[go: up one dir, main page]

SK284191B6 - Aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I - Google Patents

Aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I Download PDF

Info

Publication number
SK284191B6
SK284191B6 SK1148-97A SK114897A SK284191B6 SK 284191 B6 SK284191 B6 SK 284191B6 SK 114897 A SK114897 A SK 114897A SK 284191 B6 SK284191 B6 SK 284191B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
leu
wall
asp
ala
tyr
Prior art date
Application number
SK1148-97A
Other languages
English (en)
Other versions
SK114897A3 (en
Inventor
Robert A. Lazarus
Steven Shak
Jana S. Ulmer
Original Assignee
Genentech, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech, Inc. filed Critical Genentech, Inc.
Priority claimed from PCT/US1995/002366 external-priority patent/WO1996026278A1/en
Publication of SK114897A3 publication Critical patent/SK114897A3/sk
Publication of SK284191B6 publication Critical patent/SK284191B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka výsledkov získaných z výskumu humánnej deoxyribonukleázy 1 (DNáza 1), fosfodiesterázy, ktorá je schopná hydrolyzovať polydeoxyribonukleovú kyselinu. Týka sa všeobecne modifikovaných foriem (variantov) humánnej DNázy 1 a ich prípravy metódami rekombinantnej DNA.
Doterajší stav techniky
DNáza I je fosfodiesteráza, schopná hydrolyzovať kyselinu polydeoxy-ribonukleovú. DNáza I bola purifikovaná z rozličných druhov na rozličných stupňoch.
Bovinná DNáza 1 bola biochemický intenzívne študovaná. Pozri napr. Moore, in The Enzymes (Boyer, P.D., ed), str. 281-296, Academic press, New York (1981). Kompletná aminokyselinová sekvencia bovinnej DNázy I je známa (Liao, et al., J. Biol. Chem. 248: 1498 - 1495 (1973); Oefner, et al., J. Mol. Biol. 192: 605 - 632 (1986); Lahm, et al., J. Mol. Biol. 221: 645 - 667 (1991) a DNA kódujúca bovinnú DNázu I bola klonovaná a vytvorená (Worrall, et al., J. Biol. Chem. 265: 21889 - 21895 (1990)). Štruktúra bovinnej DNázy 1 bola stanovená rontgenovou kryštalografiou. Suck, et al., EMBO J. 3: 2423 - 2430 (1984); Suck, et al., Náture 321: 620 - 625 (1986); Oefner, et al., J. Mol. Biol. J92: 605 -632 (1986).
DNA kódujúca humánnu DNázu I bola izolovaná a sekvenovaná a táto DNA bola vytvorená v rekombinantných hostiteľských bunkách, aby sa umožnila produkcia humánnej DNázy I v komerčne použiteľných množstvách. Shak, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 87: 9188 - 9192 (1990).
DNáza 1 má množstvo známych užitočných vlastností a bola použitá na terapeutické účely. Jej zásadným terapeutickým použitím bolo zníženie viskoelasticity pľúcnych sekrétov (mucus) v takých ochoreniach, ako je zápal pľúc a cystická fibróza (CF), aby sa pomohlo pri uvoľnení respiračných ciest. Pozri napríklad Lourenco, et al., Árch. Intern. Med. 142: 2299 - 2308 (1982); Shak, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 87: 9188 - 9192 (1990); Hubbard, et al., New Engl. J. Med. 326: 812 - 815 (1992); Fuchs, et al., New Engl. J. Med. 331: 637 - 642 (1994); Bryson, et al., Drugs 48: 894 - 906 (1994). Hlien taktiež prispieva k morbidite pri chronickej bronchitíde, astmatickej bronchitíde, bronchoektázii, emfyzéme, akútnej a chronickej sínusitíde, ako aj pri bežných prechladnutiach.
Pľúcne sekréty osôb, ktoré majú takéto choroby, sú komplexnými materiálmi, ktoré obsahujú glykoproteínové hlieny, mukopolysacharidy, proteázy, aktín a DNA. Niektoré z týchto materiálov v pľúcnych sekrétoch sú uvoľnené z leukocytov (neutrofily), ktoré infiltrujú pľúcne tkanivo ako odpoveď na prítomnosť mikróbov (napr. kmene baktérií Pseudomonas, Pneumococcus alebo Staphylococcus) alebo ďalšie dráždivé látky (napríklad cigaretový dym, peľ). V priebehu reakcie s takýmito mikróbami alebo dráždivými látkami leukocyty môžu degenerovať a môže sa uvoľňovať ich obsah, ktorý prispieva k viskoelasticite pľúcnych sekrétov.
Schopnosť DNázy I redukovať (znižovať) viskoelasticitu pľúcnych sekrétov bola pripisovaná jej enzymatickej degradácii širokého množstva DNA, uvoľneného neutrofilmi. Shak, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 87: 9188 - 9192 (1990); Aitken, et al., J. Am. Med. Assoc. 267: 1947 - 1951 (1992).
Neskoršie sa pripisoval mukolytickému účinku DNázy I iný mechanizmus, zahrnujúci disagregáciu aktínu. Vas concellos, et al., Science 263: 969 - 971 (1994). Aktín je jedným z najpočetnejších proteínov v eukaryotických bunkách (napríklad, aktín zahrnuje okolo 10 % totálneho leukocytového proteínu) a bol intenzívne študovaný. Kabsch, et al., Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 21: 49 - 76 (1992); Sheterline, et al., Prot. Profde 1: 1 - 121 (1994). Aktín existuje v dvoch formách: v monomémej forme (G-aktín) a vláknitej forme (F-aktín), ktoráje zostavená z monomérov G-aktínu. Polyméme vlákna (filamenty) aktínu majú vysokú viskoelasticitu a jednoznačne prispievajú k viskozite pľúcnych sekrétov. Momet, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 8k 3680 - 3684 (1984); Newman, et al., Biochemistry 24: 1538 - 1544 (1985); Janmey, et al., Biochemistry 27: 8218 - 8226 (1988); Vasconcellos, et al., Science 263: 969-971 (1994).
Pretože DNáza I je známa na viazanie aktínu (Lazarides, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 71: 4742 - 4746 (1974); Kabsch, et al., Náture 347: 37 - 44 (1990) a depolymerizáciu vlákien aktínu (takisto aj na inhibíciu polymerizácie Gaktínu vo vláknach) (Mannherz, et al., FEBS Lett. 60: 34 - 38 (1975); Hitchock, et al., Celí 7: 531 - 542 (1976); Pinder, et al., Biochemistry 21: 4886 - 4890 (1982); Weber, et al., Biochemistry 33: 4780 - 4786 (1994)), boli predstavy, že mukolytický účinok DNázy I na spútum alebo na iné pľúcne výlučky viac spočíva v disagregácii (depolymerizácii) aktínu ako vhydrolýze DNA. Vasconcellos, et al., Science 263: 969 - 971 (1994). Ako zlúčiteľné s týmto názorom je známe, že v prítomnosti aktínu je DNA-hydrolytická aktivita DNázy I inhibovaná. Lazarides, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 7L 4742 - 4746 (1974); Mannherz, et al., Eur. J Biochem 104: 367 - 379 (1980). Tomuto názoru taktiež zodpovedá to, že bolo referované o tom, že niektoré proteíny aktínu (napr. gelsolin) sú účinné pri potláčaní viskoelasticity cystického fibrózneho spúta. Vasconcellos, et al., Science 263: 969 - 971 (1994); Stossel, et al., PCT Patent Publication No. WO 94/22465 (zverejnená 13. októbra 1994).
Predložený vynález je založený na časti výskumu vynálezcov - určiť biochemický základ mukolytickej aktivity DNázy I. Tento výskum zahrnuje vzor a syntézu rôznych variantov humánnej DNázy I, testovanie týchto variantov na posúdenie ich schopnosti hydrolyzovať DNA, viazať aktín a znižovať viskoelasticitu spúta in vitro. Vynálezcovia vytvorili niekoľko tried variantov humánnej DNázy I. Jedna trieda variantov (varianty aktín-rezistentné) znížila schopnosť viazať aktín, ale ešte má mukolytickú aktivitu a v niektorých prípadoch mukolytická aktivita vzrástla pri porovnaní s natívnou humánnou DNázou I. Tieto aktin-rezistentné varianty majú približne rovnakú DNA-hydrolytickú účinnosť ako natívna humánna DNáza I, ale táto účinnosť je menej náchylná na inhibiciu aktínom. Druhá trieda variantov viaže aktín s afinitou podobnou tej, ktorá bola zistená pre natívnu humánnu DNázu I, ale má zníženú mukolytickú účinnosť a zníženú DNA-hydrolytickú účinnosť pri porovnaní s natívnou humánnou DNázou I.
Tieto výsledky indikujú, že terapeutická efektívnosť humánnej DNázy I pri znižovaní viskoelasticity pľúcnych sekrétov je daná viac jej katalytickou, DNA-hydrolytickou aktivitou ako jej schopnosťou depolymerizovať vláknitý aktín. Preto varianty humánnej DNázy, ktoré viažu aktín s nižšou afinitou ako prírodná humánna DNáza, ale ešte majú DNA-hydrolytickú aktivitu, by mali byť použiteľné ako terapeutické činidlá, najmä pri liečení pacientov, ktorí majú pľúcne výlučky obsahujúce relatívne vysoké množstvo aktínu. Pretože takéto varianty znížili afinitu proti aktínu, ich DNA-hydrolytická aktivita je menej inhibovaná v prítomnosti aktínu a tak tieto varianty majú vyššiu mukolytickú ú činnosť v prítomnosti aktínu pri porovnaní s prírodnou humánnou DNázou I.
Podstata vynálezu
Podstatou predloženého vynálezu je teda poskytnúť varianty humánnej DNázy I, ktoré majú DNA-hydrolytickú aktivitu, ale viažu aktín s nižšou afinitou ako natívna humánna DNáza I.
Predmetom vynálezu je preto aktin-rezistentný variant humánnej DNázy I, ktorý obsahuje aspoň jednu aminokyselinovú substitúciu vybranú zo skupiny, ktorá zahŕňa H44Q, L45C, L45K, L45R, V48K, V48R, G491, G49K, G49R, G49Y, L52K, L52M, L52N, L52R, D53L, D53M, N56R, Y65K, Y65M, Y65S, Y65P, V66N, V67D, V67H, V67M, V67P, V67R, V67S, S68K, S68R, S68M, E69A, Al 14E, Al 14G, Al 14H, Al 14K, Al 14L, Al 14M, Al 14Q, A114R,A114WaA114Y.
Ďalšia podstata predloženého vynálezu spočíva v poskytnutí nukleových kyselín, kódujúcich takéto aktín-rezistentné varianty humánnej DNázy I
Podrobný opis
I. Definície
Ako je tu použité, pojmy „humánna DNáza I“, „natívna humánna DNáza I“ a „štandardný typ DNázy I“ sa týkajú polypeptidu, majúceho aminokyselinovú sekvenciu dospelej humánnej DNázy I, ako je uvedená na obr. 3.
„Variant“ alebo „aminokyselinová sekvencia variantu“ humánnej DNázy I je polypeptid, ktorý obsahuje aminokyselinovú sekvenciu odlišnú od natívnej humánnej DNázy I. Vo všeobecnosti variant bude mať minimálne 80 % sekvenčnú identitu (homológiu), výhodne minimálne 90 % sekvenčnú identitu, ešte výhodnejšie aspoň 95 % sekvenčnú identitu a najvýhodnejšie aspoň 98 % sekvenčnú identitu s natívnou humánnou DNázou I. Percento sekvenčnej identity je stanovené, napríklad, Fitch-om, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 80: 1382 - 1386 (1983), verziu algoritmu opísal Needleman, et al., J. Mol. Biol. 48: 443 - 453 (1970), po zoradení sekvencií na poskytnutie maximálnej homológie.
Pojmy „humánna DNáza I aktin-rezistentný variant“, „aktin-rezistentný variant“ a „aktin-rezistentný variant humánnej DNázy I“ sa týkajú variantu natívnej humánnej DNázy I, ktorá má (1) DNA-hydrolytickú aktivitu a (2) redukovanú viazaciu afinitu proti aktínu.
„DNA-hydrolytická aktivita“ sa týka enzymatickej aktivity natívnej humánnej DNázy I v hydrolyzujúcom (štiepiacom) substráte DNA za získania 5'-fosforylovaných oligonukleotidových koncových produktov. DNA-hydrolytická účinnosť je rýchlo stanovená niektorou z rôznych metód, známych v odbore, zahrnujúcich polyakrylamidovú a agarózovú gélovú elektroforézu, hyperchrómový test (Kunitz,
J. Gen. Physiol. 33: 349 - 362 (1950); Kunitz, J. Gen. Physiol. 33: 363 - 377 (1950)) alebo testom s metylovou zelenou (Kumick, Árch. Biochem. 29: 41 - 53 (1950); Sinicropi, et al., Anál. Biochem. 222: 351 - 358 (1994)).
„Viažuca afinita“ natívnej humánnej DNázy 1 alebo aktín-rezistentného variantu humánnej DNázy I proti aktínu sa týka schopnosti DNázy I nekovalentne sa naviazať na aktín. Viažuca afinita môže byť stanovená ktoroukoľvek z rozličných metód, známych v odbore, napríklad, ako opisuje Mannherz, et al., Eur. J. Biochem. 104: 367 - 379 (1980). Alternatívne, relatívne viazacie afinity rozličných DNáz (napríklad natívnej humánnej DNázy I a jej variantov) sú stanovené meraním naviazania DNáz na imobilizo vaný aktín v ELISA teste (opísaný v príklade 3), alebo porovnaním DNA-hydrolytickej aktivity DNáz v prítomnosti a bez aktínu (tiež opísané v príklade 3). Spôsoby opísané v príkladoch sú špeciálne vyhovujúce na skríning variantov humánnej DNázy I na rýchle identifikovanie takýchto variantov, ktoré majú zníženú viažucu afinitu proti aktínu.
„Humánna DNáza I aktin-rezistentný variant“, majúci „zníženú viazaciu afinitu proti aktínu“, je variant, majúci viazaciu aktivitu proti aktínu, ktorá jc relatívne nižšia ako afinita, s ktorou natívna humánna DNáza I viaže aktín, stanovené v porovnateľných podmienkach. Ak sa aktín-viažuci ELISA test, ako je opísaný v príklade 3, použije na stanovenie viazacej afinity humánnej DNázy I (natívnej alebo variantu) proti aktínu, potom aktin-rezistentný variant majúci „zníženú viazaciu afinitu proti aktínu“ bude ten, ktorý má hodnotu ECSo vyššiu, ako je hodnota natívnej humánnej DNázy I. V tomto pokuse aktín rezistentný variant bude mať typicky EC50 hodnotu päťkrát až 100-krát vyššiu ako hodnota natívnej humánnej DNázy; ale aktín-rezistentné varianty, majúce EC50 hodnotu viac ako 500-krát vyššiu ako hodnota natívnej humánnej DNázy I, sa tiež dajú rýchlo pripraviť, najmä viacnásobným adaptovaním aminokyselinových zvyškov natívnej humánnej DNázy I aminokyselinovej sekvencie (pozri, napríklad, obr. 5A, 5D).
„Mukolytická aktivita“ súvisí so znížením viskoelasticity (viskozity) spúta alebo iného biologického materiálu, napríklad ako sa pozorovalo pri spracovaní materiálu s natívnou humánnou DNázou I alebo variantom humánnej DNázy I. Mukolytická aktivita (účinnosť) sa rýchlo stanoví ktoroukoľvek z niektorých rôznych metód, známych v odbore, zahrnujúcich test kompaktnosti spúta (PCT Patent Publication WO 94/10567, zverejnená 11. mája 1994), testy využívajúce torzné kyvadlo (Janmey, J. Biochem. Biophys. Methods 22: 41 - 53 (1991), alebo ďalšie Teologické postupy.
„Polymerázová reťazová reakcia“ alebo „PCR“ vo všeobecnosti sa týka spôsobu amplifikácie (rozmnoženia) želanej nukleotidovej sekvencie in vitro, ako opisuje, napríklad, US pat. 4 683 195. Všeobecne, PCR spôsob zahrnuje opakované cykly syntézy predlžovania primeru, s použitím oligonukleotidových primerov schopných hybridizácie prednostne na matricovú nukleovú kyselinu.
„Bunka“, „hostiteľská bunka“, „bunková línia“ a „bunková kultúra“ sú tu navzájom zameniteľné používané a všetky takéto pojmy by mali byť chápané ako obsahujúce progén majúci pôvod v raste alebo kultivácii bunky. „Transformácia“ a „transefekcia“ sú zameniteľné používané a súvisia s procesom introdukcie (zavedenia) DNA do bunky.
„Použiteľné operatívne spojený“ sa týka kovalentného spojenia dvoch alebo viacerých DNA sekvencií prostriedkami enzymatickej ligácie alebo inakšie, v konfigurácii v pomere k jednému ďalšiemu, tak že môže byť splnená normálna funkcia sekvencií. Napríklad, DNA presekvencie alebo sekrečnej vedúcej sekvencie je operatívne spojená s DNA pre polypeptid, ak je vytvorený ako preproteín, ktorý sa podieľa na sekrécii polypeptidu; promótor alebo zosilňovač transkripcie (enhancer) je operatívne spojený s kódujúcou sekvenciou, ak ovplyvňuje transkripciu sekvencie; alebo miesto viažuce ribozóm je operatívne spojené s kódujúcou sekvenciou, ak je umiestnená tak, aby uľahčovala transláciu. Všeobecne, „operatívne spojený“ znamená, že DNA sekvencie, ktoré sa majú spojiť sú priľahlé a, v prípade sekrečnej vedúcej sekvencie, priľahlé a v čítacom rámci. Pripojenie sa dosiahne ligáciou na vhodných reštrikčných miestach. Ak takéto miesta neexistujú, potom sa použijú syntetické oligonukleotidové adaptory alebo linkery (spo jovníky), v spojení so štandardnými metódami rekombinantnej DNA.
Aminokyseliny sú tu identifikované tromi písmenami alebo jednopísmenovým označením, ako je uvedené. Asp D kyselina asparágová íle I izoleucín Thr T treonín Leu L leucín
Ser S serin Tyr Y tyrozin
Glu E kyselina glutamová Phe F fenylalanín
Pro P prolín
Gly G glycín
Ala A alanín
Cys C cysteín
Val V valín Met M metionín
His H histidín
Lys K lyzín
Arg R arginín
Trp W tryptofán
Gin Q glutamín Asn N asparagín
II. Selekcia aktín-rezistentných variantov
Predložený vynález je založený na štúdiu štruktúry, aktín viažucich (viazacích) vlastností, DNA-hydrolytickej aktivity a mukolytickcj aktivity aminokyselinovej sekvencia variantov humánnej DNázy I. Aktín-rezistentné varianty predloženého vynálezu majú DNA-hydrolytickú aktivitu, ale viazanie aktínu s nižšou afinitou ako natívna humánna DNáza I. Zníženie vo viazaní aktínu sa výhodne dosiahne vytvorením mutácií na a/alebo okolo takýchto aminokyselinových zvyškov v natívnej humánnej DNáze I, ktoré sa javia ako ovplyvňujúce viazanie aktínu, zahrnujúc, napríklad, Glul3, His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn56, Asp58, His64, Tyr65, Val67, Ser68, Glu69, Pro70, Ser94, Tyr96 a Alal 14 zvyšky natívnej humánnej DNázy I (číslo nasledujúce po trojpísmenovom aminokyselinovom označení indikuje špecifickú polohu aminokyselinového zvyšku v sekvencii na obr. 1).
Existuje množstvo spôsobov, ktorými sa môžu vyrobiť aktín-rezistentné varianty humánnej DNázy I. V jednom príklade tohoto vynálezu sa aktín-rezistentný variant pripraví introdukciou buď jednou alebo viacnásobnými aminokyselinovými substitúciami, inzerciami (vsunutím) a/alebo deléciami (vynechaniami) na, alebo priľahlých k (tzn. v približne piatich z aminokyselinových zvyškov) takým aminokyselinovým zvyškom natívnej humánnej DNázy I, ktoré ovplyvňujú viazanie aktínu. Niektoré ilustratívne príklady takýchto mutácií sú nasledujúce: D53R, D53K, D53Y, D53A, Y65A, Y65E, Y65R, V67E, V67K, E69R, D53R:Y65A, D53R:E69R, H44A:D53R:Y65A, H44A:Y65A:E69R (pozri obr. 2 až 6).
V ďalšom príklade tohto vynálezu sa aktín-rezistentný variant pripraví introdukčnou mutáciou(-iami), ktorá vytvorí nové miesto glykozylácie na (alebo na priľahlých) (t. j. v asi piatich z aminokyselinových zvyškov) aminokyselinových zvyškoch natívnej humánnej DNázy I, ktoré ovplyvňujú viazanie aktínu. Napríklad, miestom riadená mutagenézaje použitá na introdukciu jednej z tripeptidových sekvencii, asparagín-X-serín alebo asparagin-X-treonín (kde X je akákoľvek aminokyselina s výnimkou prolínu), ktoré sú rozpoznávacími sekvenciami na enzymatické naviazanie uhľovodíkovej skupiny na asparagínovú stranu reťazca. Creighton, Proteins, str. 76 - 78 (W. H. Freeman, 1984). Stérická zábrana, vyskytujúca sa medzi uhľovodíkovou skupinou výsledného N-glykozylovaného variantu DNázy I a aktínom môže znížiť alebo zamedziť viazanie aktínu a následne inhibíciu DNázy I DNA-hydrolytickej aktivity, pri porovnaní s natívnou humánnou DNázou I. Niektoré ilustratívne príklady takýchto mutácii na zavedenie nového glykozylačného miesta sú nasledujúce: H44N, D58S, D58T, V66N, H44N:T46S, H64N:V66S, H64N:V66S, H64N:V66T, Y65N:V67S, Y65N:V67T, V66N:S68T,
V67N:E69S, V67N:E69T, S68N:P70S, S68N:P70T,
S94N:Y96S, S94N:Y96T.
Ľubovoľne, v spojení s takýmito mutáciami na vytvorenie nového miesta glykozylácie, prirodzene sa vyskytujúce miesto glykozylácie v polohách 18 a/alebo 106 v natívnej humánnej DNáza I aminokyselinovej sekvencii môže byť vynechané, v závislosti od rozsahu glykozylácie želanej v aktín-rezistentom variante.
V ďalšom riešení tohto vynálezu miestom riadená mutagenéza sa použije na introdukciu zvyškov na, (alebo na priľahlých) (t. j. v asi piatich z aminokyselinových zvyškov) aminokyselinových zvyškoch natívnej humánnej DNázy I, ktoré sú obsiahnuté pri viazaní aktínu a ktoré sú vhodné na posttranslačnú modifikáciu biologicky alebo chemicky (pozri nižšie). Means, et al., Chemical Modifícation of Proteins (Holden-Day, 1971); Glazer, et al., Chemical Modification of Proteins: Selected Methods and Analvtical Procedures (Elsevier, 1975); Creighton, Proteins, str. 70 - 87 (W. H. Freeman, 1984); Lundblad, Chemical Reagents for Proteín Modification (CRC Press, 1991). Takéto posttranslačné modifikácie môžu predstavovať stérickú zábranu alebo zmenené elektrostatické vlastnosti v DNáze I, ktoré budú znižovať alebo zabraňovať viazaniu aktínu a následnej inhibícii DNA-hydrolytickej aktivity, pri porovnaní s natívnou humánnou DNázou I. Napríklad, cysteínový zvyšok môže byť zavedený na (alebo na priľahlý) zvyšok natívnej humánnej DNázy I, ktorý je obsiahnutý pri viazaní aktínu. Voľný tiol cysteínového zvyšku môže tvoriť intermolekulový disulfidický spoj (mostík) a s ďalším takým variantom DNázy I vytvoriť dimér DNázy I, alebo môžu byť modifikované, napríklad, so špecifickým tiolovým alkylačným činidlom. Niektorými ilustratívnymi príkladmi takýchto mutácií sú: H44C, L45C, V48C, G49C, L52C, D53C, N56C, Y65C, V67C, E69C, Al 14C.
Kvôli jednoduchosti sú substitúcie, inzercie a/alebo delécie v aminokyselinovej sekvencii natívnej humánnej DNázy I zvyčajne vykonané introdukčnými mutáciami do príslušnej nukleotidovej sekvencie DNA kódujúcej natívnu humánnu DNázu I, napríklad miestne riadenou mutagenézou. Expresia zmenenej DNA potom vedie k produkcii variantu humánnej DNázy I, majúceho požadovanú (nenatívnu) aminokyselinovú sekvenciu.
Zatiaľ čo akákoľvek technika, známa v odbore, môže byť použitá na miestne riadenú mutagenézu, napríklad ako opisuje Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratorv Manual, Second Edition (Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1989)), oligonukleotidom-riadená mutagenéza je preferovaným spôsobom prípravy variantov humánnej DNázy I tohto vynálezu. Tento spôsob, ktorý je dobre známy v odbore (Zoller, et al., Meth. Enz. JOO: 4668
- 500 (1983); Zoller, et al., Meth. Enz. 154: 329 - 350 (1987); Carter, Meth. Enz. 154: 382 - 403 (1987); Kunkel, et al., Meth. Enzymol 154: 367 - 382 (1987); Horwitz, et al., Meth. Enz. 185: 599 - 611 (1990)), je vhodný najmä na vyrobenie substitučných variantov, hoci môže byť taktiež výhodne použitý na prípravu variantov deléciou (vyštiepením, vynechaním) a inzerciou (vsunutím).
Technika miestne riadenej mutagenézy typicky využíva fágový vektor, ktorý existuje v dvoch formách - jednovláknovej a dvojvláknovej. Typické vektory, užitočné pre miestne riadenú mutagenézu, zahrnujú vektory, ako je M13 fág a plazmidové vektory, ktoré obsahujú jednovláknového fága replikačného pôvodu (Messing, et al., Meth. Enzymol. 101: 20 - 78 (1983); Veira, et al., Meth. Enzymol. 153: 3 - 11 (1987); Short, et al., Nuc. Acids. Res. 16: 7583 -
- 7600 (1988)). Replikácia týchto vektorov vo vhodných hostiteľských bunkách vedie k syntéze jednovláknovej
DNA, ktorá môže byť použitá na miestne riadenú mutagenézu.
V skratke, pri uskutočňovaní miestne riadenej mutagenézy DNA kódujúcej natívnu humánnu DNázu I (alebo jej variant), je DNA modifikovaná prvou hybridizáciou oligonukleotidu kódujúceho želanú mutáciu jedného vlákna DNA. Po hybridizácii je použitá DNA polymeráza na syntetizovanie celého druhého vlákna, využijúc hybridizovaný oligonukleotid ako primer a využijúc jedno vlákno DNA ako templát. Teda, oligonukleotid kódujúci želanú mutáciu je zabudovaný vo výslednej dvojvláknovej DNA.
Oligonukleotidy na použitie ako hybridizačné sondy alebo primery môžu byť pripravené akoukoľvek vhodnou metódou, ako je purifikácia prirodzene sa vyskytujúcej DNA alebo in vitro syntézou. Napríklad, oligonukleotidy sa dajú rýchlo syntetizovať s využitím rôznych techník v organickej chémii, ako sú opísané v Narang, et al., Meth. Enzymol. 68: 90 - 98 (1979); Brown, et al., Meth. Enzymol. 68: 109 - 151 (1979); Caruthers, et al., Meth. Enzymol. 154: 287 - 313 (1985). Všeobecný prístup k selekcii vhodnej hybridizačnej sondy alebo primeru je veľmi dobre známy. Keller, ct al., DNA Probes, str. 11 - 18 (Stockton Press, 1989). Typicky bude hybridizačná sonda alebo primer obsahovať 10-25 alebo viac nukleotidov a bude zahrnovať aspoň 5 nukleotidov na obidvoch stranách sekvencie kódujúcej želanú mutáciu tak, aby sa zaistilo, že oligonukleotid bude prednostne hybridizovať na želanom mieste molekuly matrice jednovláknovej DNA.
Samozrejme, miestne riadená mutagenéza môže byť použitá na introdukciu viacnásobných mutácií substitúciou, inzerciou alebo deléciou vo východiskovej DNA. Ak miesta, na ktorých sa majú mutácie uskutočniť, sú lokalizované blízko seba, mutácie môžu byť zavedené súčasne s použitím jedného oligonukleotidu, ktorý kóduje všetky želané mutácie. Ale ak miesta, ktoré majú byť mutované, sú rozmiestnené od seba v určitej vzdialenosti (oddelené viac ako desiatimi nukleotidmi), je ťažšie generovať jeden oligonukleotid, ktorý kóduje všetky želané zmeny. Miesto toho môže byť využitá jedna z dvoch alternatívnych metód.
V prvej metóde je generovaný separátny oligonukleotid pre každú žiaducu mutáciu. Oligonukleotidy sú potom naraz teplotné hybridizované na jednovláknovú matricovú (templátovú) DNA a druhé vlákno DNA, ktoré je syntetizované z matrice, bude kódovať všetky zo žiaducich aminokyselinových substitúcií.
Alternatívna metóda obsahuje dva alebo viac cyklov mutagenézy na produkciu želaného variantu. Prvý cyklus je taký, ako je opísané pri vykonávaní jednej mutácie. Druhý cyklus mutagenézy využíva zmenenú DNA, produkovanú v prvom cykle mutagenézy ako templát. Teda, tento templát už obsahuje jednu alebo viac mutácií. Oligonukleotid kódujúci ďalšiu(e) želanú(é) aminokyselinovú(é) substitúciu(e) je potom teplotné hybridizovaný na tento templát a výsledné vlákno DNA teraz kóduje mutácie obidvoch cyklov - prvého aj druhého - mutagenézy. Výsledná DNA môže byť použitá ako matrica v treťom cykle mutagenézy, atď.
PCR mutagenéza (Higuchi, in PCR Protocols, str. 177 - 183 (Academic Press, 1990); Vallette, et al., Nuc. Acids Res. 17: 723 - 733 (1989); je tiež vhodná na vyrobenie variantov humánnej DNázy I. Stručne, keď sa použijú malé množstvá matricovej DNA ako východiskové materiály v PCR, primery, ktoré sa nepatrne odlišujú v sekvencii od príslušného regiónu v matricovej DNA, môžu byť použité na generovanie relatívne veľkých množstiev špecifického fragmentu DNA, ktorý sa líši od sekvencie matrice len na miestach, kde sa primery líšia od matrice. Na zavedenie mutácie do plazmidovej DNA sekvencia jedného z primerov obsahuje, napríklad, želanú mutáciu a je označená na hybridizovanie jedného vlákna plazmidovej DNA na mieste mutácie; sekvencia druhého primeru musí byť zhodná s nukleotidovou sekvenciou protiľahlého vlákna plazmidovej DNA, ale táto sekvencia môže byť lokalizovaná kdekoľvek pozdĺž plazmidovej DNA. Ale je výhodné, keď sekvencia druhého primeru je umiestnená v 200 nukleotidoch z prvého primeru tak, že na konci celej amplifikovanej oblasti DNA viazanej primermi môže byť ľahko sekvenovaná. PCR amplifikácia využívajúca pár primerov ako jeden, už práve opísaný, sa prejavuje v populácii DNA fragmentov, ktoré sa líšia na mieste mutácie špecifikovanom primerom, a možno na iných miestach, pretože kopírujúca matrica je trocha náchylná na chyby. Wagner, et al., m PCR Topics, str. 69-71 (Springer-Verlag, 1991).
Ak pomer matrice k amplifikovanej DNA produktu je extrémne nízky, väčšina DNA fragmentov produktu zabuduje želanú(é) mutáciu(e). Táto DNA produktu sa použije na premiestnenie príslušnej oblasti v plazmide, ktorý slúžil ako PCR matrica, využijúc metódy štandardnej rekombinantnej DNA. Mutácie na oddelených miestach môžu byť zavedené súčasne buď využitím mutantu druhého primeru alebo vykonaním druhej PCR s rôznymi primermi mutantu a ligáciou dvoch výsledných PCR fragmentov súčasne na plazmidový fragmet v troj- (alebo viac-)stupňovej ligácii.
Ďalší spôsob prípravy variantov, kazetová mutagenéza, je založený na technológii opísanej vo Wels, et al., Gene 34: 315 - 323 (1985). Východiskovým materiálom je plazmid (alebo iný vektor), zahrnujúci DNA sekvenciu, ktorá má byť zmenená. Kodón(y) vo východiskovej DNA, ktorá má byť zmenená, sú identifikované. Tu musí byť typické miesto pre reštrikčnú endonukleázu na každej strane identifikovaného(ých) miesta(miest) mutácie. Ak žiadne takéto reštrikčné miesta neexistujú, môžu byť vytvorené s použitím opísanej metódy oligonukleotidom sprostredkovanej mutagenézy na ich vytvorenie na patričných miestach v DNA. Plazmidová DNA je vyrezaná na týchto miestach kvôli linearizácii. Dvojvláknový oligonukleotid kódujúci sekvenciu DNA medzi reštrikčnými miestami, ale obsahujúci želanú mutáciu(e) je syntetizovaný s využitím štandardných postupov, v ktorých dve vlákna oligonukleotidu sú syntetizované oddelene a potom spolu hybridizované s využitím štandardných technológií. Tomuto dvojvláknovému oligonukleotidu sa hovorí kazeta. Táto kazeta je konštruovaná tak, že má 5 a 3 konce, ktoré sú kompatibilné s koncami linearizovaného plazmidu, takže tento sa môže priamo ligovať na plazmid. Výsledný plazmid obsahuje zmenenú DNA sekvenciu.
Prítomnosť mutácie(ií) v DNA sa stanoví spôsobmi, ktoré sú v odbore známe a zahrnujú reštrikčné mapovanie a/alebo DNA sekvenovanie. Výhodnou metódou na sekvenovanie DNA je metóda dideoxy reťazovej terminácie podľa Sangera, et al., Proc Nat. Acad. Sci. USA 72: 3918 - 3921 (1979).
DNA kódujúca variant humánnej DNázy I je vložená do replikovateľného vektora na ďalšie klonovanie a expresiu. „Vektory“ sú plazmidy a iné DNA, ktoré sú schopné replikácie v hostiteľskej bunke samy osebe sú užitočné na uskutočnenie dvoch funkcií v spojení s kompatibilnými hostiteľskými bunkami (vektor-hostiteľský systém). Jednou funkciou je uľahčiť klonovanie nukleovej kyseliny, ktorá kóduje variant humánnej DNázy I, tzn. produkovať užitočné množstvá nukleovej kyseliny. Druhou funkciou je viesť expresiu variantu humánnej DNázy I. Jedna alebo obidve tieto funkcie sú uskutočnené vektorom v zvláštnej hostiteľskej bunke, použitej na klonovanie alebo expresiu. Vektory budú obsahovať rozličné zložky, v závislosti od funkcie, ktorú majú vykonať.
Aby sa produkoval variant humánnej DNázy I, bude expresný vektor obsahovať DNA kódujúci variant, ako už bolo uvedené, operatívne spojený s promótorom a ribozóm viažucim miestom. Variant je potom vytvorený priamo v rekombinantnej bunkovej kultúre, alebo ako fúzia s heterologickými polypeptidmi, výhodne signálnou sekvenciou alebo iným polypeptidom, ktorý má špecifické štiepiace miesto na spojení medzi heterologickým polypeptidom a variantom humánnej DNázy I.
Preferovanými hostiteľskými bunkami iniciálnych klonovacích krokov podľa tohto vynálezu sú prokaryoty (napríklad E. coli a ďalšie baktérie). Sú použiteľné najmä na rýchlu produkciu veľkých množstiev DNA, na produkciu templátov jednovláknovej DNA používaných na miestne riadenú mutagenézu a na sekvenovanie DNA generovaných variantov. Prokaryotické hostiteľské bunky môžu byť taktiež použité na expresiu DNA kódujúcej variant humánnej DNázy I. Polypeptidy, ktoré sú produkované v prokaryotických bunkách, typicky budú neglykozylované.
Okrem toho varianty humánnej DNázy I podľa tohto vynálezu môžu byť vytvorené v eukaryotických hostiteľských bunkách, zahrnujúc eukaryotické mikróby (napríklad kvasinky) alebo bunky odvodené zo živočíšneho alebo iného mnohobunkového organizmu (napríklad ovariálne bunky čínskeho škrečka a iné cicavčie bunky) alebo v živých zvieratách (napríklad dobytok, kozy, ovca).
Klonovacie a expresné metodológie sú v odbore veľmi dobre známe. Príkladmi prokaryotických a eukaryotických hostiteľských buniek a expresných vektorov, vhodných na použitie pri produkcii variantov humánnej DNázy I podľa predloženého vynálezu sú napríklad tie, ktoré sú opísané v Shak, PCT Patent Publication WO 90/07572 (zverejnená
12. júla 1990).
Ak sú prokaryotické bunky alebo bunky, ktoré obsahujú podstatné konštrukcie bunkovej steny, použité ako hostitelia, preferovanými spôsobmi transfekcie buniek DNA je spôsob spracovania vápnikom, ktorý opísali Cohen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 69: 2110 - 2114 (1972) alebo polyetylénglykolový spôsob, ktorý opísali Chung, et ah, Nuc. Acids. Res. 16: 3580 (1988). Ak sú ako hostiteľ použité kvasinky, transfekcia sa vo všeobecnosti vykoná s použitím polyetylénglykolu, ako uvádza Hinnen, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75: 1929 - 1933 (1978). Ak sa ako hostiteľské bunky použijú cicavčie bunky, transfekcia sa vo všeobecnosti uskutočňuje zrážacou metódou fosforečnanom vápenatým, Graham, et al., Virology 52: 546 (1978), Gorman, et al., DNA and Proteín Eng. Tech. 2: 3 - 10 (1990). Ale aj ďalšie známe spôsoby na zavedenie DNA do prokaryotických a eukaryotických buniek, ako napríklad jadrová injekcia, elektroporácia alebo fúzia protoplastov, sú tiež vhodné na použitie v tomto vynáleze.
Obzvlášť užitočné v tomto vynáleze sú expresné vektory, ktoré sa starajú o dočasnú expresiu v cicavčích bunkách DNA, kódujúcej varianty humánnej DNázy I. Všeobecne, dočasná expresia zahrnuje použitie expresného vektora, ktorý je schopný účinnej replikácie v hostiteľskej bunke, takže hostiteľská bunka nahromadí veľa kópií expresného vektora a v dôsledku toho syntetizuje vysoké hladiny želaného polypeptidu kódovaného expresným vektorom. Systémy dočasnej expresie, pozostávajúce z vhodného expresného vektora a hostiteľskej bunky, berú do úvahy praktickú pozitívnu identifikáciu polypeptidov, kódovaných DNA, ako aj rýchly skríning takýchto polypeptidov na požadované biologické alebo fyziologické vlastnosti. Wong, et al., Science 228: 810 - 815 (1985); Lee, et al., Proc. Nat. Acad.
Sci. USA 82: 4360 - 4364 (1985); Yang, et al., Celí 47: 3 - 10 (1986). Teda, dočasné expresné systémy sú vhodné na použitie na expresiu DNA, kódujúcej aminokyselinovú sekvenciu variantov natívnej humánnej DNázy I, v spojení s testami na identifikovanie týchto variantov, ktoré viažu aktín s nižšou afinitou ako natívna DNáza I, ako aj s testami na vyhodnotenie týchto variantov s DNA-hydrolytickou aktivitou.
Variant humánnej DNázy I je výhodne vylučovaný z buniek, v ktorých je vytvorený, a v tomto prípade sa získa späť z kultivačného média, v ktorom hostiteľské bunky rastú. V tom prípade môže byť žiaduce, aby bunky rástli v kultivačnom médiu bez séra, pretože neprítomnosť sérových proteínov a iných zložiek séra v médiu môže uľahčiť purifikáciu variantu. Ak sa nevylučuje, potom sa variant humánnej DNázy I získa naspäť z lyzátov hostiteľských buniek. Keď je variant vytvorený v hostiteľskej bunke iného ako ľudského pôvodu, variant bude kompletne bez proteínov ľudského pôvodu. V každom prípade bude potrebné purifikovať variant od rekombinantných bunkových proteínov, aby sa získali podstatne homogénne preparáty variantu humánnej DNázy I. Na terapeutické použitie budú mať purifikované varianty výhodne vyššiu čistotu ako 99 % (napríklad, akékoľvek ďalšie proteíny budú pozostávať z menej ako 1 % celkového proteínu v purifikovanej zmesi).
Všeobecne, purifikácia variantu humánnej DNázy I je uskutočnená s využitím diferenciálnych fyzikálnochemických vlastností variantov pri porovnaní s kontaminantmi, s ktorými môže byť spojená. Napríklad, ako prvý krok sa centrifuguje kultivačné médium alebo lyzát hostiteľských buniek, aby sa odstránili najmä pozostatky buniek. Variant humánnej DNázy I sa potom zbavuje znečistenín rozpustných proteínov a polypeptidov, napríklad zrážaním síranom amónnym alebo etanolom, gélovou filtráciou (molekulová vytesňovacia chromatografia), ionexovou chromatografiou, hydrofóbnou chromatografiou, imunoafinitnou chromatografiou (napríklad s použitím kolóny, pozostávajúcej z protilátok proti humánnej DNáze I naviazaných na Sepharose), zachytávacou kationexovou výmennou chromatografiou (Frenz, et al., PCT Patent Publication WO 93/25670, zverejnená 23. decembra 1993), reverznou fázovou HPLC a/alebo gélovou elektroforézou.
Je samozrejmé, že odborník v odbore pochopí, že metódy čistenia, ktoré sú použité pre natívnu humánnu DNázu I, si môžu vyžadovať nejakú modifikáciu, aby boli použiteľné na purifikáciu variantu humánnej DNázy I, zdôvodnenú štrukturálnymi alebo inými rozdielmi medzi natívnymi proteínmi a proteínmi variantu. Tak napríklad v niektorých hostiteľských bunkách (najmä v bakteriálnych hostiteľských bunkách) môže byť variant humánnej DNázy I vytvorený na začiatku v nerozpustnej, agregovanej forme (spomenuté v stave techniky ako „refŕaktilné telieska“ alebo „inklúzne telieska“), v prípade ktorej bude nevyhnutná solubilizácia a renaturácia variantu humánnej DNázy I v priebehu jeho čistenia. Spôsoby solubilizácie a renaturácie refraktilných teliesok rekombinantného proteínu sú v odbore známe (pozri, napríklad, Builder, et al., US patent 4 511 502).
V ďalšom príklade tohto vynálezu sa varianty humánnej DNázy I pripravia uskutočnením kovalentných modifikácií priamo v proteíne natívnej alebo variantu humánnej DNázy I. Takéto modifikácie sa robia kvôli aktín-viažucej (viažucej) účinnosti alebo kvôli inej vlastnosti proteínu (napríklad stabilite, biologickému polčasu rozpadu, imunogenicite) a môžu byť urobené namiesto, alebo okrem, mutácii aminokyselinovej sekvenčnej substitúcie, inzercie a delécie, opísaných skôr.
Kovalentné modifikácie môžu byť zavedené reakciou cieľových aminokyselinových zvyškov natívnej DNázy I alebo variantu DNázy I s organickým derivatizačným činidlom, ktoré je schopné reakcie s vybranými aminokyselinovými postrannými reťazcami alebo N- alebo C-koncovými zvyškami. Vhodné derivatizačné činidlá a spôsoby sú v odbore dobre známe.
Tak napríklad cysteinylové zvyšky najčastejšie reagujú s a-halogénacetátmi (a zodpovedajúcimi amínmi), ako je kyselina chlóroctová alebo chlóracetamid, za vzniku karboxymetyl alebo karboxyamidometyl derivátov. Cysteinylové zvyšky sú derivatizované reakciou s brómtrifluóracetónom, a-bróm-P-(5-imidazoyl)propiónovou kyselinou, chlóracetylfosfátom, N-alkylmaleínimidom, 3-nitro-2-pyridyldisulfídom, metyl-2-pyridyldisulfidom, p-chlórmerkuribenzoátom, 2-chlórmerkuri-4-nitrofenolom alebo chlór-7-nitrobenzo-2-oxa-l ,3-diazolom.
Histidylové zvyšky sú derivatizované reakciou s dietylpyrokarbonátom pri pH 5,5-7,0, pretože toto činidlo je relatívne špecifické pre histidylový bočný reťazec. Použiteľný je aj para-brómfcnacylbromid; reakcia sa výhodne uskutočňuje v O,1M kakodylane sodnom pri pH 6,0.
Lyzinylové a aminokoncové zvyšky reagujú so sukcinanhydridom alebo s anhydridom inej karboxylovej kyseliny. Derivatizácia týchto činidiel má účinok na reverziu náboja lyzinylových zvyškov. Iné vhodné činidlá na derivatizáciu zvyškov, obsahujúcich α-amino, zahrnujú imidoestery, ako je metylpikolínimidát; pyridoxalfosfát; pyridoxal; chlórbórhydrid; kyselina trinitrobenzénsulfónová; O-dimetylizomočovina; 2,4-pentándión a katalyzovanú transaminázovú reakciu s glyoxalátom.
Arginylové zvyšky sú modifikované reakciou s jedným alebo niekoľkými konvečnými činidlami, medzi iným fenylglyoxalom, 2,3-butándiónom, 1,2-cyklohexándiónom a mnhydrínom. Derivatizácia arginínových zvyškov vyžaduje, aby sa reakcia uskutočnila v alkalických podmienkach kvôli vysokej pKa guanidínovej funkčnej skupiny. Okrem toho tieto činidlá môžu reagovať so skupinami lyzinu ako aj s epsilon-aminoskupinou arginínu.
Bočné karboxylové skupiny (aspartyl alebo glutamyl) sú selektívne modifikované rekaciou s karbodiimidmi (R-N=C=N-R'), kde R a R sú rozličné alkylskupiny, ako je l-cyklohexyl-3-(2-morfolinyI-4-etyl)karbodiimid alebo 1-etyl-3-(4-azonia-4,4-dimetylpentyl)karbodiimid. Aspartylové a glutamylové zvyšky sú ďalej konvertované na asparaginylové a glutaminylové zvyšky reakciou s amónióvými iónmi.
Kovalentné pripájanie glykozidov na aminokyselinové zvyšky proteínu môže byť použité na modifikáciu alebo na zvyšovanie počtu alebo profilu uhľovodíkových zvyškov, najmä na, alebo pri, spojoch týchto zvyškov, ktoré sú zahrnuté pri viazaní aktínu. V závislosti od použitia kopulačného spôsobu sa môže(u) pridať cukor(kry) k (a) arginínu a histidínu, (b) voľnej karboxylovej skupine, (c) voľnej sulfohydrylovej skupine, ako je skupina cysteínu, (d) voľnej hydroxylovej skupine, ako je skupina serínu, treonínu alebo hydroxyprolínu, (e) aromatickým zvyškom, ako sú zvyšky fenylalanínu, tyrozínu alebo tryptofánu alebo (f) amidovej skupine glutamínu. Vhodné spôsoby sú opísané, napríklad, v PCTpatentovej publikácii WO 87/05330 (zverejnená 11. septembra 1987) a v Aplin, et al., CRC Crit. Rev. Biochem. str. 259 - 306 ) 1981).
Kovalentná väzba činidiel, ako je polyetylénglykol (PEG) alebo humánny sérumalbumín, na varianty humánnej DNázy I môže znížiť imunogenicitu a/alebo toxicitu variantu a/alebo predĺžiť jeho polčas rozpadu, ako sa zistilo pri iných proteínoch. Abuchowski, et al., J. Biol. Chem.
252: 3582 - 3586 (1977); Poznansky, et al., FEBS Ĺetters 239: 18 -22 (1988); Goodson, et al., Biotechnology 8: 343 - 346 (1990); Katre, J. Immunol 144: 209 - 213 (1990); Harris, Polyetyléne Glycol Chemistry (Plénum Press, 1992). Okrem toho modifikácia natívnej humánnej DNázy I alebo jej variantu týmito činidlami na, alebo v susedstve s (t.zn. asi v piatich z aminokyselinových zvyškov) aminokyselinovým zvyškom, ktorý pôsobí aktín-viažuco, môže viesť k aktín-rezistentným variantom.
V ďalšom riešení aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I môže obsahovať mutáciu na Asn zvyšku, ktorý sa vyskytuje na pozícii 74 natívnej humánnej DNázy I aminokyselinovej sekvencie (napríklad N74D, N74K alebo N74S mutácia), aby sa znížila alebo aby sa zabránilo deamidácii variantu DNázy I. Frenz, et al., PCT Patent Publication WO 93/25670, zverejnená 23. decembra 1993. Ako ďalší príklad môže aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I obsahovať mutáciu aminokyselinovej sekvencie alebo inú kovalentnú modifikáciu, ktorá zníži náchylnosť variantu na degradáciu proteázami (napríklad neutrofilnou elastázou), ktoré môžu byť prítomné v spútu alebo v iných biologických materiáloch.
DNA-hydrolytická aktivita a aktín-viažuca afinita variantov humánnej DNázy f pripravených, ako je opísané skôr, sa rýchlo stanoví s využitím testov a spôsobov známych v odbore a tu opísaných. Akýkoľvek takýto variant, ktorý má DNA-hydrolytickú aktivitu a zníženú viažucu aktivitu pre aktín (ako je definované), je aktín-rezistentným variantom, spadajúcim do rozsahu tohto vynálezu.
Aktín-rezistentné varianty humánnej DNázy I tohto vynálezu sa použijú na zníženie viskoelasticity materiálu, obsahujúceho DNA, ako je spútum, hlien alebo iné pľúcne sekréty (výlučky). Takéto varianty sú užitočné predovšetkým na liečenie pacientov s pľúcnymi ochoreniami, ktorí majú abnormálnu viskóznu (lepkavú) alebo zhustenú sekréciu a v podmienkach, ako sú akútne alebo chronické bronchiálno-pľúcne choroby, zahrnujúce infekčné zápaly pľúc, bronchitídu alebo tracheobronchitídu, bronchoektáziu, cystickú fibrózu, astmu, tuberkulózu a hubovité infekcie. Na takúto liečbu sa roztok alebo jemne rozdrobený suchý preparát aktín-rezistentného variantu dodá bežným spôsobom do vzduchových ciest (napríklad do priedušiek) alebo pľúc pacienta, napríklad aerosolizáciou.
Aktín-rezistentné varianty sú taktiež užitočné na doplnkovú liečbu abscesov alebo ťažkých uzavretých infekcii pri stavoch, ako sú empyema, meningitída, absces, peritonitída, sinusitída, otitída, periodontitída, perikarditída, pankreatitída, cholelitiáza, endokarditída a septická artritída, ako aj na topickú liečbu v rôznych druhoch zápalových a infikovaných lézií, ako sú infikované lezie pokožky a/alebo slizníc, chirurgických rán, ulceratívnych lézií a popálenín. Aktín-rezistentný variant môže zlepšiť účinnosť antibiotík, použitých pri liečení takýchto infekcií (napríklad účinnosť gentamycínu je rapídne znížená reverzibilným viazaním na intaktnú DNA).
Natívna humánna DNáza a jej aktín-rezistentné varianty môžu byť užitočné aj na liečenie systémového lupus erythematosus (SLE), život ohrozujúceho autoimunitného ochorenia, charakterizovaného produkciou rozmanitých autoprotilátok. DNA je hlavnou antigénnou zložkou imunitných súborov. V tomto prípade môže byť humánna DNáza I (Natívna alebo variant) podávaná systémovo, napríklad intravenóznou, subkutánnou, intratekálnou alebo intramuskulámou cestou postihnutému pacientovi.
Natívna humánna DNáza a jej aktín-rezistentné varianty môžu byť taktiež užitočné na prevenciu nového rozvinutia a/alebo zhoršenia dýchacích infekcií, ktoré sa môžu
Nasledujúce príklady sú ponúkané len ako spôsob ilustrácie a v žiadnom prípade sa nemajú chápať ako akýmkoľvek spôsobom obmedzujúce vynález. Všetky patenty a literárne odkazy, tu citované, sú výslovne začlenené.
odohrať u pacientov s cystickou fibrózou, chronickou bronchitídou, astmou, zápalom pľúc alebo inými pľúcnymi ochoreniami alebo u pacientov, u ktorých sa pri dýchaní napomáha s ventilátorom alebo iných mechanickým zariadením alebo u iných pacientov pri riziku vyvinutia respiračných infekcií, napríklad u pacientov po chirurgickom zákroku.
Aktin-rezistentné varianty môžu byť spracované do aplikačných foriem spôsobmi, známymi na prípravu farmaceutický použiteľných kompozícií. Výhodnou terapeutickou kompozíciou je roztok aktín-rezistentného variantu v tlmivom alebo netlmivom vodnom roztoku, výhodne v izotonickom fyziologickom roztoku, ako je 150 mM chloridu sodného obsahujúceho 1,0 mM chloridu vápenatého pri pH 7. Tieto roztoky sú obzvlášť prispôsobiteľné na použitie v komerčne dostupných nebulizátoroch, zahrnujúcich dýzové (hubicové) a ultrazvukové nebulizátory, použiteľné na podanie priamo do vzduchových ciest alebo pľúc postihnutého pacienta.
V inom príklade terapeutická zmes pozostáva zo suchého prášku aktín-rezistentného variantu, výhodne pripraveného rozprašovacím sušením roztoku aktín-rezistentného variantu, v podstate opísaného v US patentovej prihláške 08/206,020 (podaná 4. marca 1994), ktorá je v konaní.
V ďalšom príklade terapeutická zmes pozostáva z buniek, aktívne produkujúcich aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I. Takéto bunky môžu byť priamo zavedené do tkaniva pacienta alebo môžu byť enkapsulované v pórovitých membránach, ktoré sa potom pacientovi implantujú, v obidvoch prípadoch zaisťujúc dodanie aktín-rezistentného variantu do oblasti v tele pacienta, kde je potrebný nárast koncentrácie DNA-hydrolytickej aktivity. Napríklad, vlastné bunky pacienta by mohli byť transformované, buď in vivo alebo ex vivo, DNA kódujúcou aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I, a potom použité na produkciu DNázy I priamo v pacientovi.
Terapeuticky účinné množstvo aktín-rezistentného variantu humánnej DNázy I bude závisieť, napríklad, od obsahu DNA a aktínu v materiáli, ktorý má byť ošetrený, od cieľov liečby, aplikačnej cesty a od stavu pacienta. Pre terapeuta bude preto nevyhnutné titrovať dávku a modifikovať spôsob aplikácie tak, ako si to vyžaduje dosiahnutie optimálneho terapeutického efektu. Vzhľadom na zníženú viazaciu afinitu pre aktín a následný nárast DNA-hydrolytickej aktivity v prítomnosti aktínu v pomere k natívnej humánnej DNáze I, množstvo aktín-rezistentného variantu požadovaného na dosiahnutie terapeutického účinku môže byť menšie ako množstvo natívnej humánnej DNázy I potrebné na dosiahnutie rovnakého účinku za rovnakých podmienok. Vo všeobecnosti terapeuticky účinné množstvo aktín-rezistentného variantu bude dávkou približne od 0,1 pg do 5 mg variantu na kilogram telesnej hmotnosti pacienta, podanou vo farmaceutickej zmesi, ako už bolo opísané.
Variant aktín-rezistentnej DNázy I sa dá ľubovoľne kombinovať s, alebo podať v spojení, s jedným alebo viacerými ďalšími farmakologickými činidlami, použiteľnými na liečenie stavov, uvedených skôr, ako sú antibiotiká, bronchodilatátory, protizápalové prostriedky, mukolytiká (napríklad n-acetyl-cysteín), aktín-viažuce alebo aktín-oddeľujúce proteíny (napríklad gelsolin; Matsudaira, et al., Celí 54: 139 - 140 (1988); Stossel, et al., PCT Patent Publication WO 94/22465 (zverejnená 13. októbra 1994)), inhibítory proteázy alebo produkty génovej terapie (napríklad zahrnujúce gén cystickej fibrózy regulujúci vedenie cez membránu (CFTR), Riordan, et al., Science 245: 1066 - 1073 (1989).
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 predstavuje aminokyselinovú sekvenciu humánnej zrelej DNázy I (SEQ. ID. NO:1). Čísla označujú sekvenčné polohy aminokyselinových zvyškov v sekvencií.
Obr. 2 až 6 predstavujú údaje nasledujúcich variantov:
A1X4C (SEQ. ID. RC: $8) OS3A (SEQ. ID- NO: 13)
A114E (SEQ. XD. NO: €9) DS3Y (SEQ. ID· NO: 14}
A114G (SEQ. Π). NO: 70) D53T (5EQ. ID. NO: 80)
A114K (SEQ. ID. NO: 71) B13A (5SQ. ID. NO; 3)
KL14X (SEQ. ID. NO: 72) K13S (SEQ. ID. NO: 3)
A114X (SEQ. ID. NO: 73) EUR (SEQ. ID. NO: 4)
A114H (SEQ. XD. NO: 74) EUW (SEQ. ID. NO: 5}
A114Q (SEQ. ID. NO: 75) EUY (SEQ. ID. NO: 6)
AX14R (SEQ. ID. NO: 7«) E69A (SEQ. ID. NO; 65)
A1X4W (SEQ. ID. NO: 77) I69C (SEQ. ID. NO: 6«)
A114Y (SEQ. ID. NO: 78} IS9K (SEQ. ID. NO: 21)
DS3Ä. (SEQ. ID. NC: 11) X69H (SEQ. ID. NO: 67}
C53C (SEQ. ID. NC: 42) E69R (SEQ. ID. NO: 22)
DS3X (SEQ. ID. NC: 11) 049C (SEQ. ID. NO: 35)
(SEQ. ID. NO: 44) «495 (SEQ. ID. NO: 36)
DS3H (SEQ. ID. NO: 4S) G4 9K (SEQ· ID. NO: 37)
G-ÍSR (SSQ. ID. SC; 33) V»7Ä (SEQ. ID. NO: 18)
ISSS. ID. NC: 39) 767 C (SEQ. ID. NO.· SS)
H44A (SEQ. ID. NC: 7) VS7O (SEQ. ID. NO: 36)
K44C (SEQ. ID. MC: 28) V67E (SEQ. ID. NC: X9)
K44Q (SEQ. ID. NO: S) 7673 (SEQ. ID. NO: 37)
E44E (SEQ. ID. NO: 86) V67X (SEQ. ID. NO: 20)
Κ44Π (SEQ. ID. NO: 79) V67M (SEQ. ID. NO: S8)
H44Q (SEQ. ID. NC: 19) 757? (SEQ. ID. NO: SS)
K44W (SEQ. ID. NO: 101 V57R (SEQ. ID. NO: 60)
M44? (SEQ. ID. NO; 5) VÍ7S (SEQ. ÍO. NO: 61)
D4SC (SEQ. ID. NO: 301 Y S: A (SÍC- ID- NO i lf)
L45X (SEQ. ID. NO: 31) X63C (SEQ. ID. NO: 51)
L45R (SEQ. ID. NC: 32) Y552 (SEQ. ID. NO: 07)
L52C (SEQ. ID. NO: 40) Y55X (SEQ. ID. NC: SC)
L51X (SEQ. ID. NC: 41) Ϊ55Μ (SEQ. ID. NO: Sj)
L5IM (SEQ. ID. NO; 42) YS5? (SEQ. ID. NO: 97}
LS2N (SEQ. ID. NO: 90) Y55R (SEQ. ID. NO: 16)
L52R (SEQ. ID- NO: 91) Y55S (SEQ- ID. NO: 54)
N5eC (SEQ. ID. NO: 46) Y55W (SEQ. ID. NC: 17)
NSóC (SEQ. ID. NO: 92) DS3R:E65R (SEQ. ID- NO: 2S)
N5ór (SEQ. ID. NO; 47) D53R:H44Ä {SEQ. ID. NC: 23)
N5ÍP (SEQ. ID. NC: 93) DS3R:Y6SA (SEQ. ID. NO: 24}
(SEQ. ID. NO: 94) BÍ4N:VSST (SEQ. ID. NO: 81)
nsóe (SEQ. ID. NO: 48) SÍ3N;J>7CT (SEQ. ID. NO: 98)
K5 6R (SEQ. XD. NO: 49) S54N:Y967 (SEQ. ID. NO: 85)
N56R (SEQ. ID. NO: 95) V«7K:ES9T (SEQ. ID. NO: 84)
K5ÍW (SEQ. ID. NO: SO) T«5«:V«75 (S£Q. ID. NO: 82)
HSfiW (SEQ. ID. NO: 96) D53R:I65A:£69R (SEQ. ID. NC;
S63X (SEQ. ID. NO: 62) 88)
S63M (SEQ. ID. NO; 63) H44A;D33R :Y65A(SEQ. ID. NO;
S63R (SEQ. ID. NO: 64) 26)
V48C (SEQ. ID. NO: K44A:Y65A .:£69R (SEC· ID. NO;
V48X (SEQ. ID. NO: 34) 2?)
V48R (SEQ. ID. NO: B9)
V66N (SEQ. ID. NO: B3)
Obr. 2A-D zobrazujú relatívnu špecifickú aktivitu natívnej humánnej DNázy I a variantov. Chybové stĺpce znamenajú štandardnú odchýlku (n-zaťaženie). Relatívna špecifická účinnosť humánnej DNázy I Pulmozyme®-u (Genentech, Inc., South San Francisco, Califomia, USA) je definovaná ako 1,0. Relatívna špecifická účinnosť humánnej DNázy I je vyššia ako Pulmozyme®, kvôli prítomnosti deamidovanej formy humánnej DNázy I, ktorá znížila DNA-hydrolytickú aktivitu (Frenz, et al., PCT Patent Publication WO 93/25670, zverejnená 23. decembra 1993).
Obr. 3 zobrazuje DNA-hydrolytickú aktivitu natívnej humánnej DNázy I a jednozvyškových variantov humánnej DNázy I v prítomnosti aktínu, ako bolo stanovené v teste hyperchrómového efektu (test hyperchromicity). „Percento aktivity“ je percento DNA-hydrolytickej aktivity humánnej DNázy I (natívnej alebo variantu) vypočítané spôsobom, ako je opísané v príklade 3; DNA-hydrolytická aktivita humánnej DNázy I za neprítomnosti aktínu je definovaná ako
100 % aktivita. Nepresné stĺpce (pruhy) reprezentujú štandardnú odchýlku.
Obr. 4 ukazuje DNA-hydrolytickú aktivitu natívnej humánne DNázy I a viaczvyškových variantov humánnej DNázy I v prítomnosti aktínu, ako bolo stanovené v hyperchrómovom teste alebo v teste s metylovou zelenou. „Percento účinnosti“ je percento DNA-hydrolytickej aktivity humánnej DNázy I (natívnej alebo variantu) vypočítané spôsobom, ako je opísané v príklade 3; DNA-hydrolytická aktivita humánnej DNázy I za neprítomnosti aktínu je definovaná ako 100 % aktivita. Nepresné stĺpce reprezentujú štandardnú odchýlku.
Obr. 5A-D zobrazujú relatívnu viazaciu afinitu variantov humánnej DNázy I proti aktínu, ako bola stanovená aktín-viažucim ELISA testom (ako je opísané v príklade 3). Hodnota EC50 je koncentrácia DNázy I (natívnej alebo variantu), ktorá je nutná na to, aby poskytla polovicu maximálneho signálu v teste. Nepresné stĺpce reprezentujú štandardnú odchýlku. Hodnoty EC50 pre Pulmozyme® a natívnu humánnu DNázu I sú 67 ±23 pM (n=31) prípadne 87 +14 pM (n=32). Relatívna viažuca afinita, znázornená na obrázku, je hodnota EC50 určená pre variant humánnej DNázy I, delená hodnotou EC50 určenou pre natívnu humánnu DNázu I. Varianty, kde hodnota EC50 bola väčšia, ako mohlo byť odmerané v teste, sú označené ako majúce pomer (EC5ovariantu DNázy I)/EC50(natívnej DNázy I)) vyšší ako určitá hodnota (napríklad, >10, >100, >300, >2000, >20000, >35000).
Obr. 6 predstavuje mukolytickú účinnosť natívnej humánne DNázy I a variantov humánnej DNázy I vo vzorkách spúta od pacientov s cystickou fibrózou, ako bola stanovená v teste kompaktnosti. Nepresné stĺpce reprezentujú štandardnú chybu spôsobu.
Obr. 7 ukazuje schematické znázornenie aktín viažuceho ELISA testu, opísaného v príklade 3.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Mutagenéza humánnej DNázy I
E. coli, kmeň CJ236 (BioRad Laboratories, Richmond, Califomia USA) sa transformuje plazmidom pRK.DNáza.3, s použitím spôsobu podľa Chung, et al. (Nuc. Acids. Res. 16: 3580 (1988)). Plazmid pRK.DNáza.3, použitý pri uskutočnení predloženého vynálezu, je ten, ako je opísaný v PCT patentovej publikácii WO 90/07572 (zverejnená 12. júla 1990) s výnimkou toho, že nukleotidová sekvencia kódujúca humánnu DNázu I je taká, ako je ukázaná na obr. 1. Transformované bunky sa naočkovali na LB agarové platne, obsahujúce 50 pg/l karbenicilínu a nechali rásť cez noc pri 37 °C. Bujón 2YT (5 ml), obsahujúci 50 pg/ml karbenicilínu a 10 pl VCSM13 pomocného fága (Stratagene, La Jolla, Califomia USA) sa naočkoval individuálnou kolóniou z agarovej platne a nechal sa, za pretrepávania, rásť cez noc pri 37 °C. Z tejto kultúry sa izolovala jednovláknová DNA a použila sa ako templát (matrica) na následnú mutagenézu.
Miestne riadená mutagenéza sa uskutočnila s použitím syntetických oligonukleotidov, podľa metódy Kunkel, et al. (Meth. Enzymol. 154: 367 - 382 (1987)). Mutagenetickými oligonukleotidmi boli 21-mers alebo 24-mers, majúce buď 9 alebo 12 súhlasných báz 5 k nesúhlasnému kodónu a 9 súhlasných báz 3 k nesúhlasnému kodónu. Nasledujúcou mutagenézou sa jednovláknová DNA z individuálnych klonov podrobila dideoxysekvenovaniu (Sanger, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 74: 5463 - 5467 (1977)). DNA majúca variant nukleotidových sekvencií, sa potom transformovala, ako je opísané, do E. coli kmeň XL1 Blue MRF (Stratagene). Po naočkovaní a izolovaní jednej kolónie, ako už bolo uvedené, sa individuálne kolónie použili na inokuláciu 0,5 1 LB bujónu, obsahujúceho 50 pg/ml karbenicilínu. Po raste za pretrepávania cez noc pri 37 °C sa bunky odobrali centrifugáciou, variant DNA (v expresnom vektore) sa purifikoval s použitím kolón Qiagen typ-500 (Qiagen Inc., Chatsworth, Califomia USA).
Obr. 2 až 6 identifikujú rôzne varianty humánnej DNázy I, ktoré boli pripravené. Na obrázkoch a v celom texte opis aminokyselinovej(ých) substitučnej(ých) mutácie(ií), prítomnej vo variante DNázy I, je skrátený prvým písmenom abecedy, číslom a druhým písmenom abecedy. Prvé písmeno abecedy je jednopísmenová skratka aminokyselinového zvyšku v natívnej (divý typ) humánnej dospelej DNáze I, číslo indikuje polohu tohto zvyšku v natívnej humánnej dospelej DNáze I (číslovanie ako na obr. 1) a druhé abecedné písmeno je jednopísmenová skratka aminokyselinového zvyšku pri tejto polohe vo variante DNázy I. Napríklad, vo variante DNázy 1, ktorá má D53R mutáciu, zvyšok kyseliny asparágovej (D) na polohe 53 v natívnej humánnej dospelej DNáze I bol nahradený arginínovým (R) zvyškom. Viacnásobné mutácie v jednom variante sú označené podobne, so stĺpcom (:) oddeľujúcim každú z rôznych mutácií, ktoré sú prítomné vo variante. Napríklad, označenie D53R:Y65A určuje, že variant má D53R mutáciu a Y65A mutáciu.
Príklad 2
Expresia variantov humánnej DNázy I
293 buniek zárodočných humánnych obličkových buniek (ATCC CRL 1573, Američan Type Culture Collection, Rockville, Maryland USA) sa kultivovalo v sérum obsahujúcej pôde (médium) v 150 mm plastických Petriho miskách. Bunky v logaritmickej fáze sa dočasne kotransfektovali s 22,5 pg purifikovaného variantu DNA (pripraveného ako je opísané) a 17 pg adenovírusu DNA s použitím kalciumfosfátovej zrážacej metódy (Gorman, ct al., DNA and Proteín Eng. Tech. 2: 3 - 10 (1990)). Približne 16 hodín po transfekcii sa bunky premyli 15 ml fosforečnanového tlmivého roztoku a pôda sa vymenila za pôdu bez séra. Dve úrody bunkovej pôdy (kultúry) sa zobrali z každej platne; prvá buď po 24 alebo 72 hodinách a posledná po 96 hodinách po zmene za pôdu bez séra. Týmto spôsobom sa získalo spolu približne 50 ml supematantu bunkovej kultúry, obsahujúceho variant DNázy I. Fond supematantu kultúry, pozberanej z každej platne, sa zakoncentroval 5- až 50-krát s využitím zahusťovača Centriprep 10 a koncentráty sa testovali, aby sa stanovili rozličné biochemické a biologické aktivity variantov DNázy I.
Koncentrát obsahujúci natívnu humánnu DNázu I bol pripravený rovnakým postupom, ako je uvedené, okrem dočasného transfektovania 293 buniek plazmidom pRK.DNáza.3
Príklad 3
Biochemické a biologické účinky variantov humánnej DNázy I
I. Relatívna špecifická aktivita
Relatívny špecifický účinok variantov DNázy I sa testoval porovnávaním účinku variantu s variantom z natívnej humánnej DNázy I v dvoch rozdielnych testoch. Relatívna špecifická aktivita variantov je definovaná ako koncentrácia variantu (v pg/ml), stanovená testom aktivity s metylovou zelenou (Sinicropi, et ah, Anal. Biochem. 222: (351 9
- 358 (1994); Kumick, Árch. Biochem. 29: 41 - 53 (1950)), delené koncentráciou variantu (v pg/ml) stanovená v DNáze I ELISA testom (opísaný nižšie). V obidvoch testoch, v teste aktivity s metylovou zelenou a ELISA teste DNázy I, sa štandardné krivky stanovili s použitím Pulmozyme® humánnej DNázy I. Relatívna špecifická účinnosť natívnej humánnej DNázy I a variantov je znázornená na obr. 2A -D.
Test aktivity s metylovou zelenou (Sinicropi, et al., Anal. Biochem. 222: (351 - 358 (1994); Kumick, Árch. Biochem. 29: 41 - 53 (1950)) využíva farbivo metylzeleň, ktoré sa včleňuje po každých približne 10 bázach do DNA, výsledkom čoho je zelený substrát. Pretože DNA je štiepená DNázou I, metylzeleň sa uvoľňuje a oxiduje na bezfarebnú formu. Teda, strata zelenej farby je proporcionálna k množstvu DNázy I, pridaného do testovanej vzorky. Množstvo DNázy I, prítomné v teste, sa potom kvantifikuje porovnaním s krivkou štandardu, ktorá je pripravená testovaním známych množstiev DNázy I.
ELISA test DNázy I zahrnuje potiahnutie mikrotitračných platničiek s kozacou anti-DNáza I polyklonálnou protilátkou, pridanie vzorky, ktorá má byť testovaná a detegovanie akéhokoľvek výsledného pásma (hranice) DNázy I s králičou anti-DNáza I polyklonálnou protilátkou, ktorá je konjugovaná na chrenovú peroxidázu (HRP). Keď sa pridajú HRP substrát a činidlo na vyvolanie farby, rozvinutie farby je proporcionálne množstvu DNázy I, prítomnej vo vzorke. Množstvo DNázy I, prítomné v pokuse, sa potom kvantifikuje porovnaním so štandardnou krivkou, ktorá je pripravená testovaním známych množstiev DNázy I.
V obidvoch testoch sa testovali viacnásobné riedenia vzoriek a tie hodnoty, ktoré spadli do stredu rozsahu štandardnej krivky sa spriemerovali a vypočítali sa štandardné odchýlky.
Takisto koncentrácia DNázy I, stanovená DNáza I ELISA testom, bola použitá na štandardizovanie koncentrácií DNázy I v ďalších testoch, v ktorých boli charakterizované varianty DNázy I (napríklad v testoch inhibície aktínom, opísaných nižšie).
II. Inhibícia hydrolytickej aktivity DNázy I aktínom
G-aktín (Kabsch, et al., Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 21: 49 - 76 (1992) sa pripravil kratšie ako 10 dní pred použitím dialýzou cez noc 1 mg/ml roztoku komerčne dostupného aktínového preparátu (Sigma, St. Louis, Missouri USA) voči 5 mM HEPES, pH 7,2, 0,2 mM CaCl2, 0,5 mM ATP, 0,5 mM β-merkaptoetanolu pri 4 °C. Po centrifugácii pri 13 000 x g počas 5 minút sa množstvo G-aktínu kvantifikovalo meraním absorbancie pri 290 nm; 1 mg/ml roztoku má absorbanciu 0,66 OD. Množstvo G-aktínového preparátu požadované na podstatnú (>50 % inhibíciu), ale nie totálnu, inhibíciu DNA-hydrolytickej aktivity natívnej humánnej DNázy I bolo stanovené v orientačných experimentoch za použitia rovnakých podmienok pre každý test.
Citlivosť na aktínovú inhibíciu bola vyhodnotená meraním DNA-hydrolytickej aktivity variantov v prítomnosti a bez aktínu v obidvoch rozličných testoch, v už opísanom teste s metylzeleňou a v teste hyperchromicity, ktorý je založený na náraste absorbancie pri 260 nm po denaturácii a depolymerizácii DNA (Kunitz, J. Gen. Physiol. 33: 349 -
- 362 (1950); Kunitz, J. Gen. Physiol. 33: 363 - 377 (1950)). Percentá inhibície vybraných variantov v týchto testoch sú uvedené na obr. 3 a 4.
V teste hyperchromicity zahustené supematanty kultúr (pripravené opísaným spôsobom, obsahujúce varianty DNázy I) sa inkubovali buď bez pridania alebo s 2- až 3
-násobným molovým prebytkom aktínu v tlmivom roztoku A (25 mM HEPES, pH 7,5, 4 mM CaCl2, 4 mM MgCl2, 0,1 % BSA) počas jednej hodiny pri teplote miestnosti a potom sa pridali do kyvety obsahujúcej 40 pg DNA v celkovom stanovovanom objeme 1,0 ml. Konečná koncentrácia variantu DNázy I v pokuse bola približne 26 nM, ako bolo stanovené DNáza I ELISA testom. Vyhodnotil sa stupeň DNA hydrolýzy variantmi DNázy I v prítomnosti aktínu a bez aktínu. Percento aktivity, uvedené na obr. 3 a 4, sa vypočítalo stanovením pomeru DNA hydrolytickej aktivity humánnej DNázy I (natívnej alebo variantu) v prítomnosti aktínu k jej DNA hydrolytickej aktivite bez aktínu, násobené 100.
V teste s metylovou zelenou zahustené supematanty kultúr (pripravené opísaným spôsobom, obsahujúce varianty DNázy I) sa inkubovali buď bez pridania alebo s 1000-násobným molovým prebytkom aktínu v tlmivom roztoku B (25 mM HEPES, pH 7,5, 4 mM CaCl2, 4 mM MgCl2, 0,1 % BSA, 0,01 % tiomersal a 0,05 % Tween 20) pri 37 °C 16 hodín. Koncentrácia aktívneho enzýmu v každom prípade bola odhadnutá porovnaním so štandardnou krivkou Pulmozyme®. Zostávajúce „percento aktivity“ variantu sa vzťahuje na lOOx pomer aktivity v prítomnosti aktínu k aktivite bez aktínu.
Ako je zobrazené na obr. 3 a 4 DNA-hydrolytická aktivita natívnej humánnej DNázy je podstatne znížená v prítomnosti aktínu. Pri porovnaní rôzne jedno- a viaczvyškové varianty natívnej humánnej DNázy I sú relatívne odolné proti inhibicii aktínom, ako naznačuje ich vyššia DNA-hydrolytická aktivita v prítomnosti aktínu ako natívnej humánnej DNázy I.
III. Aktín viažuca ELISA
Mikrotitračný test bol vyvinutý na vyhodnotenie viazania natívnej humánnej DNázy I a variantov DNázy I na imobilizovaný aktín. Po prvé, jamky MaxiSorp doštičky (Nunc, Inc., Naperville, Illinois USA) sa pokryli 100 μΐ/jamka humánneho DC globulínu (Calbiochem, La Jolla, Califomia USA), aktín viažucim proteínom (Goldschmidt-Clermont, et al., Biochem. J. 228: 471 - 477 (1985); McLeod, et al., J. Biol. Chem. 264: 1260 - 1267 (1989); Houmeida, et al., Eur. J. Biochem. 203: 499 - 503 (1992)) v koncentrácii 10 ug/ml v 25 ml HEPES, 4 mM MgCl2, 4 mM CaCl2, pH 7,2, pri 4 °C 16 až 24 hodín. Po odstránení GC globulínu prebytočné reakčné miesta boli blokované pridaním 200 ul/jamka tlmivého roztoku C (tlmivý roztok C je rovnaký, ako tlmivý roztok B, uvedený skôr, s prídavkom 0,5 mM adenozíntrifosfátu; tlmivý roztok C bol použitý ako testovacie riedidlo vo všetkých následných krokoch, ak nie je inak uvedené) a inkubáciou doštičky v trepačke 1 - 2 hodiny pri izbovej teplote. Každý inkubačný krok, ktorý nasleduje, sa uskutočňuje pri izbovej teplote 1 hodinu na trepačke Mini Orbital Shaker (Bellco Biotechnology, Vineland, New Jersey USA); po každom kroku platňa bola vyprázdnená a 6x premytá fosfátovým fyziologickým roztokom, obsahujúcim 0,05 % Tween 20 na premývačke platničiek Microwash II (Skatron A/S, Norway). Ďalej, G-aktín, pripravený, ako bolo opísané, sa zriedil na 50 ug/ml v tlmivom roztoku C a 100 ul sa pridalo do každej jamky; doštičky sa inkubovali a premyli a 100 μΐ rôznych zriedení Pulmozyme® a bunkovej kultivačnej pôdy, obsahujúcej buď natívnu humánnu DNázu I alebo jej varianty, sa pridalo do jamiek a platničky sa inkubovali a premyli. Nakoniec, 100 μΐ 1/25000 zriedenia konjugátu králičej anti-humánna DNáza I polyklonálnej protilátky s chrenovou peroxidázou (pôvodná koncentrácia východiskového materiálu bola 465 ug/ml) sa pridalo do každej jamky. Po inkubácii a premytí sa inicioval vývoj sfarbenia pridaním 100 μΐ na jamku činidla na vyvolanie farby (Sigma Fast o-fenyléndiamin a močovina/H2O2 tabletky solubilizované podľa odporučenia výrobcu) a zastavil pridaním 100 ul na jamku 4,5N H2SO4. Zaznamenala sa absorbancia pri 492 nm a zakreslila proti koncentrácii DNázy I pôvodne pridanej do jamky. Sigmoidálne krivky sú výsledkom pre natívnu humánnu DNázu I a tie varianty, ktoré sa viazali na aktín; tieto krivky prechádzali štyrmi parametrami rovnice nelineárnej regresnej analýzy (Marquardt, J. Soc. Indust. Appl. Math. Π.: 431 - 444 (1963); koncentrácia každej DNázy I (natívnej alebo variantu), požadovaná na poskytnutie polovice maximálnej reakcie v pokuse, sa vypočítala z kriviek a je označená ako EC50 hodnota. Molová hmotnosť natívnej humánnej DNázy I a variantov bola predpokladaná ako 37 000 Daltonov.
Relatívna viažuca afinita každého variantu humánnej DNázy I bola vypočítaná delením EC50 hodnoty variantu EC5o hodnotou natívnej humánnej DNázy I, stanovenej v ELISA teste a výsledky sú ukázané na obr. 5A-5D. Podľa príkladu, ak relatívna viažuca afinita variantu humánnej DNázy I bola vypočítaná ako 5, táto hodnota by mala indikovať, že EC5o hodnota variantu je 5x vyššia ako EC50 hodnota natívnej humánnej DNázy, alebo inými slovami, že variant má afinitu proti aktínu, ktorá je 5x nižšia ako afinita natívnej humánnej DNázy I proti aktínu v tomto ELISA teste.
IV. Test hustoty spúta
Test hustoty spúta (PCT patentová publikácia WO 94/10567, zverejnená 11. mája 1994) sa použil na vyhodnotenie relatívnej viskoelasticity spúta od pacientov s cystickou fibrózou („CF spútum“) pred inkubáciou a po inkubácii s natívnou humánnou DNázou I a rozličnými variantmi DNázy I. Po zmiešaní CF spúta so vzorkou DNázy I a po 20-mi-nútovej inkubácii pri teplote miestnosti sa polotuhé roztoky naplnili do kapilárnych trubičiek, ktoré sa potom centrifugovali pri 12000 rpm 20 minút. Po centrifúgach sa zmerala výška peletky a porovnala s výškou roztoku + peletka. Tieto merania sa potom použili r>a vypočítanie percenta hustoty (kompaktnosti) spúta, ktorá je v korelácii s viskoelasticitou spúta.
Percento hustoty, stanovené po spracovaní CF spúta s natívnou humánnou DNázou I a aktín-rezistentnými variantmi humánnej DNázy I, je znázornené na obr. 6. Tieto výsledky značia, že aktín-rezistentné varianty humánnej DNázy I sú účinnejšie ako natívna humánna DNáza I pri znižovaní viskoelasticity CF spúta, ako sa stanovilo testom hustoty.
Zoznam sekvencii (1) Všeobecné informácie:
(i) Prihlasovateľ: Genentech, Inc.
Lazarus, Róbert A.
Shak, Steven Ulmer, Jana S.
(ii) Názov vynálezu: Varianty humánnej DNázy 1 (iii) Počet sekvencii: 98 (iv) Korešpondenčná adresa:
(A) Adresa: Genentech, Inc.
(B) Ulica: 460 Point San Bruno Blvd (C) Mesto: South San Francisco (D) Štát: Califomia (E) Krajina: USA (F) ZIP: 94080 (v) Počítačová forma:
(A) Typ média: 3.5 palcov, 1,44 Mb floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilný (C) Operačný systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Softvér: patín (Genentech) (vi) Súčasné údaje o prihláške:
(A) Číslo prihlášky:
(B) Dátum podania:
(C) Zatriedenie:
(vii) Údaje o prioritnej prihláške:
(A) Číslo prihlášky: PCT/US95/02366 (B) Dátum podania: 24. 02. 1995 (viii) Informácie o zástupcovi:
(A) Meno: Johnston, Sean A.
(B) Registračné číslo: 35,910 (C) Značka: P092551PCT1 (ix) Telekomunikačné informácie:
(A) Telefón: 415/225-3562 (B) Telefax: 415/952-9881 (C) Telex: 910/371-7168 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 1 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 1
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Aap Asn Leu Asn Gin Asp Ala . Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg 1 Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr . Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr ' Glu val Arg Glu Phe . Ala íle Val Pro Leu : His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 ISO
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19 5
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr Kí s Cys Ala
200 20S 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala lla Ser Asp His Tyr Pro Val
245 350 255
Glu Val Mat Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 2 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 2
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin ' Thr Phe Cly Ala t 'hr I ys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle t .eu S er
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu ’ Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn. Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
es 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12S 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Αδρ Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 3 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 3
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly His Thr Lys 15 10 1S
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val 40 Arg Asp Ser His Leu 45
35
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 65 SO
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn ASp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala 11® Val Pro Leu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 ISO
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
1S5 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
18S 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 4 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 4
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Arg Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu ser
20 2S 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lye Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 S5 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14 S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Aap Val MeC Leu
15S 160 16S
Met Gly Aap Phe Aan Ala Gly Cya Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
Íle Pro Aap Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Lau Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
360 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 5 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka : 260 aminokyselín (B) Typ : aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 5
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Trp Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Aan Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
ASp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg ryr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
90 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
1X0 lis 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser .*· Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Pne Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pre Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr ASp Arg íle Val 215 Val Ma Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ma Val 22$
val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pro Phe Asn Phe 235 Gin Ala Ma Tyr Gly 240
Leu Ser Asp Gin Leu 245 Ala Gin Ma íle Ser 250 Asp His Tyr Pro Val 255
Clu Val Mac Lau Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 6 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 6
Leu Lya íle Ma Ma Phe Asn íle Gin Thr Phe Sly Tyr Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ma Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ma Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser HÍ3 Leu
35 40 45
Thr Ma Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ma Pro
SO 55 60
ASp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 8S 90
Ma Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ma íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ma íle Val Pro Leu His Ma
125 130 135
Ma Pro Gly Asp Ma Val Ma Glu íle Asp Ma Leu Tyr Asp Val
140 14 S 1SC
Tyr Leu Aap Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1S5 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ma Gly Cya Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 iao
Trp Ser Ser íle Arg 1 185 Leu Trp Thr Ser Pro Thr p: 190 ha g: Ln Trp Leu 195
íle Pro Asp Ser Ala i Mp Thr Thr Ma Thr l 'ro Thr H is Cys Ma
200 205 3: LO
Tyr Asp Arg íle Val Val Ma Gly 1 4et 1 Lau Leu Arg G ly Ala Vi al
215 220 2: 25
Val Pro Aap Ser Ma Leu Pro Phe . Asn Phe Gin Ma Ma Tyr G iy
330 335 2 40
Leu Ser Asp Gin Lau Ma Gin Ala íle Ser Asp His Tyr P ro V al
246 350 255
Clu Val Met Lau Ly*
360 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 7 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 7
Leu Lys íle Ma Ma Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 1S
Mat Ser Asn Ma Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ma Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser Ma Leu
35 40 45
Thr Ma Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ma Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Sar Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ma Val A1P Ser Tyr Tyr Tyr Asp Aap Gly Cya Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Aan Aap Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ma íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 130
Arg Phe Thr Glu Val *rg Glu Phe Ma Ila Val Pro Leu Hia Ma
125 130 135
Ma Pro Gly Asp Ma Val Ma Glu íle Asp Ma Leu Tyr Aap Val
140 1Í5 150 (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 9
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu ASp val Mec Leu
1S5 150 155
Mae Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Aep Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 22S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Äll Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp HÍS Tyr Pro val
245 250 255
Glu Val Mec Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 8 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 8
Leu 1 Lys Zle Ala Ala 5 Phe Asn íle Gin Thr 10 Phe Gly Glu Thr Lys 15
Met Ser Asn. Ala Thr 20 Leu Val Ser Tyr Zle 25 Val Gin íle Leu Ser 30
Arg Tyr Asp Zle Ala 35 Leu Val Gin Glu Val 40 Arg Asp Ser Asp Leu 45
Thr Ala Val Gly Lys SO Leu Leu Asp Asn Leu 55 Asn Gin . Asp . Ala : Pro 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val es Val Ser Glu Pro 70 Leu Gly Arg Asn i Ser 75
Tyr Lya Glu Arg Tyr Leu 80 Phe Val Tyr Arg 85 Pro Asp Gin Val 1 Ser 90
Ala val Asp bár Tyr Tyr 95 Tyr Asp Asp Gly 100 Cys Glu Pro Cys < Gly 105
Asn Asp Thr Phe Asn 110 Arg Glu Pro Ala íle 115 Val Arg Phe Phe Ser 120
Arg Phe Thr Glu Val 125 Arg Glu Phe Ala íle 130 Val Pro Leu His Ala 135
Ala Pro Gly Asp Ala 140 Val Ala Glu íle Asp 145 Ala Leu Tyr Asp Val 150
Tyr Leu Asp val Gin 155 Glu Lys Trp Gly Leu 160 Glu Asp Val Met Leu 165
Het Gly Asp Phe Asn 170 Ala Gly Cys Ser Tyr 175 Val Arg Pro Ser Gin 180
Trp Ser Ser íle Arg 185 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gin Trp Leu 195
íle Pro Asp ser Ala 200 Asp Thr Thr Ala Thr 205 Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg íle Val 21S Val Ala Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ala Val 225
val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pro Phe Asn Phe 235 Gin Ala Ala Tyr Gly 240
Leu Ser Asp Gin Leu 245 Ala Gin Ala íle Ser 250 Asp His Tyr Pro Val 255
Glu Val Met Leu Lys 260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 9 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina
Leu 1 Lye íle Ala Ala Phe Aan íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
30 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser Tyr Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 35 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Wac Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
21S 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 10 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 10
Leu Lys Zle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys 15 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin Zle Leu Ser
25 30
Arg tyr Asp . _e Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Abp Ser Trp Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
30 56 €0
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro ASp Gin Val Ser
80 8S 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys G1U Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Zle Val Arg Phe Phe Ser
HO 115 120
Arg Pha Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 13 5
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ila Asp Ala Leu Tyr Aap Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 150 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser Ila Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Sar Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 203 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Sar Asp Gin Leu Ala Gin Ala Xle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 2S0 255
Glu Val Met Leu Lya
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 12
3S0 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 11 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 11
Leu Lya íle. 1 .a Ala S Phe Asn íle Gin Thr Phe u -/ Glu Thr Lya
10 1S
Met Ser Asn Ala Thr 20 Leu Val Ser Tyr Zle 25 Val Gin Zle Leu Ser 30
Arg Tyr Asp íle Ala 35 Leu Val Gin Glu val 40 Arg Asp Ser His Leu 45
Thr Ala Val Gly Lya $0 Leu Leu Ala Asn Leu 55 Asn Gin Asp Ala Pro 60
Asp Thr Tyr His Tyr 65 Val Val Ser Glu Pro 70 Leu Gly Arg Asn Ser 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr 80 Leu Phe Val Tyr Arg 85 Pro Asp Gin Val Ser 90
Ala Val Asp Ser Tyr 95 Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys 100 Glu Pro Cys Gly 105
Asn Asp Thr Phe Asn 110 Arg Glu Pro Ala íle 115 Val Arg Phe Phe Ser 120
Arg Phe Thr Glu Val 125 Arg Glu Phe Ala íle 130 Val Pro Leu His Ala 135
Ala Pro Gly Asp Ala 140 Val Ala Glu íle Asp 145 Ala Leu Tyr Asp Val 150
Tyr Leu Asp Val Gin 15S Glu Lys Trp Gly Leu 160 Glu Asp Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn 170 Ala Gly Cya Ser Tyr 175 Val Arg Pro Ser Gin 180
Trp Ser Ser íle Arg 185 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gin Trp Leu 195
íle Pro Asp Ser Ala 200 Asp Thr Thr Ala Thr 20S Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg íle Val 215 Val Ala Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ala Val 225
Val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pro Phe Asn Pha 235 Gin Ala Ala Tyr Gly 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle ser ASp H18 Tyr Pro val
Leu Lya íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Sar Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 2S 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
33 40 43
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Lya Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Xle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle VaL Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Zle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Aap Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu G1U Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Sar íle Arg Leu Trp Thr Sar Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
Zle Pro ASp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cye Ala
300 205 210
Tyr Aap Arg íle Val val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
315 330 335
Val Pro Asp Ser Ala Leu pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
330 235 240
Leu Ser Aap Gin t Leu . Ala Gin Ala Ila Sar Asp Hla Tyr Pro val
245 250 2S5
Glu Val Met ;U Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 13 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 13
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Arg Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
85 90
34S 350 3SS
Glu val Mat Leu Lya
2(0 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 12 (i) Sekvenčné charakteristiky:
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lye Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 16S
Met Gly Asp Ph· Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Sar Gin
170 175 iao
Trp Sex Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro 1 rhr Hĺb Cys Ala
200 20S 210
Tyr Asp Arg Ila Val Val Ala Gly Met Leu Leu . Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin . Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 15 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ IDNO: 15
245 250 25S
Glu Val Mat Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 14 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 14
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asr. Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ila Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Tyr Asn Leu Asn Gin ASp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr H1S Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Aep Gin Val Ser
BO 95 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr ASp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12 S 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Zle Asp Al* Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
so ss 60
Asp Thr Tyr His Ala Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
ao 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Aap Gly Cys Glu Pro Cys □ly
95 100 LOS
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg G1U Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lye Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 1SS
Met Gly Asp Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val k. g Pro Ser Gin
170 17S iao
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
250 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 16 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 16
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lye Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
15S 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 190
Trp Ser Ser Ila Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
195 190 195
íle Pro Asp .-r Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Tnr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
350 255
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
L 5 10 15
Met Sar Asn Ala Thr Lau Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Aap Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Arg Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Sar
65 70 75
Glu Val Met Leu Lye
260
Tyr Lys G1U Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala val ASp Ser Tyr Tyr Tyr Aap Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala lla Val Pro Leu Bis Ala
12S 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu ASp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp 3er Ser lla Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 150 195
Xle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr Hla cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg lla Val Val Ala Gly Mec Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
2S0 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 17 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 17
Leu : cys Xle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 8 10 1S
Met ; Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 2S 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Ara Leu Ara Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr tyr His Trp Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Xle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala Zle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle ASp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1SS 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser Zle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
US 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 SOS 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly All Val
215 220 22S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala Xle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 2S5 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 18 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 18
Leu Lys Xle Ala Ala Phe Asn Xle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 2S 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu ASp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 53 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Ala Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pre Leu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Zle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 16S
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cya Ser Tyr val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
Xle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala Xle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 19 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 19
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lya
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu val Ser Tyr íle Val Gin Zle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Zla Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser HÍS Leu
35 40 45
Thr Ala Vaľ ^iy Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin ASp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Glu Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
200 105
Glu Val MeE Leu Lys
2€0
Asn Asp Thr Phe Asn 110 Arg Glu Pre Ala Zle 11S val Arg Phe Phe Ser 120 íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala 200 Thr 205 Pro Thr His Cys Ala 210
Arg Phe Thr Glu Val 125 Arg Glu Phe Ala Zle 130 Val Pro Leu Kí s Ala 135 Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
216 22C 225
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150 Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Tyr Leu A*p val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 140 145 Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp Hls Tyr Pro val
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin 245 250 255
170 175 180 Glu Val Met Leu Lys
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu 260
185 190 195
ILe Pro Alp Ser Ala Asp Thr Thx Ala Thr Pro Thr Bi s Cys Ala (2) Informácia pre SEQ ID NO: 21
200 205 210 (i) Sekvenčné charakteristiky:
Tyr Asp Ar? Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val (A) Dĺžka: 260 aminokyselín
215 220 225 (B) Typ: aminokyselina
Val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pro Phe Asn Phe 235 Gin Ala Ala Tyr Gly 240 (C) Topológia: lineárna
(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 21
Leu ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp Hls Tyr Pro Val
3tS 250 255 Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Glu Val Het Leu Lya
260 Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 20 Arg Tyr Asp íle Ala Leu val Gin Glu Val Arg Asp Ser Hls Leu
(i) Sekvenčné charakteristiky: 35 40 45
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
(B) Typ: aminokyselina 50 55 60
(C) Topológia: lineárna Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Lys Pro Leu Gly Arg Asn Ser
(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 20 65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys 80 85 90
1 5 10 15 Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser 95 100 105
20 25 30
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Zle Val . Arg Phe Phe Ser
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu 110 115 120
35 40 45 Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val pro Leu His Ala
125 130 135
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60 Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Zle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Asp Thr Tyr His Tyr Val Lys Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
55 70 75 Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu . Asp Val Met Leu
155 160 165
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 8S 90
Het Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly 170 175 180
95 100 105 Trp Ser Ser Zle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser 185 190 195
110 115 120
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala 200 205 210
L25 130 135 Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val 215 220 225
140 145 150 Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu 230 235 240
155 160 165 Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin 245 250 2SS
170 175 180 Glu Val Met Leu Lys
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu 260
185 190 195 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 22 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 22
Leu 1 Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
5 10 15
Mec Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO SS 50
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Arg Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
US 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Zle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1S5 160 165
Mat Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
18S 190 19S
Zle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala Zla Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 255
Glu Val Met Leu Lys
360 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 23 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 23
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly 1 Glu 1 Thr Lys
1 5 10 1S
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu . Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Cle Ala Leu Val Gin Glu Val . Arg Asp Ser . Ala Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Arg Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 SS 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val val Ser Glu Pro Leu Gly Axg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu GlU Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 24 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 24
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Cly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lye Leu Leu Arg Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Ala Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
<5 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Axg Phe Thr Glu Val Axg Glu Phe Ala Ue Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cye Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
Cle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
250
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 25 Asp Thr Tyr Hla Ala Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
(i) Sekvenčné charakteristiky: 65 70 75
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
(B) Typ: aminokyselina 90 85 90
(C) Topológia: lineárna Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 25 95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Ar? Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys 110 lis 120
1 S 10 15 Arg Phe Thr Slu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser 13 S 130 135
20 25 30 Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
Ar? Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu 140 145 150
35 40 45 Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
Thr Ala val Gly Lys Leu Leu Ar? Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro 155 160 165
SO 55 60 Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr val Ar? Pro Ser Gin
170 L7S 180
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Arg Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75 Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Ar? Pro Asp Gin val Ser 185 190 195
80 35 90 11« Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105 Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 22S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120 Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ila Val Pro Leu His Ala
125 130 135 Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyi Asp Val
140 145 150 Glu Val Met Leu Lys
260
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lya Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr val Ar? Pro Ser Gin (2) Informácia pre SEQ ID NO: 27
170 175 190 (i) Sekvenčné charakteristiky:
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe □In Trp Leu (A) Dĺžka: 260 aminokyselín
1B5 190 19S (B) Typ: aminokyselina
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala (C) Topológia: lineárna
200 205 210 (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 27
Tyr Asp Arg Zlo Val Val Ala Gly Mat Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225 Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr 1 Lys
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly 1 S 10 15
230 235 240
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val 20 25 30
Ar? Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Ar? Asp Ser Ala Leu
Glu Val Met Leu Lys 35 40 4S
260 Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 26 Asp Thr Tyr His Ala Val Val Ser Arg Pro Leu Gly Arg Asn Ser
(i) Sekvenčné charakteristiky: 65 70 75
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Ar? Pro Asp Gin val Ser
(B) Typ: aminokyselina 80 95 90
(C) Topológia: lineárna Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 26 95 100 105
Asn Asp Thr sne Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Ar? Phe Phe ser
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys 110 115 120
1 5 10 15
Ar? Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser 125 130 135
20 25 30 Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp val
Ar? Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser Ala Leu 140 14 S 150
35 40 45 Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Ar? Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 SS 60 Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Ar? Pro Ser Gin
170 17S 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 1S0 135
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp HiS Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 28 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 28
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mat Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin GlU val Arg Asp Ser Cys Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Aep Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu HiS Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lye Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 20S no
Tyr Asp Arg íle Val Val ALa Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 29 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 29
Leu Lys íle 1 Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu val . Arg Alp Ser Gin 1 Leu
33 40 43
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 50
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 B5 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Arp Aap Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ale íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle v*i Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 X45 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Sex Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro VaL
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 30 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 30
Leu Lys Zle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 Met Ser Asn Ala 5 Tyr 10 15 Leu Ser 30
Thr 20 Leu Val Ser íle 25 Val Gin íle
Arg Tyr Asp Zle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser H18 Cys
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr HiS Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lye Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Cly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser Ila Arg 18S Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gin Trp Leu 195
íle Pro Asp Ser Ala 200 Asp Thr Thr Ala Thr 205 Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg íle Val 215 Val Ala Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ala Val 225
Val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pro Phe Asn Phe 235 Gin Ala Ala Tyr Gly 240
Leu Ser Asp Gin Leu 245 Ala Gin Ala íle Ser 250 Asp His Tyr Pro Val 255
Glu Val Met Leu Lys 260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 31 (1) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 31
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
5 1015
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
2S30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Lys
4045
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
5550
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser $5 70?5
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
8590
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cye Gly
100105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190195 íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 22022S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pre Val
245 250255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 32 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 32
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Arg
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg G1U Phe Ala íle Val Pro L«U His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Tzp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Pha Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
215 220 22S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 2S5
Glu Val Met ««u Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 33
(i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín
(B) Typ: aminokyselina
(C) Topológia: lineárna
(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 33
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Cys Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ila val Arg Phe Phe ser
1X0 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 13 5
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro ser Gin
170 17S 180
Trp ser Ser íle Arg Leu Tip Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
Zle Pro Asp Ser Ma Asp Thr Thr Ma Thr Pro Thr His Cys Ma
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ma Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe mn Ala Ma Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Aep Gin Leu Ala Gin Ma Ha Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 34 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 34
Leu Lys íle Ala Ma Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ma Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 4S
Thr Ala Lys Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr Kis Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Leu Lys Zle Ma Ma Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ma Thr Leu Val Sex Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp 11a Ala Leu val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Cys Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ma Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
>5 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ma Zle Val Arg Phe Phe Ser
U0 lis 120
Arg Phe Thr G1U Val Arg Glu Phe Ma íle Val Pro Leu His Ma
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ma Val Ma Glu Zle Asp Ma Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ma Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
18S 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ma Thr Pro Thr His Cys Ma
200 205 210
Tyr Asp Arg íle val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
21S 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pre Phe Asn Phe Gin Ma Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
243 250 255
Asn Asp Thr Phe Ara Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ha Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ma Pro Gly Asp Ma val Ala Glu íle Asp Ma Leu Tyr Asp Val 150
140 14S
Tyr Leu Asp Val Gin 155 Glu Lys Trp Gly Leu 160 Glu Asp Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Ara 170 Ala Gly Cys Ser Tyr 175 Val Arg Pre Ser Gin 180
Trp Ser Ser Zle Arg 185 Lev Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gin Trp Leu 195
íle Pro Asp Ser Ma 200 Asp Thr Thr Ma Thr 205 Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg íle Val 215 Val Ma Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ma Val 225
Val Pro Asp Ser Ma 230 Leu Pro Phe Asn Phe 335 Gin Ala Ala Tyr Gly 240
Leu Ser Asp Gin Leu 245 Ala Gin Ma íle Ser 250 Asp His Tyr Pro Val 255
Glu Val Met Leu Lys
360 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 35 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 35
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 36 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 36
Leu Lys íle Alt Ala Phe Asn rie Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu val Gin Glu Val Arg Asp Ser Hla Leu
35 40 4S
Thr Ala Val Zle Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ma Pro
SO 55 50
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Axg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ma Zle Val Pro Leu Sia Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ma Val Ma Glu íle Asp Ma Leu Tyr Asp Val
140 145 1S0
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lye Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser 114 Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
18S 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HiS cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg :1a Val Val Ala oly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala Íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lye
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 37 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 37
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
3S 40 45
Thr Ala Val Lys Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
9S 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Zle Val Pro Leu His Ala
125 130 133
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu ASp Val Gin Glu Lys Trp GXy Leu Glu Asp Val Met Leu
LS5 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cye Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
rrp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
18S 190 195
Zle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HiS Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 22S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 38 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 38
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Mat Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Arg Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 S5 SO
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu ~rg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pre Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
US 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp VaL
140 145 1S0
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys ser Tyr val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp 913 Tyr Pro Val
345 3S0 2SS
Glu Val Mat Leu Lye
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 39 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 39
Leu Lys Zle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gla Zle Uu Ser
20 25 30
Arg Tyr ASp íle Ala Uu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 4$
Thr Ala Val Tyr Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gla Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle val Pro Uu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 180
Tyr Leu Asp Val Gla Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 17S 1B0
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly NeC Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro val
245 250 2S5
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 40 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 40
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala val Gly Lys Leu Cys Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lya G1U Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14$ 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HiS Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 2S0 255
Glu Val Met Leu Lys
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Iii Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Lys Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala val Ala Glu íle ASp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Tep Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Ph· Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
330 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pre Val
245 2S0 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 42 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 42
360 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 41 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 41
Leu Lys 1 Zle Ala Ala 5 Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin Zle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Met Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 9Q
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala 11« Val Pro Leu His Ala
125 130 135
(C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 44
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Mat Gly Asp Pha Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 17S 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr pro Thr His Cys Ala
20C 205 210
Tyr Aap Arg íle Val Val Ala Gly Het Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
220 235 140
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pre Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Ly·
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 43 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 43
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn Ila Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 1S
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Cys Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro cys Gly
95 100 XOS
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cye Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 44 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn Zle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin Zle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp He Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
3S 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Leu Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro ASp Gin Val Ser
80 95 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Zle val Arg Pha Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Sar íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cye Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Lau Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 45 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 45
Leu Lys tie Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser KÍS Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Met Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 €0
Asp Thr Tyr Kis Tyr val val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Aap Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Pha Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arf Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 140 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly cys Ser ryr val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HÍS Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 47
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
X 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Phe Gin Asp Ala Pro
50 55 60
ASp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser G1U Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 46 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 46
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
L 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 2S 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Cys Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val ASp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 ISO
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 2S0 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informác ia p re S IEQ ID NO : 47
(i) Sekve :nčn é chara kter istiky:
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 12 0
Arg Phe Thr Glu Val 125 Arg Glu Phe Ala íle 130 Val Pro Leu His Ala 135
Ala Pro Gly Asp Ala 140 val Ala Glu íle Asp 145 Ala Leu Tyr Asp Val ISO
Tyr Leu Asp val Gin 155 Glu Lys Trp Gly Leu 160 Glu Asp Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn 170 Ala Gly Cys Ser Tyr 175 Val Arg Pro Ser Gin 180
Trp Ser Ser íle Arg 185 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gin Trp Leu 195
íle Pro Asp Ser Ala 200 Asp Thr Thr Ala Thr 20S Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg íle Val 215 val Ala Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ala Val 22S
Val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pro Phe Asn Phe 235 Gin Ala Ala Tyr Gly 240
Leu Ser Asp Gin Leu 245 Ala Gin Ala íle Ser 250 Asp HiS Tyr pro val 25S
Glu Val Met Leu Lys 260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 48 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 48
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 IS
Met Ser Asn Ala Thr Leu val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Lys Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lye Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin VaL Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ila Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Zle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150·
Tyr Leu Asp v*l <11 11 Glu Lys Txp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 155
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser Ila Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp i Leu
185 190 195
Zle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys i Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala i Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyx : Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pre i Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
250 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 49 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 49
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin Zle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gíy Lya Leu Leu Asp Asn Leu Arg Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Zle Val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly ASp Ala Val Ala Glu íle *βΡ Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys S«r Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 17S 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
Zle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 2S0 255
Glu Val Met Lau lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 50 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 50
Leu Lys Zle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu val Ser Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Zle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Trp Gin Asp Ala Pro
50 55 so
ASp Thr Tyr His Tyr val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys GlU Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle val Pro Leu HiS Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
Zle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala Zle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
250 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 51 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 51
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Cys Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 150 16S
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 150 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Sar Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Sar Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
Leu Ser Asp Gin Leu Ala
24$
Val Pro Asp Ser Ala Leu
230
Glu Val Met Leu Lys
250
250 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 52 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 52 >ln Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val 250 255
Pro Phe Asn Phe Gin
235 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 53 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminoky (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 53
'.selín
Leu
Met
Arg
Lys íle
Ser Asn
Tyr Asp
Ala
Ala
S íle
Gin
Thr phe
Gly
Glu Thr
Lys
Ala
Thr
Ser
Tyr íle Val is
Gin íle Leu
Ser
Zle
Ala
Gin
Glu
Val Arg Asp
Ser His
Leu
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
so 55 60
Asp Thr Tyr His Met Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
55 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
»5 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110
115
120
Arg
Phe
Thr
Glu
Glu
Phe
Val Pre
Leu His
Ala
13S
Val Arg
125
Ala íle
130
Leu L Lys íle Ala Ala 5 Phe Asn Zle Gin Thr 10 Phe Gly Glu Thr Lys 15 Ala Pro Gly Asp Ala 140 Val Ala Glu íle Asp 145 Ala Leu Tyr Asp Val 150
Met Ser Asn Ala Thr 20 Leu Val Ser Tyr íle 25 Val Gin íle Leu Ser 30 Tyr Leu Asp Val Gin 155 Glu Lys Trp Gly Leu 160 Glu Asp Val Met Leu 165
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cye Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
3$ 40 45 170 175 ISO
Thr Ala val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60 Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
135 190 195
Asp Thr Tyr His Lys val val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75 íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
val 200 205 210
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe val Tyr Arg Pro ASp Gin Ser
80 BS 90 Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly 215 220 225
95 100 105 Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe GLn Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Asn ASp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle val Arg Phe Phe Ser
110 115 120 Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
Glu
Val
Het
Leu
12S
130
13S
Lys
250
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Sar Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
220
215
225 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 54 (i) Sekvenčné charakter stiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 54
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1 5 10 1S 155 160 165
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
20 25 3C 170 17S 180
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
35 40 45 185 190 195
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro íle Pro ASp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
50 55 €0 200 205 210
Asp Thr Tyr His Ser Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
55 70 75 215 220 225
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
80 85 90 230 23S 240
Ala val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
95 100 105 245 250 255
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser Glu Val Met Leu Lys
110 115 120 260
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Het Leu
155 160 165
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 56 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 56
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser Xle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
30 2S 30
Arg Tyr Asp Zle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 4S
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 55 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 55
Leu Lys X íle Ala Ala 5 Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
10 15
Mec Ser Asn Ala Thr Leu Val Sar Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Cys Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
6S 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg G1U Pro Ala íle val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Thr Ala Val Gly Lys 50 Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
55 60
Asp Thr Tyr HÍS Tyr Val Asp Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1SS 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser ILe Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
21S 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 2S5
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 57 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 57
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val His Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
6S 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 1S0 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val ALa Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 58 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 58
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Zle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Met Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Lau Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
BO 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle VaL Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala He Val Pro Leu HiS Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Tip Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
18S 190 195
Zle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
315 220 22S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Glr. Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Aap His Tyr Pro • Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 59 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 59
Leu 1 Lys Zle Ala Ala S Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp 11« Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Pro Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Qlu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala L«u Tyr Asp Val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Qlu Asp Val Met Lau
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Ôly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
19$ 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 60
(i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín
(B) Typ: aminokyselina
(C) Topológia: lineárna
(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 60
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Axa Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Arg Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Sar íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp HiS Tyr Pro Val
245 250 2S5
Glu Val MeC Leu Lys
250 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 61 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 61
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly G1U Thr Lys
1 $ 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Ser Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
«5 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg G1U Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle VaL Pro Leu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala VaL
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 2SS
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 62 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 62
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser HÍS Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Lys Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
9S 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lvs Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
15S 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 63 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 63
SK 284191 Β6
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val val Met Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
90 95 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12S 130 13 S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 1S0
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1SS 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 190
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
135 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
215 220 225
Val Pro Asp ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp HiS Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 64 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 64
Leu Lys 1 íle Ala Ala 5 Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr ASp íle Ala Leu Val Gin Glu val Arg ASp Ser HiS Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Arg Glu Pro Leu Gly Arg Asn 5er
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
90 95 90
Ala Val Asp Ser ryr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 lis 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 13 0 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14 5 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser 11« Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
195 190 195
íle Pro Asp Ser Al* Aap Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 20S 210
Tyr Asp Arg íle val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
21S 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp 1 Gin Leu . Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 65 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 65
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Ala Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Zle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
X70 175 180
Trp Ser Ser íle Arg 185 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gin Trp Leu 195
íle Pro Asp Ser Ala 200 Asp Thr Thr Ala Thr 205 Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg íle Val 215 Val Ala Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ala Val 225
Val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pre Phe Asn Phe 235 Gin Ala Ala Tyr Gly 240
Leu Ser Aep Gin Leu 245 Ala Gin Ala íle Ser 250 Asp His Tyr Pro Val 255
Glu Val Met Leu Lys 260
SK 284191 Β6 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 66 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 66
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn. Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Cys Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pra Asp Gin Val Ser
10 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu HiS Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala VaL Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp VaL
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu G1U Asp Val Met Leu
15S 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 1B0
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pra Thr Phe Gin Trp Leu
18S 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 2QS 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pre Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 67 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 67
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu VaL Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Met Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Glv Ala val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
2S0 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 68 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 68
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr val Val Seť Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin val Ser
80 es 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro cys íle Val Arg Phe Phe Ser
no 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12S 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 22S
val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Αβρ His ryr Pro Val
245 2S0 255
G1U Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 69 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 69
Leu Lys Zle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val val ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 95 90
Ala Val ASp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
95 100 LOS
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Glu íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12S 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1SS 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
1B5 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg 11« Val Val Ala Cly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp HiS Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lye
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 70 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 70
Leu 1 Met Lys íle Ala Ala 5 Phe Leu Asn Val íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
10 íle Leu 15 Ser 30
Ser Asn Ala Thr 20 Ser Tyr íle 25 Val Gin
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
90 85 90
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg pro Asp Gin Val Ser
8550
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pre Cys Gly
1Q0105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Gly íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu Hla Ala
12S 130135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 17S180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190195 íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 20S210
Tyr Asp Arg íle Val VaL Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 71 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO; 71
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
90 85 90
Al* Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro His íle Val Arg Phe Phe ser
110 115 120
Arg 1 Phe Th: í Glu Val Arg G1U Phe Ala íle val Pro Leu His ALa
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 LSO
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 L95
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HiB Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
243 2S0 2S3
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 72 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 72
Leu 1 Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe i Gly Glu Thr Lys
1 5 ία 15
Mat : Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr 11« Val . Gin íle Lei u Ser
20 25 30
Arg ‘ Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser Hi: a Leu
35 40 45
Thr , Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Al< a Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe VaL Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Lys íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12S 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala val Ala G1U íle Asp Ala Leu Tyr ASD Val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His cys Ala
200 205 210
Tyr ASp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 32S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 73 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 73
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn. Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
SO 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly 0/3 Glu Pro C/S Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu ?ro Leu íle Val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle VaL Pro Leu His Ala
125 130 125
Ala Pro Gly ASD Ala Val Ala G1U íle Asp Ala Leu Tyr ASp val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 18 0
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Mat Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 74 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 74
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle VaL Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys GlU Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Met íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 150 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
val Pro I Asp Ser ' Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu . Set - Asp Gin . Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 75 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 75
Leu 1 Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr HiS Tyr val val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 10S
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Gin íle Val Arg Phe Phe Ser
L10 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Lau Glu Asp Val Met Leu
L55 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HÍS Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu rie Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
1S5 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
1B5 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp HiS Tyr Pro Val
245 250 255
Glu val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 77 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 77
Leu Lys íle Ala Ala Fhe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ila val Gin íle Leu Sar
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Tlxr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
JSO (2) Informácia pre SEQ ID NO: 76 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 76
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mec Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ila Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg ASp ser HiS Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
8C 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg GlU Pro Arg íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Asp Thr T/r His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg G1U Pro Trp íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala G1U íle ASp Ala Leu Tyr Asp val
140 145 ISO
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala ASp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
val Pre Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 78 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 78
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin Zle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
3S 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Tyr íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Zle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle ASp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 190
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
135 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Sar Asp Gin. Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 79 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 79
Leu Lys Xle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu val Gin Glu Val Arg Asp Ser Asn. Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
6 S 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp val Met Leu
1S5 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser Zle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
195 190 195
Zle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Pha Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 80 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 80
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 LO 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser HÍS Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Thr Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 8S 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12S 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Mee Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 ieo
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HÍS Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
G1U Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 81 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 81 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 83 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 83
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pre
50 55 60
Asp Thr Tyr Asn Tyr Thr Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lye Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
ao 85 90
Ale Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pre Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 82 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 82
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Zle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His L«U
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Asn Val Thr Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg ryr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 8S 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala zle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp val
140 14 5 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr 10 Phe Gly Glu Thr Lys 15
1 5
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
SO 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Asn Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala val Ala Glu Zle Asp Ala Leu Tyr Asp val
140 14$ 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
1S5 160 16S
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly cys Ser Tyr Val Arg Pro ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro ASp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HÍS Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 84 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 84
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr rie Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Asn Ser Thr Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin VaL Ser
80 85 90
Ala val ASp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro cys Gly
95 100 10S
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 85 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 85
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn Zle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
so 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 85 90
Ala Val Asp Asn Tyr Thr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 160
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 86 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 86
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe 10 Gly •Glu Thr Lys
1 5
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser Glu Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 S5 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly cys Glu Pro Cys Gly
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 1S0
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
120 125 1S0
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr HiS Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
250 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 87 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 87
Leu Lys íle Ala 1 Ala Phe Asn íle Cln Thr Phe Gly Glu Thr 15
5 10
Met Ser Asn Ala Thr : Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala 1 Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys 1 Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 90
Asp Thr m His Glu Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu . Arg Tyr 1 Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val . Asp ; Ser Tyr Tyr Tyr . Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 LOS
Asn Asp ' Thr : Phe Asn Arg · Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu i val Arg Glu Phe ; Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ald i Pro Gly Asp i Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 iso
Tyr ' Leu . Asp Val Gin Glu . Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met ; Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 190
Trp > Ser Ser íle Arg Leu . Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
135 190 195
íle í Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 22S
val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 88 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 88
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu val Ser Tyr íle val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser Ala Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Arg Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Ala Val Val Ser Arg Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
ao 85 90
Ala Val Asp ser Tyr Tyr Tyr Aap Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 L2C
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14 5 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala GLy Cys Ser Tyr Val Are Pro Ser Gin
170 175 1Θ0
Trp Ser Ser íle Arg Leu Tr? Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
1B5 190 195
íle Pre Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 89 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 89
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 1S
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Arg Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tvr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lye Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pre Asp Gin val Ser
80 8S 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser 120
110 115
Arg Phe Thr Glu Val 125 Arg Glu Phe Ala íle 13 0 Val Pro Leu His Ala 135
Ala Pro Gly Asp Ala 140 Val Ala Glu íle Asp 14 5 Ala Leu Tyr Asp Val 150
Tyr Leu Asp Val Gin 155 Glu Lys Trp Gly Leu 160 Glu Asp Val Met Leu 155
Met Gly Asp Phe Asn 170 Ala Gly Cys Ser Tyr 175 Val Arg Pro Ser G Ír. 180
Trp Ser Ser íle Arg 185 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gin Trp Leu
íle Pro Asp Ser Ala 200 Asp Thr Thr Ala Thr 205 Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg íle Val 2X5 Val Ala Gly Met Leu 220 Leu Arg Gly Ä_a Val 225
Val Pro Asp Ser Ala 230 Leu Pro Phe Asn Phe 23 5 Gin Ala Ala Tyr Gly 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 255
Glu Val Met L«u Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 90 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 90
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 1S
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Asn Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 55 ÓC
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Lau Gly Arg Asn Ser
65 7C 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asr. Asp Thr Phe· Asn Arg Glu Pro Ala íle val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr ASp val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp HÍS Tyr Pro val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 91 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 91
Leu Lys :le Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Are Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Arg Asp Asr. Leu Asn Gin ASD Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 BS 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
12S 130 13 5
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 1Θ0
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gl.n Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala ASp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 20S 210
Tyr Asp Arg Zle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 22S
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp Kifl Tyr Pro Val
24S 2S0 2SE
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 92 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) DÍžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna
(xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 92 Clu Thr Lys 1=
Leu 1 Lys íle Ala Ala 5 Phe Asn íle Gin Thr 10 Phe Gly
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Cys Gin Asp Ala Pro
50 55 60
ASp Thr Tyr HÍS Tyr val val ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
6S 70 7S
Tyr Lys Glu Arg Tyr 80 Leu Phe Val Tyr Arg 85 Pro Asp Gin Val Ser 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
100 los
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala tie Val Arg Phe Phe Ser
110 11S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 13S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu G1U Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 1B0
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 19S
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr GLv
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Glrt Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 2S0
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 93 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 93
Leu 1 Lys íle Ala Ala Phe Asr. íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr' íle val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lvs Leu Leu Asp Asn Leu Phe Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val ASp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Glv
95 100 LOS
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
14 0 145 15 C
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Tr? Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Glr.
170 175 ISO
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 1SS
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 20S 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro val
245 250 255
Glu val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 94 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 94
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin. Thr Phe Gly Glu Thr Lys 1S
1 5 10
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Lys Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
ao 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr T)t Asp Asp Gly Cys Glu Pre Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pre Ala íle Val Arg Phe Pha Ser
110 lis 110
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu Hl 3 Ala
125 130 115
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 1S0
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly cys Ser Tyr val Arg Pro Ser dr.
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
24S 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 95 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 95
Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 1S
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Arg Glr. Asp Ala Pro
50 53 SO
Asp Thr T/r His Tyr Val Val Ser Glu Pro Lau Gly Arg Asr. Ser
63 70
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
30 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Vaľ Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 130
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala rie Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) Informácia pre SEQ ID NO: 96 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 96
Leu Lys íle ALa Ala Phe Asn. íle Gin Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 15
Mec Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser
20 2S 2?
Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Trp Gin Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
60 65 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys □ Ly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 13 S
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly ASp Pha Asn Ala Gly Cys Ser ryr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 23S 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 97 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 97
Leu Lys íle Ala 1 Ala 5 Phe Asn íle Gin Thr 10 Phe Gly Glu Thr Lys 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Zle Val Gin íle Leu Ser
20 25 30
Are Tyr Asp íle Ala Leu Val G In Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin Asp Ala Pro
50 SS 60
Asp Thr Tyr HÍS Pro Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Sar Tyr Tyr Tyr Asp Asp Oly Cya Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu val Arg Glu Phe Ala íle Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 L6S
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 130
Trp Ser Ser íle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 22 =
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tvr Gly
230 235 I4Č
Leu : Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala Zle Ser Asp His Tvr Pro Val
245 250 2 53
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) Informácia pre SEQ ID NO: 98 (i) Sekvenčné charakteristiky:
(A) Dĺžka: 260 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (xi) Opis sekvencie: SEQ ID NO: 98
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala íle Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala íle Val Pre Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu íle Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gin Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gin
170 175 180
Trp Ser Ser Zle Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gin Trp Leu
185 190 195
íle Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg íle Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gin Leu Ala Gin Ala íle Ser Asp His Tyr Pro val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Aktin-rezistentný variant humánnej DNázy I, ktorý obsahuje aspoň jednu aminokyselinovú substitúciu vybranú zo skupiny, ktorá zahŕňa H44Q, L45C, L45K L45R, V48K, V48R, G49I, G49K, G49R, G49Y, L52K, L52M, L52N, L52R, D53L, D53M, N56R, Y65K, Y65M, Y65S, Y65P, V66N, V67D, V67H, V67M, V67P, V67R, V67S, S68K, S68R, S68M, E69A, A114E, A114G, A114H, A114K, Al 14L, Al 14M, Al 14Q, Al 14R, Al 14W a Al 14Y.
  2. 2. Variant podľa nároku, 1, ktorý obsahuje aspoň jednu aminokyselinovú substitúciu vybranú zo skupiny zahŕňajúcej V48K, G49I, G49R, D53M, N56R, V66N, A114G a A114H.
  3. 3. Variant podľa nároku 1, ktorý obsahuje najmenej jednu kombináciu aminokyselinových substitúcií vybranú zo skupiny, ktorá zahŕňa Y65N:V67T, V67N:E69T, S68N:P70T aS94N:Y96T.
  4. 4. Variant podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, ktorý je aspoň na 90 % identický s aminokyselinovou sekvenciou natívnej humánnej DNázy I.
  5. 5. Variant podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, ktorý je aspoň na 95 % identický s aminokyselinovou sekvenciou natívnej ľudskej DNázy I.
  6. 6. Izolovaná nukleová kyselina kódujúca aktín-rezistentný variant ľudskej DNázy I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 5.
    Leu Lys íle Ala Ala Phe Asn íle Gla Thr Phe Gly Glu Thr Lys 1 5 10 15 Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr íle Val Gin íle Leu Ser 20 25 30 Arg Tyr Asp íle Ala Leu Val Gin Glu Val Arg Asp Ser His Leu 35 40 45 Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gin ASp Ala Pro 50 55 60 Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Asn Glu Thr Leu Gly Arg Asn Ser 65 70 75 Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gin Val Ser 80 85 90 Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro cys Gly 95 100 105
SK1148-97A 1995-02-24 1995-02-24 Aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I SK284191B6 (sk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US1995/002366 WO1996026278A1 (en) 1995-02-24 1995-02-24 HUMAN DNase I VARIANTS
US54052795A 1995-10-10 1995-10-10
PCT/US1996/002421 WO1996026279A1 (en) 1995-02-24 1996-02-21 Human dnase i variants

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK114897A3 SK114897A3 (en) 1998-03-04
SK284191B6 true SK284191B6 (sk) 2004-10-05

Family

ID=26789529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1148-97A SK284191B6 (sk) 1995-02-24 1995-02-24 Aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I

Country Status (20)

Country Link
EP (2) EP1980618A2 (sk)
JP (1) JP4549439B2 (sk)
AR (1) AR003926A1 (sk)
AT (1) ATE397073T1 (sk)
AU (1) AU695863B2 (sk)
BR (1) BR9607328A (sk)
CA (1) CA2211413C (sk)
DE (1) DE69637548D1 (sk)
DK (1) DK0854927T3 (sk)
ES (1) ES2308775T3 (sk)
HU (1) HU222665B1 (sk)
IL (1) IL117218A (sk)
NO (1) NO326616B1 (sk)
NZ (1) NZ334762A (sk)
PL (1) PL184951B1 (sk)
RO (1) RO118886B1 (sk)
SI (1) SI9620043A (sk)
SK (1) SK284191B6 (sk)
TR (1) TR199700842T1 (sk)
WO (1) WO1996026279A1 (sk)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6391607B1 (en) 1996-06-14 2002-05-21 Genentech, Inc. Human DNase I hyperactive variants
US20150010527A1 (en) * 2012-02-01 2015-01-08 Protalix Ltd. Dnase i polypeptides, polynucleotides encoding same, methods of producing dnase i and uses thereof in therapy
EP3063275B1 (en) * 2013-10-31 2019-09-25 Resolve Therapeutics, LLC Therapeutic nuclease-albumin fusions and methods
CN104131093B (zh) * 2014-07-23 2015-12-09 哈尔滨工程大学 DNA蛋白结合位点的DNase高通测序检测信号处理方法
BR112017014433A2 (pt) 2015-01-04 2018-05-15 Protalix Ltd. proteína dnase i modificada, processo para preparar proteína dnase i modificada e composição farmacêutica
EP4225903A1 (en) 2020-10-07 2023-08-16 Protalix Ltd. Long-acting dnase

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4511502A (en) 1982-12-22 1985-04-16 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
JPS63502716A (ja) 1986-03-07 1988-10-13 マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー 糖タンパク安定性の強化方法
DE68929551T2 (de) 1988-12-23 2008-03-06 Genentech, Inc., South San Francisco Menschliche DNase
US5464817A (en) * 1990-04-11 1995-11-07 Brigham And Women's Hospital Method for reducing the viscosity of pathological mucoid airway contents in the respiratory tract comprising administering actin-binding compounds with or without DNASE I
US5279823A (en) 1992-06-08 1994-01-18 Genentech, Inc. Purified forms of DNASE
AU5546494A (en) 1992-11-02 1994-05-24 Genentech Inc. Compaction assay for assessment of respiratory disease therapy
HU223272B1 (hu) * 1995-02-24 2004-04-28 Genentech Inc. Humán dezoxiribonukleáz I variánsok

Also Published As

Publication number Publication date
HU222665B1 (hu) 2003-09-29
SK114897A3 (en) 1998-03-04
NO973877D0 (no) 1997-08-22
ATE397073T1 (de) 2008-06-15
EP0854927A1 (en) 1998-07-29
PL322002A1 (en) 1998-01-05
PL184951B1 (pl) 2003-01-31
NO973877L (no) 1997-10-24
AU695863B2 (en) 1998-08-27
CA2211413A1 (en) 1996-08-29
RO118886B1 (ro) 2003-12-30
IL117218A0 (en) 1996-06-18
NO326616B1 (no) 2009-01-19
NZ334762A (en) 2000-10-27
HUP9702147A2 (hu) 1999-07-28
AR003926A1 (es) 1998-09-30
WO1996026279A1 (en) 1996-08-29
CA2211413C (en) 2010-06-22
DE69637548D1 (de) 2008-07-10
JPH11503004A (ja) 1999-03-23
SI9620043A (sl) 1998-06-30
HUP9702147A3 (en) 1999-09-28
BR9607328A (pt) 1997-12-30
IL117218A (en) 2004-06-01
EP0854927B1 (en) 2008-05-28
TR199700842T1 (xx) 1998-01-21
EP1980618A2 (en) 2008-10-15
AU5026396A (en) 1996-09-11
ES2308775T3 (es) 2008-12-01
DK0854927T3 (da) 2008-09-08
JP4549439B2 (ja) 2010-09-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6348343B2 (en) Human DNase I variants
US7407785B2 (en) Human DNase I hyperactive variants
JP5185914B2 (ja) ヒトｄｎアーゼｉｉ
SK284191B6 (sk) Aktín-rezistentný variant humánnej DNázy I
EP0811068B1 (en) HUMAN DNase I VARIANTS
JP4624380B2 (ja) ヒトｄｎアーゼ変異体
JP2009060900A (ja) ヒトｄｎアーゼｉ変異体
NZ505985A (en) Human DNase I variants with a lower binding affinity for actin that native human dnase

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20160221