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TW201639867A - 胜肽合成方法 - Google Patents

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TW201639867A
TW201639867A TW105106523A TW105106523A TW201639867A TW 201639867 A TW201639867 A TW 201639867A TW 105106523 A TW105106523 A TW 105106523A TW 105106523 A TW105106523 A TW 105106523A TW 201639867 A TW201639867 A TW 201639867A
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TW105106523A
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Yusuke Kono
Hideaki Suzuki
Susumu Muto
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Jitsubo Co Ltd
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Abstract

本發明的目的在於提供一種胜肽合成方法，針對使 用能夠可逆地重複進行溶解狀態與不溶化狀態之載體的胜肽合成反應，其能夠容易解決胺基酸活性物種的問題，該胺基酸活性物種存在於當去保護反應時的反應系統中。藉由本發明，能夠提供一種胜肽合成方法，其包含以下的步驟：獲得N-Fmoc-C-載體保護胜肽的步驟，其是在縮合劑的存在下，使N-Fmoc保護胺基酸，與利用載體來保護C末端之胜肽進行縮合，該載體會隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化；添加胺的步驟，其是在反應系統中，添加碳數1~14的烷胺或羥胺；將N末端進行去保護的步驟；及，結晶化並且分離的步驟，其是使溶解有C-載體保護胜肽之溶劑組成進行變化，藉此使該胜肽結晶化來進行分離。

Description

胜肽合成方法
本發明關於一種新穎的胜肽合成方法，具體而言，本發明關於一種胜肽合成方法，其能夠容易地實行正確的胜肽延長反應(elongation)。
先前的化學方法中，廣泛地使用了將經溶解於液體中的特定成分作為固體來分離的方法。其原因在於，藉由僅固體化(結晶化)特定成分，會使反應後的分離和精製變得容易。根據此方法，例如，近年來使用在醫藥品的開發研究等的化合物資料庫合成等，在其依次多階段合成中，每當各反應結束時，藉由使必要或不要的化合物進行固體化(結晶化)，而能夠容易地實施經固體化(結晶化)之物質的分離和精製。從而，能夠解決在先前造成問題之步驟的繁雜程度。
又，亦可使用以下方法：隨著液體的相分離，使已溶解的特定成分選擇性地溶解(選擇性的分配)在特定的相中，藉此，實現與其他成分的分離。根據該方法，因為不需隨著固體化(結晶化)便能夠分離特定成分，故能夠對步驟的迅速化、簡便化有所貢獻。
如上述，經溶解在溶液中的特定成分之固體化(結晶化)、或者使特定成分選擇性地溶解至液體的特定的相中(選擇性的分配)，可藉由滿足化合物的化學性質、物性及與溶劑的關係中的特定的條件來實現。然而，固體化(結晶化)或選擇性的溶解(選擇性的分配)之條件，在多數的情況下，必須實行試誤，並且進行經驗性地研究。尤其，由於在逐次多階段合成中，需要基於各個階段中所合成的化合物特有的性質，來研究各個階段的條件，故會在方法開發中耗費大量的成本與時間。
因此，已提案有一種具有連接子(linker)之載體分子，其可敏感地偵測溶劑組成的變化，然後使溶解狀態與不溶化(結晶化)狀態可逆地變化；或者，隨著液體的相分離，使已溶解的特定成分選擇性並且高濃度地溶解在特定的相中(選擇性的分配)。如此的載體分子，能夠經由連接子來鍵結各種的化合物。因此，被鍵結的化合物，能夠隨著載體分子，由溶解狀態至不溶化(結晶化)狀態，或反之亦然地容易地進行狀態變化。或者，能夠使已與載體分子鍵結的化合物，選擇性並且高濃度地溶解在經分離為複數種相之液體的特定的相中(選擇性的分配)。
又，如此的載體分子，即便在由於逐次化學反應而使經鍵結之化合物的化學結構產生變化的情形中，藉由幾乎相同的條件，仍能夠使溶解狀態與不溶化(結晶化)的狀態可逆地重複進行，或者，在經分離為複數種相之液體中，能夠選擇性並高濃度地進行溶解(選擇性的分配)。 若使用如上述的載體分子，其能夠可逆地變化溶解狀態與不溶化(結晶化)狀態，或者，能夠誘導選擇性的分配狀態，便能夠一邊直接利用有機化學中一般性的液相反應的知識，一邊由均勻的溶液狀態選擇性地分離出作為分離對象的化合物。亦即，在液相反應之後，在其他的可溶性成分仍殘留在溶液中的情況下，就能夠分離出特定的化合物。
作為能夠可逆地重複進行溶解狀態與不溶化狀態之載體，已提案有各式各樣的化合物。例如有：由本發明人所提案的導入有長鏈脂肪酸之苄醇化合物(專利文獻1~4)；或者，導入有長鏈脂肪酸之茀化合物(專利文獻5)、或導入有長鏈脂肪酸之二苯甲烷化合物(專利文獻6)。
胜肽合成技術中，有固相胜肽合成法(SPPS(solid phase peptide synthesis)法)和液相胜肽合成法(LPPS(liquid phase peptide synthesis)法)。固相胜肽合成法，就原理而言，無法在胺基酸延長反應的各階段中進行精製。又，其合成成本高，因此，適用於少量生產。另一方面，液相胜肽合成法，雖然被通用於大量生產，但若胜肽鏈變長，胜肽延長反應會變得不易進行，而在長鏈的胜肽合成中有欲解決的問題。
因此，提案有使用上述的載體來實行胜肽合成之方法(專利文獻1~6)，其能夠可逆性地重複進行溶解狀態與不溶化狀態。
胜肽合成，在胜肽延長反應中會有產生胺基酸殘基的缺失的問題，即便在使用上述的載體的情況下亦會發生問題。作為胺基酸殘基的缺失之解決方法，實行有增加胺基酸和縮合劑的當量之方法。然而，作為該結果，產生了新的問題，其是若反應液中殘留了過剩的胺基酸活性物種，N末端的去保護時會發生雙重攻擊(double-hit)。因此，會有降低目標胺基酸的產率的問題。此處，所謂的雙重攻擊，是意指在目標的胜肽進一步多餘地插入一個胺基酸殘基。
作為該解決手段，在去保護前，實行了藉由洗滌從反應系統去除胺基酸活性物種的方法。例如，已提案有以下方法。將胺作為清除劑(scavenger)來添加的方法，其是在使用苄氧羰基(Cbz或Z)或三級丁氧基羰基(Boc)來作為保護基的液相胜肽合成法中，為了去除殘留在反應系統中的胺基酸的活性酯，添加具有β-丙胺酸-Obz等陰離子成分之胺(專利文獻7)。在該方法中，當將保護基由N末端進行去保護時，清除體的陰離子成分保護基亦會同時脫離，而成為水溶性。之後，以鹼性水-有機溶劑來實行液液萃取，繼而，以水來去除縮合劑和胺基酸成分。然而，在使用Cbz作為保護基時，若胜肽序列中有Met(甲硫胺酸)或Cys(胱胺酸)，去保護觸媒會失去活 性而無法使用。又，該方法中，因為無法去除二苯富烯(dibenzofulvene)，故作為保護基無法使用茀基甲氧羰基(Fmoc)。
又，作為保護基使用Boc之液相胜肽合成法中，用以去除殘留在反應系統中的胺基酸的活性酯，提案有下述方法：利用鹼性水(例如，5%的碳酸鈉水溶液)一邊將活性酯進行水解，一邊以液液萃取來去除胺基酸成分(專利文獻8)。然而在該方法中，利用了pH=11以上之強鹼的條件，而有引起表異構化的疑慮。又，因為無法去除二苯富烯，故作為保護基無法使用茀基甲氧羰基(Fmoc)。
即便使用了上述之能夠可逆地重複進行溶解狀態與不溶化狀態之載體，在前述胜肽合成中，用以解決由於過剩的胺基酸活性物種造成的雙重攻擊的問題，在去保護前，仍能夠實行藉由洗滌將胺基酸活性物種從反應系統去除。然而，用以將載體進行不溶化的結晶化操作，會有無法利用洗滌完全地去除胺基酸活性物種的情況，又，變得需要縮合反應後與去保護後之兩次的洗滌，而會造成需要大量的洗滌溶劑的問題。
又，作為胜肽合成中的Fmoc基的去除方法，已報導有下述方法：在將Fmoc由N末端進行去保護後，使其與硫醇基羧酸共存，然後使其生成二苯富烯，之後，利用鹼性水-有機溶劑實行液液萃取，繼而，以水去除縮合劑、胺基酸成分及二苯富烯，藉此來去除胺基酸活性酯 (專利文獻8)。又，揭示了在將Fmoc進行去保護前，可以將活性酯以硫醇基二氧化矽來去除或以鹼性水來分解，並且指出了將胺基酸之活性酯作為水溶性的產物來去除。
其他，作為胜肽合成中的Fmoc基的去除方法，雖然報導有下述二苯富烯加成物的去除方法，但其並未記載有關胺基酸活性酯的去除，該方法是：在將Fmoc由N末端進行去保護之後，使其與烷基硫醇或固相硫醇共存，然後使其生成二苯富烯，繼而，在濃縮後，利用醚來將胜肽成分結晶化並且進行固液分離，藉此來去除二苯富烯加成物(非專利文獻1)。
[先前技術文獻] (專利文獻)
專利文獻1：日本特開2003-183298號公報
專利文獻2：日本特開2004-059509號公報
專利文獻3：WO2007/034812號公報
專利文獻4：WO2007/122847號公報
專利文獻5：WO2010/104169號公報
專利文獻6：WO2010/113939號公報
專利文獻7：日本特開2003-55396號公報
專利文獻8：WO2007/099656號公報
(非專利文獻)
非專利文獻1：James E. Sheppeck II等人，Tetrahedron Letters 41(2000)
本發明的目的在於提供一種胜肽合成方法，針對使用能夠可逆地重複進行溶解狀態與不溶化狀態之載體的胜肽合成反應，其能夠容易地解決胺基酸活性物種的問題，該胺基酸活性物種存在於當去保護反應時的反應系統中。
本發明人有鑒於上述所欲解決之問題，而實行努力研究的結果，發現下述事實，進而完成本發明，該事實是：在去保護反應前，藉由特定的清除劑將胺基酸活性物種進行不活性化，藉此，在N末端的去保護前，即便不由反應系統去除該等胺基酸活性物種，在去保護時仍可防止胺基酸的雙重攻擊。本發明包含以下技術。
(1)一種胜肽合成方法，其包含以下的步驟a~d：a.獲得N-Fmoc-C-載體保護胜肽的步驟，其是在縮合劑的存在下，使N-Fmoc保護胺基酸或N-Fmoc保護胜肽，與C-載體保護胺基酸、C-載體保護胜肽或C-載體保護胺基酸醯胺進行縮合，來獲得N-Fmoc-C-載體保護胜肽，該N-Fmoc保護是利用茀基甲氧羰基來保護N末 端，該C-載體保護是利用載體來保護C末端，並且該載體會隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化；b.添加胺的步驟，其是在反應系統中，添加選自由碳數1~14的烷胺、碳數1~14的芳香族胺、羥胺所組成之群組中的至少一種胺(此處，烷胺或芳香族胺，是一級胺或二級胺)；c.將N末端進行去保護的步驟；及，d.結晶化並且分離的步驟，其是使溶解有所獲得的C-載體保護胜肽之溶劑組成進行變化，藉此使該C-載體保護胜肽結晶化來進行分離。
(2)如前述(1)所述之胜肽合成方法，其中，前述載體是選自由下述化合物所組成之群組的化合物：具有下述的結構之化合物(本案說明書中有時稱為「Ka」)。
式中，R1及R5是氫原子，R2、R3及R4是碳數8~30的烷氧基，並且較佳是碳數12~22的烷氧基，又，式中，RX是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基。
此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基，再者，上述式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示；具有下述的結構之化合物(本案說明書中有時稱為「Kb」)。
式中，R2、R4及R5是氫原子，R1及R3是碳數12~30的烷氧基，並且較佳是碳數18~22的烷氧基，又，式中，RY是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基。
此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基，再者，上述式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示；及， 具有下述的結構之化合物(本案說明書中有時稱為「Kc」)。
式中，R1、R3及R5是氫原子，R2及R4是碳數12~30的烷氧基並且較佳是碳數18~22的烷氧基，又，式中，RZ是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基。
此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基，再者，上述式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示。
(3)如前述(1)所述之胜肽合成方法，其中，前述載體是選自由下述化合物所組成之群組中的化合物：
式中，X是鹵素，Y是8~12的整數，Z是17~29的整數；
式中，X各自獨立地是7~21的整數；及，
式中，X各自獨立地是11~29的整數；再者，上述各式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示。
(4)如前述(1)所述之胜肽合成方法，其中，前述載體是選自由下述化合物所組成之群組中的化合物。
3,4,5-三-十八烷基芐醇；
2,4-二-二十二烷氧基芐醇；
3,5-二-二十二烷氧基芐醇；
式中，X是氟原子或氯原子；
2-(3,4,5-三-十八烷氧基芐基)-4-甲氧基芐醇；及， 雙-(4-二十二烷氧基苯基)-甲胺；再者，上述各式，是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示。
(5)如上述(1)~(4)中任一項所述之胜肽合成方法，其中，前述胺是碳數1~10的烷胺或羥胺。
(6)如上述(1)~(5)中任一項所述之胜肽合成方法，其中，前述胺是碳數3或4的烷胺。
(7)如上述(1)~(6)中任一項所述之胜肽合成方法，其中，步驟b中的胺當量，相對於在步驟a的縮合反應後理論上所殘留的胺基酸當量，是1~30倍的量。
(8)如上述(1)~(7)中任一項所述之胜肽合成方法，其中，使前述溶解有C-載體保護胜肽之溶液組成進行變化的組成變化手段，是藉由下述方法來進行：將溶液的溶劑進行濃縮，之後，添加不良溶劑(poor solvent)來進行固化。
(9)如前述(8)所述之胜肽合成方法，其中，前述不良溶劑，是選自由乙腈、任意比例的含水乙腈、甲醇、任意比例的含水甲醇及水的所組成之群組中的溶劑。
(10)如前述(1)~(9)中任一項所述之胜肽合成方法，其中，包含下述條件：在步驟d中使用經結晶化分離之C-載體保護胜肽，重複實行1次以上的步驟a~步驟d。
(11)如前述(1)~(10)中任一項所述之胜肽合成方法，其中，進一步包含以下的步驟： e.洗滌步驟，其是將經結晶化分離之C-載體保護胜肽的結晶，利用有機溶劑進行洗滌。
(12)如前述(1)~(11)中任一項所述之胜肽合成方法，其中，將前述a~c的步驟利用一鍋合成(one-pot synthesis)來實行。
本發明的胜肽合成方法，因為能夠以簡便的手段來解決去保護反應時存在於反應系統中的胺基酸活性物種的問題，而通用性優異。藉由本發明合成而成之胜肽，其胺基酸的缺失或雙重攻擊的問題較少，並且根據本發明，能夠合成高產率且高品質的胜肽。
[用以實施發明的形態]
以下，本發明將例示的實施態樣作為例子，一併說明能夠使用在本發明的實施之較佳方法和材料。
再者，在說明書中若沒有特別說明，使用在本說明書中全部的技術用語及科學用語，具有與本發明所屬之技術領域中具有通常知識者一般性所理解之相同的意思。又，相當於本說明書中所述之發明或同樣的任意的材料及方法，能夠在本發明的實施中同樣地使用。
又，與本說明書中所述之發明相關而引用在本說明書中的全部的刊物及專利，例如，是作為表示能夠使用在本發明中的方法或材料之其他方法或材料，來構成本說明書中的一部分。
以下說明本說明書中使用的用語。
[1.N-Fmoc保護胺基酸及胜肽]
所謂的利用茀基甲氧羰基(Fmoc)來保護N末端之胺基酸(N-Fmoc保護胺基酸)，是意指下述胺基酸：胺基酸的胺基會被Fmoc保護，另一方面，羰基並未被保護而具有反應性。
所謂的利用茀基甲氧羰基(Fmoc)來保護N末端之胜肽(N-Fmoc保護胜肽)，是意指下述胜肽：胜肽鏈的N末端的胺基會被Fmoc保護，另一方面，C末端的羰基並未被保護而具有反應性。
再者，當N-Fmoc保護胺基酸或N-Fmoc保護胜肽具有反應性豐富的官能基時，能夠利用下述方法獲得目標化合物：該等的官能基可以導入有胜肽化學所使用之一般的 保護基，並且在反應結束後，依據需要來去除保護基；該反應性豐富的官能基是羥基、胺基、胍基、羧基、巰基等。
作為羥基的保護基，可列舉：tBu基(三級丁基)、Trt基(三苯甲基)、Bz基(芐醯基)、乙醯基、矽烷基等；作為胺基的保護基，可列舉：Boc基(三級丁氧基羰基)、Fmoc基(茀基甲氧羰基)、Cbz基(苄氧羰基)、Trt基、Mmt基(甲氧基三苯甲基)、ivDde基(1-(4,4-二甲基-2,6-二氧基亞環己烯)-3-甲基丁基)等；作為胍基的保護基，可列舉：Pbf基(2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基)、Pmc基(氯化2,2,5,7,8-五甲基-二氫苯并哌喃-6-磺醯基)、硝基等；作為羧基的保護基，可列舉：tBu基、甲基、乙基、Bz基等；作為巰基的保護基，能夠列舉：Trt基、Acm基(乙醯胺甲基)、tBu基、S-tBu基(S-三級丁基)等。
[2.C-載體保護胺基酸、胜肽及胺基酸醯胺]
所謂的利用載體所保護C末端之胺基酸(C-載體保護胺基酸)，是意指：胺基酸的羧基會被以下所述之載體保護，並且另一方面，胺基並未被保護而具有反應性之胺基酸，其中，前述載體會隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化。
所謂的利用隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化的載體所保護C末端之胜肽(C-載體保護胜肽)，是意指下述胜肽：胜肽鏈的C末端的羧基會被以下所述之載 體保護，另一方面，N末端的胺基並未被保護而具有反應性。
所謂的利用隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化的載體所保護C末端之胺基酸醯胺(C-載體保護胺基酸醯胺)，是意指下述胺基酸醯胺：胺基酸的羧基會被以下所述之載體保護，另一方面，胺基並未被保護而具有反應性。
再者，當C-載體保護胺基酸或C-載體保護胜肽或C-載體保護胺基酸醯胺具有反應性豐富的官能基時，能夠以下述方法獲得目標化合物：該等的官能基可以導入有胜肽化學所使用之一般的保護基，並且在反應結束後，依據需要來去除保護基；該反應性豐富的官能基是羥基、胺基、胍基、羧基、巰基等。
作為羥基的保護基，可列舉：tBu基、Trt基、Bz基、乙醯基、矽烷基等；作為胺基的保護基，可列舉：Boc基、Fmoc基、Cbz基、Trt基、Mmt基、ivDde基等；作為胍基的保護基，可列舉：Pbf基、Pmc基、硝基等；作為羧基的保護基，可列舉：tBu基、甲基、乙基、Bz基等；作為巰基的保護基，能夠列舉：Trt基、Acm基、tBu基、S-tBu基等。
[3.隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化之載體]
所謂的隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化之載體，是意指：藉由溶解有載體之溶劑的組成變化， 能夠可逆地變化溶解狀態與固體化(結晶化)狀態之載體。具體而言，載體並未限定，能夠列舉例如以下的化合物，藉由使該等的化合物與胺基酸或胜肽的C末端進行鍵結，能夠製作可用於本發明中並且其C末端是利用載體所保護之C-載體保護胺基酸、C-載體保護胜肽或C-載體保護胺基酸醯胺。
[3-1.載體A]
具有下述的結構之化合物(本說明書中有時稱為「Ka」)：
式中，R1及R5是氫原子，R2、R3及R4是碳數8~30的烷氧基。又，式中，RX是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基。
此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基。
上述式中，R2、R3及R4，更佳是碳數8~22，進一步較佳是碳數12~18。
上述式中，RX更佳是羥甲基、胺甲基、巰甲基，進一步較佳是羥甲基。
包含在上述式的化合物中，較佳是3,4,5-三-十八烷基芐醇、3,4,5-三-十八烷基芐胺、3,4,5-三-十八烷基芐硫醇；進一步較佳是3,4,5-三-十八烷基芐醇、3,4,5-三-十八烷基芐胺；最佳是利用下述式所表示之3,4,5-三-十八烷基芐醇。
上述化合物對胺基酸或胜肽的C末端的鍵結，能夠使用在胜肽合成中一般性所使用的方法，本發明中並未限制，例如，能夠藉由使用DIPCI(Diisopropylcarbodiimide，二異丙基碳二醯亞胺)的酯化來實行。
[3-2.載體B]
具有下述的結構之化合物(本說明書中有時稱為「Kb」)：
式中，R2、R4及R5是氫原子，R1及R3是碳數12~30的烷氧基。又，式中，RY是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基。
此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基。
上述式中，R1及R3更佳是碳數18~22。
上述式中，RY更佳是羥甲基、胺甲基、巰甲基，進一步較佳是羥甲基。
包含在上述式的化合物中，較佳是2,4-二-二十二烷氧基芐醇、2,4-二-二十二烷氧基芐胺、2,4-二-二十二烷氧基芐硫醇；進一步較佳是2,4-二-二十二烷氧基芐醇、2,4-二-二十二烷氧基芐胺；最佳是利用下述式所表示之2,4-二-二十二烷氧基芐醇。
上述化合物對胺基酸或胜肽的C末端的鍵結，能夠使用在胜肽合成中一般性所使用的方法，本發明中並未限制，例如，能夠藉由使用DIPCI的酯化來實行。
[3-3.載體C]
具有下述的結構之化合物(本說明書中有時稱為「Kc」)
式中，R1、R3及R5是氫原子，R2及R4是碳數12~30的烷氧基。又，式中，RZ是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基。
此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基。
上述式中，R2及R4，更佳是碳數18~22。
上述式中，RZ更佳是羥甲基、胺甲基、巰甲基，進一步較佳是羥甲基。
包含在上述式的化合物中，較佳是3,5-二-二十二烷氧基芐醇、3,5-二-二十二烷氧基芐胺、3,5-二-二十二 烷氧基芐硫醇；進一步較佳是3,5-二-二十二烷氧基芐醇、3,5-二-二十二烷氧基芐胺；最佳是利用下述式所表示之3,5-二-二十二烷氧基芐醇。
上述化合物對胺基酸或胜肽的C末端的鍵結，能夠使用在胜肽合成中一般性所使用的方法，本發明中並未限制，例如，能夠藉由由於DIPCI產生的酯化來實行。
[3-4.載體D]
具有下述的結構之化合物：
式中，X是鹵素，Y是8~12的整數，Z是17~29的整數。
上述式中，X較佳是氟原子或氯原子，更佳是氟原子。
最佳的化合物是利用下述式所表示者。
式中，X是氟原子或氯原子。
上述化合物對胺基酸或胜肽的C末端的鍵結，能夠使用在胜肽合成中一般性所使用的方法，本發明中並未限制，例如，能夠藉由由於鹼催化劑產生的酯化來實行。
[3.5-載體E]
具有下述的結構之化合物：
式中，X各自獨立地是7~21的整數。
最佳的化合物是利用下述式所表示之2-(3,4,5-三-十八烷氧基芐基)-4-甲氧基芐醇。
上述化合物對胺基酸或胜肽的C末端的鍵結，能夠使用在胜肽合成中一般性所使用的方法，本發明中並未限制，例如，能夠藉由由於DIPCI產生的酯化來實行。
[3-6.載體F]
具有下述的結構之化合物：
式中，X各自獨立地是11~29的整數。
最佳的化合物是利用下述式所表示之雙-(4-二十二烷氧基苯基)-甲胺。
上述化合物對胺基酸或胜肽的C末端的鍵結，能夠使用在胜肽合成中一般性所使用的方法，本發明中並未限制，例如，能夠藉由由於DIPCI/HOBt產生的的醯胺化來實行。
[4.胜肽的製造方法]
本發明的胜肽合成方法，能夠適合使用於使用載體之胜肽合成方法，該載體能夠可逆地重複進行溶解狀態與不溶化狀態。
作為包含有本發明的胜肽合成方法之胜肽製造方法，例如，能夠例示如以下的步驟。
(i)偶合步驟
該步驟是在縮合劑的存在下，使N-Fmoc保護胺基酸或胜肽與C-載體保護胺基酸或胜肽進行縮合，來獲得N-Fmoc-C-載體保護胜肽； (ii)形成清除體的步驟，其是使用碳數1~14的一級或二級烷胺、或碳數1~14的一級或二級芳香族胺、或羥胺(以下稱為胺清除劑)，來形成清除胺基酸活性酯之清除體；(iii)去保護步驟，其是由胜肽的N末端去除Fmoc基來將N末端進行去保護；(iv)結晶化且分離的步驟，其是使用不良溶劑，將鍵結有胜肽之載體(C-載體保護胜肽)進行結晶化且分離；(v)將上述步驟(i)~(v)重複需要的次數之步驟；及，(vi)實行最終去保護的步驟，其是由胜肽去除載體來實行最終去保護。
進一步，在前述步驟(iv)之後亦能夠增加下述步驟：(vii)洗滌步驟，其是利用有機溶劑來洗滌經結晶化且分離的C-載體保護胜肽；藉由洗滌步驟，可以更完全地去除包含清除胺基酸活性酯之清除體之雜質。
以下，說明有關各自的步驟。
[4-1.偶合步驟]
本步驟中，例如，在溶劑中，藉由混合下述成分來獲得延長有一個胺基酸殘基之N-Fmoc-C-載體保護胜肽，該等成分是：N-Fmoc保護胺基酸；C-載體保護胜肽、C-載體保護胺基酸或C-載體保護胺基酸醯胺；及縮合劑(較佳是縮合劑及活化劑)。又，只要代替N-Fmoc保護胺基酸而使用N-Fmoc保護胜肽，便能夠獲得下述 N-Fmoc-C-載體保護胜肽，其僅延長有N-Fmoc胜肽的胺基酸殘基的數目。
添加各成分的方法或順序，能夠無特別限制地來實行，並且能夠使用通常用於胜肽合成中的偶合步驟之方法。
針對C-保護載體胜肽，N-Fmoc保護胺基酸或N-Fmoc保護胜肽的使用量，相對於C-載體保護胜肽等，通常是1.03~8當量，較佳是1.01~4當量，更佳是1.05~2當量，進一步較佳是1.1~1.5當量。若少於該範圍，會容易殘留未反應的C-保護胜肽等，並且變得容易產生胺基酸的缺失。本發明的胜肽合成方法，利用之後進行添加的胺清除劑來清除(捕獲)具有未反應的胺基酸之活性酯，在N-Fmoc-C-載體保護胜肽的N末端進行去保護之後，使用有機溶劑便能夠將該等容易地去除。因此，即便使用更多的N-Fmoc保護胺基酸或N-Fmoc保護胜肽，相較於先前方法不會產生殘留的問題。
作為縮合劑，本發明中並未限制，能夠使用胜肽合成中一般性所用的縮合劑，並且不限定於該等縮合劑，能夠列舉例如：4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(DMT-MM)、O-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU(6-Cl))、O-(苯并三唑-1-基) -1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TCTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亞乙基胺基氧基)二甲基胺基-嗎啉基-碳離子六氟磷酸鹽(COMU)、二異丙基碳二醯亞胺(DIPCI)、二環己基碳二醯亞胺(DCC)、及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽(WSC)；較佳是DMT-MM、HBTU、HATU或COMU。縮合劑的使用量，相對於N-Fmoc保護胺基酸，通常是0.7~1.5當量，較佳是0.85~1.0當量。
偶合步驟中，用以促進反應並且抑制外消旋反應等副作用，較佳是添加活化劑。此處所謂的活化劑，是使胜肽鍵結(醯胺鍵結)容易形成之試藥，其在與縮合劑的共存化中，可將胺基酸引導至欲對應的活性酯、對稱酸酐等。作為活化劑，能夠使用胜肽合成中一般性所用的活化劑，本發明中並未限制，能夠列舉例如：HOBt、HOCt、HOAt、HOOBt、HOSu、HOPht、HONb、五氟苯酚等，較佳是HOBt、HOOBt、HOCt、HOAt、HONb、HOSu。活化劑的使用量，相對於N-Fmoc胺基酸，通常是0~4.0當量，較佳是0.1~1.5當量。
使用於偶合步驟的溶劑，能夠使用胜肽合成中一般性所用的溶劑，本發明中並未限制，可列舉例如：DMF(二甲基甲醯胺)、NMP(N-甲基吡咯啶酮)、乙酸乙酯、THF(四氫呋喃)、乙腈、三氯甲烷、二氯甲烷或該等的混合溶劑等，較佳是THF、DMF或該等的混合物。溶劑 的使用量，通常是將經溶解C-載體保護胜肽等的濃度設為0.3M~0.1mM的量，更佳是設為0.2M~1mM的量。
反應溫度，在本發明中可使用胜肽合成中一般性所用的溫度，例如，通常是-20~40℃，較佳是0~30℃的範圍內。反應時間(1循環)，通常是0.5~30小時。
[4.2藉由胺清除劑來形成清除胺基酸活性酯之清除體的步驟]
本發明使用的胜肽製造方法的特徵在於：在胺基酸的偶合步驟之後，在反應系統中添加胺清除劑，來清除(捕獲)未反應的胺基酸活性酯。
作為能夠在本發明中使用的胺清除劑，能夠列舉一級或二級烷胺、或一級或二級芳香族胺、或羥胺。本發明並未限定於上述例子，但作為能夠使用在本發明的烷胺，能夠列舉例如碳數1~14的烷胺，較佳是碳數2~10的烷胺，更佳是碳數2~8的烷胺，進一步較佳是碳數3~4的烷胺。又，作為能夠使用在本發明的芳香族胺，能夠列舉例如碳數1~14的芳香族胺，較佳是碳數6~10的芳香族胺。作為具體的胺清除劑，並未限定於上述例子，而能夠列舉例如：丙胺、甲胺、己胺、苯胺、甲苯胺、2,4,6-三甲基苯胺、甲氧苯胺、乙氧苯胺、羥胺，特佳是丙胺。
胺清除劑的添加量，相對於理論上會殘留的胺基酸當量，通常是1~30當量，較佳是1~15當量，更佳是2~6當量，進一步較佳是3~4當量。若胺清除劑的添加量少於該範圍，胺基酸活性酯的清除(捕獲)會變得不充分，並 且在之後的步驟中會變得不易去除N-Fmoc保護胺基酸或胜肽，另一方面，若多於該範圍，未反應的胺清除劑的去除會變得困難。
[4-3.N末端去保護步驟]
本發明的方法使用的胜肽製造方法中，是在藉由胺清除劑將反應系統中的胺基酸活性酯清除(捕獲)來使清除體形成後，實行由N-Fmoc-C-載體保護胜肽的Fmoc基的去除。由N末端去除Fmoc基，能夠使用胜肽合成中一般性所用的去除方法，本發明中並未限制。未限制去除方法，例如能夠使用DBU和六氫吡啶來實行。又，之後亦能夠使用氯化銨水溶液、氯化鈉水溶液或該兩者來實行水洗。
[4-4.載體保護胜肽的結晶化且分離步驟]
使用本發明的方法之胜肽製造方法中，能夠將經去除Fmoc基之C-載體保護胜肽進行不溶化(使其結晶)並且分離。不溶化，例如，能夠藉由使溶解有C-載體保護胜肽之溶液的組成進行變化來實行。用以使其不溶化(結晶化)的條件，能夠依據所用之載體的種類或經合成之C-載體保護胜肽的種類或長度，來適當選擇。例如，雖然並未限定該條件，但能夠列舉如以下的手段。
(組成變化手段)
作為本發明的方法中較佳用於使溶液組成進行變化的手段，只要是能夠使溶解有C-載體保護胜肽之溶液的組成進行變化的手段，並未特別限制。作為使溶液組成進 行變化之較佳的手段，例如，可列舉添加不良溶劑來進行結晶化的手段，其是在原本的溶解有C-載體保護胜肽之溶液、或將溶液的溶劑經濃縮之後進行。此處，所謂的濃縮，是意指將溶液的一部分或全部餾除。之後，經析出的結晶，例如能夠藉由過濾或離心分離來進行分離。經分離的結晶，較佳是能夠藉由以有機溶劑進行洗滌，將與結晶一起分離出之雜質等由經結晶化的C-載體保護胜肽完全地去除。
本發明中的不良溶劑，是指C-保護胺基酸醯胺會溶解不良的溶劑，亦即，不易溶解或不溶解C-保護胺基酸醯胺的溶劑。所謂不易溶解或不溶解C-保護胺基酸醯胺，只要是在25℃中C-保護胺基酸醯胺的溶解度會成為未滿1質量%之常溫中液狀的溶劑即可，較佳是乙腈、任意比例的含水乙腈、甲醇、任意比例的含水甲醇、水。
如以上所述，只要使用本發明的方法，能夠將由縮合反應(偶合反應)至去保護反應利用一鍋合成來實行。
[4-5.最終去保護步驟]
在最終去保護步驟中，能夠藉由去除具有期望的胺基酸殘基數之C-載體保護胜肽的C-末端的載體，來獲得最終目標物也就是胜肽。
去除C末端的載體的方法並未特別限定，只要使用本身習知的去保護法即可。
例如能夠利用使用有TFA(Trifluoroacetic acid，三氟乙酸)之去保護法，更具體而言，較佳是利用下述比例的三氟乙酸進行去保護：當使用Ka時利用50~100%三氟乙酸；當使用Kb時利用1~100%三氟乙酸；當使用Kc時利用95~100%三氟乙酸；當使用載體D和載體E時利用1~100%三氟乙酸；當使用載體F時利用95~100%的三氟乙酸。
所獲得之最終目標物也就是胜肽，能夠依照胜肽化學中常用的方法，來進行分離精製。例如，藉由將反應混合物進行萃取洗滌、結晶化、色層分析等，能夠分離精製出最終目標物也就是胜肽。
藉由本發明的胜肽合成方法所製造之胜肽的種類並未特別限定，胜肽的胺基酸殘基數，例如較佳是數十個以下左右。藉由本發明的胜肽合成方法所獲得之胜肽，能夠與既存或未知的合成胜肽或天然胜肽同樣地利用在各式各樣的技術領域，例如醫藥、食品、化妝品、電子材料等技術領域中，並且未限定於該等技術領域。
[實施例]
以下，將下述所顯示之序列的胜肽作為例子來表示合成方法，但本發明並未限定於該等例子。
(胜肽A)H-Lys(Boc)Ala-Okb
(胜肽B)Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-OH
(胜肽C)H-Gln(Trt)-Ser(ψMe,Me Pro)-Gly-Leu- Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Okb
(胜肽D)H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH
(胜肽E)H-Ala-Gln(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Leu-OKb
(胜肽F)Fmoc-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH
(胜肽G)HCl．H-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ala-Gln(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-OKb
(胜肽H)H-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Ser-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH
(7Cys-23Cys,SS鍵結)
(胜肽I)H-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OKb
(胜肽J)Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-OH
(胜肽K)Fmoc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-OH
(胜肽L)H-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OKb
(胜肽M)H-D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH
(胜肽N)H-Lys(Boc)-Pro-Pro-Ala-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Pro-Arg(Pbf)-OKb
(胜肽O)Fmoc-Lys(Boc)Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys (Boc)-OH
(胜肽P)Boc-Gly-Ser(tBu)-Ser(n-Octanoyl)-Phe-Leu-Ser(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)- Gln(Trt)-OH
(胜肽Q)Boc-Gly-Ser(tBu)-Ser(n-Octanoyl)-Phe-Leu-Ser(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Pro-Pro-Ala-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Pro-Arg(Pbf)-OKb
(胜肽R)H-Gly-Ser-Ser(n-Octanoyl)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Lys-Leu-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg-OH
本說明書中及以下的實施例中，使用下述略稱。
AAs：1以上的任意的胺基酸殘基
AAx：任意的胺基酸殘基
Boc：三級丁氧基羰基
COMU：(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亞乙基胺基氧基)二甲基胺基-嗎啉基-碳離子六氟磷酸鹽
CPME：環戊基甲基醚
DBU：1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-十一烯
DCM：二氯甲烷
DIPCI：二異丙基碳二醯亞胺
DMAP：N,N-二甲基-4-胺基吡啶
DMF：N,N-二甲基甲醯胺
DMT-MM：4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽
EDT：1,2-乙二硫醇
HATU：O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
HBTU：O-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
HOAt：1-羥基-7-氮雜苯并三唑
HOBt：1-羥基苯并三唑
Ka：3,4,5-三-十八烷氧基芐基
Kb：2,4-二-二十二烷氧基芐基
Kc：3,5-二-二十二烷氧基芐基
Me：甲基
Oxyma：氰基(羥亞胺基)乙酸乙酯
Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基
Su：琥珀酸醯亞胺基
tBu：三級丁基
TFA：三氟乙酸
TFE：2,2,2-三氟乙醇
THF：四氫呋喃
TIS：三異丙基矽烷
WSC‧HCl：1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二醯亞胺 鹽酸鹽
(一般合成法)
以下顯示本實施例中所使用之一般合成法。
(1)[去Fmoc一般合成法]
將起始原料以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加六氫吡啶(1.5當量) 和DBU(1當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸，然後在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=9：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，並且以乙腈：水=9：1之混合液進行懸洗，進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得去Fmoc體。
(2)[胺基酸縮合一般合成法]
將起始原料以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加Fmoc-AAx-OH(1.3當量)、DMT-MM(1.13當量)及DIPEA(1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且實行兩次乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得胺基酸縮合物。
以下，顯示了使用於本發明的實施例之去保護法，其具有本發明的方法的特徵也就是在胺清除劑的存在下進行的去保護法。作為胺清除體的例子，顯示了使用丙胺的例子。
(3)[添加有胺清除劑之1pot(一鍋)縮合去保護法]
將起始原料以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加Fmoc-AAx-OH(1.3當量)、DMT-MM(1.13當量)及DIPEA(1.13當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(1當量)、六氫吡啶(1.5當量)及DBU(8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸，然後在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=1：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，並且利用乙腈：水=9：1之混合液進行懸洗，進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得去胺基酸縮合物。
(4)[添加有胺清除劑並且以氯化銨水溶液實行洗滌之一鍋縮合去保護法]
將起始原料以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加Fmoc-AAx-OH(1.3當量)、DMT-MM(1.13當量)及DIPEA(1.13當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(1當量)、六氫 吡啶(1.5當量)及DBU(8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和氯化銨水溶液：水=1：2之溶液，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=1：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，並且利用乙腈：水=9：1之混合液進行懸洗，進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得去胺基酸縮合物。
繼而，顯示將使用於本發明的載體由胜肽進行去保護(切除)的方法。
(5)[Kb保護基一般去保護法]
將原料以在DCM(二氯甲烷)中成為0.01M的方式進行溶解，然後添加該DCM的1/10量的TFE，並且進一步添加該DCM量的1/100量的TFA，在室溫中攪拌30分鐘。將沉澱物過濾，並且將濾液以在DIPEA中成為pH=9的方式進行調整，然後在減壓下餾去溶劑。在殘渣中添加水，將經析出的沉澱物過濾，然後將所獲得之固形物溶 解在THF和甲苯中後，在減壓下進行餾除。在所獲得之固形物中實行3次添加二異丙基醚的懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得去Kb保護體。
以下，顯示使用本發明的方法之胜肽合成(實施例1)中間體(化合物2)的合成
[化合物1的合成]
將2,4-二-二十二烷氧基芐醇(標示為「Kb-OH」)(3.79g，5.00mmol)溶解在DCM(50mL)中，然後添加Fmoc-Ala-OH(2.34g，7.50mmol，1.5當量)、DIPCI(1169μL，7.50mmol，1.5當量)及DMAP(31mg，0.25mmol，0.05當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加丙胺(411μL，5.00mmol，1.0當量)，在室溫中攪拌30分鐘。將沉澱物過濾，並且在減壓下餾除濾液。在殘渣中添加MeOH，將經析出的沉澱物過濾，實行2次MeOH懸洗，並且實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物1(5.02g，95.5%)。
[化合物2的合成]
將化合物1(5.00g，4.76mmol)溶解於THF(86mL)與DMF(10mL)之混合液中，添加六氫吡啶(707μL，7.14mmol，1.5當量)和DBU(712μL，4.76mmol，1當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸，然後在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=9：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，利用乙腈：水=9：1之混合液進行懸洗，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物2(4.05g，98.3%)。
(比較例1)H-Lys(Boc)Ala-OKb的二階段合成
[化合物3的合成]
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.2mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。在減壓下餾除溶劑，在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且實行2次乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物3(128.5mg，定量)。
[化合物4的合成]
將化合物3(119mg，0.093mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.2mL)之混合液中，然後添加六氫吡啶(14μL，0.14mmol，1.5當量)和DBU(28μL，0.28mmol，2當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸，然後在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=1：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，利用乙腈：水=9：1之混合液進行懸洗，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物4(92.5mg，90.7%)。
(實施例2)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(1)
將以實施例1所獲得之化合物2(173mg，0.2mmol)溶解於THF(4mL)與DMF(0.4mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(122mg，0.26mmol，1.3當量)、DMT-MM(65mg，0.226mmol，1.13當量)及DIPEA(42μL，0.24mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作 為胺清除劑的丙胺(19.7μL，0.24mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸，然後在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=1：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，利用乙腈：水=9：1之混合液進行懸洗，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物4(92.5mg，90.7%)。
(實施例3)H-Lys(Boc)Lys(Boc)Ala-OKb(化合物5)之添加有胺清除體的合成
將以實施例2所獲得之化合物4(109mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.2mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(9.9μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加六氫吡啶(15μL， 0.15mmol，1.5當量)和DBU(105μL，1.4mmol，7當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物5(115.2mg，87.2%)。
(實施例4)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(2)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.2mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、HBTU(44mg，0.113mmol，1.13當量)、HOBt(18mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(87μL，0.5mmol，1.5當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(9.9μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加六氫吡啶(15μL，0.15mmol，1.5當量)和DBU(120μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(109.2mg，99.9%)。
(實施例5)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(3)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.2mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、HATU(44mg，0.113mmol，1.13當量)、HOAt(16mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(87μL，0.5mmol，1.5當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(9.9μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加六氫吡啶(15μL，0.15mmol，1.5當量)和DBU(120μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(103.5mg，94.7%)。
(實施例6)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(4)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.2mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、COMU(50mg，0.113mmol，1.13當量)、Oxyma(17mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(87 μL，0.5mmol，5當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(9.9μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加六氫吡啶(15μL，0.15mmol，1.5當量)和DBU(120μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(105.7mg，96.7%)。
(實施例7)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(5)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(2.5μL，0.03mmol，0.3當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(105.3mg，96.3%)。
(實施例8)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(6)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當 量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(4.9μL，0.06mmol，0.6當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(105.6mg，96.6%)。
(實施例9)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(7)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(19.7μL，0.24mmol，2.4當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(105.6mg，96.6%)。
(實施例10)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(8)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(37μL，0.45mmol，4.5當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(105.2mg，96.2%)。
(實施例11)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(9)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的40%甲胺水溶液(10.3μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(101.6mg，93.0%)。
(實施例12)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(10)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的50%羥胺水溶液(7.1μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(104.1mg，95.2%)。
(實施例13)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(11)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的己胺(15.9μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL， 1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(104.6mg，95.7%)。
(實施例14)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(12)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的癸胺(15.9μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(107.5mg，98.4%)。
(比較例2)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有本發明以外的胺清除體的合成(13)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(61mg，0.13mmol，1.3當量)、DMT-MM(32mg，0.113mmol，1.13當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的2-胺醇(7.2μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加 HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(103.6mg，94.8%)。
(實施例15)H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)之添加有胺清除體的合成(14)
將以實施例1所獲得之化合物2(86mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.1mL)之混合液中，然後添加Fmoc-Lys(Boc)-OH(187mg，0.4mmol，4.0當量)、DMT-MM(100mg，0.36mmol，3.6當量)及DIPEA(21μL，0.12mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(99μL，1.2mmol，12當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBT(30.6mg，0.26mmol，1當量)、六氫吡啶(30μL，0.3mmol，1.5當量)及DBU(239μL，1.6mmol，8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。以下，與實施例2同樣地進行，來獲得化合物4(104.2mg，95.3%)。
(實施例16)藉由HPLC(high-performance liqid chromatography，高效能液相層析術)之H-Ala-OKb(化合物2)、H-Lys(Boc)Ala-OKb(化合物4)、H-Lys(Boc)Lys(Boc)Ala-OKb(化合物5)的純度測定
(1)樣品製作(共通)
量取利用上述各實施例及比較例所獲得之化合物1mg，溶解於0.5mL的THF中，然後添加0.1M Fmoc-OSu THF溶液(20μL，0.02mmol，約2當量)和0.2M DIPEA THF溶液(10μL，0.02mmol，約2當量)，在室溫中攪拌1小時。風乾後，以乙腈進行3次懸洗，然後進行減壓乾燥。在所獲得之固形物中添加HPLC用THF(不含穩定劑)1mL來溶解，並且利用0.2μm的膜過濾器來實行過濾，然後將所獲得之濾液設為HPLC用樣品，供以HPLC測定。
(2)HPLC測定
利用以下的條件來實行HPLC測定
〈逆相HPLC〉
管柱：逆相C4管柱
移動相A：THF：CH3CN=8：2混合液
移動相B：含0.1%TFA之水
流速：0.2mL/分鐘
梯度：由移動相A 70%至100%30分鐘
偵測波長：254nm
〈正相HPLC〉
管柱：正向二氧化矽凝膠管柱
移動相A：乙酸乙酯
移動相B：正己烷
流速：0.2mL/分鐘
梯度：由移動相A 0%至100%30分鐘
偵測波長：280nm
將結果顯示於以下的表1。
(實施例17)HCl．H-Ile-Gly-OKb(化合物14)之合成
[化合物6的合成]
將2,4-二-二十二烷氧基芐醇(標示為「Kb-OH」)(1.51g，2.00mmol)溶解在DCM(50mL)中，然後添加Fmoc-Gly-OH(892mg，3.0mmol，1.5當量)、DIPCI(467μL，3.0mmol，1.5當量)及DMAP(12mg，0.1mmol，0.05當量)，在室溫中攪拌 30分鐘。將沉澱物過濾，並且在減壓下餾除濾液。在殘渣中添加MeOH，將經析出的沉澱物過濾，進行2次MeOH懸洗，並且實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物6(2.01g，97.1%)。
[化合物7的合成]
將所獲得之化合物6(2.01g，0.1mmol)依照去-Fmoc一般合成法來實行去Fmoc操作，來獲得化合物7(1.84g，定量)。
[化合物8的合成]
將所獲得之化合物7(1.84g，0.1mmol)依照胺基酸一般縮合法，將Fmoc-Ile-OH進行縮合，來獲得化合物8(1.99g，88.9%)。
[化合物9的合成]
將所獲得之化合物8(662mg，0.58mmol)依照去-Fmoc一般合成法，實行去Fmoc操作，來獲得化合物9(505mg，91%)。
(比較例3)Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-OKb(化合物10)的合成
針對以實施例17所獲得之化合物9，利用重複進行胺基酸一般縮合法和去-Fmoc一般合成法之方法，導入以下的胺基酸，來獲得化合物10。
第3個殘基：Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第4個殘基：Fmoc-Asp(OtBu)-OH
第5個殘基：Fmoc-Met-OH
第6個殘基：Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第7個殘基：Fmoc-Gly-OH
(比較例4)Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-OH(化合物11)的合成。
針對以比較例2所獲得之化合物10，依照Kb保護基一般去保護法來實行去Kb操作，來獲得化合物11。將所獲得之化合物以LC-MS(Liquid Chromatography Mass Spectrometry，液相層析質譜)進行測定時，觀測到有1643.7[M+Gly+H+]、1995.2[M+Arg(Pbf)+H+]、1758.1[M+Asp(OtBu)+H+]、1718.0[M+Met+H+]。
(實施例18)Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-OKb(化合物10)藉由添加有胺清除劑之1pot(一鍋)縮合去保護法的合成
針對以實施例18所獲得之化合物9，利用重複進行添加有胺清除劑之1pot(一鍋)縮合去保護法之方法，導入以下的胺基酸，來獲得化合物10。
以下胺基酸的導入是依照胺基酸一般縮合法來實行。
第3個殘基：Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第4個殘基：Fmoc-Asp(OtBu)-OH
第5個殘基：Fmoc-Met-OH
第6個殘基：Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第7個殘基：Fmoc-Gly-OH
(實施例19)Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-OH(化合物11)的合成
針對以實施例18所獲得之化合物10，依照Kb保護基一般去保護法來實行去Kb操作，來獲得化合物11。將所獲得之化合物以LC-MS進行測定時，並未觀測到1643.7[M+Gly+H+]、1995.2[M+Arg(Pbf)+H+]1758.1[M+Asp(OtBu)+H+]、1718.0[M+Met+H+]。
(實施例20)H-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Okb(化合物14)
[化合物12的合成]
將2,4-二-二十二烷氧基芐醇(標示為「Kb-OH」)(3.79g，5.00mmol)溶解在DCM(50mL)中，然後添加Fmoc-Tyr(tBu)-OH(3.45g，7.50mmol，1.5當量)、DIPCI(1169μL，7.50mmol，1.5當量)及DMAP(31mg，0.25mmol，0.05當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加丙胺(811μL，10.0mmol，2.0當量)，在室溫中攪拌30分鐘。將沉澱物過濾，並且在減壓下餾除濾液。在殘渣中添加MeOH，將經析出的沉澱物過濾，實行2次MeOH懸洗，並且實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物12(6.06g，定量)。
[化合物13的合成]
將化合物12(6.06g，5.00mmol)溶解於THF(86mL)與DMF(10mL)之混合液中，然後添加六氫吡啶(743μL，7.5mmol，1.5當量)和DBU(748μL，5.00mmol，1當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=2：1之溶液然後進行洗滌、液液分離後將水層廢棄，並且進一步利用反應溶劑 的兩倍量的飽和食鹽水進行洗滌、液液分離後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=9：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，並且利用乙腈：水=9：1之混合液進行懸洗，進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物13(4.70g，92.9%)。
(實施例21)H-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Okb(化合物14)的合成
針對化合物13，利用重複進行一鍋縮合去保護法之方法，導入以下的胺基酸，來獲得化合物14，該一鍋縮合去保護法是添加有胺清除劑，並且利用氯化銨水溶液來實行洗滌。
第1個殘基：Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第2個殘基：Fmoc-Phe-OH
第3個殘基：Fmoc-Ser(tBu)-OH
(實施例22)H-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Okb(化合物15)的合成
將所獲得之化合物14(7.58g，4.43mmol)以在THF中成為0.05M的方式進行溶解，並且添加DIPEA(1.93mL，11.1mmol，2.5當量)。將Fmoc-Asn(Trt)-OH(3.44g，5.76mmol，1.3當量)、COMU(2.28g，5.32mmol，1.3當量)及Oxyma(0.76g，5.32mmol，1.3當量)溶解在DMF8.9mL中，然後添加DIPEA(1.93mL， 11.1mmol，2.5當量)，在室溫中攪拌2分鐘。將所獲得之混合液添加化合物14的THF溶液中，在室溫中攪拌10分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(728μL，8.86mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加六氫吡啶(658μL，6.65mmol，1.5當量)和DBU(4.64mL，31.0mmol，7當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和氯化銨水溶液：水=1：2之溶液，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=9：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物15(8.74g，95.4%)。
(實施例23)H-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Okb的合成
針對所獲得之化合物15，利用重複進行一鍋縮合去保護法之方法，導入以下的胺基酸，來獲得化合物16，該一鍋縮合去保護法是添加有胺清除劑，並且利用氯化銨水溶液來實行洗滌。
第6個殘基：Fmoc-Cys(Trt)-OH
第7個殘基：Fmoc-Gly-OH
第8個殘基：Fmoc-Leu-OH
第9個殘基：Fmoc-Gly-OH
(實施例24)H-Gln(Trt)-Ser(ψMe,Me Pro)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Okb(化合物17)的合成
將以實施例23所獲得的化合物16(10.68g，4.06mmol)以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加Fmoc-Gln(Trt)-Ser(ψMe,Me Pro)-OH(3.88g，5.28mmol，1.3當量)、DMT-MM(1.30g，4.59mmol，1.13當量)及DIPEA(845μL，4.87mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(665μL，8.12mmol，2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加六氫吡啶(601μL，6.09mmol，1.5當量)和DBU(6.05mL，40.6mmol，10當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和氯化銨水溶液：水=1：2之溶液，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添 加水，將經析出的沉澱物過濾，以正己烷進行懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物17(12.85g，100.0%)。當將所獲得之化合物17在TLC(正己烷：乙酸乙酯=9：1)中實行分析時，並未發現二苯富烯的存在。
(實施例25)H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH(化合物21)的合成
[化合物18的合成]
將3,4,5-三-十八烷氧基芐醇(標記為「Ka-OH」)(9.14g，10.00mmol)溶解在DCM(100mL)，然後添加Fmoc-Arg(Pbf)-OH(9.73g，15.00mmol，1.5當量)、DIPCI(2337μL，15.00mmol，1.5當量)及DMAP(61mg，0.50mmol，0.05當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加丙胺(1644μL，20.0mmol，2.0當量)，在室溫中攪拌30分鐘。將沉澱物過濾，並且在減壓下餾除濾液。在殘渣中添加MeOH，將經析出的沉澱物過濾，實行MeOH懸洗，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物18(15.40g，99.7%)。
[化合物19的合成]
將化合物18(15.40g，10.00mmol)溶解於THF(179mL)與DMF(20mL)之混合液中，然後添加六氫吡啶(1480μL，14.9mmol，1.5當量)和DBU(1490μL，9.96mmol，1當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=2：1之溶液然後進行洗滌、液液分離後將水層廢棄，並且進一步利用反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水進行洗滌、液液分離後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且利用乙腈進行懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物19(14.39g，定量)。
[化合物20(HCl．H-D-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser(tBu)-D-Tic-Oic-Arg(Pbf)-OKa)的合成]
針對化合物19(13.52g，9.95mmol)，利用重複使用以下的方法，來獲得化合物20(24.31g，81.6%)。
將起始原料以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加Fmoc-AAx-OH(將當量顯示於反應條件表的AA當量)、顯示於下表的縮合劑(將當量顯示於反應條件表的縮合劑當量)、顯示於下表的縮合助劑(將當量顯示於反應條件表的縮合助劑當量)及DIPEA(將當量顯示於反應條件表的鹼當量)，將縮合反應以反應條件表中所示的方式實行。繼而，添加作為胺清除劑的丙胺(將當量顯示於反應條件表的胺清除劑當量)，在室溫中攪拌30分鐘。之後，添加HOBt(將當量顯示於反應條件表的HOBt當量)、六氫吡啶(1.5當量)及DBU(將當量顯示於反應條件表的DBU當量)，在室溫中攪拌10分鐘。繼而，當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。
在反應液中，添加反應溶劑的兩倍量的洗滌條件表中所示之第1次洗滌液，然後進行洗滌、液液分離，並且將水層廢棄。依據必要，添加反應溶劑的兩倍量的洗滌條件表中所示之第2次洗滌液，然後進行洗滌、液液分離，並且將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量之飽和食鹽水，然後進行洗滌、液液分離，並且將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加洗滌條件表中所示之不良溶劑，將經析出的沉澱物過濾，並且添加洗滌條件表中所示之懸洗溶劑實行懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得胺基酸縮合物。
[表2]
[化合物21的合成]
將化合物20(10.0g，3.1mmol)溶解於TFA：TIS：水=90：2.5：7.5之混合液155mL中，在室溫中攪拌4小時。將反應液使用矽藻土進行過濾，然後將過濾殘渣以30mL的TFA洗滌、過濾，並且與所獲得的濾液一併地一邊攪拌一邊加入1.85L的冷異丙醚中。將所獲得之固形物過濾，並且將過濾殘渣進一步以冷異丙醚進行2次懸洗，然後過濾。將所獲得之固形物進行乾燥，來獲得化合物21(5.17g，定量%，HPLC純度77.36%)。將所獲得之化合物以LC-MS進行測定時，觀測到有652.9[M+2H+]/2。
(實施例26)H-Ala-Gln(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-OKb(化合物22)的合成
針對以實施例24所獲得之化合物17，利用一鍋縮合去保護法，導入Fmoc-Ala-OH，來獲得化合物22(12.42g，定量%)，該一鍋縮合去保護法是添加有胺清除劑，並且利用氯化銨水溶液來實行洗滌。
(實施例27)Fmoc-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH(化合物26)的合成
[化合物23(HCl．H-Gly-OKb)的合成]
針對Kb-OH(7.57g，10.0mmol)，將Fmoc-Gly-OH與實施例17同樣地使用來獲得化合物23(7.90g，93.1%)。
[化合物24(HCl．H-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-OKb)的合成]
導入下述殘基：
第2個殘基Fmoc-Phe-OH
第3個殘基Fmoc-Cys(Trt)-OH
第4個殘基Fmoc-Ser(tBu)-OH
第5個殘基Fmoc-Ser(tBu)-OH
第6個殘基Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第7個殘基Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第8個殘基Fmoc-Leu-OH
針對化合物23(7.89g，9.25mmol)，利用重複進行以下的方法依序導入胺基酸，來獲得化合物24(20.27g，85.5%)。
將起始原料，使用一鍋縮合去保護法(但是，是使用Fmoc-胺基酸(1.3當量)、DMT-MM(1.13當量)，並且省去氯化銨水洗滌的方法)，來獲得胺基酸縮合物，該一鍋縮合去保護法是添加有胺清除劑，並且利用氯化銨水溶液來實行洗滌。
[化合物25(Fmoc-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-OKb)的合成]
針對化合物24(20.26g，7.91mmol)，藉由胺基酸縮合一般合成法，導入Fmoc-Ser(tBu)-OH，來獲得化合物25(22.56g，定量)。
[化合物26(Fmoc-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH)的合成]
針對化合物25(22.56g，7.80mmol)，藉由使用Kb保護基一般去保護法，來獲得化合物26(22.56g，定量)。
(實施例28)HCl．H-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ala-Gln(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-OKb(化合物28)的合成[化合物27(HCl．H-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ala-Gln(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-OKb)的合成]
將以實施例19所獲得之化合物11(11.33g，5.8mmol，1.5當量)溶解於DMF(38.7mL)，然後添加THF(348mL)進行稀釋，並且在以實施例26所獲得之化合物22(12.42g，3.87mmol，1.0當量)中，添 加HATU(1.99g，5.22mmol，1.35當量)、HOAt(711mg，5.22mmol，1.35當量)及DIPEA(3369μL，19.3mmol，5.0當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(318μL，3.87mmol，1當量)，在室溫中攪拌30分鐘。進一步，添加六氫吡啶(575μL，5.80mmol，1.0當量)和DBU(5.79mL，38.7mmol，10當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和氯化銨水溶液：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=9：1之混合液，將經析出的沉澱物過濾，並且實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物27(15.29g，定量)。
[化合物28(HCl．H-Ser(tBu)-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Phe-Gly-Gly-Arg(Pbf)-Met-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ala-Gln(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-OKb)的合成]
針對化合物27(17.63g，3.87mmol)，使用以實施例27所獲得之化合物26(12.47g，5.80mmol，1.5當量)，實行與化合物27的合成同樣的反應，來獲得化合物28(26.83g，定量)。
(實施例29)H-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Ser-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH(7Cys-23Cys，SS鍵結)(化合物30)的合成
[化合物29(H-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Ser-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH)的合成]
將化合物28(6.93g，1.0mmol)溶解於TFA：TIS：水：EDT=80：5：10：5之混合液200mL中，在室溫中攪拌4小時。將反應液使用矽藻土來過濾，將過濾殘渣以100mL的TFA進行洗滌、過濾，並且與所獲得之濾液一併地一邊攪拌一邊加入3.0L的冷異丙醚中。將所獲得之固形物過濾，並且將過濾殘渣進一步以冷異丙醚進行2次懸洗，然後過濾。將所獲得之固形物進行乾燥，來獲得化合物29(3.90g，定量，HPLC純度55.22%)。
[化合物30(H-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Ser-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH(7Cys-23Cys，SS鍵結))的合成]
將化合物29(3.90g，1.0mmol)溶解於水3.77L中，以吡啶調整至pH7.1，攪拌一晚。將所獲得之反應液進行冷凍乾燥，來獲得化合物30(3.47g，92.2%，HPLC純度65.07%)。當將所獲得之化合物以LC-MS進行測定時，觀測到有1027.2[M+3H+]/3。
(實施例30)H-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OKb(化合物33)的合成
[化合物31的合成]
針對Kb-OH(2.27g，3.00mmol)，將Fmoc-Leu-OH與實施例18同樣地使用，來獲得化合物31(3.26g，99.6%)。
[化合物32的合成]
針對化合物31(3.26g，2.98mmol)，使用去-Fmoc一般合成法，來獲得化合物32(2.72g，定量)。
[化合物33(H-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OKb)的合成]
導入下述殘基：
第2個殘基Fmoc-Tyr(tBu)-OH
第3個殘基Fmoc-Glu(OtBu)-OH
第4個殘基Fmoc-Glu(OtBu)-OH
第5個殘基Fmoc-Pro-OH
第6個殘基Fmoc-Ile-OH
第7個殘基Fmoc-Glu(OtBu)-OH
針對化合物32(2.70g，2.98mmol)，利用重複進行以下的方法依序導入胺基酸，來獲得化合物33(4.40g，77.7%)。
將起始原料以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加Fmoc-胺基酸(1.3當量)、DMT-MM(1.2當量)及DIPEA(1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBt(1當量)(僅在導入第2個殘基時)、六氫吡啶(1.5當量)及DBU(7當量，僅在導入第2個殘基時是8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且利用乙腈進行懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得胺基酸縮合物。
(實施例31)Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-OH(化合物38)的合成
[化合物34的合成]
針對Kb-OH(3.41g，4.50mmol)，將Fmoc-Glu(OtBu)-OH與實施例18同樣地使用，來獲得化合物34(5.05g，96.3%)。
[化合物35的合成]
針對化合物34(5.04g，4.33mmol)，使用去-Fmoc一般合成法，來獲得化合物35(4.24g，定量)。
[化合物36(HCl．H-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-OKb)的合成]
針對化合物35(4.23g，4.33mmol)，依照以下所示的反應條件表和洗滌條件表，利用與化合物20的合成之同樣的方法，來獲得化合物36(7.05g，90.8%)。
[化合物37的合成]
將化合物36(7.04g，3.90mmol)溶解在THF(65mL)與DMF(7.2mL)之混合液，然後添加Fmoc-Gly-OH(1.39g，4.68mmol，1.2當量)、DMT-MM(1.20g，4.32mmol，1.11當量)及DIPEA(753μL，4.32mmol，1.11當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(888μL，10.8mmol，2.77當量)，在室溫中攪拌30分鐘。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=9：1之溶液進行冷卻，將經析出的沉澱物過濾，並且實行乙腈懸洗，進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物37(7.16g，90.4%)。
[化合物38(Fmoc-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-OH)的合成]
針對化合物37(2.20g，1.09mmol)，利用使用Kb保護基一般去保護法，來獲得化合物38(1.21g，83.0%)。
(實施例32)Fmoc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-OH(化合物42)的合成
[化合物39(HCl．H-Gly-OKb)的合成]
針對Kb-OH(3.41g，4.5mmol)，將Fmoc-Gly-OH與實施例17同樣地使用，來獲得化合物39(3.58g，90.2%)。
[化合物40(HCl．H-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-OKb)的合成]
導入下述殘基：
第2個殘基Fmoc-Gly-OH
第3個殘基Fmoc-Pro-OH
第4個殘基Fmoc-Arg(Pbf)-OH
第5個殘基Fmoc-Pro-OH
針對化合物39(3.33g，3.91mmol)，利用重複進行以下的方法依序導入胺基酸，來獲得化合物40(5.11g，85.7%)。
將起始原料以在THF：DMF(9/1)之混合液中成為0.05M的方式進行溶解，然後添加Fmoc-胺基酸(1.3當量)、DMT-MM(1.2當量)及DIPEA(1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加HOBt(1當量)、六氫吡啶(1.5當量)及DBU(7當量，僅在導入第2個殘基時是8當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩 倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且利用乙腈進行懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得胺基酸縮合物。
[化合物41的合成]
將化合物40(5.10g，3.38mmol)溶解在THF(61mL)與DMF(6.7mL)之混合液中，然後添加Fmoc-D-Phe-OH(1.70g，4.39mmol，1.3當量)、DMT-MM(1.12g，4.05mmol，1.2當量)及DIPEA(705μL，4.05mmol，1.2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(555μL，6.75mmol，2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈：水=9：1之溶液進行冷卻，將經析出的沉澱物過濾，並且實行乙腈懸洗，進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物41(5.92g，95.2%)。
[化合物42(Fmoc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-OH)的合成]
針對化合物41(1.84g，1.0mmol)，利用使用Kb保護基一般去保護法，來獲得化合物42(0.942g，85.3%)。
(實施例33)H-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OKb(化合物44)的合成
[化合物43(HCl．H-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OKb)的合成]
針對以實施例30所獲得之化合物33(568mg，0.3mmol)，使用以實施例31所獲得之化合物38(573mg，0.45mmol，1.5當量)，與化合物27的合成同樣地進行反應，實行液液洗滌，在濃縮殘渣中添 加乙腈：水=9：1之混合液，將經析出的沉澱物離心分離，以甲醇進行懸洗，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物43(725mg，82.6%)。
[化合物44(HCl．H-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-OKb)的合成]
針對化合物43(715mg，0.245mmol)，使用以實施例32所獲得之化合物42(405mg，0.33mmol，1.5當量)，實行與化合物32的合成同樣的操作，來獲得化合物44(863mg，93.2%)。
(實施例34)H-D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH(化合物45)的合成
將化合物44(300mg，0.079mmol)溶解於TFA：TIS：水=95：2.5：2.5之混合液8mL中，在室溫中攪拌3小時。將反應液使用矽藻土來過濾，將過濾殘渣以3mL的TFA進行洗滌、過濾，並且與所獲得的濾液一併地一邊攪拌一邊加入120mL的冷異丙醚中。將所獲得的固形物離心分離，並且將過濾殘渣進一步以冷異丙醚進行4次懸洗，然後離心分離。將所獲得之固形物進行乾燥，來獲得化合物45(147.7mg，77.4%，HPLC純度74.49%)。
(實施例35)H-Lys(Boc)-Pro-Pro-Ala-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Pro-Arg(Pbf)-OKb(化合物50)的合成
[化合物46的合成]
針對Kb-OH(2.27g，3.0mmol)，將Fmoc-Arg(Pbf)-OH(2.92g，4.5mmol，1.5當量)與實施例17同樣地使用，來獲得化合物46(4.20g，定量)。
[化合物47的合成]
針對化合物46(4.15g，2.99mmol)，使用去-Fmoc一般合成法，來獲得化合物47(3.51g，97.6%)。
[化合物48的合成]
將化合物47(3.5g，2.91mmol)溶解在THF(52mL)與DMF(5.8mL)之混合液中，添加Fmoc-Pro-OH(1.28g，3.78mmol，1.3當量)、DMT-MM(943mg，3.41mmol，1.17當量)及DIPEA(913μL，5.24mmol，1.8當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(479μL，5.82mmol，2當量)，在室溫中攪拌30分鐘。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且實行乙腈懸洗，將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物48(4.24g，98.0%)。
[化合物49的合成]
將化合物48(4.23g，2.85mmol)溶解在THF(51mL)與DMF(6mL)之混合液中，然後添加HOBt(388mg，2.85mmol，1.0當量)、六氫吡啶(423μL，4.27mmol，1.5當量)及DBU(852μL，5.69mmol，2當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和氯化銨水溶液：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物49(3.75g，定量)。
[化合物50(H-Lys(Boc)-Pro-Pro-Ala-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Pro-Arg(Pbf)-OKb)的合成]
針對化合物49(3.69g，2.84mmol)，依照以下所示的反應條件表和洗滌條件表，利用與化合物20的合成之同樣的方法，來獲得化合物50(6.02g，79.9%)。
[表6]反應條件表
(實施例36)Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-OH(化合物55)的合成
[化合物51的合成]
針對Kb-OH(1.52g，2.0mmol)，將Fmoc-Lys(Boc)-OH與實施例18同樣地使用，來獲得化合物51(2.48g，定量)。
[化合物52的合成]
針對化合物51(2.41g，1.99mmol)，使用去-Fmoc一般合成法，來獲得化合物52(2.01g，98.9%)。
[化合物53(HCl．H-Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-OKb)的合成]
針對化合物52(2.01g，1.96mmol)，依照以下所示的反應條件表和洗滌條件表，利用與化合物20的合成之同樣的方法，來獲得化合物53(4.38g，78.2%)。
[表8]反應條件表
[化合物54的合成]
針對化合物53(4.36g，1.53mmol)，使用Fmoc-Lys(Boc)-OH(934mg，1.99mmol，1.3當量)和DIPEA(481μL，2.76mmol，1.8當量)，實行與化合物48同樣的操作，來獲得化合物54(5.11g，定量)。
[化合物55(Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-OH)的合成]
針對化合物54(2.55g，0.764mmol)，利用使用Kb保護基一般去保護法，來獲得化合物55(2.26g，定量)。
(實施例37)Boc-Gly-Ser(tBu)-Ser(n-octanoyl)-Phe-Leu-Ser(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Gln(Trt)-OH(化合物61)的合成
[化合物56的合成]
針對Kb-OH(2.27g，3.00mmol)，將Fmoc-Gln(Trt)-OH與實施例18同樣地使用，來獲得化合物56(4.21g，定量)。
[化合物57的合成]
針對化合物56(4.04g，2.99mmol)，使用去-Fmoc一般合成法，來獲得化合物57(3.62g，定量)。
[化合物58(HCl．H-Ser(tBu)-Ser-Phe-Leu-Ser(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Gln(Trt)-OKb)的合成]
針對化合物57(3.48g，2.99mmol)，依照以下所示的反應條件表和洗滌條件表，利用與化合物20的合成之同樣的方法，來獲得化合物58(4.60g，72.1%)。
[表10]反應條件表
[化合物59的合成]
針對化合物58(4.59g，1.87mmol)，使用Boc-Gly-OH(425mg，2.43mmol，1.3當量)和DIPEA(1170μL，6.72mmol，3.6當量)，實行與化合物48同樣的操作，來獲得化合物59(4.55g，94.5%)。
[化合物60的合成]
將化合物59(4.55g，1.76mmol)溶解在DCM(35mL)中，然後添加辛酸(628mg，3.96mmol，2.25當量)、WSC‧HCl(760mg，3.96mmol，2.2當量)及DMAP(11mg，0.088mmol，0.05當量)，在室溫中攪拌30分鐘，然後在40℃中攪拌1小時。添加作為胺清除劑的丙胺(1086μL，13.2mmol，7.5當量)，在室溫中攪拌30分鐘。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和氯化銨水溶液：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步，添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，並且進行洗滌、液液分離，然後將水層 廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物60(4.48g，94.1%)。
[化合物61(Boc-Gly-Ser(tBu)-Ser(n-Octanoyl)-Phe-Leu-Ser(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Gln(Trt)-OH)的合成]
針對化合物60(4.47g，1.65mmol)，利用使用Kb保護基一般去保護法，來獲得化合物61(3.26g，定量)。
(實施例38)Boc-Gly-Ser(tBu)-Ser(n-Octanoyl)-Phe-Leu-Ser(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Pro-Pro-Ala-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Pro-Arg(Pbf)-OKb(化合物63)的合成
[化合物62(HCl．H-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Pro-Pro-Ala-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Pro-Arg(Pbf)-OKb)的合成]
將以實施例35所獲得之化合物50(251mg，0.1mmol)溶解於THF(9mL)與DMF(1.0mL)之混合液中，然後添加以實施例36所獲得之化合物61(443mg，0.15mmol，1.5當量)、DMT-MM(40.0mg，0.405mmol，1.45當量)、及DIPEA(63μL，0.36mmol，3.6當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(25.0μL，0.3mmol，3當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加六氫吡啶(15μL，0.45mmol，1.5當量)和DBU(150μL，3.0mmol，10當量)，在室溫中攪拌10分鐘。當反應液的pH成為6左右時添加濃鹽酸。在反應液中添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水：水=1：2之溶液，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。進一步添加反應溶劑的兩倍量的飽和食鹽水，進行洗滌、液液分離，然後將水層廢棄。將所獲得之有機層在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加乙腈，將經析出的沉澱物過濾，並且進一步實行乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合物62(485mg，定量)。
[化合物63(Boc-Gly-Ser(tBu)-Ser(n-Octanoyl)-Phe-Leu-Ser(tBu)-Pro-Glu(OtBu)-His(Trt)- Gln(Trt)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Pro-Pro-Ala-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Pro-Arg(Pbf)-OKb)的合成]
將化合物62(251mg，0.1mmol)溶解於THF(2mL)與DMF(0.2mL)之混合液中，然後添加以實施例37所獲得之化合物61(295mg，0.15mmol，1.5當量)、DMT-MM(40.0mg，0.405mmol，1.45當量)、及DIPEA(62μL，0.36mmol，3.6當量)，在室溫中攪拌30分鐘。添加作為胺清除劑的丙胺(25.0μL，0.3mmol，3當量)，在室溫中攪拌30分鐘。將反應液在減壓下餾除溶劑。在殘渣中添加冷乙腈，將經析出的沉澱物過濾，進一步實行冷乙腈懸洗，然後將所獲得之固形物進行減壓乾燥，來獲得化合63(562mg，84.4%)。
(實施例39)H-Gly-Ser-Ser(n-Octanoyl)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Lys-Leu-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg-OH(化合物64)的合成
將以實施例38所獲得之化合物63(555mg，0.083mmol)溶解於TFA：TIS：水：EDT=95：2.5：2.5之混合液8mL中，在室溫中攪拌3小時。將反應液使用矽藻土過濾，將過濾殘渣以3mL的TFA洗滌、過濾，並且與所獲得之濾液一併地在室溫中減壓濃縮至4.5mL。將殘渣一邊攪拌一邊加入45mL的冷異丙醚中。將所獲得的固形物離心分離，並且將過濾殘渣進一步以冷異丙醚進行2次懸洗，然後離心分離。將所獲得的固形物進行乾燥，來獲得化合物64(351mg，定量%，HPLC純度68.92%)。將所獲得之化合物以LC-MS進行測定時，觀測到有1119.3[M+3H+]/3。
上述之詳細的記載僅為說明本發明的目的和對象，並未用來限定本案的申請專利範圍。只要不脫離本案的申請專利範圍，藉由本說明書中所述之教示，針對所述之實施態樣之各種的變更和置換，對於所屬技術領域中具有通常知識者而言是為明顯。
[產業上的可利用性]
若使用本發明的胜肽合成方法，在N末端的去保護前，藉由使用清除劑將胺基酸活性物種進行不活性化，即便不將該等由反應系統去除，仍可以防止在去保護 時胺基酸的雙重攻擊。本發明的方法，藉由簡便的手段，能夠解決當去保護時存在於反應系統中的胺基酸活性物種的問題，而通用性優異且有用。又，藉由本發明所合成之胜肽，其胺基酸的缺失或雙重攻擊的問題較少，故根據本發明的方法，能夠合成高產率且高品質的胜肽。

Claims (12)

  1. 一種胜肽合成方法，其包含以下的步驟a~d：a.獲得N-Fmoc-C-載體保護胜肽的步驟，其是在縮合劑的存在下，使N-Fmoc保護胺基酸或N-Fmoc保護胜肽，與C-載體保護胺基酸、C-載體保護胜肽或C-載體保護胺基酸醯胺進行縮合，來獲得N-Fmoc-C-載體保護胜肽，該N-Fmoc保護是利用茀基甲氧羰基來保護N末端，該C-載體保護是利用載體來保護C末端，並且該載體會隨著用以溶解之溶劑的組成變化來進行結晶化；b.添加胺的步驟，其是在反應系統中，添加選自由碳數1~14的烷胺、碳數1~14的芳香族胺、羥胺所組成之群組中的至少一種胺，並且，此處，烷胺或芳香族胺，是一級胺或二級胺；c.將N末端進行去保護的步驟；及，d.結晶化並且分離的步驟，其是使溶解有所獲得的C-載體保護胜肽之溶劑組成進行變化，藉此使該C-載體保護胜肽進行結晶化來進行分離。
  2. 如請求項1所述之胜肽合成方法，其中，前述載體是選自由下述化合物所組成之群組的化合物：具有下述的結構之化合物： 式中，R1及R5是氫原子，R2、R3及R4是碳數8~30的烷氧基，並且，式中，RX是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基， 此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基，再者，上述式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示；具有下述的結構之化合物： 式中，R2、R4及R5是氫原子，R1及R3是碳數12~30的烷氧基，並且，式中，RY是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基， 此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基，再者，上述式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示；及， 具有下述的結構之化合物： 式中，R1、R3及R5是氫原子，R2及R4是碳數12~30的烷氧基，並且，式中，RZ是利用下述式所表示之鍵結在胺基酸或胜肽的C末端之基， 此處，R7表示氫原子、碳數1~6的烷基、苄基或烷氧基取代之苄基，R6表示氫原子、苯基、或烷氧基取代之苯基，再者，上述式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示。
  3. 如請求項1所述之胜肽合成方法，其中，前述載體是選自由下述化合物所組成之群組的化合物： 式中，X是鹵素，Y是8~12的整數，Z是17~29的整數； 式中，X各自獨立地是7~21的整數；及， 式中，X各自獨立地是11~29的整數；再者，上述各式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示。
  4. 如請求項1所述之胜肽合成方法，其中，前述載體是選自由下述化合物所組成之群組中的化合物： 式中，X是氟原子或氯原子； ；及， 再者，上述各式是以鍵結在胺基酸或胜肽的C末端前的狀態來表示。
  5. 如請求項1~4中任一項所述之胜肽合成方法，其中，前述胺是碳數1~10的烷胺或羥胺。
  6. 如請求項5所述之胜肽合成方法，其中，前述胺是碳數3或4的烷胺。
  7. 如請求項1~4中任一項所述之胜肽合成方法，其中，步驟b中的胺當量，相對於在步驟a的縮合反應後理論上所殘留的胺基酸當量，是1~30倍的量。
  8. 如請求項1~4中任一項所述之胜肽合成方法，其中，使前述溶解有所獲得的C-載體保護胜肽之溶液組成進行變化的組成變化手段，是藉由下述方法來進行：將溶液的溶劑進行濃縮，之後添加不良溶劑來進行 固化。
  9. 如請求項8所述之胜肽合成方法，其中，前述不良溶劑，是選自由乙腈、任意比例的含水乙腈、甲醇、任意比例的含水甲醇及水的所組成之群組中的溶劑。
  10. 如請求項1~4中任一項所述之胜肽合成方法，其中，包含下述條件：在步驟d中使用經結晶化分離之C-載體保護胜肽，並且重複實行1次以上的步驟a~步驟d。
  11. 如請求項1~4中任一項所述之胜肽合成方法，其中，進一步包含以下的步驟：e.洗滌步驟，其是將經結晶化分離之C-載體保護胜肽的結晶，利用有機溶劑進行洗滌。
  12. 如請求項1~4中任一項所述之胜肽合成方法，其中，將前述a~c的步驟是利用一鍋合成來實行。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI854013B (zh) * 2019-08-30 2024-09-01 日商日產化學股份有限公司 胜肽化合物之製造方法

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102479601B1 (ko) 2015-12-21 2022-12-22 텍사스 테크 유니버시티 시스템 용액상 gap 펩타이드 합성을 위한 시스템 및 방법
AU2018327171B2 (en) * 2017-08-31 2023-03-09 Daiichi Sankyo Company, Limited Improved method for producing antibody-drug conjugate
JP6531235B1 (ja) * 2017-12-19 2019-06-12 積水メディカル株式会社 新規アルキルジフェニルメタン保護剤
CN111491941B (zh) * 2017-12-19 2023-08-08 积水医疗株式会社 新型烷基二苯甲烷保护剂
CN109988056B (zh) * 2017-12-29 2020-08-07 深圳翰宇药业股份有限公司 一种用于多肽液相合成载体的化合物及其制备方法和用途
DK3778621T5 (da) 2018-04-13 2024-08-19 Jitsubo Co Ltd Peptidsyntesefremgangsmåde
WO2019198834A1 (ja) * 2018-04-13 2019-10-17 Jitsubo株式会社 リュープロレリンの製造方法
US11560401B2 (en) 2018-05-10 2023-01-24 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Method for preparing oligonucleic acid compound
US12024537B2 (en) 2018-05-31 2024-07-02 Sederma Compositions and methods for chemical synthesis
CN109678751A (zh) * 2019-01-07 2019-04-26 广州同隽医药科技有限公司 一种含有二苯甲烷结构的化合物
CN113330021B (zh) * 2019-01-24 2024-10-25 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 肽沉淀方法
CA3126705A1 (en) 2019-02-01 2020-08-06 Gap Peptides Llc Synthesis strategy for gap protecting group
WO2020162393A1 (ja) * 2019-02-04 2020-08-13 日産化学株式会社 ペプチド化合物の製造方法
CN110256277B (zh) * 2019-03-19 2020-12-15 广州同隽医药科技有限公司 一种含有芴环结构的化合物及其应用
CN111825742B (zh) * 2019-04-18 2024-01-30 陈铭 Ctpa作为特种偶合剂用于氨基酸离子液体的多肽固相合成
JP7661880B2 (ja) 2019-04-25 2025-04-15 味の素株式会社 ペプチドの連続的製造方法
CN114981280A (zh) 2019-11-13 2022-08-30 日本新药株式会社 寡核苷酸化合物的制造方法
US20230018780A1 (en) 2019-11-13 2023-01-19 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Method for producing oligonucleic acid compound
JP7709920B2 (ja) * 2019-12-27 2025-07-17 中外製薬株式会社 ペプチド化合物の合成法
JP7063408B1 (ja) 2021-07-02 2022-05-09 ペプチスター株式会社 液相ペプチド製造方法
AU2022332278B2 (en) 2021-08-23 2025-11-20 Eli Lilly And Company Compounds and methods for liquid phase synthesis
JPWO2023106356A1 (zh) * 2021-12-08 2023-06-15
JP7260725B1 (ja) * 2021-12-27 2023-04-18 株式会社トクヤマ ペプチド製造方法、保護基の除去方法、及び除去剤
WO2023127331A1 (ja) * 2021-12-27 2023-07-06 株式会社トクヤマ ペプチド製造方法、保護基の除去方法、除去剤、及びベンジル化合物
CN114315538B (zh) * 2021-12-31 2023-10-20 杭州澳赛诺生物科技有限公司 一种作为多肽液相合成载体的苄醇酚醚类化合物及其制备方法与应用
CN115626867B (zh) * 2022-10-08 2023-11-14 瑞博(苏州)制药有限公司 一种非经典固相合成载体的制备及其在胸腺五肽合成中的应用
EP4635974A1 (en) * 2022-12-12 2025-10-22 LG Household & Health Care Ltd. Cosmetic composition for skin improvement
WO2024150477A1 (ja) * 2023-01-13 2024-07-18 株式会社トクヤマ アミノ基含有化合物の製造方法、アミノ基含有化合物の分離方法、およびアミノ基含有化合物の製造装置
CN120457138A (zh) * 2023-01-13 2025-08-08 株式会社德山 含氨基化合物的制造方法、含氨基化合物的分离方法以及含氨基化合物的制造装置
CN116813693B (zh) * 2023-08-29 2023-12-01 苏州金顶生物有限公司 一种用于多肽合成的标签化合物及其在多肽合成中的应用
WO2025122535A2 (en) * 2023-12-06 2025-06-12 Amgen Inc. Liquid phase peptide synthesis methods

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE921942A1 (en) * 1992-06-16 1993-12-29 Gary A Siwruk John S Eynon Liquid phase synthesis of peptides and peptide derivatives
US5516891A (en) 1992-06-16 1996-05-14 Kinerton, Ltd. Liquid phase synthesis of peptides and peptide derivatives
CA2373816A1 (en) 1999-05-26 2000-11-30 Abbott Laboratories Minimal isolation peptide synthesis process using ion-exchange resins as scavenging agents
IL150601A (en) 2001-07-19 2010-06-30 Organon Nv Process for rapid synthesis of peptides within a solution using the back of an activated carboxyl component and destruction of the residual activated carboxyl component
EP1426101B1 (en) 2001-08-24 2011-01-05 Japan Science and Technology Agency Compatible-multiphase organic solvent system
JP4283469B2 (ja) * 2001-12-19 2009-06-24 独立行政法人科学技術振興機構 相溶性−多相有機溶媒システムによりアミノ酸を逐次的に付加する液相ペプチド合成法
US7689649B2 (en) 2002-05-31 2010-03-30 Aol Inc. Rendering destination instant messaging personalization items before communicating with destination
JP2004059509A (ja) * 2002-07-30 2004-02-26 Nokodai Tlo Kk 液相ペプチド合成用アミノ酸試薬
JPWO2006104166A1 (ja) * 2005-03-29 2008-09-11 国立大学法人東京農工大学 晶析分離用担体及び化合物の分離方法
DK1927584T3 (en) * 2005-09-20 2017-02-20 Jitsubo Co Ltd CARRIER FOR SEPARATION, PROCEDURE FOR SEPARATION OF CONNECTION AND PROCEDURE FOR SYNTHESIS OF PEPTIDE USING THE CARRIER
US8716439B2 (en) 2006-03-01 2014-05-06 Kaneka Corporation Method of producing peptide
JPWO2007122847A1 (ja) * 2006-03-24 2009-09-03 Jitsubo株式会社 有機合成用試薬、及び当該試薬を用いた有機合成反応方法
US8569453B2 (en) 2009-03-12 2013-10-29 Ajinomoto Co., Inc. Fluorene compound
US8722934B2 (en) 2009-03-30 2014-05-13 Ajinomoto Co., Inc. Diphenylmethane compound
EP2716650A1 (en) * 2011-05-31 2014-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing peptide

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI854013B (zh) * 2019-08-30 2024-09-01 日商日產化學股份有限公司 胜肽化合物之製造方法

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