[go: up one dir, main page]

PL184951B1 - Wariant ludzkiej DNazy I - Google Patents

Wariant ludzkiej DNazy I

Info

Publication number
PL184951B1
PL184951B1 PL96322002A PL32200296A PL184951B1 PL 184951 B1 PL184951 B1 PL 184951B1 PL 96322002 A PL96322002 A PL 96322002A PL 32200296 A PL32200296 A PL 32200296A PL 184951 B1 PL184951 B1 PL 184951B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
ala
asp
val
leu
actin
Prior art date
Application number
PL96322002A
Other languages
English (en)
Other versions
PL322002A1 (en
Inventor
Lazarus┴Robert┴A.
Shak┴Steven
Ulmer┴Jana┴S.
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/US1995/002366 external-priority patent/WO1996026278A1/en
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of PL322002A1 publication Critical patent/PL322002A1/xx
Publication of PL184951B1 publication Critical patent/PL184951B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Wariant ludzkiej DNazy I oporny na aktyne, posiadajacy sekwencje aminokwa- sowa przynajmniej w 90% identyczna z sekwencja aminokwasowa pokazana na figurze 1 i podstawienie co najmniej jednego aminokwasu na inny w jednej lub wiecej z nastepujacych pozycji: Ser68, Ser94 lub Tyr96. FIG. 1 PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazkujest wariant ludzkiej DNazy I. Ludzka Dnaza I to znaczy deoksyrybonukleaza I jest fosfodiesterą, która jest zdolna do hydrolizy kwasów polideoksyrybonukleinowych. Przedmiotem wynalazku jest zmodyfikowana forma (wariant) ludzkiej DNazy
184 951
I. DNaza I może być wytwarzana metodami rekombinacji DNA. Własności DNazy I mogą być wykorzystane klinicznie jako kompozycje farmaceutyczne.
DNaza I jest fosfodiesterazą zdolną do hydrolizy kwasów polideoksyrybonukleinowych. DNazę I pochodzącą z różnych źródeł oczyszczono do różnych stopni czystości.
Bydlęca DNaza I była intensywnie badana biochemicznie. Patrz na przykład, Moore, w The Enzymes (Boyer, P.D., ed), pp. 281-296, Academic press, New York (1981). Znana jest kompletna sekwencja aminokwasowa bydlęcej DNazy I (Liao, i wsp., J. Biol. Chem. 248:1489-1495 (1973); Oefner, i wsp., J. Mol. Biol. 192 : 605-632 (1986); Lahm, i wsp., J. Mol. Biol. 221:645-667(1991). Został także sklonowany i poddany ekspresji DNA kodujący bydlęcą DNazę I (Worrall i wsp., J. Biol. Chem. 265:21889-21895 (1990)). Metodą krystalografii za pomocą promieni X określono także strukturę bydlęcej DNazy I. Suck, i wsp., eMbO J. 3:2423-2430(1984); Suck i wsp., Nature 321:620-625 (1986); Oefner i wsp., J. Mol. Biol. 192:605-632 (1986).
DNA kodujący ludzką DNazę I został także wyizolowany i zsekwencjonowany. DNA ludzkiej DNazy I został poddany ekspresji w zrekombinowanych komórkach gospodarza, co umożliwia wytwarzanie ludzkiej DNazy I w odpowiednich ilościach. Shak i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. 87:9188-9192 (1990).
DNaza I ma kilka znanych własności i była używana w celach terapeutycznych. Jej głównym zastosowaniem terapeutycznym jest zmniejszenie lepkosprężystości wydzielin płucnych (śluzu) w przebiegu takich chorób jak zapalenie płuc i mukowiscydoza (CF), w ten sposób pomaga oczyszczaniu się dróg oddechowych. Patrz na przykład: Lourenco, i wsp., Arch. Intern. Med. 142:2299-2308 (1982); Shak, i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. 87:9188-9192 (1990); Hubbard, i wsp., New Engl. J. Med. 326:812-815 (1992); Fuchs, i wsp., New Engl. J. Med. 331:637-642 (1994); Bryson, i wsp., Drugs 48:894-906 (1994). Śluz bierze także udział w powstawaniu stanu chorobowego chronicznego zapalenia oskrzeli, astmatycznego zapalenia oskrzeli, rozstrzenia oskrzelowego, rozedmy płuc, ostrego i chronicznego zapalenia zatok, a nawet popularnego przeziębienia.
Wydzieliny płucne osób chorych na te choroby są materiałem złożonym, który zawiera glikoproteiny śluzowe, mukopolisacharydy, proteazy, aktynę i DNA. Niektóre składniki wydzielin płucnych uwalniane są przez leukocyty (neutrofile), które przechodzą do tkanek płucnych w odpowiedzi na obecność bakterii (na przykład, szczepów bakterii z rodzaju Pseudomonas, Pseudococcus czy Staphylococcus) lub innych czynników drażniących (na przykład, dym papierosowy, pyłek). W czasie oddziaływania z takimi bakteriami i czynnikami drażniącymi leukocyty mogą degenerować i uwalniać swoją zawartość, która zwiększa lepkoelastyczność wydzielin płucnych.
Zdolność DNazy I do zmniejszania lepkoelastyczności wydzielin płucnych przypisuje się enzymatycznej degradacji dużych ilości DNA uwalnianych przez neutrofile. Shak, i wsp.. Proc. Nat. Acad. Sci. 87:9188-9192(1990); Aitken,i wsp., J. Am. Med. Assoc. 267:1947-1951 (1992).
Ostatnio zaproponowano inny mechanizm mukolitycznego działania DNazy I polegający na rozkładzie aktyny. Vasconcellos, i wsp., Science 263:969-971 (1994). Aktyna jest jednym z białek występujących w największej ilości w komórkach eukariotycznych (na przykład, aktyna stanowi około 10% całkowitego białka limfocytów i jest bardzo intesywnie badana. Kabsch, i wsp., Ann. Rev., Biophys. Biomol. Struct. 21:49-76 (1992); Sheterline. i wsp., Prot. Profile 1:1-121 (1994). Aktyna występuje w dwóch formach, formie monomerycznej (aktyna-G) i formie włókienkowej (aktyna F), która tworzy się z monomerów aktyny G. Polimeryczne filamenty aktyny charakteryzują się wysoką lepkoelastycznością i w dużym stopniu decydują o lepkoelastyczności wydzielin płucnych. Mornet, i wsp.. Proc. Nat. Acad. Sci. 81:3680-3684 (1984); Newman, i wsp., Biochemistry 24:1538-1544 (1985); Janmey, i wsp., Biochemistry 27:8218-8226 (1988); Vasconcellos, i wsp., Science 263:969-871 (1994).
Ponieważ wiadomo, że DNaza I wiąże się z aktyną(Lazarides, i wsp., Proc., Nat. Acad. Sci. 71:4742-4746 (1974); Kabsch, i wsp., Nature 347:37-44 (1990)) i może rozkładać filamenty aktyny (a także hamuje polimeryzację aktyny G w filamenty) (Manherz, i wsp., FEBS Lett. 60:34-38 (1975); Hitchcock, i wsp., Cell 7:531-542 (1976); Pinder, i wsp., Biochemistry
184 951
21:4886-4890 (1982); Weber, i wsp., Biochemistry 33:4780-4786 (1994)), uważa się, żemukolityczne działanie DNazy I na plwocinę i inne wydzieliny płucne wynika raczej z rozkładu (depolimeryzacji) aktyny niż z hydrolizy DNA. Vasconcellos, i wsp., Science 263: 969-971 (1994). Zgodnie z tym poglądem wiadomo, że w obecności aktyny zahamowana jest zdolność hydrolizy DNA Dnazy I. Lazarides, i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. 71:4742-4746 (1974); Mannherz, i wsp., Eur. J. Biochem. 104:367-379 (1980). Zgodnie z tym poglądem, stwierdzono, że białka przecinające aktynę (na przykład, gelsolin) wydajnie zmniej szająłepkoelastyczność plwociny w przebiegu mukowiscydozy. Vasconcellos, i wsp., Science 263:969-971 (1994); Stossel i wsp.. Publikacja opisu patentowego PCT Nr WO 94/22465 (opublikowana 13 października 1994).
Niniejszy wynalazek oparty jest na badaniach mających na celu określenie biochemicznych podstaw aktywności mukolitycznej DNazy I. Badania te obejmują zaprojektowanie i wytworzenie wariantów ludzkiej DNazy I i przetestowanie tych wariantów w celu określenia ich zdolności hydrolizy DNA, wiązania aktyny i zmniejszenia lepkoelastyczności plwociny in vitro. Wytworzono kilka klas wariantów ludzkiej DNazy I. Jedna klasa wytworzonych wariantów (wariant oporny na aktynę) ma zmniejszoną zdolność wiązania aktyny, ale ciągle posiada działanie mukolityczne, a w niektórych przypadkach ma działanie mukolityczne większe niż natywna ludzka Dnaza I. Takie warianty oporne na aktynę mająprawie takąsamązdolność hydrolizy DNA jak natywna ludzka DNaza I, ale zdolność hydrolizy DNA jest mniej podatna na hamowanie przez aktynę. Druga klasa wariantów wiąże aktynę z powinowactem podobnym do powinowactwa natywnej ludzkiej DNazy I, ale ma zmniejszoną aktywność mukolityczną i zmniejszoną zdolność hydrolizy DNA w porównaniu z natywną ludzką DNazą I.
Wyniki te wskazują, że zastosowanie terapeutyczne ludzkiej DNazy I do zmniejszania lepkoelastyczności wydzielin płucnych wynika raczej z jej katalicznej zdolności hydrolizy DNA niż z jej zdolności rozkładu filamentów aktyny. Warianty ludzkiej DNazy I wiążące się z aktyną z mniejszym powinowactwem niż natywna ludzka DNazal ciągle majązdolność hydrolizy DNA i mogą być użytecznym środkiem terapeutycznym, szczególnie w leczeniu pacjentów mających wydzieliny płucne zawierające duże ilości aktyny. Ponieważ takie warianty mają zmniejszone powinowactwo do aktyny, ich zdolność hydrolizy DNA jest w mniejszym stopniu hamowana przez obecność aktyny, tak więc mają większą aktywność mukolityczną w obecności aktyny w porównaniu z natywną ludzką DNazą I.
Celem wynalazku było zatem dostarczenie wariantów ludzkiej DNazy I mających zdolność hydrolizy DNA ale wiążących się z aktyną z mniejszym powinowactwem niż natywna ludzka DNaza I.
Przedmiotem wynalazkujest wariant ludzkiej DNazy I, oporny na aktynę, posiadający sekwencję aminokwasowąprzynajmniej w 90% identycznąz. sekwencjąaminokwasowąpokazaną na figurze 1 i podstawienie co najmniej jednego aminokwasu na inny wjednej lub więcej z następujących pozycji: Glu13, Asp58, Ser68, Pro70, Ser94 lub Tyr96.
Korzystnie wariant według wynalazku charakteryzuje się tym, że ma sekwencję aminokwasową przynajmniej w 95% identycznąz sekwencją aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie co najmniej jednego aminokwasu na inny wjednej lub więcej z następujących pozycji: Glu13, Asp58, Ser68, Pro70, Ser94 lub Tyr96.
Również korzystnie wariant ma sekwencję aminokwasowąpokazanąna figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko w jednej lub więcej z następujących pozycji Glu13, Asp58, Ser68, Pro70, Ser94 lub Tyr96.
Jeszcze bardziej korzystnie wariant ma sekwencję aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko wjednej z następujących pozycji Glu13, Asp58, Ser68, Pro70, Ser94 lub Tyr96, lub ewentualnie wariant ten ma sekwencję aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko w dwóch z następujących pozycji Glu13, Asp58, Ser68, Pro70, Ser94 lub Tyr96.
Korzystnie wariant obejmuje co najmniej jedno podstawienie aminokwasu wybrane z grupy składającej się z E13A, E13H, E13R, E13W, E13Y, D58T, S68K, S68R, S68M, S68N,
P70T, S94N i Y96T.
184 951
Wariant ludzkiej Dnazy I opornej na aktynę dostarcza kwas nukleinowy kodujący takie oporne na aktynę warianty ludzkiej Dnazy I, zrekombinowane wektory zawierające taki kwas nukleinowy, zrekombinowane komórki gospodarza transformowane takim kwasem nukleinowym lub wektorem. Można także wytwarzać ten wariant metodami rekombinacji DNA.
Opis figur
Figura 1 przedstawia sekwencję aminokwasową dojrzałej ludzkiej DNazy I (SEQ.ID.NO: 1). Numery wskazują na pozycję reszt aminokwasowych w sekwencji.
Figura 2-6 przedstawia dane dla następujących wariantów:
A114C (SEQ. ID. NO: 68) D53R (SEQ. ID. NO: 13)
A114E (SEQ. ID. NO: 69) D53Y (SEQ. ID. NO: 14)
A114G (SEQ. ID. NO: 70) D58T (SEQ. ID. NO: 80)
A114H (SEQ. ID. NO: 71) E13A (SEQ. ID. NO: 2)
A114K (SEQ. ID. NO: 72) E13H (SEQ. ID. NO: 3)
A114L (SEQ. ID. NO: 73) E13R (SEQ. ID. NO: 4)
A114M (SEQ. ID. NO: 74) E13W (SEQ. ID. NO: 5)
A114Q (SEQ. ID. NO: 75) E13Y (SEQ. ID. NO: 6)
A114R (SEQ. ID. NO: 76) E69A (SEQ. ID. NO: 65)
A114W (SEQ. ID. NO: 77) E69C (SEQ. ID. NO: 66)
A114Y (SEQ. ID. NO: 78) E69K (SEQ. ID. NO: 21)
D53A (SEQ. ID. NO: 11) E69M (SEQ. ID. NO: 67)
D53C (SEQ. ID. NO: 43) E69R (SEQ. ID. NO: 22)
D53K (SEQ. ID. NO: 12) G49C (SEQ. ID. NO: 35)
D53L (SEQ. ID. NO: 44) G49I (SEQ. ID. NO: 36)
D53M (SEQ. ID. NO: 45) G49K (SEQ. ID. NO: 37)
G49R (SEQ. ID. NO: 38) V67A (SEQ. ID. NO: 18)
G4 9Y (SEQ. ID. NO: 39) V67C (SEQ. ID. NO: 55)
H44A (SEQ. ID. NO: 7) V67D (SEQ. ID. NO: 56)
H44C (SEQ. ID. NO: 28) V67E (SEQ. ID. NO: 19)
H44D (SEQ. ID. NO: 8) V67H (SEQ. ID. NO: 57)
H44E (SEQ. ID. NO: 86) V67K (SEQ. ID. NO: 20)
R44N (SEQ. ID. NO: 79) V67M (SEQ. ID. NO: 58)
H44Q (SEQ. ID. NO: 29) V67P (SEQ. ID. NO: 59)
184 951
H44W (SEQ. ID. NO: 10) V67R (SEQ. ID. NO : 60)
H44Y (SEQ. ID. NO: 9) V67S (SEQ. ID. NO : 61)
L45C (SEQ. ID. NO: 30) Y65A (SEQ. ID. NO : 15)
L45K (SEQ. ID. NO: 31) Y65C (SEQ. ID. NO : 51)
L45R (SEQ. ID. NO: 32) Y65E (SEQ. ID. NO : 87)
L52C (SEQ. ID. NO: 40) Y65K (SEQ. ID. NO : 52)
L52K (SEQ. ID. NO: 41) Y65M (SEQ. ID. NO : 53)
L52M (SEQ. ID. NO: 42) Y65P (SEQ. ID. NO : 97)
L52N (SEQ. ID. NO: 90) Y65R (SEQ. ID. NO : 16)
L52R (SEQ. ID. NO: 91) Y65S (SEQ. ID. NO : 54)
N56C (SEQ. ID. NO: 46) Y65W (SEQ. ID. NO : 17)
N56C (SEQ. ID. NO: 92) D53R:E69R (SEQ. ID. NO : 25)
N56F (SEQ. ID. NO: 47) D53R:H44A (SEQ. ID. NO : 23)
N56F (SEQ. ID. NO: 93 D53R:Y65A (SEQ. ID. NO : 24)
N56K (SEQ. ID. NO: 94) H64N:V66T (SEQ. ID. NO : 81)
N56K (SEQ. ID. NO: 48) S68N:P70T (SEQ. ID. NO : 98)
N56R (SEQ. ID. NO: 49) S94N:Y96T (SEQ. ID. NO : 85)
N56R (SEQ. ID. NO: 95) V67N:E69T (SEQ. ID. NO : 84)
N56W (SEQ. ID. NO: 50) Y65N:V67T (SEQ. ID. NO : 82)
N56W (SEQ. ID. NO: 96) D53R:Y65A: E69R (SEQ. ID.
S68K (SEQ. ID. NO: 62) 88)
S68M (SEQ. ID. NO: 63) H44A:D53R: Y65A (SEQ. ID.
S68R (SEQ. ID. NO: 64) 26)
V48C (SEQ. ID. NO: 33) H44A:Y65A: E69R (SEQ. ID.
V48K (SEQ. ID. NO: 34) 27)
V48R (SEQ. ID. NO: 89)
NO
NO
NO
V66N (SEQ. ID. NO: 83)
184 951
Figury 2-6 przedstawią względną aktywność właściwą natywnej ludzkiej DNazy I i wariantów. Błędy oznaczają odchylenie standardowe (n-ważone). Względną aktywność właściwą ludzkiej DNazy I Pulmozyme ® (Genentech, Inc. South San Francisco, California USA) określono jako 1,0. Względna aktywność właściwa natywnej ludzkiej DNazy I jest większa niż Pulmozyme ®, ze względu na obecność w Pulmozyme ® deaminowanej formy ludzkiej DNazy I, która ma zmniejszoną zdolność hydrolizy dNa (Frenz i wsp. Publikacja opisu patentowego PCT Nr WO 93/25670 (opublikowana 23 grudnia 1994).
Figura 3 przedstawia zdolność hydrolizowania DNA natywnej ludzkiej DNazy I i wariantu ludzkiej DNazy I zjednym podstawieniem reszty aminokwasowej w obecności aktyny, oznaczonej testem nadbarwliwości. „Procent aktywności” oznacza procent zdolności hydrolizowania dNa DNazy I (natywnej lub wariantu) obliczony tak jak opisano w przykładzie 3; zdolność hydrolizowania DNA, DNazy I w nieobecności aktyny, zdefiniowano jako 100% aktywności. Błędy oznaczają odchylenie standardowe.
Figura 4 przedstawia zdolność hydrolizowania DNA natywnej ludzkiej DNazy I i wariantu ludzkiej DNazy I z wieloma podstawieniami reszt aminokwasowych w obecności aktyny, oznaczonej testem nadbarwliwości i testem z zastosowaniem zieleni metylowej. „Procent aktywności” oznacza procent zdolności hydrolizowania DNA DNazy I (natywnej lub wariantu) obliczony takjak opisano w przykładzie 3; zdolność hydrolizowania DNA, DNazy I w nieobecności aktyny zdefiniowano jako 100% aktywności. Błędy oznaczają odchylenie standardowe.
Figura 5A-D przedstawia względną zdolność wiązania aktyny przez warianty ludzkiej DNazy I oznaczoną (ELISA) testem wiązania aktyny (jak opisano w przykładzie 3).
Wartość EC50 oznacza stężenie DNazy I (natywnej lub wariantu), które jest konieczne do uzyskania w teście sygnału o wartości równej połowie sygnału maksymalnego. Błędy oznaczają odchylenie standardowe. Wartość EC50 Pulmozyme ® i natywnej ludzkiej DNazy I wynosiły odpowiednio 67±23 pM (n=31) i 87±14 pM (n=32). Względna zdolność wiązania aktyny przedstawiona na figurze jest wartością EC50 otrzymaną dla wariantu ludzkiej Dnazy I podzieloną przez wartość EC50 oznaczoną dla natywnej ludzkiej DNazy I.
Warianty, dla których otrzymane wartości EC50 były większe niż możliwości pomiarowe testu oznaczono, jako mające stosunek (EC50 (wariant DNazy I)/ EC50 (natywnej DNazy I)) większy niż określona wartość (na przykład, >10, >100, >300, >2000, >20000, >35000).
Figura 6 przedstawia aktywność mukolityczną natywnej ludzkiej DNazy I i wariantów ludzkiej DNazy I w próbkach plwociny od pacjentów chorych na mukowiscydozę, oznaczoną testem zagęszczenia. Błędy oznaczają odchylenie standardowe.
Figura 7 przedstawia schematycznie immunosorpcyjny test wiązania aktyny (ELISA) opisany w przykładzie 3.
Szczegółowy opis wynalazku
Definicje
Użyte tu określenia „ludzka DNaza I”, „natywna ludzka DNaza I” i „DNaza I typu dzikiego” oznacza polipeptyd mający sekwencję aminokwasowądojrzałej ludzkiej DNazy I pokazaną na figurze 1.
Użyte tu określenia „wariant” lub „wariant sekwencji aminokwasowej” ludzkiej DNazy I oznacza polipeptyd mający sekwencję aminokwasową różną od natywnej ludzkiej DNazy I.
Ogólnie, wariant charakteryzuje się przynajmniej 80% identycznością sekwencji (homologią), korzystnie przynajmniej 90% identycznością sekwencji, bardziej korzystnie przynajmniej 95% identycznością sekwencji, najbardziej korzystnie przynajmniej 98% identycznością sekwencji z natywną ludzką DNazą I. Procent identyczności sekwencji oznaczono, na przykład, według Fitch, i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 80:1382-1386 (1983), wersją algorytmu opisanego przez Needleman, i wsp., J. Mol. Biol. 48:443-453 (1970), po takim dopasowaniu sekwencji, żeby osiągnąć maksimum homologii.
Określenia „wariant ludzkiej DNazy I oporny na aktynę”, „wariant oporny na aktynę” i „oporny na aktynę wariant ludzkiej DNazy I” oznacza wariant natywnej ludzkiej DNazy I, który ma (1) zdolność hydrolizy DNA i (2) zmniejszoną zdolność wiązania aktyny.
184 951 „Zdolność hydrolizy DNA” oznacza aktywność enzymatyczą natywnej ludzkiej DNazy I lub wariantu ludzkiej DNazy I hydrolizującą (tnącą) substrat DNA i dającąjako produkty ufosforylowane na 5'-końcu oligonukleotydy. Zdolność hydrolizy DNA można łatwo określić każdą z kilku różnych metod znanych w sztuce, włączając jakościową elektroforezę na żelu agarozowym lub poliakrylamidowym, test nadbarwliwości (Kunitz, J. Gen. Physiol. 33:349-362 (1950); Kunitz, J. Gen. Physiol. 33:363-377 (1950), czy test zieleni metylowej (Kurnick, Arch. Biochem. 29:41-53 (1950); Sinicropi, i wsp., Anal. Biochem. 222:351-358 (1994)).
„Zdolność wiązania” natywnej ludzkiej DNazy I lub opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I oznacza zdolność DNazy I do niekowalencyjnego wiązania aktyny. Zdolność wiązania można określić każdą z kilku różnych metod znanych w sztuce, na przykład, Mannherz, i wsp., Eur. J. Biochem. 104:367-379 (1980)). Względną zdolność wiązania różnych DNaz (na przykład, natywnej ludzkiej DNazy I i jej wariantów) określa się mierząc wiązanie DNaz do immobilizowanej aktyny w teście immunosorpcyjnym (ELISA) (opisanym w przykładzie 3), lub porównując zdolność hydrolizy DNA przez DNazy w obecności i nieobecności aktyny (także opisanym w przykładzie 3). Sposoby opisane w przykładach są szczególnie użyteczne do skriningu wariantów ludzkiej DNazy I w celu szybkiego znalezienia tych wariantów wytworzonych sposobem według wynalazku, które mają zmniejszoną zdolność wiązania aktyny.
Oporny na aktynę wariant ludzkiej DNazy I mający „zmniejszonązdolność wiązania aktyny”, jest to wariant, który ma zdolność wiązania aktyny mniejszą niż zdolność wiązania aktyny natywnej ludzkiej DNazy I, określonąw porównywalnych warunkach. Jeśli opisany w przykładzie 3 immunosorpcyjny test wiązania aktyny jest używany do określenia zdolności wiązania aktyny przez ludzkąDNazę I (natywnąlub wariant), to wariantem opornym na aktynę mającym „zmniejszonązdolność wiązania aktyny” jest wariant, którego wartość EC50 jest większa niż wartość EC50 natywnej ludzkiej DNazy I. W tym teście wariant oporny na aktynę ma typowo wartość EC50 od 5-krotnie do 100-krotnie większą niż wartość EC50 natywnej ludzkiej DNazy I, jednak sposobem według wynalazku łatwo można otrzymać oporne na aktynę warianty mające wartość EC50 ponad 500-krotnie większą niż wartość EC50 natywnej ludzkiej DNazy I, szczególnie przez zmianę wielu reszt aminokwasowych w sekwencji aminokwasowej natywnej ludzkiej DNazy I (patrz, na przykład, figura 5A i 5D).
„Aktywność mukolityczna” oznacza zmniejszenie lepkoelastyczności (lepkości) plwociny lub innego materiału biologicznego, jakie obserwuje się na przykład, po traktowaniu takiego materiału natywną ludzką DNazą I lub wariantem natywnej ludzkiej DNazy I. Aktywność mukolityczną można łatwo określić każdą z kilku różnych metod znanych w sztuce, włączając test zwartości plwociny (Publikacja opisu patentowego PCT Nr WO 94/10567, opublikowana 11 maja 1994), test wykorzystujący wahadło torsyjne (Janmey, J. Biophys. Methods 22:41-53 (1991), lub inne metody reologiczne.
„Reakcj a łańcuchowa polimerazy” lub „PCR” oznacza ogólnie sposób amplifikacji pożądanych sekwencji nukleotydowych in vitro, tak jak opisano, na przykład, w Dokumencie Patentowym Stanów Zjednoczonych Nr 4,683,195. Ogólnie, metoda PCR obejmuje powtarzalne cykle wydłużania primerów, wykorzystujące oligonukleotydowe primery zdolne do preferencyjnego wiązania się z matrycową sekwencj ą DNA.
Uważa się, że termin „komórka”, „komórka gospodarza”, „linia komórkowa” i „hodowla komórkowa” używane tu wymiennie i wszystkie takie terminy określają potomstwo powstające w wyniku wzrostu lub hodowli komórek. Terminów „tansformacja” i „transfekcja” używa się wymiennie dla określenia procesu wprowadzenia DNA do komórki.
Termin „połączony funkcjonalnie” oznacza kowalencyjne związanie, metodą ligacji enzymatycznej lub inną, dwóch lub więcej sekwencji DNA w takim porządku jedna względem drugiej, że zostaje zachowane normalne funkcjonowanie połączonych sekwencji. Na przykład, DNA presekwencji lub lidera wydzielniczego jest funkcjonalnie połączone z DNA polipeptydu, jeżeli ulega ekspresji jako białko poprzedzające, które bieże udział w wydzielaniu polipeptydu: sekwencja promotora lub sekwencja wzmacniająca jest funkcjonalnie połączona z sekwencją kodującą, jeżeli wpływa na transkrypcę tej sekwencji; lub miejsce wiązania rybosomów jest
184 951 funkcjonalnie połączone z sekwencją kodującą, jeżeli jest tak umiejscowione, że ułatwia translację. Ogólnie, „połączony funkcjonalnie” oznacza, że połączone sekwencje DNA przylegają do siebie i w przypadku sekwencji lidera wydzielniczego przylegają do siebie zachowując zgodność ramki odczytu. Połączenie osiąga się przez ligacje w odpowiednich miejscach restrykcyjnych. Jeśli takie miejsca nie istnieją, to używa się syntetycznych adapterów oligonukleotydowych, lub łączników, w połączeniu ze standardowymi sposobami rekombinacji DNA.
Aminokwasy oznacza się tu za pomocą kodów trzy- lub jednoliterowych, jak następuje:
Asp D kwas asparaginowy Ile I izoleucyna
Thr T treonina Leu L eucyna
Ser S seryna Tyr Y tyrozyna
Glu E kwas glutaminowy Phe F fenyloalanina
Pro P prolina His H histydyna
Gly G glicyna Lys K lizyna
Ala A alanina Arg R arginina
Cys C cysteina Trp W tryptofan
Val V walina Gln Q glutamina
Met M metionina Asn N asparagina
Selekcja wariantów opornych na aktynę
Sposób według wynalazku oparty jest na badaniach struktury, zdolności wiązania aktyny,
zdolności hydrolizy DNA i aktywności mukolitycznej wariantów sekwencji aminokwasowych ludzkiej DNazy I. Oporne na aktynę warianty wytworzone sposobem według wynalazku mają zdolności hydrolizy DNA, ale ich zdolność wiązania aktyny jest mniejsza niż natywnej ludzkiej DNazy I. Takie zmniejszenie zdolności wiązania aktyny korzystnie uzyskuje się przez wprowadzenie mutacji w miejscu i/lub obok tych reszt aminokwasowych natywnej ludzkiej DNazy I, które wydają się wpływać na miejsce wiązania aktyny, włączając na przykład, reszty Glu13, His44, Leu45, Val48, Gly49, Leu52, Asp53, Asn 56 , Asp58,His64, Tyrf55, Val66 , Val67 , Ser68 , Glu69, Pro70, Ser94, Tyr96 i Ala114 natywnej ludzkiej DNazy I (liczby następujące po trzyliterowym kodzie reszty aminokwasowej wskazują numer kolejny reszty aminokwasowej w sekwencji na figurze 1).
Istnieje wiele różnych sposobów wytworzenia opornych na aktynę wariantów ludzkiej DNazy I. W jednych przykładzie wykonania oporny na aktynę wariant wytwarza się wprowadzając jedną lub wiele podstawień aminokwasowych, insercji i/lub delecji wregion przylegający (to znaczy w obrębie około pięciu reszt aminokwasowych) do tych reszt aminokwasowych ludzkiej DNazy I, które wpływają na miejsce wiązania aktyny-.
Niektóre przykłady ilustrujące takie mutacje to: D53R, D53K, D53Y, D53A, Y65A, Y65E, Y65R, V67E, V67K, E69R, D53R:Y65A, D53R:E69R, H44A:D53R:Y65A, H44A:Y65A: E69R (patrz figura 2-6).
W innym przykładzie wykonania wynalazku, oporny na aktynę wariant, wytwarza się wprowadzając mutację lub mutacje, które tworzą nowe miejsce glikozylacji w regionie przylegającym (to znaczy w obrębie około pięciu reszt aminokwasowych) do tych reszt aminokwasowych ludzkiej DNazy I, które wpływają na miejsce wiązania aktyny. Na przykład, metody mutagenezy ukierunkowanej miejscowo, używa się do wprowadzenia trójpeptydowej sekwencji, asparagina-X-seryna lub asparagina-X-treonina (w której X znacza każdąresztę aminokwasowąz wyjątkiem proliny), którajest sekwencją sygnalną do enzymatycznego przyczepienia reszty węglowodanowej do łańcucha bocznego asparaginy. Creighton, Proteins, str. 76-78 (W.H. Freeman, 1984). Przeszkody przestrzenne występujące pomiędzy resztą węglowodanową tak powstałego N-glikolizowago wariantu DNazy I a aktyną zmniejszają lub uniemożliwiają wiązanie aktyny, co w konsekwencji prowadzi do zmniejszenia hamowania zdolności hydrolizowania dNa, DNazy I, w porównaniu do natywnej ludzkiej DNazy I. Niektóre przykłady ilustrujące takie mutacje to: H44N, D58S, D58T, V66N, H44N:T46S, H64N:V66S, H64N:V66T,
184 951
Y65N:V67S, Y65N:V67T, V66N:S68T, V67N:E69S, V67N:E69T, S68N:P70S, S68N:P70T S94N:Y96S, S94N:Y96T.
Ewentualnie, w połączeniu z takimi mutacjami powodującymi powstawanie nowych miejsc glikozylacji, występujące naturalnie w sekwencji aminokwasowej natywnej ludzkiej DNazy I miejsca glikozylacji w pozycji 18 i/lub 106 mogą być usunięte, w zależności od pożądanego stopnia glikozylacji cząsteczki wariantu opornego na aktynę.
W innym przykładzie wykonania metodę mutagenezy ukierunkowanej miejscowo, używa się do wprowadzenia reszty aminokwasowej w regionie lub obok (to znaczy w obrębie około pięciu reszt aminokwasowych) tych reszt aminokwasowych natywnej ludzkiej DNazy I, które biorą udział w wiązaniu aktyny i które poddają się biologicznym lub chemicznym modyfikacjom post-translacyjnym (patrz poniżej). Means i wsp., Chemical Modification of Proteins (Holden-Day, 1971); Glazer, i wsp., Chemical Modification of Proteins; Selected Methods and Analytical Preocedures (Elsevier, 1975); Creighton, Proteins, str. 70-87 (W.H. Freeman, 1984); Lundblad, Chemical Reagents for Protein Modification (CRC Press, 1991). Takie modyfikacje post-translacyjne wprowadzają przeszkody przestrzenne lub zmieniają własności elektrostatyczne DNazy I, co zmniejsza lub uniemożliwia wiązanie aktyny i w konsekwencji prowadzi do zmniejszenia hamowania zdolności hydrolizowania DNA DNazy I, w porównaniu do natywnej ludzkiej DNazy I. Na przykład, w miejsce lub pobliże reszty natywnej ludzkiej DNazy I biorącej udział w wiązaniu aktyny wprowadza się resztę cysternową. Wolna grupa tiolowa reszty cysternowej może tworzyć międzycząsteczkowe wiązania dwusiarczkowe z drugą cząsteczką takiego wariantu DNazy I, co prowadzi do powstania dimerów DNazy I, lub może być modyfikowana, na przykład, za pomocą specyficznych do grup tiolowych związków alkilujących. Niektóre przykłady ilustrujące takie mutacje to: H44C, L45C, V48C, G49C, L52C, D53C, N56C, Y65C, V67C, E59C, A114C.
Substytucje, insercje i/lub delecja w sekwencji aminokwasowej natywnej ludzkiej DNazy I przeważnie wytwarza się wprowadzając mutacje w odpowiadającej sekwencji nukleotydowej DNA kodującego natywną ludzką DNazę I, na przykład, metodą mutagenezy ukierunkowanej miejscowo. Ekspresja zmutowanego DNA prowadzi do wytwarzania wariantu ludzkiej DNazy I, mającego pożądaną (nie natywną) sekwencję aminokwasową.
Chociaż każda znana technika może być użyta do prowadzenia mutagenezy ukierunkowanej miejscowo, na przykład, metody opisane w Sambrook, i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Drugie Wydanie (Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1989)), do wytwarzania wariantów ludzkiej DNazy I korzystną metodąjest mutageneza ukierunkowana na oligonukleotydy. Metoda tajest dobrze znana w sztuce (Zoller, i wsp., Meth. Enz. 100:4668-500 (1983); Zoller i wsp., Meth. Enz. 154:329-350 (1987); Carter, Meth. Enz. 154:382-403 (1987); Kunkel, i wsp., Meth. Enzymol. 154:367-382 (1987); Hortwitz, i wsp., Meth. Enz. 185;599-611 (1990)) i jest szczególnie użyteczna do wytwarzania wariantów substytucyjnych, chociaż może być także użyta do wytwarzania wariantów delecyjnych i insercyjnych.
W metodzie mutagenezy ukierunkowanej miejscowo, typowo wykorzystuje się wektory fagowe występujące zarówno w formie jednoniciowej jak i dwuniciowej. Typowy wektor użyteczny wmetodzie mutagenezy ukierunkowanej miejscowo, obejmujątakie wektory jak fag M13 i wektory plazmidowe, zawierająeejednonieiowe miejsce początku replikacji pochodzenia fagowego (Messing i wsp., Meth. Enzymol. 101:20-78 (1983); Veira i wsp. Meth. Enzymol. 153:3-11 (1987); Short, i wsp. Nuc. Acids. Res. 16:7583-7600(1988)). Replikacja tych wektorów o odpowiednich komórkach gospodarza powoduje syntezę jednoniciowego DNA, który może być użyty wmetodzie mutagenezy ukierunkowanej miejscowo.
Podczas prowadzenia mutagenezy ukierunkowanej miejscowo DNA kodującego natywną ludzką DNazę I (lub jej wariant), DNA ten zmienia się najpierw przez hybrydyzację z oligonukleotydem kodującym pożądaną mutację jednej nici DNA. Po hybrydyzacji, używa się polimerazy DNA do zsyntetyzowania całej pozostałej nici DNA, wykorzystując zhybrydyzowany oligonukleotyd jako primer i pojedynczą nić DNA jako matrycę. Tym sposobem oligonukleotyd zawierający pożądaną mutację jest włączony w powstający dwuniciowy DNA.
184 951
Oligonukleotydy używane jako sondy lub primery wytwarza się odpowiednimi sposobami, takimi jak oczyszczanie naturalnie występującego DNA lub przez syntezę in vitro. Na przykład, oligonukleotydy łatwo syntetyzuje się używając różnych metod chemii organicznej, takich jak opisane przez Narang i wsp., Meth. Enzymol. 68:90-98 (1979); Brown i wsp., Meth Enzymol. 68:109-151 (1979); Caruthers, i wsp., Meth. Enzymol. 154:287-313 (1985). Ogólne podejście do selekcji odpowiednich sond lub primerów jest dobrze znane. Keller, i wsp., DNA Probes, str. 11-18 (Stockton Press, 1989). Zwykle, sonda hybrydyzacyjna lub primer zawiera 10-25 lub więcej nukleotydów i przynajmniej 5 nukleotydów po każdej ze stron pożądanej mutacji, pozwala to mieć pewność, że oligonukleotyd będzie hybrydyzował z jednoniciową cząsteczką matrycy preferencyjnie w pożądanym położeniu.
Oczywiście, metody mutagenezy ukierunkowanej miejscowo można użyć do wprowadzenia wielu podstawień, isercji lub delecji do wyjściowego DNA. Jeżeli miejscamutowane leżą blisko siebie, mutacje można wprowadzić jednocześnie, używając jednego oligonukleotydu kodującego wszystkie pożądane mutacje. Zamiast tego można także użyć jednego lub dwóch sposobów alternatywnych.
W sposobie pierwszym, dla każdej pożądanej mutacji wytwarza się oddzielny oligonukleotyd, następnie oligonukleotydy łączy się w jednąjednoniciową cząsteczkę matrycowego DNA, a drugą nić DNA syntetyzuje się używając jako matrycy nici, zawierającej wszystkie pożądane podstawienia aminokwasowe.
W alternatywnym sposobie do wytworzenia wariantu zawierającego pożądane mutacje niezbędne są dwie lub więcej rund mutagenezy. Pierwsza runda jest taka sama jak przy wprowadzaniu pojedynczej mutacji. W drugiej rundzie jako matrycę wykorzystuje się DNA mutowany w pierwszej rundzie, tak więc matryca taka, od razu zawiera jedną lub więcej mutacji. Do takiej matrycy przyłącza się następnie oligonukleotyd kodujący dodatkowe pożądane podstawienie aminokwasowe. Powstający DNA koduje teraz mutacje z pierwszej i drugiej rundy mutagenezy. Takiego DNA używa się jako matrycy w trzeciej rundzie mutagenezy i tak dalej.
Mutageneza sposobem PCR (Higuchi, w PCR Protocols, str. 177-183 (Academic Press, 1990); Vallette, i wsp.. Nuc. Acids Res. 17:723-733 (1989)) jest także przydatna do wytwarzania wariantów ludzkiej DNazy I. Jeżeli podczas reakcji PCR jako materiału wyjściowego używa się małych ilości matrycowego DNA, do wytwarzania stosunkowo dużych ilości specyficznych fragmentów DNA używa się primerów nieznacznie różniących się sekwencją od odpowiednich sekwencji matrycy. Powstałe fragmenty DNA różnią się od sekwencji matrycowej tylko w tych pozycjach sekwencji, w których primery różniły się od matrycy. Na przykład, przy wprowadzaniu mutacji do plazmidu, sekwencja jednego z primerów zawiera pożądaną mutację i jest tak zaprojektowana, że hybrydyzuje z jedną nicią plazmidowego DNA w pozycji, w której występuje mutacja. Sekwencja drugiego primera musi być identyczna z sekwencjąnukleotydowąprzeciwnej nici DNA plazmidu, ale ta sekwencja może być komplementarna z dowolnym miej scem plazmidu. Korzystnie jestjeżeli sekwencja drugiego primerajest komplementarna z miejcem drugiej nici odległej nie więcej niż 200 nukleotydów od pierwszej, dzięki temu cały zamplifikowany region DNA, ograniczony przez primery, można łatwo zsekwencjonować. Reakcja PCR przy użyciu pary primerów jak opisana powyżej, daje zbiór fragmentów DNA różniących się pozycjami mutacji określonymi przez primery, a czasami także i innymi mutacjami, ponieważ reakcja PCR czasami jest niedokładna. Wagner, i wsp., w PCR Topics, str. 69-71 (Springer-Verlag, 1991).
Jeżeli stosunek matrycy do amplifikowanego produktu jest wyjątkowo mały, większość wytworzonych fragmentów DNA zawiera pożądane mutacje. Stosując standardowe metody rekombinacji DNA, tak wytworzonego DNA, używa się do zastąpienia odpowiedniego fragmentu plazmidu, który służył za matrycę. Oddzielne mutacje można wprowadzić jednocześnie stosując drugi zmutowany primer, albo przprowadzając drugi PCR z innymi zmutowanymi primerami i włączając dwa powstałe fragmenty DNA w plazmid w reakcji trzy- (lub więcej) częściowej ligacji.
184 951
Inny sposób wytwarzania wariantów sposobem według wynalazku, mutageneza kasetowa, oparty jest na metodzie opisanej przez Wells, i wsp., Gene, 34: 315-323 (1985). Materiałem wyjściowymjest plazmid (lub inny wektor) zawierajcy sekwencję, która ma być zmutowana. W wyj ściowym DNA identyfikuje się kodon, który ma być zmutowany. Konieczna jest także obecność unikalnych miejsc restrykcyjnych po obu stronach zidentyfikowanego miejsca mutacji. Jeśli takie unikalne miejsca restrykcyjne nie istniejąmożnaje stworzyć, używając do ich wprowadzenia w odpowiednie miejsca DNA, opisanej powyżej metody mutagenezy ukierunkowanej na oligonukleotydy. Plazmidowy DNA tnie się w tych miejscach w celu linearyzacji. Przy użyciu standardowych metod syntezy DNA, które pozwalają na syntezę oddzielnych nici DNA i ich hybrydyzację, syntetyzuje się dwuniciowy oligonukleotyd kodujący sekwencję pomiędzy miejscami restrykcyjnymi, ale zawierający pożądaną mutację. Ten dwuniciowy fragment DnA nazywa się kasetą. Taką kasetę projektuje się tak, że ma 5' i 3' końce kompatybilne z końcami zlinearyzowanego plazmidu i może być połączona bezpośrednio z plazmidem. Powstały plazmid zawiera zmutowaną sekwencję DNA.
Obecność mutacji w DNA potwierdza się dobrze znanymi w stanie techniki sposobami, włączając mapowanie restrykcyjne i/lub sekwencjonowanie DNA. Korzystną metodą sekwencjonowania DNA jest metoda terminacji łańcucha za pomocą dwudeoksynukleotydów, opisaną przez Sanger i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 72:3918-3921 (1979).
W celu dalszego klonowania lub ekspresji DNA kodujący wariant ludzkiej DNazy I łączy się z wektorem replikacyjnym. „Wektorami” sąplazmidy i inne cząsteczki DNA, które są zdolne do replikacji w komórkach gospodarza i w odpowiednich komórkach gospodarza (układ wektor-gospodarz) sązdolne do pełnienia dwóch funkcji. Pierwsza funkcja polega na ułatwieniu klonowania kwasu nukleinowego kodującego wariant ludzkiej DNazy I, to jest wytworzenia odpowiedniej ilości kwasu nukleinowego. Druga funkcja polega na umożliwieniu bezpośredniej ekspresji wariantu ludzkiej DNazy I. Jedna lub obie te funkcje są spełniane przez wektor w odpowiednich komórkach gospodarza używanych do klonowania lub ekspresji. Wektory zawierają różne składniki w zależności od funkcji jaką spełniają.
Wektor ekspresyjny do wytwarzania wariantu ludzkiej DNazy I zawiera opisany powyżej DNA kodujący ten wariant, połączony funkcjonalnie z promotorem i miejscem wiązania rybosomów. Następnie wariant poddaje się ekspresji bezpośredniej w hodowli zrekombinowanych komórek, lub jako białko połączone z polipeptydem heterologicznym, korzystnie sekwencją sygnałową lub innym polipeptydem mającym specyficzne miejsce cięcia w miejscu połączenia polipeptydu heterologicznego i wariantu ludzkiej DNazy I.
Prokarionty (na przykład, E.coli i inne bakterie) są komórkami gospodarza wykorzystywanymi w początkowych etapach klonowania. Są one szczególnie użyteczne do szybkiego wytwarzania dużych ilości DNA, wytwarzania jednoniciowych matryc używanych w metodzie mutagenezy ukierunkowanej miejscowo i do sekwencjonowania wytworzonych wariantów. Prokariotyczne komórki gospodarza mogą być także użyte do ekspresji DNA kodującego wariant ludzkiej DNazy I. Polipeptydy wytworzone w komórkach prokariotycznych typowo nie są glikolizowane.
Ponadto warianty ludzkiej DNazy I według wynalazku można wytwarzać w eukariotycznych komórkach gospodarza, włączając eukariotyczne mikroorganizmy (na przykład, drożdże) lub komórki pochodzące ze zwierząt lub innych organizmów wielokomórkowych (na przykład, komórki jajnika chomika chińskiego i inne komórki ssaków) lub żywe zwierzęta (na przykład, krowy, kozy, owce).
Metodologia klonowania i ekspresji jest dobrze znana w technice genetycznej. Przykłady prokariotycznych i eukariotycznych komórek gospodarza, wektorów ekspresyjnych odpowiednich do użycia przy wytwarzaniu wariantów ludzkiej DNazy I sposobem według wynalazku są opisane, na przykład, w Shak, Publikacja opisu patentowego PCT Nr. WO 90/07572 (opublikowana 12 lipca, 1990).
184 951
Jeżeli jako komórek gospodarza używa się komórek prokariotycznych lub innych mających ścianę komórkową, korzystną metodą transfekcji komórek jest metoda wapniowa opisana przez Cohen i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. 69:2110-2114 (1972) lub metoda z użyciem glikolu polietylenowego opisana przez Chung i wsp., Nuc. Acids. Res. 16:3580 (1988). Jeżeli jako komórek gospodarza używa się komórek drożdży, transfekcję prowadzi się przede wszystkim metodą z użyciem glikolu polietylenowego opisaną przez Hinnen, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 75: 1929-1933 (1978). Jeżeli jako komórek gospodarza używa się komórek ssaków, transfekcję prowadzi się przede wszystkim metodą z precypitacji fosforanem wapniowym opisanąprzez Graham, i wsp., Virology 52:546 (1978), Gorman, i wsp., DNA and Protein Eng. Techn. 2:3-10 (1990). Jednakże można także użyć innych znanych metod wprowadzania DNA do komórek prokariotycznych i eukariotycznych. Metody, takie jak wstrzykiwanie dojądrowe, elektropacja czy fuzja protoplastów są odpowiednie do użycia sposobem według wynalazku.
Wektory ekspresyjne szczególnie użyteczne przy wytwarzaniu wariantu ludzkiej DNazy I, według wynalazku powinny zapewniać w komórkach ssaków przejściową ekspresję DNA kodującego warianty ludzkiej DNazy I. Ogólnie, przejściowa ekspresja oznacza, że używa się wektora ekspresyjnego, który jest zdolny do namnażania w komórkach gospodarza i gromadzą one wiele kopii wektora eskspresyjnego, co z kolei powoduje syntezę dużej ilości polipeptydu kodowanego przez wektor eskspresyjny. Systemy wykorzystujące przejściową ekspresję skła<^^^^jjąsię z odpowiedniego wektora eskspresyjnego i odpowiedniej komórki gospodarza i pozwalają na wygodną identyfikację polipeptydu kodowanego przez klonowane DNA, a także na szybki przegląd takich polipeptydów pod kątem pożądanych właściwości biologicznych i fizjologicznych. Wong, i wsp., Science 228:810-815 (1985); Lee, i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 82:4360-4364 (1985); Yang, i wsp., Cell 47:3-10 (1986). Systemów wykorzystujących przejściową ekspresję używa się do ekspresji DNA kodującego sekwencję aminokwasową wariantów natywnej ludzkiej DNazy I, korzystnie w połączeniu z testami pozwalającymi na identyfikację tych wariantów, które wiążą aktynę z mniejszym powinowactwem, niż natywna ludzka DNaza I, a także z testami pozwalającymi na zmierzenie zdolności tych wariantów do hydrolizy DNA.
Wariant ludzkiej DNazy I korzystniejest wydzielany przez komórki gospodarza, w których ulega ekspresj i. W takim przypadku, białko wariant odzyskuje się z podłoża hodowlanego w którym rosną komórki gospodarza. Korzystnie jest wtedy hodować komórki w podłożu pozbawionym surowicy, ponieważ brak białek surowicy i innych skadników surowicy ułatwia oczyszczanie białka wariantu. Jeżeli białko wariantu nie jest wydzielane przez komórki gospodarza wtedy białko wariantu ludzkiej DNazy I odzyskuje się z lizatu komórek gospodarza. Jeżeli wariant ulega ekspresji w komórkach gospodarza innych niż komórki ludzkie, białko wariantu będzie całkowicie wolne od białek ludzkiego pochodzenia. W każdym przypadku w celu wytworzenia homogennego preparatu białka wariantu ludzkiej DNazy I konieczne jest oczyszczenie białka wariantu od białek zrekombinowanych komórek gospodarza. Do zastosowania terapeutycznego, oczyszczony wariant korzystnie ma czystość większąniż 99% (to znaczy, że wszystkie inne białka stanowią mniej niż 1% białka całkowitego w oczyszczonej kompozycji).
Ogólnie oczyszczanie białka wariantu ludzkiej DNazy I prowadzi się wykorzystując różne własności fizykochemiczne białka wariantu i białek zanieczyszczających kompozycję. Na przykład, w pierwszym etapie podłoże hodowlane lub lizat komórek gospodarza odwirowuje się, żeby usunąć cząsteczkowe pozostałości komórkowe. Następnie, wariant ludzkiej DNazy I oczyszcza się z zanieczyszczających rozpuszczalnych białek i polipeptydów, na przykład, za pomocą wytrącania siarczanem amonowym lub alkoholem etylowym, filtracji na żelu (chromatografii sita molekularnego), chromatografii jonowymiennej, chromatografii hydrofobowej, chromatografii immunopowinowactwa (na przykład, z użyciem kolumn zawierających sprzężone z Sepharose przeciwciała przeciw ludzkiej DNazie I), chromatografii kationowymiennej (Frenz, i wsp., Publikacja opisu patentowego PCT Nr. WO 93/2570 opublikowana 23 grudnia, 1993), HPLC z wykorzystaniem fazy odwróconej i/lub elektroforezy na żelu.
Oczywiście biegli w sztuce wiedzą, że sposoby oczyszczania używane w przypadku natywnej ludzkiej DNazy I wymagają pewnych modyfikacji, żeby były przydatne do oczyszczania
184 951 wariantu ludzkiej DNazy I, ze względu na strukturalne i inne różnice między natywnym białkiem i białkiem wariantu. Na przykład, w niektórych komórkach gospodarza (szczególnie komórkach prokariotycznych) wariant ludzkiej DNazy I może ulegać ekspresji początkowo w postaci nierozpuszczalnej, zagregowanej formy (znanej w sztucejako „ciała refrakcyjne” lub „ciała wtrętowe”), wtedy w celu oczyszczenia konieczne jest jego rozpuszczenie i późniejsze odtworzenie. Sposoby rozpuszczenia i późniejszego odtworzenia zrekombinowanych białkowych ciał refrakcyjnych są znane w sztuce (patrz, na przykład, Builder, i wsp., Patent Stanów Zjednoczonych No. 4,511,502).
Warianty ludzkiej DNazy I można wytwarzać także przez bezpośrednią kowalencyjną modyfikację białka natywnej ludzkiej DNazy I. Takie modyfikacje robi się, żeby zmienić zdolność wiązania aktyny lub inne właściwości białka (na przykład, stabilność, okres półtrwania biologicznego, immunogenność). Modyfikacje takie można wytwarzać zamiast lub jako dodatek do podstawień, insercji lub delecji aminokwasowych opisanych powyżej.
Modyfikacje kowalencyjne wprowadza się w reakcji reszt aminokwasowych natywnej ludzkiej DNazy I lub jej wariantu z związkiem organicznym, który jest zdolny do reakcji z wybranym aminokwasowym łańcuchem bocznym lub resztą na N- lub C-końcu.
Na przykład, reszty cysteinylowe najczęściej poddaje się reakcji za-haloacetatami. (i odpowiednimi aminami), takimi jak kwas chlorooctowy lub chloroacetamid. W wyniku reakcji otrzymuje się pochodne karboksymetylowe lub karboksyamidometylowe. Reszty cystenylowe poddaje się także reakcji z bromotrójfluoroacetonem, kwasem a-bromo-P-(5-imidozoilo)propionowym, fosforanem chloroacetylu, imidami kwasu N-alkilomaleinowego, dwusiarczkiem
3-nitro-2-pirydylu, dwusiarczkiem metylo-2-pirydylu, p-chlorortęciobenzoesanem, 2-chlorortęcio-4-nitrofenolem lub chloro-7-nitrobenzo-2-oksy-1,3-diazolem.
Reszty histydynylowe poddaje się reakcji z dietylopirowęglanem w pH 5,5-7,0, ponieważ związek ten stosunkowo specyficznie reaguje z łańcuchem bocznym histydyny. Użyteczny jest także bromek para-bromofenyloacylowy, reakcję korzystnie prowadzi się w 0,1 M roztworze kakodylanu sodowego w pH 6,0.
Reszty lizynylowe i reszty na końcu aminowym poddaje się reakcji z bezwodnikiem kwasu bursztynowego lub innych kwasów karboksylowych. Derywatyzacja tymi związkami odwraca ładunek reszt lizynylowych. Inne związki odpowiednie do derywatyzacji reszt zawierających grupy α-aminowe obejmują imidoestry, takie jak ester metylowy kwasu pikolinimidowego, fosforan pirydoksalu, pirydoksal, chloroborowodór, kwas trójnitrobenzenosulfonowy, 0-metyloizomocznik, 2,4-pentanodion i reakcja z glioksylanem katalizowana przez transaminazę.
Reszty arginylowe modyfikuje się w reakcji z jednym lub kilkoma tradycyjnymi związkami, włączając fenylo-glioksal, 2,3-butanodion, 1,2-cykloheksanodion i ninhydryna. Derywatyzacja reszt arginylowych wymaga, żeby reakcje były prowadzone w środowisku alkalicznym ze względu na wysoką wartość pKa guanidynylowej grupy funkcyjnej. Ponadto, związki te mogą reagować z grupami lizyny, a także grupą epsylon-aminową argininy.
Boczne grupy karboksylowe (aspartyl, glutamyl) selektywnie modyfikuje się w reakcji karbodiimidów (R-N=C=N-R') w których R i R' oznaczają różne grupy alkilowe, takie jak 1-cykloheksylo-3-(2-morfolinylo-4-etylo) karbodiimid lub 1-etylo-3-(4-azonia-4,4-dimetylopentylo)karbodiimid. Ponadto, reszty aspartylowąi glutamylową można zmienić w reszty aspariginylowąi glutaminylową w reakcji z solami amonowymi.
Reakcję kowalencyjnego sprzęgania reszt glikozydowych z resztami aminokwasowymi można wykorzystać do modyfikowania lub zwiększenia liczby lub różnorodności podstawników węglowodanowych, szczególnie w miejscu lub pobliżu reszt aminokwasowych, które biorą udział w wiązaniu aktyny. W zależności od sposobu sprzęgania reszty lub resztę cukrowąmożna przyłączyć do (a) argininy lub histydyny, (b) wolnych grup karboksylowych, (c) wolnych grup siarkowodorowych, takich jak grupa cysteiny, (d) wolnych grup hydroksylowych, takich jak grupy seryny, treoniny czy hydroksyproliny, (e) reszt aromatycznych, takichjak grupy fenyloalaniny, tyrozyny lub tryptofany i (f) grupy amidowej glutaminy. Odpowiednie sposoby są opisane
184 951 na przykład w publikacji opisu patentowego PCTNr. WO 87/05330 (opublikowanej 11 września, 1987) i w Aplin, i wsp., CRC Crit. Rev. Biochem., str. 259-306 (1981).
Kowalencyjne wiązanie takich związków jak glikol polietylenowy (PEG) lub albumina surowicy ludzkiej do wariantów ludzkiej DNazy I może zmniejszyć immunogenność i/lub toksyczność wariantu i/lub wydłużyć jego okres półtrwania, takjak to obserwowano dla innych białek. Abuchowski, i wsp., J. Biol. Chem. 252:3582-3586 (1977); Poznansky, i wsp., FEBS Letters 239:18-22 (1988); Goodson, i wsp., Biotechnology 8:343-346 (1990); Katre, J. Immunol. 144:209-213 (1990); Harris, Polyethylene Glycol Chemistry (Plenum Press, 1992). Ponadto modyfikacje przez te związki reszty aminokwasowej natywnej ludzkiej DNazy I lub jej wariantu w miejscu lub pobliżu reszt aminokwasowych (to znaczy w obrębie około 5 reszt aminokwasowych), które biorą udział w wiązaniu aktyny może spowodować powstanie wariantu opornego na aktynę.
W następnym przykładzie wykonania wariant ludzkiej DNazy I według wynalazku, wytwarza się mutację reszty Asn w pozycji 74 sekwencji aminokwasowej natywnej ludzkiej DNazy I (na przykład, mutacje N74D, N74K lub N74S) w celu zmniejszenia lub uniemożliwienia deaminacji wariantu DNazy I. Frenz, i wsp., publikacja opisu patentowego PCT Nr. WO 93/25670, opublikowana 23 grudnia 1993). W innym przykładzie wykonania oporny na aktynę wariant ludzkiej DNazy I zawiera mutację sekwencji aminokwasowej lub inną modyfikację kowalencyjną, która zmniejsza podatność tego wariantu na degradację przez proteazy (na przykład, elastazę neutrofili), które mogą być obecne w plwocinie i innych materiałach biologicznych.
Aktywność hydrolityczna DNA i zdolność wiązania aktyny wariantów ludzkiej DNazy I łatwo zmierzyć za pomocą testów i metod znanych w sztuce i tu opisanych. Każdy wariant mający aktywność hydrolitycznąDNA i zredukowaną zdolność wiązania aktyny (tak jak zdefiniowano powyżej) jest wariantem opornym na aktynę i wchodzi w zakres wynalazku.
Oporne na aktynę warianty ludzkiej DNazy I według wynalazku, używa się do zmniejszenia lepkoelastyczności zawierającego DNA materiału, takiego jak plwocina, śluz i inne wydzieliny dróg oddechowych. Takie warianty są szczególnie użyteczne w leczeniu pacjentów chorych na choroby płuc i którzy mają nienormalnie lepkie lub zagęszczone wydzieliny, w przebiegu ostrych lub chronicznych chorób oskrzelowo-płucnych, włączając zakaźne zapalenie płuc, zapalenie oskrzeli, zapalenie tchawicy i oskrzeli, rozstrzeń oskrzelowy, mukowiscydozę, astmę, gruźlicę i infekcje grzybowe. W takich przypadkach roztwory lub bardzo rozdrobnione suche preparaty opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I podaje się tradycyjnymi sposobami do dróg oddechowych (na przykład, oskrzeli) lub płuc pacjenta, na przykład, przez wytwarzanie aerozolu.
Oporny na aktynę wariant ludzkiej DNazy I jest także użyteczny jako leczenie wspomagające w leczeniu ropnia lub ostrych infekcji zamkniętych przestrzeni w przebiegu ropniaka, zapalenia opon, ropnia, zapalenia otrzewnej, zapalenia zatok, zapalenia ucha, zapalenia ozębnej, zapalenia osierdzia, zapalenia trzustki, kamicy żółciowej, zapalenia wsierdzia, posocznicowego zapalenia stawów, a także w leczeniu miejscowym różnych stanów zapalnych i zakażeń, takich jak zakażone rany skóry i/lub błon śluzowych, rany pooperacyjne, rany powrzodowe i oparzenia. Oporny na aktynę wariant ludzkiej DNazy I może poprawić skuteczność antybiotyków używanych w leczeniu takich infekcji (na przykład, aktywność gentamycyny jest znacząco zmniejszona przez odwracalne wiązanie z natywnym DNA).
Natywna ludzka DNaza I i oporne na aktynę warianty ludzkiej DNazy I są też użyteczne w leczeniu tocznia rumieniowatego systemowego (SLE), przerażającej choroby auto immunologicznej, która charakteryzuje się wytwarzaniem różnorodnych przeciwciał przeciw własnemu organizmowi. DNA jest głównym składnikiem antygenowym kompleksu immunologicznego. W tym przypadku ludzkąDNazę I (natywna lub wariant) podaje się pacjentom systematycznie, na przykład: dożylnie, podskórnie, dooponowo lub domięśniowo.
Natywna ludzka DNaza I i oporne na aktynę warianty ludzkiej DNazy I są też użyteczne w zapobieganiu rozwojowi i zaostrzeniu infekcji dróg oddechowych, jakie mogą wystąpić u pacjentów chorych na mukowiscydozę, chroniczne zapalenie oskrzeli, astmę, zapalenie płuc i inne
184 951 choroby płuc, pacjentów których oddychanie jest podtrzymywane przez wentylator lub inne urządzenie mechaniczne lub pacjentów zagrożonych rozwojem infekcji dróg oddechowych, na przykład, pacjentów pooperacyjnych.
Oporne na aktynę warianty ludzkiej DNazy I można wytworzyć znanymi sposobami, w celu otrzymania kompozycji terapeutycznych. Korzystna kompozycja terapeutyczna jest roztworem opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I w zbuforowanym lub niezbuforowanym roztworze wodnym, i korzystnie jest izotonicznym roztworem soli, takim jak 150 mM roztwór chlorku sodowego zawierający 1,0 mM chlorku wapniowego o pH 7,0. Te roztwory są szczególnie dobrze przystosowane do użycia w dostępnych w handlu rozpylaczach, włączając rozpylacze strumieniowe i ultradźwiękowe przydatne do podawania leku bezpośrednio do dróg oddechowych lub płuc chorego pacjenta.
Kompozycja terapeutyczna może zawierać suchy proszek opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I, korzystnie wytworzoną metodą suszenia rozpryskowego roztworu opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I, dokładnie tak jak opisano w będącym jednocześnie przedmiotem postępowania zgłoszeniu patentowym Stanów Zjednoczonych nr 08/206020 (złożonym 4 marca 1994).
Kompozycja terapeutyczna może także zawierać komórki aktywnie wytwarzające oporny na aktynę wariant ludzkiej DNazy I. Takie komórki można wprowadzić bezpośrednio do tkanek pacjenta lub mogą być zamknięte w porowatej błonie, którą wszczepia się pacjentowi. W obu przypadkach powoduje to dostarczanie opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I w te miejsca ciała pacjenta, które potrzebują zwiększonej aktywności hydrolitycznej DNA. Na przykład, własne komórki pacjenta transformuje się in vivo lub in vitro DNA kodującym oporny na aktynę wariant ludzkiej DNazy I i używa ich do wytwarzania DNazy I w ciele pacjenta.
Skuteczna terapeutycznie ilość opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I zależy, na przykład, od ilości DNA ilości aktyny w traktowanym materiale, od celów leczenia, sposobu podania i stanu pacjenta. W celu uzyskania optymalnego efektu terapeutycznego lekarz musi więc dobrać dawkę i zmodyfikować sposób podania. Biorąc pod uwagę zmniejszoną zdolność wiązania aktyny i w konsekwencji zwiększoną zdolność hydrolizy DNA w obecności aktyny, opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I, w stosunku do natywnej ludzkiej DNazy I, ilość opornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I, niezbędną do osiągnięcia działania terapeutycznego jest mniejsza niż ilość natywnej ludzkiej DNazy I, konieczna do osiągnięcia takiego samego działania terapeutycznego, w takich samych warunkach. Ogólnie, efektywną terapeutycznie ilościąopornego na aktynę wariantu ludzkiej DNazy I jest dawka od około 0,1 pg do około 5 mg wariantu na kg wagi ciała pacjenta, podany jako kompozycja farmaceutyczna tu opisana.
Oporny na aktynę wariant DNazy I według wynalazku można połączyć lub wspólnie podawać zjednym lub więcej innych środków farmakologicznych używanych do leczenia wyżej opisach przypadków, takich jak antybiotyki, środki rozszerzające oskrzela, środki przeciwzapalne, mukolityczne (na przykład, N-acetylo-cysteina), białka wiążące aktynę lub białka rozkładające aktynę (na przykład, gelsolin; Matsudaira i wsp., Cell 54:139-140 (1988); Stossel, i wsp., Publikacja opisu patentowego PCT Nr. WO 94/22465 (opublikowana 13 października 1994)), inhibitory proteaz lub produkty do terapii genowej (na przykład, włączając gen regulatora przewodnictwa przezbłonowego stosowany w leczeniu mukowiscydozy (CFTR), Riordan, i wsp., Science 245:1066-1073 (1989)).
Przykład 1. Mutageneza ludzkiej DNazy I
Szczep E. coli CJ236 (BioRad Laboratories, Richmond, California USA) transformuje się plazmidem pRK.DNase.3 metodąopisanąprzez Chung i wsp. (Nuc. Acids. Res. 16:3580 (1988). Plazmid pRK.DNase.3 użyty w tym wynalazku jest identyczny z plazmidem opisanym w publikacji opisu patentowego PCT Nr WO 90/07572 (opublikowanej 12 lipca 1990), z wyjątkiem sekwencji kodującej ludzkąDNazę I pokazanej na Figurze 1. Transformowane komórki wysiewa się na podłoże agarowe LB, zawierające 50 pg/ml carbenicyliny i hoduje się przez noc w temperaturze 37°C. Indywidualnymi koloniami z podłoża agarowego zaszczepiono podłoże 2YT (5 ml) zawierające 50 pg/ml carbenicyliny i 10 pl faga pomocniczego VCSM13 (Stratagene, La Jolla,
184 951
California USA) i hoduje się przez noc w temperaturze 37°C z wytrząsaniem. Z takiej hodowli izoluje się jednoniciowy DNA i używa jako matrycy do mutagenezy.
Ukierunkowaną miejscowo mutagenezę prowadzi się przy użyciu syntetycznych oligonukleotydów według metody opisanej przez Kunkel, i wsp., (Meth. Enzymol. 15-4:367-382 (1987). Oligonukleotydy używane jako mutageny były 21-merami lub 24-merami, mającymi 9 lub 12 dokładnie sparowanych zasad w kierunku 5' od mutowanej zasady i 9 dokładnie sparowanych zasad w kierunku 3'. Po mutagenezie jednoniciowy DNA z indywidualnych hodowli poddaje się sekwencjonowaniu metodą terminacji łańcucha za pomocą dwudeoksynukleotydów (Sanger, i wsp., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 74:5463-5467 (1977)). DNA kodujące sekwencję wariantu transformuje się następnie opisaną powyżej metodą szczep E. coli XLI Blue MRF ((Stratagene). Po wysianiu i wyizolowaniu pojedynczych kolonii, tak jak opisano powyżej, indywidualnych kolonii używa się do zaszczepienia 0,5 litra podłoża LB zawierającego 50 pg/ml carbenicyliny.· Po całonocnym wzroście z wytrząsaniem w temperaturze 37°C, komórki zbiera się przez wirowanie i DNA kodujący sekwencję wariantu (z wektorem ekspresyjnym) oczyszca się przy użyciu kolum Oiagen tip-500 (Qiagen Inc., Chatsworth, California USA).
Figury 2-6 określają różne warianty ludzkiej DNazy I jakie wytworzono. Na figurach i w specyfikacji, opis substytucji aminokwasowych tworzących mutacje obecne w wariantach ludzkiej DNazy I skrócono do pierwszej litery, liczby i drugiej litery. Pierwsza litera oznacza jednoliterowy skrót reszty aminokwasowej w natywnej (typu dzikiego) dojrzałej ludzkiej DNazie I, liczba oznacza pozycję tej reszty w sekwencji w natywnej dojrzałej ludzkiej DNazie I (według numeracj i pokazanej na figurze 1) i druga litera oznaczaj ednoliterowy skrót reszty aminokwasowej w wariancie ludzkiej DNazie I. Na przykład, w wariancie ludzkiej DNazy I mającym mutację D53R, reszta kwasu asparaginowego (D) w pozycji 53 natywnej ludzkiej dojrzałej DNazy I została zamieniona na resztę argininy (R) . Wielokrotne mutacje w pojedynczym wariancie oznaczono podobnie, do odróżnienia oddzielnych mutacji występujących wjednym wariancie użyto dwukropka (:). Na przykład, oznaczenie D53R:Y65A oznacza, że ten wariant ma mutację D53R i Y65A.
Przykład 2. Ekspresja wariantów ludzkiej DNazy I
Ludzkie embrionalne komórki nerki 239 (ATCC CRL 1573, American Type Culture Collection, Rockville, Maryland USA) hoduje się na podłożu zawierącym surowicę w plastykowych płytkach Petri'ego o średnicy 150 mm. Komórki w logarytmicznej fazie wzrostu przejściowo kotransfekuje się 22,5 pg oczyszczonego DNA wariantu (wytworzonego tak jak opisano powyżej) i 17 pg DNA adenowirusa za pomocą metody precypitacji DNA fosforanem wapnia (Gorman, i wsp., DNA and Protein Eng. Techn. 2:3-10 (1990)). Około 16 godzin po transfekcji komórki przemywa się 15 ml roztworu soli buforowanego fosforanami i zmienia się podłoże na podłoże pozbawione surowicy. Z każdej płytki dwukrotnie zbiera się podłoże, pierwszy raz po 24 lub 72 godzinach a drugi raz po 96 godzinach zmieniając podłoże na podłoże pozbawione surowicy. W ten sposób otrzymuje się około 50 ml podłoża hodowlanego zawierającego wariant DNazy I. Takie podłoże hodowlane zebrane z każdej płytki zatęża się 5 do 50 razy za pomocą koncentratorów Centriprep 10, a zatężone podłoża testuje się w celu określenia różnych biochemicznych i biologicznych aktywności wariantów DNazy I. W ten sam opisany powyżej sposób wytwarza się zatężone podłoże zawierające natywną ludzką DNazę I, jednakże komórki 239 przejściowo transfekuje się plazmidem pRK.DNase.3.
Przykład 3. Biochemiczne i biologiczne aktywności wariantów DNazy I
I. Względna aktywność właściwa
Względną aktywność właściwą wariantów DNazy I, określa się porównując dwoma testami aktywność wariantów i aktywność natywnej ludzkiej DNazy I. Względną aktywność właściwą definiuje się jako stężenie wariantu (w mg/ml) określone testem aktywności zieleni metylowej (Sinicropi, i wsp., Anal. Biochem. 222:351-358 (1994; Kurnick, Arch. Biochem. 29:41-53 (1950)) podzielone przez stężenie wariantu (w mg/ml) określone testem ELISA dla DNazy I (opisanym poniżej). W obu testach krzywe standardowe wyznacza się używając
184 951 ludzkiej DNazy I Pulmozyme ®. Na figurach 2A-D pokazano względną aktywność właściwą natywnej ludzkiej DNazy I i wariantów DNazy I.
W teście aktywności zieleni metylowej (Sinicropi, i wsp., Anal. Biochem. 222:351-358 (1194); Kurnick, Arch. Biochem. 29:41-53 (1950)) wykorzystuje się barwnik zieleń metylową, który interkaluje mniej więcej co dziesięć zasad z DNA dając zielony substrat. Ponieważ DNA jest degradowane przez DNazę I zieleń metylowa jest uwalniana i utleniana do formy bezbarwnej. Utrata barwy jest proporcjonalna do ilości DNazy I obecnej wbadanej próbce. Ilość DNazy I obecnej w teście jest wyliczana z porównania z krzywą standardową otrzymaną przy użyciu znanych stężeń DNazy I.
Test ELISA dla DNazy I obejmuje opłaszczenie płytek ze studzienkami poliklonalnym przeciwciałem kozy przeciw DNazie I, dodanie testowanej próbki i wykrycie związanej DNazy I za pomocą studzienkami poliklonalnego przeciwciała królika przeciw DNazie I sprzężonego z peroksydaząkorzenia chrzanu (HRP). Po dodaniu substratu dla HRP i substancji wyzwalającej powstanie barwy, pojawia się barwa, której natężenie jest proporcjonalne do ilości DNazy obecnej w badanej próbce. Ilość DNazy I obecnej w teściejest wyliczana z porównania z krzywą standardową otrzymaną przy użyciu znanych stężeń DNazy I.
Oboma testami bada się wielokrotne rozcieńczenia próbek i te stężenia, których wartości w testach wypadają w środkowym zakresie krzywej standardowej uśrednia się i oblicza odchylenie standardowe.
Stężenia DNazy I wyliczonego na podstawie testu ELISA dla DNazy I używa się do standaryzacji stężenia DNazy I w innych testach służących do dalszego charakteryzowania wariantów DNazy I (na przykład, opisanych poniżej testów hamowania przez aktynę).
II. Hamowanie przez aktynę aktywności hydrolitycznej DNazy I
G-aktynę (Kabsch, i wsp., Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 21:49-76 (1992)) otrzymuje się przez całonocną dializę roztworu 1 mg/ml aktyny (kupionej (Sigma, St.Louis, Missouri USA) lub wytworzonej metodąPardee i wsp., Meth. Enzymol. 85:164-181 (1982)) wobec 5 mM roztworu HEPES pH 7,2,0,2 mM CaCl2,0,5 mM ATP, 0,5 mM (β-merkaptoetanol w temperaturze 4°C. Po odwirowaniu 13000 x g przez 5 minut, ilość G-aktyny określa się mierząc absorbancję przy długości fali 290 nm. 1 mg/ml roztworu ma absorbancję 0,66. Ilość preparatu G-aktyny konieczną do osiągnięcia istotnego (>50% hamowania), ale nie całkowitego zahamowania aktywności hydrolitycznej natywnej ludzkiej DNazy I, określa się we wstępnych testach w takich samych warunkach badania.
Wrażliwość na hamowanie przez aktynę określa się mierząc aktywność hydrolityczną wariantów w obecność i przy braku aktyny dwoma różnymi testami, opisanym wcześniej testem zieleni metylowej i testem nadbarwliwości, który jest oparty na pomiarze wzrostu absorbancji przy długości fali 260 nm po denaturacji i depolimeryzacji DNa (Kunitz, J. Gen. Physiol. 33:349-362 (1950); Kunitz, J. Gen. Physiol. 33:363-377 (1950)). Figury 3 i 4 pokazująoznaczony tymi testami procent hamowania wybranych wariantów.
W teście nadbarwliwości, zatężone supernatanty hodowli (wytworzone jak opisano powyżej i zawierające warianty Dnazy I) inkubuje się bez aktyny lub dodając 2- lub 3-krotny nadmiar w stosunku molarnym aktyny w buforze A (25 mM HEPES pH 7,5,4 mM CaCl2,4 mM MgCl2, 0,1% BSA) przez jedną godzinę w temperaturze pokojowej. Następnie mieszaninę dodaje się do kuwety zawierającej 40 pg DNA w całkowitej objętości 1,0 ml. Końcowe stężenie wariantu DNazy I w teście wynosi około 26 nM, jak określono za pomocą testu ELISA. Mierzy się stopień hydrolizy DNA przez warianty DNazy I w obecności i przy braku aktyny. Procent aktywności pokazany na figurach 3 i 4 10 obliczono określając stosunek aktywności hydrolitycznej DNazy I (natywnej lub wariantu) w obecności i przy braku aktyny i mnożąc przez 100.
W teście zieleni metylowej, zatężone supernatanty hodowli (wytworzone jak opisano powyżej i zawierające warianty DNazy I) inkubuje się bez aktyny lub dodając 1000-krotny nadmiar w stosunku molarnym aktyny w buforze B (25 mM HEPES pH 7,5,4 mM CaCk, 4 mM MgC^,
0,1 % BSA, 0,01 % thimerosal, 0,05% Tween 20) przez 16 godzin w temperaturze 37°C. Dla każdej próbki określa się stężenie aktywnego enzymu porównując z krzywą standardową otrzymaną
184 951 dla Pulmozyme ®. „Procent aktywności” pozostałej wariantu oznacza stosunek aktywności w obecności aktyny do aktywności przy braku aktyny pomnożony przez 100.
Jak pokazano na figurach 3 i 4 aktywność hydrolityczna DNA natywnej ludzkiej DNazy I jest w znacznym stopniu hamowana przez obecność aktyny. Dla porównania, różne jednoi wielopodstawione warianty DNA natywnej ludzkiej DNazy I są stosunkowo oporne na hamowanie przez aktynę, ponieważ mają w jej obecności większą aktywność hydrolityczną DNA niż natywna ludzka DNaza I.
III. Test ELISA wiązania aktyny
Do określenia zdolności natywnej ludzkiej DNazy I i jej wariantów wytworzonych sposobem według wynalazku opracowano test immunosorpcyjny ELISA wiązania aktyny. Studzienki płytki MaxiSorp (Nunc, Inc., Naperville, Illinois, USA) opłaszcza się w temperaturze 4°C przez 16-24 godziny roztworem 10 pg/ml ludzkiej globuliny GC (Calbiochem, La Jolla, California USA), białka wiążącego aktynę (Goldschmidt-Clermont, i wsp., Biochem. J. 228:471-477 (1985), McLeod, i wsp., J. Biol. Chem. 264:1260-1267 (1989), Houmeida, i wsp., Eur. J. Biochem. 203:499-503 (1992)), w buforze 25 mM HEPES pH 7,2, 4 mM CaCl2,4 mM MgCl2, dodając 100 pl na studzienkę. Po usunięciu globuliny GC, nadmiar miejsc wiązania blokuje się dodając 200 fil na studzienkę buforu C (bufor C jest taki sam jak bufor B, ale zawiera jeszcze 0,5 mM trójfosforany adenozyny; bufor C jest używany do rozcieńczania we wszystkich następnych etapach testu, chyba że napisano inaczej) i inkubując płytki na wytrząsarce przez 1 -2 godziny w temperaturze pokoj owej. Każdy następny etap inkubacj i prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę na wytrząsarce Mini Orbital Shaker (Bellco Biotechnology, Vineland, New Jersey, USA), pomiędzy każdym etapem płytkę opróżnia się i płucze 6 razy roztworem soli buforowanym fosforanami zawierającym 0,05% Tween 20 w płukarce do płytek Microwash II (Skatron A/S, Norwegia). Następnie, G-aktynę przygotowanąjak opisano powyżej, rozpuszcza się do stężenia 50 pg/ml w buforze C i do każdej studzienki dodaje się 100 pl, płytki inkubuje się i płucze, a następnie do studzienek dodaje się różnych rozcieńczeń Pulmozyme ® i supernatantu hodowli komórkowych zawierających natywną ludzką DNazę I lub jej warianty. Płytki inkubuje się i płucze, a następnie dodaje się 100 pl rozcieńczenia 1/25000 poliklonalnego przeciwciała królika przeciw ludzkiej DNazie I sprzężonego z peroksydazą korzenia chrzanu (stężenie roztworu wyjściowego 465 pg/ml). Po inkubacji i przepłukaniu do każdej studzienki dodaje się 100 pl substancji wyzwalającej powstanie barwy (Sigma Fast o-fenylenodwuamina i tabletki mocznik/H2O2 rozpuszczone według zaleceń producenta). Reakcję barwną hamuje się przez dodanie 100 pl 4,5 N H2SO4 na studzienkę. Zmierzone wartości absorbancji wykreśla się w zależności od stężenia DNazy I, które dodano do studzienek. W przypadku natywnej ludzkiej DNazy I i tych wariantów, które wiążą się z aktyną otrzymuje sigmoidalne krzywe. Krzywe te dopasowuje się do czteroparametrycznego równania metodą regresji nieliniowej (Marquardt, J.Soc.IndustApp.Math. 11:431-441 (1963). Z każdej krzywej wylicza się stężenie DNazy I (natywnej lub wariantów) konieczne do uzyskania w teście sygnału o wartości równej połowie sygnału maksymalnego i to stężenie przyjmuje się jako wartość EC50. Masa molowa natywnej ludzkiej DNazy I i jej wariantów wynosi 37000 Daltonów.
Względną zdolność wiązania aktyny każdego wariantu ludzkiej DNazy I obliczono dzieląc wartość EC50 otrzymaną dla wariantu ludzkiej Dnazy I przez wartość EC50 oznaczoną testem ELISA dla natywnej ludzkiej DNazy I, wyniki przedstawiono na Figurach 5A-D. Na przykład, jeżeli obliczona wartość względnej zdolności wiązania aktyny wariantu ludzkiej DNazy I wynosi 5 oznacza to, że wartość EC50 wariantu ludzkiej DNazy I jest 5-krotnie większa niż wartość EC50 natywnej ludzkiej DNazy I, innymi słowami, wariant ma powinowactwo do aktyny pięć razy mniejsze niż powinowactwo do aktyny natywnej ludzkiej DNazy I oznaczone testem ELISA.
IV. Test zwartości plwociny
Test zwartości plwociny (publikacja opisu patentowego PCT Nr WO 94/10567, opublikowana 11 maja 1994) został użyty do mierzenia względnej lepkoelastyczności plwociny pacjentów chorych na mukowiscydozę (plwocina CF) przed i po inkubacji z natywną ludzką DNazą I i jej różnymi wariantami. Po zmieszaniu plwociny CF z próbkąDNazy I i inkubacji przez 20 minut
184 951 w temperaturze pokojowej, półstały roztwór ładuje się do kapilar i odwirowuje przez 20 minut przy 12000 obrotów na minutę. Po wirowaniu mierzy się wysokość osadu i porównuje do wysokości osadu i roztworu. Pomiarów używa się następnie do obliczenia procentowej zwartości plwociny, która jest skorelowana z lepkoelastycznością plwociny.
Procentową zwartość plwociny oznaczoną po traktowaniu plwociny CF natywną ludzką DNazą I i wariantami ludzkiej DNazy I, opornymi na aktynę pokazano na figurze 6. Wyniki te wskazują, że warianty ludzkiej DNazy I oporne na aktynę, są bardziej efektywne niż natywna ludzka DNaza I w zmniejszaniu lepkoelastyczności plwociny CF, jak to określono testem zwartości plwociny.
184 951
LISTA SEKWENCJI (1) INFORMACJE OGÓLNE:
(i) APLIKANT: Genentech, Inc.
(ii) TYTUŁ WYNALAZKU: WARIANTY LUDZKIEJ DNAZY I (iii) LICZBA SEKWENCJI: 98 (iv) ADRES DO KORESPONDENCJI:
(A)ADRESAT: Genentech, Inc.
(B) ULICA: 4(50 Po int Sao Hruno Blrd
(C) MIASTO: South San Francisco
(D) STAN: California
(E) KRAlJ: USA
(F) KOD: 94080
(v) NOŚNIK KOMPUTEROWY:
(A) TYP NOŚNIKA:: dyskietka 3.5 cala, 1.44 Mb (B) KOMPUTER: IBM PC kompatybilny (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIA: Winpatin (Genentech) (vi) DANE APLIKACJI:
(A) NUMER APLIKACJI:
(B) DATA ZŁOŻENIA::
(C) KLASYFIKACJA:
(vii) DANE WCZEŚNIEJSZEJ APLIKACJI:
184 951 (A) NUMER APLIKACJI: PCT/U595/02366 (B) DATA ZŁOŻENIA: 02/24/95 (Viii) PEŁNOMOCNIK/ZASTĘPCA:
(A) NAZWISKO: Johnston, Sean A.
(B) NUMER REJESTRACJI: 35,910 (C) NUMER REJESTRU/SPRAWI: P0925P1PCTi (ix) INFOIRMACJE TELLCCMUMIIACCJNE:
(A) TELEFONE: 415/225-3562 (B) TELEFAX: 415/952-9881 (C) TELEX: 910/371-7166 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TJP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: AmiSTkwas (ii) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:1:
Leu Lys Ile A Ia Aa a CTa Ash I le G1 n TAa Phe Gly A lu AAr Lys
1 5 0 I 15
Met Ser· Asa A I a Thi Thu VlA I er Ta r rui VsU GIt I le Tau Sne
20 2 I 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
184 951
40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn 55 Gln Asp Ala Pro 60
50
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 77
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 lis 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 131 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
184 951
Trp Sur Sur Ilu Arg 185 Luu Trp Thr Sur Pro 190 Thr Phu Gln Trp Luu 195
Ilu Pro As Seu All Asp Thr Tiar Ala Thr Pro Thr Hso Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg I le Val Val Ala Gly Met Luu Luu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ssu AAl Leu Pro Phe Asn Phu Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Luu Sur Asp Gil Veu Ala Gln Ala Ile Sur Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val MetLeu Ols
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:2:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZKI: AmieTkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:2:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phu Asn Ilu Gln Thr Phu Gly Ala Thr Lys
184 951
1 5 00 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 50 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 00 45
Thr Ala Val Giy Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 50 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 00 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 80 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 000 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 150 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 300 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
184 951
Tyr Led Asp Val Gln Gld Lys 155 Trp Gly Led Gld Asp 1t0 Met Luu 1t5
Met Gly Aap SPe Asn Ala Gly Cys Ser TTy Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser SSe BIe Arg Leu Trp Thr S er Pro Thr Phe Gln Trp Listu
185 190 195
Ile Pro Aap Snr Ala Asp Thr Thr Al a TTh Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp AAr BIe Val Val Ala Gly Met Leu Led Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Aap Snr Ala Leu Pro Phe Asn PPe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Led Ser Aap Gln Led Ala Gln Ala I le Snu? Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Gld Val Mee Seu Lys
2t0 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:3:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2t0 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:3:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly His Thr Lys
1 5 10 15
Met ee r As r Ala Trr Ler Va 1 Lm Tri I1i Vi 1 GSi air Lui err
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Llu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Lee Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Sir
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sir
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Sir
110 115 120
184 951
Arg Phe ThT Glu Val Arg 125 Glu Phe Ala Ile 100 Val Pro Leu Hi is Ala 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 450 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu~Asp Val Met Leu
155 100 115
Met Gly Asp Phh Asn Al a Gly Cys Ser Tyr yal Arg Pro Ser Gln
170 750 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 115
Ile Pro Asp Ssr Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 250 210
Tyr Asp Arg IIe Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 200 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala T yr Gly
230 250 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
184 951 (2) INFFRWAAJA B SSE BI NCOS :
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2t0 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aninokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 4:
Leu Lys Ile AIo Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Arg Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Tho Leu VoJ Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Aog Tyr Asp HLe Ala Listu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Tho AIo Val Gly Lys Lisu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Ppto
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn. Ser
t5 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Lisu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Snr
80 85 90
Ala Val Asp Seo Tyr Tyo Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Poo Cys Gly
184 951
95 10 0 105
Asn Asp Thu Phe Asn Arg Glu Pro Ala IIa VtI Cug Phe Phe Seu
110 15 I 120
Aug Phe Thu Glu VaT Arg Glu Pho Ala IIa VtI Pro Leu His ATa
125 13 I 135
ATa Puo GTy Asp ATa VaT ATa GTu ITe Asp ATa Leu Tyu Asp VaT
140 15 I 150
Tyu Leu Asp Val GTn Glu Lys Trp GlyLeu Glu Asp Val Met Leu
155 10 0 165
Met GTy Asp Phe Asn Ala Gly Cyo Ser Tyr Va0 Cug Pro Ser GTn
170 75 I 180
Tup Seu Seu Aug Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 10 0 195
ITe Puo Asp Ser ATa AVsp Tlur Tho ATLaThr Pro Thr His Cys ATa
200 05 A 210
Tyu Asp Aug 'ITe VaT raA ATa GTy Met Leu Leu Aug GTy ATa VaT
215 220 225
VaT Puo Asp Seu ATa Leu Puo Phe Asn Phe GTn ATa ATa Tyu GTy
230
235
240
184 951
Luu Sur Asp Gln Luu Ala Gln Ala Ilu Sur Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Mut Luu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:5:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Amieokwms
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:5:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phu Asn Ilu Gln Thr Phe Gly Trp Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sur Asn Ala Thr Luu Val Sur Tyr Ilu Val Gln Ile Luu Sur
20 25 33
Arg Tyr Asp Ile Ala Luu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Luu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Luu Leu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 66
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val See
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gl_yy
95 100 110
Asn Asp Thr Płi^ Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe SSe
110 115 110
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 115
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 110
Tyr Leu Asp Val Gln 'Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 115
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 118
Trp Ser Ser Arg Ile Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
184 951
Tyu Asp Aug Ile raT 215 Val ATa (Gly Met Llu Leu Arg Gly AA a Val
220 225
VaT Puo Asp Ser ATa Leu Puo Phe Asn PPe GTn AT a Ala Tyr Gly
230 235 24(0
Leu Seu Asp Gln Leu Ala GTa Ala Ile See Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
GTu VaT Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:6:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TJP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZT! Amieτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 6:
Leu Lys ITe ATa ATa Phe Asn ITe GTn Thr Pire Gly Tyr Thr Lys
1 5 0 0 15
Met Seu Aaa Air hhr Leu VtA Ser Tyu Ile Gln Ile Leu Ser
20 5 0 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
184 951
40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn 55 Gln Asp Ala Pro 60
50
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
184 951
Trp Ser Ser Ile Arg Leu 185 Top Thr Ser Pro 10 B Thr Phe Gln Trp Leu 195
Ile Pro Asp Ser AIo Asp Thr Thr Al a Thr Pro Thr His Cys Ala
200 20 B 210
Tyo Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 20 B 225
Val Pro Asp Ser AIo Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 S 240
Leu Ser Asp Gln Leu AIo Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Gld VoI Met Leu Lys
2t0 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:7:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2t0 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA TCninokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:7:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
184 951
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser Ala Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr VvI Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe VvI Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala VvI Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp VvI
140 145 150
184 951
Tyr Leu Asp Val Gin 155 Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp 160 Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr VaL Arg Pro Ser Gln
170 176 180
Trp Ser SSe 6Ie Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 196 195
Ile Pro Aap 6er Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 210
Tyr Asp Aag 6Ie Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala VaL
215 :2:20 225
Val Pro Aap Ler Ala Leu Pro I?he Asn Phe Gln ALa Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Aap G1u Leu Ala Gln Ala IIe Ser Asp Hi s Tyr Pro VaL
245 227^0 255
Glu VaL Mee Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:8:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:8:
Luu Lys 1 Ilu Ala Ala 1 Phu Asn Ilu Gln Thr Phu Gly Glu Thr Lys
0 0 15
Mut Sur Asn Ala Thr Luu Val Sur Tyr Ile Val Gln Ilu Luu Ser
20 15 30
Arg Tyr Asp Ilu Ala Luu Val Gln Glu Val Arg Asp Sur Asp Luu
31 0 5 45
Thr Ala Val Gly Lys Luu Luu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
10 1 5 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Sur Glu Pro Luu Gly Arg Asn Ser
65 0 0 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Luu Phu Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sur
80 8 5 90
Ala Val Asp Sur Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
91 10 0 115
Asn Asp Thr Phu Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phu Pho uer
110 115 120
184 951
Arg Phe Thr Glu Val 125 Arg Glu Phe Ala Ile 130 Val Pro Leu Hil Ala 135
Ala Pro Gly Asp Ala Vll Ala du He Asp Ala Leu Tyr Asp Val
150 140 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys 'Trp Gly Leu Glu TSp Val Met Leu
155 100 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala G^/Ly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 170 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg He Val Val UL a dy/ Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp dn Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp Hii Tyr Pro Val
255 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2t0 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aminτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:1:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Suo Asn Ala Tliho Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyo Asp IIe Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser Tyr Leu
35 40 45
Thr Ala Val dy Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp AALa Pro
50 55 60
Asp Tho Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Poo Leu Gly/ Arg Asn Suo
t5 70 77
Tyr Lys Gld Aog Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sur
80 85 90
184 951
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp GA Cys Glu Pro Cys dy 105
95 100
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ul Val Arg Phe Phu Seu
110 115 110
Arg Phu Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ul Val Pro Leu His AAl
125 130 115
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala. Glu Ilu Asp Ala Luu Tyr Asp Val
140 145 110
Tyr Luu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 1^0 115
Mut Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser dn
170 175 110
Trp Sur Sur IIl Arg Leu Trp Thr Ser PPr Thr Phu Gln Trp Leu
185 190 115
Ilu Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala TTp Pro TPir His Cys AAl
200 205 221
Tyr Asp Arg Ilu Val Val Ala Gly Mut Luu Luu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Sur Ala Luu Pro Phu Asn Phu Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
184 951
Leu Seu Asp GTa Leu ATa GTa ATa ITe Seu Asp His Tyu Puo raT
245 250 255
GTu raT Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:10:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZK! Wmisκkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:10:
Leu Lys ITe ATa ATa Phe Asn ITe GTa Thu Phe GTy GTu Thu Lys
10 15
Met Suu Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr ITu Val Gln Ile Leu Ser
Aug Tyu Asp IIe Ala Leu Val Gln Glu raT Arg Asp Ser Trp Leu
40 45
Thu ATa Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro 50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
70 77
Tyr Lys Glu Arg Tyr 80 Leu Phe Val Tyr Arg Pro 85 Asp Gln Val Ser 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu P vo Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 105
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
184 951
Tyr Asp Arg Ile Val 215 Val Ala Gly Met Leu Leu Aog Gly AIo Val
220 225
Val Pro Asp Seo Ala Leu Pro Phe Asn PPł^e Gln Ala Ala Tyr Gly
230 25 S 200
Leu Ser Asp dn Seu Ala Gln Al a Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 50 S 255
Glu Val Mut Leu Lys
2t0
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:11:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2S0 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA AwzinτEwas (xi) OPIS SEKWENCJO: SEQ ID NO:11:
Leu Lys Hi AAe AAe SPh Aap S0n dn STh SPh GGn GGe STh Sls
1 5 0 S 55
Met Seo Asn Ala Tho Leu Val Ser Tyr Ile VaS Unlle Leu Ser
20 5 S 00
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
184 951
40 45
Thu ATa raT GTy Lys Leu Leu ATa Asn Leu Asn Gln Asp Ala Puo
50 55 66
Asp Thu Tyu His Tyu Val Val Seu Glu Puo Leu GTy Cug Asn Seu
65 70 75
Tyu Lys GTu Aug Ty· Leu Phe raT Tyr Aug Pro Asp Gln Val Seu
80 85 99
ATa raT Asp Ser Tyu Tyr Tyr Asp Asp GTy Cys Glu Pro Cys GTy
95 100 105
Asn Asp Thu The Asn Arg Glu Puo Ala ITe Val Cug Phe Phe Seu
110 115 120
Aug Phe Thu Glu raT Arg GGu Phe Ala ITe Val Pro Leu His ATa
125 130 135
ATa Puo GTy Asp ATa raT ATa GTu ITe Asp ATa Leu Tyu Asp raT
140 145 150
Tyu Leu Asp raT GTn GTu Lys Tup GTy Leu GTu Asp raT Met Leu
155 160 165
Met GTy Asp Phe Asn ATa GTy Cys Seu Tyu raT Aug Puo Seu GTa
170 175 180
184 951
Trp Ser Ser Ile Arg 185 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gln Trp Leu 195
Ile Pro Aap 6 Sr ALa Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys ALa
200 05 6 210
Tyr Asp Aag L I^ VaL Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 20 6 225
VaL Pro Aap L er ALa Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 L 240
Leu Ser Aap L ln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro VaL
245 556 255
GLu VaL ifee Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:12:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZKI: AmiSTkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:12:
Leu Lys Ile ALa Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe GLy GLu Thr Lys
184 951
0Ο 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu 20 Val Ser Tyr Ile 5 r Val Gln Ile Leu Ser 33
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu VvI Arg Asp Ser His Leu
35 0 i 44
Thr Ala VvI Gly Lys Leu Leu Lyr Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 5 r 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 7 r 77
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln VvI Ser
80 8 r 99
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 00 i 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 15 r 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp VvI
140 145 150
184 951
Tyr Luu Asp Val Gln 155 Glu Lys Trp Gly Luu Glu Asp 160 Val Mut Luu 165
Mut Gly Aap Vhp Asn Ala Gly Cys Ser T^r Val Arg Pro Ser Gln
170 1-715 180
Trp Sur Seu 0Ie Arg Leu Trp Thr Ser Phe Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ilu Pro Aap 0 sr Ala Asp Thr Thr .Ala TTp Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Aa- 0 Ie Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Aip 0 eu- Ala Leu Pro Phe Asn Php Gln Ala Ala Tyr Gly
257 235 240
Luu Sur Aip 0ln Luu Ala Gln Ala Ile Seu Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Meu 0eu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:13:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 050 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:13:
Leu 1 Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys 15
5 10
Met Ser Asn Ala Thi Leu Vnl Sri Tri 11i Vll Gln Ul Leu Srr
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 50 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Arg Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
05 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
184 951
Arg Phe Tho dn Val 125 Arg Glu Phe Ala Ile 130 Val Poo Leu His Ala 135
Ala Pro Gly Asp Alo Val Ala Gld Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyo Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gl^y Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Mut Gly Asp Phe Asn Ala ^/Ly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Top Seo Ser l0e Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe dn Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr AA a Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Aog IIe Val Val Ala GA^y Met Leu Leu Arg Gly Alo Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Alo Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Gld Val Met Leu Lys
260
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 14:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKIł AzinoEwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:14:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyi Ile Val Gln (tli Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser Hii Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Tyr Asn Leu Asn Gln Asp Al a Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
184 951
Ala Va1 Asp SSe Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly 000 Cys Glu Pro Cys Gly 105
15
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Pxg Phe ThG GJLu Va1 Arg Glu Phe Ala Ile Vćl1 Pro LeL Hig Ala
125 100 135
Pla Pro Gly Asp Ala V^ć^l Pla Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp VaL
140 450 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 10 0 165
Met Gly Asp Piie Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 755 180
Trp Ser Ser Ul Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 10 0 195
Ile Pro Asp SSe Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr Hi s Cys Ala
200 050 210
Tyr Asp Arg Ile Va1 Va1 Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala VaL
215 220 225
VaL Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln ALa Pla Tyr Gly
210 215 240
184 951
Leu Seu Asp GTa Leu ATa GTn ATa ITe Seu Asp His Tyu Puo raT 255
245 250
GTu raT Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:15:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTY Amisτkwas
(ii) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:15:
Leu Lys ITe Ala ATa Phe Asn Ile Gln Thu Phe GTy GTu Thr Lys
1 5 10 15
Met Suu Aaa Ala Thu Leu raT Ser Tyr ITe VaT GTn Ile Leu Ser
20 25 30
Aug Tyu Asp Ile Ala Leu raT Gln Glu VaT Aug Asp Ser His Leu
35 40 45
Thu Ala raT Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Ala Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
0Ο 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr 80 Luu Phu Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sur
50 90
Ala Val Asp Sur Tye Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 00 0 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Peo Ala Ilu Val Arg Phu Phu Ser
110 150 120
Arg Phu Thr GGu Val Arg Glu Phu Ala Ilu Val Pro Luu His Ala
125 30 0 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp Ala Luu Tyr Asp Val
140 450 150
Tyr Luu Asp Val Gln Glu Lys Tep Gly Luu Glu Asp Val Mut Luu
155 60 0 165
Mut Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Sur Tyr Val A~~ Pro Sur Gln
170 75 0 180
Trp Sur Sur Ilu Arg Luu Trp Thr Sue Pro The Phu Gln Trp Luu
185 190 195
Ilu Pro Asp Sur Ala Asp TPr TPe Ala Thr Peo Thr His Cys Ala
200 205 210
184 951
Tyr Asp Arg Ile Val 215 Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:10:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: AminoEwzs
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 10:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe G1 y Glu Thr Lys
1 5 0 i 15
Met Ser Asn Ala rTr Leu Vi1 Ser Tyr I lr Val Gln lir Leu Ser
20 5 i 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
184 951
40 45
Tho Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu A.sn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Arg Val Val Seo Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
t5 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Vol Ser
80 85 90
Ala Val Asp Seo Tyr Tyr Tyo Asp Asp Gly Cys Glu Poo Cys Gly
15 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Aog Glu Pro Ala Ile Val Aog Phe Phe Ser
110 115 120
Aog Phe Tho Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Poo Leu His Ala
125 130 1Z35
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyo Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 1t0 1t5
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Poo Seo Gln
170 175 180
184 951
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu 195
185 190
Ile Pro Aap ler Ala Asp Thr Thr Ala Tir Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gl^y Met Leu Leu Arg Gly ULa Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phh Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 220
Leu Ser Aap Gln Leu Ala Gln ULa Ile Ssu Asp His Tyr Pro vai
245 250 255
Glu Val Mee leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:1.7:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEK^^l^^t^II:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:17:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
184 951
Met Seu Asn Ala
Aug Tyu Asp Ile
Thu Ala raT GT^y
Asp Thu Tyu His
Tyu Lys GTu Aug
Ala raT Asp Ser
Aaa Asp Thu Phe
Aug Phe Thu GTu
Ala Puo GTy Asp
5 10
Thr Leu Val Ser Tyu Ile
20 25
Ala Leu Val GTn Glu VaT
35 40
Lys Leu Leu Asp Asn Leu
50 55
Trp Val VaT Ser GTu Puo
65 70
Tyu Leu Phe Val Tyu Aug
80 85
Tyr Tyr Tyr Asp Asp GTy
95 100
Asn Cug GTu Pro Ala Ile
110 115
Val Aug Glu Phe Ala Ile
125 130
Ala ral Ala Glu Ile Asp
140 145
nul Gin Ile Leu Seu
Cug Asp Ser His Leu
Asa Gln Asp Ala Pro
Leu Gly Arg Asn Ser
Pro Asp Gln Val Ser
Cys Glu Pro Cys Gly
105 raT Arg Phe Phe Ser
120 raT Pro Leu His Ala
135
Ala Leu Tyu Asp ral
150
184 951
Tyr Leu Asp Val Gln Glu 155 Lys Trp Gly Leu Glu Asp 160 Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn Al i Gl i Cyi Ser Tyy ill Arg Ppo Ser Gln
170 175 110
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Ppo Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala TTr Pro Thr His; Cys AA. a
200 205 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Llu Leu Arg dy Ala VaX
215 220 222
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phi As n PPh Gln Ala Ala Tyr dy
230 235 220
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala 11i See Asp His Tyy Pro Vv1
245 250 2235)
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:18:
( i) CHARAKCTERYSy YKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:18:
Lru Lys ITe Ala Ala Phe Asn ITe Gln Thu Phe GTy GTu Thu Lys
1 5 10 15
Mut Seu Asn ATa Thu Leu raT Seu Tyu ITe raT GTn Ile Leu Seu
20 25 30
Aug Tyu Asp ITe ATa Lru raT GTn Glu raT Aug Asp Seu His Leu
35 40 45
Thu Ala raT GTy Lys Lru Leu Asp Asn Lru Asn GTn Asp Ala Puo
50 55 60
Asp Thu Tyu His Tyu raT ATa Seu Glu Puo Leu GTy Aug Asn Seu
65 70 75
Tyu Lys GTu Aug Tyu Lru Phe raT Tyu Aug Puo Asp GTa raT Seu
80 85 90
Ala raT Asp Seu Tyu Tyu Tyu Asp Asp GTy Cys GTu Puo Cys GTy
95 JL<^0 105
Asa Asp Thu Phe Asn Aug GTu Puo Ala Ile raT Aug Phe Phe Seu
110 115 120
184 951
Arg Phe Thr Glu Val .li^gi^l^u Phe 125 Ala ll s 130 Vn A Pro Leu Hii Alo 135
Ala Pro Gly Asp Alo VaG Ala Glu 01 e Asp ^la Leu Tys As. VvI
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu G1g Asp Val Met Leu
155 60 0 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tys VaB Arg Pro Snu Gln
170 77 5 180
Trp Seo Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pos Ths Phe Gln TTy Lei
185 99 0 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Ths Prs Thr His Ccs Ala
200 05 5 210
Tyr Asp Aog Ile Val VćAl Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly AA a Val
215 20 0 225
Val Poo Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala TTr Gly
230 35 5 240
Leu Seo Asp Gln Leu Ala Gln Alo Ile Seo Asp His Tyo Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
184 951 (2) HNFRMAPCA G 6SQ ID N0:19:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(Α) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZRY AaieτEwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:19:
Leu 1 Lys Ile Ala Ala 5 Phe Asn Hg Gln Thr Phe G^y 10 Glu Thr Lys 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 33
Arg Tyr Asp IIe Ala Leu Val Gln Glu VaU Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
ThG Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 66
Psp Thr Tyr His Tyr Vnl Glu Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Prg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 99
Ala Va1 Psp Ser Tyr Tyr Tyr Psp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
184 951
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu 185 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala 200 205 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
184 951
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Va[ Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:20:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ:: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI AmieTkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID no: 20:
Leu Lys Ile Ala Ala Phl Asn 11l Gln Thr Phe Gly Glu Thr Leu
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln He Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp IIe Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Va[ Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Paso
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Lys Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
70 75
Tyr Lys Glu Arg Tye Luu 80 PPu Val Tye Arg 85 Pro Asp Gln Val Sur 90
Ala Val Asp Sur Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phu Asn Aeg Glu Peo Ala Ilu Val Arg Phu Phu Sur
110 115 110
Arg Phu Thr Glu’ ' Val Arg Glu Phu Ala Ilu : Val Pro Luu His Al,
125 130 113
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp Ala Luu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Luu Asp Val Gln Glu Lys Tep Gly Luu Glu Asp Val Mut Luu
155 160 165
Mut Gly Asp Phu Asn Ala Gly Cys Sur Tyr Val Arg Pro Sur Gln
170 175 11(0
Trp Sur Sur Ilu Arg Luu Tep The Sur Pro Thr Phu Gln Trp Luu
185 190 195
Ilu Peo Asp Sur Ala Asp Thr TPe Ala Thr Pro The His Cys Ala
200 205 210
184 951
Tyr Asp Arg Ile Val 215 Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 25 r 200
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala lir Ser Asp His P ro Val
245 50 i 255
Glu Val Met Leu Lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:21:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZKA AminTkwaK
(ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 21:
Leu Lys Ile Ala Ala Phr Asn lir Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 0 i 55
Met Ser Asn TALa Thr Leu Val Ser Tyr Ile Vl1 Gln Ile Leu Ser
20 5 r 00
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
184 951
40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Lys Pro Leu Gly Arg Asn Ser
70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu 155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
184 951
Tup Seu Seu ITe Aug 185 Leu Tup Thu Seu Puo 190 Thu Phe GTa Tup Leu 195
Ilu Puo Asp See Ala Asp Thr Thr AT a TTh Pro Thr His Cys ATa
200 205 210
Tyu Asp Aug IIt raT Val Ala G^LLy Met Llu Leu Aug GTy AT a VaT
215 220 225
ral Puo Asp See Ala Leu Pro Phe Asn PPh Gln ATa Ala Tyr Gly
230 235 240
Luu Suu Asp dn Leu Ala Gln Ala Ile See Asp His Tyu Pro VaT
245 250 255
Glu raT Met Lyu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:22:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTY AmisτEwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:22:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
184 951
10 15
Met Ser Asn Ala Tho Leu ViG Sei Tyr Ile Alal Gln Ile Leu Ser
25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
40 45
Thr Ali Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Paso
55 60
Asp Thr Tyo His Tyo Val Val Ser Arg Pro Leu G^L^y Arg Asn Sear
70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyo Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyo Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 110
Arg Phe Thr GGu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ali Pro Gly Asp Ala ViG Ali Glu IGe Asp Ali Leu Tyr Asp Val
140 145 150
184 951
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys 155 Trp Gly Llu Glu Asp 160 Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyy Val Arg Pro Ser Gln
170 115 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser PPr Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala TTh Pro Thr His Cys .Ala
200 22)5 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Lee Leu ilręj Gly Ala vai
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn PPh Gln Ala Ala Tyr Gly
230 225 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile See Asp Hii Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met eeu Lps
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:23:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:23:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phu Asn Ilu Gln TPr Phu Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sur Asn Ala Th0 Leu Vl0 Se0 1-0 13.0 Vl0 Gln iu0 Leu Srr
20 25 30
Arg Tyr Asp Ilu Ala Luu Val Gln Glu Val Arg Asp Sur Ala Luu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Luu Luu Arg Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tye Val Val Sur Glu Peo Luu Gly Arg Asn Sur
65 76 75
Tyr Lys Glu Arg Tye Luu Phu Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sur
80 85 90
Ala Val Asp Sur Tye Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phu Asn Arg Glu Peo Ala Ilu Val Arg Phu Phu Sur
110 115 120
184 951
Arg Phe Thr Glu Va1 AAg Glu 125 Phe ALa Ile 30 0 Va6 Pro Leu His AA.e 135
Pla Pro Gly Asp ALa Va1 Ala Glu Ile Asp AUi Leu Tyr Asp Va1
140 15 5 110
Tyr Leu Asp Val Gln GOLu Lys Trp G^PLy Leu Glu Asp Val Met Liu
155 60 0 116
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Va6 Arg Pro Ser GGu
170 17 5 110
Trp Ser Ser Ile Arg Llu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Liu
185 10 0 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ale
200 05 5 220
Tyr Asp Arg Ile VaL Val Ala Gly Met Leu Leu AG^g Gly Ala Val
215 20 0 225
Va1 Pro Asp Ser Ala Leu Pro PhL Asn PhL Gln Ala Ala Tyr Gly
230 25 5 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln ALa Ile Ser Asp His Tyr Pro Va1
245 250 255
Glu Va1 Met Leu Lys
260
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ 0D NO: 24:
(^CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJA:
(A) DŁUGOŚĆ: 2t0 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowo (ii) TYP CZĄSTECZTY AninokwaK (xi) OPIS SEKWENCJA: SEQ ID NO:24:
Leu Lys Ile Alo Alo Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Gli Thr Lys
10 15
Met Seo Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser 20 25 33
Aog Tyo Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Vol Arg Asp Ser His Luu
40 44
Tho Alo Vol Gly Lys Leu Leu Arg Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
55 60
Asp Tho Tyr His Alo Val Val Ser Gilu Pro Leu Gly Arg Asn Ser t5 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
85 91
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
184 951
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro 110 Ala He 115 Val Arg Phe hi r irr 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala IIe Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Aas Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Llu Glu Asp Val Met Leu
155 160 105
Met Gly Asp Ptih Asn Ala Gly Cys Ser T^r Val Arg Pro Ler enn
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser PPr Thr Phe Gln rpr Luu
185 190 195
Ile Pro Asp SSr Ala Asp Thr Thr Ala TT^h? Pro Thr His Ts i Ala
200 2(05 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
184 951
Leu Ser Asp Gln Leu AGi GGn Ala IGe Ser Asp His Tyr Pro Vil 255
245 250
Glu VaG Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:25:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENC JI (A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZKI Amino kwas
(xi) OPIS SEKWENCJI : SEQ ID NO: i 25:
Leu Lys Ile Alii AGa Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Tho Leu ViG Ser Tyr Ile Val GGn Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ali Leu Val Gln GGu Vil Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr AGi Vil Gly Lys Leu Leu Arg Asn Leu Asn GGn Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Arg Pro Leu Gly Ar~ Asn Ser
184 951
00 75
Tyo Lys Glu Aog Tyr 80 Leu Phe Vol Tyr Arg Pro 5 A Asp Gln Val Seo 90
Ala Val Asp Ser Tyo Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
15 00 A 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Aog Phe Phe Ser
110 15S 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 30 S 135
Ala Pro Gly Asp Alo Val Ala Glu Ile Asp Ala Lei Tyr Asp Val
140 45 S 100
Tyo llG Pp g Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 O0 s 1.55
Mut Gly Asp Phe Asn AnLa Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 75 S 1.00
Top Seo Ser Ile Arg Lei Trp Thr Seo Poo Thr Phe Gln Trp Lei
185 110 115
Ile Pro Asp Ssr Ala Asp Thr Thr Alo Tho Poo Tho His Cys Ala
200 205 210
184 951
Tyu Asp Aru Ile raT 215 Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gl^y Ala Vri
220 222
ral Puo Asp Ser AT a Leu Pro Phe AA>n Phe GTn Ala Ala Tyr GGLy
230 235 224
Luu Seu Asp Gln Leu Ala Gln Ala IIt Seu Asp His Tyr Pro Vri
245 250 225
Glu ral Met Luu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:26:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:26:
Leu Lys ITe ATa ATa Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 0 0 15
Met Seu Asn ATa Thu Leu VaI Seu Ty· Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 5 0 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser Ala Leu
184 951
-oo 45
Thr Ala. wa Gly Lys Leu Leu Arg Asn Leu Asn dn Asp m u roo 60
70 55
Asp Thr Ttl His Ala Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Aia eer
67 70 75
Tyr Lys du Arg Tar Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Vu i err
80 85 90
Ala Val Aip Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys du Pro Cys Gly
97 100 105
Asn Asp TTir Phe Asn Arg du Pro Ala Ile Val Arg Phe η i err
110 110 120
Arg Phe TTh Glu VaU Arg Glu Phe Ala Ile Val Ppo Leu HS i u^hi
127 100 135
Ala Pro i GLy Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asa Vu1
140 140 150
Tyr Leu Aip Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Me i eeu
177 100 167
Met Gly Aip Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr VaU Arg Pro Ser Gln
170 770 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
184 951
185 190 195
Ilu Pro Aip 0er Ala Asp Thr Thr Ala TTp Pro Tlue His Sp0 Ma
050 205 010
Tyr Asp Al- 03! Val Val Ala Gly Mut Leu Leu Arg Gly rn 0 aal
215 220 225
Val Peo Aip 0er Ala Leu Pro Phe Asn PP.P Gln Ala Ala Tyr Gly
057 235 240
Luu Sue Aip 01n Luu Ala Gln Ala IGLu Seu Asp His Tyr hr 0 mi
245 250 255
Glu Val Mmu 0eu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:27:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ): 2 55 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aailsykcas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:27:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phu Asn Ilu Gln Thr Phu Gly Glu Thr Lys 15 10 15
184 951
Met Ser Asn Ala Tho 20 Leu VaG Seo Tyr Ile 25 Val Gln Ile Leu Ser 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu VaG GGn Glu Val Arg Asp Ser Ala Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Poo
50 55 60
Asp Thr Tyr HHi Ala Val Val Ser Arg Poo Leu Gly Arg Asn Ser
65 00 75
Tyr Lys Glu Arg Tyo Leu Phe Vil Tyo Arg Poo Asp Gln Val Seo
80 8 5 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Poo Cys Gly
95 00 0 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 15 5 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala IGe Val Pro Leu His Ala
125 10 0 135
Ala Pro Gly Asp Ala VaG Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Vil
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
184 951
155 16 0 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys See Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 75 0 180
Tup Seu Seu Ile Aug Leu Trp Thu Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 90 0 195
ITe Ppu> Ars Ser ATa Asp Thr Thu Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 05 0 220
Tyu Asp Aug Ile ril Val Ala GTy Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 20 0 225
ral Puo Asp Seu ATa Leu Puo Phe Asn Phr Gln Ali Ala Tyu, GTy
230 35 0 220
Leu Ser· Ar a Gln Leu Ala Gln ATa Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 50 0 225
Glu Vai Met Leu Lys
260 (2) INFOORMCJAO 0 EE 0 D AN:2 0:
(i) CHARAKTERYSTYKA sekwencji: :
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liliowa
184 951 (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(ii) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:28:
Lei Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly du Thr Lys
1 5 0 0 15
Met Seo Asn Ala Thr Leu S3^r Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ssr
20 5 5 30
Arg Tyr Asp lis Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser Cys Leu
35 0 0 45
Thr AIv Val dy Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Ppo
50 5 5 60
Asp Tho Tyr Hi s Tys Val Val Ser Glu Pro Leu Gl y Arg Asn Ser
65 7 0 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 8 5 90
Alo Vv1 Asp Ser 'Sos Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 00 0
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala lis Val AOrg Phe Phe Ser
110 15 5 120
Arg Phe Thr Glu Va0 Arg Glu Phe Ala Ilo Val Pro Leu His Ala
184 951
125
ALa Pro Gly Asp ALa 140 Val Ala
Tyr Leu Asp Val Gln 155 Glu Ly6
Met GLy Asp Phe Asn 170 Ala C^L^y
Trp Ser Ser IIe Arg 185 Leu Tp
Ile Pro Asp SSr Ala 200 APsp Thr
Tyr Asp Arg Hue VaL 215 V1^1 Ala
Va1 Pro Asp SSr ALa 230 Leu Pro
Leu Ser Asp GLn Leu 245 ALa Gln
Glu Val Met Leu Lys
260
12^0 135
Glu Ile Aap ALa Leu Tyr Asp VaL
1^^ 150
Trp Gly Liu Glu Asp Va1 Met Leu
110 165
Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
H7> 180
Thr Ser Ppg Thr Phe Gln Trp Leu
1^(0 195
Thr ALa TTr Pro Thr His Cys Ala
205 210
GLy Met Liu Leu Arg Gly ALa VaL
2^0 225
Phe Asn Phh Gln Ala ALa Tyr Gly
225 240
Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Va1
250 255
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:29:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aminτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:29:
luu Lys Ile Ala Ala Phr Asn lir Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mit Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 33
Arg Tyr Asp Ulu Ala Leu Var Gln Glu Val Arg Asp Ser Gln Leu
35 40 44
Thr Ala VaA Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr Hl^js Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
05 70 77
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Plu Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 99
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
184 951
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn 110 Arg Glu Pro Ala IIn 115 Val Arg hhe Phe Ser 120
Arg hhe Thr Glu VaU Arg Glu Phe Ala IIn AaU Pro Leu His Ala
127 130 137
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Aap Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 170
Tyr Leu Asp Val GUn Glu Lys Trp GUy Leu Glu Asp VaU Met Leu
177 160 167
Met Gly Asp Phe Asn Ala gul Cys Ser Tyy AaU Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Ppo Thr Phe Gln Trp Leu
187 190 197
Ile Pro Asp Ser lla Asp Thr Thr Ala TTh Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Ile VaU Val Ala Gly Met Lee Leu Arg Gly Ala VaU
21S 220 227
VaU Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn hhe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
184 951
Luu Sue Asp Gln Luu Ala Gln Ala Ilu Sue Asp His Tye Peo Val
245 250 255
Glu Val Mut Luu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:30:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
CA) DŁUGOŚĆ: 050 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTY AmiSTEC^aK
(xi) OPIS SEKWENCJI : SEQ ID NO: 30:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phe Asn 13.0 Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sur Asn Ala TPr Leu Val Ser Tyr Ilu Val Gln 11 e Leu Srr
20 25 30
Arg Tye Asp IIe Ala Leu Val Gln Glu Val Arg ASsp Ser His Cys
35 40 45
TPr Ala Val Gly Lys Leu Leu AAsp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
Tyy Lys Glu Aog Tyr 80 Leu Phe
Ala Val Asp Ser Tyr 15 Tyr Tyr
Asn Asp Tłiao Phe Asn 110 Arg Glu
Arg Phe Thr Glu Val 125 Arg GGu
Ala Pro Gly Asp Ala 140 Val Ala
Tyy Lei Asp Val Gln 155 Glu Lys
Mut Gly Asp Phe Asn 170 ALa dy
Typ Ser Ser Ile Arg 185 Lei Trp
Ilu Pro Asp Ser Ala App Thr
200
70 75
Val Tyr Arg Pro Asp Gln VaS Ser
85 90
Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
100 105
Pro Ali a Ilu Val Arg Phe Phe Ser
115 1^0
Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
130 135
Glu lis Asp Ala Lei Tyr Asp Val
145 150
Trp GZLy Lei Glu Asp Met Leu
1t0 165
Cys Ser Tyo Val Aog Pro Ser Gln
175 180
Thr Ser Poo Thr Phe Gln Top Lei
110 115
Tho Alo Tho Pro Thr His Cys Ala
205 210
184 951
Tyu Asp Aug IIt VaT 215 Val Ala Gly Met Leu Leu ArgGly Ala Val
220 225
riT Puo Asp Seu Ala Leu Puo Phe Asn Phr dn Ala Ala Tyr Gly
230 2350 2^(0
Leu Seu Asp dn Leu Ala GTn Ala Ile Seu Asp HSo Tyr Val
245 200 255
Glu ral Met Llu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:H:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
CA) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA AmiSTkwas
(ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 31:
Leu Lys Ile ATa Ala Pho Asn e^ZLo Gln Thu Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Suu Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr ITe Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Lys
184 951
40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu 155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
184 951
Trp Ser Ser Ile Arg 185 Leu Trp Thr Sur Pro 190 Thr Phi Gln Trp Leu 195
Ile Pro Asp SSL Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Tłu Hir Cyr Ala
200 251 210
Tyr Asp Arg IIe Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 201 225
Val Pro Asp SSL Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 25r 240
Leu Ser Asp G!n leu AA a Gln Ala Ile Ser Asp Hir Tyr P ro Val
245 201 255
Glu Val MetLeu Lys
2β0 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:32:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZT : Aminκkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:32:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
184 951
1 5 10 15
Met Ser Asn AA. u Lłh Leu Vi1 Ser Tyr Ile Val Gln IlG Leu Ser
20 25 33
Arg Tyr Asp He Ala Leu Va1 Gln GLu VaL Arg Asp Ser His Arg
35 40 44
ThG ALa Va1 Gly Lys Leu leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Lyy Val Va1 Ser GLu Pro Luu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu AAG Lyy Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp GLn Val Ser
80 85 90
Ala VaL Asp See Gyy Lyr Tyr Asp Asp GLy Cys GLu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp ThG Phh Aap GArg Glu Pro Ala Ile VaL Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu VaL Arg Glu Phe Ala Ile Va1 Pro leu His ALa
125 130 135
ALa Pro GLy Asp Ala VaL Ala Glu Ile Asp ALa Leu Tyr Asp Va1
140 145 150
184 951
Tyr Leu Asp Val Gln 155 Glu Lys Trp Gly Leu GGu Asp Val Met Leu
160 165
Met Gly Asp PPe Asn Ala Gl y Cys Ser Tyy ial Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ssu ile: Arg Leu Trp Thr Ser Ppo Thr Pin Gln Trp Leu
165 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ali ΤΤτ Pro Tho His Cy s Ala
200 205 210
Tyr Asp AAg iIe Val Val Ali GL^y Met Le^u Leu Arg Gly ev i Vel
215 220 225
Val Pro Aap ier Ala Leu Pro Phe Asn Płie Gln Ala AGa Ty r Gly
230 235 240
Leu Seo Aap iln Leu Ala Gln Ali Ile See Asp His Tyr Pr o Val
245 250 255
Glu VaG Mee ieu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:33:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(ii) OPOS SEKWENCJI : SEQ ID NO:33:
Lei Lys Ole Ala Ala Phe Asn Ile Gln Tho Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 H
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ssr
20 25 33
Arg Tyo Asp 11 e Ala Leu Val Gln Glu Val Aog Asp Seo His Leu
35 40 44
Thr Ala Cys Gly Lys Leu Lei Asp Asn Lei Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Aog Asn Ser
05 70 77
Tyo Lys Gli Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 91
Ala VvI Asp Ser 'yy Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Gli Poo Cys Gly
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Aog Gli Pro Alo Ile Val Arg Phe Phu Ser
110 115 120
184 951
Arg Phu Thr Glu Val 125 Aeg Glu
Ala Pro Gly Asp Ala 140 Val Al i
Tyr Luu Asp Val Gln 155 Glu Lys
Mut Gly Asp Płip Asn 170 AL a Gly
Trp Sur Sur Ul Arg 185 Luu Tep
Ilu Pro Asp Ser Ala 200 Asp Thr
Tye Asp Arg IIe Val 215 Val Al a
Val Pro Asp Ser Ala 230 Luu Pro
Luu Sur Asp GlLn Luu 245 Ala Gln
Phu Ala Ilu 130 Val Peo Luu His Ala 135
Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
440 1^0
Trp Gly Luu Glu Asp Val Mut Leu
100 165
Cys Ser Tye Val Arg Pro Sur Gln
150 180
Thr Ser Pro The Phe Gln Tep Leu
100 195
Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
250 210
Gly Mut Luu Luu Arg Gly Ala Val
220 225
Phe Asn Phu Gln Ala Ala Tyr Gly
230 22^0
Ala Ile Sur Asp Hi0 Tyr Pro Val
200 255
Glu Val Mut Luu Lys
184 951
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:34:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA AtmisTkcms (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:34:
Leu Lys ITe Ala Ala Phe Asn Ile Gli Thu Phe GTy GTu Thu? Lys
10 11
Met Seu Asi Ala Thu Leu ril Ser Ty· ITe Val Gln Ile Leu Seu 20 25 33
Aug Tyu Asp 11^ Ala Leu ral Gln Glu ral Arg Asp Ser His Leu
40 44
Thu ATa Lys Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gli Asp Ali Pro
55 66
Asp Thu Tyu His Tyu Val raT Ser Glu Puo Leu GTy Aug Asi Seu
70 77
Tyu Lys GTu Arg Tyu Lyu Phe Val Ty· Aug Pro Asp Gln ral Seu
85 90
184 951
Ala Val Asp Sne Tyr 95 Tyr Tyr Asp Asp GGa Cys 100 Glu Pro Cys Gly 105
Asn Asp Thr PPh Asn Arg Glu Pro Ala IIe Val Arg Phe Ph e Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Vol AOrg Glu Phe Ala IIe val Pro LlU Hi s Ala
125 130 1135
Ala Poo Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile AAp Ala Leu Tyr As. Val
140 1-55 150
Tyo Leu Asp W! Gln Glu Lys Trp Gly Leu Gli Asp Val Me t Leu
155 160 165
Mut Gly Asp PPe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr we Aog Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Seo Ser IOe Arg Leu Trp Thr Ser Prr Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
lie Poo Asp Snr Alo Asp Thr Thr Ala TTh Pro Thr His Cy s Ala
200 205 210
Tyr Asp Aog Ile Val Val Ala Gly Met Leu Lei Arg Gly Ala Val
215 220 225
Vol Pro Asp Ser Ala Lei Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
184 951
Leu Ser Asp GUn Leu Ala GUn AUa Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:35:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTIp 7Cninokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:35:
Leu Lys Ile Ala AUa Phe Asn He GUn Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile AUa Leu Val Gln GUu VaU Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr AUa VaU Cys Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp lULa Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
65 00 75
Tyu Lys GTu Aug Tyu Leu Phe raT Tyu Aug Puo Asp Gli ral Seu
80 50 90
Ala ral Asp Seu Tyu Tyu Tyu Asp Asp Gly Cys GTu Puo Cys Gly
95 00 0 105
Asn Asp Thu PPh Asi Aug Glu Puo Ala ITe ral Aug Phe hAe Aur
110 150 120
Aug Phu Thu du raT Aug GTu Phe Ala Ile ral Puo Luu HS o Ala
125 30 0 135
Ala Puo GTy Asp Ala riT Ali Glu ITe Asp Ala Leu Tyu Asp ral
140 45 0 150
Tyu Leu Asp ral Gln Glu Lys Tup GTy Leu Glu Asp ril Met Leu
155 60 0 165
Mut GTy Asp Phe Asn Ala GTy Cys Seu Tyr ral Aug Puo Au e Tin
170 75 0 180
Tup Seu Sru Ile Aug Lru Tup Thu Seu Puo Thu Phe Gli Tup Luu
185 190 195
Ile Puo Asp Sru Ala Asp Thu Thu Ala Thu Puo Thu His Cys Ala
200 205 210
184 951
Tyr Asp Arg Ile Val 215 Val Ala Gly Mit leu Leu Arg Gly Ala Val
220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln AAa Ala Tyr Gly
230 35 r 200
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Vnl
245 50 i 255
Glu Val Met leu lys
200 (2) O SEQ ID NO:36:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:30:
Leu Lys Ile Ala AAa Phe Asn Ile Gln lir Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 0 i 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 51 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
100
184 951
Thr AGa VaG Ile Lys 50 Leu Leu Asp
Asp Thr Tyr His Tyr 65 VaG VaG Ser
Tyr Lys Glu Arg Tyr 80 Leu Phe Val
40 45
Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
£35 60
Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
70 75
Tyr Arg Pro Asp Gln VII Ser
85 90
Ala VII Asp Seo Tyr Tyo Tyo Asp Asp GGy Cys Glu Pro Cys GGy
95 100 100
Asn Asp Thr Phe Asn Arg GGu Pro Ali Ile all Arg Phe Phe Ser
110 115 110
Arg Phe Thr GGu Vil Aog GGu Phe Ala IGe Val Pro Leu His Ala
125 130 m
Ala Pro Gly Asp AGa Val AGi Glu Ile Asp Ali Leu' Tyr Asp Wl
140 145 110
Tyr Leu Asp VII GGn Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 115
Met Gly Asp Phe Asn AGa Gly Cys Ser Tyr Val Arg Poo Ser Gln
170 175 180
184 951
111
Trp Ser Ser Ile Prg 165 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe GLn Trp Leu 195
ILe Pro App Ser PLa Asp Thr Thr ALa Thh: Pro Thr His Cys Ala
200 2(05 220
Tyr Asp Apg Gle ViL Val Ala Gly Met Liu Leu AGg Gly Ala Val
215 220 225
Va1 Pro Alp Ser AUi Leu Pro PPh Psn Phh Gln Ala ALa Tyr Gly
230 2235 220
luu Ser Alp Gln Leu Ala Gln Ala ILe Ser Asp His Tyr Pro Val
245 2250 255
GLu VaL MMt Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:37:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:37:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
102
184 951
ΙΟ 15
Mut Sur Asn Ala Thr 20 Leu Va0 Ser Tyr Ile 20 Vćl1 Gln Ile Leu Ser 30
Arg Tyr Asp Ilu Ala Luu Val Gln Glu Val Arg Asp Sur His Luu
35 00 45
The Ala Val Lys Lys Luu Luu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 50 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Sur Glu Pro Luu Gly Arg Asn Sur
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Luu PPu Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sur
80 50 90
Ala Val Asp Sur Tyr Tye Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 000 105
Asn Asp Thr Phu Asn Arg Glu Pro Ala Ilu Val Arg Phe Phe Ser
150 1^0
Arg Phu The Glu Val Arg Glu Phu Ala Ilu Val Pro Luu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp Ala Luu Tye Asp Val
140 145 150
184 951
103
Tyr Leu Asp Val GUn Glu 155 Lys Trp Gly Leu 601 Glu Asp Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala GU^y Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 151 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phi Gln Tsp Leu
185 101 195
IUe Pro Asp Ser Ala Asp Thr THir Ala Thr Pro Thi His Cys Ala
200 251 210
Tyr Asp Arg Ile VaU Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 201 225
VaU Pro Asp Ser AUa Leu Pro Phe Asn PTe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 251 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln AUa Ile Ser Asp HSi Tyr Poi Vul
245 251 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:38:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: Cl) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
104
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liniowo (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:38:
Lei Lys Ile Alo Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Gli Thr Lys
1 5 00 15
Met Ser Asn Ala Ths Lei Val Ser Tyr Ile VvI Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Aog Tyo Asp Ile Ala Lei Vol Gln Glu Val Arg Asp Ser His Lei
35 40 45
Thr Ala Val Arg Lys Leu Lei Asp Asn Lei Asn Gln Asp Ala Pro
50 50 60
Asp Thr Tyr His Tys Val Vol Ser Glu Pro Leu Gly Ayg Asn Ser
65 70 75
Tyo Lys Gli Aog Tyr Lei Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 80 90
Ala Val Asp Ssr Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Poo Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Ayg Phe Phe Ser
110 115 120
184 951
105
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ale 125 IIe 130 Val Pro Leu His Ala 135
Ala Pro Gly Asp lAa Val Ala Glu IIe Asp Ala Leu Tyr lAsp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Gl-u Lys Trp Gly Llu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ssl Tkt Val Arg Pro Ser Gin
170 1-75 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Ta^rp Tłir Ssl P:r Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ilu Pro Asp Ser AAa Asp Thr Thr Ale Tłu Pro Khr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Me i 1lu Piu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Piie Am Pin rin Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ili Sir Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
106
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:39:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:39:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Tyr Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
184 951
107
100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg 110 Glu Pro Ala Ile 15 S Val Aog Phe hi s Lrr 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu HSs Ma
125 30 B 135
Ala Pro Gly Asp Ala VaB Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr App lal
140 45Β 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Lei Glu Asp Val MeS Leu
155 00 B 105
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Sir Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 75B 180
Trp Seo Seo IIe Aog Leu Trp Thr Sir Pro Thr Phe Gln Tpp Liu
185 10B IW
Ile Poo Asp Ser Ala Asp Thr Thr A. la T^r Pro Thr His Cps Ma
200 25B 210
Tyo Asp Aog Ile VvI Val Ala Gly Mit Leu Lei Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Lei Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyo Gly
250 255 240
108
184 951
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Alka Ile Ser Asp HHs Tyr Pri Vel
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:40:
(l)CH^HKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZTIł Amieykwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:40:
Leu Lys Ile Ala AGi Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Seo Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyo Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Uli Ala Leu Val Gln Gln VaA Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr AGa Val Gly Lys Leu Cys Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Gln Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
109
70 77
Tyr Lys GLn Arg Tyr 80 Leu Phh Va1 Tyr Arg 85 Pro Asp GLn VuG Srr 99
Pla VaL Psp Ser Tyr Tyr Tyr Psp Asp GLy Cys Gln Pro Cys GLy
95 100 105
Psn Asp Thr Phe Psn Arg Gln Pro ALLa ILe VaL Arg Phe hUL Urr
110 115 120
Prg Phe Thr Gln VaL Arg dn Phe Ala ILe VaL Pro Leu HSg Ma
125 130 135
PLa Pro GLy Asp PLa Val Ala GLn Ile Asp Pla Leu Ty iG Asp Vul
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Gln Lyy hrp GLy Leu Gln Asp Val Met Leu
155 161 165
Met GLy Psp Phe Psn Ala Gly Cys Ser Tyr Va1 Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Prg Leu Trp hhr Ser Pro ThG Phe Gln Trp luu
185 190 195
Ile Pro Psp SUG Pla Asp Thr hhr PLa Thr Pro ThG His Cys Pla
200 205 210
110
184 951
Tyr Asp Air IIe Val 215 Val Ala Gly Mut Luu Luu Arg Gly Ala Val
20 0 225
Val Pro Aip 0er Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 0 240
Luu Sur Aip Gln Luu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pn Val
245 50 0 255
Gln Val mmu Lsu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:46·:
(i 0 CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ): 0 50 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA AmieTE^/aK
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 41:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phu Asn Ilu Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sur Asn Ala Thr Luu Val Sur Tyr Ilu Val Gln Ile Luu Sur
20 25 33
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
184 951
111
4Ο 45
Thu Ali ral Gly Lys 50 Leu Lys Asp Asi Leu Asn Gli 5 0 Asp Ala Paso 60
Asp Thu Tyr His Ty· ril ril Seu Glu Pro Leu Gly Aug Asn Ser
65 0 0 75
Tyu Lys GTu Aug Tyu Leu Phe ral Tyu Aug Puo Asp GTn ril Seu
80 a 0 90
Ala raT Asp Seu Tyu Tyu Tyu Asp Asp Gly Cys Glu Puo Cys GTy
95 00 0 10^
Asn Asp Thr Phe Asn Aug GTu Puo Ala Ile ral Aug Phe Phu Ser
110 15 0 120
Aug Phu Thr Glu ral Aug Glu Phe Ala Ile ral Puo Leu His Ala
125 30 0 135
Ali Puo GTy Asp Ala ral Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyu Asp ral
140 45 0 1^(0
Tyu Leu Asp ral Gli Glu Lys Tup GTy Leu GTu Asp ral Met Leu
155 60 0 165
Met GTy Asp Phr Asi Ali Gly Cys Sru Tyu ral Aug Puo Seu Gli
170 175 180
112
184 951
Trp Ser Ser Ile Arg 187 Leu Trp Thr Ser Pro 190 Thr Phe Gln Trp Leu 197
Ile Pro Asp See AUa Asp Thr Thr Ala Tiar Pro Thr His Cys Ala
200 200 21^0
Tyr Asp Arg Hu Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
217 220 225
VaU Pro Asp Ser Ala Lmu Pro Phe Asn Phie GUn Ala Ala Tyr Gly
230 230 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Vv1
247 250 255
Glu Val Met Beu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:42:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (l) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZTIł UWzinokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:42:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
184 951
113
1 5 10 15
Met Seu Asn Ala Thu Leu ral Ser Tyr ITe Val Gli Ile Leu Seu
20 25 33
Aug Tyu Asp Ile ATi Leu ral Gln Glu ral Aug Asp Ser His Luu
35 40 45
Thu Ala Val Gly Lys Leu Met Asp Asn Leu Asn GTn Asp Ala Puo
50 55 66
Asp Thu Tyr His Tyu Val ral Ser Glu Puo Leu Gly Aug As i Suu
65 70 75
Tyu Lys Glu Arg Ty· Leu Phr Val Tyr Aug Pro Asp Gli vai Suu
80 85 90
Ala ral Asp Ser Tyu Tyr Tyu Asp Asp GTy Cys Glu Puo Cys GTy
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn .Arg Glu P^j^o Ala ITe Val Arg Phe Phe Seu
110 115 120
Aug Phe Thu Glu ral Aug Glu Phe Ala ITe ral Puo Leu His Ala
125 130 135
Ala Puo GTy Asp Ala ral Ali Glu Ile Asp Ala Leu Tyu Asp ral
140 145 150
114
184 951
Kyr Leu Asp Val Gln 155 llu lys Trp Gly leu Glu Asp Val Met 100 Leu 105
Met Gly Aia rhe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Pal Arg Pro Ser Gln
170 1-75 180
Krp Sur Ssl He Arg Leu Trp Thr Ser Ppo Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Aia Per Ala Asp Thr Thr Ala Tino Pro Thr His Cys Ala
200 2(35 210
Kyr Asp Air He Val \^«Ll Ala lly Mit Llu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro Aia rer Ala Leu Pro rhe Asn PPh Gln Ala Ala Kyr Gly
230 2235 240
leu Ser Aia Pln Leu Ala Gln Ala Ile See Asp His kto Pro Val
245 250 255
llu Val Mei Piu Lys
200
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:43:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: Cl) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951
115 (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 43:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile GGn Tho Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Al i hh i ee i Ve i Io i yri Gl i Ve i Gli Gl i lui lor
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val GGn GGu Vil Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Cys Asn Leu Asn Gln Asp AGa Poo
50 555 60
Asp Tho Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Poo Leu Gly Arg Api Seo
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyo Leu Phe Vil Tyo Arg Poo Asp GGn Vil Seo
80 855 90
Ali VII Asp Ser Tyr Tyo Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Poo Ali Ile Vil Arg Phe Phu Ser
110 115 120
116
184 951
Arg Phi Thr Glu Val Arg 125 Glu Phe Ala IIa 130 BbV1 Pro Leu His Ala 135
Ala Pro Gly TAsp Ala Val Ala Glu Ile AAP AA a Lei Tyr Asp VvI
140 145 150
Tyr Lii Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu du Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala GA^y Cys Ser Tyr VaO Arg Pro Ser Gln
170 1-75 180
Top Seo Sio IIe Ayg Leu Trp Thr Ser Prr STu Phu Gln Trp Lui
185 190 195
Ile Poo Asp Ser Alo Asp Thr Thr Ala Thr Prr Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg IIe Vol Val Ala Gl y Met Leu Seu BArg Gly Ala VvI
215 220 225
Val Poo Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn PP^ du Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Seo Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Poo Val
245 250 255
Glu VvI Met Leu Lys
260
184 951
117 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 44:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:44:
Luu Lys Ilu Ala Al0 Phe Asn IIe Gln TPr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sur Asn All Ph0 Leu VII Ssr Tyr Ilu Vnl Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyg Asp He Al0 Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
TPr Ala Val de 0LS Leu Luu Leu Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Sg0 Val Vil Ser Glu Peo Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyg Lys dn Aig 0!Τ Leu PPu Val Tyg Arg Pro Asp Gln Vsl Ser
85 90
118
184 951
ALa VaL Asp See Tyr Tyr Tyr Asp Psp dy Cys Glu Pro Cys Gly 105
95 100
Psn Asp Thr Phh Psn Arg Glu Pro ALa IIe VaL Arg Phe Phe Ster
110 115 120
Prg Phe Thr G2Lu Va1 Arg Glu Phe Ala IIe VaL Pro Leu His Ala
125 130 135
PLa Pro GLy Asp Ala Val Ala Glu ILe Alp ALa leu Tyr Asp VaL
140 1-45 150
Tyr Leu Psp Val Gln Glu Lys Trp GLy Liu Glu Psp Va1 Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Psn AULa Gly Cys Ser TyT Va1 Arg Pro Ser Gln
170 175 160
hrp Ser Ser II Li Prg Leu Trp Thr Ser Ppg Thr Phe GLn Trp Leu
185 190 195
ILu Pro Asp Ser PLa ASsp Thr Thr ALa Tyr Pro Thr His Cys ALa
200 205 210
Tyr Psp Arg Ile Va1 Va1 ALa Gly Met Leu Leu Prg Gly Pla VaL
215 220 225
Va1 Pro Asp Ser ALa luu Pro Phe Asn Phe Gln Pla Ala Tyr Gly
230 235 240
184 951
119
Leu Ser Asp Gln Leu Ala GUn AUa IUe Ser Asp His Tyr Pro Val 255
245 250
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:45:
(I)WHlRlKTkRYSyYKl SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTIp Amisτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:45:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn He GUn Thr Phe GUy Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu VaU Ser Tyr IUe Val GUn Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile AUa Leu Val Gln GUu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr AUa VaU Gly Lys Leu Leu Me t Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
120
184 951
00
Tyr Lys Glu Agg Tyr 80 Luu Phu Vil Tyr Arg 5 5 Peo Asp Gln Val Sur 91
Ala Val Asp Sur Tyr Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
15 00 0 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Peo Ala Ile Ve0 Arg Phu Pu. 0 uer
110 15 5 120
Arg Phu Thr Glu Vil Arg Glu Phu Ala Ile Ve0 Pro Luu HS 0 Ala
125 10 0 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp Ala Luu Tye Asp Val
140 45 5 150
Tyr Luu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Luu Glu Asp Vll Mut Luu
155 10 0 115
Mut Gly Asp Phu Asn Ala Gly Cys Sue Tye Val Arg Pro Sue Gln
110 15 5 180
Trp Sur Ser Ile Arg Luu Trp Thr Sur Pro Thr Phu ii 0 gsv ueu
185 10 0 115
Ilu Pro Asp Sur Ala Asp The Thr Ala Thr Peo The His Cys Ala
200 205 21?
184 951
121
Tyr Asp Arg Ile aaG 215 Vil Ala Gly Mut Leu Leu Arg Gly AGa Vil
220 225
Vie Pro Asp S ee Ale Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 23 i 400
Leu Ser Asp GGe ieu Ala Gln AGa 1li Ser Asp His Tyr Pri Vel
245 55 i 555
Glu Vil Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:46:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZyił /Wmieτkwms (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 46:
Leu Lys IGe AAe He Phe Asn IGe Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lps
1 5 0 i 55
Met Ser Asn AAe iTh Leu Val Sio Tyr Ile Val Gln Ile LeuSer
20 5 i 00
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
122
184 951
60 45
Thu Ala ral GTy Lys Leu Lru Asp Asi Leu Cys 55 Gln Asp Ala Puo 60
50
Asp Thu Tyu Ηίε Tyu ral ral Seu GTu Pro Leu GTy Aug Asi See
65 75 75
Tyu Lys Glu Aug Tyu Lru Phe ral Tyu Aug Puo Asp GTn raT Seu
80 85 90
Ala ral Asp Seu Tyu Tyu Tyu Asp Asp. . Gly Cys GTu Puo Cys GTy
95 00 0 100
Asi Asp Thu Phe Asi Aug Glu Puo Ala Ile ral Aug Phe Phe See
110 155 112
Aug Phe Thu Glu ral Aug Glu Phe Ala Ile ril Puo Leu His ACt
125 100 111
Ala Puo Gly Asp Ala ral Ali Glu Ilu Asp Ala Leu Tyu Asp ral
140 455 115
Tyu Leu Asp ral GTn GTu Lys Tup GTy Luu GTu Asp ril Mut Leu
155 10 0 111
Met GTy Asp Phu Asn Ala Gly Cys Seu Tyu ral Aug Puo Seu Gli
170 175 180
184 951
123
Trp Ser See Ple Arg Leu Trp Thr 105 Ser Pro 190 Thr Phe Gln Krp Leu 195
Ile Pro Aia Per AAa Asp Thr Khr Ala TKi· Pro Tł^tr His Cys Ala
200 2025 220
Tyr Asp Air P Ilu Val Val Ala Gly Mit Llu Leu Arg Gly Ala Val
215 2220 22^5,
Val Pro Aia Per Ala Leu Pro rhe Asn PPh Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
leu Ser Aaa Pin Leu Ala Gln Ala Ile Ssl Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Mei Peu lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:47:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) KYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZTY: Aainτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:47:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
124
184 951
1 5 D 15
Met Seo Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile LiG Srr
20 5B 30
Aog Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu VvI Aog Asp Ser His Leu
35 0B 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Plhe Gln Asp Al a Pro
50 5B 60
Asp Thr Tyo His Tyr Val Val Ser Gli Pro Leu Gly Arg Asn Ser
05 0B 75
Tyr Lys Glu Ayg Tyr Lei Phi Val Tyr Aog Pro Asp Gln Val Seo
80 5B 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Gli Pro Cys Gly
15 00 B 105
Asn Asp Tho PUe Asn Arg Glu Pro Alo Ile Val Arg Phe Phs Srr
110 15B 120
Aog Phe Thr Gli Val Arg Gli Phi Alo Ile Val Poo Lei His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Vol Alo Gli Ili Asp Ala Lui Tyo Asp Val
140 145 150
184 951
125
Tyr Leu Asp VaU Gln Glu 155 Lys Trp Gly Leu Glu Asp 160 Val Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Sru Hn
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Paso Thr Phe Gln Tsu Luu
185 190 195
IUe Pro Asp Ser AUa Asp Thr Thr Ala Thr Paso Thr His Cpi Ha
200 205 210
Tyr Asp Arg Ile VaU Val Ha Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
VaU Pro Asp Ser AUa Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala GUn AUa IIe Ssm Asp Hii Tyr Pro Vul
245 250 2155
Glu VaU Met Mu u Lps
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:48:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
126
184 951 (D) TOPOLOGIA: Liliowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(ch) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:48:
Leu Lys ITe Ala Ala Phe Asi ITe Gln Thu Phu GTy GTu Thu Lys
1 5 0 0 15
Met Seu Asn Ala Thr Leu ral Seu Tyu Ile ral Gli ITe Leu Ser
20 55 30
Aug Tyu Asp Ile Ala Lru ral Gln GTu ral Aug Asp Seu His Leu
15 0 5 45
Thu Ala ril GTy Lys Leu Leu Asp Asn Leu Lys Gli Asp Ala Puo
50 5 5 60
Asp Thu Tyu His Tyr ril ral Seu Glu Pro Leu GTy Aug Asn Ser
15 0 5 75
Tyu Lys Glu Aug Tyu Leu Phe ril Tyu Aug Puo Asp Gli ral Seu
80 55 90
ATi ral Asp Sru Tyu Tyu Tyu Asp Asp GTy Cys Glu Puo Cys GTy
95 00 0 115
Asi Asp Thu Phe Asi Aug GTu Puo Ala Ile ral Aug Phe Phe Ser
110 11 0 110
184 951
127
Prg Phe Thr Glu Va1 ArgGlu Phe 125 Ala IIe GaL 1230 Pro Leu His ALa 327
PUi Pro GLy Asp Ala Vul Ala Glu Ile Alp ALa Leu Tyr Asp GaL
140 145 150
Tyr Leu Psp Val GLn Glu LpG Trp Gly LlU Glu Asp VaL Met Luu
777 160 165
Met GLy Psp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Ty^r Gal Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ser He Prg Leu Trp Thr Ser Ppg Thr Phe GLn Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Psp Ser PLa ASsp Thr Thr Ala Thh Pro Thr His Cys ALa
200 2025 210
Tyr Asp Arg He VaL Val Ala Gly Met Liu Leu Arg Gly ALa Gal
215 220 225
Va1 Pro Asp Ser ALa Leu Pro Phe Asn PPh Gln Ala Ala Tyr GLy
230 2β5 240
Leu Ser Asp Gln Leu ALa GLn Ala Ilu Ser Asp His Tyr Pro VaL
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
128
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:49:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZyił A!mieokwms (ii) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:49:
Leu Lys Ile Ala Ali Phu Asn IGe Gln Tho Phe GGy GGu Thr Lys
1 5 li 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu ViG Seo Tyo Ilu Val Gln IGe Leu Ser
20 255 30
Arg Tyr Asp Ile AGa Leu Vil GGn GGu aaG Aog Asp Seo His Leu
35 4i 45
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ali Glu Ile Asp Ala Leu' Tyr Asp VaG
140 14i 150
Tyr Leu Asp VII Gln Glu Lys Top Gly Leu GGu Asp Val Met Leu
155 10i 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Vil Arg Pro Ser Gln
170 17i 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
184 951
129
185 190 195
Ilu Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala TT.P Peo Thr His Cys Ala
000 205 210
Tyr Asp Arg Ile Val Ve0 Ala Gl y Met Leu Luu Arg Gly Ala Val
060 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pr0 Phe Asn PPip Gln Ala Ala Tyr Gly
035 235 2^0
Luu Sur Asp Gln Luu Ala Gln Ala Ile Ssu Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Mmu Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:50:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Amisykwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:50:
Luu Lys Ilu All Ala PPu Asn Ilu Gln Thr PPu Gly Glu Thr Lys
130
184 951
Met Ser Asn Ala TUo Leu 20 Val Ser Tyr Ile 25 Val Gln lir Leu Ser 30
Arg Kyr Asp Ile Ala liu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His leu
35 415 45
ΚΙ,ο Ala Val G(_nr lys liu Leu Asp Asn Leu Krp Gln Asp Ala Ppso
50 255 60
Asp Khr Tyr HHi Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 Ί5 75
Tyr lys Glu Arg Tyr leu Phi Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 855 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 105 105
Asn Asp TUo PPh Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Gln Val Arg Glu Phe Ala Ili Val Pro Leu His Ala
125 2105 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Kyr Asp Val
140 145 150
Tyr leu Asp Val Gln Glu Lys Krp Gly Leu Glu Asp Val Met leu
155 160 165
184 951
131
Met Gly Asp Phe Asi Ala 170 Gly Cys Ser Tur VtA 75 0 Aug Pro Ser Gln 180
Tup Suu Seu Ile Cug Leu Trp Thr Ser Poo The Phe Gli T^rp Leu
185 90 0 195
ITe Puo Asp Ser Ala ASsp Thr Thr Ali The Por Thr His Cys Ali
200 05 0 210
Tyu Asp Aug Ile ral Val Ala Gly Mrt Leu Leu Arg GTy Ala Val
215 20 0 225
ral Puo Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asi Pho Gln Ala Ala Ty· Gly
220 35 0 240
Leu Seu Asp dn Lru Ala Gln Ala I^iLe Ser Asp His Tyu Pro Val
452 50 0 255
GTu ral Met Luu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:51:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTY: AaiSTkwas
152
184 951
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:51:
Leu Lys Ile Ala Ala Phs Asn Ile Gln Tho Phe Gly Gli Thr Lys
1 8 10 15
Met Ser Asn Ala Tho Lei Val Seo Tyo Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 28 30
Arg lyr Asp Ile Ala Lei Val Gln Glu Val Aog Asp Ser His Lei
38 40 45
Tho Ala Val Gly Lys Lei Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
80 55 60
Asp Tho Tyr His Cys Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 77
Tyo Lys Glu Aog Tyr Lei Phi Val Tyr Aog Pro Asp Gln Vv1 Ser
80 835 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyo Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phu Asn AOrg Glu Pro Ali a Ile VaB Arg Plse Phe Ser
110 :l5 120
Aog Phe Thr Glu VaB Arg Glu Phe Ala Ile VaB Pro Leu His ^a
125 130 155
184 951
AUa Pro GUy Asp Ala aaU Ala 140 Glu IUe Asp AUa 145 leu Tyr Asp Val 150
Tyr Leu Asp Val Gln guli Lys Trp Gly Leei Glu Asp VaU et i eeu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyy Val Arg Pro Ser Gln
170 115 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Par Thr Phe GUn rs a leu
185 190 195
Uie Pro Asp Ser AUa Asp Thr Thr Ala TTh Paro TTli? His Ly i Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg Ile VaU Val Ala Gly Met Lee Leu Arg Gly uv u Vu1
215 220 225
aaU Pro Asp Ser AUa Leu Pro Phe Asn PPh Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala IIe See Asp Has Tyr roi Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:52:
134
184 951 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (Α) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKIł Amisτkwms
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:52:
Leu Lys IGe AGa Ala Phe Asn Ilu Gln Thr Phe Gly Glu hh i yps
1 5 0 i 11
Met Ser Asn Ala Thr Leu VII Ser Tyo Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 5i 30
Arg Tyr Asp IGe Ali Leu VaG GGn Glu Val Arg Asp Sur His Leu
35 0i 44
Thr Ala VaG GGy Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Poo
50 5i 60
Asp Thr Tyo His Lys Val VII Sio Glu Pro Luu Gly Arg Asn Seo
65 0 i 75
Tyr Lys Glu Aog Tyr Luu Phe Val Tyr Arg Poo Asp Gln VII Ser
80 5i 90
Ala Vil Asp Seo Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly C% Glu Pro Cys Gly
95 100 105
184 951
135
Asn Asp TPe Phu Asn 110 Arg Glu Pro All II0 Ve0 Arg Phe 15 5 Phe Ser 120
Arg Phu TPe Glu Val Arg Glu Phe All Ile Ve0 Pro Leu His Ala
125 30 0 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp Ali Leu Tyr Asp Val
140 15 5 150
Tyr Luu Asp Val Gln Glu Lys TTp Gly Leu Glu Asp Val Mut Lesiu
155 10 0 165
Mut Gly Asp Phe Asn Ala Gly Ccs Sue Tyr Val Arg Pro Ser Gln
110 15 5 180
Trp Sur Sur Ile a-i Leu Trp Thr Sur Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 10 0 195
Ilu Pro Asp Ser Ala Asp Thie TTP All Thr Pro Thr His Cys Ala
200 05 5 210
Tyr Asp Arg Ile Val vai Ala Gly Mut Luu Luu Arg Gly Ali Val
215 22 0 225
Vil Pro Asp Sur Ala Luu Pro PPu Asn Phu Gln Ala Ali Tyg Gly
230 235 240
Luu Sur Asp Gln Luu Ala Gln All Ilu Sur Asp His Tye Pro Val
245 250 255
136
184 951
Glu VaL Met Luu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:53:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA GWnisokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:53:
Leu Lys ILe Ala ALa Phe Asn IIe Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Vćl1 !eu Tyr Ilu V1l1 Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Psp Ile ALa Leu Vćl1 Gln Glu VaL Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Pla VaL Gly Lys Leu Leu Asp Psn Leu Asn Gln Asp Ala Ppo
50 55 60
Psp Thr Tyr Hhs Mut VaG Val See Glu Pro Leu Gly AGg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
184 951
137
85 90
Ala ral Asp Ser Tyu Tyr Tyr Asp Asp GTy Cys Glu Pro Cys Gly
100 105
Asi Asp Thu Phe Asi Arg Glu Puo Ala ITe Val Aug Phe Phe Ser
110 115 HO
Aug Phe Thu Glu ral Arg Glu Phr Ala Ile Vil Puo Leu His Ala
125 130 115
Ala Puo Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp A.Ta Leu Tyr Asp Val
140 145 110
Tyu Leu Asp Val Gln Glu Lys Tup Gly Lru GTu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met GTy Asp Phe Asi Ala dy Cys Ser Tyu ral Aug Pro Ser Gln
170 175 110
Tup Seu Seu He Aug Leu Trp Thu Ser Pro Thu Phe Gli Trp Leu
185 190 195
ITe Puo Asp Seu Ala Asp Thu Thu Ali Thu Puo Thu His Cys Ali
200 205 210
Typ Asp Aug Ile ral ral Ala Gly Met Leu Leu Aug Gly Ali ril
215 220 225
138
184 951
Val Pro Asp luu Ser Asp
Glu Val Met
Ser Ala Leu
230
Gln leu Ala
245
Leu lys
2β0
Pro Phe Asn
Gln Ala Ile
Phe Gln Ala
235
Ser Asp His
250
Ala Tyr Gly 240
Tyr P ro Val
255
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:54:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2 00 aminokwasów (B) KYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: AmieyEwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:54:
leu lys Ile Ala Ala Phr Asn Ile Gln Khr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Khr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln lir Leu Ser
20 25 30
Arg Kyr Asp
He AAa
Leu Vs1
Gln Glu Val Arg Asp Ser HA
Leu
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
184 951
159
55 60
Asp Tho Tyr His Ser 05 Val Val Ssr Giu Pro 70 Leu Gly Arg Asn Ser 75
Tyo Lys Gli Arg lrr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala Vol Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp ASp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
15 100 115
Asn Asp Thr Phe Asn 110 Arg Glu Pro Ala Ile 115 Val Arg Phe Phe Ser 110
Aog Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala He Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Alo Val Ala Glu Ile Asp Ala Lei Tyo Asp Vv1
140 145 150
Tro Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp GZ^y Leu Glu Asp Val Met Leu
155 100 165
Mst Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ssr Tyr Val Arg Poo Ser Gln
170 175 180
Trp Sio Ser Ile Arg Lui Trp Thr Ssr Pro Thr Phe Gln Top Lei
185 190 195
140
184 051
Ile Pro Asp Seo Ala Asp Tho 200 Thr AGa Thr 205 Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Arg He Val Val AGi Gly Met Luu Leu Ahrg Gly Ala Val
215 22i 225
aae Pro Asp See Ala Leu Pro Phe Asn Phu Gln Ala Ala Tyr Gly
230 23i 240
Luu Sur Asp GGn Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp HSi Tyr Poi Val
245 20i 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:55:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(Α) DŁUGOŚĆ: 2 60 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZTY Amisokwms (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:55:
Luu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys 15 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
184 951
141
25
Arg Tyr Asp Ile AUa Leu 35 Val Gln GUu aau Arg 40 Asp Ser HSi
Thr Ala ViU Gly Lys Leu Luu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala
50 55
Asp Thr Tyr His Tye Val Cys Ser Glu heo Leu Gly Arg Asn
65 70
Tyr Lys Glu Arg Tye Leu Phe ΛΛΐ^Ι Tyr Arg Peo Asp Gln Va1
80 85
Ala Val Asp Ser yye Tyr Tye Asp Asp GUy Cys Glu Pis co Cys
95 101
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro AUa IUe VaU Arg Phe Phi
110 111
Arg Phe Thr Glu ViU Arg GUu Phe AUa Ile Val Paso Leu Hii
125 131
Ala Pro Gly Asp AUa VaU Ala Glu Ile Asp AUa Leu Tyr Asp
140 145
Tyr Leu Asp aaU Gln Glu Lys Trp GUy Leu Glu Asp aαU Met
155 160
Leu
Pro
Ser
Ser
Gly
1(05
Ser
120
Ala
135 aal
150
Lmu
165
142
184 951
Met Gly Asp Phe Psn ALa 170 GLy Cys Ser Tyr VaL 175 Prg Pro Sur Gln 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe GLn Trp Leu
185 190 115
Ilu Pro Psp Ser ALa Asp Thr Thr ALa Thr? Gpg Thr His Cys Ala
200 205 220
Tyr Psp Prg IIe Va1 Val Ala Gly Met Liu Liu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Va1 Pro Psp Ser ALa Leu Pro Phe Asn PPh dn ALa Ala Tyr Gly
230 235 22 0
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala ZLiUe See Asp His Tyr Pro Val
245 250 22525
Glu VaL Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:56:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Amisτkwas
184 951
143
(ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:56:
Luu Lys Ile Ala Ala Phe Asn ITe Gli Thu Phe Gly Glu hh r Sas
1 5 00 11
Met Seu Asi Ala The Leu ral Seu Tyu Ile ral Gln Ile Ae o Aur
20 50 33
Aug Typ Asp ITe Ala Lru ral Gli Glu ral Aug Asp Seu His Luu
35 40 44
Thu Ala ral GTy Lys Leu Leu Asp Asi Leu Asi Gli Asp Ala Puo
50 50 60
Asp Thu Typ His Tyu ral Asp Seu Glu Puo Leu Gly Aug Asi Seu
65 70 17
Tyu Lys Glu Aug Tyu Leu Phe ral Typ Aug Puo Asp Gln ral Suu
80 50 99
Ala ral Asp Seu Tyu Tyu Tyu Asp Asp Gly Cys Glu Puo Cys Gly
95 000 105
Asi Asp Thu Phe Asi Aug GTu Puo Ali Ile ral Aug Phe Phu Suu
110 115 120
Aug Phu Thu Glu ral Aug Glu Phr All Ile ral Puo Leu His Ali
125 130 135
144
184 951
Ala Pro Gly Asp Ala 140 Val Ala Glu Ili Asp Ala leu Kyr Asp Val
44 5 150
Kyr leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly leu Glu Asp Val Met Leu
155 60 0 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 75 5 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser P ro Thr Phe Gln Trp Leu
185 10 0 115
Ile Pro Asp Sir Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cy s Ala
200 25 5 210
Tyr Asp Arg Ile- -Val Val Ala Gly Met Leu leu Arg Gly Ala Val
215 20 0 225
Val Pro Asp Sir Ala Leu Prr Phe Asn Plee Gln AAa Ala Tyr Gly
230 35 5 240
leu Ser Asp Gln leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Kyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu lys
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:57:
260
184 951
145 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZK!
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:57:
Luu Lys Ilu Ali Ala Piie Asn IIe Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sur Asn Ali Thr Luu Val Ssr Tye Ilu Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Luu Val dn Glu Vil Arg Asp Sur His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Luu Leu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Ppo
50 55 60
Asp Thr Tyg His Tyg Val His Ssr Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyg Lys Glu Arg Tyr Luu Phe Val Tye Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala Val Asp Sur Tye Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
146
184 951
Asn Asp Thr Pł^e Asn Arg Glu Pro Ala 110 Ile 115 Val Arg Phe hli lor 120
Arg Phu Thr GGu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu HSi .Ala
125 30 5 135
Ala Pro GGy Aap AGa Val AGa Glu Ile Asp AGi Leu Tyr Asp Vg1
140 15 5 150
Tyr Luu Asp Vai Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 10 5 115
Met Gly Asp P^e Asn Ali Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Sei dn
170 755 180
Trp Sur Sur IIe Arg Leu Trp Thr Ser Pro Tho Phe Gln hrp luu
185 10 5 115
Ilu Pro Asp See AGa Asp Thr Thr Ala ΊΤτ Pro Tin? His Cpi Ala
200 255 210
Tyr Asp Arg IIe Vil Val Ala Gly Mut Leu Leu Arg GGy Ala Vel
215 205 225
Val Pro Asp Ser AGa Luu Poo Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 210
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
184 951
147
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:58:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:58:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn IlG Gln The Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Seo Asn Ala Thr Leu aal Ses Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyy Asp Ile Ala Leu aal Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp The Tyr His Tyr Val Met Ser Glu Poo Leu Gly Arg Asn Ser
70 75
148
184 951
Tyr lys Glu Prg Tyr 80 Leu Phe VaL Tyr Prg 85 Pro Asp Gln VaL Ser 90
PLa Va1 Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Psn Psp ThG Phe Asn Arg Glu Pro ALa Ile Val Arg Phe Phe Srr
110 15 0 120
Prg Phe Thr Glu VaL Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu HSg Ma
125 30 0 135
PLa Pro GLy Asp Ala Val Ala GLu Ile Psp PUi Leu Tyr Asp Val
140 455 150
Tyr Leu Psp Val Gln Glu Lys Trp GLy Leu Glu Asp Val Met Leu
155 H 0 165
Met GLy Psp Phe Asn Ala Gly Cys Ster Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 755 180
Trp Ser Ser IIe Prg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 H 0 195
ILe Pro Psp Ser Ala Asp Thr Thr ALa Thr Pro Thr His Cys ALa
200 205 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
184 951
149
215 220 225
ral Puo Ars Ser Ala Leu Paso Phr Asi Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 2Ί0
Leu Seu Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile See Asp His Tyu Pro Val
245 250 255
Glu ral Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:59:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZn: Aminokwas (xH) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:^:
Leu Lys Ile Ala Ali Phe Asn Ile Gln TiTu Phe Gly GTu Tilu Lys
10 115
Met Seu Asn Ala THlu Leu ral Sru Tyu ITe ral Gli ITe Leu Seu
25 30
Aug Tyu Asp Ilu Ali Leu ral Gli Glu ral Aug Asp Seu His Leu
150
184 951
Thr AUa Val Gly Lys 70 Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala 7 5 Piso 60
Asp Thr Tyr Hi Tye Val Pro Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
67 0 0 75
Tyr Lys Glu Aeg Tye Luu Phe Val Tyr Arg Pro Asp GUn Vi1 Ser
80 7 5 90
AUa VvU Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp GUy Cys GUu Pro Cys Gly
97 10 0 105
Asn Asp Thr ΡΡτ Asn Arg Glu Pro Ala Ile Va1 Arg Phe ^Jee Ser
110 17 5 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Va1 Pro Leu His Ala
127 30 0 135
AUa Pro GUy Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 17 5 150
Tyr Luu Asp aaU Gln Glu Lys Trp GUy Leu Glu Asp Val Met Leu
177 60 0 165
Met GUy Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 177 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
184 951
151
185 190 195
Ile Peo Asp Ser Ala Asp The Thr Ada TTh Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyo Asp Aog Ile Val Val Alo Gly Met Llu Leu Aog Gly Ala Val
215 220 225
Val Poo Asp Ser Ala Leu Peo Phe Asn PPh Gln Ala Alo Tyr Gly
230 235 240
Leu Seo Asp Gln Lei Ala Gln Ala Ile Snu Aap His Tyr Pro Val
245 2250 2 25
Glu Val Mut Leu Lys
200
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:00:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowo (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwzs (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:t0:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ils Gln Tho Phe Gly Glu The Lys
152
184 951
Mit Ser Asn Ala Thr 20 leu Val Sir Tyr Ile 25 Val Gln Ile luu Ser 30
Arg Kyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Sir His leu
35 -40 45
KUo Ala Val Gly Lys leu leu Asp Asn leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55- 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Arg Sir Glu Pro leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
TTr lys Glu Arg Tyr leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sir
80 85 90
Ala Val Asp Ser Kyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
15 2005 105
Asn Asp KUo Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 23235 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ili Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
184 951
153
155 160 165
Mut Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser ITr Val Arg Pro Ser Gln
170 1-75 180
Trp Sur Ssu He Arg Leu Trp Thr Ser Phh The Phe Gln Trp Luu
185 190 195
Ilu Pro Aip Ser Ala Asp Thr Tir Ali TTP Peo Thr His Cp0 Ala
O0O 205 015
Tyr Asp ZAg Ile Val Val Ala Gly Mut Leu Luu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Vil Pro Aip Ser Ali Leu Ppo hPu Asn Phe Gln Ali Ala Tyr Gly
230 235 240
Luu Sur Aip Gln Luu Ala GG.n Ali Ile Ssu Asp His Tyr hn Vel
245 2!ó0 255
Glu Val Mut Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:61:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 050 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi
154
184 951 (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (ii) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:t1:
Lei 1 Lys Ile Alo Ala Phe 5 Asn Ile Gln Thr Phs 10 Gly Gli lho Lys 15
Met Seo Asn Alo The Leu Val Ser Tye Ile Val Gln Ils Leu See
20 25 33
Arg Tyo Asp Ile Alo Leu Val Gln Gli Vv1 Aog Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Lei Lei Asp Asn Lii Asn Gln Asp Ala Peo
50 855 60
Asp Tho Tyr His Tyr Val Sie Ser Gli Pro Leu Gly Aog Asn Sie
65 70 77
Tyr Lys Glu Aog Tye Lei Phs Val Tye Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 885 99
Ala VvI Asp Seo Tyr Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Tho Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
184 951
155
125
Ali Puo Gly Asp Ali 140 Val Ali Glu
Tyu Leu Asp Val Gln 155 Glu Lys Trp
Mut Gly Asp Phe Asn 170 Ala Gly Cys
130 135
Ile Ars ATi Leu Tyr Asp Vv1
145 150
Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
160 165
Ser Tts All Aug Pro Ser Gln
175 180
Tup Seu Seu Ile Aug Leu 185 Tup Thr Ser Psu 190 Thu Phe Gln Tup Leu 195
Ile Puo Asp Ser Ala Asp Thu Thr Ala TTh Puo Thu His Cys Ala
200 205 210
Typ Asp Aug Ile ril Val Ala Gly Met Lee Leu Aug Gly Ala Val
215 2^(0 225
ral Puo Asp Ser Ala Leu Puo Phe Asi PPh Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Seu Asp Gli Lru Ala Gli Ala IlA Seu Asp HHs Typ Puo ral
252 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
156
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:62:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI AmisyEwms (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:62:
Luu Lys 1 IGe Ala Ala 5 Phe Asn Ile Gln Thr Phe 10 O^ZLy GGu Thr
Met Sur Asn Ala Tho Leu Val Ser Tyr IGe Val Gln Ile Leu
20 25
Arg Tyr Asp IIe Ali Leu Val Gln Glu ViG Arg Asp Ser His
35 40
Thr Ala Vil Gly Lys Leu Leu Asp Asi Leu Asn Gln Asp Ala
50 55
Asp Thr Tyr H Hs Tyo Val Val Lys Glu Poo Leu Gly Ar~ Asn
65 70
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Va 1 Tyr Arg Pro Asp Gln Val
80 85
Lys
Sur
Leu
Pro
Sur
Sur
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
184 951
157
100 1025
Asn Asp The Phe Asn 110 Arg Glu Pro Ala IIe 115 Val Arg Phe Phe Ser 110
Arg Phi Thr Glu Vv1 Arg llu Phe Ala IIe Val Pro Leu His Ala
125 1230 135
Ala Pro Gly Asp Plo Val Alo Glu Ils App Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp C^ZLy Leu Glu Asp Val Met Leu
300 100 1<3^
Met Gly Asp Plhe Asn Ala Gly Cys Ser Tys Val Arg Pro Ser Gln
170 1-75 110
Trp Ser Sio Ile Arg Leu lop Thr Ser Pre The Phe Gln Top Leu
185 190 115
Ile Poo Asp Ser Ala Asp Tho Thr Ala Tłu Pro Thr His Cys APa
200 205 220
lyo Asp Aog Ile Val Val Ala Gly Mst Lei Lsu Aog Gly Ala Val
415 220 225
Val Pro Asp Ser Ala Lii Pro Phi Asn Phs Gln Ala Ala Tyo Gly
250 255 240
158
184 951
Leu Sur Asp GUn Leu Ala Gln Ala Ile See Asp His Tyr Pro Vv1
245 250 255
Glu Vv1 Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:63:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTIp Amisykwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 63:
Leu Lys Ile Ala Ala Płee Asn IIe Gln The Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr IUe Val Gln Ile leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Vv1 Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Vv1 Gly Lys Leu Leu Asp Asn leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Met Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
184 951
159
70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr 80 Leu Phe VaL Tyr Arg 85 Pro Asp Gln VuG Srr 90
PLa Va1 Asp Ser Tyr Tyr Tyr Psp Asp Gly Cys Glu Pro Cys GLy
95 10(0 105
Asn Asp ThG Phe Psn Arg GGu Pro Ala Ile VaL Arg Phe PhL Urr
110 115 120
Arg Phu Thr Glu Va1 Arg GGu Phe Ala Ile VaL Pro Leu His Ma
125 130 123 5
ALa Pro GLy Asp Pla Val GAl Glu He Asp PLa Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lir Trp Gly Leu GLu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met GLy Psp Phe Asn Ala dy Cys Ser Tyr VaL Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro ThG Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Pro Psp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys PLa
200 205 210
160
184 951
Tyr Asp Arg Ile Val 215 Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA ( 0 SEQ ID NO: 64:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:64:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
184 951
161
40 45
Thr Ala aαl Gly Lys 50 Leu Leu Asp Asn leu Asn Gln 55 Asp Ala Pro 66
Asp τι? Tyr His Tyr Val Val Aeg Glu Pro Leu Gly Arg Asn See
65 70 77
Tyr Lys GUu Arg Tye Leu Phe VvI Tyi Arg Pro Asp GUn Val Sue
80 5 1 90
Ala ViI Asp Ser Tyr Tyr Tye Asp Asp Gly Cys GUu Pro Cys Gly
95 00 1 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg GUu Pro Ala Ile Val Ag i hM i hM i Mrr
110 15 1 120
Arg Phe Thr Glu Vi^l Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro leu ha i Ha
125 30 1 135
Ala Pro Gly Asp Ala Vi1 Ala GUu IUe Asp Ala leu Tye Asp VvU
140 45 1 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu lys Tep Gly leu GUu Asp VvI Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala GUy Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
162
184 951
Trp Ser Ser Ile Arg 185 liu Kop Khe Sio Peo The Phe Gln 190 Trp leu 195
Ili Pro Asp Seu Ala Asp Thr Thr Ala Kho Peo Thr His Cys Ala
200 2or 22^0
Kyr Asp Arg IIe Val Val Ala Gly Met leu Leu Arg Gly Ala Val
215 22P 225
Val Pro Asp See Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr G2Lnr
230 22255 2^0
leu Ser Asp Gln leu Ala Gln Ala He Ser Asp Hi i Tyr Pro Val
245 25P 255
Glu Val Met Liu lys
200
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:05:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) KYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aminykwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 05:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
184 951
163
10 15
Met Seu Asn Ala Thr Leu 20 Va0 Ser Tyr Ile 25 Val Gln Ilo Leu Ser 30
Aug Typ Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu ral Aug Asp See Hio Leu
15 40 45
Thu Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gli ASsp Ala Pro
50 55 60
Asp Thu Tyr His Tyr Val Val Ser Ala Puo Leu Gly Arg Asn Ser
15 70 75
Typ Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Ppo Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala ral Asp Ser Tyu Tyr ' Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cyo Gly
95 100
Asi Asp Thr Phe Asi Ahsg Glu Pro Ala Ilu Val Aug Phe Phe Ser
110 115 120
Aug Phe Thr Glu ral Arg Glu Phe AC a Ilu Val Pro Leu His Ala
125 110 135
Ala Puo Gly Asp Ala ral Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp ral
140 145 150
164
184 051
Tyr Luu Asp aaG Gln 155 GGu Lys Trp Gly Leu Glu Asp 160 Vil Mut Luu 165
Met GGy Asp Pł^e Ans Ala Gly Cys Ser Tyr Val TArg Poo Ser Gln
170 17i 180
Trp Ser Seo IIe Ug Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Luu
185 10i 105
IGe Poo Asp Seu Me Asp Thr Thr Ala Thr Pro Tin? His Cys Ala
200 20i 210
Tyr Asp Arg IIe Av1 Val Ala Gly Met Leu Luu Arg GGy Ala VaG
215 22i 225
Vil Poo Asp Ssu He Leu Pro Phe Asn Phu GGn Ala Ali Tyr Gly
230 235 240
Luu Seo Asp dn ieu Ala Gln Ala IIe Seo Asp His Tyr Pro VII
245 25i 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:66:
(i) WH,lRASykRYSTYKl SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2 60 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
184 951
165 (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:66:
Luu 1 Lys Ilu Ala Ala Phe Asn 5 110 Gln Thr 10 Phe G ly Glu Thr Lys 15
Mut Sur Asn Ala The Leu Val Ser Tyr Ilu Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Vll Gln Glu Val Arg Asp Sur His Leu
35 40 45
Thr Ali Val Gly Lys Leu Luu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyg Val VII Ser Cys Peo Luu Gly Arg Asn Ssr
15 70 75
Tyg Lys Glu Arg Tyg Leu PPu Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ssr
80 15 90
Ala Val Asp Ser Tye Tyr Tyr ASsp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
15 100 105
Asn Asp Thr Phu Asn Arg Glu Peo Ala Ilu VII Arg Phu Phu Sur
110 115 120
166
184 951
Arg Phe Thr Glu aal Aeg Gli Phe 125 Ala Ile VvI 130 Pro Lei His Alo 135
Alo Pro Gly Asp Ala VaA_ Ala Glu Ile App Ala Leu Tyr Asp Val
140 148 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp C^ly Leu Glu Asp Val Met Leu
185 160 168
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Ty-r Val Arg Pro Ser Gln
170 175 188
Trp Ser Ser IIe Arg Leu Trp Thr Ser Prr Thr Phe Gln Trp Lei
188 190 195
Ile Pro Asp Snr Alo Asp Thr Thr Ala Tli hi Pro Thr His Cys Alo
200 205 210
Tyr Asp Arg IIe Val Val Ala Gly Met Leu Lei Arg Gly Ala Vvl
215 220 228
Val Poo Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn ΡΡβ Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Seo Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Sne Asp His Tyr Pro Val
248 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
184 951
167 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:67:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKĘ: MninoJcwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:67:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Psn Ile GLn Thr Phe GLy Glu Thr Lys
1 5 10 H
Met Ser Asn Ala ThG Leu VaL Ser Tyr ILe Val GLn Ile Leu Ser
20 25 33
Arg Kyr Asp Ile Ala Leu Va1 Gln GLu VaL Arg Asp Ser His Leu
35 40 44
Thr Ala VaL Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp ALa Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val VaL Ser Met Pro Leu GLy Arg Asn Ser
65 70 Ί7
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe VaL Kyr Prg Pro Asp Gln VaL Ser
80 85 90
168
184 951
Ala Val Asp Ser Tye Tye Tye Asp Asp GUy 00 0 Cys Glu Peo Cys Gly H5
97
Asn Asp Thr Phe Asn Arg GUu Peo Ala Ile Val Arg Phe Phe See
110 17 5 110
Arg Phe Thr GUu aaU Arg Glu hhe Ala Ile we Peo Leu His Ala
127 30 0 115
Ala Pro Gly Asp AUa Val Ala Glu IUe Asp Ala Leu Tyr Asp aaU
110 17 5 150
Tye Leu Asp Val GUn Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Vću1 Mi t Leu
177 60 0 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Va1 Arg Pro Ser Gln
170 77 5 110
Trp Ser Ser IIe Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
187 10 0 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thi PAoi Thr HSi CLpi Ala
200 07 5 210
Tyr Asp Arg IUe Val Val AUa Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala aαU
217 220 227
ViI Pro Asp See Ala leu Pro Phe Asn Phu Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
184 951
169
luu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ili Seo Asp His Tyr Pro Val 22525
428 2250
Glu Val Met Leu lys
200
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:58:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: liniowa
(ii) (ci) TYP CZĄSTECZKH AminτEwas
OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 6S:
leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn IIlu Gln The Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Seo Asn Ala The Leu Val Ser Kyr Ile Val Gln He Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys leu Leu Asp Asn leu Asn Gln Asp Ala Peo
50 55 00
170
184 951
Asp Thr Tyr His Tyr 15 Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn 70 Sur 77
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
80 85 91
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
15 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Cys Ilu Val Arg Phe Phe Sur
110 111 120
Arg Phe Thr Glu VaG Arg Glu Phe Ala Ile VaG Pro Leu His Ala
125 131 135
Ala Pro GGy Asp Ali VaG Ala GGu IGe Asp Ali Leu Tyr Asp VII
110 141 150
Tyo Luu Asp Val GGn Glu Lys Trp Gly Luu Glu Asp Val Met Luu
155 161 115
Mut Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cy^ Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 171 180
Trp Ser Sur Ilu Arg Luu Trp Thr Sur Pro Thr Phe Gln Trp Luu
185 110 115
Ile Pro Asp Ser AGa Asp Thr Thr Ala Tho Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
184 951
171
Tyu Asp Arg He ral 215 Val Ala GSy Me t Leu Leu AhsgGly Ala Val
20 0 225
ral Puo Asp Ser Ala Leu Puo Pho Asn Phe Gln AA a Ala Tyr Gly
230 35 0 2^ł0
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gli Ala Ilo Ser Asp His Tyr Pro Val
455 50 0 225
Glu ral Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:69:
( i) CHARAKTERYSTYKA. SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liliowi
(ii) TYP CZĄSTECZn : AzisTEwas
(ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 69:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asi Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met SeuAsn Ala Thu Leu ral Ser Tyr Ilu ral Gli Ilr Leu Seu
172
184 951
Aog lye Asp Ile Ala Lei Val Gln Gli Val Arg Asp Sie His Leu 45
35 0 B
Tho Ala Vv1 Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Peo
50 5 B 60
Asp Tho Tyo His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Air g Asn Seo
05 s 70
75
Tyr Lys Gln Aog Tyr Lei Phi Val Tyr Aog Pro Asp Gln Vol Ser
80 s s 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Gln Pro Cys Gly
W 00 B 105
Asn Asp Tho Phe Asn Arg 91n Pro Glu Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 15 B 120
Aog Phe Thr Gln Val Arg Gln Phe Ala Ile Val Pro Leu His Alo
125 30 A 135
Ala Peo Gly Asp Alo Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 45 A 150
Tyr Leu Asp aau Gln Gln Lys Tep Gly Leu Gli Asp Val Mst Leu
155 100 105
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
184 951
173
170 11^ 188
Trp Sur Sur Ile Arg Leu Trp Thr Sur Phe Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 119
Ilu Pro Asp Ser Ali Asp Thr Thr Ala TTe Pro Tłer His Cys Ale
O0O 205 221
Tyr Asp Arg Ile Vil Val Ala Gly Mut Leu Leu Arg Gly Ala Wl
265 220 222
Val Pro Asp Ser Ali Leu Pro Płie Asn Phe Gln Ala Ala Trr GG.n
050 225 224
Luu Sur Asp Gln Luu Ala Gln Ala -Ilu Sur • Asp His Tyr Pro Val
040 250 225
Gln Vil Mut Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:70:
(i) CHARASTkRYSrIKA SEKWENCJI: CA) DŁUGOŚĆ: O50 aminokwisów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZU: AmisTEcZK (ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:70:
174
184 951
leu Lys 1 Ile Ala Ala Phi 5 Asn Ili Gln Khr Phe 10 Gly Gln Tho lys 15
Met Sio Asn Ala Khr liu Val Seo Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 55 30
Arg Tyr Asp Ilu Ala Leu Val Gln Glu Val Aog Asp Seo His leu
35 05 45
Thr Ala Val Gly lys Leu Leu Asp Asn leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Tho Tyr His Kyr Val Val Sio Glu Pro leu Gly Aog Asn Seo
65 05 75
Kyr Lys Glu Arg Tye Liu Phe Val Tye Arg Pro Asp Gln Val Seo
80 5 5 90
Ala Val Asp Ser Kyr Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
15 00 0 105
Asn Asp Khr Phe Asn Aeg Glu Peo Gly Ile Val Aog Phe Phe Ser
110 15 5 120
Arg Phe Tho Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
184 951
175
140 145 150
Tyr Luu Psp Val GLn 155 Glu Ly: Trp Gly Leu Glu Asp 106 Val Met Leu 165
Met GLy Psp Phe Psn Ala Gly Cys Ser Kyr Va1 Arg Pro Ser GLn
170 176 180
Trp Sur Ser IIe Prg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 10G 195
ILe Pro Asp Ser Pla Asp Thr Thr ALa Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 22.0
Kyr Asp Arg IIe VaL Val ALa Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Va1 Pro Asp Ser ALa Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Psp Gln Leu Ala Gln Ala IIe Ser Psp HHS Tyr Pro Val
245 250 2255
Glu VaL Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:71:
(i)CHPRPKTERYSTYKA SEKWENCJI:
176
184 951
CA) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (ii) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:71:
Luu Lys Ile Ala Alo Phs Asn Ils Gln Thr Phi Gly Gli Tho Lys
0 B H
Met See Asn Ala Thr Lei Val Ser Tyr IAi Val Ulg llb Lig Srr
5B 33
Aog Tyr Asp Ile Ala Lei Val Gln Gli Val Arg Asp See His Lei
0B 44
Tho Ala Vol Gly Lys Lei Lei Asp Asn Lei Asn Gln Asp Ala Pro
5B 60
Asp Thr Tye His Tyr Val Ser Glu Peo Lei Gly Aog Asn Ser
0B 77
Tyy Lys Gli Arg Tyr Lei Phe Vol lyr Aog Pro Asp Gln Val See 80 5S 90
Ala Val Asp Ser Tyr Asp Gly Cys Gli Pro Cys Gly
00A 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro His Ile Val Arg Phe Ser
184 951
177
110 155 120
Aug Phe Thu Glu ral Arg Glu Phe Ala 125 Ile 300 Val Pro Leu HSo Ala 135
Ala Puo Gly Asp Ala Va0 AA a Glu Ile Asp Ali Leu Tyu Asp Val
140 450 150
Tyu Leu Asp Val Gli Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp ral Met Leu
60 0 165
Met Gly Asp Phe Asn Al a GiLy Cys Ser Typ ral Aug Puo Ser Gln
170 750 1180
Tup Ser Seu Ile Aug Leu Trp Thr Ser Puo Thu Phe Gli Trp Leu
705 900 195
Ile Puo Asp Ser Ala Asp Thr Thu Ala Thu Puo Thr His Cyo Ala
200 250 210
Tyr Asp Aug Ile ral Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala vai
215 200 225
ral Puo Asp Seu Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gli Ali Ala Tyu Gly
230 235 240
Leu Sru Asp Gli Leu Ala Gln Ala Ile Seu Asp His Tyu Puo ral
245 250 255
178
184 951
Glu Val Mut Luu Lys
O50 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:72:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZn: CzĄstEczk
(xi) OhIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:72:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phe Asn II0 Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sur Asn Ala The Leu Val Ser Tyr Ilu Val Gln I3^e Luu Ser
20 25 30
Arg Tye Asp He Ala Leu Val Gln Glu Val Ahrg ASsp Ser His Leu
35 40 45
The Ala Vil Gly Lys Leu Leu ASsp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tye Val Val Ser Glu Peo Leu Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Ser
184 951
179
85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly 95 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Lys Ile Val Arg Phe Phe Ser
110 115 11(0
Arg hhe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Lmu His Ala
125 130 115
Ala Pro Gly Asp Ala Val AUe GUe IUe Asp Ala Leu Tye Asp Val
140 145 110
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lls Trp GUy Leu Glu Asp Val Mut Leu
155 160 H5
Met Gly Asp Phe Asn Ala G1[l Cys Ser Tyr Val Arg heo Sur Gln
170 175 110
Trp Ser See IIe Arg Leu Tt? The See Pro Tlne Phe GUn Trp Lee
185 190 119
IUe Pro Asp Ser Ala Asp Thr Tye Ala Thr Pro Thr His Cys Ala 200 205 210
Tyr Asp Arg Ile aaU Val Ala GUy Met leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
180
184 951
Vol Pro Asp Ser Alo Lii 230 Peo Phi Asn Phe 235 Gln Ala Ala Tyo Gly 240
Lsu Ser Asp Gln Lei Alla Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 250 2255
Glu VvI Met Lei Lys
200
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO: 73:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aninτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:73:
Leu Lys Ile Ala Ala Plss Asn Ils Gln Tho Ph.e C^ZLy Glu Thy Lys
1 5 10 15
Met See Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln IIe Luu Ser
20 25 30
Aog Tyo Asp Ile Alo Leu Val Gln Glu VvI Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
184 951
181
50 55 60
Asp Thr Tyr His Tyr aal Val Sur Glu Pro Luu GGy Arg Asn Sur
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Luu Phe VaA Tyr Arg Pro Asp Gln aal Ser
80 85 90
Ala VaA Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp GGy Cys GGu Pro Cys Gly
05 100 1025
Asn Asp Thr Phu Asn Arg GGu Pro Leu Ile VvA Arg Phu Phu Ser
110 115 110
Arg Phe Thr Glu VaG Arg Glu Phu AGa Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 115
Ala Pro Gly Asp AGi aaG AGa Glu IGe Asp Ala Leu Tyr Asp aal
140 1'45 150
Tyr Leu Asp VvG Gln Glu Lys Top GGy Luu GGu Asp aal Mut Luu
155 160 165
Mut Gly Asp Phu Asn Ali Gly Cys Sur Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Sur Sur Ilu Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
182
184 951
Ile Poo Asp Ser Ala 200 Asp Thr Thr Alo Tho 205 Peo The His Cys Alo 210
Tye Asp Aog II^us Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 20 A 225
Val Pro Asp Ser Alo Leu Prs Phe Asn Plse Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 S 2^0
Leu Seo Asp Gln Lei Ala GZ^n Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Vv1
245 50 A 225
Glu VvI Met Leu Lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:74:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZU : Aminτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 74:
Leu Lys Ile Ala Alo Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Gli Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
184 951
183
25 33
Arg Tyr Asp Ile AUa Leu 35 Val GUn Glu Vi^U Arg Asp 40 Sei HSi Luu 45
Thr Ala ViI Gly Lys Leu Lmu Asp Asn Leu AAn dn Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr Has Tye Val ViU Ser Glu Pro Lee Gly Arg Asn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Tyr Arg Peo Asp Gln Wel Ser
80 85 90
Ala VvI Asp Ser Tye Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Płac» Asn Arg GUe Pro Met Ile aaU Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe The Glu ViU TA?g GUe hhe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Vv1 lla GUu Ile Asp Ala Leu Tye Asp we
140 145 150
Tyr Lmu Asp ViI Gln Glu Lys Tep Gly Leu GUu Asp Val Mut Leu
155 160 165
184
184 951
Mut GLy Asp Płu Psn 050 Ala GLy Cys Ser Tyr 175 VaL Arg Pro Ser Gln 180
Trp SUG Ser IIe Prg Leu Trp ThG Ser Ppg Thr Phe Gln Trp Leu
165 190 195
ILe Pro Asp See Ala Asp Thr Thr ALa TKi Pro Thr His Cys ALa
200 2025 210
Tyr Asp Prg IIe VaL VaL Ala GLy Met Liu Leu Arg dy Ala GaL
215 2220 225
Va1 Pro Psp See PLa Leu Pro Phe Asn Phh GLn ALa ALa Tyr GLy
230 2 2325 240
Leu Ser Asp dn Leu ALa Gln ALa Ile See Asp His Tyr Pro Gal
245 2250 255
GLu Va1 Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:75:
(i) WHPRASTkRYSTYSP SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2 60 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKĘ: GCzisτkwas
184 951
185
(ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:75:
Luu Lys Ilu Ala Ala Ph0 Asn Ile Gln TPr Phe Gly Glu Thr Lys
1 S 10 H
Mut Sur Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ilu Val Gln Ile Luu Sur
20 25 30
Arg Tyr Asp IIe AMa Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Luu
35 40 44
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pito
50 55 60
Asp Thr Tye Hii Tyr Val Val Ser Glu hro Leu Gly Arg A^sn Ser
65 70 75
Tyr Lys Glu Tlrg Tyr Leu Phe Val Ty- Arg Pro Asp Gln Vil Ser
80 85 90
Ala Vil Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp TPr Phe Asn Arg Glu Pro Gln Ilu Val Arg Phe Phu Ser
115 120
Arg hhu TPr Glu Val Arg Glu hhu Ali Ilu Val hro Luu His Ala
125 130 135
186
184 951
Ala Peo Gly Asp Ala 140 Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp Val
45 i 150
Kyr luu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Leu Glu Asp Val Met leu
155 00 i 105
Met Gly Asp Phi Asn Ala Gly Cys Ser Tyr V^^l Arg Pro Ser Gln
170 75 i 180
Krp Sur Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp leu
185 10 i 195
Ile Pro Asp Ser- -Ala Asp Tho Tho Ala Tho Peo Thr His Cys Ala
200 05 r 210
Kyr Asp Arg Ile Var Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 20 i 225
Val Pro Asp Seo Ala Leu Pro Phe Asn Plee Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 r 240
leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 50 r 255
Glu Val Metr Leu lys
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:70:
200
184 951
187 (i) CHARAKTERYSTYKA. SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liliowi (ii) TYP CZĄSTECZn: AmiSTkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:76:
Leu Lys Ile Ala Ali Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thu Lys
1 5 10 15
Met Seu Asi CA a Thu Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Aug Tyu Asp Ile Ala Leu Val Gln du ril Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thu Ala ral Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thu Tyr His Tyr ral Vil Ser Glu Puo Leu Gly Arg oAsn Ser
65 70 75
Tyu Lys Glu Aug Tyu Luu Phi Val Tyr Aug Ppo Asp Gln ral Seu
80 85 90
Ali ral Asp Suu Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
105
188
184 951
Asn Asp lho Phe Asn 110 Arg Glu Pro Arg Ile 11B Vol Arg Plhe Phe See 120
Arg Phe Thr Glu Val Aog Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 13B 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp VvI
140 14S 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Tiry? Gly Leu Glu Asp Val Met Lei
155 10A 105
Met Gly Asp Plhe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 17B 100
Top Seo Ssr Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Tho Phe Gln Trp Leu
105 10A 105
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Tho Peo Thr His Cys Alo
200 20B 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Leu Lei Arg Gly Ala Val
215 22A 225
VvI Pro Asp Ser Alo Lii Peo Phs Asn Phe Gln Ala Ala lyr. . Gly
230 235 240
Lei See Asp Gln Lei Alo Gln Alo Ile Ser Asp His Tyo Poo Val
245 250 255
184 951
189
GGu Val Mut Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:77:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (Α) DŁUGOŚĆŻ: 2 60 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI 2Cninokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:77:
Luu Lys Ilu Ala AGa Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Ser Asn Ala ier Leu aal Ser Tyr Ile Gln I le Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu aal Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thr AGa Val Gly Lys Leu Luu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Ty? Val aaG Ser Glu Pro Leu GGy Arg Asn Ser
65 70 75
190
184 951
Tyr Lys Glu Aeg Tye Luu hPu aal 60 Tyr Arg 835 Peo Asp Gln Val Sur 99
Ala Vil Asp Sur Ty- Tyr Ty- Asp Asp Gly Cys Glu hro Cys Gly
95 2^(00 105
Asn Asp The Phu Asn Arg Glu hro Trp Ilu Vil Arg hhu Phu Sur
110 115 120
Arg Phu Thr Glu Val Arg Glu Phu Ali Ilu Vil hro Luu His Ali
125 130 135
Ala hro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp Ali Luu Tye Asp Val
140 145 150
Tye Luu Asp VII Gln Glu Lys Trp Gly Luu Glu Asp Val Mut Luu
155 160 165
Mut Gly Asp Phu Asn All Gly Cys Sur Tyr Val Arg Pro Sur Gln
170 175 180
Trp Sur Sur Ilu Arg Luu Trp Thr Sur Pro TPr hhu Gln Trp Luu
185 190 195
Ilu hro Asp Sur Ala Asp Thr Thr Ala The heo Thr His Cys Ali
200 205 015
Tyr Asp Arg Ilu Vil Val Ali Gly Mut Luu Luu Arg Gly Ala Vil
215 220 225
184 951
191
VaL Pro Asp Ser Al a Leu Pro Phe Asn Phe GLn pl i Pla Tyr
205 235
Leu Sur Psp GLn Leu Ala Gln Ala ILu Ser AYsp His Tyr Pro
245 250
Glu VaL Met Leu Lys
260
Gly
240
VaL
255 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:78:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Azisκkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:78
Luu 1 Lys ILe PLa Ala 5 Phe Psn IUe Gln Thr 10 Phe Gly Glu Thr
Met Ser Psn PLa hGe Uee VaL Ser Tyr ILe Val GLn ILe Leu
20 25
Prg Tyr Asp ILe ALa Leu Va1 Gln Glu VaL Prg Psp Ser His
40
Lys
H
Ser
Leu
192
184 951
Thr Ala aal Gly Lys 50 Lmu leu Asp Asn Leu 555 Asn GUn Asp Ala Pro 60
Asp The Tyr His Tye aαl Vv1 Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Sur
65 70 75
Tyr lys Glu Arg Tyr Lmu PIm Vv1 Tyr Arg Pro Asp GUn Val Ser
80 855 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Peo Cys Gly
95 100 105
Asn Asp The Phe Asn Aeg GUe Peo Tyr Ile Val Arg PIm Phe See
110 115 120
Arg Phe Thr Glu Val Aeg GUu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp AUa Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tyr Asp ViI
140 ^455 150
Tye Leu Asp Val Gln GUu Lys Tep Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Mut Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Aeg Leu Tep The Ser Pro Thr Phe GUn Trp Leu
185 190 195
184 951
193
Ile Puo Asp Ser Ala Asp 200 Thr Thr Ala Thr 05 0 Pro Thr His Cys Ala 210
Tyr Asp Aug Ile ril Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 20 0 225
ral Pro Asp Ser Ala Leu Paso Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 0 24(0
Leu Seu Asp Gln Leu Ala Gln Ali Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 50 0 255
Glu ral Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:79:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2 60 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZn: AaisTEwas (ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:79:
Luu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gli Thr Phe Gly Glu Thr Lys
10 15
194
184 951
Met Ser Asn Ala Tho Liu VaL 20 See Tye Ile 25 Val Gln Ile leu Seo 30
Arg Kyr Asp Ile Ala liu Val Gln Glu Val Aog Asp Sio Asn leu
35 40 45
Khe Ala Val Gly Lys liu Liu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His Kye Val Val Seo Glu Pro leu Gly Arg Asn Seo
05 70 75
Tye Lys Glu Arg Kyr Leu Phi Val Kyr Arg Pro Asp Gln Val Seo
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp The Phi Asn Arg Glu Pro Ala Ile Val Arg Phi Phe See
110 115 120
Aog Phe Tho Glu Val Arg Glu Phe Ala Ili Val Pro leu His Ala
125 2L3O 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala leu Tyr Asp Val
140 145 150
Kye Leu Asp Val Gln Glu lys Krp Gly leu Glu Asp Val Met leu
155 160 165
184 951
195
Met GLy Asp Phe Asn 170 Ala Gly Cys Ser Tyr VaL 17G Arg Pro Ser Gln 180
Trp SUG Sur IIe Arg Leu ^jrp Thr Ssr Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 10G 195
ILe Pro Psp Ser Pla Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr Hie Cys Ala
055 206 2210
Kyr Psp Prg IIe VaL V^^l Pla GLy Met Leu Leu AGrg Gly Ala Val
215 22G 225
VaL Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln ALLa IIu: Ser Psp His Tyr Pro Val
245 250 22525
GLu VaL Met Luu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:80:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (P) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aminτkwas
196
184 951
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:80:
Luu Lys Ilu Ala Ala Phu Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 0i 15
Mut Ser Asn Ala Thr Luu Val Sur Tyr Ilu Val Gln Ile Leu Sur
20 2i 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Luu ViG Gln Glu aal Arg Asp Ser His Luu
35 0i 45
Thr Ala Val Gly Lys Luu Leu Asp Asn Luu Asn Gln Thr Ala Pro
50 5i 60
Asp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Sur
65 0i 75
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Vil Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sur
80 5 i 90
Ali Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys GGu Pro Cys Gly
05 00i 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile Vei Arg Phe Phe Ser
110 15i 120
Arg Phu Thr Glu aal Arg GGu Phe Ali Ilu aal Pro Leu His Ala
125
130
135
184 951
197
Ala Pro Gly Asp Alo 140 Val Ala Glu Il.e Asp Ala 45Β Leu Tys Asp Val 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Lei Glu Asp Val Me t Leu
300 00A 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gl y Cys Sse Tye Vol Arg Pr. S (OB Gln
170 75B 180
Top Sur Sue Ile Aog Leu Trp Thr Sse Peo The Phe Gln Trp Leu
185 00A 195
Ile Peo Asp Ser Alo Asp Thr Thr Alo Thr Pro Thr His Cys Ala
200 25A 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Mst Leu Lei AOrg Gly Al a Val
215 22B 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Al a Ala Tyr Gly
230 25A 240
Leu Ser Asp Gln Lei Ala Gln Ala Ils Ser Asp His Tyr Pro Val
245 20Β 255
Glu Val Met Leu Lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:81:
198
184 951 (i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2 60 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Aainokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:81:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Seu Asi Ala Thu Leu Val Ser Tyr Ile Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Aug Tyu Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu ral Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Thu Ala ral Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pito
50 55 60
Asp Thr Tyu Asn Typ The Val Ser Glu Puo Leu GGZLy Arg Asn Ser
65 70 75
Tyu Lys Glu Aug Typ Leu Pho Val Tyr Aug Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala ral Asp Sru Tyu Tyu Tyu Asp Asp Gly Cys Glu Puo Cys Gly
95 100 105
184 951
199
Asn Asp Thr Phe Asn 110 Arg GUu Pro AUa IUe li5 Val Arg Phe hhe Ser 120
Arg Phe Thr GUu Val Arg GUu Phe Ala IIe Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val AUa Glu Ile Αίφ Ala Leu TLr Asp Val
140 1^15 150
Tyr leu Asp Val GUn Glu Lys Trp GUy Leu GUu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met GUr Asp Phe Asi Ala gul Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser GUn
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Ppo Thr Phe Gln Trp Leu
185 1^0 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala ΤΤτ Peo Thr His Cys Ala
255 205 210
Tyr Asp Arg Ile VaU Val Ala Gly Met Llm leu Arg Gly Ala VaU
215 220 225
aαl Peo Asp Sur Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
200
184 951
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:82:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI AmisΊkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:82:
Luu Lys Ile Ala Ala Phe Asn 11i Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Ser Asn Ala KIo Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln 11i Leu Ser
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu VaG Gln Glu Val Arg Asp Sei Hii Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Luu Asp Asn Luu Asn Gln Asp Al a Paso
50 55 60
Asp Thr Tyr His Asn VII Thr Ser Glu Pro Luu Gly Arg Asn Sur
70 75
184 951
201
Ty- Lys Glu Arg Ty- 80 Luu hPu
Ala Val Asp Ser Ty- 95 Tyr Tyr
Asn Asp TPe Phe Asn 110 Arg Glu
Arg hhu Thr Glu Val 125 Arg Glu
Ala Pro Gly Asp Ala 140 Vv1 Ala
Tyr Luu Asp Val Gln 600 GG.U Lys
Mut Gly Asp Phe Asn 170 Ala Gly
Trp Sue Sur Ile Arg 185 Leu Tep
Ilu Peo Asp Sur Ala 000 Asp TPr
Val Tye Arg heo Asp Gln Val Sue
90
Asp Asp GGe Cys Glu Pro Cys Gly
100 115
Pro Ali IIe Val Arg hhe Phe Ser
115 11(3
Phe Ala IIe Val Pro Luu His Ala
130 115
Glu Ile Aip Ala Leu Tye Asp Vv1
145 HO
Trp Gly Leu Glu Asp Val Mut Leu
160 U5
Cys Ser Tyr Val Arg Pro Sur dn
17^ 110
Thr Ser Ph- Thr Phe Gln Trp Leu
190 119
TPr Ali The hro Thr His Cys Ala
205 210
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
202
184 951
215 20 0 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phr Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 r 24(3
luu Ser Asp Gln leu ALla Gln Ala lir Ser Asp His Tyr Pro Val
428 50 i 2255
Glu Val Met Leu Lys
200
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:83:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) KYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Amisykwas (ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:83:
leu Lys Ile Ala Ala Phr Asn lir Gln The Phr Gly Glu Khr Lys
1 5 01 15
Met . Ser Asn Ala Khe Leu Vanl Ser Tyr Ile Val .Gln Ile Leu Ser
20 2P 30
Arg Kyr Asp Ili Ala leu Val Gln Glu Val Aog Asp Seo His Leu
40 45
184 951
203
ThG PLa VaL Gly Lys 50 Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp ALa 55 Pro 60
Asp Thr Tyr His TyG Asn Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Psn Sur
65 70 77
Tyr Lys Glu Arg TyG Leu Phe Val Kyr Arg Pro Asp Gln VaL Ser
80 85 99
Pla VaL Asp Ser Kyr Tgg Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys GLy
95 101 105
Asn Asp Thr Phe Psn AGrg Glu Pro PU_i Ile VaL Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phe Thr Glu VaL AGrg Glu Phe ALa Ile Va1 Pro Leu His Ala
125 131 135
Pla Pro GLy Asp Ala VaG ALLa GLu ILe Asp ALa Leu Tyr Psp Va1
140 14^ 150
Tyr Leu Psp Val Gln Glu Lys Trp GLy Leu Glu Asp Val Met Leu
155 161 165
Met GLy Asp Phe Asn Ala Gly Cys Sur Tyr VaL Arg Pro Ser GLn
170 17^ 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
204
184 951
185 190 195
Ile Pro Asp Sne Alo Asp Thr Tho Alia TTh Sro Thr His Cys Ala
200 22)5 210
Tyy Asp Aog IIe Val Vol Alo Gl y Met Leu Leu Aeg Gly Ala Val
215 220 225
VvI Peo Asp Ssr Ala Leu Pro Phe Asn PPh Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Luu Seo Asp Gln Lei Ala Gln Ala Ile 55r Asp His Tyr Pro Val
245 250 2255
Glu Val Met Leu Lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:84:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Amin-iEwaK (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:S4:
Luu Lys Ile Alo Alo Phi Asn Ile Gln Tho Phi Gly Gli Thr Lys
10 15
184 951
205
Mut 5cr Asn Ala Khr Leu 20 Val Ser Tyr Ilu 25 Val GGn Ile Leu 5cr 33
Arg Kyr Asp Ile AGa Leu Val Gln Glu Val Arg Asp 5c:r His Luu
35 40 44
Thr Ala Val GGy Lys Leu Leu Asp Asn Luu Asn GGn Asp Hi Pro
50 55 60
Asp Khr Kyr His Ti? Vai Asn 5cr Khr Pro Luu GGy Arg Asn 5cr
65 70 Ίβ
Tyr Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Kyr Arg Pro Asp Gln V^G 5cr
80 85 90
Ala VII Asp 5cr Kyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
05 100 105
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile VII Arg Phe Phu 5co
110 115 120
Arg Phu Thr Glu VaG Arg Glu Phe Ha Ile Vil Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu l^ZLe Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp ^ZLy Leu Glu Asp Val Met Leu
206
184 951
155 105 165
Mit Gly Asp Phe Asn Ala 170 Gly Cys Ssr Typ 170 ral Arg Pro 5cr Gln 180
Tup Ser 5ορ Ile Aug Leu Trp Thr Ssr Puo Thu Pho Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Puo Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thu Pro Thr SI s Sos Ala
200 2205 210
Typ Asp Aug IIe ral VaI Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 :2:20 225
ril Puo Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Typ Gly
230 :330 240
Leu Seu Asp Gln Leu Al a Gln Ala IIe Ser Asp Hio Tyr Pro Val
245 250 255
Glu ral Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:85:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi
184 951
207 (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:85:
Luu Lys 1 Ilu Ala Ala 5 Phe Asn Ile Gln Thr 0 0 Phe Gly Glu Thr Lls 15
Mut Sur Asn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Val Gln He Luu Ssu
20 50 30
Arg Tyr Asp Ile Ali Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 0 0 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Luu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Ppo
50 5 0 60
Asp Thr Ty- His Ty- Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
65 0 0 75
Tye Lys Glu Arg Tye Luu Phu Val Tyr log Ppo Asp Gln Vil Ser
80 5 0 90
Ala Val Asp Asn Ty- Thr Ty- Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys GĄ
95 00 0 105
Asn Asp Thr Phe Asn .Aog Glu Pro AA a Ile Va0 Ahig Phe Phe Ser
110 15 0 120
Arg Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Ala Ile Val Pro Leu His Ala
208
184 951
125 1230 135
Ala Pro Gly Asp Ala Vanl Ala Glu Ile Aaa Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Kyr leu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Llu Glu Asp Val Me r Luu
155 160 105
Met Gly Asp Piie Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Aog Pro Sur Gln
170 1-7^ 180
Kep Ser Ser IIe Arg Leu Trp Thr Ser Pro Khr Phe Gln Tr p Leu
185 190 195
Ile Peo Asp Ser Ala AASP Thr Thr Ala TKi? Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Kyr Asp Aog IIe Val Val Ala Gly Met Liu Leu Arg Gly Ala Pal
215 2220 225
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Aas PPe Gln Ala Ala Tyr GTy
230 2235 240
leu Ser Asp Gln Liu Ala Gln Ala Ile See Asp His Kyr Pro Pal
245 2250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
184 951
209 (2) INFOWACCJA O SEQ ID NO:86:
(i^CHARAKTERYSTYKA BnkKίEkCCIJ (A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI : SEQ ID NO:80:
Lsu Lys Ile Ala Ala Phs Asn Ile Gln Thr Phe Gly -Glu The Lys
1 5 10 15
Met Seo Asn Ala Tho Leu Val Ser Tyr Ilu Val Gln Ile Luu Snr
20 25 30
Aeg Tyr Asp IIe Ala Leu !^^1 Gln GUL u Val Arg Asp See Glu Leu
35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Thr Tyr His lyr Val Val Ser Glu Poo Lsu Gly Arg Asn Snr
05 70 75
Tyy Lys Glu Arg Tyr Leu Phe Val Tyr Aog Pro Asp Gln Val Snr
80 85 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
210
184 951
100 105
Asn Asp Thr PPn Asn 110 Arg Glu Pro Ala IIe Val Arg 115 PMi PMi Ser 120
Arg Phe Thr Gln Val Arg Glu Phe Ala IIn Val Pro Leu His Ala
125 130 135
Ala Pro Gly Alp Ala Val Ala Glu Ile Aap Ala Leu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Trp gul Llm Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser GUn
170 175 180
Trp Ser Ser IIe Arg Leu Trp Thr Ser Ppo Tlnc Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Peo isp Ssr Ala Asp Thr Thr Ala TTi Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyr Asp Arg IUe Vv1 Val Ala GUy Met leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val heo Asp Ser Ala Lmu Pro Phe Asn Phe Gln Ala lla Tyr Gly
230 235 240
184 951
211
Luu Sur Asp Gln Leu ALa Gln Ala ILe Ser Psp His Tyr Pro Va1
245 250 255
GLu VaL Met Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:87:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI: (Α) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZKI: Mninτkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI:: SEQ ID NO:87:
Leu 1 Lys ILe Ala Ala Phe Asn IIu: Gln ThG Phe G^ly Glu Thr Lys 5 10 15
Met Ser Psn Ala Thr Leu VaG Ssr Kyr ILe Val Gln IUe Leu Ser 20 25 30
Prg Tyr Asp Ile ALa Leu VaG Gln Glu Va1 Arg Asp Ser Hie Leu 35 40 45
Thr PLa Va1 Gly Lys Leu Leu .Ssp Psn Leu Asn Gln ASsp Ala Pro 50 55 60
Asp Thr Tyr His Glu Val Val Ser Glu Pro Leu Gly Arg Asn Ser
212
184 951
70 75
Typ Lys Glu Aug Typ 60 Leu Phe ril Tyr Aug 95 Puo Asp Gli ril Ser 90
Ala ril Asp Seu Tyu Tyr Tyu Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 1(30 105
Asi Asp Thr Phe Asn Arg Glu Pro Ala Ile ral Arg Phe Phi Ser
110 115 120
Aug Phe Thu Glu ral Aug Glu Phi Ala Ili ral Puo Leu His Ali
125 130 H5
Ala Puo Gly Asp Ala ral Ala Glu Ile Asp Ali Leu Typ Asp ral
140 145 150
Tyr Leu Asp ral Gli Glu Lys Tup Gly Leu Glu Asp ril Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ali Gly Cys Seu Tyu ril Arg Puo Siu Gln
170 175 180
Tup Se· Seu Ile Aug Leu Tup Thu Seu Puo Thr Phi Gli Tup Leu
185 190 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thu Pro Thu His Cys Ala
200 205 210
184 951
213
Tyr Asp Aog Ile Val 230 VaU Alo Gly Mst Lei Lii Arg Gly Ala Val
220 225
Val Poo Asp Ser Alo Leu Poo Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 35 B 400
Leu Ser Asp Gln Lei Ala Gln Ala Ile Ser Asp His Tyr Pro Val
245 50 A 555
Glu Val Met Lru Lys
200 (2) 0NFOΪMPCCσPB O SEQ ID NO:8: :
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas (ii) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:88:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ils Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lps
1 5 0 A 55
Met Sro Asn Ala The Leu aal Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 5 S 00
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser Ala Leu
214
184 951
4Ο 45
Thr Ala Val Gly Lys 50 Luu Luu Arg Asn Luu Asn Gln 55 Asp Ali Peo 66
Asp TPr Tyr His Ala Val Vil Sur Arg Peo Luu Gly Arg Asn Sur
65 70 77
Tyr Lys Glu Arg Ty- Luu PPh VII Tyr Arg Peo Asp Gln Vv1 Sur
80 85 90
Ala Vil Asp Sue Ty- Tyr Ty- Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Thr Phu Asn Arg Glu Pro Ala Iiu~Val Arg Phu hhu Sur
110 2L3L5 120
Arg Phu TPr Glu VII Arg Glu Phu Ala Ilu Vil Peo Luu His Ala
125 130 135
Ala Peo Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp Ali Luu Tyr Asp Val
140 145 150
Tyr Luu Asp Val Gln Glu Lys Trp Gly Luu Glu Asp Val Mut Luu
050 160 165
Mut Gly Asp Phh Asn Ali Gly Cys Sur Tye VII Arg Pro Sur Gln
170 175 180
184 951
215
Trp Sur Sur Ilu Arg 185 Leu Kop Ker Sur Pro 100 Khr Phe Gln Trp Luu 105
Ilu Pro Asp Ser Ali Asp Thr Tiar Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Kyr Asp Arg IIe aaG Val Ali Gly Met Leu Luu Arg Gly Ala Val
203 220 2225
Val Pro Asp Ser Ali Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Leu Sur Asp Gln Luu Ala Gln Ala IIe Ser Asp HiLS Tyr Pro Val
245 250 2555
GGu VII Mut Luu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:80:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: esniowi (ii) TYP CZĄSTECZKI Amisτkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:80:
Leu Lys Ile Ala Ala Phe Asn Ile Gln Thr Phe Gly Glu Thr Lys
216
184 951
1 5 1 5 15
Met Sro Asn Ala Thr Lii Val Ser Tyo Ile Vol Gln Ils Leu Ser
20 5B 30
Aog Tyo Asp Ile Ala Lii Val Gln Glu Val Aeg Asp Sio His Lei
35 0 A 45
The Ala Arg Gly Lys Lei Leu Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Pro
50 5S 60
Asp Tho lye His Tyr Val Val Sie Glu Peo Lsu Gly Arg Asn Seo
05 0 A 75
Tye Lys Gli Aog Tyr Lei Phi Vv1 Tyo Arg Pro Asp Gln Val See
80 5 B 90
Ala Val Asp Ser Tyr lye Tye Asp Asp Gly Cys Gli Peo Cys Gly
05 00 B 105
Asn Asp Tho Phe Asn Arg Gli Poo Ala Ile Val Aog hL s hL B Ser
110 15 B 120
Arg Phi The Glu Val Aeg Gli Phe Ala Ile Val Pro Lei His Ala
125 30 A 1235
Ala Peo Gly Asp Ala Vol Ala Glu Ile Asp Ala Leu Tye Asp Val
140 44 5 1250
184 951
217
Tyr Leu Asp VaL GLn Glu Lys 155 Trp Gly Leu 160 Glu Asp Va1 Met Luu 165
Met Gly Asp Phe Psn Ala GLy Cys Ser Kyr Va1 Arg Pro Sur dn
170 75 G 118
Trp Ser Ser Ile Prg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Liu
185 90 6 119
ILe Pro Psp Ser PLi Asp Khr Thr ALa Khr Pro Thr His Cys Ale
200 00G 220
Tyr Asp Arg Ile VaL Val Pla Gly Met leu Leu Arg Gly ALa Wa
215 206 222
VaL Pro Asp Ser PLa Leu Pro Phe Asn Phe GLn Ala ALa Tyr dn
230 35 6 224
Leu Ser Asp Gln -Leu Pla GLn Pla Ile Ser Asp His Tyr Pro VaL
245 r 50G 2^^
Glu Va1 Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:90:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(P) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas
218
184 951 (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) KYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:90:
leu lys Ile Ala Ala Phi Asn Ile Gln Tho Phe Gly Glu Tho lys
1 5 10 15
Met Ser Asn Ala Khr Leu Val Seo Tyr Ile Val Gln Ile leu See
20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His leu
35 40 45
Tho Ala Val Gly Lys leu Asn Asp Asn Leu Asn Gln Asp Ala Peo
50 55 60
Asp Khr Kye His Tye Val Val Seo Glu Pro leu Gly Arg Asn Seo
05 70 75
Tye Lys Glu Aog Tyr Leu Phi Val Tyr Aog Peo Asp Gln Val Seo
80 835 90
Ala Val Asp Ser Tye Tyr Tye Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
95 100 105
Asn Asp Khr Phe Asn Aog Glu Peo Ala Ile Val Aog Phi Phe Ser
110 115 120
184 951
219
Aug Phe Thr Glu ril 125 Arg Glu Phe Ala Ile 130 Val Piso Leu His Ala 135
Ala Puo Gly Asp Ala rieo Ala Glu He Asp Ala Leu Tyr Asp Val
140 115 150
Tyr Leu Asp Val Gli Glu Lyo Trp GGl^y Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tts Val Arg Pro Ser Gli
170 115) 180
Tup Ser Seu IiLe Aug Leu Trp Thr Ser Psu Thr Phi Gln Trp Leu
185 1^(0 195
Ile Pro Asp Ser Ala As p Thr Thr AA a nr Pro Thu His Cys Ala
200 205 210
Typ Asp Arg Ile ral Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala ral
425 220 225
ral Pro Asp Ser Ala Leu Pre Phe Asn PPh Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
Lru Seu Asp Gli Leu Ala Gln Ala Ilr Ser Asp His Tyr Pro ril
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
260
220
184 951 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:91:
(i) CHARAKTERYSTYKI SEKWENCJI:
(i) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGII: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKIi AminTECas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID no: 91:
Leu Lys Ilu Ala Ala Phe isn Ile Gln Thr hMi Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Ser isn Ala Thr Leu Val Ser Tyr Ile Vn1 GUn IUe Leu Sur
20 25 33
Arg Tyr isp Ile AU a Leu Val GUn Glu Val Agg Asp Ser His Lue
35 40 44
The Ala Val GUy Lys Leu Arg Asp Asn leu Am Gln Asp Ala Pro
50 55 60
isp Thr Tyr His Tyr Val Val Ser Glu Pro Meu Gly irg Asn See
65 70 77
Tye lys GUu irg Tyr Leu Phe VaU Tyr irg Ar i Asp Gln Val Ser
80 85 99
184 951
221
Ala Val Asp Ser Tye Tyr Tyr Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly 05 100 105
Asn Asp Tho Phe Asn Aog Glu Pro Alo IIe aol Arg Phe Phe Ser
115 120
Aog Phe Thr Glu Val Arg Glu Phe Alo IIa Vol Pro Leu His Ala
320 130 12325
Ala Poo Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Aap Alo Leu Tye? Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp Val Gln Glu Lys Tip Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Plhe Asn Ala Gly Cys Sio Tys Val Arg Pro Ser Gln
170 1-75 180
Trp See Seo Ile Arg Leu T:op Thr Sse Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 190 195
Ile Peo Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala TTh Poo Thr His Cys Ala
200 205 210
Tyy Asp Aog Ile VvI Val Alo Gly Mst Leu Lsu Arg Gly Ala Val
215 420 225
Val Pro Asp Ser Alo Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 240
222
184 951
Luu Ser Asp Gln Leu AZLa Gln Ala Ile Ser TAp His Tyi Pro Val
245 250 255
Glu Val Mut Leu Lys
260
(2) INFORMACJA O SEQ ID NO:02:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZKI Amisκkwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:02:
Luu 1 Lys Ilu Ala Ala Phe Asn ZLLe Gln Khr PPe Gly Glu Thr Lys 5 10 15
Met Sur Asn Ala Ter Leu aaG Ser Tyr Ile Val Gln IIe Leu Ser 20 25 30
Arg Tyr Asp Ile Ali Leu aal Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu 35 40 45
Thr Ala Val Gly Lys Leu Luu Asp Asn Luu Cys Gln Asp Ali Pro 50 55 60
184 951
223
Psp ThG Kyr His Tyr Val 65 Val SUG GLu Pro 70 Leu GLy Arg Asn Ser 77
Tyr Lys Glu Arg Kyr Leu PPi VaL Kyr Arg Pro Asp GLn Val Ser
60 65 99
PLa VaL Asp Ser Tyr Tyr Tyr Asp Asp GLy Cys GLu Pro Cys GLy
95 100 150
Psn Asp Thr Phe Asn Arg GGu Pro ALa ILu VaL Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Prg Phe Thr Glu VaL TPcg dn Phe Ala ILe Va1 Pro Leu His Ala
125 130 135
ALa Pro Gly Asp Ala Val Ala Glu Ilu Asp PLi Leu Kyr Asp VaL
140 145 150
Tyr Leu Psp Val GLn Glu Lis Trp dy Leu Glu Asp Va1 Met Leu
155 160 165
Met Gly Asp Phe Psn Ala dy Cys Sur Kyr VaL Arg Pro Sur Gln
170 175 180
Trp Ser Ser Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Khr Phe GLn Trp leu
165 190 195
Ile Pro Psp Ser ALa Asp Khr KhG Pla KhG Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
224
184 951
Tyr Asp Arg Ilu Vil Val Ali Gly Mut 210 Luu Luu 220 ’ Arg Gly Ala Val 225
Val Pro Asp Ssu Ala Luu Pro Phe Asn Phu Gln Ala Ala Tyr Gly
230 230 240
Luu Sue Asp dn Luu AA i Gln Ala IIe Sur Asp Hi0 Tg0 Pro Val
245 200 255
Glu Vv1 Mut Luu Lys
260
(2) INFORMACJA < O SEQ ID NO:93:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwisów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi
(ii) TYP CZĄSTECZKA Amisrkcas
(ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 93:
Luu Lys Ilu Ala Ala hhu Asn Ilu Gln Thr Phu Gir Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Sue Asn Ala Thr Luu Val Sur Tyr Ilu Vil Gln Ilu Luu Sur
20 25 30
184 951
225
Aog Tyo Asp Ile Ala Lei Val Gln Gli Val Aog Asp Ser His Leu 45
35 0B
Tho Ala Val Gly Lys Lei Lei Asp Asn Lei Phe Gln Asp Ala Pro
50 5A 60
Asp Tho Tye His Tyr Val Vv1 See Glu Poro Leu Gly Aog Asn Snu
05 7B 75
Tyo Lys Gli Aog Tyr Leu Phe Val Tyr Aog Pro Asp Gln VvI Seo
80 5A 90
Ala Val Asp Ser Tyr Tye lyo Asp Asp Gly Cys Glu Poo Cys Gly
05 10B IW
Asn Asp Thr Phe Asn Arg Glu Peo Ala Ils Val Aog Phe Phe Sne
110 15A HO
Aog Phe Thr Gli Val Aog Gli Phe Ala Ils Val Peo Lei His APa
125 10B
Ala Pro Gly Asp Ala Val Ala Gli Ile Asp Ala Leu Tyr Asp VvI
140 15S 115
Tyo Leu Asp VvI Gln Gli Lys Trp Gly Leu Gli Asp Val Met Luu
155 100 105
Met Gly Asp Phe Asn Alo Gly Cys Sse Tye Val Arg Pro Seo Gln
170 175 180
226
184 951
Trp Ser Seu Ile Aug 165 Leu Trp Thr Ser Puo 190 Thu Pho Gln Trp Leu 195
Ile Pro Asp See orli Asp nr nr Ala n· Puo Tlur His Cys Ala
200 200 220
Tyr Asp Arg He ral Val Ali Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
ral Pro Asp Ssr Ali Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr GG^jS
230 230 24 (0
Leu Siu Asp dn Lru Ala Gln Ala Ile Seu Asp HSo Tyo Pro Val
245 :250 255
Glu ral Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO :94:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2 60 iminokwisów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liliowa (ii) ΓΥΡ CZĄSTECZn: CaiisTkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:94:
184 951
227
Leu 1 Lys Ile Ala Ali 5 Phe Asn 11i Gln Kho 10 Phe GGy GGu Thr Lys 11
Mut Sur Asn Ala Tho Leu aaG Ser Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 33
Arg Kyr Asp Ile Ala Leu Val Gln Glu Val Ar g Asp Sur His Luu
35 40 44
Thr Ala aal Giy Lys Leu Luu Asp Asn Luu Lys GGn Asp Ala Pro
50 55 66
Asp Tho Kyr His Tyo Val Val Ser Glu Pro Luu GGy Arg Asn Sur
65 70 77
Tyr Lys Glu Arg Kyr Leu Phe Val Tyr Arg Pro Asp Gln Val Sur
80 85 90
Ali Val Asp Ser Tio Tyr Tyr Asp Asp Gly Cis Glu Pro Cys Gly
05 100 105
Asn Asp Khr Phe Asn Arg GGu Pro A^ZLa Ile VII Arg Phe Phe Ser
110 115 120
Arg Phu Khr Glu Vil Arg Glu Phe Ali Ile Val Pro Luu His Ali
125 130 135
Ala Pro Gly Asp Ala VII Ali Glu Ill Asp Ala Leu Tyr Asp aal
140 145 150
228
114 051
Tyr Leu Aaa Pal Gln Glu Lys 155 Trp Gly Leu Glu Asp 00 i λ^^Ι Met Leu 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Vl1 Arg Pro Ser Gln
170 15 r 1^0
Top Ser Ser Ile Aog Leu Krp Thr Ser Pro Thr Phe Gln Trp Leu
185 90 i 195
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Tho Thr ALla Thr Pro Thr His Cys Ala
200 05 r 22-0
Tyr Asp Arg Ile Val Val Ala Gly Met Leu Leu AOrg Gly Ala Val
215 20 i 225
Val Pro Asp Ser AAa Leu Pro Phr Asn Pin (dn Ala Ala Tyr Gly
420 35 r 240
Leu Ser Asp Gln liu Ala Gln Ala IIP Ser App His Tyr Pro Val
245 50i 255
Glu VaL Met Leu lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:95:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 200 aminokwasów
184 951
229 (B) TYP5: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowi (ii) TYP CZĄSTECZKI: Aminokwas
(ci) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:95:
Luu Lys Ilu Ala Ali Phe Asn IIl? Gln The Phe Gl y Glu Thr Lys
1 5 10 11
Mut Sur Asn Ala The Leu Vli Ser Tyr Ilu Val Gin Ile Leu Sue
20 25 33
Arg Tyr Asp Ilu Ali Leu Val GG.n Giu Val Arg Asp Ser His Luu
35 40 44
The Ala Val Gir Lys Leu Luu Asp Asn Lhu Arg Gln Asp Ala Poo
50 55 60
Asp The Tyr His Tye Val Vai Seu Glu Pro Leu Gly Arg Asn Sur
65 70 77
Tyr Lys Glu Arg S-0 hm Phu Val Ty- Arg Pro Asp Gln Val See
80 85 90
Ala Val Asp Sur T-0 Tg0 Ty- Aip Asp Gly Cys Giu Pro Cys Gir
95 100 105
Asn Asp Thr PPu Asn Aeg Glu Pro Ali Ilu Val Arg Phu Phu Sur
110 115 120
230
184 951
log Phe Thr Glu Val 125 Arg Glu Phe Ala Ile 30 1 V^iul Pro Leu His Ala 135
Ala Pro Gly Asp lla Vv1 lla Glu Ile isp Ala Luu Tyr lsp aaU
140 45 1 150
Tyr leu isp Val GUn Glu Lys Trp Gly Leu GUu isp Vv1 Met leu
155 60 1 165
Met Gly isp Phe isn ila Gly Cys Ser Tyr Val irg heo Ser Gln
170 75 1 180
Trp Ser Sur Ile Arg Leu Trp Thr Ser Pro Thr Phe GUn Tep Leu
185 K 1 195
Ile Pro isp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys ila
200 05 1 210
Tye isp irg Ile VvU aaU ila gul Met Leu Leu Arg Gly Ala VaU
215 20 1 225
Val Pro Asp Ser ila Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala AU i Tyr Gly
230 35 1 240
Leu Ser Asp Gin -Leu AUa GUn Ala Ile Ser isp His Tyr Pro Val
245 250 255
Glu Val Met Leu Lys
184 951
231
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:00:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(P) DŁUGOŚĆ: 2 00 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZTY Aminτkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:00:
Leu Lys Ile Ala Alo Plhe Asn IIe Gln Thr Phe C^ZLy Glu Thr Lys
1 5 10 15
Met Seo Asn Ala Thr Leu Val Ssr Tyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Aog Tyr Asp 11 e Alo Leu Val Gln Glu Val Arg Asp Ser His Leu
35 40 45
Tho Ala Val Gly Lys Leu Lei Asp Asn Lii Trp Gln Asp Ala Pro
50 55 60
Asp Tho Tyr His irr Val Vol Ssr Gli Pro Leu G A.y Pog Asn Ser
05 70 75
Tyo Lys Glu Arg lyr Lei Phi Val Tye Arg Poo Asp Gln Val Ser
85 90
232
184 951
Ala ral Asp Seu Typ Typ Typ Asp Asp Gly Cys Glu Pro Cys Gly
000 105
Asi Asp Thu Phe Asi Arg Glu Pro Ala Ile ral Cug Phe Phe Ser 110 150 120
Aug Phe Thu Glu ril Arg Glu Phe Ala Ile Vv1 Puo Leu His Ala
125 300 135
Ala Puo Gly Asp Ala Val Ala Glu Ile Asp Ala Leu Typ Asp Val
140 45 0 150
Tyu Leu Asp Val Gln Glu Lys Tup Gly Leu Glu Asp Val Met Leu
155 600 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr V^1 Arg Pro Ser Gln 170 750 180
Tup Seu Seu Ile Aug Leu Trp Thr Seu Pro Thr Phe Gln Trp Luu 185 900 195
Ile Puo Asp Ser Ala ASsp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 050 210
Tyu Asp Arg He Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly AA a Val 215 20 0 242
Val Pro Asp Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
184 951
233
230 235 240
Leu Ser Asp Gln Leu ALa GLn PLi ILe Ser Psp His Kyr Pro VaL
245 250 22525
Glu VaL Met Leu Lys
260 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:97:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 260 aminokwasów (B) TYP: Aminokwas (D) KOPOLOGIP: Liniowa (ii) TYP CZĄSTECZKA Wminκkwas (xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO:97:
Leu Lys ILe Ala Pla Phe Psn IIe GLn Thr Phe Gly Glu Thr Lys
1 5 10 15
Mut Ser Asn ALa Thr Leu Va1 Ser Kyr Ile Val Gln Ile Leu Ser
20 25 30
Arg Kyr Asp Ue Pla Leu VaL GG.n GLu Va1 AGg Asp Ser Hi s Leu
35 40 45
Thr ALa VaL Gly Lys Leu Leu Asp Psn Leu Asn GLn Psp ALa Pro
55 60
234
184 951
Asp Thr Tyr His Peo Val Val 05 See Glu Poo Leu Gly Arg Asn See
70 75
Tyr Lys Gli Aog Tyr Leu Phi Vol Tyo Aog Pro Asp Gln Val Ser
80 85 90
Ala VvI Asp Seo lye Tyr Tro Asp Asp Gly Cys Gli Pro Cys Gly
05 100 105
Asn Asp Thr Phu Asn Arg Gli Peo Ala Ile Val Aog Phi Phe See
110 115 120
Aog Phe The Glu VaU Aog Gli Phi Ala Ile Val Peo Lii His Alo
125 13B 135
Alo Pro Gly Asp Alo Vol Ala Glu Ilu Asp Ala Leu lyo Asp Val
140 145 150
Tyr Leu Asp VaU Gln Glu Lys Top Gly Luu Gli Asp Val Met Leu
155 10B 105
Met Gly Asp Phu Asn Alo Gly Cys Seo Tye Vol Aog Pro Ssr Gln
170 177 B 180
lop See Seo Ilu Arg Leu lep Tho Ser Poo Thr Phe Gln Trp Lei
185 100 105
Ile Pro Asp Ser Ala Asp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
184 951
235
200 205 22^0
Tyr Asp Aa? Ple Val 215 Val Ala Gly Met Leu Leu. Arg Gly Ala Val
220 225
Val Pro Asp Ser AAa Leu Pro Plee Asn Phe Gln Ala Ala Tyr Gly
230 235 2-40
Leu Ser Asp Gln Liu Ala Gln AAa Ile Sur Asp His Kyr Pro Va^l
245 250 225
Glu Val Met Leu lys
200 (2) INFORMACJA O SEQ ID NO:98:
(i)CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI:
(A) DŁUGOŚĆ: 2 00 aminokwasów (B) KYP: Aminokwas (D) TOPOLOGIA: Liniowa
(ii) TYP CZĄSTECZKA Aminokwas
(xi) OPIS SEKWENCJI: SEQ ID NO: 98:
Leu Lys Ile Ala Ala Płn Asn Tle Gln Khr rhe Gly Glu Thr Lyr
1 5 0P 15
Met Seo Asn Ala Kho Leu Val Ser Pyr Ile Val Gln ILLe Leu Ser
20 20 30
236
184 951
Aug Tyu Asp Ile Ali Lru Val 35 Gln Glu ral 0 0 Aug Asp Ser His Leu 44
η· Ala ral Gly Lys Leu Leu Asp Asn Leu Asi Gli Asp Ali Puo
50 5 0 60
Asp Thu Tyr ΗΪΗ Tyu ral Val Asn Glu Thr Luu Gly Aug Asi Ser
65 0 0 77
Typ Lys Glu Arg Typ Leu Phe Vil Tyu Aug Puo Asp Gli Val Ser
80 5 0 90
Ala Val Asp Seu Tyu Tyr Tyu Asp Asp Gly Cys Glu Puo Cys Gly
95 00 0 105
Asi Asp Thr PPięi Asi Aug Glu Puo Ala Ile Vv1 Aug Phe Phe Sru
110 15 0 120
Aug Phe Thr du Val Aug Glu Phe Ala Ile ral Puo Leu His Ala
125 n 0 135
Ala Puo Gly Asp Ali Val Ali Glu Ile Asp Ala Leu Tyu Asp Vil
140 45 0 150
Typ Leu Asp ral Gli Glu Lys Tup Gly Leu Glu Asp ral Met Lru
155 60 0 165
Met Gly Asp Phe Asn Ala Gly Cys Ser Tyr Val Arg Pro Ser Gln
184 951
237
170 175 180
Krp Sur Ser Ilu Arg 185 Leu Trp Thr Ser Pro 10i yer Phe Gln Trp Leu 195
Ilu Pro Asp Ser Ala ASsp Thr Thr Ala Thr Pro Thr His Cys Ala
200 205 210
Kyr Asp Arg IIe Val Val Ala Gly Met Leu Leu Arg Gly Ala Val
215 220 225
Val Pro As al Ser Ala Leu Pro Phe Asn Phe Gln Ala Ala Tyr G Gy
230 235 240
Leu Sur Asp Gln Luu Ala Gin. Ala IIe Sur Asp HHi Tyo Pro Val
245 250 255
Glu Vil Mętu Leu Lys
260
184 951
20 30 40 50
LKIAAFNIQTFGETKMSNATLVSYIVQILSRYDIALVQEVRDSHLTAVGK
70 80 90 100
LLDNLNQDAPDTYHYWSEPLGRNSYKERYLFVYRPDQVSAVDSYYYDDG
110 120 130 140 150
CEPCGNDTFNREPAIVRFFSRFTEVREFAIVPLHAAPGDAVAEIDALYDV
160 170 180 190 200
YLDVQEKWGLEDVMLMGDFNAGCSYVRPSQWSSIRLWTSPTFQWLIPDSA
210 220 230 240 250
DTTATPTHCAYDRIWAGMLLRGAWPDSALPFNFQAAYGLSDQLAQAIS
260
DHYPYEYMLK
FIG. 1
184 951
2.5
Względna aktywność właściwa
1.5
0.5
FIG. 2A rt c
4-) c
184 951
Względna aktywność właściwa
N56K
N56R
N56W
I FIG. 2B (0 c
184 951
Względna aktywność właściwa
d >1
+) (β d
Wariant DNazy I
184 951
Względna aktywność właściwa
S94N:Y96T
Wariant DNazy I
FIG. 2D
184 951
π3
Ν (Ο !2 α
c £
+>
π3
C
Wariant DNazy I
FIG. 3
184 951
Procent aktywności
Wariant DNaza I
FIG. 4
184 951 (wariant DNazy I)/ECąn (natywna DNaza I)
FIG. 5A
184 951 (Ο
Ν (ΰ
Ο ιΰ β
>1
-Ρ π5 β
ο ιη
U
W >ι
Ν (ΰ
S
Ο +J β
(0 •Η β
(0
Ο
1X1 ο
ΙΟ
>1
χ) d
β
Wariant DNazy
F
184 951
Η π3
Ν π3 α
FIG. 5C
184 951 (wariant DNazy I)/ECRn (natywna DNaza I)
104 r
1000 100 o
ιβ
o
LU ω
E >s
N
O
E
0.
H m
N (0 z
Q ιΰ
O £
>1
-μ (0 c
Z ł- h~ 1— 2 H H
00 CO (·. CD 05 O
Tt io co co CO CO s.
X Q > > > LU CL
2 2 2 Z
•'T LO b- co
co CO co co
X > > W
Wariant DNazy I
FIG. 5D
184 951 % zmiany lepkoelastyczności (zwartość)
Stężenie wariantu DNazy I (ug/ml) ——Θ— natywna DNaza I —a -D53R -o- -V67K --B-- D53R:Y65A
- ·♦· -D53R:E69R —-Δ- - H44A:D53R:Y65A
- ·♦ - - H44A:Y65A:E69R
FIG. 6
184 951
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 6,00 zł.

Claims (12)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Wariant ludzkiej DNazy I oporny na aktynę, posiadający sekwencję aminokwasową przynajmniej w 90% identycznąz sekwencją aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie co najmniej jednego aminokwasu na inny wjednej lub więcej z następujących pozycji: Ser68, Ser94 lub Tyr96.
  2. 2. Wariant według zastrz. 1, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasową przynajmniej w 95% identycznąz sekwencją aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie co najmniej jednego aminokwasu na inny w jednej lub więcej z następujących pozycji: Ser68, Ser94 lub Tyr96.
  3. 3. Wariant według zastrz. 1, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko w jednej lub więcej z następujących pozycji: Ser68, Ser94 lub Tyr96.
  4. 4. Wariant według zastrz. 3, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko wjednej z następujących pozycji: Ser68, Ser94 lub Tyr96.
  5. 5. Wariant według zastrz. 3, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasowąpokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko w dwóch z następujących pozycji: Ser68, Ser94 lub Tyr96.
  6. 6. Wariant według zastrz. 1, znamienny tym, że obejmuje co najmniej jedno podstawienie aminokwasu wybrane z grupy składającej się z E13A, E13H, E13R, E13W, E13Y, D58T, S68K, S68R, S68M, S68N, P70T, S94N i Y96T.
  7. 7. Wariant ludzkiej DNazy I oporny na aktynę, posiadający sekwencję aminokwasową przynajmniej w 90% identyczną z sekwencją aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie co najmniej jednego aminokwasu na inny wjednej lub więcej z następujących pozycji: Glu13, Asp58, Pro70.
  8. 8. Wariant według zastrz. 7, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasową przynajmniej w 95% identycznąz sekwencją aminokwasową pokazaną na figurze 1 i podstawienie co najmniej jednego aminokwasu na inny w jednej lub więcej z następujących pozycji: Glu13, Asp58, Pro70.
  9. 9. Wariant według zastrz. 7, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasowąpokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko w jednej lub więcej z następujących pozycji: Glu13, Asp58, Pro70.
  10. 10. Wariant według zastrz. 9, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasowąpokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko w jednej z następujących pozycji: Glu13, Asp58, Pro70.
  11. 11. Wariant według zastrz. 9, znamienny tym, że ma sekwencję aminokwasowąpokazaną na figurze 1 i podstawienie aminokwasu tylko w dwóch z następujących pozycji: Glu13, Asp58, Pro70.
  12. 12. Wariant według zastrz. 1, znamienny tym, że obejmuje co najmniej jedno podstawienie aminokwasu wybrane z grupy składającej się z E13A, E13H, E13R, E13W, E13Y, D58T, S68K, S68R, S68M, S68N, P70T, S94N i Y96T.
PL96322002A 1995-02-24 1996-02-21 Wariant ludzkiej DNazy I PL184951B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US1995/002366 WO1996026278A1 (en) 1995-02-24 1995-02-24 HUMAN DNase I VARIANTS
US54052795A 1995-10-10 1995-10-10
PCT/US1996/002421 WO1996026279A1 (en) 1995-02-24 1996-02-21 Human dnase i variants

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL322002A1 PL322002A1 (en) 1998-01-05
PL184951B1 true PL184951B1 (pl) 2003-01-31

Family

ID=26789529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL96322002A PL184951B1 (pl) 1995-02-24 1996-02-21 Wariant ludzkiej DNazy I

Country Status (20)

Country Link
EP (2) EP1980618A2 (pl)
JP (1) JP4549439B2 (pl)
AR (1) AR003926A1 (pl)
AT (1) ATE397073T1 (pl)
AU (1) AU695863B2 (pl)
BR (1) BR9607328A (pl)
CA (1) CA2211413C (pl)
DE (1) DE69637548D1 (pl)
DK (1) DK0854927T3 (pl)
ES (1) ES2308775T3 (pl)
HU (1) HU222665B1 (pl)
IL (1) IL117218A (pl)
NO (1) NO326616B1 (pl)
NZ (1) NZ334762A (pl)
PL (1) PL184951B1 (pl)
RO (1) RO118886B1 (pl)
SI (1) SI9620043A (pl)
SK (1) SK284191B6 (pl)
TR (1) TR199700842T1 (pl)
WO (1) WO1996026279A1 (pl)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6391607B1 (en) 1996-06-14 2002-05-21 Genentech, Inc. Human DNase I hyperactive variants
WO2013114373A1 (en) * 2012-02-01 2013-08-08 Protalix Ltd. Inhalable liquid formulations of dnase i
WO2015066550A1 (en) * 2013-10-31 2015-05-07 Resolve Therapeutics, Llc Therapeutic nuclease-albumin fusions and methods
CN104131093B (zh) * 2014-07-23 2015-12-09 哈尔滨工程大学 DNA蛋白结合位点的DNase高通测序检测信号处理方法
HK1245822A1 (zh) 2015-01-04 2018-08-31 Protalix Ltd 一种经修饰的dnase及其应用
CA3194643A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Ilya Ruderfer Long-acting dnase

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4511502A (en) 1982-12-22 1985-04-16 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
WO1987005330A1 (en) 1986-03-07 1987-09-11 Michel Louis Eugene Bergh Method for enhancing glycoprotein stability
EP0853121B1 (en) 1988-12-23 2007-03-28 Genentech, Inc. Human DNase
US5464817A (en) * 1990-04-11 1995-11-07 Brigham And Women's Hospital Method for reducing the viscosity of pathological mucoid airway contents in the respiratory tract comprising administering actin-binding compounds with or without DNASE I
US5279823A (en) 1992-06-08 1994-01-18 Genentech, Inc. Purified forms of DNASE
WO1994010567A1 (en) 1992-11-02 1994-05-11 Genentech, Inc. Compaction assay for assessment of respiratory disease therapy
ATE230027T1 (de) * 1995-02-24 2003-01-15 Genentech Inc Menschliche dnase i varianten

Also Published As

Publication number Publication date
HUP9702147A3 (en) 1999-09-28
EP0854927A1 (en) 1998-07-29
NO326616B1 (no) 2009-01-19
IL117218A (en) 2004-06-01
BR9607328A (pt) 1997-12-30
DK0854927T3 (da) 2008-09-08
JPH11503004A (ja) 1999-03-23
AU695863B2 (en) 1998-08-27
CA2211413A1 (en) 1996-08-29
TR199700842T1 (xx) 1998-01-21
PL322002A1 (en) 1998-01-05
RO118886B1 (ro) 2003-12-30
EP1980618A2 (en) 2008-10-15
HUP9702147A2 (hu) 1999-07-28
AU5026396A (en) 1996-09-11
WO1996026279A1 (en) 1996-08-29
AR003926A1 (es) 1998-09-30
JP4549439B2 (ja) 2010-09-22
NZ334762A (en) 2000-10-27
DE69637548D1 (de) 2008-07-10
EP0854927B1 (en) 2008-05-28
SI9620043A (sl) 1998-06-30
CA2211413C (en) 2010-06-22
NO973877D0 (no) 1997-08-22
NO973877L (no) 1997-10-24
SK114897A3 (en) 1998-03-04
HU222665B1 (hu) 2003-09-29
ATE397073T1 (de) 2008-06-15
IL117218A0 (en) 1996-06-18
ES2308775T3 (es) 2008-12-01
SK284191B6 (sk) 2004-10-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6348343B2 (en) Human DNase I variants
JP3468778B2 (ja) ヒトｄｎアーゼｉ過反応性変異体
PL184951B1 (pl) Wariant ludzkiej DNazy I
JP2000505285A (ja) ヒトｄｎアーゼ
JP5185914B2 (ja) ヒトｄｎアーゼｉｉ
AU720635B2 (en) Human DNase I variants
JP4624380B2 (ja) ヒトｄｎアーゼ変異体
JP2009060900A (ja) ヒトｄｎアーゼｉ変異体
NZ505985A (en) Human DNase I variants with a lower binding affinity for actin that native human dnase

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20120221