SK4182002A3

SK4182002A3 - Compounds for the treatment of ischemia

Info

Publication number: SK4182002A3
Application number: SK418-2002A
Authority: SK
Inventors: Hiroko Masamune; Michael Paul Deninno; Robert William Scott
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 1999-09-30
Filing date: 2000-09-22
Publication date: 2003-04-01
Also published as: EA200200316A1; NO20021474L; HK1049011A1; NZ517177A; ATE312117T1; PE20010696A1; KR20020034206A; AP2002002458A0; MXPA02003308A; MY133996A; UA73525C2; HUP0202807A2; AR029887A1; JP2003510331A; ECSP003682A; TNSN00191A1; EP1216257A1; AU778185B2; EP1216257B1; BG106636A

Description

Vynález sa týka agonistov receptoru adenozínu A-3, farmaceutických kompozícií, ktoré také inhibítory obsahujú a použitia týchto inhibítorov na liečenie napríklad ischémie, predovšetkým perioperačného ischemického poškodenia myokardu, u cicavcov, vrátane ľudí.

Doterajší stav techniky

Ischemické poškodenie myokardu sa vyskytuje pri ambulantných pacientoch a tiež ako perioperačná okolnosť a môže sa vyvinúť v náhlu smrť, infarkt myokardu alebo hromadive~šrdcové zlyhanie. V medicíne stále pretrváva potreba ischemickému poškodeniu myokardu, predovšetkým perioperačnému, zabrániť alebo ho minimalizovať. 0 takej terapii je možné predpokladať, že bude terapiou zachraňujúcou život, ktorá zníži hospitalizáciu, zvýši kvalitu života a zníži celkové náklady zdravotnej starostlivosti o ohrozených pacientov.

Farmakologická kardioprotekcia by znížila incidenciu ä progresiu infarktu a dysfunkcie myokardu, ku ktorým dochádza pri operácii (perioperačne). Okrem zníženia poškodenia myokardu a zlepšenia postischemickej funkcie myokardu pri pacientoch s ischemickou chorobou srdcovou by kardioprotekcia tiež znížila incidenciu srdcovej morbidity a mortalitu, ktorej príčinou sú infarkty a dysfunkcie myokardu, pri ohrozených pacientoch (tzn. pacientoch, ktorí sú starší ako 65 rokov, neznášajú námahu, trpia chorobou koronárnych artérií, diabetes mellitus alebo hypertenziou), pri ktorých je potrebné vykonať nesrdcovú operáciu.

, / i.

V US patente č. 5 604 210 je opísané použitie určitých zlúčenín adenozínového typu na prevenciu alebo liečenie edému mozgu, vnútrolebečného krvácania a mozgového infarktu.

V US patente č. 5 688 774 sú opísané selektívne agonisty A₃, konkrétne adenínové zlúčeniny so zvolenými substituentmi v polohách 2, 6 a 9 a príbuzné substituované zlúčeniny, predovšetkým zlúčeniny, ktoré obsahujú substituenty na benzylovej a/alebo uroamidovej skupine, ako činidlá, ktoré aktivujú receptor A₃.

V US patente č. 5 773 423 je opísaný N⁶-benzyladenozín-5'-N-uroamid a nemu príbuzné substituované zlúčeniny, predovšetkým zlúčeniny, ktoré obsahujú substituenty na benzylové a/alebo uroamidové skupiny, a modifikované xantínribozidy na aktiváciu receptoru adenozínu A₃.

V J. Med. Chem. 1994, 37, 636 až 646, Structure-Activity Relationships of N⁶-Benzyldenosine-5'-uroamides as A3-Selective Agonists je opísaná syntéza analógov adenozínu modifikovaných v 5' polohe ako uroamidy a/alebo ako N⁶-benzylderiváty, ktoré sú potenciálne užitočné ako farmakologické a biochemické sondy pre receptory A3.

V J. Med. Chem. 1995, 38, 1174 až 1188, Search for New Purine- and Ribose-Modified Adenosine Analogues as Selective Agonists and Antagonists at Adenosine Receptors sa uvádza, že bola stanovená väzbová afinita radu rôznych derivátov adenozínu v miestach receptorov.adenozínu A^, A₂a A₃. Konkrétne sa zistilo, že 3'-β-aminozlúčeniny nevykazujú žiadnu aktivitu.

V J. Med. Chem. 1995, 38, 1720 až 1735, Structure-Activity Relationship of 9-Alkyladenine and Ribose-Modified Adenosine Derivatives at Rat A₃ Adenosine Receptors je opísaná syntéza 9-alkyladenínových derivátov a ribózamodifiko3 vaných derivátov N^-benzyladenozínu vedúca k vyvinutiu nových agoništov potkanieho receptoru adenozínu A^.

V US patente č. 5 817 760 sú opísané rekombinantné ludské receptory adenozínu Al, A2a, A2b a A3, ktoré boli pripravené postupmi klonovania cDNA a polymerázou katalyzované reťazové reakcie. Rekombinantné receptory adenozínu je možné využiť pri skúškach vykonávaných za účelom identifikácie a hodnotenia entít, ktoré sa viažu alebo podporujú väzbu k receptorom adenozínu.

Napriek tomu, že došlo k určitému pokroku, je zjavné, že potreba liečenia perioperačnej ischémie myokardu pretrváva.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca I

Y predstavuje skupinu CH alebo N;

Z predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkyloxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, trifluórmetylskupinu alebo halogén;

R¹ predstavuje hydroxymetylskupinu, alkoxymetylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, cykloalkoxymetylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkoxylovej časti, karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, cykloalkoxykarbonylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkoxylovej časti, 1,1-aminoiminometylskupinu, l,l-(mono-N- alebo di-N,N-alkylamino)iminometylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, l,l-(mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylamino)iminometylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, karbamoy1skupinu, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí alebo N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti;

R² predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka;

R³ predstavuje halogén, trifluórmetylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkyl oxyskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, etenylskupinu alebo etynylskupinu;

D predstavuje oxyskupinu, tioskupinu, NH, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, alkyltioskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkylaminoskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

G predstavuje sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený päť- až osemčlenný kruh, ktorý prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, alebo bicyklický kruh tvorený dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými trojaž šesťčlennými kruhmi, brané nezávisle, prípadne s 1 až 4 heteroatómami nezávisle zvolenými z dusíka, síry a kyslíka; pričom G je prípadne mono-, dialebo trisubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, trifluórmetylskupiny, trifluórmetoxyskupinu, nitroskupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka, hydroxyskupiny alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, alebo

G predstavuje kyanoskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, cykloalkoxykarbonylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, skupinu C(O)NR⁴R⁵, C(S)NR⁴R⁵, C(NH)NR⁴r5, C(N-alkyl)NR⁴R^ s 1 až 3 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo C(N-cykloalkyl)NR⁴R⁵ s 3 až 10 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti;

R⁴ predstavuje väzbu, vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený päť- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, alebo bicyklický kruh alebo bicyklický kruh s prípadným mostíkom s 1 až 3 atómami uhlíka (napríklad adamantán) prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až atómami uhlíka, pričom, tento bicyklický kruh alebo premostený bicyklický kruh prípadne obsahuje 1 až heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka, a pričom alkylskupina s 1 až 10 atómami uhlíka, alkoxyskupina s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupina s 3 až 10 atómami uhlíka alebo kruh alebo kruhy uvedené v definícii R⁴ sú prípadne mono-, di- alebo trisubstituovaná substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, trifluórmetylskupiny, nitroskupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka, hydroxyskupiny alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

R⁵ predstavuje väzbu, vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka; alebo

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka> ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z úplne nasýtených alebo sčasti nenasýtených štvor- až deväťčlenných kruhov, ktoré sú prípadne premostené a prípadne obsahujú 1 až 3 prídavné heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka a sú prípadne mono- alebo disubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka vcykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylkarbonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, alkoxykarbonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, N-alkoxykarbonyl-N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alifatických častí, sulfamoylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených päť- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a bicyklických kruhov tvorených dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými trojaž šesťčlennými kruhmi, brané nezávisle, prípadne viazanými prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne obsahujúcimi l až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka a prípadne mono- alebo disubstituovanými halogénom, trifluórmetylskupinou, trifluórmetoxyskupinou, alkylskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich proliečivá a farmaceutický vhodné soli týchto zlúčenín a proliečiv.

Skupina prednostných zlúčenín, ktorá je označená ako skupina A, obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca I, znázorneného hore, kde

X predstavuje oxy;

Y predstavuje dusík;

Z predstavuje vodík;

R¹ predstavuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti;

R² predstavuje vodík;

D predstavuje oxyskupinu, tioskupinu, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkyltioskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

G predstavuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazinyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, pyridazinyl-, tetrazolyl-, izotiazolyl-, tiofenyl-, furyl-,

1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolyl-, izochinolylbenzo[b]furyl-, benzo[b]tiofenyl-, benzotiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- alebo morfolinylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstiutované substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny A sa venuje prednosť zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu B. Skupina B obsahuje zlúčeniny, kde

R¹ predstavuje metylkarbamoylskupinu;

R³ predstavuje halogén;

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

G predstavuje fenyl-, pyridyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, izotiazolyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl

1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl- alebo pyrolylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, trifluórmetoxyskupiny alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny B sa venuje prednosť zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu C. Skupina C obsahuje zlúčeniny, kde

D predstavuje alkoxyskupinu s l až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje fenyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrolidinyl-, piperidinylalebo morfolinylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny B sa osobitná prednost venuje zlúčeninám kde

a) R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje fenylskupinu;

b) R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje 3-furylskupinu;

c) R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje 2-furylskupinu;

d) R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje 2-tiazolylskupinu;

e) R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje 5-(3-metylizoxazolyl)skupinu;

a ich farmaceutický vhodným soliam.

Zo zlúčenín podlá vynálezu sa osobitná prednost venuje zlúčeninám zvoleným zo súboru skladajúceho sa z metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlórbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(furan-3-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl} -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(furan-2-ylmetoxy) benzy lamino ] purin-9-yl} -4 -hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-[5-chlór-2-(tiazol-2-ylmetoxy) bénzylamino ] purin-9-yl} -4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(3-metylizoxazol-5-ylmetoxy)bénzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny;

a ich farmaceutický vhodným soliam.

Skupina prednostných zlúčenín, ktorá je označená ako skupina D, obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca X, znázorneného hore, kde

X predstavuje oxy;

Y predstavuje dusík;

Z predstavuje vodík;

R² predstavuje vodík;

D predstavuje alkyloxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkyltioskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R^ alebo C(S)NR⁴R^, kde

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z úplne nasýtených stvor- až deväťčlenných kruhov, ktoré prípadne obsahujú 1 až 3 prídavné heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka a sú prípadne mono- alebo disubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovéj časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfamoylskupiny, alkylsuifonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených päť- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a bicyklických kruhov tvorených dvoma . anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šesťčlennými kruhmi, brané nezávisle, prípadne pripojenými prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne obsahujúcimi 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny D sa venuje prednosť zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu E. Skupina E obsahuje zlúčeniny, kde

R¹ predstavuje metylkarbamoylskupinu;

R³ predstavuje halogén;

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cyklóalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cyklo alkylových častí alebo N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených štvoraž osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 2 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny E sa venuje pŕednost zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu F. Skupina F obsahuje zlúčeniny, kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z hydroxyskupiny, oxoskupiny alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených stvor- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 2 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny F sa osobitná prednosť, venuje zlúčeninám, kde

a) R³ predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu; G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperazinylskupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná metylskupinou;

b) R³ predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu; G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria pipera z inylskupinu;

c) R³ predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu; G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperidinylskupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná N,N-dimetylaminoskupinou;

o

d) R^J predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu; G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperidinylskupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná piperidin-l-ylskupinou;

o

e) R predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu; G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperidinylskupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná metylaminoskupinou;

a ich farmaceutický vhodným soliam.

Skupina prednostných zlúčenín, ktorá je označená ako skupina G, obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca I, znázorneného hore, kde

X predstavuje oxy;

Y predstavuje dusík;

Z predstavuje vodík;

r¹ predstavuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovéj časti;

R² predstavuje vodík;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený pät- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, alebo bicyklický kruh tvorený dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šestčlennými kruhy, brané nezávisle, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka,

R⁵ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny G sa venuje prednost zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu H. Skupina H obsahuje zlúčeniny, kde

R¹ predstavuje metylkarbamoylskupinu;

R³ predstavuje halogén;

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵;

R⁴ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený päť- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny H sa venuje prednosť zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu I. Skupina I obsahuje zlúčeniny, v ktorých

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkylskupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka alebo cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka;

R⁵ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny I sa osobitná prednosť venuje zlúčeninám v ktorých

R³ predstavuje chlór;

D predstavuje metylénoxyskupinu;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ predstavuje vodík; a

R⁵ predstavuje vodík;

a ich farmaceutický vhodným soliam.

Skupina prednostných zlúčenín, ktorá je označená ako skupina J, obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca I, znázorneného hore, kde

G predstavuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazi nyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, pyridínazinyl-, tetrazolyl-, izotiazolyl-, tiofenyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolylizochinolyl-, benzo[b]furyl-, benzo[b]tiofenyl-, benzotiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- alebo morfolinylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstiutovaný substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny J sa venuje prednost zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu K. Skupina K obsahuje zlúčeniny, v ktorých

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

G predstavuje fenyl-, pyridyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, izotiazolyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl- alebo pyrolylskupinu, pričom G je pripadne mono-, dialebo trisubstituované nezávisle halogénom, alkylskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Skupina prednostných zlúčenín, označená ako skupina

L, obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca I znázorneného hore kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a r5 brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripoj ené, tvoria zvyšok zvolený z úplne nasýtených štvor- až deväťčlenných kruhov, ktoré prípadne obsahujú 1 až 3 prídavné heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka a sú prípadne mono- alebo disubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkyl21 aminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfamoylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených pät- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a bicyklických kruhov tvorených dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými trojaž šestčlennými kruhmi, brané nezávisle, prípadne pripojenými prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne obsahujúcimi 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny L sa venuje prednosť zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu M. Skupina M obsahuje zlúčeniny, kde

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R^ alebo C(S)NR⁴R^, kde

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinyl22 skupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-Ν,Ν-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí a N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených štvor- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny M sa venuje prednosť zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu N. Skupina N obsahuje zlúčeniny, kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R^; kde

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených stvor- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 2 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a ich farmaceutický vhodné soli.

Skupina prednostných zlúčenín, ktorá je označená ako skupina O, obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca I, znázorneného hore, kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasý24 tený alebo úplne nenasýtený pät- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, alebo bicyklický systém tvorený dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šestčlennými kruhmi, brané nezávisle, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka, r5 predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny O sa venuje prednost zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu P. Skupina P obsahuje zlúčeniny, kde

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

R⁴ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený pät- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Zo skupiny P sa venuje prednosť zlúčeninám, ktoré tvoria skupinu Q. Skupina Q obsahuje zlúčeniny, v ktorých

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Predmetom vynálezu sú dalej zlúčeniny všeobecného vzorca C

kde

R²⁰ a R²·*· predstavujú každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, vodík, fenylskupinu, fenylalkylsku pinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, alebo sú spolu spojené za vzniku piperidinylového, pyrolidinylového alebo morfolinylového kruhu;

R²² a R²³ predstavujú každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo sú spolu spojené za vzniku päť- až šesťčlenného karbocyklického kruhu; a

R²⁴ predstavuje alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, fenylskupinu alebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, pričom fenylskupina alebo fenylalkylskupina je prípadne mono-, di- alebo trisubstituovaná na fenylovom zvyšku nezávisle nitroskupinou, halogénom alebo trifluórmetylskupinou.

Ďalším predmetom vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca CI

kde

R²⁰ a R²¹ predstavuje každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, vodík, fenylskupinu, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, alebo sú spolu spojené za vzniku piperidinylového, pyrolidinylového alebo morfolinylového kruhu; a

Predmetom vynálezu sú dalej zlúčeniny všeobecného vzorca CII

kde

R²⁰ a R²¹ predstavuje každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, vodík, fenylskupinu, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, alebo sú spolu spojené za vzniku piperidinylového, pyrolidinylového alebo morfolinylového kruhu;

R²⁴ predstavuje alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, fenylskupinu alebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, pričom fenylskupina alebo fenylalkylskupina je prípadne mono-, di- alebo trisubstituovaná na fenylovom zvyšku nezávisle nitroskupinou, halogénom alebo trifluórmetylskupinou; a

R²⁵ a R²⁶ predstavuje každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka alebo fenylskupinu.

Predmetom vynálezu sú tiež zlúčeniny všeobecného vzorca CIII

kde

R³ predstavuje halogén, trifluórmetylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, etenylskupinu alebo etynylskupinu.

Zo zlúčenín všeobecného vzorca CIII sa osobitná pred nosi venuje zlúčeninám, kde

a) R³ predstavuje trifluórmetylskupinu;

b) R³ predstavuje fluór; a

c) R³ predstavuje chlór.

Predmetom vynálezu sú dalej zlúčeniny všeobecného vzorca CIV

kde

Zo zlúčenín všeobecného vzorca CIV sa osobitná pred nost venuje zlúčeninám, kde

a) R³ predstavuje trifluórmetylskupinu;

b) R³ predstavuje fluór; a

c) R³ predstavuje chlór.

Predmetom vynálezu sú ďalej zlúčeniny všeobecného vzorca CV

kde

Zo zlúčenín všeobecného vzorca CV sa osobitná prednosť venuje zlúčeninám, kde

a) R³ predstavuje trifluórmetylskupinu;

b) R³ predstavuje fluór; a

c) R³ predstavuje chlór.

Predmetom vynálezu sú ďalej zlúčeniny všeobecného vzorca CVI

R² predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka; a

R³ predstavuje halogén, trifluórmetylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkyloxyskupinu s l až 3 atómami uhlíka, etenylskupinu alebo etynylskupinu.

Zo zlúčenín všeobecného vzorca CVI sa osobitná pred nost venuje zlúčeninám, kde

a) R² predstavuje vodík; a R³ predstavuje chlór;

b) R² predstavuje vodík; a R³ predstavuje fluór; a

c) R² predstavuje cyklopropylskupinu; a R³ predstavuje fluór.

Predmetom vynálezu je tiež spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca CVII

kde

T predstavuje alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka;

R² predstavuje vodík, alkylskupinu s l až 3 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka; a

R³ predstavuje halogén, trifluórmetylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, etenylskupinu alebo etynylskupinu;

ktorého podstata spočíva v tom, že sa alkylamín s 1 až 4 atómami uhlíka acyluje zlúčeninou všeobecného vzorca CVI

kde r² predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka; a r³ predstavuje halogén, trifluórmetylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, etenylskupinu alebo etynylskupinu.

Prednosť sa venuje hore uvedenému spôsobu, pri ktorom R² predstavuje vodík alebo cyklopropylskupinu; R³predstavuje fluór, chlór alebo trifluórmetylskupinu; a kyselina všeobecného vzorca sa pred acyláciou alkylamínu s 1 až 4 atómami uhlíka esterifikuje na alkylester s 1 až 6 atómami uhlíka.

Podlá osobitne prednostného rozpracovania spôsobu opísaného bezprostredne hore sa zlúčenina všeobecného vzorca CVI esterifikuje alkoholom v prítomnosti kyseliny pri teplote okolia až teplote spätného toku počas asi 1 až asi 12 hodín.

Podlá osobitne prednostného rozpracovania spôsobu opísaného bezprostredne hore sa ester nechá reagovať s amínom približne pri teplote okolia až teplote spätného toku počas asi 1 až asi 12 hodín v alkoholickom rozpúšťadle.

Podlá osobitne prednostného rozpracovania spôsobu opísaného bezprostredne hore, ktoré je dalej označované ako spôsob X, sa esterifikácia uskutočňuje pri teplote asi 50°C a acylácia sa uskutočňuje pri teplote asi 50’C.

V osobitne prednostnom rozpracovaní spôsobu X je alkoholom metanol; kyselinou je kyselina chlorovodíková; amínom je metylamín; R² predstavuje vodík; a R³ predstavuje chlór.

V osobitne prednostnom rozpracovaní spôsobu X je alkoholom metanol; kyselinou je kyselina chlorovodíková; amínom je metylamín; R² predstavuje cyklopropylskupinu;

a R³ predstavuje fluór.

V osobitne prednostnom rozpracovaní spôsobu X je alkoholom metanol; kyselinou je kyselina chlorovodíková; amínom je metylamín; R² predstavuje vodík; a R³ predstavuje trifluórmetylskupinu.

Predmetom vynálezu je ďalej spôsob liečenia cicavca napríklad človeka, ktorý trpí chorobou alebo stavom mediovaným receptorom adenozínu A₃, ktorého podstata spočíva v tom, že sa takému cicavcovi podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo jej proliečiva.

Ďalším predmetom vynálezu je spôsob znižovania poškodenia tkaniva (napríklad v podstate zabránenie poškodenia tkaniva, indukovanie ochrany tkaniva), ktoré je následkom ischémie alebo hypoxie, ktorého podstata spočíva v ton, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia), ktorý také liečenie potrebuje, podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo jej proliečivá.

Prednostnými ischemickými/hypoxickými tkanivami, brané jednotlivo alebo ako skupina, sú ischemické/hypoxické tkanivá srdca, mozgu, pečene, obličiek, píúc, čriev, kostrového svalstva, sleziny, podžalúdkovej žíazy, nervov, miechy, retiny, vaskulatúra alebo intestinálne tkanivo.

Mimoriadne prednostným ischemickým/hypoxickým tkanivom je tkanivo srdca.

V osobitne prednostnom rozpracovaní sa zlúčeniny podávajú za účelom zabránenia perioperačnému ischemickému poškodeniu myokardu.

Zlúčeniny podía vynálezu sa prednostne podávajú profylaktický.

K ischemickému/hypoxickému poškodeniu môže dôjsť počas transplantácie orgánu.

Zlúčeniny podía vynálezu sa prednostne podávajú pred operáciou, počas operácie alebo krátko po nej (napríklad troj- až štvordennou infúziou), pričom operácia môže byt srdcová alebo nesrdcová.

Podía jedného rozpracovania tohto vynálezu sa zlúčenina všeobecného vzorca I podáva lokálne.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I, ich proliečivá a farmaceutický vhodné soli týchto zlúčenín alebo proliečiv sa prednostne podávajú v denných dávkach od asi 0,001 do asi 100 mg/kg, najmä prednostne v denných dávkach od asi 0,01 do asi 50 mg/kg.

Ďalším predmetom vynálezu je spôsob znižovania poškodenia tkaniva myokardu (napríklad v podstate zabránenie poškodenia tkaniva, indukcia ochrany tkaniva) počas operácie (napríklad transplantačnej bypass operácie koronárnej artérie (CABG), operácie ciev, perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastiky (PTCA) alebo akejkolvek perkutánnej transluminálnej koronárnej intervencie (PTCI), transplantácie orgánov alebo inej nesrdcovej operácie), ktorého podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby znižovania poškodenia tkaniva myokardu (napríklad v podstate zabránenie poškodenia tkaniva, indukcia ochrany tkaniva) pri pacientoch s prebiehajúcou príhodou sprevádzajúcou pokročilú srdcovú ischémiu (akútny koronárny syndróm, napríklad infarkt myokardu alebo nestabilná angína) alebo mozgovú ischémiu (napríklad mŕtvica), ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú dalej dlhodobé spôsoby znižovania poškodenia tkaniva myokardu (napríklad v podstate zabránenie poškodenia tkaniva, indukcia ochrany tkaniva) pri pacientoch s diagnostikovanou chorobou koronárnych artérií (napríklad absolvovaný infarkt myokardu alebo nestabilná angína) alebo pacientoch ohrozených infarktom myokardu (napríklad pacientoch starších ako 65 rokov a pacientoch vykazujúcich aspoň dva rizikové faktory koronárnej srdcovej choroby), ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby prevencie ischemického/hypoxického poškodenia, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi, ktorý také liečenie potrebuje, dlhodobo perorálne podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby liečenia kardiovaskulárnych chorôb, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia artériosklerózy, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia arytmie, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby liečenia angíny pectoris, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby liečenia hypertrofie srdca, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby liečenia renálne j choroby, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby liečenia komplikácií diabetes, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia restenózy, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečiva.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia hypertrofií alebo hyperplázii orgánov, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia septic kého šoku alebo iných zápalových chorôb (septikémie, endotoxikémie), ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia cerebrochemických porúch, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia myokardu, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčený alebo proliečivá.

Predmetom vynálezu sú dalej spôsoby liečenia dysfunkcie myokardu, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby liečenia cerebrovaskulárnych chorôb, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá.

Predmetom vynálezu sú ďalej spôsoby liečenia hypertrofií alebo hyperplázií orgánov, ktorých podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá.

Predmetom vynálezu sú tiež farmaceutické kompozície, ktorých podstata spočíva v tom, že obsahujú terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo.

Ďalej sú predmetom vynálezu farmaceutické kompozície na znižovanie poškodenia tkaniva vyvolaného ischémiou alebo hypoxiou, ktorých podstata spočíva v tom, že obsahujú terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca 1/ jej proliečivá alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo.

Predmetom vynálezu je tiež kit na použitie spotrebitelom, ktorý trpí alebo je ohrozený chorobou alebo stavom vyvolaným napríklad ischémiou alebo hypoxiou, ktorý je možný zlepšit agonistom . Tento kit obsahuje a) vhodnú dávkovaciu formu, ako roztok na injekčné parenterálne podávanie, ktorá je osobitne prispôsobená na intravenózne alebo intramuskulárne injekčné podávanie a obsahuje zlúčeninu všeobec41 ného vzorca I; a b) inštrukcie, ktoré opisujú spôsob akým použiť dávkovaciu formu za účelom znižovania poškodenia tkaniva vyvolaného ischémiou alebo hypoxiou.

Vo farmaceutických kompozíciách a pri spôsoboch opísaných hore sa prednostne používajú zlúčeniny všeobecného vzorca I z hore uvedených skupín prednostných zlúčenín označených ako skupiny A až Q.

Predmetom vynálezu sú dalej kombinácie zlúčenín všeobecného vzorca I, ich proliečiv alebo farmaceutický vhodných solí týchto zlúčenín a proliečiv, s inými zlúčeninami, ktoré sú uvedené ďalej.

Predmetom vynálezu je tiež farmaceutická kombinačná kompozícia, ktorej podstata spočíva v tom, že obsahuje: terapeuticky účinné množstvo kompozície obsahujúce prvú zlúčeninu, pričom prvou zlúčeninou je zlúčenina všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná soľ tejto zlúčeniny alebo proliečivá;

druhú zlúčeninu, pričom druhou zlúčeninou je kardiovaskulárne činidlo; a prípadne farmaceutický nosič, vehikulum alebo riedidlo.

Ďalej je predmetom vynálezu spôsob znižovania poškodenia tkaniva (napríklad v podstate zabránenie poškodenia tkaniva, indukcia ochrany tkaniva) ktoré je, alebo by mohlo byt, vyvolané ischémiou alebo hypoxiou, ktorého podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva

a) prvá zlúčenina, ktorou je zlúčenina všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná sol tejto zlúčeniny alebo proliečivá; a

b) druhá zlúčenina, ktorou je kardiovaskulárne činidlo;

pričom množstvo prvej a druhej zlúčeniny vedú k terapeutickému účinku.

Predmetom vynálezu je ďalej kit, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje

a) zlúčeninu všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodnú sol tejto zlúčeniny alebo proliečiva, a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b) kardiovaskulárne činidlo a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

c) prostriedky na obalenie prvej a druhej dávkovacej formy, pričom množstvo prvej a druhej zlúčeniny vedie k terapeutickému účinku.

V hore opísaných kombinačných kompozíciách, kombinačných spôsoboch a kitoch sú prednostnými kardiovaskulárnymi činidlami a ich sólami (napríklad činidlami s kardiovaskulárnym účinkom) napríklad β-blokátory (napríklad acebutolol, atenolol, bopindolol, labetolol, mepindolol, nadolol, oxprenol, pindolol, propranolol, sotalol), blokátory vápnikového kanálu (napríklad amlodipin, nifedipin, nizoldipin, nitrendipin, verapamil), otvárače draslíkového kanálu, adenozín, agonisty adenozínu, inhibítory sodíko-vodíkových meničov typu 1 (NHE-1), inhibítory ACE (napríklad kaptopril, enalapril), nitráty (napríklad izosorbid dinitrát, izosorbid

5-mononitrát, glyceryl trinitrát), diuretiká (napríklad hydrochlórtiazid, indapamid, piretanid, xipamid), glykozidy (napríklad digoxín, mitildigoxín), trombolytiká (napríklad tPA), inhibítory doštičiek (napríklad reopro), aspirín, dipyridamol, chlorid draselný, klonidín, prazosín, inhibítory pyruvát-dehydrogenáza kinázy (napríklad dichlóracetát), aktivátory pyruvát-dehydrogenázového komplexu, biguanidy (napríklad metformín) alebo iné agonisty adenozínu A₃· Ako iné kardiovaskulárne činidlá je možné uviesť antagonisty receptoru angiotenzínu II (AII), inhibítory C5a, solubilný receptor komplementu typu 1 (sCRl) alebo jeho analógy, parciálne inhibítory oxidácie mastných kyselín (PFOX) (predovšetkým ranolazín), aktivátory acetyl CoA karboxylázy, inhibítory malonyl CoA dekarboxylázy, inhibítory 5'AMP-aktivovaný proteín kinázy (AMPK), inhibítory adenozín nukleozidu, antiapoptotické činidlá (napríklad inhibítory kaspázy), monofosforyl lipid A alebo jeho analógy, aktivátory/inhibítory oxid dusnatý syntázy, aktivátory proteín kinázy C (predovšetkým proteín kinázy epsilon), inhibítor proteín kinázy delta, inhibítory poly (ADP ribóza) syntetázy (PARS, PARP), metformín (inhibítory glukoneogenézy, látky zvyšujúce citlivosť na inzulín), inhibítory enzýmu konvertujúceho endotelin (ECE), antagonisty receptoru endotelínu ETA, inhibítory TAFI (fibrinolytické inhibítory aktivované trombínom) a modulátory meničov Na/Ca.

Ako inhibítorom NHE-1 sa osobitná prednosť venuje zlúčeninám zvoleným zo súboru skladajúceho sa z [1-(8-brómchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidínu;

11-(6-chlórchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(indazol-7-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[l-(benzimidazol-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(1-i zochinolyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(4-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-5-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-8-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(indazol-6-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[l-(indazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(benzimidazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(l-metylbenzimidazol-6-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

1-(5-chinolyl)-5-n-propyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidínu;

l-(5-chinolyl)-5-izopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-etyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-metylbenzimidazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidínu;

[1-(1,4-benzodioxan-6-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[l-(benzotriazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[l-(3-chlórindazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(5-chinolyl)-5-butyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu ;

[5-propyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 5-izopropyl-l- (6-chinolyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 1- (2-chlór-4-metylsulf onylf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-chlórf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 1- (2-trifluórmetyl-4-f luórf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-brómfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-fluórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-chlór-5-metoxyfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-chlór-4-metylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2,5-dichlórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl] guanidínu;

[1-(2,3-dichlórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl] guanidínu;

[1-(2-chlór-5-aminokarbonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-chlór-5-aminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-fluór-6-trifluórmetylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyl]guanidínu;

[i-(2-chlór-5-metylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyl]guanidínu;

C1—(2-chlór-5-dimetylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-trifluórmetyl-4-chlórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyl]guanidínu;

[1-( 2-chlórfenyl)-5-metyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-metyl-l-(2-trifluórmetylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-etyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl)guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(2-trifluórmetylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(2,6-dichlórfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

a ich farmaceutický vhodných solí.

Z hladiska hore opísaných kombinačných kompozícií, kombinačných spôsobov a kitov sa venuje prednost zlúčeninám všeobecného vzorca I, ktoré patria do skupín prednostných zlúčenín označených ako A až Q.

Predmetom vynálezu je tiež farmaceutická kombinačná kompozícia, ktorej podstata spočíva v tom, že obsahuje: terapeuticky účinné množstvo kompozície obsahujúce prvú zlúčeninu, pričom prvou zlúčeninou je zlúčenina všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná sol tejto zlúčeniny alebo proliečivá;

druhú zlúčeninu, pričom druhou zlúčeninou je inhibítor glykogén fosforylázy; a prípadne farmaceutický nosič, vehikulum alebo riedidlo.

a) prvá zlúčenina, ktorou je zlúčenina všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná sol tejto zlúčeniny alebo proliečiva; a

b) druhá zlúčenina, ktorou je inhibítor glykogén fosforylázy;

pričom množstvo prvej a druhej zlúčeniny vedú k terapeutickému účinku.

Predmetom vynálezu je dfalej kit, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje

b) inhibítor glykogén fosforylázy a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

Z hladiska hore opísaných kombinačných kompozícií, kombinačných spôsobov a kitov sa venuje prednosť zlúčeninám všeobecného vzorca I, ktoré náležia do skupín prednostných zlúčenín označených ako A až Q.

Z hľadiska hore opísaných kombinačných kompozícií, kombinačných spôsobov a kitov ako inhibítorom glykogén fosforylázy venuje pŕednost zlúčeninám zvoleným zo súboru skladajúceho sa z [ (lS)-( (R)-hydroxydimetylkarbamoylmetyl)-2-fenyletyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, {(1S)-[ (R)-hydroxy(metoxymetylkarbamoyl)metyl]-2-fenyletyljamidu 5,6-dichlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, {(1S) - [ (R) -hydroxy (metoxyme ty lkarbamoyl) metyl ] - 2-f enyletyl}amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, ((lS)-{ (R)-hydroxy-[(2-hydroxyetyl)metylkarbamoyl]metyl}-2-fenyletyl)amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, {(1S) - [ (R)-hydroxy(metylpyridin-2-ylkarbamoyl)metyl]-2-fenyletyl}amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, ((1S) - { (R) -hydroxy- [ (metyl- (2-pyridin-2-yletyl) karbamoyl ] metyl}-2-fenyletyl)amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, hydrochloridu [(1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-(4-metylpiperazin-l-yl)-3-oxopropyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ (1S) -benzyl- (2R)-hydroxy-3- (3-hydroxyazetidin-l-yl) -3-oxopropyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, ((lS)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-izoxazolidin-2-yl-3-oxopropyl)amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, ((1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-[1,2]oxazinan-2-yl-3-oxopropyl)amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ (1S) -benzyl- (2R) -hydroxy-3- ((3S) -hydroxypyrolidin-l-yl) -3-oxopropyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [(1S)-benzyl-3-((3S, 4S) -dihydroxypyrolidin-l-yl)-(2R)-hydroxy-3-oxopropyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [(1S)-benzyl-3-((3R, 4S)-dihydroxypyrolidin-l-yl)-(2R)-hydroxy-3-oxopropyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, ((1S) -benzyl- ( 2R) -hydroxy-3-morfolin-4-yl-3-oxopropyl)amidu -5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ (1S)-benzyl-2-(3-hydroxyiminopyrolidin-l-yl)-2-oxoetyl] amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ 2- (cis-3,4-dihydroxypyrolidin-l-yl) -2-oxoetyl ]amidu

5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ 2-((3S, 4S) -dihydroxypyrolidin-l-yl)-2-oxoetyl]amidu

5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [(1S)-benzyl-2-(cis-3,4-dihydroxypyrolidin-l-yl)-2-oxoetyl] amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [2-(1,l-dioxotiazolidin-3-yl)-2-oxoetyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, (2-oxo-2-tiazolidin-3-yletyl)amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [(1S)-(4-fluórbenzyl )-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoetyl] amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ (IS)-benzyl-2- ((3RS)-hydroxypiperidin-l-yl) -2-oxoetyl ] amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [2-oxo-2-( (lRS)-oxo-l-tiazolidin-3-yl)etyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [(IS)-(2-fluórbenzyl) -2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoetyl ]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [(IS)-benzyl-2-((3S, 4S) -dihydroxypyrolidin-l-yl)-2-oxoetyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ (IS)-benzyl-2-(3-hydroxyazetidin-l-yl)-2-oxoetyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ (IS)-benzyl-2-(3-hydroxyiminoazetidin-l-yl)-2-oxoetyl]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny, [ (is) -benzyl-2- (4-hydroxyiminopiperidin-l-yl) -2-oxoetyl ]amidu 5-chlór-lH-indol-2-karboxylovej kyseliny.

Predmetom vynálezu je tiež farmaceutická kombinačná kompozícia, ktorej podstata spočíva v tom, že obsahuje: terapeuticky účinné množstvo kompozície obsahujúcej prvú zlúčeninu, pričom prvou zlúčeninou je zlúčenina všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná soí tejto zlúčeniny alebo proliečiva;

druhú zlúčeninu, pričom druhou zlúčeninou je inhibítor aldóza reduktázy; a prípadne farmaceutický nosič, vehikulum alebo riedidlo.

Ďalej je predmetom vynálezu spôsob znižovania poškodenia tkaniva (napríklad v podstate zabránenie poškodenia tkaniva, indukcia ochrany tkaniva) ktoré je, alebo by mohlo byť, vyvolané ischémiou alebo hypoxiou, ktorého podstata spočíva v tom, že sa cicavcovi (napríklad človeku ženského alebo mužského pohlavia) podáva

b) druhá zlúčeninu, ktorou je inhibítor aldóza reduktázy;

pričom množstvo prvej a druhej zlúčeniny vedie k terapeutickému účinku.

b) inhibítor aldóza reduktázy a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

Z hladiska hore opísaných kombinačných kompozícií, kombinačných spôsobov a kitov sa venuje prednosť zlúčeninám všeobecného vzorca I, ktoré patria do skupín prednostných zlúčenín označených ako A až Q.

Z hladiska hore opísaných kombinačných kompozícií, kombinačných spôsobov a kitov sa ako inhibítoru aldóza reduktázy venuje prednosť zopolrestatu, 3,4-dihydro-4-oxo-3-[[5-trifluórmetyl)-2-benzotiazolylJmetyl]-1-ftalazínoctovej kyseline.

Pri spôsoboch liečenia pri použití hore opísaných kombinácií sa venuje prednosť spôsobom podávania apod., ktoré sú uvedené dalej.

Prednostnými ischemickými/hypoxickými tkanivami, brané jednotlivo alebo ako skupina, sú ischemické/hypoxické tkanivá srdca, mozgu, pečene, obličiek, plúc, čriev, kostrového svalstva, sleziny, podžalúdkovej žlazy, nervov, miechy, retiny, vaskulatúra alebo intestinálne tkanivo.

Mimoriadne prednostným ischemickým/hypoxickým tkanivom je tkanivo srdca.

V osobitne prednostnom rozpracovaní sa kombinácie podávajú za účelom zabránenia perioperačnému ischemickému poškodeniu myokardu.

Kombinácie podlá vynálezu sa prednostne podávajú profylaktický.

Kombinácia podlá vynálezu sa prednostne podáva pred operáciou, počas operácie alebo krátko po nej , pričom operácia môže byť srdcová alebo nesrdcová.

Podía jedného rozpracovania tohto vynálezu sa kombi nácia podáva lokálne.

Podlá jedného rozpracovania sa poškodenie tkaniva myokardu znižuje počas operácie alebo po nej.

Podlá ďalšieho rozpracovania tohto vynálezu sa poškodenie tkaniva myokardu znižuje pri pacientoch s prebiehajúcimi srdcovými alebo mozgovými príhodami.

Podlá iného rozpracovania tohto vynálezu sa poškodenie tkaniva myokardu znižuje dlhodobým podávaním hore opísaných kombinácií pacientovi s diagnostikovanou koronárnou srdcovou chorobou.

Pod pojmom zníženie sa okrem úplného zabránenia rozumie prevencia čiastočná alebo prevencia, ktorá je menej ako 100%, ale je vyššia ako hodnota, ktorá by sa dosiahla pri použití placeba.

Pod pojmom poškodenie vyvolané ischémiou alebo hypoxiou alebo poškodenie, ktoré je následkom ischémie alebo hypoxie sa rozumejú stavy priamo spojené so zníženým prekrvením alebo zníženou dodávkou kyslíka do tkanív, ktoré sú napríklad následkami vzniku zrazeniny alebo obštrukcie v cievach zásobujúcich dané tkanivo a ktoré okrem iných vedú k zníženému transportu kyslíka k takom tkanive, zhoršeniu činnosti tkaniva, jej dysfunkcii a/alebo nekróze a/alebo apoptóze. V inom prípade môže byť prekrvenie alebo perfúzia orgánu kvantitatívne adekvátna, ale môže byť znížená kapacita krvi alebo perfúzneho média pre transport kyslíka, ako je to napríklad v hypoxickom prostredí, takže dôjde k zníženiu dodávky kyslíka do tkaniva a následne k zhoršeniu jej činnosti, dysfunkcii a/alebo nekróze a/alebo apoptóze.

Pod pojmom liečenie alebo liečba sa tiež rozumie liečenie preventívne (napríklad profylaktické) a paliatívne.

Prívlastok farmaceutický vhodný sa používa na označenie nosičov, riedidiel, excipientov a/alebo solí, ktoré musia byt kompatibilné s dalšími zložkami formulácie a nepoškodzujú recipienta.

Pod pojmom proliečivá sa rozumejú zlúčeniny, ktoré sú prekurzormi liečiv, ktoré po podaní pôsobením určitého chemického alebo fyziologického mechanizmu uvoíňujú liečivo in vivo (napríklad sa proliečivo vystaví fyziologickému pH alebo sa na požadovanú formu liečiva prevedie enzymatickým pôsobením).

Ako príklady pät- až šestčlenných aromatických kruhov, ktoré prípadne obsahujú 1 alebo 2 heteroatómy nezávisle zvolené zo súboru skladajúceho sa z kyslíka, dusíka a síry, je možné uviest fenyl-, furyl-, tienyl-, pyrolyl-, oxazolyl-, tiazolyl-, imidazolyl-, pyrazolyl-, izoxazolyl-, izotiazolyl-, pyridyl-, pyridazinyl-, pyrimidinyl- a pyrazinylskupinu.

Ako príklady čiastočne nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených pät- až osemčlenných kruhov, ktoré prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené zo súboru skladajúceho sa z kyslíka, síry a dusíka, je možné uviest cyklopentyl-, cyklohexyl-, cykloheptyl-, cyklooktyla fenylskupinu. Ako ďalšie príklady pätčlenných kruhov je možné uviest furyl-, tienyl-, pyrolyl-, 2-pyrolinyl-, 3-pyrolinyl-, pyrolidinyl-, 1,3-dioxolanyl-, oxazolyl-, tiazolyl-, imidazolyl-, 2H-imidazolyl-, 2-imidazolinyl-, imidazolidinyl-, pyrazolyl-, 2-pyrazolinyl-, pyrazolidinyl-, izoxazolyl-, izotiazolyl-, 1,2-ditiolyl-, 1,3-ditiolyl-,

3Η-1,2-oxatiolyl-, 1,2,3-oxadiazolyl, 1,2,4-oxadiazolyl,

1,2,5-oxadiazolyl, 1,3,4-oxadiazolyl-, 1,2,3-triazolyl,

1.2.4- triazolyl, 1,3,4-tiadiazolyl-, 3Η-1,2,3-dioxazolyl-,

1.2.4- dioxazolyl-, 1,3,2-dioxazolyl, 1,3,4-dioxazolyl-,

5Η-1,2,5-oxatiazolyl- a 1,3-oxatiolylskupinu.

Ako dalšie príklady šesťčlenných kruhov je možné uviesť 2H-pyranyl-, 4H-pyranyl-, pyridyl-, piperidyl-, 1,2-dioxinyl-, 1,3-dioxinyl-, 1,4-dioxanyl-, morfolinyl-, 1,4-ditianyl-, tiomorfolinyl-, pyridazinyl-, pyrimidinyl-, pyrazinyl-, piperazinyl-, 1,3,5-triazinyl-, 1,2,4-triazinyl-, 1,2,3-triazinyl-, 1,3,5-tritianyl-, 4H-1,2-oxazinyl-, 2H-1,3-oxazinyl-, 6H-1,3-oxazinyl-, 6H-1,2-oxazinyl-, 1,4-oxazinyl-, 2H-1,2-oxazinyl-, 4H-l,4-oxazinyl-, 1,2,5-oxatiazinyl, 1,4-oxazinyl, o-izoxazinyl, p-izoxazinyl-,

1.2.5- oxatiazinyl-, 1,2,6-oxatiazinyl- a 1,4,2-oxadiazinylskupinu.

Ako dalšie príklady sedemčlenných kruhov je možné uviest azepinyl-, oxepinyl-, tiepinyl- a 1,2,4-diazepinylskupinu.

Ako dalšie príklady osemčlenných kruhov je možné uviest cyklooktyl-, cyklooktenyl- a cyklooktadienylskupinu.

Ako príklady bicyklických kruhov, ktoré sa skladajú z dvoch anelovaných nezávisle sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených päť- a/alebo šesťčlenných kruhov a ktoré brané nezávisle prípadne obsahujú 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené zo súboru skladajúceho sa z dusíka, síry a kyslíka, je možné uviesť indolizinyl-, indolyl-, izoindolyl-, 3H-indolyl-, lH-izoindolyl-, indolinyl-, cyklopenta(b)- pyridinyl-, pyrano(3,4-b)pyrolyl-, benzofuryl-, izobenzofuryl-, benzo(b)tienyi-, benzo(c)tienyl-, ΙΗ-indazolyl-, indoxazinyl-, benzoxazolyl-, antranilyl-, benzimidazolyl-, benztiazolyl-, purinyl-, 4H-chino57 lizinyl-, chinolyl-, izochinoiyl-, cinolinyl-, ftalazinyl-, chinazolinyl-, chinoxalinyl-, 1,8-naftyridinyl-, pteridinyl-, indenyl-, izoindenyl-, naftyl-, tetralinyl-, dekalinyl-, 2H-l-benzopyranyl-, 1,4-benzodioxanyl-, pyrido(3,4-b)pyridinyl-, pyrido(3,2-b)pyridinyl-, pyrido(3,4-b)pyridinyl-, 2H-l,3-benzoxazinyl-, 2H-l,4-benzoxazinyl-, lH-2,3-benz- oxazinyl-, 4H-3,1-benzoxazinyl-, 2H-1,2-benzoxazinyl- a 4H-1,4-benzoxazinylskupinu.

Pod pojmom alkylén sa rozumie nasýtený uhľovodíkový zvyšok s reťazcom priamym alebo rozvetveným, z ktorého obidvoch terminálnych atómov uhlíka je odstránený vodíkový atóm. Ako príklady takých skupín (ktoré berú do úvahy stanovenú dĺžku reťazca) je možné uviesť metylén-, etylén-, propylén-, butylén-, pentylén-, hexylén- a heptylénskupinu. Také väzbové skupiny je možné samozrejme tiež označovať názvy bez sufixu én (napríklad metyl), čo odborníci v tomto odbore často robia. Pod týmto názvom sa však stále rozumie väzbová skupina.

Pod pojmom halogén sa rozumie chlór, bróm, jód alebo fluór.

Pod pojmom alkyl sa rozumie nasýtený uhľovodíkový zvyšok s priamym alebo rozvetveným reťazcom. Ako príklady takých alkylskupín (ktoré berú do úvahy stanovenú dĺžku reťazce) je možné uviesť metyl-, etyl-, propyl-, izopropyl-, butyl-, sek-butyl-, terc-butyl-, pentyl-, izopentyl-, neopentyl-, terc-pentyl-, 1-metylbutyl-, 2-metylbutyl-, 3-metylbutyl-, hexyl-, izohexyl-, heptyl- a oktylskupinu.

Pod pojmom alkoxy sa rozumie nasýtená alkylskupina s reťazcom priamym alebo rozvetveným, ktorá je viazaná cez atóm kyslíka. Ako príklady takých alkoxyskupín (ktoré berú do úvahy stanovenú dĺžku reťazca) je možné uviesť metoxy-, etoxy-, propoxy-, izopropoxy-, butoxy-, izobutoxy-, tercbutoxy-, pentoxy-, izopentoxy-, neopentoxy-, terc-pentoxy-, hexoxy-, izohexoxy-, heptoxy- a oktoxyskupinu.

V uvedených mono-N- alebo di-N,N-alkylových skupinách s 1 až x atómami uhlíka v každej z alkylových častí (kde x predstavuje celé číslo), je počet atómov uhlíka každej z alkylových častí braný nezávisle.

Ked karbocyklický alebo heterocyklický zvyšok môže byť viazaný alebo inak pripojený k uvedenému substrátu prostredníctvom rôznych atómov kruhu a konkrétne miesto takého pripojenia nie je uvedené, potom prichádzajú do úvahy všetky možné miesta pripojenia, nech už prostredníctvom atómu uhlíka, alebo napríklad trojväzného atómu dusíka. Tak sa napríklad pod pojmom pyridyl rozumie 2-, 3- alebo 4-pyridylskupina, pod pojmom tienyl 2alebo 3-tienylskupina apod.

Pod pojmom farmaceutický vhodné soli sa rozumejú soli obsahujúce netoxické anióny. Ako neobmedzujúce príklady takých solí je možné uviesť chlorid, bromid, jodid, sulfát, hydrogensulfát, fosfát, acetát, maleát, fumarát, oxalát, laktát, tartrát, citrát, glukonát, metánsulfonát a 4-toluénsulfonát. Pokial zlúčenina obsahuje viac ako jeden bázický zvyšok, spadajú do tohto pojmu tiež viacnásobné soli (napríklad di-soli). Do rozsahu pojmu farmaceutický vhodné soli rovnako spadajú soli s netoxickými katiónmi.

Ako neobmedzujúce príklady takých solí je možné uviesť soli, ktoré obsahujú katióny sodíka, draslíka, vápnika, horčíka, amónia alebo protónovaného benzatínu (N,N’-dibenzyletyléndiamínu), cholínu, etanolamínu, dietanolamínu, etyléndiamínu, meglumínu (N-metylglukamínu), benetamínu (N-benzylfenyletylamínu), piperazínu alebo trometamínu (2-amino-2hydroxymetyl-1,3-propándiolu).

Pod pojmom rozpúšťadlo inertné voči reakcii alebo inertné rozpúšťadlo sa v tomto textu rozumie rozpúšťadlo, ktoré neinteraguje s východiskovými látkami, reakčnými činidlami, medziproduktmi alebo produktmi spôsobom, ktorý by mal nepriaznivé účinky na výťažok požadovaného produktu.

Odborníkovi v odbore chémie bude jasné, že určité zlúčeniny podlá tohto vynálezu budú obsahovať jeden alebo viac atómov, ktoré môžu byť v osobitných stereochemických alebo geometrických konfiguráciách za vzniku stereoizomérov, a konfiguračných izomérov. Všetky také izoméry a ich zmesi sú predmetom tohto vynálezu.

Do rozsahu vynálezu tiež spadajú hydráty a solváty zlúčenín podlá vynálezu.

Skratkou DMF sa označuje N,N-dimetylformamid a skratkou DMSO sa označuje dimetylsulfoxid a skratkou THF tetrahydrofurán.

Do rozsahu vynálezu tiež spadajú zlúčeniny značené izotopmi, ktoré sú identické so zlúčeninami všeobecného vzorca I až na to, že v nich je jeden atóm alebo viac atómov nahradených atómom s atómovou hmotnostou alebo hmotnostným číslom odlišným od atómovej hmotnosti alebo hmotnostného čísla s akým sa zvyčajne nachádzajú v prírode. Ako príklady izotopov, ktoré je možné začleniť do nových medziproduktov podlá tohto vynálezu je možné uviesť izotopy vodíka, uhlíka, dusíka, kyslíka, fosforu, fluóru a chlóru, ako je ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷0, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F a ³⁶C1. Zlúčeniny podlá vynálezu, ich proliečiva a farmaceutický vhodné soli týchto zlúčenín, a proliečiv, ktoré obsahujú hore uvedené izotopy a/alebo iné izotopy iných atómov rovnako spadajú do tohto vynálezu. Určité izotopovo značené zlúčeniny podlá vynálezu, napríklad zlúčeniny značené rádioaktívnymi izotopmi, ako ³H alebo ¹⁴C, sú užitočné pri skúškach distribúcie liečiva alebo substrátu v tkanivách. Osobitná prednost sa venuje trítiovaným izotopom tzn. ³H, a ¹⁴C izotopom, pretože je ich je možné lahko pripravovat a detekovat. Nahradením tažšími izotopmi, ako deutériom, tzn. ²H, je možné dosiahnuť určitých terapeutických výhod vyplývajúcich z vyššej metabolickej stability, napríklad predĺženie polčasu in vivo alebo zníženie potrebných dávok, čo má za určitých okolností prednost. Izotopovo značené zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich proliečivá je možné zvyčajne pripravovat realizáciou spôsobov znázornených v schémach a/alebo opísaných v príkladoch uskutočnenia alebo preparatívnych postupoch, pri ktorých sa reakčné činidlo neznačené izotopom nahradí íahko dostupným činidlom značeným izotopom.

Ďalšie znaky a výhody vynálezu budú zrejmé z tohto opisu a pripojených nárokov.

Nasleduje podrobnejší opis vynálezu.

Zlúčeniny podía vynálezu je zvyčajne možné pripravovat pri použití spôsobov, ktoré sú analogické spôsobom známym, predovšetkým v svetle tohto opisu. Niektoré spôsoby výroby zlúčenín podía vynálezu predstavujú ďalšie znaky tohto vynálezu a sú ilustrované v nasledujúcich reakčných schémach. Iné spôsoby sú opísané v príkladoch uskutočnenia.

Schéma

I

III

VI

Schéma ii

XXII

Schéma I I i

Cl

XXXII

N,

ΓΪ

hiO

XXXIV

Zlúčeniny podlá tohto vynálezu je zvyčajne možné vyrobiť kopuláciou požadovaného chlórpurínribozidu a benzylamínu a následnou redukciou azidu. Podrobnejší opis je uvedený v nasledujúcom texte, ktorý sa vzťahuje k predchádzajúcim schémam.

Pri postupe podlá schémy I je požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca I, kde R¹, R², R³, X, Y, Z, D a G majú hore uvedený význam, je možné lahko pripraviť redukciou azidu v zodpovedajúcej zlúčenine všeobecného vzorca II. Typicky sa táto redukcia vykonáva tak, že sa zlúčenina všeobecného vzorca

II uvádza do styku s trialkyl- alebo triarylfosfinom, prednostne trifenylfosfinom, v rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako tetrahydrofuránu, pri teplote od asi 0 do asi 65°C, typicky pri teplote okolia, počas asi 30 minút až asi 2 hodín.

Na reakčnú zmes sa potom pôsobí bázou, prednostne amínovou bázou, najvýhodnejšie hydroxidom amónnym, počas asi 6 hodín až asi 48 hodín, pri teplote od asi 0 do asi 65’C, prednostne pri teplote okolia.

Požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca II, kde R², R³, X, Y, Z, D a G majú hore uvedený význam a R¹ predstavuje ester, je možné pripravit zo zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca o

III a benzylamínového derivátu (kde R , D a G majú význam uvedený hore). Kondenzačná reakcia sa zvyčajne vykonáva v polárnom rozpúšťadle, ako etanole, v prítomnosti bázy, prednostne amínovej bázy, najvýhodnejšie trietylamínu, pri zvýšenej teplote od asi 40 do asi 75°C, počas asi 2 až asi 24 hodín.

Podobne je požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca II, kde R², R³, X, Y, Z, D a G majú hore uvedený význam a R¹predstavuje amid, možné pripraviť zo zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca VI a benzylamínového derivátu (kde R³, D a G majú hore uvedený význam). Kondenzačná reakcia sa zvyčajne vykonáva v polárnom rozpúšťadle, ako etanole, v prítomnosti bázy, prednostne amínovej bázy, výhodnejšie trietylamínu, pri zvýšenej teplote od asi 40 do asi 75°C, počas asi 2 až asi 24 hodín.

Amid všeobecného vzorca VI je možné pripraviť zo zodpovedajúceho esteru všeobecného vzorca III reakciou s aminom. Typicky sa táto reakcia vykonáva tak, že sa vhodný amín nechá reagovať s esterom všeobecného vzorca III pri teplote od asi 15 do asi 50’C počas asi 1 hodiny až asi 24 hodín, v polárnom rozpúšťadle, ako metanole.

Niektoré spôsoby užitočné pri výrobe opísaných zlúčenín môžu vyžadovať chránenie vzdialených funkčných skupín (tzn. primárnych aminoskupín, sekundárnych aminoskupín a karboxyskupín v prekurzoroch zlúčenín všeobecného vzorca I). Potreba takého chránenia sa môže meniť v závislosti od druhu vzdialenej funkčnej skupiny a podmienok použitých pri príprave. Potrebu takého chránenia môže odborník v tomto odbore lahko určiť. Používanie metód zavádzania/odštepovania chrániacich skupín leží v rozsahu skúseností bežného odborníka. Všeobecný opis chrániacich skupín a ich používania je možné nájsť v publikácii T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, USA, 1991.

Tak je napríklad požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca I, kde R^, R², r³, χ, y, z, D a G majú hore uvedený význam, možné zo zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca VI alternatívne vyrobiť tak, že sa zavedie ochrana, vykoná sa reakcia s aminom a následne deprotekcia. Zlúčenina vzorca VI, kde R¹, R², X, Y a Z majú hore uvedený význam sa teda podrobí redukcii azidu. Zvyčajne sa táto redukcia vykonáva tak, že sa zlúčenina všeobecného vzorca VI nechá reagovať s trialkyl- alebo triarylfosfinom, prednostne trifenylfosfínom, v rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako tetrahydrofuránu, pri teplote od asi 0 do asi 65°C, typicky pri teplote okolia, počas asi 30 minút až asi 2 hodín. Reakčná zmes sa nechá reagovať s bázou, prednostne aminovou bázou, najvýhodnejšie hydroxidom amónnym, počas asi 6 až asi 48 hodín, pri teplote od asi 0 do asi 65°C. Po redukcii sa zavedie ochrana amínového zvyšku (P¹).

Amín sa prednostne chráni terc-butoxykarbonylskupinou. Zavedenie tejto skupiny sa dosiahne tak, že sa amín nechá reagovať s terc-butoxykarbonylanhydridom a bázou, prednostne aminovou bázou, najvýhodnejšie trietylamínom, v bezvodom rozpúšťadle, ako dichórmetáne, pri teplote okolia počas od asi 5 hodín do asi 24 hodín.

Požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca IV, kde R¹, R², R³, X, Y, Z, D a g majú hore uvedený význam, je možné pripraviť z vhodnej zlúčeniny všeobecného vzorca V a benzylO amínového derivátu (kde R , D a G majú hore uvedený význam). Táto kondenzačná reakcia sa typicky vykonáva v polárnom rozpúšťadle, ako etanole, v prítomnosti bázy, prednostne amínovej bázy, najvýhodnejšie trietylamínu, pri zvýšenej teplote od asi 40 do asi 75°C, počas asi 2 hodín až asi 24 hodín.

Po reakcii s amínom je požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca I možné pripraviť zo zodpovedajúcej chránenej zlúčeniny všeobecného vzorca IV vhodne katalyzovanou deprotekčnou reakciou. V typickom rozpracovaní sa chránená (napríklad vo forme terc-butylesteru) zlúčenina nechá reagovať so silnou kyselinou, prednostne trifluóroctoyou kyselinou, pri 10 až 50°C, prednostne pri teplote okolia, počas asi 1 hodiny až asi 8 hodín, čím sa odstráni chrániaca skupina.

Pri postupe podía reakčnej schémy II je požadované zlúčeniny všeobecného vzorca IA, kde R¹, R², R³, X, Y, Z,

R⁴ a R⁵ majú hore uvedený význam a D predstavuje oxyskupinu, tioskupinu alebo skupinu NH, možné pripravovať reakciou azidu v zodpovedajúcej zlúčenine všeobecného vzorca XX. Zvyčajne sa táto redukcia vykonáva tak, že sa zlúčenina všeobecného vzorca XX nechá reagovať s trialkyl- alebo triarylfosfinom, prednostne trifenylfosfinom, v rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako tetrahydrofuránu, pri teplote od asi 0 do asi 65°C, typicky pri teplote okolia, počas asi 30 minút až asi 2 hodín. Reakčná zmes sa potom nechá reagovať s bázou, prednostne amínovou bázou, najvýhodnejšie hydroxidom amónnym, počas asi 6 až asi 48 hodín, pri teplote od asi 0 do asi 65°C.

Ester všeobecného vzorca XXI (po konverzii na kyselinu) sa kopuluje s vhodným amínom v prítomnosti vhodného kopulačného činidla za vzniku požadovanej zlúčeniny všeobecného vzorca XX. Vhodným kopulačným činidlom je činidlo, ktoré mení karboxylovú kyselinu na reaktívne entity, ktoré pri reakcii s amínom tvoria amidovú väzbu.

Kopulačným činidlom môže byť činidlo, ktoré umožňuje uskutočniť kondenzačnú reakciu postupom v jednej reakčnej nádobe, kde sa spolu zmieša karboxylová kyselina a amín. Ako príklady kopulačných činidiel je možné uviesť hydrochlorid 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu/ hydroxybenzotriazol (EDC/HOBT), dicyklohexylkarbodiimid/ hydroxybenzotriazol (HOBT), 2-etoxy-l-etoxykarbonyl-l,2-dihydrochinolín (EEDQ) a dietylfosforylkyanid. Kopulácia sa vykonáva v inertnom rozpúšťadle, prednostne aprotickom rozpúšťadle, pri teplote od asi -20 do asi 50°C, počas asi 1 hodiny až asi 48 hodín, v prítomnosti nadbytku amínu, ako bázy. Ako príklady rozpúšťadiel je možné uviest acetonitril, dichlórmetán, dimetylformamid a chloroform a ich zmesi.

Kopulačným činidlom tiež môže byť činidlo, ktoré karboxylovú kyselinu mení na aktivovaný medziprodukt, ktorý sa izoluje a/alebo vznikne v prvom stupni, a v druhom stupni sa nechá reagovať s amínom. Ako príklady takých kopulačných činidiel a aktivovaných medziproduktov je možné uviesť oxalylchlorid pri premene na chlorid kyseliny, fluorid kyseliny kyanurovej pri premene na fluorid kyseliny alebo alkylchlórformiát, ako je izobutyl- alebo izopropenylchlórformiát, alebo anhydrid propánfosfónovej kyseliny (PPA) (v prítomnosti terciárnej aminovéj bázy) (týmto činidlom sa karboxylová kyselina mení na zmesový anhydrid karboxylovej kyseliny) alebo karbonyldiimidazol, ktorým sa kyselina mení na acylimidazol. Pokial sa ako kopulačné činidlo používa oxalylchlorid, s výhodou sa ako pomocné rozpúšťadlo, ktoré sa pridáva k inému rozpúšťadlu (ako je napríklad dichlórmetán) , používa malé množstvo dimetylformamidu za účelom katalýzy tvorby chloridu kyseliny. Tento aktivovaný derivát kyseliny je možné podrobiť kopulačnej reakcii s nadbytkom amínu vo vhodnom rozpúšťadle v prítomnosti vhodnej bázy.

Ako príklady vhodných kombinácií rozpúšťadlo/báza je možné uviesť dichlórmetán, dimetylformamid alebo acetonitril alebo ich zmesi v prítomnosti nadbytku amínu, ako bázy. Ako iné vhodné kombinácie rozpúšťadlo/báza prichádzajú do úvahy kombinácie obsahujúce vodu alebo alkohol s 1 až 5 atómami uhlíka alebo ich zmesi spolu s pomocným rozpúšťadlom, ako dichlórmetánom, tetrahydrofuránom alebo dioxánom a bázou, ako sodíkom, draslíkom, hydroxidom lítnym v množstve, ktoré je dostatočné na spotrebovanie kyseliny uvoínenej pri reakcii. Používanie týchto kopulačných činidiel a vhodná volba rozpúšťadiel a teplôt leží v rozsahu skúseností odborníkov v tomto odbore a je možné ich tiež íahko určiť na základe literárnych údajov. Tieto a iné príkladné podmienky, ktoré sú vhodné na kopuláciu karboxylových kyselín, sú opísané v publikácii Houben-Weyl, zv. XV, časť II, E. Winsch, Ed. ,

G. Thieme Verlag, 174, Stuttgart a M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag Berlín, 1984 a The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology (ed. E. Gross a J. Meienhofer), zv. 1 až 5 (Academic Press, NY, USA, 1979 až 1983) .

Zlúčeniny všeobecného vzorca XXI je možné na zodpovedajúce kyseliny premeniť kyslo katalyzovanou deprotekciou. Typicky sa chránená (napríklad vo forme terc-butylesteru) zlúčenina nechá reagovat so silnou kyselinou, prednostne trifluóroctovou kyselinou pri teplote 10 až 50°C, prednostne pri teplote okolia, počas asi 1 hodiny až asi 8 hodín, za vzniku zodpovedajúcej kyseliny.

Požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca XXI, kde R¹, R², R³, X, Y, Z, D majú hore uvedený význam a R účelne predstavuje esterový zvyšok (alkyl) je možné pripraviť z vhodnej zlúčeniny všeobecného vzorca XXII, kde R¹, R², R³,

X, Y, Z a D majú hore uvedený význam, alkylačnou reakciou (zvyšok D, ktorý je pred alkyláciou súčasťou skupiny DH, zvyčajne predstavuje oxyskupinu, tioskupinu alebo iminoskupinu). Zlúčenina všeobecného vzorca XXII sa zvyčajne nechá reagovať s alkylbrómacetátom v prítomnosti silnej bázy, ako hydridu sodného, v polárnom aprotickom rozpúštadle, ako dimetylformamide, pri teplote od asi o do asi 30’C počas asi 1 hodiny až asi 24 hodín.

Zlúčeniny všeobecného vzorca XXII, kde R¹, R², R³, X, Y, Z a D majú hore uvedený význam, je možné pripravovať z vhodných zlúčenín všeobecného vzorca III a vhodného benzyl amínového derivátu. Typicky sa táto kondenzačná reakcia vykonáva v polárnom rozpúšťadle, ako etanole, v prítomnosti bázy, prednostne amínovej bázy, najvýhodnejšie trietylamínu, pri zvýšenej teplote asi 40 až asi 75°C, počas asi 2 až asi 24 hodín.

Pri postupe podlá schémy III je zlúčeniny všeobecného vzorca XXX, kde X a Y majú hore uvedený význam, možné pripravovať glykozidačnou reakciou vhodnej zlúčeniny XXXI a silylovaného 6-chlórpurínu. Typicky je táto reakcia katalyzována Lewisovou kyselinou, prednostne trimetylsilyltri71 fluórmetánsulfonátom, a uskutočňuje sa v rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako dichlóretáne alebo acetonitrile, pri teplote od asi 30 do asi 75°C, typicky pri 60 °C, počas asi 30 minút až asi 6 hodín.

Požadované zlúčeniny všeobecného vzorca XXXI, kde X má hore uvedený význam, je možné pripravovat hydrolýzou vhodnej zlúčeniny všeobecného vzorca XXXII katalyzovanou kyselinou. Táto reakcia sa typicky uskutočňuje pri použití silnej minerálnej kyseliny, prednostne kyseliny sírovej, v protickej rozpúštadlovej zmesi kyseliny octovej a acetanhydridu pri teplote od asi 5 do asi 40°C počas asi 2 až asi 24 hodín.

Podobne je požadované zlúčeniny všeobecného vzorca XXXVI, kde Y a X majú hore uvedený význam, možné pripraviť zo zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca XXXIII pri použití hore opísaných glykozidačných a hydrolytických reakcií.

Požadované zlúčeniny všeobecného vzorca XXXII, kde X má hore uvedený význam, sa pripravujú zo zodpovedajúcich zlúčenín všeobecného vzorca XXXIII aktiváciou karboxylovej kyseliny a následnou reakciou s amínom. Zlúčeninu všeobecného vzorca XXXIII je typicky možné aktivovať premenou na chlorid kyseliny, napríklad reakciou s oxalylchloridom v nepolárnom aprotickom rozpúšťadle, prednostne dichlórmetáne, v prítomnosti katalytického množstva dimetylformamidu, pri teplote asi 0°C s následným zahriatím na teplotu miestnosti, počas asi 2 až asi 8 hodín. Chlorid kyseliny sa potom nechá reagovať s nadbytkom vhodného amínu pri teplote od asi 0 do asi 30°C.

Požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca XXXIII, kde X má hore uvedený význam, je možné pripraviť oxidáciou vhodnej zlúčeniny všeobecného vzorca XXXIV. Oxidačným či- 72 nidlom je zvyčajne oxid ruteničitý, pripravený pri použití katalytického množstva chloridu rutenitého a stechiometrického množstva jodistanu sodného v rozpúštadlovej zmesi chloroformu, acetonitrilu a vody. Reakcia sa účelne vykonáva pri teplote okolia počas asi 4 až asi 24 hodín.

Požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca XXXIV, kde X má hore uvedený význam, je možné pripraviť zo zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca XXXV reakciou s kyselinou jodistou, ktorá hydrolyzuje izopropylidénovú skupinu a štiepi glykol za vzniku aldehydu. Reakcia sa vykonáva v éterových rozpúšťadlách, typicky v dietylétere, účelne pri teplote okolia počas asi 2 hodín až asi 24 hodín.

Požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca XXXV je možné pripraviť zo zodpovedajúcej hydroxylovej zlúčeniny aktiváciou a vytesnením hydroxylovej skupiny ažidovým iónom. Aktivácia sa typicky vykonáva tak, že sa hydroxylová skupina reakciou s anhydridom trifluórmetánsulfónovej kyseliny v prítomnosti amínovej bázy, prednostne pyridínu, pri asi -30 až asi O’C počas asi 30 minút až asi 2 hodín premení na zodpovedajúci trifluórmetánsulfonátový derivát. Výsledný trifluórmetánsulfonát sa nechá reagovať s azidom alkalického kovu, prednostne azidom sodným, v polárnom aprotickom rozpúšťadle, prednostne dimetylformamide, približne pri teplote okolia až asi 50’C počas asi 6 až asi 24 hodín.

V schéme IV sú znázornené spôsoby výroby benzylamínových medziproduktov podlá tohto vynálezu.

Benzylamíny všeobecného vzorca L, kde D, G a R³majú hore uvedený význam (zvyšok D, ktorý je pred alkyláciou súčasťou skupiny DH, zvyčajne predstavuje oxyskupinu, tioskupinu alebo iminoskupinu) sa pripravia napríklad jedným z troch spôsobov. Podlá prvého spôsobu sa zo zodpovedajúcej aromatickej zlúčeniny všeobecného vzorca LI imidoalkylačnou reakciou pripraví imid všeobecného vzorca LII. Vhodná zlúčenina všeobecného vzorca LI sa teda nechá reagovať s N-chlórmetylftalimidom a kyselinou alebo katalytickou Lewisovou kyselinou, napríklad chloridom zinočnatým, v aprotickom rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako tetrahydrofuránu, pri teplote od teploty okolia do asi 100°C, prednostne asi 50’C.

Výsledná zlúčenina všeobecného vzorca LII sa alkyluje za vzniku zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca L tak, že sa uvádza do styku s vhodným alkylačným činidlom v polárnom aprotickom rozpúšťadle, ako dimetylformamide, pri teplote od asi 0 do asi 50’C, počas od asi 2 do asi 24 hodín. Alternatívne je možné alkyláciu vykonávať za Mitsunobuho podmienok pri použití vhodného alkoholu, trifenylfosf inu, dietylazadikarboxylátu v éterovom rozpúšťadle, prednostne tetrahydrofuráne, pri teplote okolia, počas asi 2 až asi 24 hodín.

Získaný ftalimid všeobecného vzorca LIX sa podrobí deprotekčnej reakcii s hydrátom hydrazínu v protickom rozpúšťadle, ako etanole, pri teplote okolia až asi 100’C, prednostne si 50’C, počas asi 1 hodiny až asi 6 hodín. Alternatívne sa deprotekcia môže vykonať tak, že sa imid redukuje reakciou s hydridovým redukčným činidlom, prednostne tetrahydroboritanom sodným, a následne sa zahrieva s kyselinou octovou pri asi 50 až asi 100’C počas asi 10 až asi 24 hodín.

Alternatívne je zlúčeniny všeobecného vzorca L, kde L predstavuje benzylamín, možné pripravovať pri použití nasledujúcej reakčnej sekvencie. Zo zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca LIII sa dvojstupňovým spôsobom zahŕňajúcim alkyláciu a následnú redukciu hydridom kovu pripraví zlúčenina vzorca LV. Zlúčeninu LV je tiež možné získať zo zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca LIV reakciou

- 74 s borónovou kyselinou, prednostne fenylborónovou kyselinou, a formaldehydom a kyslým katalyzátorom, ako kyselinou propiónovou, v aprotickom rozpúšťadle, ako benzéne, pri teplote od asi 30 do asi 100C počas asi 1 hodiny až asi 24 hodín.

Zlúčeninu všeobecného vzorca LVI, kde D, G a R³ má hore uvedený význam, je možné pripraviť zo zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca LV. Benzylalkohol všeobecného vzorca LV sa zvyčajne nechá reagovať s difenylfosforylazidom a bázou, prednostne silnou amínovou bázou, ako diazobicykloundekánom (DBU), v aprotickom rozpúšťadle, prednostne toluéne, pri teplote od asi 0 do asi 50°C, najvýhodnejšie pri teplote okolia, počas asi 1 hodiny až asi 24 hodín.

Vzniknutý azid je možné redukovať za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca L. Táto redukcia sa zvyčajne vykonáva tak, že sa zodpovedajúci azid všeobecného vzorca XVI zmieša s hydrogenačným katalyzátorom, prednostne paládiovým katalyzátorom, najvýhodnejšie 10% paládiom na uhlíku, v rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako alkoholickom rozpúšťadle, prednostne etanole. Reakčná nádoba sa umiestni pod atmosféru plynného vodíka, prednostne s tlakom asi 103 až 344 kPa, účelne pri teplote okolia, počas asi 30 minút až asi 4 hodín. Azid je možné redukovať tiež tak, že sa nechá reagovať s trialkyl- alebo triarylfosfinom, prednostne trifenylfosfínom, v rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako tetrahydrofuráne, pri teplote od asi 0 do asi 65 °C, typicky pri teplote okolia, počas asi 0,5 hodiny až asi 2 hodín. Na reakčnú zmes sa potom pôsobí bázou, prednostne amínovou bázou, najvýhodnejšie hydroxidom amónnym, počas asi 6 až asi 48 hodín.

Pri treťom spôsobe sa zlúčenina všeobecného vzorca L získa z nitrilu všeobecného vzorca LVII katalytickou hydrogenáciou alebo redukciou hydridom kovu. Katalytická hydrogenácia sa zvyčajne vykonáva tak, že sa vhodná zlúčenina

- 75 všeobecného vzorca LVII zmieša s hydrogenačným katalyzátorom, prednostne Raney-niklom, v rozpúšťadle inertnom voči reakcii, ako alkohole, prednostne etanole obsahujúcom asi 1% vodný roztok hydroxidu amónneho. Reakčná nádoba sa umiestni pod atmosféru plynného vodíka, prednostne s tlakom asi 103 až 344 kPa, účelne pri teplote okolia, na asi 30 minút až asi 4 hodiny. Alternatívne je možné redukciu vykonať pri použití redukčného činidla na báze hydridu kovu, prednostne lítiumalumíniumhydridu v éterovom rozpúšťadle, prednostne tetrahydrof uráne, pri teplote od asi 0 do asi 60 “C, prednostne pri teplote okolia, počas asi 1 až asi 6 hodín. Zlúčeniny všeobecného vzorca LVII sa pripravujú alkyláciou zodpovedajúcich zlúčenín všeobecného vzorca LVIII pri použití spôsobov, ktoré sú odborníkom v tomto odbore známe a sú opísané v súvislosti so zlúčeninami všeobecného vzorca LIX.

Východiskové látky a reakčné činidlá pre zlúčeniny opísané hore sú tiež lahko dostupné, alebo je možné ich lahko syntetizovať bežnými metódami organickej syntézy známymi odborníkom v tomto odbore. Tak napríklad vela používaných zlúčenín je príbuzných prírodným zlúčeninám alebo ide o ich deriváty. Na látky tohto typu sa upiera značný vedecký záujem a existuje po nich značný obchodný dopyt, a v dôsledku toho sú mnohé z týchto medziproduktov obchodne dostupné alebo sú opísané v literatúre alebo sú lahko pripravitelné z iných bežne dostupných látok metódami citovanými v literatúre.

Niektoré zlúčeniny podlá vynálezu obsahujú asymetrické atómy uhlíka, a preto sa môžu vyskytovať vo forme enantiomérov alebo diastereomérov. Diasteromerické zmesi je možné deliť na individuálne diastereoméry na základe ich fyzikálne chemických odlišností známymi metódami, napríklad chromatografiou a/alebo frakčnou kryštalizáciou. Enantioméry je možné deliť tak, že sa enantiomerická zmes premení na diasteromérnu zmes reakciou s vhodnou opticky aktívnou zlúčeninou (napríklad alkoholom), potom sa oddelia diastereo76 méry a jednotlivé diastereoméry sa premenia (napríklad hydrolýzou) na zodpovedajúce čisté enantioméry. Do rozsahu vynálezu spadajú všetky také izoméry, vrátane diastereomérov a enantiomérov, ako tiež ich zmesi. Niektoré zo zlúčenín podía vynálezu sú tiež atropoizoméry (napríklad substituované biaryly), ktoré rovnako spadajú do rozsahu tohto vynálezu.

Odborníkom v tomto odbore bude zrejmé, že zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu vyskytovať v niekoíkých tautomérnych formách. Všetky tieto tautomérne formy spadajú do rozsahu tohto vynálezu. Do jeho rozsahu tiež spadajú zlúčeniny všeobecného vzorca I vo forme enolových foriem i ketoforiem.

Niektoré zlúčeniny podía vynálezu sú kyslé, a môžu tvoriť soli s farmaceutický vhodnými katiónmi. Všetky zlúčeniny podía vynálezu sú bázické a môžu tvoriť soli s farmaceutický vhodným aniónom. Všetky také soli, vrátane disolí, spadajú do rozsahu tohto vynálezu a je možné ich pripravovať konvenčnými metódami. Tak napríklad je možné ich pripraviť jednoducho tak, že sa kyslé a zásadité zložky zmiešajú, zvyčajne v stechiometrickom pomere, vo vodnom, nevodnom alebo sčasti vodnom prostredí. Soli sa izolujú bučf filtráciou alebo zrážaním nerozpúštadlom s nasledujúcou filtráciou, alebo odparením rozpúšťadla alebo v prípade vodných roztokov tiež lyofilizáciou.

Pokiaí zlúčeniny podía vynálezu tvoria metabolity, hydráty alebo solváty, potom tieto formy tiež spadajú do rozsahu tohto vynálezu.

Spolu so zlúčeninami podía vynálezu je možné použiť tiež iné kardiovaskulárne činidlá (napríklad činidlá s kardiovaskulárnym účinkom), ktoré sú odborníkom v tomto odbore známe. Také zlúčeniny sú opísané hore v tomto texte.

Pri kombinačnej terapii sa ako zlúčeniny podlá vynálezu, tak ostatné zlúčeniny, cicavcom (napríklad lud’om, ženského alebo mužského pohlavia) podávajú pri použití obvyklých spôsobov.

Pri kombinačnej terapii podlá vynálezu je ako druhú zlúčeninu možné použiť akýkolvek inhibítor NHE-1. Pod pojmom inhibítor NHE-1 sa rozumejú zlúčeniny, ktoré inhibujú transportný systém výmeny sodík/protón (Na+/H+) a sú teda užitočné ako terapeutické alebo profylaktické činidlá pri liečení chorôb vyvolaných alebo zhoršujúcich sa zrýchlením transportného systému výmeny sodík/protón (Na+/H+). Takú inhibíciu je odborník v tomto odbore schopný lahko stanoviť na základe štandardných skúšok, ktoré sú opísané dalej, a na základe obvyklých predklinických skúšok kardioprotekcie [skúška in vivo pozri Klein, H. et al., Circulation 92: 912 až 917 (1995); skúška na izolovanom srdci pozri Scholz, W. et al., Cardiovascular Research 29: 260 až 268 (1995); antiarytmické skúška pozri Yasutake M. et al., Am.

J. Physiol., 36: H2430-H2440 (1994); NMR skúška pozri Kolke et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 112: 765 až 775 (1996)] Rôzne inhibítory sú opísané a uvedené dalej. Odborníkom v tomto odbore však budú známe aj iné inhibítory NHE-1, ako sú zlúčeniny opísané vo WO99/43663, zverejnenej 2. septembra 1999. Ako príklady inhibítorov NHE-1 užitočných v kompozíciách a pri spôsoboch podlá tohto vynálezu, je teda možné uviesť zlúčeniny zvolené zo súboru skladajúceho sa z [1-(8-brómchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-iH-pyrazol-4-karbony1]guanidínu;

[1-(6-chlórchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidínu;

[ 1- (indazol-7-yl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[1-(benzimidazol-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[l-(l-izochinolyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]-t guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(4-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-5-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-8-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[l-(indazol-6-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(indazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(benzimidazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[l-(l-metylbenzimidazol-6-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

l-(5-chinolyl)-5-n-propyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

1-(5-chinolyl)-5-i zopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-etyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-metylbenzimidazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(1,4-benzodioxan-6-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(benzotriazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(3-chlórindazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[l-(5-chinolyl)-5-butyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-propyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-izopropyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[l-(2-chlór-4-metylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[ 1—(2-chlórfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-trifluórmetyl-4-fluórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2-brómfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-fluórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-chlór-5-metoxyfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2,5-dichlórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2,3-dichlórfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-chlór-5-aminokarbonylf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-chlór-5-aminosulfonylfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-f luór-6-trif luórinetylf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ i- (2-chlór-5-metylsulf onylf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ l- (2-chlór-5-dimetylaminosulf onylf enyl )-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ i- (2-trif luórmetyl-4-chlórf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-chlórf enyl) -5-metyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[5-metyl-l-(2-trifluórmetylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[5-etyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l- (2-trif luórmetylf enyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidínu;

[5-cyklopropyl-l-(2,6-dichlórfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

a ich farmaceutický vhodných solí.

Ako druhú zlúčeninu (účinnú látku) podlá tohto vynálezu je možné použiť akýkoívek inhibitor aldóza reduktázy. Pod pojmom inhibitor aldóza reduktázy sa rozumejú zlúčeniny, ktoré inhibujú biokonverziu glukózy na sorbitol katalyzovanú enzýmom aldóza reduktázou. Takú inhibíciu odborník v tomto odbore lahko stanoví pri použití štandardných skúšok (J. Malone, Diabetes, 29: 861 až 864, 1980, Red Celí Sorbitol, an Indicator of Diabetic Control). Rôzne inhibítory aldóza reduktázy sú uvedené ďalej s príslušnými odkazmi. Odborníkom v tomto odbore však budú známe ešte ďalšie také látky. US patenty sú tu uvádzané náhradou za prenesenie celého ich obsahu do tohto textu. Spolu s odkazmi na príslušnú patentovú literatúru, ktorá sa týka daných zlúčenín, sú tieto látky opísané pri použití chemického názvoslovia USAN a ďalších označení v zátvorkách, pokial sa dajú použiť.

Aktivitu inhibítoru aldóza reduktázy v tkanivu je možné stanoviť tak, že sa skúša množstvo inhibítoru aldóza reduktázy, ktoré je potrebné na zníženie tkanivového sorbitolu (tzn. inhibíciou ďalšej produkcie sorbitolu následkom blokovania aldóza reduktázy) alebo zníženie tkanivovej fruktózy (inhibíciou produkcie sorbitolu následkom blokovania aldóza reduktázy a následkom toho produkcie fruktózy). Bez toho aby sme sa chceli viazať akoukolvek konkrétnou teóriou alebo mechanizmom, predpokladáme, že inhibitor aldóza reduktázy inhibíciou aldóza reduktázy zabraňuje poškodeniam následkom ischémie alebo ich znižuje, ako je opísané dalej.

Ako príklady inhibítorov aldóza reduktázy, ktoré sú užitočné v kompozíciách a pri spôsoboch podlá vynálezu, je teda možné uviesť:

1. 3- (4-bróm-2-fluórbenzyl)-3,4-dihydro-4-oxo-l-ftalazínoctovú kyselinu (ponalrestat, US 4 251 528);

2. N-{[(5-trifluórmetyl)-6-metoxy-1-naftalenyl]tioxometyl}-N-metylglycín (tolrestat, US 4 600 724);

3. 5-[(Z,E)-p-metylcinamylidén]-4-oxo-2-tioxo-3-tiazolidénoctovú kyselinu (epalrestat, US 4 464 382,

US 4 791 126, US 4 831 045);

4. 3-(4-bróm-2-fluórbenzyl)-7-chlór-3,4-dihydro-2,4-dioxo-l(2H)-chinazolínoctovú kyselinu (zenarestat,

US 4 734 419 a 4 883 800);

5. 2R,4R-6,7-dichlór-4-hydroxy-2-metylchromán-4-octovú kyselinu (US 4 883 410);

6. 2R,4R-6,7-dichlór-6-fluór-4-hydroxy-2-metylchromán-4-octovú kyselinu (US 4 883 410)

7. 3,4-dihydro-2,8-diizopropyl-3-oxo-2H-l,4-benzoxazín-4-octovú kyselinu (US 4 771 050);

8. 3,4-dihydro-3-oxo-4-[(4,5,7-trifluór-2-benzotiazolyl)metyl]-2H-1,4-benzotiazín-2-octovú kyselinu (SPR-210, US 5 252 572);

9. N-[3,5-dimetyl-4-[(nitrometyl)sulfonyl]fenyl ] -2-metylbenzénacetamid (ZD5522, US 5 270 342 a US 5 430 060);

10. (S)-6-fluórspiro[chromán-4,4'-imidazolidín]-2,5'-dión (sorbinil, US 4 130 714);

11. d-2-metyl-6-f luórspiro(chromán-4 ' , 4' -imidazolidín)-2',5'-dión (US 4 540 704);

12. 2-fluórspiro(9H-fluóren-9,4'-imidazolidín)-2',5'-dión (US 4 438 272);

13. 2,7-difluórspiro(9H-fluóren-9,4'-imidazolidín) -2',5'-dión (US 4 436 745, US 4 438 272);

14. 2,7-difluór-5-metoxyspiro(9H-fluóren-9,4'-imidazolidín)-2' ,5'-dión (US 4 436 745, US 4 438 272);

15. 7-fluórspiro(5H-indenol[l,2-b]pyridín-5,3'-pyrolidin )-2,5'-dión (US 4 436 745, US 4 438 272);

16. d-cis-6 '-chlór-2', 3 '-dihydro-2 '-metylspiro(imidazolidín-4,4 '-4 '-H-pyrano(2,3-b)pyridín)-2,5-dión (US 4 980 357) ;

17. spiro[ imidazolidín-4,5.' (6H)chinolín]-2,5-dión-3 '-chlór-7', 8 '-dihydro-7 '-metyl-(5 '-cis) (US 5 066 659);

18. (2S,4S)-6-fluór-2',5'-dioxospiro(chromán-4, 4' -imidazolidín)-2-karboxamid (US 5 447 946) a

19. 2-[ (4-bróm-2-f luórfenyl)metyl]-6-f luórspiro[izochinolín-4(1H) , 3 ' -pyrolidin]-l,2',3,5'(2H)tetrón (ARI-509, US 5 037 831)

Ako príklady iných inhibítorov aldóza reduktázy je možné uviesť zlúčeniny všeobecného vzorca IB

kde

Z predstavuje kyslík alebo síru;

R¹ predstavuje hydroxyskupinu alebo skupinu, ktorú je možné odstrániť in vivo za vzniku zlúčeniny všeobec ného vzorca I, kde R¹ predstavuje hydroxyskupinu; a

X a Y sú rovnaké alebo rôzne a predstavujú každý nezávisle vodík, trifluórmetylskupinu, fluór alebo chlór;

a ich farmaceutický vhodné soli.

Z hore uvedených inhibítorov aldóza reduktázy sa venuje prednosť zlúčeninám číslo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10 a 17 a nasledujúcim zlúčeninám všeobecného vzorca IB:

20. 3,4-dihydro-3-( 5-fluórbenzotiazol-2-ylmety 1) -4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R¹ = hydroxy, X = F,

Y = H]

21. 3-(5,7-difluórbenzotiazol-2-ylmety1)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R¹ = hydroxy, X = = Y = F];

22. 3-(5-chlórbenzotiazol-2-ylmetyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R³- = hydroxy, X = Cl, Y = H];

23. 3-(5,7-dichlórbenzotiazol-2-ylmetyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R¹ = hydroxy, X = - Y = Cl];

. 3,4-dihydro-4-oxo-3- (5-trifluórmetylbenzoxazol -2-ylmetyl)ftalazin-l-yloctovej kyseline [R¹ - hydroxy, X = CF₃, Y = H];

25. 3,4-dihydro-3-(5-fluórbenzoxazol-2-ylmetyl)-4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R¹ = hydroxy, X = F, Y = H];

26. 3-(5,7-difluórbenzoxazol-2-ylmetyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R^ = hydroxy, X = = Y = F];

27. 3-(5—chlórbenzoxazol-2-ylmetyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R¹ = hydroxy, X = Cl, Y = H];

28. 3-(5,7-dichlórbenzoxazol-2-ylmetyi)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctovej kyseline [R¹ = hydroxy,

X = Y = Cl] a

29. zopolrestatu, 3,4-dihydro-4-oxo-3-[[5-(trifluórmety1)-2-benzotiazolyl]metyl]-1-ftalazínoctovej

Ί kyseline [R = hydroxy, X = trifluórmety1, Y = H].

V zlúčeninách 20 až 23 a 29 Z predstavuje síru a v zlúčeninách 24 až 28 Z predstavuje kyslík.

Z hore uvedenej podskupiny prednostných zlúčenín sa väčšia prednost venuje zlúčeninám 20 až 29 a osobitná prednost sa venuje zlúčenine 29.

Z inhibítorov aldóza reduktázy sa venuje prednost predovšetkým 3,4-dihydro-4-oxo-3-[[5-(trifluórmetyl)-2-benzo tiazolylJmetyl]-1-ftalazínoctovej kyseline.

Zlúčeniny, ktoré sú inhibítormi aldóza reduktázy podía vynálezu, sú íahko dostupné alebo je odborník v tomto odbore môže íahko syntetizovať pri použití obvyklých postupov syntézy organických zlúčenín, predovšetkým s ohíadom na opisy obsiahnuté v relevantnej patentovej literatúre.

Inhibítor aldóza reduktázy sa môže použiť v množstve, ktoré je účinné pri aktivitách podía tohto vynálezu. Účinná dávka inhibítoru aldóza reduktázy v kombinačných kompozíciách, spôsoboch a kitoch podía tohto vynálezu typicky leží v rozmedzí od asi 0,1 do 100 mg/kg/deň, prednostne od 0,1 do 20 mg/kg/deň, a je možné ju podávať jednorázovo alebo vo forme niekoíkých čiastkových dávok.

Ako druhú zlúčeninu podía vynálezu je možné použiť akýkoívek inhibítor glykogén fosforylázy. Pod pojmom inhibítor glykogén fosforylázy sa rozumie akákoívek látka, činidlo alebo kombinácia látok a/alebo činidiel redukujúca, retardujúca alebo eliminujúca enzymatické pôsobenie glykogén fosforylázy. Enzymatické pôsobenie glykogén fosforylázy, ktoré je v súčasnosti známe, spočíva v degradácii glykogénu katalýzou reverzibilnej reakcie makromolekuly glykogénu a anorganického fosfátu na glukóza-l-fosfát a makromolekulu glykogénu, ktorá je o jeden glukozylový zvyšok kratší ako pôvodná makromolekula glykogénu (pri reakcii prebiehajúcej v smere glykogenolýzy). Také účinky odborník v tomto odbore íahko stanoví pri použití štandardných skúšok (aké sú na87 príklad opísané ďalej). Rôzne také zlúčeniny sú opísané v zverejnených PCT prihláškach WO 96/39384 a WO 96/39385. Odborníkom v tomto odbore však budú známe ešte ďalšie také inhibítory glykogén fosforylázy.

Ako inhibítorom glykogén fosforylázy sa venuje prednosť zlúčeninám všeobecného vzorca IC

kde prerušovaná čara predstavuje prípadnú väzbu;

A predstavuje skupinu všeobecného vzorca -C(H)=,

-C(alkyl)= s 1 až 4 atómami uhlíka v alkyiovej časti alebo -C(halogén)=, keď prerušovaná čara predstavuje väzbu; alebo A predstavuje metylénskupinu alebo skupinu všeobecného vzorca -CH(alkyl) s 1 až 4 atómami uhlíka v alkyiovej časti, keď prerušovaná čara nepredstavuje väzbu;

R¹, R¹⁰ a R¹¹ predstavuje nezávisle vždy atóm vodíka, atóm halogénu, 4-, 6- alebo 7-nitroskupinu, kyanoskupinu alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, fluórmetylskupinu, difluór metylskupinu alebo trifluórmetylskupinu;

predstavuje atóm vodíka;

R³ predstavuje atóm vodíka alebo alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka;

R⁴ predstavuje atóm vodíka, metylskupinu, etylskupinu, n-propylskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkoxyalkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 3 atómami uhlíka v alkylovej časti, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, fenylhydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, fenylalkoxyalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, tien-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo fur-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pričom kruh obsiahnutý v R⁴ je prípadne substituovaný na uhlíku jedným, dvoma alebo tromi substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka, atóm halogénu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, trifluórmetylskupinu, hydroxyskupinu, aminoskupinu a kyanoskupinu; alebo

R⁴ predstavuje pyrid-2-, -3- alebo -4-ylalkylskupinu s až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, tiazol-2-,

-4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, imidazol-1-, -2-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrol-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, oxazol-2-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrazol-3-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, izoxazol-3-,

-4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, izotiazol-3-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyridazin-3- alebo -4-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrimidin-2-, -4-, -5alebo -6-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrazin-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo 1,3,5- triazin-2-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pričom heterocyklický kruh obsiahnutý v zvyšku R⁴ je prípadne substituovaný na uhlíku jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, trifluórmetylskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupinu a hydroxyskupinu;

r5 predstavuje atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru, alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, alkanoylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, aminoalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových a 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkoxylových častí, karboxyalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, alkoxykarbonylalkoxyskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v prvej a 1 až 4 atómami uhlíka v druhej alkoxylovej časti, benzyloxykarbonylalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti alebo karbonyloxyskupinu, pričom táto karbonyloxyskupina je prostredníctvom väzby uhlík-uhlík pripojená k fenylovému, tiazolylovému, imidazolylovému, lH-indolylovému, furylovému, pyrolylovému, oxazolylovému, pyrazolylovému, izoxazolylovému, izotiazolylovému, pyridazinylovému, pyrimidinylovému, pyrazinylovému alebo 1,3,5-triazinylovému kruhu a pričom kruh obsiahnutý v zvyšku R⁵ je prípadne substituovaný na atómu uhlíka jedným substituentom zvoleným zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, aminoskupinu a trifluórmetylskupinu;

R⁷ predstavuje atóm vodíka, atóm fluóru alebo alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka; alebo

R⁵ a R⁷ dohromady prípadne predstavujú oxoskupinu;

R⁶ predstavuje karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 8 atómami uhlíka v alkoxylovej časti alebo skupinu vzorca C(O)NR⁸R⁹ alebo CCOjR·¹·², kde

R⁸ predstavuje atóm vodíka, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, hydroxyskupinu alebo alkoxyskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka; a

R⁹ predstavuje atóm vodíka, alkylskupinu s 1 až 8 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 8 atómami uhíka, metylén-perfluórovanú alkylskupinu s 1 až 8 atómami uhlíka v alkylovéj časti, fenylskupinu, pyridylskupinu, tienylskupinu, furylskupinu, pyrolylskupinu, pyrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, tiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, izoxazolylskupinu, izotiazolylskupinu, pyranylskupinu, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu alebo 1,3,5-triazinylskupinu, pričom kruh obsiahnutý v R⁹ je pripojený prostredníctvom väzby uhlík-dusík; alebo

R⁹ predstavuje alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, ktorá je substituovaná jedným, dvoma alebo tromi substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka, hydroxyskupinu, aminoskupinu, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v každej z alkylových častí; alebo

R⁹ predstavuje alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, ktorá je substituovaná jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho fenylskupinu, pyridylskupinu, furylskupinu, pyrolylskupinu, pyrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, tiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, izoxazolylskupinu, izotiazolylskupinu, pyranylskupinu, pyridylskupinu, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu alebo 1,3,5-triazinylskupinu, pričom nearomatický kruh obsahujúci atóm dusíka, » Q ktorý je súčastou R , je pripadne na atómu dusíka substituovaný jednou alkylskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, benzylskupinou, benzoylskupinou alebo alkoxykarbonylskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka v alkoxylovej časti a pričom ďalej kruh obsiahnutý v R⁹je prípadne na atómu uhlíka substituovaný jedným substituentom zvoleným zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, aminoskupinu a mono-N- a di-N,N- alkylaminoskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, s tou podmienkou, že nezahŕňa kvaternizovaný atóm dusíka a žiadnu väzbu dusík-kyslík, dusík-dusík alebo dusík-halogén;

R¹² predstavuje piperazin-l-ylskupinu, 4-alkylpiperazin-l-ylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, 4-formylpiperazin-l-ylskupinu, morfolinoskupinu, tiomorfolinoskupinu, l-oxotiomorfolinoskupinu, 1,1-dioxotiomorfolinoskupinu, tiazolidin-3-ylskupinu, l-oxotiazolidin-3-ylskupinu, 1,l-dioxotiazolidin-3-ylskupinu, 2-alkoxykarbonylpyrolidin-l-ylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, oxazolidin-3-ylskupinu alebo 2(R)-hydroxymetylpyrolidin-l-ylskupinu; alebo

R¹² predstavuje 3- a/alebo 4-mono- alebo -disubstituova nú oxazetidin-2-ylskupinu, 2-, 4- a/alebo 5-monoalebo -disubstituovanú oxazolidin-3-ylskupinu, 2-, 4- a/alebo 5-mono- alebo -disubstituovanú tiazolidin-3-ylskupinu, 2-, 4- a/alebo 5-mono- alebo -di substituovanú l-oxotiazolidin-3-ylskupinu, 2-, 4a/alebo 5-mono- alebo -disubstituovanú 1,1-dioxotiazolidin-3-ylskupinu, 3- a/alebo 4-mono- alebo -disubstituovanú pyrolidin-l-ylskupinu, 3-, 4a/alebo 5-mono-, -di- alebo -trisubstituovanú piperidin-l-ylskupinu, 3-, 4- a/alebo 5-mono-, -dialebo -trisubstituovanú piperazin-l-ylskupinu, 3substituovanú azetidin-l-ylskupinu, 4- a/alebo 5mono- alebo -disubstituovanú 1,2-oxazinan-2-ylskupinu, 3- a/alebo 4-mono- alebo -disubstituovanú pyrazolidin-l-ylskupinu, 4- a/alebo 5-mono- alebo -disubstituovanú izoxazolidin-2-ylskupinu, 4a/alebo 5-mono- a/alebo -disubstituovanú izotiazolidin-2-ylskupinu, pričom každý zo substituentov je nezávisle zvolený zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka, atóm halogénu, alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, aminoskupinu, mono-N- s di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, formylskupinu, oxoskupinu, hydroxyiminoskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, karboxyskupinu, karbamoylskupinu, mono- N- a di-N,N-alkylkarbamoylskupinu s l až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, alkoxyiminoskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxymetoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alk93 oxylovej časti, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, karboxyalkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v alkylovej časti a hydroxyalkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka;

pričom však pokiai R⁴ predstavuje atóm vodíka, metylskupinu, etylskuc pinu alebo n-propylskupinu, potom R predstavuje hydroxyskupinu a/alebo pokiai R⁵ a R⁷ predstavujú atómy vodíka, potom R⁴ nepredstavuje atóm vodíka, metylskupinu, etylskupinu, n-propylskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyalkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 3 atómami uhlíka v alkylovej časti a R⁶ predstavuje skupinu C(O)NR⁸R⁹ alebo C(O)R¹² alebo alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti;

a ich farmaceutický vhodným soliam a proliečivám.

Ako prednostné inhibítory glykogén fosforylázy je možné tiež uviesť zlúčeniny všeobecného vzorca ID

kde prerušovaná čara predstavuje prípadnú väzbu;

A predstavuje skupinu všeobecného vzorca -C(H)=,

-C(alkyl)= s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovéj časti, -C(halogén)= alebo -N=, ked prerušovaná čara predstavuje väzbu; alebo A predstavuje metylénskupinu alebo skupinu všeobecného vzorca -CH(alkyl)- s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, ked prerušovaná čara nepredstavuje väzbu;

r¹, R¹⁰ a R¹¹ predstavuje nezávisle vždy atóm vodíka, atóm halogénu, kyanoskupinu, 4-, 6- alebo 7-nitroskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, fluórmetylskupinu, difluórmetylskupinu alebo trifluórmetylskupinu;

R² predstavuje atóm vodíka;

R³ predstavuje atóm vodíka alebo alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka;

R⁴ predstavuje atóm vodíka, metylskupinu, etylskupinu, n-propylskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkoxyalkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 3 atómami uhlíka v alkylovej časti, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, fenylhydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, fenylalkoxyalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, tien-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo fur-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pričom kruh obsiahnutý v R⁴ je substituovaný na uhlíku jedným, dvoma alebo tromi substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm vodíka, atóm halogénu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, trifluórmetylskupinu, hydroxysku95 pinu, aminoskupinu, kyanoskupinu a 4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylskupinu; alebo

-4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, imidazol-2-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrol-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, oxazol-2-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrazol-3-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, izoxazol-3-,

-4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, izotiazol-3-, -4- alebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyridazin-3- alebo -4-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrimidin-2-, -4-, -5alebo -6-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrazin-2- alebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, 1,3,5triazin-2-ylalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo indol-2-alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pričom heterocyklický kruh obsiahnutý v zvyšku R⁴ je prípadne substituovaný na uhlíku jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, trifluórmetylskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupinu, hydroxyskupinu a kyanoskupinu; alebo

R⁴ predstavuje skupinu R¹⁵-karbonyloxymetyl, kde R¹⁵ predstavuje fenylskupinu, tiazolylskupinu, imidazolylskupinu, ΙΗ-indolylskupinu, furylskupinu, pyrolylskupinu, oxazolylskupinu, pyrazolylskupi96 nu, izoxazolylskupinu, izotiazolylskupinu, pyridylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu alebo 1,3,5-triazinyskupinu, pričom hore uvedené kruhy obsiahnuté v skupine R¹⁵sú prípadne substituované na uhlíku jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, aminoskupinu, hydroxyskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka a trifluórmetylskupinu;

R⁵ predstavuje atóm vodíka, metylskupinu, etylskupinu, n-propylskupinu, hydroxymetylskupinu alebo hydroxyetylskupinu;

R⁶ predstavuje karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s až 8 atómami uhlíka v alkoxylovej časti; benzyloxy karbonylskupinu alebo skupinu vzorca C(O)NR^SR⁹ alebo C(O)R¹², kde

R⁸ predstavuje atóm vodíka, alkylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, cykloalkylskupinu s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkylalkylskupinu s 3 až 6 atómami uhlíka v cykloalkylovej a 1 až 5 atómami uhlíka v alkylovej časti, hydroxyskupinu alebo alkoxyskupinu s 1 až 8 atómami uhlíka; a

R⁹ predstavuje atóm vodíka, cykloalkylskupinu sa 3 až atómami uhlíka, cykloalkylalkylskupinu sa 3 až 8 atómami uhlíka v cykloalkylovej a 1 až 5 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkenylskupinu s 4 až 7 atómami uhlíka, cykloalkylalkoxyskupinu s 3 až 7 v cykloalkylovej a 1 až 5 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, cykloalkyloxyskupinu s 3 až 7 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, metylén-perfluórovanú alkylskupinu s 1 až 8 atómami uhlíka v alky97 lovej časti, fenylskupinu alebo heterocyklickú skupinu, zvolenú zo súboru zahŕňajúceho pyridylskupinu, furylskupinu, pyrolylskupinu, pyrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, tiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, izoxazolylskupinu, izotiazolylskupinu, pyranylskupinu, pyridinyl, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu, 1,3,5-triazinylskupinu, benzotiazolylskupinu, benzoxazolylskupinu, benzimidazolylskupinu, tiochromanylskupinu a tetrahydrobenzotiazolylskupinu, pričom táto heterocyklická skupina je pripojená prostredníctvom väzby uhlík-dusík; alebo

R⁹ predstavuje alkylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkoxyskupinu s 1 až 8 atómami uhlíka, z ktorých každá je prípadne substituovaná jedným substituentom zvoleným zo súboru zahŕňajúceho cykloalken-l-yl-skupinu s 4 až 7 atómami uhlíka, fenylskupinu, tienylskupinu, pyridylskupinu, furylskupinu, pyrolylskupinu, pyrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, tiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, izoxazolylskupinu, izotiazolylskupinu, pyranylskupinu, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, tiomorfolinylskupinu, 1-oxotiomorfolinylskupinu,

1,1-dioxotiomorfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu, 1,3,5-triazinylskupinu alebo indolylskupinu a každá z hore uvedených alkylskupín s 1 až 6 atómami uhlíka a alkoxyskupín s 1 až 8 atómami uhlíka je prípadne prídavné substituovaná jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, aminoskupinu,

R¹² mono-N- a di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, kyanoskupinu, karboxyskupinu a alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti;

a pričom každý z kruhov v R⁹ je na uhlíku prípadne substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, mono-N- a diΝ,Ν-alkylaminoalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, alkoxyalkylskupinu s l až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupinu, mono-N- a di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, kyánoskupinu, karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, karbamoylskupinu, formylskupinu alebo trifluórmetylskupinu a každý z kruhov v R⁹ je prípadne prídavné substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi. nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka a atóm halogén;

s tou podmienkou, že v žiadnom z heterocyklov v R⁹nie je obsiahnutý kvaternizovaný atóm dusíka;

predstavuje morfolinoskupinu, tiomorfolinoskupinu, 1-oxotiomorfolinoskupinu, 1,1-dioxotiomorfolinoskupinu, tiazolidin-3-ylskupinu, 1-oxotiazolidin3-ylskupinu, 1,l-dioxotiazolidin-3-ylskupinu, pyrolidin-l-ylskupinu, piperidin-1-ylskupinu, piperazin-l-ylskupinu, piperazin-4-ylskupinu, azetidin-l-ylskupinu, 1,2-oxazinan-2-ylskupinu, pyrazolidin-l-ylskupinu, izoxazolidin-2-ylskupinu, ižotiazolidin-2-ylskupinu, 1,2-oxazetidin-2-ylskupinu, oxazolidin-3-ylskupinu, 3,4-dihydroizochinolin-2-ylskupinu, 1,3-dihydroizoindol-2-ylskupinu, 3,4-dihydro-2H-chinol-l-ylskupinu, 2,3dihydrobenzo[1,4]oxazin-4-ylskupinu, 2,3-dihydrobenzo[l,4]tiazin-4-ylskupinu, 3,4-dihydŕo-2Hchinoxalin-l-ylskupinu, 3,4-dihydrobenzo[c][1.2] oxazin-l-ylskupinu, 1,4-dihydrobenzo[d] [1.2] oxazin-3-ylskupinu, 3,4-dihydrobenzo[e][1.2] oxazin-2-ylskupinu, 3H-benzo[d]izoxazol2-ylskupinu, 3H-benzo[c]izoxazol-l-yl alebo azepan-l-ylskupinu;

kde každý kruh v R¹² je prípadne substituovaný jedným, dvoma alebo tromi substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atóm halogénu, alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, alkoxyskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, aminoskupinu, mono-N- a di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, formylskupinu, karboxyskupinu, karbamoylskupinu, mono-Na di-N,N-alkylkarbamoylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, alkoxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka v prvej a 1 až 3 atómami uhlíka v druhej z alkoxylových častí, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v alkoxylovéj časti, benzyloxykarbonylskupinu, alkoxykarbonylalkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 5 atómami uhlíka alkylovej časti alkoxykarbonylaminoskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, karboxyalkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v alkylovej časti, karbamoylalkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v alkylovej časti, mono-N- a di-N,N-alkylkarbamoylalkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, hydro100 xyalkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka, alkoxyalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej a 1 až 4 atómami uhlíka v alkyiovej časti, aminoalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, mono-N- a di-N,N-alkylaminoalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, oxoskupinu, hydroxyiminoskupinu a alkoxyiminoskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, pričom nie viac ako dva substituenty sú zvolené zo súboru zahŕňajúceho oxoskupinu, hydroxyiminoskupinu a alkoxyiminoskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka a oxoskupina, hydroxyiminoskupina alebo alkoxyiminoskupina s 1 až 6 atómami uhlíka je pripojená k nearomatickému atómu uhlíka; a kde každý z kruhov v je prípadne prídavné substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho alkylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka a atóm halogénu;

s tou podmienkou, že keď R⁶ predstavuje alkoxykarbonylskupinu s 1 až 5 atómami uhlíka v alkoxylovej časti alebo benzylη oxykarbonylskupinu, potom R predstavuje skupinu 5-halogén, 5-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo 5-kyano a R⁴ predstavuje (fenyl)(hydroxy)alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkyiovej časti, (fenyl)(alkoxy)alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej a l až 4 atómami uhlíka v alkyiovej časti, hydroxymetylskupinu alebo Ar-alkylskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka v alkyiovej časti, kde Ar predstavuje tien-2- alebo -3-ylskupinu, fur-2- alebo -3-ylskupinu alebo fenylskupinu, pričom uvedený zvyšok Ar je prípadne substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi nezávisle zvolenými zo súboru zahŕňajúceho atómy halogénu; s tým, že keď R⁴ predstavuje benzylskupinu a R^ predstavuje metylskupinu, potom R¹² nepredstavuje 4-hydroxypiperidin-l-ylskupinu, alebo keď R⁴ predstavuje benzylskupinu a R^ predstavuje metylskupinu, potom R nepredstavuje skupinu vzorca C(O)N(CH₃)₂;

101 s tou podmienkou, že keď R³· a R·¹·⁸ a R^ predstavujú atómy vodíka, potom R⁴ nepredstavuje imidazol-4-ylmetylskupinu, 2-fenyletylskupinu alebo 2-hydroxy-2-fenyletylskupinu;

s tou podmienkou, že keď obidva z R⁸ a R⁹ predstavujú n-pentylskupiny, potom žiadna zo skupín R¹ nepredstavuje 5-chlór, 5-bróm, 5-kyano, 5-alkyl s 1 až 5 atómami uhlíka, 5-alkoxy s 1 až 5 atómami uhlíka alebo trifluórmetylskupinu;

s tou podmienkou, že keď R^3-2 predstavuje 3,4-dihydroizochinol-2-ylskupinu, potom táto 3,4-dihydroizochinol-2-ylskupina nie je substituovaná karboxyalkylskupinou s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti;

s tou podmienkou, že keď R⁸ predstavuje atóm vodíka a R⁹predstavuje alkylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, potom R⁹nie je na atómu uhlíka, ktorý je pripojený k atómu dusíka skupiny NHR⁹, substituovaný karboxyskupinou alebo alkoxykarbonylskupinou s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti; a s tou podmienkou, že keď R⁶ predstavuje karboxyskupinu a každý z R¹, R¹⁰, R^3-1a R⁵ predstavuje atóm vodíka, potom R⁴nepredstavuje benzylskupinu, atóm vodíka, (fenyl)(hydroxy)metylskupinu, metylskupinu, etylskupinu alebo n-propylskupinu;

a ich farmaceutický vhodné soli a proliečivá.

Účinná denná dávka kompozícií na báze farmakologickej kompozície podlá tohto vynálezu, napríklad v prípade kombinácií obsahujúcich inhibítor glykogénfosforylázy podlá vynálezu znižujúcich ischemické poškodenie, leží v rozmedzí od 0,005 do 50 mg/kg, prednostne od 0,01 do 25 mg/kg a najvýhodnejšie od 0,1 do 15 mg/kg.

102

Ako druhú zlúčeninu podlá tohto vynálezu je možné použiť akýkolvek inhibítor glykogén fosforylázy. Pod pojmom inhibítor glykogén fosforylázy sa rozumie akákoivek látka alebo činidlo alebo kombinácia látok a/alebo činidiel znižujúce, spomalujúce alebo eliminujúce enzýmatické pôsobenie glykogén fosforylázy. Podlá súčasných poznatkov enzýmatické pôsobenie glykogén fosforylázy spočíva v degradácii glykogénu katalýzou reverzibilnej reakcie makromolekuly glykogénu a anorganického fosfátu na glukóza-l-fosfát a makromolekulu glykogénu, ktorá je o jeden glukózylový zvyšok kratšia ako pôvodná molekula glykogénu (v smere glykogenolýzy). Túto aktivitu je odborník v tomto odbore schopný lahko stanoviť pri použití štandardných skúšok (napríklad skúšok opísaných ďalej). Rôzne také zlúčeniny sú uvedené v nasledujúcich zverejnených medzinárodných patentových prihláškach: PCT prihláške WO 96/39384 a WO96/39385. Odborníkom v tomto odbore však budú známe tiež iné inhibítory glykogén fosforylázy.

Ako druhú zlúčeninu podlá vynálezu je možné použiť akýkolvek inhibítor sorbitol dehydrogenázy. Také zlúčeniny inhibujú tvorbu sorbitol dehydrogenázy. Túto aktivitu je odborník v tomto odbore schopný lahko stanoviť pri použití štandardných skúšok (napríklad skúšok, aké sú opísané dalej). Odborníkom v tomto odbore budú známe rôzne zlúčeniny vykazujúce hore uvedenú aktivitu (pozri napríklad US patent č. 5 728 704).

Zlúčeniny podlá tohto vynálezu farmakologicky napodobujú kardioprotektívne účinky ischemického prekondiciovania aktiváciou receptorov adenozínu A-3, a sú teda užitočné ako terapeutické alebo profylaktické činidlá na liečenie chorôb, ktoré sú vyvolané alebo ktoré sa zhoršujú ischémiou alebo hypoxiou alebo ischémiou/reperfúziou. Ako príklady takých chorôb je možné uviesť kardiovaskulárne choroby (napríklad artériosklerózu, arytmiu (napríklad

103 ischemickú arytmiu, arytmiu vyvolanú infarktom myokardu, omráčenie myokardu, dysfunkciu myokardu, arytmiu po PTCA alebo trombolýze apod.), angínu pectoris, hypertrofiu srdca, infarkt myokardu, srdcové zlyhanie (napríklad hromadivé srdcové zlyhanie, akútne srdcové zlyhanie, hypertrofiu srdca apod.), restenózu po PTCA, PTCI, šok (napríklad hemoragický šok, endotoxinový šok apod.)), choroby obličiek (napríklad diabetes mellitus, diabetickú nefropatiu, ischemické akútne zlyhanie obličiek apod.), poruchy orgánov spojené s ischémiou alebo ischemickou reperfúziou (napríklad poruchy spojené s ischemickou reperfúziou srdcového svalu, akútne zlyhanie obličiek alebo choroby indukované chirurgickým zákrokom, ako je transplantačná bypass operácia koronárnej artérie (CABG), operácia ciev, transplantácia orgánu, nekardiálna operácia alebo perkutánna transluminálna koronárna angioplastika (PTCA)), cerebrovaskulárne choroby (napríklad ischemickú mŕtvicu, hemoragickú mŕtvicu apod.), cerebroischemické poruchy (napríklad poruchy spojené s mozgovým infarktom, poruchy po mozgovej apoplexii, ako jej následky, alebo mozgový edém. Zlúčeniny podía vynálezu je tiež možné používať na ochranu myokardu počas transplantačných bypass operácií koronárnych artérií (CABG), operácií ciev, alebo perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike (PTCA), PTCI, transplantácie orgánu alebo nekardiálnych operáciách.

Prednostne je zlúčeniny podía tohto vynálezu možné používať ako činidlá na ochranu myokardu pred, v priebehu alebo po transplantačných bypass operáciách koronárnej artérie (CABG), operáciách ciev, perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike (PTCA), transplantáciách orgánov alebo nekardiálnych operáciách.

Prednostne je zlúčeniny podía tohto vynálezu možné používať ako činidlá na ochranu myokardu pri pacientoch, pri ktorých prebieha srdcová (akútne koronárne syndrómy, naprí104 klad infarkt myokardu alebo nestabilná angína) alebo mozgová ischemická príhoda (napríklad mŕtvica).

Prednostne je zlúčeniny podlá tohto vynálezu možné používať ako činidlá na dlhodobú ochranu myokardu pri pacientoch s diagnostikovanou chorobou koronárnych artérií (napríklad absolvovaný infarkt myokardu alebo nestabilná angína) alebo pacientoch ohrozených infarktom myokardu (napríklad pacientoch starších ako 65 rokov a pacientoch vykazujúcich aspoň dva rizikové faktory koronárnej srdcovej choroby).

Zlúčeniny podlá tohoto vynálezu teda znižujú mortalitu.

Užitočnosť zlúčenín podlá vynálezu ako liečivých látok pri liečení chorôb cicavcov (napríklad ľudí), ktoré sú podrobne uvedené hore, ako je napríklad ochrana myokardu počas operácie alebo ochrana myokardu pri pacientoch, pri ktorých prebieha srdcová alebo mozgová ischemická alebo hypoxická príhoda, alebo dlhodobá kardioprotekcia pri pacientoch s diagnostikovanou koronárnou srdcovou chorobou, alebo pacientoch, ktorí sú touto chorobou ohrození, srdcovou dysfunkciou alebo omráčením myokardu je možné demonštrovať ako aktivitu pri obvyklých predklinických skúškach kardioprotekcie [pozri skúšku in vivo vid Klein, H. et al., Circulation 92: 912 až 917 (1995); skúšku na izolovanom srdci viď Scholz, W. et al., Cardiovascular Research 29: 260 až 268 (1995); antiarytmickú skúšku viď Yasutake M. et al., Am.

J. Physiol., 36: H2430-H2440 (1994); NMR skúšku viď Kolke et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 112: 765 až 775 (1996)] a ďalších skúškach in vitro a in vivo, ktoré sú opísané ďalej. Tieto skúšky tiež poskytujú prostriedky, ktorými je možné aktivitu zlúčenín podľa vynálezu porovnať s aktivitami iných známych zlúčenín. Výsledky týchto porovnaní sú uži- ·

c.

i i

í

105 točné pri stanovení úrovní dávok pri cicavcoch, ako ľudí, pri liečení takých chorôb.

Skúška s íudským receptorom adenozínu Al a A3

Látky cDNA íudských receptorov adenozínu Aj a A₃ s plnou dĺžkou subklonované do eukaryontného expresného vektoru pRcCMV (Invitrogen) pochádzajú od The Garvan Inštitúte, Sydney, Austrália. Bunky vaječníkov čínskeho chrčka (CH0-K1) boli získané zo zbierky American Type Tissue Collection (Rockville, MD, USA). Kultivačné médiá DMEM a DMEM/F12 a fetálne telacie sérum boli získané od firmy Gibco-BRL (Grand Island, NY, USA). Agonista receptoru adenozínu A1/A3, N6-(4-amino-3-[¹²⁵I]jódbenzyl)adenozín (¹²⁵i-abä), bol pripravený spoločnosťou New England Nuclear (Boston, MA, USA). Adenozín deamináza (ADA) bola získaná od firmy Boehringer Mannheim (Indianapolis, IN, USA). Inhibítor fosfodiesterázy RO-20-1724 bol získaný od firmy Research Biochemicals International (Matiek, MA, USA).

Expresia íudských receptorov adenozínu Al a A3

Za účelom stabilnej expresnej štúdie receptoru adenozínu Aj a A₃ sa expresné plazmidy (20 μg) transfekujú do buniek CHO-K1 (Aj) alebo buniek HEK 293s (A₃) pestovaných v DMEM/F12 (CHO) alebo DMEM (HEK 293s) s 10% fetálnym teíacím sérom pri použití kalciumfosfátového kitu na transfekciu do cicavčích buniek (5 Prime-3 Prime). Stabilné transfektanty sa získajú selekciou v úplnom médie obsahujúcom 500 μg/ml (CHO) alebo 700 μ5/πι1 (HEK 293s) aktívneho neomycínu (G418) a podrobia sereeningu na expresiu podía väzby [¹²⁵I]-ABA.

106

Príprava receptorovej membrány

Bunky stabilne exprimujúce ludské receptory alebo A₃ sa zhromaždia päťminútovou centrifugáciou pri 300 x g. Supernatant sa odstráni a bunková peleta sa resuspenduje v bunkovom tlmivom roztoku, ktorý obsahuje HEPES (10 mmol/1), síran horečnatý (5 mmol/1), PMSF (0,1 mmol/1), bacitracín (100 μg/ml), leupeptín (10 μg/ml), DNAzu I (100 μ9/ιη1), ADA (2 U/ml) s pH 7,4. Surové bunkové membrány sa získajú opakovaným odsatím injekčnou ihlou 21, zhromaždia desaťminútovou centrifugáciou pri 60 000 x g a skladujú v bunkovom tlmivom roztoku pri -80°C.

Výpočet konštánt väzbovej aktivity zlúčenín

Receptorové membrány sa resuspendujú v inkubačnom tlmivom roztoku, ktorý obsahuje HEPES (10 mmol/1), EDTA (1 mmol/1), síran horečnatý (5 mmol/1) s pH 7,4. Väzbové reakcie (10 až 20 μg membránového proteínu) sa uskutočňujú 1 hodinu pri teplote miestnosti v 250 μΐ inkubačného tlmivého roztoku obsahujúceho 0,lnM ¹²⁵I-ABA (2200 Ci/mmol) so zvyšujúcou sa koncentráciou zlúčeniny (0,lnM až 30μΜ). Reakcia sa zastaví rýchlou filtráciou s ladovo chladným PBS cez filtre zo sklenených vláken (vopred máčané v 0,6% polyetylénimínu) pri použití zberacieho zariadenia pre 96 jamiek Tomtec (Orange, CT, USA). Filtre sa zrátajú v kvapalinovom scintilačnom počítači Wallac Mircobeta (Gaitersberg, MD, USA). Nešpecifická väzba sa stanoví v prítomnosti 5μΜ I-ABA. Inhibičné konštanty zlúčenín (K^) sa vyrátajú tak, že sa väzbové údaje prostredníctvom nelineárnej regresnej analýzy najmenších štvorcov dosadia do rovnice:

Inhibícia (%) = 100/[l+10^C/10^X)^D]

107 kde X = log [koncentrácia liečiva]

C (IC₅₀) = log [koncentrácia liečiva pri 50% inhibícii] a D = HiÍlová smernica

Pri koncentrácii rádioligandu použitej pri danej skúške (10 x < Kp), 1^50 ⁼ Kj·

Stanovenie agonistickej aktivity voči ludskému receptoru adenozínu A3

Aktivita agonistu adenozínu A3 sa stanoví prostredníctvom inhibície izoproterenolom stimulovaných hladín cAMP zlúčeninou. Bunky HEK293s stabilne transfekované ludskými receptormi A3 (hore opísaným spôsobom) sa premyjú fosfátom tlmeným solným roztokom (PBS) (bez Ca/Mg) a oddelia pri použití l,0mM EDTA/PBS. Bunky sa zhromaždia päťminútovou centrifugáciou pri 300 x g a supernatant sa odloží. Bunková peleta sa disperguje a resuspenduje v bunkovom tlmivom roztoku (DMEM/F12 obsahujúcom lOrnM HEPES, 20μΜ RO-20-1724 a 1 U/ml ADA). Po preinkubácii buniek (100 000/jamka) počas 10 minút pri 37’C (1 μΜ izoproterenol, so zvyšujúcimi sa koncentráciami (0,lnM až 300nM) skúšaných zlúčenín alebo bez nich), sa v inkubácii pokračuje dalších 10 minút. Reakcia sa zastaví prídavkom l,0M kyseliny chlorovodíkovej a potom sa vykoná desaťminútová centrifugácia pri 2000 x g. Vzorky supernatantov (10 μΐ) sa oddelia a rádioimunologickým stanovením (New England Nuclear, Boston, MA, USA) sa zistia hladiny cAMP. Bazálna a kontrolná akumulácia cAMP stimulovaného izoproterenolom (pmol/ml/100 000 buniek) je bežne 3 (bazálna) a 80 (kontrolná). Údajmi sa, pri použití nelineárnej regresnej analýzy metódou najmenších štvorcov a rovnice cAMP = 100/[1+(10^C/10^X)^D], kde X = log [koncentrácia liečiva],

C (IC₅₀) = log [koncentrácia liečiva pri 50% inhibícii] a D = Hillova smernica, preloží vyhladená krivka.

108

Ako základnú informáciu je potrebné uviesť, že krátke periódy ischémie myokardu po reperfúzii koronárnych artérií chránia srdce pred následnou závažnou ischémií myokardu (Murry et al., Circulation 74: 1124 až 1136, 1986).

Terapeutické účinky zlúčenín podlá tohto vynálezu pri prevencii poškodenia srdcového tkaniva vyvolaného ischemickým inzultom je možné demonštrovať in vitro podlá Tracey et al., Cardiovasc. Res., 33: 410 až 415, 1997, ako je podrobne opísané dalej. Kardioprotekciu, ktorá indikuje zmenšenie infarktu myokardu, je možné farmakologicky dosiahnuť pri použití agonistov receptoru adenozínu v izolovanom retrográdne perfundovanom králičom srdci, ako in vitro modele ischemického prekondiciovania myokardu (Tracey et al., Cardiovasc. Res., 33: 410 až 415, 1997). In vitro skúška opísaná dalej ukazuje, že skúšaná zlúčenina (tzn. zlúčenina uvedená v patentových nárokoch) tiež môže indukovať kardioprotekciu, tzn. znižovať velkost infarktu myokardu po podaní do izolovaného králičieho srdca. Účinky skúšanej zlúčeniny sa porovnajú s ischemickým prekondiciovaním. Presná metodológie tejto skúšky je opísaná dalej.

Protokol použitý pri nasledujúcich skúškach je opísaný v Tracey et al.l, Cardiovasc. Res., 33: 410 až 415, 1997. Samčeky novozélandského bieleho králika (3 až 4 kg) sa anestetizujú sodnou solou pentobarbitalu (30 mg/kg, i.v.).

Po dosiahnutí hlbokej anestézy (zistené na základe absencie mrkacieho reflexu) sa zviera intubuje a ventiluje 100% kyslíkom pri použití ventilátoru s pozitívnym tlakom. Vykoná sa lavá torakotómia, srdca sa exponuje a okolo prominujúcej vetve lavej koronárnej artérie sa volne umiestni slučka (hodváb 2-0), asi 2/3 vzdialenosti od srdcového hrotu. Srdce sa vyberie z hrudi a rýchlo (<30 s) sa umiestni do Langendorffovho prístroja. Srdca sa retrográdne necirkulačne perfunduje modifikovaným Krebsovým roztokom (118,5 mM chlorid sodný, 4,7mM chlorid draselný, l,2mM síran horečnatý, l,2mM

109 fosforečnan draselný, 24,8mM hydrogenuhličitan sodný, 2,5mM chlorid vápenatý a lOmM glukóza) pri konštantnom tlaku 10664 Pa a teplote 37 °C. Hodnota pH perfuzátu sa aeráciou zmesou 95% O₂/5% CO₂ udržuje na 7,4 až 7,5. Teplota srdca sa úzko reguluje pri použití zahrievaných nádrží pre fyziologické roztoky a vodného plášťa ako okolo perfúznych rúrok, tak srdca. Srdcová frekvencia a tlak v lavom ventrikule sa stanoví pri použití latexového balónu, ktorý sa vloží do lavého ventrikulu a pomocou nehrdzavejúcich rúrok spojí s tlakomerom. Intraventrikulárny balón sa nafúkne tak, aby sa dosiahol systolický tlaku 10 664 až 13 330 Pa a diastolický tlaku < 1333 Pa. Priebežne sa tiež monitoruje srdcový prietok pri použití priamej prietokovej sondy a normalizuje sa na hmotnosť srdca.

Srdca sa 30 minút nechá ekvilibrovať a počas ekvilibrácie musí stabilný tlak v lavom ventrikule vykazovať parametre spadajúce do hore uvedeného rozmedzia. Pokial kedykoľvek pred 30minútovým obdobím miestna ischémia srdcovej frekvencie poklesne pod 180 tepov/min, srdca sa počas zvyšku skúšky stimuluje na frekvenciu asi 200 tepov/min. Ischemické prekondiciovanie sa indukuje tak, že sa na 5 minút úplne preruší perfúzia srdca (globálna ischémia) a potom sa v nej pokračuje počas asi 10 minút. Miestna ischémia sa dosiahne tak, že sa okolo vetve koronárnej artérie upevní slučka. Po 30 minútach miestnej ischémie sa slučka uvolní a srdca sa reperfunduje počas ďalších 120 minút.

Farmakologická kardioprotekcia sa indukuje 5minútovou infúziou skúšanej zlúčeniny vo vopred stanovených koncentráciách, ktorá sa ukončí 10 minút pred 30minútovou miestnou ischémiou. Srdce ošetrené skúšanými zlúčeninami sa ischemickému prekondiciovaniu nepodrobia.

Po 120minútovej reperfúzii sa slučka okolo koronárnej artérie utiahne a srdce sa perfunduje fluorescenčnými

110 časticami síranu zinočnato-kademnatého (1 až ΙΟμΜ) (Duke Scientific Corp., Palo Alto, CA, USA), ktoré farbia celý myokard s výnimkou plochy ohrozenej infarktom (ohrozené oblasti). Srdca sa vyberie z Langendorffovho prístroja, osuší savým materiálom, zabalí do hliníkovej fólie a skladuje cez noc pri -20C. Nasledujúci deň sa nareže na 2mm priečne rezy smerom od hrotu k hornej časti ventrikul. Rezy sa farbia 1% trifenyltetrazóliumchloridom (TTC) vo fosfátom tlmenom soľnom roztoku 20 minút pri 37°C. Pretože TTC reaguje s živým tkanivom (obsahujúcim NAD-dependentné dehydrogenázy), tkanivo sa týmto farbením rozlíši na živé (červená farba) a mŕtve (neofarbené tkanivo postihnuté infarktom). Pre každý rez ľavého ventrikulu sa pri použití vopred kalibrovaného analyzátoru obrazu vyráta plocha infarktu (nefarbená) a ohrozená plocha (bez fluoreskujúcich častíc). Aby sa normalizovalo ischemické poškodenie z hľadiska rozdielov ohrozenej plochy medzi srdcami, údaje sa vyjadria ako pomer plocha infarktu verzus ohrozená plocha (%IA/AAR). Všetky údaje sa vyjadria ako stredná hodnota ± SE a štatisticky sa porovnajú pri použití Mann-Whitneyovho neparametrického testu s Monferroniho korekciou pre viacpočetnú komparáciu. Ráta sa s hladinou významnosti p < 0,05.

Výsledky hore opísanej in vitro skúšky ukazujú, že zlúčeniny podľa tohto vynálezu v porovnaní s kontrolnou skupinou indukujú významnú kardioprotekciu.

Terapeutické účinky zlúčenín podľa vynálezu pri prevencii poškodení srdcového tkaniva vyvolaného ischemickým inzultom je tiež možné demonštrovať: in vivo pri použití postupu opísaného v Liu et al., Circulation, zv. 84: 350 až 356, 1991, ktorý je v konkrétnejšom rozpracovaní opísaný ďalej.

Pri tejto in vivo skúške sa skúma kardioprotekcia dosiahnutá pri použití skúšanej zlúčeniny vzhladom na kon111 trolnú skupinu, ktorej sa podá iba vehikulum (solný roztok). Kardioprotekciu, ktorá sa prejaví ako zmenšenie infarktu myokardu, je možné pri intaktných anestetizovaných králikoch, ako in vivo modele ischemického prekondicionovania myokardu, farmakologicky indukovat intravenóznym podávaním agonistov receptoru adenozínu (Liu et al., Circulation 84: 350 až 356, 1991). Pri tejto in vivo skúške sa skúma, či zlúčeniny môžu farmakologicky indukovat kardioprotekciu, tzn. zmenšiť veľkosť infarktu myokardu, pri parenterálnom podávaní intaktným anestetizovaným králikom. Účinky zlúčenín podlá vynálezu je možné porovnať s ischemickým prekondicionovaním. Metodológia je uvedená ďalej.

Chirurgický výkon

Samčeky novozélandského králika (3 až 4 kg) sa anestetizujú podaním sodnej soli pentobarbitalu vo forme bolu (30 mg/kg i.v.) a ďalej infúzie (100 mg/kg/h, i.v.), ktorou sa udržuje hĺbka anestézy pre chirurgický výkon. Cervikálnym rezom vedeným ventrálnou strednou čarou sa vykoná tracheotómia. Králiky sa ventilujú 100% kyslíkom pri použití ventilátoru s pozitívnym tlakom. Ventilácia sa nastaví tak, aby sa hodnoty pH a PCO₂ udržali vo fyziologickom rozmedzí. Pri použití vyhrievacej podušky sa udržuje stála telesná teplota 38°C. Katétre sa zavedú do lávej jugulárnej vény (podávanie liečiva) a do lávej karotidy (meranie krvného tlaku). Srdce sa exponuje lávou torakotómiou a okolo prominujúcej lávej vetve lávej koronárnej artérie sa asi 2/3 vzdialenosti od srdcového hrotu umiestni slučka (hodváb 00). Utiahnutím slučky sa indukuje ischémia a jej uvoľnenie umožní reperfúziu ischemickej oblasti. Ischémia myokardu sa prejaví ako miestna kyanóza a reperfúzia sa prejaví ako reaktívna hyperémia.

112

Protokol

Skúška sa zaháji potom, čo sú arteriálny tlak a srdcová frekvencia aspoň 120 minút stabilizované. Ischemické prekondicionovanie sa indukuje Sminútovou oklúziou koronárnej artérie a následnou lOminútovou reperfúziou. Farmakologické prekondicionovanie sa indukuje infúziou skúšanej zlúčeniny, napríklad počas 5 minút, s lOminútovou prestávkou pred ďalšou intervenciou. Po ischemickom prekondicionovaní, farmakologickom prekondicionovaní alebo nulovom kondicionovaní (kontrolné vehikulum) sa artéria na 30 minút okluduje a potom reperfunduje počas 2 hodín, čím sa indukuje infarkt myokardu.

Po 2hodinovej reperfúzii sa srdcové orgány rýchlo vyberú, umiestni do Langendorffova prístroja a 1 minútu perfundujú normálnym solným roztokom zahriatym na telesnú teplotu (38°C). Hodváb použitý ako slučka sa pevne utiahne, čím sa vyvolá reoklúzia artérie. Spolu s perfuzátom sa infúziou podá 0,5% suspenzie fluorescenčných častíc síranu zinočnato-kademnatého (1 až 10 gm) (Duke Scientific Corp., Palo Alto, CA, USA), ktoré farbia celý myokard s výnimkou plochy ohrozenej infarktom (nefluoreskujúce ventrikulum). Srdcia sa vyberú z prístroja, osušia savým materiálom, zabalia do hliníkovej fólie a skladujú cez noc pri -20C. Nasledujúci deň sa ventrikuly narežú na 2mm priečne rezy smerom od hrotu k báze. Rezy sa farbia 1% trifenyltetrazóliumchloridom (TTC) vo fosfátom tlmenom solnom roztoku 20 minút pri 38°C. Pretože TTC reaguje s živým tkanivom (obsahujúcim NAD-dependentné dehydrogenázy), toto farbenie rozlíši živé (červená farba) a mŕtve (neofarbené tkanivo postihnuté infarktom) tkanivo. Pre každý rez sa pri použití vopred kalibrovaného analyzátoru obrazu vyráta plocha infarktu (nefarbená) a ohrozená plocha (bez fluoreskujúcich častíc). Aby sa normalizovalo ischemické poškodenie z hladiska rozdielov ohrozenej plochy medzi srdcovými orgánmi,

113 údaje sa vyjadria ako pomer plocha infarktu verzus ohrozená plocha (% IA/% AAR). Všetky údaje sa vyjadria ako stredná hodnota ± SEM a štatisticky sa porovnajú pri použití jednofaktorovej analýzy ANOVA alebo Mann-Whitneyovho neparametrického testu. Ráta sa s hladinou významnosti p < 0,05.

Zlúčeniny pódia tohto vynálezu je možné skúšať na užitočnosť pri znižovaní alebo prevencii ischemického alebo hypoxického poškodenia nesrdcových tkanív, napríklad mozgu alebo pečene, pri použití postupov opísaných vo vedeckej literatúre. Zlúčeniny podía vynálezu sa pri takých skúškach podávajú prednostným spôsobom, pri použití prednostného vehikula a v prednostný čas, pred ischemickou epizódou, počas ischemickej alebo hypoxickej epizódy (obdobie reperfúzie) alebo v priebehu ktoréhokoivek z ďalej uvedených štádií skúšky.

Užitočnosť zlúčenín pódia vynálezu pri znižovaní ischemického alebo hypoxického poškodenia je možné pri cicavcoch demonštrovať napríklad pri použití postupu opísaného v Park et al. (Ann. Neurol. 1988, 24: 543 až 551). Pri tomto postupe sa dospelé samčeky potkana Sprague Dawley anestetizujú 2% halotanom a potom sa ventilujú zmesou oxidu dusného a kyslíka (70 % : 30 %) obsahujúcou 0,5 až 1 % halotanu. Potom sa vykoná tracheotómia. Zdvihový objem ventilátoru sa nastaví tak, aby sa arteriálny tlak oxidu uhličitého udržoval asi na 4 kPa a aby sa zachovalo zodpovedajúce arteriálne okysličenie (PaO₂ > 12 kPa). Telesnú teplotu je možné monitorovať rektálnym teplomerom a normálna telesná teplota zvierat sa v prípade nutnosti udržuje pri použití vonkajšieho zdroja tepla. Zvieratá sa potom podrobia subtemporálnej kranioektómii, ktorou sa pod spusteným mikroskopom exponuje hlavný kmeň iavej strednej mozgovej artérie (MCA). Exponovaná artéria sa okluduje mikrobipolárnou koaguláciou, čím dôjde k vzniku veikých ischemických lézií v mozgovej kôre a bazálnom gangliu. Po 3 hodinách oklúzie

114

MCA sa potkania hlboko anestetizujú 2% halotanom a za účelom infúzneho podania heparinizovaného solného roztoku do lavého ventrikulu sa na nich vykoná torakotómia. Vytekajúca kvapalina sa zhromažďuje pomocou rezu vedeného pravým átriom. Po premytí solným roztokom sa perfúzia uskutočňuje pri použití asi 200 ml roztoku 40% formamidu, ladovej kyseliny octovej a absolútneho metanolu (FAM, v pomere 1:1:8 objemovo). Potom sa zvieratá dekapitujú a hlava sa skladuje vo fixatíve počas 24 hodín. Mozog sa vyberie, oddelí, uloží do parafínového vosku a nareže (asi 100 0,2mm rezov/mozog). Rezy sa farbia hematoxylín-eozínom alebo kombináciou violety Cresyl a modrosti Luxol^^ a podrobia mikroskopickému skúmaniu za účelom identifikácie a kvantifikácie ischemického poškodenia pri použití vopred kalibrovaného analyzátoru obrazu. Objem a plocha ischémie sa vyjadrí v absolútnych jednotkách (mm³ n

a mm ) a ako percentuálny podiel celkovej skúmanej oblasti. Účinok zlúčenín, kompozícií a spôsobov podlá tohto vynálezu pri znižovaní ischemického poškodenia mozgu indukovaného oklúziou MCA sa zaznamená na základe zmenšenia plochy alebo objemu (relatívneho alebo absolútneho) ischemického poškodenia na rezoch z mozgu potkanov z ošetrenej skupiny v porovnaní s rezmi z mozgov potkanov z kontrolnej skupiny, ktorým bolo podané placebo.

Na demonštráciu užitočnosti kompozícií a spôsobov podlá vynálezu pri znížení ischemického poškodenia mozgu je alternatívne možné použiť napríklad postupy opísané v Nakayama et al., Neurology 1988, 38: 1667 až 1673, Memezawa et al., Stroke 1992, 23: 552 až 559, Folbergrova et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 1995, 92: 5057 až 5059 a Gotti et al.,

Brain Res. 1990, 522: 290 až 307.

Užitočnosť kompozícií a spôsobov podlá vynálezu pri znižovaní ischemického poškodenia pečene pri cicavcoch je možné demonštrovať napríklad pri použití postupu opísaného ΐ v Yokoyama et al., Am. J. Physiol. 1990, 258: G564 až G570. !

i

115

Stručne je možné tento postup opísať takto: Dospelé samčeky potkana Sprague Dawley sa nalačno anestetizujú sodnou solou pentobarbitalu (40 mg/kg i.p.). Potom sa zvieratá tracheotomizujú a mechanicky ventilujú vzduchom z miestnosti. Pečeň sa vyberie a uchováva v komore s riadeným prostredím pri konštantnej teplote 37’C. Následne sa pečeň premyje portálnou vénou za konštantného tlaku 147 Pa modifikovaným Krebsovým-Henseleitovým tlmivým roztokom bez hemoglobínu (118mM chlorid sodný, 4,7mM chlorid draselný, 27mM hydrogénuhličitan sodný, 2,5mM chlorid vápenatý, l,2mM síran horečnatý, l,2mM dihydrogenfosforečnan draselný, 0,05mM EDTA a llmM glukóza s prídavkom 300 U heparinu). Hodnota pH perfuzátu sa udržuje na 7,4 tak, že sa tlmivý roztok aeruje zmesou kyslíka a oxidu uhličitého v pomere 95 : 5. Každá pečeň sa premýva jednocestným spôsobom rýchlosťou 20 ml/min počas 30 minút za účelom premytia a ekvilibrácie (preischemické obdobie), potom počas dvojhodinového obdobia celkovej ischémie a počas ďalšieho dvojhodinového obdobia reperfúzie za podmienok aké sú opísané pre preischemické obdobie. Počas preischemického obdobia, bezprostredne po okluzívnom ischemickom období a každých 30 minút dvojhodinového reperfúzneho obdobia sa zhromaždia alikvóty (20 ml) perfuzátu. Vzorky perfuzátu sa skúšajú na prítomnosť hepatocelulárnych enzýmov, napríklad aspartát aminotransferázu (AST), alanín aminotransferázu (ALT) a laktát dehydrogenázu (LDH). Tieto vzorky sa odoberajú, aby kvantitatívne reflektovali stupeň ischemického poškodenia tkaniva pečene počas postupu. Aktivitu AST, ALT a LDH v perfuzáte je možné stanoviť niekolkými postupmi, napríklad reflektometrickým postupom pri použití automatického analyzátoru Kodak Ektachem 500 (pozri Nakano et al., Hepatology 1995, 22: 539 až 545). Účinok kompozícií a spôsobov podlá vynálezu pri znižovaní ischemického poškodenia pečene indukovaného oklúziou sa zaznamenáva na základe zníženia uvolňovania hepatocelulárnych enzýmov bezprostredne po okluzívnom období a/alebo počas postischemického-reperfúzneho obdobia v perfundovanej pečeni pri potkanoch z lie116 čenej skupiny v porovnaní s perfundovanou pečeňou potkanov z kontrolnej skupiny ošetrovanej placebom.

Ďalšie postupy a parametre, ktoré je možné alternatívne využiť na demonštráciu účinku kompozícií a spôsobov podlá vynálezu pri znižovaní ischemického poškodenia pečene je napríklad možné nájsť v Nakano et al., Hepatology 1995, 22; 539 až 545.

Meranie inhibičnej aktivity voči ludskému NHE-1

Metodológia merania aktivity ludského NHE-1 a účinnosti inhibítoru je založená na postupe opísanom v Watson et al., Am. J. Physiol., 24: G229 až G238, 1991, pri ktorom sa mieri obnovenie intracelulárneho pH mediovanej NHE po intracelulárnom okyslení. Postupuje sa takto: fibroblasty stabilne exprimujúce íudský NHE-1 (Counillon, L. et al., Mol. Pharmacol., 44: 1041 až 1045, 1993) sa navzorkujú na 96jamkové platne potiahnuté kolagénom (50 000/jamka) a v rastovom médie (DMEM s vysokou glukózou, 10% fetálne hovädzie sérum,

U/ml penicilín a streptomycín) sa nechajú rásť až do konfluencie. Platne s konfluentným nárastom sa 30 minút inkubujú pri 37’C spolu s fluorescenčnou sondou citlivou na pH BCECF (5μΜ, Molecular Probes, Eugene, OR, USA). Bunky so zavedenou BCECF sa 30 minút inkubujú pri 37°C v kyselinovom zavádzačom médie (70mM chlorid cholxnu, 50mM chlorid amónny, 5mM chlorid draselný, lmM chlorid horečnatý, l,8mM chlorid vápenatý, 5mM glukóza, lOmM HEPES, pH 7,5) a umiestnia do snímacieho zariadenia Fluorescent Imaging Plate Reader (Molecular Devices, CA, USA). Fluorescencia BCECF sa monitoruje pri použití excitačnej vlnovej dĺžky 485 nm a emisnej vlnovej dĺžky 525 nM. Intracelulárne okyslenie sa vyvolá rýchlym nahradením kyselinového zavádzacieho média izolačným médiom (120mM chlorid sodný, 5mM chlorid draselný, lmM chlorid horečnatý, l,8mM chlorid vápenatý, 5mM glukóza, lOmM HEPES, pH 7,5) ± skúšaná zlúčenina. Obnovenie intracelulárneho pH

117 mediovanej NHE sa monitoruje ako následné zvýšenie BCECF fluorescencie v závislosti od času. Účinnost inhibítorov ľudského NHE-1 sa vyráta ako koncentrácia, ktorá znižuje obnovenie intracelulárneho pH s 50 % (IC₅₀). Za týchto podmienok vykazujú referenčné inhibítory NHE, amilorid a NOE-642, IC₅₀ hodnoty pre ľudský NHE-1 50μΜ a 0,5μΜ (v uvedenom poradí).

Skúška inhibičnej účinnosti na aldóza reduktázu

Pri samcoch potkana Sprague-Dawley sa i.v. injekčným podaním streptozocinu v dávke 55 mg/kg v citrátovom tlmivom roztoku s pH 4,5 vyvolá diabetes. Potkania sú kŕmené ad libitum za riadených chovných, teplotných a svetelných podmienok. Po 5 týždňoch diabetes sa potkania anestetizujú predávkovaním pentobarbitalom, tkanivá sa rýchlo odoberú a analyzujú na sorbitol a fruktózu.

Hladiny sorbitolu sa analyzujú postupom opísaným v Donald M. Eades et al., Rapid Analysis of Sorbitol, Galactitol, Mannitol and Myoinositol Mixtures From Biological Sources, Journal of Chromatography, 490, l až 8, 1989.

Fruktóza sa stanoví enzymaticky pri použití modifikovaného postupu opísaného v Ameyama, Methods in Enzymology, 89: 20 až 29, 1982, pričom sa ferokyanid nahradí resazurínom, farbivom, ktoré sa redukuje na vysoko fluorescenčný resorufín. Množstvo resorufínovej fluorescencie je v stechiometrickom pomere k množstvu fruktózy oxidovanej fruktóza dehydrogenázou. Skúšobná zmes obsahuje 0,1 ml neutralizovaného extraktu z nervov, získaného pri použití 6% kyseliny chloristej, v konečnom objeme 1,5 ml. Po 60minútovej inkubácii pri teplote miestnosti v uzatvorenom priestore sa stanoví fluorescencia vzorky pri excitácii 560 nm, emisii 580 nm s 5mm štrbinami vo fluorescenčnom spektrometre Perkin118

Elmer model 650-40. Koncentrácia fruktózy sa vyráta porovnaním so sériou známych fruktózových štandardov.

Meranie aktivity SDH

Tieto skúšky sa uskutočňujú na samcoch potkana Sprague-Dawley s hmotnosťou 350 až 400 g. Pri niektorých potkanoch sa injekciou streptozocinu do chvostovej vény (85 mg/kg) vyvolá diabetes. Po 24 hodinách po injekcii sa štyrom skupinám diabetických potkanov perorálne žalúdočnou sondou podá jediná dávka skúšanej zlúčeniny (0,001 až 100 mg/kg). Po 4 až 6 hodinách po podaní sa zvieratá usmrtia a zhromaždia sa ich krv a sciatické nervy. Tkanivá a bunky sa extrahujú 6% kyselinou chloristou.

Sorbitol v erytrocytoch a nervoch sa mieri modifikovaným postupom opísaným v R. S. Clements et al., Science, 166: 1007 až 1008, 1969. Alikvóty tkanivových extraktov sa pridajú do skúšobného systému s nasledujúcimi koncentráciami reagensov: 0,033M glycín, pH 9,4, 800mM β-nikotínadeníndinukleotid a 4 jednotky/ml sorbitol dehydrogenáza. Po 30minútovej inkubácii pri teplote miestnosti sa pri použití fluorescenčného spektrofotometru s excitáciou pri 366 nm a emisiou pri 452 nm stanoví fluorescencia vzorky. Po odčítaní zodpovedajúcich hodnôt nameraných pri slepom pokuse sa na základe lineárnej regresie sorbitolových štandardov podrobených rovnakému postupu ako tkanivové extrakty, stanoví množstvo sorbitolu v každej vzorke.

Fruktóza sa stanoví enzymaticky pri použití modifikovaného postupu opísaného v Ameyama, Methods in Enzymology, 89: 20 až 25, 1982, pričom sa ferokyanid nahradí resazurínom. Alikvóty tkanivových extraktov sa pridajú do skúšobného systému, ktorý obsahuje (konečné koncentrácie):

1,2M kyselinu citrónovú, pH 4,5, l3mM resazurín, 3,3 jednotiek/ml fruktóza dehydrogenázu a 0,068% Triton X-100.

119

Po 60minútovej inkubácii pri teplote miestnosti sa pri použití fluorescenčného spektrofotometru s excitáciou pri 560 nm a emisiou pri 580 nm stanoví fluorescencia vzorky.

Po odčítaní zodpovedajúcich hodnôt nameraných pri slepom pokuse sa na základe lineárnej regresie fruktózových štandardov podrobených rovnakému postupu ako tkanivové extrakty, stanoví množstvo fruktózy v každej vzorke.

SDH aktivita sa mieri modifikovaným postupom opísaným v U. Gerlach, Methodology of Enzymatic Analyses, ed.

H. U. Bergmeyer, 3, 112 až 117 (1983). Alikvóty séra alebo moča sa pridajú do skúšobného systému, ktorý obsahuje (konečné koncentrácie): O,1M tlmivý roztok obsahujúci fosforečnan draselný, pH 7,4, 5mM NAD, 20mM sorbitol a 0,7 jednotiek/ml sorbitol dehydrogenáza. Po 10 minútovej inkubácii pri teplote miestnosti sa pri 340 nm stanoví priemerná zmena absorbancie vzorky. SDH aktivita sa vyjadrí ako miliOD₃₄₀jednotiek/min (ΟΠ₃₄θ = optická hustota pri 340 nm).

Skúška inhibičnej účinnosti na glykogénfosforylázu

Ďalej opísanými postupmi je možné pripraviť tri rôzne purifikované izoenzýmy glykogén fosforylázy (GP), v ktorých je glykogénfosforyláza v aktivovanom a stave.

V ďalšom opise sú tieto enzýmy označené ako glykogén fosfofyláza a/alebo pod skratkou (GPa), konkrétne glykogén fosforyláza a z iudskej pečene (HLGPa), glykogén fosforyláza a z iudských svalov (HMGPa) a glykogén fosforyláza a z ludského mozgu (HBGPa).

Expresia a fermentácia

HLGP a HMGP cDNA sa exprimujú z plazmidu pKK233-2 (Pharmacia Biotech. Inc. Piscataway, New Jersey, USA) v E. coli kmeň XL-1 Blue (Stratagene Cloning Systems, LaJolla, Kalifornia, USA). Týmto kmeňom sa inokuluje LB médium (ktoré

120 sa skladá z 10 g tryptónu, 5 g kvasinkového extraktu, 5 g chloridu sodného a 1 ml IM hydroxidu sodného, vztiahnuté na 1 liter média) s prísadou 100 mg/liter ampicilínu, 100 mg/liter pyridoxínu a 600 mg/liter chloridu mangánatého. Bunky sa nechajú rásť pri 37°C do optickej denzity OD₅₅₀ = 1,0. Potom sa bunky indukujú lmM izopropyl-l-tio-p-D-galaktozidom (IPTG). Tri hodiny po indukcii sa bunky zoberú centrifugáciou a bunková peleta sa zmrazí pri -70C. V tomto stave sa skladuje až do následnej purifikácie.

HBGP cDNA je možné exprimovať niekoľkými postupmi, napríklad postupom opísaným v Crerar et al., J. Biol. Chem.

270: 13748 až 13756. Postup na expresiu HBGP opísaný v Crerar et al., J. Biol. Chem. 270: 13748 až 13756 je nasledujúci:

HBGP cDNA je možné exprimovať z plazmidu pTACTAC v E. coli kmeň 25A6. Týmto kmeňom sa inokuluje LB médium (ktoré sa skladá z 10 g tryptónu, 5 g kvasinkového extraktu, 5 g chloridu sodného a 1 ml IM hydroxidu sodného, vztiahnuté na 1 liter média) s prísadou 50 mg/liter ampicilínu. Bunky sa nechajú rásť cez noc a potom resuspendujú v čerstvom LB médie s prísadou 50 mg/liter ampicilínu. Bunkovou suspenziou sa zaočkuje 40násobný objem média LB/amp s obsahom 250μΜ izopropyl-l-tio-p-D-galaktozidu (IPTG), 0,5mM pyridoxínu a 3mM chloridu horečnatého. Bunky sa 48 až 50 hodín nechajú rásť pri 22°C a potom je možné ich zobrať centrifugáciou. Bunková peleta sa zmrazí pri -70°C a v tomto stave skladuje až do purifikácie.

HLGP cDNA sa exprimuje z plazmidu pBlue Bac III (Invitrogen Corp., San Diego, CA, USA), ktorý je kotransfekovaný lineárnou vírusovou DNA BaculoGold (Pharmingen, San Diego, CA, USA) do buniek Sf9. Rekombinantný vírus sa potom purifikuje cez plaky. Bunky Sf9 pestované v médie bez séra sa za účelom produkcie proteínu infikujú pri multiplicite infekcie (moi) 0,5 a denzite buniek 2 x 10⁶ buniek/ml. Po 72 hodinovom raste pri 27°C sa bunky centrifugujú, bunkové

121 pelety sa zmrazia na -70°C a pri tejto teplote skladujú až do purifikácie.

Purifikácia glykogén fosforylázy exprimovanej v E. coli

Bunky E. coli z peliet opísaných hore sa resuspendujú v 25mM β-glycerofosfáte (pH 7,0) s prísadou DTT (0,2mM), chloridu horečnatého (lmM) a nasledujúcich inhibítorov proteázy:

pepstatín A	0,7 μg/ml
leupeptín	0,5 μg/ml
fenylmetylsulfonylfluorid
(PMSF)	0,2mM :
EDTA	0,5mM

Vykoná sa lýza buniek predbežným spracovaním 200 μg/ml lysozymu a 3 μg/ml DNAzy s následným spracovaním ultrazvukom na lade (vždy 5 x 1,5 minúty pri použití 250ml várky) v ultra-. zvukovom zariadení na rozbíjanie buniek Branson Model 450 (Branson Sonic Power Co., Danbury, CT, USA). Lyzáty buniek E. coli sa vyčíria centrifugáciou pri 35 000 x g počas 1 hodiny a potom sa prefiltrujú cez filtre s priemerom otvorov 0,45 μη. GP v rozpustnej frakcii lyzátu (odhadom ide o množstvo pod 1 % celkového proteínu) sa purifikuje monitorovaním enzymatickej aktivity (ako je to opísané v časti Skúšanie aktivity GPa, uvedenej ďalej), vo vzorkách získaných sériou chromatografických stupňov, ktorá je podrobne opísaná ďalej.

Imobilizovaná kovová afinitná chromatografia (IMAC)

Tento stupeň je založený na metóde Luonga et al. (Luong et al., Journal of Chromatography (1992) 584, 77 až 84). 500 ml prefiltrovanej rozpustnej frakcie bunkového lyzátu (pripravenej asi z 160 g až 250 g pôvodnej bunkovej pelety) sa nanesie na 130ml stĺpec IMAC Chelating-Sepharose

122 (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, New Jersey, USA), ktorý bol predbežne upravený ekvilibračným tlmivým roztokom s pH 7 s obsahom chloridu meďnatého (50mM), β-glycerofosfátu (25mM), chloridu sodného (250mM) a imidazolu (lmM). Stĺpec sa premýva ekvilibračným tlmivým roztokom tak dlho, kým sa hodnota A280 nevráti na základnú líniu. Potom sa vzorka eluuje zo stĺpca rovnakým tlmivým roztokom, ktorý však obsahuje imidazol v lOOmM koncentrácii, aby sa odstránil viazaný GP a iné viazané proteiny. Frakcia obsahujúca aktivitu GP sa zhromaždí (približne 600 ml) a pridá sa k nej etyléndiamíntetraoctová kyselina (EDTA) do 0,3mM koncentrácie, DL-ditiotreitol (DTT) do 0,2mM koncentrácie, fenylmetylsulfonylfluorid (PMSF) do 0,2mM koncentrácie, leupeptín do 0,5 μg/ml a pepstatín A do 0,7 μg/ml. Spojená GP frakcie sa odsolia na stĺpci Sephadex G-25 (Sigma Chemical Company, St.Louis, Missouri, USA) ekvilibrovanom tlmivým roztokom A (tlmivý roztok A: 25mM Tris-HCl (pH 7,3), 3mM DTT), aby sa odstránil imidazol. Takto spracovaná frakcia sa až do uskutočnenia druhého chromatografického stupňa skladuje na íade.

Chromatografia na 5’-AMP-Sepharose

Odsolená zhromaždená vzorka GP (približne 600 ml) sa potom zmieša so 70 ml 5'-AMP Sepharose (Pharmacia LKB Bio technology, Piscataway, New Jersey, USA), ktorá bola ekvilibrovaná s tlmivým roztokom A (pozri hore). Zmes sa 1 hodinu jemne mieša pri 22°C a potom sa uloží do kolóny. Kolóna sa premýva tlmivým roztokom A tak dlho, kým sa hodnota A280 nevráti na základnú líniu. GP a iné proteiny sa zo stĺpca eluujú tlmivým roztokom B (tlmivý roztok B: 25mM Tris-HCl,

0,2mM DTT a lOmM adenozín-5 '-monofosfát (AMP), pH 7,3). Frakcie obsahujúce GP sa spoja po ich identifikácii stanovením aktivity enzýmu (pozri dalej) a vizualizuje sa M, približne 97kDa GP proteínový pás elektroforézou na polyakrylamidovom géli s nátriumdodecylsulfátom (SDS-PAGE) a následným ofarbením striebrom (2D-silver Stain II Daiichi

123

Kit, Daiichi Pure Chemicals Company, Ltd., Tokyo, Japonsko) a GP sa zhromaždí. Zhromaždený GP sa dialyzuje do tlmivého roztoku C (tlmivý roztok C: 25mM β-glycerofosfát, 0,2mM DTT, 0,3mM EDTA, 200mM chlorid sodný, pH 7,0) a potom skladuje na ľade až do nasledujúceho použitia.

Pred použitím sa GP enzým premení z neaktívnej formy exprimovanej v E. coli kmeň XL-1 Blue (označenej GPb) (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, Kalifornia, USA) na aktívnu formu (označenú GPa) postupom opísaným v časti (A) aktivácie GP, ktorá je uvedená ďalej.

Purifikácia glykogén fosforylázy exprimovanej v bunkách Sf9

Bunky Sf9 z peiiet opísaných hore sa resuspendujú v 25mM β-glycerofosfátu (pH 7,0) s prísadou DTT (0,2mM), chloridu horečnatého (lmM) a nasledujúcich inhibítorov proteázy:

pepstatín A	0,7 μg/ml
leupeptín	0,5 μg/ml
fenylmetylsulfonylfluorid
(PMSF) -	0,2mM
EDTA	0,5mM

Vykoná sa lýza buniek predbežným spracovaním pri použití 3 μg/ml DNAzy s následným spracovaním ultrazvukom (3x1 min na ľade) po dávkach pri použití ultrazvukového zariadenia na rozbíjanie buniek Branson Model 450 (Branson Sonic Power Co., Danbury, CT, USA). Lyzáty buniek Sf9 sa vyčíria centrifugáciou pri 35 000 x g počas 1 hodiny a potom sa prefiltrujú cez filtre s priemerom otvorov 0,45 μπι. GP v rozpustnej frakcii lyzátu (odhadom ide o množstvo 1,5 % celkového proteínu) sa purifikuje monitorovaním enzymatickej aktivity (ako je to opísané v časti Skúšanie aktivity GPa uvedenej

124 ďalej) vo vzorkách získaných sériou chromatografických stupňov, ktorá je podrobne opísaná ďalej.

Imobilizovaná kovová afinitná chromatografia (IMAC)

Imobilizovaná kovová afinitná chromatografia sa vykonáva spôsobom opísaným hore. Zhromaždená odsolená GP sa až do ďalšieho spracovania skladuje na lade.

Aktivácia GP:

Pred ďalšou chromatografiou sa frakcia inaktívneho enzýmu premení z inaktívnej formy, v ktorej je exprimovaný bunkami Sf9 (táto forma sa označuje skratkou GPb) na aktívnu formu (táto forma sa označuje skratkou GPa) postupom opísaným ďalej v časti (A) nazvanej Aktivácia GP.

Chromatografia na anexe

Aktivácia IMAC purifikovanej GPb na GPa sa vykonáva reakciou s imobilizovanou fosfofyláza kinázou. Zhromaždené frakcie GPa sa dialyzujú proti 25mM Tris HCl, pH 7,5, s obsahom 0,5mM DTT, 0,2mM EDTA, l,OmM fenylmetylsulfonylfluoridu (PMSF), 1,0 ^g/ml leupeptínu a 1,0 μg/ml pepstatínu A. Vzorka sa umiestni na stĺpec pre anexovú chromatografiu MonoQ (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey, USA). Stĺpec sa potom premýva ekvilibračným tlmivým roztokom, kým sa A₂gQ nevráti na základnú líniu. Vzorka sa zo stĺpca eluuje lineárnym gradientom 0 až 0,25M chloridu sodného, aby sa odstránila GP a ďalšie naviazané proteíny. Frakcie obsahujúce GP sa eluujú pri koncentračnom rozmedzí chloridu sodného 0,1 až 0,2M, ako sa stanoví monitorovaním eluantu na pik absorbancie proteínu pri A₂₈₀. GP proteín sa identifikuje vizualizáciou Mr približne 97kDa GP proteínového pásu elektroforézou na polyakrylamidovom géli s nátriumdodecylsulfátom (SDS-PAGE) a následným ofarbením striebrom (2D-Silver

125

Stain II Daiichi Kit, Daiichi Pure Chemicals Company,

Ltd., Tokyo, Japonsko) a potom zhromaždí. Shromaždená GP sa dialýzuje do tlmivého roztoku (tlmivý roztok: 25mM N,N-bis[2-hydroxyetylJ-2-aminoetánsulfónová kyselina,

Ι,ΟπιΜ DTT, 0,5mM EDTA, 5mM chlorid sodný, pH 6,8) a potom skladuje na lade až do nasledujúceho použitia.

Stanovenie enzymatickej aktivity GP

A) Aktivácia GP: Konverzia GPb na GPa

Pred stanovením enzymatickej aktivity GP sa enzým premení z inaktívnej formy, v ktorej je exprimovaný E. coli kmeň XL-1 (táto forma sa označuje skratkou GPb) (Stratagene Cloning Systems, LaJolla, Kalifornia, USA) na aktívnu formu (táto forma sa označuje skratkou GPa) fosforyláciou GP pri použití fosfofyláza kinázy postupom opísaným ďalej. Frakcia inaktívneho enzýmu, ako je exprimovaný v bunkách Sf9 (táto forma sa označuje skratkou GPb) sa rovnako premení na aktívnu formu (ktorá sa označuje skratkou GPa) pri použití nasledujúceho postupu.

Reakcia GP s imobilizovanou fosfofyláza kinázou

Fosfofyláza kináza (Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, USA) sa imobilizuje na afinitnom géli Affi-Gel 10 (BioRad Corp. Melvile, New York, USA) podlá inštrukcií výrobca. V krátkosti je možné použitý postup opísať takto: Enzým fosfofyláza kináza (10 mg) sa inkubuje s premytými perlami Affi-Gelu (1 ml) v 2,5 ml lOOmM HEPES a 80mM chloridu vápenatého s pH 7,4 4 hodiny pri 4°C. Potom sa perly Affi-Gelu raz premyjú rovnakým tlmivým roztokom, potom nasleduje blokovanie jednohodinovým pôsobením 50mM HEPES a IM metylesteru glycínu s pH 8,0 pri teplote miestnosti. Blokovací tlmivý roztok sa odstráni a nahradí sa 50mM HEPES (pH 7,4), lmM β-merkaptoetanolom a 0,2% azidom

126 sodným na skladovanie. Pred použitím na konverziu GPb na GPa sa fosfofyláza kináza imobilizovaná na perlách Affi-Gelu ekvilibruje premývaním tlmivým roztokom použitým na uskutočnenie reakcie s kinázou, ktorý sa skladá z β-glycerofosfátu (25mM), DTT (0,3mM) a EDTA (0,3mM) a má pH 7,8 (tlmivý roztok na stanovenie kinázy).

Sčasti purifikovaný inaktívny GPb získaný pri hore uvedenej chromatografii na 5’-AMP-Sepharose (z E. coli) alebo zmes GPa a GPb získaná chromatografiou IMAC (z buniek Sf9) sa zriedi v pomere 1 : 10 tlmivým roztokom na stanovenie kinázy a potom zmieša s hore opísaným enzýmom fosfofyláza kinázou, ktorý je imobilizovaný na perlách Affi-Gelu. K zmesi sa pridá NaATP (do 5mM koncentrácie) a chlorid horečnatý (do 6mM koncentrácie). Vzniknutá zmes sa 30 až 60 minút jemne mieša pri 25°C. Vzorka sa oddelí od periel a stanoví sa aktivácia (v %) spočívajúca v konverzii GPb na GPa. Stupeň aktivácie sa odhaduje na základe stanovenia aktivity enzýmu GP v prítomnosti a neprítomnosti 3,3mM AMP. Percentuálna aktivita celkového GP, tzn. aktivita enzýmu GPa (aktivita nezávislá od AMP) sa potom vyráta pomocou nasledujúceho vzorca:

Aktivita HLGP - AMP Podiel HLGPa (%) = Aktivita HLGP + AMP

Alternatívne je konverziu GPb na GPa možné monitorovať izoelektrickou fokusáciou na základe posunu v elektroforetickej mobilite, ktorá je zaznamenaná po konverzii GPb na GPa. Vzorky GP sa analyzujú izoelektrickou fokusáciou (IEF) pri použití Pharmacia PfastGel System (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey, USA) pri použití predliatych gélov (pl v rozmedzí 4 až 6,5) a podlá pokynov výrobca. Pásy rozdelené GPa a GPb sa vizualizujú na géli následným ofarbením striebrom (2D-silver Stain II Daiichi

127 Kit, Ďaiichi Pure Chemicals Company, Ltd., Tokyo, Japonsko). GPa a GPb sa identifikujú porovnaním so štandardami GPa a GPb z E. coli, ktoré sa získajú paralelne na rovnakých géloch, ako pri experimentálnych vzorkách.

B) Stanovenie aktivity GPa

Kuratívnu a profylatickú účinnosť proti uvedeným chorobám alebo chorobným stavom je pri zlúčeninách podlá vynálezu možné nepriamo stanoviť zistením účinku zlúčenín podlá vynálezu na aktivitu aktivovanej formy glykogén fosforylázy (GPa) pri použití niektorej z dvoch dalej uvedených metód. Buď sa aktivita glykogén fosforylázy mieri pri reakcii prebiehajúcej v smere tvorby glukóza-l-fosfátu z glykogénu (stepná reakcia) na základe sledovania obsahu glukóza-l-fosfátu alebo sa mieri pri reverznej reakcii (syntetická reakcia), pri ktorej sa syntetizuje glykogén z glukóza-l-fosfátu, na základe sledovania uvolňovania anorganického fosfátu. Všetky reakcie sa uskutočňujú s tromi replikáciami v 96-jamkových mikrotitrových miskách a mieri sa zmena absorbancie vplyvom tvorby reakčného produktu pri vlnovej dĺžke uvedenej dalej pri použití čítacieho zariadenia MCC/340 MKII Elisa Reader (Lab Systems, Fínsko) pripojeného k zariadeniu Titertech Microplate Stacker (ICN Biomedical Co., Huntsville, Alabama, USA).

Pri meraní aktivity enzýmu GPa pri reakcii prebiehajúcej v smere štiepenia sa sleduje tvorba glukóza-l-fosfátu z glykogénu multienzýmovým spojeným všeobecným postupom, ktorý opísali Pesce et al. (Pesce M. A., Bodourian S. H., Harris R. C. a Nicholson J. F. (1977) Clinical Chemístry 23, 1711 až 1717), ktorý je modifikovaný takto: 1 až 100 μ9 GPa, 10 jednotiek fosfoglukomutázy a 15 jednotiek glukóza-6-fosfát dehydrogenázy (Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, IN, USA) sa zriedi na 1 ml tlmivým roztokom A (tlmivý roztok A: pH 7,2, 50mM HEPES, lOOmM chlorid dra128 selný, 2,5mM etylénglykoltetraoctová kyselina (EGTA), 2,5mM chlorid horečnatý, 3,5mM dihydrogenfosforečnan draselný a 0,5mM ditiotreitol). 20 μΐ rezervnej vzorky sa pridá k 80 μΐ tlmivému roztoku A s obsahom 0,47 mg/ml glykogénu, 9,4mM glukózou a 0,63mM oxidovanou formou nikotínamidadeníndinukleotid fosfátu (NADP⁺). Skúšaná zlúčenina sa pridá vždy v podobe 5 μΐ roztoku v 14% dimetylsulfoxidu pred pridaním enzýmu. Základná hodnota aktivity enzýmu HLGPa v neprítomnosti inhibítorov sa stanoví pri použití prídavku 5 μΐ 14% dimetylsulfoxidu a úplne inhibovaná hodnota aktivity enzýmu GPa sa stanoví pri použití prídavku 20 μΐ 50mM roztoku pozitívnej kontrolnej skúšobnej látky, kofeínu. Reakcia sa sleduje pri teplote miestnosti meraním konverzie oxidovaného NADP⁺ na redukovaný NADPH pri 340 nm.

Pri meraní aktivity enzýmu GPa pri reverznej reakcii (tzn. syntetickej reakcii), pri ktorej z glukóza-l-fosfátu vzniká glykogén a anorganický fosfát, sa používa všeobecný spôsob, ktorý opísali Engers et al. (Engers H. D., Shechosky, S. a Madsen N. B. (1970) Can. J. Biochem. 48, 746 až 754), ktorý je modifikovaný takto: 1 až 100 μg GPa sa zriedi na 1 ml tlmivým roztokom B (tlmivý roztok B: pH 7,2, 50mM HEPES, lOOmM chlorid draselný, 2,5mM etylénglykoltetraoctová kyselina (EGTA), 2,5mM chlorid horečnatý a 0,5mM ditiotreitol).

μΐ rezervnej vzorky sa pridá k 80 μΐ tlmivého roztoku B s obsahom 1,25 mg/ml glykogénu, 9,4mM glukózou a 0,63mM glukóza-l-fosfátom. Skúšaná zlúčenina sa pridá vždy v podobe 5 μΐ roztoku v 14% dimetylsulfoxidu pred pridaním enzýmu. Základná hodnota aktivity enzýmu GPa v neprítomnosti pridaných inhibítorov sa stanoví pri použití prídavku 5 μΐ 14% dimetylsulfoxidu a hodnota úplnej inhibicie aktivity enzýmu GPa sa stanoví pri použití prídavku 20 μΐ 50mM roztoku kofeínu. Zmes sa inkubuje 1 hodinu pri teplote miestnosti a anorganický fosfát uvolnený z glukóza-l-fosfátu sa mieri všeobecným postupom, ktorý opísali Lanzetta et al. (Lanzetta P. A., Alvarez L. J., Reinach P. S. a Candia 0. A.

129 (1979) Anál. Biochem. 100, 95 až 97), ktorý je modifikovaný takto: k 100 μΐ zmesi obsahujúcej enzým sa pridá 150 μΐ roztoku molybdénanu amónneho s koncentráciou 10 mg/ml a malachitová zeleň (0,38 mg/ml) v IM kyseline chlorovodíkovej. Vzniknutá zmes sa 20 minút inkubuje pri teplote miestnosti a mieri sa absorbancia pri 620 nm.

Hore uvedené skúšky vykonávané v rozmedzí koncentrácií skúšaných zlúčenín umožňujú stanovit hodnotu IC₅₀(koncentráciu skúšanej zlúčeniny potrebnú na 50% inhibíciu) na in vitro inhibíciu aktivity enzýmu GPa týmito skúšanými zlúčeninami.

Zlúčeniny podlá vynálezu sa môžu podávať akoukolvek metódou, pomocou ktorej je možné ich dodať prednostne do požadovaného tkaniva, (napríklad do tkanív pečene a/alebo srdca) Tieto metódy zahŕňajú perorálnu, parenterálnu, intraduodenálnu cestu apod. Zlúčeniny podlá vynálezu sa zvyčajne podávajú v jedinej dávke, napríklad raz denne, alebo v niekolkých dávkach, alebo konštantnou infúziou.

Zlúčeniny podlá vynálezu sú užitočné pri znižovaní alebo minimalizácii priameho poškodenia všetkých tkanív, ktoré môžu byt suspceptibilné k ischemickému/reperfúznemu poškodeniu alebo poškodeniu vyvolanému hypoxiou (napríklad srdce, mozog, plúca, obličky, pečeň, črevá, kostrové svalstvo a retina) následkom ischemickej alebo hypoxickej príhody (napríklad infarktu myokardu). Účinné zlúčeniny podlá vynálezu sa teda s výhodou využívajú profylaktický za účelom zabránenia, tzn. (prospektívneho alebo profylaktického) zmiernenia alebo zastavenia poškodenia tkanív (napríklad tkaniva myokardu) pri pacientoch, ktorí sú ohrození ischémiou alebo hypoxiou (napríklad ischémiou myokardu).Zlúčeniny podlá vynálezu sa zvyčajne podávajú perorálne alebo parenterálne (napríklad intravenózne, intramu130 skulárne, subkutánne alebo intramedulárne podávanie). Tiež môže byť indikované topické podávanie, napríklad kečf pacient trpí gastrointestinálnymi poruchami alebo ked lekár dôjde k záveru, že najvhodnejší spôsob aplikácie liečiva je na povrch tkaniva alebo orgánu.

Množstvo a čas podávania zlúčenín budú samozrejme závislé od liečeného subjektu, od závažnosti postihnutia, spôsobu podávania a úsudku ošetrujúceho lekára. S ohladom na značnú variabilitu pacientov je potrebné považovať ďalej uvedené dávkovanie iba za vodidlo, pričom lekár môže dávku liečiva upraviť tak, aby dosiahol účinnosť, ktorú považuje pre pacienta za vhodnú. Pri úvahách o požadovanom stupni účinku, ktorý sa má dosiahnuť, musí lekár zvážiť najrôznejšie faktory, ako je vek pacienta, skôr absolvované choroby, ako tiež prítomnosť ďalších chorôb (napríklad kardiovaskulárne choroby).

Tak napríklad pri jednom režime podávania je kombináciu podía vynálezu možné podať tesne pred operáciou (napríklad počas 24 hodín pred operáciou, napríklad operáciou srdca), keď dochádza k ohrozeniu ischémiou, napríklad ischémiou myokardu. Pri alternatívnom režime je zlúčeniny možné podať v úvodnej zavádzačej dávke (napríklad injekcie alebo infúzie bolu), po ktorej nasleduje konštantná infúzie, a to pred operáciou, počas operácie alebo po nej. Zlúčeniny podía vynálezu je možné rovnako podávať v dennom dlhodobom režime.

Zlúčeniny podía tohto vynálezu sa používajú v množstve, ktoré je účinné na ochranu pred ischémiou alebo hypoxiou. Prednostná denná dávka zlúčeniny podía tohto vynálezu leží v rozmedzí od asi 0,001 do asi 100 mg/kg, výhodnejšie od asi 0,01 do asi 50 mg/kg.

131

Zlúčeniny podlá vynálezu sa zvyčajne podávajú v podobe farmaceutických kompozícií obsahujúcich prinajmenšom jednu zlúčeninu podlá vynálezu a dalej tiež farmaceutický vhodné vehikulum alebo riedidlo. Zlúčeniny podlá vynálezu je teda možné podávať jednotlivo alebo spoločne v akýchkolvek vhodných perorálnych, parenterálnych (tzn. intravenóznych alebo intramuskulárnych), rektálnych alebo transdermáIných dávkovacích formách.

V prípade perorálneho podávania sa môžu používať farmaceutické kompozície v podobe roztokov, suspenzií, tabliet, pilúl, toboliek, práškov apod. Tablety obsahujúce rôzne excipienty, ako je citrát sodný, uhličitan vápenatý a fosforečnan vápenatý, sa používajú spolu s rôznymi rozvolňovacími látkami, ako je škrob, prednostne zemiakový alebo tapiokový škrob a určité komplexné silikáty a rôznymi spojivami, ako je polyvinylpyrolidón, sacharóza, želatína a živica. Na tabletovacie účely sa dalej tiež hodia lubrikanty, ako je stearan horečnatý, nátriumlaurylsulfát a mastenec. Podobné kompozície sa tiež môžu používať ako náplne pre mäkké a tvrdé želatínové tobolky. Prednostné kompozície tohto typu obsahujú tiež laktózu a vysokomolekulárne polyetylénglykoly. Ked sa majú na perorálne podávanie použiť vodné suspenzie a/alebo elixíry, môžu sa zlúčeniny podlá vynálezu miešať s rôznymi sladidlami, látkami zlepšujúcimi chuť, farbiacimi činidlami, emulgátormi a/alebo suspenznými činidlami, ako tiež inými riedidlami, ako je voda, etanol, propylénglykol, glycerol a ich rôzne kombinácie.

Na účely parenterálneho podávania sa môžu použiť roztoky v sezamovom alebo arašidovom oleji alebo vo vodnom propylénglykole, ako tiež sterilných vodných roztokov zodpovedajúcich vodorozpustných solí. Také vodné roztoky môžu byť účelne tlmené a kvapalné riedidlo je vopred izotonizované dostatočným množstvom roztoku chloridu sodného alebo glukózy. Také vodné roztoky sa osobitne hodia na intrave132 nózne, intramuskulárne, subkutánne a intraperitoneálne injekčné podávanie. Sterilné vodné médiá vhodné na tieto aplikácie je možné lahko vyrobiť štandardnými technológiami, ktoré sú dobre známe odborníkom v tomto odbore.

Na účely transdermálneho (napríklad topického) podávania sa môžu použiť zriedené sterilné vodné alebo sčasti vodné roztoky (zvyčajne s približnou koncentráciou 0,1 až 5 % hmotnostných). Inak sú tieto roztoky podobné hore uvedeným parenterálnym roztokom.

Spôsoby výroby rôznych farmaceutických kompozícií s určeným množstvom účinnej prísady sú známe alebo sú zrejmé odborníkom v tomto odbore na základe tohto opisu. Ako vhodné vodidlo je možné použiť štandardnú farmaceutickú príručku, ako je Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, PA, USA, 15. vydanie, z roku 1975).

Farmaceutické kompozície podlá vynálezu môžu obsahovať napríklad 0,0001 až 95 % zlúčeniny alebo zlúčenín podlá vynálezu. V každom prípade je vhodné zaistiť, aby podávaný prostriedok obsahoval zlúčeninu alebo zlúčeniny podlá vynálezu v množstve, ktoré je účinné na liečenie choroby stavu liečeného subjektu.

Predmetom vynálezu sú tiež kity na použitie spotrebitelom, ktorý trpí alebo je ohrozený chorobou alebo stavom vyvolaným napríklad ischémiou alebo hypoxiou, ktorý je možné liečiť agonistom A₃. Súčasťou takého kitu sú vhodné dávkovacie formy, ako je roztok na parenterálne injekcie osobitne prispôsobený na intravenózne alebo intramuskulárne injekčné podávanie a inštrukcie, v ktorých je opísaný spôsob, akým má spotrebitel takú dávkovaciu formu použiť za účelom zníženia rizika poškodenia tkaniva. Inštrukcie by spotrebitelovi alebo zdravotníckemu personálu mali poskytnúť pokyny na podanie parenterálneho roztoku v súlade so spô133 sobmi podávania, ktoré sú známe odborníkom v tomto odbore. Kity môžu s výhodou byť balené a predávané vo forme jednotiek na jednorázové alebo niekolkonásobné podávanie.

Dve rôzne zlúčeniny podlá vynálezu je možné podávat súčasne alebo postupne v akomkolvek poradí, alebo je možné podávať jedinú farmaceutickú kompozíciu, ktorá obsahuje hore opísanú zlúčeninu všeobecného vzorca I a hore opísaný inhibítor aldóza reduktázy alebo hore opísaný inhibítor glykogén fosforylázy alebo inhibítor sorbitol dehydrogenázy alebo kardiovaskulárne činidlo.

Pretože vynález obsahuje aspekt, ktorý sa týka napríklad liečenia chorôb/stavov uvedených v tomto texte pri použití kombinácie účinných zložiek, ktoré môžu byť podávané oddelene, je predmetom vynálezu tiež kombinácia oddelených farmaceutických kompozícií vo forme kitu. Kit zahŕňa dve oddelené farmaceutické kompozície: na báze zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo soli takej zlúčeniny alebo proliečiva a hore opísanej druhej zlúčeniny. Súčasťou kitu je obalový prostriedok pre oddelené kompozície, ako kontejner, rozdelenú flaštičku alebo rozdelené fóliové balenie. Kit zvyčajne obsahuje pokyny pre podávanie oddelených zložiek. Forma kitu je osobitne výhodná, keď sa oddelené zložky prednostne podávajú v rôznych dávkovacích formách (napríklad perorálne a parenterálne), s rôznymi intervalmi podávania alebo keď predpisujúci lekár vyžaduje odmerovanie jednotlivých zložiek kombinácie.

Ako príklad takého kitu je možné uviesť tzv. blistrové (pretlačovacie) balenia. V obalovom priemysle sú blistre dobre známe a vo velkom meradle sa používajú na balenia farmaceutických jednotkových dávkovacích foriem (tabliet, toboliek apod.). Blistre sa zvyčajne skladajú z listu relatívne tuhého materiálu potiahnutého fóliou prednostne z transparentného plastového materiálu. Počas

134 baliaceho procesu sa v plastovej fólii vytvarujú dvorce. Dvorce majú velkost a tvar balených tabliet alebo toboliek. Potom sa do dvorcov umiestnia tablety alebo tobolky a na opačnú stranu (vzhladom na smer v ktorom boli vytvorené dvorce) plastovej fólie sa pripevní list relatívne tuhého materiálu. Výsledkom je, že tablety alebo tobolky sú uzatvorené v dvorcoch medzi plastovou fóliou a listom. Pevnosť listu je prednostne taká, že tablety alebo tobolky je možné z blistru vyberať tak, že sa rukou zatlačí na dvorec, pričom otvor v liste.vznikne v mieste dvorca. Tablety alebo tobolky je možné vyberať hore opísaným postupom.

Do blízkosti tabliet alebo toboliek je vhodné umiestniť pomôcku ulahčujúcu kontrolu odberania dávkových foriem z balenia. Táto pomôcka môže mať podobu čísel, ktoré zodpovedajú dňom režimu, v ktorom majú byť tablety brané. Ako ďalší príklad je možné uviesť kalendár, ako Prvý týždeň, pondelok, utorok ... apod., Druhý týždeň, pondelok, utorok ... apod. Ďalšie varianty takých pomôcok sú celkom zrejmé. Dennú dávku je možné podávať vo forme jedinej tablety alebo tobolky alebo vo forme niekolkých pilúl alebo toboliek, ktoré sa berú v daný deň. Denná dávka prvej zlúčeniny sa môže skladať z jednej tablety alebo tobolky, zatial čo denná dávka druhej zlúčeniny sa môže skladať z niekolkých tabliet alebo toboliek, alebo naopak. Tento prípad by mal byt vzatý do úvahy v pomôckach ulahčujúcich kontrolu odberania dávkových foriem z balenia.

Podlá iného konkrétneho rozpracovania sa používa dávkovač liekov (dispenzér) prispôsobený na dávkovanie denných dávok v určitý čas v zamýšlanom poradí. Dávkovač je prednostne opatrený pomôckou ulahčujúcou odberanie dávkových foriem, pokial to napomáha zvyšovaniu kompliancie s režimom. Ako príklad pomôcky ulahčujúcej kontrolu odberania dávkových foriem je možné uviesť mechanické počítadlo oddelených denných dávok. Iným príkladom takej pomôcky je mikročipová

135 pamäť napájaná z batérie spojená s displejom s tekutými kryštálmi alebo zvukovým upomínacim signálom, ktorý napríklad ukazuje dátum, kedy bola odoberaná posledná dávka a/alebo pripomína, kedy sa má brat ďalšia dávka.

Zlúčeniny podía vynálezu samotné alebo vo vzájomnej kombinácii alebo v kombinácii s inými zlúčeninami sa budú podávať vo forme obvyklých formulácií. Ďalej uvedené príklady formulácií majú len ilustratívny charakter a rozsah vynálezu nijak neobmedzujú.

Pod pojmom účinná zložka sa rozumie zlúčenina alebo zlúčeniny podía vynálezu.

Formulácia 1: Želatínové tobolky

Tvrdé želatínové tobolky sa pripravia pri použití nasledujúcich zložiek:

Zložka	Množstvo	(mg/tobolka)
Účinná zložka	0,	25 až	100
Škrob, NF	0	až	650
Škrobový sypký prášok	0	až	50
Kvapalný silikón
s kinetickou viskozitou 350.10”®	m².s”¹ 0	až	15

Pri použití dalej uvedených zložiek sa pripraví table tová formulácia:

136

Formulácia 2: Tablety

Zložka	Množstvo	(mg/tableta)
Účinná zložka	0,	25 až 100
Mikrokryštalická celulóza	200	až 650
Sublimovaný oxid kremičitý	10	až 650
Kyselina stearová	5	až 15

Zložky sa zmiešajú a vzniknutá zmes sa lisuje na tablety.

Tablety, z ktorých každá obsahuje 0,25 až 100 mg účinných zložiek sa alternatívne pripravia nasledujúcim postupom:

Formulácia 3: Tablety

Zložka

Množstvo (mg/tableta)

Účinná zložka

Škrob

Mikrokryštalická celulóza

Polyvinylpyrolidón (ako 10% roztok vo vode)

Sodná sol karboxymetylcelulózy

Stearan horečnatý

Mastenec

0,25 až 100 45

4,5

0,5

Účinné zložky, škrob a celulóza sa pretlačia sitom s velkosťou ôk 355 μιη a dôkladne premiešajú. Výsledný prášok sa zmieša s roztokom polyvinylpyrolidónu a vzniknutá zmes sa pretlačí cez sito s velkosťou ôk 1400 μιη. Takto pripravené granuly sa vysušia pri 50 až 60°C a pretlačia cez sito s

- 137 velkostou ôk 1000 μπι. Ku granulám sa pridajú sodná sol karboxymetylcelulózy, stearan horečnatý a mastenec, preosiate cez sito s velkostou ôk 250 μπι. Zložky sa premiešajú a na tabletovacom stroji sa lisujú tablety.

Suspenzia obsahujúca 0,25 až 100 mg účinnej zložky na 5ml dávku sa pripraví nasledujúcim spôsobom:

Formulácia 4: Suspenzia

Zložka Množstvo (mg/5 ml)

Účinná zložka	0,25 až 100 mg
Sodná sol karboxymetylcelulózy	50 mg
Sirup	1,25 mg
Roztok benzoovej kyseliny	0,10 ml
Látka upravujúca arómu alebo chut	q. v.
Farbiaca látka	q. v.
Purifikovaná voda	do 5 ml .

Účinná zložka sa pretlačí sitom s velkostou ôk 355 μπι a zmieša so sodnou solou karboxymetylcelulózy a sirupom za vzniku hladkej pasty. Roztok kyseliny benzoovej, látka upravujúca arómu alebo chut a farbiaca látka sa zriedi vodou a za miešania pridajú k paste. K vzniknutej zmesi sa pridá voda v množstve dostatočnom na dosiahnutie požadovaného objemu.

Aerosólový roztok sa pripraví pri použití nasledujúcich zložiek:

138

Formulácia 5: Aerosol

Zložka Množstvo (% hmotn.)

Účinná zložka 0,25

Etanol 25,75

Hnacia látka 22 (chlórdifluórmetán) 70,00

Účinná zložka sa zmieša s etanolom a vzniknutá zmes sa pridá k časti hnacej látky 22, výsledná zmes sa ochladí na 30°C a premiestni sa do plniaceho zariadenia. Nehrdzavejúca nádoba sa naplní požadovaným množstvom a jej obsah sa zriedi zostávajúcou hnacou látkou. Nádoba sa potom opatrí ventilom.

Čapíky sa pripravia nasledujúcim postupom:

Formulácia 6: Čapíky

Zložka Množstvo (mg/čapík)

Účinná zložka 250

Glyceridy nasýtených mastných kyselín 2000

Účinná zložka sa pretlačí sitom s veíkosťou ôk 250 μιη a suspenduje v glyceridoch nasýtených mastných kyselín roztopených pri použití minimálne nezbytného tepla. Zmes sa potom naleje do formy pre čapíky s nominálnou kapacitou 2 g a nechá schladnúť.

Intravenózne formulácie sa pripravia nasledujúcim postupom:

139

Formulácia 7: Intravenózny roztok

Zložka

Množstvo

Účinná zložka 25 až 10 000 mg

Izotonický soľný roztok 1000 ml

Roztok hore uvedených zložiek sa pacientovi podáva intravenózne.

Do rozsahu pojmu účinná zložka tiež spadajú kombinácie činidiel.

Vynález je bližšie objasnený v nasledujúcich príkladoch uskutočnenia. Tieto príklady majú výhradne ilustratívny charakter a rozsah vynálezu v žiadnom ohľade neobmedzujú.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Všeobecné experimentálne postupy

NMR spektrá sa získali na spektrometri VARIAN XL 300 (Varian Co., Palo Alto, Kalifornia, USA), Bruker AM-300 (Bruker Co., Billerica, Massachusetts, USA) alebo Varian Unity 400 pri teplote asi 23’C a frekvencii 300 alebo 400 MHz v prípade protónov. Chemický posun sa vyjadruje ako diely na milión dielov smerom dole od trimetylsilánu. Tvary pikov sú vyjadrené nasledujúcim spôsobom: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet a bs = široký singlet. Rezonancie označené ako zameniteľné sa nevyskytli v separátnom NMR pokuse, keď bola vzorka pretrepaná s niekoľkými kvapkami D₃O v rovnakom rozpúštadle. Hmotnostné spektrá s chemickou ionizáciou za atmosférického tlaku (APCIMS) boli získané pri použití spektrometru Fizons Platform II a hmotnostné spektrá s chemickou ionizáciou (CIMS) sa merajú na prístroji Hewlett-Packard 5989 (Hewlett-Packard Co., Palo

140

Alto, Kalifornia, USA) (amóniová ionizácia, PBMS). Pokiaľ je opisovaná intenzita iónov obsahujúcich chlór alebo bróm, bol pozorovaný očakávaný pomer intenzít (približne 3 : 1 pre ióny s obsahom ³⁵C1/³⁷C1 a 1 : 1 pre ióny s obsahom ⁷⁹Br/^8:LBr) a základom pre M je ³⁵C1 a ⁷⁹Br. V niektorých prípadoch sú v ¹H NMR a APCIMS uvedené iba reprezentatívne piky.

Stĺpcová chromatografia sa vykonáva pri použití silikagélu Baker Silica Gel (40 μπι) (J. T. Baker, Philipsburg, N. J., USA) alebo Silica Gel 60 (EM Sciences, Gibbstown, N.

J. v sklenenej kolóne alebo kolóne Flash 40alebo Flash 12^^r^ (Biotage Charlottesville, VA, USA) pod tlakom dusíka. Radiálna chromatografia sa uskutočňuje pri použití Chromatron (Harrizon Research, Palo Alto, CA, USA). Pokial to nie je uvedené inak, používajú sa reakčné činidlá z obchodných zdrojov. Dimetylformamid, 2-propanol, tetrahydrofurán a dichlórmetán (reakčné rozpúšťadlá) sa používajú v bezvodom stave a ide o produkty získané od Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA). Mikroanalýzy boli vykonané v laboratóriu Schwarzkopf Microanalytical Laboratory (Woodside, NY, USA). Pokial sú v príkladoch uvádzané koncentračné a odparovacie postupy, ide o postupy odstraňovania rozpúšťadiel za podtlaku vodnej vývevy v rotačnom odparovači pri teplote kúpeľa nižšej ako 50°C.

Do rozsahu pojmu hydrochloridová soľ použitého v názvoch zlúčenín v príkladoch uskutočnenia spadajú ako mono-, tak i disoli.

141

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Odštiepenie BOC

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(3-metylizoxazol-5-ylmetoxy) benzylamino ] purin-9-yl} -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny terc-Butylester (5—{6—[5-chlór-2-(3-metylizoxazol-5-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxy-2-metylkarbamoyltetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny (1,0 mmol) sa rozpustí v bezvodom tetrahydrofuráne (10 ml). K vzniknutému roztoku sa pridá voda (10 ml) a potom metánsulfónová kyselina (1,5 ml, 15 mmol). Reakčná zmes sa 6 hodín mieša pri 70°C a potom 15 hodín pri teplote miestnosti, potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni organické rozpúšťadlo. Výsled ný vodný roztok sa IM roztokom hydroxidu sodného zneutralizuje na pH 7, potom sa vyzráža titulná zlúčenina, ktorá sa odfiltruje. Teplota topenia: 152,0 až 155,0°C; [a]₂2 ~ “30/5 (c = 0,56, MeOH) ^23^25^^8θ5· MW 528,96. MS 529,1 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,57 (s, 1 H); 8,45 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,35 (bs,

H); 8,19 (s, 1 H); 7,23 (dd, 1 H, J = 8,5 Hz, J = 2,4 Hz); 7,11 (d, 1 H, J = 8,5 Hz);

7,07 (bs, 1 H); 6,48 (s, 1H); 5,99 (d, 1 H, J = 3,7 Hz); 5,87 (d, 1 H, J = 4,2 Hz); 5,29 (s, 2H); 4,62 (bs, 2H); 4,38 - 4,32 (mult, 1H); 4.,08 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,58-3,51 ímult, 1H); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,19 (s, 3H); 1,73 (bs, 2H).

Príklad 2

Acetonidové štiepenie

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(3,4,5,6142

-tetrahydropyran-2-ylmetoxy) ben zy lamino ] purin- 9 -y 1 }-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny

K roztoku metylamidu 3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2,2,7,7-tetrametyltetrahydrobis[1,3]dioxolo[4,5-b;4',5’-d]pyran-5-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetra-ⁱhydrofurán-2-karboxylovej kyseliny (59 mg, 0,09 mmol) v chloroforme (7 ml) sa pridá trifluóroctová kyselina (0,7 ml). Reakčná zmes sa 2 hodiny mieša za bezvodých podmienok pri teplote miestnosti, potom sa k nej pridá voda (10 ml). Vodná zmes sa 5 dní mieša pri teplote miestnosti a potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo. Pevný zvyšok sa trituruje s dietyléterom. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme béžového prášku (60 mg) s teplotou topenia 212,0 až 218,0’C. C₂₄H₃₀C1N₇0₉. MW 596,00. MS 596,1 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,52 - 8,36 (mult, 5H); 8,35 - 8,24 (mult, 1 H); 8,13 (s, 1 H); 7,25 - 7,16 (mult, 1 H); 7,10 - 6,90 (mult, 2H); 6,88-6,78 (mult, 1H); 6,21 6,16 (mult, 1 H); 5,2 - 4,4 (mult, 2H); 5,02 - 4,88 (mult, 2H); 4,71 - 4,59 (mult, 2H);

4,53 (d, 1 H, J = 5,0 Hz); 4,30 (d, 1 H, J = 6,8 Hz); 4,26 - 4,20 (mult, 1 H); 4,20 - 4,11 (mult, 1H); 4,10 - 3,99 (mult, 1 H); 3,95 - 3,88 (mult, 1 H); 3,84 - 3,76 (mult, 1 H);

3,62 - 3,55 (mult, 1 H); 3,34 - 3,25 (mult, 1H); 2,61 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Príklad 3

Redukcia azidu

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlórbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlórbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny (456 mg, 0,83 mmol) sa rozpustí v bez vodom tetrahydrofuráne (50 ml). Reakčná zmes sa ochladí na

143

O’C a pridá sa k nej trifenylfosfín (304 mg, 1,2 mmol). Reakčná zmes sa 30 minút mieša pri O’C a pridá sa k nej koncentrovaný hydroxid amónny (0,4 ml) a voda (0,5 ml). Reakčná znes sa nechá pomaly zahriať na teplotu miestnosti a pri tejto teplote 15 hodín mieša a potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo. Produkt sa vopred naadsorbuje na silikagéi a prečistí rýchlou chromatografiou (SiO₂, 5% a potom 18% metanol v dichlormetáne). Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky. Teplota topenia 114,2 až 115,2’C (a]₂2 = -34,34° (c = 0,255, MeOH) ^C25^H26^CI^N7°4· MW 523,98. MS 524,1 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,58 (s, 1 H); 8,47 (q , 1 H, J = 4,6 Hz); 8,35 (bs,

H); 8,22 (s, 1 H); 7,48 - 7,46 (mult, 2H); 7,38 - 7,33 (mult, 2H); 7,33 - 7,25 (mult,

H); 7,25 - 7,20 (mult, 1 H); 7,10 - 7,05 (mult, 2H); 6,01 (d, 1 H, J = 3,9 Hz); 5,95 5,85 (mult, 1 H); 5,17 (s, 2H); 4,85 - 4,75 (mult, 2H); 4,38 - 4,34 (mult, 1 H); 4,11 (d,

H, J = 5,8 Hz); 3,56 (t, 1 H, J = 5,8 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,9 -1,7 (mult, 2H).

Nasledujúce zlúčeniny uvedené v nadpisoch príkladov 4 až 93 sa vyrobia podobnými spôsobmi, aké sú opísané v pred chádzajúcom príklade 3.

Teplota topenia: 99,0 až 108,O’C

Príklad 4

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-morfolin-4-yletoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

144 [α]₂₂ = -29,64° (c = 0,280. MeOH)

C₂4H3iCIN₈O₅. MW 547,02. MS 547,2 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 8,57 (s. 1 H); 8,45 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,28 (bs.

H), 8,21 (s, 1 H); 7,22 (dd, 1 H. J = 8,7 Hz, J = 2,4 Hz); 7,05 (bs. 1 H); 7,01 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,02 (d. 1H, J = 3,7 Hz), 6,05 - 5,80 (mult, 1H); 4,63 (bs, 2H); 4,40 - 4,30 (mult, 1H); 4,12 (t. 3H. J = 5,5 Hz); 3,55 - 3,50 (mult, 5H); 2,70 - 2,60 (mult, 5H);

2,55 - 2,45 (mult, 4H); 2,25 - 1,95 (mult, 2H).

Príklad

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[5-(5-chlór-2-cyklobutylmetoxyben zylamino) purin-9-y1 ] -4 -hydroxy te trahydro f urán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 107,0 až 117,0C (a]₂i.5 = -31,28° (c = 0,390, MeOH)

C23H28CIN7O4. MW 501,98. MS 501,9 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (s, 1H); 8,45 - 8,40 (mult, 1H); 8,25 (bs, j H);

8,19 (s, 1 H); 7,18 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 - 7,00 (mult, 1H); 6,95 (d, 1H, J - 8,5 Hz); 5,99 (d, 1 H, J = 3,7 Hz); 5,90 - 5,80 (mult, 1H); 4,65 - 4,60 (mult, 2H); 4,35 - 4,30 (mult, 1 H); 4,09 (d, 1 H, J = 5,8 Hz); 3,95 (d, 2H, J = 6,2 Hz); 3,53 (t, 1 H, J = 5,8 Hz); 2,75 - 2,65 (mult, 1 H); 2,63 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,05 -1,95 (mult, 2H); 1,90 - 1,80 (mult; 4H); 1,80-1,70 (mult, 2H).

Príklad 6

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-(5-chlór-2-(3-metoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 102,0 až 108,0°C

145

1^21,5 = -28,89^(0 = 0,450,1^011) ^c26^h28^c,n7O5· MW 554,01. MS 553,8 (M+H)+.

'H NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 8,56 (s. 1 H); 8,46 (q, 1 H, J = 4,4 Hz); 8,35 (bs,

1H), 8,20 (s, 1 H); 7,26 (t, 1H, J = 8,1 Hz); 7,25 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, J = 2,6 Hz); 7,10-7,05 (mult, 1H); 7,05 - 7,00 (mult, 3H); 6,84 (d, 1H, J = 7,3 Hz); 5,99 (d, 1H,

J = 3,7 Hz); 5^95 - 5,85 (mult, 1H); 5,13 (s, 2H); 4,75 - 4,65 (mult, 2H); 4,37 - 4,30 (mult, 1 H); 4,09 (d. 1 H. J = 5,6 Hz); 3,71 (s, 3H); 3,54 (t, 1 H, J = 4,9 Hz); 2,64 (d. 3H, J = 4,4 Hz); 1,80 - 1,75 (mult, 2H).

Príklad 7

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6 —[5-chlór-2-(2,5-dimetoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 112,0 až 115,O’C (a]₂i ,5 = -30,48° (c = 0,420, MeOH) ^C27^H3O^C,N7°6· ^MW 584_;04. MS 583,8 (M+H)+.

’H NM.R (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1 H); 8,50 (q, 1 H, J = 3,7 Hz); 8,37 (bs,

H); 8,22 (s, 1 H); 7,22 (dd, 1 H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 7,10 - 7,05 (mult.1 H); 7,05 7,00 (mult, 2H); 6,97 (d, 1 H. J = 8,9 Hz); 6,86 (dd, 1H. J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 6,02 (d, 1 H, J = 3,9 Hz); 5,95 - 5,90 (mult, 1 H); 5,10 (s, 2H); 4,75 - 4,65 (mult, 2H); 4,40 - 4,35 (mult, 1 H); 4,12 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 3,78 (s, 3H); 3,67 (s, 3H); 3,60 - 3,55 ' . (mult, 1 H); 2,67 (d, 3H, J = 3,7 Hz); 1,851,75 (mult, 2H).

Príklad 8

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[ 5-chlór-2-(3-chlórbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 85,0 až 90,O’C

146 ^C25^H25^C|2^N7°4- ^mw 558,43. MS 557,8 (M+H)+.

'H NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1 H); 8,48 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,40 (bs.

H); 8,24 (s, 1 H); 7,55 (s.. 1 H); 7,50 - 7,35 (mult, 3H); 7,24 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J =

2,7 Hz); 7,17 - 7,12 (bs. 1 H); 7,05 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,02 (d. 1H, J = 3,9 Hz); 5,95 - 5,85 (mult, 1 H); 5,21 (s, 2H); 4,75 - 4,65 (mult, 2H); 4,40 - 4,35 (mult,1 H); 4,12 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,57 (t, 1 H, J = 5,8 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 1,85 - 1,75 (mult, 2H).

Príklad 9

Metylamid (2S,3S,4R, 5R) -3-amino-5-{ 6- [5-chlór-2-(4-chlórbenzyloxy) benzylamino ] purin-9-yl }-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 88,0 až 92,0’C θ25^25^'2^7θ4· MW 558,43. MS 558,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 8,61 (s, 1 H); 8,49 (q, 1 H, J = 4,4 Hz); 8,39 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,53 (d, 2H, J - 8,9 Hz); 7,45 (d. 2H J = 8,9 Hz); 7,23 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 3,6 Hz); 7,09 (bs, 1 H); 7,02 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,04 (d, 1H, J = 6,3 Hz); 5,95 - 5,87 (mult, 1 H); 5,19 (s. 2H); 4,75 - 4,68 (mult, 2H); 4,41 - 4,36 (mult,

1H); 4,13 (d, 1H, J = 5,1 Hz); 3,58 (t, 1 H, J = 5,1 Hz); 2,68 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 1,91 - 1,77 (mult, 2H).

Príklad 10

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-chlórbenzyloxy) benzylamino ] purin-9-yl}-4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 88,0 až 92,0°C

147 . [α]₂4 = -16,67° (c = 0,36, DMSO) :

^C25^h25^C,2ⁿ7°4· MW 558,43. MS 558,1 (M+H)+.

H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 8.,60 (s, 1 H); 8,49 (q , 1 H, J = 4,6 Hz); 8,36 (bs,

H), 8,23 (s, 1 H); 7,70 - 7,65 (mult, 1 H); 7,55 - 7,50 (mult, 1 H); 7,42 - 7,36 (mult, 2H), 7/27 (dd, 1H, J =8,5 Hz, J = 2,6 Hz); 7,17 - 7,09 (mult, 2H); 6,03 (d, 1H, J =

4,4 Hz); 5,95 - 5,88 (mult, 1H); 5,24 (s, 2H); 4,79 - 4,67 (mult, 2H); 4,40 - 4,36 (mult, 1 H); 4,15 (d, 1 H, J = 6,3 Hz); 3,58 (t, 1 H, J = 6,3 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,87- 1,77 (mult, 2H).

Príklad 11

Mety lamiel (2S, 3S, 4R, 5R)-3-amino-5- {6- [ 5-chlór-2- (tetrahydrofuran“3-ylmetoxy)benzylaminó]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia·: 114,0 až 118,0°C ^C23^H28^C,N7°5· MW 517,98. MS 518,0 (M+H)+ ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1H); 8,47 (d, 1H, J = 4,4 Hz); 8,31 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H);7,21 (dd, 1 H, J = 8,5 Hz, J = 2,7 Hz); 7,06 (bs, 1H);6,99(d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,01 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,89 (bs, 1H); 4,64 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1 H); 4,11 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,00 - 3,87 (mult, 2H); 3,80 - 3,70 (mult, 2H); 3,67 - 3,60 (mult,

H); 3,59 - 3,50 (mult, 2H); 2,66 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 2,60 (bs, 1 H); 2,04 - 1,96 (mult, 1H); 1,78 (bs, 2H); 1,74 - 1,62 (mult, 1H).

Príklad 12

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(4-metylbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 82,0 až 86,0°C

148 ^c26^h28^ciN.7O₄. MW 538,01. MS 538,2 (M+H)+.

• H NMR (400 MHz, DMSO-dg) 6 8,58 (bs, 1H); 8,48 (q,

1H. J = 4,8 Hz); 8,36 (bs. 1H); 6,20 (s, 1 H); 7,45 (d, 1H. J = 7,3 Hz); 7,27 - 7,15 (mult. ,4H); 7,14 (d. 1H, J = 8,7 Hz); 7,09 (bs, 1 H); 6,01 (d. 1 H, J = 3,7 Hz); 5,90 (bs, 1 H);-5>45 (s. 2H); 4,68 (bs, 2H); 4,38 (bs, 1H); 4,11 (d, 1 H, J = 5,8 Hz); 3,56 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,66 (d,

3H, J = 4,8 Hz); 2,34 (s, 3H); 1,82 (bs, 2H).

Príklad 13

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-metylbenzyloxy )benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 76,0 až 80,0°C ^C26^H29^C1N4°4· 538,01. MS 538,2 (M+H)⁺.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1H); 8,48 (q, 1H, J = 4_r6 Hz); 8,35 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,35 (d, 2H, J = 8,1 Hz); 7,21 -7,15 (mult, 3H); 7,22 - 7,17 (mult, 2H); 6,01 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,88 (bs. 1H); 5,12 (s, 2H); 4,70 (bs, 2H); 4,37 (bs,

H); 4,11 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,56 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,28 (s. 3H); 1,79 (bs, 2H).

Príklad 14

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(3-metylbenzy loxy) benzy lamino ] purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 92,0 až 97,0°C

C26^H28^CIN7O4· MW 538,01. MS 538,2 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,56 (s, 1 H); 8,45 (q, 1 H. J = 4,6 Hz); 8,32 (bs,

H); 8,19 (s, 1H); 7,25-7,21 (mult, 3H); 7,21 -7,16 (mult, 1H);7,11 - 7,00 (mult,

149

3H);.5,99 (d, 1 H, J = 3,9 Hz); 5,87 (bs; 1 H); 5,10 (s, 2H); 4,67 (bs, 2H); 4,34 (bs, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,54 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,63 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,25 (s, 3H);.1,84

Príklad 15

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-metoxybenzyloxy) benzylamino ] pur in-9-y 1} -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 102,0 až 123,0”C (a]₂i = -49,39° (c = 0,225, MeOH) ^C26^H28^CIN7°5- MW. 554,01. MS 554,1 (M+H)⁺.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1 H); 8,48 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,34 (bs,

H); 8,21 (s, 1 H); 7,44 (dd. 1H, J = 7,5 Hz, J = 1,5 Hz); 7,30 (td, 1 H, J = 7,5 Hz, J =

1,5 Hz); 7,22 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,08 - 7,01 (mult, 3H); 6,94 (t, 1 H, J = 7,5 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,91 (bs, 1 H); 5,12 (s, 2H); 4,68 (bs, 2H); 4,37 (t, 1 H, J = 4,1. Hz); 4,11 (d. 1H, J = 5,8 Hz); 3,82 (s, 3H); 3,57 (t, 1H, J = 5,8 Hz);

2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,91 (bs, 2H).

Príklad 16

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(furan-3-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán -2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 93,0 až 97,0°C ^C23^H24^C1N7°5· 513,94. MS 513,8 (M+H)⁺.

'H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1 H): 8,48 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,34 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,80 (s. 1H); 7,66 (s. 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz);

7,10 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,06 (bs, 1 H); 6,60 (s, 1 H); 6,01 (d, 1 H, J = 3,7 Hz); 5,90 (bs, 1H); 5,03 (s, 2H); 4,64 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 3,56 (t. 1H, J =4,5 Hz); 3,14 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 2,66 (d, 3H. J = 4,6 Hz); 1,77 (bs, 2H).

150

Príklad 17

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-{6 - [5-chlór-2-(4-metoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H28^C|N7°5. MW 554,01. MS 553,8 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,55 (s, 1H); 8,44 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,32 (bs,

1H); 8,19 (s, 1H); 7,37 (d, 2H, J = 8,7 Hz); 7,18 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz);

7,11 - 7,04 (mult, 2H); 6,89 (d, 2H, J = 8,7 Hz); 6,00 (d, 1 H, J = 3,7 Hz); 6,95 (bs,

H); 5,06 (s, 2H); 4,62-4,59 (mult, 2H);'4,37 (bs, -1 H); 4,11 (d, 1 H, J = 5,4 Hz);

3,70 (s, 3H); 3,60 - 3,56 (mult, 1 H); 2,63 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Príklad 18

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[ 6- (5-chlór-2-cyklopentylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 110,6 až 116,2’C [α]22 = -²⁵,⁸θ ° (^c = 0/255, MeOH)

C24H30CIN7O4. MW 516,00. MS 515,8 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1 H); 8,47 (q , 1 H, J = 4,2 Hz); 8,29 (bs,

H); 8,21 (s, 1H); 7,19 (dd, 1 H, J = 8,5 Hz, J = 2,3 Hz); 7,03 (bs, 1 H); 6,97 (d, 1H. J = 8,5 Hz); 6,01 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 5,91 (bs, 1H); 4,64 (bs, 2H); 4,37 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,87 (d, 2H, J = 6, 4 Hz); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,65 (d, 3H, J =

4,2 Hz); 2,36 - 2,22 (mult, 1 H); 2,22 - 1,90 (mult, 2H); 1,80 - 1,70 (mult. 2H); 1,62 1,44 (mult, 4H); 1,39 - 1,28 (mult, 2H).

Príklad 19

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[3-(2-morfolin-4-yletoxyJbenzyloxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny i

151 ^C31^H37^C1N8°6· ⁶⁵³ z¹⁴· ^{MS 6}53,0 (M+H) ⁺ ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) Ô 8,57 (s, 1H); 8,45 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,37 (bs,

H); 8,22 (s, 1 H); 7,26 (t, 1 H, J = 8,5 Hz); 7,21 (dd, 1 H, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz);

7,09 (bs, 1H); 7,06 - 7,00 (mult, 3H); 6,87 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,95 (bs, 1H); 5,14 (s, 2H); 4,70 (bs, 2H); 4,42 - 4,36 (mult, 1H); 4,14 (d/1H, J = 5,4 Hz); 4,06 (t, 2H, J = 5,4 Hz); 3,62 - 3,57 (mult, 1H); 3,53 (mult, 4H); 2,67 2,61 (mult, 5H); 2,42 - 2,38 (mult, 4H).

Príklad 20

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(tetrahydrof urán-3-ylmetoxy)bénzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 132,0 až 161,0’C (a]₂i = -16,47° (c = 0,170, MeOH)

C23H29CIN7O5. MW 517,98. MS 518,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-cJ₆) δ 8,53 (s, 1H); 8,42 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,29 (bs,

1H); 8,19 (s, 1H); (dd. 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,04 (s, 1H); 6,97 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,11 (bs, 1H), 6,01 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,61 (bs, 2H); 4,44 - 4,40 (mult, 1H);

4,15 (d, 1 H, J = 5,0 Hz); 3,99 - 3,92 (mult, 1 H); 3,91 - 3,85 (mult, 1 H); 3,78 - 3,65 (mult, 2H); 3,64 - 3,58 (mult, 2H); 3,57 - 3,50 (mult, 1 H); 2,95 (q, 1 H, J = 7,3

Hz); 2,69 - 2,58 (mult, 5H); 2,02 - 1,93 (mult, 1H); 1,70 -1,59 (mult, 1H).

Príklad. 21

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(tetrahydrof urán- 3 -y lmetoxy )bénzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C23^H28^C1N7O5· MW 517,98. MS 518,0 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,54 (s, 1H); 8,47 - 8,40 (mult, 1H); 8,29 (bs, 1H);

8,19 (s, 1 H); 7,18 (dd. 1H, J =8,5 Hz, J = 2,3 Hz); 7,03 (bs, 1H); 6,97 (d, 1H, J =

152

8,5 Hz); 5,99 (d, 1 H, J = 3,7 Hz); 5,97 (bs, 1 H); 4,61 (bs, 2H); 4,40 - 4,35 (mult, 1H), 4,11 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 3,98 - 3,92 (mult, 1H); 3,91 - 3,83 (mult, 1H); 3,783,68 (mult, 2H); 3,62 - 3,48 (mult, 3H); 2,87 - 2,82 (mult, 1 H); 2,65 - 2,57 (mult, 5H); 2,02 - 1,93 (mult, 1 H); 1,69 - 1,59 (mult, 1 H),

Príklad 22

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-[5~chlór-2-(furan-2-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 187,0 až 192,0°C ^C23^H24^ClN7°5* ⁵¹³'⁹⁵· ^MS 514,1 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (s. 1 H); 8,44 (q, 1 H, J = 4,4 Hz); 8,27 (bs,

1H); 8,20 (s, 1 H); 7,67 (d, 1H. J = 1,9 Hz); 7,21 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J =2,7 Hz);

7,15 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,02 (bs, 1 H); 6,57 (d, 1 H, J = 3,3 Hz); 6,44 (dd, 1H, J =

3,3 Hz. J = 1,9 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 5,86 (bs, 1H); 5,11 (s, 2H); 4,58 (bs. 2H); 4,39 - 4,32 (mult, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,59 - 3,53 (mult, 1H); 2,63 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 1,85 (bs, 2H).

Príklad 23

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2,2,7,7-tetrametyltetrahydrobis[l,3]dioxolo[4,5-b;4',5'-d]pyran-5-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C30H38CIN7O9. MW 676,13. MS 676,1 (M+H)+ ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (s, 1 H); 8,47 (q , 1 H, J = 4,4 Hz); 8,26 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,06 (bs. 1H); 7,02 (d, 1H, J

153 = 8,7 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,48 (d, 1H, J = 4,8 Hz); 4,65 (bs, 2H); 4,60 (dd, 1H, J = 7,9 Hz, J = 2,3 Hz); 4,42 - 4,39 (mult, 1 H); 4,39 - 4,37 (mult, 1 H); 4,37 4,28 (mult, 2H); 4,20 - 4,13 (mult, 2H); 4,09 - 3,98 (mult, 2H); 3,62 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 2,65 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 1,37 (s, 3H); 1,34 (s, 3H); 1,25 (s, 6H).

Príklad 24

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-<6-[5-chlór-2-(2,5-dimetylfuran-3-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 85,0 až 88,0°C

C₂5^H28^CIN7°5· ^mw 542,00. MS 542,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s. 1 H); 8,48 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,29 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7_r22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,7 Hz);

7,05 (bs, 1 H); 6,07 (s, 1 H); 6,01 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,89 (bs, 1H); 4,88 (s, 2H);

4,60 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1 H); 4,10(d,1 H, J = 5,4 Hz); 3,55 (t, 1 H, J = 5,0 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,23 (s. 3H); 2,16 (s, 3H); 1,77 (bs, 2H).

Príklad 25

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(pyridin-3-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovéj kyseliny

Teplota topenia: 200,0 až 218,0°C ^C24^H25^C1N8°4· ^{1417 524} z⁹⁷· ^MS 525,0 (M+H) ⁺ .

Ή NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,69 (s, 1H); 8,52 (q, 1H, J“= 4,6 Hz); 8,45 (s,

H); 8,45 - 8,39 (mult, 1 H); 8,35 (d, 1 H, J = 5,0 Hz); 8,20 (s, 1 H); 7,89 (d, 1 H, J =

7,7 Hz); 7,40 (dd, 1H, J = 7,7 Hz, J = 4,8 Hz); 7,24 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,3 Hz);

7,11 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,17 (d, 1H, J = 4,4 Hz); 5,22 (s, 2H); 4,90-4,84 (mult,

1H); 4,76 - 4,63 (mult, 2H); 4,60-4,56 (mult, 1H); 4,55 - 4,51 (mult, 1H); 4/I8 4,09 (mult, 2H); 2,61 (d, 3H, J = 4,6 Hz). .

154

Príklad 26

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(5-dimetylaminometylfuran-2-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 78,0 až 81,0°C ^C26^H31^CIN6°5· MW 571,04. MS 571,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 7,24 (bs, 1H); 7,20 (dd, ,1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,43 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,26 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,08 (s, 2H); 4,73 (bs, 2H); 4,59 (t, 1H J = 4,8 Hz); 4,30 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,74 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 3,48 (s, 2H); 2,82 (s, 3H); 2,20 (s, 6H).

Príklad 2 7

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(tiazol-2-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 208,0 až 209,0°C [a]₂i = -32,08° (c - 0,265, MeOH) °22^Η23^ΟΙΝ8°4θ· MW 531,00. MS 531,0 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,57 (s, 1 H); 8,45 (q, 1 H, J = 4,2 Hz); 8,38 (bs,

1H); 8,20 (s, 1 H); 7,82 (d, 1H, J = 3,2 Hz); 7,75 (d, 1H, J = 3,2 Hz); 7,23 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,13 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,07 (s. 1H); 5,99 (d, 1H, J = 3,5 Hz); 5,90 - 5,84 (mult, 1H); 5,49 (s, 2H); 4,69 (bs, 2H); 4,34 (bs, 1H); 4,09 (d, 1H. J = 5,6 Hz); 3,59 - 3,50 (mult, 1 H); 2,64 (d, 3H, J = 4,2 Hz); 1,74 (bs, 2H).

155

Príklad 28

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(benzotiazol-2-ylmetoxy)-5-chlórbenzylamino ]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 127,0 až 129,O’C ^C26^H25^C1N8°4^S- MW 581,06. MS 581,0 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,58 (s, 1H); 8,51 - 8,39 (mult, 2H); 8,21 (s, 1H);

8,09 (d. 1H, J = 8,1 Hz); 8,00 (d, 1H. J = 8,1 Hz); 7,50 (t. 1H, J = 8,1 Hz); 7.42 (t,

H, J = 8,1 Hz); 7,25 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,16 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,09 (bs, 1H); 6,00 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,91 - 5,84 (mult, 1 H); 5,65 (s,2H); 4,78 (bs,

2H); 4,34 (bs, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,59 - 3,50 (mult, 1H); 2,64 (d, 3H; J 4,8 Hz); 1,74 (bs, 2H).

Príklad 29

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(benzofuran-2-ylmetoxy) -5-chlórbenzylamino ]purin-9-yl} -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 127,0 až 130,O’C

C27H26CIN7O5. MW 564,01. MS 564,0 (M+H)+

Ή NMR (400 MKz, DMSO-dg) δ 8,57 (s, 1 H); 8,46 (q, . 1H. J = 4,4 Hz); 8,33 (b

H); 8,16 (s, 1 H); 7,61 (d, 1 H, J = 7,5 Hz); 7,56 (d, 1 H, J = 8,3 Hz); 7,32 - 7,24 (mult, 1H); 7,24 - 7,19 (mult, 3H); 7,08 - 7,01 (mult, 2H); 5,99 (d, 1H, J = 3,5 Hz);

5,87 (d, 1 H, J = 4,8 Hz); 5,33 (s, 2H); 4,63 (mult, 2H); 4,38 - 4,30 (mult, 1 H); 4,08 (d, 1 H, J = 5,6 Hz);' 3,59 - 3,48 (mult, 1 H); 2,63 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 1,73 (bs,' 2H).

Príklad 30

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(izotiazol-5-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán

-2-karboxylovej kyseliny

156

Teplota topenia: 180,0 až 183,0°C ^c22^H23^C1N8p4^S· MW 531,00. MS 531,1 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s,.1H); 8,53 (d, 1H, J = 1,5 Hz); 8,47 (q,

H, J = 4,8 Hz); 8,39 (bs, 1 H); 8,22 (s, 1 H); 7,47 (d, 1 H, J = 1,5 Hz); 7,26 (dd,' 1 H, J = 8,7 Hz, J =2,7Hz); 7,15 - 7,08 (mult, 2H); 6,02 (d, 1H, J =3,7 Hz); 5,90 (bs, 1 H); 5,59 (s, 2H); 4,69 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1 H); 4,11 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,56 (t. 1 H, J =

5,6 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 1,79 (bs, 2H).

Príklad 31

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(tiofen-2-ylmetoxy) benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 135,0 až 141,0°C

C23^H24CIN₇O₄S. MW 530,01. MS 530,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,58 (s, 1H); 8,47 (q, · 1 H, J = 4,6 Hz); 8,35 (bs,

1H); 8,21 (s, 1 H); 7,55 (dd, 1H, J = 5,0 Hz, J = 1,2Hz); 7,27 - 7,19 (mult, 2H); 7,15 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,09 - 7,00 (mult, 2H); 6,07 - 5,87 (mult, 1 H); 6,02 (d, 1 H, J =

3,3 Hz); 5,36 (s, 2H); 4,64 (bs, 2H); 4,41 (bs, 1H); 4,14 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,66 3,56 (mult, 1 H); 2,65 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Príklad 32

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(chinolin-2-ylmetoxy) ben zy lamino ]purin-9-yl} -4-hydroxy tetrahydrofurán-2-karboxylove j kyseliny

Teplota topenia: 130,0 až 134,0°c ^C28^H27CIN₈O₄. MW 575,03. MS 575,1 (M+H)+. ‘

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,57(s, 1 H); 8,50 - 8,36 (mult, 3H); 8,21 (s, 1 H); 8,02 - 7,93 (mult, 2H); 7,78 - 7,67 (mult, 2H); 7,62 - 7,53 (mult, 1 H); 7,18 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 7,13 (bs, 1H); 7,06 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,00 (d. 1H. J = 3,7 Hz); 5,88 (d 1 H, J = 4,6 Hz); 5,42 (s, 2H); 4,78 (bs, 2H); 4,34 (bs, 1H); 4;09 (d, 1H, J = 5,6 Hz)

3,57 - 3,48 (mult, 1H); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,73 (bs, 2H).

157

Príklad 33

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(4-metyl[ 1,2,3)tiadiazol-5-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 107,0 až 110,O’C C22H24CIN9O4S. MW 546,01. MS 546,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,60 (s, 1H); 8,48 (bs, 1 H); 8,39 (bs, 1H); 8,20 (s,

1H); 7,36 - 7,23 (mult, 1 H); 7,18 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 7,13 (bs, 1H);6,02 (bs, 1H);

5,92 (bs,1H); 5,60 (s, 2H); 4,66. (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 4,12 (bs, 1 H); 3,57 (bs, í H); 2,68 (bs, 6H); 1,78 (bs, 2H).

Príklad 34

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2- (naftalen-l-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxyloyej kyseliny

Teplota topenia: 115,0 až 119,0“C ^C29^H28^C1N7°4- ^{W 574}'⁰⁴· ^{MS 574}/⁹ (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,58 (s, 1 H); 8,53 - 8,45 (mult, 1 H); 8,34 (bs, 1H);

8,19 (s, 1H); 8,16 (d, 1 H, J = 7,9 Hz); 7,99 - 7,86 (mult, 2H); 7,72 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 7,63 - 7,45 (mult, 3H); 7,35 - 7,23 (mult, 2H); 7,09 (bs, 1 H); 6,01 (bs, 1 H); 5,90. (bs, 1 H); 5,63 (s, 2H); 4,64 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1 H); 4,11 (d, 1 H, J = 5,0 Hz); 3,56 (bs, 1 H); 2,66 (d, 3H, J = 4,2 Hz); 1,77 (bs, 2H).

Príklad 35

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(3,5-dimetylizoxazol-4-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

158

C24^H27^CIN8°5- ^MW 542,99. MS^3,2 (M+H)+.

’H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (bs, 1 H); 8,44 (bs, 1H); 8,31 (bs, 1H); 8,16 (s,

H); 7,25 (d, 1 H, J = 8_r5 Hz); 7,11 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,08 (bs, 1 H); 5,98 (bs, 1 H);

5,83 (bs, 1 H); 4,95 (s, 2H); 4,58 (bs, 2H); 4,37 (bs, 1 H); 4,11 (d, 1 H, J = 4,9 Hz);

3,57 (bs, 1 H); 2,64 (d, 3H, J = 3,8 Hz); 2,39 (s, 3H); 2,22 (s, 3H), 1,15 (bs, 2H). .

Príklad 36

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2-piperidin-l-yletoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C25^H31^C,N8°5 M.W. 567.00. MS 567 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,34 (s, 1H); 8,29 (bs, 1H); 7,3 (bs, 1 H); 7,18 (d,

H, J = 8,9 Hz); 6,89 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 4,91 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,64 (t, 1 H, J = 4,3 Hz); 4,38 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,79 (t, 1 H, J = 5,4 Hz); 3,51 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 1,6 (m, 6H).

Príklad 37

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-fenylkarbamoylmetoxyben z ylamino) pur in-9-y1]-4 -hydroxytetrahydro furán-2-karboxylovej kyseliny ^c26^H27^CiN8°5 M.W. 567,00. MS 567 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, D6 DMSO) δ 8,6 (bs, 1H); 8,5 (bd, 1H, J = 5,5 Hz); 8,4 (bs,

H); 7,6 (d, 2H, J = 8,2 Hz); 7.,33 (t, 2H, J = 8,2 Hz); 7,23 (d, 1H, J = 8,8 Hz);

7,12 (bs. 1H); 7,03 (t, 1 H, J = 8,2 Hz); 6,96.(d, 1 H, J = 8,8 Hz); 6.,0 (d, 1 H, J = 4,0 Hz); 5,9 (bs, 1H); 4,8(s, 2H); 4,78 (bs, 2H); 4,39 (bs, 1H); 4,1 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,59 (m, 1 H); 2,62 (d, 3H, J = 4,0 Hz); 1,94 (bs, 2H).

159

Príklad 38

Metylamid ( 2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-dimetylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C22^h27CIN8°5 M.W. 518,96. MS519(M+H)⁺.

¹HNMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,31 (s, 1H); 8,26 (bs, 1H); 7,28 (bs, 1 H); 7,17 (dd, 1 H, J = 8,9, 2,5 Hz); 6,83 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,03 (d, 1 H, J = 4,0 Hz); 4,9 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1 H, J = 4,6 Hz); 4,26 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3.7 (t, 1 H, J =

5,6 Hz); 3,02 (s, 3H); 2,9 (s. 3H); 2,8 (s, 3H).

Príklad 39

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(benzylkarbamoylmetoxy)-5-chlórbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C₂₇H290lN₈O₅ M.W. 581,04. MS 581 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,3 (s, 1 H); 8,2 (s, 1 H); 7,3 d, 1 H, J = 2,5 Hz); 7,19 (dd, 1 H, J = 8,8, 2,6 Hz); 6,9 (d, 1 H, J = 8,8 Hz); 6,02 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,64 (s, 2H); 4,58 (t. 1 H, J = 4,5 Hz); 4,4 (s, 2H); 4,3 (d, 1 H, J = 5,6 Hz);

3,78 (t, 1 H. J = 4,8 Hz); 2,78 (s, 3H).

Príklad 40 (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-Amino-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofurán-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octová kyselina ^C20^H22^C1N7°6 ^M,W· ⁴⁹¹z⁹⁰· ^{MS 492} (M+H⁺).

160

Príklad 41

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-[ 2-(4-metylpiperazin-l-yl )-2-oxoetoxy]benzylamino)purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C25^H32^ClN9°5 ^M-^W· ⁵⁷⁴»⁰⁴· ^{MS 574} (M+H⁺) ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H); 8,29 (bs, 1H); 7,29 (bs, 1H); 7,19 (d,

H, J = 8,9 Hz); 6,92 (d. 1 H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 4,91 (s,2H);

4,82 (bs, 2H); 4,59 (t, 1 H, J = 5,3 Hz); 4,30 (d, 1 H, J A 5,6 Hz); 3,79(t, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,6 (m, 4H); 2,80 (m, 3H); 2,4 (m, 4H); 222 (s, 3H).

Príklad 42

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-propylkarbaraoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C23^H29^C1N8^C1N8°5^{: M}-^W* ⁵³²/· ^{Ms 533} (M+H) ⁺ .

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1 H); 8,29 (s, 1 H); 7,27 d, 1 H, J = 2,5 Hz);

7,2 (dd, 1 H, J = 8,8, 2,6 Hz); 6,95 (D, 1H, J = 8,8 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,0 Hz);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (m, 3H); 4,3 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,8 (t, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,2 (t, 2H, J = 7,1 Hz); 2,8 (s, 3H); 1, 5 (m, 1 H); 0,83 (t, 3H, J = 7,1 Hz).

Príklad 43

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-morfolin-4-yl-2-oxoetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C24H₂9CIN₈O₆ M.W. 561,00. MS 561 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,28 (bs, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (d.

H, J = 8,9 Hz); 6,94 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 4,94(5,2^;

4,82 (bs, 2H); 4,63 (t, 1 H, J = 5,3 Hz); 4,35 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,92 (t, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,65 (m, 4H); 3,58 (m, 4H); 2,8 (s, 3H).

161

Príklad 44

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2-pyrolidin-l-yletoxy) benzylamino ]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C24^H29^CIN8°5 M.W. 545,00. MS 545 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) 5 8,28 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 7,24 (bs, 1H); 7,18 (d,

H, J = 8,9 Hz); 6,89 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1 H, J = 3.9 Hz); 4,82 (bs, 2H);

4,8 (s, 2H); 4,64 (t, 1 H, J = 5,3 Hz); 4,38 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,92 (t, 1H, J = 5.6 Hz); 3,51 (t, 2H, J = 6,7 Hz); 3,41 (t. 3H, J = 6,7 Hz); 2,8 (s, 3H); 1,92 (m. 2H)';

1,82 (m, 2H).

Príklad 45

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5- [ 6-(5-chlór-2-dipropylkarbamoylmetoxybenzylamino )purin-9-yl ]-4-hydroxytetrahyďrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H35^CIN8°5 M.W. 575,07. MS 575 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 8,32 (s, 1H); 8,27 (bs, 1H); 7,28 (bs, 1 H); 7,2 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,86 (d. 1H, J = 8,9 Hz); 6,04 (d, 1H, J = 3,8 Hz); 4,92 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1 H, J = 5,5 Hz); 4,3 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,8 (t, 1 H, J = 5,6 Hz);

3,3 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 1,65 (m, 1 H); 1,48 (m, 1 H); 0,97 (t, 3H, J = 7,2 Hz);

0,88 (t, 3H, J = 7_t2 Hz).

Príklad 46

Metylamid ( 2S , 3S, 4R, 5R) -3-amino-5- (6- { 5-chlór-2-1 ( 2-metoxyetylkarbamoyl )metoxy]benzylamino}purin-9-yl )-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C23^H29^C1N8°6 M.W. 548,99. MS 549 (M+H)⁺.

162 ¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8,37 (s. 1 H); .8,3 (s. 1H); 7,3 (d. 1H, J = 2,5 Hz);

7,2 (dd, 1H, J = 8,8, 2,5 Hz); 6,95 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,07 (d/1H, J = 4,0 Hz);

4,82 (bs, 2H); 4.6 (m, 3H); 4,3 (d, 1 H, J = 5,8 Hz); 3,8 (m, 1 H); 3,41 (s, 3H); 3,3 (m, 4H); 2,8 (s, 3H).

Príklad 47

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-metylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny C₂₁ H₂₅CIN₈O₅ M.W. 504,93. MS 505 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1 H>; 8,26 (s, 1H); 7,24 (d, 1H, J = 2,5 Hz);

7,2 (dd, 1 H, J = 8,9, 2,5 Hz); 6,83 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,04- (d, 1 H, J = 3,9 Hz);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1 H, J = 5,5 Hz); 4,58 (s, 2H); 4,3 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,8 (t, 1H, J = 5,6 Hz); 2,8 (s, 6H).

Príklad 48

Metylamid (2S,3S, 4R, 5R) -3-amino-5-[6-(5-chlór-2-cyklohexylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C26^H33^CIN8°5 ^{m w}· 573,05. MS 573 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, D6 DMSO) d 8,6 (s, 1H); 8,43 (m, 1 H); 8,4 (bs, 1H); 8,2 (s, 1H); 7,8 (bd, 1H, J = 9 Hz); 7,2 (d. 1 H, J = 8,8 Hz); 7,1 (bs, 1 H)'; 6,82 (d, 1 H, J = 8,8 Hz); 6,0 (d. 1 H, J = 4.0 Hz); 5,95 (bs, 1 H); 4,7 (bs, 2H); 4,52 (s, 2H); 4,4 (m, 1 H); 4,1 (d, 1H,J =

5,7 Hz); 3,6 (m, 2H); 2,62 (d, 3H, J = 4,2 Hz); 1,65 (m, 4H); 1,5 (m, 1H); 1,2 (m, 5H).

163

Príklad 49

Etylester (2R,3R,4S,5S)-[(2-{[ (9- (4-amino-3-hydroxy-5-metyl karbamoyltetrahydrofuran-2-yl) -9H-purin-6-ylamino ]metyl} -4

-chlórfenoxy)acetyl]piperazín-l-karboxylovej kyseliny

C27^H34CINgO7 M.W. 632,07. MS 632 (M+H)⁺. ¹H NMFt (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s, 1 H); 8,28 (s, 1 H); 7,3 (bs, 1 H); 7,2 (d, 1 H, J = 8.7 Hz);

6,93 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,93 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 5.5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,1 (q, 2H, J = 7,1 Hz); 3,79 (t, 1H, J =

5,5 Hz); 3,6 (m, 4H); 3,42 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 1.22 (t, 3H, J = 7,1 Hz).

Príklad 50

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(2-azetidin-l-yl-2-oxoetoxy)-5-chlórbenzylamino ]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny C₂3H₂7CIN₈O5 M.W. 530,97. MS 531 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s, 1 H); 8,27 (s, 1 H); 7,3 (s, 1 H); 7,2 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,85 (d. 1H, J = 8,7 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,63 (s, 2H); 4,61 (t, 1H, J = 5,3 Hz); 4,37 (m, 3H); 4,02 (m, 2H); 3,82 (t, 1H. J = 5,6 Hz); 2,8 (s, 3H); 2,3 (m, 2H).

Príklad 51

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[(2-morfolin-4-yletylkarbamoyl)metoxy]benzylamino)purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H34^C!N9°6 M.W.-604,07. MS 604 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 1 H); 8,29 (s, 1H); 7,3 (s, 1H); 7,2 (d, 1H,

J = 8,7 Hz); 6,93 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,08 (d, 1 H, J = 3,7 Hz); 4,84 (bs, 2H); 4,63 (t, 1H, J = 5,5 Hz); 4,6 (s, 2H); 4,38 (d, 1H. J = 5,6 Hz); 3,9 (t. 1H, J = 5,3 Hz);

3,55 (m. 4H); 3,4 (t, 2H, J = 6,4 Hz); 2,8 (s; 3H); 2,42 (t. 2H, J = 6,4 Hz); 2,4 (m,

4H).

164

Príklad 52

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-oxo-2-(4-fenylpiperazin-l-yl)etoxy]benzylamino)purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C30H34CIN9O5 M.W. 636.12. MS’636 (M+H)·*·.

1_H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,26 (s, 1H); 7,3 (s„.íH); 7,2 (m, 3H);

6,9 (m, 4H); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4.92 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H); 4,59 (t, 1H, J =

5,3 Hz); 4,3 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,72(m, 5H); 3,11 (m, 4H); 2, 8 (s, 3H).

Príklad 53

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-cyklohexylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy ]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C30^H40^C1N9°5 ^M-^W· ⁶⁴²/¹⁶· ^{MS 642} (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,29 (s,ΊH); 7,3 (s, 1 H); 7,2 (dd, 1H,

J = 8^8, 2,6 Hz); 6,93 (d. 1 H, J = 8,8 Hz); 6,08 (d, 1 H, J = 3,8 Hz); 4,93 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,63 (t, 1 H, J = 5,5 Hz); 4,38 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,83(m, 1 H); 3,6 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 2,6 (m, 4H); 2,32 (m, 1H); 1,8-1,2 (m, 10H).

Príklad 54

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-etylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy ] benzylamino }purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H34^CIN9°5 M.W. 588,07. MS 588 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) 8,32 (s, 1H); 8,28 (s, 1 H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (d, 1H, J

165 = 8,7 Hz); 6,93 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,07 (d, 1.H, J = 3,9 Hz); 4,93 (s, 2H); 4.82 (s,

2H); 4,64 (t, 1 H, J = 5,3 Hz); 4,38 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 3,9 (t, 1 H, J = 5,5 Hz); 3,6 (bs. 4H); 2,8 (s. 3H); 2,45 (m, 6H); 1,05 (t, 3H. J = 7,3 Hz).

Príklad 55

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-cyklopropylkarbamoylmetoxybenzylamino) purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C23H27CIN₈O₅ M.W. 530,98. MS 531 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 . MHz, CD₃OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,31 (s, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (dd, 1H, J = 8,6, 2,6

Hz); 6,85 (d, 1 H, J = 8,6 Hz); 6,07 (d. 1 H, J = 3,9 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,58 (m,

3H); 4^ (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,75 (t, 1 H, J = 5,6 Hz); 2,8 (s, 3H); 2,63 (m. 1 H); 0,7 (m, 2H); 0,5 (m. 2H).

Príklad 56

Metylamid (2S, 3S ,4R, 5R)-3-amino-5-[ 6-( 2-karbamoylmetoxy-5-chlórbenzylamino) purin-9-yl ] -4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny ^c20^H23^c,N8°5

M.W. 490,91. MS 491 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,31 (s, 1 H); 7,36 (d, 1H, 2_?65 Hz)';

7,25 (dd, 1 H, J = 8,6, 2,6 Hz); 6,96 (d, 1 H, J = 8,6 Hz); 6,09 (d, 1 H, J = 4,28 Hz);

4,88 (s, 2H); 4,62 (m, 3H); 4,33 (d. 1 H, J = 5,6 Hz); 3,77 (t, 1 H, J = 5,6 Hz); 2,84 (s, 3H).

166

Príklad 57

Metylamid ( 2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-cyklopropylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl )-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C27^H34^C1N9°5 ^M,W· ^60θ/^θδ· ^{ms 600} (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,32 (s, 1 H); 8,28 (s, 1 H); 7,3 (bs, 1 H); 7,2 (dd,

H, J = 8,8, 2,8 Hz); 6,93 (d, 1 H, J = 8,8 Hz); 6,07 (d, 1 H, J = 4,06 Hz); 4,89 (s, 2H); 4,83 (bs, 2H); 4,64 (t, 1 H. J = 4,9 Hz); 4,35 (d, 1 H, J = 5,8 Hz); 3,86 (t, 1 H, J = 5,7 Hz); 3,53 (01.4^:2.,80(5,3^2,60(01.4^: 1,63 (m, 1 H); 0,47 (m, 2H);

0,42 (m. 2H).

Príklad 58

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-izopropylpiperazin-l-yl )-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl )-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C27H36CIN9O5 M.W. 602,1. MS 602 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,28 (s, 1 H); 8,27 (s, 1 H); 7,29 (bs. 1 H); 7,2 (dd.

H, J = 8,8, 2,6 Hz); 6,9 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,11 (d. 1 H. J = 3,2 Hz); 4,93 (s, 2H);

4,9 (m, 1 H); 4,82 (s. 2H); 4,53 (d. 1 H, J = 6,2 Hz); 4,28 (t, 1 H, J = 5,5 Hz); 3,74 (bs, 4H); 3,04 (m, 1H); 2,84 (m, 4H); 2,75 (s. 3H); 1,66 (ď, 6H. J = 6,4 Hz).

Príklad 59

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-oxo-(4-propylpiperazin-l-yl )etoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny C₂7H3₆ClNgO₅ M.W. 602,1. MS 602 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,26 (s, 2H); 7,28 (bs. 1 H); 7,2 (dd, 1 H. J = 8,4. 2,2 Hz); 6,93 (d. 1 H, J = 8,4 Hz); 6,1 (d, 1 H. J = 3,2 Hz); 4,92 (s. 2H); 4,9 (m. 1 H);

167

4,82 (s, 2H); 4,54 (d, 1 H, J - 6,4 Hz); 4,33 (t, 1 H, J = 6,19 Hz); 3,66 (bs. 4H); 2,74 (s, 3H); 2,66 (m, 4H); 2,49 (t. 2H, J = 7,9 Hz); 1,57 (m, 2H); 0,93 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

Príklad 60

Metylamid (2S,3S , 4R, 5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2—(4— -cyklopentylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C29^H38^CIN9°5 M.W. 628,14. MS 628 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8,31 (s. 1H); 8,28 (s. 1H); 7,3 (s. 1H); 7,2 (dd. 1H.

J = 8,6. 2,6 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,6 Hz); 6,08 (d, 1H, J = 3,8 Hz); 4,89 (s, 2H);

4_f82 (s. 2H); 4,70 (t. 1 H. J = 4,8 Hz); 4,4 (d. 1 H, J = 5,9 Hz); 3,98(t. 1 H, J = 5,6 Hz); 3.6 (m, 4H); 2,78 (s. 3H); 2,55 (m, 4H); 1,9-1,2 (m. 9H).

Príklad 61

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{2-[2-(4-benzylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]-5-chlórbenzylamino)purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C31 HggCINgOs M.W. 650,1. MS 650 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,30 (s, 1H); 8,27 (s. 1H); 7,27 (m, 7H); 6,90 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 4,85 (s, 2H); 4,81 (s. 2H); 4.61 (t, 1H.J = 4,5 Hz); 4,32 (d. 1 H, J = 5,7 Hz); 3,79(t, 1 H. J = 5,6 Hz); 3,56 (m. 4H); 3,5 (s, 2H); 2,79 (s. 3H); 2,43 (m. 4H).

Príklad 62

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-oxo-(3-oxopiperazin-l-yl)etoxy]benzylamino}purin-9-yl) -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovéj kyseliny

168

C24H2BCIN9O6 M.W. 574,00. MS 574 (M+H)⁺.

'H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1 H); 8,27 (s, 1H); 7,30 (s, 1H), 7,2 (m,

-j pQ. 0^94 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 3,9 Hz); 4,93 (s, 2H), 4,82 (bs, 2H); 4,62 (t, 1 H, J = 4,5 Hz); 4,33 (d, 1 H, J = 5,7 Hz); 4,13(s, 1 H); 3,80 (m, 1 H);

3,8 (t; 1 H, J = 4,5 Hz); 3,76 (bs, 2H); 3,38 (m, 1 H); 3,30 (m, 1 H), 2,80 (s, 3H).

Príklad

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2piperazin-l-yletoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C24^H3O^C,N9°5 M.W. 560,01. MS 560 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H); 8,28 (s, 1 H); 7,29 (s. 1H); 7,19 (dd, 1 H, J = 8,6, 2,6 Hz); 6,92 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,3 Hz); 4,89 (s, 2H), 4,82 (s, 2H); 4,59 (dd, 1H, J = 5,0, 4,5 Hz); 4,30 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,74(d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,54 (m, 4H); 2,80 (m, 7H).

Príklad 64

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-etyl-3-oxopiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-y1)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H32CIN₉O₆ M.W. 602,1. MS 602 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8,33 (s, 1 H); 8,28 (s, 1 H); 7,30 (m, 1H); 7,2 (t, 1H, J = 6,2 Hz); 6,94 (dd, 1H, J = 8,7, 3,9 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 4,92 (s, 2H):

4,83 (m, 2H); 4,61 (t, 1H, J = 4,2 Hz); 4,32 (d, 1H, J = 5,7 Hz); 4,22 (s, 1H); 4,13 (s,1H); 3,8 (m, 3H); 3.46 (m, 4H); 2,81 (s, 3H); 1,12 (q, 3H, J = 7,3).

169

Príklad 65

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-{2-[4-(2-chlórfenyl )piperazin-l-yl]-2-oxoetoxy)benzylamino)purin-9-y 1 ] -4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxy love j kyseliny

C₃oH33CINg0₅ M.W. 670,55. MS 670 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,29 (s, 1 H); 8,23 (s, 1H); 7,33 (m, 2H); 7,2 (m, 2H); 6,97 (m,

3H); 6,03 (d, 1 H, J = 4,2 Hz); 4,92 (s, 2H); 4,83 (s, 2H); 4,56 (t, 1 H, J = 4,6 Hz);

4,28 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,73(m. 5H); 2,98 (m, 4H); 2,77 (s, 3H).

Príklad 66

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(fenetylkarbamoylmetoxy) benzylamino ] purin-9-yl} -4 -hydroxy tetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^βΗβίΟΝβΟδ M.W. 595,06. MS 595 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ'8,37 (s, 1 H); 8,27 (s, 1 H); 7,3 (d, 1 H, J = 2,5 Hz);

7,2-7,02 (m, 6H); 6,83 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,3 Hz); 4_r76 (s, 2H);

4,57 (m, 3H); 4,3 (d. 1 H, J = 5,7 Hz); 3,74 (t, 1 H, 5,6 Hz); 3,5 (t, 4H, 7 Hz); 2,80 (s, 3H); 2,76 (t. 1H, J = 7 Hz).

Príklad 67

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-fenétyloxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C26H28CIN7O4· M.W. =

538,01. M.S. 538 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1 H); 8,27 (s,

1H); 7,3-7,05 (m, 7H); 6,92 (d, 1 H, J = 8,5 Hz); 6,05 (d, 1 H. J = 4,2 Hz); 5,45 (s,

2H); 4,65 (bs. 2H); 4,59 (m, 1 H); 4,25 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 4,2 (dd, 2H, J = 6,5,

6,0 Hz); 3,74 (m, 1 H); 3,02 (dd, 2H, J ='6,5, 6,0 Hz); 2,8 (s, 3H).

170

Príklad 68

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-( 3,5-di metylpiperazin-l-yl )-2-oxoetoxy ]benzylamino)purin-9-yl )-4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny θ26^Η34^ΟΙΝ9°5 M.W. 588.1. MS 588 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,34 (s, 1 H); 8,28 (s, 1H); 7,28 (s, 1H); 7,18(00,

H, J = 8,7, 2,6 Hz); 6,92 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 4,81 (m, 2H); 4,60 (t, 1 H, J = 4,8 Hz); 4,4 (d, 1 H, J = 12 Hz); 4,31 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,83 (d, 1 H, 12.9 Hz); 3,76 (m, 1 H); 3,13 (m, 1 H); 2,81 (s, 3H); 2,72 (m, 2H); 2,51 (s, 1H); 2,27 (t, 1 H, J = 12 Hz); 1,27 (s. ,1H); 1,09 (d,.6H, J = 6,4 Hz).

Príklad 69

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[4-(4-dimetylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C27^H36^C1N9°5 M.W. 602,09. MS 602 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,32 (s, 1 H); 8,26 (s, 1H); 7,28 (s, 1 H); 7,16 (dd, 1 H, J = 8,7, 2,4

Hz); 6,90 (dd, 1H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 4,81 (s, 2H); 4,58 (t,

H, J = 4,8 Hz); 4,55 (d, 1 H, J = 12,0 Hz); 4,28 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 4,0 (d, 1 H, J 13 Hz); 3,72 (s, 1 H); 3,05 (t, 1 H, J = 5,7 Hz); 2,79 (s, 3H); 2,62 (t, 1 H, J = 13 Hz); 2,39 (m, 1H); 2,21 (s, 6H); 1,87 (s, 2H); 1,4 -1,25 (m, 4H).

Príklad 70

Metylamid (2 S,3S,4R,5R)-5-(6-{2-[2-(4-adamantan-2-ylpipera zin-l-yl)-2-oxoetoxy]-5-chlórbenzylamino)purin-9-yl}-3-amino-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

171

C₃4H44^cin9°5 ^M-^W· 694.24. MS 694 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,29 (s, 1 H); 7,31 (d, 1H, J = 2,1 Hz);'

7,2 (dd, 1 H, J = 8,7, 2,6 Hz); 6,93 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,3 Hz);

4,83 (m, 2H); 4,58 (t, 1 H, J = 4,8 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,74 (t, 1H, 5,48 Hz);

3,59 (t, 4H, 4,87 Hz); 2,82 (s, 3H); 2,4 (s, 4H); 2,1-1,27 (m, 17H).

Príklad 71

Amid (2R,3R,4S,5S)-l-[(2-{ [9-(4-amino-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofurán-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)acetyl]piperidín-4-karboxylovej kyseliny θ26^Η32^01Ν9°6 M.W. 602,05. MS 602 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,29 (s, 1 H); 7,29 (s, 1 H); 7,18 (dd, 1 H, J = 8,7. 2,6 Hz);

6,93 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,3 Hz); 4,90 (s. 3H); 4,61 (t, 1 H, J = 4,3 Hz); 4,4 (d, 1 H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,05 (d, 1 H); 3,76 (t, 1H); 3,28 (m, 1H); 2,81 (s, 3H); 2,75 (m, 1 H); 2,5 (m. 1 H); 1,83 (d, 2H); 1,63 (m, 3H).

Príklad 72

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-cykloheptylpipera z in-1-y1)-2-oxoetoxy]ben zylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C31 H42CIN9Ô5 M.W. 656,19. CIMS 656.1 (M+H)+. ¹HNMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,31 (s, 1 H); 8,29 (s, 1 H); 7,31 (s, 1 H); 7,20 (dd, 1 H, J =

8,71, 2,69Hz); 6,94 (d, 1H, J = 8,71 Hz); 6,08 (d, 1H, J = 3,74Hz); 4,90 (s, 2H); 4_Z82 (s, 2H); 4,72 (t, 1H J = 4,56Hz); 4,42 (d, 1H, J = 6,02H.z); 4,03 (t, 1H, J = 4,56Hz);

3,62 (s, 4H); 2,78 (s, 3H); 2,66 (s, 5H); 1,81-1,38 (m, Í2H)

172

Príklad 73

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-5~{6-[2-(adamentan-2-ylkarbamoylmetoxy )-5-chlórbenzylamino]purin-9-yl}-3-amino-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^c30^H37^{cl n}8°5 M.W. 625,13. CIMS 625.0 (M+1). ¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8,36 (s, 1H); 8,28 (s, 1 H); 7,34 (ď, 1 H, J = 2,49Hz); 7,24 (dd, 1 H, J = 8,72, 2,49Hz); 6,94 (d, 1H, J = 8.,93Hz); 6,06 (d,1 H, J = 4,15); 4,83 (s, 2H);4,64 (s, 2H);

4,58 (t, 1H, J = 4,77Hz), 4,30 (d, 1H, J = 5,61 Hz); 4,Q1 (s, 1 H); 3,74 (t, 1H,

5,61 Hz); 2,81 (s, 3H); 1,81-1,43 (m, 14H).

Príklad

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(1-fenyletoxy Jbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H28^C1N7°4· ^M,w· 538,01. m.S. 538 (M+H)⁺ = 538,01. M.S. 538 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,25 (s,

H); 7,42-7,08 (m, 6H); 7,0 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,74 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,4 (q, 1 H, J = 6,8 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,59 (m, 1 H); 4,3 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,73 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H); 1,58 (bs, 3H).

Príklad 75 terc-Butylester (2R,3R,4S,5S)-4-[(2—{[9-(4-amino-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)acetyl]piperazín-l-karboxylovej kyseliny ^C29^H38^CIN9°7 ^M-^W· 660,13. MS 660 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,33 (s. 1H); 8,28 (bs. 1H); 7,3 (bs. 1H); 7,2 (d, 1H. J = 8,9

Hz);. 6,93 (d. 1H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,91 (s. 2H); 4,82 (bs, 2H);

4,6 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H. J = 5,6 Hz); 3,81 (t, 1H. J = 5,OHz); 3,6 (m.

4H); 3,42 (m. 4H); 2,8 (s. 3H); 1,42 (s, 9H).

173

Príklad 76

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlór-2-kyanometoxybenzylamino) purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C20^H21^C1N8°4 ^M-^W· 472,89. MS 473 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,36 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,32 (bs, 1 H); 7,28 (dd,

H, J = 8,9, 2,5 Hz); 7,08 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 5,05 (s,

2H); 4,8 (bs, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 4,9 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,78 (t, 1H, J =

5,5 Hz); 2,8 (s, 3H).

Príklad 77

Metylester (2R,3R,4S, 5S)-(2-{[9-(4-amino-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octovej kyseliny ^C21^H38^CIN7°6 M.W.505,92. MS 506 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1 H); 8,29 (s, 1 H); 7,3 (bs, 1 H); 7£ (dd,

H, J = 8,9. 2,5 Hz); 6,9 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,04 (d, 1 H, J = 4,0 Hz); 4,8 (m, 4H);

4,6 (t, 1 H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 3,78 (m, 4H); 2,8 (s, 3H).

Príklad 78

Etylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-amino-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octovéj kyseliny θ22^Η26θ^ΙΝ7°6 M.W.519,95. MS 520 (M+H)⁺. . r i

¹H NMR .(400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1 H); 8,29 (s,1 H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (dd,

H, J = 8,9, 2,5 Hz); 6,9 (d, 1 H,. J = 8,9 Hz); 6,04 (d, 1 H, J = 4,0 Hz); 4,82 (s, 2H);

4,8 (s, 2H); 4,6 (t. 1H, J = 4,5 Hz); 4,3·(d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,21 (q, 2H, J = 7,1 Hz);

3,78 (t, 1 H, J = 5,4 Hz); 2,8 (s, 3H); 1,22 (t, 3H, J = 7,1 Hz).

174

Príklad 79

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6 - [5-chlór-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny C22^H26^C1N9°4 M.W.515,96. MS516(M+H)⁺.

í ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,4 (s, 1H); 8,3 (s, 1H); 7,32 (bs, 1H); 7,2 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,97 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 3,8 Hz); 4,84 (m, 4H); 4,6 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,75 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 3,62 (m, 4H); 2,.8 (s, 3H).

Príklad 80

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[l-(2-benzyloxy-5-chlórf enyl) etylamino ] purin-9-yl } -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H28^C1N7°4·

M.W. =538,01. M.S. 538 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,39 (bs, 1 H);

8,2 (d, 1H, J = 4,5 Hz); 7,5-7,22 (m, 5H); 7,18 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,0 (d, 2H, J =

8,6 Hz); 6,05 (d, 1 H, J = 3,9 Hz); 5,79 (bs, 1 H); 5,18 (s, 2H); 4,6 (t, 1 H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,7 (m, 1H); 2,8 (s, 3H); 1,6 (d, 3H, J = 6,8 Hz).

Príklad 81

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlórbenzylamino) -2-chlórpurin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

M.W. = 558,43. M.S. 558 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, D6DMSO) δ 8,82 (m, 1H); 8,6 (bs, 1H); 8,2 (bs, 1H); 7,43-7,02 (m, 7 H); 5,95 (bs, 2H); 4,62 (bs, 2H)

4,3 (bs, 1H); 4,1 (m, 2H); 3,52 (m, 1 H); 3,1 (d, 3H, J = 5,0 Hz); 2,42 (bs, 2H);

1,75 (bs, 2H).

175

Príklad 82

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzylsulfanyl-5-chlórbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C25^H26^C1N7°4^S· ^M*^W· = 540,05; M.S. 540 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,35 (s, 1 H); 8,27 (s, 1H); 7,4-7,1 (m, 8H); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,8 (bs,.2H); 4,61 (m, 1H); 4,35 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 4_f08 (s, 2H); 3,82 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H).·

Príklad 83

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-brómbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C25^H26^BrN7°4· ^M· ^W· ⁼

568.43. M.S. 568 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 7,42-7,23 (m, 7H); 6,97 (d, 1 H, J = 9,3 Hz); 6,06 (d,1H,J = 4,1 Hz); 5,13 (s, 2H); 4,8 (bs, 2H); 4,6 (m, 1 H); 4,3 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,79 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H).

Príklad 84

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-fluór-benzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C25^H26^FN7°4· ^M· ^W· =

507,53. M.S. 508 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) 5 8,32 (s, 1 H); 8,26 (s, 1H); 7,42-7,22 (m, 4H); 7,1-6,9 (m, 4H); 6,06 (d, 1 H, J = 4,2 Hz); 5,13 (s, 2H);

4,8 (bs, 2H); 4,5 (m, 1 H); 4,3 (d, 1 H, J = 5,5 Hz); 3,79 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H).

176

Príklad 85

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-( 2-benzyloxy-5-jódbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny ^C25^H26^IN7°4* ^M-^w· “

615,43. M.S. 490 (M-l)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1 H); 8,21 (s,

1H); 7,42-7,18 (m, 5H); 7,02-6,82 (m, 3H); 6,05 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,í (d, 2H, J = 4,9 Hz); 4,83 (bs, 2H); 4,55 (m. 1 H); 4,29 (d, 1 H, J = 5,5 Hz); 3,7 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H).

Príklad 86

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-trifluórmetylbenzylamino) purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

M.W. =557,54. M.S. 558 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 1 H); 8,24(5,1 H); 7,6-7,18 (m, 8H); 6,06 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 5,21 (s, 2H); 4,83 (bs, 2H); 4,6 (m, 1 H); 4,3 (d, 1 H, J = 5,7 Hz); 3,75 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H).

Príklad 87

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-[ 6-(2-benzyloxy-5-kyanobenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxy lovej kyseliny ^C26^H26^N8°4- ^M· =

514,55. M.S. 515 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 1 H); 8,24 (s, Ί H); '7,63-7,2 (nri, 8H); 6,06 (d, 1 H, J = 4,1 Hz); 5,24 (s, 2H); 4,83 (bs, 2H); 4,6 (m, 1 H); 4,32 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 3,76 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H).

177

Príklad 88

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-metylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

M· W· —

503,56. M.S. 504 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,31 (s, 1H); 8,22 (š, 1H); 7,4-6,9 (m, 8H); 6,03 (d, 1 H, J = 4,3 Hz); 5,04 (š, 2H); 4,8 (bs, 2H); 4,58 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,7 (m, 1H); 2,8 (s, 3H); 2,2 (s, 3H).

Príklad 89

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-vinylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C27^H29^N7°4- ^M· ^W· ⁼

515j57. M_TS. 516 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,22^;(s, 1H); 7,42-7,2 (m, 7H); 6,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,6 (dd, 1H, J = 8,2, 6,0 Hz);

6,03 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,58 (d, 1H, J = 8,2 Hz); 5,1 (s, 2H); 4,8 (bs, 2H); 4,58 (m, 1 H); 4,26 (d, 1 H, J = 5,5 Hz); 3,72 (m,· 1 H); 2,8 (s, 3H).

Príklad 90

Metylamid ( 2S, 3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-etynylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^27^27^7θ4’ M· W. =

513,56. M.S. 514 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 1 H); 8,26 (s, 1H); 7,7-7,23 (m, 7H); 7,0 (d, 1 H, J = 8,5 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,2 Hz); 5,18 (s,

2H); 4,8 (bs, 2H); 4,6 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,75 (m, 1H); 3,3 (s, 1H);

2,8 (s, 3H).

178

Príklad 91

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2-(4-piperidin-l-yl)piperidin-l-yletoxy)benzylamino]purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovéj kyseliny C30H40CIN9O5 M.W. 642,18. MS 642 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,4 (s, 1H); 8,32 (bs, 1H); 7,35 (bs,J H); 7,22 (d, j H, J = 8,9 Hz); 6,96 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1 H, J = 4_r1 Hz); 4,91 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (m, 2H); 4,33 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 4,2 (bd, 1 H, J = 10,5 Hz);

3,79 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 3,18 (m, 1H); 2,82 (s, 3H); 2,6 (m, 6H); 1,9 (m, 2H); 1,65-1,3 (m, 8H).

Príklad 92

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-metylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino)purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny . C26H34CIN9O5 M.W. 588,07. MS 588 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,39 (s, 1 H); 8,33 (s, 1 H); 7,35 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7, 2,4

Hz); 6,94 (dd, 1 H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,0 Hz); 4,95 (s, 2H); 4,81 <s, 2H); 4,62 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 4,5 (bd, 1 H, J = 12,0 Hz); 4,36 (d. 1 H, J = 5,4 Hz); 4,02 (bd, i H, J = 13 Hz); 3,79 (t, 1H, J = 5,7 Hz); 3,2 (m, 1H); 2,82 (s, 3H); 2/79 (t, 1H, J = 13 Hz); 2,62 (m, 1H); 2,4 (s, 3H); 1,97 (m, 2H); 1,4 -1,Í5 (m, 2H).

Príklad 93

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-aminopiperidin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino)purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovéj kyseliny

179 ^C25^H32^C,N9°5 M.W. 57.4,04. MS 574 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8,37 (s, 1 H); 8,28 (s. 1 H); 7_f3 (s, 1 H); 7,2 (dd, 1 H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,92 (dd, 1 H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,06 (d, 1 H, J = 4,0 Hz); 4,95 (s, 2H); 4,81 (s, 2H); 4,6 (t, 1 H, J = 4,8 Hz); 4,4 (bd, 1 H, J = 12,0 Hz); 4,3 (d, 1H, J =

5,4 Hz); 3,95 (bd, 1 H, J = 13 Hz); 3,75 (í, 1 H, J = 5,7 Hz); 3,1 (m, 1 H); 2,8 (s, 3H);

2,79 (m, 2H); 2,62 (m, 1 H); 1,82 (m, 2H); 1,4-1,15 (m, 2H).

Preparatívny po stup A 1

Štiepenie BOC

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2-piperazin-l-yletoxy) bénzylamino] pur in-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

K trifluóroctovej kyseline (30 ml) sa pri teplote okolia pridá metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-[5-chlór-2-(2-OXO-2-(4-terc-butyloxykarbonyl)piperazin-l-yletoxy)bénzylamino ] purin-9-yl} -4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny (3 g, 4,5 mmol). Vzniknutá zmes sa po 1 hodine skoncentruje. Zvyšok sa trikrát rekoncentruje z chloroformu. Surový produkt sa rozpustí v metanole (80 ml) a dichlórmetáne (100 ml). Výsledný roztok sa zneutralizuje živicou Amberlite IR 400 (OH), zmes sa prefiltruje a skoncentruje. Zvyšok sa nechá prejsť cez vrstvu silikagélu (7,5 až 10% metanol/dichlórmetán/0,1% hydroxid amónny). Získa sa 2,24 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky.

Podobným spôsobom sa zo zodpovedajúcich chránených amínov vyrobia zlúčeniny z ďalej uvedených preparátívnych postupov A2 až A3.

180

Preparatívny postup A2

Metylamid (2S,3S,4R,5R) -3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-aminopiperidin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup A3

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-metylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-y1)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovéj kyseliny

Preparatívny postup BI

Kopulácia amidu

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-oxo-2-(3-oxopiperazin-l-yl)etoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

EDCI (44 mg, 0,23 mmol), HOBT (30 mg, 0,22 mmol) a DMAP (40 mg) sa pridajú k zmesi (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octovej kyseliny (60 mg, 0,116 mmol) a piperizin-2-onu (35 mg, 0,35 mmol) v bezvodom dimetylformamide (3 ml). Po 20 hodinách pri teplote miestnosti sa zmes skoncentruje. Zvyšok sa vopred naadsorbuje na silikagél a prečistí rýchlou chromatografiou (6 až 8% metanol v dichlórmetáne). Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky. MS: 600 (M+H)⁺

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe BI, sa zo zodpovedajúcich amínov vyrobia zlúčeniny uvedené v nasledujúcich preparatívnych postupoch B2 až B38.

181

Preparatívny postup B2

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2piperidin-1-yletoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof urán- 2 -karboxylové j kyseliny

Preparatívny postup B3

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-fenylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovéj kyseliny

Preparatívny postup B4

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-dimetylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovéj kyseliny

Preparatívny postup B5

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6—[2 —(benzylkarbamoylmetoxy)-5-chlórbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny

Preparatívny postup B 6

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl) -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B7

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-propylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny i

182

Preparatívny postup B8

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-morfolin-4-yl-2-oxoetoxy) benzy lamino ] purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B9

Metylamid (2S,3S,4R,5R) -3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2-pyrolidin-l-yletoxy )benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B10

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-dipropylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup Bil

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[(2-metoxy etylkarbamoyl )metoxy]benzylamino}purin-9-yl) -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B12

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-metylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B13

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-cyklohexylkarbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

183

Preparatívny postup B14

Etylester (2R,3R,4S,5S)-4-[(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl )-9H-purin-6-ylamino] metyl} -4-chlórfenoxy) acetyl ] piperazín-l-karboxyiove j kyseliny

Preparatívny postup B15

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-{6-[2-(2-azetidin-l-yl-2oxoetoxy)-5-chlórbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B16

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[(2-morfolin-4-yletylkarbamoyl)metoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B17

Metylamid (2S,3S,4R, 5R) -3-azido-5-(6-{5-chlór-2-(2-ΟΧΟ-2-(4-fenylpiperazin-l-yl )etoxy]benzylamino}purin-9-ýl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B18

Metylamid ( 2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[ 2-( 4-cyklohexylpiperazin-l-yl) -2-oxoetoxy ] benzylamino}purin-9-yl) -4-hydroxy tetrahydrof urán- 2 -karboxylovej kysel iny

Preparatívny postup B19

Metylamid (2S,3S,4R,5R) -3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-etylpiperazin-l-yl) - 2-oxoetoxy ]benzylamino}pur in-9-yl)-4-hydroxy tetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

184

Preparatívny postup B 2 0

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-cyklopropyl karbamoylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydro furán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B21

Metylamid ( 2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-karbamoylmetoxy-5-chlórbenzylamino )purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B22

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-cyklopropylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl) 4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B23

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-izopropylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny

Preparatívny postup B24

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-oxo-2-(4-propylpiperazin-l-yl)etoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny

Preparatívny postup B25

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-cyklopentylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-y1)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

185

Preparatívny postup B26

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-(6-{2-[2-(4-benzylpiperazin-l-yl) -2-oxoetoxy ] -5-chlórbenzylamino }purin-9-yl )-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B27

Metylamid (2S,3S,4R, 5R) -3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-etyl-3-oxopiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy ] benzylamino }purin-9-y 1) -4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxy love j kyseliny

Preparatívny postup B28

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-{2-[4—(2— -chlórfenyl)piperazin-l-yl]-2-oxoetoxy}benzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny

Preparatívny postup B29

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(fenetylkarbamoylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof urán- 2-karboxylove j kyseliny

Preparatívny postup B30

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(3,5-dimetylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B31

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-dimetylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

186

Preparatívny postup B32

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-5-(6-{2-[2-(4-adamantan-2-ylpiperazin-2-yl)-2-oxoetoxy]-5-chlórbenzylamino}purin-9-yl)-3-azido-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B33

Amid (2R,3R,4S,5S)-l-[(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofurán-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)acetyl]piperidin-4-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B34

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-cykloheptylpiperazin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B35

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-5-{6-[2-(adamantan-2-ylkarbamoylmetoxy)-5-chlórbenzylamino]purin-9-yl)-3-azido-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B36

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-oxo-2-(4-terc-butyloxykarbonyl)piperazin-l-yletoxy)benzylamino]-purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup B37

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[2-(4-terc-butyloxykarbonylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoetoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

187

Preparatívny postup B38

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[ 2-(4-terc-butyloxykarbonylmetylaminopiperidin-l-yl )-2-oxoetoxy ]benzylamino} pur in-9-yl)-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup Cl

Deprotekcia terc-butylesteru ( 2R, 3R, 4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octová kyselina terc-Butylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl) -9H-purin-6-ylamino]metyl)-4-chlórfenoxyJoctovej kyseliny (1 g, 1,9 mmol) sa pridá k trifluóroctovej kyseline (15 ml). Vzniknutá zmes sa 3 hodiny mieša pri teplote miestnosti a potom skoncentruje. Zvyšok sa trikrát rekoncentruje z chloroformu. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme peny. MS. 518 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,5 (m, 2H); 7,38 (bs, 1H); 7,25 (d, 1H, J = 8,0 Hz); 6,95 (d, 1H, J = 8,0 Hz); 6,0 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 5,0 (m, 1H); 4,85 (m, 2H); 4,75 (s, 2H); 4,4 (m, 2H); 2,8 (s, 3H).

Preparatívny postup Dl

Alkylácia fenolu

Etylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octovej kyseliny

188

Hydrid sodný (115 mg, 4,8 mmol) sa za chladenia v ladovom kúpeli pridá k roztoku metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[ 5-chlór-2-hydroxybenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny (2,06 g, 4,37 mmol) v bezvodom dimetylf ormamide (30 ml). Po 30 minútach sa k vzniknutej zmesi pridá etylbrómacetát (0,58 ml, 5,25 mmol). Reakčná zmes sa zahreje na teplotu okolia, cez noc mieša, rozloží metanolom a skoncentruje. Zvyšok sa vopred naadsorbuje na silikagél a prečistí rýchlou chromatografíou (2 až 6% metanol v dichlórmetáne). Získa sa 1,7 g produktu vo forme bezfarbej pevnej látky. MS 546 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (bs, 1H); 8,3 (s, 1 H); 7,32 (bs, 1 H);

7,22 (dd, 1 H, J = 8,9, 2,6 Hz); 6,9 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 6,02 (d, 1 H. J = 7,1 Hz); 5,07 (dd. 1H, J = 7,1,4,.9 Hz); 4,85 (bs, 2H); 4,8 (s, 2H); 4,42 (m, 2H); 4,25 (q, 2H, J = 6,9 Hz); 3,0 (s, 1 H); 2,85 (s, 3H); 1,28 (t, 3H, J = 6,9 Hz).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe Dl, sa z vhodných východiskových látok vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch D2 až D3.

Preparatívny postup D2

Metylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octovej kyseliny

Preparatívny postup D3

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-kyanometoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

189

Preparatívny postup El

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-Azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-morfolin-4-yletoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

K zmesi metylesteru 4-acetoxy-3-aziďo-5-(6-chlórpurin-9-yl)tetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny (485 mg, 1,27 mmol) a v bezvodom metanole (20 ml) sa pridá trietylamín (0,51 ml, 3,8 mmol). Reakčná zmes sa za bezvodých podmienok zahreje na 50’C, potom 15 hodín mieša pri teplote spätného toku, potom sa k nej pridá metylamín (3,8 ml, l,0M V metanole). Reakčná zmes sa ďalších 15 hodín mieša pri teplote miestnosti, potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo. Produkt sa vopred naadsorbuje na silikagél a prečistí rýchlou chromatografiou (SiO₂, 2,5% metanol v etylacetáte). Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise.

C24H29CIN-10O5· M W 573,02. MS 573.1 (M+H)+.

. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,64 (q, ’ 1 H, J = 4,6 Hz); 8,46 (s, 1 H); 8,35 (bs,

T H); 8,23 (s, 1 H); 7,21 (dd, 1H, J =8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 (bs, 1H); 7,01 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,30 (d,ΊΉ, J = 5,6 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,2 Hz) 4,98 (q, 1H, J = 5,5

Hz); 4,64 (bs, 2'H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,31 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 4,12 (t, 2H, J =

5,7 Hz); 3,57 - 3,5í (mult, 4H); 2,72 - 2,.62 (mult, 5H); 2,51 - 2,45 (mult, 4H).

Preparatívny postup E2

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlórbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C25^H24^C1N9°4· 549,98. M^s 550,1 (M+H)⁺.

190 ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,65 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,42 (bs,

1H); 8,23 (s. 1H); 7,49 - 7,45 (mult, 2H);7,40 - 7,35 (mult, 2H); 7,30 (t, 1H, J = 7,1 Hz); 7,21 (dd, 1H, J = 8,7 Hz. J = 2,5 Hz); 7,20 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 6,31 (d, 1H, J =

5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,17 (s, 2H); 4,96 (quart, 1H, J = 5.8 Hz); 4.71 (bs, 2H); 4.52 - 4.45 (mult, 1 H); 4.35 - 4.30 (mult, 1H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparatívny postup E3

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6- (5-chlór-2-cyklobutylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny C23H26CIN9O4. MW 527,97. MS 527.7 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,65 (q:, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,35 (bs,

H); 8,23 (s, 1 H); 7,20 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,03 (bs, 1 H); 6,98 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,31 (d, 1 H, J = 5,0 Hz); 5,98 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 4,96 (q, 1 H, J = 5,2

Hz); 4,64 (bs, 2H); 4,48 (bs, 1H); 4,30 - 4,32 (mult, 1H); 3,97 (d, 2H, J = 6,2 Hz);

2,71 (bs, 1H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,03 (bs, 2H); 1,86 (bs, 4H).

Preparatívny postup E 4 .

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[ 5-chlór-2-(3-metoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C26^H26^C,N9°5· MW 580,01. MS 579.8 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,65 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,43 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,28 (t, 1H, J = 8,2 Hz); 7,21 (dd, 1H, J = 8,6 Hz, J = 2,5 Hz);

7,10 - 7,00 (mult, 4H); 6,86 (d, 1H, J = 6,8 Hz); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6_f4 Hz); 5,15 (s, 2H); 4,96 (q , ' 1H, J = 5,5 Hz); 4,71 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult. 1H); 4,31 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 3,72 (s, 3H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

191

Preparatívny postup E5

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2,5-dimetoxybenzyloxy )benzylamino ]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny C27^H28^C1N9°6- MW 610,03. MS 609.9 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,66 (q, 1 H, J = 4,8 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,41 (bs

1H); 8,23 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (bs, 1H); 7,05 - 7,00 (mult, 2H); 6,96 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,86 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 3,1 Hz); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,10 (s, 2H); 4,95 (q, 1H, J = 5,8 Hz);

4,69 (bs, 2H); 4,49 - 4,48 (mult. 1 H); 4,31 (d, 1 H, J = 2,9 Hz); 3,77 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparatívny postup E6

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(3-chlórbenzyloxy) benzylamino ]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 89,0 až 95,0°C θ25^Η23^ΟΙ2^Ν9°4· ^MW 584,43. MS 583,8 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,63 (q 1 H, J = 4,4 Hz); 8,45 (s, 1 H); 8,45 (bs,

H); 8,23 (s, 1 H); 7,52 (s, 1 H); 7,45 - 7,32 (mult, 3H); 7,21 (dd, 1 H, J = 8,9 Hz, J =

2,7 Hz); 7,10 (bs, 1H); 7,02 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,29 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 5,96 (d, '

1H, J = 6,4 Hz); 5,17 (s, 2H); 4,98 - 4,90 (mult, 1H); 4,69 (bs, 2H); 4,48 - 4,44 (mult, 1 H); 4,30 (d, 1 H, J = 2,9 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Preparatívny postup E 7

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(4-chlórbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

192

Teplota topenia: 79,0 až 84,0°C

C25^H23^CI2^N9°4- MW 584.43. MS 584.1 (M+H)+.

• H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,66 (q , 1H, J = 4,4 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,44 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,50 (d, 2H, J = 8,3 Hz); 7,47 - 7,41 (mult, 2H); 7,25 - 7,20 (mult, 1H); 7,15 - 7,05 (mult, 2H); 6,32 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 7,7 Hz); 5,17 (s, 2H); 4,96 (q , 1 H, J = 5,2 Hz); 4,70 (bs, 2H); 4,49 (bs, 1 H); 4,32 (d, 1 H, J =

2,9 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

preparatívny postup E8

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-<6-[5-chlór-2-(2-chlórbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 66,0 až 70,0°C ^C25^H23^C,2^N9°4· MW 584,43. MS 584,1 (M+H)+

H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8.66 (q , 1H, J = 4,8 Hz); 8,47 (s,1H); 8,42 (bs,

1H), 8,22 (s, 1H); 7,67 - 7,61 (mult, 1 H); 7,52 - 7,48 (mult, 1 H); 7.41 - 7,34 (mult, 2H); 7,27 - 7,18 (mult, 1 H); 7,11 (d, 2H, J = 9,1 Hz); 6,32 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,22 (s, 2H); 4,96 (q , 1 H, J = 5,8 Hz); 4,70 (bs, 2H); 4,50 4,45 (mult, 1 H); 4,32 (d, 1 H, J = 3,1 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,8 Hz).

Preparatívny postup E9

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(tetrahydro furan-3-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

193 ^c23^h26^cin9O5- MW 543.97. MS 544.1 <M+H)+ ’H NMR (400 MHz, DMS0-d₆) δ 8.65 (q» 1 H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,38 (bs,

H); 8,24 (s, 1 H); 7,21 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2_Z7 Hz); 7,06 (bs, 1 H); 6,99 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 6,31 (dd, 1H, J = 5,4 Hz, J = 2,1 Hz); 5,99 - 5,97 (mult,1 H); 4,97 - 4,95 (mult, 1 H); 4,65 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,35 - 4,29 (mult, 1H); 4,01 - 3,88 (mult, 2H); 3,83 - 3,72 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,59 - 3,53 (mult, 1H);

2,70 - 2,60 (mult, 4H); 2,05 - 1,95 (mult, 1 H); 1,75 - 1,62 (mult, 1 H).

Preparatívny postup E10

Metylamid (2S,3S,4R,5R) -3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(4-metylbenzyloxy) benzylamino ]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 88,0 až 95,0°C ^C26^H26^CIN9°4· MW 564,01. MS 564,2 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q, 1 H, J = 4,8 Hz); 8,47 (s,1 H); 8,42 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,45 (d, ÍH, J = 7,1 Hz); 7,27 - 7,16 (mult, 4H); 7,14 (d, 1H, J = 8,7.Hz); 7,06 (bs, 1 H); 6,32 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 5,15 (s, 2H); 4,96 (q., 1 H, J = 5,5 Hz); 4,68 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1 H); 4,32 (d, 1 H,

J = 2,9 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 2,34 (s, 3H).

Preparatívny postup Eli

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-metylbenzyloxy) benzylamino ]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 58,0 až 62,0°C C26^H26^C,N9°4· MW 564,01. MS 564,2 (M+H)+ ’H NMR (400 MHz.'.DMSO-dg) δ 8.66 (q., 1 H, J = 4,8 Hz); 8,48 (s, 1 H); 8,41 (bs,

1H);8,24(s, 1 H); 7,35 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,21 (d, 1 H, J = 8,5 Hz); 7,20 - 7,15 (mult, 3H); 7₇06 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,32 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,12 (s, 2H); (q , 1H, J = 5,8 Hz); 4,68 (bs, 2H);

4,50 - 4,47 (mult, 1 H); 4,32 (d, 1 H, J = 3,1 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4.8 Hz); 2,28 (s,

3H).

194

Preparatívny postup E12

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6- [5-chlór-2-(3-metylbenzyloxy) bénzylamino] purin-9-yl}-4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 80,0 až 84,0°C ^26^26^^9θ4· MW 564.01. MS 564.2 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,66 (q , 1 H, J = 4,8 Hz); 8,48 (s,1 H); 8,41 (bs,

H); 8,24 (s, 1 H); 7,28 - 7,24 (mult, 3H); 7,22 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,13 - 7,05 (mult, 3H); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 5,13 (s, 2H);

4,96 (q, 1 H, J = 5,7 Hz); 4,69 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1 H); 4,32 (d, 1 H, J =

3,1 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 2,28 (s, 3H).

Preparatívny postup E13

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2-metoxybenzyloxy) bénzylamino ] purin-9-y 1} -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H26^CIN9°5- MW 580,01. MS 580,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8.63 (q., 1 H, J = 4,8 Hz);. 8,45 (s, 1 H); 8,36 (bs,

H); 8,21 (s, 1 H); 7,41 (dd, 1 H, J = 7,7 Hz, J = 1,7 Hz); (t, 1 H, J = 7,2 Hz); 7,19 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 - 6,99 (mult, 3H); 6,92 (t, 1 H, J = 7,5 Hz);

6,28 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 5,96 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 5,09 (s, 2H); 4,98 - 4,90 (mult,

H); 4,65 (bs, 2H); 4,48 - 4,42 (mult, 1H); 4,29 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 3,80 (s, 3H);

2,64 (d, 3H, J = 4,8 Hz).

Preparatívny postup E14

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(furan-3-ylmetoxy)bénzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

195

Teplota topenia: 86,0 až 90,0°C

C23H22CIN9O5. MW 539,94. MS 540,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q., 1H, J =4,6 Hz); 8,48 (s, 1H); 8,39 (bs,

1H); 8,24 (s, 1 H); 7,80 (s, 1 H); 7,66 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz);

7,11 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,06 (bs, 1 H); 6,60 (s, 1 H); 6,31. (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 5,03 (s, 2H); 4,96 (q., 1 H, J = 5,6 Hz); 4,64 (bs, 2H); 4,49 4,47 (mult, 1 H); 4,32 (d, 1 H, J = 3,1 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,6 Hz). ·

Preparatívny postup E 1 5

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(4-metoxybenzyloxy)benzylaraino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny C26^h26^CIN9°5· MW 580,01. MS 580,0 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q , 1 H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s, 1 H); 8,37 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,37 (d, 2H, J = 8,5 Hz); 7,19 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz);

7,05 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 6,89 (d, 2H, J = 8,7 Hz); 6,28 (d,.1H, J = 4,8 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,2 Hz); 5,06 (s, 2H); 4,98 - 4,90 (mult, 1H); 4,63 (bs, 2H); 4^6 - 4_Λ42 (mult, 1 H); 4,29 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 3,70 (s, 3H); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparatívny postup E16

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-cyklopentylmetoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

C24H28CIN9O4. MW 542,00. MS 541,8 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d_s) δ 8,64 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,45 (s, 1 H); 8,33 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,17 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,9 Hz); 7,00 (bs, 1H), 6,95 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,29 (d, 1 H, J = 5,6 Hz); 5,96 (d, 1 H, J = 6,2 Hz); 4,95 - 4,90 (mult, 1 H);

4,62 (bs, 2H); 4,47 - 4,43 (mult, 1 H); 4,29 (d, 1 H, J = 3,1 Hz); 3,85 (d, 2H, J = 6,9 Hz); 2,64 (d. 3H. J = 4,8 Hz); 2,32 - 2,21 (mult, 1 H); 1,78 -1,66 (mult, 2H); 1,60 1,42 (mult, 4H); 1,37 -1,25 (mult, 2H).

196

Preparatívny postup E17

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlór-2-[3-(2-morf olin-4-yletoxy) benzyloxy]benzylamino}purin-9-yl) -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^c31^h35^cin10°6· MW 679,14. MS 678,7 (M+H)+ ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,62 (q, 1H, J ='5,0 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,40 (bs,

H); 8,22 (s, 1 H); 7,27 - 7,17 (mult, 2H); 7,05 - 7,03 (mult, 1 H); 7,03 - 6.98 (mult, 3H); 6,84 (d, 1H,' j = 8,3 Hz); 6,30 - 6,25 (mult, 1 H); 5,99 - 5,92 (mult, 1H); 5,12 (s, 2H); 4,95 - 4,88 (mult, 1H); 4,73 - 4,65 (mult, 2H); 4,45 - 4,41 (mult, 1 H); 4,30 4,26 (mult. .1 H); 4,07 - 4,00 (mult, 2H); 3,55 - 3,45 (mult, 4H); 2,67 - 2,60 (mult,

5H); 2,42 - 2,37 (mult, 4H).

Preparatívny postup E18

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2,2,7,7-tetrametyltetrahydrobis[l,3]dioxolo[4,5-b;4 ',5’]pyran-5-ylmetoxy) benzylamino ]purin-9-yl} -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^c30^H36^clN9°9- MW 702,13. MS 702,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,72 - 8,65 (mult, 1 H); 8,47 (s, 1H); 8,38 (bs, 1H);

8,25 (s, 1 H); 7,21 (dd, 1 H, J = 8,5 Hz, J = 2,3 Hz); 7,06 (bs, 1 H); 7,03 (d, 1 H, J =

8,5 Hz); 6,38 (bs, 1 H); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,48 (d, 1H, J = 4,8 Hz); 4,95 (t,

H, J = 5,8 Hz); 4,65 (bs, 2H); 4,60 (d, 1 H, J = 7,9 Hz); 4,51 - 4,45 (mult, 1 H); 4,39 - 4,35 (mult, 1 H); 4,35 - 4,29 (mult, 2H); 4,21 - 4,16 (mult, 1 H); 4,08 - 3,99 (mult, 2H); 2,67 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,35 (d, 6H, J = 11,4 Hz); 1,25 (s, 6H).

Preparatívny postup Fl terc-Butylester (5-{6-[5-chlór-2-(3-metylizoxazol-5-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxy-2-metylkarbamoyltetrahydrofuran-3-yl)karbámovej kyseliny

197

K zmesi terc-butylesteru [5-(6-chlórpurin-9-yl)-4-hydroxy-2-metylkarbamoyltetrahydrofuran-3-yl]karbámovej kyseliny (500 mg, 1,2 mmol) a (3-metylizoxazol-5-ylmetoxy)benzylamínu (1,4 mmol) v bezvodom etanolu (10 ml) sa pridá trietylamin (0,5 ml, 3,6 mmol). Reakčná zmes sa zahreje na 65°C a potom 15 hodín mieša pri teplote spätného toku za bezvodých podmienok, potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo. Produkt sa vopred naadsorbuje na silikagél a prečistí rýchlou chromatografiou. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise.

Teplota topenia: 135,0 až 137,O’C ^C28^H33^CIN8°7- MW 629,08. MS 629,2 (M+H)+ ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (bs, 1 H); 8,41 - 8,33 (mult, 2H); 8,19 (s, 1H);

7,23 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,12 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,07 (bs, 1 H); 6,96 • (d, 1 H, J = 6,0 Hz); 6,47 (s, 1 H); 5,98 (d, 1 H, J = 4,6 Hz); 5,91 (bs, 1 H); 5,29 (s,

2H); 4,63 (bs, 2H); 4,55 - 4, 43 (mult, 1 H); 4,28 - 4,17 (mult, 2H); 2,63 (d, 3H, J.=

4,6 Hz); 2,20 (s, 3H); 1,35 (s, 9H).

Preparatívny postup G 1 terc-Butylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]metyl}-4-chlórfenoxy)octovej kyseliny

Trietylamin (0,3 ml, 2,1 mmo) sa pri teplote miestnosti pridá k roztoku metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlórpurin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny (302 mg, 0,9 mmol) a terc-butylesteru 2-aminometyl-4-chlórfenoxyoctovej kyseliny (290 mg, 1,07 mmol) v etanole. Reakčná zmes sa 2,5 hodiny zahrieva na 70’C, potom ochladí a vytvorená pevná látka sa premyje chladným etanolom a vysuší. Získa sa 420 mg (81 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky. Alternatívne je možné produkt prečistiť rýchlou chromatografiou (2 až 5% metanol v dichlórmetáne). MS 574 (M+H)⁺. ¹H NMR

198 (400 MHz, CD3OD) δ 8,28 (bs, 1 H); 8,24 (s, 1 H); 7,32 (bs, 1 H); 7,18 (dd, 1H, J = 8,9, 2,6 Hz); 6,92 (d,1 H, J = 8,9 Hz); 5,95 (d, 1 H, J = 7,1 Hz); 5,03 (dd, 1 H, J =

7,1,4,9 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,83 (s, 2H); 4,39 (m, 2H); 3,0 (s, 1 H); 2,8 (s, 3H);

1,4 (s, 9H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe Gl, sa pri použití vhodných východiskových látok vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch G2 až G30.

Preparatívny postup G2

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(3-metylizoxazol-5-ylmetoxy) benzylamino]purin-9-yl }-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 94,0 až 98,0°C ^C23^H23^C1N10°5· “W ⁵⁵⁴»⁹⁶· ^MS S⁵'¹ (M+H)⁺

Ή NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 8,63 (q, 1 H. J = 4,6 Hz); 8,46 (s. 1 H); 8,41 (bs.

H); 8,21 (s, 1 H); 7,23 (dd, 1 H. J = 8,7 Hz. J = 2,5 Hz); 7,11 (d, 1_H, J = B 7 Hz)· 7,06 (bs, 1H); 6,48 (S, 1 H); 6,29 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 5,97 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5 29 (s, 2H); 4,94 (q , 1 H, J = 5,6 Hz); 4,63 (bs, 2H); 4,48 - 4,42 (mult, ) H); 4,30M.

H, J = 2,7 HZ); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,19 (s, 3H).

Preparatívny postup

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(tetrahydrof urán-3-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny θ23^Η26°^ΙΝ9°5· ^MW 543,97. MS 544,1 (M+H)+.

¹H ŇMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,38 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J =2,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,31 (dd, 1H, J = 5,4 Hz, J = 2,1 Hz); 5,99 - 5,97 (mult,1 H); 4,97 - 4,95 (mult, 1 H); 4,65 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1 H); 4,35 - 4,29 (mult, 1H); 4,01 - 3,88 (mult, 2H); 3,83 - 3,72 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,59 - 3,53 (mult, 1 H);

2,70 - 2,60 (mult. 4Hk 2.05 - 1.95 (mult. 1ΗΊ: 1.75 -1 ími .H 1

199

Preparatívny postup G4

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(tetrahydrof uran-3 -y lmetoxy) benzylamino ]purin-9-yl} -4-hydroxytetrahydrof urán- 2-karboxylovej kyseliny ^C23^H26^CIN9°5· ^MW 543,97. MS 544,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (quart, 1 H, J = 4.6 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,38 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,21 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,31 (dd, 1H, J = 5,4 Hz, J = 2,1 Hz); 5,99 - 5,97 (mult,1H); 4,97 - 4,95 (mult, 1H); 4,65 (bs, 2H); 4,50-4,45 (mult, 1H); 4,35 - 4,29 (mult, 1H); 4,01 - 3,88 (mult, 2H); 3,83 - 3,72 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,59 - 3,53 (mult, 1H);

2,70 - 2,60 (mult, 4H); 2,05 -1,95 (mult, 1H); 1,75 - 1,62 (mult, 1H).

Preparatívny postup G5

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(furan-2-y lmetoxy) benzylamino ] pur in-9-yl) -4 -hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 182,0 až 185,0“C

C23H22^C1N9°5- ^{MW 539}r⁹⁴· ^MS (^Μ+Η)+· ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (d, 1H, J = 4.6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,38 (bs.

H); 8,23 (s, 1 H); 7,68 (d, 1 H, J = 1,9 Hz); 7,23 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz);

7,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,03 (bs, 1H); 6,60 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,45 (dd, 1H, J =

3,1 Hz, J = 1,9 Hz); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,2 Hz); 5,13 (s, 2H);

4,96 (q, 1 H, J = 6,0 Hz); 4,60 (bs, 2H); 4,51 -4,45 (mult, 1H); 4,31 (d, 1H, J =

3,1 Hz); 2,66 (d, 3H. J = 4,6 Hz).

200

Preparatívny postup G6

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(2,5-dimetylfuran-3-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 85,0 až 87,0°C ^c25^h26^c,N9°5· ^MW 568,00. MS 568,1 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz, DM5O-d₆) δ 8,63 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s, 1 H); 8,33 (bs,

1H); 8,20 (s, 1 H); 7,19 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,02 (bs, 1 H); 6,28 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 6,06 (s, 1 H); 5,96 (d, 1 H. J = 6,4 Hz); 4,93 (q, 1 H, J = 5,2 Hz); 4,86 (s, 2H); 4,59 (bs, 2H); 4,47 - 4,42 (mult, 1 H); 4,29 (d,

H, J = 3,1 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,21 (s, 3H); 2,14 (s, 3H).

Preparatívny postup G7

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[ 5-chlór-2-(5-dimetylaminomety1furán-2-ylmetoxy)benzylamino]pur in-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny ^C26^H29^C,N1O°5· MW 597,04. MS 597,1 (M+H)⁺.

H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,63 (q, 1 H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,34 (bs,

H); 8,20 (s, 1 H); 7,22 - 7,16 (mult, 1 H); 7,13 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,00 (bs, 1 H);

6,49 (d, 1H, J = 3.7 Hz); 6,29 (bs, 1H); 6,22 (d, 1H, J= 3,1 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,0 Hz); 5,06 (s, 2H); 4,92 (bs, 1 H); 4,56 (bs, 2H); 4,48 - 4,41 (mult, 1 H); 4,36 - 4,22 (mult, 1H); 3,28 (bs, 2H); 2,63 (d, 1H, J = 4,6 Hz); 2,14 - 2,04 (mult, 6H).

Preparatívny postup G8

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-[5-chlór-2-(tiazol-2-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

201

Teplota topenia: 88,0 až 92,0°C ^C22^H21^CIN10°4^S- MW 556,99. MS 557,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,66 (q, 1 H, J = 4,4 Hz); 8,52 - 8,40 (mult,

2H); 8,24 (s, 1 H); 7,84 (d, 1 H. J = 2,9 Hz); 7,77 (d, 1 H, J = 2,9 Hz); 7,25 (d, .1 H, J =

8,5 Hz); 7,15 (d. 1H, J = 8,5 Hz); 7,08 (bs, 1H); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d,

H, J = 6,4 Hz); 5,51 (s, 2H); 5,00 - 4,91 (mult, 1 H); 4,72 (bs, 2H); 4,49 (bs, 1 H);

4,32 (bs, 1 H); 2,66 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Preparatívny postup G9

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(benzotiazol-2-ylmetoxy)-5-chlórbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 95,0 až 100,0'C ^c26^H23^CIN10°4^s- MW 607,05. MS 607,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,66 (q , 1H, J = 4,4 Hz); 8,49 (bs, 2H); 8,24 (s, ¹ 1 H); 8,11 (d, 1 H, J = 8,1 Hz); 8,01 (d, 1 H, J = 8,1 Hz); 7,52 (t, 1 H, J = 7,7 Hz); 7,44 (t, íH, J = 7_r7 Hz); 7,26 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 7,17 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 7,10 (bs, 1H);

6,32 (d, 1 H, J = 5,2 Hz); 5,99 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 5,67 (s, 2H); 5,00 - 4,96 (mult,

H); 4,80 (bs, 2H); 4,49 (bs, 1 H); 4,32 (bs, 1 H); 2,66 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Preparatívny postup G10

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(benzofuran-2-ylmetoxy)-5-chlórbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 89,0 až 100,0°C

C27^H24^CIN9°5- ^{MW 590}'⁰⁰· ^{MS 590}'¹ (^M+H)⁺·

Ή NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,65 (q, 1 H, J = 4,4 Hz); 8,47 (s, 1 H); 8,41 (bs,

1H); 8,20 (s, 1 H); 7,63 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,57 (d, lH, J = 7,9 Hz); 7,31 (t, 1H, J =

7,5 Hz); 7,26 - 7,20 (mult, 3H); 7,07 (mult. 2H); 6,31 (d, 1 H, J = 5,2 Hz); 5,98 (d,

1H. J = 6,4 Hz); 5,35 (s, 2H); 4,95 (q , 1H, J = 5,8 Hz); 4,66 (bs, 2H); 4,48 (bs,

1H

202

Preparatívny postup

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(izotiazol-5-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 96,0 až 99,O’C ^C22^H21^C1N1O°4^S· ^mw 55(3,99. MS 557,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q , . 1 H, J = 4,6 Hz); 8,51 (s, 1 H); 8,46 (s,

1H), 8,42 (bs, 1 H); 8,22 (s, 1H); 7,45 (s, 1H); 7,24 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J =2,5 Hz);

7,12 - 7,07 (mult, 2H); 6,29 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,97 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,57 (s, 2H), 4,94 (q, 1H, J = 5^8 Hz); 4,67 (bs, 2H); 4,49 -4,41 (mult, 1H); 4,30 (d,1H,

J = 3,1 Hz); 2,65 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparatívny postup G12

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(tiofen-2-ylmetoxy) benzylamino ]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 91,0 až 112,O’C

C23H22CIN9O4S. MW 556,01. MS 556,1 (M+H)⁺.

Preparatívny postup G13 . 1 H, J = 4,6 Hz); 8,46 (s, 1H); 8,42 (bs, ,25 - 7,18 (mult, 2H); 7,13 (d, 1H, J = t; 6,30 (bs. 1 H); 5,97 (d, 1 H, J = q.2 2 (bs, 2H); 4_f48 - 4,41 (mult, 1 H); 4,30

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(chinolin-2-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán- 2-karboxy love j kyseliny

203

Teplota topenia: 117,0 až 120,0°C

C28^H25^C1N1Ô°4· MW.601,03. MS 601,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,64 (q , 1 H, J = 4,6 Hz); 8,47 (bs, 1 H), 8,45 (s,

1H); 8,37 (d. 1H, J = 8,5 Hz); 8,24 (s, 1H); 8,03 - 7,92 (mult, 2H); 7,80 - 7,67 mult,

2H); 7,58 (t, 1 H, J = 7_f 1 Hz); 7,18 (dd, 1 H, J = 8,5 Hz, J = 2,1 Hz); 7,12 (bs, 1 H);

7,07 (d,1 H, J = 8,5 Hz); 6,30 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 5,97 (d, 1 H, J = 6,4 Hz); 5,42 (s,

2H); 4,95 (q^;, 1 H, J = 5,2 Hz); 4,78 (bs, 2H); 4,51 - 4,44 (mult, 1 H); 4,30 (d, 1 H, '

J = 3,1 Hz); 2,64 (d, 3H, j = 4,6 Hz).

Preparatívny postup G14

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-{6-[5-chl-ór-2-(4-metyl-[1,2,3]tiadiazol-5-ylmetoxy)benzylamino}purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 105,0 až 107,0^eC ^C22^H22^CIN11°4^S· MW 572,01. MS 572,.0 (M+H)⁺.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,46 (s, 1H); 8,42 (bs,

H), 8,20 (s, 1 H); 7,27 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,16 (d, 1 H, J = 8,7 Hz);

7_t09 (bs, 1H); 6,30 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,6 Hz); 5,57 (s, 2H); 4,94 (Q' . 1 H, J = 5,2 Hz); 4,63 (bs, 2H); 4,49 - 4,42 (mult, 1 H); 4,30 (d, 1 H, J = 5 4

Hz); 2,70 - 2,60 (mult, 6H). ⁷

Preparatívny· postup G15

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[ 5-chlór-2-(naftalen-1-ylmetoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Teplota topenia: 115,0 až 119,0°C ^c29^h26^cin9°4· MW 600,04. MS 600,1 (Μ+Η)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q , 1 H, J = 4,8 Hz); 8_Z44 (s, 1 H); 8,38 (bs,

H); 8,19 (s, 1H); 8,14 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,98-7,86 (mult, 2H); 7,70 (d, 1H. J =

204

6,6 Hz); 7,59 - 7,43 (mult, 3H); 7,32 - 7,21 (mult, 2H); 7,06 (tjs, 1H); 6,29 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 5,96 (d, 1H, J - 6,4 Hz); 5,61 (s, 2H); 4,93 (q, 1 H, J =5,6 Hz); 4,62 (bs, 2H); 4,49 - 4,42 (mult, 1 H); 4,30 (d, 1 H, j = 2,9 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,8 Hz).

Preparatívny postup G16

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-hydroxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10,04 (bs, 1 H); 8.63 (q., 1 H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,40 (bs, 1H); 8,25 (s, 1H); 7,05 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 7,00 (bs,

H); 6,77 (d, 1 H, J = 8,5 Hz); 6,30 (d, 1 H, J = 5,4 Hz); 5,96 (d, 1 H, J = 6,2 Hz);

4,94 (q., 1 H, J = 5,6 Hz); 4,56 (bs, 2H); 4,49 - 4,43 (mult, 1 H); 4,30 (d, 1 H, J = ;

2,9 Hz); 2,65 (d, 3H, J - 4,6 Hz).

Preparatívny postup G17

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlórbenzylamino) -2-chlórpurin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G18

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlór-2-fenetyloxybenzylamino) -2-chlórpurin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G19

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(1-fenyletoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

205

Preparatívny po stup G 2 0

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmetoxy)benzylamino}purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G21

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[1-(2-benzyloxy-5-chlórfenyl)etylämino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G 2 2

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-brómbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxy lovej kyseliny

Preparatívny postup G23

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-fluórbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxy lovej kyseliny

Preparatívny postup G 2 4

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-jódbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxy lovej kyseliny

Preparatívny postup G25

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-trif luórmetylbenzylamino) purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

206

Preparatívny postup G 2 6

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-kyanobenzylamino) purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G27

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-metylbenzylamino) purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G 2 8

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-vinylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G 2 9

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-etynylbenzylamino )purin-9-yl ] -4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup G30

Metylamid 3-azido-5-{6-[5-chlór-2-(3,5-dimetylizoxazol-4-y lmetoxy) benzylamino ] pur in-9-y 1} -4-hydroxytetrahydrof uránτ-2-karboxylovej kyseliny ^C24^H25^CIN1O°5· MW 568.98. MS 569.1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,69 (quart, 1H, J = 4,8 Hz); 8,40 (s, 1 H); 8,35 (bs,

1H); 8_r14 (s, 1H); 7,25 (dd, 1H, J = 8,7 Hz. J = 2,7 Hz); 7,11 (d. 1H, J = 8,7 Hz); 7,07 (bs, 1H); 6_r28 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 6,6 Hz); 4,95 (s, 2H); 4,85 4,77 (mult, 1 H); 4,67 - 4,52 (mult, 2H); 4,49 - 4,42 (mult, 1 H); 4,39 - 4,32 (mult,

H); 2,65 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 2,38 (s, 3H); 2,22 (s, 3H).

207

Preparatívny postup Hl

Metylamid (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-(6-chlórpurin-9-ylj -4-hydr oxy tetrahydrof urán- 2 -karboxylovej kyse 1 iny

Trietylamín (4,4 ml, 0,032 ml) sa pridá k roztoku metylamidu (2S,3S,4R, 5R)-3-azido-5-(6-chlórpurin-9-yl)-4-acetoxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny (4 g, 0,011 mmol) v metanole (80 ml). Vzniknutá zmes sa 15 hodín mieša a potom skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou (5% metanol v dichlórmetáne). Získa sa 2,7 g (77 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky MS 339 (M+H)⁺. ^ΤΗ NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8,72 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 7,62 (bs, 1H), 5,98 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 5,07 (t, 1H, J = 6,2 Hz), 4,65 (dd, 1H, J = 5,4, 2,7 Hz), 4,58 (m, 1H), 4,2 (bs, 1H), 2,88 (d, 1H, J = 4,9 Hz), 1,67 (bs, 1H).

Preparatívny postup II

Alternatívna príprava metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlórpurin-9-yl)-5-metylkarbamoyltetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

K roztoku 4-azido-2-(6-chlórpurin-9-yl)-5-metylkarbamoyltetrahydrofuran-3-ylesteru octovej kyseliny (1,1 g,

2,9 mmol) v bezvodom metanole (100 ml), ochladenému na 0’C sa pridá metylamín (1,2 ml, 8,6 mmol). Výsledný roztok sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti za bezvodých podmienok, potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo. Pevný zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou (7% metanol v dichlórmetáne). Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme bielej peny.

CuHíiCINqOs. MW 338,72. MS 339,1 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 9,01 (s, 1 H); 8,81 (s, 1 H); 8,22 (qi, 1 H, J = 4,2 Hz); 6,41 (dd, 1 H. J = 5,2 Hz. J = 2,1 Hz); 6,12 (d, 1 H, J = 5,2 Hz); 5,03 (qi, i H. J = 5,2 Hz); 4,57 - 4,47 (mult, 1H); 4,41 (d. 1H. J = 3,9 Hz); 2,61 (d. 3H. J =<2 Hz).

208

Preparatívny postup JI

Glykozidácia

Metylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlórpurin-9-yl)-4-acetoxyfurán-2-karboxylovej kyseliny

6-Chlórpurín (20,4 g, 0,132 mmol) sa suspenduje v hexametyldisilazáne (165 ml). Vzniknutá suspenzia sa zahreje na 110’C a po 2 hodinách sa vzniknutá homogénna zmes skoncen truje. Pevný zvyšok sa dvakrát rekoncentruje z toluénu a na hodinu umiestni do vysokého vákua. Získaná pevná látka sa zmieša s metylamidom 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-D-ribofuránurónovej kyseliny (12,7 g, 0,044 mol) a výsledná zmes sa rozpustí v bezvodom dichlóretáne (350 ml). K zmesi sa pridá molekulárne sito 4A (15 g), zmes sa 15 minút mieša a pridá sa k nej TMSOTf (16,0 ml, 0,088 mol). Reakčná zmes sa hodiny zahrieva na 60’C, ochladí a rozloží opatrným prídavkom nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). K výslednej zmesi sa pridá etylacetát (350 ml) a etylacetátová zmes sa prefiltruje cez sklenenú fritu. Filtrát sa extrahuje etylacetátom (3x). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodným roztokom chloridu sodného, vysušia síranom sodným, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou (15% a potom 20% acetón v dichlórmetáne). Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise (10,6 g) vo forme špinavo bielej peny. MS 381 (M+H)⁺.

¹H NMR (CDCl₃) δ 8,8 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 7,6 (bs, 1H),

6,13 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 5,87 (dd, 1H, J = 7,0, 5,6 Hz), 4,85 (dd, 1H, J = 5,6, 3,0 Hz), 4,58 (d, 1H, J = 3,0 Hz),

2,9 (d, 1H, J = 4,9 Hz), 2,11 (s, 3H) .

Pri použití podobného spôsobu, aký je opísaný v preparátívnom postupe Jl, sa zo zodpovedajúcich východiskových látok vyrobí zlúčenina z preparatívneho postupu J2.

209

Preparatívny postup J2

Metylamid (2S,3S, 4R, 5R)-3-azido-5-(2,6-dichlórpurin-9-yl)-4 -hydroxy tetrahydrof urán- 2 -karboxylovej kyseliny

Preparatívny postup KÍ

Metylamid 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-D-ribof uránurónovej kyseliny

Metylamid 3-azido-3-deoxy-l,2-0-izopropylidén-a-D-ribofuránurónovej kyseliny (12 g, 0,05 mmol) sa rozpustí v kyseline octovej (150 ml) a acetanhydridu (50 ml). Výsledná zmes sa ochladí v ladovom kúpeli a pridá sa k nej roztok kyseliny sírovej (1 ml v 5 ml kyseliny octovej). Výsledná zmes sa nechá zahriať na teplotu miestnosti, 18 hodín mieša a prikvapká k nasýtenému roztoku hydrogenuhličitanu sodného (2 litre). Vzniknutá zmes sa extrahuje chloroformom (3x). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (2x) a nasýteným hydrogenuhličitanom sodným (2x) a vodným roztokom chloridu sodného (lx), vysuší síranom sodným, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje. Získa sa zmes anomérnych acetátov vo forme zlatohnedého oleja.

Preparatívny postup LI

Metylamid 3-azido-3-deoxy-l,2-O-izopropylidén-a-D-ribofuránurónovej kyseliny

Oxalylchlorid (15 ml) sa pri 0°C pridá k roztoku 3-azido-3-deoxy-a-D-ribofuránurónovej kyseliny (30 g) v bezvodom tetrahydrofuráne (250 ml). K vzniknutej zmesi sa pridá dimetylformamid (1 ml). Reakčná zmes sa nechá zahriať na teplotu miestnosti, pri ktorej sa začne vyvíjať plyn. Po 5 hodinách sa zmes skoncentruje a zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne (100 ml). Dichlórmetánový roztok sa ochladí

210 na 0C a pomaly sa k nemu pridá roztok metylaminu v tetrahydrofuráne (260 ml 2M roztoku). Po 30 minútach sa reakčná zmes zriedi vodou (500 ml) a vodná zmes sa extrahuje chloroformom (3x). Spojené organické vrstvy sa vysušia síranom sodným, prefiltrujú a skoncentrujú. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme svetlohnedej pevnej látky. NMR (400 MHZ, CDC1₃) S 6,39 (bs, 1H), 5,80 (d, 1H, J = 3,7 Hz),

4,67 (dd, 1H, J = 4,0, 3,7 Hz), 4,42 (d, 1H, J = 9,3 Hz),

3,6 (dd, 1H, J = 9,3, 4,0 Hz), 2,9 (d, 3H, J = 5,0 Hz),

1,54 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).

Preparatívny postup Ml

Metylester (2S,3S,4R,5R)-4-acetoxy-3-azido-5-(6-chlórpurin-9-yl)tetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny

Roztok 6-chlórpurínu (4,96 g, 32 mmol) a hexametyldisilazánu (40 ml) sa 3 hodiny zahrieva na 100°C za bezvodých podmienok. Výsledná zmes sa nechá schladnút na teplotu miestnosti a skoncentruje v rotačnom odparovači pri použití toluénu (3 x 50 ml) na uiahčenie odstránenia rozpúšťadla. Pevný zvyšok sa na 15 minút umiestni pod vysoké vákuum, potom sa k nemu pridá bezvodý acetonitril (50 ml). Metylester 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-D-ribofuránurónovej kyseliny (3,09 g, 10,7 nmol) sa rozpustí v bezvodom acetonitrile (20 ml) a pridá k reakčnej zmesi. K reakčnej zmesi sa pridá trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (7,5 ml, 41,4 mmol). Reakčná zmes sa 15 hodín mieša za bezvodých podmienok pri 70°C, potom rozloží nasýteným vodným hydrogenuhličitanom sodným (200 ml) a pridá sa k nej voda (160 ml). Výsledná zmes sa extrahuje etylacetátom (4 x 100 ml), vysuší síranom sodným a skoncentruje v rotačnom odparovači. Pevný zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou (hexán : etylacetát, 7 : 3).

Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise (2,88 g) vo forme bielej peny.

211

Teplota topenia 94,0 až 96,0°C;

’H NMR (400 MHz. CDCI₃) δ 8,73 (s, 1 H); 8,60 (s. 1 H); 6,36 (d. 1 H, J = 5,4 Hz);

5,83 (t. 1 H. J = 5,4 Hz); 4,83 - 4,77 (mult, 1 H); 4,65 (d, 1 H, J = 4,2 Hz); 3,84 (s.

3H); 2,14 (s, 3H).

Preparatívny postup NI

Metylester 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-4-ribofuránurónovej kyseliny

Zmieša sa etylester 3-azido-3-deoxy-l,2-O-izopropylidén-a-D-ribofuránurónovej kyseliny (4,85 g, 20 mmol), koncentrovaná kyselina sírová (5,5 ml), ladová kyselina octová (65 ml) a acetanhydrid (18 ml, 20 mmol). Výsledná zmes sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti za bezvodých podmienok a potom vyberie do vody (500 ml). Vodná zmes sa pevným hydroxidom sodným zneutralizuje na pH 7 a extrahuje etylacetátom (3 x 250 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú nasýteným vodným chloridom sodným (500 ml), vysušia síranom sodným a skoncentrujú v rotačnom odparovači. Pevný zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 2:1. Získa sa 3,09 g titulnej zlúčeniny vo forme číreho bezfarbého oleja.

’H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 6,18 (s, 1 H);.5,33 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 4,53 (d, 1H, J =

7,5 Hz); 4,44 - 4,38 (mult, 1 H);.3,83 (s. 3H); 2,17 (s, 3H); 2,08 (s, 3H).

Preparatívny postup 01

Metylester 3-azido-3-deoxy-l,2-0-izopropylidén-a-D-ribofuránurónovej kyseliny

212

K roztoku 3-azido-3-deoxy-l,2-izopropylidén-a-D-ribofuránurónovej kyseliny (4,23 g, 18 mmol) v dimetylformamide (50 ml) sa pridá uhličitan draselný (3 g, 22 mmol) a jódmetán (2,3 ml, 37 mmol). Reakčná zmes sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti za bezvodých podmienok a potom vyberie do etylacetátu (500 ml). Etylacetátová zmes sa premyje vodou (500 ml), nasýteným vodným hydrogenuhličitanom sodným (2 x 50 ml) a nasýteným vodným chloridom sodný (500 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušia síranom sodným a skoncentrujú v rotačnom odparovači. Olejovitý zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití zmesi hexánu a etylacetátu v pomere 7:3. Získa sa 4,45 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme číreho bezfarbého oleja.

•’-H NMR (400 MHZ, CDCl₃) S 5,89 (d, 1H, J = 3,3 Hz) , 4,74 4.68 (mult, 1H), 4,53 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 3,82 (s, 3H),

3.69 - 3,63 (mult, 1H) , 1,55 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).

Preparatívny postup Pl

3-Azido-3-deoxy-l,2-izopropylidén-a-D-ribofuránurónová kyselina

Roztok 3-azido-l,2,5,6-bis-0-izopropylidén-3-deoxy-D-alofuranózy (451 g, 1,58 mol) v dietylétere (4,5 litru) sa pri teplote okolia, ktorá sa udržuje pomocou vodného kúpeía, zmieša s kyselinou jodistou (540 g, 2,37 mol). Po 24 hodinách sa vyzrážaná soí odfiltruje a premyje éterom. Filtrát sa skoncentruje a surový aldehyd sa pridá k zmesi chloroformu (2,5 litru), acetonitrilu (2,5 litru) a vody (3,4 litru). K vzniknutej zmesi sa za intenzívneho miešania pri teplote miestnosti udržovanej pri použití vodného kúpela pridá jodistan sodný (1211 g, 5,67 mol) a hydrát chloridu rutenitého (14,5 g, 0,69 mol). Po 20 hodinách sa vzniknutá zmes zriedi chloroformom (4 litre) a vodou (4 litre). Výsledná zmes sa prefiltruje cez pomocnú filtračnú látku Celit Vrstvy sa oddelia a vodná fáza sa extrahuje chloroformom.

213

Spojené organické vrstvy sa skoncentrujú pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozdelí medzi nasýtený vodný hydrogenuhličitan sodný (2 litre) a etylacetát (3 litre). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom (2 litre). Vodná vrstva sa okyslí 2M kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje etylacetátom (3x3 litre). Spojené organické vrstvy sa vysušia síranom sodným, prefiltrujú a skoncentrujú. Získa sa 208 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme špinavo bielej pevnej látky. Tento produkt je podľa TLC a NMR čistý. ¹H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,5 (bs, 1H), 5,95 (d, 1H, J = 3,7), 4,8 (dd, 1H, J = 4,0, 3,7 Hz), 4,6 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 3,72 (dd, 1H, J = 9,5, 4,0 Hz), 1,58 (s, 3H), 1,38 (s, 3H).

Preparatívny postup Ql

3-Azido-l,2,5,6-bis-0-izopropylidén-3-deoxy-D-alofuranóza

Anhydrid trifluórmetánsulfónovej kyseliny (1500 g,

5,3 mmol) sa pri -15°C prikvapká k roztoku pyridínu (493 g,

6,2 mol) v dichlórmetáne (7,5 litru). Po 30 minútach sa k vzniknutej zmesi pridá roztok 1,2,5,6-bis-O-izopropylidén-D-glukofuranózy (735 g, 2,84 mol) vo forme roztoku v dichlórmetáne (2,5 litru). Po 1 hodine sa reakčná zmes rozloží prikvapkaním vody (4 litre) a nechá zahriať na 0°C. Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje na červený olej. Vzniknutý trifluórmetánsulfonát sa ihneď rozpustí v dimetylformamide (8 litrov). Výsledný roztok sa zmieša s azidom sodným (554 g, 8,5 mol). Získaná zmes sa zahreje na 35°C a po 18 hodinách naleje do vody (12 litrov). Vodná zmes sa extrahuje etylacetátom (3x4 litre). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (2x3 litre) a vodným roztokom chloridu sodného (1x3 litre), vysušia síranom sodným, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa vopred naadsorbuje na silikagél a prečistí rýchlou chromatografiou pri použití zmesi hexánu a etylacetátu najskôr v pomére

214

6:1a potom 4:1. Získa sa 228 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja. ¹H NMR (400 MHz,

CDCl	₃) δ	5,77	(d,	1H, J = 3,7 Hz), 4,7 (dd, 1H, J = 4,4,
3,7	Hz) ,	4,15	(m,	2H), 4,0 (m, 2H), 3,5( dd, 1H, J = 9,1,
4,4	Hz) ,	1,56	(s,	3H), 1,47 (S, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,34
(s,	3H) .

Preparatívny postup Rl

5-Chlór-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmetoxyJbenzylamín

30% roztok chlorovodíka v étere (0,5 ml) sa pridá k roztoku terc-butylesteru [5-chlór-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmetoxy)benzyljkarbámovej kyseliny (146 mg, 0,43 mmol) v metanole (5 ml). Vzniknutá zmes sa cez noc mieša, potom skoncentruje a zvyšok sa trituruje s éterom, odfiltru je, premyje éterom a vysuší. Získa sa 76 mg zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 2H), 7,04 (m, 1H), 4,91 (s, 2H),

4,12 (s, 2H), 4,00 (s, 2H), 3,79 (s, 3H).

Preparatívny postup SI terc-Butylester (5-chlór-2-kyanometoxybenzyl)karbámovej kyseliny

Diterc-butyldikarbonát (0,45 g, 2,03 mmol) sa pri teplote okolia pridá k roztoku (2-aminometyl-4-chlórfenoxy) acetonitrilu (0,2 g, 1,01 mmol) a trietylamínu (0,57 ml, 4 mmol) v suchom tetrahydrofuráne (10 ml). Po 4 hodinách sa reakčná zmes zriedi etylacetátom (30 ml). Etylacetátová zmes sa premyje IM roztokom kyseliny chlorovodíkovej (lx), nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (lx) a vodným roztokom chloridu sodného (lx), vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografíou pri použití 5 až 20% etylacetátu v

215 hexáne. Získa sa 218 mg (74 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky. ’-H NMR (400 MHz, CDClg):

7,3 (m, 2H), 6,92 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 4,91 (bs, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 1,41 (s, 9H).

Preparatívny postup TI terc-Butylester 2-aminometyl-4-chlórfenoxyoctovej kyseliny

Raney-nikel (asi 0,5 g) sa pridá k miešanému roztoku terc-butylesteru 2-kyano-4-chlórfenoxyoctovej kyseliny (560 mg, 0,21 mmol) v metanole (25 ml) obsahujúcim 1 ml nasýteného hydroxidu amónneho. Výsledná zmes sa umiestni pod atmosféru vodíka s tlakom 275 kPa, 2 hodiny trepe, potom prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa rozdelí medzi IM kyselinu chlorovodíkovú a éter. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje éterom. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa opäť extrahuje éterom. Vodná vrstva sa roztokom uhličitanu draselného zalkalizuje na pH asi 10 a extrahuje éterom (3x). Spojené organické vrstvy sa vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje. Získa sa 360 mg zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme oleja. MS 272 (M+H)⁺. ^ΧΗ NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7,22 (s, 1H), 7,12 (d, 1H,

J = 8,7 Hz), 6,61 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 4,5 (s, 2H), 3,85 (s, 2H), 2,62 (bs, 2H), 1,41 (s, 9H).

Preparatívny postup Ul terc-Butylester 2-kyano-4-chlórfenoxyoctovej kyseliny

Hydrid sodný (96 mg, 4,1 mmol) sa pri -10 °C pridá k roztoku 2-kyano-4-chlórfenolu (0,5 g, 3,26 mmol) v bezvodom dimetylformamidu (6 ml). Po 15 minútach vznikne homogénna zmes, ku ktorej sa prikvapká terc-butylbrómacetát. Po 2 hodinách sa zmes rozloží vodou a vodná zmes sa extrahuje etylacetátom (2x). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (2x),

216 vodným roztokom chloridu sodného (lx), vysušia síranom sodným, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 10% etylacetátu v hexánoch. Získa sa 850 mg zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého sirupu (97 %). ^H NMR (400 MHz, CDC1₃) S 7,53 (d, 1H, J = 2,7 HZ), 7,46 (dd, 1H, J = 9,1, 2,7, Hz), 6,78 (d,

1H, J = 9,1 Hz), 4,63 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Preparatívny postup VI (-) -5-Chlór-2- (tetrahydrof uran-3-ylmetoxy) benzylamín

Hydrochlorid 5-chlór-2-(tetrahydrofurán-3-ylmetoxy)benzylamínu sa najskôr premení na volnú bázu, ktorá sa podrobí chirálnej HPLC. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise.

(_a)₂₂ = -23,57° (c = 0,140, MeOH) ’H NMR (400 MHz. DMSO-dg) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,37 (dd, _1H) J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1H. J = 8_f7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mutt, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,75 - 2,71 (mult, 1H); 2,05 - 1,95 (mult, ÍR); 1,77 -1,63 (mult, 1H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe VI, sa vyrobí zlúčenina z nasledujúceho preparatívneho postupu V2.

Preparatívny postup V 2 (+) -5-Chlór-2- (tetrahydrof uran-3-ylmetoxy) benzylamín

Hydrochlorid 5-chlór-2-(tetrahydrofuran-3-ylmetoxy)benzylamínu sa najskôr premení na volnú bázu, ktorá sa podrobí chirálnej HPLC. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise.

217 [α]₂2 =⁺¹θ,32 °(c = 0,190, MeOH) 'H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d. 1 H, J = 2,7 Hz); 7,37.(dd,

H, J = 8,7 Hz, J = 2.7 Hz); 7,07 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65-3.,60 (mult, 1 H); 3,60 - 3,55 (mult, 1 H); 2,75 - 2,71 (mult,

H); 2,05 -1,95 (mult, 1 H); 1,77 -1,63 (mult, 1 H).

Preparatívny postup W 1

Hydrochlorid 5-chlór-2-(2-morfolin-4-yletoxyJbenzylamínu

Roztok 5-chlór-2-(2-morfolin-4-yletoxy)benzonitrilu (412 mg, 1,54 mmol) v bezvodom tetrahydrofuráne (15 ml) sa pri teplote miestnosti pridá k roztoku lítiumalumíniumhydridu (3,53 ml, 1,0M v tetrahydrofuráne). Reakčná zmes sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti za bezvodých podmienok, potom ochladí na O’C a pridá sa k nej IM vodný hydroxid sodný (0,54 ml). Vzniknutá zmes sa 0,5 hodiny mieša pri O’C, potom sa z nej odfiltruje pevná látka, ktorá sa premyje tetrahydrofuránom. Filtrát sa skoncentruje v rotačnom odparovači a vzniknutá pevná látka sa rozpustí v 30 ml absolútneho etanolu. K reakčnej zmesi sa pridá vodný HCI roztok (l,0M, 1,7 ml). Zo vzniknutej zmesi sa v rotačnom odparovači odparí rozpúšťadlo a výsledná pevná látka sa trituruje s dietyléterom. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise.

Οΐ3Η₁₉ΟΙΝ2θ₂. MW 270,76. MS 271,2 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7,45 - 7,40 (mult, 2H); 7,13 (d, 1H, J = 5.9); 4,34 (bs, 2H); 4,15 (s, 2H); 3,.79 (bs, 4H); 3,35 - 3,25 (mult, 4H); 3,08 (bs, 2H); 2,83 (bs, 2H)

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparátívnom postupe Wl, sa zo zodpovedajúcich východiskových látok vyrobia zlúčeniny uvedené v nasledujúcich preparatívnych postupoch W2 až W26.

218

Preparatívny postup W 2

Hydrochlorid 2-benzyloxy-5-chlórbenzylamínu

Teplota topenia 150,5 až 152,5’C ^C14^H14C1NO. MW 247,73. MS 248,1 (M+H)⁺ ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,34 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,47.7,33 (mult, 2H); 7,43 - 7,33 (mult, 3H) 7,32 - 7,25 (mult, 1H); 7,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz);

5,14 (s, 2H); 3,96 (s, 2H).

Preparatívny postup W3

Hydrochlorid 5-chlór-2-cyklobutylmetoxybenzylamínu

Teplota topenia: 168,0 až 170,0°C

C₁₂H₁₆CINO. MW 225,72. MS 225,8 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,36 (bs, 3H); 7,48 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,36 (dd,

H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,06 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 3,97 (d, 2H, J = 6,4 Hz); 3,92 (bs, 2H); 2,76 - 2,71 (mult, 1 H); 2,09 - 1,97 (mult, 2H); 1,97 -1,77 (mult, 4H).

Preparatívny postup W4

Hydrochlorid 5-chlór-2-(3-metoxybenzyloxy)benzylamínu

Teplota topenia: 159,0 až 160,0’C

C^H^CINOa. MW 277.75. MS 277,9 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,37 (bs, 3H); 7,51 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,38 (dd,

1H, J =8,7 Hz, J = 2,7Hz); 7,28 (t. 1H. J = 8,0 Hz); 7,10 (d, 1H, J = 8_A9 Hz); 7,06 7,00 (mult, 2.H); 6,87 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 5,13 (s, 2H); 3,99 (s, 2H); 3,74 (s, 3H).

219

Preparatívny postup w 5

Hydrochlorid 2-chlór-2-(2,5-dimetoxybenzyloxy)benzylamínu

Teplota topenia: 212,0 až 213,O’C

C₁₆Hi8^CINO3· MW 307,78. MS 307,8 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,30 (bs, 3H); 7,50 (d, 1 H. J = 2,7 Hz); 7,38 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,02 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,96 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,86 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 3,1 Hz); 5,09 (s, 2H); 3,98 (s, 2H);

3,75 (s, 3H); 3,68 (s, 3H).

Preparatívny postup W6

Hydrochlorid 5-chlór-2-(3-chlórbenzyloxy)benzylamínu

Teplota topenia: 164,0 až 166,O’C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,31 (bs, 3H); 7,58 (s 1 H); 7,52 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,50 - 7,37 (mult, 4H); 7,11 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,19 (s, 2H); 4,02 (bs, 2H).

Preparatívny postup W 7

Hydrochlorid 5-chlór-2-(2-chlórbenzyloxy) benzylamínu ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,33 (bs, 3H); 7,85 - 7,80 (mult, 1 H); 7,55 - 7,45 (mult, 2H); 7,45 - 7,35 (mult, 3H); 7,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,22 (s, 2H); 4,00 (d,

2H. J = 5,2 Hz).

Preparatívny postup W8

Hydrochlorid 5-chlór-2-(tetrahydrofuran-2-ylmetoxy)benzylamínu

220

Teplota topenia: 105,5 až 108,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-ds) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz), 7,37 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3.70 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H), 2,75 - 2,71 (mult,

H); 2,05 - 1,95 (mult, 1 H); 1,77 -1,63 (mult, 1 H).

Preparatívny postup W 9

Hydrochlorid 5-chlór-2-(4-metylbenzyloxy)benzylamínu

Teplota topenia: 155,0 až 157,0°C ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,33 (bs, 3H); 7,50 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,40 - 7,35 (mult, 3H); 7,17 (d, 2H, J = 7,7 Hz); 7,12 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,11 (s, 2H); 3,96 (bs, 2H); 2,28 (s, 3H).

Preparatívny postup W10

Hydrochlorid 2-chlór-2-(2-metylbenzyloxy)benzylamínu

Teplota topenia: 176,0 až 178,0°C ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,38 (bs, 3H); 7,53 (d, 1H, J = 2,7Hz); 7,45 - 7,38' .

(mult, 2H); 7,25 - 7,17 (mult, 4H); 5,15 (s, 2H); 3,97 (d, 2H, J = 5,4 Hz); 2,31 (s, • 3H).

Preparatívny postup Wll

Hydrochlorid 5-chlór-2-(3-metylbenzyloxy)benzylamínu

Teplota topenia: 137,0 až 140,0°C ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,26 (bs, 3H); 8,49 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,39 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,29 - 7,22 (mult. 3H); 7,12 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 5,12 (s,' 2H); 4,02 - 3,97 (mult, 2H); 2,30 (s, 3H).

221

Preparatívny postup W12

Hydrochlorid 5-chlór-2-(2-metoxybenzyloxy)benzylamínu

Teplota topenia: 199,5 až 200,5’C ^C15^H16^C1NO2· ²⁷⁷,⁷⁵· ^MS 278,1 (M+H) ⁺ ’H NMR (400 MHz. DMSO-d6) δ 8,37 (bs. 3H); 7,51 (d. 1H. J = 2,3 Hz); 7,41 (d. 1H, J = 7,5 Hz); 7,37 (dd. 1H. J = 8,7 Hz, J =2,5 Hz); 7,33 (dd. 1H. J = 8,3 Hz, J =

7,5 Hz); 7,12 (d. 1 H. J = 8,9 Hz); 7,04 (d, 1 H. J = 8,3 Hz); 6,94 (t. 1H. J = 7,5 Hz);

5,12 (s, 2H); 3,97 (bs, 2H); 3,81 (s. 3H).

Preparatívny postup W13

Hydrochlorid 5-chlór-2-(furan-3-ylmetoxy)benzylamínu

Teplota topenia: 137,0 až 140,0’C C₁₂H₁₂CINO₂. MW 237,7. MS 238,1 (M+H)+ ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) 5 8,33 (bs. 3H); 7,80 (s, 1H); 7,66 (s,1H); 7,49 (d.

H. J = 2,7 Hz); 7,39 (dd. 1 H, J = 8,9 Hz. J = 2,7 Hz); 7,17 (d. 1H, J = 8,7 Hz); 6,62 (s, 1 H); 5,03 (s, 2H); 3,92 (q, 2H. J = 5,7 Hz).

Preparatívny postup W 1 4

5-Chlór-2-(4-metoxybenzyloxy)benzylamín

Teplota topenia: 142,0 až 147,0°C C₁₅H₁₆CINO₂. MW 277,75. MS 278,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz. DMSO) δ 8,38 (bs, 2H); 8,25 (bs. 1 H); 7,50 (d, 1H. J = 2,1 Hz);

7,43 - 7,36 (mult, 3H); 7,14 (d. 1 H, J = 8,7 Hz); 6,95 - 6,90 (mult, 2H); 5,07 (s, 2H);

3,96 - 3,90 (mult, 2H); 3,73 (s, 3H).

222

Preparatívny postup W15

5-Chlór-2-cyklopentylmetoxybenzylamín

Teplota topenia: 155,0 až 157,0°C ^ηΗ NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,34 (bs, 3H); 7,47 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,36 (dd,

1H, J = 8,9 Hz, J = 2,5 Hz); 7,06 (d, 1H, J ~ 8,9 Hz); 3,94 (bs, 2H); 3,88 (d, 2H, J =

6,8 Hz); 2,32 (sept, 1H, J =7,5 Hz); 1^0-1,70 (mult, 2H); 1,62-1,45 (mult, 4H); 1,38- 1,28 (mult, 2H).

Preparatívny postup W16

Hydrochlorid 5-chlór-2-[3-(2-morfolin-4-yletoxy) benzyloxy] benzylamínu

C20^H25^C,N2°3· ^{MW 376}/⁸⁹· ^{MS 377}/¹ (^M+H)⁺· ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,39 (bs, 3H); 7,51 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,39 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,31 (t, 1H, J = 7,9 Hz); 7,12 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 5,14 (s, 2H); 4,47 - 4,27 (mult, 2H);

4,02 - 3,98 (mult, 2H); 3,98 - 3,70 (mult, 4H); 3,59 - 3,39 (mult, 4H); 3,35 - 3,25 (mult, 2H).

Preparatívny postup W17

Hydrochlorid 5-chlór-2-(tetrahydrofurán-3-ylmetoxy)benzylamínu

Teplota topenia: 105,5 až 108,0’C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,37 (dd,

H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,75 - 2,71 (mult,

H); 2,05 - 1,95 (mult, 1 H); 1,77 - 1,63 (mult, 1 H).

223

Preparatívny postup W18

Hydrochlorid 5-chlór-2-(tetrahydrofuran-3-ylmetoxy)benzylamínu

Teplota topenia: 105,5 až 108,0°C ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,37 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1 H); 3,60 3.,55 (mult, 1 H); 2,75 - 2,71 (mult, 1H);.2,O5 - 1,95.(mult, 1H); 1,77- 1,63 (mult, 1H).

Preparatívny postup W 1 9

Hydrochlorid 5-chlór-2-(furan-2-ylmetoxy)benzylamínu

Teplota topenia: 145,0 až 150,0°C ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,35 (bs, 3H); 7,69 (s, 1 H); 7,50 (d, 1 H, J = 2,5 Hz); 7,39 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 1,9 Hz); 7,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,60 (d, 1H. J =

3,1 Hz); 6,46 (bs, 1 H); 5,14 (s, 2H); 3,89 (d, 2H, J .= 4,4 Hz).

Preparatívny postup W 2 0

Hydrochlorid 5-chlór-2- (2,2,7,7-tetrametyltetrahydrobis[1,3]dioxolo[4,5-b;4',5']pyran-5-ylmetoxy)benzylamínu ’H NMR (400.MHz, DMSO-dg) δ 8,23 (bs, 3H); 7,48 - 7,42 (mult, 1H);.7,34 (dd, 1H

J = 8,9 Hz, J =2,7 Hz); 7,13 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,43 (d. 1H, J = 5,0 Hz); 4,59 (dd,

1H, J = 8,1 Hz, J = 2,3 Hz); 4,36 - 4,40 (mult, 2H); 4,01 (s. 2H); 4,05 - 3,80 (mult.

3H); 1,30 (d, 6H, J = 6,6 Hz); 1,23 (d, 6H, J = 11,0 Hz).

224

Preparatívny postup

W 2 1

5-chlór-2-(5-dimétylaminometylfuran-2-ylmetoxy)benzylamín , mno _MW 294.78. MS 295.2 (M+H)+

2· , iu J = 2 4 HzV, 7_f43 (dd,

Ή NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8 49 (bs 3 ; _{θ 5/8} _{n u} I O A u,y 7 29 (d, 1H, j = ^ηζ>· >

1H, J = 9,0 Hz. J = 2,4 HZ). z,z . _6H) z/ ouv Ά q? (d 2H, J = 5,6 Hz), d, ιό \ _2H). 4,39.4,34 (mult, 2H), H f

Preparatívny postup W 2 2

Hydrochlorid 5-chlór-2- (naftalen-l-ylmetoxy)benzylamínu

Teplota topenia: 196,0 až 198,0°C ^C18^h16^CINO· MW 297,79. MS 297,9 (M+H)⁺.

’H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 8,35 (bs, 3H); 8,14 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz), 8,03 - 7,92 (mult,.2H); 7,72 (d, 1H, J = 6,9 Hz); 7,63 - 7,41 (mult, 5H); 7_y40 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 5,66 (s, 2H); 3,95 (d, 2H, J = 5,6 Hz). '

Preparatívny postup W23

Hydrochlorid 5-chlór-2-(4-chlórbenzyloxy)benzylamínu

Ή NMR (400 MHZ, OMSO-c^) δ 8,35 (bs, _3H): 7,54 - 7,47 (mul., ₃H,· 7 46 7 (mult. 3H): 7,10 (d. 1H. J = 8,9 Hz); 5,16 (s, 2H); 3,99 (bs. 2H). ' ' ’

Preparatívny postup w 2 4

5-Chlór-2-(2,5-dimeťylfurán-2-ylmetoxy)benzylamí n

Modifikáciou spôsobu opísaného v preparatívnom postupe Wl, pri ktorej sa namiesto hydrochloridovej soli

225 izoluje zlúčenina uvedená v nadpise vo forme volnej bázy, sa volná báza, 5-chlór-2-(2,5-dimetylfuran-3-ylmetoxy)benzonitril, premení na titulnú zlúčeninu. Po rozložení zmesi hydroxidom sodným a filtrácii sa pevná látka premyje tetrahydrof uránom a filtrát sa skoncentruje v rotačnom odparovači. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme svetložltého oleja.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,31 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,15 (dd, 1H, J = 8,7 Hz

J = 2,7 Hz); 6,98 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,00 (s, 1H); 4,78 (s, 2H); 3,56 (s, 2H); 2,18 (s, 3H); 2,14 (s, 3H); 1,65 (bs, 2H).

Preparatívny postup W25

5-Chlór-2-benzylamín

Modifikáciou spôsobu opísaného v preparátívnom postupe Wl, pri ktorej sa namiesto hydrochloridovej soli izoluje zlúčenina uvedená v nadpise vo forme volnej bázy, sa 5-chlór-2-metoxybenzonitril premení na titulnú zlúčeninu. Po rozložení zmesi hydroxidom sodným a filtrácii sa pevná látka premyje tetrahydrofuránom. Filtrát sa skoncentruje v rotačnom odparovači. Výsledný viskózny olej sa vyberie do dietyléteru (100 ml) a vody (100 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje ešte dvakrát dietyléterom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodnou nasýtenou kyselinou chlorovodíkovou, vysušia síranom sodným, prefiltrujú a z filtrátu sa v rotačnom odparovači odparí rozpúšťadlo. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme žltého oleja.

¹H NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 7,43 - 7,38 (mult, 1 H); 7,25 - 7,15 (mult, 1 H); 6,92 (td, 1 H, J =11 Hz, J = 8,7 Hz ); 3,75 (d. 3H, J = 7,2 Hz); 3,65 - 3,55 (mult, 2H);

1,72 (bs. 2H).

226

Preparatívny postup W26 [ 3- (2-Morf olin-4-yletoxy) f enyl ]metanol

Modifikáciou spôsobu opísaného v preparatívnom postupe WI, pri ktorej sa namiesto pridania vodného HCI roztoku titulná zlúčenina extrahuje ako alkohol, sa 3-(2-morfolin-4-yletoxy)benzaldehyd premení na titulnú zlúčeninu. Po rozložení zmesi hydroxidom sodným a filtrácii sa pevná látka premyje tetrahydrofuránom. Filtrát sa skoncentruje v rotačnom odparovači. Výsledný viskózny olej sa vyberie do dietyléteru (100 ml) a vody (100 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje ešte dvakrát'dietyléterom. Spojené organické vrstvy sa premyjú vodným nasýteným Chloridom sodným, vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a z filtrátu sa v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme žltého oleja.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d_s) δ 7,18 (t, 1H, J = 7,9 Hz); 6,87-6,81 (mult, _2H);

6,76 (d, 1 H. J = 8,1 Hz); 5,17 - 5,09 (mult, 1H); 4,43 (d, 2H, J = 5,6 Hz); 4,04 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 3,59 - 3,51 (mult, 4H); 2,70 - 2.62 (mult, 2H); 2,50 - 2,38 (mult, 4H).

Preparatívny postup XI

5-Chlór-2-( 3-metylizoxazol-5-ylmetoxy Jbenzylamín

Do nádoby obsahujúcej bezvodý 2-propanol (40 ml), hydrát hydrazínu (4 ml) a bezvodý tetrahydrofurán (60 ml) sa pri teplote miestnosti pridá 2-[5-chlór-2-(3-metylizoxazol-5-ylmetoxy)benzyl]izoindol-1,3-dión (5 g, 13 mmol). Reakčná zmes sa 3 hodiny mieša pri 50°C. Pevná látka sa odfiltruje a premyje tetrahydrofuránom. Filtrát sa skoncentruje a zvyšok sa rozpustí v étere (100 ml). Éterový roztok sa premyje IM hydroxidom sodným (lx) a chloridom sodným, vysuší síranom horečnatým a skoncentruje. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme pevnej látky.

227

Teplota topenia: 32,0 až 35,0°C ^C12^H13^C1N2°2· ^{W 252}/⁷⁰· ^Ms 253,1 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,37 (d, 1H, J = 2,6 Hz); 7,18 (dd, 1 H, J = 8,8 Hz,

J = 2,6 Hz); 7,04 (d, 1 H, J = 8,8 Hz); 6,42 (s, 1 H); 5,21 (s, 2H); 3,60 (s, 2H); 2,18 (s, 3H); 1,71 (bs, 2H).

' z

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe XI, sa z vhodných východiskových látok vyrobia zlú čeniny uvedené v preparatívnych postupoch X2 až X6.

Preparatívny postup X 2

5-Chlór-2-(pyridin-3-ylmetoxy)benzylamín ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,63 (d, 1H, J

J -1,5 Hz); 7,83 (dd, 1H, J = 6,0 Hz, J = 3,1 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,9 Hz); 7,02 (d, 1 H, J = = 1,5 Hz); 8,50 (dd, 1 H, J = 4.8 Hz,

Hz); 7,42 - 7,35 (mult, 2H); 7_r20 (dd,

8,7 Hz); 5,13 (s, 2H);3,67(s, 2H).

Preparatívny postup X3

5-Chlór-2-(tiazol-2-ylmetoxy)benzylamín

Teplota topenia: 74,0 až 76,0°C C-uHľiCI^OS. MW 254,74. MS 255,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7_T80 (d, 1 H, J = 3,3 Hz); 7,74 (d, 1 H, J = 3,3 Hz);

7,39 (d, 1 H, J = 2,7Hz); 7,19 (dd, 1 H, J = 8,3 Hz. J = 2,7 Hz); 7,05 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 5,41. (s, 2H); 3,68 (s, 2H); 1,78 (bs. 2H),

Preparatívny postup X4

2-(Benzotiazol-2-ylmetoxy)-5-chlórbenzylamín

228

Teplota topenia: 72,0 až 79,0°C

C15H-13CIN2OS. MW 304,80. MS 305,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,09 (d, 1 H, J = 7,9 Hz); 7,97 (d, i H, J = 7,9 Hz); 7,49 (dd, 1H, J = 8,1 Hz, J = 7,3 Hz); 7,44-7,39 (mult, 2H); 7,20 (dd, 1H, J = 8,6 Hz, J = 2,6 Hz); 7,07 (d, 1 H, J = 8,6 Hz); 5,57 (s, 2H); 3,75 (s, 2H); 1,83 (bs, 2H).

Preparatívny postup X5

2-(Benzofuran-2-ylmetoxy)-5-chlórbenzylamín

Teplota topenia: 75,5 až 77,0°C ;₁₆H₁₄CINO₂. MW 287,75. MS 288,0 (M+H)+.

H NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 7,60 (d, 1 H, J = 7,9 Hz); 7,54 (d, 1 H, J = 7,9 Hz); 7,36 (d. 1H. J =2,1 HZ); 7,28 (t. 1H. J =7,3 Hz); 7,25-7,16 (mult, 2H); 7.,13 (d, 1H. j'= 8,7 Hz); 6,99 (s. 1 H); 5,25 (s, 2H); 3,61 (s, 2H); 1,78 (bs, 2H).

Preparatívny postup X6

5-Chlór-2-(tiofen-2-ylmetoxy )benzylamín

C12H12CINOS. MW 253,75. MS 254,0 (M+H)+ ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7_Z53 (dd, 1H, J = 5,0 Hz, J = 1,2 Hz); 7,40-7,36 (mult, 1 H); 7,22 - 7,16 (mult; 2H); 7,07 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,04 - 6,98 (mult, 1 H); 5,29 (s, 2H); 3,62 (s, 2H); 1 79 (bs, 2H).

Preparatívny postup Yl

5-Chlór-2-(i zotiazol-5-ylmetoxy)benzylamín

K zmesi 2-[5-chlór-2-(izotiazol-5-ylmetoxy)benzyl] izoindol-1, 3-diónu (464 mg, 1,20 mmol), 2-propanolu (20 ml), vody (2,5 ml) a tetrahydrofuránu (25 ml) sa pridá tetra hydroboritan sodný (295 mg, 7,80 mmol). Reakčná zmes sa 16

229 hodín mieša pri teplote miestnosti, potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo. Olejovitý zvyšok sa vyberie do dichlórmetánu (50 ml). Organická vrstva sa premyje vodou (50 ml), nasýteným vodným chloridom sodným (50 ml), vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje v rotačnom odparovači. Zvyšok sa vyberie do 2-propanolu (20 ml), ladovej kyseliny octovej (1,2 ml) a vody (1,0 ml). Reakčná zmes sa v uzatvorenej nádobe 24 hodín zahrieva na 80C, potom so z nej v rotačnom odparovači odstráni organické rozpúšťadlo. Olejovitý zvyšok sa vyberie do dichlórmetánu (50 ml). Organická vrstva sa premyje vodou (50 ml), nasýteným vodným chloridom sodným (50 ml), vysuší síranom sodným a skoncentruje v rotačnom odparovači. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise.

Ή NMR (400 MHz. DMSO-de) δ 8,50 (s. 1H); 7,42 · 7,38 (mult. 2H); 7,19 (dd. 1H.

J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,02 (d. 1H, J = 8,7 Hz); 5,50 (s, 2H): 3,65 (s, 2H); 1,73 (bs,'2H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparátívnom postupe Yl, sa z vhodných azidov vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch Y2 a Y3.

Preparatívny postup Y2

5-Chlór-2-(chinolin-2-ylmetoxy)benzylamín

C₁₇H₁₅CIN₂O. MW 298,77. MS 299,2 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,40 (d, 1 H, J = 8,5 Hz); 8,03 - 7,96 (mult, 2H);

7,76 (t, 1 H, J = 6,8 Hz); 7,65 (d, 1 H, J = 8,3 Hz); 7,60 (t 1 H, J = 6,8 Hz); 7,42 (s,

1H); 7,18 (d, 1H. J = 8,5 Hz); 7,01 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,37 (s, 2H); 3,78 (s, 2H).

230

Preparatívny postup Y3

5-Chlór-2-( 4-metyl-[l, 2,3 ] tiadiazol-5-ylmetoxy )benzylamín

Teplota topenia: 64,0 až 66,O’C _CliH₁₂ClN₃OS. MW 269,75. MS 270,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,42 (d, 1H, J = 2,3 Hz); 7,25 (dd, 1H, J = 8/ Hz, J = 2,3 Hz); 7,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,53 (s, 2H); 3,65 (s, 2H); 2-66 (s, 3H); 1,84 (bs, 2H).

Preparatívny postup Z . 1

2-Benzyloxy-5-kyanobenzylamín

Trifenylfosfín (1,64 g, 6,24 mmol) sa pri O’C pridá k roztoku 2-benzyloxy-5-kyanobenzylazidu (1,1 g, 4,16 mmol) v bezvodom tetrahydrofuráne (10 ml). Po 1 hodine sa k vzniknutej zmesi pridá hydroxid amónny (0,5 ml). Výsledná zmes sa zahreje na teplotu miestnosti, cez noc mieša a potom skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 3% metanolu v dichlórmetáne. Získa sa 677 mg (69 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja. ¹H NMR (400 MHZ, CDC1₃) δ 7,6 - 7,3 (m, 7H) , 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,18 (s, 2H), 3,9 (s, 2H)

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe Zl, sa zo zodpovedajúcich azidov vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch 72 až 74.

Preparatívny postup Z2

2-Benzyloxy-5-etenylbenzylamín

231

Preparatívny postup Z3

2-Benzyloxy-5-etynylbenzylamín

Preparatívny postup Z4 (2-Aminometyl-4-chlórfenoxy)acetonitril

Preparatívny postup A A 1

2-Benzyloxy-5-trifluórmetylbenzylamín

Lítiumalumíniumhydrid (136 mg, 3,58 mmol) sa pri O’C pridá k roztoku 2-benzyloxy-5-trifluórmetylbenzylazidu (1,1 g, 3,58 mmol). Po 1 hodine sa reakčná zmes rozloží postupným prídavkom vody (136 μΐ), 15% hydroxidu sodného (136 μΐ) a vody (400 μΐ), zriedi dichlórmetánom, vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 3% metanolu v dichlórmetáne. Získa sa 825 mg (82 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja. MS 282 (M+H) ⁺ . NMR (400 MHz, CDClg) δ 7,6 - 7,3 (m, 7H) , 6,92 (d, 1H, J = 9,1 HZ), 5,18 (s, 2H), 3,9 (s, 2H), 2,65 (bs, 2H) .

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe AA1, sa z vhodných azidov vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch AA2 až AA5.

Preparatívny postup A A 2

2-Benzyloxy-5-brómbenzylamín

Preparatívny postup A A 3

2-Benzyloxy-5-fluórbenzylamín

232

Preparatívny postup A A 4

2-Benzyloxy-5-jódbenzylamín

Preparatívny postup AA5

2-Benzyloxy-5-metylbenzylamín

Preparatívny postup BB1

2-Benzyloxy-5-trifluórmetylbenzylazid

DBU (1 ml, 6,62 mmol) a difenylfosforylazid (1,6 ml, 7,5 mmol) sa pri teplote miestnosti pridajú k roztoku 2-benzyloxy-5-trifluórmetylbenzylalkoholu (1,24 g, 4,41 mmol) v bezvodom toluéne (10 ml). Po 3 hodinách sa k vzniknutej zmesi pridá voda a vodná zmes sa extrahuje etylacetátom (3 x). Spojené organické vrstvy sa premyjú IM kyselinou chlorovodíkovou (lx), vodným chloridom sodným (lx), vysušia síranom sodným, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje pri zníženom tlaku. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 3% etylacetátu v hexánoch. Získa sa 1,14 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja (84 %). MS 280 (M-N₂). ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) S 7,6 - 7,3 (m, 7H), 7,01 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,42 (S, 2H)

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparátívnom postupe BB1, sa z vhodných alkoholov vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch BB2 až BB7.

Preparatívny postup B B 2

2-Benzyloxy-5-brómbenzylazid

233

Preparatívny postup BB3

2-Benzyloxy-5-fluórbenzylazid

Preparatívny postup BB4

2-Benzyloxy-5-metylbenzylazid

Preparatívny postup BB5

2-Benzyloxy-5-kyanobenzylazid

Preparatívny postup BB6

2-Benzyloxy-5-jódbenzylazid

Preparatívny postup BB7 (2-Azidometyl-4-chlórfenoxy)acetonitril

Preparatívny postup CC1

2-Benzyloxy-5-trifluórmetylbenzylalkohol

Uhličitan cézny (2,24 g, 6,9 mmol) sa pri teplote miestnosti pridá k roztoku 2-hydroxy-5-trifluórmetylbenzylalkoholu (886 mg, 4,6 mmol) a benzylbromidu (547 μΐ, 4,6 mmol) v bezvodom dimetylformamide (8 ml). Reakčná zmes sa 2 hodiny zahrieva na 50°C, ochladí a zriedi etylacetátom (25 ml). Etylacetátová zmes sa premyje vodou (3 x 25 ml) a vodným chloridom sodným (1 x 25 ml), vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Získa sa 1,3 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky. I-H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,6 - 7,3 (m, 7H) , 7,01 (d, 1H,

J = 9,1 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,79 (s, 2H), 2,8 (bs, 1H).

234

Preparatívny postup DD1

2-Hydroxy-5-trifluórmetylbenzylalkohol

Paraformaldehyd (3,4 g, 0,114 mol) sa počas 6 hodín po 0,5g dávkach pridá k refluxujúcej zmesi 4-trifluórmetylfenolu (2,3 g, 0,0142 mol), fenylborónovej kyseliny (2,1 g, 0,017 mol) a propiónovej kyseliny (530 μΐ, 7 mmol) v benzéne za azeotropického odstraňovania vody (Dean-Starkov odlučovač) Po dokončení prídavku sa reakčná zmes ďalšiu hodinu zahrieva, potom ochladí v ladovom kúpeli a zriedi tetrahydrofuránom. Tetrahydrofuránová zmes sa zmieša s 5 ml 30% roztoku peroxidu vodíka. Po jednohodinovom miešaní sa zmes rozdelí medzi vodu (50 ml) a etylacetát (50 ml). Organická vrstva sa premyje roztokom hydrogensiričitanu sodného (l x 50 ml), vodným roztokom chloridu sodného (l x 50 ml), vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 30% etylacetátu v hexánoch. Získa sa 950 mg (35 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbej pevnej látky. NMR (400 MHz,

CDC1₃) δ 7,42 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 7,3 (s, 1H), 6,95 (d,

1H, J = 9,1 Hz), 4,89 (s, 2H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe DD1, sa zo zodpovedajúceho fenolu vyrobí zlúčenina uvedená v preparatívnom postupe DD2.

Preparatívny postup D D 2

2-Hydroxy-5-kyanobenzylalkohol

Preparatívny postup EE1

2-Benzyloxy-5-fluórbenzylalkohol

235

Lítiumaluminiumhydrid (226 mg, 5,95 mmol) sa pri 0°C pridá k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-fluórbenzoovej kyseliny (2 g, 5,95 mmol). Reakčná zmes sa zahreje na teplotu miestnosti a po 1 hodine rozloží postupným prídavkom vody (225 μΐ), 15% hydroxidu sodného (226 μΐ) a vody (760 μΐ). Výsledná zmes sa zriedi etylacetátom. Etylacetátová zmes sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 10% etylacetátu v hexánoch. Získa sa 1,13 g (82 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja. MS 250 (M+NH₄)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 5H), 7,05 (dd, 1H), J = 9,1, 4,3 Hz), 6,92 (m, 2H), 5,08 (s, 2H), 4,65 (s, 2H), 2,2 (bs, 1H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe EE1, sa z vhodných alkoholov vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch EE2 až EE3.

Preparatívny postup E E 2 .

2-Benzyloxy-5-jódbenzylalkohol

Preparatívny postup E E 3

2-Benzyloxy-5-metylbenzylalkohol

Preparatívny postup FF1

2-Benzyloxy-5-etynylbenzylazid a 2-benzyloxy-5-etenylazid

Lítiumaluminiumhydrid (95 mg, 2,49 mmol) sa pri 0°C pridá k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-etynylbenzoovej kyseliny (680 mg, 1,99 mmol) v tetrahydrofuráne (5 ml). Po 15 minútach sa reakčná zmes rozloží postupným prídavkom vody (100 μΐ), 15% hydroxidu sodného (100 μΐ) a vody (300 μΐ). Výsledná zmes sa zriedi etylacetátom (10 ml), vy236 suší síranom horečnatým, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 10% etylacetátu v hexánoch. Získa sa 600 mg zmesi 2-benzyloxy-5-etynylbenzylalkoholu a 2-benzyloxy-5-etenylbenzylalkoholu v pomere približne 1:1. Táto zmes sa rozpustí v toluéne (8 ml). Toluénový roztok sa pri teplote miestnosti zmieša s DBU (0,7 ml, 4,52 mmol) a difenylfosforylazidom (1,1 ml, 5,12 mmol). Po 18 hodinách sa k zmesi pridá voda a vodná zmes sa extrahuje etylacetátom (3 x). Spojené organické vrstvy sa premyjú IM kyselinou chlorovodíkovou (1 x) a vodným chloridom sodným (l x), vysušia síranom sodným, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje pri zníženom tlaku. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 3,5% tetrahydrofuránu v hexánoch. Zmesové frakcie sa podrobia ďalšej chromatografii pri použití 3% éteru v petrolétere. Získa sa 206 mg 2-benzyloxy-5-etenylbenzylazidu ako rýchlejšie eluovanej frakcie. MS 238 (M-N₂)⁺. ^H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 7H), 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 6,62 (dd,

1H, J = 17,5, 10,5 Hz), 5,61 (d, 1H, J = 17,5 Hz), 5,15 (m, 3H), 4,40 (s, 2H). Ďalšou elúciou sa získa 135 mg 2-benzyloxy-5-etynylbenzylazid. MS 236 (M-N₂)⁺. ^H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 7H), 7,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,1 (s,

2H), 4,39 (s, 2H), 3,0 (s, 1H).

Preparatívny postup G G 1

Benzylester 2-benzyloxy-5-etynylbenzoovej kyseliny

Tetrabutylamóniumfluorid (2,97 ml IM roztoku v tetrahydrofuráne, 2,97 mmol) sa pri teplote miestnosti pridá k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-(2-trimetylsilyletynyl)benzoovej kyseliny (1,07 g, 2,58 mmol) v tetrahydrofuráne (10 ml). Po 30 minútach sa zmes zriedi éterom (20 ml). Éterová zmes sa premyje vodou (3 x 30 ml) a vodným roztokom chloridu sodného (1 x 30 ml), vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí

237 rýchlou chromatografiou pri použití 5% etylacetátu v hexánoch. Získa sa 687 mg (78 %) produktu vo forme svetlooranžo vého oleja. ^H NMR (400 MHz, CDCl-j) S 7,98 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,52 (dd, 1H, J = 9,1, 1 Hz), 7,38 (m, 10H), 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,35 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 3,0 (s, 1H) .

Preparatívny postup HH1

Benzylester 2-benzyloxy-5- (2-trimetylsilyletynyl)benzoovej kyseliny

Chlorid difenylfosfínpaladnatý (194 mg, 0,277 mmol), jodid medný (106 mg, 0,554 mmol) a trietylamín (0,8 ml, 5,44 mmol) sa pri teplote miestnosti pridajú k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-jódbenzoovej kyseliny (1,23 g,

2,77 mmol) a trimetylsilylacetylénu (0,5 ml, 3,32 mmol) v bezvodom dimetylformamide (15 ml). Reakčná nádoba sa zakryje hliníkovou fóliou a vzniknutá zmes sa cez noc mieša potom zriedi etylacetátom (50 ml) a premyje vodou (3x), IM kyselinou chlorovodíkovou (lx) a vodným chloridom sodným (lx), vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 5% etylacetátu v hexánoch. Získa sa 1,07 g (93 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme oleja. NMR (400 MHz, CDC1₃) S 7,98 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,52 (dd, 1H, J = 9,1 1 Hz), 7,38 (m, 10H), 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,31 (s, 2H), 5,17 (s, 2H), 0,1 (s, 9H).

Preparatívny postup III

Benzylester 2-benzyloxy-5-fluórbenzoovej kyseliny

Benzylbromid (0,86 ml, 7,2 mmol) a uhličitan cézny (2,6 g, 8 mmol) sa pri teplote miestnosti pridá k roztoku 2 -hydroxy-5-fluórbenzoovej kyseliny (0,5 g, 3,2 mmol) v bezvodom dimetylformamide (8 ml). Reakčná zmes sa 2 hodiny za238 hrieva na 80“C, ochladí a zriedi vodou (50 ml). Vodná zmes sa extrahuje etylacetátom (3 x 40 ml), spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (1 x 50 ml) a vodným chloridom sodným (1 x 50 ml), vysušia síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Získa sa 1,02 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja (93 %). MS: 337 (M+H)⁺. ^XH NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7,55 (dd, 1H, J = 8,7, 3,1 Hz), 7,35 (m, 10H), 7,1 (m, 1H), 6,97 (dd, 1H, J = 9,1, 4,3 Hz),

5,3 (S, 2H), 5,1 (S, 2H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe III, sa z vhodných východiskových látok vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch 112 a 113.

Preparatívny postup 112

Benzylester 2-benzyloxy-5-jódbenzoovej kyseliny

Preparatívny postup 113

Benzylester 2-benzyloxy-5-metylbenzoovej kyseliny

Preparatívny postup JJ1

2-Benzyloxy-5-brómbenzylalkohol

Tetrahydroboritan sodný (339 mg, 8,93 mmol) sa pri 0°C pridá k roztoku 2-benzyloxy-5-brómbenzaldehydu (2,6 g, 8,93 mmol) v bezvodom etanole (20 ml). Reakčná zmes sa nechá zahriať na teplotu miestnosti a po 3 hodinách skoncentruje. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (50 ml) a etylacetátový roztok sa premyje vodou (1 x 25 ml), IM kyselinou chlorovodíkovou (1 x 25 ml) a vodným chloridom sodným (1 x 25 ml), vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 8% etylacetátu v hexáne. Získa sa 2,58 g zlúčeniny

239 uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja (98 %).

MS 292 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7,39 (m, 9H), 6,9 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 5,06 (s, 2H), 4,62 (s, 2H), 2,2 (bs, 1H) .

Preparatívny postup KK1

2-Benzyloxy-5-brómbenzaldehyd

Benzylbromid (18 ml, 14,9 mmol) a uhličitan cézny (8,1 g, 24,9 mmol) sa pri teplote miestnosti pridajú k roztoku 2-hydroxy-5-brómbenzaldehydu (2 g, 9,95 mmol) v bezvodom dimetylformamide (25 ml). Reakčná zmes sa 2 hodiny zahrieva na 80°C, potom ochladí a zriedi vodou (50 ml). Vodná zmes sa extrahuje etylacetátom (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy sa premyjú vodou (1 x 50 ml) a vodným chlo ridom sodným (1 x 50 ml), vysušia síranom sodným, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa prečistí rýchlou chromatografiou pri použití 10% etylacetátu v hexáne. Získa sa 2,67 g zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bezfarbého oleja (92 %). MS 291 (M+H)⁺. ^ľH NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,94 (s, 1H), 7,6 (dd, 1H, J = 8,9, 2,7 Hz), 7,39 (m, 6H), 6,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 5,18 (s, 2H).

Preparatívny postup LL1

2- [ 5-Chlór-2- (3-metylizoxazol-5-ylmetoxy) benzyl ] izoindol-1,3-dión

K zmesi 2-[5-chlór-2-hydroxybenzyl]izoindol-1,3diónu (800 mg, 2,78 mmol), 5-hydroxymetyl-3-metylizoxazolu (373 mg, 3,3 mmol) a trifenylfosfínu (1,0 g, 4,2 mmol) v bezvodom tetrahydrofuráne (10 ml) sa pridá dietylazodikarboxylát (0,657 ml, 4,7 mmol). Vzniknutý roztok sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti za bezvodých podmienok, potom sa z nej v rotačnom odparovači odstráni rozpúšťadlo.

240

Produkt sa vopred naadsorbuje na silikagél a prečistí rýchlou chromatografiou. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise (555 mg, 52 %) .

C20H15CIN2O4. MW 382,81. MS 382,2 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,85 - 7/9 (mult, 4H); 7,28 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, J = 2,6 Hz); 7,18 (d, 1H, J = 2,6 Hz); 7,16 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,39 (s, 1H); 5,25 (s, 2H);4,67 (s, 2H); 2,17 (s, 3H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe LL1, sa reakciou východiskovej látky s vhodným alko holom vyrobia zlúčeniny uvedené v preparatívnych postupoch LL2 až LL32.

Preparatív n ý postup L L 2

5-Chlór-2- ( 2-morfolin-4-yletoxy )benzonitril

Teplota topenia: 78,0 až 80,O’C ^C13^Hl5^c,rJ2°2- MW 266,73. MS 267,2 (M+H)+.

H NMR (300 MHz, CDCl·,) δ 7,55 - 7,45 (mult, 2H); 6,92 (d, 1 H, J = 8,9 Hz); 4,20 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 3,72 (t, 4H, J = 4,6 Hz); 2,86 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 2,62 (t, 4H, J -4,6 Hz).

Preparatívny postup L L 3

2-Benzyloxy-5-chlórbenzonitril

Teplota topenia: 75,0 až 76,5°C 'H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,88 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,68 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,45 - 7,36 (mult, 4H); 7,35 - 7,28 (mult, 2 H); 5,25 (s, 2H).

241

Preparatívny postup LL4

5-Chlór-2-cyklobutylmetoxybenzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,84 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,65 (dd, 1H, J = 8,7 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,45 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 4,06 (d, 2H, J = 6,4 Hz); 2,75-2,63 (mult,

H); 2;.05 - 1,95 (mult, 2H); 1,92 -1,75 (mult, 4H).

Preparát í v n y postup LL5

5-Chlór-2-(3-metoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota topenia: 90,0 až 92,O’C ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,91 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 8,9 Hz,

J = 2,5 Hz); 7,35 - 7,25 (mult, 2H); 7,05 - 6,95 (mult, 2H); 6,88 (dd, 1H, J = 8,3 Hz, J = 2,5 Hz); 5,25 (s, 2H); 3,73 (s, 3H).

Preparatívny postup LL6

5-Chlór-2-(2,5-dimetoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota topenia: 99,0 až 102,O’C ⁿH NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,90 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd, 1 H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 7,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 7,02 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,97 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,87 (dd, 1 H, J = 8,9 Hz, J = 3,1 Hz); 5,17 (s, 2H); 3,75 (s, 3H); 3,68 (s, 3H).

Preparatívny postup LL7

5-chlór-2-(3-chlórbenzyloxy)benzonitril

Teplota topenia: 101,0 až 104,O’C

242

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,73 (dd, 1 H, J = 8,9 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,53 (d, 1 H, J =. 1,5Hz); 7,47 - 7,36 (mult, 2H); 7,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz);

7,25 - 6,95 (mult, 1H); 5,30 (s, 2H).

Preparatívny postup L L 8

5-Chlór-2- (4-chlórbenzyloxy )benzonitril ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,92 (d. Íh, J = 2,7 Hz); 7,71 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, 1 “ 27 Hz), 7,46 (s, 4H); 7,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 5,27 (s, 2H).

Preparatívny postup L L 9

5-Chlór-2- (2-chlórbenzyloxy) benzonitril ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,93 (d, 1 H, J = 2,6 Hz); 7,73 (dd, 1 H, J = 9,1 Hz,

J = 2,6 Hz); 7,64 - 7,59 (mult, 1H); 7,54 - 7,49 (mult, 1H); 7,45 - 7,37 (mult, 3.H);

5,32 (s, 2H).

Preparatívny postup LL10

5-Chlór-2-( tetrahydrof urán-2-ylmetoxy) benzonitril

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd. 1 H, J = 9_Z1 Hz, J = 2,7 Hz);. 7,28 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 4,13 - 4,00 (mult, 2H); 3,80 - 3,70 (mult, 2H);

3,65 (dd, 1 H, J = 7,7 Hz, J = 6,6 Hz); 3,55 - 3,50 (mult, 1 H); 2,70 - 2,60 (mult, 1 H); 2,05 - 1,95 (mult, 1 H); 1,70 - 1,61 (mult, 1 H).

Preparatívny postup LL11

5-Chlór-2-(4-metylbenzyloxy)benzonitril

243

Teplota topenia: 106,0 až 108,0°C ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,89 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd, 1 H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,35 - 7,30 (mult, 3H); 7,19 (d, 2H, J = 8,1 Hz); 5,21 (s, 2H); 2_Z28 (s, 3H).

Preparatívny postup LL12

5-Chlór-2- (2-metylbenzyloxy)benzonitril 'H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,88 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9_Z1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,39 (d, 2H, J = 9,1 Hz); 7,25 - 7,15 (mult, 3H); 5,23 (s, 2H); 2,30 (s, 3H).

Preparatívny postup L L 1 3

5-Chlór-2-(3-metylbenzyloxy )benzonitril ’H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ.7,91 (d, 1 H, J = 2,5 Hz); 7,71 (dd, 1H, J = 9,2 Hz,

J = 2,5 Hz); 7,40 - 7,12 (mult, 5H); 5,24 (s, 2H); 2,31 (s, 3H).

Preparatívny postup LL14

5-Chlór-2-(2-metoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota topenia: 114,0 až 115,O’C

Ή NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,89 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd, 1 H, J - 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,40 (d, 1 H. J = 7,5 Hz); 7,39 - 7,31 (mult, 2H); 7,05 (d, 1 H, J = 8,3 Hz); 6,97 (t, 1 H, J = 7,5 Hz); 5,20 (s, 2H); 3,80 (s, 3H).

Preparatívny postup LL15

5-Chlór-2-(furan-3-ylmetoxy)benzonitril

244

Teplota topenia: 72,0 až 74,O’C 'H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,89 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,81 (s, 1 H); 7,73 - 7,67 (mult, 2H); 7,38 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 6,56 (s, 1H); 5,13 (s, 2H).

Preparatívny postup LL16

5-Chlór-2-( 4-metoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota topenia: 84,0 až 85,O’C ’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,88 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd, 1 H, J - 9,1 Hz,

J - 2,7 Hz); 7,41 -7,30 (mult, 3H); 6,98 - 6,92 (mult, 2H); 5,18 (s, 2H); 3,73 (s, 3H).

Preparatívny postup L L 1 7

5-Chlór-2-cyklopentylmetoxybenzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,86 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,67 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); (d, 1 H, J = 9,1 Hz); 3,99 (d, 2H, J = 6,8 Hz); 2,30 (sept, 1 H, J = 7,4 Hz); 1,80 - 1,68 (mult, 2H); 1,65 - 1,48 (mult, 4H); 1,38 -1,26 (mult, 2H).

Preparatívny postup L L 1 8

3-(2-Morfolin-4-yletoxy)benzaldehyd

Ci₃H₁₇NO₃. MW 235,29. MS 236,1 (M+H)+

-H NMR (400 MHZ. DMSO-d₆) δ 9,94 (s. 1H); 7,51 - 7,43 (mult, 2H); 7,42 (bs, 1 H);

7,29 - 7,22 (mult. 1H); 4,14 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 3,55 (t.4H, J = 3,7 Hz); 2,72 - 2,63 (mult, 2H); 2,50 - 2,43 (mult, 4H).

Preparatívny postup L L 1 9 chlór 2 [3—(2—morfolin-4—yletoxy)benzyloxy]benzonitril

245

C20H21CIN2O3. MW 372,86. MS 373,1 (Μ+Η)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1 H, J = g.7 Hz); 7,68 (dd, 1 H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,29 (d, 1 H, J = 9,1 Hz); 7,25 (d, 1 H, J = 7,7 Hz); 7,00 (bs, 1 H); 6,96 (d, 1H, J = 7)5 Hz); 6,87 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 5,21 (s, 2H); 4,04 (t, 2H, J = 5,8 Hz); 3,57 - 3,49 (mult, 4H); 2,67 - 2,58 (mult, 2H); g.42 - 2,38 (mult, 4H).

Preparatívny postup LL20

5-Chlór-2-( tetrahydrof uran-3-ylmetoxy)benzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,89 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1 H, J = 9/ Hz, J = 2,7 Hz); 7,28 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 4,13 - 4,00 (mult, 2H); 3,80 - 3,70 (mult, 2H);

3,65 (dd, 1H, J = 7_r7 Hz, J = 6,.6 Hz); 3,55 - 3,50 (mult, 1 H); 2,70 - 2,60 (mult, 1H); 2,05 - 1,95 (mult, 1 H); 1,70 -1,61 (mult, 1 H).

Preparatívny postup LL21

5-Chlór-2-(tetrahydrofuran-3-ylmetoxy)benzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,89 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,28 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 4,13 - 4,00 (mult, 2H); 3,80 - 3_z70 (mult, 2H);

3,65 (dd, 1H, J = 7,7 Hz, J = 6,6 Hz); 3,55 -3,50 (mult, 1H); 2,70 - 2,60 (mult, 1H); 2,05 -1,95 (mult, 1 H); 1,70-1,61 (mult, 1 H).

Preparatívny postup LL22

5-Chlór-2-(furan-2-ylmetoxy)benzonitril

Teplota topenia: 85,0 až 88,O’C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,89 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,78 - 7,69 (mult, 2H);

7,44 (d, 1 H, J = 9,1 Hz); 6,64 (d, 1 H, J = 3,1 Hz); 6,46 (bs, 1 H); 5,.25 (s, 2H).

246

Preparatívny postup LL23

5-Chlór-2- (2,2,7-7-tetrametyltetrahydrobis [ 1,3 jdioxolo[ 4,5-b;4',5'-d]pyran-5-ylmetoxy)benzonitril ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,88 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,67 (dd, 1 H, J - 9/ Hz, J = 2,7 Hz); 7,31 (d, 1 H, J = 9,1 Hz); 5,44 (d, 1 H, J = 5,0 Hz); 4,64 (dd, 1 H, J = 7,9 Hz, J = 1,9 Hz); 4,37 - 4,32 (mult, 2H); 4,30 (dd, 1 H, J = 10,4 Hz, J = 4,2 Hz), 4,19 4,11 (mult, 1 H); 4,08 - 4,02 (mult, 1 H); 1,34 (d, 6H, J = 1,5 Hz); 1,26 (d, 6H, J =

10,2 Hz).

Preparatívny postup LL24

5-Chlór-2- ( 2,5-dimetylfuran-3-ylmetoxy )benzonitril

Teplota topenia: 103,0 až 105,0°C

Ή NMR (400 MHz. DMSO-dg) δ 7,87 (d, 1H. J.2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,33 (d, 1 H, J = 9,1 Hz); 6,03 (s, 1H); 5,00 (s, 2H); ^.23 (s, 3H)· 2 17 (s,3H). ’

Preparatívny postup LL25

5-Chlór-2-(5-dimetylaminometylfuran-2-ylmetoxy) benzonitril ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,86 (dd, 1H, J = 2,7Hz, j = 1,0 Hz); 7,69 (ddd,

1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz, J = 1,0 Hz); 7,40 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 6,54 (d, 1H, J =

3,1 Hz); 6,23 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 5,18 (s, 2H); 3,36 (s, 2H); 2,06 (d, 6H, J = 1,0 Hz).

Preparatívny postup LL26

2-[5-Chlór-2-(tiazol-2-ylmetoxy)benzyl]izoindol-1,3-dión

247

Teplota topenia: 205,0 až 205,5°C

C19H13CIN2O3S. MW 384,84. MS 385,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,90 - 7^80 (mult, 4H); 7,78 (d, 1H, J = 3,1 Hz);

7,74 (d,lH, J = 3,1 Hz); 7,29 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,19 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,16 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,48 (s, 2H); 4,74 (s, 2H).

Preparatívny postup LL27

2-(2-(Benzofuran-2-ylmetoxy)-5-chlórbenzyl]izoindol-1,3-dión

Teplota topenia: 155,0 až 156,0’C ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,83 - 7,75 (mult, 4H); 7,59 (d, 1 H, J = 7,5 Hz);

7,37 (d, 1 H, J = 7,5 Hz); 7,33 - 7,17 (mult, 5H); 6,98 (s, 1 H); 5,29 (s, 2H); 4,69 (s,

2H).

Preparatívny postup LL28

2-[5-Chlór-2-(izotiazol-5-ylmetoxy)benzyl]izoindol-1,3-dión ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,48 (s, 1H); 7,89 - 7,79 (mult, 4H); 7,42 (s, 1 H);

7,30 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,20 (d, 1H. J = 2,5 Hz); 7,14 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,56 (s, 2H); 4,73 (s, 2H).

Preparatívny postup LL29

2-[5-Chlór-2-(tiofen-2-ylmetoxy)benzyl]izoindol-1,3-dión

Teplota topenia: 135,0 až 137,0°C

C20^H14^CIN°3^S· ^{MW 383}>⁸⁶· ^{MS 383,1} <^M+H)⁺· ¹H MNR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,84 - 7,78 (mult, 4H); 7,47 (dd, 1H, J = 5,0 Hz, J = 1,2 Hz); 7,27 - 7,22 (mult, 1 H), 7,19 - 7,12 (mult, 3H); 6,95 (dd, 1 H, J = 5,0 Hz, J = 3,5 Hz); 5,31 (s, 2H); 4,65 (s, 2H).

248

Preparatívny postup LL30

2-[ 5-Chlór-2-(chinolin-2-ylxnetoxy)benzyl]izoindol-1,3-dión

Teplota topenia: 190,0 až 192,0'C ^C25^H17^CIN2°3· MW 428,89. MS 429,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,20 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 8,06 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 7,90 - 7,80 (mult, 3H); 7,79 - 7,67 (mult, 4H); 7,56 (t, 1H, J = 7,3 Hz); 7,17 - 7,08 (mult, 2H); 6,86 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 5,42 (s,'2H); 5,02 (s, 2H).

Preparatívny postup LL31

2-[5-Chlór-2-(4-metyl-[1,2,3]tiadiazol-5-ylmetoxy)benzyl]izoindol-1,3-dión

Teplota topenia: 205,0 až 208,0’C

C^HuCINaOsŠ. MW 399,86. MS 400,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,82 (s/4H); 7,36 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 7,26 (bs,

1H); 7,19 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,55 (s, 2H); 4,69 (s, 2H); 2,61 (s,3H).

Preparatívny postup LL32

5-Chlór-2-(naftalen-l-ylmetoxy)benzonitril

Teplota topenia: 128,0 až 130,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,12 - 8,05 (mult, 1 H); 7,97 - 7,85 (mult, 3H); 7,74 (dd, 1 H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,68 (d J H, J = 6,9 Hz); 7,60 - 7,44 (mult, 4H);

5,71 (s, 2H).

249

Preparatívny postup M M 1

2-[5-Chlór-2-(pyridin-3-ylmetoxy)benzyl]izoindol-1,3-dión

K roztoku 2-[5-chlór-2-hydroxybenzyl]izoindol-1,3-diónu (300 mg, 1,04 mmol) a hydrochloridu 3-pikolylchloridu (171 mg, 1,04 mmol) v bezvodom Ν,Ν-dimetylformamide (10 ml) ochladenému na 0’C sa pridá 60% disperzia hydridu sodného v oleji (104 mg, 2,6 mmol). Reakčná zmes sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti za bezvodých podmienok, potom rozloží prídavkom vody (5 ml) a naleje do deliaceho lievika a pridá sa k nej nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Vodná vrstva sa extrahuje 3 x 50 ml dichlórmetánu. Organické vrstvy sa spoja a premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného (100 ml), vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje v rotačnom odparovači. Zvyšok sa trituruje s éterom, odfiltruje a vysuší. Získa sa zlúčenina uvedená v nadpise.

Teplota topenia: 173,0 až 175,0°C C21H15CIN2O3. MW 378,82. MS 379,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,61 (s, 1 H); 8,49 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 7,84 - 7,78 (mult, 5H); 7,34 (dd, 1 H, J = 7,9 Hz, J = 4,8 Hz); 7,27 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,1 Hz); 7,17 (d, 1H, J = 1,9 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,15 (s, 2H); 4,70 (s, 2H).

Podobným spôsobom, aký je opísaný v preparatívnom postupe MM1, sa zo zodpovedajúcej východiskovej látky vyrobí zlúčenina uvedená v preparatívnom postupe MM2.

Preparatívny postup M M 2

2-[2-(Benzotiazol-2-ylmetoxy)-5-chlórbenzyl]izoindol-1,3-dión

Teplota topenia: 209,0 až 211,0’C

250

C₂3H-|5^CIN2O3^S· MW 434,90. MŠ 435,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,03'(d, 1H, J = 8,0 Hz); 7,93 (d, 1H, J = 8,0 Hz);

7,88 - 7,76 (mult, 4H); 7,49 (td, 1H, J = 7,7 Hz, J = 1,2 Hz); 7,41 (td, 1H, J = 7,7 Hz, J = 1,2 Hz); 7,29 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,20 (d, 1 H, J = 2,7 Hz); 7,17 (d, 1 H, J = 8,7 Hz); 5,63 (s, 2H); 4,80 (s, 2H).

Preparatívny postup NN1

4-Metyl[1,2,3]tiadiazol-5-yl)metanol

K zmesi metylesteru 4-metyl-[1,2,3]tiadiazol-5-karboxylovej kyseliny (923 mg, 5,84 mmol) v bezvodom etanole (32 ml) sa pridá tetrahydroboritan sodný (993 mg, 26,2 mmol. Reakčná zmes sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti za bezvodých podmienok, potom ochladí na 0°C a pridá sa k nej nasýtený vodný chlorid amónny (25 ml). Výsledná zmes sa naleje do vody (25 ml) a vodná zmes sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 40 ml), vysuší síranom horečnatým a skoncentruje v rotačnom odparovači na olej. ’-H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,00 (bs, 1H), 4,78 (s, 2H), 2,51 (s, 3H).

Preparatívny postup OO1

Metylester 4-metyl-[1,2,3]tiadiazol-5-karboxylovej kyseliny

4-Metyl-[1,2,3]tiadiazol-5-karboxylová kyselina (1,0 g, 6,94 mmol), koncentrovaná kyselina sírová (866 μΐ) a metanol (12 ml) sa zmiešajú a vzniknutá zmes sa 15 hodín zahrieva k spätnému toku, potom sa skoncentruje odparením rozpúšťadla v rotačnom odparovači. Zvyšok sa naleje na 15 g ladu. Výsledná zmes sa zneutralizuje nasýteným vodným hydrogenuhličitanom sodným a vzniknutý roztok sa extrahuje dichlórmetánom (4 x 35 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje v rotačnom odparovači. Produkt sa vopred naadsorbuje na silikagél a prečistí rýchlou chromatografiou. Získa

251 sa zlúčenina uvedená v nadpise vo forme žltého oleja. C₅H₆N₂O₂S. MW 158,18. MS 159,0 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 3,87 (s, 3H) , 2,85 (s, 3H) .

Preparatívny postup PP1

3-Deoxy-l, 2-0- (1-metyletylidén) -3- [ (f enylmetyl) amino ] -5-0-(trifenylmetyl)-a-ribofuranóza (trojstupňový spôsob)

Stupeň 1:

Do čistej a plynom premytej reakčnej nádoby vyloženej sklom sa predloží dichlórmetán (49,2 litru), ku ktorému sa pridá 1,2-0-(1-metyletylidén)-a-D-xylofuranóza (7,0 kg, 36,8 mmol) a potom pyridin (4,5 litru). Reakčná zmes ochladí na 10 až 15°C a pridá sa k nej tritylchlorid (10,8 kg, 38,6 mol; je pozorovaná určitá exotermická reakcia) Reakčná zmes sa potom 5 hodín mieša pri 20 až 25’C. Úplnosť reakcie sa posúdi pomocou TLC. Surová reakčná zmes sa premyje 5% vodným roztokom kyseliny octovej (2 x 43,5 litru) a vodou (83,3 litru). Organická vrstva obsahujúca 1,2-0-(1-metyletylidén)-5-0-(trifenylmetyl)-α-D-xylofuranózu sa bez vysušenia a izolácie podrobí spracovaniu podlá stupňa 2.

Stupeň 2:

K surovej organickej vrstve obsahujúcej 1,2-0-(1-metyletylidén)-5-0-(trifenylmetyl)-α-D-xylofuranózu v dichlormetáne sa pri 25 až 30°C pridá bromid draselný (877 g, 7,36 mmol) a potom voda (64,4 litru) a hydrogenuhličitan sodný (15,4 kg). Reakčná nádoba sa ochladí na 0 až 5°C a pridá sa do nej volný radikál 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloxy (TEMPO) (280 g). Pri chladení na 0 až 5°C na plášti sa do reakčnej nádoby za intenzívneho miešania počas 4 hodín pridá 49,2 litrov bielidla Clorox (ktoré vyvoláva silnú exotermickú reakciu, takže sa prídavok vy252 konáva takou rýchlosťou, aby sa vnútorná teplota udržala v rozmedzí 0 až 5°C). Vzorka reakčnej zmesi sa analýzou ^ΧΗ NMR (CDC1₃) skúša na úplnosť reakcie. Potom, čo je reakcia považovaná za úplnú, sa reakčná zmes zriedi dichlórmetánom (144 litrov) a vodou (91 litrov). Fázy sa oddelia a dichlórmetánová fáza sa premyje vodou (2 x 113,6 litru) a vodným chloridom sodným (60,6 litru). Organická vrstva sa skoncentruje za atmosférického tlaku na objem 37,9 až 56,8 litrov a priamo sa použije v stupni 3.

Stupeň 3:

K produktu zo stupňa 2 v dichlórmetáne sa pridá kyselina octová (1,7 litru). Do reakčnej nádoby sa počas 30 minút pridá benzylamín (6 litrov, 56,31 mol), pričom sa roztok chladí na 15°C (na plášti reakčnej nádoby) (pri prídavku spočiatku dôjde k velmi exotermickej reakcii, obsah sa udržuje na < 30°c). Do reakčnej nádoby sa počas 15 minút pridá triacetoxynátriumbórhydrid (11,6 kg, 51,5 mol). Reakčná zmes sa 12 hodín mieša, potom sa pomocou HPLC vzorky posúdi úplnosť reakcie. Reakčná zmes sa pri teplote 4 až 14’C počas 30 minút zriedi dichlórmetánom (98,4 litru) a 2M hydroxidu sodného (98,4 litru). Fázy sa oddelia a organická vrstva sa extrahuje vodou (37,9 litru) a vodným chloridom sodným (37,9 litru). Organická vrstva sa za atmosférického tlaku skoncentruje na objem 56,8 litru a pridá sa k nej metanol (75,7 litru). Metanolická zmes sa za atmosférického tlaku a pri konečnej teplote par 65°C opäť skoncentruje na objem 64,4 litru, ochladí na 10 až 20’C a cez noc nechá granulovať. Kryštalická pevná látka sa odfiltruje. Získa sa 18,4 kg 3-deoxy-l,2-0-(l-metyletylidén)-3-[(fenylmetyl)amino]-5-0-(trifenylmetyl)-a-D-ribofuranózy, ktorá podlá výpočtu obsahuje 16% hmotn. metanolu (výťažok 80 % korigovaný vzhladom na zvyškové rozpúšťadlo z troch stupňov). Táto látka je vhodná na ďalšiu transformáciu v nasledujúcom stupni bez ďalšieho sušenia.

253 [a]_D: +70,75 (c = 1, CH₂C1₂) Teplota topenia: 116,2 až 116,3’C ľoľľľľsT' ^d6'^{DMS0): 1,31 (S}' ³⁾' ¹’^{47 (S}· ³>· ²-°⁶ υ. 2,93 (br s. 1),

-13^ 4 85 ľ ' ľ' ^<d' θ’ ^(bf ¹’ ^J=13'^7>' ³’⁷⁶ <· υ· 3,80 ir d 1, J-13,5), 4,65 (t. 1. J=4,2), 5,82 (d. 1, J=₃,9), 7,1 6-7,42 (m, ₂₀₎

C NMR (100 MHz, de-DMSO): 26,94, 51,,3. ₅₀,₆₀. ₆₃,₇₀. „_{>M ?g 12} θθ 1 4,75. 111,32, 127,07, 127,43, 128,07. 128,29, 128,49, 126,78. 140^81. 14^,17

Analýza pre C₃₄H₃₅NO₄: vyrátané: C 78,28, H 6,76, N 2,69, zistené: C 77,89, H 6,55, N 2,56

Preparatívny postup Q Q 1

3-Deoxy-l,2-O-(l-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-α-D-ribofuranóza (trojstupňový spôsob)

Stupeň 1:

K roztoku 3-deoxy-l,2-0-(l-metyletylidén)-3-[(fenylmetyl)amino]-5-0-(trifenylmetyl)-α-D-ribofuranózy (200 g, o,383 mol) v toluéne (1000 ml) sa pridá kyselina octová (30 ml) a potom 10% paládium na uhlíku (48 g). Reakčná zmes sa hydrogenuje v Parrovom trepanom zariadení a po 20 hodinách ešte vykazuje 5% obsah východiskovej látky. K zmesi sa teda pridá ďalšia dávka katalyzátoru (9,6 g) a v hydrogenácii sa pokračuje ďalších 20 hodín. Vzniknutý roztok sa prefiltruje cez celit a katalyzátor sa premyje toluénom (200 ml). Roztok surovej 3-amino-3-deoxy-l,2-0-(1-metyletylidén)-5-0-(trifenylmetyl)-a-D-ribofuranózy sa priamo použije v nasledujúcom stupni.

Stupeň 2:

K roztoku získanému v stupni 1 sa pridá voda (2 litre) a hydrogénuhličitan sodný (128,8 g). K výslednej

254 zmesi sa za dôkladného miešania postupne, aby sa zabránilo peneniu, počas 5 minút pridá p-nitrobenzoylchlorid (71,1 g, 0,383 mol). Po dalších 5 minútach je reakcia podlá HPLC úplná. Fázy sa oddelia a organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým a prefiltruje. Získa sa surová 3-deoxy-l,2-0-(1-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-5-0-(trifenylmety1) -α-ribofuranóza, ktorá sa priamo použije v nasledujúcom stupni.

Stupeň 3:

K surovému 3-deoxy-l,2-0-(l-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-5-0-(trifenylmetyl)-α-ribofuranózovému roztoku zo stupňa 2 sa pridá metanol (890 ml) a koncentrovaná kyselina chlorovodíková (0,6 ml). Priebeh reakcie sa monitoruje pomocou HPLC. Po 3,5 hodine zmes ešte obsahuje niekolko percent východiskovej látky a tiež niekolko percent vediajších produktov. Reakčná zmes sa rozloží prídavkom hydrogenuhličitanu sodného (18,5 g). Roztok sa skoncentruje, pričom na úplné odstránenie metanolu sa využije vákuum. Ku koncu sa roztok za atmosférického tlaku zahrieva na vnútornú teplotu 60°C, pridá sa k nemu voda a vodná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a nechá cez noc granulovať. Pevná látka sa odfiltruje, premyje toluénom (200 ml) a vysuší za vákua pri 40 až 45°C. Získa sa 117,5 g 3-deoxy-l,2-0-(l-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-α-D-ribofuranózy s 8,7% obsahom popolovín (zvyškový hydrogenuhličitan sodný). To vedie ku korigovanému výťažku 107 g (83 %). Čistota získaného produktu je dostatočná, aby sa dal použiť v nasledujúcich stupňoch syntézy. Analyticky čistý produkt je možné získať po resuspendovaní v zmesi toluénu a vody.

[ct]_D: +53,25 (c = 1, CH₂C1₂)

Teplota topenia: 187,2 až 187,6’C

255 ’H NMR (400 MHz, CDCI₃): 1,38 (s, 3), 1,58 (s, 3), 3,18 (dd, 1, J=6,6, 7,7), 3,723,80 (m, 1), 3,87-3,94 (m, 2), 4,43 (ddd, 5,1, 9,0, 9,0), 4,72 (dd, 1, J=4,0, 4,9), 5,93 (d, 1, J=3,8), 6,77 (d, i, J=8,1). 7,96 (d, 2, J=8_f8), 8,30 (d, 2, J=8,9).

’³C NMR (75 MHz, CDCI₃): 26,38. 26,51,52,32, 60,77, 78,96, 80,41, 104,24, 112,89, 124,05, 128,40, 138,59, 149,97, 166,08.

M.S. (AP-) = 337,2

Analýza pre C₁₅H₁₈N₂O₇: vyrátané: C 53,25, H 5,36, N 8,28, zistené: C 53,28, H 5,62, N 8,33.

Preparatívny postup R R 1

1-[3-deoxy-l,2-0-(l-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-a-D-ribofuranuronoyl]piperidín (dvojstupňový spôsob)

K zmesi dichlórmetánu (2700 ml) a vody (1800 ml) sa pridá 3-deoxy-l,2-0-(1-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl ) amino ]-ct-D-ribofuranóza (300 g, 0,887 mol), bromid draselný (21,1 g, 0,177 mol), hydrogenuhličitan sodný (408 g, 4,86 mmol) a Et₄NCl (12,3 g, 0,044 mol). Vzniknutý roztok sa ochladí na 0 až 5°C, potom sa k nemu pridá TEMPO. K výslednej zmesi sa kvapkacím lievikom počas 80 minút pridá obchodne dostupné bielidlo Clorox (4400 ml, 5,25% NaOCl) takou rýchlosťou, aby sa vnútorná teplota udržala pod 5°C.

Po ďalšej 1 hodine sa reakčná zmes zriedi vodou (7500 ml). Vodná zmes sa zahreje na teplotu miestnosti. Organická fáza sa odstráni. Hodnota pH vodnej vrstvy sa prídavkom koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej (560 ml) upraví na 2,4 a k zmesi sa pridá etylacetát (4000 ml). Po zmiešaní sa vrstvy oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje opäť etylacetátom (200 ml). Spojené etylacetátové extrakty sa vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje pri zníženom tlaku. Získa sa riedky olejovitý produkt (ktorý stále obsahuje zvyškový etylacetát). Tento olej sa použije priamo v nasledujúcom stupni.

256

Stupeň 2:

K surovej 3-deoxy-l,2-0-(1-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl )amino]-a-D-ribofuránurónovej kyseline sa pridá dichlórmetán (3100 ml). Vzniknutý roztok sa ochladí na 0 až 5’C a prikvapká sa k nemu trietylamín (310 ml) a potom dimetylf ormamid (34 ml). K výslednej zmesi sa pomaly pridá oxalylchlorid (85 ml), čo vyvolá značný vývoj plynu. Oxalylchlorid sa pridáva takou rýchlosťou, aby teplota reakčnej zmesi nepresiahla 5°C (čas prídavku = 1 hodina). K reakčnej zmesi sa po ďalších 15 minútach pridá piperidín (114 ml) takou rýchlosťou, aby sa vnútorná teplota udržala pod 5’C (čas prídavku =45 minút). Po ďalšej 1 hodine sa reakčná zmes zriedi vodou (3 litre). Fázy sa oddelia a organická vrstva sa extrahuje vodným hydrogenuhličitanom sodným (1,5 litru vody, 100 g hydrogenuhličitanu sodného). Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a filtrát sa umiestni do nádoby prispôsobenej na destiláciu. Destiláciou sa odstráni väčšina rozpúšťadla (3200 ml) a k zmesi sa pridá heptán (500 ml). Heptánová zmes sa ďalej zahrieva, kým teplota destilátu nedosiahne 58’C, pridá sa ďalší heptán (1 liter) a v zahrievaní sa pokračuje, kým teplota destilátu nedosiahne 65’C. Ďalších 300 ml destilátu sa odstráni za mierneho vákua, zmes sa potom ochladí a pridá sa k nej dichlórmetán (45 ml). Dichlórmetánový roztok sa cez noc mieša. Vzniknutá pevná látka je stále pomerne lepivá, takže sa k nej pridá ďalší dichlórmetán (120 ml) a zmes sa 3 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Pevná látka sa odfiltruje a premyje heptánom (80 ml). Získa sa 242 g (výťažok 65 % z dvoch stupňov) l-[3-deoxy-l,2-0-(1-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-α-D-ribofuranuronoyl]piperidinu. Odhadnuté zloženie roztoku na resuspendovanie:

až 14% dichlórmetán v heptáne.

257 [a)_D: +72.1 (c 1,CH₂CI₂) ¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): 1,36 (s, 3), 1,57 (s, 3), 1,51-1,68 (m, 6), 3,30-3,45 (m, 2), 3,60-3,74 (m, 2), 4,67 (d, 1, J=8,7), 4,84 (dd, 1, J=3,7, 5,0), 4,90 (ddd, 1, J =5,0, 7,9, 8,3), 5,95 (d, 1, J=3,3), 6,69 (d, 1, J=7,5),' 7,94 (d, 2, J=8,7), 8,26 (d, 2, J=9,1). 13G NMR (100 MHz, CDCI₃): 24,68, 25,64, 26,57, 26,74, 27,16, 43,79, 46,88, 54,76, 78,79, 105,16,113,23, 124,00, 128,68, 139,66, 149,90, 165,17, 165,67.

Preparatívny postup SSl

1- [ 1,2-di-0-acetyl-3-deoxy-3- [ (4-nitrobenzoyl) amino] -D-ribofuranuronoyl]piperidín - zmes anomérov (dvojstupňový spôsob)

Stupeň 1:

K roztoku trifluóroctovej kyseliny (345 ml) a vody (85 ml) sa pridá l-[3-deoxy-l,2-0-(l-metyletylidén)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-a-D-ribofuranuronoyl]piperidín (150 g, 0,357 mol). Reakčná zmes sa 5,5 hodiny udržuje pri teplote miestnosti a potom pomaly pridá k zhášaciemu roztoku, ktorým je zmes obsahujúca vodu (7,5 litru), chlorid sodný (2250 g), hydrogenuhličitan sodný (450 g) a dichlórmetán (3,75 litru). Po zastavení reakcie sa zmes ďalších 15 minút mieša a oddelia sa fázy. Vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (1,5 litru) Spojené organické vrstvy sa vysušia síranom horečnatým a prefiltrujú. Získaný roztok sa použije priamo v nasledujúcom stupni.

Stupeň 2:

K roztoku získanému hore opísaným spôsobom sa pridá trietylamín (225 ml) a potom acetanhydrid (137 ml, po kvapkách tak, aby sa teplota udržala pod 30’C). Po 45 minútach sa úplnosť reakcie potvrdí analýzou HPLC. K reakčnej zmesi sa pomaly pridá 2M hydroxid sodný (1 liter), pričom sa zmes vodou chladí tak, aby sa jej teplota udržala pod 30°C. Po dokončení prídavku sa oddelia fázy a organická vrstva sa

258 extrahuje vodou (800 ml) a skoncentruje. K tmavému olejoví tému zvyšku sa pridá etylacetát (500 ml) a etylacetátový roztok sa prefiltruje cez oxid kremičitý (120 g) a premyje etylacetátom (200 ml). Eluenty sa skoncentrujú. Získa sa 132 g (80 % z dvoch stupňov) 1-[1,2-di-0-acetyl-3-deoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)amino ] -D-ribofuranuronoyl]piperidínu vo forme žltej peny.

Poznámka: Pomer anomérov je asi 3:2. NMR údaje sú uvedené pre zmes a pre jednoduchosť boli integračné hodnoty aproximované tak, ako by pomer bol 1 : 1.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): 1,44-1,74 (m, 12), 2,08 (s, 3), 2,09 (s, 3), 2,12 (s, 3),

2,16 (s, 3), 3,22-3,80 (m, 8), 4,84 (d, 1. J=6,8), 5,05 (s, 1), 5,11 (dd, 1, J=6,2, 7,5),

5,45 (d, 1, J=5,35), 5,52-5,60 (m. 2), 6,18 (s, i), 6,48 (d, 1, J=7,3), 6,60 (d, 1, J=4,5), 6,96 (d, 1, J=7,5), 7,88-7,94 (m, 4), 8,26-8,36 (m, 4).

^,3C NMR (75 MHz, CDCI₃): 20,61,20,93, 21,22, 21,43,24,57, 24,63, 25,64, 25,80, 26,62, 26,68, 27,15, 43,70, 43,96, 46,87, 46,98, 47,07, 52,20, 52,61,70,51,75,92, 78,81, 80,06, 81,51, 94,94, 98,56; 105,17, 124,01, 124,10, 124,34, 128,19, 128,54,

128,64, 139,43, 139_;56,150,00,150,12, 165,26, 165,39,165,62,165,66, 168,59, 168,90,169,52,169,55.

' Ϊ ·

MS (M+H) s vysokým rozlíšením: vyrátané 464>1669, zistené 464,1674.

Analýza pre ^c2l^H25^N3°9^: vyrátané: C 54,42, H 5,44, N 9,07, zistené: C 54,21, H 5,80, N 9,06.

Preparatívny postup TT1

N-[[5-chlór-2-[(3-metyl-5-izoxazolyl)metoxy]fenyl]metyl]-lH-purín-6-amín (dvojstupňový spôsob)

Stupeň 1:

K roztoku 2-[[5-chlór-2-[(3-metyl-5-izoxazolyl)metoxy]fenyl]metyl]-lH-izoindol-l,3(2H)diónu (3000,0 g, 7,837 mol) v tetrahydrofuráne (42 litrov) a izopropylalko259 holú (31,5 litru) sa pridá 54% vodný hydrazín (1500 ml). Vzniknutý roztok sa 5 hodín zahrieva na 50°C. Úplnosť reakcie sa potom posúdi analýzou HPLC. Roztok sa ochladí na teplotu miestnosti. Objemná pevná biela pevná látka sa odfiltruje a premyje tetrahydrofuránom (2500 ml). Filtrát sa skoncentruje a k olejovitému zvyšku sa pridá TMBE (36 litrov). (Poznámka: destilát obsahujúci nadbytok hydrazínu sa rozloží bieliacim činidlom). K MTBE zmesi sa pridá IM hydroxid sodný (35 litrov). Výsledná zmes sa 10 minút mieša a vrstvy sa oddelia. Organická fáza sa extrahuje vodným chloridom sodným (18 litrov), vysuší síranom sodným, prefiltruje a filtrát sa skoncentruje na olejovitý. zvyšok. Tento postup sa opakuje a surový 5-chlór-2-[(3-metyl-5-izoxazolyl)metoxy]benzénmetánamín z obidvoch frakcií sa spojí (teória 15,674 mol).

Stupeň 2

K olejovitému produktu získanému hore opísaným spôsobom sa pridá izopropylalkohol (79 litrov), trietylamín (4 litre) a 6-chlórpurín (2620 g, 16,95 mol). Vzniknutý roztok sa zahrieva na 75°C a približne po 30 minútach začne vznikať pevná zrazenina. Po uplynutí celkového reakčného času 22 hodín sa úplnosť reakcie posúdi HPLC analýzou. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a hustá suspenzia sa zriedi izopropylalkoholom (15 litrov), prefiltruje a filtračný koláč sa premyje izopropylalkoholom (2 x 20 litrov). Pevná látka sa vysuší za vákua. Získa sa 4700 g (výťažok z dvoch stupňov 81 %) N-[[5-chlór-2-[(3-metyl-5- i zoxazolyl) metoxy] fenyl ]metyl]-lH-purín-6-amínu vo forme špinavej bielej pevnej látky.

¹H NMR (500 MHz, d₆-DMSO): 2,25 (s, 3), 4,68 (br s, 2), 5,35 (s, 2), 6,52 (br s, 1),

7,14 (br s, 1),7,17 (d, 1, J=8,8), 7,28 (dd, 1, J=2,0, 8,6), 8,17 (br s, 2) ¹³CNMR (125 MHz, d₆-DMSO): 11,6, 38,6, 61,7, 105,4, 114,3, 119,3,125,6, 12^4, 127,8, 131,2, 140,0, 150,7, 153,04, 154,4, 154,7, 160,4, 167,9.

260

Teplota topenia: 264,2 až 265,8’C

Analýza pre Cj₇H₁₅NgO₂Cl: vyrátané: C 55,07, H 4,08, N 22,67, Cl 9,56, zistené: C 54,98, H 4,18, N 22,54, Cl 9,74.

1- [ 2-0-Acetyl-l- [ 6- [ [ [ 5-chlór-2- [ (3-metyl-5-izoxazolyl) metoxy]fenyl]metyl]amino]-9H-purin-9-yl]-l, 3-dideoxy-3- [ (4-nitrobenzoyl) amino ] -β-D-ribofuranuronoyl ]piperidín

K roztoku N-[[5-chlór-2-[(3-metyl-5-izoxazolyl)metoxy]fenylmetyl]-lH-purín-6-amínu (36,54 g, 0,0985 mol) v DME (175 ml) sa pridá trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát (TMSOTf) (50,00 g, 0,2250 mol). Výsledný roztok sa zahrieva na 65“C. V oddelenej nádobe sa l-[1,2-di-0-acetyl-3-deoxy-3-[ (4-nitrobenzoyl)amino] -D-ribofuranuronoyl] piperidín (surový, z predchádzajúceho stupňa, 51,46 g,

0,1110 mol) rozpustí v DME (80 ml). l-[1,2-di-O-acetyl-3-deoxy-3- [ (4-nitrobenzoyl)amino] -D-ribofuranuronoyl ]piperidínový roztok sa premiestni do kvapkacieho lievika a počas 30 minút prikvapká k horúcemu roztoku N-[[5-chlór-2-[ ( 3-metyl-5-izoxazolyl)metoxy] f enylmetyl ]-lH-purín-6-amínu a TMSOTf. Po ďalších 15 minútach sa zahrievanie preruší a reakčný roztok sa pridá k dichlórmetánu (750 ml) a nasýtenému hydrogenuhličitanu sodnému (750 ml). Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje raz dichlórmetánom (200 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a filtrát sa skoncentruje. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte (250 ml), etylacetátový roztok sa prefiltruje a premyje etylacetátom (150 ml). Etylacetátová vrstva (celkový objem 400 ml) sa cez noc skladuje pri 5°C, čo umožní pomalú tvorbu kryštalického produktu. Kryštály sa odfiltrujú a premyjú chladným etylacetátom (200 ml). Produkt je stále mierne zafarbený, takže sa 1 hodinu mieša v etylacetáte (400 ml), odfiltruje a premyje etylacetátom (100 ml) Získa sa 46,76 g (54 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bielej pevnej látky. Tento produkt (s 85% čistotou

261 podlá analýzy HPLC) sa použije bez ďalšieho prečistenia. Vzorka s analytickou čistotou sa získa chromatografiou pri použití 5% izopropylalkoholu v dichlórmetáne.

[a]_D: -51,8 (c 1,CH_?CI₂) ¹H NMR (500 MHz, d₆-DMSO); 1,40-1,56 (m, 6), 2,02 (s, 3), 2,25 (s, 3), 3,40-3,55 (m, 4), 4,69 (br s, 1/ 2), 5,20 (d, 1, J=5,6), 5,35 (s, 2), 5,35-5,40 (m, 1), 5,93 (~ t, 1, J=5,4), 6,52 (br s, 2), 7,15 (brs, 1), 7,17 (d, 1, J=8,8), 7,29 (dd, 1, J=2,5, 8.7),

8,10 (d, 2, J=8,7), 8,24 (s, 1), 8,37 (d, 2, J=8,7), 8/2 (brs, 1), 8,51 (brs, 1), 9,18 (d, 1,J=7,9).

¹³C NMR (125 MHz, D₆-DMSO): 10,94, 20,43, 23,83, 25,21,26,14, 37,94, 42,76, 46,04, 52,42, 61,07/74,00, 77,81,86,33, 104,77, 113,77, 119,27, 123,64, 124,97, 126,71,127,24, 129,05, 130,26, 139,25, 139,49, 148,82, 149,24, 152,92, 153,70,

154,43, 159,71, 165,21, 165,53, 167,22, 169,22.

M.S. (AP+)=774,2

Analýza pre C₃gH₃₆N_gOgCl: vyrátané: C 55,85, H 4,69, N 16,28, Cl 4,58, zistené: C 55,82, H 4,77, N 1‘6,28, Cl 4,63

Preparatívny postup

3-Amino-l-[6-[[[5-chlór-2-[(3-metyl-5-izoxazolyl )metoxy]fenyl ]metyl]amino]-9H-purin-9-yl]-1,3-dideoxy-p-D-ribofuránurónová kyselina

K l-[2-(O-acetyl-l-[6-[[[5-chlór-2-[(3-metyl-5-i zoxa zoly1)metoxy]fenyl]metyl]amino]-9H-purin-9-y1]-1,3-dideoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-β-D-ribofuranuronoyl]piperidínu (250,0 g, 0,3229 mol, s 88% čistotou) sa pridá tetrahydrofurán (1250 ml), voda (650 ml), metanol (350 ml) a pevný hydroxid draselný (85 %, 127,9 g). Výsledný roztok sa 23 hodín zahrieva na 65°C, nechá schladnút na teplotu miestnosti a pridá sa k nemu voda (1250 ml) a MTBE (1250 ml) Fázy sa oddelia a MTBE vrstva sa odloží. K vodnej vrstve sa pridá koncentrovaná kyselina chlorovodíková, ktorou sa hodnota pH upraví na 5,6. Vytvorí sa charakteristická zrazenina

262

Po dvojhodinovej granulácii sa suspenzia prefiltruje. Filtračný koláč sa vloží späť do nádoby s vodou (200 ml) a tetrahydrof uránom (1800 ml). Výsledná zmes sa 1 hodinu mieša, vzniknutá suspenzia sa prefiltruje a vlhký filtračný koláč sa opäť pridá do nádoby s vodou (1 liter). K vodnej suspenzii sa pridá koncentrovaná kyselina chlorodovíková, kým sa nedosiahne pH = 1,2 a ďalej tetrahydrofurán (2 litre) a etylacetát (1 liter). Ďalej sa pridá ďalší tetrahydrofurán (1 liter), aby sa ulahčila separácia. Vzhladom na to, že vznikne emulzia, pridá sa ďalší tetrahydrofurán (500 ml) a dvojvrstva sa prefiltruje cez celit. Fázy sa oddelia a organická fáza sa extrahuje vodou (2 x 500 ml). Všetky vodné fázy sa spoja a pridá sa k nim 6M hydroxid sodný (asi 100 ml), čím sa pH upraví na 5,0. Pevná látka sa odfiltruje a premyje roztokom vody a tetrahydrofuránu v pomere 10 : 90 (celkom 1300 ml). Pevná látka sa vysuší vo vákuovej sušiarni Získa sa 91,02 g (55 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme špinavého bieleho prášku.

MS s vysokým rozlíšením = 516,1390 (M+H). Vyrátané 516,1398.

’H NMR (500 MHz, d₆-DMSO): 2,24 (s, 3), 3,82 (br s, 1), 4,34 (br d, 1, J=5,1), 4,66 (br s, 2), 5,34 (s, 2), 6,14 (d, 1, J=2,9), 6,52 (s, 1), 7,11 (br s, 1), 7,15 (d, 1, J«8_t8),

7,27 (dd, 1, J=2,3, 8,7), 8,20 (s, 1), 8,34 (br s, 1), 8,88 (br s, 1).

¹³C NMR (125 MHz, d₆-DMSO): 10,94, 37,88, 55,31, 61,05, 73,82, 81,57, 88.61, 104,76.113,73,119,34, 124,95,126,61,127,16, 130,39,139,97, 148,70, 152,49, 153,67,154,33, 159,71, 167,20, 172,06.

Preparatívny postup VV1

3-Amino-1-[6-[[[5-chlór-2-[(3-metyl-5-izoxazolyl)metoxy]fenyl Jmetyl]amino]-9H-purin-9-yl]-1,3-dideoxy-N-metyl-p-D-ribofuránuroamid

Roztok chlorovodíka v metanole sa pripraví tak, že sa acetylchlorid (8,5 ml, 0,12 mol) pomaly pridá k metanolu (1 liter). K vzniknutému roztoku sa po 10 minútach pridá

263

3-amino-l-[6-[ [ [5-chlór-2-[ (3-metyl-5-izoxazolyl)metoxy]fenyl ]metyl] amino ]-9H-purin-9-yl]-l, 3-dideoxy-p-D-ribofuránurónová kyselina (40,03 g, 0,0776 mol) pri použití metanolu, ako premývacej kvapaliny (100 ml). Získaný roztok sa 15 hodín zahrieva na 50°C. Potom sa konverzia kyseliny na metylester potvrdí pomocou HPLC. Roztok sa ochladí na 37°C, potom sa k nemu pridá metylamín (600 ml 2,0M roztoku v metanole). Reakčná zmes sa 5,5 hodiny opäť zahrieva na 50°C a konverzia esterú na metylamid sa potvrdí pomocou HPLC. Reakčná zmes sa pripraví na destiláciu a pri použití zníženého tlaku sa z nej odstráni 250 ml rozpúšťadla, pričom sa vnútorná teplota udržiava medzi 45 až 50°C. Teplota roztoku sa za atmosférického tlaku zvýši na 65°C a k roztoku sa pridá Darco (6,0 g) a voda (10 ml). Po 5 minútach sa roztok za horúca prefiltruje cez celit a filtračná vrstva sa premyje metanolom (100 ml). Filtrát sa za miešania cez noc nechá schladnúť na teplotu miestnosti. Vzniknutý kryštalický produkt sa prefiltruje a premyje metanolom (200 ml). Získa sa 30,73 g (72 %) zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme hydrátu. HPLC analýza tohto produktu ukáže viac ako 98% čistotu.

Vynález sa neobmedzuje na konkrétne uskutočnenia uvedené v tomto texte. Tieto realizácie je možné rôzne obmeňovať a modifikovať, bez toho aby došlo k odklonu od ducha a úniku z rozsahu tohto nového konceptu, ktorý je definovaný v nasledujúcich patentových nárokoch.

Claims

1. Zlúčeniny všeobecného vzorca I kde

X predstavuje oxy, metylén alebo tioskupinu;

Y _; predstavuje skupinu CH alebo N;

R¹ predstavuje hydroxymetylskupinu, alkoxymetylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka v alkoxylovéj časti, cykloalkoxymetylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkoxylovej časti, karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s l až 3 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, cykloalkoxykarbonylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkoxylovej časti, 1,1-aminoiminometylskupinu, 1,1-(mono-N- alebo di-N,N-alkyl265 amino)iminometylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, l,l-(mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylamino)iminometylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, karbamoylskupinu, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí alebo N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti;

G predstavuje sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený päť- až osemčlenný kruh, ktorý prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, alebo bicyklický kruh tvorený dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šesťčlennými kruhy, brané nezávisle, prípadne s 1 až 4 heteroatómami nezávisle zvolenými z dusíka, síry a kyslíka; pričom G je prípadne mono-, di266 alebo trisubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s l až 3 atómami uhlíka, trif luórme ty lskupíny, trif luórmetoxyskupinu, nitroskupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka, hydroxyskupiny alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, alebo

G predstavuje kyanoskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, cykloalkoxykarbonylskupinu s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, skupinu C(O)NR⁴R⁵, C(S)NR⁴R⁵, C(NH)NR⁴R⁵, C(N-alkyl)NR⁴R⁵ s 1 až 3 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo C(N-cykloalkyl)NR⁴R^ s 3 až 10 atómami uhlíka v cykloalkylovéj časti;

R⁴ predstavuje väzbu, vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený päť- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, alebo bicyklický kruh alebo bicyklický kruh s prípadným mostíkom s 1 až 3 atómami uhlíka prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, pričom tento bicyklický kruh alebo premostený bicyklický kruh prípadne obsahuje l až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka, a pričom alkylskupina s 1 až 10 atómami uhlíka, alkoxyskupina s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupina s 3 až 10 atómami uhlíka alebo kruh alebo kruhy uvedené v definícii R⁴ sú prípadne mono-, di- alebo trisubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, trifluórmetylskupiny, nitro267 skupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka, hydroxyskupiny alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

R predstavuje väzbu, vodík, alkylskupinu s l až 10 atómami uhlíka alebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka; alebo

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pri pojené, tvoria zvyšok zvolený z úplne nasýtených alebo sčasti nenasýtených stvor- až deväťčlenných kruhov, ktoré sú prípadne premostené a prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka a sú prípadne mono- alebo disubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cyklo alkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylkarbonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, alkoxykarbonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, N-alk

268 oxykarbonyl-N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alifatických častí, sulfamoylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených päť- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a bicyklických kruhov tvorených dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šesťčlennými kruhy, brané nezávisle, prípadne viazanými prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne obsahujúcimi 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka a prípadne monoalebo disubstituovanými halogénom, trifluórmetylskupinou, trifluórmetoxyskupinou, alkylskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka;

2. Zlúčeniny podlá nároku 1 všeobecného vzorca I, kde

X predstavuje oxy;

Y predstavuje dusík;

Z predstavuje vodík;

269

R² predstavuje vodík;

G predstavuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazinyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, pyridazinyl-_; tetrazolyl-, izotiazolyl-, tiofenyl-, furyl-,

1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolyl-, izochinolylbenzo[b]furyl-, benzo[b]tiofenyl-, benzotiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- alebo morfolinylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstiutovaný substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

3. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 2, kde

R³· predstavuje metylkarbamoylskupinu;

R³ predstavuje halogén;

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

270

G predstavuje fenyl-, pyridyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, izotiazolyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl- alebo pyrolylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, trifluórmetoxyskupiny alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

4. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 3, kde

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje fenyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrolidinyl-, piperidinylalebo.morfolinylskupinu, pričom G je prípadne monodi- alebo trisubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

5. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 3, kde R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje fenylskupinu; a ich farmaceutický vhodné soli.

6. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 3, kde R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje 3-furylskupinu; a ich farmaceutický vhodné soli.

7. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 3,

O kde R predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu

271 a G predstavuje 2-furylskupinu; a ich farmaceutický vhodné soli.

8. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 3, kde R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje 2-tiazolylskupinu; a ich farmaceutický vhodné soli.

9. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 3, kde R³ predstavuje chlór, D predstavuje metylénoxyskupinu a G predstavuje 5-(3-metylizoxazolyl)skupinu; a ich farmaceutický vhodné soli.

10. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 1, kde

X predstavuje oxy;

Y predstavuje dusík;

Z predstavuje vodík;

R² predstavuje vodík;

G predstavuje skupinu C(0)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

272

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z úplne nasýtených štvor- až deväťčlenných kruhov, ktoré prípadne obsahujú 1 až 3 prídavné heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka a sú prípadne monoalebo disubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, amino skupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-Nalebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených päť- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a bicyklických kruhov tvorených dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými trojaž šesťčlennými kruhmi, brané nezávisle, prípadne

273 pripojenými prostredníctvom alkylskupiny s 1 až

3 atómami uhlíka, a prípadne obsahujúcimi 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

11. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 10, kde

R¹ predstavuje metylkarbamoylskupinu;

R³ predstavuje halogén;

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje skupinu C(0)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cyklo274 alkylových častí alebo N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených štvoraž osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 2 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a ich farmaceutický vhodné soli.

12. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 11, kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z hydroxyskupiny, oxoskupiny alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených štvor- až osemčlenných kruhov, ktoré sú pri275 padne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až

3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 2 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a ich farmaceutický vhodné soli.

13. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 12, o

kde R predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperazinyl skupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná metylskupinou; a ich farmaceutický vhodné soli.

14. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 12, kde R³ predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperazinyl skupinu; a ich farmaceutický vhodné soli.

15. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 12, kde R³ predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperidinyl skupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná N,N-dimetylaminoskupinou; a ich farmaceutický vhodné soli.

16. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 12, kde R³ predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R®, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperidinyl skupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná piperidin-l-ylskupinou; a ich farmaceutický vhodné soli.

17. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podía nároku 12, kde R³ predstavuje chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brané dohromady

276 s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria piperidinylskupinu, ktorá je v polohe 4 substituovaná metylaminoskupinou; a ich farmaceutický vhodné soli.

18. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1, kde

X predstavuje oxy;

Y predstavuje dusík;

Z predstavuje vodík;

R¹ predstavuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka v alkyiovej časti;

R² predstavuje vodík;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený päť- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka,

277 alebo bicyklický kruh tvorený dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šesťčlennými kruhy, brané nezávisle, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka,

a ich farmaceutický vhodné soli.

19. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 18, kde

R¹ predstavuje metylkarbamoylskupinu;

R³ predstavuje halogén;

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵;

278

a ich farmaceutický vhodné soli.

20. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 19, kde

G predstavuje skupinu C(0)NR⁴R^;

a ich farmaceutický vhodné soli.

21. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 20, kde

R³ predstavuj e chlór; D predstavuje metylénoxyskupinu; G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵; R⁴ predstavuje vodík; a R⁵ predstavuje vodík;

279 a ich kde

D

G a ich kde

D

G farmaceutický vhodné soli.

22. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1, predstavuje oxyskupinu, tioskupinu, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkyltioskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

predstavuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazinyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, pyridinazinyl-, tetrazolyl-, izotiazolyl-, tiofenyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolyl-, izochinolyl-, benzo[b]furyl-, benzo[b]tiofenyl-, benzotiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- alebo morfolinylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstiutovaný substituentmi nezávisle zvolenými z halogénu, alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka;

farmaceutický vhodné soli.

23. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 22, predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

predstavuje fenyl-, pyridyl-, tiazolyl-, oxazolyl-, izoxazolyl-, izotiazolyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-tiadiazolyl-, pyrazolyl- alebo pyrolylskupinu, pričom G je prípadne mono-, di- alebo trisubstituovaný nezávisle halogénom, alkylskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka alebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atómami uhlíka;

280 a ich farmaceutický vhodné soli.

24. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 1, kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R^ alebo C(S)NR⁴r5, kde

R⁴ a R⁵ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z úplne nasýtených štvor- až deväťčlenných kruhov, ktoré prípadne obsahujú 1 až 3 prídavné heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka a sú prípadne mono- alebo disubstituované substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s i až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovéj časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfa281 moylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených päť- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 3 heteroatómami nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a bicyklických kruhov tvorených dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šesťčlennými kruhy, brané nezávisle, prípadne pripojenými prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne obsahujúcimi 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

25. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 24, kde

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a r5 brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-Nalebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-Nalebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 3 až

282

5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v každej z cykloalkylových častí a N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, cykloalkylformylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka v cykloalkylovej časti, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, cykloalkylsulfonylaminoskupiny s 3 až 5 atómami uhlíka a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených štvoraž osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 2 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, a ich farmaceutický vhodné soli.

25. Zlúčeniny všeobecného vzorca I pódia nároku 25, kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵; kde

R⁴ a R⁸ brané dohromady s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené, tvoria zvyšok zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrolidinylskupiny, pričom uvedený kruh je prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atómami uhlíka, alkylskupiny

283 a ich kde

D

G

R⁴ s 1 až 8 atómami uhlíka, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí, mono-N- alebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí a sčasti nasýtených, úplne nasýtených alebo úplne nenasýtených stvor- až osemčlenných kruhov, ktoré sú prípadne viazané prostredníctvom alkylskupiny s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahujú 1 až 2 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, farmaceutický vhodné soli.

27. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 1, predstavuje alkyloxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkyltioskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ alebo C(S)NR⁴R⁵, kde predstavuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atómami uhlíka, cykloalkoxyskupinu s 3 až 10 atómami uhlíka alebo sčasti nasýtený, úplne nasýtený alebo úplne nenasýtený päť- až osemčlenný kruh, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 3 heteroatómy nezávisle zvolené z kyslíka, síry a dusíka, alebo bicyklický systém tvorený dvoma anelovanými sčasti nasýtenými, úplne nasýtenými alebo úplne nenasýtenými troj- až šesťčlennými kruhy, brané nezávisle, ktorý je prípadne viazaný cez alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka a prípadne obsahuje 1 až 4 heteroatómy nezávisle zvolené z dusíka, síry a kyslíka,

284

a ich farmaceutický vhodné soli.

28. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 27, kde

D predstavuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atómami uhlíka;

a ich farmaceutický vhodné soli.

29. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podlá nároku 28, kde

G predstavuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

285

a ich farmaceutický vhodné soli.

30. Zlúčeniny všeobecného vzorca CVI kde

R³ predstavuje halogén, trifluôrmetylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alkyl oxyskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, etenyiskupinu alebo etynylskupinu.

286

31. Zlúčeniny podía nároku 30 všeobecného vzorca CVI, kde R² predstavuje vodík; a R³ predstavuje chlór.

32. Zlúčeniny podía nároku 30 všeobecného vzorca CVI, kde R² predstavuje vodík; a R³ predstavuje fluór.

33. Zlúčeniny podía nároku 30 všeobecného vzorca CVI, kde R² predstavuje cyklopropylskupinu; a R³ predstavuje fluór.

34. Spôsob znižovania poškodenia tkaniva, ktoré je následok ischémie alebo hypoxie, vyznačuj úci sa t ý m , že sa cicavcovi, ktorý také liečenie potrebuje, podáva terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo jej proliečiva.

35. Spôsob podía nároku 34, vyznačujúci sa t ý m , že tkanivom je tkanivo srdca, mozgu, pečene, obličiek, píúc, čriev, kostrového svalstva, sleziny, podžalúdkovej žíazy, nervov, miechy, retiny, vaskulatúra alebo intestinálne tkanivo.

36. Spôsob podía nároku 34, vyznačujúci sa t ý m , že sa zlúčenina všeobecného vzorca I podáva v množstve od asi 0,01 mg/kg/deň do 50 mg/kg/deň.

37. Spôsob podía nároku 34, vyznačujúci sa t ý m , že sa zlúčenina podáva pred operáciou, počas operácie alebo po operácii.

38. Farmaceutická kompozícia, vyznačuj ú ca sa tým, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, jej proliečiva alebo farmaceutický vhodnej soli tejto zlúčeniny alebo proliečivá a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo.

287

39. Farmaceutická kombinačná kompozícia, vy z n a čujúca sa tým, že obsahuje: terapeuticky účinné množstvo kompozície obsahujúcej prvú zlúčeninu, pričom prvou zlúčeninou je zlúčenina pódia nároku 1 všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná sol tejto zlúčeniny alebo proliečivá;

40. Farmaceutická kompozícia podlá nároku 39, vyznačujúca sa tým, že kardiovaskulárnym činidlom je β-blokátor, blokátor vápnikového kanálu; otvárač draslíkového kanálu; adenozín; agonista adenozínu; inhibítor ACE; nitrát; diuretikum; glykozid; trombolytikum; inhibítor doštičiek; aspirín; dipyridamol; chlorid draselný; klonidín; prazosín; inhibítor pyruvát dehydrogenáza kinázy; inhibítor pyruvát dehydrogenázového komplexu; biguanid; inhibítor NHE-1; antagonista receptoru angiotenzínu II, AII; inhibítor C5a; solubilný receptor komplementu typu 1, sCRl, alebo jeho analóg; parciálny inhibítor oxidácie mastných kyselín PFOX; aktivátor acetyl CoA karboxylázy; inhibítor malonyl CoA dekarboxylázy; inhibítor 5'AMP-aktivovaný proteín kinázy AMPK; inhibítor adenozín nukleozidu; antiapoptotické činidlo, napríklad inhibítor kaspázy; monofosforyl lipid A alebo jeho analóg; aktivátor/inhibítor oxid dusnatý syntázy; aktivátor proteín kinázy C, najmä proteín kinázy epsilon59 inhibítor proteín kinázy delta, inhibítor poly (ADP ribóza) syntetázy, PARS, PARP; metformín, inhibítor glukoneogenázy, látka zvyšujúca citlivosť na inzulín; inhibítor enzýmu konvertujúceho endotelín, ECE; antagonista receptoru endotelínu ETA; inhibítor TAFI alebo modulátor meničov Na/Ca.

288

41. Farmaceutická kompozícia podlá nároku 40, vyznačujúca sa tým, že inhibítorom NHE-1 je zlúčenina zvolená zo súboru skladajúceho sa z [ 1- (8-brómchinolin-5-yl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (6-chlórchinolin-5-yl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (indazol-7-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (benzimidazol-5-yl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidínu;

[ l-(l-izochinolyl )-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l- (4-chinolyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l- (chinolin-5-yl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l- (chinolin-8-yl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 1- (indazol-6-yl) -5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidínu;

[ l-(indazol-5-yl )-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (benzimidazol-5-yl) -5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

289 [ 1-( l-metylbenzimidazol-6-yl) -5-etyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidínu;

1- (5-chinolyl) -5-n-propyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

1- ( 5-chinolyl) -5-izopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidínu;

[ 5-etyl-l-( 6-chinolyl )-lH-pyrazol-4-karbonyl] guanidínu;

[ 1- (2-metylbenzimidazol-5-yl) -5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[1- (1,4-benzodioxan-6-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ l-(benzotriazol-5-yl )-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidínu;

[1- (3-chlorindazol-5-yl)-5-etyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

(1- (5-chinolyl) -5-butyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 5-propyl-l- (6-chinolyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 5-izopropyl-l- (6-chinolyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 1- (2-chlór-4-metylsulfonylfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-chlórfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidínu;

[ 1- (2-trif luórmetyl-4-f luórf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

290 [ i- (2-brómfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl Jguanidínu;

[ l- (2-f luórf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 1- (2-chlór-5-metoxyfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2,5-dichlórf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 1- ( 2,3-dichlórf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 1- ( 2-chlór-5-aminokarbonylfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- ( 2-chlór-5-aminosulfonylfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-f luór-6-trif luórmetylf enyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- (2-chlór-5-metylsulfonylfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[1-(2-chlór-5-dimetylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyra zol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 1- ( 2-trifluórmetyl-4-chlórfenyl) -5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

291 [ 1-( 2-chlórf enyl) -5-metyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 5-metyl-l- (2-trif luórmetylf enyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

[ 5-etyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l- (2-trif luórmetylf enyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidínu;

[ 5-cyklopropyl-l- (2,6-dichlórfenyl) -lH-pyrazol-4-karbonyl ] guanidínu;

a ich farmaceutický vhodných solí.

42. Spôsob znižovania poškodenia tkaniva, ktoré je následok ischémie alebo hypoxie, vyznačujúci sa t ý m , že sa cicavcovi, ktorý také liečenie potrebuje podáva prvá zlúčenina, ktorou je zlúčenina všeobecného vzorca I, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná sol tejto zlúčeniny alebo proliečivá; a druhá zlúčenina, ktorou je kardiovaskulárne činidlo;

pričom množstvo prvej a druhej zlúčeniny vedie k terapeutickému účinku.

43. Spôsob podlá nároku 42, vyznačujúci sa t ý m , že kardiovaskulárnym činidlom je β-blokátor, blokátor vápnikového kanálu; otvárač draslíkového kanálu;

292 adenozín; agonista adenozínu; inhibítor ACE; nitrát; diuretikum; glykozid; trombolytikum; inhibítor doštičiek; aspirín; dipyridamol; chlorid draselný; klonidín; prazosín; inhibítor pyruvát dehydrogenáza kinázy; aktivátor pyruvát dehydrogenázového komplexu; biguanid; inhibítor NHE-1; antagonista receptoru angiotenzínu II, AII; inhibítor C5a; solubilný receptor komplementu typu 1, sCRl, alebo jeho analóg; parciálny inhibítor oxidácie mastných kyselín PFOX; aktivátor acetyl CoA karboxylázy; inhibítor malonyl CoA dekarboxylázy; inhibítor 5’AMP-aktivovaný proteín kinázy AMPK; inhibítor adenozín nukleozidu; antiapoptotické činidlo, napríklad inhibítor kaspázy; monofosforyl lipid A alebo jeho analóg; aktivátor/inhibítor oxid dusnatý syntázy; aktivátor proteín kinázy C, najmä proteín kinázy epsilon59 inhibítor proteín kinázy delta, inhibítor poly (ADP ribóza) syntetázy, PARS, PARP; metformín, inhibítor glukoneogenázy, látka zvyšujúca citlivosť na inzulín; inhibítor enzýmu konvertujúceho endotelín, ECE; antagonista receptoru endotelínu ETA; inhibítor TAFI alebo modulátor meničov Na/Ca.

44. Kit, vyznačujúci sa tým, že obsahuje

a) prvú zlúčeninu, ktorou je zlúčenina všeobecného vzorca I podľa nároku 1, jej proliečivo alebo farmaceutický vhodná soľ tejto zlúčeniny alebo proliečivá, a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b) druhú zlúčeninu, ktorou je kardiovaskulárne činidlo a farmaceutický vhodný nosič, vehikulum alebo riedidlo v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

c) prostriedky na obalenie prvej a druhej dávkovacej formy,

293 pričom množstvo prvej a druhej zlúčeniny vedie k terapeutickému účinku.

45. Kit podlá nároku 44, vyznačujúci sa t ý m , že kardiovaskulárnym činidlom je β-blokátor, blokátor vápnikového kanálu; inhibítor ACE; nitrát; diuretikum; glykozid; trombolytikum; inhibítor doštičiek; aspirín; dipyridamol; chlorid draselný; klonidín; prazosín; inhibítor pyruvát dehydrogenáza kinázy; aktivátor pyruvát dehydrogenázového komplexu; biguanid alebo inhibítor NHE-1.

46. Zlúčenina zvolená zo súboru skladajúceho sa z metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlórbenzylamino )purin-9-yl ]-4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(furan-3-y lmetoxy) benzylamino ] purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(furan-2-ylmetoxy) benzylamino ]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof urán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(tiazol-2-y lmetoxy) benzylamino ] purin-9-yl }-4-hydroxytetrahydrofurán-2-karboxylovej kyseliny;

metylamidu (2S,3S,4R, 5R)-3-amino-5-{6-[5-chlór-2-(3-metylizoxazol-5-ylmetoxy) benzylamino] pur in-9-yl}-4-hydroxy tetrahydrof urán-2-karboxylove j kyseliny;

a ich farmaceutický vhodných solí.