TW201425298A - ４-（４-（３-（４-氯-３-（三氟甲基）苯基）醯脲）-３-氟-苯氧基）-２-（ｎ-１’，１’，１’-三氘代甲基）吡啶醯胺的鹽、其溶劑合物、其製備方法及其用途 - Google Patents

Abstract

一種4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺的鹽、其溶劑合物以及其製備方法。該4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺的鹽或其溶劑合物用於製備抑制磷酸激酶的藥物組合物。

Description

4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟- 苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺的鹽、其溶劑合物、其製備方法及其用途

本發明是有關於一種含氟的氘代二苯基脲的化合物，特別是指一種4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺的鹽、其溶劑合物、其製備方法及其用途。

已知的ω-二苯基脲衍生物是c-RAF激酶活性的化合物。例如在WO 2000/042012中公開了一類ω-羧基芳基取代的二苯基脲，及其在治療癌症以及相關疾病中的用途。

ω-二苯基脲化合物如索拉非尼(Sorafenib)最先被發現是c-RAF激酶的抑制劑，之後不斷的研究發現它還能抑制MEK和ERK信號傳導通路、血管內皮生長因數-2(VEGFR-2)、血管內皮生長因數-3(VEGFR-3)、以及血小板源生長因數-β(PDGFR-β)的酪胺酸激酶的活性(Curr Pharm Des 2002；8：2255-2257)，因此它被稱之為多激酶抑制劑，具有雙重抗腫瘤作用。

索拉非尼(Sorafenib)，商品名Nexavar，是由拜耳公司和ONXY公司共同研製的一種新型的口服多激酶抑制劑，由於它在一項針對晚期腎癌的III期臨床研究中的卓越表現，2005年12月被FDA快速批准用於治療晚期腎細胞癌，2006年11月在中國上市。然而，索拉非尼(Sorafenib)具有多種副作用，例如高血壓、體重減輕、皮疹等。

BAY 73-4506是一種索拉非尼3-氟基的衍生物，也是作為多激酶的抑制劑靶向作用於腫瘤及其血管。尤其是，BAY 73-4506是一種有效的raf激酶、p38激酶、血小板生長因數受體(PDGFR)激酶以及血管內皮生長因數受體(VEGFR)激酶2和3的抑制劑。對於這些特殊激酶的抑制已與預防或治療骨質疏鬆症、炎症性疾病、增生性疾病、血管生成性疾病包括癌症密切相關(Dumas等，專利PCT Publication WO 2005009961 A2，Hedbom S等，Journal of Clinical Oncology,25,(Suppl.18)：Abs，3593)。該化合物目前正進行腎細胞癌(ClinicalTrials.gov Web Site 2008,May 05)、實體瘤(J.Clin.Oncol.,2008,26(15,Suppl.)：Abst 2558)、肝癌(ClinicalTrials.gov Web Site 2010,May 17)和轉移性結腸癌(ClinicalTrials.gov Web Site 2010,May 17)治療的臨床評價。BAY 73-4506正在進行治療多發性骨髓瘤的臨床前評價(Blood,2008,112(11)：Abst 2766)。

然而，本領域仍需要開發對raf激酶有抑制活性、或更好藥效學性能的化合物及其製程。

本發明的目的就是提供一類新型的具有raf激酶抑制活性和更好藥效學性能的化合物及其用途。

本發明的另一目的是提供氘代的ω-二苯基脲及其中間體的一系列合成方法，從而滿足藥物工業生產方面中的標準，並提高操作性和安全性。

在本發明的第一方面，提供了一種式B2中間體。

在本發明的第二方面，提供了一種製備下式化合物的方法，

所述方法包括：(a)在惰性溶劑中以及鹼存在下，式B2化合物與式V化合物反應，形成所述化合物；

式中，X為Cl、Br、I、或OSO₂CF₃；或者，所述方法包括： (b)在惰性溶劑中，式B’化合物與CD₃NH₂或CD₃NH₂‧HCl反應，形成所述的化合物；

式中，R為H、C₁-C₈直鏈或支鏈烷基，或芳基；或者，所述方法包括：(c)在惰性溶劑中，4-氯-3-三氟甲基苯異氰酸酯(Ⅷ)與式5化合物反應，形成所述的化合物；

或者，所述方法包括：(d)在惰性溶劑中，在CDI和CH₂Cl₂存在下，式5化合物與式6化合物反應，形成所述的化合物。

或者，所述方法包括：(e)在惰性溶劑中，將3-氟-4-胺基-苯酚與式V反應，從而形成式B1化合物；在惰性溶劑中，將B1化合物與式W進行反應，從而形成式M化合物；和在惰性溶劑中，將式M化合物與4-氯-3-三氟甲基苯胺進行反應，從而形成所述化合物

式中，R為氫、甲基、硝基和氯；所述的惰性溶劑選自氯仿、二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧六環、甲苯、吡啶、DMF、DMSO、或其混合溶劑；所述的鹼選自吡啶、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、三乙胺、N,N-二乙基異丙胺、N,N-二甲胺吡啶、N-甲基嗎啡，或其組合；或者，所述方法包括：(f)在惰性溶劑中，將4-氯-3-三氟甲基苯胺與式W進行反應，從而形成式B化合物；在惰性溶劑中，將B1化合物與式B化合物進行反應，從而形成所述化合物。

式中，R為氫、甲基、硝基和氯；所述的惰性溶劑選自氯仿、二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧六環、甲苯 、吡啶、DMF、DMSO、或其混合溶劑；所述的鹼選自吡啶、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、三乙胺、N,N-二乙基異丙胺、N,N-二甲胺吡啶、N-甲基嗎啡，或其組合。

在另一優選例中，所述的式B2化合物是通過以下該方法製備：在惰性溶劑中，將3-氟-4-胺基苯酚和4-氯-3-三氟甲基苯基異氰酸酯進行縮合，從而形成式B2化合物：

在另一優選例中，所述的惰性溶劑包括(但並不限於)：二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、正己烷、甲苯、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亞碸、或其組合。

在另一優選例中，所述的鹼選自第三丁醇鉀、氫化鈉、氫化鉀，碳酸鉀、碳酸銫、磷酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉或組合。

在另一優選例中，在方法(a)還包括：在催化劑存在下進行反應，所述的催化劑選自碘化亞銅和脯胺酸之組合、或碘化亞銅和吡啶甲酸之組合。

在另一優選例中，各反應在溫度0-200℃下進行。

在另一優選例中，反應時間為0.2-72小時，較 佳地為0.5-64小時，更佳地為1-48小時。

在本發明的第三方面，提供了一種製備4-氯吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺的方法，它包括以下步驟：

(a1)在鹼性條件下，於惰性溶劑中，將4-氯-2-吡啶甲酸甲酯與1,1,1-三氘代甲胺或其鹽(如鹽酸鹽)進行反應，從而形成4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺；或者

(a2)在惰性溶劑中，將4-氯-2-吡啶甲酸，與1,1,1-三氘代甲胺或其鹽(如鹽酸鹽)進行反應，形成4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺；或者

(a3)在惰性溶劑中，將4-氯-吡啶-2-甲醯氯與1,1,1-三氘代甲胺進行反應，形成4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺

在另一優選例中，所述的惰性溶劑包括：四氫呋喃、乙醇、甲醇、水、或其混合溶劑。

在另一優選例中，步驟(a1)和(a2)中，反應溫度為-10℃至回流溫度，較佳地為-4℃至60℃，更佳地為5-50 ℃。

在另一優選例中，步驟(a1)和(a2)中，反應時間為0.5-72小時，較佳地為1-64小時，更佳地為2-48小時。

在另一優選例中，步驟(a1)中，所述的鹼性條件為反應體系中存在碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、氫氧化鈉、氫氧化鉀或其組合。

在本發明的第四方面，提供了一種式B2化合物的製備方法，包括步驟：在惰性溶劑中，將3-氟-4-胺基苯酚和4-氯-3-三氟甲基苯基異氰酸酯進行縮合，從而形成式B2化合物：

在本發明的第五方面，提供了本發明第一方面所述的中間體的用途，它們被用於製備氘代二苯基脲或用作製備氘代二苯基脲的原料。

在另一優選例中，所述的氘代二苯基脲包括4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(CM4309)；4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)吡啶-1-氧化物；4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺對甲苯磺酸鹽(CM4309‧TsOH)；4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代 甲基)吡啶醯胺鹽酸鹽；或4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺甲磺酸乙醇合物。

在本發明的第六方面，提供了一種式V所示的中間體，

式中，X為Cl、Br、I、或OSO₂CF₃。

在另一優選例中，X為Cl，結構式為。

在本發明的第七方面，提供了本發明第六方面所述的中間體的用途，它們被用於製備氘代二苯基脲或用作製備氘代二苯基脲的原料。

在本發明的第八方面，提供了一種下式化合物(CM4309)的用途，所述化合物用於製備抑制磷酸激酶(如raf激酶)的藥物組合物。

在另一優選例中，所述的藥物組合物用於治療和預防以下疾病：癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、腎病、血管發生(angiogenesis)、或前列腺疾病。

在另一優選例中，所述的癌症包括(但並不限於 )：非小型細胞肺癌、子宮癌、直腸癌、腦癌、頭癌、頸癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、固體腫瘤、腎癌、血癌、肝癌、胃癌、或胰腺癌。

在本發明的第九方面，提供了一種治療方法，它包括步驟：給需要治療的對象施用本發明的CM4309化合物，或其晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物，或施用含所述化合物的藥物組合物，從而抑制磷酸激酶(如raf激酶)。較佳地，所述的疾病包括：癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、腎病、血管發生、或前列腺疾病。

應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在此不再一一累述。

圖1顯示了CM4306，CM4308和CM4309對人肝細胞癌SMMC-7721裸鼠移植模型的抑制作用(Mean+SEM)。圖中，“treatment”表示治療的時間為14天。“control”表示空白對照。

本發明人經過研究，意外地發現，本發明的含氟的氘代ω-二苯基脲及其藥學上可接受的鹽與未經氘代 的化合物相比，具有明顯更優異的藥物動力學和/或藥效學性能，因此更適合作為抑制raf激酶的化合物，進而更適用製備治療癌症以及相關疾病的藥物。此外，本發明人還發現，採用新的式V或式B2中間體，可以高效、簡便地製備高純度的二苯基脲化合物。在此基礎上完成了本發明。

定義

如本文所用，“鹵素”指F、Cl、Br、和I。更佳地，鹵原子選自F、Cl和Br。

如本文所用，“烷基”包括直鏈或支鏈的烷基。優選的烷基是C₁-C₄烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基等。

如本文所用，“氘代”指化合物或基團中的一個或多個氫被氘所取代。氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。術語“一個或多個氘代的”與“一次或多次氘代”可互換使用。

在另一優選例中，氘在氘取代位置的氘同位素含量是大於天然氘同位素含量(0.015%)，更佳地大於50%，更佳地大於75%，更佳地大於95%，更佳地大於97%，更佳地大於99%，更佳地大於99.5%。

在另一優選例中，式(I)化合物至少含有1個氘原子，更佳地3個氘原子，更佳地5個氘原子。

如本文所用，術語“化合物CM4306”指化合物4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-苯氧基)-N-甲基吡啶醯胺。

如本文所用，術語“化合物CM4308”指化合物4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-N-甲基吡啶醯胺。

如本文所用，術語“化合物CM4309”指化合物4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺。

如本文所用，術語“TsOH”表示對甲苯磺酸。CM4309‧TsOH表示化合物CM4309的對甲苯磺酸鹽。

氘代二苯基脲

在本發明的優選的氘代二苯基尿素化合物具有式(I)結構：

式中：X是N或者N⁺-O^-；R¹是鹵素(如F、Cl或Br)，一個或多個氘代的或全氘代的C₁-C₄烷基；R²是未氘代的、一個或多個氘代的或全氘代的C₁-C₄烷基，或者部分或全部鹵素取代的C₁-C₄烷基；R³、R⁴、R⁵、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴分別是氫、氘、或鹵素(如F、Cl、或Br)；R⁶是氫、氘、或一個或多個氘代的或全氘代的C₁-C₄烷基；R⁷是氫、氘、或一個或多個氘代的或全氘代的C₁-C₄烷基；附加條件是R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³或R¹⁴中至少一個是氘代的C₁-C₄烷 基或氘。

在另一優選例中，氘在氘取代位置的氘同位素含量至少是大於天然氘同位素含量(0.015%)，較佳地大於30%，更佳地大於50%，更佳地大於75%，更佳地大於95%，更佳地大於99%。

在另一優選例中，式(I)化合物中的除H之外的其他元素(如N、C、O、F等)全部或基本上(>99wt%)為含量最高的天然存在的元素，例如¹⁴N、¹²C、¹⁶O和¹⁹F。

在另一優選例中，式(I)化合物至少含有1個氘原子，更佳地3個氘原子，更佳地5個氘原子。

在另一優選例中，R¹選自鹵素；更佳的是氯。

在另一優選例中，R²是三氟甲基。

在另一優選例中，R⁶或R⁷分別獨立地選自氫、氘、氘代的甲基、或氘代的乙基；更佳地，選自一氘甲基、二氘甲基、三氘甲基、一氘乙基、二氘乙基、三氘乙基、四氘乙基、或五氘乙基。

在另一優選例中，R⁶或R⁷分別獨立地選自氫、甲基或三氘甲基。

在另一優選例中，R³、R⁴或R⁵分別獨立地選自氫或氘。

在另一優選例中，R⁸、R⁹、R¹⁰或R¹¹分別獨立地選自氫或氘。

在另一優選例中，R¹²、R¹³或R¹⁴分別獨立地選自氫或氘。

在另一優選例中，所述化合物是選自下組的優選化合物：N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-N’-(4-(2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)-4-吡啶基氧)苯基)脲；

4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)吡啶-1-氧化物；

4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(CM4309)；

4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)吡啶-1-氧化物；

中間體

如本文所用，術語“本發明的中間體”指式V化合物、式B’化合物(尤其是式B2化合物)。

上式化合物中的除H之外的其他元素(如N、C、O等)全部或基本上(>99wt%)為含量最高的天然存在的元素，例如¹⁴N、¹²C和¹⁶O。

活性成分

如本文所用，術語“本發明化合物”指式(I)所示的化合物。該術語還包括式(I)化合物的各種晶型形式、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物。

特別優選的化合物是CM4309或其藥學上可接受的鹽。

如本文所用，術語“藥學上可接受的鹽”指本發明化合物與酸或鹼所形成的適合用作藥物的鹽。藥學上可接受的鹽包括無機鹽和有機鹽。一類優選的鹽是本發明化合物與酸形成的鹽。適合形成鹽的酸包括但並不限於：鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有機酸；以及天冬胺酸、麩胺酸等酸性胺基酸。

製備方法

下面更具體地描述本發明式(I)結構化合物和新穎中間體的製備方法，但這些具體方法不對本發明構成任何限制。本發明化合物還可以任選將在本說明書中描述的或本領域已知的各種合成方法組合起來而方便的製得，這樣的組合可由本發明所屬領域的技術人員容易的進行。

本發明使用的未氘代的ω-二苯基脲及其生理上相容的鹽的製備方法是已知的。對應氘代的ω-二苯基脲的製備可以用相應的氘代起始化合物為原料，用同樣的路線合成。例如，本發明式(I)化合物可按WO 2000/042012中所述的製備方法製備，不同點在於在反應中用於氘代的原料代替非氘代的原料。

通常，在製備流程中，各反應通常在惰性溶劑中，在室溫至回流溫度(如0℃-80℃，優選0℃-50℃)下進行。反應時間通常為0.1-60小時，較佳地為0.5-48小時。

以化合物CM4309為例，一種優選的製備流程如下：

如合成路線一所示，3-氟-4-胺基-苯酚(化合物I)和4-氯-3-三氟甲基苯胺(化合物II)在N,N’-羰基二咪唑、光氣或三光氣作用下，反應得到1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-3-(2-氟-4-羥基-苯基)-脲(化合物III)。吡啶甲酸甲酯(化合 物Ⅳ)和氘代甲胺或氘代甲胺鹽酸鹽在鹼(例如碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉、三乙胺、吡啶等)的作用下、或直接混合反應，得到吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺(化合物V)。化合物III和化合物V在鹼(如第三丁醇鉀、氫化鈉、氫化鉀，碳酸鉀、碳酸銫、磷酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉)或任選的催化劑(如碘化亞銅和脯胺酸、或碘化亞銅和吡啶甲酸)的作用下，得到化合物CM-4309。上述反應在惰性溶劑，如二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、正己烷、甲苯、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸等中，溫度0-200℃下進行。

以化合物CM4309為例，另一種優選的製備流程如下：

如合成路線二所示，吡啶甲酸酯(化合物VI)和3-氟-4-氨基-苯酚(化合物I)在鹼(如第三丁醇鉀、氫化鈉、氫化鉀，碳酸鉀、碳酸銫、磷酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉)或任選的催化劑(如碘化亞銅和脯氨酸、或碘化亞銅和吡啶 甲酸)的作用下，得到胺(化合物VII)。再和化合物II在N,N’-羰基二咪唑、光氣或三光氣作用下、或和4-氯-3-三氟甲基-苯基異氰酸酯(化合物Ⅷ)反應得到脲(化合物Ⅸ)。化合物Ⅸ和氘代甲胺或氘代甲胺鹽酸鹽在鹼(例如碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉、三乙胺、吡啶等)的作用下、或直接混合反應得到化合物CM4309。上述反應在惰性溶劑，如二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、正己烷、甲苯、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸等中，溫度0-200℃下進行。

以化合物CM4309為例，另一種優選的製備流程如下：

如合成路線三所示，2-氟-4-甲氧基苯胺(化合物X)和化合物II在N,N’-羰基二咪唑、光氣或三光氣作用下、或和4-氯-3-三氟甲基-苯基異氰酸酯(化合物Ⅷ)反應得到脲(化合物XI)。利用本領域已知的各種去甲基方法得到1-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-3-(2-氟-4-羥基苯基)脲(化合物III)。然後使用和合成路線一中描述的同樣方法，或本領域 已知的各種合成方法，化合物III和化合物V反應得到化合物CM4309。上述反應在惰性溶劑，如二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、正己烷、甲苯、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸等中，溫度0-200℃下進行。

以化合物CM4309為例，另一種優選的製備流程如下：

如合成路線四所示，化合物V和化合物3-氟-4-胺基-苯酚在惰性溶劑中和鹼性條件下反應得到4-(4-胺基-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(化合物B1)。在惰性溶劑中，將B1化合物與式W進行反應，從而形成式M化合物；和在惰性溶劑中，將式M化合物與4-氯-3-三氟甲基苯胺進行反應，從而反應得到化合物CM4309。上述反應在惰性溶劑，如二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、正己烷、甲苯、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、吡啶等中，溫度0-200℃下進行。

以化合物CM4309為例，另一種優選的製備流程如下：

如合成路線五所示，在鹼性條件下，將4-氯-3-三氟甲基苯胺與式W進行反應，從而形成式B化合物；在鹼性條件下，將B1化合物與式B化合物進行反應，從而反應得到化合物CM4309。上述反應在惰性溶劑，如二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、正己烷、甲苯、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、吡啶等中，溫度0-200℃下進行。

以化合物CM4309為例，一種特別優選的製備流程如下：

氘代可以通過氘代甲胺引入的。

可通過以下反應得到氘代甲胺或其鹽酸鹽。硝基甲烷在鹼(氫化鈉、氫化鉀、氘代氫氧化鈉、氘代氫氧化 鉀、碳酸鉀等)，或在相轉移催化劑下，和氘水反應得到氘代硝基甲烷，如有必要，重複上述實驗，以得到高純度的氘代硝基甲烷。氘代硝基甲烷還原，如鋅粉、鎂粉、鐵或鎳等作用下，得到氘代甲胺或其鹽酸鹽。

再者可以通過以下反應得到氘代甲胺或其鹽酸鹽。

關鍵中間體3也可以通過如下方法從氘代甲醇合成。

其具體合成方法在實施例1中有詳細的說明。

本發明的主要優點包括：

(1)本發明化合物對磷酸激酶(kinase)例如raf激酶具有優異的抑制性。

(2)通過本發明的式V、式B或式B2中間體，可以方便、高效、高純度地製備多種氘代二苯基脲。

(3)反應條件更加溫和，操作過程更為安全。

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則份數和百分比為重量份和重量百分比。

實施例1：N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-N’-(4-(2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)-4-吡啶基氧)苯基)脲(化合物CM4307)

流程一

1：4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺(3)的製備

在配有尾氣處理裝置的250mL單頸圓底燒瓶中，加入氯化亞碸(60mL)，維持溫度在40-50℃之間，向其中緩慢的滴加無水DMF(2mL)，滴加完畢後，繼續攪拌10分鐘，在20分鐘內向其中分批加入煙酸(20g，162.6mmol)，溶液的顏色逐漸由綠色轉變為淺紫色。將溫度升到72℃ ，攪拌回流16小時，產生大量的固體沉澱物。冷卻到室溫，用甲苯(100mL)稀釋，濃縮至近乾，然後再用甲苯稀釋，濃縮至乾。過濾，用甲苯洗滌，得到淡黃色的4-氯-吡啶-2-甲醯氯固體。冰浴下將此固體慢慢的加入到氘代甲胺的四氫呋喃飽和溶液中，維持溫度低於5℃，繼續攪拌5小時。濃縮，加乙酸乙酯，析出白色固體，濾除，濾液用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮至乾，得到淡黃色的4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺(3)(20.68g)，產率73%。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)：δ8.37(d,1H),8.13(s,1H),7.96(br,1H),7.37(d,1H)。

2：4-(4-胺苯氧基)-2-吡啶-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺(5)的製備

向100mL乾燥的無水DMF中依次加入對胺基苯酚(9.54g,0.087mol)，第三丁醇鉀(10.3g,0.092mol)，溶液變成深褐色，室溫下攪拌2小時後，向其中加入4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺(3)(13.68g,0.079mol)，無水碳酸鉀(6.5g,0.0467mol)，將反應液溫度升到80℃後繼續攪拌過夜。TLC檢測反應完畢，冷卻到室溫，將反應液倒入乙酸乙酯(150mL)和飽和食鹽水(150mL)的混合溶液中，攪拌分層，靜置後分液，水層用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合併萃取液，用飽和水洗滌(100mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到淡黃色的4-(4-胺苯氧基)-2-吡啶-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺(18.00g)，產率92%。

¹H NMR(CDCl₃,300MHz)：δ8.32(d,1H),7.99(br,1H),7.66(s,1H),6.91-6.85(m,3H),6.69(m,2H),3.70(br,s,2H)。

3：N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-N’-(4-(2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)-4-吡啶基氧)苯基)脲(CM4307)的製備

向120mL二氯甲烷中加入5-胺基-2-氯-三氟甲基苯(15.39g,78.69mol)，N,N’-羰基二咪唑(CDI)(13.55g,83.6mmol)，室溫攪拌16小時後，向其中緩慢的滴加4-(4-胺苯氧基)-2-吡啶-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)甲醯胺(18g,73mmol)的二氯甲烷(180mL)溶液，室溫下繼續攪拌18小時。TLC檢測反應完畢，旋去部分二氯甲烷溶劑至100mL左右，室溫放置數小時，有大量白色固體析出，抽濾，固體用大量二氯甲烷洗滌。濾液濃縮去除部分溶劑後，又析出部分固體，合併兩次固體，用大量二氯甲烷再次洗滌，得到白色粉狀的N-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-N’-(4-(2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)-4-吡啶基氧)苯基)脲CM4307純品(20.04g)，產率58%。

¹H NMR(CD₃OD,300MHz)：δ8.48(d,1H),8.00(d,1H),7.55(m,5H),7.12(d,1H),7.08(s,2H),ESI-HRMS m/z：C₂₁H₁₃D₃ClF₃N₄O₃,calcd.467.11,found 490.07[M+Na]⁺。

另外，可將化合物CM4307溶於二氯甲烷中，與過氧苯甲酸進行反應，製得相應的氧化產物：4-(4-(3-(4- 氯-3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)吡啶-1-氧化物。

實施例2

基於4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(中間體A2)合成CM4309

1：4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(中間體A2)的製備

方法1：

將4-氯-2-吡啶甲酸甲酯(50g，291mmol，1eq)置入盛有250mL四氫呋喃的三口瓶中，攪拌並加入1,1,1-三氘代甲胺鹽酸鹽(31g，437mmol，1.5eq)，無水碳酸鉀(80g，583mmol，2eq)，室溫攪拌反應20小時後加入水(250mL)和甲基第三丁基醚(150mL)，攪拌並分層，獲得有機相。水相用甲基第三丁基醚萃取(100mL)，合併有機相並加入無水硫酸鈉乾燥並過濾，減壓除去溶劑得到標題化合物，為淺黃色液體48g，純度99%，產率96%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.64(dd,J=2Hz,5.2Hz,1H),7.97(d,J=1.6Hz,1H),8.54(d,J=5.2Hz,1H),8.74(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₇H₄D₃ClN₂O：173,found：174[M+H]⁺。

方法2：

將4-氯-2-吡啶甲酸(200mg,1.27mmol,1eq)溶於N,N-二甲基甲醯胺(DMF，5mL)，加入1,1,1-三氘代甲胺鹽酸鹽(179mg，2.54mmol，2eq)，2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，965mg，2.54mmol，2eq),N,N-二異丙基乙胺(DIEA，492mg，3.81mmol，3eq)，並在室溫下攪拌反應16小時，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取，並用飽和食鹽水(10mL×3)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓除去溶劑得到標題化合物，200mg淺黃色液體，純度97%，產率91%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.64(dd,J=2Hz,5.2Hz,1H),7.97(d,J=1.6Hz,1H),8.54(d,J=5.2Hz,1H),8.74(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₇H₄D₃ClN₂O：173,found：174[M+H]⁺。

2：4-(4-胺基-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-(N-1’,1’,1’- 三氘代甲基)醯胺B1的製備

將第三丁醇鉀(15g，130mmol，1.3eq)置入盛有N，N-二甲基乙醯胺(DMA，50mL)的溶液中，在0-5℃下緩慢滴加3-氟-4-胺基-苯酚(16g，127mmol，1.3eq)的DMA(50mL)溶液，在室溫下攪拌反應20分鐘，升溫至100℃並緩慢滴加4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺A2(17g，97mmol，1eq)的DMA(50mL)，滴加完畢後繼續攪拌0.5小時，冷卻至室溫，向反應液中加入乙酸乙酯(1.5L)稀釋並攪拌0.5小時，過濾除去無機鹽，用水洗滌(500mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，減壓除去溶劑，向粗品中加入乙醇(100mL)並回流攪拌2小時，冷卻至室溫過濾得到標題化合物，為褐色固體20g，HPLC純度96%，產率80%。

¹H NMR(CD₃OD-d₄，400MHz)：δ 6.74-6.77(m,1H),6.87(dd,J=2.4Hz,11.6Hz,1H),6.93(t,J=10Hz,1H),7.02(dd,J=2.8Hz,6Hz,1H),7.54(d,J=2.4Hz,1H),8.44(d,J=6Hz,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for Cl₃H₉D₃ClN₃O₂：264,found：265[M+H]⁺。

3：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(CM4309)的製備

方法1：

在室溫下，將4-氯-3-三氟甲基苯基異氰酸酯(13g，58mmol，1.1eq)置入盛有二氯甲烷(70mL)的單口瓶中 ，並將4-(4-胺基-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(14g，53mmol，1eq)的二氯甲烷(350mL)溶液緩慢滴加至上述溶液中，室溫攪拌20小時，反應完畢過濾並用二氯甲烷(20mL×2)洗滌，得到淺褐色固體13g，純度98%，產率50%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.06-7.10(m,1H),7.19(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.35(dd,J=2.8Hz,12Hz,1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.63(m,2H),8.14(br,1H),8.17(t,J=8.8Hz,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.75(d,J=1.6Hz,1H),8.78(br,1H),9.54(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₃：485,found：486[M+H]⁺。

方法2：

在室溫下，將4-氯-3-三氟甲基-苯胺(300mg，1.53mmol，1.05eq)溶於二氯甲烷(5mL)中，加入N,N-羰基二咪唑(CDI，265mg，1.64mmol，1.12eq)並室溫攪拌16小時，將4-(4-胺-3-氟-苯氧基)-2-吡啶-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(386mg，1.46mmol，1eq)加入到上述反應液中，繼續室溫攪拌20小時，將溶劑減壓除去，加入石油醚(10mL)與乙酸乙酯(5mL)回流攪拌2小時，冷卻至室溫過濾得到CM4309，為淺褐色固體635mg，純度95%，產率 90%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.06-7.10(m,1H),7.19(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.35(dd,J=2.8Hz,12Hz,1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.63(m,2H),8.14(br,1H),8.17(t,J=8.8Hz,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.75(d,J=1.6Hz,1H),8.78(br,1H),9.54(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₃：485,found：486[M+H]⁺。

實施例3

基於4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(中間體A2)合成CM4309

1：1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-3-(2-氟-4-羥基-苯基)-脲B2的製備

在室溫下，將3-氟-4-胺基-苯酚(500mg，3.93mmol，1eq)溶於N,N-甲基甲醯胺(3mL)中，並將4-氯-3-三氟甲基苯基異氰酸酯(917mg，4.13mmol，1.05eq)的二氯甲烷(3mL)溶液滴加到上述溶液中，室溫攪拌反應16小時，加入水(10mL)並用乙酸乙酯(20mL)萃取，用飽和食鹽水(10mL×3)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓除去溶 劑後固體用石油醚(15mL)與乙酸乙酯(5mL)回流攪拌2小時，冷卻至室溫過濾得到標題化合物，為褐色固體1.2g，純度98%，產率89%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 6.56-6.59(m,1H),6.64(dd,J=2.4Hz,12.4Hz,1H),7.59-7.63(m,3H),8.11(br,1H),8.28(br,1H),9.34(br,1H),9.69(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₁₄H₉ClF₄N₂O₂：348,found：349[M+H]⁺。

2：4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(CM4309)的製備

將第三丁醇鉀(906mg，8.09mmol，1.4eq)溶於N,N-甲基乙醯胺(DMA，5mL)中，在0℃下緩慢滴加1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-3-(2-氟-4-羥基-苯基)-脲(2.8g，8.09mmol，1.4eq)的DMA(5mL)溶液至上述溶液，在室溫下攪拌反應20分鐘，升溫至100℃緩慢滴加4-氯-N-氘代甲基吡啶-2-甲醯胺(1g，5.78mmol，1eq)的DMA(5mL)溶液，滴加完畢後，冷卻至室溫，向反應液中加入乙酸乙酯(200mL)稀釋並攪拌0.5小時，過濾除去無機鹽，用水洗滌(5mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，減壓除去溶劑，粗品通過層析柱分離(石油醚：乙酸乙酯=4：1)得到520mg的CM4309，為褐色固體，純度98%，產率20%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.06-7.10(m, 1H),7.19(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.35(dd,J=2.8Hz,12Hz，1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.63(m,2H),8.14(br,1H),8.17(t,J=8.8Hz,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.75(d,J=1.6Hz,1H),8.78(br,1H),9.54(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₃：485,found：486[M+H]⁺。

實施例4

基於4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(中間體A2)合成CM4309

1：(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-胺基甲酸苯酯B3的製備

將4-氯-3-三氟甲基苯胺(4.9g，25mmol，1eq)加入至二氯甲烷(50mL)中，室溫下緩慢滴加氯甲酸苯酯(3.9g，25mmol，1eq)的二氯甲烷(10mL)溶液，繼續攪拌反應1小時。加入稀鹽酸(1N，50mL)，再用水洗滌(40mL×3)，分層。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，除去溶劑得到標題化合物，為類白色產品7.5g，純度99%，產率94%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.25-7.30(m,3H),7.45(t,J=8Hz,2H),7.67-7.78(m,2H),8.07(d,J=2Hz,1H),10.73(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₁₄H₉ClF₃NO₂：315,found：316[M+H]⁺。

2：4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲醯基}胺基)-3-氟苯氧基]-N-氘代甲基吡啶-2-甲醯胺CM4309的製備

在室溫下，將(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-胺基甲酸苯酯(0.95g，3.0mmol，1eq)溶於吡啶(10mL)，並加入4-(4-胺-3-氟-苯氧基)-2-吡啶-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(0.79g，3.0mmol，1eq)，升溫至85℃攪拌反應2小時。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯(50mL)，用稀鹽酸洗滌(1N，10mL)，用飽和食鹽水(10mL)洗滌，分層，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯(3mL)，攪拌1小時，過濾得到標題化合物，為類白色固體0.5g，純度96%，產率35%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.06-7.10(m,1H),7.19(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.35(dd,J=2.8Hz,12Hz,1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.63(m,2H),8.14(br,1H),8.17(t,J=8.8Hz,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.75(d,J=1.6Hz,1H),8.78(br,1H),9.54(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₃：485,found：486[M+H]⁺。

實施例5

基於4-氯-吡啶-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺(中間體A2)合成CM4309

1：[2-氟-4(2-氘代甲基甲醯胺基-吡啶-4-基氧基)-苯基]-胺基甲酸苯酯B4的製備

將4-(4-胺-3-氟-苯氧基)-2-吡啶-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)醯胺2.60g，10mmol，1eq)溶於二氯甲烷(15mL)，加入吡啶(1.58g，20mmol，2eq)，室溫下，將氯甲酸苯酯(1.88g，12mmol，1.2eq)溶於二氯甲烷(15mL)滴加至上述溶液中，室溫攪拌反應1小時。用稀鹽酸(1N，30mL)洗滌，飽和食鹽水(10mL×2)，分層。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑得標題化合物3.6g，純度95%，產率94%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.10-7.13(m,1H),7.21(dd,J=2.8Hz,5.6Hz,1H),7.26(t,J=6.4Hz,3H),7.36(dd,J=2.8Hz,11.6Hz,1H),7.43-7.47(m,3H),7.80(t,J=8.4Hz,1H),8.55(d,J=5.2Hz,1H),8.79(br,1H),10.10(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₀H₁₃D₃FN₃O₄：384, found：385[M+H]⁺。

2：4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲醯基}胺基)-3-氟苯氧基]-N-氘代甲基吡啶-2-甲醯胺CM4309的製備

在室溫下，將[2-氟-4(2-氘代甲基甲醯胺基-吡啶-4-基氧基)-苯基]-胺基甲酸苯酯(1.92g，5mmol，1eq)溶於吡啶(10mL)，加入4-氯-3-三氟甲基苯胺(0.98g，5mmol，1eq)，溫度升至85℃攪拌反應2小時。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯(100mL)，用飽和食鹽水(30mL×3)洗滌，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑得到淺褐色固體，加入乙酸乙酯(5mL)並在50℃下攪拌30分鐘，過濾得到標題化合物，為灰白色固體(0.6g)，純度95%，產率25%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.06-7.10(m,1H),7.19(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.35(dd,J=2.8Hz,12Hz,1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.63(m,2H),8.14(br,1H),8.17(t,J=8.8Hz,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.75(d,J=1.6Hz,1H),8.78(br,1H),9.54(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₃：485,found：486[M+H]⁺。

實施例6

基於中間體B7合成CM4309

以4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲]-3-氟-苯氧基}-吡啶-2-甲酸(中間體B7)為關鍵中間體的路線

1：4-氯-吡啶-2-甲酸第三丁酯A7的製備

將4-氯-吡啶-2-甲酸(10.5g，66.64mmol)懸浮於氯化亞碸(40mL)中，升溫至80℃回流，滴加N,N-二甲基甲醯胺(0.2mL)，回流反應2小時，減壓除去二甲亞碸得到淺黃色的醯氯，並加入二氯甲烷(60mL)。在-40℃下，將上述配製的二氯甲烷溶液滴加至第三丁醇(25mL)、吡啶(20mL)與二氯甲烷(80mL)的混合溶液中。將該反應液升溫至50℃並攪拌反應16小時。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯(150mL)，並用飽和食鹽水洗滌(50mL×2)，再用氫氧化鈉溶液(1N)洗滌(50mL×2)，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓除去溶劑，真空乾燥得到標題化合物，為淺黃色固體11.1g，純度95%，產率78%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 1.56(s,9H),7.80(dd,J=2.4Hz,5.2Hz,1H),8.02(d,J=2Hz,1H),8.69(d,J=5.2Hz,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₁₀H₁₂ClNO₂：213, found：158(M-Bu^t+H)⁺。

2：4-(4-胺基-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-甲酸第三丁酯B5的製備

將第三丁醇鉀(5g，23.47mmol，1.4eq)溶於N,N-二甲基乙醯胺(DMA，12mL)，在0℃下緩慢滴加3-氟-4-胺基苯酚(4.2g，32.86mmol，1.4eq)的DMA(15mL)溶液，滴加完畢後在室溫下攪拌30分鐘。升溫至100℃並緩慢滴加4-氯-吡啶-2-甲酸第三丁酯的DMA溶液(18mL)，攪拌1小時，降至室溫，加入乙酸乙酯(500mL)，過濾除去不溶物，用飽和食鹽水洗滌(200mL×3)，無水硫酸鈉乾燥，減壓除去溶劑得到褐色固體，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯=3：1)得到標題化合物，為淺褐色固體1.38g，純度98%，產率20%。

¹H NMR(CD₃OD-d₄，400MHz)：δ 1.61(s,9H),6.78-6.80(m,1H),6.89-6.97(m,2H),7.07(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.55(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=5.6Hz,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₁₆H₁₇FN₂O₃：304,found：249[M-Bu^t+H]⁺。

3：4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲]-3-氟-苯氧基}-吡啶-2-甲酸第三丁酯B6的製備

在室溫下，將4-氯-3-三氟甲基苯基異氰酸酯(1.06g，4.77mmol，1.05eq)溶於二氯甲烷(10mL)，並將4-(4-胺基-3-氟-苯氧基)-吡啶-2-甲酸第三丁酯(1.38g，4.54mmol，1eq)的二氯甲烷(50mL)溶液緩慢滴加至上述溶液中 ，室溫攪拌16小時。減壓除去溶劑，得到的固體用柱層析分離(二氯甲烷：甲醇=30：1)得到標題化合物，為紅棕色固體1.9g，純度94%，產率80%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 1.54(s,9H),7.08(dd,J=2Hz,8.8Hz,1H),7.18(dd,J=2.8Hz,5.6Hz,1H),7.34(dd,J=2.4Hz,3.6Hz,1H),7.46(d,J=2.4Hz,1H),7.61-7.66(m,2H),8.13-8.19(m,2H),8.58(d,J=5.6Hz,1H),8.76(d,J=1.6Hz,1H),9.53(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₄H₂₀ClF₄N₃O₄：525,found：526[M+H]⁺。

4：4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲]-3-氟-苯氧基}-吡啶-2-甲酸B7的製備

在室溫下，將4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲]-3-氟-苯氧基}-吡啶-2-甲酸第三丁酯(1.8g，3.43mmol)溶於二氯甲烷(15mL)，加入三氟乙酸(15mL)與三乙基矽烷(0.2mL)，升溫至50℃攪拌反應16小時。減壓除去溶劑，加入水(50mL)與乙酸乙酯(50mL)，分層，除去有機相，水層過濾並用水(20mL×2)洗滌，得到標題化合物，為灰色固體，真空乾燥的1.48g，純度85%，產率92%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.13(dd,J=1.2Hz,9.2Hz,1H),7.38-7.41(m,2H),7.61-7.66(m,3H),8.15(s,1H),8.22(t,J=8.8Hz,1H),8.67(d,J=5.6Hz,1H),9.06-9.08(m,1H),10.21-10.28(m,1H),11.96(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₀H₁₂ClF₄N₃O₄：469, found：468[M-H]^-。

5：4-[4-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲醯基}胺基)-3-氟苯氧基]-N-氘代甲基吡啶-2-甲醯胺CM4309的製備

方法1：

在室溫下，將4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲]-3-氟-苯氧基}-吡啶-2-甲酸(1.48g，3.15mmol，1eq)溶於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)，加入1,1,1-三氘代甲胺鹽酸鹽(0.45g，6.29mmol，2eq)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，2.40g，6.29mmol，2eq)與N,N-二異丙基乙胺(DIEA，1.20g，9.44mmol，3eq)，並室溫攪拌16小時。向上述反應液中滴加水(50mL)，攪拌0.5小時，過濾得到淺紅色固體，加入乙酸乙酯(150mL)，用飽和食鹽水(50mL×3)洗滌，分層，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑得1.2g CM4309，為淺紅色固體，純度97%，產率79%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.06-7.10(m,1H),7.19(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.35(dd,J=2.8Hz,12Hz,1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.63(m,2H),8.14(br,1H),8.17(t,J=8.8Hz,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.75(d,J=1.6Hz,1H),8.78(br,1H),9.54(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₃：485,found：486[M+H]⁺。

方法2：

將4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲]-苯氧基}-吡啶-2-甲酸(1g，2.13mmol)懸浮於甲醇(20mL)中，室溫下加入濃硫酸(5mL)並回流3小時，減壓除去溶劑，柱層析(二氯甲烷：甲醇=10：1)分離得到白色固體4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲基]-苯氧基}-吡啶-2-甲酸甲酯B8(0.83g)，純度97%，產率80%。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₄ClF₄N₃O₄：483,found：484[M+H]⁺。

將4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-脲]-苯氧基}-吡啶-2-甲酸甲酯(0.83g，1.71mmol，1eq)置入盛有15mL四氫呋喃的三口瓶中，攪拌並加入1,1,1-三氘代甲胺鹽酸鹽(0.24g，3.43mmol，2eq)，無水碳酸鉀(0.47g，3.43mmol，2eq)，室溫攪拌反應20小時後，加入水(10mL)和甲基第三丁基醚(25mL)，攪拌並分層，獲得有機相。水相用甲基第三丁基醚萃取(15mL)，合併有機相並加入無水硫酸鈉乾燥並過濾，減壓除去溶劑得到CM4309，淺紅色固體680mg，純度95%，產率82%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.06-7.10(m,1H),7.19(dd,J=2.4Hz,5.6Hz,1H),7.35(dd,J=2.8Hz,12Hz,1H),7.43(d,J=2.4Hz,1H),7.63(m,2H),8.14(br, 1H),8.17(t,J=8.8Hz,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.75(d,J=1.6Hz,1H),8.78(br,1H),9.54(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₃：485,found：486[M+H]⁺。

實施例7

CM4309的氧化物BO的製備

在室溫下，將4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(0.5g，1.03mmol，1eq)溶於二氯甲烷(10mL)與四氫呋喃(10mL)，加入間氯過氧苯甲酸(0.54g，3.09mmol，3eq)，升溫至50℃攪拌反應20小時。減壓除去溶劑，加入乙酸乙酯(50mL)，用稀的氫氧化鈉溶液(1N，20mL×2)洗滌，飽和食鹽水(20mL×2)洗滌，分層。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓除去溶劑，管柱層析純化(乙酸乙酯)得到標題化合物(0.23g)，為白色固體化合物BO，純度95%，產率45%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.10(dd,J=1.2Hz,8.8Hz,1H),7.32-7.38(m,2H),7.61-7.63(m,2H),7.89-7.91(m,1H),8.13-8.17(m,2H),8.42(d,J=6.8Hz,1H),8.76(d,J=1.6Hz,1H),9.53(br,1H),11.35(br,1H)。

MS(ESI,m/z)calcd.for C₂₁H₁₂D₃ClF₄N₄O₄：501,found：502[M+H]⁺。

實施例8

CM4309鹽的製備

1：CM4309鹽酸鹽(4309‧HCl)的製備

將4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(2.5g，5.16mmol，1eq)懸浮於乙醇(50mL)中，加熱回流至溶液澄清，趁熱過濾除去不溶物後，將濾液加熱回流，加入濃鹽酸(37%，6.39mmol，0.6mL，1.24eq)，澄清液保持0.5分鐘左右，關掉油浴自然冷卻至室溫，攪拌1小時，過濾得到不溶物，50℃真空乾燥20小時，得到標題化合物，為淺灰色固體2.56g，產率：95%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 7.08-7.10(m,1H),7.24(dd,J=3.2Hz,5.6Hz,1H),7.36(dd,J=2.8Hz,11.6Hz,1H),7.52(d,J=2.4Hz,1H),7.64(s,2H),8.14(s,1H),8.18(t,J=9.2Hz,1H),8.56(d,J=5.6Hz,1H),8.89(br,1H),8.97(br,1H),10.05(br,1H),10.23(br,1H)。

熔點：240℃-241.5℃

元素分析 理論值：C,48.29%；H,3.67%；N,10.73%.實測值：C,48.33%；H,3.20%；N,10.93%。

2：CM4309甲磺酸乙醇合物(4309‧MeSO ₃ H‧CH ₃ CH ₂ OH)的製備

將4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(2.1g，4.33mmol，1eq)懸浮於乙醇(50mL)中，加熱回流至溶液澄清， 趁熱過濾除去不溶物後，將濾液加熱回流，加入甲磺酸(85%，8.66mmol，0.6mL，2eq)，澄清液保持0.5分鐘左右，關掉油浴自然冷卻至室溫，攪拌1小時，過濾得到不溶物，50℃真空乾燥20小時，得到標題化合物，為淡紅色固體2.25g，產率為89%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 1.05(t,J=6.8Hz,3H),2.48(s,3H),3.44(q,J=6.8Hz,2H),7.11(dd,J=1.2Hz,8.4Hz,1H),7.31(dd,J=2.8Hz,6Hz,1H),7.38(dd,J=2.4Hz,11.6Hz,1H),7.61-7.65(m,3H),8.14-8.19(m,2H),8.60(d,J=6Hz,1H),8.90(t,J=1.2Hz,1H),8.99(br,1H),9.39(br,1H),9.66(br,1H)。

熔點：157.5℃-158.1℃。

3：CM4309對甲苯磺酸鹽(4309‧TsOH)的製備

將4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺(2.16g，4.33mmol，1eq)懸浮於乙醇(50mL)中，加熱回流至溶液澄清，趁熱過濾除去不溶物後，將濾液加熱回流溶清，一次性快速加入對甲苯磺酸(70%，8.66mmol，1mL，2eq)，澄清液保持0.5分鐘左右，關掉油浴自然冷卻至室溫，攪拌1小時，過濾得到不溶物，50℃真空乾燥20小時，得到白色晶體2.36g，產率為83%。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ 2.30(s,3H),7.09-7.14(m,3H),7.24(dd,J=2.4Hz,5.2Hz,1H),7.37(dd,J=2.4Hz,11.6Hz,1H),7.48-7.50(m,3H),7.61-7.66(m, 2H),8.15-8.19(m,2H),8.56(d,J=5.6Hz,1H),8.79(br,1H),8.85(br,1H),9.56(br,1H),10.38(br,1H)。

熔點：240.7℃-241℃。

實施例9

對於c-Kit、PDGFR-β蛋白酪胺酸激酶分子層級抑制活性

1、實驗方法

本實施例採用酵素結合免疫吸附分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)測定二苯基脲化合物對c-Kit、PDGFR-β蛋白酪胺酸激酶分子層級抑制活性。

測定的化合物：CM4306、CM4308(4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-N-甲基吡啶醯胺)、CM4309。

主要試劑：

反應底物Poly(Glu,Tyr)_4：1購自Sigma公司；抗磷酸化酪胺酸的單株抗體PY99購自Santa Cruz公司；辣根過氧化物酶標記羊抗鼠的IgG購自Calbiochem公司；ATP、DTT、OPD購自Amresco公司；ELISA盤購自Corning公司；Su11248購自Merk公司。

實驗方法：

參見Roskoski,R.,Jr.Sunitinib：a VEGF and PDGF receptor protein kinase and angiogenesis inhibitor.Biochem Biophys Res Commun,356：323-328,2007，具體包 括：激酶反應底物Poly(Glu,Tyr)_4：1用無鉀離子的PBS稀釋成20μg/mL，塗佈ELISA盤。在塗佈好的ELISA盤井內加入受試的二苯基脲樣品(受試樣品先用DMSO配製成10^-2M的儲存液，臨用前用反應緩衝液稀釋到所需濃度，加至實驗井內，使其在100μL反應體系的終濃度為10^-5mol/L)。同時設立陽性對照井，加入陽性對照化合物Su11248。

加入用反應緩衝液稀釋的ATP溶液(ATP終濃度5μM)，最後，加入用反應緩衝液稀釋的受試酪胺酸激酶。反應體系總體積為100μL。同時設立陰性對照井和無酶對照井。

將反應體系置於濕盒內，37℃搖晃避光反應1h，反應結束後T-PBS洗盤三次。加入抗體PY99 100μL/井，37℃搖晃反應30min。T-PBS洗盤三次。加入辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠的IgG 100μL/井，37℃搖晃反應30min。T-PBS洗盤三次。加入OPD顯色液100μL/井，室溫避光反應1-10min。加入2M H₂SO₄ 50μL中止反應，用可調波長式ELISA讀取儀VERSAmax測A492值。

通過下列公式計算樣品的抑制率：

2、實驗結果

以上實驗結果為兩次試驗的均值。

3、評價標準和結果評價

在陽性對照化合物的抑制活性符合參考範圍的前提下，受試化合物在實驗濃度10^-5mol/L下，抑制率大於50%判定其有效；抑制率小於50%判定無效。

結果顯示，CM4306、CM4308、CM4309對蛋白酪胺酸激酶c-Kit、PDGFR-β的抑制率大於50%，故在分子水準具有顯著的針對c-Kit、PDGFR-β酪胺酸激酶的抑制活性。

實施例10

CM4306、CM4308和CM4309的大鼠藥物動力學研究

3雄性SD大鼠，體重220g左右，禁食過夜後，同時灌胃給予4mg/kg(折算成鹼)CM4306、CM4308和CM4309的混合溶液[PEG400為載體]。分別在給藥後0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，9.0，24，36，48和72h採血，用LC/MS/MS測定血漿中CM4306和CM4307的濃度。

結果顯示，CM4309(23.7h±2.9h)的t1/2顯著高於CM4306(12.5h±2.4h)和CM4308(11.1h±0.9h)。

CM4309(32611ng‧h/mL±7866ng‧h/mL)的AUC(0-∞)顯著高於CM4308(13371ng‧h/mL±4958ng‧h/mL)。

實施例11

CM4306、CM4308和CM4309的體內藥效學研究

腫瘤裸鼠移植模型的建立：收穫對數生長期的SMMC-7721細胞，計數後將細胞懸於1×PBS，調整細胞懸液濃度至1.5×10⁷/mL，在裸鼠右側腋下皮下接種腫瘤細胞，3×10⁶/0.2mL/隻。共接種45隻裸鼠。在腫瘤體積達到30-130mm³時，將動物進行隨機分組，共獲得34隻動物，使各組腫瘤差異小於均值的10%，並開始給藥。對照組10隻裸鼠，治療組每組8隻裸鼠。CM4306、CM4308和CM4309單劑量30mg/kg每日灌胃給藥連續2周；停藥後繼續觀察 ，直至腫瘤體積大於2000mm³，試驗期間每週測定兩次動物體重和腫瘤大小。化合物溶解在Cremophor EL/ethanol/water(12.5：12.5：75)中。

腫瘤體積(Tumor volume，TV)的計算公式為：TV=a×b²/2。其中a、b分別代表腫瘤測量長和寬。相對腫瘤體積(relative tumor volume，RTV)計算公式為：RTV=Vt/V₀。其中V₀為分組給藥時的腫瘤體積，Vt為測量時的腫瘤體積。抗腫瘤活性的評價指標為相對腫瘤增值率T/C(%)，計算公式為：T/C(%)=(T_RTV/C_RTV)×100%。T_RTV為治療組RTV，C_RTV為陰性對照組RTV。

療效評價標準：T/C(%)40%並經統計學分析p<0.05為有效。

給藥結束後，CM4306 30mg/kg的T/C(%)為64.1%，CM4308的T/C(%)為51.0%，CM4309為27.0%。其中CM4309在30mg/kg的抑制率<40%，腫瘤體積與對照比較有顯著差異(p<0.01)，表現顯著的抑制腫瘤生長的作用。在相同劑量下，CM4306和CM4308的腫瘤體積之間沒有顯著差異(p>0.05)，而CM4309與CM4306(p<0.05)和CM4308(p<0.01)的腫瘤體積之間有顯著差異(圖1)。

實施例12-14 藥物組合物

其中，活性化合物分別為實施例6-8中製備的 CM4309、CM4309氧化物或CM4309的甲磺酸乙醇合物。按常規方法，將上述物質混合均勻後，裝入普通明膠膠囊，各得到1000顆膠囊。

在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。

Claims (10)

1. 一種下式化合物的鹽， 其中，該化合物的鹽是擇自於該化合物的鹽酸鹽、該化合物的對甲苯磺酸鹽，或該化合物的甲磺酸鹽。
2. 一種製備下式化合物的鹽的方法，包括以下步驟：將下式化合物與酸反應，其中，該酸是擇自於鹽酸、對甲苯磺酸或甲磺酸；
3. 如請求項2所述的製備下式化合物的鹽的方法，其中，該酸為鹽酸時，將4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺與乙醇混合，並加熱迴流至溶液澄清，之後進行過濾處理，並將濾液加熱迴流，接著，加入鹽酸，冷卻至室溫並過濾，取得濾餅後進行乾燥處理。
4. 如請求項2所述的製備下式化合物的鹽的方法，其中，該酸為對甲苯磺酸時，將4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺與乙醇混合，並加熱迴流至溶液澄清，之後進行過濾處理，並將濾液加熱迴流，接著，加入對甲苯磺酸，冷卻至室溫並過濾，取得濾餅後進行乾燥處理。
5. 一種下式化合物的溶劑合物， 其中，該化合物的溶劑合物是擇自於該化合物的甲磺酸乙醇合物。
6. 一種製備請求項5所述的下式化合物的溶劑合物的方法，包括以下步驟：將4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺與乙醇混合，並加熱迴流至溶液澄清，之後進行過濾處理，並將濾液加熱迴流，接著，加入甲磺酸，冷卻至室溫並過濾，取得濾餅後進行乾燥處理。
7. 一種4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)吡啶-1-氧化物，是由下式所示：
8. 一種製備4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘甲基胺基甲醯基)吡啶-1-氧化物的方法，包括以下步驟：將一包括4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)醯脲)-3-氟-苯氧基)-2-(N-1’,1’,1’-三氘代甲基)吡啶醯胺與氧化劑的混合物進行反應。
9. 一種下式化合物的鹽的用途， 該化合物的鹽用於製備抑制磷酸激酶的藥物組合物，其中，該化合物的鹽是擇自於包括該化合物的鹽酸鹽、該化合物的對甲苯磺酸鹽，或該化合物的甲磺酸鹽。
10. 一種下式化合物的溶劑合物的用途， 該化合物的溶劑合物用於製備抑制磷酸激酶的藥物組合物，其中，該化合物的溶劑合物是擇自於該化合物的甲磺酸乙醇合物。