RU2835906C1 - Inactivated cultural sorbed vaccine against foot-and-mouth disease of genotype sat-2/xiv from strain "sat-2/xiv/2023" - Google Patents
Inactivated cultural sorbed vaccine against foot-and-mouth disease of genotype sat-2/xiv from strain "sat-2/xiv/2023" Download PDFInfo
- Publication number
- RU2835906C1 RU2835906C1 RU2024121725A RU2024121725A RU2835906C1 RU 2835906 C1 RU2835906 C1 RU 2835906C1 RU 2024121725 A RU2024121725 A RU 2024121725A RU 2024121725 A RU2024121725 A RU 2024121725A RU 2835906 C1 RU2835906 C1 RU 2835906C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sat
- xiv
- foot
- mouth disease
- strain
- Prior art date
Links
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 title claims abstract description 184
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 85
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 60
- 101100422538 Escherichia coli sat-2 gene Proteins 0.000 title 2
- 101710173681 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 2 Proteins 0.000 claims abstract description 213
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 47
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 38
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 34
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 25
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 17
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 13
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 8
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 claims abstract description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 27
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 5
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 claims description 4
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims 1
- 244000309730 Foot-and-mouth disease virus serotype SAT2 Species 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 2
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 63
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 36
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 9
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 7
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 6
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241001250094 Capra sibirica Species 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 4
- -1 polyhexamethylene guanidine hydrochloride Polymers 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 3
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010629 Molecular evolutionary genetics analysis Methods 0.000 description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 description 1
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N O.O.O.[Al] Chemical compound O.O.O.[Al] MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241001144416 Picornavirales Species 0.000 description 1
- 101710140501 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100030100 Sulfate anion transporter 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710144481 Sulfate anion transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009351 contact transmission Effects 0.000 description 1
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L disodium;2-hydroxy-3-[4-[4-[(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)amino]-3-methylphenyl]-2-methylanilino]propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC=2)=C1 BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000010464 virion assembly Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к разработке вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV культуральной инактивированной сорбированной.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, namely to the development of a culture-based inactivated sorbed vaccine against foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype.
Ящур - самое контагизное опасное вирусное заболевание животных, которое вызывается РНК-содержащим вирусом семейства Picornaviridae рода Aphtovirus [1, 2, 3, 4]. Известно 7 серотипов вируса ящура: O, A, C, Азия-1, SAT-1, SAT-2 и SAT-3. Внутри каждого серотипа имеет место явление мутационной изменчивости, чтобы определять появление новых изолятов, отличных от ранее выделенных штаммов вируса ящура. Различия между ними определяют при анализе нуклеотидной последовательности 1D-гена (белок VP1), который характеризуется высокой геномной и антигенной вариабельностью [1]. Вирус ящура серотипа SAT-2 имеет большую изменчивость последовательности в гене белка VP1 по сравнению с вирусами серотипов О, А и С [2, 3], для которых он рассматривается как широкий антигенный вариант, поэтому в случае SAT-2 требуется тщательный отбор иммунодоминантного вакцинного штамма [3, 5, 6].Foot-and-mouth disease is the most contagious dangerous viral disease of animals, which is caused by an RNA-containing virus of the Picornaviridae family, genus Aphtovirus [1, 2, 3, 4]. There are 7 known serotypes of foot-and-mouth disease virus: O, A, C, Asia-1, SAT-1, SAT-2 and SAT-3. Within each serotype, there is a phenomenon of mutational variability to determine the emergence of new isolates that differ from previously isolated strains of foot-and-mouth disease virus. Differences between them are determined by analyzing the nucleotide sequence of the 1D gene (VP 1 protein), which is characterized by high genomic and antigenic variability [1]. Foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 has greater sequence variability in the VP 1 protein gene compared to viruses of serotypes O, A and C [2, 3], for which it is considered a broad antigenic variant, therefore, in the case of SAT-2, careful selection of an immunodominant vaccine strain is required [3, 5, 6].
Для вируса ящура серотипа SAT-2 характерна высокая генетическая изменчивость, а именно он включает в себя следующие 14 топотипов (I - XIV), внутри которых нет разделения на генетические группы. Такое высокое генетическое и антигенное разнообразие приводит к проблемам в специфической профилактике ящура при применении культуральных инактивированных противоящурных вакцин, а также затрудняет штаммоспецифическую диагностику выделенных изолятов вируса ящура. В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики в отношении вируса ящура серотипа SAT-2 [7-11].Foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 is characterized by high genetic variability, namely, it includes the following 14 topotypes (I - XIV), within which there is no division into genetic groups. Such high genetic and antigen diversity leads to problems in the specific prevention of foot-and-mouth disease when using culture-based inactivated foot-and-mouth disease vaccines, and also complicates strain-specific diagnostics of isolated foot-and-mouth disease virus isolates. As a result, there is a need to create new diagnostic tools and specific immunoprophylaxis against foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 [7-11].
По причине легкого и быстрого распространения возбудителя ящура данное заболевание может приобретать размах эпизоотий [12]. С целью недопущения возникновения болезни в хозяйствах Российской Федерации применяется система мероприятий по борьбе и профилактике ящура, которая направлена на предупреждение заноса вируса в страну, систематическую иммунизацию крупного и мелкого рогатого скота в буферной зоне, а также проведение мониторинга иммунного статуса привитых животных. Due to the easy and rapid spread of the pathogen of foot-and-mouth disease, this disease can acquire the scope of an epizootic [12]. In order to prevent the occurrence of the disease in farms of the Russian Federation, a system of measures for the control and prevention of foot-and-mouth disease is used, which is aimed at preventing the introduction of the virus into the country, systematic immunization of cattle and small cattle in the buffer zone, as well as monitoring the immune status of vaccinated animals.
Для иммунизации животных должна применяться вакцина, изготовленная из вируса, гомологичного полевым изолятам [10,12, 13]. Данная инфекция продолжает оставаться значимой экономической проблемой во всем мире. Для проведения эффективной кампании по вакцинации нужно наличие эффективной, безопасной вакцины, содержащей в качестве иммуногенной части антиген вируса, соответствующий эпизоотическому распространяющемуся изоляту определенного генотипа [14]. Создание подобных вакцин является актуальной задачей. Достижение данной цели позволит эффективно применять вакцину в неблагополучном пункте и угрожаемой зоне для формирования иммунитета против конкретного генотипа вируса ящура.To immunize animals, a vaccine made from a virus homologous to field isolates should be used [10,12,13]. This infection remains a significant economic problem worldwide. To conduct an effective vaccination campaign, it is necessary to have an effective, safe vaccine containing, as an immunogenic part, a virus antigen corresponding to an epizootic spreading isolate of a certain genotype [14]. The development of such vaccines is an urgent task. Achieving this goal will allow the vaccine to be effectively used in an unfavorable location and a threatened zone to form immunity against a specific genotype of the foot-and-mouth disease virus.
На территории Юго-Восточной, Южной, Восточной Азии вспышки ящура генотипа SAT-2/XIV теперь имеют спорадический характер. Следует отметить, что в последние годы усилились торгово-экономические связи России со странами этого региона, в частности, Монголии, Китая, Индии и др., а также Африки. Исходя из этого, крайне высоки риски заноса возбудителя данного генотипа на территорию Российской Федерации, что угрожает биологической безопасности нашей страны по ящуру. In the territory of South-East, South, East Asia, outbreaks of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype are now sporadic. It should be noted that in recent years, trade and economic ties between Russia and the countries of this region, in particular, Mongolia, China, India, etc., as well as Africa, have strengthened. Based on this, the risks of introducing the pathogen of this genotype into the territory of the Russian Federation are extremely high, which threatens the biological security of our country in terms of foot-and-mouth disease.
На протяжении многих лет периодически фиксировали вспышки ящура генотипа SAT-2/XIV в странах Африки, однако в 2023 г. представители данного варианта вируса были обнаружены на территории Азиатского континента и Ближнего Востока, в частности, изоляты вируса ящура указанного генотипа были выделены в марте 2023 года в Иордании, Ираке, Грузии, Турции, в апреле 2023 - Омане, в мае 2023 в Бахрейне. For many years, outbreaks of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype have been periodically recorded in African countries, but in 2023, representatives of this variant of the virus were detected on the territory of the Asian continent and the Middle East, in particular, isolates of the foot-and-mouth disease virus of this genotype were isolated in March 2023 in Jordan, Iraq, Georgia, Turkey, in April 2023 - Oman, in May 2023 in Bahrain.
Известны производственные штаммы вируса ящура серотипа SАT-2, которые применяются или использовались ранее в мире для производства средств специфической профилактики ящура: There are known production strains of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 that are used or have been used previously in the world for the production of specific foot-and-mouth disease prophylaxis:
- штамм «SAT-2/ZIM/14/2002» (генотип SAT-2/I), - strain “SAT-2/ZIM/14/2002” (genotype SAT-2/I),
- штамм «SAT-2/ZIM/5/81» (генотип SAT-2/II), - strain "SAT-2/ZIM/5/81" (genotype SAT-2/II),
- штамм «SAT-2/BOT/P3/98» (генотип SAT-2/III), - strain "SAT-2/BOT/P3/98" (genotype SAT-2/III),
- штамм «SAT-2/ETH/1/90» (генотип SAT-2/IV), - strain "SAT-2/ETH/1/90" (genotype SAT-2/IV),
- штамм «SAT-2/GHA/2/90» (генотип SAT-2/V), - strain “SAT-2/GHA/2/90” (genotype SAT-2/V),
- штамм «SAT-2/GAM/8/79» (генотип SAT-2/VI), - strain “SAT-2/GAM/8/79” (genotype SAT-2/VI),
- штамм «SAT-2/SAU/6/2000» (генотип SAT-2/VII), - strain “SAT-2/SAU/6/2000” (genotype SAT-2/VII),
- штамм «SAT-2/RWO/1/00» (генотип SAT-2/VIII), - strain “SAT-2/RWO/1/00” (genotype SAT-2/VIII),
- штамм «SAT-2/KEN/2/84» (генотип SAT-2/IX), - strain "SAT-2/KEN/2/84" (genotype SAT-2/IX),
- штамм «SAT-2/UGA/19/98» (генотип SAT-2/X), - strain “SAT-2/UGA/19/98” (genotype SAT-2/X),
- штамм «SAT-2/ANG/4/74» (генотип SAT-2/XI), - strain "SAT-2/ANG/4/74" (genotype SAT-2/XI),
- штамм «SAT-2/UGA/51/75» (генотип SAT-2/XII), - strain “SAT-2/UGA/51/75” (genotype SAT-2/XII),
- штамм «SAT-2/ETH/2/2007» (генотип SAT-2/XIII), - strain "SAT-2/ETH/2/2007" (genotype SAT-2/XIII),
- штамм «SAT-2/ETH/2/91» (генотип SAT-2/XIV).- strain "SAT-2/ETH/2/91" (genotype SAT-2/XIV).
Изолят вируса ящура был выделен в результате лабораторно-диагностических исследований в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из патологического материала, отобранного от крупного рогатого скота на территории Иорданского Хашимитского Королевства в августе 2023 г. При проведении научных исследований в ФГБУ «ВНИИЗЖ» был охарактеризован и получил название - штамм «SAT-2/XIV/2023».The isolate of foot-and-mouth disease virus was obtained as a result of laboratory diagnostic studies at the All-Russian Research Institute of Animal Health from pathological material collected from cattle in the Hashemite Kingdom of Jordan in August 2023. During scientific research at the All-Russian Research Institute of Animal Health, the strain "SAT-2/XIV/2023" was characterized and named.
По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный штамм принадлежит к генотипу SAT-2/XIV вируса ящура, который значительно отличается от производственных штаммов вируса ящура серотипа SAT-2 (Фиг. 1).According to the results of comparative analysis of nucleotide sequences, the isolated strain belongs to the SAT-2/XIV genotype of foot-and-mouth disease virus, which differs significantly from the production strains of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 (Fig. 1).
По причине значительного увеличения торгово-экономических взаимоотношений между Россией и странами Африки, Ближнего Востока и Азии, в которых стабильно регистрируют вспышки ящура генотипа SAT-2/XIV, возникает опасность случаев возникновения ящура данного генотипа в Российской Федерации и особое значение приобретает проблема возможной экстренной профилактики данного заболевания с целью формирования иммунитета у восприимчивых животных. Таким образом, возникла необходимость разработать вакцину против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральную инактивированную сорбированную для обеспечения биологической безопасности и ветеринарного благополучия территории Российской Федерации, сопредельных государств и стран, эндемичных по ящуру, которые будут использовать данный препарат для профилактики заболевания.Due to a significant increase in trade and economic relations between Russia and the countries of Africa, the Middle East and Asia, where outbreaks of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype are consistently registered, there is a risk of cases of foot-and-mouth disease of this genotype in the Russian Federation, and the problem of possible emergency prevention of this disease in order to form immunity in susceptible animals is of particular importance. Thus, it became necessary to develop a vaccine against foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype from the strain "SAT-2/XIV/2023" cultural inactivated sorbed to ensure biological safety and veterinary well-being of the territory of the Russian Federation, neighboring states and countries endemic for foot-and-mouth disease, which will use this drug for the prevention of the disease.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная сорбированная против ящура серотипа SAT-2 (штамм «SAT-2/SAU/6/2000»), содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного культурального антигенного материала из гомологичного возбудителю ящура штамма
«SAT-2/SAU/6/2000», полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде гидроокиси алюминия и сапонина (адъювант): концентрация антигена (инактивированные 146S+75S компоненты вируса ящура) не менее 3,0 мкг/см3, содержание 10% раствора гидроокиси алюминия - 50% по объему, концентрация сапонина - 1,5 мг/см3, добавка в виде поддерживающей среды - до 1,0 см3 (прототип) [15 - 18].The closest to the proposed invention in terms of the set of essential features is the inactivated sorbed vaccine against foot-and-mouth disease of the SAT-2 serotype (strain "SAT-2/SAU/6/2000"), containing an active substance in the form of avirulent and purified cultural antigen material from a strain homologous to the causative agent of foot-and-mouth disease.
"SAT-2/SAU/6/2000" obtained in a sensitive biological system, and target additives in the form of aluminum hydroxide and saponin (adjuvant): antigen concentration (inactivated 146S+75S components of the foot-and-mouth disease virus) of at least 3.0 μg/ cm3 , content of 10% aluminum hydroxide solution - 50% by volume, saponin concentration - 1.5 mg/ cm3 , additive in the form of a supporting medium - up to 1.0 cm3 (prototype) [15 - 18].
В качестве чувствительной биологической системы для репродукции вируса ящура используют перевиваемую суспензионную клеточную линию почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21, в качестве поддерживающей среды применяют среду Игла DMEM без внесения сыворотки, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого, гидролизата белков крови сухого при рН среды 7,4-7,6.As a sensitive biological system for the reproduction of the foot-and-mouth disease virus, a transplantable suspension cell line of the kidney of a newborn Syrian hamster BHK-21 is used; as a supporting medium, the Eagle's DMEM medium is used without adding serum, with the addition of dry enzymatic muscle hydrolysate, dry blood protein hydrolysate at a pH of 7.4-7.6.
Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). При изготовлении сорбированной вакцины в качестве адъюванта служит гидроксид алюминия (Al(OH)3). Очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей осуществляют с применением полигексаметиленгуанидин гидрохлорида (ПГМГ).Aminoethylethyleneimine (AEEI) is used to inactivate the virus. In the production of the sorbed vaccine, aluminum hydroxide (Al(OH) 3 ) is used as an adjuvant. The purification of the virus-containing suspension from ballast impurities is carried out using polyhexamethylene guanidine hydrochloride (PHMG).
Авирулентный и очищенный инактивированный антигенный материал из штамма «SAT-2/SAU/6/2000» вируса ящура серотипа SAT-2 представляет собой суспензию, состоящую из 146S+75S компонентов вируса ящура, то есть полных иммуногенных частиц и «пустых» капсидов.Avirulent and purified inactivated antigen material from the strain "SAT-2/SAU/6/2000" of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 is a suspension consisting of 146S+75S components of the foot-and-mouth disease virus, i.e. complete immunogenic particles and "empty" capsids.
Существенный недостаток вакцины-прототипа состоит в его очень низкой иммуногенной активности относительно изолятов вируса ящура генотипа SAT-2/XIV, циркулирующих в странах Африки и Ближнего Востока. Кроме того, в прототипном варианте вакцины учитывается сумма компонентов 146S и 75S, при этом полноценными иммуногенными свойствами обладают только 146S частицы, которые являются полными вирионами, несущими абсолютно все иммуногенные сайты и структурные вирусные белки и вирусную РНК.A significant drawback of the prototype vaccine is its very low immunogenic activity against isolates of the foot-and-mouth disease virus of the SAT-2/XIV genotype circulating in Africa and the Middle East. In addition, the prototype version of the vaccine takes into account the sum of the 146S and 75S components, while only 146S particles, which are complete virions carrying absolutely all immunogenic sites and structural viral proteins and viral RNA, have full immunogenic properties.
Для решения этой проблемы было создано настоящее изобретение, в которое входила разработка вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной.To solve this problem, the present invention was created, which included the development of a vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" of cultural inactivated sorbed type.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала инактивированных культуральных сорбированных вакцин для защиты животных против изолятов и штаммов вируса ящура серотипа SAT-2 и, в частности, генотипа SAT-2/XIV.The technical result of using the proposed invention consists in expanding the arsenal of inactivated culture sorbed vaccines for protecting animals against isolates and strains of foot-and-mouth disease virus of serotype SAT-2 and, in particular, genotype SAT-2/XIV.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков, отраженных ниже.The specified technical result was achieved by creating a vaccine against foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype from the strain “SAT-2/XIV/2023”, a cultural inactivated sorbed vaccine, characterized by the following set of features, reflected below.
Разработанная вакцина в 1,0 см3 препарата содержит следующие основные компоненты: 1) активное вещество в виде авирулентного и очищенного 146S компонента из гомологичного возбудителю инфекции штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура, репродуцированного в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH, в количестве не менее 6,0 мкг; 2) гидроксид алюминия 10%-ный коллоидный раствор с содержанием 40% по объему (4,0 % в пересчете на сухое вещество), 3) сапонин в количестве 2,0 мг, 4) поддерживающая среда - до 1,0 см3.The developed vaccine in 1.0 cm3 of the preparation contains the following main components: 1) the active substance in the form of an avirulent and purified 146S component from the homologous to the causative agent of the infection strain "SAT-2/XIV/2023" genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus, reproduced in the transplantable suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH, in an amount of at least 6.0 μg; 2) aluminum hydroxide 10% colloidal solution with a content of 40% by volume (4.0% in terms of dry matter), 3) saponin in an amount of 2.0 mg, 4) maintenance medium - up to 1.0 cm3 .
Штамм вируса ящура «SAT-2/XIV/2023» депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вирусов ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ», под регистрационным номером: №489 - деп / 23-39 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ». The foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2/XIV/2023" is deposited in the All-Russian State Collection of Exotic Types of Foot-and-Mouth Disease Viruses and Other Animal Pathogens (GKShM) of the FGBU "ARRIAH", under the registration number: No. 489 - dep / 23-39 - GKShM of the FGBU "ARRIAH".
Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным клеткам линии свиной почки (СП) и перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21/SUSP/ARRIAH), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30).The strain is adapted to primary trypsinized cells of the pig kidney (SP) line and continuous cell lines from the kidney of a newborn Syrian hamster (BHK-21/SUSP/ARRIAH), pig kidney (IB-RS-2) and the kidney of the Siberian ibex (PSGK-30).
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно перевиваемую суспензионную культуру клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH, а в качестве поддерживающей среды применяют среду Игла DMEM без внесения сыворотки, но с добавлением гидролизата белков крови в количестве 5% от общего объема при рН среды 7,45-7,65. Инактивацию вируса проводят с использованием аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) с концентрацией 0,028% от объема вируссодержащей суспензии. Инактивированный вирус очищают от балластных примесей с помощью полигексаметиленгуанидина (ПГМГ), который вносят в суспензию до концентрации 0,028% от общего объема.To produce the vaccine, the transplantable suspension culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells is preferably used as a sensitive biological system, and the Eagle's DMEM medium without adding serum, but with the addition of blood protein hydrolysate in an amount of 5% of the total volume at a pH of the medium of 7.45-7.65, is used as a supporting medium. The virus is inactivated using aminoethylethyleneimine (AEEI) with a concentration of 0.028% of the volume of the virus-containing suspension. The inactivated virus is purified from ballast impurities using polyhexamethylene guanidine (PHMG), which is added to the suspension to a concentration of 0.028% of the total volume.
Авирулентный и очищенный антиген штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура представляет собой суспензию, содержащую преимущественно инактивированный 146S иммуногенный компонент вируса ящура. Содержание компонента в продукте оценивают с помощью количественного варианта реакции связывания комплемента (РСК) [19]. Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1,0 см3 не менее 6,0 мкг инактивированных иммуногенных 146S частиц вируса ящура. Необходимую концентрацию иммуногенного компонента в вакцинном препарате обеспечивают благодаря концентрированию антигена с помощью сорбирования на поверхности коллоидных частиц гидроксида алюминия.The avirulent and purified antigen of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus is a suspension containing predominantly the inactivated 146S immunogenic component of the foot-and-mouth disease virus. The content of the component in the product is assessed using a quantitative version of the complement fixation reaction (CFR) [19]. To prepare the vaccine, viral material is used that contains at least 6.0 μg of inactivated immunogenic 146S particles of the foot-and-mouth disease virus per 1.0 cm3 . The required concentration of the immunogenic component in the vaccine preparation is ensured by concentrating the antigen by sorption on the surface of colloidal aluminum hydroxide particles.
Вакцину против ящура из штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV культуральную инактивированную сорбированную получают путем смешивания очищенного антигена (инактивированный 146S иммуногенный компонент) и 10%-ной суспензии гидроксида алюминия в соотношении 60% на 40% по объему, соответственно. Для усиления иммунного ответа используют сапонин в количестве 2,0 мг в дозе. Полученная вакцина представляет собой суспензию, содержащую частицы не растворимого в воде гидроокиси алюминия, несущие на своей поверхности инактивированные 146S частицы вируса ящура, которые обеспечивают формирование иммунитета у животных.The vaccine against foot-and-mouth disease from the strain "SAT-2/XIV/2023" of the genotype SAT-2/XIV, cultural inactivated sorbed vaccine, is obtained by mixing purified antigen (inactivated 146S immunogenic component) and 10% suspension of aluminum hydroxide in a ratio of 60% to 40% by volume, respectively. To enhance the immune response, saponin is used in an amount of 2.0 mg per dose. The resulting vaccine is a suspension containing particles of water-insoluble aluminum hydroxide carrying inactivated 146S particles of foot-and-mouth disease virus on their surface, which ensure the formation of immunity in animals.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана:The proposed invention includes the following set of essential features that ensure the achievement of a technical result in all cases for which legal protection is requested:
1. Вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV культуральная инактивированная сорбированная.1. Vaccine against foot-and-mouth disease genotype SAT-2/XIV, cultural inactivated sorbed.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю заболевания штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура в эффективном количестве.2. An active substance in the form of avirulent and purified antigen material from the strain "SAT-2/XIV/2023" of the genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus homologous to the causative agent of the disease in an effective amount.
3. Целевые добавки.3. Targeted supplements.
Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный очищенный 146S компонент штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура в эффективном количестве.The essential distinguishing features of the proposed vaccine are that it contains, as an active substance, the avirulent purified 146S component of the SAT-2/XIV/2023 strain of the SAT-2/XIV genotype of the foot-and-mouth disease virus in an effective amount.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The proposed invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of implementation or special conditions of its use:
Авирулентный и очищенный антиген штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура, полученный в суспензионной перевиваемой клеточной линии BHK-21/SUSP/ARRIAH и представляющий собой суспензию, содержащую 146S иммуногенный компонент вируса ящура в эффективном количестве.Avirulent and purified antigen of the strain "SAT-2/XIV/2023" of the genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus, obtained in the suspension transplantable cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH and representing a suspension containing the 146S immunogenic component of the foot-and-mouth disease virus in an effective amount.
Авирулентный и очищенный антиген штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура, полученный в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21/SUSP/ARRIAH и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в количестве не менее 6,0 мкг в 1,0 см3 готового вакцинного препарата.Avirulent and purified antigen of the strain "SAT-2/XIV/2023" of the genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus, obtained in a suspension transplantable cell culture BHK-21/SUSP/ARRIAH and representing a suspension containing predominantly the 146S immunogenic component of the foot-and-mouth disease virus in an amount of at least 6.0 μg in 1.0 cm 3 of the finished vaccine preparation.
Из целевых добавок вакцина содержит адъювант.Among the target additives, the vaccine contains an adjuvant.
Из целевых добавок вакцина содержит адъювант - гидроксид алюминия в комплексе с сапонином.Among the target additives, the vaccine contains an adjuvant - aluminum hydroxide in combination with saponin.
Вакцина содержит адъювант - 10% коллоидный раствор гидроксида алюминия 40,0% по объему (4,0% в пересчете на сухой остаток) в комплексе с сапонином в концентрации 2,0 мг в 1,0 см3 готового препарата.The vaccine contains an adjuvant - a 10% colloidal solution of aluminum hydroxide 40.0% by volume (4.0% in terms of dry residue) in combination with saponin at a concentration of 2.0 mg in 1.0 cm3 of the finished product.
Авирулентный и очищенный антиген штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура, полученного в перевиваемой суспензионной клеточной линии BHK-21/SUSP/ARRIAH, адъювант - гидроксид алюминия и сапонин, добавка в готовом препарате в виде поддерживающей среды в следующих количествах:Avirulent and purified antigen of the strain "SAT-2/XIV/2023" of the genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus, obtained in the continuous suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH, adjuvant - aluminum hydroxide and saponin, additive in the finished product in the form of a supporting medium in the following quantities:
SAT-2/XIV вируса ящураAvirulent and purified antigen of the strain "SAT-2/XIV/2023" genotype
SAT-2/XIV foot and mouth disease virus
Предлагаемая вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV культуральная инактивированная сорбированная обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против изолятов вируса ящура генотипа SAT-2/XIV, циркулирующего в странах Африки, Ближнего Востока и Азии.The proposed vaccine against foot-and-mouth disease genotype SAT-2/XIV, cultural inactivated sorbed vaccine, has high immunogenic activity and provides reliable protection against isolates of foot-and-mouth disease virus genotype SAT-2/XIV circulating in countries of Africa, the Middle East and Asia.
Достижение технического результата от использования изобретения обеспечивается тем, что в состав предлагаемой противоящурной вакцины в качестве активного вещества введен инактивированный 146S компонент штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура, обладающий высокой иммуногенной активностью, создающий эффективную защиту восприимчивых животных против изолятов вируса ящура представленного генотипа, которые в последние годы вызывают вспышки заболевания в странах Африки, Ближнего Востока и Азии.The achievement of the technical result from the use of the invention is ensured by the fact that the proposed anti-foot-and-mouth disease vaccine contains, as an active substance, an inactivated 146S component of the strain "SAT-2/XIV/2023" of the genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus, which has high immunogenic activity, creating effective protection of susceptible animals against isolates of the foot-and-mouth disease virus of the presented genotype, which in recent years have caused outbreaks of the disease in countries in Africa, the Middle East and Asia.
Сущность изобретения отражена на графических изображениях:The essence of the invention is reflected in the graphic images:
Фиг. 1 - Положение штамма «SAT-2/XIV/2023» на филогенетическом древе вируса ящура серотипа SAT-2. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена 1D (белок VP1). Штамм выделен красным цветом и обозначен «SAT-2/XIV/2023».Fig. 1 - Position of the strain "SAT-2/XIV/2023" on the phylogenetic tree of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2. The dendrogram is based on a comparison of the complete nucleotide sequences of gene 1D (VP 1 protein). The strain is highlighted in red and designated "SAT-2/XIV/2023".
Фиг. 2 - График инактивации штамма «SAT-2/XIV/2023» для получения антигена с целью изготовления вакцинного препарата.Fig. 2 - Schedule of inactivation of the strain "SAT-2/XIV/2023" to obtain antigen for the purpose of manufacturing a vaccine preparation.
Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:The essence of the invention is explained by the following lists of sequences:
SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VР1 штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура генотипа SAT-2/XIV;SEQ ID NO:1 represents the nucleotide sequence of the gene of the VP 1 protein of the strain "SAT-2/XIV/2023" of the foot-and-mouth disease virus of the genotype SAT-2/XIV;
SEQ ID NO:2 представляет последовательность аминокислот гена белка VР1 штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура генотипа SAT-2/XIV.SEQ ID NO:2 represents the amino acid sequence of the VP 1 protein gene of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus genotype SAT-2/XIV.
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.The strain "SAT-2/XIV/2023" of foot-and-mouth disease virus is characterized by the following features and properties.
Морфологические признакиMorphological features
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура имеет следующую таксономию: сфера Riboviria, царство Orthornavirae, тип Pisuviricota, класс Pisoniviricetes, отряд Picornavirales, семейство Picornaviridae, род Aphthovirus, вид Foot-and-mouth disease virus, серотип SAT-2, генотип SAT-2/XIV. Штамм возбудителя обладает следующими морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона иксаэдрическая, размер 23 нм. Вирион состоит из молекулы одноцепочечной положительно заряженной молекулы РНК и 60 копий полипептида, каждый из которых представлен белками VP4, VP2, VP3, VP1.The strain "SAT-2/XIV/2023" of foot-and-mouth disease virus has the following taxonomy: sphere Riboviria , kingdom Orthornavirae , phylum Pisuviricota , class Pisoniviricetes , order Picornavirales , family Picornaviridae , genus Aphthovirus , species Foot-and-mouth disease virus , serotype SAT-2 , genotype SAT-2/XIV. The strain of the pathogen has the following morphological features characteristic of the causative agent of foot-and-mouth disease: the shape of the virion is ixahedral, the size is 23 nm. The virion consists of a molecule of a single-stranded positively charged RNA molecule and 60 copies of a polypeptide, each of which is represented by proteins VP 4 , VP 2 , VP 3 , VP 1 .
Антигенные свойстваAntigenic properties
По антигенным свойствам штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура относится к серотипу SAT-2. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности. У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе и реакции микронейтрализации (РМН). According to its antigenic properties, the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus belongs to the SAT-2 serotype. The virus is stably neutralized by homologous antiserum. The virus does not exhibit hemagglutinating activity. In animals that have recovered from the disease, type-specific antibodies are formed in the blood serum, which are detected in an enzyme-linked immunosorbent assay and a microneutralization reaction (MNR).
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура 1D-гена белка VP1 штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура принадлежит к генотипу SAT-2/XIV (Фиг. 1).The primary structure of the 1D gene of the VP protein was determined using nucleotide sequencing1strain "SAT-2/XIV/2023" of foot-and-mouth disease virus. Comparative analysis of nucleotide sequences showed that the strain "SAT-2/XIV/2023" of foot-and-mouth disease virus belongs to the genotype SAT-2/XIV (Fig. 1).
Антигенное родство (r1) штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура изучено в реакции микронейтрализации вируса, в перекрестном исследовании штамма со специфическими сыворотками, полученными на следующие производственные штаммы вируса ящура: штамм «SAT-2/ZIM/14/2002», штамм «SAT-2/ZIM/5/81», штамм «SAT-2/BOT/P3/98», штамм «SAT-2/ETH/1/90», штамм «SAT-2/GHA/2/90», штамм «SAT-2/GAM/8/79», штамм «SAT-2/SAU/6/2000», штамм «SAT-2/RWO/1/00», штамм «SAT-2/KEN/2/84», штамм «SAT-2/UGA/19/98», штамм «SAT-2/ANG/4/74», штамм «SAT-2/UGA/51/75», штамм «SAT-2/ETH/2/2007», штамм «SAT-2/ETH/2/91». Antigenic relatedness (r 1 ) of the strain "SAT-2/XIV/2023" of foot-and-mouth disease virus was studied in the virus microneutralization reaction, in a cross-study of the strain with specific sera obtained for the following production strains of foot-and-mouth disease virus: strain "SAT-2/ZIM/14/2002", strain "SAT-2/ZIM/5/81", strain "SAT-2/BOT/P3/98", strain "SAT-2/ETH/1/90", strain "SAT-2/GHA/2/90", strain "SAT-2/GAM/8/79", strain "SAT-2/SAU/6/2000", strain "SAT-2/RWO/1/00", strain "SAT-2/KEN/2/84", strain "SAT-2/UGA/19/98", strain "SAT-2/ANG/4/74", strain "SAT-2/UGA/51/75", strain "SAT-2/ETH/2/2007", strain "SAT-2/ETH/2/91".
Титр референтных сывороток крови КРС, полученных путем иммунизации животных моновалентными вакцинами из производственных штаммов вируса ящура серотипа SAT-2, против 102 ТЦД50 гомологичного и гетерологичного вируса определяли в РМН при перекрестном титровании, рассчитывая значения с использованием уравнения линейной регрессии, и выражали в lg. Значение r1 определяли, как антилогарифм разности lg титров сыворотки против гетерологичного и гомологичного вируса [7, 8, 9, 20].The titer of reference cattle blood sera obtained by immunizing animals with monovalent vaccines from industrial strains of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 against 102 TCID50 of homologous and heterologous virus was determined in RMN by cross-titration, calculating the values using the linear regression equation, and expressed in lg. The r1 value was determined as the antilogarithm of the difference lg of serum titers against heterologous and homologous virus [7, 8, 9, 20].
Значение r1 в РМН интерпретировали следующим образом:The r 1 value in the RMN was interpreted as follows:
при ≥ 0,3 - исследуемый и производственный штаммы вируса ящура являются родственными;at ≥ 0.3 - the studied and production strains of foot-and-mouth disease virus are related;
при < 0,3 - исследуемый образец штамма вируса ящура значительно отличается от производственного штамма.at < 0.3 - the studied sample of the foot-and-mouth disease virus strain differs significantly from the production strain.
Максимальное родство отмечается при значении r1 в РМН, стремящимся к 1,0.The maximum relationship is observed when the value of r 1 in the RMN tends to 1.0.
Показатели антигенного родства при изучении штамма «SAT-2/XIV/2023» составили r1 от 0,01 до 0,27, что свидетельствует об отсутствии явного антигенного родства с производственными штаммами вируса ящура серотипа SAT-2.The antigenic relationship indices in the study of the strain "SAT-2/XIV/2023" were r 1 from 0.01 to 0.27, which indicates the absence of obvious antigenic relationship with production strains of foot-and-mouth disease virus of serotype SAT-2.
Гено- и хемотаксономическая характеристикиGeno- and chemotaxonomic characteristics
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура является РНК(+) - содержащим вирусом с молекулярной массой 8,079×106 Д. Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,84×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует. The strain "SAT-2/XIV/2023" of foot-and-mouth disease virus is an RNA(+)-containing virus with a molecular weight of 8.079×10 6 D. The nucleic acid is represented by a single-stranded linear molecule with a molecular weight of 2.84×10 6 D. The virion has a protein membrane consisting of four main proteins VP 1 , VP 2 , VP 3 and VP 4. The lipoprotein membrane is absent.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирусная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса, в том числе такой важный фермент как РНК-зависимую РНК-полимеразу (3D-ген), участвующую в репликации РНК для сборки вирионов.The main antigenic protein is VP 1 . The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Viral RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, are cleaved to form more stable structural and non-structural viral polypeptides, including such an important enzyme as RNA-dependent RNA polymerase (3D gene), which is involved in RNA replication for virion assembly.
Физические свойстваPhysical properties
Масса вириона составляет 8,44×10-18 г. Плавучая плотность 1,47 г/см3.The mass of the virion is 8.44×10 -18 g. The buoyant density is 1.47 g/cm 3 .
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура устойчив к эфиру, хлороформу, и ацетону. Наиболее стабилен при pH 7,44-7,70. Сдвиги pH в кислую и сильно щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам (выше 38,7°С).The strain "SAT-2/XIV/2023" of the foot-and-mouth disease virus is resistant to ether, chloroform, and acetone. It is most stable at pH 7.44-7.70. Shifts in pH to the acidic and strongly alkaline side lead to inactivation of the virus. It is sensitive to formaldehyde, UV radiation, γ-irradiation, high temperatures (above 38.7°C).
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Реактогенность - антиген реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - the antigen does not have reactogenic properties.
Патогенность - антиген не патогенен для парнокопытных животных.Pathogenicity - the antigen is not pathogenic for ungulates.
Вирулентность - антиген не вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - the antigen is not virulent for naturally susceptible animals upon contact, aerosol and parenteral infection.
Стабильность - штамм сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемых культурах.Stability - the strain retains its original biological properties when passaged in sensitive biological systems for 5 passages (observation period) on transplantable cultures.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура репродуцируется в перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомячка (ВНК-21). The strain "SAT-2/XIV/2023" of the foot-and-mouth disease virus is reproduced in continuous cell cultures: Siberian ibex kidneys (PSGK-30), pig kidneys (IB-RS-2), Syrian hamster kidneys (VNK-21).
При испытании было проведено 5 последовательных пассажей штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21, IB-RS-2. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой клеточной линии IB-RS-2 и на естественно восприимчивых животных - крупном рогатом скоте (КРС) и свиньях.During the test, 5 consecutive passages of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus were carried out in continuous cell cultures PSGK-30, BHK-21, IB-RS-2. Biological properties were characterized by determining the infectious activity of the virus of each passage in the continuous cell line IB-RS-2 and in naturally susceptible animals - cattle and pigs.
Для снижения эпизоотической опасности возникновения ящура, вызванного генотипом SAT-2/XIV, и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки безопасной и эффективной вакцины.To reduce the epizootic risk of foot-and-mouth disease caused by the SAT-2/XIV genotype and to prevent the emergence of new outbreaks of the disease, timely vaccination is important, which requires the development of a safe and effective vaccine.
Получена безопасная, высокоиммуногенная и эффективная вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральная инактивированная сорбированная. A safe, highly immunogenic and effective vaccine against foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype was obtained from the strain "SAT-2/XIV/2023", culture inactivated sorbed.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the proposed invention is explained by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Генетическая характеристика штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура по данным ПЦР и нуклеотидного секвенирования. Example 1. Genetic characteristics of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus based on PCR and nucleotide sequencing data.
Проводили анализ первичной структуры гена 1D (белок VP1) штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура методом нуклеотидного секвенирования методом Сенгера и определении положения данного штамма на филогенетическом древе вируса ящура серотипа SAT-2. Метод основан на определении первичной структуры гена 1D (белок VP1) испытуемого изолята/штамма с последующим анализом филогенетического родства с другими изолятами/штаммами (19 представителей) вируса ящура серотипа SAT-2 (фиг. 1).The primary structure of the 1D gene (VP 1 protein) of the SAT-2/XIV/2023 foot-and-mouth disease virus strain was analyzed using Sanger nucleotide sequencing and the position of this strain on the phylogenetic tree of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 was determined. The method is based on determining the primary structure of the 1D gene (VP 1 protein) of the test isolate/strain, followed by an analysis of the phylogenetic relationship with other isolates/strains (19 representatives) of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 (Fig. 1).
Было необходимо провести сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей гена 1D, кодирующего белок VP1 вируса ящура вакцинного штамма «SAT-2/XIV/2023» с другими изолятами и штаммами. Последовательность нуклеотидов гена белка VР1 штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура представлена SEQ ID NO:1. Последовательность аминокислот 1D-гена, кодирующего белок VР1 штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура отражена на SEQ ID NO:2. It was necessary to conduct a comparative analysis of the nucleotide sequences of the 1D gene encoding the VP 1 protein of the foot-and-mouth disease virus vaccine strain "SAT-2/XIV/2023" with other isolates and strains. The nucleotide sequence of the VP 1 protein gene of the strain "SAT-2/XIV/2023" genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus is presented in SEQ ID NO: 1. The amino acid sequence of the 1D gene encoding the VP 1 protein of the strain "SAT-2/XIV/2023" genotype SAT-2/XIV foot-and-mouth disease virus is reflected in SEQ ID NO: 2.
Осуществлен филогенетический анализ для штамма «SAT-2/XIV/2023». Филогенетическое дерево выведено с использованием программы MEGA 6 и алгоритма Neighbor-Joining [21]. Процент повторяющихся ветвей, в которых связанные таксоны сгруппированы вместе в тесте начальной загрузки (увеличили со стандартных 100 до 1000 повторов для высокой степени достоверности), показан рядом с ветвями [22, 23]. Эволюционные расстояния были рассчитаны с использованием метода Maximum Composite Likelihood [24] и выражены в единицах количества замен оснований на сайт. Этот анализ включал 11 нуклеотидных последовательностей, в том числе последовательность 1D-гена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура. Все позиции, содержащие пробелы и отсутствующие данные, были удалены (вариант полного удаления). Эволюционный анализ проводился в MEGA 6.A phylogenetic analysis was performed for the SAT-2/XIV/2023 strain. The phylogenetic tree was inferred using MEGA 6 and the Neighbor-Joining algorithm [21]. The percentage of repeat branches in which related taxa are grouped together in the bootstrap test (increased from the standard 100 to 1000 repeats for high confidence) is shown next to the branches [22, 23]. Evolutionary distances were calculated using the Maximum Composite Likelihood method [24] and are expressed as base substitutions per site. This analysis included 11 nucleotide sequences, including the 1D gene sequence of the SAT-2/XIV/2023 foot-and-mouth disease virus strain. All positions containing gaps and missing data were removed (complete deletion option). The evolutionary analysis was performed in MEGA 6.
В результате проведенной работы по сравнению полных нуклеотидных последовательностей гена 1D (белок VP1) штамма «SAT-2/XIV/2023» и других изолятов/штаммов вируса ящура серотипа SAT-2 определено положение исследуемого штамма на филогенетическом древе (фиг. 1). Таким образом, исследуемый штамм «SAT-2/XIV/2023» относится к генотипу SAT-2/XIV, что подтверждают данные нуклеотидного и аминокислотного анализа.As a result of the work carried out on comparison of complete nucleotide sequences of the 1D gene (VP 1 protein) of the strain "SAT-2/XIV/2023" and other isolates/strains of the foot-and-mouth disease virus of the SAT-2 serotype, the position of the studied strain on the phylogenetic tree was determined (Fig. 1). Thus, the studied strain "SAT-2/XIV/2023" belongs to the SAT-2/XIV genotype, which is confirmed by the data of nucleotide and amino acid analysis.
Пример 2. Адаптация штамма «SAT-2/XIV/2023» к перевиваемой монослойной культуре клеток почки сибирского горного козерога ПСГК-30. Example 2. Adaptation of the strain "SAT-2/XIV/2023" to the transplantable monolayer culture of Siberian ibex kidney cells PSGK-30.
Для заражения перевиваемой монослойной культуры клеток почки сибирского горного козерога ПСГК-30 использовали 10%-ную афтозную суспензию вируса ящура, полученную из афт свиньи (2 пассаж). Посевная концентрация клеток составляла 0,20-0,25 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,001 ТЦД50/кл. По результатам исследования репродукция вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» проходила при специфическом разрушении монослоя на 90-100% за 13 ч. В течение 6 последовательных пассажей отмечали рост значений титра инфекционной активности вируса от 6,05±0,10 до 7,05±0,10 lg ТЦД50/см3.To infect the continuous monolayer culture of Siberian ibex kidney cells PSGK-30, a 10% aphthous suspension of foot-and-mouth disease virus obtained from pig aphthae (passage 2) was used. The inoculation concentration of cells was 0.20-0.25 million cells/cm 3 , the dose of virus infection was 0.001 TCID 50 /cell. According to the study results, the reproduction of foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2/XIV/2023" occurred with specific destruction of the monolayer by 90-100% in 13 hours. Over the course of 6 consecutive passages, an increase in the titer of infectious activity of the virus was noted from 6.05 ± 0.10 to 7.05 ± 0.10 lg TCID 50 /cm 3 .
Максимальное значение титра инфекционной активности вируса было достигнуто на этапе 6 пассажа (7,05±0,10 lg ТЦД50/см3). Концентрация 146S частиц с 1 по 6 пассажи изменялась с 0,30±0,02 до 0,88±0,02 мкг/см3. При этом наибольшее количество 146S компонента отмечали на этапе 6 пассажа (0,88±0,02 мкг/см3). Степень достоверности (R2) результатов исследования в количественном варианте ОТ-ПЦР-РВ колебалась от 99,21 до 100,00%. Таким образом, на протяжении 6-ти последовательных пассажей была успешно проведена адаптация штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура к перевиваемой монослойной клеточной линии ПСГК-30. The maximum value of the virus infectious activity titer was achieved at the stage of passage 6 (7.05±0.10 lg TCID50 / cm3 ). The concentration of 146S particles from passages 1 to 6 changed from 0.30±0.02 to 0.88±0.02 μg/ cm3 . Moreover, the highest amount of the 146S component was noted at the stage of passage 6 (0.88±0.02 μg/ cm3 ). The reliability degree ( R2 ) of the study results in the quantitative version of RT-PCR-RV ranged from 99.21 to 100.00%. Thus, over the course of 6 consecutive passages, the adaptation of the SAT-2/XIV/2023 foot-and-mouth disease virus strain to the transplantable monolayer cell line PSGK-30 was successfully carried out.
Пример 3. Изучение условий монослойного культивирования вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» в промышленных масштабах. Example 3. Study of conditions for monolayer cultivation of foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2/XIV/2023" on an industrial scale.
В процессе промышленного культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в перевиваемой монослойной культуре клеток ПСГК-30 осуществляли подбор оптимальных условий культивирования вируса, анализируя разный состав поддерживающей среды, температурный фактор и дозу заражения клеток (n=5).In the process of industrial cultivation of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus in a continuous monolayer culture of PSGK-30 cells, the optimal conditions for culturing the virus were selected by analyzing the different composition of the supporting medium, the temperature factor and the dose of cell infection (n=5).
На первом этапе исследования оценивали влияние состава поддерживающей среды на репродукцию штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 в масштабах производства (на этапе с 5-го на 6-ой пассажи). Для сравнения применяли три среды с добавлением 2,0% фетальной сыворотки крови телят: 1) среда Игла DМЕМ; 2) среда RPMI-1640; 3) раствор Хэнкса. Посевная концентрация клеток составляла 0,20 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,1000-0,0001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли при температурах 35±0,2 - 38±0,2°С до разрушения клеточного монослоя не менее 85%. Результаты репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура с поддерживающими средами разного состава отражены в таблице 1. At the first stage of the study, the effect of the composition of the maintenance medium on the reproduction of the SAT-2/XIV/2023 foot-and-mouth disease virus strain in a monolayer culture of PSGK-30 cells on a production scale (at the stage from the 5th to the 6th passage) was assessed. For comparison, three media with the addition of 2.0% fetal calf blood serum were used: 1) Eagle's DMEM medium; 2) RPMI-1640 medium; 3) Hanks' solution. The cell inoculation concentration was 0.20 million cells/ cm3 , the virus infection dose was 0.1000-0.0001 TCID50 /cell. The virus was cultivated at temperatures of 35±0.2 - 38±0.2°C until the cell monolayer was destroyed by at least 85%. The results of reproduction of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus with support media of different compositions are shown in Table 1.
Из данных таблицы видно, что при репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 с применением поддерживающих сред разного состава, оптимальной является среда Хэнкса, позволяющая за 13-14 ч достичь специфического разрушения клеточного монослоя на 95-100% с накоплением в полученной суспензии 146S компонента в количестве 0,95±0,02 мкг/см3 и титром инфекционной активности 7,45±0,10 lg ТЦД50/см3. При использовании среды RPMI-1640 и Игла DMEM показатели репродукции вируса были ниже.The data in the table show that when reproducing the SAT-2/XIV/2023 foot-and-mouth disease virus strain in a monolayer culture of PSGK-30 cells using support media of different compositions, the optimal medium is Hanks' medium, which allows achieving specific destruction of the cell monolayer by 95-100% in 13-14 hours with the accumulation of the 146S component in the resulting suspension in an amount of 0.95±0.02 μg/cm 3 and an infectious activity titer of 7.45±0.10 lg TCID 50 /cm 3 . When using the RPMI-1640 medium and Eagle DMEM, the virus reproduction rates were lower.
На следующем этапе изучения условий монослойного культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в культуре клеток ПСГК-30 в условиях производства оценивали влияние на процесс репродукции вируса температурного фактора. Для этого культивирование вируса проводили в среде Игла DМЕМ с 2% сыворотки КРС при следующих температурах: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. Доза заражения культуры клеток вирусом ящура составляла 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли до разрушения клеточного монослоя на 85-100% в течение 13-28 ч. По итогам исследования выявили, что для полной репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 оптимальной является температура среды 37,0±0,2°С, при которой за 13-14 ч развитие ЦПД достигало 95-100% с накоплением 146S частиц, равным 0,95±0,02 мкг/см3 и титром инфекционной активности вируса 7,45±0,10 lg ТЦД50/см3.At the next stage of studying the conditions of monolayer cultivation of the SAT-2/XIV/2023 foot-and-mouth disease virus strain in the PSGK-30 cell culture under production conditions, the effect of the temperature factor on the virus reproduction process was assessed. For this purpose, the virus was cultivated in Eagle's DMEM medium with 2% bovine serum at the following temperatures: 35.0±0.2; 36.0±0.2; 37.0±0.2; 38.0±0.2°C. The dose of infection of the cell culture with the foot-and-mouth disease virus was 0.010-0.001 TCID50 /cell. The virus was cultured until the cell monolayer was 85-100% destroyed over 13-28 hours. The results of the study revealed that for complete reproduction of the SAT-2/XIV/2023 foot-and-mouth disease virus strain in a monolayer culture of PSGK-30 cells, the optimal temperature was 37.0±0.2°C, at which the CPE development reached 95-100% over 13-14 hours with an accumulation of 146S particles equal to 0.95±0.02 μg/ cm3 and a virus infectious activity titer of 7.45±0.10 lg TCID50 / cm3 .
Оценивали влияние дозы заражения монослоя клеток линии ПСГК-30 штаммом «SAT-2/XIV/2023» при культивировании в масштабах производства. Для этого использовали разные дозы вируса: 0,10-0,01; 0,010-0,001; 0,0010-0,0001 ТЦД50/кл. В качестве поддерживающей среды применяли среду Игла МЕМ с 2% сыворотки крови КРС. Репродукцию вируса проводили при температуре 37,0±0,2°С в течение 13-26 ч до специфического разрушения клеток на 85-100%. По итогам культивирования определяли концентрацию 146S компонента и титр инфекционной активности вируса ящура. Как следует из данных таблицы 1, наибольшее накопление 146S компонента вируса достигалось при дозе заражения 0,01-0,001 ТЦД50/кл. и составило 0,95±0,02 мкг/см3 с титром инфекционной активности вируса 7,45±0,10 lg ТЦД50/см3.The effect of the infection dose of the PSGK-30 cell line monolayer with the SAT-2/XIV/2023 strain was assessed during cultivation on a production scale. For this purpose, different doses of the virus were used: 0.10-0.01; 0.010-0.001; 0.0010-0.0001 TCID 50 /cell. The Eagle's MEM medium with 2% bovine blood serum was used as a maintenance medium. Virus reproduction was carried out at a temperature of 37.0±0.2°C for 13-26 hours until specific cell destruction by 85-100%. Based on the results of cultivation, the concentration of the 146S component and the titer of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus were determined. As follows from the data in Table 1, the highest accumulation of the 146S virus component was achieved at an infection dose of 0.01-0.001 TCID 50 /cell. and amounted to 0.95±0.02 μg/ cm3 with a titer of infectious activity of the virus of 7.45±0.10 lg TCID 50 / cm3 .
Таким образом, проведено изучение условий монослойного культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в культуре клеток ПСГК-30 в промышленных масштабах. В результате исследования определены следующие оптимальные параметры репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в монослойной клеточной линии ПСГК-30: 1) поддерживающая среда - среда Хэнкса; 2) температурный режим культивирования - 37,0±0,2°С; 3) доза заражения вирусом - 0,01-0,001 ТЦД50/кл.Thus, the conditions of monolayer cultivation of the foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2/XIV/2023" in the PSGK-30 cell culture were studied on an industrial scale. As a result of the study, the following optimal parameters for the reproduction of the foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2/XIV/2023" in the PSGK-30 monolayer cell line were determined: 1) maintenance medium - Hanks'medium; 2) cultivation temperature - 37.0±0.2°C; 3) virus infection dose - 0.01-0.001 TCID50 /cell.
Пример 4. Изучение условий суспензионного культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в промышленных масштабах. Example 4. Study of conditions for suspension cultivation of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus on an industrial scale.
При промышленном культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура в перевиваемой суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH проводили поиск оптимальных параметров для успешной репродукции возбудителя ящура, используя разные концентрации клеток, температурные условия и дозу заражения вирусом.During industrial cultivation of the strain "SAT-2/XIV/2023" genotype SAT-2/XIV of the foot-and-mouth disease virus in the continuous suspension culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells, a search was conducted for optimal parameters for successful reproduction of the foot-and-mouth disease pathogen using different cell concentrations, temperature conditions and the dose of virus infection.
На первом этапе работы определяли влияние посевной концентрации клеток линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в суспензии на репродукцию штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в промышленных масштабах. Для анализа подготовили суспензии со следующими концентрации клеток: 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 млн кл./см3. Температура культивирования вируса составляла 37,0±0,2°С, доза заражения вирусом - 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса проводили до специфической гибели клеток на 95-100%, которая осуществлялась в течение 9-20 ч. Результаты суспензионного культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в суспензии с разными концентрациями клеток представлены в таблице 2. At the first stage of the work, the influence of the seeding concentration of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells in suspension on the reproduction of the strain "SAT-2/XIV/2023" was determined. foot-and-mouth disease virus on an industrial scale. For analysis, suspensions with the following cell concentrations were prepared: 2.5; 3.0; 3.5; 4.0 million cells/cm3The virus cultivation temperature was 37.0±0.2°C, the virus infection dose was 0.010-0.001 TCD50/kl. Virus reproduction was carried out until specific cell death by 95-100%, which was carried out within 9-20 hours. Results of suspension cultivation of the strain "SAT-2/XIV/2023" The results of the analysis of the results of the study of the foot-and-mouth disease virus in suspension with different cell concentrations are presented in Table 2.
Как следует из таблицы 2, при культивировании вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH с разными концентрациями клеток, определили, что накопление 146S компонента в суспензии с концентрацией клеток 2,5 млн кл./см3 составило 1,02±0,02 мкг/см3, с концентрацией 3,0 млн кл./см3 - 1,15±0,02 мкг/см3, с концентрацией 3,5 млн кл./см3 - 1,23±0,02 мкг/см3, и с концентрацией 4,0 млн кл./см3 - 1,29±0,02 мкг/см3. Как следует из полученных данных для репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура достаточной является концентрация клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH в суспензии, равная 3,5 млн кл./см3 (при концентрации 4,0 млн кл./см3 концентрация незначительно выше, но затраты на производство по количеству клеток выше, исходя из этого, экономически целесообразно использовать концентрацию клеток, равную 3,5 млн кл./см3). Значение титра инфекционной активности вируса при этом составило 8,50±0,10 lg ТЦД50/см3.As follows from Table 2, when cultivating the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” in the suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH with different cell concentrations, it was determined that the accumulation of the 146S component in a suspension with a cell concentration of 2.5 million cells/cm3amounted to 1.02±0.02 μg/cm3, with a concentration of 3.0 million cells/cm3- 1.15±0.02 μg/cm3, with a concentration of 3.5 million cells/cm3- 1.23±0.02 μg/cm3, and with a concentration of 4.0 million cells/cm3- 1.29±0.02 μg/cm3. As follows from the data obtained for the reproduction of the strain "SAT-2/XIV/2023" For the foot-and-mouth disease virus, a sufficient concentration of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells in suspension is 3.5 million cells/cm3(at a concentration of 4.0 million cells/cm3the concentration is slightly higher, but the production costs per cell number are higher, based on this, it is economically feasible to use a cell concentration equal to 3.5 million cells/cm3). The titer of infectious activity of the virus was 8.50±0.10 lg TCD50/cm3.
На следующем этапе работы исследовали влияние температурного фактора на репродукцию штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в суспензионной культуре клеток линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в промышленных масштабах. Для этого репродукцию вируса проводили при следующих температурных условиях: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. Доза заражения культуры клеток вирусом составляла 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса проводили до ЦПД, равного не менее 85% (приоритет отдавали полной специфической деструкции клеток), в течение 12-20 ч. По результатам анализа определили, что для полной репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH оптимальной является температура среды 37,0±0,2°С, при которой в течение 12-13 ч наблюдается специфическая гибель клеток на 95-100% с высоким накоплением 146S компонента (1,23±0,02 мкг/см3) и титром инфекционной активности вируса 8,50±0,10 lg ТЦД50/см3.At the next stage of the work, the influence of the temperature factor on the reproduction of the strain "SAT-2/XIV/2023" was studied. foot-and-mouth disease virus in suspension culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells on an industrial scale. For this purpose, virus reproduction was carried out under the following temperature conditions: 35.0±0.2; 36.0±0.2; 37.0±0.2; 38.0±0.2°C. The dose of infection of cell culture with the virus was 0.010-0.001 TCID50/cell. The virus was cultured to a CPE of at least 85% (priority was given to complete specific destruction of cells) for 12-20 hours. Based on the analysis results, it was determined that for complete reproduction of the strain "SAT-2/XIV/2023" For the growth of foot-and-mouth disease virus in a suspension culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells, the optimal temperature is 37.0±0.2°C, at which specific cell death of 95-100% is observed within 12-13 hours with a high accumulation of the 146S component (1.23±0.02 μg/cm3) and a titer of infectious activity of the virus of 8.50±0.10 lg TCD50/cm3.
В ходе работы по изучению условий суспензионного культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в промышленных масштабах с применением культуры клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH оценивали влияние дозы заражения клеток. Для этого клеточные суспензии заражали вирусом в разных дозах: 0,10-0,01; 0,01-0,001; 0,001-0,0001 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса осуществляли при температуре 37,0±0,2°С в течение 13-22 ч до цитопатического действия, равного не менее 90%. По итогам культивирования определяли концентрацию 146S частиц и титр инфекционной активности вируса ящура. Как видно из данных таблицы 2, наибольшее накопление 146S компонента отмечали при дозе заражения 0,010-0,001 ТЦД50/кл. (1,23±0,02 мкг/см3) с титром инфекционной активности вируса, равным 8,50±0,10 lg ТЦД50/см3.In the course of work on studying the conditions of suspension cultivation of the strain "SAT-2/XIV/2023" of the foot-and-mouth disease virus on an industrial scale using the BHK-21/SUSP/ARRIAH cell culture, the effect of the cell infection dose was assessed. For this purpose, cell suspensions were infected with the virus at different doses: 0.10-0.01; 0.01-0.001; 0.001-0.0001 TCD50/cell. Virus reproduction was carried out at a temperature of 37.0±0.2°C for 13-22 hours until the cytopathic effect was at least 90%. Based on the results of cultivation, the concentration of 146S particles and the titer of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus were determined. As can be seen from the data in Table 2, the highest accumulation of the 146S component was noted at an infection dose of 0.010-0.001 TCD50/cl. (1.23±0.02 µg/cm3) with a titer of infectious activity of the virus equal to 8.50±0.10 lg TCD50/cm3.
Таким образом, проведено изучение трех параметров суспензионного культивирования штамма «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в промышленных масштабах. Выявлены оптимальные условия репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» в суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH: 1) концентрация клеток перед заражением - 3,5 млн кл./см3; 2) температурный режим культивирования - 37,0±0,2°С; 3) доза заражения вирусом - 0,010-0,001 ТЦД50/кл.Thus, a study of three parameters of suspension cultivation of the strain "SAT-2/XIV/2023" was carried out. genotype SAT-2/XIV of the foot-and-mouth disease virus in the suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH on an industrial scale. Optimal conditions for the reproduction of the strain "SAT-2/XIV/2023" in the suspension cell culture BHK-21/SUSP/ARRIAH were identified: 1) the concentration of cells before infection is 3.5 million cells/cm3; 2) cultivation temperature regime - 37.0±0.2°C; 3) virus infection dose - 0.010-0.001 TCD50/cl.
Пример 5. Инактивация суспензии вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023». Example 5. Inactivation of a suspension of foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023”.
По окончании цикла репродукции вируса ящура, не прекращая процесс термостатирования (37,0±0,2°С), в вируссодержащую суспензию добавляли подкисленный раствор аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) с рН, равным 8,2-8,6. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,028%. Инактивацию инфекционной активности вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» проводили в течение 12 часов при температуре 37,0±0,1°С и рН 7,45-7,65 с перемешиванием. At the end of the reproduction cycle of the foot-and-mouth disease virus, without stopping the thermostatting process (37.0 ± 0.2 ° C), an acidified solution of aminoethylethyleneimine (AEEI) with a pH of 8.2-8.6 was added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be equal to 0.028%. Inactivation of the infectious activity of the foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2 / XIV / 2023" was carried out for 12 hours at a temperature of 37.0±0.1°C and pH 7.45-7.65 with stirring.
Для определения времени полной инактивации после добавления АЭЭИ каждые 30 мин производили отбор проб. Полученные образцы проверяли на наличие инфекционной активности вируса ящура в первичной культуре клеток почки свиньи СП. Результаты представлены в таблице 3 и фиг. 2. To determine the time of complete inactivation after the addition of AEEI, samples were taken every 30 min. The obtained samples were tested for the presence of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus in the primary culture of SP pig kidney cells. The results are presented in Table 3 and Fig. 2.
Как видно из таблицы 3 и фиг. 2, полная инактивация инфекционной активности культурального вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023», репродуцированного в культиваторах, произошла через 3 часа после внесения инактиванта.As can be seen from Table 3 and Fig. 2, complete inactivation of the infectious activity of the cultured foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023”, reproduced in cultivators, occurred 3 hours after the introduction of the inactivator.
Готовые вирусные инактивированные суспензии исследовали в реакции связывания комплемента для оценки содержания в них компонентов вируса. Концентрация 146S компонента составила 1,20±0,03 мкг/см3, а общего вирусного белка - 1,64±0,03 мкг/см3. The prepared viral inactivated suspensions were studied in the complement fixation reaction to assess the content of viral components in them. The concentration of the 146S component was 1.20±0.03 μg/cm 3 , and that of the total viral protein was 1.64±0.03 μg/cm 3 .
Пример 6. Подбор условий очистки суспензии вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023». Example 6. Selection of conditions for purification of a suspension of foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2/XIV/2023".
Суспензию вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023», полученную при репродукции в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH, подвергли инактивации (как представлено в примере 5) и очистке. Для получения очищенного антигена вируса ящура использовали полигексаметиленгуанидин (ПГМГ) с концентрациями 0,024, 0,028 и 0,032%. До и после процесса очистки антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» в количественном варианте реакции связывания комплемента определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов. Результаты анализа отражены в таблице 4.The suspension of the foot-and-mouth disease virus strain "SAT-2/XIV/2023" obtained by reproduction in the suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH was subjected to inactivation (as presented in Example 5) and purification. Polyhexamethylene guanidine (PHMG) with concentrations of 0.024, 0.028 and 0.032% was used to obtain the purified foot-and-mouth disease virus antigen. Before and after the purification process of the foot-and-mouth disease virus antigen strain "SAT-2/XIV/2023" In the quantitative version of the complement fixation reaction, the concentration of total viral protein and immunogenic components was determined. The results of the analysis are shown in Table 4.
Как следует из данных таблицы 4, в результате очистки антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» с помощью ПГМГ в концентрации 0,024% отмечали снижение концентрации балластного белка на 7%, иммуногенных компонентов - на 1,0%. При использовании ПГМГ в концентрации 0,028% наблюдали снижение количества балластного белка на 13%, 146S компонента - на 2,1%. Применяя ПГМГ в концентрации 0,032% содержание балластного белка уменьшалось на 20%, а иммуногенных компонентов - на 9,3%. Таким образом, исследуя условия очистки антигена штамма «SAT-2/XIV/2023», пришли к выводу о том, что для получения очищенного продукта оптимально использовать ПГМГ с концентрацией 0,028%.As follows from the data in Table 4, as a result of purification of the foot-and-mouth disease virus antigen of the strain “SAT-2/XIV/2023” Using PHMG at a concentration of 0.024%, a decrease in the concentration of ballast protein by 7% and immunogenic components by 1.0% was noted. When using PHMG at a concentration of 0.028%, a decrease in the amount of ballast protein by 13% and the 146S component by 2.1% was observed. Using PHMG at a concentration of 0.032%, the content of ballast protein decreased by 20% and immunogenic components by 9.3%. Thus, studying the conditions for purification of the antigen of the strain "SAT-2/XIV/2023", we came to the conclusion that it is optimal to use PHMG with a concentration of 0.028% to obtain a purified product.
Пример 7. Подбор условий концентрирования суспензии антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура. Example 7. Selection of conditions for concentrating the suspension of the antigen of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus.
Культуральную инактивированную суспензию штамма «SAT-2/XIV/2023», полученную с применением суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH, подвергали концентрированию в 8 раз по объему. Для увеличения концентрации иммуногенных компонентов антигена вируса ящура использовали следующие приемы: 1) добавление полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 4 ч; 2) добавление полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 12 ч; 3) концентрирование с помощью гидроокиси алюминия (10% коллоидный раствор в количестве 40%, антиген вируса - 60% от общего объема).The culture inactivated suspension of the SAT-2/XIV/2023 strain obtained using the BHK-21/SUSP/ARRIAH suspension cell line was concentrated 8 times by volume. The following techniques were used to increase the concentration of immunogenic components of the foot-and-mouth disease virus antigen: 1) adding polyethylene glycol (PEG-6000) at a concentration of 50% to the antigen in a ratio of 1:4, with an exposure of 4 hours; 2) adding polyethylene glycol (PEG-6000) at a concentration of 50% to the antigen in a ratio of 1:4, with an exposure of 12 hours; 3) concentration using aluminum hydroxide (10% colloidal solution in an amount of 40%, virus antigen - 60% of the total volume).
До и после процесса концентрирования суспензии антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов в количественном варианте РСК. Результаты исследований представлены в таблице 5, из которой следует, что при концентрировании антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура с помощью ПЭГ-6000 в течение 4 ч отмечали увеличение содержания компонентов по сравнению с исходными значениями (до концентрирования) в 6,2 раз. Используя тот же полимер, но повышая время воздействия до 12 ч, увеличили концентрацию компонентов вируса в 7,1 раз. Применяя метод сорбирования с помощью гидроксида алюминия, удалось увеличить количество иммуногенных компонентов антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в суспензии в 8,0 раз (от теоретического 8,0 раз). Таким образом, исследуя условия концентрирования антигена штамма «SAT-2/XIV/2023», пришли к выводу о том, что оптимальным способом увеличения концентрации компонентов вируса ящура является метод сорбирования с применением коллоидного раствора гидроксида алюминия.Before and after the process of concentrating the suspension of the foot-and-mouth disease virus antigen strain "SAT-2/XIV/2023" the concentration of total viral protein and immunogenic components in the quantitative version of the RSC was determined. The results of the studies are presented in Table 5, from which it follows that when concentrating the antigen of the strain "SAT-2/XIV/2023" foot-and-mouth disease virus with PEG-6000 for 4 hours showed an increase in the content of components compared to the initial values (before concentration) by 6.2 times. Using the same polymer, but increasing the exposure time to 12 hours, the concentration of virus components increased by 7.1 times. Using the sorption method with aluminum hydroxide, it was possible to increase the amount of immunogenic components of the antigen of the strain "SAT-2 / XIV / 2023" foot-and-mouth disease virus in suspension by 8.0 times (from the theoretical 8.0 times). Thus, studying the conditions for concentrating the antigen of the strain "SAT-2/XIV/2023", we came to the conclusion that the optimal way to increase the concentration of foot-and-mouth disease virus components is the sorption method using a colloidal solution of aluminum hydroxide.
Пример 8. Подбор адъюванта и соотношения антиген-адъювант. Example 8. Selection of adjuvant and antigen-adjuvant ratio.
При изготовлении моновалентной сорбированной вакцины против вируса ящура использовали 4,0% гидроокиси алюминия в пересчете на сухое вещество и сапонин в количестве 2,0 мг в дозе.In the production of a monovalent sorbed vaccine against foot-and-mouth disease virus, 4.0% aluminum hydroxide based on dry matter and saponin in an amount of 2.0 mg per dose were used.
Пример 9. Компоновка вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV культуральной инактивированной сорбированной. Example 9. Composition of the vaccine against foot-and-mouth disease genotype SAT-2/XIV, culture-based, inactivated, sorbed.
Из полученного концентрата антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» изготовили вакцину против ящура генотипа SAT-2/XIV культуральную инактивированную сорбированную с применением в качестве адъюванта гидроокиси алюминия и сапонина. Количество 146S иммуногенного компонента в 1,0 см3 готового антигена составило 9,36±0,03 мкг (табл. 5).From the obtained concentrate of foot-and-mouth disease virus antigen strain "SAT-2/XIV/2023" produced a vaccine against foot-and-mouth disease genotype SAT-2/XIV, culture inactivated sorbed using aluminum hydroxide and saponin as an adjuvant. The amount of 146S immunogenic component in 1.0 cm3The content of the prepared antigen was 9.36±0.03 μg (Table 5).
Пример 10. Иммунизация животных вакциной против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной. Example 10. Immunization of animals with a vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain “SAT-2/XIV/2023” of the cultured inactivated sorbed variety .
Из полученной вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV культуральной инактивированной сорбированной был приготовлен ряд разведений для КРС с 4-х кратным шагом. 15 голов КРС разделили на 3 группы по 5 голов в каждой. Иммунизирующая доза составляла 2,0 см3. Первую группу КРС (№№ 1-5) иммунизировали вакциной без разведения, вторую группу КРС (№№ 6-10) привили вакциной, разведенной 1/4, третья группа КРС (№№ 11-15) - вакциной, разведенной 1/16. Препарат вводили внутримышечно в среднюю треть шеи. В качестве контроля вируса оставили 2 головы без вакцинации. A series of dilutions for cattle with a 4-fold step were prepared from the obtained vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV, cultured inactivated adsorbed. 15 heads of cattle were divided into 3 groups of 5 heads each. The immunizing dose was 2.0 cm 3 . The first group of cattle (Nos. 1-5) was immunized with the vaccine without dilution, the second group of cattle (Nos. 6-10) was vaccinated with the vaccine diluted 1/4, the third group of cattle (Nos. 11-15) - with the vaccine diluted 1/16. The preparation was administered intramuscularly into the middle third of the neck. Two heads without vaccination were left as a virus control.
Пример 11. Исследование сывороток крови вакцинированных животных на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура. Example 11. Study of blood serum of vaccinated animals for the presence of antibodies to non-structural proteins of foot-and-mouth disease virus.
Сыворотки крови от КРС, полученные до иммунизации животных, через 14 суток после начала тестирования вакцины на авирулентность и безвредность и на 14 сутки после иммунизации, исследовали на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура с помощью блокирующего варианта иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с рекомендациями OIE (МЭБ) [3]. Тестирование полученных сывороток проводили с использованием тест-системы для ИФА «Prio CHECK®FMDV NSP ELISA for in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs» (Prionics Lelystad B.V., Нидерланды). Полученные результаты исследований отражены в таблице 6, из которой видно, что сыворотки крови животных не содержали антител к неструктурным белкам вируса ящура (значения PI для сывороток крови КРС < 50%).Cattle blood sera obtained before immunization of animals, 14 days after the start of testing the vaccine for avirulence and harmlessness, and 14 days after immunization were tested for the presence of antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus using a blocking version of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in accordance with OIE recommendations [3]. The obtained sera were tested using the ELISA test system "Prio CHECK ® FMDV NSP ELISA for in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs" (Prionics Lelystad BV, the Netherlands). The obtained research results are reflected in Table 6, which shows that the animal blood sera did not contain antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus (PI values for cattle blood sera < 50%).
Пример 12. Определение авирулентности и безвредности вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной Example 12. Determination of the avirulence and harmlessness of the vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" of the cultured inactivated sorbed
Для определения авирулентности вакцины на КРС отобранную пробу вакцинного препарата вводили внутрикожно по 0,1 см3. В исследовании использовали КРС массой 250-300 кг. В течение 10 суток наблюдения животные остались клинически здоровыми, и при патологоанатомическом исследовании не было обнаружено изменений, характерных для ящура. Данные результаты свидетельствовали об отсутствии вирулентных свойств разработанной вакцины.To determine the avirulence of the vaccine on cattle, a selected sample of the vaccine preparation was administered intradermally at 0.1 cm 3 . Cattle weighing 250-300 kg were used in the study. During 10 days of observation, the animals remained clinically healthy, and pathological examination did not reveal changes characteristic of foot-and-mouth disease. These results indicated the absence of virulent properties of the developed vaccine.
Контроль безвредности продукта на КРС проводили путём внутримышечного введения вакцины в дозе 6,0 см3. Срок наблюдения также составлял 10 суток. Следует отметить, что после иммунизации температура тела животного может повышаться до 41,5°С и удерживаться на этом уровне в течение 1-2 суток.The harmlessness of the product on cattle was controlled by intramuscular administration of the vaccine at a dose of 6.0 cm 3 . The observation period also amounted to 10 days. It should be noted that after immunization, the animal's body temperature can rise to 41.5°C and remain at this level for 1-2 days.
По результатам исследований вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральная инактивированная сорбированная была безвредна, все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.According to the research results, the vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" is a culture-based inactivated sorbed vaccine was harmless, all animals remained clinically healthy during the observation period, and pathological analysis did not reveal tissue necrosis at the site of vaccine administration.
Пример 13. Изучение иммуногенных свойств вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной по способности индуцирования вируснейтрализующих антител у естественно восприимчивых животных. Example 13. Study of the immunogenic properties of the vaccine against foot-and-mouth disease of genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" cultured inactivated adsorbed by the ability to induce virus-neutralizing antibodies in naturally susceptible animals.
На 21 сутки после введения вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной у КРС отбирали кровь и проводили исследование полученных сывороток крови в реакции микронейтрализации [3]. Выявлено, что у КРС, иммунизированных вакциной в цельной дозе (5 голов), средние значения титра антител составили 8,30±0,11 log2 SN50, с разведением 1/4 (5 голов) - 4,40±0,14 log2 SN50, с разведением 1/16 (5 голов) - 3,10±0,22 log2 SN50 (табл. 7). Полученные данные реакции микронейтрализации (РМН) свидетельствуют о том, что после введения вакцины в цельном виде обеспечивается формирование гуморального иммунитета с защитными титрами штаммоспецифических антител (5,5 и более log2 SN50), что соответствует требованиям международных стандартов [3].On the 21st day after the administration of the SAT-2/XIV genotype foot-and-mouth disease vaccine from the SAT-2/XIV/2023 strain, blood was collected from cattle and the obtained blood sera were tested in a microneutralization reaction [3]. It was found that in cattle immunized with the vaccine in a whole dose (5 heads), the average antibody titer values were 8.30±0.11 log 2 SN 50 , with a dilution of 1/4 (5 heads) - 4.40±0.14 log 2 SN 50 , with a dilution of 1/16 (5 heads) - 3.10±0.22 log 2 SN 50 (Table 7). The obtained data from the microneutralization reaction (MNR) indicate that after the administration of the vaccine in its entirety, the formation of humoral immunity with protective titers of strain-specific antibodies (5.5 or more log 2 SN 50 ) is ensured, which meets the requirements of international standards [3].
Пример 14. Изучение защитной способности вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной путем контрольного заражения естественно восприимчивых животных. Example 14. Study of the protective capacity of the vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" cultured inactivated sorbed by challenge infection of naturally susceptible animals.
Крупный рогатый скот, иммунизированный в количестве 15 голов, вакциной в цельном виде и в разведениях, заражали контрольным штаммом «SAT-2/XIV/2023» генотипа SAT-2/XIV вируса ящура, адаптированного к этим животным в слизистую оболочку языка в дозе 104,0 ИД50/0,20 см3 (в две точки по 0,10±0,05 см3). Спустя 7 суток после заражения всех животных подвергли эвтаназии и провели патологоанатомический осмотр. Защищенными от ящура считали животных, у которых на конечностях отсутствовали поражения.Cattle immunized in the amount of 15 heads with the vaccine in whole form and in dilutions were infected with the control strain "SAT-2/XIV/2023" genotype SAT-2/XIV of the foot-and-mouth disease virus adapted to these animals in the mucous membrane of the tongue at a dose of 104.0ID50/0.20 cm3(in two points of 0.10±0.05 cm3). Seven days after infection, all animals were euthanized and underwent pathological examination. Animals with no lesions on their limbs were considered protected from foot-and-mouth disease.
Результаты контрольного заражения представлены в таблице 7, из которой следует, что вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральная инактивированная сорбированная в цельном виде и в разведении 1/4, введенная в однократной дозе (2,0 см3) защищает КРС от заражения гомологичным штаммом всех животных (5 из 5 голов).The results of the control infection are presented in Table 7, from which it follows that the vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" culture inactivated adsorbed in whole form and in a dilution of 1/4, administered in a single dose (2.0 cm3 ) protects cattle from infection with a homologous strain of all animals (5 out of 5 heads).
Вакцинный препарат, инокулированный в разведении 1/16, защитил 4 из 5 животных. По результатам контрольного заражения было установлено, что в прививном объеме данной вакцины содержится 24,25 ПД50 и 0,08 ИмД50 для КРС.The vaccine preparation inoculated at a dilution of 1/16 protected 4 out of 5 animals. According to the results of the control infection, it was established that the inoculation volume of this vaccine contains 24.25 PD 50 and 0.08 IMD 50 for cattle.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральная инактивированная сорбированная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральная инактивированная сорбированная обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического штамма вируса ящура серотипа SAT-2 генотипа SAT-2/XIV, циркулирующего в странах Африки, Ближнего Востока и Азии.Thus, the above information indicates that the vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023", cultural inactivated sorbed, embodying the proposed invention, is intended for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology; the possibility of implementing the presented is confirmed; the vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023", cultural inactivated sorbed, has high immunogenic activity and is capable of providing effective protection of susceptible animals against the epizootic strain of foot-and-mouth disease virus of serotype SAT-2 genotype SAT-2/XIV, circulating in Africa, the Middle East and Asia.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральная инактивированная сорбированная»:Sources of information taken into account when drafting the description of the invention for the application for the issuance of a Russian patent for the invention "Vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" cultural inactivated sorbed":
1. Ящур. Меры профилактики. URL: http://89.rospotrebnadzor.ru/directions/epid_nadzor/146902 (Дата обращения: 11.11.2022).1. Foot-and-mouth disease. Preventive measures. URL: http://89.rospotrebnadzor.ru/directions/epid_nadzor/146902 (Accessed: 11.11.2022).
2. Опасность болезни ящура. URL: https://vet.astrobl.ru/press-release/opasnost-bolezni-yashchura (Дата обращения: 11.11.2022).2. The danger of foot-and-mouth disease. URL: https://vet.astrobl.ru/press-release/opasnost-bolezni-yashchura (Accessed: 11.11.2022).
3. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. - Paris, 2022 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.3. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. - Paris, 2022 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
4. Бурдов А. Н., Дудников А. И., Малярец П. В. и др. Ящур. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.4. Burdov A. N., Dudnikov A. I., Malyarets P. V., et al. Foot-and-mouth disease. - M.: Agropromizdat, 1990. - 320 p.
5. Пономарев А. П., Узюмов В. Л., Груздев К. Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. - Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с.5. Ponomarev A. P., Uzyumov V. L., Gruzdev K. N. Foot-and-mouth disease virus: structure, biological and physicochemical properties. - Vladimir: Foliant, 2006. - 250 p.
6. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.6. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M./ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
7. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateies: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p. 13-21.7. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strategies: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p. 13-21.
8. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J. M. Pachecoa, Т. Doel [et. al.] // Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.8. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J. M. Pachecoa, T. Doel [et. al.] // Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.
9. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.9. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M./ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
10. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.10. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
11. Официальный сайт The FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm (Дата обращения 11.11.2022).11. Official website of the FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm (Accessed 11.11.2022).
12. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - Р. 746-754.12. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - R. 746-754.
13. Рахманов А.М. Современная эпизоотическая ситуация в мире по ящуру и меры ее контроля //Ветеринарная медицина мiжвiд. тем. наук. Харкiв, 2013. - С. 37-38.13. Rakhmanov A.M. Current epizootic situation in the world on foot-and-mouth disease and measures for its control // Veterinary medicine of interdisciplinary sciences. Kharkiv, 2013. - P. 37-38.
14. Longjam N., Tayo T. Antigenic variation of Foot and Mouth Disease Virus // Vet. World. - 2011. - Vol. 4(10). - P. 475-479.14. Longjam N., Tayo T. Antigenic variation of Foot and Mouth Disease Virus // Vet. World. - 2011. - Vol. 4(10). - P. 475-479.
15. Доронин М.И. Опосредованное определение титра вируса ящура в сырье для вакцины с применением метода изотермической амплификации вирусной РНК (NASBA) // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2022. - № 2. - С. 29-37.15. Doronin M.I. Indirect determination of foot-and-mouth disease virus titer in vaccine raw materials using the isothermal amplification of viral RNA (NASBA) method // Actual issues of veterinary biology. - 2022. - No. 2. - P. 29-37.
16. Мельник Р.Н., Хаустова Н.В., Мельник Н.В., Самуйленко А.Я., Гринь С.А., Святенко М.С., Литенкова И.Ю. Антигенная вариабельность вируса ящура серотипа А и обоснование необходимости получения новых актуальных производственных штаммов/ Ветеринария и кормление. - 2019. - №3. - С.29-31.16. Melnik R.N., Khaustova N.V., Melnik N.V., Samoylenko A.Ya., Grin' S.A., Svyatenko M.S., Litenkova I.Yu. Antigenic variability of foot-and-mouth disease virus serotype A and rationale for the need to obtain new relevant production strains / Veterinary science and feeding. - 2019. - No. 3. - P.29-31.
17. Paton D.J., Sumption K.J., Charleston B. Options for control of foot-and-mouth disease: knowledge, capability and policy/ Phil. Trans. R. Soc. B (2009) 364. - P. 2657-2667.17. Paton D.J., Sumption K.J., Charleston B. Options for control of foot-and-mouth disease: knowledge, capability and policy/ Phil. Trans. R. Soc. B (2009) 364. - pp. 2657-2667.
18. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.18. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
19. Методические рекомендации по определению концентрации 146S, 75S, 12S компонентов вакцинных штаммов культурального вируса ящура в реакции связывания комплемента (РСК) / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Утв. 21.09.17.19. Methodological recommendations for determining the concentration of 146S, 75S, 12S components of vaccine strains of culture foot-and-mouth disease virus in the complement fixation reaction (CFR) / FGBU "ARRIAH". - Approved 21.09.17.
20. Методические указания по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации: утв. Россельхознадзором 13.09.2017 / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир: 2017. - 24 с.20. Guidelines for determining the antigen match between epizootic isolates and production strains of foot-and-mouth disease virus in a cross-microneutralization reaction: approved by Rosselkhoznadzor on September 13, 2017 / FGBU "ARRIAH". - Vladimir: 2017. - 24 p.
21. Saitou N. and Nei M. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution 4:406-42.21. Saitou N. and Nei M. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution 4:406–42.
22. Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap. Evolution 39:783-791.22. Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap. Evolution 39:783–791.
Tamura K., Nei M., and Kumar S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 101:11030-11035.Tamura K., Nei M., and Kumar S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 101:11030–11035.
24. Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C., and Tamura K. (2018). MEGA 6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution 35:1547-1549.24. Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C., and Tamura K. (2018). MEGA 6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution 35:1547–1549.
Таблица 1Table 1
Результаты адаптации штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура при культивировании в перевиваемой монослойной культуре клеток ПСГК-30 в разных условиях Results of adaptation of the SAT-2/XIV/2023 strain of foot-and-mouth disease virus when cultivated in a continuous monolayer culture of PSGK-30 cells under different conditions
(n=5, p<0,01)(n=5, p<0.01)
2% SКРС Hanks' solution with 5% HBC +
2% S Cattle
Примечание: SКРС - сыворотка крови крупного рогатого скота, Note: S KRS - bovine serum,
ГБК - гидролизат белков крови, GBP - blood protein hydrolysate,
DМЕМ - название среды Игла, DMEM is the name of the Eagle medium,
RPMI-1640 - название культуральной среды, RPMI-1640 is the name of the culture medium,
ЦПД - цитопатическое действие.CPE - cytopathic effect.
Таблица 2Table 2
Результаты репродукции штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в перевиваемой суспензионной культуре клеток линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH с разной концентрацией клеток Results of reproduction of the strain "SAT-2/XIV/2023" of foot-and-mouth disease virus in a transplantable suspension culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells with different cell concentrations
(n=5, M±m, p<0,01) (n=5, M ± m, p<0.01)
млн кл./см3 Concentration of cells before infection,
million cells/ cm3
Таблица 3Table 3
Исследование кинетики инактивации суспензии вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» Study of the kinetics of inactivation of the foot-and-mouth disease virus suspension strain "SAT-2/XIV/2023"
(n=5, p<0,05)(n=5, p<0.05)
Таблица 4Table 4
Содержание компонентов штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в суспензиях до и после очистки Content of components of strain "SAT-2/XIV/2023" foot and mouth disease virus in suspensions before and after purification
(n=5, M±m, p<0,005) (n=5, M ± m, p<0.005)
0,024%PGMG,
0.024%
0,032% PGMG,
0.032%
Примечание: концентрацию балластного белка определяли по формуле Калькара: Note: the concentration of ballast protein was determined using the Kalkar formula:
С=1,45 × А280-0,74 × А260,C=1.45 × A 280 -0.74 × A 260 ,
где, А280 - значение оптической плотности при длине волны 280 нм, А260 - значение оптической плотности при длине волны 260 нм, where, A 280 is the optical density value at a wavelength of 280 nm, A 260 is the optical density value at a wavelength of 260 nm,
ПГМГ - полигексаметиленгуанидин (флокулянт).PHMG - polyhexamethylene guanidine (flocculant).
Таблица 5Table 5
Содержание компонентов антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в суспензиях до и после концентрирования Content of antigen components of strain "SAT-2/XIV/2023" foot-and-mouth disease virus in suspensions before and after concentration
(n=5, M±m, p<0,01) (n=5, M ± m, p<0.01)
Примечание: ПЭГ - полиэтиленгликоль, Note: PEG - polyethylene glycol,
ОВБ - общий вирусный белок.OVB - total viral protein.
Таблица 6Table 6
Результаты исследования сывороток крови КРС на антитела к неструктурным белкам вируса ящура до и после введения разработанной вакцины (предлагаемое изобретение)Results of the study of cattle blood serum for antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus before and after the introduction of the developed vaccine ( proposed invention )
Таблица 7Table 7
Исследование гуморального иммунитета и иммуногенной активности вакцины против ящура генотипа SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральной инактивированной сорбированной (предлагаемое изобретение) на крупном рогатом скотеStudy of humoral immunity and immunogenic activity of the vaccine against foot-and-mouth disease of the genotype SAT-2/XIV from the strain "SAT-2/XIV/2023" cultural inactivated sorbed ( proposed invention ) on cattle
XIV/2023» « SAT-2/
XIV/2023 »
24,250.08/
24,25
Примечание: «-» отсутствие генерализации процесса ящура, РМН - реакция микронейтрализации.Note: “-” absence of generalization of the foot-and-mouth disease process, RMN – microneutralization reaction.
--->--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="FMD-Vaccine-SAT-2 <ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="FMD-Vaccine-SAT-2
XIV 2023.xml" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2" XIV 2023.xml" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2"
productionDate="2023-12-11">productionDate="2023-12-11">
<ApplicationIdentification><ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-12-11</FilingDate> <FilingDate>2023-12-11</FilingDate>
</ApplicationIdentification></ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>560</ApplicantFileReference> <ApplicantFileReference>560</ApplicantFileReference>
<EarliestPriorityApplicationIdentification> <EarliestPriorityApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-12-11</FilingDate> <FilingDate>2023-12-11</FilingDate>
</EarliestPriorityApplicationIdentification> </EarliestPriorityApplicationIdentification>
<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ "Федеральный центр охраны <ApplicantName languageCode="ru">Federal State Budgetary Institution "Federal Center for Security
здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ")</ApplicantName>Animal Health" (Federal State Budgetary Institution "ARRIAH")</ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>FGBI "ARRIAH"</ApplicantNameLatin> <ApplicantNameLatin>FGBI "ARRIAH"</ApplicantNameLatin>
<InventorName languageCode="ru">Доронин Максим <InventorName languageCode="ru">Doronin Maxim
Игоревич</InventorName>Igorevich</InventorName>
<InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin> <InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Вакцина против ящура генотипа <InventionTitle languageCode="en">FMD vaccine genotype
SAT-2/XIV из штамма «SAT-2/XIV/2023» культуральная инактивированная SAT-2/XIV from strain "SAT-2/XIV/2023" culture inactivated
сорбированная</InventionTitle>sorbed</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity> <SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1"> <SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq><INSDSeq>
<INSDSeq_length>645</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>645</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table><INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..645</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..645</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier><INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q1"><INSDQualifier id="q1">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table></INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>accacttcggccggtgagggcgctgacgtcgtgaccattgaccccacca <INSDSeq_sequence>accacttcggccggtgagggcgctgacgtcgtgaccattgaccccacca
cacaaggcgggtccgtgacaccggccaggcgcatccacaccgatgtggcattccttctggaccgcagcaccacaaggcgggtccgtgacaccggccaggcgcatccacaccgatgtggcattccttctggaccgcagcac
gcacgtccacaccaacaagaccaccttcaacatcgacctcatggacacaaaggagaaggcactggtaggggcacgtccacaccaacaagaccaccttcaacatcgacctcatggacacaaaggagaaggcactggtaggg
gccatactgcgctcagccacgtactacttctgtgacctggagatcgcgtgtgttggtgaacacaagaggggccatactgcgctcagccacgtactacttctgtgacctggagatcgcgtgtgttggtgaacacaagaggg
tgttttggcaaccgaatggggcgcccagaacaacaacgctgggtgacaaccccatggtgtactcgcacaatgttttggcaaccgaatggggcgcccagaacaacaacgctgggtgacaaccccatggtgtactcgcacaa
cggagtcactagatttgccattccgtacacggcaccgcaccggttgctttccactgtatacaacggtgagcggagtcactagatttgccattccgtacacggcaccgcaccggttgctttccactgtatacaacggtgag
tgcgactacaagaaagcctctaccgccatccgcggtgacagggccgtccttgcggccaagtacgctaacatgcgactacaagaaagcctctctaccgccatccgcggtgacagggccgtccttgcggccaagtacgctaaca
ccaagcacactctcccaagcactttcaactttggtcatgtgacggctgacgcacccgtcgacgtgtactaccaagcacactctcccaagcactttcaactttggtcatgtgacggctgacgcacccgtcgacgtgtacta
taggatgaaacgtgctgagttgtactgtccacgcgctcttcttcccgcgtacgaccacgtgggacgtgactaggatgaaacgtgctgagttgtactgtccacgcgctcttcttcccgcgtacgaccacgtgggacgtgac
agatttgacgcgccaattggagtggagagacaactc</INSDSeq_sequence>agatttgacgcgccaattggagtggagagacaactc</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq></INSDSeq>
</SequenceData></SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="2"> <SequenceData sequenceIDNumber="2">
<INSDSeq><INSDSeq>
<INSDSeq_length>215</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>215</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table><INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..215</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..215</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier><INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2"><INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table></INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>TTSAGEGADVVTIDPTTQGGSVTPARRIHTDVAFLLDRSTHVHTNKTTF <INSDSeq_sequence>TTSAGEGADVVTIDPTTQGGSVTPARRIHTDVAFLLDRSTHVHTNKTTF
NIDLMDTKEKALVGAILRSATYYFCDLEIACVGEHKRVFWQPNGAPRTTTLGDNPMVYSHNGVTRFAIPYNIDLMDTKEKALVGAILRSATYYFCDLEIACVGEHKRVFWQPNGAPRTTTLGDNPMVYSHNGVTRFAIPY
TAPHRLLSTVYNGECDYKKASTAIRGDRAVLAAKYANTKHTLPSTFNFGHVTADAPVDVYYRMKRAELYCTAPHRLLSTVYNGECDYKKASTAIRGDRAVLAAKYANTKHTLPSTFNFGHVTADAPVDVYYRMKRAELYC
PRALLPAYDHVGRDRFDAPIGVERQL</INSDSeq_sequence>PRALLPAYDHVGRDRFDAPIGVERQL</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq></INSDSeq>
</SequenceData></SequenceData>
</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>
<---<---
Claims (3)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2835906C1 true RU2835906C1 (en) | 2025-03-05 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2804875C1 (en) * | 2023-05-11 | 2023-10-09 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-2/vii genotype from sat-2/eritrea/1998 strain |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2804875C1 (en) * | 2023-05-11 | 2023-10-09 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-2/vii genotype from sat-2/eritrea/1998 strain |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| FRANCOIS F.MAREE et al."Intra-serotype SAT2 chimeric foot-and-mouth disease vaccine protects cattle against FMDV challenge"; Vaccine, 2015, N33, p.2909-2916/. BASTOS A.D.S., SANGARE O. "Geographic distribution of SAT-2 type foot-and-mouth disease virus genotypes in Africa"; Proceedings of the southern African society for veterinary epidemiology and preventive medicine"; 2001, Onderstepoort, South Africa, p. 20-26. ЛУГОВСКАЯ Н.Н. и др. "Диагностическая тест-система для выявления антител к структурным белкам вируса ящура генотипа SAT2/VII в жидкофазном блокирующем варианте ИФА"; Актуальные вопросы ветеринарной биологии, 2023, N 4(60), с.43-52. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| RU2603003C1 (en) | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 | |
| RU2699671C1 (en) | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion | |
| RU2835906C1 (en) | Inactivated cultural sorbed vaccine against foot-and-mouth disease of genotype sat-2/xiv from strain "sat-2/xiv/2023" | |
| RU2665849C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o | |
| RU2824660C1 (en) | Culture inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of sat-2/xiv genotype from sat-2/xiv/2023 strain | |
| RU2837673C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease of genotype sat-2/vii/ghb-12 from strain "sat-2/north america/2012" cultural inactivated emulsion | |
| RU2824662C1 (en) | Culture inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of asia-1/g-v genotype from asia-1/g-v/2006 strain | |
| RU2847822C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease genotype o/ea-2, monovalent, inactivated, emulsion | |
| RU2810131C1 (en) | CULTURE INACTIVATED SORBED VACCINE AGAINST FOOT AND MOUTH DISEASE OF O/ME-SA/PanAsia2ANT-10 GENOTYPE FROM O N2356/PAKISTAN/2018 STRAIN | |
| RU2847814C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease genotype a/africa/g-i, cultured monovalent inactivated emulsion | |
| RU2804875C1 (en) | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-2/vii genotype from sat-2/eritrea/1998 strain | |
| RU2849063C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease genotype sat-2/xiii culture inactivated emulsion | |
| RU2848204C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine for early protection against sat-1/i genotype foot-and-mouth disease | |
| RU2850550C1 (en) | Vaccine against sat-2/iv genotype culture inactivated emulsion | |
| RU2849065C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease genotype o/ea-4 culture inactivated emulsion | |
| RU2839345C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of sat-3/v genotype from "sat-3/uganda/v" strain | |
| RU2817381C1 (en) | Cultural inactivated sorbed vaccine against foot-and-mouth disease from the strain "a/egypt/euro-sa/2022" | |
| RU2802192C1 (en) | Inactivated sorbed vaccine against fmd of o/ea-2 genotype from o/kenya/2017 strain culture | |
| RU2847820C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease serotype o, cultural monovalent inactivated emulsion | |
| RU2849071C1 (en) | Vaccine against sat-2/iii genotype foot-and-mouth disease culture-inactivated emulsion | |
| RU2815536C1 (en) | Culture inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease from a/tanzania/2013 strain of a/africa/g-i genotype | |
| RU2847812C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease genotype a/asia/iran-05/her-10, culture-inactivated emulsion | |
| RU2840148C1 (en) | Culture-based inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease a/africa/g-vii genotype | |
| RU2816944C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease serotype o from strain "o/arriah/mya-98" |