SK8994A3 - Agent for inducing of cytotoxic t-lymphocyte answers - Google Patents
Agent for inducing of cytotoxic t-lymphocyte answers Download PDFInfo
- Publication number
- SK8994A3 SK8994A3 SK89-94A SK8994A SK8994A3 SK 8994 A3 SK8994 A3 SK 8994A3 SK 8994 A SK8994 A SK 8994A SK 8994 A3 SK8994 A3 SK 8994A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- protein
- antigens
- antigen
- carcinoma
- hsv
- Prior art date
Links
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 115
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 140
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 140
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 135
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 66
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 36
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 22
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 58
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 11
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 10
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 10
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 8
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims description 6
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 6
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 6
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims description 5
- 108010069621 Epstein-Barr virus EBV-associated membrane antigen Proteins 0.000 claims description 5
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010083021 Epstein-Barr virus glycoprotein 85 Proteins 0.000 claims description 4
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims description 4
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims description 4
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 4
- 101710192036 Sporozoite surface protein 2 Proteins 0.000 claims description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 4
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 3
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 claims description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 claims 7
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims 7
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims 5
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims 5
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims 4
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims 3
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 claims 3
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 claims 3
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 claims 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims 1
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 claims 1
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 claims 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims 1
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 27
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003019 stabilising effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 72
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 44
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 31
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 30
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 28
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 25
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 24
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 24
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 23
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 23
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 23
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 22
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 22
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 21
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 20
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 17
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 15
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 15
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 13
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 9
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 9
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 8
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 8
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 6
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N icosane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 4
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 101000957351 Homo sapiens Myc-associated zinc finger protein Proteins 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 102100038750 Myc-associated zinc finger protein Human genes 0.000 description 2
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 2
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 229920002046 Pluronic® L 62 LF Polymers 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108700027479 Syntex adjuvant formulation Proteins 0.000 description 2
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- -1 tetratetraoctane Chemical compound 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1r)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001560752 Adenoa Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N Asn-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WQAOZCVOOYUWKG-LSJOCFKGSA-N Asn-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WQAOZCVOOYUWKG-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101710086578 Chaperone protein gp12 Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N Glu-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 101150076359 Mhc gene Proteins 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 101710102575 Pre-neck appendage protein Proteins 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N Val-Met-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N Val-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 229940111685 dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006971 mastocytoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 1
- YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N n-Hexatriacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC YDLYQMBWCWFRAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N sodium chromate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Cr]([O-])(=O)=O PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(C)CCCCCCCC OLTHARGIAFTREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001148—Regulators of development
- A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
- A61K39/001151—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin p53
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00119—Melanoma antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oblasť techniky
Tento vynález sa týka metód a prostriedkov užitočných na indukciu odpovedi sprostredkovaných cytotoxickými T-bunkami v lud’och a domácich a poľnohospodárskych zvieratách. Toto je časť pokračovania v U.S. Seriál č. 07/735 069, podaného 25. júla 1991 pod názvom Indukcia cytotoxických T-lymfocytových odpovedí [Induction of Cytotoxic T-lymphocyte Responses] Syamalom Raychaudhurim a Williamom H. Rastetterom.
Súčasný stav techniky
O cytotoxických T-lymfocytoch (CTL) sa. súdi, že sú hlavným obranným mechanismom hostiteľa pri odpovedi na rad vírusových infekcií a na neoplastický lebo nádorový rast. Tieto bunky eliminujú infikované lebo transformované bunky rozoznávaním antigénnych fragmentov spojených s rôznymi molekulami (nazývanými molekuly MHC triedy I) na infikovaných lebo transformovaných bunkách. CTL môžu byť indukované experimentálne cytoplazmatickým zavedením istých rozpustných antigénov do špecifických buniek. Imunizácia samotným rozpustným antigénom je všeobecne nedostačujúca na špecifickú indukciu cytotoxických T-lymfocytov.
Jedna metóda, ktorou sa dá CTL odozva indukovať zahrňuje použitie techník rekombinantného inžinierstva na inkorporáciu kritickej zložky antigénu, o ktorý sa jedná, do genómu benigného infekčného agens. Cieľ takejto stratégie je vyvolať antigén-špecifickú cytotoxickú T-lymfocytovú odpoveď k žiadanému epitopu podrobením hostiteľa miernej, samoregulovanej infekcii. Boli popísané chimérne vektory s použitím vakcínie, polio, adenoa retro-vírusov, ako aj baktérií ako Listéria a BCG. Napríklad Takahashi et al. 85 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 3105, 1988 popisujú použitie rekombinantného vírusu vakcínie exprimujúceho HIV gpl60 obalový gén, ako potenciálny prostriedok na indukciu cytotoxických T-lymfocytov.
Druhá metóda, ktorou sa dá bunkami sprostredkovaná odozva indukovať, zahrnuje použitie adjuvancií. Zatiaľčo v tomto odbore sa zdá byť plno diskúzii o použití adjuvancií, zostáva vzdore nejasné či sa takáto bunkami T-lymfocytovú indukuje bunkami sprostredkovaná imunita a či sprostredkovaná imunita zahrnuje cytotoxickú odpoveď. Následujúce sú príklady reprezentatívnych piblikácií v tejto oblasti.
Stover et al. 352 Náture 456, 1991 (neuznávané ako predchádzajúci spôsob k tomuto vynálezu) popisuje CTL odozvu na β-galaktozidázu s použitím rekombinantnej BCG obsahujúcej β-galaktozidázový gén. Takáto odozva nebola detegovaná pri použití nekompletného Freundovho adjuvans a β-galaktozidázy.
Mitchell et al., 8 J. Clinical Oncoloqy 856, 1990 (čo sa neuznáva ako predchádzajúci spôsob k tomuto vynálezu) popisuje liečbu pacientov s metastázujúcimi melanomámi pomocou adjuvans nazývaného DETOX a lyzátov alogenických melanómov s podávaním päť razy behom šesť týždňov. U malej časti pacientov sa pozoroval vzrast cytotoxických T-buniek. Autori popisujú potrebu zlepšenia hladiny tvorby cytotoxických T-lymfocytov a navrhujú kombinovanú terapiu adjuvans a interleukínom 2, ako aj predchádzajúce pôsobenie [pretreatment] cyklofosfamidmi na zníženie hladiny nádorovo špecifických T-supŕesorových buniek, ktoré môžu existovať. DETOX zahrnuje detoxifikovaný endotoxín (monofosforyl lipid A) zo Salmonela minnesota, kostru bunečnej steny Mycobacterium phlei, skvalénový olej a emulgátor.
Allison a Gregoriadis, 11 Immunoloqy Today 427, 1990 (čo sa neuznáva ako predchádzajúci spôsob k tomuto vynálezu) zisťujú, že jediné adjuvans povolené na použitie v luďoch sú hlinité soli (alum), ktoré neposkytujú konzistentnú podporu bunkami sprostredkovanej imunity. Allison a Gregoriadis tvrdia nastáva preto potreba vývoja adjuvancií s účinnosťou kompletného Freundovho adjuvans, ale bez jeho rôznych vedľajších účinkov ako sú granulómy. Pokračujú tvrdením, že existujú tri stratégie, napríklad použitie lipozómov; použitie adjuvancii, nazývaných imunostimulačné komplexy (ISCOM, ktoré zahrnujú saponínalebo Quil A (triterpenoid s dvomi cukornými reťazcami), cholesterol a fosfatidyl cholín), ktoré sú povolené na použitie v chrípkovej vakcíne pre kone (Morein et al., Immnuloqical Adjuvants and Vaccines, Plénum Press, 153); a použitie emulzii (SAF) skvalénu lebo Squalanu (s lebo bez pluronického činidla) a muramyl dipeptidu (MDP). 0 SAF sa hovorí, že podporuje vyvolanie bunkami sprostredkovanej imunity v myšiach, aj keď sa dlho myslelo, že podjednotkové antigény nemôžu vyvolávať cytotoxické T-bunkové (CTL) odpovede.
Takahashi et al., 344 Náture 873, 1990, popisujú indukciu pomocných buniek obmedzených na triedu II [class II restricted helper] a cytotoxických T-lymfocytov použitím ISCOM s jednou podkožnou imunizáciou v myšiach. Tvrdia že Freundovo adjuvans, nekompletné Freundovo adjuvans, fosfátom pufrovaný solný roztop neindukovali cytotoxickú aktivitu T-lymfocytov proti cielom, o ktoré bol záujem. Tvrdia, že na rozdiel od výsledkov s inými formami exogénneho rozpustného bielkovinného antigénu, ukázali, že je možné iniciovať antigén špecifické CD8+ CD4“ CTL obmedzené na MHC triedy I imunizáciou s exogénnou intaktnou bielkovinou s použitím ISCOM. Tvrdia tiež, že popísané pokusy napovedajú, že že by malo byť možné vyvolať ludské CTL použitím ISCOM obsahujúcich HIV bielkoviny, a že vakcíny založené na ISCOM môžu dosiahnúť dlho hladaný ciel súčasnej indukcie CTL a protilátok purifikovanou bielkovinou.
Byars a Allison, 5 Vaccines 223, 1987 popisujú použitie SAF-1, ktorá obsahuje TWEEN 80, PLURONIC L121, a skvalén lebo Squalane, s lebo bez muramyl dipeptidu, a predpokládajú, že podlá ich dát budú prostriedky bez muramyl dipeptidu užitočné na humánne a veterinárne vakcíny. Zosilovacie dávky [booster shots] adjuvans sa podávali bez muramyl dipeptidu. 0 muramyl dipeptid-s sa hovorí, že zvyšuje produkciu protilátok významne oproti použitiu adjuvans bez muramyl dipeptidu. Bunkami sprostredkovaná imunita sa merala ako hypersenzitivita oneskoreného typu pomocou kožných testov na stanovenie indukcie T pomocných buniek. Táto hypersenzitivita bola vyššia a trvalejšia keď sa podal v adjuvans muramyl dipeptiď. Podobné adjuvans sú popísané v Allison et al., U.S. Patent 4 770 874 (kde sa tvrdí, že kombinácia muramyl dipeptidu a pluronického polyólu je podstatná na vyvolanie bunkami sprostredkovanej a humorálnej odozvy na sérový albumín); Allison et al., U.S. Patent 4 772 466; Murphy-Corb et al., 246 Science 1293, 1989 (kde sá tvrdí, že použitie kombinovaného adjuvans s muramyl dipepetidom by mohlo zosiliť indukciu oboch zložiek imunitnej odpovedi, humorálnej a bunečnej); Allison a Byars, 87 Vaccines 56, 1987 (kde sa tvrdí, že bunkami sprostredkovaná imunitná odpoveď je vyvolávaná SAF (s muramyl dipeptidom) ako sa ukazuje hypersenzitivitou oneskoreného typu, proliferatívnou odpoveďou T-buniek na antigén, produkciou interleukínu 2, a špecifickou geneticky obmedzenou lýzou delových buniek nesúcich imunizačný antigén); Allison a Byars, Immunopharmacoloqy of Infectious Diseases; Vaccine Adjuvans and Modulators oŕ Non-Specific Resistance 191-201, 1987; Morgan et al., 29 J. Medical Viroloqy 74, 1989; Kenney et al., 121 J. Immunoloqical Methods 157, 1989; Allison a Byars, 95 J. Immunoloqical Methods 157, 1986 (kde sa ukazuje, že hlinité soli a emulzie minerálnych olejov zvyšujú tvorbu protilátok, ale nie bunkami sprostredkovanú imunitu a že prostriedky s muramyl dipeptidom vyvolávajú bunkami sprostredkovanú imunitu); Byars et al. 8 Vaccine 49, 1992 (neuznávané ako predchádzajúci spôsob k tomuto vynálezu; kde sa tvrdí, že ich adjuvančné prípravky význačne zvyšovali humorálne odpovede a v menšej miere zosilovali bunkami sprostredkované odozvy na chrípkový hemaglutinín ako antigén); Allison a Byares, 28 Molecular Immunoloqy 279, 1991 (neuznávané ako predchádzajúci spôsob k tomuto vynálezu; kde sa tvrdí, že funkcia muramyl dipeptidu je indukovať expresiu cytokínov a zvyšovať expresiu hlavných histokompatibilitných (MHC) génov; a že sa dosiahli lepšie protilátkové a bunečné odozvy ako s inými adjuvans, a že sa očakáva zistenie, či podobné; stratégie vedú k žiadanému účinku v lud’och); Allison a Byars, Technology Advances in Vaccine Development 401, 1988 (kde sa popisuje bunkami sprostredkovaná imunita, s použitím SAF); Epstein et al., 4 Advance Druq Delivery Reviews 223, 1990 (kde je poskytnutý prehľad rôznych adjuvancií používaných pri príprave vakcín); Allison a Byars, 95 J. Immunoloqical Methods 157, 1986 (kde sa tvrdí, že prídavok muramyl dipeptidu k adjuvans význačne zvyšuje bunkami sprostredkované odozvy na rad antigénov, vrátane monoklonálnych imunoglobulinov a vírusových antigénov); a Morgan et al. 29 J. Medical Viroloqy 74, 1989 (kde sa popisuje použitie SAF-1 k príprave vakcíny na Epstein-Barrov vírus).
Kwak et al., Idiotypové siete v biológii a lekárstve ΓIdiotype Networks in Bioloqy and Medicíne 1, Elsevier Science Publishers, str. 163, 1990 (neuznávané ako predchádzajúci spôsob k tejto prihláške) popisuje použitie SAF bez muramyl dipeptidu ako adjuvans pre B-bunkový lymfómový idiotyp v ľuďoch. Konkrétne, emulzia Pluronic L121, Squalenu a 0.4 % TWEEN-80 vo fosfátom pufrovanom soľnom roztoku sa podávala s idiotypom. Uvádza sa, že pridanie adjuvans má ďalej zvýšiť ... humorálnu odpoveď, a môže uľahčiť aj indukciu bunečnej odpovede.
Iné imunologické prostriedky zahrnujú lipozómy (Allison et al., U.S. patenty 4 053 585 a 4 117 113); cyklické peptidy (Dreesman et al., U.S. Patent 4 778 784 ); Freundovo kompletné adjuvans (Asherson et al., 22 Immunoloqy 465, 1972; Berman et al.
International____J.____Cartcer
1967; Allison, 18
Immunopotentiation 73,
1973 ;
a Allison Nešpecifické faktory ovplyvňujúce____hostiteľskú odolnosť____[Non-Specif ic Factors
Influencinq Host Resistance] 247, 1973); ISCOM (Letvin et al., 87 Vaccines 209, 1987); adjuvanciá obsahujúce blokové polymérové činidlá tvorené minerálnym olejom, povrchovo aktívne činidlá a TWEEN 80 (Hunter a Bennett, 133 J. Immunoloqy 3167, 1984; a Hunter et al. 127 J. Immunoloqy 1244, 1981); adjuvancie zložené z minerálneho oleja a emulgačného činidla s alebo bez umŕtvených mykobaktérií (Sanchez-Pescador et al., 141 J. Immunoloqy 1720, 1988); a iné adjuvanci . ako lipofilné deriváty muramyl tripeptidu, a muramyl dipeptid, kovalentne konjugovaný k rekombinantnej bielkovine.
Podstata vynálezu
Žiadate! objavil bezpečný a výhodný spôsob a prostriedky, ktorými sa dajú CTL odpovede indukovať v ludoch alebo v domácich, či poľnohospodársky významných zvieratách. Spôsob zahrňuje použitie prípravku antigénu, ktorý má malú alebo žiadnu toxicitu pre zvieratá a neobsahuje imunostimulačný peptid (napr. muramyl dipeptid), ktorého prítomnosť by mohla znížiť žiadanú bunečnú odpoveď. Navyše sa metodológia ľahko používa a nevyžaduje rozsiahlu in vivo prácu na zmenu existujúcich buniek rekombinantnými technikami tak, aby sa stali imunogennými. Tento objav je prekvapujúci lebo sa neočakávalo, že takéto CTL odpovede by sa dali dosiahnúť takýmito antigénovými prípravkami, neobsahujúcimi imunostimulačné peptidy lebo ich ekvivalent. Žiadateľove nálezy dovoľujú použitie takýchto prípravkov antigénu v širokom spektre chorobných stavov, alebo ako profylaktického činidla. Napríklad, podávanie takéhoto prípravku antigénu sa dá použiť na liečbu vírusového ochorenia, v ktorom je dôležitá CTL odpoveď, napríklad v liečbe infekcie HlValebo chrípky; môže byť tiež rozšírené na použitie pri liečbe bakteriálnych infekcií, rakoviny, parazitálnych infekcií a podobne. Ako profylaktické činidlo, antigénový prípravok s vhodným antigénom je užitočný na prevenciu infekcii vírusmi zodpovednými za horeuvedené vírusové ochorenia, najmä profylaxiu HIV infekcie, a tiež pri profylaxii pacientov s rizikom rakoviny, napríklad po resekcii primárneho nádoru.
Takto prvým aspektom vynálezu je spôsob indukcie CTL odpovede v človekovi alebo v domácom zvierati (napr. pes či kočka) alebo v poľnohospodársky významnom zvierati (napr. kôň, krava či prasa) k antigénu, inému ako je antigén lymfómových B-buniekálebo vaječný albumín. Spôsob zahrnuje kroky poskytnutia antigénu, ku ktorému je CTL odpoveď žiadaná, a poskytnutia netoxického antigénneho prípravku ktorý zahrnuje, obsahuje alebo sa v podstate skláda zo stabilizujúceho detergentu, činidla tvoriaceho micely [micelle-forming agent], a biodegradovatelného a biokompatibilného oleja. Tento antigénový prípravok s výhodou neobsahuje žiadnu peptidovú imunostimulačnú zložku, alebo má dostatočne nízku hladinu takejto zložky takže žiadaná bunečná odpoveď nie je znížená. Tento prípravok je s výhodou poskytnutý ako stabilná emulzia olej vo vode. Toto znamená, že každá z rozličných zložiek je vybraná tak, aby emulzia pretrvala, ako taká, počas najmenej jednoho mesiaca, s výhodou dlhlšie ako rok, bez oddelenia fáz. V tomto spôsobe sa antigén a antigénový prípravok zmiešajú spolu, aby vytvorily zmes (s výhodou pomocou mikrofluidizácie) a táto zmes sa podá zvieraťu v množstve dostatočnom na vyvolanie CTL odpovede v zvierati. Takéto podanie je potrebné len jeden raz.
Pod pojmom stabilizujúci detergent sa myslí detergent, ktorý umožňuje zložkám emulzie zostať v stálej emulzii. Takéto detergenty zahrňujú polysorbát, 80 (TWEEN) (Sorbitan-mono-9oktadecenoát-poly(oxy-1,2-etándiyl; vyrábaný ICI Americas, Wilmington, DE), TWEEN 40, TWEEN 20, TWEEN 60, Zwittergent 3-12, TEEPOL HB7, a SPAN 85. Tieto detergenty sú zvyčajne poskytované v množstve približne 0.05 až 0.5%, s výhodou asi 0.2%.
Pod pojmom činidlo tvoriace micely sa rozumie činidlo, ktoré má schopnosť stabilizovať emulziu s inými zložkami tak, že sa vytvorí štruktúra podobná micelám. Takéto činidlá s výhodou spôsobujú isté podráždenie v mieste injekcie, aby sa pritiahli makrofágy na podporu bunečnej odpovede. Príklady týchto činidiel zahrnujú polymérne povrchovo aktívne látky [surfactants] popísané BASF Wyandotte publikáciami, napr. Schmolka, 54 J. Am. Pil. Chem. Soc. 110, 1977, a Hunter et al. 129 J. Immunol. 1244, 1981, obidvoje zahrnuté odkazom, PLURONIC L62LF, L101, a L64, L121, PEG1000, a TETRONIC 1501, 150R1, 701, 901, 1301 a 130R1. Chemické štruktúry týchto činidiel sú v obore dobre známe. S výhodou je toto činidlo vybrané tak, aby malo pomer hydrofilov/lipofílov [hydrophile-lipophile balance, HLB] medzi 0 a 2, ako je definované Hunterom a Bennettom, 133 J. Immunoloqy 3167, 1984. Činidlo sa s výhodou v množstve medzi 0.001 a 10%, najvýhodnejšie v množstve medzi 0.001 a 5%.
Olej je vybraný na podporu udržania antigénu v emulzii oleja vo vode, t.j. na poskytnutie vehikla pre žiadaný antigén, a s výhodou má teplotu topenia nižšiu ako 65°C takže emulzia sa vytvorí pri izbovej teplote (okolo 20°C až 25°C),alebo pri znížení teploty emulzie na izbovú teplotu. Príklady takýchto olejov zahrnujú skvalén, Squalane, EICOSANE, tetratetraoktán, glycerol a arašídkový olej, Alebo iný rastlinný olej. Olej sa s výhodou poskytuje v množstve medzi 1 a 10%, najvýhodnejšie medzi 2.5a 5%. Je dôležité, aby olej bol biodegradovatelný a biokompatibilný tak, aby telo mohlo olej v čase rozkládať a aby žiadne škodlivé účinky, ako granulómy, neboli zrejmé pri použití oleja.
Pri horeuvedených prípravkoch je dôležité, že v nich nie je peptidová zložka, osobitne muramyl dipeptid (MDP). Takýto peptid by interferoval s indukciou CTL odpovede ak by bol poskytnutý v množstve väčšom ako 20 mikrogramov na normálne humánne podacie prípravku. Prednosť sa dáva úplnej neprítomnosti takých peptidov v antigénovom prípravku, napriek ich zreteľnej stimulácii humorálneho oddielu imunitného systému. To znamená: Žiadateľ zistil, že aj keď také peptidy môžu podporovať humorálnu odpoveď, sú nevýhodné, keď je žiadaná cytotoxická T-lymfocytová odpoveď.
Z iných príbuzných ohľadov, antigénový. prípravok je tvorený len dvoma z troch horeuvedených zložiek a použitý s akýmkoľvek žiadaným antigénom (kde tento výraz zahrnuje bielkoviny, polypeptidy a ich fragmenty, ktoré sú imunogénne) s výnimkou vaječného albumínu (lebo iných albumínov, :napr HSA, BSA a ovalbumín) na indukciu CTL odpovede v horeuvedených zvieratách ilébo ľuďoch.
Žiadateľ je presvedčený, že horeuvedené prípravky sú výhodnejšie ako prvšie prípravky (vrátane ISCOM, DETOX a SAF) pre humánne účely. Na rozdiel od takýchto prípravkov, predkladané prípravky obsahujú činidlo podporujúce tvorbu micel a súčasne nemajú žiadne peptidy, kostru bunečnej steny alebo bakteriálne bunečné zložky. Predkladané prípravky tiež vyvolávajú CTL odpoveď, ktorá buď nenastáva s prvšími prípravkami,alebo je významne zvýšená v porovnní s týmito prípravkami.
Výrazom netoxický sa rozumie, že v zvieratiilebo človeku, na ktoré sa pôsobí, sa pozorujú malé alebo nepozorujú žiadne vedľajšie účinky antigénneho prípravku. Ti, ktorí majú bežné znalosti v lekárskych cllebo veterinárnych oboroch rozoznajú, že tento výraz má široký význam. Napríklad, pre v podstate zdravého človeka <žlebo zviera sa môže toleravat len slabá toxicita, zatiaľčo pre ľudí trpiacich terminálnou chorobou (s prognózou menej ako tri roky života) sa dá tolerovať toxicita podstatne vyššia.
V prevedeniach, ktorým sa dáva prednosť, antigénový prípravok obsahuje v podstate dvealebo tri zo zložiek: detergent, činidlo a olej; spôsob spočíva v podstate z jednorázového podania zmesi (antigén plus antigénový prípravok); človek á.lebo zviera sú infikovaní vírusom a trpia jednýmdlebo viac symptómami infekcie vírusom (ako sú obecne definované lekármi v príslušnom obore); a antigénový prípravok je netoxický pre ľudícžlebo zvieratá.
V iných prevedeniach, ktorým sa dáva prednosť, je antigén vybraný z antigénnych úsekov HIV antigénov: gp!60, gag, pol, Nef,
Tat, a Rev; maláriových antigénov: CS protein a sporozoitový povrchový protein 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2z HBc Ag, a HBe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpes vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinného produktu, cytomegalovirusového gB, cytomegalovirusového gH, a IE proteínu gP72; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F protein, G protein a N protein; a z nádorových antigénov karcinómu CEA, s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97, a karcinómového produktu Neu onkogénu, melanomového antigénu nazývaného MAGE, a mutovaného p21 ras proteínu prítomného v rade zhubných nádorov.
Podlá súvislosti vynález sa vyznačuje zložením zahrnujúcim, alebo v podstate pozostávajúcim z antigénu zmiešaného s antigénovým prípravkom popísaným vyššie, a antigén je vybraný z antigénnych úsekov vypadaných vyššie.
V iných ohladoch, pacienta infikovaného chrípkou, trpiaceho vynález sa vyznačuje spôsobom liečby HIV, trpiaceho maláriou, trpiaceho hepatitídou, trpiaceho rakovinou, infikovaného herpes vírusom, alebo infikovaného respiračným syncytiálnym vírusom, pomocou podania prostriedku zahrnujúceho príslušný antigén (napr. vybraný z tých, čo sú vywotiné vyššie) zmiešaného s jedným zo vyxs i^uvedených antigénových prípravkov.
Iné význačné vlastnosti a výhody vynálezu vyplynú z následujúceho popisu
Popis výhodných prevedení
Najprv budú v krátkosti popísané obrázky
Obrázky
OBR. 1A - 1C sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu rôznymi ovoalbuminovými prípravkami. E:T predstavuje pomer efektoru k cieľu [effector to target ratio] vo všetkých Obrázkoch.
OBR. 2A a 2B sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu rôznymi β-galaktozidázovými prípravkami.
OBR. 3 je grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu ovoalbumínom v lipozóme a v antigénovom prípravku.
OBR. 4 je grafickým znázornením dát ukazujúcich vplyv deplécie CD4 a CD8 buniek na CTL indukciu.
OBR. 5 a 6 sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu ovoalbumínom v lipozóme a v antigénovom prípravku.
OBR. 7 je grafickým znázornením dát ukazujúcich CTL indukciu zmesou Squalane a TWEEN a antigénu.
OBR. 8 je grafickým znázornením dát ukazujúcich CTL indukciu zmesou Squalane a pluronic a antigénu.
OBR. 9 je grafickým znázornením indukcie anti-gpl20IIIb protilátok v opiciach rôznymi antigénovými prípravkami.
OBR. 10A - 10 B sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich gpl20-špecifickú CTL odpoveď v opiciach imunizovaných vakcíniou-gpl20 a gpl20-antigénovým prípravkom [gpl20-AF].
Antiqénové prípravky
Antigénové prípravky užitočné podľa tohoto vynálezu sú obecne popísané vyššie. Tí, čo sú obyčajne zbehlí v?</bore rozpoznajú, že rovnocenné prípravky sa ľahko pripravia a že sa môže očakávať, že budú mať rovnocenné vlastnosti pri indukcii CTL odpovede. Takéto prípravky sú ľahko testo.vateľné čo do ich vlastnosti s použitím techník popísaných v príkladoch nižšie.
Tu následujú príklady vynálezu s použitím antigénového prípravku [antigén formulation, AF] zloženého z asi 15% Squalane (0.6% TWEEN 80) a (0.0045-3.75% pluronic) vo fosfátom pufrovanom soľnom roztoku (Imed STP). Konkrétne, emulzia AF obsahovala: 150 mg Squalane, 0.045-37.5 mg poloxaméru 401 (PLURONIC L121), 6 mg polysorbátu 80 (TWEEN 80), 0.184 mg chloridu draselného,
0.522 mg monobázického fosforečnanu draselného, 7.36 mg chloridu sodného, 3.3 mg dibázického fosforečnanu draselného (bezvodého), na 1 ml vody, pH 7.4. Táto emulzia bola mikrofluidizovaná s použitím standartnej techniky (Microfluidics Model M11OF) s modulom spätného tlaku pri 11-14 000 psi s postupným návratom k atmosférickému tlaku, chladením a balením v lade.
V iných príkladoch sa antigén miešal s mikrofluidizovaným Squalane (S), pluronic (P) a TWEEN 80 (T) zmesami na dosiahnutie príslušných konečných koncentrácií 5% Squalane, 0.2% TWEEN 80 alebo 0.0015-1.25% pluronic. Na určenie pod-zložiek potrebných na indukciu imunitnej odpovede špecifickej k antigénu,
Šqualane-TWEEN 80, pluronic-TWEEN 80 a Squalane-pluronic boli pripravené v tých istých koncentráciách ako pri trojzložkovej zmesi. Pluronic, Squalane a TWEEN 80 boli pripravené aj jednotlivo na určenie vplyvu jednotlivých zložiek na CTL indukciu. Uskutočnila sa aj náhrada TWEEN 40, TWEEN 20 a Zwittergent za TWEEN 80 na určenie vplyvu rôznych derivátov TWEEN na CTL indukciu v ova systéme. Uskutočnila sa náhrada
Squalane v trojzložkovom prípravku Triacontone a náhrada kopolyméru trojzložkovom prípravku pomocou PEG a Tetronics
1501 a 150R1. Pokiaľ prípravkov, rôzne analóg.é v rôznych pomocou Eicosane alebo pluronic v tom istom 1000, Pleuronic L62LF sa týka dvojzložkových kombináciách sa miešali a testovali na ova špecifickú CTL indukciu,. Boli to zmesi cholesterol - TWEEN 80, Squalane - TWEEN 20, Pristane - TWEEN 80, dlebo olivový olej - TWEEN 80. Na štúdiu stabilizácie, mikrofluidizovaná zmes Squalane-TWEEN bola zmiešaná z dextrózou do konečnej koncentrácie 5%. Vo všetkých prípadoch sa excipienty miešali v mikrofluidizačnom prístroji na vytvorenie stabilnej emulzie. V niektorých pokusoch sa dvojzložkové prípravky zmiešali s rôznymi koncentráciami MDP na indukcie CTL a humorálnych odpovedí. Tabuľka I ukazuje prehľadný zoznam rôznych prípravkov použitých pre túto štúdiu.
TABUĽKA 1
Vplyv rôznych náhrad v trojzložkových a dvojzložkových systémoch
| Pokus č. | 1 | Pokus č. | 2 | |
| Náhrada v trojzložkových | Percent | zabitia | Percent | zabitia |
| prípravkoch | pri E:T | 100:1 | pri E:T | 100:1 |
| STP | 88 | 10 | ||
| Tween 40 (T) | 66 | * | ||
| Tween 20 (T) | 48 | — | ||
| T1501 (P) | 39 | — | ||
| T150R1 (P) | 30 | — | ||
| Pluronic L62LF (P) | 47 | — | ||
| Eicosane (S) | — | 41 | ||
| PEG1000 (P) | 24 | |||
| Triacontane (S) | — | 30 | ||
| Zwittergent (T) | — | 0 | ||
| Náhrada v dvojzložkových prípravkoch | ||||
| ST | 82 | 44 | ||
| PT | 77 | — | ||
| SP | 69 | — | ||
| Cholesterol(S)+Tween 80 | 38 | — | ||
| Squalane + Tween 20 (T) | 65 | — | ||
| Pristane (S) + Tween 80 | 60 | — | ||
| Olivový olej(S)+Tween 80 | 69 | — | ||
| Jednozložkové prípravky | ||||
| Pluronic L121 | 0 | — | ||
| Squalane | 0 | — | ||
| Tween 80 | 0 | — | ||
| Squalane + Tween 80 + | ||||
| 5% dextróza | 86 | — |
: nebolo k dispozícii
Prípravok adjuvans Syntex (mikrofluidizovaný; Syntex adjuvant formulation, SAFm) sa používal ako kontrolné adjuvans a skládal sa z dvoch častí. Časť I sa skladala z fosfátom pufrovaného soľného roztoku obsahujúceho finálnu koncentráciu 5% Squalane, 1.25% pluronic a 0.2% TWEEN 80 (vehikel čiže I-SAF). Časť II sa skladala z N-acetylmuramyl-L-treo:nyl-D-izoglutamínu (Thr-MDP), derivátu zložky mykobakteriálnej bunečnej steny. Pre účely imunizácie sa antigén miešal s mikrofluidizovaným vehiklom (časť I) k získaniu homogénnej emulzie. MDP sa pridal k vytvoreniu SAFm a krátko vortexoval. Koncentrácia MDP sa menila, aby sa dalo stanoviť, či existuje koncentrácia optimálna pre CDL indukciu. Ako kontrola adjuvans, myši boli tiež imunizované s rozpustným antigénom zmiešaným s alumom podľa príručky výrobcu (Pierce Chemical, Rockford, IL) alebo s úplným Freundovým andjuvans (CFA).
STP antigénový prípravok sa používa na indukciu cytotoxických T-lymfocytových odpovedí v myšiach. Tí, čo sú zbehlí výbore rozpoznajú, že takýto myšací model ukazuje, že rovnocenné pokusy budú podobne indukovať cytotoxické T-lymfocytové odpovede v ľudoch a domácichdlebo poľnohospodárskych zvieratách. Množstvo anigénneho prípravku a antigén užitočný pre vytvorenie žiadanej bunečnej odpovede sa dajú stanovť empiricky štandartnými postupmi, dobre známymi tým; čo sú obyčajne zbehlí v bore, bez zbytočného experimentovania. Teda: Ak je žiaduce minimalizovať vedľajšie účinky pôsobenia takejto zmesi, tí čo sú obyčajne zbehlí vtóbore môžu stanoviť minimálnu hladinu takejto zmesi na podávanie ľuďom, domácim alebo poľnohospodárskym zvieratám tak, aby sa vyvolala CTL odpoveď a tak indukovala imunita k žiadanému antigénu. Pri normálnom použití sa takáto zmes podá injekčný ktorýmkoľvek z radu štandartných postupov, ale osobitne preferované je vnútrosvalová //^i'ekcia v mieste, ktoré dovolí, aby emulzia zostala stabilná behom niekoľko dnialebo týždňov.
Metódy
Následujúce materiály a metódy sa použili v príkladoch poskytnutých nižšie ak sa neuvádza inak:
Myši
Samice myši C57BL/6 a BALB/c (H-2^) sa získali od Harlen Sprague (San Diego, Kalifornia).
Antigény
Ovalbumín (ova, v
Gráde VII, Sigma Chemical Co., St. Louis, natívnej forme, β-galaktozidáza, (β-gal, používala v natívnej forme a po varení vytvorenie alkalického hydrolyzátu.
MO) sa používal Gráde VIII; BRL) v 1 N NaOH po 2 sa minúty na
Rekombinantný gpl20 sa získal od Američan Biotechnology.
Nádorové bunky a transfektanty
Používané nádorové bunky boli la línie EL4 (C57BL/6 H-2^ tymómové) a P815 (DBA/2, H-2d mastocytómové). Odvodenie ova-produkujúceho EL4 transfektantu, EG7-ova, je popísané prvšie Moorom et al, 54 Celí 777, 1988. β-gal-produkujúci transfektant, P13.1, bol odvodený elektroporáciou 107 buniek P815 v 1 ml fosfátom pufrovaného soíného roztoku (PBS) s 10 mg Pstl-linearizovaného pCHUO (Pharmacia LKB Biotechnology Inc., Piscataway, NJ) a 1 mg Pvul-linearizovaného pSV2 neo (Southern et al., 1 J. Mol. Appl. Genet. 327, 1988) s následujúcou selekciou v 400 ^g/ml antibiotika G418. Transfektant C3-4 bol odvodený z BALB/c hybridómu Igm 662 trnasfekciou plasmidom kódujúcim β-gal gén fúzovaný k tretiemu a štvrtému exónu ťažkého reťazca IgM (Rammensee et al., 30 Immunoqenetics 296, 1989). Fibroblast 3T3 exprimujúci gpl60IIIb, 15-12, bol poskytnutý Dr. Germainom z NIH (Bethesda, MD). Kb transfekovahá L bunková línia bola poskytnutá Dr. Carboneom, Monash University, Austrália. D^a Ld transfekované L bunkové línie boli poskytnuté Dr. Tedom Hensenom,
Washington University, St. Louis.
Imunizácia £
Myši boli imunizované intravenózne 200 μΐ suspenzie 25 x 10 splenocytov, po cytoplazmatickom nabití [loading] ako je oísané v Moore et al., vyššie, a Carbone et al., J. Exp. Med. 169:603, 1989. Na imunizáciu ova-antigénovým prípravkom a β-gal-antigénovým prípravkom, 30 μg každého bielkovinného antigénu na myš sa podalo iny.ekčne subkutánne do šliap a koreňa chvosta. Každá inekcia sa skladala z 67 μΐ mikrofluidizovaného antigénneho prípravku (pripraveného podlá štandatného postupu) a 30 μg bielkovinného antigénu vo finálnom objeme 200 μΐ. Finálny objem sa doplňoval HBSS, viď Whittaker manual (Welkersville, MD). MDP sa poskytlo v koncentráciách medzi 0 a 300 μg. Tam, kde je uvedené, boli myši imunizované rozpustnými antigénmi v CFA alebo alume v celkovom objeme 200 μΐ.
In vitro stimulácia efektorovych populácií
Slezinné bunky (30 x 106) z normálnych alebo imunizovaných myší, ktoré boli primované [prímed] najmenej 14 dní skôr, boli inkubované s 1.5 x 106 EG7-ova (ožiarených 20 000 rad) na ova odpovede alebo s 1.5 x 106 C3-4 buniek (ožiarených 20 000 rad) na β-gal odpovede v 24-jamkovej platničke pri 37°c a 7% CO2/vzduchu. Všetky tkáňové kultivácie sa vykonávali v kompletnom médiu zloženom z IMDM média, viď Whittaker manual (Welkersville, MD),, doplnenom 10% fetálneho teľacieho séra (FCS), 2 mM glutamínom, gentamycínom a 2 x 10~5 M merkaptoetanolom. Pre in vitro deplečné pokusy, na slezinné bunky in vivo primované alebo in vitro stimulované sa pôsobilo monoklonálnymi protilátkami mAb RL.172 (anti-CD4) alebo mAb 3.168 (anti-CD8) na odstránenie CD4+alebo CD8+ T buniek (Sarmiento et al., 125 J. Immunol. 2665, 1980, a Ceredig et al., 314 Náture 98, 1985). mAb RL.172 a mAb 3.168 boli získané od Dr. Jonathana Sprenta na Scripps Clinic and
Research Foundation, La Jolla, CA.
Slezinné bunky (30 x 106) z normálnych alebo imunizovaných myší, ktoré boli primované najmenej 21 dní skôr, boli inkubované s 1.5 x 106 15-12 buniek (opracovaných s 200 jxg mitomycinu C na 108 buniek po 45 minút)alebo s 500 μg 18111b peptidu obsahujúceho dominantný CTL epitop v BALB/c myši v kompletnom IMDM médiu, obsahujúcom 10% predom hodnoteného FCS (ICN Flow; ICN Biochemicals, Inc., Costa Mes, CA), 2 mM glutamín, gentamycín a 2 x 105 M merkaptoetanol. Na in vitro stimuláciu peptidmi boli slezinné bunky kultivované v kompletnom IMDM obsahujúcom 5% ConA supernatantu.
Pre in vitro deplečné pokusy sa na slezinné bunky in vivo primované alebo in vitro stimulované pôsobilo monoklonálnymi protilátkami mAb RL.172 (anti-CD4) alebo mAb 3.168 (anti-CD8) v prítomnosti nízko toxického králičieho komplementu na odstránenie CD4+ alebo CD8+ T buniek (22, 23). mAb RL.172 a mAb 3.168 boli dar od Dr. Jonathana Sprenta na Scripps Clinic and Research Foundation, La Jolla, CA.
Stanovenie cytotoxicity
Cieľové bunky (1 x 106) boli označené 100 μΰί [51Cr] chromanu sodného po 60 minút. Pre peptidmi pulzované ciele, 50 μΐ roztoku 1 mg/ml peptidu v HBSS 51Cr. Po premytí, 104 cieľov buniek boli inkubované v 200 μΐ sa po 100 μΐ supernatantu a sa pridalo behom značenia cieľa seriálne riedenia efektorových
RP10 po 4 hodiny pri 37°C. Vzalo špecifická lýza sa určila ako:
Percento špecifickej lýzy spontánne uvoľnenie) /
100 x {(uvoľnenie pomocou CTL (maximálne uvoľnenie - spontánne uvoľnenie)}. Spontánne uvoľnenie v neprítomnosti cytotoxických
T-lymfocytov (CTL) bolo vo všetkých pokusoch < 25% maximálneho uvoľnenia detergentom.
Stanovenie protilátkovej odpovede v myšiach a opiciach
Každá jamka 96-jamkovej platničky s U profilmi dna (Costar, Cambridge, MA) bola pokrytá 150 ng ova .ilebo gpl20 v 50 μΐ HBSS a inkubovaná cez noc pri 4°C. Na stanovenie anti-ova a anti-gpl20 protilátkových odpovedí v myšiach, platnička bola blokovaná 1% BSA po 1 hodinu. Seriálne riedené séra boli pridané v objeme 25 μΐ na jamku a inkubované po 2 hodiny. Platne boli premyté a 50 μΐ 1:1000 riedenia kozieho protimyšacieho IgG konjugovaného s HRPO (SBT, Alabama) v 1% BSA sa pridalo na jamku. Po 1-hodinovej inkubácii sa platne premyly a pridalo sa 100 μΐ substrátu na jamku. OD405 sa brala po 10 až 15 minútach. Na stanovenie opičích anti-gpl20 protilátkových odpovedí boli všetky kroky rovnaké až na to, že ako blokovanie platničiek, tak riedenie séra sa vykonali v 5% normálneho kozieho séra v Hankovom vyrovnanom solnom roztoku.
Syntéza peptidov
Syntetické peptidy zodpovedajúce aminokyselinovej sekvencii
253-276 (Zoznam sekvencii čís. 1: EQLESIINFEKLTEWTSSNVMEER; kde sa používa štandartný jednopísmenkový kód na označenie každej aminokyseliny) ovalbumínu {ova 253-276), aminokyselinovej sekvencii 84 - 102 myelínového bázického proteínu (MBP 84 - 102) (Zoznam sekvencii čís. 2: DENPWHFFKNIVTPRTPP) a syntetické peptidy zodpovedajúce aminokyselinovej sekvencii 308 - 322 (18111b sekvencia) gpl20IIIb boli vytvorené peptidovou syntézou na pevnom nosiči s použitím syntetizátoru Applied Biosystems 430A. Aminokyseliny boli kondenzované prostredníctvom preformovaných symetrických anhydridov, s výnimkou asparagínu, glutamínu a arginínu, ktoré boli kondenzované ako hydroxybenzotriazolové estery. Kondenzačná účinnosť bola sledovaná ninhydrínovou
Biochem. 595, podlá postupu reakciou podlá postupu Keisera et al., 34 Anál. 1970. Peptidy boli uvoľňované z nosiča pomocou HF vysoko-nízko popísaného Tamom et al. 21 J. Am.
Chem. Soc. 6442, 1983 a peptidy boli extrahované zo živice 10% kyselinou octovou. Po lyofilizácii boli peptidy odsolené na kolóne Sephadex G-25 a vzorky peptidov potom čistené HPLC chromatografiou s obrátenou fázou na preparatívnej kolóne Vydac C-18. Vyčistené peptidy (98%) boli solubilizované v HBSS vo finálnej koncentrácii 10 mg/ml a zriedené na žiadanú koncentráciu v kompletnom médiu.
Diqescia CNBr
Na vzorky bielkovín (napr. β-galaktozidázy) sa pôsobilo 100-násobným molárnym prebytkom brómkyánu v roztoku 100 mM trifluóroctovej kyseliny. Reakcia sa nechala prebiehať 18 hodín pri izbovej teplote (asi 20°C) s obracaním. Po predpísanom reakčnom čase boli peptidové fragmenty oddelené od reaktantov s použitím prístroja SEP-PAK C-18 (Waters), eluované 95% acetonitrilom a lyofilizované.
Alkalická diqescia
Na vzorky bielkovín (napr. β-galaktozidázy) sa pôsobilo 1 N NaOH s varom po 2 minúty a výsledné peptidové fragmenty boli oddelené od reaktantov s použitím prístroja SEP-PAK C-18 (Waters), a eluované 95% acetonitrilom a lyofilizované.
Príklad 1: Iniciácia CTL obmedzených na triedu I
Moore et al., 113 UCLA Symp. Mol. Celí, Biol. 1989 a Carbone a Bevan, 171 imunizované
J. Exp. Medicíne 377, 1990, ukazujú, že myši slezinnými bunkami cytoplazmaticky nabitými rozpustným ova boli primované ku špecifickej odpovedi CTL obmedzených na triedu I. Ova-exprimujúci EL4 transfektant EG7-ov<a bol použitý na in vitro stimuláciu in vivo primovaných slezinných lymfocytov a tiež ako cieľ pre ova špecifické CTL sprostredkované zabíjanie. Táto štúdia tiež ukázala že CD8+ efektory indukované EG7-ova transfektantom alebo slezinnými bunkami cytoplazmaticky nabitými ova rozpoznávajú determinantu mapovanú peptidom ova 258-2276 v kontexte H-2K^, lýzujú EG7-ova, a tiež zabíjajú EL4 bunky pokryté ova 258-276. Teda: Aby sa určilo, či nejaká endogénna dráha CD8+ T buniek obmedzených na triedu I môže byť indukovaná rozpustným antigénom, horeuvedený systém sa použil na stanovenia, či sa isté antigénne prípravky dajú použiť na zavedenie rozpustného antigénu do dráhy obmedzenej na triedu I.
a) ova
Myši C57BL/6 boli imunizované jeden raz rôznymi množstvami ova (30 ug - 1 mg na myš) s alebo bez antigénového prípravku. Myši dostali ekciu subkutánne do koreňa chvosta. Slezinné bunky boli vybra-té z imunizovaných myši najmenej dva týždne po imunizácii a boli in vitro stimulované EG7-ova transfektantami. Koncentrácia ova tak nízka ako 30 μυ bola rovnako účinná ako dávka 1 mg. Pre toto boli CTL štúdie rutinne vykonávané so slezinnými bunkami z myší primovaných 30 μg ova.
Myši, ktorým bol injekčné podaný rozpustný ova v HBSS v tak vysokom množstve ako 1 mg, nevykazovali žiadne potvrdenie CTL primovania [priming] (OBR. 1A). Naproti tomu myši imunizované 30 μg ova v antigénnom prípravku popísanom hore (označovanom v obrázkoch ako AF [antigén formulation]) vykazovali významnú transfektant-špecifickú CTL odpoveď (OBR. 1C). Navyše rozsah zabíjania EG7-ova buniek ova-AF imunizovanými slezinnými bunkami bol porovnateľný s rozsahom zbíjania bunkami z myší imunizovaných ova-nabitými slezinnými bunkami (OBR. 1B) .
To, že špecifita CTL primovania in vivo bola antigén špecifická, ukazovala neschopnosť slezinných buniek z β-galaktozidázou imunizovaných myší vykazovať sekundárnu CTL odpoveď in vitro pri stimulácii EG7-ova. Žiadna ova-špecifická CTL indukcia nebola pozorovaná.
b) β-qalaktozidáza
Podobné výsledky boli získané pri použití iného rozpustného antigénu, β-gal. Pre určovanie β-gal špecifickej CTL odpovede bol používaný ako cieľ β-gal exprimujúci transfektant C3-4 odvodený z BALB/c. Imunizácia BALB/c myší rozpustným β-gal dala CTL odpoveď na úrovni pozadia. Preto na stanovenie špecifickej CTL odpovede odobranie slezinných lymfocytov bolo odložené na najmenej osem týždňov a tieto boli kultivované 5 dní v prítomnosti ožiarených C3-4 transfektantov.
OBR. 2B ukazuje, že 30 ug β-galaktozidázy v AF indukovalo silnú špecifickú CTL odpoveď proti transfektantovi. Pri pomere efektoru k cieľu (E:T) 3:1, β-gal-AF imunizované myši vykazovali okolo 80% špecifického zabíjania. Naproti tomu len 20% zabíjania toho istého cieľa sa dosiahlo s efektormi izolovanými z myší imunizovaných β-gai v HBSS pri rovnakom pomere E:T (OBR. 2A). Pretože ani EL4 ani P815 neexprimujú MHC génové produkty triedy II a lýza vykazuje syngénnu reštrikciu, tieto ova a β-gal špecifické efektory sú obmedzené na triedu I MHC.
Aby sa preukázala užitočnosť antigénových prípravkov, myši boli imunizované rozpustným ova uzavretým [encapsulated] do dvoch typov lipozómov, z ktorých jedny boli pH senzitívne lipozómy. Po jednom týždni boli slezinné bunky stimulované in vitro ako je popísané vyššie a testované proti 51CR-značeným EGľ-ovaalebo EL4. OBR. 3 ukazuje reprezentatívny výsledok preukazujúci, že ova v lipozóme nemôže primovať myš k podstatnej CTL indukcii. Podobné výsledky sa pozorovali keď sa imunizovalo ova v alumine.
Príklad 2: CTL rekoqnícia epitopu
Carbone a Bevan, vyššie, preukázali, že CTL indukované v C57BL/6 myšiach EG7-ova transfektantom a cytoplazmaticky ova-nabitými splenocytmi rozpoznávajú EL4 bunky pokryté [coated] peptidom ova 258-276. Aby sa stanovilo, či rozpustný ovalbumín v AF indukuje podobné CTL odpovede, slezinné bunky sa pripravili z imunizovaných myší a stimulovali in vitro EGl-ova. Efektory boli testované proti EL4 bunkám pokrytým peptidom ova 253-276, alebo kontrolným peptidom odvodeným od myelínového bázického proteínu (MBP 84-102). Výsledky ukazujú na ova-AF primované CTL so špecifitou podobnou tým, čo boli primované transfektantmialebo cytoplazmaticky nabitými ova (OBR. ΙΑ, 1B a 1C). Ova-AF primované efektorové bunky účinne lýzovali EGl-ova a netransfekované EL4 bunky pokryté 50 pg/108 buniek ova peptidu, ale nelýzovali EL4 bunky pokryté 50 pg/108 buniek MBP peptidu.
V β-galaktozidázovom systéme Carbone a Bevan, vyššie, ukázali, že β-gal exprimujúce transfektanty a splenocyty cytoplazmaticky nabité β-galaktozidázou indukujú CTL, ktoré lýzujú β-gal exprimujúce transfektanty a netransfekované P815 bunky pokryté alkalický hydrolyzovanou β-galaktozidázou. Rozpustná β-gaíakťozidáza indukuje CTL, ktoré majú podobnú špecifitu ak sa imunizuje v AF (OBR. 2).
Príklad 3: CTL efektory sú CDS* bunky
To, že rozpustné bielkovinné antigény v AF indukujú CD8+ ektorové T bunky a.k.0 je rizs/e. . Splenocyty z imunizovaných myší boli kultivované po päť dní s ožiarenými transfektantmi in vitro. Potom sa bunky zobrali a depletovali od CD4+ a CD8+ T buniek s použitím monoklonáIných anti-CD4 alebo anti-CD8 protilátok plus kómplementu. Depletované populácie boli potom testované proti 51cR-EG7-ova v ova systéme alebo 5^CR-P13.1 v β-gal systéme. Dáta uvedené v OBR. 4 ukazujú, že v ova systéme deplécia od CD8+ T buniek zničí cytolytickú aktivitu príslušnú celej efektorovej bunečnej populácii. Naproti tomu deplécia od CD4+ T buniek nemala žiadny efekt na lýzu EGl-ova.
Podobne v β-gal systéme deplécia od CD8+ T buniek ničila cytolytickú aktivitu slezinných buniek imunizovaných β-gal-AF (dáta nie sú uvedené).
Príklad 4: Rozpustný ova v AF primule CD8+ T bunky
Aby sa preukázalo, že ova-AF primuje CD8+ T bunkovú populáciu in vivo a je kruciálny pre in vitro sekundárnu odpoveď, CD4+ a CD8+ populácie boli depletované zo slezín ova-AF imunizovaných myší a kontrolných myší. Takto opracované populácie boli potom stimulované in vitro EGl-ova samotnými, Alebo v kombinácii s CD4 + a CD8+ T bunkami z ova-AF imunizovaných myší 21ebo v rôznych kombináciách CD4+ a CD8+ T buniek z ova-AF imunizovaných myší s CD4+ a CD8+ bunkami z kontrolných myší. OBR. 5 ukazuje, že primovanie CD8+ buniek je podstatné pre prejavy sekundárnej CTL odpovede in vitro. Tieto dáta tiež ukazujú, že pre účinnú sekundárnu CTL odpoveď in vitro sú potrebné CD4+ T bunky. CD4+ bunky nie sú potrebné na primovanie.
Horeuvedené príklady ukazujú vplyv antigénneho prípravku na indukciu odpovede CTL obmedzených na triedu I proti rozpustným bielkovinným antigénom. Antigénny prípravok sprostredkoval a rozpustný antigén vyvolal primovanie CTL, ktoré bolo čo do aktivity podobné tomu, čo sa vyvolávalo transfektentam^alebo splenocytmi cytoplazmaticky nabitými ova Alebo β-gal. V ovalbumínovom systéme EGl-ova, cytoplazmaticky nabité ova splenocyty a ova-AF indukovali: (a) CD8+ CTL obmedzené na triedu I; (b) CTL, ktoré rozoznávali cieľ zcitlivený ova 253-276 syntetickým peptidom a (c) CTL s dlhou životnosťou po jedinej imunizácii. V β-galaktozidázovom systéme β-gal-AF indukoval CTL, ktor é rozoznávali β-gal exprimujúceho transfektanta C3-4 a tiež netransfekované P815 bunky zcitlivené alkalický hydrolyzovanou β-gal. Toto je analogické tomu, čo sa pozorovalo s CTL indukovanými imunizáciou slezinnými bunkami cytoplazmaticky nabitými β-galaktozidázou. Indukcia ova-špecifických CTL antigénovým prípravkom je jedinečná, pretože ova uzavretý v pH citlivom lipozómealebo v alumine (dáta nie sú predvedené) nemôže indukovať CTL primovanie in vivo.
Tieto príklady ukazujú, že antigénový prípravok použitý ✓v' .
óúebo jeho ekvivalenty, su užitočné v humánnej terapii a vývoji vakcín na indukciu CTL pri rôznych nádorových a vírusových ochoreniach.
Príklad 5
Toto je konkrétny príklad predvádzajúci použitie horeuvedeného AF na vytvorenie primovania CTL obmedzených na triedu I rozpustným gpl20 z HIV.
gpl60 exprimujúca bunečná línia (15-12) bola vytvorená v Balb/c bunečnej 3T3 línii odvodenej z fibroblastov. Získaná bola od Dr. Rona Germaina a Dr. Jaya Berzofskyho, National Inštitúte of Health, Bethesda, MD. Bunečná línia exprimujúca gpl60 sa použila na in vitro stimuláciu in vivo primovaných slezinných lymfocytov a tiež ako cieľ na gpl60-špecifickú CTL indukciu. V mnohých pokusoch bol peptid 18111b, ktorý obsahuje dominantný CTL epitop, použitý na in vitro stimuláciu. Na peptidovú restimuláciu v kultúre sa pridal do média IL-2. Balb/c myši boli imunizované raz 1 ug gpl20 na myš s alebo bez AF. Myšiam sa podali m/ekcia subkutánne alebo do koreňa chvosta. Slezinné bunky sa vzali tri týždne po imunizácii a in vitro stimulovali ožiarenými gpl60 transfektantami «Jlebo peptidom 18111b. Po piatich dňoch kultivácie in vitro bolo primovanie zisťované podľa prítomnosti špecifických efektorov schopných lýzovať gpl60 transfektanty ale nie netransfekované bunečné línie. V niektorých pokusoch vac:gpl60 infikované P815 bunky boli použité akOcieľ. Výsledky sú predvedené v Tabuľke 4A, kde CTL odpoveď je potencovaná AF a gpl20. Musí sa pripomenúť, že v gpl20 systéme je optimum AF prípravku na gpl20-špecifickô CTL indukciu (po jednej imunizácii 1 μg gpl20 v AF) také, ktoré neobsahuje žiadny a_lebo minimálny pluronic. Ak však myši boli imunizované viac razy 5 μg gpl20 v AF obsahujúcom vyššiu koncentráciu pluronic (3.75%), pozorovala sa podstatná CTL indukcia (dáta sa neuvádzajú).
Následujúci príklad ukazuje použitie antigénneho prípravku s použitím len jednej a_lebo dvoch zložiek:.' Tieto príklady preukazujú, že CTL odpovede môžu byt indukované lensjednou^lebo dvomi z troch horeuvedených zložiek.
Príklad 6: Stanovenie kľúčových zložiek potrebných na CTL indukciu
Na stanovenie, či všetky horezmienené zložky sú potrebné na antigén-špecifickú CTL indukciu, myši boli imunizované ovalbumínom v mikrofluidizovaných prípravkoch s rôznymi kombináciami dvoch alebo troch zložiek uvádzaných v AF vyššie, s náhradou PBS na mieste tretej zložky. Použité dvojzložkové kombinácie boli ako následuje: Squalane/TWEEN v PBS; Squalane/Pluronic v PBS ôilebo Pluronic/TWEEN v PBS. Iná sada skupín bola zahrnutá, ked sa myši imunizovali ova formulovaným v jednozlôžkových systémoch, t.j. len v Squalane v PBS, Pluronic v PBSdlebo TWEEN V PBS.
Horeuvedené antigénne prípravky sa skladajú z: 0.300 g TWEEN 80 (Aldrich, WI) , 1.875 g Pluronic L121 (BASF, NJ) , a 7.5 g Squalane (Aldrich, WI), doplnených PBS na 50 ml.
Dvojzložkové antigénne prípravky boli:
Squalane/TWEEN: 0.300 g TWEEN 80 a 7.5 g Squalane doplnených PBS na 50 ml.
Pluronic/TWEEN: 1.875 g Pluronic L121 a 0.300 g TWEEN 80’ doplnených PBS na 50 ml.
Pluronic/Squalane: 1.875 g Pluronic L121 a 7.5 g Squalane doplnených PBS ha 50 ml.
Trojzložkové prípravky s premennou koncentráciou pluronic boli:
Koncentrácie Squalane a TWEEN sa udržiavali ako predtým a koncentrácia pluronic sa menila.
Na 50 ml objemy.
| S (gramov) | T (gramov) | P (gramov) | P |
| 7.5 | 0.300 | 0.75 | 1.5% |
| 0.075 | 0.15% | ||
| 0.0075 | 0.015% | ||
| 0.00075 | 0.0015 | ||
| 0.00091 | 0.018% | ||
| 0.00045 | 0.009% | ||
| 0.00017 | 0.003% |
Vzorky boli potom spracované cez mikrofluidizér, model HOT, Microfluidics Corp, naplnené a uložené pri 4°C do použitia.
Ovalbumín (ova, Sigma MO) bol navážený a prevedený do roztoku 0.3 mg/ml v HBSS (Whittaker, vyššie). Zásobný roztok 0.3 mg/ml bol spojený s dvojzložkovými prípravkami v následujúcich .^množstvách: 5 dielov roztoku, ovalbuminu
... .....
0.3 mg/ml, 3.3 diela dvojzložkového prípravku a 1.7 diela HBSS. Podobne sa s AF miešali β-gal a gpl20.
Prípravok sa vortexoval a držal na lade do injekčného použitia. Všetky roztoky sa spojovali tesne pred injekciou.
Každá myš dostala 200 μΐ jednoho prípravku obsahujúceho 30 μΐ ova subukutánnou injekciou do koreňa chvosta. Myši boli ponechané najmenej dva až štyri týždne pred zberom slezín.
Dva týždne po imunizácii boli slezinné bunky vypreparované a in vitro stimulované ožiarenými EGl-ova. Po piatich dňoch kultivovania bola prítomnosť ova-špecifických CTL meraná testovním proti 51Cr-EG7-ova alebo 51Cr-EL4 pomocou stanovenia štvorhodinového uvoľnenia 51Cr. Dáta uvedené na OBR. 6-8 ukazujú, že ovalbumín pripravený v mikrofluidizovanom dvojzložkovom systéme môže primovať ova-špecifické CTL in vivo.
Ďalej sme hodnotili relatívny príspevok jednotlivých zložiek na ich schopnosť indukovať CTL v spojení s bielkovinnými antigénmi. Na imunizačné účele bol rozpustný antigén zmiešaný s mikrofluidizovanými excipientami, aby sa získala stabilná homogénna emulzia s veľkosťou častíc medzí 250-300 nm. Na ďalšie určenie zložiek prípravku Squalane-TWEEN 80-pluronic (STP) zodpovedných za indukciu CTL imunizovali sme myši ova v zmesi Squalane-TWEEN 80 (ST), pluronic-TWEEN 80 (PT), zmesi Squalanepluronic (SP) a ako kontrolu v Squalane (S), TWEEN 80 (T), lebo pluronic (P). Myši boli tiež imunizované ova-SAFm (obsahujúcom 70 μg MDP) aJLebo ova-alumom ako s kontrolnými adjuvanciami. Pre pozitívnu kontrolu boli myši imunizované slezinnými bunkami cytloplazmaticky nabitými rozpustným ova. Boli použité aj iné kombinácie a výsledky sú uvedené v Tabuľke 1. Výsledky ukazujú, že STP <71ebo ST primuje odpoveď CTL obmedzených na triedu I v myšiach. Primovanie ova-špecifických CTL ova pomocou ova v STP alebo ova v SP sa ukazuje ako lepšie než to, ktoré je indukované slezinnými bunkami cytoplazmaticky nabitými ova. ova v PT alebo ova v SP mohli indukovať ova-špecifické CTL odpovede v myšiach, ale nekonzistentné a slabo. Na rozdiel od SAFm, pridanie MDP do ST prípravkov neohrozovalo ova-špecifickú CTL indukciu v myšiach (Tabuľka 2). Žiadna ova-špecifická CTL indukcia neprebehla, keď myši boli imunizované ova zmiešaným s jednotlivými zložkami S, P či Talebo keď myši boli imunizované ova-SAFmalebo ova-alumom. Myši imunizované tak vysokým množstvom ova ako je 1 mg ova v (a) HBSS, v (b) SAFmalebo (c) absorbovaným k alumu neprimovali ova-špecifické CTL.
- 28 Tabuľka 2
Indukcia ova-špecifickej CTL odpovede nie je blokovaná ST + MDP % cytotoxicity v myšiach imunizovaných s*
| ova-ST | ova-ST | ||||
| MDP | MDP | ||||
| 3 0 Opg | 75pg | ||||
| Stimulátor | Cieľ E-T | ova-ST | ova-ST | myš | myš |
| EG7-ova | EG7-ova 100:1 | 0 | 100 | 82 | 76 |
| 33:1 | 0 | 86 | 67 | 62 | |
| 11:1 | 0 | 33 | 39 | 25 | |
| 3:1 | 0 | 6 | 13 | 3 | |
| 1:1 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 3:1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
myši boli imunizované 30 μg ova s rôznymi prípravkami % cytotoxicity bolo počítané odčítaním percenta zabitia proti bunečným líniám neexprimujúcim antigén
Príklad 7; Zložky potrebné na tvorbu ova-špecifických protilátok Myši boli imunizované tri razy v dvojtýždňových intervaloch
μ. g ova v HBSS, STP, ST, PT alebo SP. Ako pozitívna kontrola boli myši tiež imunizované ova-SAFm, keďže pre SAFm je známa indukcia silnej protilátkovej odpovede. Sedem dní po druhej a tretej imunizácii bola myšiamodobraná krv a sérum testované na ova-špecifickú protilátkovú odpoveď. Výsledky sú predvedené v Tabulke 3. Výsledky ukazujú, že myši imunizované ova v STP, ST dlebo v SAFm vykazujú podobnú anti-ova odpoveď po troch imunizáciach.
Tabuľka 3
Indukcia anti-ova protilátkovej odpovede
| Imunizácia sa ova v | Počet myší s odpoveďou/ celkový počet myší | Titer anti-ova protilátok*3 (1/riedenie séra) |
| Pokus č. 1 | ||
| HBSS | 0/3 | <1/20; <1/20; >1/15 360 |
| STP | 3/3 | >1/15 360; >1/15 360; >1/15 360 |
| ST | 3/3 | 1/3 840; 1/15 360; 1/3 840 |
| PT | 3/3 | >1/15 360; >1/15 360; >1/15 360 |
| SP | 3/3 | >1/15 360; >1/15 360; >1/15 360 |
| SAFm | 3/3 | >1/15 360; >1/15 360; 1/3 840 |
| Pokus č. 2 | ||
| STP 0.0015% | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
| STP 0.015% | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
| STP 0.15% | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; 1/1 620 |
| STP 1.5% | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; 1/1 620 <1/20; 1/80; <1/20 |
| HBSS | 1/3 | |
| ST | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
| STP | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
a b
Myši boli imunizované tri razy s 30 pg ova v rôznych prípravkoch
Titer bol vypočítavaný ako riedenie séra, ktoré dáva OD^q^ väčšie ako OD^q5+2SD získané s preimunným sérom
Príklad 8: HIV qpl20 špecifická CTL indukcia
HIV gpl20 Illb bol použitý ako tretí antigénový systém na stanovenie CTL indukcie v STP Ä-lebo iných dvoja troj zlôžkových obmenách prípravkov. Myši boli imunizované 1 pg gpl20 Illb v HBSS, STP, PTčLLebo v ST. Ako kontroly boli myši imunizované 1 pg gpl20 Illb v SAFmdlebo CFA (kompletné Freundovo adjuvans) (Tabulka 4B). Slezinné bunky sa vzali tri týždne po imunizácii a in vitro stimulovali mytomycínom opracovanými transfektovanými bunkami 15-12dlebo peptidom 18111b. Po piatich dňoch kultivácie výsledné efektorové bunky boli testované proti vakcínia:gpl60 IIIB, alebo rodičovským vakcíniou infikovaným P815 bunkám ako cieľom. Výsledky ukazujú, že gpl20--Squalane-TWEEN 80 konzistentne indukuje špecifickú CTL odpoveď v myšiach (Tabuľky 4A a 4B) . CFA a SAFm však boli neschopné indukovať gpl20-špecifické CTL (Tabuľka 4B). V osobitej štúdii sa na CTL indukciu testovali gpl20 v rôznych dávkach pluronic, od 0.0015% do 1.5%.
Tabuľka 4A
Indukcia gp!20-špecifickej CTL odpovede v myšiach ý
% cytotoxicity v myšiach imunizovaných s
| Stimulátor | Ciel | E-T | gpl20-HBSS | gpl20-ST | gpl20-STP |
| 18lIIb/IL2 | vac:gp12 0 | 100:1 | 23 | 42 | *** ND |
| 33:1 | 23 | 38 | ND | ||
| 11:1 | 0 | 0 | ND | ||
| 3:1 | 0 | 35 | ND | ||
| 18lIIb/IL2 | 15-12 | 100:1 | 0 | 50 . | 0 |
| 33:1 | 0 | 35 | 0 | ||
| 11:1 | 0 | 27 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 18 | 0 | ||
| 18IIIb/IL2 | 3T3+18lIIb | 100:1 | 0 | 59 | 13 |
| 33:1 | 0 | 59 | 2 | ||
| 11:1 | 0 | 57 | 0 | ||
| 3:1 | 0 | 29 | 0 | ||
| 15-12 | vac:gpl2 0 | 100:1 | 35 | 84 | ND |
| 33:1 | 19 | 65 | ND | ||
| 11:1 | 12 | 37 | ND | ||
| 3:1 | 0 | 22 | ND | ||
| 1:1 | 0 | 0 | ND |
* myši boli imunizované 1 pg gpl20HI v rôznych prípravkoch % cytotoxicity bolo počítané odčítaním percenta zabitia proti bunečným líniám neexprimujúcim antigén
ND: nedostupné
Tabuľka 4B
Indukcia gpl20-špecifickej CTL odpovede v myšiach3 t% cytotoxicity v myšiach imunizovaných sD
| gpl20-HBSS | gpl20-ST | gpl20-CFA | gpl20-SAFm | ||||
| CE-T | % | E-T | % | E-T | % | E-T | % |
| — | — | — | — | — | — | — | |
| 100:1 | 16 | 67:1 | 94 | 17:1 | 0 | 100:1 | 3 |
| 33:1 | 14 | 22:1 | 91 | 6:1 | 0 | 33:1 | 2 |
| 11:1 | 2 | 7:1 | 58 | 2:1 | 0 | 11:1 | 0 |
| 3:1 | 0 | 2.5:1 | 57 | 0.7:1 | 0 | 3:1 | 0 |
| 1:1 | 0 | 0.8:1 | 12 | 0.2:1 | 0 | 1:1 | 0 |
| 0.3:1 | 0 | 0.3:1 | 7 | 0.07:1 | 0 | 0.3:1 | 0 |
myši boli imunizované 1 pg gpl20lII v rôznych prípravkoch
Slezinné bunky z rôznych skupín boli stimulované in vitro 18111b peptidom a IL-2
Cytotoxicita bola testovaná proti ^Cr značeným bunkám 3T3 lebo 15-12. Percento špecifickej cytotoxicity bolo počítané odčítaním percenta zabitia proti bunečným líniám neexprimujúcim antigén
Príklad 9: Indukcia gpl20-špecifických humorálnych odpovedí v myšiach
Na indukciu gpl20-špecifických humorálnych odpovedí boli myši imunizované 1 μg gpl20IIIb tri razy v intervaloch. Zvieratám bola odobraná krv na prítomnosť IgG protilátok detekciou gp!20IIIb dvojtýždenných a testovaná pomocou meraní
ELISA na pevnej fáze. Výsledky pokusu č. 1 ukazujú, že gpl20 v ST alebo PT sú lepšie imunogény ako gpl20-HBSSalebo gpl20-SAFm.
Pokus č. 2 však ukazuje, že gpl20 v ST lebo STP (s koncentráciami pluronic 1.5% alebo 3.75%) môže indukovať vysokotitrové protilátkové odpovede.
Tabuľka 5
Indukcia anti-gp!20 protilátkovej odpovede
| Imunizácia sa gpl20 v | Počet myší s odpoveďou/ celkový počet myší | Titer anti-gpl20 protilátok^ (1/riedenie séra) |
| Pokus č. 1 | ||
| HBSS | 2/3 | 1/60; <1/20; 1/60 |
| STP | 1/3 | <1/20; >1/4 860; >1/4 860 |
| ST | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860; |
| PT | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860; |
| SP | 2/3 | <1/20; 1:540; 1:540 |
| SAFm | 3/3 | 1:180; >1/4 860; 1:540 |
| Pokus č. 2 | ||
| STP 0.0015% | 2/3 | 1/180; 1/1 620; <1/120 |
| STP 0.015% | 0/3 | <1/20; <1/20; <1/20 |
| STP 0.15% | 2/3 | >1/4 860; 1/1 620; <1/20 |
| STP 1.5% | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
| HBSS | 1/3 | <1/20; <1/20; >1/4 860; |
| ST | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
| STP | 2/3 | >1/4 860; >1/4 860; 1/20 |
a b
Myši boli imunizované tri razy s 1 pg gpl20HIb v rôznych prípravkoch Anti-gpl20 titer bol vypočítavaný ako je popísané v Tabuľke 3.
Príklad 10: qpl20-špecifické protilátkové odpovede v opiciach
Opice (dve na skupinu) boli imunizované gpl20-SAFm, gpl20-SPT, gpl20-ST lebo gpl20-HBSS. Ako kontrola bola skupina opíc imunizované rekombinanťntou vakcíniou obsahujúcou gplôOIIIb. Opice boli imunizované v dvojtýždenných intervaloch a krv im bola odoberaná dva a tri týždne po druhej imunizácii. Pre- a imúnne séra z každej opice boli seriálne riedené a merané na anti-gpl20 aktivituv ELISA ako je popísané v materiáloch a metódach. Dáta (Obr. 9) ukazujú, že opice imunizované gpl20-STP a gpl20-SAFm indukovali podobné odpovede v opiciach. Jedna opica indukovaná gpl20-ST indukovala anti-gpl20 odpoveď podobnú gp!20-SAFmalebo gpl20-SPT imunizovanej skupine. Jedna opica imunizovaná gpl20-ST neindukovala silnú anit-gpl20 odpoveď po dvoch imunizáciach.
Príklad 11: qp!20 špecifické CTL odpovede v opiciach
Opice boli imunizované 30 μg až 50 ug HIV gpl20 v AF alebo v HBSS viac razy. Ako kontrola boli opice tiež imunizované rekombinantným gpl60 vo vakcinii. Naše predbežné výsledky ukazujú, že 1/2 opíc imunizovaných gpl20--AF a 1/2 opíc imunizovaných gpl60:vakcínia vykazuje preferenčné zabíjanie vac:gpl60 infikovaných autológnych buniek (OBR. 10A a 10B).
Iné prevedenia sú v rámci následujúcich nárokov.
ZOZNAM SEKVENCIÍ (1) Obecné informácie:
(i) Žiadatelia: Syamal Raychaudhuri
William H. Rastetter (ii) Názov vynálezu: Indukcia cytotoxických T-lymfocytových odpovedi (iii) Počet sekvencií: 2 (iv) Korešpondenčná adresa:
(A) adresát: Lyon & Lyon (B) ulica: 611 West Sixth Street (C) mesto: Los Angeles (D) štát: California (E) zem: USA (F) poštovné smerovacie číslo: 90017 (v) Počítačová čítacia forma:
(A) typ média: disketa 3,5, 1,44 Mb pamäti (B) počítač: IBM kompatibilný (C) operačný systém: IBM P.C. DOS (verzia 5.0) (D) počítačový program (software): Wordperfect (verzia 5.1) (vi) Údaje o súčasnej prihláške:
(A) číslo prihlášky:
(B) dátum podania:
(C) klasifikácia:
(vii) Údaje o predchádzajúcej prihláške:
Celkovo predošlých prihlášok, vrátane prihlášky popísanej nižšie: 1 (A) číslo prihlášky: 07/735,069 (B) dátum podania: 25. júla 1991 (viii) Informácia o zástupcovi:
(A) Meno: Warburg, Richard J.
(B) číslo registrácie: 32,327 (C) odkaz/číslo spisu: 197/077 (ix) Informácia o spojení:
| (A) | telefón: | (213) | 489-1600 |
| (B) | fax: | (213) | 955-0440 |
| (C) | telex: | 67-3510 |
(2) Informácia o sekvencii id. č. 1:
(i) Vlastnosti sekvencie:
| (A) | dĺžka: | 24 |
| (B) | typ: | aminokyselinová |
| (C) | typ vlákna: | jednovláknová |
(D) topológia:
lineárna (ii) typ molekuly: Sekv. id. č.: 1:
Glu Gin Leu Glu Ser íle íle Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr
Ser Ser Asn Val Met Glu Glu Arg (2) Informácia o sekvencii id. č. 2:
(i) Vlastnosti sekvencie:
(A) dĺžka:
(B) typ:
(C) typ vlákna:
aminokyselinová j ednovláknová (D) topológia:
lineárna (ii) typ molekuly: Sekv. id. č.: 2:
Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg
Claims (15)
1. Prostriedok zahrnujúci antigén, s výnimkou albumínu, zmiešaný s antigénovým prípravkom, zložený/?? z dvoch (zložiek) z:
(a) stabilizujúceho detergentu, (b) činidla tvoriaceho micely, a (c) biodegredovatelného a biokompatibilného oleja, pričom zmienený antigénový prípravok je pripravovaný ako stabilná emulzia olej vo vode.
2. Prostriedok podlá nároku 1, vyznačujúci sa tým, že zmienený antigén je vybraný z antigénnych úsekov HIV antigénov: gpl60, gag, pol, Nef, Tat, a Rev; maláriových antigénov: CS proteín a sporozoitový povrchový protein 2;
z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag, a HBe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpes vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinného produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH, a IE proteínu gP72; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov karcinómu CEA, s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97, a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA) a s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras. proteínu.
2. Prostriedok zahrňujúci antigén, s výnimkou antigénu B-bunkového lymfómu aJLebo albumínu, zmiešaný s antigénovým prípravkom, zloženým z dvoch (zložiek) z:
(a) stabilizujúceho detergentu, (b) činidla tvoriaceho micely, a (c) biodegredovatelného a biokompatibilného oleja, pričom zmienený antigénový prípravok neobsahuje imunostimulačnú peptidovú zložku a je pripravovaný ako stabilná emulzia olej vo vode.
4. Prostriedok podlá nároku 3, vyznačujúci sa t ý m, že zmienený antigénový prípravok sa skladá v podstate zo zmienených: detergentu, činidla a oleja.
5. Prostriedok podlá nároku 3, vyznačujúci sa tým, že zmienený antigénový prípravok je netoxický ku zmieneným lud’om alebo domácim alebo poľnohospodárskym zvieratám.
6. Prostriedok podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že zmienený antigén je vybraný z HIV antigénov: gpl60, gag, pol, Nef, Tat, a Rev; maláriových antigénov: CS protein a sporozoitový povrchový protein 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag, a HBe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A;
z antigénov herpes vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinného produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH, a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického papilómového vírusu E4, E6 a E7; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F protein, G protein a N protein; a z nádorových antigénov: karcinómu CEA, s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97, a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA) a s prostatou asociovaného antigénu, a mutovaného p21 ras proteínu.
7. Spôsob indukcie cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede v človekovi ?i-lebo domácom, či poľnohospodárskom zvierati, zahrnujúci kroky:
podania zmesi antigénu, s výnimkou antigénu
B-bunkového lymfómu alebo albumínu, zmiešaného s antigénovým prípravkom, zahrňujúcim:
(a) stabilizujúci detergent, (b) činidlo tvoriace micely, a (c) biodegredovatelný a biokompatibilný olej, pričom zmienený antigénový prípravok neobsahuje imunostimulačnú peptidovú zložku a je pripravovaný ako stabilná emulzia olej vo vode;
vyznačujúci sa tým, že zmienená zmes sa podáva zmienenému človekovi alebo zvieraťu v množstve dostatočnom na vyvolanie cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede v zmienenom človekovi alebo zvierati.
8. Spôsob podlá nároku 7, vyznačujúci sa t ý m, že zmienený antigénový prípravok sa skladá v podstate zo zmienených: detergentu, činidla a oleja.
9. Spôsob podlá nároku 7, vyznačujúci sa t ý m, že zmienený postup pozostáva v podstate z jediného podania zmienenej zmesi zmienenému človekovi alebo zvieraťu.
10. Spôsob podlá nároku 7, vyznačujúci sa t ý m, že zmienený človek alebo zviera je infikovaný vírusom alebo trpí jednýmalebo viac symptómami infekcie zmieneným vírusom.
tým, že zmienený antigén je vybraný z HIV antigénov: gpl60, gag, pol, Nef, Tat, a Rev; maláriových antigénov: CS proteín
40 a sporozoitový povrchový proteín 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag, a HBe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A;
z antigénov herpes vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV.gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinného produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovirusového gH, a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického papilómového vírusu E4, E6 a E7; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov: karcinómu CEA, s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97, a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA) a s prostatou asociovaného antigénu, a mutovaného p21 ras. proteínu.
13. Spôsob indukcie cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede v človekovi alebo domácom či polnohospodárskom zvierati, zahrnujúci kroky:
podania zmesi antigénu zmiešaného s antigénovým prípravkom, zloženým v podstate z dvoch (zložiek) z:
(a) stabilizujúceho detergentu, (b) činidla tvoriaceho micely, a (c) biodegredovatelného a biokompatibilného oleja, pričom zmienený antigénový prípravok je pripravovaný ako stabilná emulzia olej vo vode;
vyznačujúci sa tým,, že zmienená zmes sa podáva. zmienenému človekovi alebo zvieraťu v množstve dostatočnom na vyvolanie cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede v zmienenom človekovi alebo zvierati.
14. Spôsob podlá nároku 13, vyznačujúci sa t ý m, že zmienený človek alebo zviera je infikovaný vírusom tllebo trpí jedným alebo viac symptómami infekcie zmieneným vírusom.
Spôsob podľa nároku 13, sa tým, že zmienený antigénový ku zmienenému človekovi alebo zvieraťu.
15.
Spôsob podľa nároku 13, vy zmienený antigén je vybraný gpl60, gag, CS proteín antigénov
Ag; chrípkových v y z n prípravok č u j ú c i je netoxický c i sa úsekov HIV maláriových proteín 2;
a hepatitídy antigénov:
16.
tým, že antigénov: antigénov:
z povrchových a HBe antigénov hepatitídy A; z antigénov gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, produktu, cytomegalovírusového gB, z n a č u z antigénnych pol, Nef, Tat, a Rev;
sporozoitový povrchový
Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag, HA, NP a NA; z povrchových herpes vírusu: EBV gp340, EBV HSV včasného bielkovinného cytomegalovírusového gH, a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického E6 a E7; F proteín, G karcinómu
B:
karcinómu
CEA,
P53
Neu produktu prostatického asociovaného antigénu, a z antigénov proteín a N s karcinómom , melanómu MPG, melanómu onkogénu, karcinómového špecifického antigénu mutovaného p21 respiračného proteín; a asociovaného papilómového vírusu E4, syncytiálneho vírusu: z nádorových antigénov mucínu, karcinómu P21, p97, a karcinómového p53 génového produktu, (PSA) a s prostatou proteínu.
ras.
17.
Spôsob podľa čujúci sa skladá ktoréhokoľvek sa tým, že v podstate zo nárokov vyzná prípravok a zmieneného činidla tvoriaceho micely.
zmienený zmieneného
16, antigénový detergentu
18.
Spôsob podľa čujúci sa skladá vyzná prípravok a zmieneného oleja.
ktoréhokoľvek z sa tým, v podstate nárokov
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73506991A | 1991-07-25 | 1991-07-25 | |
| PCT/US1992/006193 WO1993001831A1 (en) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK8994A3 true SK8994A3 (en) | 1994-11-09 |
| SK282920B6 SK282920B6 (sk) | 2003-01-09 |
Family
ID=24954233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK89-94A SK282920B6 (sk) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Prostriedok na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede a jeho použitie |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5585103A (sk) |
| EP (1) | EP0596032B2 (sk) |
| JP (1) | JP3939746B2 (sk) |
| KR (1) | KR100198868B1 (sk) |
| AT (1) | ATE166578T1 (sk) |
| AU (1) | AU666127B2 (sk) |
| BG (1) | BG62240B1 (sk) |
| BR (1) | BR9206310A (sk) |
| CA (1) | CA2113720A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ288048B6 (sk) |
| DE (1) | DE69225710T3 (sk) |
| DK (1) | DK0596032T4 (sk) |
| ES (1) | ES2117052T5 (sk) |
| FI (2) | FI108114B (sk) |
| HU (2) | HU220295B (sk) |
| IE (1) | IE922436A1 (sk) |
| IL (1) | IL102639A (sk) |
| MX (1) | MX9204376A (sk) |
| NO (1) | NO317203B1 (sk) |
| OA (1) | OA09880A (sk) |
| PH (1) | PH30906A (sk) |
| RO (1) | RO116459B1 (sk) |
| RU (1) | RU2129439C1 (sk) |
| SK (1) | SK282920B6 (sk) |
| TW (1) | TW349867B (sk) |
| WO (1) | WO1993001831A1 (sk) |
| ZA (1) | ZA925614B (sk) |
Families Citing this family (80)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6197311B1 (en) * | 1991-07-25 | 2001-03-06 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| US5709860A (en) * | 1991-07-25 | 1998-01-20 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| AU6363094A (en) * | 1993-03-15 | 1994-10-11 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Peptide coated dendritic cells as immunogens |
| GB9314623D0 (en) * | 1993-07-14 | 1993-08-25 | Nordion Int Inc | Localization and therapy with agents directed against prostate specific antigen in breast cancer |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| AUPM446594A0 (en) * | 1994-03-16 | 1994-04-14 | Csl Limited | Cytotoxic t-cell epitopes identified within epstein-barr virus |
| GB9620795D0 (en) * | 1996-10-05 | 1996-11-20 | Smithkline Beecham Plc | Vaccines |
| US5820880A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Liposomal formulation |
| US6884435B1 (en) * | 1997-01-30 | 2005-04-26 | Chiron Corporation | Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof |
| PT991403E (pt) * | 1997-01-30 | 2003-08-29 | Chiron Corp | Uso de microparticulas com antigenio adsorvido para estimular respostas imunes |
| DE69838324T2 (de) * | 1997-02-05 | 2008-05-15 | Bystryn, Jean-Claude | Ph-sensitive liposomen und andere typen immunomodulatoren enthaltender gekapselter impfstoffe sowie herstellungs- und anwendungsverfahren dafür |
| AT405939B (de) * | 1997-02-24 | 1999-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von lipidumhüllten viren |
| US6632619B1 (en) * | 1997-05-16 | 2003-10-14 | The Governors Of The University Of Alberta | Microfluidic system and methods of use |
| WO1998052691A1 (en) * | 1997-05-16 | 1998-11-26 | Alberta Research Council | Microfluidic system and methods of use |
| DE69815692T2 (de) | 1997-09-05 | 2004-04-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Öl in wasser emulsionen mit saponinen |
| GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| MY131805A (en) * | 1997-09-18 | 2007-09-28 | Biogen Idec Inc | Synergistic composition and methods for treating neoplastic or cancerous growths and for restoring or boosting hematopoiesis. |
| US6949339B1 (en) | 1998-05-21 | 2005-09-27 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, and staging colon cancer |
| US6858386B1 (en) * | 1998-05-21 | 2005-02-22 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| CN1342085A (zh) * | 1998-10-30 | 2002-03-27 | 遗传研究所有限公司 | 通过p－选择素配体(psgl)拮抗剂抑制细胞素t细胞的分化 |
| WO2000028031A2 (en) * | 1998-11-10 | 2000-05-18 | Emory University | Mitogenic regulators |
| US7198920B1 (en) | 1999-01-29 | 2007-04-03 | Corika Corporation | HER-2/neu fusion proteins |
| US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
| US20050244434A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-11-03 | Cohen David I | Tat-based tolerogen compositions and methods of making and using same |
| EP1250149A4 (en) * | 1999-11-22 | 2003-06-04 | Diadexus Inc | NEW METHOD FOR DIAGNOSIS, MONITORING, STADIFYING, IMAGING AND TREATING CANCER |
| US7238471B1 (en) * | 1999-11-23 | 2007-07-03 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating breast cancer |
| US20020048777A1 (en) * | 1999-12-06 | 2002-04-25 | Shujath Ali | Method of diagnosing monitoring, staging, imaging and treating prostate cancer |
| CA2410436A1 (en) * | 2000-05-26 | 2001-12-06 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| US7229623B1 (en) * | 2000-08-03 | 2007-06-12 | Corixa Corporation | Her-2/neu fusion proteins |
| US6663861B2 (en) | 2000-11-09 | 2003-12-16 | Antibodyshop A/S | Method of producing antibodies by immunization with conjugates of molecules coupled to charge-modified proteins |
| RU2303264C2 (ru) * | 2001-02-19 | 2007-07-20 | Мерк Патент Гмбх | Способ идентификации эпитопов т-клеток и его применение для получения молекул со сниженной иммуногенностью |
| US20070073047A1 (en) * | 2002-06-10 | 2007-03-29 | Biogen Idec Ma Inc. | Genes overexpressed by ovarian cancer and their use in developing novel therapeutics |
| US7741437B2 (en) | 2002-09-19 | 2010-06-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | P. ariasi polypeptides, p. perniciosus polypeptides and methods of use |
| US7485306B2 (en) | 2002-10-29 | 2009-02-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Lutzomyia longipalpis polypeptides and methods of use |
| MXPA05010697A (es) * | 2003-04-04 | 2005-12-12 | Pfizer Prod Inc | Emulsiones de aceite en agua microfluidizadas y composiciones de vacunas. |
| UA84024C2 (ru) * | 2003-07-24 | 2008-09-10 | Мериал Лимитед | Новые вакцинные композиции, которые содержат эмульсию типа "масло в воде" |
| US7927580B2 (en) * | 2004-03-16 | 2011-04-19 | Nanirx, Inc. | Tat-based immunomodulatory compositions and methods of their discovery and use |
| PL1942932T3 (pl) | 2005-08-08 | 2013-11-29 | Univ Oregon Health & Science | Inaktywacja patogenów nadtlenkiem wodoru do wytwarzania szczepionek |
| US20100130425A1 (en) | 2005-09-09 | 2010-05-27 | Oregon Health & Science University | Use of toll-like receptor ligands in treating excitotoxic injury, ischemia and/or hypoxia |
| BRPI0708865A8 (pt) | 2006-03-14 | 2019-01-22 | Univ Oregon Health & Science | métodos para produzir uma resposta imune à tuberculose |
| WO2007124133A2 (en) | 2006-04-20 | 2007-11-01 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Incorporated | Methods and compositions based on shiga toxin type 1 protein |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| CA2662921C (en) | 2006-09-26 | 2018-11-20 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine and pharmaceutical compositions and kits and uses thereof in stimulating an immune response with a synthetic glucopyranosyl lipid adjuvant |
| TWI441648B (zh) | 2007-01-03 | 2014-06-21 | Oncotherapy Science Inc | Ｆｏｘｐ３胜肽疫苗 |
| EP2918598B1 (en) | 2007-02-28 | 2019-01-30 | The Govt. Of U.S.A. As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Brachyury polypeptides and methods for use |
| AU2008312444B2 (en) * | 2007-10-18 | 2014-02-06 | Bavarian Nordic A/S | Use of MVA to treat prostate cancer |
| US9005631B2 (en) | 2008-08-04 | 2015-04-14 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Membrane proximal region of HIV gp41 anchored to the lipid layer of a virus-like particle vaccine |
| US8664183B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-03-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | SPANX-B polypeptides and their use |
| DK2411043T3 (da) | 2009-03-23 | 2013-10-21 | Pin Pharma Inc | Behandling af cancer med immunostimulatorisk hiv tat derivat-polypeptider |
| CN102481312B (zh) | 2009-06-05 | 2015-07-15 | 传染性疾病研究院 | 合成的吡喃葡萄糖脂佐剂 |
| BR112012009401A2 (pt) | 2009-10-07 | 2017-02-21 | Uvic Ind Partnerships Inc | vacinas que compreendem transgenes sensíveis ao calor |
| US9181306B2 (en) | 2009-10-16 | 2015-11-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Insertion of foreign genes in rubella virus and their stable expression in a live, attenuated viral vaccine |
| CN102834106A (zh) | 2009-11-20 | 2012-12-19 | 俄勒冈健康科学大学 | 产生针对结核病的免疫应答的方法 |
| WO2011112599A2 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary. Department Of Health & Human Services | Immunogenic pote peptides and methods of use |
| AU2011230619C1 (en) | 2010-03-25 | 2016-06-23 | Oregon Health & Science University | CMV glycoproteins and recombinant vectors |
| CA2832307A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-10-18 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| LT2691530T (lt) | 2011-06-10 | 2018-08-10 | Oregon Health & Science University | Cmv glikoproteinai ir rekombinantiniai vektoriai |
| PL2734544T3 (pl) | 2011-07-18 | 2021-05-31 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Sposoby i kompozycje do hamowania patologii związanej z poliomawirusem |
| AU2012216792A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-28 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing HIV-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| EP2586461A1 (en) | 2011-10-27 | 2013-05-01 | Christopher L. Parks | Viral particles derived from an enveloped virus |
| US9566329B2 (en) | 2012-04-06 | 2017-02-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Live, attenuated rubella vector to express vaccine antigens |
| AU2013262691B2 (en) | 2012-05-16 | 2018-12-20 | Immune Design Corp. | Vaccines for HSV-2 |
| IN2014KN02769A (sk) | 2012-06-06 | 2015-05-08 | Bionor Immuno As | |
| ES2631608T3 (es) | 2012-06-27 | 2017-09-01 | International Aids Vaccine Initiative | Variante de la glicoproteína Env del VIH-1 |
| ES2752190T3 (es) | 2012-09-14 | 2020-04-03 | Us Health | Proteína Brachyury, vectores adenovirales que codifican proteína Brachyury y su uso |
| AU2013331328B2 (en) | 2012-10-19 | 2018-05-31 | Bavarian Nordic A/S | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| EP3711768A1 (en) | 2013-04-18 | 2020-09-23 | Immune Design Corp. | Gla monotherapy for use in cancer treatment |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| CN105705164A (zh) | 2013-10-04 | 2016-06-22 | 品诺制药公司 | 用于癌症治疗的免疫刺激性hiv tat衍生多肽 |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| CA2932248C (en) | 2013-12-13 | 2022-08-02 | Lauren V. Wood | Multi-epitope tarp peptide vaccine and uses thereof |
| US9931393B2 (en) | 2013-12-20 | 2018-04-03 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Immunogenic JC polyomavirus compositions and methods of use |
| EP3069730A3 (en) | 2015-03-20 | 2017-03-15 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| CN116196403A (zh) | 2015-08-03 | 2023-06-02 | 美国卫生和人力服务部 | Brachyury缺失突变体、编码该缺失突变体的非酵母载体及其用途 |
| US10744198B2 (en) | 2016-05-10 | 2020-08-18 | Najit Technologies, Inc. | Inorganic polyatomic oxyanions for protecting against antigenic damage during pathogen inactivation for vaccine production |
| EP3703745B1 (en) | 2017-11-04 | 2024-04-10 | Nevada Research & Innovation Corporation | Immunogenic conjugates and methods of use thereof |
| WO2020117590A1 (en) | 2018-12-04 | 2020-06-11 | The Rockefeller University | Hiv vaccine immunogens |
| WO2021160887A1 (en) | 2020-02-14 | 2021-08-19 | Immunor As | Corona virus vaccine |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3083142A (en) * | 1958-02-27 | 1963-03-26 | Glaxo Group Ltd | Improved swine erysipelas vaccine |
| US3790665A (en) * | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US3919411A (en) * | 1972-01-31 | 1975-11-11 | Bayvet Corp | Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant |
| GB1502774A (en) * | 1974-06-25 | 1978-03-01 | Nat Res Dev | Immunological preparations |
| US4117113A (en) * | 1974-06-25 | 1978-09-26 | National Research Development Corporation | Immunological preparations |
| US4772466A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-20 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccines comprising polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US4770874A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| JPS6147500A (ja) * | 1984-08-15 | 1986-03-07 | Res Dev Corp Of Japan | キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法 |
| US4707443A (en) * | 1985-04-19 | 1987-11-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Soluble interleukin-2 receptor as a disease indicator and a method of assaying the same |
| DE3751772T2 (de) * | 1986-10-20 | 1996-12-05 | Chiron Corp | Impfstoff zur behandlung von hsv |
| US4778784A (en) * | 1987-01-07 | 1988-10-18 | Baylor College Of Medicine | Cyclic peptide and method of use for inducing an immunological response to hepatitis B virus |
| US4963354A (en) * | 1987-01-21 | 1990-10-16 | Genentech, Inc. | Use of tumor necrosis factor (TNF) as an adjuvant |
| IL162181A (en) * | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| WO1990014837A1 (en) * | 1989-05-25 | 1990-12-13 | Chiron Corporation | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
| ES2076259T3 (es) * | 1989-06-30 | 1995-11-01 | American Cyanamid Co | Metodo para el tratamiento de enfermedades infecciosas activando celulas fagociticas en animales. |
| AU1025692A (en) * | 1991-02-06 | 1992-08-13 | Ciba-Geigy Ag | Novel chimeric antiidiotypic monoclonal antibodies |
-
1992
- 1992-07-24 CA CA002113720A patent/CA2113720A1/en not_active Abandoned
- 1992-07-24 ES ES92917479T patent/ES2117052T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 KR KR1019940700218A patent/KR100198868B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 HU HU9400202A patent/HU220295B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 RU RU94038046/14A patent/RU2129439C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 MX MX9204376A patent/MX9204376A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 EP EP92917479A patent/EP0596032B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 IE IE243692A patent/IE922436A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 IL IL102639A patent/IL102639A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 SK SK89-94A patent/SK282920B6/sk unknown
- 1992-07-24 PH PH44711A patent/PH30906A/en unknown
- 1992-07-24 AU AU24338/92A patent/AU666127B2/en not_active Ceased
- 1992-07-24 BR BR9206310A patent/BR9206310A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-07-24 DK DK92917479T patent/DK0596032T4/da active
- 1992-07-24 CZ CZ1994150A patent/CZ288048B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 JP JP50307193A patent/JP3939746B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 AT AT92917479T patent/ATE166578T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 US US07/919,787 patent/US5585103A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 DE DE69225710T patent/DE69225710T3/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 RO RO94-00094A patent/RO116459B1/ro unknown
- 1992-07-24 WO PCT/US1992/006193 patent/WO1993001831A1/en not_active Ceased
- 1992-07-27 ZA ZA925614A patent/ZA925614B/xx unknown
- 1992-08-27 TW TW081105966A patent/TW349867B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-01-21 NO NO19940218A patent/NO317203B1/no unknown
- 1994-01-24 BG BG98410A patent/BG62240B1/bg unknown
- 1994-01-24 FI FI940335A patent/FI108114B/fi active
- 1994-01-24 OA OA60461A patent/OA09880A/en unknown
-
1995
- 1995-05-24 US US08/449,728 patent/US6270769B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-22 HU HU95P/P00339P patent/HU211299A9/hu unknown
-
2001
- 2001-06-05 FI FI20011187A patent/FI109335B/fi active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK8994A3 (en) | Agent for inducing of cytotoxic t-lymphocyte answers | |
| AP661A (en) | Induction of cytotoxic T- lymphocite responses. | |
| US6197311B1 (en) | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses | |
| KR100478617B1 (ko) | 세포독성t-림프구반응을유도하는방법 |