SK3192000A3

SK3192000A3 - Pyrrolopyrrolone derivatives as inhibitors of neutrophil elastase

Info

Publication number: SK3192000A3
Application number: SK319-2000A
Authority: SK
Inventors: Geoffrey Duke Edward Clarke; Michael Dennis Dowle; Harry Finch; Lee Andrew Harrison; Graham George Adam Inglis; Martin Redpath Johnson; Simon John Macdonald; Pritom Shah; Robin Andrew Smith
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1997-09-09
Filing date: 1998-09-07
Publication date: 2001-03-12
Also published as: MA26543A1; NO20001198L; ID24452A; AP2000001761A0; CA2303176A1; NZ503130A; EP1003748A2; JP2001515904A; AR017072A1; IS5391A; WO1999012933A2; NO20001198D0; PE107899A1; EE200000138A; BR9812062A; CO4970719A1; WO1999012933A3; PL339176A1; KR20010023766A; HUP0004644A3

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka bicyklických derivátov s liečebným účinkom, spôsobu ich výroby a farmaceutických prostriedkov, ktoré tieto látky obsahujú a sú určené na liečenie zápalových stavov.

Doterajší stav techniky

Zápal je primárna odpoveď na poranenie tkaniva alebo na mikrobiálnu infekciu a je charakterizovaný tým, že leukocyty vystupujú z ciev cez endotel. Ide o neutrofily, eozinofily, bazofily, monocyty a lymfocyty. Pri rôznych formách zápalových reakcií dochádza k infiltrácii tkaniva rôznymi typmi leukocytov.

Zápalové stavy môžu byť vyvolané celým radom príčin, napríklad infekciou, poškodením tkaniva a tiež autoimunitnými reakciami. V priebehu zápalového pochodu dochádza k výstupu neutrofilov z krvného obehu do tkaniva v mieste jeho poškodenia. Neutrofily obsahujú veľké množstvo rôznych vnútrobunkových granúl a v prípade aktivácie v mieste zápalu dochádza k vylučovaniu obsahu týchto granúl do tkaniva. Rôzne granuly obsahujú rôzne typy enzýmov a iných bielkovín, z ktorých niektoré majú antibakteriálne vlastnosti.

Jeden z enzýmov, ktoré je možno nájsť v azurofilných granulách je neutrofilná elastáza. Tento enzým má v organizme široké spektrum účinku, napríklad v pľúcnom tkanive zvyšuje tento enzým produkciu slizu a mení typy buniek vo výstelke pľúc. Enzým tiež môže spôsobiť zmeny permeability ciev v rôznych tkanivách a zásadne je účinným deštrukčným činidlom proti celému radu zložiek spojivových tkanív. Aj napriek tomu, že existujú vo vnútri organizmu endogénne inhibítory elastázy vrátane antitrypsínu a inhibítora proteázy leukocytov, predpokladá sa, že sa elastáza zúčastňuje vzniku rôznych chorobných stavov vrátane zápalových ochorení dýchacích ciest, kĺbov a pokožky. Enzým je takisto

-2zodpovedný za väčšinu príznakov syndrómu akútnej respiračnej nedostatočnosti ARDS a ďalších akútnych zápalových stavov po poranení a/alebo infekcii.

Teraz bola nájdená nová skupina zlúčenín, ktoré majú schopnosť vyvolať inhibíciu neutrofilnej elastázy. Tieto látky by mohli mať priaznivý vplyv na vyššie uvedené ochorenia alebo na zlepšenie príznakov týchto ochorení.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoria pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I

(je uvedená relatívna stereochémia), kde

R¹ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka,

R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka,

X znamená CO alebo SO₂,

Het znamená prípadne substituovaný, 5 až 10 členný monocyklický alebo bicyklický aromatický kruhový systém obsahujúci 1 až 4 heteroatómy zo skupiny O, N a S, n znamená celé číslo 0 až 4,

R³ a R⁴ nezávisle znamenajú atóm vodíka, alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka, -(CH2)i-4CONR⁵R⁶, CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo (CH2)o-₂Ph, kde Ph znamená fenyl, prípadne substituovaný jedným alebo väčším počtom alkylových zvyškov s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atómov halogénu alebo NR³R⁴ spoločne tvoria azetidinyl, pyrolidinyl, piperidinyl, azepinyl, morfolinyl, piperazinyl, prípadne Nsubstituované alkylovým zvyškom s 1 až 6 atómami uhlíka, fenylom, prípadne substituovaným halogénom alebo alkylovým zvyškom s 1 až 4 atómami uhlíka alebo

-3benzylom, prípadne substituovaným na benzénovom kruhu halogénom alebo alkylovým zvyškom s 1 až 4 atómami uhlíka alebo NR³R⁴ spoločne tvoria vyššie opísaný kruh, substituovaný na atómoch uhlíka jedným alebo väčším počtom substituentov zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, CONR⁵R⁶ alebo COOR⁶,

R⁵ a R⁶ nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, a soli a solváty týchto látok.

Vo všeobecnom vzorci I je znázornená relatívna stereochémia stredu chirality. Vynález zahrnuje zlúčeniny podľa vynálezu v racemickej forme a vo formách, v ktorých jeden z enantiomérov prevažuje alebo je výlučne prítomný. Všeobecne je výhodné získavať zlúčeniny všeobecného vzorca I v enantiomérne čistej forme, najmä vo forme, v ktorej je znázornený vo vzorci I.

Vynález zahrnuje aj fýziologicky prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca I. Môže ísť o soli s anorganickými alebo organickými kyselinami, ako sú hydrochloridy a vínany.

Pod pojmom „alkyl“ sa rozumejú alkylové zvyšky s priamym alebo rozvetveným reťazcom a v prípade, že zvyšok obsahuje viac ako 3 atómy uhlíka, môže ísť tiež o cykloalkyl.

Vhodnými alkylovými skupinami vo význame R¹ sú metyl, etyl alebo propyl.

Ako príklad skupín vo význame Het je možné uviesť furanyl, imidazolin, tiofenyl, pyrolyl, tiazolyl, izoxazolyl, pyrazolyl, pyridinyl a pyrazinyl.

Skupina Het môže byť viazaná na pyrolidínový kruh cez skupinu X v akejkoľvek polohe. Ako príklady tohto spojenia je možné uviesť furán-2-yl, furán-3yl, imidazol-2-yl, imidazol-4-yl, tiofén-2-yl, pyrol-2-yl, tiazol-4-yl, izoxazol-3-yl, pyrazol-3-yl, pyrazol-5-yl, pyridín-3-yl, 1-metylpyrol-2-yl, 1-metylpyrazol-3-yl, 1metylpyrazol-5-yl alebo pyrazín-2-yl.

Ako príklady substituentov pre skupinu Het je možné uviesť alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, napríklad metyl alebo etyl, alkoxyskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, napríklad metoxyskupinu, nitroskupinu a atóm halogénu, ako je chlór, bróm, fluór a jód. Substituenty sa môžu nachádza na atóme uhlíka alebo na atóme dusíka.

»

Príkladom substituovaných skupín vo význame Het môžu byť 1-metylpyrolyl alebo 1-metylpyrazolyI.

-4Príkladom polôh pre vedľajší reťazec vo všeobecnom vzorci I môže byť pre furán-2-yl poloha 5, pre furán-3-yl poloha 2, pre tiofén-2-yl poloha 5, pre pyrol-2-yl poloha 4 alebo 5, pre 1-metylpyrol-2-yl poloha 5, pre tiazol-4-yl poloha 2, pre izoxazol-3-yl poloha 5, pre 1-metylpyrazol-3-yl poloha 5, pre 1-metylpyrazol-5-yl poloha 3, pre pyridín-3-yl poloha 6 a pre pyrazín-2-yl poloha 5.

V prípade, že R³ a R⁴ nezávisle znamenajú alkylové zvyšky s 1 až 8 atómami uhlíka, môže ísť napríklad o metyl, etyl, cyklopropyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, CH(iPr)2 a cyklohexyl.

V prípade, že R³ a R⁴ nezávisle znamenajú (CH₂)o-2Ph môže ísť o fenyl, benzyl a (4-F-fenyl)metyl.

V prípade, že NR³R⁴ spoločne tvoria /V-substituovaný piperazinyl, môže byť príkladom týchto skupín /V-fenylpiperazinyl a /V-metylpiperazinyl.

V prípade, že NR³R⁴ spoločne tvoria kruhy, substituované na atómoch uhlíka, môže ísť o substituenty typu metyl, CONH₂ a COOMe. Príkladom môže byť 4-metylpiperidín-1-yl.

Výhodným významom pre R¹ je metyl alebo etyl a najmä metyl.

Výhodným významom pre R² je izopropyl alebo propyl, najmä izopropyl.

Výhodným významom pre X je skupina CO.

Het výhodne znamená 5 alebo 6 členný monocyklický aromatický kruh, ktorý obsahuje 1 alebo 2 heteroatómy zo skupiny O, N a S, výhodne ide o tiazolyl, izoxazolyl, pyrazolyl alebo pyrazinyl, zvlášť výhodný je tiazolyl, najmä tiazol-4-yl alebo pyrazinyl.

Ďalším výhodným významom pre Het je pyridinyl a najmä 3-pyridinyl.

Zvlášť výhodným významom pre Het je pyrazinyl, ideálne Het znamená pyrazín-2-yl, v ktorom je vedľajší reťazec v polohe 5.

Ďalším výhodným významom pre Het je oxazolyl a najmä oxazol-4-yl.

Výhodným významom pre n je 1 až 3, najmä 1 alebo 2 a najvýhodnejšie 1.

R³ a R⁴ znamenajú výhodne nezávisle atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka, výhodným významom pre NR³R⁴ je pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo piperazinyl, ktoré môžu byť prípadne /V-substituované alkylovým zvyškom s 1 až 8 atómami uhlíka alebo fenylovým zvyškom, prípadne substituovaným halogénom alebo alkylovým zvyškom s 1 až 4 atómami uhlíka. V prípade, že

-5R³ a R nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka, sú výhodnými skupinami vo význame NR³R⁴ skupiny ΝΜβ2, N(n-butyl)2, NHMe, NH(cyklopropyl), NHCH(iPr)₂ a N(cyklohexyl)₂.

Skupina zlúčenín všeobecného vzorca I zvláštneho významu sú zlúčeniny všeobecného vzorca IA, v ktorých Het znamená oxazol-4-yl s vedľajším reťazcom v polohe 2.

R*R³N(CH₂)_n

(relatívna stereochémia je uvedená) kde jednotlivé symboly sú určené vyššie.

Výhodným významom pre X je skupina CO. R² výhodne znamená izopropyl alebo propyl, najmä izopropyl. Výhodným významom pre R¹ je metyl alebo etyl, najmä metyl. Symbol n je výhodne celé číslo 1 až 3, výhodnejšie 1 alebo 2 a najvýhodnejšie 1. Výhodným významom pre R³ a R⁴ je nezávisle atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka alebo v prípade NR³R⁴ môže ísť o pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo piperazinyl, prípadne /V-substituované alkylovým zvyškom s 1 až 8 atómami uhlíka alebo fenylovým zvyškom, prípadne ďalej substituovaným atómom halogénu alebo alkylovým zvyškom s 1 až 4 atómami uhlíka. Zvlášť výhodným významom pre NR³R⁴ je pyrolidinyl, piperidinyl, Nfenylpiperazinyl, N(butyl)2, NMe(cyklopropyl) alebo N(cyklohexyl)₂, najmä výhodný je pyrolidinyl.

Schopnosť zlúčenín podľa vynálezu vyvolať inhibíciu neutrofilnej elastázy môže byť preukázaná napríklad použitím nasledujúcich skúšok in vitro a in vivo.

-6Skúška in vitro na ľudskú neutrofilnú elastázu

Materiály:

mM Tris/HCI s pH 8,6

150 mM NaCI

11,8 nM čistenej ľudskej neutrofilnej elastázy

Príslušné koncentrácie skúmaných látok sa riedia vodou zo zásobného roztoku týchto látok s koncentráciou 10 mM v dimetylsulfoxide. Uvedené hodnoty sú konečné koncentrácie po pridaní roztoku substrátu.

Vyššie uvedená zmes sa inkubuje 15 minút pri teplote 30 °C a potom sa meria zostávajúca účinnosť elastázy po dobu 10 minút v zariadení BioTek 340i po pridaní 0,6 mM MeO-sukcinyl-alanyl-alanyl-propyl-valyl-p-nitroanilidu. Rýchlosť vzrastu absorbancie pri 450 nm je priamoúmerná účinnosti elastázy. Účinnosť enzýmov sa graficky vynesie proti koncentrácii inhibítora a z takto vzniknutej krivky je možné stanoviť príslušnú hodnotu IC₅o pomocou počítačového programu.

Účinnosť inhibítorov ľudskej elastázy in vivo

Perorálne podanie inhibítorov v prípade pľúcneho infiltrátu, vyvolaného IL-8 na stanovenie intracelulárnej inhibície elastázy

Dospelí škrečkovia s hmotnosťou 100 až 150 g sa náhodne rozdelili do skupín po 4 a cez noc im nebolo podávané krmivo. Potom boli zvieratá uspané plynným 3% izofluoranom a perorálne sa im podalo len nosné prostredie, tzn. 1 ml vody na 100 g hmotnosti alebo sa podáva tiež nosné prostredie s obsahom rozpustených skúmaných látok. Súčasne alebo následne sa zvieratám podáva intratracheálne ešte v narkóze roztok 1 miligramu rekombinantného ľudského IL-8 v 100 μΙ sterilného fýziologického roztoku chloridu sodného. 6 hodín po podaní IL-8 sa zvieratá usmrtili intraperitoneálnym podaním pentabarbitónu. Pľúca sa vymyli 2 x

2,5 ml sterilného fýziolog ického roztoku chloridu sodného a boli tiež vybrané stehenné kosti zvierat.

Intracelulárna elastáza bola pripravená z neutrofilov, získaných vymytím a z kostnej drene stehennej kosti. Neutrofily boli rozrušené pomocou ultrazvuku a

-Ί odstredením boli získané vnútrobunkové granuly. Tieto granuly sa rozrušili opakovaným zmrazením a rozpustením a spracovaním pomocou ultrazvuku. Potom sa na vzorkách tohto materiálu uskutočnili skúšky na elastázu a myeloperoxidázu na dôkaz účinnosti skúmaných látok.

Skúška na inhibiciu ľudskej elastázy z krvi

Skúška sa uskutočnila tak, že čerstvá heparinizovaná ľudská krv v množstve 200 °C sa pridala k 10 μΙ príslušne zriedenej vzorky skúmanej látky. Každá skúška sa uskutočnila v trojnásobnom opakovaní. Bolo tiež skúmaných 6 kontrolných vzoriek, ktoré obsahovali namiesto účinnej látky len vodu. Všetky vzorky sa premiešali pomocou pipety a potom sa inkubovali 30 minút pri teplote 37 °C. Potom sa pridal chladný pufor na rozrušenie buniek, obsahujúci 750 μΙ 155 mM chloridu amónneho, 0,12 mM EDTA a 10 mM hydrogenuhličitanu draselného pri pH 7,4. Skúmavky sa uzavreli viečkom, niekoľkokrát prevrátili na premiešanie obsahu a potom sa udržovali 15 minút pri teplote 4 °C, pričom sa každých 5 minút znova prevrátia. Po odstreďovaní 10 minút pri 250 g pri teplote 4 °C sa výsledná usadenina buniek premyla 300 μΙ fyziologického roztoku chloridu sodného a potom sa znova odstreďuje 10 minút pri 100 g a pri teplote 4 °C. Usadenina sa týmto spôsobom ešte 2-krát premyje a potom sa výsledná usadenina buniek uvedie do suspenzie v 200 μΙ pufra s obsahom 100 mM, 300 mM NaCI, 1% hmotnostné HTAB s pH 8,6. Vzorky sa potom uložia pri teplote -20 °C. Vzorky sa 4-krát zmrazia sa opäť nechajú rozpustiť, potom sa meria účinnosť elastázy kolorimetricky v zmesi, ktorá obsahuje 50 mM tris, 150 mM NaCI a 0,6 mM MeO-Succ-Ala-Ala-Ala-Pro-ValpNA pri pH 8,6, meria sa rýchlosť vzostupu absorbancie pri 405 nm.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu mať potenciálne priaznivý liečebný účinok v prípade chorôb, pri vzniku ktorých sa predpokladá účinnosť elastázy. Ide najmä o zápal priedušiek vrátane chronických zápalov. Ďalšou chorobou, ktorú by zrejme bolo možné priaznivo ovplyvniť je chronické obštrukčné pľúcne ochorenie COPD.

Ako príklady ďalších chorobných stavov, pri ktorých by mohlo byť podanie zlúčenín podľa vynálezu výhodné, je možné uviesť ďalšie zápalové stavy dýchacích ciest, ako je zápal priedušiek vrátane chronického zápalu, bronchiektasia, astma a stavy hyperaktivity pľúcneho tkaniva, akútna pľúcna nedostatočnosť, septický šok a

-8ďalšie zápalové alebo deštrukčné stavy pľúcneho tkaniva, ako je rozdutie, cystická fibróza a tiež zápalové alebo deštrukčné stavy ďalších tkanív, ako je ochorenie pokožky, napríklad lupienka alebo lupus a ochorenie ďasien vrátane zápalu ďasien.

Ako ďalšie príklady chorobných stavov, u ktorých by zlúčeniny podľa vynálezu mohli mať priaznivý vplyv na možnosť hojenia rán a liečenie popálenín, choroby srdcového a cievneho systému, ako je infarkt myokardu, mŕtvica, periférne cievne ochorenia vrátane uzatvárania tepien na dolných končatinách aterosklerózy, poranenia po reperfúzii, ťažkostí vznikajúce pri kardiopulmorálnom bypase a septikémii.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť podávané aj pri poruchách spojivových tkanívm, ako sú reumatoidná artritída, osteoartritída a spondylitis a potom zápalové stavy obličiek, napríklad glomerulonefritis.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné použiť aj na liečenie niektorých typov leukémie vrátane akútnej myelogénnej leukémie, akútnej myelomonocytickej leukémie a chronických monocytických leukémií a aj pri prevencii alebo inhibícii metastáz tuhých nádorov, napríklad nádorov pľúc, mliečnej žľazy, prostaty a žalúdka a aj v prípade melanómov.

Zvláštny uskutočnením vynálezu je použitie zlúčenín všeobecného vzorca I na liečenie chronického zápalu priedušiek. Chronický zápal priedušiek je stav, ktorý je výsledkom pôsobenia škodlivých chemických alebo iných látok na dýchacie cesty. Tento stav môže vzniknúť aj sekundárne v dôsledku inej choroby. Príznaky tejto choroby sú vyvolané príliš veľkou sekréciou na povrchu dýchacích ciest. Toto veľké množstvo sekrétu nie je zvyčajne účinne vylúčené a v dôsledku toho dochádza k zníženej výmene plynov v pľúcach a k ťažkostiam pri dýchaní a nedostatočnému zásobeniu tkanív kyslíkom a v dôsledku toho k častým mikrobiálnym infekciám a takmer k trvalému kašľu, spojenému s vykašliavaním značného množstva materiálu. Pravdepodobným mechanizmom pre príliš veľkú sekréciu v prieduškách je výstup neutrofilov do dýchacích ciest v prípade dráždenia výstelky týchto dýchacích ciest. Neutrofily vylučujú elastázu na povrchu dýchacích ciest a tento enzým potom spôsobuje zvýšené množstvo sekrétu na povrchu dýchacích ciest a tiež dramatické zmeny v zložení výstelky týchto dýchacích ciest. Pri inhibícii účinnosti elastázy podávaním zlúčenín podľa vynálezu by mohlo dôjsť k zlepšeniu príznakov

-9chronického zápalu priedušiek. Znížená funkcia pľúc v prípade COPD, napríklad pri chronickom zápale priedušiek s uzáverom niektorých priedušiek je tiež spôsobená poškodením pľúc, ktoré je vyvolané elastázou a vedie k zúženiu dýchacích ciest a vzniku zápalových stavov. Tiež aj v tomto prípade bude možné podávaním inhibítorov elastázy zlepšiť celkovú funkciu pľúc.

Ako už bolo uvedené, sú zlúčeniny podľa vynálezu účinnými inhibítormi elastázy, najmä neutrofilnej elastázy. Tieto látky je možné využiť v ľudskom alebo veterinárnom lekárstve, najmä na liečenie stavov, pri ktorých vzniku sa elastáza zúčastňuje ako je napríklad chronický zápal priedušiek.

Je samozrejmé, že v prípade, že sa uvádza možnosť liečenia niektorej choroby, rozumie sa aj možnosť prevencie.

Súčasť riešenia tvorí aj použitie zlúčenín všeobecného vzorca I alebo ich fyziologicky prijateľných solí alebo solvátov na výrobu farmaceutického prostriedku na liečenie chorôb, pri ktorých vzniku sa zúčastňuje elastáza, napríklad na liečenie chronického zápalu priedušiek.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné spracovať na farmaceutický prostriedok akýmkoľvek bežným spôsobom, Súčasť riešenia tvorí aj farmaceutický prostriedok, ktorý ako svoju účinnú zložku obsahuje zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo ich fyziologicky prijateľné soli alebo solváty spolu s jedným alebo väčším počtom farmaceutický prijateľných látok alebo nosičov.

Tieto farmaceutické prostriedky sa zvyčajne vyrábajú obyčajným zmiešaním všetkých zložiek.

Zlúčeniny podľa vynálezu je napríklad možné spracovať na farmaceutické prostriedky určené na perorálne podanie, podanie ústnou sliznicou, parenterálne podanie, miestne podanie alebo rektálne podanie.

Tablety a kapsuly na perorálne podanie môžu obsahovať bežné pomocné látky, napríklad spojivá, ako sú sirupy, akáciová guma, želatína sorbitol, tragant, škrobový sliz alebo polyvinylpyrolidón, plnivá, ako je laktóza, mikrokryštalická celulóza, cukor, kukuričný škrob, fosforečnan horečnatý, kyselina stearová, mastenec, polyetylénglykol alebo oxid kremičitý, dezintegračné činidlá, ako je zemiakový škrob, sodná soľ zosietenej karmalózy alebo sodná soľ glykolátu škrobu a tiež zmáčadlá, napríklad laurylsíran sodný. Tablety je možno opatriť povlakom

- 10zvyčajným spôsobom. Kvapalné prostriedky na perorálne podanie môžu mať napríklad formu olejových alebo vodných suspenzií, roztokov, emulzií, sirupov alebo elixírov alebo môžu byť dodávané ako suché produkty, určené na zriedenie vodou alebo iným vhodným nosným prostredím tesne pred použitím. Tieto kvapalné prostriedky môžu obsahovať bežné prísady, ako suspenzné činidlá, napríklad sorbitolový sirup, metyIcelulóžu, želatínu, glukózový sirup, hydroxymetylcelulózu, karboxymetylcelulózu, gél stearanu hlinitého alebo jedlé hydrogenované oleje, emulgačné činidlá, napríklad lecitín, sorbitanmonooleát alebo akáciovú gumu, nosné prostredie môže mať aj nevodnú povahu vrátane jedlých olejov, ako je mandľový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery typu olejov, propylénglykol alebo etylalkohol a tiež konzervačné činidlá, napríklad metyl- alebo propyl-p-hydroxybenozát alebo kyselinu sorbovú. Ďalej môžu farmaceutické prostriedky obsahovať pufre, látky na úpravu chuti, farbivá a/alebo sladidlá, napríklad manitol podľa potreby.

Na podanie ústnou sliznicou môže mať farmaceutický prostriedok formu tablety alebo kosoštvorčekové tablety, vyrobené bežným spôsobom.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné spracovať aj na čapíky, napríklad použitím bežného základu na výrobu čapíkov, ako je kakaové maslo alebo iné glyceridy.

Zlúčeniny podľa vynálezu je taktiež možné spracovať na parenterálne podanie vo forme injekcie alebo kontinuálnej infúzie, na tento účel je možné prostriedok uložiť do ampúl alebo fľaštičiek s obsahom jednotlivej dávky, do vopred naplnených injekčných striekačiek alebo do väčších obalov, ktoré obsahujú väčší počet dávok a tiež konzervačný prostriedok. Prostriedok môže mať formu roztoku, suspenzie alebo emulzie vo vodnom alebo nevodnom nosnom prostredí a môže tiež obsahovať rôzne pomocné látky, ako sú antioxidačné činidlá, pufre, antimikrobiálne látky a/alebo látky znižujúce toxicitu. Účinná látka môže byť dodávaná aj vo forme prášku, ktorý je určený na zmiešanie s vhodným nosným prostredím tesne pred použitím, napríklad so sterilnou bezpyrogénnou vodou. Pri podávaní účinnej látky v tuhej forme sa sterilný prášok za aseptických podmienok plní do sterilných nádobiek a oddelene sa dodáva nosné prostredie alebo sa sterilný roztok aseptický plní do nádobiek a potom sa lyofilizuje.

- 11 Na miestne podanie je možné dodávať prášky na inhaláciu alebo insufláciu. Môže ísť aj o masti, krémy, emulzie, aerosóly, pesary alebo kapsuly na použitie v inhalačných prístrojoch, môže ísť aj o kvapky do nosa alebo do oka.

Masti a krémy je možné vytvoriť napríklad zmiešaním účinnej látky s vodným alebo olejovým základom, ako prísady je možné pridať rôzne zahusťovadlá a/alebo látky vytvárajúce gél a/alebo rozpúšťadlá. Základ pre masti alebo krém môže napríklad obsahovať vodu a/alebo olej, napríklad kvapalný parafín alebo rastlinný olej, ako je arašidový olej alebo ricínový olej alebo niektoré rozpúšťadlo, ako je polyetylénglykol. Z použiteľných zahusťovadiel je možné uviesť mäkký parafín stearan hlinitý, cetostearylalkohol, polyetylénglykoly, mikrokryštalický vosk a včelí vosk.

Emulzie môžu byť pripravené použitím vodného alebo olejového základu a všeobecne môžu obsahovať jedno alebo väčší počet emulgačných činidiel, stabilizátor, dispergačné látky, suspenzné činidlá a zahusťovadlá.

Prášky, určené na vonkajšie podanie môžu byť vytvorené použitím akéhokoľvek vhodného práškového základu, napríklad mastenca, laktózy alebo škrobu. Na výrobu kvapiek je možné použiť akýkoľvek vodný alebo nevodný základ, ktorý môže obsahovať dispergačné činidlá, solubilizačné činidlá alebo suspenzné látky.

Postreky alebo aerosóly je možné vytvoriť ako vodné roztoky alebo suspenzie alebo ako aerosóly, aplikované z tlakového obalu pri použití vhodného hnacieho prostriedku, ako je dichlórdifluórmetán, trichlórfluórmetán, dichlórtetrafluóretán, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluórpropán, 1,1,1,2-tetrafluóretán, oxid uhličitý alebo iný vhodný plyn.

Kapsuly na použitie v inhalačných alebo insuflačných prístrojoch môžu byť napríklad želatínové kapsuly, do ktorých sa uloží prášková zmes zlúčeniny podľa vynálezu a vhodného základu, ktorým môže byť laktóza alebo škrob.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu je možné použiť aj v kombinácii s ďalšími účinnými látkami, napríklad s protizápalovými látkami, ako sú kortikosteroidy alebo NSAID, bronchodilatačné látky, ako je beta-2-adrenergné látky a xantíny, napríklad teofýlín, mukolytické látky, antimuskarínové látky, antileukotriény,

-12inhibítory adhézie buniek ako látky, antagonizujúce ICAM, antioxidačné látky, ako je A/-acetylcysteín, plniace zmáčadlá a/alebo antimikrobiálbe a protivírusové látky.

Farmaceutické látky podľa vynálezu je možné použiť aj v kombinácii s genetickou liečbou.

Podľa vynálezu je teda možné použiť kombinácie, obsahujúce zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo ich fýziologicky prijateľnú soľ alebo solvát a okrem toho ďalšiu účinnú látku.

Uvedená kombinácia môže byť spracovaná na farmaceutický prostriedok, ktorý bude potom obsahovať ako účinnú zložku kombináciu zlúčeniny podľa vynálezu a ďalšie účinné látky.

Inak je však možné takéto kombinácie podávať oddelene, a to súčasne alebo následne. Príslušné dávky známych účinných látok ľahko určí ošetrujúci lekár.

Zlúčeniny podľa vynálezu budú podávané napríklad v dávkach 0,01 až 50 mg/kg, výhodne 0,05 až 25 mg/kg perorálne raz alebo viackrát za deň. Presná dávka bude závisieť na veku a celkovom stave chorého, na spôsobe podania a na liečenom ochorení, pri liečbe zápalu priedušiek bude obvykle najvýhodnejšie perorálne podanie. V prípade iných chorôb, napríklad v prípade ARDS môže byť výhodné napríklad vnútrožilové podanie.

Zlúčeniny podľa vynálezu majú veľmi výhodné trvanie účinku.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich solváty je možné pripraviť spôsobmi, ktoré budú ďalej uvedené. Tieto spôsoby tvoria taktiež súčasť podstaty vynálezu.

Spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I spočíva v tom, že sa

i) kondenzuje zlúčenina všeobecného vzorca II

(relatívna stereochémia je uvedená)

-13so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³N(CH2)nHetCOOH alebo kyslým derivátom tejto zlúčeniny, napríklad chloridom, aktivovaným esterom alebo anhydridom alebo zmesným anhydridom alebo so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³N(CH2)_nHetXY, kde Y je reaktívna skupina, napríklad atóm halogénu, napríklad chlóru alebo s chráneným derivátom tejto látky, alebo sa ii) sulfonyluje zlúčenina všeobecného vzorca III

R⁴R³N(CH₂)_n

-Het-X

(III) (relatívna stereochémia je uvedená) alebo chránený derivát tejto látky, pôsobením zlúčeniny YO2SR¹, kde Y znamená reaktívnu skupinu, napríklad atóm halogénu, ako je chlór alebo sa iii) cyklizuje zlúčenina všeobecného vzorca IV

(relatívna sterochémia je uvedená) alebo jej ester, vytvorený na karboxylovej skupine, alebo sa (IV)

-14iv) oxiduje sa zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca V

R⁴R³N-(CH,)_n-Het-X

N i

X^a k

(V) (relatívna sterochémia je uvedená) kde X^a je atóm síry alebo SO alebo sa

v) nechá reagovať zlúčenina vzorca VI

L(CH₂)_n-Het-X.

(VI) (relatívna stereochémia je uvedená) kde L znamená odštiepiteľnú skupinu, so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³NH, alebo sa vi) pripraví zlúčenina všeobecného vzorca I, v ktorej n znamená celé číslo 1 až 4 redukciou reakčného produktu zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca VII

(Vil)

-15(relatívna sterochémia je uvedená) so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³NH, alebo sa vii) pripraví zlúčenina všeobecného vzorca I, v ktorej n znamená 1 reakciou zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca VIII

Het-X.

(VIII) (relatívna stereochémia je uvedená) s formaldehydom alebo paraformaldehydom spolu so zlúčeninou vzorca R⁴R³NH v kyslom prostredí, alebo sa viii) odstránia ochranné skupiny z chránenej zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo sa ix) zo zmesi enantiomérov izoluje v čistej forme jeden z enantiomérov, a potom sa v prípade potreby sa premení výsledná voľná báza zlúčeniny všeobecného vzorca I na svoju soľ, prijateľnú z fyziológ ického hľadiska, alebo naopak soľ sa premení na voľnú bázu zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo sa jedna soľ premení na inú fýziologicky prijateľnú soľ.

Spôsob i)

Kondenzačná reakcia so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³N(CH₂)_nHetCOOH sa účelne uskutočňuje v prítomnosti väzbového činidla, napríklad 1-(3-/V,/Vdimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu a výhodne aj v prítomnosti HOBT a v rozpúšťadle, ako je dichlórmetán, DMF, MeCN alebo tetrahydrofurán pri teplote 0 °C až teplote miestnosti. V prípade, že sa použije derivát kyseliny, napríklad chlorid, aktivovaný ester, anhydrid alebo zmesný anhydrid, je nutné reakčné podmienky

-16zodpovedajúcim spôsobom modifikovať, napríklad tak, že sa reakcia uskutočňuje v prítomnosti bázy. V prípade, že obidva symboly R³ a R⁴ znamenajú atómy vodíka, je zvyčajne výhodne chrániť atóm dusíka, napríklad naviazaním skupiny BOC.

V prípade použitia zlúčeniny vzorca R⁴R³N(CH₂)nHetSO2Y sa reakcia účelne uskutoční v prítomnosti bázy, napríklad trietylamínu a v rozpúšťadle, napríklad DCM pri teplote 0 °C až teplote miestnosti.

Spôsob ii)

Sulfonylácia sa zvyčajne uskutočňuje v prítomnosti LHMDS alebo NaH v rozpúšťadle, napríklad v teterahydrofuráne pri teplote -78 až 0 °C.

V prípade, že jeden zo symbolov R³ a R⁴ alebo oba tieto symboly znamenajú atómy vodíka, môže byť potrebné chrániť atóm dusíka, napríklad pomocou skupiny BOC.

Spôsob iii)

Cyklizačná reakcia sa uskutočňuje v prítomnosti 2-chlór-1-metylpyridíniumjodidu alebo EDC v rozpúšťadle, ako je dichlórmetán pri teplote 0 °C až teplote varu pod spätným chladičom. Túto reakciu je možné uskutočniť aj použitím tioesterov karboxylovej kyseliny vzorca IV. Rovnako dobre je možné použiť iný derivát kyseliny, napríklad halogenidu, ako je napríklad chlorid.

Spôsob iv)

Oxidačnú reakciu je možné uskutočniť zvyčajným spôsobom, napríklad pôsobením perkyseliny.

Spôsob v)

Pri uskutočňovaní tohto postupu je výhodnou odštiepiteľnou skupinou atóm halogénu, ako chlór, bróm alebo jód, mesilát alebo tosilát. Reakciu je možné uskutočniť zmiešaním reakčným zložiek, prípadne v prítomnosti bázy, ako je trietylamín alebo uhličitan draselný v inertnom rozpúšťadle ako je DMF alebo MeCN.

-17Spôsob vi)

Túto reakciu je možné uskutočniť zmiešaním zložiek v inertnom rozpúšťadle, ako je DCM pri teplote miestnosti alebo pri vyššej teplote. Redukciu je možné uskutočniť priamo v reakčnej zmesi použitím mierneho redukčného činidla, napríklad NaBH₃CN alebo NaBH(OAc)3Spôsob vii)

Reakciu heterocyklickje zlúčeniny vzorca VIII s formaldehydom alebo paraformaldehydom a amínom je možné uskutočniť za štandardných Mannichových podmienok, napríklad pri teplote varu pod spätným chladičom v kyslom prostredí, typicky v zmesi kysliny octovej a etanolu, v prípade, že sa amin použije vo forme soli s kyselinou, napríklad vo forme hydrochloridu, je možné kyselinu octovú vynechať.

Spôsob viii)

Ochranné skupiny, najmä skupiny použiteľné na ochranu atómu dusíka a tiež spôsoby opätovného odštiepenia týchto skupín boli opísané v publikácii T. W. Greene „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydanie 1991, J. Willey a Sons.

Spôsob ix)

Čistenie jednotlivého enantioméru je možné dosiahnuť bežnými spôsobmi, napríklad pomocou chirálnej chromatografie, ako je chirálna HPLC alebo kryštalizácia s homochirálnou kyselinou, napríklad s kyselinou vínnou.

Fyziologicky prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca I s kyselinami, napríklad hydrochloridy alebo vínany je možné pripraviť reakciou voľnej bázy zlúčeniny všeobecného vzorca I s požadovanou kyselinou.

Medziprodukty všeobecného vzorca II je možné ľahko pripraviť spôsobom uvedeným v nasledujúcej schéme 1.

-18Schéma 1

(Xiv) (h)

R K, CO,alkyl

'Ž (XIX) (k)

R%, (H) (m)

(XXI)

- 19Stupeň a)

Ide o bežné zavedenie ochranných skupín, v prípade, že P² znamená BOC, je možné reakciu uskutočniť pôsobením (BOC)₂O v prítomnosti bázy ako je NaOH v polárnom systéme rozpúšťadiel, napríklad v zmesi dioxánu a vody.

Stupeň b)

Premenu je možné uskutočniť pôsobením hydrogenuhličitanu amónneho v prítomnosti vhodného rozpúšťadla, napríklad v zmesi pyridínu a DMF a v prítomnosti (BOC)₂O alebo vhodného ekvivalentu.

Stupeň c)

Ide o bežné zavedenie ochrannej skupiny. V prípade, že P¹ znamená CBZ, prebieha reakcia dobre pri použití nBuLi a potom CBZ-CI v prítomnosti inertného rozpúšťadla ako je THF pri teplote nižšej ako -50 °C.

Stupeň d)

Reakciu je možné uskutočniť pôsobením zlúčeniny RX, napríklad Mel, benzyljodidu alebo Me₂SO4, ide o látky ktoré sú schopné premeniť atóm síry v skupine SMe na sulfóniový ión vo vhodnom rozpúšťadle, ako je propanón alebo acetonitril. Skupina R bude zvyčajne alkylová alebo aralkylová skupina, X znamená atóm halogénu, najmä jódu alebo zvyšok sulfátu. Pri tejto reakcii je vhodné, aj keď nie nevyhnutné chrániť amidovú skupinu.

Stupeň e)

Uzavretie kruhu je možné uskutočniť pôsobením živice Dowex 2 x 8400 mesh v OH' forme vo vhodnom rozpúšťadle, ako je metylkyanid. Je tiež možné kruh uzavrieť pôsobením uhličitanu draselného vo vhodnom rozpúšťadle, ako je metylkyanid.

Stupeň f)

Ochranné skupiny je možné odstrániť bežným spôsobom, skupina BOC sa napríklad odstráni pôsobením HCI, napríklad dioxánu.

-20Stupeň g)

Reakciu je možné uskutočniť pôsobením alkylesteru kyseliny trifluóroctovej, napríklad jej metylesteru alebo pôsobením anhydridu kyseliny trifluóroctovej v prítomnosti vhodnej bázy, ako je /V-metylmorfolín.

Stupeň h)

Premena sa uskutočňuje pôsobením redukčného činidla, napríklad borohydridu lítneho na zlúčeninu všeobecného vzorca XV s následným pôsobením koncentrovanou kyselinou sírovou v prítomnosti alkylalkoholu, ako je etanol ako rozpúšťadla.

Stupeň i)

Reakcia zlúčeniny vzorca XVI a XVII prebieha v Lewisovej kyseline, napríklad v dieteráte fluoridu boritého v inertnom rozpúšťadle, ako je dichlórmetán alebo metylkyanid. Alkylová skupina v O-alkylovej skupine a v skupine OSi(alkyl)3 zvyčajne obsahuje 1 až 6 atómov uhlíka. V zlúčenine XVII sú výhodnými alkylovými skupinami v silylalkylovej skupine metyl, izopropyl a ŕerc-butyl. Výhodnými Oalkýlovými skupinami sú najmä OEt a výhodnou OSi(alkyl)3-skupinou je skupina OSi(i-Pr)₃ alebo OSi(Me)2(t-Bu). Je tiež možné použitie variantu zlúčeniny všeobecného vzorca XVII, v ktorom je O-alkylová skupina nahradená skupinou OSi(alkyl)3.

Zlúčeniny všeobecného vzorca XVII je možné pripraviť tak, že sa na zodpovedajúci ester, vytvorený na karboxylovej skupine, t.j. etylester alebo akýkoľvek alkylester pôsobí silnou bázou, napríklad LHMDS a potom trialkylsilylchloridom, ako je trimetylsilylchlorid alebo trialkylsilyltriflát. Reakcia prebieha typicky pri nízkych teplotách pod 0 °C v inertnom rozpúšťadle, ako je THF v prítomnosti DMPU.

Stupeň j)

Ide o bežné odstránenie ochrannej skupiny pôsobením bázy, ako je uhličitan draselný.

-21 Stupeň k)

Uzavretie kruhu je možné uskutočniť pôsobením Grignardovho činidla na zavedenie alkylovej skupiny, napríklad pôsobením ŕerc-butylmagnéziumchloridu v inertnom rozpúšťadle, ako je THF v prítomnosti tetrametyléndiamínu pri teplote -20 až 25 °C.

Stupeň I)

Ide o sulfonylačnú reakciu laktámu. Táto reakcia dobre prebieha pôsobením R¹SO₂-Y, kde Y znamená reaktívnu skupinu, výhodne atóm chlóru, v prítomnosti LHMDS, NaH alebo KH v rozpúšťadle ako THF pri teplote -78 až 0 °C.

Stupeň m)

Ide o odstránenie ochrannej skupiny z atómu dusíka bežným spôsobom. V prípade, že P¹ znamená CBZ, je možné ochrannú skupinu odstrániť hydrogenáciou pri použití katalyzátora na báze hydroxidu paladnatého v rozpúšťadle, ako je etylacetát alebo THF.

Zlúčeniny všeobecného vzorca XV je možné pripraviť spôsobom opísaným v schéme 2.

(a)

-►

O (XXIII)

2HCI

NHCOCF, (c)

HN (XXV)

ΝΗ₂ (XXIV) (XV)

-22Stupeň a)

Reakcia prebieha za bežných podmienok na tvorbu alkylesterov, napríklad pôsobením alkoholu, ako je metanol v prítomnosti SOCI₂. R¹³ výhodne znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, najmä metyl.

Stupeň b)

Cyklizáciu je možné uskutočniť miešaním vo vode so živicou Dowex 2x8 (výhodne 400 mesh).

Stupeň c)

Amín, chránený TFA sa vytvorí pôsobením metyltrifluóracetátu na zlúčeninu vzorca XXIV v polárnom protickom rozpúšťadle, ako je MeOH.

Stupeň d)

Vhodná ochranná skupina P¹ zahrnuje CBZ. V tomto prípade je možné postupovať tak, že sa na zlúčeninu vzorca XXV pôsobí silnou bázou, ako je LHMDS alebo nBuLi v inertnom rozpúšťadle ako je THF s následným pôsobením CBZ-CI.

Ďalší možný spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca XX, ktorej výroba už bola opísaná v schéme 1 je uvedený v nasledujúcej reakčnej schéme 3.

Schéma 3

(c)

(XXVII) (XXVIII) (XXIX)

-23Schéma 3 - pokračovanie

Stupeň a)

Zlúčeniny všeobecného vzorca XXVI sú známe látky alebo je možné ich pripraviť analogickým spôsobom ako známe látky. P¹ znamená /V-ochrannú skupinu, výhodne CBZ. Stupeň a) je ďalšou možnosťou zavedenia ochrannej skupiny na atóm dusíka. P² vo vzorci XXVII je odlišná /V-ochranná skupina, výhodne BOC. V prípade, že P² znamená BOC, uskutočňuje sa reakcia pri použití (BOC)₂O.

-24Reakcia prebieha dobre v prítomnosti bázy, ako je trietylamín alebo 4dimetylaminopyridín v rozpúšťadle, ako je etylacetát pri teplote 0 až 25 °C.

Stupeň b)

Premena sa výhodne uskutočňuje pôsobením pyridínium-p-toluénsulfonátu v rozpúšťadle, ako je zmes acetónu a vody pri teplote 25 až 75 °C.

Stupeň c)

Ide o kondenzačné preskupenie, ktoré sa účelne uskutočňuje použitím esteru kyseliny 2-fenylsulfinyloctovej, PhSOChhCOsR¹³ a piperidínu v rozpúšťadle, ako je acetonitril, výhodne pri teplote miestnosti. R¹³ je výhodne alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, najmä metyl.

Stupeň d)

Ide o substitučnú reakciu podľa Mitsunoby použitím ftalimidu PPh₃ a dialkylazodiakarboxylátu ako DEAD v prítomnosti rozpúšťadla ako je THF pri teplote 0 až 40 °C.

Stupeň e)

V tomto stupni sa odstráni ochranná skupina, výhodne pri použití silnej kyseliny, ako je TFA v rozpúšťadle, ako je DCM pri teplote 0 až 40 °C. R¹³ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, najmä etyl.

Stupeň f)

Cyklizačná reakcia ľahko prebieha ako intramolekulová Michaelova reakcia. Vhodným reakčným činidlom je NaH v rozpúšťadle, ako je THF pri teplote 0 až 25 °C.

Stupeň g)

V tomto stupni dochádza k dvom reakciám a to k odstráneniu ochrannej skupiny z atómu dusíka a k opätovnému zavedeniu ochrannej skupiny. Ftalimidoskupina sa odstráni pôsobením hydrazínhydrátu v rozpúšťadle ako je etanol pri

-25teplote 0 °C až teplote varu pod spätným chladičom. Ochranná skupina P³ sa naviaže bežným spôsobom. V prípade, že P³ znamená BOC, použije sa výhodne na uskutočnenie reakcie zlúčenina BOC₂O.

Stupeň h)

Bočný reťazec vo význame R² je možné naviazať alkyláciou, ako reakčné činidlo sa použije zlúčenina R²-Y, kde Y je reaktívna skupina, ako je atóm brómu alebo jódu. Reakcia sa uskutočňuje použitím bázy, výhodne silnej bázy, ako je LHMDS. V prípade použitia tejto látky sa ako pomocné rozpúšťadlo použije DMPU v THF. Vhodná reakčná teplota je v rozmedzí -78 až 50 °C. Za týchto podmienok je zvyčajne možné reakciu stereochemicky dobre riadiť.

Stupeň i)

Ide o hydrolýzu, nasledovanú odstránením ochrannej skupiny z dusíkového atómu. Hydrolýza sa uskutočňuje bežným spôsobom, napríklad použitím KOH vo vodnom etanole pri teplote 25 až 80 °C. Ochranná skupina sa odstráni taktiež bežným spôsobom, napríklad pôsobením HCl v dioxáne pri teplote 0 až 50 °C alebo v prípade, že je ochrannou skupinou trifluóracetát, pôsobením bázy.

Stupeň j)

Táto cyklokondenzačná reakcia sa zvyčajne uskutočňuje v prítomnosti 2chlór-1-metylpyridíniumjodidu a vhodnej bázy, ako je /V,/V-diizopropyletylamín v rozpúšťadle, ako je dichlórmetán pri teplote 0 °C až teplote varu pod spätným chladičom. Bolo tiež dokázané, že je možné použiť zlúčeninu všeobecného vzorca XXXV vo forme esteru karboxylovej kyseliny. V tomto prípade nie je potrebné uskutočňovať hydrolýzu esteru v stupni i). Výhodné podmienky pre cyklokondenzačnú reakciu zahrnujú použitie Grignardovho reakčného činidla pre alkyláciu, ako je ŕerc-BuMgCI v THF pri teplote v rozmedzí -20 až 25 °C.

Ďalší možný spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca XXXIII je znázornený v nasledujúcej reakčnej schéme 4.

-26Schéma 4

(a)

CO,H

--H₂N I ₃ ² NHP³ (XXXVII) diaminomaslová kyselina

CH,OH

P¹hn

NH'P³ (XXXIX)

Stupeň a)

Zlúčeniny všeobecného vzorca XXXVI sú známe látky alebo je možné ich pripraviť rovnakým spôsobom ako známe zlúčeniny. P³ je vyššie uvedená ochranná skupina, ako je BOC. Reakcia dobre prebieha použitím fenyljodosyl-bis(trifluóracetátu), PIFA a bázy, ako je pyridín vo vodnom rozpúšťadle, ako je zmes vody a THF, dioxánu alebo acetonitrilu. Spôsob bol opísaný v publikácii Stansfield C. F. Organic Preparations and Procedures Int., 1990, 22(5), 593 až 603.

Stupeň b)

P¹ je ochranná skupina ako je CBZ. Zavedenie ochrannej skupiny sa uskutočňuje bežným spôsobom. Reakcia sa uskutoční v rozpúšťadle, miešateľnom s vodou, ako je THF, DMF alebo dioxán použitím /V-(benzyloxykarbonyloxy)sukcínimidu, benzyloxykarbonylchloridu alebo akéhokoľvek iného zdroja benzyloxy-27karbonylovej skupiny, pH sa upravuje na alkalickú stranu pridávaním uhličitanu sodného.

Je tiež možné postupovať tak, že sa zlúčenina vzorca XXXVIII v alternatívnom stupni b¹) pripraví bežným spôsobom z kysliny diaminomaslovej.

Stupeň c) reakcia dobre prebieha v dvoch stupňoch. V prvom stupni reaguje zlúčenina vzorca XXXVIII pri nízkej teplote s /V-metylmorfolínom a potom s alkylchlórmravčanom, napríklad etylchlórmravčanom v organickom rozpúšťadle, ako je DCM, dioxánu alebo THF. V druhom stupni sa produkt redukuje, zvyčajne pôsobením borohydridu sodného pri zníženej teplote, napríklad -20 až 10 °C v rozpúšťadle, ako je THF.

Stupeň d)

Oxidačnú reakciu je možné uskutočniť akýmkoľvek spôsobom, napríklad použitím oxalylchloridu v DMSO a metylénchloridu pod dusíkom pri nižšej teplote, ako -30 až -70 °C s následným pôsobením trietylamínu. Medziprodukt vzorca XXXX sa neizoluje.

Stupeň e)

Reakcia sa uskutočňuje použitím Wíttigovho reakčného činidla, ako je trifenylfosforan R¹³O2CCH=PPh3 alebo pomocou Wadsworth-Emmonsovej reakcie.

Stupeň f)

Túto Michaelovu reakciu je možné uskutočniť použitím LHMDS alebo inej silnej bázy v organickom rozpúšťadle, ako je THF, éter alebo toluén a výhodne v prítomnosti komplexotvornej látky ako je TMEDA.

Medziprodukty vzorca III je možné pripraviť reakciou zlúčeniny XXII zo schémy 1, zbavenej ochranných skupín, s R⁴R³N(CH2)nHetCOOH alebo R⁴R³N(CH2)nHetXY vyššie opísaným spôsobom.

Počiatočnú N-deprotekciu je možné uskutočniť podľa schémy 1, stupeň m).

-28Medziprodukty vzorca IV je možné získať zo zlúčeniny vzorca XIX, prípadne chránenej, analogickým spôsobom, aký bol opísaný pre výrobu zlúčeniny vzorca III zo zlúčeniny vzorca XX v schéme 1.

Zlúčeniny vzorca V, v ktorých X^a znamená S je možné získať reakciou zlúčeniny vzorca III so zlúčeninou R¹ SSR¹ za bežných podmienok nukleofilnej výmeny. Zlúčeniny vzorca V, v ktorých X^a znamená SO sa pripravia oxidáciou látky, v ktorej X^a znamená S.

Zlúčeniny vzorca VI, VII a VIII sa pripravia zo zlúčeniny vzorca II bežnými postupmi. Mesilátové a tosilátové deriváty sa získajú zo zodpovedajúceho alkoholu pôsobením MeSO2CI alebo p-metylbenzénsulfonylchloridu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca R⁴R³N(CH2)nHetCOOH a ich deriváty, odvodené od kyslej funkcie a zlúčeniny všeobecného vzorca R⁴R³N(CH2)_nHetXY sú známe látky alebo je možné ich pripraviť známymi spôsobmi.

Je zrejmé, že schémy 1, 2, 3 a 4 by bolo možné ešte modifikovať na získanie homochirálnych produktov použitím homochirálnych východiskových látok, napríklad S-metionínu v schéme 1 alebo kyseliny S-diaminomaslovej v schéme 4 alebo tak, že sa uskutoční prídavný chirálny deliaci stupeň.

V prípade, že sú zlúčeniny vzorca 14 pripravené v racemickej forme spôsobom podľa schémy 1 z racemického metionínu, bolo zistené, že izoméry zlúčeniny vzorca XIV je možné od seba oddeliť dynamickým postupom. Je možné postupovať tak, že sa na racemickú zlúčeninu vzorca XIV pôsobí homochirálnou kyselinou di-p-toluoylvinnou v prítomnosti 3,5-dichlór-2-hydroxybenzaldehydu ako katalyzátora v inertnom rozpúšťadle ako je THF. Získa sa homochirálna soľ zlúčeniny vzorca XIV. Zlúčeninu vzorca XV je potom možné získať následným pôsobením metylesteru kyseliny trifluóroctovej v prítomnosti /V-metylmorfolínu.

Oba enantioméry zlúčeniny vzorca XIV je tiež možné pripraviť použitím Smetionínu podobným spôsobom.

Je zrejmé, že vyššie uvedené postupy na výrobu zlúčenín všeobecného vzorca I je možné ešte modifikovať tak, že sa použije väčší počet ochranných skupín alebo sa tieto skupiny vynechajú alebo sa použijú iné skupiny na dosiahnutie optimálnych podmienok, ako je uvedené v publikácii T. W. Greene „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vydanie (1991), J. Wiley and Sons.

-29Súčasť podstaty vynálezu tvoria taktiež nové chirálne medziprodukty, použiteľné pre vyššie opísané chirálne postupy a pre delenie zmesí, obsahujúcich oba izoméry.

Súčasť podstaty vynálezu tvorí aj spôsob výroby uvedených medziproduktov.

Výhoda zlúčenín podľa vynálezu spočíva vtom, že uvedené látky majú vyššiu účinnosť, vyššiu selektivitu, vyvolávajú menšie množstvo nežiadúcich vedľajších účinkov, majú dlhšiu dobu pôsobenia a sú pri výhodnom spôsobe podania ľahšie biologicky dostupné, takže tieto látky majú v porovnaní so známymi látkami výhodnejšie farmakodynamické alebo farmakokinetické vlastnosti ako známe zlúčeniny.

Praktické uskutočnenie vynálezu bude vysvetlené nasledujúcimi príkladmi, ktoré však nemajú slúžiť na obmedzenie rozsahu vynálezu. V týchto príkladoch budú použité nasledujúce skratky.

Zoznam skratiek

BOC ŕerc-butyloxykarbonyl

CBZ benzyloxykarbonyl (BOC)₂O di-ŕezc-butyldikarbonát

THF tetrahydrofurán

LHMDS lítium-bis(trimetylsilyl)amid

DMPU 1,3-dimetyl-3,4,5,6-tetrahydro-2-(1H)-pyrimidinón

DMAP 4-dimetylaminopyridín

DMF dimetylformamid

EDC 1-(3-/V,A/-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid

DEAD dietylazodikarboxylát

DCM dichlórmetán

TMEDA tetrametyletyléndiamín

DMSO dimetylsulfoid

HOBT 1-hydroxybenztriazol

NaBH(OAc)3 triacetoxyborhydrid sodný

-30V príkladoch a príprave medziproduktov sa pri chromatografii na tenkej vrstve používajú dosky oxidu kremičitého.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Medziprodukt 1

Dihydrochlorid metylesteru kyseliny 2,4-diaminomaslovej

Do 350 g dihydrochloridu kyseliny D.L-diaminomaslovej v 1,6 I metanolu sa počas 0,5 hodiny pri teplote 0 °C pridá 200ml tionylchloridu. Reakčná zmes sa 3 hodiny zahrieva pod refluxom a potom sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozotrie so 650 ml toluénu za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako 385 g bielej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum voľných báz MH⁺ (nájdené) 133, MH⁺ (vypočítané) 133.

Medziprodukt 2

3-Amino-pyrolidín-2-ón

Jednu hodinu sa mieša zmes 1 g medziproduktu 1, 70 ml vody a 16,4 ml anionomeničovej živice Dowex 2x8, 400 mesh. Živica sa odfiltruje a filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku 0,40 g výslednej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

TLC (etylacetát:metanol) Rf 0,07.

Medziprodukt 3

2,2,2-trifl uór-/V-(2-oxo-py rolid í η-3-y l)acetamid

Počas 2 hodín sa uvedie do suspenzie 181 g medziproduktu 2, 218 ml metyltrifluóracetátu a 2,6 I metanolu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 355 g béžovej tuhej látky ako výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 214, MNH/ (vypočítané) 214.

-31 Medziprodukt 4

Benzylester kyseliny 2-oxo-3-(2,2,2-trifluór-acetylamino)pyrolidín-1 -karboxylovej

Do reakčnej zmesi 3,5 g medziproduktu 3 a 100 ml tetrahydrofuránu sa pri teplote -70 °C pridá 20 ml LHMDS. Po 0,25 hodine sa pridá 2,8 ml benzylchlórmravčanu. reakčná zmes sa 1 hodinu zahrieva na teplotu miestnosti a následne sa pridá 25 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje 25 ml etylacetátu, zlúčené extrakty sa premyli 2% roztokom amoniaku, 2M roztokom kyseliny chlorovodíkovej a nasýteným roztokom chloridu sodného a potom sa sušia nad síranom horečnatým. Po odstránení rozpúšťadla sa biela tuhá látka kryštalizuje zo zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 5:1 za poskytnutia 4,2 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako biele kryštály.

TLC (etylacetát:metanol 9:1) Rf 0,7.

Medziprodukt 5

Benzylester kyseliny 2-etoxy-3-(2,2,2-trifluór-acetylamino)pyrolidín-1 -karboxylovej

Do roztoku 34 g medziproduktu 4 v 1070 ml etanolu sa pri teplote -5 °C pridá 9,86 g borhydridu sodného. Po kvapkách sa pridá 20 ml 4M roztoku chlorovodíka v

1,4-dioxáne. Opakovane sa pridá dvakrát 5 ml a raz 10 ml 4M roztoku chlorovodíka v 1,4-dioxáne a 2 g borhydridu sodného. Po 3 hodinách sa pridá 11 mi koncentrovanej kyseliny sírovej a reakčná zmes sa 2 hodiny zahrieva na teplotu miestnosti. Po pridaní 300 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného sa etanol a dioxán odstráni vo vákuu. Zvyšok sa zriedi 500 ml vody a trikrát sa extrahuje 500 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne silikagélu 9385 pri elúcii éterom za poskytnutia v nadpise uvedenej zlúčeniny ako 21 g tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 378, MNH? (vypočítané) 378.

-32Medziprodukt 6

Benzylester kyseliny trans-2-(1 -etoxykarbonyl-2-metylpropyl)-3-(2,2,2-trifluór-acetylamino)pyrolidín-1 -karboxylovej

Na teplotu 5 °C sa ochladí 10 g medziproduktu 5, 11 ml etyltrimetylsilylizopropylketénacetálu a 250 ml dichlórmetánu a následne sa počas 0,25 hodiny pridá 17 ml bórtrifluoriddieterátu a 11 ml keténacetálu. Po ďalšej 1 hodine sa pridá 200 mi 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a organický podiel sa oddelí a premyje nasýteným roztokom chloridu sodného a suší sa vo vákuu za vzniku 16,7 g výslednej zlúčeniny ako oleja.

TLC (étercyklohexán 2:1) Rf 0,18 a 0,27.

Medziprodukt 7

Benzylester kyseliny trans-3-amino-2-(1 -etoxykarbonyl-2-metylpropyl)pyrolidín-1 karboxylovej

Reakčná zmes 31 g medziproduktu 6, 71 g uhličitanu draselného, 930 ml vody a 930 ml etanolu sa 3 hodiny zahrieva na teplotu 60 °C. Etanol sa odstráni vo vákuu a vodný zvyšok sa trikrát extrahuje 300 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za poskytnutia 17,5 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako hnedého oleja.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 349, MH⁺ (vypočítané) 349.

Medziprodukt 8

Benzylester kyseliny rel-(3R,3aR,6aS)-6-izopropyl-5-oxohexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1 -karboxylovej

Do roztoku 17,5 g medziproduktu 7 v 1800 ml tetrahydrofuránu ochladeného na teplotu -5 °C sa počas 0,5 hodiny pridá 1M roztok ŕerc-butylmagnéziumchloridu v 204 ml tetrahydrofuránu. Po 2 hodinách sa pridá 250 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 300 ml nasýteného roztoku chloridu sodného a reakčná zmes sa

-33extrahuje 250 ml etylacetátu. Po zahustení extraktov na polovicu objemu vo vákuu sa extrakty premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozotrie so 60 ml dietyléteru za vzniku bielej tuhej látky. Tento produkt sa nechá kryštalizovať z etylacetátu za poskytnutia 3,4 g v nadpise uvedenej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 303, MH⁺ (vypočítané) 303.

Medziprodukt 9

Benzylester kyseliny rel-(3R,3aR,6aS)-6-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxohexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-1-karboxylovej

Do miešaného roztoku 15,01 g medziproduktu 8 v 950 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa v atmosfére dusíka pri teplote -74 °C po kvapkách pridá 69,5 ml 1,0M LHMDS v tetrahydrofuráne. Po 10 minútach miešania pri teplote -74 °C sa reakčná zmes nechá počas 45 minút zohriať na teplotu 0 °C a potom sa 20 minút nechá pri tejto teplote. Reakčná zmes sa potom ochladí na teplotu -76 °C, po kvapkách sa pridáva 9,61 ml metánsulfonylchloridu a potom sa 1,5 hodiny mieša pri tejto teplote. Reakčná zmes sa potom zahreje na teplotu -50 °C, reakcia sa ukončí pridaním 480 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho a nechá sa zohriať na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa rozdelí medzi 300 ml vody a 750 ml etylacetátu. Vodný podiel sa ďalej extrahuje 750 ml etylacetátu a zlúčené organické extrakty sa premyjú 450 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom sodným a zahustia sa vo vákuu za vzniku béžovej tuhej látky. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou etylacetátu a cykiohexánu v pomere 1:3, 1:2, 1:1 a potom 3:1 za vzniku výslednej zlúčeniny ako 13,65 g bielej kryštalickej tuhej látky.

TLC (dichlórmetán) Rf 0,22.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 398, MNH/ (vypočítané) 398.

Medziprodukt 10

Rel-(3/?,3afi,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón

-34Suspenzia 13,63 g medziproduktu 9 v 900 ml etylacetátu sa pridá do 3,16 g 20% hydroxidu paládnatého na aktívnom uhlí a vytvorená čierna suspenzia sa pri teplote miestnosti 90 minút energicky mieša v atmosfére vodíka. Reakčná zmes sa potom filtruje cez Harborlite J2 a zahustí sa vo vákuu za poskytnutia 8,63 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako jemného bieleho prášku.

TLC (metanohdichlórmetán 1:9) Rf 0,50.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ (nájdené) 247, MH⁺ (vypočítané) 247.

Medziprodukt 11

Rel-5-(6/?-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxohexahydro-(3aS,6a/?)-pyrolo[3,2-b]-pyrol1 -karbonyl)furán-2-karbaldehyd

Do miešaného roztoku 100 mg medziproduktu 10 v 5 ml acetonitrilu sa pridá 74 mg 5-formyl-2-furoovej kyseliny a 156 mg hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu. Reakčná zmes sa mieša 3 dni. Vo vákuu sa odstráni acetonitril vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi dichlórmetán a nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podiel sa premyje nasýteným roztokom chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí za vo vákuu. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého 9385 pri elúcii zmesou dichlórmetánu a acetonitrilu v pomere 9:1 za poskytnutia 80 mg v názve uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 369, MH⁺ (vypočítané) 369.

Medziprodukt 12

Rel-(3R,3a/?,6aS)-3-(6-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)furán-2-karbaldehyd

Do miešaného roztoku 540 mg medziproduktu 10 v 40 ml acetonitrilu sa pridá 400 mg 2-formyl-3-furoovej kyseliny a 841 mg hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu: Reakčná zmes sa mieša 16 hodín. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi dichlórmetán a nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodný podiel sa extrahuje dichlórmetánom, zlúčené

-35organické podiely sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom sodným a zahustia sa vo vákuu. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou dichlórmetánu a acetonitrilu v pomere 9:1 za poskytnutia 626 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako béžovej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 369, MH⁺ (vypočítané) 369.

Medziprodukt 13

Rel-(3R,3aR,6aS)-5-(6-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)tiofén-2-karbaldehyd

Do miešaného roztoku 250 mg medziproduktu 10 v 10 ml acetonitrilu sa pridá 206 mg 5-formyltiofén-2-karboxylovej kyseliny a 389 mg hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu. Reakčná zmes sa 3 hodiny mieša. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi dichlórmetán a nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Vodný podiel sa extrahuje dichlórmetánom. Zlúčené organické podiely sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za vzniku peny. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou dichlórmetánu a acetonitrilu v pomere 9:1 za poskytnutia 280 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako béžovej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 385, MH⁺ (vypočítané) 385.

Medziprodukt 14

Rel-(3/?,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1H-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón

Päť minút sa mieša roztok 60 mg pyrol-2-karboxylovej kyseliny, 81 mg 1hydroxybenzotriazolu, 115 mg hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu a 101 mg trietylamínu v 3 ml dimetylformamidu a potom sa pridá 100 mg medziproduktu 10. reakčná zmes sa 6 hodín mieša, potom sa rozdelí medzi 25 ml 8% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 50 ml etylacetátu. Organický podiel sa

-36oddelí, premyje sa dvakrát 50 ml vody a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku tuhej látky. Suspenzia 25 ml tuhej látky vdietyléteri sa 10 minút mieša a potom sa prefiltruje za odsávania. Zvyšok sa suší za poskytnutia 123 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bieleho prášku s teplotou topenia 200 až 203 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 340, MH⁺ (vypočítané) 340.

Medziprodukt 15

Rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-1/-/-pyrol-2-karbonyl)hexahyd ropyrolo[3,2-b]-py rol-2-όη

Pätnásť minút sa mieša roztok 150 mg 1-metylpyrol-2-karboxylovej kyseliny, 180 mg 1-hydroxybenzotriazolu, 250 mg hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3etylkarbodiimidu a 240 mg trietylaminu v 5 ml dimetylformamidu a potom sa pridá 246 mg medziproduktu 10. Reakčná zmes sa mieša 18 hodín a potom sa rozdelí medzi 135 ml 2% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 150 ml etylacetátu. Organický podiel sa oddelí, premyje sa dvakrát 120 ml vody, suší sa nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku polotuhej látky. Suspenzia polotuhej látky v 20 ml dietyléteru sa 10 minút mieša, ester sa dekantuje a vymení sa ďalšími 10 ml éteru. Vytvorená suspenzia sa 10 minút mieša, éter sa znova dekantuje a zvyšok sa suší za poskytnutia 227 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako svetlohnedej tuhej látky s teplotou topenia 176 až 178 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 354, MH⁺ (vypočítané) 354.

Medziprodukt 16

Kyselina 2-(2,2-dimetylpropionyloxymetyl)-tiazol-4-karboxylová

Zmes 1,85 g α-pyrohroznovej kyseliny, 1,75 g 1-(terc-butylkarbonyloxy)tioacetátu a 10 g aktívnych molekulových sít s veľkosťou ôk 4A v 100 ml etanolu sa 24 hodín mieša. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a nahradí sa 100 ml dichlórmetánu. Vytvorená suspenzia sa 5 minút mieša a potom sa prefiltruje cez Harborlite J2. Filtrát sa odparí za vzniku tuhého produktu, ktorý sa rozpustí v etylacetáte, suší sa nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za

-37vzniku 1,83 g výslednej zlúčeniny ako svetložltej tuhej látky s teplotou topenia 155 až 158 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 244, MH⁺ (vypočítané) 244.

Medziprodukt 17

Kyselina 2-hydroxymetyl-tiazol-4-karboxylová

Za stáleho miešania sa po refluxom 4,5 hodiny zahrieva zmes 1,78 g medziproduktu 16 a 1,80 g uhličitanu draselného v 90 ml metanolu a 30 ml vody, ochladí sa, zahustí sa na objem 30 ml a okyslí sa pridaním 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Zmes sa päťkrát extrahuje 60 ml dichlórmetánu a potom sa zahustí vo vákuu za vzniku tuhej látky, ktorá sa dvakrát extrahuje 150 ml horúcej zmesi technického metylovaného etanolu a etylacetátu v pomere 2:1. Vytvorené extrakty sa zlúčia s dichlórmetanovými extraktami a rozpúšťadla sa odstránia vo vákuu. Vytvorená guma sa nechá kryštalizovať z dietyléteru za poskytnutia 834 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako hnedého prášku s teplotou topenia 121 až 127 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 160, MH⁺ (vypočítané) 160.

Medziprodukt 18

Rel-(3S,3aS,6a/?)-4-(2-hydroxymetyltiazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Sedemnásť hodín sa mieša roztok 787 mg medziproduktu 17, 1,00 g medziproduktu 10, 655 mg tiretylamínu, 718 mg 1-hydroxybenzotriazolu a 997 mg hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu v 5 ml dimetylformamidu a potom sa rozdelí medzi 250 ml 8% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 250 ml etylacetátu. Vodný podiel sa oddelí a extrahuje 250 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa dvakrát premyjú 200 ml 0,5M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a dvakrát 200 ml vody, sušia sa nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku peny, ktorá sa za stáleho miešania počas 5 minút uvedie do suspenzie v 100 ml dietyléteru. Vytvorená tuhá suspenzia sa prefiltruje za

-38odsávania. Zvyšok sa suší za vzniku 1,23 g výslednej zlúčeniny hnedého prášku s teplotou topenia 197 až 201 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 388, MH⁺ (vypočítané) 388.

Medziprodukt 19

Kyselina 2-dimetylaminometyltiazol-4-karboxylová

Za stáleho miešania sa pod refluxom 1,5 hodiny zahrieva zmes 370 mg abrómpyrohroznovej kyseliny, 300 mg hydrochloridu 1-(dimetylamino)tioaceamidu a 200 mg hydrogenuhličitanu draselného sa zmes pod refluxom ďalších 0,75 hodín zahrieva. Reakčná zmes sa ochladí a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa 0,5 hodiny mieša s 30 ml etylacetátu. Rozpúšťadlo sa dekantuje. Vytvorená tuhá látka sa rozdelí medzi 16 ml 0,5M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 20 ml etylacetátu. Vodný podiel sa oddelí a zahustí vo vákuu za vzniku gumy. Na gumu sa pôsobí 20 ml metanolu a reakčná zmes sa filtruje. Filtrát sa zahustí vo vákuu a zvyšok sa suší za vzniku 430 mg výslednej zlúčeniny ako tmavohnedého prášku. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 187, MH⁺ (vypočítané) 187.

Medziprodukt 20

Kyselina 5-formylizoxazol-3-karboxylová

Za stáleho miešania sa pod refluxom 5 hodín zahrieva roztok 25 mg etyl-5formylizoxazol-3-karboxylátu v 3 ml 1,4-dioxánu a 1 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Reakčná zmes sa ochladí a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozotrie v dietyléteri. Rozpúšťadlo sa odstráni a zvyšok sa suší za vzniku 18 mg výslednej zlúčeniny ako oranžovohnedej tuhej látky.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf 0,32.

Medziprodukt 21

Rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-(6-izopropyl-4-metánsylfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2b]pyrol-1-karbonyl)izoxazol-5-karbaldehyd

-39Do miešaného roztoku 670 mg medziproduktu 10 v 50 ml acetonitrilu sa pridá 500 mg medziproduktu 20 a 1,04 g hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu. Reakčná zmes sa 4 hodiny mieša. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi dichlórmetán a nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podiel sa oddelí a nechá sa prejsť cez dopredu pripravenú kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut, pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom, etylacetátom, acetonitrilom a metanolom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia sa za poskytnutia 660 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

TLC (dichlórmetán:acetonitril 9:1) Rf 0,33.

Medziprodukt 22

Etylester kyseliny 1-metyl-5-styry 1-1 H-pyrazol-3-karboxylovej

Pod refluxom sa 2 hodiny zahrieva roztok 40 g (E)-etyl-2,4-dioxo-6-fenylhex5-enoátu a 9 g metylhydrazínu v 250 ml etanolu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého pri elúcii zmesou dietyléteru a cyklohexánu v pomere 1:1. Zlúčia sa podiely obsahujúce zložku s vyššou polaritou a rozpúšťadlo a odparí za vzniku 25,4 g výslednej zlúčeniny ako žlté kryštály.

TLC (dietyléter:cyklohexán 1:1) Rf 0,14.

Počas tejto reakcie sa vyrobí aj medziprodukt 23.

Medziprodukt 23

Etylester kyseliny 2-metyl-5-styryl-2H-pyrazol-3-karboxylovej

Podiely obsahujúce jednu z dvoch nových hlavných zložiek s nižšou polaritou, ktoré sa získajú pri čistení chromatografiou 22, sa zlúčia a rozpúšťadlo sa odstráni za vzniku 11,4 g výslednej zlúčeniny ako žltého oleja.

TLC (dietylétercyklohexán 1:1) Rf 0,62.

-40Medziprodukt 24

Etylester kyseliny 5-formyl-1-metyl-1 H-pyrazol-3-karboxylovej

Roztokom 156 g medziproduktu 22 v 10 ml etylacetátu sa pri teplote -78 °C 2 hodiny nechá prebublávať ozón. Roztokom sa potom nechá prebublávať plynný dusík a potom sa pridá 500 mg trifenylfosfínu. Roztok sa zahreje na teplotu miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa nechá prejsť vopred pripravenou kolónou oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut, pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom a dietyléterom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za poskytnutia 127 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako biele kryštáliky.

TLC (dietylétercyklohexán 1:1), Rf 0,58.

Medziprodukt 25

Kyselina 5-formyl-1 -metyl-1 H-pyrazol-3-karboxylová

Za stáleho miešania sa pod refluxom 24 hodín zahrieva roztok 1,02 g medziproduktu 24 v 10 ml 1,4-dioxánu a 10 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Reakčná zmes sa ochladí a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku výslednej zlúčeniny ako 0,85 g svetložltej tuhej látky.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf 0,19.

Medziprodukt 26

Rel-(3R,3a/?,6aS)-5-(6-izopropyl-4-metánsylfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)-2-metyl-2H-pyrazol-3-karbaldehyd

Do miešaného roztoku 783 mg medziproduktu 10 v 60 ml acetonitrilu sa pridá 645 mg medziproduktu 25 a 1,22 g hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3etylkarbodiimidu. Reakčná zmes sa cez noc mieša. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi díchlórmetán a nasýtený roztok hydrogenuhličtanu sodného. Organický podiel sa oddelí a nechá sa prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyl-41 éterom a etylacetátom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za poskytnutia 315 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

TLC (dichlórmetán:acetonitril 9:1) Rf 0,24.

Medziprodukt 27

Roztokom 124 mg medziproduktu 23 v 15 ml etylacetátu sa pri teplote -78 °C 3 hodiny prebublával ozón. Roztokom sa prebublával plynný dusík, a potom sa pridá 500 mg trifenylfosfínu. Roztok sa zahreje na teplotu miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Produkt sa nechá prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom a dietyléterom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za poskytnutia 62 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako biele kryštály.

TLC (dietylétercyklohexán 1:1) Rf 0,70.

Medziprodukt 28

Kyselina 5-formyl-2-metyl-2H-pyrazol-3-karboxylová

Za stáleho miešania sa pod refluxom cez noc zahrieva roztok 1,0 g medziproduktu 27 v 10 ml 1,4-dioxánu a 10 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Reakčná zmes sa ochladí a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku výslednej zlúčeniny ako 0,8 g svetložltej tuhej látky.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf 0,54.

Medziprodukt 29

Rel-(3/?,3aR,6aS)-5-(6-izopropyl-4-metánsylfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]py rol-1 -karbonyl)-1 -metyl-1 /-/-pyrazol-3-karbaldehyd

Do miešaného roztoku 812 mg medziproduktu 10 v 45 ml acetonitrilu sa pridá

660 mg medziproduktu 28 a 1,26 g hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-42karbodiimidu. Reakčná zmes sa 22 hodín mieša. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi dichlórmetán a nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podiel sa oddelí a nechá sa prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom a etylacetátom. Podiely obsahujúc e požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za poskytnutia 955 mg v názve uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

TLC (dichlórmetán:acetonitril 9:1) Rf 0,22.

Medziprodukt 30

Kyselina 6-brómmetylnikotínová

Za stáleho miešania sa 24 hodín zahrieva na teplotu 80 °C zmes 3,8 g metyl2-(brómmetyl)pyridín-5-karboxylátu a 16,5 ml bis(tri-n-butylcín)oxidu v 80 ml toluénu. Reakčná zmes sa ochladí a dvakrát sa extrahuje 50 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Zlúčené vodné extrakty sa premyjú 40 ml toluénu a zahustia sa vo vákuu za vzniku 3,0 g výslednej zlúčeniny ako žltohnedej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 216,218, MH⁺ (vypočítané) 216,218.

Medziprodukt 31

Rel-(3R,3aR,6aS)-4-(6-chlórmetylpyridín-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsylfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-ón

Do miešanej suspenzie 177 mg medziproduktu 30 a 236 mg hydrochloridu 1(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu v 5 ml acetonitrilu sa pridá 100 mg medziproduktu 10. Reakčná zmes sa 2 hodiny mieša. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 40 ml dichlórmetánu a 40 ml 2M roztoku uhličitanu sodného. Organický podiel sa oddelí, premyje sa 20 ml roztoku uhličitanu sodného a 20 ml vody, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa za vzniku oleja. Tento produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého pri elúcii zmesou dichlórmetánu a acetonitrilu v pomere 7:3 za vzniku 76 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej peny.

TLC (dichlórmetán:acetonitril 7:3) Rf 0,45.

-43Medziprodukt 32

Metylester kyseliny 5-brómmetylpyrazín-2-karboxylovej

Pod refluxom sa zahrieva a mieša zmes 5,3 g metyl-(5-metyl)pyrazín-2karboxylátu, 6,3 g N-brómsukcínimidu a 0,33 g d i benzoylperoxid u v 125 ml tetrachlórmetánu a zmes sa 0,5 hodiny ožaruje 200 W žiarovkou swolfrámovým vláknom. Reakčná zmes sa ochladí, premyje sa dvakrát 20 ml 10% roztoku siričitanu sodného, 20 ml vody a 15 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa za vzniku oleja. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého pri elúcii cyklohexánom a etylacetátom v pomere 3:2 za poskytnutia 3,8 g v nadpise uvedenej zlúčeniny hnedej tuhej látky. TLC (cyklohexán:etylacetát 3:2) Rf 0,28.

Medziprodukt 33

Hydrochlorid kyseliny 5-brómmetylpyrazín-2-karboxylovej

Zmes 3,48 g medziproduktu 32 a 6,00 g hydroxidu sodného v 40 ml vody sa 2 hodiny mieša, okyslí sa pridaním 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a štyrikrát sa extrahuje 30 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú 15 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 2,58 g výslednej zlúčeniny ako svetložltej tuhej látky. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 217,219, MH⁺ (vypočítané) 217,219.

Medziprodukt 34

Rel-(3/?,3a/?,6aS)-4-(5-chlórmetylpyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsylfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-ón

Do miešaného roztoku 800 mg medziproduktu 10 a 934 mg hydrochloridu 1(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu v 10 ml acetonitrilu sa pridá 1,23 g medziproduktu 33. Reakčná zmes sa 18 hodín mieša. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 20 ml dichlórmetánu a 25 ml 2M roztoku uhličitanu sodného. Vodný podiel sa oddelí a dvakrát sa extrahuje 20 ml dichlórmetánu.

-44Zlúčené organické podiely sa premyjú 15 ml vody a 15 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia za vzniku oleja. Tento produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého pri elúcii zmesou dichlórmetánu a acetonitrilu v pomere 7:3 za vzniku 562 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej peny.

TLC (dichlórmetán:acetonitril 7:3) Rf 0,42.

Medziprodukt 35

Kyselina 2R-(2,2,2-trifluóracetylamino)jantárová

Pri teplote 110 °C sa počas 48 hodín sušenia pripraví 37,9 g práškového Dasparagínu, ktorý sa následne uvedie do suspenzie v 144 ml metanolu a suspenzia sa suší 5 hodín na site s veľkosťou ôk 3Á. Do miešanej suspenzie sa v atmosfére dusíka pridá 40,2 ml trietylamínu a následne 36 ml metyltrifluóracetátu. Vytvorená zmes sa nechá 48 hodín miešať. Do reakčnej zmesi sa pridá 145 ml bezvodého metanolu a potom 115 g H+ formy živice Dowex 50 sušenej 24 hodín pri teplote 56 °C. Vytvorená zmes sa 10 minút mieša, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku surovej tuhej látky obsahujúcej výslednú zlúčeninu. Tento surový produkt sa zlúči so surovým produktom pripraveným podobným postupom a kryštalizuje sa z horúcej vody za vzniku výslednej zlúčeniny ako 106 g bielej kryštalickej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 245, MNH₄ ⁺ (vypočítané) 246.

Medziprodukt 36

Metylester kyseliny 2R-(2,2,2-triflóracetylamino)jantárovej

Roztok 95,14 g medziproduktu 35 v 1150 ml metanolu sa suší nad 3Ä molekulárnymi sitami s veľkosťou ôk 3Ä a následne sa ochladí za stáleho miešania na -70 °C. Pri zachovaní reakčnej teploty pod -60 °C sa pomaly pridáva 162 ml acetylchloridu. Reakčná zmes sa nechá zahriať na teplotu -20 °C a nechá sa 48 hodín pri tejto teplote. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku číreho a bezfarebného oleja obsahujúceho výslednú zlúčeninu. Tento produkt sa rozotrie

-45s dietyléterom a vytvorená biela tuhá látka sa nechá kryštalizovať z vriacej vody za vzniku výslednej zlúčeniny ako 42 g bielej kryštalickej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ (nájdené 243, MH⁺ (vypočítané) 243.

Medziprodukt 37

Metylester kyseliny 3-kyano-2ft-(2,2,2-trifluóracetylamino)propiónovej

Do miešanej suspenzie 3,0 g medziproduktu 36 v 20 ml dichlórmetánu sa pridá 4,92 ml pyridínu a 4,92 g p-toluénsulfonylchloridu. pridá sa ďalších 15 ml dichlórmetánu a hnedý roztok sa nechá 48 hodín miešať pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi 25 ml dichlórmetánu, premyje sa 74 ml 1M vodného roztoku kyseliny trihydrogenfosforečnej, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 3,57 g hnedej tuhej látky obsahujúcej výslednú zlúčeninu. Surová zmes sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou etylacetátu a cyklohexánu v pomere najskôr 1:3 a potom 1:2,5. Po odparení vo vákuu vznikne 1,62 g výslednej zlúčeniny ako bielej kryštalickej tuhej látky.

TLC (1:1 etylacetát:cyklohexán) Rf 0,5.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 242, MNH/ (vypočítané) 242.

Medziprodukt 38

2,2,2-Trifluór-/\/-(2-oxo-pyrolidín-3R-yl)acetamid

Roztok 200 mg medziproduktu 37 v 10 ml etanolu sa v atmosfére vodíka mieša 3 hodiny za prítomnosti 1,00 g 5% rodia na oxide hlinitom. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku surovej gumy obsahujúcej výslednú zlúčeninu. Reakčná zmes sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii acetonitrilom. Elučné činidlo sa odparí vo vákuu za vzniku 40 mg výslednej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

TLC (acetonitril) Rf 0,63.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 214, MNH₄ ⁺ (vypočítané) 214.

-46Medziprodukt 39

Benzylester kyseliny 2-oxo-3R-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1-karboxylovej

Do miešaného roztoku 1,04 g medziproduktu 38 v tetrahydrofuráne ochladenom na teplotu -70 °C sa pridá 3,31 ml 1,6M roztoku n-butyllítia v zmesi hexánov. Po 5 minútach sa pridá 833 μΙ benzylchlórmravčanu a reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Po 2,5 hodine sa reakčná zmes zriedi 100 ml etylacetátu a dvakrát sa premyje 150 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Zlúčené extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, prefiltrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku surovej oranžovobielej tuhej látky, ktorá sa čistí rozotrením s dietyléterom za vzniku 1,25 g výslednej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 348, MNH₄ ⁺ (vypočítané) 348.

Chirálna HPLC (Chiracel AD, systém elučných činidiel: etanokheptán 15:85, rýchlosť prietoku = 1 ml/min).

Doba retencie enantioméru R = 10,08 min (71,8 %).

Doba retencie enantioméru S = 12,50 min (28,2 %).

Medziprodukt 40

Benzylester kyseliny 2-etoxy-3/?-(2,2_l2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1 -karboxylovej

V 1 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa rozpustí 100 mg medziproduktu 39 v 1 ml bezvodého tetrahydrofuránu, ochladí sa na teplotu -20 °C a pridá sa 0,15 ml 2M roztoku borhydridu lítneho. Po 0,5 hodine sa pridá 1 ml etanolu a následne sa pridá 33 μΙ koncentrovanej kyseliny sírovej a vytvorený miešaný roztok sa nechá 3,5 hodiny pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa privedie na pH 8 až 9 pridaním nasýteného vodného hydrogénuhličitanu sodného a organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Vytvorený zvyšok sa rozdelí medzi 20 ml etylacetátu a 10 ml vody. Vodný podiel sa extrahuje 10 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku výslednej zlúčeniny ako 101 mg číreho oleja, ktorý sa bez ďalšieho čistenia použije v nasledujúcej syntéze.

Hmotnostné spektrum MNH₄ ⁺ (nájdené) 378, MNH₄ ⁺ (vypočítané )378.

-47Medziprodukt 40 (alternatívny spôsob prípravy)

Benzylester kyseliny 2-etoxy-3R-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1 -karboxylovej

Roztok 214,8 g medziproduktu 39 v 1200 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa mieša a ochladí na teplotu -30 °C. Pridáva sa 336 ml 2M roztoku borhydridu lítneho (po úvodnom vzostupe teploty na -12 °C sa reakčná teplota počas adície udržuje pod -17 °C). Reakčná zmes sa 90 minút mieša pri teplote -20 °C, pridá sa 760 ml etanolu pri udržaní teploty pod -19 °C. Do reakčnej zmesi sa pomaly pridáva ochladená zmes 75 ml koncentrovanej kyseliny sírovej v 215 ml etanolu pri udržaní vnútornej teploty pod -18 °C. Chladiaci kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša 90 minút, pričom dôjde k zvýšeniu teploty na +15 °C. Opatrne sa počas 35 minút pridá 1600 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a následne sa prchavý podiel odstráni vo vákuu. Vytvorený vodný podiel sa extrahuje raz 1000 ml a dvakrát 800 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú 800 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa cez noc nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za poskytnutia 211,6 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako oranžového oleja.

TLC (4:1, CH₂CI₂:Et₂O) Rf 0,64 a 0,43.

Medziprodukt 41

Benzylester kyseliny (2S,3R)-2-(rel-1 S-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1-karboxylovej

Zmes 90 mg medziproduktu 40, 0,22 g (1-etoxy-3-metyl-but-1-enyloxy)triizopropylsilánu (ktorého príprava je opísaná v medzinárodnej patentovej prihláške č. WO 97/136903 ako príprava medziproduktu 95) a 1,1 ml dichlórmetánu sa ochladí na teplotu 5 °C a pridá sa 0,15 ml bór-trifluoriddieterátu. Po 55 minútach sa reakcia ukončí pridaním 15 ml 2M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a zriedi sa 10 ml dichlórmetánu. Vodný podiel sa oddelí a organický podiel sa premyje 10 ml nasýteného vodného roztoku chloridu sodného. Organický extrakt sa suší nad

-48síranom horečnatým, prefiltruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku výslednej zlúčeniny ako 106 mg bezfarebného oleja.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 445, MH⁺ (vypočítané) 445.

Medziprodukt 41 (alternatívny spôsob prípravy)

Benzylester kyseliny (2S, 3R)-2-(rel-1 S-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1-karboxylovej

Zmes 97,9 g medziproduktu 40, 233 g (Z)-(1-etoxy-3-metylbut-1-enyloxytriizopropylsilánu) a 600 ml dichlórmetánu sa v atmosfére dusíka ochladí na teplotu 5 °C a počas 15 minút sa pridá 200 ml bórtrifluoriddietyléterátu. Po ďalších 15 minútach sa pridáva 750 ml 2M roztoku uhličitanu sodného tak, aby teplota zmesi nestúpla nad 20 °C. Reakčná zmes sa prefiltruje cez Hyflo a tuhá látka sa dvakrát premyje 200 ml dichlórmetánu. Premývacie podiely sa pridajú do zmesi rozdelenej do dvoch fáz. Vodný podiel sa oddelí a extrahuje sa dvakrát 400 dichlórmetánu. Zlúčené extrakty sa dvakrát premyjú 250 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za poskytnutia 154 g v nadpise uvedenej zlúčeniny.

TLC SiO₂ (1:3, etylacetát:cyklohexán) Rf 0,49 (β-anomér), 0,42 (a-anomér). Hmotnostné spektrum (nájdené) MH⁺ = 445, (vypočítané) MH⁺ = 445.

Medziprodukt 42

Benzylester kyseliny (2S,3R)-3-amino-2-(1 -etoxykarbonyl-2-metylpropyl)pyrolidín-1 karboxylovej

Do teploty refluxu sa 2,25 hodín zahrieva zmes 97 mg medziproduktu 41, 300 mg uhličitanu draselného, 2 ml etanolu a 2 ml vody. Etanol a voda sa odparia vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 10 ml etylacetátu a 10 ml vody. Vodný extrakt sa privedie na pH 9 až 10 pridaním 2M vodného roztoku hydroxidu sodného a trikrát sa extrahuje 20 ml dietyléteru. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, prefiltrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku výslednej zlúčeniny ako 56 mg číreho oleja.

-49Medziprodukt 42 (alternatívny spôsob prípravy)

Benzylester kyseliny (2S,3/?)-3-amino-2-(1-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)pyrolidín-1karboxylovej

Do teploty refluxu sa 5 hodín zahrieva zmes 153 mg medziproduktu 41,183,3 g uhličitanu draselného, 1000 ml etanolu a 1000 ml vody. Organický podiel sa potom oddelí a zahustí vo vákuu. Zvyšok, vodný podiel a 200 ml nasýteného roztoku chloridu sodného sa dvakrát extrahuje 500 ml éteru a následne raz 250 ml éteru, a zlúčené extrakty sa trikrát extrahujú 500 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Zlúčené kyslé extrakty sa privedú na pH 8 pridaním 150 g tuhého hydrogenuhličitanu sodného a extrahujú sa raz 600 ml a následne trikrát 300 ml dichlórmetánu. Zlúčené dichlórmetánové extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za vzniku 87,9 výslednej zlúčeniny.

TLC SiO₂ (100:8:1 dichlórmetán:etanol:amoniak) Rf 0,55.

Hmotnostné spektrum (nájdené) MH⁺ = 349, (vypočítané) MH⁺ = 349.

Medziprodukt 43

Benzylester kyseliny (3a/?,6S,6aS)-6-izopropyl-5-oxohexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1karboxylovej

V 1 ml tetrahydrofuránu sa rozpustí 50 mg medziproduktu 42 v 12 ml tetrahydrofuránu a 1 ml tetrametyletyléndiamínu a potom sa pridá 0,4 ml 1M roztoku ferc-butylmagnéziumchloridu v tetrahydrofuráne. Po 3 hodinách miešania sa reakcia ukončí pridaním 1 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho. Vodný podiel sa oddelí a zmes sa extrahuje 4 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa odparia vo vákuu. Zvyšok sa rozdelí medzi 10 ml dichlórmetánu a 10 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Vodný podiel sa oddelí a trikrát sa extrahuje 5 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, zvyšok sa prefiltruje a zahustí vo vákuu za vzniku surovej bielej tuhej látky obsahujúcej výslednú zlúčeninu. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou etylacetátu a cyklohexánu v pomere 1:1 za vzniku 16 ml výslednej zlúčeniny ako 16 mg bielej tuhej látky.

-50TLC (2:1 etylacetát:cyklohexán) Rf 0,38.

Chiral HPLC (kolóna chiracel AD, systém elučných činidiel etanoľheptán 10:90, rýchlosť prietoku 1 ml/min).

Doba retencie RRS laktámu = 9,92 minút (73,6 %).

Doba retencie SSR laktámu = 13,12 minút (26,4 %).

Medziprodukt 44

Benzylester kyseliny (3aR,6S,6aS)-6-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxohexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-karboxylovej

Do 0,46 g medziproduktu 43 v 30 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pri teplote -70 °C v atmosfére dusíka pridá 2,0 ml 1M hexametyldisilazidu lítneho v tetrahydrofuráne. Roztok sa 15 minút zahrieva na teplotu 0 °C a potom sa znova ochladí na teplotu -70 °C a pridá sa 0,30 ml metánsulfonylchloridu. Po 1,5 hodine sa pridá 30 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a reakčná zmes sa trikrát extrahuje 5 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa dvakrát premyjú 25 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého pri elúcii zmesou etylacetátu a cyklohexánu v pomere 1:1 za vzniku 0,34 g výslednej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

TLC SiO₂ (1:1 etylacetát:cyklohexán) Rf 0,4.

Hmotnostné spektrum MNH/ (nájdené) 398, MNH/ (vypočítané) 398.

Medziprodukt 45 (3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-ón

V atmosfére vodíka sa 3 hodiny mieša zmes 0,31 g medziproduktu 44, 0,24 g 10% hydroxidu paládia na aktívnom uhlí, 25 ml 1,4-dioxánu a 25 ml etylacetátu. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez Hyflo a filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku 0,20 g výslednej zlúčeniny ako svetložltej tuhej látky.

TLC SiO₂ (9:1 chloroform:metanol) Rf = 0,36.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 247, MH⁺ (vypočítané) = 247.

-51 Medziprodukt 46 (3S,3aS,6a/?)-4-(5-chlóormetylpyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-ón

Do miešaného roztoku 900 mg medziproduktu 45 a 1,25 g hydrochloridu 1(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu v 25 ml acetonitrilu sa pridá 1,16 g medziproduktu 1. Reakčná zmes sa 1 hodinu mieša a následne sa pridá 25 ml acetonitrilu. Reakčná zmes sa 19 hodín mieša, acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 30 ml dichlórmetánu a 30 ml 2M roztoku uhličitanu sodného. Vodný podiel sa oddelí a dvakrát sa extrahuje 30 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia za vzniku hnedej peny. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii 20% roztokom acetonitrilu v dichlórmetáne. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa odparia do sucha vo vákuu za vzniku 1,095 g v nadpise uvedenej zlúčeniny (1,095 g) ako bielej peny.

TLC (20% acetonitril v dichlórmetáne) Rf = 0,52.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 401,403, MH⁺ (vypočítané) 401,403.

Medziprodukt 47

Kyselina 5-[(ŕerc-butoxykarbonylcyklopropylamino)metyl]pyrazín-2-karboxylová

Do miešanej suspenzie 60 g 2-metylpyrazín-5-karboxylovej kyseliny v 300 ml kyseliny octovej sa pridá bróm. Reakčná zmes sa 1 hodinu zahrieva na teplotu 80 °C. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 250 ml etylacetátu a 250 ml 2M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Vodný podiel sa päťkrát extrahuje 250 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa premyjú 100 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 100 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým, prefiltrujú sa a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu za vzniku hnedej tuhej látky. Tuhý produkt sa mieša v 900 ml acetonitrilu a pridá sa 60 ml trietylamínu a 30 ml cyklopropylamínu. Po 20 hodinách miešania pri teplote miestnosti sa pridá 30 ml cyklopropylamínu a reakčná zmes sa 15 minút mieša. Prchavý podiel sa odparí vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 200 ml etylacetátu a

-52300 ml 2M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Organický podiel sa štyrikrát extrahuje 200 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej, zlúčené vodné extrakty sa premyjú 50 ml etylacetátu, ochladia sa v ľadovom kúpeli a privedú sa na bázické pH pridaním 120 ml 10M vodného roztoku hydroxidu sodného. Roztok sa trikrát premyje 200 ml etylacetátu a raz 200 ml dietyléteru. Prchavý organický podiel sa odstráni vo vákuu za vzniku hnedého vodného roztoku. Do roztoku sa pridá 500 ml

1,4-dioxánu a 71 g di-terc-butyldikarbonátu. Reakčná zmes sa 20 hodín mieša pri teplote miestnosti. Pridá sa 10 g di-terc-butyldikarbonátu a reakčná zmes sa ďalších 24 hodín mieša. Do miešanej zmesi sa pridá 85 g kyseliny citrónovej a zmes sa extrahuje dvakrát 200 ml, trikrát 150 ml a dvakrát 100 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku hnedého oleja, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii dichlórmetánu, metanolu a kyseliny octovej v pomere 100:8:1. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa odparia do sucha vo vákuu za vzniku žltohnedej tuhej látky, ktorá sa energicky mieša v zmesi cykiohexánu a dietyléteru v pomere 5:1 do konečného rozdelenia. Tuhá látka sa odstráni filtráciou a suší sa vo vákuu za poskytnutia 16,65 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako oranžovohnedej tuhej látky.

TLC (zmes dichlórmetánu, metanolu a kyseliny octovej 100:8:1) Rf = 0,31. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 294, MH⁺ (vypočítané) = 294.

Medziprodukt 48 terc-Butylester kyseliny cyklopropyl-[5-(6S-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3a/?,6aS)pyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)pyrazín-2-ylmetyl]karbamovej

Pri teplote miestnosti sa mieša zmes 11,36 g medziproduktu 45, 13,53 g medziproduktu 47 a 19,3 g O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluróniumhexafluórfosfátu v 260 ml acetonitrilu a pridá sa 16 ml Ν,Ν-diizopropyletylamínu. Po 2 hodinách miešania sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu, zvyšok sa zriedi 250 ml dichlórmetánu a premyje sa 250 ml 1M roztoku uhličitanu sodného. Vodný podiel sa trikrát extrahuje 150 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa premyjú 50 ml 1M roztoku uhličitanu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým, prefiltrujú sa a

-53rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu za vzniku žltohnedej tuhej látky. Tuhá látka sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii 50% roztokom etylacetátu v cyklohexáne. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa odparia do sucha vo vákuu za poskytnutia 21,55 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej peny.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 522, MH⁺ (vypočítané) 522.

[cc]d²⁰ = +69,5 (c = 0,8, metylkyanid).

Medziprodukt 49

Etylester kyseliny 2-pyrolidín-1-ylmetyl-oxazol-4-karboxylovej

Do miešaného roztoku 43,9 g etylesteru kyseliny 2-(brómmetyl)oxazol-4karboxylovej v 300 ml acetonitrilu sa pridá 15,7 ml pyrolidínu. Po 10 minútach miešania sa pridá 7,8 ml pyrolidínu. Po ďalších 30 minútach sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu za vzniku oranžového oleja. Olej sa rozdelí medzi 400 ml 1M roztoku uhličitanu sodného a 500 ml dichlórmetánu a podiely sa oddelia. Organický podiel sa premyje 100 ml vody, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 24,0 g výslednej zlúčeniny ako oranžového oleja. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 225, MH⁺ (vypočítané) = 225.

Medziprodukt 50

Metylester 2-pyrolidín-1-ylmetyloxazol-4-karboxylovej kyseliny

Do suspenzie 25 mg uhličitanu draselného a 27,5 mg metylesteru kyseliny 2(brómmetyl)oxazol-4-karboxylovej v 2,5 ml acetonitrilu sa pridá 14 mg pyrolidínu. Reakčná zmes sa 6 hodín mieša a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozdelí medzi 15 ml etylacetátu a 5 ml vody. Organický podiel sa suší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za poskytnutia 23 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako svetlohnedého oleja.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 211, MH⁺ (vypočítané) = 211.

-54Spôsobom prípravy medziproduktu 2 sa pripravia medziprodukty 51 až 55 použitím metylesteru kyseliny 2-(brómmetyl)oxazol-4-karboxylovej ako východiskovej zlúčeniny.

Medziprodukt 51

Hydrochlorid metylesteru kyseliny 2-[(cyklopropylmetylamino)metyl]oxazol-4karboxylovej

Vyrobené ako hydrochlorid, v podobe svetlohnedej gumy.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 211, MH⁺ (vypočítané) = 211.

Medziprodukt 52

Metylester kyseliny 2-[(dicyklohexylamino)metyl]oxazol-4-karboxylovej

Svetložltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 321, MH⁺ (vypočítané) = 321.

Medziprodukt 53

Metylester kyseliny 2-piperidín-1-ylmetyloxazol-4-karboxylovej

Svetlohnedá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 225, MH⁺ (vypočítané) = 225.

Medziprodukt 54

Metylester kyseliny 2-(4-fenyl-piperazín-1-ylmetyl)oxazol-4-karboxylovej

Svetložltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 302, MH⁺ (vypočítané) = 302.

Medziprodukt 55

Metylester kyseliny 2-rdibutylaminometyloxazol-4-karboxylovej

-55Viskózny svetložltý olej.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 269, MH⁺ (vypočítané) = 269.

Medziprodukt 56

Kyselina 2-pyrolidín-1-ylmetyloxazol-4-karboxylová / draselná soľ kyseliny 2pyrolidín-1-ylmetyloxazol-4-karboxylovej

Príprava 1

Do roztoku 24,0 g medziproduktu 49 v 150 ml etanolu a 150 ml vody sa pridá 14,8 g uhličitanu draselného. Reakčná zmes sa za stáleho miešania 4 hodiny zahrieva pod refluxom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku oranžovohnedého zvyšku, ktorý sa trikrát azeotropicky destiluje s toluénom a potom sa suší vo vákuu. Tuhý zvyšok sa energicky mieša so 100 mi éteru a po filtrácii a sušení do sucha vo vákuu vznikne zmes výslednej zlúčeniny a uhličitanu draselného ako 34,5 g hnedej tuhej látky. Výsledný materiál sa použije bez ďalšieho čistenia.

Príprava 2

Po 5 hodinách miešania roztoku 22 mg medziproduktu 50 v 1,5 ml dioxánu a 0,3 ml 1M roztoku hydroxidu sodného sa roztok neutralizuje na pH približne 7 pridávaním po kvapkách 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a tuhý zvyšok sa ďalej suší vo vákuu za vzniku zmesi výslednej zlúčeniny a chloridu sodného ako 40 mg svetložltej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 197, MH⁺ (vypočítané) = 197.

Spôsobom prípravy medziproduktu 56 (príprava 2) sa pripravia medziprodukty 57 až 59 použitím medziproduktov 53 až 56 ako východiskových zlúčenín.

Medziprodukt 57

Kyselina 2-piperidín-1 -ylmetyloxazol-4-karboxylová

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 211, MH⁺ (vypočítané) = 211.

-56Medziprodukt 58

Kyselina 2-(4-fenylpiperazín-1 -ylmetyl)oxazol-4-karboxylová

Biela tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 288, MH⁺ (vypočítané) = 288.

Medziprodukt 59

Kyselina 2-dibutylaminometyloxazol-4-karboxylová

Svetložltá polotuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 255, MH⁺ (vypočítané) = 255.

Príklady

V nasledujúcom texte sa dichloridové soli označujú výrazom „(2:1)“ nasledujúcim po chemickom názve.

Príklad 1

Hyd roch lorid rel-(3R, 3a/?,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(5-pyrolid í n-1 -ylmetylfurán-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Zmes 80 mg medziproduktu 11 a 17 mg pyrolidínu v 6 ml dichlórmetánu sa 2 hodiny mieša. Po pridaní 69 mg triacetoxyborhydridu sodného sa zmes cez noc mieša. Reakčná zmes sa premyje 8% vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organický podiel sa nechá prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut (ktorá sa vopred eluuje dichlórmetánom, ktorého objem zodpovedá objemu kolóny), pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom, zmesou dietyléteru a etylacetátu v pomere 1:1, etylacetátom, acetonitrilom a metanolom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za vzniku gumy, na ktorú sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 80 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako žltej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 424, MH⁺ (vypočítané) = 424.

TLC (dichlórmetán.metanol 9:1) Rf = 0,27.

-57Príklady 2 až 4 sa pripravia spôsobom ako v príklade 1 za použitia medziproduktu 11 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 2

Hyd roch lorid rel-(3R, 3aR,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsu lfonyl-4-(5-morfol íη-4-ylmetylfurán-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 440, MH⁺ (vypočítané) = 440. TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf = 0,60.

Príklad 3

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-[5-(4-fenylpiperazín-1 ylmetyl)furán-2-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Červená tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 515, MH⁺ (vypočítané) = 515.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf = 0,65.

Príklad 4

Hydrochlorid rel-(3R,3afi,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-metylpiperazín1-ylmetyl)furán-2-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biela tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 453, MH⁺ (vypočítané) = 453. TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf = 0,16.

Príklad 5

Hydrochlorid rel-(3ŕ?,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-morfolín-4-ylmetyl)furán-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

-58Zmes 50 mg medziproduktu 12 a 13 mg morfolínu v 3,5 ml dichlórmetánu sa

1,5 hodiny mieša. Po pridaní 43 mg triacetoxyborhydrátu sodného sa zmes cez noc mieša. Reakčná zmes sa zriedi dichlórmetánom a extrahuje sa 2M roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Vodný extrakt sa privedie na bázické pH pridaním 8% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje sa dichlórmetánom. Dichlórmetánové extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného a sušia sa nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku tuhej látky, na ktorú sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 32 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako béžovej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 440, MH⁺ (vypočítané) = 440.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,68.

Príklady 6 až 10 sa pripravia spôsobom ako v príklade 5 za použitia medziproduktu 12 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 6

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-4-(2-dimetylaminometylfurán-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 398, MH⁺ (vypočítané) = 398. TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,70.

Príklad 7

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-piperidín-1-ylmetylfurán-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 438, MH⁺ (vypočítané) = 438. TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,68.

-59Príklad 8

Hydrochlorid rel-(3ŕ?,3af?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-pyrolidín-1-ylmetylfurán-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 424, MH⁺ (vypočítané) = 424.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,67.

Príklad 9

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-fenylpiperazín-1ylmetyl)furán-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 515, MH⁺ (vypočítané) = 515.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,86.

Príklad 10

Hyd roch lorid rel-(3R, 3aR,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsu lfonyl-4-[2-(4-metyl-piperazín1-ylmetyl)furán-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 453, MH⁺ (vypočítané) = 453.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,50.

Príklad 11

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-4-(5-dimetylaminometyltiofén-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Zmes 60 mg medziproduktu 13, 36 mg dimetylamóniumchloridu a 66 mg triacetoxyborhydrátu sodného v 6 ml dichlórmetánu sa cez noc mieša. Reakčná zmes sa zriedi dichlórmetánom a extrahuje sa 2M roztokom kyseliny chlorovo-60díkovej. Vodné extrakty sa premyjú dichlórmetánom a potom sa privedú na bázické pH pridaním 2M roztoku uhličitanu sodného a extrahujú sa dichlórmetánom. Dichlórmetánové extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku gumy, na ktorú sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka vdietyléteri za poskytnutia 15 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako žltej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 414, MH⁺ (vypočítané) = 414.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,44.

Príklad 12 sa pripraví spôsobom ako v príklade 11 použitím medziproduktu 13 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 12

Hyd roch lorid rel-(3R, 3a/?,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(5-piperid í n-1 -ylmetyltiofén-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 454, MH⁺ (vypočítané) = 454.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf - 0,52.

Príklad 13

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-morfolín-4-ylmetyl1/-/-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Zmes 80 mg medziproduktu 14, 28 mg paraformaldehydu a 40 mg morfolínu v 4 ml etanolu a 1,5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za stáleho miešania 18 hodín zahrieva pod refluxom. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a rozdelí sa medzi 25 ml 8% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 25 ml etylacetátu. Vodný podiel sa extrahuje 30 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu za vzniku gumy. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 200:8:1 za vzniku 21 mg bieleho prášku, na ktorý sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka vdietyléteri za

-61 poskytnutia 22 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bieleho prášku s teplotou topenia 184 až 188 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 439, MH⁺ (vypočítané) = 439.

Príklady 14 až 20 sa pripravia podľa spôsobu z príkladu 13 použitím medziproduktu 14 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 14

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-4-(5-dimetylaminometyl-1H-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 233 až 236 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 397, MH⁺ (vypočítané) = 397.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,45.

Príklad 15

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetyl1H-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 160 až 164 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 437, MH⁺ (vypočítané) = 437.

Príklad 16

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(5-pyrolidín-1 -ylmetyl1H-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 175 až 178 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 423, MH⁺ (vypočítané) = 423.

Príklad 17

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-[5-(4-fenylpiperazín-1 ylmetyl)-1H-pyrol-2-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

-62Béžový prášok s teplotou topenia 156 až 160 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 514, MH⁺ (vypočítané) = 514.

Príklad 18

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-metylpiperazín1-ylmetyl)-1H-pyrol-2-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Béžový prášok s teplotou topenia 177 až 181 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 452, MH⁺ (vypočítané) = 452.

Príklad 19

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-4-(5-dibutylaminometyl-1A7-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Svetložltý prášok s teplotou topenia 116 až 120 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 481, MH⁺ (vypočítané) = 481.

Príklad 20

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-metylaminometyl1/-/-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžový prášok s teplotou topenia 210 až 215 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 383, MH⁺ (vypočítané) = 383.

Príklad 21

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-piperidín-1ylmetyl-1/-/-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Zmes 40 mg medziproduktu 15, 15 mg paraformaldehydu a 23 mg piperidínu v 3 ml etanolu a 1,5 ml ľadovej kyseliny octovej sa 22 hodín za stáleho miešania zahrieva pod refluxom. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a rozdelí sa

-63medzi 30 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 20 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu za vzniku gumy. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 100:8:1 za vzniku 26 mg bielej tuhej látky, na ktorú sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 28 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bieleho prášku s teplotou topenia 149 až 153 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 451, MH⁺ (vypočítané) = 451.

Príklady 22 až 25 sa pripravia spôsobom z príkladu 21 použitím medziproduktu 15 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 22

Hydrochiorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-morfolín-4ylmetyl-1/-/-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Svetložltý prášok s teplotou topenia 150 až 154 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 453, MH⁺ (vypočítané) = 453.

Príklad 23

Hydrochiorid rel-(3S,3aS,6aR)-4-(5-dimetylaminometyl-1H-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 137 až 141 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 411, MH⁺ (vypočítané) = 411.

Príklad 24

Hydrochiorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-pyrolidín-1ylmetyl-1H-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltý prášok s teplotou topenia 135 až 139 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 437, MH⁺ (vypočítané) = 437.

-64Príklad 25

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-metyl-aminometyl-1H-pyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 216 až 218 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 397, MH⁺ (vypočítané) = 397.

Príklad 26

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-4-(4-dimetylaminometyl-1/7-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Zmes 80 mg medziproduktu 14, 25 mg paraformaldehydu, 38 mg dimetylamóniumchloridu a 200 mg aktivovaných molekulárnych sít s veľkosťou ôk 4 Ä v 100 ml etanolu sa 24 hodín za stáleho miešania zahrieva pod refluxom. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu miestnosti a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu za vzniku gumy. Produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na dvoch kolónach oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii prvej kolóny zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 80:8:1 prvej kolóny a zmesou v pomere 100:8:1 druhej kolóny. Oddelí sa 16 mg bieleho prášku, na ktorý sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 16 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bieleho prášku s teplotou topenia 160 až 165 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 397, MH⁺ (vypočítané) = 397.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,20.

Príklad 27

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(2-pyrolidín-1 -ylmetyltiazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Na miešaný roztok 387 mg medziproduktu 18 a 202 mg trietylamínu v 42 ml dichlórmetánu sa pôsobí 172 mg metánsulfonylchloridu. Po 1,5 hodine miešania sa odstráni 7 ml alikvotného podielu a do miešaného roztoku sa pridá 30 mg pyrolidínu v 2 ml dichlórmetánu. Roztok sa dva dni mieša. Za energického miešania sa pridá

-6512 mi 8% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodný podiel sa oddelí a extrahuje 15 ml dichlórmetánu. Organické podiely sa zlúčia a sušia nad síranom sodným. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku polotuhej látky, ktorá sa rozotrie v 10 ml dietyléteru za vzniku tuhej suspenzie. Do suspenzie sa pridá 10 ml cyklohexánu a rozpúšťadlo sa dekantuje. Vytvorená tuhá látka sa suší vo vákuu za vzniku bielej tuhej látky, na ktorú sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka vdietyléteri za vzniku 51 mg výslednej zlúčeniny ako béžového prášku s teplotou topenia 130 až 134 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 441, MH⁺ (vypočítané) = 441.

Výsledné zlúčeniny z príkladov 28 až 35 sa pripravia spôsobom z príkladu 27 použitím medziproduktu 18 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 28

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-morfolín-4-ylmetyltiazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Svetložltý prášok s teplotou topenia 138 až 143 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 457, MH⁺ (vypočítané) = 457.

Príklad 29

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-piperidín-1-ylmetyltiazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžový prášok s teplotou topenia 153 až 158 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 455, MH⁺ (vypočítané) = 455.

Príklad 30

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-metylpiperirazín1-ylmetyl)tiazol-4-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Biely prášok s teplotou topenia 153 až 158 °C.

-66Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 470, Mhľ (vypočítané) = 470.

Príklad 31

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-4-(2-cyklopropylaminometyltiazol-4-karbonyl)-3-izo propyl-1-metánsulfonyl-4-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Svetlošedý prášok s teplotou topenia 160 až 163 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 427, MH⁺ (vypočítané) = 427.

Príklad 32

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-4-{2-[(4-fluórbenzylamino)metyl]tiazol-4-karbonyl}-3 izopropyl-1-metánsulfonyl-4-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Svetložltý prášok s teplotou topenia 141 až 145 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 495, MH⁺ (vypočítané) = 495.

Príklad 33

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-fenylpiperirazín 1-ylmetyl)tiazol-4-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Béžový prášok s teplotou topenia 156 až 161 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 532, MH⁺ (vypočítané) = 532.

Príklad 34

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aR)-4-(2-dibutylaminometyltiazol-4-karbonyl)-3-izopropyl 1-metánsulfonyl-4-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Svetložltý prášok s teplotou topenia 81 až 86 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 499, MH⁺ (vypočítané) = 499.

-67Príklad 35

Hydrochlorid rel-(3/?,3aR,6aS)-3-izopropyl-4-{2-[(1-izopropyl-2-metylpropylamino)metyl]tiazol-4-karbonyl}-1-metánsulfonyl-4-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžový prášok s teplotou topenia 192 až 195 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 485, MH⁺ (vypočítané) = 485.

Príklad 36

Hydrochlorid rel-(3S,3aS,6aft)-4-(2-dimetylaminometyltiazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Do miešanej suspenzie 125 mg medziproduktu 19 v 10 ml dichlórmetánu sa pridá 127 mg oxalylchloridu a následne 1 kvapka dimetylformamidu. Reakčná zmes sa 1 hodinu mieša a potom sa zahustí vo vákuu. Zvyšok sa uvedie do suspenzie v 15 ml dichlórmetánu a na suspenziu sa za stáleho miešania pôsobí 43 mg medziproduktu 10 a 175 mg hydrogenuhličitanu sodného. Po 16 hodinách miešania reakčnej zmesi sa pridá 12 ml 8% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodný podiel sa oddelí a extrahuje 15 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom sodným a odparia za vzniku hnedej gumy, ktorá sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 160:8:1 za vzniku hnedej gumy. Na produkt sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v éteri za poskytnutia 23 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako béžovej tuhej látky s teplotou topenia 122 až 127 °C. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 415, MH⁺ (vypočítané) = 415.

Príklad 37

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-morfolín-4-ylmetylizoxazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Zmes 50 mg medziproduktu 21 a 13 mg morfolínu v 5 ml dichlórmetánu sa

1,5 hodiny mieša. Po pridaní 43 mg triacetoxyborhydrátu sodného sa zmes 2,5

-68hodiny mieša. Reakčná zmes sa premyje 8% vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organický podiel sa nechá prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut (ktorá sa vopred eluuje dichlórmetánom, ktorého objem zodpovedá objemu kolóny), pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom, etylacetátom, acetonitrilom a metanolom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za vzniku peny, na ktorú sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 39 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 441, MH⁺ (vypočítané) = 441.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf = 0,65.

Výsledné zlúčeniny z príkladov 38 až 44 sa pripravia spôsobom z príkladu 37 použitím medziproduktu 21 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 38

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-4-(5-dimetylaminometylizoxazol-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biela tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 399, MH⁺ (vypočítané) = 399.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf = 0,58.

Príklad 39

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-pyrolidín-1-ylmetylizoxazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 425, MH⁺ (vypočítané) = 425.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf = 0,55.

Príklad 40

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetylizoxazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

-69Biela tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 439, MH⁺ (vypočítané) = 439.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,52.

Príklad 41

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-metyl-piperazín ylmetyl)izoxazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biela tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 454, MH⁺ (vypočítané) = 454.

TLC (dichlórmetán:metanol 9:1) Rf = 0,13.

Príklad 42

Hydrochlorid rel-(3ft,3a/?,6aS)-4-{5-[(4-fluór-benzylamino)metyl]izoxazol-3-karbo nyl}-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 479, MH⁺ (vypočítané) = 479.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,59.

Príklad 43

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-fenylpiperazín-1 ylmetyl)izoxazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 516, MH⁺ (vypočítané) = 516.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,62.

Príklad 45

Hydrochlorid rel-(3/?,3aR,6aS)-4-(5-dimetylaminometyl-1-metyl-1/-/-pyrazol-3-karbo nyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

-70Zmes 50 mg medziproduktu 26 a 32 mg dimetylamómiumchloridu v 5 ml dichlórmetánu sa 2 hodiny mieša. Po pridaní 55 mg triacetoxyborhydrátu sodného sa zmes 3 hodiny mieša. Reakčná zmes sa premyje 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Organický podiel sa nechá prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut (ktorá sa vopred eluuje dichlórmetánom, ktorého objem zodpovedá objemu kolóny), pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom, etylacetátom, acetonitrilom a metanolom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za vzniku svetlohnedého oleja, na ktorý sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka vdietyléteri za poskytnutia 28 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 412, MH⁺ (vypočítané) = 412.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,68.

Výsledné zlúčeniny z príkladov 46 až 49 sa pripravia spôsobom z príkladu 45 použitím medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 46

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(1 -metyl-5-pyrolidín-1 ylmetyl-1H-pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 438, MH⁺ (vypočítané) = 438.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,65.

Príklad 47

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-morfolín-4ylmetyl-1H-pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 454, MH⁺ (vypočítané) = 454. TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,69.

-71 Príklad 48

Hydrochlorid rel-(3F?,3aft,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-piperidín-1ylmetyl-1H-pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 452, MH⁺ (vypočítané) = 452.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,67.

Príklad 49

Hydrochlorid rel-(3ft,3aft,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[1-metyl-5-(4-metylpiperidín-1-ylmetyl)-1H-pyrazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 466, MH⁺ (vypočítané) = 466.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,78.

Príklad 50

Hydrochlorid rel-(3/?,3aft,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-metyl-5-(4-fenylpiperazín-1-ylmetyl)-2H-pyrazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Zmes 50 mg medziproduktu 29 a 28 mg fenylpiperazínu v 5 ml dichlórmetánu sa 2 hodiny mieša. Po pridaní 50 mg triacetoxyborhydrátu sodného sa zmes cez noc mieša. Reakčná zmes sa premyje 8% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organický podiel sa nechá prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut (ktorá sa vopred eluuje dichlórmetánom, ktorého objem zodpovedá objemu kolóny), pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom, etylacetátom, acetonitrilom a metanolom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za vzniku gumy, na ktorú sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 16 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako žltej tuhej látky. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 529, MH⁺ (vypočítané) = 529.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,77.

-72Výsledné zlúčeniny z príkladov 51 až 55 sa pripravia spôsobom z príkladu 50 použitím medziproduktu 29 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 51

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-4-(5-dimetylaminometyl-2-metyl-2H-pyrazol-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 412, MH⁺ (vypočítané) = 412.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,66.

Príklad 52

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(2-metyl-5-pyrolidín-1 ylmetyl-2/-/-pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 438, MH⁺ (vypočítané) = 438.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,63.

Príklad 53

Hydrochlorid rel-(3F?,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-metyl-5-morfolín-4ylmetyl-2H-pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 454, MH⁺ (vypočítané) = 454.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,65.

Príklad 54

Hydrochlorid rel-(3/?,3af?,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(2-metyl-5-piperidín-1 ylmetyl-2H-pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

-73Hmotnostné spektrum Mhľ (nájdené) = 452, MH⁺ (vypočítané) = 452.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,65.

Príklad 55

Hydrochlorid rel-(3ŕ?,3aŕ?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-metyl-5-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)-2H-pyrazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 467, MH⁺ (vypočítané) = 467.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak 100:8:1) Rf = 0,29.

Príklad 56

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-4-{6-[(dicyklohexylamino)metyl]pyridín-3-karbonyl}3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Zmes 90 mg medziproduktu 31, 104,6 μΙ dicyklohexylamínu,79 mg jodidu sodného a 169 mg uhličitanu draselného v 2 ml acetonitrilu sa 5 dní mieša. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozdelí medzi 2 ml 2M roztoku uhličitanu sodného a 3 ml dichlórmetánu. Podiely sa oddelia. Organický podiel sa nechá prejsť cez kolónu oxidu kremičitého Varian SPE Bond Elut (ktorá sa vopred eluuje dichlórmetánom, ktorého objem zodpovedá objemu kolóny), pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom, etylacetátom, acetonitriiom a metanolom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za vzniku bezfarebného oleja, na ktorý sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 60 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako béžovej tuhej látky. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 545, MH⁺ (vypočítané) = 545.

TLC (etylacetát) Rf = 0,47.

Výsledné zlúčeniny z príkladov 57 až 64 sa pripravia spôsobom z príkladu 56 použitím medziproduktu 31 ako východiskovej zlúčeniny.

-74Príklad 57

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-4-(6-dibutylaminometylpyridín-3-karbonyl}-3-izopro pyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Hnedá sklovitá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 493, MH⁺ (vypočítané) = 493.

TLC (etylacetát) Rf = 0,49.

Príklad 58

Hydrochlorid rel-(3/?,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(6-morfolín-4-ylmetylpyridín-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Oranžová sklovitá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 451, MH⁺ (vypočítané) = 451.

TLC (etylacetát) Rf = 0,38.

Príklad 59

Hydrochlorid rel-(3ŕ?,3af?,6aS)-4-(6-cyklopropylaminometylpyridín-3-karbonyl}-3izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Svetlohnedá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 421, MH⁺ (vypočítané) = 421.

TLC (etylacetát) Rf = 0,36.

Príklad 60

Hydrochlorid rel-(3ft,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(6-piperidín-1-ylmetyl pyridín-3-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Zelená tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 449, MH⁺ (vypočítané) = 449. TLC (etylacetát) Rf = 0,36.

-75Príklad 61

Hydrochlorid rel-(3fi,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[6-(4-metyl-piperazín 1 -ylmetyl)-pyridín-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Oranžová sklovitá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 464, MH⁺ (vypočítané) = 464.

TLC (etylacetát) Rf = 0,05

Príklad 62

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-4{6-[(1-izopropyl-2-metyl-propylamino) metyl]pyridín-3-karbonyl}-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Žltá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 479, MH⁺ (vypočítané) = 479.

TLC (etylacetát) Rf = 0,42.

Príklad 63

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-4-(6-dimetylaminometyl-pyridín-3-karbonyl)-3-izopro py 1-1 -metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Svetložltá sklovitá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 409, MH⁺ (vypočítané) = 409.

TLC (etylacetát) Rf = 0,21.

Príklad 64

Hydrochlorid rel-(3/?,3aft,6aS)-4{6-[(4-fluór-benzylamino)metyl]-pyridín-3-karbonyl}

3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Žltohnedá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 489, MH⁺ (vypočítané) = 489.

TLC (etylacetát) Rf = 0,41.

-76Príklad 65

Hydrochlorid rel-(3f?,3a/?,6aS)-4-(5-cyklopropyl-aminometyl-pyrazín-2-karbonyl)-3izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Zmes 45 mg medziproduktu 34, 23,3 μΙ cyklopropylamínu a 25 mg jodidu sodného v 1 ml dichlórmetánu sa 18 hodín mieša. Pridá sa ďalších 23,3 μΙ cyklopropylamínu a zmes sa ďalej mieša 24 hodín. Reakčná zmes sa rozdelí medzi 3 ml 2M roztoku uhličitanu sodného a 3 ml dichlórmetánu. Podiely sa oddelia. Organický podiel sa nechá prejsť cez kolónu Varian SPE, (ktorá sa dopredu eluuje dichlórmetánom, ktorého objem zodpovedá objemu kolóny) pri elúcii postupne dichlórmetánom, chloroformom, dietyléterom, etylacetátom, acetnitrilom a metanolom. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za vzniku 17 mg svetlohnedého oleja, na ktorý sa pôsobí 1,0 M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 20 mg v názve uvedenej zlúčeniny ako hnedej tuhej látky. Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 442, MH⁺ (vypočítané) = 442.

TLC (etylacetát) Rf = 0,12.

Výsledné zlúčeniny z príkladov 66 až 75 sa pripravia podľa postupu príkladu 65 za použitia medziproduktu 34 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 66

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-4-(5-dibutylaminometylpyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Bledohnedá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 494, MH⁺ (vypočítané) = 494.

TLC (etylacetát) Rf = 0,63.

Príklad 67

Hydrochlorid rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-morfofín-4-ylmetylpyrazín-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Béžová tuhá látka.

-77Hmotnostné spektrum Mhľ (nájdené) = 452, MH⁺ (vypočítané) = 452.

TLC (etylacetát) Rf= 0,12.

Príklad 68

Hyd roch lorid rel-(3R, 3a/?,6aS)-4- {5-[(d icyklohexylamino)metyl]-pyrazí n-2-karbonyl}

3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 546, MH⁺ (vypočítané) = 546.

TLC (etylacetát) Rf = 0,65.

Príklad 69

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetyl pyrazín-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Béžová tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 450, MH⁺ (vypočítané) = 450.

TLC (etylacetát) Rf = 0,12.

Príklad 70

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-metyl-piperazín 1 -ylmetyl)-pyrazín-2-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Hnedá sklovitá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 465, MH⁺ (vypočítané) = 465.

TLC (etylacetát) Rf = 0,02.

Príklad 71

Hydrochlorid rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-4-{5-[(1-izopropyl-2-metyl-propylamino) metyl]pyrazín-2-karbonyl}-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Béžová tuhá látka.

-78Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 480, Mhľ (vypočítané) = 480.

TLC (etylacetát) Rf= 0,45.

Príklad 72

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-4-(5-dimetylaminometyl-pyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Svetlohnedá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 410, MH⁺ (vypočítané) = 410.

TLC (etylacetát) Rf = 0,06.

Príklad 73

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-fenyl-piperazín 1 -ylmetyl)-pyrazín-2-karbonyl]-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Svetložltá sklovitá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 527, MH⁺ (vypočítané) = 527.

TLC (etylacetát) Rf = 0,27.

Príklad 74

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(5-pyrolidín-1 -ylmetyl pyrazín-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Oranžovohnedá tuhá látka.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 436, MH⁺ (vypočítané) = 436.

TLC (etylacetát) Rf = 0,05.

Príklad 75

Hydrochlorid rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-metylaminometylpyrazín-2-karbonyl]-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (1:2)

Svetlohnedá tuhá látka.

-79Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 396, MH⁺ (vypočítané) = 396.

TLC (etylacetát) Rf = 0,02.

Príklad 76

Hydrochlorid (3S,3aS,6aR)-4-(5-cyklopropyl-aminometyl-pyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Pri teplote miestnosti sa 2 hodiny mieša roztok 21,53 g medziproduktu 48 a 200 ml 4,0 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej v 200 ml 1,4-dioxánu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku špinavo bielej tuhej látky. Tuhá látka sa nechá kryštalizovať z 2,3 1 horúceho 5 % vodného roztoku 2-propanolu za vzniku 15,54 g výslednej zlúčeniny ako bielej tuhej látky s teplotou topenia 183 až 185 °C.

TLC (oxid kremičitý, elučné činidlo: zmes dichlórmetánu, etanolu 0,880 amoniaku v pomere 200:8:1) Rf = 0,21.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) 422,19, MH⁺ (vypočítané) 422,19.

[a]o²⁰ +51,3 (c = 0,9, zmes vody a metylkyanidu v pomere 1:1).

Cirkulárny dichroizmus: Ä_max 250,2 nm (ΔΕ -1,34 M¹ cm¹), Ä_max 285,4 nm (ΔΕ +0,99 M'¹ cm'¹), (metylkyanid/voda)

Elementárna analýza:

nájdené C 47,4; H 6,4; N 14,3; S 6,5; Cl 7,8; voda 4,9 %;

(C19H27CIN5O4S.HCI.I.3H2O vypočítané C 47,4; H 6,4; N 14,6; S 6,7; Cl 7,4; voda 4,9 %).

Príklad 76 (alternatívny spôsob prípravy)

Zmes 1,056 g medziproduktu 46, 0,73 ml cyklopropylamínu a 481 mg jodidu draselného v 25 ml acetnitrilu sa 3 hodiny mieša. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zmes sa rozdelí medzi 2é ml nasýteného roztoku bikarbonátu sodného a 20 ml dichlórmetánu. Podiely sa oddelia. Vodný podiel sa ďalej dvakrát extrahuje 20 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku oleja. Tento produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesí

-80dichlórmetánu, etanolu a 0,880 amoniaku v pomere 200:8:1. Podiely obsahujúce požadovaný produkt sa zlúčia a odparia za vzniku 924 mg tuhej látky, ktorá sa rozpustí v 10 ml dichlórmetánu a na roztok sa pôsobí 10 ml 1,0 M roztoku chlorovodíka v dietyléteri. Vznikne 1,00 g zlúčeniny ako bielej tuhej látky.

Príklad 77

Hydrochlorid (3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-pyrolidín-1-ylmetyloxazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Do miešaného roztoku 13,0 g 1-hydroxybenztriazolu v 350 ml acetonitrilu sa rýchlo pridá 32,2 g medziproduktu 56. Pridá sa roztok 21,7 g (3S,3aS,6a/?)-3izopropyl-1 -metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu (medziprodukt 122 v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/36903) a následne 37,0 g hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu v 70 ml acetonitrilu a potom sa reakčná zmes mieša 20 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 900 ml dichlórmetánu a 600 ml 1M roztoku uhličitanu sodného. Vodný podiel sa oddelí a extrahuje 150 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa premyjú 250 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za vzniku hnedej tuhej látky. Tuhá látka sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii gradientom pomerov zmesi dichlórmetánu, etanolu a amoniaku od 150:8:1 do 135:8:1 za vzniku 29,3 g béžovej tuhej látky. Tuhá látka sa rozpustí v 150 ml dichlórmetánu a na produkt sa pôsobí 75 ml 1M roztoku chlorovodíka v éteri. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku tuhej látky, ktorá sa znova rozpustí v 150 ml dichlórmetánu a na vytvorený produkt sa pôsobí 75 ml 1M roztoku chlorovodíka v éteri. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku tuhej látky, ktorá sa nechá kryštalizovať z acetónu za poskytnutia 26,3 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky s teplotou topenia 156 až 158 °C.

TLC (oxid kremičitý; elučná zmes dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere

100:8:1; dvojitá elúcia) Rf = 0,66.

¹H NMR (400 MHz, D-6 DMSO): δ 8,78 (s, 1H), 4,68 (s, 2H), 4,13 (ddd, J = 11, 11,7

Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 11,10 Hz, 1H), 3,80 (ddd, J = 12, 10,5, 5,5 Hz, 1H), 3,60 (m,

-81 2Η), 3,55 (dd, J = 12, 10,5 Hz, 1H), 3,31 (s, 3H), 3,20 (m, 2H), 3,03 (dd, J = 12, 2,5 Hz, 1H), 2,88 (md, J = 2,5 Hz, 1H), 2,34 (m, 1H), 2,12 (m, 1H), 1,96 (m, 4H), 1,19 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 7 Hz, 3H). Obsahuje 0,16 molových % acetónu. Spektrum v infračervenom svetle (difúzna reflektancia v bromide draselnom) 3633, 3474, 3149, 3102, 2956, 2882, 2668, 2576, 2475, 1747, 1709, 1639, 1634, 1567, 1442, 1380, 1347, 1161, 1146, 967, 810, 547 cm'¹.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 425,186372, MH⁺ (vypočítané) = 425,185867 (chyba = 1,2 ppm).

Spaľovacia analýza:

nájdené: C 48,65, H 6,39, N 11,41, S 6,19, Cl 7,13 %.

C₁₉H₂₈N₄O₅S HCI.0.75H₂O.0,2Me₂CO vypočítané: C 48,43, H 6,57, N 11,53, S

6,60, Cl 7,29 %.

Príklad 78

Hydrochiorid (3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-pyrolidín-1-ylmetyloxazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Na miešanú suspenziu 40 mg medziproduktu 56 v 4 ml dichlórmetánu sa pôsobí 63 mg oxalylchloridu a následne pridaním 1 kvapky dimetylformamidu. Reakčná zmes sa 1,5 hodiny mieša, rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a nahradí sa 10 ml toluénu. Vytvorená suspenzia sa 10 minút energicky rozotiera. Toluén sa odstráni vo vákuu za vzniku gumy, ktorá sa uvedie do suspenzie v 5 ml dichlórmetánu, na ktorú sa pôsobí 20 mg medziproduktu 10 a 35 mg hydrogénuhličitanu sodného. Reakčná zmes sa 3,75 hodín mieša, a potom sa rozdelí medzi dvakrát 10 ml dichlórmetánu a 5 ml vody. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom sodným a zahustia sa vo vákuu za vzniku tuhej látky. Tuhá látka sa 10 minút rozotiera v 4 ml éteru. Éter sa dekantuje. Zvyšok sa suší vo vákuu za vzniku bieleho prášku, na ktorý sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za poskytnutia 17 mg v nadpise uvedenej zlúčeniny ako béžového prášku s teplotu topenia 116 až 120 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 425, MH⁺ (vypočítané) = 425.

-82Výsledné zlúčeniny z príkladov 79 až 81 sa pripravia spôsobom z príkladu 78 za použitia medziproduktu 10, prípadne 57 až 59 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 79

Hydrochlorid (3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-piperidín-1-ylmetyloxazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 140 až 143 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 439, MH⁺ (vypočítané) = 439.

Príklad 80

Hydrochlorid (3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-[2-(4-fenylpiperazín-1 ylmetyl)oxazol-4-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Béžová tuhá látka s teplotou topenia 156 až 160 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 516, MH⁺ (vypočítané) = 516.

Príklad 81

Hydrochlorid (3S,3aS,6aR)-4-(2-dibutylaminometyl-oxazol-4-karbonyl)-3-izopropyl1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 122 až 126 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 483, MH⁺ (vypočítané) = 483.

Príklad 82

Hydrochlorid (3S,3aS,6aR)-4-{2-[(cyklopropylmetylamino)metyl]-oxazol-4-karbonyl}3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Roztok 21 mg medziproduktu 51 v 1,5 ml dioxánu a 0,4 ml 1M hydroxidu sodného sa 3,5 hodiny mieša. Za stáleho miešania sa pridá 0,35 ml kyseliny chlorovodíkovej. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa 5 minút rozotiera v 3

-83ml dioxánu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Za použitia ďalších 3 ml dioxánu sa opakuje rozotieranie a potom sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a zvyšok sa suší vo vákuu za vzniku tuhej látky. Na miešanú suspenziu tejto tuhej látky v 3 ml dichlórmetánu sa pôsobí 50 mg oxalylchloridu a následne 1 kvapkou dimetylformamidu. Reakčná zmes sa 1 hodinu mieša a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa 5 minút energicky rozotiera v 10 ml zmesi dichlórmetánu a toluénu v pomere 1:1. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku gumy, ktorá sa uvedeie do suspenzie v 5 ml dichlórmetánu. Na produkt sa pôsobí 18 mg medziproduktu 10 a 35 mg hydrogenuhličitanu sodného. Reakčná zmes sa 0,75 hodín mieša a potom sa 3 dni ponechá pri teplote miestnosti. Produkt sa zriedi 10 ml dichlórmetánu a premyje sa 10 ml vody. Organický podiel sa suší nad síranom sodným a zahustí sa vo vákuu za vzniku gumy, ktorá sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne oxidu kremičitého (Merck 9385) pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 150:8:1 za vzniku bieleho prášku. Na produkt sa pôsobí 1M roztokom chlorovodíka v dietyléteri za vzniku 7 mg výslednej zlúčeniny ako bieleho prášku s teplotou topenia 116 až 119 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 425, MH⁺ (vypočítané) = 425.

Výsledná zlúčenina z príkladu 83 sa pripraví spôsobom podľa príkladu 82 použitím medziproduktu 10 a medziproduktu 52 ako východiskových zlúčenín.

Príklad 83

Hydrochlorid (3S,3aS,6a/?)-4-{2-[(dicyklohexylamino)metyl]-oxazol-4-karbonyl}-3izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Biely prášok s teplotou topenia 130 až 133 °C.

Hmotnostné spektrum MH⁺ (nájdené) = 535, MH⁺ (vypočítané) = 535.

Biologické skúšky

1. V skúške in vitro s elastázou sa sledovali výsledné zlúčeniny z príkladov 1 až 83.

Nasledujúca tabuľka zhrňuje výsledky hodnôt IC₅o-84-

Príklad	ICso (μΜ)	Príklad	IC₅₀ (μΜ)
1	0,123	43	0,051
2	0,081	44	0,099
3	0,164	45	0,019
4	0,065	46	0,014
5	0,039	47	0,024
6	0,071	48	0,030
7	0,082	49	0,051
8	0,086	50	0,054
9	0,129	51	0,021
10	0,114	52	0,012
11	0,139	53	0,015
12	0,104	54	0,011
13	0,032	55	0,020
14	0,021	56	0,038
15	0,021	57	0,041
16	0,019	58	0,045
17	0,068	59	0,028
18	0,022	60	0,037
19	0,057	61	0,030
20	0,013	62	0,041
21	0,029	63	0,025
22	0,043	64	0,048
23	0,026	65	0,013
24	0,024	66	0,076
25	0,009	67	0,019
26	0,017	78	0,087
27	0,008	69	0,022
28	0,011	70	0,013
29	0,014	71	0,050
30	0,017	72	0,012
31	0,016	73	0,074
32	0,009	74	0,012
33	0,005	75	0,093
34	0,013	76	0,011
35	0,056	77	0,010
36	0,013	78	0,014
37	0,017	79	0,016
38	0,014	80	0,100
39	0,021	81	0,076
40	0,030	82	0,084
41	0,014	83	0,137
42	0,057

-852. Zlúčeniny z príkladov 1,2, 11, 12, 13, 15, 16, 17,27, 28, 29, 31, 33, 34, 35, 37 až 50, 56, 57, 59, 60 až 69, 72, 73, 76, 78, 80 a 81 boli podrobené skúškam in vivo na škrečkoch vyššie uvedeným spôsobom. Bolo dokázané, že účinná dávka je nižšia ako 10 mg/kg pri trvaní účinku najmenej 6 hodín.

3. Zlúčeniny z príkladov 1 až 83 sa podrobili klinickým skúškam na inhibíciu elastázy v krvnom obehu tak, ako bolo vyššie opísané. Zistené hodnoty IC50 sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke.

Príklad	ΐθδο(μΜ)	Príklad	ΙΟ₅₀(μΜ)
1	0,355	43	0,429
2	1,882	44	0,528
3	2,195	45	0,518
4	4,185	46	0,524
5	3	47	1,043
6	4,015	48	0,414
7	3,04	49	0,539
8	3,46	50	1,92
9	3,615	51	>10
10	5,5565	52	7,637
11	1,16	53	8,23
12	2,4	54	4,205
13	1,103	55	>10
14	1,885	56	0,293
15	0,452	57	0,193
16	0,774	58	2,44
17	0,316	59	0,394
18	2,925	60	0,605
19	0,408	61	5,898
20	6,405	62	0,252
21	0,317	63	1,62
22	0,453	64	0,521
23	0,364	65	0,333
24	0,306	66	0,217
25	1,64	67	0,878
26	>10	68	0,221
27	0,704	69	0,264
28	1,125	70	3,215
29	0,311	71	0,205
30	1,683	72	0,322
31	0,896	73	0,282

32	0,427	74	0,205
33	0,257	75	5,025
34	0,546	76	0,139
35	0,81	77	0,245
36	0,296	78	0,411
37	1,187	79	0,502
38	0,224	80	0,4
39	0,358	81	0,296
40	0,222	82	0,717
41	1,76	83	0,55
42	0,43

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Pyrolopyroiónové deriváty všeobecného vzorca I (je uvedená relatívna stereochémia), kde

R¹ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka,

R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka,

X znamená CO alebo SO2,

Het znamená prípadne substituovaný, 5 až 10 členný monocyklický alebo bicyklický aromatický kruhový systém obsahujúci 1 až 4 heteroatómy zo skupiny O, N a S, n znamená celé číslo 0 až 4,

R³ a R⁴ nezávisle znamenajú atóm vodíka, alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka, -(CH2)i-4CONR⁵R⁶, CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo (CH₂)o-2Ph, kde Ph znamená fenyl, prípadne substituovaný jedným alebo väčším počtom alkylových zvyškov s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atómov halogénu alebo NR³R⁴ spoločne tvoria azetidinyl, pyrolidinyl, piperidinyl, azepinyl, morfolinyl, piperazinyl, prípadne /V-substituované alkylovým zvyškom s 1 až 6 atómami uhlíka, fenylom, prípadne substituovaným halogénom alebo alkylovým zvyškom s 1 až 4 atómami uhlíka alebo benzylom, prípadne substituovaným na benzénovom kruhu halogénom alebo alkylovým zvyškom s 1 až 4 atómami uhlíka alebo NR³R⁴spoločne tvoria vyššie opísaný kruh, substituovaný na atómoch uhlíka jedným alebo väčším počtom substituentov zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, CONR⁵R⁶alebo COOR⁶,

R⁵ a R⁶ nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka,

-88a soli a solváty týchto látok.
2. Pyrolopyrolónové deriváty podľa nároku 1, všeobecného vzorca I, v ktorom Het znamená 5 alebo 6 členný monocyklický aromatický kruh, obsahujúci 1 alebo 2 heteroatomy zo skupiny O, N a S.
3. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 2, v ktorých Het znamená tiazolyl, izoxazolyl, pyrazolyl alebo pyrazinyl.
4. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 2, v ktorých Het znamená pyridín-3-yl.
5. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 2, v ktorých Het znamená oxazolyl.
6. Pyrolopyrolónové deriváty podľa nároku 1, 2 alebo 5 všeobecného vzorca IA

R*R³N(CH₂)_n (relatívna stereochémia je uvedená).
7. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, v ktorých R² znamená izopropyl alebo propyl.
8. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 7, v ktorých R² znamená izopropyl.

-899. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 8, v ktorých R¹ znamená etyl alebo metyl.
10. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 9, v ktorých R¹ znamená metyl.
11. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 10, v ktorých X znamená CO.
12. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11, v ktorých n znamená 1 až 3.
13. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 12, v ktorých R³ a R⁴ nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, alebo NR³R⁴ spoločne tvoria pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo piperazinyl, prípadne N-substituované na dusíkovom atóme alkylovým zvyškom s 1 až 8 atómami uhlíka alebo fenylovým zvyškom, prípadne substituovaným atómom halogénu alebo alkylovým zvyškom s 1 až 4 atómami uhlíka.
14. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vybrané zo skupiny:

rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-pyrolidín-1-ylmetylfurán-2karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-morfolín-4-ylmetylfurán-2karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-fenylpiperazín-1-ylmetylfurán2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-metylpiperazin-1-ylmetylfurán2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R_I3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-morfolín-4-ylmetylfurán-3karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

-90rel-(3/?_I3a/?_I6aS)-4-(2-dimetylaminometylfurán-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?_l6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-piperidín-1-ylmetylfurán-3karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aŕ?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-pyrolidin-1-ylmetylfurán-3karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aR_I6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-fenylpiperazín-1-ylmetyl)furánS-karbonylJhexahydropyrolop^-blpyrol^-ón, rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)furán-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aR,6aS)-4-(5-dimetylaminometyl-tiofén-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetyltiofén-2karbonyl) hexahyd ropy rolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-morfolín-4-ylmetyl-1/-/-pyrol-2karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aŕ?)-4-(5-dimetylaminometyl-1/-/-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1 -ylmetyl-1 H-pyrol-2karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-pyrolidín-1-ylmetyl-1/-/-pyrol-2karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-[5-(4-fenylpiperazín-1 -yl-metyl)-1 Hpyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S_I3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)-1/7pyrol-2-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-4-(5-dibutylaminometyl-1H-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aŕ?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-metylaminometyl-1/-/-pyrol-2karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-piperidín-1-ylmetyl-1Hpyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

-91 rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-morfolín-4-ylmetyl-1Hpyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6af?)-4-(5-dimetylaminometyl-1-metyl-1H-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-ÍSS.SaS.ea/^-S-izopropyl-l-metánsulfonyM-O-metyl-S-pyrolidín-l-ylmetyl-l/ypyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6af?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-metylaminometyl-1Hpyrol-2-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-4-(4-dimetylaminometyl-1H-pyrol-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6af?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-pyrolidín-1-ylmetyltiazol-4karbonyl)hexahydropyroloI3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-morfolín-4-ylmetyltiazol-4karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-piperidín-1-ylmetyltiazol-4karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)tiazol-4-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/^:?)-4-(2-cyklopropylaminometyltiazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-4-[2-[(4-fluorbenzylamino)metyl]tiazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-fenylpiperazín-1-ylmetyl)tiazol-4-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-4-(2-dibutylaminometyltiazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3f?,3aR,6aS)-3-izopropyl-4-[2-[(1-izopropyl-2-metylpropylannino)metyl]tÍazol-4karbonyl]-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aŕ?)-4-(2-dimetylaminometyltiazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-ÍSS.Saft.eaSJ-S-izopropyl-l-metánsulfonyM-íS-nnorfolín^-ylmetylizoxazol-Skarbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

-92rel-(3f?,3a/?,6aS)-4-(5-dimetylaminometylizoxazol-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-pyrolidín-1-ylmetylizoxazol-3karbony l)hexahyd ropy rol o[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetylizoxazol-3karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?_I6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)izoxazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3af?,6aS)-4-[5-[(4-fluorbenzylamino)-metyl]-izoxazol-3-karbonyl]-3-izopropyl1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-fenylpiperazín-1-ylmetyl)izoxazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aR,6aS)-4-(5-dibutylaminometylizoxazol-3-karbonyl)-3-izopropyl-1metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aR,6aS)-4-(5-dimetylaminometyl-1-metyl-1H-pyrazol-3-karbonyl)-3izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3af?,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-(1 -metyl-5-pyrolidín-1 -ylmetyl-1 Hpyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-morfolín-4-ylmetyl-1/-/pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-5-piperidín-1 -ylmetyl-1 Hpyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-ÍS/^Sa/^eaSí-S-izopropyl-l-metánsulfonyl^-tl-metyl-S-^-metylpiperidín-l ylmetyl)-1/7-pyrazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-metyl-5-(4-fenylpiperazín-1ylmetyl)-2H-pyrazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3ŕ?,3aŕ?,6aS)-4-(5-dimetylaminometyl-2-metyl-2/7-pyrazol-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-metyl-5-pyrolidín-1-ylmetyl-2/-/pyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aŕ?_l6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-metyl-5-morfolín-4-ylmetyl-2Hpyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3.2-b]pyrol-2-ón,

-93rel-(3ft,3aft,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-metyl-5-piperidín-1-ylmetyl-2Hpyrazol-3-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-metyl-5-(4-metylpiperazín-1ylmetyl)-2H-pyrazol-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3₁2-b]pyrol-2-ón, rel-(3f?,3a/?,6aS)-4-[6-[(dicyklohexylamino)metyl]pyridín-3-karbonyl]-3-izopropyl-1metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?,6aS)-4-(6-dibutylaminometylpyridín-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(6-morfolín-4-ylmetylpyridín-3karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-4-(6-cyklopropylaminonnetylpyridín-3-karbonyl)-3-izopropyl-1metán-sulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(6-piperidín-1-ylmetylpyridín-3karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[6-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)pyridín-3-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-4-[6-[(1-izopropyl-2-metylpropylamino)-metyl]-pyridín3-karbonyl]-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aŕ?,6aS)-4-(6-dimetylaminometylpyridín-3-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR_I6aS)-4-[6-[(4-fluorbenzylamino)metyl]pyridín-3-karbonyl]-3-izopropyl-1metán-sulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?,6aS)-4-(5-cyklopropylaminometylpyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1metán-sulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3a/?,6aS)-4-(5-dibutylaminometylpyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3ŕ?,3aŕ?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-morfolín-4-ylmetylpyrazín-2karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aŕ?,6aS)-4-[5-[(dicyklohexylamino)metyl]pyrazín-2-karbonyl]-3-izopropyl-1metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetylpyrazín-2karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

-94rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)pyrazín-2-karbonyl]hexahydropyrolo(3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3F?,3a/?,6aS)-3-izopropyl-4-[5-[(1-izopropyl-2-metylpropylamino)metyl)pyrazín-2karbonyl]-1-metánsulfonylhexahydropyroloI3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(5-dimetylaminometylpyrazín-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahyd ropy rolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3a/?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[5-(4-fenylpiperazín-1-ylmetyl)pyrazín-2-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3ŕ?,3af?,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-pyrolidín-1-ylmetylpyrazín-2karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3/?,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-metylaminometylpyrazín-2karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, alebo soli a solváty týchto zlúčenín.
15. Pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je rel-(3S,3aS,6aF?)-4-(5-cyklopropylaminometylpyrazin-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón alebo soli a solváty tejto látky.
16. Pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorý je vybratý zo skupiny:

rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-pyrolidín-1-ylmetyloxazol-4karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS_I6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-piperidín-1-ylmetyloxazol-4karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6a/?)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[2-(4-fenylpiperazín-1-ylmetyl)oxazol-4-karbonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S_I3aS,6aR)-4-(2-dibutylaminometyloxazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aR)-4-[2-[(cyklopropylmetylamino)metyl)oxazol-4-karbonyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3S,3aS,6aR)-4-[2-[(dicyklohexylamino)metyl]oxazol-4-karbonyl)-3-izopropyl-1metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

-95alebo soli a solváty týchto látok.
17. Pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je (3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(2-pyrolidín-1-ylmetyloxazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, alebo jeho soli alebo solváty.
18. Pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je hydrochlorid (SS.SaS.eaRj-S-izopropyl-l-metánsulfonyl^-^-pyrolidín-l-ylmetyloxazol-4-karbonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu.
19. Čistený jednotlivý enantiomér pyrolopyrolónového derivátu všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 14 a 16 v absolútnej stereochémii, znázornenej vo všeobecnom vzorci I.
20. Spôsob výroby pyrolopyrolónových derivátov všeobecného vzorca I podľa nároku 1,vyznačujúci sa tým, že sa

i) kondenzuje zlúčenina všeobecného vzorca II (relatívna stereochémia je uvedená) so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³N(CH2)nHetCOOH alebo kyslým derivátom tejto zlúčeniny, napríklad chloridom, aktivovaným esterom alebo anhydridom alebo zmesným anhydridom alebo so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³N(CH2)_nHetXY, kde Y je reaktívna skupina, napríklad atóm halogénu ako je atóm chlóru alebo s chráneným derivátom tejto látky, alebo sa

-96ii) sulfonyluje zlúčenina všeobecného vzorca III

R«R³N(CH₂)„Het-X (Hl) (relatívna stereochémia je uvedená) alebo chránený derivát tejto látky, pôsobením zlúčeniny YO2SR¹, kde Y znamená reaktívnu skupinu, napríklad atóm halogénu, ako je chlór alebo sa iii) cyklizuje zlúčenina všeobecného vzorca IV (IV) (relatívna sterochémia je uvedená) alebo ester karboxylovej kyseliny, alebo sa iv) oxiduje sa zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca V (V)

-97(relatívna sterochémia je uvedená) kde X^a je atóm síry alebo SO alebo sa

v) nechá reagovať zlúčenina vzorca VI

H i

so.

(VI) (relatívna stereochémia je uvedená) kde L znamená odštiepiteľnú skupinu, so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³NH, alebo sa vi) pripraví zlúčenina všeobecného vzorca I, v ktorej n znamená celé číslo 1 až 4 redukciou reakčného produktu zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca VII (VII) (relatívna sterochémia je uvedená) so zlúčeninou všeobecného vzorca R⁴R³NH, alebo sa vii) pripraví zlúčenina všeobecného vzorca I, v ktorej n znamená 1 reakciou zodpovedajúcej zlúčeniny vzorca VIII

-98Het-X (VIII) (relatívna stereochémia je uvedená) s formaldehydom alebo paraformaldehydom spolu so zlúčeninou vzorca R⁴R³NH v kyslom prostredí, alebo sa viii) odstránia ochranné skupiny z chránenej zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo sa ix) zo zmesi enantiomérov izoluje v čistej forme jeden z enantiomérov, a potom sa v prípade potreby premení výsledná voľná báza zlúčeniny všeobecného vzorca I na svoju soľ, prijateľnú z fyziologického hľadiska, alebo naopak soľ sa premení na voľnú bázu zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo sa jedna soľ premení na inú fyziologicky prijateľnú soľ.
21. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že ako svoju účinnú zložku obsahuje pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 v zmesi s aspoň jedným fyziologicky prijateľným rozpúšťadlom alebo nosičom.
22. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 na použitie ako liečivo.
23. Použitie pyrolopyrolónových derivátov všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 na výrobu liečiva na liečenie chronického zápalu priedušiek alebo chronických obštrukčných pľúcnych ochorení.

-9924. Použitie pyrolopyrolónových derivátov všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 19 na výrobu liečiva na liečenie astmy.
25. Medziprodukt všeobecného vzorca III (relatívna stereochémia je uvedená) kde R², R³, R⁴, n, Het a X majú význam uvedený v nároku 1, alebo chránený derivát tejto látky na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
26. Medziprodukt všeobecného vzorca IV (IV) (relatívna stereochémia je uvedená) kde R¹, R², R³, R⁴, n, Het a X majú význam uvedený v nároku 1, alebo estery tejto látky, vytvorené na karboxylovej skupine na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.

- 100
27. Medziprodukt všeobecného vzorca V (V) (relatívna stereochémia je uvedená) kde R¹, R², R³, R⁴, n, Het a X majú význam uvedený v nároku 1, a X^a znamená atóm síry alebo SO, na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
28. Medziprodukt všeobecného vzorca VI (VI) (relatívna stereochémia je uvedená) kde R¹, R², n, Het a X majú význam uvedený v nároku 1, a L znamená odštiepiteľnú skupinu, na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1
29. Medziprodukt všeobecného vzorca VII

CHO-(CH₂)^-Het-X.

(VII)

-101 (relatívna stereochémia je uvedená) kde R¹, R², n, Het a X majú význam uvedený v nároku 1, a kde n znamená celé číslo 1 až 4, na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
30. Medzipodukt všeobecného vzorca VIII

Het-X.

so.

(VIII) (relatívna stereochémia je uvedená) kde R¹, R², Het a X majú význam uvedený v nároku 1, na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.