[go: up one dir, main page]

TR201907128T4 - Tümörlerin tedavisi için virüs-benzeri partikül konjugatları. - Google Patents

Tümörlerin tedavisi için virüs-benzeri partikül konjugatları. Download PDF

Info

Publication number
TR201907128T4
TR201907128T4 TR2019/07128T TR201907128T TR201907128T4 TR 201907128 T4 TR201907128 T4 TR 201907128T4 TR 2019/07128 T TR2019/07128 T TR 2019/07128T TR 201907128 T TR201907128 T TR 201907128T TR 201907128 T4 TR201907128 T4 TR 201907128T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
tumor
viral
nanoparticles
photosensitive
cells
Prior art date
Application number
TR2019/07128T
Other languages
English (en)
Inventor
De Los Pinos Elisabet
T Schiller John
C Kines Rhonda
Macdougall John
Original Assignee
Aura Biosciences Inc
Health
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aura Biosciences Inc, Health filed Critical Aura Biosciences Inc
Publication of TR201907128T4 publication Critical patent/TR201907128T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M37/00—Other apparatus for introducing media into the body; Percutany, i.e. introducing medicines into the body by diffusion through the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/06—Radiation therapy using light
    • A61N5/0613—Apparatus adapted for a specific treatment
    • A61N5/062—Photodynamic therapy, i.e. excitation of an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/13—Labelling of peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/01—DNA viruses
    • C07K14/025—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/084—Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20023—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20033—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)

Abstract

Mevcut açıklama, ışığa duyarlı moleküllere konjuge virüs-benzeri partiküller kullanılarak oküler tümörler gibi tümörlerin tanısı ve/veya tedavisi için yöntemlere ve bileşimlere yöneliktir.

Description

TARIFNAME TÜMÖRLERIN TEDAVISI IÇIN VIRÜS-BENZERI PARTIKÜL KONJUGATLARI BULUSUN SAHASI Bu açiklama, tümör tanisi ve terapötikleri alaniyla ilgilidir. BULUSUN ALT YAPISI Her ne kadar kanser için sayisiz tedavi mevcut olsa da, kanserin birçok biçimi iyilestirilemez, tedavi edilemez veya standart terapilere dirençli hale gelmeye devam etmektedir ve birçok kanser için etkili tedaviler istenmeyen yan etkilere sahiptir. Oküler melanom ve retinoblastom gibi oküler kanserlerin tedavisi özellikle zorlayicidir. Oküler melanom tanisi konulan bir hastanin, tümörün boyutuna bagli olarak, asagidakiler dahil olmak üzere birkaç tedavi seçenegi vardir: (1) tamami oldukça invazif olan ve temel olarak gözün ve optik sinirin bir parçasinin çikarilmasini içeren rezeksiyon, enükleasyon veya ekzenterasyon gibi cerrahi prosedürler (ameliyattan sonra hasta çogunluk yapay bir göz için hazirlanir) ve (2) bir tarafini kaplayan radyoaktif çekirdeklere sahip ince bir metal parçasinin (örnegin, altin), çekirdekler tümöre bakacak sekilde gözün dis duvarinin üzerine dikildigi bir tür radyasyon terapisi olan plak brakiterapi. Ince metal parçasi, çogunlukla uzun günler süren tedavinin sonunda çikartilir. Ciddi radyoaktif iliskili komplikasyonlara asagidakiler dahildir: en yaygin olan sekilde katarakt olusumu ve ardindan vitröz hemoraj. Diger komplikasyonlara kuru göz, keratit, radyasyon-indüklü iris neovaskülerizasyon, neovasküler glokom, radyasyon- indüklü retinopati, radyasyon-indüklü optik nöropati, episkleral birikmeleri, skleral nekroz ve/veya ekstraoküler kas degisimleri dahildir. Radyasyon retinopatisinin, plak brakiterapi ile tedavi edilen hastalarin %10-63'ünde meydana geldigi ve tedaviden makülopati gelismesine kadar geçen ortalama sürenin yaklasik olarak 25,6 ay oldugu bildirilmistir. proliferasyon önlenmeden ve/veya normal hücreler öldürülmeden kanser hücrelerinin öldürülmesinin, söz konusu tanimli süjeye, bir papilloma psödovirüs veya bir papilloma VLP ile formüle edilen ve söz konusu psödovirüse veya söz konusu VLP'ye kimyasal olarak esli olan bir terapötik ajan içeren bir bilesimin verilmesini içeren yöntemlerde' kullanim için düsünülmüs olan Alexa Fluor floresan boyaya esli bir tümör-hedefleyici virüs-benzeri partikülü (VLP), yani HPV-16RFP'yi açiklamistir. BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus, eslik eden istemlerde ortaya konuldugu sekilde virüs-benzeri partiküller saglamaktadir. Mevcut açiklama, en azindan kismen, örnegin, kanserin (örnegin, oküler kanser) tanisi ve/veya tedavisi için tümör hücrelerinin saptanmasi ve/veya seçimli olarak hedeflenmesi için bilesimler saglamaktadir. Bazi örneklerde, burada saglanan bilesimler kanserli tümör hücrelerini saglikli hücrelere zarar vermeden seçimli olarak öldürmek için kullanilabilir. Örnegin, isiga duyarli moleküller içeren (örnegin, bunlara konjuge edilen) viral-benzeri nanopartiküller tümör hücrelerine seçimli olarak aktarilabilir ve isiga maruz birakilarak isik-aktif edilebilir. Isik-aktif edildiginde, isiga duyarli bir molekül fotonlari abzorbe eder ve abzorbe edilen 0 enerji, toksisiteye (örnegin, hücresel toksisiteye) neden olan moleküler degisiklikler üretir. (Burada bir benzeri nanopartikül", isiga duyarli bir moleküle konjuge bir viral-benzeri nanopartikülü ifade etmektedir. Sasirtici bir sekilde, isiga duyarli moleküllerin viral-benzeri nanopartiküllere konjugasyonu, nanopartiküllerin doku/tümör tropizmine (örnegin, viral- benzeri nanopartiküllerin belirli bir konak tümör dokusu veya tümör hücresi için özgüllügüne) müdahale etmez. Mevcut açiklamanin (virüs-benzeri partiküller (VLP'Ier) olarak da ifade edilen) virüs- benzeri nanopartikülleri, genellikle, LI kapsit proteinlerinden veya LI ve L2 kapsit proteinlerinin bir kombinasyonundan bir araya getirilir ve isiga duyarli moleküller, bazi yönlerde, viral-benzeri nanopartikülleri olusturan bir kapsit proteinine konjuge edilir. Böylelikle, açiklamanin çesitli yönleri, kapsit proteinlerine konjuge isiga duyarli moleküller içeren tümör-hedefleyici virüs-benzeri nanopartiküller saglamaktadir. Açiklamanin bazi yönleri ayrica, partikül basina yaklasik 50 ila yaklasik 500, yaklasik tümör-hedefleyici virüs-benzeri partiküller de saglamaktadir. Bazi yönlerde, tümör- hedefleyici virüs-benzeri partiküller partikül basina yaklasik 400, yaklasik 500, yaklasik içerir. Bazi yönlerde, tümör-hedefleyici virüs-benzeri partiküller partikül basina 500 isiga duyarli molekül veya 1000 isiga duyarli molekül içerir. Bazi uygulamalarda, kapsit proteinleri papilloma virüsü kapsit proteinleridir. Örnegin, bazi uygulamalarda, papilloma virüsü kapsit proteinleri, bovin papilloma virüsü kapsit proteinleri gibi insan-olmayan papilloma virüsü kapsit proteinleridir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partikül insan papilloma virüsü kapsit proteinleri içerir ve insan papilloma virüsü (HPV) 16, HPV 18 veya HPV için özgül olan önceden-var olan antikorlarla çapraz-tepkimez. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller (örnegin, insan, bovin veya diger türlerin) papilloma L1 veya L1/L2 proteinlerini içerir. Bazi uygulamalarda, L1 veya L1/L2 VLPyler, insan papilloma virüsü (HPV) 16, HPV 18'e nötrlestirici antikorlarla veya diger HPV'ler için özgül önceden-var olan antikorlarla çapraz-tepkimez. Ancak, bazi yönlerde virüs-benzeri partiküller, HPV16'nin insan papilloma virüsü kapsit proteinlerini içerir. Bazi yönlerde isiga duyarli moleküller, kapsit proteinlerinin yüzeye-çikmis peptitlerine konjuge edilir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller L1 kapsit proteinleri veya L1 ve L2 kapsit proteinlerinin bir kombinasyonunu içerir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller L1 kapsit proteinlerinden olusur. Bazi yönlerde bir virüs-benzeri partikül BPV L1 kapsit proteini (örnegin, SEQ ID NO: 2), BPV L1 ve BPV L2 kapsit proteinlerinin bir kombinasyonunu içerir. Bazi uygulamalarda, bir virüs-benzeri partikül HPV L1 kapsit proteinleri veya HPV L1 ve HPV L2 kapsit proteinlerinin bir kombinasyonunu içerir. Bazi uygulamalarda, HPV L1 kapsit proteini, modifiye immünojenesiteye ve/veya antijenesiteye sahip bir varyant HPV16/31 L1 proteinidir (örnegin, SEQ ID NO: 1). Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir virüs-benzeri proteinlerinin (örnegin, SEQ ID NO: 1) ve HPV L2 kapsit proteinlerinin bir kombinasyonunu içerir veya bunlardan olusur. Bazi yönlerde bir virüs-benzeri partikülün kapsit proteinleri modifiye immünojenesiteye ve/veya antijenesiteye sahiptir. Bu tip bir kapsit proteininin sinirlayici-olmayan bir örnegi HPV. Modifiye kapsit proteinleri ihtiva eden virüs-benzeri proteinler burada, dogal-sus virüs-benzeri paitiküllere kiyasla modifiye immünojenesite ve/veya antijenesite ihtiva eden virüs- benzeri partiküller olarak ifade edilebilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller kapsit proteinlerine esdeger sekilde konjuge edilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller, kapsit proteinlerinin bir amino asidine konjuge edilir. Bazi yönlerde isiga duyarli moleküller, kapsit proteinlerinin bir amino asidinin bir amin grubuna (örnegin, primer alifatik amin) konjuge edilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller, kapsit proteinlerinin Iizin kalintilarinin amin gruplarina (örnegin, Iizinin yan zincir amini) konjuge edilir. Bazi yönlerde isiga duyarli moleküller, kapsit proteinlerinin arjinin ve/veya histidin kalintilarinin amino gruplarina konjuge edilir. Mevcut açiklama, isiga duyarli moleküllerin Iizine ve amin gruplari ihtiva eden diger amino asitlere konjuge edilmesi için yöntemler saglamaktadir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller virüs-benzeri partikülün, tümör hücrelerinin yüzeyine baglanmasini bozmaz (örnegin, engellemez, müdahale etmez veya önlemez). Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller virüs-benzeri partikülün, tümör hücrelerinin yüzeyindeki heparan sülfat proteoglikanlarina veya diger polisakkaritlere baglanmasini bozmaz (örnegin, engellemez, müdahale etmez veya önlemez). Bazi yönlerde virüs-benzeri partiküller yaklasik 10 ila yaklasik 1000 isiga duyarli molekül içerir. Bazi uygulamalarda, istemler tarafindan tanimlandigi üzere virüs- benzeri yaklasik 50 ila yaklasik 1000 isiga duyarli molekül içerir. Bazi yönlerde virüs- benzeri partiküller yaklasik 100 ile yaklasik 1000 isiga duyarli molekül içerir. Bazi yönlerde virüs-benzeri partiküller yaklasik 100 ila yaklasik 500 isiga duyarli molekül içerir. Bazi yönlerde virüs-benzeri partiküller yaklasik 500 ila yaklasik 1000 isiga duyarli molekülü veya daha fazlasini içerir. Bazi yönlerde virüs-benzeri partiküller, L1 kapsit proteinlerinin, L2 kapsit proteinlerinin veya L1 kapsit proteinlerinin ve L2 kapsit proteinlerinin Iizin kalintilarina veya diger amino asit kalintilarina konjuge yaklasik 10 ila yaklasik 1000 isiga duyarli molekül Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller kizilötesi, yakin-kizilötesi veya ultraviyole isikla aktive edilir. Isiga duyarli bir molekül, buradaki diger kisimlarda tarif edildigi üzere molekül fotonlari abzorbe ettiginde ve abzorbe edilen 0 enerji toksisiteye neden olan moleküler degisiklikler ürettiginde "aktive edilmis" olarak degerlendirilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller bir floresan boya, bir kizilötesi boya, bir yakin kizilötesi boya, bir porfirin molekülü, bir klorofil molekülü veya yukaridakilerin ikisinin veya daha fazlasinin bir kombinasyonunu içerir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller porfirin molekülleridir. Mevcut açiklamaya göre kullanim için porfirin moleküllerinin örneklerine, sinirlama olmada, HpD (hematoporfirin türevi), HpD-tabanli, BPD (benzoporfirin türevi), ALA (5-amin0levulinik asit) ve teksafirinler dahildir. Bazi uygulamalarda, porfirin molekülü verteporfindir (Visudyne®). Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller klorofil molekülleridir. Mevcut açiklamaya göre kullanim için klorofil moleküllerinin örneklerine, sinirlama olmadan, klorinler, purpurinler ve baserioklorinler dahildir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller boyalardir. Mevcut açiklamaya göre kullanim için boyalarin örneklerine, sinirlama olmadan, ftalosiyanin ve naftalosiyanin dahildir. Bazi uygulamalarda, ftalosiyanin boyasi hem bir floresan moleküldür hem bir yakin kizilötesi moleküldür. Örnegin, bazi uygulamalarda, ftalosiyanin boyasi IR700 boyadir (örnegin, lRDye® spektrumda tipik olarak 680 nm ila 800 nm arasinda bir emilim ve yayilma dalga boylarina sahip bir floresan boyadir. NIR spektrumunda bir emilim ve yayilma dalga boylarina sahip diger floresan boyalar burada saglanmaktadir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller ftalosiyanin boyalarda (örnegin, IRDye® 700DX gibi IR7OO boya), porfirin moleküllerinden (örnegin, Visudyne® gibi verteporfin) ve ftalosiyanin boyalarinin ve porfirin moleküllerinin bir kombinasyonundan seçilir. Açiklamanin bazi yönleri, bir tümörü olan söz konusu süjeye, burada saglanan virüs- benzeri partiküllerin veya isiga duyarli virüs-benzeri partiküllerin herhangi birinin verilmesini içeren yöntemler saglamaktadir. Bazi yönlerde yöntemler, bir virüs-benzeri partikülün isiga duyarli moleküllerinin, isiga hassas moleküllerin görsellestirilmesine izin veren isigin bir dalga boyunda aktive edilmesini içerir. Böylelikle, bazi yönlerde mevcut açiklamanin isiga duyarli molekülleri görüntüleme ajanlari ve/veya tani ajanlari olarak kullanilir. Bazi yönlerde yöntemler, isiga duyarli moleküllerin, molekülün sitotoksik olmasina neden olan isigin bir dalga boyunda aktive edilmesini içerir. Bazi yönlerde yöntemler, isiga duyarli moleküllerin, tümör hücresinin içinde nekroza yol açan dogrudan ve tersinemez hücre hasari yaratan bir enerji transferi üreten isigin bir dalga boyunda aktive edilmesini içerir. Böylelikle, bazi yönlerde mevcut açiklamanin isiga duyarli molekülleri terapötik ve/veya profilaktik ajanlar olarak kullanilir. Açiklamanin bazi yönleri, bir tümörü olan bir süjeye, kapsit proteinlerine konjuge isiga duyarli moleküller içeren bir tümör-hedefleyici virüs-benzeri partikülün verilmesini içeren yöntemler saglamaktadir. Bazi yönlerde yöntemler, virüs-benzeri partiküllerin isiga duyarli moleküllerinin, molekülleri görünür hale getiren bir dalga boyunda aktive edilmesini içerir. Yani, isiga duyarli moleküller isik uyarimi üzerine isigi yeniden-yayar. Bazi uygulamalarda, yöntemler, isiga duyarli moleküllerin, molekülleri sitotoksik hale getiren bir dalga boyunca aktive edilmesini, bu sayede tümörün hücrelerinin öldürülmesini içerir. Yani, isiga duyarli moleküller isik uyarimi üzerine, isiga duyarli moleküllerin hücrelere toksik hale gelmesiyle sonuçlanan bir moleküler degisiklige maruz kalir. Bazi yönler, bir tümörü olan bir süjeye, yaklasik 50 ila yaklasik 1000, yaklasik 50 ila benzeri partikül verilmesini içeren yöntemler saglamaktadir. Bazi yönlerde yöntemler, veya daha fazla isiga duyarli molekül içeren bir tümör-hedefleyici virüs-benzeri partikülün verilmesini içerir. Bazi yönlerde yöntemler, isiga duyarli moleküllerin, molekülleri görünür hale getiren bir dalga boyunda aktive edilmesini içerir. Bazi yönlerde yöntemler, isiga duyarli moleküllerin, molekülleri sitotoksik hale getiren bir dalga boyunda aktive edilmesini, bu sayede tümörün hücrelerinin öldürülmesini içerir. Bazi yönlerde isiga duyarli moleküller lazerle aktivedir. Bazi yönlerde, lazer bir kizilötesi, yakin-kizilötesi veya ultraviyole Iazerdir. Bazi yönlerde kizilötesi lazer 5 Jul yönlerde lazer yaklasik 5 saniye ila yaklasik 5 dakika arasinda uygulanir. Bazi yönlerde isiga duyarli moleküller, virüs-benzeri partiküller bir süjeye verildikten yaklasik 30 dakika ila yaklasik 48 saat sonra aktive edilir. örnegin, isiga duyarli moleküller virüs-benzeri partiküller bir süjeye verildikten 30 dakika sonra aktive edilebilir. Bazi yönlerde, isiga duyarli moleküller virüs-benzeri partiküller bir süjeye saat, 21 saat, 22 saat, 23 veya 24 saat sonra aktive edilir. Bazi yönlerde, isiga duyarli moleküller virüs-benzeri partiküller bir süjeye verildikten 1 gün, 2 gün veya 3 gün sonra aktive edilir. Bazi uygulamalarda, tümör bir oküler tümör veya göye metastaz yapmis bir tümördür. Örnegin, bazi uygulamalarda, oküler tümör vitrözde, koroidal boslukta, iriste, siliyer cisimde, sklerada, göz çukurunda, retinada, optik diskte veya optik sinirde yer alir. Bazi uygulamalarda, tümör bir akcigerde, plevrada, karacigerde, pankreasta, midede, özofagusta, kolonda, memede, yumurtalikta, prostatta, beyinde, beyin ve omurilik zarinda, testiste, mide bagirsak yolunda, böbreklerde veya mesanede yer alir. Bazi uygulamalarda, tümöre cerrahi müdahale olmadan erisilebilir. Bazi uygulamalarda, tümör basta, boyunda, servikste, larenkste veya deride yer alir. Bazi uygulamalarda, tümör bir orfan veya nadir hastaliktir. Bazi uygulamalarda, tümör kanserözdür. Bazi uygulamalarda, tümör metastatiktir. Bazi uygulamalarda, tümör pre-kanseröz veya displastiktir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller enjeksiyonla verilir. Örnegin, virüs-benzeri partiküller enjeksiyonla intraoküler olarak, vitrözün içine veya intravenöz olarak verilebilir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller bir bos veya kapli igneyle, mini- igneyle veya mikro-igneyle verilir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller topikal olarak verilir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller implantasyonla verilir. Bazi uygulamalarda, kapsit proteinleri papilloma virüsü kapsit proteinleridir. Örnegin, bazi uygulamalarda, papilloma virüsü kapsit proteinleri, bovin papilloma virüsü (BPV) kapsit proteinleri gibi insan-olmayan papilloma virüsü kapsit proteinleridir. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller insan papilloma virüsü kapsit proteinleri içerir ve insan papilloma virüsü (HPV) 16, HPV 18 veya HPV için özgül önceden-var olan antikorlarla çapraz-tepkimez. Bazi uygulamalarda, virüs-benzeri partiküller insan papilloma virüsü tip 16 kapsit proteinleri içerir. Bazi uygulamalarda VLP'Ier, insan papilloma virüsü (HPV) 16, HPV 18 VLP'IerI için özgül antikorlari veya özgül olarak HPV enfeksiyonuyla indüklenen önceden-var olan antikorlari baglamaz. Açiklamanin bazi yönler, bir süjede, tümörlerin (örnegin, oküler tümörlerin ve malignan sinifin) saptanmasinin yöntemlerini saglamakta olup yöntemler süjeye (örnegin, süjenin gözüne), isiga duyarli bir molekül (örnegin, floresan boya veya kizilötesi boya) içeren bir virüs-benzeri partikül gibi burada saglanan virüs-benzeri partikülün herhangi birinin verilmesini ve tümörün konumunun saptanmasini içerir. Bazi yönlerde yöntemler, süjenin (örnegin, süjenin gözünün) bir lazerle (örnegin, ultra-viyole veya kizilötesi lazer) aydinlatilarak tümörün konumunun saptanmasini içerir. Bazi yönlerde yöntemler, bir tümörü oldugundan süphelenilen bir süjenin virüs-benzeri partikül verilmeden önde tanimlanmasini içerir. Bazi yönlerde yöntemler, süjenin bir tümörüne veya bir tümörü olan veya oldugundan süphelenilen bir süjeye isiga duyarli virüs-benzeri partiküllerin verilmesiyle tümörün tanilanmasini ve/veya tedavi edilmesini içerir. Açiklamanin diger yönleri, kanseröz-olmayan (örnegin, normal, saglikli) hücrelerin proliferasyonu veya viyabilitesi önlenmeden kanseröz hücrelerin proliferasyonunun seçimli olarak önlenmesinin veya öldürülmesinin yöntemlerini saglamakta olup, yöntemler bir süjenin bir tümörüne (örnegin, süjenin bir oküler tümörüne), isiga duyarli moleküller (örnegin, kizilötesi boya) içeren virüs-benzeri partiküller gibi burada saglanan tümör-hedefleyici virüs-benzeri partiküllerin verilmesini ve tümörü (örnegin, yaklasik 660 nm ila 740 nm arasinda bir dalga boyunda ve en az 8 Jul bir dozda) bir kizilötesi Iazere maruz birakarak tümörün kanserli hücrelerinin etkili bir sekilde isinlanmasini içerir. Bazi yönlerde mevcut açiklama, papilloma virüsü L1 proteinlerine (örnegin, bovin papilloma virüsü L1 proteinlerine) konjuge isiga duyarli moleküller içeren (bir virüs- benzeri partikül olarak da ifade edilen) bir viral-benzeri nanopartikül saglamaktadir. nanopartikül kapsit proteini, örnegin 360 L1 kapsit proteini (örnegin, ikohasedral simetriye dayali olarak) ihtiva eder. Bazi yönlerde BPV L1) kapsit proteini ihtiva ettigi anlasilmalidir. Ancak, bazi yönlerde bir viral-benzeri nanopartikül kapsit proteini ihtiva eder. bovin papilloma virüsü viral-benzeri nanopartikül saglamaktadir. Bazi uygulamalarda, bovin papilloma virüsü (BPV) viral-benzeri nanopartikülünün kapsit proteinleri BPV L1 kapsit proteinleri veya BPV L1 ve BPV L2 kapsit proteinlerinin bir kombinasyonunu içerir veya bunlardan olusur. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller, isiga duyarli moleküllerdeki bir ester grubunun kapsit proteinlerindeki bir amin grubuyla tepkimeye sokulmasiyla, bu sayede bir amid bagi olusturulmasiyla olusturulan bir esdeger bag yoluyla viral-benzeri nanopartiküllere (veya viral-benzeri nanopartiküllerin kapsit proteinlerine) konjuge edilir. Böylelikle, bazi uygulamalarda, mevcut açiklamanin viral- benzeri nanopartiküllerinin kapsit proteinleri amid baglar yoluyla isiga duyarli moleküllere konjuge edilir. Bazi uygulamalarda, mevcut açiklama, en azindan bazilari (örnegin, %10, %20, %30, boya) esdegerli olarak konjuge olan 300 ila 500 arasinda BPV L1 kapsit proteini içeren ve/veya 20 60 nm çapinda bir viral-benzeri nanopartikül saglamaktadir. Mevcut açiklama ayrica, viral-benzeri nanopartiküllerinin üretilmesinin yöntemlerini de saglamaktadir. Açiklanan partiküller viral-benzeri nanopartiküllerin bir süjeye bir tanisal, terapötik veya profilaktik ajan olarak verilmesinin yöntemlerinde kullanilabilir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI SEKIL 1, isiga duyarli bir moleküle konjuge bir virüs-benzeri partikül (VLP) kullanilarak hücre ölümünün indüklenmesi için bir mekanizmayi göstermektedir. SEKIL 2, örnegin, bir antikor tarafindan iki degerli hedeflemenin ve örnegin, bir VLP tarafindan çok degerli hedeflemenin bir karsilastirmasini göstermektedir. SEKIL 3, hücrelere VLP baglanmasini özgüllügüne heparan sülfat proteoglikan (HSPG) etkilesimlerinin aracilik ettigini ve heparin tarafindan önlendigini ortaya koyan bir grafigi göstermektedir. Ayrica, yalnizca isiga duyarli VLP'Ier hücreye baglandiginda ve hücreler kizilötesi isimaya tabi tutuldugunda tümör hücrelerinin spesifik öldürülmesini de göstermektedir. SEKIL 4, hücre ölümünün kizilötesi radyasyonun dozuna ve aktarilan VLP'nin ve isiga duyarli molekülün (örnegin, boyanin) miktarina bagli oldugunu ortaya koyan bir grafigi göstermektedir. SEKIL 5, IR isinlama üzerine in vitro yumurtalik kanser hücresi (SKOV-S) ölümünü ortaya koyan bir grafigi göstermektedir. SEKIL 6A, kontrol VLP'Ierinin bir elektrosprey iyonizasyon-uçus-zamani (ESl- TOF) analizini göstermektedir. SEKIL GB, IR700'ün 1000 molekülüne konjuge VLP'Ierin (sekilde PsV olarak gösterilmektedir) bir ESI-TOF analizini göstermektedir. SEKILLER 7A-7C, bir insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 negatif (HER2') oküler melanom hücre hattinin (92.1) hücre ölümünün, iki degerli ajanlarin (örnegin, antikorlarin) ve çok degerli ajanlarin (örnegin, VLP konjugatlari olarak da ifade edilen, sekilde PsV olarak gösterilen isiga duyarli VLPiler) etkililigini karsilastiran grafiklerini göstermektedir. SEKILLER 8A-BC, bir insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 negatif (HER2*) yumurtalik kanseri hücre hattinin (SKOV-3) hücre ölümünün, iki degerli ajanlarin (örnegin, antikorlarin) ve çok degerli ajanlarin (örnegin, VLP konjugatlari olarak da ifade edilen, sekilde PsV olarak gösterilen isiga duyarli VLP'Ier) etkililigini karsilastiran grafiklerini göstermektedir. SEKIL 9, asi indüklü anti-HPV16 nötrlestirici antikorlarin, BPV*IR700 VLP'Ierin oküler melanom hücre hatti 92.1'e baglanmasini bloke etmedigini ortaya koyan bir grafigi göstermektedir. SEKIL 10A, IRDye® 7OODX NHS esterinin bir kimyasal yapisini göstermektedir. SEKIL 108, daire içine alinan bir tepken karboksil grubuna sahip Visudyne®`nin bir kimyasal yapisini göstermektedir. SEKIL 11, Visudyne® ve VLP`nin (1-etiI-3-(-3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorür) (EDC) ve süIfo-N-Hidroksisüksinimid (sülfo-NHS) aracili baglanmasini içeren bir tepkime semasini göstermektedir. Bu semada,@ Visudyne®`i temsil etmektedir ve ® VLP`yi temsil etmektedir. Istenen son ürüne giden 2 yol oldugu kaydedilmelidir. Sülfo-NHS varligi tepkimeyi stabilize etme egilimindedir ve istenen ürünün üretilmesini arttirir. SEKIL 12, çesitli tiplerde kanser hücrelerine baglanan HPV16 kapsit proteinleri, varyant HPV16/31 kapsit proteinleri ve BPV1 kapsit proteinleri (L1 veya L1 ve L2 proteinleri) ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküllerin HSPG-bagimli baglanmasinin temsilci numunelerinin histogramlarini göstermektedir. SEKILLER 13A ve 138, enjeksiyonun ardindan 12. saatte PES-enjekte negatif kontrol farelerinden, 12. saatte isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküI-enjekte farelerden (#3 ve #4) ve 24. saatte isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül- enjekte farelerden (#1 ve #2) parlak alanda eksize edilen tümör dokusunun (SEKIL 13A) ve florisimanin (SEKIL 13B) görüntülerini göstermektedir. SEKIL 14, VLP'Ierin intravenöz enjeksiyonundan 12 ve 24 saat sonra eksize edilen ex vivo TC-1 tümör numunelerinde (Sekil 13 ile ayni tümörler) toplam tümör iliskili viral-benzeri nanopartiküI-iliskili florisimanin kantitatif bir temsilini göstermektedir. SEKIL 15, Örnek 14 için deney tasariminin bir sematigini göstermektedir. SEKILLER 16A ve 168, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin (sekilde NP'ler olarak gösterilmektedir) in vivo verilisinden sonra hücre ölümünün yüzdesinin ve subkütan 92.1 oküler melanom (OM) hücreleri üzerinde isik titrasyonunun (isik tedavisinden 24 saat sonra ölçülen hücre viyabilitesi) grafiklerini göstermektedir. SEKILLER 17A-17C, SEKILLER 16A ve 1GB'de sunulan veriler ilin ham histogramlari göstermektedir. hücreleriyle asilanan ve asagidakilerin verildigi hayvanlardan elde edilen doku numunelerini göstermektedir: (1) tedavi yok, (2) varyant HPV16/31 L1 proteinlerinden ve HPV L2 proteinlerinden bir araya getirilen, IRDye® 7OODX ile viral-benzeri nanopartiküller, (5) 50 J/cm2 isikla 100 ug viral-benzeri nanopartiküller ve (6) 50 J/cm2 isikla 50 pg viral-benzeri nanopartiküller. SEKIL 18 (alt panel), alti test kosulunun her biri için ölü hücrelerin yüzdesini göstermektedir. SEKIL 19A, Örnek 15yte tarif edilen deneyin bir sematigini göstermektedir. SEKIL 198, (sekilde nanopartiküller olarak gösterilen) viral-benzeri nanopartiküllere karsilik (isikli) kontrol ile enjekte edilen hayvanlardaki sagkalim yüzdesinin bir grafigini göstermektedir. SEKIL 190, münferit farelerde tümör hacmini (üst panel), "E7 tetramer+ CD8+ T-hücrelerini" ve "INF-gamma salgilayan CD8+ hücrelerini" göstermektedir. SEKIL 20, bir güçlülük tayininden alinan sonuçlarin, isiga duyarli BPV viral- benzeri nanopartiküllerin ve isiga duyarli HPV viral-benzeri nanopartiküllerin hücre viyabilitesi üzerindeki etkilerini karsilastiran bir grafigini göstermektedir. SEKIL 21, bir baglanma tayininden alina sonuçlarin, isiga duyarli BPV viral- benzeri nanopartiküllerin ve isiga duyarli HPV viral-benzeri nanopartiküllerin hücrelere baglanmasini karsilastiran bir grafigini göstermektedir. SEKIL 22, (sekilde PsV olarak gösterilen) isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllere tedavinin ardindan bas ve boyun kanseri hücrelerinin tümör büyümesi egrisinin bir grafigini göstermektedir. SEKILLER 23A ve 238, (örnegin, Örnek 20'de tarif edildigi üzere) mevcut açiklamanin bir isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül üretimi isleminin örneklerini göstermektedir. BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Fotodinamik terapi (PDT), isiga seçimli olarak maruz birakildiginda, toksik hale gelen ve malignan ve diger hastalikli hücreleri hedefleyen ve/veya öldüren nontoksik isiga duyarli moleküller kullanan birfototerapi biçimidir. Kanserin tedavisinde PDT tarafindan ortaya konan bir güçlük, isiga duyarli moleküllerin yüksek konsantrasyonlarinin yalnizca tümör hücrelerine aktarilmasidir. Hedeflenen aktarimin elde edilmesi için, her ne kadar antikor basina 2-8 isiga duyarli molekül araliginda olan aktarim kapasiteleriyle sinirli olsalar da antikorlar kullanilabilir. Ayrica, tanimlanmis bir tümör reseptörü molekülünden yoksun olan ve bu yüzden bir antikorla hedeflenmeyen önemli tümörler bulunmaktadir. Bunun bir sonucu olarak, birden fazla tümör (örnegin, oküler melanom) tedavi edilemez durumda kalmaktadir. Ek olarak, antikor/boya konjugatlari tarafindan hedeflenen moleküllerin (örnegin, EGFR) birçogu, tümör-olmayan hücrelerin yüzeyinde de bulunmaktadir ve bu da istenmeyen hedef disi etkilere yol açmaktadir. Mevcut açiklama, kismen, (burada viral-benzeri nanopartiküller olarak da ifade edilen) virüs-benzeri partiküllerin (VLP'Ier) (örnegin, papilloma VLP'Ieri), tümör-hedefleyici becerilerini veya yapisal stabilitelerini kaybetmeden birçok isiga duyarli molekül (örnegin, IR700) tasimak için kimyasal olarak modifiye edilebileceklerine dair beklenmedik kesfe dayalidir. Örnegin, bazi uygulamalarda, VLP'Ier 50"den fazla duyarli molekül) tasimak için kimyasal olarak modifiye edilebilir. L1 veya L1 ve L2 kapsit proteinlerinden bir araya getirilen virüs-benzeri partiküller kanseröz-olmayan hücreleri etkilemeden kanser hücrelerine seçimli olarak baglanabilir ve enfekte edebilir, bu sayede tedavilerin sitotoksisitesini minimize eder (bakiniz U.S. Patent Basvurusu miktarlarda isiga duyarli moleküllerin aktarilmasi, asiri derece düsük miktarlarda (örnegin, pikomolar konsantrasyonlarda) ilaçla isik isinimi üzerine tümör hücrelerinin seçimli öldürülmesini saglar. Bir VLP'nin kilit bir hücre baglama özelligi, kapsit proteinler (örnegin, L1) üzerinde yüksek bir sayida heparin baglama alanlarinin varligidir. Isiga duyarli moleküllerin yüzey amino asitlerine konjugasyonu (örnegin, yüzey lizin kalintilari, arjinin kalintilari ve histidin kalintilari gibi yüzey amino asitlerine bir amid bagi vasitasiyla konjugasyon), sasirtici bir sekilde, VLP'nin tümör hücrelerinin yüzeyindeki heparan sülfat proteoglikanlarina (HSPG'Ier) baglanmasini bozmaz. Her ne kadar, mevcut açiklama isiga duyarli moleküllerin kapsit proteinlerinin yüzeye-çikmis peptitlerine konjugasyonunun tarif etse de, isiga duyarli moleküllerin, kapsit proteinlerinin herhangi bir peptidine konjuge edilebilecegi anlasilmalidir. Yani, isiga duyarli molekülleri yalnizca L1 proteinlerine veya L1 ve L2 proteinlerinin bir kombinasyonuna konjuge edilebilir. Isiga duyarli bir molekülün konjuge edildigi protein ve amino asit kalintisi. virüs-benzeri partikülün bilesimine bagli olabilir. Yukaridaki kesifler, yeni hedeflenmis kanser tedavilerinin gelistirilmesi için önemli etkilere sahiptir. Örnegin, mevcut açiklamanin (VLP konjugatlari olarak da ifade edilen) isiga duyarli VLP`Ieri, çok sinirli bir aktarim kapasitesine sahip antikorlar gibi diger hedefleyici moleküllere göre bir avantaj saglamaktadir. Ek olarak, mevcut açiklamanin isiga duyarli VLP'Ieri, baska sekillerde antikorlar veya diger hedefleyici moleküller tarafindan hedeflenmeyen çok çesitli tümörlerin (örnegin, oküler tümörlerin) hedeflenmesi için faydalidir çünkü uygun tümör-yüzeyine özgü determinantlar tanimlanmamistir. Ayrica, isiga duyarli VLP'Ier uzak metastazlarin tedavisi için faydalidir. Ek olarak isiga duyarli VLP'Ier, erken malignan veya pre-kanseröz tanisi ve tedavisi için faydalidir. Burada kullanildigi sekliyle bir "virüs-benzeri partikül" (VLP), L1 veya L1 ve L2 kapsomerlerinin kendiliginden-bir araya gelen sirali dizilimlerini içeren ve bir viral genom içermeyen bir organize kapsit-benzeri yapiyi (örnegin, kabaca küresel veya silindirik sekilli) ifade etmektedir. Virüs-benzeri partiküller morfolojik olarak ve antijenik olarak otantik viryonlara benzerdir, ancak partikülleri enfeksiyöz-olmayan hale getiren viral genetik materyalden (örnegin, viral nükleik asit) yoksunlardir. Bir VLP bir alici hücreye bir ajanin (örnegin, profilaktik ajan, terapötik ajan veya tanisal ajan) veya bir kapali dairesel veya dogrusal DNA veya RNA molekülünün aktarilmasi için kullanilabilir. "Virüs-benzeri partikül" veya "VLP" ve "psödovirüs" veya "PSV" terimlerinin burada degisimli olarak kullanilabildigi ve ayrica "viral-benzeri nanopartikül" terimiyle de degisimli olarak kullanilabildigi anlasilmalidir. Burada kullanildigi sekliyle bir "tümör-hedefleyici virüs-benzeri partikül", tümör-olmayan (örnegin, kanseröz-olmayan, diger durumlarda normal, saglikli) hücreleri (örnegin, bozulmamis dokudaki) hedeflemeden tümör (örnegin, kanseröz) hücrelerini hedefleyen bir VLP'yi ifade etmektedir. Mevcut açiklamaya göre VLP'Ier, dogal sus papillomavirüs VLP'Ierine göre modifiye bir immünojenesiteye ve/veya antijenesiteye sahip olabilir. VLP'Ier, örnegin, modifiye immünojenesite ve/veya antijenesiteye sahip bir varyant kapsit proteinine sahip kapsomerlerden bir araya getirilebilir. "Modifiye immünojenesiteye ve/veya antijenesiteye" sahip bir varyant kapsit proteini, kapsit proteininin önceden-var olan (örnegin, endojen) viral serotipe-özgü antikorlar tarafindan taninmasini indirgemek veya engellemek için bir amino asitte dogal olarak veya sentetik olarak (örnegin, mutasyona ugratilmis, ikame edilmis, silinmis, pegile edilmis veya sokulmus) modifiye edilen bir proteindir. Bir varyant kapsit proteini farkli HPV serotiplerinden amino asitlerin bir kombinasyonuna dayali olarak bir insan papillomavirüs (HPV) L1 varyanti, bir insan- olmayan papillomavirüs L1 varyanti veya bir papillomavirüsü L1 varyanti olabilir. Örnegin, modifiye immünojenesiteye ve/veya antijenesiteye sahip bir L1 varyanti HPV serotipi 16 ve HPV serotipi 31'e (burada bir "varyant HPV16/31 L1 proteini" - SEQ ID tarif edilen bir rekombinan protein olabilir. Bazi uygulamalarda, bir VLP, istemler tarafindan tanimlandigi sekilde bir papilloma virüsüdür. VLP, (örnegin, insani enfekte edebilen bir virüsten türetilen) bir insan papilloma virüsü VLP olabilirken, diger yönlerde VLP bir insan-olmayan papilloma virüsü VLP'dir. Insan-olmayan VLP'Ierin örneklerine, sinirlama olmadan, bovin papilloma virüslerinden, murin papilloma virüslerinden, pamuk-tavsani papilloma virüslerinden ve makak veya resus papilloma virüsü partiküllerinden türetilenler dahildir. Bazi uygulamalarda, VLP'ler (örnegin, BPV L1 kapsit proteinlerinden veya BPV L1 ve BPV L2 kapsit proteinlerinin bir kombinasyondan bir araya getirilen) bovin papilloma virüsü viral-benzeri nanopartiküllerdir (örnegin, tip 1 viral-benzeri nanopartiküller). Burada kullanildigi sekliyle bir "kapsit proteini", birçogu bir kapsomer oligomeri olusturan bir protein monomerini ifade etmektedir. Burada kullanildigi sekliyle bir virüsün genetik materyalini koruyan bir dis örtüsü olan temel oligomerik yapisal birimini ifade etmektedir. Mevcut açiklamanin kapsit proteinlerine papillomavirüsü L1 majör kapsit proteinleri ve papillomavirüsü L2 minör kapsit proteinleri dahildir. Bazi yönlerde mevcut açiklamanin VLP'leri yalnizca L1 kapsit proteinlerini ihtiva ederken, diger uygulamalarda, VLP'ler L1 ve L2 kapsit proteinlerinin bir karisimini (veya kombinasyonunu) ihtiva eder. Bazi yönlerde bir virüs-benzeri partiküldeki L1 kapsit proteinlerinin yüzdesi, virüs- benzeri partiküldeki L2 kapsit proteinlerinin yüzdesinden büyüktür. Örnegin, bazi yönlerde bir virüs-benzeri partiküldeki L1 kapsit proteinlerinin yüzdesi (virüs-benzeri partiküldeki kapsit proteinlerinin toplam sayisinin) %80 ila %100"ü arasindadir. Bazi yönlerde bir virüs-benzeri partiküldeki L1 kapsit proteinlerinin yüzdesi %80, %85, %90, virüs-benzeri partiküldeki L2 kapsit proteinlerinin yüzdesi (virüs-benzeri partiküldeki kapsit proteinlerinin toplam sayisinin) %1 ila %25'i arasindadir. Örnegin, bazi yönlerde bir virüs-benzeri partiküldeki L2 kapsit proteinlerinin yüzdesi %1, %2, %3, %4, %5, %6, Bazi yönlerde bir virüs-benzeri partikül 12 ila 72 arasinda L2 proteini ihtiva eder. Bazi yönlerde bir virüs-benzeri partikül 360 L1 proteini ve 12 ila 72 arasinda L2 proteini ihtiva eder. Bazi yönlerde kapsit proteinleri, 20 ila 60 nm arasinda bir çapa sahip viral- benzeri nanopartiküllerin içinde bir araya gelir. Örnegin, kapsit proteinleri, 20, 25, 30, araya gelir. Burada kullanildigi sekliyle bir "harici kapsit proteini", bir VLP'nin yüzeyinde açiga çikarilan bir kapsit proteinini ifade etmektedir. Bazi yönlerde harici kapsit proteinleri (örnegin, L1 proteinleri) bir (örnegin, en az bir adet) isiga duyarli moleküle konjuge Burada kullanildigi sekliyle bir "isiga duyarli molekül", isiga seçimli olarak maruz birakildiginda, "aktive olan" ("isikla aktive" olarak da ifade edilen) bir nontoksik molekülü ifade etmektedir. Bazi yönlerde aktive bir isiga duyarli molekül isik uyarimi (örnegin, bir florofor) üzerine isigi yeniden yayar. Bazi uygulamalarda, aktive bir isiga duyarli molekül isik uyarimi üzerine toksik hale gelebilir veya toksik moleküller üretebilir. Örnegin, isiga duyarli moleküllerin fotosansitizerler olarak ifade edilen bir sinifi, isigin emilimi üzerine uyarilmis bir duruma yükseltilebilir ve tekli oksijen üretmek için oksijenle sistemler arasi çaprazlamaya maruz kalabilir. Bu tekli oksijen karsilastigi herhangi bir organik bilesige hizlica saldirir, bu yüzden oldukça sitotoksiktir. Mevcut açiklamanin çesitli yönlerine göre, isiga duyarli moleküller, VLP'Ierin kapsit proteinlerine (örnegin, L1 ve/veya L2 kapsit proteinleri) konjuge edilebilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller VLP`Ierin kapsit proteinlerine esdegerli olarak konjuge edilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller, VLP'Ierin kapsit proteinlerinin Iizin kalintilarina esdegerli olarak konjuge edilir. Isiga duyarli moleküllere konjuge edilen VLPller burada "VLP konjugatlari" veya "isiga duyarli VLP'Ier" olarak ifade edilebilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküller, bir esdegerli amid bagi olusturmak için kapsit proteininin bir amin grubuyla (örnegin, Iizinin veya diger amino asidin amin grubu) tepkiyen bir NHS (N-Hidroksisüksinimid) ester grubu içerir. bir VLP yaklasik 10 ila yaklasik 1000 arasinda isiga duyarli molekül içerebilir. Bazi isiga duyarli molekül içerebilir. Bazi yönlerde, VLP 1000'den fazla isiga duyarli molekül veya 10'dan az isiga duyarli molekül içerebilir. Birden fazla isiga duyarli molekül bir tekli kapsit proteinine konjuge edilebilir. Örnegin, bir tekli kapsit proteini (örnegin, L1 veya L2 kapsit proteini) 1 ila 5 adet (örnegin, 1, 2, 3, 4 veya 5) isiga duyarli moleküle konjuge edilebilir. Böylelikle, bir kapsit proteininin birden fazla amino asidi isiga duyarli bir moleküle konjuge edilebilir. Bazi yönlerde bir tekli kapsit proteini 1 ila 2, 1 ila 3 veya 2 ila 3 isiga duyarli moleküle konjuge edilebilir. Böylelikle, isiga duyarli bir molekül, bir tekli kapsit proteininin 1, 2, 3, 4 veya 5 farkli amino asidine (örnegin, Iizin, arjinin ve/veya histidin veya diger amino asit) konjuge edilebilir. Mevcut açiklamaya göre kullanim için isiga duyarli moleküllerin örneklerine, sinirlama olmadan, floresan boyalar, kizilötesi boyalar, yakin-kizilötesi boyalar, porfirin moleküller ve klorofil moleküller dahildir. Mevcut açiklamaya göre kullanim için floresan boyalarin örneklerine, sinirlama olmadan, akridin turuncu, akridin sari, Alexa Fluor, 7-Aminoaktinomisin D, 8- Anilinonaftalen-1-sülfonik asit, ATTO boyalari, auramin-rodamin boyasi, benzantron, biman, 9,10-Bis(feniletinil)antrasen, 5,12-Bis(feniletinil)naftasen, bisbenzimid, mor isik boyasi, kalsein, karboksifloresein, karboksifloresein diasetat süksinimidil ester, karboksifloresein süksinimidil ester, 1-kl0ro-9,10-bis(feniIetinil)antrasen, 2-kIoro-9,10- bis(feniletinil)antrasen, 2-kI0r0-9,10-difenilantrasen, kumarin, DAPI, karanlik söndürücü, DiOCG, DyLight Fluor, Flu0-3, Flu0-4, FIuoProbes, floressein, floressein izotiyosiyanat, floresan görüntü-kilavuzlu cerrahi, floro-zümrüt boya, fura-2, fura-2- asetoksimetil ester, GelGreen, GelRed, yesil floresan protein, heptametin boyalari, Hint sarisi, Ind0-1, Lusifer sarisi, Iusiferin, MCherry, Merosiyanin, Nil mavisi, Nil kirmizisi, optik parlaklastirici, perilen, floksin, fikobilin, fikoeritrin, fikoeritrobilin, propidyum iyodür, piranin, rodamin, rodamin -stilben, (Z)-stilben, sülforodamin 101, sülforodamin B, SYBR Yesil I, sinapto-pHIuorin, tetrafenil butadien, tetrasodyum tris(bat0fenantrolin disülfonat)rutenyum(ll), Teksas Kirmizisi, Titan sarisi, TSQ, umbelliferon, sari floresan protein ve YOYO-1 dahildir. Mevcut bulusa göre kullanim için fotosensitize edici boyalarin örneklerine, sinirlama olmadan, HpD, Porfimer sodyum (Photofrin®, Photogem®, Photosan Hemporfin®), m- THPC, Temoporfin (Foscan®), Verteporfin (Visudyne®), HPPH (Photochl0r®), PaIadyum-bakteri-feoforbid (Tookad®,) 5-ALA, 5 aminolevulinik asit (Levulan®), 5-ALA metilester (Metvix®), 5-ALA benzilester (Benzvix®), 5-ALA heksilester (Hexvix®), SnET2, Tin (IV) etil etiopurpurin (Purlytin®, Photrex®), NPe6, mono-L-aspartil klorin e6, talaporfin sodyum (Talporfin®, Laserphyrin®), BOPP, boronatli protoporfirin (BOPP®), Çinko ftalosiyanin (CGP55847®), silikon ftalosiyanin (Pc4®), sülfonatli alüminyum ftalosiyanin türevleririin karisimi, (Photosens®), ATMPn, Asetoksi-tetrakis (beta-metoksietil-)p0rfisen), TH9402 ve dibromorodamin metil ester dahildir. Mevcut bulusa göre kullanim için fotosensitize edici boyalarin örneklerine, La Jolla Blue® ve IRDye® ?OODX gibi, floresan görüntülemede kullanilabilenler (örnegin, yakin kizilötesi (NIR) floresan boyalar) dahildir. Mevcut açiklama ayrica, bir tümörü olan bir süjeye, kapsit proteinlerine konjuge isiga duyarli bir tümör-hedefleyici virüs-benzeri partikülün verilmesinin veya bir tümörü olan molekül içeren bir tümör-hedefleyici virüs-benzeri partikülün verilmesinin yöntemlerini de saglamaktadir. Bazi yönlerde süje bir memelidir, mesela bir insandir. Verilis sekli enjeksiyonla, infüzyonla, implantasyonla, topikal verilisle veya virüs-benzeri partiküllerin aktarilmasi için tipik olarak kullanilan herhangi bir diger araçla olabilir. Bazi uygulamalarda, enjeksiyon alanina bagli olarak bos igneler, kapli igneler, mini-igneler veya mikro-igneler kullanilir. Bazi uygulamalarda, verilis sekli, (örnegin, oküler tümörleri veya göze metastaz yapmis tümörleri hedeflemek için) bir gözün intraoküler boslugunun içine veya vitrözün içine enjeksiyonladir. Mevcut açiklamanin virüs-benzeri partiküllerinin aktarilmasi için kullanilabilen belirteçlerin örneklerine, sinirlama olmadan, salin, MgCIz, trehaloz, sodyum hiyalüronat, polisorbat 20, polisorbat 80 veya yukaridaki belirteçlerin ikisinin veya daha fazlasinin herhangi bir kombinasyonu dahildir. Açiklamanin isiga duyarli molekülleri uygun bir dalga boyunca aktive edilebilir. Bazi uygulamalarda, isiga duyarli moleküllerin aktivasyonu molekülleri sitotoksik veya sitotoksik bir molekül üretebilir hale getirir. Uygun dalga boylarina, sinirlama olmadan, ultraviyole dalga boylari, görünür dalga boylari, kizilötesi dalga boylari ve yakin kizilötesi dalga boylari dahildir. Bazi yönlerde isiga duyarli moleküller, 600 nm ila 800 nm veya 660 nm ila 740 nm arasinda bir dalga boyunda aktive edilir ve sitotoksik hale aktive edilir ve sitotoksik hale gelir. Bazi yönlerde isiga duyarli moleküller 600 nm'den az veya 800 nm'den çok bir dalga boyunda aktive edilir. Isiga duyarli molekül aktivasyonu için uygun dalga boylari, kullanilan belirli moleküle bagli olacaktir. Açiklamanin isiga duyarli moleküller, molekülün tipine bagli olarak, kizilötesi, yakin- kizilötesi veya ultraviyole isik tarafindan aktive edilebilir. Örnegin, bazi uygulamalarda, VLP konjugatlarinin isiga duyarli moleküllerini aktive etmek için bir kizilötesi, yakin- kizilötesi veya ultraviyole lazer kullanilabilir. Lazer tarafindan aktarilan enerji yaklasik 5 J ila yaklasik 100 J arasinda, yaklasik 5 Jul (J) ila yaklasik 50 J arasinda veya yaklasik 8 J ila yaklasik 36 J arasinda degisebilir. Bazi uygulamalarda, lazer tarafindan aktarilan saniye ila yaklasik 5 dakika arasinda uygulanabilir. Örnegin, bazi uygulamalarda, isiga uygulanir. Isiga duyarli bir moleküle uygulanan bir isigin veya Iazerin süre uzunlugunun, örnegin, ikincisinin enerjisine (örnegin, watt miktarina) bagli olarak degisebilecegi anlasilmalidir. Örnegin, daha düsük bir watt miktarina sahip lazerler isiga duyarli bir moleküle, molekülün aktive edilmesi amaciyla daha uzun bir süre boyunca uygulanabilir. Bir isik veya lazer isiga duyarli moleküllere (veya VLP konjugatlarina), VLP konjugatlari verildikten yaklasik 30 dakika ila yaklasik 48 saat sonra uygulanabilir. Örnegin, bazi yönlerde isik veya lazer isiga duyarli moleküllere, VLP konjugatlari uygulamalarda, isik veya lazer isiga duyarli moleküllere, VLP konjugatlari verildikten 36 veya 48 saat sonra uygulanir. hedefleyen VLP konjugatlari, gözün aydinlatilmasiyla aktive edilebilir. Mevcut açiklamaya göre herhangi bir tipte tümör hedeflenebilir. Tümörlerin örneklerine, sinirlama olmadan, gözde, akcigerde, plevrada, karacigerde, pankreasta, midede, özofagusta, kolonda, memede, yumurtalikta, prostatta, beyinde, beyin ve omurilik zarinda, testiste, böbreklerde, mesanede, basta, boyunca, servikste, Iarenkste ve/veya deride yer alanlar dahildir. Bazi uygulamalarda, tümör bir oküler tümördür. Oküler tümör vitrözde, koroidal boslukta, iriste, siliyer cisimde, sklerada, göz çukurunda, retinada, optik diskte veya optik sinirde yer alabilir. Tümör, bazi uygulamalarda, kanseröz veya malignandir. Bazi uygulamalarda, tümör metastatiktir. Diger tümörler de hedeflenebilir. Örnegin, mevcut basvuru, servikal kanser hücrelerinin, yumurtalik kanser hücrelerinin. melanom kanser hücrelerinin, akciger kanser hücrelerinin, bas ve/veya boyun kanser hücrelerinin ve mesane kanser hücrelerinin hedeflenmesi için yöntemler ve bilesimler saglamaktadir. BiIesimIer Mevcut açiklamanin virüs-benzeri partikülleri (viral-benzeri nanopartiküller), bazi yönlerde, isiga duyarli moleküle-konjuge viral-benzeri nanopartiküllerdir. Viral-benzeri nanopartiküller, papilloma virüsünden bir veya iki tipte kapsit proteinler ihtiva eder. Bazi yönlerde kapsit proteinleri modifiyedir. Kapsit proteinleri tipik olarak yaklasik 55 nm çapindaki (örnegin, bos bir göbek ihtiva eden küre-benzeri partiküller) "bos" proto- kapsitlerin içinde kendiliginden-bir araya gelir. Viral-benzeri nanopartiküllerin (virüs- benzeri partiküller) olusturulmasi için proto-kapsitlerin olgunlasmasindan sonra, viral- benzeri nanopartiküller daha sonra isiga duyarli bir molekülle (örnegin, LI-COR® tarafindan üretilen kizilötesi bir boya olan lRDye® 700DX gibi IR700) kimyasal olarak konjuge edilir. Bazi yönlerde, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller tek kullanimlik flakonlarda (örnegin, borosilikat cam flakonlar) steril bir solüsyonda (örnegin, 1 veya 2 ml) saglanir. Bazi yönlerde isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller, opsiyonel olarak NaCI, KCI, NazHPO4.2H20, KH2PO4 veya bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin herhangi bir kombinasyonunu içeren suyun steril bir solüsyonunda saglanir. Bazi yönlerde solüsyonda NaCI 400 ila bir konsantrasyonda mevcut olabilir. Bazi yönlerde solüsyonda KCI 2 ila 6 mMol (örnegin, bir konsantrasyonda mevcut olabilir. Bazi yönlerde solüsyonda NazHPO4.2H20 5 ila 15 mMoI (örnegin, 10 mMoI) bir konsantrasyonda mevcut olabilir. Bazi yönlerde solüsyonda KH2PO4 1 ila 3 mMoI (örnegin, 2 mMoI) bir konsantrasyonda mevcut olabilir. Bazi yönlerde isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller seyreltilir ve oftalmik prosedürlerde yaygin olarak kullanilan bir steril siringa ve igne kullanilarak intra-oküler olarak verilir. Mevcut açiklama ayrica, burada baska kisimlarda tarif edildigi üzere, diger verilis yollarini ve diger tümörlere ve/veya metastazlara verilisi de saglamaktadir. Bazi yönlerde her bir viral-benzeri nanopartikül, her bir kapsomerin L1 kapsit proteininin 5 molekülünü (örnegin, her biri ve L2 kapsit proteininin 1 molekülünü (örnegin, her biri 52 kD) ihtiva ettigi sekilde 12-72 kapsomer içerir. Bazi yönlerde her bir viral-benzeri nanopartikül, her bir kapsomerin yalnizca L1 kapsit proteinlerini (örnegin, kapsomer basina L1 proteininin 5 molekülü) ihtiva ettigi sekilde 12-72 kapsomer içerir. Bazi yönlerde her bir viral-benzeri nanopartikül, proteinin en az bir amino asidine (örnegin, Iizin amino asidi) isiga duyarli molekülün (IRDye® 700DX gibi IR700 boya) 10 ila 1000 molekülüyle (örnegin, 500 molekül) (örnegin, bir amid bagi vasitasiyla) kimyasal olarak konjuge edilir. Virüs-benzeri partiküllerin üretilmesinin yöntemleri Mevcut açiklamanin isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerinin üretilmesi için, memeli hücreleri, mesela (örnegin, süspansiyon kültüründe) büyütülebilir ve geçici olarak BPV veya HPV L1 (veya L1 ve L2) kapsit proteinlerini kodlayan bir nükleik asitle (örnegin, bi-sistronik plazmid DNA) transfekte edilir. Bu, (örnegin, Buck et. al. Current Protocols in Cell Bio/ogy 26.1.1- 26.1.19, Aralik 2007'de tarif edildigi üzere) proto-kapsitlerin olusumunu indükler. Hücre kütlesi geri kazanimi ve parçalanmasinin ardindan, proto-kapsitler benzonaz tedavisiyle konak DNA klirensine ve stabil viral-benzeri nanopartiküller olusturmak için müteakip bir in vitro olgunlastirma islemine tabi tutulabilir. Saflastirmanin ardindan, viral-benzeri nanopartiküller, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller üretmek için isiga duyarli moleküllerle (örnegin, IR kimyasal olarak konjuge edilebilir. SEKIL 23, burada saglanan bir üretim isleminin bir örneginin sematik bir temsilini göstermektedir. Böylelikle, bazi yönlerde, burada isiga duyarli moleküllerin üretilmesinin, (a) hücrelerin bir veya daha fazla kapsit proteini kodlayan bir nükleik asitle geçici olarak transfekte edilmesini, bu sayede proto-kapsitlerin olusturulmasini, (b) proto-kapsitlerin toplanmasini ve proto-kapsitlerin bir in vitro olgunlastirma islemine tabi tutulmasini, bu sayede stabil viral-benzeri nanopartiküllerin olusturulmasini ve (c) viral-benzeri nanopartiküllerin 50 ila 1000 isiga duyarli moleküle kimyasal olarak konjuge edilmesini içeren yöntemler saglanmaktadir. Bazi uygulamalarda, viral-benzeri nanopartiküller 500 isiga duyarli moleküle konjuge edilir. Bazi uygulamalarda. viral-benzeri nanopartiküller isiga duyarli moleküllere, bir amid bag yoluyla (örnegin, isiga duyarli bir molekülün bir ester grubunun, bir viral-benzeri nanopartikülün kapsit proteininin bir amino asidinin bir amin grubuyla tepkimeye sokulmasiyla) konjuge edilir. ÖRNEKLER Örnek 1 - IRDye® ?OODX 'in Konjugasyonu VLP'Ierin (örnegin, varyant HPV16/31 L1 proteinlerinin ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller) isiga duyarli bir moleküle (örnegin, IRDye® 700DX) kimyasal konjugasyonunun prosedürü asagidaki gibidir. Tipik olarak, VLP'Ierin solüsyonlari PBS, pH=7,2 ve 0,3 ila 0,5 M NaCI içinde 1 mg/ml'lik bir konsantrasyonda muhafaza edildi. IR molekülleri üreticiden kuru NHS (N-Hidroksisüksinimid) esterleri olarak tedarik edildi (NHS- esterleri, amid baglari olusturmak için proteinleri üzerindeki amin gruplariyla tepkimeye girer) (SEKIL 10A). Proteinler üzerindeki mevcut amin gruplari, proteinin amino uçlaridir veya amino asit (örnegin, Iizin) üzerindeki s-amin grubudur. Kuru kati IR700- NHS esteri DMSO içinde 5 mg/ml'lik bir konsantrasyonda çözündürüldü ve donmus sekilde saklandi. Tipik olarak, farkli VLP:boya oranlari, farkli IR700-NHS miktarlarinin, VLP'nin sabit bir miktarina, çogunlukla PBS içinde 1 mg/ml solüsyonun 1 ml oraniyla karistirilmasiyla elde edildi. IR700-NHS'nin tipik oranlari ve miktarlari asagidaki tabloda orani NHS kütlesi solüsyonu hacmi 200:1 16 ug 3.2 pl 50011 40 ug 8 pl 1000:1 80 pg 16 pl esteri solüsyonuyla karistirildi. Bu tepkimeler 2-4 saat süreyle oda sicakliginda gerçeklestirildi. Tepkimenin tamamlanmasinin ardindan VLP'Ier, baglanmamis lR700- NHS'nin (isiga duyarli bir VLP olarak da ifade edilen) yeni olusan VLP-IR700 konjugatindan ayirmak için heparin afinite kolon kromatografiyle saflastirildi. Örnek 2 -Visudyne®'in Konjugasyonu Visudyne®'in VLP'Iere konjugasyonu, IR700-NH8'ye göre hafifçe farkli bir protokol izledi. Visudyne® molekülleri, VLP'Iere konjugasyon öncesinde NHS'ye fonksiyonellestirme gerektirdi. Bu fonksiyonellestirme, EDC (1-etil-3-(-3- dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorür) kullanimi yoluyla elde edildi. EDC, Visudyne® gibi serbest bir karboksilik asit molekülüne sahip moleküllerin fonksiyonellestirilmesi için (bakiniz SEKIL 108, daire içinde) ve sülfo-NHS varliginda NHS bölütünü bu ajana etkili sekilde transfer etmek için kullanildi. Bu tepkime semasi SEKIL 11'de gösterilmektedir. Kisaca, yaklasik olarak 2 mM EDC ve sülfo-NHS'nin 2x bir molar fazlaligi, degisen miktarlarda Visudyne® ile tepkimeye sokuldu. Oda sicakliginda 15 dakika sonra, tepkimeler, 20 mM'Iik bir nihai konsantrasyon olarak 2- merkaptoetanol eklenmesiyle durduruldu. Bu tepkime karisimi, PBS, pH=7,2 + O,3-O,5 M NaCl içinde 1 mg/ml'lik bir konsantrasyonda 1 mg VLP'ye eklendi ve 2-4 saat süreyle oda sicakliginda inkübe edildi. Son olarak, tepkimeye girmemis bilesenler VLP- konjugatlarindan heparin afinite kolon kromatografiyle ayrildi. Örnek 3 - VLP baglanma özgüllügüne HSPG aracilik eder ve heparin tarafindan önlenir. Süspansiyon içinde SK-OV-3 hücrelerine asagidaki kosullar altinda muamele edildi: sifir VLP (örnegin, varyant HPV16/31 Li proteinlerinin ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller), VLP Alexa Fluoi® 488'e VLP konjugatlari HSPG varliginda inkübe edildi. Inkübasyonun ardindan, bu kültürler 4 jul 690 mm yakin kizilötesi isiga maruz birakildi. Isiga tutulmamis hücrelerin paralel bir kümesi bir kontrol görevi gördü. Isiga tutmanin ardindan, kültürler hücre ölümünün seviyesi için tayin edildi. SEKIL 3, kayda deger hücre öldürmenin oldugu tek kosulun, ölümü AF488*PsV'ye maruziyetle gözlemlendi, bu da hücre ölümünün IR700 boya konjugatlarina özgü oldugunu ortaya çikarmaktadir. Dahasi, hücre ölümü HSPG varliginda neredeyse tamamen ortadan kalkar ve bu da hücreye VLP baglanmasinin Örnek 4 - Hücre ölümü kizil ötesi radyasyona ve VLP ile lR700iün miktarina baglidir. Süspansiyon içinde SK-OV-3 hücreleri, farkli miktarlarda IR700 boyasi (örnegin, varyant HPV16/31 L1 proteinlerinin ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller) ile muamele edildi. IR700 boyasina konjugasyon olmadan VLP bir kontrol olarak kullanildi. Inkübasyonun ardindan, bu kültürler 0 veya 16 jul 690 nm yakin-kizilötesi isiga maruz birakildi. Isik muamelesinin ardindan, hücre ölümünün derecesi tayin edildi. SEKIL 4, hücre ölümünün hem IR700 boyasinin varligina hem isik muamelesine bagli oldugunu göstermektedir. Bu, hücre ölümünün hem VLP konsantrasyonuna hem IR700 boya konjugasyon oranina bagli olduguna dair gözlemle desteklenmektedir. Örnek 5 - IRTOO'e konjuge VLP'ler ile muamelenin ardindan isiga tutma üzerine SKOV-3 hücrelerinin in vitro hücre ölümü. SKOV-3 yumurtalik kanseri hücreleri 24-kuyucuklu bir plaka üzerine kaplandi ve 1 saat süreyle 37°C'de, iki farkli konsantrasyonda isiga duyarli VLP partikülleriyle (örnegin, kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller), 2,5 ug (kirmizi) ve 0,25 ug (mavi) ile muamele edildi. Baglanma üzerine, hücreler yikandi, ardindan 4J isikla muamele edildi. Hücre ölümü, LDH saliminin enzimatik kestirimi üzerine belirlendi (490 nmlde emilimin ölçülmesiyle belirlendi). VLP:IR700 konjugasyonunun üç farkli molar maksimum etkililiginin, test edilen her iki konsantrasyon için 1:1000'Iik bir VLP:IR700 ("PsVzlR700") oraninda gözlemlendigini göstermektedir. Deterjan-aracili hücre Iizisi bir pozitif kontrol olarak kullanildi. Örnek 6 - IR700-PSV komplekslerinin yapisal degerlendirilmesi SEKIL 6, kontrol VLP'Ierinin (PsV) (A) ve IR bir ESI- TOF analizini göstermektedir. SEKIL GB'de, tepkime, her bir VLP (PsV) molekülünün taramalarindaki sinyal vuruslari VLP L1 proteinine karsilik gelmektedir. Kontrol numunelerine göre konjuge numunelerinde 5517 amu bir degisim gözlemlendi, bu konjuge numuneler L1 proteini basina 3 konjuge IR700 molekülünün (1840 amu) veya VLP basina yaklasik 1000 IR700 molekülünün bir ortalamasina karsilik gelmektedir (tipik olarak, VLP basina 360 L1 bulunmaktadir). Örnek 7 - Ajan baglama, bir oküler melanom hücre hattindaki hücre ölümünün derecesini belirler. Süspansiyon içinde oküler melanom hücre hatti ( degisen seyreltilerde boyasina konjuge VLP'Iere (örnegin, varyant HPV16/31 L1 proteinlerinin ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller) maruz birakildi. Paralel kültürler daha sonra ajan baglama (SEKIL 7C) veya 16qu 690 nm yakin-kizilötesi isik yoklugunda (SEKIL 78) veya varliginda (SEKIL 7A) hücre ölümü için tayin edildi. SEKIL TC, 92.1 oküler melanom hücrelerine konsantrasyon-bagimli VLP baglanmasini gösterirken, Herceptin® antikor baglanmasi esasen mevcut degildir. SEKIL 7B, isik yoklugunda, hiç hücre ölümünün olmadigini göstermektedir. SEKIL 7A, yalnizca isiga duyarli VLP-muameleli hücrelerde konsantrasyon-bagimli hücre ölümünü göstermektedir. Örnek 8 - Ajan baglama, bir yumurtalik kanseri hücre hattinda hücre ölümünün derecesini belirler. Süspansiyon içinde SK-OV-3 hücreleri (HER2') degisen seyreltilerde, IR700 boyasina (örnegin, IRDye® 700DX) konjuge Herceptin® antikorlarina veya VLP'Ierin partiküllerine (örnegin, varyant HPV16/31 L1 proteinlerinin ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller) maruz birakildi. Paralel kültürler daha sonra Herceptin® veya VLP baglama (SEKIL 80) veya 16 jul 690 nm yakin-kizilötesi isik yoklugunda (SEKIL SB) veya varliginda (SEKIL 8A) hücre ölümü için tayin edildi. SEKIL 8C, VLP baglamanin SK-OV-3 hücrelerinde doydugunu göstermektedir. Herceptin® baglama da konsantrasyon bagimlidir, ancak VLP'Iere göre daha az bir derecededir. SEKIL 8B, isik yoklugunda hiç hücre ölümü olmadigini gösterir. SEKIL 8A her iki kosul altinda ancak baglanmaya benzer konsantrasyon bagimli hücre ölümünü göstermektedir, yanit VLP'ler ile doymusken Herceptin® ile hücre ölümünde bir konsantrasyon-bagimli artis vari gibi görünmektedir. Bu veriler, Örnek 9 - Asi indüklü anti-HPV16 nötrlestirici antikorlar, BPV*IR700 VLP'Ierin oküler melanom hücre hatti, 92.1'e baglanmasini bloke etmez. Farkli antikorlar ihtiva eden serum numuneleri, 92.1 oküler melanom hücre hattina baglanan isiga duyarli VLP partiküllerini (örnegin, HPV16 VLP`ler veya BPV VLP'ler) önleme yetisi için test edildi. SEKIL 9, "sifir serumun" veya "naif serumun", VLP baglanmasini nötrlestiren hiç aktivite ihtiva etmedigini göstermektedir. Dahasi, bloke etme aktivitesi virüs serotipi için özgül olarak gözlemlendi. Yani, yalnizca IR700 boyasina konjuge insan papilloma virüs-benzeri partiküller (HPV16-IR700) HPV16 antikorlar ihtiva eden serumla nötrlestirildi. IR700`e konjuge bovin papilloma virüs- benzeri partiküller (BPV-IR700), HPV16-özgü antikorla ihtiva eden serum tarafindan nötrlestirilmedi. Örnek 10 - Immünojenesite degerlendirilmesi Örnek 9'da tarif edilen benzer bir çalismada, nötrlestirme titreleri, HPV16'ya veya BPV`ye karsi antikorlar ihtiva eden serumlarin seri seyreltilmeleriyle belirlendi. Tablo 2'de açiklanan sonuçlar, HPV16'ya karsi antikorlarin yalnizca HPV16'yi nötrlestirdigini göstermektedir. Dahasi, BPV'ye karsi antikorlar yalnizca BPV'yi nötrlestirmektedir. Böylelikle, ne BPV,ye karsi HPV16 antikorlarinin ne de HPV16'ya karsi BPV antikorlarinin çapraz-tepkenligi bulunmaktadir. Örnek 11 - Baglanma Çalismasi Bu Örnegin amaci, insan papilloma virüsü 16 (HPV16) kapsit proteinleri, varyant HPV kapsit proteinleri ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküllerin çesitli tiplerde kanser hücrelerine baglanmasini tayin etmekti. Ek olarak, L1 ve L2 kapsit proteinleri veya yalnizca L1 kapsit proteinleri ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller, kanser hücrelerine baglanan viral-benzeri nanopartikül için L2"ye bir bagimliligin olup olmadigini belirlemek için test edildi. Bu çalismanin sonuçlari, BPV viral-benzeri nanopartiküllerin ve HPV viral-benzeri nanopartiküllerin baglanmasinin benzer oldugunu göstermektedir. Asagidakileri içeren çok genis bir hücre hatlari paneli tarandi: çesitli hücre hatlari (örnegin, , servikal hücre hatlari (örnegin, HeLa, SiHa, CaSki ve C-33A), yumurtalik hücre hatlari (örnegin, MOSEC, SHIN-3. SK-OV-3, WF-3, ES-2, A, melanom hücre hatlari (örnegin, B, oküler melanom hücre hatlari (örnegin, , akciger hücre hatlari (örnegin, NCI-H23, NCI-H, bas ve boyun hücre hatlari (örnegin, ÇAL-33 (HPV-), FaDu (HPV-), HSC-3 (HPV-), SNU-, UPCI- SSC-90 (HPV+) ve UPCI-SCC- ve mesane hücre hatlari (örnegin, 5637, J82, RT. Deney öncesinde, viral-benzeri nanopartiküller, hücre yüzeyine baglanan viral-benzeri nanopartikülün kolay ve dogrudan analizine olanak saglamak için AIexaFluor488'e konjuge edildi. AIexaFlu0r488. baglanmaya müdahale etmeyen N-Hidroksisüksinimid (NHS)-ester kimyasi kullanilarak viral-benzeri nanopartiküle eklendi. Viral-benzeri nanopartiküllerin her biri 10 ug/ml, 1 pg/ml ve 0,1 u/ml'lik bir konsantrasyonda test Hücreler, bunlarin doku kültürü plakalarinin yüzeyinden çikarilmasi için tripsinlendi, yikandi ve sallanan platform üzerinde büyütme vasatinda 4 saat süreyle 37°C'de toparlanmalari saglandi. Hücreler daha sonra yikandi, sayildi ve fosfat tamponlu salin (PBS)/%2 fötal bovin serumu (FBS) içinde 1 x 105 hücre/kuyucuk olarak 96-kuyucuklu bir yuvarlak dipli plakaya yerlestirildi. Hücrelere 100 ul'lik PES/%2 FBS bir nihai hacimde viral-benzeri nanopartiküller eklendi. Heparinle (1 mg/ml, 1 saat, 4°C) ön- inkübe edilen viral-benzeri nanopartiküller de kontroller olarak kuyucuklara eklendi. Hücreler ve viral-benzeri nanopartiküller daha sonra 1 saat süreyle 4°C'de (karanlikta) inkübe edildi, iki kez FBS/%2 FBS ile yikandi ve 15 dakika süreyle oda sicakliginda %4 paraformaldehit ile sabitlendi. Hücresel sonra olarak yeniden yikandi ve 200 pl PBS/%2 FBS içinde yeniden süspanse edildi ve BD FACSDIVATM (BD Biosciences, San Jose, CA) ve FlowJo yazilimi kullanilarak bir BD FACS CANTOTM ll (BD Biosciences, San Jose, CA) üzerinde analiz edildi. hücre hatlari kullanilarak sonuçlar SEKIL 12'de histogramlar olarak sunulmaktadir. SEKIL 12'den görüldügü üzere, tüm viral-benzeri nanopartiküller, serotiplerine veya özyapilarina (L1'e karsilik L1/L2) bakilmaksizin baglanma tayininde kanser hücrelerine baglanir. Dahasi, heparin baglanma için rekabet eder, bu da viral-benzeri nanopartikül baglanmasinin özgül ve HSPG bagimli oldugunu ortaya koymaktadir. Örnek 12 - Biyodagilim Süreci Bu Örnegin amaci, tümör-tasiyan hayvanlara intravenöz enjeksiyonun ardindan tümör konumlandirmasini ve viral-benzeri nanopartiküllerin klirensinin sürecini tayin etmekti. Saflastirilmis viral-benzeri nanopartiküller, viral-benzeri nanopartiküllerin (örnegin, varyant HPV16/31 Li proteinlerinin ve HPV L2,nin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller) 1:500'Iük bir viral-benzeri nanopartikülzboya oraninda viral-benzeri nanopartiküller, OPTIPREPTM Yogunluk Gradyan Vasati kullanilarak yogunluk gradyan ultrasantrifüjlemeyle saflastirildi. içinde subkütan enjeksiyonuyla olusturuldu. Yaklasik iki hafta sonra, hayvanlar tedavi gruplarina rastgele ayrildi. Tümör-tasiyan hayvanlar intravenöz enjeksiyonla 100 ulllik bir hacimde PBS veya 200 ug isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül aldi. Enjeksiyonun on iki veya yirmi dört saat ardindan, hayvanlara ötenazi yapildi. Ötenazinin ardindan, tümör dokusu hasat edildi ve isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin varligini gösterecek sekilde IR700 boyasinin (örnegin, lRDye® 7OODX) florisimasi için görüntülendi. SEKIL 135, hem 12 hem 24 saatlik zaman noktalarindan elde edilen tümör dokusunda saptanabilir IR700 boyasi (örnegin, lRDye® 700DX) florisimasini gösterirken, PBS kontrolde (12 saatlik zaman noktasi) florisima saptanmadi. Tümör dokusundaki kantitatif toplam florisima, SEKIL 14'te gösterilen grafikte çizilidir. Örnek 13 - Biyodagilim Süreci Bu Örnegin amaci, tümör-tasiyan hayvanlara intravenöz enjeksiyonun ardindan tümör konumlandirmasini ve viral-benzeri nanopartiküllerin klirensinin sürecini tayin etmekti. Saflastirilmis viral-benzeri nanopartiküller lizat içinde AlexaFIuor488 ile etiketlendi ve OPTIPREPT'VI Yogunluk Gradyan Vasati kullanilarak yogunluk gradyan ultrasantrifüjlemeyle saflastirildi. içinde subkütan enjeksiyonuyla olusturuldu. Yaklasik 2 hafta sonra, intravenöz enjeksiyonla 100 ul'lik bir hacimde 200 ug isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül aktarildi. Tümörler isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül enjeksiyonunun ardindan üzerine, tümörlerin fragmanlari mikroskobik tayin için donduruldu. Bu mikroskobik tayin için, doku kesitleri daha fazla boyandi. HPV16'ya karsi tavsan poliklonal serumlari bir AIexafluor-488 ikincil antikorla birlikte kullanildi. Kan damarlari bir siçan anti-CD31 antikoruyla ve bir anti-siçan AlexaFIuor-594 ikincil antikoruyla es-boyandi. Çekirdekler DAPI ile vurgulandi. Veriler (in situ görüntüler gösterilmemektedir) 1-saatlik zaman noktasinda isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin varligini ortaya koymaktadir. Sinyalin konumlandirilmasi kan damarlarinin içerisinde iliskili gibi görünmektedir. Boyamanin maksimum seviyesi 8-saatlik zaman noktasinda ortaya çikiyor gibi göründü ve 8-saatlik zaman noktasinda, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller kan damarlarinin içinden tümör hücrelerine difüze oluyor gibi göründü. Sori olarak, 24-saatlik ve 48-saatlik zaman noktalarinda, tümörde az viral-benzeri nanopartikül sinyali var gibi göründü. Örnek 14 - Sistemik verilisten sonra in vivo etkili/ik Bu Örnekte sunulan çalisma, tek bir tedaviden 24 saat sonra tümör viyabilitesini ölçmek için tasarlandi. Çalisma, uzun-dönemli in vivo çalismalar için kilavuz olusturmaktadir. Tam çalisma tasarimi SEKIL 15'te resmedilmektedir. Tümör boyutlarindaki aralik nedeniyle, hayvanlar, büyük ve küçük tümörlerin esit bir dagiliminin her bir grup içinde salin-tedavili gruplarda n=3 ve IR-isiga duyarli viral- benzeri nanopartikül-tedavi" gruplarda n=5 olacagi sekilde rastgele ayrildi. Viral benzeri nanopartiküller, isik tedavisinden önce intravenöz olarak 12 saat verilmistir. 62,3 5) veya 50 J ( içerdi. 24 saat sonra, tümörler hasat edildi ve bir tekli hücre süspansiyonu olusturmak için kolajenaz ve DNaz kullanilarak islendi. Daha sonra BD LIVE/DEAD® sari boya uygulandi ve hücreler bir FACS CANTOTM Il yoluyla yerlestirildi. Veriler, Pasifik turuncusu kanalindaki florisimada bir degisimle gösterildigi üzere ölü hücrelerin yüzdesi olarak bildirilmektedir (SEKIL 16A). isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül (NP'Ier) dozu, 50 J isikla tedaviden sonra tümör hücrelerinin çogunlugunu öldürme becerisine sahipti (SEKIL 168 ve SEKIL 170). 200 ug NP ile öldürme seviyesi, tümörler 25 J isikla (SEKIL 168 ve SEKIL 17B) tedavi edildiginde neredeyse yariya yeterli degildi; ancak bazi tümör ölümleri 50 J dozunda (SEKIL 168 ve SEKIL 17C) gözlendi. Bu çalisma in vi'vo çalismalar için gerekli IR7OO (örnegin, IRDye® 700DX) isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller ve isik dozaj bilgisini sagladi. Örnek 15 - Bagisiklik Sistemi Aktivasyon Çalismasi TC-1 tümör modeli, bagisiklik yetenegi olan hayvanlarda viral-benzeri nanopartiküllere tedavi üzerine anti-tümör bagisiklik indüklenmesini inceleme yetisini saglamaktadir. TC-1 tümör hatti, HPV16 onkojenleri E6 ve E7`nin yani sira c-Ha-Ras eksprese eden mutasyona ugratilmis bir gen ile ölümsüzlestirilen C57Bl/6 akciger epitelyal hücreler subkütan olarak implante edilebilir veya metastatik modellerin çalisilmasi için. akcigerlerdeki tohum hücrelerine intravenöz olarak enjekte edilebilir. Neredeyse yirmi yildir bu hücreler, Eö ve E? terapötik asi etkililiginin test edilmesi için kullanilmistir. E7, bir CD8 T-hücresi yaniti kendisine karsi meydana çikarilirsa (H-2Db, aa koruyucu oldugu gösterilmis olan (Feltkamp MC, et al. European Journal epitopuna sahiptir. Bu yanitlar hem tetramer boyamasiyla ve hücrelerin yeniden- uyarilmasiyla ve ardindan hücre içi sitokin boyamayla saptanir. Doz Yanit Çalismasi: Hayvanlar subkütan olarak 100 ul PBS içinde 2 x 105 TC-1 hücreleriyle asilandi. Asilamadan yaklasik olarak iki hafta sonra, hayvanlar rastgele sekilde alti gruba ayrildi: (1) tedavi kontrolleri yok, (2) isik kontrolleri olmadan (IRDye® TOODX ile etiketlenen varyant HPV16/31 L1 proteinlerinin ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden) 100 ug viral-benzeri nanopartiküller, (3) 50 J/cm2 isik isikla 100 bg n viral-benzeri nanopartiküller ve (6) 50 J/cm2 isikla 50 ug viral-benzeri nanopartiküller. Fareler 100 ul'lik bir hacimde intravenöz enjeksiyonla PBS veya viral- benzeri nanopartiküller aldi ve isik tümöre 12 saat sonra 890 nm bir lazer kullanilarak uygulandi. Tümörler 24 saat sonra hasat edildi, tekli bir hücre süspansiyonu olusturmak için özütlendi ve ölü hücrelerin yüzdesinin ölçülmesi için bir viyabilite boyasiyla boyandi (SEKIL 18, üst). Yüksek doz grubundaki birçok hayvan, muhtemelen masif ve hizli tümör nekrozu ve hücre içi bilesenlerin hayvanlarin sistemine salimi nedeniyle tümör Iizis sendromuyla ilgili semptomlar yasadi. "50 J/cm2 isikla 100 ug nanopartikül" grubundakilerin hiçbiri ölmezken, gruptaki fareler hastaligin bazi belirtilerini sergiledi (SEKIL 18, üst). "Isiksiz 100 ug nanopartikül" ve "50 J/cm2 isikla PBS" gruplari hastaligin belirtilerini göstermedi, bu da gözlemlenen yanitin viral-benzeri nanopartiküllerin ve isigin kombinasyonu nedeniyle oldugunu göstermektedir. Genel olarak, viral-benzeri nanopartiküller ve isik almis olan tüm gruplarda nekroz görüldü. Maksimal öldürme tüm gruplarda meydana geldi ve hiç doz yaniti gözlemlenmedi (SEKIL 18, alt). Sagkalim ÇalismaSI.' Hayvanlar subkütan olarak 100 pl PBS içinde 2 x 105 TC-1 hücreleriyle asilandi. Asilamadan yaklasik iki ila üç hafta sonra, hayvanlar rastgele sekilde tedavi grubuna (25 ug viral-benzeri nanopartiküller) ve plasebo grubuna (yalnizca PBS) ayrildi. Fareler üç gün arayla iki tur tedavi aldi. Bir tedavi 100 pl 25 ug viral-benzeri nanopartikül veya steril PBS olarak bir tekli intravenöz enjeksiyon, ardindan 12 saat sonra 690 nm bir lazer kullanilarak 50 J/cm2"de isik tedavisi olarak degerlendirildi. Tümör hacimleri her 3-4 günde bir ölçüldü ve hayvanlar tümörleri 1500 mm3 bir boyuta ulastiginda ötenazi edildi (SEKIL 19A). Viral-benzeri nanopartiküllere tedavi 500 mm3"ten az tümörleri olan hayvanlarda tümörlerin büyümesini veya yayilmasini geciktirebildi (SEKILLER 198 ve 19C). Plasebo grubunda tümör büyüme kinetikleri üzerinde hiç etki yoktu. En küçük tümörlerle baslamis olan iki hayvan birinci tedavinin 7 günü içerisinde hiç tümör kaniti göstermedi ve hayvanlarin üçü tümör azalmasi belirtileri gösterdi (SEKIL 190). Immünoloji Çalismasi.' Immünolojik okuma için, kari 0. günde (birinci tedaviden önce), . günde ve 17. günde alindi. Kirmizi kan hücreleri Iize edildi ve kalan hücreler ikiye peptidi 49-57 ile yeniden-uyarildi ve ardindan CD4, CD8 ve IFN-gammaya karsi antikorlarin yani sira canli hücrelerin ayirt edilmesi için bir viyabilite boyasiyla boyandi. Kontrollü tümör büyümesi olan iki hayvanin kaninda, hem "E7 tetramer+ CD8+ T- hücreleri" hem "INF-gamma salgilayan CD8+ hücreleri" (E7 peptidiyle yeniden- uyarilmadan sonra) saptanabildi, bu da potansiyel bir anti-tümör yanitinin meydana çikarildigini gösterdi (SEKIL 19C). Örnek 16 - Histolojik Analiz HPV16/31 L1 proteinlerinin ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral-benzeri nanopartiküller) histolojik seviyedeki etkileri, bir murin ksenograft modeli kullanilarak tayin edildi. Kisaca, 1,5 x 106 92.1 uveal melanom hücreleri nu/nu farelerinin art bögrünün subkütan bosluguna implante edildi. Tümörlerin yaklasik olarak 200 mm3,e ulasmasi saglandi, bu anda hayvanlar 200 ug isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin intravenöz bir enjeksiyonuyla tedavi edildi. Isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin enjeksiyonundan on iki saat sonra, tümör alani 50 J/cm2 690 nm yakin-kizilötesi isikla isimaya tabi tutuldu. Ek bir 24 saatlik süreden sonra, hayvanlar ötenize edildi, tümör dokusu eksize edildi, formalinde sabitlendi, parafine gömüldü ve standart histolojik inceleme için islendi. Hematoksilin ve eosin (H&E) görüntüleri, tedavi edilmemis kontrollerle (görüntüler gösterilmemektedir) karsilastirildiginda büyük bir derecede nekroz açiga çikardi. Isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllere ve lazerle tedavi edilen tümör, kontrol tümörüyle karsilastirildiginda soluk bir görünüse sahipti. Daha yüksek büyütmede Inceleme üzerine, isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül-tedavili tümörler, kontrol tedavili tümöre kiyasla çarpici bir sitoplazma kaybi gösterdi. Dahasi, nekrozun derecesi, NIR isigin tümör dokusunun tüm derinligi üzerinden nüfuz ettigi sonucuna yol açarak tüm tümörü kapladi. Örnek 17 - Uveal Melanomun Ortotopik bir Ksenograft Mode/inde Viral-benzeri nanopartikül Aktivitesi Gözün en yaygin primer malignitesi uveal melanomdur (UM). Yillik olarak ABD'de yaklasik 2.000 hasta mevcuttur, bu durum Avrupa`da daha sik ortaya çikar. UM için birçok tedavi seçenegi var olsa da, hiçbir tedavi tümör büyümesini güvenilir sekilde kontrol etmez, görüsü korumaz ve radyasyon-iliskili yan etkilerin ortaya çikmasini minimize etmez. Viral-benzeri nanopartikül fototerapi (PT), hem ilacin hem isik aktivasyonunun verilisini gerektiren iki-asamali bir islem içeren yeni bir moleküler-hedef" kanser terapisidir. Viral-benzeri nanopartikül PT'nin ilaç kismi, bir isik sensitizörü görevi gören bir yakin- kizilötesi (NIR) ftalosiyanin boya olan IRDye®700 DXIe konjuge bir isiga duyarli viral- benzeri nanopartiküldür (NP), ardindan primer uveal melanomu olan yetiskinlerin tedavi edilmesi için tasarlanan termal-olmayan NIR isigi uygulanir. Mevcut çalismada isiga duyarli viral-benzeri nanopartikülün anti-kanser aktivitesi, uveal melanomun ortotopik bir ksenograft modelinde degerlendirildi. Bu modelde, insan uveal melanom hücreleri, immün-bastirilmis tavsanlarin koroidal boslugunun içine implante edildi ve büyümeleri saglandi. Tümörler fundoskopi ile gözlemlenebilir oldugunda, hayvanlar tedavi veya kontrol gruplarina ayrildi. Her iki durumda da, hayvanlar progresif tümör büyümesi veya tedaviye yanit için fundoskopi ve ultrasonla takip edildi. Çalismanin sonlandirilmasinin ardindan, tümör-tasiyan gözler ayrica tümörün kabaca grosu ve histopatoloji ile de incelendi. Bu çalisma, 92.1 uveal melanom hücre hatti ile implante edilen toplamda 20 tavsan kullanilarak gerçeklestirildi. Toplamda, yirmi hayvanin 11'i tümör gelistirdi. Iki hayvan tedavi öncesindeki takip sürecinde beklenmedik sekilde öldü; bu hayvanlar tedavi edilmemis kontroller olarak kullanildi. Birçok hayvan, lazerlenmemis ekstra-oküler tümöre sahipti; bunlar dahili kontroller olarak kullanildi. Anteriyor haznede tümörleri olan hayvanlar çalismadan hariç tutuldu. Tedavi edilen tüm tümörler, kontrol hayvanlarina kiyasla majör bir tümör yaniti gösterdi ve bu da fundoskopi, gros patoloji ve histopatoloji degerlendirmesiyle ortaya kondu. Tümörlere bitisik retinal dokular tedaviden etkilenmedi. Sonuç olarak, isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül verilisinin ve lazer tatbikinin ardindan görülen tümör yanitinin ve nekrozun derecesine dayali olarak, burada saglanan tedavi metodolojisi, uveal melanom tümörlerinin tedavisi için kullanilabilir. Çalisma Programi: Iki tedavi grubu: 1) tam tümör tedavisi; 2) Tedavi yok. Hayvanlarin gelisi 22/23 Nisan, 2014 Tümör hücresi implantasyonu 29/30 Nisan, 2014 Tedaviye baslama 20 Mayis, 27 Mayis, 3 Haziran 2014 Çalisma sonlandirma 24 Haziran 2014 Taslak rapor 25 Temmuz. 2014 Test Sistemi Tür: Tavsan Sus: Yeni Zelanda Albino Sayi ve Cinsiyet Siparis edilen toplam: 20 Çalismada önerilen toplam: 20 Cinsiyet: Disi Alindigindaki Yas: 6 ay Kaynak: Charles River Tanimlama: RFID ve kulak etiketi Hücre kültürü Insan uveal melanom hücre hatti 92.1 (Dr. Jerry Y. Niederkorn, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, TX sayesinde) 37°C'de %5 COz'de tam kültür vasatinda (%10 fötal bovin serumu, 100 U/mL penisilin G, 250 ng/mL amfoterisin B ve kültürlendi. Hayvanlar ve immün-baskilamanin indüklenmesi Yaklasik 3 kg'lik bir ortalama ilk agirliga sahip Yeni Zelanda albino tavsanlar bu çalisma için kullanildi. Tavsanlar günlük olarak siklosporin A (CsA; Sandimmune 50 mg/mL; Novartis Pharmaceuticals, Cambridge, MA, ABD) subkütan enjeksiyonlariyla immün-baskilandi. CsA verilisi, spontan tümör regresyonunun engellenmesi için deney boyunca muhafaza edildi. Dozaj programi hücre asilamasindan önce 3 gün ve sonrasinda 4 hafta boyunca günde 15 mg/kg ve ardindan deneyin sonuna kadar günde mg/kg idi. Dozaj veterinerin takdiriyle daha da azaltildi. CsA dozlari günlük olarak her bir hayvanin vücut agirligina göre ayarlandi. Vücut agirligi günlük olarak ölçüldü ve tavsanlarin yuvalandigi odaya asildi. Takip esnasinda, hayvanlar günlük olarak, diseti hipertrofisi, salya artisi, diyare ve kilo kaybi gibi CsA toksisitesinin belirtileri için izlendi. Hayvanlar CsA toksisitesinin erken belirtilerini (örnegin, istah kaybi) gösterdiyse, istah arttirma ve GI hareketlilik güçlendirici gibi destek yönetimi için derhal veteriner personeline danisildi. Enjeksiyon dozunun ayarlanmasi da veterinerin tavsiyesine göre degerlendirildi. Hücre implantasyonu CsA tedavisinden sonraki 3. günde, hayvanlar ketamin (40 mg/kg) ve ksalazin (6 mg/kg) intramusküler enjeksiyonla uyutuldu. Anesteziden sonra, sag gözlere 1-3 damla insan uveal melanom hücreleri enjekte edildi. Kisaca, killarla veya kirpiklerle herhangi bir kontaminasyonunun önlenmesi amaciyla gözün üzerine steril bir bez örtüldü ve konjunktiva %10 betadin solüsyonuyla temizlendi. Daha sonra, göz, oküler kaslarin altinda dikisler kullanilarak ileri döndürüldü ve konjunktivanin kesilip çikarilmasindan sonra, Iimbustan yaklasik 10 mmlde bir sklerotomi gerçeklestirildi. Kanül daha sonra sklerotominin içine (uzunlugunun 1/3-1/2'si) sokuldu ve hücreler (1,0 x 10^6 hücre ihtiva eden 100 pl) suprakoroidal boslugun içine enjekte edildi. Igne yavasça geri çekildi ve sklerotomiyi kapatan dikisler, enjeksiyon alanindan minimal geri akisin temin edilmesi için sikilastirildi. Enfeksiyonun engellenmesi için cerrahi yaranin üzerine bir damla antibiyotik oftalmik solüsyon (eritromisin merhemi) uygulandi. Yuva/ama, Besleme, Su ve Çevresel Kosullar, Ortama Alistirma Hayvanlar 6'Ii gruplar halinde grup yuvalarinda yuvalandi ve taze, lezzetli ve besleyici ad /ibi'tum yeterli gidayla beslendi. Temiz, içilebilir ve kontamine olmamis su ad !fb/tum muhafaza edilmesi için ayarlandi. 12-saatlik bir aydinlik/karanlik döngüsü muhafaza edildi. Hayvanlar, referans hatti degerlendirmesi öncesinde tesise vardiktan sonra en az 5 gün süreyle ortama alistirildi. Hayvanlar referans hatti fundoskopik degerlendirmelerden sonra test gruplarina ayrildi. Test ve Kontrol Maddeleri Kimlik: PBS Depolama Kosullari: 3 aya kadar 4°C isiktan koruma Kullanim Önlemleri: Standart PPE Tablo 6: Test Maddesi Kimlik: IRDye®7OO DX ile etiketli nanopartikül Depolama Kosullari: 2 aya kadar 4°C isiktan koruma Kullanim Önlemleri: Standart PPE Tablo 7: Lazer Güç Ayari: 600 mW Akis: 50 J/cm2 Nokta boyutu: 5.0 mm Dalga boyu: 690 nm Doz Formülasyonlarinm Hazirlanmasi Test maddesi steril enjeksiyon için suda 1:1 seyreltildi. Test/Kontrol Maddelerinin Veri/isi Dozlama: Isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül veya salin vitröze intraoküler enjeksiyonla verildi. Lazer tatbiki: Lazer tedavisi 50 J/sz'lik bir toplam akis için 83 saniyelik bir süre boyunca 600 mW'Iik bir güçte 690 nm isik aktaran bir Coherent Opal Photoactivator® bir çapa ayarlandi ve bu itibarla, bu boyuttan daha büyük tümörler örtüsen noktalarla lazerlendi. Tümör sinirinin net bir ayriminin oküler komplikasyonlar (örnegin, vitrit, retinal detasman) nedeniyle betimlenemedigi durumlarda, tüm süpheli alan lazerlendi. Mortalite/Morbidite Kontrolleri: CSA komplikasyonlari nedeniyle (bakiniz asagi) ölen iki hayvan haricinde tüm hayvanlar çalisma boyunca saglikli kaldi. Klinik Gözlemler: Tüm hayvanlar günlük olarak hayvan tesisi personeli tarafindan gözlemlendi; gözlemler kaydedildi. Birçok hayvan, CsA'ya atfedilen sekilde bir derece kilo kaybi ve istah kaybi yasadi. Oftalmoloji Siklik: Fundoskopi ve ultrasonla oftaImik inceleme haftalik olarak gerçeklestirildi. Prosedür: Hayvanlar sakinlestirildi ve sag gözleri oküler Fenilefrin hidroklorür ve tropikamid damlalar kullanilarak dilate edildi. Sonra, gözün fundoskopik bir muayenesi dolayli bir binoküler oftalmoskop kullanilarak gerçeklestirildi. Oftalmolog herhangi bir oküler komplikasyonu kaydetti. Bir tümör tanimlandiginda, boyut, optik diskle kiyaslamayla kestirildi (disk çapi [DD]; 1 DD = yaklasik olarak 1,75 mm). Ultrason okumalari için, fundus muayenesinin hemen ardindan, fundus muayenesiyle belirlendigi üzere tümörün konumunun görsellestirilmesi için göze bir ultrason probu uygulandi. Ultrason ölçümleri teknik güçlük gösterdi, çünkü temel olarak tümörlerin bazilari düzgün sekilde görsellestirilmek için çok periferik olarak yer aliyordu. Bunun bir sonucu olarak, en büyük tümör boyutunu ölçmek her zaman mümkün degildi; ve birçok durumda yalnizca yükseklik miktari belirlenebildi. Terminal Prosedürler ve Anatomik Patoloji Programlanmamis Ölümler: Bu çalismada kullanilan 20 hayvandan bir tanesi protokol kilavuzlarina göre kilo kaybi (gelisteki agirligin %20'si) nedeniyle ötenize edildi. Bir hayvan, CsA toksisitesinin neden oldugu gastrointestinal yavaslama nedeniyle beklenmedik sekilde öldü. Programlanmis Ötenazi: Çalismanin sonlandirilmasi üzerine, hayvanlar kabul edilen Amerikan Veteriner Tip Dernegi (AVMA) kilavuzlarina göre ötenize edildi. Hayvanlar bir ketamin-ksilazin-asepromazin (sirasiyla, 0,75 mg/kg, 5 mg/kg ve 20-35 mg/kg) ve buprenorfin (0,2 mg/kg) kombinasyonu kullanilarak anesteziyle kansiz birakildi. Sonuçlar Genel olarak, 11 hayvan histopatolojik olarak belirgin tümör gelistirdi. Önceden belirtildigi üzere, iki hayvan beklenmedik sekilde öldü ve tedavi edilmemis kontrol olarak kullanildi. Farkli tümör boyutlarina sahip 9 hayvan, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllere tedavi aldi. Ekvatorun anteriyor segmentinde Iazerlenemeyen tümörün derecesi nedeniyle bir hayvan degerlendirmeye dahil edilmedi. Gözün arkasinda tümörleri olan ve tam tedavi (isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül +Iazer) almis olan hayvanlar için, üç ögeyle karakterize edilmis olan fark edilir bir tümör yaniti gözlemlendi: 1) ekstansif tümör nekrozunun indüklenmesi; 2) büyüme paterninde, difüzden bir "kilif-benzeri paterne" degisiklik; ve 3) bitisik retinanin ayrilmasi. Hayvan Fundoskopi Fundoskopi Tümörün kabaca grosu & sayisi & velveya velveya ultrason: histopatolojik tümör ultrason: tedaviden sonra konumu tedaviden tümör ve boyutu önce tümör degerlendirilmesi varligi 3-ekvatora + Tümör büyümesi Gros patolojisine genel posteriyor aresti nekrotik tutarlilikla büyük intraoküler tümör tumor Histopatolojiyle %50 nekroz Hayvan Fundoskopi sayisi & velveya tümör ultrason: konumu tedaviden ve boyutu önce tümör varligi 6-e kvatora + posteriyor 7-e kvatora + posteriyor orta boy 9-e kvatora + posteriyor ekvatora posteriyor orta boy ekvatora Fu ndoskopi velveya ultrason: tedaviden sonra degerlendirilmesi Tümör büyümesi aresti Tam yanit Tam yanit Tümör küçülmesi Tam yanit Tümörün kabaca grosu & histopatolojik Bitisik retinaya hasar yok Gros patolojisi degerlendirilmesinde bölünmüs intraoküler tümör Histopatolojiyle %70 nekroz Bitisik retinaya hasar yok Gros patolojisinde pigmente-olmamis tümör Histopatolojide hiç tümör bulunmadi - süpheli alan tümör konumuna karsilik geldiginden süphelenilen ~ 8,2 mm boyunda Gros patolojisinde tümör Histopatolojide tam yanit; bitisik retinaya hasar yok Gros patolojisinde ekvatorda yer alan pigmente-olmamis tümör Gros patolojisinde ~%70 nekroz Gros veya histopatolojide tümör yok ve boyutu posteriyor ekvatora posteriyor ekvatora posteriyor ekvatora posteriyor Fundoskopi ultrason: tedaviden önce tümör varligi Fundoskopi velveya ultrason: tedaviden sonra degerlendirilmesi Tedavi edilen nodülün tam yaniti Periferal tümörde kismi nekroz Tam yanit Tümör büyümesi aresti Tümörün kabaca grosu & histopatolojik Çeperde yer alan gros patolojide pigmente- olmamis tümör ve gözün ardinda ilave bitisik tümör Histopatolojik, tedavi edilen nodülün mevcut oldugu yerde sifir tümör gösterdi. Çok periferik olan diger alanlara lazerle tam erisim zordu ve tümörün apeksinde bir dereceye kadar nekroz gösterdi. Gros patolojide pigmente- olmamis nodül tanimlandi Histopatolojide tümör yok; tümörün yer almis olduguna inanilan alanda ~1,5 mm ölçülen skar (fibroz ve enflamasyon) Gros patolojisinde bölünmüs/nekrotik görünümlü büyük tümör Hayvan Fundoskopi Fundoskopi Tümörün kabaca grosu & sayisi & velveya velveya ultrason: histopatolojik tümör ultrason: tedaviden sonra konumu tedaviden tümör ve boyutu önce tümör degerlendirilmesi varligi Masif nekroz, kilif-benzeri Tedavi Edilmemis Kontrol/er Tavsan #14 kabul edilemez kilo kaybi (ilk vücut agirliginin %20'si) nedeniyle 4. haftada ötenize edildi. Tümörün varligi için fundus muayenesi, masif hemoraj ve retinal detasman nedeniyle sonuçsuzdu. Bu hayvan hiç tedavi almadi. Ultrason: Bu tavsan ölüm zamanlamasi nedeniyle bir ultrason muayenesine girmedi. Gros/histopatoloji: Gros patolojide, 3 mm yüksekliginde (H) x 8 mm ölçüsünde en büyük tümör boyutunda (LTD) bir intraoküler tümör ve histopatolojide 2,2 mm H ve 9,5 ölçüsünde en büyük tümör boyutunda bir intraoküler tümör kaydedildi. Gros patolojide, 1,4 mm yüksekliginde ve 9,4 mm ölçüsünde en büyük tümör boyutunda bir ekstraoküler tümör kaydedildi. Hem intra- hem ekstra-oküler tümörlerin yaklasik olarak %10'u nekrotikti. Hiç kilif paterni saptanmadi. Tam Tedavi Tavsan #9, fundusta 4. haftada yaklasik 1 DD boyutunda, derhal tedavi edilmis olan klinik olarak saptanabilir bir tümöre sahipti. Sonraki hafta, tümör 0,5 DD olarak hesaplandi. 6. haftada, tümör <0,5 DD olarak hesaplandi ve son haftada saptanmadi. Ultrason: Ultrason 3. haftada bir tümör fark etmedi, ancak 4.'de 1,04 mm yüksekliginde ölçülen bir kütle tanimlandi. Müteakip haftalarda, ultrasondaki ölçümler 6, hafta ve sonrasi itibariyle artik görünür olmayana kadar geriledi. Gros/Histopatoloji: Histopatoloji hiç tümör veya hücre açiga çikarmadi. Ancak, tüm gözün seri kesitleri ve immünohistolojik sonuçlar bu sonucu teyit etmek için beklemededir. 4. haftada bir tümörün klinik bir süphesi vardi (retinanin altinda yükselmis kütle), ancak subretinal kanama, sivi ve retinal detasman, deney süresi boyunca klinik boyut kestirimini imkansiz kildi. Ultrason: Ultrasonla, 3. haftada 4,88 mm'lik, tedaviyi baslattigimiz 4. haftada 5,29 mm'ye büyüyen büyük bir kitle saptandi. 5. haftada, tümör 4,88 mm olarak ölçülürken 6. ve 7. haftalarda tümör, sirasiyla, 4,02 ve 4,98 mm olarak ölçüldü. Gros/histopatoloji: Gros patolojisinde, iki ayri tümör tanimlandi: intraoküler bir tümör ve hücre implantasyonu esnasindaki geri akisin bir sonucu oldugundan süphelenilen konjunktival bir tümör. Konjunktival tümör konumu yüzünden tedavi edilmedi ve böylelikle bunu dahili bir kontrol olarak degerlendirdik. Intraoküler tümör parçalandi ve 7 mm H x 11 mm LTD olarak ölçüldü. 6 mm H x 9 LTD mm olarak ölçülen, karakteristik bir yapiya sahip ekstraoküler bir uzanti da tanimlandi. Histopatolojide, intraoküler tümör 4,9 mm H x 8,3 LTD olarak ölçüldü ve kalan viyabil hücrelerinin çogu yukaridaki belirtilen kilif-benzeri paterni olusturacak sekilde %70 nekrotikti. Tedavi edilmemis konjunktival tümör çok daha az nekroz (~%15) sergiledi ve kilif paterni bariz degildi. Bu çalismanin amaci, tavsan gözünde uveal melanomun ortotopik bir ksenograft modelinde isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin + NIR isigin aktivitesini incelemekti. Isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller + lazer tedavisi alan tüm tümörler tedaviye olumlu yanit verdi. Bu durum özellikle, tedavinin bir yaniti ve tam histopatolojik yanitlar olarak bariz tümör küçülmesine sahip küçükle orta arasi tümörler için barizdi. Örnegin, 4. haftada küçük bir tümörle sunulan tavsan 9'da, tümör tedavinin ilk iki dozuyla tamamen kurutuldu ve ikinci tedavinden iki hafta sonra ne klinik olarak ne de histopatolojik olarak artik saptanabilir degildi. Daha büyük tümörlerde, örnegin tavsan 4'te, tümörün çogu nekrotikti ve bu durum yalnizca tümör hacminin yaklasik %10'una nekroz sergileyen tedavi edilmemis kontrole (tavsan 14) tamamen zitti ve bu da tedavinin etkililiginin net bir göstergesi oldu. Dahasi. tam tedavi alan intraoküler tümörleri olan birçok hayvan, Iazerlenmemis ekstraoküler uzantilara sahipti; bu kesitler tedavi edilen tümör kesitlerinden büyük ölçüde daha az nekroz gösterdi ve bu da uveal melanomun tedavisi için lazerle aktive edilmis isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin etkililiginin destekleyen bir diger kanit oldu. Tümörlere bitisik retinal Tedavinin ardindan intraoküler tümör yanitina dayali olarak, özellikle kontrollere (tedavi edilmemis, ekstraoküler kesitler) kiyasla, burada saglanan veriler, oküler melanomun tedavisi için bir tümörün varliginda isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin seçimli ve kuvvetli bir anti-kanser aktivitesini desteklemektedir. Örnek 18 - HPVL1 vs BPV L1'i kiyas/ayan in vitro kuwet tayini lsiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin (örnegin, IR7OO boyasina konjuge varyant HPV16/31 L1 proteinleri ve HPV L2 proteinlerinin bir kombinasyonunu ihtiva eden viral- benzeri nanopartiküller) kuvveti bir in vitro hücre öldürme tayiniyle tayin edildi. Uveal melanom hücreleri (örnegin, hücre hatti OCM-1 veya 92.1), bir EDTA ve tripsin solüsyonu kullanilarak rutin yöntemlerle hasat edildi. Doku kültürü plastiginden çikarildiklarinda, hücreler tam büyüme vasatinda süspanse edildi ve yaklasik olarak 30 dakika süreyle 37°C'de toparlanmalari saglandi. Bu toparlanma periyodu esnasinda, isiga duyarli viral-benzeri nanopartikülün seri seyreltilmeleri PBS + %2 fötal bovin yapildi. Toparlanma periyodunun ardindan, hücreler sayildi, santrifüjlendi ve PBS + %2 FBS içinde 3x105/ml'lik bir hücre yogunluguna süspanse edildi. Hücre süspansiyonunun esit bir hacmi, viral-benzeri nanopartikülün uygun konsantrasyonunda ( ml basina 1,5x106 hücre saglamak için viral-benzeri nanopartikül seyreltilerine eklendi. Bu kosullar (örnegin, 360 ul) buz üzerinde yaklasik 1,5 ila 2 saat süreyle inkübe edildi. Bu inkübasyonun ardindan, tüpler hücrelerin toplanmasi için santrifüjlendi ve hücreler müteakiben iki kez, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller olmadan PBS + %2 FBS ile yikandi. Nihai santrifüjlemeden sonra, hücreler 200 pl PBS + %2 FBS içinde süspanse edildi. Her bir numunenin 100 ul'si çikartildi ve bir 96-kuyucuklu, 1/2 alan plakasinin kuyucuguna aktarildi. Her bir numune daha sonra 25 J/cm2 (600 mW. 43 saniye) yakin kizilötesi isikla (689 nm) bir Coherent Opal Photoactivator oftalmik lazer kullanilarak isimaya tutuldu. Isimanin ardindan, hücrelerin numunesi daha sonra yeni bir tüpe aktarildi. Hem isiga tutulmus hem tutulmamis numuneler 37°C'de ilave 1 ila 2 saatlik bir süre boyunca yerlestirildi. Bu inkübasyonun ardindan hücrelerin nihai bir 20 pl numunesi 121 AOPI boyasiyla (Akridin Turuncu ve Propidyum Iyodür) karistirildi ve hücrelerin viyabilitesi bir Nexcelom Cellometer Auto 2000 kullanilarak degerlendirildi. SEKIL 20, yari maksimal HPVL1'in benzer etkilerini göstermektedir, bu da isiga duyarli moleküllerin kuvvetlerinin birbirine benzer oldugunu göstermektedir. SEKIL 21, SEKIL 20'de tarif edilen öldürme tayininden gelen hücrelerin, isiga duyarli viral-benzeri nanopartikül baglanmasi için analiz edilen bir numunesini göstermektedir. Öldürme tayininden gelen hücreler bir Odyssey Clx jel/plaka tarayici üzerinde tarandi. Odyssey Clx spesifik olarak, IR dahil olmak üzere bir dizi kizilötesi boyanin saptanmasi ve miktar tayini için tasarlanmistir. Böylelikle, bu tayinde, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin farkli konsantrasyonlariyla tedavi edilmis olan hücreler, hücrelerin hem BPV-L1-IR700 hem HPV-L1-IR700'ü bagladigini gösterecek sekilde hücrelerle iliskili florisimanin konsantrasyona bagimli bir miktarini göstermektedir. Örnek 19 - Isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin, bas ve boyun kanserinin bir ksenograft modelindeki aktivitesi Bas & Boyun kanseri hücreleri nu/nu farelerinin dorsal yanal bögrüne implante edildi. Tümörlerin iki hafta süreyle büyümesi saglandi. Tümör 150 mm3'lük ortalama bir boyuta ulastiginda, hayvanlar rastgele sekilde 6 çalisma grubuna (grup basina 7 hayvan) asagidaki sekilde ayrildi: Salin; isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller (HPV16/31 L1/L2; ; isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller (; isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller (; ve isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller (50 ug doz) + NIR isik (50 J/cm2). Dozlama ve NIR isik tedavisi üç günde bir gerçeklestirildi. Tümör ölçümleri her 3-5 günde bir kaydedildi. Tüm kontroller ilgili tedavileri için hiç kayda deger etki göstermezken, doz gruplarinin tümünde kayda deger bir tümör büyümesi önlenmesi vardi (SEKIL 22). Gözlemlenen tümör büyümesi önlenmesi doz bagimliydi. Yüksek doz gruplarinda tümörlerin bir yaniti vardi. Iki hayvan masif hücre ölümüyle ve potansiyel olarak Tümör Lizis Sendromu iliskili toksisitelerle iliskili olarak 200 ug tedavi grubunda öldü. Örnek 20 -Isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerin üretilmesi Mevcut açiklamanin isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküllerinin üretilmesi için, HEK293F hücreleri süspansiyon kültüründe büyütüldü ve geçici olarak L1 (veya L1 ve L2) kapsit proteinlerini kodlayan bi-sistronik plazmid DNA ile transfekte edildi. Bu, edildigi üzere) proto-kapsitlerin olusumunu indükler. Hücre kütlesi geri kazanimi ve parçalanmasinin ardindan, proto-kapsitler konak DNA kirleticilerinin yok edilmesi için benzonaz tedavisine ve konjugasyon için stabil viral-benzeri nanopartiküller olusturmak için müteakip bir in vitro olgunlastirma islemine tabi tutuldu. Saflastirmanin ardindan, viral-benzeri nanopaitiküller, isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller üretmek için lR700 NHS esteriyle kimyasal olarak konjuge edildi. SEKIL 23, bir üretim isleminin sematik bir temsilini göstermektedir. Bu Örnekte tarif edilen islemden üretilen isiga duyarli viral-benzeri nanopartiküller, SDS-PAGE, SE-HPLC ve DLS kullanilarak karakterize edilmistir ve %90-95 saflik göstermektedir. HEK293 hücrelerinden histonlar, viral-benzeri nanopartikül bilesiminin parçasi olarak mevcuttur ve viral-benzeri nanopartikülün toplam proteininin %10- 15iinden olusur. TR TR TR TR TR TR TR

Claims (1)

1.
TR2019/07128T 2013-09-18 2014-09-18 Tümörlerin tedavisi için virüs-benzeri partikül konjugatları. TR201907128T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361879627P 2013-09-18 2013-09-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201907128T4 true TR201907128T4 (tr) 2019-06-21

Family

ID=52689416

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/07128T TR201907128T4 (tr) 2013-09-18 2014-09-18 Tümörlerin tedavisi için virüs-benzeri partikül konjugatları.

Country Status (15)

Country Link
US (6) US10117947B2 (tr)
EP (3) EP3517130B1 (tr)
JP (3) JP6444417B2 (tr)
KR (1) KR102257009B1 (tr)
CN (2) CN120617536A (tr)
AU (3) AU2014323424B2 (tr)
CA (1) CA2924684C (tr)
DK (1) DK3046583T3 (tr)
ES (2) ES2917573T3 (tr)
HU (1) HUE043463T2 (tr)
MX (1) MX385842B (tr)
PL (1) PL3046583T3 (tr)
PT (1) PT3046583T (tr)
TR (1) TR201907128T4 (tr)
WO (1) WO2015042325A1 (tr)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2683352T3 (es) 2009-04-13 2018-09-26 Inserm - Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale Partículas de HPV y usos de las mismas
US8524239B2 (en) 2010-07-09 2013-09-03 The United States of America as represented by the Secrectary, Department of Health and Human Services Photosensitizing antibody-fluorophore conjugates
US9700639B2 (en) 2012-02-07 2017-07-11 Aura Biosciences, Inc. Virion-derived nanospheres for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents to cancer cells
EP3517130B1 (en) 2013-09-18 2022-03-30 Aura Biosciences, Inc. Method of producing photosensitive molecules
CA2950299A1 (en) 2014-06-02 2015-12-10 Li-Cor, Inc. Phthalocyanine probes and uses thereof
CN106470705B (zh) 2014-08-08 2020-03-31 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 在体内和在体外的靶标的光控移除
CN108136215B (zh) 2015-08-18 2022-04-29 乐天医药生技股份有限公司 酞菁染料偶联物的制造方法及稳定偶联物
EP3337514B8 (en) 2015-08-18 2022-04-06 Rakuten Medical, Inc. Composition comprising a conjugate comprising a phthalocyanine dye linked to a targeting molecule for photoimmunotherapy
JP2018532801A (ja) 2015-10-30 2018-11-08 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 標的化がん療法
CN107789743A (zh) * 2016-08-31 2018-03-13 北京至感传感器技术研究院有限公司 无创肿瘤治疗装置
EP3609520A4 (en) * 2017-04-12 2021-01-06 Aura Biosciences, Inc. TARGETED COMBINATION THERAPY
US11285203B2 (en) 2017-06-23 2022-03-29 Verimmune Inc. Chimeric virus-like particles and uses thereof as antigen-specific redirectors of immune responses
WO2019036249A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Li-Cor, Inc. SONODYNAMIC THERAPY
WO2019161139A2 (en) 2018-02-14 2019-08-22 The University Of Houston System Probe for universal detection of circulating tumor cells
CA3125184A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 Verimmune Inc. Conjugated virus-like particles and uses thereof as anti-tumor immune redirectors
US20220152218A1 (en) * 2019-03-26 2022-05-19 Aura Biosciences, Inc. Human papillomavirus nanoparticle formulations
CN115943306A (zh) 2019-03-29 2023-04-07 乐天医药生技股份有限公司 用于光免疫疗法的方法和相关生物标志物
GB201917487D0 (en) 2019-11-29 2020-01-15 Oxular Ltd Methods for the treatment of retinoblastoma
CA3179937A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Rakuten Medical, Inc. Phthalocyanine dye compounds, conjugates and methods of use thereof
CA3195963A1 (en) 2020-10-19 2022-04-28 Joshua Weiyuan WANG Virus-inspired compositions and methods of redirecting preexisting immune responses using the same for treatment of cancer
WO2022165023A1 (en) * 2021-01-27 2022-08-04 Vanderbilt University Combination of intracellular and extracellular photosensitizers for treatment of bacterial infection
WO2023038927A1 (en) * 2021-09-08 2023-03-16 Aura Biosciences, Inc. Bladder cancer therapies
DE102023004549A1 (de) 2023-11-07 2025-05-08 Biolitec Research Gmbh Vorrichtung und verfahren zur behandlung von dysplasien
DE102023004548A1 (de) 2023-11-07 2025-05-08 Biolitec Research Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Behandlung von Tumoren
CN118986895B (zh) * 2024-07-31 2025-10-24 山东第一医科大学附属眼科医院(山东省眼科医院) 一种可见光催化交联的病毒样氧化钌纳米颗粒用于高效跨膜治疗圆锥角膜

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4625014A (en) * 1984-07-10 1986-11-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cell-delivery agent
US4659839A (en) 1984-10-10 1987-04-21 Mallinckrodt, Inc. Coupling agents for radiolabeled antibody fragments
WO1989010758A1 (en) * 1988-05-02 1989-11-16 Zynaxis Technologies, Inc. Compounds, compositions and method for binding bio-affecting substances to surface membranes of bio-particles
US5126129A (en) 1988-05-23 1992-06-30 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services Cancer therapy using interleukin-2 and flavone compounds
CA2039718C (en) 1989-08-31 2003-02-25 John J. Rossi Chimeric dna-rna catalytic sequences
US5290551A (en) 1990-05-08 1994-03-01 Thomas Jefferson University Treatment of melanoma with a vaccine comprising irradiated autologous melanoma tumor cells conjugated to a hapten
DE69123979T2 (de) 1990-10-12 1997-04-30 Max Planck Gesellschaft Abgeänderte ribozyme
DE4216134A1 (de) 1991-06-20 1992-12-24 Europ Lab Molekularbiolog Synthetische katalytische oligonukleotidstrukturen
US5652094A (en) 1992-01-31 1997-07-29 University Of Montreal Nucleozymes
US20030206887A1 (en) 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5437951A (en) 1992-09-03 1995-08-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Self-assembling recombinant papillomavirus capsid proteins
US5478556A (en) 1994-02-28 1995-12-26 Elliott; Robert L. Vaccination of cancer patients using tumor-associated antigens mixed with interleukin-2 and granulocyte-macrophage colony stimulating factor
US5716824A (en) 1995-04-20 1998-02-10 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-alkylthioalkyl and 2-C-alkylthioalkyl-containing enzymatic nucleic acids (ribozymes)
US5783169A (en) 1995-07-26 1998-07-21 Brookhaven Science Associates Llc Rigid bifunctional chelating agents
EP1108724B1 (en) 1996-01-16 2007-09-19 Sirna Therpeutics, Inc. Synthesis of methoxy nucleosides and enzymatic nucleic acid molecules
IT1283218B1 (it) * 1996-03-08 1998-04-16 Bracco Spa Polichelanti, loro complessi con ioni metallici, loro preparazione e loro usi
AU732125B2 (en) 1996-07-17 2001-04-12 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Infectious papillomavirus pseudoviral particles
US6180389B1 (en) 1997-01-03 2001-01-30 The Research And Development Institute, Inc. Virion-constrained nanoparticles comprising a plant virion coat protein shell and encapsulated guest molecules
CA2292760A1 (en) 1997-06-04 1998-12-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Vector
US7351533B2 (en) 1997-09-05 2008-04-01 Medimmune, Inc. In vitro method for disassmbly/reassembly of papillomavirus virus-like particles (VLPs). Homogeneous VLP and cavsomere compositions produced by said methods: use thereof as vehicle for improved purification, and delivery of active agents
EP1015561B1 (en) 1997-09-05 2006-07-19 Medimmune, Inc. In vitro method for disassembly/reassembly of papillomavirus virus-like particles (vlps)
FR2768749A1 (fr) 1997-09-22 1999-03-26 Inst Nat Sante Rech Med Virus artificiels derives de papillomavirus, et leurs utilisations, notamment en therapie genique
WO2000009673A1 (en) 1998-08-13 2000-02-24 Johnson & Johnson Research Pty. Limited Dnazymes and methods for treating hpv-related disorders
US6991795B1 (en) 1998-08-14 2006-01-31 Merck & Co., Inc. Protein delivery system using human papillomavirus virus-like particles
US20050112141A1 (en) 2000-08-30 2005-05-26 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
US20040146531A1 (en) 1999-09-30 2004-07-29 Active Biotech Ab Virus-like particles devoid of HPV 16 type-specific antibody epitopes as carriers of peptides for introduction into cells
EP1252309A2 (en) 2000-01-28 2002-10-30 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Mhc class ii restricted t cell epitopes from the cancer antigen ny-eso-1
CN1114690C (zh) 2001-05-15 2003-07-16 乔良 乳头瘤假病毒及其制备方法
CA2452653A1 (en) 2001-07-17 2003-01-30 Anne Josephine Milner Silencing of gene expression by sirna
US20030129583A1 (en) 2002-01-08 2003-07-10 Martin William John Therapy of stealth virus associated cancers and other conditions using light
EP1467760A2 (en) * 2002-01-23 2004-10-20 Light Sciences Corporation Systems and methods for photodynamic therapy
AU2003272187A1 (en) 2002-02-01 2004-01-06 Montana State University Novel nanoparticles and use thereof
AU2003217413A1 (en) 2002-02-14 2003-09-04 Novavax, Inc. Method for isolation and purification of expressed gene products in vitro
JP4212921B2 (ja) 2002-03-29 2009-01-21 独立行政法人科学技術振興機構 抗体を提示するタンパク質中空ナノ粒子を用いる治療薬剤およびタンパク質中空ナノ粒子
JP2003286189A (ja) 2002-03-29 2003-10-07 Japan Science & Technology Corp 中空ナノ粒子を形成するタンパク質に疾患治療用の細胞導入物質を融合させた薬剤
AU2003239531A1 (en) 2002-05-17 2003-12-02 Montana State University Protein cages for the delivery of medical imaging and therapy
AU2003242742B2 (en) 2002-06-20 2009-04-30 Cytos Biotechnology Ag Packaged virus-like particles for use as adjuvants: method of preparation and use
JP2004081210A (ja) 2002-06-28 2004-03-18 Japan Science & Technology Corp システイン残基を改変したタンパク質からなる中空ナノ粒子およびそれを用いた薬剤
JP2004261002A (ja) 2003-01-08 2004-09-24 Tsutomu Suzuki ｓｉＲＮＡの製造方法
WO2005051431A1 (en) 2003-11-25 2005-06-09 The University Of York Colloidal delivery system for biological therapeutic agents
EP3388521A1 (en) 2004-02-27 2018-10-17 Dow AgroSciences LLC High efficiency peptide production in plant cells
US20060216238A1 (en) * 2005-02-28 2006-09-28 Marianne Manchester Compositions and methods for targeting or imaging a tissue in a vertebrate subject
US8067572B2 (en) 2005-05-25 2011-11-29 The University Of York Hybrid interfering RNA
GB2426687A (en) 2005-05-26 2006-12-06 Jason Kershaw Inter-engaging fasteners
JP5077914B2 (ja) 2005-08-05 2012-11-21 シンジーテック株式会社 電子写真装置用ポリウレタン部材
CA2558601A1 (en) 2005-09-14 2007-03-14 Japan Science And Technology Agency Substance carrier using hollow nanoparticle of hepatitis b virus protein and liposome, and method of introducing substance into cell
US20070258889A1 (en) 2005-11-09 2007-11-08 Montana State University Novel nanoparticles and use thereof
US20110104051A1 (en) 2006-03-27 2011-05-05 The Regents Of The University Of California Chemically Modified Viral Capsids as Targeted Delivery Vectors for Diagnostic and Therapeutic Agents
US7700541B2 (en) * 2006-04-06 2010-04-20 Nitto Denko Corporation Biodegradable cationic polymers
CN100415859C (zh) 2006-07-28 2008-09-03 上海应用技术学院 薰衣草纳米精油的制备方法
US20100003326A1 (en) 2006-08-01 2010-01-07 Dolphys Technologies B.V. Drug delivery device comprising a pharmaceutically or biologically active component and an infrared absorbing compound
KR100962301B1 (ko) 2006-11-03 2010-06-11 재단법인서울대학교산학협력재단 자궁경부암을 위한 치료용 조성물
US20090035389A1 (en) 2007-02-23 2009-02-05 Specigen Inc. Targeted protein cages
US20130136689A1 (en) * 2007-06-05 2013-05-30 Christian Rohlff Proteins
CA2686990C (en) * 2007-05-08 2018-04-24 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Papillomavirus pseudoviruses for detection and therapy of tumors
WO2009046738A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
WO2009106999A2 (en) 2008-02-28 2009-09-03 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung Des Öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
US20110159023A1 (en) 2008-08-25 2011-06-30 Solomon Langermann Pd-1 antagonists and methods for treating infectious disease
WO2010047839A1 (en) 2008-10-25 2010-04-29 Aura Biosciences Modified plant virus particles and uses therefor
ES2683352T3 (es) 2009-04-13 2018-09-26 Inserm - Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale Partículas de HPV y usos de las mismas
WO2010143942A1 (en) * 2009-06-12 2010-12-16 Erasmus University Medical Center Rotterdam Targeted nano-photomedicines for photodynamic therapy of cancer
US8993715B2 (en) 2009-07-06 2015-03-31 Canon Kabushiki Kaisha Labeled protein and method for obtaining the same
WO2011039646A2 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Papilloma virus -like particles for targeted gene delivery
US20120207840A1 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Diagnostic Or Therapeutic Agents For The Treatment Of Non-Melanoma Skin Cancer
US20130071414A1 (en) 2011-04-27 2013-03-21 Gianpietro Dotti Engineered cd19-specific t lymphocytes that coexpress il-15 and an inducible caspase-9 based suicide gene for the treatment of b-cell malignancies
WO2013009717A1 (en) 2011-07-10 2013-01-17 Elisabet De Los Pinos Virion derived protein nanoparticles for delivering diagnostic or therapeutic agents for the treatment of skin-related diseases
JP2014231477A (ja) 2011-09-21 2014-12-11 シャープ株式会社 アルコキシ基を有する遷移金属錯体、及びこれを用いた有機発光素子、色変換発光素子、光変換発光素子、有機レーザーダイオード発光素子、色素レーザー、表示装置、照明装置並びに電子機器
US20130116408A1 (en) * 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
US20130115247A1 (en) * 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
EP2785842A4 (en) * 2011-12-01 2015-11-25 Univ Cape Town CHIMERIC HPV PARTICLES
US9700639B2 (en) 2012-02-07 2017-07-11 Aura Biosciences, Inc. Virion-derived nanospheres for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents to cancer cells
WO2014039523A1 (en) 2012-09-04 2014-03-13 Cellectis Multi-chain chimeric antigen receptor and uses thereof
ES3011466T3 (en) 2013-04-18 2025-04-07 Tilt Biotherapeutics Oy Enhanced adoptive cell therapy
US20160024469A1 (en) 2013-07-29 2016-01-28 Allan Yang Wu Non-conventional Cellular Based Immunotherapy
EP3517130B1 (en) 2013-09-18 2022-03-30 Aura Biosciences, Inc. Method of producing photosensitive molecules
DK3071222T3 (da) 2013-11-21 2020-11-16 Ucl Business Ltd Celle
WO2015120363A1 (en) 2014-02-10 2015-08-13 Emory University Expression of chimeric polypeptide with variable lymphocyte receptors on immune cells and uses for treating cancer
WO2015142675A2 (en) 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
GB201503776D0 (en) 2015-03-05 2015-04-22 Pci Biotech As Compound and method
EP3337514B8 (en) 2015-08-18 2022-04-06 Rakuten Medical, Inc. Composition comprising a conjugate comprising a phthalocyanine dye linked to a targeting molecule for photoimmunotherapy
JP2018532801A (ja) 2015-10-30 2018-11-08 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 標的化がん療法
WO2017075399A1 (en) 2015-10-30 2017-05-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Targeted cancer therapy
EP3609520A4 (en) 2017-04-12 2021-01-06 Aura Biosciences, Inc. TARGETED COMBINATION THERAPY

Also Published As

Publication number Publication date
EP3046583A4 (en) 2017-05-03
AU2022202408B2 (en) 2025-07-10
US20190083647A1 (en) 2019-03-21
AU2022202408A1 (en) 2022-05-05
JP2020005662A (ja) 2020-01-16
WO2015042325A1 (en) 2015-03-26
CA2924684A1 (en) 2015-03-26
EP4059521A1 (en) 2022-09-21
PL3046583T3 (pl) 2019-10-31
EP3517130B1 (en) 2022-03-30
EP3046583B1 (en) 2019-02-13
US20160228568A1 (en) 2016-08-11
US10588984B2 (en) 2020-03-17
KR20160079779A (ko) 2016-07-06
ES2917573T3 (es) 2022-07-08
CN120617536A (zh) 2025-09-12
US11806406B2 (en) 2023-11-07
JP6444417B2 (ja) 2018-12-26
AU2020201799A1 (en) 2020-03-26
AU2014323424B2 (en) 2019-12-19
BR112016005917A2 (pt) 2017-09-26
CA2924684C (en) 2021-02-09
EP3046583A1 (en) 2016-07-27
HUE043463T2 (hu) 2019-08-28
MX385842B (es) 2025-03-18
US11110181B2 (en) 2021-09-07
US20200188529A1 (en) 2020-06-18
US20220387619A2 (en) 2022-12-08
JP6685365B2 (ja) 2020-04-22
PT3046583T (pt) 2019-05-30
US20220088216A1 (en) 2022-03-24
US10117947B2 (en) 2018-11-06
MX2016003660A (es) 2016-12-20
CN105979967A (zh) 2016-09-28
US20240216527A1 (en) 2024-07-04
US12029794B2 (en) 2024-07-09
US20210393797A1 (en) 2021-12-23
EP3517130A1 (en) 2019-07-31
AU2020201799B2 (en) 2022-04-28
KR102257009B1 (ko) 2021-05-27
JP2016531591A (ja) 2016-10-13
JP2019013249A (ja) 2019-01-31
AU2014323424A1 (en) 2016-04-21
ES2729841T3 (es) 2019-11-06
DK3046583T3 (da) 2019-05-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12029794B2 (en) Virus-like particle conjugates for diagnosis and treatment of tumors
CN107158405A (zh) 一种线粒体靶向的纳米光敏免疫复合药物及其制备方法和应用
CN110448699A (zh) 包含功能性多肽修饰七甲川花菁素类染料的肿瘤细胞核靶向载药纳米粒子及制备方法
BR112019021476A2 (pt) Terapia de combinação direcionada
CN117531011A (zh) 一种基于全肿瘤抗原的肿瘤疫苗和抗肿瘤制剂及其制备方法和应用
HK1227301B (en) Virus-like particle conjugates for treatment of tumors
HK1227301A1 (en) Virus-like particle conjugates for treatment of tumors
BR112016005917B1 (pt) Conjugados de partículas semelhantes a vírus, composição e seus usos