RU2835503C1 - Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза и в-клеточной неходжкинской лимфомы - Google Patents
Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза и в-клеточной неходжкинской лимфомы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2835503C1 RU2835503C1 RU2023135910A RU2023135910A RU2835503C1 RU 2835503 C1 RU2835503 C1 RU 2835503C1 RU 2023135910 A RU2023135910 A RU 2023135910A RU 2023135910 A RU2023135910 A RU 2023135910A RU 2835503 C1 RU2835503 C1 RU 2835503C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lymphocytes
- proportion
- less
- peripheral blood
- leukocytes
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 67
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 title claims abstract description 36
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 208000028564 B-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 title claims description 68
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 title claims description 33
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 162
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 119
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims abstract description 104
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims abstract description 104
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 81
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 claims abstract description 76
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 claims abstract description 76
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims abstract description 69
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 39
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 30
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 claims description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 12
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 6
- 208000030289 Lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000008846 dynamic interplay Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001002 morphogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000491 multivariate analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Abstract
Предложенная группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии. Предложены способы дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ). Способы включают забор у пациента образца периферической крови и подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценку доли В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD22+ и CD23+ и оценку иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ в образце периферической крови в различных вариациях. Предложенная группа изобретений обеспечивает снижение трудоемкости процедуры дифференциальной диагностики ХЛЛ и НХЛ, повышение ее точности, а также повышение вероятности выявления заболевания на ранних стадиях заболевания за счет определения абсолютного количества лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови и оценки доли популяции HLADR+, CD4+, CD8+, CD3+HLADR+, CD20+, CD22+ и CD23+ и иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ в образце периферической крови. 7 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 4 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к области медицины, биохимии, иммунологии, онкологии.
В наши дни методами молекулярной диагностики устанавливается гистогенез, стадия дифференцировки и иммунофенотип опухолевых клеток, свойственный злокачественной зрелоклеточной лимфопролиферации - хроническому лимфоцитарному лейкозу (ХЛЛ) и неходжкинским В-клеточным лимфомам (НХЛ). Своевременная дифференциальная диагностика ХЛЛ и НХЛ в рамках диагностики лимфопролиферативных заболеваний является важной клинической задачей т.к. при схожих симптомах заболеваний подходы к их терапии разнятся.
ХЛЛ - злокачественное клональное лимфопролиферативное заболевание, характеризующееся накоплением атипичных зрелых CD5/CD19/CD23-положительных В-лимфоцитов преимущественно в крови, костном мозге, реже в лимфатических узлах, печени и селезенке [Chiorazzi N., Rai K.R., Ferrarini М. Chronic lymphocytic leukemia // N Engl J Med. - 2005. - T. 352, вып.8. - С.804-815]. Выявлены сотни маркеров, отражающих особенности этого заболевания [Hallek М. Chronic lymphocytic leukemia: 2020 update on diagnosis, risk stratification and treatment. Am J Hematol. 2019; 94:1266-1287. https://doi.org/10.1002/ajh.25595].
При В-клеточных НХЛ (далее - НХЛ) первичное поражение, злокачественная пролиферация зрелых В-лимфоцитов, локализуется в лимфатических узлах, селезенке, печени и вне лимфатических узлов в тканях (не нодальные формы), реже наблюдается лейкемизация костного мозга и выход клеток в кровеносную систему. Это группа онкологических заболеваний, отличающихся между собой по степени злокачественности, скорости развития опухолевого процесса и симптоматике.
В охране генетического гомеостаза организма иммунная система использует механизмы, в которых участвует многокомпонентный состав ее клеток и их продуценты. Описаны дисфункции иммунитета, генетические особенности и иммунофенотипы опухолевых В-клеток при зрелоклеточной лимфопролиферации [Д.Б. Казанский. Т-лимфоциты в развитии хронического лимфоцитарного лейкоза. Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. Ж-л Клиническая онкогематология, 2012, Т.5, №2, С. 84-95], [А.И. Свирновский. Хронический лимфоцитарный лейкоз: парадигмы и парадоксы. Медицинские новости. - 2008. - №13. - С. 7-19], [С.А. Луговская, М.Е. Почтарь. Гематологический атлас, М., 2016, 296], [Кузьмина Е.Г., Мушкарина Т.Ю., Константинова Т.В., Зацаренко С.В. и др., Субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток периферической крови при В-клеточном хроническом лимфоцитарном лейкозе/лимфоме из малых лимфоцитов. Клиническая Онкогематология, 2020, Т. 13, №4 С. 395-405], [Beekman R, Chapaprieta V, Russinol N, et al. The reference epigenome and regulatory chromatin landscape of chronic lymphocytic leukemia. Nat Med. 2018; 24:868-880], [Hacken E, Burger JA. Microenvironment interactions and В cell receptor signaling in chronic lymphocytic leukemia: implications for disease pathogenesis and treatment. In: Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Cell Research, Amsterdam: Elsevier B.V.; 2016, v. 1863.401-13]. Степень нарушения иммунокомпетентности в сочетании с присутствием в крови опухолевых клеток представляют собой комплексный образ (многомерный паттерн), отражающий динамическое взаимодействие в системе «иммунитет-опухоль». Этот многомерный образ, как правило, отражает определенные изменения состава и численности клеток периферической крови. Таким образом, разные патологии крови формируют уникальные паттерны признаков.
На современном этапе развития науки, для дифференциальной диагностики ХЛЛ и НХЛ необходима не только характеристика их морфогенетических и других молекулярных признаков, но и сопоставление их размерности с качеством противоопухолевого иммунитета.
Ближайшим аналогом заявленного способа является иммунофенотипирование образцов периферической крови и костного мозга [Луговская С.А., Почтарь М.Е. Гематологический атлас. 4-е издание, дополненное. М.: Триада, 2016. 434 с.], [Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению лимфопролиферативных заболеваний. Под ред. И.В. Поддубной, В.Г. Савченко. М, 2018. 356 с.].
Для осуществления процедуры иммунофенотипирования клетки в составе исследуемого образца обрабатывают флуоресцентно мечеными моноклональными антителами к различным поверхностным антигенам. Для анализа состава клеточных суспензий используются проточный цитофлуориметр. Исследование производится следующим образом. Лазерный луч направляется на кварцевую кювету, через которую поочередно поступают клетки, вызывая прямое и боковое светорассеяние лазера. На первом этапе производится оценка параметров рассеяния, которые отражают размер и гранулярность клеток в составе исследуемого образца. Данный подход позволяет выделить как минимум три типа клеток: лимфоциты (клетки мелкого размера без зернистости, моноциты (клетки с промежуточными характеристиками), и гранулоциты (клетки более крупного размера с зернистостью). Затем каждый тип клеток может быть проанализирован более детально. Так, при лимфопролиферативных заболеваниях анализируется состав т.н. лимфоцитарного гейта. При облучении клеток лазером происходит испускание монохроматического излучения определенной длины волны за счет антител, специфично связанных с антигенами на поверхности клеток и меченых различными флуорохромами. Оценивая интенсивность эмиссии, лимфоцит относят к определенному типу антигенположительных клеток (Т-, В-, NK-клетки). Сочетание различных флуорохромов и антител позволяет обнаруживать одновременно несколько антигенных детерминант на клетке интересующего типа. Основную проблему при проточной цитофлуориметрии представляет формирование панели моноклональных антител. При диагностике злокачественных лимфом и хронического лимфоцитарного лейкоза основное внимание при иммунофенотипировании уделяется учету бокового светорассеяния для выделения лимфоцитарного гейта, составу набора антител для определения основных характеристик пролиферирующих клеток и их клональности. Указанный метод является трудозатратным в связи с необходимостью забора материала лимфоузлов и костного мозга, а также в связи с необходимостью оценки большого количества различных антигенных детерминант, и, следовательно, использования панелей, включающих большое количество различных антител. Также указанный метод ограничен по точности.
Таким образом, техническим результатом заявленного изобретения является снижение трудоемкости процедуры дифференциальной диагностики ХЛЛ и НХЛ, повышение ее точности, а также повышение вероятности выявления заболевания на ранних стадиях заболевания за счет возможности организации исследования, например, в рамках периодического осмотра пациентов, входящих в группу риска развития заболевания.
Указанный технический результат достигается за счет способа дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающего забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценка доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценка доли и идентификация В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD23+ и оценка иммунорегуляторного индекса CD4+/ CD8+, в образце периферической крови, при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22%, и доля лимфоцитов HLADR+ составляет не менее 61,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22%, доля лимфоцитов HLADR+ составляет менее 61,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ менее 0,3% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22%, доля лимфоцитов HLADR+ составляет менее 61,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 0,3% от общего количества лимфоцитов определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85* 109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 79,05% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет менее 18,15% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 18,15% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, и доля В-лимфоцитов CD22+ составляет менее 21,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, доля В-лимфоцитов CD22+ составляет не менее 21,5%, и доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 17% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, доля В-лимфоцитов CD22+ составляет не менее 21,5%, и доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 17% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 27,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет менее 34,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 27,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 34,5% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, и доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 55,5% и менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет менее 39,4444% и не менее 29,7059% от общего количества лейкоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет не менее 39,4444% от общего количества лейкоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 1 1,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет менее 29,7059% от общего количества лейкоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 44,85%, и доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 28,1% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 44,85%, и доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 28,1% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, и иммунорегуляторный индекс CD4+/ CD8+ равен менее 0,179131, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4+/ CD8+ равен не менее 0,179131, и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 24% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4+/ CD8+ равен не менее 0,179131, и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 24% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
Как вариант, при реализации указанного способа оценка доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценка доли и идентификация В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD23+, и оценка иммунорегуляторного индекса CD4+/ CD8+ в образце периферической крови может проводится методом иммунофенотипирования. При этом, процедура иммунофенотипирования может, например, проводиться с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
Авторами изобретения разработан алгоритм и выполнена серия системных исследований по сопоставлению состояния иммунитета и признаков опухолевого роста по данным периферической крови при ХЛЛ и НХЛ. На первом этапе был проведен многомерный сравнительный анализ данных пациентов с ХЛЛ и НХЛ, а также практически здоровых людей. Проведено клинико-иммунологическое обследование 315 пациентов с ХЛЛ и 352 пациентов с НХЛ. Группу контроля составили данные 184 практически здоровых человека, преимущественно доноров крови; на момент взятия крови у которых не было отклонений в состоянии здоровья. Средний возраст пациентов с ХЛЛ составил 62 года, пациентов с НХЛ - 60 лет, практически здоровых людей - 58 лет. Для определения ХЛЛ и НХЛ использованы критерии классификации ВОЗ опухолей лимфоидной и кроветворной системы: объективный анализ ультразвукового, магнитно-резонансного обследования пациентов, иммуногистохимического исследования материала лимфатических узлов, тканей и костного мозга, иммунофенотипирование опухолевых клеток крови и костного мозга [С.А. Луговская, М. Е. Почтарь. Гематологический атлас, М., 2016, 296].
По гемограмме подсчитывали количество лейкоцитов, относительное и абсолютное число лимфоцитов. Состав ядросодержащих клеток оценивали в цельной крови после предварительного лизиса эритроцитов лизирующим раствором фирмы BD Biosciences. Далее в лимфоцитарном гейте определяли фенотипы субпопуляций иммунокомпетентных клеток и опухолевых В-лимфоцитов методами 2-6-цветной проточной цитометрии на приборе FACSCan или FACSCanto II (BD Biosciences) по известной методике [Swerdlow S.H., Campo Е., Pileri S.A. et al. The 2016 revision of the World Health Organization classification of lymphoid neoplasms. Blood 2016; 19;127(20):2375-90. DOI: 10.1182/blood-2016-01-643569].
Для многомерного анализа состояния иммунитета и признаков В-клеточной пролиферации для каждого пациента использовано по 13 показателей. Это: количество лейкоцитов, WBC абс, х109 кл/л, доля лимфоцитов (LYM), общих Т-клеток, CD3+CD16-; Т-хелперы, CD3+CD4+; Т-киллеры, CD3+CD8+; иммунорегуляторный индекс, CD4/CD8; процент NK-клеток, (CD16+CD3-); активированных Т-клеток, CD3+HLADR+; HLADR+ лимфоцитов (включает активированные Т-клетки и В-лимфоциты в лимфоцитарном гейте). Идентификация В-лимфоцитов проведена по маркерам CD19+, CD20+, CD23+.
Визуализация многомерных данных, характеризующих состояние иммунитета и В-клеточной пролиферации, проведена, используя самоорганизующиеся карты (СОКК, Self Organizing Maps, SOM), разработанные Т. Кохоненом [Kohonen, Essentials of the self-organizing map, Neural Networks 37 (2013) 52-65]. Этим методом многомерные данные проецируются в пространство пониженной размерности и визуализируются в виде двух(трех)мерной карты. На основе карты возможно осуществление кластеризации за счет выделения в ней векторов (показателей анализируемых признаков) пациентов и здоровых людей с близкими (похожими) характеристиками. Авторами изобретения определены показатели в многомерных структурах, контрастирующие данные в исследуемых группах «ХЛЛ», «НХЛ», и «Норма», которые затем использованы для разработки заявленного способа дифференциальной диагностики ХЛЛ и НХЛ.
Образы ХЛЛ и НХЛ, полученные с использованием СОКК, позволяют упростить способ дифференциальной диагностики данных заболеваний. Этот подход более прост, менее трудозатратен для дифференциальной диагностики ХЛЛ и НХЛ, и может быть использован для проведения скринингового определения указанных заболеваний.
Как вариант, заявленный способ может быть реализован следующим образом. У пациента проводится забор образца периферической крови. В полученном образце по гемограмме осуществляется подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов. Затем на проточном цитофлуориметре (FACSCanto II (BD Biosciences), используя метод 2-4-цветной проточной цитофлуориметрии, в образце периферической крови осуществляется оценка доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценка доли и идентификация В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD23+ и оценка иммунорегуляторного индекса CD4+/ CD8+.
На следующем этапе осуществляется интерпретация полученных данных.
1. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22% и доля лимфоцитов HLADR+ составляет не менее 61,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
2. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22% и доля лимфоцитов HLADR+ составляет менее 61,5% и доля В-лимфоцитов CD20+ менее 0,3% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
3. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22%, доля лимфоцитов HLADR+ составляет менее 61,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 0,3% от общего количества лимфоцитов определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
4. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22% и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 79,05% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
5. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет менее 18,15% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
6. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 18,15% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
7. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, и доля В-лимфоцитов CD22+ составляет менее 21,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
8. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+составляет менее 22%о, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, доля В-лимфоцитов CD22+ составляет не менее 21,5%, и доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 17% от общего количества лимфоцитов определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
9. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, доля В-лимфоцитов CD22+ составляет не менее 21,5%, и доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 17% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
10. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 27,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет менее 34,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
11. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 27,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 34,5% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
12. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, и доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 55,5% и менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
13. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет менее 39,4444% и не менее 29,7059% от общего количества лейкоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
14. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет не менее 39,4444% от общего количества лейкоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
15. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5%о от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет менее 29,7059% от общего количества лейкоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
16. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 44,85%, и доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 28,1% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
17. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 44,85%, и доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 28,1% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
18. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, и иммунорегуляторный индекс CD4+/ CD8+ равен менее 0,179131, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
19. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4+/ CD8+ равен не менее 0,179131, и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 24% от общего количества лимфоцитов, определяют хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
20. В случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4+/ CD8+ равен не менее 0,179131, и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 24% от общего количества лимфоцитов, определяют неходжкинскую лимфому (НХЛ).
На фиг.1 представлена схема реализации указанного способа.
На фиг.2 представлена ROC-кривая, характеризующая точность (качество) предложенного способа.
Полученное значение AUC (площади, ограниченной ROC-кривой и осью абсцисс) свидетельствует о высокой точности заявленного способа. Чем значение AUC ближе к 1, тем выше качество предложенной модели.
Заявленное изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.
Пример 1. Реализация заявленного способа
У пациента М. проводился забор образца периферической крови. В полученном образце по гемограмме определялась доля и количество лимфоцитов. Затем на проточном цитофлуориметре (FACSCanto II (BD Biosciences), используя метод 2-4-цветной проточной цитофлуориметрии осуществлялась оценка доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценка доли и идентификация В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD23+ и оценка иммунорегуляторного индекса CD4+/ CD8+. Абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составила 12,91*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составила 23%, доля лимфоцитов HLADR+ составила 56,5%, доля В-лимфоцитов CD20+ составила 0,2% от общего количества лимфоцитов. У пациента определен хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ).
Пример 2. Реализация заявленного способа
У пациента Е. проводился забор образца периферической крови. В полученном образце по гемограмме определялась доля и количество лимфоцитов. Затем на проточном цитофлуориметре (FACSCanto II (BD Biosciences), используя метод 2-4-цветной проточной цитофлуориметрии осуществлялась оценка доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценка доли и идентификация В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD23+ и оценка иммунорегуляторного индекса CD4+/ CD8+. Абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составило 13,43*109/л, доля Т-хелперов CD4+составило 19%о, доля В-лимфоцитов CD23+ составило 69,12%, доля В-лимфоцитов CD20+ составила 23,1%, доля В-лимфоцитов CD22+ составила 22,0%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составила 19% от общего количества лимфоцитов. У пациента определена неходжкинская лимфома (НХЛ),
Пример 3. Реализация заявленного способа.
У пациента В. проводился забор образца периферической крови. В полученном образце по гемограмме определялась доля и количество лимфоцитов. Затем на проточном цитофлуориметре (FACSCanto II (BD Biosciences), используя метод 2-4-цветной проточной цитофлуориметрии осуществлялась оценка доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценка доли и идентификация В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD23+ и оценка иммунорегуляторного индекса CD4+/ CD8+. Абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составило 10,56*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составило 25,0%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составило 53,8%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составило 44,67% от общего количества лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4+/ CD8+ равен 0,186543, доля В-лимфоцитов CD23+ составило 25% от общего количества лимфоцитов. У пациента определен хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ),
Пример 4. Сравнительная оценка точности заявленного способа. В рамках оценки точности анализа в дифференциальном определении ХЛЛ и НХЛ с использованием заявленного способа было проведено рандомизированное сравнительное исследование 10 пациентов с диагнозом ХЛЛ, 10 пациентов с диагнозом НХЛ заявленным способом, а также контрольным способом, включающим определение иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови (в соответствии с ближайшим аналогом заявленного изобретения). Для подтверждения диагноза (эталонный способ определения ХЛЛ) выполнено ультразвуковое, магнитно-резонансное исследование, иммуногистохимическое исследование материала лимфатических узлов и иммунофенотипирование образцов периферической крови и костного мозга [Луговская С.А., Почтарь М.Е. Гематологический атлас. 4-е издание, дополненное. М.: Триада, 2016. 434 с.], [Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению лимфопролиферативных заболеваний. Под ред. И.В. Поддубной, В.Г. Савченко. М., 2018. 356 с.].
Результаты исследования приведены в таблице 1.
По результатам сравнительной оценки точности анализа с использованием заявленного способа было установлено, что данный способ позволяет производить дифференциальную диагностику ХЛЛ и НХЛ с большей точностью, чем контрольный способ. При этом использование заявленного способа позволяет снизить трудоемкость процедуры определения при повышении ее точности.
Claims (36)
1. Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающий забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+ и оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD20+ в образце периферической крови,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22%, доля лимфоцитов HLADR+ составляет менее 61,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ менее 0,3% от общего количества лимфоцитов, диагностируют ХЛЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 22%, доля лимфоцитов HLADR+ составляет менее 61,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 0,3% от общего количества лимфоцитов, диагностируют НХЛ.
2. Способ по п. 1, где оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+ и оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD20+ в образце периферической крови проводят методом иммунофенотипирования.
3. Способ по п. 1, где иммунофенотипирование проводят с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
4. Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающий забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли популяции Т-хелперов CD4+, оценку доли В-лимфоцитов по маркерам CD20+ и CD23+ в образце периферической крови,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет менее 18,15% от общего количества лимфоцитов, диагностируют ХЛЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В- лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 18,15% и менее 21,5% от общего количества лимфоцитов, диагностируют НХЛ.
5. Способ по п. 4, где оценку доли популяции Т-хелперов CD4+, оценку доли В-лимфоцитов по маркерам CD20+ и CD23+ в образце периферической крови проводят методом иммунофенотипирования.
6. Способ по п. 4, где иммунофенотипирование проводят с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
7. Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающий забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценку доли В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD22+ и CD23+ в образце периферической крови,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, доля В-лимфоцитов CD22+ составляет не менее 21,5%, и доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 17% от общего количества лимфоцитов, диагностируют ХЛЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет не менее 11,85*109/л, доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 22%, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 79,05%, доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 21,5%, доля В-лимфоцитов CD22+ составляет не менее 21,5%, и доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+составляет не менее 17% от общего количества лимфоцитов, диагностируют НХЛ.
8. Способ по п. 7, где оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценку доли В-лимфоцитов по маркерам CD20+, CD22+ и CD23+ в образце периферической крови проводят методом иммунофенотипирования.
9. Способ по п. 7, где иммунофенотипирование проводят с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
10. Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающий забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли В-лимфоцитов по маркерам CD20+ и CD23+ в образце периферической крови,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 27,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет менее 34,5% от общего количества лимфоцитов, диагностируют ХЛЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 27,5%, и доля В-лимфоцитов CD20+ составляет не менее 34,5% от общего количества лимфоцитов, диагностируют НХЛ.
11. Способ по п. 10, где оценку доли В-лимфоцитов по маркерам CD20+ и CD23+ в образце периферической крови проводят методом иммунофенотипирования.
12. Способ по п. 10, где иммунофенотипирование проводят с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
13. Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающий забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли популяции Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD23+ в образце периферической крови,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет от 29,7059% до 39,4444% от общего количества лейкоцитов, диагностируют ХЛЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет не менее 39,4444% от общего количества лейкоцитов, диагностируют НХЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет не менее 56,5% от общего количества лимфоцитов, и доля лимфоцитов составляет менее 29,7059% от общего количества лейкоцитов, диагностируют НХЛ.
14. Способ по п. 13, где оценку доли популяции Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD23+ в образце периферической крови проводят методом иммунофенотипирования.
15. Способ по п. 13, где иммунофенотипирование проводят с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
16. Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающий забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD23+ в образце периферической крови,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 44,85%, и доля Т-хелперов CD4+ составляет не менее 28,1% от общего количества лимфоцитов, диагностируют ХЛЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 27,5%, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет не менее 44,85%, и доля Т-хелперов CD4+ составляет менее 28,1% от общего количества лимфоцитов, диагностируют НХЛ.
17. Способ по п. 16, где оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-хелперов CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD23+ в образце периферической крови проводят методом иммунофенотипирования.
18. Способ по п. 16, где иммунофенотипирование проводят с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
19. Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) и В-клеточной неходжкинской лимфомы (НХЛ), включающий забор у пациента образца периферической крови, подсчет количества лейкоцитов и лимфоцитов в образце периферической крови, оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD23+ и оценку иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ в образце периферической крови,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4+/CD8+ равен не менее 0,179131, и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет не менее 24% и менее 27,5% от общего количества лимфоцитов, диагностируют ХЛЛ,
при этом в случае, если абсолютное количество лейкоцитов в периферической крови составляет менее 11,85*109/л, доля Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+ составляет менее 55,5%, доля активированных Т-клеток CD3+HLADR+ составляет менее 44,85% от общего количества лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4+/CD8+ равен не менее 0,179131, и доля В-лимфоцитов CD23+ составляет менее 24% от общего количества лимфоцитов, диагностируют НХЛ.
20. Способ по п. 19, где оценку доли популяции лимфоцитов HLADR+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD8+, активированных Т-клеток CD3+HLADR+, оценку доли В-лимфоцитов по маркеру CD23+ и оценку иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ в образце периферической крови проводят методом иммунофенотипирования.
21. Способ по п. 19, где иммунофенотипирование проводят с использованием моноклональных антител к поверхностным дифференцировочным антигенам на клетках иммунной системы методом проточной цитофлуорометрии.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2835503C1 true RU2835503C1 (ru) | 2025-02-25 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2052199C1 (ru) * | 1992-06-15 | 1996-01-10 | Елена Тарасовна Дудко | Способ дифференциальной диагностики хронических лимфолейкозов и лейкемизации неходжкинских лимфом |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2052199C1 (ru) * | 1992-06-15 | 1996-01-10 | Елена Тарасовна Дудко | Способ дифференциальной диагностики хронических лимфолейкозов и лейкемизации неходжкинских лимфом |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ВОЙЦЕХОВСКИЙ В.В. и др. Хронический лимфолейкоз. Благовещенск, 2015, 178 c. PALMA M. et al. T cells in chronic lymphocytic leukemia display dysregulated expression of immune checkpoints and activation markers. Haematologica. 2017 Mar; 102(3): 562-572. Epub 2016 Dec 7. CRAIG F.E. et al. Flow cytometric immunophenotyping for hematologic neoplasms. Blood. 2008 Apr 15; 111(8): 3941-67. Epub 2008 Jan 15. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stetler-Stevenson et al. | Diagnostic utility of flow cytometric immunophenotyping in myelodysplastic syndrome | |
| Czystowska et al. | The immune signature of CD8+ CCR7+ T cells in the peripheral circulation associates with disease recurrence in patients with HNSCC | |
| KR102268963B1 (ko) | 머신러닝 기법으로 말초혈액 내 암 면역력을 평가하여 암을 진단하거나 치료반응을 예측하는 방법 및 이를 이용한 진단키트 | |
| Hamdy et al. | Circulating prostate specific antigen‐positive cells correlate with metastatic prostate cancer | |
| Fleisher et al. | Flow cytometry | |
| JP2018185316A (ja) | 循環腫瘍細胞の検出方法および哺乳類対象における癌の診断方法 | |
| US20130078667A1 (en) | Methods for detecting and collecting circulating tumor cells | |
| JPH02500297A (ja) | 単核白血球免疫システムの免疫調節状態の自動的評価のための方法及び装置 | |
| Choi et al. | Diagnostic value of peripheral blood immune profiling in colorectal cancer | |
| WO2000042431A1 (en) | Methods and assay kits for detecting mononuclear cell phenotype | |
| de Tute | Flow cytometry and its use in the diagnosis and management of mature lymphoid malignancies | |
| KR20200052356A (ko) | 면역요법에 대한 반응을 예측하는 방법 | |
| Liu et al. | The potential diagnostic power of CD138+ microparticles from the plasma analysis for multiple myeloma clinical monitoring | |
| Fisher et al. | Immunophenotyping lymphomas in dogs: a comparison of results from fine needle aspirate and needle biopsy samples | |
| JP5800149B2 (ja) | 標的細胞の検出方法 | |
| RU2835503C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики хронического лимфоцитарного лейкоза и в-клеточной неходжкинской лимфомы | |
| RU2831405C1 (ru) | Способ определения в-клеточной неходжкинской лимфомы | |
| RU2835466C1 (ru) | Способ определения хронического лимфоцитарного лейкоза | |
| Rout et al. | Clinical outcome and Ki67 evaluation in dogs with nodal small cell B‐cell lymphoma diagnosed by flow cytometry | |
| US10557849B2 (en) | Diagnostic of chronic myelomonocytic leukemia (CMML) by flow cytometry | |
| CN117222880A (zh) | 用于流式细胞术方法的阈值门控 | |
| Ahmad et al. | Flow cytometric analysis: four-year experience in a Tertiary Care Centre of Pakistan | |
| Biggerstaff et al. | Enumeration of leukocyte infiltration in solid tumors by confocal laser scanning microscopy | |
| Pastoret et al. | Integration of Immature granulocytes quantification with the version 2.0 UniCel DxH 800 in the hematoFlow strategy | |
| JP4768706B2 (ja) | 流体血球計算測定を使用する最小疾患レベルを監視するのに使用される腫瘍性細胞中の異常表現型の多次元検出方法 |