TW200817006A - IL-8 receptor antagonist - Google Patents

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200817006 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於4-{[6-氯-3-({[(2-氯-3-氟苯基)胺基]羰基} 胺基)_2·羥基苯基]磺醯基}-1-哌畊羧酸U-二甲基乙基酯甲 5 苯磺酸鹽、含有此化合物之醫藥組成物及其於治療IL-8、 GROa、GROp、GROY、NAP-2 及 ENA-78 所介導疾病之用 ~ 途。 _ 【先前技術】 10 白介素-8(IL-8)有許多不同的應用名稱’例如嗜中性細 胞誘引劑/活化蛋白-l(NAP-l)、單核細胞衍生的嗜中性細胞 趨化因子(MDNCF)、嗜中性細胞活化因子(NAF)及T-細胞淋 巴細胞趨化因子。白介素_8為一種嗜中性細胞、嗜驗性細胞 及T-細胞亞群之誘引劑。其係由包括巨嗤細胞、纖維母細 15 胞、内皮細胞及上皮細胞之大部分的有核細胞暴露於TNF、 IL-Ια、IL-Ιβ或LPS時及由當嗜中性細胞本身暴露於Lps ⑩ 或趨化因子(例如FMLP)時所產生。 GROa、GR〇p、GROy及NAP-2亦屬於趨化激素^家族。 如同IL-8 ’這些化學激素亦具有不同的名稱。例如GR()a、、 !° Ρ、γ分別係指MGSAa、P、Y(黑色素瘤生長刺激活性）。直 接在CXC模體前具有ELR模體(motif)之所有的a_家族 化激素係與IL-8 B受體(CXCR2)結合。 IL-8、GROa、GROp、GROy、ΝΑΡ·2 及 ENA_78 在、、舌 體外刺激許多功能。其所有皆顯示對嗜中性細胞具有化學^ 5 200817006 隱性，而同時IL-8及GR〇p展現t淋巴細胞及嗜鹼係性細 胞趨化活性。此外，IL_8可引發正常及異常個體之嗜驗性細 胞，=、、且私函文。此外，GR〇_a及正_8可引發嗜中性細胞釋 ^溶酶體酵素及呼吸爆發。IL-8亦顯示可在無de贿0蛋白 5 口成下增加於嗜中性細胞之Mac-1(CD 11 b/CD 18)的表面表 現。此有助於增加嗜中性細胞與血管内皮細胞之黏附。許多 已知的疾病特徵為大量的嗜中性細胞浸潤。因為IL-8、 _ GROa、GR〇p、GR〇Y及NAP-2促進了嗜中性細胞之堆積及 所以這些趨化激素已意味著包括牛皮癬及類風濕性關 1〇 節义之廣範圍的急性及慢性發炎疾病。此外，ELR趨化激素 (該等包含在CXC模體前之胺基酸ELR模體）亦意味著抗血 管生成。 在活體外，藉由活化及結合至IL-8受體（最顯著地為 IL-8R受體(CXCR2))，IL-8、GROa、GROp、GROY及NAP-2 15 引發嗜中性細胞形狀改變、化學趨向性、顆粒釋放及呼吸爆 φ 發。開發針對此受體家族成員之非胜肽小分子拮抗劑已有先 例。因此，IL-8受體代表著一開發新穎抗發炎劑之有希望的 目標。 在此領域中，仍有需要能與CXCR1及/或CXCR2受體結 20 合之治療、化合物。因此，受體結合抑制劑之化合物，係有 ‘ 利於與IL-8產量增加有關之症狀（造成嗜中性細胞之化學趨 向性及τ-細胞亞群進入發炎位置）。此等化合物係揭示於w〇 2004/039775、美國專利第6，180,675號及美國專利第 6,500,863號中。 6 200817006 【發明内容】 本發明係關於4-{[6-氣-3·({[(2-氯-3·氟苯基)胺基]幾基) 胺基)-2-說基苯基]石黃醯基辰π井敌酸1，1_二甲基乙基醋甲 苯磺酸鹽（本發明化合物)及包含本發明化合物及醫藥上可接 受載劑或稀釋劑之組成物。 本發明係關於包含本發明化合物及一或多種另外的治 療成份之組合物。 本發明進一步係關於治療趨化激素所介導疾病之方 法’其中該趨化激素係與IL-8a或β受體結合，且其方法包括 投予一有效量之本發明化合物。 本發明亦關於於有此需要之哺乳動物中（特別是人類)抑 制IL-8與其受體結合之方法，其包括包括投予一有效量之本 發明化合物。 本發明之詳細說明 —本發明係關於4-{[6·氯·3-({[(2·氯-3-氟苯基)胺基]羰基} 2-羥基苯基]石黃醯基-派畊羧酸丨，1_二甲基乙基酯甲 本-久嚴（本叙明化合物）及包含本發明化合物及醫藥上可接 受載劑或稀釋劑之組成物。 、本么明亦關於包含本發明化合物及一或多種另外的治 療成份之組合物。 、、本發明進一步係關於治療趨化激素所介導疾病之方 中該趨化數素係與IL_8a或(3受體結合，且其方法包括 杈予一有效量之本發明化合物。 7 200817006 本發明亦關於於有此需要之哺乳動物中（特別是人類）抑制 IL-8與其受體結合之方法，其包括包括投予一有效量之本發 v 明化合物。 ^ 製備方法 :5 4-(f6-氯氯-3-氟茉基)胺基羰基}胺基)-2-羥基茉某1 磺醯基）-1-哌畊羧酸U-二甲基乙基酯曱笨磺酸酸

二亂笨基)-2,2-二曱基丙酿月安 將3,4-二氯苯胺（100 g)溶於四丁基甲基胺（TBME)(660 ml·)並冷卻至10-15。€：。加入氫氧化鈉（94 g的30%水溶液）並 8 10 200817006 以機械攪拌器劇烈攪拌溶液。以將内部溫度保持在3 5。c以下 之速度加入二甲基乙醯氯(84 mL)。當添加完成後分 鐘），將混合物保持在30_35γ約3〇分鐘，然後於3〇_4〇分鐘内 冷卻至0-5°C。將反應混合物保持在小時，然後過 5 濾，先以90:10水/曱醇(4⑻mL)過濾然後以水（600 mL)過 濾。於50-55〇C真空下乾燥得到灰白色結晶之產物。得到127 g之產量。 二甲—畊基確醯基)丄3_芏并磲4 10 將叫3,4_二氯苯基)-2,2-二甲基丙醯胺(50 g)之四氫咬 喃（300 mL)溶液於惰性氮氣壓下冷卻至_5〇一 _4〇cC。以將溶 液溫度保持在-45- -30oC間之速度加入丁基链(2.51V[己燒 /谷液,179 mL)(約15-30分鐘添加時間）。將溶液保持在約_35 --25°C直到HPLC顯示起初的反應已完成。然後將溶液再冷 15 卻至_45一 _40〇C，並於溶液中通入二氧化硫(〜16.9 g)，將内部 _ 度保彳寸在約-ifc以下，直到溶液成酸性。當反應完成後， 將混合物加溫至-10 —〇。〇由_2 —3。〇開始，然後於5一15分 鐘期間逐濟將石黃醯氯(25·2 mL)加至四氫咬喃溶液中，並將溫 度保持在22QC以下。5分鐘後，以HPLC確認反應完成，同 2〇 時將溶液溫度保持在約l〇-15°C。減壓下將混合物進行溶劑 • 交換成α，α，α_三氟甲苯。過濾、真空下進行部份濃縮（至〜1〇〇 mL) ’接著加入二氯甲烷(35〇 mL)。於周圍溫度下於此混合 物中逐滴加入哌畊(61 ·2 g)之二氯曱烷(625 mL)溶液，將溶液 之内部溫度保持在15-27°C(2小時添加時間）。將反應保持在 9 200817006 20-24 C直到反應完成。將混合物以去離子水(2〇〇 mL)清 洗，濃縮有機層，接著加入庚烷(45〇mL)。過濾分離出產物 (70·5 g)，以庚烧(50-100 mL)清洗並於5〇-55°C之真空下乾 燥。 5 胺基-3-氯旅啡基確醯某、紛二祐g參鹽_ 將6-氯-2-(1，1-二甲基乙基哌啡基磺醯基)4,3-苯 _ 并啐嗤(30 g)加到〜16%(重量/重量之水溶液)硫酸(^⑽mL)。 將所生成的混合物於99-103°C加熱回流〜6小時。反應完成 10 後，將溶液冷卻至40-50°C，然後於減壓下濃縮至_6〇 mL。 加入乙腈(225 mL)並將生成的懸浮液於2〇_25°C攪拌約1小 日守。過濾分離出產物’以乙猜（135 mL)清洗並於45dCPC之 真空下乾燥。得到33.34 g之產量。 15 基-6-亂-2-輕基表基)石黃酿基l-1-p辰α井蜂酸ι,ι_二甲美 乙基酯 將6_胺基-3-氯井基績醯基）紛二硫酸鹽（2〇 g)加 到去離子水(200 mL)中。加入50%氫氧化鈉水溶液(〜6.35 mL) 將所生成溶液的pH值調整至6·5-7·0,同時將内部溫度保持 20 在20_3〇〇C間。然後加入二碳酸二第三丁酯（8·9 g)之乙酸乙 • 醋溶液(80 mL + 20 mL清洗）。加入50%氫氧化鈉水溶液(2.45 mL)將所生成溶液的pjj值调整至6 · 8〜7 · 0，同時將内部溫度 保持在20_3〇π間。反應完成後，將反應溶液過濾移除此小 量的沉澱。將二層濾液分離並以乙酸乙酯（14〇 mL)萃取水 10 200817006 層。將組合的乙酸乙酯層以水(40 mL)清洗並濃酸至l〇〇 加入庚烧(1⑽mL)並將生成的懸浮液濃縮至60 mL。將 此步驟重複一次。然後加入庚烷（140 mL)並將生成的懸浮液 於2〇-25。(：攪拌約1小時。過濾分離出產物，以庚烧⑽mL) 5 清洗並於4〇-45。。之真空下乾燥。得到15Jg之產量。 包也氬氯-3-氟苯基）胺某1藉基}胺基)_2_轉某茉某1 • jtil產哌畊羧酸L1-二甲某Λ其酷 將4-[(3-胺基-6·氯-2_羥基苯基)續醯基]小哌畊羧酸ι，ι_ 10 二甲基乙基酯⑽g)加到二曱基曱醯胺(20 mL)及乙腈(80 mL) 中。加入2-氯-3-氟苯基異氰酸酯(4.77 g)同時將内部溫度保 持在20-30°C間，接著以lOmL乙腈清洗。將生成的混合物 於20-25°C攪拌約2小時。待反應完成後，加入甲醇(50 mL)。 將生成的懸浮液於20-25°C攪拌約1〇分鐘。加入去離子水 15 (150 mL)並將生成的懸浮液於20-25QC攪拌約1小時。過濾 分離出產物，以去離子水（100 mL)及甲醇（15-20 mL)清洗然 響 後於45_5〇°C之真空下乾燥。得到l4.i5g之產量。 4τ·{『6_氯-3-(丨丨(2-氣-3-氟苯基）胺基1藉某}胺某)-2-經基苯臬1 20 石黃醯基}-1-派畊羧酸1,1-二甲基乙基酯甲笨確酸鹽 _ 將4-{[6-氯-3_({[(2-氯-3-氟苯基)胺基]幾基}胺基)_2_羥 基本基]石頁酸基}-1-派17井叛酸1，1-二曱基乙基醋（5〇 g)溶於四 氳吱喃（THF，200 mL)及加熱至33-37°C並保持在33-37qC。 在另一反應器中製備乙腈(250 mL)、THF (50 mL)及對甲苯石黃 11 200817006 5

10 15 20 酸單水合物(43·9 g)之溶液。將生成的溶液加熱至33-37°C並 保持在33-37。€。將對曱苯磺酸溶液過濾並轉置於含有4-{[6-氯-3-({[(2-氯-3-氟笨基）胺基]羰基}胺基)-2-羥基苯基]磺醯 基哌畊羧酸1,1-二曱基乙基酯及THF之反應器中，同時 將溫度保持在33_37。€>當起始物質耗完後，將微粒化之產 物晶種(0.5 g)置於最少量的乙腈mL)中。然後將反應混合 物於約40分鐘期間加熱至53-57。0並保持在此溫度至少約 4小時。將反應冷卻至〇_5〇C，過濾分離出產物，以乙腈(25〇 mL)清洗並於55-60°C之真空下乾燥。得到52.24 g之產量。 胺基1羰基丨胺基V2_鎢其 基酯甲笨磺酸另一释

#將4][6_氯冬({[(2·氣各氟苯基)胺基]獄基}胺基)_2_經 基苯基]磺醯基}-1-哌畊羧酸u_二曱基乙基酯（5〇〇g)裝入反 應态1中，接著加入乙腈(CAN，375〇 mL)及四氫呋喃（丁 1250 niL)。然後將溶液加熱至6〇_65。€，一 J 液’進行澄清過滤至反應器2中。於反應器二乂;二 石頁酸早水合物(Ts〇H.H2〇, 439祕著加入ACN⑽ T二F (25'mL)。將混合物加熱至.桃，—但觀察到澄清 =液？打澄清過濾，將溶液加至反應器2中（含有起始物 貝之溶液)並將反應H 2之溫度賴請。 熱回流並保持在70-80。〇吉？,=产上、、/’此口物加 直到反應完成。以常壓蒸餾移除 〜350〇mL的溶劑。然後於反應器最中入心水 1 將脈度月正至70'80〇C。觀察到溶解後，將生成的 12 200817006 溶液冷卻至64-68〇C 〇 5_1〇八 加到最少量的乙腈中並保持Π 68二碎，物晶種(5 g) 期間將混合物冷卻至〇_ 68 C下一小時。於2小時 〇代達约30分鐘。以^在料分離產物之前保持在 5

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50-60°C ^ J： ^ π- ^ .的乙腈清洗固體產物並於 之真工下乾餘。得到48〇g之產量。 符聚万法 動物預防上或治㈣ 合之哺乳動物Γ 受體(亦指第1型或第11型受體)結 胞)，==:’但不限於他 趨化激+ 、、]的1L-8細胞激素（cytokine)或其他 放素所加劇或造成之任何疾病狀態之醫藥品。 法，發日㈣提供—種轉趨化崎所介導疾病之方 予一有效量之本發㈣合物。特而言之，_化激素為ΐ!8 GROa、GR〇p、GROy、NAP-2或ENA-78。 本电明化合物係以有效抑制細胞激素功能，特別是 IL-8、GROa、GR〇p、GROy、NAP-2 或 ENA-78 功能之量 給樂’而使其在生物上下調至生理功能之正常量，或在某些 情況下係下調至正常以下之量，因而減緩疾病狀態。例如， 在本發明内文中，不正常的IL-8、GROa、GROp、GROy、 NAP-2或ENA-78之量構成了 ：（i)游離IL-8之量大於或等於 每毫升(mL)l 皮克(pictogram) ; (ii)任何與 il-8、GROa、 GROp、GROy、NAP-2或ENA-78有關之細胞高於正常生理 13 20 200817006 f，或(ill)細胞或組織中 IL-8、GROa、GR〇p、GROy、NAP-2 或ENA-78之存在高於基本量，其中分別產生IL_8、GR〇a、 GR〇p、GROy、NAP-2 或 ENA-78 〇 有許多其中IL-8產生過量或不規則與加遽及/或造成疼 5 病有關聯之疾病狀態。趨化激素所介導之疾病包括牛皮癬、 異位性皮膚炎、骨關節炎、類風濕性關節炎、氣喘、慢性陬 塞性肺疾病、成人呼吸窘迫症候群、發炎性腸道疾病、克隆 ⑩ 氏症(Crohn’sdisease)、潰瘍性結腸炎、中風、敗血性休克、 内毋素休克、格蘭氏陰性菌敗血症、毒性休克症候群、心臟 1〇 及月臟再灌注損傷、腎絲球腎炎、血栓、移植物抗宿主反應、 阿炫海默症、移植排斥、瘧疾、再狹窄、血管新生、動脈硬 化、骨質疏鬆症、牙齦炎、病毒性病例如鼻病毒或不欲的造 血幹細胞釋放。 适些疾病主要的特徵為大量的嗜中性細胞浸潤、τ_細胞 15 /文潤或新血管生長’並與1L-8、GR〇a、GR〇P、GR〇y、NAP-2 φ 或ΕΝΑ-78產生增加有關，其造成嗜中性細胞之化學趨向進 入發炎位置或内皮細胞之方向性生長。對照其他發炎性細胞 激素(IL-1、TNF及IL-6)，IL-8、GH〇a、GR〇P、GROy > NAP-2 或ENA-78具有獨特的促進嗜中性細胞化學趨向、酵素釋放 20 (包括但不限於彈力蛋白酶釋放以及超氧化物產生和活化）之 - 特性。a-趨化激素，但特別是IL-8、GROa、GROp、GROy、 NAP-2或ENA-78，經由IL-8第I或π型受體作用，可藉由促進 内皮細胞之方向性生長促進腫瘤之新生血管。因此，抑制IL_8 引發化學趨向或活化，能直接降低嗜中性細胞浸潤。 14 200817006 隶近的證據亦顯不趨化激素在治療Hiv感染上之角 色，Littleman 等人，Nature 381，ρρ· 661 (1996)及 Koup 等人， Nature 381，ρρ· 667 (1996)。 目荊的證據亦指出IL_8抑制劑於治療動脈硬化上之用 5 途。首要的參考文獻，Boisvert等人，J. Clin. Invest. 1998, 101:353-363顯示，經由骨髓移植，其在幹細胞上（因此，係 在單核細胞/巨噬細胞）缺乏IL_8受體，導致LDL受體缺陷小 0 鼠之動脈硬化斑塊之發展降低。 本發明亦提供一種治療CNS損傷之方法。此治療係於 10 急性發作時提供，以及供該等易受傷之個體預防損傷。 CNS損傷如本文之定義包括開放或穿透性頭部創傷，例 如手術所引起的，或閉合性頭部創傷損害，例如頭部區域損 傷所引起。缺血性中風(特別是腦區域）亦包括在此定義中。' 缺血性中風可定義為由特定腦區域血液供應不足所產 15 生之局料經學病症，通常是栓塞、錄或局部動脈粥樣硬 化封閉血管之結果。發炎性細胞激素之角色已浮現出且本發 明提供潛在治療這些損傷之方法。僅有相#少的治療可用ς 類似此等之急性損傷。 、 TNF-α為一種帶有包括内皮性白血球黏附分子表 2〇發炎作用之細胞激素。白血球浸潤至缺血性腦部位且因此;; ，或降低TNF量之化合物能用於治療缺血性腦損傷。參見L iu 等人，Vol. 25., No. 7, PP. 1481-88 (1994)，該揭示文俜 以引用的方式併入本文中。 $ 閉合性腦損傷模式m合5_L(D/a)_之治療係揭示 15 200817006 於 Shohami 等人，瘴 ainical phvsi〇1〇gv and Pharmacology Vol· 3, No· 2, pp. 99-107 (1992)。已發現降低 • 水腫形成之治療可促進該等經治療的動物之功能性效果。 本發明化合物係以有效抑制IL_8、結合至IL_8 α*Ρ受體 5 之里給樂，避免與這些受體結合，例如由降低嗜中性細胞化 學趨向及活化得到證實。本發明化合物為IL_8結合抑制劑之 發現係基於本發明化合物於分析中之效用。 馨 如文中所用，術語「IL_8介導之疾病或疾病狀態」係指 其中 IL-8、GROa、GR〇p、GROy、NAP-2 或ENA-78藉由產 10 生11"8、GROa、GR〇P、GR〇Y、NAP-2或 ENA-78本身或藉 由 IL_8、GROa、GROp、GR〇7、NAP-2 或ENA-78造成另外 的單核細胞激素釋放扮演角色之任何及所有疾病狀態。其 中，例如IL-1為主要組份及因回應IL_8使其產生和作用加劇 或產生之疾病狀態因此可視為由江_8所介導之疾病。 15 如文中所用，術語「趨化激素介導之疾病或疾病狀態」 係指，其中與IL-Sa或β受體結合之趨化激素扮演一個角色之 任何或所有疾病狀悲’例如但不限於IL-8、GROa、GRX)p、 GROy、NAP-2或ENA-78。其可包括其中江_8藉由產生正_8 本身或籍由造成另外的單核細胞激素釋放（例如但不限於 20 IL-!、IL<或TNF)扮演角色之疾病狀態。其中，例如几^為 主要組份及因回應IL-8使其產生和作用加劇或分泌之疾病狀 態因此可視為由IL-8所介導之疾病。 如文中所用，術語「細胞激素」係指任何影響細胞功能 之所分泌的多肽且為在免疫、發炎或造血反應間調節細胞交 16 200817006

10 15 Z〇 互作用之分子。無論其係由哪個細胞產生，細胞激素包括但 不限於單核細胞激素及淋巴細胞激素。例如，單核細胞激素 一般係指由單核細胞（例如巨嗔細胞及/或單核細胞）產生或 分泌。然而許多其他細胞亦產生細胞激素，例如天然殺手細 胞、嗜驗性細胞、嗜中性細胞、内皮細胞、腦星狀膠質細胞、 骨髄間質細胞、表皮角化細胞及B-淋巴細胞。淋巴細胞激素 一般係由淋巴細胞所產生。細胞激素之實例包括但不限於白 介素-l(IL-l)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(11^8)、腫瘤壞死因 子a(TNF_a)及腫瘤壞死因子β(τΝΡ_β)。 如文中所用，術語「趨化激素」係指任何影響細胞功能 之所分泌的多肽且為在免疫、發炎或造血反應間調節細胞交 互作用之分子，與上述術語「細胞激素」相類似。趨化激素 主要係經由細胞跨膜所分泌並造成特定白血球細胞和白血 球、嗜中性細胞、單核細胞、巨噬細胞、Τ-細胞、Β·細胞、 内皮細胞及平滑肌細胞之化學趨向性及活化。趨化激素之實 例包括但不限於 IL-8、GROa、GR〇p、GROy、ΝΑΡ-2 或 ENA-78、ΠΜ〇 ' ΜΠΜα、ΜΙΡ·β、PF4 及 MCP1、2 和 3。 為了將本發明化合物用於治療中，—般係根據標準的醫 配成醫藥組成物。因此，本發明亦關於包含-之醫藥組本發明化合物和醫f上可接受制或稀釋劑 於藥化合物及併人彼等之醫藥組成物可以任何習用 地二兹又太5路U例如口服、局部、非經腸或以吸入方便 市。本發8純合物可藉h本發㈣合減鮮醫藥載 17 200817006 製程所製備之習用劑型來給藥。本發明化合物亦 知的第二治療活性化合物組合二)型來給 -或溶解成份。應了解，醫可包括混合、造粒及:丁 和特性係視與餘合之时絲之形式 。_在與-配物之其 須 為可接受的且對其接受者為無害的。 奋祝

10 _所用的醫藥載劑可為例如，固體或液體。固體載劑之例 不f乳糖、白土（terra alba)、蔗糖、滑石、明膠、洋菜膠、 果膠:阿拉伯膠、硬脂_、硬脂酸及其類似物。液體載劑 之例示有糖槳、花生油、橄欖油、水及其類似物。同樣的， ，釗或稀釋劑可包括本項技術中熟知之時間延遲物質，例如 單獨或與壤混合之單硬脂酸甘油g旨或二硬脂酸甘油醋。 制可使用廣泛各種醫藥形式。因此’若使用固體載劑時， 衣備物可製成錠、以粉末或小顆粒形式置於硬式明膠膠囊或 以片劑錢錠劑之形式。固體載狀量可廣泛地變化，但較 也係Ί勺25 mg至約！ g。當使用液體載劑時，製備物可為 =漿、乳化液、軟式明膠膠囊、無菌可注射液體例 戈 非水性液體懸浮液。 本lx明化合物可局部給藥，亦即以非全身性給藥。 =本發明化合物外用於表皮或鼻腔及將此化合^ 鼻：’如此化合物無法顯著的進入血流中。： i ft給樂係指口服、靜脈、腹腔内及肌肉内給率。 U局部給藥之調配物包括適合經由皮膚參透^液 18 200817006 體、半液體調配物，例如搽劑、乳液、乳霜、軟膏或糊漿， 以及適合眼部、耳部或鼻部給藥之滴劑。用於局部給藥之活 性成份可包括從0.001%至10%重量/重量，例如1%至2%重量 比之調配物。然而其可包含多至10%重量/重量，但較佳地將 包含低於5%重量/重量，更佳地從0·1%至1%重量/重量之調配 物。 本發明之乳液包括適合用於皮膚或眼部者。眼部乳液可 包括一無菌水性溶液視需要含有殺菌劑並可由該等類似製 備滴劑之方法來製備。用於皮膚之乳液或搽劑亦可包括加速 乾燥及使皮膚涼爽之試劑，例如酒精或丙酮，以及保濕劑例 如甘油或油脂如昆麻油或花生油。 本發明之乳霜、軟膏或糊漿為供外用之活性化合物之 固體調配物。其可在適合機械知輔助下以油性或非油性美 底，單獨將活性成份混成細粉或粉末形式或溶液形式戈土 或非水性液體之懸浮液。該基底可包含碳水化合物，例 f生、权性或液體石織、甘油、蜜纖、金屬皂；膠水；天款、 脂例如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或撖欖油；木 其衍生物或脂肪酸例如硬脂酸或油酸與醇類例如丙二^ ^ 大粒凝膠。調配物可併入任何適合的界面活性二或 子、1¼ #子或非離子界面活性劑例如山梨醇酯或其聚' ^ 衍生物。懸浮劑例如天然膠、纖維素衍生物或無機物y烯 質氧化矽並亦可包括其他成份例如羊毛脂。 矽 本發明之滴劑可包含無菌水性或油性溶液並可笋 活性成份溶解於適合的殺細菌劑及/或殺真菌劑及/或任何= 19 200817006 他適a的防扃則，較佳地係包含一界面活性劑之水性溶液中 來製備。、然後可將所生成的溶液過濾澄清，轉置於適合的容 裔中，然後蜜蜂並以殺菌釜或維持在98_1〇〇。€殺菌半小時。 另外’洛液可藉由過濾殺菌並以無菌操作轉置於容器中。適 5 合包含於滴劑中之殺細菌劑及殺真菌劑之實例有硝酸苯汞 或醋酸苯汞(0· 002%)、氣化苯二甲烴銨(〇· 〇〗及醋酸氯己定 (chlorhexidme acetate)(〇.〇l%)。適合製備油性溶液之溶劑包 g 括甘油、稀酒精及丙二醇。 本發明化合物可以非經腸給藥，即以靜脈、肌肉内、皮 ίο 軋、鼻内、直腸内、陰道内或腹腔内給藥。一般而言以皮下 及肌肉内形式之非經腸給藥為較佳。此等給藥之適合的劑型 可由習用的技術來製備。本發明化合物亦可由吸入來給藥， 亦即由鼻内和口部吸入給藥。此等給藥之適合的劑型例如喷 霧調配物或定量吸入器，可藉由習用技術來製備。 15 就揭示於本文中用於本發明化合物之所有方法，每日口 服姻量療法较佳地係從約0·01至約80 mg/kg之總體重。每曰 響 非經腸劑量療法係約〇.〇1至約80 mg/kg之總體重。每曰局部 劑量療法較佳地係從約〇·1至約150 mg/kg，每日投予一至四 次，較佳地二或三次。每日吸收入劑量療法較佳地係從每日 2〇 約〇·〇1至約Img/kg。熟習本項技術者亦應了解，本發明化合 _ 物個體劑量之最適量及間隔應由所欲治療症狀之性質及範 圍、形式、路徑和投予的部位以及所欲治療之特定病患而 定，且此最適量可由習用技術來決定。熟習本項技術者亦應 了解，治療的最佳方式，亦即在一定的天數中，每日給予本 20 200817006 發明化合物之劑量數目可由熟習本項技術者使用習用的治 療測試試驗之方法來確定。 組合物： 5 本發明化合物及本發明之醫藥調配物可包括或盥一或 多種其他治療劑組合使用，例如選自抗發炎劑、抗膽驗劑(特 別是叫雇顧3受體拮抗劑）、βρ腎上腺素受體促進劑、抗感 • 染劑例如抗生素、抗病毒劑或抗組織胺。因此在另一方面， 本發明係提供包含本發明化合物或本發明化合物之生理功 10 能衍生物與一或多種治療劑，例如，選自抗發炎劑例如皮質 類固醇或NSAID、抗膽驗劑、ρ2_腎上腺素受體促進劑、抗感 染劑例如抗生素或抗病毒劑或抗組織胺之組合物。一本發明 之實施例涵蓋了包括本發明化合物或其生理功能衍生物與 Pr腎上腺素受體促進劑及/或抗膽鹼劑、及g1pde_4抑制 15 劑、及/或抗組織胺之組合物。 φ 热習本項技術者應了解，若適當，可使用其他治療成份 1鹽類形式，例如鹼金屬鹽或胺鹽，或前藥或為酯類例如低 石厌烷基酯，或為溶劑化物例如水合物，以使治療成份之活性 及/或穩定性及/或物理特性例如溶解度最適化。應了解，若 20 適當，可使用純光學形式之治療成份。 ’ ^在一實施例中，本發明係涵蓋包括本發明化合物與β2_ 腎上腺素受體促進劑之組合物。Pr腎上腺素受體促進劑之者 例包括沙美特羅(salmeterol)(其可為外消旋物或單一鏡像^ 構物例如R-鏡像兴構物）、沙丁胺醇(salbutam〇l)(其可為外、、肖 21 200817006 方疋物或單一鏡像構物例如R-鏡像異構物）、福莫特羅 (formoterol)(其可為外消旋物或單一鏡像構物例如R，R_非對 映異構物）、沙曱胺醇(salmefamol)、非諾特羅(fen〇ter〇1)、卡 莫特羅（carmoterol)、依坦特羅（etanter〇1)、那明特羅 5 (namintero1)、克备特羅(士111>1^1*〇1、吼布特羅(0油11如〇1)、 flerbutero卜瑞普特羅(reproterol)、班布特羅作碰如如叫、 因達特維(indacaterol)、特布他林(terbutaline)及其鹽類，例如 着 ’少美彳寸維之每秦甲酸（1-經基-2-萘綾酸)鹽、硫酸鹽或沙丁胺 醇之游離鹼或福莫特羅之延胡索酸鹽。在一實施例中， ίο 腎上腺素受體促進劑為長效之β2_腎上腺素受體促進劑，例如 提供有效支氣管舒張達約12小時或更長之化合物。其他β2_ 腎上腺素受體促進劑係包括描述於WO2002/066422、 W02002/070490、W02002/076933、W02003/024439、 W02003/072539、W02003/091204、W02004/016578、 15 W02004/022547 > W02004/037807 > W02004/037773 - W02004/037768、W02004/039762、W02004/039766、 W02001/42193 及 W02003/042160 中之化合物。 βπ腎上腺素受體促進劑之另外的實例包括： 3- (4-{[6-({(2R)-2-羥基-2-0羥基-3-(經基曱基）苯基]乙基}胺 2〇 基）己基]氧基} 丁基）苯磺醯胺； , 3-(3-{[7-({(2R)-2·羥基羥基-3-羥基曱基）苯基]乙基}-胺 基)庚基]氧基}丙基)苯磺醯胺； 4- {(lR)-2-[(6j2-[(256-二氯苯甲基）氧基]乙氧基}己基）胺 基]-1_羥基乙基}-2-(羥基甲基)酚； 22 200817006 4基M & 了竭己細 N-[2-羥基 1_5-[(1R)_i+其 胺基]苯基]乙基]胺基:基]苯基]甲 Ν-2{2-[4-(3·苯基冰曱意 2 M Mm π 基本基）胺基苯基]乙基}_2-經基 -2-(8-減-2叫喧琳私基)乙基胺；及 4_ΙΧΚ〇·2-(2-{4-[4-(2-胺其 9 ® ^

10 15

r胺基_2-甲基-丙氧基)-苯基胺基]·笨基}_ 土二羥土-乙基]'8·經基-1H-喹啉-2-酮。 β:-腎土腺素受體促進劑可與選自硫酸、鹽酸、延胡索 酉义罗工基奈甲酸(例如！_或3_經基_2_萘甲酸）、肉桂酸、經取 代肉私fee —苯基醋酸、胺基4酸、胺基苯續酸、萘丙婦酸、 苯甲酸、4_甲氧基苯甲酸、2_或4_經基苯甲酸、4_氯苯甲酸 及4-苯基苯甲gH藥上可接受酸形成鹽類形式。 適口的抗發炎肖彳包括皮質類固醇。可用於與本發明化合 物組合之皮質麵醇之實例有鱗口服及吸人之皮質類固 醇及其具有抗發炎活性之前藥。 實例包括甲基潑尼松龍、潑尼松龍㈣a—)、地塞 米松（dexamethasone)、氟替卡松丙酸鹽（fluticas〇ne p_〇nate)、6α,9α。氟山(3_經基彻甲基叫(4甲基 -1,3悬嗤-5-叛基)氧基]-3-氧基泰μ-二稀_17卜甲硫酿酸& 氟甲基i旨、6α’9α·υΜ㈠喃基㈣）氧基]_ιιβ經基 -16α甲基-3-氧基雄-1,4-—豕17(3_甲硫醯酸&氟甲基醋（氣 替卡松糠酸酿)、6_-二氟、u__16a_甲基各氧基德 丙酸基氧基♦Id取甲硫酿酸吵氧基-四氫士南 23 20 200817006 -3S_ 基）醋、6〇1，9〇1_二氟-110-經基-16〇1-甲基-3-氧基 -17〇1-(2,2,3,3_四曱基環丙基幾基）氧基-雄-1，4-二嫦_170-甲硫 醯酸S-氰基曱基酯及6α，9α-二氟-11 β-羥基-16α-甲基_ΐ7α4 曱基環丙基幾基）氧基-3-氧基-雄-1，4-二烯-17β-甲硫臨酸8_ 5 氟甲基酯、倍氯米松(beclomethasone)醋（例如17-丙酸g旨或 17,21-二丙酸酯）、布地奈德（budesonide)、氟尼縮鬆 (flunisolide)、莫美他松(mometasone)酯（例如莫美他松糠酸 • S旨）、曲安奈德（triamcinolone acetonide)、 羅氟奈德 (rofleponide)、環索奈德(ciclesonide)(16a，17-[[(R)-環己基伸 1〇 曱基]雙（氧基)]-11β，21-二羥基-孕-1，4-二烯-3,20-二酮）、布替 可特丙酸酯、RPR-106541及ST-126。在一實施例中，皮質類 固醇包括氟地卡松丙酸酯（fluticasone propionate)、6a，9a-二 氟-11β-經基-16ct-甲基-17(x-[(4-甲基-1，3-σ塞ΰ坐-5-幾基）氧 基]-3-氧基-雄-1，4-二細-17β-甲硫酿酸S-氟甲基醋、6α，9α-二 15 氟-17α-[(2-呋喃基羰基）氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3·氧基_雄 -1，4-二細-17(3-甲硫酿酸S-鼠甲基酯、6a，9a-二氣-11(3-經基 馨 -16α-甲基-3 -氧基-17α-(2,2,3,3-四曱基環丙基幾基）氧基-雄 -1，4-二坤_170-曱硫蕴酸8-氣基甲基酯及6&，93-二氣-110-經基 -16α-曱基-17(χ-(1-甲基環丙基羰基）氧基-3-氧基-雄-1，4-二稀 2〇 -17β-曱硫醯酸S-氟甲基酯。在一實施例中，該皮質類固醇為 6α，9α-二氟-17α-[(2-σ夫喃基幾基）氧基]-ΐΐβ-羥基-16α-甲基-3-氧基-雄-1，4-二烯-17β-曱硫醯酸S-氟曱基酯。 皮質類固醇之實例亦包括該等描述於 W02002/088167、W02002/100879、WO2002/12265、 24 200817006 WO2002/12266、W02005/005451、W02005/005452、 W02006/072599 及 W02006/072600者。 對交替活化之轉錄抑制可具有選擇性且其可用於組合 治療之具有糖皮質激素促進作用之非類固醇化合物包括該 5 等下列公開專利申請案及專利所涵蓋之化合物： W02003/082827、W01998/54159、W02004/005229、 W02004/009017、W02004/018429、W02003/104195、 _ W02003/082787、W02003/082280、W02003/059899、 W02003/101932、W02002/02565、W02001/16128、 10 W02000/66590、W02003/086294、W02004/026248、 W02003/061651、W02003/08277、W02006/000401、 W02006/000398及W02006/015870。 對交替活化之轉錄抑制可具有選擇性且其可用於組合 治療之具有糖皮質激素促進作用之非類固醇化合物包括該 15 等下列專利所涵蓋之化合物·· W02003/082827、 W01998/54159、W02004/005229、W02004/009017、 ® W02004/018429、W02003/104195、W02003/082787、 W02003/082280、W02003/059899、W02003/101932、 W02002/02565 、W02001/16128 、W02000/66590 、 2〇 W02003/086294、W02004/026248、W02003/061651 及 W02003/08277。 抗發炎劑之實例包括非類固醇抗發炎藥劑(NSAID)。 NS AID之實例包括色甘酸納（sodium cromoglycate)、尼 多考米納（nedocromil sodium)、石粦二醋酶(PDE)抑制劑（例 25 200817006 如，茶鹼(theophylline)、Μ)Ε4抑制劑或混合PDE3/PDE4抑制 齊丨J)、白二細(leukotriene)拮抗劑、白三稀合成抑制劑（例如孟 魯司特(montelukast))、iNOS抑制劑、胰蛋白酶及彈力蛋白酶 WO1993/13055 > 抑制劑、β-整合素拮抗劑及腺苷受體促進劑或拮抗劑(例如腺 苷2a促劑進）、細胞激素拮抗劑(例如趨化激素拮抗劑，例如 CCR3拮抗劑）或細胞激素合成抑制劑或5_脂氧化酶抑制劑。 在一貫施例中，本發明係涵蓋口服給藥之iN〇s(誘生性一氧 化氮合成酶）抑制劑。iNOS抑制劑之實例包括該等揭示於 WO1998/30537 、W02002/50021 、 實例包括揭示於WO2002/26722之化合物。 10 爾995/34534及W01999職75中之化合物。CCR3抑制劑之 在一實施例中，本發明係提供本發明化合物與磷酸二酯 ，例如適用於吸入之調配物之

其他PDE4抑制化合物包括 Elbion (Hofgen，Ν·等人 酶4(PDE4)抑制劑組合之用途， 情況。用於木發明此.古品4 Γ)ΤΛ 26 200817006 15th EFMC Int Symp Med Chem (Sept 6-10, Edinburgh) 1998, AbstP.98 ； CAS reference No. 247584020-9)之 AWD-12-281 (N-(3,5_二氯-4-吼啶基)· 1 -[4-氟苯基）甲基]-5-羥基·α-氧基 -1Η-吲哚·3-乙醯胺）；稱為NCS-613 (INSERM)之9·苯甲基腺 5 σ票呤衍生物；Chiroscience 及 Schering-Plougli 公司之 D-4418 ; Pfizer 公司稱為 CI-1018(PD-168787)之苯并二氮呼 PDE4抑制劑；Kyowa Hakko於W099/16766所揭示之苯并 _ 間二氧雜戊烯衍生物；Kyowa Hakko公司之K-34 ; Napp (Landells，L.J·等人，Eur Resp J [Annu Cong Eur Resp Soc ίο (Sept 19-23, Geneva) 1998] 1998, 12 (Suppl. 28): Abst P2393) 之V_11294A ;羅氟司特（rofhimilast)(3-(環丙基甲氧 基)-N-(3,5-二氯-4-吼啶基)_4-(二氟甲氧基）苯甲醯胺）(參見 Byk Gulden Lomberg 之 EP 0 706 513 B1，例如參見其實例 5); Byk-Gulden 公司之吹口井酮(phthalazinone)(W01999/47505); 15 譜馬分曲（Pumafentrine)，（_)-p-[(4aR*，10bS*)-9_ 乙氧基 •l,2,3,4,4a，10b-六氫_8_曱氧基-2-曱基苯并[c][l，6]喑啶-6-^ 基]-Ν，Ν-二異丙基苯曱醯胺，其為Byk-Gulden公司，目前為

Altana所製備及公開之混合的PDE3/PDE4抑制劑； Almirall-Prodesfarma 所開發之阿羅茶鹼（arofylline); Vernalis 2〇 公司之 VM554/UM565;或 T-440 (Tanabe Seiyaku; Fuji，Κ·等 人，J Pharmacol Exp Ther，1998, 284(1): 162)及 Τ2585。 另外的PDE4抑制化合物係揭示於Glaxo Group Limited 公司名下之公開國際專利申請案W02004/024728、 W02004/056823、W02004/103998(例如文中所揭示之實例 27 200817006 399 或 544)、W02005/058892、W02005/090348、 W02005/090353 及 W02005/090354。 抗膽驗劑之實例為該等作為簟毒驗受體（muscarinic receptor)拮抗劑之化合物，特別是該等Μι或M3受體拮抗 5 劑、M"M3或M2/M3雙重拮抗劑或受體泛拮抗劑。 經由吸入給藥之例示化合物包括異丙托品（ipratropium)(例如 溴化物，CAS 22254-24-6，以Atrovent名稱銷售）、氧托銨 • (oxitropium)(例如溴化物，CAS 30286-75-0)及噻托銨 (tiotropium)(例如，溴化物，CAS 136310-93-5，以 Spiriva 名 1〇 稱銷售）。又較佳的有瑞伐托酯（revatropate)(例如，為氫溴酸 鹽’CAS 262586-79-8)及 LAS-34273 係揭示於 W02001/04118 中。口服給藥之例示化合物包括哌崙西平(pirenzepine)(CAS 28797-61-7)、達非那新(darifenacin)(以 Enablex 名稱銷售之 CAS 133099-04-4 或 CAS 133099_07-7 氫漠酸鹽）、奥昔布寧 15 (〇xybutynin)(CAS 5633-20-5，以 ditropan 名稱銷售）、特羅地 林(terodilineXCAS 15793-40-5)、托特羅定(t〇lterodine)(CAS 124937-51-5 或 CAS 124937-52-6 酒石酸鹽，以 Detrol 名稱 銷售）、奥替銨(otilonium)(例如，為溴化物，CAS 26095-59-0， 以 Spasmomen 名稱銷售）、曲司氣铵(trospium chloride)(CAS 20 10405-02-4)及素立芬新（solifenacin)(CAS 242478-37-1 或 ， CAS 242478-38-2 琥珀酸鹽，亦稱為 ym-905 並以 Vesicare 名稱販售）。 另外的化合物係揭示於WO 2005/037280、WO 2005/046586及WO 2005/104745中。本發明組合物包括(但 28 200817006 不限於）： (3-内）-3-(2，2·二-2-0塞吩基乙細基)-8,8-二甲基-8-氮陽離子二 環[3.2.1]辛烷碘； (3-内）-3-(2-氣基-2，2-二苯基乙基)-8,8·二甲基-8-氮陽離子二 5 環[3.2.1]辛烷溴； 4-[羥基(二苯基）曱基]-l-{2-[(苯基曱基)氧基]乙基}-1-氮陽離 子二環[2.2.2]辛烷溴；及 _ (lR，5S)-3-(2-氰基-2,2-二苯基乙基)-8-曱基-8-{2-[(苯基甲基) 氧基]乙基}-8-氮陽離子二環[3·2·1]辛烷溴。 ίο 其他抗膽鹼劑包括揭示於美國專利申請案60/487981之 化合物，其係在本發明施行需要之範圍内以引用的方式併入 本文中。此等包括，例如： (内）-3_(2-甲氧基-2,2-二-硫苯-2-基-乙基)-8,8-二曱基-8-氮陽 離子-二環[3.2.1]辛烷碘； 15 3-((内）-8-曱基-8-氮雜-二環[3.2.1]辛-3-基)-2,2-二苯基-丙腈； (内）-8-曱基-3-(2,2,2-0三苯基-乙基氮雜-二環[3.2.1]辛烷； • 3-((内)-8-甲基-8-氮雜-二環[3.2.1]辛-3-基)-2,2-二苯基-丙醯胺； 3-((内）-8-甲基-8-氮雜-二環[3.2.1]辛-3-基)-2,2-二苯基-丙酸； (内）-3-(2-氧基-2,2-二苯基-乙基)-8,8-二甲基-8-氮陽離子-二 2〇 環[3·2·1]辛烧蛾； . (内）-3-(2-氣基-2，2-二苯基-乙基)-8,8-二曱基-8 -說陽離子-二 環[3.2.1]辛烷溴； 3-((内)|曱基-8·氮雜-二環[3.2·1]辛-3-基)-2,2-二苯基-丙小醇； N·苯曱基(内)冬曱基I氮雜-雙環[3.2.1]辛_3·基)-2,2_二 29 200817006 苯基·丙醯胺； (内）-3-(2-胺甲酿基_2,2_二苯基_乙基)_8,8_二甲基各氮陽離 • 子-二環[3·2·1]辛烧峨； 1-苯甲基-3-[3-((内）_8_甲基各氮雜_二環[3.2 u]辛_3_ 5 基)-2,2_二苯基·丙基]-尿素； 1_乙基-ΗΗ(内）-8-甲基I氮雜-二環[3·21]辛各基)_2,2二 苯基-丙基]-尿素； ’ • Ν-[3-((内）各甲基I氮雜_二環[3·2·1]辛各基)-2,2-二苯基-丙 基]-乙醯胺； ίο Ν_[3_((内）1甲基I氮雜-二環[3·2·1]辛冬基)-2,2-二苯基-丙 基]-苯曱酿胺； 3_((内）_8-甲基_8·氮雜-二環[3.2.1]辛-3-基)-2,2-二-嗟吩-2-基- 丙腈； (内）-3-(2-氰基-2,2-二-噻吩-2-基-乙基)_8,8·二甲基_8_氮陽離 15 子-二環[3·2·1]辛烧峨； Ν-[3-((内）-8-甲基_8_氮雜_二環[3 21]辛-3_基)_2,2_二苯基-丙 基]-苯績酿胺； [3-((内）-8-甲基-8-氮雜-二環[3·2· 1 ]辛-3-基）-2,2-二苯基-丙 基]-尿素； 20 N_[3·((内）-8-曱基-8-氮雜-二環[3·2·1]辛-3-基)-2,2_二苯基-丙 ^ 基]-曱石黃醯胺；及/或 (内）-3-{2,2-二苯基苯基-甲醯基)_胺基]_丙基卜8,8_二 甲基-8-氮陽離子-二環[3.2.1]辛烷漠。 另外的化合物包括： 30 200817006 (内）-3-(2-曱氧基-2,2_二-嗔吩-2-基-乙基)-8,8-二甲基·8_氮陽 離子-二環[3·2·1]辛烷碘； 火 (内）-3-(2-氰基-2,2-聯苯·乙基二曱基-8-默陽離子-二學 [3·2.1]辛烷破； ^ 5 (内）-3-(2-氧基-2,2·聯苯-乙基)-8,8·二曱基-8-氮陽離子_二考 [3.2.1]辛烧溴； (内）冬(2-胺甲醯基-2,2-聯苯-乙基)-8,8-二甲基-8-氮陽離子_ _ 二環[3·2·1]辛烷碘； (内）-3-(2-氰基-2,2_一·嗟吩-2-基-乙基)-8,8-二甲基-8-氮陽離 1〇 子-一％^[3·2·1]辛烧蛾；及/或 (内）-3-{2,2-一本基_3-[(1-苯基-甲酿基)-胺基]-丙基》_8,8-二 甲基-8-氮陽離子-二環[3.2.1]辛烷溴。 在一實施例中，本發明係提供包含本發明化合物與Η1 拮抗劑之組合物。Η1拮抗劑之實例.包括（但不限 15 於）amelexanox、阿斯咪唑（astemizole)、阿扎他定（azatadine)、 參.氮唑斯汀（azelastine)、阿伐斯汀（acrivastine)、溴苯那敏 (brompheniramine)、西替利嗪（cetirizine)、左西替利嗪 (levocetirizine)、乙貌利嗪（efletirizine)、氯苯那敏 (chlorpheniramine)、氯馬斯汀（clemastine)、賽克利口秦 20 (cyclizine)、卡瑞斯、;丁（carebastine)、賽庚唆（cyproheptadine)、 卡比沙明（carbinoxamine)、去叛乙氧基氣雷他定 (descarboethoxyloratadine)、多西拉敏(doxylamine)、二甲茚 定（dimethindene)、依巴斯汀（ebastine)、依匹斯汀 (epinastine)、乙氟利嗪（efletirizine)、非索非那定 31 200817006 (fexofenadine)、經嗪(hydroxyzine)、酮替芬(ketotifen)、氯雷 他定（loratadine)、左卡巴斯汀（levocabastine)、味嗤斯灯 (mizolastine)、美喧他嗓(mequitazine)、米安色林(mianserin、 諾柏斯汀（noberastine)、美克洛嗪（meclizine)、諾司味口坐 5 (norastemizole)、奥洛他定（〇l〇patadine)、哌香豆司特 (picumast)、吡拉明（Pyrilamine、異丙嗓(proniethazine)、特非 那丁（terfenadine)、曲吡那敏（tripeiennamine)、替美斯汀 • (temelastine)、阿利馬嗪（trimeprazine)及曲普利口定 (tripmlidine)，特別是西替利嗪、左西替利嗪、乙氟利嗪及非 〇 索非那定。在另一實施例中，本發明係提供包含本發明化合 物與H3拮抗劑（及/或反向促進劑）之組合物。H3拮抗劑之實 例包括，例如該等揭示於W02004/035556及W02006/045416 中之化合物。可用於與本發明化合物組合之其他組胺酸受體 拮抗齊丨包括H4受體之拮抗劑（及/或反向促進劑），例如揭示 5 於 Jablonowskl 等人，J· Med· Chem· 46:3957-3960 (2003)中之 化合物。 在一實施例中，本發明係提供包含本發明化合物與 CCR5受體拮抗劑，例如454_二氟_抓《1;§)_3]3_[3-甲基 甲基乙基）-4Η-1，2,4-三唑·4_基]_8_氮雜二環[3·21]辛_8_ -0 基苯基丙基)環己甲醯胺之組合物：

200817006 在一貫施例中，本發明係提供包含本發明化合物與 CXCR3受體拮抗劑，例如N_((1R)小{3_[4_(乙基氧基）苯 基]-4-氧基-3,4-二氳吡啶[2,3-(!]嘧啶-2-基}乙基)_义(3_吡啶 基甲基)-2-{4-[(三氟甲基)氧基；|苯基}乙醯胺：

N N 因此’在另-方面’本發明係提供包含本發明化合物盥 PDE4抑制劑之組合物。 〃 β2 另—方面’本發明係提供包含本發明化合物與 β2-腎上腺素促進劑之組合物。 此另—方面，本發明係提供包含本發明化合物與 皮貝類固醇之組合物。 /、 非類因二在:進 15 抗膽面，本發明係提供包含本㈣ 抗組面’本發明係提供包含本發明化合物與 FDE4lt’ *另一方面，本發明係提供包含本發明化人物斑 I 腺素促進劑之組合物。 抗膽驗劑及咖4抑制劑^合^提供包含本發明化合物與 33 20 200817006 j所指之組合物H藥娜物存在❹ 以組合的調配物4 ίΓ 別的化合物係同時 者應能容易地了 ^。、 _之適合缝_本項技術 因此’在另-方面，本發明係提供包含 另外的治療活性劑之醫藥組成物。 衫月化口物與 七在另方面，本發明係提供包含本發明化人物| PDE4抑制劑之醫藥組成物。 月化口物與 R2跃口Π在另—方面，本發明係提供包含本發明化合物盘 β2-腎上腺素促進劑之醫藥組成物。 ^ 15 α此’在丨心’本發㈣提供包含本發明化 皮質類固醇之醫藥組成物。 ，、 因此’在另-方面’本發明係提供包含本發明化合物與 非類固醇GR促進劑之醫藥組成物。 因此’在另-方面’本發明係提供包含本發明化合物與 抗膽驗劑之醫藥組成物。 因此，在另-方面，本發明係提供包含本發明化合物與 抗組織胺之醫藥組成物。 因此’在另-方面’本發明係提供包含本發明化合物與 CXCR3受體拮抗劑之醫藥組成物。 因此，在另-方面’本發明係提供包含本發明化合物與 200817006 CCR5受體拮抗劑之醫藥組成物。 現在係藉由參照下列生物實例來描述本發明，其僅為說 明而不應視為本發明範圍之限制。 5 【實施方式】 以下列活體外分析測定本發明之IL-8及GRO-α趨化激素 抑制效用： ⑩ 受體結合分析： 10 [ I]IL-8(人類重組)係得自ge Healthcare公司，具有專

一活性2000 Ci/mmol。所有其他的化學藥品為分析等級。將 高效之重組的人類CXCRl(IL-8a型）及CXCR2(IL-8p型）受 體各別表現於如前述之非黏附中國倉鼠卵巢（CH〇)細胞 (Holmes，#人 Science,, 1991，ϋ 1278)。根據前面所述之 15 方法，Haour，事乂, L Biol. Chem.. 249 pp 2195-2205 (1974)) 製備膜，該文獻係在製備本發明所需之範圍内以引用的方式 _ 併入本文中，但是均質緩衝液係修改為40mM Tris-HCL (pH 7·5)、ImM MgS04、0.5 mM EGTA (乙二醇雙(2-胺基乙基 醚）-N，N，N’，N’-四-乙酸）、imM PMSF(a-曱苯磺醯氟）、2·5 2〇 mg/L tc抑 i#狀(leupeptin)及0.1 mg/ml抑狀酶(aprotinin)。將細 胞均質化並以2,000 rpm離心10分鐘。將上清液以i〇〇,〇〇〇Xg 離心1小時。將上清液倒出並將膜儲存K-80〇C。使用BioRad 试劑根據製造商之方法使用牛血清球蛋白（bsa)為標準，測 定膜蛋白之濃度。 35 200817006 所有IL - 8結合係使用閃爍親近分析（S PA)，使用麥胚凝集 素微珠於96-孔盤的形式中進行。將膜CHO-CXCR1或 CHO-CXCR2以^^珠之結合缓询1液中預j：咅着30分鐘，而4〇Q 的緩衝液含有20 mM L3-雙[(三羥甲基）甲基氨基]丙燒 5 (Bis-Trispropane)緩衝液、pH 8.0含有 1 mM MgS04、0.1 mivj EDTA及25 mM NaCl。將化合物於DMSO中以20X最終稀釋倍 數稀釋（最終化合物濃度介於1 nM至30 uM間及最終DMS〇 ⑩濃度5%)。分析係於96-孔盤（〇ptiplate96, Packard)於室溫下， 於具有膜及0.04% CHAPS(3-[(3-氣醯胺基丙基）二甲基胺 1〇 基]小丙磺酸酯、0.0025% BSA及0.23 nM [1251] IL-8之0·1 ml 結合緩衝液中進行。將測定盤於平台上震盪丨小時，在培養 終了時將測定盤以2,〇〇〇 rpm離心5分鐘並於Top Count計數 器上計數。重組的几-8 Rot、CXCR1或第I型受體在本文中亦 指非允許受體，而重組的IL-8 Ιφ、CXCR2或第II型受體亦指 15 允許受體。 ⑩ 在此分析中，若其具有<30uM之IC5〇值，則此化合物係 視為具活性。在本分析中，本發明化合物預計其試驗活性Ic% 值約13 nM。 20 化學趨向性： . 進行嗜中性細胞化學趨向性分析。原代人類嗜中性細胞 係由周圍全血中使用非連續梯度離心、葡聚醣沉降及低滲溶 離作用所分離出。將化學誘引物IL-8 (CXCL8)或GRO-α (CXCL 1)置於96多孑匕室之底室中(ChemoTx System，Neuro 36 200817006

Probe，Gaithersburg，MD)。所用的促進劑濃度為EC80濃度。 將二室以5 um聚碳酸酯膜隔開。將試驗化合物以細胞預培養 之後置於過濾器上方。 化學趨向性係於濕化培養器中於37〇c以5% C〇2處理45 5 分鐘。在培養終了期間，將膜移除並將底室遷移的細胞轉置 於96孔盤。使用發光細胞活性分析（ceiititer-Glo，Promega，

Madison，WI)測量這些細胞。各樣本係以二重複進行試驗且 瞻各化合物至少重複三次。正性對照細胞為無添加化合物之細 胞並代表隶大化學趨向反應、。負性對照（未經刺激）為添加至 10 底室無趨化激素。正向對照及負性對照間之差異代表細胞之 化學趨向活性。 ' 若其具有<5 uMiK：%值，則此化合物係視為具活性。 CDllb人類全金分析l 15

2〇 於人類全血中試驗化合物其抑制GR〇a_引發整合素 CDllb於嗜中性細胞之表現。 、 使用蝴蝶線及含有0‘2 ml作用肝素鈉之10鮒注射哭取 出血液(9 ml)。將血液保持在37〇c直到於下列步驟5中至:冰 上為止。然後將化合物儲存溶液稀釋12倍，最大最線潫产^❻ 。然後於_巾崎半對數連續騎。錢將十微又 化合，稀釋液或媒劑加到適合的12χ75聚丙烯試管中1於每 支=管加人-百微升的全血並於37。〇水浴中培_分鐘:開 〇始時攪動(溫和)。將GR〇alt存液以i:166.66於 (U/。BSA-DPBS中稀釋至12G 之” 12χ，，濃度，並㈣ 37 200817006 GROa稀釋液或0.1%BSA_DPBj^，適合的試管中，使最終 的GROa濃度等於10 nM。將試管於37°C培養10分鐘同時再5 分鐘時以手緩和震動。然後將樣本置於冰上並加入25() ul冰 冷的CellFix作用稀釋液，接著於冰上培養一分鐘。於GR〇a 5 培養期間藉由加入適合的抗體準備1.5mlEppendorf試管。除 了加入同型對照中加入lOul的IgG2a_FITC取代CDllb外，於 每支試管加入10 ul的CDllb-FITC及5 ul的CD16-PE。另外取 藝 各试管50 ul的固定企液加到適合的Eppendorf試管。然後將樣 本於黑暗中4°C下培養20分鐘。將加入500 ul冷的DPBS之jk 10 液/抗體混合物加到適當標明的12x75聚苯乙稀試管。將生成 的混合物保持在冰上。加入LDS儲存液（1〇 ul)並將混合物於 4QC培養10分鐘，之後進行流動分析。將樣本保持在黑暗的 環境中。在將樣品收集在流式細胞儀時，於添加LDS時搖 晃，使所有的樣本在添加LDS後跑動〜10-20分鐘。

15 使用中度流速收集流體及增加的FL3閥值，以使用LDS afl消除为析中紅金球。使用位標定的樣本及單色樣本適當地 設定顏色補償，以減少LDS流至PE及PE流至FITC及FITC流 至PE。就BD LSR細胞儀，LDS=FL3、PE=FL2、FITC=FL1。 最少收集2000-3000群集，其滿足粒細胞之SSC及FSC設門， 2〇 且用FL2訊號時為CD16正性。 穩定表現CXCR2及Gal6之CHO-K1細胞中之耗活動性： 穩定表現CXCR2及Gal6之CHO-K1細胞置於 DMEM/F12 (HAM’s)l:l、w/ 10% FCS (熱滅性）、w/2 mM L- 38 200817006 5

10 15 麩醯胺酸、w/0.4mg/mlG418中，同時於5%c〇2培養箱中維 持在37°C ’生長至80%之覆蓋率。分析前二十四小時，收集 細胞並以每孔40,000細胞置於96孔、黑壁、透明底之盤中 (Packard View)及放回C〇2培養箱中。分析當天，將化合物連 續於100%DMSO中稀釋至300X所欲之分析濃度。由生長培 養基抽出細胞及以100 ul的承載培養基(EMEM帶有Earl”s鹽 w/L-麩醯胺酸、0.1% BSA(Seriologicals 公司之 Bovuminar Cohen Fraction V)、4 uM Fhio-4-乙醯氧基甲基醋螢光指示器 染劑（Fluo-4 AM，Molecular Probes 公司）及 2·5 mM 丙績舒 (probenecid))取代，並於37CC之C〇2培養箱中培養1小時。將 承載培養基抽出並以帶有Earl”s鹽w/L-Glutamine、0.1%吉利 丁（gelatin)及2.5 mM丙磺舒之100 uL的EMEM取代，另再培 養10分鐘。將300X於DMSO連續稀釋之化合物轉置於含有 297微米 KRH(120 mM NaC卜 4.6mM KC1、1·03 mM KH2P04、 25 mM NaHC03、l.OmM CaCl2、1·1 mM MgCl2、11 mM葡 萄糖、20 mM HEPES (pH 7.4))w/2.5 mM丙磺舒及〇·1〇/0吉利 丁（化合物目前為3Χ)之96孔盤中。由培養基抽出細胞，以及 將細胞以KRH w/2.5 mM丙磺舒、w/0J%吉利丁清洗3次。將 帶有0.1%吉利丁之KRH (100 ul ) w/2.5 mM丙磺舒加到孔槽 中，然後再將50 ul溶於KRH w/2.5 mM丙磺舒及0.1%吉利丁 之3X化合物加到孔槽中（化合物目前為1 X)並於37°C之C02 培養箱中培養10分鐘。將測定盤置於FLIPR (Fluorometric Imaging盤式判讀機，Molecular Devices公司，Sunnyvale CA) 如前述進行,分析（Sarau等人，1999)。測定各種濃度之化合物 39 20 200817006 由^0iiMIL_8，CXCR2之ECso濃度引起之最大人類il_8引發 Ca活動之百分比，並計算抑制5〇%由1() nM IL_8引起的最 大反應時之試驗化合物濃度係為IC5〇。在此分析中，若其具 有<10 uM之ICw值，則此化合物係視為具活性。 5 劑大鼠後試中性細胞C D11 b剡澈 口服給予路易斯(Lewis)大鼠(250-300 gm)本發明化合物 着 或媒劑，一小時後將其以〇〇2窒息殺死。以心臟穿刺抽出大 鼠全血3 ml置於含有 1〇〇 μ1 的〇·25 M EDTA (GIBCO, Grand 10 Island，NY)的注射器中。於10 μΜ之Kreb，s/0.1 %BSA(KBSA) 中重建大鼠CXCL2 (PeproTech，Rocky Hill，NJ)儲存液。將儲 存液稀釋至”llx”，用於DPBS (GIBCO)之最大濃度，以及連 續地於KBSAIDPBS媒劑稀釋。將1〇 μΐ適當濃度之本發明化 合物（1.2-100 ηΜ)或媒劑加到12x75 mm聚丙稀試管中，接著 15 加入10〇 μΐ的全金。將試管於37°c浴中培養30分鐘，期間每 10分鐘以手輕輕搖晃。然後將樣本置於冰上10分鐘，接著加 入10 μΐ的抗-大鼠-CDllb-FITC或FITC^定小鼠lgG2a同型 對照（二者皆得自 Antigenix America，Huntington Station，NY) 並於冰上培養30分鐘。於立即劇烈旋動下加入FACS解離濃 20 液(Becton dickinson，San Jose，CA)、1 ml的 IX，接著在溶液 1 加到最後的樣本後另再旋動。將樣本於室溫下培養10分鐘以 及將白血球以〜300 X g形成小團並以DPBS清洗。將細胞再轉 浮於650 μΐ的1%三聚甲醛中。FACS解離溶液沒有完全解離大 鼠紅金球。因此，就流式細胞分析，係將3、5 μΐ的1.67 mg/ml 40 200817006 LDS_751(Exciton，Dayton，OH)之乙醇溶液(過飽和；以離心澄 清)於流式分析的1 -2分鐘内加到各樣本中’以排出任何殘餘^ 的紅血·球。使用CellQuest軟體及LSR流式細胞儀 (Becton-dickinson)收集樣本數據，以低流速，藉由增加fL3 5 闊值消除LDS-751負性紅血球，然後將嗜中性細胞群族留在 侧散射及前散射圖區。然後藉由以CellQuest軟體分析，測量 此群族之FL1 (綠色FITC螢光，與CDllb含量直接相關）的平均 I 通道螢光。 在此分析中，本發明化合物係試驗給予路易斯大鼠1〇 〇 mg/kg劑量後，抑制全血嗜中性細胞CDllb表現活性。本發 明化合物CXCL2濃度反應曲線之EC50明顯地由媒劑治療大 鼠之4.7 ηΜ(1·9-7·4 ; 95% C.I·)移動至 12·3 ηΜ (10.0-14.7)， (ρ<0·001，η=6每群族）。 上述說明充分揭示了本發明，包括其較佳實施例。本文 5 中特別揭示之實施例的修正與改進係在下列申請專利範圍 _ 之範臂中。無需進一步詳細闡述，咸信熟習本項技術者，使 用别述之描述，能可完全地利用本發明。因此，文中之實例 僅作為說明用而非在任何方面限制本發明之範圍。其中聲請 獨立特性及特許權之本發明實施例係如下所定義。 41

Claims (1)

1. 200817006 十 15 20 申請專利範圍： 1· 一種4_{[6_氣-Η{[(2_氣·3_氟苯基)胺基]羰基}胺基)_2· 赵基苯基]磺醯基}-1_哌畊羧酸二曱基乙基酯曱苯 磺酸鹽。 一種包含4- {[6-氯-3_({[(2-氯-3-氟苯基)胺基]羰基}胺 基)_2•羥基苯基]磺醯基卜哌畊羧酸丨，^二甲基乙基酯 甲本^酸鹽及醫藥上可接受載劑或稀釋劑之醫藥組成 物。 一種4-{[6-氣-3-({[(2-氯-3-氟苯基)胺基]羰基}胺基)_2_ 羥基苯基]磺醯基}-1-旅啩羧酸U —二曱基乙基酯曱苯 磺酸’係用作活性治療物質。 一種={[6-氯-3-({[(2-氯_3-氟苯基)胺基]羰基丨胺基)_2-羥基笨基]磺醯基}_1_哌畊羧酸〗，^二甲基乙基酯甲苯 石黃酸鹽：係用治療趨化激素所介導之疾病，其中該趨 化激素係於哺乳動物中與IL_8或 。 氣-3·-氣-3-氣笨基胺基).2_ ^本基]俩基PM底倾酸Μ·二甲基乙基醋甲苯 ;二二係用，治療由下列組成之群中選出之疾病： ^性J且基性肺疾病、成人呼吸窘迫症候群。 ίΑ|{Γ^-Μ{[(2·氣錢苯基)胺基]幾基}胺基)-2· 羥基本基]磺醯基Μ_哌畊 :用鹽:製造供用於治療趨化激素“導 2· 3· 4. 5· 6· 7. 一種治療趨化激相介導疾病 之醫藥組成物，其中在 42 200817006 哺乳動物中該趨化激素係與IL-8a或β受體結合，而該組 成物係包括一有效量之4-{[6-氯-3-({[(2·氯_3_氟苯基） fe基]基}胺基)·2•經基苯基]石黃酸基卜1_旅，幾酸1 1_ 二甲基乙基酯甲苯磺酸鹽。 8·如申請專利範圍第7項之醫藥組成物，其中該哺乳動物 係患有氣喘、慢性阻塞性肺疾病、成人呼吸窘迫症候 群。 9.如申請專利範圍第8項之醫藥組成物，其中該哺乳動物 係患有恢性阻基性肺疾病。 10· —種包含4-{[6-氯-3·({[(2_氯-3-氟笨基）胺基]羰基}胺 基)-2-經基苯基]石黃醯基}小旅畊羧酸匕卜工甲基乙基酉旨 曱苯磺酸鹽及一或多種另外其他治療成份之醫藥組合 物。 11·如申請專利範圍第10項之組合物，其中該另外的治療 成份為CXCR3受體拮抗劑或CCR5受體拮抗劑。 12· —種合成4-{[6-氯-3-(U(2_氣„3_氟笨基）胺基]羰基}胺 基)·2·基本基]石黃醯基卜井羧酸1，卜二甲基乙基妒 曱苯磺酸鹽之方法，係包含下列步驟·· 曰 a) 將乙腈與對甲苯磺酸單水合物組合； b) 將步驟a)之產物加到溶於四氫呋喃之[心氣 _3_({[(2_氯-3_氟苯基)胺基憤基}胺基)-2，基笨 基]石頁酿基卜1-13辰畊羧酸1，1-二甲基乙基酯中；及 c) 將在步驟b)中所得到的產物以乙腈處理。 43 200817006 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 益

   八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 15 無

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