4

此實例證明示例性肽對所培養人原代脂肪細胞中游離脂肪酸水準之影響。將人原代脂肪細胞以每孔5,000至100,000個細胞之密度接種於96-孔板、48-孔板或24-孔板上之前脂肪細胞培養基中(Zen-Bio,Durham,NC)，並在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中生長至覆蓋培養基。在覆蓋培養基兩天后，將細胞置於脂肪細胞分化培養基(Zen-Bio,Durham,NC)中，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再培養3天。然後，利用脂肪細胞維持培養基(Zen-Bio)代替該培養基，並且在每隔一天替換部分培養基之情況下，使細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再保持11至21天。經過14至24天之分化，以25μM之最後濃度加入測試肽，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中，在脂肪細胞維持培養基中溫育18至20小時。18小時至20小時後，將該培養基與含有測試肽之新鮮脂肪細胞維持培養基進行交換，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中溫育1小時。1小時後，將培養基與含有異丙腎上腺素(1nM)(加入除未被處理之對照組之外之全部樣品中)及測試肽之測定緩衝液(Zen-Bio)進行交換。將細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再溫育3小時。利用游離脂肪酸測定製劑盒(Zen-Bio)，依據該製造商關於板式讀數器(540nm)之使用說明書，確定游離脂肪酸在培養基中之濃度。對未處理之背景校正吸收度值，並且相對於異丙腎上腺素處理之細胞表達該等吸收度值。將單獨利用異丙腎上腺素(1nM)進行之處理用作游離脂肪酸水準刺激對照組。異丙腎上腺素對照組之相對標準差<14%。胰島素用作用於降低游離脂肪酸水準之高效陽性對照組。胰島素(100nM)處理之游離脂肪酸水準<異丙腎上腺素對照值之5%。結果示於表6中。

實例5

該實例證明示例性肽對所培養人原代脂肪細胞中游離脂肪酸水準之影響。將人原代脂肪細胞以每孔5,000至100,000個細胞之密度接種於96-孔板、48-孔板或24-孔板上之前脂肪細胞培養基中(Zen-Bio,Durham,NC)，並在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中生長至覆蓋培養基。在覆蓋培養基兩天后將細胞置於脂肪細胞分化培養基(Zen-Bio,Durham,NC)中，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再培養3天。然後，利用脂肪細胞維持培養基(Zen-Bio)代替該培養基，並且在每隔一天替換部分培養基之情況下，使細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再維持11至21天。經過14至24天之分化，以25μM之最後濃度加入測試肽，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中，在脂肪細胞維持培養基中溫育18至20小時。18小時至20小時後，將該培養基與含有測試肽之新鮮脂肪細胞維持培養基進行交換，並且在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中溫育1小時。1小時後，將培養基與含有毛喉素(1μM)(加入除未被處理之對照組之外之全部樣品中)及測試肽之測定緩衝液(Zen-Bio)進行交換。細胞在37℃下在5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再溫育3小時。利用游離脂肪酸測定製劑盒(Zen-Bio)，依據該製造商關於板式讀數器(540nm)之使用說明書，確定游離脂肪酸在培養基中之濃度。對未處理之背景校正吸收度值，並且相對於毛喉素處理之細胞表達該等吸收度值。將單獨利用毛喉素(1μM)進行之處理用作游離脂肪酸水準刺激對照組。毛喉素對照組之相對標準差<20%。胰島素用作用於降低游離脂肪酸水準之高效陽性對照組。胰島素(100nM)處理之游離脂肪酸水準<毛喉素對照值之8%。結果示於表7中。

實例6

此實例證明了示例性肽對飲食誘發肥胖(DIO)小鼠之體重、血糖水準及脂肪量之影響。雄性C57BL/6小鼠在高脂肪飲食中維持18周，以發展為飲食誘發的肥胖。動物被隨機分配至基於血糖水準及體重之治療組。以皮下注射或腹腔內注射之方式將本發明之肽以每日一次或兩次每次15毫克/千克/劑之劑量施用至兩組雄性DIO小鼠連續施用10天(N=每個治療組8個動物)。另一組雄性DIO小鼠(n=8)單獨使用運輸體(水或生理鹽水)。監測體重、血糖水準及食物攝入量。在服藥前與服藥結束時由定量全身核磁共振(NMR)確定身體質量分佈(脂肪與瘦肉之比)。與相較於單獨使用運輸體進行處理之動物，施用本發明之肽相對於基線值更大地降低體重、更大地降低血糖、及更大地減少脂肪量(表8)。

實例7

此實例證明一個為期21天之研究，其目的在於確定示例性肽對飲食誘發肥胖(DIO)小鼠之體重及脂肪量之影響。雄性C57BL/6小鼠維持高脂肪飲食12至22周，以發展為飲食誘發肥胖。動物被隨機分配至基於血糖水準及體重之治療組。以適當途徑將肽(SEQ ID No：208 and SEQ ID NO：210)以每天兩次每次15毫克/千克/劑之劑量分別施用於一組雄性DIO小鼠連續施用21天(N=每個治療組8至12個動物)。另一組雄性DIO小鼠(n=8/組)接受對照測試製品(利拉魯肽或吡格列酮)或單獨運輸體(水或生理鹽水)。監測包含體重、血糖水準及食物攝入量在內之代謝參數。在服藥前與服藥結束時由定量全身核磁共振(NMR)確定身體質量分佈(脂肪與瘦肉之比)。相較於單獨使用肽SEQ ID NO：2、對照測試製品(吡格列酮或利拉魯肽)或單獨用運輸體處理之動物，施用該肽相對於基線值更大地降低體重、更大地降低血糖、及/或更大地減少脂肪量(表9)。

實例8

此實例證明一個為期21天之研究，其目的在於確定包含本揭露之示例性肽及可商購降血糖治療機之組合治療對飲食誘發肥胖(DIO)小鼠之體重及脂肪量之影響。

雄性C57BL/6小鼠維持高脂肪飲食12至22周，以發展為飲食誘發肥胖。動物被隨機分配至基於血糖水準及體重之治療組。以適當途徑將肽(SEQ ID No：208及SEQ ID NO：210)以每天一次每次5毫克/千克/劑之劑量協同腹腔內施用利拉魯肽(每日10nmol/kg)分別施用於一組雄性DIO小鼠連續施用21天(N=每個治療組8個動物)。另一組雄性DIO小鼠(n=8/組)接受對照測試製品(單用利拉魯肽)或單用運輸體(水或生理鹽水)。監測包含體重、血糖水準及食物攝入量在內之代謝參數。在服藥前與服藥結束時在適當時由定量全身核磁共振(NMR)確定身體質量分佈(脂肪與瘦肉之比)。相較於單用利拉魯肽或單用運輸體治療之動物，協同利拉魯肽施用該肽相對於基線值更大地降低體重、更大地降低血糖、及/或更大地減少脂肪量(表10)。

實例9

此實例證明示例性肽對甘油三酯水準及肝損傷之標記物之影響。

雄性C57BL/6小鼠維持高脂肪飲食12至22周，以發展為飲食誘發肥胖。動物被隨機分配至基於血糖水準及體重之治療組。以適當途徑將肽(SEQ ID No：208及SEQ ID NO：210)以每天兩次每次15毫克/千克/劑之劑量分別施用於一組雄性DIO小鼠連續施用21天(N=每個治療組8至12個動物)。另一組雄性DIO小鼠(n=8/組)接受對照測試製品(利拉魯肽)或單獨運輸體(水或生理鹽水)。在第21天第一次服藥後2小時結束時獲得血清樣本。利用此項技術中眾所習知之方法對樣本之標準臨床化學參數進行分析。相較於使用對照測試製品(利拉魯肽)或單用運輸體所處理之動物，施用肽SEQ ID NO：208及SEQ ID NO：210更大地降低血清中甘油三酯、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)及天冬氨酸轉氨酶(AST)(表11)。

實例10

此實例證明本揭露之示例性肽在獼猴中之藥代動力學

雄獼猴(2至6kg)在服藥之前被禁食8小時。對動物採用單劑量單一靜脈注射或皮下注射注射測試肽(0.1至15mg/kg)。靜脈注射係藉由隱靜脈或另一合適之靜脈施行的。皮下注射係在肩胛區施行。血液樣本在24小時內被提取並進行血漿處理。在注射後四小時恢復進食。血漿樣本中肽及/或代謝物之濃度由合適之分析方法確定(例如LCMS)，而藥代動力學參數則由非分割方法計算。相較於SEQ ID No：2，本發明之肽顯示出暴露增多(如Cmax、AUC及/或半衰期增大)。

實例11

此實例證明了本揭露之示例性肽在非人類靈長類動物之肥胖模型中之療效。

天生肥胖的雄性獼猴被馴化服藥及處置至少3周時間。確定基線動物特性，並將動物隨機分配至基於體重及基線代謝參數(諸如甘油三酯水準)之治療組。遵循隨機化原則，各組猴子接受每天一次或每天兩次劑量的本發明之肽，該肽由適合途徑施行4周或更長時間。對照組的猴子接受每日劑量之運輸體或正控制。在研究期間，每隔一段時間就會量測食物消耗量及體重。將所施用之肽對體重、食物攝入量、體重指數(BMI)及/或代謝參數之影響與採用運輸體治療之對照組動物進行比較。

實例12

此實例證明本揭露之示例性肽在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)之STAM®小鼠模型中之療效。

在NASH之STAM模型中，對C57/BL6單劑量皮下注射鏈球菌毒，出生三天后破壞胰腺β-細胞。在4周齡大時，讓動物吃高脂肪的食物。此種聯合處理導致發展為脂肪變性、纖維化、肝硬化及最終肝細胞癌(HCC)並伴隨高血糖及中度高血脂症，因此與人類NASH極為相似。自5周齡開始，對STAM動物組(每組8個動物)採用本發明之肽治療，由適當途徑施行每天一次或每天，直至研究終止。對照組動物接受每日施用合適之正控制化合物(例如，替米沙坦)。在大約10周齡時，代謝參數得到確定，動物犧牲。得到肝標本並固定，嵌在石蠟中，用蘇木精及伊紅或馬松三色染色，以及用光學顯微鏡檢查。根據此項技術中已知之方法，組織病理學上確定了脂肪變性及非酒精性脂肪肝(NAFLD)活性分值(NAS)之範圍。

實例13

此實例證明本揭露之示例性肽對承載腫瘤之小鼠異種移植模型中腫瘤生長之療效。

小鼠異種移植模型係由此項技術中眾所習知之方法製備的。例如，SCID小鼠被注射了人腫瘤細胞(例如，MCF-7、MDA-MB-231、PC-3、或諸如此類)，並且腫瘤生長受到監測。當腫瘤具有足夠大尺寸時，動物被隨機分配到治療組並每天服用、每隔一天服用、或每週服用本發明之肽、運輸體控制、正控制(例如：胞苷或紫杉醇)或本發明肽+正控制之組合。對腫瘤生長、體重及存活時間監測14至28天。相較於用運輸體控制處理之動物，測試到單獨及/或結合正控制施用本發明之肽減小腫瘤生長及/或延長生存期。

實例14

此實例證明本揭露之示例性肽在小鼠血漿中之穩定性。

肽(100uM)溫育在37℃下之池化小鼠血漿中，並在將樣本移開後立即由LC/MS/MS分析在3小時進程內完整肽之濃度。每個時間點血漿中剩餘肽的百分比係相對於初始峰面積計算的(表12)。

實例15

此實例證明本揭露之示例性肽在小鼠血漿中之穩定性。

肽(10uM)溫育在37℃下之池化小鼠血漿中，並在將樣本移開後立即由LC/MS/MS分析在3小時進程內完整肽之濃度。每個時間點血漿中剩餘肽的百分比係相對於初始峰面積計算的(表13)。

實例16

此實例證明本揭露之示例性肽在猴子及人類血漿中之穩定性。肽(10uM)溫育在37℃下之池化小鼠或人類血漿中，並在將樣本移開後立即由LC/MS/MS分析在3小時進程內完整肽之濃度。每個時間點在血漿中剩餘肽的百分比係相對於初始峰面積計算的(表14)。

實例17

此實例證明示例性肽對所培養小鼠脂肪細胞中游離脂肪酸水準之影響。將小鼠3T3-L1細胞以每孔1,000-20,000個細胞之密度接種於96-孔板、48-孔板、或24-孔板在前脂肪細胞培養基中(Zen-Bio,Durham,NC)並在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中成長至覆蓋培養基。覆蓋培養基兩天后，將細胞放置於脂肪細胞分化培養基(Zen-Bio,Durham,NC)並在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再培養三天。然後，將該培養基用脂肪細胞維持培養基(Zen-Bio,Durham,NC)替換，並在每隔一天替換部分培養基之情況下，將細胞在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再保持9-14天。接著經12-17天分化，以25-50μM之最終濃度添加測試肽並在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中在脂肪細胞維持培養基中溫育18-20小時。在培養基溫育後，將培養基移除並用含有異丙腎上腺素(1nM)(添加至除了未經處理對照物之外之所有樣品中)及測試肽之測定緩衝液(Zen-Bio)進行交換。將細胞在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中再溫育3小時。依據該製造商關於板式讀數器(540nm)之使用說明書，利用游離脂肪酸測定製劑盒(Zen-Bio)確定培養基中之游離脂肪酸濃度。

針對未經處理之背景校正吸收值，並相對於經異丙腎上腺素處理細胞表達該等吸收值。單獨使用異丙腎上腺素(1nM)進行之處理作為游離脂肪酸水準刺激對照組。異丙腎上腺素對照組的相對標準差<10%。胰島素用作減少游離脂肪酸水準的高效陽性對照組。胰島素(100nM)治療之游離脂肪酸水準小於異丙腎上腺素控制值之5%。結果見於表15中。

實例18

此實例證明了本揭露之示例性肽在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)之STAM®小鼠模型中之療效。在NASH之STAM®模型中，C57/BL6小鼠被單劑量皮下注射200μg之鏈球菌毒，出生兩天后破壞胰腺β-細胞。在4周齡時，動物吃高脂肪的食物(57% kcal來自脂肪)，並在整個研究過程中保持吃相同之飲食。此種聯合處理導致發展為脂肪變性、纖維化、肝硬化及最終肝細胞癌(HCC)並伴隨高血糖及中度高血脂症，因此與人類NASH極為相似。自6周齡開始，對STAM動物組(每組8個動物)採用本發明之肽治療，施行每天兩次腹腔內注射，直至研究終止。對照組STAM動物(n=8)接受每日劑量(10mg/kg)之替米沙坦對照化合物。另一組正常小鼠(n=8)未接受治療。經過21天的服藥，在9周齡時，代謝參數得到確定，動物犧牲。得到肝標本並固定，嵌在石蠟中，用蘇木精及伊紅染色，以及用光學顯微鏡檢查。根據此項技術中已知之方法，組織病理學上確定了脂肪變性及非酒精性脂肪肝(NAFLD)活性分值(NAS)之範圍。所得之NAS分值在表16中示出。

實例19

此實例證明了本揭露之示例性肽在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)之STAM®小鼠模型中降低肝甘油三酯水準及血漿ALT水準之療效。在NASH之STAM®模型中，C57/BL6小鼠被單劑量皮下注射200μg之鏈球菌毒，出生兩天后破壞胰腺β-細胞。在4周齡時，動物吃高脂肪的食物(57% kcal來自脂肪)，並在整個研究過程中保持吃相同之飲食。此種聯合處理導致發展為脂肪變性、纖維化、肝硬化及最終肝細胞癌(HCC)並伴隨高血糖及中度高血脂症，因此與人類NASH極為相似。自6周齡開始，對STAM動物組(每組8個動物)採用本發明之肽治療，施行每天兩次腹腔內注射，直至研究終止。對照組STAM動物(n=8)接受每日劑量(10mg/kg)之替米沙坦對照化合物。另一組正常小鼠(n=8)未接受治療。經過21天的服藥，在9周齡時，代謝參數得到確定，動物犧牲。由氯仿-甲醇之均質化確定肝甘油三酯水準并在室溫下隔夜溫育。採用氯仿-甲醇-水洗滌後，提取物被蒸發至乾燥並使其溶解於異丙醇中。然後，肝甘油三酯含量由甘油三酯E-測試(Wako,Japan日本和光)測定。使用Fuji Dri-Chem 7000(日本富士膠片)測定血漿ALT水準。結果在表17中示出。

實例20

此實例證明了示例性肽對飲食誘發肥胖(DIO)小鼠之體重、血糖水準及脂肪量之影響。

雄性C57BL/6小鼠在高脂肪飲食中維持18周，以發展為飲食誘發的肥胖。動物被隨機分配至基於血糖水準及體重之治療組。本發明之肽每日一次或兩次以5至15毫克/千克/劑之劑量對兩組雄性DIO小鼠施行腹腔內注射或皮下注射，連續注射10天(N=8個動物每個治療組)。另一組雄性DIO小鼠(n=8)單獨使用運輸體(水或生理鹽水)。監測體重、血糖水準及食物攝入量。在服藥前與服藥結束時由定量全身核磁共振(NMR)確定身體質量分佈(脂肪與瘦肉之比)。施用本發明之肽自基線值降低體重及/或減少脂肪量(表18)。

實例21.-葡萄糖利用

肽對葡萄糖代謝的作用可以用在人工培養之細胞(諸如鼠成肌細胞)中測定葡萄糖利用進行評估。肽最初被製備為在二甲基亞碸中之10mM儲存液並以10μM(0.1% DMSO)之最終濃度使用。C2C12小鼠成肌細胞株係自美國標準菌庫(American Type Culture Collection)(Manassas,VA)購買。在每兩天改變培養基之情況下，將C2C12人工培養維持在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中。C2C12細胞在培養基DMEM(1g/L之葡萄糖)輔以具有100IU/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之10% FBS中生長。C2C12細胞以每孔7000個細胞被接種於96孔板上並被培養至覆蓋培養基。一旦細胞覆蓋培養基，培養基更換為輔以具有100IU/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之2% HS之DMEM(1g/L葡萄糖)並維持在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中。將誘導后5天之輔以具有100IU/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之2% HS之分化新鮮DMEM(1g/L葡萄糖)添加至培養菌中。細胞在37℃下於5%二氧化碳及95%空氣之加濕氣氛中維持5個小時。5個小時後，將製備於新鮮分化培養基中之10μM測試肽或對照組(1% DMSO中之0.5mM或1mM二甲雙胍)添加至細胞並且該培養菌在37℃下於5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中維持18至22小時。在溫育期結束時，將培養基自細胞移除，並且根據製造商之說明書，利用570nm之Cytation 3板式讀數器(BioTek,Winooski,VT)，使用葡萄糖測定製劑盒(Abcam)量測剩餘之葡萄糖濃度。相對於0.1% DMSO所治療之對照細胞，計算培養基中葡萄糖濃度。將二甲雙胍用作降低血糖水準之正控制。相較於採用運輸體控制治療者，單獨施用本發明之肽及/或結合正控制導致在C2C12小鼠成肌細胞中增加或降低葡萄糖利用率。

示例22-在暴露於星孢菌素之細胞中之三磷酸腺苷(ATP)水準

對肽之細胞活力之潛在細胞保護作用或潛在協同增效作用可以利用測定在培養細胞中(諸如暴露至適當壓力例如暴露於星孢菌素之人類神經母細胞瘤細胞中)之三磷酸腺苷(ATP)水準進行評估。肽最初被製備為在二甲基亞碸中之10mM儲存液並以10μM(0.1% DMSO)之最終濃度用於測試。星孢菌素用作降低細胞ATP水準的細胞凋亡/細胞壞死的高效誘導劑。星孢菌素以自10 nM至1μM範圍濃度使用。CellTiter-Glo®測定製劑盒自Promega公司購買。SH-SY5Y人類神經母細胞瘤細胞株自美國標準菌庫(American Type Culture Collection)(Manassas,VA)購買，並自紀念斯隆-凱特琳癌症中心(New York,NY)獲得許可。SH-SY5Y細胞在DMEM/F12培養基輔以具有100IU/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之10% FBS中生長。培養細胞維持在37℃下及5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中。SH-SY5Y細胞以每孔30,000個細胞被接種於96孔板上。第二天用0.1% DMSO中10μM之測試肽及星孢菌素(40μM)溫育細胞並在37℃下5%二氧化碳/95%空氣之加濕氣氛中維持18至20小時。根據製造商之說明書使用CellTiter-Glo測定製劑盒(Promega)確定ATP水準。用Cytation 3板式讀數器(BioTek,Winooski,VT)量測板上每個樣品孔之發光度。藉由用40μM星孢菌素治療，相對於ATP降低計算活性。小於100%之值指示有細胞保護作用，而大於100%之值指示了對生存能力之協同作用。40μM星孢菌素治療之對照細胞之結果之相對標準差為<5%。相較於採用運輸體控制治療者，單獨施用本發明之肽及/或結合正控制導致在所培養之暴露於星孢菌素之SH-SY5Y神經母細胞瘤細胞中增加或降低ATP水準。

依據本揭露，在不需要太多實驗之情況下，能夠實施并執行在此揭露之或要求保護之全部製品及方法。儘管依據較佳實施例描述了本揭露之製品及方法，然而熟習此項技術者應當理解，可對該製品及方法進行變型，而不脫離本揭露之精神及範圍。對於熟習此項技術者顯而易見之所有該等變型及等同(無論係現有的還是後開發的)皆被認為落入所附申請專利範圍限定之本揭露之精神及範圍內。例如，在此描述為使用方法之所有態樣及/或實施例亦被視為所描述用途之組成物，或在藥劑物中用於特定用途之組成物。本說明書中提及之全部專利、專利申請書及公開表示此項技術中具有通常知識者之水準。在缺少未在此具體揭露之任意單元之情況下，可以實施在此說明性地適當描述之揭露。因此，例如，在本文中的每種情形中，術語「包含」、「基本上由...組成」、及「由...組成」可以被另外二個術語中之任一者代替。已經採用之術語及表達用作描述之術語而無限制性，並且無意使用該等術語及表達排除所示及所描述之特徵或其一些部分之任意等同，但應理解，在要求保護之本揭露之範圍內可有各種修改。因此應當明白，儘管利用較佳實施例及任選特徵具體揭露了本發明，然而熟習此項技術者可對在此揭露之概念進行修改及變型，並且此類修改及變型皆被認為落入所附申請專利範圍限定之本揭露之範圍內。

在此引用之包含出版物、專利申請、及專利之全部參考文獻之全部內容以引用之方式併入本案中，並且達到如同每個參考文獻被單獨地並且具體地指出以引用方式併入並且如同在此以整體方式闡述之程度(達到法律允許之最大程度)。在此，所有標題及子標題僅出於方便之目的使用，而不應被視為以任何方式進行限制。使用在此提供之任何及全部實例或示例性語言(例如，「諸如」)僅旨在更佳地理解本揭露，而無意對本揭露之範圍施加限制，除非另有說明。本說明書中的任何語言皆不應當理解為將任何非要求保護元件表示為實施本揭露所必不可少的。在此引用及併入專利文獻僅出於方便之目的，而不反映對該等專利文獻之有效性、專利性及/或可實施性之觀點。

基於適用法律之允許，本揭露包含對在所附態樣中陳述主體所做之全部修改及等同形式。

<110> 美商寇峇有限公司

<120> 治療性肽

<130> 32701/51155A

<150> US 62/401,123

<151> 2016-09-28

<160> 380

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Arg可能空缺，當Xaa在位置1為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (3)..(3)

<223> Trg空缺，當Xaa在位置2為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係具有非極性側鏈之氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係具有非極性側鏈之氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> Xaa係Lys或具有非極性側鏈之氨基酸或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> Leu空缺，當Xaa在位置14為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> Xaa係Arg或具有非極性側鏈之氨基酸或為空缺，當Xaa在位置14為空缺時

<400> 1

<210> 2

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<212> 程式參考表

<213> 人工序列

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<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

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<223> C-末端醯胺化

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<211> 16

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> 混合特徵

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<223> N-末端乙醯化

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> 混合特徵

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<223> C-末端醯胺化

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

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<221> 混合特徵

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<223> C-末端醯胺化

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> 混合特徵

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<223> N-末端乙醯化

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<223> C-末端醯胺化

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<213> 人工序列

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<223> 合成肽

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<221> 混合特徵

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<223> N-末端乙醯化

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<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 27

<210> 28

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 28

<210> 29

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 29

<210> 30

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 30

<210> 31

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 31

<210> 32

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 32

<210> 33

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 33

<210> 34

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 34

<210> 35

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 35

<210> 36

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 36

<210> 37

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 37

<210> 38

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 38

<210> 39

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 39

<210> 40

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 40

<210> 41

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 41

<210> 42

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 42

<210> 43

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 43

<210> 44

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 44

<210> 45

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 45

<210> 46

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 46

<210> 47

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 47

<210> 48

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 48

<210> 49

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 49

<210> 50

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 50

<210> 51

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 51

<210> 52

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> C-末端醯胺化

<400> 52

<210> 53

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> C-末端醯胺化

<400> 53

<210> 54

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> C-末端醯胺化

<400> 54

<210> 55

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> C-末端醯胺化

<400> 55

<210> 56

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> C-末端醯胺化

<400> 56

<210> 57

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> C-末端醯胺化

<400> 57

<210> 58

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> C-末端醯胺化

<400> 58

<210> 59

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> C-末端醯胺化

<400> 59

<210> 60

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> C-末端醯胺化

<400> 60

<210> 61

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> C-末端醯胺化

<400> 61

<210> 62

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> C-末端醯胺化

<400> 62

<210> 63

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> C-末端醯胺化

<400> 63

<210> 64

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> C-末端醯胺化

<400> 64

<210> 65

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> C-末端醯胺化

<400> 65

<210> 66

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係正亮氨酸

<400> 66

<210> 67

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係正亮氨酸

<400> 67

<210> 68

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係正亮氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係正亮氨酸

<400> 68

<210> 69

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 乙醯化

<400> 69

<210> 70

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 乙醯化

<400> 70

<210> 71

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 71

<210> 72

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 72

<210> 73

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 73

<210> 74

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<400> 74

<210> 75

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 75

<210> 76

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 76

<210> 77

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 77

<210> 78

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 78

<210> 79

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 79

<210> 80

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 80

<210> 81

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 81

<210> 82

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 82

<210> 83

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 83

<210> 84

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 84

<210> 85

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 85

<210> 86

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 86

<210> 87

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 87

<210> 88

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 88

<210> 89

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 89

<210> 90

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 90

<210> 91

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 91

<210> 92

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 92

<210> 93

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 93

<210> 94

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 94

<210> 95

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 95

<210> 96

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 96

<210> 97

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 97

<210> 98

<211> 33

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 98

<210> 99

<211> 33

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 99

<210> 100

<211> 28

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 100

<210> 101

<211> 28

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 101

<210> 102

<211> 35

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 102

<210> 103

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (8)..(8)

<223> 磷酸-酪氨酸

<400> 103

<210> 104

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> 磷酸-酪氨酸

<400> 104

<210> 105

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端棕櫚醯基

<400> 105

<210> 106

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 棕櫚醯化

<400> 106

<210> 107

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 經由谷氨酸接頭棕櫚醯化

<400> 107

<210> 108

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 108

<210> 109

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 109

<210> 110

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 110

<210> 111

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 111

<210> 112

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 112

<210> 113

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 113

<210> 114

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 114

<210> 115

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 115

<210> 116

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> C-末端醯胺化

<400> 116

<210> 117

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> C-末端醯胺化

<400> 117

<210> 118

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係白蛋白

<400> 118

<210> 119

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係白蛋白

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 119

<210> 120

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係白蛋白

<400> 120

<210> 121

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係白蛋白

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 121

<210> 122

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 122

<210> 123

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 123

<210> 124

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 124

<210> 125

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 125

<210> 126

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 126

<210> 127

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 127

<210> 128

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 128

<210> 129

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 129

<210> 130

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 130

<210> 131

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 131

<210> 132

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 132

<210> 133

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 133

<210> 134

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 134

<210> 135

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 135

<210> 136

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 136

<210> 137

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> D-丙氨酸

<400> 137

<210> 138

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (3)..(3)

<223> D-丙氨酸

<400> 138

<210> 139

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (4)..(4)

<223> D-丙氨酸

<400> 139

<210> 140

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> D-丙氨酸

<400> 140

<210> 141

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> D-丙氨酸

<400> 141

<210> 142

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> D-丙氨酸

<400> 142

<210> 143

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (8)..(8)

<223> D-丙氨酸

<400> 143

<210> 144

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> D-丙氨酸

<400> 144

<210> 145

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> D-丙氨酸

<400> 145

<210> 146

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> D-丙氨酸

<400> 146

<210> 147

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> D-丙氨酸

<400> 147

<210> 148

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> D-丙氨酸

<400> 148

<210> 149

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> D-丙氨酸

<400> 149

<210> 150

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> D-丙氨酸

<400> 150

<210> 151

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<400> 151

<210> 152

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 152

<210> 153

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 153

<210> 154

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (3)..(3)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 154

<210> 155

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (4)..(4)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 155

<210> 156

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 156

<210> 157

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 157

<210> 158

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 158

<210> 159

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (8)..(8)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 159

<210> 160

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 160

<210> 161

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 161

<210> 162

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 162

<210> 163

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 163

<210> 164

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 164

<210> 165

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 165

<210> 166

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 166

<210> 167

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 167

<210> 168

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 168

<210> 169

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 169

<210> 170

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 170

<210> 171

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 171

<210> 172

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 172

<210> 173

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 173

<210> 174

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 174

<210> 175

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 175

<210> 176

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 176

<210> 177

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 177

<210> 178

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 178

<210> 179

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 179

<210> 180

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 180

<210> 181

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 181

<210> 182

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 182

<210> 183

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 183

<210> 184

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 184

<210> 185

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 185

<210> 186

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 186

<210> 187

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 187

<210> 188

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 188

<210> 189

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 189

<210> 190

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 190

<210> 191

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 191

<210> 192

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 192

<210> 193

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 193

<210> 194

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 194

<210> 195

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 195

<210> 196

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 196

<210> 197

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 197

<210> 198

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> Xaa係， -二乙基甘氨酸

<400> 198

<210> 199

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> Xaa係， -二乙基甘氨酸

<400> 199

<210> 200

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> Xaa係， -二乙基甘氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 200

<210> 201

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> Xaa係， -二乙基甘氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 201

<210> 202

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 202

<210> 203

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 203

<210> 204

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 204

<210> 205

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 205

<210> 206

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 206

<210> 207

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 207

<210> 208

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 208

<210> 209

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 209

<210> 210

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 210

<210> 211

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 211

<210> 212

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 212

<210> 213

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 213

<210> 214

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 214

<210> 215

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 215

<210> 216

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 216

<210> 217

<211> 15

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 217

<210> 218

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 218

<210> 219

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 219

<210> 220

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 二硫化物

<222> (6)..(12)

<223> 環化

<400> 220

<210> 221

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(12)

<223> 內醯胺橋

<400> 221

<210> 222

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(14)

<223> 內醯胺環

<400> 222

<210> 223

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (4)..(12)

<223> 內醯胺環

<400> 223

<210> 224

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(12)

<223> 內醯胺環

<400> 224

<210> 225

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 二硫化物

<222> (6)..(12)

<223> 環化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 225

<210> 226

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(12)

<223> 內醯胺環

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 226

<210> 227

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(14)

<223> 內醯胺環

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 227

<210> 228

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (4)..(12)

<223> 內醯胺環

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 228

<210> 229

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<223> 環化肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(12)

<223> 內醯胺環

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> C-末端醯胺化

<400> 229

<210> 230

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 230

<210> 231

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<400> 231

<210> 232

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 232

<210> 233

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 233

<210> 234

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<400> 234

<210> 235

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 235

<210> 236

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 236

<210> 237

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<400> 237

<210> 238

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 238

<210> 239

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 239

<210> 240

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<400> 240

<210> 241

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 241

<210> 242

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 242

<210> 243

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<400> 243

<210> 244

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 244

<210> 245

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 245

<210> 246

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> D-丙氨酸

<400> 246

<210> 247

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 247

<210> 248

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 248

<210> 249

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 249

<210> 250

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 250

<210> 251

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 251

<210> 252

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 252

<210> 253

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 253

<210> 254

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 254

<210> 255

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 255

<210> 256

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 256

<210> 257

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 257

<210> 258

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 258

<210> 259

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 259

<210> 260

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 260

<210> 261

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 261

<210> 262

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 262

<210> 263

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 263

<210> 264

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 264

<210> 265

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 265

<210> 266

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 266

<210> 267

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 267

<210> 268

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 268

<210> 269

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 269

<210> 270

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 270

<210> 271

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 271

<210> 272

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 272

<210> 273

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 273

<210> 274

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 274

<210> 275

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 275

<210> 276

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 276

<210> 277

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 277

<210> 278

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 278

<210> 279

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 279

<210> 280

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 280

<210> 281

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 281

<210> 282

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 282

<210> 283

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 283

<210> 284

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 284

<210> 285

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 285

<210> 286

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端乙醯化

<400> 286

<210> 287

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> C-末端醯胺化

<400> 287

<210> 288

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> D-丙氨酸

<400> 288

<210> 289

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端棕櫚醯基

<400> 289

<210> 290

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> C-末端聚乙二醇600

<400> 290

<210> 291

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 291

<210> 292

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> C-末端棕櫚醯基

<400> 292

<210> 293

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> C-末端醯胺化

<400> 293

<210> 294

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 294

<210> 295

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 295

<210> 296

<211> 6

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 296

<210> 297

<211> 7

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 297

<210> 298

<211> 8

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 298

<210> 299

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 299

<210> 300

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 300

<210> 301

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 301

<210> 302

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (3)..(3)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 302

<210> 303

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (4)..(4)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 303

<210> 304

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係脂肪族或帶電荷氨基酸

<400> 304

<210> 305

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係脂肪族或帶電荷氨基酸

<400> 305

<210> 306

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (3)..(3)

<223> Xaa係脂肪族或帶電荷氨基酸

<400> 306

<210> 307

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (4)..(4)

<223> Xaa係脂肪族或帶電荷氨基酸

<400> 307

<210> 308

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 308

<210> 309

<211> 4

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 309

<210> 310

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聯接至C7-C20脂質部分

<400> 310

<210> 311

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 聯接至C7-C20脂質部分

<400> 311

<210> 312

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> 經由谷氨酸接頭聯接至C7-C20脂質部分

<400> 312

<210> 313

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聯接至C7-C20脂質部分

<400> 313

<210> 314

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> C-末端聯接至C7-C20脂質部分

<400> 314

<210> 315

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> C-末端聯接至5-20kDa聚乙二醇

<400> 315

<210> 316

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 316

<210> 317

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 317

<210> 318

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 318

<210> 319

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 319

<210> 320

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 320

<210> 321

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (8)..(8)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 321

<210> 322

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 322

<210> 323

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 323

<210> 324

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 324

<210> 325

<211> 7

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 325

<210> 326

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 326

<210> 327

<211> 5

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 327

<210> 328

<211> 17

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 328

<210> 329

<211> 17

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 329

<210> 330

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 330

<210> 331

<211> 17

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 331

<210> 332

<211> 17

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 332

<210> 333

<211> 17

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 333

<210> 334

<211> 17

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 334

<210> 335

<211> 55

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 335

<210> 336

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 智人/現代人

<400> 336

<210> 337

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 黑猩猩

<400> 337

<210> 338

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 倭黑猩猩

<400> 338

<210> 339

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 婆羅州猩猩

<400> 339

<210> 340

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 小鼠

<400> 340

<210> 341

<211> 20

<212> 程式參考表

<213> 褐鼠

<400> 341

<210> 342

<211> 22

<212> 程式參考表

<213> 裸鼴鼠

<400> 342

<210> 343

<211> 24

<212> 程式參考表

<213> 家犬

<400> 343

<210> 344

<211> 29

<212> 程式參考表

<213> 家牛

<400> 344

<210> 345

<211> 19

<212> 程式參考表

<213> 斑馬魚

<400> 345

<210> 346

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 非洲獅

<400> 346

<210> 347

<211> 24

<212> 程式參考表

<213> 熊科

<400> 347

<210> 348

<211> 28

<212> 程式參考表

<213> 家馬

<400> 348

<210> 349

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 短喙真海豚

<400> 349

<210> 350

<211> 5

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 350

<210> 351

<211> 5

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 351

<210> 352

<211> 6

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 352

<210> 353

<211> 6

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 353

<210> 354

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> C-末端醯胺化

<400> 354

<210> 355

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> D-丙氨酸

<400> 355

<210> 356

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> D-丙氨酸

<400> 356

<210> 357

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聚乙二醇600

<400> 357

<210> 358

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端生物素

<400> 358

<210> 359

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> C-末端生物素

<400> 359

<210> 360

<211> 5

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 360

<210> 361

<211> 7

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 361

<210> 362

<211> 8

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 362

<210> 363

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 363

<210> 364

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 364

<210> 365

<211> 9

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 365

<210> 366

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 366

<210> 367

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端生物素

<400> 367

<210> 368

<211> 8

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聚乙二醇600

<400> 368

<210> 369

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聚乙二醇600

<400> 369

<210> 370

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聚乙二醇600

<400> 370

<210> 371

<211> 12

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聚乙二醇600

<400> 371

<210> 372

<211> 11

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> N-末端聚乙二醇600

<400> 372

<210> 373

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 373

<210> 374

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (8)..(8)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 374

<210> 375

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 375

<210> 376

<211> 10

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係任意氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係任意氨基酸

<400> 376

<210> 377

<211> 13

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> C-末端聚乙二醇600

<400> 377

<210> 378

<211> 16

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈或為空缺當Xaa在位置2為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈或為空缺當Xaa在位置3為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (3)..(3)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> Xaa係Leu、Lys、Arg或係選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> Xaa係Leu、Lys、Arg或係選自具有非極性側鏈或極性側鏈或為空缺當Xaa 在位置14為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> Xaa係Arg或選自具有非極性側鏈或極性側鏈的氨基酸或為空缺當Xaa在位置15為空缺時

<400> 378

<210> 379

<211> 17

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係Met、Leu、Gly、Lys、Glu、Ala、D-Ala或Nle或為空缺當Xaa在位置2為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係Arg、Ala、Gly、Asp、Lys、Aib、D-Ala或Glu或為空缺當Xaa在位置3為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (3)..(3)

<223> Xaa係Trp、Ala、D-Ala、Gly、或Glu或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (4)..(4)

<223> Xaa係Gln、Gly、Ala、D-Ala、Ecyc、Asn或Glu

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係Glu、Ecyc、Asp、Gly、D-Ala或Ala

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係Nle、Gly、Lys、Ccyc、D-Ala、Met或Ala

<220>

<221> 混合特徵

<222> (7)..(7)

<223> Xaa係Gly、Asn、Gln、D-Ala或Ala

<220>

<221> 混合特徵

<222> (8)..(8)

<223> Xaa係Tyr、Gly、Glu、D-Ala或Ala

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> Xaa係Ile、Gly、Glu、D-Ala或Ala

<220>

<221> 混合特徵

<222> (10)..(10)

<223> Xaa係Phe、Gly、Glu、D-Ala或Ala

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> Xaa係Tyr、Gly、Glu、D-Ala或Ala

<220>

<221> 混合特徵

<222> (12)..(12)

<223> Xaa係Pro、Gly、Glu、Phe、Ccyc、Kcyc、D-Ala或Ala或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(13)

<223> Xaa係Arg、Gly、Asp、Leu、Lys、Glu、D-Ala或Ala或為空缺當Xaa在位置12為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (14)..(14)

<223> Xaa係Lys、K-Ac、Gly、Arg、Leu、Gln、Asn、Kcyc、Glu、D-Ala或 Ala或為空缺當Xaa在位置13為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (15)..(15)

<223> Xaa係Leu、Gly、Arg、Lys、Deg、Glu、D-Ala或Ala或為空缺當Xaa在位置14為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (16)..(16)

<223> Xaa係Arg、Asp、Glu、Leu、Lys、Gly、D-Ala或Ala或為空缺當Xaa在位置15為空缺時

<220>

<221> 混合特徵

<222> (17)..(17)

<223> Xaa係Glu或為空缺當Xaa在位置16為空缺

<400> 379

<210> 380

<211> 14

<212> 程式參考表

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> 混合特徵

<222> (1)..(1)

<223> Xaa係Arg或具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (2)..(2)

<223> Xaa係Trp或具有非極性側鏈之氨基酸或極性側鏈之氨基酸或為空缺

<220>

<221> 混合特徵

<222> (5)..(5)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (6)..(6)

<223> Xaa係具有非極性側鏈或極性側鏈

<220>

<221> 混合特徵

<222> (9)..(9)

<223> Xaa係具有非極性側鏈之氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (11)..(11)

<223> Xaa係具有非極性側鏈之氨基酸

<220>

<221> 混合特徵

<222> (13)..(14)

<223> Xaa係Lys-Leu、Leu-Arg、具有非極性側鏈之氨基酸或為空缺

<400> 380

Claims

一種肽，包含式I之氨基酸序列：X ¹-QE-X ²-X ³-YI-X ⁴-Y-X ⁵-R-X ⁶ (I)(SEQ ID NO：1)其中X ¹空缺，或若存在，則係X ⁷-RW，其中X ⁷空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ²及X ³分別獨立地係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ⁴及X ⁵分別獨立地係具有非極性側鏈之氨基酸；X ⁶空缺，或若存在，則係KL-X ⁸或X ⁹-LR，其中X ⁸空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈之氨基酸，並且X ⁹係具有非極性側鏈之氨基酸；或C-末端酸或醯胺，或其N-乙醯基衍生物、或其在藥學上可接受之鹽：其中該肽不係由SEQ ID NO：2、42、77、78、316至318、及328-349之氨基酸序列中之任一者組成之肽。
如請求項1所述之肽，其中X ¹空缺，或若存在，則係X ⁷-RW，其中X ⁷空缺，或若存在，則選自：D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ²及X ³分別獨立地選自：D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ⁴及X ⁵分別獨立地選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ⁶空缺，或若存在，則係KL-X ⁸或X ⁹-LR，其中X ⁸空缺，或若存在，則選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)並且X ⁹選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M或(dM)；或其在藥學上可接受之鹽。
如請求項1所述之肽，其中X ¹空缺，或若存在，則係X ⁷-RW，其中X ⁷空缺，或若存在，則係M或E；X ²係M、A或E；X ³係G、N或Q；X ⁴係F或A；X ⁵係P或A；X ⁶空缺，或若存在，則係KL-X ⁸或X ⁹-LR，其中X ⁸空缺，或若存在，則係R或A並且X ⁹選自K、A、(dA)、N及Q；或其在藥學上可接受之鹽。
如請求項1所述之肽，選自由如下組成之組中：MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)； ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；或其在藥學上可接受之鹽。
一種分離肽，包含式I之氨基酸序列：X ¹-QE-X ²-X ³-YI-X ⁴-Y-X ⁵-R-X ⁶ (I)其中X ¹空缺，或若存在，則係X ⁷-RW，其中X ⁷空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ²及X ³分別獨立地係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ⁴及X ⁵分別獨立地係具有非極性側鏈之氨基酸；X ⁶空缺，或若存在，則係KL-X ⁸或X ⁹-LR，其中X ⁸空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈之氨基酸，並且X ⁹係具有非極性側鏈之氨基酸；或其在藥學上可接受之鹽；其中該肽不係由SEQ ID NO：2、42、77、78、316至318、及328-349之氨基酸序列中之任一者組成之肽。
如請求項5所述之分離肽，其中X ¹空缺，或若存在，則係X ⁷-RW，其中X ⁷空缺，或若存在，則選自：D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ²及X ³分別獨立地選自：D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ⁴及X ⁵分別獨立地選自：G、A、(dA)、 V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ⁶空缺，或若存在，則係KL-X ⁸或X ⁹-LR，其中X ⁸空缺，或若存在，則選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)並且X ⁹選自：G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M或(dM)；或其在藥學上可接受之鹽。
如請求項5所述之分離肽，其中X ¹空缺，或若存在，則係X ⁷-RW，其中X ⁷空缺，或若存在，則係M或E；X ²係M、A或E；X ³係G、N或Q；X ⁴係F或A；X ⁵係P或A；X ⁶空缺，或若存在，則係KL-X ⁸或X ⁹-LR，其中X ⁸空缺，或若存在，則係R或A並且X ⁹選自K、A、(dA)、N及Q；或其在藥學上可接受之鹽。
如請求項5所述之分離肽，選自：MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)； MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；或其在藥學上可接受之鹽。
一種修飾肽，包含選自如下之肽：MRWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：208)；MRWQEAGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：11)；MRWQEMGYIFYPR(dA)LR(SEQ ID NO：149)；MRWQEMGYIFYPRNLR(SEQ ID NO：213)；MRWQEMQYIFYPRALR(SEQ ID NO：219)；RWQEMNYIFYPR(SEQ ID NO：248)；MRWQEMGYIFYPRALR(SEQ ID NO：19)；MRWQEMGYIFYPRKLA(SEQ ID NO：21)；MRWQEMGYIFYARKLR(SEQ ID NO：17)；RWQEMGYIFYPRQLR(SEQ ID NO：217)；MRWQEEGYIFYPRKLR(SEQ ID NO：172)；MRWQEMGYIFYPRKL(SEQ ID NO：45)；ERWQEAGYIAYPR(SEQ ID NO：241)；RWQEMQYIFYPR(SEQ ID NO：211)；MRWQEMGYIFYPAKLR(SEQ ID NO：18)；其中該肽包含用選自下列中之至少一個氨基酸或其在藥學上可接受之鹽來置換：(i)具有D構型之氨基酸；及(ii)非天然存在之氨基酸殘基。
如請求項1至9中任一項所述之任何之肽，更包含持續時間增強部分，可視情況用代謝可裂解之接頭聯接該肽至該時間增強部分。
一種肽或肽類似物包含：(a)RWQE(SEQ ID NO：294)、(b)YIFY(SEQ ID NO：295)、或(c)RWQE(SEQ ID NO：294)及YIFY(SEQ ID NO：295)二者，其中該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度，其中該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之游離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。
如請求項11所述之肽或肽類似物包含(a)及(b)，其中該肽或肽類似物之部分(a)位於部分(b)之N-末端，存在0-10個中間氨基酸。
如請求項12所述之肽或肽類似物，其中該肽或肽類似物之部分(a)位於部分(b)之N-末端，存在1、2或3個中間氨基酸。
如請求項11至13中任一項所述之肽或肽類似物，其中該肽或肽類似物包含直接位於SEQ ID NO：294之Arg之N-末端或直接位於SEQ ID NO：294之Glu之C-末端之Met。
如請求項14所述之肽或肽類似物，包含MRWQE(SEQ ID NO：350)、RWQEM(SEQ ID NO：351)、或MRWQEM(SEQ ID NO：352)。
如請求項11至15中任一項所述之肽或肽類似物，包含直接位於SEQ ID NO：295之第一氨基酸之N-末端之Gly、直接位於SEQ ID NO：295之最後氨基酸之C-末端之Pro，或包含GYIFYP(SEQ ID NO：353)。
如請求項11至16中任一項所述之肽或肽類似物，包含YIFYPR(SEQ ID NO：296)、YIFYPRK(SEQ ID NO：297)、YIFYPRKL(SEQ ID NO：298)、或YIFYPRKLR(SEQ ID NO：299)。
如請求項11至17中任一項所述之肽或肽類似物，包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列，以及(B)具有一個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。
如請求項18所述之肽或肽類似物，其中該具有一個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列包含XIFY(SEQ ID NO：300)、YXFY(SEQ ID NO：301)、YIXY(SEQ ID NO：302)、或YIFX(SEQ ID NO：303)，其中X係任意氨基酸。
如請求項19所述之肽或肽類似物，其中SEQ ID NO：300至303中之任一者之X係小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。
如請求項19或20所述之肽或肽類似物，其中SEQ ID NO：300至303中之任一者之X選自由Ala、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。
如請求項11至21中任一項所述之肽或肽類似物，包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列，以及(B)具有二個氨基酸修飾之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。
如請求項22所述之肽或肽類似物，包含：(A)RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列，以及 (B)具有二個氨基酸置換之YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列。
如請求項23所述之肽或肽類似物，包含：RWQE(SEQ ID NO：294)及YIAE(SEQ ID NO：308)或EIFE(SEQ ID NO：309)之氨基酸序列。
如請求項11至24中任一項所述之肽或肽類似物，包含：RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列及YI或YIF。
如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物，包含：(A)YIFY(SEQ ID NO：295)之氨基酸序列，以及(B)具有一個氨基酸置換之RWQE(SEQ ID NO：294)之氨基酸序列。
如請求項26所述之肽或肽類似物，包含具有一個氨基酸置換之RWQE(SEQ ID NO：294)之該氨基酸序列包含XWQE(SEQ ID NO：304)、RXQE(SEQ ID NO：305)、RWXE(SEQ ID NO：306)、或RWQX(SEQ ID NO：307)，其中X係任意氨基酸。
如請求項26所述之肽或肽類似物，其中X係脂肪族氨基酸或帶電荷氨基酸。
如請求項27所述之肽或肽類似物，其中當該肽或肽類似物包含XWQE(SEQ ID NO：304)時，X選自由Ala、Gly、Asp、Lys、Aib、(dA)、Glu組成之組中。
如請求項27所述之肽或肽類似物，其中當該肽或肽類似物包含RXQE(SEQ ID NO：305)時，X選自由Ala、Gly、(dA)、Glu組成之組中。
如請求項27所述之肽或肽類似物，其中當該肽或肽類似物包含RWXE (SEQ ID NO：306)時，X選自由Gln、Ala、Glu、Gly、Asn、(dA)組成之組中。
如請求項27所述之肽或肽類似物，其中當該肽或肽類似物包含RWQX(SEQ ID NO：307)時，X選自由Glu、Ala、Gly、Asp、(dA)組成之組中。
如請求項14至32中任一項所述之肽或肽類似物，其中該肽或肽類似物之部分(A)係至部分(B)之N-末端，具有0至10個中間氨基酸。
如請求項33所述之肽或肽類似物，其中該肽或肽類似物之部分(A)係至部分(B)之N-末端，具有1、2或3個中間氨基酸。
如請求項11至34中任一項所述之肽或肽類似物，包含RWQEX ¹X ²YIFY(SEQ ID NO：319)之氨基酸序列，其中X ¹及X ²分別獨立地係任意氨基酸。
如請求項35所述之肽或肽類似物，其中X ¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物組成之組中。
如請求項36所述之肽或肽類似物，其中X ¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu及Cys組成之組中。
如請求項35至37中任一項所述之肽或肽類似物，其中X ²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物組成之組中。
如請求項35所述之肽或肽類似物，其中X ²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)及Glu組成之組中。
如請求項35至39中任一項所述之肽或肽類似物，其中X ¹X ²係Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn、或Glu-Gln。
如請求項11至41中任一項所述之肽或肽類似物，包含：RWQEX ¹X ²X ³IFY(SEQ ID NO：320)、RWQEX ¹X ²YX ³FY(SEQ ID NO：321)、RWQEX ¹X ²YIX ³Y(SEQ ID NO：322)或RWQEX ¹X ²YIFX ³(SEQ ID NO：323)之氨基酸序列，其中X ¹、X ²或X ³分別獨立地係任意氨基酸。
如請求項42所述之肽或肽類似物，其中X ¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu、Cys及其等同物組成之組中。
如請求項42所述之肽或肽類似物，其中X ¹選自由Met、Ala、Nle、Gly、(dA)、Glu及Cys組成之組中。
如請求項41至43中任一項所述之肽或肽類似物，其中X ²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)、Glu及其等同物組成之組中。
如請求項44所述之肽或肽類似物，其中X ²選自由Asn、Gln、Gly、(dA)及Glu組成之組中。
如請求項44所述之肽或肽類似物，其中X ¹X ²係Met-Asn、Met-Gln、Ala-Gly、Met-Ala、Nle-Gly、Gly-Gly、Met-(dA)、(dA)-Gly、Glu-Gly、Met-Glu、Cys-Gly、Glu-Asn、或Glu-Gln。
如請求項41至45中任一項所述之肽或肽類似物，其中X ³係小脂肪族氨基酸或酸性氨基酸。
如請求項46所述之肽或肽類似物，其中X ³選自由Ala、Gly、(dA)、及Glu組成之組中。
如請求項35至47中任一項所述之肽或肽類似物，其中該肽或肽類似物之部分(A)係至部分(B)之N-末端，具有0至10個中間氨基酸。
如請求項48所述之肽或肽類似物，其中該肽或肽類似物之部分(A)係至部分(B)之N-末端，具有1、2或3個中間氨基酸。
如請求項11至49中任一項所述之肽或肽類似物，其中該肽或肽類似物不由序列SEQ ID NO：2、42、77、78、316至318，及328至349組成。
一種肽或肽類似物，包含SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者。
一種肽或肽類似物，包含、基本上由、或由SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377中之任一者組成，或包含、基本上由、或由與SEQ ID NO：1、3至41、43至76、及79至293、310至315、319至323及354至377其中之一具有至少95%之序列同一性之序列組成。
如請求項52所述之肽或肽類似物，具有8至20個氨基酸之長度。
如請求項52或53所述之肽或肽類似物，其(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之遊離脂肪酸之水準，(iii)或(i)及(ii)二者。
如請求項52至54中任一項所述之肽或肽類似物包含、基本上由、或由SEQ ID NO：11、17至19、21、32、45、148、172、208、210、211、213、219、及241中之任一者組成。
一種肽，包含式II之氨基酸序列：X ¹⁷-X ¹⁸-X ¹⁹-Q-E-X ²⁰-X ²¹-Y-I-X ²²-Y-X ²³-X ²⁴-X ²⁵ (II)(SEQ ID NO：378) 其中X ¹⁷空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ¹⁸空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ¹⁹空缺，或若存在，則係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ²⁰係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ²¹係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ²²係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ²³係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；X ²⁴係具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；及X ²⁵空缺，或若存在，則選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸、-LKR、-KLX ²⁶、-X ²⁷LR、-KX ²⁸R、-RX ²⁹R及-KRX ³⁰；其中X ²⁶空缺，或若存在，則選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；其中X ²⁷選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；其中X ²⁸選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；其中X ²⁹選自具有非極性側鏈或極性側鏈之氨基酸；且其中X ³⁰空缺，或若存在，則選自具有非極性側鏈之氨基酸；條件還有若X ¹⁹空缺，則X ¹⁷及X ¹⁸空缺；並且條件還有若X ¹⁸空缺，則X ¹⁷空缺；及或其C-末端酸或醯胺、或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽；條件係該肽不係由SEQ ID NO：2、42、77、78、316至318及328至349之氨基酸序列中之任一者組成之肽。
如請求項57所述之肽，其中X ¹⁷空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、Nle、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ¹⁸空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、 V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ¹⁹空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ²⁰選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ²¹選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ²²選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ²³選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、Aib、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；X ²⁴空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；及X ²⁵空缺，或若存在，則選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、 I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M、(dM)、-LKR、-KLX ²⁶、-X ²⁷LR、-KX ²⁸R、-RX ²⁹R及-KRX ³⁰；其中X ²⁶空缺，或若存在，則選自-RE、D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；其中X ²⁷選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；其中X ²⁸選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；其中X ²⁹選自D、(dD)、E、(dE)、K、(dK)、R、(dR)、H、(dH)、N、(dN)、Q、(dQ)、S、(dS)、T、(dT)、Y、(dY)、C、(dC)、G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；及其中X ³⁰空缺，或若存在，則選自G、A、(dA)、V、(dV)、L、(dL)、I、(dI)、F、(dF)、W、(dW)、P、(dP)、M及(dM)；或其C-末端酸或醯胺、或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽。
如請求項57所述之肽，其中X ¹⁷空缺，或若存在，則係M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X ¹⁸空缺，或若存在，則係R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X ¹⁹空缺，或若存在，則係W、A、(dA)、G、或E；X ²⁰係Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X ²¹係G、N、Q、(dA)或A；X ²²係F、G、E、(dA)或A；X ²³係P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A； X ²⁴空缺，或若存在，則係R、G、D、L、K、E、(dA)或A；及X ²⁵空缺，或若存在，則選自-K、-R、N、Q、(dA)、-KL、-KR、-R(Da)、-KLR、-K(Ac)LR、-K(cyc)LR、-ALR、-(dA)LR、-GLR、-ELR、-NLR、-QLR、-KAR、-K(dA)R、-KGR、-KER、-KLA、-KL(dA)、-KLD、-KLE、-KLG、-KLK、-RKR、-RLR、-LKR、-KRL、及-KLRE；其C-末端酸或醯胺，或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽。
一種肽，包含式III之氨基酸序列X ³¹-X ³²-X ³³-X ³⁴-X ³⁵-X ³⁶-X ³⁷-X ³⁸-X ³⁹-X ⁴⁰-X ⁴¹-X ⁴²-X4 ³-X ⁴⁴-X ⁴⁵-X ⁴⁶-X ⁴⁷ (III)(SEQ ID NO：379)其中X ³¹空缺，或若存在，則係M、L、G、K、E、A、(dA)或Nle；X ³²空缺，或若存在，則係R、A、G、D、K、Aib、(dA)或E；X ³³空缺，或若存在，則係W、A、(dA)、G、或E；X ³⁴係Q、G、A、(dA)、Ecyc、N或E；X ³⁵係E、Ecyc、D、G、(dA)或A；X ³⁶係Nle、G、K、Ccyc、(dA)、M或A；X ³⁷係G、N、Q、(dA)或A；X ³⁸係Y、G、E、(dA)或A；X ³⁹係I、G、E、(dA)或A；X ⁴⁰係F、G、E、(dA)或A；X ⁴¹係Y、G、E、(dA)或A；X ⁴²空缺，或若存在，則係P、G、E、F、Ccyc、Kcyc、(dA)或A；X ⁴³空缺，或若存在，則係R、G、D、L、K、E、(dA)或A；X ⁴⁴空缺，或若存在，則係K、K-Ac、G、R、L、Q、N、Kcyc、E、(dA)或A；X ⁴⁵空缺，或若存在，則係L、G、R、K、Deg、E、(dA)或A；X ⁴⁶空缺，或若存在，則係R、D、E、L、K、G、(dA)或A；及X ⁴⁷空缺，或若存在，則係E；條件還有若X ³³空缺，則X ³¹及X ³²空缺；條件還有若X ³²空缺，則X ³¹空缺；條件還有若X ⁴²空缺，則X ⁴⁷、X ⁴⁶、X ⁴⁵、X ⁴⁴、及X ⁴³空缺；條件還有若X ⁴³空缺，則X ⁴⁷、X ⁴⁶、X ⁴⁵、及X ⁴⁴空缺；條件還有若X ⁴⁴空缺，則X ⁴⁷、X ⁴⁶、及X ⁴⁵空缺；條件還有若X ⁴⁵空缺，則X ⁴⁷及X ⁴⁶空缺；並且條件還有若X ⁴⁶空缺，則X ⁴⁷空缺；及或其C-末端酸或醯胺，或其N-乙醯基衍生物；或其在藥學上可接受之鹽；條件為該肽不係由SEQ ID NO：2、42、77、78、316至318、及328至349之氨基酸序列中之任一者組成之肽。
如上述請求項中任一項所述之肽，其中該肽被衍生化。
如請求項61所述之肽，其中該衍化物經由乙醯化、聚乙二醇化、生物素化或醯化進行製備。
如請求項62所述之肽，其中該衍化物係PEG600、乙醯基、生物素或棕櫚基。
一種如在此描述之肽或肽類似物。
一種綴合物，包含如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物及異源部分。
一種核酸，包含對如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物或綴合物進行編碼之核苷酸序列。
一種表達載體，包含如請求項66所述之核酸。
一種宿主細胞，包含如請求項66所述之核酸或如請求項67所述之表達載體。
一種組成物，包含如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體、或宿主細胞、以及運載體、賦形劑或稀釋劑。
一種制劑盒，包含在容器或包裝中之如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體、或宿主細胞。
一種用於生產肽或肽類似物之方法，該肽或肽類似物包含如下之氨基酸序列a．RWQE(SEQ ID NO：294)、b．YIFY(SEQ ID NO：295)、或c．RWQE(SEQ ID NO：294)及YIFY(SEQ ID NO：295)二者，其中該肽或肽類似物具有8至20個氨基酸之長度；其中該肽或肽類似物(i)在37攝氏度下在小鼠血漿中呈現至少10%之穩定性達60分鐘，(ii)降低人原代脂肪細胞中之游離脂肪酸水準，(iii)或(i)及(ii)二者。所述方法包含：(i)使第一氨基酸與第二氨基酸反應，以在該第一氨基酸與該第二氨基酸之間形成共價聯接，其中該第一氨基酸或該第二氨基酸視情況附接至另一個氨基酸；以及(ii)重複該反應步驟(i)，藉此產生該肽或肽類似物。
如請求項71所述之方法，包含示例1中所描述之一或多個步驟。
一種用於治療需要其之受試者之代謝疾病之方法，包含以有效治療該代謝疾病之量對該受試者施用如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞。
一種如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞之用途，其係用於治療代謝疾病。
如請求項73或74所述之方法或用途，其中該代謝疾病選自由肥胖症、糖尿病(例如，2型糖尿病)、認知功能障礙及/或神經退行性病變、心血管疾病、脂肪肝、及胃腸道疾病組成之組中。
一種用於治療需要其之受試者之癌症之方法，包含以有效治療該癌症之量對該受試者施用如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞。
如請求項75所述之方法，其中該癌症係肺癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、或肝細胞癌。
一種用於治療需要其之受試者之肝病之方法，包含以有效治療該肝病之量對該受試者施用如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞。
如請求項77所述之方法，其中該肝病係脂肪肝。
如請求項78所述之方法，其中該脂肪肝係非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)或脂肪性肝炎(NASH)。
一種用於調節需要其之受試者之脂肪酸代謝之方法，包含以有效調節脂肪酸代謝之量對該受試者施用如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞。
如請求項80所述之方法，其中在對該受試者施用該肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞之後，該受試者之脂肪酸代謝增加。
一種用於降低需要其之受試者之體重之方法，包含以有效降低該受試者之體重之量對該受試者施用如前述請求項中任一項所述之肽或肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞。
一種如前述請求項中任一項所述之肽、肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞中之任一者之用途，其係用於治療代謝疾病、癌症、肝病、或任何疾病、失調症、或在此描述之內科疾病。
一種如前述請求項中任一項所述之肽、肽類似物、綴合物、核酸、表達載體或宿主細胞中之任一者之用途，其係用於製造藥物用以治療代謝疾病、癌症、肝病、或任何疾病、失調症、或在此描述之內科疾病。