[go: up one dir, main page]

SE522578C2 - Adenosin A3-receptormodulatorer - Google Patents

Adenosin A3-receptormodulatorer

Info

Publication number
SE522578C2
SE522578C2 SE0003984A SE0003984A SE522578C2 SE 522578 C2 SE522578 C2 SE 522578C2 SE 0003984 A SE0003984 A SE 0003984A SE 0003984 A SE0003984 A SE 0003984A SE 522578 C2 SE522578 C2 SE 522578C2
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
substituted
alkyl
triazolo
amino
furyl
Prior art date
Application number
SE0003984A
Other languages
English (en)
Other versions
SE0003984D0 (sv
SE0003984L (sv
Inventor
Pier Giovanni Baraldi
Pier Andrea Borea
Original Assignee
King Pharmaceuticals Res & Dev
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by King Pharmaceuticals Res & Dev filed Critical King Pharmaceuticals Res & Dev
Publication of SE0003984D0 publication Critical patent/SE0003984D0/sv
Publication of SE0003984L publication Critical patent/SE0003984L/sv
Publication of SE522578C2 publication Critical patent/SE522578C2/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D513/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0459—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having six-membered rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, e.g. piperazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0491—Sugars, nucleosides, nucleotides, oligonucleotides, nucleic acids, e.g. DNA, RNA, nucleic acid aptamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/05—Isotopically modified compounds, e.g. labelled
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
    • G01N2333/726—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

30 5 2 2 5 7 2 ceptorn eftersöks som potentiella antiinflammatoriska eller möjligen antiischemiska ämnen i hjärnan. Nyligen har A3-antagonister varit under utveckling som antiast- matiska, antidepressiva, antiarrytmiska, njurskyddande läkemedel, antiparkinsonläkemedel och kognitivförstärk- ande läkemedel . _ Det är således ett ändamål med föreliggande uppfin- ning att àstadkomma föreningar och förfarande för fram- ställning och användning därav, vilka är agonister, par- tiella agonister och/eller antagonister för adenosin-A3_ -receptorn.
Samm nfattnin v fin in Föreningar som är användbara som potentiella, ändå selektiva modulatorer för adenosin-A3-receptorn med akti- vitet som antagonister för denna receptor och förfarande för framställning och användning därav beskrivs.
Föreningarna har följande allmänna formel: Rs N \ / /N N Rz | / eller N NHR 10 15 20 25 30 35 5 2 2 5 7 ¿::= gi; vari: A är imidazol, pyrazol eller triazol; R är -c(x)R1, -c(x)-N(R1)2, -c(x)oR1, -c(x>sR1, -SOHR1, -SOnOR1, -SOnSRl, eller SOn-N(R1)2; .R1 är väte, alkyl, substituerad alkyl, alkenyl, sur- stituerad alkenyl, alkynyl, substituerad alkynyl, aryl, heteroaryl, heterocykel, låg alkenyl, låg alkanoyl, ellef om den är bunden till en kväveatom bildar den tillsammans med kväveatomen en azetidinring eller en 5-6-ledad hete- rocyklisk ring innehållande en eller flera heteroatomer, såsom N, O, S; R2 är väte, alkyl, äikenyl, älkynyi, eubetinue-rrflä alkyl, substituerad alkenyl, substituerad alkynyl, arsl- kyl, substituerad aralkyl, heteroaryl, substituerad hete- roaryl eller aryl; R3 är furan, pyrrol, tiofen, bensofuran, bensypyr~ rol, bensotiofen, eventuellt substituerad med en eller flera substituenter som beskrivits tidigare för substi- tuerade heteroarylringar; x är o, s eller NR1; n är 1 eller 2; radiomärkta analoger därav, fluorescensmärkta analoger därav och farmaceutiskt accepterbara salter därav; Förecrädesvie är Rl väte; cl- till cs-älkyl; C2- till C7-alkenyl, C2- till C7-alkynyl; C3- till C7-cykla- alkyl; Cl- till C5-alkyl substituerad med en eller få ra halogenatomer, hydroxigrupper, Cl- till C4-alkoxy, C®~ till C7-cykloalkyl eller grupper enligt formeln ~NR1;, -C(O)NRï2; aryl, substituerad aryl vari substitutionwa år vald från den grupp som består av Cl- till C4-alkoxy, till C4-alkyl, nitro, amino, cyano, Cl- till C4-halcal- kyl, Cl- till C4-haloalkoxy, karboxy, karboxiamido; C7- till C10-aralkyl i vilken aryldelen kan vara substituerad med en eller flera av de substituenter som indikerats ovan för arylgruppen; en grupp enligt formel -(CH2)m Å _, vari Het är en 5-6-ledad aromatisk eller icke-aromatish 10 15 20 25 30 35 5 2 2 5 7 s . ïlffíï 4 heterocyklisk ring innehållande en eller flera heteroato- mer valda fràn den grupp som bestàr av N, O och S och m är ett heltal från 1 till 5, _Föredragna Cl- till C8-alkylgrupper är metyl, etyl, propyl, butyl och isopentyl. Exempel pà C3- till C7-cyk- loalkylgrupper inkluderar cyklopropyl, cyklopentyl och cyklohexyl. Exempel pà Cl- till C5-alkylgrupper som sub- stituerats med C3- till C7-cykloalkylgrupper inkluderar cyklohexylmetyl, cyklopentylmetyl och 2-cyklopentyletyl.
Exempel pà substituerade Cl- till C5-alkylgrupper inklu- derar 2-hydroxietyl, 2-metoxietyl, trifluormetyl, 2-fluo- retyl, 2-kloretyl, 3-aminopropyl, 2-(4-metyl-1-pipera- zin)etyl, 2-(4-morfolinyl)etyl, 2-aminokarbonyletyl, 2- dimetylaminoetyl, 3-dimetylaminopropyl. Aryl är företrä- desvis fenyl, eventuellt substituerad med Cl-, F-, me- toxi-, nitro-, cyano-, metyl-, trifluormetyl-, difluorme- toxigrupper. Exempel pà 5- till 6-ledade heterocykliska ringgrupper innehållande N, O och/eller S inkluderar pi- perazinyl, morfolinyl, tiazolyl, pyrazolyl, pyridyl, fu- ryl, tienyl, pyrrolyl, triazolyl, tetrazolyl. Exempel pà C7- till C10-aralkylgrupper innefattar bensyl eller fene- tyl eventuellt substituerad med en eller flera substi- tuenter valda från Cl, F, metoxy, nitro, cyano, metyl, trifluormetyl och difluormetoxy. Företrädesvis är Rl väte, Cl- till C8-alkyl, aryl eller C7- till C10-aralkyl, eventuellt substituerad, företrädesvis med halogenatomer.
Företrädesvis är X O, R2 är C2-3-alkyl eller substituerad alkyl och R3 är furan.
Särskilt föredragna föreningar är sàdana i vilka R är en fenetylgrupp i vilken fenylringen är substituerad med en eller flera substituenter valda fràn den grupp som består av klor-, fluoratomer, metoxy-, nitro-, cyano-, metyl-, trifluormetyl- och difluormetoxigrupper.
De möjliga betydelserna för A kan återges med hjälp av följande strukturella formler: lO 15 20 25 30 35 522 578 . u ~ n . u N / . \\ N t /N ,N y N N ' . ' R . 1 R \ ,N\ ,N R-N\ / NQ | N N Föreningarna kan användas i ett förfarande för modu- 3U~_ lering av adenosin-A3-receptorer i ett däggdjur inkluder- ande en människa. Förfaranden involverar att administrera en effektiv mängd av en förening enligt formel I som är tillräcklig för att moderera adenosin-A3-receptorer i däggdjuret. Användningar av föreningarna inkluderar: 0 behandling av hypertoni; 0 behandling av inflammatoriska störningar, såsom reumatoid artrit och psoriasis; 0 behandling av allergiska störningar, såsom höfeber och allergisk rinit; 0 mastcelldegranulering; 0 antitumörämnen; 0 behandling av hjärthypoxi; och 0 skydd mot cerebral ischemi; 0 diagnostiska användningar, t ex för att bestämma närvaro av ett eller flera av ovan beskrivna medi- cinska tillstånd eller i en screening-analys för att bestämma effektiviteten av andra föreningar för bindning till A3-Ado-receptorn (dvs genom kom- petitiv inhibition som bestäms genom olika bind- ningsanalyser) som beskrivits i Jacobson och Van Rhee, therapy, York, 1997, Pharmacol., Purinergic approaches to experimental Jacobson och Jarvis, ed., Wiley, New sid 101-128; Mathot et al., Brit. J. 116:1957-1964 (1995); van der Wenden v... 10 l5 20 25 30 35 6 et al., J. Med. Chem., 38:4000-4006 (l995); och van Calenberg, J. Med. Chem., 40:3765-3772 (1997), innehàllet av vilka införlivas härmed genom refe- ' rens.
Föreningarna kan också användas i ett förfarande id; att fullständigt eller partiellt inhibera adenylatcyklua (A3) i ett däggdjur inkluderande en människa. Förfarandan involverar att administrera en effektiv mängd av en före- ning enligt formel I som är tillräcklig för att fullstän- digt eller partiellt inhibera adenylatcyklas i däggdju- ret. Föreningarna kan också märkas och användas för att detektera närvaro av tumörceller innehållande adenosin- -A3-ligander i en patient eller i ett cellprov genom att bringa cellerna i kontakt med den märkta föreningen, var- vid föreningen tilläts att binda till A3-receptorerna, och detektera närvaro av märkningen.
Föreningarna kan användas i en farmaceutisk bered- ning som inkluderar en förening enligt formel I och en eller flera konstituenser. Olika kemiska mellanprodukter kan användas för att framställa föreningarna.
Kort beskrivning av figurerna Fig 1 visar ett diagram som visar mättnaden av [125I]AB-MECA-bindning (fmol/mg protein) till humana A3- receptorer uttryckta i HEK 293-celler mot molarkoncentra- tionen av [125IJAB-MECA.
Fig 2 visar ett diagram som visar mättnaden av [l25I1AB-MEcA-bindning (fmol/mg protein) till humana A3- -receptorer uttryckta i JURKAT-cellinjen mot molarkon- centrationen av [125I]AB-MECA. Såsom visas i figuren var den densitet av A3-receptorn som detekterades approxima- tivt 300 fmol/mg protein i Jurkat-cellmembraner genom an- vändning av [l25I]AB-MECA.
Fig 3 och 4 visar diagram som visar mättnaden av bindningen av en tritiumbehandlad analog av förening 47-5-[[(4-metoxifenyl)amino]karbonyl]amino-8-propyl-2-(2- furyl)-pyrazolo]4,3-e]-l,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidin (förening 102) (fmol/mg protein) till A3-receptorer 10 15 20 25 30 35 , . . » n nu 5 2 2 5 7 gig 'IF - ÉlÉi lf: 7 uttryckta i JURKAT-cellinjen mot molarkoncentrationen av förening 102. Informationen i dessa figurer visar närvaro av adenosin-A3-receptorer i humana tumörceller vid höga densiteter. T ex detekterades approximativt 1300 fmol/mg protein i Jurkat-celler och 650 fmol/mg protein detekte- rades i HL60-celler. Således är förening 102 ett mycket mer känsligt redskap för att detektera adenosin-A3-receptorer än [125I]AB-MECA. Dessa rön har underlättat bestämningen av närvaro av A3-receptorer i många humana tumörer.
Detaljerad beskrivning av uppfinningen Föreliggande ansökan beskriver föreningar som är an- vändbara som potentiella, ändå selektiva modulatorer för adenosinreceptorer med aktivitet som A3-agonister och i vissa fall A3-antagonister och förfaranden för framställ- ning och användning därav.
Föreningarna kan användas i ett förfarande för modu- lering av adenosin-A3-receptorer i ett däggdjur inkluder- ande en människa. Förfaranden involverar att admininstre- ra en effektiv mängd av föreningen enligt formel I som är tillräcklig för att moderera adenosin-A3-receptorer till däggdjuret.
Föreningarna kan användas i en farmaceutisk bered- ning som inkluderar en förening enligt formel I och en eller flera konstituenser. Olika kemiska mellanprodukter kan användas för att framställa föreningarna.
Definitioner Såsom används häri är en förening en agonist till en adenosin-Al-receptor om den uppvisar förmåga att full- ständigt inhibiera adenylatcyklas (A3) och uppvisar för- måga att tränga undan [125I]-AB-MECA i en kompetitiv bindningsanalys.
Såsom används häri är en förening en partiell ago- nist till en adenosin-A3-receptor om den uppvisar förmåga att partiellt inhibera adenylatcyklas (A3) och uppvisar förmåga att tränga undan [l25I]-AB-MECA i en kompetitiv bindningsanalys. 10 15 20 25 30 35 522 578 8 Såsom används häri är en förening en antagonist till en adenosin-A3-receptor om den uppvisar förmåga att för- hindra inhibitionen beroende på en agonist och uppvisar förmåga att tränga undan [1251]-AB-MECA i en kompetitiv bindningsanalys. p Såsom används häri är en förening selektiv för A3- receptorn om förhållandet Al/A3- och A2/A3-aktivitet är större än ca 50, företrädesvis mellan 50 och 100, och ännu hellre större än ca 100.
Såsom används häri hänför sig uttrycket “alkyl” till envärda raka, grenade eller cykliska alkylgrupper som har företrädesvis från 1 till 20 kolatomer, ännu hellre 1 till 10 kolatomer (“låg alkyl”) och allra helst 1 till 6 kolatomer. Detta uttryck exemplifieras med hjälp av grup- -butyl, iso-butyl, n-hexyl och liknande. Uttrycken “alkylen” och per, såsom metyl, etyl, n-propyl, iso-propyl, “låg alkylen” hänför sig till tvåvärda radikaler till motsvarande alkan. Dessutom andra delar som används häri och har namn härledda från alkaner, såsom alkoxyl, alka- noyl, alkenyl, cykloalkenyl etc, då de modifieras med “làg”, har kolkedjor med tio eller mindre kolatomer. I de fallen där minimiantalet kolatomer är större än ett, t ex alkenyl (minst två kol) och cykloalkyl, (minst tre kol) skall det inses att "låg" betyder åtminstone minimian- talet kol.
Såsom används häri hänför sig uttrycket ”substitue- rad alkyl” till en alkylgrupp, företrädesvis med från 1 till 10 kolatomer ("substituerad låg alkyl”), som har från 1 till 5 substituenter, och företrädesvis 1 till 3 substituenter valda från den grupp som består av alkoxy, cykloalkyl, substituerad cykloalkenyl, substituerad alkoxy, substituerad cykloalkyl, cykloalkenyl, acyl, acylamino, acyloxy, amino, substituerad amino-aminoacyl, aminoacyl- oxy, oxiacylamino, cyano, halogen, hydroxyl, keto, tio- keto, karboxyl, karboxylalkyl, tiol, tioalkoxy, substi- tuerad tioalkoxy, aryl, aryloxy, heteroaryl, heteroaryl- nitro, oxi, heterocykel, hydroxiamino, alkoxiamino, 10 15 20 25 30 35 522 578 9 -SO-alkyl, -SO-substituerad alkyl, -SO-aryl, -SO-hete- roaryl, -S02-alkyl, S02-substituerad alkyl, -S02-aryl, -SO2-heteroaryl, och mono och di-alkylamino, mono- och di(substituerad alkyl)amino, mono- och diarylamino, mono- och di-heteroarylamino, mono- och di-heterocyklisk amino och ej symmetriska disubstituerade aminer som har olika substituenter valda från alkyl, aryl, heteroaryl och he- terocykel. Såsom används häri är andra delar som har pre- fixet ”substituerad” avsedda att inkludera en eller flera av de substituenter som listats ovan.
Såsom används häri avser ”alkaryl” en alkylgrupp med en arylsubstituent. Bindning föreligger genom alkylgrup- pen. ”Aralkyl” avser en arylgrupp med en alkylsubsti- tuent, där bindning föreligger genom arylgruppen.
Såsom används häri avser uttrycket ”alkoxy” gruppen ”alkyl-O-”, där alkyl definierats ovan. Föredragna al- koxigrupper inkluderar med hjälp av exempel metoxy, etoxy, tert-butoxy, Tl-prOpOXY , iSO -prOpOXY , Tl-blltOXY, sec-butoxy, n-pentoxy, n-hexoxy, 1,2-dimetylbutoxy och liknande.
Såsom används häri avser uttrycket ”alkenyl” alkenyl- grupper som företrädesvis har från 2 till 10 kolatomer och ännu hellre från 2 till 6 kolatomer och har åtminstone 1 och företrädesvis från 1-2 säten av alkenylomättnad. Före- dragna alkenylgrupper inkluderar etenyl(-CH=CH2), n-prope- nyl(-CH2CH=CH2), iso-propenyl(-C(CH3)=CH2) och liknande.
Såsom används häri avser uttrycket “alkynyl” alky- nylgrupper som företrädesvis har från 2 till 10 kolatomer och ännu hellre 2 till 6 kolatomer och har åtminstone 1 och företrädesvis från 1-2 alkynylomättnadssäten.
Såsom används häri avser uttrycket “acyl” grupperna alkyl-C(O)-, substituerad alkyl-C(O)-, cykloalkyl-C(O)-, substituerad cykloalkyl-C(O)-, aryl-C(O)-, heteroaryl- C(O)- och heterocykel-C(O)- där alkyl, substituerad alkyl, cykloalkyl, aryl och heterocykel är som de definierats ovan. substituerad cykloalkyl, aryl, hetero- 10 15 20 25 30 35 522 578 10 Såsom det används häri avser uttrycket “acylamino” gruppen -C(O)NRR där varje R är oberoende väte, alkyl, substituerad alkyl, aryl, heteroaryl eller heterocykel, vari alkyl, substituerad alkyl, aryl, heteroaryl och heterocykel är som de definierats ovan.
Såsom det används häri avser uttrycket ”aryl" en omättad aromatisk karbocyklisk grupp med från 6 till 14 kolatomer som har en enstaka ring (t ex fenyl) eller flera kondenserade (fuserade) ringar (t ex naftyl eller antryl). Föredragna aryler inkluderar fenyl, naftyl och liknande. Om inte annat tolkas genom definitionen för arylsubstituenten kan sådana arylgrupper eventuellt vara substituerade med från l till 5 substituenter och före- trädesvis 1 till 3 substituenter valda från den grupp som alkyl, substituerad alkoxy, består av hydroxy, acyl, alkoxy, alkenyl, alkynyl, substituerad alkyl, substituerad alkenyl, substituerad alkynyl, amino, substituerad amino, aminoacyl, acyloxy, acylamino, alkaryl, aryl, A halo, roaryl, heteroaryloxy, heterocykel, heterocykloxy, amino- aryloxy, azido, karboxyl, karboxylalkyl, cyano, nitro, hete- acyloxy, oxiacylamino, tioalkoxy, substituerad tioalkoxy, -SO-alkyl, -SO-substituerad -S02-alkyl, -SO2-substi- -S02-aryl, S02-heteroaryl, trihalometyl. tioaryloxy, tioheteroaryloxy, alkyl, tuerad alkyl, -SO-aryl, -SO-heteroaryl, Föredragna substituenter inkluderar alkyl, alkoxy, halo, cyano, nitro, trihalometyl och tioalkoxy.
Såsom används häri avser uttrycket “cykloalkyl” cyk- liska alkylgrupper med från 3 till 12 kolatomer som har en enstaka cyklisk ring eller flera kondenserade ringar.
Sådana cykloalkylgrupper inkluderar med hjälp av exempel enstaka ringstrukturer, såsom cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklooktyl och liknande eller flera ring- strukturer, såsom adamantyl, och liknande.
Såsom används häri avser uttrycken “halo" eller “ha- logen” fluor, klor, brom och jod och är företrädesvis an- tingen fluor eller klor. 10 l5 20 25 30 35 ll Såsom används här avser uttrycket “heteroaryl” en aromatisk karbocyklisk grupp med från 1 till 15 kolatomer och 1 till 4 heteroatomer valda fràn den grupp som består av syre, kväve och svavel inom åtminstone en ring (om det finns mer än en ring).
Om inte annat tolkas genom definitionen av hetero- arylsubstituenten kan sådana heteroarylgrupper eventuellt vara substituerade med från 1 till 5 substituenter och företrädesvis 1 till 3 substituenter valda från den grupp som består av hydroxy, acyl, alkyl, alkoxy, alkenyl, al- kynyl, substituerad alkyl, substituerad alkoxy, substi- tuerad alkenyl, substituerad alkynyl, amino, substituerad amino, aminoacyl, acyloxy, acylamino, alkaryl, aryl, aryloxy, azido, karboxyl, karboxylalkyl, cyano, halo, nitro, heteroaryl, heteroaryloxy, heterocykel, hetero- cykloxy, aminoacyloxy, oxiacylamino, tioalkoxy, substi~ tuerad tioalkoxy, tioaryloxy, tioheteroaryloxy, -SO- alkyl, -SO-substituerad alkyl, -SO-aryl, -SO-heteroaryl, -S02-alkyl, -S02-substituerad alkyl, -S02-aryl, -S02-he~ teroaryl, och trihalometyl. Föredragna substituenter in- kluderar alkyl, alkoxy, halo, cyano, nitro, trihalometyl och tioalkoxy. Sådana heteroarylgrupper kan ha en enstak: ring (t ex pyridyl eller furyl) eller flera kondenserada ringar (t ex indolizinyl eller bensotienyl).
”Heterocykel” eller ”heterocyklisk alkyl” avser en envärd mättad eller omättad grupp som har en enstaka ring eller flera kondenserade ringar från 1 till 15 kolatomer och från 1 till 4 heteroatomer valda från den grupp som består av kväve, svavel och syre inom ringen.
Om inte annat tolkas genom definitionen av den hete- rocykliska substituenten kan sådana heterocykliska grup- per eventuellt vara substituerade med 1 till 5 substi- tuenter valda från den grupp som består av alkyl, substi- tuerad alkyl, alkoxy, substituerad alkoxy, aryl, aryloxy, halo, nitro, heteroaryl, tiol, tioalkoxy, substituerad tioalkoxy, tioaryloxy, trihalometyl, och liknande. Sådana n uu»- 10 15 20 25 30 35 522 573 12 heterocykliska grupper kan ha en enstaka ring eller flera kondenserade ringar.
Beträffande någon av ovanstående grupper som inne- håller 1 eller flera substituenter skall det inses för- stàs att sådana grupper inte innehåller någon substitu- tion eller substitutionsmönster vilka är steriskt oprak- tiska och/eller syntetiskt omöjliga.
Såsom används häri avser ”karboxylsyraderivat” och ”sulfonsyraderivat” -C(X)R1, -C(X)-N(R1)2, -C(X)OR1, -C(X)SR1, -SOnR1, -SOHOR1, -SOnSR1, eller SOn-N(R1)2, där X är O, S eller NR1, där Rl är väte, alkyl, substituerad alkyl eller aryl och aktiverade derivat därav, såsom an- hydrider, estrar och halider, såsom klorider, bromider och jodider, vilka kan användas för att binda karboxyl- syra- och sulfonsyraderivaten till 5'-aminen genom an- vändning av standardbindningskemi.
”Farmaceutiskt accepterbara salter” avser farmaceu- tiskt accepterbara salter av en förening enligt formler IA, IB eller IC, vilka salter är härledda från en mångfald olika organiska och oorganiska motjoner som är väl kända inom teknikområdet och inkluderar med hjälp av exempel enbart, natrium, kalium, kalcium, magnesium, ammonium, tetraalkylammonium och liknande; och när molekylen inne- håller en basisk funktionalitet kan salter av organiska eller oorganiska syror, såsom hydroklorid, hydrobromid, tartrat, mesylat, acetat, maleat, oxalat och liknande, användas som det farmaceutiskt acceptbara saltet.
Uttrycket ”skyddande grupp” eller "blockerande grupp” avser vilken som helst grupp som förhindrar, då den är bunden till en eller flera hydroxyl-, amino- eller karboxylgrupper hos föreningarna (inkluderande mellanpro- dukter därav, såsom aminolaktamerna, aminolaktonerna etc), reaktioner från att inträffa vid dessa grupper och vilken skyddande grupp kan avlägsnas genom konventionella kemiska eller enzymatiska steg för att återetablera hyd- roxyl-, amino eller karboxylgruppen. Föredragna avlägs- ningsbara aminoblockerande grupper inkluderar konventio- 10 15 20 25 30 35 522 578 13 nella substituenter, såsom t-butyoxikarbonyl(t-BOC), bensyloxikarbonyl(CBZ),och liknande vilka kan avlägsnas genom konventionella betingelser som är kompatibla med produktens karaktär.
.Följande förkortningar används häri: Förkortningarzd [l25I]AB-MECA, [125I]N5-(4-amino-3-jodbensyl)adenosin- 5'N-metyluronamid; (R)-PIA, (R)-N5-(fenylisopropyl)ade- nosin; DMso, dimetysulfoxid; I-AB-MECA, N6-(4-amino-3- jodbensyl)adenosin-5'-N-metyluronamid; IB-MECA, N5-(3- jodbensyl)adenosin-5'-N-metyluronamid, Ki, jämviktsinhi- bitionskonstant; NECA, 5'-N-etylkarboxamidoadenosin; THF, tetrahydrofuran; Tris, Föreningsframställning Fackmän inom omrâdet organisk kemi inser att reak~ tris(hydroximetyl)aminometan. tiva och ömtàliga funktionella grupper ofta mäste skyddas före en särskild reaktion eller reaktionsföljder och sedan àterställas till sina ursprungliga former efter den sista reaktionen är fulländad. Vanligtvis skyddas grupper genom att omvandla dem till ett relativt stabilt derivat.
Till exempel kan en hydroxylgrupp omvandlas till en eter~ grupp och en amingrupp omvandlas till en amid eller kar- bamat. Metoder för att skydda och avlägsna skydd, som också är kända som “blockeringsmetod” och “deblockerings- metod" är väl kända och vitt utövade inom teknikomràdct, se t ex T. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley, New York (1981) eller Protective Groups in Organic Chemistry, Ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, London (1973).
Föreningarna framställs företrädesvis genom att liva en förening enligt formel II reagera med en lämplig karf boxylsyra- eller sulfonsyraderivat med hjälp av kända ka miska metoder. 522 578 14 R3 Nlg ~ íflïN R A_ - _ 5 2%) N _ “ N67l\~NH2 10 H Föreningar enligt formel II kan framställas med hjälp av följande reaktionsschema I och II illustrerade där R3 är furan.
REAKTIONSSCHEMA I CN ”r R' H N:::N" NHQ _ m CgEt [H _ \\ \ O B MN NJ ++- VH' 522 575' 15 D \ \ \ \ O 5 o N N \ \ / /N 5 ,, / N N * - ~ / R | | N " H R A I Å 10 V NHZ N/ NH2 VH I Reagens: A) trietylortoformat; B) Z-furonsyrahydrazid, 2- metoxietanol; C) PhOPh, 260°; D) 10% HCl, under áterflö- 15 de; E) cyanamid, pTsOI-I, N-metylpyrrolidon REAKTION§§QHEMA II x \ O N 20 I \N CN N, F R ___»- R | | H NHZ NH2 25 m E \ \ 30 O N \ I N _ N” R I ,¿ 35 N A .N NH-Z lO 15 20 25 30 35 522 sm "' 16 Reagens: F) furonsyrahydrazid, difenyleter; E) cyanamid, pTsOH, N-metylpyrrolidon.
Föreningarna enligt formel II kan framställas genom antingen en indirekt väg beskriven i reaktionsschema I eller en direkt väg beskriven i reaktionsschema II; Lämp- liga utgàngsmaterial för båda reaktionsschema är de hete- rocykliska ortoaminonitrilerna enligt formel III, allmänt framställda enligt syntetiska metoder kända i litteratu- ren och rapporteras i boken av E.C. Taylor och A.
McKillop (vol. 7 av serien Advances in Organic Chemistry, Ed. Interscience, 1970).
CN NH2 m Orto-aminonitriler III transformeras till motsvar- ande imidater enligt formel IV genom reaktion med ett etylortoformatöverskott vid àterflödestemperaturen under 8 till 10 h. Reaktionen, efter evaporation av etylorto- formatet, leder till de motsvarande väsentligen rena imidaterna IV i ett högt utbyte som bevisades genom IR- och 1H NMR-analys av de råa reaktionsprodukterna.
CN N: (TJ/H m OEt Imidaterna enligt formel IV underkastas sedan en följd av två reaktioner, varvid de tricykliska struktu- rerna enligt formel VI tillåts att erhållas i ett högt utbyte. u vv»- 10 15 20 25 30 35 17 Reaktionsföljden inkluderar: a) reaktion med 2-fu- ronsyrahydrazid i en 2-metoxietanollösning vid àterflö- destemperaturen under 8-10 h för att erhålla mellanpro- duktsföreningarna enligt formel V; b) termisk cyklisering av den senare till motsvarande föreningar enligt formel VI genom att värma i difenyleter vid temperaturen 260°C under 0,5 till 1 h.
De tricykliska föreningarna VI hydrolyseras sedan med HCl vid àterflöde under 1 till 3 h för att ge triazo- ler VII, vilka slutligen cykliseras till önskvärda före- ningar II med cyanamid i N-metylpyrrolidon vid àterflöde och i närvaro av para-toluensulfonsyra (reaktionsschema IL N O O / m / \N 'ï/ N/ R = H R Il NH2 N NH2 VH H I vissa fall kan triazoler VII erhållas genom att direkt värma i difenyleterortoaminonitril III med 2-fu- 522 5.78 18 ronsyrahydrazid. Triazoler VII cykliseras sedan som be- skrivits ovan i rektionsschema II). I följande reak- tionsscheman III, IV och V redogörs i mera detalj synte- vsen av föreningarna enligt formel II i vilken A är en 5 triazolring.
REAKTIQNSSCHEMA III Syntes av 5-amino-7-substituerad-2 (Z-furyl) -1, 2, 3-tria- zolo [5 , 4 -e) 1 , 2 , 4-triazolo [l , 5-c] pyrimidinderivat 10 coNH » R-N ---> 3 + CN oMso \N NH2 - / R POCÜ3 \\ oMF:o°c ° \ /N N/ 260 c N NH2 N/ I \ / R \ H [N N H 2 R NH2-CN pTs - O H, 0 N-metylpyrrolidon 1 ÖÛ C \ \ O N 1 ä” /fN N 10 15 20 25 30 35 522 578 19 REAKTIQN§§QHEMA IV Syntes av 5-amino-8-substituerad-2 (Z-furyl) -1 , 2, 3-tria- zo1o[5 , 4-e] 1 , 2 , 4-triazolo [l , 5-c] pyrimidinderivat M C CN 'âGSfbNs * < =-->N°°H f/NICN CN om \N / NHso2C7H7 H H2so4konc. -15°C /N\ CN RCI' - R~N | ' <_______^ ”N CN \N«~ K2C03.0M N | N NH , 2 H .NB \ \\ 0 'i \~ N / R__N/ \ N \ -f /,L\ N NI/ NH 2 Reagenser: A) furonsyrahydrazid, PhOPh, 260°C, B) NHZCN, pTsOH, N-metylpyrrolidon. 10 15 20 25 30 35 522 578 20 REAKTI N S HE V Syntes av 5-amino-9-substituerad-2(2-furyl)-1,2,3~tria- zolo[5,4-e]1,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidinderivat Me -O- 5°2N3 * CN NÄOH áN CN ----> CN '()°C N\N;;H;: / NHSO2C7H7 H RU NQH, 4 DMF 80°C R P{SO \ ' 2 4 _konc. IN CN '":;§=z' “i I r NHSO2C7H7 H \ O 2 Reagenser: A) furonsyrahydrazid, PhOPh, 260°C, B) NH2CN, pTsOH, N-metylpyrrolidon. 10 15 20 25 30 35 (Il -a »H fa v _. 21 Slutligen tillåts de 5-amininnehàllande föreningarna II att reagera med karboxylsyror, sulfonsyror, aktiverade karboxylsyror, aktiverade sulfonsyror, tiokarboxylsyror, aktiverade tiokarboxylsyror och liknande för bildning av de önskvärda föreningarna. Aktiverade karboxylsyror in- kluderar syrahalider, estrar, anhydrider och andra deri- vat som är kända för att reagera med aminer för bildning av amider. Aktiverade sulfonsyror inkluderar sulfonylha- lider, såsom sulfonylklorider.
Det är inte nödvändigt att i alla fall använda akti- verade karboxylsyra- och sulfonsyraderivat. Syrorna själva kan bindas till aminerna med hjälp av standard- bindningskemi, t ex med hjälp av dicyklohexyldiimid (DCI) och andra rutinmässigt använda bindningsmedel. Lämpliga bindningsbetingelser för bildning av amidbindningar är välkända för fackmän inom området vid peptídsyntes.
I allmänhet kan kemin ovan användas för att fram- ställa 8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4- triazolo[l,5c]pyrimidiner när 3-cyano-2-aminopyrazoler används som utgàngsmaterial. 3-cyano-2-aminopyrazolerna kan tillåtas att reagera med en alkylhalid (RX) i ett polärt aprotiskt lösningsmedel, såsom dimetylformamid (DMF), för att åstadkomma en R-grupp på en av kväveato- merna i ringen. Den erhållna föreningen kan återflödas med trietylortoformat för att åstadkomma en iminetyles- ter, vilken kan tillåtas att reagera med furonhydrazid, företrädesvis med hjälp av en ”Dean-Stark”-fälla för den azeotropiska elimineringen av vatten som framställts i reaktionen för att åstadkomma 8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)-py- razolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[l,5c)lpyrimidiner. Produk- terna kan renas genom kromatografi t ex i (EtOAc/hexan 1:1) för användning i efterföljande kemi.
Produkten av denna reaktion kan tillåtas att reagera med en lämplig syra, såsom HCl, vid återflöde följt av reaktion med cyanamid i ett lösningsmedel, såsom N-metyl- pyrrolidon, med katalytisk para-toluensulfonsyra vid för- höjda temperaturer för att åstadkomma 5-amino-8-(Ar)al- 10 15 20 25 30 35 522 578 - | ø n . n 22 kyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4-triazolo[l,5c]py- rimidiner.
Dessa aminsubstituerade föreningar kan tillåtas att reagera med lämpliga isocyanater för bildning av ureafö- såsom syrahalider, reningar, aktiverade karboxylsyror, för att åstadkomma amider, aktiverade sulfonsyror, såsom sulfonsyrahalider, för bildning av sulfonamider eller andra reaktiva karboxylsyra- eller sulfonsyraderivat för bildning av andra önskvärda föreningar.
Triazolo-triazolo-pyrimidinföreningar kan framstäl- las med hjälp av liknande kemi men med en lämplig funk- tionaliserad azid som utgångsmaterial och làta aziden reagera med H2NC(O)CH2CN för bildning av den initiala heterocykliska ringen, följt av reaktion av amidgruppen med ett dehydratiserande medel, såsom POCl3, för bildning av en nitril. Den erhållna cyanoaminotriazolen kan tillà- tas att reagera på samma sätt som de 3-cyano-2-aminopyra- zoler som diskuterats ovan för framställning av triazolo- -triazolo-pyrimider.
Syntes av radiomärkta analoger Föreningarna kan märkas med vilken som helst lämplig radiomärkning. Exempel på lämpliga radiomärkningar inklu- derar 3H och 14C, men vilken som helst väsentligen icke- toxisk radiomärkning som vanligtvis används i farmakoki- netiska studier kan användas. Sätt för att införliva radiomärkningar i organiska föreningar är välkända för fackmannen inom området.
När föreningarna är 5-[[substituerad fenyl)amino]kar- bonyl]amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]1,2,4- triazolo[l,5-c]pyrimidinföreningar eller 5-amino-8-(ar)- alkyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4-triazolo[1,5-c]- pyrimidinföreningar, är införlivande av en tritiummärkning någorlunda rättfram.
I en utföringsform är ett lämpligt utgångsmaterial en förening i vilken (ar)alkylgruppen vid 8-positionen inkluderar en dubbelbindning. Dubbelbindningen kan tillå- tas att reagera med tritium i närvaro av en lämplig kata- .nu :in ~ 10 15 20 25 30 35 522 578 23 lysator, t ex palladium pà träkol eller andra kända hyd- reringskatalysatorer.
Till exempel kan 5-[[(4-metoxifenyl)amino]karbonyl]- amino-8-(1,2-ditritiopropyl)-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]- l,2,4-triazolo[l,5-clpyrimidin (förening 102) framställas genom tillsättning av tritium tvärs dubbelbindningen hos 5-[[(4-metoxifenyl)amino]karbonyl]amino-8-l-propenyl-2- (2-furyl)pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidin (förening 101). Förening 102 diskuteras nedan med avse- ende på olika bindningsaffinitetsstudier pä JURKAT-can- cerceller.
Alternativt kan tritiummärkningen vara närvarande pà de föreningar som används för att reagera med 5-amino- gruppen för bildning av ifrågavarande amider, urea eller andra grupper vid 5-positionen. Till exempel kan isocya- naterna som används för att framställa 5-aminokarbonyl- aminoföreningarna beskrivna häri inkludera en tritium- eller annan radiomärkning och kan således lätt införlivas i den slutliga produkten.
I en annan utföringsform kan radiomärkningen inför- livas i molekylen medan ringsystemet sätts samman. Som diskuterats ovan med avseende pà syntesen av föreningarna enligt formel II hydrolyseras olika tricykliska förening- ar enligt formel VI med HCl för att ge triazoler enligt formel VII, vilka cykliseras med cyanamid vid återflöde i närvaro av paratoluensulfonsyra som visas i reaktions- schema I. Det är relativt rättfram att införliva en 14C- märkning vid detta steg i syntesen med hjälp av 14C-märkt cyanamid.
Jodiserade föreningar kan framställas t ex genom att införliva ett radioaktivt jod i den aromatiska förening som används för att reagera med 5-amingruppen. Införliv- ande av jod i aromatiska ringar är väl känt för fackmän inom området. Det är rättfram att införliva en jodatom i de aromatiska föreningar som används för att reagera med 5-amingurppen för framställning av föreningarna beskrivna häri. 10 15 20 25 30 35 24 Således kan man med hjälp av ordinära kunskaper inom teknikomràdet lätt framställa lämpliga radiomärkta ana- loger.
Svntes av fluorescensmärkta analoqer Som med de radiomärkta föreningarna är syntesen av fluorescensmärkta föreningar relativt rättfram. Företrä- desvis är de fluorescerande grupperna närvarande vid R2- positionen, fastän substitution vid R3-positionen är också möjlig. I en utföringsform inkluderar ifrågavarande fluorescerande grupp(er) en furanring som kan vara fäst vid R3-positionen. Alternativt kan andra aromatiska ringar användas. Fluorescerande märkningar är välkända för fackmän inom området och kan lätt fästas på de före- ningar som beskrivs häri med hjälp av känd kemi.
Sätt att använda föreningarna Föreningarna kan användas för alla indikationer i vilka agonister och antagonister pà A3-receptor verkar, inkluderande: 0 behandling av hypertoni; 0 behandling av inflammatoriska störningar, såsom reumatoid artrit och psoriasis; 0 behandling av allergiska störningar, såsom hö- feber och allergisk rinit; I mastcelldegranulering; 0 antitumörmedel; 0 behandling av hjärthypoxi; och 0 skydd mot cerebral ischemi; som beskrivs t ex i Jacobson, TIPS maj 1998, sid 185-191, innehållet av vilken införlivas härmed genom referens.
En föredragen användning av dessa föreningar är i de- tektionen och/eller behandlingen av cancer. Såsom diskute- ras nedan har tumörceller visat sig uttrycka A3-receptorn.
Det förmodas att A3-receptorn skyddar cellerna från ische- misk skada när de inte erhàller en tillräcklig blodtill- försel. Åtskilliga kommersiellt tillgängliga läkemedel såväl som läkemedel som för närvarande är under utveckling anpassas för att inhibera VEGF-uttryck, som hindrar blod- 10 15 20 25 30 35 522 578 25 tillförseln till tumörcellerna. Agonism pà adenosin-A3- -receptorerna kan emellertid åstadkomma en skyddande effekt, får en tillräcklig blodtillförsel. Genom att administrera varvid tumörcelldöd förhindras medan cellerna inte antagonister till dessa receptorer tillsammans med anti- VEGF-föreningar eller andra anti-angiogeniska föreningar kan tumörcellerna avskärmas från ny blodtillförsel såväl som att förlora skyddet mot ischemisk skada som agonism pà A3-receptorerna åstadkommer.
Föreningarna kan administreras till en patient via vilka som helst medicinskt accepterbara sätt. rektal, Lämpliga administrationssätt inkluderar oral, topisk eller parenteral (inkluderande subkutan, intramuskulär och intravenös) administration, fastän oral eller parenteral administration är föredragna.
Den mängd av föreningen som erfordras för att vara effektiv som en modulator till en adenosinreceptor kommer förstås att variera med det individuella däggdjuret som behandlas och bedöms slutligen av läkaren eller veterinä- ren. De faktorer som skall betraktas inkluderar det till- stànd som behandlas, administrationsvägen, beredningens ålder och all- mänt tillstànd och den särskilda förening som skall admi- karaktär, däggdjurets kroppsvikt, ytarea, nistreras. Emellertid är en lämplig effektiv dos i områ- det av ca 0,1 ug/kg till ca 10 mg/kg kroppsvikt per dag, företrädesvis i området av ca 1 mg/kg till ca 3 mg/kg per dag.
Den totala dagliga dosen kan ges som en enstaka dos, flera doser, t ex tvà till sex gånger per dag, eller genom intravenös infusion under en vald tid. Doser över eller under det område som nämnts ovan är inom ramen för föreliggande uppfinning och kan administreras till den individuella patienten om önskvärt och nödvändigt. Till exempel skulle ett dosområde för en 75 kg däggdjur vara ca 75 mg till ca 220 mg per dag och en typisk dos skulle kunna vara ca 150 mg per dag. Om diskreta flera doser är 10 15 20 25 30 35 n H f f I i' °' ' '° 'en 1.11* I :I ' 'P ' z ° . »,øf n n u 522 573 26 indikerade kan behandling typiskt vara 50 mg av en före- ning som ges 3 gánger per dag.
I en annan utföringsform kan de radiomärkta före- ningarna administreras till en patient i syfte att genom- föra en analys för att bestämma närvaro eller fränvaro av cancerogena tumörceller som uttrycker A3-receptorer. De föreningar som beskrivs häri som att ha en relativt hög affinitet för A3-receptorsubtypen administreras fördelak- tigt till en patient och efter att föreningarna binder till de A3-receptorer som är närvarande i tumörcellerna, kan läget av föreningarna bestämmas genom bestämning av de radiomärkta föreningarnas lägen. Anordningar för be- stämning av läget och densitet av radiomärkta föreningar är väl kända för fackmän inom omrâdet.
Användning av radiomärkta och/eller fluorescensmärk- ta föreningar under kirurgi för avlägsnande av cancerogen vävnad kan också vara fördelaktig. Ofta måste kirurger försäkra fullständigt avlägsnande av den cancerogena väv- naden. De radiomärkta eller fluorescensmärkta föreningar- na kan administreras till en patient antingen före eller under kirurgin och binder till de cancerceller som är närvarande i patienten. Administrationstiden varierar ke- roende bland andra faktorer på upptaget av den särskilda föreningen av de särskilda tumörcellerna och läget av tumören i kroppen. Kirurgen har sedan en relativt rätt- fram analys för bestämning av närvaron av àterstàendæ cancerceller efter avlägsnande av tumören. Närvaron av äterstàende tumörceller kan bestämmas genom mätning av fluorescens eller radioaktivitet vid det operativa fixa: genom användning av analytiska anordningar som är vä? kända för fackmannen inom omrâdet.
Detektion av cancerceller in vitro kan genomföras genom att administrera föreningarna till en suspension av celler i cellodlingsmedia, vilket tillåter föreningen att binda till adenosin-A3-receptorerna på cancercellerna r~% detektera märkningen. 10 15 20 25 30 35 .nu- o u un u . n oo n 27 Beredningar De föreningar som beskrivits ovan administreras företrädesvis i en beredning inkluderande en aktiv före- ning, d v s en förening enligt formel I, tillsammans med en accepterbar bärare för administrationssättet. Lämpliga farmaceutiskt accepterbara bärare är kända för fackmän inom området.
Kompositionerna kan eventuellt inkludera andra tera- peutiskt aktiva komponenter, såsom antivirala medel, antitumörmedel, antibakteriella medel, antiinflammato- riska medel, smärtstillande medel och immunsuppressiva medel. Bäraren mäste vara farmaceutiskt accepterbar i den mening att den måste vara kompatibel med de andra kompo- nenterna hos beredningen och inte vara skadlig för motta- garen därav.
Beredningarna kan inkludera bärare som är lämpliga för oral, rektal, topisk eller parenteral (inkluderande subkutan, intramuskulär och intravenös) administration.
Föredragna bärare är sådana som är lämpliga för oral eller parenteral administration.
Beredningar som är lämpliga för parenteral administ- ration inkluderar lämpligen en steril vattenbaserad bered- ning av den aktiva föreningen som företrädesvis är isoto- nisk med blodet hos mottagaren. Sådana beredningar kan lämpligen således innehålla destillerat vatten, 5% dextros i destillerat vatten eller salin. Användbara föreningar inkluderar också koncentrerade lösningar eller fasta ämnen innehållande föreningen enligt formel (I) vilka vid späd- ning med ett lämpligt lösningsmedel ger en lösning som är lämplig för parenteral administration ovan.
För enteral administration kan föreningen införlivas i en inert bärare i diskreta enheter, såsom kapslar, oblatkapslar, tabletter eller pastiller, var och en in- nehållande en förutbestämd mängd av den aktiva förening- en; som ett pulver eller granuler; eller en suspension eller en lösning i en vattenbaserad vätska eller icke- -vattenbaserad vätska, t ex en sirap, ett elixir, en l0 15 20 25 30 35 522 578 twzaà 28 emulsion eller en flytande dos. Lämpliga bärare kan vara stärkelser eller socker och inkluderar smörjmedel, smak- ämnen, bindemedel och andra material av samma karaktär.
,En tablett kan tillverkas genom kompression eller malning eventuellt med en eller flera accessoriska kom- ponenter. Komprimerade tabletter kan framställas genom att komprimera i en lämplig anordning den aktiva före- ningen i en fri flytande form, t ex ett pulver eller granuler, eventuellt blandad med accessoriska komponen- ter, t ex bindemedel, smörjmedel, inerta spädningsmedel, ytaktiva ämnen eller dispergerande medel. Malda tabletter kan tillverkas genom att mala i en lämplig anordning en blandning av den pulvriserade aktiva föreningen med vilken som helst lämplig bärare.
En sirap eller suspension kan tillverkas genom att sätta den aktiva föreningen till en koncentrerad, vat- till vilken man också kan sätta vilka som helst accessoriska tenbaserad lösning av ett socker, t ex sackaros, komponenter. Sådana accessoriska komponenter kan inklu- dera smakämne, ett medel för att försena kristallisation av sockret eller ett medel för att öka lösligheten av vilken som helst annan komponent, t ex som en flervärd alkohol, t ex glycerol eller sorbitol.
Föreningarna kan också administreras lokalt genom topiskt anbringande av en lösning, salva, kräm, gel, lotion eller polymert material (t ex ett PluronicTM, BASF), metoder kända inom farmaciomràdet. vilka kan framställas genom konventionella Förutom lösningen, salvan, krämen, gelen, lotionen eller polymera basen och den aktiva komponenten kan sådana topiska beredningar också innehålla konserveringsmedel, parfymer och ytter- ligare aktiva farmaceutiska medel.
Beredningar för rektal administration kan presente- ras som suppositorier med en konventionell bärare, t ex kokossmör eller Witepsol S55 (varumärke hos Dynamite Nobel Chemical, Tyskland), som en suppositorisk bas. e... 10 15 20 25 30 35 522 578 29 Alternativt kan föreningen administreras i liposomer eller mikrosfärer (eller mikropartiklar). Metoder för framställning av liposomer och mikrosfärer för administ- ration till en patient är väl kända för fackmän inom områ- det. Us-patent 4 789 734, innehållet av vilket införlivas härmed genom referens, beskriver metoder för inkapsling av biologiska material i liposomer. I huvudsak upplöses mate- rialet i en vattenbaserad lösning, de lämpliga fosfolipi- derna och lipiderna tillsätts, tillsammans med ytaktiva ämnen om det erfordras och materialet dialyseras eller sonikeras som är nödvändigt. En granskning av kända meto- der tillhandahålls av G. Gregoriadis, kapitel 14, ”Lipo- somes,” Drug Carriers in Biology and Medicine, sid 287-341 (Academic Press, 1979). Mikrosfärer som bildas av polyme- rer eller proteiner är väl kända för fackmän inom området och kan förses med svans för passage genom det gastroin- testinala området direkt till blodomloppet. Alternativt kan föreningen införlivas och mikrosfärerna eller kompo- sitmikrosfärerna implanteras för långsam frisättning under en tidsperiod som sträcker sig från dagar till månader. Se t ex US-patent 4 906 474, 4 925 673 och 3 625 214, inne- hållet av vilka införlivas härmed genom referens.
Föredragna mikropartiklar är sådana framställda från bionedbrytbara polymerer, såsom polyglykolid, polylaktid och sampolymerer därav. Fackmän inom området kan lätt be- stämma ett lämpligt bärarsystem beroende på olika fakto- rer inkluderande den önskvärda hastigheten för läkeme- delsfrisättning och den önskvärda dosen.
Beredningarna kan lämpligen presenteras i endosform och kan framställas med hjälp av vilken som helst metod som är känd inom farmaciområdet. Alla metoder inkluderar steget att bringa den aktiva föreningen i association med en bärare som utgörs av en eller flera accessoriska kom- ponenter. I allmänhet framställs beredningarna genom att enhetligt och intimt bringa den aktiva föreningen i asso- ciation med en flytande bärare eller en fint fördelad 10 15 20 25 30 35 522 578 30 fast bärare och sedan om nödvändigt forma produkten till en önskvärd endosform.
Förutom ovan nämnda komponenter kan beredningarna dessutom inkludera en eller flera valfria accesssoriska komponenter som utnyttjas inom området för farmaceutiska beredningar, t ex spädningsmedel, buffertar, smakämnen, bindemedel, ytaktiva ämnen, förtjockningsmedel, smörjme- del, suspenderingsmedel, konserveringsmedel (inkluderande antioxidanter) och liknande.
Bestämning av aktivitetsqraden hos föreningarna Föreningarnas aktivitet kan lätt bestämmas med hjälp av rutinexperiment genom användning av vilken som helst av följande analyser.
Bindningsanalys med A1- och A2A-ráttadenosinreceptor Membranberedningar: Hanràttor av typen Wistar (200-250 g) kan dekapite- ras och hela hjärna (minus hjärnstammen, striatum och cerebellum) dissekeras på is. Hjärnvävnaderna kan rubbas i en Polytron (inställning 5) i 20 vol 50 mM Tris HCl, pH 7,4. Homogenatet kan sedan centrifugeras vid 48 000 g under 10 min och pelleten resuspenderas i Tris-HCL inne- hållande 2 IU/ml adenosindeaminas, typ VI(Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo., USA). Efter 30 min inkubation vid 37°C kan membranerna centrifugeras och pelletar lag- ras vid -70°C. Striatala vävnader kan homogeniseras med en Polytron i 25 vol 50 mM Tris HCL-buffert innehållande 10 mM MgCl2, pH 7,4. Homogenatet kan sedan centrifugeras vid 48 000 g under 10 min vid 4°C och resuspenderas i Tris-HCL-buffert innehållande 2 IU/ml adenosindeaminas.
Efter 30 min inkubation vid 37°C kan membraner centrifu- geras och pelleten lagras vid -70°C.
Radioligandbindningsanalyser: Bindning av [3H]-DPCPX(l,3-dipropyl-8-cyklopentyl- xantin) på ràtthjärnmembraner kan genomföras väsentligen enligt metoden som tidigare beskrivits av Bruns et al, Proc. Natl. Acad. Sci. 77, 5547-5551 1980. Undanträng- ningsexperiment kan genomföras i 0,25 ml buffert inne- 10 15 20 25 30 35 522 57%) 31 hållande 1 nM[3H]-DPCPX, 100 pl spädda membraner från ràtthjärna (100 pg protein/analys) och åtminstone 6-8 olika koncentrationer av studerade föreningar. Icke- specifik bindning kan bestämmas i närvaro av 10 pM CHA (N5 cyklohexyladenosin) och detta är alltid S 10% av den totala bindningen. Inkubationstider år typiskt 120 min vid 25°C.
Bindning av [3HJ-SCH 58261 (s-amino-v-(z-fenylecyn- -2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimi- din) pà striatala membraner från råtta (100 pg protein/- analys) kan genomföras enligt metoder beskrivna i Zocchi et al., J. Pharm. and Exper. Ther. 276:398-404 (1996). I konkurrensstudier bör åtminstone 6-8 olika koncentratio- ner av studerade föreningar användas. Icke-specifik bind- ning kan bestämmas i närvaro av 50 pM NECA (5'-(N-etyl- karboxamido)adenosin). Inkubationstid är typiskt 60 min vid 25°C.
Bunden och fri radioaktivitet kan separeras genom filtrering av analysblandningen genom glasfiberfilter av typen Whatman GF/B med hjälp av en ”Brandel”-cellskördare (Gaithersburg, MD, USA). Inkubationsblandningen kan spä- das med 3 ml iskall inkubationsbuffert, vakuumfiltreras snabbt och filtret kan tvättas tre gånger med 3 ml inku- bationsbuffert. Den filterbundna radioaktiviteten kan mätas t ex genom vätskeskintillationsspektrometri. Pro- teinkoncentrationen kan bestämmas t ex enligt en Bio-Rad- (Bradford, Anal. Biochem. 72:248 (1976)) albumin som referensstandard. metod med bovint Bindningsanalvs med klonad human A3-adenosinreceptor Receptorbindningsanalyser: Bindningsanalyser kan genomföras Natl.
I mättnadsstudier kan en från HEK-293-celler som transfekterats med den humana rekombinanta A3-adenosin- enligt metoder beskrivna i Salvatore et al., Proc.
Acad. Sci. 90:10365-10369 (1993). alikvot av membraner (8 mg protein/ml) receptorn (Research Biochemical International, Natick, MA, USA) inkuberas med 10-12 olika koncentrationer av [125I]AB- MECA som sträcker sig från 0,1 till 5 nM. Konkurrensexperi- oo.- 10 15 20 25 30 35 32 ment kan genomföras i tvà exemplar i en slutvolym av 100 ul i provrör innehållande 0,3 nM [125IJAB-MECA, so mM Tris HCL-buffert, 10 mM MgCl2, pH 7,4 och 20 pl spädda membraner (l2,4 mg protein/ml) och åtminstone 6-8 olika koncentratio- ner av studerade ligander. _ Inkubationstid var 60 min vid 37°C enligt resultaten från tidigare tidsexperiment. Bunden och fri radioaktivi- tet separerades genom filtrering av analysblandningen genom glasfiberfilter av typen Whatman GF/B genom använd- ning av en ”Brandel”-cellskördare. Icke-specifik bindning definierades som bindning i närvaro av 50 pM R-PIA och var ca 30% av total bindning. Inkubationsblandningen späddes med 3 ml iskall inkubationsbuffert, vakuumfiltre- rades snabbt och filtret tvättades tre gànger med 3 ml inkubationsbuffert. Den filterbundna radioaktiviteten räknades i en Beckman gamma 5500B y-räknare. Proteinkon- centrationen kan bestämmas enligt en Bio-Rad-metod (3) med bovint albumin som referensstandard.
Dataanalys Inhibitoriska bindningskonstantvärden, Ki, kan be- räknas fràn IC50 enligt Cheng & Prusoff-ekvationen (Cheng och Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22:3099-3108 (1973)), Ki = IC50/(1+[C*]/KD*), där [C*] är koncentrationen av ra- dioliganden och KD* dess dissociationskonstant.
Ett viktat icke-linjärt kurvpassningsprogram med hjälp av minsta kvadratmetoden LIGAND (Munson and Rodbard, Anal, Biochem. lO7:220-239 (1990)) kan användas för dataanalys av mättnads- och inhibitionsexperiment.
Data uttrycks typiskt som geometriska medelvärden med 95% eller 99% konfidensintervall inom parentes.
EXEMPEL Följande exempel illustrerar aspekterna av denna uppfinning men bör inte tolkas som begränsningar. De sym- boler och vedertagna former som används i dessa exempel är avsedda att vara konsekventa med dem som används i den nutida, internationella kemiska litteraturen, t ex Jour- 10 15 20 25 30 35 33 nal of the American Chemical Society (”J. Am. Chem.
Soc.”) och Tetrahedron.
E¿§mp§1_1: Framställning av 8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyra- zolo[4,3-e]l,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidiner (föreningar 18-25) g - '8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazo- lo[1,5-c]pyrimidiner framställdes enligt den syntesstra- tegi som visas i följande reaktionsschema VI.
Reaktionsschema VI. Allmänna metoder för framställning av 8-(Ar)alkvl-2-(2-furvl)-ovrazolo[4.3-e]l,2,4-triazolo- 11.5-cïnvrimidin (18-25) Reagens: a) NaH, DMF, RX; b) HC(Oet)3, àterflöde; c) 2- furonhydrazid, MeO(CH2)2OH; d) Ph2O, 260°C, snabbkromato- grafi CN CN NFX _1_, är/Öí ___b__, \N' Nfh _ \k:§ I¶H2 I - /I 1 H R 1 i 2-9 \ 1047 1825 Vid framställning av föreningar 18-25 behandlas en lösning 1 (10 mmol) i 40 ml DMF som kylts till 0°C med NaH (60% i olja, 12 mmol) i åtskilliga delar under 10 min. Efter 45 min tillsattes den lämpliga (ar)alkyl- haliden (12 mmol) och reaktionsblandningen tilläts att värmas till 25°C och omrördes under 3-5 h (TLC: EtOAc 1:1). Reaktionen släcktes genom tillsättning av H20 (80 ml) och det vattenbaserade skiktet extraherades med EtOAc (5 x 25 ml). 10 15 20 25 30 35 522 578 34 De organiska skikten rekombinerades, torkades (Na2S04), filtrerades och koncentrerades vid reducerat tryck för att ge den alkylerade pyrazolen (2-9) som en ej separerbar blandning av Nl- och N2-isomerer (förhållande approximativt 1:4). Denna blandning av N1- och N2-substi- tuerad-4-cyano-5-aminopyrazoler (2-9) upplöstes sedan i trietylortoformat (60 ml) och lösningen àterflödades under kväve under 8 h. Lösningsmedlet avlägsnades sedan under vakuum och den oljiga återstoden som utgjordes av blandningen av imidater (10-17) upplöstes 2-metoxietanol (50 ml) och 2-furonsyrahydrazid (13 mmol) tillsattes.
Blandningen àterflödades under 5-10 h, sedan efter kyl- ning avlägsnades lösningsmedlet under reducerat tryck och den mörka oljiga återstoden cykliserades ytterligare och vilken som helst annan rening i difenyleter (50 ml) vid 260°C med hjälp av en Dean-Stark för den azeotropiska elimineringen av vatten som framställts i reaktionen.
Efter 1,5 h hälldes blandningen pà hexan (300 ml) och kyldes. Fällningen filtrerades bort och renades genom (EtOAc/hexan 1:1). Pà detta sätt erhölls (18-25) i ett fördelaktigt kromatografi huvudprodukten (N8-alkylerad) totalt utbyte.
Efter denna allmänna metod har följande föreningar framställts: 8-metvl-2-(2-furyl)-Dyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazolo[1,5-C]- 18) utbyte 45%; gult fast ämne, s.p.: 155- 156°C (EtOAc-lätt petro1eum); IR (KBr): 1615,l51O cm'1; 1H NMR (DMso dö) 64,1 (S, 1H); s,32(m,1H); 7,25(m,lH);8,06(m,1H); 8,86(S, lH),9,38(S,lH). 8-etvl-2-(2-furvl)-DVrazolo[4,3-e]1.2.4-triazolo[l,5-c]- pyrimidin (19) utbyte 50%; svagt gult fast ämne, s.p. 188-189°C (EtOAc-lätt petroleum); IR(KBr): 1620, 1500 cm-1; 1H NMR(DMso dö) 6; 1,e7(c,2H,J=7); 4,53(q,2H,J=7); 6,59(m,lH); 7,23(m,lH); 7,64(S, 8,34(s,lH); 9,lO(S, lH) 8-nroDVl-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4.3-e]l,2.4-triazolo[1.5- clpyrimidin (20) utbyte 60%; gult fast ämne, s.p. 189- rimidin lH); 10 15 20 25 30 35 -190°C (EtOAc-lätt petroleum); IR(KBr); 1600, 1505 cm“1; lH NMR(DMSO d5) Ö: O,98(t,2H,J=7); 2,03-2,l0(m,2H); 4,4l(q,2H,J=7); 6,60(m,lH); 7,24(m,lH); 7,64(S,lH); 8,32flS,lH); 9,lO(S,lH). 8-butyl-2-(2-furyl)-Dvrazolo[4.3-ell,2.4~triazolo[l,5-c]- pyrimidin§2l) utbyte 50%, svagt gult fast ämne, s.p. 245- -247°C (EtOAc-lätt petroleum); IR (KBr):l6lO, 1500 cm'1; 11-1 NMR(DMSO d6)ö, o,9(m,3H),- 1,3(m,2H),- 1,9(m,2H),- 4,5(t,2H;J=7,2); 6,2(m,lH); 7,3(m,lH); 8,0(m,lH); 8,9(s,lH); 9,4(s,lH). 8-isonentvl-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4,3-e]1,2,4-triazolo- 11,5-c]DVrimidin (22) utbyte 54%; svagt gult fast ämne, s.p. 235-237°C (EtOAc- lät: petroleum); IR(KBr)= 1635,151o,145o cm-l; 1H NMR(DMSO d5)Ö; l,O(d,6H,J=6,2); 1,5-l,9(m,3H); 4,6(t,2H,J=7,4); 6,6(m,lH), 7,3(m,lH); 7,7(m,lH); s,s(s,1H); 9,1(s,1H). 8-(2-isopentenvl)-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4,3-e]1,2,4-tria- zolo[l,5-clpvrimidin (23) utbyte 48%; gult fast ämne, s.p. 210-2l2°C (EtOAc-lätt petroleum); 1R(KBr)= 1625, 1500, 1430 cm-l; 1H NMR(DMSO d5) Ö; 1,79(S, 3H); l,87(S,3H); 5,05(d,2H,J=6); 5,55- -5,63(m,lH); 6,60(m,lH); 7,24(m,lH); 7,64(S,lH)8,34(S,lH); 9,lO(S,lH). 8-2-fenyletvl-2-(2-furyl)-DVrazolo[4.3-e]l,2,4-triazolo- [l,5-Clbvrimidin (24) utbyte 56%, s.p. 268-270°C; (EtOAc-lätt petroleum); 1R(KBr)= 166o,1s1o,145o crrrl; 1H NMR(DMSO d6)ö= 3,32(t,2H,J=6,7); 4,72(t,2H,J=6,7); 6,73(S,1H); 7,23(m,5H); 7,95(S,lH); 8,8(S,lH); 9,4l(S,lH).
Anal. (C18H14N5O)C,H,N. 8-(3-fenylDroDVl-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4.3-e]l,2,4-triazo- lo[l,5-c]Dvrimidin (25) utbyte 63%;gult fast ämne, s.p. 165-l66°C (EtOAc-lätt petroleum); IR(KBr): l630,l500,l44O cm'1; 1H NMR(DMSO d6)Ö: 2,34-2,48(m,2H); 2,67(t,3H,J=7,5); a ...wa ~ u 5 20 25 30 35 522 578 36 4,43(t,2H,J=7,5), 6,6l(m,lH); 7,16-7,32(m,6H); 7,64(d,1H,J=2); 8,29(S,lH); 902(S,lH).
Exem el 2: fram ällnin av 5-amino-8-(ar)alkyl-2-(2-fu- rvl)-nvrazolo[4.3-ell.2,4-triazolo[1.5-clnvrimidiner (Föreningar 33-40) 5-amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-py- razolo[4,3-e]l,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidiner kan fram- ställas enligt den syntesstrategi som visas i följande reaktionsschema VII. \ i \ ,3441 Reaktionsschema VII: Allmänna metoder för framställning av 5-amino-8-(ar)alkvl-2-(2-furvl)-nvrazolo[4.3-e11.2.4- -triazolo[l.5-cïnvrimidin (33-40) Reagens: a) HCl, àterflöde; b) NHZCN, l-metyl-2-pyrroli- don, pTsOH, l40°C Vid framställning av föreningar 33-40 àterflödas en lösning av blandningen triazolo-pyrimidin (18-25) (10 mmol) i vattenbaserad 10% HCl (50 ml) under 3 h.
Sedan kyldes lösningen och neutraliserades med en mättad lösning av NaHCO3 vid O°C. Föreningarna (26-33) extrahe- rades med EtOAc (3 x 20 ml), torkades de organiska skik- ten med Na2SO4 och evaporerades under vakuum. Den erhàll- na ràa aminen (26-33) upplöstes i N-metylpyrrolidon (40 ml), cyanamid (60 mmol) och p-toluensulfonsyra (15 mmol) tillsattes och blandningen värmdes vid 160°C under 4 h. Sedan tillsattes cyanamid (60 mmol) igen och lösningen värmdes över natten. Sedan späddes lösningen med EtOAc (80 ml) och fällningen (cyanamidöverskott) filtrerades bort; filtratet koncentrerades under reduce- ~\ N' R-4¶ \ z N NÅNH \\ \0 2 10 15 20 25 30 35 37 rat tryck och tvättades med vatten (3 x 30 ml). Det orga- niska skiktet torkades (Na2SO4) och evaporerades under vakuum. Återstoden renades genom kromatografi (EtOAc/lätt petroleum 2:1) för att ge den önskvärda produkten (34-41) som ett fast ämne. y Enligt denna allmänna metod har följande föreningar framställts: 5-amino-8-metvl-2-(2-furvl)-DVrazolo[4,3-e]1.2.4-triazo- lo)l.5-clbvrimidin (34) utbyte 53%; gult fast ämne, s.p. 167-l68°C (EtOAc-lätt petroleum); IR(KBr): 3500-2950, 1680, 1645, 1610, 1560, 1455 cm-1; 1H NMR (DMso d6)ö= 4,12(s,3H); 6,7o(m,1H); 6,99(bS,2H); 7,18(m,lH); 7,81(S,lH),8,42(S,1H). 5-amino-8-etv1-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4.3-e]1,2.4-triazo- 1o[1,5-c]Dvrimidin (35) utbyte 65%, gult fast ämne, s.p. 249-250°C (EtOAc-lätt petroleum); IR(KBr): 3430-2950, 1680, 1655, 1620, 1550, 1450 cm-1; 1H NMR(DMsod6)ö; 1,46(c,2H,J=7); 4,30(d,2H;J=7); 6,72(m,1H); 7,18(m,1H); 7,93(bs,2H); 7,93(S,1H); 8,62(S,1H). 5-amino-8-DroDVl-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4,3-e]l,2.4-triazo- 1o[l,5-c]DVrimidin (36) utbyte 57%; svagt gult fast ämne, s.p. 209-2lO°C (EtOAc- lätt petroleum); IR(KBr); 3400-2900, 166o,1645,161o,1545,143o cm'1; 1H NMR(DMsod6)ö= O,83(t,2H,J=7); 1,81-l,9l(m,2H); 4,22(d,2H,J=7); 6,71(m,1H); 7,19(m,1H); 7,63(bS,2H); 7,93(S,1H); 8,61(5,1H). 5-amino-8-butV1-2-(2-furyl)-DVrazo1o[4,3-e]l,2,4-triazo- lo[1,5-C]DVrimidin (37) utbyte 47%; vitt fast ämne, s.p. 200-203°C (EtOAc-lätt petroleum); IR(KBr): 3500-2900, 1685, 1640, 1620, 1550, 1450 cm~1; 1H NMR(DMso d6)ö= o,9(c,3H); 1,2(m,2H); 1,8(m,2H); 4,2(t,2H); 6,7(m,1H); 7,2(m,2H); 7,6(S,1H); 8,0(s,1H); 8,6(s,1H). n :anv 10 15 20 25 30 35 38 5-amino-8-isopentvl-2-(2-furvl)-DVrazolo[4.3-e]l,2,4- triazolo[l,5-c]DVrimidin (38) utbyte 60%; benvitt fast ämne, s.p. 212-2l3°C (EtOAc-lätt petroleum; IR(KBr): 3500-2850, 1670, 1650, l6l5, 1560, 1455 cnrl; 1H NMR(cDc13)ö= o,96(d,6H,J=6,4),- 1,59(m,1H),- 1,s6(m,2H),- 4,32(t,2H,J=6,4),- 6,5a(m,1H),- s,72(bs,2H),- 7,2l(d,lH,J=4,2); 7,63(d,lH,J=l,2); 8,10(S,lH). 5-amino-8-(2-isoDentenVl)-2-(2-furvl)-DVrazolo[4.3-e]- l,2.4-triazolo[l,5-clnvrimidin (39) utbyte 58%; svagt gult fast ämne, s.p. 178-l79°C (EtOAc- lätt petrOleum); IR(KBr): 3520-2950, 1665, 1640, l6l0,1555, 1450 Cm"l; lH NMR(CDCl3)Ö: l,74(S,3H); l,77(S,3H); 4,87(d,2H,J=7); 5,43-5,46(m,lH); 6,72(m,lH), 7,l8(m,lH); 7,62(bS,2H); 7,93(S,lH); 8,55(S,lH). 5-amino-8-(2-fenvletvl)-2-(2~furvl)-Dvrazolo[4,3-e]l.2,4- -triazolo[1,5-c]Dvrimidin (40) utbyte 45%; vitt fast ämne, s.p. 183-185°C (EtOAc-lätt petrOleum); IR(KBr)2 3500-2900,l670,l645,l620,l530,l455 cm-l; 1H NMRUJMSO d6)ö= 3,21(c,2H,J=6,4),- 4,53(t,2H,J=6,4); 6,7(S,lH); 7,1-7,4(m,6H); 7,65(bS,2H); 7,93(S,lH); 8,45(S,lH). 5-amino-8-(3-fenvlnronvl)-2-(2-furvl)-pvrazolo[4,3-e]- IJ2.4-triazolo[l,5-c]DVrimidin (41) utbyte 57%; gult fast ämne, s.p. 168-l70°C (EtOAc-lätt petrOleum); IR(KBr): 3510-2950,l665,l640,16l5,l520,1455 cm-l; 1H NMRmMso d5)ö= 2,14-2,21(m,2H),- 2,54(c,2H,J=7),- 4,29(t,2H,J=6,4); 6,7l(S,lH); 7,14-7,32(m,6H), 7,64(bS,2H); (S,lH); 8,64(S,1H).
Exempel 3: Framställninq av 5-[[(substituerad fenvl)ami- no]karbonvl]amino-8-(ar)alkvl-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4,3- e1l,2,4-triazolo[l,5-c]Dvrimidin (föreningar 42-57) 5-[[substituerad fenyl)karbonyl]amino-8-(Ar)alkyl-2- (2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidiner kan framställas enligt den syntetstrategi som visas i följande reaktionsschema VIII. 15 20 25 30 35 R. sill H\prfnšN ,, . _ i /L H // R bl/' br,N y w ®N=c=o N/ / irqw \ THF återflöde,l2 h N 4257 l R 34-41 Reaktionsschema VIII: Allmänna metoder för framställning av 5-([(substituerad fenyl)amino]karbonyl1amino-8-(ar)al- kvl-2-(2-furvl)-Dvrazolo[4,3-e]1.2,4-triazolo[1,S-c]ovri- midin (42-57) Vid framställning av föreningar 42-57 upplöstes den (10 mmol) tillerad THF (15 ml) och den lämpliga isocyanaten lämpliga aminoföreningen (34-41) i nyligen des- (13 mmol) tillsattes. Blandningen àterflödades under argon under 18 h. Sedan avlägsnades lösningsmedlet under reducerat tryck och återstoden renades genom snabbkroma- (EtOAc-lätt petroleum 4-6) da föreningarna 42-57. Enligt denna allmänna metod har tografi för att ge de önskvär- följande föreningar framställts: 5-[[(3-klorfenyl)aminolkarbonyllamino-8-metVl-2-(2-fu- rvl)-Dvrazolo[4.3-e]12,4-triazolo[l,5-clnvrimidin (42) utbyte 98%; s.p. 142-l45°C (Et2-lätt petroleum); I(KBr): 3210-293o,165o,163o,161o,15oo cm-1; 1H NMR(cDc13)ö. 4,2l(S,3H); 6,60(m,lH); 7,ll(d,lH,J=8); 7,13-7,28(m,2H): 7,55(d,lH,J=8); 7,65(S,lH); 7,78(d,lH;J=2); 8,22(S,lH); s,61(bs,1H); 11,24(bs,1H). 5[I(4-metoxifenyl)amino]karbony1]amino-8-metvl-2-(2-fu- svagt gult fast ämne, ryl)-Dvrazolo[4,3-e1l.2,4-triazolo[l.5-cløvrimidin (43) utbyte 99%; gult fastämne, s.p. 193-l95°C (Et2O-lätt pet- ro1eum); IR(KBr)= 3200-2900,1664,1625,16oo,15oo cm~1, 1H 10 15 20 25 30 35 522 573 í{?0*ï 40 NMR(CDCl3); 3,8l(S,3H); 4,20(S,3H); 6,61(m,1H); 6,85(d,2H;J=9); 7,26(m,1H); 7,55(d,2H,J=9); 7,65(S,lH); 8,2l(S,lH); 8,59(bS,1H); 10,96(bS,1H). 5-[[(3-klorfenvl)aminolkarbonvllamino-8-etvl¿2-(2-furvl)- -Dvrazolo[4.3-e]1,2.4-triazolo[l,5-c]Dvrimidin (44) utbyte 98%; svagt gult fast ämne, s.p. 204-205°C (Et2O- (KBr): 3220-2930, 1660, 1620, 1600, 1500 cm-1; 1H NMR(cDc13)ö= 1,71(c,3H,J=7); 4,50(q.2H,J=7); 6,67(m,lH); 7,20(d,1H,J=8); 7,3l(m, 1H); 7,61(d,1H,J=8); 7,70(S,1H); 7,84(S,1H); 8,30(S,lH); 8,67(bS,lH); ll,30(bS,1H). 5-[[(4-metoxifenvl)aminolkarbonvllamino-8-etvl-2-(2-fu- -lätt petroleum; IR ryl)-Dvrazolo[4,3-e]l.2,4-triazolo[l,5-c]Dvrimidin (45) utbyte 99%; svagt gult fast ämne, s.p. 200-20l°C (Et2O- IR(KBr): 3250-2950, 1665, 1620, 1610, 1520 cm-1; lH NMR(cDc13)ö= 1,71 4,49(S,3H); 6,65(m,1H); 6,88(d,2H,J=9); 7,26(m,1H); 7,58(d,2H,J=9); 7,69(s,1H); 8,28(s,lH); 8,63(bs,lH); l0,99(bs,lH). 5-[[(3-klorfenvl)amino]karbonVl]amino-8-Dropvl-2-(2-fu- -lätt petroleum); rvl)-Dvrazolo[4,3-e]l,2,4-triazolo[1,5-clnvrimidin (46) utbyte 95%; vitt fast ämne, s.p. 138-l39°C (Et2O-lätt petroleum): IR(KBr): 3210-2920,l655,l6l5,l600,l5l0 cm°1; 1H NMR(cDc13)6; 1,71(c,3H,J=7); 2,04(m,2H); 4,36(q,2H,J=7); 6,62(m,1H); 7,12(d,1H;J=8); 7,56(d,lH;J=8); 7,66(S,1H); 7,80(S,1H; 8,62(bs,lH); l1,08(bS,1H). 5-[[í4-metoxifenvl)aminolkarbonyl]amino-8-propvl-2-(2-fu- 7,27(m,lH); 8,24(S,1H); ryl)-DVrazolo[4,3-e]1.2.4-triazolo[l.5-clbvrimidin (47) utbyte 98%; svagt gult fast ämne, s.p. 146-l48°C (Et2O- -lätt petrOleum); IR(KBr): 3230-2950,1660,l620,l600,l530 cm-1; ln NMR(cDc13)ö= 0,98(c,3H,J=7); 2,04-2,0s(m,2H); 3,82(S,3H); 4,35(t,2H,J=7); 6,6l(m,lH); 6,89(d,2H,J=9); 7,25(m,lH); 7,56(d,2H,J=9); 7,65(S,lH); 8,23(S,lH); 8,59(bS,lH); 10,95(bs,1H). 10 15 20 25 30 35 522 578 41 5-[[(3-klorfenvl)amino]karbonv1]amino-8-butv1-2-(2-fu- ryl)-DVrazolo[4,3-e]l,2,4-triazolo[l,5-clnvrimidin (48) utbyte 97%; vitt fast ämne, s.p. 210-212°C (Et2O-lätt petrpleunø; IR(KBr)= 324o-297o,165o,161o,151o cm-l; 1H NMR(CDCl3)Ö: l,O0(t,3H,J=7); 1,39-1,4l(m,2H); 1,99- -2,03(m,2H); 4,4l(q,2H,J=7); 6,63(m,1H); 7,14(d,1H,J=8); 7,29(m,1H); 7,56(d,lH;J=8); 7,67(S,1H),7,80(S,1H); 8,25(S,lH); 8,63(bS,lH); l1,26(bS,lH). 5-[[(4-metoxifenvl)amino]karbonvl]amino-8-butvl-2-(2-fu- rvl)-DVrazo1o[4,3-e]l,2.4-triazolo[l.5-c]Dvrimidin (49) utbyte 96%; vitt fast ämne, s.p. 197-l98°C (Et2O-lätt petrOleum); IR(KBr): 3250-2960,1665,1610,l600,1520 Cm'l; lH NMR(CDCl3)Ö: O,98(t,3H,J=7); 1,38-1,42(m,2H); 2,02- -2,05(m,2H); 3,82(S,3H), 4,39(t,2H,J=7); 6,63(m,lH); 6,92(d,2H,J=9); 7,25(m,1H); 7,57(d,2H,J=9); 7,67(S,1H); 8,23(S,1H); 8,60(bS,1H); 10,95(bS,1H). 5-[[(3-k1orfenvl)amino]karbonvl]amino-8-isoDentv1-2-(2- furvl)-DVrazo1o[4,3-e]l,2,4-triazolo[1,5-c]DVrimidin (50) utbyte 97%; svagt gult fast ämne, s.p. 199-200°C (Et2O- -lätt petroleum); IR(KBr): 3230-2950,l655,1600,l5lO cm'1; 1H NMR(CDCl3)Ö: l,Ol(d,6H,J=7,5); 1,49-1,51(m,1H); 1,88- -2,03(m,2H),4,42(t,2H,J=7); 6,62(m,lH); 7,13(d,lH;J=8); 7,34(m,1H); 7,57(d,1H,J=8); 7,67(S,lH); 7,80(S,lH); 8,24(s,lH); 8,63(bs,1H); ll,25(bs,lH). 5-[[(4-metoxifenyl)aminolkarbonvl]aminø-8-isODentv1-2-(2- furvl) -DVrazolo[4,3-e]l.2.4-triazo1o[l.S-chwrimidin (51) utbyte 98%; vitt fast ämne, s.p. 192-l93°C (Et2O-lätt petroleum); IR(KBr): 3230-2970,l660,l6l5,1600,15OO cm'1; lH NMR(CDCl3)Ö:O,99(d,6H,J=7,5); 1,58-1-22(m,1H); 1,87- -1,97(m,2H); 3,82(S,3H); 4,40(t,2H,J=7); 6,62(m,lH); 6,9l(d,2H;J=9); 7,23(m,1H); 7,58(d,2H,J=9); 7,66(S,1H); 8,23(S,1H); 8,59(bS,1H); 10,94(bS,lH). 10 15 20 25 30 35 522 578 42 5-[[(3-klorfenvl)amino]1karbonvl]amino-8-(2-isoDentenVl)- 2-(2-furv1)Dvrazolo[4,3-e]1.2.4-triazolo[1,5-clnvrimidin läål. utbyte 99%; vitt fast ämne, s.p. 204-205°C (Et2O-lätt petreleum); IR(KBr); 3245-2960,l650,l600,l5l0 Cm"1, lH NMR(CDCl3)Ö: l,84(S,3H); l,88(s,3H); 5,0l(d;2H,J=8); 5,57(m,1H); 6,62(m,lH); 7,l2(d,lH,J=8); 7,29(m,1H); 7,56(d,lH,J=8); 7,66(S,lH); 7,80(S,lH); 8,26(S,lH); 8,60(bS,1H); ll,26(bS,lH). 5-[[(4-metoxifenvl)amino]karbonvl]amino-8-(2-isoDente- nvl)-2-(2-furyl)-Dvrazolo[4,3-e]l,2,4-triazo1o[1,5-c1- Qyrimidin §53) utbyte 96%; svagt gult fast ämne, s.p. 198-199°C (Et2O- -lätt petroleum); IR(KBr): 3235-2950, 1665, 1620, 1600, 1510 cm-l, ln NMR(cDc13)ö= 1,s3(s,3H),- 1,e7(s,3H); 3,8l(S,3H); 4,97(d,2H,J=7); 5,57(m,lH); 6,6l(m,lH); 6,93(d,2H,J=9); 7,24(m,lH); 7,54(d,2H,J=9); 7,66(S,lH)í s,25(s,1H),- 8,58 (bs,1H),- 1o,96(bs,1H). 5-[[(3-klorfenvl)amino]karbonvl]amino-8-(2-fenvletvl)-2- lå-furvl)-Dvrazolo[4,3-e]1,2.4-triazolo[l,5-c]Dvrimidin Lâíl utbyte 98%; vitt fast ämne, s.p. 186-l87°C (Et2O-lätt petroleum); IR(KBr); 325o-297o,166o,161o,1515 cm-l; lH NMR(CDCl3)Ö: 3,33(t,2H,J=7); 4,62(t,2H,J=7); 6,60(m,1H); 7,19-7,35(m,7H); 7,57(d,lH,J=8); 7,6l(S,lH); 7,8l(S,lH)í 7,89(S,lH); 8,63(bS,lH); ll,27(bS,lH), 5-[[(4-metoxifenvl)amino]karbonvl]amino-8-(2-fenvletvl)- 2-(2-furvl)-DVrazolo[4,3-e]l,2,4-triazolo[l,5-c]Dvrimidin lëå). utbyte 99%; vitt fast ämne, s.p. 180-l8l°C (Et2O-lätt petroleum); IR(KBr); 3245-2960,l660,l6l5,1600,l5OO cm'1; lH NMR(cDc13)ö= 3,42 4,60(t,2H,J=7); 6,60(m,lH); 6,93(d,2H,J=9); 7,09(m,2H); 7,20-7,28(m,4H); 7,56(d,2H,J=8); 7,60(S,1H); 7,89(S,lH); 8,59(bS,lH); lO,96(bS,lH). 10 15 20 25 30 35 43 5-[[(3-klorfenvl)amino]karbonvl]amino-8-(3-fenvlpropvl)- 2-(2-furvl)-Dvrazolo[4,3-e]1.2.4-triazolo[l,5-c]Dvrimidin LSÅL utbyte 99%; svagt gult fastämne, s.p¿ 183-184°C (Et2O- -läcc petroleurrn; IR(KBr),- 3245-29601665,161o,1515 cm-l, 1H NMR(cDc13)6= 2,46(m,2H),- 2,73(t,2H,J="/),- 4,43 (1;,2H,J=7) ; i6,66(m,1H),- 7,19-7,4o(m,sH),- 7,59(d,lH,J=8); 7,64(S,lH); 7,85(m,lH); 8,25(S,lH); 8,67(bs,lH); l1,30(bS,lH). 5-[[(4-metoxifenvl)amino]karbonVl]amino-8-(3-fenvlDro- pvl)-2-(2-furvl)-nvrazolo[4,3-e]l,2.4-triazolo[1,5-c]- pyrimidin (57) utbyte 98%; vitt fast ämne, s.p. 174-175°C (Et2O-lätt petroleum); IR(KBr): 3240-2950, 1665, 1615, 1600, 1510 cm-l; lH NMR(cDc13)6= 2,46(m,2H),- 2,73(:;,2H,J=7),- 4,42(t,2H,J=7); 6,67(m,lH); 6,96(d,2H,J=9); 7,22- 7,4l(m,6H); 7,60(d,2H,J=8); 7,64(S,lH); 8,25(S,lH); 8,65(bS,lH); ll,l6(bs,lH).
Exempel 4: Framstàllninq av 5-[(bensvl)karbonvl]amino-8- -(ar)alkvl-2-(2-furvl)-pvrazolo[4,3~e]l.2,4-triazolo[l,5- clnvrimidin (föreningar 58-59) 5-[[bensyl)karbonyl]amino-8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)- -pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidiner kan framställas enligt den syntesstrategi som visas i föl- jande reaktionsschema IX.
Reaktionsschema IX: Allmänna metoder för framställning av 5-[(bensvl)karbonvl]amino-8-(ar)alkvl-2-(2-furvl)-DVrazo- lo[4,3-e]1,2,4-triazolo[1.5-c]DVrimidin (58-59) Vid framställning av föreningar 58-59 upplöstes den lämpliga aminoföreningen (38 eller 41) (10 mmol) i nyli- gen destillerad THF (15 ml) lämplig syrahalid (13 mmol) och trietylamin (13 mmol) tillsattes. Blandningen àter- flödades under argon under 18 h. Lösningsmedlet avlägsna- des sedan under reducerat tryck och återstoden upplöstes 1 . vov- a :vi g 10 15 20 25 30 35 LH BJ ßâ LP \Q CC 44 CH2COCI - Et3N, THRåterflöde, 12 I: 38,41 ' i 5359 EtOAc (30 ml) och tvättades tvá gànger med vatten (15 ml). Den organiska fasen torkades pà Na2SO4 och kon- centrerades under reducerat tryck. Ãterstoden renades genom snabbkromatografi (EtOAc-lätt petroleum 4:6) för att ge de önskvärda föreningarna 48,58. Enligt denna all- männa metod har följande föreningar framställts: 5-I(bensvl)karbonvllamino-8-isoDentvl-2-(2-furvl)-Dvrazo- lof4.3.e11.2.4~triazolo(1,5-clovrimidin (58) utbyte 85%, svagt gult fast ämne s.p. 144-l45°C (Et2O- lätt petrOleum); IR(KBr): 3255-2930,l673,l620,l6lO,l52O cm-l; 1H Nmrucnclyö; 0,98 (d,6H,J='/,s),- 1,60(m,1H),- l,91(m,lH); 4,40(t,2H,J=7); 4,53(S,2H); 6,60(m,lH); 7,l8(m,lH); 7,26-7,39(m,5H); 7,64(S,lH); 8,22(S,lH); 9,l1(bS,lH). 5-[(bensvl)karbonvl1amino-8-(3-fenvlDroDvl)-2-(2-furv1)- Dvrazolo[4.3-el1.2.4-triazolo[1.5-clnvrimidin (59) utbyte 95%, svagt gult fast ämne, s.p. 116-l17°C (Et2O-lätt petroleum); IR(KBr); 3250-2900, 1675, 1625, 1600, 1500 cm-l; lH NMR(cDc13)ö= 2,39(m,2H),- 2,67(t,2H,J=7); 4,37(t,2H,J=7); 4,53(s,2H); 6,6l(m,lH); 7,16-7,43(m,llH); 7,65(S,lH); 7,64(s,lH); 8,l9(s,lH); 9,l2(bS,lH).
Exempel 5: Framstäl1ninq,av 1-substituerad-4-cvano-5-ami- ngpyrazgler Enligt de metoder som beskrivits i J. Org. Chem. 1956, 21, 1240; J. Am. Chem. Soc. 1956, 78, 784 och de referenser som citerats häri framställs följande före- n vov- 10 15 20 25 30 35 522 578 45 ningar, varvid man började med kommersiellt tillgängliga etoximetylenmalondinitril och N1-substituerade hydrazi- ner, vilka också är huvudsakligen kommersiellt tillgäng- liga; V 1-metyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-n-butyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-isopentyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-(2-cyklopentyl)etyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-hydroxietyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-fenyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-tert-butyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-fenyletyl-4-cyano-5-aminopyrazol 1-(2-klorfenyl)-4-cyano-5-aminopyrazol.
Dessa föreningar kan användas som mellanprodukter för framställning av pyrazolo-triazolo-pyrimidinförening- ar som beskrivits häri.
Exempel 6: Framställning av 1-substituerad-4-cyano-3-ami- nopyrazoler Med utgångspunkt från 4-cyano-5-aminopyrazol, fram- ställt enligt metoden beskriven i Chem. Pharm. Bull. 1970, 18, 2353 eller i J. Heterocyclic Chem. 1979, 16, 1113, kan 1-substituerad-4-cyano-3-aminopyrazoler kan framställas genom direkt alkylering med motsvarande al- kylhalid i dimetylformamid vid 80°C under 1 till 2 h i närvaro av vattenfri kaliumkarbonat. Från reaktionsbland- ningen, innehàllande de två Nl- och N2-alkylerade posi- tionsisomererna i ett förhållande av ca 1:2, kan N2-iso- meren isoleras genom en enkel kristallisation eller ko- lonnkromatografi på kiseldioxidgel, vilken elueras med etylacetat och petroleumeterblandningar. Med hjälp av dessa metoder framställdes följande föreningar: 1-metyl-4-cyano-3-aminopyrazol 1-butyl-4-cyano-3-aminopyrazol 1-bensyl-4-cyano-3-aminopyrazol 1-isopentyl~4-cyano-3-aminopyrazol 1-fenyletyl-4-cyano-3-aminopyrazol 10 15 20 25 30 35 522 578 46 Dessa föreningar kan användas som mellanprodukter för framställning av pyrazolo-triazolo-pyrimidinförening- ar som beskrivits häri.
Exempel 7: framställning av fenyletyl-4-cyano-3-aminopy- razoler A a) En suspension av vattenfri kaliumkarbonat (30 mmol) i DMF (50 ml) sätts till 3-amino-4-cyanopyrazol (20 mmol), varvid man värmde suspensionen till en tempe- ratur av 80°C under 30 min. Suspensionen sätts till fene- tylbromid (25 mmol) och värms till 80°C under 2 h. Efter att man låtit suspensionen svalna till rumstemperatur evaporeras blandningen till torrhet under vakuum och den erhållna återstoden späds med destillerat vatten (100 ml) och extraheras med etylacetat (3 x 50 ml). De kombinerade organiska skikten torkas över vattenfritt natriumsulfat och evaporeras till torrhet under vakuum. Den erhållna återstoden består av en 1:3 blandning av l-fenyletyl-4- cyano-5-aminopyrazol (20%) och av 1-fenyletyl-4-cyano-3- aminopyrazol (60%) som kan användas som i Exempel 9 eller kromatograferas på kiseldioxidgelkolonn, vilken elueras med en etylacetat/hexanblandning för att ge: l-fenyletyl- -4-cyano-5-aminopyrazol s.p. 172-l73°C; (20%); 1H- NMR(DMSO-d6): 3,04(t,2H); 4,l2(t,2H); 5,85(sb,2H); 7,21- ~7,30(m,5H); 7,41(s,lH); 1-ß-fenyletyl-4-cyano-3-aminopy- razol s.p. 9s-1oo°c (eo%),- lH NMR(cDc13)= 3,o7(t,2H),- 4,l0(t,2H); 4,23(Sb,2H); 7,l7(S,lH); 7,00-7,28(m,5H). b) En lösning av 1-B-fenyletyl-4-cyano-5-aminopyra- zol (20 mmol) i trietylortoformat (40 ml) àterflödades under kvävgas under 8 h. Överskottet av ortoformat eva- porerades till torrhet under vakuum och den återstående gula oljan upplöses i etyleter och perkoleras på kisel- (87% utbyte).
Den återstod som erhölls efter ortoformatevaporation är dioxidgel för att ge motsvarande iminoeter praktiskt taget ren och används direkt i följande steg.
En lösning av iminoetern (20 mmol) och av 2-furonsyrahyd- 22 mmol) (50 ml) àterflö- dades under 5 till 10 h. Efter att man låtit lösningen razid (2,5 g, i 2-metoxietanol 10 15 20 25 30 35 522 578 47 svalna evaporerades lösningen till torrhet för att ge en oljig återstod som utsätts för termisk cyklisering i di- fenyleter (50 ml) genom användning av en apparat av typen Dean-Stark för att azeotropiskt avlägsna vatten som bil- dats under reaktionen. Efter 1,5 h kontrolleras reaktio- nen i TLC (etylacetat:petroleumeter 2:1) och när utgångs- föreningen är fullständigt frånvarande kyls blandningen och hexan tillsätts. Den erhållna fällningen filtreras och kristalliseras för att ge 7-(ß-fenyletyl)-2(2-furyl)- -pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazolo[1,5c]-pyrimidin s.p. 174- l75°C (20%) 1H NMR(DMSO-d6):3,23(t,2H)4,74(t,2H); 6,75(S,1H); 7,14-7,l7(m,5H); 7,28(S:lH); 7,98(s,lH); 8,53(s,lE); 9,56(S,lH).
Med utgångspunkt från 1-ß-fenyletyl-4-cyano-3-amino- pyrazol, framställdes på liknande sätt 8-(ß-fenyletyl)- -2(2-furyl)pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazol(1,5-c)-pyrimidin; -s.p. 268-270°C (600A)lH NMR(DMSO-d6):3,32(t,2H); 4,72(t,2H); 6,73(s,lH); 7,23(m,5H); 7,95(s,lH); 8,8(S,lH); 9,4l(S,lH). c) En suspension av produkterna från steg b) (10 mmol) i 10% HCl (5,0 ml) under 3 h. Efter att man låtit lösningen svalna alkalini- àterflödas under omröring seras lösningen med koncentrerad ammoniumhydroxid vid lO°C och den erhållna fällningen filtreras eller extrahe- (3 x 100 ml), till torrhet under vakuum för att ge motsvarande 1-(ß-fe- ras med etylacetat torkas och evaporeras nyletyl)-4-[3(2-furyl)-1,2,4-triazol-5-yl]-5-aminopyrazol -S.p. 175-l76°C; 1H NMR(DMSO-d6):3,l5(t,2H); 4,48(t,2H); 5,78(S,lH), 6,37(S,lH); 6,68(S,lH); 7,l(s,lH); 7,27-7,28(m,5H); 7,82(S,lH); l4,51(Sb,2H): på ett lik- nande sätt erhàlls 1-(ß-fenyletyl)-4-[3(2-furyl)-1,2,4- -triazol-5-yl)-3-aminopyrazol (s.p. 205-206°C); 1H NMR(DMSO-d6): 3,l2(t,2H); 4,46(t,2H)5,75(S,lH); l4,4l(Sb,2H). d) Cyanamid (60 mmol) (10 mol i N-metylpyrrolidon sätts till en suspension av (40 ml) följt av p-toluensulfonsyra (15 mmol). Blandningen värms aminen från steg c) 10 15 20 25 30 35 48 till 160°C under omrörning. Efter 4 h tillsätts en andra portion av cyanamid (60 mmol) och värmning fortgàr över natten. Blandningen behandlas sedan med varmt vatten (200 ml) och fällningen filtreras, tvättas med vatten nok kristalliseras fràn etanol för att ge motsvarande 5-ami- no-7-(ß-fenyletyl)-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4- S.p. 225-226°c. 1H NMR(DMso-de>; 3,2l(t,2H); 4,5l(t,2H); 6,65(S,lH); 7,1-7,44(m,5H, OCh lH); 7,78(S,lH); 7,89(Sb,2H); 8,07(S,lH).
På ett liknande sätt erhölls 5-amino-8-(ß-fenyl- triazol[l,5-c]pyrimidin atom etyl)-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4-triazol[l,5c)- pyrimidin S.p. 212-2l3°C. lH NMR(DMSO-d6): 3,2l(t,2H); 4,53(t,2H); 6,7(S,lH); 7,1-7,4(m,5H, 7,65(Sb,2H); 7,93(S,lH); 8,45(s,lH).
Exempel 8: arom och lH); ler (O,23 mol) i DMSO (70 ml) sätts därefter till cyanoacetamid (70 mmol) och En suspension av kaliumkarbonat p-fluorbensylazid (54,5 mmol). Den erhållna lösningen om« rörs vid rumstemperatur under l h och hålls sedan i en stor volym vatten (1,5 l). Det separerade fasta ämnet filtreras, tvättas med vatten och torkas i ugn vid 70°C för att ge 1-(p-fluorbensyl)-4-karboxamido-5-amino-1,2,3- -nriazol (961% utbyte). s.p. 198-199°c; 1H NMR(DMso-de>= 7,5-7,l(m,6H); 6,4(s,2H); 5,4(s,2H). En amidsuspension (0,005 mol), i DMF (5 ml) sätts till fosforoxiklorid Den erhållna lös- som omrörts och kylts till O°C, (0,01 mol). 10 min vid 25°C och 15 min vid 80°C. Efter nedkylning till rumstemperatur tillsätts 5 ml N HCl och blandningen àterflödas under ningen omröres under 5 min vid 0°C, 5 min. 1-(p-fluorfenyl)-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol separerar fràn den nedkylda lösningen (90% utbyte).
S.p. 185-l86°C; lH NMR(DMSO-d6): 7,3-7,0(m,6H)í 5,5(s,2H); IR(KBr): 3400, 3220, 2220, 1655 Cm'1.
Följande föreningar framställdes analogt: l- eller 2-bensyl-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol 1- eller 2-(o-fluorbensyl)-4-cyano-5-amino-l,2,3- Framställninq av 4-cvano-5-amino-l,2.3-triazo¿ 10 15 20 25 30 35 522 578 Åš.Ü=:I-' 49 triazol 1- eller 2-(p-fluorbensyl)-4-cyano-5-amino- l,2,3-triazol 1- eller 2-butyl-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol 1- eller 2-isopentyl-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol 1- eller 2-(2-metoxietyl)4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol 1-2-heptyl-cyano-5-amino-1,2,3-triazol 1- eller 2-oktyl-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol.
Dessa föreningar kan användas som mellanprodukter för framställning av triazolo-triazolo-pyrimidinförening- ar som beskrivits häri.
Exempel 9: Framställning av etoximetvlenaminoheterocvkler Framställningen av etoximetylenaminoheterocykler enligt formel IV genomförs genom ett àterflöde varje or- toaminonitril med etylortoformat. Med hjälp av exempel rapporteras framställning av 4-cyano-5-(etoximetylenami- no)-1-butylpyrazol. En lösning av 4-cyano-5-amino-1-bu- tylpyrazol (20 mmol) i trietylortoformat (40 ml) värms till àterflödestemperaturen under kvävgasatmosfär under 8 h. Ortoformatöverskottet evaporeras till torrhet under vakuum och den àterstàende gula olja upplöses i etyleter och elueras genom kiseldioxidgel för att ge den rena fö- reningen (87% utbyte). I många fall är den återstod som erhållits efter evaporationen av ortoformatet väsentligen ren och används som sådan i efterföljande steg. IR (nujOl): 3140, 2240, 1640 Cm-1; lH NMR(CDCl3); 8,4(S,lH); 7,9(S,lH); 4,5(t,2H); 4,3(q,2H); l,8(m,2H); 1,5(m,2H); l,4(t,3H); 0,9(t,M).
Exempel 10: Cvkliserinq_av etoximetvlenaminoheterocvkler En lösning av etoximetylenaminoheterocykeln (20 mmol) och 2-furonsyrahydrazid (2,5 g, 22 mmol) i 2-metoxietanol (50 ml) àterflödas under 5-10 h. Efter att man låtit lös- ningen svalna evaporeras lösningen till torrhet för att erhålla en återstående olja som utsätts för termisk cykli- sering i difenyleter (50 ml) med hjälp av en rundbottnad kolv anpassad för en apparat av typen Dean-Stark för att azeotropiskt avlägsna det vatten som bildats under reak- tionen. Efter att man varierat tiden (3 till 5 h) kontrol- 10 15 20 25 30 35 522 578 50 leras reaktionen genom TLC (2:l etylacetat:petroleumeter) och när all utgàngsprodukt har försvunnit kyls blandningen och hexan tillsätts. Den erhållna fällningen filtreras och kristalliseras från det lämpliga lösningsmedlet. I vissa fall separerar en viskös olja från lösningen som sedan de- kanteras och extraheras därefter. Den oljiga återstoden kromatograferas sedan på kiseldioxidgel, vilken eluerar med etylacetat/petroleumeterblandningar för att ge den tricykliska föreningen VI.
Som exempel rapporteras de analytiska och spektro- skopiska särdragen hos vissa föreningar som framställs med hjälp av dessa metoder: 7-butyl-2(2-furyl)-pyrazolo-[4,3-e],2,4-triazolo- [1,5c]pyrimidin. lH NMR(DMso-d6)=9,6(s,1H); s,s(s,1H); l,3(m,2H); O,9(t,3H). 8-butyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-el],2,4-triazolo- [1,5c]pyrimidin. 1H NMR(DMso-d6)= 9,4(s,1H); 8,9(s,1H); 8,0(m,1H),7,3(m,lH); 6,2(m,lH); 4,5(t,2H); l,9(m,2H); 1.; (m,2H); 0,9(m,3H). I 2D-NMR(NOESY)-spektrumet visar N- CH2-signalen som ger resonans vid 4,5 tvärtoppar med C9- H-signalen som ger resonans vid 8,9. 7-isopentyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4-triazo- 1o[1,5-clpyrimidin. 1H NMR(cDc13)= 9,1(s,1H); a,s(s,1H); 7,7(m,lH); 7,3(m,lH); 6,6(m,lH); 4,6(t,2H); 1,18- l,7(m,3H); 1,0(d,6H). 8-isopentyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4-triazo- lo[l,5-c]pyrimidin. 9,1(s,lH); 8,8(s,lH); 7,7(m,1H); 7,3(m,lH); 6,6(m,lH); 4,6(t,2H); 1,9-l,5(m,3H)í l,O(d,6H).
Enligt denna metod framställdes följande före- ningar: 7-metyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4-triazolo- [1,5c]pyrimidin 8-metyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e],2,4-triazolo- [1,5c]pyrimidin 10 l5 20 25 30 35 u uu I n .. .- n ny; I: u I; »nu u. u n . .- 522 578 51 7-(2-klorfenyl)-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4- -triazolo(1,5-c]pyrimidin 7-fenyletyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazo- lo[l,5-c]pyrimidin '7-tert-butyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin I 7-(2-cyklopentyl)etyl-2(2-furyl)-pyrazolO[4,3-e]- 1,2,4-triazolo(l,5-c)pyrimidin 8-bensyl-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4-triazolo- [l,5c]pyrimidin 7-bensyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[4,4-e]l,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin 7-(2-fluorbensyl)-2(2-furyl)-1,2,3-triazolo[5,4e]- 2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidin 7-(4-fluorbensyl)-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4e]- 1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidin 7-butyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]1,2,4-tria- zolo[l,5-clpyrimidin 7-isopentyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4~e]l,2,4- triazolo(1,5-c)pyrimidin 7-(2-metoxi)etyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazo1o[5,4-e]- 1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidin 7-heptyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazolo[5,4-e]l,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin 7-oktyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]l,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin 8-bensyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]l,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin 8-(2-fluorbensyl)-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]- 1,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidín 8-(4-fluorbensyl)-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo(5,4-e]- 1,2,4-triazolofl,5-c]pyrimidin 8-butyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]1,2,4-tria- zolo[1,5-c]-pyrimidin 8-isopentyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazo1o[5,4-e]1,2,4- triazolo[l,5-c]pyrimidin 10 15 20 25 30 35 - o u ~ o n 522 578 52 8-hexyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]l,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin 8-heptyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]1,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin 8-oktyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]l,2,4-tria- zolo[l,5-c]pyrimidin 9-bensyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazolo[4,5-e}l,2,4-tria- zolo[l,5-clpyrimidin 9-(2-fluorbensyl)-2(2-furyl)-1,2,3-triazolo[4,5-e]- l,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidin 9-(4-fluorbensyl)-2(2-furyl)-l,2,3-triazolo[4,5-e]- l,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidin Dessa föreningar kan användas som mellanprodukter för framställning av triazolo-triazolo-pyrimidiner och pyrazolo-triazolo-pyrimidiner som beskrivits häri.
Exempel ll: Framställning av 5-amino-7-[aralkVl)]-2-(2- furvl)-Dvrazol[4,3-e]-l.2,4-triazol[l.5-clpvrimidiner En suspension av aminerna enligt formel VII (10 mmol) (60 mmol) i N-metylpyrrolidon (40 ml) sätts till cyanamid följt av p-toluensulfonsyra (15 mmol). Bland- ningen värms till l60°C med magnetomrörning. Efter 4 h tillsätts en andra portion av cyanamid (60 mmol) och värmning fortgår över natten. Blandningen behandlas sedan med varmt vatten (200 ml) och det utfällda fasta ämnet filtreras, tvättas med vatten och kristalliseras fràn etanol. Om inga utfällningar äger rum extraheras lösning- en med etylacetat (4 x 100 ml), extrakten tvättas med saltlösning (2 x 50 ml), torkas och evaporeras till torr- het under vakuum. Återstoden kromatograferas sedan pà en kiseldioxidgelkolonn, vilken eluerar med etylacetat.
I följande del rapporteras de analytiska och spekt- roskopiska data för vissa föreningar som framställts med hjälp av denna metod. 5-amino-7-butyl-2~(2-furyl\-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4- -uriazolo[Ls-clpyrimidin. s.p. 157-1ss°c,- 1H NMfuDMso- -d6)8,l(s,lH); 8,0(s,2H); 7,9(m,1H); 7,2(m,lH); 6,7(m,lH); 4,2(t,2H); l,9(m,2H); l,5(m,2H); O,9(t,3H).5-aminO-8- ~ n » ~ u ~ - » q n u .uu- 10 15 20 25 30 35 522 578 53 butyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4-triazolo[l,5- clpyrimidin s.p. 183-1s5°c,- 1H NMRUJMSO-ds) =s,6(s,1H),- 8,0(S,lH); 7,6(s,2H); 7,2(m,lH); 6,7(m,lH); 4,2(t,2H); l,8(m,2H); l,2(m,2H); O,9(t,3H). _ 5-amino-7-bensyl-2-(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]- l,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidin. S.p. 295-297°C; lH NMmDMso-dsm s,"5(s,2H),- s,o(s,1H),- 7,3(m,6H),- 6,7(m,1H),- 5,7(S,2H). 5-amino-7-o-fluor-bensyl-2-(2-furyl)-l,2,3-triazo- 1o[5,4-e]~1,2,4-1;riazo1o[Ls-dpyrimidin s.p. 31o-312°c,- 1H NMR(DMso-d6)= s,5(s,2H),- s,o(s,1H),- 7,3(m,5H),- 6,8(S,lH); 5,75(S,2H). 5-amino-7-metyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4- -triazolo-[1,5-c]pyrimidin; s.p. 210-213°C. 5-amino-7-tert-butyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]- -l,2,4-triazolo-[l,5-c]pyrimidin; s.p. 238-240°C. 5-amino-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4-triazolo- -(1,5-c]pyrimidin; s.p. 248-250°C. 5-amino-7-(2-hydroxietyl)-2-(2-furyl)-pyrazolo- [4,3-e]-1,2,4-triazolo-[l,5-c]pyrimidin; s.p. 258-260°C. 5-amino-7-fenyl-2-(2-furyl)-pyrazolo(4,3-e]-l,2,4- -triazolo-[l,5-c]pyrimidin; s.p. 295-297°C. 5-amino-7-isopentyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]- -l,2,4-triazolo-[l,5-e]pyrimidin; s.p. 208-2lO°C. 5-amino-8-isopentyl-2-(2-furyl)-pyrazolo(4,3-e)- -l,2,4-triazolo-[l,5-c]pyrimidin; s.p. 200-203°C. 5-amino-7-fenetyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-l,2,4- -triazolo-[l,5-c]pyrimidin; s.p. 225°C. 5-amino-7-bensyloxietyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]- l,2,4-triazolo-[1,5-c]pyrimidin. 5-amino-7-[ß-(4-isobutylfenetyl)]-2-(2-furyl)-pyra- zol[4,3-e]-1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin s.p. 207-210°C.
Dessa föreningar kan tillåtas att reagera med en lämplig syra eller sulfonsyraderivat för att uppnå före- ningarna enligt formel I beskrivna häri. 10 15 20 25 30 35 522 54 Exempel 12: Framställninq av substituerad-4-karboxamido- -5-amino-1,2,3-triazoler p-fluorbensylazid (15,1 g, 0,1 mol) och cyanacetamid (l0,8 g, 0,13 mol) sätts i denna ordning till en suspen- sion av pulvriserad kaliumkarbonat (57,5 g, 0,42 mol) i dimetylsulfoxid (150 ml). peratur under 1 h. Blandningen hälls i 3 1 vatten och det Blandningen omrörs vid rumstem- fasta ämnet som separerar filtreras och tvättas ingående med vatten för att ge 22,47 g (96%) 1-p-fluorbensyl-4- karboxamido-5-amino-1,2,3-triazol. S.p.: 198-l99°C; 1H NMR(DMSO-d6): 7,5-7,1(m,6H); 6,4(S,2H); 5,4(S,2H).
Analogt erhålls 2-fluor-6-klorbensyl-4-karboxamid-5- amino-1,2,3-triazol; S.p. 230-231°c; ln NMR(DMso d6)= 5,40(S,2H); 6,52(Sb,2H); 7,12-7,45(m,5H). 3-fluorbensyl-4-karboxamido-5-amino-1,2,3-triazol; S.p. 211-211°c ln NMR(DMso-d6)= 5,46(s,2H); 6,47(sb,2H); 7,00-7,52(m,6H). 2-fluorbensyl-4-karboxamido-5-amino-1,2,3-triazol; s.p. 195-l97°C. 1-(ß-fenyletyl)-4-karboxamido-5-amino-1,2,3-triazol; S.p. 181-l83°C; IH NMR(DMSO-d6): 3,04(t,2H); 4,35(t,2H); 6,30(Sb,2H); 7,20-7,47(m,7H) Exempel 13: Framställninq av substituerad-4-cvano-5-ami- no-1,2,3-triazoler En suspension av l-p-fluorbensyl-4-karboxamido-5- i DMF (100 10 ml) (0,2 mol) 10 h vid rums- amino-1,2,3-triazol (23,4 g, 0,1 mol) som magnetomrörts vid O°C sätts till 20,8 ml POCl3. Lösningen omrörs under 5 h vid O°C, temperatur och slutligen 15 h vid 80°C. Efter man låtit (100 ml) därtill och den erhållna lösningen återflödas under 5 h; vid svalning lösningen svalna sätts 1N HCl utfälls l,5-p-fluorbensyl-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol (1s,54 g, 90%). s.p. 185-1a6°c; 1H NMR(DMso-d6)= 7,3- 7,o(m,6H); 5,5(s,2H); IR(KBr)= 3400, 3220, 2220, 1655 cm'1.
Följande föreningar erhålls analogt: ..- n. u - n . n n. u u n n n a a Q -1 . u n o n u I v n o. u n n -n vn- v c v. t» u v v u I . . ~ - n. o a 5 å) . . . . .. .. . . - - . .- u~ 10 15 20 25 30 35 522 578 55 2-fluor-6-klorbensyl-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol; s.p. l8l-l85°C lH NMR(DMSO-d6): 5,40(S,2H); 7,26- -7,50(m,5H). _3-fluorbensyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol;slp. 195-l97°C; 1H NMR(DMSO-d6): “5,44(S,2H); 7,00-7,43(m,6H). 2-fluorbensyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol; s.p.: 195-l97°C. l-(ß-fenyletyl)-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol; s.p. 149-l50°C. 1H NMR(DMSO-d6): 3,04(t,2H), 4,36(t,2H); 7,03(Sb,2H); 7,23-7,28(m,5H).
Exempel 14: Framställninq av substituerad-4[3(2-furvl)- -l,2,4-triazol-5-Vl]-5-amino-1,2.3-triazoler En suspension av 1-p-fluorbensyl-4-cyano-5-amino- l,2,3-triazol (20 mmol) och 2-furonsyrahydrazid (22 mmol) i difenyleter (30 ml) omrörs och värms till àterflöde (260°C) med en apparat av typen Dean-Stark fram till att utgàngsföreningen försvinner (TLC, l till 2 h). Efter svalning späds blandningen med petroleumeter och den er- hållna fällningen antingen filtreras eller separeras genom dekantering och kromatograferas pà en kiseldioxid- gelkolonn, vilken eluerar med 2:1 etylacetat och petro- leumeter. l-p-fluorbensyl-4[3(2-furyl)-l,2,4-triazol-5-yl]-5- amino-l,2,3-triazol: s.p. 266-268°C 1H NMR(DMSO-d6): l4,5(S,lH); 7,8(S,lH); 7,4-7,l(m,5H); 6,6(S,lH); 6,5(S,2H); 5,5(S,2H).
Analogt erhålls 1-(ß-fenyletyl)-4[3(2-furyl)-1,2,4- triazol-5-yl]-S-amino-l,2,3-trizol (50%): s.p. 200-202°C.
IH NMRmMso-dsm 3,o7(r;,2H),- 4,16(c,2H),- 5,5o(sb,2H),- 6,6l(S,lH); 6,95(S,lH); 7,2-7,4(m,5H); 7,78(S,lH); l3,8(Sb,1H).
Exempel 15: framställning av 5-amino-7-substituerad-2-(2- furvl)-1.2.3-triazo1o[5,4-e]1,2,4-triazolo[l,5-c]pvrimi- diner En suspension av 1-p-fluorbensyl-4[3(2-furyl)1,2,4- triazol-5-yl-5-amino-1,2,3-triazol (0,325 g, 1 mmol) i N- -metylpyrrolidon (4 ml) sätts till cyanamid (6 mmol) 10 15 20 25 30 35 56 följt av p-toluensulfonsyra (1,5 mmol). Blandningen värms vid l60°C med magnetomrörning. Efter 4 h tillsätts en andra portion cyanamid (6 mmol) och värmning fortgår över natten. Blandningen behandlas sedan med varmt vatten (20 ml) och det utfällda fasta ämnet filtreras, tvättas med vatten och kristalliseras fràn etanol. Om ingen ut- fällning äger rum extraheras lösningen med etylacetat (4 X 10 ml), extrakten tvättas med saltlösning (2 x 5 ml), torkas och evaporeras till torrhet under vakuum. Återstoden kromatograferas sedan pá en kiseldioxidgel- kolonn, vilken eluerar med etylacetat för att ge 105 mg (30% utbyte) av 5-amino-7-p-fluor-bensyl-2-(2-furyl)- -l,2,3-triazolo[5,4-e]1,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidin s.p.: 266-268°C; lH NMR(DMSO-d6): 8,5(sb,2H); 7,95(S,lH); 7,4-7,l(m,6H); 6,8(s,lH); 5,7(S,2H).
Följande föreningar erhölls analogt: 5-amino-7-o-fluorbensyl~2-(2-furyl)-l,2,3-triazolo- [5,4-e]l,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidin; s.p. 310°C. 5-amino-7-bensyl-2-(2-furyl)-l,2,3-triazolo[5,4-e]- 1,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidin; s.p. 295-297°C.
S-amino-7-(2-fluor-6-klorbensyl)-2-(2-furyl)-1,2,3- -triazolo-5,4-e]l,2,4-triazolo[l,5-c]pyrimidin; s.p. 218-220°C, lH NMR(DMSO-d6); 8,5l(Sb',2H); 7,98(s,1H); 7,55-7,28(m,4H); 6,77(m,1H); 5,73(S,2H). 5-amino-7-(m-fluorbensyl)-2-(2-furyl)l,2,3-triazo- lo[5,4-e]l,2,4-triazolo(1,5-c]pyrimidin; s.p. 280-283°C; lH NMR(DMSO-d6); 8,45(bS,2H); 7,98(s, lH); 7,4-7,l(m,5H); 6,76(s,1H); 5,75(s,2H). 5-amino-7-(ß-fenyletyl)-2-(2-furyl)~l,2,3-triazolo- [5,4-e]-l,2,4-triazolo[1,5-c]pyrimidin; s.p. 269-27l°C;lH NMR(DMso-d6)= s,4(sb, 2H),- 7,98(s,1H),- 7,3-7,15(m,6H),- 6,8(s,lH); 4,7l(t,2H); 3,3l(t,2H) Exempel 16: Ytterligare föreningar Med hjälp av den kemi som beskrivits ovan framställ- des följande ytterligare föreningar: 522 578 57 4 /NLRI /N \ / R 522 578 58 Förening R R] Nr so H H 61 H 4-Meo-Pn-NHCo sz H s-cn-pn-NHco ss :-C,H, H 64 :-C,H, - 4-Meo-Ph-NHCo ss z-QH, s-Cn-Ph-NHCO se CH, Pn-NHCo 67 CH, 4-so,H-Pn-NHCo ss CH, 3,4-C|,-Ph-NHCo 69 CH, s,4-(oCH,-o)-Ph- ' NHCO % 70 CH, Lz-mog-Ph-NHCO 71 CH, MCHJPH-NHCO 72 CH, Pn-(CHg-Co 73 C,H, Ph-NHCo 74 C,H, 4-so,H-Pn-NHCo 7s C,H, sfz-Cg-Ph-NHCO 76 C,H, 3,4-(oCH,-o)-Pn- NHCo 77 Cgg 44No;æHNHCo 7s Cgg 44CH;æHNHCo 79 C,H, rh-(cHg-Co so n-C,H, Ph-NHCo s1 n-C,H, 4-so,H-Pn-NHCo sz n-C,'H, sfz-Cg-Ph-NHCQ 10 15 20 25 30 35 Exempel 17: Utvärdering av föreningarnas biologiska ak- tivitet Åtskilliga av de föreningar som beskrivits ovan har testats avseende sin affinitet vid A1 och AZA från råtta och humana A3-receptorer med hjälp av följande analyser. 5 2 '2 5 7 8 59 ss n-cgi, sfz-(ocflfm-Pn- NHco 84 H-CJH, Mmg-Pn-Nnco 85* fli-QH, i Mcng-Pn-Nnco se n-cgl, Ph-(cng-co 37 fl-CJI, Ph-Nnco ss 11-0411, 4-so,H-Ph-NHco ss» n-QH, sfz-cg-Pn-Nnco 90 n-qH, ^ 3,4-(ocH,-o)-Pn- Nnco 91 fl-QH, MNOJ-Ph-Nnco 92 n-QH, Hcng-Ph-Nflco 93 Z-(a-naflynetyl ph-(CHl)-C0 94 Z-(on-naftyßetyl H 95 Zffl-Hflfryvetyl 4-Meo-Ph-NHco 96 Ha-naflylktyl s-cl-Pn-NHCO 97 ' z-(zfgs-tribwm- H feny1)etyl 9s uzfgs-:fibfom- 4-Meo-Ph-NHco fenyl)ety1 99 z-(zfgs-ffibfom- s-cl-Ph-Nnco ü fenyl)ety1 ioo z-prøpen-Lyl 4-Meo-Ph-NHco lO 15 20 25 30 35 u u ; o » | vu 522 60 Bindningsanalys med A1- och A2-ràttadenosinreceptor Hanràttor av typen Wistar (200-250 g) dekapiterades och hela hjärnan och striatum dissekerades pá is. Vävna- derna rubbades i en polytronhomogenisator vid en inställ- ning av 5 till 30 s i 25 volymer 50 mM Tris HCl, pH 7,4, innehållande 10 mM MgCl2. Homogenatet centrifugerades vid 48 000 under 10 min och pelleten resuspenderades i samma buffert innehållande 2 IU/ml adenosindeaminas. Efter 30 min inkubation vid 37°C centrifugerades membranen och pelletarna lagrades vid -80°C. Före frysning avlägsnades en homogenatalikvot för proteinanalys med bovint albumin som referensstandard. Bindningsanalyser genomfördes pà ràtthjärna respektive -striatummembraner i närvaro av 10 mM MgCl2 vid 25°C. Alla buffertlösningar justerades för att bibehålla ett konstant pH av 7,4.
Undanträngningsexperiment genomfördes i 500 pl Tris HCl-buffert innehållande 1 nM av den selektiva adenosin- A1-receptorliganden {3H]CHA(N5-cyklohexyladenosin) och membraner från rátthjärna (150-200 pg protein/analys).
Undanträngningsexperiment genomfördes i 500 pl Tris HCl-buffert innehållande 10 mM MgCl2, 0,2 nM av den se- lektiva adenosin-A2A-receptorliganden [3H]SCH5826l (5- amino-7-(2-fenyletyl)-2(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]-1,2,4- triazolo[1,5-c]pyrimidin) och membraner frän ràttstriatum (80-100 pg protein/analys). För att bestämma IC50-värden (där IC50 är inhibitorkoncentrationen som ersätter 50% av märkt ligand) sattes testföreningen i tre exemplar till bindningsanalysprover vid ett minimum av sex olika kon- centrationer. Separation av bunden från fri radioligand genomfördes genom snabb filtrering genom filter av typen Whatman GF/B vilka tvättades tre gånger med iskall buf- fert. Filterbunden radioaktivitet mättes genom skintilla- tionsspektrometri efter tillsättning av 5 ml Aquassure.
Icke-specifik bindning definierades som bindning i närva- ro av 10 pM R-PIA (N5-(fenylisopropyl)adenosin) respekti- ve och 10 pM NECA (5'-(N-etylkarboxamido)adenosin) och var alltid 10% av den totala bindningen. Inkubationstid lO 15 20 25 30 35 522 578 61 sträckte sig fràn 150 min vid 0°C till 75 min vid 30°C enligt resultaten från tidigare genomgàngna tidsexperi- ment. Ki-värden beräknades från ekvationen enligt Cheng- Prusoff. All bindningsdata analyserade med hjälp av det icke-linjära regressionskurvanpassningsdatorprogrammet LIGAND.
Bindninqsanalvser med human klonad A3-adenosinreceptor En alikvot av membraner (8 mp protein/ml) från HEK- -293-celler som transfekterats med den humana rekombinan- ta A3-receptorn användes för bindningsanalyser. Fig 1 vi- sar en typisk mättnad av [125I]AB-MECA(N5-(4-amino-3-jod- bensyl)-5'-(N-metylkarbamoyl)adenosin) pà HEK-293-celler.
Inhibitionsexperiment genomfördes i två exemplar i en slutvolym av 100 pl i provrör innehållande 0,3 nM [125I]AB-MECA, 50 nM 'Iris Hcl-buffert, io mM Mgclz, pH 7,7, åtminstone 6-8 olika koncentrationer av typiska adenosin- 20 pl spädda membraner (12,4 mg protein/ml) och receptorantagonister. Icke-specifik bindning definierades i närvaro av 50 pM R-PIA och var ca 30% av total bind- ning. Inkubationstid var 60 min vid 37°C enligt resulta- ten fràn tidigare genomförda tidsexperiment. Bunden och fri radioaktivitet separerades genom filtrering av ana- lysblandningen genom glasfiberfilter av typen Whatman GF/B med hjälp av en ”Brandel”-cellskördare.
Resultat och diskussion Föreningar 34-59 testades i radioligandbindningsana- lyser avseende affinitet vid A1- och A2A-receptorer fràn ràtthjärna och humana A3-receptorer och resultaten sam- manfattas i Tabell 1.
Data visar att föreningar som saknar klumpiga (före- ningar 38, 40 och 41) grupper vid N5-position visar stor affinitet för A2A-adenosinreceptorer med låg selektivitet mot A1 och làg affinitet vid human adenosin-A3-receptor- subtyp och att föreningar med en substituerad fenylkarba- moylkedja vid N5-positionen besitter affinitet i nanomo- lart område vid hA3-receptorsubtyp med olika grader av selektivitet mot A1- och A2A-receptorsubtyp. Särskilt lO nu .av 62 4-metoxifenylkarbamoyldelen (föreningar 51, 55 och 57) tilldelar högre affinitet, av ca tre storleksordningar, än 3-klorfenylkarbamoyldelen (föreningar 50, 54 och 56). gïnförlivandet vid N3-positionen av kedjor med olika steriska särdrag tillåter utformningen av derivat med hög potential vid human A3-adenosinreceptor och bättre selek- tivitet mot A1- och A2A-receptorsubtyper.
Fig 1 visar en mättnadskurva av [125I]AB-MECA till adenosin-A3-receptor och linjäriteten av Scatchard-dia- grammet i insatsen är indikativ i våra experimentbeting- elser för närvaro av en enstaka klass av bindningssäten med KD-värde av 0,9i0,0l nM och Bmax-värde av 6211 fmol/mg protein (n=3). 578 nÄ 63 ^oo.o-“o._oo :ofiaonc W ëo o o~o.~ “oo aoïëo “oo “_ “4 oumzoaïuo.. wökmuwouflmu “v cåoowoo “oowoåqa “Ba “ooo o“.o šwooa So äoa oomz.o.“-oo2-o. flmuumuwouflmo 3 :æwvæoo æ .v såå - “ooo ~o.o oo? -så o? -ooäo onoo m Nmoßmofiooæno R æwoáào Aoowvooïo oowo? “Noa owo oooov Nä.. oo=z-o.“-ö-“ Nmuamuqou oo afloefloo “oofmqs go move? oflo nä.. ooo.o_^ oomz-o.“-o“.2-v iu-~mu.:o S Gooaoa ^o“.“~-S.o: :o Ão: “oo .So So “Noo on m wooionmo om c “äoá ^ooo_~-_~o.~o aoflwäws . om? SN.. ooo oowo oooæ oumvwoïoa äuio 3 ^~“.o-“~.oo _ _ 3%? EE? _ “No ooooí ooo.o_^ o2.“z-._.“-oo2-.. flzoio “o _ ä? oäá A32 xäo wwwflooämoww “ooo . “oo “Sa 2. _ _ oo.“o z áuáo “o _ o _ ^“~.o-o~.oo _ ^oo“.“-o.o“_$ n å» “X .oo NN ooo ooo oX “å “ oomzlooooa :u .Q c _ .o oooooX oooooí -oooo o_.o ooo.o_^ oooäv oomzèrwoflšo. .mo “o Goooovo .Room Qvwoos . “o.o ““.o o““ -Sooáwoo o o: m mo å ä oo . oc. “wo fl “oo “o fl ~“ fi “oo *ooü “m2 .<.=:<~ .fiši Se. .ac J... A2.. .ac :É så. J: J: .m m woëäom .æwcëfiâ »om oäoomuooäwwocuuoöíffi zoo ßmèw :oo Ä .om .Slå .Q .ov .wm .om .mm - ouzcmwowmcwcwzmm ä :unoh 522 578 .säs wïïæzqam .äæö ._52 ._ .___ s eQ så å? EE? ._ Om mn womA Noood wfi _mm Noooó wa wmnA Sed Ü _oo.o wa ÄNA , <2. wood Nßw .good wmN afi 3.0 m6 om É wood Ami-SD _§ Qwmvaads Så _R.--G.:_ 3.2 æaflwmmnß å N _Q.B-n_.____ ä: å.. _--. __ a: §_.m-mæ~.~_ _ n: ~ ÉÃN __ t; . Åæšwwqš 2.3 __š_-š._ :___ aoøwawææ 2.3 aqšæwws ___ .___ Qvaïaøæ 2.3 ___~m._-_.~__.__ S3 ææåwc 0% :_52 c än æwnwm~__.fl_ å m oooAZA ____.__-___~.o_ and _~s_._-__~m.__ NS _ __ä._-m-.__ än _ :qclmwcv OS a_æ._-m3.__ ma. _ oooxïA __æ._-â.__ a: Éïæs än så. _ så. __ t: _ Galna ån Sv. TS. __ OS oocdf ^_§__-~._Q.__ ___ m _ §.m_-$...___ 2.: æwfifiss så _ _~æ~._-m_~_.__ Nä _ šfiqc Ea _2~._1~._ ns ia m _ _ ___.m-@.~______ åN m QS væš _02 Qswofls .mä ^_~_~._.._-_~wm. __ OS _ Qwmåmï mßv æwwåflv Gå oufiuå ou_.__,_-._._-ö-m oo~__,_-._._-o~.2-_~ __ oumz-._._-_u-m ou_._z-._._-ou_>_-_~ __ oumz-__._-_o-__ oumz-__._-o@2-« m ouflmoå oumz.._._-_ua ou_._z-__h_-oflš-_~ m .muxmußmuå _ ~_.__o-~__o-~mu-__,_ ~__u-~mu-~mu-._._ ~mu-~__u-~mu-__._ ~mu-_:o-._._ wfivflmoå ~mukmuå -~__u-__ouu~_.mu_ -~__o-_._unu~_.mu_ -~mu-__uuu~_.__u_ .Eu -~__o.mu~_fimu_ -fo -~___u-mu~q__u_ N _ hä - :uàu _ _._o_ -io -~_._u-__u~_.__u_ mm ßm vm mm cv Nm mm mm mm om _m wm 10 15 20 25 30 35 - -men n -.annu 522 578 ïWÜH^Jfl" 65 Data visar att substituenter med liten kedja (C1_3) vid 8-positionen hos 5-[{substituerad fenyl)amino]karbo- nyl]amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]l,2,4- -triazolo[1,5-c]pyrimidinföreningar beskrivna häri, sär- skilt metyl-, etyl- och propylgrupper, är föredragna i förhållande till större kedjor, såsom pentyl- och hexyl- 8-etyl och 8-propyl, 5-(4-metoxifenyl)substituerade föreningar grupper. Särskilt föreningar 45 och 47, 8-metyl, visade den högsta affiniteten och selektiviteten och för- modas faktiskt ha den högsta affiniteten och selektivite- ten för human adenosin-A3-receptorsubtyp (hA3) av alla föreningar som någonsin syntetiserats.
Metyl-, etyl- och propylkedjor kan substitueras med fenyl eller substituerade fenylgrupper och uppvisar fort- farande relativt hög affinitet och selektivitet för A3- -receptorsubtypen men affiniteten är minskad med en fak- tor mellan 10 och 100. Föreningen med en ß-fenyletylkedja vid N8 och 4-MeO-fenylkarbamoylkedja vid N5-positionen (förening 55) uppvisade emellertid ett relativt bra värde vad beträffar affinitet och selektivitet (KihA3 = 1,47 nM, rAl/hA3 = 872, rA2A/hA3 = 951). Även med de relativt stora pentylgrupperna som är närvarande i föreningar 50 och 51 uppvisar föreningarna en relativt hög affinitet för A3-receptorsubtypen (8l,l0 respektive 29,57 nm), faktor av ca 10 till 100.
Tidigare studier visade att affiniteten av 5-amino- fastän selektivitet sjunker med en 8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazolo[4,3-e]1,2,4-triazo1o- [l,5-c]pyrimidinföreningar för adenosin-A2-receptorsub- typen tenderade att öka med storleken av gruppen vid 8- -positionen. Det verkar som att den motsatta trenden är sann för affinitet av föreningar beskrivna häri för A3- receptorsubtypen. C1_3-substituenter synes representera de ideala steriska och lipofila särdragen för interaktion med A3-receptorsubtypen. 10 15 20 25 ...ann - a u ...nu - n o» ~ o n u ~ u -n-n un» n; -nonca o a a o n 1 a n n z o no man 0 522 578 66 Exempel 18: Bindningsexperiment med en radiomärkt förening En serie bindningsexperiment genomfördes på olika tumörcellinjer genom användning av 0,5 nM [125I]-ABMECA med ospecifik bindning som bestämdes i närvaro av 50 uM R-PIA eller 200 uM NECA pà cellinjernas cellmembraner. Specifik bindning bestämdes genom att subtrahera ospecifik bindning NB4-, SKN-MC-, SKN-Be2C-, SKN-SH- och JURKAT-cellinjer. Bindningsexperi- mentens resultat visas nedan i Tabell 2. fràn totalbindning. Cellinjerna var HL 60-, TABELL 2 Cellinjer Total bind- Ospecifik Specifik Specifik ning bindning bindning bindning i (cpm) procent HL 60 3484 2791 693 20 NB4 3377 2740 637 19 SKN-MC 7528 6220 1308 17 SKN-Be2C 6000 4585 1415 24 SKN-SH 2671 2580 91 3 JURKAT 7599 4753 2846 38 Resultaten visas i grafisk from i Fig 2.
Jurkat-cellinjer verkade åstadkomma de bästa resul- taten för de cellinjer som testats. Ett mättnadsexperi- ment genomfördes med hjälp av Jurkat-cellinjer vid 37°C med en en timmes inkubationsperiod genom användning av [125I]-ABMECA (o,125-1,5 nM) , varvid icke-specifik bind- ning mättes med hjälp av RPIA (50 uM). Kd (nM) var 4 och Bmax (fmol/mg protein) var 290. Resultaten visas också i fig 2.
En annan analys genomfördes för att bestämma om Al- receptor var närvarande. En undanträngningsanalys genom- fördes vid 0°C under 150 min pà Jurkat-celler genom an- vändning av [3H]DPCPX, en specifik A1-antagonist (0,5 nM), varvid icke-specifik bindning bestämdes genom användning av R-PIA (50 pM). Den totala bindningen var 13208, den icke-specifika bindningen var 2997 och den 1 un: 10 15 20 25 30 522 578 67 specifika bindningen var 10211 (77%). Således observera- des en signifikant mängd A1-bindning.
Följande experiment som beskrivs för första gängen avser karakterisering av A3-receptorer i vissa humana tumörcellinjer, såsom HL60, en promyelocytisk human leuke- mi, och Jurkat, en human T-celleukemi, genom användning av den nya selektiva antagonisten (förening 102) beskriven häri. I dessa studier inkuberades membraner (0,5 mg fràn Jurkat- och HL60-celler med 10-12 olika sträcker sig från 0,2 protein/ml) koncentrationer av förening 102 som till 15 nM och 0,1 till 10 nM för Jurkat- respektive HL60- celler. Fig 3 visar en mättnadskurva för bindning av fö- rening 102 till adenosin-A3-receptorer i Jurkat-cellmemb- raner och linjäriteten av Scatchard-diagrammet i insatsen är indikativ för närvaron av en enstaka klass av bind- ningssäten med ett Kd-värde av 1,9i0,2 nM och Bmax-värde av 1,30i0,03 pmol/mg protein (n=3). Fig 4 visar en mätt- nadskurva för bindning av förening 102 till adenosin-A3- -receptorer i HL60-membraner och linjäriteten av Scatchard-diagrammet i insatsen är indikativ för närvaron av en enstaka klass av bindningssäten med ett Kd-värde av 1,2i0,l nM och Bmax-värde av 626i42 fmol/mg protein (n=3).
Dessa resultat visar att många cellinjer innehåller relativt stora mängder av adenosinreceptorer. Eftersom förening 102 är känd för att binda A3-receptorer med en hög affinitet och selektivitet är det sannolikt att det finns en relativt stor närvaro av A3-receptorer i tumörceller.
Exempel 19. Farmaceutiska beredningar (A) Transdermalt system - för 1000 oblatkapslar.
Komponenter Mängd Aktiv förening 100 g Silikonvätska 450 g Kolloidal kiseldioxid 2 g 10 15 20 522 578 68 (B) Oral tablett - för 1000 tabletter Komponenter Mängd Aktiv förening 50 g Stärkelse 50 g Magnesiumstearat 5 g Den aktiva föreningen och stärkelsen granuleras med vatten och torkas. Magnesiumstearat sätts till de torkade granulerna och blandningen mals ingående. Den malda blandningen komprimeras till tabletter.
(C) Injektion - för 1000, 1 ml ampuller Komponenter Mängd Aktiv förening 10 g Buffertar Tillräckligt(q.s.) Propylenglykol 400 mg Vatten för injektion q.s. 1000 ml Den aktiva föreningen och buffertar upplöses i pro- pylenglykolen vid ca 50°C. Vattnet för injektion till- sätts sedan under omrörning och den erhållna lösningen filtreras, fylls i ampuller, förseglas och steriliseras genom autoklavering.
(D) Kontinuerlig injektion - för 1000 ml Komponenter Mängd Aktiv förening 10 g Buffertar Tillräckligt (q.s.) Vatten för injektion q.s. 1000 ml Fackmän inom teknikomràdet inser eller kan konstate- ra med hjälp av rutinexperiment många ekvivalenter till de specifika utföringsformer enligt uppfinningen som be- skrivs häri. Sådana ekvivalenter är avsedda att vara om- fattade av följande krav.

Claims (7)

1. eller 522 '578 b? PATENTKRAV Förening enl igt formel: /7 n f.. ~ . ,' 5 2 2 5 7 s = ?O vari: A är imidazol, pyrazol eller triazol; R är -c(x)R1, -c(x)-N(R1)2, -c(X>oR1, -c(x)sRV1, -SOnRl, -SOnORl, -SOnSR1 ellêr SOn-N(R1)2; Rl är väte, Cl-Cw-alkyl, substituerad Cl-Clo-alkyl, Cz-Cm- alkenyl, substituerad C;-Cm-alkenyl, Cyßäo-alkynyl, substituerad C;-Cm-alkynyl, aryl, heteroaryl, heterocykel, C2- C5-alkenyl, låg alkanoyl, eller om den är bunden till en kväveatom bildar den tillsammans med kväveatomen en azetidinring eller en 5-6-ledad heterocyklisk ring innehållande en eller flera heteroatomer, såsom N, O, S; R2 är väte, Cl-Cm-alkyl, substituerad Cl-Cm-alkyl, aralkyl, substituerad aralkyl, heteroaryl, substituerad heteroaryl eller aryl; R3 är furan, pyrrol, tiofen, bensofuran, bensypyrrol, bensotiofen, eventuellt substituerad med en eller flera substituenter valda från den grupp som består av hydroxy, acyl, C1-Cm-alkyl, alkoxy, C;-Cm-alkenyl, C;-Cm-alkynyl, substituerad Cl-Cm-alkyl, substituerad alkoxy, substituerad C2- Cm-alkenyl, substituerad C2-Cm-alkynyl, amino, substituerad amino, aminoacyl, acyloxy, acylamino, alkaryl, aryl, aryloxy, azido, karboxyl, karboxylalkyl, cyano, fluoro, kloro, nitro, heteroaryl, heteroaryloxy, heterocykel, heterocyklooxy, aminoacyloxy, oxiacylamino, tioalkoxy, substituerad tioalkoxy, tioaryloxy, tioheteroaryloxy, -SO-C1-Cm-alkyl, -SO-substituerad Cy4h°-alkyl, SO-aryl, -SO-heteroaryl, -S02- C1-Cm-alkyl, -S02-substituerad Cl-Cm-alkyl, -S02-aryl, -S02-heteraryl, trifluorometyl och trikloromethyl; X är O, S eller NRl; n är l eller 2; och farmaceutiskt accepterbara salter därav.
2. Förening enligt krav 1, vari R är vald fràn den grupp som består av urea, amider, tiourea, tioamider och sulfonamider.
3. Förening enligt krav 1, vari R1 är vald från den grupp som består av väte, Cl-Cm-alkyl, C2-Cm-alkenyl och aryl.
4. Förening enligt krav 1, vari R2 är vald från den grupp som består av väte, C1-Cm-alkyl, C2-Cm-alkenyl och aryl. ~ o - n nu - ~ o » n u Q .. 522 57:; = = ='..-=-.:š f'--' 71 Förening enligt krav , vari Ra är furan. Förening enligt krav , vari X är O. l-'i-*H Förening enligt krav , vari A är en triazoloring. CD\10'\U1 Förening enligt krav 1, vari A är en pyrazoloring. 9. Användning av en förening enligt krav 1 för framställning av ett läkemedel för att behandla hypertoni, inflammation, allergiska reaktioner, mastcelldegranulering, tumörer och hjärthypoxi och skydda mot cerebral ischemi. 10. Användning enligt krav 9, vari R är vald från den grupp som består av urea, amider, tiourea, tioamider och sulfonamider. 11. Användning enligt krav 9, vari R1 är vald fràn den grupp som består av väte, Cl-CN-alkyl, C2-Cm-alkenyl och aryl. 12. Användning enligt krav 9, vari R2 är vald frän den grupp som består av väte, Cl-Cm-alkyl, C2~Cm-alkenyl och aryl. 13. Användning enligt krav 9, vari X är O. 14. Användning enligt krav 9, vari A är en pyrazolo- ring. 1
5. Användning enligt krav 9, vari A är en triazolo- ring. 1
6. Användning enligt krav 9, vari den störning som skall behandlas är vald fràn den grupp som består av hjärt- hypoxi och cerebral ischemi. 1
7. Förfarande för bestämning av närvaron av tumör- celler som besitter en hög koncentration av adenosin- -A3-receptorer i ett cellprov innefattande; a) att framställa en suspension av cellerna i ett cellodlingsmedium, b) att administrera till cellerna en förening enligt krav 1 vilken inkluderar en märkning som kan detekteras efter bindning av föreningen till tumörceller, c) att låta föreningen binda till tumörcellerna; d) att detektera märkningen.
SE0003984A 1998-09-16 2000-11-01 Adenosin A3-receptormodulatorer SE522578C2 (sv)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/154,435 US6448253B1 (en) 1998-09-16 1998-09-16 Adenosine A3 receptor modulators
US09/379,300 US6407236B1 (en) 1998-09-16 1999-08-23 Adenosine A3 receptor modulators
PCT/US1999/021103 WO2000015231A1 (en) 1998-09-16 1999-09-15 Adenosine a3 receptor modulators

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE0003984D0 SE0003984D0 (sv) 2000-11-01
SE0003984L SE0003984L (sv) 2000-12-22
SE522578C2 true SE522578C2 (sv) 2004-02-17

Family

ID=22551355

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE0003984A SE522578C2 (sv) 1998-09-16 2000-11-01 Adenosin A3-receptormodulatorer

Country Status (27)

Country Link
US (2) US6448253B1 (sv)
JP (1) JP2002524519A (sv)
KR (1) KR100448555B1 (sv)
CN (1) CN1154494C (sv)
AT (2) AT414240B (sv)
AU (1) AU749211B2 (sv)
BR (1) BR9913766A (sv)
CA (1) CA2332007C (sv)
CH (1) CH692132A5 (sv)
DE (1) DE19983530T1 (sv)
DK (1) DK200100432A (sv)
ES (1) ES2204262B1 (sv)
FI (1) FI116624B (sv)
GB (1) GB2353527B (sv)
HU (1) HUP0102589A3 (sv)
ID (1) ID28100A (sv)
IL (1) IL156851A (sv)
LU (1) LU90687B1 (sv)
NO (1) NO318078B1 (sv)
NZ (1) NZ509149A (sv)
RO (1) RO121030B1 (sv)
RU (1) RU2250904C2 (sv)
SE (1) SE522578C2 (sv)
TR (1) TR200003461T2 (sv)
WO (1) WO2000015231A1 (sv)
YU (1) YU83600A (sv)
ZA (1) ZA200101626B (sv)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6921825B2 (en) * 1998-09-16 2005-07-26 King Pharmaceuticuals Research & Development, Inc. Adenosine A3 receptor modulators
IL133680A0 (en) 1999-09-10 2001-04-30 Can Fite Technologies Ltd Pharmaceutical compositions comprising an adenosine receptor agonist or antagonist
JPWO2002062801A1 (ja) * 2001-02-05 2004-06-10 株式会社大塚製薬工場 トリアゾロキナゾリン及びピラゾロトリアゾロピリミジン誘導体、医薬組成物、アデノシンａ３受容体親和剤、眼圧低下剤、緑内障の予防及び治療のための製剤、並びに眼圧低下方法
HUP0402018A3 (en) * 2001-11-30 2008-06-30 Schering Corp 5-amino-7h-pyrazolo[4,3-e][1,2,4]triazolo[1,5-c]pyrimidine derivatives, their use and pharmaceutical compositions containing them
HUP0105407A3 (en) * 2001-12-21 2004-04-28 Sanofi Aventis Triazolo[1,5-a]quinolin derivatives, process for their preparation, pharmaceutical compositions thereof and intermediates
HK1082662A1 (zh) * 2002-05-30 2006-06-16 King Pharmaceuticals Research And Development Inc. 具有三环吡唑并三唑并嘧啶环结构的制药活性化合物及其使用方法
WO2004030621A2 (en) * 2002-09-30 2004-04-15 The Trustees Of Boston University Method of treating cancer using adenosine and its analogs
JP2006505620A (ja) * 2002-10-07 2006-02-16 レイディオアールエックス インコーポレイテッド Ｘ−ニトロ化合物、それらの医薬組成物及びそれらの使用
DE60315863T2 (de) * 2002-10-22 2008-05-15 Can-Fite Biopharma Ltd. A3ar als ein marker für einen erkrankungszustand
HUP0203976A3 (en) * 2002-11-15 2004-08-30 Sanofi Aventis Adenozine a3 receptors, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US8236874B2 (en) * 2003-06-11 2012-08-07 3M Innovative Properties Company Compositions and method for improving the processing of polymer composites
US7402625B2 (en) * 2003-06-11 2008-07-22 3M Innovative Properties Company Compositions and method for improving the processing of polymer composites
DK1678182T3 (da) * 2003-10-28 2007-06-04 Schering Corp Fremgangsmåde til fremstilling af substituerede 5-amino-pyrazolo[4,3-E]-1,2,4-triazolo-[1,5-C]pyrimidiner
JP2007514758A (ja) * 2003-12-19 2007-06-07 シェーリング　コーポレイション 医薬組成物
WO2005113828A1 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 King Pharmaceuticals Research & Development, Inc. Methods of diagnosing and prognosticating solid tumors and melanoma
JP2008520746A (ja) * 2004-11-22 2008-06-19 キング・ファーマシューティカルズ・リサーチ・アンド・デベロプメント・インコーポレイティッド アデノシンａ３受容体アンタゴニストを用いる癌及びｈｉｆ−１が介在する疾患の促進的治療
EP1819349A2 (en) * 2004-11-22 2007-08-22 King Pharmaceuticals Research and Development Inc. Enhancing treatment of hif-1 mediated disorders with adenosine a3 receptor agonists
US7507842B2 (en) * 2005-08-12 2009-03-24 Radiorx, Inc. Cyclic nitro compounds, pharmaceutical compositions thereof and uses thereof
US20070135380A1 (en) 2005-08-12 2007-06-14 Radiorx, Inc. O-nitro compounds, pharmaceutical compositions thereof and uses thereof
US20090088403A1 (en) * 2007-05-07 2009-04-02 Randy Blakely A3 adenosine receptors as targets for the modulation of central serotonergic signaling
US20110190324A1 (en) * 2008-07-16 2011-08-04 Edward Leung Methods of treating atherosclerosis
TWI404931B (zh) * 2009-02-20 2013-08-11 Nat Synchrotron Radiation Res Ct 癌化生物樣本之檢測方法及其使用之檢驗試劑
WO2011010306A1 (en) 2009-07-21 2011-01-27 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. A3 adenosine receptor ligands for modulation of pigmentation
CN102711476B (zh) * 2009-12-01 2014-12-03 Abbvie公司 新的三环化合物
US8471041B2 (en) * 2010-02-09 2013-06-25 Alliant Techsystems Inc. Methods of synthesizing and isolating N-(bromoacetyl)-3,3-dinitroazetidine and a composition including the same
US8664247B2 (en) 2011-08-26 2014-03-04 Radiorx, Inc. Acyclic organonitro compounds for use in treating cancer
WO2013052803A2 (en) 2011-10-07 2013-04-11 Radiorx, Inc. Methods and compositions comprising a nitrite-reductase promoter for treatment of medical disorders and preservation of blood products
US9139519B2 (en) 2011-10-07 2015-09-22 Epicentrx, Inc. Organonitro thioether compounds and medical uses thereof
US9227979B2 (en) * 2012-01-25 2016-01-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Fluorescent antagonists of the A3 adenosine receptor
ES2578363B1 (es) 2015-01-22 2017-01-31 Palobiofarma, S.L. Moduladores de los receptores A3 de adenosina
WO2016202935A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Glucose transport inhibitors
US11512092B2 (en) 2015-10-16 2022-11-29 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11780848B2 (en) 2015-10-16 2023-10-10 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1- carboxamide and solid state forms thereof
CN120289468A (zh) 2015-10-16 2025-07-11 艾伯维公司 制备咪唑并[1,2-a]吡咯并[2,3-e]吡嗪类化合物及其固态形式的方法
US10550126B2 (en) 2015-10-16 2020-02-04 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-A]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11524964B2 (en) 2015-10-16 2022-12-13 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11365198B2 (en) 2015-10-16 2022-06-21 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US12365689B2 (en) 2015-10-16 2025-07-22 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US10342778B1 (en) 2015-10-20 2019-07-09 Epicentrx, Inc. Treatment of brain metastases using organonitro compound combination therapy
US9987270B1 (en) 2015-10-29 2018-06-05 Epicentrix, Inc. Treatment of gliomas using organonitro compound combination therapy
US11576895B2 (en) 2016-01-11 2023-02-14 Epicentrx, Inc Compositions and methods for intravenous administration of 2-bromo-1-(3,3-dinitroazetidin-1-yl)ethanone
KR20190128619A (ko) 2016-10-14 2019-11-18 에피센트알엑스, 인코포레이티드 의약에서 사용하기 위한 술폭시알킬 오르가노니트로 및 관련 화합물 및 제약 조성물
ES2676535B1 (es) 2017-01-20 2019-04-29 Palobiofarma Sl Moduladores de los receptores a3 de adenosina
MX2019010733A (es) 2017-03-09 2019-11-01 Abbvie Inc Metodos para tratar la enfermedad de crohn y la colitis ulcerosa.
US11564922B2 (en) 2017-03-09 2023-01-31 Abbvie Inc. Methods of treating crohn's disease and ulcerative colitis
CN110678472B (zh) 2017-03-30 2023-01-24 伊忒欧斯比利时股份公司 作为a2a抑制剂的2-氧代噻唑衍生物和用于治疗癌症的化合物
KR102869384B1 (ko) 2017-07-07 2025-10-15 에피센트알엑스, 인코포레이티드 치료제의 비경구 투여를 위한 조성물
WO2019164593A2 (en) 2018-01-08 2019-08-29 Epicentrx, Inc. Methods and compositions utilizing rrx-001 combination therapy for radioprotection
CN108864114B (zh) * 2018-06-04 2020-11-06 应世生物科技(南京)有限公司 选择性a2a受体拮抗剂
US11376255B2 (en) 2018-09-11 2022-07-05 iTeos Belgium SA Thiocarbamate derivatives as A2A inhibitors, pharmaceutical composition thereof and combinations with anticancer agents
CN111205291B (zh) * 2018-11-22 2022-08-23 上海科技大学 三唑并环类化合物、其制备方法、中间体和应用
CN111004245B (zh) * 2019-12-11 2022-01-07 徐州医科大学 吡唑-嘧啶并咪唑类化合物、制备方法及其应用
US12233053B2 (en) 2021-05-04 2025-02-25 Oradin Pharmaceutical Ltd. Adenosine A3 receptor antagonists for treating aging skin and wounds
CN116854644B (zh) * 2023-07-06 2025-10-21 浙江大学 5-氨基-1-烷基-1h-1,2,3-三氮唑-4-甲酰胺类化合物及其制备和应用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3625214A (en) 1970-05-18 1971-12-07 Alza Corp Drug-delivery device
US4906474A (en) 1983-03-22 1990-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible polyanhydrides for controlled drug delivery
US4789734A (en) 1985-08-06 1988-12-06 La Jolla Cancer Research Foundation Vitronectin specific cell receptor derived from mammalian mesenchymal tissue
WO1988001213A1 (en) 1986-08-18 1988-02-25 Clinical Technologies Associates, Inc. Delivery systems for pharmacological agents
AU612331B2 (en) * 1986-09-30 1991-07-11 Ciba-Geigy Ag 2-substituted-e-fused-(1,2,4)triazolo(1,5-c)pyrimidines pharmaceutical compositions
HU208693B (en) * 1991-02-22 1993-12-28 Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar Process for producing 1,2,4-triazolo (1,5-a) pyrimidinis derivatives and their carbicycli-tetrahydro-thiofurane-tetrahydrothiopyrane-, or tetrahydropyridine- condensated derivatives or medical preparatives containing them
IT1264901B1 (it) 1993-06-29 1996-10-17 Schering Plough S P A Analoghi eterociclici di 1,2,4-triazolo(15-c)pirimidine ad attivita' antagonista per il recettore a2 dell'adenosina
US5688774A (en) 1993-07-13 1997-11-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services A3 adenosine receptor agonists
WO1995003806A1 (en) * 1993-07-27 1995-02-09 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Remedy for parkinson's disease
IT1275420B (it) 1995-06-02 1997-08-05 Schering Plough S P A Metodo per misurare l'affinita' di legame al recettore a2a dell'adenosina di componenti di interesse farmacologico mediante l'uso del ligando triziato (3h)-sch 58261
IT1277392B1 (it) 1995-07-28 1997-11-10 Schering Plough S P A Analoghi eterociclici di 1,2,4-triazolo(1,5-c]pirimidine ad attivita' antagonista per il recettore a2a dell'adenosina
US6066642A (en) * 1996-01-29 2000-05-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Dihydropyridine-, pyridine-, benzopyran-4-one- and triazoloquinazoline derivative, their preparation and their use as adenosine receptor antagonists
US6326390B1 (en) * 1998-08-25 2001-12-04 King Pharmaceuticals Reseach And Development, Inc. Use of adenosine A3 receptor antagonists to inhibit tumor growth

Also Published As

Publication number Publication date
KR20010089154A (ko) 2001-09-29
AU749211B2 (en) 2002-06-20
FI116624B (sv) 2006-01-13
NO318078B1 (no) 2005-01-31
KR100448555B1 (ko) 2004-09-13
DK200100432A (da) 2001-03-14
FI20002367L (sv) 2001-01-19
RU2250904C2 (ru) 2005-04-27
AT503591A2 (de) 2007-11-15
LU90687B1 (en) 2000-12-19
DE19983530T1 (de) 2001-11-08
TR200003461T2 (tr) 2001-06-21
HUP0102589A3 (en) 2002-01-28
GB0027879D0 (en) 2000-12-27
CN1154494C (zh) 2004-06-23
NO20005508D0 (no) 2000-11-01
ID28100A (id) 2001-05-03
GB2353527B (en) 2004-02-25
IL156851A (en) 2006-08-20
CA2332007A1 (en) 2000-03-23
YU83600A (sh) 2003-12-31
WO2000015231A9 (en) 2000-08-17
CN1303289A (zh) 2001-07-11
SE0003984D0 (sv) 2000-11-01
AT414240B (de) 2006-10-15
CH692132A5 (de) 2002-02-28
RO121030B1 (ro) 2006-11-30
WO2000015231A8 (en) 2000-06-15
AU6248299A (en) 2000-04-03
ES2204262B1 (es) 2005-03-01
HK1035671A1 (en) 2001-12-07
NO20005508L (no) 2001-03-15
GB2353527A (en) 2001-02-28
ZA200101626B (en) 2001-12-13
CA2332007C (en) 2007-08-07
US6407236B1 (en) 2002-06-18
ATA904399A (de) 2006-01-15
WO2000015231A1 (en) 2000-03-23
JP2002524519A (ja) 2002-08-06
NZ509149A (en) 2003-08-29
BR9913766A (pt) 2001-06-05
SE0003984L (sv) 2000-12-22
ES2204262A1 (es) 2004-04-16
US6448253B1 (en) 2002-09-10
HUP0102589A2 (hu) 2001-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE522578C2 (sv) Adenosin A3-receptormodulatorer
US7470698B2 (en) Adenosine A3 receptor modulators
Gatta et al. Synthesis of imidazo [1, 2-c] pyrazolo [4, 3-e] pyrimidines, pyrazolo [4, 3-e] 1, 2, 4-triazolo [1, 5-c] pyrimidines and 1, 2, 4-triazolo [5, 1-i] purines: new potent adenosine A2 receptor antagonists
CA2666664A1 (en) Sulfamoyl-containing derivatives and uses thereof
Jansa et al. Efficient one-pot synthesis of polysubstituted 6-[(1H-1, 2, 3-triazol-1-yl) methyl] uracils through the “click” protocol
CA2596612A1 (en) Novel adenosine a3 receptor modulators
CZ20004240A3 (cs) Modulátory adenosinového receptorů A3
MXPA00012385A (en) Adenosine a3
US20240239818A1 (en) Compounds and compositions comprising fluorophores for use in visualization and purification or manipulation
KR20050015956A (ko) 아데노신 에이3 수용체 조절제