TW200808335A - Methods for the treatment of macular degeneration and related eye conditions - Google Patents

Description

200808335 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於眼科學及視覺細胞生物學。具體而言，本 發明係關於治療、缓解、或預防年齡相關性黃斑變性 (ARMD)，包括非滲出性（乾型ARMD)形式及滲出性（濕型 ARMD)形式。本發明涵蓋用於治療ARMD及相關眼睛病症 之新穎的組合物及方法。在一實施例中，談方法利用（或 該組合物包含）一脫辅基脂蛋白A-I Milano(AIM)或一脫輔 基脂蛋白A-I Milano-脂質複合體。 【先前技術】 2.1年齡相關性黃斑變性 在發達國家中，年齡相關性黃斑變性（ARMD)係嚴重的 視力喪失之主要原因之一（Taylor等人，Br J Ophtalmol 85:261-266，2001; VanNewkirk 等人0卩1^&1111〇1 107:1593-1600，2000)。在該病症之早期階段中，在自脈絡膜新血管 形成出現視力損失之前，在布魯赫氏膜中存在遞增的脂質 體積聚（Pauleikhoff 等人，PNAS USA 94:4647-4652, 1990 ； Holz 等人，Arch Ophtalmol 112:402-406,1994 ; Sheraidah 等人，Ophtalmol 100:47-51，1993 ; Spaide 等 人，Retina 19:141-147，1999)。布魯赫氏膜位於介於外侧 視網膜及其血液供給部分（脈絡膜毛細管層）之間的關鍵結 合處。遞增的脂質沈積可致使布魯赫氏膜中液壓傳導性及 大分子滲透性降低，由此可能損害視網膜代謝作用（Moore 等人，Invenst Optalmol Vis Sci 36:1290-1297，1995 ; 118868.doc 200808335

Pauleikhoff等人，PNAS USA 94:4647-4652，1990 ; Starita 等人，Exp Eye Res 62:5 65-572, 1996)。當膽固醇及其它脂 質於布魯赫氏膜中足量沈積後，視網膜色素沉著的上皮細 胞（RPE)可能會藉由對可促進脈絡膜新血管生長之血管生 成因子（例如VEGF及vFGF)進行加工而作出響應。 因此，液壓傳導性降低係RPE及視網膜局部缺血之一可 能原因。另一原因係脈絡膜環流減少，脈絡膜環流通常隨 年齡減少且在患有ARMD之患者中減少更嚴重。惡化的脈 絡膜環流水平與更嚴重的ARMD水平有關（Spraul等人， Invest Ophtalmol Vis Sci, 39(11):2201-2202, 1998 ί

Grunwald 等人，Invest Ophtalmol Vis Sci，46(3): 1033- 1038，2005 ; Ciulla等人，Br J Ophtalmol. 86(2):209-213, 2002)。並且存在脈絡膜動脈硬化之組織學證據（Curcio等 人，Invest Ophtalmol Vis Sci，42:265，2001) 〇 一待決問題係最終引發新血管形成之脂質沈積的發病機 理。令人感興趣的是，在ARMD中發現的布魯赫氏膜中之 脂質積聚與在動脈硬化症動物模型（脫辅基脂蛋白E(apo E) 基因缺陷小鼠）中發現的情況具有相似性（等人，如ναί Ry 5W·, 41:2035_2042，2000 ; Kliffen等人，办 J 84:1415-1419, 2000)。在死後眼睛上進行的免 疫組織化學檢查已經顯示在視網膜色素上皮細胞（RPE)中 存在 apo E(Anderson等人，dw 131(6):767-768, 2001)。培養的RPE細胞可合成高水平的apo E mRNA，其 水平比得上在腦中發現的水平（Anderson等人，2001，上 118868.doc 200808335 文）。脫輔基脂蛋白E及apo E等位基因可能係與數種年齡 相關性變性（例如阿耳茨海默氏症及動脈硬化症）相關的共 同特徵。此關聯已經刺激了近期對apo E在ARMD中之可能 作用的研究。為發現與特定等位基因之聯繫，人們已對 ARMD中之apo E多態現象進行了數種研究（Simonelli等 人，Ophtalmic Res 33:325-328， 2001 ; Klayer等人，dm J Hum Ge似i 63(1):200-206, 1998 ; Souied 等人，dm c/ 125(3):353_359，1998)。與阿耳茨海默氏症相 比，人們已將apo E-4等位基因與降低的ARMD患病率聯繫 起來。Apo E-2等位基因在ARMD患者中略有增加。進一步 支持apo E在ARMD病因中起作用的是，在玻璃膜疣（布魯 赫氏膜沈積物，係ARMD的標諸）中已檢測出了 apo E(Klayer 等人，1998，上文；Anderson 等人，2001，上 文）。 儘管暗示而未確定apo E在ARMD中起作用，但此阿樸脂 蛋白具有數種可能影響此疾病過程的功能。AP0 E具有抗 企管生成效果（Browning等人 ’ J Exp Med 180(5): 1949-1954，1994)、抗炎症效果（Michael 等人’於 Cellular Immunology，159卷 ’ 2期’弟 124-139 ’ 1994)、及抗氧化 效果（Tangirala 等人，E J Biol Chem 276(1): 261-266, 2001)。據認為該等皆係Apo E之防動脈粥樣硬化特性，但 亦可能在防止ARMD之增進中具重要作用。儘管起初據認 為apo E之防動脈粥樣硬化效果係源自其對於血脂水平的 影響，但對於血管巨嗟細胞的局部影響可能同樣重要。因 118868.doc 200808335 此，巨嗟細胞apo E在動脈壁上選擇性增強的表現可減少 動脈硬化症（不考慮高指血症）（Shimano等人，J Clin Invest 95:469-476, 1995 ; Bellosta等人，J Clin Invest 96:2170-2177， 1995 ; Hasty 等人，Circulation 99:2571-2576, 1999)。相反，藉由在C57BL/6野生型小鼠中重構apo E基 因缺陷巨噬細胞而引起的Apo水平之減小可促進動脈粥樣 硬化的發展（Fazio等人，1994)。 動脈apo E表現之防動脈粥樣硬化作用據認為係部分地 源自於膽固醇逆行轉運之促進（Mazzone等人，Circulation 86 (Suppl 1):1-2，1992 ; Lin等人，EJLipidRes40··1618-1626，1999)。Apo E促進膽固醇反向運輸之機制仍未完全 理解。Apo E表現可增加J774巨噬細胞中流向HDL3之膽固 醇（Mazzone及 Reardon，J Lipid Res 35:1345-1353，1994)及 不含脂質之阿樸脂蛋白Al(Langer等人，J Mol Med 78: 217-227，2000)。亦猜測細胞表面apo E可誘導自質膜之流 出（Lin等人，1999，上文）。 膽固醇轉運在ARMD之致病機理中可能係重要的，因為 脂質自RPE流至布魯赫氏膜中。與内膜巨噬細胞極其相 似，RPE細胞在一生中漸進地積聚脂質沉積物；然而，與 管壁巨噬巧胞不同，據認為RPE脂質源係視網膜光受體外 侧段（P〇S)(Kennedy等人，Eye 9:262-274，1995)。每天， 各RPE細胞吞噬並經由溶酶體酵素降解超過1〇〇〇個p〇s。 此等POS富含構脂並包含光反應性色素、視紫紅質。未完 全消化的POS呈脂褐質形式在RPE中積聚。至80歲時，約 118868.doc 200808335 20%的RPE細胞容積由脂褐質佔據（Feeney-Burns等人，J Invest Ophtalmol Vis Sci 25: 195-200，1984) 〇 對布魯赫氏膜之脂質分析揭示一年齡相關性的磷脂、甘 油三酯、膽固醇、及膽固醇酯積聚（Holz等人，1994，上 文；Curcio等人，J Invest Ophtalmol Vis 42:265，2001)。 亦據認為該等脂質之來源主要源自POS而不是源自循環 (Holz等人，1994，上文；Spaide等人，1999，上文）。據 猜測，POS脂質自RPE流至布魯赫氏膜中，儘管膽固醇酯 在布魯赫氏膜中之沉積暗示來自血脂之影響，但對該等醚 之生化分析暗示細胞内膽固醇藉助源自RPE細胞之ACAT 的酯化作用（Curcio等人，ARVO Abstracts, 2002)。儘管已 經對脂質自視網膜向RPE細胞之運輸進行了廣泛研究，但 仍未能清楚地瞭解脂質自RPE向布魯赫氏膜之流動機制。 並且，自致病的角度分析，對脂質向布魯赫氏膜中流動的 調節在測定衰老中由脂質誘導之增厚的速率中可能係重要 的。 在布魯赫氏膜中膽固醇之三種可能來源包括上述細胞膽 固醇及血脂，以及原位合成。舉例而言，大腦可合成其自 身的膽固醇，自血漿中獲得極少量的膽固醇，並具有極慢 的膽固醇代謝周轉。

巨噬細胞中膽固醇逆行轉運係藉由細胞核激素受體配體 經由其對ABCA-1及apo E表現的影響而調節。肝臟X受體 (LXR)及/或類視色素X受體（RXR)配體可增加該等運載體 之水平及增加巨噬細胞中之膽固醇逆行轉運（Mak等人，J 118868.doc -10- 200808335

Biol Chem 277(35): 31900-31908，2002 ; Laffitte 等人， P见98(2): 507-512, 2001)。亦已證明甲狀腺激素可 增加apo E三倍體在HepG2細胞中的表現（Laffitte等人，五wr 224(2): 463-471，1994)。 在動脈粥樣硬化（AS)中，脂質在細胞外基質中及在吞噬 細胞（主要係巨噬細胞）中發生積聚。有人已對脂質在AS中 的代謝機制進行了詳細研究。未以如對於AS之彼等濃度的 相同深度對RPE之脂質加工及繼後的脂質流入BM及循環實 施類似研究。因此，需要乾型ARMD之可能治療方法。

Mullins(Mullins等人，14(7): 835-846, 2000)闡 述介於玻璃膜疣與其他細胞外沈積物（包括動脈粥樣硬化 斑塊）之間的成份相似性。具體而言’玻璃體結合蛋白、 澱粉狀蛋白P、Apo E及脂質皆屬於共同具有的組份。更具 體而言，在視網膜色素上皮細胞中可鑑別出脫辅基脂蛋白 E。

Friedman(Friedman, Am J Ophtalmol 130(5): 658-663 5 2000)綜述了動脈粥樣硬化在ARMD之發病機理中作用。具 體而言，該綜述提及面向血管生成途徑來治療ARMD之新 血管生成，例如成員VEGF。應注意，干擾血管生成劑之 上調或作用可能有助於脈絡膜新血管生成，並且，在替代 實施例中，他汀類藥物可能對降低ARMD之風險有用。

Anderson等人「Anderson等人，2001，上文）報告在與玻 璃膜疣相同的部位中發現了脫輔基脂蛋白E蛋白，可能源 自視網膜色素上皮細胞。 118868.doc -11- 200808335 美國專利第6,071，924號考慮藉由使111>]^細胞與視黃酸受 體激動劑（不包括視黃酸）接觸_較佳藉此抑制依賴的 基因表現來抑制視網膜色素上皮細胞之增殖。在具體實施 例中，將一 API拮抗劑遞送至有其需要之受試者來抑制視 網膜色素上皮細胞增殖或與其有關之疾病。 美國專利第6,075,032號係關於藉由使RPE細胞與一 Ap-1 拮抗劑相接觸來抑制脈絡膜新血管生成。 美國專利第5,824,685號考慮藉由使RPE細胞與一選自6_ [2-(4,4-一甲基二氫苯并噻喃基）乙炔基]煙鹼酸乙酯、 [2 (4,4- 一曱基色滿_6一基）乙炔基]煙驗酸、及對·[(E)·]· (5,6,7,8-四氫-5,5,8,8-四甲基_2_萘基）丙烯基]_苯甲酸之 RAR視黃酸受體接觸來緩解增殖性玻璃體視網膜病變或牽 拉視網膜脫離。 美國專利第6,372,753號探討藉由提供至少一 Ap-1拮抗劑 及至少一視黃酸受體（RAR)激動劑（不包括視黃酸）來抑制 由視網膜色素上皮細胞增殖引起的眼病。 WO 01/58494係關於藉由使一視覺細胞與一包含編碼一 血官生成抑制物及一神經營養物之核酸序列的表達載體相 接觸來治療或預防一眼病，例如年齡相關性黃斑變性。在 具體實施中，該血管生成抑制物與該神經營養物為一種且 相同’例如由色素上皮產生的因子（PEDF)。 WO 02/13812考慮將胰島素敏化劑（較佳係過氧化物酶體 增生物激活受體y(PPAR y)激動劑）用於治療發炎疾病，例 如眼病。 118868.doc •12- 200808335 WO 00/52479探討診斷、治療、及預防與玻璃膜疣相關 的病症（任何涉及玻璃膜疣形成的疾病），包括ARMD。在 具體實施中，給出了關於提供有效量之可抑制免疫細胞增 殖或分化的藥劑，例如腫瘤壞死因子（TNF)- α及細胞因子 之拮抗劑。 WO 2004/098506及WO 2004/0266663利用對類似於動脈 粥樣硬化之致病機制之調節來治療年齡相關性黃斑變性。 在具體實施中，膽固醇的逆行轉運組份（例如轉運蛋白及 HDL成份）用作年齡相關性黃斑變性的診斷及治療目標。 在另一具體具體實施例中，視網膜色素上皮細胞的脂質含 量及/或布魯赫氏膜係藉由遞送脫辅基脂蛋白ΑΙ(較佳一模 擬肽）而減小。

Arroyo 於 ’’Age-related macular degeneration-I and II，" UpToDate(線上服務）（最後修改於2005年九月19日）中提供 年齡相關性黃斑變性之背景資料，包括流行病學、病源 學/風險因素、臨床表現、診斷、治療及預防。

Duncan 等人（Duncan 等人，J 89(12): 1549-51，2005)闡述，自於LDL受體不足的小鼠中之發現可 分析出早期ARMD之機理。

Rudolf等人（Rudolf等人，2005)闡述，LDL受體不足的 小鼠顯示出脂質顆粒在布魯赫氏膜中之積聚作用，且在攝 入脂肪後該積聚作用進一步增大。

Nissen等人 fNissen等人，290: 2292-2300, 2003)揭 示一其中當用重組apo A-I Milano-POPC複合體治療後動脈 118868.doc -13- 200808335 粥樣硬化體積減小的研究。 2·2脫輔基脂蛋白A-I Milano 人類Apo-I Milano為野生型脫辅基脂蛋白（Apo A-Ι)之一 天然變體（Weisgraber 等人，C/z·?? 66: 901-907, 1980)。在Αρο A-Ι Milano中，胺基酸精胺酸（Argl73)由胺 基酸半胱胺酸（Cysl73)取代。Apo A_I Milano之受試者之特 徵在於具有低水平的血漿HDL膽固醇及Αρο A-Ι。參見（例 如）Parolini(Parolini等人，di/zerwc/eros以 183(2): 222-229, 2005)、Chiesa 及 Sirtori(Chiesa 及 Sirtori，Cwrr Lipidol 14(2): 159-163, 2003)^ Genbank Accession No. NP-000030.1 (gi 4557321) 〇 在每個Apo A-I Milano分子中存在一個半胱胺酸殘基可 使相似的或不相似的多肽鏈之間形成二硫鍵。因此，在脂 蛋白顆粒中Apo A-I Milano可以單體的、同二聚體的、或 異二聚體的形式存在（參見（例如）美國專利農5,876,968 號）。該等形式具化學互換性，且術語Apo A-I Milano不區 別該等形式。在DN A水平上，在基因序列中自C至T之取 代（即密碼子CGC變為TGC)，使胺基酸位置173處轉譯為半 胱胺酸（Cys)而不是精胺酸（Arg)，可導致產生變體形式。 獲得Apo A-I Milano之方法為業内所熟知。舉例而言， Apo A-I Milano可（例如）藉由密度梯度離心並隨後藉由脂 蛋白去脂作用、還原、變性作用及凝膠過濾層析法、離子 交換柱層析、疏水性（例如苯基瓊脂糖凝膠）相互作用層析 或免疫親和層析自血漿中分離出來，或以合成方式、半合 118868.doc -14- 200808335 成方式、或使用重組DNA技術並隨後藉由業内熟練的技術 人員所瞭解的純化技術製得。（參見（例如）美國專利第 6，107,467 號；第 6,559,284 號;第 6,423,830 號；第 6,090,921 號；第 5,834,596 號；第 5,990,081 號；第 6,506,879 號；第 5,059528 號；第 5,876,968 號；及第 5,721，114號；Mulugeta等人，J· C/zromaiogr 798(1-2): 83-90 (1998) ; Chung 等人，J. 及以 21(3): 284-91 (1980) ; Cheung等人，J· 及以 28(8): 913-29 (1987); Persson等人，J· 711: 97-109 (1998);及 PCT 出 版物 WO 86/04920 及 WO 87/02062)。 因此’需要一種藉由減小玻璃膜疲之大小和脂質含量及 視網膜和眼組織（例如布魯赫氏膜）之其它病理學損傷來治 療、緩解或預防年齡相關性黃斑變性之新穎途徑。 【發明内容】 本發明涵蓋一用於治療哺乳動物年齡相關性黃斑變性或 相關病症之方法及組合物，其用體外製得的脂蛋白充當 HDL模擬物（例如Apo A-I Milano或AIM :填脂複合體）。 本文提供方法、組合物及劑量方案，且據認為不受理論 限制地涵蓋安全、有效、及非手術治療-該等治療可快速 促進膽固醇自視網膜、RPE或布魯赫氏膜之脂質斑點（例如 玻璃膜疢）流出及轉移，藉此而有利於改善視敏度、預防 視敏度減小、或改善或預防會導致視敏度受損的黃斑變 性。作用機理包括：改善視網膜或脈絡叢之血流或環流從 而直接或間接地改善視敏度或防止視敏度減損、或緩解能 118868.doc -15- 200808335 促進可降低視敏度之視網膜血管增生的損傷。 “本發明方法包括向有其需要之哺乳動物投與一可溶或微 粒形式之ΑΡ〇 ΑβΙ Milan〇(，，AIM”）蛋白質或一 AIM:脂質複 合體。在本發明方法中，可將Apo A-I Milano與脂質或磷 脂結合。本發明涵蓋使用包含任一適宜磷脂之Apo A-I Milano顆粒的治療，在一實施例中該磷脂為磷脂p〇pc， 其在一典型的治療性顆粒中隨變體脫辅基脂蛋白共同投 與。如本文所用，Apo A-I Milano(或脂質或其磷脂複合體） 可呈或可不呈醫藥組合物的形式。 本發明醫藥組合物可包含選自一或多種Ap〇 A] Milano 或其衍生物及一或多種肽：脂質複合體（例如AIM :脂質複 合體）之單活性成份。該Apo A-I Milano可為任一藉由業内 任一熟知方法自任一可用來源獲得的重組、合成或純化的 人類或非人類Apo A-I Milano。在一實施例中，該Ap〇 A-I Milan〇為一重組蛋白。在另一實施例中，該AP〇A-I Milano 為一人類ApoA-I Milano。在本發明方法及組合物中，可 以約1毫克/公斤至約50毫克/公斤之劑量向有其需要之哺乳 動物 4又與 Apo A-I Milano。 本發明提供包含呈顆粒或乳劑形式之Apo A_I Milano劑 型或與脂質或磷脂結合的Ap〇 A-I Milano劑型之醫藥套 組。可在該等醫藥調配物上貼上標籤並附上標示以在預防 或治療年齡相關性黃斑變性中確認其中所包含的調配物及 其他對於健康護理提供者及受試者有用的信息，包括（但 不限於）劑量、給藥間隔、持續期、適應症、禁忌症、注 118868.doc -16- 200808335 意事項、預防措施、操作及儲存指示及諸如此類。 【實施方式】 4.1定義 如本文所用，以下術語應具有下述含義： 如本文在說明書中所用，”一 C，a”或” an”）”可意指一或多 個。如本文在申請專利範圍中所用，當與詞語，，包括"結合 使用時，詞語”一（"a”或"an”）"可意指一個或一個以上。如 φ 本文所用Π另一 π可意指至少第二個或第更多個。 如本文所用術語”年齡相關性黃斑變性，，指濕型及乾型、 早期或晚期的黃斑變性，通常出現在超過約5〇歲之個體 中，但亦會較少地存在青少年型之該疾病。在一具體實施 例中，其與位於視網膜黃斑區中之光感受器的破壞及減少 有關，此可導致中央視覺減弱及對於晚期情況導致法定 盲。 如本文所用術語，，布魯赫氏膜（Bruch，s membrane)”指一將 • 脈絡膜毛細管層自視網膜色素上皮（RPE)分開的五層構 造❹此結構由RPE基底層及脈絡膜毛細血管層、兩膠原層 及一彈性層構成。 θ 如本文所用術語”增加（„increase，，或"incasing，，）脂質流 出指脂質流出的水平及/或速度增加、加速脂質流出、择 強脂質流出、促進脂質流出、上調脂質流出、提高心 出来及/或擴大月曰貝流出。在一具體實施例中，該流出包 括科月曰甘/由二_、膽目醇、及/或膽固醇醋的流出。 術語"逆行膽固醇轉運"指膽固醇（例h，在肝外組織中合 118868.doc •17- 200808335 成 出 的或自脂蛋白獲得的膽固醇)移至肝臟 或轉運）以供排入膽汁中。 之淨運動（例如流 如本文所用術語 感受器。 頁斑”指視網膜中央區 的感光細胞或光 術語”黃斑變性”如本文所 變質。 用指視網联中央部分（黃斑）的 一 treating” 或"treatment”）指的是減 輕、減小、消除、或以其他 力式調即一疾病、病症及/或 其一或多種症狀，對於現存病況具有治療效果。 術語"治療上有效量"指當與彼等未經治療時出現的症狀 術語π治療（"treat，

相比权時’▲活性成份足以改善所治療病況或病症之一或 多個症狀時之用量。該改善可為臨時性的或永久性的。 術語"預防有效量"指該活性成份足以防止病況或病症之 一或多個症狀之發生或復發時之用量。 術語”防止（"prevent”、"preventing"或"preventi〇n")"指阻 止或降低個體罹患疾病、病症與/或其症狀之風險。 術語"醫藥調配物"指一適於投與接受治療者的包含活性 成份及適合的稀釋劑、載劑、媒劑、或賦形劑的組合物。 該醫藥調配物或組合物應包含ApoA_I Milano。術語”級合 物n及”調配物’’在本文中可互換使用。該術語亦欲涵蓋其 中組合治療劑之組份係呈相同的調配物或分開的調配物形 式。此術语包括（但不限於）如下文所述的口服的、非經腸 的、眼内的、眼周的、黏膜及局部的組合物。 術語"約”指指示其所指數值增減1 〇%、（在一實施例中） 1188 幼.doc -18- 200808335 增減5%、（在另一實施例中）增減2%之近似值的相對術 語。在本揭示内容之範圍内，此近似水平係適當的，除非 特別指明該值需要一更嚴格的範圍。 術語’’標籤”指位於物品之直接容器上所顯示的書寫物、 印刷物、或繪示物，例如，包含醫藥活性劑之小瓶上顯示 的書寫材料。 術語’’標示”指位於任一對象或任一其容器或包裝物上的 φ 或伴隨此對象的所有標籤及其它書寫物、印刷物或繪示 物，例如，伴隨醫藥活性劑容器或與之相關聯的包裝說明 書、說明性錄像帶或說明性DVd。 4·2本發明醫藥組合物 本發明醫藥組合物包括一選自一或多種ApoAd訄…⑽ 或其衍生物及一或多種肽：脂質複合體（例如MM ••脂質複 合體）的活性成份。 本發明S藥組合物4見需要包含醫藥±可接受之賦形劑以 • 接近於生理條件，例如PH調節劑、缓衝劑、及張力調節劑 (例如乙酸鈉、乳酸鈉、氣化鈉、氯化鉀、及氯化鈣卜其 亦可包含在滲透壓方面起作用的冷凍保護劑，像甘露糖醇 或蔗糖。可添加抗細菌劑（例如苯盼、苯紫氯錢或氣化节 乙氧銨）以保持產品無菌，尤其應將其加入欲用於多劑量 非經腸應用之醫藥調配物中。在本發明組合物中亦可使用 懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。 該等醫藥調配物可呈適用於包括但不限於非經腸投藥、 眼内投藥、眼周投藥、皮下注射、口服、經皮投藥、經黏 118868.doc -19- 200808335 膜投藥及直腸投藥之任一投藥途徑的多種形式。 在只施例中，該等組合物係根據常規製調配成適於非 經腸投與之醫藥組合物。 非經腸投藥指不穿過消化管之任一投藥途徑，其包括 (但不限於）可注射投藥（即靜脈内投藥、動脈内投藥、肌内 投藥、皮内投藥、眼内投藥、眼周投藥及本文所述此類途 徑）（一般參見Remington，s Pharmaceuticai Sciences，第 版，Gennaro等人’編輯’ Mack pdnting c〇mpany，—bn， Pennsylvania, 1990) 〇 本發明醫藥調配物可係一適合於眼睛投藥途徑之形式， 其包括（但不限於）··玻璃體内、眼内（眼房内）、結膜下、 特農氏囊下、眼球後注射、及局部應用。在一實施例中， 該醫藥調配物係作為玻璃體内注射劑投與。本發明可注射 醫藥調配物係眼睛可接受的，即，其適於直接投與眼睛 (包括水狀液及玻璃狀液）。 可注射醫藥調配物可係存於水性或油性媒劑中的無菌释 浮液、溶液或乳液。該等注射用調配物可呈單位劑量形式 存於（例如）安瓿瓶或多劑量容器中，且可包含添加的保存 劑。在一實施例中’用於非經腸醫藥調配物之緩衝液為鱗 酸鹽、檸檬酸鹽及乙酸鹽，且可包含穩定劑或冷藏保存1 (例如蔗糖、甘露糠醇、海藻糖）。 可用於提供本發明非經腸劑型之適宜媒劑為彼等業内熟 練的技術人員所熟知。實例包括（但不限於）：、、t ’ /土射用水 USP ;水性媒劑，例如（但不限於）··氯化鈉注射液、林才夂 118868.doc -20- 200808335 氏注射，〆SI_n)、葡萄糖注射液、葡萄糖及氯 化納注射液、及乳酸鹽林格氏注射液；切溶混性媒劑， 例如（但不限於）：乙醇、聚乙二醇、及聚丙二醇·，及非水 性的媒劑，例如（但不限於）玉米油、棉 ^ U /田、化生油、芝 麻油、油酸㈣、肉豆級異㈣、及笨甲料基醋。亦 可將能增強本文所述-或多種活性成份之溶解度的化合物 納入本發明非經腸劑型中。

可對該等醫藥調配物進行調配用於單獨、一次性使用或 可將其調配成多劑量形式。組合冶療劑之組份可係相同或 不同的醫藥調配物，且可同時或依序投與。在某些實施例 中’可將該醫藥調配㈣乾於可經冰;東或冷;東的無菌疏或 無菌預填充注射器或無菌預填充袋中。亦可將該調配物柬 乾再用適宜媒劑實施再構成。 4·3脫輔基脂蛋白AJ Milano之用途 在一怨樣中，本發明提供用於藉由投與一包含正常人類 Apo A_I、Ap〇 A] Milan〇、或其其他生物學活性變體之組 1物來治療年齡相關性黃斑變性、其多種形式（例如濕 型、乾型、早期的 '晚期）或相關病症之組合物及方法。 人類ΑΡ〇 Α·Ι核苷酸序列於下示SEQ m Ν〇:ι中給出。該編 碼序列包括核苷酸39-842。 118868.doc -21 - 200808335 CAGCAAGCTGCGCGAACAGCTCGGCCCTGTGACCCAGGAGTTCTGGGATAACCTGGAAiyVGGAGACAGAG GGCCTGAGGCAGGAGATGAGCAAGGATCTGGAGGAGGTGAAGGCCAAGGTGCAGCCCTACCTGGACGACT TCCAGAAGAAGTGGCAGGAGGAGATGGAGCTCTACCGCCAGAAGGTGGAGCCGCliXSCGCGCAGAGCTCCA AGAGGGCGCGCGCCAGAAGCTGCACGAGCTGCAAGAGAAGCTGAGCCCACTGGGCGAGGAGATGCGCGAC CGCGCGCGCGCCCATGTCGACGCGCTGCGCACGCATCTGGCCCCCTACAGCGACGAGCTGCGCCAGCGCT TGGCCGCGCGCCTIHSAGGCTCTCAAGGAGAACGGCGGCGCCAGACTGGCCGAGTACCACGCCAAGGCCAC CGAGCATCTGAGCACGCTCAGCGAGAAGGCCi^AGCCCGCGCTCGAGGACCTCCGCCAAGGCCTGCTGCCC GTGCTGGAGAGCTTCAAGGTCAGCTTCCTCAGCGCTCTCGAGGAGTACACTAAGAAGCTCAACACCCAGT GAGGCGCCCGCCGCCGCCCCCCTTCCCGGTGCTCAG祕TjyyiCGTOTCCAAAGTGGG 啡

此基因編碼Apo A-I，其為血漿中高密度脂蛋白（HDL)之 主要蛋白質組份。該蛋白質可促進膽固醇自組織流至肝臟 中以供排出，且其係卵磷脂膽固醇乙醯轉移酶（LCAT)之輔 因子，其負責形成大部分血漿膽固醇酯（參見，Law及

Brewer » PNAS USA 81(1): 66-70, 1984 ； Genbank Accession No. NM-000039.1 (gi 4557320)。人類 Apo A-I 前蛋白胺基 酸序列於下示SEQ ID NO: 2中給出。 IXrKA^VLTIAVLFLTGSQARHFWQQDEPPQSPWDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQFEGSALGKQLNLKL LDNWDSVTSTFSKLREQLGPVTQEFWDisiLEKETEGLRQEMSKDLSEVKAKVQPYLDDFQKKWQBEMELYR QKVBPLIU^LQEGARQKLHELQEKLSPLGEEMRDRARMIVDALRTHLAPYSDELRQRLAARluEALKENGG ΑΗΙΑΕΥΗΑΚΑΊΈΗΙ^ΤΙ^ΕΚΑΚΡΜ^ΙΗ^Οαί^Ρν^ΕβΡΚνΒΕΊ^ΑΙιΕΕΥΤΚΚΙ^ΝΤΟ《SEQ ID NO:2} 在一實施例中，本發明提供用於藉由向有其需要之受試 者投與一包含Apo A-I Milano之組合物來治療年齡相關性 黃斑變性、其多種开j式（例如濕型、乾型、早期的、晚期 的）或相關病症之組合物及方法。在某些實施例中，Apo A-I Milano可與一脂質或填脂結合。如本文所用，Apo A-I Milano(或脂質複合體）可呈或可不呈醫藥調配物形式。 在某些實施例中，Apo A-Ι Milano可為Apo A-Ι Milano的 變體或經保守取代的Apo A-I Milano。藉由"保守取代部 分"，其意指可用其他胺基酸殘基置換Apo A-I Milano之某 些胺基而不會顯著有害地影響該蛋白質之活性。舉例而 -22- 118868.doc 200808335 在蛋白貝各處具有许多半脱胺酸取代（即一或多個血 Apo A-Ι突變體不同的半胱胺酸取代部分）的Ap〇 a]蛋白可 藉由以與在Ap〇 Aq變體中所觀察到的情況相似之方式促 進二體形成來達成合意的功能性結果。因此，本發明亦涵 蓋、、二改變或經取代形式的Ap〇 A-I Milano，其中該結構中 至少一界定的胺基酸殘基經另一胺基酸殘基取代。 本备明中利用的Apo A-I Milano可自任一可用來源獲 得。舉例而言，該Apo A] Milan〇可為重組的、合成的、 半合成的或純化的Apo A-I Milano。在一實施例中，該Ap〇 A_I Milano為一在酵母菌或大腸桿菌中表現的重組蛋白 (rApo A-I Milano或rAIM)，如美國專利第5,721，114號及歐 洲專利第EP 0 469 017號及第EP 0 267 703號中所闡述。 獲得本發明所用Apo A_I Milano之方法為業内所熟知。 舉例而言，Apo A-I Milano可（例如）藉由密度梯度離心並 隨後藉由脂蛋白去脂作用、還原、變性作用及凝膠過濾層 析法、離子交換柱層析、疏水性（例如苯基瓊脂糖凝膠）相 互作用層析或免疫親和層析自血漿中分離出來，或以合成 方式、半合成方式、或使用業内彼等熟練的技術人員所瞭 解的重組DNA技術並隨後藉由業内熟練的技術人員所熟悉 的純化法製得（參見（例如）美國專利第6，107,467號；第 6,559,284號，第 6,423,830號；第 6,090,921 號；第 5,834,596 號；第 5,990,081 號；第 6,506,879號；第 5,059,528號；第

5，876，968 5虎及弟 5，721，114 號；Mulugeta 等人，J C7^廳Mgr 798(1-2): 83-90 (1998)，· Chung等人，乂 118868.doc -23- 200808335 Λα 21(3): 284-91 (1980) ; Cheung等人，《/· 及以 28(8): 913_29 (1987) ; Persson等人，J· C/zramaiogr 711: 97-109 (1998);及 PCT 公開案 WO 86/04920 及 WO 87/02062)。

若該Apo A-I Milano係自天然來源獲得，其可自任何種 類之任何動物來源獲得。在某些實施例中，Ap0 a Milano係自哺乳動物來源獲得。在某些實施例中，Ap〇 A_ I Milano係自人類來源獲得。在一具體實施例中，Ap〇 Aj Milano係源自與擬投與該Apo A-I Milano之哺乳動物相同 之種類。 4.3.1編碼入卩〇人-11\111311〇之基因的表現 可將編碼A-I Milano或其變體之核苷酸序列插入一恰當 的表達载體中，即，一包含係轉錄及翻譯所插入蛋白之編 碼序列所必需要素的載體。必需的轉錄及翻譯信號亦可由 天然A-I Milano基因及/或其側翼區提供。可利用多種宿主 載體系統來表現蛋白編碼序列。該等包括（但不限於）：經 病毒（例如牛痘病毒等）感染的哺乳動物細胞系統；經病毒 (例如杆狀病毒）感染的昆蟲細胞系統；包含酵母載體的微 生物（例如酵母菌）；或經噬菌體、DNA、質粒DNA、或黏 粒簡A轉化的細菌。載體之表現要素在其強度及特異性上 不同1視所利用的宿主載體系、统，可使用多種適宜 及翻譯要素之任一種。 ” 、任-先前針對將DNA片段插入載體所闡述的方法皆可用 :::包含一由恰當的轉錄/翻譯控制信號及蛋白質編碼 成的嵌合體基因之表現載體。該等方法可包括活體 118868.doc -24- 200808335 外重組DNA及合成技術及活體内重組（基因重組）。可藉由 一第二核酸序列對編碼一 A-I Milano之核酸序列之表現進 行調節，以便在一用重組DNA分子轉化的宿主中表現該A-I Milano。舉例而言，可藉由任一業内已知啟動子/增強子 要素來控制A-I Milano之表現。在一具體實施例中，該啟 動子與具體的A-I Milano編碼基因係異源的，即，並非該 A-I Milano編碼基因之天然啟動子。可用於控制A-I Milano 編碼基因之啟動子包括（但不限於）：SV40早期啟動子區 (Bernoist^. Chambon 5 Nature 290: 304-310 (1981))、魯斯 氏肉瘤病毒（Rous sarcoma virus)之3’長末端重複序列中包 含的啟動子（Yamamoto等人，CW/ 22: 787-797 (1980))、皰 療胸普激酶啟動子（Wagner等人，/Vex. A^i/. dead· *Sez·· U.S.A. 78: 1441-1445 (1981))、金屬硫蛋白基因之調節序 列（Brinster等人，⑶re 296: 39-42 (1982));原核表現載 體，例如孓φ内醯胺酶啟動子（Villa-Kamaroff等人，iV%. iVai/· dead. Sci· U.S.A. 75: 3727-3731 (1978))、或 ίαί啟動 子（DeBoer等人，/^〇(：· NatL Acad. Sci. U.S.A. 80: 21-25 (1983)) 〇 業内熟練的技術人員應瞭解，可對cDNA、基因組的、 及合成的序列進行克隆及表現。一種達成此表現之方法係 藉由將A-I Milano基因（或編碼A-I Milano或其變體之核酸） 轉移至組織培養細胞中。該經轉移基因之表現可藉由其天 然啟動子進行控制，或可藉由非天然啟動子進行控制。除 轉移一包含編碼A-I Milano之核酸序列的核酸外，該經轉 118868.doc -25- 200808335

移的核酸可編碼特定H Milan〇之一功能部分、或一與本 文所揭示A-I Milano具有至少6〇〇/0序列等同性之蛋白質（如 在該特定A-I Milano之整個長度上比較）、或一與一 Aj Milano變體具有至少6〇%序列相似性之多肽（如在該 Milano k體之整個長度上比較）。將核酸引入細胞系藉由 諸如電穿孔法、脂質轉染法、磷酸鈣介導的轉染、或病毒 轉染等方法實現。通常，轉移方法包括將一可選標記物轉 移至細胞。然後將細胞置於筛選條件下以分離出彼等已經 吸收並正在表現經轉染基因之細胞。 4.3.2脫辅基脂蛋白Milan〇之脂質複合體 在某些κ轭例中，本發明組合物包含Ap〇 A] Mila⑽之 質複&體纟些實施例中，本發明提供AIM :構脂複 合體之醫藥調配物。藉助脂質或鱗脂與Αρα Α·Ι Milano之 口可增強功效。通常在投藥前將脂質或磷脂與 Mllan〇混合。可在一水性溶液中以適當比例將Apo a] Mil_與脂質混合，並可藉由業内已知方法（包括冷柬乾 燥或冷涞解束循環、去污劑增溶作用及隨後的渗析、微流 化、聲處理、及均質化作用）使其結合。結合效率可（例如） =由改變壓力、超音波頻率、或去污劑濃度而達最優化。 常用於製備AIM:磷脂複合體之去污劑一實例為膽酸鈉。 以ίΐ些情況下’僅投與Ap〇冬1 Milan°(基本上不含脂質) > 口\包括其各種形式之年齡相關性黃斑變性。在另一實 施例中，向一有其需要 體之治療劑。“之…投與包含聲脂質複合 Π 8868.doc -26 - 200808335 在一實施例中，該AIM :磷脂複合體係呈包含適當醫藥 稀釋劑之溶液形式。在另一實施例中，在投藥前用一適宜 的醫藥稀釋劑對AIM :磷脂複合體之冷凍乾燥的或凍乾的 製劑實施水化或再構成。在又一實施例，該AIM :脂質複 合體可係在向有其需要之受試者投藥前實施解凍直至達成 均質〉谷液的冷;東製劑。 該脂質可係彼等業内熟練技術人員所瞭解的任何適宜的 Φ 脂質。可使用不包含磷的脂質，包括硬脂胺、十二烷基 胺、棕櫚酸乙醯基酯、（1，3)_D_#露糖基_(1，3)甘油二酯、 胺基苯基糖苷、3-膽固醇基-6，-(硫代糖基）己基醚糖脂、N_ (2,3_二（9-(Z)·十八烯醇）_丙-^基·N，N，N_三甲基氯化銨及 脂肪酸酿胺類。 在一實施例中，該脂質為一磷脂。該等磷脂可自彼等業 内熟練的技術人員所瞭解的任何來源獲得。舉例而言，該 填脂可自商業來源、天然來源或藉由彼等業内熟練的技術 _ 人員所瞭解的合成或半合成方法獲得（參見（例 如）Mel’nichuk等人，Ukr Biokhim Zh 59(6): 75-7 (1987); Mel’nichuk等人，Ukr Biokhim Zh 59(5): 66-70 (1987); ’ Ramesh等人，J. Am· Oil Chern· Soc. 56(5): 585-7 (1979); ^ Patel 及 Sparrow, J· Chromatogr 150(2): 542-7 (1978);

Kaduce 等人，J. Lipid Res 24(10): 1398-403 (1983); Schlueter等人，〇rg. Lett 5(3): 255-7 (2003) ; Tsuji等人， Nippon Yakurigaku Zasshi 120(1): 67P-69P (2002)) ° 磷脂可為彼等業内熟練技術人員所瞭解的任何磷脂。舉 118868.doc -27- 200808335 例而言，該磷脂可為小的烷基鏈磷脂、磷酯醯膽鹼、蛋磷 酯醯膽鹼、大豆磷酯醯膽鹼、二棕橺醯基磷酯醯膽鹼、大 豆碟脂醯基甘油、卵麟脂醯基甘油、二硬脂醯基磷脂醯基 甘油、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼、二硬脂醯基磷脂醯膽 鹼、二月桂基填脂醯膽鹼、1 -肉豆蔻醯基棕櫚醯基磷脂 醯膽鹼、1-棕櫚醯基-2-肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼、1-棕橺醯 基-2-硬脂醯基磷脂醯膽鹼、^硬脂醯基-2-棕櫚醯基磷脂 醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼、1-棕櫊醯基-2-油醯基磷脂 醯膽驗、1 -油醯基-2-棕櫚基鱗脂醯膽驗、二油醯基磷脂酿 基乙醇胺、二月桂醯基磷脂醯基甘油、磷脂醯基絲胺酸、 石粦脂醯基乙醇胺、碌脂醯基肌醇、磷脂醯基甘油、二磷脂 醯基甘油、二肉豆蔻醯基磷脂醯基甘油、二棕橺醯基磷脂 醯基甘油、二硬脂醯基磷脂醯基甘油、二油醯基磷脂醯基 甘油、磷脂酸、二肉豆蔻醯基磷脂酸、二棕櫚醯基磷脂 酸、二肉豆蔻醯基磷脂醯基乙醇胺、二棕櫚醯基鱗脂醯基 乙醇胺、二肉豆蔻醯基填脂醯基絲胺酸、二棕櫚醯基填脂 醯基絲胺酸、腦磷脂醯基絲胺酸、鞘磷脂、神經鞘磷脂、 腦鞘磷脂、二棕櫚醯基鞘磷脂、二硬脂醯基鞘磷脂、半乳 糖腦苦脂、神經節苷脂、腦苷脂、磷脂醯基甘油、磷脂 酸、溶血卵鱗脂、溶血填脂醯基乙醇胺、腦碌脂、心鱗 脂、磷酸聯十六烷基酯、二硬脂醯基-磷脂醯基乙醇胺及 膽固醇及基衍生物。 該磷脂亦可為任一上述磷脂之衍生物或類似物。在某些 實施例中’ AIM :磷脂複合體包含兩或更多種填脂之組 118868.doc •28· 200808335 合。 在一實施例中，該治療劑包含一 AIM :填脂複合體。在 另一實施例中，該脂質為一磷脂，例如1_棕櫚醯基_2_油醯 基磷酯醯膽鹼（"POPC”）或（"1-棕櫚醯基-2-油醯基-順式-甘 油-3-填酸膽鹼”）。在另一實施例中，該AIm : pope複合 體包含約1:1重量比的AIM : POPC。在另一實施例中，該 AIM : POPC複合體為醫藥調配物。AIM : POPC複合體稱 為 ETC-000216 赛 ETC-216(Nissen 等人，290: 2292-2300，2003，亦 TV Broadcast，’’Good Morning America，，， 2004年4月15曰）。 包含Apo A-I Milano及一脂質之複合體可包含任何數量 的脂質（包括鱗脂）及可有效治療年齡相關性黃斑變性及其 各種形式之任何數量的Apo A-I Milano。在某些實施例 中，Apo A-I Milano以約1:1之重量比包含Apon Milan〇 及一磷脂。Apo A_I Milano可用磷脂與Apo A-I Milano之其 他重量比包含複合物，例如約1 〇〇: 1、約丨〇:丨、約5:1、約 3:1、約 2:1、約 1:1、約 1:2、約 1:3、約 1:5、約 i:i〇 或約 1:100。在某些實施例中，介於約1:〇·5至約1:3之間的重量 比（在一實施例中為約1:0·8至約1:12之重量比）可產生最同 質的月曰蛋白顆粒群並產生穩定且可再現之批料。在另一實 施例中’ Apo A-I Milano與磷脂之重量比為1:〇 95。 適合在本發明組合物及方法中使用的額外脂質係業内熟 練的技術人員所熟知者並於多種熟知來源中加以引用，例 如 McCutcheon’s Detergents and Emulsifiers及 McCiitChe〇n，s 118868.doc -29- 200808335

Functional Materials，Allured Publishing公司，Ridgewood， N.J· ’兩者皆以引用的方式併入本文中。在某些實施例 中，脂質在37 C、35°C、或32°C下為液晶態。在另一實施 例中’脂質在37°C下為液晶態。 在某些實施例中，該治療劑包含一足以治療有其需要之 哺乳動物年齡相關性黃斑變性或相關眼疾病之濃度的Etc· 216。在某些實施例中，et(>216之濃度為約2·5毫克/公斤 至約50毫克/公斤。在其他實施例中，ETC_216濃度為約1〇 毫克/公斤至約20毫克/公斤。在某些實施例中，ETC-216 之農度為約13毫克/公斤至約16毫克/公斤。ETC-216之濃 度可由彼等業内熟練技術人員藉由任一適宜技術加以確 定。在某些實施例中，ETC-216濃度係藉由尺寸排阻高效 液相層析法（SE-HPLC)加以確定。 在某些實施例中，該醫藥調配物包含一足以製造一醫藥 上適合的與ETC-216之調配物之量的蔗糖。在某些實施例 中’該醫藥調配物包含約0.5%至約20%的蔗糖。在某些實 施例中’該醫藥調配物包含約3%至約12%的蔗糖。在其他 實施例中，該醫藥調配物包含約5%至約7。/❶的蔗糖。在其 他實施例中，該醫藥調配物包含約6·〇%至約6·4%的蔗糖。 在其他實施例中，該醫藥調配物包含6·2❹/()的蔗糖。 在某些實施例中，該醫藥調配物包含一足以製造一醫藥 上適a的ETC-216調配物之置的甘露糖醇。在一些實施例 中’該醫藥調配物包含約0.01%至約5%的甘露糖醇。在其 他實施例中，該醫藥調配物包含約0· 1%至約3%的甘露糠 118868.doc • 30 - 200808335 〇 ψ'在匕 〇二具⑪例中’該醫藥調配物包含約0.5%至約20/〇 的甘露糖醇。太甘 念 在/、他實轭例中，該醫藥調配物包含約0.7% 至、、勺1〆。的甘露糖醇。在其他實施例中，該醫藥調配物包 含0.8%的甘露糖醇。 在某二實施例中，該醫藥調配物包含一足以製造一醫藥 適合的Ap〇 A] Milan〇*AIM :脂質複合體之調配物之 1的緩衝背]。在一些實施例中，醫藥調配物包含磷酸鹽缓 衝液。在具體實施例中，該緩衝液濃度為約3 mM至約25 mM。在其他實施中，該緩衝液濃度為約5 mM至約20 mM。在另外的實施中，該緩衝液濃度為約8 至約15 mM 〇 在某些實施例中，添加一適宜的緩衝劑以將該醫藥調配 物之pH值調節至適宜投與受試者之範圍内。在某些實施例 中’該醫藥調配物具有一約6·8至約7·82ρΉ值。在一些實 施例中’该醫藥調配物具有一約7.0至約7.8之pH值。在其 匕貝施例中，該醫藥調配物可具有一約7.2至約7·5之 值。在一較佳實施例中，該醫藥調配物具有一約7·4之pH 值。 4 ·3 ·3脫辅基脂蛋白A -1 M i 1 a η 〇脂質複合艟之製備 AIM ··脂質複合體可藉由一業内熟練技術人員所瞭解之 任一方法製得。在一些情況下，脂質與Ap〇 A] Milan〇係 在投藥前進行混合。脂質可為溶液或呈任一適合製備一與 Apo A-I Milano之複合體的形式。 AIM ··脂質複合體可利用業内熟知方法以多種形式製 118868.doc -31- 200808335 得， 體〇 該等形式包括（但不限於）微脂體、 脂質體或脂蛋白

低壓凍乾法製得。（參見，例如，美國專利第6,〇〇4,925 號、第 6,037,323號、第 6,046，166號、第 6,287,590號及第 在某些實施例中，可使Apo w廳_與預形成的脂質 微脂體合併，致使ΑΙΜ:脂質複合體自發形成。在另一實 施例中’ Ap〇 w Milano可藉由去污劑渗析方法獲得。舉 例而言，可對Ap。w Milan。、脂質及_去污劑（例如膽酸 鹽）實施滲析以去除該去污劑並實施再構成以製得脂質複 合體。（參見，例如，J0nas等人，施咖办細卿〇/ 128, 553-82 (1986))。在另一實施例中，脂質複合體可藉由共 6,455,088號）。業内彼等熟練技術人員應明確瞭解製備 AIM :脂質複合體之其他方法。 在另一實施例中，脂質複合體係藉由均質化作用製得。 在一實施例中，AIM :脂質複合體係藉由首先用注射用水 將重組Apo A-Ι Milano稀釋為15宅克/毫升之濃度的溶液。 然後添加磷酸鈉至9-1 5 mM之最終濃度以將pH值調節至介 於約7.0及約7.8之間。然後，添加甘露糖醇至一約〇.8%至 約1% (w/v)之濃度，並添加POPC以達成約ι:〇·95(蛋白質重 量/脂質重量）之混合物。用懸掛式攪拌葉片及ultra TURRAX分配儀以5000 rpm擾拌該混合物約20分鐘，同時 保持溫度介於3 7 C至43 °C之間。以100至3 00 rpm連續擾拌 供料容器’同時用連線管道熱交換器（Avestin公司）使溫度 保持在32°C至43°C之間。起初30分鐘之均質化作用係在50 118868.doc -32- 200808335 MPa(7250 psi)下實施，隨後將壓力保持在8〇至12〇 MPa (11600至17400 psi)直至藉由凝膠滲透層析法線上測試顯示 % AUC在蛋白質標準物之>70%之間。 4·3·4 ETC-216之醫藥組合物 ETC-216之醫藥組合物包含適於治療年齡相關性黃斑變 性或相關病症之Apo A-I Milano:脂質複合體。 在一實施例中，Apo A-I Milano:脂質複合體之醫藥組合 _ 物包含一醫藥上可接受之載劑或賦形劑。可採用許多醫藥 上可接受之載劑或賦形劑，例如蔗糖-甘露糖醇、生理鹽 水、葡萄糖、海藻糖、蔗糖、無菌水、緩衝水、〇 45%鹽 水（半生理鹽水）、及0.3%甘胺酸，且可進一步包含用於增 強穩定性的酷蛋白’例如白蛋白。該等調配物可藉由習用 的熟知滅菌技術實施滅菌。可將所得水性溶液包裝起來供 使用或可在無菌條件下對所得水性溶液實施過渡及束乾 (冷凍-乾燥）。然後，可在投藥前將該凍乾製劑與一無菌水 φ 性溶液混合。 包含ETC-216之醫藥調配物可呈鹽形式。舉例而言，因 蛋白質可包含酸性的及/或鹼性的末端或側鏈，因此 ， 216可呈游離酸或鹼形式、或呈醫藥上可接受之鹽形式包 • 含於醫藥調配物中。能與ETC-216形成醫藥上可接受鹽之 適宜酸包括（例如）：無機酸，例如氫氯酸、氫溴酸、高氯 酸、硝酸、硫氰酸、硫酸、磷酸及諸如此類；及有機酸， 例如曱酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、 丙一酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰胺基苯甲酸、肉桂 118868.doc -33 - 200808335 酸、萘磺酸、磺胺酸及諸如此類。能夠與Apo A-I MiUn〇 形成鹽的適宜鹼可包括（例如）：無機鹼，例如氫氧化納、 氲氧化銨、氫氧化卸及諸如此類；及有機驗，例如單_、 二-及三-烷基胺類（例如三乙胺、二異丙基胺、甲基胺、二 甲胺及諸如此類）及視情況經取代的乙醇胺類（例如乙醇 胺、一乙醇胺及諸如此類）。 在另一實施例中，該等醫藥調配物可以一在隨適宜載劑 使用之前經再構成之粉劑形式或凍乾形式提供，該載劑包 括但不限於無致熱源的無菌水、鹽水或葡萄糖。為此目 的，該ETC-216可係凍乾的。在另一實施例中，該等醫藥 調配物可以單位劑量形式供應並於使用前實施再構成。 對於延時遞送，該醫藥調配物可作為一儲存庫製劑提 供’用於精由植入法投藥，例如，用於皮下、皮内、眼 内、眼周或肌内注射。因此，舉例而言，ETC-216之組合 物可用適宜的聚合材料或疏水材料（例如作為存於可接受 油中之乳劑）或離子交換樹脂進行調配，或調配為微溶衍 生物；例如，調配為ETC-216之微溶鹽形式。 對眼組織之尋靶作用可以多種途徑中之任一種達成。一 種方法係注射至眼睛的水狀液或玻璃狀液中。對於某些形 式的ARMD，直接將ETC-216注射至rpe或布魯赫氏膜之 接近處可提供該複合體之尋乾作用。在一實施例中，該複 合體係經由眼内支持的遞送（例如Bausch及L〇mb的 Vitrasert®或Envision®)投與。在另一實施例中，該化合物 係藉由後側眼球囊下眼周注射遞送。 118868.doc -34- 200808335 勺在某些實施例中，ETC_216之醫藥調配物為一單位劑量 裝如業内热練的技術人員所瞭解，一單元劑量包裝可 提供1劑量藥物肖一受試者之遞送。纟發明组合物及方 法可提供一包含（例如）1〇5〇毫克Ap〇 a·〗 Miia⑽蛋白每包 ，裝之單元劑1包裝的醫藥調配物。舉例而言，i 毫克

Apo A-I Milano蛋白質係一可向一 70公斤受試者投與15毫 母公斤Apo A-I Milano之劑量。該單元可係（例如）無菌 φ 單用小瓶、無菌預填充注射器、無菌預填充袋（即背袋）及 堵如此類。 在其它實施例中，該醫藥調配物為一使用單位包裝。如 彼等業内熟練技術人員所瞭解，一使用單位包裝為一便利 7、處方大小的、患者即用單元，其經標示可由健康護理 $供者直接分配。-使用單位包裝包含―對給定適應症之 常用治療間隔及期程而言所需要之量的醫藥調配物。本發 •明組合物及方法提供一使用單位包裝的醫藥調配物，其包 Φ 各用（例如）15毫克/公斤之靜脈内注射的Apo A-I Milano蛋 白每週一次共5周足以治療一平均個頭之成年男性及女性 之量的ETC-216。因此，一使用單位包裝可包含五次劑量 的ETC-216(存於-小瓶或預填充的注射器中）。在一實施 例中，該使用單位包裝包含一以一15毫克/公斤、3〇毫克/ 公斤或45毫克/公斤之Ap〇 A-I MUan〇之劑量每週一次共$ 周足以治療一平均個頭的成年男性或女性之量含有ETC- 216的醫藥調配物。彼等業内熟練技術人員應明瞭，本文 所述劑量係基於受試者之體重。 118868.doc -35- 200808335 该專包含ETC-216之醫樂調配物必須具有適宜的ppj值、 滲透壓、有效滲透壓當量、純度及無菌性以使安全地投與 受試者。 ETC-216之醫藥調配物闡述於美國公佈的申請案第 US20050142 180號（公佈於2005年6月30日）美國公佈的申請 案第US20040038891號（公佈於2〇〇4年2月26日）及美國公佈 的申請案第US20030109442號（公佈於2003年6月12日），其

全部内容皆以引用的方式併入本文中。 4.3.5使用ETC-216來治療年齡相關性黃斑變性（armd) 本文揭示本發明涵蓋的ETC_216劑量。可用於治療年齡 相關性黃斑變性之劑量包括向一有此需要之受試者經靜脈 内投與的高至約50毫克/公斤ETC_216之劑量。在某些實施 例中，該等組合物及方法包括投與一約1毫克/公斤至約5〇 毫克/公斤受試者體重之劑量的E T C - 216。在具體實施例 中’該等組合物及方法包括靜脈内投與-約10毫克/公斤 ，約50毫克/公斤之劑量的ET(%2i卜在其他實施例中，該 等、’且口物及方法包括眼内投與一約〇5至約2 5毫克，公斤之 W里的ETC-216。在其他實施例中，該等組合物及方法包 括靜脈内投盘一約】ς古士，、 ^力5宅克/公斤之劑量的ETC-210醫藥調配 物。在另一實施例中， Ψ 該荨組合物及方法包括投與一約3〇 宅克7公斤之劑量的ETC 21 - “ + W ^216。在又—實施财，該等組人 物及方法包括投與一 、且口 楚，人 ^45笔克/公斤之劑量的ETC-216。兮 荨組合物及方法亦可包 一 μ 吉/八+ ^胃 僅使用15耄克/公斤劑量或3〇毫 克“斤劑χ或與45 零 兄/ Α斤劑量結合使用來治療年齡相 118868.doc -36 - 200808335 關性黃斑變性或相關疾病。 彼荨業内热練技術人貝應理解，本發明ETC-216之實於 劑里可隨給藥途徑、受試者之身高、體重、年齡、病情嚴 重度 '疋否存在併發醫學病症及諸如此類而變化。舉例而 言，作為治療之一部分，一腎臟或肝臟功能受損的年老受 5式者可用處於約1毫克/公斤劑量之較低範圍之劑量（例如 〇·8宅克/公斤或〇·9毫克/公斤）的ETC-216進行治療。作為 /口療之一部分，一肥胖的具有良好腎臟及肝臟功能之嚴重 心血管疾病或相關疾病患者可用處於（例如）約45毫克/公斤 劑量之較高範圍之劑量（例如50毫克/公斤、48毫克/公斤、 45毫克/公斤及類似劑量）的]£1^_216進行治療。該等劑量 可達到一系列包括具有一可接受風險-益處曲線之有效劑 量的循環濃度。 ETC-216之劑量在該治療期程中可發生變化。舉例而 曰，可用45¾克/公斤之劑量的ET(%216醫藥調配物經靜脈 内每週投與一次共3周對一患者實施治療，然後用15毫克/ 公斤之ETC-216每四個月一次或每年一次直至該患者生命 終止對該患者實施治療。可投與此類週期性劑量以保持布 魯赫氏膜中玻璃膜夜之減小的大小及數目。本發明範圍涵 蓋為保持玻璃膜疣中脂質之經減小體積的週期性劑量。 在某些實施例中，經靜脈内向患者投與一單高劑量（例 如50毫克/公斤或45毫克/公斤）之ETC-216。在其它實施例 中’先向文试者投與_或多次高劑量之Etc-216，再投與 一或多次相同或較低劑量之Ετ〇216(例如1、5、10、15、 118868.doc -37- 200808335 45或50毫克/公斤）。另外，可能使用相反的用藥法，包括 先投與一或多次低劑量ETC-216(例如約1、5、1〇或15毫 克/公斤），再投與一或多次相同或更大劑量ETC-216(例如 約1、5、1〇、15、45或5〇毫克/公斤）。對於更晚期的黃斑 變性（例如濕型的），在某些實施例中首先遞送高劑量。

在某些實施例中，ETC_216係呈一靜脈輸注形式投與。 在某些實施例中，該等組合物及方法包括呈一靜脈内推注 劑形式之投與。在某些實施例中，ETC-2丨6係經一短時段 (例如最長5分鐘，例如2至5分鐘）藉由靜脈内推注經靜脈内 杈與。在某些實施例中，ETC-216之投與包括一連續靜脈 輸注。在某些實施例中，ETC_216係藉由經一（例如”勺^】、 時至3小時、較佳約30分鐘至120分鐘之時間段連續靜脈内 輸主投與。連續的靜脈内輸注可在一輸注泵或裝置之協助 下實施。在某些實施例中，ETC_216之投與可為連續靜脈 内輸/主與靜脈内推注（”團注劑量"）之組合。團注劑量可在 連續輸注之前、之後、或期間投與。 該等組合物及方法提供Apo 庄投藥法。對於輸注，可使用 管’例如上肢之肘窩，或進入 些實施例中，將醫藥調配物輸 處之頭側或中間的肘血管中。 A-I Milano組份之靜脈内輸 任何適宜血管，包括周圍血 胸部主靜脈之中心線。在某 注至受試者前肢中位於肘窩 4.3.6 ETC-216之投與定時 一-實知例中，5亥荨用於治療年齡相關性黃斑變性或 關病症之方法包括約每週、約每隔一周、約每5、ό、 118868.doc -38- 200808335 7、8至10或11至14天向有其需要之受試者投與etc_2i6。 在一實施例中，可約每7天投與ETC_216。在某些實施例 中，ETC-216之投與可係每六個月《每年投與一次。在某 些實鈿例中’可連續投與約i周、約2周、約3周、約4周、 約5周、約6周、約7至12周、約13至24周、或約25至52 周。在某些較佳實施例中，約每7天投與ETC_216，共投與 約5周。在某些實施例中，可（例如）在約5周後實施週期性 φ 投與。舉例而言，可每週一次對一受試者實施治療共約5 周’並Ik後在第二年對該受試者實施約3至約4次治療。在 某些實施例中，可週期性地向受試者投與本文所述醫藥調 配物以保持布魯赫氏膜内玻璃膜疣之減小的大小及數目。 舉例而言，可約每1〇天一次投與一約15毫克/公斤之劑量 的ETC-216共約7周，並隨後（例如）於約26周後或約52周後 實施投與。 4.4擬藉由該療法進行治療的患者及疾病 _ 本發明提供新穎的組合物及方法以治療年齡相關性黃斑 變性或相關病症或類型（濕型、乾型、初期的、晚期的）。 在一些實施例中，本發明組合物及方法係用於治療具有 年齡相關性黃斑變性或相關病症之體徵或症狀之受試者。 年齡相關‘性黃斑變性（ARMD)係基於散瞳眼睛檢查中存在 視覺障礙及特徵檢查結果作出的臨床診斷。在患有乾型 ARMD之患者中，在散瞳眼睛檢查中可見到玻璃膜疣。在 該等患者中，視網膜區位性萎縮之圓形或橢圓形斑塊表現 為色素減退區域，可觀察到增加的色素沉著伴有RPE色素 118868.doc -39- 200808335 斑點。在濕型ARMD患者中，散瞳檢查可顯示出視網膜下 液體、出血、及脂質滲出物。在該等患者中，血管增生在 黃斑區中顯示為一淡灰色的污點。年齡相關性黃斑變性 (ARMD)之額外資料，包括流行病學、病源學/風險因素、 臨床表現、診斷、治療及預防參見Jorge G. ArroyoiMAge-related macular degeneration-! and II， "UpToDate(、線上月艮 務）（最終修改於2005年9月19日），該文獻以引用的方式併 入本文中。 ® 對於RPE及視網膜局部缺血有兩種可能的解釋。一種解 釋係穿過布魯赫氏膜之液壓傳導性降低，另一種解釋係脈 絡膜環流減小。脈絡膜環流通常會隨年齡而減小，並在 ARMD患者中會更嚴重地減小。惡化的脈絡膜環流水平與 更嚴重的ARMD水平有關（Spraul等人，/wesi

Scz·, 39(11): 2201-2202，1998 ; Grunwald等人，/πναί Ophtalmol Vis Sci, 46(3): 1033-1038，2005 ; Ciulla等人， φ J Op/zia/mo/· 86(2): 209-213, 2002)。並且存在脈絡膜動 脈硬化之組織學證據（Curcio等人，Invest Ophtalmol Vis Sci，42: 265，2001)。非受限於理論地建議，若Apo A-I • Milano可起到促進動脈硬化總體降低的作用，則可預期脈 _ 絡膜動脈硬化之減輕及脈絡膜環流之改善。改善的脈絡膜 環流應轉而可減輕RPE及視網膜局部缺血，因而有助於使 ARMD減退。 在一實施例中，本發明組合物及方法為處於患ARMD之 風險中的受試者提供對年齡相關性黃斑變性或相關病症之 118868.doc -40- 200808335 治療。吾人已經識別出許多可能的風險因素，其中年齡、 吸煙及家族史係一些顯示會確定地增加ARMD危險之最強 因素。其它風險因素參見Jorge G· Arroyo之’’Age-related macular degeneration-I and II，’’ UpToDate(線上服務），如 上文所引用。 5.實例 藉由參考以下非限制性實例，可進一步瞭解本發明。 5.1 實例1 : ETC-216之調配物 ETC-216為1:0.9重量比的重組脫輔基脂蛋白A-I Milano/Ι-棕櫚醯基-2-油醯基磷脂醯膽鹼複合體。ETC-216 之儲備溶液包含存於蔗糖甘露糖醇緩衝劑中之14.5毫克/毫 升之蛋白質。 5.2 實例2 :在Apo A_I Milano突變載體中對Apo A-I Milano突變對於ARMD發展之作用實施的比較性研究 此研究之目的係在Apo A-I Milano突變載體中測定Apo A-I Milano突變對於ARMD發展之影響。 此研究係在Limon sul Garda(Italy)實施。研究組係由具 有Apo A-I Milano突變之家族提供並由大於50歲之7人組組 成。對照組由大於5 0歲的24人組組成。兩組皆由吸煙者及 不吸煙者組成。 經確定可指示ARMD發展的參數為：大於63微米的玻璃 膜疣、與色素沉著過度結合的任何大小的玻璃膜疣及與色 素沉著不足結合的任何大小的玻璃膜疣。 結果示於表1及表2中。 118868.doc -41- 200808335 表1. Ap 〇 A-1 Milano突變對玻璃膜疲數目的影響 玻璃膜疣 大於63微米的 玻璃膜疣 大於125微米i 玻璃膜疣 Apo A-I Milano (n=7) 2.11 1.46 0 ^^ 對照（n=24) 11.36 7.08 1.89 ~ P-值（T測試） 0.29 0.30 0.35 表2· Apo A-I Milano突變對色素沉著過度RPE及色素沉著 不足RPE的影響

色素沉著 過度RPE 色素沉著 不足RPE ARMD Apo A-I Milano (n=7) 0/14眼睛 (〇%) 5/14眼睛（35%) 5/14眼睛（36%) 對照 （n=24) 18/48眼睛 (3 7.5%) 29/48眼睛 (60%) 30/48眼睛 (63%) P-值（T測試） 0.006 0.21 0.13 研究顯示，Apo A-I Milano突變載體較少的玻璃膜疣、 車父少的大於63微米之玻璃膜疲及較少的大於125微米之玻 璃膜疣。RPE色素沉著過度及色素沉著不足在研究組中顯 然更不明顯。總之，與對照組相比較，Ap〇 Ad Milan〇變 性載體展示了較小的armd。 現已對本發明多個實施例進行了闡述。該等閣述及實例 係欲闡釋本發明而非對其加以限制。實際上，"業内孰 練技術人員應明瞭’可對所述本發明多個實施例加以修改 而不背離本發明之精神或下立辦 .货砰次下文所給出之隨附權利要求之範 圍。本文所引用的全部參考文獻 乂馱白以引用的方式全部併入 本文中。 118868.doc -42- 200808335 【序列表】 1. 美商輝瑞大藥廠 2. 美國貝斯依瑟瑞爾女執事醫學中心 3. 波士頓布萊根婦女醫院 治療黃斑部變性及相關眼睛病症之方法 <130> 10173-153-228 <14〇> 096106247 <141> 2007-02-16

<150> US 60/775,915 <151> 2006-02-22 <150> US 60/774,331 <151> 2006-02-17 <160> 2 <170> PastSBQ for Windows Version 4*0

<210> 1 <211> 897 <212> DMA c213>智人 <400> 1 agagactgcg aga^ggaggt cccccacggc ccttcaggat gaaagctgcg gtgctgacct 60 tggccgtgct cttcctgacg gggagccagg ctcggcattt ctggcagcaa gatgaacccc 120 cccagagccc ctgggatcga gtgaaggacc tggccactgt gtacgtggat gtgctcaaag 180 acagcggcag agactatgtg tcccagtttg aaggctccgc cttgggaaaa cagctaaacc 240 taaagctcct tgacaactgg gacagcgtga cctccacctt cagcaagctg cgcgaacagc 300 tcggccctgt gacccaggag ttctgggata acctggaaaa ggagacagag ggcctgaggc 360 aggagatgag caaggatctg gaggaggtga aggccaaggt gcagccctac ctggacgact 420 tccagaagaa gtggcaggag gagatggagc tctaccgcca gaaggtggag ccgctgcgcg 480 cagagctcca agagggcgcg cgccagaagc tgcacgagct gcaagagaag ctgagcccac 540 tgggcgagga gatgcgcgac cgcgcgcgcg cccatgtgga cgcgctgcgc acgcatctgg 600 ccccctacag cgacgagctg cgccagcgct tggccgcgcg ccttgaggct ctcaaggaga 660 acggcggcgc cagactggcc gagtaccacg ccaaggccac cgagcatctg agcacgctca 720 gcgagaaggc caagcccgcg ctcgaggacc tccgccaagg cctgctgccc gtgctggaga 780 gcttcaaggt cagcttcctg agcgctctcg aggagtacac taagaagctc aacacccagt 840 gaggcgcccg ccgccgcccc ccttcccggt gctcagaata aacgtttcca aagtggg 897 <210> 2 <211> 267 <212> PRT <213：>智人 <400> 2

Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser 118868.doc 200808335 1 5 10 15

Gin Ala Arg His Phe Trp Gin Gin Asp Glu Pro Pro Gin Sex Pro Trp 20 25 30

Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr Val Asp Val Leu Lys Asp 35 40 45

Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gin Phe Glu Gly Ser Ala Leu Gly Lys 50 55 60

Gin Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr 65 70 75 80

Phe Ser Ly曰 Leu Arg Glu Gin Leu Gly Pro Val Thr Gin Glu Phe Trp 85 90 95

Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly Leu Arg Gin Glu Met Ser Lys 100 105 110

Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val Gin Pro Tyr Leu Asp Asp Phe 115 120 125

Gin Lys Lys Trp Gin Glu Glu Met Glu Leu Tyr Arg Gin Lys Val Glu 130 135 140

Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gin Glu Gly Ala Arg Gin Lys Leu His Glu 145 150 155 160

Leu Gin Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala 165 170 175

Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp 180 185 190

Glu Leu Arg Gin Arg Leu Ala Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn 195 200 205

Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr His Ala Lys Ala Thr Glu His Leu 210 215 220

Ser Thr Leu Ser Glu Lys Ala Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gin 225 230 235 240

Gly Leu Leu Pro Vai Leu Glu Ser Phe Lys Val Sex Phe Leu Ser Ala 245 250 255

Leu Glu Glu Tyr Thr Lys Lys Leu Asn Thr Gin 260

2- 118868.doc

Claims (1)

1. 200808335 十、申請專利範圍： 1· 種脫辅基脂蛋白 A-I Milano(Apo A-I Milano 或 AIM)或 其變體之用途’其係用於製造用於治療或預防需此治療 之受試者中的年齡相關性黃斑變性之醫藥。 2·如請求項1之用途，其中該Ap〇 a-ι Milano或其變體適於 呈蛋白質-脂質複合體形式投與。 3·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約1毫克/公斤至 約50毫克/公斤之劑量經靜脈内投與。 4·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約〇1至約3毫克 /公斤之劑量經眼内投與。 5·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約1〇毫克/公斤 至約45毫克/公斤之劑量投與。 6·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約15毫克/公斤 至約45毫克/公斤之劑量投與。 7·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約1〇毫克/公斤 之劑量投與。 8·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約15毫克/公斤 之劑量投與。 9·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約45毫克/公斤 之劑量投與。 10·如請求項2之用途，其中該複合體適於以約3〇毫克/公斤 之劑量投與。 π·如請求項2至10中任一項之用途，其中該蛋白質-脂質複 合體為Ap〇 A-I MilanoM-棕櫚醯基-2-油醯基-順式-甘油_ 118868.doc 200808335 3_填酸膽鹼複合體（Apo a-im: P〇pc複合體）。 12·如請求項1至11中任一項之用途，其中該年齡相關性黃 斑變性為非滲出性或乾型年齡相關性黃斑變性。 13·如請求項1至11中任一項之用途，其中該年齡相關性黃 斑變性為滲出性或濕型年齡相關性黃斑變性。 14·如清求項1至13中任一項之用途，其中該Ap〇 A-I IvlUan〇 為重組 Apo A-I Milano。 15. 如請求項2至14中任一項之用途，其中該脂質為磷脂、 膽固醇、三酸甘油酯、或膽固醇酯。 16. 如請求項15之用途，其中該脂質為磷脂。 17·如請求項16之用途，其中該磷脂選自由下列各物組成之 群：磷脂醯膽鹼、卵磷脂醯膽鹼、大豆磷脂醯膽鹼、二 棕櫚醯基磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼、二硬 脂醯基磷脂醯膽鹼、二月桂基磷脂醯膽鹼、1-肉豆蔻醯 基_2_棕櫚醯基磷脂醯膽鹼、1-棕櫚醯基-2-肉豆蔻醯基磷 脂醯膽鹼、1-棕櫚醯基-2-硬脂醯基磷脂醯膽鹼、1-硬脂 醯基-2-棕櫚醯基磷脂醯膽鹼、二油醯基磷脂醯膽鹼、1-棕櫚醯基-2-油醯基磷脂醯膽鹼、1-油醯基-2-棕櫚基磷脂 醯膽鹼、二油醯基磷脂醯基乙醇胺、二月桂醯基磷脂醯 基甘油、磷脂醯基絲胺酸、磷脂醯基乙醇胺、磷脂醯基 肌醇、磷脂醯基甘油、二磷脂醯基甘油、二肉豆蔻醯基 磷脂醯基甘油、二棕櫚醯基磷脂醯基甘油、二硬脂醯基 磷脂醯基甘油、二油醯基磷脂醯基甘油、磷脂酸、二肉 豆蔻醯基磷脂酸、二棕橺醯基磷脂酸、二肉豆蔻醯基磷 118868.doc 200808335 脂醯基乙醇胺、二棕櫚醯基磷脂醯基乙醇胺、二肉豆蔻 醯基磷脂醯基絲胺酸、二棕櫚醯基磷脂醯基絲胺酸、腦 磷脂醯基絲胺酸、鞘磷脂、腦鞘磷脂、二棕櫚醯基鞘磷 脂及二硬脂醯基鞘磷脂。 18·如請求項17之用途，其中該磷脂為1-棕櫚醯基_2_油醯基 磷脂醯膽鹼（POPC)。 19·如請求項11之用途，其中該Apo A_I Milano及POPC係以 約1:0·8至約1:1·〇之重量比存於該複合體中。 2〇·如請求項19之用途，其中該Apo A-Ι Milano及POPC係以 約1:0.9之重量比存於該複合體中。 21 ·如請求項20之用途，其中該複合體適於呈醫藥調配物形 式投與。 ， 22·如請求項21之用途，其中該醫藥調配物包含一種含有蔗 糖及甘露糖醇之緩衝劑，且其中該Ap〇 A-I Milano係濃 度為約12毫克/毫升至約18毫克/毫升緩衝劑的重組Apo A-I Milano 〇 23 ·如請求項22之用途，其中該重組Ap〇 A-I Milano之濃度 為14 · 5毫克/毫升緩衝劑。 24·如請求項23之用途，其中該醫藥調配物包含一種含有葡 萄糖及磷酸鈉之水性緩衝劑，且其中該缓衝劑具有約7.0 至7.8之pH值。 25·如請求項24之用途，其中該緩衝劑為2〇/〇的葡萄糖及4 mM的磷酸鈉，且其中該pH值為約7.4。 26·如請求項21至25中任一項之用途，其中該醫藥調配物為 118868.doc 200808335 無菌液體醫藥調配物。 27· — 種包含Αρ〇 Α τ ^ ^ p A·1 Milano : 1_棕櫚醯基_2_油醯基-順式-甘 油-3-½酸膽驗複合體p〇pc複合體）之醫藥調 配物，其将μ、， 、’、用於治療或預防個體中年齡相關性黃斑變 性。 28·種Μ脫輔基脂蛋白應嶋或其變體於製造用於治 療或預防個體中年齡相關性黃斑變性之醫藥上之用途， 其中該AP〇 Milano之用量足以促進該個體的膽固醇 逆行轉運，從而能治療年齡相關性黃斑變性。 118868.doc 200808335 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： • 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無）

   118868.doc