TW200942233A

TW200942233A - Compositions of hydrophobic taxane derivatives and uses thereof

Info

Publication number: TW200942233A
Application number: TW097135271A
Authority: TW
Inventors: Neil P Desai; Chunlin Tao; Tapas De; Sherry Xiaopei Ci; Vuong Trieu
Original assignee: Abraxis Bioscience Llc
Priority date: 2008-04-10
Filing date: 2008-09-12
Publication date: 2009-10-16
Also published as: JP2011517683A; WO2009126175A1; KR20100133475A; RU2010145529A; KR20150136137A

Description

200942233 九、發明說明：本申請案主張2008年4月10曰申請之題為"Compositions of Hydrophobic Taxane Derivative and Uses Thereof"之美國臨時申請案第61/044,006號之優先權，該案之全部内容以引用的方式併入本文中’其引用程度就如同其全文列於下文申一般。【先前技術】紫杉烷、尤其兩種當前可用之紫杉烷藥物太平洋紫杉醇 ® 及歐洲紫杉醇為有效的抗腫瘤劑。太平洋紫杉醇之水溶性極差（小於10 pg/mL)，且因此不能在實務上用水性介質調配以便用於IV投與。當前，太平洋紫杉醇以聚氧乙基化蓖麻油（Polyoxyl 35或Cremophor®)作為主溶劑/界面活性劑、高濃度乙醇用作輔溶劑調配成溶液形式用於IV投與癌症患者。投與太平洋紫杉醇之主要難點之一在於出現過敏性反應。此專反應包括嚴重皮療、麻療、臉發紅、呼吸困難、心搏過速及其他反應，其可至少部分歸因於調配物中用作 ❿溶劑之高濃度乙醇及Cremophor®。歐洲紫杉醇（太平洋紫杉醇之衍生物）係自10-去乙醯基漿果赤黴素ΙΠ半合成產生，ίο-去乙醯基漿果赤黴素m為自漿果紫杉（Taxus baccata)之針葉提取且經酯化得到化學合成之側鏈之非細胞毋性前驅體。如同太平洋紫杉醇，歐洲紫杉醇之水溶性極差。當前，用來溶解歐洲紫杉醇之最佳溶劑/界面活性劑為聚山梨醇酯80(吐溫80)。如同Cremoph〇r®，吐溫時常導致患者之過敏性反應。另外，吐溫8〇不能為pvc傳送裝 134531.doc 200942233 置使用，此係因為其傾向於溶出高毒性的鄰苯二甲酸二乙基己s旨。已投入極大精力來開發具有較高親水性基團（諸如水溶性聚合物）以增強水溶性的水溶性前藥及新穎紫杉烧衍生物。舉例而言，US 2003/0203961描述紫杉烷-聚乙二醇 (PEG)結合物，其充當前藥且在正常生理條件下水解以提供具有治療活性之紫杉烷。雖然太平洋紫杉醇與高分子量 PEG聚合物之結合物之溶解度增加，但由於高分子量PEG © 為達成足夠溶解度所必需，因此其亦導致藥物負荷相應減少。類似地，W094/1 3324揭示增強水溶性之磷脂前藥。解決與紫杉烷之不良水溶性有關之問題的另一方法為開發紫杉烷之各種調配物，諸如奈米顆粒、水包油型乳液及脂質體。舉例而言，Abraxane®為太平洋紫杉醇與白蛋白之奈米顆粒組合物。大體上不良水溶性之藥物之奈米顆粒組合物及其用途已揭示於（例如）美國專利第5,91 6,596號、第 6,096,331 號、第 6,749,868 號及第 6,537,579 號，及 PCT 申 ® 請公開案第W098/14174號、第W099/00113號、第 W007/027941 號及第 W007/027819號中。各種紫杉烧衍生物已揭示於（例如）Kingston, J.

Prod. 2000, 63, 726-734 ； Deutsch 等人，J· Med. Chem. 1989, 32, 788-792 ； Mathew# A > J. Med. Chem. 1992, 35, 145-151，歐洲專利第1 063 234號；及美國專利第 5,059,699 號、第 4,942,184 號、第 6,482,850 號及第 6,602,902號中〇 134531.doc 200942233 案、專利、專利申請案及公開專以全文引用的方式併入本文中。本文中提及之所有公開利申請案之揭示内容據此【發明内容】 ==在-態樣中提供包含奈米顆粒之組合物，其中該顆粒包含疏水性紫杉烷衍生物及載體蛋白。在一些實施例’’載體蛋白為白蛋白(諸如人血清白蛋白)。

在-些實施例中，本文中描述之組合物中之奈米顆粒具不大於約150 nm之平均直徑，包括例如不大於約_、 90 80、70或60 nm中之任一者。在一些實施例中，組合物中所有奈米顆粒之至少約5〇%(例如至少約㈣、鳩、 8〇。/。、_9〇%、95%或99%中之任一者）具有不大於約15〇咖之直徑’包括例如不大於約1〇〇、9〇、8〇、7〇或6〇 nm中之任一者。在—些實施例中’組合物中所有奈米顆粒之至少約50%(例如至少60%、7〇%、8〇%、9〇%、㈣或州中之任一者）處於約20至約150 nmi範圍内，包括例如約⑽至約14〇 nm中之任一者，及約40至約130、約50至約120，及約6〇至約1 〇〇 nm中之任一者。在一些實施例中，載體蛋白具有可形成二硫鍵之硫氫基在些實施例中，組合物之奈米顆粒部分中載體蛋白之至少約5%(包括例如至少約1〇❶/。、15%或2〇%中之任一者）經父聯（例如經由一或多個二硫鍵交聯）。在些實施例中，奈米顆粒包含經諸如白蛋白（例如人血清白蛋白）之載體蛋白塗佈之疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式j、n、m、Iv、v 134531.doc 200942233 或νι化合物）^在一些實施例中，組合物包含非奈米顆粒形式之疏水性紫杉烷衍生物，其中該組合物中疏水性紫杉烧衍生物之至少約50%、60%、7〇%、8〇%、9〇%、95%或 990/〇中之任一者係呈奈米顆粒形式。在一些實施例中奈米顆粒中之疏水性紫杉烷衍生物以重量計構成奈米顆粒之大於約 50%、60%、70%、80%、90%、95% 或 99% 中之任一者。在一些實施例中’奈米顆粒具有非聚合物基質。在一些實施例中’奈米顆粒包含大體上不含聚合物材料（諸如聚合物基質）的疏水性紫杉烷衍生物核心。在一些實施例中，組合物大體上不含（諸如不含）界面活性劑（諸如Cremophor®、吐溫80或用於投與紫杉烷之其他有機溶劑）。在一些實施例中，組合物含有小於2〇0/。、 15°/〇、1〇〇/0、7.5%、5%、2.5%或1%中之任一者之有機溶劑。在一些實施例中，組合物中載體蛋白（諸如白蛋白）與疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及 ❿ 任何式I、II、III、IV、V或VI化合物）之重量比為約18:1或 18:1以下，諸如約15:1或15:1以下’例如約10:1或1〇:1以下。在一些實施例中，組合物中載體蛋白（諸如白蛋白）與疏水性紫杉烷衍生物之重量比處於約1:1至約18:1、約2:1 至約15:1、約3:1至約13 :1、約4:1至約12:1、約5 :1至約 1 0:1中之任一者之範圍内。在一些實施例中，組合物之奈米顆粒部分中載體蛋白與疏水性紫杉烷衍生物之重量比為約 U、1:3、1:4、1:5、1:1〇、I:15 或 1:15 以下中之任一者0 134531.doc -9- 200942233 在一些實施例中，顆粒組合物可包含以上特徵中之一或多者。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物烧之一置之疏一一些實施例中，疏基，諸如-c(〇)_C4_ClQ烷基，例如<(〇)&烷基。在一些實施例中，疏水基為附著於紫杉烷之2，_羥基之醯基❶在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物為紫杉烷之前藥。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物卜 2、3-23中之任一者及任何式1、II、III、IV、V*VI化合物）具有相較於相應未改質紫杉烷經改良（例如相較於太平洋紫杉醇及/或歐洲紫杉醇經改良）之白蛋白結合力。在一二實施例中’蛋白質奈米顆粒組合物中之疏水性紫杉烧衍生物在相等毒性劑量下顯示相較於相應未改質紫杉烷（例如太平洋紫杉醇及/或歐洲紫杉醇）之奈米顆粒組合物經改良之治療功效。 ^ 在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物為本文中描述之式1化β物。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物為本文中描述之式η化合物。在一些實施例中，疏水性衍生物為本文中描述之式m化合物。在一些實施例中，疏水性衍生物為本文中描述之式1¥化合物。在一些實施例中，疏水性衍生物為本文中描述之式v化合物。在一些實施例中，疏水性衍生物為本文甲描述之式VI化合物。在一些實施例中，疏水性衍生物為本文中描述之化合物卜23中之任一者。在一些實施例中，疏水性衍生物為本文中描述之化合 134531.doc -10· 200942233 物2。本文中亦提供使用本文中描述之組合物治療疾病（諸如癌症）之方法，以及用於本文中描述之用途的套組及單位劑量。【實施方式】本發明提供調配成基於蛋白質之奈米顆粒形式之紫杉烷衍生物。此等紫杉烷衍生物具有附著於相應紫杉烷之疏水基且與未改質紫杉烷相比具有增加之疏水性。已發現含有疏水基（諸如附著於紫杉烷之2，羥基之醯基，例如-C(0)-C4_C丨〇烷基，尤其_C(0)_C6烷基）之紫杉烷衍生物在調配成蛋白質奈米顆粒組合物時產生具有相較於未改質紫杉烷之蛋白質奈米顆粒顯著改良之性質的奈米顆粒。此等性質可包括（但不限於）以下一或多者：小粒徑（例如小於約100 nm之平均直徑）、窄粒徑分布、化合物至其預定作用位點之傳送增強、延遲或持續釋放、延遲清除及抗癌功效增加。因此本文描述之組合物尤其適合用於治療諸如癌症之疾病。因此’本發明在一態樣中提供包含奈米顆粒之組合物，該等奈米顆粒包含：1)疏水性紫杉烷衍生物；及2)載體蛋白。在一些實施例中’疏水性紫杉烷衍生物為前藥。在另一態樣中’本發明提供使用本文中描述之組合物治療疾病（諸如癌症）之方法。本發明亦提供套組及單位劑型。縮寫及定義 134531.doc •11- 200942233 本文中使用之縮寫具有其在化學及生物學技術内之習知含義。如本文中使用之"疏水性紫杉烷衍生物”係指經疏水基取代之紫杉烧。"疏水基"係指在紫杉烧上經取代時產生與未經取代紫杉烧相比具有增加之疏水性之紫杉院衍生物的部分。增加之疏水特性可例如藉由減少之水溶性、減少之極性、減少之氫結合潛力，及/或增加之油/水分配係數來確定。如本文中使用之"紫杉烧"包括太平洋紫杉醇及歐洲紫鼙杉醇。因此術語”疏水性紫杉烧衍生物"不包括太平洋紫杉醇或歐洲紫杉醇》除非另有說明’ η彳單㈣作為另—取代基之部分的術語"画基"或"自素"意謂氟、氯、溴或碘原子。除非另有說明’否則單獨或作為另—取代基之部分之術語”烷基"意謂完全飽和直鏈（線性；不分支）或分支鏈或其組合’若經指定則具有規定之碳原子數目(亦即Μ。意謂 ❹一至十個碳）。實例包括（但不限於）諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、異丁基、第二丁基之基團，例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基之同系物及異構邀，及其類似基團。若未指定大小，則本文中提及之院基含有1-20個碳原子、通常uo個碳原子，或μ個碳原子’或1-6個碳原子’或1_4個碳原子。術語"稀基”係指包括直鍵（線性；不分支）、分支鏈基團及其組合之不飽和脂族基，若指定則其具有規定之碳原子數目，其含有至少一個雙鍵（-OC-)。所有雙鍵可獨立地為（幻 134531.doc 12 200942233 或（z)幾何構型以及其混合物。烯基之實例包括（但不限於） (H2(H=CH-CH3、-CH=CH-CH=CH2 及(h2-CH=CH偶CH3>CH2切右未指定大小’則本文中提及之烯基含有2_20個碳原子、通常2-10個碳原子，或2_8個碳原子，或2_6個碳原子，或 2-4個碳原子。術語"炔基"係指包括直鏈（線性；不分支）、分支鏈基團及其組合之不飽和脂族基，若指定則其具有規定之碳原子數目，其含有至少一個碳_碳參鍵（_CsC_"炔基之實例包括（但不限於)-CH2-C式-ch3、-C3⑽卿-CH2-C三C-CH(CH3)-CH2-CH3。右未各定大小，則本文中提及之炔基含有2_20個碳原子、通常2_1〇個碳原子’或2_8個碳原子，或2_6個碳原子或 2-4個碳原子。 —除非另有說明，否則單獨或與其他術語結合之術語"環烧基”表示烧基、稀基或炔基之環狀型式，或其混合物。另外’環烷基可含有稠環，但不包括稠合芳基及雜芳基。〇環烷基之實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基、】_環己埽基、3_環己烯基、環庚基、降縣，及其類似基團。若未指定大小，則本文中提及之環块基含有 3-9個碳原子，通常3_7個碳原子。單獨或與其他術語結合之術語"雜環貌基••表示含有至少一個環碳原子及至少—個選自由。、N、p、si及s組成之雜原子的環料，且其中氮及硫原子可視情況經氧，雜原子可視情況經錢化。時常，此等環雜原子係選㈣、Ο及卜雜觀基可在環碳或環雜原子處附著於分 i34531.doc •13- 200942233 子之其餘部分。另外，雜環烷基可含有稠環，但不包括稠合芳基及雜芳基。雜環烷基之實例包括（但不限於）1-(1，2,5,6-四氫°比咬基）、1_哌啶基、2-哌啶基、3-略咬基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃_2_基、四氫呋喃-^ 基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩_3_基、卜哌嗪基、2•哌嗪基及其類似物。術語"環烷基-烷基"及"雜環烷基-烷基"分別表示經烷基取代之環烷基及經烷基取代之雜環烷基，其中烷基部分附〇著於母體結構。非限制性實例包括環丙基-乙基、環丁基_ 丙基、環戊基-己基、環己基-異丙基、丨_環己烯基_丙基、 3-環己烯基-第三丁基、環庚基_庚基、降袼基甲基、丨·派啶基-乙基、4-嗎啉基·丙基、3_嗎啉基_第三丁基、四氫呋喃_2_基-己基、四氫呋喃基-異丙基及其類似基團。環烷基-烧基及雜環院基-烧基亦包括其中至少一個碳原子存在於烧基中且其中烧基之另一碳原子已經例如氧、氮或硫原 ❹子置換之取代基（例如環丙氧基甲基、2_哌啶基氧基-第三丁基及其類似基團）。除非另有說明，否則術語"芳基"意謂多不飽和度、芳族、烴取代基’其可為單環或稠合在一起或共價連接之多環（例如1至3個環）。另外，芳基可含有稠環，其中一或多個環視情況為環烷基或雜環烷基。芳基之實例包括（但不限於）苯基、1_萘基、2·萘基、4-聯笨。術語"雜芳基"係指含有一個至四個選自Ν、Ο及S之環雜原子之芳基（或環），其中氮及硫原子視情況經氧化，且氮 134531.doc 200942233 原子視情況經季銨化《雜芳基可在環碳或環雜原子處附著於分子之其餘部分。另外，雜芳基可含有稠環，其中一或多個環視情況為環烷基或雜環烷基。雜芳基之非限制性實例為1-"比咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-啼唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3_異噁唑基、4_異噁唑基、5_異噁唑基、2-嘆峻基、4-售唾基、5-喧唾基、2-吱味基、3-β夫喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶 ^ 基、2-嘧啶基、4_嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2_苯并咪嗅基、5-吲哚基、丨·異喹啉基、5_異喹啉基、2喧嗜啦基、5-啥°若琳基、3-喹琳基及6-喹琳基。上述各芳基及雜^基環狀系統之取代基可選自如下所述之可接受取代基之群。術語"芳烷基"表示經烷基取代之芳基，其中烷基部分附著於母體結構。實例為苯甲基、苯乙基及其類似物。，，雜 ❹芳烷基"表示經由烷基殘基附著於母體結構之雜芳基部分。實例包括呋喃基甲基、吡啶基甲基、嘧啶基乙基及其類似基團。芳烷基及雜芳烷基亦包括其中烷基之至少一個碳原子存在於烷基中且其中烷基之另一碳已經例如氧原子置換之取代基（例如苯氧基甲基、2_。比咬基甲氧基、萘氧基）丙基及其類似基團）。以上術語（例如"烧基"、”烯基"、"炔基"、"環院基"、"雜環烷基"、"環烷基-烷基"、"雜環烷基_烷基"、"芳基"、，，雜芳基，’、，，芳烷基"及"雜芳烷基"）各自意欲包括所指示基團 134531.doc 200942233 之經取代及未經取代形式。 "視情況經取代"或"經取代"係指一或多個氫原子經單價或二價基團置換。合適取代基包括（例如）羥基、硝基、胺基、亞胺基、氰基、鹵基（諸如F、ci、Br、I)、鹵烷基（諸如-CCI3或-CFO、硫基、磺醯基、硫醯胺基、脒基、亞脒基（imidino)、侧氧基、氧脒基、甲氧脒基、亞脒基、胍基、磺醯胺基、羧基、曱醯基、烷基、烷氧基、烷氧基_ 烷基、烷基羰基、烷基羰氧基（_〇c〇R)、胺基羰基、芳基 ® 羰基、芳烷基羰基、羰基胺基、雜芳基羰基、雜芳烷基_ 羰基、烷硫基、胺基烷基、氰基烷基、胺甲醯基 (-NHCOOR-或-OCONHR-)、腺基卜NHC〇NHR_)、芳基及其類似基團。在本發明之一些實施例中，以上基團（例如烷基）經（例如）胺基、雜環烷基（諸如嗎啉、哌嗪、哌啶、氮雜環丁烷）、羥基、甲氧基或雜芳基（諸如吡咯啶）取代。取代基本身可經取代。取代至取代基上之基團可為叛 0 基、_基、硝基、胺基、氰基、羥基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、胺基羰基、_SR、硫醯胺基、_s〇3h ' -s〇2R 或環烷基，其中R通常為氫或烷基。在經取代之取代基包括直鏈基團時，該取代基可出現在該鏈内（例如2-羥丙基、2-胺基丁基及其類似基團）或在該鍵末端（例如2-羥乙基、3-氰基丙基及其類似基團）。經取代之取代基可為共價鍵結之碳或雜原子（N、〇或8)之直鏈、分支鏈或環狀排列。除非另有指示’否則如本文中使用之"異構體”包括本文 134531.doc -16 - 200942233 之諸式中所涉及之化合物之所有立邀異構體，包括對映異構體、非對映異構體以及所有構象異構體、旋轉異構體變異構體。本發明包括所揭示之任何對掌性化合物之 =有對映異構體，其呈大體上純的左旋或右旋形式，或外消旋混合物形式，或任何比率之對映異構體形式。對於揭丁為（R)-對映異構體之化合物，本發明亦包括（S)_對映異構體，對於揭不為⑻-對映異構體之化合物，本發明亦包〇括⑻·對映異構體。本發明包括以上諸式所涉及之化合物之任何非對映異構體，其呈非對映異構性純的形式及所有比率之混合物形式。除非在化學結構或化學名稱中明確指示立體化學，否則化學結構或化學名稱意欲包含所描述化合物之所有可能的立體異構體 '構象異構體、旋轉異構體及互變異構體。舉例而言’含有對掌性碳原子之化合物意欲包含（r)對映異構體及⑻對映異構體以及對映異構體之混合物，包括外 ❹4旋是合物；且含有兩個對掌性碳之化合物意欲包含所有對映異構體及非對映異構體（包括（R’R)、（s，s)、（r，^ (R，S)異構體）。在本文中揭示之諸式之化合物之所有用途中，本發明亦包括所描述化合物之任何或所有立體化學、對映異構、非對映異構、構形異構、旋轉異構、互變異構、溶劑合物、艮口物、多晶型、結晶形式、非結晶形式、鹽、醫藥學上可接受的鹽、代謝產物及前藥型式之用途。本發明之某些化合物可以非溶劑化形式以及溶劑化形式 134531.doc •17· 200942233 (亦即/奋劑合物）存在。本發明之化合物亦可包括水合形式 (亦即水合物）。通常，對於生物效用之目的而言，溶劑化形式及水合形式與非溶劑化形式等效且包括在本發明之範 =内。本發明，亦包括所有多晶型物，包括结晶形式及非結阳形式。通常，對於本發明所涵蓋之用途而言，所有物理弋為荨效的，且意欲處於本發明之範嗓内。本發明包含本文中描述之化合物之所有鹽，以及使用化合物之此等鹽之方法。本發明亦包含本文中描述之化合物之任何鹽之所有非鹽形式’以及本文中提及之化合物之所有鹽之其他鹽。在一實施例中，化合物之鹽包含醫藥學上可接觉的鹽^ "醫藥學上可接受的鹽，，為保持游離化合物之生物活性且可作為藥物或藥品投與個體（例如人）之彼等鹽。化合物之鹼性官能基之所需鹽可藉由熟習此項技術者已知之方法藉由以酸處理化合物來製備。無機酸之實例包括（但不限於）鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸及磷酸。有機酸之實例包括（但不限於）曱酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、馬尿酸、丙酮酸、乙二酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯曱酸、肉桂酸、扁桃酸、磺酸及水楊酸。化合物之酸性官能基之所需鹽可藉由熟習此項技術者已知之方法藉由以鹼處理化合物來製備。酸化合物之無機鹽之實例包括（但不限於）鹼金屬及鹼土金屬鹽’諸如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽，及鈣鹽；銨鹽；及鋁鹽。酸化合物之有機鹽之實例包括（但不限於）普魯卡因 (procaine)、二苄基胺、Ν-乙基哌啶、Ν，Ν·-二苄基乙二胺 134531.doc •18· 200942233 及三乙胺鹽。術浯"前藥"係指本身相對無活性，但在投與使用其之個體之後藉由化學或生物過程活體内（例如藉由水解及/或酶轉化）轉變成更具活性之化合物的化合物。前藥包括（例如）其中羥基、胺或硫醇基鍵結至在投與個體後裂解以分別形成游離經基、胺基或硫醇基之任何基團的化合物。前藥之實例包括（但不限於）醇及胺官能基之乙酸鹽、甲酸鹽及苯甲酸鹽衍生物。本發明之化合物之醫藥學上可接受的前藥 ® 包括（但不限於）酯、碳酸鹽、硫代碳酸鹽、N-醯基衍生物、N-酿氧基炫基衍生物、第三胺之第四衍生物、％曼尼希鹼（N-Mannich base)、席夫鹼（Schiff base)、胺基酸結合物、麟酸酯、金屬鹽及續酸酯。T_ Higuchi及V· Stella之

Pro_drugs as Novel Delivery Systems(A.C.S.專題研討會論文集之第 14 卷）及 Edward B. Roche 編之 Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987 中提供充分論述，該兩種文獻以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，用於本發明中之紫杉炫衍生物本身為前藥。在一些實施例中，用於本發明中之紫杉烷衍生物不為前藥。大體上純的化合物意謂該化合物係在雜質及/或不同形式不超過化合物總量之約15%或不超過約1 〇%或不超過約 5%或不超過約3°/。或不超過約1%的情況下存在。舉例而言’大體上純的S，S化合物意謂所存在之R，R、S，R及R，S形式總量不超過約15%或不超過約10%或不超過約5%或不超 134531.doc -19- 200942233 過約3%或不超過約10/〇。 "保護基"係指展現以下特徵之化學基團：1}對於需要保護之預期反應為穩定的；2)可自經保護之受質除去以產生所需官能基；及3)可由與該等預期反應中存在或產生之其他官能基相容之試劑除去。用於本文中描述之方法中之合適保護基之選擇在一般熟習此項技術者之技能範圍之内。合適保護基之實例可見於Greene等人，（1991) pr〇teetive

Groups in Organic Synthesis，第三版（John Wiley & Sons ❹ Inc” New York)，該文獻之内容以引用方式併入本文中。在本發明之一些實施例中，保護基並不自疏水性紫杉烷衍生物除去。如本文中使用之"羥基保護基"表示能夠保護游離羥基以產生"經保護羥基"的基團，其在使用保護之反應之後可在不干擾化合物之其餘部分的情況下除去。例示性羥基保護基包括（但不限於）醚（例如烯丙基、三苯基曱基 (三苯曱基或Tr)、苄基、對曱氧苄基（PMB)、對曱氧苯基 ©(PMP))、縮醛（例如甲氧基甲基（MOM)、3-甲氧基乙氧基曱基（MEM)、四氫哌喃基（THP)、乙氧基乙基（EE)、曱基硫曱基（MTM)、2-曱氧基-2-丙基（MOP)、2-三甲基矽烷基乙氧基甲基（SEM))、酯（例如苯甲酸酯（Bz)、烯丙基碳酸酯、2,2,2-三氯乙基碳酸酯（Troc)、2-三甲基石夕院基乙基碳酸酯）、矽烷基醚（例如三曱基矽烷基（TMS)、三乙基矽烷基（TES)、三異丙基矽烷基（TI PS)、三苯基矽烷基（TPS)、第三丁基二甲基矽烷基（TBDMS)、第三丁基二苯基矽烷基 (TBDPS))及其類似基團。 134531.doc -20- 200942233 如本文中使用之"治療"為獲得包括臨床結果之有益或所需結果的方法。出於本發明之目％，有益或所需臨床結果包括(但不限於)以下一或多者：減少由疾病引起之一或多種症狀、減輕疾病程度、穩定疾病（例如防止或延遲疾病惡化)、延遲或減緩疾病進程、改善疾病病況、減少治療疾病所需之-或多種其他藥物之劑量、增加生活品質，及/ 或延長存活（包括總存活及無疾病進展存活）。”治療，，亦包 ❹ 括減少癌症之病理後果。本發明之方法涵蓋治療之此等態樣中之任意一或多者。如本文中使用之"延遲"癌症發展意謂延緩、阻礙、減緩阻滞、穩疋及/或推遲疾病之發展。視疾病歷程及/或所治療個體而定，此延遲可具有不同時間長度。如熟習此項技術者顯而易見，充分或顯著延遲可實際上包括預防，此係因為個體不發展該疾病。，I延遲"癌症發展之方法為在與未使用該方法相比時減少給定時段内疾病發展之機率及/ Q 或減輕給定時段内疾病程度的方法。該等比較通常基於使用統§十上顯著數量之受檢者的臨床研究。癌症發展可使用諸如常規身體檢查或X射線之標準方法來偵測。發展亦可私最初可能不可偵測之疾病進程且包括出現及發作。如本文中使用之"處於危險中，，之個體為處於發展病狀（例如癌症）之危險中之個體。"處於危險中"之個體可能患有或可能不患有可债測疾病’且在本文中描述之治療方法之前可能已顯示或可能未顯示可偵測疾病。"處於危險中"表示個體具有一或多種所謂危險因素，其為本文中描述之與病 13453 丨.doc 21 200942233 狀發展有關之可量測參數。與不具有此等危險因素之個體相比，具有一或多種此等危險因素之個體具有更高的發展病狀之機率。如本文中使用之，，醫藥活性化合物"、"治療劑"及此等術語之同類術語意謂引起所需效應（例如治療、穩定、預防及/或延遲癌症）之化合物。如本文中使用之術語•，額外醫藥劑"其及同類術語意欲指稱經投與以引起治療效應之不同於紫杉烷衍生物之活性劑 ® (例如藥物）。該（等）醫藥劑可針對與紫杉烷衍生物意欲治療或預防之病狀（例如癌症）相關的治療效應，或該（等）醫藥劑可意欲治療或預防潛在病狀之症狀（例如腫瘤生長、出血、潰瘍、疼痛、腫大之淋巴結、咳嗽、黃疸、腫脹、體重減輕、惡病質、出汗、貧血'副腫瘤現象、血检形成等）或另外減少投與紫杉烷衍生物之副作用之出現或嚴重程度。 φ 如本文中使用之”醫藥學上可接受"或"藥理上相容"意謂不為生物學上或其他方面不當之材料，例如該材料可併入投與患者之醫藥組合物中，而不引起任何顯著不當之生物效應或以有害方式與包含其之組合物之任何其他組份相互作用。如本文中使用之術語"醫藥學上可接受的載劑，·及其 =類術語係指熟習此項技術者已知適合於投與個體（例如哺乳動物或非哺乳動物）之佐劑、黏合劑、稀釋劑等。兩種或兩種以上載劑之組合亦兩述之盤遂摩，曲|於本發明巾。如本文中插这之醫藥學上可接受的載劑及任何額外組份應適宜用於特 13453 丨.doc -22- 200942233 定劑型之預期投與途徑（例 a ^ ''' 、非經腸h該適宜性將易於二熟習此項技術者識別，尤其馨於本文中提供之教二Γ學上可接受的載劑或賦形劑較佳滿足毒物學及製之所需標準及/或包括於美國食品及藥物管理局所制訂之非活性組分指南（Inacti ve Ingredient Guide)。如本文中使用之術語，，醫藥有效量”、"治療有效量"、”有效量及此等術語之同類術語係指對於特定病狀（例如疾 ❹病、病症等)或其一或多種症狀產生所需藥理及/或生理效應及/或完全或部分預防病狀或其症狀之出現及/或就部分或完全治癒病狀（例如癌症）及/或可歸因於該病狀之副作用而言可具有治療性的量。關於本文中描述之病狀（例如癌症).，、醫藥或治療有效量可包含尤其足以減少癌細胞數目，減少腫瘤尺寸；抑制（亦即在某種程度上減緩且較佳終止）癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制（亦即在某種程度上減緩且較佳終止）腫瘤轉移；在某種程度上抑制腫瘤生 Q長，防止生長及7或殺死現有癌細胞；具細胞抑制性及/或細胞毒性；恢復或維持血管抑制或防止血管抑制之損害或喪失；減少腫瘤負荷；減少發病率及/或死亡率；及/或在某種程度上減輕與癌症有關之一或多種症狀的量。有效量可延長無疾病進展存活（例如藉由實體腫瘤之反應評價標準、RECIST或CA-125變化來量測）、引起客觀反應（包= 部分反應或完全反應）、增加總存活時間，及/或改善癌症之一或多種症狀（例如藉由FOSI評定）。在某些實施例中，醫藥有效量足以預防病狀’如在預防性投與個體之情況 134531.doc 23· 200942233 下。 ’’醫藥有效量"或"治療有效量"可視所投與之組合物、所治療/預防之病狀（例如癌症之類型）、所治療或預防病狀之嚴重程度、個體之年齡及相對健康狀態、投藥途徑及形式、主治醫生或獸醫之判斷及熟習此項技術者鑒於本文中提供之教示所知曉之其他因素而變化。如此項技術中所瞭解，"有效量”可為一或多個劑量，亦即可能需要單一劑量或多個劑量以達成所需治療終點。可在投與一或多種治療劑之情況下考慮有效量，且若與一或多種其他劑結合’可能為或達成合意或有益之結果，則可將奈米顆粒組合物（例如包括紫杉烷衍生物及載體蛋白之組合物）視為以有效量給與。除非另外清楚地指示’否則如本文中使用之"個體"意指哺乳動物’包括（但不限於）靈長類動物、人、牛、馬、描、犬及/或齧齒動物》 ^ 在關於本文中描述之治療/預防方法及化合物及其奈米顆粒組合物之用途使用時，"有需要"之個體可為已診斷患有待治療之病狀或先前已針對待治療之病狀經治療之個體。關於預防，有需要之個體亦可為處於病狀危險（例如該病狀之家族史、預示病狀危險的生活方式因素等）中之個體。如本文中使用之"組合療法”意謂包括包含疏水性紫杉烷衍生物及載體蛋白之奈米顆粒之第一療法結合可用於治療、穩定、預防及/或延遲癌症之第二療法（例如手術或額 134531.doc • 24 · 200942233 外治療劑）。"結合"另一化合物投與包括在同一或不同組合物中依序、同時或連續投與。在一些實施例中組合療法視情況包括一或多種醫藥學上可接受的載劑或賦形劑，非醫藥活性化合物及/或惰性物質。本文中使用之術語"抗微生物劑”係指能夠抑制（例如延遲、減少、減緩及/或預防）一或多種微生物生長之藥劑。顯著微生物纟長可藉由此項技術中已知的諸多方式量測或指示’諸如以下-或多者：⑴組合物中足以在將組合物投與個體時引起對個體之—或多種不良反應之微生物的生長；（π)在外部污染（例如在⑼至乃^範圍内之溫度下暴露於1〇_103集落形成單位）後經某一時段（例如經24小時）微生物生長增加約10倍以上。顯著微生物生長之其他指示描述於仍2〇〇7/〇117744中，該專利之全文以引用的方式併入本文中。如本文中使用之”糖"包括（但不限於）單醣、雙醣、多醣〇及其衍生物或改質形式。適用於本文中描述之組合物之糖包括（例如）甘露糖醇、餘、果糖、乳糖、麥芽糖及海藻糖。術語"蛋白質"係指任何長度之胺基酸之多肽或聚合物（包括全長或片&)’其可為線性或分枝的，包含改質胺基酸及/或間雜有非胺基酸。該術語亦包括已經天然改質或藉由插入（例如二硫鍵形成、糖基化作用、脂化作用、乙醯化作用、錢化或任何其他操作或改質）來改質之胺基酸聚口物。該術浯亦包括（例如）含有胺基酸之一或多種衍生 134531.doc 200942233 物（包括（例如）非天然他改質之多肽。胺基酸等）以及此項技術中已知的其 '存活"係指患者保括、、壬这㈣持“ ’且包括總存活以及無疾病進展存活。總存活”係指自吟餅七，A成于扣目^斷或治療之時起患者保持活歷時特定時段，諸如1年、5车黧„ & 午5年等。”無疾病進展存活"係指在癌症不進展或惡化的情況下，患者保持活著。”延長存活意謂相對於未經治療的患者（例如相對於未經紫杉燒奈 ❹ 米顆粒組合物治疼^ \ ΙϋΑ I . 瀠之患者）增加經治療患者之總存活或無疾病進展存活* 、如本文中使用，提到"不為"某一值或參數通常意謂且描述不同於某一值或參數。舉例而言，若不投與紫杉烷，則其意S胃投與不同於紫杉院之藥劑。本文中提到"約"某一值或參數包括（且描述）針對彼值或參數本身之變化形式。舉例而言，描述涉及"約X"包括描述"X” 0 除非上下文另外清楚地規定，否則如本文中及隨附申請專利範圍中使用之單數形式"一”、"或"及"該"包括複數個指示物。應瞭解本文中描述之本發明之態樣及變化形式包括"由態樣及變化形式組成"及/或”基本上由態樣及變化形式組成"。除非上下文另外規定或清楚地指示，否則本文中使用之所有技術及科學術語具有如一般熟習本發明所屬技術者通常瞭解之相同含義。奈米顆粒組合物 134531.doc -26 - 200942233 提供包含奈米顆粒之組合物’其中奈米顆粒包含紫杉院衍生物（例如化合物1、2、3·23中之任—者及 ^^，，、咖蝴及載體蛋白洶如白 Π’例如人血清白蛋白)。在-些實施例中，提供包：物及㈣Π 水性㈣燒衍生 W如白蛋白’例如人血清白蛋白），且其中 ❹ ❹ =紫在杉燒衍生物具有改良之白蛋白結合力(與紫杉统相比）。在一些實施例中，組合物為醫藥組合物。在-些實施例中’提供包含奈米顆粒之組合物，”奈米顆粒包含疏水性紫杉貌衍生物（例如化合物2、2、3 — 之任-者及任何式卜^出^ 乂或驚合蛋白(諸如白蛋白，例如人血清白蛋白），且其中與紫杉燒相比’組合物顯示改良之治療功效。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物’其中奈米顆粒包含疏水性紫杉炫街生物及載體蛋白（諸如白蛋白，例如人血清白蛋白且其中疏水性紫杉烷衍生物為紫杉烷之前藥。，在些實施例甲，提供包含奈米顆粒之組合物，其十奈米顆粒包含疏水性太平洋紫杉醇衍生物及載體蛋白、(諸如白蛋白，例如人血清白蛋白）。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物’其中奈米顆粒包含疏水性歐洲紫杉醇衍生物及載體蛋白（諸如白蛋白，例如人血清白蛋白在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含疏水性紫杉烷衍生物及載體蛋白，其中疏水性紫杉烷衍生物具有附著於相應紫杉烷之2，_羥基位置之疏水 134531.doc •27- 200942233 基在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，其中不米顆粒包含疏水性紫杉烷衍生物及載體蛋白，其中疏水紫杉院衍生物具有附著於相應紫杉烷之2，-羥基位置之醯基。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含式1化合物及載體蛋白。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含式π化合物 ❹及載體蛋白。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含式m化合物及載體蛋白。在—些實施例中，^供包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含式IV化合物及載體蛋白。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含式V化合物及載體蛋白。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物其中奈米顆粒包含式VI化合物及載體蛋白。在一些實施例中’提供包含奈米顆粒之組合物，其中奈 ❹米顆粒包含選自化合物1-23之化合物及載體蛋白。在一些實施例中，提供包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含化合物2及載體蛋白。在一些實施例中，奈米顆粒包含經諸如白蛋白（例如人血清白蛋白）之載體蛋白塗佈之疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式j、n、ln、IV、v 或VI化合物）。與包含未經疏水基取代之紫杉烷之奈米顆粒組合物相比’本文中描述之奈米顆粒具有顯著較小的直徑（參見圖 134531.doc -28- 200942233 8)。奈米顆粒通常具有不大於約1000奈米（nm)之平均直徑 (例如呈乾燥形式），諸如不大於約900 nm、800 nm、700 nm ' 600 nm、500 nm、400 nm、300 nm ' 200 nm或 100 nm中之任一者。在一些實施例中，顆粒之平均直徑不大於約200 nm。在一些實施例中，顆粒之平均直徑在約20至約 400 nm之間。在一些實施例中，顆粒之平均直徑在約40至約200 nm之間。在一些實施例中，顆粒為可經無菌過濾。在一些實施例中，本文中描述之組合物中之奈米顆粒具有 ® 不大於約150 nm之平均直徑，包括例如不大於約100、 90、80、70、60或50 nm中之任一者。較小粒徑可有益於輔助輸送，如下所述。在一些實施例中，組合物中所有奈米顆粒之至少約50%(例如至少約60%、70%、80%、90%、 95%或99%中之任一者）具有不大於約150 nm之直徑，包括例如不大於100、90、80、70或60 nm中之任一者。在一些實施例中，組合物中所有奈米顆粒之至少約50%(例如至少 60%、70%、80%、90%、95% 或 99% 中之任一者）處於20- ❹ 150 nm 之範圍内，包括例如 30-140 nm、40-130、50-120，及60-100 nm中之任一者。本文中描述之奈米顆粒可為任何形狀（例如球形或非球形）。在一些實施例中，在約2 5、 50、75、100、125、150、175、200、250、300、350 或 400 pg/mL中之任一者之血液濃度下，血液循環中包含疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式I、II、III、IV、V或VI化合物）之奈米顆粒的平均直徑不大於約1000奈米（nm)，諸如不大於約900 nm、800 134531.doc -29- 200942233 nm、700 nm、600 nm、500 nm、400 nm、300 nm、200 nm，或100 nm中之任一者。在一些實施例中，在活體内所有奈米顆粒之至少約50%(例如至少約60%、70%、80%、 90%、95°/〇或99%中之任一者）具有不大於約150 nm之直徑，包括例如不大於100、90、80、70或60 nm中之任一者。在一些實施例中，在介於約10 pg/ml與300 gg/ml之間、25 pg/ml與 150 pg/ml之間，或50 pg/ml與 100 pg/ml之間中之任一者的血液濃度下，血液中包含疏水性紫杉烷衍 ® 生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式I、II、 III、IV、V或VI化合物）之奈米顆粒的平均直徑介於約5 nm與80 nm之間、10 nm與70 nm之間、20 nm與60 nm之間、3 0與5 0 nm之間，或約4 5 nm中之任一者。在一些實施例中，載體蛋白具有可形成二硫鍵之硫氫基。在一些實施例中，組合物之奈米顆粒部分中載體蛋白之至少約5%(包括例如至少約10%、15%或20%中之任一者）經交聯（例如由S-S交聯）》〇在一些實施例中，組合物包含呈奈米顆粒形式及非奈米顆粒形式之疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式I、II、III、IV、V或VI化合物），其中總疏水性紫杉烷衍生物之大於約50%、60%、70%、80%、 90°/。、95%或99%中之任一者呈奈米顆粒形式。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物以重量計構成奈米顆粒之大於約 50%、60%、70%、80%、90%、95% 或 99% 中之任一者。在一些實施例中，奈米顆粒大體上不含聚合物核心材 134531.doc -30- 200942233 料。在一些實施例中，牟 Α韭曰各不米顆粒中之疏水性紫杉烷衍生物為非日日形的。在—些實 .s.u 用於製造奈米顆粒組合物中载體蛋白（諸如j中，奈米顆粒組合物蛋白）與疏水性紫杉统衍生物之重量比為約18:1或18:1以下、4 .或丨5.1以下、14:1或14:1以下、 13:1或13:1以下、】9 ·】+ ^ 以1或12:1以下、mi或11:1以下、10:1 或 10:1以下、9:1 ^9.】w πτ δ，士。 ^ .1以下、8:1 或 8:1 以下、75:1或7 5:1 〇

^下、7,1或7:1以下、6:1或6:1以下、5:1或5:1以下、4:1 以下，或3:1或3:1以下中之任一者。在一些實施例組口物中載體蛋白（諸如白蛋白）與疏水性紫杉烧衍生物之重量比處於約1:1至約18:1、約2:1至約ΐ5:ι、約Η至約13:1、約4:1至約12:1、約5:1至約10:1中之任一者之範圍内。在一些實施例中，組合物之奈米粒子部分中載體蛋白與疏水性紫杉烷衍生物之重量比為約1:2、1:3、i:4、 15、1:1〇、1:15或1:15以下中之任一者。本文中描述之奈米顆粒可存在於乾燥調配物（例如凍乾組合物）中或懸浮於生物相容介質中。合適生物相容介質包括（但不限於）水、經緩衝之水性介質、生理食鹽水、經緩衝之生理食鹽水、視情況經緩衝之胺基酸溶液、視情況經緩衝之蛋白質溶液、視情況經緩衝之糖溶液、視情況經緩衝之維生素溶液、視情況經緩衝之合成聚合物溶液、含有脂質之乳液及其類似物。在一些實施例中，組合物包含含有疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物丨、2、3_23中之任一者及任何式I、II、HI、IV、V或VI化合物）及載體蛋白（諸 134531.doc -31 · 200942233 如白蛋白）之顆粒（例如奈米顆粒）（例如經白蛋白塗佈之疏水性紫杉烷衍生物之顆粒）之穩定水性懸浮液。在一些實施例中，組合物大體上不含（諸如不含）界面活性劑（諸如Cremophor®、吐溫80或用於投與紫杉烷之其他有機溶劑）。本文中描述之奈米顆粒組合物可能會增強疏水性紫杉烷及/或疏水性紫杉烷衍生物之代謝產物至細胞（例如腫瘤細胞）之輸送及7或增強疏水性紫杉烷及/或疏水性紫杉烷衍生物之代謝產物與細胞（例如腫瘤細胞）之結合。與正常細胞相比，腫瘤細胞展現對包括（例如）白蛋白及轉鐵蛋白之蛋白質的增強吸收。因為踵瘤細胞以較快速率分裂，所以其與正常細胞相比需要額外營養源。本發明之含有太平洋紫杉醇及人血清白蛋白之醫藥組合物的腫瘤研究顯示腫瘤對白蛋白-太平洋紫杉醇之高吸收性。已發現此係歸因於過去未曾發現對白蛋白具有特異性之醣蛋白6〇(”gp6〇")受體輸送白蛋白-藥物的現象。 p 在一態樣中，奈米顆粒組合物包含疏水性紫杉烷衍生物 (例如化合物1、2、3·23中之任一者及任何式J、„、m、 IV、V或VI化合物）及能夠結合印60受體之載體蛋白（例如白蛋白）。在另一實施例中，奈米顆粒組合物包含疏水性紫杉烧衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式 I、π、hi、iv、v或vi化合物）及能夠結合SPARC受體之載體蛋白（例如白蛋白）。在另一態樣中，在與未經衍生之紫杉烷衍生物相比時， 134531.doc •32- 200942233 本文中描述之包含疏水性紫杉烷衍生物之奈米顆粒組合物具有不同的溶解圖形，其可產生顯著優點。舉例而言，已顯示某些含有疏水性紫杉烷衍生物之奈米顆粒比其未經衍生之對應物具有明顯較低之溶解度（參見實例21 ;表9及 10;及圖9-11)。降低之溶解度可使奈米顆粒在循環期間長期保持完整。因此，在一實施例中，奈米顆粒組合物包含疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式1、11、HI、IV、V或VI化合物）及載體蛋白（例如白 Ο 蛋白）’其中與包含未經疏水基取代之紫杉烷（例如歐洲紫杉醇）之奈米顆粒組合物相比，該奈米顆粒具有減少之水溶解速率（包括大體上減少之溶解速率）。在一些此等實施例中’在與包含未改質紫杉烷（例如歐洲紫杉醇或太平洋紫杉醇）之奈米顆粒組合物相比時，包含疏水性紫杉烷衍生物之奈米顆粒組合物之水溶解度下降超過約2倍，或3 倍，或 5、7、10、12、15、17、20、25、30、35、40、 ❹ 50、75、100、200、500或1〇〇〇倍中之任一者。在一些實施例中’如藉由動態光散射使用Malvern Zetasizer來量測’在37°C下5% HSA中之溶解試驗中，在約5、1〇、25或 50pg/ml中之任一者下，奈米顆粒具有約1〇1^至1〇()11111、 20至75 nm、15至50 nm中之任一者，或大於約2〇 nm、3〇 nm、40 nm、50 nm中之任一者的平均粒徑。在一些實施例中，在37°C下5% HSA中之溶解試驗中，在約5、5〇、75 或100 pg/ml中之任一者下，奈米顆粒具有約2〇 nrr^75 nm，或大於約30 nm之平均粒徑。在一些實施例中，如藉 134531.doc -33- 200942233 由動態光散射使用Malvern Zetasizer來量測，在37°C下5% HSA中量測時，奈米顆粒展現以下溶解圖形：（l)a)在200 pg/ml下約 40 nm至 75 nm或大於約 50 nm ; b)在 100 pg/ml下約30 nm至60 nm或大於約40 nm;及c)在10 pg/ml下約10 nm至40 nm或大於約20 nm;或（2)a)在約400 pg/ml下約50 nm至100 nm或大於約60 nm ; b)在200 pg/ml下約40 nm至 75 nm或大於約50 nm ; c)在約100 pg/ml下約30 nm至60 nm 或大於約40 nm ; d)在10 gg/ml下約10 nm至40 nm或大於約 ® 大於20 nm ;及e)在約5 pg/ml下約10 nm至40 nm或大於約 20 nm。在一些實施例中，如藉由動態光散射使用Malvern Zetasizer來量測，在37°C下5°/〇 HSA中量測時，奈米顆粒展現以下溶解圖形：（l)a)在200 pg/ml下約40 nm至75 nm或大於約50 nm ; b)在100 pg/ml下約30 nm至60 nm或大於約 40 nm ;及c)在10 pg/ml下約10 nm至40 nm或大於約20 nm ;或（2)a)在約400 pg/ml下約50 nm至100 nm或大於約60 nm; b)在 200 pg/ml 下約 40 nm 至 75 nm或大於約 50 nm; c) 〇在約100 pg/ml下約30 nm至60 nm或大於約40 nm; d)在10 pg/ml下約10 nm至40 nm或大於約大於20 nm ;及e)在約5 pg/ml下約10 nm至40 nm或大於約20 nme在一些實施例中，在藉由動態光散射使用Malvern Zetasizer在37°C下5% HSA中量測時，奈米顆粒展現表9之溶解圖形。在一些實施例中，在藉由動態光散射使用Malvern Zetasizer在37°C 下5% HSA中量測時，溶解圖形之EC50(亦即半點）低於約 200 pg/ml、150 pg/ml、120 pg/mL、100 pg/ml，或 50 134531.doc -34- 200942233 μ§/ιη1中之任一者。在一些實施例中，在37°C下5% HSA中量測時’溶解圖形之EC50小於相同奈米顆粒調配物中未改質紫杉院之EC50的約75%、50%、25%、10%或5%中之任者在些實施例中’在藉由動態光散射使用Malvern

Zetasizer在37°C下5% HSA中量測時，溶解圖形之E9〇(亦即 90 溶解點）低於約 100 μβ/ηι1、75 μβ/πι1、5〇 yg/ml、3〇 pg/m 卜 20 pg/nU、i 5 pg/ml 或！〇 gg/ml 中之任一者。在一些實施例中，在靜脈内投與時，奈米顆粒能夠維持約3〇 nm至約50 nm之平均直徑歷時至少約5分鐘、1〇分鐘或】小時。如上所述之包含疏水性紫杉烷衍生物之奈米顆粒顯著減少之粒徑及溶解可使完整奈米顆粒進入細胞膜穴樣内陷以便内皮輸送至腫瘤細胞中（其開口為約3〇_5〇 nm且内徑為 100 nm ;參見Westermann等人，机^以⑽Ce"仍〇/ (1999) 111··71-81 ,該文獻之内容以引用的方式併入本文中）。因此，包含疏水性紫杉烷衍生物之奈米顆粒之輸送可能比包含未經疏水基取代之紫杉燒之奈米顆粒的輸送更有效。杉巧一月厅、>r夕坑、例如太平洋紫醇及/或歐洲紫杉醇）之奈米顆粒相比，含有疏水性紫杉烧衍生物之奈米顆粒具有改良之物理及/或化學穩定性。在-些實施例中’奈米顆粒組合物包含疏水性紫杉院衍生物（例如化合物卜2、3_23中之任_者及任何式卜心 m、IV、V·化合物）及載體蛋白（例如白蛋白），其中在 134531.doc -35- 200942233 4°C(或25°C)及約6、7或8中之任一者之？1^值下儲存5、ι〇、 30、60、90、120、180、27〇、36〇天中之任一者，或2、 3、4、5、6、7、8、9或1〇年中之任一者之後，奈米顆粒呈大體上純的形式（雜質及/或不同形式（諸如不同形式之紫杉烷/紫杉烷衍生物）不超過組合物總量的約15%或不超過約10%或不超過約5%或不超過約3%或不超過約1%)。在一些實施例中’在4。〇(或25t)下儲存5、10、30、6〇、9〇、 120、180、270、360 天中之任一者，或2、3、4、56、 7 8 9或10年中之任一者之後，含有疏水性紫杉烧衍生物之奈米顆粒適合於輸注至人體令。在一些實施例中，在不另外包含穩定劑（例如檸檬酸鹽）的情況下，含有疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物丨、2、3_23中之任一者及任何式 I、II、III、IV、V或VI化合物）之奈米顆粒為穩定的。在一些實施例中，奈米顆粒組合物具有在投與靈長類動物約0·05小時至約〇·3小時之後展現之血液Cmax。在一些 Q實施例中，在投與靈長類動物之後，奈米顆粒組合物以約 1小時至約5小時之終半衰期（包括（例如）約2小時至約4小時，諸如約3小時至約3.7小時）展現在血液中之分解。在— 些實施例中，投與靈長類動物之後，奈米顆粒組合物具有介於約2%與20%之間、約3%與1〇%之間，或約4%與7%之間中之任一者的代謝產物轉化率，以便自疏水性紫杉烷衍生物移除疏水基。在一些實施例中，靈長類動物為猴子。在一些實施例中’靈長類動物為人。疏水性紫杉烷衍生物 134531.doc •36- 200942233 本文中描述之奈米顆粒組合物包含疏水性紫杉烷衍生物 (例如疏水性太平洋紫杉醇衍生物或疏水性歐洲紫杉醇衍生物）。包括太平洋紫杉醇及歐洲紫杉醇之紫杉烷之結構實例以如本文中使用之習知編號系統顯示如下：

太平洋紫杉酵:R: 歐洲紫杉醇：R Ph：R·*乙醢基 -OtBu; R'= Η 為說明本文中使用之命名法之實例，符號C2，或2,係指標記為以上顯示之"2，"之碳原子，且Α·環係由圍繞字母A之最少數目之環碳形成之環（亦即由C1、ci5、Cll、C12、C13 及^4形成之環）所構成。因此，”2，_羥基，，係指附著於標記為"2’"之碳原子的羥基部分。附掛侧鏈為由連接至cU氧原子之原子（例如Cl，、C2'、C3，等）構成之部分。在-些實施例中’疏水性紫杉烷衍生物為太平洋紫杉醇之衍生物。在-些實施例中，疏水性紫杉院衍生物為歐洲紫杉醇之衍生物。

&万法·來量測能夠轉化為紫杉烷（例如文中實例部分中描述如歐洲紫杉醇或太平 134531.doc •37· 200942233 洋紫杉醇）達大於約1、2、3、4、5、8、10、12、15 18 ' 20、25或30%中之任一者（例如由人肝微粒體轉化）。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物含有附著於A環碳或直接與A環碳連接之環外原子的疏水基。在一些實施例中’疏水性紫杉烷衍生物含有附著於B環碳或直接與b 環碳連接之環外原子的疏水基。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物含有附著於C環碳或直接與c環碳連接之環外原子的疏水基。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物 ® 含有附著於附掛側鏈之疏水基。

在一些該等實施例十’疏水性紫杉烷衍生物含有一或多個疏水基在一些實施例中，疏水性紫杉院衍生物含有多個疏水基》在-些實施财，疏水性紫㈣衍生物僅含有個疏水基。在一些實施例中，疏水基為_c(〇)r6 ;其中 R為選自燒基、縣、块基、環烧基、環烧基烧基、芳基、雜彡纟、芳@基及雜芳院基的經取代或未經取代部分。在-些實施例中，r6獨立地為選自烧基、稀基、環院基環烧基-燒基、芳基及芳燒基之經取代或未經取代部分。在一些實施例中，R6為選自烧基、稀基、環貌基、環烷基-烷基、芳基及芳烷基之經取代或未經取代部分。在二實施例中，R6為選自烷基、芳基及芳烷基之經取代或 ^經取代部分。在—些實施例中，院基、芳基及芳烧基未 ^代。、在—些實施例中，r6為未經取代〜⑽基或丄取代之6員方基。在—些實施例中，r6為未經取代之 …基或未經取代之苯基。在__些實施例中，汉6為未 13453I.doc •38- 200942233 經取代iCl_ClG烷基（例如a烷基）。在一些實施例中，R6 為未經取代之苯基。在一些該等實施例中，疏水性紫杉烷衍生物具有下式：

Ο 其中Rl為苯基或_0tBu ; r2、R3、R4及R5獨立地為H或疏水基’且其中R2、R3、R4及R5中之至少一者不為H。在一些實施例中，式I之疏水性紫杉烷衍生物含有以下限制條件：在R1為苯基且R2、R3及R5各自為Η時，R4不為乙酿基部分。在一些實施例中’ R1為苯基。在一些實施例中，R1為-OtBu。在一些實施例中，Ri為苯基且尺2為疏水基（諸如醯基’例如-C(0)-C4-C1Q烷基，尤其未經取代之-C(0)-C6烧基）。在一些實施例中，R1為苯基且r2為疏水〇基（諸如醯基，例如-c(〇)-C4-c1G烷基，尤其未經取代之-C(0)-C6烷基）。在一些實施例中，R2、R3、尺4及R5中之僅一者不為Η。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物具有下式：

134531.doc •39· 200942233 其中R丨為苯基或-〇tBu ; r2、r3、尺4及r5獨立地為h 或-c(〇)r6;每_r6獨立地為選自烷基烯基炔基、環烷基環烷基-烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳烷基之經取代或未經取代部分；且其中r2、r3、RW中之至少一者不為Η。在一些實施例中，式„之疏水性紫杉烷衍生物含有以下限制條件.在苯基且R2、R3及R5各自為Η時，R4不為 ❹ 乙醯基部分。在一些實施例中，Rl為苯基。在一些實施例中，R1 為-OtBu。在一些實施例中，式Π之每一 R6獨立地為選自4丨-^5烷基、_CVC15稀基、_Cl_Ci5块基、_Ci_Ci5環烷基、_Ci Ci5 環烷基-烷基、芳基、5至7員雜芳基、芳烷基及雜芳烷基之經取代或未經取代部分。在一些實施例中，每一Μ獨立地為選自烷基、-Ci-C^烯基及芳基之經取代或未經取代部分。在一些實施例中，每一 R6獨立地為經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之_Ci_Ci5烷基。在一些實施例中，每一R6獨立地為未經取代之芳基或未經取代之-Ci-Ch烷基。在一些實施例中，每一 R6獨立地為未經取代之苯基或未經取代之甲基。在一些實施例中，每一尺6獨立地為未經取代之芳基。在一些實施例中，每一 R6獨立地為未經取代之苯基。在一些實施例中，每一 R6獨立地為未經取代之-Ci-Cu烷基。在一些實施例中，每一R6獨立地為未經取代之-Ci-C^o烧基’或-CVCio统基。在一些實施例中，每一R6為-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-(〇Η2)3(：Η3、 13453I.doc ·40· 200942233 -(CH2)4CH3 > -(CH2)5CH3 ' -(CH2)6CH3 > -(CH2)7CH3 及-(CHACH3中之任一者。在一些實施例中，R6 為-(CH2)4CH3。在一些實施例中，式II之R2、R3、R4&R5中之僅一者不為Η。在一些實施例中，R2不為H。在一些實施例中，R3 不為Η。在一些實施例中，R4不為H。在一些實施例中， R5不為Η。在一些實施例中，式H2R2、R3、尺4及汉5中之僅兩者不為Η。在一些實施例中，R2及R3不為H。在一些 °實施例中，RW不為H。在_些實施例中， Η。在一些實施例十，R4為乙醯基部分且r2、“及汉5中之僅一者不為Η » 在一些實施例中，式11之R4為乙醯基部分D苯基；且R3及R5各自為Η。在-些實施例中，乙醯基部分； R1為苯基；R3及r5各自為Η ;且尺6為選自义^烷基、-C|_Cl5烯基及芳基之經取代或未經取代部分。

在一些實施例中，R4為乙醯基部分；Rl為苯基；R3及R5 各自為Η，且R6為經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之-CVC】5烧基。在一些實施例中，R4為乙酿基部分；R1為苯基；RW各自為H; &r6為未經取代之芳基或未經取代之-CVCW基。在—些實施例中，R4為乙㈣部分；R1為苯基HR5各自為H;且“未經取代之苯基或未經取代之_c:4_Ci。炫基4 —些實施例中，R4為乙酿基部分；R1為笨基；R3AR5各自為HaR6為未經取代之方基。在一些實施例中，r4為乙醯基部分；r丨為苯基；r3 134531.doc -41 - 200942233 及R各自為Η，且R6為苯基。在一些實施例中，r4為乙酿基部分；R1為苯基；R3AR5各自為H; ar6為未經取代之-C^-C〗5烷基。在一些實施例中，R4為乙醯基部分；…為苯基；R3及R5各自為H;且r6為未經取代之C广〜院基。在一些實施例中，R4為乙醯基部分；Rl為苯基；R3及R5各自為Η ;且R6為未經取代之_C4_Cig烷基。在一些實施例中，R4為乙醯基部分；R丨為苯基；R3及r5各自為H ;且以為-(CH2)4CH3 0 在一些實施例中，式π之R丨為_〇tBu ; R3、…及尺5各自為 Η ;且R6為經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之-cvcu娱:基。在一些實施例中，式π之R^-〇tBu ; R3、R4及R5各自為H ;且R6為未經取代之芳基或未經取代之-Ci-C丨5烧基。在一些實施例中，式R丨為_〇tBu ; R、R及R各自為Η ;且R6為未經取代之苯基或未經取代之-cvc丨〇烧基。在一些實施例中，式π之Ri為_〇tBu ; ❹ R、R及R各自為Η;且R6為未經取代之芳基。在一些實施例中’式II之R1為_〇tBu ; R3、R^R5各自為Η ;且R6為苯基。在一些實施例中’式Π之R1為_〇tBu ; R3、R4及R5各自為Η ;且R6為未經取代之_Ci_Cl5烷基，在一些實施例中’式II之R1為_〇tBu ; R3、R4及R5各自為η ;且R6為未經取代之-(VCw烷基。在一些實施例中，式π之Ri 為-OtBu ; R3、R4及R5各自為η ;且r6為未經取代之_c4-c10 燒基。在一些實施例中，式II之R1為_〇tBu ; R3、R4及R5各自為 Η ;且 R6為 _(CH2)4CH3。 134531.doc -42- 200942233 在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物具有下式：

❹ 其中R2、R3及R4獨立地為mc(〇)R6;每—r6獨立地為選 2烷基、烯基、炔基、環烷基、環烷基-烷基、芳基、雜方基、芳烷基及雜芳烷基之經取代或未經取代部分；且其中R2、R3及R4中之至少一者不為Η。在-些實施例中，式⑴之每一r6獨立地為選自_c心院基、-cvc15婦基、_Ci_Ci5炔基、_Ci Ci5環院基㈣基{基'芳基、5至7員雜芳基、芳燒基及雜芳烧基之經取代或未經取代部分。在—些實施例中，每—R6獨立地為選自基、以15稀基及芳基之經取代或未經 3部分。在-些實施财，每_R6獨立地為經取代或未、絲代之芳基或經取代或未經取代之_C1_C15^。在一此實施例巾，每—R6獨立地為未經取代之芳基或未經取代 =-以15絲。在-些實施例中，每—心立地為未經取代之苯基或未經取代之甲基。在_些實施例中，每一 2為未經取代之些實施财，每—R6獨立地為未經取代之苯基。在一肽眘渝如A ρ Λ 一貫施例中，每一 R6獨立地為未 :取代之成基。在—些實施例中，每—r6獨立未經取代W基’或^。貌基β在一些實施例 134531.doc -43· 200942233 中，每-R6為-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-(CH2)3CH3、 -(CH2)4CH3 > -(CH2)5CH3 > -(CH2)6CH3 ^ -(CH2)7CH3 及-(CH2)8CH3中之任一者。在一些實施例中，R6 為-(CH2)4CH3。在一些實施例中，式ΙΠ之R2、R3及R4中之僅一者不為 Η。在一些實施例中，R2不為H。在一些實施例中，…不為Η。在一些實施例中’ R4不為Η。在一些實施例中， r2、r3及r4中之僅兩者不為ίί。在一些實施例中，尺2及R3 不為Η。在一些實施例中，…及尺4不為H。在一些實施例中，R3及R4不為Η。在一些實施例中，R4為HiR2及R3中之僅一者不為Η。在一些實施例中，式niR3&R4各自為^^在一些實施例中，R3及R4各自為Η ;且R6為選自_Cl_Ci5烷基、_Ci_Ci5 烯基及芳基之經取代或未經取代部分。在一些實施例中， R及R各自為Η ;且R6為經取代或未經取代之芳基或經取 ❹代或未經取代之-C^-Ci5烷基。在一些實施例中，R3及R4各自為Η ;且R6為未經取代之芳基或未經取代之烷基。在一些實施例中，…及…各自為H;且尺6為未經取代之苯基或未經取代之-CrCio烷基。在一些實施例中，汉3及 R4各自為Η ;且R6為未經取代之芳基。在—些實施例中， R及R各自為Η ;且R6為苯基。在一些實施例中，汉3及汉4 各自為Η ;且R6為未經取代之_Ci_Cis烷基。在一些實施例中，R3及R4各自為Η ;且R6為未經取代之_Ci_Ci〇烷基。在一些實施例中，R3及R4各自為H;且r6為未經取代之-Cp 134531.doc -44 - 200942233 C10烷基。在一些實施例中，R3及R4各自為H ;且r 為-(CH2)4CH3。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物具有下#

其中R2、R3及R4獨立地為Η或-C(0)R6 ;每一 R6獨立地為選自烷基、烯基、炔基、環烷基、環烷基_烷基、芳基、雜芳基、芳烷基及雜芳院基之經取代或未經取代部分且其中R2、R3及R4中之至少一者不為H。在一些實施例中，在 R2、R3及R5各自為Η時，R4不為乙醯基部分❶ 在一些實施例中，式iv之每一R6獨立地為選自烷基、-c丨-c15烯基、_Cl-Cl5炔基、_Ci_Ci々烷基、4a 環烷基-烷基、芳基、5至7員雜芳基、芳烷基及雜芳烷基5 之經取代或未經取代部分H實施例中，每— 地為選自·〇^15烷基、_Ci_c]5烯基及芳基取代部分》在—些實施财，每—R6獨立地為經取=未i =代之芳基或經取代絲經—基。在L此中，每一R6獨立地為未經取代之芳基或未經取：代之笼m 二實施例中，每—R6獨立地為未經取代之笨基或未經取代之曱基。此立地為未經取代之芳A力實施例中’每务基。在一些實施例中，每一R6獨立地 134531.doc •45· 200942233 為未經取代之苯基。在一些實施例中，每一 R6獨立地為未經取代之-C1-C15烧基β在一些實施例中，每一 R6獨立地為未經取代之-Cl-Cl 〇院基’或-C4_C 10烧基。在一些實施例中，每一R6為-CH3、_ch2ch3、-(ch2)2ch3、-(CH2)3CH3、 -(CH2)4CH3 、 -(CH2)5CH3 、 -(CH2)6CH3 、 -(CH2)7CH3 及-(CH2)8CH3中之任一者。在一些實施例中，為-(ch2)4ch3。在一些實施例中，式IV之R2、R3及R4中之僅一者不為 © Η。在一些實施例中，R2不為H。在一些實施例中，&3不為Η。在一些實施例中，R4不為H。在一些實施例中， R R及R中之僅兩者不為η。在一些實施例中，r2及r3 不為Η。在一些實施例中，尺2及R4不為Η ^在一些實施例中，R3及R4不為Η »在一些實施例中，R4為乙醯基部分且 R2及R3中之僅一者不為Η。在一些實施例中，式IV之R4為乙醯基部分且R3為Η。在 © —些實施例中，R4為乙酿基部分；R3為Η;且V為選 :_Ci-C15烷基、-C丨-Cl5烯基及芳基之經取代或未經取代部刀在*實施例中，R4為乙酿基部分；且尺6為 2取代或未經取代之芳基或經取代絲經取狀々A燒 ^在—些實施例中，R4為乙酿基部分；r3為H;m =經=之芳基^經取代之々A㈣。在—些實施例未哩取代乙醢基部分’ R3為H;且為R6未經取代之苯基或未經取代之_c4_c,G烷基。分;R3為Η⑽未經取代之：例：，R為乙酿基部 π t芳基。在一些實施例中， 134531.doc -46. 200942233 R4為乙醯基部分；R3為Η ;且r6為苯基^在一些實施例中’ R為乙醯基部分；R3為H;且R6為未經取代之烷基。在一些實施例中’ R4為乙醯基部分；R3為Η ;且R6 為未經取代之-CfC 1〇烷基。在一些實施例中，R4為乙醯基部分；R3為Η ;且R6為未經取代之_C4_Cig烷基。在一些實施例中’ R4為乙醯基部分；r3為η ;且尺6為_(CH2)4CH3。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物具有下式：

其中R2為-C(0)R6 ;且R6獨立地為選自烷基烯基炔基、環院基、環院基-虎基、芳基、雜芳基、芳院基及雜芳烷基的經取代或未經取代部分；或其醫藥學上可接受的 ❹ 鹽、異構體或溶劑合物。在一些實施例中，式V及式V&R6為選自·Ci_Ci5烷基、烯基及芳基之經取代或未經取代部分。在一些實施例中，R6為經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之-CVC,5烧基。在一些實施例中，R6為未經取代之芳基或未經取代之_Cl_Cl5烧基。在一些實施例中，r6為未經取代之苯基或未經取代之甲基。在一些實施例中，r6為未經取代之芳基（例如苯基）。在一些實施例中，以未經取 I34531.doc -47- 200942233 代之_C丨-Cls烷基。在一些實施例中，R6為未經取代之_Ci_Ci〇烷基（例如-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-(<：Η2)3(：Η3、 -(CH2)4CH3、-(CH2)5CH3、-(CH2)6CH3、-(ch2)7ch3、 -(CH2)8CH3)。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物為以下化合物中之任一者：

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134531.doc -52 200942233 載體蛋白本文中描述之奈米顆粒組合物可利用合適的天然存在或口成蛋白口適載體蛋白之實例包括通常發現於血液或血聚中之蛋白質’包括(但不限於)白蛋白、免疫球蛋白(包括 g)月曰蛋白阿樸脂蛋白Β、α-酸醣蛋白、β_2_巨球蛋白、曱狀腺球蛋白、轉鐵蛋白、纖維結合蛋白、玻璃連結蛋白血纖維蛋白原、因子、因子VIII、因子ΙΧ、因子 ❹X及其類似物。在—些實施例中，載體蛋白為非血液蛋白質，諸如絡蛋白、α-乳白蛋白或β·乳球蛋白。載體蛋白可為天然來源或合成製備。在一些實施例中，醫藥可接受的載劑包含白蛋白’諸如人血清白蛋白（HSA)。舰為队 65K之高度可溶的球狀蛋白f且由奶個胺基酸组成。脱為血漿中最豐富的蛋白質且佔人血浆之膝體滲透塵的70_ 80%。HSA之胺基酸序列含有總共⑺固二硫橋、一個游離硫醇咖34)及單—色胺酸（Trp2i4)。涵蓋其他白蛋白， ❹卩牛血清白蛋白。例如在此等組合物用於諸 (裳包括家庭寵物及農用牲畜）之非人哺乳動物的情形中1 皮 <使用可為適當的。在一些實施 ::::括姨鳥素―溶菌酶、免疫球蛋白、。:：之组人广白及其類似物以及其任何兩者或兩者以上免疫^實施例中，合適蛋白f係選自由白蛋白、白（包括IgA)、脂蛋白、阿樸脂蛋白B、 =甲狀腺球蛋白組成之群。在一些實施例令，醫二可接受的载劑包含白蛋白（例如人也清白蛋白）。適:於 134531.doc -53- 200942233 本發明之蛋白質（包括白蛋白）可為天然來源或合成製備。人血清白蛋白（HSA)具有多個疏水性結合位點（總共八個脂肪酸（HSA之内源性配位體）結合位點）且結合一組不同的藥物，尤其中性及帶負電的疏水化合物（Goodman等人， The Pharmacological Basis of Therapeutics，％ 9 版， McGraw-Hill New York (1996))。已提出 HSA 之子域 IIA 及 ΠΙΑ中之兩個高親和力結合位點，該等子域為在充當用於極性配位體特徵之連接點的表面附近具有帶電離胺酸及精 ® 胺酸殘基的高度伸長疏水性囊袋。（參見例如Fehske等人， Biochem. Pharmcol., 30, 687-92 (1981), Vorum, Dan. Med. Bull., 46, 379-99 (1999)，Kragh-Hansen, Dan. Med. Bull., 1441, 131-40 (1990), Curry# A » Nat. Struct. Biol., 5, 827-35 (1998), Sugiof A » Protein. Eng., 12, 439-46 (1999), He# Λ > Nature, 358, 209-15 (1992) > 及 Carter等人，di/v. Proiez.w. C/zem·，45，153-203 (1994)) o O 組合物中之載體蛋白（例如白蛋白）通常充當疏水性紫杉烷衍生物之載劑，亦即與不包含載艎蛋白之組合物相比，組合物中之載體蛋白使得疏水性紫杉烷衍生物可更容易地懸浮於水性介質中或幫助維持懸浮。此舉可避免使用有毒溶劑來溶解疏水性紫杉烷衍生物，且藉此可減少將該衍生物投與個體（例如人）的一或多種副作用。在一些實施例中，組合物大體上不含（例如不含）有機溶劑或界面活性劑。若在組合物投與個體時組合物中之有機溶劑或界面活性劑之量不足以導致對個體之一或多種副作用，則組合物 134531.doc -54- 200942233 "大體上不含有機溶劑"或"大體上不含界面活性劑”。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒具有固體核心。在―: 實施例中，組合物中之奈米顆粒具有非水性核心（亦即; 同於水性核心）。在-些實施例令，組合物之奈米顆粒缺乏聚合物基質。在一些實施例中，組合物之奈米顆粒為可、經過遽滅菌。在一些實施例中，組合物中之奈米顆粒包含至少一種交聯載體蛋白。在一些實施例中，組合物中之奈 ^ 米顆粒包含至少1 〇%之交聯載體蛋白。若疏水性紫杉烷衍生物保持懸浮於水性介質中（例如無明顯沈澱或沈降）歷時較長時間（例如至少約〇1、〇 2、 0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、1〇、U、12、 24、36、48、60或72小時中之任一者），則其在水性懸浮液中”穩定"。該懸浮液通常（但並不一定）適合於投與個體 (例如人）。懸浮液之穩定性通常（但並不一定）在儲存溫度下評估，諸如在室溫（例如2〇-25。〇或冷藏條件（例如4。〇下 φ 評估。舉例而言，若在製備懸浮液之後約十五分鐘，其不展現肉眼可見或在1000倍光學顯微鏡下檢視時的明顯絮凝或顆粒聚結’則懸浮液在儲存溫度下為穩定的^穩定性亦可在加速測試條件下評估，諸如在高於約4(rc之溫度下評估》在一些實施例中，組合物包含含有疏水性紫杉烷衍生物 (例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式I、π、ΠΙ、 IV、V或VI化合物）及載體蛋白（在各種變化形式中基本上由該等物質組成）的奈米顆粒。在衍生物呈液體形式時， 134531.doc -55- 200942233 顆粒或奈米顆粒亦稱為液滴或奈米液滴。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物經載體蛋白塗佈。不良水溶性之醫樂劑之顆粒（諸如奈米顆粒）已揭示於例如美國專利第 5,916,596 號、第 6,506,405 號、第 6,〇96,331 號、第 6,749,868號及第6,537,579號，美國專利申請公開案第 2005/0004002A1 號，及 PCT 申請公開案第 w〇98/14174 號、第 W099/00113 號、第 WO07/027941 號及第 w〇〇7/027819號中。此等文獻之内容以全文引用的方式併入 0本文中。本文中描述之組合物中載體蛋白之量將視特定疏水性紫杉烷衍生物、組合物中之其他組份及/或預定投藥途徑而變化。在一些實施例中，組合物包含足以使呈水性懸浮液、例如呈穩定膠體懸浮液（例如奈米顆粒之穩定懸浮液）之形式的衍生物穩定之量的載體蛋白。在一些實施例中，載體蛋白係呈降低疏水性紫杉烷衍生物在水性介質中之沈 0降速率的量》在-些實施例中，組合物中所包括之載體蛋白之量為有效減少疏水性紫杉烷衍生物之一或多種副作用的量。載體蛋白之量亦可視疏水性紫杉燒衍生物顆粒之粒度及密度而定。在一些實施例中，液體形式之組合物包含約01重量％至約25重量％(例如約〇·5重量％、約5重量％、約1〇重量％、約 15重量％，或約20重量％)的載體蛋白（例如白蛋白卜在一些實施例中，液體形式之級合物包含約Q5重量％至約5重量％之載體蛋白（例如白蛋白）。組合物可（例如）藉由束乾、 134531.doc -56 - 200942233 喷霧乾燥、流化床乾燥、濕式造粒及此項技術中已知的其他合適方法來脫水。在（諸如）藉由濕式造粒、流化床乾燥及熟習此項技術者已知之其他方法製備呈固體形式之組合物時，將載體蛋白（例如白蛋白）及其他賦形劑（若存在）以溶液形式塗覆於活性醫藥劑。在一些實施例中，溶液為約〇. 1重量％至約25重量％(例如約〇·5重量％、約5重量％、約 10重量％、約15重量％，或約20重量％)的載體蛋白（例如白蛋白）。在一些實施例中’組合物包含大於、等於或小於約 5%、約 10%、約 20%、約 25%、約 30%、約 40¾、約 45〇/〇、約50%、約55%、約60%、約65%、約750/〇或約80%中之任一者之奈米顆粒形式的載體蛋白（例如白蛋白）。在一些實施例中’載體蛋白係以與不具有載體蛋白之組合物相比’有效減少與將疏水性紫杉烧衍生物投與人有關之一或多種副作用的量存在。此等副作用包括（但不限於）骨髓抑制、神經毒性、過敏、炎症、靜脈刺激、靜脈炎、疼痛、皮膚刺激、中性白血球減少性發燒、過敏反應、血液毒性及大腦或神經毒性及其組合。在一些實施例中，提供減少與投與疏水性紫杉烷衍生物有關之過敏性反應的方法，該等過敏性反應包括（例如）嚴重皮疹、麻疹、臉發紅、呼吸困難、心搏過速、肺循環血壓過高（例如淋巴瘤）；胸痛；黑便、瀝青樣便；一般病態感覺、呼吸急促；腺體腫脹；體重減輕；皮膚及眼睛發黃、腹痛；不可解釋的焦慮；血尿或濁尿；骨疼痛；寒戰；意識模糊；驚 134531.doc •57- 200942233 厥（癲癇發作）；咳嗷；排尿慾望減少；快速、緩慢或不視則的心跳；發燒；排尿慾望頻繁；口渴增加；食您不振；下背或體側疼痛；情緒改變；肌肉疼痛或抽筋；噁心或嘔吐；唇、手或足部周圍麻痹或刺痛；排尿疼痛或困難；皮疹；喉嚨痛；唇上或口中之瘡或白斑；手、踝、足或小腿腫脹；腺體腫脹；呼吸難難；不尋常流血或瘀傷；不尋常疲勞或虛弱；腿虛弱或沉重、皮膚潰瘍或瘡、體重增加、粉刺“更秘；腹填；運動困難；頭痛；能量摘失或：弱；肌肉疼痛或僵直；疼痛；顫動或發抖；睡眠困難；鼻出血；及/或面部腫脹。然而，此等副作用僅僅為例示性的且可減少與疏水性紫杉烷衍生物有關之其他副作用或副作用之組合。副作用可為即時或延遲的（諸如在治療開始之後數日、數週、數月或數年内不發生）。組合物中之抗微生物劑在些實施例中，本發明之組合物亦包括足以顯著抑制〇 (例如延遲、減少、減緩及/或預防)用於本文中描述之治療方法、投藥方法及給藥方案中之組合物中微生物生長之量的抗微生物劑(例如除疏水性紫杉烷衍生物之外之藥劑卜例示性微生物劑及微生物劑之使用的變化形式揭示於美國專利申請公開案第2007/0117744A1號中（諸如第[〇〇36]段至第[0058]段中描述之彼等_)，該#之内容以全文引用的方式併入本文甲。在一此眘你二實施例中，抗微生物劑為螯合劑諸如EDTA、乙二胺四乙酸鹽、摔㈣鹽、喷替酸$ (Pedate)、緩血酸胺、山梨酸鹽、抗壞血酸鹽、其衍生 134531.doc -58- 200942233 物或其混合物。在一些實施例中，抗微生物劑為多牙螯合劑。在-些實施例中，抗微生物劑為非整合劑，諸如亞硫酸鹽、苯曱酸、节醇、氣丁醇及對經基苯甲酸酿令之任一者。在-些實施例中，不同於以上所討論之紫杉院之抗微生物劑並不包含或用於本文中描述之治療方法投藥方法及給藥方案中。、含有糖之組合物在一些實施例中，本發明之組合物包括用於本文中描述之治療方法中之糖。在一些實施例中，本發明之組合物包括用於本文中描述之治療方法中之糖及抗微生物劑兩者。例示性糖及糖之使用的變化形式揭示於美國專利申請公開案第2007/0117744A1號中（諸如第[0084]段至第[〇〇9〇]段中描述之彼等糖），該案之内容以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中’糖充當使凍乾組合物比無糖情況下凌乾組合物之溶解更快溶解或懸浮於水及/或水溶液中的 • 復水增強劑。在一些實施例中，組合物為藉由使乾燥組合物復水或再懸浮所獲得之液體（例如水性）組合物。在一些實施例中，組合物中糖之濃度大於約50 mg/ml β在-些實施例中’糖係呈與無糖之組合物相比有效增加組合物中疏水性紫杉烧衍生物之穩定性的量。在一些實施例中，糖係呈與無糖之組合物相比有效改良組合物之可過濾性的量。本文中描述之含有糖之組合物可另外包含一或多種抗微生物劑’諸如本文中或美國專利申請公開案第 2007/0117744Α1號中描述之抗微生物劑。除一或多種糖之 134531.doc •59- 200942233 外其他復水增強劑（諸如美國專利申請公開案第 2005/0152979號中描述之彼等增強劑，該案以全文引用的方式併入本文中）亦可添加至組合物中。在一些實施例中，糖不包含或用於本文中描述之治療方法、投藥方法及給藥方案中。組合物中之穩定劑在一些實施例中，本發明之組合物亦包括用於本文甲描述之治療方法、投藥方法及給藥方案中之穩定劑^在一些實施例中本發明之組合物包括用於本文^描述之治療方法、投藥方法及給藥方案中之抗微生物劑及/或糖及/或穩疋劑。例不性穩定劑及穩定劑之用途之變化形式揭示MUs 2007/0082838中（諸如第[〇〇38]段至第[〇〇83]及第陶段至第[0114]段中描述之彼等穩定劑）。本發明在另一變化形 f中提供在暴露於諸如長期儲存、高溫或稀釋供非經腸投藥之某二條件後保留合意治療效應且保持物理上及/或化 ©學上穩定的疏水性紫杉烧衍生物的組合物及製備方法。穩定劑包括(例如)螯合劑(例如檸檬酸鹽、蘋果酸、乙二胺四乙酸鹽或喷替酸鹽）、焦填酸納及葡糖酸鈉。在-些實施例中’本發明提供包含檸檬酸鹽、焦磷酸納、EDTA、葡糖酸納、檸檬酸鹽及氣化鈉之疏水性紫杉烧衍生物之醫藥調配物。在另—變化形式中，本發明提供疏水性紫杉燒衍生物之組合物，其中用於製備調配物之衍生物在併入組合物之前呈無水形式。在-些實施例中’穩定劑不包含或用於本文中描述之治 134531.doc -60- 200942233 療方法、投藥方法及給藥方案中。醫藥組合物及調配物 ^本文中描述之組合物可用於藉由將所描述之奈米顆粒組 «物與用於本文中描述之治療方法、投藥方法及給藥方案醫藥可接受的載劑、賦形劑、穩^劑及/或此項技術中已知之其他試劑組合來製備調配物，諸如醫藥組合物或調配物。 0 為藉由增加奈米顆粒之負ς電位來增加穩定性，可添加某—帶負電的組份。該等帶負電的組份包括（但不限於）膽汁風膽汁酸、甘膽酸、膽酸、鵝脫氧膽酸、牛磺膽酸、鶴脫氧甘膽酸、牛確鶴脫氧膽酸、石膽酸、熊脫氧膽酸、脫氫膽酸及其他n包括基於卵㈣（蛋黃）之填脂，包括以下碌脂酿膽驗：軟脂醯基油酿基鱗脂酿膽鹼、軟脂基亞油酿基碟脂酿膽鹼、硬脂醯基亞油醯基磷脂醯膽驗硬月曰醯基油酿基鱗脂酿膽驗、硬脂酿基花生油酿基墙 ◎ &醯膽驗及二軟脂酿基嶙脂醯膽驗。其他破脂包括U二肉豆惹醯基磷脂醯膽鹼（DMpc)、二油醯基磷脂醯膽鹼 (DOPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼⑴spc)、氫化大豆磷脂酿膽驗（HSPC)及其他相關化合物。帶負電的界面活性劑或乳化劑亦適合作為添加劑，例如膽固醇基硫酸鈉及其類似物。本文中描述之奈米顆粒組合物可使用醫藥學上可接受的界面活性劑來穩定。如本文中使用之術語·，界面活性劑，，係兩！生刀子之表面活性基團。界面活性劑可為陰離子型、 134531.doc 200942233 陽離子型、非離子型及兩性離子型。任何合適界面活性劑可包括於本發明之醫藥組合物中。合適界面活性劑包括非離子型界面活性劑，諸如磷脂、聚氧乙烯脫水山梨糖醇酯及生育酚聚乙二醇丁二酸酯。在一些實施例中，界面活性劑為卵磷脂、吐溫80或維生素匕丨d_ac_生育酚聚乙二醇_ 1000丁二酸酯（TPGS) » 合適醫藥載劑包括無菌水；生理食鹽水；右旋糖；水或〇生理食鹽水中之右旋糖；萬麻油及氧化乙烯之縮合產物，每莫耳蓖麻油組合約30至約35莫耳之氧化乙烯；液體酸；低碳烷醇；與乳化劑（諸如脂肪酸之單甘油酯或二甘油酯，或例如卵磷脂之磷脂及其類似物）一起存在之油類（諸如玉米油、花生油、芝麻油及其類似物）；乙二醇；聚烷二酵；在單獨或與合適分配劑（諸如卵磷酯、聚氧乙烯硬脂酸酯及其類似物）一起存在之懸浮劑（例如羧甲基纖維素鈉、海藻酸鈉、聚（乙烯吡咯啶酮）及其類似物）存在下之水 ❿性介質。載劑亦可含有佐劑，諸如防腐穩定劑、濕湖劑、乳化劑及其類似物，以及穿透增強劑。最終形式可為無菌的且可能亦會容易地穿過注射裝置，諸如空心針。可藉由適當選擇溶劑或賦形劑來達成及維持適當的黏度。此外，可利用諸如卵磷脂之分子或顆粒衣料之使用、分散液中之粒徑之適當選擇，或具有界面活性劑性質之材料之使用。本文中描述之奈米顆粒組合物可包括改良組合物之性質的其他試劑、賦形劑或穩定劑。合適賦形劑及稀釋劑之實例包括（但不限於）乳糖、右旋糖、廉糖、山梨糖醇、甘露 134531.doc -62- 200942233 糖醇、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、海藻酸鹽、黃蓍膠、明膝碎酸約、微晶纖維素、聚乙稀比洛β定酮、纖維素、水、生理食鹽水溶液、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸曱酯及羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油。調配物可另外包括潤滑劑、濕潤劑、乳化及懸浮劑、防腐劑、甜味劑或調味劑。乳化劑之實例包括生育酚酯（諸如生育酚聚乙一醇丁 —酸醋及其類似物）、plur〇niC(g)、基於聚氧伸 ❹乙基化合物之乳化劑、斯潘80(Span 80)及相關化合物及此項技術中已知且經批准用於動物或人劑型中的其他乳化劑。可藉由使用此項技術中熟知之程序調配組合物以便在投與患者之後提供活性成份之快速、持續或延遲釋放。在些實施例中’組合物經調配以具有約4.5至約9.0範圍内之pH值，包括（例如）約5 〇至約8 〇、約6 5至約7 5，及約6.5至約7.0中之任一者的pH值範圍。在一些實施例中，組合物之pH值經調配以不小於約6，包括（例如）不小於約 ◎ 6_5、7或8中之任一者（例如約8) »亦可藉由添加諸如甘油之合適張力調節劑來使組合物與血液等張。在一些實施例中，組合物適合於投與人。存在本發明之、卫口物的多種合適調配物（參見例如美國專利第5,916,596 號及第6’096,331號，其以全文引用的方式併入本文中）。以下調配物及方法僅僅為例示性的且決不具有限制性。適合於口服之調配物可包含（a)液體溶液，諸如有效量之溶於諸如水、生理食鹽水或橙汁之稀釋劑中之化合物，膠囊、藥囊或錠劑，其各自含有預定量之活性成份，呈固 134531.doc •63· 200942233 體或顆粒形式，、电a )適备液體中之懸浮液，⑷合適乳液， m 劑形式可包括乳糖、甘露糖醇、玉米殿粉、澱粉、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、膠體二氧化交聯m甲基纖維素納、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸、及其他賦形劑、签&灰丨劑、稀釋劑、緩衝劑、濕潤劑、防腐劑、調味劑及藥理學相容的賦形劑中之一或多者。口含劍形式可包含於調味劑（通常為嚴糖及阿拉伯冑或黃蓍谬）中之活陡成伤，以及包含於惰性基質（諸如明膠及甘油或簾糖及阿拉伯膠）中之活性成份的片劑，除活性成份之外含有此項技術中已知之賦形劑的乳液、凝膠及其類似物。本發明之奈米顆粒可包封於硬膠囊或軟膠囊中，可壓縮成疑劑’或可與飲料或食物合併或以其他方式併入腾食中。膠囊可藉由將奈米顆粒與惰性醫藥稀釋劑混合且將混合物插入具有適當粒度之硬膠囊中來調配。若需要軟膠囊，則可由機器將奈米顆粒與可接受的植物油、輕質石油或其他惰性油之漿液囊封至膠囊中。適合於非經腸投與之調配物包括水性及非水性之等張無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑，及使得調配物與預定接受者之血液相容的溶質，·及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩定劑及防腐劑。調配物可存在於單劑量或多劑量密封容器 (諸如安瓿及小瓶）中，且可在冷凍乾燥（凍乾）條件下儲存，僅需要在臨用别添加注射用無菌液體賦形劑（亦即水）以便用於本文中描述之治療方法'投藥方法及給藥方案。 I34531.doc 200942233 即用型注射溶液及懸浮液可自先前描述種類之無菌粉末、顆粒劑及錠劑製備。可注射調配物為較佳的。本發明亦包括適合於藉由吸入投與以便用於本發明方法中之包含疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3_23中之

Ο 任一者及任何式工、π、m、IV、V或VI化合物）及載劑的奈米顆粒組合物之調配物。適合於氣霧劑投與之調配物包含本發明之組合物，其包括水性及非水性之等張無菌溶液’其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及溶質；以及水性及非水性無菌懸浮液’其可包括單獨或與可製成待經由吸入投與之乳霧劑調配物之其他合適組份組合之懸浮劑、曰谷齊】增稍劑、穩定劑及防腐劑。此等氣霧劑調配物可置於加壓可接受的推進劑中，諸如二氣二氟甲烷、丙烷、氮及其類似物。其亦可調配成用於非加壓製劑（諸如在喷霧器或霧化器中)之醫藥製品。 ^發明亦包括以供直腸投與之栓劑形式投與的奈米顆粒之調配物。此等調配物可藉由將藥劑與在室溫下為，體但在直腸溫度下為液體且因此將在直腸中融化以釋放藥物之合適㈣激賦形劑混合來製備。該等㈣包括可脂、蜂蠟及聚乙二醇。 ^明亦包括局部投與之奈米顆粒組合物之調配物，尤、〜療靶包括可易於藉由局部施用接近之 =睛官中皮之膚Γ腸道之疾病)Η 中之每一者製備合適局部調配物。下腸道之局部施用可以直腸栓劑調配物（參見上文）形式 134531.doc -65- 200942233 或合適灌腸劑調配物形式實現。亦可使用局部經皮貼片。亦提供包含本文中描述之組合物及調配物的單位劑型。此等單位劑型可以單個或多個單位劑量儲存於合適封裝中且亦可進一步經滅菌及密封。舉例而言，醫藥組合物（例如醫藥組合物之劑型或單位劑型）可包括⑴包含疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3_23中之任一者及任何式 I、II、III、IV、¥或¥1化合物）及載體蛋白之奈米顆粒及 (H)醫藥學上可接受的載劑。在一些實施例中，醫藥組合物亦包括可用於治療癌症之一或多種其他化合物（或其醫藥學上可接受的鹽）。在各種變化形式中，組合物中之疏水性紫杉烷衍生物之量包括於以下範圍中之任一者中：約 5至約50 mg、約20至約50 mg、約50至約1〇〇 mg、約1 〇〇至約 125 mg、約 125至約 150 mg、約 150至約 175 mg、約 175 至約200 mg、約200至約225 mg、約225至約250 mg、約 250 至約 300 mg、約 300 至約 350 mg、約 350 至約 4〇〇 mg、 ❹約400至約450 mg，或約450至約500 mg »在一些實施例中，組合物（例如劑型或單位劑型）中之疏水性紫杉燒衍生物之量在約5 mg至約500 mg之範圍内，諸如約3〇 mg至約 300 mg或約50 mg至約200 mg衍生物。在—些實施例中，載劑適合於非經腸投與（例如靜脈内投與）。在—些實施例中，疏水性紫杉烧衍生物為包含於組合物中之治療癌症之唯一醫藥活性劑。在一些實施例中’本發明提供用於治療癌症之劑型（例如單位劑型），該劑型包含⑴包含載體蛋白及疏水性紫杉 134531.doc -66- 200942233 烧衍生物（例如化合物i、2、3_23中之任一者及任何式卜 ΪΙ、ΙΙΙ、ΐν、化合物）之奈米顆粒，其中單位劑量中之衍生物之量在約5 mg至約500 mg之範圍内及醫藥學上可接受的載劑。在一些實施例中，單位劑型中之疏水性紫杉烧衍生物之量包括約30 mg至約3〇〇 mg。亦提供將本文中描述之組合物、調配物及單位劑量包含於合適封裝中以便用於本文中描述之治療方法、投藥方法及給藥方案的製品。本文中描述之組合物之合適封裝在此項技術中已知，且包括（例如）小瓶（諸如密封小瓶）、容器 (諸如密封容器）、安瓿、瓶子、廣口瓶、撓性封裝（例如密封邁拉（Mylar)或塑膠袋）及其類似物。此等製品可進一步經滅菌及/或密封。套組本發明亦&供包含用於本文中描述之治療方法、投藥方法及給藥方案中之本文中描述之組合物、調配物、單位劑 ❹量及製品的套組《本發明之套組包括一或多種包含含有疏水性紫杉烧衍生物之奈米顆粒組合物（調配物或單位劑型及/或製品）之容器，且在一些實施例中進一步包含根據本文中描述之治療方法中之任一者的使用說明書。在一些實施例中，套組包含i)包含含有疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式I、n、m、iv、乂或 VI化合物）及載體蛋白（諸如白蛋白）之奈米顆粒的組合物及 ii)同時及/或依序投與該等奈米顆粒及化學治療劑以便治療癌症之說明書。在各種變化形式中’套組中之疏水性紫 134531.doc -67· 200942233 杉烷衍生物之量包括於以下範圍中之任一者中：約5至約 20 mg、約20至約50 mg、約50至約100 mg、約100至約125 mg、約125至約150 mg、約150至約175 mg、約175至約 200 mg、約 200 至約 225 mg、約 225 至約 250 mg、約 250 至約 300 mg、約 300 至約 350 mg、約 350 至約 400 mg、約 400 至約450 mg，或約450至約500 mg。在一些實施例中，套組中之疏水性紫杉烷衍生物之量在約5 mg至約5〇〇 mg之範圍内’諸如約30 mg至約300 mg或約50 mg至約200 mg。在一些實施例中’套組包括一或多種可用於癌症之其他化合物（亦即一或多種不同於疏水性紫杉烷衍生物之化合物）。提供於本發明之套組中之說明書通常為書寫於標籤或包裝插頁（例如套組中所包括之張紙）上之說明書，但機器可讀說明書（例如載於儲存磁碟或光碟上之說明書）亦為可接受的。關於奈米顆粒組合物之使用之說明書通常包括關於預定治療之劑量、給藥時程及投藥途徑的資訊。套組可進一步包含選擇合適或治療之個體的描述。本發明亦提供包含本文中描述之組合物（或單位劑型及/ 或製品）且可進一步包含關於該等組合物之使用方法（諸如本文中進一步描述之使用）之說明書的套組。在一些實施例中，本發明之套組包含上述封裝。在其他變化形式中，本發明之套組包含上述封裝及包含緩衝劑之第二封裝。其可進-步包括自商業及使用者觀點而言為合意之其他材料，包括其他緩衝劑 '稀釋劑、過濾器、針、注射器及關於執行本文中描述之任何方法之說明書的包裝插頁。 134531.doc -68- 200942233 十；本發明之組合療法，套組可含有同時及/或依序投與第—+ —療法以便有效治療癌症之說明書。第一及第 β療法可存在於分開容器中或在單一容器中。應瞭解套組可匕3種獨特組合物或兩種或兩種以上組合物其中一種組合物構成第―祕且―種組合物構成第二療法。

G ❹ 々亦可提供含有充足劑量之如本文中揭示之疏水性紫杉從何生物以向個體提供歷時較長時間(諸如工週、2週、3週、 4週、6週、8週、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、 8個月、9個月或更長時間中之任一者）之有效治療的套組。套組亦可包括多個單位劑量之本文中描述之疏水性紫杉燒衍生物組合物、醫藥組合物及調配物及使用說明書且以足以在例如醫院藥房及配製藥房之藥房中儲存及使用之 f來封裝。在一些實施例中，套組包含可復水、再懸浮或再水合以通常形成包含疏水性紫杉㈣生物及白蛋白（例 :經白蛋白塗佈之疏水性紫杉院衍生物)之奈米顆粒的穩疋水性懸浮液的乾燥（例如凍乾）組合物。本發明之套組係呈合適封裝形式。合適封裝包括（但不限於)小叙、瓶子、廣口瓶、撓性封裝(例如密封邁拉或塑膠袋)及其類似物。套組可視情況提供額外組份，諸如緩衝劑及說明性資訊。 & $缓製造奈米顆粒组合物之方法製造含有載體蛋白及不良水溶法在此項技術中已知。舉例而令，:劑之組合物的方劑及載體蛋白(例如白蛋白)之 3有不良水溶性之醫藥不水顆粒可在高剪切力的條 134531.doc •69- 200942233 件（例如超音波處理、高壓均化等）下製備。此等方法揭示於（例如）美國專利第5,916,596號、第6,〇96 331號、= 6,749,868號及第6,537,579號，及PCT申請公開案第 98/14174 號、第 W099/00113 號、第 W007/027941 號及第 W007/027819號中。簡而言之，將疏水性紫杉烷衍生物（例如疏水性歐洲紫杉醇衍生物）溶於有機溶劑中。合適有機溶劑包括（例如') 酮、酯、醚、氣化溶劑及此項技術中已知的其他溶劑。舉例而言’有機溶劑可為二氣曱烷、氣仿/乙醇或氣仿/第= 丁醇（例如具有約 1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、、 1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1 或 9:1 中之任一者之比率’或具有約 3:7、5:7、4:6、5:5、6:5、8.5、 9.5、9.5.5、5.3、7:3、6:4 或 9.5:0.5 中之任一者之比率）。將溶液添加至載體蛋白（例如人血清白蛋白）中。對混合物進行高壓均化（例如使用Avestin、APV Gaulin、

MicrofluidizerTM，諸如來自 Microfluidics，Stansted 之

Microfluidizei·™ 處理器 M-110EH 或 Ultra Turrax均化器）0 可使乳液循環穿過高壓均化器歷時約2至約100個循環，諸如約5至約50個循環或約8至約20個循環（例如約8、10、 12、14、16、18或20個循環中之任一者）。隨後可藉由發利用已知用於此目的之合適設備來移除有機溶劑，該設備包括（但不限於）可以批次模式或連續操作來操作之旋轉蒸發器、降膜式蒸發器、刮膜式蒸發器、噴霧乾燥器及其類似物。溶劑可在減壓（諸如約25 mm Hg、30 mm Hg、40 134531.doc -70. 200942233 mm Hg、50 mm Hg、100 mm Hg、200 mm Hg或 300 mm

Hg中之任一者）下移除。用於在減壓下移除溶劑之時間長短可基於調配物之體積來調整。舉例而言，對於以3〇〇 mL 規模製造之調配物’溶劑可在約1至約3〇〇 mm Hg(例如約 5-100 mm Hg、10-50 mm Hg、20-40 mm Hg或 25 mm Hg 中之任一者）歷時約5至約60分鐘（例如約7、8、9、i〇、u、 12、13、14、15 16、18、20、25 或 30 分鐘中之任一者）來移除。所獲得之分散液可進一步凍乾。若需要’則可將人白蛋白溶液添加至分散液中來調整人血清白蛋白與疏水性紫杉烧衍生物之比率或調整分散液中之疏水性紫杉烷衍生物之濃度。舉例而言，可添加人血清白蛋白溶液（例如25% w/v)以調整人血清白蛋白與疏水性紫杉烧衍生物（例如化合物1、2、3-23中之任一者及任何式 I、Η、III、IV、V或VI化合物）之比率至約ι8:1、15:1 14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7.5:1、7:1、 6:1、5:1、4:1或3:1中之任一者。舉例而言，添加人血清白蛋白溶液（例如25% w/v)或另一溶液以調整分散液中之疏水性紫杉烷衍生物之濃度至約〇.5 mg/mi、1.3 mg/ml、 1.5 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml、5 mg/ml、6 mg/ml、7 mg/ml、8 mg/ml、9 mg/ml、10 mg/ml、15 mg/ml、20 mg/ml、25 mg/ml、30 mg/ml、40 mg/ml 或 mg/mL中之任一者。分散液可經由多個過濾器連續過慮’諸如1.2 μιη及0.8/0.2 μιη過濾器之組合、1,2 μιη、〇 8 μιη、0.45 μιη及0.22 μιη過濾器之組合，或此項技術中已知 134531.doc -71 - 200942233 =任，其他過據器之組合。所獲得之分散液可進-步柬 n吏用刀批法或或連續法（例如組合物之大規模製造）來製造奈米顆粒組合物。。若需要，則組合物中亦可包括第二療法(例如一或多種 ° ; /α療癌症之化合物）、抗微生物劑、糖及/或穩定劑。此額外藥劑可在製備疏水性紫杉烧衍生物/載體蛋白組合物期間與疏水性紫杉烧衍生物及/或載體蛋白混合， ❹或在製備疏水性紫杉烷衍生物/載體蛋白組合物之後添加:在-些實施例中，該藥劑係在束乾之前與疏水性紫杉 .元衍生物/载體蛋白組合物混合。在一些實施例中，藥劑係添加至凍乾之疏水性紫杉烷衍生物/載體蛋白組合物在二實施例中，在藥劑之添加改變組合物之pH值時，通f (但並不一定）將組合物中之pH值調整至所需pH ” σ物之例示性pH值包括（例如）約5至約8 5之範圍内在一些實施例中，組合物之pH值調整至不小於約6，〇包括（例如）不小於約6.5、7或8中之任一者（例如約8)。在本發月之些實施例中提供包含疏水性紫杉燒衍生物 (例如化合物1、2、3_23中之任一者及任何式卜n、m、 ιν、v或νι化合物）之乳液，該乳液包含：（a)包含含有溶於疏水性紫杉烷衍生物之有機溶劑及疏水性紫杉烷衍生物之醇溶劑中t至少-部分疏水性紫杉烧衍生物之奈米液滴的第一相，及（b)包含水及生物相容聚合物之第二相，其中乳液大體上不含界面活性劑。製造疏水性紫杉烧衍生物之方法 134531.doc -72- 200942233 本發明之疏水性紫杉烷衍生物係藉由通常熟知之合成方法之適當組合來合成。用於合成本發明之化合物之技術為熟習相關技術者為顯而易見的且可得到，尤其蓉於本文中描述之教示》提供以下論述以說明可用於組裝本發明之化合物之不同方法中的某些方法。然而，該論述不意欲界定用於製備本發明之化合物的反應或反應次序的範圍，亦不意欲界定化合物本身之範圍。用於本發明中之一些化合物之合成揭示於wo 2006/089207中’其尤其關於所揭示化合物及合成實例之内容以全文引用的方式併入本文中。用於本發明中之一些疏水性紫杉烷衍生物可藉由如流程 1所示改變紫杉烷之2，-羥基來合成。在鹼（諸如三乙胺或吡啶）存在下以約一當量之反應性疏水基（例如苄基齒，諸如苯甲醯氣）處理紫杉烷（例如歐洲紫杉醇）提供所需疏水性紫杉烷衍生物。或者，在偶合劑（例如二環己基碳化二亞胺） Q 及視情況催化量之4·吡咯啶幷吡啶或4-二甲胺基吡啶存在下以約一當量之反應性疏水基（例如苯甲酸）處理紫杉烷提供所需疏水性紫杉烷衍生物（例如顯示於流程i中之2·_苯甲醯基歐洲紫杉醇）。流程1 :

134531.doc 73· 200942233 用於本發明中之一些疏水性紫杉烷衍生物可藉由如流程 2所示改變紫杉烷之7位置來合成，為在7位置上引入疏水基之新穎官能基，可以保護基阻斷紫杉烷之2，_羥基之反應性。可使用諸如三乙基矽烷基之選擇性保護基，此係因為其容易藉由以酸（例如曱醇中之鹽酸或0比啶中之氫氟酸）處理而自2’-羥基移除。因此，如流程2所示，在鹼（例如三乙胺（TEA)或吡啶）存在下以約一當量之氣三乙基矽烷 (TESCl^S紫杉⑥（例如歐洲紫杉醇）之後，可以良好產率提供2’·經保護羥基紫杉烷（例如2，_三乙基矽烷基太平洋紫杉醇）。或者，亦可使用諸如2,2,2_三氣乙基_氧羰基衍生物之其他保護基且隨後藉由以鋅及酸（例如乙酸）處理來移除該等保護基》隨後可使含有2’-經保護羥基之紫杉烷接觸如本文中描述之反應性疏水基（例如在二環己基碳化二亞胺及催化量之4_ 吡咯啶幷吡啶或4-二甲胺基吡啶存在下之苯甲酸），以產生 ❹在7位置上改變之疏水性紫杉烷衍生物^ 2·-經保護羥基（例如2-二乙基矽烷基）可容易地藉由移除保護基（例如在適度酸性條件下）來釋出，從而產生所需產物。流程2 :

134531.doc -74· 200942233

用於本發明中之一些疏水性紫杉烷衍生物可藉由如流程 3所示改變紫杉烷之10位置來合成。為在10位置上引入疏水基之新穎官能基，可以保護基阻斷紫杉烷之21-羥基及7-羥基之反應性。在鹼（諸如吡啶）存在下以約兩當量之合適保護基（例如氯三乙基矽烷（TESC1))處理紫杉烷（例如歐洲

紫杉醇）之後，可產生經雙重保護之紫杉烷（例如2'，7-雙（三乙基矽烷基）太平洋紫杉醇）。在使該受保護之紫杉烷接觸如本文中描述之反應性疏水基（例如在二環己基碳化二亞胺及催化量之4-二甲胺基吡啶存在下之苯曱醯氣/吡啶或苯曱酸）時，獲得所需10-醯化產物（例如10-醯化），可容易地自該產物移除兩個保護基（例如在適度酸性條件下）。流程3 :

藉由2’-經保護紫杉烷及7-經保護紫杉烷之可用性，可藉由使用不同官能基（例如酯、碳酸酯、胺基曱酸酯及其類 134531.doc -75· 200942233 似物）來連接疏水基及紫杉烷而完成10位置上經醯基官能基之進一步改變。根據本發明之一實施例，諸如苯曱醯基之疏水基可與根據本發明之方法調配及使用之幾乎任何藥物化合物或診斷劑結合。醫藥劑包括以下類別及特定實例。並不希望類別受特定實例限制。一般熟習此項技術者鑒於本文中提供之教示將認識到處於該等類別内且根據本發明可使用之許多其他化合物。本發明亦包括藉由本文中描述之方法製造之產物。量測抗癌活性之方法疏水性紫杉烷衍生物或含有疏水性紫杉烷衍生物之奈米顆粒組合物之抗癌活性可（例如）藉由將癌細胞培養物與衍生物一起培育，且隨後評估培養物中之細胞生長抑制來活體外檢查。該測試之合適細胞包括鼠科P388白血病細胞、 B16黑色素瘤細胞及路易斯（Lewis)肺癌細胞以及人乳房 MCF7、印巢OVCAR_3、A549肺癌細胞、Μχι(人乳房腫瘤細胞）、HT29(結腸癌細胞株）、HepG2(肝癌細胞株）及 HCT116(結腸癌細胞株）。或者，疏水性紫杉烷衍生物（或含有疏水性紫杉烷衍生物之組合物）可（例如）藉由首先在合適測試動物（例如裸鼠）體内建立腫瘤來活體内測試抗癌活性。適合於建立腫瘤之細胞包括上述用於活體外測試之彼等細胞以及此項技術中普遍接受用於建立腫瘤之其他細胞。隨後，將紫杉烷衍生物投與動物；然後測定ee>5g值，亦即達成動物體内腫瘤生長之50%抑制所需要的衍生物（或 134531.doc -76- 200942233 組合物）之量，同樣測定存活率β 一般熟習此項技術者鑒於本文中描述之教示完全能夠基於諸如Eh。及存活率值之因子選擇特定疏水性紫杉烷衍生物（或含有疏水性紫杉烷衍生物之組合物）以用於對抗某些癌症。 ά療方法本發明之奈米顆粒組合物可用來治療與細胞增殖或過度增殖有關之疾病（諸如癌症）。在一些實施例中提供治療個體之增生性疾病（例如癌症）之方法，其包含投與個體有效量之包含奈米顆粒之組合物，其中奈米顆粒包含疏水性紫杉烷衍生物（例如化合物丨、2、3_23中之任一者及任何式 I、II、III、IV、V*VI化合物）及載體蛋白（例如白蛋白）。可藉由本發明之方法治療之癌症之實例包括（但不限於）多發性骨髓瘤、腎細胞癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、肝癌、腎癌、胃癌及乳癌。在-些變化形式中’進行增生性疾病治療之個體已確定為患有本文中描述之病狀中之一或多者。熟練醫師對如本文中描述之病狀的識別在此項技術中為常規的（例如經由血液測試、X射線、CT掃描、内窺鏡檢查、活組織檢查等）且亦可由個體或其他人推測，例如歸因於腫瘤生長、出血、潰瘍、疼痛、腫大淋巴結、咳嗽、黃疸、腫脹、體重減輕、惡病質、出汗、貧血、副腫瘤現象、血栓形成等。在-些實施例中’個體已確定為易患如本文中描述之病狀中之-或多者。個體之感病性可基於熟習此項技術者 134531.doc •77· 200942233 知曉之諸多危險因子及/或診斷方法中之任何一或多者，包括（但不限於）遺傳概況、家族史、病歷（例如相關病狀之出現）、生活方式或習慣。在-些實施例中，與治療前之同一個體之相應症狀相比或與不接受本文中使用之方法及/或组合物之其他個體之相應症狀相比，該等方法及/或組合物減輕與增生性疾病 (例如癌症）有關之一或多種症狀之嚴重程度達至少約㈣、20%、3G%、4G%、5G%、嶋、7()%、8()%、9〇%、 V 95%或100%中之任一者。組合療法在一些實施例中，本發明提供藉由投與個體有效量之組合來治療個體之癌症的方法，該組合具有a)包含含有奈米顆粒之組合物之第一療法，該等奈米顆粒包含雷帕黴素 (rapamycin)或其衍生物及載體蛋白（例如白蛋白），及…可用於治療癌症之第二療法。在一些實施例中，第二療法包〇括手術、放射、基因療法、免疫療法、骨髓移植、幹細胞移植、激素療法、靶向療法、冷凍療法、超音波療法、光動力學療法及/或化學療法（例如一或多種可用於治療癌症之化合物）。應瞭解以下提及且描述之治療癌症之方法為例示性的，且此描述同樣適用於使用組合療法治療癌症之方法且包括使用組合療法治療癌症之方法。給藥及投藥方法投與個體（諸如人）之本發明之組合物的量可隨特定組合物、投藥方法及所治療之復發性癌症的特定類型而變。該 134531.doc -78- 200942233 量應足以產生所需的有益效應。舉例而言，在一些實施例中，組合物之量有效產生客觀反應（諸如部分反應或完全反應）。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物奈米顆粒組合物之量足以使個體產生完全反應。在一些實施例中，組合物之量足以使個體產生部分反應。在一些實施例中，單獨投與之組合物之量足以在接受該組合物治療之個體群體中產生大於約40%、50%、60%或64%中之任一者之總反應率。個體對於本文中描述之方法之治療的反應可（例如） ® 依據RECIST或CA-125等級來確定。舉例而言，在使用CA-125時，完全反應可定義為至少28日自治療前值返回至正常範圍值。局部反應可定義為自治療前值持續降低50%以上。在一些實施例中，疏水性紫杉烧衍生物奈米顆粒組合物之量足以延長個體之無疾病進展存活（例如量測RECIST或 CA-125之變化）。在一些實施例中，組合物之量足以延長個體之總存活率。在一些實施例中，組合物之量足以在接

G 受組合物治療之個體群體中產生超過約50%、60%、70% 或77°/〇中之任一者之臨床效益。在一些實施例中，組合物中之疏水性紫杉烷衍生物之量低於引起毒物學效應（亦即高於臨床上可接受之毒性水準之效應）之水準或處於將組合物投與個體時潛在副作用可得以控制或容忍之水準。在一些實施例中，組合物之量接近於遵循相同給藥方案之組合物之最大耐受劑量（MTD)。在一些實施例中，組合物之量大於MTD之約80%、90%、 134531.doc •79- 200942233 95%或98%中之任一者。在一些實施例中，組合物之量為與治療前之同一受檢者之相應腫瘤‘尺寸、癌細胞數目或腫瘤生長速率相比或與不接受治療之其他受檢者之相應活性相比，足以減少腫瘤尺寸、減少癌細胞數目或減少腫瘤生長速率達至少約i 〇0/。、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95〇/〇咬 100〇/〇中之任一者的量。可使用標準方法來量測此效應之量值，諸如使用純化酶之活體外檢定、基於細胞之檢定、

A ^ 動物模型或人測試。在一些實施例中，組合物中之疏水性紫杉烧衍生物之量包括於以下範圍中之任一者中：約0.5至約5 mg、約5至約 10 mg、約10至約15 mg、約15至約20 mg、約20至約25 mg、約20至約50 mg、約25至約50 mg、約50至約75 mg、約50至約100 mg、約75至約100 mg、約1〇〇至約125 mg、約125至約150 mg、約150至約175 mg、約175至約200 q mg、約200至約225 mg、約225至約250 mg、約250至約 300 mg、約 300 至約 350 mg、約 350 至約 400 mg、約 400 至約450 mg，或約450至約500 mg。在一些實施例中，有效量之組合物（例如單位劑型）中之疏水性紫杉烷衍生物之量在約5 mg至約500 mg之範圍内，諸如約3〇 mg至約300 mg 或約50 mg至約200 mg。在一些實施例中，組合物中之疏水性紫杉烷衍生物之濃度較稀（約〇 1 mg/ml)或較濃（約1 〇〇 mg/ml) ’包括（例如）約〇丨至約5〇 mg/ml、約〇.1至約20 mg/ml、約 1至約 1〇 mg/nU、約 2 mg/ml至約 8 mg/ml、約 134531.doc •80- 200942233 4至約6 mg/ml、約5 mg/ml中之任一者。在一些實施例中，疏水性紫杉烷衍生物之濃度為至少約〇5 mg/mi、u mg/ml、1.5 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml、5 mg/ml、6 mg/ml、7 mg/ml、8 mg/ml、9 mg/ml、l〇 mg/ml、15 mg/ml、20 mg/ml、25 mg/ml、30 mg/ml、4〇 mg/ml或50 mg/ml中之任一者。奈米顆粒組合物中之疏水性紫杉烷衍生物之例示性有效量包括（但不限於）約 25 mg/m2、30 mg/m2、50 mg/m2、60 mg/m、75 mg/m、80 mg/m2、90 mg/m2、100 mg/m2、 120 mg/m2、160 mg/m2、175 mg/m2、180 mg/m2、200 mg/m2、210 mg/m2、220 mg/m2、250 mg/m2、260 mg/m2、300 mg/m2、350 mg/m2、400 mg/m2、500 mg/m2、540 mg/m2、750 mg/m2、1000 mg/m2 或 1080 mg/m2中之任一者的疏水性紫杉烷衍生物。在各種變化形式中’組合物包括小於約350 mg/m2、300 mg/m2、250 ❿ mg/m2、200 mg/m2、150 mg/m2、120 mg/m2、1〇〇 mg/m2、90 mg/m2、50 mg/m2或 30 mg/m2 中之任一者的疏水性紫杉烷衍生物。在一些實施例中，每次投與之疏水性紫杉烷衍生物之量小於約25 mg/m2、22 mg/m2、20 mg/m2、18 mg/m2、15 mg/m2、14 mg/m2、13 mg/m2、12 mg/m2、11 mg/m2、10 mg/m2、9 mg/m2、8 mg/in2、7 mg/m2 > 6 mg/m2 ' 5 mg/m2 ' 4 mg/m2 ' 3 mg/m2 ' 2 mg/m2 或1 mg/m2中之任一者。在一些實施例中，組合物中之疏水性紫杉烷衍生物之有效量包括於以下範圍中之任—者 134531.doc -81 - 200942233

❹ 中：約1至約5 mg/m2、約5至約10 mg/m2、約10至約25 mg/m2、約 25 至約 50 mg/m2、約 50 至約 75 mg/m2、約 75 至約 100 mg/m2、約 100 至約 125 mg/m2、約 125 至約 15〇 mg/m2、約 150至約 175 mg/m2、約 175 至約 200 mg/m2、約 200 至約 225 mg/m2、約 225 至約 250 mg/m2、約 250 至約 300 mg/m2、約 300至約 350 mg/m2，或約 350至約 400 mg/m2。較佳地，組合物中之疏水性紫杉烷衍生物之有效量為約5 至約300 mg/m2，諸如約1〇〇至約150 mg/m2、約120 mg/m2、約 130 mg/m2，或約 140 mg/m2。在任何以上態樣之一些實施例中，組合物中之疏水性紫杉烧付生物之有效量包括至少約1 mg/kg、2.5 mg/kg、3.5 mg/kg、5 mg/kg、6.5 mg/kg、.. 7.5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg或20 mg/kg中之任一者◦在各種變化形式中，組合物中之疏水性紫杉烷衍生物之有效量包括小於約35〇 mg/kg、300 mg/kg、250 mg/kg、200 mg/kg、150 mg/kg、 100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg、 7.5 mg/kg、6.5 mg/kg、5 mg/kg、3.5 mg/kg、2.5 mg/kg或 1 mg/kg中之任一者之疏水性紫杉烷衍生物。例示性給藥頻率包括（但不限於）不間斷地每週一次、四週中二週每週一次、每三週—次、每兩週一次、三週中兩週每週人中之任一者。在一些實施例中，組合物大約每 2週一次、每3週一次、每4週一次、每6週一次，或每8週人投與在些實施例中，組合物至少約一週1次、2 -人、3-人、4次、5次、6次或7次（亦即每日一次）中之任一者 134531.doc -82- 200942233 投與。在一些實施例 6個月、3個月、_ :人曼與之間的時間間隔小於約 8日、7日、6日、5日、4 Η日、12日、1(>日、9日、在一些實施例中，一日2日或1曰中之任一者。月、2個月、3個月：投與之間的時間間隔大於約!個月中之任一者。在一月5個月、6個月、8個月或12個 ❹

G 在-些實施例中，各“列中’在給藥時程中無中斷。週。各: 人投與之間的時間間隔不超過約一』°物之技與可延續較長時間，諸如約一個月直年。在一些實施例中月直至約七中，組合物在至少約2、 7 、 8 、 9 、 1〇、 U 、 ^ 4 5 ' 6 ' 2 、 18 、 24 、 30 、 36 、 48 、 6〇 84個月中之任一者内庐 72或奴與。在一些實施例申，烷衍生物在至少—個日不性紫杉間隔不超過約一週，且t ]的時間 .^ _ 且其中各次投與之疏水性紫杉烷衍生物…為約〜m2至約75mg/m2，諸如約〇25 mg/m 至約 25mg/m2或約 25mg/m2至約 5〇mg/m2。. 在一實施例中，奈米顆粒組合物中之疏水性紫杉院衍生物之劑量在以3週時程給與時可在5_4〇〇叫化2之範圍内’或在以每週-次時程給與時可在5韻叫化2之範圍内舉例而。疏水性紫杉烷衍生物之量為約60至約300 mg/m2(例如約 260 mg/m2)。投與奈米顆粒組合物（例如疏水性紫杉烷衍生物/白蛋白奈米顆粒組合物）之其他例示性給藥時程包括（但不限於）不間斷地每週一次100 mg/m2、4週中3週每週一次75 134531.doc -83- 200942233 mg/m2、4週中3週每週一次1〇〇 mg/m2、4週中3週每週一次 U5 mg/m2、3週中2週每週一次125 mg/m2、不間斷地每週二人 130 mg/m2、每 2週一次 175 mg/m2、每 2 週一次 260 mg/m2、每 3 週一次 260 mg/m2、每 3 週 180-300 mg/m2、不間斷地每週一次6〇-丨75 mg/m2、每週兩次20-150 mg/m2及每週兩次150-250 mg/m2中之任一者。組合物之給藥頻率可在治療過程中基於投藥醫師之判斷來調整。

本文中描述之組合物可在短於約24小時之輸注時間内將組合物輸注至個體體内。舉例而言，在一些實施例中組合物在小於約24小時、12小時、8小時、5小時、3小時、2 小時、1小時、30分鐘、2〇分鐘或1〇分鐘中之任一者之輸庄期間内投與。在一些實施例中，組合物在約3〇分鐘之輸注期間内投與。在一些實施例中，本發明提供藉由非經腸投與個體（例如人）有效量之包含含有疏水性紫杉烷衍生物及載體蛋白 (例如白蛋白，諸如人血清白蛋白）之奈米顆粒之組合物來治療個體之癌症的方法。本發明亦提供藉由靜脈内、動脈内肌肉内、皮下、吸入、經口、腹膜内、經鼻或氣管内投與個體(例如人)有效量之包含含有疏水性紫杉烷衍生物載體蛋白（例如白蛋白，諸如人血清白蛋白）之奈米顆粒 H物來/σ療個體之癌症的方法。在—些實施例中，投藥途徑為腹膜内°在―些實施例中，投藥途徑為靜脈内、動脈内、肌肉内或皮下。在各種變化形式中，每劑量投與約5邮至約㈣叫’諸如約3〇 mg至約3〇〇 mg或約50至約 134531.doc -84 - 200942233 在一些實施例中，疏水性之治療癌症之唯一醫藥活 500 mg之疏水性紫杉烷衍生物。紫杉烧衍生物為包含於組合物中性劑。本文中描述之組合物中之往一 ^ ^ 者可經由包括（例如）靜脈内、動脈内、腹膜内、肺内 ^ ^ I 口、吸入、囊泡内、肌肉内、氣管内、皮下、眼内、鞘 ,朝内、經黏膜及經皮之各種途徑投與個體（諸如人）。在一此 4. ^ ^ ^ —實施例中，可使用組合物之

持續連續釋放調配物。在本發明之—變化形式中，本發明之化合物之奈米顆粒(諸如白蛋白奈米顆粒)可藉由包括(但不限於）經口、肌肉内、經皮、 ^靜脈内之任何可接受的途徑經由吸入器或其他空惫摞谨巩揭運輪送系統及其類似物來投與0 .含有疏水性紫杉烧衍生物之奈米顆粒人物及笫-#人t 次第一療法一起投與。組 w物及第—化合物之給藥頻率可在治療過程中基於投藥醫 ❹：之判斷來調整。在一些實施例中，第一及第二療法同時生=並行投與。在分開投與時，含有疏水性紫杉烧 /丁之奈未顆粒組合物及第二化合物可以不同給藥頻率 J時間間隔投與。舉例而言，組合物可每週投與一次，而第一化合物可以P古中…頻率投與。在-些實施例二化Μ 疏水性紫杉炫衍生物之奈米顆粒及/或第配物及裝置在此項技術中已知㈣組態之組合。了使用本文中描述之投藥 134531.doc -85- 200942233

本發明亦提供本文中描述之治療方法及投藥方法中之任一者的節拍式治療方案。例示性節拍式治療方案及節拍式治療方案之使用的變化形式論述於下文中且揭示於2006年 2月21曰申請之u s s N 11/359,286中，其公開為美國公開案第2006/0263434號（諸如第[0138]段至第[〇157]段中描述之彼等方案），該案以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，奈米顆粒組合物在至少一個月内投與，其中各次投與之間的時間間隔不超過約一週，且其中各次投與之疏水性紫杉烷衍生物之劑量為其遵循傳統給藥方案之最大耐受劑量之約〇.25%至約25%。在一些實施例中奈米顆粒組合物在至少兩個月内投與，其中各次投與之間的時間間隔不超過約一週，且其中各次投與之疏水性紫杉烷衍生物之劑量為其遵循傳統給藥方案之最大耐受劑量之約 1%至約20%»在一些實施例中，每次投與之疏水性紫杉烷衍生物之劑量小於最大耐受劑量之約25%、24%、Μ%、 12%、ιι〇/0、1〇0/〇、 22%、20%、18%、15%、14%、130/〇 9%、8〇/〇、7〇/〇、6〇/〇、5〇/〇、4〇/〇、3〇/〇、2% 或 1% 中之任一者。在一些實施例中，任何奈米顆粒組合物至少約一週ι 次、2次、3次、4次、5次、6次或7次（亦即每日一次）中之任-者投與。在-些實施例中，各次投與之間的時間間隔小於約6個月、3個月、1個月、20日、μ

丄J 口、丄2曰、1Q 曰、9曰、8曰、7曰、6日、之任一者。在一些實施例中 5日'4日'3曰、2曰或1曰中，各次投與之間的時間間隔大 134531.doc -86 - 200942233 於約1個月、2個月、3個、6個月、8個組合物在至少 18 、 24 、 30 、個月、4個月、5偏日月或12個月中之任—者。月 „ 〇 , 者在一些實施例中，約2、3、4、5、6、7、8〇1 8 、 9 、 10 、 11 、 12 、 36、48、60、72或 84個實例月中之任-者内投與

蒽欲純粹例證本發明且因此決亦描述且詳述以上所論述之本發明之離發明之實例作出努力以確保關於所用數字(例如 =式。已性，但應考慮-些實驗誤差及偏差。除非：二)之準確份數為重量份，分子量為重量平均分子量，=不’否則為單位’且麼力為大氣虔或接近大氣壓。攝氏度實例1:製儀2，-苯甲酿基-歐洲紫杉醇⑴

⑴ mmol)於二氣甲〇·3〇 mmol)，隨室溫下將混合物。在藉由添加飽在〇°C下，向歐洲紫杉醇（2〇1 mg , 〇 25 貌（6 mL)中之溶液中添加三乙胺（42叫，後添加苯曱醯氣（29此，〇·25 mm〇1)。在攪拌2小時，接著TLC指示起始物質消失和碳酸氫鈉溶液來中止反應之後，用乙醚來萃取混合物。將有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾，且在真 134531.doc -87. 200942233 空中濃縮。將殘餘物藉由急驟矽膠管柱層析（己烷： DCM ’ 1:1)純化以提供呈白色泡沫狀之產物（181 mg， 80%)。NMR (CDC13，500 MHz): δ 8.10 (d，J=7.5 Hz， 2H)，7.98 (d，J=7.6 Hz，2H)，7.61 (t，J=7.4 Hz，1H)，7.50 (t， J=7.9 Hz, 2H), 7.45 (t, J=7.8 Hz, 2H), 7.41-7.36 (m, 4H), 7.29-7.26 (m, 1H), 6.25 (t, J=8.6 Hz, 1H), 5.67 (d, J=7.0 Hz, 1H), 5.58-5.45 (m, 3H), 5.22 (s, 1H), 4.94 (dd, J=9.6, 1.9 Hz, 1H), 4.31 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.27 (dd, J=10.9, 6.6 Hz, 1H), 4.19 (s, 1H), 4.18 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.93 (d, J=6.9 Hz, 1H), 2.60-2.58 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.32-2.25 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.15-2.05 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.88-1.80 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.34 (s, 9H), 1.22 (s, 3H), 1.11 (s，3H)· ESI-MS: C50H57NO〗5Na (M+Na)+之計算值： 934，實驗值：934。實例2:製備2’-己醢基歐洲紫杉醇（2)

在0°C下’向歐洲紫杉醇（2.20 g，2.72 mmol)於二氣甲烷 (220 mL)中之溶液中添加三乙胺（〇 95爪卜6 8〇 mm〇1)，隨後添加己醯氣（0.38 mL，2.72 mmol)。在(TC下將混合物攪拌1.5小時’接著TLC指示起始物質消失。在藉由添加飽和 134531.doc •88· 200942233 碳酸氫鈉溶液來中止反應之後，用二氣甲烷來萃取混合物。將有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。將殘餘物藉由急驟矽膠管柱層析（己烷中之10-50%乙酸乙酯）純化以提供呈白色固體狀之產物（2.〇〇 g，81%)。NMR (CDC13, 500 ΜΗζ): δ 8.10 (d，J=7.3 Hz，

2H), 7.61 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.50 (t, J=7.9 Hz, 2H), 7.38 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.30 (m, 3H), 6.25 (t, J=8.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J=7.1 Hz, 1H), 5.46-5.37 (m, 3H), 5.21 (s, 1H), 4.96 (dd, J=7.7, 2.0 Hz, 1H), 4.32 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.27 (dd, J=10.9, 6.6 Hz, 1H), 4.19 (d, J=8.5 Hz, 2H), 3.93 (d, J=7.2 Hz, 1H), 2.60-2.58 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.39-2.30 (m, 3H), 2.29-2.20 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.96-1.85 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.57-1.53 (m, 4H), 1.33 (s, 9H), 1.23 (s, 3H), 1.26-1.17 (m, 4H), \.\2 (s, 3H), 0.85 (t, J=7.1 Hz, 3H). ESI-MS: C49H63N〇15Na (M+Na)+之計算值：929，實驗值：929 。實例3:製備2’-癸醮基·歐洲紫杉酵（3)

在〇°C下’向歐洲紫杉醇（144 mg，0.18 mmol)於二氣甲烧（10 mL)中之溶液中添加三乙胺（134 pL，0.96 mmol)， 134531.doc -89 - 200942233 隨後添加癸醯氣（37 pL，0.18 mm〇i)。在〇〇c下將混合物授拌4.5小時’接著TLC指示起始物質消失。在藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液來中止反應之後，用二氣甲烷來萃取混合物。將有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。將殘餘物藉由急驟矽膠管柱層析（己烷中之10-50%乙酸乙酯）純化以提供呈白色固體狀之產物（112 mg . 65%) 〇 ^ NMR (CDC13, 500 MHz): δ 8.10 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.61 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.50 (t, J=7.9 Hz, 2H), 7.38 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.30 (m, 3H), 6.25 (t, J=8.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J=7.1 Hz, 1H), 5.46-5.37 (m, 3H), 5.21 (s, 1H), 4.96 (d, J=7.7 Hz, 1H), 4.32 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.27 (m, 1H), 4.19 (m, 2H), 3.93 (d, J=7.2 Hz, 1H), 2.60-2.58 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.39-2.30 (m, 3H), 2.29-2.20 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.96-1.85 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.57- 1.45 (m, 4H), 1.33 (s, 9H), 1.23 (s, 3H), 1.26-1.21 (m, 12H)，1.12 (s, 3H)，0.85 (t，J=7.1 Hz，3H)。實例4:製備2’-戊醯基-歐洲紫杉醇（4)

在0。0下向歐洲紫杉醇（144 mg，0· 1 8 mmol)於二氣甲院 (10 mL)中之溶液中添加三乙胺（100 pL，0.72 mmol)，隨 134531.doc -90- 200942233 後添加戊醯氣（44 μί ’ 0.18 mmol)。在〇°C下將混合物授样 5.5小時，接著TLC指示起始物質消失。在藉由添加飽和碳酸氫納溶液來中止反應之後’用二氣甲烧來萃取混合物。將有機層用鹽水洗滌’經無水硫酸鈉乾燥，過滤，且在真二中濃縮。將殘餘物藉由急驟梦膠管柱層析（己烧中之1〇_ 50%乙酸乙酯）純化以提供呈白色固聽狀之產物（丨〇〇， 62%)。H NMR (CDC13，500 MHz): δ 8.10 (d，J=7.3 Hz, ©2H), 7.61 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.50 (t, J=7.9 Hz, 2H), 7.38 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.30 (m, 3H), 6.25 (t, J=8.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J=7.1 Hz, 1H), 5.46-5.37 (m, 3H), 5.21 (s, 1H), 4.96 (d, J=7.7 Hz, 1H), 4.32 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.27 (m, 1H), 4.19 (m, 2H), 3.93 (d, J=7.2 Hz, 1H), 2.60-2.58 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.39-2.30 (m, 3H), 2.29-2.20 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.96-1.85 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.57-1.45 (m, 4H), 1.33 (s, 9H), 1.23 (s, 3H), 1.26-1.21 (m, 2H), 1.12 (s, 3H), 0.85 (t, J=7.1 Hz, 3H)。實例5:製備2’-丙醯基-歐洲紫杉醇（5)

在0 C下’向歐洲紫杉醇（195 mg，0.24 mmol)於二氣甲烧（10 mL)中之溶液中添加三乙胺（1〇〇从，0.72 mmol)， 134531.doc •91 - 200942233 隨後添加丙醯氣（20.8 pL，0·24 mm〇1)。在0〇c下將混合物攪拌5小時，接著TLC指示起始物質消失。在藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液來中止反應之後，用二氣甲烷來萃取混合物。將有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。將殘餘物藉由急驟矽膠管柱層析（己烷中之10-50%乙酸乙酯）純化以提供呈白色固體狀之產物（1〇〇 mg . 48%) 〇 *H NMR (CDC13, 500 MHz): δ 8.10 (d, J=7.3 Hz> 2H)> 7.61 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.50 (t, J=7.9 Hz, 2H), 7.38 (t, J=7.4 Hz, 2H), 7.30 (m, 3H), 6.25 (t, J=8.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J=7.i Hz, 1H), 5.46-5.37 (m, 3H), 5.21 (s, 1H), 4.96 (d, J=7.7 Hz, 1H), 4.32 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.27 (m, 1H), 4.19 (m, 2H), 3.93 (d, J=7.2 Hz, 1H), 2.60-2.58 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.39-2.30 (m, 3H), 2.29-2.20 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.96-1.85 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.57- 1.45 (m, 2H), 1.33 (s, 9H), 1.23 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.10 (t, J=7.1 Hz, 3H) 〇 o 實例6:製備2，-苯曱醢基_太平洋紫杉醇（6)

在〇C下向歐洲紫杉醇（5〇2 mg，〇.62 mmol)於二氣曱烷 134531.doc -92- 200942233 (5 mL)中之溶液中添加三乙胺（104 pL ’ 0.74 mmol)，隨後添加苯甲醯氣（72 ML，0.62 mmol)。在室溫下將混合物攪掉2小時’接耆tlc指示起始物質消失。在藉由添加飽和碳酸氫納溶液來中止反應之後，用乙醚來萃取混合物。將有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾，且在真空中濃縮。將殘餘物藉由急驟矽膠管柱層析（己烷/二氣甲烷，1/1)純化以提供呈白色泡沫狀之產物（531 mg，94%)。 *H NMR (CDC13, 500 MHz): δ 8.10 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.99 o (d, J=7.5 Hz, 2H), 7.76 (d, /=7.1 Hz, 2H), 7.62-7.56 (m, 2H), 7.55-7.39 (m, 13H), 7.32 (d, /=7.1 Hz, 1H), 7.05 (d, /=9.0 Hz, 1H), 6.30 (s, 1H), 6.25 (t, /=8.6 Hz, 1H), 6.04 (dd, J=8.9, 3.8 Hz, 1H)} 5.68 (d, J=3.8 Hz, 1H), 5.67 (d, /=7.6 Hz, 1H), 4.94 (dd, /=9.7, 1.8 Hz, 1H), 4.46 (dd, 7=10.9, 6.6 Hz, 1H), 4.30 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4.19 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.81 (d, J=7.1 Hz, 1H), 2.56-2.48 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.36-2.31 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.17-2.12 (m, 1H), 1.96 (d, J=0.S Hz, 3H), 1.91-1.85 (m, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.13 (s, 3H). ESI-MS: C54H55N015Na (M+Na)+之計算值：980，實驗值：980。實例7:製備7-苯甲醢基-歐洲紫杉酵（7)

⑺ 134531.doc • 93· 200942233 在室溫下，在氬氣下將歐洲紫杉醇於二氣甲烧中之溶液與咪唑及三乙基矽烷基氯化物混合。將反應混合物在室溫下攪拌，用二氯甲烷稀釋，用水、飽和氣化鈉水溶液洗滌，乾燥且濃縮。殘餘物之急驟層析產生2，_三乙基矽烷基歐洲紫杉醇。在周圍溫度下’在氬氣下將2，·三乙基石夕烧基歐洲紫杉醇於二氯甲烷中之溶液與吡啶及苯甲酿氣混合。將反應混合物在室溫下攪拌，用乙醚稀釋，且將有機層濃縮。執行殘餘物之急驟層析以產生中間物2'-三乙基梦烧基 ^ 7-苯甲醯基歐洲紫杉醇。在〇C下’在氬氣下將中間物2，-三乙基矽烷基7_苯甲醯基歐洲紫杉醇於甲醇中之溶液與Ηα水溶液混合且在相同溫度下攪拌反應混合物。在以乙醚及飽和碳酸氫鈉稀釋之後，將有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。將粗產物藉由急驟矽膠管柱層析純化以產生 7-苯甲醯基歐洲紫杉醇。 Q 實例8 :製備10-苯甲醢基歐洲紫杉醇（8)

(8) 在室溫下，在氬氣下將歐洲紫杉醇於二氣甲烧及吼咬中之冷液與二乙基矽烷基氣化物混合。將反應混合物在室溫下攪拌，用二氣甲烷稀釋，用水、飽和氣化鈉水溶液洗 134531.doc •94· 200942233 蘇，乾燥且濃縮。殘餘物之急驟層析產生2，，7-雙（三乙基矽烷基）-歐洲紫杉醇。首先在室溫下，在氬氣下將2，，7_雙（三乙基矽烷基）_歐洲紫杉醇於m中之溶液與之氯化納混合，然後添加苯甲醯氣。將反應混合物在室溫下攪拌，用乙醚稀釋，且將有機層濃縮。執行殘餘物之急驟層析以產生中間物 2，7-雙（二乙基石夕烧基）_ι〇_苯甲醯基歐洲紫杉醇。在〇°c下，在氬氣下將中間物2，，7_雙（三乙基矽烷基）1〇_ 苯甲醯基歐洲紫杉醇於曱醇中之溶液與HC1水溶液混合且在至/JBL下授拌反應混合物β在以乙喊及飽和碳酸氫鈉稀釋之後，將有機層用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。將粗產物藉由急驟矽膠管柱層析純化以產生10-苯甲醯基歐洲紫杉醇。實例9 :對ΜΧ-1(人乳房癌）細胞之活體外生長抑制使用Promega CellTiter Blue Cell生存力檢定來量化細胞毒性檢定。簡而言之，將細胞（5〇〇〇個細胞/孔）於補充有 10% FBS之RPMI 1640培養基中塗覆至96孔微量滴定盤上且在37〇C下在加濕5¼ C〇2氣氛中培育。24小時之後，將細胞暴露於以不同濃度於DMSO中之疏水性紫杉烷衍生物且再培養72小時。移除100 μΐ培養基且將2〇 μ1 pr〇mega CellTiter Blue試劑添加至每一孔中且震盪以混合。在3<rc 下加濕5% C〇2氣氛中培育4小時之後，在544ex/62〇em下讀取滴定盤。所產生之螢光與活細胞數目成比例。在將所產生之螢光相對於藥物濃度來作圖之後，按照所得非線性回 134531.doc -95- 200942233 歸之半衰期計算IC50。數據提供於表1中。表1 :疏水性歐洲紫杉醇衍生物之細胞毒性 \1 OH 〇y。魏 H〇Bz0 α<λ^0 ID R IC50(MX-1) (μΜ) 2 -CO(CH2)4CH3 103 3 -CO(CH2)8CH3 8.8 4 -co(ch2)3ch3 211 5 -COCH2CH3 209 1 -COPh 38.4 實例10 :在人肝微粒體中疏水性歐洲紫杉酵衍生物轉化為歐洲紫杉醇樣品製備及培育將藥物儲備溶液於DMSO中製成5 mg/mL且在同一曰使 ® 用。對於不含有微粒體之對照溶液，將藥物儲備溶液摻入以下培育混合物中：83 mM K2HP〇4緩衝劑（pH 7_4)、13.3 mM MgCl2、含有 1.3 mM NADP+、3.3 mM 葡萄糖-6-磷酸、0.4 U/mL葡萄糖-6_磷酸脫氫酶及0.05 mM檸檬酸鈉的 NADPH再生系統（NRS)連同1% DMSO給出50 gg/mL之最終藥物濃度。對於不含有NADPH再生系統之對照溶液，將藥物儲備溶液摻入以下培育混合物中：84 mM K2HP〇4緩衝劑（pH 7.4)、10 mM MgCl2、12·5 mM蔗糖及 1 mg/mL人 134531.doc -96- 200942233 肝微粒體（HLM)連同1% DMSO給出50 gg/mL之最終藥物濃度。對於活性溶液，將藥物儲備溶液摻入以下培育混合物中：78 mM K2HP〇4緩衝劑（pH 7.4)、13.3 mM MgCl2、含有 1.3 mM NADP+、3.3 mM葡萄糖-6-磷酸、0.4 U/mL 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、0.05 mM檸檬酸鈉、12.5 mM蔗糖及1 mg/mL HLM之NADPH再生系統（NRS)連同1% DMSO給出 50 pg/mL之最終藥物濃度。藉由添加HLM來啟始酶促反應。在摻入HLM以啟始反應之前，將對照溶液及活性溶液在 Thermomixer中培育約5分鐘。總樣品體積在1至2.5 mL之間。在不同時間點擷取對照溶液及活性溶液之等分試樣以進行HPLC分析。在擷取之前，藉由輕拍小瓶來使樣品短暫渦動以改良溶液之均質性。在樣品擷取之後，將反應等分試樣立即以乙腈（ACN)l :2 稀釋以使蛋白質沈澱且中止酶促反應。使樣品渦動且在 14,000 rpm下離心8分鐘。將上清液轉移至1 mL自動採樣器小瓶中且注射至HPLC中。 HPLC條件使用 Synergi Fusion-RP 管柱（Phenomenex，15〇x4.6 mm，80 A，4微米）及以下移動相梯度達成HPLC分離：移動相A:水；移動相B:乙腈；自0分鐘至10分鐘以A/B (50:50)開始；自10分鐘至30分鐘達到A/B(10:90);自30分鐘至40分鐘保持於A/B(10:90);在第40分鐘恢復至 A/B(50:50);在第50分鐘終止運作。流動速率為1 134531.doc -97- 200942233 mL/min。在228 nm下偵測。烘箱溫度保持於35°C。樣品注射體積為20 pL。各種疏水性紫杉烷衍生物之HPLC滯留時間匯總於表2申。表2 :疏水性紫杉烷衍生物之HPLC滞留時間〇 C HC OH 槪。 Bz0 AcO ID R HPLC 滞留時間 (分鐘）相對滯留時間 (相對於歐洲紫杉醇）脂水分配係數 (Log P) 2 CO(CH2)4CH3 23.0 2.77 6.44 3 CO(CH2)8CH3 29.3 3.53 8.64 4 CO(CH2)3CH3 21.2 2.55 6.37 5 -COCH2CH3 16.9 2.04 5.31 1 -COPh 20.4 2.46 6.67 歐洲紫杉酵 Η 8.3 1 4.20 、结果藉由疏水性紫杉烷衍生物在人肝微粒體中之活體外代謝所產生之歐洲紫杉醇的產量係藉由在HPLC層析圖中所偵測之歐洲紫杉醇之相對峰面積百分比來測定。在圖1中將各疏水性紫杉烧衍生物所產生之歐洲紫杉醇相對於培育時間來作圖。曲線圖之比較指示歐洲紫杉醇之產量視疏水性 134531.doc -98- 200942233 紫杉烷衍生物之結構而定。在歐洲紫杉醇侧鏈上具有苯甲醯基取代之疏水性紫杉烧衍生物（化合物-1)中不產生歐洲紫杉醇。然而，在歐洲紫杉醇側鏈上具有烷基取代之疏水性紫杉烷衍生物中產生大量歐洲紫杉醇。烷基側鏈之長度不與所產生之歐洲紫杉醇之百分比相關，實情為在人肝: 粒體中培育2小時後a歐洲紫杉醇產量在具有^側鍵之化合物-2中最顯著（約16%)，其次為具有極類似轉化率（約〇 11%)之化合物-4(C5)及化合物-3(C9)。具有較短（C3)側鏈之化合物-5產生較少歐洲紫杉醇。令人驚訝的為化合物_2 經代謝且產生最多歐洲紫杉醇。此情形不能基於侧鏈取代來預測。歐洲紫杉醇產量對於疏水性紫杉烷衍生物之結構之依賴性可能與R側鏈配合於負責水解反應之酶之活性位點中的能力有關。不受理論束縛，在此五種歐洲紫杉醇疏水性紫杉烷衍生物中，含有C6烷基取代之化合物·2可在立體化學 Q 上最佳地配合至酶之活性位點處之疏水性囊袋中。苯曱醯基之剛性特性可阻止其完全到達疏水性囊袋，或此芳族醋之不同反應性可阻止酶促水解反應發生。實例11.藉由高壓均化製備2，_苯甲醢基歐洲紫杉醇及白蛋白之奈米顆粒將48.5 mg 2，-苯甲酿基歐洲紫杉醇（在實例1中製備）溶解於〇·56 mL氣仿-第三丁醇混合物（1〇.2:1)中。將溶液添加至 10.0 mL人血清白蛋白溶液（5%，w/v)中。將混合物在 10.000 rpm 下預均化 5 分鐘（VirTi^化器，Tempest j Q 型） 134531.doc •99· 200942233

以便形成粗乳液’且隨後轉移至高壓均化器（Avestin)中。預均化器之轉子/定子總成之尖端及乳液之容器用3.0 mL水洗務且將洗務液轉移至高壓均化器（Avestin)中。在i8,〇〇〇_ 20,000 psi下執行乳化同時將乳液再循環3_12遍。將所得系統轉移至旋轉蒸發器中，且在減壓（4〇 mm Hg)下在4〇(>c下快速移除氯仿及第三丁醇歷時1〇分鐘。所得分散液為半透明的’且發現所得奈米顆粒之典型直徑為1217土 14 nm(Z 平均值’ Malvern Zetasizer)。分散液可直接經由0.22 μϊη 針筒過渡器（Costar，μ star，8110)過濾、。在不添加任何低溫保護劑或凍乾保護劑的情況下，進一步將分散液凍乾48小時。所得餅狀物可容易地藉由添加無函水或生理食鹽水復水為原始分散液。復水後之粒徑與來乾之前相同。實例12 :藉由高壓均化製備2，-〇·己醢基歐洲紫杉酵及白蛋白之奈米顆粒將64.9 mg 2’-0-己醯基歐洲紫杉醇溶解於〇.56 ^[氣仿-第三丁醇（10.2:1，v/v)中。然後將溶液添加至15 mL 5%(w/v)HSA溶液。將混合物在1〇,〇〇〇 rpm下預均化5分鐘 (Vitris均化器，Tempest I.Q.型）以便形成粗乳液’且隨後轉移至高壓均化器（Avestin)中。預均化器之轉子/定子總成之尖端及乳液之容器用3.0 mL 5%(w/v)HSA溶液洗滌且將洗蘇液轉移至高壓均化器（Avestin)中。在18,000-20,000 psi下執行乳化同時將乳液再循環3-12遍。將所得系統轉移至旋轉蒸發器中，且在減壓（40 mm Hg)下在40°C下快速移 134531.doc -!00- 200942233 除氣仿及第三丁醇歷時10分鐘。使用WFI將所得懸浮液製成20 mL且隨後進行顯微表徵及粒度量測》在顯微鏡下懸浮液粒度太小以致難以觀察到顆粒。懸浮液可經由0.8 μηι 過濾且經過濾組合物之粒度為95 nm。實例13.1 :製備包含2，-0-己醮基歐洲紫杉醇及白蛋白之醫藥調配物將藉由如實例12中描述之方法以4個獨立批次製造之約 1 00 mL 0·8 μηι組合物經由 0.45 μιη 1000 mL粒度之 Steri-杯 ® 過濾。全部組合物經由以上過濾器中之一者過濾。將經過濾組合物轉移至具有5 mL填充容積之20 mL血清小瓶中且遵循基本上在25°C下進行初次乾燥840分鐘且在3〇°C下進行二次乾燥480分鐘的方案來凍乾》此舉產生白色至灰白色之良好餅狀物。凍乾餅狀物可在不到2分鐘内由 0.9%(w/v)生理食鹽水溶液復水成淺藍色半透明溶液。顆粒粒度為107 nm。此復水組合物在4°C下保持其完整性歷 ^ 時24小時。在4°C下儲存24小時之後，顆粒粒度為1〇8 nm 且粒度分布無明顯的變化。實例13.2:製備包含2，-〇_己醯基歐洲紫杉醇及白蛋白之醫藥調配物此試驗中之添加劑係選自可注射賦形劑，亦即張力調節劑、NaCl及d-甘露糖醇。將藉由如實例12中描述之方法製造之約20 mL 0.8 μιη組合物經由0.45 μιη針筒過濾器過濾。將經〇_45 μηι過濾之組合物分成各2〇 mL之兩個獨立部分。向一部分中添加d·甘露糖醇至5%(w/v)之濃度且向另一部 134531.doc -101- 200942233 分中添加NaCl以具有150 mM之濃度。將含有扣甘露糖醇及氣化鈉之組合物轉移至具有5 mL填充容積之2〇 mL血清小瓶中且遵循基本上在25 °c下進行初次乾燥84〇分鐘且在 3〇 C下進行二次乾燥48〇分鐘的方案來凍乾。此舉產生白色至灰白色之良好餅狀物。可使用WFI將凍乾餅狀物在不到2分鐘内復水為淺藍色半透明溶液。復水組合物在ye下保持其元整性歷時24小時。在床乾前後及儲存時粒度及粒度分布無明顯變化。實例13.3:製備包含2，_〇_己醸基歐洲紫杉醇及白蛋白之醫藥調配物此實例展示包含2，-〇-己醯基歐洲紫杉醇及白蛋白之醫藥調配物之製備’其中組合物粒徑小於100 nm且可過濾性及回收率較尚。以下列參數製備八個批次之組合物且其特徵以製表形式匯總（表粒徑分布顯示於（例如）圖8中。 ❹ 1^八濃度=5%(评~)，氣仿：第三丁醇=1〇.2:1;有機溶劑 0/〇=3·6 ;批量尺寸=22.5 mL ; HSA :藥物=9-10 表3 :批量製備2’-〇-己醯基歐洲紫杉醇/白蛋白組合物批次名稱藥物量，mg 過濾（0·45 μη^Ζ^ϋπΟ 1 127.6 70.8 2 122.9 67.4 3 121.3 67.6 4 121.4 68.0 5 123.7 66.9 6 121.5 73.7 7 122.6 74.4 8 121.7 71.8 134531.doc 200942233 將表3中之所有經0.45 μηι過濾之組合物混合在一起。混合組合物之總體積為約1 5 0 mL且可經由一 2 5 0 mL尺寸 Steri-杯（0.22 μηι孔徑）過滤。將所有此等組合物置於34個具有4 mL填充容積之20 mL血清小瓶中。將組合物凍乾及復水而其粒徑無明顯的變化。實例14 :奈米顆粒穩定性在2-8°C、RT及40°C下儲存之後評定凍乾2'-0-己醯基歐洲紫杉醇/白蛋白組合物之穩定性以確定儲存溫度/存放期且鑑別加速條件下之可能降解產物以確定處置及運輸方案。亦執行2-8°C及RT下之復水穩定性以確定使用中存放期。量測視覺觀測結果、復水時間、pH值、RP-HPLC(對於效能及降解％)、粒徑（藉由Malvern Nanosizer)來確定含有白蛋白之調配物之完整性及穩定性。發現調配物就餅狀外觀、可復水性、粒度及粒度分布而言在3個月内為穩定的。此試驗之結果顯示於表4中。表4 : 2'-0-己醯基歐洲紫杉醇/白蛋白組合物儲存特徵時間點溫度餅狀物細節復水溶液復水馥積 (mL) 復水時間 (min) pH 值 zav (nm) 視覺顯微鏡 0 RT 灰白色良好餅狀物 0.9% (w/v) NaCl 2.0 3.1 6.60 68.7 無明顯顆粒顆粒太小不能觀察到 1個月 -20。。如上如上 2.0 2.8 6.62 67.2 無明顯顆粒顆粒太小不能觀察到 134531.doc -103- 200942233 2-8〇C 如上如上 2.0 2.6 6.63 68.8 無明顯顆粒顆粒太小不能觀察到 25〇C 如上如上 2.0 3.2 6.64 68.6 無明顯顆粒顆粒太小不能觀察到 40°C 如上如上 2.0 3.8 6.61 82.6 無明顯顆粒 ------- 顆粒太小不能觀察到實例15 :藉由高壓均化作用製備2，_苯甲醢基太平洋紫杉醇

❹ 將57.6 mg 2，-苯甲醯基太平洋紫杉醇溶解於〇6 mL之氣仿-乙醇混合物（9:1，v/v)中。將溶液添加至12 〇 mL人血清白蛋白溶液（3%，w/幻中。將混合物在1〇〇〇〇 rpm下預均化 5分鐘（VirTis均化器，Tempest q型）以便形成粗乳液且隨後轉移至高壓均化器（Avestin)中。在18,〇〇〇 2〇〇〇〇 pd 下執行乳化同時將乳液再循環3_1〇遍。將均化乳液轉移至旋轉蒸發器之500 mL燒瓶中，且在減壓（4〇 mm H㈡下在 4〇°C下快速移除氣仿及乙醇歷時2G分鐘。所得分散液為淺藍色半透明溶液。發現所得苯甲醯基太平洋紫杉醇之直徑為 86.7±3.1 nm(Z平均值，Malvern Zetasizer)。分散液可直接經由0.22㈣針筒過濾器（c〇star，μ_，8ιι〇)過慮且奈米顆粒之粒度為61.1±0.2 nme在不添加任何低溫保：劑或凍乾保護劑的情況下，進一步將分散液凍乾。所得餅狀物可容易地藉由添加無菌水或生理食鹽水復水為原始液。復水後之粒徑與凍乾之前相同。〇刀實例心包含2’_〇_己睡基歐洲紫杉酵及白蛋白之醫藥 134531.doc -104- 200942233 配物之最大耐受劑量（MTD) 在第1曰、第5曰及第9曰向小鼠靜脈内投與15、30、 60、90、120及150 mg/kg(q4dx3)之生理食鹽水（對照）或 nab-2(實例12中製備之2·-己酿基歐洲紫杉醇之奈米顆粒）。使用S形方程式擬合死亡率與劑量之對比關係且將其顯示於圖7中。根據q4dx3時程，Nab-2調配物以LDn)=61 mg/kg 及LD50=113 mg/kg良好对受。實例17 : nab-2(實例12中製備之2，-己醢基歐洲紫杉酵之奈米顆粒）對抗乳癌異種移植物的抗癌活性在雌性裸鼠之右側腹附近皮下植入1千萬個MDA-MB-23 1細胞。十一天後，將分成十隻一組之攜帶腫瘤之小鼠 (平均腫瘤尺寸=126 mm3)以根據q4dx3時程靜脈内投與之生理食鹽水或不同劑量（60、90及120 mg/kg)之Nab-2(在實例12中製備）或15 mg/kg之Taxotere®處理。每週兩次記錄腫瘤量測值及動物體重。在MDA-MB-23 1乳癌模型中’經處理對照動物之腫瘤在十隻小鼠中之九隻中良好生長至評估尺寸，連到腫瘤翻_ 番之中值時間為12.2日（圖2A ;值為平均值土 SEM)。觀察到最大平均體重為減輕1 _3%(圖2B值為平均值土SEM)。以 Nab-2處理有效延遲MDA-MB-231人乳房腫瘤之生長，在 120、90及60毫克/公斤/注射之劑量下之T_c值分別為 83.1、80.7及>84.8曰，且與媒劑對照相比腫瘤生長抑制 >96%(與生理食鹽水對照比較P<〇〇〇〇1，aN〇va統計）。 Nab-2在最高測試劑量120毫克/公斤/注射下不可耐受且弓丨 134531.doc -105- 200942233 起50%死亡率，儘管明顯抑制腫瘤生長。以90及60毫克/公斤/注射之劑量之Nab-2處理良好耐受，最大平均體重減輕分別為5%及3%。在MDA-MB-231模型中，15毫克/公斤/注射之劑量之丁&\〇16代@可财受，最大平均體重減輕為3.3%。 Taxotere®延遲MDA-MB-231乳房腫瘤之生長（T-C值為49.5 曰）且減少腫瘤生長達88%(與生理食鹽水對照比較 P<0.0001)。以Taxotere®與Nab-2處理之動物之間在腫瘤生長抑制方面無顯著差異，然而在相等毒性劑量水準下，以 ® Nab-2達成具有30-40%腫瘤消退之出眾抗腫瘤功效（參見表 5)。表5 :裸鼠皮下人乳癌異種移植模型中Nab-2與Taxotere®相比之抗腫瘤活性模型 η 藥劑劑量 (第0曰、龛4日、第8日， mg/kg) TGI (%)a BWL 最大值 (%)¾ 死亡？腫瘤消退部分c 完全d MDA-MB-231(乳房） 10 生理食鹽水 0 _ 0/10 0/10 試驗編號ABS-15 10 Nab-2e 120 96 5/10 3/10 0/10 10 Nab-2 90 96 -5.00 2/10 1/10 10 Nab-2 60 97 -3.30 4/10 2/10 10 Taxotere® 15 88 -3.30 4/10 0/10 aTGI，腫瘤生長抑制；bB WL最大值，最大體重減輕百分比；e治療後腫瘤變成其尺寸之<50%或變得不可觸知，但隨後復發。 d腫瘤變得不可觸知；eNab，結合白蛋白之奈米顆粒。實例18 : nab-2(實例12中製備之2’-己醢基歐洲紫杉醇之奈 134531.doc -106- 200942233 米顆粒）對抗肺癌異種移植物的抗癌活性為測定Nab-2對抗肺癌之功效，在雄性裸鼠之右側腹附近皮下植入一百萬個H358細胞。十一天後，將分成七隻或九隻一組之攜帶腫瘤之小鼠（平均腫瘤尺寸=422 mm3)以根據q4d><3時程靜脈内投與之生理食鹽水或60 mg/kg Nab-2或 1 0 mg/kg Taxotere®處理。每週兩次記錄腫瘤量測值及動物體重。在H3 5 8人非小細胞肺癌模型中，60 mg/kg之Nab-2良好 ❹ 耐受，最大平均體重減輕為9.1%且減少腫瘤生長達53%(與生理食鹽水對照比較P<0.001 ;圖3(值為平均值土SEM)及表 6) ° 90 mg/kg 之 Nab-2 引起 100% 死亡率，10 mg/kg 之 Taxotere®雖然減少腫瘤生長達93%(與生理食鹽水對照比較 P<0.001)，但其引起57%死亡率。不同於Taxotere®，60 mg/kg劑量水準之Nab-2在毒性最小的情況下引起九隻動物中之六隻中部分腫瘤消退。 ^ 表6:裸鼠皮下人肺癌異種移植模型中Nab-2與Taxotere®相 ❹ 比之抗腫瘤活性模型 η 藥劑劑量 (第0曰、窠4日、第8曰， mg/kg) TGI (%)a BWL 最大值 (%)¾ 死亡r 腫瘤消退部分c 完全d H358 (NSCLC)f 7 生理食鹽水 0 - 0/7 0/7 試驗編號 CA-AB-24 7 Nab-2 90 N/A 7/7 — — 9 Nab-2 60 53 -9.10 6/9 0/9 7 Taxotere® 10 93 4/7 1/7 1/7 aTGI，腫瘤生長抑制；bB WL最大值，最大體重減輕百分 134531.doc -107- 200942233 比；e治療後腫瘤變成其尺寸之<50%或變得不可觸知，但隨後復發；d腫瘤變得不觸知；eNab，結合白蛋白之奈米顆粒，fNSCLC，非小細胞肺癌。實例19 : nab-2(實例12中製備之2，-己醢基歐洲紫杉醇之奈米顆粒）對抗結勝直勝癌異種移植物的抗癌活性進行兩個獨立試驗以確定Nab-2對抗結腸直腸癌的功效。在試驗編號CA-AB-6中，在雄性裸鼠之右及左側腹中皮 ® 下植入1百萬個HT29。十五天後，將分成3隻一組之攜帶腫瘤之小鼠（平均腫瘤尺寸=143 mm3)以根據q4d><3時程靜脈内投與之生理食鹽水或90 mg/kg Nab-2或22 mg/kg Nab-歐洲紫杉醇處理。每週3次記錄腫瘤量測值及動物體重。在試驗編號ABS-18中’在雄性裸鼠之右側腹附近皮下植入1百萬個HT29細胞。十一天後，將分成十隻一組之攜帶腫瘤之小鼠（平均腫瘤尺寸=186 mm3)以根據q4d><3時程 q 靜脈内投與之生理食鹽水或60及90 mg/kg Nab-2或15 mg/kg Taxotere®處理。每週兩次記錄腫瘤量測值及動物體重。在HT29結腸腫瘤異種移植（試驗編號abs_丨8及ca-AB-6) 中，Nab-2在60及90 mg/kg之劑量水準下引起明顯腫瘤生長抑制（95-99%)及腫瘤生長延遲（與生理食鹽水對照比較 P<0.0001，圖4-6(值為平均值士SEM)及表7)。在以9〇或6〇 mg/kg Nab-2處理之十隻攜帶腫瘤之小鼠中有九隻出現部仝腫瘤消退，最大平均體重減輕為u 6%(abs_i8)。在9〇 134531.doc -108- 200942233 mg/kg劑量水準下，一隻動物死亡且對一隻施以安樂死。在相同實驗條件下’ 15 mg/kg2Tax〇tere®引起94〇/〇 TGI及 19%體重減輕》表5.在裸鼠皮下人結腸癌異種移植模型中，Nab_2與Nab· 歐洲紫杉醇及TaX〇tere®相比之抗腫瘤活性棋型 η 藥劑劑量 (第0曰、第4日、第8日， mg/kg) TGI (%)* BWL 最大值 (%)或死亡)b 膣瘸消退部分* 完全d HT29 (結腸）試驗編號 CA-AB-6 12 生理食鹽水 — 0 0/12 0/12 3 Nab-2 90 95.1 -19.00 1/3 0/3 3 Nab-2 30 -53.5 -7.20 0/3 0/3 3 Nab-2 15 -5.1 -9.60 0/3 0/3 3 Nab-歐洲紫杉醇 ---—. 22 91.2 -27.10 0/3 0/3 3 Taxotere® 15 86.1 -27.30 0/3 0/3 HT29 (結腸）試驗編號 ABS-18 10 生理食鹽水 -----, 0 - - 0/10 0/10 10 Nab-2 —--—, 90 99 3/10 9/10 1/10 10 Nab-2 — — 60 98 -11.60 9/10 0/10 10 Taxotere® 15 94.3 -19.10 3/10 0/10 aTGI，腫瘤生長抑制；bBWL·最大值，最大體重減輕百分比；e治療後腫瘤變成其尺寸之<5〇%或變得不可觸知，但隨後復發；d腫瘤變得不可觸知；eNab，結合白蛋白之奈米顆粒。 HT29結腸腫瘤模型（試驗編號CA-AB-6)中Nab-2、Nab-歐洲紫杉醇及Taxotere®之比較性功效試驗揭示Nab-歐洲紫杉醇及Taxotere®之劑量限制性毒性，平均體重減輕為 134531.doc -109- 200942233 27/。，儘管TGI為86至91%(與生理食鹽水對照比較 P<0.01)。與此對比’ 9〇 mg/kg劑量水準之Nab 2引起全面腫瘤消退，最大體重減輕為丨9%(與生理食鹽水對照比較 P<0.0001)。因此，在HT29結腸腫瘤模型中，不同於Nab_ 2，Tax〇tere®&Nab_g洲紫杉醇在其MTDt不引起部分或完全腫瘤消退，而引起明顯體重減輕。實例20 : Nab-2在猴子體内之藥物代謝動力學及安全性材料及方法將首次劑篁投與日指定為試驗第丨日，且將後續日依序編號。在將最終適應日稱為第日的情況下將首次劑量投與前之試驗日依序編號。將3隻經證實先前未暴露於白蛋白之非原態、雄性食蟹狼分派至如下顯示之表6中指定之劑量組。在試驗開始時，動物體重為5.4-6.7 kg且年齡為4至7歲。表6_藥物代謝動力學試驗設計組材料途徑劑量水準給藥曰雄性動物數目 3 Nab-2 IV 5 mg/kg 1 、 8 、 15 1 4 Nab-2 IV 10 mg/kg 1 5 Nab-2 IV 20 mg/kg 1 1 10 mg/kg 8 ' 15 所有動物係在第1日、第8曰及第15曰每週給藥一次。經由3 0分鐘靜脈内輸注’向第3組及第4組之動物分別投與5 及10 mg/kg之Nab-2(批號：ABI139-2-83)，且向第5組動物投與20、10及1〇 mg/kg(分別在第1曰、第8曰及第15曰）之 134531.doc .110- 200942233

Nab-2。在整個試驗過程中，每日兩次執行臨床觀察且每週一次記錄體重。在第1日及第15日，對第1組動物在8個時間點下且對第3組、第4組及第5組在9個時間點下收集連續血樣以作藥物代謝動力學分析。結果及結論在第3組及第4組動物之體重或臨床觀察中未發現治療相關效應。一般而言，nab-2測試品遵循經口及靜脈内重複 Ο 劑量投與良好耐受。Nab-2測試品遵循以5及1〇 mg/kg靜脈内投與良好耐受。與此對比，以2〇 mg/kg單一IV劑量投與Nab-2(第5組）導致不利臨床徵象及體重減輕。出於此等原因，將對此動物之劑量水準減少至10 mg/kg以便在第8日及第15日給藥。第5組動物之不利臨床觀察結果包括嘔吐有血糞便黏稠糞便、軟性糞便及液體糞便，及食慾不振。在第7日，觀察到第5組動物躺下且第17日顯示彎腰駝背姿勢。食慾〇不振及總體狀況下降與到第7日其體重減輕大約7。/。（與給藥前體重量測值相比）及到第15日其給藥前體重減輕大約15% 相關。分析物及PK分析如下分別顯示於表7及8中。Nab2展現終半衰期為3.0-3.7小時且最早收集時間下之τ職為〇〇83 彳時的血液中之刀解。Nab_2及其代謝產物（歐洲紫杉醇）展現Μη及鞭與劑量成比例的增加。化合物2展現VZ為7. g的較大分布體積。代謝產物轉化率(歐洲紫杉醇歲^化合物2鞭响比率）為4859%。 134531.doc • 111 - 200942233 此等數據清楚地顯示Nab_2可以10 mg/kg或120爪^一在 PK與劑量成比例的情況下安全投與。化合物2顯示以4.8-5.9%之轉化率產生歐洲紫杉醇。表7.來自Nab-2 IV投與之分析物數據時間（小時）濃度（ng/raL) 劑量（mg/kg)-分析物 0 0 5 -化合物2 0.083 1074.29 5-化合物2 0.25 939.925 5 -化合物2 0.5 774.415 5 _化合物2 1 534.3 19 5-化合物2 2 421.84 5-化合物2 8 136.199 5 -化合物2 0 0 5-歐洲紫杉醇 0.083 36.706 5-歐洲紫杉醇 0.25 40.729 5-歐洲紫杉醇 0.5 35.458 5-歐洲紫杉醇 1 32.11 5-歐洲紫杉醇 2 34.063 5-歐洲紫杉醇 8 1.154 5-歐洲紫杉醇 0 0 10-化合物2 0.083 1547.177 10-化合物2 0.25 1300.995 10-化合物2 0.5 935.651 10-化合物2 1 733.656 10-化合物2 2 657.257 10·化合物2 8 202.185 10 -化合物2 0 0 10-歐洲紫杉醇 134531.doc 112- 200942233 0.083 99.44 10-歐洲紫杉醇 0.25 70.117 10-歐洲紫杉醇 0.5 63.362 10-歐洲紫杉醇 1 47.475 10-歐洲紫杉醇 2 44.227 10-歐洲紫杉醇 8 0 10-歐洲紫杉醇 0 0 20-化合物2 0.083 2387.681 20-化合物2 0.25 2617.855 20-化合物2 0.5 1819.776 20-化合物2 1 1365.583 20-化合物2 2 958.369 20-化合物2 8 264.147 20-化合物2 0 0 20-歐洲紫杉醇 0.083 381.848 20-歐洲紫杉醇 0.25 231.964 20-歐洲紫杉醇 0.5 157.466 20-歐洲紫杉醇 1 90.505 20-歐洲紫杉醇 2 69.21 20-歐洲紫杉醇 8 0 20-歐洲紫杉醇表8.來自Nab-2 IV投與之藥物代謝動力學分析劑量 (mg/kg)/ 分析物 HL λ z (小—時一） Tmax (小時） Cmax (ng/mL) Cmax/D (kg*ng/ mL/mg) AUCINF (hr*ng/mL) 10-化合物2 3.7 0.0830 1547 155 5346 10-歐洲紫杉醇 3.2 0.0830 99 10 314 20-化合物2 3.0 0.2500 2618 131 7857 134531.doc -113- 200942233 20-歐洲紫杉醇 1.4 0.0830 382 19 394 5-化合物2 3.6 0.0830 1074 215 3613 5-歐洲紫杉醇 1.4 0.2500 41 8 175 劑量 (mg/kg)/ 分析物 AUCINF/D (hr*kg*ng/ mL/mg) Vz (mL/kg) Cl (mL/hr/ kg) Vss (mL/kg) 比率：歐洲紫杉醇/化合物2 10-化合物2 535 9927 1871 8120 5.9% 10-歐洲紫杉醇 31 20-化合物2 393 11176 2545 8740 5.0% 20-歐洲紫杉醇 20 5-化合物2 723 7176 1384 5837 4.8% 5-歐洲紫杉醇 35 實例21 ·· Nab-2及Nab-歐洲紫杉酵之溶解圖形執行Nab-2及Nab-歐洲紫杉醇之溶解實驗（對於Nab-2參〇見表9/圖9，對於Nab-歐洲紫杉醇參見表10/圖10)。Nab-2 之顆粒在最低測試濃度下保持完整（5 pg/mL)。與此對比， nab -歐洲紫杉醇在100 pg/mL下快速分解為白蛋白-藥物複合物，且無可偵測奈米顆粒（穩定性之20倍差異）。相應地，nab-2之EC50(溶解圖形之半點）為103 pg/mL且nab-歐洲紫杉醇之EC50為230 pg/ml(圖11)-2倍差異。nab-2之 EC90(90°/〇溶解）為16 pg/ml且nab-歐洲紫杉醇之EC90為121 pg/ml-7.6倍差異。Nab-2及Nab-歐洲紫杉醇之正規化溶解 134531.doc -114- 200942233 曲線顯示於圖11中。表9 : Nab-2之溶解數據藥物濃度粒徑(rnn) 標準偏差 (pg/mL) (土nm) 0 23.9 3.5 經0.2 μιη過遽之5% (w/v) HSA溶液 0 23.9 3.2 5 24.4 4.3 10 27.6 5.1 25 28 3.7 50 35.9 4.5 75 41.5 3.5 經 0.1 μιη 過遽之 5%(w/v) HSA溶液 100 45.6 3.6 150 52.1 4.7 200 56.3 3.4 300 61.3 3.5 400 64.3 2.8 表10 : Nab-歐洲紫杉醇之溶解數據藥物濃度bg/mL) 粒徑(nm) 標準偏差(±nm) 0 8.1 1.5 10 7.6 1.7 25 8.2 1.6 50 8.1 1.5 75 8.7 2.3 100 10.1 3.9 150 35.7 13.2 200 77.8 12.7 300 135.4 12 500 183.3 7.2 134531.doc -115- 200942233 【圖式簡單說明】圖1顯示疏水性紫杉炫衍生物所產生之歐洲紫杉醇之量與培育時間之對比關係。圖2A顯示與Taxotere®相比，漸增濃度之含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於乳癌異種移植模型中之腫瘤生長之效應。圖2B顯示與Taxotere®相比’漸增濃度之含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於乳癌異種移植模型中之 ® 體重變化之效應。圖3A顯示與Taxotere®相比，含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於H3 58肺癌異種移植模型中之腫瘤體積變化之效應。圖3B顯示與Taxotere®相比，含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於H358肺癌異種移植模型中之體重變化之效應。〇圖4A顯示與Nab-歐洲紫杉醇相比，含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於HT29結腸癌異種移植模型中之腫瘤生長之效應（試驗編號CA_AB_6) β 圖4Β顯示與Nab-歐洲紫杉醇相比，含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於HT29結腸癌異種移植模型中之體重變化之效應（試驗編號CA_AB_6)。圖5A顯示與TaXotere®相比，含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於結腸癌HT29異種移植模型中之腫瘤生長之效應（試驗編號CA_AB_6)。 134531.doc -116- 200942233 圖5B顯示與Taxotere®相比，含有疏水性紫杉燒衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於結腸癌HT29異種移植模型中之體重變化之效應（試驗編號CA-AB-6)。圖6A顯示與Taxotere®相比，漸增濃度之含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於結腸癌HT29異種移植模型中之腫瘤生長之效應（試驗編號ABS-18)。圖6B顯示與Taxotere®相比，漸增濃度之含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒對於結腸癌HT29異種移植 0% ^ 模型中之體重變化之效應（試驗編號ABS-18)。圖7顯示含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒之重複劑量毒性。圖8顯示含有疏水性紫杉烷衍生物及白蛋白之奈米顆粒之顆粒分布及平均粒徑。圖9顯示奈米顆粒組合物Nab-2之顆粒溶解圖形。圖10顯示奈米顆粒組合物Nab-歐洲紫杉醇之顆粒溶解圖形。 ❹ 圖11顯示奈米顆粒組合物Nab-2及Nab-歐洲紫杉醇之正規化溶解圖形。 134531.doc 117-

Claims

200942233 十、申請專利範園： 1. -種包含奈米顆粒之組合物水性紫杉炫衍生物及_蛋白。4奈㈣粒包含疏 2. 如請求们之組合物’其中該疏水杉炫前藥。生物為紫 3. 如請求項…之組合物’其中該載體蛋白為白蛋白。 4. 如：求項3之組合物，其中該白蛋白為人血清白蛋白。太：述叫求項中任一項之組合物，其中該組合物包含 'd粒形式及非奈米顆粒形式之載體蛋自，且其於約25%之該載體蛋自係呈奈米顆粒形式。、 6.如前述晴求項中任一項之組合物其中該組合物米顆粒之平均直徑小於約綱㈣。之不如前述明求項中任一項之組合物其中該組合物中米顆粒之平均直徑小於約100 nm。 " 月J述4求項中任一項之組合物其中該組合物以上之太伞, 〇 ❹ 下八顆粒具有小於約100 nm之直徑。 9. 如前述請灰馆Λ , 靖中任一項之組合物，其中該組合物中以上之本半SB Α ”水顇粒具有小於約100 nm之直徑。 10. 如前述請灰馆+ , 崎中任一項之組合物，其中該疏水性紫杉衍生物具有下式：

134531.doc 200942233 其中 R為苯基或-OtBu ; R、R、R4及R5獨立地為]^或疏水基；且其中R2、r3、R4及R5中之至少一者不為H; 4其限制條件為當Rl為苯基且R2、R3及R5各自為H時， R4不為乙醯基部分基團；或其醫藥學上可接受的鹽、異構體或溶劑合物。 11 ❹ 如刖述請求項中任一項之組合物，其中該疏水性紫杉烷衍生物具有下式：

其中 R為苯基或-OtBu ; ❹ 12. R、R3、R4及 R5獨立地為11或_(：(〇)116; 每-R6獨立料選自絲、縣、炔基、環貌基、環烧基-院基、芳基、雜芳基、芳炫基及雜芳燒基之經取代或未經取代部分基團；且其中R2、R3、R4及R5中之至少-者不為H; 其限制條件為在Ri為苯基且以、r^r5各自為H時， R4不為乙醯基部分基團；或其醫藥學上可接受的鹽、異構體或溶劑合物。如請求項11之組合物，其中Ri為苯基。 I34531.doc 200942233 13.如請求項^之組合物，其中Ri為_〇tBu。 14·如請求項11-13中任一項之組合物，其中每一 R6獨立地為選自_ci-c15烷基、-cvCm烯基、-q-Ch炔基、_Cl_Cl5環院基、-CVC1S環烷基-烷基、芳基、5至7員雜芳基、芳炫:基及雜芳烷基之經取代或未經取代部分基團。 15·如明求項丨1-1〕中任一項之組合物，其中每一 R6獨立地為選自-CVc〗5烧基、-Ci-C!5；)^基及芳基之經取代或未經取代部分基團。 16.如請求項u_13中任一項之組合物，其中每一r0獨立地為經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之_CiCi5 燒基。青求項11-13中任一項之組合物，其中每一 R6獨立地為未經取代之芳基或未經取代之c15烷基。 18.如叫求項u]3中任一項之組合物其中每一作立地為未’呈取代之苯基或未經取代之甲基。 ❹19· ^求項1113中任一項之組合物其中每一心立地為未經取代之芳基。 20.如請求項“ 未經取代之 -13中任一項之組合物，其中每一笨基β R6獨立地為其中每一 R6獨立地為其中每一 R6獨立地為其中每一 R6為-CH3。 β，項11-13中任一項之組4 未經取代之·Ci_Ci5烷基。 22·如請求項叫3中任一項之㈣未經取代之_Cl_Ci。烷基。 23.如請求項11七中任-項之㈣ 134531.doc 200942233 24. 如請求項11-13中任一項之組合物，其中每一 R6 為-CH2CH3。 25. 如請求項11-13中任一項之組合物，其中每一 R6 為-(CH2)2CH3。 26. 如請求項11-13中任一項之組合物，其中每一 R6 為-(CH2)3CH3。 27·如請求項U_13中任一項之組合物其中每一 R6 為 _(CH2)4CH3。 28. 如請求項ιι·ι3中任一項之組合物其中每一 R6 為 _(CH2)5CH3。 29. 如咕求項11-13中任一項之組合物，其中每一 R6 為-(CH2)6CH3。 3如叫求項11-13中任一項之組合物，其中每一 R6 為-(CH2)7CH3。 31.如晴求項n_13中任一項之組合物其中每一 R6 為-(CH2)8CH3。如凊求項11 -3 1中任一項之組合物，其中R2、R3、R4及R5 中僅—者不爲Η。 33如凊求項⑴”中任一項之組合物，其中不為& 如”月求項11-33中任_項之組合物，其中r3不為H。 :求項11-34中任—項之組合物，其中r4不為Ηβ 奢求項11-35中任一項之組合物，其中r5不為Ηβ 37·如請求jgn ) 中任一項之組合物，其中R4為乙酿基部分基團且中僅一者不為H。 134531.doc 200942233 38. 如請求項1-10中任一項之組合物衍生物具有下式：

❹ 其中該疏水性紫杉烷其中 R2為-C(0)R6 ; 且R6獨立地為選自烷基基-烷基、芳基、雜芳基、未經取代部分基團；、烯基、炔基、環烷基、環烷芳烷基及雜芳烷基之經取代或或其醫藥學上可接受的鹽、異構體或溶劑合物。 39. ^求項38之組合物，其中r6為選自基、埤基及芳基之經取代或未經取代部分基團。

4〇·如請求項38之組合物，其中r6為經取代或未經取代之芳基或經取代或未經取代之烷基。 41’：：求項38之組合物，其中r6為未經取代之芳基或未經取代之-CrC15烷基。 42.如請求㈣之組合物’其中r6為未經取代之苯基或未經取代之甲基。月求項38之組合物，其中r6為未經取代之芳基。 .如4求項3 8之組合物，其中R6為未經取代之苯基。 5.如明求項38之組合物，其中R6為未經取代之CiC丨$烷基。 I34531.doc 200942233 46. 如0月求項38之組合物，其中R6為未經取代之-cvc^ 基。 47. 如請求項38之組合物，其中青求項38之組合物，其中r6為_(CH2)4CH3。 49. 如2求項38之組合物，其中R6為-(ch2)5ch3。 50. 如明求項_中任一項之組合物其中該疏水性紫杉烧衍生物具有下式：

或其醫藥學上可接受的鹽、異構體或溶劑合物。 5 L如吻求項1-50中任一項之組合物，其中根據HPLC，在 37°C下5% HSA中之溶解試驗中，在1〇 pg/m^，該等奈米顆粒具有大於約20 nm之粒度。 52·如请求項1-50中任一項之組合物，其中根據HPLC，在 37°C下5% HSA中之溶解試驗中，在50 gg/mi下，該等奈米顆粒具有大於約30 nm之粒度。 53. 如叫求項1-50中任一項之組合物，其中在37°C下5% HS A 中藉由HPLC量測時，該等奈米顆粒展現下列溶解圖形中之一或多者：a)在2〇〇 pg/mi下’大於約5〇 nin ; b)在 100 μ§/Γη1下，大於約40 nm ;及c)在10 pg/ml下，大於約 20 nm ° 54. 如請求項1-50中任一項之組合物’其中在37。〇下5% hsa 134531.doc 200942233 中藉由HPLC量測時，該等奈米顆粒展現下列溶解圖形中之或多者.a)在400 pg/ml下，大於約60 nm ; b)在 200 Hg/ml下’大於約50 nm; c)在1〇〇 jxg/ml下，大於約 40 ; d)在10 pg/mi下，大於約大於2〇 nm ; e)在5 pg/ml下，大於約2〇nme 55. 如清求項^50中任一項之組合物其中在下5% hsa 中量測時，該溶解圖形之EC5〇小於相同奈米顆粒調配物中未改質紫杉烷之EC 50之約25%。 56. 如請求項㈣中任一項之組合物，其中在投與靈長類動物時，該奈米顆粒組合物在投與後約〇〇5小時至約〇 3小時之間於血液中達到Cmax。 57.如請求項㈣中任一項之組合物，其中在投與靈長類動物時，該奈米顆粒組合物於血液中分解之最終半衰期為約1小時至約5小時。

58•-種治療個體之增生性疾病之方法，其包含投與該個體有效量之如前述請求項中任一項之組合物。〇發性骨髓結腸癌、 59. 如請求項58之方法，其中該增生性疾病為癌症 60. 如凊求項59之方法，其中該癌症為實體腫瘤。 61. 如請求項59之方法，其中該癌症係選自由多瘤、腎細胞癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌及乳癌組成之群。 62. 如請求項59之方法，其中該癌症為乳癌。 63. 如請求項59之方法，其中該癌症為印巢癌〇 64. 如明求項59之方法，其中該癌症為結腸癌。 134531.doc 200942233 65. 如請求項58-64中任一項之方法，其中組合物係非經腸投與。 66. 如請求項65之方法，其中組合物係靜脈内投與。 67. 種包3疏水性紫杉院衍生物之乳液，該乳液包含：⑷ 包3 3有冷解於該疏水性紫杉烷衍生物之疏隸紫杉燒衍生物之醇溶劑中的至少一部分疏水性紫 =何生物之奈米液滴的第一相，及㈨包含水及生物相谷聚合物之第二相 ❺ 一^目’其中該乳液大體上不含界面活性 ¥ 劑0 ❹ 134531.doc