TARIFNAME PEPTIT KONJUGATLI PARTIKÜLLER ÖNCEKI TEKNIK Inflamatuvar hastalllgar ve bozukluklar, bir anormal veya baska bir sekilde deregüle inflamatuvar yan-IE, hastalik] etiyolojisine veya siddetine katki bulundugu kosullardlü Örnekler, tip 1 diyabet ve Çölyak hastallgllîgiibi otoimmün hastalllZlarEiÇermektedir. Bu hastalllglar aras-an birçogu, doku hasarEbölgesinde veya bir baska travma bölgesinde bir mononükleer hücre infiltrasyonu ile karakterize edilmektedir. Bu infiltrasyonlarda gözlemlenmis mononükleer hücrelerin örnekleri, lenfositleri, özellikle T lenfositleri ve monositler, makrofajlar, dendritik hücreler, mikroglial hücreler ve digerleri gibi mononükleer fagosit sisteminin hücrelerini (MPS hücrelerini) içermektedir. Mononükleer hücre infiltraltarIa gözlemlenen birçok hücrenin, bu anormal inflamatuvar yanlflhrda bir role sahip oldugundan süphelenilmektedir. Örnegin, multipl skleroz gibi hastalllZlarda, CD4+ T hücrelerinin, patolojik otoimmün yan-a bir merkezi rol oynad[gll:| bilinmektedir. T hücresi aktivasyonunda bir önceki süre noktasIda, dendritik hücreler ve diger MPS hücreleri, CD4+ T hücrelerinin aktivasyonundan sorumlu olabilmektedir. En azlEL'lan bazünflamatuvar hastalllîlarda, bu tarz hücrelerin, CD4* T hücrelerinin yoklugunda bunu gerçeklestirip gerçeklestirmeyecegi ne olmamalea ragmen, MPS hücreleri ayrlEla fagositoz vaslßslîzla inflamasyona katki bulunabilmistir. Periferik kan monositleri, ekspresyona göre iki grup arasIan birisine sIEflandBllâbilmektedir veya belirli hücre yüzeyi moleküllerine sIlflhndlEIlüîamaktadEI Belirgin olarak, insan "yerlesik monositlerin" veya "olgun monositlerin", bir CD14'°CD16+ fenotipine sahip oldugu anlasllüîaktadEÜare karslllglüCX3CR1hICCR2`Gr1"dir). Bir diger hücre grubu, "inflamatuvar monositler" veya "olgun olmayan monositlerin" bir CD14+CD16` fenotipine sahip oldugu anlasUBiaktadlElÜare karslElglüCX3CR1'°CCR2+Gr1+'d[3. (Geissmann F. ve meslektaslarEEOO3 Önemli ölçüde, sonrakinin kemik iligi türevi periferik kan hücrelerinden inflame dokuya geçtiginin gözlemlendigi alg. "inflamatuvar" oldugu anlaslIJIlken, bu hücrelerin, dogrudan TARIFNAME PEPTIT KONJUGATLI PARTIKÜLLER ÖNCEKI TEKNIK Inflamatuvar hastalllgar ve bozukluklar, bir anormal veya baska bir sekilde deregüle inflamatuvar yan-IE, hastalik] etiyolojisine veya siddetine katki bulundugu kosullardlü Örnekler, tip 1 diyabet ve Çölyak hastallgllîgiibi otoimmün hastalllZlarEiÇermektedir. Bu hastalllglar aras-an birçogu, doku hasarEbölgesinde veya bir baska travma bölgesinde bir mononükleer hücre infiltrasyonu ile karakterize edilmektedir. Bu infiltrasyonlarda gözlemlenmis mononükleer hücrelerin örnekleri, lenfositleri, özellikle T lenfositleri ve monositler, makrofajlar, dendritik hücreler, mikroglial hücreler ve digerleri gibi mononükleer fagosit sisteminin hücrelerini (MPS hücrelerini) içermektedir. Mononükleer hücre infiltraltarIa gözlemlenen birçok hücrenin, bu anormal inflamatuvar yanlflhrda bir role sahip oldugundan süphelenilmektedir. Örnegin, multipl skleroz gibi hastalllZlarda, CD4+ T hücrelerinin, patolojik otoimmün yan-a bir merkezi rol oynad[gll:| bilinmektedir. T hücresi aktivasyonunda bir önceki süre noktasIda, dendritik hücreler ve diger MPS hücreleri, CD4+ T hücrelerinin aktivasyonundan sorumlu olabilmektedir. En azlEL'lan bazünflamatuvar hastalllîlarda, bu tarz hücrelerin, CD4* T hücrelerinin yoklugunda bunu gerçeklestirip gerçeklestirmeyecegi ne olmamalea ragmen, MPS hücreleri ayrlEla fagositoz vaslßslîzla inflamasyona katki bulunabilmistir. Periferik kan monositleri, ekspresyona göre iki grup arasIan birisine sIEflandBllâbilmektedir veya belirli hücre yüzeyi moleküllerine sIlflhndlEIlüîamaktadEI Belirgin olarak, insan "yerlesik monositlerin" veya "olgun monositlerin", bir CD14'°CD16+ fenotipine sahip oldugu anlasllüîaktadEÜare karslllglüCX3CR1hICCR2`Gr1"dir). Bir diger hücre grubu, "inflamatuvar monositler" veya "olgun olmayan monositlerin" bir CD14+CD16` fenotipine sahip oldugu anlasUBiaktadlElÜare karslElglüCX3CR1'°CCR2+Gr1+'d[3. (Geissmann F. ve meslektaslarEEOO3 Önemli ölçüde, sonrakinin kemik iligi türevi periferik kan hücrelerinden inflame dokuya geçtiginin gözlemlendigi alg. "inflamatuvar" oldugu anlaslIJIlken, bu hücrelerin, dogrudan veya diger hücrelerin eylemi vaslßslýla inflamasyona neden oldugu gösterilmemistir. DahasÇl bu hücreler farklllâstlglia olusturulabilen çesitli MPS hücrelerinin inflamasyona yol açtlglü gösterilmemistir. Bir arzu edilmeyen immün yaniEllZl ile iliskili bozukluklarda genel uzun dönemli immünosüpresyona yönelik geleneksel klinik stratejiler, örnegin siklosporin (A) (CsA), FK506 (takrolimus) ve kortikosterodiler gibi sinyal 1 bloke ediciler benzeri genis hareket eden immünosüpresif ilaçlarI uzun dönemli uygulamasi baglIIEl Bu ilaçlar. yüksek dozda uzun dönemli kullanHÇltoksik yari etkilere sahip olabilmektedir. DahasÇlbu ilaçlarElloIere edebilen bu hastalarda bile, yasam boyu immünosüpresif ilaç tedavisine yönelik gereksinim, tümörler, ciddi enfeksiyonlar, nefrotoksisite ve metabolik bozukluklar dahil siddetli etkilere dair önemli bir risk tasIiaktadE Bir antijenden veya peptitten hücre baglantEEahil antijene özgü tolerans. Indüklenmesine yönelik yöntemler gelistirilmistir. Örnegin, bir yöntemde, peptit, bu spesifik otoantijenlerle periferik kan hücrelerinin toplanmasIIIZlayrilfhasEye islemini ve steril kosullar altlEda etilen karbodimit (ECDI) baglantüeaktifini ve sonraki donör/hastaya yeniden infüzyonu içermistir. Bu süreç maliyetlidir ve teknikte tecrübe sahibi kisiler taraflEdan yaklEbIan takip edilmis kosullar altIda yürütülmelidir ve prosedürü yürütebilen merkez say-da klglfllllEl Donör hücresi tipi olarak klülnlZEkan hücrelerinin kullanlüalojeneik donörleri içerecek sekilde potansiyel kaynaglîgienisletmektedir, bu sekilde hücre kaynaklarII beslenmesi çarpEEblçüde arttlElEhaktadEve potansiyel olarak, bu tedavinin, kan aktarIiEilçin belgeli herhangi bir ayara iletimi genisletilmektedir. Bu yaklasIilar, kaynak hücre temini ve donör hücrelerine immün yan-üninimize etmek üzere eslesen doku tipi için gereklilik aç-an önemli klglfliamalara sahiptir. Ek olarak, EDCI vasßslýla otoantijenleri baglamak üzere hücrelerin yerel islemi, önemli ölçüde kaliteli bir kontrol dokusunu sunmaktadlEI DahasÇl bu yaklasIilar ayrlîla immün toleranlellElarandiglüiatolojik antijenin en azIan belirli bir bilgisini gerektirmektedir. Son zamanlarda, kaynak hücre teminine yönelik gereksinimi ortadan kaldßan ve burada tiplemesi gereksinimini önleyen peptide bagllîpartiküller açlElanmlgtE Fakat, bu yaklasIilar hala antijene özgü immün tolerans. dayanmaktadlE Antijene özgü tolerans genel olarak spesifik antijenlerIn/epitoplarI Insan hastallKlarIa genel olarak bilinmemesinden dolayElideal degildir. DahaslÇl antijenler, bir antijene özgü veya diger hücrelerin eylemi vaslßslýla inflamasyona neden oldugu gösterilmemistir. DahasÇl bu hücreler farklllâstlglia olusturulabilen çesitli MPS hücrelerinin inflamasyona yol açtlglü gösterilmemistir. Bir arzu edilmeyen immün yaniEllZl ile iliskili bozukluklarda genel uzun dönemli immünosüpresyona yönelik geleneksel klinik stratejiler, örnegin siklosporin (A) (CsA), FK506 (takrolimus) ve kortikosterodiler gibi sinyal 1 bloke ediciler benzeri genis hareket eden immünosüpresif ilaçlarI uzun dönemli uygulamasi baglIIEl Bu ilaçlar. yüksek dozda uzun dönemli kullanHÇltoksik yari etkilere sahip olabilmektedir. DahasÇlbu ilaçlarElloIere edebilen bu hastalarda bile, yasam boyu immünosüpresif ilaç tedavisine yönelik gereksinim, tümörler, ciddi enfeksiyonlar, nefrotoksisite ve metabolik bozukluklar dahil siddetli etkilere dair önemli bir risk tasIiaktadE Bir antijenden veya peptitten hücre baglantEEahil antijene özgü tolerans. Indüklenmesine yönelik yöntemler gelistirilmistir. Örnegin, bir yöntemde, peptit, bu spesifik otoantijenlerle periferik kan hücrelerinin toplanmasIIIZlayrilfhasEye islemini ve steril kosullar altlEda etilen karbodimit (ECDI) baglantüeaktifini ve sonraki donör/hastaya yeniden infüzyonu içermistir. Bu süreç maliyetlidir ve teknikte tecrübe sahibi kisiler taraflEdan yaklEbIan takip edilmis kosullar altIda yürütülmelidir ve prosedürü yürütebilen merkez say-da klglfllllEl Donör hücresi tipi olarak klülnlZEkan hücrelerinin kullanlüalojeneik donörleri içerecek sekilde potansiyel kaynaglîgienisletmektedir, bu sekilde hücre kaynaklarII beslenmesi çarpEEblçüde arttlElEhaktadEve potansiyel olarak, bu tedavinin, kan aktarIiEilçin belgeli herhangi bir ayara iletimi genisletilmektedir. Bu yaklasIilar, kaynak hücre temini ve donör hücrelerine immün yan-üninimize etmek üzere eslesen doku tipi için gereklilik aç-an önemli klglfliamalara sahiptir. Ek olarak, EDCI vasßslýla otoantijenleri baglamak üzere hücrelerin yerel islemi, önemli ölçüde kaliteli bir kontrol dokusunu sunmaktadlEI DahasÇl bu yaklasIilar ayrlîla immün toleranlellElarandiglüiatolojik antijenin en azIan belirli bir bilgisini gerektirmektedir. Son zamanlarda, kaynak hücre teminine yönelik gereksinimi ortadan kaldßan ve burada tiplemesi gereksinimini önleyen peptide bagllîpartiküller açlElanmlgtE Fakat, bu yaklasIilar hala antijene özgü immün tolerans. dayanmaktadlE Antijene özgü tolerans genel olarak spesifik antijenlerIn/epitoplarI Insan hastallKlarIa genel olarak bilinmemesinden dolayElideal degildir. DahaslÇl antijenler, bir antijene özgü yaklasIiI etkili olmasDçin denekten denege degiskenlik gösterebilmektedir, bu sebepten ötürü, her bir bireysel hastanI hangi antijenleri tanlýlacagII belirlenmesi gerekli olacaktlEl veya uygulamadan önce partiküllere olaslîlpeptitlerin bir kütüphanesinin baglanmasIEl gerektirecektir. Bu peptitlerin sentezi ve bireysel baglantEÇl hem zaman allîElhem de pahalIE Bu sebepten ötürü, bu problemlerin her Ikisini çözen bir tedaviye ihtiyaç mevcuttur, bu sekilde dokusu eslesen hücrelerin bir kaynaglEb olan ihtiyaç ortadan kalkmaktad [Eve aynIZI zamanda, peptitlerin genis panellerinin sentezlenmesine ve baglanmasi yönelik ihtiyaç ortadan kaldlîllüiaktadß iletimine yönelik bilesimleri ve sistemleri tarif etmektedir. Doküman, T hücrelerinde ve/veya B hücrelerinde bir immün yan-El uyarabilen, bazE] yapliândünalarda en az bir immünomodülatör maddeyi içeren ve tercihe baglEblarak, en az bir hedefleyici parçayEl/e tercihe bagllîlolarak, en az bir immünostimülatör maddeyi içeren asElnano taslýlEllârIEl açlKlamaktadlEl BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus, ekteki istemlere göre belirlenmektedir. Ekteki istemler tarafIdan kapsanmayan asaglki açlKIamanI yapilândlElnalarEl/e/veya örneklerinin, mevcut bulusun parçasßlmad [gllîrllüsünülmektedin BazÜapHândlElnalarda, mevcut bulus, bir antijenik peptide birlestirilen bir tasmartikülünü (örn. PLG partikülü) içeren bilesimleri (örn. antijene özgü toleransI indüklenmesi için) saglamaktadE Belirli yapllândlîilnalarda, taslýlîiîlpartikülü, bir poli(laktit-ko-glikolit) (PLG) partikülüdür. BazElyapllândlElnalarda, mevcut bulus, asag-kileri içeren bilesimleri saglamaktadlB bir negatif zeta potansiyeli ile bir tasIîLIEEl partikülüne baglanan bir antijen. BazEI yapllândlElnalarda, partikülün zeta potansiyeli, yaklasliZJ-lOO mV ila yaklasllZiO mV arasIadIEl Bazüyaplßndünalarda, partikülün zeta potansiyeli, yaklasllZl -50 mV ila yaklasllîl -40 mV arasIadlÜ BazÜ/apllândlünalarda, partikül, yaklasllZJ 80:20 ila yaklasIKl 100:0 arasIa bir molar orana sahip bir ko-polimerdir. BazElyapliândIEnalarda, ko-polimer oranü kßîlbylüîl olmayacak sekilde polistirenzpoli (vinil karboksilat)/80:20, polistiren:p0li(vinil ka rboksilat)/90: 10, poli(vinil karboksilat): polistiren/80:20, poli(vinil yaklasIiI etkili olmasDçin denekten denege degiskenlik gösterebilmektedir, bu sebepten ötürü, her bir bireysel hastanI hangi antijenleri tanlýlacagII belirlenmesi gerekli olacaktlEl veya uygulamadan önce partiküllere olaslîlpeptitlerin bir kütüphanesinin baglanmasIEl gerektirecektir. Bu peptitlerin sentezi ve bireysel baglantEÇl hem zaman allîElhem de pahalIE Bu sebepten ötürü, bu problemlerin her Ikisini çözen bir tedaviye ihtiyaç mevcuttur, bu sekilde dokusu eslesen hücrelerin bir kaynaglEb olan ihtiyaç ortadan kalkmaktad [Eve aynIZI zamanda, peptitlerin genis panellerinin sentezlenmesine ve baglanmasi yönelik ihtiyaç ortadan kaldlîllüiaktadß iletimine yönelik bilesimleri ve sistemleri tarif etmektedir. Doküman, T hücrelerinde ve/veya B hücrelerinde bir immün yan-El uyarabilen, bazE] yapliândünalarda en az bir immünomodülatör maddeyi içeren ve tercihe baglEblarak, en az bir hedefleyici parçayEl/e tercihe bagllîlolarak, en az bir immünostimülatör maddeyi içeren asElnano taslýlEllârIEl açlKlamaktadlEl BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus, ekteki istemlere göre belirlenmektedir. Ekteki istemler tarafIdan kapsanmayan asaglki açlKIamanI yapilândlElnalarEl/e/veya örneklerinin, mevcut bulusun parçasßlmad [gllîrllüsünülmektedin BazÜapHândlElnalarda, mevcut bulus, bir antijenik peptide birlestirilen bir tasmartikülünü (örn. PLG partikülü) içeren bilesimleri (örn. antijene özgü toleransI indüklenmesi için) saglamaktadE Belirli yapllândlîilnalarda, taslýlîiîlpartikülü, bir poli(laktit-ko-glikolit) (PLG) partikülüdür. BazElyapllândlElnalarda, mevcut bulus, asag-kileri içeren bilesimleri saglamaktadlB bir negatif zeta potansiyeli ile bir tasIîLIEEl partikülüne baglanan bir antijen. BazEI yapllândlElnalarda, partikülün zeta potansiyeli, yaklasliZJ-lOO mV ila yaklasllZiO mV arasIadIEl Bazüyaplßndünalarda, partikülün zeta potansiyeli, yaklasllZl -50 mV ila yaklasllîl -40 mV arasIadlÜ BazÜ/apllândlünalarda, partikül, yaklasllZJ 80:20 ila yaklasIKl 100:0 arasIa bir molar orana sahip bir ko-polimerdir. BazElyapliândIEnalarda, ko-polimer oranü kßîlbylüîl olmayacak sekilde polistirenzpoli (vinil karboksilat)/80:20, polistiren:p0li(vinil ka rboksilat)/90: 10, poli(vinil karboksilat): polistiren/80:20, poli(vinil karboksilat):polistiren/90:10, polilaktik asit: poliglikolik asit/80:20 veya polilaktik asit: poliglikolik asit/90:10 olabilmektedir. Hala diger yapllândlünalarda, partikül, bir polistiren partikül, bir karboksile polistiren partikül veya bir poli(laktik-ko-glikolik asit) partikülüdür. BazD yapilândülnalarda, partikül, bir poli(laktik-ko-glikolik asit) partikülüdür. BazÜapllândIElnalarda, partikül, yaklaslEl0.1 pm ila yaklaslKl 10 pm araleUa bir çapa sahiptir. Bazülapllândlüinalarda, partikül, yaklasllZl0.3 pm ila yaklasllâS pm arasIa bir çapa sahiptir. Bazüiapllândlülnalarda, partikül, yaklasllîl0.5 pm ila yaklasllZl3 pm arasIa bir çapa sahiptir. BazÜapllândlElnalarda, partikül, yaklaslla 0.5 pm ila yaklasllal pm araslfiüa bir çapa sahiptir. Bazüapllândlülnalarda, partikül, yaklaslKlO.5 pm araletla bir çapa sahiptir. Diger yapllândlünalarda, antijen, bir otoimmün antijenin en az bir bölümünü, bir denege transplante edilecek bir dokuda eksprese edilen bir antijeni ve bir alerjeni içermektedir. BazEl yapllândiîrlnalarda, antijen, miyelin bazik proteini, asetilkolin reseptörü, endojen antijen, miyelin oligodendrosit glikoproteini, pankreas beta-hücreli antijeni, insülin, glutamik asit dekarboksilaz (GAD), kollajen tip 11, insan klEIEak gp39, fp130-RAPS, proteolipid proteini, küçük, Fibroller proteini, küçük tiroid uyarlEIfaKtör reseptörü, histonlar, glikoprotein gp70, piruvat dehidrojenaz dehidrolipoamid asetil transferaz (PCD-E2), saç folikülü antijeni, A- gliaden, ve insan tropomiyosin izoformu 5, Bahia otu poleni (BaGP), seftali alerjeni Pru p 3, alfa s l-Caein Süt alerjeni, Apigl kereviz alerjeni, Berel Brezilya flâtlglîlalerjeni, B- Laktoglobulin Süt alerjeni, SlgllEl serum albümini, Cor 1.04 FIIEI alerjeni veya Ovalbumin Yumurta alerjenin bir bölümünü içermektedir. Diger yapilândlEinalarda, antijen, bir otoimmün antijenini, bir denege transplante edilecek bir dokuda eksprese edilen bir antijeni ve bir alerjeni içermektedir. KlgltlhylEElolmayan yapllândlîilnalarda, antijen, örnegin miyelin bazik proteini, asetilkolin reseptörü, endojen antijen, miyelin oligodendrosit glikoproteini, pankreas beta-hücreli antijeni, insülin, glutamik asit dekarboksilaz (GAD), kollajen tip 11, insan klKIElak gp39, fp130-RAPS, proteolipid proteini, küçük, fibroller proteini, küçük tiroid uyarlEJJaktör reseptörü, histonlar, glikoprotein gp70, piruvat dehidrojenaz dehidrolipoamid asetil transferaz (PCD-EZ), saç folikülü antijeni, A-gliaden, ve insan tropomiyosin izoformu 5, Bahia otu poleni (BaGP), seftali alerjeni Pru p 3, alfa s 1-Caein Süt alerjeni, Apigl kereviz alerjeni, Berel Brezilya fEtlglElalerjeni, B- Laktoglobulin Süt alerjeni, S[g]lEIserum albümini, Cor a 1.04 FIIKl alerjeni veya Ovalbumin Yumurta alerjenin bir bölümünü içermektedir. karboksilat):polistiren/90:10, polilaktik asit: poliglikolik asit/80:20 veya polilaktik asit: poliglikolik asit/90:10 olabilmektedir. Hala diger yapllândlünalarda, partikül, bir polistiren partikül, bir karboksile polistiren partikül veya bir poli(laktik-ko-glikolik asit) partikülüdür. BazD yapilândülnalarda, partikül, bir poli(laktik-ko-glikolik asit) partikülüdür. BazÜapllândIElnalarda, partikül, yaklaslEl0.1 pm ila yaklaslKl 10 pm araleUa bir çapa sahiptir. Bazülapllândlüinalarda, partikül, yaklasllZl0.3 pm ila yaklasllâS pm arasIa bir çapa sahiptir. Bazüiapllândlülnalarda, partikül, yaklasllîl0.5 pm ila yaklasllZl3 pm arasIa bir çapa sahiptir. BazÜapllândlElnalarda, partikül, yaklaslla 0.5 pm ila yaklasllal pm araslfiüa bir çapa sahiptir. Bazüapllândlülnalarda, partikül, yaklaslKlO.5 pm araletla bir çapa sahiptir. Diger yapllândlünalarda, antijen, bir otoimmün antijenin en az bir bölümünü, bir denege transplante edilecek bir dokuda eksprese edilen bir antijeni ve bir alerjeni içermektedir. BazEl yapllândiîrlnalarda, antijen, miyelin bazik proteini, asetilkolin reseptörü, endojen antijen, miyelin oligodendrosit glikoproteini, pankreas beta-hücreli antijeni, insülin, glutamik asit dekarboksilaz (GAD), kollajen tip 11, insan klEIEak gp39, fp130-RAPS, proteolipid proteini, küçük, Fibroller proteini, küçük tiroid uyarlEIfaKtör reseptörü, histonlar, glikoprotein gp70, piruvat dehidrojenaz dehidrolipoamid asetil transferaz (PCD-E2), saç folikülü antijeni, A- gliaden, ve insan tropomiyosin izoformu 5, Bahia otu poleni (BaGP), seftali alerjeni Pru p 3, alfa s l-Caein Süt alerjeni, Apigl kereviz alerjeni, Berel Brezilya flâtlglîlalerjeni, B- Laktoglobulin Süt alerjeni, SlgllEl serum albümini, Cor 1.04 FIIEI alerjeni veya Ovalbumin Yumurta alerjenin bir bölümünü içermektedir. Diger yapilândlEinalarda, antijen, bir otoimmün antijenini, bir denege transplante edilecek bir dokuda eksprese edilen bir antijeni ve bir alerjeni içermektedir. KlgltlhylEElolmayan yapllândlîilnalarda, antijen, örnegin miyelin bazik proteini, asetilkolin reseptörü, endojen antijen, miyelin oligodendrosit glikoproteini, pankreas beta-hücreli antijeni, insülin, glutamik asit dekarboksilaz (GAD), kollajen tip 11, insan klKIElak gp39, fp130-RAPS, proteolipid proteini, küçük, fibroller proteini, küçük tiroid uyarlEJJaktör reseptörü, histonlar, glikoprotein gp70, piruvat dehidrojenaz dehidrolipoamid asetil transferaz (PCD-EZ), saç folikülü antijeni, A-gliaden, ve insan tropomiyosin izoformu 5, Bahia otu poleni (BaGP), seftali alerjeni Pru p 3, alfa s 1-Caein Süt alerjeni, Apigl kereviz alerjeni, Berel Brezilya fEtlglElalerjeni, B- Laktoglobulin Süt alerjeni, S[g]lEIserum albümini, Cor a 1.04 FIIKl alerjeni veya Ovalbumin Yumurta alerjenin bir bölümünü içermektedir. Bazü yapEIândlElnalarda, antijen, bir konjugat molekülü ile söz konusu partiküle baglanmaktadlü BazElyapllândlElnalarda, antijen, bir baglayIEZIIIe söz konusu partiküle baglanmaktadla BazElyapllândlEnalarda, konjugat molekülü, etilen karbodiimiddir (ECDI). Bazüyapllândlülnalarda, antijen, bir negatif zeta potansiyeli ile partikülün dlgl taraf. baglanmaktadlü Bain/apllândünalarda, antijen, bir negatif yüzey zeta potansiyeline sahip partikülde enkapsüle edilmektedir. BazEl/apllândülnalarda, partikül biyolojik olarak bozulabilmektedir. BazEl/apllândlElnalarda, partikül, fonksiyonlanmlgl yüzeydir. BazEl yapllândünalarda, partikül, fonksiyonlanmlgl karboksilat yüzeyidir. BazEyapllândlîrlnalarda, mevcut bulus, bir denekte antijene özgü toleransI indüklenmesine yönelik, asagIkileri içeren yöntemleri saglamaktadlB söz konusu denege, bir antijene bagIEl partikülü içeren, söz konusu denege etkili bir bilesim miktarII uygulanmasü burada söz konusu partikül, bir negatif zeta potansiyeline sahiptir ve burada söz konusu partikül ve antijen, söz konusu denekte söz konusu antijenin toleransIlZlindüklemektedir. Bazü yapllândlülnalarda, uygulama islemi, bir hastallgllîl veya kosulu tedavi etmek üzere uygulanmaktadIB Bazlîyapllând lîilnalarda, uygulama islemi, söz konusu antijenin yol açtlgllîlbir hastal[g]I veya kosulun baslang-an önce veya sonra uygulanmaktadlEl Bazü yapllândlîrlnalarda, hastalik] veya kosul, asag-kilerden olusan gruptan seçilmektedir: bir otoimmün hastalllg inflamatuvar hastalüîl bir alerji, transplantasyon reddi ve bir hiperimmün yanlEI BazEI yapllândlElnalarda, hastalllZl veya kosul, asaglElhkilerden olusan gruptan seçilmektedir: multipl skleroz, tip 1 diyabet, astIi, bir 9. alerjisi, bir çevresel alerji, bir Çölyak hastal[g]ü/e söz konusu antijene aslEIÜeaksiyonu azaltmak üzere söz konusu denekte söz konusu antijenin yol açtfglEIbir kosul. Bazüapllând Elnalarda, yöntemler ayrEla söz konusu bilesimin söz konusu denege söz konusu uygulamanItekrar edilmesini içermektedir. Bazlîyapllândlfrlnalarda, bilesim, intravenöz olarak uygulanmaktadlEI BazElyapElândlElnalarda, mevcut bulus ayri& bir negatif zeta potansiyeli ile bir immünü modifiye edilmis partikülün hazlEIbnmaleb yönelik bir süreci saglamaktadlîl söz konusu süreç sunlarlZliçermektedir: bir negatif zeta potansiyeli ile immünü modifiye edilmis partikülü olusturmak için etkili kosullar altlEtla bir tampon çözeltisi ile bir immünü modifiye edilmis partikül prekürsörünün temasa geçirilmesi. BazÜ/aplßndlünalarda, immünü modifiye edilmis partikül prekürsörü, ko-polimerizasyon ile olusturulmaktadlü BazEyapllând lünalarda, tampon Bazü yapEIândlElnalarda, antijen, bir konjugat molekülü ile söz konusu partiküle baglanmaktadlü BazElyapllândlElnalarda, antijen, bir baglayIEZIIIe söz konusu partiküle baglanmaktadla BazElyapllândlEnalarda, konjugat molekülü, etilen karbodiimiddir (ECDI). Bazüyapllândlülnalarda, antijen, bir negatif zeta potansiyeli ile partikülün dlgl taraf. baglanmaktadlü Bain/apllândünalarda, antijen, bir negatif yüzey zeta potansiyeline sahip partikülde enkapsüle edilmektedir. BazEl/apllândülnalarda, partikül biyolojik olarak bozulabilmektedir. BazEl/apllândlElnalarda, partikül, fonksiyonlanmlgl yüzeydir. BazEl yapllândünalarda, partikül, fonksiyonlanmlgl karboksilat yüzeyidir. BazEyapllândlîrlnalarda, mevcut bulus, bir denekte antijene özgü toleransI indüklenmesine yönelik, asagIkileri içeren yöntemleri saglamaktadlB söz konusu denege, bir antijene bagIEl partikülü içeren, söz konusu denege etkili bir bilesim miktarII uygulanmasü burada söz konusu partikül, bir negatif zeta potansiyeline sahiptir ve burada söz konusu partikül ve antijen, söz konusu denekte söz konusu antijenin toleransIlZlindüklemektedir. Bazü yapllândlülnalarda, uygulama islemi, bir hastallgllîl veya kosulu tedavi etmek üzere uygulanmaktadIB Bazlîyapllând lîilnalarda, uygulama islemi, söz konusu antijenin yol açtlgllîlbir hastal[g]I veya kosulun baslang-an önce veya sonra uygulanmaktadlEl Bazü yapllândlîrlnalarda, hastalik] veya kosul, asag-kilerden olusan gruptan seçilmektedir: bir otoimmün hastalllg inflamatuvar hastalüîl bir alerji, transplantasyon reddi ve bir hiperimmün yanlEI BazEI yapllândlElnalarda, hastalllZl veya kosul, asaglElhkilerden olusan gruptan seçilmektedir: multipl skleroz, tip 1 diyabet, astIi, bir 9. alerjisi, bir çevresel alerji, bir Çölyak hastal[g]ü/e söz konusu antijene aslEIÜeaksiyonu azaltmak üzere söz konusu denekte söz konusu antijenin yol açtfglEIbir kosul. Bazüapllând Elnalarda, yöntemler ayrEla söz konusu bilesimin söz konusu denege söz konusu uygulamanItekrar edilmesini içermektedir. Bazlîyapllândlfrlnalarda, bilesim, intravenöz olarak uygulanmaktadlEI BazElyapElândlElnalarda, mevcut bulus ayri& bir negatif zeta potansiyeli ile bir immünü modifiye edilmis partikülün hazlEIbnmaleb yönelik bir süreci saglamaktadlîl söz konusu süreç sunlarlZliçermektedir: bir negatif zeta potansiyeli ile immünü modifiye edilmis partikülü olusturmak için etkili kosullar altlEtla bir tampon çözeltisi ile bir immünü modifiye edilmis partikül prekürsörünün temasa geçirilmesi. BazÜ/aplßndlünalarda, immünü modifiye edilmis partikül prekürsörü, ko-polimerizasyon ile olusturulmaktadlü BazEyapllând lünalarda, tampon çözeltisi, bir bazik pH'a sahiptir. BazÜapilândÜnalarda, tampon çözeltisi, sodyum bikarbonat, potasyum bikarbonat, Iityum bikarbonat, potasyum dihidrojen fosfat, sodyum dihirojen fosfat veya lityum dihidrojen fosfattlB Bazüllapllândlüinalarda, mevcut bulus, bir yüzeyi fonksiyonlanmglipozom çekirdegi içerisinde enkapsüle bir antijeni içeren bir bilesimi saglamaktadlEl Bir diger yapllândIElnada, lipozom, bir :30:40 oran-a fosfatidilkolin: fosfatidilgliserol: kolesterolden olusmaktadlEl Bir diger yapiiândülnalarda, söz konusu antijen, bir otoimmün antijenini, bir denege transplante edilecek bir dokuda eksprese edilen bir antijeni ve bir alerjeni içermektedir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, (A) bir poli(laktit-ko-glikolit) (PLG) partikülün bir mikrografigini göstermektedir. B ve C, dinamik SIKI saçllJEMIIanalizi ile yüzeyi fonksiyonlanmlSl poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko- glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 2.5 x 105 sayi oranIda bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmgpoli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, yigiI basi %5 ila 15 degiskenlik göstermistir, fakat genel olarak 567 nm bir Z-ortalama çapa, 670 nm bir zirve çaplEb ve 0.209 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Sekil 2, PLG nanopartiküllerinin, antijene özgü toleransIlZIndükledigini göstermektedir. Deneysel Otoimmün Ensefalitin (R-EAE) önlenmesine yönelik toleransElindükleyecek sekilde kullanUBrlStlEl Fareler, PLP veya immünizasyon zaman. (gün 0) göre gün -7'de konjugatllZblmayan PLGA (N=5) ile tedavi edilmistir. Hastalik] zirvesi tipik olarak yaklasllîl gün 12 ila 14'te gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastalllîliçin skorlanmaktadlE Peptit içermeyen veya kontrol peptidi (OVA323- 339) ile modifiye edilmis partiküller, hastallEI indüksiyonunu önlememistir. Fakat PLP139-151 ile modifiye edilmis PLGA partikülleri, gün 20 ila 30 arasIa sergilenen 1'in altIaki düsük klinik skorlarEliiaricinde 0 olan (hastalllîlyok) bir klinik skoru üretmistir. Sekil 3, uygulanan partikül tipinin, fare modelinde EAE gelisiminde bir etkiye sahip oldugunu göstermektedir. A) ortalama klinik skor göstermektedir ve B) EAE hayvanlarII ortalama kümülatif skorunu göstermektedir. Fareler, immünizasyon zaman. (gün 0) göre gün -7'de OVA, OVA323-339'PLGAPEMA çözeltisi, bir bazik pH'a sahiptir. BazÜapilândÜnalarda, tampon çözeltisi, sodyum bikarbonat, potasyum bikarbonat, Iityum bikarbonat, potasyum dihidrojen fosfat, sodyum dihirojen fosfat veya lityum dihidrojen fosfattlB Bazüllapllândlüinalarda, mevcut bulus, bir yüzeyi fonksiyonlanmglipozom çekirdegi içerisinde enkapsüle bir antijeni içeren bir bilesimi saglamaktadlEl Bir diger yapllândIElnada, lipozom, bir :30:40 oran-a fosfatidilkolin: fosfatidilgliserol: kolesterolden olusmaktadlEl Bir diger yapiiândülnalarda, söz konusu antijen, bir otoimmün antijenini, bir denege transplante edilecek bir dokuda eksprese edilen bir antijeni ve bir alerjeni içermektedir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, (A) bir poli(laktit-ko-glikolit) (PLG) partikülün bir mikrografigini göstermektedir. B ve C, dinamik SIKI saçllJEMIIanalizi ile yüzeyi fonksiyonlanmlSl poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko- glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 2.5 x 105 sayi oranIda bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmgpoli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, yigiI basi %5 ila 15 degiskenlik göstermistir, fakat genel olarak 567 nm bir Z-ortalama çapa, 670 nm bir zirve çaplEb ve 0.209 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Sekil 2, PLG nanopartiküllerinin, antijene özgü toleransIlZIndükledigini göstermektedir. Deneysel Otoimmün Ensefalitin (R-EAE) önlenmesine yönelik toleransElindükleyecek sekilde kullanUBrlStlEl Fareler, PLP veya immünizasyon zaman. (gün 0) göre gün -7'de konjugatllZblmayan PLGA (N=5) ile tedavi edilmistir. Hastalik] zirvesi tipik olarak yaklasllîl gün 12 ila 14'te gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastalllîliçin skorlanmaktadlE Peptit içermeyen veya kontrol peptidi (OVA323- 339) ile modifiye edilmis partiküller, hastallEI indüksiyonunu önlememistir. Fakat PLP139-151 ile modifiye edilmis PLGA partikülleri, gün 20 ila 30 arasIa sergilenen 1'in altIaki düsük klinik skorlarEliiaricinde 0 olan (hastalllîlyok) bir klinik skoru üretmistir. Sekil 3, uygulanan partikül tipinin, fare modelinde EAE gelisiminde bir etkiye sahip oldugunu göstermektedir. A) ortalama klinik skor göstermektedir ve B) EAE hayvanlarII ortalama kümülatif skorunu göstermektedir. Fareler, immünizasyon zaman. (gün 0) göre gün -7'de OVA, OVA323-339'PLGAPEMA ile tedavi edilmistir. HastallKi zirvesi tipik olarak yaklaslK] gün 12 ila 14'te gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastallEl için skorlanmaktadE Kontrol peptidi (OVA323-339) ile modifiye edilmis herhangi bir bilesimin partikülleri, hastaIIKl indüksiyonunu önlememistir. Fakat, bagIEliicari (phosphorex) PLG veya polistirenden daha etkili olmustur. Sekil 4, gün 28'de çözülebilir OVA ile tedavi edilmis bu farelerin, OVA-PLG partikülü ile tedavi edilmis bu hayvanlara klýasla lelakIlEta bir azalma sergiledigini göstermektedir. Partiküllerin iletilmesinden 1 saat içerisinde vücut slîiakllglükja herhangi bir azalma gözlemlenmemistir. Sekil 5, remisyon esnasIa PLP-PLG uygulamasIlEI, herhangi bir anafilaksi ile iliskili mortaliteye yol açmadigiIEl göstermektedir. EAE, CFA'da PLP139-151'in subkütanöz enjeksiyonu ile altEiIa sekiz haftaliKldisi SJL/J farelerinde indüklenmistir ve klinik hastaligiI gelisimi takip edilmis ve kaydedilmistir (B). HastallKl indüksiyonuna göre gün 21'de, farelere, çözülebilir PLP veya PLG nanopartiküllerine (katiiâr) baglanan aynlîpeptitlerin iv enjeksiyonlarül'erilmistir. Hayvanlari leiakligiüenjeksiyondan (A) sonra 1 saat boyunca her 10 dakikada bir takip edilmis ve kaydedilmistir. Sekil 6, hastalilîl indüksiyonundan yedi gün önce intravenöz olarak uygulanan optimal tedavi edilen SJL/J farelerine klýbsla ölçülmüstür. AItEila sekiz haftallKl disi SJL/J fareleri, PLP-bagll:PLG nanopartikülleri ile iv olarak enjekte subkütanöz enjeksiyonu ile indüklenmistir. Panel B'den hayvanlar, 100 gün boyunca klinik hastaliEliçin takip edilmistir. HastalilZlindüksiyonuna göre gün 8'de, bir gecikmeli tip hiper duyarllüß (DTH) reaksiyonu, panel B'de (E) gösterilen farelerin bir alt kümesinde uygulanmlgtlü Panel B'de (OVA PLP139-151/CFA astarIEl peptidi ile kulaktan uygulanmlStlEI Bir DTH ölçümü olarak kulak sismesi, 24sa sonra belirlenmistir ve uygulamadan önceki yanifllar çiKlarIIJ-:hlgtlü AltEilla sekiz haftalilg disi SJL/J farelerine, PLP-bagIDPLG nanopartikülleri veya tek baslEb baglanmamlgl partiküller (dlg çizgili daire) (F) ile intravenöz olarak enjekte edilmistir. EAE, CFA'da PLP173-191'in subkütanöz enjeksiyonu ile 7 gün sonra indüklenmistir ve hastalüö, gösterilen zaman noktalarIa takip edilmistir. Sekil 7A-D, profilaktik toleranlel, PLG-PLP139-151 partikülleri intravenöz olarak veya intraperitoneal olarak uyguland[gil:zaman en etkili oldugunu göstermektedir. Intravenöz ile tedavi edilmistir. HastallKi zirvesi tipik olarak yaklaslK] gün 12 ila 14'te gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastallEl için skorlanmaktadE Kontrol peptidi (OVA323-339) ile modifiye edilmis herhangi bir bilesimin partikülleri, hastaIIKl indüksiyonunu önlememistir. Fakat, bagIEliicari (phosphorex) PLG veya polistirenden daha etkili olmustur. Sekil 4, gün 28'de çözülebilir OVA ile tedavi edilmis bu farelerin, OVA-PLG partikülü ile tedavi edilmis bu hayvanlara klýasla lelakIlEta bir azalma sergiledigini göstermektedir. Partiküllerin iletilmesinden 1 saat içerisinde vücut slîiakllglükja herhangi bir azalma gözlemlenmemistir. Sekil 5, remisyon esnasIa PLP-PLG uygulamasIlEI, herhangi bir anafilaksi ile iliskili mortaliteye yol açmadigiIEl göstermektedir. EAE, CFA'da PLP139-151'in subkütanöz enjeksiyonu ile altEiIa sekiz haftaliKldisi SJL/J farelerinde indüklenmistir ve klinik hastaligiI gelisimi takip edilmis ve kaydedilmistir (B). HastallKl indüksiyonuna göre gün 21'de, farelere, çözülebilir PLP veya PLG nanopartiküllerine (katiiâr) baglanan aynlîpeptitlerin iv enjeksiyonlarül'erilmistir. Hayvanlari leiakligiüenjeksiyondan (A) sonra 1 saat boyunca her 10 dakikada bir takip edilmis ve kaydedilmistir. Sekil 6, hastalilîl indüksiyonundan yedi gün önce intravenöz olarak uygulanan optimal tedavi edilen SJL/J farelerine klýbsla ölçülmüstür. AItEila sekiz haftallKl disi SJL/J fareleri, PLP-bagll:PLG nanopartikülleri ile iv olarak enjekte subkütanöz enjeksiyonu ile indüklenmistir. Panel B'den hayvanlar, 100 gün boyunca klinik hastaliEliçin takip edilmistir. HastalilZlindüksiyonuna göre gün 8'de, bir gecikmeli tip hiper duyarllüß (DTH) reaksiyonu, panel B'de (E) gösterilen farelerin bir alt kümesinde uygulanmlgtlü Panel B'de (OVA PLP139-151/CFA astarIEl peptidi ile kulaktan uygulanmlStlEI Bir DTH ölçümü olarak kulak sismesi, 24sa sonra belirlenmistir ve uygulamadan önceki yanifllar çiKlarIIJ-:hlgtlü AltEilla sekiz haftalilg disi SJL/J farelerine, PLP-bagIDPLG nanopartikülleri veya tek baslEb baglanmamlgl partiküller (dlg çizgili daire) (F) ile intravenöz olarak enjekte edilmistir. EAE, CFA'da PLP173-191'in subkütanöz enjeksiyonu ile 7 gün sonra indüklenmistir ve hastalüö, gösterilen zaman noktalarIa takip edilmistir. Sekil 7A-D, profilaktik toleranlel, PLG-PLP139-151 partikülleri intravenöz olarak veya intraperitoneal olarak uyguland[gil:zaman en etkili oldugunu göstermektedir. Intravenöz olarak uygulanan PLP139-151-PLG ile tedavi edilen hayvanlar, hastallglîgelistirmemistir ve çogu zaman noktasIa 0 olan ortalama klinik skorlara sahip olmustur. Sekil 8A-F, OVA323.339-PLG partiküllerinin uygulanmasIIEl, tedavi edilmis hayvanlarda Th1 ve Th 17 yanlflhrIEihhibe ettigini göstermektedir. Sekil 9A-C, PLP139-151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar. omuriligi içerisinde ve natif dokuya, OVA323-339-PLG ile tedavi edilmis hayvanlardan aI-n dokuya olandan daha fazla benzeyen immün hücre infiltrasyonunda bir azalmayEgöstermektedir. OVA323.339-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar, CD45, CD4 ve CD11b için pozitif boyaya sahip olurken, PLP139- 151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar, bu faktörler için minimum boyaya sahip olmustur. Sekil 10A-C, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulamasIEl, tedavi edilen farenin omuriliginde kan beyin bariyeri (BBB) bozulmasIElve makrofaj aktivasyonunu inhibe ettigini göstermektedir. Hayvanlar, Tam Freund AdjuvanEl(CFA), OVA323.339 PLG partikülleri veya PLP139-151-PLG partikülleri ile tedavi edilmistir. EAE'nin klinik skorlarlZlie yüzde oranEbeIirlenmistir (B) ve omurilikler, in w'vo görüntüleme (A ve C) vaslßslýla gözlemlenmistir. Sekil 11A ve B, i'n v/vo görüntüleme vasißslýla tedavi edilmis farelerin omuriliklerini göstermektedir. C-D, görüntü verisinin kantifikasyonunu gösteren grafiklerdir. Sekil 12, PLP139-151'in gözlemlendigi PLG partiküllerinin uygulanmasllül, farelerde R-EAE indüksiyonunu inhibe ettigini göstermektedir. Otoantijenleri enkapsüle edebilme kabiliyeti, yüzey baglantlgüle mümkün olmayan proteinlerin veya hatta organ homojenatlarII karmaslig karisimlarüiçin kullanIia olanak saglamaktadB bu da daha fazla antijenin kapsanmasßb ve bu sekilde epitop yayllîhaslîile daha etkili bir sekilde basa çlEllhiasEla olanak saglamaktadlEl bazen PLP139-151-PLG partiküller ve bir kontrol IgG antikoru ile tedavi edilen bu hayvanlardan daha büyük bir ortalama klinik skor sergiledigini göstermektedir. Sekil 14, terapötik toleranleI, aktif ve adoptif EAE'de PLP139-151-PLG ile indüklendigini aktarIiElle altEila sekiz haftalllîl disi SJL/J farelerde indüklenmistir. Farelere, hastallß indüksiyonundan 2 gün (A) veya 14 gün (C) sonra 500nm PLG nanopartiküllerine baglanan PLP peptidi enjekte edilmistir. Klinik hastallE] skorlarüantijen baglEsplenositler (A) ile tedaviden sonrakilerle klýlaslanmlstlü Beyin ve farelerden toplanmlStlEl Panel A'dan farelerden kesitler, PLP proteini ve CD45 (B) için boyanmlgtlîl Panelden (C) farelerden omurilik kesitleri, Luxol Fast Blue (D) ile olarak uygulanan PLP139-151-PLG ile tedavi edilen hayvanlar, hastallglîgelistirmemistir ve çogu zaman noktasIa 0 olan ortalama klinik skorlara sahip olmustur. Sekil 8A-F, OVA323.339-PLG partiküllerinin uygulanmasIIEl, tedavi edilmis hayvanlarda Th1 ve Th 17 yanlflhrIEihhibe ettigini göstermektedir. Sekil 9A-C, PLP139-151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar. omuriligi içerisinde ve natif dokuya, OVA323-339-PLG ile tedavi edilmis hayvanlardan aI-n dokuya olandan daha fazla benzeyen immün hücre infiltrasyonunda bir azalmayEgöstermektedir. OVA323.339-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar, CD45, CD4 ve CD11b için pozitif boyaya sahip olurken, PLP139- 151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar, bu faktörler için minimum boyaya sahip olmustur. Sekil 10A-C, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulamasIEl, tedavi edilen farenin omuriliginde kan beyin bariyeri (BBB) bozulmasIElve makrofaj aktivasyonunu inhibe ettigini göstermektedir. Hayvanlar, Tam Freund AdjuvanEl(CFA), OVA323.339 PLG partikülleri veya PLP139-151-PLG partikülleri ile tedavi edilmistir. EAE'nin klinik skorlarlZlie yüzde oranEbeIirlenmistir (B) ve omurilikler, in w'vo görüntüleme (A ve C) vaslßslýla gözlemlenmistir. Sekil 11A ve B, i'n v/vo görüntüleme vasißslýla tedavi edilmis farelerin omuriliklerini göstermektedir. C-D, görüntü verisinin kantifikasyonunu gösteren grafiklerdir. Sekil 12, PLP139-151'in gözlemlendigi PLG partiküllerinin uygulanmasllül, farelerde R-EAE indüksiyonunu inhibe ettigini göstermektedir. Otoantijenleri enkapsüle edebilme kabiliyeti, yüzey baglantlgüle mümkün olmayan proteinlerin veya hatta organ homojenatlarII karmaslig karisimlarüiçin kullanIia olanak saglamaktadB bu da daha fazla antijenin kapsanmasßb ve bu sekilde epitop yayllîhaslîile daha etkili bir sekilde basa çlEllhiasEla olanak saglamaktadlEl bazen PLP139-151-PLG partiküller ve bir kontrol IgG antikoru ile tedavi edilen bu hayvanlardan daha büyük bir ortalama klinik skor sergiledigini göstermektedir. Sekil 14, terapötik toleranleI, aktif ve adoptif EAE'de PLP139-151-PLG ile indüklendigini aktarIiElle altEila sekiz haftalllîl disi SJL/J farelerde indüklenmistir. Farelere, hastallß indüksiyonundan 2 gün (A) veya 14 gün (C) sonra 500nm PLG nanopartiküllerine baglanan PLP peptidi enjekte edilmistir. Klinik hastallE] skorlarüantijen baglEsplenositler (A) ile tedaviden sonrakilerle klýlaslanmlstlü Beyin ve farelerden toplanmlStlEl Panel A'dan farelerden kesitler, PLP proteini ve CD45 (B) için boyanmlgtlîl Panelden (C) farelerden omurilik kesitleri, Luxol Fast Blue (D) ile boyanmlgtü Demiyelinasyon ve hücresel infiltrasyon alanlarüoklar ile gösterilmektedir. sonra aktif EAE ve adoptif EAE ile farelerin ortalama klinik skorlarIEgösteren grafikleri göstermektedir. Farelere, hastalllg indüksiyonundan 10 gün (A) veya 2 gün (B) sonra OVA323-339 - PLG peptidi enjekte edilmistir ve ortalama klinik skor belirlenmistir. Her iki durumda, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulanmasüfarelerde toleransEihdüklemektedir. Sekil 16, merkezi sinir sistemi immün hücrelerinin infiltrasyonunun da PLP-PLG tolerize farelerde çarplîlîsekilde azaltIlglIlliöstermektedir. SJL/J farelerine, adoptif aktarIiEile EAE indüksiyonundan 2 gün sonra PLP ile baglanan omurilikler çllZlarllüîlStlEIve Ienfositler (B), APC'Ier (C), mikroglia (D), periferik dendritik hücreler (E), miyeloid dendritik hücreler (F) ve makrofajlarI (G) numarasÇl aklgl sitometrisi ile numaralandlElllBwlStlEl Bu popülasyonlar Için kapllâma stratejisi (A)'da gösterilmektedir. CNS hücre preparasyonlarlîl IL-17A ve IFN-y (H) için hücre içi boyamadan önce 5 sa boyunca PMA ve iyonomisin ile uyarilE1lStE Sekil 17, partikül PBS ile uygulandlglia bir PLG partikülünde enkapsüle edilen PLP139.151 peptidinin uygulanmasIlEl, toleransüindükledigini göstermektedir. Fakat, anti-PD-l antikorunun uygulanmasÇlbu toleranslîâzaltmaktadlü Sekil 18, partikül PBS ile uygulandlglia bir PLG partikülünde enkapsüle edilen PLP139-151 peptidinin uygulanmasIlEl, toleransEihdükledigini göstermektedir. Bir anti-CD40 antikorun uygulanmasü bu toleransEIazaltmaktadlEI fakat toleranstaki bu azalma, bir anti-IL-12 antikorunun eklentisi ile tersine çevrilmektedir. Sekil 19A-G, OVA-PLG'nin uygulamasllül, IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 saIg-Bizalttlglllîl'e akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azalttlglIlleöstermektedir. Sekil 20, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nlEl, mediastinal lenf bezlerinden OVA'ya özgü in vitro anIisama yanßhrlllrofilaktik olarak inhibe ettigini göstermektedir. 25 pg OVA ile yeniden uyarndan sonra gözlemlenen lenf bezi proliferasyonu, OVA-PLG (A) ile tedavi edilen bu hayvanlarda azaltIJÜiaktadlEl DahasECDVA-PLG ile tedavi, OVA ile yeniden uyarldan sonra sitokinlerin salIilüzaltmaktadIEl IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 seviyeleri, OVA-PLG (B) ile tedavi edilen farelerde azaltlßiaktadE Sekil 21, OVA-PLG'nin terapötik uygulamasllöl, IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 saIg-IZI azalttlglIEl ve akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azalttlglllîl göstermektedir. Sekil 22, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nlEl, BAL s-a OVA'ya özgü Th2 boyanmlgtü Demiyelinasyon ve hücresel infiltrasyon alanlarüoklar ile gösterilmektedir. sonra aktif EAE ve adoptif EAE ile farelerin ortalama klinik skorlarIEgösteren grafikleri göstermektedir. Farelere, hastalllg indüksiyonundan 10 gün (A) veya 2 gün (B) sonra OVA323-339 - PLG peptidi enjekte edilmistir ve ortalama klinik skor belirlenmistir. Her iki durumda, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulanmasüfarelerde toleransEihdüklemektedir. Sekil 16, merkezi sinir sistemi immün hücrelerinin infiltrasyonunun da PLP-PLG tolerize farelerde çarplîlîsekilde azaltIlglIlliöstermektedir. SJL/J farelerine, adoptif aktarIiEile EAE indüksiyonundan 2 gün sonra PLP ile baglanan omurilikler çllZlarllüîlStlEIve Ienfositler (B), APC'Ier (C), mikroglia (D), periferik dendritik hücreler (E), miyeloid dendritik hücreler (F) ve makrofajlarI (G) numarasÇl aklgl sitometrisi ile numaralandlElllBwlStlEl Bu popülasyonlar Için kapllâma stratejisi (A)'da gösterilmektedir. CNS hücre preparasyonlarlîl IL-17A ve IFN-y (H) için hücre içi boyamadan önce 5 sa boyunca PMA ve iyonomisin ile uyarilE1lStE Sekil 17, partikül PBS ile uygulandlglia bir PLG partikülünde enkapsüle edilen PLP139.151 peptidinin uygulanmasIlEl, toleransüindükledigini göstermektedir. Fakat, anti-PD-l antikorunun uygulanmasÇlbu toleranslîâzaltmaktadlü Sekil 18, partikül PBS ile uygulandlglia bir PLG partikülünde enkapsüle edilen PLP139-151 peptidinin uygulanmasIlEl, toleransEihdükledigini göstermektedir. Bir anti-CD40 antikorun uygulanmasü bu toleransEIazaltmaktadlEI fakat toleranstaki bu azalma, bir anti-IL-12 antikorunun eklentisi ile tersine çevrilmektedir. Sekil 19A-G, OVA-PLG'nin uygulamasllül, IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 saIg-Bizalttlglllîl'e akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azalttlglIlleöstermektedir. Sekil 20, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nlEl, mediastinal lenf bezlerinden OVA'ya özgü in vitro anIisama yanßhrlllrofilaktik olarak inhibe ettigini göstermektedir. 25 pg OVA ile yeniden uyarndan sonra gözlemlenen lenf bezi proliferasyonu, OVA-PLG (A) ile tedavi edilen bu hayvanlarda azaltIJÜiaktadlEl DahasECDVA-PLG ile tedavi, OVA ile yeniden uyarldan sonra sitokinlerin salIilüzaltmaktadIEl IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 seviyeleri, OVA-PLG (B) ile tedavi edilen farelerde azaltlßiaktadE Sekil 21, OVA-PLG'nin terapötik uygulamasllöl, IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 saIg-IZI azalttlglIEl ve akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azalttlglllîl göstermektedir. Sekil 22, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nlEl, BAL s-a OVA'ya özgü Th2 Sitokinlerini, OVA-baglEl PLG partiküllerini terapötik olarak asagü düzenledigini göstermektedir. Fareler, gün 0 ve 14'te long/fare dozunda OVA/Alum ile intraperitoneal olarak tedavi edilmistir. Fareler, gün 28 ve 42'de PLG partiküllerinde enkapsüle OVA-bagllîl PLG partikülleri veya OVA ile intravenöz olarak uygulanmlgtE Gün 56 ila 58 arasIa, fareler, aerosollenmis OVA ile üç defa tedavi edilmistir. Grafik, hayvanlar, PLG partiküllerine (A) bagIEDVA veya PLG partikülleri (B) içerisinde enkapsüle OVA ile tedavi edildiginde sitokin salg -lîgiöstermektedin Sekil 23, p31-PLG partikülleri ile tedaviden sonra tip 1 diyabetik hayvanlar. kan glikoz seviyelerini göstermektedir. p31 peptidine bagIElPLG partiküllerinin uygulanmasüMOG35-55 peptidine bagllîibartiküller (A ve B) ile uygulamadan sonra görülenlere klýlasla düsük kan glikozu seviyelerine neden olmustur. Hayvanlarda gözlemlenen IFNy salgllâylîlîlhücrelerin yüzdesi ayriEla MOG ile klýbslanan p31-PLG ile tedavi edilmis farelerde indüklenmistir. Sekil 24A-B, p31-PLG ile indüklenmis toleranlel, Tregs gerektirdigini göstermektedir. Tip 1 diyabet, adoptif aktarIi ile farelerde indüklenmistir. Aktiflestirilmis hücrelerin NOD.SCID farelerine aktarllihaleUan iki saat sonra, fareler, p31-PLG veya MOG35-55 PLG partikülleri ile tolere edilmistir. Tregs bosalmasÇlp31-PLG partiküllerinin uygulanmasüle indüklenen toleranslîkald lEInaktadlEl Sekil 25, insülin baglüPLG partiküllerinin uygulanmasIIEl, 300 gün boyunca diyabet gelistirmemis fare yüzdesini önemli ölçüde arttüinlStE (%22.7'ye klýasla %69.6; p=0.0027). NOD farelerine, 6, 8 ve 10 haftalllZlyasta intravenöz uygulama vasitâslýla BSA (N=22) veya insülin (N=23) bagIElPLG partikülleri ile tedavi edilmistir. Fareler daha sonrasIda diyabet gelisimi için degerlendirilmistir. Sekil 26, allEIIliareIerde gözlemlenen CD45.1 donör hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Disi CD45.2 fareleri, gün -7'de OVA-PLG veya Dby-PLG ile tolere edilmistir. Gün -1'de, fareler, 200 Elm ile lglülanmlgtlîlve daha sonrasIa gün 0'da erkek CD45.1 farelerden sonrasiEUa gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolere edilmistir ve kimerizmin FACS analizi için kan toplanmlgtlîl Sekil 27, gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolerizasyondan sonra aIlEIZI farelerde donör CD45.1 hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Bir pozitif kontrol faresi, önemli melezlesme (~%10) sergilememistir. Tüm negatif kontrol fareleri, donör hücrelerini asllâmamlgtlü Bir Dby-SP fareleri, önemli melezlesme (~%10) göstermemistir. Iki OVA-PLG farelerine donör hücreleri asllânmlSIlEI(~°/010); 16 hafta boyunca tamamen reddedilmis. Bir Dby-PLG fare, Hafta 12'de reddetmeye baslamlStlE ve Hafta 16'da Sitokinlerini, OVA-baglEl PLG partiküllerini terapötik olarak asagü düzenledigini göstermektedir. Fareler, gün 0 ve 14'te long/fare dozunda OVA/Alum ile intraperitoneal olarak tedavi edilmistir. Fareler, gün 28 ve 42'de PLG partiküllerinde enkapsüle OVA-bagllîl PLG partikülleri veya OVA ile intravenöz olarak uygulanmlgtE Gün 56 ila 58 arasIa, fareler, aerosollenmis OVA ile üç defa tedavi edilmistir. Grafik, hayvanlar, PLG partiküllerine (A) bagIEDVA veya PLG partikülleri (B) içerisinde enkapsüle OVA ile tedavi edildiginde sitokin salg -lîgiöstermektedin Sekil 23, p31-PLG partikülleri ile tedaviden sonra tip 1 diyabetik hayvanlar. kan glikoz seviyelerini göstermektedir. p31 peptidine bagIElPLG partiküllerinin uygulanmasüMOG35-55 peptidine bagllîibartiküller (A ve B) ile uygulamadan sonra görülenlere klýlasla düsük kan glikozu seviyelerine neden olmustur. Hayvanlarda gözlemlenen IFNy salgllâylîlîlhücrelerin yüzdesi ayriEla MOG ile klýbslanan p31-PLG ile tedavi edilmis farelerde indüklenmistir. Sekil 24A-B, p31-PLG ile indüklenmis toleranlel, Tregs gerektirdigini göstermektedir. Tip 1 diyabet, adoptif aktarIi ile farelerde indüklenmistir. Aktiflestirilmis hücrelerin NOD.SCID farelerine aktarllihaleUan iki saat sonra, fareler, p31-PLG veya MOG35-55 PLG partikülleri ile tolere edilmistir. Tregs bosalmasÇlp31-PLG partiküllerinin uygulanmasüle indüklenen toleranslîkald lEInaktadlEl Sekil 25, insülin baglüPLG partiküllerinin uygulanmasIIEl, 300 gün boyunca diyabet gelistirmemis fare yüzdesini önemli ölçüde arttüinlStE (%22.7'ye klýasla %69.6; p=0.0027). NOD farelerine, 6, 8 ve 10 haftalllZlyasta intravenöz uygulama vasitâslýla BSA (N=22) veya insülin (N=23) bagIElPLG partikülleri ile tedavi edilmistir. Fareler daha sonrasIda diyabet gelisimi için degerlendirilmistir. Sekil 26, allEIIliareIerde gözlemlenen CD45.1 donör hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Disi CD45.2 fareleri, gün -7'de OVA-PLG veya Dby-PLG ile tolere edilmistir. Gün -1'de, fareler, 200 Elm ile lglülanmlgtlîlve daha sonrasIa gün 0'da erkek CD45.1 farelerden sonrasiEUa gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolere edilmistir ve kimerizmin FACS analizi için kan toplanmlgtlîl Sekil 27, gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolerizasyondan sonra aIlEIZI farelerde donör CD45.1 hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Bir pozitif kontrol faresi, önemli melezlesme (~%10) sergilememistir. Tüm negatif kontrol fareleri, donör hücrelerini asllâmamlgtlü Bir Dby-SP fareleri, önemli melezlesme (~%10) göstermemistir. Iki OVA-PLG farelerine donör hücreleri asllânmlSIlEI(~°/010); 16 hafta boyunca tamamen reddedilmis. Bir Dby-PLG fare, Hafta 12'de reddetmeye baslamlStlE ve Hafta 16'da OVA-PLG fareleri sunlarlîgöstermistir: 1) Spontane asüâma, 2) OVA323 ve Dby arasIa sekans homolojisi veya 3) partiküllerin tolerojenik özellikleri. Dby-PLG, Dby-SP ve OVA- PLG'den daha fazla asilâmaya olanak saglamaktadlEl Sekil 28, zamanlama toleransIlEl, allîlîfarede CD45.1 hücrelerinin yüzdesinde bir etkiye sahip oldugunu göstermektedir. Pozitif Kontroller, beklenenden (~%10) daha az asllâma (NO/04) göstermektedir. Bir Negatif kontrol faresi, tüm 3 OVA-PLG gruplar dlglüja %5 asiiâmaya sahip olmustur, Gün -7'de, Gün +1 grubunda bir fare, asuâma göstermistir (%12). Gün 1'de tolerans, gün -7'deki toleranstan klinik olarak çok daha iliskilidir. Sekil 29, bir antijene baglanmlg-il veya antijen içermeyen kumarin-6 PLGA partikülünün, uygulamadan sonra 3 saatte tespit edilebildigini, fakat uygulamadan sonra 24 saatte tespit edilmedigini göstermektedir. Partiküller, uygulamadan sonra 3 saate tespit edilebilmistir, fakat uygulamadan sonra 24 saate tespit edilmemistir. Enjeksiyon sonrasl3 saatte (orta 5%) ve enjeksiyon sonrasEl24 saate (ait SEI) i.v. floresan PLGA/PMEA mikropartiküllerinin enhekte edildigi fare dalagErsol kolon), karaciger (orta kolon) ve akcigere (sol kolon) klýbsla naif enjekte edilmemis fare (üst sü), DAPI ile karslEl boyanmlgtlEl Sekil 30, PLGA partiküllerinin, karacigerde F4/80* hücreleri ile 6 ve 15 saat sonra birlikte lokallestirildigini göstermektedir. Sekil 31, marjinal bölge makrofajlarIlEl, intravenöz infüzyondan 24 saat sonra TAMRA isaretli PLP139.151-baglEbartikülleri baskI bir sekilde ald[glIl:göstermektedir. En yüksek PLP139.15 + hücre yüzdesi, marjinal bölge makrofajlarIlEl Sekil 32, PLP139-151/CFA astarlama günü say_ karsEgünlük ortalama klinik skoru göstermektedir. PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri kullanilârak immünolojik tolerans indüksiyonu ile SJL/J farelerinde inhibe edilmektedir. Sekil 33, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, eozinofil akümülasyonunda en büyük azalmayßergiledigini göstermektedir. Sekil 34, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, tedavi edilmemis veya kontrollü tedavi edilmis farelere klýlasla serum IgE seviyelerinde en büyük azalmayEtergiledigini göstermektedir. Sekil 35, dinamik Ella saçlIlliiEbnalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmEpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye basli-ala 1.792 x 105 sayIi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern OVA-PLG fareleri sunlarlîgöstermistir: 1) Spontane asüâma, 2) OVA323 ve Dby arasIa sekans homolojisi veya 3) partiküllerin tolerojenik özellikleri. Dby-PLG, Dby-SP ve OVA- PLG'den daha fazla asilâmaya olanak saglamaktadlEl Sekil 28, zamanlama toleransIlEl, allîlîfarede CD45.1 hücrelerinin yüzdesinde bir etkiye sahip oldugunu göstermektedir. Pozitif Kontroller, beklenenden (~%10) daha az asllâma (NO/04) göstermektedir. Bir Negatif kontrol faresi, tüm 3 OVA-PLG gruplar dlglüja %5 asiiâmaya sahip olmustur, Gün -7'de, Gün +1 grubunda bir fare, asuâma göstermistir (%12). Gün 1'de tolerans, gün -7'deki toleranstan klinik olarak çok daha iliskilidir. Sekil 29, bir antijene baglanmlg-il veya antijen içermeyen kumarin-6 PLGA partikülünün, uygulamadan sonra 3 saatte tespit edilebildigini, fakat uygulamadan sonra 24 saatte tespit edilmedigini göstermektedir. Partiküller, uygulamadan sonra 3 saate tespit edilebilmistir, fakat uygulamadan sonra 24 saate tespit edilmemistir. Enjeksiyon sonrasl3 saatte (orta 5%) ve enjeksiyon sonrasEl24 saate (ait SEI) i.v. floresan PLGA/PMEA mikropartiküllerinin enhekte edildigi fare dalagErsol kolon), karaciger (orta kolon) ve akcigere (sol kolon) klýbsla naif enjekte edilmemis fare (üst sü), DAPI ile karslEl boyanmlgtlEl Sekil 30, PLGA partiküllerinin, karacigerde F4/80* hücreleri ile 6 ve 15 saat sonra birlikte lokallestirildigini göstermektedir. Sekil 31, marjinal bölge makrofajlarIlEl, intravenöz infüzyondan 24 saat sonra TAMRA isaretli PLP139.151-baglEbartikülleri baskI bir sekilde ald[glIl:göstermektedir. En yüksek PLP139.15 + hücre yüzdesi, marjinal bölge makrofajlarIlEl Sekil 32, PLP139-151/CFA astarlama günü say_ karsEgünlük ortalama klinik skoru göstermektedir. PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri kullanilârak immünolojik tolerans indüksiyonu ile SJL/J farelerinde inhibe edilmektedir. Sekil 33, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, eozinofil akümülasyonunda en büyük azalmayßergiledigini göstermektedir. Sekil 34, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, tedavi edilmemis veya kontrollü tedavi edilmis farelere klýlasla serum IgE seviyelerinde en büyük azalmayEtergiledigini göstermektedir. Sekil 35, dinamik Ella saçlIlliiEbnalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmEpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye basli-ala 1.792 x 105 sayIi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 584 nm bir Z-ortalama çapa, 679 nm bir zirve çaplElei ve 0.162 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarlöh yazlIEl] protokolden sonra 6 sentez ylglIII temsilidir. Sekil 36, Ç-potansiyel Ölçümü ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmßpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 6.67 x 104 sayn oranlElda bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, -48.9 mV bir Ç-potansiyeline ve 5.14 mV bir Ç- potansiyeline sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukari yazlIJJZprotokolden sonra 6 sentez yigiIIItemsiIidir. Sekil 37, dinamik @Esaçlülîliünalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlg poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye basIEla 1.822 x 105 sayi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 569.7 nm bir Z-ortalama çapa, 700.3 nm bir zirve çap. ve 0.230 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarßla yazlIJJJ protokolden sonra 3 sentez y[glIII temsilidir. Sekil 38, Ç-potansiyel ölçüm ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmE poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmisîl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye baslEEi 2.67 x 104 sayIi oranIia bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlg poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, -52.2 mV bir Ç-potansiyeline ve 5.38 mV bir Ç-potansiyeline sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukari yazlIlElprotokolden sonra 3 sentez y[gIIII temsilidir. Sekil 39, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139.151 peptidini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgllipozomlarIE, multipl sklerozun mürin modelinde immünolojik toleranslîl Indüklemedigini sergileyen bir grafigi göstermektedir. Hayvanlar, çekirdekleri (daireler) içerisinde çözülebilir PLP139.151 peptidini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl IipozomlarEl/eya çözülebilir OVA323.339 peptidini (kare) içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgllipozomlar ile tedavi edilmistir. PLP139-151 peptidi IipozomlarIElalan bu hayvanlar. ortalama klinik skorlarÇl OVA323.339 peptidi IipozomlarlElBlan hayvanlarlEkinden daha düsük olmustur. glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 584 nm bir Z-ortalama çapa, 679 nm bir zirve çaplElei ve 0.162 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarlöh yazlIEl] protokolden sonra 6 sentez ylglIII temsilidir. Sekil 36, Ç-potansiyel Ölçümü ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmßpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 6.67 x 104 sayn oranlElda bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, -48.9 mV bir Ç-potansiyeline ve 5.14 mV bir Ç- potansiyeline sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukari yazlIJJZprotokolden sonra 6 sentez yigiIIItemsiIidir. Sekil 37, dinamik @Esaçlülîliünalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlg poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye basIEla 1.822 x 105 sayi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 569.7 nm bir Z-ortalama çapa, 700.3 nm bir zirve çap. ve 0.230 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarßla yazlIJJJ protokolden sonra 3 sentez y[glIII temsilidir. Sekil 38, Ç-potansiyel ölçüm ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmE poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmisîl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye baslEEi 2.67 x 104 sayIi oranIia bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlg poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, -52.2 mV bir Ç-potansiyeline ve 5.38 mV bir Ç-potansiyeline sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukari yazlIlElprotokolden sonra 3 sentez y[gIIII temsilidir. Sekil 39, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139.151 peptidini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgllipozomlarIE, multipl sklerozun mürin modelinde immünolojik toleranslîl Indüklemedigini sergileyen bir grafigi göstermektedir. Hayvanlar, çekirdekleri (daireler) içerisinde çözülebilir PLP139.151 peptidini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl IipozomlarEl/eya çözülebilir OVA323.339 peptidini (kare) içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgllipozomlar ile tedavi edilmistir. PLP139-151 peptidi IipozomlarIElalan bu hayvanlar. ortalama klinik skorlarÇl OVA323.339 peptidi IipozomlarlElBlan hayvanlarlEkinden daha düsük olmustur. BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI Mevcut bulus, antijene bagIEl nanopartiküllerin, otoimmün hastallgla toleransEl indükleyebildigini ve immün yan-ElazalttEglIEbulmustur. Bu partiküller, partikül yüzeyine baglIZqup olmadllZlarlEla veya içerisinde enkapsüle olup olmadlKlar- baklßiadan toleransü indükleyebilmektedir. Bu partiküller bu sekilde, otoimmün hastal[Elar gibi, bir aslHJ inflamatuvar immün yanllîlIZlle karakterize edilen herhangi bir hastallKl veya kosul tedavisinde kullanSllîdilabilmektedir. Burada kullanIlglEüzere "partikül" terimi, maddenin herhangi bir doku türevi bilesimini ifade etmektedir, küre veya küre benzeri varlllîl tanecik veya Iipozom olabilmektedir. "Partikül" terimi, "immün modifiye edici partikül" terimi, "taslîlüîpaitikül" terimi ve "tanecik" terimi, baglama baglElolarak birbirlerinin yerine kullanllâbilmektedir. Ek olarak, "partikü terimi, tanecikleri ve küreleri kapsayacak sekilde kullanllâbilmektedir. Burada kullanllân "negatif olarak yüklenmis partikü terimi, slfJEdan daha az bir net yüzey degisimine sahip olmak üzere modifiye edilmis partikülleri ifade etmektedir. yüzeyinde bir karboksil grubu içerecek sekilde modifiye edilmis herhangi bir partikülü indüklemektedir. BazElyapllândlElnalarda, karboksil grubun eklentisi, örnegin MARCO gibi çöpçü reseptörleri ile etkilesim vasißslýla dolasIidan partiküllerin fagosit/monosit alnllîl gelistirmektedir. Partiküllerin karboksilasyonu, klglEiaylEEblmayacak sekilde Poli(etilen-maleik anhidrit) (PEMA) dahil karboksil gruplarüekleyen herhangi bir bilesik kullanllârak elde edilebilmektedir. Burada kullanllân "antijenik parça", konaklarI immün sistemi tarafIdan tannlanan bir peptit gibi herhangi bir parçayüfade etmektedir. Antijenik parçalarII örnekleri, kEElayEEl olmayacak sekilde otoantijenleri ve/veya bakteriyel veya viral proteinleri, peptitleri veya bilesenleri içermektedir. Belirli bir teoriye baglEkalmadan, karboksile taneciklerin kendileri immün sistemi tarafIdan tan-bilirken, buraya daha fazla ekli olmayan karboksillenmis tanecikler, bulusun amaçlarübin bir "antijenik parça" olarak görülmemektedir. Burada kullanllân "yalI tanecikler" veya "yalI partiküller" veya "yaII küreler", BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI Mevcut bulus, antijene bagIEl nanopartiküllerin, otoimmün hastallgla toleransEl indükleyebildigini ve immün yan-ElazalttEglIEbulmustur. Bu partiküller, partikül yüzeyine baglIZqup olmadllZlarlEla veya içerisinde enkapsüle olup olmadlKlar- baklßiadan toleransü indükleyebilmektedir. Bu partiküller bu sekilde, otoimmün hastal[Elar gibi, bir aslHJ inflamatuvar immün yanllîlIZlle karakterize edilen herhangi bir hastallKl veya kosul tedavisinde kullanSllîdilabilmektedir. Burada kullanIlglEüzere "partikül" terimi, maddenin herhangi bir doku türevi bilesimini ifade etmektedir, küre veya küre benzeri varlllîl tanecik veya Iipozom olabilmektedir. "Partikül" terimi, "immün modifiye edici partikül" terimi, "taslîlüîpaitikül" terimi ve "tanecik" terimi, baglama baglElolarak birbirlerinin yerine kullanllâbilmektedir. Ek olarak, "partikü terimi, tanecikleri ve küreleri kapsayacak sekilde kullanllâbilmektedir. Burada kullanllân "negatif olarak yüklenmis partikü terimi, slfJEdan daha az bir net yüzey degisimine sahip olmak üzere modifiye edilmis partikülleri ifade etmektedir. yüzeyinde bir karboksil grubu içerecek sekilde modifiye edilmis herhangi bir partikülü indüklemektedir. BazElyapllândlElnalarda, karboksil grubun eklentisi, örnegin MARCO gibi çöpçü reseptörleri ile etkilesim vasißslýla dolasIidan partiküllerin fagosit/monosit alnllîl gelistirmektedir. Partiküllerin karboksilasyonu, klglEiaylEEblmayacak sekilde Poli(etilen-maleik anhidrit) (PEMA) dahil karboksil gruplarüekleyen herhangi bir bilesik kullanllârak elde edilebilmektedir. Burada kullanllân "antijenik parça", konaklarI immün sistemi tarafIdan tannlanan bir peptit gibi herhangi bir parçayüfade etmektedir. Antijenik parçalarII örnekleri, kEElayEEl olmayacak sekilde otoantijenleri ve/veya bakteriyel veya viral proteinleri, peptitleri veya bilesenleri içermektedir. Belirli bir teoriye baglEkalmadan, karboksile taneciklerin kendileri immün sistemi tarafIdan tan-bilirken, buraya daha fazla ekli olmayan karboksillenmis tanecikler, bulusun amaçlarübin bir "antijenik parça" olarak görülmemektedir. Burada kullanllân "yalI tanecikler" veya "yalI partiküller" veya "yaII küreler", karboksillenmemis olan tanecikleri, partikülleri veya küreleri ifade etmektedir. Burada kullanllân "pro-inflamatuvar aracllâr" veya "pro-inflamatuvar polipeptitler", bir denekte inflamasyonu indükleyen, sürdüren veya uzatan polipeptitleri veya bunlari fragmanlarliîifade etmektedir. Pro-inflamatuvar aracilârl örnekleri, klîiflhylîiîiolmayacak sekilde sitokinleri ve kemokinleri içermektedir. Partikül, herhangi bir partikül sekline veya konformasyonuna sahip olabilmektedir. Fakat, bazü yapliândiîrinalarda, in vivo kümelesmesi daha az olasEioIan partiküllerin kullanIiEitercih edilmektedir. Bu yapllândlânalar içerisindeki partiküllerin örnekleri, bir küresel sekle sahip olan partiküllerdir. Bulusun bir diger yönü, bir negatif zeta potansiyeline sahip olan ve antijen parçalardan serbest olan bir immünü modifiye edilmis partikülü içeren bir bilesim ile ilgilidir. Bir diger yapllândüinada, bulus, bir antijene baglanan bir negatif zeta potansiyeli ile bir immünü modifiye edilmis partikülü içeren bilesimleri saglamaktadlEl Bir diger yapilândlîiinada, antijen, partikülün dlgitaraf- baglanmaktadlEI Bulusun bir diger yapllândlEinasIda, antijen, partikül içerisinde enkapsüle edilmektedir. Bulusun bir diger yönü, bir negatif zeta potansiyeline sahip olan ve antijen parçalardan serbest olan bir immünü modifiye edilmis partikülün preparasyonuna yönelik bir süreç ile ilgilidir. Süreç, bir negatif zeta potansiyeli ile immünü modifiye edilmis partikülü olusturmak için etkili kosullar aItIa bir tampon çözeltisi ile bir immünü modifiye edilmis partikül prekürsörünün temasa geçirilmesini içermektedir. Mevcut bulusun bazEyapllândlîilnalarIa, immün modifiye edilmis partikül prekürsörü, ko-polimerizasyonu vasitîiislýla olusturulmaktadiü Partikül mikro yapIEIÇiko-polimerizasyonun yöntemine bagllîcblabilmektedir. BazÜapilândiEinalarda, bir antijenik peptit molekülü, bir konjugat molekülü ve/veya baglayiîü grup ile taslîtlEEbartiküle (örn. immünü modifiye edilmis partikül) baglanmaktadß Bain yapliândiEinalarda, antijenik peptit ve/veya apoptotik sinyallesme molekülünün taslîiama (örn. PLG partikülüne) baglanmasübir veya birden fazla kovalent ve/veya kovalent olmayan etkilesimi içermektedir. BazÜapilândlEinalarda, antijenik peptit, bir negatif zeta potansiyeli ile tasEEüpartikülünün yüzeyine eklenmektedir. BainyapilândlEinalarda, antijenik peptit, bir negatif zeta potansiyeli ile taslîtlEEkerisinde enkapsüle edilmektedir. karboksillenmemis olan tanecikleri, partikülleri veya küreleri ifade etmektedir. Burada kullanllân "pro-inflamatuvar aracllâr" veya "pro-inflamatuvar polipeptitler", bir denekte inflamasyonu indükleyen, sürdüren veya uzatan polipeptitleri veya bunlari fragmanlarliîifade etmektedir. Pro-inflamatuvar aracilârl örnekleri, klîiflhylîiîiolmayacak sekilde sitokinleri ve kemokinleri içermektedir. Partikül, herhangi bir partikül sekline veya konformasyonuna sahip olabilmektedir. Fakat, bazü yapliândiîrinalarda, in vivo kümelesmesi daha az olasEioIan partiküllerin kullanIiEitercih edilmektedir. Bu yapllândlânalar içerisindeki partiküllerin örnekleri, bir küresel sekle sahip olan partiküllerdir. Bulusun bir diger yönü, bir negatif zeta potansiyeline sahip olan ve antijen parçalardan serbest olan bir immünü modifiye edilmis partikülü içeren bir bilesim ile ilgilidir. Bir diger yapllândüinada, bulus, bir antijene baglanan bir negatif zeta potansiyeli ile bir immünü modifiye edilmis partikülü içeren bilesimleri saglamaktadlEl Bir diger yapilândlîiinada, antijen, partikülün dlgitaraf- baglanmaktadlEI Bulusun bir diger yapllândlEinasIda, antijen, partikül içerisinde enkapsüle edilmektedir. Bulusun bir diger yönü, bir negatif zeta potansiyeline sahip olan ve antijen parçalardan serbest olan bir immünü modifiye edilmis partikülün preparasyonuna yönelik bir süreç ile ilgilidir. Süreç, bir negatif zeta potansiyeli ile immünü modifiye edilmis partikülü olusturmak için etkili kosullar aItIa bir tampon çözeltisi ile bir immünü modifiye edilmis partikül prekürsörünün temasa geçirilmesini içermektedir. Mevcut bulusun bazEyapllândlîilnalarIa, immün modifiye edilmis partikül prekürsörü, ko-polimerizasyonu vasitîiislýla olusturulmaktadiü Partikül mikro yapIEIÇiko-polimerizasyonun yöntemine bagllîcblabilmektedir. BazÜapilândiEinalarda, bir antijenik peptit molekülü, bir konjugat molekülü ve/veya baglayiîü grup ile taslîtlEEbartiküle (örn. immünü modifiye edilmis partikül) baglanmaktadß Bain yapliândiEinalarda, antijenik peptit ve/veya apoptotik sinyallesme molekülünün taslîiama (örn. PLG partikülüne) baglanmasübir veya birden fazla kovalent ve/veya kovalent olmayan etkilesimi içermektedir. BazÜapilândlEinalarda, antijenik peptit, bir negatif zeta potansiyeli ile tasEEüpartikülünün yüzeyine eklenmektedir. BainyapilândlEinalarda, antijenik peptit, bir negatif zeta potansiyeli ile taslîtlEEkerisinde enkapsüle edilmektedir. Bir yapllând lîilnada, immünü modifiye edilmis partikül ile temasa geçen tampon çözeltisi, bir herhangi bir uygun bazdan ve konjugatIan olusturulabilmektedir. Bulusun bazü yapllândünalaria, tampon çözeltisi, klîlflhylîüolmadan sodyum bikarbonat, potasyum bikarbonat, lityum bikarbonat, potasyum dihidrojen fosfat, sodyum dihidrojen fosfat veya lityum dihidrojen fosfat veya bunlari konjugatlarIEgerebilmektedir. Bir yapllândlElnada, immünü modifiye edilmis partiküller, ko-polimerleri içermektedir. Bu ko- polimerler, degisken molar orana sahip olabilmektedir. Mevcut immünü modifiye edilmis olabilmektedir. Bir diger yapllândIElnada, ko-polimer, periyodik, istatistiksel, lineer, dallanmlg (yIlîl fEa veya tarak ko-polimerleri dahil) olabilmektedir. Bazüyapllândünalarda, ko- polimer oranÇI klîlfllaylîlîl olmayacak sekilde polistiren:poli (vinil karboksilat)/80:20, polistiren:poli(vinil karboksilat)/90:10, poli(vinil karboksilat): polistiren/80:20, poli(vinil karboksilat):polistiren/90:10, polilaktik asit: poliglikolik asit/80:20 veya polilaktik asit: poliglikolik asit/90:10 olabilmektedir. Bir yapllândlîilnada, partikül, bir lipozomdur. Bir diger yapüândlülnada, partikül - 30:30:40 fosfatidilkolin: fosfatidilgliserol: kolesterol gibi molar oranlarlüha asaglilhki Iipidlerden olusan bir lipozomdur. Bir diger yapllândlEnasEtla, partikül, bir lipozom içerisinde en kapsüllen mektedir. Partiküllerin genel olarak bir antijen temsil eden hücrede veya diger MPS hücresinde fagositozu tetiklemesi için yeterli bir boyutta olmasEgerekmesine ragmen, her bir partikülün boyut olarak tekdüze olmaslîgljerekli degildir. Tercihen partiküller, çözülebilirligi gelistirmek, In vivo toplanman yol açtlglßlasükomplikasyonlarEönlemek için ve pinositoza olanak saglamak için boyut olarak mikroskopik veya nanoskopiktir. Partikül boyutu, lenfosit matürasyon alanlarlEla dokular arasEhlandan alIia yönelik bir faktör olabilmektedir. YaklaslKl 0.1pm ila yaklasllZl 10 pm aras-a bir çapa sahip olan bir partikül, fagositozu tetikleyebilmektedir. Bu sekilde bir yapllând lElnada, partikül, bu limitler içerisinde bir çapa sahiptir. Bir diger yapllândünada, partikül, yaklasüîl 0.3 pm ila yaklasllZJ 5 pm arasIa bir çapa sahiptir. Bir diger yapllândlElnada, partikül, yaklaslEl 0.5 pm ila yaklas[lZl 3 pm araleUa bir çapa sahiptir. Bir diger yapllândlElnada, partikül, yaklasllZl 0.1 pm, veya yaklasllîl 0.2 pm veya yaklasllîl 0.3 Bir yapllând lîilnada, immünü modifiye edilmis partikül ile temasa geçen tampon çözeltisi, bir herhangi bir uygun bazdan ve konjugatIan olusturulabilmektedir. Bulusun bazü yapllândünalaria, tampon çözeltisi, klîlflhylîüolmadan sodyum bikarbonat, potasyum bikarbonat, lityum bikarbonat, potasyum dihidrojen fosfat, sodyum dihidrojen fosfat veya lityum dihidrojen fosfat veya bunlari konjugatlarIEgerebilmektedir. Bir yapllândlElnada, immünü modifiye edilmis partiküller, ko-polimerleri içermektedir. Bu ko- polimerler, degisken molar orana sahip olabilmektedir. Mevcut immünü modifiye edilmis olabilmektedir. Bir diger yapllândIElnada, ko-polimer, periyodik, istatistiksel, lineer, dallanmlg (yIlîl fEa veya tarak ko-polimerleri dahil) olabilmektedir. Bazüyapllândünalarda, ko- polimer oranÇI klîlfllaylîlîl olmayacak sekilde polistiren:poli (vinil karboksilat)/80:20, polistiren:poli(vinil karboksilat)/90:10, poli(vinil karboksilat): polistiren/80:20, poli(vinil karboksilat):polistiren/90:10, polilaktik asit: poliglikolik asit/80:20 veya polilaktik asit: poliglikolik asit/90:10 olabilmektedir. Bir yapllândlîilnada, partikül, bir lipozomdur. Bir diger yapüândlülnada, partikül - 30:30:40 fosfatidilkolin: fosfatidilgliserol: kolesterol gibi molar oranlarlüha asaglilhki Iipidlerden olusan bir lipozomdur. Bir diger yapllândlEnasEtla, partikül, bir lipozom içerisinde en kapsüllen mektedir. Partiküllerin genel olarak bir antijen temsil eden hücrede veya diger MPS hücresinde fagositozu tetiklemesi için yeterli bir boyutta olmasEgerekmesine ragmen, her bir partikülün boyut olarak tekdüze olmaslîgljerekli degildir. Tercihen partiküller, çözülebilirligi gelistirmek, In vivo toplanman yol açtlglßlasükomplikasyonlarEönlemek için ve pinositoza olanak saglamak için boyut olarak mikroskopik veya nanoskopiktir. Partikül boyutu, lenfosit matürasyon alanlarlEla dokular arasEhlandan alIia yönelik bir faktör olabilmektedir. YaklaslKl 0.1pm ila yaklasllZl 10 pm aras-a bir çapa sahip olan bir partikül, fagositozu tetikleyebilmektedir. Bu sekilde bir yapllând lElnada, partikül, bu limitler içerisinde bir çapa sahiptir. Bir diger yapllândünada, partikül, yaklasüîl 0.3 pm ila yaklasllZJ 5 pm arasIa bir çapa sahiptir. Bir diger yapllândlElnada, partikül, yaklaslEl 0.5 pm ila yaklas[lZl 3 pm araleUa bir çapa sahiptir. Bir diger yapllândlElnada, partikül, yaklasllZl 0.1 pm, veya yaklasllîl 0.2 pm veya yaklasllîl 0.3 pm veya yaklasilg 0.4 ;m veya yaklasila 0.5 pm veya yaklasllg 1.0 pm veya yaklasilg 1.5 pm veya yaklaslKl2.0 pm veya yaklasüîl 2.5 pm veya yaklasllîl3.0 pm veya yaklaslE]3.5 pm veya yaklasilg 4.0 pm veya yaklasila 4.5 pm veya yaklaslla 5.0 pm bir boyuta sahiptir. Özel bir yapllândünada, partikül, yaklasilîl 0.5 pm bir boyuta sahiptir. Bazüyapilândlülnalarda, partiküllerin genel aglillugarüyaklasllg] 10,000 kDa'dan daha az, yaklasiEl 5,000 kDa'dan daha kDa'dan daha azdlEl Bir bilesimdeki partiküllerin, tekdüze çapta olmasEgerekli degildir. Örnek yoluyla, bir farmasötik formülasyon, bazlglîlyaklaslKl 0.5 pm olurken, digerlerinin yaklasilZl 1.0 pm oldugu birden fazla partikülü içerebilmektedir. Bu verilen aralilZlar içerisinde herhangi bir partikül boyutu karlglEilERullanlSllIrblacaktlB Mevcut bulusun partikülleri, özel bir zeta potansiyeline sahip olabilmektedir. Belirli yapllândünalarda, zeta potansiyeli negatiftir. Bir yapilândlElnada, zeta potansiyeli, yaklasilîl- 100 mV'den daha azdlE Bir yapliândlElnada, zeta potansiyeli, -50 mV'den daha azdlE Belirli yapüândlîilnalarda, partiküller, -100 mV ve 0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândünada, partiküller, -75 mV ve 0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândlîilnada, partiküller, -60 mV ve 0 mV arasia bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapilândlElnada, partiküller, -50 mV ve 0 mV arasia bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândlünada, partiküller, -40 mV ve 0 mV arasIia bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândünada, partiküller, -30 mV ve 0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândünada, partiküller, -20 mV ve +0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllând Binada, partiküller, -10 mV ve -0 mV araleUa bir zeta potansiyeline sahiptir. Özel bir yapllândlElnada, partiküller, -50 mV ve -40 mV arasIa bir zeta potansiyeline sahiptir. BazElyapllândEnalarda, bir tasls-LIEEII yükü (örn. pozitif, negatif, nötr), uygulamaya özgü faydalarllörn. fizyolojik uyumluluk, faydaIEyüzey-peptit etkilesimleri ve benzeri) uygulamak üzere seçilmektedir. Bazüiapllândlülnalarda, bir taslîdîübir net nötr veya negatif yüke (örn. genel olarak bir net negatif yükü taslýbn hücre yüzeylerine spesifik olmayan baglantlQZI azaltmak için) sahiptir. Belirli yapllândlünalarda, taslîtlüßr, dogrudan veya dolaylEblarak, toleransI arzu edildigi bir antijene (ayrlîla burada bir antijene özgü peptit, antijenik peptit, otoantijen, indükleyici antijen veya tolere edici antijen olarak da ifade edilmektedir) konjuge edilebilmektedir. Bazlîlurumlarda, bir taslsîlEÇlbir antijene özgü peptidin çok sayEIla kopas- veya yüzeyde ifsa olan çok saylah farkllîoeptitlere sahip olmak için (örn. bir tolerans yan-I pm veya yaklasilg 0.4 ;m veya yaklasila 0.5 pm veya yaklasllg 1.0 pm veya yaklasilg 1.5 pm veya yaklaslKl2.0 pm veya yaklasüîl 2.5 pm veya yaklasllîl3.0 pm veya yaklaslE]3.5 pm veya yaklasilg 4.0 pm veya yaklasila 4.5 pm veya yaklaslla 5.0 pm bir boyuta sahiptir. Özel bir yapllândünada, partikül, yaklasilîl 0.5 pm bir boyuta sahiptir. Bazüyapilândlülnalarda, partiküllerin genel aglillugarüyaklasllg] 10,000 kDa'dan daha az, yaklasiEl 5,000 kDa'dan daha kDa'dan daha azdlEl Bir bilesimdeki partiküllerin, tekdüze çapta olmasEgerekli degildir. Örnek yoluyla, bir farmasötik formülasyon, bazlglîlyaklaslKl 0.5 pm olurken, digerlerinin yaklasilZl 1.0 pm oldugu birden fazla partikülü içerebilmektedir. Bu verilen aralilZlar içerisinde herhangi bir partikül boyutu karlglEilERullanlSllIrblacaktlB Mevcut bulusun partikülleri, özel bir zeta potansiyeline sahip olabilmektedir. Belirli yapllândünalarda, zeta potansiyeli negatiftir. Bir yapilândlElnada, zeta potansiyeli, yaklasilîl- 100 mV'den daha azdlE Bir yapliândlElnada, zeta potansiyeli, -50 mV'den daha azdlE Belirli yapüândlîilnalarda, partiküller, -100 mV ve 0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândünada, partiküller, -75 mV ve 0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândlîilnada, partiküller, -60 mV ve 0 mV arasia bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapilândlElnada, partiküller, -50 mV ve 0 mV arasia bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândlünada, partiküller, -40 mV ve 0 mV arasIia bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândünada, partiküller, -30 mV ve 0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllândünada, partiküller, -20 mV ve +0 mV arasIda bir zeta potansiyeline sahiptir. Bir diger yapllând Binada, partiküller, -10 mV ve -0 mV araleUa bir zeta potansiyeline sahiptir. Özel bir yapllândlElnada, partiküller, -50 mV ve -40 mV arasIa bir zeta potansiyeline sahiptir. BazElyapllândEnalarda, bir tasls-LIEEII yükü (örn. pozitif, negatif, nötr), uygulamaya özgü faydalarllörn. fizyolojik uyumluluk, faydaIEyüzey-peptit etkilesimleri ve benzeri) uygulamak üzere seçilmektedir. Bazüiapllândlülnalarda, bir taslîdîübir net nötr veya negatif yüke (örn. genel olarak bir net negatif yükü taslýbn hücre yüzeylerine spesifik olmayan baglantlQZI azaltmak için) sahiptir. Belirli yapllândlünalarda, taslîtlüßr, dogrudan veya dolaylEblarak, toleransI arzu edildigi bir antijene (ayrlîla burada bir antijene özgü peptit, antijenik peptit, otoantijen, indükleyici antijen veya tolere edici antijen olarak da ifade edilmektedir) konjuge edilebilmektedir. Bazlîlurumlarda, bir taslsîlEÇlbir antijene özgü peptidin çok sayEIla kopas- veya yüzeyde ifsa olan çok saylah farkllîoeptitlere sahip olmak için (örn. bir tolerans yan-I 50... 100 veya daha fazla) sahiptir. BazEyapilândlEinalarda, bir taslýlîütek tipte bir antijenik peptidi sergilemektedir. Bazlîyapllândlülnalarda, bir tasiýlîüyüzeyde çok saylâh farklljintijenik peptidi sergilemektedir. BazElyapllândlElnalarda, bir taslsîIEZl/üzeyi, seçilen parçalar. (örn. antijenik peptitler) kovalent birlesimine yönelik fonksiyonel gruplarEIsergilemektedir. BazEl yapliândünalarda, taslîlîlîiyüzeyin fonksiyonel gruplari: seçilen parçalar (örn. antijenik peptitler) ile kovalent olmayan etkilesime yönelik bölgeleri saglamaktadlE BazIZI yapllândiEinalarda, bir tasMEDkonjuge edici parçalarIEl, kimyasal bag formasyonu olmadan sogurulabildigi bir yüzeye sahiptir. BazEIyapllândlElnalarda, partikül, metalik degildir. Bu yapllândlElnalarda, partikül, bir polimerden olusturulabilmektedir. Tercih edilen bir yapllândlünada, partikül, bir bireyde biyolojik olarak bozulabilmektedir. Bu yapilândlîilnada, partiküller, bireyde partiküllün bir akümülasyonu olmadan bir bireye çok say. doz saglayabilmektedir. Uygun partiküllerin örnekleri, polistiren partikülleri, PLGA partiküllerini ve elmas partikülleri Içermektedir. Tercihen partikül yüzeyi, spesifik olmayan veya istenmeyen biyolojik etkilesimleri minimuma indiren bir malzemeden olusmaktadlB Partikül yüzeyi ve interstitium arasIaki etkilesimler, etkilesimleri önlemek veya azaltmak için bir malzeme ile kaplanabilmektedir. Poli(etilen glikol) (PEG) gibi hidrofilik katmanlarla ve PLURONICS gibi kopolimerleri (poli(etilen glikol)-bl- poli (propilen glikol)-bI-poli(etilen glikol) kopolimerleri dahil) ile partiküllerin kaplamasElle sterik stabilizasyonu, subkütanöz enjeksiyondan sonra gelismis Ienfatik aln ile gösterildigi gibi interstitium proteinleri ile spesifik olmayan etkilesimleri azaltabilmektedir. Tüm bu gerçekler, lenfatik alIi aç-an partiküllerin fiziksel özelliklerinin önemine isaret etmektedir. Biyolojik olarak parçalanabilir polimerler, tüm veya baz polimerleri ve/veya partikülleri ve/veya katmanlarüolusturacak sekilde kullanllâbilmektedir. Biyolojik olarak bozulabilir polimerler, örnegin çözeltide su ile reaksiyona giren fonksiyonel gruplarI bir sonucu ile degradasyona tabi olabilmektedir. Burada kullanllân "degradasyon" terimi, moleküler aglEiligiI azaltllßîaslîlveya hidrofobik gruplariEl, hidrofilik gruplara dönüsümü ile uygun çözülebilir hale gelmesini ifade etmektedir. Ester gruplar. sahip polimerler genel olarak spontane hidrolize, örnegin polilaktidlere ve poliglikolitlere tabidir. Partiküller ayriEb ek bilesenleri içerebilmektedir. Örnegin, tasEIEllâr, tasEIElîla dahil edilen veya konjuge edilen görüntüleme maddelerine sahip olabilmektedir. Günümüzde ticari olarak temin edilebilen bir görüntüleme maddesine sahip olan bir taslsîlîlîhanosferinin bir örnegi, 50... 100 veya daha fazla) sahiptir. BazEyapilândlEinalarda, bir taslýlîütek tipte bir antijenik peptidi sergilemektedir. Bazlîyapllândlülnalarda, bir tasiýlîüyüzeyde çok saylâh farklljintijenik peptidi sergilemektedir. BazElyapllândlElnalarda, bir taslsîIEZl/üzeyi, seçilen parçalar. (örn. antijenik peptitler) kovalent birlesimine yönelik fonksiyonel gruplarEIsergilemektedir. BazEl yapliândünalarda, taslîlîlîiyüzeyin fonksiyonel gruplari: seçilen parçalar (örn. antijenik peptitler) ile kovalent olmayan etkilesime yönelik bölgeleri saglamaktadlE BazIZI yapllândiEinalarda, bir tasMEDkonjuge edici parçalarIEl, kimyasal bag formasyonu olmadan sogurulabildigi bir yüzeye sahiptir. BazEIyapllândlElnalarda, partikül, metalik degildir. Bu yapllândlElnalarda, partikül, bir polimerden olusturulabilmektedir. Tercih edilen bir yapllândlünada, partikül, bir bireyde biyolojik olarak bozulabilmektedir. Bu yapilândlîilnada, partiküller, bireyde partiküllün bir akümülasyonu olmadan bir bireye çok say. doz saglayabilmektedir. Uygun partiküllerin örnekleri, polistiren partikülleri, PLGA partiküllerini ve elmas partikülleri Içermektedir. Tercihen partikül yüzeyi, spesifik olmayan veya istenmeyen biyolojik etkilesimleri minimuma indiren bir malzemeden olusmaktadlB Partikül yüzeyi ve interstitium arasIaki etkilesimler, etkilesimleri önlemek veya azaltmak için bir malzeme ile kaplanabilmektedir. Poli(etilen glikol) (PEG) gibi hidrofilik katmanlarla ve PLURONICS gibi kopolimerleri (poli(etilen glikol)-bl- poli (propilen glikol)-bI-poli(etilen glikol) kopolimerleri dahil) ile partiküllerin kaplamasElle sterik stabilizasyonu, subkütanöz enjeksiyondan sonra gelismis Ienfatik aln ile gösterildigi gibi interstitium proteinleri ile spesifik olmayan etkilesimleri azaltabilmektedir. Tüm bu gerçekler, lenfatik alIi aç-an partiküllerin fiziksel özelliklerinin önemine isaret etmektedir. Biyolojik olarak parçalanabilir polimerler, tüm veya baz polimerleri ve/veya partikülleri ve/veya katmanlarüolusturacak sekilde kullanllâbilmektedir. Biyolojik olarak bozulabilir polimerler, örnegin çözeltide su ile reaksiyona giren fonksiyonel gruplarI bir sonucu ile degradasyona tabi olabilmektedir. Burada kullanllân "degradasyon" terimi, moleküler aglEiligiI azaltllßîaslîlveya hidrofobik gruplariEl, hidrofilik gruplara dönüsümü ile uygun çözülebilir hale gelmesini ifade etmektedir. Ester gruplar. sahip polimerler genel olarak spontane hidrolize, örnegin polilaktidlere ve poliglikolitlere tabidir. Partiküller ayriEb ek bilesenleri içerebilmektedir. Örnegin, tasEIEllâr, tasEIElîla dahil edilen veya konjuge edilen görüntüleme maddelerine sahip olabilmektedir. Günümüzde ticari olarak temin edilebilen bir görüntüleme maddesine sahip olan bir taslsîlîlîhanosferinin bir örnegi, Kodak X-görüs nanosferleridir. Kuantum noktalarüQD'ler) olarak bilinen inorganik kuantum sIlEllEllüminesan nanokristalleri, FRET uygulamalarIa ideal donörler olarak ortaya çlthnlStlEl yüksek kuantum verimliligi ve ayarlanabilir boyuta baglilßtokes KaymalarüfarklEboyutlarlEl, tek bir ultraviyole dalga uzunlugunda uyguland[gilda maviden k-tesine yayllÜiasI izin hibrid organik/inorganik kuantum noktalarElgibi kuantum noktalarÇl biyolojik isaretleme, görüntüleme ve optik biyo alglßma sistemlerinde kullanllâbilmektedir. (Lemon, ve geleneksel sentezinin aksine, bu hibrid kuantum noktasljianopartiküllerinin sentezi, yüksek lebkIilZlarElveya yüksek derecede toksik, stabil olmayan reaktifleri gerektirmemektedir. Partiküller, genis bir malzeme arallglIan olusturulabilmektedir. Partikül tercihen biyolojik kullanl için uygun bir malzemeden olusmaktadlEl Örnegin, partiküller, cam, silika, hidroksi karboksilik asitlerin polyesterleri, dikarboksilik asitlerin polianhidritleri veya hidroksi karboksilik asitlerin kopolimerleri ve dikarboksilik asitlerden olusabilmektedir. Daha genel olarak, taslýlîlîpartikülleri, düz zincirli veya dallanmlgl ikame edilmis veya ikame edilmemis, doymus veya doymamEJ lineer veya çapraz baglüalkanil, haloalkil, tioalkil, aminoalkil, aril, aralkil, alkenil, aralkenil, heteroaril veya alkoksi hidroksi asitler veya düz zincirli veya dallanmlg] ikame edilmis veya ikame edilmemis, doymus veya doymamlgl lineer veya çapraz baglüalkanil, haloalkil, tiyoalkil, polianhidritleri veya aminoalkil, aril, aralkil, alkenil, aralkenil, heteroaril veya alkoksi dikarboksilik asitlerin polyesterlerinden olusabilmektedir. Ek olarak, taslýlîlîlpartikülleri, kuantum noktalarüolabilmektedir veya kuantum noktasEI polistiren partikülleri gibi kuantum noktalarlEL'lan olusabilmektedir (Joumaa ve meslektaslarEKZOOö) Langmuir 22: 1810-6). Esterin ve anhidrit baglarI karElînilarlElEQörn. glikolik ve sebasik asidin kopolimerleri) içeren taslîtlaîbartiküller de kullanllâbilmektedir. Örnegin, taslsîlîlîbaitiküller, poliglikolik asit polimerler (PGA), polilaktik asit polimerler (PLA), polisakasik asit polimerler (PSA), poli(laktik-ko-glikolik) asit kopolimerleri (PLGA veya PLG; terimler birbirinin yerine geçebilir), [rho]oli(laktIk-ko-sebasik) asit kopolimerleri (PLSA), poli(glikolik-ko-sebasik) asit kopolimerleri (PGSA) ve benzerini içeren malzemeleri içerebilmektedir. Mevcut bulusta kullanlglüliger biyouyumlu, biyolojik olarak bozulabilir polimerler, kaprolaktonlar, karbonatlar, amitler, amino asitler, ortoesterler, asetaller, siyanoakrilatlar ve parçalanabilir üretanlarlEl polimerlerini veya kopolimerlerini içermektedir, ayrlîla düz zincirli veya dallanmlgl ikame Kodak X-görüs nanosferleridir. Kuantum noktalarüQD'ler) olarak bilinen inorganik kuantum sIlEllEllüminesan nanokristalleri, FRET uygulamalarIa ideal donörler olarak ortaya çlthnlStlEl yüksek kuantum verimliligi ve ayarlanabilir boyuta baglilßtokes KaymalarüfarklEboyutlarlEl, tek bir ultraviyole dalga uzunlugunda uyguland[gilda maviden k-tesine yayllÜiasI izin hibrid organik/inorganik kuantum noktalarElgibi kuantum noktalarÇl biyolojik isaretleme, görüntüleme ve optik biyo alglßma sistemlerinde kullanllâbilmektedir. (Lemon, ve geleneksel sentezinin aksine, bu hibrid kuantum noktasljianopartiküllerinin sentezi, yüksek lebkIilZlarElveya yüksek derecede toksik, stabil olmayan reaktifleri gerektirmemektedir. Partiküller, genis bir malzeme arallglIan olusturulabilmektedir. Partikül tercihen biyolojik kullanl için uygun bir malzemeden olusmaktadlEl Örnegin, partiküller, cam, silika, hidroksi karboksilik asitlerin polyesterleri, dikarboksilik asitlerin polianhidritleri veya hidroksi karboksilik asitlerin kopolimerleri ve dikarboksilik asitlerden olusabilmektedir. Daha genel olarak, taslýlîlîpartikülleri, düz zincirli veya dallanmlgl ikame edilmis veya ikame edilmemis, doymus veya doymamEJ lineer veya çapraz baglüalkanil, haloalkil, tioalkil, aminoalkil, aril, aralkil, alkenil, aralkenil, heteroaril veya alkoksi hidroksi asitler veya düz zincirli veya dallanmlg] ikame edilmis veya ikame edilmemis, doymus veya doymamlgl lineer veya çapraz baglüalkanil, haloalkil, tiyoalkil, polianhidritleri veya aminoalkil, aril, aralkil, alkenil, aralkenil, heteroaril veya alkoksi dikarboksilik asitlerin polyesterlerinden olusabilmektedir. Ek olarak, taslýlîlîlpartikülleri, kuantum noktalarüolabilmektedir veya kuantum noktasEI polistiren partikülleri gibi kuantum noktalarlEL'lan olusabilmektedir (Joumaa ve meslektaslarEKZOOö) Langmuir 22: 1810-6). Esterin ve anhidrit baglarI karElînilarlElEQörn. glikolik ve sebasik asidin kopolimerleri) içeren taslîtlaîbartiküller de kullanllâbilmektedir. Örnegin, taslsîlîlîbaitiküller, poliglikolik asit polimerler (PGA), polilaktik asit polimerler (PLA), polisakasik asit polimerler (PSA), poli(laktik-ko-glikolik) asit kopolimerleri (PLGA veya PLG; terimler birbirinin yerine geçebilir), [rho]oli(laktIk-ko-sebasik) asit kopolimerleri (PLSA), poli(glikolik-ko-sebasik) asit kopolimerleri (PGSA) ve benzerini içeren malzemeleri içerebilmektedir. Mevcut bulusta kullanlglüliger biyouyumlu, biyolojik olarak bozulabilir polimerler, kaprolaktonlar, karbonatlar, amitler, amino asitler, ortoesterler, asetaller, siyanoakrilatlar ve parçalanabilir üretanlarlEl polimerlerini veya kopolimerlerini içermektedir, ayrlîla düz zincirli veya dallanmlgl ikame edilmis veya ikame edilmemis alkanil, haloalkil, tioalkil, aminoalkil, alkenil veya aromatik hidroksi veya di-karboksilik asitler ile bunlar. kopolimerlerini içermektedir. Ek olarak, 88/5000 Iisin, arginin, aspartik asit, glutamik asit, serin, treonin, tirozin ve sistein gibi reaktif taraf zincir gruplar. veya enantiyomerlerine sahip biyolojik olarak önemli amino asitler, antijen peptitlerine ve proteinlerine veya konjuge edici parçalara konjuge edilmesine yönelik reaktif gruplarßaglamak üzere yukar- bahsi geçen herhangi bir malzeme ile kopolimerlere dahil edilebilmektedir. Mevcut bulus için uygun biyolojik olarak bozulabilir malzemeler, bulusta kullan! için uygun PLGA polimerleriyle elmas, PLA, PGA ve PLGA polimerleri içermektedir. Biyolojik olarak uyumlu, fakat biyolojik olarak bozulmayan malzemeler de bulusun taslýlûîbartiküllerinde kullanilâbilmektedir. Örnegin, akrilatlar, etilen-vinil asetatlar, asil ikameli selüloz asetatlar, bozunmaz üretanlar, stirenler, vinil klorürler, vinil floritler, vinil imidazoller, klorosülfonatlanmlgl olefinler, etilen oksit, vinil alkoller TEFLON® (DuPont, Wilmington, Del.) ve naylonlarI biyolojik olarak bozulabilir polimerleri kullanllâbilmektedir. Günümüzde ticari olarak temin edilebilen uygun tanecikler, FIuoSpheres (Molecular Probes, Eugene, Oreg.) gibi polistiren tanecikleri içermektedir. BazEIyapllândlEinalarda, mevcut bulus, asagülakileri içeren sistemleri saglamaktadEl (a) kimyasal ve/veya biyolojik maddelerin bir denege iletilmesi için yapllândIEllân bir iletim skafoldu; ve (b) antijene yönelik toleransI indüklenmesine yönelik antijene baglüaoliüaktit- koglikolit) partikülleri. BazEyapllândlîiinalarda, söz konusu iletim skafoldun en az bir bölümü mikro gözeneklidir. BazEl/apilândünalarda, antijene baglEpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, söz konusu skafold içerisinde enkapsüle edilmektedir. BazlZlyapllândlîrlnalarda, kimyasal ve/veya biyolojik maddeler, asag-kilerden olusan gruptan seçilmektedir: protein, peptid, küçük moleküller, nükleik asitler, hücreler ve partiküller. BazEl/apllândünalarda, kimyasal ve/veya biyolojik maddeler, hücreyi içermektedir ve söz konusu hücreler, pankreatik adaclKl hücrelerini içermektedir. Fiziksel özellikler ayrIEla olgun olmayan Ienfostilere sahip olan alanlarda alldan ve muhafazadan sonra bir nanopartikül kullanlSIHJEElile iliskilidir. Bunlar, bir sertlik veya kauçukluk gibi mekanik özellikleri içermektedir. Bazülapüândlîilnalar, örnegin sistemik (fakat hedeflenmemis veya immün) iletim için güncel olarak gelistirilmis ve karakterize edilmis PPS- PEG sisteminde oldugu gibi PEG sistemindeki gibi bir hidrofilik üst katman benzeri bir üst katman ile bir poli(propilen sülfür) (PPS) çekirdegi gibi bir kauçuk çekirdege baglIE Kauçuk çekirdegi, bir polistiren veya metal nanopartikül sistemde oldugu gibi büyük ölçüde sert bir edilmis veya ikame edilmemis alkanil, haloalkil, tioalkil, aminoalkil, alkenil veya aromatik hidroksi veya di-karboksilik asitler ile bunlar. kopolimerlerini içermektedir. Ek olarak, 88/5000 Iisin, arginin, aspartik asit, glutamik asit, serin, treonin, tirozin ve sistein gibi reaktif taraf zincir gruplar. veya enantiyomerlerine sahip biyolojik olarak önemli amino asitler, antijen peptitlerine ve proteinlerine veya konjuge edici parçalara konjuge edilmesine yönelik reaktif gruplarßaglamak üzere yukar- bahsi geçen herhangi bir malzeme ile kopolimerlere dahil edilebilmektedir. Mevcut bulus için uygun biyolojik olarak bozulabilir malzemeler, bulusta kullan! için uygun PLGA polimerleriyle elmas, PLA, PGA ve PLGA polimerleri içermektedir. Biyolojik olarak uyumlu, fakat biyolojik olarak bozulmayan malzemeler de bulusun taslýlûîbartiküllerinde kullanilâbilmektedir. Örnegin, akrilatlar, etilen-vinil asetatlar, asil ikameli selüloz asetatlar, bozunmaz üretanlar, stirenler, vinil klorürler, vinil floritler, vinil imidazoller, klorosülfonatlanmlgl olefinler, etilen oksit, vinil alkoller TEFLON® (DuPont, Wilmington, Del.) ve naylonlarI biyolojik olarak bozulabilir polimerleri kullanllâbilmektedir. Günümüzde ticari olarak temin edilebilen uygun tanecikler, FIuoSpheres (Molecular Probes, Eugene, Oreg.) gibi polistiren tanecikleri içermektedir. BazEIyapllândlEinalarda, mevcut bulus, asagülakileri içeren sistemleri saglamaktadEl (a) kimyasal ve/veya biyolojik maddelerin bir denege iletilmesi için yapllândIEllân bir iletim skafoldu; ve (b) antijene yönelik toleransI indüklenmesine yönelik antijene baglüaoliüaktit- koglikolit) partikülleri. BazEyapllândlîiinalarda, söz konusu iletim skafoldun en az bir bölümü mikro gözeneklidir. BazEl/apilândünalarda, antijene baglEpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, söz konusu skafold içerisinde enkapsüle edilmektedir. BazlZlyapllândlîrlnalarda, kimyasal ve/veya biyolojik maddeler, asag-kilerden olusan gruptan seçilmektedir: protein, peptid, küçük moleküller, nükleik asitler, hücreler ve partiküller. BazEl/apllândünalarda, kimyasal ve/veya biyolojik maddeler, hücreyi içermektedir ve söz konusu hücreler, pankreatik adaclKl hücrelerini içermektedir. Fiziksel özellikler ayrIEla olgun olmayan Ienfostilere sahip olan alanlarda alldan ve muhafazadan sonra bir nanopartikül kullanlSIHJEElile iliskilidir. Bunlar, bir sertlik veya kauçukluk gibi mekanik özellikleri içermektedir. Bazülapüândlîilnalar, örnegin sistemik (fakat hedeflenmemis veya immün) iletim için güncel olarak gelistirilmis ve karakterize edilmis PPS- PEG sisteminde oldugu gibi PEG sistemindeki gibi bir hidrofilik üst katman benzeri bir üst katman ile bir poli(propilen sülfür) (PPS) çekirdegi gibi bir kauçuk çekirdege baglIE Kauçuk çekirdegi, bir polistiren veya metal nanopartikül sistemde oldugu gibi büyük ölçüde sert bir çekirdegin aksinedir. Kauçuk terimi, polimer tekniklerinde olanlara benzer bir terim olan kauçuk ile dogal veya sentetik kauçuklardan ziyade belirli esnek malzemeleri ifade etmektedir. Örnegin, çapraz bagIEPPS, bir hidrofobik kauçuk çekirdegi olusturmak üzere kullanüâbilmektedir. PPS, polisülfokside veya nihai olarak polisülfona oksidatif kosullar aItIa bozulan, bir hidrofobik kauçuktan, bir hidrofilik suda çözülebilir polimere geçis yapan bir polimerdir. Diger sülût polimerler, meronun omurgasIa bir sülfür ile bir polimere istinaden sülfit polimer terimiyle kullan! için benimsenebilmektedir. Kullanilâbilen diger kauçuk polimerler, yaklasiEJ37° C'den daha az olan hidratlanmlgikosullar aItIa cam geçis slîlakl[gi. sahip polyesterlerdir. Bir hidrofobik çekirdek, çekirdegin ve üst katmanlEl, birbirine karlginaya meyilli olmayacak olmasian dolayElbir hidrofilik üst katman ile avantajlElbir sekilde kullaniiâbilmektedir, böylelikle üst katman, çekirdekten sterik olarak genislemeye meyillidir. Bir çekirdek, üzerinde bir katmana sahip olan bir partikülü ifade etmektedir. Bir katman, çekirdegin en az bir bölümünü kapsayan bir malzemeyi ifade etmektedir. Bir katman, sogurulabilmekte veya kovalent olarak baglanabilmektedir. Bir partikül veya çekirdek, katEl veya Içi bos olabilmektedir. Kauçuk hidrofobik çekirdekler, hidrofobik ilaçlarI daha yüksek yüklerinin, kauçuk hidrofobik çekirdeklerle partiküller vasEislîla uygulanabilmesi aç-an kristalin veya camsEi(polistiren durumunda oldugu gibi) çekirdekler gibi katElhidrofobik çekirdekler üzerinde avantajlIE Bir diger fiziksel özellikle, yüzeyin hidrofilisitesidir. Bir hidrofilik malzeme, çapraz baglanmadigliîida litre basli-iki en az 1 gram suda bir çözünürlüge sahip olabilmektedir. Hidrofilik polimerlerle partiküllerin sterik stabilizasyonu, indirgeyici spesifik olmayan etkilesimler ile interstitiumdan aIIiEgelistirebilmektedir; fakat partiküllerin artan görünmez yapEEiayrlEti olgun olmayan Ienfostilere sahip olan alanlarda fagositik hücreler ile içsellestirmeyi azaltabilmektedir. Fakat bu rekabetçi özelliklerin dengelenmesinin zorlugu karsilânmigtmve bu basvuru, lenf bezlerinde DC'Iere veya diger APC'Iere etkili Ienfatik iletime yönelik nanopartiküllerin üretimini belgelendirmektedir. BazEl yapHândlElnalar, örnegin hidrofilik malzemenin bir katmanEigibi bir hidrofilik bileseni içermektedir. Uygun hidrofilik malzemelerin örnekleri, bir veya birden fazla polialkilen oksitler, polietilen oksitler, polisakaritler, poliakrilik asitler ve polieterlerdir. Bir katmanda polimerlerin moleküler agIElilglÇI engelin faydaIEbir derecesini saglamak üzere ayarlanabilmektedir; teknikte tecrübe sahibi kisiler, tüm aralüZIarI ve açUZlça belirtilen aralElZIar içerisindeki degerlerin, örnegin 10,000 ve 50,000 arasIa tasarland [glIEIiakdir edecektir. çekirdegin aksinedir. Kauçuk terimi, polimer tekniklerinde olanlara benzer bir terim olan kauçuk ile dogal veya sentetik kauçuklardan ziyade belirli esnek malzemeleri ifade etmektedir. Örnegin, çapraz bagIEPPS, bir hidrofobik kauçuk çekirdegi olusturmak üzere kullanüâbilmektedir. PPS, polisülfokside veya nihai olarak polisülfona oksidatif kosullar aItIa bozulan, bir hidrofobik kauçuktan, bir hidrofilik suda çözülebilir polimere geçis yapan bir polimerdir. Diger sülût polimerler, meronun omurgasIa bir sülfür ile bir polimere istinaden sülfit polimer terimiyle kullan! için benimsenebilmektedir. Kullanilâbilen diger kauçuk polimerler, yaklasiEJ37° C'den daha az olan hidratlanmlgikosullar aItIa cam geçis slîlakl[gi. sahip polyesterlerdir. Bir hidrofobik çekirdek, çekirdegin ve üst katmanlEl, birbirine karlginaya meyilli olmayacak olmasian dolayElbir hidrofilik üst katman ile avantajlElbir sekilde kullaniiâbilmektedir, böylelikle üst katman, çekirdekten sterik olarak genislemeye meyillidir. Bir çekirdek, üzerinde bir katmana sahip olan bir partikülü ifade etmektedir. Bir katman, çekirdegin en az bir bölümünü kapsayan bir malzemeyi ifade etmektedir. Bir katman, sogurulabilmekte veya kovalent olarak baglanabilmektedir. Bir partikül veya çekirdek, katEl veya Içi bos olabilmektedir. Kauçuk hidrofobik çekirdekler, hidrofobik ilaçlarI daha yüksek yüklerinin, kauçuk hidrofobik çekirdeklerle partiküller vasEislîla uygulanabilmesi aç-an kristalin veya camsEi(polistiren durumunda oldugu gibi) çekirdekler gibi katElhidrofobik çekirdekler üzerinde avantajlIE Bir diger fiziksel özellikle, yüzeyin hidrofilisitesidir. Bir hidrofilik malzeme, çapraz baglanmadigliîida litre basli-iki en az 1 gram suda bir çözünürlüge sahip olabilmektedir. Hidrofilik polimerlerle partiküllerin sterik stabilizasyonu, indirgeyici spesifik olmayan etkilesimler ile interstitiumdan aIIiEgelistirebilmektedir; fakat partiküllerin artan görünmez yapEEiayrlEti olgun olmayan Ienfostilere sahip olan alanlarda fagositik hücreler ile içsellestirmeyi azaltabilmektedir. Fakat bu rekabetçi özelliklerin dengelenmesinin zorlugu karsilânmigtmve bu basvuru, lenf bezlerinde DC'Iere veya diger APC'Iere etkili Ienfatik iletime yönelik nanopartiküllerin üretimini belgelendirmektedir. BazEl yapHândlElnalar, örnegin hidrofilik malzemenin bir katmanEigibi bir hidrofilik bileseni içermektedir. Uygun hidrofilik malzemelerin örnekleri, bir veya birden fazla polialkilen oksitler, polietilen oksitler, polisakaritler, poliakrilik asitler ve polieterlerdir. Bir katmanda polimerlerin moleküler agIElilglÇI engelin faydaIEbir derecesini saglamak üzere ayarlanabilmektedir; teknikte tecrübe sahibi kisiler, tüm aralüZIarI ve açUZlça belirtilen aralElZIar içerisindeki degerlerin, örnegin 10,000 ve 50,000 arasIa tasarland [glIEIiakdir edecektir. Nanopartiküller, diger reaksiyona yönelik fonksiyonel gruplarEl içerebilmektedir. Diger reaksiyona yönelik fonksiyonel gruplar, elektrofilleri veya nükleofilleri içermektedir, bunlar, diger moleküller ile reaksiyona girmesi için uygundur. Nükleoûlleirn örnekleri, birincil aminler, tiyollar ve hidroksillerdir. Elektrofillerin örnekleri, süksinimidil esterler, aldehitler, izosiyanatlar ve maleimidlerdir. Teknikte iyi bilinen genis say. araçlar, tasMElâra antijenik peptitleri ve proteinleri konjuge edecek sekilde kullanuâbilmektedir. Bu yöntemler, antijen peptitlerin ve proteinlerin biyolojik aktivitesini yok etmeyen veya siddetli bir sekilde klîlt'lamayan ve bir kognat T hücresi reseptörü ile antijen peptidin veya proteinin etkilesimine olanak saglayan bir yönlendirmede taslýlaýb konjuge edilecek yeteri say. antijen peptidine ve proteinine olanak saglayan herhangi bir standart kimyayüçermektedir. Genel olarak, bir antijen peptidin veya proteinin C-terminal bölgelerini veya bir antijen peptidin veya protein füzyon proteinin C-terminal bölgelerini, kazanana künjüge eden yöntemler tercih edilmektedir. Kesin kimyalar elbette kazanan malzemesinin yap-, antijen peptidine veya proteine C-terminal füzyonlarII mevcudiyetine veya yokluguna ve/veya konjuge edici parçalarII mevcudiyetine veya yokluguna bagllîcblacaktlü Fonksiyonel gruplar, kullanliâbilirlik için gerektigi kadar partiküle konumlandlEllâbilmektedir. Bir konum, çekirdek polimerinde veya bir çekirdekteki katmanlar olan polimerlerde veya baska bir sekilde partiküle baglanan polimerlerde yari gruplar veya terminaller olabilmektedir. Örnegin, burada spesifik hücre hedefleme veya protein ve peptit ilaç iletimi için hali hazüla fonksiyonlandlîllâbilen nanopartikülleri stabilize eden PEG'yi aç[lZ]ayan örnekler burada dahil edilmektedir. Etilen karbodiimid (ECDI), heksametilen diizosiyanat, 2 epoksi kallEtlýEiçeren propileneglikol di-glikidileter vepiklorohidrin gibi konjugatlar, peptitlerin veya proteinlerin tasMEEVüzeyine sabitlenmesi için kullanllâbilmektedir. Belirli bir teoriye baglEkalmadan, ECDI'nlEl, tolerans indüksiyonu için iki ana fonksiyonu uygulandEglüdan süphelenilmektedir: (a) serbest amino ve serbest karboksil gruplar arasIa peptit bagEllormasyonun katalizi vasltâslýla hücre yüzeyine proteini/peptitleri kimyasal olarak baglamaktadlîj ve (b) dalakta hücreleri temsil eden konak antijeni ile toplandllZlarEl/e toleranslZlndükledikleri sekilde apoptotik hücre bölümünü taklit etmek üzere taslîlîlîüindüklemektedir. Bu, otoreaktif hücrelerde bir dogrudan anerji Indüksiyonuna yol açan bir immünojenik olmayan modelde konak T-hücrelerine sunumdur. Ek olarak, ECDI, spesifik düzenleyici T hücrelerinin indüksiyonu için potansiyelli bir uyarlEEl Nanopartiküller, diger reaksiyona yönelik fonksiyonel gruplarEl içerebilmektedir. Diger reaksiyona yönelik fonksiyonel gruplar, elektrofilleri veya nükleofilleri içermektedir, bunlar, diger moleküller ile reaksiyona girmesi için uygundur. Nükleoûlleirn örnekleri, birincil aminler, tiyollar ve hidroksillerdir. Elektrofillerin örnekleri, süksinimidil esterler, aldehitler, izosiyanatlar ve maleimidlerdir. Teknikte iyi bilinen genis say. araçlar, tasMElâra antijenik peptitleri ve proteinleri konjuge edecek sekilde kullanuâbilmektedir. Bu yöntemler, antijen peptitlerin ve proteinlerin biyolojik aktivitesini yok etmeyen veya siddetli bir sekilde klîlt'lamayan ve bir kognat T hücresi reseptörü ile antijen peptidin veya proteinin etkilesimine olanak saglayan bir yönlendirmede taslýlaýb konjuge edilecek yeteri say. antijen peptidine ve proteinine olanak saglayan herhangi bir standart kimyayüçermektedir. Genel olarak, bir antijen peptidin veya proteinin C-terminal bölgelerini veya bir antijen peptidin veya protein füzyon proteinin C-terminal bölgelerini, kazanana künjüge eden yöntemler tercih edilmektedir. Kesin kimyalar elbette kazanan malzemesinin yap-, antijen peptidine veya proteine C-terminal füzyonlarII mevcudiyetine veya yokluguna ve/veya konjuge edici parçalarII mevcudiyetine veya yokluguna bagllîcblacaktlü Fonksiyonel gruplar, kullanliâbilirlik için gerektigi kadar partiküle konumlandlEllâbilmektedir. Bir konum, çekirdek polimerinde veya bir çekirdekteki katmanlar olan polimerlerde veya baska bir sekilde partiküle baglanan polimerlerde yari gruplar veya terminaller olabilmektedir. Örnegin, burada spesifik hücre hedefleme veya protein ve peptit ilaç iletimi için hali hazüla fonksiyonlandlîllâbilen nanopartikülleri stabilize eden PEG'yi aç[lZ]ayan örnekler burada dahil edilmektedir. Etilen karbodiimid (ECDI), heksametilen diizosiyanat, 2 epoksi kallEtlýEiçeren propileneglikol di-glikidileter vepiklorohidrin gibi konjugatlar, peptitlerin veya proteinlerin tasMEEVüzeyine sabitlenmesi için kullanllâbilmektedir. Belirli bir teoriye baglEkalmadan, ECDI'nlEl, tolerans indüksiyonu için iki ana fonksiyonu uygulandEglüdan süphelenilmektedir: (a) serbest amino ve serbest karboksil gruplar arasIa peptit bagEllormasyonun katalizi vasltâslýla hücre yüzeyine proteini/peptitleri kimyasal olarak baglamaktadlîj ve (b) dalakta hücreleri temsil eden konak antijeni ile toplandllZlarEl/e toleranslZlndükledikleri sekilde apoptotik hücre bölümünü taklit etmek üzere taslîlîlîüindüklemektedir. Bu, otoreaktif hücrelerde bir dogrudan anerji Indüksiyonuna yol açan bir immünojenik olmayan modelde konak T-hücrelerine sunumdur. Ek olarak, ECDI, spesifik düzenleyici T hücrelerinin indüksiyonu için potansiyelli bir uyarlEEl olarak hareket etmektedir. Bir dizi yapllândlünada, antijen peptitler ve proteinler, bir kovalent kimyasal bag vasßâslßa taslýlîlýla baglanmaktadlEl Örnegin, antijenin C-terminalinin yakIIda bir reaktif grup veya parça (örn. C-terminal karboksil grup veya bir hidroksil, tiyol veya bir amino asit yan zincirinden amin grup), dogrudan kimyasal reaksiyon ile taslýlüjiüzeyinde bir reaktif gruba veya parçaya (örn. bir PLA veya PGA polimerinin bir hidroksil veya karboksil grubu, bir dendrimerin bir terminal amini veya karboksil grubu veya bir fosfolipidin, bir hidroksil, karboksil veya fosfat grubu) dogrudan konjuge edilebilmektedir. Alternatif olarak, antijen peptitlerine ve proteinlere ve taslýlîlîla kovalent olarak konjuge olan bir konjuge edici parça olabilmektedir, bu sekilde bunlarl]birbirine baglamaktadlEl Bir tasEIElEllEl yüzeyindeki reaktif karboksil gruplar, örnegin 1-etil-3-[3,9-dimetil aminopropil]karb0diimid hidroklorür (EDC) veya N-hidroksisüksinimid ester (NHS) ile bunlari] reaksiyona sokarak antijen peptidinde veya proteinde serbest aminlere (örn. Lys kallEtllârIdan) birlestirilebilmektedir. Benzer bir sekilde, aynElkimya, antijen peptidinde veya protein serbest karboksillerle (örn. C-terminalînden veya Asp veya Glu kalliîtllârirîkjan) bir taslýlîlüll yüzeyinde serbest aminleri konjuge edecek sekilde kullanllâbilmektedir. Alternatif olarak, bir taslýlîlîlyüzeyinde serbest amin gruplar, esasen Arano ve meslektaslarE(1991) Chem. 2:71-6 tarafIan açlElandigllîgibi sülfo-SIAB kimyasIEkullanarak antijen peptitlerine ve proteinlerine veya antijen peptide veya protein füzyon proteinlerine kovalent olarak baglanabilmektedir. Bir diger yapllândünada, antijen peptidine veya proteinine baglEbir Iigand ve taslîlöß birlestirilen bir anti-Iigand arasiEUaki bir kovalent olmayan bag, taslsîlîlýla antijeni konjuge edebilmektedir. Örnegin, bir biyotin Iigaz tanIia sekansüatiketi, bir antijen peptidinin veya proteinin C-terminaline birlestirilebilmektedir ve bu etiket, biyotin ligazEIiIe biyotinile edilebilmektedir. Biyotin daha sonrasIia antijen peptidini veya proteini, sogurulan veya baska bir sekilde bir anti-ligand olarak tasElîEl/üzeyine baglanan avidin veya streptavidine kovalent olmayacak sekilde konjuge etmek üzere bir Iigand olarak hareket edebilmektedir. Alternatif olarak, antijen peptitlerinin ve proteinlerin, yukar- açllîlandlglîgliibi bir Fc bölgesini taslEan bir immünoglobulin alan. kaynaslEIolmalelialinde, Fc alanEbir Iigand olarak hareket edebilmektedir ve tasElîElyüzeyine kovalent olarak veya kovalent olmayacak sekilde baglanan protein A, taslîlýla antijen peptidi veya proteini kovalent olmayacak sekilde konjuge etmek üzere anti-ligand olarak hareket edebilmektedir. Diger araçlar, metal iyon selasyon olarak hareket etmektedir. Bir dizi yapllândlünada, antijen peptitler ve proteinler, bir kovalent kimyasal bag vasßâslßa taslýlîlýla baglanmaktadlEl Örnegin, antijenin C-terminalinin yakIIda bir reaktif grup veya parça (örn. C-terminal karboksil grup veya bir hidroksil, tiyol veya bir amino asit yan zincirinden amin grup), dogrudan kimyasal reaksiyon ile taslýlüjiüzeyinde bir reaktif gruba veya parçaya (örn. bir PLA veya PGA polimerinin bir hidroksil veya karboksil grubu, bir dendrimerin bir terminal amini veya karboksil grubu veya bir fosfolipidin, bir hidroksil, karboksil veya fosfat grubu) dogrudan konjuge edilebilmektedir. Alternatif olarak, antijen peptitlerine ve proteinlere ve taslýlîlîla kovalent olarak konjuge olan bir konjuge edici parça olabilmektedir, bu sekilde bunlarl]birbirine baglamaktadlEl Bir tasEIElEllEl yüzeyindeki reaktif karboksil gruplar, örnegin 1-etil-3-[3,9-dimetil aminopropil]karb0diimid hidroklorür (EDC) veya N-hidroksisüksinimid ester (NHS) ile bunlari] reaksiyona sokarak antijen peptidinde veya proteinde serbest aminlere (örn. Lys kallEtllârIdan) birlestirilebilmektedir. Benzer bir sekilde, aynElkimya, antijen peptidinde veya protein serbest karboksillerle (örn. C-terminalînden veya Asp veya Glu kalliîtllârirîkjan) bir taslýlîlüll yüzeyinde serbest aminleri konjuge edecek sekilde kullanllâbilmektedir. Alternatif olarak, bir taslýlîlîlyüzeyinde serbest amin gruplar, esasen Arano ve meslektaslarE(1991) Chem. 2:71-6 tarafIan açlElandigllîgibi sülfo-SIAB kimyasIEkullanarak antijen peptitlerine ve proteinlerine veya antijen peptide veya protein füzyon proteinlerine kovalent olarak baglanabilmektedir. Bir diger yapllândünada, antijen peptidine veya proteinine baglEbir Iigand ve taslîlöß birlestirilen bir anti-Iigand arasiEUaki bir kovalent olmayan bag, taslsîlîlýla antijeni konjuge edebilmektedir. Örnegin, bir biyotin Iigaz tanIia sekansüatiketi, bir antijen peptidinin veya proteinin C-terminaline birlestirilebilmektedir ve bu etiket, biyotin ligazEIiIe biyotinile edilebilmektedir. Biyotin daha sonrasIia antijen peptidini veya proteini, sogurulan veya baska bir sekilde bir anti-ligand olarak tasElîEl/üzeyine baglanan avidin veya streptavidine kovalent olmayacak sekilde konjuge etmek üzere bir Iigand olarak hareket edebilmektedir. Alternatif olarak, antijen peptitlerinin ve proteinlerin, yukar- açllîlandlglîgliibi bir Fc bölgesini taslEan bir immünoglobulin alan. kaynaslEIolmalelialinde, Fc alanEbir Iigand olarak hareket edebilmektedir ve tasElîElyüzeyine kovalent olarak veya kovalent olmayacak sekilde baglanan protein A, taslîlýla antijen peptidi veya proteini kovalent olmayacak sekilde konjuge etmek üzere anti-ligand olarak hareket edebilmektedir. Diger araçlar, metal iyon selasyon teknikleri dahil (örn. antijen peptidinin veya proteininin veya antijen peptidi veya protein füzyon proteinlerinin C-terminalinde bir poIi-His etiketini ve bir Ni+-kapll:llasl$mullanarak) taslEEllâra antijen peptitlerini ve proteinlerini kovalent olmayacak sekilde konjuge etmek üzere kullanüâbilen teknikte iyi bilinmektedir ve bu yöntemler, burada açiElananlar için ikame edilebilmektedir. Bir nükleik asit parçasIlEl, bir platform molekülüne konjugasyonu, nükleik asit parçasIa ve platform molekülünde tipik olarak bir veya birden fazla çapraz baglama maddelerini ve fonksiyonel gruplarEliçeren herhangi bir saylElia yöntemde etkilenebilmektedir. Baglantlîl gruplarüstandart sentetik kimya tekniklerini kullanarak platformlara eklenmektedir. Baglantlîl gruplari: standart sentetik teknikleri kullanarak nükleik asit parçalar. eklenebilmektedir. Pratisyen hekim, bu bulusun kombinasyonlarIa kullan En antijenlere yönelik bir dizi seçime sahiptir. Kombinasyonda mevcut indükleyici antijen, indüklenen tolerojenik yan- özgüllügünü katküia bulunmaktadE Mevcut antijen olan veya istenmeyen Immünolojik yani& yönelik bir hedef olan ve tolerans. arzu edildigi, tedavi edilen denege yerlestirilecek hedef antijen olan hedef antijen ile aynlîcblabilmektedir veya aynlßlmayabilmektedir. Mevcut bulusun bir indükleyici antijeni, bir polipeptit, polinükleotid, karbonhidrat, glikolipid veya bir biyolojik kaynaktan izole diger molekül olabilmektedir veya mukozal baglama bileseni ile birlestirildiginde bu aç[Elamaya göre toleransündükleyebilme kabiliyetine sahip olmasIElsaglayarak bir kimyasal olarak sentezlenmis küçük molekül, polimer veya bir biyolojik malzemenin türevi olabilmektedir. BazEl/apilândlülnalarda, mevcut bulus, bir veya birden fazla peptide, polipeptide ve/veya proteinlere baglanan bir taslýlîlýljörn. immün modifiye edici partikülü) saglamaktadE BazEI yapilândlElnalarda, burada açiKIananlar gibi bir taslýlEElörn. PLG tasa-dilim antijene özgü toleransElindükIemek ve/veya bir immün ile iliskili hastaIIgiI (bir fare modelinde EAE) baslang-Elönlemek ve/veya bir önceden mevcut immün ile iliskili hastaligil siddetini azaltmak için etkilidir. Bain/apliândünalarda, mevcut bulusun bilesimleri ve yöntemleri, T hücrelerinin, T-hücresi aktivasyonu ile iliskili önceki eylemleri üstlenmesine neden olabilmektedir, fakat T-hücrelerinin, efektör fonksiyonunu elde etmesine olanak saglamamaktadlEl Örnegin, mevcut bulusun bilesimlerinin uygulanmasüT-hücrelerinin, CD69 ve/veya CD44 yukarülüzenleme gibi bir yarlîaktiflestirilmis fenotipine sahip olmasi neden olabilmektedir, fakat IFN-y veya IL-17 sentezinin yoklugu ile gösterildigi gibi efektör fonksiyonunu sergilememektedir. BazElyapllândlElnalarda, mevcut bulusun bilesimlerinin teknikleri dahil (örn. antijen peptidinin veya proteininin veya antijen peptidi veya protein füzyon proteinlerinin C-terminalinde bir poIi-His etiketini ve bir Ni+-kapll:llasl$mullanarak) taslEEllâra antijen peptitlerini ve proteinlerini kovalent olmayacak sekilde konjuge etmek üzere kullanüâbilen teknikte iyi bilinmektedir ve bu yöntemler, burada açiElananlar için ikame edilebilmektedir. Bir nükleik asit parçasIlEl, bir platform molekülüne konjugasyonu, nükleik asit parçasIa ve platform molekülünde tipik olarak bir veya birden fazla çapraz baglama maddelerini ve fonksiyonel gruplarEliçeren herhangi bir saylElia yöntemde etkilenebilmektedir. Baglantlîl gruplarüstandart sentetik kimya tekniklerini kullanarak platformlara eklenmektedir. Baglantlîl gruplari: standart sentetik teknikleri kullanarak nükleik asit parçalar. eklenebilmektedir. Pratisyen hekim, bu bulusun kombinasyonlarIa kullan En antijenlere yönelik bir dizi seçime sahiptir. Kombinasyonda mevcut indükleyici antijen, indüklenen tolerojenik yan- özgüllügünü katküia bulunmaktadE Mevcut antijen olan veya istenmeyen Immünolojik yani& yönelik bir hedef olan ve tolerans. arzu edildigi, tedavi edilen denege yerlestirilecek hedef antijen olan hedef antijen ile aynlîcblabilmektedir veya aynlßlmayabilmektedir. Mevcut bulusun bir indükleyici antijeni, bir polipeptit, polinükleotid, karbonhidrat, glikolipid veya bir biyolojik kaynaktan izole diger molekül olabilmektedir veya mukozal baglama bileseni ile birlestirildiginde bu aç[Elamaya göre toleransündükleyebilme kabiliyetine sahip olmasIElsaglayarak bir kimyasal olarak sentezlenmis küçük molekül, polimer veya bir biyolojik malzemenin türevi olabilmektedir. BazEl/apilândlülnalarda, mevcut bulus, bir veya birden fazla peptide, polipeptide ve/veya proteinlere baglanan bir taslýlîlýljörn. immün modifiye edici partikülü) saglamaktadE BazEI yapilândlElnalarda, burada açiKIananlar gibi bir taslýlEElörn. PLG tasa-dilim antijene özgü toleransElindükIemek ve/veya bir immün ile iliskili hastaIIgiI (bir fare modelinde EAE) baslang-Elönlemek ve/veya bir önceden mevcut immün ile iliskili hastaligil siddetini azaltmak için etkilidir. Bain/apliândünalarda, mevcut bulusun bilesimleri ve yöntemleri, T hücrelerinin, T-hücresi aktivasyonu ile iliskili önceki eylemleri üstlenmesine neden olabilmektedir, fakat T-hücrelerinin, efektör fonksiyonunu elde etmesine olanak saglamamaktadlEl Örnegin, mevcut bulusun bilesimlerinin uygulanmasüT-hücrelerinin, CD69 ve/veya CD44 yukarülüzenleme gibi bir yarlîaktiflestirilmis fenotipine sahip olmasi neden olabilmektedir, fakat IFN-y veya IL-17 sentezinin yoklugu ile gösterildigi gibi efektör fonksiyonunu sergilememektedir. BazElyapllândlElnalarda, mevcut bulusun bilesimlerinin uygulanmasünaif antijene özgü T-hücrelerini, CD25J'/Foxp3+ fenotiplerine sahip olanlar gibi bir düzenleyici fenotipe dönüstürülmeden, T-hücrelerinin bir yarElaktiflestirilmis fenotipine sahip olmalela neden olmaktadlB BazEl/apllândlünalarda, bir taslýlElElI (örn. partikülün) yüzeyi, antijenik peptitlerin ve/veya diger fonksiyonel elemanlarlEl taslýlüýb (örn. kovalent olarak, kovalent olmayacak sekilde) birlestirilmesine olanak saglayan kimyasal parçalarEle/veya fonksiyonel gruplarEigermektedir. BazElyapUândlElnalarda, taslîlîlîfb (örn. partikül) kimyasal parçalar. ve/veya fonksiyonel gruplarI saylgüyönlendirmesi, araliglüle benzeri, taslýlîlîlkimyas., arzu edilen uygulamaya ve benzerine göre degiskenlik göstermektedir. BazElyapllândlElnalarda, bir taslîlîütaslýlîlýb birlestirilen, taslîlîlala sogurulan, taslýlîEl içerisinde enkapsüle edilen ve/veya taslîlEJboyunca dahil edilen bir veya birden fazla biyolojik veya kimyasal maddeyi içermektedir. BazElyapllândlEnalarda, bir kimyasal veya biyolojik madde, partiküllerde enkapsüle edilmektedir ve/veya partiküller boyunca dahil edilmektedir. Mevcut bulus, kimyasal veya biyolojik maddelerin yapEEille klglflbnmamaktadü Bu tarz maddeler, klgfllaylEEblmayacak sekilde proteinler, nükleik asit molekülleri, küçük moleküllü ilaçlar, Iipitler, karbonhidratlar, hücreler, hücre bilesenleri ve benzerlerini içermektedir. BazB/apllândlîilnalarda, iki veya ikiden fazla (örn. 3, 4, 5 ve benzeri) farkIlZI kimyasal veya biyolojik maddeler, taslsîIEELizerinde veya içerisinde dahil edilmektedir. BazEl yapllândlünalarda, maddeler, spesifik saIIIi oranlarEl Için yapHândlEllIhaktadB BazEl yapllândlElnalarda, çogu farklü madde, farkIIIIsaIIIi oranlarEIiçin yapllândEllB'iaktadE Örnegin, bir birinci madde, saatlik bir süreç boyunca saIIbilirken, bir ikinci madde, uzun bir zaman süreci (örn. günler, haftalar, aylar ve benzeri) boyunca saIlEmaktadlE BazEl yapllândünalarda, taslsîlEÜIeya bunun bir bölümü, biyolojik veya kimyasal maddelerin yavas saIIIi Egin yapllândlîllîhaktadlîl Bazüapllândlîilnalarda, yavas saIIn, en azIan 30 günlük boyunca maddenin biyolojik olarak aktif miktarlarII saIInIEl saglamaktadlB BazEl yapllândünalarda, taslîlEZl/eya bunun bir bölümü, hücrelerin gözeneklerin içine girmesine izin vermek için yeterince gözenekli olarak sekilde yapllând lEIIBiaktadlEl Gözeneklerin boyutu, ilgili özel hücre tipleri için ve/veya arzu edilen giris miktarEIçin seçilebilmektedir. Bulusun partikülünde antijen, biyolojik ve/veya kimyasal maddelerin enkapsülasyonunun sasIlEElbir sekilde Immünolojik toleransElindükledigi ve çesitli avantajlara sahip oldugu kesfedilmistir. Ilk olarak, enkapsüle partiküller, daha yavas bir sitokin yan& sahiptir. Ikinci uygulanmasünaif antijene özgü T-hücrelerini, CD25J'/Foxp3+ fenotiplerine sahip olanlar gibi bir düzenleyici fenotipe dönüstürülmeden, T-hücrelerinin bir yarElaktiflestirilmis fenotipine sahip olmalela neden olmaktadlB BazEl/apllândlünalarda, bir taslýlElElI (örn. partikülün) yüzeyi, antijenik peptitlerin ve/veya diger fonksiyonel elemanlarlEl taslýlüýb (örn. kovalent olarak, kovalent olmayacak sekilde) birlestirilmesine olanak saglayan kimyasal parçalarEle/veya fonksiyonel gruplarEigermektedir. BazElyapUândlElnalarda, taslîlîlîfb (örn. partikül) kimyasal parçalar. ve/veya fonksiyonel gruplarI saylgüyönlendirmesi, araliglüle benzeri, taslýlîlîlkimyas., arzu edilen uygulamaya ve benzerine göre degiskenlik göstermektedir. BazElyapllândlElnalarda, bir taslîlîütaslýlîlýb birlestirilen, taslîlîlala sogurulan, taslýlîEl içerisinde enkapsüle edilen ve/veya taslîlEJboyunca dahil edilen bir veya birden fazla biyolojik veya kimyasal maddeyi içermektedir. BazElyapllândlEnalarda, bir kimyasal veya biyolojik madde, partiküllerde enkapsüle edilmektedir ve/veya partiküller boyunca dahil edilmektedir. Mevcut bulus, kimyasal veya biyolojik maddelerin yapEEille klglflbnmamaktadü Bu tarz maddeler, klgfllaylEEblmayacak sekilde proteinler, nükleik asit molekülleri, küçük moleküllü ilaçlar, Iipitler, karbonhidratlar, hücreler, hücre bilesenleri ve benzerlerini içermektedir. BazB/apllândlîilnalarda, iki veya ikiden fazla (örn. 3, 4, 5 ve benzeri) farkIlZI kimyasal veya biyolojik maddeler, taslsîIEELizerinde veya içerisinde dahil edilmektedir. BazEl yapllândlünalarda, maddeler, spesifik saIIIi oranlarEl Için yapHândlEllIhaktadB BazEl yapllândlElnalarda, çogu farklü madde, farkIIIIsaIIIi oranlarEIiçin yapllândEllB'iaktadE Örnegin, bir birinci madde, saatlik bir süreç boyunca saIIbilirken, bir ikinci madde, uzun bir zaman süreci (örn. günler, haftalar, aylar ve benzeri) boyunca saIlEmaktadlE BazEl yapllândünalarda, taslsîlEÜIeya bunun bir bölümü, biyolojik veya kimyasal maddelerin yavas saIIIi Egin yapllândlîllîhaktadlîl Bazüapllândlîilnalarda, yavas saIIn, en azIan 30 günlük boyunca maddenin biyolojik olarak aktif miktarlarII saIInIEl saglamaktadlB BazEl yapllândünalarda, taslîlEZl/eya bunun bir bölümü, hücrelerin gözeneklerin içine girmesine izin vermek için yeterince gözenekli olarak sekilde yapllând lEIIBiaktadlEl Gözeneklerin boyutu, ilgili özel hücre tipleri için ve/veya arzu edilen giris miktarEIçin seçilebilmektedir. Bulusun partikülünde antijen, biyolojik ve/veya kimyasal maddelerin enkapsülasyonunun sasIlEElbir sekilde Immünolojik toleransElindükledigi ve çesitli avantajlara sahip oldugu kesfedilmistir. Ilk olarak, enkapsüle partiküller, daha yavas bir sitokin yan& sahiptir. Ikinci olarak, çok say. antijen, biyolojik ve/veya kimyasal madde kullanlHBken, enkapsülasyon, maddelerin, partikül yüzeyine birlestirilmesi halinde meydana gelebilen bu çesitli moleküller araslßhaki rekabeti kaldlElnaktadE Üçüncü olarak, enkapsülasyon, birden fazla antijen, biyolojik ve/veya kimyasal maddelerin partikül ile dahil edilmesine olanak saglamaktadlü Dördüncü olarak, enkapsülasyon, kompleks protein antijenlerinin veya ortan homojenatlarII (örn. yer flgtigllîlalerjisinde tip 1 diyabet veya yer flâtfglüekstrakt- yönelik pankreas homojenatIlEl daha kolay kullan" olanak saglamaktadlü Nihai olarak, partikül yüzeyine konjugasyon yerine partikül içerisinde antijenlerin, biyolojik ve/veya kimyasal maddelerin enkapsülasyonu, partikül yüzeyinde net negatif yükü devam ettirmektedir. Belirli yapllândlünalarda, mevcut bulus, burasEüzerinde (veya burasElçerisinde) hücrelere veya diger biyolojik veya kimyasal maddelere sahip olan taslýlîllârßaglamaktadlîl Hücrelerin kullanI[g]I:lyerde, tasMEllâr, özel tipte bir hücreye klîlflllîdegildir. BazElyapllândlElnalarda, tasMEliâr buraslîilizerinde pankreatik adacllZl hücrelere sahiptir. Bazü/apllândülnalarda, mikro gözenekli taslîlîllâr ek olarak burasüüzerinde ECM proteinlerine ve/veya eksendin-4'e sahiptir. Taslîzlîllâr, özel bir tipe klîltlllîllegildir. BazlZyapllândlîrlnalarda, bir taslîlmdegisken gözenekli bölgelere (örn. degisken gözenekli boyuta, gözenek derinligine ve/veya gözenek yogunluguna sahiptir). BazEIyapllândElnalarda, taslsîlîllâr burasüüzerinde (veya burasEI içerisinde) farmasötik maddeler, DNA, RNA, hücre dlgElmatris proteinleri, eksendin-4 ve benzerine sahiptir. Belirli yapüândlîilnalarda, mevcut bulus, bu taslýlîllârla pankreatik adaclE hücrelerinin transplante edilmesine yönelik yöntemleri saglamaktadlB Mevcut bulusun belirli yapllândülnalaria, indükleyici madde, bir tekli izole veya rekombinant olarak üretilmis moleküldür. Hedef antijenin, konakta çesitli konumlara yayI[g]EIk0sulIarlEl tedavisi için, indükleyici antijenin genel olarak hedef antijene özdes olabilmesi veya hedef antijen ile immünolojik olarak iliskili olmasEgerekIidir. Bu tarz antijenlerin örnekleri, en polinükleotid antijenlerdir ve bazERarbonhidrat antijenleri (örnegin kan grubu antijenleri). Herhangi bir uygun antijen, kullanl bulabilmektedir. Bazüyapüândlülnalarda, indükleyici antijen, indüklenen tolerojenik yan. özgüllügüne katkldla bulunmaktadB Indükleyici antijen, mevcut antijen olan veya istenmeyen immünolojik yanltâ yönelik bir hedef olan ve tolerans. arzu edildigi, tedavi edilen denege yerlestirilecek hedef antijen olan hedef antijen ile aynlîhlabilmektedir veya ayri Elmayabilmektedir. Hedef antijenin tercihen özel bir organ, hücre veya doku tipinde eksprese edildigi yerde, pratisyen hekim tekrardan, hedef antijenle özdes veya antijen ile immünolojik olarak iliskili olarak, çok say. antijen, biyolojik ve/veya kimyasal madde kullanlHBken, enkapsülasyon, maddelerin, partikül yüzeyine birlestirilmesi halinde meydana gelebilen bu çesitli moleküller araslßhaki rekabeti kaldlElnaktadE Üçüncü olarak, enkapsülasyon, birden fazla antijen, biyolojik ve/veya kimyasal maddelerin partikül ile dahil edilmesine olanak saglamaktadlü Dördüncü olarak, enkapsülasyon, kompleks protein antijenlerinin veya ortan homojenatlarII (örn. yer flgtigllîlalerjisinde tip 1 diyabet veya yer flâtfglüekstrakt- yönelik pankreas homojenatIlEl daha kolay kullan" olanak saglamaktadlü Nihai olarak, partikül yüzeyine konjugasyon yerine partikül içerisinde antijenlerin, biyolojik ve/veya kimyasal maddelerin enkapsülasyonu, partikül yüzeyinde net negatif yükü devam ettirmektedir. Belirli yapllândlünalarda, mevcut bulus, burasEüzerinde (veya burasElçerisinde) hücrelere veya diger biyolojik veya kimyasal maddelere sahip olan taslýlîllârßaglamaktadlîl Hücrelerin kullanI[g]I:lyerde, tasMEllâr, özel tipte bir hücreye klîlflllîdegildir. BazElyapllândlElnalarda, tasMEliâr buraslîilizerinde pankreatik adacllZl hücrelere sahiptir. Bazü/apllândülnalarda, mikro gözenekli taslîlîllâr ek olarak burasüüzerinde ECM proteinlerine ve/veya eksendin-4'e sahiptir. Taslîzlîllâr, özel bir tipe klîltlllîllegildir. BazlZyapllândlîrlnalarda, bir taslîlmdegisken gözenekli bölgelere (örn. degisken gözenekli boyuta, gözenek derinligine ve/veya gözenek yogunluguna sahiptir). BazEIyapllândElnalarda, taslsîlîllâr burasüüzerinde (veya burasEI içerisinde) farmasötik maddeler, DNA, RNA, hücre dlgElmatris proteinleri, eksendin-4 ve benzerine sahiptir. Belirli yapüândlîilnalarda, mevcut bulus, bu taslýlîllârla pankreatik adaclE hücrelerinin transplante edilmesine yönelik yöntemleri saglamaktadlB Mevcut bulusun belirli yapllândülnalaria, indükleyici madde, bir tekli izole veya rekombinant olarak üretilmis moleküldür. Hedef antijenin, konakta çesitli konumlara yayI[g]EIk0sulIarlEl tedavisi için, indükleyici antijenin genel olarak hedef antijene özdes olabilmesi veya hedef antijen ile immünolojik olarak iliskili olmasEgerekIidir. Bu tarz antijenlerin örnekleri, en polinükleotid antijenlerdir ve bazERarbonhidrat antijenleri (örnegin kan grubu antijenleri). Herhangi bir uygun antijen, kullanl bulabilmektedir. Bazüyapüândlülnalarda, indükleyici antijen, indüklenen tolerojenik yan. özgüllügüne katkldla bulunmaktadB Indükleyici antijen, mevcut antijen olan veya istenmeyen immünolojik yanltâ yönelik bir hedef olan ve tolerans. arzu edildigi, tedavi edilen denege yerlestirilecek hedef antijen olan hedef antijen ile aynlîhlabilmektedir veya ayri Elmayabilmektedir. Hedef antijenin tercihen özel bir organ, hücre veya doku tipinde eksprese edildigi yerde, pratisyen hekim tekrardan, hedef antijenle özdes veya antijen ile immünolojik olarak iliskili olan bir indükleyici antijenin kullanl tercihine sahiptir. Fakat, hedef için bir bekleyen bir antijenin kullanIi- dair ek tercih mevcuttur. Bu, hedef antijen ile immünolojik olarak iliskili olmayabilen bir antijendir, fakat tercihen hedef antijenin eksprese edildigi bir dokuda eksprese edilmektedir. Bekleyen süpresyon etkinligine iliskin bir çalisma teorisi, hedef hücrelerde immün yari-I efektör kolunu asagEtlüzenleyen bir aktif hücre aracllliilsüreçtir. Süpresör hücreleri spesifik olarak mukozal yüzeyinde indükleyici antijen ile uyarIJEnaktadIElve bekleyen antijenin tercihen eksprese edildigi bir doku bölgesine ev sahipligi yapmaktadlE Bir interaktif veya sitokin araclIIEl mekanizma sayesinde, lokalize Süpresör hücreler daha sonrasia neye karslîn'eaktif olduklarIan bagsE olarak komsuda efektör hücreleri (veya efektör hücrelerin indükleyicilerini) asaglIIdüzenlemektedir. Efektör hücrelerin, indükleyici antijenden farkIElbir hedefe özgü olmasElhaIinde, sonuç, bekleyen bir etkidir. Bekleyen reaksiyonun ve bu etkiye sahip tolerojenik peptitlerin bir listesinin daha fazla detaylandlElBiasEliçin, okuyucu, WO 93/16724 SayHJDUIuslararasEIPatent Yayi. atlElia bulunulmaktadlEl Bekleme teorisinin bir anlamüteknikte tecrübe sahibi bir kisinin, mevcut bulusu uygulamak için tolerans. arzu edildigi bir özel hedef antijenini tanUIamas veya izole etmesin gerek olmamasIlE Pratisyen hekimin sadece, bir indükleyici antijen olarak kullanla yönelik hedef bölgede tercihen eksprese edilen en az bir molekülü elde edebilmeye ihtiyaç duymaktad IE Belirli yapllândlüinalarda, indükleyici antijen, tedavi edilen bireyde eksprese edilenle aynEl formda degildir, fakat bir fragmandlüveya bunun bir türevidir. Mevcut bulusun indükleyici antijenleri, uygun özgüllükte bir moleküle bagIEblan, fakat diger fonksiyonel özelliklerine sahip olan peptitlerle fragmentasyon, kalan ikame, isaretleme, konjugasyon ve/veya füzyon ile adapte edilen peptitleri içermektedir. Adaptasyon, kEIfIbylEEblmayacak sekilde toksisite veya immunojenesite gibi herhangi bir arzu edilmeyen özelligin ortadan kaldEllIhasIEIçeren; veya mukozal baglanma, mukozal penetrasyon veya immün yari-I tolerojenik kolunun uyarHElgibi herhangi bir arzu edilebilir özelligini getirilmesine yönelik herhangi bir arzu edilebilir amaç için uygulanabilmektedir. Burada kullanIlglElgibi insülin peptidi, kolajen peptidi ve miyelin bazik protein peptidi gibi terimler, sadece bozulmamE alt birimini degil, ayrlîla alotipik ve sentetik varyantlar, fragmanlar, füzyon peptitler, konjugatlar ve bir analog oldugu ilgili molekülün en az 10 ve tercihen 20 ardlglîl amino asidine homolog olan (amino asit seviyesinde tercihen %70 özdes, daha çok tercih edilecek sekilde %80 özdes ve hatta daha çok tercih edilecek sekilde %90 özdes) bir bölgeyi içeren diger türevleri de ifade etmektedir, burada türevin homolog bölgesi, hedef antijene toleransElindükIeyebiIme kabiliyetini, ilgili ana molekül ile paylasmaktadlEl olan bir indükleyici antijenin kullanl tercihine sahiptir. Fakat, hedef için bir bekleyen bir antijenin kullanIi- dair ek tercih mevcuttur. Bu, hedef antijen ile immünolojik olarak iliskili olmayabilen bir antijendir, fakat tercihen hedef antijenin eksprese edildigi bir dokuda eksprese edilmektedir. Bekleyen süpresyon etkinligine iliskin bir çalisma teorisi, hedef hücrelerde immün yari-I efektör kolunu asagEtlüzenleyen bir aktif hücre aracllliilsüreçtir. Süpresör hücreleri spesifik olarak mukozal yüzeyinde indükleyici antijen ile uyarIJEnaktadIElve bekleyen antijenin tercihen eksprese edildigi bir doku bölgesine ev sahipligi yapmaktadlE Bir interaktif veya sitokin araclIIEl mekanizma sayesinde, lokalize Süpresör hücreler daha sonrasia neye karslîn'eaktif olduklarIan bagsE olarak komsuda efektör hücreleri (veya efektör hücrelerin indükleyicilerini) asaglIIdüzenlemektedir. Efektör hücrelerin, indükleyici antijenden farkIElbir hedefe özgü olmasElhaIinde, sonuç, bekleyen bir etkidir. Bekleyen reaksiyonun ve bu etkiye sahip tolerojenik peptitlerin bir listesinin daha fazla detaylandlElBiasEliçin, okuyucu, WO 93/16724 SayHJDUIuslararasEIPatent Yayi. atlElia bulunulmaktadlEl Bekleme teorisinin bir anlamüteknikte tecrübe sahibi bir kisinin, mevcut bulusu uygulamak için tolerans. arzu edildigi bir özel hedef antijenini tanUIamas veya izole etmesin gerek olmamasIlE Pratisyen hekimin sadece, bir indükleyici antijen olarak kullanla yönelik hedef bölgede tercihen eksprese edilen en az bir molekülü elde edebilmeye ihtiyaç duymaktad IE Belirli yapllândlüinalarda, indükleyici antijen, tedavi edilen bireyde eksprese edilenle aynEl formda degildir, fakat bir fragmandlüveya bunun bir türevidir. Mevcut bulusun indükleyici antijenleri, uygun özgüllükte bir moleküle bagIEblan, fakat diger fonksiyonel özelliklerine sahip olan peptitlerle fragmentasyon, kalan ikame, isaretleme, konjugasyon ve/veya füzyon ile adapte edilen peptitleri içermektedir. Adaptasyon, kEIfIbylEEblmayacak sekilde toksisite veya immunojenesite gibi herhangi bir arzu edilmeyen özelligin ortadan kaldEllIhasIEIçeren; veya mukozal baglanma, mukozal penetrasyon veya immün yari-I tolerojenik kolunun uyarHElgibi herhangi bir arzu edilebilir özelligini getirilmesine yönelik herhangi bir arzu edilebilir amaç için uygulanabilmektedir. Burada kullanIlglElgibi insülin peptidi, kolajen peptidi ve miyelin bazik protein peptidi gibi terimler, sadece bozulmamE alt birimini degil, ayrlîla alotipik ve sentetik varyantlar, fragmanlar, füzyon peptitler, konjugatlar ve bir analog oldugu ilgili molekülün en az 10 ve tercihen 20 ardlglîl amino asidine homolog olan (amino asit seviyesinde tercihen %70 özdes, daha çok tercih edilecek sekilde %80 özdes ve hatta daha çok tercih edilecek sekilde %90 özdes) bir bölgeyi içeren diger türevleri de ifade etmektedir, burada türevin homolog bölgesi, hedef antijene toleransElindükIeyebiIme kabiliyetini, ilgili ana molekül ile paylasmaktadlEl Bir indükleyici antijenin tolerojenik bölgelerin genel olarak bir antikor yan-I uyar" yönelik immünodominant epitoplardan farklüoldugu anlasUBiaktadB Tolerojenik bölgeler genel olarak T hücrelerini içeren özel hücresel etkilesimlerde temsil edilebilen bölgelerdir. Tolerojenik bölgeler, bozulmamE antijen sunumundan sonra mevcut olabilmektedir ve toleransElndükleyebilmektedir. BazEantijenler, natif antijenin islenmesinin ve sunumunun, normal bir sekilde toleransElletikIememesi aç-an kriptik tolerojenik bölgeleri içermektedir. Kriptik antijenlerin detaylandlîllüiaslîlve tanilanmalarü WO 94/27634 SaylIIElUIusIararasEl Patent YayIlEtIa bulunmaktadIEl Belirli yapllândlîilnalarda, iki, üç veya üçten fazla indükleyici antijen kullanllfhaktadlîl Birden fazla hedef antijen oldugunda bu yapllândlElnalarI uygulanmasü/eya hedefe yönelik birden fazla bekleyenin saglanmasElarzu edilebilmektedir. Örnegin, insülin ve glükagon, diyabet tedavisinde bir mukozal baglanma bileseni ile karlStlElllâbilmektedir. AyrlEla birkaç olasEI alternatif hedefi kapsamak üzere bir antijen kokteylini saglamasüarzu edilebilmektedir. Örnegin, histo uyumlu antijen fragmanlarII bir kokteyli, bilinmeyen fenotipte bir alogreft ile sonraki transplantasyonun öngörülmesinde bir denegi tolere etmek üzere kullanilâbilmistir. 29:231, 1989. Bir diger örnekte, alerjenlerin bir karElEJllZIatopi tedavisine yönelik indükleyici antijen olarak hareket edebilmektedir. Indükleyici antijenler, molekül yap_ baglDolarak teknikte bilinen bir dizi teknik ile hazlEbnabilmektedir. Polinükleotid, polipeptit ve karbonhidrat antijenleri, zenginlestirildikleri, tedavi edilecek türlerin hücrelerinden izole edilebilmektedir. KEla peptitler, amino asit sentezi ile uygun bir sekilde hazlEllanmaktadIEl Bilinen sekansI daha uzun proteinleri, bir kodlaylEEI sekansI sentezlenmesi veya bir dogal kaynaktan veya vektörden bir kodlaylîßekansl PCR- ile güçlendirilmesi ve daha sonraslda bir uygun bakteriyel veya ökaryotik konak hücrede kodlaylEBekansI eksprese edilmesi ile hazlEIlanabilmektedir. Belirli yapllândlElnalarda, kombinasyon, bir hücre veya dokudan elde edilen antijenlerin bir kompleks karlSIEiIEliçermektedir, bir veya birden fazlasÇI indükleyici antijenin rolünü oynamaktadlEl Bozulmamlglolan veya antijenler, formaldehit, glutaraldehid veya alkol gibi bir sabitleyici ile tedavi edilen tüm hücrelerin formunda olabilmektedir. Antijenier, hücrelerin veya dokunun deterjan çözünürlügü veya mekanik yIHBiaslZile olusturulan bir hücre IizatII formunda olabilmektedir. Antijenler ayrlEla alt hücresel ayrilBia, özellikle diferansiyel Bir indükleyici antijenin tolerojenik bölgelerin genel olarak bir antikor yan-I uyar" yönelik immünodominant epitoplardan farklüoldugu anlasUBiaktadB Tolerojenik bölgeler genel olarak T hücrelerini içeren özel hücresel etkilesimlerde temsil edilebilen bölgelerdir. Tolerojenik bölgeler, bozulmamE antijen sunumundan sonra mevcut olabilmektedir ve toleransElndükleyebilmektedir. BazEantijenler, natif antijenin islenmesinin ve sunumunun, normal bir sekilde toleransElletikIememesi aç-an kriptik tolerojenik bölgeleri içermektedir. Kriptik antijenlerin detaylandlîllüiaslîlve tanilanmalarü WO 94/27634 SaylIIElUIusIararasEl Patent YayIlEtIa bulunmaktadIEl Belirli yapllândlîilnalarda, iki, üç veya üçten fazla indükleyici antijen kullanllfhaktadlîl Birden fazla hedef antijen oldugunda bu yapllândlElnalarI uygulanmasü/eya hedefe yönelik birden fazla bekleyenin saglanmasElarzu edilebilmektedir. Örnegin, insülin ve glükagon, diyabet tedavisinde bir mukozal baglanma bileseni ile karlStlElllâbilmektedir. AyrlEla birkaç olasEI alternatif hedefi kapsamak üzere bir antijen kokteylini saglamasüarzu edilebilmektedir. Örnegin, histo uyumlu antijen fragmanlarII bir kokteyli, bilinmeyen fenotipte bir alogreft ile sonraki transplantasyonun öngörülmesinde bir denegi tolere etmek üzere kullanilâbilmistir. 29:231, 1989. Bir diger örnekte, alerjenlerin bir karElEJllZIatopi tedavisine yönelik indükleyici antijen olarak hareket edebilmektedir. Indükleyici antijenler, molekül yap_ baglDolarak teknikte bilinen bir dizi teknik ile hazlEbnabilmektedir. Polinükleotid, polipeptit ve karbonhidrat antijenleri, zenginlestirildikleri, tedavi edilecek türlerin hücrelerinden izole edilebilmektedir. KEla peptitler, amino asit sentezi ile uygun bir sekilde hazlEllanmaktadIEl Bilinen sekansI daha uzun proteinleri, bir kodlaylEEI sekansI sentezlenmesi veya bir dogal kaynaktan veya vektörden bir kodlaylîßekansl PCR- ile güçlendirilmesi ve daha sonraslda bir uygun bakteriyel veya ökaryotik konak hücrede kodlaylEBekansI eksprese edilmesi ile hazlEIlanabilmektedir. Belirli yapllândlElnalarda, kombinasyon, bir hücre veya dokudan elde edilen antijenlerin bir kompleks karlSIEiIEliçermektedir, bir veya birden fazlasÇI indükleyici antijenin rolünü oynamaktadlEl Bozulmamlglolan veya antijenler, formaldehit, glutaraldehid veya alkol gibi bir sabitleyici ile tedavi edilen tüm hücrelerin formunda olabilmektedir. Antijenier, hücrelerin veya dokunun deterjan çözünürlügü veya mekanik yIHBiaslZile olusturulan bir hücre IizatII formunda olabilmektedir. Antijenler ayrlEla alt hücresel ayrilBia, özellikle diferansiyel santrifüjleme gibi teknikler, bundan sonra deterjan çözünürlügü ve diyalizi ile plazma membranII zenginlestirilmesi ile elde edilebilmektedir. Çözülmüs membran proteinlerinin affinitesi veya iyon degisim kromatografisi gibi diger aylüna teknikleri de uygundur. Bir yapllândiBlnada, antijenik peptit veya protein, bir otoantijen, bir aloantijen veya bir transplantasyon antijenidir. Bir diger özel yapHândlEinada, otoantijen miyelin bazik protein, kolajen veya bunlarlEl fragmanlarÇI DNA, nükleer ve nükleolar proteinler, mitokondriyal proteinler ve pankreatik ß-hücresi proteinlerinden olusan gruptan seçilmektedir. Bulus, toleransI arzu edildigi antijeni uygulayarak otoimmün hastalllîlarII tedavisine yönelik bir otoantijene tolerans indüksiyonunu saglamaktadlEI Örnegin, miyelin bazik proteine (MBP) karsEýönIendiriImis otoantikorlar, multipl skleroz ile hastalarda gözlemlenmektedir ve dolaylîlEa, MBP antijenik peptitler veya proteinler, multipl sklerozu tedavi etmek ve önlemek için mevcut bulusun bilesimleri kullanllârak iletilecek sekilde kullanllâbilmektedir. Bir diger klîlflhylîljblmayan örnek yoluyla, bir özdes olmayan ikizden bir transplanta yönelik bir aday olan bir birey, engreftli antijenler alir-:Ma yabanchIdugu için engreftli hücrelerin, dokular. veya organlar. reddinden muzdarip olabilmektedir. AIlEElbireyin, amaçlanan grefte önceden toleransü sonraki reddi kaldiElnaktadlEI veya azaltmaktadIE Kronik ret karsIEIEl tedavilerin azaltDBiasElveya ortadan kaldlEIlEiasÇl mevcut bulusun uygulanmasElile elde edilebilmektedir. Bir diger örnekte, birçok otoimmün hastaIUZl bir endojene veya kendi antijenine bir hücresel immün yanlEIEile karakterize edilmektedir. Immün sisteminin, endojen antijene toleransühastallglERontrol etmek üzere arzu edilebilmektedir. Bir diger örnekte, bir bireyin, bir endüstriyel kirleticiye veya kimyasal duyarlüâstlîlllîhasüis hayatIa karsllâsllâbildigi gibi, bir immün yan-lü! bir tehlikesini sunmaktadE Bireyin immün sisteminin kimyasal önceki toleransü özellikle bireyin endojen proteinleri ile reaksiyona sokulan kimyasaIlE] formunda, bir immün yan-I sonraki mesleki bir gelisimini önlemesi arzu edilebilmektedir. Alerjenler, buraya immün yan-I toleransII arzu edilebildigi diger antijenlerdir. Bir yapüând Binada, antijen, bir gliadendir. Bir diger yapüând lEilnada, antijen, A-gliadendir. Bilhassa, patojenik otoantijenin bilinmedigi hastalilîlarda bile, bekleyen süpresyon, anatomik sIIEda mevcut antijenler kullanllârak indüklenebilmektedir. Örnegin, kolajen otoantikorlar, santrifüjleme gibi teknikler, bundan sonra deterjan çözünürlügü ve diyalizi ile plazma membranII zenginlestirilmesi ile elde edilebilmektedir. Çözülmüs membran proteinlerinin affinitesi veya iyon degisim kromatografisi gibi diger aylüna teknikleri de uygundur. Bir yapllândiBlnada, antijenik peptit veya protein, bir otoantijen, bir aloantijen veya bir transplantasyon antijenidir. Bir diger özel yapHândlEinada, otoantijen miyelin bazik protein, kolajen veya bunlarlEl fragmanlarÇI DNA, nükleer ve nükleolar proteinler, mitokondriyal proteinler ve pankreatik ß-hücresi proteinlerinden olusan gruptan seçilmektedir. Bulus, toleransI arzu edildigi antijeni uygulayarak otoimmün hastalllîlarII tedavisine yönelik bir otoantijene tolerans indüksiyonunu saglamaktadlEI Örnegin, miyelin bazik proteine (MBP) karsEýönIendiriImis otoantikorlar, multipl skleroz ile hastalarda gözlemlenmektedir ve dolaylîlEa, MBP antijenik peptitler veya proteinler, multipl sklerozu tedavi etmek ve önlemek için mevcut bulusun bilesimleri kullanllârak iletilecek sekilde kullanllâbilmektedir. Bir diger klîlflhylîljblmayan örnek yoluyla, bir özdes olmayan ikizden bir transplanta yönelik bir aday olan bir birey, engreftli antijenler alir-:Ma yabanchIdugu için engreftli hücrelerin, dokular. veya organlar. reddinden muzdarip olabilmektedir. AIlEElbireyin, amaçlanan grefte önceden toleransü sonraki reddi kaldiElnaktadlEI veya azaltmaktadIE Kronik ret karsIEIEl tedavilerin azaltDBiasElveya ortadan kaldlEIlEiasÇl mevcut bulusun uygulanmasElile elde edilebilmektedir. Bir diger örnekte, birçok otoimmün hastaIUZl bir endojene veya kendi antijenine bir hücresel immün yanlEIEile karakterize edilmektedir. Immün sisteminin, endojen antijene toleransühastallglERontrol etmek üzere arzu edilebilmektedir. Bir diger örnekte, bir bireyin, bir endüstriyel kirleticiye veya kimyasal duyarlüâstlîlllîhasüis hayatIa karsllâsllâbildigi gibi, bir immün yan-lü! bir tehlikesini sunmaktadE Bireyin immün sisteminin kimyasal önceki toleransü özellikle bireyin endojen proteinleri ile reaksiyona sokulan kimyasaIlE] formunda, bir immün yan-I sonraki mesleki bir gelisimini önlemesi arzu edilebilmektedir. Alerjenler, buraya immün yan-I toleransII arzu edilebildigi diger antijenlerdir. Bir yapüând Binada, antijen, bir gliadendir. Bir diger yapüând lEilnada, antijen, A-gliadendir. Bilhassa, patojenik otoantijenin bilinmedigi hastalilîlarda bile, bekleyen süpresyon, anatomik sIIEda mevcut antijenler kullanllârak indüklenebilmektedir. Örnegin, kolajen otoantikorlar, romatoid artritte gözlemlenmektedir ve dolayElîla, bir kolajen kodlayüen, romatoid artriti tedavi etmek için antijen eksprese edici gen modülü olarak kullanüâbilmektedir (bkz. örn. Choy (2000) Curr Opin Investig Drugs 1: 58-62). Dahasübeta hücre otoantijenlere tolerans, tip 1 diyabetin gelisimini önleyecek sekilde kullanllâbilmektedir (bkz. örn. Bach ve Chatenoud Bir diger örnek olarak, miyelin oligodendrosit glikoproteine (MOG) karsElyönlendirilmis otoantikorlar, otoimmün ensefalomiyelitte ve birçok diger CNS hastal[glEk:la, ayrlîla multipl Dolaylîlýla, bulusta yapllârßksprese eden MOG antijenin kullanIiÇlmultipl sklerozun, ayrlîla merkezi sinir sisteminin iliskili otoimmün bozukluklarIlEl tedavisine olanak saglamaktadB Otoimmün hastlalgll tedavisinde kullanIia yönelik aday otoantijenlerin diger örnekleri sunlarü içermektedir: insüline bagIiIEUiyabet hastallgiIEtedavi etmek için pankreatik beta-hücresi antijenleri, insülin ve GAD; romatoid artritin tedavisinde kullanIia yönelik kolajen tip 11, insan klElîdlaglîgp 39 (HCgp39) ve gpl30-RAPS; mltipl skleoruz tedavi etmek için miyelin bazik proteini (MBP), proteo lipid proteini (PLP) ve miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG, yukarüa bakIlîll; sklerodermaylîltedavi etmek için fibrilarin ve küçük nükleolar protein (snoRNP); Graves hastal[glII tedavisinde kullanIia yönelik tiroid uyarlEEfaktör reseptörü (TSH-R); sistemik Iupus eritematozun tedavisinde kullanma yönelik nükleer antijenler, histonlar, glikoprotein gp70 ve ribozomal proteinler; birincil biliyer sirozun tedavisinde kullanIia yönelik piruvat dehidrojenaz dehidrolipoamid asetiltransferaz (PCD-E2); saçklßnl tedavisinde kullanIia yönelik saç folikül antijenleri; ve ülseratif kolitin tedavisinde kullanma yönelik insan tropomiyosin izoform 5 (hTM5). Kombinasyonlar, izole hücrelerle veya hayvan modellerinde deneylerin yürütülmesi ile toleransßrttßbilme kabiliyetleri için test edilebilmektedir. BazEI yapllând Elnalarda, mevcut bulusun tolerans indükleyici bilesimleri, bir poptoz sinyallesme molekülünü (örn. bir antijenik peptide veya diger antijenik moleküle ek olarak) içermektedir. BazElyapllândlEnalarda, apoptoz sinyallesme molekülü, taslsîlEElyüzeyi ile baglanmaktadlüve/veya birlestirilmektedir. BazEyapllândlEilnalarda, bir apoptotik sinyallesme molekülleri, bir tasEIElEIIEI, konak retikülo-endoteliyal sistemin hücreleri gibi konagi antijen sunan hücreleri ile bir apoptotik gövde olarak algllânmamaleb olanak saglamaktadlB bu, bir tolerans indükleyici sekilde birlesik peptit epitoplarII sunumuna olanak saglamaktadlEl romatoid artritte gözlemlenmektedir ve dolayElîla, bir kolajen kodlayüen, romatoid artriti tedavi etmek için antijen eksprese edici gen modülü olarak kullanüâbilmektedir (bkz. örn. Choy (2000) Curr Opin Investig Drugs 1: 58-62). Dahasübeta hücre otoantijenlere tolerans, tip 1 diyabetin gelisimini önleyecek sekilde kullanllâbilmektedir (bkz. örn. Bach ve Chatenoud Bir diger örnek olarak, miyelin oligodendrosit glikoproteine (MOG) karsElyönlendirilmis otoantikorlar, otoimmün ensefalomiyelitte ve birçok diger CNS hastal[glEk:la, ayrlîla multipl Dolaylîlýla, bulusta yapllârßksprese eden MOG antijenin kullanIiÇlmultipl sklerozun, ayrlîla merkezi sinir sisteminin iliskili otoimmün bozukluklarIlEl tedavisine olanak saglamaktadB Otoimmün hastlalgll tedavisinde kullanIia yönelik aday otoantijenlerin diger örnekleri sunlarü içermektedir: insüline bagIiIEUiyabet hastallgiIEtedavi etmek için pankreatik beta-hücresi antijenleri, insülin ve GAD; romatoid artritin tedavisinde kullanIia yönelik kolajen tip 11, insan klElîdlaglîgp 39 (HCgp39) ve gpl30-RAPS; mltipl skleoruz tedavi etmek için miyelin bazik proteini (MBP), proteo lipid proteini (PLP) ve miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG, yukarüa bakIlîll; sklerodermaylîltedavi etmek için fibrilarin ve küçük nükleolar protein (snoRNP); Graves hastal[glII tedavisinde kullanIia yönelik tiroid uyarlEEfaktör reseptörü (TSH-R); sistemik Iupus eritematozun tedavisinde kullanma yönelik nükleer antijenler, histonlar, glikoprotein gp70 ve ribozomal proteinler; birincil biliyer sirozun tedavisinde kullanIia yönelik piruvat dehidrojenaz dehidrolipoamid asetiltransferaz (PCD-E2); saçklßnl tedavisinde kullanIia yönelik saç folikül antijenleri; ve ülseratif kolitin tedavisinde kullanma yönelik insan tropomiyosin izoform 5 (hTM5). Kombinasyonlar, izole hücrelerle veya hayvan modellerinde deneylerin yürütülmesi ile toleransßrttßbilme kabiliyetleri için test edilebilmektedir. BazEI yapllând Elnalarda, mevcut bulusun tolerans indükleyici bilesimleri, bir poptoz sinyallesme molekülünü (örn. bir antijenik peptide veya diger antijenik moleküle ek olarak) içermektedir. BazElyapllândlEnalarda, apoptoz sinyallesme molekülü, taslsîlEElyüzeyi ile baglanmaktadlüve/veya birlestirilmektedir. BazEyapllândlEilnalarda, bir apoptotik sinyallesme molekülleri, bir tasEIElEIIEI, konak retikülo-endoteliyal sistemin hücreleri gibi konagi antijen sunan hücreleri ile bir apoptotik gövde olarak algllânmamaleb olanak saglamaktadlB bu, bir tolerans indükleyici sekilde birlesik peptit epitoplarII sunumuna olanak saglamaktadlEl Belirli bir teoriye baglEblmadan, bunun, MHC sI[lîlEI/II ve yardlcüiyarlîüriolekülleri gibi immün hücre uyarIi- dahil edile moleküllerin yukarlîldüzenlenmesini önledigi farz edilmektedir. Bu apoptoz sinyallesme molekülleri ayrlEla fagositik markörler olarak hareket edebilmektedir. Örnegin, mevcut bulus için uygun apoptoz sinyallesme molekülleri, burada Mevcut bulus Için uygun moleküller, makrofajlar, dendritik hücreler, monositler ve nötrofilleri içeren fagositleri hedef alan molekülleri içermektedir. BazEl/apüândlîilnalarda, apoptotik sinyallesme molekülleri olarak uygun moleküller, birlesik peptitlerin toleransIElgeIistirmek üzere hareket etmektedir. Ek olarak, bir apoptotik sinyallesme molekülüne baglEl olan bir tasma: apoptotik hücre tanik-aha Clq ile bütünüyle referans ile dahil edilmektedir). Örnegin, apoptotik sinyallesme molekülleri olarak kullanlglüilabilen moleküller, fosfatidil serin, aneksin-l, aneksin-S, süt yagüglobüI-EGF-faktör 8 (MFG-E8) veya trombospondinlerin ailesini (örnegin, trombospondin-l (TSP-1)) içermektedir. Mevcut bulusla apoptotik sinyallesme molekülleri olarak kullanIi için uygun burada bütünüyle referans ile dahil edilmektedir). Bazüyapllândülnalarda, apoptotik sinyallesme molekülü, antijene özgü peptide konjuge olabilmektedir. Bazlîdurumlarda, apoptotik sinyallesme molekülü ve antijene özgü peptit, bir füzyon proteinin olusturulmasElle konjuge edilebilmektedir. Örnegin bir füzyon proteini, bir apoptotik sinyallesme molekülünün en az bir molekülüne (veya bunlari bir fragmanEVeya bir varyantm baglanan en az bir antijene özgü peptidi (veya bunlari bir fragmanIEl/eya bir varyantID]içerebilmektedir. Füzyon proteinlerinin olusumu için, "füzyon proteini", "füzyon peptidi", "füzyon polipeptidi" ve "kimerik peptit" birbirlerinin yerine kullanElÜiaktadlE Antijene özgü peptidin uygun fragmanlarÇl mevcut bulusun arzu edilen antijene özgü tolerans fonksiyonunun olusturulmasEfonksiyonunu muhafaza eden tam uzunlukta peptidin herhangi bir fragmanIEliçermektedir. Füzyon proteini, teknikte (örn. genetik füzyon, kimyasal konjugasyon ve benzeri) anlasllân çesitli araçlar vasltâslýla olusturulabilmektedir. Iki protein, dogrudan veya bir amino asit baglaymasßslîla kaynasllîl olabilmektedir. Füzyon proteini olusturan polipeptitler, C-terminalinden C-terminaline, N-terminalinden N-terminaline veya N- terminalinden C-terminaline baglEIolabilmelerine ragmen tipik olarak C-terminalinden N- terminaline baglIlEl Füzyon proteininin polipeptitleri, herhangi bir slüda olabilmektedir. Bir peptid baglaylEElsekans, her bir polipeptidin, ikincil ve üçüncül yapllâra katlanmasIthemin Belirli bir teoriye baglEblmadan, bunun, MHC sI[lîlEI/II ve yardlcüiyarlîüriolekülleri gibi immün hücre uyarIi- dahil edile moleküllerin yukarlîldüzenlenmesini önledigi farz edilmektedir. Bu apoptoz sinyallesme molekülleri ayrlEla fagositik markörler olarak hareket edebilmektedir. Örnegin, mevcut bulus için uygun apoptoz sinyallesme molekülleri, burada Mevcut bulus Için uygun moleküller, makrofajlar, dendritik hücreler, monositler ve nötrofilleri içeren fagositleri hedef alan molekülleri içermektedir. BazEl/apüândlîilnalarda, apoptotik sinyallesme molekülleri olarak uygun moleküller, birlesik peptitlerin toleransIElgeIistirmek üzere hareket etmektedir. Ek olarak, bir apoptotik sinyallesme molekülüne baglEl olan bir tasma: apoptotik hücre tanik-aha Clq ile bütünüyle referans ile dahil edilmektedir). Örnegin, apoptotik sinyallesme molekülleri olarak kullanlglüilabilen moleküller, fosfatidil serin, aneksin-l, aneksin-S, süt yagüglobüI-EGF-faktör 8 (MFG-E8) veya trombospondinlerin ailesini (örnegin, trombospondin-l (TSP-1)) içermektedir. Mevcut bulusla apoptotik sinyallesme molekülleri olarak kullanIi için uygun burada bütünüyle referans ile dahil edilmektedir). Bazüyapllândülnalarda, apoptotik sinyallesme molekülü, antijene özgü peptide konjuge olabilmektedir. Bazlîdurumlarda, apoptotik sinyallesme molekülü ve antijene özgü peptit, bir füzyon proteinin olusturulmasElle konjuge edilebilmektedir. Örnegin bir füzyon proteini, bir apoptotik sinyallesme molekülünün en az bir molekülüne (veya bunlari bir fragmanEVeya bir varyantm baglanan en az bir antijene özgü peptidi (veya bunlari bir fragmanIEl/eya bir varyantID]içerebilmektedir. Füzyon proteinlerinin olusumu için, "füzyon proteini", "füzyon peptidi", "füzyon polipeptidi" ve "kimerik peptit" birbirlerinin yerine kullanElÜiaktadlE Antijene özgü peptidin uygun fragmanlarÇl mevcut bulusun arzu edilen antijene özgü tolerans fonksiyonunun olusturulmasEfonksiyonunu muhafaza eden tam uzunlukta peptidin herhangi bir fragmanIEliçermektedir. Füzyon proteini, teknikte (örn. genetik füzyon, kimyasal konjugasyon ve benzeri) anlasllân çesitli araçlar vasltâslýla olusturulabilmektedir. Iki protein, dogrudan veya bir amino asit baglaymasßslîla kaynasllîl olabilmektedir. Füzyon proteini olusturan polipeptitler, C-terminalinden C-terminaline, N-terminalinden N-terminaline veya N- terminalinden C-terminaline baglEIolabilmelerine ragmen tipik olarak C-terminalinden N- terminaline baglIlEl Füzyon proteininin polipeptitleri, herhangi bir slüda olabilmektedir. Bir peptid baglaylEElsekans, her bir polipeptidin, ikincil ve üçüncül yapllâra katlanmasIthemin etmek için yeterli bir mesafe ile birinci ve ikinci polipeptit bilesenlerini aylElnak üzere kullanllâbilmektedir. BaglaylEEloIarak faydalüolarak kullanllâbilen amino asit sekanslarü Patent YayIlsîlburada bütünlüklerinde referans ile dahil edilmektedir. Baglaylîßekans genel olarak uzunluk aç-an 1 ila yaklaslE 50 amino asit olabilmektedir. Bazülapüândlülnalarda, baglaylEEtsekanslar, örnegin birinci ve ikinci polipeptitler, fonksiyonel alanlarüayianak ve sterik enterferansEönlemek için kullanllâbilen esas olmayan N-terminal amino asit bölgelerine sahip oldugunda gerekli degildir ve/veya kullanilüiamaktadß Tolerojenik aktiviteye yönelik bir proksi, bir bozulmamlgl antijenin veya fragmanlEl, hedef bölgede bir uygun sitokinin üretimini uyarabilmesi kaibliyetidir. Hedeflenen bölgede T süpresör hücreleri ile sal-n immünodüzenleyici sitokinin, TGF-ß oldugu düsünülmektedir (Miller ve meslektaslarü Proc. Natl. Acad. Sci. ABD 89:421, 1992). Tolerans esnasIda üretilebilen diger faktörler, sitokinlerdir (IL4 ve IL-10) aracElPGE'dir. Buna karslEl, aktif immün y" tabi olan dokulardaki lenfositler, IL-I, IL-2, IL-6 ve y-IFN gibi sitokinleri salgllâmaktadlîl Bu sekilde, bir aday indükleyici antijenin verimliligi, sitokinlerin uygun tipini uyarabilme kabiliyeti ölçülerek degeriendirilebilmektedir. Bununla, indükleyici antijenin tolerojenik epitoplar- yönelik bir hlZEtarama testi, etkili mukozal baglama bilesenleri, etkili kombinasyonlar veya mukoza uygulamanI etkili modlari] ve programlarÇl in vitro hücre deneylerine yönelik donörler olarak genetik olarak özdes hayvanlarEkullanarak yürütülebilmektedir. Hayvanlar, test bilesimi ile bir mukozal yüzeyde islenmektedir ve bazen, tam Freund adjuvanIElda hedef antijene parenteral uygulama ile yapilE1aktadlEl Dalak hücreleri izole edilmektedir ve yaklaslKl 50 pg/mL bir konsantrasyonda hedef antijen mevcudiyetinde in vitro kültürlenmektedir. Hedef antijen, tolerojenik epitoplarI konumu ile eslesmek üzere aday proteinler veya alt fragmanlar ile ikame edilebilmektedir. Ortama sitokin salgEîJstandart immüno deney ile ölçülebilmektedir. Hücrelerin, diger hücrelerin aktivitesini süprese edebilme kabiliyeti, hedef antijen ile immünize bir hayvandan izole hücreleri kullanarak veya hedef antijene yan[l3al olarak bir hücre dizisini olusturarak belirlenebilmektedir (Ben-Nun ve meslektaslarlZlEur. J. Immunol. 11 süpresör hücresi popülasyonu, proliferasyonu önlemek üzere hafifçe @ElanmaktadEWaklaslEJ 1000 ila , süpresörler, yanlElveren hücreler ile birlikte kültürlenmektedir veya daha etmek için yeterli bir mesafe ile birinci ve ikinci polipeptit bilesenlerini aylElnak üzere kullanllâbilmektedir. BaglaylEEloIarak faydalüolarak kullanllâbilen amino asit sekanslarü Patent YayIlsîlburada bütünlüklerinde referans ile dahil edilmektedir. Baglaylîßekans genel olarak uzunluk aç-an 1 ila yaklaslE 50 amino asit olabilmektedir. Bazülapüândlülnalarda, baglaylEEtsekanslar, örnegin birinci ve ikinci polipeptitler, fonksiyonel alanlarüayianak ve sterik enterferansEönlemek için kullanllâbilen esas olmayan N-terminal amino asit bölgelerine sahip oldugunda gerekli degildir ve/veya kullanilüiamaktadß Tolerojenik aktiviteye yönelik bir proksi, bir bozulmamlgl antijenin veya fragmanlEl, hedef bölgede bir uygun sitokinin üretimini uyarabilmesi kaibliyetidir. Hedeflenen bölgede T süpresör hücreleri ile sal-n immünodüzenleyici sitokinin, TGF-ß oldugu düsünülmektedir (Miller ve meslektaslarü Proc. Natl. Acad. Sci. ABD 89:421, 1992). Tolerans esnasIda üretilebilen diger faktörler, sitokinlerdir (IL4 ve IL-10) aracElPGE'dir. Buna karslEl, aktif immün y" tabi olan dokulardaki lenfositler, IL-I, IL-2, IL-6 ve y-IFN gibi sitokinleri salgllâmaktadlîl Bu sekilde, bir aday indükleyici antijenin verimliligi, sitokinlerin uygun tipini uyarabilme kabiliyeti ölçülerek degeriendirilebilmektedir. Bununla, indükleyici antijenin tolerojenik epitoplar- yönelik bir hlZEtarama testi, etkili mukozal baglama bilesenleri, etkili kombinasyonlar veya mukoza uygulamanI etkili modlari] ve programlarÇl in vitro hücre deneylerine yönelik donörler olarak genetik olarak özdes hayvanlarEkullanarak yürütülebilmektedir. Hayvanlar, test bilesimi ile bir mukozal yüzeyde islenmektedir ve bazen, tam Freund adjuvanIElda hedef antijene parenteral uygulama ile yapilE1aktadlEl Dalak hücreleri izole edilmektedir ve yaklaslKl 50 pg/mL bir konsantrasyonda hedef antijen mevcudiyetinde in vitro kültürlenmektedir. Hedef antijen, tolerojenik epitoplarI konumu ile eslesmek üzere aday proteinler veya alt fragmanlar ile ikame edilebilmektedir. Ortama sitokin salgEîJstandart immüno deney ile ölçülebilmektedir. Hücrelerin, diger hücrelerin aktivitesini süprese edebilme kabiliyeti, hedef antijen ile immünize bir hayvandan izole hücreleri kullanarak veya hedef antijene yan[l3al olarak bir hücre dizisini olusturarak belirlenebilmektedir (Ben-Nun ve meslektaslarlZlEur. J. Immunol. 11 süpresör hücresi popülasyonu, proliferasyonu önlemek üzere hafifçe @ElanmaktadEWaklaslEJ 1000 ila , süpresörler, yanlElveren hücreler ile birlikte kültürlenmektedir veya daha sonrasIda tritiye timidin katllliîiiüveya MTT), yanEl/erenlerin proliferatif aktivitesini ölçmek için kullanllüîaktadlü Bir diger varyasyonda, süpresör hücre popülasyonu ve yan[tîl veren hücre popülasyonu, popülasyonlarlEl, birbirlerinden 1 mm içerisinde birlikte inkube olmasIEla izin veren, bir polikarbonat membran (WO 93/16724) ile ayrlßn bir çift hazneli transwell kültür sisteminin Costar, Cambridge Mass) üst ve alt seviyelerinde kültürlenmektedir. Bu yaklasIida, yanlüverenlerin proliferatif aktivitesi, ayrDJir sekilde ölçülebildigi için, süpresör hücre popülasyonunun @Elanmaslîlierekli degildir. Hedef antijenin hali hazHla bireyde mevcut oldugu yapllândlElnalarda, antijenin izole edilmesine veya mukozal baglanma bileseni ile bunun önceden birlestirilmesine ihtiyaç yoktur. Örnegin, antijen, bir patolojik kosulun (örnegin inflamatuvar baglEtak hastallglü/eya Çölyak hastaligimsonucu olarak veya bir 9. alerjinin sindirimiyle belirli bir modelde bireyde eksprese edilebilmektedir. Test, bir veya birden fazla dozda veya formülasyonda mukoza baglanma bileseninin verilmesiyle ve antijene karsElyerinde tolerizasyonu arttlâabilme kabiliyetinin belirlenmesi ile uygulanmaktadlEI Spesifik hastallgllrîl tedavisi için bilesimlerin etkinligi ve uygulama modlarlîlia bir ilgili hayvan hastaligilîl modelinde detaylandEIâbilmektedir. Tedavinin, hastal[glI semptomatolojisini ortadan kaldlîiiria veya geciktirme kabiliyeti, hastallglI biyokimyasal ve immünolojik niteliklerinin seviyesinde, etkilenen dokunun immünohistolojisinde ve uygulanan model için uygun olan brüt klinik özelliklerde takip edilmektedir. Test için kullanllâbilen hayvan modellerinin kEIEIhymlmayan örnekleri, asaglîzlhki kesite dahil edilmektedir. Bulus, TH1 yan-ÇITHZ yan-ÇITH17 yan-Üveya bu yanlflhrl bir kombinasyonunu modüle ederek toleransI modülasyonunu tasarlamaktadß TH1 yan-I modüle edilmesi, örnegin interferon-gamanI degisen ekspresyonunu kapsamaktadE TH2 yan-I modüle edilmesi, örnegin IL-4, IL-5, IL-10 ve IL-13'ün herhangi bir kombinasyonundan degisen ekspresyonunu kapsamaktadlE Tipik olarak TH2 yan-a bir artlg(azalma), IL-4, IL-5, IL-10 veya IL-13 arasIan en az birisinin ekspresyonunda bir artmazalma) içerecektir; daha tipik olarak, TH2 yan-a bir artß(azalma), IL-4, IL-5, IL-10 veya EL-13 arasIan en az ikisinin ekspresyonunda bir artEIIçerecektir, daha tipik olarak TH2 yan-aki bir artlgl(azalma), DL- 4, IL-5, IL-10 veya IL-13 araleldan en az üçünde bir artlgîiçerecektir, bu esnada TH2 yan-a bir art& (azalma) ideal olarak IL-4, IL-5, IL-10 ve IL-13 arasülclan tümünün ekspresyonunda bir artmazalmaybgliçerecektir. TH 17'nin modüle edilmesi, örnegin TGF- sonrasIda tritiye timidin katllliîiiüveya MTT), yanEl/erenlerin proliferatif aktivitesini ölçmek için kullanllüîaktadlü Bir diger varyasyonda, süpresör hücre popülasyonu ve yan[tîl veren hücre popülasyonu, popülasyonlarlEl, birbirlerinden 1 mm içerisinde birlikte inkube olmasIEla izin veren, bir polikarbonat membran (WO 93/16724) ile ayrlßn bir çift hazneli transwell kültür sisteminin Costar, Cambridge Mass) üst ve alt seviyelerinde kültürlenmektedir. Bu yaklasIida, yanlüverenlerin proliferatif aktivitesi, ayrDJir sekilde ölçülebildigi için, süpresör hücre popülasyonunun @Elanmaslîlierekli degildir. Hedef antijenin hali hazHla bireyde mevcut oldugu yapllândlElnalarda, antijenin izole edilmesine veya mukozal baglanma bileseni ile bunun önceden birlestirilmesine ihtiyaç yoktur. Örnegin, antijen, bir patolojik kosulun (örnegin inflamatuvar baglEtak hastallglü/eya Çölyak hastaligimsonucu olarak veya bir 9. alerjinin sindirimiyle belirli bir modelde bireyde eksprese edilebilmektedir. Test, bir veya birden fazla dozda veya formülasyonda mukoza baglanma bileseninin verilmesiyle ve antijene karsElyerinde tolerizasyonu arttlâabilme kabiliyetinin belirlenmesi ile uygulanmaktadlEI Spesifik hastallgllrîl tedavisi için bilesimlerin etkinligi ve uygulama modlarlîlia bir ilgili hayvan hastaligilîl modelinde detaylandEIâbilmektedir. Tedavinin, hastal[glI semptomatolojisini ortadan kaldlîiiria veya geciktirme kabiliyeti, hastallglI biyokimyasal ve immünolojik niteliklerinin seviyesinde, etkilenen dokunun immünohistolojisinde ve uygulanan model için uygun olan brüt klinik özelliklerde takip edilmektedir. Test için kullanllâbilen hayvan modellerinin kEIEIhymlmayan örnekleri, asaglîzlhki kesite dahil edilmektedir. Bulus, TH1 yan-ÇITHZ yan-ÇITH17 yan-Üveya bu yanlflhrl bir kombinasyonunu modüle ederek toleransI modülasyonunu tasarlamaktadß TH1 yan-I modüle edilmesi, örnegin interferon-gamanI degisen ekspresyonunu kapsamaktadE TH2 yan-I modüle edilmesi, örnegin IL-4, IL-5, IL-10 ve IL-13'ün herhangi bir kombinasyonundan degisen ekspresyonunu kapsamaktadlE Tipik olarak TH2 yan-a bir artlg(azalma), IL-4, IL-5, IL-10 veya IL-13 arasIan en az birisinin ekspresyonunda bir artmazalma) içerecektir; daha tipik olarak, TH2 yan-a bir artß(azalma), IL-4, IL-5, IL-10 veya EL-13 arasIan en az ikisinin ekspresyonunda bir artEIIçerecektir, daha tipik olarak TH2 yan-aki bir artlgl(azalma), DL- 4, IL-5, IL-10 veya IL-13 araleldan en az üçünde bir artlgîiçerecektir, bu esnada TH2 yan-a bir art& (azalma) ideal olarak IL-4, IL-5, IL-10 ve IL-13 arasülclan tümünün ekspresyonunda bir artmazalmaybgliçerecektir. TH 17'nin modüle edilmesi, örnegin TGF- seviyelerini etkilemektedir. Mevcut bulusun bilesimlerinin ve yöntemlerinin etkinliginin degerlendirilmesine yönelik diger bütünüyle referans ile dahil edilmektedir) açlKIand [giügibi teknikte anlasllîhaktadlü Mevcut bulusun belirli yapllândlünalarüterapötik müdahale ile öncesinde tolere edilmeyen bir bireyde immün tolerans.. astarlanmasEile ilgilidir. Bu yapllândlîilnalar genel olarak antijen ve mukoza baglanma bileseninin bir kombinasyonunun birden fazla uygulamaslü içermektedir. Tipik olarak, denek, tedavi seyrinde önceden tolerans manifestasyonlarlîl sergileyebilmesine ragmen, en az üç uygulama, sllZllEIa en az dört uygulama bazen en az aItEl uygulama, bir uzun süren sonuca ulasmak için astarlama esnaslda uygulanmaktadIEl Daha genel olarak, her bir doz, bir bolus uygulamasEblarak verilmektedir, fakat mukoza sal.! yapabilen sürekli formülasyonlar da uygundur. Çok saylöh uygulanman. yaplig'llîlyerde, uygulamalar arasIaki zaman genel olarak 1 gün ve 3 hafta arasiEtladlEl ve tipik olarak yaklasiEJ 3 gün ve 2 hafta arasiEUadlEI Genel olarak, aynEbntijen ve mukozal baglanma bileseni, aynEl konsantrasyonda mevcuttur ve uygulama, aynEl mukozal yüzeye saglanmaktadIB fakat bir tedavi seyri esnasiEda bu herhangi bir degiskenin varyasyonu dahil edilebilmektedir. Mevcut bulusun diger yapHândEünalarlJ öncesinde olusturulmus bir immün tolerans.. Etarcüg.. arttEEl-iaslîlveya uzatEIBwasEIiIe ilgilidir. Bu yapilândlEtnalar genel olarak, olusturulan tolerans düsügünde veya düsme riskini tas.[g]Ia tedavinin bir uygulamas- veya bir klîa seyrini içermektedir. ArttlEna islemi genel olarak astarlamadan veya bir önceki arttlElnadan dolayIZIL ay ila 1 yilZlve tipik olarak 2 ila 6 ay uygulanmaktadB Mevcut bulus ayrlîla haftada iki defa, haftaliKl iki haftada bir veya herhangi bir baska düzenli programda meydana gelen uygulamalar. bir programlEUa düzenli tolerans bak D içeren yapilândlîrlnalarEiÇermektedir. Partiküller, ihtiyacüblan bir denekte inflamatuvar immün yan-Dazaltmak veya Ihtiyacßlan bir denekte bir bakteriyel veya viral enfeksiyonu tedavi etmek için etkili herhangi bir dozda verilebilmektedir. Belirli yapilândlülnalarda, yaklasiE] 102 ila yaklasilZl 1020 partikül, bireye saglanmaktadlB Bir diger yapilândlülnada, yaklasilZl 103 ila yaklasllîl 1015 partikül saglanmaktadlEl Bir diger yapilândlElnada, yaklaslK] 106 ila yaklasiKl 1012 partikül saglanmaktadIE Bir diger yapllândülnada, yaklas[lZl 108 ila yaklasllîl 1010 partikül seviyelerini etkilemektedir. Mevcut bulusun bilesimlerinin ve yöntemlerinin etkinliginin degerlendirilmesine yönelik diger bütünüyle referans ile dahil edilmektedir) açlKIand [giügibi teknikte anlasllîhaktadlü Mevcut bulusun belirli yapllândlünalarüterapötik müdahale ile öncesinde tolere edilmeyen bir bireyde immün tolerans.. astarlanmasEile ilgilidir. Bu yapllândlîilnalar genel olarak antijen ve mukoza baglanma bileseninin bir kombinasyonunun birden fazla uygulamaslü içermektedir. Tipik olarak, denek, tedavi seyrinde önceden tolerans manifestasyonlarlîl sergileyebilmesine ragmen, en az üç uygulama, sllZllEIa en az dört uygulama bazen en az aItEl uygulama, bir uzun süren sonuca ulasmak için astarlama esnaslda uygulanmaktadIEl Daha genel olarak, her bir doz, bir bolus uygulamasEblarak verilmektedir, fakat mukoza sal.! yapabilen sürekli formülasyonlar da uygundur. Çok saylöh uygulanman. yaplig'llîlyerde, uygulamalar arasIaki zaman genel olarak 1 gün ve 3 hafta arasiEtladlEl ve tipik olarak yaklasiEJ 3 gün ve 2 hafta arasiEUadlEI Genel olarak, aynEbntijen ve mukozal baglanma bileseni, aynEl konsantrasyonda mevcuttur ve uygulama, aynEl mukozal yüzeye saglanmaktadIB fakat bir tedavi seyri esnasiEda bu herhangi bir degiskenin varyasyonu dahil edilebilmektedir. Mevcut bulusun diger yapHândEünalarlJ öncesinde olusturulmus bir immün tolerans.. Etarcüg.. arttEEl-iaslîlveya uzatEIBwasEIiIe ilgilidir. Bu yapilândlEtnalar genel olarak, olusturulan tolerans düsügünde veya düsme riskini tas.[g]Ia tedavinin bir uygulamas- veya bir klîa seyrini içermektedir. ArttlEna islemi genel olarak astarlamadan veya bir önceki arttlElnadan dolayIZIL ay ila 1 yilZlve tipik olarak 2 ila 6 ay uygulanmaktadB Mevcut bulus ayrlîla haftada iki defa, haftaliKl iki haftada bir veya herhangi bir baska düzenli programda meydana gelen uygulamalar. bir programlEUa düzenli tolerans bak D içeren yapilândlîrlnalarEiÇermektedir. Partiküller, ihtiyacüblan bir denekte inflamatuvar immün yan-Dazaltmak veya Ihtiyacßlan bir denekte bir bakteriyel veya viral enfeksiyonu tedavi etmek için etkili herhangi bir dozda verilebilmektedir. Belirli yapilândlülnalarda, yaklasiE] 102 ila yaklasilZl 1020 partikül, bireye saglanmaktadlB Bir diger yapilândlülnada, yaklasilZl 103 ila yaklasllîl 1015 partikül saglanmaktadlEl Bir diger yapilândlElnada, yaklaslK] 106 ila yaklasiKl 1012 partikül saglanmaktadIE Bir diger yapllândülnada, yaklas[lZl 108 ila yaklasllîl 1010 partikül saglanmaktadlEl Tercih edilen bir yapllândlîrlnada, tercih edilen doz, %0.1 katlülnl'dir. Bu sebepten ötürü, 0.5 um tanecikler Için, tercih edilen bir doz, yaklasllZl olarak 4 x 109 tanecik, 0.05 pm tanecikler için, tercih edilen bir doz yaklasIKl olarak 4 x 1012 taneciktir, 3pm tanecikler için, tercih edilen bir doz, 2 x 107 taneciktir. Fakat, tedavi edilecek olan özel kosulun tedavisinde etkili herhangi bir doz kapsanmaktadlü Bulus, otoimmün hastaliEl transplant reddi ve alerjik reaksiyonlar gibi immün ile iliskili bozukluklar. tedavisi için kullanSlIE Immün toleranslühdüklemek üzere bir sentetik, biyo uyumlu partikül sisteminin ikamesi, üretim kolaylg'lîib, terapötik maddelerin genis mevcudiyetine yönelebilmistir, numuneler arasIiaki tekdüzeligi arttlßbilmis, potansiyel tedavi bölgelerinin say-ürttlübilmis ve bir taslýlîiîhücreye alerjik yanlfliar için potansiyeli siddetli ölçüde azaltabilmistir. Burada kullanIiglEüzere, "immün yaniElEl terimi, T hücresi arac[[[Ü/e/veya B hücresi aracilliîl immün yanElbrIübermektedir. Örnek teskil eden immün yanitllarüörnegin sitokin üretimi ve hücresel sitotoksisite gibi T hücresi yanlfilarIEiçermektedir. Ek olarak, immün yan[Eltherimi, örnegin antikor üretimi (humoral yanühr) gibi T hücresi aktivasyonu ve örnegin makrofajlar gibi sitokin yanißal hücrelerin aktivasyonu ile dolayIElolarak etkilenen immün yanlfliarlü içermektedir. Immün yari- dahil edilen immün hücreleri, B hücreleri ve T hücreleri (CD4+, CD8+, Th1 ve Th2 hücreleri) gibi Ienfositleri; antijen sunucu hücreleri (örn. dendritik hücreler, makrofajlar, B Ienfositleri, Langerhans hücreleri gibi profesyonel antijen sunucu hücreler ve keratinositler, endotel hücreleri, astrositler, fibroblastlar, oligodendrositler gibi profesyonel olmayan antijen sunucu hücreler); dogal öldürücü hücreler; makrofajlar, eozinofiller, kütle hücreleri, bazofiller ve granülositler gibi miyeloid hücreleri içermektedir. BazIZI yapllândlElnalarda, mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri, inflamasyon bölgesine inflamatuvar hücre trafigini azaltmak için etkilidir. Burada kullanIEgiElüzere, "anerji", "tolerans" veya "antijene özgü tolerans" terimi, T hücrelerinin, T hücresi reseptörü aracHJJBIyarIia duyarslîliglIEi'fade etmektedir. Bu duyarslîlilZJ genel olarak antijene özgüdür ve antijenik peptide maruziyetin kesilmesinden sonra ErarcIlEl Örnegin, T-hücrelerindeki anerji, örnegin IL-2 gibi sitokin üretiminden yoksunluk ile karakterize edilmektedir. T hücresi anerjisi T hücreleri, bir Ikinci sinyal (bir yardIicIZIJyarlîEl sinyal) yoklugunda antijene maruz kald[g]Ia ve bir birinci sinyali (bir T hücresi reseptörü veya CD-3 aracli]]3inyal) ald[giIa meydana gelmektedir. Bu kosullar aItIda, hücrelerin aynEI antijene yeniden maruziyeti (bir yardIicElmolekül mevcudiyetinde yeniden maruziyetin saglanmaktadlEl Tercih edilen bir yapllândlîrlnada, tercih edilen doz, %0.1 katlülnl'dir. Bu sebepten ötürü, 0.5 um tanecikler Için, tercih edilen bir doz, yaklasllZl olarak 4 x 109 tanecik, 0.05 pm tanecikler için, tercih edilen bir doz yaklasIKl olarak 4 x 1012 taneciktir, 3pm tanecikler için, tercih edilen bir doz, 2 x 107 taneciktir. Fakat, tedavi edilecek olan özel kosulun tedavisinde etkili herhangi bir doz kapsanmaktadlü Bulus, otoimmün hastaliEl transplant reddi ve alerjik reaksiyonlar gibi immün ile iliskili bozukluklar. tedavisi için kullanSlIE Immün toleranslühdüklemek üzere bir sentetik, biyo uyumlu partikül sisteminin ikamesi, üretim kolaylg'lîib, terapötik maddelerin genis mevcudiyetine yönelebilmistir, numuneler arasIiaki tekdüzeligi arttlßbilmis, potansiyel tedavi bölgelerinin say-ürttlübilmis ve bir taslýlîiîhücreye alerjik yanlfliar için potansiyeli siddetli ölçüde azaltabilmistir. Burada kullanIiglEüzere, "immün yaniElEl terimi, T hücresi arac[[[Ü/e/veya B hücresi aracilliîl immün yanElbrIübermektedir. Örnek teskil eden immün yanitllarüörnegin sitokin üretimi ve hücresel sitotoksisite gibi T hücresi yanlfilarIEiçermektedir. Ek olarak, immün yan[Eltherimi, örnegin antikor üretimi (humoral yanühr) gibi T hücresi aktivasyonu ve örnegin makrofajlar gibi sitokin yanißal hücrelerin aktivasyonu ile dolayIElolarak etkilenen immün yanlfliarlü içermektedir. Immün yari- dahil edilen immün hücreleri, B hücreleri ve T hücreleri (CD4+, CD8+, Th1 ve Th2 hücreleri) gibi Ienfositleri; antijen sunucu hücreleri (örn. dendritik hücreler, makrofajlar, B Ienfositleri, Langerhans hücreleri gibi profesyonel antijen sunucu hücreler ve keratinositler, endotel hücreleri, astrositler, fibroblastlar, oligodendrositler gibi profesyonel olmayan antijen sunucu hücreler); dogal öldürücü hücreler; makrofajlar, eozinofiller, kütle hücreleri, bazofiller ve granülositler gibi miyeloid hücreleri içermektedir. BazIZI yapllândlElnalarda, mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri, inflamasyon bölgesine inflamatuvar hücre trafigini azaltmak için etkilidir. Burada kullanIEgiElüzere, "anerji", "tolerans" veya "antijene özgü tolerans" terimi, T hücrelerinin, T hücresi reseptörü aracHJJBIyarIia duyarslîliglIEi'fade etmektedir. Bu duyarslîlilZJ genel olarak antijene özgüdür ve antijenik peptide maruziyetin kesilmesinden sonra ErarcIlEl Örnegin, T-hücrelerindeki anerji, örnegin IL-2 gibi sitokin üretiminden yoksunluk ile karakterize edilmektedir. T hücresi anerjisi T hücreleri, bir Ikinci sinyal (bir yardIicIZIJyarlîEl sinyal) yoklugunda antijene maruz kald[g]Ia ve bir birinci sinyali (bir T hücresi reseptörü veya CD-3 aracli]]3inyal) ald[giIa meydana gelmektedir. Bu kosullar aItIda, hücrelerin aynEI antijene yeniden maruziyeti (bir yardIicElmolekül mevcudiyetinde yeniden maruziyetin meydana gelmesi halinde bile), sitokinleri üretememesi ve daha sonrasIa prolifere olamamasElile sonuçlanmaktadE Bu sekilde, sitokinleri üretilememesi, proliferasyonu önlemektedir. Fakat anerjik T hücreleri, sitokinler (örn. IL-2) ile kültürlenmesi halinde prolifere olabilmektedir. Örnegin, T hücresi anerjisi de ELISA ile ölçüldügü gibi T lenfositleri ile veya bir gösterge hücre dizisi kullanllârak bir proliferasyon deneyi ile IL-2 üretiminin yoksunlugu ile gözlemlenebilmektedir. Alternatif olarak, bir haberci gen yaplîlîl kullanilâbilmektedir. Örnegin, anerjik T hücreleri, 5' IL-2 geni gelistiricisin in kontrolü altlEUa bir heterolog promoter ile veya gelistirici içerisinde bulunabilen API sekansII bir multimeri ile indüklenmis DL-2 gen transkripsiyonunu baslatamamaktadE(Kang ve meslektaslarEl992 Burada kullanllglüizere, "immünolojik tolerans" terimi, tedavi edilmemis deneklere klýlasla tedavi edilmis deneklerin bir oranIda uygulanan yöntemleri ifade etmektedir, burada: a) bir spesifik immünolojik yari- bir azalmlgl seviyesi (antijene özgü efektör T lenfositleri, B lenfositleri, antikor veya esdegerleri ile en azIan kEfnen yönlendirildigi düsünülmektedir); b) bir spesifik immünolojik yari- baslang-a veya ilerlemesinde bir gecikme; veya c) bir spesifik immünolojik yari- baslanglElEa veya ilerlemesine dair azalmglbir risk. immünolojik tolerans tercihen digerleri ile klýlaslamada belirli antijenlere karsEbaslatI[g]lEtla, "spesifik" immünolojik tolerans meydana gelmektedir. Immünolojik tolerans, bir inflamatuvar immün yan- yönelen antijenlere karsEbyrIi gözetmeksizin baslatIIgllEUa, "spesifik olmayan" immünolojik tolerans meydana gelmektedir. Immünolojik tolerans, bir patojenik immün yari- yönelen, fakat bir koruyucu immün yari- yol açan digerlerine yönelmeyen antijenlere karsEyarEyarEfarklEblarak baslatI[g]Ia, "YarlZlSpesiûk" immünolojik tolerans meydana gelmektedir. Otoantijenlere ve otoimmün hastal[gla tolerans, timusta kendiliginden reaktif T hücrelerinin negatif seçimini içeren çesitli mekanizmalar ve timik delesyondan ç[lZbn ve periferikte bulunan bu otoreaktif T hücrelerine yönelik periferik tolerans mekanizmalarüle elde edilmektedir. Periferik T hücresi toleranslüsaglayan mekanizmalar. örnekleri, kendi antijenlerinin, anerjinin veya otoantijene yanlßlîltgll "bilgisizligini", sitokin immün sapmasIEl ve kendiliginden reaktif T hücrelerinin aktivasyon ile indüklenmis hücre ölümünü içermektedir. Ek olarak, düzenleyici T hücrelerinin, periferik tolerans. yönlendirilmesine dahil edildigi gösterilmistir. Bkz. örnegin Walker ve meslektaslarlJZOOZ) Nat. Rev. Immunol. 2: 11-19; Shevach ve meslektaslarEQZOOl) Immunol. Rev. 182z58-67. BazlIrHurumIarda, bir otoantijene periferik tolerans kaylîitlEl (veya koparlEnaktadlE) ve bir otoimmün yanlflE] meydana meydana gelmesi halinde bile), sitokinleri üretememesi ve daha sonrasIa prolifere olamamasElile sonuçlanmaktadE Bu sekilde, sitokinleri üretilememesi, proliferasyonu önlemektedir. Fakat anerjik T hücreleri, sitokinler (örn. IL-2) ile kültürlenmesi halinde prolifere olabilmektedir. Örnegin, T hücresi anerjisi de ELISA ile ölçüldügü gibi T lenfositleri ile veya bir gösterge hücre dizisi kullanllârak bir proliferasyon deneyi ile IL-2 üretiminin yoksunlugu ile gözlemlenebilmektedir. Alternatif olarak, bir haberci gen yaplîlîl kullanilâbilmektedir. Örnegin, anerjik T hücreleri, 5' IL-2 geni gelistiricisin in kontrolü altlEUa bir heterolog promoter ile veya gelistirici içerisinde bulunabilen API sekansII bir multimeri ile indüklenmis DL-2 gen transkripsiyonunu baslatamamaktadE(Kang ve meslektaslarEl992 Burada kullanllglüizere, "immünolojik tolerans" terimi, tedavi edilmemis deneklere klýlasla tedavi edilmis deneklerin bir oranIda uygulanan yöntemleri ifade etmektedir, burada: a) bir spesifik immünolojik yari- bir azalmlgl seviyesi (antijene özgü efektör T lenfositleri, B lenfositleri, antikor veya esdegerleri ile en azIan kEfnen yönlendirildigi düsünülmektedir); b) bir spesifik immünolojik yari- baslang-a veya ilerlemesinde bir gecikme; veya c) bir spesifik immünolojik yari- baslanglElEa veya ilerlemesine dair azalmglbir risk. immünolojik tolerans tercihen digerleri ile klýlaslamada belirli antijenlere karsEbaslatI[g]lEtla, "spesifik" immünolojik tolerans meydana gelmektedir. Immünolojik tolerans, bir inflamatuvar immün yan- yönelen antijenlere karsEbyrIi gözetmeksizin baslatIIgllEUa, "spesifik olmayan" immünolojik tolerans meydana gelmektedir. Immünolojik tolerans, bir patojenik immün yari- yönelen, fakat bir koruyucu immün yari- yol açan digerlerine yönelmeyen antijenlere karsEyarEyarEfarklEblarak baslatI[g]Ia, "YarlZlSpesiûk" immünolojik tolerans meydana gelmektedir. Otoantijenlere ve otoimmün hastal[gla tolerans, timusta kendiliginden reaktif T hücrelerinin negatif seçimini içeren çesitli mekanizmalar ve timik delesyondan ç[lZbn ve periferikte bulunan bu otoreaktif T hücrelerine yönelik periferik tolerans mekanizmalarüle elde edilmektedir. Periferik T hücresi toleranslüsaglayan mekanizmalar. örnekleri, kendi antijenlerinin, anerjinin veya otoantijene yanlßlîltgll "bilgisizligini", sitokin immün sapmasIEl ve kendiliginden reaktif T hücrelerinin aktivasyon ile indüklenmis hücre ölümünü içermektedir. Ek olarak, düzenleyici T hücrelerinin, periferik tolerans. yönlendirilmesine dahil edildigi gösterilmistir. Bkz. örnegin Walker ve meslektaslarlJZOOZ) Nat. Rev. Immunol. 2: 11-19; Shevach ve meslektaslarEQZOOl) Immunol. Rev. 182z58-67. BazlIrHurumIarda, bir otoantijene periferik tolerans kaylîitlEl (veya koparlEnaktadlE) ve bir otoimmün yanlflE] meydana gelmektedir. Örnegin, EAE'ye yönelik bir hayvan modelinde, TLR dogal immün reseptörleri vasilîâislýla antijen sunucu hücrelerin (APC'Ier) aktivasyonunun kendi toleransIEkopard[g]|:| gösterilmistir ve EAE Indüksiyonuna neden oImaktadIEl(WaIdner ve meslektaslarE[2004) J. Clin. Invest. 113:990-997). Dolaylîlýla, bazlîyapllândlülnalarda bulus, TLR7/8, TLR9 ve/veya TLR 7/8/9'a baglilüiücre uyarIilEJDbastlEHken veya azaltlBken artan antijen sunumunun arttlEllßîasI yönelik yöntemleri saglamaktadlîl Burada açlEland[gI:lüzere, özel modifiye edilmis partiküllerin uygulanmasüimmüno uyarlEEboIinükleotidler ile iliskili TLR 7/8, TLR9 ve/veya TLR7/8/9'a bagIiIIZIhücre yanifibrIübastlEElken DC'Ier veya APC'Ier ile antijen sunumuna neden olmaktadlEl Bu bastIElna islemi, bir veya birden fazla TLR ile iliskili sitokinlerin artan seviyelerini içerebilmektedir. Yukarlîzlh açllZlandlîgEgibi, mevcut bulus, Mac-1 ve LFA-1 aracIIJEbozukluklarI tedavisi için kullanlglüiaiyolojik özelliklere sahip olan yeni bilesikleri saglamaktadlEI Dolaylêlýla, bir diger yönde, immün modifiye edici partikülleri içeren ve tercihe baglüblarak bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasEIElsîElçeren farmasötik bilesimler saglanmaktadlE Belirli yapüândlülnalarda, bu bilesimler tercihe bagIlZbIarak ayri& bir veya birden fazla ek terapötik maddeyi içermektedir. Alternatif olarak, mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri, bir veya birden fazla diger terapötik maddenin uygulanmasEile kombinasyon halinde, ihtiyacüblan bir hastaya uygulanabilmektedir. Örnegin, birlesik uygulamaya yönelik ek terapötik maddeler veya mevcut bulusun bir bilesigi ile bir farmasötik bilesime dahil edilmesi, bir onaylanmlg anti-inflamatuvar madde olabilmektedir veya bir kontrolsüz inflamatuvar immün yan[tî[l:lieya bir bakteriyel veya viral enfeksiyon ile karakterize edilen herhangi bir bozuklugun tedavisi için onaylîhihai olarak elde eden Amerikan GlElb ve Ilaç Kurumu tarafIan onaylanan bir dizi madde arasIan herhangi birisi olabilmektedir. AyrlEla mevcut bulusun belirli modifiye edilmis partiküllerinin, tedaviye yönelik serbest formda veya uygun oldugu yerde, bunlar. farmasötik olarak kabul edilebilir bir türevi olarak mevcut olabilmektedir. Mevcut bulusun farmasötik bilesimleri, burada kullanI[g]I:lüzere, arzu edilen özel dozaj formuna uygun bir sekilde herhangi bir ve tüm solventleri, seyrelticileri veya diger slîEl vehikülü, dispersiyon veya süspansiyon yard IicHârÇlyüzey aktif maddeler, izotonik maddeler, kallEIastlElEElveya emülsifiye edici maddeler, koruyucular, katEbaglaylEIIEr, yaglaylalâr ve gelmektedir. Örnegin, EAE'ye yönelik bir hayvan modelinde, TLR dogal immün reseptörleri vasilîâislýla antijen sunucu hücrelerin (APC'Ier) aktivasyonunun kendi toleransIEkopard[g]|:| gösterilmistir ve EAE Indüksiyonuna neden oImaktadIEl(WaIdner ve meslektaslarE[2004) J. Clin. Invest. 113:990-997). Dolaylîlýla, bazlîyapllândlülnalarda bulus, TLR7/8, TLR9 ve/veya TLR 7/8/9'a baglilüiücre uyarIilEJDbastlEHken veya azaltlBken artan antijen sunumunun arttlEllßîasI yönelik yöntemleri saglamaktadlîl Burada açlEland[gI:lüzere, özel modifiye edilmis partiküllerin uygulanmasüimmüno uyarlEEboIinükleotidler ile iliskili TLR 7/8, TLR9 ve/veya TLR7/8/9'a bagIiIIZIhücre yanifibrIübastlEElken DC'Ier veya APC'Ier ile antijen sunumuna neden olmaktadlEl Bu bastIElna islemi, bir veya birden fazla TLR ile iliskili sitokinlerin artan seviyelerini içerebilmektedir. Yukarlîzlh açllZlandlîgEgibi, mevcut bulus, Mac-1 ve LFA-1 aracIIJEbozukluklarI tedavisi için kullanlglüiaiyolojik özelliklere sahip olan yeni bilesikleri saglamaktadlEI Dolaylêlýla, bir diger yönde, immün modifiye edici partikülleri içeren ve tercihe baglüblarak bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasEIElsîElçeren farmasötik bilesimler saglanmaktadlE Belirli yapüândlülnalarda, bu bilesimler tercihe bagIlZbIarak ayri& bir veya birden fazla ek terapötik maddeyi içermektedir. Alternatif olarak, mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri, bir veya birden fazla diger terapötik maddenin uygulanmasEile kombinasyon halinde, ihtiyacüblan bir hastaya uygulanabilmektedir. Örnegin, birlesik uygulamaya yönelik ek terapötik maddeler veya mevcut bulusun bir bilesigi ile bir farmasötik bilesime dahil edilmesi, bir onaylanmlg anti-inflamatuvar madde olabilmektedir veya bir kontrolsüz inflamatuvar immün yan[tî[l:lieya bir bakteriyel veya viral enfeksiyon ile karakterize edilen herhangi bir bozuklugun tedavisi için onaylîhihai olarak elde eden Amerikan GlElb ve Ilaç Kurumu tarafIan onaylanan bir dizi madde arasIan herhangi birisi olabilmektedir. AyrlEla mevcut bulusun belirli modifiye edilmis partiküllerinin, tedaviye yönelik serbest formda veya uygun oldugu yerde, bunlar. farmasötik olarak kabul edilebilir bir türevi olarak mevcut olabilmektedir. Mevcut bulusun farmasötik bilesimleri, burada kullanI[g]I:lüzere, arzu edilen özel dozaj formuna uygun bir sekilde herhangi bir ve tüm solventleri, seyrelticileri veya diger slîEl vehikülü, dispersiyon veya süspansiyon yard IicHârÇlyüzey aktif maddeler, izotonik maddeler, kallEIastlElEElveya emülsifiye edici maddeler, koruyucular, katEbaglaylEIIEr, yaglaylalâr ve benzerleri içeren bir farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîlýüçermektedir. Remington's Pharmaceutical Sciences, Onbesinci BasküE. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980), farmasötik bilesimlerin formüle edilmesinde kullanllân ve bunlar. preparasyon için bilinen tekniklerde kullanilan çesitli taslýlîllârütarif etmektedir. Belirli bir dereceye kadar olmasüharicinde, herhangi bir geleneksel taslîlîßrtam, herhangi bir arzu edilmeyen biyolojik etkide üretilerek veya farmasötik bilesimin herhangi bir diger bileseni ile silici bir sekilde etkilesimi geçilmesi ile oldugu gibi bulusun anti-viral bilesikleri ile uyumlu olmad[glI:için, mevcut bulusun kapsamEiçerisinde olmasülçin kullanIiElasarlanmaktadlEl Farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîllâr olarak hareket edebilen malzemelerin bazüörnekleri, klglîlhylaîl olmayacak sekilde Iaktoz, glukoz ve sukroz gibi sekerleri; mlEIElnisastasü/e patates nisastaslîl gibi nisastalarlüsodyum karboksimetil selüloz, etil selüloz ve selüloz asetat gibi selülozu ve türevlerini; toz haline getirilmis kitreyi; maltLîljelatini; talkLîlkakao yaglZi/e fitil mumlarEgibi eksipiyanlarElyer flgtlgllîyagüpamuk yagüaspir yagüsusam yagüzeytin yaglîlmlglESzü yagü ve soya yaglîgibi yaglarlîlglikolleri; bir propilen glikolü; etil oleat ve etil Iaurat gibi esterleri; agarlümagnezyum hidroksit ve alüminyum hidroksit gibi tamponlaylîlînaddeleri; aljinik asidi; pirojensiz suyu; izotonik salini; Ringer çözeltisini; etil alkolü ve fosfat tampon çözeltilerini ve aynüamanda sodyum Iauril sülfat ve magnezyum stearat gibi diger toksik olmayan uyumlu yaglarüçermektedir, renk verici maddeler, serbest bIBakIEEmaddeler, kaplama maddeleri, tatlandlEIEÇltatlandIElEÜve parfüm maddeleri, koruyucular ve antioksidanlar, formülatörün karar. göre bilesimde engellenebilmektedir. Oral uygulamaya yönelik slîEHozaj formlarüklîlflhyßîblmayacak sekilde farmasöitk olarak kabul edilebilir emülsiyonlarÇl mikroemülsiyonlarÇl çözeltileri, süspansiyonlarü suruplarlZlve eliksirleri içermektedir. Aktif bilesiklere ek olarak, slîEUozaj formu, su veya diger solvent, çözücü maddeler ve etil alkol, izopropil alkol, etil karbonat, etil asetat, benzil alkol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-bütilen glikol, dimetilformamid, yaglar (özellikle, pamuk tohumu, yer flgtlglümlglü tohum, zeytin, hintyagüve susam yagD] gliserol, tetrahidrofurfuril alkol, polietilen glikoller ve sorbitanI yaglElasit esterleri ve bunlarlEl karlglmlarlîgibi emülgatörler tarzlEtla teknikte genellikle kullanllân inert seyrelticileri içermektedir. Inert seyrelticilerin yanEl sü, oral bilesimler ayrlEla Elatlîljnaddeler, emülsifiye edici ve süspanse edici maddeler, tatland lElEÇIIezzet verici ve parfüm verici maddeler gibi adjuvanlarlîîçerebilmektedir. Partiküller, oral, nazal, intravenöz, intramüsküler, oküler, transdermal, traperitoneal veya sübkütanöz olarak uygulanabilmektedir. Bir yapüândünada, bulusun partikülleri intravenöz olarak uygulanmaktadlEl benzerleri içeren bir farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîlýüçermektedir. Remington's Pharmaceutical Sciences, Onbesinci BasküE. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980), farmasötik bilesimlerin formüle edilmesinde kullanllân ve bunlar. preparasyon için bilinen tekniklerde kullanilan çesitli taslýlîllârütarif etmektedir. Belirli bir dereceye kadar olmasüharicinde, herhangi bir geleneksel taslîlîßrtam, herhangi bir arzu edilmeyen biyolojik etkide üretilerek veya farmasötik bilesimin herhangi bir diger bileseni ile silici bir sekilde etkilesimi geçilmesi ile oldugu gibi bulusun anti-viral bilesikleri ile uyumlu olmad[glI:için, mevcut bulusun kapsamEiçerisinde olmasülçin kullanIiElasarlanmaktadlEl Farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîllâr olarak hareket edebilen malzemelerin bazüörnekleri, klglîlhylaîl olmayacak sekilde Iaktoz, glukoz ve sukroz gibi sekerleri; mlEIElnisastasü/e patates nisastaslîl gibi nisastalarlüsodyum karboksimetil selüloz, etil selüloz ve selüloz asetat gibi selülozu ve türevlerini; toz haline getirilmis kitreyi; maltLîljelatini; talkLîlkakao yaglZi/e fitil mumlarEgibi eksipiyanlarElyer flgtlgllîyagüpamuk yagüaspir yagüsusam yagüzeytin yaglîlmlglESzü yagü ve soya yaglîgibi yaglarlîlglikolleri; bir propilen glikolü; etil oleat ve etil Iaurat gibi esterleri; agarlümagnezyum hidroksit ve alüminyum hidroksit gibi tamponlaylîlînaddeleri; aljinik asidi; pirojensiz suyu; izotonik salini; Ringer çözeltisini; etil alkolü ve fosfat tampon çözeltilerini ve aynüamanda sodyum Iauril sülfat ve magnezyum stearat gibi diger toksik olmayan uyumlu yaglarüçermektedir, renk verici maddeler, serbest bIBakIEEmaddeler, kaplama maddeleri, tatlandlEIEÇltatlandIElEÜve parfüm maddeleri, koruyucular ve antioksidanlar, formülatörün karar. göre bilesimde engellenebilmektedir. Oral uygulamaya yönelik slîEHozaj formlarüklîlflhyßîblmayacak sekilde farmasöitk olarak kabul edilebilir emülsiyonlarÇl mikroemülsiyonlarÇl çözeltileri, süspansiyonlarü suruplarlZlve eliksirleri içermektedir. Aktif bilesiklere ek olarak, slîEUozaj formu, su veya diger solvent, çözücü maddeler ve etil alkol, izopropil alkol, etil karbonat, etil asetat, benzil alkol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-bütilen glikol, dimetilformamid, yaglar (özellikle, pamuk tohumu, yer flgtlglümlglü tohum, zeytin, hintyagüve susam yagD] gliserol, tetrahidrofurfuril alkol, polietilen glikoller ve sorbitanI yaglElasit esterleri ve bunlarlEl karlglmlarlîgibi emülgatörler tarzlEtla teknikte genellikle kullanllân inert seyrelticileri içermektedir. Inert seyrelticilerin yanEl sü, oral bilesimler ayrlEla Elatlîljnaddeler, emülsifiye edici ve süspanse edici maddeler, tatland lElEÇIIezzet verici ve parfüm verici maddeler gibi adjuvanlarlîîçerebilmektedir. Partiküller, oral, nazal, intravenöz, intramüsküler, oküler, transdermal, traperitoneal veya sübkütanöz olarak uygulanabilmektedir. Bir yapüândünada, bulusun partikülleri intravenöz olarak uygulanmaktadlEl Bir immün yan-I modülasyonuna yönelik, mevcut bulusun uygulanmasi dair etkili miktarlar ve yöntem, hangi kosulun tedavi edilecegine ve teknikte tecrübe sahibi kisilerin bildigi diger faktörlere göre bireylere baglEl olarak degiskenlik gösterebilmektedir. Düsünülecek faktörler, uygulama yolunu ve uygulanacak doz say-Dçermektedir. B tarz faktörler teknikte bilinmektedir ve teknikte tecrübe sahibi kisiler, gereksiz deney olmadan bu tarz saptamalarEl olusturabilmektedir. Bir uygun dozaj araligiü arzu edilen immün düzenlemesini saglayan aral[EtlÜ Iletilen taslEEJmiktarlarIla verilen tasMEEI kullanlglîl dozaj aralilZlarÇlörnegin yaklasilZl asaglkiler arasIdan herhangi birisinden olabilmektedir: mg/kg, 5 ila 10 mg/kg. Alternatif olarak, dozaj, partikül say_ bagIEl olarak uygulanabilmektedir. Örnegin, iletilen taslýlEÜniktarlarIa verilen kullaniSIEtaslýlHJjozajlarü olabilmektedir. Her bir hastaya verilen mutlak miktar, biyoyararlanIi, klerens oranEIve uygulama yolu gibi farmakolojik özelliklere bagl- Farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîllârlül, seyrelticilerin ve eksipiyanlarI detaylarEl ve farmasötik bilesimlerin ve formülasyonlarI hazlîlbnmas- yönelik yöntemler, burada bütünüyle referans ile dahil edilen Remmingtons Pharmaceutical Sciences 18. BasklZI1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa., ABD örneginde saglanmaktadiEI Özel taslýlîlîliormülasyonun uygulanmasi dair etkili miktar ve yöntem, bireysel hasta, arzu edilen sonuç ve/veya bozukluk tipi, hastallEevresi ve teknikte tecrübe sahibi kisiler taraflEtlan bilinen diger faktörlere baglüolarak degiskenlik gösterebilmektedir. Özel bir uygulamada kullanlglühygulama yollarÇlteknikte tecrübe sahibi bir kisi tarafIian bilinmektedir. Uygulama yollarlZlkElflbylElîrblmayacak sekilde transbronsiyal ve transalveolar dahil olmak üzere topikal, dermal, transdermal, transmukozal, epidermal, parenteral, gastrointestinal ve nazofarengeal ve pulmoneri içermektedir. Uygun bir dozaj arallgiÇlkan seviyeleri ile ölçüldügü gibi yaklasllZl 1 ila 50 ;M bir doku konsantrasyonunu elde etmek üzere yeterli IRP-içeren bilesimi saglayan bir araI[IZIIB Her bir hastaya verilen mutlak miktar, biyoyararlanIi, klerens oranEl/e uygulama yolu gibi farmakolojik özelliklere baglIE Mevcut bulus, klîlflhylîüolmayacak sekilde fizyolojik olarak kabul edilebilir implantlar, merhemler, kremler, durular ve jeller dahil topik uygulama için uygun tasmormülasyonlarü saglamaktadB Dermal uygulamanI örnek teskil eden yollarlZltransdermal iletim, epidermal uygulama ve subkütanöz enjeksiyon gibi en az invazif olanlardE Bir immün yan-I modülasyonuna yönelik, mevcut bulusun uygulanmasi dair etkili miktarlar ve yöntem, hangi kosulun tedavi edilecegine ve teknikte tecrübe sahibi kisilerin bildigi diger faktörlere göre bireylere baglEl olarak degiskenlik gösterebilmektedir. Düsünülecek faktörler, uygulama yolunu ve uygulanacak doz say-Dçermektedir. B tarz faktörler teknikte bilinmektedir ve teknikte tecrübe sahibi kisiler, gereksiz deney olmadan bu tarz saptamalarEl olusturabilmektedir. Bir uygun dozaj araligiü arzu edilen immün düzenlemesini saglayan aral[EtlÜ Iletilen taslEEJmiktarlarIla verilen tasMEEI kullanlglîl dozaj aralilZlarÇlörnegin yaklasilZl asaglkiler arasIdan herhangi birisinden olabilmektedir: mg/kg, 5 ila 10 mg/kg. Alternatif olarak, dozaj, partikül say_ bagIEl olarak uygulanabilmektedir. Örnegin, iletilen taslýlEÜniktarlarIa verilen kullaniSIEtaslýlHJjozajlarü olabilmektedir. Her bir hastaya verilen mutlak miktar, biyoyararlanIi, klerens oranEIve uygulama yolu gibi farmakolojik özelliklere bagl- Farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîllârlül, seyrelticilerin ve eksipiyanlarI detaylarEl ve farmasötik bilesimlerin ve formülasyonlarI hazlîlbnmas- yönelik yöntemler, burada bütünüyle referans ile dahil edilen Remmingtons Pharmaceutical Sciences 18. BasklZI1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa., ABD örneginde saglanmaktadiEI Özel taslýlîlîliormülasyonun uygulanmasi dair etkili miktar ve yöntem, bireysel hasta, arzu edilen sonuç ve/veya bozukluk tipi, hastallEevresi ve teknikte tecrübe sahibi kisiler taraflEtlan bilinen diger faktörlere baglüolarak degiskenlik gösterebilmektedir. Özel bir uygulamada kullanlglühygulama yollarÇlteknikte tecrübe sahibi bir kisi tarafIian bilinmektedir. Uygulama yollarlZlkElflbylElîrblmayacak sekilde transbronsiyal ve transalveolar dahil olmak üzere topikal, dermal, transdermal, transmukozal, epidermal, parenteral, gastrointestinal ve nazofarengeal ve pulmoneri içermektedir. Uygun bir dozaj arallgiÇlkan seviyeleri ile ölçüldügü gibi yaklasllZl 1 ila 50 ;M bir doku konsantrasyonunu elde etmek üzere yeterli IRP-içeren bilesimi saglayan bir araI[IZIIB Her bir hastaya verilen mutlak miktar, biyoyararlanIi, klerens oranEl/e uygulama yolu gibi farmakolojik özelliklere baglIE Mevcut bulus, klîlflhylîüolmayacak sekilde fizyolojik olarak kabul edilebilir implantlar, merhemler, kremler, durular ve jeller dahil topik uygulama için uygun tasmormülasyonlarü saglamaktadB Dermal uygulamanI örnek teskil eden yollarlZltransdermal iletim, epidermal uygulama ve subkütanöz enjeksiyon gibi en az invazif olanlardE Transdermal uygulama, tasljîlîlül cilt nüfuza etmesine ve kan aklglüb girmesine izin verebilen bir krem, durulama, jel ve benzerinin uygulanmaslîlile tamamlanmaktadlE Transdermal uygulama için uygun bilesimler, klglflhylîlîblmayacak sekilde cilde dogrudan uygulanan veya bir transdermal cihaz (söz konusu "plaster") gibi bir koruyucu taslîlîlýla dahil edilen farmasötik olarak kabul edilebilir süspansiyonlarÇl yaglarÇl kremleri ve merhemleri içermektedir. Uygun kremlerin, merhemlerin ve benzerinin örnekleri, örnegin Hekimin Danlglna MasasIia bulunabilmektedir. Transdermal iletim ayrlEla, örnegin birkaç günlük veya daha fazla bir süreç için hasarllîtilt boyunca ürünü arallllelZl olarak ileten ticari olarak temin edilebilir yamalar kullanllârak iyontoforez ile tamamlanabilmektedir. Bu yöntemin kullanIiü nispeten büyük konsantrasyonlarda farmasötik bilesimlerin kontrollü iletimine olanak saglamaktadlü kombinasyon iIaçIarII infüzyonuna izin vermektedir ve bir sogurum promoterin es zamanlEkullanIiI olanak saglamaktadB UygulamanI parenteral yollarÇIklgîllaylElllmayacak sekilde elektriksel (iyontoforez) veya bir santral venöz hatta bir dogrudan enjeksiyon gibi dogrudan enjeksiyon, intravenöz, intramüsküler, intraperitoneal, intradermal veya subkütanöz enjeksiyonu içermektedir. Parenteral uygulama için uygun taslEEJformülasyonlarElgenel olarak USP suda veya enjeksiyonu yönelik suda formüle edilmektedir ve ayrlElsi pH tamponlarIÇltuz olusturma maddelerini, koruyucularEl ve diger farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyanlarlZl içermektedir. Parenteral enjeksiyona yönelik immüno düzenleyici polinükleotid, enjeksiyona yönelik salin ve fosfat tamponlu salin gibi farmasötik olarak kabul edilebilir steril izotonik çözeltilerde formüle edilebilmektedir. UygulamanI gastrointestinal yollarükElEhylEEblmayacak sekilde sindirimi ve rektal yollarü içermektedir ve örnegin sindirime yönelik farmasötik olarak kabul edilebilir tozlarITJl, haplar. veya slîllâr ve rektal uygulamaya yönelik supozituvarlarI kullanIiIübermektedir. Nazofarengeal ve pulmoner uygulama, inhalasyon ile tamamlanmaktadlîl ve intranazal, transbronsiyal ve transalveoler yollar gibi iletim yollarIEIiçermektedir. Bulus, kEElayIEEI olmayacak sekilde aerosollerin olusturulmasi yönelik slîüsüspansiyonlar, ayrlîla kuru toz inhalasyon iletim sistemlerine yönelik kuru tozlar dahil Inahalasyon ile uygulama Için uygun tasMEEformülasyonlarlElEiçermektedir. Taslýlaîformülasyonun inhalasyonu ile uygulama için uygun cihazlar, küflbyElllmayacak sekilde atomizörler, buharlastEEllâr, nebülizerler ve kuru toz soluma daglEEi cihazlarlîgermektedir. Transdermal uygulama, tasljîlîlül cilt nüfuza etmesine ve kan aklglüb girmesine izin verebilen bir krem, durulama, jel ve benzerinin uygulanmaslîlile tamamlanmaktadlE Transdermal uygulama için uygun bilesimler, klglflhylîlîblmayacak sekilde cilde dogrudan uygulanan veya bir transdermal cihaz (söz konusu "plaster") gibi bir koruyucu taslîlîlýla dahil edilen farmasötik olarak kabul edilebilir süspansiyonlarÇl yaglarÇl kremleri ve merhemleri içermektedir. Uygun kremlerin, merhemlerin ve benzerinin örnekleri, örnegin Hekimin Danlglna MasasIia bulunabilmektedir. Transdermal iletim ayrlEla, örnegin birkaç günlük veya daha fazla bir süreç için hasarllîtilt boyunca ürünü arallllelZl olarak ileten ticari olarak temin edilebilir yamalar kullanllârak iyontoforez ile tamamlanabilmektedir. Bu yöntemin kullanIiü nispeten büyük konsantrasyonlarda farmasötik bilesimlerin kontrollü iletimine olanak saglamaktadlü kombinasyon iIaçIarII infüzyonuna izin vermektedir ve bir sogurum promoterin es zamanlEkullanIiI olanak saglamaktadB UygulamanI parenteral yollarÇIklgîllaylElllmayacak sekilde elektriksel (iyontoforez) veya bir santral venöz hatta bir dogrudan enjeksiyon gibi dogrudan enjeksiyon, intravenöz, intramüsküler, intraperitoneal, intradermal veya subkütanöz enjeksiyonu içermektedir. Parenteral uygulama için uygun taslEEJformülasyonlarElgenel olarak USP suda veya enjeksiyonu yönelik suda formüle edilmektedir ve ayrlElsi pH tamponlarIÇltuz olusturma maddelerini, koruyucularEl ve diger farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyanlarlZl içermektedir. Parenteral enjeksiyona yönelik immüno düzenleyici polinükleotid, enjeksiyona yönelik salin ve fosfat tamponlu salin gibi farmasötik olarak kabul edilebilir steril izotonik çözeltilerde formüle edilebilmektedir. UygulamanI gastrointestinal yollarükElEhylEEblmayacak sekilde sindirimi ve rektal yollarü içermektedir ve örnegin sindirime yönelik farmasötik olarak kabul edilebilir tozlarITJl, haplar. veya slîllâr ve rektal uygulamaya yönelik supozituvarlarI kullanIiIübermektedir. Nazofarengeal ve pulmoner uygulama, inhalasyon ile tamamlanmaktadlîl ve intranazal, transbronsiyal ve transalveoler yollar gibi iletim yollarIEIiçermektedir. Bulus, kEElayIEEI olmayacak sekilde aerosollerin olusturulmasi yönelik slîüsüspansiyonlar, ayrlîla kuru toz inhalasyon iletim sistemlerine yönelik kuru tozlar dahil Inahalasyon ile uygulama Için uygun tasMEEformülasyonlarlElEiçermektedir. Taslýlaîformülasyonun inhalasyonu ile uygulama için uygun cihazlar, küflbyElllmayacak sekilde atomizörler, buharlastEEllâr, nebülizerler ve kuru toz soluma daglEEi cihazlarlîgermektedir. Örnegin, steril enjekte edilebilir sulu ya da yaglElsüspansiyonlar gibi enjekte edilebilir preparasyonlar, teknikte bilinen uygun daglElEEli/eya ElatEEtnaddelere ve süspanse edici maddelere göre formüle edilebilmektedir. Steril enjekte edilebilir preparasyon, örnegin 1,3- bütandiolde bir çözücü gibi toksik olmayan parenteral olarak kabul edilebilir seyreltici veya çözücüde steril bir enjekte edilebilir çözücü, süspansiyon veya emülsiyon olabilmektedir. Kullanllâbilen kabul edilir tasmr ve çözeltiler arasia, Ringer çözeltisi, U.S.P. ve izotonik sodyum klorür çözeltisi su halinde bulunmaktadlB Ek olarak, steril, stabil yaglar, geleneksel olarak bir çözelti veya süspansiyon ortamIa kullanilÜiaktadEl Bu amaca yönelik olarak, herhangi bir yumusak sabit yag, sentetik mono veya digliseritler içerilerek kullanllâbilmektedir. Ek olarak, oleik asit gibi yag asitleri, enjekte edilebilir preparasyonda kullanilIhaktadlEl Enjekte edilebilir formülasyonlar, örnegin bakteri tutucu bir filtre sayesinde filtrelenme yöntemi ile veya kullanIi öncesinde steril suda veya diger steril enjekte edilebilir ortamda çözülebilen veya ayrlgtlEllâbilen steril katElbiIesimlerin formunda sterilize edici maddeler dahil edilerek sterilize edilebilmektedir. Bir ilacI etkisinin uzatllBiasEliçin, subkütanöz veya intramüsküler enjeksiyondan ilacI sogurumunun yavaslatilBiasElarzu edilmektedir. Bu, bir slîlîlsüspansiyonun veya zayif] su çözünürlügüne sahip kristalin veya amorf malzemenin kullanIiElle tamamlanabilmektedir. IlacI sogurum oranüdolaylglýla kristal boyutuna ve kristal formuna bagllîrblabilen bir ayrlglna oranIEla bagIIE Alternatif olarak, parenteral olarak uygulanan ilaç formunun geciktirilmis sogurumu, bir yag vehikülünde ilacI çözülmesi veya asklýb allElnasEile tamamlanmaktadlü Enjekte edilebilir depot formlarÇI polilaktid-poliglikolid gibi biyolojik olarak bozulabilen polimerlerde ilacI mikro kapsüllü matrislerinin olusturulmasüle olusturulmaktadß Polimere iIacI oranlEb ve kullanllân belirli bir polimerin dogalela baglüilarak, ilaç saIIl oranEkontrol edilebilmektedir. Diger biyolojik olarak bozulabilir polimerlerin örnekleri, poli(ortoesterleri) ve poli(anhidritleri) içermektedir. Birikimli enjekte edilebilir formülasyonlar, vücut dokularElle uyumlu olan Iipozomlarda veya mikroemülsiyonlarda ilacItutulmasEiIe hazlEllanmaktadlB Bazüyapllândlîilnalarda, mevcut bulusun sentetik, biyolojik olarak bozulabilir partikülleri, üretim kolayllgllÇlgenis terapötik madde mevcudiyeti ve artan tedavi bölgelerini saglamaktadE Özel yapilândlElnalarda, sürfaktan etilen-a/t-maleik anhidrit) kullanilarak sentezlenen, yüksek yogunlukta yüzey karboksilat gruplara sahip yüzeyi fonksiyonlanmlgl biyolojik olarak bozulabilir poli(laktit-k0-glik0lit), diger partiküller ve/veya yüzeyler boyunca saylglîl avantaj Örnegin, steril enjekte edilebilir sulu ya da yaglElsüspansiyonlar gibi enjekte edilebilir preparasyonlar, teknikte bilinen uygun daglElEEli/eya ElatEEtnaddelere ve süspanse edici maddelere göre formüle edilebilmektedir. Steril enjekte edilebilir preparasyon, örnegin 1,3- bütandiolde bir çözücü gibi toksik olmayan parenteral olarak kabul edilebilir seyreltici veya çözücüde steril bir enjekte edilebilir çözücü, süspansiyon veya emülsiyon olabilmektedir. Kullanllâbilen kabul edilir tasmr ve çözeltiler arasia, Ringer çözeltisi, U.S.P. ve izotonik sodyum klorür çözeltisi su halinde bulunmaktadlB Ek olarak, steril, stabil yaglar, geleneksel olarak bir çözelti veya süspansiyon ortamIa kullanilÜiaktadEl Bu amaca yönelik olarak, herhangi bir yumusak sabit yag, sentetik mono veya digliseritler içerilerek kullanllâbilmektedir. Ek olarak, oleik asit gibi yag asitleri, enjekte edilebilir preparasyonda kullanilIhaktadlEl Enjekte edilebilir formülasyonlar, örnegin bakteri tutucu bir filtre sayesinde filtrelenme yöntemi ile veya kullanIi öncesinde steril suda veya diger steril enjekte edilebilir ortamda çözülebilen veya ayrlgtlEllâbilen steril katElbiIesimlerin formunda sterilize edici maddeler dahil edilerek sterilize edilebilmektedir. Bir ilacI etkisinin uzatllBiasEliçin, subkütanöz veya intramüsküler enjeksiyondan ilacI sogurumunun yavaslatilBiasElarzu edilmektedir. Bu, bir slîlîlsüspansiyonun veya zayif] su çözünürlügüne sahip kristalin veya amorf malzemenin kullanIiElle tamamlanabilmektedir. IlacI sogurum oranüdolaylglýla kristal boyutuna ve kristal formuna bagllîrblabilen bir ayrlglna oranIEla bagIIE Alternatif olarak, parenteral olarak uygulanan ilaç formunun geciktirilmis sogurumu, bir yag vehikülünde ilacI çözülmesi veya asklýb allElnasEile tamamlanmaktadlü Enjekte edilebilir depot formlarÇI polilaktid-poliglikolid gibi biyolojik olarak bozulabilen polimerlerde ilacI mikro kapsüllü matrislerinin olusturulmasüle olusturulmaktadß Polimere iIacI oranlEb ve kullanllân belirli bir polimerin dogalela baglüilarak, ilaç saIIl oranEkontrol edilebilmektedir. Diger biyolojik olarak bozulabilir polimerlerin örnekleri, poli(ortoesterleri) ve poli(anhidritleri) içermektedir. Birikimli enjekte edilebilir formülasyonlar, vücut dokularElle uyumlu olan Iipozomlarda veya mikroemülsiyonlarda ilacItutulmasEiIe hazlEllanmaktadlB Bazüyapllândlîilnalarda, mevcut bulusun sentetik, biyolojik olarak bozulabilir partikülleri, üretim kolayllgllÇlgenis terapötik madde mevcudiyeti ve artan tedavi bölgelerini saglamaktadE Özel yapilândlElnalarda, sürfaktan etilen-a/t-maleik anhidrit) kullanilarak sentezlenen, yüksek yogunlukta yüzey karboksilat gruplara sahip yüzeyi fonksiyonlanmlgl biyolojik olarak bozulabilir poli(laktit-k0-glik0lit), diger partiküller ve/veya yüzeyler boyunca saylglîl avantaj sunan bir taslýlîlýlîlsaglamaktadü Mevcut bulusun yapllândlülnalarlElI gelisimi esnaleUa yürütülen deneyler, bu partiküller peptitlerin (örn. PLP139.151 peptidi) konjugasyonunu sergilemistir. Bu tarz peptidi baglllartiküller, hastallKl gelisiminin önlenmesi ve immünolojik tolerans. indüksiyonu (örn. multipl sklerozun SJL/J PLP139-151 /CFA-indüklenmis R-EAE mürin molinde) için etkili olduklarIElgöstermistir. Mevcut bulusun peptit baglüaslýlüßrü diger tolerans indüksiyon yapllârüwyunca sayßi avantaj saglamaktadlE BazÜ/apllândlünalarda, partiküller biyolojik olarak bozulabilmektedir ve bu sebepten ötürü, vücutta uzun süre ElarclZl olmayacaktB Tam degredasyon zamanElkontrol edilebilmektedir. BazlZlyapilândlElnalarda, partiküller, hücre aktivasyonu (örn. PLG mikro kürelerine yüklenen fosfatidilserin) olmadan içsellestirme islemine olanak saglamak üzere fonksiyonlanmaktadlE BazEl/apllândünalarda, partiküller, spesifik bir hücre popülasyonuna yönelik hedefleyici Iigandlarlübermektedir. BazEl yapllândünalarda, IL-10 ve TGF-ß gibi anti-inflamatuvar sitokinler, partiküllere içsellesen hücre tipinde aktivasyonu klgEIiamak ve düzenleyici T hücrelerinin enerjisi ve/veya delesyonu ve aktivasyonu vaslüislîcla tolerans indüksiyonuna olanak saglamak üzere partiküller üzerine veya içerisine dahil edilmektedir. Oral uygulamaya yönelik katmozaj formlarÇlkapsülleri, tabletleri, haplarDtozlarEle granülleri içerebilmektedir. Bu tarz katEdozaj formlarütla, modifiye edilmis partiküller, sodyum sitrat veya dikalsiyum fosfat gibi en az bir inert, fizyolojik olarak kabul edilebilir eksipiyan veya tasMEEl/e asag-kilerden birisidir: a) nisastalar, Iaktoz, sakroz, glükoz, mannital, ve silisik asit gibi dolgu veya dolgu maddeleri; b) örnegin, karboksimetilselüloz, alginatlar, jelatin, polivinilpirolidon, sakroz ve akasya gibi baglayülâr; c) gliserol gibi nemlendiriciler; d) agar- agar, kalsiyum karbonat, patates veya tapyoka nisastasü alginik asit, bazlîlsilikatlar ve sodyum karbonat gibi daglflEDmaddeler; e) parafin gibi çözelti geciktirici maddeler; f) kuaterner amonyum bilesikleri gibi absorpsiyon hlîlandlElEllâr; g) örnegin, setil alkol ve gliserol monositrat gibi nemlendirici maddeler; h) kaolin ve bentonit kili gibi emici maddeler; ve i) talk, kalsiyum stearat, magnezyum stearat, katlîibolietilen glikoller, sodyum lauril sülfat ve bunlar. karlglEliIarlIgljibi yaglaylîllâr. Kapsüllerin, tabletlerin ve haplar. durumunda, dozaj formu tamponlama maddelerini içermektedir. Benzer tipte katIZI bilesimler ayrlEla, yüksek moleküler aglEllüZlEl polietilen glikoller ve benzerlerinin yanßü Iaktoz veya süt sekeri olarak bu tarz eksipiyanlarEkullanan yumusak ve sert dolgulu jelatin kapsüllerindeki dolgu olarak kullantlâbilmektedir. Tabletlerin, drajelerin, kapsüllerin, haplarlEl ve granüllerin katEldozaj formlarÇl enterik kaplamalar ve farmasötik formülasyon tekniginde iyi bilinen diger kaplamalar gibi kaplamalarla ve kabuklarla sunan bir taslýlîlýlîlsaglamaktadü Mevcut bulusun yapllândlülnalarlElI gelisimi esnaleUa yürütülen deneyler, bu partiküller peptitlerin (örn. PLP139.151 peptidi) konjugasyonunu sergilemistir. Bu tarz peptidi baglllartiküller, hastallKl gelisiminin önlenmesi ve immünolojik tolerans. indüksiyonu (örn. multipl sklerozun SJL/J PLP139-151 /CFA-indüklenmis R-EAE mürin molinde) için etkili olduklarIElgöstermistir. Mevcut bulusun peptit baglüaslýlüßrü diger tolerans indüksiyon yapllârüwyunca sayßi avantaj saglamaktadlE BazÜ/apllândlünalarda, partiküller biyolojik olarak bozulabilmektedir ve bu sebepten ötürü, vücutta uzun süre ElarclZl olmayacaktB Tam degredasyon zamanElkontrol edilebilmektedir. BazlZlyapilândlElnalarda, partiküller, hücre aktivasyonu (örn. PLG mikro kürelerine yüklenen fosfatidilserin) olmadan içsellestirme islemine olanak saglamak üzere fonksiyonlanmaktadlE BazEl/apllândünalarda, partiküller, spesifik bir hücre popülasyonuna yönelik hedefleyici Iigandlarlübermektedir. BazEl yapllândünalarda, IL-10 ve TGF-ß gibi anti-inflamatuvar sitokinler, partiküllere içsellesen hücre tipinde aktivasyonu klgEIiamak ve düzenleyici T hücrelerinin enerjisi ve/veya delesyonu ve aktivasyonu vaslüislîcla tolerans indüksiyonuna olanak saglamak üzere partiküller üzerine veya içerisine dahil edilmektedir. Oral uygulamaya yönelik katmozaj formlarÇlkapsülleri, tabletleri, haplarDtozlarEle granülleri içerebilmektedir. Bu tarz katEdozaj formlarütla, modifiye edilmis partiküller, sodyum sitrat veya dikalsiyum fosfat gibi en az bir inert, fizyolojik olarak kabul edilebilir eksipiyan veya tasMEEl/e asag-kilerden birisidir: a) nisastalar, Iaktoz, sakroz, glükoz, mannital, ve silisik asit gibi dolgu veya dolgu maddeleri; b) örnegin, karboksimetilselüloz, alginatlar, jelatin, polivinilpirolidon, sakroz ve akasya gibi baglayülâr; c) gliserol gibi nemlendiriciler; d) agar- agar, kalsiyum karbonat, patates veya tapyoka nisastasü alginik asit, bazlîlsilikatlar ve sodyum karbonat gibi daglflEDmaddeler; e) parafin gibi çözelti geciktirici maddeler; f) kuaterner amonyum bilesikleri gibi absorpsiyon hlîlandlElEllâr; g) örnegin, setil alkol ve gliserol monositrat gibi nemlendirici maddeler; h) kaolin ve bentonit kili gibi emici maddeler; ve i) talk, kalsiyum stearat, magnezyum stearat, katlîibolietilen glikoller, sodyum lauril sülfat ve bunlar. karlglEliIarlIgljibi yaglaylîllâr. Kapsüllerin, tabletlerin ve haplar. durumunda, dozaj formu tamponlama maddelerini içermektedir. Benzer tipte katIZI bilesimler ayrlEla, yüksek moleküler aglEllüZlEl polietilen glikoller ve benzerlerinin yanßü Iaktoz veya süt sekeri olarak bu tarz eksipiyanlarEkullanan yumusak ve sert dolgulu jelatin kapsüllerindeki dolgu olarak kullantlâbilmektedir. Tabletlerin, drajelerin, kapsüllerin, haplarlEl ve granüllerin katEldozaj formlarÇl enterik kaplamalar ve farmasötik formülasyon tekniginde iyi bilinen diger kaplamalar gibi kaplamalarla ve kabuklarla hazlEllanabilmektedir. Bunlar, tercihe bagllîblarak opaklastEEEmaddeleri içerebilmektedir ve bunun yanDlei, sadece aktif içerikleri saldiElarEi/eya tercihen baglßak yolunda ve istege baglEloIarak geciktirici bir sekilde bir bilesimden olabilmektedir. Kullanlßbilen gömülü bilesimlerin örnekleri, polimerik maddeleri ve vakslarüiçermektedir. Benzer tipte katEl bilesimler ayrEa, yüksek moleküler aglîllilîlmolietilen glikoller ve benzerlerinin yanß& laktoz veya süt sekeri olarak bu tarz eksipiyanlarlîlkullanan yumusak ve sert dolgulu jelatin kapsüllerindeki dolgu olarak kullanlßbilmektedir. Modifiye edilmis partiküller ayrlEla yukarlElb belirtildigi gibi bir veya birden fazla eksipiyan ile mikro-enkapsüle formda olabilmektedir. Tabletlerin, drajelerin, kapsüllerin, haplar. ve granüllerin katlIcliozaj formlarlglenterik kaplamalar, salIIi kontrollü kaplamalar ve farmasötik formülasyon tekniginde iyi bilinen diger kaplamalar gibi kaplamalarla ve kabuklarla hazlîianabilmektedir. Bu tarz katÜlozaj formlarIda, aktif bilesik, sakaroz, laktoz veya nisasta gibi en az bir inert seyreltici ile karlgtlEllâbilmektedir. Bu tarz dozaj formlarlIlda normal uygulamada oldugu gibi, örnegin tablet yaglarElve magnezyum stearat ve mikrokristalin selüloz gibi diger tablet hazlEllama yardIilarlZgibi inert seyrelticilerinden baska ek maddeleri içerebilmektedir. Kapsüllerin, tabletlerin ve haplarI durumunda, dozaj formu tamponlama maddelerini de içerebilmektedir. Bunlar, tercihe bagIIZI olarak opaklastIElEEl maddeleri içerebilmektedir ve ayrlîia, sadece veya tercihen baglBak yolunun belirli bir parçasIa ve istege baglüilarak geciktirilmis bir sekilde modifiye edilmis partikülleri saldlKlarEiiJir bilesimden olabilmektedir. Kullanüâbilen gömülü bilesimlerin örnekleri, polimerik maddeleri ve vakslarEl içermektedir. Mevcut bulus, yenilikçi modifiye edilmis partiküllerin farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonlarEkapsamaktadE Burada kullanilân "farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonu" terimi, formülasyonun epidermise uygulanmasEIIe bulusun modifiye edilmis mikropaitiküllerin intradermal uygulamaslîilçin farmasötik olarak kabul edilebilir olan herhangi bir formülasyonu anlam. gelmektedir. Belirli yapüândlîünalarda, topik formülasyon, bir tasEIEElsistemi içermektedir. Farmasötik olarak kabul edilebilir etkili taslîlüiâr, kEIEIiayEEI olmayacak sekilde solventler (örn. alkoller, poli alkoller, su), kremler, Iosyonlar, merhemler, yaglar, süblar, Iipozomlar, tozlar, emülsiyonlar, mikroemülsiyonlar ve tamponlu çözeltiler (örnegin, hipotonik veya tamponlu salin) veya topik olarak uygulanan farmasötiklerin tekniginde bilinen herhangi bir diger tasEIElîLIJÇermektedir. Teknikte bilinen taslsîlîliârl daha tam bir listesi, örnegin burada bulusun bütünlükleriyle referans ile dahil edildigi, her Ikisinin Mack Publishing Company, Easton, Pa. tarafIan yayIand[glERemington's Pharmaceutical hazlEllanabilmektedir. Bunlar, tercihe bagllîblarak opaklastEEEmaddeleri içerebilmektedir ve bunun yanDlei, sadece aktif içerikleri saldiElarEi/eya tercihen baglßak yolunda ve istege baglEloIarak geciktirici bir sekilde bir bilesimden olabilmektedir. Kullanlßbilen gömülü bilesimlerin örnekleri, polimerik maddeleri ve vakslarüiçermektedir. Benzer tipte katEl bilesimler ayrEa, yüksek moleküler aglîllilîlmolietilen glikoller ve benzerlerinin yanß& laktoz veya süt sekeri olarak bu tarz eksipiyanlarlîlkullanan yumusak ve sert dolgulu jelatin kapsüllerindeki dolgu olarak kullanlßbilmektedir. Modifiye edilmis partiküller ayrlEla yukarlElb belirtildigi gibi bir veya birden fazla eksipiyan ile mikro-enkapsüle formda olabilmektedir. Tabletlerin, drajelerin, kapsüllerin, haplar. ve granüllerin katlIcliozaj formlarlglenterik kaplamalar, salIIi kontrollü kaplamalar ve farmasötik formülasyon tekniginde iyi bilinen diger kaplamalar gibi kaplamalarla ve kabuklarla hazlîianabilmektedir. Bu tarz katÜlozaj formlarIda, aktif bilesik, sakaroz, laktoz veya nisasta gibi en az bir inert seyreltici ile karlgtlEllâbilmektedir. Bu tarz dozaj formlarlIlda normal uygulamada oldugu gibi, örnegin tablet yaglarElve magnezyum stearat ve mikrokristalin selüloz gibi diger tablet hazlEllama yardIilarlZgibi inert seyrelticilerinden baska ek maddeleri içerebilmektedir. Kapsüllerin, tabletlerin ve haplarI durumunda, dozaj formu tamponlama maddelerini de içerebilmektedir. Bunlar, tercihe bagIIZI olarak opaklastIElEEl maddeleri içerebilmektedir ve ayrlîia, sadece veya tercihen baglBak yolunun belirli bir parçasIa ve istege baglüilarak geciktirilmis bir sekilde modifiye edilmis partikülleri saldlKlarEiiJir bilesimden olabilmektedir. Kullanüâbilen gömülü bilesimlerin örnekleri, polimerik maddeleri ve vakslarEl içermektedir. Mevcut bulus, yenilikçi modifiye edilmis partiküllerin farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonlarEkapsamaktadE Burada kullanilân "farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonu" terimi, formülasyonun epidermise uygulanmasEIIe bulusun modifiye edilmis mikropaitiküllerin intradermal uygulamaslîilçin farmasötik olarak kabul edilebilir olan herhangi bir formülasyonu anlam. gelmektedir. Belirli yapüândlîünalarda, topik formülasyon, bir tasEIEElsistemi içermektedir. Farmasötik olarak kabul edilebilir etkili taslîlüiâr, kEIEIiayEEI olmayacak sekilde solventler (örn. alkoller, poli alkoller, su), kremler, Iosyonlar, merhemler, yaglar, süblar, Iipozomlar, tozlar, emülsiyonlar, mikroemülsiyonlar ve tamponlu çözeltiler (örnegin, hipotonik veya tamponlu salin) veya topik olarak uygulanan farmasötiklerin tekniginde bilinen herhangi bir diger tasEIElîLIJÇermektedir. Teknikte bilinen taslsîlîliârl daha tam bir listesi, örnegin burada bulusun bütünlükleriyle referans ile dahil edildigi, her Ikisinin Mack Publishing Company, Easton, Pa. tarafIan yayIand[glERemington's Pharmaceutical saglanmaktadlB Belirli diger yapllândlElnalarda, bulusun topik formülasyonlarEbksipiyanlarEl içerebilmektedir. Teknikte bilinen herhangi bir farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyan, yenilikçi farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonlarEI hazlEIlamak üzere kullanllâbilmektedir. Bulusun topik formülasyonlar. dahil edilebilen eksipiyanlarI örnekleri, klîlühylEEblmayacak sekilde modifiye edilmis partiküllere kombinasyon halinde koruyucular, antioksidanlar, nemlendiriciler, yumusatlEllâr, tamponlama maddeleri, çözündürme maddeleri, diger penetrasyon maddeleri, cilt koruyucularüyüzey aktif maddeler ve iticiler ve/veya ilave terapötik maddeleri içermektedir. Uygun koruyucular, klîlflbylaîlolmayacak sekilde alkoller, kuaterner aminler, organik asitler, parabenler ve fenolleri içermektedir. Uygun antioksidanlar, klglflhylEIJJlmayacak sekilde askorbik asit ve bunun esterleri, sodyum bisülfit, bütillenmis hidroksitolüen, bütillenmis hidroksianisol, tokoferoller ve EDTA ve sitrik asit gibi kenetleme maddelerini içermektedir. Uygun nemlendiriciler, klgltlbylîlîblmayacak sekilde gliserin, sorbitol, polietilen glikoller, üre ve propilen glikolü içermektedir. Bulusla kullanIia yönelik uygun tamponlaylîü maddeler, klîlflbylîlîl olmayacak sekilde sitrik, hidroklorik ve Iaktik asit tamponlarEliçermektedir. Uygun çözücü maddeler, kElIIlayIEEI olmayacak sekilde kuaterner amonyum klorürler, siklodekstrinler, benzil benzoat, lesitin ve polisorbatlarEIiçermektedir. Bulusun topik formülasyonlarütla kullanllâbilen uygun cilt koruyucularü klîlflbylîlîlolmayacak sekilde E vitamini yagÇlaIIantoin, dimetikon, gliserin, vazelin ve çinko oksidi içermektedir. Belirli yapllândlElnalarda, farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonlar, bulusun en azIan modifiye edilmis partiküllerini ve bir penetrasyon arttlEIEJmaddeyi içermektedir. Topik formülasyon seçimi, tedavi edilecek olan kosul, yenilikçi bilesigin fizyokimyasal özellikleri ve mevcut diger eksipiyanlarü formülasyondaki stabiliteleri, mevcut üretim ekipmanElve maliyet klîlt'lhmalarlîldahil birkaç faktöre baglElolacaktE Burada kullanllân, sogurum olmadan epidermise veya dermise farmakolojik olarak aktif bir bilesigi taslýlabilen bir madde anlam. gelmektedir. Genis salela bilesik, cilt boyunca ilaçlarI penetrasyon oranII gelistirilmesindeki etkinliklere göre degerlendirilmistir. Bkz., örnegin, Percutaneous Penetration Enhancers, Maibach H. I. ve Smith H. E. (Eds.), CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla. (1995), çesitli cilt penetrasyon arttlElEllârII kullanlIElve testini arastlElnaktadIÜ ve Buyuktimkin ve meslektaslarü Chemical Means of Transdermal Drug Permeation Enhancement In Transdermal and Topical Drug Delivery Systems, Gosh T. K., Pfister W. R., Yum S. I. (Eds.), Interpharm Press Inc., Buffalo Grove, 111. (1997). Belirli örnek teskil eden saglanmaktadlB Belirli diger yapllândlElnalarda, bulusun topik formülasyonlarEbksipiyanlarEl içerebilmektedir. Teknikte bilinen herhangi bir farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyan, yenilikçi farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonlarEI hazlEIlamak üzere kullanllâbilmektedir. Bulusun topik formülasyonlar. dahil edilebilen eksipiyanlarI örnekleri, klîlühylEEblmayacak sekilde modifiye edilmis partiküllere kombinasyon halinde koruyucular, antioksidanlar, nemlendiriciler, yumusatlEllâr, tamponlama maddeleri, çözündürme maddeleri, diger penetrasyon maddeleri, cilt koruyucularüyüzey aktif maddeler ve iticiler ve/veya ilave terapötik maddeleri içermektedir. Uygun koruyucular, klîlflbylaîlolmayacak sekilde alkoller, kuaterner aminler, organik asitler, parabenler ve fenolleri içermektedir. Uygun antioksidanlar, klglflhylEIJJlmayacak sekilde askorbik asit ve bunun esterleri, sodyum bisülfit, bütillenmis hidroksitolüen, bütillenmis hidroksianisol, tokoferoller ve EDTA ve sitrik asit gibi kenetleme maddelerini içermektedir. Uygun nemlendiriciler, klgltlbylîlîblmayacak sekilde gliserin, sorbitol, polietilen glikoller, üre ve propilen glikolü içermektedir. Bulusla kullanIia yönelik uygun tamponlaylîü maddeler, klîlflbylîlîl olmayacak sekilde sitrik, hidroklorik ve Iaktik asit tamponlarEliçermektedir. Uygun çözücü maddeler, kElIIlayIEEI olmayacak sekilde kuaterner amonyum klorürler, siklodekstrinler, benzil benzoat, lesitin ve polisorbatlarEIiçermektedir. Bulusun topik formülasyonlarütla kullanllâbilen uygun cilt koruyucularü klîlflbylîlîlolmayacak sekilde E vitamini yagÇlaIIantoin, dimetikon, gliserin, vazelin ve çinko oksidi içermektedir. Belirli yapllândlElnalarda, farmasötik olarak kabul edilebilir topik formülasyonlar, bulusun en azIan modifiye edilmis partiküllerini ve bir penetrasyon arttlEIEJmaddeyi içermektedir. Topik formülasyon seçimi, tedavi edilecek olan kosul, yenilikçi bilesigin fizyokimyasal özellikleri ve mevcut diger eksipiyanlarü formülasyondaki stabiliteleri, mevcut üretim ekipmanElve maliyet klîlt'lhmalarlîldahil birkaç faktöre baglElolacaktE Burada kullanllân, sogurum olmadan epidermise veya dermise farmakolojik olarak aktif bir bilesigi taslýlabilen bir madde anlam. gelmektedir. Genis salela bilesik, cilt boyunca ilaçlarI penetrasyon oranII gelistirilmesindeki etkinliklere göre degerlendirilmistir. Bkz., örnegin, Percutaneous Penetration Enhancers, Maibach H. I. ve Smith H. E. (Eds.), CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla. (1995), çesitli cilt penetrasyon arttlElEllârII kullanlIElve testini arastlElnaktadIÜ ve Buyuktimkin ve meslektaslarü Chemical Means of Transdermal Drug Permeation Enhancement In Transdermal and Topical Drug Delivery Systems, Gosh T. K., Pfister W. R., Yum S. I. (Eds.), Interpharm Press Inc., Buffalo Grove, 111. (1997). Belirli örnek teskil eden yapllândünalarda, bulusla kullanIia yönelik penetrasyon maddeleri, klglflhylîüolmayacak sekilde trigliseritler (örn. soya fasulyesi yagm aloe bilesimleri (örn. aloe-vera jeli), etil alkol, izopropil alkol, oktoilfenilpolietilen glikol, oleik asit, polietilen glikol 400, propilen glikol, N- desilmetil sülfoksit, yag asidi esterleri (örn. izopropil miristat , metil Iorat, gliserol monooleat ve propilen glikol monooleat) ve N-metilpirrolidon içermektedir. Belirli yapüândlülnalarda, bilesimler, merhemler, macunlar, kremler, Iosyonlar, jeller, tozlar, çözeltiler, Spreyler, inhalantlar veya yamalarI formunda olabilmektedir. Belirli örnek teskil eden yapllândünalarda, bulusa göre bilesimlerin formülasyonlarlÇl özellikle tercih edilen stearik asit, palmitik asit, oleik asit, palmito-oleik asit, setil veya oleil alkoller, stearik asit gibi doymus veya doymamlgyaglllsitleri içerebilen kremlerdir. Bulusun kremleri ayrlEla polioksi- 40-stearat gibi bir iyonik olmayan sürfaktanüçerebilmektedir. Belirli yapilândülnalarda, aktif bilesen, farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslSLIEZlIe gerektigi kadar herhangi bir ihtiyaç duyulan koruyucu veya tampon ile steril kosullar altEtla karlgtßllhiaktadlîl Oftalmik formülasyon, küpeler veya göz damlalarLIl mevcut bulusun kapsamlîiçerisinde oldugu gibi tasarlanmaktadü Tercihe bagllîrblarak, mevcut bulus, bir bilesigin vücuda kontrollü bir sekilde iletilmesinin saglanmasi yönelik ek avantaja sahip olan transdermal yamalarlEl kullaniIEl tasarlamaktadlEl Bu tarz dozaj formlarlîJ uygun ortamda bilesigi çözerek veya dagßrak olusturulmaktadlü Yukar- açilZland[g]l]`izere, penetrasyon arttlEElîiinaddeler de cilt boyunca bilesigin aklgEIElarttIElnak için kullanilâbilmektedir. Oran, bir oran kontrol eden membran saglanarak veya bir polimer matriste veya jelde bilesigi dag [târak kontrol edilebilmektedir. Modifiye edilmis partiküller, aerosol ile uygulanabilmektedir. Bu, bir sulu erosolü, lipozomal preparasyonu veya modifiye edilmis partikülleri içeren katEl partikülleri hazlEllayarak tamamlanabilmektedir. Bir sulu olmayan (örn. florokarbon püskürtücü) süspansiyon kullanllâbilmistir. Normal olarak, bir 5qu aerosol, geleneksel farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîlßr ve stabilizörlerle birlikte maddenin bir sulu çözeltisini veya süspansiyonunu formüle ederek olusturulmaktadlü Taslîlîllâr ve stabilizörler, tipik olarak noniyonik yüzey aktif cisimleri (Tweens, Plüroikler veya polietilen glikol), serum albümin, sorbitan esterler, oleik asit, lesitin gibi zararslîl proteinler, glisin gibi amino asitler, tamponlar, tuzlar, sekerler veya seker alkollerini içeren özel bilesigin gereksinimleri ile degiskenlik göstermektedir. Aerosoller genel olarak izotonik çözeltilerden hazlîllanmaktadlü yapllândünalarda, bulusla kullanIia yönelik penetrasyon maddeleri, klglflhylîüolmayacak sekilde trigliseritler (örn. soya fasulyesi yagm aloe bilesimleri (örn. aloe-vera jeli), etil alkol, izopropil alkol, oktoilfenilpolietilen glikol, oleik asit, polietilen glikol 400, propilen glikol, N- desilmetil sülfoksit, yag asidi esterleri (örn. izopropil miristat , metil Iorat, gliserol monooleat ve propilen glikol monooleat) ve N-metilpirrolidon içermektedir. Belirli yapüândlülnalarda, bilesimler, merhemler, macunlar, kremler, Iosyonlar, jeller, tozlar, çözeltiler, Spreyler, inhalantlar veya yamalarI formunda olabilmektedir. Belirli örnek teskil eden yapllândünalarda, bulusa göre bilesimlerin formülasyonlarlÇl özellikle tercih edilen stearik asit, palmitik asit, oleik asit, palmito-oleik asit, setil veya oleil alkoller, stearik asit gibi doymus veya doymamlgyaglllsitleri içerebilen kremlerdir. Bulusun kremleri ayrlEla polioksi- 40-stearat gibi bir iyonik olmayan sürfaktanüçerebilmektedir. Belirli yapilândülnalarda, aktif bilesen, farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslSLIEZlIe gerektigi kadar herhangi bir ihtiyaç duyulan koruyucu veya tampon ile steril kosullar altEtla karlgtßllhiaktadlîl Oftalmik formülasyon, küpeler veya göz damlalarLIl mevcut bulusun kapsamlîiçerisinde oldugu gibi tasarlanmaktadü Tercihe bagllîrblarak, mevcut bulus, bir bilesigin vücuda kontrollü bir sekilde iletilmesinin saglanmasi yönelik ek avantaja sahip olan transdermal yamalarlEl kullaniIEl tasarlamaktadlEl Bu tarz dozaj formlarlîJ uygun ortamda bilesigi çözerek veya dagßrak olusturulmaktadlü Yukar- açilZland[g]l]`izere, penetrasyon arttlEElîiinaddeler de cilt boyunca bilesigin aklgEIElarttIElnak için kullanilâbilmektedir. Oran, bir oran kontrol eden membran saglanarak veya bir polimer matriste veya jelde bilesigi dag [târak kontrol edilebilmektedir. Modifiye edilmis partiküller, aerosol ile uygulanabilmektedir. Bu, bir sulu erosolü, lipozomal preparasyonu veya modifiye edilmis partikülleri içeren katEl partikülleri hazlEllayarak tamamlanabilmektedir. Bir sulu olmayan (örn. florokarbon püskürtücü) süspansiyon kullanllâbilmistir. Normal olarak, bir 5qu aerosol, geleneksel farmasötik olarak kabul edilebilir taslýlîlßr ve stabilizörlerle birlikte maddenin bir sulu çözeltisini veya süspansiyonunu formüle ederek olusturulmaktadlü Taslîlîllâr ve stabilizörler, tipik olarak noniyonik yüzey aktif cisimleri (Tweens, Plüroikler veya polietilen glikol), serum albümin, sorbitan esterler, oleik asit, lesitin gibi zararslîl proteinler, glisin gibi amino asitler, tamponlar, tuzlar, sekerler veya seker alkollerini içeren özel bilesigin gereksinimleri ile degiskenlik göstermektedir. Aerosoller genel olarak izotonik çözeltilerden hazlîllanmaktadlü Mevcut bulusun modifiye edilmis partiküllerinin ve farmasötik bilesimlerinin formüle edilebilmesi ve kombinasyon tedavilerinde kullanüâbilmesi, bir baska ifadeyle bilesiklerin ve farmasötik bilesimlerin, bir veya birden fazla diger istenilen terapötik veya medikal prosedürlerle es zamanIEl olarak, öncesinde veya sonrasIa uygulanabilmesi takdir edilecektir. Bir kombinasyon rejiminde kullanmak üzere tedavilerin (terapötikler veya prosedürler) özel kombinasyonu, arzu edilen terapötiklerin ve/veya prosedürlerinin uyumlulugunu ve elde edilecek olan arzu edilen terapötik etkiyi hesaba katacaktlB Kullanlßn tedavilerin, aynlZbozukluga yönelik arzu edilen bir etkiye ulasabilmesi (örnegin, bir yenilikçi bilesigin, bir diger anti-inflamatuvar madde ile es zamanllîblarak uygulanabilmesi) veya farklEl etkilere ulasabilmesi (örn. herhangi bir yan etkinin kontrolü) takdir edilecektir. Belirli yapilândlElnalarda, mevcut bulusun modifiye edilmis partiküllerini içeren farmasötik bilesimler ayri& bir veya birden fazla ek terapötik olarak aktif içerikleri (örn. anti- inflamatuvar ve/veya paliyatif) içermektedir. Bulusun amaçlarEla yönelik olarak, "Paliyatif" terimi, bir terapötik rejimin, fakat küratif olmayan bir hastaliglI ve/veya yan etkilerin semptomlarII rahatlatüûwas- odaklanilân tedaviyi ifade etmektedir. Örnegin, paliyatif tedavi, agrEkesiciler, bulantlîgjiderici ilaçlar ve hastalilîlönleyici ilaçlarllapsamaktadlü Bulus, burada aç[lZlanan modifiye edilmis partiküllerin bireye uygulanmasIEliçeren, bir bireyde, tercihen bir memelide, daha çok tercih edilecek sekilde bir insan bir immün yan-I düzenlenmesine yönelik yöntemleri saglamaktadlEl Bulus taraflfidan saglanan immüno düzenleme yöntemleri, klîlflhyßîblmayacak sekilde immüno uyarlEEboIipeptitler veya viral veya bakteriyel bilesenler ile uyarllân bir immün yan[EliIcllahiI bir dogal immün yan-Eleya bir adaptif immün yan-[bastßn ve/veya inhibe edenleri içermektedir. Modifiye edilmis partiküller, bir immün yan-El düzenlemesi için yeterli miktarda uygulanmaktadlEl Burada açÜZIandigiElüzere, bir immün yan-I düzenlenmesi, humoral ve/veya hücresel olabilmektedir ve teknikte ve burada açlEIand[g]l:üzere standart teknikleri kullanarak ölçülmektedir. BazÜ/aplßndünalarda, burada açlKJanan bilesimler, bir implant (örn. cihaz) ve/veya burasEl ile iliskili immün yan-Elyönlendirmek, reddetmek, düzenlemek ve/veya azaltmak üzere transplant (örn. doku, hücreler, organ) ile birlikte (örn. es zamanlEblarak, öncesinde veya sonrasIa) uygulanmaktadlB Mevcut bulusun modifiye edilmis partiküllerinin ve farmasötik bilesimlerinin formüle edilebilmesi ve kombinasyon tedavilerinde kullanüâbilmesi, bir baska ifadeyle bilesiklerin ve farmasötik bilesimlerin, bir veya birden fazla diger istenilen terapötik veya medikal prosedürlerle es zamanIEl olarak, öncesinde veya sonrasIa uygulanabilmesi takdir edilecektir. Bir kombinasyon rejiminde kullanmak üzere tedavilerin (terapötikler veya prosedürler) özel kombinasyonu, arzu edilen terapötiklerin ve/veya prosedürlerinin uyumlulugunu ve elde edilecek olan arzu edilen terapötik etkiyi hesaba katacaktlB Kullanlßn tedavilerin, aynlZbozukluga yönelik arzu edilen bir etkiye ulasabilmesi (örnegin, bir yenilikçi bilesigin, bir diger anti-inflamatuvar madde ile es zamanllîblarak uygulanabilmesi) veya farklEl etkilere ulasabilmesi (örn. herhangi bir yan etkinin kontrolü) takdir edilecektir. Belirli yapilândlElnalarda, mevcut bulusun modifiye edilmis partiküllerini içeren farmasötik bilesimler ayri& bir veya birden fazla ek terapötik olarak aktif içerikleri (örn. anti- inflamatuvar ve/veya paliyatif) içermektedir. Bulusun amaçlarEla yönelik olarak, "Paliyatif" terimi, bir terapötik rejimin, fakat küratif olmayan bir hastaliglI ve/veya yan etkilerin semptomlarII rahatlatüûwas- odaklanilân tedaviyi ifade etmektedir. Örnegin, paliyatif tedavi, agrEkesiciler, bulantlîgjiderici ilaçlar ve hastalilîlönleyici ilaçlarllapsamaktadlü Bulus, burada aç[lZlanan modifiye edilmis partiküllerin bireye uygulanmasIEliçeren, bir bireyde, tercihen bir memelide, daha çok tercih edilecek sekilde bir insan bir immün yan-I düzenlenmesine yönelik yöntemleri saglamaktadlEl Bulus taraflfidan saglanan immüno düzenleme yöntemleri, klîlflhyßîblmayacak sekilde immüno uyarlEEboIipeptitler veya viral veya bakteriyel bilesenler ile uyarllân bir immün yan[EliIcllahiI bir dogal immün yan-Eleya bir adaptif immün yan-[bastßn ve/veya inhibe edenleri içermektedir. Modifiye edilmis partiküller, bir immün yan-El düzenlemesi için yeterli miktarda uygulanmaktadlEl Burada açÜZIandigiElüzere, bir immün yan-I düzenlenmesi, humoral ve/veya hücresel olabilmektedir ve teknikte ve burada açlEIand[g]l:üzere standart teknikleri kullanarak ölçülmektedir. BazÜ/aplßndünalarda, burada açlKJanan bilesimler, bir implant (örn. cihaz) ve/veya burasEl ile iliskili immün yan-Elyönlendirmek, reddetmek, düzenlemek ve/veya azaltmak üzere transplant (örn. doku, hücreler, organ) ile birlikte (örn. es zamanlEblarak, öncesinde veya sonrasIa) uygulanmaktadlB Belirli yapllândEnalarda, birey, alerjik hastalllZJ veya kosul, alerji ve astl gibi istenmeyen immün aktivasyonu ile iliskili bir bozukluktan muzdarip olmaktadlE Bir alerjik hastallgh veya astia sahip olan bir birey, bir mevcut alerjik hastallgll veya astIiItanlElabiIir semptomuna sahip bir bireydir. Tolerans, örnegin alerjik reaksiyona neden olan spesifik gIIar (örn. yer flîtlglîbroteinleri ve benzeri), enjekte edilen maddeler (örn. arüehri proteinleri ve benzeri) veya solunan maddeler (örn. bezelye polen proteinleri, evcil hayvan tehlikesi proteinler ve benzeri) ile komplekslenen partiküller ile bu tarz bir bireyde indüklenebilmektedir. Belirli yapüând [Binalarda, birey, otoimmün hastalllöveya inflamatuvar hastalüîlgibi istenmeyen immün aktivasyon ile iliskili bir bozukluktan muzdariptir. Bir otoimmün hastallg'la veya inflamatuvar hastallgb sahip bir birey, bir mevcut otoimmün hastaligllül veya inflamatuvar hastal[glI tanIilanabilir bir semptomuna sahip bir bireydir. Tolerans, örnegin özel otoimmün hastallgllîtahrik eden ilgili otoantijenlerle komplekslenmis partiküller ile bu tarz bir bireyde indüklenebilmektedir. Belirli yapüândlîilnalarda, birey, enzim degistirme tedavisi ile iliskili bir bozukluktan muzdariptir. Tolerans, örnegin genetik bozukluklara sahip hastalarlEl, üretemedigi, bunlarü özel bozukluklarÇlörnegin Faktör VIII'i olusturabilme kabiliyetinde bir genetik bozukluktan dolathemoûli olan hastalarda insan Faktör VIII'e tolerans gibi özel bozukluklarIEtedavi etmek üzere uygulanan rekombinant olarak üretilmis enzimlere nötrlestîrici antikor yanlflbrIEl olusturmaslrîllîlönleyemedigi enzimlerle komplekslenmis partiküller ile bu tarz bir bireyde indüklenebilmektedir. Belirli yapllândlîilnalarda, birey, hastaIlEl tedavisi ile iliskili bir bozukluktan muzdariptir. Rekombinant antikorlarI durumunda, tolerans, örnegin bir hastanIEl, antikor terapötigine karsljliötrlestirici antikorlarßlusturmaslîönlemek üzere bir terapötik baglamda kullanllân bir insanlastlîlliilgantikora indüklenebilmektedir; otoimmün hastallgb yönelik bir tedavi olarak kullanllân bir insanlastlElIlBilglimmün alt küme bosaltiEllntikor veya anti-sitokin antikoruna toleranstß Otoimmün hastalIElar, iki genis kategoriye bölünebilmektedir: organa özgü ve sistemik. Otoimmün hastallEar, kEJHlaylEIJJImaks- romatoid artrit (RA), sistemik lupus eritematozus (SLE), tip I diyabetes mellitus, tip II diyabetes mellitus, multipl skleroz (MS), erken over yetersizligi, skleroderma, Sjögren hastal[glÇl vitiligo (vitiligo, vitiligo, kellik), poliglandüler yetmezlik, Mezar hastalglühipotiroidizm, polimiyozit, pemûgus vulgaris, pemfigus foliaceus, Belirli yapllândEnalarda, birey, alerjik hastalllZJ veya kosul, alerji ve astl gibi istenmeyen immün aktivasyonu ile iliskili bir bozukluktan muzdarip olmaktadlE Bir alerjik hastallgh veya astia sahip olan bir birey, bir mevcut alerjik hastallgll veya astIiItanlElabiIir semptomuna sahip bir bireydir. Tolerans, örnegin alerjik reaksiyona neden olan spesifik gIIar (örn. yer flîtlglîbroteinleri ve benzeri), enjekte edilen maddeler (örn. arüehri proteinleri ve benzeri) veya solunan maddeler (örn. bezelye polen proteinleri, evcil hayvan tehlikesi proteinler ve benzeri) ile komplekslenen partiküller ile bu tarz bir bireyde indüklenebilmektedir. Belirli yapüând [Binalarda, birey, otoimmün hastalllöveya inflamatuvar hastalüîlgibi istenmeyen immün aktivasyon ile iliskili bir bozukluktan muzdariptir. Bir otoimmün hastallg'la veya inflamatuvar hastallgb sahip bir birey, bir mevcut otoimmün hastaligllül veya inflamatuvar hastal[glI tanIilanabilir bir semptomuna sahip bir bireydir. Tolerans, örnegin özel otoimmün hastallgllîtahrik eden ilgili otoantijenlerle komplekslenmis partiküller ile bu tarz bir bireyde indüklenebilmektedir. Belirli yapüândlîilnalarda, birey, enzim degistirme tedavisi ile iliskili bir bozukluktan muzdariptir. Tolerans, örnegin genetik bozukluklara sahip hastalarlEl, üretemedigi, bunlarü özel bozukluklarÇlörnegin Faktör VIII'i olusturabilme kabiliyetinde bir genetik bozukluktan dolathemoûli olan hastalarda insan Faktör VIII'e tolerans gibi özel bozukluklarIEtedavi etmek üzere uygulanan rekombinant olarak üretilmis enzimlere nötrlestîrici antikor yanlflbrIEl olusturmaslrîllîlönleyemedigi enzimlerle komplekslenmis partiküller ile bu tarz bir bireyde indüklenebilmektedir. Belirli yapllândlîilnalarda, birey, hastaIlEl tedavisi ile iliskili bir bozukluktan muzdariptir. Rekombinant antikorlarI durumunda, tolerans, örnegin bir hastanIEl, antikor terapötigine karsljliötrlestirici antikorlarßlusturmaslîönlemek üzere bir terapötik baglamda kullanllân bir insanlastlîlliilgantikora indüklenebilmektedir; otoimmün hastallgb yönelik bir tedavi olarak kullanllân bir insanlastlElIlBilglimmün alt küme bosaltiEllntikor veya anti-sitokin antikoruna toleranstß Otoimmün hastalIElar, iki genis kategoriye bölünebilmektedir: organa özgü ve sistemik. Otoimmün hastallEar, kEJHlaylEIJJImaks- romatoid artrit (RA), sistemik lupus eritematozus (SLE), tip I diyabetes mellitus, tip II diyabetes mellitus, multipl skleroz (MS), erken over yetersizligi, skleroderma, Sjögren hastal[glÇl vitiligo (vitiligo, vitiligo, kellik), poliglandüler yetmezlik, Mezar hastalglühipotiroidizm, polimiyozit, pemûgus vulgaris, pemfigus foliaceus, Crohn hastallglü/e ülseratif kolit dahil inflamatuvar bag Bak hastaligiühepatit B virüsü (HBV) ve hepatit C virüsü (HCV) ile iliskili oIanIarElçeren otoimmün hepatit, hipopitüitarizm, greft versus-host hastaIIgHGvHD), miyokardit, Addison hastallglüotoimmün cilt hastalllglarüüveit, pernisiyöz anemi, Çölyak hastallgiüle hipoparatiroidizmi içermektedir. Otoimmün hastaIlElar ayrlEla, klîlfllaylîlîblmayacak sekilde Hashimoto tiroiditi, Tip I ve Tip II otoimmün poliglandüler sendromlar, paraneoplastik pemfigus, boga pemfigoid, dermatit herpetiformis, lineer IgA hastallgiüepidermolizis bullosa suse, cemilem, anemili, pemfigoid cemaatis , trombositopenik purpura, Goodpasture sendromu, otoimmün nötropeni, myastenia gravis, Eaton-Lambert myastenik sendromu, katEinsan sendromu, akut yayißiß ensefalomiyelit, GuiIIaIn-Barre sendromu, kronik enflamatuar demiyelinizan, monopatik, monapromatil monoklonal gamopati, opsonoklonus-miyoklonus sendromu, serebellar dejenerasyon, ensefalomiyelit, retinopati, primer biliyer skleroz, skletanan kolanjit, glütene duyarlllnteropati, ankilozan spondilit, reaktif artis poliamid, anestezi sorun hastalgüBechet sendromu, sedef hastal[gll3poliartit nodoza, alerjik anguit ve granülomatöz (Churg-Strauss hastaligiüj polianjiit örtüsme sendromu, aslEEUuyarliHEl vasküliti, Wegener granülomatozisi, zamansal arterit, Takayasu arteriti, Kawegai granülomatizisi, izole edilmis arterit, Takayasu arteriti, Kawasaki, merkezi sinir hastaligiEblan vasküler sistem , tromboangiutis obliterans, sarkoidoz, glomerülonefrit ve kriyopatileri içerebilmektedir. Bu kosullar, tlTil tekniginde iyi bilinmektedir ve örnegin, Harrison's Principles of Internal Medicine, 14. baskÇIFauci A S ve meslektaslarüeds., New York: McGraw-Hill, 1998 referansliîhla açlKlanmaktadlEl Otoimmün hastaligil incelenmesine dair hayvan modelleri teknikte bilinmektedir. Örnegin, insan otoimmün hastaligi. en benzer görünen hayvan modelleri, yüksek bir özel hastal[lZl vakasIE'lpontane bir sekilde gelistiren hayvan suslarIEiçermektedir. Bu modellerin örnekleri, klîlfiaylîüolmayacak sekilde tip 1 diyabete benzer bir hastaliglügelistiren obez olmayan diyabetik (NOD) faresini ve ve Yeni Zelanda hibrid, MRL-FasIpr ve BXSB fareleri gibi lupus benzeri hastallla egilimli hayvanlarEEiçermektedir. Bir otoimmün hastaligllElI indüklendigi hayvan modeller, kEIfliaylîElolmayacak sekilde multipl sklerozun bir modeli deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), romatoid artrite yönelik bir model olan kolajen ile indüklenmis artrit (CIA) ve uveite yönelik bir model olan deneysel otoimmün uveiti (EAU) içermektedir. Otoimmün hastaltgla yönelik hayvan modelleri, genetik manipülasyon ile olusturulmustur ve örnegin, SLE için inflamatuvar baglîskak hastaltgiü Fas veya Fas ligand nakavtlEb yönelik IL-2/IL-10 nakavt farelerini ve romatoid artrite yönelik IL-I reseptör antagonist nakavtlübermektedir. Crohn hastallglü/e ülseratif kolit dahil inflamatuvar bag Bak hastaligiühepatit B virüsü (HBV) ve hepatit C virüsü (HCV) ile iliskili oIanIarElçeren otoimmün hepatit, hipopitüitarizm, greft versus-host hastaIIgHGvHD), miyokardit, Addison hastallglüotoimmün cilt hastalllglarüüveit, pernisiyöz anemi, Çölyak hastallgiüle hipoparatiroidizmi içermektedir. Otoimmün hastaIlElar ayrlEla, klîlfllaylîlîblmayacak sekilde Hashimoto tiroiditi, Tip I ve Tip II otoimmün poliglandüler sendromlar, paraneoplastik pemfigus, boga pemfigoid, dermatit herpetiformis, lineer IgA hastallgiüepidermolizis bullosa suse, cemilem, anemili, pemfigoid cemaatis , trombositopenik purpura, Goodpasture sendromu, otoimmün nötropeni, myastenia gravis, Eaton-Lambert myastenik sendromu, katEinsan sendromu, akut yayißiß ensefalomiyelit, GuiIIaIn-Barre sendromu, kronik enflamatuar demiyelinizan, monopatik, monapromatil monoklonal gamopati, opsonoklonus-miyoklonus sendromu, serebellar dejenerasyon, ensefalomiyelit, retinopati, primer biliyer skleroz, skletanan kolanjit, glütene duyarlllnteropati, ankilozan spondilit, reaktif artis poliamid, anestezi sorun hastalgüBechet sendromu, sedef hastal[gll3poliartit nodoza, alerjik anguit ve granülomatöz (Churg-Strauss hastaligiüj polianjiit örtüsme sendromu, aslEEUuyarliHEl vasküliti, Wegener granülomatozisi, zamansal arterit, Takayasu arteriti, Kawegai granülomatizisi, izole edilmis arterit, Takayasu arteriti, Kawasaki, merkezi sinir hastaligiEblan vasküler sistem , tromboangiutis obliterans, sarkoidoz, glomerülonefrit ve kriyopatileri içerebilmektedir. Bu kosullar, tlTil tekniginde iyi bilinmektedir ve örnegin, Harrison's Principles of Internal Medicine, 14. baskÇIFauci A S ve meslektaslarüeds., New York: McGraw-Hill, 1998 referansliîhla açlKlanmaktadlEl Otoimmün hastaligil incelenmesine dair hayvan modelleri teknikte bilinmektedir. Örnegin, insan otoimmün hastaligi. en benzer görünen hayvan modelleri, yüksek bir özel hastal[lZl vakasIE'lpontane bir sekilde gelistiren hayvan suslarIEiçermektedir. Bu modellerin örnekleri, klîlfiaylîüolmayacak sekilde tip 1 diyabete benzer bir hastaliglügelistiren obez olmayan diyabetik (NOD) faresini ve ve Yeni Zelanda hibrid, MRL-FasIpr ve BXSB fareleri gibi lupus benzeri hastallla egilimli hayvanlarEEiçermektedir. Bir otoimmün hastaligllElI indüklendigi hayvan modeller, kEIfliaylîElolmayacak sekilde multipl sklerozun bir modeli deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), romatoid artrite yönelik bir model olan kolajen ile indüklenmis artrit (CIA) ve uveite yönelik bir model olan deneysel otoimmün uveiti (EAU) içermektedir. Otoimmün hastaltgla yönelik hayvan modelleri, genetik manipülasyon ile olusturulmustur ve örnegin, SLE için inflamatuvar baglîskak hastaltgiü Fas veya Fas ligand nakavtlEb yönelik IL-2/IL-10 nakavt farelerini ve romatoid artrite yönelik IL-I reseptör antagonist nakavtlübermektedir. Belirli yapHândlElnalarda, birey, bir bakteriyel veya viral enfeksiyondan muzdariptir. Bir bakteriyel veya viral enfeksiyona sahip olan bir birey, bir mevcut bakteriyel veya viral enfeksiyonun tanIiIanabiIir bir semptomuna sahip bir bireydir. Mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri ile tedavi edilebilen viral enfeksiyonlar. kElHbylaîblmayan bir listesi, herpes virüsü enfeksiyonlarühepatit virüsü enfeksiyonlarljbatlj nil virüsü enfeksiyonlarÇlflavivrus enfeksiyonlarlZlinfluenza virüsü enfeksiyonlarlZIrino virüsü enfeksiyonlarÇl papillomavirüs enfeksiyonlarÇl paromiksin virüs enfeksiyonlarÇlparainfluenza virüs enfeksiyonlarlîl'e retrovirüs enfeksiyonlarIEÇermektedir. Tercih edilen virüsler, denegin merkezi sinir sistemini enfekte eden virüslerdir. En çok tercih edilen virüsler, ensefalit veya menenjite neden olanlardlEI Mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri ile tedavi edilebilen bakteriyel enfeksiyonlar. klglfllaylEEl olmayan bir listesi, stafilokok enfeksiyonlarÇl streptokok enfeksiyonlarü mikrobakteriyel enfeksiyonlar, basil enfeksiyonlarlÇl Salmonella enfeksiyonlarÇl Vibrio enfeksiyonlarü spiroset enfeksiyonlarElve Neisseria enfeksiyonlarIDiçermektedir. Denegin merkezi sinir sistemini enfekte eden bakteriler tercih edilmektedir. En çok, ensefalit veya menenjite neden olan bakteriler tercih edilmektedir. BazEyapllândlElnalarda, bulus, hastallglI baslang-an önce mevcut bulusun bilesimlerinin kullanIilarlZlle ilgilidir. Diger yapllândlElnalarda, bulus, devam eden hastalfglElnhibe etmek üzere bilesimlerin kullanIilarEile ilgilidir. Bazljapllândlüinalarda, bulus, bir denekte hastallgll hafifletilmesi ile ilgilidir. Bir denekte hastal[g]I hafifletilmesi ile, denekte hastalfglI tedavisinin, önlenmesinin veya bastßllüîasll içerildigi kast edilmektedir. BazlZi/apllândünalarda, bulus, hastaligll nüksetmesinin önlenmesi ile ilgilidir. Örnegin, bir istenmeyen immün yanlEllZl bir peptidin bir bölgesinde (örnegin, bir antijenik belirleyici) olusabilmektedir. Bir istenmeyen immün yanlEIElle iliskili bir hastallgiI nüksetmesi, peptidin farklEl bir bölgesinde bir immün yanlfll] said_ sahip olacak sekilde meydana gelebilmektedir. Mevcut bulusun immün modifiye edici partikülleri, birlesik peptitlerden veya antijenik parçalardan serbest oldugu için, partiküller, multipl epitoplara karslltkili olacaktlB MS ve diger Thl/17 araclDIbtoimmün hastallElar dahil bazümmün yanltJEbozuklukIarlEUa T- hücresi yanlührlÇl nükseden-tekrarlayan ve/veya kronik ilerleyici hastallglI seyri esnasIa dinamik olabilmektedir ve degisebilmektedir. T- hücresi repertuvarII dinamik yaplgühedefin Belirli yapHândlElnalarda, birey, bir bakteriyel veya viral enfeksiyondan muzdariptir. Bir bakteriyel veya viral enfeksiyona sahip olan bir birey, bir mevcut bakteriyel veya viral enfeksiyonun tanIiIanabiIir bir semptomuna sahip bir bireydir. Mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri ile tedavi edilebilen viral enfeksiyonlar. kElHbylaîblmayan bir listesi, herpes virüsü enfeksiyonlarühepatit virüsü enfeksiyonlarljbatlj nil virüsü enfeksiyonlarÇlflavivrus enfeksiyonlarlZlinfluenza virüsü enfeksiyonlarlZIrino virüsü enfeksiyonlarÇl papillomavirüs enfeksiyonlarÇl paromiksin virüs enfeksiyonlarÇlparainfluenza virüs enfeksiyonlarlîl'e retrovirüs enfeksiyonlarIEÇermektedir. Tercih edilen virüsler, denegin merkezi sinir sistemini enfekte eden virüslerdir. En çok tercih edilen virüsler, ensefalit veya menenjite neden olanlardlEI Mevcut bulusun modifiye edilmis partikülleri ile tedavi edilebilen bakteriyel enfeksiyonlar. klglfllaylEEl olmayan bir listesi, stafilokok enfeksiyonlarÇl streptokok enfeksiyonlarü mikrobakteriyel enfeksiyonlar, basil enfeksiyonlarlÇl Salmonella enfeksiyonlarÇl Vibrio enfeksiyonlarü spiroset enfeksiyonlarElve Neisseria enfeksiyonlarIDiçermektedir. Denegin merkezi sinir sistemini enfekte eden bakteriler tercih edilmektedir. En çok, ensefalit veya menenjite neden olan bakteriler tercih edilmektedir. BazEyapllândlElnalarda, bulus, hastallglI baslang-an önce mevcut bulusun bilesimlerinin kullanIilarlZlle ilgilidir. Diger yapllândlElnalarda, bulus, devam eden hastalfglElnhibe etmek üzere bilesimlerin kullanIilarEile ilgilidir. Bazljapllândlüinalarda, bulus, bir denekte hastallgll hafifletilmesi ile ilgilidir. Bir denekte hastal[g]I hafifletilmesi ile, denekte hastalfglI tedavisinin, önlenmesinin veya bastßllüîasll içerildigi kast edilmektedir. BazlZi/apllândünalarda, bulus, hastaligll nüksetmesinin önlenmesi ile ilgilidir. Örnegin, bir istenmeyen immün yanlEllZl bir peptidin bir bölgesinde (örnegin, bir antijenik belirleyici) olusabilmektedir. Bir istenmeyen immün yanlEIElle iliskili bir hastallgiI nüksetmesi, peptidin farklEl bir bölgesinde bir immün yanlfll] said_ sahip olacak sekilde meydana gelebilmektedir. Mevcut bulusun immün modifiye edici partikülleri, birlesik peptitlerden veya antijenik parçalardan serbest oldugu için, partiküller, multipl epitoplara karslltkili olacaktlB MS ve diger Thl/17 araclDIbtoimmün hastallElar dahil bazümmün yanltJEbozuklukIarlEUa T- hücresi yanlührlÇl nükseden-tekrarlayan ve/veya kronik ilerleyici hastallglI seyri esnasIa dinamik olabilmektedir ve degisebilmektedir. T- hücresi repertuvarII dinamik yaplgühedefin hastaliiîiilerledikçe degisebilmesinden dolaylÇibelirli hastalilZlarI tedavisine yönelik çEIZlarIilara sahiptir. Öncesinde, yan [lîimodelinin önceden mevcut bilgisi, hastal[giI ilerlemesini öngörmek için gerekli olmustur. Mevcut bulus, hastaligll dinamik degisim etkisini, bir "epitop yay[lîha" fonksiyonunu önleyebilen bilesimleri saglamaktadlü Bir bilinen nüksetme modeli, multipl skleroza (MS) yönelik bir model olarak proteolipid proteine (PLP) bir immün reaksiyonudur. Ilk immün yarilEiiZi PLP139-15'e bir yanit] ile meydana gelebilmektedir. Sonraki hastaliKi baslang EgPLP[pi] s-ißi'ye bir nüksetme immün yaniEiijle meydana gelebilmektedir. Mevcut bulusun diger yapüândHnalarütransplantasyon ile ilgilidir. Bu, bir donör bireyinden, bir allEEbireye bir doku numunesinin veya greftin aktarilmasEIle ilgilidir ve doku tarafIan saglanan bir fizyolojik islevi restore etmek için dokuya Ihtiyaç duyan Insan aliîliârda sliZliiZla uygulanmaktadlEi Transplante edilen dokular (kiîiühyiîlîl olmayacak sekilde) böbrek, karaciger, kalp, akciger gibi tüm organlarlîicilt greftleri ve göz korneasiîçiJIbI organ bilesenleri; ve kemik iligi hücreleri ve hücrelerin kültürleri ve kemik iligi veya dolasan kan ve tüm kan aktarIiIlaran seçilen ve genisletilen hücre kültürleri gibi hücre süspansiyonlarIiZI içermektedir. Herhangi bir transplantasyonun bir ciddi potansiyel komplikasyonu, konak aIIEEi/e engreftli doku arasIaki antijenik farklardan sonuçlanmaktadB FarkI yap_ ve derecesine bagIEi olarak, konak ile bir greftin immünoiojik saidlEEriski mevcut olabilmektedir veya greft ile konagI bir immünoiojik saldiüüiski veya her ikisi de meydana gelebilmektedir. Risk ölçüsü, bir benzer fenotip ile benzer bir sekilde tedavi edilen denelerin bir popülasyonunda yaniiîi modelini takip ederek ve iyi kabul edilen klinik prosedürlere göre çesitli olasElkatklHEi bulunan faktörlerle iliskili olarak belirlenmektedir. Immünolojik saldiBD önceden mevcut bir immünoiojik yan. (örnegin önceden olusturulmus antikorun) sonucu olabilmektedir veya transplantasyon zamanEi(örnegin, TH hücrelerinin üretilmesi) hakkIa baslatilândan kaynaklanabilmektedir. Antikor, TH hücreleri veya Tc hücreleri, birbirleri ile ve çesitli efektör moleküller ve hücreler ile herhangi bir kombinasyon halinde dahil edilebilmektedir. Fakat, immün yan_ dahil edilen antijenler genel olarak bilinmemektedir, bu sekilde antijene özgü tedavilerin tasarIiIda veya antijene özgü tolerans. indüklenmesinde zorluklar dogurmaktad [El Bulusun belirli yapilândiîiinalarlîiallîütarafian doku greftinin reddine yol açan konaga karsEi greft hastaligiEriskinin azaltHB1aslZile ilgilidir. Tedavi, bir hiperakut, akut veya kronik ret yan-I etkisini önlemek veya azaltmak üzere uygulanabilmektedir. Tedavi tercihen hastaliiîiilerledikçe degisebilmesinden dolaylÇibelirli hastalilZlarI tedavisine yönelik çEIZlarIilara sahiptir. Öncesinde, yan [lîimodelinin önceden mevcut bilgisi, hastal[giI ilerlemesini öngörmek için gerekli olmustur. Mevcut bulus, hastaligll dinamik degisim etkisini, bir "epitop yay[lîha" fonksiyonunu önleyebilen bilesimleri saglamaktadlü Bir bilinen nüksetme modeli, multipl skleroza (MS) yönelik bir model olarak proteolipid proteine (PLP) bir immün reaksiyonudur. Ilk immün yarilEiiZi PLP139-15'e bir yanit] ile meydana gelebilmektedir. Sonraki hastaliKi baslang EgPLP[pi] s-ißi'ye bir nüksetme immün yaniEiijle meydana gelebilmektedir. Mevcut bulusun diger yapüândHnalarütransplantasyon ile ilgilidir. Bu, bir donör bireyinden, bir allEEbireye bir doku numunesinin veya greftin aktarilmasEIle ilgilidir ve doku tarafIan saglanan bir fizyolojik islevi restore etmek için dokuya Ihtiyaç duyan Insan aliîliârda sliZliiZla uygulanmaktadlEi Transplante edilen dokular (kiîiühyiîlîl olmayacak sekilde) böbrek, karaciger, kalp, akciger gibi tüm organlarlîicilt greftleri ve göz korneasiîçiJIbI organ bilesenleri; ve kemik iligi hücreleri ve hücrelerin kültürleri ve kemik iligi veya dolasan kan ve tüm kan aktarIiIlaran seçilen ve genisletilen hücre kültürleri gibi hücre süspansiyonlarIiZI içermektedir. Herhangi bir transplantasyonun bir ciddi potansiyel komplikasyonu, konak aIIEEi/e engreftli doku arasIaki antijenik farklardan sonuçlanmaktadB FarkI yap_ ve derecesine bagIEi olarak, konak ile bir greftin immünoiojik saidlEEriski mevcut olabilmektedir veya greft ile konagI bir immünoiojik saldiüüiski veya her ikisi de meydana gelebilmektedir. Risk ölçüsü, bir benzer fenotip ile benzer bir sekilde tedavi edilen denelerin bir popülasyonunda yaniiîi modelini takip ederek ve iyi kabul edilen klinik prosedürlere göre çesitli olasElkatklHEi bulunan faktörlerle iliskili olarak belirlenmektedir. Immünolojik saldiBD önceden mevcut bir immünoiojik yan. (örnegin önceden olusturulmus antikorun) sonucu olabilmektedir veya transplantasyon zamanEi(örnegin, TH hücrelerinin üretilmesi) hakkIa baslatilândan kaynaklanabilmektedir. Antikor, TH hücreleri veya Tc hücreleri, birbirleri ile ve çesitli efektör moleküller ve hücreler ile herhangi bir kombinasyon halinde dahil edilebilmektedir. Fakat, immün yan_ dahil edilen antijenler genel olarak bilinmemektedir, bu sekilde antijene özgü tedavilerin tasarIiIda veya antijene özgü tolerans. indüklenmesinde zorluklar dogurmaktad [El Bulusun belirli yapilândiîiinalarlîiallîütarafian doku greftinin reddine yol açan konaga karsEi greft hastaligiEriskinin azaltHB1aslZile ilgilidir. Tedavi, bir hiperakut, akut veya kronik ret yan-I etkisini önlemek veya azaltmak üzere uygulanabilmektedir. Tedavi tercihen toleranslül, greft kuruldugunda yer almasEl için transplant öncesinde yeterince baslatllîhaktadlü fakat uygun olmadEglEyerde, tedavi, transplant ile es zamanllîblarak veya transplant sonrasia baslatllâbilmektedir. Baslanglg zamanlEla bakHBiakslîlEl, tedavi genel olarak transplanttan sonra en azIan birinci ay boyunca düzenlik araIlKlarda devam edecektir. Takip dozlarügreftin yeterli bir sekilde kalmasElhaIinde gerekli olmayabilmektedir, fakat greftin reddine veya inflamasyona dair herhangi bir kan. mevcut olmasEhaIInde devam ettirilebilmektedir. Elbette, mevcut bulusun tolerizasyon prosedürleri, daha düsük bir risk seviyesini bile elde etmek üzere immünosüpresyonun diger formlarlZIile kombine edilebilmektedir. Bazüyapllândlünalarda, mevcut bulusun bilesimleri (örn. antijenik moleküle bagIElPLG tasMîlîD] bir veya birden fazla skafold, matris ve/veya iletim sistemi ile kullanIi bulmaktadlîl 6,281,256 SayllliîPatent Dokümanlîl burada bütünlükleriyle referans ile dahil edilmektedir). BazEk/apilândlElnalarda, partiküller (örn. antijene bagIEPLG partikülleri), (örn. bir denege kimyasal/biyolojik malzemenin, hücrelerin dokunun ve/veya bir organ. iletimi için) bir skafold, matrisi ve/veya iletim sisteminde sogurulmasüiçerisinde gömülü olmasÇlbu sisteme konjugatlEblmasEl/e benzeri ile iliskilidir. BazÜ/apüândlüinalarda, bir skafold, matris ve/veya iletim sistemi (örn. kimyasal/biyolojik malzemenin, hücrelerin, dokunun ve/veya bir organ. bir denege iletilmesi Için), burada açIanan malzemeleri (örn. bir veya birden fazla antijenik peptide konjugatlEiPLG) içeren ve/veya bu malzemelerden olusturulmaktadlEl BazEIyaplIândIElnalarda, (örn. biyolojik malzemenin (örn. hücreler, doku ve benzeri) bir denege transplante edilmesine yönelik) mikrogözenekli skafoldlar saglanmaktadß BazEl yapllândlîrlnalarda, burada maddelere (örn. hücre dlgünatris proteinlerini, eksendin-4'ü) ve biyolojik malzemeye (örn. pankreatik adadkl hücreleri) sahip olan mikro gözenekli skafoldlar saglanmaktadlE BazEIyapilândÜnalarda, skafoldlar, hastallElarI (örn. tip 1 diyabet) tedavisinde ve iliskili yöntemlerde (örn. teshis yöntemleri, arastiEina yöntemler, Ilaç tarama) kullanlEhaktadIE BazElyapEndIElnalarda, skafoldlarlEh, burada ve/veya skafold içerisinde açilZIanan antijen konjugatlütaslîlalâr saglanmaktadlEl BazElyapllândlEinalarda, skafoldlar, antijen konjugatlünalzemelerden (örn. antijen konjugatlEPLG) üretilmektedir. Bazlîlyapilândlîilnalarda, bir skafold ve/veya iletim sistemi, bir veya birden fazla katmanEI toleranslül, greft kuruldugunda yer almasEl için transplant öncesinde yeterince baslatllîhaktadlü fakat uygun olmadEglEyerde, tedavi, transplant ile es zamanllîblarak veya transplant sonrasia baslatllâbilmektedir. Baslanglg zamanlEla bakHBiakslîlEl, tedavi genel olarak transplanttan sonra en azIan birinci ay boyunca düzenlik araIlKlarda devam edecektir. Takip dozlarügreftin yeterli bir sekilde kalmasElhaIinde gerekli olmayabilmektedir, fakat greftin reddine veya inflamasyona dair herhangi bir kan. mevcut olmasEhaIInde devam ettirilebilmektedir. Elbette, mevcut bulusun tolerizasyon prosedürleri, daha düsük bir risk seviyesini bile elde etmek üzere immünosüpresyonun diger formlarlZIile kombine edilebilmektedir. Bazüyapllândlünalarda, mevcut bulusun bilesimleri (örn. antijenik moleküle bagIElPLG tasMîlîD] bir veya birden fazla skafold, matris ve/veya iletim sistemi ile kullanIi bulmaktadlîl 6,281,256 SayllliîPatent Dokümanlîl burada bütünlükleriyle referans ile dahil edilmektedir). BazEk/apilândlElnalarda, partiküller (örn. antijene bagIEPLG partikülleri), (örn. bir denege kimyasal/biyolojik malzemenin, hücrelerin dokunun ve/veya bir organ. iletimi için) bir skafold, matrisi ve/veya iletim sisteminde sogurulmasüiçerisinde gömülü olmasÇlbu sisteme konjugatlEblmasEl/e benzeri ile iliskilidir. BazÜ/apüândlüinalarda, bir skafold, matris ve/veya iletim sistemi (örn. kimyasal/biyolojik malzemenin, hücrelerin, dokunun ve/veya bir organ. bir denege iletilmesi Için), burada açIanan malzemeleri (örn. bir veya birden fazla antijenik peptide konjugatlEiPLG) içeren ve/veya bu malzemelerden olusturulmaktadlEl BazEIyaplIândIElnalarda, (örn. biyolojik malzemenin (örn. hücreler, doku ve benzeri) bir denege transplante edilmesine yönelik) mikrogözenekli skafoldlar saglanmaktadß BazEl yapllândlîrlnalarda, burada maddelere (örn. hücre dlgünatris proteinlerini, eksendin-4'ü) ve biyolojik malzemeye (örn. pankreatik adadkl hücreleri) sahip olan mikro gözenekli skafoldlar saglanmaktadlE BazEIyapilândÜnalarda, skafoldlar, hastallElarI (örn. tip 1 diyabet) tedavisinde ve iliskili yöntemlerde (örn. teshis yöntemleri, arastiEina yöntemler, Ilaç tarama) kullanlEhaktadIE BazElyapEndIElnalarda, skafoldlarlEh, burada ve/veya skafold içerisinde açilZIanan antijen konjugatlütaslîlalâr saglanmaktadlEl BazElyapllândlEinalarda, skafoldlar, antijen konjugatlünalzemelerden (örn. antijen konjugatlEPLG) üretilmektedir. Bazlîlyapilândlîilnalarda, bir skafold ve/veya iletim sistemi, bir veya birden fazla katmanEI içermektedir ve/veya bir veya birden fazla kimyasal ve/veya biyolojik varliEiara/maddelere (örn. proteinler, peptit konjugatllîpartiküller, küçük moleküller, hücreler, doku ve benzeri) dahil edilmektedir. Bazüyapüândlîiinalarda, antijene bagIElpartiküIler, skafolda ve iliskili malzemelere immünolojik tolerans indüksiyonunu temin etmek üzere bir skafold Iletim sistemi ile birlikte uygulanmaktadlü Bazüyapliând Ünalarda, mikro gözenekli skafold, skafold üzerinde veya skafold içerisinde burada açiEIanan partiküllerle bir denege uygulanmaktadlEl BazEl yapilând Elnalarda, antijene bagllîpartiküller, bir skafold iletim sistemine baglanmaktadE Bain yapllând iEinaIarda, bir skafold iletim sistemi, antijene baglßartikülleri içermektedir. ÖRNEKLER Malzemeler ve Yöntemler K/mer/'k fare Üretimi AItEliIe sekiz haftallK] Bö.SJL-PtprcaPep3b/BoyJ (CD45.1) fareleri, 950 @E bir doz ile hücreleri ile sulandiEllIhlStE Farelere, Siilamadan sonra 10 gün boyunca içme suyunda sülfametoksazol (Sigma Aldrich) ve trimetoprim (Sigma Aldrich) verilmistir. Fareler, yukari açiEIand[gElgibi iglülamadan aItDhafta sonra WNV ile enfekte edilmistir. Kimerizm, akis sitometrisi kullanüârak denetlenmistir ve degismez bir sekilde, öncesinde gösterildigi gibi donör kaynagII %96 ila 99'u oldugu bulunmustur (Getts ve meslektaslarÇlJ Neurochem. Farelere anestezi uygulanmlgtlEI ve 50mL steril PBS ile perfüze edilmistir. Parafin bloklara organlar izole edilmis ve Optimum Kesme SEbkligElBilesiginde dondurulmustur (OCT; Tissue- Tek, Tokyo, Japonya). Sekiz mikron doku kesiti, bir kriyostat mikromda kesilmis, gece boyunca havayla kurutulmus ve daha sonrasIda gerekli olana kadar -80°C'de depolanmlîstE Dondurulmus kesitler eritilmistir ve histolojik (standart hematoksilin ve eosin boyamasDZlveya MARCO, SIGN-Rl ve SIGLEC-l (R&D Systems, MN, ABD), CD68 (Abcam, MA, ABD) ve içermektedir ve/veya bir veya birden fazla kimyasal ve/veya biyolojik varliEiara/maddelere (örn. proteinler, peptit konjugatllîpartiküller, küçük moleküller, hücreler, doku ve benzeri) dahil edilmektedir. Bazüyapüândlîiinalarda, antijene bagIElpartiküIler, skafolda ve iliskili malzemelere immünolojik tolerans indüksiyonunu temin etmek üzere bir skafold Iletim sistemi ile birlikte uygulanmaktadlü Bazüyapliând Ünalarda, mikro gözenekli skafold, skafold üzerinde veya skafold içerisinde burada açiEIanan partiküllerle bir denege uygulanmaktadlEl BazEl yapilând Elnalarda, antijene bagllîpartiküller, bir skafold iletim sistemine baglanmaktadE Bain yapllând iEinaIarda, bir skafold iletim sistemi, antijene baglßartikülleri içermektedir. ÖRNEKLER Malzemeler ve Yöntemler K/mer/'k fare Üretimi AItEliIe sekiz haftallK] Bö.SJL-PtprcaPep3b/BoyJ (CD45.1) fareleri, 950 @E bir doz ile hücreleri ile sulandiEllIhlStE Farelere, Siilamadan sonra 10 gün boyunca içme suyunda sülfametoksazol (Sigma Aldrich) ve trimetoprim (Sigma Aldrich) verilmistir. Fareler, yukari açiEIand[gElgibi iglülamadan aItDhafta sonra WNV ile enfekte edilmistir. Kimerizm, akis sitometrisi kullanüârak denetlenmistir ve degismez bir sekilde, öncesinde gösterildigi gibi donör kaynagII %96 ila 99'u oldugu bulunmustur (Getts ve meslektaslarÇlJ Neurochem. Farelere anestezi uygulanmlgtlEI ve 50mL steril PBS ile perfüze edilmistir. Parafin bloklara organlar izole edilmis ve Optimum Kesme SEbkligElBilesiginde dondurulmustur (OCT; Tissue- Tek, Tokyo, Japonya). Sekiz mikron doku kesiti, bir kriyostat mikromda kesilmis, gece boyunca havayla kurutulmus ve daha sonrasIda gerekli olana kadar -80°C'de depolanmlîstE Dondurulmus kesitler eritilmistir ve histolojik (standart hematoksilin ve eosin boyamasDZlveya MARCO, SIGN-Rl ve SIGLEC-l (R&D Systems, MN, ABD), CD68 (Abcam, MA, ABD) ve Ki67'ye (Abeam) karsüntikorlar gösterildigi gibi kullanilfhlgtlü Görüntüler, bir DP-70 kamera ve DP yönetici 2.2.1 yaz[l]]îiil:(0lympus, Tokyo, Japonya) kullanüârak bir Olympus BX-51 mikroskopta elde edilmistir. Mikroskop ve görüntü edin/mi Görüntüler, bir DP-70 kamera ve DP yönetici kullanlßrak bir Olympus BX-51 mikroskopta (Olympus, Japonya) elde edilmistir. Beyin ve karaagerden lökositlerin izolasyonu deoksi-ribonükleaz (0.005 g/ml; Sigma Aldrich) ve kollajenaz IV (0.05 g/ml; Sigma Aldrich) ile PBS'de 37°C'de 60 dakika boyunca beyinleri sindirerek PBS perfüze farelerin beyinlerinden elde edilmistir. Sindirim, %10 FCS ile durdurulmustur ve homojenat, bir 70pm naylon hücre süzgeci (Becton Dickinson, NJ, ABD) üzerinden geçirilmistir. 340xg'de 10 dakikalik] santrifüjlemeden sonra elde edilen topak, %30 Percoll'de (Amersham, Norveç) yeniden süspanse edilmistir ve %80 Percol boyunca katmanlanmlgtlü Lökositler, oda sükllglia 25 dakika boyunca 1140xg'de santrifüjlemeden sonra %30/%80 ara yüzden toplanmIStB AynEl protokol, islem öncesinde aglEIllgDölçülen dokuyla akcigerden Iökositleri türetmek Üzere kullanilßîaktadlü Dalak, kan ve kem/l( /l/g/nden lökositlerin izolasyonu Aklgl sitometrik analiz için, sag femur kesip allümlgl ve kemik iligi hücreleri, PBS yüklü slîlügalar kullanilârak temizlenmistir. Kemik iligi prekürsör izolasyonu için, en az 4 fareden femurlar ve tibyalar kullanilüügtlü Temizleme isleminden sonra elde edilen hücresel süspansiyon, bir 70pm hücre süzgeci vasüâslýla filtrelenmis ve 3409'de 5 dakika boyunca santrifüjlenmistir. Elde edilen topakta klîrlnliîlkan hücreleri, 340xg'de 5 dakika boyunca santrifüjlemeden önce NH4Cl-bazlEklElnlîl31ücre Iizis tamponunda (BD Pharm Lysem; BD Pharmingen) çözünmüstür. Periferik kan durumunda, kan, kardiyak punktür vasltâlea toplanmlgtlîl ve hemen sitrat tamponuna aktarllB1iStlEl(mMol, Sigma Alrich). Elde edilen süspansiyon, %70 Percoll boyunca katmanlanmlStEl ve yavaslama ile oda slîlakllglia 20 dakika boyunca 1140xg'de santrifüjlenmistir. Ara yüz toplanmlgtlîlve hücreler, PBS'de bir kez ylKlanmlgl 340xg'de bir defa ylElanmlgIlB Splenik lökositlerin izolasyonu için, dalaklar, bir Ki67'ye (Abeam) karsüntikorlar gösterildigi gibi kullanilfhlgtlü Görüntüler, bir DP-70 kamera ve DP yönetici 2.2.1 yaz[l]]îiil:(0lympus, Tokyo, Japonya) kullanüârak bir Olympus BX-51 mikroskopta elde edilmistir. Mikroskop ve görüntü edin/mi Görüntüler, bir DP-70 kamera ve DP yönetici kullanlßrak bir Olympus BX-51 mikroskopta (Olympus, Japonya) elde edilmistir. Beyin ve karaagerden lökositlerin izolasyonu deoksi-ribonükleaz (0.005 g/ml; Sigma Aldrich) ve kollajenaz IV (0.05 g/ml; Sigma Aldrich) ile PBS'de 37°C'de 60 dakika boyunca beyinleri sindirerek PBS perfüze farelerin beyinlerinden elde edilmistir. Sindirim, %10 FCS ile durdurulmustur ve homojenat, bir 70pm naylon hücre süzgeci (Becton Dickinson, NJ, ABD) üzerinden geçirilmistir. 340xg'de 10 dakikalik] santrifüjlemeden sonra elde edilen topak, %30 Percoll'de (Amersham, Norveç) yeniden süspanse edilmistir ve %80 Percol boyunca katmanlanmlgtlü Lökositler, oda sükllglia 25 dakika boyunca 1140xg'de santrifüjlemeden sonra %30/%80 ara yüzden toplanmIStB AynEl protokol, islem öncesinde aglEIllgDölçülen dokuyla akcigerden Iökositleri türetmek Üzere kullanilßîaktadlü Dalak, kan ve kem/l( /l/g/nden lökositlerin izolasyonu Aklgl sitometrik analiz için, sag femur kesip allümlgl ve kemik iligi hücreleri, PBS yüklü slîlügalar kullanilârak temizlenmistir. Kemik iligi prekürsör izolasyonu için, en az 4 fareden femurlar ve tibyalar kullanilüügtlü Temizleme isleminden sonra elde edilen hücresel süspansiyon, bir 70pm hücre süzgeci vasüâslýla filtrelenmis ve 3409'de 5 dakika boyunca santrifüjlenmistir. Elde edilen topakta klîrlnliîlkan hücreleri, 340xg'de 5 dakika boyunca santrifüjlemeden önce NH4Cl-bazlEklElnlîl31ücre Iizis tamponunda (BD Pharm Lysem; BD Pharmingen) çözünmüstür. Periferik kan durumunda, kan, kardiyak punktür vasltâlea toplanmlgtlîl ve hemen sitrat tamponuna aktarllB1iStlEl(mMol, Sigma Alrich). Elde edilen süspansiyon, %70 Percoll boyunca katmanlanmlStEl ve yavaslama ile oda slîlakllglia 20 dakika boyunca 1140xg'de santrifüjlenmistir. Ara yüz toplanmlgtlîlve hücreler, PBS'de bir kez ylKlanmlgl 340xg'de bir defa ylElanmlgIlB Splenik lökositlerin izolasyonu için, dalaklar, bir 7070um hücre süzgeci boyunca geçirilmis ve 3409'de 5 dakika boyunca santrifüjlenmistir. Elde edilen topakta klEln lillan hücreleri, 340xg'de 5 dakika boyunca santrifüjlemeden önce NH4CI-bazlEklElnEElliücre lizis tamponunda (BD Pharm LyseTM; BD Pharmingen) çözünmüstür. Akgsitometris/ Beyin, karaciger, kan ve kemik iliginden toplanmlgl hücrelere (yukarlElh açllîlandlgllîgibi), PBS'de ylKlanmlStlE ve anti-CDlö/CD32 antikoru (Biolegend) ile bloke edilmistir. CanIEl hücreler, rutin olarak %95 hücre canIlIJglElsergileyen tripan mavisi dlglanIlEkullanHârak sayiIBilStIE Hücre yüzeyi molekül ekspresyonu ölçülmüstür ve hücre türleri, bir Argon iyon ve HeNe Iazeri ile donatllân bir FACS ARIA'da (Becton Dickinson) uygulanmlgtlE Canllîpopülasyonlar, iler ve yan saçiIJEl ile kapüânmlgtß ve daha sonrasIa, ileri-kapllâmayla belirlenen floresan popülasyonlarEl tanIIanmIStB SIEIhnd Iîilna, spesifik floresan ve ilgili popülasyonu tanIilayan saçlIHîli parametreleri kullanllârak uygulanmlgtlü SIMhndlîilna siddetleri, kemik iligi popülasyonlarlîlsin %98 saflllgelde etmek için saflEgla ayarlanmlgtlEl Edinilen FACS veri dosyalarüaklg sitometri programüFlow Jo (FIowJo, Ashland, OR, ABD) kullanllârak analiz edilmistir. Ilgili hücre popülasyonlarII kantifikasyonu, analizde aklg sitometrisi yüzdeleri ve her bir organdan mutla hücre sayllâr- bagllîalarak hesaplanmlgtlü Adopt/f .ez/(farm Deneyler, adoptif aktarIi olarak adlandlEllân aktif hastallglI bir ikinci modelini incelemek üzere mevcut bulusun yapüândlülnalarlüll gelisimi esnaleUa sürdürülmüstür. Hayvanlari peptidi ile immünize edilmesinden ziyade, aktif hastallgla sahip fare dalaglEUan Ienfositler, daha sonraleha hastaIlKI gelistirecek olan bir allElýla aktarHBilStlB Deneyler, PLG nanopartiküllerinin, adoptif olarak aktarüân aktiflestirilmis efektör hücrelerini deaktif hale getirebilme kabiliyetini karakterize etmek üzere mevcut bulusun yapüândlElnalarII gelisimi esnasIa yürütülmüstür. Bir kontrol peptidi ile baglanan partiküllerle veya splenositlerle tedavi edilen fareler, gün 4'te baslayan klinik skorda bir artisla sahip olmustur. Gün 2'de PLG- PLP139-151 partiküllerle tedavi edilen fareler, tümü için 0 olan bir ortalama klinik skoruna, fakat 40 gün boyunca iki zaman noktalela sahip olmustur ve bu diger zaman noktalar. yönelik ortalama klinik skor 0.25 olmustur. 7070um hücre süzgeci boyunca geçirilmis ve 3409'de 5 dakika boyunca santrifüjlenmistir. Elde edilen topakta klEln lillan hücreleri, 340xg'de 5 dakika boyunca santrifüjlemeden önce NH4CI-bazlEklElnEElliücre lizis tamponunda (BD Pharm LyseTM; BD Pharmingen) çözünmüstür. Akgsitometris/ Beyin, karaciger, kan ve kemik iliginden toplanmlgl hücrelere (yukarlElh açllîlandlgllîgibi), PBS'de ylKlanmlStlE ve anti-CDlö/CD32 antikoru (Biolegend) ile bloke edilmistir. CanIEl hücreler, rutin olarak %95 hücre canIlIJglElsergileyen tripan mavisi dlglanIlEkullanHârak sayiIBilStIE Hücre yüzeyi molekül ekspresyonu ölçülmüstür ve hücre türleri, bir Argon iyon ve HeNe Iazeri ile donatllân bir FACS ARIA'da (Becton Dickinson) uygulanmlgtlE Canllîpopülasyonlar, iler ve yan saçiIJEl ile kapüânmlgtß ve daha sonrasIa, ileri-kapllâmayla belirlenen floresan popülasyonlarEl tanIIanmIStB SIEIhnd Iîilna, spesifik floresan ve ilgili popülasyonu tanIilayan saçlIHîli parametreleri kullanllârak uygulanmlgtlü SIMhndlîilna siddetleri, kemik iligi popülasyonlarlîlsin %98 saflllgelde etmek için saflEgla ayarlanmlgtlEl Edinilen FACS veri dosyalarüaklg sitometri programüFlow Jo (FIowJo, Ashland, OR, ABD) kullanllârak analiz edilmistir. Ilgili hücre popülasyonlarII kantifikasyonu, analizde aklg sitometrisi yüzdeleri ve her bir organdan mutla hücre sayllâr- bagllîalarak hesaplanmlgtlü Adopt/f .ez/(farm Deneyler, adoptif aktarIi olarak adlandlEllân aktif hastallglI bir ikinci modelini incelemek üzere mevcut bulusun yapüândlülnalarlüll gelisimi esnaleUa sürdürülmüstür. Hayvanlari peptidi ile immünize edilmesinden ziyade, aktif hastallgla sahip fare dalaglEUan Ienfositler, daha sonraleha hastaIlKI gelistirecek olan bir allElýla aktarHBilStlB Deneyler, PLG nanopartiküllerinin, adoptif olarak aktarüân aktiflestirilmis efektör hücrelerini deaktif hale getirebilme kabiliyetini karakterize etmek üzere mevcut bulusun yapüândlElnalarII gelisimi esnasIa yürütülmüstür. Bir kontrol peptidi ile baglanan partiküllerle veya splenositlerle tedavi edilen fareler, gün 4'te baslayan klinik skorda bir artisla sahip olmustur. Gün 2'de PLG- PLP139-151 partiküllerle tedavi edilen fareler, tümü için 0 olan bir ortalama klinik skoruna, fakat 40 gün boyunca iki zaman noktalela sahip olmustur ve bu diger zaman noktalar. yönelik ortalama klinik skor 0.25 olmustur. Çok/ayEE'USA Çoklanmlglplaka ELISA'Iar, üreticilerin talimatlar. göre uygulanmlgtE(Quansys Biosciences, Logan, Utah, ABD). KisacasÇlbeyin, dalak ve karaciger dokusu, PBS'de homojenize edilmistir, bir 1000xg dönme ile belirginlestirilmistir ve deney uygulanana kadar -20°C'de depolanmlgtlB Serum numuneleri de kullanIIBilgIlE Erimis numuneler ve standartlar, saglanan tamponda seyreltilmistir ve 30pl olan her birisi, özel bir çözülebilir proteine yönelik bir yakalama antikorunu içeren 16 noktayEilçeren her bir haznede plakalanmlgtlEl Plakalar daha sonrasIia 120 r.p.m'de (dds) bir orbital çalkalay- 1 saat boyunca inkube edilmistir. Plakalar, 3 defa yilZhnmlStlEl ve 30ul tespit antikoru, her bir hazneye eklenmistir ve bir kaç saat boyunca inkube edilmistir. 3 defa yllZlamadan sonra, strepavidin-HRP, 15 dakika daha eklenmis ve inkube edilmistir. Plakalar 6 defa yllZlanmlgtlElve sübstrat karlgfthüaklenmistir. Plakalar, bir CCD görüntüleyicide (Kodak, Rochester NY, ABD) hlîIEIbir sekilde okunmustur. Plaka görüntüleri, Quansys Q-view yazÜJIîJiEllQuansys Biosciences) kullanilârak analiz edilmistir. Deneysel Oto/mmÜn Ensefa//Ün (E45) /hdûksiyonu ve degerlendir/Imal' Içeren emülsiyon; Auspep, Parkville, Victoria, Avustralya; %95 saflastlElllfnlS HPLC) ve 2mg/mL Miyobakteriyum tüberküloz (Sigma Aldrich) içeren Tam Freund adjuvanElile sübkütanöz olarak enjekte edilmistir. Iki gün sonra, farelere, i.p. olarak 500pl Pertussis toksini (Sigma Aldrich) uygulanmlgtlEi Fareler, hastal[giI ilerlemesi boyunca takip edilmistir ve asaglki ölçekte derecelendirilmistir: 1, aksak kuyruk ve/veya 1 arka bacagI zayifliiglsîl 2, birden fazla bacakta zayiflillîl yürüme güçlügü; 3, 1 bacakta felç; 4, birden fazla bacakta felç, idrarIEIlutamama; 5, ölümcül. Graükler olusturulmustur ve hesaplanmlgl istatistiksel analiz, sßslýla GraphPad Prism ve uygulanmlgtlîl Veriye baglßlarak, bir eslesmemis, iki uçlu Student t-testi veya Tukey-Kramer post testi ile tek yönlü ANOVA, önemli oldugu düsünülen P < 0.05 ile uygulanmlStlEl AglElllKI kaybÇlinfiItrasyon ve virüs titresi gibi parametreler aras-aki iliski analizi için, bir Çok/ayEE'USA Çoklanmlglplaka ELISA'Iar, üreticilerin talimatlar. göre uygulanmlgtE(Quansys Biosciences, Logan, Utah, ABD). KisacasÇlbeyin, dalak ve karaciger dokusu, PBS'de homojenize edilmistir, bir 1000xg dönme ile belirginlestirilmistir ve deney uygulanana kadar -20°C'de depolanmlgtlB Serum numuneleri de kullanIIBilgIlE Erimis numuneler ve standartlar, saglanan tamponda seyreltilmistir ve 30pl olan her birisi, özel bir çözülebilir proteine yönelik bir yakalama antikorunu içeren 16 noktayEilçeren her bir haznede plakalanmlgtlEl Plakalar daha sonrasIia 120 r.p.m'de (dds) bir orbital çalkalay- 1 saat boyunca inkube edilmistir. Plakalar, 3 defa yilZhnmlStlEl ve 30ul tespit antikoru, her bir hazneye eklenmistir ve bir kaç saat boyunca inkube edilmistir. 3 defa yllZlamadan sonra, strepavidin-HRP, 15 dakika daha eklenmis ve inkube edilmistir. Plakalar 6 defa yllZlanmlgtlElve sübstrat karlgfthüaklenmistir. Plakalar, bir CCD görüntüleyicide (Kodak, Rochester NY, ABD) hlîIEIbir sekilde okunmustur. Plaka görüntüleri, Quansys Q-view yazÜJIîJiEllQuansys Biosciences) kullanilârak analiz edilmistir. Deneysel Oto/mmÜn Ensefa//Ün (E45) /hdûksiyonu ve degerlendir/Imal' Içeren emülsiyon; Auspep, Parkville, Victoria, Avustralya; %95 saflastlElllfnlS HPLC) ve 2mg/mL Miyobakteriyum tüberküloz (Sigma Aldrich) içeren Tam Freund adjuvanElile sübkütanöz olarak enjekte edilmistir. Iki gün sonra, farelere, i.p. olarak 500pl Pertussis toksini (Sigma Aldrich) uygulanmlgtlEi Fareler, hastal[giI ilerlemesi boyunca takip edilmistir ve asaglki ölçekte derecelendirilmistir: 1, aksak kuyruk ve/veya 1 arka bacagI zayifliiglsîl 2, birden fazla bacakta zayiflillîl yürüme güçlügü; 3, 1 bacakta felç; 4, birden fazla bacakta felç, idrarIEIlutamama; 5, ölümcül. Graükler olusturulmustur ve hesaplanmlgl istatistiksel analiz, sßslýla GraphPad Prism ve uygulanmlgtlîl Veriye baglßlarak, bir eslesmemis, iki uçlu Student t-testi veya Tukey-Kramer post testi ile tek yönlü ANOVA, önemli oldugu düsünülen P < 0.05 ile uygulanmlStlEl AglElllKI kaybÇlinfiItrasyon ve virüs titresi gibi parametreler aras-aki iliski analizi için, bir lineer olmayan regresyon (egri uymasD] bir ikinci sü polinomial (Y=A + B*X + C*X^2) ile kullanilîhigtiü Negatif Olarak Yüklenmis Immün Modifiye Edici PartikÜ//er/h (IMF/er) preparasyonu DZO'da (4 mL, %1 aglElillZYhacim cinsinden) poli(etilen-maleik anhidrit) (PEMA) çözeltisine, diklorometanda (DCM) (2 mL, %20 aglEllHZl'hacim cinsinden) poli(laktit-ko-glikolik asit) çözeltisi damlatüârak eklenmistir. KarlglEJilEl, VC 30 Ultrasonik Islemci kullanliârak 30 saniye boyunca 16 watta buzda sonike olmas. izin verilmistir. Elde edilen homojenize ham ürün, bir DZO çözeltisine (aglEIillZl'hacim cinsinden % dökülmüstür. Homojenize bulamaclü, Bellco Glass, Inc., Bellstir Multi karStiElEEB manyetik karlgtlElEEüO ayarIa gece boyunca karlStiElB1alela izin verilmistir. Sonuç/ar Üç saatlik karlgtülna isleminden sonra, partikül boyut analizleri, kullan at polistiren küvetlerde dinamik igllîisaçüilîilîkullanüârak uygulanmlgtlEi Reaksiyon tamamlandIJZtan sonra, daha sonrasIa elde edilen ham süspansiyon saflastlEilBilgtlB Saliastßna Taze DZO ve 10x sodyum bikarbonat tampon, 4°C'ye gece boyunca sogutulmustur. bir 40 pm bir hücre süzgeci kullanüârak, 36 mL partikül süspansiyon, 4 mL sogutulmus 10x sodyum bikarbonat tamponu içeren yaklasila olarak isaretli 50 mL bir santrifüj tüpüne her bir yigiian filtrelenmistir. Her bir beherglas, yaklasliZioIarak 6 bu tarz tüpü üretmistir. Tüm tüpler, 4°C'de lineer olmayan regresyon (egri uymasD] bir ikinci sü polinomial (Y=A + B*X + C*X^2) ile kullanilîhigtiü Negatif Olarak Yüklenmis Immün Modifiye Edici PartikÜ//er/h (IMF/er) preparasyonu DZO'da (4 mL, %1 aglElillZYhacim cinsinden) poli(etilen-maleik anhidrit) (PEMA) çözeltisine, diklorometanda (DCM) (2 mL, %20 aglEllHZl'hacim cinsinden) poli(laktit-ko-glikolik asit) çözeltisi damlatüârak eklenmistir. KarlglEJilEl, VC 30 Ultrasonik Islemci kullanliârak 30 saniye boyunca 16 watta buzda sonike olmas. izin verilmistir. Elde edilen homojenize ham ürün, bir DZO çözeltisine (aglEIillZl'hacim cinsinden % dökülmüstür. Homojenize bulamaclü, Bellco Glass, Inc., Bellstir Multi karStiElEEB manyetik karlgtlElEEüO ayarIa gece boyunca karlStiElB1alela izin verilmistir. Sonuç/ar Üç saatlik karlgtülna isleminden sonra, partikül boyut analizleri, kullan at polistiren küvetlerde dinamik igllîisaçüilîilîkullanüârak uygulanmlgtlEi Reaksiyon tamamlandIJZtan sonra, daha sonrasIa elde edilen ham süspansiyon saflastlEilBilgtlB Saliastßna Taze DZO ve 10x sodyum bikarbonat tampon, 4°C'ye gece boyunca sogutulmustur. bir 40 pm bir hücre süzgeci kullanüârak, 36 mL partikül süspansiyon, 4 mL sogutulmus 10x sodyum bikarbonat tamponu içeren yaklasila olarak isaretli 50 mL bir santrifüj tüpüne her bir yigiian filtrelenmistir. Her bir beherglas, yaklasliZioIarak 6 bu tarz tüpü üretmistir. Tüm tüpler, 4°C'de 70009'de yaklasik] 15 dakika boyunca santrifüjlenmistir ve süpernatant aspire edilmistir. Süspansiyonun preparasyonu, yukarüb bahsi geçen prosedürü kullanarak tekrar edilmistir ve 1 mL sogutulmus DZO'da mümkün oldugunca çok partikül topag Büspanse edilmistir. Yeniden süspanse edilmis partiküller, 4 mL sogutulmus 10x sodyum bikarbonat tamponu ile Partikülün yeniden süspansiyonu, tüm partikül topaklarElbasarHJIlbir sekilde yeniden süspanse edilene kadar tekrar edilmistir. 6 santrifüjel tüp daha sonrasIa bir santrifüj tüpüne (50 mL tüp) birlestirilmistir ve tüp, 40 mL sogutulmus DZO'nun kalan hacmi ile doldurulmustur (YilZlama 1). Tüp, 4°C'de 7000g'de 20 dakika boyunca santrifüjlenmistir ve süpernatant aspire edilmistir. Elde edilen partikülün AdIi 1 ve 2 ve Yikama 1'i, her defaletla en az iki defa daha tekrar edilmistir. Nihai olarak, elde edilen partikül topagüdaha sonrasIa slîEinitrojende bir soklamaya tabi tutulmustur ve negatif olarak IMP'leri elde etmek üzere manifoldda kuruyana kadar Iiyofilize edilmistir. Sekil 1, dinamik @El saçllIüElanalizi ile yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-gIikolitin) karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye baslîila 2.5 x 105 sayIi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgipoli(laktit- ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 567 nm bir Z-ortalama çapa, 670 nm bir zirve çap- ve 0.209 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Tablo 1, yüzeyi fonksiyonlanmigl PLG-PEMA partiküllerine yönelik ölçümleri göstermektedir. Tablodaki veriler, her bir ylgll hafifçe farkllîbldugu için temsilidir. Tablodaki sayllâr, bir kaç partikül yigiiüllElI birlestirilmesine baglEloImustur. Çift emülsiyon partiküllerine yönelik ölçümler, Tablo 1'de olanlara benzerdir. 70009'de yaklasik] 15 dakika boyunca santrifüjlenmistir ve süpernatant aspire edilmistir. Süspansiyonun preparasyonu, yukarüb bahsi geçen prosedürü kullanarak tekrar edilmistir ve 1 mL sogutulmus DZO'da mümkün oldugunca çok partikül topag Büspanse edilmistir. Yeniden süspanse edilmis partiküller, 4 mL sogutulmus 10x sodyum bikarbonat tamponu ile Partikülün yeniden süspansiyonu, tüm partikül topaklarElbasarHJIlbir sekilde yeniden süspanse edilene kadar tekrar edilmistir. 6 santrifüjel tüp daha sonrasIa bir santrifüj tüpüne (50 mL tüp) birlestirilmistir ve tüp, 40 mL sogutulmus DZO'nun kalan hacmi ile doldurulmustur (YilZlama 1). Tüp, 4°C'de 7000g'de 20 dakika boyunca santrifüjlenmistir ve süpernatant aspire edilmistir. Elde edilen partikülün AdIi 1 ve 2 ve Yikama 1'i, her defaletla en az iki defa daha tekrar edilmistir. Nihai olarak, elde edilen partikül topagüdaha sonrasIa slîEinitrojende bir soklamaya tabi tutulmustur ve negatif olarak IMP'leri elde etmek üzere manifoldda kuruyana kadar Iiyofilize edilmistir. Sekil 1, dinamik @El saçllIüElanalizi ile yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-gIikolitin) karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye baslîila 2.5 x 105 sayIi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgipoli(laktit- ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 567 nm bir Z-ortalama çapa, 670 nm bir zirve çap- ve 0.209 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Tablo 1, yüzeyi fonksiyonlanmigl PLG-PEMA partiküllerine yönelik ölçümleri göstermektedir. Tablodaki veriler, her bir ylgll hafifçe farkllîbldugu için temsilidir. Tablodaki sayllâr, bir kaç partikül yigiiüllElI birlestirilmesine baglEloImustur. Çift emülsiyon partiküllerine yönelik ölçümler, Tablo 1'de olanlara benzerdir. Tablo 1 -Yüzeyi fonksiyonlanmlglPLG-PEMA partiküllerine yönelik ölçümler Partikül (nm) Ç-potansiyel (mV) Ant/jane bag/@L GA tanecik/er/hin uygu/anmasÜT ekrar/a yan Deneyse/ Otoimmün Ensefa//ti ön/emekted/'r PLG nanopartikülleri, Tekrarlayan Deneysel Otoimmün Ensefalitin (R-EAE) önlenmesine yönelik toleranslîindüklemek üzere immünodominant proteolipid protein PLP139-151 epitopu (PLG-PLP139-151) ile incelenmistir. R-EAE fareleri, yukar- aç[lZIand[g]l3_l]ibi üretilmistir. Hayvanlara uygulanan peptitler, 500 nm ortalama sahip partiküllere baglanmlStE Fareler, PLP göre gün -7'de konjugatlEbImayan PLGA (N=5) ile tedavi edilmistir. HastalUZJ zirvesi tipik olarak yaklaslKl gün 12 ila 14'de gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastallKl için skorlanmaktadE Peptit içermeyen veya kontrol peptidi (OVA323-339) ile modifiye edilmis partiküller, hastallla indüksiyonunu önlememistir. Fakat PLP139-151 ile modifiye edilmis PLGA partikülleri, gün 20 ve 'da (Sekil 2) araleUa sergilenen 1'in aItIaki düsük klinik skorlarlZlharicinde 0 olan (hastaIlKl yok) bir klinik skoru üretmistir. Modifiye edilmemis PLG'ye sahip veya polistiren partikülleri kullanan önceki çallgi'nalar, anafilaksiyi yaygI olarak tetikleyen polistirene baglEI partiküllerle bu etkili hastal[Eiazaltiliîliretmemistin Dahasi: miyeline özgü CD4+ T hücrelerinin spesifik inaktivasyonu, her iki immünize edici sergilenmistir. Birlikte aliglüda, gün -7'de PLG-PLP139-151 ile profilaktik tedavi spesifik olarak EAE gelisimini önlemistir ve partiküllerin hastallgllîbnleyebilme kabiliyetine dair bir gelisimi temsil etmektedir. Partiküller ile üretilmis skorlar antijene baglßplenositler ile üretilen skorlar kadar iyidir ve hatta belki de daha iyidir. Uygulanan partikül tipi ayrlEla fare modelinde EAE gelisiminde bir etkiye sahiptir. Fareler, immünizasyon zaman. (gün 0) göre gün -7'de OVA, OVA323-339- PLGAPHOSPOREX (N=5)i OVAi PLPi39-isi- Tablo 1 -Yüzeyi fonksiyonlanmlglPLG-PEMA partiküllerine yönelik ölçümler Partikül (nm) Ç-potansiyel (mV) Ant/jane bag/@L GA tanecik/er/hin uygu/anmasÜT ekrar/a yan Deneyse/ Otoimmün Ensefa//ti ön/emekted/'r PLG nanopartikülleri, Tekrarlayan Deneysel Otoimmün Ensefalitin (R-EAE) önlenmesine yönelik toleranslîindüklemek üzere immünodominant proteolipid protein PLP139-151 epitopu (PLG-PLP139-151) ile incelenmistir. R-EAE fareleri, yukar- aç[lZIand[g]l3_l]ibi üretilmistir. Hayvanlara uygulanan peptitler, 500 nm ortalama sahip partiküllere baglanmlStE Fareler, PLP göre gün -7'de konjugatlEbImayan PLGA (N=5) ile tedavi edilmistir. HastalUZJ zirvesi tipik olarak yaklaslKl gün 12 ila 14'de gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastallKl için skorlanmaktadE Peptit içermeyen veya kontrol peptidi (OVA323-339) ile modifiye edilmis partiküller, hastallla indüksiyonunu önlememistir. Fakat PLP139-151 ile modifiye edilmis PLGA partikülleri, gün 20 ve 'da (Sekil 2) araleUa sergilenen 1'in aItIaki düsük klinik skorlarlZlharicinde 0 olan (hastaIlKl yok) bir klinik skoru üretmistir. Modifiye edilmemis PLG'ye sahip veya polistiren partikülleri kullanan önceki çallgi'nalar, anafilaksiyi yaygI olarak tetikleyen polistirene baglEI partiküllerle bu etkili hastal[Eiazaltiliîliretmemistin Dahasi: miyeline özgü CD4+ T hücrelerinin spesifik inaktivasyonu, her iki immünize edici sergilenmistir. Birlikte aliglüda, gün -7'de PLG-PLP139-151 ile profilaktik tedavi spesifik olarak EAE gelisimini önlemistir ve partiküllerin hastallgllîbnleyebilme kabiliyetine dair bir gelisimi temsil etmektedir. Partiküller ile üretilmis skorlar antijene baglßplenositler ile üretilen skorlar kadar iyidir ve hatta belki de daha iyidir. Uygulanan partikül tipi ayrlEla fare modelinde EAE gelisiminde bir etkiye sahiptir. Fareler, immünizasyon zaman. (gün 0) göre gün -7'de OVA, OVA323-339- PLGAPHOSPOREX (N=5)i OVAi PLPi39-isi- PLGAPHOSPOREX (N=5) veya PLP ile tedavi edilmistir. HastallEI zirvesi tipik olarak yaklaslKl gün 12 ila 14'te gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastalilZl için skorlanmaktadlB Kontrol peptidi (OVA323-339) ile modifiye edilmis herhangi bir bilesimin partikülleri, hastaliiîi indüksiyonunu önlememistir. Fakat, PLP139-151 bagIEPLG tanecikleri, R- EAE'nin asagüdüzenleyici indüksiyonunda, PLP139-151 baglEiticari (phosphorex) pLG veya polistirenden daha etkili olmustur (Sekiller 3A ve 38). Ant/Jane bag/@LG part/kÜ//er/h intravenöz infîzyonu, OVA/A/um önceden duyar/ESIME hayvan/arda anafilaksi ile /hdÜk/enm/s sük/Edüsûsûnü indÜk/ememektedir Aktif hastallgil mevcudiyetinden dolayEl antijenlere karsEl anafilaksi, hlZIEl ölümle sonuçlanabilen ve polistirene baglEbartiküllerle açilZIanmlSl bir sorundur. Anafilaksi, vücut leiakllgiIa önemli bir düsüsle iliskilidir. OVA-PLG'nin intravenöz uygulamasIlEi, önceden duyarlilâstlîilüwlg hayvanlarda bir anafilaksi ile indüklenmis slîakliEI düsüsünü indükleyip indüklenmedigini test etmek için, fareler intraperitoneal enjeksiyon vasißsMa 10pg OVA/Alum ile gün O'da immünize edilmistir. Gün 14'te, fareler tekrardan intraperitoneal enjeksiyon vasltâlea 10pg OVA/Alum ile immünize edilmistir ve daha sonrasIa, gün 21'de intravenöz olarak uygulanan OVA-PLG ile tolere edilmistir. Gün 28'de, fareler daha sonrasiEtla intravenöz uygulama vasitâslsîla OVA-PLG partikülleri veya OVA ile tolere edilmistir. Sekil 4'te gösterildigi üzere, gün 28'de çözülebilir OVA ile tedavi edilmis bu fareler, OVA-PLG partikülü ile tedavi edilmis bu hayvanlara kMasla slîbklitha bir azalma sergilemistir. Partiküllerin iletilmesinden 1 saat içerisinde vücut leakligIIda herhangi bir azalma gözlemlenmemistir. Sekil 5, remisyon esnasIa PLP-PLG uygulamasIlEI, herhangi bir anafilaksi ile iliskili mortaliteye yol açmad @Ilîgöstermektedin EAE, CFA'da PLP 139-151'in subkütanöz enjeksiyonu ile altEila sekiz haftallKl disi SJL/J farelerinde indüklenmistir ve klinik hastaligiI gelisimi takip edilmis ve kaydedilmistir (Sekil SB). Hastalik] indüksiyonuna göre gZl'de, farelere, çözülebilir PLP veya PLG nanopartiküllerine (katüâr) baglanan aynlleptitlerin iv enjeksiyonlarElrerilmistir. Hayvanlar. lelakllglü enjeksiyondan sonra 1 saat boyunca her 10 dakikada bir takip edilmis ve PLGAPHOSPOREX (N=5) veya PLP ile tedavi edilmistir. HastallEI zirvesi tipik olarak yaklaslKl gün 12 ila 14'te gözlemlenmistir ve fareler, klinik hastalilZl için skorlanmaktadlB Kontrol peptidi (OVA323-339) ile modifiye edilmis herhangi bir bilesimin partikülleri, hastaliiîi indüksiyonunu önlememistir. Fakat, PLP139-151 bagIEPLG tanecikleri, R- EAE'nin asagüdüzenleyici indüksiyonunda, PLP139-151 baglEiticari (phosphorex) pLG veya polistirenden daha etkili olmustur (Sekiller 3A ve 38). Ant/Jane bag/@LG part/kÜ//er/h intravenöz infîzyonu, OVA/A/um önceden duyar/ESIME hayvan/arda anafilaksi ile /hdÜk/enm/s sük/Edüsûsûnü indÜk/ememektedir Aktif hastallgil mevcudiyetinden dolayEl antijenlere karsEl anafilaksi, hlZIEl ölümle sonuçlanabilen ve polistirene baglEbartiküllerle açilZIanmlSl bir sorundur. Anafilaksi, vücut leiakllgiIa önemli bir düsüsle iliskilidir. OVA-PLG'nin intravenöz uygulamasIlEi, önceden duyarlilâstlîilüwlg hayvanlarda bir anafilaksi ile indüklenmis slîakliEI düsüsünü indükleyip indüklenmedigini test etmek için, fareler intraperitoneal enjeksiyon vasißsMa 10pg OVA/Alum ile gün O'da immünize edilmistir. Gün 14'te, fareler tekrardan intraperitoneal enjeksiyon vasltâlea 10pg OVA/Alum ile immünize edilmistir ve daha sonrasIa, gün 21'de intravenöz olarak uygulanan OVA-PLG ile tolere edilmistir. Gün 28'de, fareler daha sonrasiEtla intravenöz uygulama vasitâslsîla OVA-PLG partikülleri veya OVA ile tolere edilmistir. Sekil 4'te gösterildigi üzere, gün 28'de çözülebilir OVA ile tedavi edilmis bu fareler, OVA-PLG partikülü ile tedavi edilmis bu hayvanlara kMasla slîbklitha bir azalma sergilemistir. Partiküllerin iletilmesinden 1 saat içerisinde vücut leakligIIda herhangi bir azalma gözlemlenmemistir. Sekil 5, remisyon esnasIa PLP-PLG uygulamasIlEI, herhangi bir anafilaksi ile iliskili mortaliteye yol açmad @Ilîgöstermektedin EAE, CFA'da PLP 139-151'in subkütanöz enjeksiyonu ile altEila sekiz haftallKl disi SJL/J farelerinde indüklenmistir ve klinik hastaligiI gelisimi takip edilmis ve kaydedilmistir (Sekil SB). Hastalik] indüksiyonuna göre gZl'de, farelere, çözülebilir PLP veya PLG nanopartiküllerine (katüâr) baglanan aynlleptitlerin iv enjeksiyonlarElrerilmistir. Hayvanlar. lelakllglü enjeksiyondan sonra 1 saat boyunca her 10 dakikada bir takip edilmis ve kaydedilmistir (Sekil 5A). PLP-PLG pa/ÜkÜ//er/ ile proû/akiv'k fedai/I; uzun dönem/i, anÜJene özgü to/eransÜ /ndÜk/emekted/'r Optimal dozaj, hastalilZl indüksiyonundan yedi gün önce PLP139.151-PLG'nin artan konsantrasyonlarII intravenöz uygulamasüle belirlenmistir ve OVA323-339 -PLG ile tedavi edilen SJL/J farelerine klýbsla klinik hastallg'lI gelisimi için takip edilmistir (Sekil 6A). AItEila sekiz haftallK] disi SJL/J farelerine, PLP-bagll:iPLG nanopartikülleri ile iv olarak enjekte edilmistir. EAE, 7 gün (Sekil 68), 25 gün (Sekil 6C) veya 50 gün (Sekil GD) sonra CFA'da PLP139-151'in subkütanöz enjeksiyonu ile indüklenmistir. Panel B'den hayvanlar, 100 gün boyunca klinik hastalEIZJ için takip edilmistir. Sekil 6E, hastallß indüksiyonuna göre gün 8'de, bir gecikmeli tip hiper duyarllUKl(DTH) reaksiyonu, panelde (B) gösterilen farelerin bir alt kümesinde uygulandlglüllîgöstermektedir. Panelde (B) (OVA333-339- PLG ve PLP PLP139-151/CFA astarlElgrupIarIan seçilen temsili hayvanlara, ölçümü olarak kulak sismesi, 24sa sonra belirlenmistir ve uygulamadan önceki yanElbr (daire) veya PLP139-151 (kare)-bagll:lPLG nanopartikülleri veya tek bas. baglanmamlgl partiküller (dE çizgili daire) (F) ile intravenöz olarak enjekte edildigini göstermektedir. EAE, CFA'da PLP178-191'in subkütanöz enjeksiyonu ile 7 gün sonra indüklenmistir ve hastalilZl gösterilen zaman noktalarIa takip edilmistir. Ant/jene bag/Üart/kÜ//er /`/e Tekrar/ayan Deneysel Otoi'mmün Ensefa/it/h Tedavisi Deneyler, hastalgilîiiinlemekten ziyade, PLG-PLP139.151 partiküllerinin hastallgiDLai/i edebilme kabiliyetini incelemek ve hastal[glI:tedavi etmek ve uygulama yolunun, hastaliEJ gelisimini etkileyip etkilemedigini belirlemek için mevcut bulusun yapilândlîilnalarlüllül gelisimi esnaleUa yürütülmüstür. Fareler, PLP139-151 ve bir adjuvan ile gün 0'da immünize edilmistir. Fareler normalde gün 12 ila 14'te maksimum klinik skorlara sahiptir. Bu modelde, fareler, intavenöz (iv) uygulama, intraperitoneal (ip) uygulama, subkütanöz (sc) uygulama vasEislîla veya oral kaydedilmistir (Sekil 5A). PLP-PLG pa/ÜkÜ//er/ ile proû/akiv'k fedai/I; uzun dönem/i, anÜJene özgü to/eransÜ /ndÜk/emekted/'r Optimal dozaj, hastalilZl indüksiyonundan yedi gün önce PLP139.151-PLG'nin artan konsantrasyonlarII intravenöz uygulamasüle belirlenmistir ve OVA323-339 -PLG ile tedavi edilen SJL/J farelerine klýbsla klinik hastallg'lI gelisimi için takip edilmistir (Sekil 6A). AItEila sekiz haftallK] disi SJL/J farelerine, PLP-bagll:iPLG nanopartikülleri ile iv olarak enjekte edilmistir. EAE, 7 gün (Sekil 68), 25 gün (Sekil 6C) veya 50 gün (Sekil GD) sonra CFA'da PLP139-151'in subkütanöz enjeksiyonu ile indüklenmistir. Panel B'den hayvanlar, 100 gün boyunca klinik hastalEIZJ için takip edilmistir. Sekil 6E, hastallß indüksiyonuna göre gün 8'de, bir gecikmeli tip hiper duyarllUKl(DTH) reaksiyonu, panelde (B) gösterilen farelerin bir alt kümesinde uygulandlglüllîgöstermektedir. Panelde (B) (OVA333-339- PLG ve PLP PLP139-151/CFA astarlElgrupIarIan seçilen temsili hayvanlara, ölçümü olarak kulak sismesi, 24sa sonra belirlenmistir ve uygulamadan önceki yanElbr (daire) veya PLP139-151 (kare)-bagll:lPLG nanopartikülleri veya tek bas. baglanmamlgl partiküller (dE çizgili daire) (F) ile intravenöz olarak enjekte edildigini göstermektedir. EAE, CFA'da PLP178-191'in subkütanöz enjeksiyonu ile 7 gün sonra indüklenmistir ve hastalilZl gösterilen zaman noktalarIa takip edilmistir. Ant/jene bag/Üart/kÜ//er /`/e Tekrar/ayan Deneysel Otoi'mmün Ensefa/it/h Tedavisi Deneyler, hastalgilîiiinlemekten ziyade, PLG-PLP139.151 partiküllerinin hastallgiDLai/i edebilme kabiliyetini incelemek ve hastal[glI:tedavi etmek ve uygulama yolunun, hastaliEJ gelisimini etkileyip etkilemedigini belirlemek için mevcut bulusun yapilândlîilnalarlüllül gelisimi esnaleUa yürütülmüstür. Fareler, PLP139-151 ve bir adjuvan ile gün 0'da immünize edilmistir. Fareler normalde gün 12 ila 14'te maksimum klinik skorlara sahiptir. Bu modelde, fareler, intavenöz (iv) uygulama, intraperitoneal (ip) uygulama, subkütanöz (sc) uygulama vasEislîla veya oral tedavi edilmistir. Sekil 7'de gösterildigi gibi, profîlaktik toleranleI, PLG-PLP139-151 partikülleri intravenöz olarak veya intraperitoneal olarak uygulandigûaman en etkili olanIlE Intravenöz olarak uygulanan PLP139-151-PLG ile tedavi edilen hayvanlar, hastaliglgelistirmemistir ve çogu zaman noktasIa 0 olan ortalama klinik skorlara sahip olmustur. Bu, PLP139-151 polistiren partikülleri ile tedavi edilmis hayvanlar. aksinedir, bu vesileyle hayvanlarlEl %70'Inin anafîlaksiden öldügü gözlemlenmistir. Ant/jene bag/@adikû/ toleransÜakt/'f Tekrar/ayan Deneysel Oto/mmün Ensefa//tte ant/jene özgü 7771 ve Th127 yanEErEE/ndüksiyonunu lnb/be etmektedir Antijene bagIEpartiküllerin uygulamasilEl, T-yardIicEhücrelerin indüksiyonunu inhibe edip farelerine intravenöz olarak uygulanmlStiEI Gün 0'da, OVA323-339-PLG partikülleri ve Tam Freund AdjuvanEl(CFA), farelere subkütanöz olarak uygulanmlgtlEl Hayvanlar, Gün 10'da hücreleri izole edilmistir. CPM ve IL-17, GM-CSF, IFN-y, IL-10 ve IL-4'ün seviyeleri, Gün 10'da ölçülmüstür. Sekil 8'de gösterildigi Üzere, OVA323-339-PLG partiküllerinin uygulanmasütedavi edilen hayvanlarda Th1 ve Th 17 yan [übrlElEihhibe etmistir. Tolerans, PLP- 1 39- 151 bag/@L GA part/kÜ//eri i/e /ndÜk/enmekted/r uygulanmlgtlü Histolojik analiz, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulanmasIlEI, servik omurilik inflamasyonunu ve demiyelinasyonunu inhibe ettigini göstermistir. Fareler, PLP-PLG veya OVA323-339-PLG ile tedavi edilmistir ve doku, gün 40'ta aIlEmlgtlEI Servik omurilik izole edilmistir ve CNS içerisinde immün yan-Eihcelemek üzere kesit allElnlStlB R-EAE ve multipl sklerozun patolojisine vurgu yapmaktadB Sekil 9, PLP139-151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar. omuriligi içerisinde ve natif dokuya, OVA323-339-PLG ile tedavi edilmis hayvanlardan alin dokuya olandan daha fazla benzeyen immün hücre infiltrasyonunda bir azalmayü tedavi edilmistir. Sekil 7'de gösterildigi gibi, profîlaktik toleranleI, PLG-PLP139-151 partikülleri intravenöz olarak veya intraperitoneal olarak uygulandigûaman en etkili olanIlE Intravenöz olarak uygulanan PLP139-151-PLG ile tedavi edilen hayvanlar, hastaliglgelistirmemistir ve çogu zaman noktasIa 0 olan ortalama klinik skorlara sahip olmustur. Bu, PLP139-151 polistiren partikülleri ile tedavi edilmis hayvanlar. aksinedir, bu vesileyle hayvanlarlEl %70'Inin anafîlaksiden öldügü gözlemlenmistir. Ant/jene bag/@adikû/ toleransÜakt/'f Tekrar/ayan Deneysel Oto/mmün Ensefa//tte ant/jene özgü 7771 ve Th127 yanEErEE/ndüksiyonunu lnb/be etmektedir Antijene bagIEpartiküllerin uygulamasilEl, T-yardIicEhücrelerin indüksiyonunu inhibe edip farelerine intravenöz olarak uygulanmlStiEI Gün 0'da, OVA323-339-PLG partikülleri ve Tam Freund AdjuvanEl(CFA), farelere subkütanöz olarak uygulanmlgtlEl Hayvanlar, Gün 10'da hücreleri izole edilmistir. CPM ve IL-17, GM-CSF, IFN-y, IL-10 ve IL-4'ün seviyeleri, Gün 10'da ölçülmüstür. Sekil 8'de gösterildigi Üzere, OVA323-339-PLG partiküllerinin uygulanmasütedavi edilen hayvanlarda Th1 ve Th 17 yan [übrlElEihhibe etmistir. Tolerans, PLP- 1 39- 151 bag/@L GA part/kÜ//eri i/e /ndÜk/enmekted/r uygulanmlgtlü Histolojik analiz, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulanmasIlEI, servik omurilik inflamasyonunu ve demiyelinasyonunu inhibe ettigini göstermistir. Fareler, PLP-PLG veya OVA323-339-PLG ile tedavi edilmistir ve doku, gün 40'ta aIlEmlgtlEI Servik omurilik izole edilmistir ve CNS içerisinde immün yan-Eihcelemek üzere kesit allElnlStlB R-EAE ve multipl sklerozun patolojisine vurgu yapmaktadB Sekil 9, PLP139-151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar. omuriligi içerisinde ve natif dokuya, OVA323-339-PLG ile tedavi edilmis hayvanlardan alin dokuya olandan daha fazla benzeyen immün hücre infiltrasyonunda bir azalmayü boyaya sahip olurken, PLP139-151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar, bu faktörler için minimum boyaya sahip olmustur. PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulamasIlEl, tedavi edilen farenin omuriliginde kan beyin bariyeri (BBB) bozulmasIEl/e makrofaj aktivasyonunu inhibe etmektedir. Hayvanlar, Tam edilmistir. EAE'nin klinik skorlarEi/e yüzde oranEbelirlenmistir (Sekil 108) ve omurilikler, in w'vo görüntüleme (Sekil 10A ve 11) vaslüslîla gözlemlenmistir. Anjiyosens, CNS'deki vasküler -El ölçmektedir ve prosens aktive edilmis makrofajlarEl bildirmektedir (katepsin aktivasyonu, flüoresan sinyalini açiga çüZlaran raportörü bölmektedir). Çubuk grafigi, beyin ve SC taramalarIa gösterilen sinyal gücüne saylgbl numaralar vermektedir. Tolerans ayrlîla antijenin enkapsüle edildigi partiküller ile indüklenebilmektedir. Sekil 12, PLP139-151'in gözlemlendigi PLG partiküllerinin uygulanmasilEl, farelerde R-EAE indüksiyonunu inhibe ettigini göstermektedir. Otoantijenleri enkapsüle edebilme kabiliyeti, daha fazla antijen kapsamllîlde etmek ve bu sekilde, epitop yayUBia ile daha etkili bir sekilde mücadele etmek üzere proteinlerin veya hatta organ homojenatlarII kompleks karlSlRilarIan kullanIia olanak saglamaktad E aktivasyonuna kgnen basim/EE SJL/J Fareleri, Gün -9'da düzenleyici T hücrelerine (Tregs) yönelik ortak bir markör olan bir anti-CDZS antikoru ile tedavi edilmistir ve daha sonralelda Gün -7'de, OVA323-339 PLG partikülleri ve anti-CD25 antikoru, OVA323-339 PLG partikülleri ve bir kontrol IgG antikoru, kontrol IgG antikoru ile tedavi edilmistir. Sekil 13'te gösterildigi üzere, PLP139-151-PLG partiküllerle ve bir anti-CD25 antikor ile tedavi edilen hayvanlar, bazen PLP139-151-PLG partiküller ve bir kontrol IgG antikoru ile tedavi edilen bu hayvanlardan daha büyük bir ortalama klinik skor sergilemistir. Bu, Tregs veya en ainan CD25'i eksprese eden T hücrelerinin, tolerans& baslang-a bir rol oynad[giI|ZbnaylamaktadE boyaya sahip olurken, PLP139-151-PLG ile tedavi edilmis hayvanlar, bu faktörler için minimum boyaya sahip olmustur. PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulamasIlEl, tedavi edilen farenin omuriliginde kan beyin bariyeri (BBB) bozulmasIEl/e makrofaj aktivasyonunu inhibe etmektedir. Hayvanlar, Tam edilmistir. EAE'nin klinik skorlarEi/e yüzde oranEbelirlenmistir (Sekil 108) ve omurilikler, in w'vo görüntüleme (Sekil 10A ve 11) vaslüslîla gözlemlenmistir. Anjiyosens, CNS'deki vasküler -El ölçmektedir ve prosens aktive edilmis makrofajlarEl bildirmektedir (katepsin aktivasyonu, flüoresan sinyalini açiga çüZlaran raportörü bölmektedir). Çubuk grafigi, beyin ve SC taramalarIa gösterilen sinyal gücüne saylgbl numaralar vermektedir. Tolerans ayrlîla antijenin enkapsüle edildigi partiküller ile indüklenebilmektedir. Sekil 12, PLP139-151'in gözlemlendigi PLG partiküllerinin uygulanmasilEl, farelerde R-EAE indüksiyonunu inhibe ettigini göstermektedir. Otoantijenleri enkapsüle edebilme kabiliyeti, daha fazla antijen kapsamllîlde etmek ve bu sekilde, epitop yayUBia ile daha etkili bir sekilde mücadele etmek üzere proteinlerin veya hatta organ homojenatlarII kompleks karlSlRilarIan kullanIia olanak saglamaktad E aktivasyonuna kgnen basim/EE SJL/J Fareleri, Gün -9'da düzenleyici T hücrelerine (Tregs) yönelik ortak bir markör olan bir anti-CDZS antikoru ile tedavi edilmistir ve daha sonralelda Gün -7'de, OVA323-339 PLG partikülleri ve anti-CD25 antikoru, OVA323-339 PLG partikülleri ve bir kontrol IgG antikoru, kontrol IgG antikoru ile tedavi edilmistir. Sekil 13'te gösterildigi üzere, PLP139-151-PLG partiküllerle ve bir anti-CD25 antikor ile tedavi edilen hayvanlar, bazen PLP139-151-PLG partiküller ve bir kontrol IgG antikoru ile tedavi edilen bu hayvanlardan daha büyük bir ortalama klinik skor sergilemistir. Bu, Tregs veya en ainan CD25'i eksprese eden T hücrelerinin, tolerans& baslang-a bir rol oynad[giI|ZbnaylamaktadE Terapöt/'k to/erans, aktif ve adoptif EAE 'de PLP139.151-PLGpart/'/(Ü//er176 indüklenmektedir PLP139-151-PLG partiküller ile indüklenen terapötik tolerans, aktif ve adoptif EAE'de aItEila sekiz haftaIlKl disi SJL/J farelerde indüklenmistir. Farelere, hastaIlKl indüksiyonundan 2 peptit, iv olarak enjekte edilmistir. Klinik hastalilZIskorlarü antijen baglElsplenositIer ile tedaviden sonrakilerle klýlaslanmlgtlîl (Sekil 14A). Beyin ve toplanmlgtlîl Paneld A'dan farelerden kesitler, PLP proteini ve CD45 için boyanmlStlEl(SekiI 14B). Panel C'den farelerden omurilik kesitleri, Luxol Fast Blue ile boyanmlStlEl(Sekil 14D). Demiyelinasyon ve hücresel infiltrasyon alanlarü oklar ile gösterilmektedir. Sonuçlar, toleranleJ, adoptif EAE ile farelerde PLP139-151-PLG partiküller ile Indüklendigini göstermektedir. sonra aktif EAE ve adoptif EAE ile farelerin ortalama klinik skorlarIElgösteren grafikleri göstermektedir. Farelere, hastalilZl indüksiyonundan 10 gün (Sekil 15A) veya 2 gün (Sekil veya OVA323.339 - PLG peptidi enjekte edilmistir ve ortalama klinik skor belirlenmistir. Her iki durumda, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulanmasIlEl, hastalig'llîlazaltmaktadß tolerans indüksiyonunun göstergesidir. Merkezi sinir sistemi immün hücrelerinin infiltrasyonunun da PLP-PLG tolerize farelerde çarplEiISekilde azaltüBiaktadlEl SJL/J farelerine, adoptif aktarIiEIIe EAE indüksiyonundan 2 gün sonra PLP ile baglanan 500nm PLG nanopartikülü enjekte edilmistir. Hastaligl zirvesinde (gün 14), beyinler ve omurilikler çilZlarilüilgtlEl ve lenfositlerin (Sekil , periferik dendritik hücrelerin (Sekil 16E), miyeloid dendritik hücrelerin (Sekil 16F) ve makrofajlarI (Sekil 16G), aklgl sitometrisi ile numaralandlülmlgtlü Bu popülasyonlar için kapllâma stratejisi (Sekil 16A)'da gösterilmektedir. CNS hücre preparasyonlarüIL-17A ve IFN-y (Sekil 16H) için hücre içi boyamadan önce 5 sa boyunca PMA ve iyonomisin ile uyarilüîlgtlîl Terapöt/'k to/erans, aktif ve adoptif EAE 'de PLP139.151-PLGpart/'/(Ü//er176 indüklenmektedir PLP139-151-PLG partiküller ile indüklenen terapötik tolerans, aktif ve adoptif EAE'de aItEila sekiz haftaIlKl disi SJL/J farelerde indüklenmistir. Farelere, hastaIlKl indüksiyonundan 2 peptit, iv olarak enjekte edilmistir. Klinik hastalilZIskorlarü antijen baglElsplenositIer ile tedaviden sonrakilerle klýlaslanmlgtlîl (Sekil 14A). Beyin ve toplanmlgtlîl Paneld A'dan farelerden kesitler, PLP proteini ve CD45 için boyanmlStlEl(SekiI 14B). Panel C'den farelerden omurilik kesitleri, Luxol Fast Blue ile boyanmlStlEl(Sekil 14D). Demiyelinasyon ve hücresel infiltrasyon alanlarü oklar ile gösterilmektedir. Sonuçlar, toleranleJ, adoptif EAE ile farelerde PLP139-151-PLG partiküller ile Indüklendigini göstermektedir. sonra aktif EAE ve adoptif EAE ile farelerin ortalama klinik skorlarIElgösteren grafikleri göstermektedir. Farelere, hastalilZl indüksiyonundan 10 gün (Sekil 15A) veya 2 gün (Sekil veya OVA323.339 - PLG peptidi enjekte edilmistir ve ortalama klinik skor belirlenmistir. Her iki durumda, PLP139-151-PLG partiküllerinin uygulanmasIlEl, hastalig'llîlazaltmaktadß tolerans indüksiyonunun göstergesidir. Merkezi sinir sistemi immün hücrelerinin infiltrasyonunun da PLP-PLG tolerize farelerde çarplEiISekilde azaltüBiaktadlEl SJL/J farelerine, adoptif aktarIiEIIe EAE indüksiyonundan 2 gün sonra PLP ile baglanan 500nm PLG nanopartikülü enjekte edilmistir. Hastaligl zirvesinde (gün 14), beyinler ve omurilikler çilZlarilüilgtlEl ve lenfositlerin (Sekil , periferik dendritik hücrelerin (Sekil 16E), miyeloid dendritik hücrelerin (Sekil 16F) ve makrofajlarI (Sekil 16G), aklgl sitometrisi ile numaralandlülmlgtlü Bu popülasyonlar için kapllâma stratejisi (Sekil 16A)'da gösterilmektedir. CNS hücre preparasyonlarüIL-17A ve IFN-y (Sekil 16H) için hücre içi boyamadan önce 5 sa boyunca PMA ve iyonomisin ile uyarilüîlgtlîl Bir ant/-PD-J monok/ona/ ant/`koru 17e feda VI, adoptif aktarlcîi EAEîç/nde PLP139451 'I` enkapsüle eden PLG nanoparÜkÜ//eri ile to/erans ihdÜkSIi/onunu ka/dÜnaktadE Gün 0'da adoptif EAE ile farelercle PLP139-151 ile indüklenmis toleransta bir anti-PD-l antikoru aktiflestirilmis T-hücresi patlamalarElalmlStlEl Gün 2'de, PBS veya bir anti-PD-l antikoru ile PBS almlstE Sekil 17'de gösterildigi üzere, bir PLG partikülünde enkapsüle PLP139-151 peptidinin uygulanmasü partikül PBS ile uyguland[g].a toleransElindüklemektedir. Fakat, anti-PD-l antikorunun uygulanmasÇlbu toleransüzaltmaktadlü Bir ant/-CD40 monok/ona/ ant/koru ile fedai/I, bir [L-JZ'ye bagm/Sek//de adoptif ekte/'157) EAES/hde PLP139451'/ enkapsü/e ede/7 PLG nanopa/ÜkÜ//er/ ile to/erans /ndÜ/(S/yonunu ka/dÜnaktadE Gün 0'da adoptif EAE ile farelercle PLP139-151 ile indüklenmis toleransta bir agonistik anti-CD40 antikoru ile tedavinin etkisini test etmek için, fareler, intravenöz uygulama vasEislîLIa 3x106 PLP139-151 aktiflestirilmis T-hücresi patlamalarßlmlstü Gün 2'de, fareler, intravenöz uygulama hayvanlar, bir kontrol IgG2a antikor, bir anti-CD40 antikoru veya bir anti-CD40 antikoru ve bir anti-Il-12 antikorunu almlStlE Sekil 18'de gösterildigi üzere, partikül PBS ile uygulandiglia bir PLG partikülünde enkapsüle edilen PLP139-151 peptidinin uygulanmasütoleransElndükIemektedir. Bir anti-CD40 antikorun uygulanmasü bu toleransüazaltmaktadlü fakat toleranstaki bu azalma, bir anti-IL-12 antikorunun eklentisi ile tersine çevrilmektedir. Bir ant/-PD-J monok/ona/ ant/`koru 17e feda VI, adoptif aktarlcîi EAEîç/nde PLP139451 'I` enkapsüle eden PLG nanoparÜkÜ//eri ile to/erans ihdÜkSIi/onunu ka/dÜnaktadE Gün 0'da adoptif EAE ile farelercle PLP139-151 ile indüklenmis toleransta bir anti-PD-l antikoru aktiflestirilmis T-hücresi patlamalarElalmlStlEl Gün 2'de, PBS veya bir anti-PD-l antikoru ile PBS almlstE Sekil 17'de gösterildigi üzere, bir PLG partikülünde enkapsüle PLP139-151 peptidinin uygulanmasü partikül PBS ile uyguland[g].a toleransElindüklemektedir. Fakat, anti-PD-l antikorunun uygulanmasÇlbu toleransüzaltmaktadlü Bir ant/-CD40 monok/ona/ ant/koru ile fedai/I, bir [L-JZ'ye bagm/Sek//de adoptif ekte/'157) EAES/hde PLP139451'/ enkapsü/e ede/7 PLG nanopa/ÜkÜ//er/ ile to/erans /ndÜ/(S/yonunu ka/dÜnaktadE Gün 0'da adoptif EAE ile farelercle PLP139-151 ile indüklenmis toleransta bir agonistik anti-CD40 antikoru ile tedavinin etkisini test etmek için, fareler, intravenöz uygulama vasEislîLIa 3x106 PLP139-151 aktiflestirilmis T-hücresi patlamalarßlmlstü Gün 2'de, fareler, intravenöz uygulama hayvanlar, bir kontrol IgG2a antikor, bir anti-CD40 antikoru veya bir anti-CD40 antikoru ve bir anti-Il-12 antikorunu almlStlE Sekil 18'de gösterildigi üzere, partikül PBS ile uygulandiglia bir PLG partikülünde enkapsüle edilen PLP139-151 peptidinin uygulanmasütoleransElndükIemektedir. Bir anti-CD40 antikorun uygulanmasü bu toleransüazaltmaktadlü fakat toleranstaki bu azalma, bir anti-IL-12 antikorunun eklentisi ile tersine çevrilmektedir. PLG part/kü//er/nde enkapsüle OVA, a/erj/'k solunum yolu infîamasyonunu ve in w'i/o 0144 'ya özgü 7772 yanürWrOÜYakt/k olarak inh/be etmektedir Solunum yolu inflamasyonunda PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nI profilaktik etkisini test etmek için, fareler, gün -7'de OVA-PLG ile intravenöz olarak tedavi edilmistir. Gün 0'da, fareler, 10 tig/fare bir dozda OVA/Alum'un intraperitoneal enjeksiyonlarElalmlStlEl Gün 7'de, fareler tekrardan OVA-PLG ile intravenöz olarak tedavi edilmistir ve gün 14'te OVA/Alum ip enjeksiyonunu 10 tig/fare ip olarak almlgtlEl Gün 28 ve 30 arasIa, fareler, aerosollestirilmis OVA ile üç defa tedavi edilmistir. Sekil 19'da gösterildigi üzere, OVA-PLG'nin profilaktik uygulamaslZIIL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 salg müzaltmlgtîlve akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azaltmlStlB PLG partiküllerinde enkapsüle OVA, mediastinal lenf bezlerinden OVA'ya özgü in vitro anIisama yanlfllarlüarofilaktik olarak inhibe etmektedir. Sekil 20A'da gösterildigi üzere, 25 ug OVA ile yeniden uyarIidan sonra gözlemlenen lenf bezi proliferasyonu, OVA-PLG ile tedavi edilen bu hayvanlarda azaltllBraktadB DahasIZOVA-PLG ile tedavi, OVA ile yeniden uyarldan sonra sitokinlerin salIiIElazaltmaktadlEl Sekil 20B, IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 seviyelerinin, OVA-PLG ile tedavi edilen farelerde azaltIlglllzlJöstermektedir. PLG parti/(Ü//er/'nde enkapsüle OVA, a/erj/k solunum yolu inflamasyonunu ve in Viva Ol/A 'ya özgü ThZ yanßkrmerapöt/k olarak Inn/'be etmektedir Solunum yolu inflamasyonunda PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nI profilaktik etkisini test etmek için, Fareler, gün 0'da ve gün 14'te 10ug/fare dozunda OVA/Alum ile intraperitoneal olarak tedavi edilmistir. Farelere, gün 28 ve 42'de intravenöz olarak OVA-PLG uygulanmlStlEl Gün 56 ila 58 arasIia, fareler, aerosollestirilmis OVA ile üç defa tedavi edilmistir. Sekil 21'de gösterildigi üzere, OVA-PLG'nin terapötik uygulamasüIL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 salg müzaltmlgtlîlve akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azaltmlgtlB Sekil 22, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nlE, BAL s-a OVA'ya özgü Th2 Sitokinlerini, OVA-bagIEPLG partiküllerinden daha iyi terapötik olarak asagüjüzenledigini göstermektedir. PLG part/kü//er/nde enkapsüle OVA, a/erj/'k solunum yolu infîamasyonunu ve in w'i/o 0144 'ya özgü 7772 yanürWrOÜYakt/k olarak inh/be etmektedir Solunum yolu inflamasyonunda PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nI profilaktik etkisini test etmek için, fareler, gün -7'de OVA-PLG ile intravenöz olarak tedavi edilmistir. Gün 0'da, fareler, 10 tig/fare bir dozda OVA/Alum'un intraperitoneal enjeksiyonlarElalmlStlEl Gün 7'de, fareler tekrardan OVA-PLG ile intravenöz olarak tedavi edilmistir ve gün 14'te OVA/Alum ip enjeksiyonunu 10 tig/fare ip olarak almlgtlEl Gün 28 ve 30 arasIa, fareler, aerosollestirilmis OVA ile üç defa tedavi edilmistir. Sekil 19'da gösterildigi üzere, OVA-PLG'nin profilaktik uygulamaslZIIL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 salg müzaltmlgtîlve akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azaltmlStlB PLG partiküllerinde enkapsüle OVA, mediastinal lenf bezlerinden OVA'ya özgü in vitro anIisama yanlfllarlüarofilaktik olarak inhibe etmektedir. Sekil 20A'da gösterildigi üzere, 25 ug OVA ile yeniden uyarIidan sonra gözlemlenen lenf bezi proliferasyonu, OVA-PLG ile tedavi edilen bu hayvanlarda azaltllBraktadB DahasIZOVA-PLG ile tedavi, OVA ile yeniden uyarldan sonra sitokinlerin salIiIElazaltmaktadlEl Sekil 20B, IL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 seviyelerinin, OVA-PLG ile tedavi edilen farelerde azaltIlglllzlJöstermektedir. PLG parti/(Ü//er/'nde enkapsüle OVA, a/erj/k solunum yolu inflamasyonunu ve in Viva Ol/A 'ya özgü ThZ yanßkrmerapöt/k olarak Inn/'be etmektedir Solunum yolu inflamasyonunda PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nI profilaktik etkisini test etmek için, Fareler, gün 0'da ve gün 14'te 10ug/fare dozunda OVA/Alum ile intraperitoneal olarak tedavi edilmistir. Farelere, gün 28 ve 42'de intravenöz olarak OVA-PLG uygulanmlStlEl Gün 56 ila 58 arasIia, fareler, aerosollestirilmis OVA ile üç defa tedavi edilmistir. Sekil 21'de gösterildigi üzere, OVA-PLG'nin terapötik uygulamasüIL-4, IL-5, IL-13 ve IL-10 salg müzaltmlgtlîlve akcigerde serum OVA IgE ve eozinofillerin seviyelerini azaltmlgtlB Sekil 22, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA'nlE, BAL s-a OVA'ya özgü Th2 Sitokinlerini, OVA-bagIEPLG partiküllerinden daha iyi terapötik olarak asagüjüzenledigini göstermektedir. Hayvanlar, gün 28 ve 42'de, farelerin, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA veya PLG partiküllerine baglanan OVA ile tedavi edilmesinin haricinde yukarth açlKland[gll:gibi tedavi edilmistir. SaslEillEJJIr sekilde, enkapsüle (OVA), PLG partikülünün yüzeyine baglanan OVA peptidinden daha fazla Th2 sitokinlerinin saIg-ühhibe etmistir. Kromograni's A ,031 peptidi-PLG part/külleri i/e indüklenen tolerans, Tip 1 diyabet/ inh/be etmekted/'r Tip 1 diyabet, 3 haftada farelerden dalak, aksiller, brakiyal, inguinal ve pankreas lenf bezi hücrelerini izole ederek BDC2.5 farelerinde indüklenmistir. Izole hücreler, 96 saat boyunca 0.5uM p31 peptidi ile 2x106 hücre/mL inkube ederek in vitro kültürlenmistir ve aktif hale getirilmistir. intravenöz uygulama vasiüslîla aktarilBilStB Fareler, 2 saat ila 3 gün sonra SP veya PLG 2'ye baglanan p31 veya MOG35-55 peptidi ile intravenöz uygulama vasitâslýla tolere edilmistir. Sekil 23A ve 238, tedaviden sonra hayvanlarda kan glikoz seviyelerini göstermektedir. p31 peptidi bagIElPLG uygulamasÇl MOG35.55 peptit baglüpartiküller ile uygulamadan sonra görülenlere klýlasla daha düsük kan glikoz seviyelerine neden olmustur. Sekil 23, hayvanlarda gözlemlenen IFNy salgllâylElJhücrelerin yüzdesi ayrlEb MOG35.55 peptidi-PLG ile tedavi edilmis fareler ile klýiaslanan p31-PLG ile tedavi edilmis farelerde azaltlihlgtlîl p31-PLG ile indüklenmis tolerans, Tregs gerektirmektedir. Tip 1 diyabet, yukarlîib açilîland[gil:l gibi farelerde indüklenmistir ve aktiflestirilmis hücrelerin NOD.SCID farelerine aktarllBiasIan iki saat sonra, fareler, p31-PLG veya MOG35.55 PLG partikülleri ile tolere edilmistir. Sekil 24'te gösterildigi üzere, tregs bosalmaslÇl p31-PLG partiküllerinin uygulanmasElile indüklenen toleransüiald EnaktadEl gel/S/m/hi lnb/'be etmektedir NOD farelerine, 6, 8 ve 10 haftallE yasta intravenöz uygulama vasltâslýla BSA (N=22) veya Hayvanlar, gün 28 ve 42'de, farelerin, PLG partiküllerinde enkapsüle OVA veya PLG partiküllerine baglanan OVA ile tedavi edilmesinin haricinde yukarth açlKland[gll:gibi tedavi edilmistir. SaslEillEJJIr sekilde, enkapsüle (OVA), PLG partikülünün yüzeyine baglanan OVA peptidinden daha fazla Th2 sitokinlerinin saIg-ühhibe etmistir. Kromograni's A ,031 peptidi-PLG part/külleri i/e indüklenen tolerans, Tip 1 diyabet/ inh/be etmekted/'r Tip 1 diyabet, 3 haftada farelerden dalak, aksiller, brakiyal, inguinal ve pankreas lenf bezi hücrelerini izole ederek BDC2.5 farelerinde indüklenmistir. Izole hücreler, 96 saat boyunca 0.5uM p31 peptidi ile 2x106 hücre/mL inkube ederek in vitro kültürlenmistir ve aktif hale getirilmistir. intravenöz uygulama vasiüslîla aktarilBilStB Fareler, 2 saat ila 3 gün sonra SP veya PLG 2'ye baglanan p31 veya MOG35-55 peptidi ile intravenöz uygulama vasitâslýla tolere edilmistir. Sekil 23A ve 238, tedaviden sonra hayvanlarda kan glikoz seviyelerini göstermektedir. p31 peptidi bagIElPLG uygulamasÇl MOG35.55 peptit baglüpartiküller ile uygulamadan sonra görülenlere klýlasla daha düsük kan glikoz seviyelerine neden olmustur. Sekil 23, hayvanlarda gözlemlenen IFNy salgllâylElJhücrelerin yüzdesi ayrlEb MOG35.55 peptidi-PLG ile tedavi edilmis fareler ile klýiaslanan p31-PLG ile tedavi edilmis farelerde azaltlihlgtlîl p31-PLG ile indüklenmis tolerans, Tregs gerektirmektedir. Tip 1 diyabet, yukarlîib açilîland[gil:l gibi farelerde indüklenmistir ve aktiflestirilmis hücrelerin NOD.SCID farelerine aktarllBiasIan iki saat sonra, fareler, p31-PLG veya MOG35.55 PLG partikülleri ile tolere edilmistir. Sekil 24'te gösterildigi üzere, tregs bosalmaslÇl p31-PLG partiküllerinin uygulanmasElile indüklenen toleransüiald EnaktadEl gel/S/m/hi lnb/'be etmektedir NOD farelerine, 6, 8 ve 10 haftallE yasta intravenöz uygulama vasltâslýla BSA (N=22) veya insülin (N=23) baglElPLG partikülleri ile tedavi edilmistir. Fareler daha sonrasIa kari glikozu 250 mg/dL olarak tanllanmlg diyabetlerin gelisimi için degerlendirilmistir. Sekil 25'te gösterildigi üzere, insülin bagllZPLG partiküllerinin uygulanmasü300 gün boyunca diyabet Asdâma kmet/k/er Disi CD45.2 fareleri, gün-7'de OVA-PLG veya kontrol peptidi Dby-PLG (Erkek C57BL/6 fareleri taraf-an eksprese edilen ana H-Y antijeni) ile tolere edilmistir. Gün -1'de, fareler, 200 @E 1x107 kemik iligi hücreleri ile transplante edilmistir. AlEEfareler daha sonrasIa gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolere edilmistir ve kimerizmin FACS analizi için kan toplanmlgtlEl Sekil 26, allaîlfarelerde gözlemlenen CD45.1 donör hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Sekil 27, gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolerizasyondan sonra aIlEEfareIerde donör CD45.1 hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Bir pozitif kontrol faresi, önemli melezlesme (NO/010) sergilememistir. Tüm negatif kontrol fareleri, donör hücrelerini asllâmamlgtlB Bir Dby-SP fareleri, önemli asllâma (NO/010) sergilememistir. Iki OVA-PLG farelerine donör hücreleri asllânmlStIE(~°/010); Hafta 16'da tamamen reddedilmis. Bir Dby- PLG fare, Hafta 12'de reddetmeye baslamlgtlîive Hafta 16'da boyunca %10'da olmustur. Dby-PLG grubu, Hafta 16'da %10-0/056 asllâma aral[g]Ida olmustur. OVA-PLG fareleri sunlarlZl göstermistir: 1) Spontane asüâma, 2) OVA323 ve Dby araleUa sekans homolojisi veya 3) partiküllerin tolerojenik özellikleri. Dby-PLG, Dby-SP ve OVA-PLG'den daha fazla asilâmaya olanak saglamaktadlEl Sekil 28, zamanlama toleransIlEl, alwarede CD45.1 hücrelerinin yüzdesinde bir etkiye sahip oldugunu göstermektedir. Pozitif Kontroller, beklenenden (~%10) daha az asilâma (~%4) göstermektedir. Bir Negatif kontrol faresi, tüm 3 OVA-PLG gruplar dElEUa %5 asllâmaya sahip olmustur, Gün -7'de, Gün +1'de grubunda bir fare, asllâma göstermistir (%12). 1. günde tolerans, Gün -7'de toleranstan klinik olarak çok daha iliskilidir. insülin (N=23) baglElPLG partikülleri ile tedavi edilmistir. Fareler daha sonrasIa kari glikozu 250 mg/dL olarak tanllanmlg diyabetlerin gelisimi için degerlendirilmistir. Sekil 25'te gösterildigi üzere, insülin bagllZPLG partiküllerinin uygulanmasü300 gün boyunca diyabet Asdâma kmet/k/er Disi CD45.2 fareleri, gün-7'de OVA-PLG veya kontrol peptidi Dby-PLG (Erkek C57BL/6 fareleri taraf-an eksprese edilen ana H-Y antijeni) ile tolere edilmistir. Gün -1'de, fareler, 200 @E 1x107 kemik iligi hücreleri ile transplante edilmistir. AlEEfareler daha sonrasIa gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolere edilmistir ve kimerizmin FACS analizi için kan toplanmlgtlEl Sekil 26, allaîlfarelerde gözlemlenen CD45.1 donör hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Sekil 27, gün 1'de OVA-PLG, Dby-SP veya Dby-PLG ile tolerizasyondan sonra aIlEEfareIerde donör CD45.1 hücrelerinin yüzdesini göstermektedir. Bir pozitif kontrol faresi, önemli melezlesme (NO/010) sergilememistir. Tüm negatif kontrol fareleri, donör hücrelerini asllâmamlgtlB Bir Dby-SP fareleri, önemli asllâma (NO/010) sergilememistir. Iki OVA-PLG farelerine donör hücreleri asllânmlStIE(~°/010); Hafta 16'da tamamen reddedilmis. Bir Dby- PLG fare, Hafta 12'de reddetmeye baslamlgtlîive Hafta 16'da boyunca %10'da olmustur. Dby-PLG grubu, Hafta 16'da %10-0/056 asllâma aral[g]Ida olmustur. OVA-PLG fareleri sunlarlZl göstermistir: 1) Spontane asüâma, 2) OVA323 ve Dby araleUa sekans homolojisi veya 3) partiküllerin tolerojenik özellikleri. Dby-PLG, Dby-SP ve OVA-PLG'den daha fazla asilâmaya olanak saglamaktadlEl Sekil 28, zamanlama toleransIlEl, alwarede CD45.1 hücrelerinin yüzdesinde bir etkiye sahip oldugunu göstermektedir. Pozitif Kontroller, beklenenden (~%10) daha az asilâma (~%4) göstermektedir. Bir Negatif kontrol faresi, tüm 3 OVA-PLG gruplar dElEUa %5 asllâmaya sahip olmustur, Gün -7'de, Gün +1'de grubunda bir fare, asllâma göstermistir (%12). 1. günde tolerans, Gün -7'de toleranstan klinik olarak çok daha iliskilidir. Kumar/'n-ö P/_GA partikül/eri, uygulamadan 24 saat sonra tespit edi/ememektedir Fareler, bir antijene veya antijen içermeyen bagllîblan kumarin-6 PLGA partikülü ile tedavi edilmistir. Sekil 29'da gösterildigi üzere, partiküller, uygulamadan sonra 3 saatte tespit edilebilmistir, fakat uygulamadan sonra 24 saatte tespit edilmemistir. Enjeksiyon sonrasEB saatte (orta lei) ve enjeksiyon sonrasEl24 saatte (alt slBi) i.v. floresan PLGA/PMEA mikropartiküllerinin enjekte edildigi fare dalagEdsol kolon), karaciger (orta kolon) ve akcigere (sol kolon) klýbsla naif enjekte edilmemis fare (üst sig), DAPI ile karsiElboyanmlStlEl Nanopa/Iikü//ec in i/ii/o makrafaj/ar i/e bir/estiri/mektedir Uygulamadan 6 saat ve 15 saat sonraki karaciger analizi, PLGA partiküllerinin, karacigerdeki F4/80* hücreleri ile birlikte lokalize oldugunu göstermektedir (Sekil 30). Marjinal bölge makrofajlarüintravenöz Infüzyondan 24 saat sonra TAMRA Isaretli PLP 139.151- bagllîbartikülleri baskI bir sekilde almaktadlEl Sekil 31'de gösterildigi üzere, en yüksek PLP139-151+ hücre yüzdesi, marjinal bölge makrofajlarllü Çekirdek/eri içer/;sinde çözülebiiir PLP139-I5J içeren yüzeyi fonksiyon/anmg poli(lakÜt-ko- giiko/it) partiküller/ni kullanarak SJL/ J fare/erde R-EAE 'nin mhibisyonu SJL/J fare gruplar., Gün 0'da PLP139- 151/CFA ile astarlamdan önce Gün -7'de ve Gün - fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, IV olarak enjekte edilmistir. Kontrol fareleri, Gün 0'da astarlanmßtlü fakat Gün -7'de veya Gün -1'de partikül tedavisini almamlgtlü Fareler, 20 gün boyunca daha R-EAE'nin klinik isaretleri için gözlemlenmistir. Sekil 32'de gösterilen sonuçlar, PLP139-151/CFA astarlama günü say- karsElgünlük ortalama klinik skoru göstermektedir. PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmg poli(laktit-ko-glikolit) Kumar/'n-ö P/_GA partikül/eri, uygulamadan 24 saat sonra tespit edi/ememektedir Fareler, bir antijene veya antijen içermeyen bagllîblan kumarin-6 PLGA partikülü ile tedavi edilmistir. Sekil 29'da gösterildigi üzere, partiküller, uygulamadan sonra 3 saatte tespit edilebilmistir, fakat uygulamadan sonra 24 saatte tespit edilmemistir. Enjeksiyon sonrasEB saatte (orta lei) ve enjeksiyon sonrasEl24 saatte (alt slBi) i.v. floresan PLGA/PMEA mikropartiküllerinin enjekte edildigi fare dalagEdsol kolon), karaciger (orta kolon) ve akcigere (sol kolon) klýbsla naif enjekte edilmemis fare (üst sig), DAPI ile karsiElboyanmlStlEl Nanopa/Iikü//ec in i/ii/o makrafaj/ar i/e bir/estiri/mektedir Uygulamadan 6 saat ve 15 saat sonraki karaciger analizi, PLGA partiküllerinin, karacigerdeki F4/80* hücreleri ile birlikte lokalize oldugunu göstermektedir (Sekil 30). Marjinal bölge makrofajlarüintravenöz Infüzyondan 24 saat sonra TAMRA Isaretli PLP 139.151- bagllîbartikülleri baskI bir sekilde almaktadlEl Sekil 31'de gösterildigi üzere, en yüksek PLP139-151+ hücre yüzdesi, marjinal bölge makrofajlarllü Çekirdek/eri içer/;sinde çözülebiiir PLP139-I5J içeren yüzeyi fonksiyon/anmg poli(lakÜt-ko- giiko/it) partiküller/ni kullanarak SJL/ J fare/erde R-EAE 'nin mhibisyonu SJL/J fare gruplar., Gün 0'da PLP139- 151/CFA ile astarlamdan önce Gün -7'de ve Gün - fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, IV olarak enjekte edilmistir. Kontrol fareleri, Gün 0'da astarlanmßtlü fakat Gün -7'de veya Gün -1'de partikül tedavisini almamlgtlü Fareler, 20 gün boyunca daha R-EAE'nin klinik isaretleri için gözlemlenmistir. Sekil 32'de gösterilen sonuçlar, PLP139-151/CFA astarlama günü say- karsElgünlük ortalama klinik skoru göstermektedir. PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmg poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri kullanilârak immünolojik tolerans indüksiyonu ile SJL/J farelerinde inhibe edilmektedir. Çözü/ebi/ir ovalbumin içeren yüzeyi fonksiyon/mm& poii(/aktit-k0-g/ik0/it) part/kÜ//eri i/e a/eijik solunum yo/u infiamasyonun inhibisyonu Alerjik solunum yolu inflamasyonu (AIA), farelerde indüklenmistir. BaIb/c fare gruplar., Gün 0'da ve +14'de ovalbumin/alum ile astarlamadan önce Gün -7'de ve Gün +7'de çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumin veya çözülebilir bovin serum albumini (kontrol) ile 2.5 mg 500 nm - 700 nm yüzeyi fonksiyonlanmE poli)laktit-ko-glikolit), intravenöz olarak enjekte edilmistir. Farelere, Gün +28 ila 30'da aerosollenmis ovalbumin uygulanmlgtlü Fareler daha sonrasEtla feda edilmistir ve bronkoalveolar lavaj sli-Llîlîlelde edilmistir. Ovalbumine özgü IgE'nin serum seviyeleri de ölçülmüstür. Bronkoalveoler lavaj slîlgjçerisinde eozinofil sayilârÇlAAI siddetini göstermektedir - daha yüksek sayi, en kötü hastaliglîlgöstermistir. IgE'nin serum seviyeleri, AAI siddetini göstermektedir - daha yüksek seviyeler, en kötü hastallgiügiöstermistir. Sekil 33, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, eozinofil akümülasyonunda en büyük azalmaylîtergiledigini göstermektedir. Sekil 34, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, tedavi edilmemis veya kontrollü tedavi edilmis farelere klîiasla serum IgE seviyelerinde en büyük azalmayßergiledigini göstermektedir. Balb/c farelerinde ovalbumin/alum ile indüklenmis alerjik solunum yolu inflamasyonu, çekirdekler içerisinde çözülebilir ovalbumin içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-/(0 glikolit) partiküllerini kullanarak immünolojik toleransIindüksiyonu ile inhibe edilmistir. Mevcut Örnek, yüksek yogunlukta karboksilat gruplarEile yüzeyi fonksiyonlanmlgl olan ve otoimmün hastalikta tolerans indüksiyonu için ve alerji tedavisi için bir poli(laktit-k0-glikolit) partikülleri kullanilârak immünolojik tolerans indüksiyonu ile SJL/J farelerinde inhibe edilmektedir. Çözü/ebi/ir ovalbumin içeren yüzeyi fonksiyon/mm& poii(/aktit-k0-g/ik0/it) part/kÜ//eri i/e a/eijik solunum yo/u infiamasyonun inhibisyonu Alerjik solunum yolu inflamasyonu (AIA), farelerde indüklenmistir. BaIb/c fare gruplar., Gün 0'da ve +14'de ovalbumin/alum ile astarlamadan önce Gün -7'de ve Gün +7'de çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumin veya çözülebilir bovin serum albumini (kontrol) ile 2.5 mg 500 nm - 700 nm yüzeyi fonksiyonlanmE poli)laktit-ko-glikolit), intravenöz olarak enjekte edilmistir. Farelere, Gün +28 ila 30'da aerosollenmis ovalbumin uygulanmlgtlü Fareler daha sonrasEtla feda edilmistir ve bronkoalveolar lavaj sli-Llîlîlelde edilmistir. Ovalbumine özgü IgE'nin serum seviyeleri de ölçülmüstür. Bronkoalveoler lavaj slîlgjçerisinde eozinofil sayilârÇlAAI siddetini göstermektedir - daha yüksek sayi, en kötü hastaliglîlgöstermistir. IgE'nin serum seviyeleri, AAI siddetini göstermektedir - daha yüksek seviyeler, en kötü hastallgiügiöstermistir. Sekil 33, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, eozinofil akümülasyonunda en büyük azalmaylîtergiledigini göstermektedir. Sekil 34, enkapsüle OVA-PLG ile tedavi edilmis farelerin, tedavi edilmemis veya kontrollü tedavi edilmis farelere klîiasla serum IgE seviyelerinde en büyük azalmayßergiledigini göstermektedir. Balb/c farelerinde ovalbumin/alum ile indüklenmis alerjik solunum yolu inflamasyonu, çekirdekler içerisinde çözülebilir ovalbumin içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-/(0 glikolit) partiküllerini kullanarak immünolojik toleransIindüksiyonu ile inhibe edilmistir. Mevcut Örnek, yüksek yogunlukta karboksilat gruplarEile yüzeyi fonksiyonlanmlgl olan ve otoimmün hastalikta tolerans indüksiyonu için ve alerji tedavisi için bir poli(laktit-k0-glikolit) ile çevrelenen çekirdekler içerisindeki çözülebilir antijeni içeren biryolojik olarak bozulabilir poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin formülasyonunu ve klgini karakterizasyonunu ayriEtElândlEnaktadiB Yüksek yogunlukta karboksilat gruplar, poli(etilen-a/t-maleik anhidrit (PEMA)) kullanliü emülsifikasyon süreci için sürfaktan olarak omurgasiEh dahil edilen karboksilat gruplarEîçeren bir polimer ile elde edilmistir. Yukarlâia açiiZJandigiEigibi, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren ve yüksek yogunlukta karboksilat gruplarla yüzeyi fonksiyonlandlElân biyolojik olarak bozulabilir poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, multipl sklerozun SJL/J PLP139-151/CFA ile indüklenmis R- EAE mürin modelinde immünolojik tolerans indüksiyonu için etkilidir. DahasÇi çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumin içeren ve yüksek yogunlukta karobksilat gruplarEile yüzeyi fonksiyonlanmg biyolojik olarak bozulabilir polilaktit-ko-glikolit) partikülleri, alerjik astIia yönelik BaIb/c ovalbumin/alum ile indüklenmis AAI mürin modelinde immünolojik tolerans indüksiyonu için etkilidir. Çekirdekler içerisinde çözülebilir ovalbumin veya bovin serum albumini Içeren ve yüksek yogunlukta karboksilat gruplarlZiIe yüzeyi fonksiyonlanmEl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, asag-ki gibi bir çift emülsiyon-solvent buharlastiüina yöntemi kullan [Iârak sentezlenmistir: 1. endotoksin içermeyen suda 200 mg/mL ovalbumin veya bovin serum albuminden 150 uL'si, bir 20 mL sintilasyon sisesindeki diklorometanda 2 mL aglEliIKi'hacim cinsinden %20 poli(laktit-ko-glikolite) damlatliârak eklenmistir. 2. Elde edilen karElEi, buza yerlestirilmistir ve bir prob sonikatörü kullanilârak 10 watta 30 saniye boyunca sonike edilmistir. 3. Suya 10 mL %1 aglElliiZl'hacim cinsinden poli(etilen-a/t-maleik anhidrit) eklenmistir. 4. Elde edilen karlgirîii, buza yerlestirilmistir ve bir prob sonikatörü kullanilârak 16 watta 30 saniye boyunca sonike edilmistir. . Elde edilen emülsiyon, 600 mL bir beherglasta 200 mL %0.5 aglEiiiiZJ/hacim cinsinden poii(etilen-a/t-maleik anhidrite) dökülmüstür ve partikülün sertlesmesine izin vermek üzere gece boyunca karigtiüißiigtiîi 6. Sertlestirilmis paritküller daha sonrasIa santrifüjleme ile saflastlElBiiStiEi ve pH 9.6 bikarbonat tamponu ile 3 defa yilâanm !Stiü 7. SaflastlElIBüS partiküller, suda %4 ag [HiiiZYhacim cinsinden sakarozda ve %3 ile çevrelenen çekirdekler içerisindeki çözülebilir antijeni içeren biryolojik olarak bozulabilir poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin formülasyonunu ve klgini karakterizasyonunu ayriEtElândlEnaktadiB Yüksek yogunlukta karboksilat gruplar, poli(etilen-a/t-maleik anhidrit (PEMA)) kullanliü emülsifikasyon süreci için sürfaktan olarak omurgasiEh dahil edilen karboksilat gruplarEîçeren bir polimer ile elde edilmistir. Yukarlâia açiiZJandigiEigibi, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren ve yüksek yogunlukta karboksilat gruplarla yüzeyi fonksiyonlandlElân biyolojik olarak bozulabilir poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, multipl sklerozun SJL/J PLP139-151/CFA ile indüklenmis R- EAE mürin modelinde immünolojik tolerans indüksiyonu için etkilidir. DahasÇi çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumin içeren ve yüksek yogunlukta karobksilat gruplarEile yüzeyi fonksiyonlanmg biyolojik olarak bozulabilir polilaktit-ko-glikolit) partikülleri, alerjik astIia yönelik BaIb/c ovalbumin/alum ile indüklenmis AAI mürin modelinde immünolojik tolerans indüksiyonu için etkilidir. Çekirdekler içerisinde çözülebilir ovalbumin veya bovin serum albumini Içeren ve yüksek yogunlukta karboksilat gruplarlZiIe yüzeyi fonksiyonlanmEl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, asag-ki gibi bir çift emülsiyon-solvent buharlastiüina yöntemi kullan [Iârak sentezlenmistir: 1. endotoksin içermeyen suda 200 mg/mL ovalbumin veya bovin serum albuminden 150 uL'si, bir 20 mL sintilasyon sisesindeki diklorometanda 2 mL aglEliIKi'hacim cinsinden %20 poli(laktit-ko-glikolite) damlatliârak eklenmistir. 2. Elde edilen karElEi, buza yerlestirilmistir ve bir prob sonikatörü kullanilârak 10 watta 30 saniye boyunca sonike edilmistir. 3. Suya 10 mL %1 aglElliiZl'hacim cinsinden poli(etilen-a/t-maleik anhidrit) eklenmistir. 4. Elde edilen karlgirîii, buza yerlestirilmistir ve bir prob sonikatörü kullanilârak 16 watta 30 saniye boyunca sonike edilmistir. . Elde edilen emülsiyon, 600 mL bir beherglasta 200 mL %0.5 aglEiiiiZJ/hacim cinsinden poii(etilen-a/t-maleik anhidrite) dökülmüstür ve partikülün sertlesmesine izin vermek üzere gece boyunca karigtiüißiigtiîi 6. Sertlestirilmis paritküller daha sonrasIa santrifüjleme ile saflastlElBiiStiEi ve pH 9.6 bikarbonat tamponu ile 3 defa yilâanm !Stiü 7. SaflastlElIBüS partiküller, suda %4 ag [HiiiZYhacim cinsinden sakarozda ve %3 aglElllKl'hacim cinsinden D-manitolde yeniden süspanse edilmistir, slîlîl nitrojende dondurulmustur ve kuruyana kadar liyofilize edilmistir. Sekil 35, dinamik lgllîl saçlÜElllnalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmEl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlg poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye baslEla 1.792 x 105 sayIi oranlEUa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 584 nm bir Z-ortalama çapa, 679 nm bir zirve çap. ve 0.162 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarüla yazllIprotokolden sonra 6 sentez y[g`lIII temsilidir. Sekil 36, g-potansiyel ölçümü ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 6.67 x 104 sayIi oranlElda bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, -48.9 mV bir C-potansiyeline ve 5.14 mV bir Ç-potansiyeline sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarlîlh yazHJJbrotokolden sonra 6 sentez ylglIII temsilidir. Sekil 37, dinamik EUZJsaçEHîIlEanalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 1.822 x 105 sayIi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 569.7 nm bir Z-ortalama çapa, 700.3 nm bir zirve çaplEla ve 0.230 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarElla yazllDîbrotokolden sonra 3 sentez ylglIII temsilidir. Sekil 38, Ç-potansiyel ölçüm ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 2.67 X 104 sayIi oranla bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin popülasyonu, -52.2 mV bir Ç-potansiyeline ve 5.38 mV bir Ç-potansiyeline sahip olmustur. Bu aglElllKl'hacim cinsinden D-manitolde yeniden süspanse edilmistir, slîlîl nitrojende dondurulmustur ve kuruyana kadar liyofilize edilmistir. Sekil 35, dinamik lgllîl saçlÜElllnalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmEl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlg poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye baslEla 1.792 x 105 sayIi oranlEUa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 584 nm bir Z-ortalama çapa, 679 nm bir zirve çap. ve 0.162 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarüla yazllIprotokolden sonra 6 sentez y[g`lIII temsilidir. Sekil 36, g-potansiyel ölçümü ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-koglikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 6.67 x 104 sayIi oranlElda bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partiküllerinin popülasyonu, -48.9 mV bir C-potansiyeline ve 5.14 mV bir Ç-potansiyeline sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarlîlh yazHJJbrotokolden sonra 6 sentez ylglIII temsilidir. Sekil 37, dinamik EUZJsaçEHîIlEanalizi ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 1.822 x 105 sayIi oranIa bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern glikolit) partiküllerinin popülasyonu, 569.7 nm bir Z-ortalama çapa, 700.3 nm bir zirve çaplEla ve 0.230 bir polidispersite endeksine sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukarElla yazllDîbrotokolden sonra 3 sentez ylglIII temsilidir. Sekil 38, Ç-potansiyel ölçüm ile çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin karakterizasyonunu göstermektedir. Yüzeyi fonksiyonlanmlglpoli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, 18.2 M9 suda saniye bas. 2.67 X 104 sayIi oranla bir Malvern Zetasizer Nano ZS'de (Malvern Instruments, Westborough, MA) analiz edilmistir. Yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerinin popülasyonu, -52.2 mV bir Ç-potansiyeline ve 5.38 mV bir Ç-potansiyeline sahip olmustur. Bu sonuçlar, yukari yaziillbrotokolden sonra 3 sentez y[giIII temsilidir. Çek/?dek/er/ içer/;sinde gözü/em# PLP]39.151,II içeren yüzeyi fonksiyon/anmE/ipozom/ar, mu/t/p/ sklerozun mürin R-EAE mode/inde immünolojik ta/eransûîidÜ/(lemekted/'r Mucitler ayrIEla yüksek yogunlukta negatif olarak yüklenmis gruplar ile yüzeyi fonksiyonlanmlg olan ve çekirdekleri içerisinde çözülebilir antijeni içeren biyolojik olarak bozulabilir Iipozomal iletim vehiküllerinin, multipl sklerozun R-EAE mürin modelinde immünolojik toleransEI indükledigini kesfetmistir. Bu çaligmada kullanilân lipozomlar, 30:30:40 molar oranlariEUa fosfatidilkolin: fosfatidilgliserol:kolesterol Iipidlerinden olusmustur. SJL/J fare gruplarßb, Gün 0'da PLP139. ile500 nm - 700 nm yüzeyi fonksiyonlanmigi lipozom (fare basi 10 ;mei toplam Iipid) enjekte edilmistir. Kontrol fareleri, Gün 0'da astarlanmlSIlElve Gün -7'de çekirdekleri içerisinde basi 10 umol toplam Iipid) almiStiEi Fareler, 17 gün boyunca daha R-EAE'nin klinik isaretleri için gözlemlenmistir. Sonuçlar, PLP139-151/CFA astarlama günü say_ karsügünlük ortalama klinik skoru göstermektedir. Sekil 39'da gösterildigi gibi, çekirdekler içerisinde çözülebilir PLP139.151 peptidi ile yüzeyi fonksiyonlanmlgi Iiozomlar ile tedavi edilmis hayvanlar, çözülebilir OVA323-339 peptidini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlg Iipozomlarla tedavi edilen bu hayvanlardan daha düsük bir klinik skora sahip olmustur. Bu çalEinanI sonuçlarü çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren ve yüksek yogunlukta negatif olarak yüklenmis gruplarla yüzeyi fonksiyonlanmgi biyolojik olarak bozulabilir IipozomlariEl, multipl sklerozun SJL/J PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE mürin modelinde immünolojik tolerans. indüksiyonu için etkili oldugunu göstermektedir. Antijen bagIÜ/eya antijen enkapsüle partiküller ile indüklenmis tolerans, antijene özgü doza bagIiIEie uzun sümektedir (150 gün). Tolerans en iyi 5 -5- mV bir zeta potansiyeline sahip çapta 500nm ve 1 um arleUa baglEbir partikülün intravenöz uygulamasEile indüklenmistir. sonuçlar, yukari yaziillbrotokolden sonra 3 sentez y[giIII temsilidir. Çek/?dek/er/ içer/;sinde gözü/em# PLP]39.151,II içeren yüzeyi fonksiyon/anmE/ipozom/ar, mu/t/p/ sklerozun mürin R-EAE mode/inde immünolojik ta/eransûîidÜ/(lemekted/'r Mucitler ayrIEla yüksek yogunlukta negatif olarak yüklenmis gruplar ile yüzeyi fonksiyonlanmlg olan ve çekirdekleri içerisinde çözülebilir antijeni içeren biyolojik olarak bozulabilir Iipozomal iletim vehiküllerinin, multipl sklerozun R-EAE mürin modelinde immünolojik toleransEI indükledigini kesfetmistir. Bu çaligmada kullanilân lipozomlar, 30:30:40 molar oranlariEUa fosfatidilkolin: fosfatidilgliserol:kolesterol Iipidlerinden olusmustur. SJL/J fare gruplarßb, Gün 0'da PLP139. ile500 nm - 700 nm yüzeyi fonksiyonlanmigi lipozom (fare basi 10 ;mei toplam Iipid) enjekte edilmistir. Kontrol fareleri, Gün 0'da astarlanmlSIlElve Gün -7'de çekirdekleri içerisinde basi 10 umol toplam Iipid) almiStiEi Fareler, 17 gün boyunca daha R-EAE'nin klinik isaretleri için gözlemlenmistir. Sonuçlar, PLP139-151/CFA astarlama günü say_ karsügünlük ortalama klinik skoru göstermektedir. Sekil 39'da gösterildigi gibi, çekirdekler içerisinde çözülebilir PLP139.151 peptidi ile yüzeyi fonksiyonlanmlgi Iiozomlar ile tedavi edilmis hayvanlar, çözülebilir OVA323-339 peptidini içeren yüzeyi fonksiyonlanmlg Iipozomlarla tedavi edilen bu hayvanlardan daha düsük bir klinik skora sahip olmustur. Bu çalEinanI sonuçlarü çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren ve yüksek yogunlukta negatif olarak yüklenmis gruplarla yüzeyi fonksiyonlanmgi biyolojik olarak bozulabilir IipozomlariEl, multipl sklerozun SJL/J PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE mürin modelinde immünolojik tolerans. indüksiyonu için etkili oldugunu göstermektedir. Antijen bagIÜ/eya antijen enkapsüle partiküller ile indüklenmis tolerans, antijene özgü doza bagIiIEie uzun sümektedir (150 gün). Tolerans en iyi 5 -5- mV bir zeta potansiyeline sahip çapta 500nm ve 1 um arleUa baglEbir partikülün intravenöz uygulamasEile indüklenmistir. Tolerans indüksiyonu, polianyonik yüzeyleri gören MARCO çöpçü reseptörü ile partiküllerin (örn. karboksile PS/PLG partikülleri) alIilEla baglIlEl Tolerans, enerji (anti-PD-l ve agonistik anti-CD4O antikorlarüle klglnen tersine çevrilmektedir) ve iTregs'in (anti-CD25 antikorlarEile kßnen tersine çevrilmektedir) bir kombinasyonu ile indüklenmektedir ve sürdürülmektedir. Bulusun partikülleri, karaciger ve splenik marjinal bölge makrofajlarIa (CD11bhi CD baskI bir sekilde toplanmaktadE Bunlar, antijen darbeli veya antijene yönlendirilmis olgun olmayan tolerojenik dendritik hücreler veya antijene özgü Tregs'in tasarnlîlile klýbslanan otoimmün hastaliKlarII tedavisine yönelik antijen bagllîibartiküllerin kullanIia dair saylîlîlavantajlar mevcuttur. GMP kullanilarak üretilebilen, kullanma hazlEevrensel tolerojenik bir taslîzlajmllanarak tolerojen preparasyonunun ve indüksiyonun hEIillgiElve basitligi; organizma dglîida olgun olmayan dendritik hücrelerin veya Tregs'in izole edilmesine ve genisletilmesine ihtiyaç yoktur; organizma dISIImanipülasyondan sonra aktif hale gelen ve tolerojenikten ziyade uyarlEEIiiale gelen veya aktarn sonrasIa, Tregs'den Th1/17'ye dönüsen olgun olmayan dendritik hücrelerle ilgilenmeye gerek yoktur; bu olgun olmayan marjinal bölge APC'leri, antijeni tolerojenik bir sekilde isledigi ve temsil ettigi için, konak APC'ler, bozulmamlgloto-antijenleri veya doku ekstraktlarllîénkapsüle eden PLG partiküllerinden ilgili immünodomnan epitoplarEI seçebilmektedir (örn. OVA enkapsüle PLG partikülleri, OVA/Alum ile indüklenmis AAD'yi önlemektedir); ve protokol, herhangi bir bekleyen süpresyonu olmadan antijene özgüdür, güvenlidir, yüksek derecede etkilidir ve epitop yayHB'iasEîle dahil edilen efektör T hücrelerinde (Th1, Th2, Th 17 ve CD8) ve naif T hücrelerinde tepkisizligi indükleyebilmektedir. Senteitk, biyolojik olarak bozulabilir partiküller ve Iipozomlar, üretim kolayligilEb, genis terapötik madde mevcudiyetine yol açabilmistir ve potansiyel tedavi bölgelerinin say-III arttßbilmektedir. Sonuç olarak, sürfaktan poli(etilen-a/t-maleik anhidriti) kullanarak yüksek yogunlukta yüzey karboksilat gruplarla yüzeyi fonksiyonlanmlg biyolojik olarak bozulabilir poli(laktit-k0-glikolit) partiküllerini spesifik olarak tasarladllg Ayrü, 30:30:40 oranIa fosfatidilkolin:fosfatidilgliserol:kolesterol kullanarak yüzeyi fonksiyonlanmlâlipozomlarügelistirmistir. Kimyasal kontaminasyonu ve peptidin veya proteinin yüzey konjugasyonunu çevreleyen safllE sorunlarIElönlemek için çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini Içermek üzere bu partikülleri tasarladilîi Çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren bu yüzeyi Tolerans indüksiyonu, polianyonik yüzeyleri gören MARCO çöpçü reseptörü ile partiküllerin (örn. karboksile PS/PLG partikülleri) alIilEla baglIlEl Tolerans, enerji (anti-PD-l ve agonistik anti-CD4O antikorlarüle klglnen tersine çevrilmektedir) ve iTregs'in (anti-CD25 antikorlarEile kßnen tersine çevrilmektedir) bir kombinasyonu ile indüklenmektedir ve sürdürülmektedir. Bulusun partikülleri, karaciger ve splenik marjinal bölge makrofajlarIa (CD11bhi CD baskI bir sekilde toplanmaktadE Bunlar, antijen darbeli veya antijene yönlendirilmis olgun olmayan tolerojenik dendritik hücreler veya antijene özgü Tregs'in tasarnlîlile klýbslanan otoimmün hastaliKlarII tedavisine yönelik antijen bagllîibartiküllerin kullanIia dair saylîlîlavantajlar mevcuttur. GMP kullanilarak üretilebilen, kullanma hazlEevrensel tolerojenik bir taslîzlajmllanarak tolerojen preparasyonunun ve indüksiyonun hEIillgiElve basitligi; organizma dglîida olgun olmayan dendritik hücrelerin veya Tregs'in izole edilmesine ve genisletilmesine ihtiyaç yoktur; organizma dISIImanipülasyondan sonra aktif hale gelen ve tolerojenikten ziyade uyarlEEIiiale gelen veya aktarn sonrasIa, Tregs'den Th1/17'ye dönüsen olgun olmayan dendritik hücrelerle ilgilenmeye gerek yoktur; bu olgun olmayan marjinal bölge APC'leri, antijeni tolerojenik bir sekilde isledigi ve temsil ettigi için, konak APC'ler, bozulmamlgloto-antijenleri veya doku ekstraktlarllîénkapsüle eden PLG partiküllerinden ilgili immünodomnan epitoplarEI seçebilmektedir (örn. OVA enkapsüle PLG partikülleri, OVA/Alum ile indüklenmis AAD'yi önlemektedir); ve protokol, herhangi bir bekleyen süpresyonu olmadan antijene özgüdür, güvenlidir, yüksek derecede etkilidir ve epitop yayHB'iasEîle dahil edilen efektör T hücrelerinde (Th1, Th2, Th 17 ve CD8) ve naif T hücrelerinde tepkisizligi indükleyebilmektedir. Senteitk, biyolojik olarak bozulabilir partiküller ve Iipozomlar, üretim kolayligilEb, genis terapötik madde mevcudiyetine yol açabilmistir ve potansiyel tedavi bölgelerinin say-III arttßbilmektedir. Sonuç olarak, sürfaktan poli(etilen-a/t-maleik anhidriti) kullanarak yüksek yogunlukta yüzey karboksilat gruplarla yüzeyi fonksiyonlanmlg biyolojik olarak bozulabilir poli(laktit-k0-glikolit) partiküllerini spesifik olarak tasarladllg Ayrü, 30:30:40 oranIa fosfatidilkolin:fosfatidilgliserol:kolesterol kullanarak yüzeyi fonksiyonlanmlâlipozomlarügelistirmistir. Kimyasal kontaminasyonu ve peptidin veya proteinin yüzey konjugasyonunu çevreleyen safllE sorunlarIElönlemek için çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini Içermek üzere bu partikülleri tasarladilîi Çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren bu yüzeyi fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, hastallEI gelisimin ve bu sekilde alerjik astIiI Balb/c ovalbumin/alum ile Indüklenmis AAI mürin modelinde immünolojik toleransI indüksiyonunun önlenmesi için etkilidir. EDC kullanllârak karboksilat-fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerine konjugatlmeptit veya protein, bir aylîll edilmemis modelde birlestirilmektedir, bu da homojene popülasyonlara karakteri edilmesi ve saflasmasüor olan antijen agregatlarlEb ve partikül-antijen-partikül agregatlarlEla neden olmaktadIEI Antijenin yüzey konjugasyonunu gerektirmeyen çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmEpoli(laktit ko-glikolit) partiküllerin bir homojen popülasyonunu üretmistir. AyrlEla, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren ve yüksek yogunlukta negatif olarak yüklenmis gruplarla yüzeyi fonksiyonlanmE biyolojik olarak bozulabilir lipozomlarEl, multipl sklerozun SJL/J PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE mürin modelinde immünolojik tolerans. indüksiyonu Için etkili oldugunu sergilemistir. Mevcut bulusun Iipozomlarül/e poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, sayElZl avantaj sunmaktadE Avantajlar asaglühkileri içermektedir: 1) Biyolojik olarak bozulabilir partiküller, vücutta uzun süreler Erarclîrblmayacaktlîlve tam degradasyon zamanEltontrol edilebilmektedir. 2) Partiküller ve Iipozomlar, hücre aktivasyonu olmadan Içsellestirmeye olanak saglamak üzere fonksiyonlandlîllâbilmektedir. Bu hedefe ulasmak için, PLG mikro kürelerine fosfatidilserin yükledik. 3) Partiküller ve Iipozomlar ayrlîla bir spesifik hücre popülasyonuna yönelik hedefleyici 4) IL-10 ve TGF-ß gibi anti-inflamatuvar sitokinler, partiküllere içsellesen hücre tipinde aktivasyonu klîlflhmak ve düzenleyici T hücrelerinin enerjisi ve/veya delesyonu ve aktivasyonu vaslßslýla tolerans indüksiyonuna olanak saglamak üzere dahil edilmektedir. Partikülün veya lipozomun bu kombinasyonel fonksiyonu, çok sayldh perspektiften tolerans indüksiyonunu hedef alabilmektedir, bu sekilde tasarIicEpartiküller, polistiren partiküllere göre önemli bir ilerlemedir. Bu tolerans indükleme teknolojisinin potansiyel klinik uygulamalarüasaglfllakileri içermektedir: fonksiyonlanmlgl poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, hastallEI gelisimin ve bu sekilde alerjik astIiI Balb/c ovalbumin/alum ile Indüklenmis AAI mürin modelinde immünolojik toleransI indüksiyonunun önlenmesi için etkilidir. EDC kullanllârak karboksilat-fonksiyonlanmlgl poli(laktit-koglikolit) partiküllerine konjugatlmeptit veya protein, bir aylîll edilmemis modelde birlestirilmektedir, bu da homojene popülasyonlara karakteri edilmesi ve saflasmasüor olan antijen agregatlarlEb ve partikül-antijen-partikül agregatlarlEla neden olmaktadIEI Antijenin yüzey konjugasyonunu gerektirmeyen çekirdekleri içerisinde çözülebilir ovalbumini içeren yüzeyi fonksiyonlanmEpoli(laktit ko-glikolit) partiküllerin bir homojen popülasyonunu üretmistir. AyrlEla, çekirdekleri içerisinde çözülebilir PLP139-151 içeren ve yüksek yogunlukta negatif olarak yüklenmis gruplarla yüzeyi fonksiyonlanmE biyolojik olarak bozulabilir lipozomlarEl, multipl sklerozun SJL/J PLP139-151/CFA ile indüklenmis R-EAE mürin modelinde immünolojik tolerans. indüksiyonu Için etkili oldugunu sergilemistir. Mevcut bulusun Iipozomlarül/e poli(laktit-ko-glikolit) partikülleri, sayElZl avantaj sunmaktadE Avantajlar asaglühkileri içermektedir: 1) Biyolojik olarak bozulabilir partiküller, vücutta uzun süreler Erarclîrblmayacaktlîlve tam degradasyon zamanEltontrol edilebilmektedir. 2) Partiküller ve Iipozomlar, hücre aktivasyonu olmadan Içsellestirmeye olanak saglamak üzere fonksiyonlandlîllâbilmektedir. Bu hedefe ulasmak için, PLG mikro kürelerine fosfatidilserin yükledik. 3) Partiküller ve Iipozomlar ayrlîla bir spesifik hücre popülasyonuna yönelik hedefleyici 4) IL-10 ve TGF-ß gibi anti-inflamatuvar sitokinler, partiküllere içsellesen hücre tipinde aktivasyonu klîlflhmak ve düzenleyici T hücrelerinin enerjisi ve/veya delesyonu ve aktivasyonu vaslßslýla tolerans indüksiyonuna olanak saglamak üzere dahil edilmektedir. Partikülün veya lipozomun bu kombinasyonel fonksiyonu, çok sayldh perspektiften tolerans indüksiyonunu hedef alabilmektedir, bu sekilde tasarIicEpartiküller, polistiren partiküllere göre önemli bir ilerlemedir. Bu tolerans indükleme teknolojisinin potansiyel klinik uygulamalarüasaglfllakileri içermektedir: (1)T hücresi- ve antikor-araclIJJIiotoimmün hastalilîlar (örnegin multipl skleroz, tip 1 diyabet, romatoid artrit, sistemik Iupus ve benzerû-toleransüözel otoimmün hastallgiü harekete geçiren ilgili otoantijenlerle komplekslenmis partiküllerle indüklenecektir. (2) g. ve akciger alerjileri, cilt alerjileri ve astn - tolerans, spesifik g-larla (örn. yer fistigllîrbroteinleri ve benzeri) komplekslenen partiküller, enjekte edilen (arlîehri proteinleri ve benzeri) veya alerjik reaksiyona neden olan solunan maddeler (Örn. ragweed polen proteinleri, evcil hayvan dander proteinleri ve benzer/) ile indüklenecektir. (3) transplant reddi -tolerans, allîlZHarafIan reddi önlemek için organ transplantldan önce donör organlarIa veya hücrelerde transplant antijenlere indüklenecektir. (4) enzim degistirme tedavisi - tolerans, özel bozukluklarIlZliedavi etmek üzere uygulanan rekombinant olarak üretilmis enzimlere nötrlestirici antikor yanElbrIIEIolusturmalarEi önlemek üzere, genetik bozukluklara sahip hastalar. üretmedigi enzimlere indüklenecektir. TR TR TR TR TR TR TR TR TR