TW200804409A - Processes for the synthesis of rocuronium bromide - Google Patents

Description

200804409 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明涵蓋合成1-[170-乙醯基氧基_3α_羥基_2卜(4_嗎啉 基）·5α-雄错院_16β_基]小(2_丙稀基）0比洛錠溴（羅庫演鞍） 及其中間物之方法。 【先前技術】 式I之1-[17β-(乙醯基氧基）-3α_羥基啉基>5心雄 留烷-16β-基]-1_(2-丙烯基）吼咯錠溴（羅庫溴銨）具有以下結 構： 、、、口

其具有式（：32115381^2〇4及609.70之分子量。羅庫溴銨係用 作非去極化神經肌肉阻斷劑，視劑量及介導持續時間而 定，其迅速介導開始。其藉由在運動神經終板處競爭膽驗 能受體而起作用。此作用係由諸如新斯的明（ne〇stigmine) 及騰喜龍（edrophonium)之乙醯膽鹼酯酶抑制劑所拮抗。 式I之羅庫溴銨係以ZEMURON®之名稱銷售且供應為僅 用於靜脈内注射之透明、無色至黃色/橙色之無菌、非致 熱、專張溶液。 羅庫溴銨之製備係揭示於美國專利第5,817,803號及第 4,894,369號中，及美國公開案第2005/0159398號中。 美國專利第4,894,369號（"，369專利”）揭示經由式Π之 114649.doc 200804409 2〇1，3〇^環氧基_1邱_(1-吼洛唆基）-5〇^雄甾烧-170-醇製備羅 庫溴銨：

其中R3為C、N-CH3或直接C-C鍵。產率適中（約60% w/w產 率）。該專利揭示在水存在下，2(χ，3α-環氧基_16β-(1-吡洛 咬基）_5α-雄甾烷_ΐ7β-醇與嗎啉反應產生2β-(4-嗎啉基）_ 16β-(1_σ比洛σ定基）_5α-雄甾烧_3α，17β-二醇。該步驟係進行 二天之反應時間，其後藉由蒸發移除溶劑，且使最終產物 自丙酮結晶，隨後自甲醇進一步再結晶。 其後，使2β-(4-嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶基）_5α•雄甾烷· 3α，17β-二醇與乙醯化試劑反應以獲得17卜乙酸2β_(4_嗎琳 基）·16β-(1-吡咯啶基）·5α_雄留烷_3α_醇酯。在此醯化過程 中，產物係以約48%之低產率獲得，其包含藉由柱層析隨 後自一乙醚與正己烷之混合物結晶自剩餘起始二醇及二乙 酸酯副產物純化之過程。參見，369專利，第5行，第31-5〇 列（實例7)。 最終，單四級銨化合物羅庫溴銨係藉由在室溫下在一壓 力瓶中使單乙酸S旨衍生物與大量過量之烯丙基糾7#量） 反應22個小時而製備。參見从在第時，第（實例 23)。藉由氧化銘柱層析純化產物且隨後使合併之純溶離 份自二氯甲烷-二乙醚結晶以得到純羅庫溴銨。 114649.doc 200804409 美國公開案第2005/0159398號（，，，398公開案”）揭示經由雙 乙酿化中間物製備羅庫溴銨之衍生物。該雙乙醯化化合物 經歷選擇性脫乙醯化反應以得到單乙酸酯產物，藉由兩次 結晶將其進一步純化以約52%之產率得到所需產物。參見 ’398公開案，第8頁，第112_ 115列。 每一純化步驟降低產率，增加生產成本，且增加製造時 間。因此’降低成本及製造時間且同時增加產物產率及純 度之方法係極為需要的。亦需要簡化生產過程之方法。本 發明之方法解決先前技術之該等缺點。 【發明内容】 本發明之一實施例涵蓋經分離之以下結構之化合物VI。

本發明之另一實施例涵蓋結晶化合物VI。 本發明之另一實施例涵蓋一種製造化合物VI之方法，其 包含··在約40°C至約回流之溫度下，將化合物v 2α，3α-環 氧基_5α-雄留烧-Ι6β-醇

與σ比咯啶組合於可與水混溶之有機溶劑中以獲得混合物； 114649.doc -8- 200804409 在約40°C至約回流之溫度下攪拌該混合物至少約30分鐘至 約一小時以獲得化合物VI ;及分離化合物VI。 本發明之另一實施例涵蓋一種增大化合物VI與以下結構

VI-a， 之化合物VI-a之異構比的方法，其包含將含有約10%至約 40面積％(根據HPLC)之化合物VI-a之起始化合物VI與可與 水混溶之有機溶劑組合以獲得懸浮液；在約55°C至約80°C 之溫度下攪拌該懸浮液以獲得混合物；將水添加至該混合 物中；及自該混合物分離化合物VI，其中該經分離之化合 物VI具有小於約10面積。/〇(根據HPLC)之化合物VI-a。 本發明之一實施例涵蓋一種藉由根據本發明之方法製備 具有小於約25面積％(根據HPLC)之化合物VI-a的化合物 VI，且使其轉變為羅庫溴銨來製備式I之羅庫溴銨（在下文 中為’’羅庫之方法。

本發明亦涵蓋一種製備化合物IV之方法： 114649.doc 200804409

其包含形成具有小於約10%之化合物心的化合㈣與視 情況與不可與水混溶之有機溶劑組合之可與水混溶之有機 溶劑的溶液；在約-15t至約1(rc之溫度下將至少一種還原 劑添加至該溶液中以獲得混合物；在約2〇。〇至約24。〇之溫 度下攪拌该混合物；及自具有至少85面積％(根據HpLC)之 純度之該混合物分離化合物IV。 本發明之一實施例涵蓋一種藉由製備上述具有至少85面 積％(根據HPLC)之純度的化合物IV，且使其轉變為式I之 羅庫來製備式I之羅庫的方法。 本發明之另一實施例涵蓋一種製造化合物VII之方法，

其包含形成化合物IV、嗎啉及至少一種酸催化劑之懸浮 液；在約100°c至約回流之溫度下將該懸浮液攪拌約24小 時至約48小時；及自該懸浮液分離化合物νπ。 本發明之另一實施例涵蓋一種藉由製備上述化合物 VII ’且使其轉變為式ϊ之羅庫來製備式羅庫的方法。 114649,doc •10· 200804409 合物VIII之方& 本發明之一實施例涵蓋一種製儀^匕

VIII， 其包含將化合物νπ、極性有機溶劑及至少—種^

物 VIII 1 至二-種驗組合以獲得混合物；及自該混合物分離化： 本發明之另一實施例涵蓋—種製備羅庫溴銨之方、去复 包含自化合物vm製備羅庫料之方^，該方法包含㈣ 合物VIII、極性非質子性有機溶劑、烯丙基演及至少—種 無機驗組合以獲得混合物；及分離羅庫演錢。 經分離之羅料銨可藉由包含以下步驟之方法純化：將 經分離之羅庫演銨溶解於至少—種極性非f子性有機溶劑 中以形成溶液；將視情況與鹼組合之脫色劑添加至該溶液 中；將溶液過濾；將反溶劑添加至所得濾液中；攪拌以獲 得懸浮液；自該懸浮液回收濕固體羅庫溴銨；及在不高於 約35°c之溫度下乾燥該濕羅庫溴銨。 ； 本發明之另—實施例涵蓋—種製備式I之四級錢鹽羅庫 之方法 114649.doc -11- 200804409

其包含將含有約10%至約40面積％(根據HPLC)之化合物VI- a的起始化合物VI與可與水混溶之有機溶劑組合以獲得懸 浮液；在約55°C至約80°C之溫度下攪拌該懸浮液以獲得溶 液；藉由添加水至該溶液中形成懸浮液；自該懸浮液分離 化合物VI，其中該經分離之化合物VI具有小於約25面積 %(根據HPLC)之化合物VI-a ;形成具有少於約25%之化合 物VI-a的化合物VI及至少一種可與水混溶之有機溶劑的溶 液；在約-15°C至約5°C之溫度下將至少一種還原劑添加至 該溶液中以獲得混合物；在約20°C至約24°C之溫度下攪拌 該混合物；自具有至少85面積％(根據HPLC)、較佳大於 90%之純度之混合物中分離化合物IV ;形成化合物IV、嗎 啉及至少一種酸催化劑之懸浮液；在約100°C至約回流之 溫度下將該懸浮液攪拌約24小時至約48小時；自該懸浮液 分離化合物VII ;將化合物VII、極性有機溶劑及至少一種 醯化試劑與至少一種鹼組合以獲得混合物；自該混合物分 離化合物VIII ;將化合物VIII、極性非質子性有機溶劑、 烯丙基溴及至少一種無機鹼組合以獲得混合物；及分離羅 庫溴銨。視情況，可藉由將經分離之化合物VI溶解於曱醇 中、添加水以促進結晶且收集所得晶體而獲得純度大於 97%之化合物VI。 【實施方式】 114649.doc -12- 200804409 本發明涵蓋經分離之以下結構之化合物νι。

經分離之式VI之化合物可由選自以下之資料表徵··在約 218.3、 69、53.9、52.2、51.9、50.8、47.5、46.9、38.1、 36.2 > 34.4 > 33.8 ^ 31.9 > 30.6 > 28.9 > 28 > 26.6 > 23.2 > 2〇、13.9及12.9 ppm處具有碳化學位移之i3c_NMr光譜； 大體上如圖5中所描述之13C-NMR光譜；在約3.17-3.09、 2.92、2·79、2·64、2·1、1·95-0_6ό、0·9 及 0.75 ppm 處具有 氫化學位移之iH-NMR光譜；大體上如圖4中所描述之ιΗ_ NMR光譜；在約358·2處具有mh+峰之質譜（fab(+)， m/z);大體上如圖6中所描述之質譜；在約1736、3452及 1157 cm 1處具有峰之IR光譜，及大體上如圖7中所描述之 IR光譜。 本發明亦涵蓋結晶化合物VI。結晶化合物可藉由在 10.3、 14.8、17.5、18.4 及 19 度（2Θ)±0·1 度（2Θ)處之粉末 X 射 線繞射峰來表徵。該結晶化合物VI亦可由選自由以下資料 組成之群之資料表徵：在約1〇.9、20.7、22、24.1、25.9及 27度（2Θ)±0·1度（2Θ)處之粉末X射線繞射峰；大體上如圖i 中所描述之粉末X射線繞射；如由TGA分析測定之約0.2重 量％之重量損失；大體上如圖3中所描述之TGA曲線；具有 在約146°C處之吸熱峰之DSC ;大體上如圖2中所描述之 114649.doc -13 - 200804409 DSC曲線，及約155°C之熔點。 本發明進一步涵蓋使用增加中間物及最終產物之產率同 時降低雜質分佈之方法來合成羅庫溴銨之方法。部分地， 當在中間物合成過程中使2莫耳當量之吡咯啶與以下定義 之化合物V反應以避免不需之副產物產生及/或不必要之純 化步驟時’該等雜質減少。此外，產物之回收更為容易， 其使得產物僅含有少量諸如式VI-a及/或VI-c之化合物之副 產物：

如本文中所使用，術語”鹼”係指在化學反應過程中接受 一或多個質子之物質。術語”強鹼”係指對H+具有高親和力 之物質，其包括（但不限於）NaOH、NaHC03、Na2C03、 KOH、KHC03 或 K2C03 〇 如本文中所使用，術語"含水溶劑”係指在溶劑之總體積 中含有約1%至約7%之體積之水的溶劑。

製備化合物VI

之方法包含在約40°C至約回流之溫度下，將化合物ν 114649.doc -14 - 200804409 2α，3α-環氧基- 5α-雄留烧-16β-醇-17-_與吼洛唆組合於可 與水混溶之有機溶劑中以獲得混合物；在約40°C至約回流 之溫度下攪拌該混合物約30分鐘至約一個小時以獲得化合 物VI ;及分離化合物VI。 可藉由在約40°C至約回流之溫度下，在可與水混溶之有 機溶劑中，使2α，3α，16α，17α-雙環氧基·5α-雄留烧-17β-乙 酸酯（化合物III)之溶液與強鹼水溶液反應來製備化合物 V。可與水混溶之有機溶劑可為彼等以下描述用於合成化 合物VI中之溶劑中之任一者。然而，更佳可與水混溶之有 機溶劑為甲醇且更佳鹼為NaOH。 或者，化合物V可在與吡咯啶反應之前現場製得。因 此，以上描述之反應可按順序進行，其中使 2〇1，3〇1，16〇1，17〇1-雙環氧基-5〇1-雄留烷-170-乙酸酯（化合物111) 與強鹼之水溶液反應以產生化合物V，隨後使其與吡咯啶 反應以產生化合物VI。因此，在合成化合物VI之前製得化 合物V而無需中間物分離。 可例如根據由 Buckett，W.R·，"Pancuronium bromide and other steroidal neuromuscular blocking agents containing acetylcholine fragments, f, J. Med. Chem., 1973, 16(10),第 1116-1124頁揭示之方法獲得化合物III。 較佳地，可與水混溶之有機溶劑為至少一種直鏈或支鏈 CVC5醇。較佳地，該CVC5醇為CVC3醇。較佳CVC3醇為 曱醇、乙醇或2-丙醇。更佳地，醇為甲醇。 較佳地，在約40°C至約65°C之溫度下、更佳約60°C至 114649.doc -15- 200804409 65C之溫度下’將化合物ν 2α，3心環氧基巧心雄甾烷_ΐ6β 醇-17’與㈣她合於可與水混溶之有機溶劑中。 ϋ比嘻咬應以足夠量存在以產生化合物VI，而不產生大量 的化口物VI-e。較佳地"叫㈣以每莫耳當量之化合物 III 2莫耳當量或更少莫耳當量之量存在。 較佳地，在約4代至約阶、更佳㈣。c至約价之溫 度下攪拌混合物。 較佳地，將混合物攪拌約3〇至約12〇分鐘。 可藉由此項技術+已知之方法回收化合物V!，諸如向混 合物中添加冰-水，且過濾沉澱產物。 化合物V 2α，3α-環氧基_5心雄留烷_16^醇_17_酮與吡咯 啶之反應通常產生異構體化合物¥1與化合物vi_a之混合 物： 114649.doc

η

VI-a 〇 本發明進一步涵蓋增大化合物¥1與化合物¥1_&之異構比 之方法，其包含將含有約10%至約40面積％(根據肌〇之 化合物VI-a的起始化合物¥1與可與水混溶之有機溶劑組合 -16 - 200804409 以獲得懸浮液；在約55°C至約80°C之溫度下攪拌該懸浮液 以獲得混合物；將水添加至該混合物；及自該混合物分離 化合物VI，其中該經分離之化合物VI含有小於約1 〇面積 %(根據HPLC)之化合物vi-a。 通常起始化合物VI可含有約10%至約4〇面積％(根據 HPLC)之化合物VI-a，且較佳含有約1〇%至約3〇面積％(根 據HPLC)。更佳地，起始化合物VI含有約1〇%至約2〇面積 根據HPLC)之化合物νΐ-a，最佳地，經分離之式vi之化 合物含有約12%至約18面積。/◦(根據HPLC)之式VI-a之化合 物。 較佳地’在平衡後，化合物^含有小於1〇面積％(根據 HPLC)之化合物VI_a，更佳地，小於約5面積％(根據 HPLC)，最佳地，小於2面積％(根據HpLC)。 較佳地，可與水混溶之有機溶劑為至少一種Cw醇，更 佳地為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇或丁醇。較佳地，該Cw 醇為甲醇。 車乂仏地，在約5〇°C至約7〇。〇之溫度下攪拌懸浮液。 較佳地，以逐滴方式添加水，更佳地，歷經約9〇分鐘之 時期。 較佳地’添加水的同時將混合物保持在高於6〇。。之溫度 下。 又 車乂佳也卩可與水處溶之有機溶劑之體積之約3至約4體 積的量’更佳地’以可與水混溶之有機溶劑之體積之約3 體積的量添加水。 114649.doc -17- 200804409 較佳地，可藉由將添加水後形成之混合物冷卻至約5°C 至約〇°C之溫度，隨後過濾且乾燥來回收含有少於約25面 積％(根據HPLC)之化合物VI-a的化合物VI。較佳地，將混 合物冷卻歷經約40至約50分鐘之時期。 本發明進一步涵蓋藉由如上所述製備具有少於約25面積 %(根據HPLC)之化合物VI-a的化合物VI，且使其轉變為羅 庫溴銨來製備式I之羅庫溴銨的方法。

本發明亦涵蓋一種製備化合物IV之方法：

其包含形成具有少於約10%之化合物VI-a的化合物VI與視 情況與不可與水混溶之有機溶劑組合之可與水混溶之有機 溶劑的溶液；在約-15°C至約l〇°C之溫度下向該溶液中添加 至少一種還原劑以獲得混合物；在約20°C至約24°C之溫度 下攪拌該混合物；及自具有至少85面積％(根據HPLC)、較 佳至少90面積％(根據HPLC)之純度之混合物中分離化合物 IV。視情況，可藉由將經分離之化合物IV溶解於甲醇中， 114649.doc -18 - 200804409 日日體而獲得純度大於97面積％(根 添加水以促進結晶且收集 據HPLC)之化合物iv。 如以下比較性實例27中所說明，當執行美國專利第 4,894,369號中揭示之用於製備化合物IV之方法時，形成兩 種主要之極性更大之雜質。藉由舰、MS且藉由勘分 析，錢基還原後㈣料雜f為所需⑽之單環氧化物 之異構體。獲得約12面積％(根據HPLC)之式IV_a之異構體 2α，3α_環氧基_16α-(1_°比咯啶基）-導羥基-5«_雄留烷（被稱 作化合物IV-a)，

且獲得約5面積％(根據HPLC)之式IV-b之第二異構體2α，3α-環氧基-16α·(1-吡卩各啶基）-ΐ7α_羥基-5α-雄甾烧（被稱作化合 物 IV-b)。

此外，獲得不大於4面積％(根據HPLC)之雜質IV-c(下式之 二吼洛σ定基類似物）。 114649.doc -19- 200804409

此外，美國專利第4,894,369號中揭示之方法以約57重量 %之中等產率產生產物。然而，藉由本發明之方法以約 80%之更佳產率獲得化合物IV。 自以上方法獲得約85%至約100面積％(根據HPLC)之純度 之化合物IV，更佳約90%至約100面積％(根據HPLC)之純 度，最佳約97%至約100面積。/◦(根據HPLC)之純度。 此外，藉由以上方法製備之化合物IV含有選自由化合物 IV-a、化合物IV-b、IV-c及其混合物組成之群之雜質。較 佳地，化合物IV-a係以少於約2面積％(根據HPLC)之量存 在，更佳約1%至約2面積％(根據HPLC)之量。較佳地，化 合物IV-b係以少於約1面積％(根據HPLC)之量存在。另 外，獲得具有少於0.5%之下式之化合物IV-c之化合物IV。

較佳地，用作起始物質之化合物VI具有少於約25面積 %(根據HPLC)之化合物IV-a，因此所獲得之化合物IV含有 少於約2面積％(根據HPLC)、更佳約1%至約2面積％(根據 HPLC)之化合物IV-a，少於約1面積％(根據HPLC)之化合物 114649.doc -20- 200804409 IV-b及少於0.5%之化合物Iv_c。 較佳地，可與水混溶之有機溶劑為至少__種直鏈或支鍵 。醇。較佳地’該直鏈或支鏈。醇為k醇。更佳地， 該直鏈或支鏈Cw醇為甲醇、乙醇或異丙醇。最佳 甲醇。 W師為 較佳地，在約(TC至約_5。〇之溫度下添加還原劑。 在反應中使用之還原劑為能夠還原羰基之任何還原劑。 還原劑較佳為氫化金屬錯合物，更佳為氫化鹼金屬錯合 物，最佳為硼氫化鈉、硼氫化鉀或三甲氧基硼氫化鈉，且 甚至最佳為氣化納。 可藉由熟練技工已知之任何方法分離化合物Iv。該等方 法包括（但不限於）在真空下濃縮及視情況向有機相中添加 水0 本發明涵蓋藉由如上所述製備具有至少90面積％(根據 HPLC)、較佳大於95%之純度之化合物1¥且將其轉變為式工 之羅庫來製備式I之羅庫之方法。 本發明進一步涵蓋製備化合物VII之方法，

其包含形成化合物IV、嗎啉及至少一種酸催化劑之懸浮 液；在約1〇〇。(：至約回流之溫度下將該懸浮液攪拌約24小 114649.doc •21- 200804409 時至約48小時；及自該懸浮液分離化合物νπ。 如美國專利第4,894,369號中揭示之化合物VII之分離包 括蒸發嗎琳’其極不方便且耗時。此外，化合物之分 離進一步需要結晶及再結晶過程，因此降低產率且增加生 產成本。參見’369專利，第4行，第47列至第5行，第2列 (實例3及4)。相反，藉由以上方法同時避免處理步驟，以 較佳約82%至約96%之高莫耳產率獲得本發明之粗化合物 VII。而且，藉由本發明之方法獲得之化合物νΠ具有約 77%至約98面積％(根據HPLC)之純度，更佳約94%至約98 面積(根據HPLC)之純度’且因此可不經進一步純化而用 於下個階段。 嗎啉較佳為水溶液之形式。 酉文催化劑應為能夠增加反應速率之化合物。典型酸催化 劑包括（但不限於）無機酸、有機酸或路易斯酸。較佳有機 酸為對甲苯磺酸、甲磺酸、三氯乙酸或三氟乙酸。較佳 地’無機酸為硫酸或鹽酸。較佳路易斯酸為A1C13、

ZnCl2、BF3、S11CI4、TiCl4、AgC104、Zn(〇Ac)2 或 FeCl3。 更佳路易斯酸為乙酸鋅或氯化鐵。最佳催化劑為對甲苯磺 酸。 較佳地’在約l〇(TC至約ii〇°c之溫度下攪拌懸浮液。 較佳地’在約loot：至約1Hrc之溫度下攪拌懸浮液以獲 得溶液。 較佳地，將溶液保持20至約50個小時，更佳在擾拌下。 視情況’為增大反應速率，可將懸浮液保持在壓力下， 114649.doc •22- 200804409 :::在2溶：蒸汽之壓力下。該壓力較佳為約。.5至約i g⑽。“字懸夺液保持於壓力下時 約113°C至約117°c。 反曰刀口主 較佳地，可藉由自冷稀驗性水溶液沉殿且於直空伊箱中 乾燥分離化合物v„’因此避免美國專利第4,894 369號中 揭示之結晶步驟。更佳地，驗性溶液為選自由以下各物組 成之群之驗性驗：瑞酿杨卢 反敵鈉、奴酸虱鈉、碳酸鉀、碳酸氫 鉀、氫氧化鈉及氫氧化鉀。最佳鹼為碳酸鈉。 更佳地自化合物以製備化合物VII之方法可以工業規模 進行。 、本卷月亦涵蓋藉由如上所述製備化合物vii且將其轉變 為式I之羅庫來製備式1之羅庫的方法。如以下比較性實例 26中所說明，重複美國專利第4,894,369號中揭示之程序提 供81.56面積％(根據HPLC)純度之化合物VIII，其含有5.16 面積。/〇(根據HPLC)之量之化合物VII起始二醇及丨1β93面積 %(根據HPLC)之量之化合物IX二乙酸醋雜質。 然而，本發明之方法應用少量鹼及酐用作醯化試劑，且 因此化學選擇性地以更佳產率產生化合物VIII且其在純化 前具有約90%至約99面積％(根據HPLC)之純度。在純化後 藉由簡單結晶，獲得總產率為約70%且純度為約97°/。至大 於99面積％(根據HPLC)、最佳大於99面積％(根據HPLC)之 產物，無需藉由柱層析進行純化。 本發明涵蓋製備化合物VIII之方法， 114649.doc •23- 200804409

VIII 將Γ合物νπ、極性有機溶劑及至少—種醯化試劑 合讀得混合物；及自Μ合物分離2 可藉由本發明之方法或藉由諸如以引用的方式 中之美國專利第4,894,369財揭示之方法的任何其他方ί 獲得化合物VII。 表 極性非質子性有機溶劑包括（但不限於）m酿 胺、硝基甲燒或齒化煙。較佳嗣為C36_。較佳C3摘為丙 酮或甲基異丁基酮。較佳地，酯為C“酯。較佳c4_6酷為乙 酸乙醋或乙酸異丁醋。較佳趟為C3-4環狀醚，更佳為四氫 °夫°南（™F)。較佳醯胺為〜酿胺，更佳為N，N-二甲基甲酿 胺。較佳地，函化烴為Cl.2i化煙。較佳Ci·』化烴為二氣 甲燒或二氣乙烧。更佳極性非質子性有機溶劑為二氯甲 烷。 ，化試劑包括(但不限於)乙酿基齒、齒化醋、肝或醋。 較佳乙醯基i為乙醯基^較㈣化醋為Ae〇cH2cci3或 Ac〇CH2CF3。較佳地，酐可為混合酐或乙酸肝。較佳地， 酉旨為乙酸異丙_旨。更_化試劑為乙醯基氣或乙酸針。 通常，驗包括有機驗或無機驗。有機驗包括（但不限於） 脂族胺及芳族胺。較佳地，脂族胺為三乙胺、二乙基異丙 H4649.doc -24. 200804409 土 *、二正丙基胺或三丁基胺。較佳地’芳族胺為4-二甲 基胺基^ ^。無機鹼包括（但不限於）鹼性鹼及鋁鹼。較佳 地’驗性鹼為碳酸鈉或碳酸氫鈉。較佳鋁鹼為氧化鋁。 更佳驗為二乙胺、。比σ定或碳酸鋼。 較佳地’混合物在約〇。〇至約6〇t之溫度下攪拌混合 物，更佳地，在約20°C至約24°C之溫度下。較佳地，攪拌 混合物約12小時至約48小時，更佳地，攪拌混合物約12小 時至約22小時。 可藉由熟練技工已知之任何方法分離化合物VIII。該等 方法包括（但不限於）藉由添加鹼性水溶液中和混合物、分 離有機相及水相、以水洗滌有機相、過濾有機相且在真空 下濃縮有機相。 經分離之化合物VIII含有選自由化合物VII、

化合物IX、

及其混合物組成之群之雜質。較佳地，化合物VII係以不 大於約1.7面積％(根據HPLC)之量、更佳地約〇·2%至約 1.24面積％(根據HPLC)之量存在於粗化合物vm*。較佳 114649.doc •25- 200804409 地’化合物IX係以不大於約7%、更佳約1 %至約5.2面積 %(根據HPLC)之量存在。 視情況，經分離之化合物VIII可藉由自含水乙腈及二氯 曱烷之混合物結晶以產生具有約90%至約99.9面積％(根據 HPLC)之純度的化合物Yin而純化。 較佳地，藉由以上結晶過程，化合物VII於化合物VIII中 之含量可顯著降低。藉由以上結晶過程所獲得之化合物 VIII含有選自由化合物VII、化合物ΙΧ及其混合物組成之群 之雜質。較佳地，化合物VII係以不大於0.3面積％(根據 HPLC)之量、更佳約0.1%至〇·3面積％(根據hplC)之量存 在。較佳地，化合物IX係以不大於1面積％(根據hplc)之 量、更佳不大於約〇·5面積。/。（根據HPLC)之量存在。 如上所述進行第二次結晶，產生含有選自由化合物 VII、化合物IX及其混合物組成之群之雜質之化合物。 較佳地，化合物VII係以不大於0·3面積％(根據HpLc)、更 佳不大於約0.2面積°/〇(根據HpLC)之量存在。較佳地，化合 物IX係以不大於0.3面積％(根據HPLC)之量、更佳約 至〇.3面積％(根據HPLC)之量存在。 • 較佳地，含水乙腈含有約1體積％至約5體積％之水，更 佳約1體積％至約1·25體積％之水。 更佳自化合物VII製備化合物VIII之方法可以工業規模進 行。 本發明涵蓋合成羅庫溴銨（化合物I)之方法，：^巾副i #勿 之量係經最小化。副產物包括諸如 114649.doc -26 - 200804409

之化合物，甘么 具係當使用大量過量之烯丙基溴時而獲得。 本發"BB ^ v ^ 方法具有約95%之羅庫溴銨之莫耳產率，其係 自 jLg». 氣甲烷與二乙醚之混合物沉澱而獲得。沉澱 複雜或耗時之純化步驟。 製備羅庫溴銨之方法包含將化合物VIII、極性非質子性 有機洛劑、烯丙基溴及至少—種無機驗組合 物；及分離羅庫漠銨。 口 藉由以上方法獲得之羅庫具有至少約94面積。（根據 HPLC)、較佳約99%至約1〇〇面積％(根據肌c)之純度。 極性非質子性有機溶劑包括(但不限於)鹵化烴、酯或 鲷。較佳鹵化烴為Cl_2鹵化烴，更佳為二氯甲烧。較佳酯 為Cq醋，更佳為乙酸乙醋。較佳地，綱為&嗣，更佳為 丙酮。更佳極性非質子性有機溶劑為二氯甲烷。 烯丙基溴之量應足以產生所需產物而不形成大量不需之 副產物。較佳地，料基溴係以每莫耳化合物VIII約13至 約3莫耳當量之量存在，更佳地，以每莫耳化合物彻約2 莫耳當量之量存在，而非如美國專利第4,894,369號中揭示 114649.doc -27- 200804409 之方法中使用之8莫耳當量。 、較佳地，化合物彻、極性非質子性有冑溶劑及稀丙基 溴之混合物具有低水含量，更佳小於約01%之水含量（藉 由卡耳費雪法（Karl Fischer))，甚至更佳小於0.05%之水含 量’且最佳小於約0.03%之水含量。 無機鹼之存在抑制提供諸如以下之不需副產物之競爭反 應：

額外副產物包括 〇

f>cx

A

B

D O-

C

E 114649.doc -28- 200804409 無機鹼之存在容許溫和條件下之更快轉化，其降低產生諸 如結構A-E(參見以上圖示）之副產物之競爭反應的速率。 結構C為羅庫-1之質子化形式且其存在影響電位檢定。 視情況’在冑其組合之前，可分別α無機驗處理化合物 νπ、烯丙基演及極性非質子性有機溶劑。無機驗包括（但 不限於）驗性驗及_。更佳地，驗性驗為碳酸鈉、碳酸 氫鈉或碳酸鉀。更佳鋁鹼為氧化鋁。最佳無機鹼為碳酸 鈉0 較佳地’在約饥至約4代之溫度下，更佳在約饥至 約40°C之温度下攪拌混合物。 較佳地’㈣混合物約2〇小時至約24小時，更佳約叫、 時至約24小時。 可藉由熟練技工已知之任何方法分離粗羅庫漠錢。該等 方法包括（但不限於）濃縮所得反應混合物、以二氣甲燒溶 解殘餘物且過遽出諸如碳酸鈉之用於反應中之鹽。 藉由以上方法獲得之式！之粗羅庫可藉由包含以下步驟 之方法進一步純化：將粗羅庫漠銨溶解於至少一種極 質子性有機溶劑中以形成溶液；將視情況與驗組合之脫色 劑添加至該溶液中；將該溶液過遽；將反溶劑添加至所得 濾：中；攪拌以獲得懸浮液；回收濕固體羅庫溴銨丨及在 不兩於35 C之溫度下乾燥該濕羅庫溴銨。 羅庫溴錄移除過量婦 少一種極性非質子性 而自粗羅庫溴銨移除 較佳地，在使用脫色劑之前，自粗 丙基溴。可藉由將羅庫溴銨溶解於至 有機溶劑中且較佳藉由蒸發移除溶劑 114649.doc -29- 200804409 過量烯丙基溴以獲得油壯致μ Λ 由狀殘餘物。可按需要重複多次溶劑 之溶解及移除以移除過量烯丙基溴。 極性非質子性有機溶劑包括（但不限於）鹵化烴、酯或 _。較佳地，函化烴為二氯甲燒。較佳酿為乙酸乙醋。較 佳地，酮為丙酮。更估砧 更佳地極性非質子性有機溶劑為二氯 甲烷。 脫色包括（但不限於）氧化銘、活性炭或石夕膠。當脫色 劑並非驗性時’則驗可與脫色劑組合使用。較佳地，脫色 劑為氧化鋁。較佳地，鹼為碳酸氫鈉。 較佳地，進行遽液與反溶劑之混合同時用力授掉。"用 力"擾拌之條件減應容k尺寸而定。在例如⑽雨 瓶之小規模中，rpm對應於用力授拌。在例如 觸L燒瓶之較大規模中，在折流板存在下謂啊之葉 輪/授拌器可認為為用力授拌。用力授拌容許其獲得可經 乾燥至低殘餘溶劑含量之產物。 較佳地，反溶劑係選自由喊、醋及芳族烴及其混合物組 成之群。較佳地，較佳驗為二乙縫或二異丙基鱗。較佳 地？旨為乙酸乙醋。較佳芳族烴為甲苯。較佳地，濾、液中 :洛劑為二氣甲烷且反溶劑為二乙醚。通常，當溶劑為二 虱甲烷且反溶劑為二乙醚時，反應產生約Η”，。至 W/W之羅庫溴銨。 ’將羅庫溴銨在真空 較佳地，在不高於約35它之溫度下 下乾燥至少5天。 以工業規模進 更佳自化合物νίπ製備式羅庫之方法可 114649.doc -30- 200804409 本發明亦涵蓋製備式i之四級銨鹽羅庫之方法，

其包含將含有約1〇%至約4〇面積％(根據HPLC)之化合物vi-a 的起始化合物VI與可與水混溶之有機溶劑組合以獲得懸浮 液；在約55°C至約80°C之溫度下攪拌該懸浮液以獲得混合 物；將水添加至該混合物；自該混合物分離化合物VI，其 中該經分離之化合物VI具有少於約1〇面積％(根據hplc)之 化合物VI-a ;形成具有少於約1〇%之化合物VI_a之化合物 VI與視情況可與不可與水混溶之有機溶劑組合之可與水混 溶之有機溶劑的溶液；在約_15r至約10。〇之溫度下將至少 一種還原劑添加至該溶液中以獲得混合物；在約20。〇至約 24 C之溫度下攪拌該混合物；自具有至少85面積％(根據 HPLC)之純度之混合物分離化合物IV ;形成化合物、嗎 琳及至少一種酸催化劑之懸浮液；在約i〇〇。〇至約回流之 溫度下將該懸浮液攪拌約24小時至約48小時；自該懸浮液 分離化合物VII ;將化合物¥„、極性有機溶劑及至少一種 醯化試劑與至少一種鹼組合以獲得混合物；自該混合物分 離化合物ΥΙΠ;將化合物VI„、極性非質子性有機溶劑、 烯丙基溴及至少一種無機鹼組合以獲得混合物；及分離羅 庫漠銨。 114649.doc -31 - 200804409 雖然已關於特定實例及較佳實施例描述了本發明，但應 瞭解本發明並非限制於該等實例及實施例。因此所主張之 本發明包括對本文描述之特定實例及較佳實施例之改變， 其對熟習此項技術者顯而易見。 實例 化合物VI 2«，3心環氧基-16p_(1-吡咯啶基）-5心雄留烷-17_ 酮之X射線繞射分析 在具有帕耳帖冷卻（Peltier cooling)之ARL X射線粉末 繞射儀（型號X'TRA-030、Θ-Θ測角儀、Cu管、固態偵測器） 上進行粉末X射線繞射（PXRD)。樣品固持器為具有25(直 徑）χ〇·5 mm(深度）之腔之圓形零背景石英板之圓形標準鋁 樣品固持器。掃描參數：範圍：2-4〇度（20);掃描模式·· 連續％描；及掃描速率：每分鐘3度。 差示掃描熱量測定（DSC) 差示掃描熱量測定係在一DSC 822e/700, Mettler Toledo 上進行，其中樣品重量：3_5 mg。加熱速率：每分鐘 1 〇 C，且坩堝之孔數目為3。n2流：流動速率為每分鐘4〇 ml且掃描範圍為30-250°C。 熱重量分析（TGA) 熱重量分析係在一 TGA/SDTA 851e，Mettler Toledo上進 行’且樣品重量為7-15 mg。加熱速率為每分鐘i〇°c，且 N2流流動速率為每分鐘5〇 ml。掃描範圍為25-250°C。 實例1 :製備化合物VI 2α，3α-環氧基-I6p-(1-吡咯啶基）_ 5α-雄甾烷-17-酮與化合物νΐ4 2α，3α-環氧基-16α-(1_吡咯 114649.doc -32- 200804409 咬基）-5ct-雄甾燒-17-嗣之混合物 在20-24°C下且在氮氣氛下，向2〇1，3〇1，16〇1，17.雙環氧基_ 5α-雄留烧-17β-醇乙酸酯III(5〇 g，144 32 mmol)於甲醇 (500 mL)中之溶液中添加氫氧化鈉之4 n溶液（40 mL， 9·525 ’ 158.75 mmol)。將混合物加熱至回流（6〇_65。〇歷時 30分鐘’隨後冷卻至40°C且添加吡咯啶（24 mL，288.64 mmol)。將反應混合物加熱至回流（6〇_65它）歷時3(μ45分 鐘’隨後冷卻至室溫且隨後添加冰·水（5〇〇 mL)以獲得懸浮 液。在5°C下將該懸浮液攪拌30分鐘且隨後將固體過濾出 且以冷水洗務（2x200 mL)。在真空下乾燥濕固體，得到47

g之呈淺育色粉末狀之化合物VI，其具有18:82之VI-a與VI 之比率。 實例2 :獲得化合物VI 2α，3α-環氧基-16p-(l-吡咯啶基）_ 5α-雄甾燒-17-酮之平衡方法 將實例1之乾燥化合物（47 g)懸浮於甲醇（235 mL)中且回 流（60-65°C)20-30分鐘之間。經2〇分鐘之時期添加水（715 mL) ’且在30分鐘内將所得混合物在65_70°C下加熱。在 30-40分鐘之時期内將所形成之懸浮液在〇_5π下冷卻且在 此溫度下將懸浮液進一步攪拌2〇分鐘。將懸浮液過濾且以 水（188 mL)洗滌。在真空下乾燥濕固體以得到43 g(12〇26 mmol，83%產率，93%之純度（根據HPLC)，具有146°C之 溶點）呈白色固體狀之化合物VI，其具有ι·8:98.2之VI-a與 VI之比率。[a]D2〇+101_l(於 CHC13 中 c=1.0)。 實例3:製備化合物Iv 2a，3a-環氧基-16p-(1_吡略咬基）_ 114649.doc •33- 200804409 5α-雄留烷-17β-醇 將1 g(2.8 mmol)化合物VI於甲醇（20 mL)中之懸浮液冷 卻至-10°C，且隨後在氮氣氛下小心逐份添加硼氫化鈉（200 mg，5.04 mmol)。使所得非均勻反應混合物達到20-24°C且 攪拌至少3小時。以CH2C12稀釋反應混合物且隨後在20-22°C下添加純水。將溶液攪拌10分鐘，且隨後分離相。以 純水洗滌有機相且在真空下濃縮溶液以得到所需粗化合物 IV。在一真空烘箱中在40°C下將產物乾燥至少16小時以得 到1 g(0.00278莫耳）白色固體（99.3%產率），其含有98.5面 積％(根據HPLC)之產物IV及1.1面積％(根據HPLC)之異構體 IV-a。熔點 171°C ; [a]D20+34.0(於 CHC13中 c=1.0)。藉由光 譜分析證實結構。 化合物1¥-&之2〇1，3〇1-環氧基-16〇1-(吡咯啶-1-基）-170-羥 基-5a-雄留烷之表徵資料。

NMR(300 MHz，CDC13): δ(ρρπι) 多重性 (Η) Jh-h(Hz) 賦值 3.60 雙重峰 0) 6.6 H-17a 3.15-3.09 多重峰 (2) Η-2β? Η-3β 2.75-2.66 多重峰 (5) Η-16β，Η·2”，Η-5〃 1.94-0.62 多重峰 (23) 所有其他脂族氫 0.77 單峰 (3) ch3 0.76 單峰 (3) ch3 114649.doc ·34· 200804409 13C NMR(300 MHz，CDC13): 5(ppm) 賦值 85.0 CH，C-17 69.9 CH，C-16 53.6 CH，C-2 52.3 CH，C_3 52.2 ch2 50.9 CH 48.8 CH 43.5 C 38.1 ch2 36.5 ch2 36.2 CH 35.3 CH 33.7 C 31.0 ch2 29.0 ch2 28.7 ch2 28.2 ch2 23.2 ch2 20.1 ch2 12.9 ch3 12.2 ch3 質譜 359 m/z ： (M) IR 3462 cm](0-H) 1133 cm-l(C-N) 化合物1\^-1>之2〇1，3〇1-環氧基-16〇1_(11比口各唆-1-基）-17〇1-經 基-5cx-雄错烷之表徵資料。

200804409 4 NMR(300 MHz，CDC13): 5(ppm) 多重性 ⑻ Jh-h(Hz) 賦值 3.48 雙重峰 (1) 4.8 Η-17β 3.15-3.09 多曹峰 (2) Η-2β，Η·3β 2.81 多會峰 (1) Η-16β 2.66 多重峰 (2) Η-2” 2.54 多重峰 (2) Η-5” 1.95-0.62 多重峰 (23) 所有其他脂族氫 0.76 單峰 (3) ch3 0.68 多重峰 (3) ch3 13C NMR(300 MHz，CDC13) ·· 5(ppm) 賦值 78.3 CH，017 67.0 CH，C-16 53.4 CH，C-2 53.3 ch2 52.3 CH，C-3 51.0 CH 47.4 CH 45.0 C 38.2 ch2 36.2 CH 35.7 CH 33.7 C 31.9 ch2 31.0 ch2 29.5 ch2 29.0 ch2 28.4 ch2 23.3 ch2 19.9 ch2 16.6 ch3 12.9 ch3 質譜 360 m/z ： (M+) IR 3413 cm-'CO-H) 1225 cm_1(C-N) 114649.doc -36- 200804409 製備化合物1V 2α，3α_環氧基-16β-(1-吡咯啶基）-5α-雄留烷_17释_醇 按照實例3之寂皮Π /Jr 序且使用乙醇作為溶劑製備呈固體狀之 標題化合必7 ·、j^ ’溶點 154.5°C ; [a]D20+29.4。（於 CHC13 中 c=1.0) 〇 實例5冑備化合物Iv 2a，3a_環氧基_16卩_(1_吡咯啶基)_ 5a_雄留烷-17β-醇 按…、κ例3之耘序且使用異丙醇作為溶劑製備呈固體狀 之祆題化口物’熔點158°C ; [a]D20+33.6。（於CHC13中 c=l ·0)。 實例6:冑備化合物VII 2p-(4_嗎琳基）]6p -(1-11比洛咬基）_ 5a-雄甾烷-3<x，17p-二醇 在20-24 C下且在N2氣氛下，製備Μ，％·環氧基_16β_(卜 口比嘻唆基）-5a-雄留烧_17卜醇（1 8〇 Kg，5 〇〇6 m〇1)於嗎啉 (11.44 L)及純水（i」44 L)之混合物中之懸浮液。在2〇_24。〇 下且在A氣氛下向該懸浮液中添加對甲苯磺酸（ι·24 Kg， 6.508 m〇1)。將懸浮液在黑暗中攪拌且經加熱至回流（ι〇〇_ ll〇°C)歷時40小時。40小時後，將反應混合物冷卻至2〇_ 24°C，且傾入保持在約4它之含有2%碳酸鈉溶液（128 L)之 第一谷恭中，同時用力攪拌。在約4°C下將所得懸浮液攪 拌1小時。將所得固體在真空下過濾出、以冷純水（丨〇〇 L) 洗滌，且在一真空烘箱中在約4(rc下乾燥至少48小時，以 得到2.07 Kg(4.49 mol)之白色固體。（89·7%之莫耳產率及 94.12面積％(根據HPLC)之純度）熔點225°C ; 114649.doc -37- 200804409 [cx]D20+82.0。（於CHC13中c=1.02)。產物可不經進一步純化 而用於下個階段。 將獲得之產物自甲醇進一步結晶且隨後經受證實產物立 體化學之早晶X射線結晶學分析。

0.42%面積(根據HPlc) 未知雜質為5.16面積（根據11?1^〇：)。未鑑別雜質為〇.29面 積％(根據HPLC)。 實例7:製備化合物VII邛_(扣嗎啉基卜16卜（1_吡咯啶基卜 5α•雄留燒-3α，17β-二醇 按照實例6之程序且使用甲磺酸作為催化劑製備呈固體 狀之標題化合物；熔點為230°C。 實例8· t備化合物νπ 2p普嗎琳基卜叫心“叫咬基卜 5α-雄甾烷_3α，ΐ7β-二醇 按照貫例6之& CJ Λ4* I ^序且使用硫酸作為催化劑製備呈固體狀 之標題化合物 溶點 230°C ; [a]D20+83.8。（於 CHC13 中 。該粗 產物含有以下雜質： 1〇2)粗產物之純度（根據HPLC)為97.36面積％。該

0.503 % a/j 114649.doc •38- 200804409

OH

實例9:製備化合物VII 2β-(4-嗎啉基）-160-(1_吡咯啶基）-5α-雄留烷-3α，17β-二醇 按照實例6之程序且使用鹽酸作為催化劑製備呈固體狀 之標題化合物；熔點226°C ; [cx]D2G + 81.3。（於CHC13中 c=1.02)。粗產物之純度（根據HPLC)為94_23面積％。粗產 物含有以下雜質：

OH

OH

"IN

114649.doc -39- 200804409

實例ι〇:製備化合物VII 2p_(4·嗎啉基）_l6p_(1 -ΰ比洛咬基）- 5α-雄甾燒·3α，17β-二醇 按照實例6之程序且使用乙酸鋅作為催化劑製備呈固體 狀之標題化合物；炼點218它。粗產物之純度（根 為7 7 · 4 2面積％。粗產物含有以下雜質：

及0.82面積％(根據Ηριχ)之起始物質。 實例Π·製備化合物VII 2β-(4-嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶基）· 5α_雄甾烷-3α，17β-二醇 按照實例6之程序且使用氯化鐵作為催化劑製備呈固體 狀之標題化合物；熔點216^。粗產物之純度（根據hplc) 為89.0面積％。粗產物含有以下雜質： 114649.doc 200804409

3.61 % a/a 0.08 % a/a

0.97 % a/a 及0.76面積％(根據HPLC)之起始物質。 實例I2:製備化合物VII 2β-(4_嗎啉基）-16p-(l-吡咯啶基）-5α_雄甾烷-3α，17β-二醇 按照實例6之程序且在處理過程中使用標準條件及NaOH 製備呈固體狀之標題化合物；熔點229°C ; [a]D2G+83.5。（於 CHC13中c= 1.02)。粗產物之純度（根據HPLC)為97.17面積 °/〇。粗產物含有以下雜質：

0.19 % a/a 0.29 % a/a

0.10 % a/a 實例I3:製備化合物VII 2β-(4-嗎啉基）-16p-(l-吡咯啶基）- 114649.doc -41 - 200804409 5α-雄留燒-3α，17β_二醇 按照實例6之如r- 私序且使用無催化劑之標準條件製備呈固 體狀之&題化合物；溶點225。〇 ; [a]D2G+81.3。（於CHC13中 cl·02)粗產物之純度（根據HPLC)為94.45面積％。粗產 物含有以下雜質：

及1.01面積％(根據HPLC)之起始物質。 實例I4··製備化合物VIII 2p-(4_嗎啉基）-i6p_(le吡咯啶 基）-5a-雄甾烷-3α，17β_二醇17-乙酸酯 在A氣氛下，在20-22°C下向2β-(4-嗎琳基）-ΐ6β-(1-吡洛 啶基）_5α-雄甾烷，3α，17β-二醇（2.067 Kg，4.628 mol)於二 氣甲烧（103.35 L)中之懸浮液中添加三乙胺（ι·935 L， 13.883 mol)。授拌混合物直至完全溶解。在連續擾拌下緩 慢饋入乙酸酐（0.873 L，9.255 mol)且隨後在2〇-22°C之溫度 下將所得反應混合物攪拌22小時。隨後添加5% Na2C03溶 液（41.34 L)且將混合物攪拌5-10分鐘。分離相且在15。〇下 將有機相以水（2χ41 L)洗滌、經無水Na2SO4(10 Kg)乾燥且 114649.doc • 42- 200804409 在真空下過濾以移除鹽，將其用二氯甲烷（10 L)沖洗。在 真空下在低於20°C之溫度下移除溶劑直至獲得12 l之最終 體積。在20°C之最高溫度下向經濃縮攪拌之溶液中添加含 水乙赌（40 L) ’隨後在低於15 C之溫度下在真空下濃縮至 40 L之總體積之懸浮液。將所得懸浮液冷卻至〇_rc，擾拌 1小時，在真空下過濾出且以乙腈（3 L)洗滌。在2〇-22°C下 將所需濕產物溶解於二氯甲烷（9.5 L)中，隨後添加乙腈 (3 8 L) °在真空下在低於15°C之溫度下使體積減少至39 L 之總體積以得到懸浮液。將所得懸浮液冷卻至〇 _ 5。(3且擾 拌1小時。將所得固體在真空下過濾出且以乙腈（3 L)洗滌 產物。在真空烘箱中在40°C下乾燥純產物至少15小時以得 到1·51 Kg之白色固體。（68·8%之莫耳產率及99·9%(根據 HPLC)之純度）；、溶點 i60°C ; [a]D20+55.5(於 CHC13 中 c= 1 ·0) 〇 OAc

實例IS:製備化合物VIII 2p-(4-嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶 基）-5α-雄甾燒_3α，17β·二酵17-乙酸酯 按照實例14之程序且使用乙醯基氯及三乙胺製備呈固體 狀之標題化合物；熔點155七；[a]D2〇+543(於CHC13中 c=1.0) °經純化之產物之純度為9748面積％(根據HpLC)， 其含有以下雜質：VII 1.24面積％(根據HPLC)及IX 1.05面 114649.doc -43 - 200804409 積％(根據HPLC)。 實例Ιό:製備化合物VIII 2β·(4_嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶 基）-5α-雄甾烧_3α，ΐ7β_二醇17-乙酸酯 按照實例14之程序且使用乙酸酐及吡啶製備呈固體狀之 標題化合物；熔點147.5°C ; [α]ο20+50·7(於CHC13中 c=1.0)。經純化之產物之純度為93 ·92面積％(根據hplc)， 其含有以下雜質：VII 〇.88面積％(根據HPLC)及IX 5.19面 積％(根據HPLC)。 實例口：製備化合物VIII 2β-(4·嗎啉基）·16β-(1_吡咯啶 基）-5α-雄甾燒-3α，17β_二醇17-乙酸酯 按照實例I4之程序且使用乙酸酐及碳酸鈉製備呈固體狀 之標題化合物；熔點l53e5°C ; [a]D20+50.9(於CHC13中 c=1.0)。經純化之產物之純度為97.11面積％(根據HPLC)， 其含有以下雜質：VII 〇·23面積％(根據HPLC)及IX 2.64面 積％(根據HPLC)。 實例18:製備化合物νπΐ 2P-(4-嗎啉基）-ΐ6β-(ΐ_吡洛啶 基）-5α-雄甾燒-3α，17β·二酵17-乙酸酯 使用乙酸乙酯作為溶劑，重複實例13之程序。如HPLC 所測定，獲得之殘餘物為25.37%之所需化合物VIII、4.4% 之化合物IX及49.26%之化合物VII之混合物。 實例19:製備化合物VIII 2ρ·(4_嗎啉基）_16p_(1_吡咯啶 基）-5a-雄甾烧-3a，17p-二醇17-乙酸酯 使用乙酸異丁酯作為溶劑，重複實例丨3之程序。如 HPLC所測定，獲得之殘餘物為23.74%之所需化合物 114649.doc -44- 200804409 VIII、11.52%之化合物IX及17.34%之化合物VII之混合 物。 實例20:製備化合物VIII 2β-(4-嗎啉基）_16β-(1-吡咯啶 基）-5α-雄甾烷-3α，17β-二醇17·乙酸酯 使用曱基異丁基酮作為溶劑，重複實例13之程序。如 HPLC所測定，獲得之殘餘物為35.0%之所需化合物VIII、 6.9%之化合物IX及17.0%之化合物VII之混合物。 實例21 :製備化合物VIII 2p-(4-嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶 基）-5α-雄留烷-3α，17β-二醇17-乙酸酯 Α.使用二氣曱烧作為溶劑且有意添加0」％ w/w之水，重 複實例13之程序。在22小時之反應時間後，獲得之殘餘物 為90.54%之所需化合物VIII、3.70%之化合物IX及3.99%之 化合物VII之混合物（如由HPLC所測定）。 B.使用二氣曱烧作為溶劑且有意添加0.5 % w/w之水，重 複實例13之程序。在22小時之反應時間後，獲得之殘餘物 為87.41 °/〇之所需化合物VIII、2.26%之化合物IX及8.79%之 化合物VII之混合物（如由HPLC所測定）。 結果概述於下列表中：

表1. 22小時之反應時間後之HPLC 水含量 ί%1 面積％ 理論值 K.F· VII VIII IX 0 0.015 1.35 92.61 4.22 0.1 0.081 3.99 90.54 3.70 0.5 0.100 8.79 87.41 2.26 1.0 0.103 7.77 88.79 1.90 114649.doc -45- 200804409 200804409 表2. 41小時之反應時間後之HPLC 水含 [%] 量 面積％ 理論值 K. F. VII VIII IX 0.1 0.081 1.52 89.10 5.95 0.5 0.100 8.61 85.33 2.68 1.0 0.103 7.95 86.64 2.26 實例22 ··製備化合物VIII 2β-(4_嗎琳基）_ΐ6β-(1-吡咯咬 基）-5α-雄甾烧_3α，17β-二醇17-乙酸酯 使用"一氣甲烧作為溶劑且有意添加1 % w/w之水，重複 實例16之程序。在22小時之反應時間後，獲得之殘餘物為 88·8%之所需化合物VIII、1 ·9〇%之化合物lx及7.77%之化 合物VII之混合物（如由HPLC所測定）。 實例23:製備化合物I 乙醯基氧基羥基-2(4_嗎 琳基）_5心雄甾烷_16β-基】_ι(2_丙烯基）吡咯錠溴 在20-22°C下在A氣氛下製備2β_(4_嗎啉基）_16ρ·(1_吡咯 啶基）-5α_雄甾烷-3α，17β-二醇π-乙酸酯（1〇 g，〇·〇2 mol)於 一氣甲烷（150 ml)中之溶液。隨後，在常壓下蒸餾75 。 同時，製備烯丙基溴（3.5 mL，0.04 mol)於二氯甲烷（25 ml) 中之溶液且將其與碳酸鈉（5·2 g，〇 〇4 m〇1)混合，隨後在室 溫下攪拌30分鐘。經由_〇·45 μπΐ2過濾器過濾出懸浮液 且將其添加至2卜(4-嗎琳基）-16β-(1·口比洛咬基）-5α-雄留燒 3α，17β-二醇17-乙酸酯〇〇 g，〇〇2 m〇1)於二氣甲烷中之溶 液中將反應傾入琥珀色Schott燒瓶中、淨化、密封且 在4〇°C下㈣22小時。隨後將混合物冷卻至室溫且保持溫 度低於20 C在真空下濃縮。將二氣甲烷（5〇 mL)添加至燒瓶 114649.doc -46 - 200804409 中且隨後保持溫度低於20°c在真空下濃縮；將此程序重複 兩人在至溫及氮氣氣下將殘餘物溶解於二氣甲烧（ill mL)_，經由一 〇·45 μιη之膜過濾且在連續攪拌下缓慢添加 至二乙醚（745 mL)中。 將所得懸浮液攪拌30分鐘且在氮氣氛下過濾。在35〇c下 將所得固體乾燥60小時，得到U.8 g(118% w/w，94.58〇/。 111〇1/111〇1，根據1^1^(：純度為99.4%)之灰白色固體，其含有 〇·1。/。之雜質A、0·1面積％(根據HPLC)之雜質B及0.1面積 /〇(根據 HPLC)之雜質E。溶點 209°C ; [a]D20+29.8。（於 CHCI3 中 c=l ·〇) 〇

實例24:製備化合物1 iqwp—乙醯基氧基-3a-羥基_2(4-嗎 啉基）_5α·雄甾烷-16β·基卜1(2-丙烯基）吡咯溴 按照實例14之程序且使用丙酮作為反應溶劑製備呈固體 狀之標題化合物。熔點206°C ; [a]D20+29.3。（於CHC13中 c=1.0)。產物之純度為99·5面積❽/〇(根據HPLC)，其含有0.1 114649.doc -47- 200804409 面積。/。（根據HPLC)之雜質A、0.1面積％(根據HPLC)之雜質 B及0.1面積％(根據HPLC)之雜質F。

實例25 ··現場製備化合物I鹼1-[17β-乙醢基氧基羥基-2(4-嗎啉基）-5ot-雄留烷-16β-基卜1(2-丙烯基）吡咯錠溴 在20-22°C下在Ν2氣氛下將化合物VIII 2β-(4-嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶基）-5α-雄甾烷-3α，17β_二醇17-乙酸酯（8·65 Kg，17.7 mol)及二氣曱烷（130 L)饋入一玻璃反應器中。隨 後，在32-3 5°C下在常壓下蒸餾40 L之二氣曱烷且使溶液達 到20-25°C。以40 L之二氯曱烷置換該體積且在32-35°C下 洗提相同體積，將混合物冷卻至20-25°C。將碳酸鈉（8.65 Kg)添加至反應器中且在5分鐘内攪拌所得混合物。隨後添 加烯丙基溴（4.28 1(^)。在32-3 5。(：下將所得懸浮液攪拌24 小時。隨後將混合物冷卻至室溫（2〇_25°C )且在真空下過濾 以移除鹽，其係用二氣甲烷（8·65 L)沖洗。保持溫度低於 20°C在真空下移除溶劑混合物。以二氣甲烷（45 L)溶解獲 得之油狀產物且保持溫度低於別它在真空下濃縮；將此程 序重複兩次。在室溫下在氮氣氛下再次將殘餘物溶解於二 氯甲烷（86.5 L)中，且添加氧化鋁（4·32 Kg)，在2〇_22。〇下 在30分鐘内攪拌所得混合物且隨後過濾。在連續攪拌下， 114649.doc •48- 200804409 將溶液緩慢添加至含有二乙醚（452 L)之玻璃反應器中。將 所得懸浮液攪拌30分鐘且在氮氣氛下過濾。在35艺下將所 得固體乾燥至少5天以得到9.70 Kg(0.016 mol, 112.13% w/w產率，89.88%莫耳產率）之灰白色固體，其具有99.9面 積％(根據HPLC)之純度，且含有〇」面積％(根據HPLC)之雜 質A及0.1面積％(根據HPLC)之雜質B。 實例26 :比較性實例·•根據美國專利第4,894,369號之實例 7，製備化合物VIII 2P-(4_嗎啉基）_16ρ_(ι_吡咯啶基卜5α_ 雄甾烷-3α，17β-二醇17-乙酸酯 將乙醯基氣（0.179 mL)添加至化合物vil(1.0 g)於二氣甲 烷（40 mL)之溶液中且在室温下保持反應29小時（在反應過 程中進行TLC分析）。減壓下移除溶劑，且將殘餘物溶於二 氯甲烷（19.4 mL)中。將溶液以5%之碳酸鈉溶液（20 mL)及 水（2x20 mL)洗滌、乾燥（Na2S04)且蒸發至乾燥以產生膠狀 物（1.18 g)。粗產物展示含有純度為81.56面積％之化合物 VIII、5.1 6面積％之量之化合物VII起始二醇及ΐΐ·93面積％ 之量之化合物IX二乙酸酯雜質的HPLC分佈。 實例27 :比較性實例：根據美國專利第4,894,369號之實例 1，製備化合物 IV (2〇1，3〇1，5〇〇，160，170)-2,3_環氧基-16-(1-吡 咯啶基）雄留烷-17-醇 在室溫下向化合物111(10 g)於甲醇（1〇〇 mL)中之懸浮液 中添加氫氧化鈉溶液（10 mL ; 4 N)。在回流下將反應混合 物加熱30分鐘。隨後將反應混合物冷卻至4〇°C且添加吡咯 11定（1 5 mL)。在回流下將反應混合物加熱15分鐘。將反應 114649.doc -49- 200804409 /a a物冷卻至1 〇 ◦且隨後添加删氫化納（2 g)。將反應混合 物加熱至室溫且攪拌兩小時。添加水（2〇〇 mL)且將所得^ 體過濾出並以水洗滌（3xl〇〇 mL)。在真空下將固體乾燥隔 夜以得到白色產物（9.6 g)，其具有HPLC純度為··化合物 IV(75.12面積％)、化合物IV_a(n62面積％)及化合物…-M4.89 面積 ％)。 粗產物自丙酮（250 mL)結晶，得到5.3 g之白色固體，其 具有HPLC純度為：化合物ιν(92·2〇面積％)、化合物…一 a(2· 13面積％)及化合物1^|3(〇.82面積％)。 實例28·製備化合物iv 2α，3α-環氧基-吡咯啶基）_ 5α-雄留烷-Ι7β-醇 步驟（a):合成 在20-22 C下’在擾動下，將1〇 g之2α，3α，16α17-雙環氧 基- 5a-雄甾烷-17β-醇乙酸酯（28.86莫耳）溶解於1〇〇 ml甲醇 中。隨後添加8 ml氫氧化鈉4 N(32莫耳）。隨後將混合物溫 至回流且在回流溫度下保持30分鐘。隨後將混合物冷卻至 35°C且添加4.8 ml之吡咯啶（57.37莫耳）。隨後，再次將混 合物加熱至回流且在回流下保持2小時。隨後將混合物冷 卻至3(TC、傾入一含有600 ml冷水（3-6。〇之燒瓶中。以20 ml甲醇洗滌反應燒瓶，隨後將其傾入反應混合物已傾入其 中之燒瓶中。隨後在3-6°C下，伴以攪拌將混合物保持40 分鐘。隨後藉由過濾收集所得固體且以40 ml冷水洗滌。 隨後在過濾器上將固體抽吸乾燥至少12小時且將濕固體用 於下個步驟中。獲得：9.5 g之具有86:14比率之VI-a之濕 114649.doc •50- 200804409 VI混合物。 步驟（b):異構體平衡 將步驟（a)中獲得之9·5 g之VI與νΐ-a之濕固體混合物懸浮 於47.5 ml甲醇（5體積）中，隨後將混合物加熱至回流溫度 且在回流下保持20分鐘。隨後歷經約9〇分鐘之時期緩慢添 力口 142.5 ml水（15體積），在添加過程中容許回流溫度升 面。其後’在回流溫度下伴以攪拌將混合物另外保持3〇分 鐘。隨後將混合物冷卻至〇-5°C歷經約45分鐘之時期。隨 後藉由過濾收集固體且以3 8 ml水洗務。在抽吸下將固體 保持在過濾器上12小時且隨後用於下個步驟中。獲得： 8·8 g之98.2:1.8之富集異構體比率之vi。

步驟（c):還原為IV 在一燒瓶中’在氮氣氛下，裝填8.8 g之VI(富集異構體 比率）、88 ml甲醇（10體積）及44 ml二氯甲烷（5體積）。隨後 在20-25 C下攪拌混合物直至達到完全溶解。將所得溶液 冷卻至0-5°C且隨後歷經約10分鐘之時期逐份添加17〇 §硼 氫化鈉（45莫耳）。隨後歷經約90分鐘之時期將所得混合物 溫至20-25°C且伴以攪拌另外保持60分鐘。 隨後在真空下在小於或等於40°C之内部溫度下蒸餾出一 些/谷剤，直至達到79·2 ml之殘餘體積。隨後將35·2以甲 醇添加至混合物中。隨後在真空下蒸餾出溶劑，直至達到 79.2 ml之殘餘體積。隨後將混合物溫至乃艺且在攪動下添 加352 ml除礦質水歷經約！小時之時期。隨後將所得懸浮 液冷卻至·2/+2ΐ歷經至少30分鐘之時期，且在攪動下在此 114649.doc -51 - 200804409 溫度下將懸浮液另外保持90分鐘。隨後藉由過濾收集固體 且以35 ml除礦質水洗滌濾餅。乾燥（16小時，4〇。〇，在真 空下）後，獲得8.3§之卩（產率80.6%)。此樣品展示0.83% 之 IV-a ; 0.49% 之 IV-b ; 1.91% 之 iv_c ;未知總量 3·3〇/〇。 步驟（d):最終純化 在氮下，將來自步驟（c)之8.3 g之IV裝填入一燒瓶中且 添加104 ml二氣曱烷。隨後將混合物加熱至3〇它直至達到 完全溶解。隨後將7.0 ml之〇·01 M HC1添加至混合物中且 將混合物攪拌30分鐘以完成萃取。將水層自所得兩相系統 分離且丟棄。以2.4 ml之O.i M HC1洗滌有機層，且將水層 分離且丟棄。隨後以2.5 ml水洗滌有機層，且將水層分離 且丟棄。隨後將有機層加熱至回流溫度，且自該有機層蒸 餾約ml之溶劑歷經約i小時之時期。隨後添加ι〇4…甲 醇。隨後將溶液加熱至回流溫度且蒸餾出約59 ml溶劑歷 經約i小時之時期。隨後，當將溫度保持為約5〇。〇時，= 加33 ml除礦質水歷經約15分鐘之時期。隨後將所得不透 明溶液冷卻至25°(：歷經約！小時之時期。隨後將溶液冷卻 至〇/-2°C歷經約1小時之時期且在此溫度下保持6()分鐘。隨 後藉由過濾收集固體且以33 ml除礦質水洗滌。在4〇。〇下在 真空下將產物乾燥16小時後，獲得8 〇 ^^IV(IV_a 〇 ι〇% ; IV-b 0·10% ; IV-c 〇.58%)，產率為78%。 化口物VI 2α，3α-ί衣氧基比咯啶基）_5α·雄甾炫^ _ 17_酮及化合物VI_a 2α，3α_環氧基_16α _(卜叫咬基）巧心雄 留烷-17-S同與化合物νι 2α，3α_環氧基七叩^比咯啶基）· 114649.doc -52- 200804409 5α-雄甾烷-17-酮之平衡反應混合物之分析。HPLC條件如 下。柱及填料為 X Terra MS C18 ; 5 μιη，250 mm><4.6 mm 目錄號18600494或等同物。溶離劑A為水且溶離劑B為 100:l(v/v)之甲醇：NH4OH。溶離劑之組成為A:B 20:80(ν/ν)。停止時間為20分鐘，流動速率為每分鐘0.8 ml，偵測器為210 nm之UV，柱溫度為30°C，且注入體積 為 20 μΐ 〇 化合物IV 2α，3α-環氧基-16β-(1-吡咯啶基）-5α·雄甾烷-17β-醇之分析係以一柱及填料X Terra MS C18 ; 5 μιη，250 mmx4.6 mm目錄號18600094或等同物進行。溶離劑Α為水 且溶離劑B為曱醇（NH4OH，28%)100:l(v/v)。組成為A:B 20:8 0(v/v)。停止時間為45分鐘，流動速率為每分鐘0.8 mL，偵測器為210 nm之UV，柱溫度為30°C，且注入體積 為 10 μΐ 〇 化合物VII 2β-(4-嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶基）-5α-雄留烷-3α，17β-二醇之分析係以一柱及填料X Terra MS C18 ; 5 μιη，25 0 mmx4.6 mm目錄號18600494或等同物進行。溶離 劑A為水且溶離劑B為100:l(v/v)之甲醇：NH4OH，組成為 A:B 20:80(v/v)。停止時間為45分鐘，流動速率為每分鐘 0.8 mL，偵測器為210 nm之UV，柱溫度為30°C，且注入體 積為20 μΐ。 化合物VIII 2β-(4_嗎啉基）-16β-(1-吡咯啶基）-5α-雄甾烷-3 α，17 β-二醇1 7-乙酸酉旨之分析係以一柱及填料Hyper si 1石夕 石；5 μιη，25 0 mmx4.6 mm 目錄號 30005-254630或等同物 114649.doc -53 - 200804409 進行。溶劑A為四曱基氳氧化銨之緩衝液，溶離劑b為乙 腈，且組成為Α··Β 25:75。停止時間為20分鐘，流動速率為 每分鐘1.0 mL，偵測器為210 nm之UV，柱溫度為30°C，且 注入體積為10 μΐ。 化合物I羅庫溴錢之分析係以一柱及填料Hypersil；g夕石； 5 μηι，250 mmx4.6 mm 目錄號 30005-254630 或等同物進 行。溶離劑A為四甲基氫氧化銨緩衝液，〇·〇5 μ，pH值 7 · 4 ’ /谷離劑B為乙腈’且組成為1 q : 9 〇之a : B。停止時間為 25分知’流動速率為每分鐘2 〇 mL，偵測器為21〇 nm之 UV ’柱溫度為30°C，且注入體積為5 μΐ。 實例29 :參考實例：化合物VI轉變為化合物IV(美國專利 第4,894,369號之實例1) 將氫氧化鈉溶液（150 ml ; 4 Ν)添加至（2α，3α，5α， 160，17〇〇-2,3，16，17-雙環氧基-雄甾烷-17_醇乙酸酯（15〇8) 於甲醇（1_5 1)中之懸浮液中且在回流下將混合物加熱3〇分 鐘。當溶液已冷卻至約40°C後，添加ti比洛咬（225 ml)且在 回流下將溶液另外加熱15分鐘。借助於冰浴將溶液冷卻至 約10°C，且在攪拌下逐份添加硼氫化鈉（3〇 g)，保持溫度 低於20°C。在室溫下將溶液攪拌2小時，隨後添加水（3丨）以 使產物沉澱，將其過濾出且以水（3次之1丨）洗滌。將粗固 體於二氯甲烷（1 1)中之溶液以水（2次之1 1)洗滌中和、乾燥 (NazSCU)且蒸發至乾燥。所得白色固體自丙鲷結晶得到 (2〇1,3〇1,5〇^160,170)-2,3-環氧基-16-(1-口比口各淀基）_雄<邊烧_ 17-醇（85.2 g)，熔點 156。-160。(： ； [a]D20+33_6。（於 CHC13 中 c 114649.doc -54- 200804409 1.05)。 實例30 :參考實例：化合物IV轉變為化合物νπ(美國專利 第4,894,369號之實例3) 將水（50 ml)添加至（2α，3α，5α，16β，17β)2,3-環氧基-16-(1- 。比咯啶基）-雄甾烷-17-醇（85·2 g)於嗎啉（500 ml)中之溶液 中且將反應混合物在回流溫度下加熱3天。蒸發反應混合 物得到粗產物，將其自丙酮結晶。自甲醇再結晶得到純 (20，3〇1，5〇1，160，170)-2(4-嗎琳基）-16-(1-口比口各咬基）-雄留燒_ 3，17-二醇（71.2 g)，熔點 212°-219°C ; [a]D2()=+87.9。（於 CHC13 中 c 1.02) 〇 實例31 :參考實例··化合物VII轉變為化合物νΠΙ(美國專 利第4,894,369號之實例7) 將乙醯基氣（9.63 ml)添加至（2β，3α，5α，16β，17β)_2·(4^Ι| 啉基）_16-(1-吡咯啶基）-雄留烷_3,17-二醇（53· 5 g)於二氣甲 烧（2· 14 1)中之溶液中且在室溫下將反應保持18小時。減壓 下移除溶劑且將殘餘物溶於二氣曱烷（5〇〇 ml)中。將溶液 以5%碳酸鈉溶液（500 ml)及水（2次500 ml)洗滌、乾燥 (NazSO4)且蒸發至乾燥以得到膠狀物（59·9 g)，使其經氧化 銘（Fluka型5016A)(50 g)層析。物質自純溶離份、自二乙 醚-正己烷結晶得到（20，3〇1，5〇1，160，170)-2-(4-嗎啉基）-16_(1· 吼咯啶基）-雄甾烷-3，17-二醇17-乙酸酯（28_(^)，熔點149。_ 153°C。[a]D20=+54.0。（於 CHC13 中 c 1·03)。 實例32 :參考實例：化合物VIII轉變為化合物丨（美國專利 第4,894,369號之實例23) 114649.doc -55- 200804409 將 2-丙烯基溴（ι·95 ml)添加至（2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4^| 琳基M6(l-啦咯啶基）_雄留烷-3，17-二醇I?·乙酸酯（1·35 於二氣甲烧（27 ml)中之溶液中且在室溫下將該溶液密封於 一壓力觀中22小時。伴以最小之加熱在減壓下移除溶劑且 使粗固體（1.59 g)經氧化鋁層析（Flukas5〇16A)。將純溶離 份組合、溶於二氯甲烷（15 ml)中，且添加二乙醚（1〇〇 以沉澱純1-[(2β，3α，5α，16β，17β)-17-乙醯基氧基-3-羥基-2- (4-嗎啉基）-雄留烷_16-基丙烯基）_吡咯錠溴（114 【圖式簡單說明】 圖1說明化合物VI 2α，3α-環氧基-16β_(1-吡咯啶基）-5心雄 甾烷-17-酮之X射線繞射圖案。 圖2說明化合物VI 2〇1，3〇1-環氧基-160-(1-吡咯啶基）-5〇1-雄 甾烷_17_酮之DSC曲線。 圖3說明化合物\^12〇1，3〇1-環氧基-160-(1-吡咯啶基）-5〇1-雄 甾烷-17-酮之TGA曲線。 圖4說明化合物\^12〇1，3€1-環氧基-160-(1-11比洛啶基）-5〇1-雄 甾烷-17-酮之1H-NMR光譜。 圖5說明化合物VI 2α，3α-環氧基-16β-(1-吡咯啶基）-5α-雄 甾烷-17-酮之13C-NMR光譜。 圖6說明化合物VI 2α，3α-環氧基-16β_(1_吡咯啶基）-5α-雄 甾烷-17-酮之MS光譜。 圖7說明化合物¥12〇1，3〇1-環氧基-160-(1-11比洛11定基）-5〇^雄 甾烷-17-酮之IR光譜。 114649.doc -56-

Claims (1)

1. 200804409 十、申請專利範圍： 1 · 一種用於製備式I之四級銨鹽羅庫溴銨之方法，‘

   其包含： (a) 將含有約10面積％至約40面積％(根據HPLC)之化合物 VI - a的起始化合物v ：[與可與水混溶之有機溶劑組合以 獲得懸浮液； (b) 在約55°C至約80°C之溫度下攪拌該懸浮液以獲得混合 物； 0)將水添加至該混合物； (d) 自該混合物分離化合物¥1，其中該經分離之化合物νι 具有少於約10面積％(根據HPLC)之化合物vi_a ; (e) 形成具有少於約10%之化合物VI-a的化合物vi盘視情 況與不可與水混溶之有機溶劑組合之可與水混溶之有 機溶劑的溶液； (f) 在約-15°C至約l〇°C之溫度下將至少一還原劑添加至 該溶液中以獲得混合物； (g) 在約20°C至約24°C之溫度下攪拌該混合物； (h) 自具有至少85面積％(根據HPLC)之純度之該混合物分 離化合物IV ; ⑴形成化合物IV、嗎琳及至少一酸催化劑之懸浮液； (j)在約100°C至約回流之溫度下將該懸浮液攪拌約24小 114649.doc 200804409 時至約48小時； (k) 自該懸浮液分離化合物γη ; (l) 將化合物νπ、極性有機溶劑及至少一醢化試劑與呈 少一鹼組合以獲得混合物； (m) 自該混合物分離化合物νιπ ; ⑻將化合物VIII、極性非f子性有機溶劑、烯丙基漠及 至少一無機鹼組合以獲得混合物；及 (〇)分離羅庫溴銨。 2. —種經分離之以下結構之化合物νι 2α，3α_環氧基_ι6β_ (1-吡洛啶基）-5α-雄甾烧-17-酮

   3·如請求項2之化合物，其特徵為選自以下資料之資料： 在約 218.3、69、53.9、52.2、51.9、50.8、47.5、46.9、 38.1、 36.2、34.4、33.8、31.9、30.6、28.9、28、26.6、 23.2、 20、13.9及12.9 ppm處具有碳化學位移之"C_NMR 光譜；大體上如圖5中所描述之I3c-NMR光譜；在約 3.17-3.09、2.92、2.79、2.64、2.1、1.95-0.66、0.9 及 〇·75 ppm處具有氫化學位移之光譜；大體上如圖 4中所描述之1h_NMR光譜；在約358.2處具有MH+峰之質 譜（FAB(+)，m/z);大體上如圖6中所描述之質譜；在約 1736、3452及1157 cm·1處具有峰之IR光譜；及大體上如 114649.doc -2- 200804409 圖7中所描述之IR光譜。 4· 一種結晶化合物VI，2α，3α-環氧基-16β-(1_吡咯啶基）-5α-雄甾燒-17 - _。 月求項4之結晶2α，3α-ί^氧基-160-(1-11比嘻σ定基）-5α-雄 留烧~17_酮，其特徵為在10.3、14.8、17.5、18.4及19度 (2Θ)± (^丨度^”處之粉末X射線繞射峰。 6·如凊求項5之結晶2α，3α-環氧基-16β-(1-吡咯啶基）-5α-雄 留烧-17-酮，其特徵進一步為選自由以下資料組成之群 之負料：在約1〇.9、2〇.7、22、24.1、25.9及27度（20)士 0·1度（2Θ)處之粉末X射線繞射峰；大體上如圖1中所描述 之粉末X射線繞射；如由TGA分析測定之約〇.2重量％之 重量損失；大體上如圖3中所描述之TGA曲線；具有在 約35 C至約122°C處之第一寬吸熱峰及在約146。〇處之第 二吸熱峰之DSC ;大體上如圖2中所描述之DSC曲線，及 約155°C之熔點。 7. 一種增大化合物VI與化合物vi-a之異構比之方法，其包 含： Ο)將含有約10面積％至約4〇面積％(根據HPLC)之化合物 VI-a的起始化合物VI與可與水混溶之有機溶劑組合以獲 得懸浮液， (b) 在約55°C至約80。(：之溫度下攪拌該懸浮液以獲得混合 物； (c) 將水添加至該混合物中；及 (d) 自該混合物分離化合物VI ; 114649.doc 200804409 其中該經分離之化合物v!含有少於約丨〇面積％ (根據 HPLC)之化合物vi-a

   8. 9. 10 11 12. 13. 14. 15. 16. 如請求項！及7中任-項之方法’其中該起始化合物以含 有約1 〇面積％至約3 〇面積％(根據HPLC)之化合物vi_a。 如明求項8之方法，其中該起始化合物VI含有約ι〇面積％ 至約20面積％(根據HPLC)之化合物vi-a。 如請求項8之方法，其中該起始化合物VI含有約12面積％ 至約18面積％(根據jjPLC)之化合物VI_a。 如請求項1及7中任一項之方法’其中該經分離之化合物 VI含有少於10面積％(根據HPLC)之化合物VI_a。 如請求項8之方法，其中該經分離之化合物…含有少於 約5面積。/〇(根據hplC)之化合物VI-a。 合物VI含有少於 可與水混溶之有 如請求項12之方法，其中該經分離之化 2面積％(根據HPLC)之化合物VI-a。 如請求項1及7中任一項之方法，其中該 機溶劑為C〗-4醇。 如明求項14之方法，其中該。^4醇為甲醇、乙醇 醇、異丙醇或丁醇及其混合物。 如請求項15之方法，其中該Cl-4醇為甲醇。 114649.doc 200804409 17·如請求項1及7中任一頂夕古 項之方法，其中在步驟b中之該縣 浮液係在約50。(：至約7〇。 Y之忑〜 υ，凰度下經受攪拌。 18.如請求項1及7中任一項之方 直 添加係以逐滴方式進行。 在^中該水之 19·如請求項1及7中任一項之方 η — 項之方法其中該水之添加係在同 時保持該溶液在高於的它之溫度下進行。 20·如#求項1及7中任_項之方法’其中該水係以該可與水 混溶之有機溶劑之體積的約3至約4倍體積之量添加。 21•如請求項7之方法，其中將具有少於約h面積％(根據 HPLC)之化合物Vl_a的該經分離之式…之化合物轉變為 羅庫溴銨。 2 2 · —種用於製備化合物iv之方法：

   〇 IV. 其包含： (a) 形成化合物VI與視情況可與不可與水混溶之有機 溶劑組合之可與水混溶之有機溶劑的溶液； (b) 在約-15 C至約5°C之溫度下將至少一還原劑添加至 該溶液中以獲得混合物； (c) 在約2〇t至約24°C之溫度下攪拌該混合物，·及 (d) 自具有至少85面積％(根據HpLC)之純度之該混合物 114649.doc 200804409 分離化合物ιν。 23 ·如請求項1及7中任一項之方法，其中該經分離之化合物 IV含有選自由化合物IV_a、

   化合物IV-b

   化合物IV-c

   及其混合物組成之群之雜質。 24. 如請求項23之方法，其中化合物IV-a係以少於約2面積 %(根據HPLC)之量存在。 25. 如請求項23之方法，其中化合物IV-a係以約1面積％至約 2面積％(根據HPLC)之量存在。 26. 如請求項23之方法，其中化合物IV-b係以少於約1面積 %(根據HPLC)之量存在。 27. 如請求項23之方法，其中化合物IV不含化合物IV-c。 114649.doc -6- 200804409 如明求項1及7中任一項之方法，其中用作起始物質之該 化合物VI具有少於約10面積％(根據HPLC)之化合物νΐ-a， 且4獲侍之化合物IV含有少於約2面積％(根據HPLC)之 化口物1¥义、少於約1面積❶（根據HPLC)之化合物IV-b且 不含化合物IV_C。 29·如μ求項1及7中任一項之方法 機溶劑為直鏈或支鏈Cl-5醇。 其中該可與水混溶之有

   30·如請求項29之方法，其中該CV5醇為Ci 3。 31.如請求項30之方法’其中該^醇為甲醇 醇0 乙醇或異丙 32. 如請求項31之方法’其中該〇13醇為甲醇。 33. 如請求項！及7中任一項之方法，其 至約-rc之溫度下添加。 、心原劑係在約0°C 34·如請求項i & 7中任一項之方法，其 … 屬錯合物。 還原劑為氫化金 35·如請求項34之方法，其中該氫化金 屬錯合物。 3 σ物為氫化鹼金 36·如請求項35之方法，其中該氫化鹼金屬錯入 納、硼氫化鉀或三曱氧基硼氫化納。 〇物為硼氫 化 37·如請求項36之方法，其中該氫 納0 化驗金屬 錯合物 為爛氫化 3 8·如請求項22之方法，其進一步包含 月等具^有 %(根據HPLC)之純度之化合物1乂轉#炎 足少85面積 I為羅庫、、皇 39· —種用於製備化合物VII之方法， 戌銨。 114649.doc 200804409

   其包含： (a) 形成化合物IV、嗎淋及至少一酸催化劑之懸浮液； (b) 在約100°C至約回流之溫度下將該懸浮液攪拌約24 小時至約48小時；及 (c) 自該懸浮液分離化合物VII。 40·如請求項1及39中任一項之方法，其中該嗎啉係為水溶 液之形式。 4 1 ·如請求項1及39中任一項之方法，其中該催化劑係選自 由無機酸、有機酸及路易斯酸組成之群。 42.如請求項4 1之方法，其中該有機酸為對甲苯磺酸、甲磺 酸、三氯乙酸或三氟乙酸。 43·如請求項41之方法，其中該無機酸為硫酸或鹽酸。 44. 如請求項41之方法，其中該路易斯酸為Aici3、zncu、 BF3 ^ SnCl4 ^ TiCl4 > AgC104 > Zn(〇Ao)2^ FeCl3 〇 45. 如請求項44之方法，其中該路易斯酸為乙酸辞或氯化 46_如請求項41之方法，其中該催化劑為對甲苯續酸。 4 7 ·如δ青求項1及3 9中任一頂夕古、t "、士…、 項之方法，其中在請求項1之步驟 (J)中及在睛求項39之步驟（b)中夕+ μ - )中之该懸洋液係在約1 〇〇。〇 114649.doc 200804409 至約110°C之溫度下經受攪拌。 48.如請求項21之方法，其進一步包含將化合物VII轉變為羅 庫溴銨。 49· 一種用於製備化合物VIII之方法，

   其包含： (a) 將化合物VII、極性有機溶劑及至少一醯化試劑與至 少一鹼混合以獲得混合物；及 (b) 自該混合物分離化合物VIII。 50·如請求項1及49中任一項之方法，其中該經分離之化合 物VIII含有選自由化合物VII、

   化合物IX

   及其混合物組成之群之雜質。 114649.doc 200804409 5 1·如請求項50之方法，其中化合物νπ係以不大於約17面 積％(根據HPLC)之量存在。 52·如請求項51之方法，其中化合物νΠ係以約〇·2面積％至 約1.24面積％(根據HPLC)之量存在。 53·如請求項5〇之方法，其中化合物ιχ係以不大於約7面積 %(根據HPLC)之量存在。 54·如請求項53之方法，其申化合物ιχ係以約工面積％至約 5·2面積％(根據HPLC)之量存在。

   55·如凊求項5〇之方法，其中化合物νιι係藉由如請求項w之 方法或藉由任何其他方法獲得。 如明求項1及49中任一項之方法，其中該極性非質子性 一、合J係選自由酮、酯、醚、醯胺、硝基甲烷及鹵化 fe組成之群。 57·如吻求項56之方法，其中該酮為匸3_6酮。 5 8 ·如請求項5 7 方去’其中該酮為丙酮或甲基異丁基 59·如請求項56之方法 6〇·如請求項59之方法 丁酉旨。 61·如請求項56之方法 62·如請求項61之方法 63·如請求項56之方法 64.如請求項63之方法 胺0 其中該S旨為C4-6S旨。 其中該C：4·6酯為乙酸乙酯或乙酸異 其中該醚為C3-4環狀醚。 其中該C%4環狀鱗為四氫咬喃。 其中該醯胺為c3_4醯胺。 其中該C3·4醢胺為n，n_二甲基甲醯 114649.doc 200804409 65. 66. 67. 68. 69. 70. 71. 72. 73. 74. 75. 76. 77. 78. 79. 項56之方法，其中該鹵化烴為化烴。 "月求項6 5之方法，苴中兮Γ ^ 氯乙烷。 八中忒Cl·2鹵化烴為二氯甲烷或二 其中該極性非質子性有機溶劑為二 如請求項56之方法， 氣甲燒。 ;、項1及49中任一項之方法，其中該醯化試劑係選 主乙醯基化醋、酐及酯組成之群。 」:、員68之方法，其中該乙醯基鹵為乙醯基氯。 ，員68之方法，其中該鹵化酯為Ac〇c c AcOCH2CF3 ο 如明求項68之方法，其中該酐為混合酐或乙酸酐。 如：求項68之方法，其中該醋為乙酸異丙烯g旨。 月求項68之方法，其中該醯化試劑為乙醯基氯或乙酸 野〇 如请求項1及49中任-項之方法，其中該驗為有機驗。 月求項74之方法，其中該有機驗係選自由脂族胺及芳 族胺組成之群。 如請求項75之方法，其中該脂族胺為三乙胺、二乙基異 丙基胺、三正丙胺或三丁胺。 如請求項75之方法，其中該芳族胺為扣二甲基胺基吡 如請求項1及49中任一項之方法，其中該鹼為無機鹼。 如明求項78之方法，其中該無機鹼係選自由鹼性鹼及鋁 鹼組成之群。 114649.doc -11- 200804409 其中《亥驗性驗為碳酸納或碳酸氫 80.如請求項79之方法 鈉0 81. 82. 如請求項79之方法， 如請求項1及49中任 吡啶或碳酸鈉。 其中該銘驗為氧化銘。 一項之方法，其中該鹼為三乙胺 83. 如請求項1及49中任—項之方法，其中在請求項1之步驟 ⑴中及請求項49之步驟⑷中之該混合物係在約吖至約 60°C之溫度下經受授拌。 、 84.如請求们及的中任一項之方法，其中在請求们之步驟 ⑴中及請求項49之步驟⑷中之該混合物係_拌約12小 時至約22小時。 85. 如請求項⑽中任一項之方法，其進一步包含在將化 合物VIII分離後，藉由自含水乙腈及二氣曱燒之混合物 中結晶來純化化合物VIH。 86. 如請求項85之方法，其中含水乙腈含有體積％至約$ 體積％之水。 87. 如請求項86之方法，其中含水乙腈含有約1體積％至約 1.25體積％之水。 88·如請求項85之方法，其中化合物VIII含有選自由化合物 VII、化合物IX及其混合物組成之群之雜質。 89·如請求項88之方法，其中化合物VII係以不大於〇.3面積 %(根據HPLC)之量存在。 90·如請求項89之方法，其中化合物νπ係以約〇1面積。/〇至 〇.3面積％(根據只？1^(：)之化合物\^11之量存在。 114649.doc -12- 200804409 91. 如睛求項88之方法，其中化合物Ιχ係以不大於i面積 %(根據HPLC)之量存在。 92. 如請求項91之方法，其中化合物IX係以約0.5面積％(根 據HPLC)之化合物IX之量存在。 93· —種自化合物VIII製備羅庫溴銨之方法，其包含·· (a) 將化合物Vin、極性非質子性有機溶劑、烯丙基溴 及至少一無機鹼組合以獲得混合物；及 (b) 分離羅庫溴銨。 94. 如請求項1及93中任一項之方法，其中該極性非質子性 有機溶劑係選自由_化烴、酯及酮組成之群。 95. 如請求項94之方法，其中該齒化烴為鹵化烴。 96. 如咕求項94之方法，其中該cK：2鹵化烴為二氯甲燒。 97. 如請求項94之方法，其中該酯為乙酸乙酯。 98·如請求項94之方法，其中該酮為c3-4酮。 99. 如請求項94之方法，其中該c3_4酮為丙酮。 100. 如請求項1及93中任一項之方法，其中該極性非質子性 有機溶劑為二氣甲烷。 101·如請求項1及93中任一項之方法，其中該烯丙基溴係以 每莫耳化合物VIII約1.3至約3莫耳當量之量存在。 102·如請求項1及93中任一項之方法，其中在請求項1之步驟 (η)中及請求項93之步驟（a)中獲得的該混合物具有藉由卡 耳費雪法（Karl Fischer)測定之少於約〇 1%之水含量。 103·如請求項1及93中任一項之方法，其中該無機鹼係選自 由驗性驗及銘驗組成之群。 114649.doc -13- 200804409 104. 如請求項1 〇3之方法 甘士斗 ’/、中該驗性驗為碳酸納、碳酸藎 鈉或碳酸鉀。 105. 如請求項1〇3之方法，其中該鋁鹼為氧化鋁。 106. 如明求項103之方法，其中該無機驗為碳酸納。 107·如請求項1及93中任 二 〒任項之方法，其中在分離羅庫溴銨 之前，請求項1之步驟⑷中及請求項93之步驟㈨中的 混合物係在約15°C至約40°C之溫度下經受攪拌。 ⑽·如請求項⑽中任一項之方法，其中在分離羅庫填十 之前，將請求項1之步驟（n)中及請求項93之步驟化）中々 該混合物保持約20小時至約24小時。 的 109.如請求項1及93中任一項之方法，其中之粗羅庫填浐 係藉由包括以下步驟之方法純化： ' ' a) 將該粗羅庫溴銨溶解於極性非質子性有機溶劑中· b) 添加視情況與驗組合之脫色劑； c) 過濾； d) 將反溶劑添加至該濾液中； e) 在約840 rpm至1000 rpm下攪拌以獲得懸浮液； f) 回收羅庫溴銨之濕固體；及 g) 在不尚於約3 5 °C之溫度下乾燥該濕羅庫漠銨。 114649.doc -14 -