SE458367B

SE458367B - STAND BEFORE TRANSFER OF A FOOD DETERMINED QUANTITY OF BACTERIA JAEMTE SAET HAFERER

Info

Publication number: SE458367B
Application number: SE8305617A
Authority: SE
Inventors: R L Nelson; J F Drake; M W Downing
Original assignee: Minnesota Mining & Mfg
Priority date: 1977-06-21
Filing date: 1983-10-13
Publication date: 1989-03-20
Also published as: JPS632591B2; FR2395312B1; DE2827484A1; DE2858341C2; GB2000187B; DE2858340C2; GB2077760B; SE8305617D0; FR2395312A1; SE7806946L; GB2000187A; SE443799B; SE452020B; SE8305616L; DE2827484C2; SE8305617L; GB2077760A; SE8305616D0; JPS548787A

Description

458 567 10 15 20 25 so 35 2 nämnes McFarland-standard). 458 567 10 15 20 25 so 35 2 mention the McFarland standard).

Mueller-Hinton- En platta, som innehåller agar bestryks sedan med bakteriebuljong- suspensionen med användning av en bomullslapp. När in- okulatet har torkat appliceras en pappersskiva, som inne- håller ett antibiotiskt eller kemoterapeutiskt medel, på agarn. Plattorna inkuberas över natten och det område runt varje skiva där bakterietillväxt saknas, mäts. Detta område är känt som inhiberingszonen och används för att bestämma vilket antibiotika som är användbart för att bekämpa den särskilda bakterien.Mueller-Hinton- A plate containing agar is then coated with the bacterial broth suspension using a cotton swab. When the inoculum has dried, a paper disc containing an antibiotic or chemotherapeutic agent is applied to the agar. The plates are incubated overnight and the area around each disc where bacterial growth is absent is measured. This area is known as the inhibition zone and is used to determine which antibiotic is useful to fight the particular bacterium.

För att Kirby-Bauer-tekniken skall vara noggrann måste det finnas ungefärligen l x 108 CFU/ml i det medium som stryks ut på agarplattan. Vanligen bestäms tillväxt- nivàngenonrvisuell jämförelse med den ovan beskrivna McFarland-standarden. Tidrymden för att nå denna bakterie- koncentration kan variera från 2 till 8 h beroende på bakterien. Om bakterien tillåts växamed mer än l x 108 CFU/ml och blir grumligare än McFarland-standarden, mäste mediet spädas för att vara ekvivalent med standarden.For the Kirby-Bauer technique to be accurate, there must be approximately 1 x 108 CFU / ml in the medium applied to the agar plate. Usually, the growth level is determined by visual comparison with the McFarland standard described above. The time taken to reach this bacterial concentration can vary from 2 to 8 hours depending on the bacterium. If the bacterium is allowed to grow with more than 1 x 108 CFU / ml and becomes cloudier than the McFarland standard, the medium must be diluted to be equivalent to the standard.

En annan metod för att bestämma känsligheten hos bak- terier för olika antibiotika kallas för MIC-testet (MIC = = Minimum Inhiberande Koncentration). Detta test diskute- ras i Current Techniques for Antibiotics Susceptibility Testing, Albert Balows, 1974, sid 77-87. Denna metod in- begriper framställning av en serie koncentrationer av ett antibiotika, antingen i ett flytande eller fast medium, som underhåller tillväxten av tas. Flytande medier fördelas fasta medier hälls vanligen i att iordningställa ett omrâde den bakterie som skall tes- lämpligen i provrör och petriskålar. Det är praxis av antibiotikakoncentrationer spädningar för att genomföra testet. Varje provrör eller petriskâl inokuleras med bak- terien ifråga. i form av en serie tvåfaldiga Efter en inkubationsperiod observeras bak- terietillväxten eller frånvaron av bakterietillväxt för varje antibiotikakoncentration. På detta sätt bestäms MIC för antibiotikan till den närmsta utspädningen vid använd- ning i serie. Detta är den noggrannaste metoden för att bestämma den inhiberande koncentrationen. Denna metod blev- lO 15 20 25 30 35 458 367 3 emellertid inte populär förrän nyligen då det mödosamma spädningsarbetet förenklades. Den utspädda antibiotikan inokuleras vid MIC-testet med bakterie i ett visst kon- centrationsomrâde, dvs vanligen 105 - 106 CFU/xnl. Buljong, som innehåller bakterier som odlats till ekvivalens med McFarland-standarden, dvs ungefärligen 1 x 108 CFU/ml, späds för att erhålla denna koncentration.Another method for determining the susceptibility of bacteria to various antibiotics is called the MIC test (MIC = = Minimum Inhibitory Concentration). This test is discussed in Current Techniques for Antibiotics Susceptibility Testing, Albert Balows, 1974, pp. 77-87. This method involves the preparation of a series of concentrations of an antibiotic, either in a liquid or solid medium, which sustains the growth of tas. Liquid media are distributed solid media is usually poured into preparing an area for the bacteria to be suitably tested in test tubes and petri dishes. It is the practice of antibiotic concentrations dilutions to conduct the test. Each test tube or petri dish is inoculated with the bacterium in question. in the form of a series of doubles After an incubation period, bacterial growth or the absence of bacterial growth is observed for each antibiotic concentration. In this way, the MIC for the antibiotic is determined for the nearest dilution when used in series. This is the most accurate method for determining the inhibitory concentration. However, this method did not become popular until recently when the laborious dilution work was simplified. The diluted antibiotic is inoculated during the MIC test with bacteria in a certain concentration range, ie usually 105 - 106 CFU / xnl. Broth containing bacteria grown to the equivalent of the McFarland standard, i.e. approximately 1 x 108 CFU / ml, is diluted to obtain this concentration.

De ovan angivna känslighetstesterna, liksom andra tester för att bestämma typen av bakterie eller dess känslighet gentemot antibiotika, kräver att en viss för- utbestämd bakteriemängd utnyttjas vid testet för att in- okulera de plattor, på vilka pappersskivan skall placeras när det är fråga om Kirby-Bauer-testet eller för att in- okulera det utspädda antibiotikat när det är fråga om MIC-testet. Detta krävs för att testet skall vara nog- grant. Om en mindre bakteriekoncentration används vid testet, skulle resultatet indikera att bakterien är mera känslig för att antibiotika: än vad den faktiskt ar. om ä andra sidan bakterien föreligger i en högre koncentra- tion, skulle testresultatet indikera att en högre koncen- tration av antibiotikat krävs för att inhibera tillväxt av bakterien. Båda indikationerna skulle vara felaktiga.The above sensitivity tests, as well as other tests to determine the type of bacterium or its sensitivity to antibiotics, require that a certain predetermined amount of bacteria be used in the test to inoculate the plates on which the paper disc is to be placed in the case of Kirby. -Bauer test or to inoculate the diluted antibiotic in the case of the MIC test. This is required for the test to be accurate. If a lower bacterial concentration is used in the test, the result would indicate that the bacterium is more sensitive to antibiotics than it actually is. if, on the other hand, the bacterium is present in a higher concentration, the test result would indicate that a higher concentration of antibiotic is required to inhibit the growth of the bacterium. Both indications would be incorrect.

Förattde ovannämnda testernaellermotsvarandetester skall utföras, är det nödvändigt att en laboratorietekni- ker tar ett bakterieprov från 4-5 bakteriekolonier från den agarplatta, på vilken bakterien har odlats, och place- rar provet i ett buljongodlingsmedium, såsom beskrivits ovan, i 2-8 h. Mediumet kontrolleras periodiskt för att bestämma huruvida bakteriekoncentrationen är ekvivalent med McFarland-standarden eller ej. Vid en visuell under- sökning av mediumet finner man att vissa bakteriekulturer inte har växt till rätt koncentration, medan andra har växt förbi den riktiga koncentrationen. Det förra fallet erfordrar att laboratorieteknikern låter bakterien växa längre, medan det senare fallet erfordrar en spädning för att återföra koncentrationen till samma koncentration som hos standarden. Alla dessa åtgärder är mödosamma och tidsödande. 458 367 10 15 20 25 30 35 4 Föreliggande uppfinning hänför sig till en stavanord- ning, som medger upplockning av en viss förutbestämd bakteriemängd fràn bakteriekolonier. Den upplockade bak- teriemängden kan därefter inokuleras på ett tillväxt- begränsande medium, som kommer att beskrivas närmare nedan. Staven enligt uppfinningen kännetecknas därav, att den väsentligen utgöres av ett stavliknande organ, som har en toppände och en undre spets för kontakt med bakteriekolonin, vilken undre spets har minst en ränna i spetsens understa ände, vilken ränna har förmåga att indraga en förutbestämd bakteriemängd genom kapillärverkan.Before performing the above tests or equivalent tests, it is necessary for a laboratory technician to take a bacterial sample from 4-5 bacterial colonies from the agar plate on which the bacterium has been grown, and place the sample in a broth culture medium, as described above, for 2-8 hours. The medium is periodically checked to determine if the bacterial concentration is equivalent to the McFarland standard or not. A visual examination of the medium finds that some bacterial cultures have not grown to the correct concentration, while others have grown beyond the correct concentration. The former case requires the laboratory technician to allow the bacterium to grow longer, while the latter case requires a dilution to return the concentration to the same concentration as with the standard. All of these measures are laborious and time consuming. 458 367 10 15 20 25 30 35 4 The present invention relates to a rod device which allows the picking up of a certain predetermined amount of bacteria from bacterial colonies. The amount of bacteria picked up can then be inoculated on a growth-limiting medium, which will be described in more detail below. The rod according to the invention is characterized in that it consists essentially of a rod-like member having a top end and a lower tip for contact with the bacterial colony, which lower tip has at least one groove in the lower end of the tip, which groove is capable of withdrawing a predetermined amount of bacteria by capillary action.

Uppfinningen hänför sig även till ett sätt att upp- plocka en förutbestämd bakteriemängd från ytan av en koloni av nämnda bakterier, kännetecknat därav, att spetsen hos ett stavliknande organ med en toppände och en undre spets för kontakt med bakteriekolonin, vilken undre spets har minst en ränna i spetsens understa ände, bringas i kontakt med nämnda yta, varigenom en förutbestämd bak- teriemängd indrages i rännan genom kapillärverkan.The invention also relates to a method of picking a predetermined amount of bacteria from the surface of a colony of said bacteria, characterized in that the tip of a rod-like member with a top end and a lower tip for contact with the bacterial colony, which lower tip has at least one gutter at the lower end of the tip, is brought into contact with said surface, whereby a predetermined amount of bacteria is drawn into the gutter by capillary action.

Ytterligare kännetecken hos uppfinningen framgår av de efterföljande patentkraven.Further features of the invention appear from the following claims.

Den med hjälp av staven och sättet enligt uppfin- ningen upplockade, förutbestämda bakteriemängden inokuleras med fördel på ett odlingsmedium av det särskilda slag som beskrivs närmare i det följande.The predetermined amount of bacteria picked up by means of the rod and the method according to the invention is advantageously inoculated on a culture medium of the special kind described in more detail below.

Detta medium medger odling av bakterier, men begränsar den koncentrationsnivà vartill bakterierna tillväxer.This medium allows the cultivation of bacteria, but limits the level of concentration to which the bacteria grow.

Närmare bestämt medger detta vattenhaltiga medium odling av minst en art från två olika släkten av aeroba, patogena, snabbväxande bakterier från en begynnelsepopulation till en bestämd slutpopulation, vid vilken tillväxten av bak- terien i huvudsak upphör på grund av näringsbrist i medi- umet. Bakterien förblir lívsduglig i mediumet i minst 18 h. Mediumet innefattar en vattenlösning, som inbegriper en kolkälla, en kvävekälla, vitaminer och mineralämnen i tillräcklig mängd för att åstadkomma nämnda tillväxt och i en form, som är användbar för bakteriernas tillväxt. 10 15 20 25 30 35 458 367 5 De bakterier, för vilka mediumet är användbart, är aeroba bakterier, dvs de som utnyttjar syre för sin till- växt. Bakterierna är också patogena i det att de förorsakar sjukdomar och de är snabbväxande i det att de har genera- tionstid av 50 min eller mindre.More specifically, this aqueous medium allows the cultivation of at least one species from two different genera of aerobic, pathogenic, fast-growing bacteria from an initial population to a specific end population, in which the growth of the bacterium mainly ceases due to nutrient deficiency in the medium. The bacterium remains viable in the medium for at least 18 hours. The medium comprises an aqueous solution comprising a carbon source, a nitrogen source, vitamins and minerals in sufficient quantity to effect said growth and in a form useful for the growth of the bacteria. The bacteria for which the medium is useful are aerobic bacteria, ie those which use oxygen for their growth. The bacteria are also pathogenic in that they cause diseases and they are fast-growing in that they have a generation time of 50 minutes or less.

Mediumet är användbart vid både gram-negativa och gram-positiva, aeroba, patogena, snabbväxande bakterier.The medium is useful in both gram-negative and gram-positive, aerobic, pathogenic, fast-growing bacteria.

Typen och mängden av de olika beståndsdelarna i mediumet skiljer sig emellertid vanligen för gram-positiva och för gram-negativa bakterier, och den tidsperiod som krävs för att erhålla erforderlig koncentration för de gram-positiva tenderar att vara längre än den för gram-negativa bakte- rier.However, the type and amount of the various constituents of the medium usually differ for gram-positive and for gram-negative bacteria, and the time period required to obtain the required concentration for the gram-positive tends to be longer than that for gram-negative baked - rier.

Odlingsmediet är användbart för odling av minst en art från två olika släkten av aeroba, patogena bakterier. Nor- malt kan mediumet odla minst en art från två släkten av gram-positiva bakterier eller minst en art från minst två släkten av gram-negativa bakterier. Bland gram-positiva, aeroba bakterier finns tvâ släkten, som inbegriper de bak- terier, vilka förorsakar de flesta sjukdomar, för vilka normal bakterie- och känslighetstestning utföres. Dessa släkten är Staphylococcus och Streptococcus. Om mediet kan odla arter från vart och ett av dessa båda släkten, kan man enkelt testa bakterierna för att bestämmacnndenär gram- positiv eller gram-negativ med användning av ett gram- färgningstest. Om bakterien är gram-positiv används me- diumet för odling av grampositiva bakterier och bakte- rien odlas till den önskade nivån, såsom till ekvivalens med McFarland-standarden.The culture medium is useful for culturing at least one species from two different genera of aerobic, pathogenic bacteria. Normally, the medium can grow at least one species from two genera of gram-positive bacteria or at least one species from at least two genera of gram-negative bacteria. Among gram-positive aerobic bacteria, there are two genera, which include the bacteria that cause most diseases for which normal bacterial and susceptibility testing is performed. These genera are Staphylococcus and Streptococcus. If the medium can grow species from each of these two genera, the bacteria can be easily tested to determine whether gram-positive or gram-negative using a gram-staining test. If the bacterium is gram-positive, the medium is used to grow gram-positive bacteria and the bacterium is grown to the desired level, such as to equivalence with the McFarland standard.

Om bakterien konstateras vara gram-negativvidanvänd- ning av gramfärgningstestet, kan bakterien höra till ett mycket större antal släkten. 16 släkten representerar de bakterier som befunnits förorsaka 99 % av de sjukdomar som orsakas av gram-negativa, aeroba bakterier.Dessagram- negativa släkten inbegriper: Escherichia, Shigella, Edward- siella, Salmonella, Arizona, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Yersinia, Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella och Pasterurella. 458 367 10 15 20 25 30 35 6 Bakterierna tillväxer i mediet från en viss popula- som normalt uttrycks såsom CFU enligt definitionen ovan och som normalt hänförs till populationen i en viss volym av mediet, dvs CFU/ml. Begynnelsekoncentrationen kan vara så låg som l CFU, men är normalt och föredraget minst s x 106 cpu/ml. tion, Att man startar med en lägre begynnelsepopulation eller -koncentration gör inte att bakterierna tillväxer i mediet till en väsentlig annorlunda slutpopulation eller -koncentration än vid högre begynnelsekoncentration, men påverkar den tid det tar för att slutkoncentrationen skall uppnås. Om inkubationstiden skall regleras, måste sålunda begynnelsekoncentrationen regleras. Den slutkoncentration vartill bakterierna skall odlas benämnes den stationära fasen.If the bacterium is found to be gram-negative in the use of the gram stain test, the bacterium may belong to a much larger number of genera. 16 genera represent the bacteria that have been found to cause 99% of the diseases caused by gram-negative, aerobic bacteria.Desagram-negative genera include: Escherichia, Shigella, Edward- siella, Salmonella, Arizona, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Proteus , Providencia, Yersinia, Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella and Pasterurella. 458 367 10 15 20 25 30 35 6 The bacteria grow in the medium from a certain population which is normally expressed as CFU as defined above and which is normally attributed to the population in a certain volume of the medium, ie CFU / ml. The initial concentration may be as low as 1 CFU, but is normal and preferably at least s x 106 cpu / ml. Starting with a lower initial population or concentration does not cause the bacteria to grow in the medium to a significantly different final population or concentration than at a higher initial concentration, but affects the time it takes for the final concentration to be reached. Thus, if the incubation time is to be regulated, the initial concentration must be regulated. The final concentration to which the bacteria are to be grown is called the stationary phase.

Såsom diskuterats ovan, varierar tiden för att nå en koncentration ekvivalent med McFarland-standarden i enlig- het med förfarandet från 2 till 8 h, varvid de flesta bakterier tar minst 5 - 6 21 för att nå denna koncentra- tion. Med det tillväxtbegränsande mediet när bakterierna företrädesvis slutkoncentrationen eller den stationära fasen inom 5 h. Om bakterierna när den stationära fasen på 2 h med det tillväxtbegränsade mediet, förblir bakte- rierna vid denna fas även cm man inte kontrollerar mediet under 5 h och ingen spädning erfordras för att erhålla en koncentration, som är ekvivalent med McFarland-stan- darden. 5 När den stationära fasen eller slutkoncentrationen är uppnådd upphör i huvudsak bakterierna: tillväxt. Detta beror på utarmning av minst ett näringsämne, som är kri- tiskt för den kontinuerliga tillväxten av bakterien och inte på bildning av toxiska biprodukter från bakterien, vilka stoppar tillväxten och kan förorsaka att popula- tionen minskar väsentligt. Med de standardmedier, som använts tidigare och som beskrivs i Kirby-Bauer- -förfarandet, bestäms den bakteriepopulation som skall näs för att tillväxten skall upphöra av toxiska biproduk- ter från bakterien. Denna bakteriepopulation ligger över 10 l5 20 25 30 35 458 567 McFarland-standarden.As discussed above, the time to reach a concentration equivalent to the McFarland standard according to the procedure varies from 2 to 8 hours, with most bacteria taking at least 5 to 6 hours to reach this concentration. With the growth-limiting medium when the bacteria preferably reach the final concentration or stationary phase within 5 hours. If the bacteria reach the stationary phase in 2 hours with the growth-restricted medium, the bacteria remain at this phase even if the medium is not controlled for 5 hours and no dilution is required. to obtain a concentration equivalent to the McFarland standard. When the stationary phase or final concentration is reached, the bacteria essentially cease: growth. This is due to depletion of at least one nutrient, which is critical for the continuous growth of the bacterium and not to the formation of toxic by-products from the bacterium, which stop the growth and can cause the population to decrease significantly. The standard media previously used and described in the Kirby-Bauer procedure determine the bacterial population to be reached in order to stop the growth of toxic by-products from the bacterium. This bacterial population is above the 10 m5 20 25 30 35 458 567 McFarland standard.

Slutkoncentrationen eller den maximala stationära fasen erhålles på grund av utarmning av ett eller flera näringsämnen. Vid denna punkt planar antalet livskraftiga CFU/ml ut och förblir i huvudsak oförändrat under minst 18 h. Bakterierna förblir livskraftiga under en tidsperiod, som är användbar för att utföra de olika tester som skall utföras på bakterien, såsom beskrivits ovan. Normalt är den tidsperiod, under vilken bakterierna är livsdugliga, minst 18 h.The final concentration or maximum stationary phase is obtained due to depletion of one or more nutrients. At this point, the number of viable CFU / ml flattens out and remains essentially unchanged for at least 18 hours. The bacteria remain viable for a period of time, which is useful for performing the various tests to be performed on the bacterium, as described above. Normally, the time period during which the bacteria are viable is at least 18 hours.

Den önskade slutkoncentrationen för de flesta bakte- rier ligger mellan 6 x 107 och 3,0 x 108 CFU/ml. Detta är ekvivalent med 0,5 McFarland-standarden. Medlet kan modi- fieras för att ge andra önskade koncentrationsnivåer.The desired final concentration for most bacteria is between 6 x 107 and 3.0 x 108 CFU / ml. This is equivalent to the 0.5 McFarland standard. The agent can be modified to give other desired concentration levels.

Mediet innehåller olika typer och mängder av bestånds- delar beroende på den önskade slutkoncentrationen av bak- terierna och den typ av bakterie som odlas. I samtliga fall förefinnes en kolkälla och kvävekälla, som tillför kol och kväve i en form, som är användbar vid bakterieod- lingen. Normaltförefinnesävenvitaminerocnndneralämnen.Så- som påpekats, är emellertid mängden av en eller flera av dessa beståndsdelar begränsad för att åstadkomma att bak- terien når en förutbestämd slutkoncentration och därefter i huvudsak upphör att tillväxa.The medium contains different types and amounts of constituents depending on the desired final concentration of the bacteria and the type of bacterium that is grown. In all cases, there is a source of carbon and nitrogen, which supply carbon and nitrogen in a form which is useful in bacterial culture. However, as pointed out, the amount of one or more of these constituents is limited to cause the bacterium to reach a predetermined final concentration and then substantially cease to grow.

För de gram-negativa bakterierna inbegriper ett föredraget medium cirka 0,42-0,70 mg kol per milliliter medium. Kolet föreligger i en form, som är användbar för bakterieodling. Denna form har befunnits vara den, vari kol föreligger i pepton eller en motsvarande form. Det föredragna mediet inbegriper också 0,09-0,15 mg kväve per milliliter medium i en form, som motsvarar det kväve som finns i pepton. Det föredragna mediet har ett pH-värde av cirka 7-8. Vid proteospepton är kolhalten cirka 0,16-O,27 mg kol per milliliter medium, kvävehalten är 0,035-0,056 mg kväve per milliliter medium och kolet och kvävet föreligger i den form som de finns i proteospepton eller i en motsvarande form. En typisk analys av peptonen anges nedan: 458 567 8 Procent Pegton Pr0fB0S29Ei0D Totalt kväve 16,16 ' 14,37 Primärt proteos N 0,06 A 0,60 Sekundärt proteos N 0,68 4,03 5 Pepton N 15,38 9,74 Ammoniak N ' 0,04 0,00 Fri amino 3,20 2,66 Amia N 0,49 0,94 Mono-amino N 9,42 7,61 10 Di-amino N 4,07 4,51 Tryptofan 0,29 0,51 Tyrosin 0,98 2,51 Crystin 0,22 0,56 Organiskt svavel 0,33 0,60 15 Oorganiskt svavel _ 0,29 0,04 Fosfor 0,22 0,47 Klor - 0,27 3,95 Natrium 1,08 2,84 Kalium _ 0,22 0,70 20 Kalcium 0,058 0,137 Magnesium 0,056 0,118 Mangan noll 0,0002 Järn 0,0033 0,0056 Aska 3,53 9,61 25 Eterlösligt extrakt 0,37 0.32 Reaktion, pH 7,0 L 5,8 pH 1 % lösning i destillerat vatten efter autoklavering 15 min vid 121°c. 10 15 20 25 30 35 458 367 9 Den föredragna sammansättningen innehåller de vita- miner och mineralämnen som återfinnas i pepton eller protecspepton. Två särskilt föredragna sammansättningar, vilka har befunnits vara användbara vid odling av gram- negativa bakterier till en slutkoncentration av från 6 x 107 till 3 x 108 CPU/ml på mindre än 5 h, innefattar en blandning av 1000 ml vatten innehållande 0,8 g pepton eller 0,3 g proteospepton, 0,03 g dextros, 2,5 g dikalium- fosfat, 1,25 g monokaliumfosfat och 5,0 g natriumklorid.For the gram-negative bacteria, a preferred medium comprises about 0.42-0.70 mg of carbon per milliliter of medium. The carbon is present in a form which is useful for bacterial culture. This form has been found to be that in which carbon is present in peptone or a similar form. The preferred medium also includes 0.09-0.15 mg of nitrogen per milliliter of medium in a form corresponding to the nitrogen present in peptone. The preferred medium has a pH of about 7-8. In proteospeptone, the carbon content is about 0.16-0.27 mg of carbon per milliliter of medium, the nitrogen content is 0.035-0.056 mg of nitrogen per milliliter of medium and the carbon and nitrogen are in the form in which they are in proteospeptone or in a corresponding form. A typical analysis of the peptone is given below: 458 567 8 Percent Pegton Pr0fB0S29Ei0D Total nitrogen 16.16 '14.37 Primary proteose N 0.06 A 0.60 Secondary proteose N 0.68 4.03 Peptone N 15.38 9, 74 Ammonia N '0.04 0.00 Free amino 3.20 2.66 Amia N 0.49 0.94 Mono-amino N 9.42 7.61 Di-amino N 4.07 4.51 Tryptophan 0, 29 0.51 Tyrosine 0.98 2.51 Crystin 0.22 0.56 Organic sulfur 0.33 0.60 Inorganic sulfur _ 0.29 0.04 Phosphorus 0.22 0.47 Chlorine - 0.27 3, 95 Sodium 1.08 2.84 Potassium _ 0.22 0.70 20 Calcium 0.058 0.137 Magnesium 0.056 0.118 Manganese zero 0.0002 Iron 0.0033 0.0056 Ash 3.53 9.61 25 Soluble extract 0.37 0.32 Reaction pH 7.0 L 5.8 pH 1% solution in distilled water after autoclaving for 15 minutes at 121 ° C. 10 15 20 25 30 35 458 367 9 The preferred composition contains the vitamins and minerals found in peptone or protec peptone. Two particularly preferred compositions, which have been found to be useful in culturing gram-negative bacteria to a final concentration of from 6 x 107 to 3 x 108 CPU / ml in less than 5 hours, comprise a mixture of 1000 ml of water containing 0.8 g peptone or 0.3 g proteospeptone, 0.03 g dextrose, 2.5 g dipotassium phosphate, 1.25 g monopotassium phosphate and 5.0 g sodium chloride.

Fosfaterna tillsätts som buffertmaterial för att hålla kompositionen vid ett pH-värde av cirka 7,0. Euffring är nödvändig vid vissa bakterier. De ovannämnda båda samman- sättningarna skapar ett medium, på vilket arter från de flesta av släktena hos de gram-negativa, aeroba, patogena bakterierna kan odlas till de ovan beskrivna CFU/ml-områ- dena på 5 h om bakteriens begynnelsekoncentration är till- räcklig, dvs minst cirka 5 x 106 CFU/ml.The phosphates are added as a buffer material to maintain the composition at a pH of about 7.0. Euffring is necessary for some bacteria. The above two compositions create a medium on which species from most of the genera of the gram-negative, aerobic, pathogenic bacteria can be grown to the above-described CFU / ml ranges in 5 hours if the initial concentration of the bacterium is present. sufficient, ie at least about 5 x 106 CFU / ml.

Såsom påpekats, är det föredragna kol- och kvävekäl- lorna pepton och proteospepton för de gram-negativa bakte- rierna. Neopepton, trypton och polypepton kan också använ- das, men man har funnit att dessa inte alstrar tillväxt till nivån hos McFarland-standarden inom samma tidrymd och att de inte tillhandahåller de rätta näringsämnena för att odla vissa gram-negativa bakterier i väsentlig omfattning.As pointed out, the preferred carbon and nitrogen sources are peptone and proteospeptone for the gram-negative bacteria. Neopeptone, tryptone and polypeptone can also be used, but it has been found that they do not produce growth to the level of the McFarland standard within the same time frame and that they do not provide the right nutrients to grow certain gram-negative bacteria to a significant extent.

Dessa material är därför användbara för ett mera begränsat antal bakterier. Kombinationerna av sådana material med pepton eller proteospepton kan emellertid användas för att skapa ett medium, som är användbart vid ett större antal bakterier.These materials are therefore useful for a more limited number of bacteria. However, the combinations of such materials with peptone or proteospeptone can be used to create a medium useful in a large number of bacteria.

Ett föredraget medium för användning vid gram-positiva bakterier inbegriper en lösning av 1000 ml vatten innehål- lande 1,7 g tryptikas, 0,3 g fyton, 0,25 g dextros, 0,5 g natriumklorid och 0,23 g dikaliumfosfat.A preferred medium for use in gram-positive bacteria comprises a solution of 1000 ml of water containing 1.7 g of trypticase, 0.3 g of phyton, 0.25 g of dextrose, 0.5 g of sodium chloride and 0.23 g of dipotassium phosphate.

Alla de olika medierna används genom att inokulera mediet med bakterien och inkubera mediet under 2-8 h. 458 567 10 15 20 25 30 35 10 Genom att utnyttja staven enligt uppfinningen kan sålunda en viss förutbestämd bakteriemängd upplockas från en bakteriekoloni och därefter överföras till det ovan beskrivna tillväxtbegränsande mediet. Detta medger att även tidrymden för bakterieodlingen kan förutbe- stämmas. För att erforderlig växt skall ske inom den föredragna tidrymden av 5 h för de gram-negativa bakte- rierna måste begynnelsepopulationen vara minst cirka s x 106 cFu/ml.Thus, using the rod of the invention, a certain predetermined amount of bacteria can be picked up from a bacterial colony and then transferred to it. the growth-limiting medium described above. This allows that the time period for bacterial culture can also be predetermined. In order for the required growth to occur within the preferred period of 5 hours for the gram-negative bacteria, the initial population must be at least about s x 106 cFu / ml.

Med hjälp av en anordning, som innefattar (a) ett kärl, som innehåller ett förråd av odlingsmedium med förmåga attt odla bakterien från begynnelsepopulationen till en förutbestämd slutpopulation och vilket kärl har en öppning; (b) en stav enligt uppfinningen inuti kärlet för att erhålla en känd bakteriemängd från minst en tillväxtkoloni av bakterien utanför kärlet och för att inokulera odlingsmediet; och (c) avtagbara medel för att täcka öppningen i kärlet för att bevara steri- liteten inuti kärlet, för att medge avlägsnande av nämnda bakterieerhållande medel för att erhålla nämnda kända bakteriemängd från bakteriekolonin utanför kärlet, vilken bakterie används för att inokulera mediet, samt för att tillsluta kärlet under inkuberingen av det inoku- lerade mediet, åstadkommes en anordning för odling av bakterier från en begynnelsepopulation till en bestämd slutpopulation, vid vilken tillväxten av bakterien i huvudsak upphör på grund av brist på näringsämne.By means of a device comprising (a) a vessel containing a supply of culture medium capable of culturing the bacterium from the initial population to a predetermined end population and which vessel has an opening; (b) a rod of the invention inside the vessel to obtain a known amount of bacteria from at least one growth colony of the bacterium outside the vessel and to inoculate the culture medium; and (c) removable means for covering the opening in the vessel for maintaining the sterility inside the vessel, for allowing removal of said bactericidal means for obtaining said known amount of bacteria from the bacterial colony outside the vessel, which bacterium is used to inoculate the medium, and for closing the vessel during the incubation of the inoculated medium provides a device for culturing bacteria from an initial population to a specific end population, in which the growth of the bacterium essentially ceases due to lack of nutrient.

En sådan anordning, som innefattar staven enligt uppfinningen, skall beskrivas mera i detalj med hänvis- ning till de bifogade ritningarna. På dessa är fig l en sektionsvy med delarna isärförda av anordningen.Such a device, which comprises the rod according to the invention, will be described in more detail with reference to the accompanying drawings. Fig. 1 is a sectional view with the parts separated from the device.

Pig 2 är en perspektivvy av anordningen med delarna sektionerade. Fig 3 är en vy av en del av staven enligt uppfinningen. Fig 4 är en vy av staven i fig 3 med in- förlivade bakterier. Fig 5 är en sektionsvy av anord- ningen strax efter inokulering av odlingsmediet med 1D 15 20 25 30 35 458 367 ll bakterier. Fig 6 är en sektionsvy av anordningen längs linjen 6-6 i fig 5. Pig 7 är en sektionsvy av anordningen ¿ efter inokulering av inkubering till den maximala sta- r tionära fasen eller det förutbestämda odlingsstadiet.Pig 2 is a perspective view of the device with the parts sectioned. Fig. 3 is a view of a part of the rod according to the invention. Fig. 4 is a view of the rod of Fig. 3 with incorporated bacteria. Fig. 5 is a sectional view of the device shortly after inoculation of the culture medium with 1D bacteria. Fig. 6 is a sectional view of the device taken along line 6-6 of Fig. 5. Fig. 7 is a sectional view of the device ¿after inoculation of incubation to the maximum stationary phase or predetermined culture stage.

Fig 8 visar en sektion av anordningen i fig 7 längs J linjen 8-8. l Anordningen inbegriper ett kärl eller en hylsa 1, som är gjord av transparent, deformerbart material, såsom polypropen, polyamid, cellulosaacetatbutyrat eller olika polyestrar. Inuti hylsan l finns en glas- ampull 2, som inrymmer det tillväxtbegränsande mediet 3, såsom beskrivits ovan. Glasampullen, som skall be- skrivas senare, är spröd, dvs den bryts sönder när den deformerbara hylsan l pressas samman. Intill ampullen 2 hos anordningen finns en stav 4, som innehåller en av- smalnande ränna 5, vilken skall beskrivas mera i detalj i samband med fig 3 och 4. Staven 4 används för att plocka bakterier från de olika bakteriekolonierna och är utformad för att införa en förutbestämd bakteriemängd från kolo- nierna till den avsmalnande rännan 5. Staven 4 är fäst till ett lock 6. Både locket 6 och staven 4 är gjorda av plastmaterial, såsom polypropen. På insidanav locket6 finns tvâ âsar 7 och 8, vilka medger aseptisk tätning mellan locket 6 och hylsan l. Detta hindrar andra mikroorganismer från att intränga i hylsan l innan anordningen inokuleras samt under inkubationen. I locket 6 finns också tre stycken utsprâng 9, av vilka två visas i fig l. Dessa utsprâng skyddar hålet lO i locket 6 från att blockeras av krossat glas från ampullen 2 (som bildas när anordningen aktiveras) när den deformerbara hylsan l deformeras för att pressa ut eller utsöndra bakterierna och mediet 3 via hålet 10. Hålet lo är täckt med en tryckhäftande klisterremsa lllnedeuiflik 12 under tiden före användning av anordningen och till dess att inkubationen av anordningen är avslutad. Vid denna tid- punkt avlägsnas klisterremsan ll så att hålet 10 exponeras.Fig. 8 shows a section of the device in Fig. 7 along the line 8-8. The device comprises a vessel or sleeve 1, which is made of transparent, deformable material, such as polypropylene, polyamide, cellulose acetate butyrate or various polyesters. Inside the sleeve 1 there is a glass ampoule 2, which contains the growth-limiting medium 3, as described above. The glass ampoule, which will be described later, is brittle, ie it breaks when the deformable sleeve 1 is compressed. Adjacent to the ampoule 2 of the device is a rod 4, which contains a tapered groove 5, which will be described in more detail in connection with Figs. 3 and 4. The rod 4 is used to pick bacteria from the different bacterial colonies and is designed to introduce a predetermined amount of bacteria from the colonies to the tapered groove 5. The rod 4 is attached to a lid 6. Both the lid 6 and the rod 4 are made of plastic material, such as polypropylene. On the inside of the lid 6 there are two axes 7 and 8, which allow aseptic sealing between the lid 6 and the sleeve 1. This prevents other microorganisms from penetrating the sleeve 1 before the device is inoculated and during the incubation. The lid 6 also has three projections 9, two of which are shown in Fig. 1. These projections protect the hole 10 in the lid 6 from being blocked by broken glass from the ampoule 2 (which is formed when the device is activated) when the deformable sleeve 1 is deformed to squeeze out or secrete the bacteria and the medium 3 via the hole 10. The hole 10a is covered with a pressure-sensitive adhesive strip 12 during the time before use of the device and until the incubation of the device is completed. At this time, the adhesive strip 11 is removed so that the hole 10 is exposed.

Detta medge: utsöndring eller utpressning av mediet 3 och 458 367 10 15 20 25 30 35 12 bakterier från hylsan l.This allows: secretion or squeezing of the medium 3 and bacteria from the sleeve 1.

Fig 2 visar anordningen i dess normala form före användning, utom att den tryckhäftandc klisterremsan ll inte finns med. Såsom framgår av fig 2 är staven 4 be- lägen intill ampullen 2 och åsarna 7 och 8 är belägna intill den övre delen av hylsan l. Hålet 10 visas per- spektiviskt med den tryckhäftande klisterremsan ll av- lägsnad. Utsprången 9 är inte synliga i figuren. Glas- ampullen 2 har normalt dimensionerna 35,6 mm X 6,3 mm och innehåller cirka 0,6 ml odlingsmedium. Hylsan 1 är normalt 43,0 mm lång och 8,6 mm i diameter.Fig. 2 shows the device in its normal form before use, except that the pressure-sensitive adhesive strip 11 is not included. As can be seen from Fig. 2, the rod 4 is located next to the ampoule 2 and the ridges 7 and 8 are located next to the upper part of the sleeve 1. The hole 10 is shown in perspective with the pressure-sensitive adhesive strip 11 removed. The projections 9 are not visible in the figure. The glass ampoule 2 normally has the dimensions 35.6 mm X 6.3 mm and contains approximately 0.6 ml of culture medium. Sleeve 1 is normally 43.0 mm long and 8.6 mm in diameter.

Ett viktigt drag hos anordningen är staven 4 med den av- smalnande rännan 5 . Rännan 5 visas mera i detalj i fig 3. Såsom framgår av fig 3 är rännan 5 avsmalnande. Rännan är utformad för attåstadkommakapillärverkan,varigenmnbakteriernaskjuts in i rännan 5. När bakterierna skjuts in genom att föra staven 4 vinkelrät mot kolonins yta så att den större än- den av den avsmalnande rännan 5 först bringas i kontakt börjar bakterierna att röra sig uppför rännan och luft bortgår från rännans avsmalnande ände. Vid en viss förutbestämd niv föras i rännan, med kolonin, å kan ytterligare bakterier inte in- eftersom bakterier som kontinuerligt tvingas in i rännan 5 rör sig ut vid rännans 5 topp i stället för att röra sig upp till den avsmalnande änden hos rännan 5. Fig 4 visar schematiskt bakterier 13 i rän- nan 5 vid den normala, fyllda nivån hos rännan. Rännan 5 är utformad för att tillåta en viss bakteriepopulation att införas i rännan. Denna population är vanligen ekvi- valent med åtminstone 5 x 106 bakterier per milliliter när bakterierna placeras i mediet hos anordningen. smalnande ränna, som är cirka 0,43 mm djup, En av- 0,25 mm bred tillåter den ovan- nämnda upptagningen. Rännan kan modifieras för att in- rymma andra önskade bakteriepopulationer. vid sin största ände och 3,1 mm lång, Användningen av anordningen kommer nu att beskrivas med hänvisning till fig 5-8. Fig 5 visar schematiskt i sektion an- 10 20 25 30 35 458 367 13 1 ordningaijstefterinokuleringavanordningenmedanvändning 1 avstaven4.Incket6haravlägsnatsfrànhylsanl,ochstaven4 harviadenavsmalnanderännæuSplockatuppen tillräcklig bakteriemängd för att inokulera anordningen, vanligen minst 5 x 106 bakterier, från 4-5 bakteriekolonier. Loc- ket 6 har satts på och via staven 4 och rännan S har bak- terierna placerats intill ampullen 2. Såsom visas i fig 5, har ampullen 2 krossats genom att deformera hylsan och bakterierna 13 anges schematiskt i det tillväxtbegränsan- de mediet 3. I denna form inkuberas anordningen normalt vid cirka 35°C erfordrar cirka 5 h för att uppnå den förutbestämda, före- under 2-8 h. Det föredragna odlingsmediet 8 dragna bakteriemängden, dvs från 6 x 107 till 3 x 10 I CFU/ml.l2fig Gvisas anordningen enligt fig 5 i sektion ; vid begynnelsestadiet av inkubation och fig 6 visar hyl- san l, som innesluter den krossade ampullen 2, odlings- mediet 3 och bakterierna 13.An important feature of the device is the rod 4 with the tapered groove 5. The gutter 5 is shown in more detail in Fig. 3. As can be seen from Fig. 3, the gutter 5 is tapered. The gutter is designed to provide capillary action, whereby the bacteria are pushed into the gutter 5. When the bacteria are pushed in by moving the rod 4 perpendicular to the surface of the colony so that the larger end of the tapered gutter 5 is first brought into contact, the bacteria begin to move up the gutter and air away from the tapered end of the gutter. At a certain predetermined level, in the gutter, with the colony, additional bacteria cannot enter because bacteria which are continuously forced into the gutter 5 move out at the top of the gutter 5 instead of moving up to the tapered end of the gutter 5. Fig. 4 schematically shows bacteria 13 in the gutter 5 at the normal, filled level of the gutter. The gutter 5 is designed to allow a certain bacterial population to be introduced into the gutter. This population is usually equivalent to at least 5 x 10 6 bacteria per milliliter when the bacteria are placed in the medium of the device. narrowing gutter, which is about 0.43 mm deep, A 0.25 mm wide allows the above-mentioned uptake. The gutter can be modified to accommodate other desired bacterial populations. at its largest end and 3.1 mm long. The use of the device will now be described with reference to Figs. 5-8. Fig. 5 shows schematically in section an in order of subsequent inoculation of the device using 1 rod 4. Nothing 6 has been removed from the sleeve, and the rod 4 has a narrowing of the tip of the pickup sufficient bacterial amount to inoculate from bacteria, usually bacteria, 106. The lid 6 has been put on and via the rod 4 and the gutter S the bacteria have been placed next to the ampoule 2. As shown in Fig. 5, the ampoule 2 has been crushed by deforming the sleeve and the bacteria 13 are schematically indicated in the growth-limiting medium 3. In this form, the device is normally incubated at about 35 ° C, requiring about 5 hours to reach the predetermined, before 2-8 hours. The preferred culture medium is the amount of bacteria drawn, i.e. from 6 x 107 to 3 x 10 I CFU / ml. Fig. 2 shows the device according to Fig. 5 in section; at the initial stage of incubation and Fig. 6 shows the sleeve 1 enclosing the crushed ampoule 2, the culture medium 3 and the bacteria 13.

Efter inkuberingen har anordningen den i fig 7 visade formen. I detta fall är anordningen precis som förut, bortsett från att bakteriepopulationen 13 har ökat betyd- ligt. Fig 8 är en sektion av anordningen i fig 7 vid detta stadium. Pig 7 illustrerar anordningen vid använd- ning efter inkubering och visar att remsan ll har avlägs- nats och att anordningen nu är färdig för utpressning av de odlade bakterierna via hålet 10. Anordningen hålles med hålet 10 nedåt, hylsan l pressas samman och deforma- ras och bakterierna 13 och mediet 3 pressas ut via hå- let lO. Krossat glas från ampullen 2 förhindras från att sätta igen hålet medelst utsprången 9.After the incubation, the device has the shape shown in Fig. 7. In this case, the device is just as before, except that the bacterial population 13 has increased significantly. Fig. 8 is a section of the device of Fig. 7 at this stage. Fig. 7 illustrates the device in use after incubation and shows that the strip II has been removed and that the device is now ready for squeezing the cultured bacteria via the hole 10. The device is held with the hole 10 downwards, the sleeve 1 is compressed and deformed and the bacteria 13 and the medium 3 are pressed out via the hole 10. Broken glass from the ampoule 2 is prevented from clogging the hole by means of the projections 9.

Den avsmalnande rännan 5 i staven 4 kan varieras för att effektuera ett bakterieinokulat av annan storlek, så att den upplockade bakteriepopulationen är större eller mindre än den ovan beskrivna. Andra konfigurationer än en avsmalnande ränna kan användas vid föreliggande upp- finning så länge staven eller upplockningsorganet har för- måga att upprepat plocka upp en förutbestämd bakteriemängd.The tapered groove 5 in the rod 4 can be varied to effect a bacterial inoculum of a different size, so that the picked bacterial population is larger or smaller than that described above. Configurations other than a tapered chute may be used in the present invention as long as the rod or pick-up means is capable of repeatedly picking up a predetermined amount of bacteria.

Anordningen medger odling av bakterier från en viss för- utbestämd nivå, som bestäms av upplockningsorganet, till 458 367 10 20 25 30 35 14 en slutnivâ, som bestäms av det tillväxtbegränsande me- diet, på en viss tidrymd, vilken tidrymd bestäms av be- gynnelsepopulationen, det tillväxtbegränsande mediets sammansättning samt typen av bakterie. Vid användning i ett Kirby-Bauer-test eller MIC-test, föredrages det att anordningen odlar bakterierna på 5 h till en koncentra- tion av från cirka 6 x lO7 till 3 x 108 CFU/ml.The device allows the cultivation of bacteria from a certain predetermined level, which is determined by the picking means, to a final level, determined by the growth-limiting medium, at a certain time period, which time period is determined by the benefit population, the composition of the growth-limiting medium and the type of bacterium. When used in a Kirby-Bauer test or MIC test, it is preferred that the device grow the bacteria for 5 hours to a concentration of from about 6 x 10 7 to 3 x 108 CFU / ml.

Den visade anordningen innehåller det tillväxtbe- gränsande mediet 3 i en glasampull 2. Andra modifieringar kan göras för att uppnå samma resultat. Så t ex kan an- ordningen utgöras av enbart en gängad hylsa med ett skruvlock, varpå staven är fäst. I detta fall föreligger det tillväxtbegränsande mediet inuti hylsan och inokule- direkt när locket sätts på hylsan. Bakterierna ploc- upp med staven och när staven placeras i mediet skru- ras kas vas locket åter på. Andra modifieringar inses av fack- mannen på området och innefattas i de efterföljande pa- tentkraven.The device shown contains the growth-limiting medium 3 in a glass ampoule 2. Other modifications can be made to achieve the same result. For example, the device can consist of only a threaded sleeve with a screw cap, to which the rod is attached. In this case, the growth-limiting medium is present inside the sleeve and inoculum directly when the lid is put on the sleeve. The bacteria pick up with the rod and when the rod is placed in the medium, the vase lid is screwed on again. Other modifications will be appreciated by those skilled in the art and are included in the appended claims.

Den i fig l visade anordningen är gjord genom att gjuta och forma de olika glas- och plastkomponenterna.The device shown in Fig. 1 is made by molding and shaping the various glass and plastic components.

Ungefär 0,6 ml av mediet 3 placeras i glasampullen 2 som värmeförseglas och ângsteriliseras under lO min vid l2l°C.Approximately 0.6 ml of the medium 3 is placed in the glass ampoule 2 which is heat sealed and steam sterilized for 10 minutes at 120 ° C.

Hylsan 1, locket 6 och remsan ll gassteriliseras med etylenoxid under 3 h vid 38°C och luftas sedan under 8 h.Sleeve 1, lid 6 and strip 11 are gas sterilized with ethylene oxide for 3 hours at 38 ° C and then aerated for 8 hours.

Den förseglade och steriliserade glasampullen 2 införas aseptiskt i hylsan l, locket 6 sätts på och remsan ll pressas på plats. Z I de efterföljande exemplen hänvisas till följande material och bakterier, vars källa anges nedan. I exemp- len hänför sig "odlingsanordning" till en anordning med de ovan beskrivna dimensionerna.The sealed and sterilized glass ampoule 2 is inserted aseptically into the sleeve 1, the lid 6 is put on and the strip 11 is pressed into place. Z In the following examples reference is made to the following materials and bacteria, the source of which is given below. In the examples, "cultivation device" refers to a device with the dimensions described above.

Trypton, ett enzymatiskt hydrolysat av kasein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.Tryptone, an enzymatic hydrolyzate of casein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.

Pepton, ett enzymatiskt hydrolysat av kasein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA: A Dextros, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.Peptone, an enzymatic hydrolyzate of casein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA: A Dextros, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.

Polypepton, ett enzymatiskt hydrolysat av kasein och djurvävnad, Bioquest, Inc., Baltimore, Maryland, USA. 10 15 20 25 30 35 458 367 15 Neopepton, ett enzymatiskt hydrolysat av protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.Polypeptone, an enzymatic hydrolyzate of casein and animal tissue, Bioquest, Inc., Baltimore, Maryland, USA. Neopeptone, an enzymatic hydrolyzate of protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.

Proteospepton, ett enzymatiskt hydrolysat av protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.Proteospeptone, an enzymatic hydrolyzate of protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.

Salmonella typhimurium, American Type Culture Collec- (ATCC) Nr. 19028.Salmonella typhimurium, American Type Culture Collec- (ATCC) Nr. 19028

Shigella Sonnei, (ATCC 25331).Shigella Sonnei, (ATCC 25331).

Enterobacter cloacae (ATCC 23355) och St. Paul Ramsey tion, Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Enterobacter cloacae (ATCC 23355) and St. Paul Ramsey tion, Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Klebsiella pneumoniae, (ATCC 23357) och St. Paul Ram~ sey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Klebsiella pneumoniae, (ATCC 23357) and St. Paul Ram ~ sey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Proteus vulgaris (ATCC 6380).Proteus vulgaris (ATCC 6380).

Proteus mirabilis, St. John's Hospital, St. Paul, Minnesota and St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul. Minne- USA.Proteus mirabilis, St. St. John's Hospital, St. Paul, Minnesota and St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul. Memory- USA.

Serratia marccscens (ATCC 8100) och St. Paul Ramsey sota, Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Serratia marccscens (ATCC 8100) and St. Paul Ramsey Sota, Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Providencia species, University of Minnesota, Minne- apolis, Minnesota, USA.Providencia species, University of Minnesota, Minne- apolis, Minnesota, USA.

Citrobacter species, University of Minnesota, Minne- apolis, Minnesota, USA.Citrobacter species, University of Minnesota, Minnesota, Minnesota, USA.

Edwardsiella, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.Edwardsiella, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.

Arizona, University of Minnesota, Minneapolis, Minne- sota, USA.Arizona, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.

Yersinia, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.Yersinia, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.

Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Escherichia coli (ATCC 25922) och St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Escherichia coli (ATCC 25922) and St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Acinetobacter calcoaceticus, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Acinetobacter calcoaceticus, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Proteus morganii, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, USA.Proteus morganii, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, USA.

Enterobacter aerogenes, St. Paul Ramsey Hospital, Minnesota, St. Paul, Minnesota, USA. - 458 10 20 25 367 16 Pasteurella (species), St. Paul Ramsey Hospital, St. Éaul, Minnesota, USA.Enterobacter aerogenes, St. Paul Ramsey Hospital, Minnesota, St. Paul, Minnesota, USA. - 458 10 20 25 367 16 Pasteurella (species), St. Paul Ramsey Hospital, St. Éaul, Minnesota, USA.

'CDC Group II F, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.'CDC Group II F, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Moraxella, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Moraxella, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Citrobacter freundii, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Citrobacter freundii, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

EXEMPEL l Anordningar med de ovan beskrivna specifikationerna inokulerades med olika bakterier med användning av den avsmalnande rännan på staven hos anordningen. En begynnel- sekoncentration noterades för bakterien. Det tillväxtbe- gränsande mediet, som var inrymt i ampullen hos varje an- ordning, innehöll följande: 0,8 g pepton 0,03 g dextros 2,5 g dikaliumfosfat \ l,25 g monokaliumfosfat 5,0 g natriumklorid Lösningar av mediet innehållande 0,2 g pepton och 1,6 g pepton iordningsställdes ocksâ.EXAMPLE 1 Devices with the specifications described above were inoculated with various bacteria using the tapered groove on the rod of the device. An initial concentration was noted for the bacterium. The growth-limiting medium contained in the ampoule of each device contained the following: 0.8 g peptone 0.03 g dextrose 2.5 g dipotassium phosphate / l, 25 g monopotassium phosphate 5.0 g sodium chloride Solutions containing the medium 0.2 g of peptone and 1.6 g of peptone were also prepared.

Fyra andra tillväxtbegränsande medier användes, vilka inbegrep proteospepton, trypton, neopepton och polypepton.Four other growth inhibitory media were used, which included proteospeptone, tryptone, neopeptone and polypeptone.

Dessa insattes i stället för peptonen i ovanstående samman- sättning. De resulterande begynnelsekoncentrationerna be- stämdes och var, räknat i CFU/ml, såsom anges i tabell l.These were used instead of the peptone in the above composition. The resulting initial concentrations were determined and were, calculated in CFU / ml, as given in Table 1.

Värdena avser medelvärdet för 15 prover, dvs 5 prover för var och en av de tre sammansättningarna för varje medium. 458 567 17 »CH H CHN »CH H :HH »CH H H.H »CH H C_m~ »CH H H_C »CH H C_H, »CH H HH »CH H MHN »CH H HHH coumwmwﬁøm »CH H ».m »CH H C.H »CH H C.C »CH H C_~ COQNGNONZ. .umH»xCHww Hm> »CH H C_H »CH H C.N »CH H C_~ »CH H H_m »CH H m.H »CH H C_~ »CH H C.m »CH H @.C »CH H »Hm »CH H CHH mmwmwmw H ÅAMQHÉ...The values refer to the mean value of 15 samples, ie 5 samples for each of the three compositions for each medium. 458 567 17 »CH H CHN» CH H: HH »CH H HH» CH H C_m ~ »CH H H_C» CH H C_H, »CH H HH» CH H MHN »CH H HHH coumwmw ﬁ øm» CH H ».m» CH H CH »CH H CC» CH H C_ ~ COQNGNONZ. .umH »xCHww Hm>» CH H C_H »CH H CN» CH H C_ ~ »CH H H_m» CH H mH »CH H C_ ~» CH H Cm »CH H @ .C» CH H »Hm» CH H CHH mmwmwmw H ÅAMQHÉ ...

Noa NoH Noa Noa Noa Noa Noa Noa Noﬂ Noa Noa Noa X X uwumHøxosH nun umnmcøH w©um> >m ©mcxmm>< .nm>o uuH>Hmcm Eomww um mcHm»ummHuwuxmm m.» H_m H.~ m.H C.H C.C C.m CH» CHH »_H C_C H_N COUQÜWMOÜ&O.HÛ »CH H NCH »CH H CCH »CH M mHm »CH H.H_~ »CH H m_H »CH H CHC .»CH H C.C »CH H C.N »CH H C.H »CH H m.» »CH H m.H »CH H »_~ »CH H C_m »CH H C.H mmmmmm nHnmwHs> wzuuonm wHHmnnmm mHcHmnww dﬁﬁøﬂmonmznw mcoHHn< nmvomnonaHu mmcosoøswmm mHHwcoeHmm CHHHn~HHz CCCHCHC mHocøuH>onm nmßomnonwucm Caﬁmﬂmnmax HHHCwHnm HHoo wHsoHnmnCmm 458 367 10 ß: UI 20 18 BXEMPEL 2 Följande material löstes i 1000 ml avjoniserat vat- ten och ångsteriliserades vid l2l°C i l5 min: 0,8 g pepton 0,03 g dextron 2,5 g dikaliumfosfat 1,25 g monokaliumfosfat 5,0 g natriumklorid Mediumlösningar innehållande 0,2 g pepton och l,6 g pepton iordningställdes också. Odlingsanordningar iord- ningställdes sedan med användning av vart och ett av me- dierna. Med utnyttjande av staven 4 hos odlingsanordningen plockades bakterier från 4-5, l8-25 h gamla bakteriekolo- nier av de olika bakterier, som anges i tabell 2. Fem od- lingsanordningar användes för varje bakterie för att er- hålla ett medelvärde för fem prover för varje bakterie.Noa NoH Noa Noa Noa Noa Noa Noa No ﬂ Noa Noa Noa X X uwumHøxosH nun umnmcøH w © um>> m © mcxmm> <.nm> o uuH> Hmcm Eomww um mcHm »ummHuwuxmm m.» H_m H. ~ mH CH CC Cm CH »CHH» _H C_C H_N COUQÜWMOÜ & O.HÛ »CH H NCH» CH H CCH »CH M mHm» CH H.H_ ~ »CH H m_H» CH H CHC. »CH H CC» CH H CN »CH H CH» CH H m. » »CH H mH» CH H »_ ~» CH H C_m »CH H CH mmmmmm nHnmwHs> wzuuonm wHHmnnmm mHcHmnww d fifi O fl monmznw mcoHHn <nmvomnonaHu mmcosoøswmm mHHwcoeHmm CHHHn ~ HHZ CCCHCHC mHocøuH> onm nmßomnonwucm Ca fi et al mnmax HHHCwHnm HHoo wHsoHnmnCmm 458 367 10 SS: UI 20:18 EXAMPLE 2 The following materials were dissolved in 1000 ml of deionized water and steam sterilized at 21 ° C for 15 minutes: 0.8 g of peptone 0.03 g of dextron 2.5 g of dipotassium phosphate 1.25 g of monopotassium phosphate 5.0 g of sodium chloride. .2 g of peptone and 1.6 g of peptone were also prepared. Cultivation devices were then prepared using each of the media. Using the rod 4 of the culture device, bacteria were picked from 4-5, 18-25 h old bacterial colonies of the various bacteria, listed in Table 2. Five culture devices were used for each bacterium to obtain an average of five samples for each bacterium.

Fjorton olika bakterier testades. Sålunda utnyttjades 70 stycken odlingsanordningar vid testet för vart och ett av de tre medierna. Varje odlingsanordning blandades un- der l0 s och inkuberades vid 35°C. Antalet livsdugliga bakterier räknades vid 0, 4, 5 och 6 h. Resultaten anges i tabell 2. 458 367 19 ' TABELL 2 6 Antal (x 107 CFU/ml) Bakterier Eid (h) Q 2 3 Q 3 g 1,5 q Escheríchia coli 0 1,6 1,äh 2,8 ß o,u 5,2 11,6 5 3,7 10,2 lU,ß 6 1,3 7,6 15,4 Shigella sonnei 0 H,2 3,62 1,2 ll 5,7 14,1! 15,8 5 8,1 17,0 19,8 6 6,0 12,2 21,0 Klebsiella pneumoniae O 2,6 2,86 2,6 4 5,3 13,4 11,6 5 u,9 13,6 13,6 6 u,9 12,0 16,0 Enterobacter cloacae 0 5,3 H,R 3,9 'å å” ååå šåå 2 6 afu 19,6 3826 -Providencia species 0 7,3 6,1U 9,1 ß 11,6 22,2 30,2 5 13,2 27,ü 38,6 6 13,2 22,8 39,8 Proteus mirabilis 0- ll ,2 11 ,66 S, lt 4 8,9 21,ß 21,ë 5 8,6 19,8 33,2 _ 6 9,7 2u,o 37,2 Salmonella typhimurium 0 2,3 2,32 3,8 , u 6,6 1É,ä 27,8 5 7 1 1 31 Q 6 6:8 1920 3312 Pseudomonas aeruginosa 0 1,0 0,7 0,5 ïš š'š ååä íårë 6 5,3 2614 29,2 Citrobacter species 0 3,8 31,0 6,6 'å 3% 33% šäå 6 1226 3111 3216 Arizona 0 1,1 1,H6 2,0 U H,l 15,2 16,0 5 u,9 16,0 21,8 6 u,9 17,6 26,2 458 367 '20 TABELL 2 (fortsättning) Antal (x 107 CFU/ml) 0,8 g 1,6 g 0,2 g Tid (h) Bakterier ons/Ö Edwardsiella Yersinia nU-HHSS Serrati marcescens Ûus/D Proteus vulgaris EXEMPEL 3 Exempel 2 upprepades, utom att pepton utbyttes mot polypepton. Resultaten anges i tabell 3.Fourteen different bacteria were tested. Thus, 70 cultivators were used in the test for each of the three media. Each culture medium was mixed for 10 s and incubated at 35 ° C. The number of viable bacteria was counted at 0, 4, 5 and 6 h. The results are given in Table 2. 458 367 19 'TABLE 2 6 Number (x 107 CFU / ml) Bacteria Eid (h) Q 2 3 Q 3 g 1.5 q Escheríchia coli 0 1.6 1, äh 2.8 ß o, u 5.2 11.6 5 3.7 10.2 lU, ß 6 1.3 7.6 15.4 Shigella sonnei 0 H, 2 3, 62 1.2 ll 5.7 14.1! 15.8 5 8.1 17.0 19.8 6 6.0 12.2 21.0 Klebsiella pneumoniae O 2.6 2.86 2.6 4 5.3 13.4 11.6 5 u .9 13 .6 13.6 6 u .9 12.0 16.0 Enterobacter cloacae 0 5.3 H, R 3.9 'å å ”ååå šåå 2 6 afu 19.6 3826 -Providencia species 0 7.3 6.1U 9.1 ß 11.6 22.2 30.2 5 13.2 27, ü 38.6 6 13.2 22.8 39.8 Proteus mirabilis 0- ll, 2 11, 66 S, lt 4 8.9 21, ß 21, ë 5 8,6 19,8 33,2 _ 6 9,7 2u, o 37,2 Salmonella typhimurium 0 2,3 2,32 3,8, u 6,6 1É, ä 27,8 5 7 1 1 31 Q 6 6: 8 1920 3312 Pseudomonas aeruginosa 0 1.0 0,7 0,5 ïš š'š ååä íårë 6 5,3 2614 29,2 Citrobacter species 0 3,8 31,0 6,6 'å 3% 33% šäå 6 1226 3111 3216 Arizona 0 1.1 1, H6 2.0 UH, l 15.2 16.0 5 u, 9 16.0 21.8 6 u, 9 17.6 26, 2 458 367 '20 TABLE 2 (continued) Number (x 107 CFU / ml) 0.8 g 1.6 g 0.2 g Time (h) Bacteria Wed / Ö Edwardsiella Yersinia nU-HHSS Serrati marcescens Ûus / D Proteus vulgaris EXAMPLE 3 Example 2 was repeated, except that peptone was exchanged for polypeptone. The results are given in Table 3.

TABELL 3 Antal (X 107 CFU/ml) 0,8 g 1,6 g 'Tid (h) Bakterier _ 0,2 g ons/D Escherichia coli 86|4Û oh. 56 Shigella Sonnei ÛhHSrD Klebsiella pneumoniae 458 367 21 »TABELL 3 (fortsättning) Antal (x 107 CPU/ml) §5§gg5¿g5 Tid_¿¿¿ 0,2 § 0,8 3 1,6 5 Enterobacter cloacae 0 3,2 3,2 1,3 ~ M 16,2 19,0 8,1 5 15,8 12,8 13,2 6 11,6 13,6 16,8 Providencia species 0 - - - (fel på inokulatetl U - - - 2 _ 5 _ _ _ 5 _ _ _ Proteus mirabilis 0 0,H6 0,U6 0, Ä 2,7 3,86 3, 5 7,6 1H,6 13, 6 7,5 10,6 11, Salmonella typhimurium 0 1,3 1,H 0, U 6,8 6,9 7, 5 10,0 11,8 10, 6 9,0 lU,l ll, Pseudomonas aeruginosa 0 5,8 7,7 5, Ä 8,0 8,3 ll, 5 - 22,2 zh, 6 7,5 20,3 23, Citrobacter species O l5,U 21,6 3U,2 M 16,6 22,0 22,2 5 1u,8 31,H 25,6 6 15,2 27,2 30,4 Arizona 0 3,7 4,0 3,2 H 5,3 6,6 5,6 5 6,6 13,2 12,5 Edwardsiella 0 Ingen tillväxt U Ingen tillväxt 5 Ingen tillväxt 5 Ingen tillväxt Yersinia 0 u,u 2,85 5,7 Ä U,ß 5,0 10,7 5 310 9,73 17,2 6 8,6 11,0 18,6 Serratia marcescens . 0 Ä,ü ü,6 H,l u 13,6 11,1 8,8 5 15,2 1u,h 10,1 6 15,u 15,0 13,6 .E oxoaocn o-q.=u> .bqggvﬂ w 458 367 22 TABELL 3 (fortsättning) Antal (x 107 CPU/ml) gšgterier Tid (6) o,2 g' o,s q 1,6 6 Proteus vulgaris O 4,5 2,64 1,4 É 6,9 7,92 4,2 5 15,5 15,4 11,3 6 16,5 8,0 15,3 EXEMPEL 4 Exempel 2 upprepades , utom att pepton utbyttes mot neopepton. Resultaten anges i tabell 4. ækn \D TABELL 4 Antal (X 1o7 cßu/ml) Bakterier Tid (h) 0,2 g 0,8 g 1,6 g Escherichia coli 0 0,8ü 1,0 0,5 H 0,5ü 0,6 0,3 § 1,8 _1,96 1,1 b 1,3 14,0 3,0 snlgeila sonnei o 1,8 .0,8 0,7 H 3,3 2,3 1,0 5 11,6 6,2 11,2 6 6,3 6,1 11,0 Klebsiella pneumoniae - 0 0,2 0,13 0,1 11 3,7 2,5 11.0 5 7,2 2,5 &,0 . 6 5,3 5,8 8,2 Enterobacter cloacae 0 Ingen tillväxt Å Ingen tillväxt 5 Ingen tillväxt 6 Ingen tillväxt Providencia species 0 0 U - 0,2 ' 6 ~ u _ O' 5 _ _ Û;7 6 1.19 _ 118 Proteus mir-anus o 2,0 1,0 11,2 1 6,3 8,5 6,8 5 1o,o 17,6 16,0 6 10,5 21,8 22,2 458 367 23 *TABELL 4 (fortsättning) Antal (x 107 can/ml) Bakteriër Tid (h) 0,2 g 0,8 g 1,6 3 salmonella cypn1mur10m 0 3,3 2,“ß 2,6 0 7,2 8,92 8,0 5 13,2 17,2 19,0 6 12,6 16,6 18,0 Pseudømonas aeruginosa O 0,2 0,16 0,2 H 1,8 5,9 4,9 5 5,3 9,5 9,5 5 7,2 18,0 16,0 Citrobacter species: 0 5,5 7,52 13,0 _ 1 7,0 7,01 _ 5 12,2 21,6 27,2 s 15,6 30,2 31,h Årizüna 'Û 3," 3,0 2,06 Ä 6,3 5,5 7,6 5 7,9 13,0 11,8 6 9,8 16,H 17,4 Yersinía 0 “,9 6,2" 5,0 u 6,0 10,7 10,8 5 9,7 15,5 15,0 6 10,u 20,6 21,0 Edwardsiella 0 Inga värden - U ' Inga värden 5 Inga värden 6 Inga värden Serratia marcescens 0 3,5 3,16 5,1 M 8,7 10,1 9,8 5 11,3 _ll,6 12,3 6 9,7 12,7 12,8 Proteus vulgaris 0 2,ü 3,56 2,0 Ä 5,5 12,5 8,1 5 8,6 23,8 16,H 6 10,7 20,1 23,2 EXEMPEL 5 Exempel 2 upprepades, utom att pepton utbyttes mot trypton. Resultaten anges i tabell 5. 458 367 2'4 TABE LL .å Antal (X 107 CFU ml) 0,3 9 0,2 g Tid (h) Bakterier On. EJCU Escherichia coli ÛhﬁCJ/Ö Shigella sonnei ÛUSrD Klebsiella pneumoniae 0.456 Enterobacter cloacae O-Mxsrß Providencia species Proteus mirabilis Salmonella typhimurium 2 11; 13,0 2,52 11,0 10,u 3,4 10,0 11,0 01456 Pseudomonas aeruginosa 368Û 111 ÛuCJrO Citrobacter species nuurJrO Arizona .fa Bakterier Edwardsiella Yersinía Serratia marcescens Proteus vulgaris EXEMPEL 6 25 TABELL 5 Tid (h) O'\\J'\J='CJ O'\\J1-¥='O ChUï-DO O\\J'|J='O 458 567 1 6 _ -'.__ﬂ MFP' TOIUP' l-“l-'l-l I\J(IJUJY°' Uïl-'UIUJ GDUJÖTU -EUJUJI-l unww wwﬁw -- ON O'J\-OJ='C\ (fortsättning) §§;a1 0,2 q 0,8 q- o,78 0,85 2,3 1,9 3,1 2,3 2,9 2,8 2 0 1 58 5,1 518 6,1 8,42 7,1 12,8 3,2 ﬂ,98 16,6 20,8 19,2 25,4 23,2 29,8 1,46 1,1 8,0 16,2 10,0 16,5 5\'I°I tucatuca cn::o\o xpzm Exempel 2 upprepades, utom att pepton utbyttes mot proteospeptøn. Resultaten anges i tabell 6.TABLE 3 Number (X 107 CFU / ml) 0.8 g 1.6 g 'Time (h) Bacteria _ 0.2 g ons / D Escherichia coli 86 | 4Û oh. 56 Shigella Sonnei ÛhHSrD Klebsiella pneumoniae 458 367 21 »TABLE 3 (continued) Number (x 107 CPU / ml) §5§gg5¿g5 Time_¿¿¿ 0.2 § 0.8 3 1.6 1.6 Enterobacter cloacae 0 3, 2 3.2 1.3 ~ M 16.2 19.0 8.1 5 15.8 12.8 13.2 6 11.6 13.6 16.8 Providencia species 0 - - - (inoculum error U - - - 2 _ 5 _ _ _ 5 _ _ _ Proteus mirabilis 0 0, H6 0, U6 0, Ä 2,7 3,86 3, 5 7,6 1H, 6 13, 6 7,5 10,6 11, Salmonella typhimurium 0 1.3 1, H 0, U 6.8 6.9 7, 5 10.0 11.8 10, 6 9.0 lU, ll, Pseudomonas aeruginosa 0 5.8 7.7 5, Ä 8.0 8.3 ll, 5 - 22.2 zh, 6 7.5 20.3 23, Citrobacter species O l5, U 21.6 3U, 2 M 16.6 22.0 22.2 5 1u, 8 31, H 25.6 6 15.2 27.2 30.4 Arizona 0 3.7 4.0 3.2 H 5.3 6.6 5.6 5 6.6 13.2 12.5 Edwardsiella 0 None growth U No growth 5 No growth 5 No growth Yersinia 0 u, u 2.85 5.7 Ä U, ß 5.0 10.7 5 310 9.73 17.2 6 8.6 11.0 18.6 Serratia marcescens .0 Ä, ü ü, 6 H, lu 13.6 11.1 8.8 5 15.2 1u, h 10.1 6 15, u 15.0 13.6 .E oxoaocn oq. = u>. bqggv ﬂ w 458 367 22 TABLE 3 (continued) Number (x 107 CPU / ml ) gšgterier Tid (6) o, 2 g 'o, sq 1,6 6 Proteus vulgaris O 4,5 2,64 1,4 É 6,9 7,92 4,2 5 15,5 15,4 11,3 6 16.5 8.0 15.3 EXAMPLE 4 Example 2 was repeated, except that peptone was exchanged for neopeptone. The results are given in Table 4. TABLE 4 Number (X 1o7 cßu / ml) Bacteria Time (h) 0.2 g 0.8 g 1.6 g Escherichia coli 0 0.8ü 1.0 0.5 H 0 , 5ü 0,6 0,3 § 1,8 _1,96 1,1 b 1,3 14,0 3,0 snlgeila sonnei o 1,8 .0,8 0,7 H 3,3 2,3 1, 0 5 11.6 6.2 11.2 6 6.3 6.1 11.0 Klebsiella pneumoniae - 0 0.2 0.13 0.1 11 3.7 2.5 11.0 5 7.2 2.5 & , 0. 6 5.3 5.8 8.2 Enterobacter cloacae 0 No growth Å No growth 5 No growth 6 No growth Providencia species 0 0 U - 0.2 '6 ~ u _ O' 5 _ _ Û; 7 6 1.19 _ 118 Proteus mir-anus o 2.0 1.0 11.2 1 6.3 8.5 6.8 5 1o, o 17.6 16.0 6 10.5 21.8 22.2 458 367 23 * TABLE 4 (continued) Number (x 107 can / ml) Bacteria Time (h) 0.2 g 0.8 g 1.6 3 salmonella cypn1mur10m 0 3.3 2, “ß 2.6 0 7.2 8.92 8, 0 5 13.2 17.2 19.0 6 12.6 16.6 18.0 Pseudomonas aeruginosa O 0.2 0.16 0.2 H 1.8 5.9 4.9 5 5.3 9.5 9.5 5 7.2 18.0 16.0 Citrobacter species: 0 5.5 7.52 13.0 _ 1 7.0 7.01 _ 5 12.2 21.6 27.2 s 15.6 30 , 2 31, h Årizüna 'Û 3, "3,0 2,06 Ä 6,3 5,5 7,6 5 7,9 13,0 11,8 6 9,8 16, H 17,4 Yersinía 0“ .9 6.2 "5.0 u 6.0 10.7 10.8 5 9.7 15.5 15.0 6 10, u 20.6 21.0 Edwardsiella 0 No values - U 'No values 5 None values 6 No values Serratia marcescens 0 3.5 3.16 5.1 M 8.7 10.1 9.8 5 11.3 _ll, 6 12.3 6 9.7 12.7 12.8 Proteus vulgaris 0 2 , ü 3.56 2.0 Ä 5.5 12.5 8.1 5 8.6 23.8 16, H 6 10.7 20.1 23.2 EXAMPLE 5 Example 2 u was repeated, except that peptone was exchanged for tryptone. The results are given in Table 5. 458 367 2'4 TABLE LL .å Number (X 107 CFU ml) 0.3 9 0.2 g Time (h) Bacteria On. EJCU Escherichia coli Ûh ﬁ CJ / Ö Shigella sonnei ÛUSrD Klebsiella pneumoniae 0.456 Enterobacter cloacae O-Mxsrß Providencia species Proteus mirabilis Salmonella typhimurium 2 11; 13.0 2.52 11.0 10, u 3.4 10.0 11.0 01456 Pseudomonas aeruginosa 368Û 111 ÛuCJrO Citrobacter species nuurJrO Arizona .fa Bacteria Edwardsiella Yersinía Serratia marcescens Proteus vulgaris EXAMPLE 6 25 TABLE 5 Time (h) O '\\ J' \ J = 'CJ O' \\ J1- ¥ = 'O ChUï-DO O \\ J' | J = 'O 458 567 1 6 _ -'.__ ﬂ MFP' TOIUP 'l- “l -'ll I \ J (IJUJY ° 'Uïl-'UIUJ GDUJÖTU -EUJUJI-l unww ww ﬁ w - ON O'J \ -OJ =' C \ (continued) §§; a1 0.2 q 0.8 q- o .78 0.85 2.3 1.9 3.1 2.3 2.9 2.8 2 0 1 58 5.1 518 6.1 8.42 7.1 12.8 3.2 ﬂ .98 16.6 20.8 19.2 25.4 23.2 29.8 1.46 1.1 8.0 16.2 10.0 16.5 5 \ 'I ° I tucatuca cn :: o \ o xpzm Example 2 was repeated, except that peptone was exchanged for proteospeptone, the results are given in Table 6.

Bakterier Escherichia coli Shigella sonnei Klebsiella pneumoniae Enterobacter cloacae TABELL 6 Tid (h) ßUïäO ChU1-B-'Ö GUI-PO O"\\J'1šO An:a1 (X 107 cF0/m1) 0,2_g 0,8 ¶ l,6¿g 2,2 1,78 1,9 -10,0 15,4 14,5~ 7,4 .22,0 22,0 7,6 20,4 29,0 6,9 6,38 4,6 14,0 23,2 20,6 13,4 20,0 20,8 13,8 25,4 33,4 4,1 3,52 3,5 12,6 15,2 15,4. 12,0 26,0 23,4 13,4 21,2 17,8 4,2 0,0 4,3 12,2 24,2 17,6 13,0 28,3 27.0- - 458 367 26 TABELL 6 (fortsättning} Antal (x 107 cFU/ml) 0,2 g Bakterier 0,8 9 1.6 9 Tid (h) OHﬁSrO Providencia species Proteus mirabilis 01.456 Salmonella typhimurium Ons/U Pseudomonas aeruginosa ÛuRJ/D Citrobacter species OHHEJ/O Arizona Guns/O Edwardsiella hva-SG Yersinia Serratia marcescens ÛhHK/G Proteus"vu1gar1s 10 15 20 25 30 35 458 367 27 EXEMPEL 7 Resultaten som erhölls med det tidigare beskrivna mediet jämfördes med de resultat som erhölls med användning av ett konventionellt buljongmedium, dvs tryptisk sojabuljong och standardförfarande. lOO odlings- anordningar iordningställdes, vilka innehöll samma medium sOm angivits i exempel 2. 100 kliniska bakterieisolat, som erhållits från patienter, odlades med användning av dessa odlingsanordningar och den standardodlingsteknik som etablerats för Kirby-Bauer-testet. De testade bakte- rierna inbegrep: Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter calocoaceticus Proteus mirabilis Proteus morganii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Serratia marcescens Pasteurella (species) CDC Group II F Moraxella Citrobacter freundii 4 till S isolerade kolonier berördes med odlings- anordningens stav och staven användes för att inokulera odlingsmediet i odlingsanordningen. Enheterna inkubera- des vid 3S°C i en inkubator av märket 3M modell lO7 under 4 h. Klisterremsförseglingen på locket avlägsnades hos odlingsenheten och 6-8 droppar bakteriesuspension för- delades pâ en bomullslapp.Lappenströksi.Briktningaröveren Hueller-Hinton-agarplatta och Kirby-Bauer-testet fullfölj- des i enlighet med ovan angivna National Clinical Committee for Laboratory Standards (NCCLS) of the United States of America, Antibiotics Susceptibility Standard. En jämförelse gjordes mellan resultaten för den antibiotiska känslighet som erhållits med användning av föreliggande odlings- -medium-anordning samt med användning av standardteknik 458 367 10 15 20 28 för bakterieodling. Resultaten var jämförbara.Bacteria Escherichia coli Shigella sonnei Klebsiella pneumoniae Enterobacter cloacae TABLE 6 Time (h) ßUïäO ChU1-B-'Ö GUI-PO O "\\ J'1šO An: a1 (X 107 cF0 / m1) 0,2_g 0,8 ¶ l , 6¿g 2.2 1.78 1.9 -10.0 15.4 14.5 ~ 7.4 .22.0 22.0 7.6 20.4 29.0 6.9 6.38 4 .6 14.0 23.2 20.6 13.4 20.0 20.8 13.8 25.4 33.4 4.1 3.52 3.5 12.6 15.2 15.4 .12, 0 26.0 23.4 13.4 21.2 17.8 4.2 0.0 4.3 12.2 24.2 17.6 13.0 28.3 27.0- - 458 367 26 TABLE 6 (continued } Number (x 107 cFU / ml) 0.2 g Bacteria 0.8 9 1.6 9 Time (h) OH ﬁ SrO Providencia species Proteus mirabilis 01.456 Salmonella typhimurium Ons / U Pseudomonas aeruginosa ÛuRJ / D Citrobacter species OHHEJ / O Arizona Guns / O Edwardsiella hva-SG Yersinia Serratia marcescens ÛhHK / G Proteus "vu1gar1s 10 15 20 25 30 35 458 367 27 EXAMPLE 7 The results obtained with the previously described medium were compared with the results obtained using a conventional broth medium, i.e. tryptic soy broth and standard procedure. 100 cultivation devices were prepared, which in contained the same medium as given in Example 2. 100 clinical bacterial isolates obtained from patients were cultured using these culture devices and the standard culture technique established for the Kirby-Bauer test. The bacteria tested included: Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter calocoaceticus Proteus mirabilis Proteus morganii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Serratia marcescens Pasteurella (species) CDC Group II F Moraxella Citroen bacterium to inoculate the culture medium into the culture device. The units were incubated at 3S ° C in a 3M model 107 incubator for 4 hours. The adhesive seal on the lid was removed at the culture unit and 6-8 drops of bacterial suspension were distributed on a cotton swab. Lappenströksi. Directions over Hueller-Hinton agar plate and The Bauer test was completed in accordance with the above-mentioned National Clinical Committee for Laboratory Standards (NCCLS) of the United States of America, Antibiotics Susceptibility Standard. A comparison was made between the results for the antibiotic susceptibility obtained using the present culture medium device and using standard bacterial culture techniques. The results were comparable.

EXEMPEL 8 Följande material löstes i 1000 ml avjoniserat vatten och ângsteriliserades vid 12100 under 15 min: 1,7 g Tryptikas 0,3 g Fyton 0,25 g Dextros o, 5 g Nacl 0,25 g KZHPO4 Odlingsanordningarna som användes i detta exempel var polyprapenhylsor, såsom beskrivits ovan, med mediet placerat direkt inuti. Hylsorna tillslöts med ett plast- lock innehållande ett "Tyvec"-filter. Mediet inokulerades med användning av en trådögla med Staphyloccocus aureus- bakterier, som erhållits från 4-5 kolonier av nämnda bak- terie på en aqarplatta. Odlingsanordningarna blandades under 10 s och inkuberades sedan vid 35°C. Antalet livs- dugliga bakterier beräknades vid O, 1, 2,5, 4,5, 5,5, 6,5, 11,5, 13,5, 23,5 och 31 h. Resultaten visade att det ur- sprungliga antalet var l x 104 och att vid 11,5 h antalet hade ökat till cirka 1,7-1,9 X 108 CFU/ml samt att antalet inte minskade väsentligt från detta värde under de reste- rande intervallerna.EXAMPLE 8 The following materials were dissolved in 1000 ml of deionized water and steam sterilized at 12100 for 15 minutes: 1.7 g Trypticase 0.3 g Phyton 0.25 g Dextrose 0.5 g NaCl 0.25 g KZHPO4 The culture apparatus used in this example was polypropylene sleeves, as described above, with the medium placed directly inside. The sleeves were closed with a plastic lid containing a "Tyvec" filter. The medium was inoculated using a wire loop with Staphyloccocus aureus bacteria obtained from 4-5 colonies of said bacterium on an aquarium plate. The cultures were mixed for 10 s and then incubated at 35 ° C. The number of viable bacteria was calculated at 0, 1, 2.5, 4.5, 5.5, 6.5, 11.5, 13.5, 23.5 and 31 hours. The results showed that the original number was lx 104 and that at 11.5 h the number had increased to about 1.7-1.9 X 108 CFU / ml and that the number did not decrease significantly from this value during the remaining intervals.

Claims

10 15 20 25 30 35 458 367 29 PATENT REQUIREMENTS

A rod for picking up a predetermined amount of bacteria from the surface of at least one colony of said bacteria, characterized in that the rod consists essentially of a rod-like member having a top end and a lower tip for contact with the bacterial colony, which lower tip has at least one groove at the lower end of the tip, which groove has the ability to draw in a predetermined amount of bacteria through capillary action.

Rod according to Claim 1, characterized in that at least one of the gutters is a tapered gutter.

3. A rod according to claim 1, wherein the top end includes means for releasably engaging and covering an opening in a vessel when the rod is placed therein.

4. A method of picking up a predetermined amount of bacteria from the surface of a colony of said bacteria, characterized in that the tip of a rod-like member having a top end and a lower tip for contact with the bacterial colony, which lower tip has at least one the strip at the lower end of the tip, is brought into contact with said surface, whereby a predetermined amount of bacteria is drawn into the channel by capillary action. '

A method of inoculating a vessel containing a liquid medium into a space of the vessel, with a predetermined amount of bacteria, characterized in that a predetermined amount of bacteria is picked up according to the method of claim 4; that the bacteria, via said rod-like means, are placed next to the medium in the vessel, and that the bacteria and said medium are brought into contact with each other.

6. A method according to claim 5, characterized in that the predetermined amount of bacteria picked up is equivalent to at least 5 x 10 bacteria per milliliter when the bacteria are in contact with the medium.