SK16712002A3

SK16712002A3 - Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4,triazolo[1,5-c]- pyrimidíny, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Info

Publication number: SK16712002A3
Application number: SK1671-2002A
Authority: SK
Inventors: Bernard R. Neustadt; Neil A. Lindo; William J. Greenlee; Deen Tulshian; Lisa S. Silverman; Yan Xia; Craig D. Boyle; Samuel Chackalamannil
Original assignee: Schering Corporation
Priority date: 2000-05-26
Filing date: 2001-05-24
Publication date: 2003-08-05
Also published as: ATE293627T1; US6897216B2; CZ303790B6; MY132006A; NO20025651L; BR0111015A; DE60110219D1; HUP0600239A2; US20040023997A1; CN100384847C; SI1283839T1; IL152726A; HK1049007B; TWI288137B; DK1283839T3; CN1247588C; CA2410237C; HUP0600239A3; US7067655B2; JP2003535094A

Description

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa týka substituovaných 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4triazolo[1,5-c]pyrimidínových antagonistov adenozínového receptora A_2a, farmaceutického prostriedku s ich obsahom a ich použitia na liečenie ochorení centrálnej nervovej sústavy, najmä Parkinsonovej choroby. Vynález sa tiež týka spôsobu výroby 5-amino-2-(substituovaných)pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínov a medziproduktov, ktoré sa používajú pri výrobe zlúčenín podľa vynálezu.

Doterajší stav techniky

Adenozín je známy tým, že je endogénnym modulátorom mnohých fyziologických funkcií. Na úrovni kardiovaskulárneho systému je adenozín silným vazodilátorom a srdcovým depresorom. V nervovej sústave vyvoláva adenozín sedatívne, anxiolytické a antiepileptické účinky. V respiračnom systéme vyvoláva zúženie priedušiek. Na úrovni obličiek uplatňuje dvojfázový účinok, pri nízkych koncentráciách vyvoláva zužovanie ciev a pri vysokých dávkach rozširovanie ciev. Adenozín sa správa ako inhibítor lypolýzy v tukových bunkách a ako antiagregačné činidlo v krvných doštičkách.

Účinok adenozínu je sprostredkovaný interakciou s rozličnými membrámami špecifických receptorov, ktoré patria do rodiny receptorov spojených s G proteínmi. Biochemické a farmakologické štúdie, spolu s pokrokom v molekulárnej biológii, umožnili identifikáciu najmenej štyroch podtypov receptorov adenozínu: Ai, A_2a. A₂b a A₃. A! a A₃ majú vysokú afinitu a inhibujú účinok enzýmu adenylát cyklázy a A_2aa A₂b majú nízku afinitu a stimulujú účinok toho istého enzýmu. Identifikovali sa tiež analógy adenozínu, ktoré sú schopné vzájomne sa ovplyvňovať ako antagonisty s receptormi A-ι, A_2a, A₂b a A₃.

-2Selektívne antagonisty pre receptor A_2a sú v záujme farmakológie kvôli zníženej hladine ich vedľajších účinkov. V centrálnej nervovej sústave môžu mať antagonisty A_2a antidepresívne účinky a môžu stimulovať kognitívne funkcie.

Okrem toho údaje ukázali, že receptory A_2a sú vo vysokej hustote prítomné v bazálnom ganglione, ktorý je známy tým, že je dôležitý pri kontrole pohybu. Preto antagonisty A_2a môžu zlepšiť motorický defekt spôsobený neurodegeneratívnymi ochoreniami, ako je napríklad Parkinsonova choroba, senilná demencia vyskytujúca sa pri Alzheimerovej chorobe a psychózy organického pôvodu.

Zistilo sa, že niektoré zlúčeniny príbuzné xantínu sú selektívnymi antagonistami receptora Ai, a zistilo sa, že xantínové alebo nexantínové zlúčeniny majú vysokú afinitu voči A_2a s líšiacimi sa stupňami A_2a versus Ai selektivity. Napríklad vo WO 95/01356; US 5565460; WO 97/05138; a WO 98/52568 už boli opísané triazolo-pyrimidínové adenozínové antagonisty receptora A_2a s rozličnými substitúciami v polohe 7.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu sú 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínové zlúčeniny všeobecného vzorca I

alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde

R znamená R¹-furanyl, R¹-tienyl, R¹-pyridyl, R¹-pyridyl N-oxid, R¹-oxazolyl, R¹⁰fenyl, R¹-pyrolyl alebo C4-C₆-cykloalkenyl;

X znamená C₂-C₆-alkylén alebo -C(O)CH₂-;

Y znamená -N(R²)CH2CH2N(R³)-, -OCH2CH₂N(R²)-, -0-, -S-, -CH₂S-, -(CH₂)₂-NHalebo

-3(CH₂)_m/ \ θ 'χΝ (CH₂y>_R4

Z znamená R⁵-fenyl, R⁵-fenyl(Ci-C₆)alkyl, R⁵-heteroaryl, difenylmetyl, R⁶-C(O)-,

Q

R⁶-SO₂-, R⁸-OC(O)-, R⁷-N(R⁸)-C(O)-, R⁷-N(R⁸)-C(S)-, ηνΓ?Ν~. fenyl-CH(OH)- alebo n

I o fenyl-C(=NOR²)-; alebo ak Q je -C-, Z je tiež fenylamino alebo pyridyiamino;

H alebo Z a Y spolu sú

R¹ znamená 1 až 3 substituenty nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík, Ci-C6-alkyl, -CF3, halogén, -NO2, -NR¹²R¹³, C-i-C6-alkoxy, Ci-C6-alkyitio, Ci-C₆alkylsulfinyl a Ci-C6-aikyÍsulfonyl;

R² a R³ sú nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík a CrCe-alkyl; m a n sú nezávisle 2 až 3;

Q znamená

-N-, -C-, -C-, -ΟΙ alebo -C- ;

CN OH

COCH3

-4R⁴ znamená 1 až 2 substituenty nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík a C_rC6-alkyl, alebo dva R⁴ substituenty na tom istom atóme uhlíka môžu tvoriť =0;

R⁵ znamená 1 až 5 substituentov nezávisle vybraných zo skupiny zahrnujúcej vodík, halogén, C-i-C6-alkyl, hydroxy, Ci-C₆-alkoxy, -CN, di-((C₁-C₆)alkyl)amino, -CF₃, -OCF₃, acetyl, -N0₂, hydroxy(Ci-C6)alkoxy, (Ci-C6)alkoxy(Ci-C₆)alkoxy, di-((Ci-C₆)alkoxy)(Ci-C₆)alkoxy, (C₁-C6)alkoxy(Ci-C₆)alkoxy(C₁-C6)alkoxy, karboxy(Ci-Ce)alkoxy, (CrCeJalkoxykarbonyKCrCejalkoxy, (C₃-C₆)cykloalkyl(Ci-C₆)alkoxy, di((CrCejalkyljaminoCCi-Cejalkoxy, morfolinyl, (C-i-C₆)alkyl-SO₂-, (C-i-Cejalkyl-SCHCr C₆)alkoxy, tetrahydropyranyloxy, (Ci-C₆)alkylkarbonyl(Ci-C₆)alkoxy, (C_rC₆)-alkoxykarbonyl, (CrCeJalkylkarbonyloxyíCrCejalkoxy, -SO₂NH₂, fenoxy,

alebo susedné R⁵ substituenty sú spolu -O-CH₂-O-, -O-CH₂CH₂-O-, -O-CF₂-Oalebo -O-CF₂CF₂-O- a tvoria kruh s atómami uhlíka, na ktoré sú naviazané;

R⁶ znamená (CrCejalkyl, R⁵-fenyl, R⁵-fenyl(C_rC6)alkyl, tienyl, pyridyl, (C₃-C₆)cykloalkyl, (Ci-CeJalkyl-OCíOj-NH^CrCejalkyl-, di-((Ci-C6)alkyl)aminometyl alebo (CrC₆)alkylO O

R⁷ znamená (C-i-C6)alkyl, R⁵-fenyl alebo R⁵-fenyl(Ci-C6)alkyl;

R⁸ znamená vodík alebo CrCe-alkyl; alebo R⁷ a R⁸ spolu sú -(CH₂)_p-A-(CH₂)_q, kde p a q sú nezávisle 2 alebo 3 a A je väzba, -CH₂-, -S- alebo -O- a tvoria kruh s dusíkom, na ktorý sú naviazané;

R⁹ znamená 1 až 2 skupiny nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík, C1-C6alkyl, hydroxy, Ci-C₆-alkoxy, halogén, -CF₃ a (Ci-C6)alkoxy(CrC₆)alkoxy;

R¹⁰ znamená 1 až 5 substituentov nezávisle vybraných zo skupiny zahrnujúcej vodík, halogén, C-i-C6-alkyl, hydroxy, Ci-C6-alkoxy, -CN, -NH₂, Ci-C6-alkylamino, di((C_rC₆)alkyl)amino, -CF₃, -OCF₃ a -S(O)₀-2(C₁-C₆)a!kyl;

R¹¹ je H, Ci-C6-alkyl, fenyl, benzyl, C₂-C₆-alkenyl, (Ci-C₆)alkoxy(C-i-C6)alkyl, di((Ci-C₆)alkyl)amino(C_rC₆)alkyl, pyrolidinyl(C-i-C₆)alkyl alebo piperidino(Ci-C6)-alkyl;

-5R¹² znamená H alebo Ci-C₆-alkyl; a

R¹³ znamená (Ci-C6)alkyl-C(O)- alebo (Ci-C6)alkyl-SO₂-.

Výhodné zlúčeniny všeobecného vzorca sú tie, v ktorých R je R¹-furanyl, R¹tienyl, R¹-pyrolyl alebo R¹⁰-fenyl, ešte výhodnejšie zlúčeniny sú tie, kde R je R¹furanyl. R¹ je výhodne vodík alebo halogén. Ďalšia skupina výhodných zlúčenín je tá, kde X je alkylén, výhodne etylén. Y je výhodne (CHgim / \

kde Q je -N- alebo -CHs Q, ktorý je výhodne dusík. Výhodne m a n sú každý 2 a R⁴ je H. Výhodne Z je R⁵fenyl, R⁵-heteroaryl, R⁶-C(O)- alebo R⁶-SO₂-. R⁵ je výhodne H, halogén, alkyl, alkoxy, hydroxyalkoxy alebo alkoxyalkoxy. R⁶ je výhodne R⁵-fenyl.

Ďalej vynález poskytuje farmaceutický prostriedok obsahujúci terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.

Ďalej vynález poskytuje použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I na výrobu lieku na liečenie ochorení centrálneho nervového systému, ako je napríklad depresia, kognitívne ochorenia a neurodegeneratívne ochorenia, ako je napríklad Parkinsonova choroba, senilná demencia alebo psychózy organického pôvodu a mozgová príhoda u cicavca, ktorý takúto liečbu potrebuje. Vynález sa týka najmä použitia zlúčeniny všeobecného vzorca I na liečenie Parkinsonovej choroby.

Ďalej vynález poskytuje spôsob výroby 5-amino-2-(R-substituovaných)pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínov všeobecného vzorca II, ktoré sú medziproduktami užitočnými pri výrobe zlúčenín všeobecného vzorca I

kde R je určené vyššie

-6v ktorom sa na:

1) 2-amino-4,6-dihydroxypyrimidín vzorca VI

HO' nh₂

N^N

A>., (VI)

OH pôsobí POCI3 v dimetylformamide (DMF) za vzniku 2-amino-4,6-dichlórpyrimidín-5karboxaldehydu vzorca VII

(VII)

2) na karboxaldehyd vzorca VII sa pôsobí hydrazidom všeobecného vzorca H₂NNH-C(O)-R, kde R je určené vyššie, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca VIII

(VIII)

R

3) na medziprodukt všeobecného vzorca VIII sa pôsobí hydrátom hydrazínu za vzniku pyrazolového kruhu, čím sa získa medziprodukt všeobecného vzorca IX

(IX) a

4) vytvorenie požadovanej zlúčeniny všeobecného vzorca II dehydratačným preskupením.

Výhodným uskutočnením spôsobu je dehydratačné preskupenie medziproduktu všeobecného vzorca IX za vzniku 5-amino-2-(R-substituovaný)-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínu všeobecného vzorca II. Vo výhodnom

-7uskutočnení spôsobu sa použije 2-furánkarbohydrazid alebo 2-tienoylhydrazid v kroku 2, takže sa pripravia zlúčeniny všeobecného vzorca II, kde R je 2-furyl alebo 2-tienyl.

Ďalej vynález poskytuje spôsob výroby 7-brómalkyl-5-amino-2-(R-substituovanýJ-pyrazolo^.S-ej-l^^-triazolofl.S-cjpyrimidínov všeobecného vzorca llla, ktoré sú medziproduktami užitočnými pri príprave zlúčenín všeobecného vzorca I. V spôsobe výroby zlúčenín všeobecného vzorca llla

(Hla) kde R je určené vyššie, sa na:

1) chlorid všeobecného vzorca VIII

I (VIII) pôsobí hydroxyalkylhydrazínom vzorca HO-(CH2)_r-NHNH2, kde r je 2 až 6 za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca X

NH-NH

O

(X)

2) cyklizáciu medziproduktu všeobecného vzorca X dehydratačným preskupením za vzniku tricyklického medziproduktu všeobecného vzorca XI

(XI)

-83) konvertovanie hydroxyzlúčeniny všeobecného vzorca XI na bromid všeobecného vzorca llla.

Ďalej vynález poskytuje použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I spolu s jednou alebo viacerými látkami, ktoré sú užitočné na liečenie Parkinsonovej choroby, ako je napríklad dopamín; dopamínový agonista; inhibítor monoamínoxidázy, typu B (MAO-B); DOPA dekarboxylázový inhibítor (DCI); alebo inhibítor katechol-O-metyltransferázy (COMT) na výrobu lieku na liečenie Parkinsonovej choroby.

Vynález sa ďalej týka farmaceutického prostriedku, ktorý obsahuje zlúčeninu všeobecného vzorca I a jednu alebo viac látok, ktoré sú užitočné na liečenie Parkinsonovej choroby a farmaceutický prijateľný nosič.

Ako je tu použité, výraz alkyl zahrnuje priame alebo rozvetvené reťazce. Alkylén sa vzťahuje na dvojväzbovú alkylovú skupinu, takisto s priamymi alebo rozvetvenými reťazcami. Cykloalkylén znamená dvojväzbovú cykloalkylovú skupinu. Cykloalkenyl znamená C4-C₆cykloalkylový kruh obsahujúci jednu dvojitú väzbu.

Heteroaryl znamená jedno-kruhovú, bicyklickú alebo benzokondenzovanú heteroaromatickú skupinu s 5 až 10 atómami, ktorá obsahuje 2 až 9 atómov uhlíka a 1 až 4 heteroatómy nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pod podmienkou, že kruhy nezahrnujú susediace kyslíkové a/alebo sírové atómy. Zahrnuté sú tiež N-oxidy na atóme kruhového dusíka. Príkladmi jedno-kruhových heteroarylových skupín sú pyridyl, oxazolyl, izoxazolyl, oxadiazolyl, furanyl, pyrolyl, tienyl, imidazolyl, pyrazolyl, tetrazolyl, tiazolyl, izotiazolyl, tiadiazolyl, pyrazinyl, pyrimidyl, pyridazinyl a triazolyl. Príkladmi bicyklických heteroarylových skupín sú naftyridyl (napríklad 1,5 alebo 1,7), imidazopyridyl, pyrido[2,3]imidazolyl, pyridopyrimidinyl a 7-azaindolyl. Príkladmi benzokondenzovaných heteroarylových skupín sú indolyl, chinolyl, izochinolyl, ftalazinyl, benzotienyl (napríklad tionaftenyl), benzimidazolyl, benzofuranyl, benzoxazolyl a benzofurazanyl. Patria sem všetky pozičné izoméry, napríklad 2-pyridyl, 3-pyridyl a 4-pyridyl. R⁵-substituované heteroaryly znamenajú také skupiny, kde substituovateľné kruhové uhlíkové atómy majú substituent ako je uvedené vyššie.

Niektoré zlúčeniny podľa vynálezu môžu existovať v rôznych stereoizomérnych formách (napríklad ako enantioméry, diastereoizoméry a atropizoméry).

-9Vynález zahrnuje všetky tieto stereoizoméry, čisté aj vo forme zmesí, vrátane racemických zmesí.

Niektoré zlúčeniny sú vo svojej podstate kyslé, napríklad tie zlúčeniny, ktoré majú karboxylovú alebo fenolovú hydroxylovú skupinu. Tieto zlúčeniny môžu vytvárať farmaceutický prijateľné soli. Príklady takýchto solí môžu zahrnovať solí sodíka, draslíka, vápnika, hliníka, zlata a striebra. Zahrnuté sú tiež soli vytvorené s farmaceutický prijateľnými amínmi, ako je napríklad amoniak, aikylamíny, hydroxyalkylamíny, /V-metylglukamín a podobne.

Niektoré bázické zlúčeniny môžu tiež vytvárať farmaceutický prijateľné solí, napríklad adičné soli s kyselinou. Napríklad pyrido-dusíkové atómy môžu vytvárať soli so silnou kyselinou, kým zlúčeniny, ktoré majú bázické substituenty, ako sú napríklad aminoskupiny, vytvárajú soli tiež so slabšími kyselinami. Príkladmi kyselín, ktoré sú vhodné na prípravu solí, sú kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, octová, citrónová, šťavelová, malónová, salicylová, jablčná, fumárová, jantárová, askorbová, maleínová, metánsulfónová a iné anorganické a karboxylové kyseliny dobre známe odborníkom v danej oblasti techniky. Soli sa pripravia zmiešaním voľnej bázy s dostatočným množstvom požadovanej kyseliny za získania solí bežným spôsobom. Voľné bázy sa môžu regenerovať spracovaním soli s vhodným zriedeným vodným roztokom bázy, ako je napríklad zriedený vodný roztok NaOH, uhličitanu draselného, amoniaku a hydrogenuhličitanu sodného. Voľné bázy sa odlišujú od ich príslušných solí fyzikálnymi vlastnosťami, ako je napríklad rozpustnosť v polárnych rozpúšťadlách, ale na účely vynálezu soli kyseliny a bázy sú ekvivalentné k ich príslušným voľným bázam.

Všetky takéto soli kyselín a báz budú farmaceutický prijateľnými soľami v rozsahu vynálezu a všetky soli kyselín a báz sa považujú za ekivalentné k voľným bázam zodpovedajúcich zlúčenín na účely tohto vynálezu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu pripraviť známymi spôsobmi z východiskových zlúčenín buď známych z doterajšieho stavu techniky alebo pripravených známymi spôsobmi z doterajšieho stavu techniky pozri napríklad WO 95/01356 a J. Med. Chem., 39 (1996) 1164 až 1171.

Výhodne zlúčeniny všeobecného vzorca I sú pripravené spôsobmi znázornenými v nasledujúcej reakčnej schéme. V schéme 1 je na výrobu zlúčenín

- 10všeobecného vzorca I použitá alkylácia S-amino-pyrazolo^.S-ej^.Ž^jtriazolotl.S-c]pyrimidínu všeobecného vzorca II.

Schéma 1

Východiskové zlúčeniny všeobecného vzorca II môžu reagovať s alkyldiolditosilátom a bázou ako je napríklad NaH v inertnom rozpúšťadle ako je dimetylformamid (DMF) alebo s chlór-bróm- alebo dibrómalkylovou zlúčeninou za podobných podmienok, za získania alkylom substituovaných medziproduktov všeobecného vzorca III. Zlúčenina všeobecného vzorca III potom reaguje s amínom všeobecného vzorca Z-Y-H v inertnom rozpúšťadle ako je DMF pri zvýšenej teplote za získania zlúčeniny všeobecného vzorca la, napríklad zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde X je alkylén.

Alternatívne môžu východiskové zlúčeniny všeobecného vzorca II reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca Z-Y-X-CI a bázou ako je NaH v inertnom rozpúšťadle ako je DMF za získania zmesí 7-substituovanej zlúčeniny všeobecného vzorca I a príslušnej 8-substituovanej zlúčeniny.

Na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde Y je piperazinyl a Z je R⁶C(O)-, R⁶-SO₂-, R⁶-OC(O)-, R⁷-N(R⁸)-C(O) alebo R⁷-N(R⁸)-C(S)- sa zo zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde Z-Y je 4-terc-butoxykarbonyl-1-piperazinyl odstránia ochranné skupiny, napríklad reakciou s kyselinou ako je HCl. Výsledná voľná piperazinylová zlúčenina všeobecného vzorca IV sa potom spracuje spôsobom

-11 dobre známym v danej oblasti techniky za získania požadovaných zlúčenín. Nasledujúca schéma 2 zhrňuje takého spôsoby.

všeobecného vzorca I je znázornený

Nasledujúci spôsob prípravy zlúčenín v schéme 3.

Schéma 3

- 12V tomto spôsobe chlórpyrazolo-pyrimidín všeobecného vzorca V reaguje so zlúčeninou všeobecného vzorca Z-Y-X-CI spôsobom podobným alkylačnému spôsobu opísanému v schéme 1 a výsledný medziprodukt reaguje s hydrazidom všeobecného vzorca H2N-NH-C(O)-R (alebo s hydrátom hydrazínu, a potom so zlúčeninou vzorca CI-C(O)-R). Výsledný hydrazid sa potom podrobí dehydratačnému preskupeniu, napríklad pôsobením A/,O-bis(trimetylsilyl)acetamidu (BSA) alebo kombinácii BSA a hexametyldisilazánu (HMDS) pri zvýšenej teplote.

Východiskové zlúčeniny sú známe alebo sa môžu pripraviť spôsobmi známymi v danej oblasti techniky. Jednako sa ale zlúčeniny všeobecného vzorca II výhodne pripravia novým spôsobom opísaným vyššie a detailnejšie opísaným ďalej.

V prvom kroku spôsobu, sa 2-amino-4,6-dihydroxypyrimidín vzorca VI konvertuje na príslušný 4,6-dichlór-5-karboxaldehyd pôsobením POCI3 alebo SOCI2 v DMF ako je opísané v Helv. Chim. Acta, 69 (1986), 1602 až 1613. Reakcia sa uskutočňuje pri zvýšenej teplote, výhodne pri približne 100 °C 2 až 48 hodín, výhodne približne 5 hodín.

V druhom kroku sa na 2-amino-4,6-dichlórpyrimidín-5-karboxaldehyd vzorca VII pôsobí hydrazidom všeobecného vzorca H2N-NH-C(O)-R, kde R je určené vyššie, za získania zlúčeniny všeobecného vzorca VIII; zlúčenina všeobecného vzorca VI a hydrazid sa použijú v molovom pomere približne 1:1, výhodný je mierny prebytok hydrazidu. Reakcia sa uskutočňuje pri teplote miestnosti alebo až do 80 °C v rozpúšťadle ako je CH₃CN alebo DMF. Reakčný čas je približne 16 hodín (napríklad cez noc).

V treťom kroku sa zlúčenina všeobecného vzorca VIII zahrieva pri 60 až 100 °C s 1 až 5 ekvivalentami hydrátu hydrazínu v rozpúšťadle ako je CH₃CN alebo DMF 1 až 24 hodín za získania zlúčeniny všeobecného vzorca IX.

V poslednom kroku sa zlúčenina všeobecného vzorca IX podrobí dehydratačnému preskupeniu pôsobením zmesou HMDS a BSA alebo samotného BSA. Reakcia sa uskutočňuje pri zvýšenej teplote, výhodne pri približne 120 °C približne 16 hodín (napríklad cez noc).

Po každom kroku spôsobu sa surový produkt čistí bežnými spôsobmi, napríklad extrakciou a/alebo rekryštalizáciou.

- 13Vzhľadom na skôr publikované spôsoby na prípravu medziproduktov všeobecného vzorca II, tento spôsob sa uskutočňuje v niekoľkých málo krokoch za miernych reakčných podmienok a s veľmi vysokým výťažkom.

Zlúčeniny všeobecných vzorcov V a VII sú známe (Helv. Chim. Acta, 69 (1986), 1602 až 1613).

Ďalší spôsob na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca I je znázornený v nasledujúcej schéme 4.

Schéma 4

NH₂

N^N _s HO-(CH₂)_n—NHNH₂( VI11) —-->- HO-(CH₂)_n-N xV„-N y

O

Λ

NH-NH R (X)

BSA (x)-* (XI)Ä nh₂

H_O-(0H₂)_n-_Np^^N _(χ0 nh₂

Λμ-ν.

XAí )n“N T

Br-(CH₂)_n-N / _(jlla)

Na chlorid všeobecného vzorca VIII sa pôsobí hydroxyalkyl-hydrazínom v inertnom rozpúšťadle ako je etanol pri teplote od teploty okolia do teploty 100 °C za poskytnutia derivátu všeobecného vzorca X. . Ten sa potom podrobí dehydratačnej cyklizácii podobne ako pri zlúčenine všeobecného vzorca IX, s BSA, za vzniku tricyklickej zlúčeniny všeobecného vzorca XI. Tricyklická zlúčenina všeobecného vzorca XI sa potom konvertuje na bromid všeobecného vzorca llla s PBr₂ pri zvýšenej teplote od 80 °C do 150 °C 1 až 24 hodín. Medziprodukt všeobecného vzorca XI sa môže tiež konvertovať na tosilátový analóg až zlúčeninu všeobecného vzorca llla použitím toluénsuifonylchloridu a bázy. Bromid všeobecného vzorca llla sa potom konvertuje na zlúčeninu všeobecného vzorca I ako je opísané vyššie pre zlúčeninu všeobecného vzorca III.

-14Ďalší spôsob na výrobu v nasledujúcej schéme 5.

zlúčenín všeobecného vzorca I je znázornený

Schéma 5

HsNNHCOOR'

ÍXIV)

-

N

-J H (XIlO

R²¹-(CH2)₂tN nh₂

Λ _ΟγΟ-Η· ' .NH

-NH₂

Z-Y-H

Z-Y-(CH₂)₂tN J Jf

N^U (XVI)

nh₂ • N^N ^0<^^RzVA..^NH

Z-Y-(CH₂)₂^-N T N (XVH)

HOOC-R alebo CICO-R

- (la)

Analogicky ako v schéme 1, sa chlorid všeobecného vzorca V konvertuje na alkylovanú zlúčeninu všeobecného vzorca XII a potom táto ďalej reaguje s karbazátom všeobecného vzorca XIV, kde R' je výhodne terc-butyl alebo benzyl za vzniku derivátu všeobecného vzorca XIII. Môže sa použiť rozpúšťadlo, ako je DMF pri zvýšenej teplote od 60 do 120 °C. Derivát všeobecného vzorca XIII potom reaguje ako je znázornené v Schéme 1 za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca XV. Skupina R' sa potom odstráni spôsobom ako sa odstráni terc-butylová skupina s HCI alebo TFA, za vzniku hydrazínu všeobecného vzorca XVI. Acylácia zlúčeniny všeobecného vzorca XVI poskytne zlúčeninu všeobecného vzorca XVII, ktorá sa potom podrobí dehydratačnej cyklizácii ako je opísané vyššie za vzniku požadovanej zlúčeniny všeobecného vzorca la. Alternatívne môže zlúčenina

- 15všeobecného vzorca XII reagovať s hydrazidom všeobecného vzorca XVIII za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca XIX, ktorá sa potom môže konvertovať na zlúčeninu všeobecného vzorca XVII analogicky ako v príprave zlúčeniny všeobecného vzorca XV.

Použitím vyššie uvedených spôsobov sa pripravia nasledujúce zlúčeniny.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príprava 1

N2H4 nh₂

N^N'ⁿ dehydratačné q preskupenie (a) ΗΝ^^Ν>_θ ^kr°^{k4 W}

Krok 1

K POCI3 (84 ml, 0,9 mol) sa po kvapkách pridal DMF (17,8 ml, 0,23 mol) za miešania a chladenia na 5 až 10 °C. Zmes sa nechala zahriať na teplotu miestnosti (RT) apo častiach sa pridal 2-amino-4,6-dihydroxypyrimidín VI (14 g, 0,11 mol). Počas 5 hodín sa zmes zahriala na 100 °C. Vo vákuu sa odstránil prebytok POCI3, zvyšok sa nalial do ľadovej vody a miešal sa cez noc. Tuhé látky sa zozbierali filtráciou a suchý materiál sa rekryštalizoval z filtrovaného rozroku etylacetátu (EtOAc) za vzniku aldehydu VII, s teplotou topenia 230 °C (rozklad). Hmotnostné spektrum: M+ = 192. PMR (DMSO): δ 8,6 (d, 2H), δ 10,1 (s, 1H).

-16Krok 2

Zmes produktu z kroku 1 (0,38 g, 2 mmol) a 2-furánkarbohydrazidu (0,31 g, 2,5 mmol) v CH₃CN (50 ml) obsahujúceho Λ/,/V-diizopropyletylamín (0,44 ml, 2,5 mmol) sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Z reakčnej zmesi sa odstránilo rozpúšťadlo a zvyšok sa rozdelil medzi EtOAc a vodu. Organická vrstva sa vysušila nad MgSO4, rozpúšťadlo sa odstránilo a zvyšok re kryštalizoval z CH3CN za vzniku požadovanej zlúčeniny VIII. Hmotnostné spektrum: MH+ = 282.

Krok 3

K horúcemu roztoku CH₃CN a produktu z kroku 2 (0,14 g, 0,5 mmol) sa pridal hydrát hydrazínu (75 mg, 1,5 mmol). Zmes sa refluxovala 1 hodinu. Potom sa ochladila na teplotu miestnosti a zozbieral sa žltý produkt IX. Hmotnostné spektrum: MH+ = 260.

Krok 4

Produkt z kroku 3 (5,4 g, 0,021 mol) v zmesi hexametyldisilazánu (100 ml) a A/,O-bis(trimetylsilyl)acetamidu za zahrial na 120 °C cez noc. Prchavé zložky sa odstránili vo vákuu a kašovitý zvyšok v horúcej vode poskytol tuhú zrazeninu. Rekryštalizáciou z 80%-ného vodného roztoku kyseliny octovej sa získala požadovaná zlúčenina. Teplota topenia > 300 °C. Hmotnostné spektrum: MH+ = 242.

Príprava 2

- 17Produkt z prípravy 1 (6,0 g, 25 mmol) sa zmiešal s etylénglykolditosilátom (11,1 g, 30 mmol) a NaH (60%-ný v oleji, 1,19 g, 30 mmol) v suchom DMF (30 ml). Zmes sa miešala pod N2 24 hodín a prefiltrovala sa za získania požadovanej zlúčeniny ako tuhej látky krémovej farby (PMR v DMSO: δ 4,47+4,51 triplety, 8,03s). Dodatočný produkt sa izoloval chromatografiou filtrátu.

Príprava 3

Podobným spôsobom ako v príprave 1, ale použitím 2-tienoyIhydrazidu, sa pripravila požadovaná zlúčenina ako žltá tuhá látka s hmotnostným spektrom: MH+ = 258.

Príprava 4

Podobným spôsobom ako v príprave 2, ale použitím produktu z prípravy 3, sa získala požadovaná zlúčenina ako žltá tuhá látka, PMR (DMSO) δ 4,49+4,54 triplety, 8,05s.

Príprava 5

Arylpiperazíny

1-(2,4-Difluórfenyl)piperazín sa pripravil z 2,4-difluórbrómbenzénu. K bromidu (8,0 g, 41,4 mmol), piperazínu (21,4 g, 249 mmol), terc-butoxidu sodnému (5,6 g, 58 mmol) a BINAP (1,55 g, 2,5 mmol) v toluéne (20 ml) sa pridal Pd₂(dba)₃ (0,477 g,

-180,83 mmol). Zmes sa zahrievala pri 110 °C pod N2 počas 20 hodín. Zmes sa nechala ochladiť a potom sa extrahovala s 1N HCl. Extrakt sa zalkalizoval s NaOH na pH = 10, potom sa extrahoval s CH₂CI₂, vysušil a skoncentroval za získania požadovanej zlúčeniny vo forme hnedého oleja.

Podobným spôsobom sa pripravili nasledujúce arylpiperazíny (Me znamená metyl):

N^{Z X}NH \=r	Cl—CY-Ν⁷ NH \=/	^ciX^-O^h	^F_tyO^H
F f-(^-nX F	F—Cy-N^{7 S}NH 'K O F	Me—_/NH	XC>
K/O F	OMe	-X- F—^-N_^NH	Me /X MeO—
Q>O^h	EF ΟηΓνη FF z C₆F₅Br	H >=\ f~\ _,^ΝΗ	»-0-O
y—OMe O—<7~~N\ H MeO	F Me mC/vx	MeO—ý—^NH F	OMe /X, ^F\_/^_íXy^NH F
r— OMe F /X '— 0—_Z ^NH	/To	F /X r~\ MeO—_NH MeO	MeO F °“φΧ^ΝΗ F
/—OMe p O— F⁷	Γ\ MeO O f-Q-nQnh	. y—OMe Me \ /==( t— 0—(\ ň— N NH \-l/ \_f	y—OMe <φθ NC
/^CF3^ MeO—N_^NH	y—OMe \ /=\ Λ~λ Ο-^γ-Ν^ΝΗ F₃C	y—OMe CN O— /M	O OMe >=\ r~\ ^FX_/^N\_/^NH

Me XO	x MeO—\_,ΝΗ	vóhQ-nQn	h Meo-^2^~\2/^NH
r- OMe O—N H MeO—\ ' '—O	/—OMe CF3 °_£j-nQn^h	/—OMe /^CF3/ —f Me Me O—G Λ—Ν NH \_t	OO~v^h
Me. Mrt· O-Q-nQw	MeO— MeO O-Ν_χ /NH	Ο°-Ο-·0
^Q~h~\ Me⁷ O-^ __Z ^NH	N=\ / \ Ο~^ΝΧ

1-(5-Etyl-2-pyrimidÍnyl)piperazín sa pripravil z 2-chlór-5-etylpyrimidínu. Zmes chloridu (2,0 g, 14 mmol) a piperazinu (3,0 g, 35 mmol) v EtOH (70 ml) za zahrievala pri 90 °C 2 hodiny v zapečatenej nádobe. Zmes sa potom skoncentrovala a rozdelila medzi CH2CI2 a 2N NaOH. Organická vrstva sa vysušila s MgSO₄a potom sa skoncentrovala. Chromatografiou surového produktu na silikagéli (CH2CI2-CH3OH) za získal piperazín vo forme žltého oleja.

Podobným spôsobom sa z príslušného chloridu pripravili nasledujúce piperazíny:

MeO )=N /—\ 4 N NH /-N ^⁷ MeO	f₃Q >=N /—\ 4. /y~N NH V_n ^X'
H₂N /==\ /“Λ N N NH >-N ^-⁷ H?N	P /=N f~\

1-(4-Kyano-2-fluórfenyl)piperazín sa pripravil z 3,4-difluórbenzonitrilu. Zmes nitrilu (2,0 g, 14,4 mmol), piperazinu (6,2 g, 72 mmol) a K₂CO₃ (2,4 g, 17 mmol) v toluéne (10 ml) sa zahrievala pri refluxe 22 hodín. Zmes sa nechala ochladiť

-20a potom sa extrahovala s 1N HCI. Zmes sa alkalizovala NaOH na pH = 10. Zmes sa extrahovala s CH₂CI₂ a premyla sa vodou a potom soľankou. Organická vrstva sa vysušila s MgSO4 a skoncentrovala sa za vzniku piperazínu ako bielej tuhej Itáky.

Podobným spôsobom sa z príslušného fluoridu pripravili nasledujúce piperazíny (Et znamená etyl).

no₂ F—^N\ /^NH	CN ^F”CZ/ ^Nv v^NH	Me_x /=\ / \ o₂s—yslH
Me—_y^NH	F /^nh F	EtOOC—
H2NO2S—^NH
reakcia v H₂O, 100718 h

1-(4-(2-Metoxyetoxy)fenyl)piperazín sa pripravil zo 4-(4-hydroxyfenyl)-1acetylpiperazínu. K zmesi NaH (60%-ný v minerálnom oleji, 0,79 g, 20 mmol) v DMF (25 ml) sa pridal fenol (3,0 g, 13,6 mmol), potom 2-brómetylmetyléter (2,27 g, 16,3 mmol). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti 18 hodín, potom sa skoncentrovala a zvyšok sa rozdelil medzi EtOAc a 5% kyselinu citrónovú. Organická vrstva sa premyla 1N NaOH a potom soľankou. Zmes sa potom vysušila nad MgSO4 a skoncentrovala za vzniku alkylovaného produktu ako bielej tuhej látky. Tento materiál (2,2 g, 7,9 mmol) v 6N HCI (30 ml) sa potom zahrieval pri refluxe 1 hodinu. Zmes sa nechala ochladiť a alkalizovala sa na pH = 10 NaOH. Extrahovala sa CH₂CI₂ a premyla sa vodou a potom soľankou. Organická vrstva sa vysušila s MgSO₄ a skoncentrovala za vzniku piperazínu vo forme žltého oleja.

Podobným spôsobom (okrem bázickej hydrolýzy sa použil cyklopropylmetyléter) sa pripravili nasledujúce piperazíny:

—NMe₂ O——N^ ^NH	^X° ^NV/^NH	Me*/\ >—O Me o-Q-nQnh
Λ° Q—β—_^NH	r~\ )—O OMe \ /=\ /“λ O-^ //\__/ ^NH	y-*OMe \ /==\ Ζ~Λ OMe O—^~^N\
/—OH O—^NH	/—Me \ /=\ /~y °Ά #^N\_/^NH	V. — r-A Μ/ο-ζ-γ-Ν^ΝΗ chlóracetón, K₂CO₃ ako
(z brómetylacetátu)		báza
\ ^XNH NMe? ^J '

4-(2-Metylaminoetoxy)fluórbenzén sa pripravil zo 4-(2-brómetoxy)fluórbenzénu. Bromid (1,0 g, 4,6 mmol) v CH3OH (5 ml) a CH3NH2 v CH3OH (2M, 46 ml, 92 mmol) sa zmiešali v zapečatenej nádobe. Zmes sa zahrievala pri 60 °C 18 hodín, potom sa skoncentrovala a zvyšok sa rozdelil medzi EtOAc a nasýtený roztok NaHCO3. Organická vrstva sa premyla soľankou, vysušila sa s MgS04 a skoncentrovala sa za vzniku amínu vo forme žltého oleja.

N-Metyl-2-(4-(2-metoxyetoxy)fenoxy)etylamín sa pripravil v dvoch krokoch. 4-(2-Metoxyetoxy)fenol (1,68 g, 10,0 mmol), 1,2-dibrómetán (16,9 g, 90 mmol) a K2CO3 (2,76 g, 20 mmol) v CH₃CN (20 ml) sa zmiešali s DMF (10 ml). Zmes sa zahrievala pri refluxe 22 hodín, potom sa nechala ochladiť, prefiltrovala sa a rozdelila medzi éter (Et₂O) a 1N NaOH. Potom sa premyla soľankou, vysušila nad MgSO₄ a skoncentrovala za vzniku brómetyléteru ako béžovej tuhej látky. Zmiešal sa tento produkt (0,97 g, 3,5 mmol) s 2M CH3NH₂/CH₃OH (35 ml). Zmes sa zahrievala v zapečatenej skúmavke (65 °C, 18 hodín), potom sa skoncentrovala a zvyšok sa rozdelil medzi Et₂O a 1N NaHCO₃. Zmes sa premyla soľankou, vysušila sa MgSO4 a skoncentrovala za vzniku amínu vo forme oranžového oleja.

-221-Fenyl-2-piperazinón sa pripravil zo 4-benzyloxykarbonyl-1-fenyl-2piperazinónu. Tento materiál (1,61 g, 5,2 mmol) sa zmiešal s 10%-ným Pd/C (0,4 g) v EtOH (50 ml) a 1N HCl (6 ml). Zmes sa hydrogenovala pri 310 kPa (45 psi) 2 hodiny a potom sa prefiltrovala. Potom sa skoncentrovala a zvyšok sa chromatografoval na silikagéli (elúcia s CH₂CI₂:CH3OH:NH₄OH) za vzniku piperazinónu vo forme krémovej tuhej látky.

Príprava 6

| PBr₃

Príprava 6

Krok 1

Produkt z prípravy 1, krok 2 (0,56 g, 2,0 mmol) sa rozpustil v horúcom CH₃CN (200 m. Pridal sa 2-hydroxyetylhydrazín (0,51 g, 6,0 mmol). Zmes sa zahrievala pri refluxe 2 hodiny a potom sa skoncentrovala. Spracovala sa potom s 25 ml vody a miešala sa za vzniku tuhej látky. Tá sa potom zozbierala a sušila za vzniku alkoholu, MS: m/e = 304 (M+1).

Krok 2

Produkt z kroku 1 (0,10 g, 0,33 mmol) sa zahrieval v BSA (10 ml) 4 hodiny pri 115 °C. Zmes sa skoncentrovala vo vákuu a zahrievala s CH₃OH. Produkt sa zozbieral a sušil za vzniku kryštalizačného produktu, MS: m/e = 286 (M+1).

-23Krok 3

Produkt z kroku 2 (0,285 g, 1,0 mmol) sa zmiešal s PBr₃ (2,0 ml, 21 mmol). Zmes sa zahrievala pri 145 °C 2 hodiny a potom sa ochladila a naliala na ľad. Zmes sa prefiltrovala a tuhé látky sa vysušili. Rekryštalizáciou z CH3OH sa získala požadovaná zlúčenina, MS: m/e = 348 + 350 (M+1).

Príprava 7

HOOC -Q-’

Kyselina 5-bróm-2-furánkarbónová (0,50 g, 2,6 mmol) sa zmiešala s NaHCO₃(0,44 g, 5,2 mmol) v hexáne (6 ml) a vode (5,2 ml). Pridal sa Selectfluor^R (0,98 g, 2,8 mmol) a zmes sa miešala 2 hodiny. Hexánová vrstva sa oddelila a vysušila nad MgSO4 za vzniku roztoku 2-bróm-5-fluórfuránu. Roztok sa potom zriedil THF (6 ml) a ochladil sa na -78 °C. Pridal s 2,5M n-BuLi/hexán (4,2 ml, 11 mmol). Zmes sa miešala 10 minút, pridal sa nadbytok suchého ľadu a zmes sa miešala ďalšiu hodinu. Potom sa na ňu pôsobilo 1N HCI, extrahovala sa s CH2CI2 a vysušila sa nad MgSO₄. Koncentrovala sa a sušila za vzniku požadovanej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky, PMR (CDCI₃) δ 6,70 + 7,28.

Príklad 1

Tosilát z prípravy 2 (0,55 g, 1,25 mmol) sa zmiešal s 1-(2,4-difluórfenyI)piperazínom (0,50 g, 2,5 mmol) v DMF (7 ml) a zahrieval sa pri 80 °C 20 hodín. Zmes sa skoncentrovala a vyčistila pomocou bleskovej stĺpcovej chromatografie (CH₂CI₂, CH₃OH+NH₃) za vzniku požadovanej zlúčeniny vo forme krémovej tuhej látky, hmotnostné spektrum m/e = 466 (M+H).

Podobným spôsobom sa pripravili nasledujúce zlúčeniny:

Príklad	Z-Y-	MS, [M+1] m/e
1-2	O-O^-	430
1-3	CI-£/-^N\_y^N_	498, 500, 502
1-4		498
1-5	Ο-Ό-	444
1-6	/=N /-Λ	431
1-7	och₃ d-o-	460
1-8	^fOO	448
1-9		404
1-10	Z~~K —	520
1-11	_F3c-o<>-	498

1-12	f₃c Κ“Η>	532, 534
1-13 I	^Η3%λ CI-θ-Ν^Ν-	478,480
1-14	och₃ 0-0- Cl	494,496
1-15		444
1-16	_c,_/a__n^_n_ o	478, 480
1-17	^ci~Oⁿ3ⁿ	464,466
1-18	/=N V.f'W	432
1-19	/—k Boe“N N— ^ch₃	468
1-20	0-0	431
1-21	h₃c /=^ '— oKJ-’VJ'-	472
1-22	Br—	508, 510
1-23	H₃CO HsCO-Q-nQn-	490

1-24	och₃ HaCO-O-O-	490
1-25	H₃c >n r-\	445
1-26	^h3c°On3n-	460
1-27	^nc~C^~ⁿC3ⁿ”	455
1-28	cf₃ ClT^N^NV-N ^v-^/	533, 535
1-29	s V_/	437
1-30	>=N /—\ Ml7ⁿv^ⁿ~	481
1-31	,^cl C-O-N__χΝ—	498, 500, 502
1-32	ÓO	448
1-33	/=N /—	432
1-34		444
1-35	H₃C^ Η^Ο-θ-Ν^Ν—	474

1-36	^Clx Cl	498, 500, 502
1-37	N —t H	470
1-38	F-XXl^jsl-	466
1-39	CH₃ ^FO^_bC^N_	462
1-40	/=N h₃ch₂c-<\ />-n n— x~N	460
1-41	^FH^^N3^N“ F	484
1-42	,cf₃ Q-0N- '—s	499
1-43	F	480
1-44	F AC-XX-'VJj-	462
1-45		474
1-46	Η₃ΟΟ-θ-θ-	478

1-47	F	484
1-48	^-N(CH₃)₂	517 I
1-49	F NC—\_N—	473
1-50	och₃ ^ρ-θΌ-	478
1-51	F. F	484
1-52	CK₃ _H3coO-n2n-	474
1-53	h₃co X=N /—\ <\ /)—N N— /—N '—' H₃CO	492
1-54	FsCohQ-nQn-	514
1-55	/=N t—\ F—v /)“N N“ v_n ^-⁷	450
1-56	no₂ ^f-O~O^n_	493
1-57	CN ^ρ-θ“θ	473 [

1-58	f₃c. y=N /—\	500
1-59	h₂n >=\ N /)-N N— ?-N H₂N	462
1-60	_ZO /=\ s-'	447
1-61	/=N y—\ ^H3^C“O^NV^^N”	445
1-62	/-OCH3 q-Oⁿ3ⁿ	504
1-63	^r-0 O-QfnQsI-	488
1-64	ft-O- F F	502
1-65	iM=V^ θΌ-ν^-	510
1-66	^ci-Ô-O-	482,484
1-67	F h₃coh^-n3n-	478
1-68	A-OCH3 \ /==\ /—\ h₃cc>	534

1-69		480
1-70	F ^h3CO-^^-N^N- F	496
1-71	och₃ ^f-0-O- F	496
1-72		444
1-73	F NC-0O- F	491
1-74	/— OCH₃ < f=\ r-Λ 0“C ytf“N N- H₃CO-\ M '—O	578
1-75	F. F fhQ-n^n- F F	520
1-76	z-och_{3 f} °-0-O—	522
1-77	°~V_/^_Nv-y^N~	560
1-78	o-QO^-	500

1-79	F h₃co-0-nQn- h₃co	508
1-80	H3C-A /—0 CH₃ °Ov-	532
1-81	h₃co X- °57-n^_n- F	540
1-82	CH3CK3 XT'V“ F	468
1-83	/—OH °-OC^N-	490
1-84	/-OCHa CF₃	572
1-85	t—OCH3 f o-CpO^- F	540
1-86	/—\ H₃CO 0 p-OO¹“·	522
1-87	1—OCH 3 .ch₃ °<λθ-	518
1-88	ζ- och₃ Q—_^N— Nc'	529

1-89 I	rOCHs /^CF3 \ /=( ,ch₃ ch₃o—/—	574
1-90	ä-CF₃ £q-O-	572
1-91	/^0Ρ3 h.co^-nQn-	528
1-92	z-OCH₃ \ /=\ s~\ f₃c	572
1-93	y-OCHa/CN 0 ——	529
1-94	</—och₃ f-O-O-	522
1-95	z-O^{7 K}DCH₃ O“~^ /—	548
1-96	^_^r-OCH₃ ÓCH/O-^^-N^N-	548
1-97	/=\_ ?^H3	437
1-98	z-ch₃ C° '’O’LJ'-	518

1-99	cooch₂ch₃ θ-ΟΌ^-	532
1-100	^COOH	504
1-101		518
1-102	HO	479, 501
1-103		401
1-104	°C“- NC '—'	454
1-105	B'-O-Cn-	507, 509
1-106	cyo-	443
1-107	0	471
1-108		457
1-109	nh—	401

1-110	αρ- Η	440
1-111	ην\^ν-Ο⁵“ 0	485
1-112		429
1-113	Ρ HÍ.JO 0	499
1-114	□33-	461
1-115	ΗΟ—_^Ν—	446
1-116	ο₂ν —ν—	475
1-117	(H3O2N-Q— Ν—	473
1-118	H3CH2CQ—_Ν—	474
1-119	,ch₃ 0-0- ch₃	458
1-120	OH Q-O“	446

1-121	^HCV (Χλ	446
1-122	h₃co 0-0- h₃cc>	490
1-123	HaCO-C^-N^N- Cl	528, 530, 532
1-124	^H3^C°-0-0-	460
1-125	h₃c HsC-Q-nQn-	458
1-126	CH₃ ^Η3θ-θ-Ν^Ν-	458
1-127	HO OC- .	445
1-128	HO ^er-00-	523, 525
1-129	/~~ύ ΛΛ /“V O\ N—β—_K	515
1-130	Me /~\ /=\ Γ' MeO 0— N	518
1-131	Me /=\ /—\ __	493
1-132	MeO—\ MeO 0~^~^— N\_N—	548

1-133	MeO O—0 ,Ν— '— Me	493
1-134	°0^Η°'Ο^ΝΟ^-	530
1-135	os-\ /=\ r~\ Me Q^-—	507
1-136	0 Me _/^N	487
1-137	Cl °y^\ /=\ Me Q—/Z \	531
1-138	EtOOC-^~~^— \l—	487
1-139		531
1-140	H₂NO₂S——	494
1-141	0~^N_ MeO	419
1-142	^θι0~Ο-	461,463
1-143	ox>	459
1-144	ô-	441
1-145		457

1-146	,^N=\ r~\ V/ V?'-	431
1-147 I	F	407

Príkiad 2

Krok 1

Produkt z prípravy 1 (0,60 g, 2,5 mmol) sa zmiešal s 1,3-dobrómpropánom (0,60 g, 3,0 mmol) a NaH (60%-ný v oleji, 0,119 g, 3,0 mmol) v suchom DMF (9 ml). Zmes sa miešala pod N₂ 2 hodiny a potom sa skoncentrovala a bleskovou chromatografiou sa získala požadovaná zlúčenina ako tuhá látka (PMR v CDCb + CD3OD: δ 2,43 kvintet, 3,38 + 4,51 triplety, 8,09s) ako 8-substituovaný izomér.

Krok 2

Produkt z kroku 1 (0,050 g, 0,14 mmol) sa zmiešal s 1-fenylpiperazínom (0,045 g, 0,28 mmol) v DMF (2 ml) a zmes sa zahrievala pri 80 °C 4 hodiny. Zmes sa potom skoncentrovala a čistila bleskovou chromatografiou (CH₂Ci₂₎CH3OH+NH3) za získania požadovanej zlúčeniny vo forme krémovej tuhej látky, hmotnostné spektrum m/e = 443 (M+H).

Podobným spôsobom sa pripravili nasledujúce zlúčeniny:

Príklad	Z	MS, [M+1] m/e
2-2	^ciO^	478, 480
2-3	H₃CO-^2^—	474

Príklad 3

Zlúčenina z príkladu 1-2 sa pripravila tiež aj nasledujúcim spôsobom:

Produkt z prípravy 1 (0,15 g, 0,6? mmol) sa zmiešal s 1 -fenyl-4-(2-chlóretyl)piperazínom (0,17 g, 0,75 mmol) a NaH (60%-ný voleji, 0,035 g, 0,87 mmol) v suchom DMF (7 ml). Zmes sa miešala pod N₂ 48 hodín a potom sa pridal ďalší chlorid (0,03 g) a NaH (0,005 g) a zmes sa miešala ešte 72 hodín. Zmes sa skoncentrovala a čistila pomocou bleskovej stĺpcovej chromatografie (CH2CI2, CH3OH+NH3) za vzniku požadovanej zlúčeniny vo forme krémovej tuhej látky, hmotnostné spektrum m/e = 429 (M+H).

Podobným spôsobom sa pripravila zlúčenina z príkladu 1-3 a aj nasledujúce zlúčeniny:

Príklad	Z-Y-X-	MS, m/e
3-1	(H₃C)₃C-O /—\ y— ^-Ν N—' 0 ^x'	454

3-2		444
3-3	OO-v	429

Príklad 4

1-(2,4-Difluórfenyl)piperazín (1,5 g, 7,6 mmol) sa zmiešal s etyl-2-brómpropionátom (1,65 g, 9,1 mmol) a DIPEA (1,1 g, 8,3 mmol) v DMF (8 ml). Zmes sa miešala 4 hodiny, skoncentrovala sa a rozdelila medzi Et₂O a vodu. Premyla sa soľankou, vysušila nad MgSCL a skoncentrovala za vzniku esteru vo forme žltého oleja, NMR (CDCI₃) zodpovedajúce.

Krok 2

K produktu z kroku 1 (2,15 g, 7,2 mmol) v THF (10 ml) sa po kvapkách pridal LiAIH₄ (1,0M v THF, 4,4 ml, 4,4 mmol). Zmes sa zahrievala pri 60 °C 1 hodinu a potom sa pridala voda (0,16 ml), 15% NaOH (0,16 ml) a potom znova voda (0,49 ml). Zmes sa prefiltrovala a skoncentrovala za získania alkoholu vo forme žltého oleja, NMR (CDCI₃) zodpovedajúce.

-40Krok 3

K produktu z kroku 2 (0,90 g, 3,5 mmol) v CH2CI2 (10 ml) pri 5 °C sa pridal SOCI₂ (0,38 ml, 5,3 mmol). Zmes sa nechala zahrievať a miešala sa 16 hodín. Potom sa skoncentrovala a rozdelila medzi CH2CI2 a 1N NaOH, premyla vodou, vysušila (MgSO4) a skoncentrovala za vzniku surového produktu vo forme žltého oleja.

Krok 4

Produkt z prípravy 1 (0,20 g, 0,83 mmol) sa zmiešal s produktom z kroku 3 (0,34 g, 1,2 mmol) a NaH (60%-ný v oleji, 0,040 g, 1,0 mmol) v suchom DMF (5 ml). Zmes sa zahrievala pri 60 °C 24 hodín a potom sa pridal ďalší chlorid (0,15 g) a NaH (0,02 g) a zmes sa zahrievala ďalšie 4 hodiny. Pootm sa skoncentrovala a čistila pomocou bleskovej stĺpcovej chromatografie (CH2CI2, CH3OH+NH3) za vzniku požadovanej zlúčeniny vo forme žitej tuhej látky, hmotnostné spektrum m/e = 479 (M+H).

Podobne sa pripravila nasledujúca zlúčenina:

Príklad 4-2: MS, m/e = 478, 480

Príklad 5

Nasledujúce zlúčeniny sa pripravili použitím postupu z príkladu 1, kde sa tosilát z prípravy 2 nahradil tosilátom z prípravy 4:

Príklad	Z	MS, [M+1] m/e
5-1	^F“CX~	482
5-2	0OCH₃	520
5-3	^OCHa F o-Q-	538

Príklad 6

Krok 1

K roztoku produktu z príkladu 3-1 (4,17 g, 9,2 mmol) v CH2CI2 (500 ml) sa pridala bezvodá HCl (120 ml 4,0M dioxánový roztok) a zmes sa miešala 2 hodiny. Zmes sa skoncentrovala do sucha vo vákuu a zvyšok sa vložil do vody. Zmes sa zalkalizovala vodným roztokom NaOH a zozbierala sa zrazenina produktu, v ktorom sa odstránili ochranné skupiny. Hmotnostné spektrum: MH+ = 354.

Krok 2

Zmes produktu z kroku 1 (71 mg, 0,2 mmol) a 4-metoxybenzoylchloridu (51 mg, 0,3 mmol) v suchom DMF (10 ml) obsahujúcom Λ/,/V-diizopropyletylamín (52 mg, 0,4 mmol) sa miešala 6 hodín pri teplote miestnosti. Roztok sa potom nalial do vody a zozbierala sa zrazenina požadovanej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: MH+ = 488.

Podobným spôsobom sa pripravili nasledujúce zlúčeniny:

Príklad	Z-	MS, [M+1] m/e
6-2	P<>-o O/	502
6-3	0	396
6-4	f₃c Qt? f₃c	594
6-5	o	464
6-6	H₃C h₃c ⁰	438
6-7		464
6-8	Opi	459
6-9	^Η3θ-ζ^-ΤΓ^ 0	472
6-10	^HV^ HaC²/ o H₃C	452
6-11	HaC H₃C _Ch₃h₃c-4-q Y~ir-£ h₃c ₀<h^NH o	539
6-12	=<~ΙΓ? h₃co-0 ⁰ h₃co	532
6-13	^F\_y n 2 P ⁰ F	508

6-14	^h3cT³ V 0 H₃C	551
6-15	/•-H (H₃C)₂N o.	439
6-16	^cl_C^Tr· £ ^-⁷ 0-	492

Príklad 7

Cl

NH /—s, £-N N

O ^-⁷

K roztoku produktu z príkladu 6, krok 1 (53 mg, 0,15 mmol) v NMP (10 ml) sa pridal 4-chlórfenylizokyanát (25,3 mg, 0,165 mmol) pri teplote miestnosti. Zmes sa miešala cez noc a pridalo sa ďalších 25,3 mg izokyanátu a zmes sa miešala 1 hodinu, kým úplne neprebehla konverzia východiskovej zlúčeniny. Zmes sa potom naliala do vody a zozbierala sa zrazenina požadovanej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: MH+ = 507.

Podobným spôsobom sa pripravili nasledujúce zlúčeniny z vhodného izokyanátu, izotiokyanátu alebo karbamoylchloridu:

Príklad	Z-	MS, [M+1] m/e
7-2		517
7-3	CTÍ	451

7-4	H N^-n—£ H3CX O H₃C ^ch3	453
7-5	W o	491 i
7-6	yj o F	509
7-7	0	467

Príklad 8

Produkt z príkladu 6, krok 1 (53 mg, 0,15 mmol) sa suspendoval v suchom DMF (20 ml) obsahujúcom trietylamín (77 mg, 0,76 mmol), pridal sa 2,4-difluórbenzénsulfonylchlorid (37 μΙ, 0,225 mmol). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti 2 dni. Potom sa naliala do vody a zozbierala sa zrazenina požadovanej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: M+ = 529.

Podobným spôsobom sa pripravili nasledujúce zlúčeniny:

Príklad	Z-	MS, [M+1] m/e
8-2	_y^cl P _cr °	561,563, 565

8-3	O	529
8-4	a-o-r? 0	571,573
8-5		511
8-6	O	554
8-7	h₃co-Q-s-^ O	524
8-8	H3C. /? , O	446

Príklad 9

K suspenzii produktu z príkladu 6, krok 1 (71 mg, 0,2 mmol) v teplom DMF (25 ml) obsahujúcom trietylamín (101 mg, 1,0 mmol) sa pridal 4-metoxyfenylchlórformiát (56 mg, 0,3 mmol). Zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Potom sa skoncentrovala na 1/3 objemu a naliala sa do vody. Zrazenina sa zozbierala, premyla vodou a vysušila vo vákuu. Rekryštalizáciou z CH3OH/CH2CI2 vznikla požadovaná zlúčenina. Hmotnostné spektrum: MH+ = 504.

-46Príklad 10

Krok 1

Zmiešal sa 1-bróm-2,4-difluórbenzén (1,0 g, 5,18 mmol), Λ/,Λ/’-dimetyIetyléndiamínu (2,74 g, 31,1 mmol), NaO-ŕ-Bu (0,70 g, 7,2 mmol), Pd(dba)₂ (0,060 g, 0,10 mmol) a (±)-BINAP (0,19 g, 0,31 mmol) v toluéne (10 ml). Zmes sa zahrievala pri 110 °C 18 hodín, potom sa nechala ochladiť a extrahovala sa s 1N HCI. Zmes sa zalkalizovala vodným roztokom NaOH a extrahovala s CH₂CI₂. Potom sa vysušila a čistila pomocou PLC za vzniku /V-(2,4-difluórfešnyl)-/V,/\/’-dirnetyIetyléndiamínu.

Krok 2

Zmiešal sa produkt z prípravy 2 (0,100 g, 0,23 mmol) s produktom z kroku 1 (0,091 g, 0,46 mmol) v DMF (2 ml). Zmes sa zahrievala pri 80 °C 90 hodín, potom sa nechala ochladiť, skoncentrovala sa a čistila na stĺpcovej chromatografii za vzniku požadovanej zlúčeniny ako oleja, hmotnostné spektrum m/e = 467.

Príklad 11

Zlúčenina z príkladu 1-2 sa pripravila nasledujúcim spôsobom.

Krok 1

Do roztoku produktu z prípravy 1, krok 1, (768 mg, 4 mmol) v DMF (20 ml) sa pridal Λ/,/V-diizopropyletylamín (0,88 ml, 5 mmol), nasledovalo pridanie hydrátu hydrazínu (0,2 ml, 4,1 mmol). Roztok sa zahrial a tuhá látka sa vyzrážala a pozvoľne počas hodiny rozpustila. Po miešaní 3 hodiny sa roztok skoncentroval vo

-47vákuu na približne 1/3 objemu a nalial do vody. Zrazenina sa zozbierala a rekryštalizovaia zCH₃OH, čím sa získal chlórpyrazolpyrimidín. Hmotnostné spektrum: MH+ = 170.

Krok 2

Cl

Do miešaného roztoku 1-fenylpiperazínu (6,5 g, 40 mmol) a 50% vodného roztoku chlóracetaldehydu (6,4 ml, 48 mmol) v CH₂CI₂ (125 ml) sa pri 5 až 10 °C pridal po častiach Na(OAc)₃BH (12,72 g, 60 mmol). Keď penenie prestalo, zmes sa zahriala na teplotu miestnosti a miešala 3 hodiny. Zriedila sa CH₂CI₂ (100 ml) a pretrepala 1N vodným roztokom NaOH, čím sa pH upravilo na približne 8. Organická vrstva sa premyla vodou a soľankou, vysušila nad MgSO4 a rozpúšťadlo sa odstránilo. Chromatografiou na oxide kremičitom elúciou s 1% CH₃OH/CH₂CI₂ sa získala v nadpise uvedená zlúčenina. Hmotnostné spektrum: MH+ = 225.

Krok 3

Do suspenzie 60% NaH (0,14 g, 3,5 mmol) v DMF (30 ml) v ľadovom kúpeli sa po častiach pridal produkt kroku 1 (0,51 g, 3 mmol). Výsledná zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Tmavočervená nerozpustná látka sa odfiltrovala a filtrát sa skoncentroval dosucha vo vákuu. Trituráciou gumového zvyšku s CH₃OH sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme svetložltej tuhej látky. Hmotnostné spektrum: MH+ = 358.

Produkt z kroku 3 sa spracoval spôsobom opísaným v príprave 1, krok 2 a 4, čím sa získala zlúčenina z príkladu 1 až 2.

-48Príklad 12

Krok 1

K NaH (60% voleji, 142 mg, 3,5 mmol) v DMF (15 ml) sa pridal chlorid z príkladu 11, krok 1 (500 mg, 2,9 mmol). Do tejto zmesi sa pridal 1-(2-chlóretyl)-4(2,4-difluórfenyl)piperazín (846 mg, 3,5 mmol). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti 90 hodín a potom sa skoncentrovala. Chromatografiou sa získala požadovaná zlúčenina vo forme bielej tuhej látky. PMR v DMSO: δ 2,57 (4H, s), 2,76 (2H, t), 2,85 (4H, s), 4,30 (2H, t), 7,0 (2H, m), 7,15 (1 H, dxt), 7,26 (2H, s), 7,97 (1H,s).

Krok 2

Na chlorid z kroku 1 (37 mg, 0,095 mmol) v DMF (95 ml) sa pôsobilo hydrátom hydrazínu (9,2 μΙ, 0,19 mmol). Po 4 hodinách sa zmes skoncentrovala a chromatografiou na PLC sa získal hydrazín vo forme hnedého oleja. Hmotnostné spektrum: MH+ = 390.

-49Krok 3

Na hydrazín z kroku 2 (18 mg, 0,047 mmol) v DMF (2 ml) sa pôsobilo tiofén2-karbonylchloridom (5,2 μΙ, 0,047 mmol) a DIPEA (12,2 μΙ, 0,07 mmol). Po 4 hodinách sa zmes skoncentrovala a chromatografiou na PLC sa získal hydrazid vo forme žltého oleja. Hmotnostné spektrum: MH+ = 500.

Krok 4

Hydrazid z kroku 3 (13 mg, 0,026 mmol) v A/,O-bis(trimetylsilyl)acetamide (1 ml) sa zahrieval 2 hodiny pri 100 °C. Skoncentrovaním a chromatografiou na PLC sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky. Hmotnostné spektrum: MH+ = 482.

1-(2-Chlóretyl)-4-(2,4-difluórfenyl)piperazín použitý v tejto sekveneii sa pripravil v dvoch krokoch. Chlóracetylchlorid (1,76 ml, 22,1 mmol) a /V-metylmorfolín (2,65 ml, 24,1 mmol) sa pri 0 °C pridali do 1-(2,4-difluórfenyl)piperazínu (3,98 g, 20,1 mmol) v CH2CI2 (15 ml). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti, skoncentrovala, rozdelila medzi EtOAc-vodu, vysušila a skoncentrovala, čím sa získal amid vo forme hnedého oleja. Do 0 °C roztoku tejto zmesi (4,71 g, 17,1 mmol) v THF (25 ml) sa po kvapkách pridal BH3*CH3S/THF (2M, 12,8 ml, 25,6 mmol). Zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti, reakcia sa uhasila CH₃OH, zmes sa skoncentrovala a rozdelila medzi CH₂CI₂-vodu. Organická vrstva sa vysušila a skoncentrovala. Na surový produkt sa druhýkrát pôsobilo BH₃*CH₃S/THF a potom sa spracoval ako je opísané vyššie, čím sa získal chlóretylpiperazín vo forme hnedého oleja.

Príklad 13

NH

Krok 1

K NaH (2,14 g, 60% voleji, 53 mmol) v DMF (20 ml) sa pridal produkt z príkladu 11, krok 1 (7,55 g, 45 mmol). Potom sa pridal 1-bróm-2-chlóretán (14,8 ml, 178 mmol). Zmes sa miešala 1,5 hodinu a skoncentrovala sa. Chromatografiou sa získal dichlorid vo forme bielej tuhej látky.

Krok 2

K produktu z kroku 1 (3,7 g, 16 mmol) v DMF (20 ml) sa pridal tercbutylkarbazát (2,53 g, 19 mmol). Zmes sa zahrievala pri 80 °C 18 hodín a potom sa skoncentrovala. Chromatografiou sa získal karbazát vo forme bielej tuhej látky.

Krok 3

K produktu z kroku 2 (3,16 g, 9,6 mmol) a Kl (1,6 g, 9,6 mmol) v DMF (25 ml) sa pridal 1-(2,4-difluórfenyl)piperazín (3,82 g, 19 mmol). Zmes sa zahrievala pri 90 °C 68 hodín a potom sa skoncentrovala. Chromatografiou sa získal piperazín vo forme hnedej tuhej látky.

Krok 4

Produkt z kroku 3 (3,38 g, 6,9 mmol) sa rozpustil v 1:1 CH3OH-CH2CI2 (50 ml). Pridal sa 4M HCI v dioxáne (20 ml). Zmes sa miešala 16 hodín a pridal sa

-51 vodný roztok NH₃ aby sa pH upravilo na 11 až 12. Koncentráciou a chromatografiou sa získal hydrazín vo forme žltej tuhej látky.

Krok 5

Produkt z kroku 4 (0,120 g, 0,31 mmol) sa zmiešal s kyselinou 5-bróm-2furánkarbónovou (0,071 g, 0,37 mmol) a HOBt*H2O (0,050 g, 0,37 mmol) v DMF (6 m!). Pridal sa EDCI (0,071 g, 0,37 mmol) a zmes sa miešala hodinu. Koncentráciou a chromatografiou sa získal hydrazid vo forme žltej tuhej látky.

Krok 6

Produkt z kroku 5 (0,163 g, 0,28 mmol) sa rozpustil v /V,O-bis(trimetylsilyI)acetamide (6 ml). Zmes sa zahrievala pri 120 °C 16 hodín a naliala do CH₃OH. Koncentráciou a chromatografiou sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme šedobielej tuhej látky: MS m/e 544+546 (M+1).

Podobne sa pripravili zlúčeniny nasledujúcich vzorcov, kde R je určené v tabuľke:

Príklad	R	MS m/e
13-2	Me	480
13-3	-Q-o.	500, 502
13-4	-O N H	465
13-5	“Q Me	479

13-6		544,546
13-7	-o	466
13-8		512
13-9		476
13-10		484

Príklad 14

Na produkt z príkladu 13, krok 4 (0,080 g, 0,20 mmol) sa pôsobilo hydrochloridom nikotinoylchloridu (0,044 g, 0,25 mmol) a diizopropyletylamínom (0,086 ml, 0,49 mmol) v DMF (4 ml). Zmes sa miešala 2 hodiny, koncentráciou a chromatografiou sa získal hydrazid vo forme bielej tuhej látky.

Na tento materiál sa pôsobilo BSA ako je opísané v príklade 13, krok 6, čim sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky: MS m/e 477 (M+1).

Príklad	R	MS, m/e
14-2	—ξ^Ο₂	511
14-3	~ó	494

Príklad 15

Krok 1

K produktu z príkladu 13, krok 2 (3,54 g, 10,8 mmol) a Kl (1,79 g, 10,8 mmol) v DMF (35 ml) sa pridal 1-(4-(2-metoxyetoxy)fenyl)piperazín (5,1 g, 22 mmol). Zmes sa zahrievala pri 90 °C 90 hodín a potom sa skoncentrovala. Chromatografiou sa získal piperazín vo forme hnedej tuhej látky.

Krok 2

Na produkt z kroku 1 sa pôsobilo HCl ako je opísané v príklade 13, krok 4, čím sa získal hydrazín vo forme žltej tuhej látky.

Krok 3

Na produkt z kroku 2 sa pôsobilo kyselinou 5-chlór-2-furánkarbónovou ako je opísané v príklade 13, krok 5, čím sa získal hydrazid vo forme žltej tuhej látky.

Krok 4

Na produkt z kroku 3 sa pôsobilo BSA ako je opísané v príklade 13, krok 6. Chromatografiou sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS m/e 538+540 (M+1).

Príklad	R	MS, m/e
15-2	-Ο-ΒΓ O	582, 584
15-3		532
15-4	F	550
15-5	-ty_r	522
15-6		518

Príklad 16

Produkt s príkladu 1-83 (0,080 g, 0,16 mmol) sa zmiešal s Ac₂O (0,028 ml, 0,28 mmol) a 4-dimetylaminopyridínom (0,004 g, 0,03 mmol) v DMF (5 ml). Zmes sa miešala 4 hodiny, skoncentrovala a chromatografiou sa získal acetátester vo forme bielej tuhej látky, MS: m/e = 532 (M+1).

Príklad 17

- 55Produkt s príkladu 1-21 (0,100 g, 0,21 mmol) sa zmiešal s H₂NHOH»HCI (0,029 g, 0,42 mmol) v 95% EtOH (9 ml). Pridalo sa 10 kvapiek koncentrovanej HCI, zmes sa zahrievala za refluxu 5 hodín, pridal sa DMF (1,5 ml), zmes sa zahrievala 18 hodín, potom sa nechala ochladiť a prefiltrovala sa, čím sa získal oxím vo forme bielej tuhej látky, MS: m/e = 487 (M+1). Chromatografiou materského lúhu sa získal ďalší produkt.

Podobne sa pripravil metoxím, biela tuhá látka, MS m/e = 501 (M+1).

Príklad 17-2

Príklad 18

Krok 1

K roztoku 4-brómfenetylalkoholu (0,600 g, 2,98 mmol) a kyseliny 3-pyridinylborónovej (0,734 g, 5,97 mmol) v toluéne (35 ml) a EtOH (9 ml) sa pridal roztok K₂CO₃ (0,8826 g, 5,97 mmol) v H₂O (16 ml) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium(0) (0,172 g, 0,149 mmol). Zmes sa zahrievala v uzavretej skúmavke pri 120 °C 18 hodín a potom sa ochladila. Zmes sa extrahovala EtOAc, premyla soľankou, vysušila (K₂CO₃) a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom (30 až 50% EtOAc/hexány) sa získal biarylalkohol.

-56Krok2

K produktu z kroku 1 (0,540 g, 2,71 mmol) v CH₂CI₂ (15 ml) sa pri 0 °C pridal mesylchlorid (0,35 ml, 3,52 mmol) a Et₃N (0,57 ml, 4,00 mmol). Zmes sa miešala 2,5 hodiny a extrahovala CH2CI2. Vysušením (Na₂SO₄) a skoncentrovaním sa získal mesilát.

Krok 3

Produkt z prípravy 4 (0,347 g, 1,44 mmol) sa pridal do mesilátu z kroku 2 (0,480 g, 1,73 mmol) v DMF (4,5 ml), nasledovalo pridanie NaH (60% voleji, 0,082 g, 4,04 mmol). Zmes sa miešala 18 hodín a extrahovala EtOAc. Zmes sa premyla H₂O, vysušila (K₂CO₃) a skoncentrovala. Čistením PTLC (5% CH3OH/CH2CI2, premyté dvakrát) sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS: 423 (M+1).

Postupom opísaným vyššie sa pripravili nasledujúce zlúčeniny (príklad 18-8 z komerčne dostupného bifenyletanolu):

Príklad	Z-Y-	MS, m/e
18-2		468
18-3		452
18-4	B°OO-	466
18-5		506
18-6		453

18-7		423
18-8	Q-Q-	422
18-9	0	423

Príklad 19

Krok 1

Zmiešal sa 4-brómfenetylalkohol (3,00 g, 14,9 mmol), trietylamínu (2,68 ml, 19,2 mmol), dimetylaminopyridín (0,180 g, 1,47 mmol) a terc-butyldimetylsilyl-chlorid (2,45 g, 16,3 mmol) v CH2CI2 (75 ml). Zmes sa miešala 1 hodinu, potom sa premyla H2O, vysušila (K2CO3), a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom (hexány) sa získal silyléter.

Krok 2

K zlúčenine z kroku 1 (0,300 g, 0,95 mmol) v suchom toluéne (15 ml) sa pridal 2-(tri-butylstanyl)pyridin (1,05 g, 2,86 mmol) a tetrakis(trifenylfosfín)paládium (0,11 g, 0,095 mmol). Zmes sa prepláchla N₂ a zahrievala pri 120 °C 16 hodín. Ochladila sa, prefiltrovala cez celit, premyla NH₄CI, soľankou a potom vodou. Zmes

-58sa vysušila a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom (3 až 5% EtOAc/hexány) sa získal biaryl, MS 314 (M+1).

Krok 3 ,

Biaryl z kroku 2 (0,180 g, 0,57 mmol) sa spojil s TBAF (1M v THF, 1,7 ml) v THF (5,7 ml). Zmes sa miešala 2 hodiny, premyla sa nasýteným roztokom NH₄CI a extrahovala EtOAc. Zmes sa niekoľkokrát premyla H2O, vysušila (K2CO3) a skoncentrovala, čím sa získal alkohol.

Krok 4 a 5

Ďalej sa postupovalo ako je písané v príklade 18, krok 2 a 3, čím sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS: 423 (M+1).

Podobne sa pripravili nasledovné zlúčeniny:

Príklad 19-2, MS: 424 (M+1)

Príklad 19-3, MS: 423 (M+1)

Príklad 20

Do produktu z príkladu 18 (0,055 g, 0,13 mmol) v CH2CI2 (1,5 ml) sa pri -78 °C pridal m-CPBA (0,050 g, 0,29 mmol). Zmes sa nechala zahriať, miešala sa 5 hodín a postupne sa premyla nasýteným roztokom Na2S2O3, 5% K2CO3 a H2O.

-59Zmes sa potom vysušila (Na₂SO₄) a skoncentrovala. Čistením PTLC (10% CH3OH/CH2CI2) sa získala v nadpise uvedená zlúčenina, MS: 439 (M+1).

Podobne sa získal suifoxid okysličením produktu z príkladu 18-2 pri 0 °C alebo teplote miestnosti, MS: 484 (M+1), alebo suifón, MS: 500 (M+1).

Príklad 20-2 Príklad 20-3

Príklad 21

Produkt z prípravy 6 (0,104 g, 0,30 mmol) sa zmiešal so 4-metylbenzéntiolom (0,075 g, 0,60 mmol) a K2CO3 (0,091 g, 0,66 mmol) v DMF (20 ml). Zmes sa zahrievala pri 80 °C 5 hodín a skoncentrovala sa. Rekryštalizáciou z CH3OH sa získala v nadpise uvedená zlúčenina, MS: m/e = 392 (M+1).

Podobne sa pripravili nasledujúce zlúčeniny:

Príklad	Z	MS, m/e
21-2	——OMe	408
21-3	Cl Ji	426, 428

21-4	Me	394
21-5	N=\ 0	. 379

Príklad 22

Produkt z prípravy 6 (0,11 g, 0,25 mmol) sa zmiešal s 3,4-dimetoxyfenolom (0,154 g, 1,0 mmol) a K₂CO₃ (0,138 g, 1,0 mmol) v DMF (5 ml). Zmes sa zahrievala pri 90 °C 48 hodín a potom sa skoncentrovala. Rozdelila sa medzi EtOAc a vodu, premyla 1N NaOH a potom soľankou, vysušila nad MgSO₄ a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom (1,5% ΟΗ₃ΟΗ/ΟΗ₂ΟΙ₂) sa získala v nadpise uvedená zlúčenina, MS: m/e = 422 (M+1).

Podobne sa pripravila nasledujúca zlúčenina, MS: m/e = 454 (M+1).

Príklad 22-2

Príklad 23

MeQ

MeO

-61 Krok 1

K NaH (60% v oleji, 132 g, 33 mmol) v DMF (25 ml) sa pri 5 °C po kvapkách počas miešania pridal 3,4-dimetoxyfenol (4,77 g, 30 mmol). Po 0,5 hodine sa pridal 1,5-dibrómpentán (20,7 g, 90 mmol). Zmes a miešala 2 hodiny a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom (CH2CI2) sa získal monobromid, MS: m/e = 303 (M+1).

Krok 2

K NaH (60% voleji, 0,044 g, 1,1 mmol) v DMF (25 ml) sa pri 5 °C pridal produkt z prípravy 1 (0,241 g, 1,1 mmol). Po 0,5 hodine sa pridala zlúčenina z kroku 1. Zmes sa nechala zahriať, miešala sa 18 hodín a potom sa skoncentrovala. Zmes sa potom rozdelila medzi EtOAc a vodu, premyla 1N NaOH a neskôr soľankou, vysušila nad MgSO4 a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom (2% CH3OH/CH2CI2) a rekryštalizáciou vhodnej frakcie CH₃CN sa získala v nadpise uvedená zlúčenina, MS: m/e = 464 (M+1).

Príklad 24

TsOnh₂ ^Me0\ ΓΛ N^N'V.0 nh₂ r°\/“^ (VA, nV-/ krok 1 SA-/

NH₂

N j N-⁷

Príklad 24

MeONH₂ krok 3

HCI krok 2

NH₂ v Y /—\ N ^x N'N\ χθχ

Μ=·*

Krok 1

1,4-Dioxa-8-azaspiro(4,5)dekán (0,48 ml, 3,8 mmol) sa zmiešal s produktom z prípravy 2 (0,66 g, 1,5 mmol) v DMF (10 ml). Zmes sa zahrievala pri 90 °C 16

--62hodín, nechala sa ochladiť, prefiltrovala sa a premyla CH₃OH, čím sa získala šedobiela tuhá látka, MS: m/e = 411 (M+1).

Krok 2

Produkt z kroku 1 (0,476 g, 1,16 mmol) v acetóne (10 ml) a 5% HCI (10 ml) sa zahrievali pri 100 °C 16 hodín. Zmes sa ochladila, neutralizovala nasýteným roztokom NaHCO₃ a extrahovala 10% CH₃OH v CH2CI2. Vysušením (MgSC>4), skoncentrovaním a chromatografiou na oxide kremičitom s CH₃OH-CH₂Cl2 sa získal ketón vo forme bieleho prášku, MS: m/e = 367 (M+1).

Krok 3

Produkt z kroku 2 (0,050 g, 0,13 mmol) sa zmiešal s hydrochloridom O-metylhydroxylamínu (0,033 g, 0,39 mmol) v pyridíne (3 ml). Zmes sa miešala 16 hodín a potom sa skoncentrovala. Rozdelila sa medzi NaHCO₃ (nasýtený roztok) s 5% CH₃OH v CH2CI2. Vysušením (MgSC>4), skoncentrovaním a chromatografiou na oxide kremičitom s 5% CH₃OH-CH₂Cl2 sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS: m/e = 396 (M+1).

Podobne sa pripravili nasledujúce zlúčeniny:

Príklad	R¹¹	MS, m/e
24-2	-CH₂CH₃	410
24-3	-ch₂ch₂ch₃	424
24-4	-CH2CHCH2	422
24-5	-C(CH₃)₃	438
24-3	-c₆h₅	458
24-4	-ch₂c₆h₅	472

-63Príklad 25

Krok 1

Benzyl-4-oxo-1-piperidínkarboxylát (1,0 g, 4,3 mmol) sa zmiešal s H2NOH.HCI (0,89 g, 13 mmol) v pyridíne (5 ml). Zmes sa miešala 16 hodín a skoncentrovala. Rozdelila sa medzi NaHCC>3 (nasýtený roztok) a EtOAc, vysušila (MgSO₄) a skoncentrovala, čím a získal oxím.

Krok 2

Produkt s kroku 1 (0,44 g, 1,8 mmol) sa zmiešal s 2-brómetyl-metyléterom (0,20 ml, 2,2 mmol) a NaH (0,10 g, 2,7 mmol) v DMF (8 ml). Zmes sa miešala 16 hodín a potom sa skoncentrovala. Rozdelila sa medzi NH4CI (nasýtený roztok) a éter, vysušila (MgSO₄) a skoncentrovala. Chromatografiou zvyšku na oxide kremičitom s 20% EtOAc-hexán sa získal alkylovaný oxím.

Krok 3

Produkt z kroku 2 (0,45 g, 1,47 mmol) sa miešal nad 5% Pd/C (0,045 g) v EtOAc (25 ml) pod H₂ 6 hodín. Zmes sa prefiltrovala a skoncentrovala, čím sa získal amín.

Krok 4

Na amín z kroku 3 sa pôsobilo produktom z prípravy 2 spôsobom opísaným v príklade 24, krok 1, čím sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS: m/e 440 (M+1).

-64Príklad 26

Triacetoxyborhydrid sodný (0,083 g, 0,39 mmol) sa pridal do zmesi produktu z príkladu 24, krok 2 (0,050 g, 0,13 mmol), anilínu (0,035 ml, 0,39 mmol) a AcOH (0,045 ml, 0,78 mmol) v dichlóretáne (3 ml). Zmes sa miešala 16 hodín a rozdelila sa medzi NaHCO3 (nasýtený roztok) a 5% CH3OH v CH₂CI₂. Zmes sa vysušila (MgSO₄) a skoncentrovala. Chromatografiou (5% CH₃OH-CH₂CI₂) sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS m/e 444 (M+1).

Podobným spôsobom sa pripravila nasledovná zlúčenina, MS: m/e 445 (M+1).

Príklad 27

Krok 1

4-Brómfenol (3,46 g, 20,0 mmol) sa zmiešal s 2-brómetyl-metyléterom (2,82 ml, 30,0 mmol) a K₂CO₃ (8,30 g, 60,0 mmol) v acetóne (50 ml). Zmes sa zahrievala pri refluxe 16 hodín, ochladila sa, prefiltrovala a skoncentrovala.

-65Chromatografiou na oxide kremičitom s 5% EtOAc/hexán a získal éter vo forme čistého oleja. K tomuto éteru (2,73 g, 11,8 mmol) v suchom THF (50 ml) sa pri -78 °C pridal n-BuLi (1,6M v hexáne, 7,4 ml, 11,8 mmol). Zmes sa miešala 10 minút a pridal sa roztok benzyl-4-oxo-1-piperidínkarboxylátu (2,5 g, 10,7 mmol) v suchom THF (5 ml). Zmes sa miešala 2 hodiny a nechala sa zahriať. Potom sa rozdelila medzi nasýtený roztok NH₄CI a EtOAc, vysušila (MgSO₄) a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom s EtOAc/hexán (20:80, potom 40:60) sa získal alkohol.

Krok 2

Do roztoku produktu z kroku 1 (0,386 g, 1,0 mmol) a trietylsilánu (0,80 ml, 5,0 mmol) v suchom CH2CI2 (10 ml) sa pri -78 °C pridala kyselina trifluóroctová (0,38 ml, 5,0 mmol). Zmes sa zahrievala 2 hodiny a rozdelila medzi nasýtený roztok NaHCO₃a CH2CI2. Zmes sa vysušila (MgSO₄) a skoncentrovala. Chromatografiou na oxide kremičitom s 20% EtOAc/hexán sa získal redukčný produkt, MS: m/e 370 (M+1).

Krok 3

Produkt z kroku 2 (0,300 g, 0,758 mmol) sa miešal nad 5% Pd/C (0,030 g) v EtOAc (5 ml) a CH₃OH (5 ml) pod H₂ 2 hodiny. Prefiltrovaním a skoncentrovaním sa získal amín.

Krok 4

Na amín z kroku 3 sa pôsobilo produktom z prípravy 2 spôsobom opísaným v príklade 24, krok 1, čím sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS: m/e 503 (M+1).

Príklad 28

HO

-66Na produkt z príkladu 1-145 (0,020 g, 0,044 mmol) v EtOH (0,5 ml) sa pri 0 °C pôsobilo borhydridom sodným (0,005 g, 0,13 mmol) apo 0,75 hodiny opäť rovnakým množstvom. Po ďalšej 0,75 hodiny sa zmes rozdelila medzi CH2CI2 a nasýtený roztok NH4CI. Zmes sa vysušila (Ňa₂SO4) a skoncentrovala. Čistením PTLC (10% CH3OH/CH2CI2) sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky, MS: 459 (M+1).

Príklad 29

Na produkt z príkladu 1-145 (0,020 g, 0,044 mmol) v pyridíne (0,5 ml) sa pôsobilo hydrochloridom metoxyamínu (0,011 g, 0,13 ml). Zmes sa miešala 16 hodín a potom sa skoncentrovala. Zmes sa rozdelila medzi CH₂CI₂ a nasýtený roztok NaHCO₃. Vysušila (Na₂SO₄) a skoncentrovala. Čistením PTLC (5% ΟΗ₃ΟΗ/ΟΗ₂ΟΙ₂) sa získala požadovaná zlúčenina ako biela tuhá látka, MS: 486 (M+1).

Podobným spôsobom sa pripravil oxím 29-2 ako dva oddelené geometrické izoméry, každý ako biela tuhá látka, MS: 472 (M+1).

HO N^:

Príklad 29-2

Zlúčeniny podľa vynálezu sú kvôli ich antagonistickému účinku na adenozínový receptor A_2a užitočné na liečenie depresie, ochorení kognätívnych funkcií a neurodegeneratívnych ochorení, ako je napríklad Parkinsonova choroba, senilná demencia, vyskytujúca sa napríklad pri Alzheimerovej chorobe a psychózy organického pôvodu. Zlúčeniny podľa vynálezu môžu najmä zmenšiť motorický

-67defekt spôsobený neurodegeneratívnym ochorením, ako je napríklad Parkinsonova choroba.

Iné látky, známe tým, že sú užitočné na liečenie Parkinsonovej choroby, ktoré sa môžu podávať v kombinácii so zlúčeninami všeobecného vzorca I zahrnujú: L-DOPA; dopaminergné agonisty, ako je napríklad kvinpirol, ropinirol, pramipexol, pergolid a bromokriptín; MAO-B inhibítory, ako je napríklad deprenyl a selegilín; DOPA dekarboxylázové inhibítory, ako je napríklad karbidopa a benserazid; a COMT inhibítory, ako je napríklad tolcapón a entakapón. V kombinácii zo zlúčeninou všeobecného vzorca I sa môže použiť jedna až tri tieto látky, výhodne jedna.

Farmakologický účinok zlúčenín podľa vynálezu sa určil nasledujúcimi in vitro a in vivo testmi na meranie aktivity receptora A2aPostup testu kompetitívneho viazania ľudského adenozínového receptora A2a a Ai

Zdroje membrány:

A2₃: Membrány ľudského adenozínového receptora k₂a, Katalóg #RB-HA2a, Receptor Biology, Inc., Beltsville, MD. Zriediť na 17 pg/100 μΙ v riediacom pufri membrán (pozri nižšie).

Testovacie pufre:

Riediaci pufor membrán: Dulbecco' Phosphate Buffered Saline (Gibco/BRL) + 10 mM MgCI₂.

Riediaci pufor zlúčenín: Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (Gibco/BRL) + 10 mM MgCb doplnený 1,6 mg/ml metylcelulózy a 16% DMSO. Pripravoval sa denne čerstvý.

Ligandy:

A₂: [3HJ-SCH 58261, bežná syntéza, Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ. Pripravil sa 1 nM zásobný roztok v membránovom riediacom pufri. Konečná koncentrácia pre test je 0,5 nM.

-68A< [3H]-DPCPX, Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ. Pripravil sa 2 nM zásobný roztok v membránovom riediacom pufri. Konečná koncentrácia pre test je 1 nM.

Nešpecifické viazanie:

A_2a: Za účelom určenia nešpecifického viazania pridajte 100 nM CGS 15923 (RBI, Natick, MA). Pripravil sa 400 nM pracovný zásobný roztok v riediacom pufri zlúčenín.

Av Za účelom určenia nešpecifického viazania pridajte 100 μΜ NECA 15923 (RBI, Natick, MA). Pripravil sa 400 μΜ pracovný zásobný roztok v riediacom pufri zlúčenín.

Riedenie zlúčenín:

Pripravte 1 mM zásobné roztoky zlúčenín v 100% DMSO. Zried’te v riediacom pufri zlúčenín. Testujte pri 10 koncentráciách v rozmedzí 3 μΜ až 30 pM. Pripravte pracovné roztoky ako 4x konečná koncentrácia v riediacom pufri zlúčenín.

Postup testu:

Uskutočnite testy v platni s 96 hlbokými jamkami. Celkový objem testu je 200 μΙ. Pridajte 50 μΙ riediaceho pufra zlúčenín (celkové viazanie ligandu) alebo 50 μΙ CGS 15923 pracovného roztoku (nešpecifické viazanie A_2a) alebo 50 μΙ NECA pracovného roztoku (nešpecifické viazanie A-ι) alebo 50 μΙ pracovného roztoku liečiva. Pridajte 50 μΙ ligandovej zložky ([3H]-SCH 58261 pre A_2a, [3H]-DPCPX pre A-ι). Pridajte 100 μΙ zriedených membrán, ktoré obsahujú vhodný receptor. Zamiešajte. Inkubujte pri teplote miestnosti 90 minút. Zozbierajte použitím Brandel bunkového zbieracieho stroja na Packard GF/B filtračné platne. Pridajte 45 μΙ Microscint 20 (Packard) a odčítajte použitím Packard TopCount mikroscintilačného čítača. Určite hodnoty IC₅o zhotovením grafu použitím programu na zhotovenie iteračného grafu (Excel). Určite hodnoty Ki použitím rovnice Cheng-Prusoffova.

Katalepsia vyvolaná haloperidolom u potkana

-69Použili sa samce potkanov Sprague-Dawley (Charles River, Calco, Italy) s hmotnosťou 175 až 200 g. Kataleptický stav sa vyvolal podkožným podaním haloperidolu, antagonistu dopamínového receptora (1 mg/kg, sc), 90 minút pred testovaním zvierat v rámci testu vertikálnej mriežky. Na účely tohto testu sa potkany umiestnili na kryt plexisklovej klietky z drôteného pletiva veľkosti 25 x 43, ktorá bola umiestnená pri uhle 70 stupňov s pracovným stolom. Potkan sa položil na mriežku so všetkými štyrmi nohami odtiahnutými a rozšírenými („žabia poloha“). Použitie takejto neprirodzenej polohy je nutné kvôli špecifickosti tohto testu na katalepsiu. Časový interval od umiestnenia labiek až do kompletného ohybu jednej labky (dobrá latencia) bol nameraný maximálne 120 sekúnd.

Selektívne antagonisty adenozínového receptora A_2a podľa ohodnotenia sa podávali orálne v dávkach v rozmedzí 0,03 až 3 mg/kg, 1 a 4 hodiny pred umiestnením zvierat.

V jednotlivých testoch sa určili antikataleptické účinky referenčnej zlúčeniny L-DOPA (25, 50 a 100 mg/kg, ip).

6-OHDA lézia stredného predného mozgového zväzku potkana

Vo všetkých testoch sa použili dospelé samce potkanov Sprague-Dowley (Charles River, Calco, Como, Italy), ktoré vážili 275 až 300 g. Potkany sa umiestnili v skupinách po 4 v klietke s voľným prístupom k potrave a vode, za kontrolovanej teploty a pri 12 hodinovom cykle svetlo/tma. Deň pred chirurgickým zákrokom sa potkany cez noc spontánne postili vodou.

Unilaterálna 6-hydroxydopamínová lézia stredného predného mozgového zväzku sa uskutočnila spôsobom opísaným v Ungerstedt a ďalší (Brain Research, 1971, 6-OHDA and Cathecolamine Neurons, North Holland, Amsterdam, 101 až 127) s malými zmenami. Zvieratá sa znecitliveli hydrátom chloralu (400 mg/kg, ip) a ošetrili desipramínom (10 mpk, ip) 30 minút pred 6-OHDA injekciou, aby sa zablokovala absorpcia toxínu prostredníctvom noradrenergných zakončení. Potom sa zvieratá umiestnili na stereotaxický rám. Koža nad lebkou sa odhrnula a určili sa stereotaxické koordináty (-2,2 zadne od bregma (AP), +1,5 laterálne od bregma (ML), 7,8 ventrálne od durha (DV)) podľa mapy od Pellegrino a ďalší (Pellegrino L.

J., Pellegrino A. S. and Cushman A. J., Stereotaxic Atlas of the Rat Brain, 1979,

-70New York: Plénum Press). Vyvŕtal sa otvor do lebky nad miestom lézie a ihla, pripevnená na Hamiltonovu injekčnú striekačku, sa spustila do ľavého stredného predného mozgu (MFB). Potom sa rozpustilo 8 pg 6-OHDA-HCI v 4 μΙ soľanky s 0,05% kyselinou askorbovou ako antioxidantom a nalialo pri konštantnej rýchlosti prietoku 1 μΙ/1 minútu použitím infúznej pumpy. Po ďalších 5 minútach sa ihla vytiahla a chirurgická rana sa uzavrela a zviera sa nechalo 2 týždne zotavovať.

Dva týždne po zákroku sa potkanom podávalo L-DOPA (50 mg/kg, ip) spolu s benserazidom (25 mg/kg, ip) a potkany sa potom vybrali na základe počtu úplných kontralaterálnych otáčok, ktoré sa vyčíslili počas 2 hodinovej doby testu automatickými rotametrami (úvodný test). Ktorýkoľvek z potkanov, ktorý nemal najmenej 200 kompletných otáčok za 2 hodiny, sa nezahrnul do štúdie.

Vybrané potkany prijímali testovanú zlúčeninu 3 dni po úvodnom teste (maximálna supercitlivosť dopamínového receptora). Orálne sa podávali nové antagonisty receptora A2_a v dávkových hladinách v rozmedzí 0,1 až 3 mg/kg v rozličných časových okamihoch (napríklad, 1, 6, 12 hodín) pred injekciou podprahovej dávky L-DOPA (4 mpk, ip) spolu s benserazidom (4 mpk, ip) a vyhodnotením otáčania.

Použitím vyššie opísaných postupov testov sa získali nasledujúce výsledky pre výhodné a/alebo reprezentatívne zlúčeniny podľa vynálezu.

Výsledky testu viazania na zlúčeniny podľa vynálezu vykázali A_2a hodnoty Ki 0,3 až 57 nM, výhodné zlúčeniny vykázali hodnoty Ki 0,3 až 5,0 nM.

Selektivita sa určila vydelením hodnoty Ki receptora Ai hodnotou Ki receptora A₂. Výhodné zlúčeniny podľa vynálezu majú selektivitu v rozmedzí približne 100 až 2000.

Výhodné zlúčeniny vykazovali 50 až 70%-ný pokles v pôvodnej latencii, keď sa testovali orálne pri 1 mg/kg na antikataleptický účinok u potkanov.

V 6-OHDA léziovom teste urobili potkany, ktorým sa podával orálne 1 mg/kg výhodnej zlúčeniny, 170 až 440 otáčok v dobe trvania dvojhodinového testu.

V teste haloperidolom indukovanej katalepsie vykázala kombinácia podprahového množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I a podprahového množstva L-DOPA podstatnú inhibíciu katalepsie, pričom sa prejavil synergný účinok. V 6-OHDA léziovom teste sa zvieratá, ktorým sa podávala kombinácia zlúčeniny

-71 všeobecného vzorca I a podprahové množstvo L-DOPA, urobili podstatne viac kontralaterálnych otočiek.

Na prípravu farmaceutických prostriedkov zo zlúčenín podľa vynálezu, inertné farmaceutický prijateľné nosiče môžu byť buď tuhé alebo tekuté. Farmaceutické prostriedky v tuhej forme zahrnujú prášky, tablety, rozptýliteľné granuly, kapsuly, mäkké kapsuly a čapíky. Prášky a tablety môžu obsahovať 5 až 70 % účinnej zložky. Vhodné tuhé nosiče sú známe v danej oblasti techniky, ako je napríklad uhličitan horečnatý, stearan horečnatý, mastenec, cukor, laktóza. Ako tuhé dávkové formy vhodné na orálne podanie sa môžu použiť tablety, prášky, mäkké kapsuly a kapsuly.

Na prípravu čapíkov sa najskôr roztopil vosk s nízkou teplotou topenia ako je zmes glyceridov mastných kyselín alebo kakaového masla, a účinná zložka sa do neho miešaním homogénne rozptýlila. Roztopená homogénna zmes sa potom naliala do foriem vhodnej veľkosti, nechala sa ochladiť a tým stuhnúť.

Farmaceutické prostriedky v tekutej forme zahrnujú roztoky, suspenzie a emulzie. Ako príklad sa môžu spomenúť vodné alebo vodno-propylénglykolové roztoky pre parenterálnu injekciu.

Farmaceutické prostriedky v tekutej forme môžu tiež zahrnovať roztoky pre intranazálne injekcie.

Aerosólové prostriedky vhodné na inhaláciu môžu zahrnovať roztoky a tuhé látky v práškovej forme, ktoré môžu byť v kombinácii s farmaceutický prijateľným nosičom, ako je napríklad inertný stlačený plyn.

Zahrnuté sú tiež farmaceutické prostriedky v tuhej forme, ktoré sa konvertujú, krátko pred použitím, na farmaceutické prípravky v tekutej forme na orálne alebo parenterálne podanie. Takéto tekuté formy zahrnujú roztoky, suspenzie a emulzie.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu tiež podávať transdermálne. Transdermálne prostriedky môžu mať formu krémov, pleťovej vody, aerosólov a/alebo emulzií a môžu byť zahrnuté v transdermálnej náplasti matrice alebo zásobníkovom type, ktoré sú bežné v danej oblasti techniky na tento účel.

Výhodne sa zlúčenina podáva orálne.

-72Výhodne je farmaceutický prostriedok v jednotkovej dávkovej forme. V takej forme sa farmaceutický prostriedok rozdelí do jednotkových dávok, ktoré obsahujú vhodné množstvá účinnej zložky, napríklad účinné množstvo za účelom dosiahnutia žiadaného cieľa.

Množstvo účinnej zlúčeniny všeobecného vzorca I v jednotkovej dávke farmaceutického prostriedku sa môže meniť alebo upravovať v rozmedzí približne 0,1 mg až 1000 mg, výhodnejšie v rozmedzí približne 1 mg až 300 mg, podľa konkrétnej aplikácie.

Konkrétna použitá dávka sa môže meniť v závislosti od požiadaviek pacienta a vážnosti liečeného stavu. Určenie správnej dávky v konkrétnej situácii je v kompetencii ošetrujúceho lekára. Všeobecne sa liečba začína malými dávkami, ktoré sú menšie ako optimálna dávka zlúčeniny. Potom sa dávka zvyšuje malými prídavkami, až kým sa nedosiahne optimálny účinok za daných okolností. Ak sa to požaduje, môže sa výhodne celková denná dávka rozdeliť a podávať v dávkach počas dňa.

Množstvo a frekvencia podávania zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných solí sa bude regulovať podľa rozhodnutia ošetrujúceho lekára, pričom sa berú do úvahy také faktory, ako je vek, stav a hmotnosť pacienta, rovnako ako aj vážnosť liečených symptómov. Typickým odporúčaným dávkovým režimom zlúčenín všeobecného vzorca I je orálne podanie 10 mg až 2000 mg/deň výhodne 10 až 1000 mg/deň, v dvoch až štyroch oddelených dávkach za účelom poskytnutia úľavy od ochorení centrálneho nervového systému, ako je napríklad Parkinsonova choroba. Zlúčeniny sú netoxické, ak sa podávajú v tomto rozmedzí dávok.

Dávky a dávkový režim iných činidiel na liečenie Parkinsonovej choroby určí ošetrujúci lekár, napríklad z pohľadu schválených dávok a dávkového režimu uvedeného v príbalovom letáku, pričom sa berie do úvahy vek, pohlavie a stav pacienta a vážnosť ochorenia. Predpokladá sa, že keď sa podá kombinácia zlúčeniny vzorca I a inej látky, budú v porovnaní s dávkami účinných zložiek, ktoré sa podávajú vo forme monoterapie, účinné nižšie dávky účinných zložiek.

Nasledujú príklady farmaceutických dávkových foriem, ktoré obsahujú zlúčeninu podľa vynálezu. Odborníci v danej oblasti techniky pripúšťajú, že dávkové

-73formy sa môžu meniť tak, aby obsahovali aj zlúčeninu všeobecného vzorca I aj inú látku. Rozsah vynálezu z hľadiska farmaceutického prostriedku podľa vynálezu nebude poskytnutými príkladmi limitovaný.

Príklady foriem farmaceutických dávok

Príklad A - tablety

Por. č.	Zložky	mg/tableta	mg/tableta
1.	Účinná zložka	100	500
2.	Laktóza USP	122	113
3.	Kukuričný škrob, potravinárskej kvality, ako 10% pasta v čistenej vode	30	40
4.	Kukuričný škrob, potravinárskej kvality	45	40
5.	Stearan horečnatý	3	7
Celkom		300	700

Spôsob spracovania

Zmiešajte položky číslo 1 a 2 vo vhodnom mixéri 10 až 15 minút. Granulujte zmes s položkou číslo 3. Ak je to nutné, preosejte vlhké granuly cez hrubé sito (napríklad, 'Λ, 0,63 cm). Vysušte vlhké granuly. Ak je to nutné, granuly preosejte a miešajte ich s položkou číslo 4 10 až 15 minút. Pridajte položku číslo 5 a miešajte 1 až 3 minúty. Stlačte zmes na vhodnú veľkosť a hmotnosť vo vhodnom tabletovacom stroji.

Príklad B - kapsuly

Por.č.	Zložka	mg/kapsula	mg/kapsula
1.	Účinná zložka	100	500
2.	Laktóza USP	106	123
3.	Kukuričný škrob, potravinárskej kvality	40	70
4.	Stearan horečnatý NF	7	7
	Celkom	253	700

-74Spôsob spracovania

Miešajte položky číslo 1, 2 a 3 vo vhodnom mixéri 10 až 15 minút. Pridajte položku číslo 4 a miešajte 1 až 3 minúty. Naplňte zmes do vhodných tvrdých želatínových kapsúl, zložených z dvoch častí, vo vhodnom obaľovacom stroji.

Kým tento vynález bol opísaný v spojení so špecifickým uskutočneniami vyššie vysvetlenými, odborníkom v danej oblasti techniky bude zrejmé, že existuje mnoho ich alternatív, modifikácií a variácií. Všetky tieto alternatívy, modifikácie a variácie budú spadať do podstaty a rozsahu tohto vynálezu.

Claims

1. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínové zlúčeniny všeobecného vzorca I (I) alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde

R znamená R¹-furanyl, R¹-tienyl, R¹-pyridyl, R¹-pyridyl N-oxid, R¹-oxazolyl, R¹⁰fenyl, R¹-pyrolyl alebo C4-C6-cykloalkenyl;

X znamená C2-C₆-alkylén alebo -C(O)CH₂-;

Y znamená -N(R²)CH2CH2N(R^{3 *})-, -OCH2CH₂N(R²)-, -0-, -S-, -CH₂S-, -(CH₂)₂-NHalebo '(GH₂)n^

Z znamená R⁵-fenyl, RMenylíC^CeJalkyl, R⁵-heteroaryl, difenylmetyl, R⁶-C(O)-,

Q

R⁶-SO₂-, R^s-OC(O)-, R⁷-N(R⁸)-C(O)-, R⁷-N(R⁸)-C(S)-, HN^N-, fenyl-CH(OH)- alebo ¹ ° fenyl-C(=NOR²)-; alebo ak Q je -C-, Z je tiež fenylamino alebo pyridylamino;

H alebo Z a Y spolu sú ,^N alebo

N—

R¹ znamená 1 až 3 substituenty nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík, Ci-C6-alkyl, -CF3, halogén, -NO2, -NR¹²R¹³, CrC6-alkoxy, Ci-C₆-alkyltio, Ci-C₆alkylsulfinyl a Ci-C6-alkylsulfonyl;

R² a R³ sú nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík a Ci-C₆-alkyl;

m a n sú nezávisle 2 až 3; Q znamená 1 1 1 1 -N-, -C-, -C-, -C- 1 1 i 1 alebo -C- ; | 1 1 1 H CN OH 1 COCH

R⁴ znamená 1 až 2 substituenty nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík a C-i-C₆-alkyl, alebo dva R⁴ substituenty na tom istom atóme uhlíka môžu tvoriť =0;

R⁵ znamená 1 až 5 substituentov nezávisle vybraných zo skupiny zahrnujúcej vodík, halogén, CrCe-alkyl, hydroxy, C-i-C₆-alkoxy, -CN, di-((C-i-C6)alkyl)annino, -CF₃, -OCF₃, acetyl, -N0₂, hydroxy(CrC₆)alkoxy, (CrCeJalkoxy^-CeJalkoxy, di-((C-i-C₆)alkoxyXCvCsJalkoxy, (C-i-CejalkoxyíCrCejalkoxyíCi-Cejalkoxy, karboxy(C_rC₆)alkoxy, (Ci-C6)alkoxykarbonyl(Ci-C₆)alkoxy, (C₃-C₆)cykloalkyl(C₁-C₆)alkoxy, di((C₁-C₆)alkyl)amino(Ci-C6)alkoxy, morfolinyl, (CrC6)alkyl-SO₂-, (Ci-Ce)alkyl-SO-(CiC6)alkoxy, tetrahydropyranyloxy, (Ci-C₆)alkylkarbonyl(CrC6)alkoxy, (Ci-C6)-alkoxykarbonyl, (C-i-C₆)alkylkarbonyloxy(Ci-C6)alkoxy, -SO₂NH₂, fenoxy, (C_rC₆ alkyl) —C=NOR² alebo susedné R⁵ substituenty sú spolu -O-CH₂-O-, -O-CH₂CH₂-O-, -O-CF₂-Oalebo -O-CF₂CF₂-O- a tvoria kruh s atómami uhlíka, na ktoré sú naviazané;

R⁶ znamená (C-i-C6)alkyl, R⁵-fenyl, R⁵-fenyl(CrC6)alkyl, tienyl, pyridyl, (C₃-C₆)cykloalkyl, (CrCejalkyl-OCÍOj-NHXCi-Cejalkyl-, di-^CrCeJalkylJaminometyl alebo

Ck

N (C_rC₆)a1kyl-cYo

-77R⁷ znamená (Ci-C6)alkyl, R⁵-fenyl alebo R⁵-fenyl(Ci-Ce)alkyl;

R⁸ znamená vodík alebo CrCg-alkyl; alebo R⁷ a R⁸ spolu sú -(CH2)_p-A-(CH2)_q, kde p a q sú nezávisle 2 alebo 3 a A je väzba, -CH₂-, -S- alebo -O- a tvoria kruh s dusíkom, na ktorý sú naviazané;

R⁹ znamená 1 až 2 skupiny nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík, Ci-C₆alkyl, hydroxy, C-i-C₆-alkoxy, halogén, -CF₃ a (Ci-C₆)alkoxy(Ci-C₆)alkoxy;

R¹⁰ znamená 1 až 5 substituentov nezávisle vybraných zo skupiny zahrnujúcej vodík, halogén, CrC₆-alkyl, hydroxy, C-i-C6-alkoxy, -CN, -NH₂, Ci-C₆-alkylamino, di((Ci-C₆)álkyl)amino, -CF₃, -OCF₃ a -S(0)o-₂(CrC6)alkyl;

R¹¹ je H, C-i-C₆-alkyl, fenyl, benzyl, C₂-C₆-alkenyl, (C-|-C₆)alkoxy(Ci-C6)alkyl, di((C-i-C₆)alkyl)amino(C-i-C6)alkyl, pyrolidinyl(C-i-C6)alkyl alebo piperidino(C₁-C₆)-alkyl; R¹² znamená H alebo C-i-Ce-alkyl; a

R¹³ znamená (CrC6)alkyl-C(0)- alebo (C_rC6)alkyl-SO₂-.

2. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínové zlúčeniny podľa nároku 1, kde R je R¹-furanyl.

3. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínové zlúčeniny podľa nároku 1, kde X je (C₂-C₆)alkylén.

4. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-cjpyrimidínové zlúčeniny podľa nároku 1, kde Y je (CH₂)_m/ \ —<a \,^N (CH2Ž>_R4

5. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínové zlúčeniny podľa nároku 4, kde Q je

-N- alebo -CH-, m a n sú každý 2 a R⁴ je H.

-786. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-cjpyrimidínové zlúčeniny podľa nároku 1, kde Zje R⁵-fenyl, R⁵-heteroaryl, R⁶-C(O)- alebo R⁶-SO₂-.

7. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínové zlúčeniny podľa nároku 6, kde R⁵ je H, halogén, (CrC^alkyl, (C-i-Côjalkoxy, hydroxyíCrCejalkoxy alebo (Ci-C6)alkoxy(Ci-C₆)alkoxy, a R⁶ je R⁵-fenyl.

8. Substituované 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-cjpyrimidínové zlúčeniny podľa nároku 1, vybrané zo skupiny zahrnujúcej zlúčeniny všeobecného vzorca kde R a Z-Y sú určené v nasledujúcej tabuľke:

Z-Y- R ^f-OO^_ OG- -ô F cy SJ OCH₃ °-oo -Ô ^t-OCH₃o — “Ô

HaCO-Tl-NJJ- h₃cc> -ô f ^ci”O^hC^N“' -ô r- OCH, _F ^o_CcO^_ /=N /—Λ f-4 />-n n— H₃c—Z N N— N '—' f-Ό-Ό^- XX^F F X)

9. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo substituovanej 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínovej zlúčeniny podľa nároku 1 vo farmaceutický prijateľnom nosiči.

10. Použitie substituovaných 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínových zlúčenín na výrobu lieku na liečenie depresie, kognitívnych ochorení, neurodegeneratívnych ochorení alebo mozgovej príhody.

11. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca II (ll)

-80kde

R znamená R¹-furanyl, R¹-tienyl, R¹-pyridyl, R¹-pyridyl N-oxid, R¹-oxazolyl, R¹⁰fenyl, R¹-pyrolyl alebo C4-C6-cykloalkenyl; a

R¹ znamená 1 až 3 substituenty nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík, Ci-C6-alkyl, -CF3, halogén, -NO2, -NR¹²R¹³, Ci-C6-alkoxy, Ci-C₆-alkyltio, Ci-C₆alkylsulfinyl a CrCe-alkylsulfonyl;

R¹⁰ znamená 1 až 5 substituentov nezávisle vybraných zo skupiny zahrnujúcej vodík, halogén, Ci-C₆-alkyl, hydroxy, Ci-C₆-alkoxy, -CN, -NH₂, CrCe-alkylamino, di((CrCeJalkyQamino, -CF₃, -OCF₃ a -S(0)o.₂(Ci-C₆)a!kyl;

R¹² znamená H alebo CrC6-alkyl; a

R¹³ znamená (Ci-Ce)alkyl-C(O)- alebo (Ci-C6)alkyl-SO₂-, vyznačujúci sa tým, že sa

1) na 2-amino-4,6-dihydroxypyrimidín vzorca VI nh₂

N^N

HO'

OH (VI) pôsobí POCI₃ v dimetylformamide za vzniku 2-amino-4,6-dichlórpyrimidín-5-karboxaldehydu vzorca VII

NH₂

Λ (VIĎ

CHO

2) na karboxaldehyd vzorca VII sa potom pôsobí hydrazidom všeobecného vzorca H₂N-NH-C(O)-R, kde R je určené vyššie, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca VIII

Cl nh₂

Π 1 cho^{h h} (Vili)

3) na medziprodukt všeobecného vzorca VIII sa potom pôsobí hydrátom hydrazínu za vzniku pyrazolového kruhu, čím sa získa medziprodukt všeobecného vzorca IX (IX) a

4) dehydratačným preskupením sa vytvorí požadovaná zlúčenina všeobecného vzorca II.

12. Spôsob výroby medziproduktu všeobecného vzorca II kde

R¹ znamená 1 až 3 substituenty nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík, Ci-C6-alkyl, -CF3, halogén, -NO2, -NR¹²R¹³, Ci-C6-alkoxy, CrCe-alkyltio, C1-C6alkylsulfinyl a Ci-C6-alkylsulfonyl;

R¹⁰ znamená 1 až 5 substituentov nezávisle vybraných zo skupiny zahrnujúcej vodík, halogén, Ci-C₆-alkyl, hydroxy, Ci-C₆-alkoxy, -CN, -NH₂, CrCe-alkylamino, di((C_rC₆)alkyl)amino, -CF₃, -OCF₃ a -S(0)o-2(CrC₆)alkyl;

R¹² znamená H alebo CrCe-alkyl; a

R¹³ znamená (C_rC6)alkyl-C(O)- alebo (Ci-C₆)alkyl-SO₂-, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje konvertovanie zlúčeniny všeobecného vzorca IX na požadovanú zlúčeninu všeobecného vzorca II dehydratačným preskupením.

(IX)

-8213. Spôsob výroby medziproduktu všeobecného vzorca llla

Br-(CH₂)_I

NH₂

YY

H IN γ

AA?

hr >-R (llla) kde

R znamená R¹-furanyl, R¹-tienyl, R¹-pyridyl, R¹-pyridyl N-oxid, R¹-oxazolyl, R¹⁰fenyl, R¹-pyrolyl alebo C₄-C6-cykloalkenyl; a

R¹ znamená 1 až 3 substituenty nezávisle vybrané zo skupiny zahrnujúcej vodík, Ci-C6-alkyl, -CF3, halogén, -NO2, -NR¹²R¹³, CrCe-alkoxy, Ci-C6-alkyltio, Ci-C₆alkylsulfinyl a Ci-C₆-alkylsulfonyl;

R¹⁰ znamená 1 až 5 substituentov nezávisle vybraných zo skupiny zahrnujúcej vodík, halogén, Ci-C₆-alkyl, hydroxy, CrCe-alkoxy, -CN, -NH₂, Ci-C6-alkylamino, di((C-|-C6)alkyl)amino, -CF₃, -OCF₃ a -S(0)o-2(C_rC6)alkyl;

R¹² znamená H alebo CrC6-alkyl; a

R¹³ znamená (Ci-C₆)alkyl-C(O)- alebo (Ci-C₆)alkyl-SO₂-, vyznačujúci sa tým, že sa

1) na chlorid všeobecného vzorca VIII

Cl

NH₂

N^N

A|A_n_n

CHO^{H H} (VIII) pôsobí hydroxyalkylhydrazínom všeobecného vzorca HO-(CH₂)'_r-NHNH2, kde r je 2 až 6 za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca X

O

Λ

NH-NH R (X)

-832) cyklizácia medziproduktu všeobecného vzorca X dehydratačným preskupením za vzniku tricyklického medziproduktu všeobecného vzorca XI (XI) a

3) konvertovanie hydroxyzlúčeniny všeobecného vzorca XI za vzniku bromidu všeobecného vzorca Hla.

14. Farmaceutický prostriedok, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo substituovanej 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínovej zlúčeniny podľa nároku 1 spolu s 1 až 3 inými látkami užitočnými na liečenie Parkinsonovej choroby vo farmaceutický prijateľnom nosiči.

15. Použitie substituovaných 5-amino-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidínových zlúčenín podľa nároku 1 spolu s 1 až 3 inými látkami užitočnými na liečenie Parkinsonovej choroby na výrobu lieku na liečenie Parkinsonovej choroby.