SA93130529B1 - علاج مضاد لفيروس التهاب الكبد ب Hepatits B virus بمركبات بيورين 3.2 ثنائي دي اكسي نكلوسيدات - Google Patents

Abstract

الملخص: يبين هذا الاختراع طريقة لعلاج الإصابة بفيروس دنا كبدي hepadnavirus في الحيوانات. يمكن أن نتم معالجة حيوانات مصابة بفيروس التهاب كبد البط ب duck hepatitis B virus بمركب ٢'،٣'-ثنائي دي أكسي نكلوسيد أدنين 2',3'-dideoxy nucleoside adenine أو جوانين guanine أو هيبوكسانثين hepoxanthine أو ٢،٦-ثنائي أمينو بيورين 2,6-diaminopurine، أو مركبات تماثلها مختلفة من بيورينات مستبدلة substituted purines. وتثبط مركبات بيورين ٢'،٣'-ثنائي دي أكسي نكلوسيد - '3,'2 dideoxypurinenucleoside عدة تكاثر فيروس التهاب كبد البط ب duck hepatitis B virus في مزرعة خلايا كبدية بنسبة تفوق ٩٩% عند جرعة ١ ميكروجم/مل. كذلك فقد تم إثبات فاعلية ٢،٦-ثنائي أمينو بيورين ٢'،٣'-ثنائي دي أكسي نكلوسيد -2,6diaminopurine-2',3'-dideoxynucleoside القوية الشديدة في تطهير أمصال دم sera البط البكيني pekin ducks تطهيرا تاما. من فيروس التهاب كبد البط ب duck hepatitis B vims. وأن التأثير الانتقائي لبيورين ٢'،٣'-ثنائي دي أكسي نكلوسيدات- '3, '2 dideoxypurinenucleosides على تكاثر الفيروس دنا الكبدي hepadnavirus يعتمد على اكتشاف التأثير غير المتوقع لفيروس دنا الكبدي hepadnavirus بمماثلات بيورين ٢'،٣'-ثنائي دي أكي نكلوسيد -'3,'2dideoxypurinenucleoside. وهذه المركبات تقدم علاجا جديدا مضاد للفيروس لعلاج الإصابات بفيروس دنا الكبدي hepadnavirus الحادة أو المزمنة.

Description

2 Y

Hepatitis B virus ‏علاج مضاد لفيروس التهاب الكبد ب‎ 2,3 -Dideoxypurine nucleosides ‏دي أكسي نكتلوسيدات‎ AY JY ‏بمركبات بيورين‎ ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع‎ ‏دي أكسي‎ ALITY ‏يتعلق هذا الاختراع بطريقة لاستعمال مركبات بيورين‎ ‏أو مشتقاتها المقبولة من الناحية الصيدلانية‎ 2" ,3"-dideoxypurine nucleoside ‏نكلوسيدات‎ ‏كعلاجا مضادآ للفيروس في مداواة الإصابة الحادة أو المزمنة بفيروس التهاب الكبد النوع ب‎ ‏في الحيوانات.‎ ٠ ‏فالتهاب الكبد النوع ب مرض شائع متفش على نطاق عالمي. وينقل الفيروس الذي‎ ‏يحدث هذا المرض عن طريق الدم ومنتجات الدم وتلوث إبر الحقن بواسطة مسيئي استخدام‎ ‏من أمهات‎ Lady ‏وبالاتصال الجنسي والانتقال‎ «IV drug abusers ‏العقار حقنا في الوريد‎ ‏وعلى نطاق العالم فالمرض‎ infants ‏مصابات بالفيروس أو حاملات له إلى الأطفال الرضع‎ ‏أكثر تفشيآً في جنوب شرق أسيا وفي أفريقيا وأجزاء من أمريكيا الجنوبية. وفي تلك المناطق‎ - ٠ ‏من الأمهات إلى الأطفال في سن مبكرة إلى تحول نسبة عالية من‎ Lady ‏يؤدي انتقال الفيروس‎ ‏لفيروس التهاب الكبد ب. وفرصة‎ chronic carriers ‏ْم الأفراد المصابين إلى حاملين مزمنين‎ 56 ‏موت الذكور الذين يصابون بفيروس التهاب الكبد ب؛ وهم أطفال رضع؛ تبلغ حوالي‎

Primary hepatocellular ‏أو سرطان الخلايا الكبدية الابتدائي‎ cirrhosis ‏يموتون من تليف الكبد‎ ‏نتيجة لإصابة مزمنة بفيروس التهاب الكبد ب. أما الإناث اللاي يصبن بهذا‎ carcinoma Ve ‏من الإصابة المزمنة‎ Sian Tiga ‏المرض عند الميلاد فلديهن فرصة نحو 110 أن يمتن‎ ‏لفيروس التهاب الكبد ب على‎ Jala ‏مليون‎ YA ‏بفيروس التهاب الكبد ب. ويقدر أنه يوجد‎ ٍ ‏نطاق العالم.‎ ‏وبما أن تكاثر‎ Gawd ‏إن مجال المعالجة الكيميائية المضادة للفيروس يعتبر حديث‎ ٠ ‏تحديد مواقع‎ fan ‏الفيروسات يشمل الخلية المضيفة بشكل أساسي. فقد كان من الصعب‎ © "4 ‏ض ض‎

ّ v ‏فيروسية تخصصية لعلاج كيميائي تخصصي مضاد للفيروس. ولم تلق محاولات علاج حاملي‎

Adenine ‏فيروس التهاب الكبد ب المزمنين إلا نجاحاً ضئيلاً. وقد تم استخدام أدنين أرابينوسيد‎ ‏لعلاج حاملين مزمنين. وقد أجريت ثلاث دراسات متحكم‎ interferon ‏وإنترفيرون‎ arabinoside ‏في معالجة الإصابة المزمنة‎ placebo ‏بعلاج ضابط غفل‎ dna gin J ‏فيها لمقارنة تأثير أدنين‎ ‏م بفيروس التهاب الكبد ب. وفي دراستين من هذه الدراسات الثلاث كان معدل الاستجابة للأدنين‎ ‏أرابينوسيد أفضل بشكل ملحوظ في المرضى الذين عولجوا به من مرضى المجموعة الضابطة‎ ‏دراسة المعدة والأمعاء"‎ ale’ ‏ومن معه؛‎ (Bassendine ‏الذين تلقوا علاجاً غفلاً (باسندين‎

Yokosuta ‏لستة 1941 ويوكوسرتا‎ ٠١7١-١٠١١ ٠١ ‏صفحة‎ A+ ‏مجلد‎ ("Gastroeutorology” (VAC ‏صفحة 301-746 لسنة‎ (AY ‏أمراض المعدة والأمعاء"؛ مجلد‎ ple Aad ‏ومن معه‎ ‏وفي دراسة ثالثة متحكم فيها لم تلاحظ فائدة تذكر على المرضى المعالجون بالأدنين أرابينوسيد‎ 157-1590 ya (AT ‏أمراض المعدة والأمعاء"؛ مجلد‎ ale” ‏ومن معه‎ (Hoofnagle) ‏(هوفناجل‎ ‎prednisone ‏وقد ذكر أن إعطاء المرضى نظامآً تمهيدياً بجرعات من بريدنيزون‎ (VAS ‏لسنة‎ ‎(Perrillo, RP.) ‏متناقصة تدريجياً قبل العلاج بالأدنين أرابينوسيد يكون مفيدآً (ر.ب.بريليى‎

YAT=YA+ Gaia AA ‏مجلد‎ "Gastroeutorology ‏والأمعاء‎ sazall ‏أمراض‎ ale’ ‏ومن معه‎ ‏بيد أنه في معظم الدراسات المفتوحة والمتحكم فيها لم يبدي استفادة من العلاج‎ (VAAC ‏لسنة‎ 0s ‏بالإضافة‎ fas ‏فقط من المرضى المعالجين؛ بل حتى هذه النتائج لم تكن مقنعة‎ Ye ‏إلا حوالي‎ ‏إلى ذلك فقد كان العلاج بالأدنين أرابينوسيد مصحوبا بإخماد نقي العظم (نضاع العظم)‎ ‏وتسمم للنسيج العصسبي‎ neuromuscular ‏وألم عضلي عصبي‎ marrowsuppression / ‏ولقد أوقفت معظم تجارب استعمال الأدنين أرابينوسيد لعلاج الإصابة المزمنة‎ neurotoxicity ‏بفيروس التهاب الكبد ب لضآلة نسبة النجاح والسمية المتوسطة لهذا العامل المضاد للفيروس.‎ vo ‏ولم تكلل المساعي لعلاج التهاب كبد مزمن نشيط أحدثه فيروس التهاب الكبد النوع ب‎ ‏وحده أو بالاقتران مع الأدنين أرابينوسيد إلا بنجاح محدود جدآً وسمية‎ interferon ‏بالانترفيرون‎ ‎| ‏معتبرة. وهكذا فثم نقص لعلاج فعال مضاد لفيروس التهاب الكبد ب.‎ 2 3" dideoxynucleosides ‏وقد تم اقتراح مركبات 767-ثنائي دي أكسي نكلوسيدات‎ 2',3"dideoxycytidine ‏كعؤامل مضادة للفيروس» وحقا فإن 707 - ثنائي دي أكسي سيتيدين‎ > vo

¢ 0 أصبح يدرس بشكل نشيط بصفته عامل مضاد فيروسي للفيروسات العكسية ‎retroviruses‏ بما في ذلك فيروسات نقص المناعة في البشر ‎HIV‏ وقد أظهرت مركبات 767 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات أخرى؛ لكن ليس 767 -ثنائي دي أكسي تايميدين ‎dideoxy thymidine‏ 2,3 أنها مثبطات قوية لفيروس نقص المناعة في البشر ‎(HIV)‏ (ميتسويا ومن معه ‎(Mitsuya etal.‏ مجلة ‎PNAS >‏ مجلد ‎AY‏ صفحة ‎(YY + ١-7695‏ لسنة ‎¢Y3A0‏ وميتسويا وبرودر مجلة ‎(PNAS‏ ‏مجلد ‎AY‏ صفحة 1519-1511 لسنة ‎.)١985‏ ‏ولقد كشفت شركة بروز ولكم ‎Burroughs Wellcome‏ في طلب براءة الاختراع الأوروبية المقدم منها برقم متسلسل ‎8077657-٠١‏ المتشور أن مركبات ثنائي دي أكسي نكلوسيدات قد تكون مفيدة في علاج الإصابات بفيروس دنا كبدي ‎Hopadnavirus‏ مثل فيروس © - التهاب الكبد ب. بيد أنها لم تقدم أي دليل تجريبي لدعم هذا الافتراض ‎hypothesis‏ ولم تذكر اكتشافنا غير المتوقع أن مركبات بيورين 77 -ثنائي دي أكسي تكلوسيدات ‎purine‏ ‎dideoxynucleosides‏ 2,3 أشد فاعلية بكثير من مركبات بيريميدين 7 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات ‎pyrimidine 2,3 -dideoxynucleosides‏ وبالرغم أنه قد عرف لمركبات ‎WY‏ ‏ثنائي دي أكسي نكلوسيدات فاعلية مضادة للفيروسء فإن العمل الذي تم الكشف ‎die‏ قد ركز ‎vo‏ على مركب من هذا النوع كونه فعال ضد الفيروسات العكسية ولا سيما فيروس نقص المناعة في البشر ‎SL (HIV)‏ كانت مركبات 767 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات الأشد فعالية ضد فيروس نقص المناعة في البشر ‎(HIV)‏ هي 707 -ثنائي دي أكسي سيتيدين ‎١‏ ‎-dideoxycytidine (ddC) |‏ 231و --ثنائي دي أكسي أدينوزين ‎-dideoxyadenosine‏ "3 2 ‎(ddA)‏ وبيريميدين ل "-ثنائي دي أكسي نكلوسيد ‎pyrimidine 2 3 -dideoxynucleoside‏ ‎٠‏ وبيورين ‎SY CY‏ دي أكسي نكلوسيد ‎purine 2,3 -dideoxynucleosides‏ على الترتيب. ومن الواضح أنه من المستحيل التنبؤ بالتأثر النوعي لفيروسات دنا الكبادية بمركبات 767 ‎SE‏ ‏دي أكسي نكلوسيدات بالاعتماد على التأثيرات المعروفة للفيروسات العكسية بهذه المركبات. ولاغرو في هذا إذ أن الفيروسات العكسية هي فيروسات حمض نووي ريبي ‎RNA viruses‏ في حين أن فيروسات دنا الكبادية فيرروسات حمض نووي مختزل ‎DNA viruses‏ من فصيلة ‎Yo‏ مختلفة اختلافاً جليا وتتضاعف ‎AL replicate‏ مختلفة. ‎¥i4‏

الوصف العام للاختراع طبقا لهدف ‎op) FAY)‏ تشمل طريقة معالجة طبيه لحيوان مصاب بفيروس دنا كبادي إعطاء هذا الحيوان تركيباً يتضمن مقدارا ‎Yad‏ من مركب 767 -ثنائي دي أكسي نكلوسيد ‎-dideoxynucleoside‏ 2,3 فعال بيولوجياً مخلوطآ بحامل مقبول إحيائيا؛ على أن يكون هذا م المركب 707 ثنائي دي أكسي نكلوسيد المذكور ممثلاً بالصيغة: ‎Y‏ ‎NF T <<‏ َل ل ‎R, 001120‏ 11 11 ‎i 11‏ ‎il 83‏ حيث يكون ‎(x)‏ إما ذرة هيدروجين أو مجموعة ألكيل ‎(Ry)‏ أو مجموعة أمين ‎(NI)‏ أو هالوجين؛ أو ‎NHR;‏ أو ‎NR),‏ أو ‎OH‏ أو ‎OR,‏ أو ‎SH‏ أو ‎SR;‏ ‏وتكون (لا) إما ذرة هيدروجين أو مجموعة ألكيل ‎(Ri)‏ أو مجموعة أمين ‎(NH)‏ أو هالوجين ‎0٠ |‏ أو ‎NHR,‏ أو ‎NR):‏ أو ‎OR, sl OH‏ أو ‎SH‏ أو ‎SR;‏ ‏وتكون ‎(Ry)‏ عبارة عن مجموعة ألكيل منخفض به من ‎١‏ إلى 8 ذرات كربون. وتكون (يع) إما ذرة هيدروجين أو استر مقبول ‎(Lia shan) Wikia)‏ أو ملح للاستر المذكور يعطي ‎Ll‏ مقبولا إحيائيا. ‘ شرح مختصر للرسوم ‎yo‏ لقد تم توضيح تجسيدات مفضلة للاختراع بالرسوم حيث: الشكل ‎١‏ : يوضح متحنيات الاستجابة لجرعات من مركبات مختارة من مركبات بيورين وبيريميدين ‎Sr Y‏ دي أكسي نكلوسيدات. "7 ْ

1 ب الشكل ‎Y‏ : عبارة عن تهجين استشراب نقطة ‎dot-blot‏ لحمض الدنا ‎DNA‏ من فيروس ضابط ‎virus control (ve)‏ وخلايا كبدية مصابة بفيروس التهاب كبد البط ب ‎(DHBV) |‏ ومعالجة بالعقار. ا الشكل ؟ : عبارة عن تحليل لبقعة ساوثرن م51 ‎Ua] Southern‏ فيروسي داخلي ‎intracellular viral DNA °‏ فصلت على هلام الاجاروز ‎ANS (agarose gel)‏ الشكل ؛ : عبارة عن تحليل ساوثرن لبقعة دنا فيريون خارجي ‎extracellular virion‏ ‎DNA‏ فصلت على هلام الأجاروز 71,9. الشكل ه : تحليل استشراب نقطة ‎dot-blotanalysis‏ لأمصال مستخلصة من حيوانات مصابة بفيروس التهاب كبد البط ب (01187). الوصف التفصيلى يوضح هذا الشرح المفصل لتجسيدات الاختراع المفضلة اكتشاف أن مركبات الصيغة ‎(V)‏ عوامل مضادة للفيروس تنفع في معالجة الإصابات بفيروس دنا الكبدي. ‎Eg‏ أنه من الأيسر إثبات فاعلية هذه المركبات في الحيوان وخاصة لأن فيروس التهاب كبد البط ب يسلك في البط سلوكاً ‎Tan Silas‏ لسلوك مماثله فيروس التهاب الكبد ب في البشر. ومن ثم فقد أجري ‎ve‏ اختبار هذه المركبات لإثبات فاعليتها غير المتوقعة في بط مصاب بفيروس التهاب كبد البط ب (01287). ويقدر أن هذه المركبات فعالة في مداواة حيوانات مصابة بفيروس دنا كبادي؛ كالبشر وغير البشر. وتشمل الحيوانات غير البشر البط والمرموط ‎woodchucks‏ وسنجاب الأرض بيتشي والكنغرو. وفي دراسات سابقة لعوامل مضادة فيروس» لم يفرق بين فاعليات بيورين ‎CNY‏ ‎Y.‏ ثنائي دي أكسي نكلوسيدات ‎purine 2,3 -dideoxynucleosides‏ وبيريميدين ‎EY JY‏ دي أكسي نكلوسيدات ‎pyrimidine 2,3 -dideoxynucleosides‏ وقد اتضح هذا الفرق في الفاعليات ‎Us‏ في النسق الحالي لفيروس التهاب كبد البط ب. ولم تدرك إدراكا كاملا أساس الفاعلية الانتقائية ضد الفيروس لبيورين 767 -ثنائي دي أكسي تكلوسيدات ‎Wag purine 2,3 -dideoxynucleoside‏ يفترض أن مركبات الصيغة )0 تستطيع أن تربط ‎vo‏ البروتين المتحد بالجيتوم ‎genome linked protein‏ الذي يبدأ تكوين جديلة الذنا السالبة. وبما أن حاص pg v ‘ (Will et al) ‏لتكوين الجديلة الموجبة (ويل ومن معه‎ template ‏الجديلة السالبة تعمل كقالب‎ ‏فالمنع‎ (VAAY ‏مجلد )1< صفحة 111-4504 لسنة‎ (jof Virology ‏مجلة علم الفيروسات‎ ‏في هذه المرحلة المبكرة من تكوين الدنا سيمتع تكوين جديلتي الدنا السالبة والموجبة‎ blockage lad ‏عن تكاثر فيروسات دنا الأخرى.‎ Gla ‏ويختلف تكاثر فيروس دنا الكبادي اختلافاً‎ 5 ‏مماثلة لما يرى في فيروسات‎ reverse transcription ‏ويكمن فرق جلي في مرحلة نسخ عكسي‎ ‏فيروس دنا‎ ASS ‏آلية‎ (Summers and Mason) ‏وقد اكتشف سمرزوماسون‎ retrovirus ‏عكسية‎ ‏مجلد 749؛ صفحة‎ cell’ ‏(الخلية‎ (DHBV) ‏الكبادي أولا في نموذج فيروس التهاب كبد البط ب‎ ‏الأمريكية؛ صفحة‎ PNAS ‏مجلة‎ (Mason et al) ‏وماسون ومن معه‎ «VAY ‏لسنة‎ 15-67 ‏وتبين بعد ذلك أنها تكون مماثلة في فيروس التهاب الكبد ب‎ (VAY ‏لسنة‎ 4001-9892 ٠ ‏صفحة 87/-17؛ لسنة‎ ٠9 alas cvirology ‏علم الفيروسات‎ ¢(Blum et al) ‏(بلوم ومن معه‎ 1-07 ‏صفحة‎ VT ‏مجلد‎ virology ‏الفيروسات‎ ale (Miller et al) ‏وميلر ومن معه‎ «VAS .77-7 4 ‏صفحة‎ OY ‏علم الفيروسات؛ مجلد‎ dae ‏وميلر ومن‎ ١985 ‏لسنة‎ ‏وبعد أن يخترق فيروس دنا الكبادي الخلايا المستهدفة (خلايا الكبد) ينزع غلاف‎ ‏وفي النواة يتحول فيروس الدنا مزدوج الجدل جزئياً إلى‎ nucleus ‏الفيروس ويدخل الدنا النواة‎ ‏صورة دائرية مقفلة تكافثية مشتركة مزدوجة الجدل. وتؤدي الجديلة السالبة دور القالب لتكوين‎ ‏من الجديلة‎ (kb) ‏والذي يكون أكبر ) ؛,؟ ألف قاعدة)‎ pregepomic ‏قبل جيني‎ RNA ‏حمض رنا‎ ‏ألف قاعدة). ويكوّن رنا قبل الجيني عن طريق أنزيم بوليمراز رنا خلوي‎ TY) ‏السالبة‎ ‎ًّ ‏السالبة؛‎ DNA Gall ‏ويعمل رنا قبل الجيني كالقالب لتكوين جديلة‎ cellular RNA polymerase ‏(فاعلية أنزيم نسخ‎ viral DNA polymerase ‏والذي ينجز بواسطة أنزيم بوليمراز الدنا الفيروسي‎ © ‏ويقوم ببدء تكوين الجديلة السالبة؛ بروتين متحد بشكل تكافؤي‎ (reverse transcriptase ‏عكسي‎ ‏صفحة 005-801 لسنة‎ 7١ ‏الخلية؛ مجلد‎ (Robinson ‏وروبنسن‎ Gerlich ‏مشترك (جيرليتش‎ ‏لسنة‎ AVY=110 ‏مجلد £0 صفحة‎ «lug pill ale ‏ومولنار-كيمبر ومن معه مجلة‎ 8٠

H ‏وأثناء التكوين يتحلل رنا قبل الجينوم بفاعلية مماثلة لفاعلية أنزيم ريبونيوكليز‎ .)١ 54 ‏لأنزيم بوليمراز الدنا الفيروسي. وعند إتمام تكوين الجديلة السالبة ينتقل جزء‎ (ribonuclease H) vo

Jr A ‏إلى منطقة ال 082 للجديلة السالبة ويقوم‎ DRI ‏صغير من رنا قبل الجينوم من منطقة ال‎ ‏مجلة علم الفيروسات؛ مجلد‎ (Will et al ‏بدور الممهد لتكوين الجديلة الموجبة (ويل ومن معه‎ ‏وقد لا يتم تكوين الجديلة الموجبة قبل أن تظلف‎ (VIAY ‏صفحة 111-904 لسنة‎ 71 ‏وتصدير جسيمات فيروسية.‎ nucleo eapsids ‏بأغطية نووية بروتينية للفيروس‎

° ومن ثم فالتفسير الممكن لشدة تأثير فيروسات دنا الكبادية الغير متوقع بمركبات بيورين 7 -ثنائي دي أكسي نكلوسيد ‎purine 2,3 -dideoxynucleoside‏ بالمقارنة بمركبات بيريميدين ‎SEY Y‏ دي أكسي نكلوسيدات ‎pyrimidine 2,3 -dideoxynucleosides‏ هو أن بيورين 27 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات ‎purine 2,3 -dideoxynucleosides‏ ترتبط بالبروتين المتحد بالجينوم الذي يبدأ تكوين الجديلة السالبة. وفي فيروس التهاب الكبد ب 18 ‎hepatitis‏

‎٠‏ البشر يكون الطرف "5 في سلسلة تعاقب الجديلة السالبة هو ‎(GAAAAAGT.)‏ 5-4 (ويل ‎(Will‏ ومن معه؛ مجلة علم الفيروسات؛ مجلد ‎(YAAY ud 911-464 dad ia TY‏ ‎5d (GTAATTCTT...) 5‏ في ‎DHBV‏ (ج.م لين .160,734 ومن معه مجلة علم ‎(lag pill‏ مجلد )1 صفحة ‎(FAL -VATY‏ لسنة ‎L(VAAY‏ وفي ‎WS‏ الحالتين فالنكلؤتيد ‎nucleotide‏ عند الطرف 5 الذي يتحد بالبروتين هو بيورين نكلؤتيد ‎purine nucleotide‏ وتدل النتائج الحالية ‎Ne‏ في مزارع الخلايا الكبدية ‎hepatocyte cultures‏ أن 01197 وبالمقارنة بفهيروسات دنا الكبادية الأخرى؛ تكون أشد تأثيرا لبيورين 767 -ثنائي دي أكسي تكلوسيد ‎purine‏ ‏ض ‎Ly 2,3 -dideoxynucleoside‏ لا يقل عن ‎٠٠١‏ إلى ‎٠٠٠١‏ مرة من مركبات بيريميدين 7 ثنائي دي أكسي نكلوسيدات ‎pyrimidine 2,3’ dideoxynucleosides‏ وقد تكون هذه الخطوة الفريدة للاتحاد ببروتين بدء تكوين جديلة حمض الدنا السالبة آلية ممكنة ‎(Als‏ عن طريقها ْ ‎٠‏ يفسر هذا الاكتشاف غير المتوقع. بيد أن من الجائز أن توجد ‎alll‏ أخرى في هذا الصدد. وعلى أية حال فإن نتائج الاختبارات تثبت بجلاء فاعلية مركبات الصيغة ((). ويوحي هذا التأثير الغير متوقع لفيروسات دنا الكبادية بمركبات بيورين 7607-ثنائي دي أكسي نكلوسيدات ‎-dideoxynucleosides‏ 2,3 بدون إحداث أي ضرر على الخلايا العائلة عند تراكيز أعلى بكثير ‎٠٠١(‏ إلى ‎٠٠٠١‏ ضعف) يوحي أن هذه العوامل المضادة للفيروس ‎ve‏ تؤثر على نحو فريد في تكاثر الفيروس. ويتيح فرض منع بروتين بدء تكوين الحمض النووي

‎LE 9‏ الفيروسي بيورين ‎SY JY‏ دي أكسي نكلوسيدات ‎purine 2.31 -dideoxynucleosides‏ تطبيقاً. على نطاق واسع لمداواة إصابات بفيروسات أخرى مثل فيروسات شلل الأطفال ‎polio‏ ‏وفيروسات الغدد ‎adeno‏ التي يعرف أيضآً أن لها ‎Gig pa‏ يبدأ تكوين حمضها النووي. -

‏والمركبات المفيدة في هذا الاختراع تمثلها الصيغة )1( التالية: ‎Q‏ ‎Y‏ ‎NZ <<‏ ‎No‏ | جل ‎N‏ ‎R, 0Clia 0 |‏ ‎i‏ 11 ‎i 11‏ 3 11 وفي هذه الصيغة فإن ‎(X)‏ تكون ذرة هيدروجين ‎(H)‏ أو مجموعة ألكيل ‎(Ry)‏ أو أمين ‎(NEL)‏ أو هالوجين أو (.2138) أو ‎NR):‏ أو ‎OH‏ أو ‎SH‏ أو ‎OR,‏ أو ‎(Y)5 SR‏ تكون ‎H‏ أو مجموعة ب أو ‎NH;‏ أو هالوجين؛ أو ‎NHR;‏ أو ‎NR):‏ أو ‎OH‏ أو ‎OR,‏ أو ‎SH‏ أو ‎(Rt) SR:‏ هي مجموعة ألكيل منخفض به من ‎١‏ إلى 4 ذرات كربون؛ ‎(Re)‏ تكون إما ذرة هيدروجين ‎(H)‏ أو : 0 استر مقبول إحيائياً أو ملح لهذا الاستر يعطي ‎tale‏ مقبولا إحيائياً. 4 2

١ ‏ويبين الجدول التالي أمتلة لمركبات الصيغة )1( المبينة أعلاه:‎ ‏ض‎ ١ ‏الجدول‎ ‎(Y) ‏ما يمثله الرمز‎ X ‏رقم المركب ما يمثله الرمز‎

OH H ١

NH; H 7

NH, ‏إلخ)‎ C,H, CH=R)R y

OH NH, 3 ‏إلخ)‎ C,H; CH;=R)OR NH, o

NH, NH, 1

H NH, ‏لا‎ :

SH NH, A (& C,H; ,CH;=R)NHR NH; 45 ‏مكارت إلخ)‎ CH=R)N(R), NH, 0" (I,Br,CLF) ‏هالوجين‎ |ّ NH, ١١ (J C;Hs,CH;=R) SR NH, yy ‏ض‎ ‎NH (IBr.CLF) ‏هالوجين‎ Vv ‏ض‎ ‎NH; © ‏لغ‎ CH CH=R)NER ve oo

NH, ‏إلخ)‎ C,H; CH=R)N(R), yo

NH, OH 5

NH, (2) ‏بتكن‎ ,CH;=R)OR ١ ّ NH; SH YA

NH, ‏إلخ)‎ CH, CH;=R) SR 14 ‏والهيبوكسانثين‎ guanine ‏والجوانين‎ adenine ‏ومركبات الصيغة 0 المفضلة هي الأدنين‎ ‏من الصيغة 1 أعسلاه.‎ 2,6-diamino purine ‏أو مشتقات 6 7-ثنائي أمينو بيورين‎ hepoxanthine °

‎JE 1‏ أي الذي تكون فيه ‎(X)‏ هيدروجين ‎(H)‏ و(لا) ‎(X) 5 NH;‏ أمينو ‎NH,‏ و(7) هيدروكسيل ‎(OH)‏ ‎(KX)‏ تكون هيدروجين و(7ا) تكون هيدروكسيل؛ ‎(X)‏ تكون ‎eNH, (Y) NH,‏ الترتيب. ويؤدي كثير من المركبات أعلاه المدرجة في الجدول 1 وظيفة عقاقير تمهيدية ‎pro-drugs‏ التي تؤيض في الأحياء إلى 07 ‎SE‏ دي أكسي نكلوسيدات الأشد فاعلية مثل ‎SE TY‏ دي ° أكسي جو انوسين ‎dideoxy guanosine‏ 3 2. وقد يكون ‎(Re)‏ ذرة هيدروجين ليكوّن هيدروكسيل أو مجموعة أسيل أو استراته أو ض أملاح إستر والتي تكون استرات منهاء وأملاح الاسترات أو أملاح بذاتها على أن تكون كلها مقبولة إحيائياً. وقد يكون هذا الاستر مستقيم أو متفرع السلسلة. والمفضل أن يكون الاستر قصير طول السلسلة فيه من ‎١‏ إلى ؛ ذرات كربون. ويمكن أن يعطى مركب أو أكثر من هذه ‎٠‏ المركبات ليؤمن تركيز فعال في تيار الدم ‎JH‏ من ‎5٠‏ ميكروجم/مل (ميكروجرام في المليلتر)؛ ومدى التركيز المفضل للجرعة من ‎١,١‏ إلى ‎٠١‏ ميكروجم/مل. وتعطى هذه التراكيب بالأساليب المعتادة ‎Jie‏ أقراص وسوائل تؤخذ عن طريق الفم أو (لبوس) تحميلة ‎suppository‏ ‏أو سوائل حقن أو رذاذ استنثاق ‎aerosol‏ إلخ. إن غياب العامل الفعال المضاد للفيروس لعلاج التهاب الكبد الفيروسي النوع ب قد ‎ve‏ حدا إلى استعمال مزارع خلايا كبد البط لزراعة ‎DHBV‏ ولاختبار فاعلية عوامل المعالجة الكيميائية ‎chemotherapeutic‏ ضد الفيروس. ومن ثم تستعمل مزارع خلايا أكباد بط لزراعة ض 77 واختبار فاعلية عوامل المعالجة الكيميائية ضد الفيروس. وبرغم أن الطرق تختصر ض شرح معالجة ‎DHBY‏ فإنه ينبغي إدراك أن طريقة المعالجة هذه تكون فعالة ضد فيروسات تتكاثر بآلية تكاثر مماثلة. ومن ثم فالغرض من هذه الأمثلة التالية إيضاح جوانب شتى 0 © © ا للاختراع على سبيل التمثيل وليس لحصر هدف الاختراع إذ أن هدف الاختراع محدد بجلاء في عناصر الحماية. وقد تم إعداد (إنشاء) منحنيات الاستجابة لجرعات بيورين 767 -ثتائي دي أكسي ْ نكلوسيدات ‎purine 2,3 -dideoxynucleosides‏ وبيريميدين ‎GS Y‏ دي أكسي نكلوسيدات ‎pyrimidine 2,3 -dideoxynucleosides‏ باستعمال مجموعة خلايا كبدية مصابة بفيروس التهاب ‎vo‏ كبد البط ‎DHBV‏ وقد أعدت مزارع الخلايا الكبدية المصابة بفيروس 011877 بالكيفية التي

‎os "7‏ وصفت في مثال ‎.١‏ وأضيفت مماثلات ثنائي دي أكسي تكلوسيد إلى أوساط ‎media‏ مزارع الخلايا الكبدية في اليوم الثاني وحفظت في المزارع مع تغيير الأوساط كل يومين. وفي اليوم السادس عشر استخلص حمض الدنا من الخلايا وأجري استشراب نقط الفيروس باستخدام مسبار ‎DHBV probe‏ موسوم (معلم) بفوسفور مشع ‎(PP)‏ وحسب النشاط الإشعاعي لكل نقطة كميآً بقطع النقطة وإحصاء نشاطها الإشعاعي. وفيما يلي تفسير المختصرات المستعملة في الشكل ‎١‏ لتمييز منحنيات الاستجابة للجرعات: ‎ddA‏ = 7 -ثنائي دي أكسي أدينوزين ‎-dideoxyadenosine‏ 2,3 6 - 7 -ثنائي دي أكسي جوانوزين ‎-dideoxyguanosine‏ 2',3 ‎dar‏ > 727 -ثنائي دي أكسي إينوسين ‎-dideoxyinosine‏ 2,3 ‎ddDAPR‏ = ١7-ثنائي‏ أمينوبيورين ‎diaminopurine 2 3 -dideoxyriboside vy‏ -2,6 ثنائي دي أكسي ريبوسيد 7 > 207 -ثنائي ‎ga‏ أكسي ثايمدين ‎-dideoxythymidine‏ "2,3 ‎SET = ddC‏ دي أكسي سايتيدين ‎-dideoxycytidine‏ 2,3 ومن النتائج المبينة في الشكل ‎١‏ حسبت تراكيز نظير ‎(Silas)‏ النكلوسيد اللازمة لتثبيط تكاثر الفيروس بنسبة ‎(IDs) 78 ٠‏ فكانت كما يلي: ض ‎١.077 ٠‏ ميكروجم/مل بالنسبة ل ‎EYE‏ أمينو بيورين 07 -ثنائي دي أكسي ريبوسيد؛ ض و0٠‏ ميكروجم/مل بالنسبة ل 707-ثنائي دي أكسي جوانوزين و17 ميكروجم/مسل بالنسبة ل 77 -ثنائي دي أكسي أدينوزين» 1,05 ميكروجم/مل بالنسبة ل 77 -ثنائي دي أكسي إينوزين؛ و٠؛‏ ميكروجم/مل لأجل 77 ‎SUE‏ دي أكسي سايتيدين. ولم يشبط 727 - ثنائي دي أكسي ثايميدين تكاثر ‎DHBV‏ : ‎Vo‏ | مثال ‎٠ ١‏ عرضت أفراخ بط حديثة الولادة لعدوى فيروس ‎DHBV‏ وبعد مضي ‎Y=0‏ أيام على الإصابة أخذت عينات دم من أفراخ البط وفحت ‎Bing‏ عن ‎DHBV DNA‏ باستخدام تهجين النقط 0 ض بمسبار دنا متخصص (ماسون ‎(Mason‏ ومن معه محاضر أعمال أكاديمية العلوم الطبيعية ض ‎via‏

7 3 ‎¢(Proc, Natl.

Acad.

Sci)‏ الولايات المتحدة الأمريكية؛ مجلد ‎VA‏ صفحة 50601-79917 لسنة ‎)١ 7‏ ونزعت الأكباد من أفراخ البط التي أعطت نتيجة موجبة في استشراب النقط ‎dot-blot‏ ‏واستعملت لإنتاج مزارع خلايا كبدية أولية مصابة بعدوى فيروس 01187 كما وصفت فيما سبق (تتلمان ‎(Tuttleman‏ ومن معه ‎Aas‏ علم الفيروسات؛ مجلد ‎OA‏ صفحة 5-17 ْ( ‎٠‏ وبعذ ‎٠‏ نمو المزرعة يومين أضيفت العوامل المضادة للفيروس إلى أوساط المزارع. غيرت الأوساط كل يومين وأزيلت الخلايا عند أوقات مختارة واستخلص الدنا الكلي.

وبع (وضع على شكل بقع) ‎Lal‏ على ورق نيتروسليولوز ‎nitrocellulose‏ وسبر

بمسبار ‎DHBY DNA‏ الموسوم بفسفورا"" مشع ‎Gay (2P)‏ للكيفية التالية: تم استخلاص ‎ball‏ من خلايا أكباد مصابة بعدوى ‎DHBV‏ وبقسشع على مرشح ‎٠‏ نيتروسليلوزي واستعمل المسبار الموسوم بفسفور” المشع والذي وصف أعلاه ‎Penick translated-DHBV DNA (pDH-010=DHBV)‏ واستخلص ‎Gall‏ من أطباق زراعة بقطر ‎+١‏ سم على فترات متباينة عقب الزراعة. ففي المجموعة الضابطة المصابة بالفيروس ‎(VC)‏ بلا علاج حصدت الخلايا في الأيام ‎Y‏ و 7 و 48و ١٠و‏ 4١و‏ 8١و ‎Cal Gg Ye‏ نسختان من عينات الأيام ‎١6‏ و ‎١8‏ و 70. أما في مزارع المجاميع المعالجة بالعقاقير فقد ‎ve‏ حصدث الخلايا في الأيام ‎A‏ و ‎١4‏ و ‎Ye‏ وفي الشكل 7 يظهر تدرج الأيام من الشمال إلى اليمين. وأضيفت العقاقير إلى المزارع في اليوم الثاني عقب الزراعة؛ ‎co Bing‏ طوال تغيرات الأوساط كل يومين. وقد بينت التراكيز المستعملة (ميكروجم/مل) في الشكل ؟ للعقاقير 27 -ثنائي دي أكسي ثايميدين ‎(AT)‏ و77 ‎AE‏ دي أكسي سايتيدين )400(

وأدنين أرابينوسيد ‎(ara A)‏ و77 -ثنائي دي أكسي أدينوزين ‎(ddA)‏ و77 -ثنائي دي أكسي ْ ‎Yo‏ جوانوزين (400). واستخلص كل الدنا الذي يوجد داخل الخلايا من الخلايا بإستعمال طريقة الاستخلاص القياسية بالفينول ‎٠‏ وتم حل ‎lysed‏ الخلايا في طبق بتري ‎Petri dish‏ قطره 7 سم (حوالي ‎"axe‏ خلية) في محلول تحلل منظم الأس الهييدروجيني ‎lysis buffer‏ يحتوي ‎SDS Ly‏ و١٠٠١‏ مليجزيئي ‎(mM)‏ من ‎Tris-HCI‏ أس هيدروجيني ‎eA‏ و ‎٠١‏ مليجزيئي ‎EDTA‏ 5 © مليجزيئي ‎EGTA‏ 5 104 مليجزيئي ‎NaCl‏ وهضمت حلاله ‎lysate‏ الخلايا ‎ve‏ بمقدار 00+ مج/مل أنزيم بروناز 8 (متيسر من شركة سيجما) عند ‎PY‏ درجة مئوية لمدة

J VE

ساعتين ثم انتزع البروتين بالاستخلاص بحجم مساو من فينول مشبع بمحلول ‎Yo‏ مليجزيئي ‎(ul «Tris-HCI‏ هيدروجيني 0,¥ ‎(pH=7.5)‏ 04,+ مليجزيئي ‎7٠,١ 5 EDTA‏ -هيدروكسي- كينولين #صنام0ن:8-070:0:70. وأضيف محلول خلات أمونيوم مركز [أس هيدروجيني مولا ‎Y,0)‏ جزيئي)] إلى الطبقة المائية لينتج محلول خلات أمونيوم تركيزه 78 جزيئي ورسبت ‎٠‏ الأحماض النووية بإضافة حجمين من إيثانول ‎JY er‏ وغسل قرص الحمض النووي بالإيثانول وجفف. وأذيب الدنا في محلول يحتوي ‎VY,0‏ مليجزيثي ‎(Tris-HCI‏ أس هيدروجيني 05 و١٠‏ مليجزيني ‎EDTA‏ و١٠77‏ جليسرول و ‎70,0٠‏ أزرق البروموفيتول ‎bromophenol‏ ‎blue‏ وبقع جزء من ‎(one twelfth) fe 3a ١١‏ من عينة الدنا على النيتروسليولوز للتحليل باستشراب النقطة. وتم شراء كل من ‎ddA‏ 106؛ ‎ddC‏ و ‎ddT‏ من شركة فارمسيا ‎pharmacia‏ ‎٠‏ وبالإمكان تحضير ‎JECT‏ أمينو بيورين ‎SEY‏ دي أكسي-ريبوسيد [أو 7 -ثنائي أمينو-4-؛7-ثنائي دي أكسي -7-8- جليسرو-بنتوفهورانوزيل)-بيورين ‎(ddDAPR) [2,6-diamino-9-2,3-dideoxy-B-D-glycero-pentofuranosoyl-purine‏ بأسلوب طبق ‎Bias‏ لتحويل فعال للأدينوزين ‎adenosine‏ إلى مشتقه ‎ddAdo‏ (روبينز ومن معه تتراهميدرون لترزء؛ مجلد ‎(V0‏ صفحة ‎775-77١‏ لسنة ‎(Robins et al. Tetrahedron Lett., 25, 367- ١٠9445‏ ‎١‏ 1984 ,370( وهانسكي وروبينز تتراهيدرون ‎il‏ مجلد ‎YW‏ صفحة 47498-/479؛ لسنة ‎((Hansske and Robins, Tetrahedron Lett.,26, 4295-4298,1985) ١ Ao )‏ ول ‎ddDAPR‏ ض المتبلور درجة انصهار 144 إلى 190 درجة مثوية؛ وطيف كتلة ك/شحنة

MS m/z 250.1180 [M+(C1oH14Ne0)=250.1178] وقد أثبت هذا النسق شدة التأثر العالية غير المتوقعة لفيروس ‎DHBV‏ بكل من َ ض © 727 -ثنائي دي أكسي أدينوزين ‎(ddA)‏ و77 -ثنائي ذي أكسي جوانوزين (416). وكما يظهر في الشكل ؟ فإن 727 ثنائي دي أكسي ثايميدين ‎(ddT)‏ لم يثبط تكوين ‎DHBV DNA‏ حتى عندما بلغ تركيزه ‎٠١‏ ميكروجم/مل. ويثبط 767 -ثنائي دي أكسي سايتيدين إنتاج الدنا الفيروسي بمقدار 707 تقريبا عند تركيز ‎٠١‏ ميكروجم/مل لكن قدرته على التثبيط ضئيلة عند تركيز ‎١‏ ميكروجم/مل. ويثبط أدنين أرابينوز عند تركيز ‎٠١‏ ميكروجسم/مل تكوين ‎DHBV-DNA vo‏ بحوالي 757. أما كل من ‎ddG 5 ddA‏ فيثبط تكوين ال ‎DHBV-DNA‏ بما يزيد 4" ض

SL Yeo ‏ميكروجم/مل. وهذه النتائج ثابتة في نتائج تجارب ثلاثية (مكررة‎ ١ ‏على 794 عند تركيز‎ ‏ثلاث مرات). ينظر الجدول 7 التالي:‎ . ‏الجدول ؟‎ ‏مقارنة فاعلية بيورين 767 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات وفاعلية بيريميدين 707 -ثنائي دي أكسي‎ ‏م | نكلوسيدات في تثبيط تكاثر فيروس دنا الكبدي.‎ ‏لتهجين النقط في اليوم العشرين بعد الزراعة.‎ (densitometry scans) ‏على أساس مسح قياس الكثافة‎ ‏المركب المقارن النسبة المثوية للتثبيط‎ / ‏أوساط ضابطة بلا عقار صفر‎ iy ‏ميكروجم/مل)‎ 1 +) 7 1 ‏ميكروجم/مل) صفر‎ 1) ddC

Lov ‏ميكروجم/مل)‎ ٠١( ddC ‏ميكروجم/مل) برا‎ ٠١( ara A 7959 ‏ميكروجم/مل) فوق‎ V+) ddA 734 ‏ميكروجم/مل) فوق‎ ١( ddA 794 ‏ميكروجم/مل) فوق‎ ٠١( 6 734 ‏ميك روجم/مل) فوق‎ ١( 6 (*) ‏ميكروجم/مل) هذ‎ ١( ‏-ثنائي دي أكسي ريبوسيد‎ FY ‏-ثنائي إيمينو بيورين‎ 7 ٍ (*) 741 ‏ميكروجم/مل)‎ ١( 7 ‏لا تظهر بقع تهجين المركبين في الشكل ؟‎ )*( ‏مثال ؟‎ : ‏دي‎ AEYEY ‏أن فاعلية مماثلات بيورين‎ southern ‏أكد تحليل استشراب ساوثرون‎ ‏كما يظهر في الشكل . وقد‎ DHBV DNA ‏الفيروس متخصصة ضد‎ dia ‏أكسي نكلوسيد‎ ١ ‏جمعت هذه المعلومات بالكيفية التالية:‎ ‏فيروسي داخل الخلايا على هلام أجاروز‎ DNA Lal ‏ثم فصل تحليل استشراب ساوثرن‎ ‏في‎ (DHBV) ‏ب‎ Jap ‏واستخلص الدنا من خلايا كبدية مضابة بفيروس التهاب أكباد‎ 6 ‏وكما يظهر في‎ Lane ‏طبق قطره 1 سم ووضع خمس المقدار الكلي من الدنا على كل درب‎ ‏وفي اليوم.‎ )١ ‏استخلص دنا المجموعة الضابطة الفيروسية في اليوم الثاني (الدرب‎ YO ‏الشكل‎ ١

Jy A ‏(الدرب ؛). وحصدت المجاميع‎ Yeo ‏(الدرب “*) وفي اليوم‎ VE ‏وفي اليوم‎ (Y ‏الثامن (الدرب‎ ‏بعد الزراعة في الأطباق. وكانت عينات الدنا من‎ ٠١و‎ VE ‏المعالجة بالعقار في اليومين‎ (0 ‏(الدرب‎ VE ‏ميكروجم/مل) اليوم‎ ٠١( ddA ‏الخلايا الكبدية المعالجة بعقار كما يلي:‎ ‏(الدرب‎ ٠١ ‏واليوم‎ (V ‏(الدرب‎ VE ‏ميكروجم/مل) اليوم‎ ١( ddA )١ ‏(الدرب‎ Ye ‏واليوم‎ ‎١( ‏و0046‎ )٠١ ‏(الدرب‎ Yo ‏(الدرب 3( واليوم‎ VE ‏ميكروجم/مل) اليوم‎ ٠١( ddG (A © ‏الدنا‎ pled com Zag ‏وقد‎ (VY ‏(الدرب‎ Yo ‏واليوم‎ )١١ ‏(الدرب‎ VE ‏ميكروجم/مل) اليوم‎ covalently ‏ودائرية مقفلة إسهامية‎ (RC) Relaxed Circular ‏في الشكل ؟ وهي دائرية مرتخية‎ ‏وقد تم الحصول على حجم‎ ٠ (SS) single-stranded ‏ومفرد الجديلة‎ (CCC) closed circular ‏بكتيرياً‎ agile a” aga Hin d 111 7 ‏من هيند‎ (Kilobases) ‏(بآلاف القواعد)‎ markers ‏الواسمات‎ ‎(bacteriophage) DNA ‏حمض‎ laal ٠ ‏والدائرية المقفلة الإسهامية‎ (RC) ‏الدائرية المرتخية‎ DHBV DNA ‏وقد زادت أشكال‎ ddG ‏أو‎ ddA ‏ويثبط‎ DHBV ‏كبدية مصابة ب‎ LDA ‏بالحضانة في‎ (SS) ‏ومفرد الجديلة‎ (CCC) ‏في التجارب الثلاثية. وقد ثبط‎ ddA ‏وكان 006 أشد فاعلية من‎ .01137 DNA ‏تكوين‎ ‏ميكروجم/مل. وحدثت‎ ١ ‏عند تركيز‎ 011817 DNA ‏تكوين جميع أشكال‎ Tan ‏بشكل قوي‎ ddA ‏إلى اليوم‎ ١6 ‏من اليوم‎ ddA ‏الخلايا الكبدية المعالجة بالعقار‎ ERC DNA ‏زيادة طفيفة في‎ |.

DHBV DNA ‏في جميع أشكال‎ Lalli 006 ‏ومن جهة أخرى فقد أحدثت المعالجة بالعقار‎ .٠ ‏عامل مضاد للفيروس أشد فاعلية‎ ddG ‏في اليوم الثاني. وعلى أساس هذه الدراسات نرى أن‎ 0 ad ‏و 106 يعتبر عامل مضاد للفيروس‎ ddA ‏بيد أن كلا من‎ DHBV ‏في علاج‎ ddA ‏من‎ : ‏أو مماثلات التكلوسيد الأخرى مثل أدنين‎ AT ‏و‎ ddC ‏فاعلية بكثير من‎ ْ ‏دي‎ J JY ‏وفي تجارب مماثلة استعمل فيها العقاران‎ .adenine arabinoside ‏أرابينوسيد‎ 7

SEY ‏-ثنائي دي أكسي ريبوسيد‎ JY $23 -dideoxy inosine (ddI) ‏أكسي إينوسين‎ ‏تبين أن هذين العقارين‎ 2,6-diamino purine 2 ,3 -dideoxyriboside (ddDAPR) ‏أمينو بيورين‎ ‏هما‎ purine 2,3 -dideoxynucleosides ‏-ثنائي دي أكسي نكلوسيدات‎ + ١ ‏من مركبات بيورين‎ ١ ‏(تثبيط فوق 746 عند‎ DHBV ‏ضد‎ Ta a ‏أيضاً عاملان مضادان للفيروس فعالان‎ ‏يتم نزعها‎ ddDAPR ‏ميكروجم/مل) انظر جدول 7. ومن المعروف أن مجاميع أمين‎ Yo ّ Yaa

7 VY ‏(بلزاريني ومن معه‎ adenosine deaminase ‏بواسطة أنتزيم نزع الأمين أدينوزين‎ (Balzarini » ‏يلد‎ ١5/87 ‏صفحة 771-754 لسنة‎ ٠46 ‏بيوكيم. بيوفيز. رس. كوميون؛ مجلد‎ ‏وبلزايني ومن معه المرجع نفسه‎ Biochem, Biophs. Res. Commun.145, 269-276, 1987) . ((Balzarini et al, Biochem, Biophs. Res. Commun. 145, 277-283, 1987) YAY=YVY ‏صفحات‎ ‏فعال‎ Prodrug ‏يعمل كأنه عقار تمهيدي‎ ddDAPR ‏ومن ثم فمن المرجح أنه وبشكل مشابه أن‎ ٠ .000 ‏لعقار‎ ‏مثال ؟‎ ْ ‏يبين الشكل ؛ قدرة مماثلات 67 -ثنائي دي أكسي نكلوسيد على تثبيط إنتاج‎ ‏خارج الخلايا. وقد فصل تحليل استشراب ساوثرن لدنا فيريون خارج الخلايا على‎ 17 ‏بعد‎ Ye ‏إلى اليوم‎ ١١ ‏وجمعت أوساط المزارع من اليوم‎ .71,9 agarose gel ‏هلام أجاروز‎ ٠ ‏بأتزيم بروناز ووضع الدنا‎ pelleted virions ‏الزراعة في الأطباق. وهضمت فيريونات محببة‎ ‏عينة مجموعة ضابطة‎ )١ all) 4 ‏من العينة كلها على كل درب. وكما مبين في الشكل‎ ) ‏و(الدرب‎ ddA ‏ميكروجم/مل من‎ ١ ‏فيروسية و(الدرب 7) عينة خلايا كبدية معالجة بمقدار‎ ‏خلايا كبدية‎ de ‏و(الدرب ؛)‎ ddG ‏ميكروجم/مل من‎ ١ ‏خلايا كبدية معالجة بمقدار‎ die ‏ميكروجم/مل‎ ١ ‏ميكروجم/مل من 407 و(الدرب 0( عينة خلايا كبدية بمقدار‎ ١ ‏معالجة بمقدار‎ 16 ‏الشكل ؛ على دنا في شكل دائري مرتخي.‎ ARC ‏ويدل الرمز‎ .006 ge ‏أو 6 إنتاج الفيروس خارج الخلايا بشكل ملحوظ عند‎ ddA ‏ويخفض‎ ‏و 040 فقد فشلا في تثبيط إنتاج القيروس خارج الخلايا عند‎ ddT ‏ميكروجم/مل؛ ض أما‎ ١ / ‏ميكروجم/مل.‎ ١ ‏عند‎ DHBV LS ‏دي أكسي نكلوسيدات‎ A= CY ‏وتثبط مركبات بيورين‎ Ye ‏بمركبات بيورين‎ DHBV ‏استعمالها بتراكيز منخفضة. ولا تعرف آلية التثبيط الانتقائي لتكاثر‎ . يسكأ ‏-ثنائي دي أكسي تنكلوسيدات؛ بالمقارنة بمركبات بيريميدين 707 -ثنائي دي‎ 7 ‏خلف هذا‎ ABU ‏تقدم‎ Leg ‏قد ذكر‎ (BY) ‏على‎ Tian ‏تكلوسيدات. بيد أن ثم تفسيزآ واحدآً‎ ‏الاكتشاف. وثم آلية ممكنة أخرى هي أن مركبات بيريميدين 77 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات‎ ‏دي أكسي نكلوسيدات في‎ Sr ١ ‏بكفاءة؛ مثل مركبات بيورين‎ phosphorylated ‏لاتتفسفر‎ Yo

Yaa pr YA ‏لمركبات بيورين 77 -ثنائي دي أكسي‎ Tan ‏بيد أنه حتى بفرض فسفرة جيدة‎ dad) ‏خلايا أكباد‎ compete ‏دي أكسي تكلوسيد ثلاثي الفوسفات أن ينافس‎ SEY ‏نكلوسيدات؛ فعلى بيورين‎ ‏ودي أكسي-أدينوزين ثلاثي الفوسفات‎ (dGTP) ‏ثلاثي دي أكسي-جوانوزين ثلاثي الفوسفات‎ ‏لتثبيط أنزيم بوليمراز دنا الفيروسي. بيد أن كفاءة التثبيط الملاحظة في هذه التجارب‎ (dATP) ‏م توحي بآلية فريدة لمفعول مركبات بيورين 707 ثنائي نكلوسيدات. كذلك ينبغي أن تثبط‎ (HBV) ‏دي أكسي نكلوسيد تكاثر فيروس التهاب الكبد النوع ب‎ JU TY ‏مماثلات بيورين‎ ‏انتقائياً. فعلى أساس آلية التكاثر المماثلة جد يتوقع أن يبدي فيروس التهاب الكبد النوع‎ Uap ‏بهذه العوامل المضادة للفيرروس. وتثبت طريقة المداواة هذه فاعليتها‎ Silas Til (HBV) ‏ب‎ ‎(HBV) ‏ضد فيروسات تتكاثر بكيفية مماثلة لتكاثر 011837 مثل فيروس التهاب الكبد النوع ب‎ ‏في البشر.‎ ٠ ‏دي أكسي نكلوسيد من الصيغة 1 على صورة‎ AE 707 ‏ويجوز أن تعطى مماثلات‎ ‏إستر مقبول إحيائياً أو ملح لهذا الاستر أو ملح مقبول إحيائياً. ويجوز أن تعطى مركبات هذا‎

Goh ‏الاختراع بأساليب العلاج المعتادة بما فيها عن طريق الفم أو الشرج أو عن‎ ‏الحقن (عن طريق الحقن في الوريد أو في العضل أو تحت الجلد) أو باستتنشاق رذاذ‎ .aerosol inhalation | ٠ ‏ومن المعلوم أن مركبات بيورين 767 ثنائي دي أكسي نكلوسيدات عرضة للانفصام‎ ‏عند قيم للأس الهيدروجيني الحمضي كتلك التي توجد عادة في المعدة. ومن ثم ينبغي‎ cleavage ‏ض ض‎ ‏أن تكون التركيبة المعدة للتناول بالفم قادرة على تجاوز الأس الهيدروجيني الحمضي في‎ . ' 0 ‏المعدة. ويجوز أن يتحقق هذا باستعمال كبسولة ينطلق منها العقار بعد زمن معين أو بتعديل‎ ‏الاس الهيدروجيني المعدي قبل تناول بيورين 767 ثنائي دي أكسي نكلوسيدات عن طريق‎ © ‏الفم.‎ ‏ولإعطاء بيورين 767 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات عن طريق الحقن فإنه ينبغي أن‎ ٠ ‏للحقن مائية أو لا مائية. وبما أن هذه المركبات تذوب في‎ ALE ‏تعد في صورة محاليل معقمة‎ . ‏الماء فمن الأرجح أن تكون التركيبة الأمثل للحقن في الوريد هو محلول مائي متساوي‎

‎pe 19 |‏ الاسموزية ‎isotonic‏ متعادل الأس الهيدروجيني يحتوي ‎buffer La” ais‏ مناسباً ‎le‏ يمنع تكاثر البكتيريا مقبولاً. ض ومن المنشود بلوغ مستويات عقار في بلازما الدم من ‎١‏ إلى ‎٠١‏ ميكروجم/مل. وقد تقتضي بعض الحالات مستويات أعلى بيد أنه من المتوقع أن مستويات الإعطاء لن تتجاوز ض ‎١ ٠‏ ميكروجم/مل في تيار الدم. وعلى أساس الدراسات المنشورة لمركبات 707 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات أخرى؛ ففي الوسع بسهولة بلوغ المستويات الأدنى التي تقع في المدى من ‎١‏ إلى ‎٠١‏ ميكروجم/مل بإعطاء مقدار من ‎9-١‏ ملغم/كج (مليجرام من العقار لكل كيلوجرام من وزن الجسم) عن طريق الفم بشرط مراعاة حدود الحمضية المتغيرة ‎Tability‏ التي ذكرت فيما تقدم. وأساس هذا ‎٠‏ هو الخبرة المعروفة بمماثلات نكلوسيد أخرى مثل ‎Ya JY‏ -دي أكسي تايميدين ‎(AZT)‏ ‎-azido-3 -deoxythymidine‏ 3 الذي يعطي ذروة مستويات بلازما من ‎١‏ ميكروجم/مل بعد تشريب ‎١‏ ملغم/كج من العقار في الوريد أو إعطاء 7 ملغم/كج من العقار عن طريق ‎al‏ ‎halls‏ تتحقق مستويات بلازما فعالة في تثبيط ‎ASS‏ فيروس نقص المناعة في البشر ‎(HIV)‏ ‏بواسطة 040 مباشرة عقب إعطاء العقار عن طريق الفم. ‎vo‏ وقد اختبرت سمية مركبات بيورين 767 -ثنائي دي أكسي نكلوسيدات في أكباد البط 0 وخلايا كلية القرد (فيرو) فتبين أنه لم يكتشف نقص في حيوية الخلايا بعد تعرضها على مدى ‎٠١-٠ |‏ أيام لجرعات من ‎ddA‏ أو 400 بلغت ‎٠٠١‏ ميكروجم/مل. وكما هو معلوم فقد فحضصضت ض خطوط خلية كرية لمفاوية ‎lymphocyte‏ كثيرة من قبل لمعرفة مدى حيويتها وأدائها لوظائفها في وجود ‎SEY‏ دي أكسي نكلوسيدات. ولم تظهر خطوط الخلايا هذه نقصاً في الحيوية ْ ‎ve‏ والوظيفة. ولم تظهر خطوط الخلية هذه ‎Lali‏ في الحيوية وفقط أظهرت ‎TS‏ معتدلا لوظيفة المناعة حتى عندما تعرضت لجرعات ‎٠٠١‏ ميكروجم/مل من 707-ثائي دي أكسي نكلوسيدات (ميتسويا ومن معه ‎PNAS‏ مجلد ‎(AY‏ صفحات ‎١86 Lid 2٠٠١-7095‏ ‎(Mitsuya et al, PNAS, 82,7096-7 100, 1985)‏ . ‎Yd |‏

ٍ Y. ‏مثال ؛‎ ‏أجريت اختبارات إضافية للتحقق من الفاعلية في الأحياء. فقد عولجت أربع بطات‎ ‏بكينية ثبت أنها مريضة بعدوى مزمنة من فيروس التهاب كبد البط النوع ب (011817)؛‎ ‏دي أكسي ريبوسيد وحقنت هذه الحيوانات‎ AE 767 ‏بيورين‎ sind JETT ‏بالعقار‎ ‏ملغم/كج من العقار حقنتين يومياً في العضل لمدة أسبوعين. وقد أحدثت هذه‎ ٠١ ‏م بمقدار‎ ‏المعالجة تطهيراً سريعاً لأمصال هذه الحيوانات من الفيروس كما يظهر في الشكل 0+ ويبين‎ ‏الصف "أ" في الشكل 0 نتائج فحص أمصال 0 حيوانات قبل المعالجة في صورة بقع متشربة‎ ‏يتضح أن الحيوانات الخمسة تعاني من إصابة مزمنة بفيروس التهاب كبد البط‎ diay .20 ‏ض‎ ‏ب (011377. وعولجت أربعة حيوانات )£71( ويبين الصف "ب" نتائج المعالجة بعد أسبوع‎ ‏واحدء وكما يمكن مشاهدته في هذا الشكل فإن المعالجة قد طهرت أمصال الحيوانات الأربعة‎ > bled dai’ ‏تطهيراً كاملاً من الفيروس في أسبوع واحد. أما البطة التي لم تعالج (رقم 0( فلم‎ ‏في هذا الوقت. ويبين الصف "ج نتائج الفحص في صورة بقع متشربة بعد أسبوعين من"‎ ‏العلاج. لقد طهرت أمصال البطات الأربع المعالجة تطهيراً كاملاً من الفيروس. أما البطة‎ ‏(رقم ©( قد بقيت نتائج فحصها موجبة بشدة بعد أسبوعين (الصف ج‎ control animal ‏الضابطة‎ ‎(© ‏العمود‎ yo ‏وقد تحققنا‎ .ddG ‏سريعاً إلى‎ metabolized (a3 ddDAPR ‏كذلك فقد تأكدنا من أن‎ 0 ‏وقد دلت نتائجنا‎ .ddG ‏إلى‎ ddDAPR ‏من ذلك باستعمال دم كامل من بطة وقياس معدل تحول‎ ‏في بحر © دقائق.‎ ddG ‏قد تأيض إلى‎ ddDAPR ‏على أن ما يزيد على 0 من‎ ‏في أنابيب الاختبار‎ Tas ‏فعال‎ ddDAPR ‏وتقدم هذه الاختبارات تعزيزآً رائعاً لحقيقة أن‎ ‏للعقار‎ prodrug ‏على حد سواء وأن من المرجح أنه عقار تمهيدي‎ in vivo ‏وفي .الأحياء‎ in vitro Y. .006 ‏ومع أنه وصفت تجسيدات مفصلة للاختراع وصفآ تفصيلياً فيما تقدم فإن المتمرسون‎ : ‏الاختراع‎ Tae ‏بهذه التقنية سيدركون أنه بالإمكان إجراء تعديلات شتى عليها دون الخروج عن‎ ‏أو نطاقه المحدد في عناصر الحماية المرفقة.‎

CY

Claims (1)

1. 2 Yh ‏عناصر الحماية‎ ‏الكبدي‎ Lal ‏طريقة لمعالجة حيوان طبياً بحاجة لمثل هذه الطريقة ومصاب بفيروس‎ -١ ١ ‏يكون الحيوان المذكور عرضة للإصابة بفيروس الدنا الكبدي‎ Cua chepadnavirus ‏المذكور» تشتمل على إعطاء هذا الحيوان تركيبة تشتمل على مقدار فعال‎ hepadnavirus tv ‏فعال إحيائياً بالاقتران مع‎ 2,3 -dideoxynucleoside ‏دي أكسي نكلوسيد‎ SEY JY ‏من‎ 3 2,3 ‏دي أكسي نكلوسيد‎ SEY SY ‏ويمثل مركب‎ Lila) ‏حامل مقبول‎ 0 ‏المذكور بالصيغة:‎ dideoxynucleoside 1 7 N ‏ع‎ ‎| | v oA R,CCH; 0 H H H H H H ‏والذي فيها تكون كل من 7 و7 كما يلي:‎ A Y X OH H ١ NH, H Y ; OH NH, 1

   (C.Hs «CH; = R) OR NH, 1 NH, NH, © H NH, 1 SH NH, ‏ل‎ (C;Hs «CH; = R) NHR NH, A (I Br «CI F) Halogen ‏هالوجين‎ NH, 4 (C;Hs «CH; = R) SR NH, Ye oF YY ‎٠‏ تكون 17 أو مجموعة أسيل 1رهه تحتوي من ‎١‏ إلى ؛ ذرات كربون مما يشكل إستر

   ‎: .. ‏المذكور ليوفر ملح مقبول إحيائياً.‎ ester ‏مقبول إحيائياً أو ملح من الإستر‎ ester ١ ‏المذكور‎ hapadnavirus ‏الكبدي‎ Ball ‏حيث يكون فيروس‎ )١( ‏لمطلب الحماية‎ Wy ‏طريقة‎ -”7 ١

   ‎| .hepatitis B virus ‏عبارة عن فيروس التهاب الكبد ب‎ Y ‎HOS Ry ‏لمطلب الحماية )1( حيث‎ Gp ‏طريقة‎ -* ٠ ‎١‏ ؛- طريقة وفقاً لمطلب الحماية ‎)١(‏ حيث ‎Ry‏ عبارة عن إستر ‎ester‏ مقبول إحيائياً. ‎OCH; ‏تكون‎ Ys NH, ‏تكون‎ X ‏حيث‎ oF) ‏لمطلب الحماية‎ Wy ‏طريقة‎ —0 ١ ‎(OH ‏و7 تكون‎ NH, ‏تكون‎ X ‏حيث‎ oF) ‏طريقة وفقآ لمطلب الحماية‎ -١ ١ OH ‏و7 تكون‎ H ‏تكون‎ X ‏لمطلب الحماية (؟) حيث‎ Ty ‏طريقة‎ -7 ١ 0 ‎CNH; ‏تكون‎ Ys NH, ‏تكون‎ X Cua )7( ‏طريقة وفقاً لمطلب الحماية‎ -8+ ١ ‎0١‏ 4- طريقة ‎Ty‏ لمطلب الحماية (١)؛‏ حيث المقدار الفعال المذكور في مجرى دم الحيوان يكون ‏ل أقل من ‎٠١‏ ميكروجم/مل. ‎-٠ ١‏ طريقة ‎ad,‏ لمطلب الحماية ) 4 حيث المقدار الفعال المذكوز في مجرى دم الحيوان ‎Y‏ يكون في المدى من ‎١.١‏ إلى ‎٠١‏ ميكروجم/مل.

   So YY ‏طريقة وفقاً لمطلب الحماية ) © ( حيث المقدار الفعال المذكور في مجرى دم الحيوان‎ =) ١ ‏ميكروجم/مل.‎ ٠١ ‏إلى‎ ١.١ ‏يكون في المدى من‎ , ‏طريقة وفقا لمطلب الحماية )1( حيث المقدار الفعال المذكور في مجرى دم الحيوان‎ -١7 ٠ ‏ميكروجم/مل.‎ ٠١ ‏إلى‎ ١.١ ‏يكون في المدى من‎ Y ‏المقدار الفعال المذكور في مجرى دم الحيوان‎ Cua (V) ‏لمطلب الحماية‎ Way ‏طريقة‎ VY ١ ‏ميكروجم/مل.‎ ٠١ ‏إلى‎ ١.١ ‏يكون في المدى من‎ ‏حيث المقدار الفعال المذكور في مجرى دم الحيوان‎ (A) ‏لمطلب الحماية‎ Gig ‏طريقة‎ -١4 ١ ‏ميكروجم/مل.‎ ٠١ ‏إلى‎ ١١ ‏يكون في المدى من‎ ‏حيث يكون الحيوان المذكور بشري.‎ (VY) ‏لمطلب الحماية‎ Gag ‏طريقة‎ —v0 > ١ ‏عبارة‎ hepadnavirus ‏يكون فيروس الدنا الكبدي‎ Cua (VY) ‏لمطلب الحماية‎ Gay ‏طريقة‎ -5 ١ hepatitis B virus ‏عن فيروس التهاب الكبد ب‎ ‏المذكور‎ hepadnavirus ‏حيث يكون فيروس الدنا الكبدي‎ (VY) ‏لمطلب الحماية‎ la ‏طريقة‎ VY Co hepatitis B virus ‏عبارة عن فيروس التهاب الكبد ب‎ Y ‏المذكور‎ hepadnavirus ‏الكبدي‎ Gall ‏يكون فيروس‎ Cua (VY) ‏لمطلب الحماية‎ Tag ‏طريقة‎ =A ١ hepatitis B virus ‏عبارة عن فيروس التهاب الكبد ب‎ Y ‏المذكور‎ hepadnavirus ‏يكون فيروس الدنا الكبدي‎ Cua )١4( ‏طريقة وفقآ لمطلب الحماية‎ -4 ١ .hepatitis 3 virus ‏عبارة عن فيروس التهاب الكبد ب‎

   J Y¢ ‏حيث تكون التركيبة المذكورة على شكل أقراص تعطى‎ (V1) ‏طريقة وفقآ لمطلب الحماية‎ —Y 0٠١ ‏بالفم أو سائل أو تحاميل أو محلول قابل للحقن أو على شكل رذاذ أزدنم:عه.‎ Y ‏حيث تكون التركيبة المذكورة على شكل أقراص تعطى‎ (VY) ‏طريقة وفقاً لمطلب الحماية‎ -7١ ١ .aerosol ‏للحقن أو على شكل رذاذ‎ Ju ‏بالفم أو سائل أو تحاميل أو محلول‎ Y ‏حيث تكون التركيبة المذكورة على شكل أقراص تعطى‎ (VA) ‏لمطلب الحماية‎ Gig ‏طريقة‎ —YY ١ ‏بالفم أو سائل أو تحاميل أو محلول قابل للحقن أو على شكل رذاذ اموضضعة.‎ Y ‏حيث تكون التركيبة المذكورة على شكل أقراص تعطى‎ (V9) ‏لمطلب الحماية‎ Gi ‏طريقة‎ —YY 0٠١ .aerosol ‏رذاذ‎ JE ‏بالفم أو سائل أو تحاميل أو محلول قابل للحقن أو على‎ 7 : ‏حيث يكون كل من * و7 كما بلي‎ ١ ) ‏؛؟*- طريقة 885( لمطلب الحماية‎ ١ Y X OH H ١ oo OH NH, Y OCH; NH, or OCH; NH, ¢ H NH, ° NH, NH, 1 NHCH; NH, v NHC,H; NH, A F NH, 4 Cl NH, Yo : Br NH, 1) I NH, VY oF Yo ‏ض‎ NH; ‏و7 تكون‎ NH, ‏تكون‎ X ‏حيث‎ (VE) ‏لمطلب الحماية‎ Gay ‏طريقة‎ —Yo ١ ‏ض‎ ‎| (OH ‏و7 تكون‎ NHy ‏تكون‎ X ‏لمطلب الحماية (؟) حيث‎ Gi, ‏طريقة‎ -7١ ١ OCH; ‏و7 تكون‎ NH, ‏تكون‎ X Cum (V6) ‏طريقة وفقا لمطلب الحماية‎ -77 ٠ OCH; ‏و7 تكون‎ NH ‏تكون‎ ثيح‎ (V4) ‏لمطلب الحماية‎ thy ‏طريقة‎ -78 ٠

   NHCH; ‏تكون‎ Ys NH, ‏تكون‎ X Cua (YE) ‏طريقة وفقاً لمطلب الحماية‎ -4 ١ Cl ‏و7 تكون‎ NH, ‏حيث 7 تكون‎ (YE) ‏طريقة وفقآ لمطلب الحماية‎ =F ٠١

   ‎AN‏ ض