TW200930358A - Anti-fatigue agent containing arachidonic acid as active ingredient - Google Patents

Description

200930358 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關以花生四烯酸、使花生四烯酸爲構成脂 肪酸之化合物、或該等物質之混合物爲有效成份之抗疲勞 劑，以及具有抗疲勞作用之醫藥組成物（包含功能性食品 〇 【先前技術】 疲勞是一種一般主要症狀爲疲勞感、倦怠感，但也伴 隨其他如睡眠障礙及慾望降低等各種症狀之疾病。疲勞感 及倦怠感是提醒身體出現異常的一個重要的警示訊號，在 健康時進行激烈運動、長時間的勞動及處於過度壓力等狀 況時，可自覺出疲勞感及倦怠感。這種生理上的疲勞通常 可藉由讓身體休息而恢復至原本的正常狀態，不會長時間 持續。在1985年總統府所進行的「與健康有關的國民意 〇 識調查」中，約有六成多的人表示感到疲勞，而在表示感 到疲勞的人當中有七成的人回答「藉由一個晚上的睡眠可 恢復疲勞」。然而，進年來該傾向不斷地在改變當中。根 據1 999年所進行之厚生省疲勞調查硏究班所實施之疫學 ^ 調查，報告指出自覺有疲勞的人當中，有六成的人感覺到 疲勞已持續六個月以上。亦即自1985年至19 99年這14 年間，苦於慢性疲勞的人增加，且疲勞的性質也已產生變 化（非專利文件1)。因此目前慢性疲勞症候群（Chronic Fatigue Syndrome ; CFS)所造成的疾病以及過勞死，變成 -5- 200930358 一個相當大的社會問題。然而，與疲勞有關的原因 機轉相當地多，雖有許多學者正在進行硏究當中， 掌握其全貌，且目前尙未確立慢性疲勞症候群及過 起因於疲勞之疾病之明確的治療或預防方法。 最近報告指出一種具有疲勞減輕作用，及可提 勞狀態恢復爲正常狀態作用等，亦即被稱爲「抗疲 」之物質。例如報告有某種胺基酸組成物（專利文件 0 及與左旋肉鹼與組胺酸有關之雙肽（專利文件2) 萃取物（專利文件3)等具體力增強作用》另外， 有目的爲於因運動等而造成體力消耗及疲勞時之營 ，適用之含抗壞血酸之營養補給組成物（專利文件 另外，由本專利申請人揭示了花生四烯酸以及 四烯酸爲構成脂肪酸之化合物，具有預防或改善腦 低以及其所伴隨症狀或疾病之作用（專利文件5 ) 具有改善於日常生活中活動量降低以及/或憂鬱症 〇 用（專利文件6 )。 但並未有任何文獻針對藉由經口投予花生四烯 使花生四烯酸爲構成脂肪酸之化合物之抗疲勞作用 何的暗示或揭示。 專利文件1 :特開平9-1 24473號公報 專利文件2 :特開200 1 -046021號公報 專利文件3 :特開平8-473 8 1號公報 專利文件4 :特開平6-327435號公報 專利文件5:特開20 06-83136號公報 、致病 但仍未 勞死等 早由疲 勞物質 1)， ，山楂 亦揭示 養補給 4 ) ° 使花生 功能降 ，以及 狀之作 酸，或 ，有任 200930358 專利文件6 :特開2 0 0 7 - 8 8 6 1號公報 非專利文件1 :疲勞科學（9.疲勞恢復資訊；200 1， 講談社） 【發明內容】 [發明欲解決之課題] 本發明係以提供因對人及動物等安全，而可持續攝取 〇 ，且對疲勞之預防以及/或治療有效之組成物，特別係醫 藥組成物爲目的。 [解決課題之手段] 本發明之發明者們針對上述課題進行專心檢討後，發 現藉由經口攝取使花生四烯酸爲構成脂肪酸之化合物，可 獲得抗疲勞作用（疲勞之減輕作用以及促進疲勞恢復作用 )，本發明遂至完成。 Ο 亦即，本發明係關於下述之內容。 1. 一種抗疲勞劑，其係以花生四烯酸、使花生四烯 酸爲構成脂肪酸之化合物或該等物質之混合物爲有效成份 〇 2. 如上述1項之抗疲勞劑’其中成人每日投予量以 花生四烯酸換算時爲10〜800mg。 3. 如上述1或2項之抗疲勞劑’其係一週以上之持 續投予。 4. 如上述1〜3項中任一項之抗疲勞劑，其中使花生 200930358 四烯酸爲構成脂肪酸之化合物係花生四烯酸之醇酯、或構 成脂肪酸之一部分或全部爲花生四烯酸之三酸甘油酯、磷 脂質或糖脂質。 5 ·如上述1〜4項中任一項之抗疲勞劑，其係用作治 療或預防疲勞狀態。 6.如上述1〜5項中任一項之抗疲勞劑，其係經口劑 〇 0 7. —種醫藥組成物，其係包含如上述1〜6項中任一 項之抗疲勞劑。 8. —種花生四烯酸、使花生四烯酸爲構成脂肪酸之 化合物或該等物質之混合物之使用，其係爲了製造抗疲勞 劑。 9. 一種方法，其係疲勞狀態之預防或治療之方法， 其係包含對需要其之對象，投予花生四烯酸、使花生四烯 酸爲構成脂肪酸之化合物或該等物質之混合物。 ❾ [發明的效果] 本發明之抗疲勞劑具有優異的疲勞減輕、疲勞恢復促 進作用，且對人類及非人類之動物都很安全，可持續進行 投予。因此，本發明之抗疲勞劑係可做爲包含功能性食品 之醫藥組成物，可廣泛應用。 (花生四烯酸，以及使花生四烯酸爲構成脂肪酸之化合物） 本發明之抗疲勞劑有效成份係花生四烯酸，於本發明 -8- 200930358 之抗疲勞劑中，除游離的花生四烯酸之外，可利用使花生 四烯酸爲構成脂肪酸之全部的化合物（本說明書中將該等 物質總稱爲花生四烯酸類）。使花生四烯酸爲構成脂肪酸 之化合物，並無任何限定，可利用花生四烯酸鹽（例如鈣 鹽、鈉鹽等），及花生四烯酸之低碳醇酯（例如花生四烯 酸甲酯、花生四烯酸乙酯等），及構成脂肪酸之一部分或 全部爲花生四烯酸之三酸甘油酯、磷脂質、糖脂質等。 〇 因本發明的抗疲勞劑之有效成份爲花生四烯酸，以使 用花生四烯酸含量高者爲佳。例如前述之含花生四烯酸之 三酸甘油酯（與構成脂肪酸之一部分或全部爲含花生四烯 酸之三酸甘油酯，或含其之油脂同義），構成三酸甘油酯 之全部脂肪酸中花生四烯酸的比例可舉出以10重量（ W/W) %以上爲佳，20重量％以上更佳，30重量％以上， 40重量％以上之油脂（三酸甘油酯）最佳。該種含花生四 烯酸之三酸甘油酯，除了例如藉由培養具有可生產含花生 〇 四烯酸油脂（三酸甘油酯）之微生物，可進行工業上的製 造，及含25質量％之花生四烯酸之微生物油（含95%以上 之三酸甘油酯）（SUNTGA (註冊商標）25，三多利股份 有限公司），及含40質量％之花生四烯酸之微生物油（含 95%以上之三酸甘油酯）（SUNTGA (註冊商標）40S，三 多利股份有限公司）之外，可根據特開2003-4883 1號公 報，及特開2006-83 1 3 6號公報及 W02003/ 004667號所 記載之方法以及條件，培養具有含花生四烯酸油脂（三酸 甘油酯）生產能力之微生物，而進行製造。具體可使用之 -9- 200930358 微生物、培養條件等請參照該等文獻。 於藉由培養含花生四烯酸油脂之生產菌所生產之含花 生四烯酸油脂（三酸甘油酯）中，提高花生四烯酸比例的 方法’除如前述文獻所記載之控制培養基碳素來源濃度以 外，亦可對含花生四烯酸油脂進行選擇性的水解，而獲得 含高量花生四烯酸之油脂。該用於選擇性水解的解脂酵素 並非具有三酸甘油酯之位置特異性，而因水解活性會與雙 〇 鍵數目成比例而降低，而使高度不飽和脂肪酸以外的脂肪 酸之酯鍵結被水解。因此，於所生成之PUFA部分甘油酯 間引起酯交換反應等，而成爲高度不飽和脂肪酸被提高之 三酸甘油醋（「Enrichment of Archidonic Acid : Selective Hydrolysis of a Single-Cell Oil from Mortierella with Candida cylindracea Lipase」：J· Am. Oil. Chem. Soc.， 72, 1323-1327, 1995)。 如此，可將上述對含花生四烯酸油脂進行選擇性的水 〇 解後所得之含有高花生四烯酸油脂（三酸甘油酯），做爲 本發明之有效成份。相對於本發明之含花生四烯酸油脂（ 三酸甘油酯）之全部脂肪酸，花生四烯酸之比例由於目的 在於排除其他脂肪酸之影響而以較高者爲佳，但並未限定 於高的比例。實際上應用於食品上時，有時花生四烯酸的 絕對含量會成爲問題，實際上可使用含10重量％以上花生 四烯酸油脂（三酸甘油酯）。 (抗疲勞作用以及抗疲勞劑） -10- 200930358 藉由將上述之花生四烯酸類對人類以及非 行經口投予，可獲得顯著的抗疲勞作用。此處 係指做爲抗疲勞對象之動物，而本發明之抗疲 用於感覺疲勞之人類、畜產動物、寵物以及實 別適用於人類。畜產動物係指牛、馬、豬、山 家畜及賽馬、獵犬等，寵物則指狗、貓、土撥 ，實驗動物爲小鼠、大鼠、天竺鼠、米格魯犬 〇 普通獼猴、長尾獼猴等提供醫學、生物學、農 領域硏究之動物。本發明之抗疲勞劑，可使用 之人類、畜產動物、寵物以及實驗動物，特別 〇 疲勞係指連續加諸於身體上或精神上負荷 的一時性身體以及精神表現降低之現象，表現 體以及精神的工作能力的質或量降低。於本發 」中亦包含慢性疲勞症候群及過勞死。

〇 本發明中「抗疲勞作用」，亦即「抗疲勞I 可稱其爲具有可使前述之疲勞減弱及使疲勞恢 具體而言，係具有提升運動及作用部位（包含 的持續時間，以及於相同的運動量及工作量之 疲勞物質的增加（持久力提升.體力增強）， 工作部位是否疲勞，改善腦及神經等所呈現的 態，以及促進運動及工作部位自疲勞狀態恢復 之效果。 本發明抗疲勞劑目標之慢性疲勞症候群， 人類動物進 非人類動物 勞劑，可使 驗動物，特 羊、綿羊等 鼠、倉鼠等 、迷你豬、 學、藥學等 於感覺疲勞 適用於人類 時，感受到 降低意指身 明之「疲勞 ftf」之效果， 復之作用， 腦部）工作 下，可抑制 無論運動及 疲勞感知狀 至一般狀態 係指成爲曰 -11 - 200930358 常生活障礙之長期性的全身疲勞感、倦怠感、輕微發燒、 淋巴結腫脹、肌肉疼痛、關節疼痛、精神方面的症狀等基 本症狀。本發明之抗疲勞劑可處理該慢性疲勞症候群，亦 即可緩和慢性疲勞症候群之各種症狀，而可使其轉變至正 常狀態。本發明之抗疲勞劑目標之過勞死係指處於重度過 勞狀態，無論是否無法保持身體的活力，均無法確實感覺 到疲勞，其結果，發生腦血管疾病及心臟疾病症狀，導致 〇 永久無法工作及死亡狀態。本發明之抗疲勞劑可處理慢性 疲勞症候群，更可預防過勞死。 本發明之「抗疲勞劑」之效果，可藉由例如於浸水中 斷睡眠試驗中測定游泳時間而進行評價。該試驗如同進行 浸水飼育，使用於無法獲得充分睡眠及休息姿勢，肉體及 精神均處於無法休息之環境下所飼育之小鼠，迫使其於負 載重錘之狀態下游泳，藉由測定力竭游泳時間（例如以最 初鼻子沒入水中1 0秒以上開始至完全沉入水中的時間， © 或於最後（至無法再浮上來爲止）鼻頭沒入水中時至完全 沉入水中之時間），可確認其疲勞度。而因該動物模型爲 肉體及精神的疲勞模型，藉由投予被試驗物質可延長游泳 時間時，表示身體上及/或精神上的疲勞被減輕，還有疲 勞狀態下身體的活力被維持（體力被增強），提升持久力 等，確認其對疲勞的抵抗性。 抗疲勞劑之效果除上述之浸水中斷睡眠試驗之外，可 藉由於強制運動時測定自發運動量，以及測定血中疲勞物 質量等加以確認。 -12- 200930358 本發明之發明者們檢討結果，確認使小鼠經口攝取使 花生四烯酸爲構成脂肪酸之化合物（特別係含花生四烯酸 之三酸甘油酯）時，於前述之浸水中斷睡眠試驗中，對疲 勞具有抵抗性。該結果不僅意味花生四烯酸可做爲抗疲勞 劑，亦適用於慢性疲勞症候群之預防及治療，及預防過勞 死。 如上所述，可藉由服用本發明之抗疲勞劑而不易疲勞 0 ，或是具有疲勞恢復效果。亦即於進行體育運動等肌肉運 動而感覺肉體疲勞時，及計算工作等連續工作而感覺精神 疲勞時可進行服用而可以期待疲勞恢復效果，而預先服用 再進行勞動、體育運動等時可預防疲勞產生。另外可藉由 於進行體育運動之前及中途進行攝取，而可期待增加持久 力。進而，藉由日常性地攝取，亦可預防精神性的疲勞及 其所伴隨之疾病。 本發明之抗疲勞劑可使用爲醫藥品及食品（功能性食 φ 品、健康輔助食品、營養功能食品、特殊用途食品、特定 保健用食品等可經口投予者）。本發明之抗疲勞劑亦可使 用爲於包裝、容器或說明書上表示有效成份之種類、製劑 之用途、提升持久力以及抗疲勞效果等效能’以及/或攝 取方法。 將本發明之疲勞劑使用爲醫藥品時，可單獨將花生四 烯酸以及/或使花生四烯酸爲構成脂肪酸之化合物’或是 與藥理學上所容許之載體'稀釋劑或賦型劑一同’以液劑 、錠劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑、糖漿劑或九劑等劑型進 -13- 200930358 行經口投予。投予量及投予型態可視對象、病況及其進行 狀態、其他條件而適當地加以選擇，例如可選擇使花生四 烯酸爲構成脂肪酸之化合物之含花生四烯酸的三酸甘油酯 ，以人類（成人）爲對象，以獲得抗疲勞作用爲目的而進 行經口投予時，所換算之花生四烯酸量以每日10〜800mg 爲佳，50〜700mg更佳，最佳爲攝取100〜500mg左右，1 日1〜3次的頻率連續進行投予。特別係1星期以上，以2 0 星期以上之連續投予爲佳而可獲得抗疲勞作用。且本發明 之發明者們使用小鼠的疲勞動物模型進行檢討後，確認了 希望以預先服用含花生四烯酸油脂而減輕精神上及肉體上 疲勞時，以 10〜800mg/kg’ 50〜700mg/kg更佳，100〜 500mg/kg最佳連續服用2星期，可獲得抗疲勞作用。 將本發明之抗疲勞劑使用爲飲食品時，其搭配量因使 花生四烯酸爲構成脂肪酸之化合物之種類等而異，例如使 用含花生四烯酸之三酸甘油酯時，花生四烯酸以0.001重 〇 量％以上爲佳，0.01重量％以上更佳，〇·1重量％以上爲最 佳之量進行搭配。 本發明之抗疲勞劑若於不會損及花生四烯酸效果的範 圍內，亦即不會因爲與花生四烯酸搭配而產生不希望的交 互作用之範圍內，可因應需要，與其他生理活性成份、礦 物質類、維生素類、荷爾蒙、營養成份、呈味料、香料等 其他添加物進行混合。該等添加物可使用均用於一般醫藥 、食品者。 -14- 200930358 【實施方式】 [實施例] 以下藉由實施例更具體說明本發明’但本發明並未因 此而有所限定。 '實施例1.因攝取花生四烯酸之抗疲勞作用（1) 做爲被試驗物質之花生四烯酸係使用SUNTGA (註冊 Q 商標）40S (含48%花生四烯酸）《SUNTGA (註冊商標） 40S係以特開2003-4883 1號公報（實施例Ο所記載之方 法而製造。 藉由浸水中斷睡眠試驗評價對疲勞之效果。評價方法 係使用將 Tanaka氏等人之方法（Neurosience, Let.3 52, 159-162, 2 00 3)改變一部分之方法而實施。受試動物係使 用Balb/c系雄性小鼠（5週大）（自日本SLC公司購入） ，於試驗環境將其進行馴化一週後，將呈現順利發育之動 Ο 物用於試驗。以使平均體重均等而分爲5群（每群6〜10 隻），以經添加含花生四烯酸油脂之實驗動物用標準飼料 (AIN-9 3G飼料）進行2星期之飼育。之後，將4群（群 2〜群5)爲浸水中斷睡眠壓力群，取代墊料（紙屑）的是 水溫爲23 °C之自來水，且使水深爲7mm並將其放入飼育 籠中’藉此進行小鼠浸水中斷睡眠試驗。浸水中斷睡眠試 驗中以實驗動物用標準飼料（AIN-93G飼料）進行鎖食， 對群3〜群5等3群以前述之將含花生四烯酸油脂溶解於 橄欖油後之飼料，做爲受試檢體，1日丨次，進行2天的 -15- 200930358 強制經口投予（浸水飼育花生四烯酸群）。對照群（群2 )則以橄欖油強制經口投予。剩下的1群（群1 )以普通 的墊料（紙屑）於飼育籠中進行飼育，1天1次，以橄欖 油強制經口投予（普通飼育對照群）。 ❹ 浸水飼育或普通飼育2天後，於小鼠的尾部綁上相當 其體重8 %的重錘，並強迫其於水槽中（直徑18cm，水深 3 0cm )游泳，並測定力竭游泳時間（最後（無法再浮上來 爲止）鼻頭沒入水中，其至沉沒的時間）。浸水飼育群之 小鼠較普通飼育群之小鼠游泳時間縮短，但藉由投予被試 驗檢體（花生四烯酸），藉由游泳時間縮短可被抑制之程 度，來判定對疲勞之效果。 Ο 表1之花生四烯酸量， 生四烯酸油脂添加飼料之量 攝取量，以及自對小鼠所投 予量，而計算之花生四烯酸 表1 群1 (com) —般飼育對照群 群2浸水飼育對照群 群3浸水飼育花生四烯酸群 群4浸水飼育花生四烯酸群 群5浸水飼育花生四烯酸群 係記載自經小鼠所攝取之含花 ，所計算之花生四烯酸的一曰 予之含花生四烯酸油脂量之投 一曰攝取量。 橄欖油 橄欖油 花生四嫌酸224mg/kg/day(橄欖油） 花生四稀酸448mg/kg/day(橄欖油） 花生四稀酸896mg/kg/day(橄横油） 結果如圖1所不。圖1中**係表不根據Student T Test危險率爲o.oi %之有意義差異。如圖i可明確得知， 浸水飼育群對照群之游泳時間，較一般飼育群相比爲有意 義的縮短。反之，可發現於投予被試驗檢體之花生四烯酸 -16- 200930358 224mg/kg ' 448mg/kg、8 96mg/kg之群，特別係投予花生 四烯酸224mg/kg、448mg/kg之群中，游泳時間的短縮被 抑制。該結果暗示藉由經口攝取花生四烯酸可獲得抗疲勞 作用。 實施例2.因攝取花生四烯酸之抗疲勞作用（2) 除如表2所示使各群爲9〜10隻小鼠，並分爲3群之 0 外，與實施例1相同地測定藉由花生四烯酸之抗疲勞作用 。但實施例2中之力竭游泳時間係測定最初鼻頭沒入水中 1 〇秒以上開始，至其完全沉入水中之時間。且表2中花生 四烯酸量係與實施例1以相同方式計算。 表2 群1 (cont) —般飼育對照群 橄横油 群2 浸水飼育對照群橄_ 群3 浸水飼育 花生四烯酸群花生四烯酸112mg/kg/day(橄橫油）

❹ 結果如圖2所示。圖2中**係表示根據Student T

Test危險率爲0.01 %之有意義之差異。如圖2可明確得知 ，浸水飼育群對照群之游泳時間，與一般飼育群相比爲有 意義地縮短。攝取被試驗檢體之花生四烯酸之群中，可發 現游泳時間的縮短抑制效果，確認即使攝取l〇〇mg/kg亦 可獲得抗疲勞作用。 實施例3 .製劑例 (製劑例1 :調製膠囊劑） -17- 200930358 於100質量份之明膠以及35質量份之食品添加物用 甘油中加入水，於50〜60 °C下進行溶解，調製黏度爲 2 00 0cp之明膠被膜。再將含花生四烯酸油脂（SUNTGA ( 註冊商標）40S )，與0.05質量％之維生素E油混合，調 製爲內容物。使用該明膠被膜與內容物，遵照常用方法進 行膠囊成形及乾燥，製成每粒含有內容物爲180 mg之軟 質膠囊。 ❹ (製劑例2 :調製脂肪輸液劑） 加入400g之含花生四烯酸油脂（SUNTGA (註冊商標 )40S) ，48g之純化卵磷脂，20g之油酸，l〇〇g之甘油 以及40ml之0.1N之苛性鈉，以均質混合機使其分散後， 加入注射用蒸餾水至4公升。再使用高壓噴霧式乳化機進 行乳化，調製成脂質乳液。再將該脂質乳液每200ml分注 入塑膠製包裝袋後，再進行121 °C、20分鐘之高壓蒸汽滅 〇 菌處理而製成脂肪輸液劑。 (製劑例3 :調製果汁） 將2g之β-環糊精添加於20ml之20%乙醇水溶液，以 攪拌子攪拌其之同時，加入1 〇〇mg之含花生四烯酸油脂（ SUNTGA (註冊商標）40S中搭配有0.05質量％之維生素 E)，於50°C下進行2小時赙育。冷卻至室溫（約1小時 )後，再持續進行攪拌同時於4°c下進行10小時游育。將 所生成之沉澱以離心分離進行回收，以正己烷洗淨後再進 -18- 200930358 行冷凍乾燥，而得l_8g之含有含花生四烯酸之三酸甘油 酯之環糊精晶籠化合物。取lg該粉末使其與500ml果汁 均勻混合，而調製成含有含花生四烯酸之三酸甘油酯之果 汁。 【圖式簡單說明】 [圖1]係表示於實施例1中’因攝取花生四烯酸之抗 疲勞作用圖。 [圖2]係表示於實施例2中’因攝取花生四烯酸之抗 疲勞作用圖。

-19-

Claims (1)

1. 200930358 十、申請專利範圍 1. 一種抗疲勞劑，其特徵係以花生四烯酸、使花生 四烯酸爲構成脂肪酸之化合物或該等物質之混合物爲有效 成份。 2 ·如申請專利範圍第1項之抗疲勞劑，其中成人每 日投予量以花生四烯酸換算時爲10〜800mg。 3. 如申請專利範圍第1或2項之抗疲勞劑，其係一 〇 週以上之持續投予。 4. 如申請專利範圍第1〜3項中任一項之抗疲勞劑， 其中使花生四烯酸爲構成脂肪酸之化合物係花生四烯酸之 醇酯、或構成脂肪酸之一部分或全部爲花生四烯酸之三酸 甘油酯、磷脂質或糖脂質。 5. 如申請專利範圍第1〜4項中任一項之抗疲勞劑， 其係用作治療或預防疲勞狀態。 6·如申請專利範圍第1〜5項中任一項之抗疲勞劑， Θ 其係經口劑。 7- 一種醫藥組成物，其特徵係包含如申請專利範圍 第1〜6項中任一項之抗疲勞劑。 8. —種花生四烯酸、使花生四烯酸爲構成脂肪酸之 化合物或該等物質之混合物之使用，其特徵係爲了製造抗 疲勞劑。 9. 一種方法，其係疲勞狀態之預防或治療之方法， 其特徵係包含對需要其之對象，投予花生四烯酸、使花生 四烯酸爲構成脂肪酸之化合物或該等物質之混合物。 -20-