TW201402129A - 包含蘿蔔硫素之組成物或包含一種蘿蔔硫素前驅物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組成物 - Google Patents

Abstract

本發明係關於一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及奶薊萃取物或奶薊粉末之組合。本發明亦與一種蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合有關。本發明亦與一種青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合有關。本發明提供與該些組合有關之組成物及方法。

Description

包含蘿蔔硫素之組成物或包含一種蘿蔔硫素前驅物及一種奶薊萃取物或奶 薊粉末之組成物

本申請案主張以下申請案之優先權，各該申請案之全部內容茲列為本申請案之參照：2012年7月5日申請之美國臨時專利申請案61/668,328號2012年7月5日申請之美國臨時專利申請案61/668,342號2012年7月5日申請之美國臨時專利申請案61/668,386號、2012年7月5日申請之美國臨時專利申請案61/668,396號、2012年7月5日申請之美國臨時專利申請案61/668,364號、2012年7月5日申請之美國臨時專利申請案61,668,374號，以及2013年3月15日申請之美國臨時專利申請案61/794,417號。

本發明係關於一種蘿蔔硫素前驅物一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑(enzyme potentiator)，以及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合。本發明亦與一種蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合有關。本發明亦與一種青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合有關。本發明提供與該些組合有關之組成物及方法。

天然物的使用在人類及寵物間越來越廣泛。一些天然物會與膳食補充品及醫療用食品結合。本發明所屬技術領域對於可作為化學保護 劑及/或抗氧化劑之補充品有所需求。此外，對於可用在麩胺基硫(glutathione)相關疾病及失調之醫藥組成物及膳食補充品，本發明所屬技術領域亦有需求。為預防或減少影響人類及家養動物之許多疾病發生，透過使用天然物以提供化學保護(chemoprotection)正逐漸成為一種安全、有效、價廉、容易取得且實用的方式。目前已知，可在分子等級對細胞造成損害的致癌物，經常以無毒前驅物的形式被攝取及吸入。這些無毒前驅物之後在體內會轉換成致癌物質。化學保護劑，例如可活化去毒酵素或其輔助因子的天然物質，可抵消致癌物之作用及允許致癌物之清除。這些天然物質亦可增強其他現有的自然防禦機制，例如免疫系統。

某些天然物具有抗氧化活性。在老化、神經退化性疾病之進程，以及諸如局部缺血之生理創傷中，氧化壓力(oxidative stress)扮演了主要角色。抗氧化劑可減少或抑制重要維生生物分子的氧化，亦可在治療、預防或減少氧化壓力相關疾病發生等方面發揮其作用。

某些天然物有助於增進肝臟健康。在美國，非酒精性脂肪肝疾病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是最常見的肝臟疾病，大約有30%的人口受其影響。NAFLD亦稱肝脂沉積(hepatic lipidosis)。在有NAFLD疾病的人中，10%會發展成非酒精性脂肪變性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)，當中有25%會發展成肝硬化(cirrhosis)。肝硬化患者中，有10~25%可能發展成肝癌(hepatocellular carcinoma)。按照此速度及目前沒有有效治療方式的情況下，預計2030年前肝癌將成為美國診斷罹癌排名第一位。NAFLD的發生是因脂肪在肝臟中沉積(脂肪變性，steatosis)，而非由於酒精濫用。NAFLD與慢性炎症、胰島素阻抗(insulin resistance)、糖尿病及肥胖症有關。NAFLD幾乎沒有或完全沒有症狀，經常是在常規血液測試結果有異常(亦即血清ALT及AST水平升高)後才發現，然後經超音波或組織切片後確認。NAFLD目前無法以手術或藥物治療。控制NAFLD的建議包含調整生活方式，例如健康的飲食、運動、減重、降低膽固醇及控制糖尿病。

NAFLD經常與麩胺基硫(glutathione)水平降低有關。麩胺基硫是一種三肽(tripeptide)，其在半胱氨酸之胺基與穀胺酸側鏈之羧基間有一γ肽鍵。麩胺基硫在體內扮演重要角色，因其可作為一種抗氧化劑、解毒劑及免疫調節劑。麩胺基硫可與代謝物及毒素，例如前致癌物(procarcinogens)，共軛結合，以從身體排出。在病人體內，麩胺基硫的水平可能因幾種原因而下降，包括不健康的飲食、污染、曝露在毒素及/或某些藥物下、壓力、創傷、老化、感染及輻射。低水平之麩胺基硫會使病人易受氧化壓力、疾病及癌症所影響。舉例而言，麩胺基硫的水平降低與肝臟、前列腺、腦部、肺臟、腎臟、大腸、乳房、食道、胰臟、卵巢等等相關疾病有關。與麩胺基硫低水平及麩胺基硫缺乏有關聯之病症包含但不限於：NAFLD、癌症(肺癌、前列腺癌、大腸癌、乳癌、腦癌、肝癌、卵巢癌、食道癌、胰臟癌、鼻咽癌、骨肉瘤)、白血病、囊性纖維變性、人類後天免疫不全病毒(HIV)、麩胺基硫合成酵素缺乏(glutathione synthetase deficiency)、阿滋海默氏症、帕金森氏症、亨丁頓舞蹈症、肌萎縮性側索硬化(ALS)、Friedreich共濟失調、多發性硬化、纖維肌痛(fibromyalgia)、慢性疲勞、自閉症，以及糖尿病。

蘿蔔硫素(sulforaphane)是被認為具化學保護及抗氧化特 性的天然物之一實例。蘿蔔硫素是一種有機硫化合物，又稱1-isothiocyanato-4-methylsulfinylbutane。蘿蔔硫素前驅物，即蘿蔔苷(glucoraphanin)，可從十字花科蔬菜中獲得，例如青花菜、抱子甘藍及甘藍。但要獲得產生化學保護所需的水平，必須食用非常大量的蔬菜。蘿蔔苷係由稱作芥子酵素(myrosinase)的一種硫代葡萄糖苷酵素(thioglucosidase enzyme)轉換成蘿蔔硫素，該轉換發生於各種外因性來源(例如十字花科蔬菜)及內因性之腸道菌相中。然而，不是所有動物都能在攝取蘿蔔苷後將其轉換成蘿蔔硫素，原因很可能是微生物相及整體健康的變化。此外，在諸如胃等酸性環境中，蘿蔔苷可能被轉換成惰性代謝物。活性代謝物蘿蔔硫素能夠誘發核轉錄因子nuclear factor erythroid-2-related factor(Nrf2),Nrf2會轉而上調(upregulate)第二階段去毒酵素(Phase II detoxification enzymes)及細胞保護酵素(cytoprotective enzymes)的產生，例如麩胺基硫轉移酵素(glutathione S-transferases)、氧化還原酵素NAD(P)H：quinine oxidoreductase(NQO1)，以及第一型血基質氧化酵素(heme-oxygenase-1,HO-1)。蘿蔔硫素已被認為可誘發這些酵素產生而不會顯著改變細胞色素P-450酵素的合成。第二階段酵素的上調被認為在各種生物活性中均發揮了作用，包含保護腦部不受細胞毒性影響、保護肝臟不受脂肪蓄積之毒性作用影響，以及其他各種組織之去毒。

蘿蔔硫素及其前驅物蘿蔔苷已受到廣泛研究。Shapiro等人在Nutrition and Cancer,(2006),Vol.55(1),pp.53-62之文章中討論了一項第一階段臨床試驗，該試驗係測定青花菜芽之硫代葡萄糖苷(glucosinolates)及異硫氰酸酯(isothiocyanates)之安全性、耐受性及代謝。Shapiro等人討 論以含有硫代葡萄糖苷(例如蘿蔔苷)或異硫氰酸酯(例如蘿蔔硫素)之青花菜芽萃取物，對健康人類受試者所進行的一項有安慰劑控制組、雙盲、隨機之臨床試驗。該試驗發現，給受試者服用這些物質並不會導致系統的、有臨床顯著性之不良反應。

奶薊(Silybum marianum)是一種菊科植物。奶薊含有水飛薊素(silymarin)，水飛薊素由數種成分組成，包含但不限於黄酮木脂素(flavonolignans)，例如水飛薊賓(silibinin，亦稱silybin或silibin)、異水飛薊賓(isosilibinin)、水飛薊亭(silichristin)、水飛薊寧(silydianin)、檞皮素(kvercetin)、脫氫水飛薊賓(dehydrosilybin)、去氧水飛薊亭(deoxysilycistin)、去氧水飛薊寧(deoxysilydianin)、silandrin、silybinome、silyhermin及neosilyhermin。水飛薊素之成分具有若干生物效應，包括抑制自由基形成、結合自由基群組(free radical species)、防止細胞膜脂質過氧化反應、增加麩胺基硫之水平，以及鐵之螯合作用。水飛薊賓為水飛薊素之主要活性成分，水飛薊賓被認為具有護肝特性。有關水飛薊素之討論見美國專利7,563,779號，該專利之全部內容茲以此述及方式納入本說明書。

Zhang等人在Proc.Natl.Acad.Sci.,(1994),Vol.91,pp.3147-3150之文章中討論了一項對SD大鼠進行之試驗，以測定蘿蔔硫素及與其結構相關之合成降莰基異硫氰酸酯(norbornyl isothiocyanates)之抗致癌活性。該試驗測定出，給予服用蘿蔔硫素在阻斷乳腺腫瘤形成方面有效果。

Cornblatt等人在Carcinogenesis,(2007),Vol.38(7)：pp.1485-1490之文章中討論了一項對SD大鼠進行之試驗，以測定蘿蔔硫素在乳房中之化學預防效果。該試驗測定出，口服蘿蔔硫素或蘿蔔苷其中之一可 使乳腺上皮細胞中氧化還原酵素NAD(P)H：quinine oxidoreductase(NQO1)之酵素活性增加到三倍，及使第一型血基質氧化酵素(HO-1)之免疫染色提高到四倍。

Munday等人在Cancer Res,(2008),Vol.68(5)：pp.1593-1600之文章中討論了一項對大鼠進行之試驗，該試驗係關於青花菜芽之一種冷凍乾燥水萃取物對膀胱癌進展之效應。該試驗發現，給予服用該青花菜芽萃取物可顯著誘發膀胱中的麩胺基硫轉移酵素及氧化還原酵素NAD(P)H：quinine oxidoreductase(NQO1)，該些酵素係對抗氧化物及致癌物施以防護活性之酵素。

Aghazadeh S等人在Exp Toxicol Pathol.(2011)Sep；63(6)：569-74之文章中討論在實驗性脂肪變性肝炎之治療中，奶薊之抗凋亡及抗發炎作用。該研究發現，相較於僅以甲硫胺酸與膽鹼缺乏(methionine and choline deficient,MCD)飲食飼養之控制組大鼠而言，給予用MCD飲食所飼養以誘發非酒精性脂肪變性肝炎之大鼠服用一種奶薊萃取物，可改善其體內AST及ALT之活性並增加麩胺基硫之含量。

歐洲專利申請案2213280號揭露了包含硫代葡萄糖苷(例如蘿蔔苷)及芥子酵素之配方，其中該配方係封入膠囊或以膜衣包覆。

本說明書所引用之一切參考資料其全部內容茲以此述及方式納入本說明書。

本發明提供一種組成物，該組成物包含：(i)一種蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷；(ii)一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔 硫素之酵素，較佳者為一種葡萄糖苷酵素(glucosidase enzyme)，更佳者為一種硫代葡萄糖苷酵素(thioglucosidase enzyme)，尤佳者為芥子酵素；(iii)一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸；以及(iv)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對一受試者之肝臟、前列腺、腦部、肺臟、腎臟、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關之一種疾病或狀況，提供一種治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)一種蘿蔔硫素前驅物、(ii)一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、(iii)一種酵素增強劑，以及(iv)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對有必要增加其體內麩胺基硫水平之一受試者，提供一種增加其體內麩胺基硫水平之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)一種蘿蔔硫素前驅物、(ii)一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、(iii)一種酵素增強劑，以及(iv)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對一種非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)及/或其他肝臟障礙，提供一種治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)一種蘿蔔硫素前驅物、(ii)一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、(iii)一種酵素增強劑，以及(iv)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。

本發明提供一種組成物，該組成物包含：(i)蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對一受試者之肝臟、前列腺、腦部、肺臟、腎臟、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關之一種疾病或狀況，提供一種治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)蘿 蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對有必要增加其體內麩胺基硫水平之一受試者，提供一種增加其體內麩胺基硫水平之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對一種非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)及/或其他肝臟障礙，提供一種治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。

本發明提供一種組成物，該組成物包含：(i)一種青花菜萃取物或青花菜粉末，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對一受試者之肝臟、前列腺、腦部、肺臟、腎臟、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關之一種疾病或狀況，提供一種治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)一種青花菜萃取物或青花菜粉末，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對有必要增加其體內麩胺基硫水平之一受試者，提供一種增加其體內麩胺基硫水平之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)一種青花菜萃取物或青花菜粉末，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。本發明亦針對一種非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)及/或其他肝臟障礙，提供一種治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用：(i)一種青花菜萃取物或青花菜粉末，以及(ii)一種奶薊萃取物或奶薊粉末。

圖1為一圖表，其呈現在38℃無抗壞血酸環境下蘿蔔苷之轉換，如實例4所述。

圖2為一圖表，其呈現蘿蔔苷在38℃下大約10分鐘內之轉換作為抗壞血酸濃度之函數，如實例4所述。

圖3為一圖表，其呈現在38℃及1mM抗壞血酸環境下，30分鐘內轉換成之蘿蔔硫素，如實例4所述。

圖4為一圖表，其呈現蘿蔔苷在模擬腸液中轉換成蘿蔔硫素，如實例5所述。

圖5為一圖表，其呈現實例6所述之實驗結果。

圖6為一圖表，其呈現實例6所述之實驗結果。

本發明係關於一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合。本發明亦與蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合有關。本發明亦與一種青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合有關。本發明亦與使用一種奶薊萃取物或奶薊粉末，並搭配由下列當中一項或多項所混合之物有關：蘿蔔硫素前驅物、蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，及青花菜萃取物。本發明提供與該些組合有關之組成物。

本發明提供包含給予服用該些組合之方法。在一些實施例中，可針對一受試者之肝臟、前列腺、腦部、肺臟、腎臟、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關之一種疾病或狀況，給予該受試者服用該組合，以 治療、預防、減少該疾病或狀況之發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發。在一些實施例中，可針對有必要增加其體內麩胺基硫水平之一受試者給予服用該組合，以增加其體內麩胺基硫之水平。在一些實施例中，可針對一受試者體內一種非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)及/或其他肝臟障礙，給予該受試者服用該組合，以治療、預防、減少該疾病或狀況之發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發。

蘿蔔硫素亦稱1-isothiocyanato-4-methylsulfinylbutane。蘿蔔硫素之衍生物包含但不限於蘿蔔硫素之次硫酸硫代氨基甲酸鹽類似物(sulfoxythiocarbamate analogues)、6-methylsulfinylhexyl isothiocyanate(6-HITC)，以及包含蘿蔔硫素結構，但在異硫氰基(isothiocyanato group)及亞碸基(sulfoxide group)間有不同側鏈及/或不同間距基長度之化合物。蘿蔔硫素衍生物之範例包含以下參考資料所述者，各該參考資料之全部內容茲以此述及方式納入本說明書：Hu等人發表於Eur J Med Chem,2013,64：529-539之文章；Ahn等人發表於Proc Natl Acad Sci USA,2010,107(21)：9590-9595之文章；Morimistu等人發表於J.Biol.Chem.2002,277：3456-3463之文章；以及Baird等人發表於Arch Toxicol,2011,85(4)：241-272之文章。

在一些實施例中，該組成物包含蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，較佳者為蘿蔔硫素，其份量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約3μg至大約5g，較佳者為大約5μg至大約1000mg，較佳者為大約7μg至大約750mg，更佳者為大約10μg至大約500mg，尤佳者為大約100μg至大約100mg。在一些實施例中，適於人類使用之組成物包含大約1mg至大約20 mg。

在一些實施例中，本發明之方法包含給予一受試者服用蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，較佳者為蘿蔔硫素，其用量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約3μg至大約5g，較佳者為大約5μg至大約1000mg，較佳者為大約7μg至大約750mg，更佳者為大約10μg至大約500mg，尤佳者為大約100μg至大約100mg。在受試者為人類之一些實施例中，該方法包含給予受試者服用大約1mg至大約20mg。在一些實施例中，本發明之方法包含給予一受試者服用蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物，較佳者為蘿蔔硫素，其用量為大約0.01μg/kg至大約0.2g/kg，較佳者為大約0.05μg/kg至大約0.07g/kg，更佳者為大約0.07μg/kg至大約15mg/kg，更佳者為大約0.1μg/kg至大約11mg/kg，尤佳者為大約0.2μg/kg至大約7mg/kg。在受試者為人類之一些較佳實施例中，該方法包含給予受試者服用大約2μg/kg至大約2mg/kg之用量，更佳者為大約0.01mg/kg至大約0.3mg/kg之用量。上述該些用量可指每劑服用之量或每日總劑量。每日總劑量係指在24小時內給予一受試者服用之一種化合物或成分之總量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用一種蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物當中不只一者。在一些實施例中，該些組成物包含一種蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物當中不只一者。舉例而言，該些方法或組成物可同時包含蘿蔔硫素及蘿蔔硫素之一種或多種衍生物，或同時包含兩種或更多種衍生物。在一些實施例中，當該方法或組成物包含一種蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物當中不只一者時，上文所述之量可指每種蘿蔔硫素或每一種蘿蔔硫素衍生物各別之量，或指不只一種之蘿蔔硫素或蘿 蔔硫素衍生物之總量。

在本說明書中，「蘿蔔硫素前驅物」一詞係指可用於生產蘿蔔硫素之任何化合物、物質或原料。在較佳實施例中，該蘿蔔硫素前驅物包含可被轉換或代謝成蘿蔔硫素之一種化合物，較佳者為由一種酵素轉換或代謝成蘿蔔硫素。在一些較佳實施例中，該蘿蔔硫素前驅物包含蘿蔔苷。蘿蔔苷是一種硫代葡萄糖苷，亦稱4-methylsulfinylbutyl glucosinolate及1-S-[(1E)-5-(methylsulfinyl)-N-(sulfonatooxy)pentanimidoyl]-1-thio-β-D-glucopyranose。

在一些實施例中，該組成物包含該蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷，其份量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約250μg至大約5g，更佳者為大約500μg至大約2000mg，甚佳者為大約1mg至大約750mg，再甚佳者為大約1.5mg至大約250mg，更甚佳者為大約2mg至大約100mg，尤佳者為大約3mg至大約75mg。在一些實施例中，適於人類使用之組成物包含大約3.5mg至大約50mg之該蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷。

在一些實施例中，該方法包含給予一受試者服用該蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷，其份量為大約1μg至大約10g，較佳者為大約250μg至大約5g，更佳者為大約500μg至大約2000mg，甚佳者為大約1mg至大約750mg，再甚佳者為大約1.5mg至大約250mg，更甚佳者為大約2mg至大約100mg，尤佳者為大約3mg至大約75mg。在受試者為人類之一些實施例中，該方法包含給予受試者服用大約3.5mg至大約50mg。在一些實施例中，該方法包含給予一受試者服用一份量之蘿蔔硫素前驅物，其用量為大約1μg/kg至大約1000mg/kg，較佳者為大約5μg/kg至大約500mg/kg，更佳者為 大約7.5μg/kg至大約100mg/kg，甚佳者為大約10μg/kg至大約25mg/kg，尤佳者為大約25μg/kg至大約10mg/kg。在受試者為人類之一些實施例中，該方法包含以大約50μg/kg至大約800μg/kg之用量給予受試者服用。上述該些用量可指每劑服用之量或指每日總劑量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用不只一種蘿蔔硫素前驅物。在一些實施例中，該組成物包含不只一種蘿蔔硫素前驅物。在一些實施例中，當該方法或組成物包含不只一種蘿蔔硫素前驅物時，上述該些用量可指每一種蘿蔔硫素前驅物之量，或指該些蘿蔔硫素前驅物之總量。

該蘿蔔硫素前驅物可被轉換或代謝成蘿蔔硫素。在一些實施例中，該蘿蔔硫素前驅物係由一種酵素轉換成蘿蔔硫素。在一些實施例中，能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素包含一種葡萄糖苷酵素(glucosidase enzyme)，較佳者為一種硫代葡萄糖苷酵素(thioglucosidase enzyme)，更佳者為芥子酵素。芥子酵素亦稱硫代葡萄糖苷醣類水解酵素(thioglucoside glucohydrolase)。

在一些實施例中，該組成物包含該酵素之量為大約1pg至大約1ug，較佳者為大約50pg至大約500ng，尤佳者為大約1ng至大約150ng。在一些實施例中，適於人類使用之組成物包含之該酵素為大約5ng至大約75ng。

在一些實施例中，該方法包含以大約1pg至大約1μg，較佳者為大約50pg至大約500ng，尤佳者為大約1ng至大約150ng之量給予服用該酵素，較佳者為芥子酵素。在受試者為人類之一些實施例中，該方法包含給予服用大約5ng至大約75ng之該酵素。在一些實施例中，該方法包含 給予一受試者服用該酵素，其用量為大約0.02pg/kg至大約0.02ug/kg，較佳者為大約0.7pg/kg至大約7ng/kg，尤佳者為大約0.02ng/kg至大約2ng/kg。在受試者為人類之一些較佳實施例中，該方法包含以大約0.1ng/kg至大約1ng/kg之量給予服用。上述該些用量可指每劑服用之量或每日總劑量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用不只一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素。在一些實施例中，該組成物包含不只一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素。在一些實施例中，當該些方法或組成物包含不只一種酵素時，上述該些用量可指每一種酵素之量，或指該些酵素之總量。

本發明亦提供一種青花菜萃取物及/或青花菜粉末之使用，包含但不限於青花菜種子及青花菜芽之萃取物及粉末。本發明提供給予服用青花菜萃取物及/或青花菜粉末之方法，以及包含青花菜萃取物及/或青花菜粉末之組成物。在一些實施例中，該青花菜萃取物或青花菜粉末經過標準化處理，使之包含大約1%至大約75% w/w，更佳者為大約2.5%至大約50% w/w，甚佳者為大約5%至大約25% w/w，尤佳者為大約10%至大約20% w/w之一種蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷。青花菜萃取物及青花菜粉末之範例包含但不限於美國專利5,411,986號；5,725,895號；5,968,505號；5,968,567號；6,177,122號；6,242,018號；6,521,818號；7,303,770號及8,124,135號所述者，各該專利之全部內容茲以此述及方式納入本說明書。青花菜粉末可經由將青花菜，較佳者為青花菜芽，舉例而言，風乾、冷凍乾燥、滾筒乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥及/或部分真空乾燥而獲得。在一些實施例中，該些組成物及方法包含使用大約1μg至大約10g，更佳者為大約250μg至大 約5g，甚佳者為大約500μg至大約1g，較佳者為大約600μg至大約500mg，更佳者為大約750μg至大約400mg，尤佳者為大約1mg至大約300mg之該青花菜萃取物。在一些實施例中，該青花菜萃取物或青花菜粉末係存在於一組成物中，或係以足夠提供上述該些份量之一種蘿蔔硫素前驅物或蘿蔔硫素之量，而給予一受試者服用。在一些實施例中，該組成物可更包含一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。在一些實施例中，該方法可更包含給予服用一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。

蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物、該蘿蔔硫素前驅物，及/或能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素，可取自任何來源，包含但不限於十字花科(亦稱蕓薹科)之一種或多種植物。十字花科植物之範例包含但不限於以下所列者：青花菜、抱子甘藍、花椰菜、甘藍、辣根、歐洲防風、蘿蔔、山葵、水田芥及白芥菜。在一些較佳實施例中，蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷，以及該酵素，較佳者為芥子酵素，係取自青花菜、青花菜芽或青花菜種子。該蘿蔔硫素前驅物及該酵素可取自相同來源或不同來源。在一些實施例中，該蘿蔔硫素前驅物及該酵素可皆取自該些植物之一種萃取物或粉末，較佳者為青花菜種子或青花菜芽之一種萃取物或粉末。

本發明提供一種酵素增強劑之使用。酵素增強劑可用於加強能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素之活性。在一些實施例中，該酵素增強劑包含一種酵素輔助因子，較佳者為抗壞血酸。抗壞血酸，亦稱抗壞血酸鹽或維生素C，可增強芥子酵素之活性。在一些實施例中，當沒有諸如抗壞血酸之酵素增強劑存在時，轉換成蘿蔔硫素之反應可能會太 慢，以致無法在最大吸收(peak absorption)所需之位置發生。該酵素增強劑可取自一天然來源或以合成方式生產。

在一些實施例中，該些組成物可包含大約1mg至大約500mg，較佳者為大約1mg至大約250mg，尤佳者為大約1mg至大約125mg之該酵素增強劑。在一些較佳實施例中，適於人類使用者組成物包含大約1mg至大約50mg之該酵素增強劑。

在一些實施例中，本發明之方法包含以大約1mg至大約500mg，較佳者為大約1mg至大約250mg，尤佳者為大約1mg至大約125mg之量，給予服用一種酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。在受試者為人類之一些較佳實施例中，該方法包含給予服用大約1mg至大約50mg。在一些實施例中，本發明之方法包含以大約0.01mg/kg至大約3mg/kg，尤佳者為大約0.02mg/kg至大約2mg/kg之量，給予服用該酵素增強劑，較佳者為抗壞血酸。在受試者為人類之一些較佳實施例中，該方法包含以大約0.02mg/kg至0.7mg/kg之量給予服用該酵素增強劑。上述該些用量可指每劑服用之量或每日總劑量。

在一些實施例中，該方法包含給予服用不只一種酵素增強劑。在一些實施例中，該組成物包含不只一種酵素增強劑。在一些實施例中，當該方法或組成物包含不只一種酵素增強劑時，上述該些用量可指每一種酵素增強劑之量，或指該些酵素增強劑之總量。

本發明更包括一種奶薊萃取物或奶薊粉末之使用。奶薊屬於Silybum marianum種。奶薊包含具有生物活性之數種成分或區分(fraction)。奶薊之一種有效區分為水飛薊素，其包含數種組成成分。水飛薊素成分之 實例包含但不限於：水飛薊賓(亦稱silybin或silibin)、異水飛薊賓(isosilibinin)、水飛薊亭(silichristin)、水飛薊寧(silydianin)，以及檞皮素(kvercetin)、脫氫水飛薊賓(dehydrosilybin)、去氧水飛薊亭(deoxysilycistin)、去氧水飛薊寧(deoxysilydianin)、silandrin、silybinome、silyhermin，以及neosilyhermin。水飛薊賓之異構物包含Silybinin A(或Silibinin A)及Silybinin B(或Silbinin B)。在較佳實施例中，該奶薊萃取物或奶薊粉末包含水飛薊素。

在一些實施例中，本發明之該些組成物及方法可包含使用水飛薊素之一種或多種衍生物，而非一種奶薊萃取物或奶薊粉末，或是除一種奶薊萃取物或奶薊粉末外，還可包含使用水飛薊素之一種或多種衍生物。水飛薊素成分之衍生物包含上述化合物之任何修飾形態(modified form)，該些修飾形態包含但不限於7-醯基(7-O-acyl)及23-醯基(23-O-acyl)衍生物，以及類似物。水飛薊素成分之衍生物實例包含但不限於2,3-dehydrosilybin(DHS)；7-O-methylsilybin；7-O-galloylsilybin；7,23-disulphatesilybin(DSS)；7-O-palmitoylsilybin；以及23-O-palmitoylsilybin。衍生物之實例包含以下參考資料所述者，各該參考資料之全部內容茲以此述及方式納入本說明書：Agarwal等人於PLOS ONE,2013,8(3)：e60074發表之文章；英國專利GB 2167414號；以及加拿大專利CA1337124號。在一些實施例中，本發明之該些組成物及方法可包含使用純化形式或合成生產之水飛薊素或水飛薊賓，而非一種奶薊萃取物或奶薊粉末，或是除一種奶薊萃取物或奶薊粉末外，還可包含使用純化形式或合成生產之水飛薊素或水飛薊賓。

在一些實施例中，可使用該奶薊萃取物或奶薊粉末。在較佳實施例中，該奶薊萃取物包含水飛薊素。在較佳實施例中，該奶薊萃取物包含水飛薊賓。在一些實施例中，該奶薊萃取物或奶薊粉末係經過標準化處理，以包含大約25%至大約95%之水飛薊素，較佳者為大約50%至大約90%，更佳者為大約55%至大約85%之水飛薊素。在一些實施例中，該奶薊萃取物或奶薊粉末係經過標準化處理，以包含大約5%至大約75%之水飛薊賓，較佳者為大約10%至大約60%，更佳者為大約15%至大約50%，尤佳者為大約20%至大約35%之水飛薊賓。奶薊萃取物之實例包含但不限於美國專利6,555,141號；美國專利6,863,906號；美國專利7,563,779號；國際專利WO200908006號；歐洲專利EP2020238號；國際專利WO2009043671號；歐洲專利EP1584240號；以及國際專利WO2011076154號所述者，各該專利之全部內容茲以此述及方式納入本說明書。舉例而言，奶薊粉末可經由將奶薊風乾、冷凍乾燥、滾筒乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥及/或部分真空乾燥而獲得。

在一些實施例中，該些組成物及方法包含使用大約1.25mg至大約15g，較佳者為大約5mg至大約10g，尤佳者為大約10mg至大約7.5g之奶薊萃取物。在該組成物適於人類使用之一些較佳實施例中，該組成物包含大約25mg至大約5g之奶薊萃取物。在一些實施例中，該組成物包含大約0.75mg至大約15g，較佳者為大約3mg至大約7g，更佳者為大約7mg至大約5g，尤佳者為大約15mg至大約3.5g之水飛薊素。在該組成物適於人類使用之一些較佳實施例中，該組成物包含大約50mg至大約200mg之水飛薊素。在一些實施例中，該組成物包含大約0.3mg至大約5g，較佳者為大 約1.5mg至大約3g，更佳者為大約3mg至大約2g，尤佳者為大約7mg至大約1.5g之水飛薊賓。在該組成物適於人類使用之一些較佳實施例中，該組成物包含大約30mg至大約90mg之水飛薊賓。

在一些實施例中，該方法包含給予服用水飛薊素，其用量為大約1μg/kg至大約75mg/kg，較佳者為大約2.5μg/kg至大約50mg/kg，更佳者為大約5μg/kg至大約25mg/kg，又更佳者為大約10μg/kg至大約15mg/kg，尤佳者為大約15μg/kg至大約10mg/kg。在受試者為人類之一些較佳實施例中，該方法包含以大約1mg/kg至大約3mg/kg之量給予服用水飛薊素。在一些實施例中，該方法包含給予服用水飛薊賓，其用量為大約0.5μg/kg至大約50mg/kg，較佳者為大約1μg/kg至大約35mg/kg，更佳者為大約2.5μg/kg至大約25mg/kg，又更佳者為大約5μg/kg至大約10mg/kg，尤佳者為大約7.5μg/kg至大約5mg/kg。在受試者為人類之一些較佳實施例中，該方法更包含以大約300μg/kg至大約2mg/kg之量給予服用水飛薊賓。在使用一種水飛薊素成分之一衍生物之實施例中，該些方法及組成物可包含以大約0.75mg至大約15g，較佳者為大約3mg至大約7g，更佳者為大約7mg至大約5g，尤佳者為大約15mg至大約3.5g之量使用該衍生物。在該組成物適於人類使用之一些較佳實施例中，該些組成物所包含之一種水飛薊素成分之該衍生物為大約50mg至大約200mg。上述該些用量可指每劑服用之量或每日總劑量。

在一些實施例中，可使用S-腺苷甲硫胺酸(S-adenosylmethionine)代替該奶薊萃取物、水飛薊素及/或水飛薊賓，或是除該奶薊萃取物、水飛薊素及/或水飛薊賓外，還可使用S-腺苷甲硫胺酸。

本發明之方法可更包含給予服用一種或多種額外成分。本發明之組成物可更包含一種或多種額外成分。該些額外成分可包含有效藥劑成分、營養補充劑及營養萃取物。額外成分之範例包含，但不限於，檞皮素或檞皮素之一種衍生物、一種胺基醣類，例如葡萄糖胺、一種葡萄胺聚醣，例如軟骨素、鱷梨/大豆之不皂化物、維生素，例如維生素K2、咖啡果實、鎂、熊果酸、原花青素、α-及β-葡聚醣、薑黃素、植物固醇、植物固烷醇，以及S-腺苷甲硫胺酸(SAMe)。該些額外成分可存在於蔓越橘(Vaccinium macrocarpon)之萃取物(原花青素、檞皮素及熊果酸)、薑黃(Curcuma longa)、藥用蕈菇之萃取物，例如香菇(Lentinus edodes)、舞菇(Grifola frondosa)之萃取物，以及靈芝(Ganoderma lucidum)之萃取物中。

在一些實施例中，水飛薊素與蘿蔔硫素或一種蘿蔔硫素衍生物之比為大約1：1至大約75：1，較佳者為大約2：1至大約50：1，更佳者為大約2.5：1至大約25：1，甚佳者為大約5：1至大約15：1，尤佳者為大約6：1至大約9：1。在一些實施例中，水飛薊賓與蘿蔔硫素或一種蘿蔔硫素衍生物之比為大約1：2至大約35：1，較佳者為大約1：1至大約25：1，更佳者為大約1：1至大約15：1，甚佳者為大約2：1至大約10：1，尤佳者為大約2：1至大約5：1。在一些實施例中，水飛薊素與蘿蔔硫素前驅物之比為大約1：5至大約50：1，較佳者為大約1：2至大約25：1，更佳者為大約1：1至大約10：1，又更佳者為大約1.5：1至大約5：1，尤佳者為大約1：1至大約4：1。在一些實施例中，水飛薊賓與蘿蔔硫素前驅物之比為大約1：5至大約50：1，較佳者為大約1：2至大約25：1，更佳者為大約1：1至大約20：1，尤佳者為大約1：1至大約13：1。

在一些實施例中，該組成物包含一種單位劑量形式，其包含但不限於適合口服、直腸給藥、靜脈給藥、皮下給藥、肌內給藥、經皮給藥、經黏膜給藥及局部給藥之醫藥劑量形式。在一些較佳實施例中，該組成物包含一種口服劑型或一種直腸給藥劑型。口服劑型之範例包含但不限於藥錠、膠囊、可分散於飲料中之粉末、一種液體，例如溶液、懸浮液或乳劑、一種軟膏/咀嚼膠囊、一種咀嚼棒，或本發明所屬技術領域中已知之其他合適劑型。在較佳實施例中，該組成物包含一種藥錠、膠囊或柔軟之咀嚼點心。該些口服劑型可製備成快速釋放、持續釋放或延遲釋放。

在一些實施例中，用於提供至少該蘿蔔硫素前驅物、該酵素及該酵素增強劑之劑型，係能夠在消化道中具有pH值至少為4之一區域，較佳者為具有pH值至少為5之一區域釋放者，例如小腸，較佳者為十二指腸。在一些實施例中，用於提供至少該蘿蔔硫素或蘿蔔硫素衍生物，及/或該青花菜萃取物或青花菜粉末之劑型，係能夠在消化道中具有pH值至少為4之一區域，較佳者為具有pH值至少為5之一區域釋放者，例如小腸，較佳者為十二指腸。在一些實施例中，該奶薊萃取物或奶薊粉末，以及/或任何選擇性額外成分被釋放之區域，亦是在消化道中具有pH值至少為4之一區域，較佳者具有pH值至少為5之一區域，例如小腸，較佳者為十二指腸。前文所述之小腸包含十二指腸、空腸及迴腸。

在一些實施例中，每一種成分(亦即蘿蔔硫素前驅物、酵素、酵素增強劑、蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物、青花菜萃取物或青花菜粉末、奶薊萃取物或奶薊粉末，及/或額外成分)係同時釋放或相伴釋放(亦即在一短時間內彼此伴隨釋放)。這種方式優於被製備成在消化道中具有pH 值低於4之一區域(例如胃)釋放之含蘿蔔苷之組成物。因在此種低pH值環境下，其酸性環境會將蘿蔔硫素前驅物改而轉換成生理上非活性之其他最終產物，例如蘿蔔硫腈(sulforaphane nitrile)及環硫腈(epithionitrile)。

在一些實施例中，該些組成物可包括含有胃腸保護配方之口服組成物，其包含腸溶膜衣劑型或可耐受消化道中pH值低於4之一區域(例如胃)之降解之任何劑型。舉例而言，該口服組成物可包括含腸溶膜衣之一藥錠或膠囊。該腸溶膜衣所包括之材料可包含但不限於乙醯醋酸纖維素(cellulose acetate phthalate)、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素(hydroxypropyl methylcellulose phthalate)、聚乙烯醋酸纖維素(polyvinyl acetate phthalate)、甲基丙烯酸共聚物(methacrylic acid copolymer)、甲基丙烯酸：丙烯酸酯共聚物(methacrylic acid：acrylic ester copolymer)、羥丙基甲基纖維素琥珀酸醋酸鹽(hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate)、羥丙基甲基纖維素偏苯三甲酸酯(hydroxypropyl methylcellulose trimellitate)、蟲膠(shellac)、乙酸偏苯三甲酸酯纖維素(cellulose acetate trimellitate)、羧甲基乙基纖維素(carboxymethylethylcellulose)，及由前述者混合之物。該腸溶膜衣可包含本發明所屬技術領域中已知之任何合適之腸溶性聚合物。在一些實施例中，該組成物中該些成分之一種或多種可嵌入腸溶性聚合物之一基質。在一些實施例中，該些口服組成物包含會在胃酸中緩慢溶解並移動至小腸之一種耐酸膠囊，例如CAPSUGEL®所銷售之DRCAPS^TM耐酸膠囊，或其他任何耐酸膠囊。

在最佳形式下，該口服組成物係被一膜衣所圍住，該膜衣只會在周圍介質之pH值至少為4，更佳者為pH值至少為5，時才會溶解。作為 一替代方案，可採用以時間而非pH值來控制釋放之一種膜衣，其釋放速率被調整至只有在消化道之pH值上升到至少為4，更佳者為上升到至少為5，該些成分才會被釋放。這樣，一種按時間釋放(緩釋)之配方可用於防止該蘿蔔硫素前驅物、能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素及該酵素增強劑，或是防止該蘿蔔硫素，在胃部釋放。該(些)膜衣層可以標準包覆技術應用於口服組成物。該些腸溶膜衣之材料可溶解或分散於有機溶劑或水溶劑中。使該腸溶膜衣開始溶解之pH值，可經由具選定之側鏈基及/或側鏈基比率之一種聚合物或多種聚合物之組合加以控制。舉例而言，該聚合物膜之溶解特性可經由調整游離羧基與酯基之比而加以改變。腸溶膜衣層亦含有醫藥上可接受之塑化劑，例如檸檬酸三乙酯(triethyl citrate)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)、三醋汀(triacetin)、聚乙二醇(polyethylene glycols)、聚山梨醇酯(polysorbates)或其他塑化劑。添加物亦可包含在內，例如分散劑、著色劑、抗黏著劑及抗發泡劑。

該些組成物可含有一種或多種非有效藥劑成分(通常亦稱「賦形劑」)。非有效成分，舉例而言，係用於溶解化、懸浮、稠化、稀釋、乳化、安定、保存、保護、著色、調味及形成該些有效成分，使其成為可適用及有效之一種製劑，該製劑是安全、方便並在其他方面可以使用的。該些賦形劑最好為醫藥上可接受之賦形劑。醫藥上可接受之賦形劑類別之範例包含潤滑劑、緩衝劑、安定劑、發泡劑、色素、著色劑、調味劑、充填劑、增積劑、香料、釋出修飾劑(release modifiers)、佐劑、塑化劑、流加速劑(flow accelerators)、離型劑、多元醇、造粒劑(granulating agents)、稀釋劑、黏合劑、緩衝劑、吸收劑、滑動劑、黏著劑、抗黏劑、酸化劑、 軟化劑、樹脂、緩和劑、溶劑、表面活性劑、乳化劑、彈性體，及由前述者混合之物。

在一些實施例中，(i)一種蘿蔔硫素前驅物，較佳者為蘿蔔苷、(ii)一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素，較佳者為一種葡萄糖苷酵素，更佳者為一種硫代葡萄糖苷酵素，尤佳者為芥子酵素、(iii)一種酵素增強劑，較佳者為一種酵素輔助因子，更佳者為抗壞血酸，以及(iv)奶薊萃取物或奶薊粉末之組合，表現出協同作用。在一些實施例中，蘿蔔硫素(或蘿蔔硫素之一種衍生物)及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合表現出協同作用。協同作用係指兩種或更多種成分之組合所提供之效果，大於該些作用物單獨使用時所產生效果之總和。在較佳實施例中，該協同作用大於累加作用。在一些實施例中，一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合，相較於下列情況而有統計顯著性之較大效果：(i)僅有各單獨成分，(ii)僅有該蘿蔔硫素前驅物及該酵素之組合；及/或(iii)僅有該蘿蔔硫素前驅物、該酵素及該酵素增強劑之組合。

在較佳實施例中，該蘿蔔硫素前驅物、該酵素、該酵素增強劑，以及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合，因相較於僅有該蘿蔔硫素前驅物及僅有該奶薊萃取物或奶薊粉末之情況，顯示出有統計顯著性及/或大於累加之效應而證明其協同作用。在一些實施例中，相較於僅有蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸之組合，以及相較於僅有水飛薊素之情況，蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸及水飛薊素之組合具有協同作用。在一些實施例中，相較於僅有蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸之組合，以及相較於僅有水飛薊 賓之情況，蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸及水飛薊賓之組合具有協同作用。

在一些實施例中，一種蘿蔔硫素(或蘿蔔硫素之一種衍生物)及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合，較下列情況有統計顯著性及/或大於累加之效應：(i)僅有蘿蔔硫素(或蘿蔔硫素之一種衍生物)，及/或(ii)僅有一種奶薊萃取物或奶薊粉末。在一些實施例中，相較於僅有蘿蔔硫素及僅有水飛薊素之情況，蘿蔔硫素及水飛薊素之組合具有協同作用。在一些實施例中，相較於僅有蘿蔔硫素及僅有水飛薊賓之情況，蘿蔔硫素及水飛薊賓之組合具有協同作用。

在一些實施例中，青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合，較下列情況有統計顯著性及/或大於累加之效應：(i)僅有青花菜萃取物或青花菜粉末，及/或(ii)僅有一種奶薊萃取物或奶薊粉末。在一些實施例中，相較於僅有青花菜萃取物或青花菜粉末及僅有水飛薊素之情況，青花菜萃取物或青花菜粉末及水飛薊素之組合具有協同作用。在一些實施例中，相較於僅有青花菜萃取物或青花菜粉末及僅有水飛薊賓之情況，青花菜萃取物或青花菜粉末及水飛薊賓之組合具有協同作用。

本發明提供使用之方法其包含給予有需要之一受試者服用之方法。在一些實施例中，該方法包含給予服用一種蘿蔔硫素前驅物、一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素、一種酵素增強劑，以及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合。在一些實施例中，該方法包含給予服用一種蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合。在一些實施例中，該方法包含給予服用一種青花菜萃取物或青花 菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之組合。

在一些實施例中，該方法與針對一受試者之肝臟、生殖泌尿系统(包含前列腺、乳房及卵巢)、腦部、肺臟、腎臟、大腸、食道、胰臟或造血系統相關之一種疾病或狀況，加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發有關，該方法包括向該受試者給藥。該些方法可有助降低或延緩對組織及器官之損害，例如對肝臟、生殖泌尿系统(包含前列腺、乳房及卵巢)、腦部、肺臟、腎臟、大腸、食道及胰臟之損害。在一些實施例中，該方法與針對有必要增加其體內麩胺基硫水平之一受試者，增加其體內麩胺基硫之水平有關。該方法亦可有助於針對與麩胺基硫低水平相關之疾病或狀況加以治療、預防、減輕相關症狀，及/或減少二次復發。此種疾病及狀況之實例包含，但不限於，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、癌症(例如肝、肺、前列腺、大腸、乳房、腦、卵巢、食道、胰臟、鼻咽、骨肉瘤之癌症)白血病、囊性纖維變性、人類後天免疫不全病毒(HIV)、麩胺基硫合成酵素缺乏(glutathione synthetase deficiency)、阿滋海默氏症、帕金森氏症、亨丁頓舞蹈症、肌萎縮性側索硬化(ALS)、Friedreich共濟失調、多發性硬化、纖維肌痛(fibromyalgia)、慢性疲勞、自閉症、糖尿病、肝毒性，以及環境因素造成之毒性。

在一些實施例中，該方法與針對一受試者體內一種非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)及/或其他肝臟肝臟疾病，加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發有關。在一些實施例中，該些方法與改善或降低NAFLD之有害效應有關。

在一些實施例中，該些方法係關於為生物標記提供有益之影 響，以及針對這些生物標記之異常水平加以治療、預防、減少發生及減輕相關症狀。此等生物標記之實例包含，但不限於，NADPH依賴酵素(NADPH-dependent enzymes)、硫氧化還原蛋白(thioredoxin,TXN)、硫氧化還原蛋白還原酵素(thioredoxin reductase-1,Txnrd-1)、麩胺酸-半胱胺酸接合酵素次單位(glutamate-cysteine ligase subunit,GCLC)、亞硫酸基轉移酵素1A1(sulfotransferase 1A1,SULT1A1)、第一型血基質氧化酵素(heme oxygenase-1,HMOX1)、麩胺基硫過氧化酶-3(glutathione peroxidase-3,GPx-3)、麩胺基硫轉移酵素theta 2(glutathione S-transferse theta 2,GSTT2)、微粒體麩胺基硫轉移酵素1(microsomal glutathione S-transferase 1,MGST1)、醛氧化酵素(aldehyde oxidase,AOX1)、醛酮還原酵素1B8(aldo-keto reductase 1B8,Akr1b8)、含黃素之單氧酵素2(flavin-containing monooxygenase 2,FMO2)、Fc受體區域受體III(Fc receptor region receptor III,Fcgr3)、類胰蛋白酵素beta1(tryptase beta 1,TPSB1)、肥大細胞蛋白分解酵素-6(mast cell protease-6,Mcpt6)、神經細胞表面蛋白-1-alpha(neurexin-1-alpha,NRXN-1)、小眼症相關轉錄因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)、第二型碘化甲狀腺素脫碘酵素(type II iodothyronine deiodinase,DIO2)、血管生成素-14(angiopoietin-14,Angpt14)、細胞膜表面抗原分化群36(cluster of differentiation,CD36)，以及Ntel。與該些生物標記之高水平或異常水平相關之疾病或狀況包含，但不限於，癌症、肺及中樞神經系統之結核、多發性硬化、局部性迴腸炎、動脈粥樣硬化、骨關節炎、氣喘、中風、肺氣腫、糖尿病性腎病變、胎盤之慢性組織細胞絨毛炎、高血壓、腹主動脈瘤、發 炎性腸道疾病、慢性鼻竇炎、冠狀動脈疾病及腎臟疾病。

在一些實施例中，該方法包含給予有需要之一受試者服用蘿蔔硫素及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之一組合。在一些實施例中，該方法包含給予有需要之一受試者服用青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之一組合。在一些較佳實施例中，該方法包含給予該受試者服用蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸及一種奶薊萃取物或奶薊粉末之一組合。在較佳實施例中，該些組合在本發明之該些方法中表現出協同作用。

在較佳實施例中，該些組合之一種或多種成分(例如，該蘿蔔硫素前驅物、能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素、該酵素增強劑、該奶薊萃取物或奶薊粉末；或是該蘿蔔硫素或其衍生物及該奶薊萃取物或奶薊粉末；或是該青花菜萃取物或青花菜粉末及該奶薊萃取物或奶薊粉末)係以單一組成物或單一劑型之方式一起服用，或者係分開服用，較佳者為在該些成分之治療性質互相重疊之一段時間內服用。在一些實施例中，該些組合之該些成分可以兩個或更多個口服組成物或劑型之方式服用。舉例而言，在一些實施例中，該蘿蔔硫素前驅物、能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素，以及該酵素增強劑係以單一口服劑型之方式服用，而該奶薊萃取物或奶薊粉末則以分開或額外之一個或多個口服劑型之方式服用。在較佳實施例中，該組合之該些成分係以單一劑型之方式服用。

在一些實施例中，該組合之服用頻率可為每日一次至十次，較佳者為每日一次至五次，更佳者為每日一次至三次，尤佳者為每日一次。

本申請案所揭露之劑量泛指適用於人類之劑量。劑量之計 算，可由熟習本發明所屬技術領域者在評估體重、表面積、代謝率及物種差異後加以判定。

在本說明書中，[受試者」一詞係指任何動物，包含哺乳類及鳥類。哺乳動物包含但不限於人類、狗、貓、馬、牛、駱駝、象、獅、虎、熊、海豹，及兔。在較佳實施例中，該些受試者包含非食用類之哺乳動物，例如人類、貓及狗。

實例1

以下為一示範性配方：含蘿蔔苷之青花菜萃取物(濃度大約12% w/w),50mg至5g

含芥子酵素之冷凍乾燥青花菜芽粉末，25mg至500mg

抗壞血酸，5mg至500mg

奶薊萃取物(大約20%至35% w/w之水飛薊賓)，25mg至5g

實例2

一種疏水性交互作用層析(hydrophobic interaction chromatographic,HILIC)法已研究出來，該方法包含以下條件：層析管柱：沃特斯公司(Waters Corp.)之BEH(ethylene bridged hybrid)醯胺，粒徑1.7-μm；內徑2.1mm x 100mm

流動相溶液：20% 10mM之醋酸銨，pH 5.0；80%之乙腈；分離方式：等位(isocratic)

管柱溫度：70℃

流率：0.7mL/min

上述條件允許分離五種典型之十字花科硫代葡萄糖苷，包含蘿蔔硫素前驅 物、蘿蔔苷。

實例3 蘿蔔苷消耗量作為抗壞血酸濃度之函數。

在有可變濃度之抗壞血酸(範圍從0至600μmoles/Liter)環境下，以取自青花菜芽之固定濃度之芥子酵素，將含有約12%(w/w)蘿蔔苷之大約250mg青花菜種子萃取物加以水解。使該些反應混合物保持在38℃之恆溫下60分鐘，並每15分鐘取出等份之實驗試樣(aliquots)，以層析方式測定蘿蔔苷之濃度。蘿蔔苷之消耗速率被解釋為蘿蔔苷轉換成蘿蔔硫素之速率。將蘿蔔苷含量減少作為抗壞血酸濃度增加之函數以圖表呈現時產生了一系列之線性圖；該些線性回歸線之斜率反映了蘿蔔苷之消耗速率，其單位為μmoles/minute。明顯的是，在濃度600μmoles/Liter之抗壞血酸環境下，其反應速率較缺少抗壞血酸之調節作用時之反應速率增加到13倍。

實例4 蘿蔔苷等莫耳轉換成蘿蔔硫素。

茲進行由兩部分組成之一項實驗，以進一步闡明抗壞血酸在調節芥子酵素活性中的作用。所有溶液均以20mM TBS緩衝液(Tris-buffered saline)製備，pH值為7.5，該pH值之前已被指出最適於芥子酵素之活性；每一取樣管內裝有精確稱重之冷凍乾燥青花菜粉末100mg作為芥子酵素之來源。該實驗在38℃下進行2小時，每隔30分鐘移除等分之試樣，且蘿蔔苷及蘿蔔硫素之含量皆以HPLC法測定。一種強酸性之反應停止液被用於即刻抑制被移除等份試樣中芥子酵素之進一步活性。一控制樣本不含抗壞血酸，且未以輔助因子協助酵素轉換之進行。

第一部分。在濃度固定為1mmol/Liter之抗壞血酸環境下，加入青花菜種子萃取物(含大約12% w/w之蘿蔔苷)，份量從250mg增加至500mg。

第二部分。將青花菜種子萃取物之量固定在250mg，使抗壞血酸之濃度從0.4mmol/Liter改變至3.8mmol/Liter。

下表將蘿蔔苷(GR)及蘿蔔硫素以μmole為單位表示。明顯的是，在幾乎全部的反應混合物中，蘿蔔苷轉換成蘿蔔硫素在前30分鐘內便告完成。然而，控制樣本在沒有抗壞血酸(AA)之刺激作用下所發生之酵素轉換經仔細檢驗後顯示，蘿蔔苷等莫耳轉換成蘿蔔硫素，亦即所消耗之蘿蔔 苷之量，相當於所產生之蘿蔔硫素之量。

該實驗之第二部分評定濃度漸增之抗壞血酸對芥子酵素活性之調節作用。可觀察到的是，在芥子酵素之促進下，蘿蔔苷轉換成蘿蔔硫素一開始明顯呈線性，直到抗壞血酸濃度達2mmol/L，之後便顯著趨於平穩。

最後，在該實驗第一部分之30分鐘後，檢驗蘿蔔硫素之產出，其顯示在濃度1mmol/Liter之抗壞血酸環境下，100mg冷凍乾燥青花菜芽粉末中所含固定份量之芥子酵素，能夠以可預測之線性方式產生至少200μmole之蘿蔔硫素。圖1、2、3及4呈現了本實驗之結果。

實例5 蘿蔔苷在模擬腸液之環境下轉換成蘿蔔硫素。

本實例之實驗使用模擬腸液(SIF)粉末，其係一種商業供應之濃縮物，在組成、pH值及離子強度方面十分接近人類之腸內容物。該實驗使用美國藥典(USP)溶離試驗儀2(Dissolution Apparatus 2(槳形))，有500mL之模擬腸液分配至該試驗儀之六個溶解容器，並以150mg之冷凍乾燥青花菜芽粉末作為芥子酵素之來源。在容器1~4中，抗壞血酸之濃度從0.25mmol/Liter至1.00mmol/Liter不等；在容器5中，除濃度1mmol/Liter之抗壞血酸外，還懸浮有3.125g之胰酵素(8x USP)；在容器6中，除濃度lmmol/Liter之抗壞血酸及3.125g之胰酵素(8x USP)外，還加有雙倍份量之冷凍乾燥青花菜芽粉末(300mg)。在該些容器溫度達到38℃後，將富含蘿蔔苷(12%,w/w)之250mg青花菜種子萃取物加入每一容器，並將以此得到之懸浮液以75RPM之轉速攪動2小時。每隔15分鐘取出等份試樣並測定其蘿蔔硫素含量。圖4呈現蘿蔔硫素較大產出與抗壞血酸較高濃度間之直接相關，尤其是在該實驗之前期階段。

實例6

以下所進行之試驗係為測定蘿蔔硫素及水飛薊賓之組合對麩胺基硫水平之作用。麩胺基硫在體內扮演重要角色，因其可作為一種抗氧化劑、解毒劑及免疫調節劑。低水平之麩胺基硫會使病人易受氧化壓力、疾病及癌症所影響。因此，增加麩胺基硫之水平能帶來有益影響。

在該試驗中，將人類肝癌細胞株HepG2細胞分別以二甲基亞碸(DMSO，為載體控制組(vehicle control))、蘿蔔硫素(SFN)、水飛薊賓(Silib)、蘿蔔硫素及水飛薊賓之組合，處理24小時。將細胞萃取液(cell lysate)加以收集，並使用鄰苯二甲醛(o-phthalaldehyde,OPT)作為螢光試劑來測量麩胺基硫之水平。圖5及圖6呈現該試驗之結果。

在該試驗之第一部分，將0.5μM蘿蔔硫素之效果與不同濃度之水飛薊賓及不同濃度之0.5μM蘿蔔硫素與水飛薊賓之組合加以比較。詳細而言，該些細胞係以下列其中之一加以處理：(i)DMSO(載體控制組)、(ii)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)、(iii)100μM水飛薊賓(Silib)、(iv)200μM水飛薊賓(Silib)、(v)300μM水飛薊賓(Silib)、(vi)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)及100μM水飛薊賓(Silib)、(vii)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)及200μM水飛薊賓(Silib)，以及(viii)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)及300μM水飛薊賓(Silib)。其結果顯示，與各成分單獨存在之情況相較，蘿蔔硫素與水飛薊賓之組合在每一測試用量下都具有協同效果。舉例而言，在該些細胞係以單獨成分處理之情況下，與DMSO(載體)控制組相較，單獨以蘿蔔硫素處理時，其麩胺基硫之水平皆相同，而單獨以水飛薊賓處理時，其麩胺基硫之水平稍微降低。然而，當該些細胞係以蘿蔔硫素與水飛薊賓之組合處理時，在每一測試用量下，其麩胺基硫之水平與控制組相較，皆有協同式之增加。麩胺基硫之水平增加為有益之影響。此部分試驗之結果呈現於圖5。

在該試驗之第二部分，將2μM蘿蔔硫素之效果與不同濃度之水飛薊賓，以及不同濃度之2μM蘿蔔硫素與水飛薊賓之組合加以比較。詳細而言該些細胞係以下列其中之一加以處理(i)DMSO(載體控制組)、(ii)2μM蘿蔔硫素(SFN)、(iii)100μM水飛薊賓(Silib)、(iv)300μM水飛薊賓(Silib)、(v)2μM蘿蔔硫素(SFN)及100μM水飛薊賓(Silib)，以及(vi)0.5μM蘿蔔硫素(SFN)及300μM水飛薊賓(Silib)。其結果顯示， 與各成分單獨存在之情況相較，蘿蔔硫素與水飛薊賓之組合在每一測試用量下都具有協同效果。舉例而言，在該些細胞係以單獨成分處理之情況下，與DMSO控制組相較，單獨以蘿蔔硫素處理時，其麩胺基硫之水平皆相同，而單獨以水飛薊賓處理時，其麩胺基硫之水平稍微降低。然而，當該些細胞係以蘿蔔硫素與水飛薊賓之組合處理時，在每一測試用量下，其麩胺基硫之水平與控制組相較，皆有協同式之增加。麩胺基硫水平增加有益於細胞之去毒。此部分試驗之結果呈現於圖6。

實例7

患有非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)之一受試者經歷之症狀包括不舒服、疲倦及腹部不適。給予該受試者服用含有蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸及一種奶薊萃取物之一藥錠。該藥錠為一種腸溶膜衣配方，會將該些內容物在小腸中釋放。每日服用該藥錠一個月後，該受試者感到多種替代性生物標記(surrogate biomarkers)，包含與症狀改善相關之麩胺基硫，均獲得了調節。

Claims (33)

1. 一種口服組成物，該口服組成物包含：一種蘿蔔硫素前驅物；一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素；一種酵素增強劑；以及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
2. 如申請專利範圍第1項之口服組成物，其中該蘿蔔硫素前驅物包含蘿蔔苷。
3. 如申請專利範圍第1項之口服組成物，其中能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素包含芥子酵素。
4. 如申請專利範圍第1項之口服組成物，其中該酵素增強劑包含抗壞血酸。
5. 如申請專利範圍第1項之口服組成物，其中該組成物包含一種腸溶膜衣錠或腸溶膠囊。
6. 如申請專利範圍第1項之口服組成物，其更包含自：檞皮素、一種胺基糖(aminosugar)、一種葡萄胺聚醣(glycosaminoglycan)、鱷梨/大豆之不皂化物、一種維生素、咖啡果實、鎂、水飛薊素、原花青素、熊果酸、薑黃素、植物固醇及植物固烷醇所構成群組中選定之一種或多種額外成分。
7. 如申請專利範圍第1項之口服組成物，其包含蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸及奶薊萃取物。
8. 如申請專利範圍第1項之口服組成物，其中該組成物包含青花菜萃取物或青花菜粉末。
9. 一種針對直腸癌或大腸癌加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，以及減少二次復發之方法，該方法包括給予有前揭需要之一受試者服用 一種蘿蔔硫素前驅物；一種能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之酵素；一種酵素增強劑；以及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
10. 如申請專利範圍第9項之方法，其中該蘿蔔硫素前驅物包含蘿蔔苷。
11. 如申請專利範圍第9項之方法，其中能夠將該蘿蔔硫素前驅物轉換成蘿蔔硫素之該酵素包含芥子酵素。
12. 如申請專利範圍第9項之方法，其中該酵素增強劑包含抗壞血酸。
13. 如申請專利範圍第9項之方法，該方法包含給予服用蘿蔔苷、芥子酵素、抗壞血酸及奶薊萃取物。
14. 如申請專利範圍第9項之方法，該方法包含給予服用一種腸溶膠囊或腸溶膜衣錠。
15. 一種口服組成物，該口服組成物包含一種青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
16. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其中該該青花菜萃取物或青花菜粉末包含大約1%至大約75% w/w之蘿蔔苷。
17. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其中該青花菜萃取物或青花菜粉末包含芥子酵素。
18. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其更包含一種酵素增強劑。
19. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其中該酵素增強劑包含抗壞血酸。
20. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其中該組成物包含一種腸溶膜衣劑型。
21. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其包括含有水飛薊素之一種奶薊 萃取物。
22. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其包括含有水飛薊賓之一種奶薊萃取物。
23. 如申請專利範圍第15項之口服組成物，其更包含自：檞皮素、一種胺基糖(aminosugar)、一種葡萄胺聚醣(glycosaminoglycan)、鱷梨/大豆之不皂化物、一種維生素、咖啡果實、鎂、水飛薊素、原花青素、熊果酸、薑黃素、植物固醇、植物固烷醇，以及S-腺苷甲硫胺酸(SAMe)所構成群組中選定之一種或多種額外成分。
24. 一種針對一受試者之肝臟、前列腺、腦部、肺臟、腎臟、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關之一種疾病或狀況加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用一種青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊蕈菇萃取物或奶薊粉末。
25. 一種增加一受試者體內麩胺基硫濃度之方法，該方法包括給予有此需要之該受試者服用青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
26. 一種針對一受試者之一種非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予有此等需要之該受試者服用青花菜萃取物或青花菜粉末及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
27. 一種口服組成物，該口服組成物包含蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
28. 如申請範圍第27項之口服組成物，其包括含有水飛薊素之一種奶薊萃取 物。
29. 如申請範圍第27項之口服組成物，其包括含有水飛薊賓之一種奶薊萃取物。
30. 如申請範圍第27項之口服組成物，其更包含自：檞皮素、一種胺基糖(aminosugar)、一種葡萄胺聚醣(glycosaminoglycan)、鱷梨/大豆之不皂化物、一種維生素、咖啡果實、鎂、水飛薊素、原花青素、熊果酸、薑黃素、植物固醇，以及植物固烷醇所構成群組中選定之一種或多種額外成分。
31. 一種針對一受試者之肝臟、前列腺、腦部、肺臟、腎臟、大腸、乳房、食道、胰臟或卵巢相關之一種疾病或狀況加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予該受試者服用蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
32. 一種增加一受試者體內麩胺基硫濃度之方法，該方法包括給予有此需要之該受試者服用蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。
33. 一種針對一受試者之一種非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)加以治療、預防、減少發生、減輕相關症狀，及/或減少二次復發之方法，該方法包括給予有此等需要之該受試者服用蘿蔔硫素或蘿蔔硫素之一種衍生物及一種奶薊萃取物或奶薊粉末。