TW200944225A - Cyclic compound and salt thereof - Google Patents

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200944225 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係一種醫藥組成物，其係關於適用爲治療真菌 病症，特別係深層真菌病症之醫藥組成物之有效成分的環 狀化合物。 【先前技術】 〇 深層真菌病症一般認爲係長時間對患者投予抗生素時 ，雖然去除了標的的病原菌，卻因可抵抗抗生素之真菌增 生而引發的病症（於此，存活之真菌異常地增殖的現象， 稱做細菌代換現象（microbial substitution))，亦即高 齡患者、術後患者、或正進行投予抗癌劑及免疫抑制劑之 患者，由於活體防禦功能被抑制變爲容易感染真菌，因該 真菌增殖而引發病症。 深層真菌病症的治療用藥有1)作用機轉爲阻礙真菌 〇 合成DNA之核酸鹼基系藥劑之氟胞嘧啶，及2)作用機轉 爲阻礙真菌合成細胞膜之多巨環內酯（Polyene macrolide )系藥劑之雙性黴素B、咪唑系藥劑之咪可納唑、以及三 哩系藥劑之氟康哩（Fluconazole)等抗真菌劑。 然而，雖已知如下所述之由3個鳥胺酸所構成之環狀 六胜肽之鐵色素（ferrichrome)(非專利文件1)，但於 該文獻中並無鐵色素具有抗真菌活性之記載。 -5- 200944225 [化i]

非專利文件 1 : Journal of American Chemical Society, 102期，pp.4224-423 1, 1 980年 【發明內容】 [發明欲解決之課題] 本發明係提供一種醫藥組成物，其係適用爲治療真菌 病症，特別係深層真菌病症之醫藥組成物之有效成分的化 合物。 〇 [解決課題之手段] 本發明之發明者們，針對自然存在的微生物所產生之 具抗真菌作用之化合物進行專心檢討後，發現稱爲真菌桃 色枝頂孢MF - 347833株之菌株，可產生具優異抗真菌作 用之化合物。進而詳細檢討該菌株之培養液，成功地自該 菌株之培養液分離出具優異抗真菌作用之環狀化合物，遂 完成本發明。 亦即，本發明係關於式（I)之化合物或其鹽，以及 -6- 200944225 含有式（I)之化合物或其鹽、及賦形劑之醫藥組成物。 [化2]

另外’本發明係關於含有式（I)之化合物或其鹽之 治療真菌病症之醫藥組成物，即爲含有式（I)之化合物 或其鹽之真菌病症治療劑。 本發明係關於爲製造治療真菌病症之醫藥組成物之式 (Ο之化合物或其鹽之使用，以及包含對患者投予式（I )之化合物或其鹽之有效量之治療真菌病症之方法。 [發明的效果] 式（I)之化合物或其鹽可使用爲真菌病症，特別係 深層真菌病症等之預防及/或治療劑。 [實施發明之最佳方式] 以下詳細說明本發明。 本發明之化合物有時也會形成與鹼基之鹽。相關的鹽 200944225 具體而言可舉出與鈉、鉀、鎂鈣等無機鹼基、甲基胺、乙 基胺、乙醇胺、離胺酸、鳥胺酸等有機鹼基之鹽。另外， 鹽亦包含錯鹽及螯合化合物。形成相關鹽的金屬可舉出2 價或3價之金屬，例如可舉出鐵、鋁、鎵等。 以下，於本說明書中有時會將 式（I)之化合物之游離體記載爲化合物A、 式（I)之化合物之鋁鹽記載爲化合物B、 式（I)之化合物之鐵鹽記載爲化合物C、 式（I)之化合物之鎵鹽記載爲化合物D。 式（I)之化合物中能存在幾何異構物。本說明書中 ，式（I)之化合物有時僅以異構物的一個型態被記載， 但本發明亦包含其以外之異構物，及包含異構物經被分離 者，或該等之混合物。 另外式（I)之化合物中也有具有不對稱碳原子之情 況，以此爲基礎能存在光學異構物。本發明係包含式（I )之化合物之光學異構物經被分離者，或該等之混合物。 本發明進而包含以式（I)所示之化合物之製藥學上 被容許之前驅藥物。製藥學上被容許之前驅藥物係指於藉 由加溶媒分解或於生理學之條件下，具有能夠被變換爲圬 基等基之化合物。 本發明亦進而包含式（I)之化合物或其鹽之各種水 和物及溶媒和物，以及結晶多形之物質。另外，本發明亦 包含各種被放射性或非放射性同位素標誌後之化合物。 產生式（I)之化合物或其鹽之微生物的菌學性質如 -8- 200944225 下所示。 (1 )生產菌之由來 真菌頂孢黴屬MF- 347833株，係採集自馬來西亞之 新山州（Johor Bahru)的Endau Rompin國家公園內之腐落 葉植物所分離的。本菌株目前寄存於獨立行政法人產業技 術綜合硏究所專利生物寄存中心，寄存號碼爲FERM BP — 〇 10916 (寄存日爲2007年10月10日），並以寄存號碼BCRC 930 1 1 9寄存於食品工業發展硏究所。 (2)生產菌之型態學性質 型態上之特徵係觀察於馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基上之 型態而判定。於馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基（DifC0公司製 之2010 )上生長旺盛，於25 °C下2週後擴展至直徑爲39_ 41mm >亦發現形成分生孢子。菌落表面爲羊毛狀（ ❹ floccose)，菌落周圍則爲波浪狀（undulate)。雖自中央 部位向周圍部位產生數條放射狀的溝，但難以自表面確認 。菌落爲白色（white，1A1 )，但中央部位爲稍淺之黄白 色（yellowish white，4A2)。於菌落背面可確認自中央部 位向周圍部位產生呈現放射狀的溝。整體顏色爲淺米色（ ivory，4A3 )’但菌落之中央部位爲淺棕色（mustard brown, 5E6 )。於30°C下2週後菌落之直徑爲約24mm， 未發現於5°C與3 7°C下有生長情形。 玉米萃取液洋菜培養基（Difco公司製之0386) 上生 200944225 長旺盛，於25°C下2週後擴展至直徑爲39-40mm。菌落表面 爲氈狀（felty )。菌落周圍則爲波浪狀（undulate )且菌 落中未產生溝。菌落爲白色（white, 1A1 )。菌落背面亦 爲白色（white，1A1)。於30°C下進行培養2週後菌落之直 徑爲約14mm。菌落表面未產生溝。未發現於5°C與37 °C下 有生長情形。 營養菌絲粗細爲1.8 _ 2.7 /zm，未觀察到厚膜孢子，分 生孢子柄無分枝，無色且單生於營養菌絲或細長之孢子束 。分生孢子柄表面存在許多小的疣狀突起，分生孢子柄的 根部有隔膜。分生孢子形成樣式爲瓶梗型，自分生孢子柄 根部至瓶梗前端長度爲33-40 #m。分生孢子爲無色的橢圓 形，大小爲3.7-4 ·5χ2·8-3.2/ζ m (平均爲4x3" m)。稍具 黏性，瓶梗前端形成孢子塊。以光學顯微鏡（4 00倍）可 見孢子的表面呈現平滑，但以電子顯微鏡（9000倍）觀察 則可確認呈劇烈凹凸形狀。 該等型態上之特徵暗示本菌屬於頂孢黴屬之可能性。 根據 Cephalosporium-artige Schimmelpilze ( Hyphomycetes )/Walter Gams ( 1971)比較檢討後，結果與 Gliomastix 節之桃色枝頂孢型態上之特徵十分一致。另外，檢索本菌 之28SrDNA與18SrDNA之相似性後，由於其包含於 Gliomastix節之桃色枝頂孢之群（clade )，形態上及基因 上均無矛盾。因此鑑定本菌爲桃色枝頂孢，並稱其爲桃色 枝頂孢MF - 347833株。 200944225 (3 )培養特性 培養特性係根據市售上培養基，以及以記載於文獻之 組成所調製之培養基而進行判定。分別購買Difco公司製 之2010馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基、Difco公司製之0109沙 氏葡萄糖洋菜培養基、Difco公司製之0739EmerS〇n YpSs 洋菜培養基、Difco公司製之03 86玉米萃取液洋菜培養基 、Difco公司製之0552燕麥洋菜培養基。麥芽萃取洋菜培 Φ 養基、Czapek氏液狀洋菜培養基、MY20洋菜培養基之組 成係遵循 JCM 目錄（Nakase，T. 6th ed·, ρρ·617，Japan Collection of Microorganisms, the Institute of Physical and Chemical Research, Saitama, 1 9 9 5 ) o 觀察真菌MF- 3 47 833株自接種於各洋菜培養基開始 於25 °C下進行培養14天之情形。色調之記載係參照 Methuen Handbook of Colour (Kornerup, A. and J. H. Wanscher, 3rd e d. pp. 252, Methuen, London, 1 987) ° 有關 〇 生長溫度係於馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基（Difco公司製之 2010 )上進行判定。 -11 - 200944225 [表i] 桃色枝頂孢MF - 347833株之培養特性 培養基 培養特性 生長：旺盛。直徑30-31mm 麥芽萃取洋菜 表面：圓形且周圍邊緣成波浪狀、羊毛狀、白色(1A1) 背面：淺黃色〜淺橘色(5A3) 生長：旺盛。直徑39-41mm 馬鈴薯葡萄糖洋菜 (Difco 2010) 表面：圓形且周圍邊緣成波浪狀、羊毛狀、 白色(1A1)〜黃白色(4A2) 背面：形成溝。淺米色(4A3)。 中央部位爲淺棕色(5E6) Czapek^'^^洋菜 生長：旺盛。直徑57-59mm 表面：圓形且周圍邊緣爲正圓。毵狀、 中央部位稍爲紅灰色(7B3)但整體爲白色(1A1) 背面：淺橘色(5A2) 生長：旺盛。直徑32-33mm 沙氏葡萄糖洋菜 表面：圓形且周圍邊緣成波浪狀。形成線條。 (Difco 0109) 羊毛狀、白色(1A1) 背面：形成溝。黃白色(4A2) 生長：旺盛。直徑36-38mm Emerson YpSs 洋菜 表面：圓形且周圍邊緣成波浪狀。耗狀、 (Difco 0739) 整體爲白色(1A1) 背面：淺橘色(5A2) 生長：旺盛。直徑39-40mm 玉米萃取液洋菜 表面：圓形且周圍邊緣成波浪狀。氈狀、 (Difco 0386) 整體爲白色(1A1) 背面：白色(1A1) 生長：旺盛。直徑34-35mm MY20洋菜 表面：圓形且周圍邊緣爲正圓。羊毛狀、 整體爲白色(1A1) 背面：淺黃色(4A4) 生長：旺盛。直徑5〇-51mm 燕麥洋菜 表面：圓形且周圍邊緣爲正圓。羊毛狀、 (Difco 0552) 中央部位爲淺黃色(4A2)但整體爲白色(1A1) 背面：淺黃色(4A4)

-12- 200944225 另外，本菌株有時會有人工的或天然的變異，於本發 明中所使用之真菌桃色枝頂孢MF - 3 4783 3株，除自自然 界所分離出之微生物之外，亦包含使其以紫外線、放射線 '化學藥劑等進行人工變異者以及該等之天然變異株。 (生產方法） 本發明之化合物係培養具有生產本發明化合物之能力 〇 之頂孢黴屬微生物而得。培養係以一般微生物之培養方法 爲準而進行。 培養基以選用含有真菌桃色枝頂孢MF - 347833株可 利用營養源之培養基爲佳，可使用合成培養基、半合成培 養基或天然培養基。培養基之組成做爲碳源者例如爲L-樹 膠醛醣、D-木醣、D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖、肌醇、L-鼠 李糖、棉實糖、D-甘露糖醇、甘露糖、密二糖、乳糖、D-半乳糖、麥芽糖、海藻糖、水楊甘、葉黃素、幾丁質、澱 〇 粉、葡萄糖、葡聚糖、甘油、植物油等，氮源爲牛肉.萃取 物、消化蛋白質、筋粉、棉實粕、大豆粉、花生粉、魚粉 、玉米漿、乾燥酵母、酵母萃取液、氯化銨、硫酸銨、硝 酸銨、尿酸之外，使用有機、無機之氮來源。另外金屬鹽 可爲鈉、鉀、鎂、鈣、錫、鈷等之硫酸鹽、硝酸鹽、碳酸 鹽、磷酸鹽等可因應需要而添加。可進而因應需要添加蛋 胺酸、半胱胺酸、胱胺酸、硫代硫酸鹽、油酸甲酯、豬油 、二氧化矽油、界面活性劑等促進生成物質或消泡劑。 培養條件一般於好氧的條件下進行培養較有利，培養 -13- 200944225 溫度範圍於8.9〜31.2t，以於26.0〜27.6°C附近進行爲佳 。培養時間可因應培養基之組成、溫度條件適宜地加以設 定，但一般1〜30天左右，以2〜7天爲佳。 自培養物純化本發明化合物並進行分離之方法，可使 用一般自微生物之培養物純化具生理活性物質並進行分離 之方法。亦即，自培養物以適當的有機溶媒進行萃取，再 對該萃取物進行純化而分離出有效物質。亦即以抗真菌活 性爲指標，利用對於適當的溶劑之溶解性以及溶解度之差 別，藉由一般於製造生理活性物質所使用之方法而進行分 離、純化。該等方法可因應需要單獨使用，或以任意順序 進行組合、反覆進行。其他的純化方法可使用將原本之培 養物，或經離心分離、進行過濾後去除菌體之後，利用對 於適當的溶劑之溶解性以及溶解度之差別、自溶液析出速 度之差別、對各種吸附劑吸附親和性之差別、於2種液相 間分配之差別等方法。具體而言可舉出例如使培養液與適 當的載體接觸後使該化合物吸附，接著再藉由以適當的溶 媒進行溶出而純化該化合物之方法。可因應需要將該等方 法單獨使用，或以任意順序進行組合、反覆進行。 本發明之化合物，式（I)之化合物之鹽，係可於式 (I )之化合物中，將無機鹽（例如AlK(S〇4)2 · 12H2〇、 FeCl3 · 6H20 ' Ga2(S04)3 · ηΗ20等）使其於不會影響反應 之溶媒中，由室溫至加溫條件下進行反應而製造。溶媒無 特別限定，可舉出例如甲醇等含醇類之水溶液。反應溫度 以1 0 °C〜5 0 °C爲佳。 -14- 200944225 本發明之環狀化合物（I)或其鹽，可藉由於營養培 養基培養該物質之生產菌，再由蓄積該化合物之培養物中 依尋常用方法而得。於該化合物之製造方法中所使用之微 生物係屬於頂孢黴屬，可使用任一種具有產生該化合物之 能力之微生物。 含有1種或2種以上之式（I)之化合物或其鹽爲有效 成分之醫藥組成物，可使用於該領域中常使用之賦形劑， 〇 亦即藥劑用賦形劑及藥劑用載體等，根據常用方法而進行 調製。 投予可爲錠劑、九劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液劑 等經口投予，或爲關節內、靜脈內、肌肉內等之注射劑、 坐劑、點眼劑、眼軟膏、經皮用液劑、軟膏劑、經皮用貼 付劑、經黏膜液劑、經黏膜貼付劑、吸入劑等非經口投予 之任一種型態。 爲進行經口投予之固體組成物可使用錠劑、散劑、顆 Ο 粒劑等。於該等固體組成物中，可將1種或2種以上之有效 成分’與至少一種的低活性賦形劑例如乳糖、甘露糖醇、 葡萄糖、羥基丙基纖維素、微結晶纖維素、澱粉、聚乙烯 批略烷酮、及/或鎂鋁矽酸鹽等進行混合。組成物可根據 常用方法亦可含有低活性添加劑例如硬酯酸鎂之滑澤劑， 及竣甲基澱粉鈉等崩解劑、安定劑、溶解輔助劑。錠劑或 九劑可根據需要以糖衣或胃溶性或腸溶性物質之薄膜進行 被膜。 爲進行經口投予之液體組成物含有於藥劑學上被容許 -15- 200944225 之乳濁劑、溶液劑、懸濁劑、糖漿劑或酏劑等，及含有一 般所使用之低活性稀釋劑例如純化水或乙醇。該液體組成 物除低活性稀釋劑之外亦可含有如可溶化劑、濕潤劑、懸 濁劑之輔助劑、甜味劑、風味劑、芳香劑、防腐劑。 爲進行非經口投予之注射劑含有無菌之水性或非水性 之溶液劑、懸濁劑或乳濁劑。水性溶劑可舉出包含例如注 射用蒸餾水或生理食鹽水溶液。非水性之溶劑可舉出例如 丙二醇、聚乙二醇或如橄欖油等之植物油、如乙醇之醇類 、或聚山梨醇酯80(藥典名）等。而該等組成物可進而含 有等張化劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、安定化 劑、或溶解輔助劑。再將該等物質通過可濾細菌過濾器進 行過濾、混合殺菌劑或輻射照射而進行無菌化。另外，可 將該等物質製造爲無菌之固體組成物，於使用前以無菌水 或無菌之注射用溶媒進行溶解或懸濁後再使用。 外用劑包含軟膏劑、硬膏劑、乳霜劑、凝膠劑、泡沫 劑、噴霧劑、乳液劑、點眼劑、眼軟膏等。含有一般所使 用之軟膏基劑、乳液基劑、水性或非水性之液劑、懸濁劑 、乳劑等。軟膏或乳液基劑可舉出例如聚乙二醇、丙二醇 、白色凡士林、蜜蟣、聚氧乙烯氫化蓖麻油、單硬酯酸乙 酯、硬酯酸醇、鯨蠟醇、聚桂醇、山梨醇倍半油酸酯等。 吸入劑及經鼻劑等經黏膜劑可使用固體、液體或半固 體狀者，可根據以往周知之方法進行製造。例如適當地於 周知之賦形劑中進而添加pH調整劑、防腐劑、界面活性劑 、滑澤劑、安定劑及增黏劑等亦可。投予可使用爲吸入或 -16- 200944225 吹送適當的裝置。例如可使用計量投予吸入裝置等周知之 裝置及噴霧器，將化合物單獨地或經處方之混合物的粉末 ’或於醫藥上被容許之載體組合後，成爲溶液或懸濁液而 進行投予。乾燥粉末吸入器等，可用於單次或數次投予用 者’可利用乾燥粉末或含乾燥粉末之膠囊。或者可使用適 當的推動劑，例如氟氯烴類、氫氟烷烴或二氧化碳等適合 氣體，而爲加壓氣霧噴劑等型態。 ❹ 一般經口投予時，1天的投予量約相當於每公斤體重 爲0.01〜100mg/kg’以0.1〜10mg/kg較爲適當，將其以 1次’或分做2次〜4次進行投予。進行靜脈內投予時，1天 的投予量約相當於每公斤體重爲0.01〜lOOmg / kg，1天1 次〜分做數次進行投予。投予量可考慮症狀、年齡、性別 等因應各個狀況而適當地加以決定。 式（I)之化合物或其鹽，可與被認爲前述之式（I) 之化合物或其鹽顯示有效性之疾病之各種治療劑或預防劑 Φ 進行倂用。該倂用可爲投時投予，或各別地連續地進行投 予，或可於所期望的時間間隔進行投予。投時進行投予之 製劑，可爲混合劑或可爲經各別製劑化者。 【實施方式】 [實施例] 以下以實施例爲基礎，將式（I)之化合物或其鹽之 製造方法更詳細地說明。且本發明並未限定於下述實施例 所記載之化合物。另外，式（I)之化合物或其鹽之製造 -17- 200944225 方法，亦非僅限定於以下所示之具體的實施例之製造法， 式（I)之化合物或其鹽可組合該等製造方法，或可根據 相關業者當然之方法進行製造。 另外，於實施例、製造例以及後述表中，有時會使用 以下之略碼。 [表2]

賴 Full name AlK(S〇4)2 . 12H20 硫酸鋁鉀12水合物 CHC13 氯仿 FeCl3 · 6H20 氯化鐵(瓜)6水合物 Ga2(S04)3 · ηΗ20 硫酸鎵(瓜冰合物 KC1 氯化鉀 KH2PO4 磷酸二氫鉀 MeCN 乙睛 MeOH 甲醇 MgS04 · 7H20 硫酸鎂7水合物 NaN03 硝_ (NH4)2S04 硫酸錶 TFA 三氟醋酸 HR ESI MS 高解析電灑式MS 實施例1 (化合物A之培養生產） 將基礎培養基1 (參照表3，30mL)分注至三角燒瓶（ 尺寸：100mL)中，以高壓蒸氣滅菌器進行滅菌（121°C， 30分鐘）。於該基礎培養基1，以白金耳釣無菌方式進行 真菌MF - 347833株之斜面培養物（斜面培養物）之植菌 -18- 200944225 後，於25°C下進行4天以旋轉搖盪器之震盪培養（ 220rpm )。其次，將生產培養基1(參照表4，lOOmL )分注至三 角燒瓶（尺寸：500mL)中，以高壓蒸氣滅菌器進行滅菌 (121 °C，30分鐘）。於該燒瓶以無菌方式植入基礎培養 物（2mL)，於25 °C下進行7天以旋轉搖盪器之震盪培養 ( 220rpm)。培養係於以HPLC進行分析同時進行（分析 HPLC1，條件參照表5 )。 〇 [表3] 基礎培養基1 培養基成分 含有率(％) 玉米濺粉 2 甘油 1 蔗糖 1 藥劑培養基 1 筋粉 1 Tween 80 0.2 ❷ [表4] 生產培養基1 培養基成分 含有率(％) 葡萄糖 0.5 可溶性殿粉(NACALAI公司製） 1.5 酵母萃取物(和光純藥工業公司製） 0.5 KC1 0.02 MgS04· 7H20 0.02 KH2P〇4 0.1 NaN03 0.2 19- 200944225 [表5] 分析HPLC1之條件 管柱q Miehtvsil RP-18 GP 150-4.6(5μιη)關東化學公司製 移動相 MeCN :水=28 : 72(ν/ν)(含0·5%ΝΗ4Η2Ρ〇4) 流速 lmL/分 檢測波長 210nm 留滯時間 約4.2分 (化合物A之分離純化） 於以上述之培養方法所得之培養物（2.6L )中添加等 量之丙酮，攪拌1小時後進行過濾而得培養萃取物。於該 培養萃取液中加入2倍量之水，再使其通過Diaion SP 850 管柱（尺寸：400mL，三菱化學公司製），以混合溶媒{丙 酮：水= 30: 70(v/v) ，1.9L}進行溶出。 於該溶出液中加入水（2.1L)，再使其通過Daisogel SP-120-ODS-B 管柱（尺寸：3 50mL，15/30"m，DAISO 公司製），以混合溶媒{MeCN :水=2 5 : 75 ( v/ v )， 340mL}進行溶出。 於該溶出液中加入水（ 350mL)，再使其通過OASIS HLB層析管柱（尺寸：6g，Waters公司製），以MeOH ( 150 mL)進行溶出。將該溶出液進行減壓濃縮，添加丙酮 後得沉源物。將該沉澱物進行乾燥後得黃色粉末（l〇〇mg )° 取該黃色粉末（15mg)溶解於少量之Me〇H，以製備 HPLC1進行純化（條件參照表6)。製備溶出時間爲約22 分之區段。於該取出區段之沖堤液中加入等量的水，再使 200944225 |S@〇ASIS HLB® 丰斤^主（R4:5〇〇mg) ’ 以水（5〇 mL )進行通液後，再以MeOH ( 50 mL )進行溶出。& 印將該 溶出液進行減壓濃縮，添加丙酮後得沉澱物。將該 Μ彳几锻物 進行乾燥後得化合物A( 13mg)之白色粉末。 [表6] 製備HPLC1之條件 管柱 Symmetry 7/i m C18管柱，19x300mm，Waters^wjg^'--- 移動相 MeCN :水=27 : 73(v/v)(含0.05%TFA)' 流速 7mL/分 ' — -----

(化合物A之物理化學上之性質） 以上述方法進行純化分離後之化合物A，顯示& 理化學上之性質。 [表7] 化合物Α物理化學上之性質 顏色及形狀 白色粉末 旋光度 Γα]〇25 -57 °(c 0.01, MeOH) 分子式 〇4〇Η62Νΐ〇〇13 HR ESI-MS Found 891.4592(M+H)+, Calcd 891.4576 IR(KBr) cm'1 3300, 2950, 1680, 1650,1640,1540, 1460,1420,1240,1210, 1160, 1040,970 h-NMR分析圖譜 如圖1所示 13C-NMR之分析圖譜 如圖2所示 〇 化合物A之化學構造根據物理化學性質決定如下述式 (Π)所述。針對構造胺基酸之立體結構，係適用改良 -21 - 200944225

Murphy法，並決定爲D-Phe，L-Leu，L-Asn。有關鳥胺酸 部分，與相似之天然物鐵色素（非專利文件1 )相比較， 由胺基酸分析得知3個胺基酸爲相同，推測爲L·鳥胺酸。 [化3]

(II) ❹ 實施例2 (化合物B及C之培養生產） 將基礎培養基2(參照表8)分注（30mL )至三角燒瓶 (尺寸：lOOmL)中，以高壓蒸氣滅菌器進行滅菌（121°C ，30分鐘）。於該培養基使用白金耳釣以無菌方式進行真 菌MF - 3 47 83 3株之斜面培養物（斜面培養物）之植菌後 ，於25°C下進行4天以旋轉搖盪器之震盪培養（ 220rpm) 〇 其次，將相同組成之基礎培養基（160mL )分注至三 角燒瓶（尺寸：500mL )中，以高壓蒸氣滅菌器進行滅菌 (121 °C，30分鐘）。於該基礎培養機中以無菌方式植入 基礎培養物（3.2 mL )，於25 °C下進行3天以旋轉搖盪器 -22- 200944225 之震盪培養（ 220rpm)。 其次，預先調製生產培養基2(參照表9)，再將該生 產培養基2(2 0L)注入發酵槽（尺寸：30L)，進行滅菌 (121 °C，30分鐘）後，以無菌方式植入基礎培養物（480 mL)。培養條件係通氣量爲20L/分，攪拌速度爲200rpm ，於25 °C下進行7天之培養。培養係於以HPLC進行分析同 時進行（分析HPLC2，條件參照表1 1 )。 〇 另外，使用生產培養基3取代生產培養基2以相同培養 條件可進行生產。 [表8]

基礎培養基2 培養基成分 含有率(％) 玉米源粉 2 甘油 1 蔗糖 1 藥劑培養基 1 筋粉 1 Tween 80 0.2 -23- 200944225 [表9] 生產培養基2 培養基成分 含有率 葡萄糖 - 可溶性锻粉(NACALAI公司製） 1.5 '^ 酵母萃取物(和光純藥工業公司製） Adekanol LG-109(ADEKA公司製） -----〜 0.05 二氧化砂KM-70(信越化學工業公司製） --- 0.05 KC1 0.02 MgS04 · 7H20 0.02 ^、 KH2P〇4 0.1 NaN03 0.2 、 [表 10] 生產培養基3 培養基成分 含有率 蔗糖 4 ^ 乾燥酵母潮日食品及健康關懷公司製） 1.5^^ (NH4)2S〇4 0.5 ''^' 碳酸鈣 0.5 ^〜 [表 11] 分析HPLC2之條件 管柱 移動相 流速 檢測波長 留滯時間

Mightysil RP-18 GP 15〇-4.6(5 ;m)關東化學ggpT MeCN :水=28 : 72(v/v脸0·5%ΝΗ4Η2Ρ〇4) lmL/分 _21〇mn^ 化合物B(約8.7分）$合物g(約1〇ϋ (化合物Β及C之分離純化） 200944225 於以上述之培養方法所得之培養物（生產培養基2: 90L )中添加等量之丙酮，攪拌1小時後進行過濾而得培養 萃取物。於該培養萃取液中加入等量之水，再使其通過 Diaion SP 850管柱（10L，三菱化學公司），以混合溶媒{ 丙酮：水= 40: 60 (v/v) ，40L}進行溶出。 於該溶出液中加入等量的水，再使其通過Daisogel 3?-120-008-8管柱（15/30//111，尺寸：21^，0人180公司 〇 製），以混合溶媒{MeCN :水=25 : 75 ( v/ V ) ，7L}進 行溶出。 於該溶出液中加入等量的水，使其再度通過Daisogel 8?-12 0-00 8 4管柱（尺寸：21〇 ，以混合溶媒{MeCN :水 =27.5 : 72.5 (含 0.05%TFA) ( v/v) }進行溶出。 於該溶出液中加入等量的水，使其再度通過Daisogel SP-120-ODS-B管柱（尺寸：180mL)，以MeOH進行溶出 ，將該溶出液進行減壓濃縮。 參 將殘渣以少量的MeOH溶解，以製備HPLC2進行純化 (條件參照表1 2 )。 溶出時間爲約24〜25分之區段加入等量的水，使其通 過OAS IS HLB層析管柱（尺寸：6g，Waters公司製），以 水（100 mL )進行通液後，再以MeOH ( 1 〇〇 mL )進行溶 出。將該溶出液進行減壓濃縮，除去水後，藉由冷凍乾燥 ，得粉末狀之化合物C ( 130mg )。將該粉末以溶媒（ MeOH、醋酸乙醋、正己院）進fj結晶化，得化合物c之橘 色結晶。 -25- 200944225 將對溶出時間爲約19〜21分之區段進行相同操作後所 得粉末’以CHCh溶解後，以矽凝膠管柱色層分析儀（球 狀6 0>1’中性，4〇-1〇〇以111，關東化學股份有限公司製， CHC13 : MeOH =10: 1)進行純化。將該溶出液進行減壓 濃縮，除去水後，藉由冷凍乾燥，得白色粉末狀之化合物 B ( 150mg )。將該粉末（109mg)以溶媒（MeOH、醋酸 乙酯、正己烷）進行結晶化，得無色結晶之化合物B( 9 0.1 m g )。 [表 12] 製備Η P L C 2之條件 管柱 Mightysil RP-18 GP管柱250x20mm Π).、關東化學公司製 移動相 MeCN :水=30 : 70(v/v)(含0.05%TFA) 流速 10mL/分 (化合物Β之物理化學上之性質） 以上述方法進行純化分離後之化合物Β’由於顯示以 下物理化學上之性質’推測爲化合物Α與鋁之比例爲1 : 1 之化合物。 200944225 [表 13] 化合物B物理化學上之性質 顏色及形狀 無色結晶 旋光度 Tab25 +210 °(c 0.01, MeOH) 分子式 C40H59AIN10O13 HR ESI-MS Found 951.4191(M+H)+, Calcd 915.4157 IR(KBr) cm*1 3300,2930, 1680,1650,1620,1520,1370, 1240, 1140, 990 融點 295〇C h-NMR分析圖譜 如圖3所示 13C-NMR之分析圖譜 如圖4所不 (化合物C之物理化學上之性質） 以上述方法進行純化分離後之化合物C，由於顯示以 下物理化學上之性質及自單結晶X繞射構造解析，決定爲 化合物A與鐵之比例爲1 : 1之化合物。 [表 14] 化合物C物理化學上之' 生質 顏色及形狀 橘色結晶 旋光度 Tab25 +256 °(c 0.01, MeOH) 分子式 C4〇H59FeN 1 〇〇i3 HRESI-MS Found 944.3693(M+H)+, Calcd 944.3691 單結晶X繞射構造解析 a= 13.850(1) A, b= 15.135(1) A, c=24.290(2) A, V=5091.6(6) A3 實施例3 (化合物D之製造） 將化合物A ( 4mg )溶解於MeOH ( 0.4mL )與水（ -27- 200944225 0.4mL )之混合溶媒中，再加入Ga2 ( SO4 ) 3 · ηΗ20 ( 10mg)之水溶液（1.2mL)，於2 5 °C下進行攪拌1 Μ、時。 於反應液中加入水（18 mL)，使其通過OASIS HLB層析管 柱（Waters公司製），以水（6mL )進行通液後，再以 MeOH ( 4mL )進行溶出。將該溶出液進行減壓濃縮，得 白色粉末狀之化合物D(4mg)。 (化合物D之物理化學上之性質） 以上述方法所製造之化合物D，由於顯示以下物理化 學上之性質，推測爲化合物A與鎵之比例爲1 : 1之化合物 [表 15] 化合物D物理化學上之性質 分子式 C4〇H59GaNi〇〇i3 HRESI-MS Found 957.3597(M+H)+, Calcd 957.3597 t-NMR分析圖譜 如圖5所不 13C-NMR之分析圖譜 如圖6所τκ 實施例4 (抗真菌活性測定法） 以下述表所示之對於檢測菌之抗真菌活性，係使用微 量 '液體稀釋法（久米光，山崎敏和著，臨床與微生物，21 期5號，5 73-5 8 0頁，1 994年）進行測定。其結果，化合物 B對各種檢測菌之抗菌活性試驗之結果如下表所載。 -28- 200944225 [表 16] 化合物B之最小有效濃度（MEC) 檢測菌 MEC("g/mL) 克柔假絲酵母菌FP1979 0.31 光滑假絲酵母菌FP1944 0.31 高裏假絲酵母菌FP2086 0.31 近平滑假絲酵母菌FP1980 0.39 新型隱球菌FP1739 0.2 薰煙色麴菌FH305 0.31 土麴菌 SR0174 0.31 黑麹菌ATCC6275 0.78 黃麴菌ATCC9643 0.2 Trichosporon asashii FP2044 0.2 腐皮鐮孢FP1930 0.2 Pseudoallescheria boydii FP1987 0.2 米根黴FP1988 25 鬚髮癬菌FP2103 0.78 紅色毛癬菌FP596 1.25 碰孢菌AHU9258 0.1 根據上述試驗結果，確認式（I)之化合物或其鹽具 有抗真菌作用。因此，式（I)之化合物或其鹽可使用於 真菌病症，特別係深層真菌病症等例如副鼻腔炎真菌病症 之治療。 另外，例如鐵色素（自Sigma購入）對薰煙色麹菌 FP 1 3 05 之 MEC 爲 50// g/mL 以上。 實施例5 -29- 200944225 (細胞傷害性測定法） 對細胞之傷害性係於小鼠之T淋巴腫瘤細胞株之EL-4 細胞，添加入試驗藥劑之各種濃度，並於C02培養箱中於 3 7 °C下培養72小時後，使用細胞計數試劑組（和光純藥工 業公司製）測定細胞數，以計算IC5Q而進行判定。 其結果例如化合物B，於50 # g/ mL之濃度時並未顯 示對EL-4細胞之傷害性。 [產業上之利用可能性] 式（I)之化合物或其鹽可使用爲真菌病症，特別係 深層真菌病症等之預防及/或治療劑。 以上本發明沿用特定的方式進行說明，但相關業者當 然的改變及改良亦包含於本發明之範圍內。 【圖式簡單說明】 [圖1]圖1係化合物A之1H-NMR之分析圖譜。（測定溶 媒爲 d6-DMSO ) [圖2]圖2係化合物A之13C-NMR之分析圖譜。（測定溶 媒爲 d6-DMSO ) [圖3]圖3係化合物B之1H_NMR之分析圖譜。（測定溶 媒爲 d6-DMSO ) [圖4]圖4係化合物B之13C-NMR之分析圖譜。（測定溶 媒爲 d6-DMSO) [圖5]圖5係化合物D之1 H-NMR之分析圖譜。（測定溶 200944225 媒爲 d6-DMSO ) [圖6]圖6係化合物D之13 C-NMR之分析圖譜。（測定溶 媒爲 d6-DMSO )

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Claims (1)

1. 200944225 七、申請專利範圍： I—種化合物或其鹽，其係如式（I)所示， [化1]

   2.如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其中申請 專利範圍第1項中之化合物之鹽係與鋁或鐵之鹽。 3·如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其中申請 專利範圍第1項中之化合物之鹽係與鋁之鹽。 4. 一種菌株，其寄存號碼係BCRC 93 0 1 1 9之桃色枝頂 孢 MF - 347833 株(Acremonium persicinum MF - 347833 株 )° 5. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其係培養. 如申請專利範圍第4項之菌株，再藉由對該培養液進行萃 取·純化而可得。 6. —種如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽之製造 方法，其係包含培養屬於真菌枝頂孢屬之菌株’再自該培 養液中分離出式（I)之化合物。 7. 如申請專利範圍第6項之製造方法’其中屬於真菌 枝頂孢屬之菌株係申請專利範圍第4項之菌株。 200944225 8. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其中申請 專利範圍第1項中之化合物之鹽係與鎵之鹽。 9. 一種醫藥組成物，其特徵爲含有如申請專利範圍第 1項之化合物或其鹽、以及於製藥學上被容許之賦形劑。 10·—種使用於預防或治療真菌病症之醫藥組成物， 其特徵爲含有如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽。 11. 一種如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽之使用 ❹，其 特徵爲使用於預防或治療真菌病症之醫藥組成物之製 造者。 12·—種如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽之使用 ，其特徵爲使用於預防或治療真菌病症者。 13.—種預防或治療真菌病症之方法，其特徵爲包含 對患者投予申請專利範圍第1項之化合物或其鹽之有％^ 〇 ❹ -33-