TW200820961A - Novel eucalyptus extract, process for the preparation thereof and therapeutic uses thereof - Google Patents

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200820961 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 、本發明係關於一種以尤加利萃取物製備用於治療及/ 或預防下列神l遞貝·多巴胺血清素(Ser〇t〇I^n) 及/或正腎上腺素再吸收障礙引起之疾病或病徵的藥物或 食品補充品之用途。料取物較佳為富含至少—種式⑴化 合物或其任何形式的非鏡像異構物：

其R及其連接的碳原子共同形成C=CH2或、 r>CH3 qlj Η 或C(〇H3及及2代表異丁基、異丁基或異丁基。 丄本發明亦係關於上述至少一種式（I)化合物製備用於 治，及/或預防該神經遞質再吸收障礙引起之疾病或病徵 之藥物或食品補充品的用途。 【先前技術】 狀特徵而命名 有許多尤加利品種(超過600種），其大部分原生於澳 州和塔斯曼尼亞(Tasmania)、少數於新幾内亞和東馬來= 亞尤加利屬於桃金孃科(myrtle family)，其係根據花的形 尤加利（Eucalyptus) —字意指覆蓋花雄蕊 6 200820961 (stamen)之蒴蓋(形成合瓣花冠）的，，良 — 為美麗的大财在原生國家(澳 彳=盍’’°尤加利通常 在溫帶氣候為3至2G米。其樹皮通^ _米樹高或 長條形。葉二態性為其—般的 1滑的淡至灰色 (EuCalyptus globulus Labill)而言兔就監膠尤加利 色、藍色環形、抱合及益柄而点整目為印圓形、淡灰綠 及無柄而成葉則為具有扭曲筆缸#午 直方向（㈣雙面）的鐮狀、灰綠色及懸垂 ，' 4 壯夕尤替从装 ^ . $成四角形錐 til"!!! 5 已极而路出許夕具有長白絲狀和黃色花藥的雄蕊。其果實 被具有直徑2至2.5釐米含黑或棕色種子㈣膜所包覆。、 在草本療法中，主要用於歐洲藥典的三品種為：藍膠 尤加利(E. gl〇bulus Labill)、多苞葉尤加利(E. p〇lybract:a R.T· Baker)和史密斯尤加利(ε· smithii R.T· Baker)。使用獲 付自隶老分支之葉子（鐮狀和有柄）的精油和桉葉醇 15 (eucalyptol) 〇 尤加利葉一般被用於口服及局部塗敷以治療呼吸系 統疾病（支氣管炎、喉嚨發炎、鼻塞、感冒等）或用於治療 傷口、皮膚潰瘍等。 許多製劑内的桉葉精油和桉葉醇（或1，8_桉葉素)係利 用其抗菌、化痰和祛痰效果用於治療呼吸道疾病。精油被 用於驅蟲劑及獸藥内。 目前尤加利精油的已知藥理性質為：抗菌、祛痰和鎮 咳性質（Wichtl M·和 Anton R. 1999，piantes 200820961 therapeutiques，177〜179);抗炎和止喘性質（Juergens 等人， 2003，1，8-桉葉素(桉葉醇)於支氣管性氣喘的抗炎性質··雙 盲安慰劑控制試驗一Respir· Med· 97(3) ·· 250〜256);抗糖 尿性質（Swanston等人，1990—傳統植物的糖尿病治療，正 5 常和鏈脲佐菌素糖尿病大鼠的試驗一Diabetologia，33(8): 462〜464);抗組織胺性質（ikawati Z·等人，2001 —數種印 尼藥用植物對RBL-2H3細胞釋放組織胺之抑制效果的篩 檢一J· Ethnopharmacol· 75(2〜3) : 248〜256);抗癌性質 (Takasaki等人，2000—巨桉（E· grandis)葉之藍桉酸 1〇 (euglobal)-Gl的癌症化學預防活性—Cancer Lett 155⑴： 61〜65)，抗病毒性質（Takasaki等人一巨桉之藍桉酸-G1、 -G2和-G3構造··活化伊波病毒的三種新型抑制劑—chem·

Pharm· Bull· 38 (5): 1444〜1446)以及抗-HIV 性質（Wichtl Μ· 和 Anton R·，1999—Plantes therapeutiques—177〜179) 〇 15 意外及驁奇地，申請者指出可利用尤加利萃取物製造 用於治療及/或預防神經遞質再吸收障礙引起之疾病或病 徵的藥物或食品補充品。 【發明内容】 因此，本發明之領域係關於已被發現有價值藥理性質 及口而具有新頑治療用途的尤加利萃取物。本發明不包括 文獻目錄中大量記載的尤加利精油。 藥物或食品補充品可有效用於治療及/或預防神經遞 8 200820961 貝再吸收p早礙引起的疾病其群組選自： •神經性病、疾病或障礙； 籲精神性病、疾病或障礙； •與神經性和精神性病、疾病或障礙有關的記憶、注意力 5 和警覺性障礙； 籲功能性軀體障礙； 籲成癮物質的依賴性。 該疾病或病徵的治療及/或預防較佳為包含抑制神經 遞質的再吸收。 10 本發明所述的“神經遞質，，包括多巴胺、血清素及/或正 腎上腺素。 本發明所述的“尤加利樹”較佳為屬於Eudesmia亞 屬、雙蒴蓋亞屬（Symphomyrtus)和傘房桉亞屬（Corymbia) 的品種以及更佳為下列的品種：E. globulus L· ; E. 15 pulverulenta Sims ； E. kartzoffiana L.A. S. Jonnson 1

Blaxell ； E. macrocarpa Hook ； E. cinerea F. Muell ex Benth ； E, dorrigoensis(Blakely) L.A.S. Johnson 1 K.D. Hill ； E. leptopoda Benth ； E. occidentalis Endl ； E. viridis R.T.

Baker ; E· polybractea R.T· Baker 和 E· smithii R.T. Baker o 20 然而本發明的實例並非僅侷限於上述的範圍。 有用的尤加利萃取物可獲得自尤加利的葉、花、果 實、梗或樹幹，其較佳為獲得自尤加利的樹葉。 具有本發明之特色的尤加利萃取物包含至少一種式⑴ 9 200820961 化合物或其任何一非鏡像異構物型。 該式（I)特別包括四種大果屬（macrocarpa)的化合物， 亦即： 大果素 A : (5-((lR)_l-((llS，7R)-7_羥基-3,3,7，11-四甲 5 基三環(6·3·0·0(2,句)十一-11-基)-3•曱基丁基)-2,4,6-三羥基 苯-1,3-二曱醛），其R1與其連接的碳原子共同形成e、.CH3

'OH 基以及R2代表yS -異丁基。

OH

實驗式·· c28h40o6 分子量：472克/莫耳 根據本發明尤加利萃取物内之大果素A的重量比例較 15 佳為大於或等於0.1%和絕對小於3%。 大果素 B : (5-((lS)，l-((llS, 7R)_7_羥基-3,3,7，11_四曱基 三環(6·3·0·0(2,4))十一-11-基)-3•甲基丁基)-2,4,6-三羥基苯 -1,3-二曱醛），其R1與其連接的碳原子共同形成基 以及R2代表α-異丁基。

10 200820961 實驗式：c28h4〇o6 分子量：472克/莫耳 根據本發明尤加利萃取物内之大果素B的重量比例較 佳為大於或等於0.1%和絕對小於3%。 5 大果素 C : (5_((1R)-1-((11S)_3,3，11_三曱基_7_亞曱基三 環（6·3·0·0(2,4))十一 -11-基）·3-曱基丁基）-2,4,6-三羥基苯 二曱醛），其R1與其連接的碳原子共同形成OCH2基 以及R2代表異丁基。

實驗式：c28h38o5 分子量：454克/莫耳 15 根據本發明尤加利萃取物内之大果素C的重量比例較 佳為大於或等於0.1%和絕對小於3%。 大果素G : (5-(1-(3,3，11-三曱基-7-亞曱基三環 (6·3·0·0 (2,4))十一 -11-基）-3•曱基 丁基）_2,4,6·三羥基苯 _1，3_二甲醛），其R1與其連接的碳原子共同形成C=CH2基 2〇 以及R2代表異丁基。

11 200820961 實驗式：c28h38o5 分子量：454克/莫耳 根據本發明尤加利萃取物内之大果素G的重量比例較 佳為大於或等於0.1%和絕對小於5〇/。。 藉由熟習本項技術者已知習知步驟的萃取方法獲得 該尤加利萃取物。 研磨尤加利(Eucalyptus sp·)的葉、花、果實、梗或幹， 或其混合物然後以有機溶劑萃取，包括烷烴(戊烷、己烷、 庚烷、辛烷、環己烷）；氧化醚（四氫呋喃、二噚烷、二乙 峻），S曰（乙酸乙酯、乙酸異丙酯）；醇（曱醇、乙醇、丙醇、 異丙醇、丁醇、辛醇）；酮（曱基乙基酮、甲基異丁基酮）； 南化烴（氯仿、二氯甲烷）或水和水可混合有機溶劑的混合 物(例如含水酒精混合物）。 > —以從約1/1至約1/20的植物/溶劑比例進行萃取及可重 複萃取2至3次。萃取溶_溫度可特或高於環境溫度 及高達溶劑的沸點溫度。植物與溶劑的接觸時間可從約3〇 分鐘至約72小時。 、 植物然後進行固/液分離而藉由過濾或離心從溶劑分離出 後得的過濾、物可為：

或濃縮至較高或較低的濃度。在混人贫 在混合萃取溶劑^丨l人

200820961 全蒸發為止。在有機溶劑的實例中，將—定量的水加 入獲得的濃縮物。藉由水相加人何私關而進行 液-液純化步驟，其可為燒烴(例如己燒）、氧化鍵(例如 二乙_)、醋(例如乙酸乙酯）、醇(例如丁醇）、酮(例如 5 甲基乙基酮）或由化烴(例如氯仿）。進行―、二或三次 的液-液萃取。在被蒸發至乾燥之前可在硫“上=燥 合併的有機相。 在從室溫至沸點溫度的真空内濃縮獲得的溶液。 藉由冷綠燥或熟習本項技術者已知的—般乾燥方 10 (贺霧、供箱等）進行終萃取物的乾燥。乾燥溫度較佳為 不超過約60°C。 〆每100克乾萃取物藉由加入從約0 05至約1克之量的 抗氧化劑，例如抗壞血酸或檸檬酸以穩定該萃取物。 —更引人興趣者為尤加利萃取物抑制神經遞質再吸收 15 <*理性質的本發明—項絕對顯著特徵，其特別指富含至 ^種式⑴化合物或其任一非鏡像異構物的萃取物。 因此，該尤加利萃取物較佳為富含至少一種式(1)化合 物。 口 本發明中“富含大果素A的尤加利萃取物，，意指大果素 2〇 A的重量比例大於或等於3%和絕對小於9〇%的尤加利萃 取物，較佳為大於或等於3%和小於5〇%，更佳為大於或 等於3%和小於4〇%和又更佳為大於或等於抓和小於 20%。 、 本發明中“富含大果素B的尤加利萃取物，，意指大果素 13 200820961 B的重量比例大於或等於3%和絕對小於90%的尤加利萃 取物，較佳為大於或等於3%和小於5〇%，更佳為大於或 等於3%和小於40%及又更佳為大於或等於3%和小於 20%。 本發明中“富含大果素C的尤加利萃取物，，意指大果素 C的重量比例大於或等於3%和絕對小於90%的尤加利萃 取物’較佳為大於或等於3%和小於50%，更佳為大於或 等於3%和小於40%及又更佳為大於或等於3%和小於 20% 〇 本發明中“富含大果素G的尤加利萃取物，，意指大果素 G的重量比例大於或等於5%和絕對小於90%的尤加利萃 取物’較佳為大於或等於5%和小於5〇%，更佳為大於或 等於5。/。和小於4〇%及又更佳為大於或等於5%和小於 20% 〇 15 、申睛人已指出尤加利萃取物對多巴胺、正腎上腺素及 /或血清素再吸收的效應。 由於其抑制這些神經遞質再吸收的藥理性質，該萃取 萃取物可特別有效製備用於治療及/或預防多巴胺、血 =素及/或正腎上腺素缺乏所引起之許多疾病或病徵的藥 物或食品補充品。 可被本發明之尤加利萃取物治療及/或預防的疾病或 ^徵包括下列非限制性的實例·· 仞神經性病、疾病或障礙·· 1如砷經退化性疾病（阿茲海默症、杭丁頓舞蹈症、帕金森 20 200820961 氏症、腦血管意外中風、 老年癡呆症、額顳葉失知^創傷）、肌萎縮性側索硬化症、 _神_變疼痛；血管性失智症、偏頭痛、中 •精神性病、疾病或障礙： 例如憂鬱症（内源性、 崩潰、精神分裂症、'性憂#症）' 關疾病、恐慌症、強=、廣泛性焦慮症、壓力相 過動症、進舍失正、創傷後壓力徵候群、注意力和 指空間恐㈣Γ自^指厭食症和暴食症）、恐懼症(特別 鲁與神經性和精袖把 病、疾病或障礙有關的記憶、注意 力和警覺性障礙； # 功能性軀體障礙： 15 …!如匕性疲勞徵候群、肌纖維疼痛症、激躁性腸炎、胃食 ，逆流、性慾喪失、勃起功能障礙、尿失禁； 成痛物質的依賴性： 斗寸別指尼古丁、酒精、鴉片、大麻鹼、興奮劑。 事貫上’根據本發明的藥物或食品補充品有助於尼古 工、/酉精、鴉片、大麻鹼或興奮劑的戒斷及預防戒斷者的 復發。 因此本發明的藥物或食品補充品可被用於成癮物質 的替代療法，及用於預防或治療戒斷相關的抑鬱徵候群。 熟習本項技術者將可確認需此類抑制療法的其他疾 病。申請人以非限制性方法於此處提出許多疾病和其藉由 二重多巴胺、血清素及/或正腎上腺素再吸收抑制劑之治療 15 200820961 間相關的參考文獻目錄。已列出各“組，，的實例。 多巴胺、血清素和正腎上腺素在神經元的發育和生存 中相辅相成(Lauder J.M.，心 iVeMmycz·.，1993，16: 233)。 一些神經性疾病如帕金森氏症（Hornykiewicz 〇.， 5 ，1971，1 : 369)會導致多巴胺缺乏症；增 加多巴胺、血清素和正腎上腺濃度的單胺氧化酶抑制劑可 用於治療帕金森氏症及其他神經性疾病（Ebadi M.，

Drwg Tbrg你，2006，7 : 1513)。根據本發明之尤加利萃取 物因此可有效用於治療此類的神經性疾病。 1〇 憂鬱症係一種經常性情緒性疾病，其特徵為感覺極度 哀傷、悲觀思維、自卑，通常伴隨失去原動力、熱誠和性 慾。通常亦稱為快感缺失(anhedonia)的對正常愉快經驗失 去感覺亦被視為是憂營症的常見症狀。目前憂鬱症的治療 係以選擇性血清素再吸收抑制劑如氟西汀(fluoxetine)、西 15 酜普蘭（citalopram)或帕羅西汀(paroxetine);選擇性正腎上 腺素再吸收抑制劑如瑞波西汀(reboxetine)，或混合型血清 素和正腎上腺素再吸收抑制劑如米那普奋(milnacipran)或 文拉法辛(venlafaxine)。然而，突出至腦部區域稱為伏隔核 (nucleus accumbens)的多巴胺神經元被認為在欣快感和動 20 機上扮演重要角色(Koob G.F·，TVewmycz··，1992，4 : 139 ; Salamone J.D·，，1994，61 : 117)。 因此可藉由多巴胺、血清素和正腎上腺素再吸收抑制劑如 根據本發明的尤加利萃取物治療憂鬱症的症狀。 吸收包括尼古丁的成癮物質可升高動物(Di Chiara G. 16 200820961 和 Imperato A.，美國 pri?c·施"· 5W·，1988，85 ·· 5274) 和人類（Brody 等人，/· P吵，2004，161 ·· 1211) 之腹侧紋狀體内細胞外多巴胺的濃度。戒煙可能伴隨著憂 營症的症狀(Wilhelm K·等人，Drwg· d/co/zi?/ ，2006， 5 10 15 20 25 : 97)。因此根據本發明的尤加利萃取物可用作為成癮物 質如尼古丁的替代療法，及用於預防或治療戒斷相關的抑 鬱徵候群。 处梆局驅體障礙的功能性障礙係非器官性病變但與 器官（肝、心等）主要生理功能有關的疾病。功能性軀體障 礙本身可為稍後將發病的疾病根源。此類疾病中，肌纖維 疼痛症為合併瀰漫性和局部性疼痛、慢性疲勞、抑鬱症狀 及記憶和注意力障礙的疾病（R〇〇ks DS.，Cw/T 〇化 及心麵如〇/·，2〇〇7，19 ·· U1)。可利用混合型正腎上腺户^ 血清素再吸收抑制劑治療肌纖維疼痛症的症狀（Vm〇n 〇· ’ Hum· Psychopharmacol.，2QQ4，19 補充 γ · 此，根據本發明之尤加利萃取物内添加有助於=。因 於治療及/或預防功能一 該藥物適合被製成口服或可注射劑型。 口服劑型可選自由錠劑、凝膠膠囊、膠 液態製劑、Π服液或可飲㈣浮液之粉末糠毅之 、該食品（營養或膳食)補充品可被包裝成、蛘組。 即被製成如凝膠膠囊、糖錠、錠劑、華蜊型，亦 型’及藥包、液態安瓶、具有滴量計的=他 ΛΠ 200820961 量小劑量之液體或粉末製劑的其他類似劑型。 -非至少一種根據本發明之式(1)化合物亀

10 15 20 :成、構物型之尤加利萃取物的結果顯示本發明之 利盈可延伸至任一以至少一種式人 型為基質之組成物，無論該化;物; 物^•疋由化學方法、生化方法或植物萃取物取得。 因此，本發明係關於使用至少一種式(1)化合物或其他 :鏡像異構物於製備用於轉及/或預防神經遞質再㈣ p 早礙引起的功能性軀體徵候群和成瘾物f依賴性之神經 性或精神性疾病或病徵及相關疾病的藥物或食品補充 品。該疾病或病徵的治療及/或預防較佳為包 質的再吸收。 由於其抑制神經遞質再吸收的藥理性質，式⑴化合物 及其非鏡像異構物特別可製造用於治療及/或預防多巴 ，、血清素及/或正腎上腺素缺乏引起的許多疾病或病徵之 樂物或食品補充品。 可藉由本發明化合物被治療及/或預防的疾病或病徵 包括下列非限制性的實例： #神經性病、疾病或障礙： ，如神經退化性疾病（阿兹海默症、杭丁頓舞蹈症、帕金森 =、腦血管意外巾風、頭箱傷）；肌萎雜㈣硬化症； 料癡呆症；額顳葉失智症；血管性失智症；偏頭痛；中 樞性神經病變疼痛； #精神性病、疾病或障礙： 18 200820961 憂鬱症（内源性、頑固性、反應性或醫源性憂鬱症）、 崩潰、精神分裂症、雙相憂》症、廣泛性焦慮症、塵力相 關疾病恐慌症、強迫症、創傷後壓力徵候群、注意力和 過動症、進食失調(特別指厭食症和暴食症）、恐懼症(特別 指空間恐懼症）、自閉症； •與神經性和精神性病、疾病或障礙有關的記憶、注意 力和警覺性障礙； •功能性軀體障礙·· 、例如k性疲勞徵候群、肌纖維疼痛症、激躁性腸炎、胃食 道逆流、性慾喪失、勃起功能障礙、尿失禁； 成瘤物質的依賴性： 特別指尼古丁、酒精、鵪片、大麻鹼、興奮劑。 事貫上’根據本發明的藥物或食品補充品有助於尼古 丁、酒精、鸦片、大麻鹼或興奮劑的戒斷及預防戒斷者的 復發。 、因此本發明的藥物或食品補充品可被用於成瘾物質 的替代療法，及用於預防或治療戒斷相關的抑鬱徵候群。 戒習本項技術者將可確認需此類抑制療法的其他疾 病0 、本發明係關於使用大果素A、大果素b、大果素C及 一'果素G衣造用於治療及/或預防多巴胺、血清素及/或 正Z上腺素再吸收障礙引起的功能性軀體徵候群和成瘾 物貝依賴性之神經性或精神性疾病或病徵的藥物或食品 補充品。 200820961 式（I)化合物及其非鏡像異構物的試驗已顯示該化合 物具有抑制多巴胺、血清素及/或正腎上腺素再吸收的作 用0 5 該藥物適合被製成口服或可注射劑型。 可藉由植物萃取物的純化獲得本發明的式（I)化合物 及其非鏡像異構物，或藉由化學或生物化學合成法如述於 (-)-大果素c以新穎六基取代苯Cr(CO)3複合物作為仿生不 對稱节基等價陽離子之立體選擇性偶聯反應的全合成法 10 15 /Tanaka’Tetsuaki;Mikamiyama，Hidenori;Maeda，Kimiya; Iwata ^ Chuzo ； In ^ Yasuko ； Ishida ^ Toshim^/Jouranl of Organic ChemiStry(1998)，63(26): 9782 〜9793。 該化合物可分離自“尤加利萃取物，，或來自“富含至少 種式(I)之大果素的萃取物，，。其純化技術為利用熟習本 ，技術者所習知的層析法。該萃取物在具有較佳為 ^letry Slneld®作為固定相之反向的5微米（伽㈣製備級 ’其以95/5/〇·1%比例之乙腈/水/三氟乙酸混合 物作為流動相。 20 二d之式(I)化合物的純度係大於或等於9⑽。 G的：大果素A、大果素B、大果素C及/或大果素 G的純度係大於或等於9〇%。 可利用本發明的大果素A、大 或大果素G製造用协、、Λ成 果素Β、大果素C及/食品補充品。 、/α療及/或預防肥胖和過重的藥物或 本發明亦係關於_ 種濃縮尤加利萃取物 ，其特徵在於 20 200820961 包含至少一種式⑴化合物或其任一非鏡像異構物：

其R及其連接的碳原子共同形成C=CH2或cx〇HH3、

CH CH C^OH3或C、0H3及R2代表異丁基、“_異丁基或点-異丁基； 10 以及在於： ♦大果素A的重量比例為大於或等於3%和絕對小於 90%，較佳為大於或等於3。/。和小於5〇%，更佳為大於 或等於3%和小於40%及又更佳為大於或等於3%和小 於 20% ; 15 #大果素B的重量比例為大於或等於3%和絕對小於 90%，較佳為大於或等於3%和小於5〇%，更佳為大於 或等於3%和小於40%及又更佳為大於或等於3%和小 於 20% ; *大果素C的重量比例為大於或等於3%和絕對小於 2〇 9〇=較佳為大於或等於3%和小於50%，更佳為大於 或等於3〇/0和小於4〇%及又更佳為大於或等於 於 20% ; •大〇果素G的重量比例為大於或等於5%和絕對小於 9〇/°，較佳為大於或等於5%和小於50%，更佳為大於 21 200820961 或等於5%和小於4〇%及又更佳為大於或等於 於 20% 〇 4 本發明因此較佳係關於使用該濃縮尤加利萃取物 勿或食品補充品。 最後，本發明係關於製備此類濃縮尤加利萃取物的方

•磨碎尤加利的葉、花、果實、梗及/或樹幹； •以有機溶劑或水和水可混合有機溶劑之混合物至少萃 取人以彳之約丨/1至約1/20的植物/溶劑比例進行萃 取複萃取2至3次。萃取溶劑的溫度可等於或高 :f兄/m度及鬲達〉谷劑的沸點温度。植物與溶劑的接觸 日守間可從約30分鐘至約72小時。 醇、辛醇）；酮（甲基乙基酮、 二氯曱烧）或水和水可混合 精混合物）。 町、丨吁、〇奸、内醉、吳内醇、丁 I酮' 曱基異丁基酮）；鹵化烴（氯仿、 混合有機溶劑的混合物（例如含水酒 产較Ϊ為選自包含㈣（戊烧、己烧、庚炫、辛烧、 ^ 元，氧化鍵（四氣11 夫喃、二0号燒、二乙韃）；醋（乙酸 @ \ ”夂異丙酉曰）；醇（曱醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁

马一氣甲烧或乙酸異丙醋。 >容劑的實例中，將其過濾物蒸發至乾燥 不可混合溶劑内。 朗的實例中，濃縮該過濾物。 22 200820961 Φ藉由熟習本項技術者已知的方法分離其固/液相。 在^發明—較佳具體實施例中，藉由添加較佳為碳酸納 沾J、- 9的驗進行液遗萃取。藉由添加較佳為氫氯酸(HC1) ^夂進行合併祕含水相⑽化，然後财何混合溶劑 進仃一至數次的液-液萃取。酸化的優點為可使其產生約i 的酸驗度。 、 ，硫酸鈉上乾燥合併的有機相然後在從室溫至沸點間 交化溫度的真空下進行濃縮。 猎由習知的乾燥法(喷霧、烘箱等)在較佳為不超過6〇它 的溫度'乾燥濃縮物而形成富含大果素G的萃取物。每 丨t萃取物藉由加人從約G.G5至約1克之量的抗氧化 釗舉例如抗壞血酸或擰檬酸以穩定該萃取物。 蓋發㈣―特定具體實施射，彻超臨界液體作為 15 20 人/合劑的卒取法同樣可獲得該尤加利萃取物或所謂“富 二至夕種式(I)化合物或其任一非鏡像異構物“的尤加利 卒取物。 杏磨碎或未經研磨的尤加利(Eucalyptus sp)的葉、花、果 I化=或樹幹’或其混合物的萃取可藉由超臨界液體如二 依照下列條件進行超臨界C02的第一次萃取： •液體的溫度較佳為從約4(rc至約8(rc;更佳為從約牝 c至約60°c ; •壓力較佳為從約80巴至❸250 &;更佳為從約 至約2〇〇巴； 23 200820961 •萃取時間較佳為從約1小時至约6小時； •熟習本項技術者可根據被萃取植物的數沾 大小調節其流速。流速較佳為從約2至约15心= 的 5 β 2物的數量為從約細克至約_克;較二约： 高㈣的大小為從约2升至約1〇升 第-次萃取時可加入有機共溶劑，其 =广 氧⑽、S旨或二❹種上述溶_混合物。括乙知）、 、經萃取的植物可選擇性地進行第二次 1〇為含或不含共溶劑的超臨界c〇2。其操作條件如^卒取液體可 • ·;:=從約8〇巴至約250巴;更佳為從約巴 _液體流速較佳為從約2至約丨 至、㈣柿小時； 5姉小時；更佳為從8 20 ^物的數量為從約克至約_克；較佳為約漏 高壓小紐約2衫約 比,—為從約，至二二 的萃辅助萃取步驟 24 200820961 然後蒸發獲得的萃取物。 為獲得較高或較低濃度的濃縮尤加利萃取物，熟習本 項技術者可利用超臨界液體調節該處理的操作條件Γ +藉由冷凍乾燥或熟習本項技術者已知的一般乾炉 (噴霧、烘箱等）進行終萃取物的乾燥。乾本电 超過約60°C。 ，卞’皿又叙佳為不 母100克乾萃取物藉由加入從約0 05至約i 抗氧化劑舉例如抗壞血酸或檸檬酸以穩定該萃取物之1的 借助於下列的實例可更瞭解本發明，然而本 侷限於該範圍内。 &乃非僅 【實施方式】 金Li ·製備藍膠尤加利的萃取物 磨碎藍膠尤加利的葉子然後在室溫下以5倍體積、 醇萃取。植物和溶劑接觸的時間為48小時。 、、乙 藉由過濾、從溶劑分離植物。 在60°C的真空内乾燥獲得的過濾物。 獲得的萃取物將被用於實例5中的體外試驗。 獲得的萃取物中每100克乾燥萃取物含有約： φ 〇·65克的大果素A; * 〇·7克的大果素Β ; * 〇·4克的大果素C ; * 1克的大果素G。 25 200820961 宜例2 •製備藍膠尤加利的萃取物 磨碎藍膠尤加利的葉子然後在迴流下以 5〇0/。體積/體積的乙醇萃取三次。 倍體積之 5 植物和溶劑接觸的時間約為1小時。 藉由過濾從溶劑分離植物。 獲得的過濾物被濃縮至0.5體積。 贫藉由加入二氯甲烷進行液-液的純化。進行=心 个取。合併之有機相然後在硫酸鈉上乾燥。 ^的液、液 1〇 内進行終萃取物的乾燥。 〇C的真空 _獲得的萃取物中每100克乾燥萃取物含有約·· 克的大果素A ; *丨·4克的大果素B ; # 〇·8克的大果素c ; 15 · 2克的大果素G。 ·製備藍膠尤加利的萃取物 磨碎藍膠尤加利的葉子然後在迴流下以5倍體積之 〇°/〇體積/體積的乙醇/水混合物約丨小時萃取兩次。 20 轉由過濾從溶劑分離植物。 後縮獲得的過濾物然後每100克乾燥萃取物加入0]L克 的抓檬酸使其穩定化。 冷凍濃縮物然後進行冷凍乾燥。 獲得的萃取物中每100克乾燥萃取物含有約·· 克的大果素a ; 26 200820961 • 〇·35克的大果素b ; 籲0·2克的大果素c; 籲〇·5克的大果素G。 5 實例4 ： 。磨碎537克的尤加利葉然後將其置入高壓鍋内。在$ ^150巴的超臨界C〇2下以1〇公斤/小時的流速萃取4 經萃取的葉子在150巴、50。(：的i體積乙醇下每i份 10 重量比的植物利用超臨界c〇2/乙醇混合物進行第二次二 萃取。進行2小時15分鐘的萃取之後在相同操作條件下藉 由通過其本身的C02將其葉子乾燥3〇分鐘。 曰 可獲得273.7克的萃取物，然後藉由蒸發溶劑進行乾 燥。依此方法每1〇〇克乾燥萃取物可獲得含有6·85克大果 15 素G的27.9克萃取物。 兔金Li :測定藍膠尤加利葉萃取物對血清素、多巴胺和正 腎上腺素的再吸收作用 以大鼠的神經突觸進行體外的吸收試驗。 20 (1)血清素（或5-HT)再吸收的測定 其測定方法述於 Perovic，S.和 Muller W.E.G.，1995— 金絲桃萃取物的藥理特性··突觸後受體對血清素吸收的效 應 ’ Zrzwezw-Fo厂sc/i· ，45 ·· 1145〜1148 〇 27 200820961 其原理如下： 含118毫莫耳濃度NaC卜5毫莫耳濃度KC1、2.5毫莫 耳濃度MgSCU、1·2毫莫耳濃度NaHJCU、25毫莫耳濃度 NaHC〇3、11毫莫耳濃度葡萄糖、10微莫耳濃度EGTA和 5 5〇微莫耳濃度抗壞血酸(ρΗ=7·4)的緩衝液内在有或無（對 照）製備自貫例1的藍膠尤加利萃取物或伊米帕明 (imipramine)(標準）之下以〇]微居里血清素在”。◦將 獲得自大鼠腦組織的神經突觸培養15分鐘。基線活動的測 定係在37°C的存在1〇微莫耳濃度伊米帕明以阻斷再吸收 10 之下藉由相同混合物培養15分鐘。 培養之後，使樣本在真空内迅速通過玻璃纖維濾過器 (GB/B ’ Packard)然後以冰冷培養缓衝液清洗兩次以除去游 離的[3η]α清素。乾燥濾過器及利用閃爍試劑（Micr〇sint 0 ’ Packard)藉由閃爍計數器（T〇pCOunt，Packard)測定留滯 15 的放射活性。 其結果表示為對照組[3H]血清素之吸收量的抑制百分 比(請看表1)。 (2)多巴胺（或DA)再吸收的測定 20 其測定方法述於 Janowsky A.、Berger P.、Vocci R、

LabarcaR·、SkolnickP·、和 Paul S.M·，1996—腦中鈉依賴 性[3H]GBR-12935合併的特徵：選擇性標示多巴胺轉運複 & 物的放射性配體 ’ y ，46 : 1272〜1276 〇 其原理如下： 28 200820961 緩衝液(請看血清素再吸收）内在有或無（對照）製備自 實例1的藍膠尤加利萃取物或GBR 12909(標準）之下以〇」 微居里[3H]DA在37°C將突觸介質（大鼠紋狀體的神經突觸) 培養15分鐘。 基線活動的測定係在37°C的存在10微莫耳濃度GBR 12909以阻斷再吸收之下藉由相同混合物培養15分鐘。 培養之後，使樣本在真空内迅速通過玻璃纖維濾過器 (GB/B，Packard)然後以冰冷培養緩衝液清洗兩次以除去游 離的[3h]多巴胺。乾燥濾過器及利用閃爍試劑（Microsint Ο，Packard)藉由閃爍計數器（Topcount，Packard)測定留滯 的放射活性。 其結果表示為對照組[3H]多巴胺之吸收量的抑制百分 比(請看表1)。 (3)正腎上腺素（或NE)再吸收的測定 其測定方法述於 Perovic，S.和 Muller W.E.G.，1995— 金絲桃萃取物的藥理特性：突觸後受體對血清素吸收的效 應 ’ 婦Forsd ，45 : 1145〜1148 〇 其原理如下： 緩衝液(請看血清素再吸收）内在有或無（對照）製備自 實例1的藍膠尤加利萃取物或普羅替林(protriptyline)(標準） 之下以〇·1微居里[3H]NE在37°c將突觸介質（大鼠下視丘 的神經突觸)培養20分鐘。基線活動的測定係在3rt的存 在10微莫耳濃度普羅替林以阻斷再吸收之下藉由相同混 29 200820961 合物培養20分鐘。 培養之後’使樣本在直空内迅速通過玻璃纖維滤過裔 (GB/B，Packard)然後以冰冷培養缓衝液清洗兩次以除去游 離的[3H]NE。乾燥濾過器及利用閃燦試劑(Microsint 〇， Packard)藉由閃爍計數器(T〇pc〇unt，packard)測定留滯的放 射活性。 其結果表示為對照組PH；)正腎上腺素之吸收量的抑制 百分比(請看表1)。 10 (4)結果： 其結果表示為神經遞質再吸收的抑制百分比（請看表 1)。 測定 i清素再吸收 多巴胺再吸收 正腎上腺素再吸收 1¾¾(乾萃取物微多毫井) 1 10 100^ 10巡 10 100 抑制百分比 43 103丁 91 102 ^14" 11 101 15 幻^藍膠尤加利葉萃取物肢清素、乡巴胺和正腎上腺 素再吸收的測定 在10微克/毫升時可明顯抑制也清素和多巴胺的再吸 收，以及在100微克/毫升可明顯抑制上述三種神經遞質的 200820961 再吸收 宜§含大果素G之尤力π利萃取物對無大果素〇和純 大果素G之尤加利萃取物的測定 一 1碎藍膠尤加利葉然後以5體積的二氯甲料取。在 的迴流下進行兩次的萃取。然後在真空内過滤。將 δ併的過濾物濃縮至2體積。 、、、、藉由加入1體積的0·1莫耳濃度碳酸鈉(Na2C〇3)進行 液液萃取。保留用盡的二氯甲烧相。在硫酸納上乾燥獲得 ϋ 殘留物之後，在_的真空内濃縮及蒸發至乾燥而形成 …、大，素的萃取物”(大果* G的重量比例為低㈣1%)。 15 、藉由加入1克分子氫氯酸(HC1)直至獲得約！的酸鹼度 以，化合併的驗性含水相然後以二氯甲烧進行三次的液_ ，萃取。在硫酸鈉上乾爍有機相然後在最高60°C的真空内 濃縮及蒸發至乾燥。獲得的乾燥殘留物即為“ f含大果 的萃取物，，。後者含有7%重量比例的大果素G。 a在具有反向、Symetry Shield®、5微米（Waters)作為固 疋相的拍級官柱上㈣該濃縮萃取物，其以95/猜篇比 例之乙腈/水/三氟乙酸混合物作為流動相。 獲知为餾物之大果素G的純度為約97%。 後續測定也清素再吸收的方法係與實例5相同。其結 果記錄於下表2。 31 20 200820961

^人比車父昌含大果素G萃取物”、“無大果素〇萃取物” 口萄3大果素G分餾物對血清素再吸收的活性 5 前^示較高的大果素⑽量有較大的血清素再吸收抑 大果素B、大果素C和大果素G 金絲桃素(hyperforin)比較的50〇/〇

JtfcLI:測定大果素A、 對神經遞質再吸收與貫葉 抑制濃度(IC5Q) 其方法為依照眘々，丨4； f ^ ^ 、、只例5。大果素A、B、C和G及貫葉金 絲桃素係以不同的濃度進行測定。 從抑制曲線可獲得下列的iC5〇值：

4_1 •測疋大果素A、A果素b、大果tc、大果素G 和貫葉金絲桃素對血清素、正腎上腺素和多巴胺再吸 收的50%抑制濃度（ic5q) 該四種化合物均具有神經遞質再吸 32 15 200820961 收的抑制活性。此外，該四種化合物具有相同強度的 活性。 【圖式簡單說明】 5 無 【主要元件符號說明】 無 33

Claims (1)

1. 200820961 十、申請專利範圍： 1· 一種以尤加利萃取物製備用於治療及/或預防多巴 胺、血清素及/或正腎上腺素再吸收障礙引起之神經性或精 5 祕疾病或賴及功能性軀體障礙和依賴成瘾物質相關疾 病之藥物或食品補充品的用途。

   3·如申請專利範圍第1 ，其特徵在於治療及 L及功能性軀體障礙 ^巴胺、血清素及/或 利萃取物包含至少一 物： 图弟1項之用途，其特徵在於該尤加 種式(I)化合物或其任一非鏡像異構

   4·如申請專利範圍第3 項之用途，其特徵在於該式(I) 200820961 2物為大果素A (5 (⑽_i ((iis，7R) 7·經基^ 7 u四 e>CH3 )，其中R與其連接的碳原子共同形成 c’，基以及R2代表石-異丁基；以及其在尤加利萃取物内 的重里比例為大於或等於0.1%及絕對小於3%。 ^如申請專利範圍第3項之用途，其特徵在於該式⑴ & 2大果素 B (5-((lS)-l-((llS，7R)-7-經基_3,3,7，u_四 甲 f 三環(6.3.0.0(2,4))十一-11-基)-3-曱基丁基)_2,4,6_三羥 基苯-1，3-二甲醛）’其中Rl與其連接的碳原子共同形成 10 15 C^CH3 0H基以及r2代表α—異丁基；以及其在尤加利萃取物 内的重量比例為大於或等於0.1%及絕對小於3%。 6·如申請專利範圍第3項之用途，其特徵在於該式⑴ 化合物為大果素C (5-((lR)-l-((llS)-3,3，ll-三曱基_7_亞曱 基三環(6·3·0,〇(2,4))十一-11-基)-3-曱基丁基)-2,4,6-三羥基 苯-1，3-二曱酸），其中Ri與其連接的碳原子共同形成c=ch2 基以及R2代表β -異丁基；以及其在尤加利萃取物内的重量 比例為大於或等於0.1%及絕對小於3%。 7·如申請專利範圍第3項之用途，其特徵在於該式⑴ 化合物為大果素G (5-(1-(3,3，11-三曱基·7_亞曱基三環 (6·3·〇·0(2,4))十一 _11-基）_3_ 曱基丁基）-2,4,6-三羥基苯-l，3-二曱趁），其中R1與其連接的碳原子共同形成〇CH2基以 及R代表異丁基；以及其在尤加利萃取物内的重量比例為 35 20 200820961 大於或等於〇·1%及絕對小於5%。 8.如—申^專利範圍第1項之用途，其特徵在於該尤加 利萃取物畐含至少-種如申請專利範圍第3項中所 式⑴化合物。 5 9.如㈣專利範圍第8項之用途，其特徵在於該尤加 利卒取物虽含大果素Α，該富含大果素八萃取物内之大果 素Α的4量關為大於或等於3%及絕對小於9〇%。 10.如申請專利範圍第8項之用途，其特徵在於該尤加 利萃取物富含大果素B ’該富含大果素B萃取物内之大果 10 素B的重量比例為大於或等於3%及絕對小於90%。 1L如申請專利範圍帛8項之用途，其特徵在於該尤加 利萃取物富含大果素C，該富含大果素c萃取物内之大果 素C的重量比例為大於或等於3%及絕對小於90%。 12·如申請專利範圍第8項之用途，其特徵在於該尤加 15 利萃取物富含大果素G，該富含大果素g萃取物内之大果 素G的重量比例為大於或等於5%及絕對小於90%。 13·如申請專利範圍第1項之用途，其特徵在於該萃取 物係獲得自選自 Eudesmia、Symphomyrtus 及 Corymbia 亞 屬及下列：Ε· globulus L· ; Ε· pulverulenta Sims ; E. 20 kartzoffiana L.A· S. Jonnson 1 Blaxell ; E. macrocarpa Hook ; E· cinerea F· Muell ex Benth ; E· dorrigoensis(Blakely) L.A.S. Johnson 1 K.D. Hill ； E. leptopoda Benth ； E. occidentals Endl ; E· viridis R.T· Baker ; E· polybractea R.T· 36 200820961 er和E. smithii R T Baker之品種的尤加利0 mL4.如申請專利範圍第1項之賤，其特徵在於該尤加 卞物係萃取自尤加利的葉、花、果實、梗和樹幹。 利範圍第1項之用途，其特徵在於該神經 ，或精神性病徵或疾病或功能性軀體障礙和依賴成癮物 之相關疾病係選自包括： 4 、 φ神經性疾病如神經退化性疾病（阿茲 ，:帕金森氏症、腦金管意外中風、= 铪）、肌萎縮性侧索硬化症、老年癡呆症、額顳葉 2症、血管性失智症、偏頭痛、中樞性神經病變 =病如憂營症（内源性、頑固性、反應性或醫 二:Γί)、崩潰、精神分裂症、雙相憂鬱症、 15 創傷後壓力徵候群、注意力和過動症、進食失^特 別指厭食症和暴舍症）、巩,”進艮失_才 症）、自閉症/、 （特別指空間恐懼 • 憶、注意力和警覺 • 疲勞_群、肌纖維疼痛 能障胃食道逆流、性您喪失、勃起功 質’特別指尼古丁、酒精、鵪片、大麻 20 200820961 ’其特徵在於該藥物 16·如申請專利範圍第丨項之用途 被製成口服或可注射劑型。 17·—種以至少 —式”或其任-非鏡像異構物：

   ^CH3 、C，CH3 C、)H或、oh及R2代表異丁基、〇：_異丁基或厂異丁 基；製備用於治療及/或預防多巴胺、血清素及/或正腎上腺 素再吸收障礙彳丨起之神經性或精神性疾病或病徵及功能性 軀體障礙和依賴成癮物質相關疾病之藥物或食品補充品的 15 用途。 18·如申睛專利範圍第17項之用途，其特徵在於治療 及/或預防該神經性或精神性疾病或病徵及功能性軀體障 礙和依賴成癩物質之相關疾病包含抑制多巴胺、企清素及/ 或正腎上腺素的再吸收。 19·如申請專利範圍第π項之用途，其特徵在於該式⑴ 化合物為： •大果素 A : (5-((lR)_l_((llS，7R)-7-羥基-3,3,7，11_四 曱基三環（6·3.0·0(2,4))十一 -11-基）-3-曱基丁 38 200820961 基)-2,4,6-三羥基苯-1,3-二甲醛），其R1與其連接的 碳原子共同形成基以及R2代表/5-異丁基； •大果素 B : (5-((lS)-l_((llS，7R)-7_羥基-3,3,7，11_四 甲基三環（6.3.0.0(2,4))十一 -11•基）-3-曱基丁 5 基)-2,4,6-三羥基苯-1，3-二甲醛），其R1與其連接的 碳原子共同形成c‘eQHH3基以及R2代表α-異丁基； •大果素 C:(5_((1R)-1-((11S)-3,3，11_三甲基-7-亞曱 基三環（6.3.0.0(2,4))十一 -11-基）-3-曱基丁 基)-2,4,6-三羥基苯-1，3-二曱醛），其R1與其連接的 ίο 碳原子共同形成C=CH2基以及R2代表/3-異丁基； •或大果素G : (5-(1-(3,3，11-三曱基-7-亞曱基三環 (6.3.0.0(2,4))十一-11-基)-3-曱基丁基)-2,4,6-三經 基苯-1,3-二曱醛），其R1與其連接的碳原子共同形 成OCH2基以及R2代表異丁基。 15 20.如申請專利範圍第17項之用途，其特徵在於該大 果素A、大果素B、大果素C或大果素G係獲得自化學或 生物化學合成法或來自植物萃取。 21.如申請專利範圍第17項之用途，其特徵在於該神 經性或精神性病徵或疾病或功能性軀體障礙和依賴成癮物 20 質之相關疾病係選自包括· 籲神經性疾病如神經退化性疾病（阿茲海默症、杭丁頓 舞蹈症、帕金森氏症、腦血管意外中風、頭部創 傷）、肌萎縮性側索硬化症、老年癡呆症、額顳葉 失智症、血管性失智症、偏頭痛、中樞性神經病變 39 200820961 I ㈣症(内源性、㈣性、反應性或醫 :支鬱症）、崩潰、精神分裂症、雙相憂鬱症 ^焦慮症、壓力相關疾病、恐慌症、 幻二1力徵候群、注意力和過動症、進舍二正、 二心厭二症和暴食症)、恐 二，(特 症）、自閉症； 诗別指空間恐懼 籲與神經病變和掉& 性障礙精神疾病有關的記憶、注意力和黎覺 10 15 •=雜躺體徵候群如慢性疲勞 見 欠激躁性腸炎、胃食道逆流、性：益肌纖維疼痛 月έΡ羊礙、尿失禁； 喪失、勃起功 •依賴成癮物質’特別指尼古丁、、、西扯 驗、興奮劑。 積、鴆片、大麻 22·如申請專利範圍第17項之用 物被製成口服或可注射劑型。 、，其特徵在於該藥 23·—種尤加利萃取物，其特徵在於龙 · 、 ⑴化合物或其任一非鏡像異構物：、，、包含至少一種式

   40 20 200820961 其R1及其連接的碳原子共同形成C=CH2或、 V— ^CHg pU C〜〇H或及R2代表異丁基、α-異丁基或/3-異丁 ΟΗ 5 基；以及在於： •大果素 A : (5-((lR)-l-((llS，7R)-7-羥基-3,3,7，11-四 曱基三環（6·3·0·0(2,4))十一 -11-基）-3_曱基丁 基)-2,4,6-三羥基苯-1，3-二甲醛），其R1與其連接的 碳原子共同形成c‘lHH3基以及R2代表/5-異丁基 ίο 的重量比例係大於或等於3%及絕對小於90% ; •大果素 B : (5-((lS)-l-((llS，7R)-7-羥基-3,3,7，11-四 甲基三環（6.3.0.0(2,4))十一 -11-基）-3-曱基丁 基)-2,4,6-三羥基苯-1,3-二曱醛），其R1與其連接的 碳原子共同形成基以及R2代表α-異丁基 15 的重量比例係大於或等於3%及絕對小於90% ; •大果素 C:(5-((1R)小((11S)-3,3，11-三曱基_7_亞曱 基三環（6·3·0·0(2,4))十一 -11-基）_3_ 曱基丁 基)-2,4,6-三羥基苯-1,3-二曱醛），其R1與其連接的 碳原子共同形成C=CH2基以及R2代表/5-異丁基的 20 重量比例係大於或等於3%及絕對小於90% ; 鲁及大果素〇:(5-(1-(3,3，11-三曱基-7-亞曱基三環 (6·3·0·0 (2,4))十一-11-基)-3-甲基丁基）-2,4,6_三經 基苯_1，3_二曱醛），其R1與其連接的碳原子共同形 成C=CH2基以及R2代表異丁基的重量比例係大於 41 .200820961 或等於5%及絕對小於9〇〇/0。 24.—種用於製備如申請專利範圍第23項 方法，其特徵在於其包含下列的步驟： 、卒取物的 5 ·磨碎尤加利的葉、花、果實、梗及/或樹幹； 以有或無共 >谷劑的超5¾界液體萃取至少—^ 萃取物及選擇性地乾燥該萃取物，或二有：溶：集 水和水可混合有機溶劑的混合物萃取至少一’=劑或 離固/液相及濃縮該過濾物。 夕—人’分 25·如申請專利範圍第24項之枝，其特徵在於 10 機溶劑為二氯甲烷或乙酸異丙酯。 26·如申睛專利範圍第24項之方法，其特徵在於該 濃縮步驟相當於至少一次藉由添力^驗的液_液萃取、酸化及 至少一次利用水不可混合溶劑的液/液萃取。 42 200820961 七、指定代表圖·· (一） 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 無 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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