TW200825106A - Tumor therapy with an anti-VEGF antibody - Google Patents

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200825106 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於在以抗-HER2抗體治療期間或之後使用抗_ VEGF抗體對患有復發性HER2陽性癌症之患者之治療。 【先前技術】 血管生成涉及於多種病症之發病機制中，該等病症包括 實體腫瘤；眼内新生血管症候群，諸如增殖性視網膜病變 或年齡相關之黃斑部變性（AMD);類風濕性關節炎；及牛 皮癣（Folkman 等人，J. Biol· Chem. 267 (1992) 10931-10934 ; Klagsbrun等人，Annu. Rev. Physiol. 53 (1991) 217-239 ;及 Garner，A·，Vascular diseases，於 Pathobiology of ocular disease，A dynamic approach 中，Garner, A.及 Klintworth，G. K.(編），第 2版，Marcel Dekker，New York (1994)，第1625· 1710頁）。在實體腫瘤之情況下，新血管 生成使得腫瘤細胞可獲得相較於正常細胞而言之生長優勢 及增殖自主性。因此，已觀察到腫瘤切片之微脈管密度與 乳癌以及若干其他腫瘤中之患者成活率之間的相互關係 (Weidner等人，N. Engl. J· Med. 324 (1991) 1-8 ; Horak等 人 ’ Lancet 340 (1992) 1120-1124 ;及 Macchiarini 等人，

Lancet 340 (1992) 145-146)。 血管内皮生長因子（VEGF)涉及於與腫瘤及眼内病症相 關聯之正常及異常血管生成及新血管生成的調節（Ferrara 等人，Endocr· Rev. 18 (1997) 4-25 ; Berkman 等人，J· Clin. Invest. 91 (1993) 153-159 ; Brown 等人，Human 123320.doc 200825106

Pathol· 26 (1995) 86-91 ; Brown等人，Cancer Res. 53 (1993) 4727-4735 ; Mattern 等人，Brit. J· Cancer. 73 (1996) 931-934 ;及 Dvorak等人，Am. J. Pathol· 146 (1995) 1029-1039)。抗-VEGF中和抗體抑制各種人類腫瘤細胞株 在小鼠體内之生長（Kim等人，Nature 362 (1993) 841-844 ; Warren等人，J. Clin· Invest· 95 (1995) 1789-1797 ; Borgstrom 等人，Cancer Res· 56 (1996) 4032-4039 ;及 Melnyk 等人，Cancer Res. 56 (1996) 921-924)。WO 94/10202、 WO 98/45332、WO 2005/00900 及 WO 00/35956 提及抗 VEGF之抗體。人化單株抗體貝伐單抗（bevacizumab)(以商 標名Avastin⑧銷售）為用於腫瘤治療之抗-VEGF抗體，且為 唯一經認可用於治療癌症之抗血管生成劑（WO 98/45331)。 HER2為人類表皮生長因子受體家族之一成員，且在其 細胞質域中具有蛋白激酶活性。HER2在腫瘤細胞中過度 表現且與不良之預後及成活率相關。因此，HER2為乳癌 治療之一重要目標。抗HER2抗體係自Takai N.等人， Cancer 104 (2005) 2701-2708 ; Yeon，C. H.，等人，Invest New Drugs. 23 (2005) 391-409 ; Wong，W· Μ·等人，Cancer Pract. 7 (1999) 48-50 ; Albanell，J.等人，Drugs Today (Bare). 35 (1999) 931-46 已知。 曲妥珠單抗（Trastuzumab)(以商標名Herceptin⑧銷售）為 用於治療HER2過度表現/HER2基因擴增之轉移性乳癌之重 組人化抗-HER2單株抗體。臨床前研究證明該抗體在活體 123320.doc 200825106 内及活體外具有抗癌活性。此外，在小鼠模型中觀察到曲 妥珠單抗與各種抗瘤劑組合之抗癌活性的附加或協同增 強。在臨床研究中，在HER2過度表現轉移性乳癌患者中 觀察到成活率之擴展。 WO 2005/012531描述在結腸直腸癌、轉移性乳癌及腎癌 之治療中可與抗-ErbB抗體（例如Herceptin®，亦稱為曲妥 珠單抗）及/或抗-VEGF抗體（例如Avastin⑧，亦稱為貝伐單 抗）組合之抗體。根據WO 2005/063816，抗-VEGF抗體在 轉移性乳癌之治療中可與抗-ErbB抗體組合。根據WO 98/4533 1，可藉由將抗-VEGF抗體連續投與或與對於彼等 目的有效之另一試劑（諸如能夠與HER2受體結合之抗體）組 合投與來改良該抗體預防或治療疾病之有效性。WO 2005/00090及WO 2003/077841亦揭示用於腫瘤治療之抗· VEGF抗體與抗-ErbB2抗體之組合。Pegram，M.D·等人， Seminars in Oncology 29 (2002) 29-37係關於抗-ErbB2抗體 與抗-VEGF抗體在乳癌治療中之組合。 臨床腫瘤學家一致認為，癌症治療之失敗未必係由原發 性腫瘤之生長（其通常使用手術來處理）導致，而係因為轉 移性擴散至不同器官中。由不同細胞毒素藥物導致之原發 性腫瘤的消退本身並不總表示抗癌轉移活性。相反，已觀 察到對若干種抗癌藥物起反應之增強癌轉移（Geldof等人， Anticancer Res 8 (1988) 1335-40，Murphy，J·，Clin. Oncol· 11 (1993) 199-201，及 De Larco 等人，Cancer Res. 61 (2001) 2857-61)。明確需要研發不僅靶向原發性腫瘤，亦 123320.doc 200825106 抑制癌轉移之治療療法。舉例而言，該等抗癌轉移活性可 藉由根據 Schneider，T.等人，Clin. Exp. Metas. 19 (2002) 571-582之方法來評估。 【發明内容】 本發明包含抗-VEGF抗體之用途，其係用於製造用於在 以抗-HER2抗體治療期間或之後治療患有復發性HER2陽性 癌症之患者的藥物。 另一實施例為抗-VEGF抗體之用途，其係用於製造用於 在以抗-HER2抗體治療期間或之後預防或減少患有復發性 HER2陽性癌症之患者體内之癌轉移的藥物。 該抗-HER2抗體之治療較佳為使用該抗-HER2抗體之一 線單藥治療。 該抗-VEGF抗體較佳與貝伐單抗一樣結合至相同之抗原 決定基。 該抗-VEGF抗體較佳為貝伐單抗。 該抗-HER2抗體較佳為曲妥珠單抗。 在一較佳實施例中，本發明包含將該抗_VEGF抗體及該 抗-HER2抗體共同投與至患者。 本發明進一步提供一種製品，其包含一容器、一處於該 容器内之包含抗-VEGF抗體之組合物及一指示該組合物之 使用者在以抗-HER2抗體治療期間或之後對患有復發性 HER2陽性癌症之患者投與該抗-VEGF抗體之封裝插頁。 【實施方式】 根據本發明之術語’’VEGF”係指血管内皮細胞生長因子 123320.doc 200825106 (Swiss-Prot第P 1 5692號）、替代性拼接形式（參見例如 Leung等人，Science，246 (1989) 1306-1309及 Houck等人， Mol.Endocrin.，5 (1991) 1806-14)及活性片段，較佳為其N 末端片段。 • 根據本發明之術語”抗-VEGF抗體”為與VEGF特異性結合 且展現抗血管生成活性之抗體。本文中較佳之人化抗-VEGF抗 體或變異抗- VEGF抗體以不高於約lxl(T8M且較佳不高於 約5χ10·9Μ之Kd值與人類VEGF結合。抗-VEGF抗體較佳為 與根據 Presta等人，Cancer Res. 57 (1997) 4593-4599 而生 成之重組人化抗-VEGF單株抗體（貝伐單抗）一樣結合至相 同抗原決定基之單株抗體。較佳之抗體為貝伐單抗。抗-VEGF抗體及其製造方法（例如）在US 6,054,297、US 2003/0190317、US 6,632,926、US 6,884,879及US 2005/0112126 中 描述。 貝伐單抗包含源自阻斷人類VEGF與其受體結合之鼠類 (/ 抗-hVEGF單株抗體的突變人類IgGl構架區及抗原結合互 補判定區。貝伐單抗之約93%之胺基酸序列（包括大部分構 架區）係源自人類IgGl，且約7%之該序列係源自鼠類抗體 . A4.6.1。貝伐單抗具有約149,000道爾頓之分子質量且經糖 、 基化。貝伐單抗及其製備方法係在EP 1325932中描述。 根據本發明之術語"HER2"係指185-kDa生長因子受體， 亦稱為 neu 及 c-erbB-2(Slamon 等人，Science 235 (1987) 177-182; Swiss-Prot P04626)，其功能係關於人類乳癌細 胞中之瘤性轉形。已在20%至30%之乳癌患者中識別該蛋 123320.doc -10- 200825106 白之過度表現，其中該過度表現係與局部晚期疾病、增加 之腫瘤復發可能性及減少之患者成活率相關。多達30%至 40%之患有胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、非小細胞肺 癌、胰腺癌、卵巢癌、腹膜癌、前列腺癌或結腸直腸癌之 患者亦可展現該蛋白之過度表現。 根據本發明之術語W^-HER2抗體”為與Hudziak等人， Mol. Cell. BioL 9 (1989) 1165-1172 中所述之鼠類抗-HER2 抗體4D5 —樣特異性地結合至相同HER2抗原決定基之抗 體。與"HER2之4D5抗原決定基”結合之抗-HER2抗體（包括 抗-HER2抗體4D5自身）及其製造方法（例如）係在US 6,054,297、WO 89/06692、US 6,399,063、US 6，165,464、 US 6,054,297、US 5,772,997、WO 2003/087131、WO 01/00245、WO 01/00238、WO 00/69460、WO 99/31140及 WO 98/17797中描述。在本發明之一較佳實施例中，抗-HER2 抗體為曲妥珠單抗，其為一種重組人化抗-HER2單株抗體 (鼠類抗-HER2抗體4D5之人化變型，稱為rhuMAb HER2或 曲妥珠單抗），其已在臨床上對於已接受廣泛先前抗癌治 療之患有HER2過度表現轉移性乳癌之患者具有活性。 (Baselga等人，J Clin. Oncol. 14 (1996) 737-744)。曲妥珠 單抗及其製備方法係在EP 590058中描述。 π抗原決定基4D51’為ErbB2之細胞外域中與抗體 4D5(ATCC CRL 10463)結合之區域。該抗原決定基靠近 ErbB2之跨膜區。為篩選與4D5抗原決定基結合之抗體， 可進行諸如 Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring 123320.doc 200825106

Harbor Laboratory, Harlow 及 David Lane 編（1988)中所述之 常規交叉阻斷檢定。或者，可進行抗原決定基定位以評估 抗體是否結合至ErbB2之4D5抗原決定基。

ο 如本申請案中所用之術語"抗原決定基，，表示能夠與抗體 特異性結合之蛋白質決定子。抗原決定基通常係由諸如胺 基酸或糖側鏈之分子的化學活性表面分組組成，且通常具 有特異性三維結構特徵以及特異性電荷特徵。構形抗原決 定基及非構形抗原決定基係根據以下方法區分：在變性溶 劑存在下喪失與前者之結合，而未喪失與後者之結合。視 抗原決定基所屬之抗原大小而定，每種抗原可有一個以上 之抗原決定基，此同樣導致每種抗原具有一個以上抗體結 合位點（=抗原決定基）之可能性。 抗體可針對（例如）人類、小鼠或大鼠多肽而生成。本發 明涵蓋特異性識別靶抗原之抗體（多株或單株）。該等抗體 係使用熟習此項技術者所知之標準免疫學技術來培養。抗 體可為多株或單株，或可重組產生（諸如對於人化抗體而 5)。在競爭性測試系統中可容易地判定抗體是否不與已 知治療抗體一樣結合至相同抗原決定基。 、 藉助於競爭性測試系統，可制與相同㈣原結合之兩 種抗體的可能抗原決^基重疊。為此，例如藉助於酶免疫 檢定測試新抗體與已知抗體競爭結合至固定乾抗原之程 度。為此，將適當固定靶抗原與經標記形式之已知抗體及 過量之所述抗體一刼i立盖 ^ , σ養。糟由偵測結合標記，可容易地 確定所述抗體可置換夾ό έ 換來自結合位點（=抗原決定基）之已知 123320.doc -12- 200825106 抗體的程度。若在相同濃度或較高濃度下（較佳在相對於 已知抗體1〇5倍過量之所述抗體的情況下）存在大於10%、 較佳大於20%之置換，則存在抗原決定基重疊。其意謂所 述抗體與已知抗體一樣結合至相同抗原決定基。 術語’’靶抗原π係關於藉由其相應治療性抗體而結合之生 物分子。舉例而言，抗HER2(=ErbB2或ρ 185心“）治療性抗 體（如Herceptin⑧或Omnitarg®)之靶抗原為HER2，抗EGFr 治療性抗體（如Erbitux®)之靶抗原為EGFr，抗VEGF治療性 抗體（如Avastin⑧）之靶抗原為VEGF。靶抗原可為可溶性 (亦即分泌或排出）之靶抗原或（細胞）膜結合之靶抗原。 免疫檢定為熟習此項技術者所熟知。在相關教科書中概 述用於進行該等檢定之方法以及實踐應用及程序。相關教 科書之實例為 Tijssen，P·，Practice and theory of enzyme immunoassays 中之 Preparation of enzyme-antibody or other enzyme-macro molecule conjugates ， Burdon, R.H.及 v. Knippenberg，P.H.(編），Elsevier，Amsterdam (1990)，第 221-278 頁；及 Colowick，S.P.及 Caplan，Ν·0·(編），Methods in Enzymology， Academic Press, dealing with immunological detection methods之各卷，尤其為第 70、 73、74、84、92及 121卷 ° 術語HER2受體蛋白之π過度表現”意欲表示相對於源自 患者之特定組織或器官之正常細胞中的表現水平而言， HER2受體蛋白在源自該組織或器官内之腫瘤細胞中之異 常表現水平。藉由此項技術中已知之標準檢定可確定患有 123320.doc -13- 200825106 特徵在於HER2受體過度表現之癌症的患者。較佳使用免 疫組織化學（IHCH貞測在冷柬或石蠟包埋組織切片之固定 細胞中量測過度表現。當外加組織染色時，可確定革巴蛋白 之定位且可定性地且半定量地量測其在腫瘤中之表現程 度。該等IHC偵測檢定在此項技術中為已知的，且包括臨 床試驗檢定（CTA)、市售LabCorp 4D5測試及市售DAK〇

HeixePTeSt®(DAKO，Carpinteria，Calif )。後者

ϋ 。一染色(0為正常表現，3+表示最強陽:表 =: 定範圍以識別具有HER2蛋白過度表現之癌症（參見 Herceptin®(曲妥珠單抗）完整處方資訊；1998年9月； Genentech，Inc· ’ San Francisco，Calif )。因此，具有特徵 為1+、2+或3+,較佳為2+或3+，更佳為3 +範圍内之HER2 蛋白過度表現之癌症的患者將自本發明之治療方法獲益 術語” HER2陽性癌症，，係指諸如以下之癌症：乳癌、胃 癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、卵 巢癌、腹膜癌、前列腺癌或結腸直腸癌，其特徵在於 HER2蛋白之過度表現。 HER2陽性癌症可為（例如）肺癌、非小細胞肺（nscl) 癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭 部或頸部癌症、皮膚或眼内黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直 知癌肛門&域癌症、胃癌（stomach cancer，gastric cancer)、結腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮内膜 癌、子宮頸癌、陰道癌、陰門癌、霍奇金病（H〇dgkin，s Disease)、食道癌、小腸癌、内分泌系統癌、甲狀腺癌、 123320.doc -14- 200825106 副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、 前列腺癌、膀胱癌、腎癌或尿道癌、腎細胞癌、腎:癌、 間皮瘤、肝細胞癌、膽管癌、慢性或急性白血病、淋巴細 胞性淋巴瘤、中樞神經系統（CNS)之費瘤、脊椎神經轴腫 瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞 瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、脊臈瘤、鱗 狀細胞癌、垂體腺瘤，其包括以上癌症中任一者之難治癒 又3L或以上癌症中一或多者之組合。癌前病狀或病變包括 (例如)由下列各病症組成之群：口腔白斑症、光化性角化 病(日光性角化病；)、結腸或直腸之癌前息肉、胃上皮里型 增生、腺瘤異型增生、遺傳性非息肉性結腸癌症候群 (HNPCC)、巴瑞特氏食道症⑺繼心⑽咖㈣、膀耽里 型增生及癌前頸部病狀。在一較佳實施例中，癌症為復發 性證2陽性乳癌，其較佳在抗概2抗體之—線單藥治療 Ο /月間或之後n療’其中該抗·ΗΕΚ2抗體較佳為曲妥 抗。 術語"乳癌”係指異常乳腺細胞之非受控生長4包括乳 腺管原位癌、侵襲性乳腺管癌、小葉原位癌 癌、應、佩吉特氏乳頭病(Pagetis disease 〇f :e nipple)及轉移性乳癌。 術語"復發性癌症”係指初始對於先前治療作出反應但該 治療反應未在其體内維持之腫瘤患者體内之異常細胞的非 μ生長”w復發性HER2陽性癌症"係指異常細胞之 非文控生長’其特徵在於初始對於抗臟2抗體（較佳為曲 123320.doc 200825106 妥珠單抗）之先前治療作出反應但該治療反應於以該抗-HER2抗體治療期間未在其體内維持之腫瘤患者體内的 HER2蛋白過度表現。將初始對於以抗-HER2抗體（較佳為 曲妥珠單抗）之先前治療作出反應但該治療反應未在其體 内維持之腫瘤患者稱為”復發者’’。 根據從業者藉由源自此項技術中一般已知之臨床及實驗 室資料的結果而確定之醫學判斷來確立治療反應（RE)，從 而評估患者治療。舉例而言，該等資料可自臨床檢查、細 胞學及組織學技術、内窺鏡檢查法及腹腔鏡檢查法、超 音、CT及MRI掃描、胸部X射線及乳腺成像以及量測腫瘤 標記（諸如CEA、Cyfra、CA15-3、介白素8及可溶性HER2) 之濃度而獲得。較佳可使用RECIST標準來測定腫瘤反應 (RE)。（Therasse等人，J. Nat· Cancer Institute. 92 (2000) 205-216)。 根據該等RECIST標準，視腫瘤之體積發展或消退（例如 經由CT測定）而定，將實體腫瘤之腫瘤反應（Therasse等 人，J. Nat. Cancer Institute. 92 (2000) 205-216)分類為四 個水平：完全反應（CR)或部分反應（PR)、穩定疾病（SD)及 進行性疾病（PD)(參見表1)。此外，歐洲癌症研究與治療組 織（EORTC)提出視經由2-[18F]-氟-2-去氧葡萄糠正電子放 射斷層攝影法（FDG-PET)(Young H.，等人，Eur J Cane 35 (1999) 1773-1782及 Kellof，G. J.等人，Clin Cane Res 11 (2005) 2785- 2808)量測之腫瘤代謝而定分類為四個水平： 完全代謝反應（CMR)或部分代謝反應（PMR)、穩定代謝疾 123320.doc -16 - 200825106 病（SMD)及進行性代謝疾病（pmD)(參見表2)。 表1 : CT標準（根據RECIST)標準

CT量測： 最長直徑變化總和 RECIST 消失；（治療開始後)4週時確認 CR 30%減少；4週時確認 PR 既不滿足PR標準亦不滿足PD標準 SD 20%增加，在疾病增加之前未記載CR、PR、SD PD 表2 :建議FDG-PET(根據EORTC，參見Young H.，等 人，Eur J Cane 35 (1999) 1773_1782)

PET量測 建議 FDG-PET 標準 2-[lsF]-氟-2-去氧葡萄糖(FDG)腫瘤攝取之完全解析 CMR 在一個治療循環後最少15%至25%之標準化攝取值 (SUV)減少，且在一個以上治療循環後最少25%以上 之標準化攝取值(SUV)減少 PMR 標準化攝取值(SUV)增加<25%或SUV減少<15% FDG腫瘤(>20%之最長尺寸)攝取程度無可視增加 SMD SUY 增加 >25% FDG腫瘤攝取(>20%之最長尺寸)之可視增加 在轉移性病變中出現新FDG攝取 PMD 因此，根據本發明之’，反應（RE)”&n無反應（NR)’’最佳係 根據藉由電腦斷層攝影法（CT)與2-[18F]-氟-2-去氧葡萄糖 正電子放射斷層攝影法（FDG-PET)(Kellof，G· J.等人，Clin Cane Res 11 (2005) 2785，2808 及 Young Η·等人，Eur J Cane 35 (1999) 1773-82)之組合所獲得之資料，使用如上 文所述之RECIST及FDG-PET標準兩者來建立。因此，如 123320.doc -17- 200825106 下測定根據本發明之反應（RE)及無反應（NR): 反應（RE):經由CT-RECIST標準建立CR或PR(表1)且同 時經由FDG-PET建立CMR或PMR(表2)。因此，反應（RE) 意謂對於組合CT及PET量測之以下四種情況中之一者：CR 及 CMR、PR 及 PMR、CR 及 PMR 以及 PR 及 CMR。 無反應（NR):經由CT-RECIST標準建立SD或PD(表1)且 同時經由FDG-PET建立SMD或PMD(表2)。因此，對於組 合CT及PET量測之以下四種情況表示無反應（NR) : SD及 SMD、SD及 PMD、PD及 SMD 以及 PD及 PMD。 通常在治療開始後約3至8週，較佳約6週時測定反應。 該反應測定通常以4至8週，較佳6至8週之時間間隔重複進 行。當在第一次測定時識別顯著之反應（RE)，則最早可在 第二次反應測定時測定復發（其意謂在第一次測定後無反 應（NR))。抗-VEGF抗體之治療最早開始於HER2陽性癌症 之復發的測定之後。對於患有復發性HER2陽性癌症之患 者之抗-VEGF抗體治療較佳最早開始於自以該抗-HER2抗 體之治療開始之時間點計12週後，更佳為15週後且進一步 更佳為1 8週後。在一較佳實施例中，欲經治療之癌症為復 發性HER2陽性癌症，較佳為復發性HER2陽性乳癌。 術語”患有復發性HER2陽性癌症之患者”係指在其體内 於第一次反應測定之後建立為反應（RE)，且於第二次或其 後之反應測定中建立為無反應（NR)之患者。 如本文所用之術語"患者”較佳係指需要治療癌症或癌前 病狀或病變之治療的人類。然而，術語’’患者”亦可係指需 123320.doc -18 · 200825106 要治療之非人類動物，較佳為哺乳動物，尤其諸如狗、 貓、馬、牛、豬、羊及非人類靈長類動物。 術語’’群’’係指患者之群以及患者之子群。 本發明包含抗-VEGF抗體之用途，其係用於製造用於在 以抗-HER2抗體治療期間或之後治療患有復發性HER2陽性 癌症之患者的藥物。 在一較佳實施例中，本發明包含抗-VEGF抗體之用途， 其係用於製造用於在以抗-HER2抗體治療期間治療患有復 發性HER2陽性癌症之患者的藥物。此係指抗-VEGF抗體 用於製造用於治療患有復發性HER2陽性癌症之患者之藥 物的用途，其包含在HER2陽性癌症復發之後將該抗-VEGF 抗體及該抗-HER2抗體共同投與至患者。因此，較佳在以 該抗-HER2抗體治療期間將該藥物投與至患者。在一較佳 實施例中，本發明包含抗-VEGF抗體之用途，其係用於製 造用於在抗-HER2抗體之一線單藥治療期間治療患有復發 性HER2陽性癌症之患者的藥物。因此，較佳在該抗-HER2 抗體之一線單藥治療期間將該藥物投與至患者。 在一較佳實施例中，本發明包含抗-VEGF抗體之用途， 其係用於製造用於在以抗-HER2抗體治療之後治療患有復 發性HER2陽性癌症之患者的藥物。此係指抗-VEGF抗體 用於製造用於治療患有復發性HER2陽性癌症之患者之藥 物的用途，其包含在HER2陽性癌症復發之後將該抗-VEGF 抗體單獨投與至患者。因此，較佳在以該抗-HER2抗體治 療之後將該藥物投與至患者。在一較佳實施例中，本發明 123320.doc -19- 200825106 包含抗- VEGF抗體之用途，其係用於製造用於在抗_HER2 抗體之一線單藥治療之後治療患有復發性HER2陽性癌症 之患者的藥物。因此，較佳在該抗_]^£112抗體之一線單藥 治療之後將該藥物投與至患者。 該抗-VEGF抗體較佳與貝伐單抗一樣結合至相同之抗原 決定基。 該抗-VEGF抗體較佳為貝伐單抗。 ^、 該抗-HER2抗體較佳為曲妥珠單抗。 如本文所用之術語，，一線治療”係指對於癌症或癌轉移之 治療所指定之第一種類型的藥物治療。此可為在診斷及/ 或手術後初始提供之辅助或新型辅助化學治療或免疫治 療。如本文所用之術語”輔助化學治療或免疫治療，，係指手 術之後旨在防止癌症復發之治療，如本文所用之術語，，新 型輔助化學治療或免疫治療”係指手術之前意圖減小腫瘤 大小所給定之治療。如本文所用之術語"化學治療，，係指利 用化學物質或生物化學物質（如細胞毒素藥物，諸如5-氟尿 。密淀）之癌症化學治療，或使用諸如曲妥珠單抗之單株抗 體或使用諸如埃羅替尼（erl〇tinib)之激酶抑制劑來治療癌 症之輕向治療。 - 如本文所用之術語，，一線單藥治療，，係指使用單一化學物 質或生物化學物質之如上文所述之一線治療（不同於術語 ’’一線組合治療”，其係指使用兩種或兩種以上化學物質或 生物化學物質之一線治療）。 在一較佳實施例中，本發明包含將該抗體及該 123320.doc -20- 200825106 抗-HER2抗體共同投與至患者。 一般而言，術語”用於製造藥物之方法”係關於製造用於 如本文所指定之適應症且特定言之用於治療腫瘤、腫瘤轉 移或癌症之藥物。 本發明進一步包含一種在以抗_HER2抗體治療期間或之 後治療患有復發性HER2陽性癌症之患者的方法，其包含 將治療有效量之抗-VEGF抗體投與至患者。

Ο 在一較佳實施例中，本發明包含一種在以抗_HER2抗體 治療期間治療患有復發性HER2陽性癌症之患者的方法， 其包含在HER2陽性癌症復發之後將治療有效量之抗_ vegf 抗體及該抗-HER2共同投與至患者。 /-較佳實施例中，本發明包含__種在以抗·舰2抗體 治療之後治療患有復發性HER2陽性癌症之患者的方法， 其包含在HER2陽性癌症復發之後將治療有效量之抗·vegf 抗體單獨投與至患者。 除非另外指丨’否則如本文所用之術語·，治療,,意謂逆 轉、減輕、抑難展或㈣（料地或完全 :::其:r癌或贊生性細胞在患者體内之生長。除非另 外=㈣如本文㈣之術語"治療"係指治療之行為。 n療方法”或其等效物在應 :::::減少或消除患者體内之癌細胞數量或減= "治療方;二序二方/。對於癌症或另-増殖性病症之 胞或病症之數量；=胞或其他病症實際上將消除，細 實際上將減少’或癌症或其他病症之症狀 123320.doc -21 - 200825106 κ際上將減輕。通常，即使在成功可能性較低之情況下亦 將進行治療癌症之方法，但鑒於患者之病史及預期存活 率’该方法仍被視為總體上有益之行為方案。 不a而喻地，以治療有效量將抗體投與至患者，該治療 - f效量為將引發研究者、獸醫、醫師或其他臨床醫師所追 之組織、系統、動物或人類之生物或醫學反應之主題化 合物或組合的量。 〇 丑抗-VEGF抗體投藥之量或抗- VEGF抗體及抗_HER2抗體 ”同杈藥之里及投藥之時序將視所治療患者之類型（物 種生別、年齡、體重等）及病狀以及所治療疾病或病狀 之厫重程度而定。通常使用抗-VEG抗體及抗_HER2抗體 伐單抗及曲妥珠單抗）之典型劑量。舉例而言，根據 ^明’藉由—或多次獨立投藥或藉由連續輸注之抗體之 又藥刮里可為約1叫㈣至5〇 mg/kg(例如〇1至2〇 mg/kg)抗 體。典型每曰劑量可在約1 M/kg至約100 mg/kg之範圍 J 心在一較佳態樣中，每2至3週以約img/kg至約15mg/kg 耗圍内之劑量投與抗體。曲妥珠單抗之較佳劑量在以連續 輸注形式投與時為4 mg/kg之速效劑量，及隨後以連續輸 庄形式投樂每3週輸注2 mg/kg至6 mg/kg，較佳為2 g g i至m彳到疾病進展。貝伐單抗之較佳劑量為每 14天一次靜脈内輸注形式之5叫心至㈣心，較佳為$ mg/kg至1〇 mg/kg，且更佳為5。 Γ在以抗_HER2抗體治療期間”係指除抗-HER2抗體 之外投與之抗-VEGF抗體之"共同投藥"或"共同投與"。"共 123320.doc -22- 200825106 同投藥”意謂除抗-HER2抗體之外同時或連續地投與抗-vegf 抗體。共同投藥可為同時或以任意次序連續，其中較佳存 在兩種（或所有）活性劑同時發揮其生物活性之時段。當同 時投與兩種抗體時，在同一天於一次投藥中（例如在一次 - 連續輸注期間）投與該劑量。當連續投與兩種抗體時，在 • 同一天於兩次獨立投藥（例如兩次獨立連續輸注）中投與該 劑量，或在第1天投與抗體中之一種且在第2天至第7天， 較佳在第2天至第4天投與第二種抗體。關於抗-VEGF抗體 及抗-HER2抗體之維持劑量的術語”共同投藥，，或，，共同投與，， 意謂若治療循環適合於兩種抗體，則可同時（例如在一次 連續輸注期間）投與該等維持劑量。或可在一天或數天内 連續投與該等維持劑量，例如每隔3週投與抗_11£以2抗體 之、准持蜊里，且每隔2週投與抗-VEGF抗體之維持劑量。 其他治療循環（通常為丨至4週，較佳為2至3週）亦可用於兩 種抗體。 術語”在以抗-HER2抗體治療之後，，係指在停止抗_HER2 抗體治療之後投與抗_vegf抗體之投藥。 在一較佳實施例中，藥物適用於減少該患者體内之癌轉 移，增加該患者之存活持續時間，增加該患者之無進展存 活J柘加反應之持續時間，導致如由存活持續時間、無 進展存活期、反應速率或反應持續時間所量測之對經治療 患者統計學上顯著且臨床上有意義之改良。在一較佳實施 例中，藥物適用於增加患者群中之反應速率。 在車乂佳貝施例中，藥物適用於在以抗-HER2抗體治療 123320.doc -23- 200825106 期間藉由將該抗_VEGF抗體（較佳為貝伐單抗）及該抗_ HER2抗體（較佳為曲妥珠單抗）共同投與至患有復發性 HER2陽性癌症之患者，從而減少該患者體内之癌轉移。 在一較佳實施例中，本發明包含抗_VEGF抗體之用途， - 其係用於製造用於在以抗-HER2抗體治療期間或之後預防 或減少患有復發性HER2陽性癌症之患者體内之癌轉移的 藥物。 ^ 在一較佳實施例中，本發明包含抗-VEGF抗體之用途， 其係用於製造用於在以抗_HER2抗體治療期間預防或減少 患有復發性HER2陽性癌症之患者體内之癌轉移的藥物。 因此，較佳在以該抗—HER2抗體治療期間投與該藥物。 在一較佳實施例中，本發明包含抗_VEGf抗體之用途， 其係用於製造用於在抗-HER2抗體之一線單藥治療期間預 防或減少患有復發性HER2陽性癌症之患者體内之癌轉移 的藥物。因此，較佳在該抗_HER2抗體之一線單藥治療期 Q 間投與該藥物。 在一較佳實施例中，本發明包含抗-VEGF抗體之用途， 其係用於製造用於在以抗-HER2抗體治療之後預防或減少 ' 患有復發性HER2陽性癌症之患者體内之癌轉移的藥物。 - 因此，較佳在以該抗-HER2抗體治療之後投與該藥物。 在一較佳實施例中，本發明包含抗-VEGF抗體之用途， 其係用於製造用於在抗_HER2抗體之一線單藥治療之後預 防或減少患有復發性HER2陽性癌症之患者體内之癌轉移 的藥物。因此，較佳在該抗_HER2抗體之一線單藥治療之 123320.doc -24- 200825106 後投與該藥物。 根據本發明之術語丨丨癌轉客 —轉移係指癌細胞自原發性腫瘤至 -者體内其他一或多個位點之傳輸 曰 轉移之方法在此項技術中已知；疋& ’正疋否已 ㈣ f 6知，且包括㈣掃描、胸部χ 射線、CAT掃描、贿掃描及腫瘤標記測試。 Ο

，二本文利之術語"用於預防癌轉移之藥物”或”用於減 ，。轉移之樂物”係指用作對抗患有復發㈣咖陽性癌症 之患者體内之癌轉移之預防劑的藥物，其以此方式抑制或 減少癌細胞自原發性腫瘤至患者體内其他—或多個位點之 進—步傳輸。此意謂對原發性、轉移性腫瘤或癌症之轉移 進：預防、延遲或抑制。較佳預防或減少肝臟之癌轉移， 其思明預防或減少癌細胞自原發性腫瘤至肝臟之轉移性傳 輸0 在本發明之上下文中，額外之其他細胞毒素劑、化療劑 或抗癌劑，或增強該等藥劑之效應的化合物可在抗_her2 抗體之先前治療（較佳為先前一線單藥治療）失敗後（亦即在 線曲女珠單抗單藥治療之治療後於患有復發性HER2陽 性癌症之患者體内）用於抗_ VEGF抗體加抗-HER2抗體組合 治療，或用於抗-VEGF抗體治療。較佳在無該等額外細胞 毋素劑、化療劑或抗癌劑，或增強該等藥劑之效應之化合 物的情況下使用抗-VEGF抗體加抗-HER2抗體組合治療或 抗-VEGF抗體治療。 例如’該等藥劑包括：烷基化劑或具有烷基化作用之藥 劑’諸如環填醢胺（CTX ;例如cytoxan®)、苯丁酸氮芥 123320.doc -25- 200825106 (chlorambucil)(CHL ;例如 leukeran®)、順崔白（cisplatin)(CisP ; 例如 platinol®)、白消安（busulfan)(例如 myleran®)、美法 侖（melphalan)、卡莫司汀（carmustine)(BCNU)、鏈脲佐菌 素（streptozotocin)、曲他胺（triethylenemelamine)(TEM)、 絲裂黴素C(mitomycin C)及其類似物；抗代謝物，諸如甲 胺 口票吟（methotrexate)(MTX)、依託泊皆（etoposide)(VP16 ; 例如vepesid®)、6-魏基嗓呤（6MP)、6-硫鳥嗓呤（6TG)、阿 糖胞苷（cytarabine)(Ara-C)、5-氟尿嘧啶（5-FU)、卡西他濱 (capecitabine)(例如 Xeloda®)、達卡巴喚（dacarbazine)(DTIC) 及其類似物；抗生素，諸如放線菌素D(actinomycin D)、 經道諾紅黴素（doxorubicin)(DXR ;例如 adriamycin®)、道 諾黴素（daunorubicin)(柔紅黴素（daunomycin))、博萊黴素 (bleomycin)、米拉黴素（mithramycin)及其類似物；生物驗 類，諸如長春花屬生物驗類，如長春新驗（vincristine)(VCR)、 長春驗（vinblastine)及其類似物；及其他抗腫瘤劑，諸如 紫杉醇（paclitaxel)(例如taxol®)及紫杉醇衍生物；細胞抑 制劑；糖皮質激素，諸如地塞米松（dexamethasone)(DEX ; 例如decadron®);及皮質類固醇，諸如潑尼松 (prednisone);核苷酶抑制劑，諸如羥基脲；胺基酸消耗 酶，諸如天冬醯胺酶；甲醯四氫葉酸及其他葉酸衍生物； 及類似各種抗腫瘤劑。以下藥劑亦可用作額外藥劑：胺磷 汀（arnifostine)(例如 ethyol®)、放線菌素（dactinomycin)、 氮芥（mechlorethamine，nitrogen mustard)、鏈腺佐菌素 (streptozocin)、環構醢胺、洛莫司汀（lomustine)(CCNU)、 123320.doc -26- 200825106 羥道諾紅黴素脂（doxorubicin lip〇)(例如doxil®)、吉西他濱 (gemcitabine)(例如 gemzar®)、道諾黴素脂（daunorubicin lipo)(例如 daunoxome®)、丙卡巴肼（procarbazine)、絲裂黴 素、多烯紫杉醇（docetaxel)(例如taxotere⑧）、阿地白介素 , (aldesleukin)、卡鉑（carboplatin)、奥沙利鉑（oxaliplatin)、 克拉屈濱（cladribine)、喜樹鹼（camptothecin)、CPT 11(伊 立替康（irinotecan))、10 -經基7 -乙基-喜樹驗（SN3 8)、氟脲 苦（floxuridine)、敗達拉濱（f!udarabine)、異環填醢胺 〇 (ifosfamide)、伊達比星（idarubicin)、美司納（mesna)、干 擾素β、干擾素α、米托蒽醌（mitoxantrone)、拓朴替康 (topotecan)、亮丙立德（leuprolide)、甲地孕酮（megestrol)、 美法侖、魏基嘌呤（mercaptopurine)、普卡黴素 (plicamycin)、米托擔（mitotane)、培門冬酶（pegaspargase)、 噴司他丁（pentostatin)、口辰泊溴烧（pipobroman)、普卡黴素 (plicamycin)、他莫西芬（tamoxifen)、替尼泊苦 (teniposide)、睾内赂（testolactone)、硫鳥嗓呤（thioguanine)、 σ塞替派（thiotepa)、烏拉莫司、汀（uracil mustard)、長春瑞賓 (vinorelbine)、苯丁酸氮芥。較佳在無該等額外藥劑之情 況下使用抗-VEGF抗體加抗-HER2抗體組合治療或抗· - VEGF抗體治療。 在本發明之上下文中，抗激素劑可在抗-HER2抗體之先 前治療（較佳為先前一線單藥治療）失敗後（亦即在患有復發 性HER2陽性癌症之患者體内）用於抗-VEGF抗體加抗-HER2 抗體組合治療中，或用於抗-VEGF抗體治療中。如本文所 123320.doc -27- 200825106 用之術語"抗激素劑”包㈣於調節或抑制激素對於腫瘤之 作用的天然或合成有機化合物或肽化合物。例如，抗激素 T包括：類固醇受體拮抗劑、抗雌激素，諸如他莫西芬:、 雷洛西芬（raloxifene)、芳香酶抑制性4(5)_咪唑、其他芳香 . 酶抑制劑、42·羥基他莫西芬、曲沃西芬（trioxifene)、克洛 西芬（keoxifene)、LY 117018、奥那司酮（onapHst〇ne)及托 瑞米芬（t〇remifene)(例如Farest〇n®);抗雄激素，諸如氟他 f) 胺（flutamide)、尼魯胺（nilutamide)、比卡魯胺（bicalutamide)、 冗丙立德及戈舍瑞林（goserelin);及以上任一者之醫藥學 上可接受之鹽、酸或衍生物；醣蛋白激素之促效劑及/或 拮抗劑’諸如促濾泡素（FSH)、促甲狀腺素（TSH)及促黃體 素（LH)及LHRH(促育體素釋放激素）；以z〇ladex®(AstraZeneca) 市售之LHRH促效劑戈舍瑞林乙酸鹽；LHRH拮抗劑D-丙胺 醯胺N-乙醯基_3-(2-萘基）-D-丙胺醯基-4-氯-D-苯基丙胺醯 基-3·(3·吡啶基）-D-丙胺醯基-L-絲胺醯基-Ν6-(3·吡啶基羰 (J 基）-L·離胺醯基-Ν6-(3-吡啶基羰基）-D-離胺醯基-L-白胺 醯基-N6-(l-甲基乙基）-L-離胺醯基-L-脯胺酸（例如 Antide®，Ares-Serono) ; LHRH拮抗劑加尼瑞克（ganirelix) - 乙酸鹽；類固醇抗雄激素環丙孕酮（cyproterone)乙酸鹽 、 （CPA)及甲地孕酮乙酸鹽，以 Megace®(Bristol-Myers

Oncology)市售；非類固醇抗雄激素氟他胺（2·甲基-N_ [4,20-硝基-3_(三氟甲基）苯丙醯胺），以Eulexin⑧（Schering Corp.)市售；非類固醇抗雄激素尼魯胺（5,5-二甲基确 基-3-(三氟甲基）-4，-硝基苯基]-4,4-二甲基-嘯峻σ定-二銅）； 123320.doc -28 - 200825106 及其他非許可$體之拮抗劑，諸如Rar(視黃酸受體）、 RXR(類視色素χ受體）、TR(曱狀腺受體）、舰(維生素〇 受體）及其類似受體之拮抗劑。該抗_vegf抗體加抗概2 抗體組合治療或抗_VEGF抗體治療較佳係在無該等額外抗 激素劑之情況下使用。 上文所述之細胞毒素劑及其他抗癌劑在化療方案尹之用 途一般充分表徵於癌症治療技術中，且其用途在本文中伴 些調整而歸人相同考慮中，以監控容許度及有效性以 及，制投藥途徑及劑量之。舉例而言，細胞毒素劑之實際 劑篁可視藉由使用組織培養方法所測定之患者之培養細胞 反應而變化。-般而言，與不存在額外其他藥劑之情況下 所用之量相比，劑量將減少。 有效細胞毒素劑之典型劑量可介於製造商所推薦之範圍 内’、且其中在由活體外反應或動物模型中之反應表示時， 可減少至多約一個數量級之濃度或量。因此，實際劑量將 視醫師之判斷、患者之病狀及治療方法之有效性(基於經 原發培養之惡性細胞或經組織培養之組織樣本的活體外反 應性，或在合適動物模型中所觀察到之反應）而定。 在本發明之上下文中，額外抗增殖劑可在抗_HER2抗體 之先前治療（較佳為先前一線單藥治療）失敗後用於抗_VEGF 抗體加抗-HER2抗體組合治療中或用於抗_VE(JF抗體治療 中，該等抗增殖劑包括（例如）··酶法呢基蛋白轉移酶之抑 制劑及受體酪胺酸激酶PDGFR之抑制劑，其包括在以下專 利案中揭示及主張之化合物：美國專利第6,〇8〇,769號、第 123320.doc -29- 200825106 6，194,438號、第 6,258,824號、第 6,586,447號、第 6,071，935號、 第 6,495,564號、第 6，150,377號、第 6,596,735號及第 6,479,513 號，及國際專利公開案WO 01/40217。該抗-VEGF抗體加 抗-HER2抗體組合治療或抗_VEGI^體治療較佳係在無該 等額外抗增殖劑之情況下使用。 在本發明之上下文中，在抗-HER2抗體之先前治療（較佳 為先前一線單藥治療）失敗後（亦即在患有復發性HER2陽性 (、 癌症之患者體内）除抗··VEGF抗體加抗-HER2抗體組合治療 或抗-VEGF抗體治療之外，可進行有效量之離子化放射及/ 或使用放射性藥品。放射源可位於經治療患者之體外或體 内。當該源位於患者體外時，將該治療稱為體外放射治療 (EBRT)。當放射源位於患者體内時，將該治療稱為近距治 療（BT)。在本發明之上下文中所用之放射性原子可選自包 括（但不限於）下列各原子之群：鐳、鉋-137、銥_192、鎢- 241、金 _198、始 _57、銅 _67、鍀-99、碘-123、埃-131及 Ο 錮-111。當本發明之EGFR激酶抑制劑為抗體時，亦可能 使用該等放射性同位素來標記該抗體。較佳在無該等離子 化放射之情況下使用抗_VEGF抗體加抗_HER2抗體組合治 • 療或抗-VEGF抗體治療。 放射性治療為用於控制不可切除或不可動手術之腫瘤及/ 或腫瘤轉移之標準治療。在將放射治療與化學治療組合 時已可見改良之結果。放射治療係基於此原理：傳遞至 靶區域之高齊j量放射將導致腫瘤及正常組織中之生殖細胞 死亡。放射給藥方案-般係根據放射吸收劑量㈣、時間 123320.doc -30- 200825106 及分級來定義，且必須由腫瘤學家小心地定義。患者接受 之放射量將視各種考慮因素而定，但最重要之兩個考慮因 素為腫瘤相對於身體其他重要結構或器官之位置，及腫瘤 已擴散之程度。對於經受放射治療之患者而言，典型治療 - 過程將為歷時1至6週時期之治療時程，將10與80 Gy之間 的總劑量按照每週5天約1.8至2.0 Gy之單一每日分量投與 至患者。在本發明之一較佳實施例中，當使用本發明之組 f ) 合治療及放射來治療人類患者體内之腫瘤時，存在協同效 應。換言之，當與放射組合時，視情況與額外化療劑或抗 癌劑組合時，藉助於包含本發明之組合或單一治療之藥劑 對腫瘤生長之抑制作用得以增強。舉例而言，輔助放射治 療之參數包含於國際專利公開案W〇 99/60023中。 根據已知方法，藉由靜脈内投藥以大丸劑形式或藉由歷 時一段時期之連續輸注，藉由肌肉内、腹膜内、腦脊内、 皮下、關節内、滑液内或鞘内途徑將抗體投與至患者。抗 U 體之靜脈内或皮下投藥為較佳的。 本發明進一步提供一種製品，其包含一容器、一處於該 容器内之包含抗-VEGF抗體之組合物及一指示該組合物之 ’ 使用者在以抗-HER2抗體治療期間或之後對患有復發性 HER2陽性癌症之患者投與該抗-Vegf抗體之封裝插頁。 術语”封裝插頁”係指通常包括於治療產品之商業封裝中 之說明書，其可包括關於適應症、用法、劑量、投藥、禁 忌及/或涉及該等治療產品用途之警告的資訊。 在一較佳實施例中，製品容器可進一步包括醫藥學上可 123320.doc -31 - 200825106 接受之載劑。該製品可進一 存於一獨立額外容器中。 步包括無菌稀釋劑，其較佳儲

=本文所用之醫藥學上可接受之載劑π意欲包括與 投藥相容之任何及所有材料，其包括溶劑、分散介質：塗 層:抗菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑以及其他二 面藥投藥相谷之材料及化合物。除非任何習知介質或藥劑 均不與活性化合物相容，否則將涵蓋其在本發明之組合: 中之用途。亦可將補充活性化合物併入組合物中。 〜提供以下實例及圖式以助於瞭解本發明，本發明之真實 範嘴係在隨附巾請專圍中陳述。應瞭解，在不偏離本 發明之精神的情況下’可在所陳述之程序中進行修改。 實驗程序 引言 抑目前研究檢查在單獨曲妥珠單抗治療失敗後，a)曲妥珠 早抗與貝伐單抗之組合及b)單獨貝伐單抗治療在人類乳房 異種移植物模型中之抗腫瘤活性。該研究之其他目標在於 檢查治療對於癌轉移之效應。 測試劑 提供於組胺酸-HC1、α·α海藻糖（6〇 mM)、〇 〇1% Polysorb中之25 mg/ml儲備溶液形式之曲妥珠單抗，pH 6.0(Herceptin®)。提供於磷酸鈉、α_α海藻糖（6〇碰）、 0.01% Polysorb中之25 mg/ml儲備溶液形式之貝伐單抗’ pH 6.0(Avastin®)。兩種溶液均在PBS中經適當稀釋以用於 注射。 123320.doc -32- 200825106 細胞株及培養條件 人類乳癌細胞株KPL-4已自患有發炎性皮膚癌轉移之乳 癌患者的惡性胸膜滲出液形成，且過度表現ErbB家族受 體。（Kurebayashi等人，Br· J· Cancer 79 (1999) 707-17)通 常在37°C下於5% C02之水飽和氣氛中，將腫瘤細胞培養 於補充有10%胎牛血清（PAA)及2 mM L·麩醯胺酸（Gibco)之

DMEM介質（PAA Laboratories，Austria)中。使用胰蛋白酶/EDTA Ιχ(ΡΑΑ)分裂每週兩次進行培養繼代。細胞繼代P6用於活 〇 、 體内研究。 動物 將SCID beige(C.B.-17)小鼠；年齡10至12週；體重18至 20 g(Charles River，Sulzfeld，Germany)根據國際準則 (GV-Solas ; Felasa ; TierschG)以 12 h明/12 h暗之每日循環 飼養在無特異性病原體之條件下。到達後，將動物收容於 動物設施之隔離區中歷時一週，以使其習慣新環境且用於 Q 觀察。以常規方式進行連續健康監控。隨意提供食物 (Alltromin)及水（經酸化pH值2.5至3)。 活體内之腫瘤生長抑制研究 自培養燒瓶（Greiner TriFlask)收集腫瘤細胞（胰蛋白酶_ EDTA)，且將其轉移至50 ml培養基中，洗滌一次且重新懸 浮於PBS中。在使用PBS之額外洗滌步驟及過濾（細胞渡 器；Falcon 100 μηι)後，將最終細胞力價調整為〇.75xl08/ml。 用移液管小心地將腫瘤細胞懸浮液混合’以免細胞凝集。 在封閉循環系統中使用具有預培養室（膠質玻璃）、個別小 123320.doc -33- 200825106 Γ 罩（石夕）及異氟烧（Pharmacia-Upjohn，Germany)之小動 物用斯提芬（Stephens)吸入裝置進行麻醉。在注射前兩天 將動物之毛剃去。對於乳腺内脂肪墊（i.m.f.p.)注射而言， 在正位上將體積為20 μ1之細胞注射至各經麻醉小鼠之右側 _ 次末腹股溝乳腺脂肪墊中。對於正位植入而言，經由皮膚 • 在礼頭下注射細胞懸浮液。腫瘤細胞注射對應於實驗之第 1天。 監控 〇 — 每日對動物進行控制以偵測反作用之臨床症狀。對於監 控整個實驗而言，每週記錄2次動物之體重且藉由測徑規 每週ΐ測2次腫瘤體積。根據NCI方案（TV=l/2 ab2，其中a 及b為腫瘤大小之長徑及短徑，單位為瓜瓜，Teicher，b.，

Anticancer drug development guide，Humana Press，5 (1997) 92)計算原發性腫瘤體積。將計算值記錄為平均值 及標準偏差。 {j 動物之治療 當腫瘤體積約為100 mm3時，將帶有腫瘤之小鼠隨機分 組（各組n= 10)。在開始於腫瘤細胞注射27天後之治療之前 各組精密匹配。A組：媒劑組-每週一次腹膜内（ip)接受1〇 ml/kg PBS緩衝液。B組：以30 mg/kg之速效劑量腹膜内投 與曲妥珠單抗，繼而每週一次投與15 mg/kg之劑量（維持劑 量）。在第60天將B組之動物分為另外三組：b，、C&D。僅 對B’組使用每週一次15 mg/kg之劑量（維持劑量）來維持單 獨曲妥珠單抗之治療。C組：在第61天，將對於c組之治 123320.doc -34- 200825106 療轉換為曲妥珠單抗（每週—次15 mg/kg腹膜内）與貝伐單 二（母週兩-人5 mg/kg腹膜内）之組合治療。d組··在第61 天將對於D組之治療轉換為貝伐單抗（每週兩次5 mg/kg 腹膜内）之單藥治療，同時停止曲妥珠單抗之治療。 癌轉移之評估 在死亡動物中測定腫瘤細胞至肺部之擴散。根據

Schneider，T·等人，Clin· Exp. Metas. 19 (2002) 571-582量 測癌轉移。簡言之，收集肺組織且藉由即時pcR定量人類 Alii序列。較高之人類DNA水平（藉由即時pcR定量）對應於 較兩之癌轉移水平。 結果

在圖1及表1中展示對於原發性腫瘤生長之治療效應。媒 贫J組(A組）中之腫瘤快速生長且小鼠在注射腫瘤細胞乃天 後由於腫瘤之潰瘍及臨床症狀之發展而死亡。曲妥珠單抗 之治療（B組）顯著地抑制腫瘤生長；然而在第5 〇天左右腫 瘤開始重新生長。在第61天開始轉變為曲妥珠單抗與貝伐 單抗之組合治療（C組）以及轉換為貝伐單抗單藥治療（D 組），二者均導致在實驗期間（112天）對於腫瘤生長之完全 抑制，且治療良好耐受。 123320.doc -35- 200825106 表1 : 在曲妥珠單抗治療失敗後，a)組合曲妥珠單抗與貝伐單抗治療 及b)單獨貝伐單抗治療對於腫瘤生長之抗癌活性（囷1之資料）。報 導平均腫瘤艎積（單位為mm3)及標準偏差（SD)。 天數 媒劑 (A) SD 曲妥珠 單抗 (B+B，） SD 自曲妥珠單抗 變為曲妥珠單 抗+貝伐單抗 (C) SD 自曲妥珠 單抗變為 貝伐單抗 單藥治療 (D) SD 27 85 27 81 29 29 115 42 106 36 34 136 66 100 49 37 193 108 97 70 41 235 163 133 100 44 335 220 139 128 48 406 309 172 181 51 591 463 201 203 55 690 479 263 286 58 565 333 315 383 60 729 402 393 426 63 911 391 493 531 407 263 427 365 65 898 313 585 582 350 210 306 220 70 1213 440 798 776 190 45 180 142 73 1015 330 961 841 149 44 154 112 77 861 418 146 45 129 78 79 896 434 159 92 127 84 83 1034 485 158 148 97 80 87 193 228 95 57 91 159 166 100 82 94 225 292 120 106 98 242 340 112 95 101 154 160 120 108 105 119 109 92 85 108 175 157 104 105 112 122 68 110 103

在圖2及表2中展示對於肝臟癌轉移之治療效應。在曲妥 珠單抗治療失敗後曲妥珠單抗與貝伐單抗之組合導致癌轉 移銳減。與死於第73天之經媒劑治療動物相比，自第61天 123320.doc -36- 200825106 Ο

開始經組合治療治療3 1天之動物中之人類Alu序列之含量 (與癌細胞侵入次生組織相關）顯著降低。在經曲妥珠單抗 或貝伐單抗單藥治療治療之分別死於第83或112天之動物 體内，癌轉移亦受到抑制。對於癌轉移之該令人驚訝之效 應與使用細胞毒素藥物所見之效應相反（Geldof等人， Anticancer Res. 8 (1988) 1335-40, Murphy, J.3 Clin. Oncol. 11 (1993) 199-201 及 De Larco 等人，Cancer Res. 61 (2001) 2857-61)。 表2 :

對於肝臟癌轉移之治療效應。藉由即時PCR定量Alu DNA 且對各動物進行報導。 媒劑(A) (第73天） 曲妥珠單抗 (B+B，） (第83天） 貝伐單抗(D) (第112天） 曲妥珠單抗+ 貝伐單抗(C) (第112天） 人類DNA [pg/ml] 41.750 21.000 12.250 7.155 51.400 10.550 7.405 6.785 54.500 26.600 45.600 15.500 19.300 12.250 29.200 8.040 6.545 37.900 7.640 8.305 48.550 25.050 22.900 7.740 平均值 37.008 22.225 18.962 9.157 【圖式簡單說明】 圖1在曲妥珠單抗治療失敗後，a)組合曲妥珠單抗及貝 伐單抗治療及b)單獨貝伐單抗治療對於腫瘤生長之抗腫瘤 活性。在y軸上繪出腫瘤體積之平均值（mm3);在X軸上緣 出注射腫瘤細胞後之天數。A)媒劑（圓形），B)30 mg/kg速 效劑量及每週一次1 5 mg/kg維持劑量之曲妥珠單抗（方 123320.doc -37- 200825106 >)。在第60天，將Β組之動物分為另外三組：零天後之 形）、C及D。僅對Β，組以每週—次15叫如之劑量（維持 別量）來維持單獨曲妥珠單抗之治療。〇自第η天起，每 人5mg/kg之曲文珠單抗維持劑量與每週兩次 之額外貝伐單抗治療劑量組合（三角形），·及D)自第“天 (s V止曲·*·珠單抗之治療時，每週兩次$ 之貝 之Ο或多Ο**)隻小鼠死亡之時間點。 圏2 (A)無治療媒劑組、（B)單獨曲妥珠單抗治療（直至第 83天）、（C)單獨曲妥珠單抗治療（第27天至第6〇天）後之組 合曲妥珠單抗及貝伐單抗治療（第61天至第112天）及（d)單 獨曲妥珠單抗治療（第27天至第6G天）後之單獨貝伐單抗治 伐單抗（十字形）。藉由—或多個星號⑺表示基於終止標準 Ο 療（第61天至第II2天）對於肝臟癌轉移之效應。使用即時 PCR自肝臟組織定量人類aiu DNA序列之平均值丨）， 且繪製於y軸上。 123320.doc -38-

Claims (1)

1. 200825106 十、申請專利範圍： 丄種抗VEGF抗體之用途’其係用於製造用於在以抗观r2 -口療』間或之後治療患有復發性her2陽性癌症之患 者的藥物。 - 3求項1之用途’其特徵在於其係在以抗-HER2抗體治 療期間將該藥物投與至該患者。 ::東員2之用途’其特徵在於其係在抗·HER2抗體之- 線單藥治療期間投與該藥物。 C 1 ^ 月求項1之用途，其特徵在於其係在以抗抗體治 療之後投與該藥物。 ::東員4之用途’其特徵在於其係在抗-HER2抗體之-線單藥治療之後投與該藥物。 種抗VEGF抗體之用途，其係用於製造用於在以抗_her2 體化療期間或之後預防或減少患有復發性her2陽性癌 症之患者體内之癌轉移的藥物。 I) θ求員6之用途，其特徵在於其係在以抗-HER2抗體治 療期間投與該藥物。 :求員7之用途’其特徵在於其係在抗_册&2抗體之一 ^ 線單藥治療期間投與該藥物。 • @求員6之用途，其特徵在於其係在以抗-HER2抗體治 療之後投與該藥物。 :求項9之用通，其特徵在於其係在抗-抗體之一 線單藥治療之後投與該藥物。 月长員1至10中任一項之用途，其特徵在於該抗_vegf 123320.doc 200825106 為貝伐單抗（bevacizumab)。 12. 如請求項1至10中任一項之用途，其特徵在於該抗-HER2 抗體為曲妥珠單抗（trastuzumab)。 13. —種製品，其特徵在於包含一容器、一處於該容器内之 包含抗-VEGF抗體之組合物及一指示該組合物之使用者 在以抗-HER2抗體治療期間或之後對患有復發性HER2陽 性癌症之患者投與該抗-VEGF抗體之封裝插頁。

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