RU2832680C1 - Фармацевтические композиции, содержащие инсулин - Google Patents
Фармацевтические композиции, содержащие инсулин Download PDFInfo
- Publication number
- RU2832680C1 RU2832680C1 RU2021118063A RU2021118063A RU2832680C1 RU 2832680 C1 RU2832680 C1 RU 2832680C1 RU 2021118063 A RU2021118063 A RU 2021118063A RU 2021118063 A RU2021118063 A RU 2021118063A RU 2832680 C1 RU2832680 C1 RU 2832680C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- insulin
- ethoxy
- pharmaceutical composition
- formulations
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 141
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 79
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title abstract description 47
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title abstract description 47
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title abstract description 47
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 117
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 73
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 66
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 63
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims abstract description 43
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 41
- DLSWIYLPEUIQAV-UHFFFAOYSA-N Semaglutide Chemical compound CCC(C)C(NC(=O)C(Cc1ccccc1)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CCCCNC(=O)COCCOCCNC(=O)COCCOCCNC(=O)CCC(NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O)C(O)=O)NC(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC(=O)C(Cc1ccccc1)NC(=O)C(NC(=O)CNC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C)(C)NC(=O)C(N)Cc1cnc[nH]1)C(C)O)C(C)O)C(C)C)C(=O)NC(C)C(=O)NC(Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O DLSWIYLPEUIQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 229950011186 semaglutide Drugs 0.000 claims abstract description 41
- 108010060325 semaglutide Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 33
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims abstract description 17
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 claims abstract description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 202
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 29
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 29
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 abstract 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 143
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 97
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 89
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 35
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 24
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 19
- JADVWWSKYZXRGX-UHFFFAOYSA-M thioflavine T Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=[N+](C)C2=CC=C(C)C=C2S1 JADVWWSKYZXRGX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 6
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- FYZPCMFQCNBYCY-WIWKJPBBSA-N Insulin degludec Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]cn3)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc3ccccc3)C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc3c[nH]cn3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc3ccc(O)cc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O)C(O)=O)C(O)=O)NC1=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC FYZPCMFQCNBYCY-WIWKJPBBSA-N 0.000 description 5
- 108010092217 Long-Acting Insulin Proteins 0.000 description 5
- 102000016261 Long-Acting Insulin Human genes 0.000 description 5
- 229940100066 Long-acting insulin Drugs 0.000 description 5
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 5
- 108010050259 insulin degludec Proteins 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000000978 circular dichroism spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 4
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100025101 GATA-type zinc finger protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 3
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 3
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 3
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 238000000235 small-angle X-ray scattering Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 125000001207 fluorophenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002473 insulinotropic effect Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000013310 pig model Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241001313846 Calypso Species 0.000 description 1
- 101800004266 Glucagon-like peptide 1(7-37) Proteins 0.000 description 1
- 208000031773 Insulin resistance syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 201000010390 abdominal obesity-metabolic syndrome 1 Diseases 0.000 description 1
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- -1 hexamers Chemical compound 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229960004225 insulin degludec Drugs 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 208000011661 metabolic syndrome X Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- BAPROVDXKNPHAM-UHFFFAOYSA-N n-(2-aminoethyl)-3-(3,5-ditert-butyl-4-hydroxyphenyl)propanamide Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(CCC(=O)NCCN)=CC(C(C)(C)C)=C1O BAPROVDXKNPHAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001464 small-angle X-ray scattering data Methods 0.000 description 1
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано для лечения патологических состояний, связанных с диабетом. Предложена фармацевтическая композиция для лечения патологического состояния, связанного с диабетом, содержащая: 4,2 мМ производного инсулина, представляющего собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K ((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30; 0,49 мМ семаглутида; 1,5% вес/вес глицерина; 60 мМ фенола; 0 или 10 мМ м-крезола; 2,2±0,2 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина; 20 мМ хлорида натрия, и имеющая значение pH 7,4. Предложено также применение указанной фармацевтической композиции для лечения или облегчения заболевания, расстройства или состояния, связанного с диабетом 1 типа, диабетом 2 типа, нарушением толерантности к глюкозе, гипергликемией, дислипидемией, ожирением или метаболическим синдромом. Изобретение обеспечивает снижение степени образования олигомеров в месте инъекции и повышение стабильности композиции инсулина. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 9 ил., 17 табл., 8 пр.
Description
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ИНСУЛИН
Настоящая заявка выделена из заявки № 2019118696 на выдачу патента РФ на изобретение, поданной 15.12.2017 г., с испрашиванием приоритета по дате подачи заявки № 16204688.2, поданной 16.12.2016 г.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к области фармацевтических композиций для лечения патологических состояний, связанных с диабетом. Более конкретно, настоящее изобретение предусматривает фармацевтические композиции, содержащие ацилированное производное длительного действия аналога инсулина человека, и медицинское применение таких композиций для терапии путем введения базального инсулина.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Первичная цель инсулинотерапии при лечении метаболических расстройств заключается в получении гликемии на устойчивом близком к нормальному уровне путем замены или дополнения секреции эндогенного инсулина физиологическим образом, насколько это возможно, в послеобеденное время, а также между приемами пищи и в течение ночи. Разделение потребностей в базальном и связанном с приемом пищи (болюсный) инсулином представляет собой систематический подход в отношении подкожной инсулинотерапии.
Наиболее значимые фармакологические характеристики любого указанного инсулина - начало действия, профиль максимального эффекта, продолжительность действия и т.д., - главным образом определяются кинетикой его всасывания из места подкожной инъекции в системный кровоток.
Нековалентная опосредованная цинком олигомеризация представляет собой хорошо описанное свойство инсулиновых продуктов. При физиологическом значении pH инсулин человека растворим, но обладает тенденцией к самосборке в четко определенные гексамеры (т. е. частицу из шести единиц инсулина) путем координации двух ионов цинка (Zn++) с участками связывания с высокой аффинностью (B10His). Также хорошо известно, что фенольные лиганды, особенно фенол, специфически связываются с гексамером инсулина и способствуют образованию R-состояния гексамера. После инъекции фенольные лиганды быстро диффундируют из места инъекции. В отсутствие фенола в месте инъекции конформация и размер олигомера инсулина могут изменяться, также как и вязкость инсулинсодержащего раствора, что влияет на профиль пролонгированного действия.
В Jonassen et al., Pharm. Res. 2012 29 2104-2114 описан механизм продления действия инсулина деглудек, производного инсулина с цепью, ацилированной двумя остатками жирной кислоты, для введения один раз в день, и описана корреляция между высокой концентрацией цинка и продлением действия. В WO 2009/115469 описаны различные производные инсулина длительного действия с цепями, ацилированными двумя остатками жирной кислоты. В WO 2013/153000 описан состав тех производных инсулина длительного действия для подкожного введения, которые содержат высокий уровень цинка (не менее 3,5 Zn++/шесть молей производных инсулина). Они были сконструированы с целью получения пролонгированной продолжительности действия, соотносящейся с профилем введения один раз в неделю. Высокое содержание Zn++ в составах, описанных в WO 2009/115469, приводит к получению пролонгированного профиля PK.
В WO 2009/063072 раскрыты фармацевтические композиции для парентерального введения, содержащие производное базального инсулина (например, деглудек) и производное GLP-1 (например, лираглутид). Поскольку мономер лираглутида связывается с цинком с образованием дигептамера, в комбинированном составе необходим уровень цинка выше, чем в моносоставе с деглудеком, для достижения сравнимого профиля PK деглудека и достижения приемлемой физической стабильности.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
В соответствии с настоящим изобретением был разработан новый состав с производными инсулина длительного действия, который способен обеспечивать конформационное состояние и паттерн олигомеризации, в большей степени близко сходные с таковыми инсулина человека, т.е. гексамерами, особенно гексамерами R6.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую выбранное производное инсулина длительного действия в уникальной комбинации вспомогательных веществ, внимательно составленную с целью снижения степени образования олигомеров в месте инъекции, которая при этом все еще демонстрирует свойства PK/PD, подходящие для введения один раз в неделю.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию со сниженной вязкостью после инъекции и, соответственно, пониженной склонностью к причинению какого-либо дискомфорта после инъекции.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию с повышенной стабильностью.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для применения в качестве лекарственного препарата для лечения метаболического расстройства.
Другие цели настоящего изобретения будут очевидны для специалиста в данной области, исходя из следующих подробного описания и примеров.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
В своем первом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую производное инсулина, выбранное из группы, состоящей из
человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30; (соединение 1);
человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K(Nε-гексадекандиоил-γGlu), desB30 (соединение 2);
человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K(Nε-эйкозандиоил-γGlu), desB30 (соединение 3) и
человеческого инсулина A14E, B25H, desB27, B29K(Nε-октадекандиоил-γGlu), desB30 (соединение 4), и дополнительно содержащую от приблизительно 1 до приблизительно 2% (вес/вес) глицерина; от приблизительно 45 до приблизительно 75 мМ фенола; от приблизительно 0 до приблизительно 19 мМ м-крезола; от приблизительно 1,5 до приблизительно 2,5 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина; не более приблизительно 75 мМ хлорида натрия; и характеризующуюся значением pH в диапазоне от 7,2 до 8,0.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтические композиции, дополнительно содержащие соединение, представляющее собой инсулинотропный GLP-1, и, в частности, соединение, представляющее собой инсулинотропный GLP-1, известное как семаглутид.
Семаглутид может быть описан с помощью структуры Aib8,Lys26(OEG-OEG-гамма-Glu-C18-дикислота),Arg34)GLP-1 H(7-37)-OH, которая также может быть обозначена как (N-эпсилон26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-карбокси-4-(17-карбоксигептадеканоиламино)бутириламино]этокси}этокси)ацетиламино]этокси}этокси)ацетил][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37), схожее раскрытие в WO 2006/097537.
Настоящее изобретение может быть дополнительно охарактеризовано с помощью ссылки на один или более приведенных далее признаков или вариантов осуществления.
1. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, содержащая производное инсулина, которое представляет собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1).
2. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, содержащая производное инсулина, которое представляет собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K(Nε-гексадекандиоил-γGlu), desB30 (соединение 2).
3. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, содержащая производное инсулина, которое представляет собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K(Nε-эйкозандиоил-γGlu), des-B30 (соединение 3).
4. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, содержащая производное инсулина, которое представляет собой человеческий инсулин A14E, B25H, desB27, B29K(Nε-октадекандиоил-γGlu), desB30 (соединение 4).
5. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, где производное инсулина находится в диапазоне от приблизительно 3,5 до приблизительно 5,0 мМ.
6. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, где производное инсулина находится в диапазоне от приблизительно 4,0 до приблизительно 4,5 мМ.
7. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, где производное инсулина составляет приблизительно 4,2 мМ.
8. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 1 до приблизительно 2% (вес/вес) глицерина.
9. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 1,4 до приблизительно 1,8% (вес/вес) глицерина.
10. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 1,5% или 1,6% (вес/вес) глицерина.
11. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 45 до приблизительно 75 мМ фенола.
12. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 50 до приблизительно 70 мМ фенола.
13. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 55 до приблизительно 65 мМ фенола.
14. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 или 70 мМ фенола.
15. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 0 до приблизительно 19 мМ м-крезола.
16. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая 0 мМ, 1 мМ, 2 мМ, 3 мМ, 4 мМ м-крезола.
17. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 0 до приблизительно 15 мМ м-крезола.
18. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ или 19 мМ м-крезола.
19. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 1,5 до приблизительно 2,5 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина.
20. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 2,0 до приблизительно 2,4 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина.
21. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 2,0 или 2,1 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина.
22. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 2,2 или 2,3 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина.
23. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 2,4 или 2,5 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина.
24. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая менее приблизительно 75 мМ хлорида натрия.
25. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 5 до приблизительно 50 мМ хлорида натрия.
26. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 10 до приблизительно 25 мМ хлорида натрия.
27. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 15 до приблизительно 25 мМ хлорида натрия.
28. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 20 мМ, 50 мМ или 75 мМ хлорида натрия.
29. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, которая характеризуется значением pH в диапазоне от 7,2 до 8,0.
30. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, которая характеризуется значением pH в диапазоне от 7,2 до 7,6.
31. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, которая характеризуется значением pH приблизительно 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 или 7,9.
32. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая
от приблизительно 4,0 до приблизительно 4,5 мМ производного инсулина;
от приблизительно 1 до приблизительно 2% (вес/вес) глицерина;
от приблизительно 50 до приблизительно 70 мМ фенола;
от приблизительно 0 до приблизительно 15 мМ м-крезола;
от приблизительно 2,0 до приблизительно 2,5 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина;
менее приблизительно 50 мМ хлорида натрия, и
которая характеризуется значением pH в диапазоне от 7,2 до 7,6.
33. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая
приблизительно 4,2 мМ производного инсулина;
приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина;
приблизительно 60 мМ фенола;
приблизительно 0 мМ м-крезола;
приблизительно 2,0 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина;
приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и
которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
34. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая
приблизительно 4,2 мМ производного инсулина;
приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина;
приблизительно 60 мМ фенола;
приблизительно 10 мМ м-крезола;
приблизительно 2,0 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина;
приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и
которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
35. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая
приблизительно 4,2 мМ производного инсулина;
приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина;
приблизительно 60 мМ фенола;
приблизительно 0 мМ м-крезола;
приблизительно 2,2 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина;
приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и
которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
36. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая
приблизительно 4,2 мМ производного инсулина;
приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина;
приблизительно 60 мМ фенола;
приблизительно 10 мМ м-крезола;
приблизительно 2,2 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина;
приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и
которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
37. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая
приблизительно 4,2 мМ производного инсулина;
приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина;
приблизительно 60 мМ фенола;
приблизительно 0 мМ м-крезола;
приблизительно 2,4 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина;
приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и
которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
38. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая
приблизительно 4,2 мМ производного инсулина;
приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина;
приблизительно 60 мМ фенола;
приблизительно 10 мМ м-крезола;
приблизительно 2,4 моль ионов цинка на шесть молей производного инсулина;
приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и
которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
39. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 4,2 мМ производного инсулина; от приблизительно 1 до приблизительно 2% (вес/вес) глицерина; от приблизительно 45 до приблизительно 75 мМ фенола; от приблизительно 0 до приблизительно 15 мМ м-крезола; от приблизительно 1,5 до приблизительно 2,5 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина; не более приблизительно 50 мМ хлорида натрия, и которая характеризуется значением pH в диапазоне от 7,2 до 8,0.
40. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 0 мМ м-крезола.
41. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 5 до приблизительно 10 мМ м-крезола.
42. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 10 мМ м-крезола.
43. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, дополнительно содержащая семаглутид.
44. Фармацевтическая композиция, содержащая человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1) и семаглутид и дополнительно содержащая от приблизительно 1 до приблизительно 2% (вес/вес) глицерина; от приблизительно 45 до приблизительно 75 мМ фенола; 0-15 мМ м-крезола; от приблизительно 1,5 до приблизительно 2,5 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина; не более приблизительно 25 мМ хлорида натрия, и которая характеризуется значением pH в диапазоне от 7,2 до 8,0.
45. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 0,20 до приблизительно 0,70 мМ семаглутида.
46. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 0,30 до приблизительно 0,70 мМ семаглутида.
47. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 3,5 мМ до приблизительно 5,0 мМ человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1).
48. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая от приблизительно 0,30 до приблизительно 0,70 мМ семаглутида и от приблизительно 3,5 мМ до приблизительно 5,0 мМ человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1).
49. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 0,30 мМ семаглутида и от приблизительно 3,5 мМ до приблизительно 5,0 мМ человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1).
50. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 0,40 мМ семаглутида и 4,2 мМ человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1).
51. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 0,49 мМ или 0,50 мМ семаглутида и 4,2 мМ человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1).
52. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления, содержащая приблизительно 0,60 мМ семаглутида и 4,2 мМ человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1).
53. Фармацевтическая (совместный состав) композиция, содержащая человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1) и семаглутид и дополнительно содержащая приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина; приблизительно 60 мМ фенола; приблизительно 0 мМ м-крезола; приблизительно 2,2 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина; приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
54. Фармацевтическая (совместный состав) композиция, содержащая человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1) и семаглутид и дополнительно содержащая приблизительно 1,5% (вес/вес) глицерина; приблизительно 60 мМ фенола; приблизительно 10 мМ м-крезола; приблизительно 2,2 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина; приблизительно 20 мМ хлорида натрия, и которая характеризуется значением pH приблизительно 7,4.
55. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления для введения нуждающемуся в этом субъекту при интервалах с меньшей частотой, чем один раз в день (т.е. при интервалах более 24 часов), в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 6 месяцев или по меньшей мере 1 год.
56. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления для введения нуждающемуся в этом субъекту с частотой в диапазоне от каждого 2-го дня до каждого 11-го дня, в среднем.
57. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления для введения нуждающемуся в этом субъекту с частотой в диапазоне от каждого 3го дня до каждого 10-го дня, в среднем.
58. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления для введения нуждающемуся в этом субъекту с частотой в диапазоне от каждого 4го дня до каждого 9-го дня, в среднем.
59. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления для введения нуждающемуся в этом субъекту с частотой в диапазоне от каждого 5го дня до каждого 8-го дня, в среднем.
60. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления для введения нуждающемуся в этом субъекту с частотой в диапазоне от каждого 6-го дня до каждого 7го дня, в среднем.
61. Фармацевтическая композиция согласно предыдущим вариантам осуществления для введения нуждающемуся в этом субъекту один раз в неделю, т.е. каждый 7-й день, в среднем, в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 6 месяцев или по меньшей мере 1 год.
62. Способ получения инъекционной фармацевтической композиции включает приведенное далее.
(i) Получение раствора путем растворения человеческого инсулина A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 в воде.
(ii) Получение раствора путем растворения консервантов и средств, регулирующих изотоничность, в воде.
(iii) Получение раствора путем растворения ионов цинка в воде.
(iv) Смешивание раствора a) и раствора b).
(v) Добавление раствора c) к раствору a+b.
(vi) Растворение семаглутида в объединенном растворе a+b+c.
(vii) Регулирование pH смеси f) до необходимого значения pH с последующей стерильной фильтрацией.
Любая комбинация из двух или более вариантов осуществления, описанных в данном документе, рассматривается в рамках объема настоящего изобретения.
Биологическая активность
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает фармацевтические композиции, применимые в качестве лекарственных препаратов для лечения метаболических заболеваний, расстройств или состояний и, в частности, заболеваний, расстройств или состояний, связанных с диабетом.
В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция по настоящему изобретению предназначена для применения в лечении или облегчении заболевания, расстройства или состояния, связанного с диабетом, диабетом 1 типа, диабетом 2 типа, нарушением толерантности к глюкозе, гипергликемией, дислипидемией, ожирением или метаболическим синдромом (метаболический синдром X, синдром резистентности к инсулину).
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция по настоящему изобретению предназначена для применения в лечении или облегчении заболевания, расстройства или состояния, связанного с диабетом и, в частности, диабетом 1 типа, диабетом 2 типа.
Фактическая доза зависит от природы и тяжести заболевания, подлежащего лечению, и находится в рамках компетенции врача, и может варьироваться путем титрования дозы в отношении конкретных обстоятельств по настоящему изобретению для получения необходимого терапевтического эффекта.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано с помощью ссылки на сопутствующие графические материалы, на которых представлено следующее.
На фиг. 1 показана олигомеризация моносоставов A, B и C на основе соединения 1 при смоделированных условиях в месте инъекции.
Фиг. 1A: выявляемый средний гидродинамический радиус (rH) [нм], измеренный с помощью DLS.
Фиг. 1B: выявляемая средняя молекулярная масса, измеренная с помощью CG-MALS.
Фиг. 1C: выявляемый средний коэффициент седиментации (S), измеренный с помощью AUC.
Белые столбцы: соединение 1, состав C с 2,2 Zn++ на шесть единиц инсулина (моль:моль).
Серые столбцы: соединение 1, состав B с 2,4 Zn++ на шесть единиц инсулина (моль:моль).
Черные столбцы: соединение 1, состав A, содержащий 4,5 Zn++ на шесть единиц инсулина (моль:моль).
На фиг. 2 показана олигомеризация моносоставов 01-06 на основе соединения 1 при смоделированных условиях в месте инъекции.
Фиг. 2A: выявляемый средний гидродинамический радиус (Rh, ср.) [нм], измеренный с помощью DLS.
Фиг. 2B: выявляемый средний коэффициент седиментации (S*), измеренный с помощью AUC.
На фиг. 3 показана выявляемая динамическая вязкость [сПа] (фиг. 3A и фиг. 3C) и удельная вязкость [η удел.] (фиг. 3B, фиг. 3D) различных подвергнутых замене буфера составов соединения 1 и буфера интерстициальной жидкости (ISF) в зависимости от температуры [°C].
Фиг. 3A и фиг. 3B: состав A; состав B; состав C; буфер ISF.
Фиг. 3C и фиг. 3D: состав 02; состав 03; состав 04; буфер ISF.
На фиг. 4 показано конформационное состояние соединения 1 в составах.
Фиг. 4A: CD-спектроскопия в близком к УФ спектре [Δε251 нм(M-1 см-1)], демонстрирующий конформационные изменения (T-состояние; смешанное TR-состояние; R-состояние) в зависимости от Zn++ на шесть единиц инсулина (моль:моль) для составов 01-06.
Фиг. 4B: CD-спектроскопия в близком к УФ спектре [Δε251 нм(M-1 см-1)], демонстрирующий конформационные изменения (T-состояние; смешанное TR-состояние; R-состояние) в зависимости от Zn++ на шесть единиц инсулина (моль:моль) для составов B1-B6, D1-D7 и составов с инсулином человека с различным уровнем цинка.
Незакрашенные круги: инсулин человека (600 нмоль/мл инсулина человека, 30 мМ фенола, 150 мМ NaCl, pH 7,4).
Черные квадраты: соединение 1, составленное с 25 мМ фенола, 25 мМ м-крезола и 20 мМ NaCl.
Серые круги: соединение 1, составленное с 60 мМ фенола, 10 мМ м-крезола и 20 мМ NaCl.
На фиг. 5 показано распределение олигомеров соединения 1 в составах с применением SEC.
На фиг. 5A показана нативная хроматограмма SEC составов 01, 02, 03, 04, 05 и 06.
На фиг. 5B показана нативная хроматограмма SEC составов A и B1-B6.
На фиг. 6 показаны данные SAXS-рассеяния [интенсивность (ед. погл.) относительно с(Å-1)] соединения 1 и инсулина человека в составленном состоянии.
Фиг. 6A: кривые рассеяния состава A с соединением 1 показаны черным цветом и инсулина человека показаны серым цветом (соединение 1, 4,2 мМ, 4,5 Zn/гексамер; инсулин человека 0,6 мМ, 2,2 Zn/гексамер).
Фиг. 6B: кривые рассеяния состава C с соединением 1 показаны черным цветом и инсулина человека показаны серым цветом (соединение 1, 4,2 мМ, 2,2 Zn/гексамер; инсулин человека 0,6 мМ, 2,2 Zn/гексамер (R6-гексамер)).
На фиг. 7 показана чистота соединения 1 в составах.
На фиг. 7A показана чистота (% общего пептида) при хранении при 30°C [временная точка (месяц)] для состава A (черная линия), состава B (серая линий) и состава C (пунктирная линия) с соединением 1.
На фиг. 7B показана чистота (% общего пептида) при хранении при 37°C [временная точка (недели)] для составов 01, 04, 05 и 06 с соединением 1.
Белые круги: состав 01, черные круги: состав 04, белые квадраты: состав 05, черные квадраты: состав 06.
На фиг. 8 показана чистота соединения 1 (% общего соединения 1) при хранении при 37°C [временная точка (недели)] в комбинированных составах с семаглутидом.
Белые круги: комбинированный состав I, черные круги: комбинированный состав II, белые треугольники: комбинированный состав III, черные треугольники: комбинированный состав IV, белые квадраты: комбинированный состав V, черные квадраты: комбинированный состав VI.
На фиг. 9 показана олигомеризация комбинированных составов в моделированных условиях в месте инъекции.
Фиг. 9A: выявляемый средний гидродинамический радиус (rH) [нм], измеренный с помощью DLS.
Фиг. 9B: показан размер олигомеров комбинированных составов после замены буфера, наблюдаемый с помощью AUC (S*).
ПРИМЕРЫ
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано с помощью ссылки на следующие примеры, которые не предназначены каким-либо образом ограничивать объем настоящего изобретения, который заявлен.
Пример 1
Улучшенные биофизические свойства при смоделированных условиях в месте инъекции
Протокол
API составов представляет собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30 (соединение 1), полученный, как описано, например, в WO 2009/115469, см. пример 33.
Олигомеризацию соединения 1 определяли при смоделированных условиях в месте инъекции. Смоделированные условия в месте инъекции получали путем уменьшения количества фенола и/или метакрезола соответственно и замены буфера на смоделированный буфер интерстициальной жидкости. Данная процедура фактически обеспечивала удаление всех фенольных лигандов, но сохраняла соотношение цинк/инсулин исходного состава.
Составы подвергали замене буфера на буфер интерстициальной жидкости (ISF) с помощью колонки PD-MidiTrap G-25 в соответствии с протоколом изготовителя.
Колонки уравновешивали с помощью целевого буфера путем промывания колонки достаточным объемом целевого буфер, и применяли состав в подходящем объеме, и элюировали с помощью целевого буфера. Буфер ISF состоял из 140 мМ NaCl, 4 мМ KCl, 1 мМ MgSO4, 2 мМ CaCl2, 10 мМ Hepes, pH 7,4.
Если не указано иное, процедура являлась следующей:
замена буфера при 22°C;
последующая инкубация при 37°C в течение 14-18 часов и
последующее измерение при 22°C (если не указано иное).
Как правило, измерения проводили через приблизительно 1 ч. после окончания инкубации при 37°C. Если это было невозможно, образцы хранили при 22°C до проведения измерения.
Если не указано иное, образцы измеряли неразбавленными. Следует отметить, что размер олигомеров, полученный в результате процедуры описанного уменьшения количества фенолов, является зависимым от способа, и в случае данного состава он может варьироваться в зависимости от факторов, таких как время, температура и партия колонки. Следовательно, необходимо, чтобы измерения для данного набора составов сравнивались в рамках одного и того же эксперимента, а не среди экспериментов. Следовательно, в случае одного и того же стандарта состав тестировали вместе с отличным составом по настоящему изобретению в различных экспериментах. Например, состав A по сравнению с составом B и C; состав 01 по сравнению с составами 02-06.
Выявляемый средний гидродинамический радиус (rH) измеряли с помощью динамического светорассеяния (DLS) с применением DynaPro PR™ (Wyatt technology, Санта-Барбара, Калифорния, США). Перед анализом образцы центрифугировали в течение 5 минут при 1200 об/мин для удаления каких-либо частиц пыли в растворе. Измерения проводили при 25°C с применением 40 операций получения данных и при времени получения данных 2 сек.
Выявляемую среднюю молекулярную массу (кДа) измеряли с помощью многоуглового статического светорассеяния с градиентом состава (CG-MALS) с применением системы, состоящей из блока титратора Calypso II от Wyatt Technology Corporation (WTC), присоединенного к детектору светорассеяния DAWN8+ от WTC (эксплуатируемому при 664 нм) и рефрактометру Optilab T-rEX от WTC (эксплуатируемому при 660 нм), при 25°C. Образцы фильтровали через фильтр 0,45 мкм, а затем через фильтр 0,22 мкм перед проведением измерения.
Эксперименты в отношении скорости седиментации (SV) проводили с помощью аналитической ультрацентрифуги XL-I (BeckmanCoulter, Брея, Калифорния) в двухсекторных вкладышах 12 мм или 3 мм, покрытых сапфировыми окошками. Образцы центрифугировали при 40000 об/мин и 20°C до завершения седиментации и отслеживали с помощью интерференционной оптики прибора. Распределения коэффициента седиментации (SCD) рассчитывали с помощью SedFit, версия 11.8 (www.analyticalultracentrifugation.com) с применением модели c(s) с сеткой из 100 s-значений в диапазоне, достаточном для описания всего седиментационного материала, исходя из rmsd и характера распределения остатков. Соотношение коэффициента трения f/fo принимали в качестве переменной, подлежащей оптимизации во время аппроксимации (P Schuck, MA Perugini, NR Gonzales, GJ Howlett and D Schubert: Size-distribution analysis of proteins by analytical ultracentrifugation: strategies and application to model systems; (Biophys. J. 2002 82:1096). Средние значения коэффициента седиментации получали посредством интеграции полученных в результате c(s)-распределений.
Значения зависимой от температуры динамической вязкости измеряли с помощью вискозиметра шарикового типа Lovis2000 (Anton Paar, Грац, Австрия). Температуру понижали с 40°C до 4°C по 2°C за этап с обеспечением 5 минут для установления равновесия температуры между этапами. Плотность буфера одновременно измеряли с помощью денситометра DMA5000, также от Anton Paar.
Получали три моносостава, т.е. состав A, характерный для существующего уровня техники (см., например WO 2013/153000), и составы B, C, характерные для настоящего изобретения (60 мМ фенола/10 мМ м-крезола).
Таблица 1A. Сравнительные моносоставы A, B и C
| Ингредиент | Состав A Характерный для существующего уровня техники |
Состав B Характерный для настоящего изобретения |
Состав C Характерный для настоящего изобретения |
| Соединение 1 | 4200 нмоль/мл (4,2 мМ) |
4200 нмоль/мл (4,2 мМ) |
4200 нмоль/мл (4,2 мМ) |
| Цинк (в виде ацетата цинка) | 206 мкг/мл (~4,5 Zn++/гексамер) |
110 мкг/мл (~2,4 Zn++/гексамер) |
101 мкг/мл (~2,2 Zn++/гексамер) |
| Глицерин | 16 мг/мл (1,6%) | 15 мг/мл (1,5%) | 15 мг/мл (1,5%) |
| Фенол | 2,35 мг/мл (25 мМ) | 5,65 мг/мл (60 мМ) | 5,65 мг/мл (60 мМ) |
| Метакрезол | 2,70 мг/мл (25 мМ) | 1,08 мг/мл (10 мМ) | 1,08 мг/мл (10 мМ) |
| Хлорид натрия | 1,17 мг/мл (20 мМ) | 1,17 мг/мл (20 мМ) | 1,17 мг/мл (20 мМ) |
| pH | 7,4 | 7,4 | 7,4 |
Получали еще шесть моносоставов, т.е. состав 01 (такой же, как состав A) и составы 02, 03, 04, 05 и 06, характерные для настоящего изобретения (таблица 1B). Содержание цинка варьировало от 4,5 Zn++/шесть единиц инсулина до 2,4, 2,2 и 2,0 Zn++/шесть единиц инсулина. Кроме того, протестировали системы консервантов из либо 25/25 мМ фенола/м-крезола, либо 60/0 мМ фенола/м-крезола.
Таблица 1B. Сравнительные составы
| Ингредиент | Состав | |||||
| 01* | 02 | 03 | 04 | 05 | 06 | |
| Соединение 1 (мМ) |
4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 |
| Zn(ацетат)2 (мкг/мл) |
206 | 206 | 101 | 101 | 110 | 92 |
| n Zn/6 единиц инсулина (моль/моль) | ~4,5 | ~4,5 | ~2,2 | ~2,2 | ~2,4 | ~2,0 |
| Фенол | 25 мМ | 60 мМ | 25 мМ | 60 мМ | 60 мМ | 60 мМ |
| м-крезол | 25 мМ | 0 | 25 мМ | 0 | 0 | 0 |
| глицерин | 1,6% | 1,5% | 1,6% | 1,5% | 1,5% | 1,5% |
| Среда-носитель (все составы) | 20 мМ NaCl pH 7,4 |
|||||
* тот же, что и состав A
Повышенный размер олигомеров у подвергнутых замене буфера моносоставов, содержащих 60 мМ фенола и 10 м-крезола (таблица 2A; фиг. 1A, 1B и 1C)
Таблица 2A. Размер олигомеров при моделировании в месте инъекции
| A | B | C | |
| Rh(ср.) [нм] | 37,31 | 9,21 | 8,37 |
| S*(ср.) [S] | 17,32 | 10,53 | 9,41 |
| Mw (ср.) [кДа] | 1059,8 | 190,5 | 184,7 |
Повышенный размер олигомеров у подвергнутых замене буфера моносоставов, содержащих 60 мМ фенола и 0 м-крезола (таблица 2B; фиг. 2A и 2B)
Таблица 2B. Размер олигомеров при моделировании в месте инъекции
| 01 | 02 | 03 | 04 | 05 | 06 | |
| Rh(ср.) [нм] | 19,42 | 14,20 | 5,83 | 4,51 | 5,20 | 3,98 |
| S*(ср.) [S] | 8,46 | 11,00 | 5,39 | 4,78 | 5,33 | 4,32 |
Вывод
Содержание цинка понижали с 4,5 Zn++/шесть единиц инсулина в составе A до 2,4 и 2,2 Zn++/шесть единиц инсулина в составах B и C (с повышенным содержанием фенола и пониженным содержанием метакрезола) соответственно. Данное понижение содержания цинка сопровождалось уменьшением размера олигомеров (см. фиг. 1A, 1B и 1C), определенным при смоделированных условиях в месте инъекции с помощью способа, описанного выше.
Результаты для составов 01-06 дополнительно подтверждают, что размер олигомеров уменьшается, если содержание Zn понижается с 4,5 Zn++/шесть единиц инсулина до 2,2±0,2 Zn++/шесть единиц инсулина. В случае 2,2±0,2 Zn++/шесть единиц инсулина размер олигомеров дополнительно уменьшается, если содержание фенола/крезола понижают с 25 мМ/25 мМ до 60 мМ/0 мМ. См. фиг. 2A и 2B.
Улучшенная вязкость у подвергнутых замене буфера моносоставов, содержащих 60 мМ фенола и 10 мМ м-крезола (см. таблицу 3A; фиг. 3A и 3B)
Таблица 3A. Вязкость подвергнутых замене буфера составов A, B, C
| Динамическая вязкость (сПа) | Удельная вязкость | ||||||
| Состав | Состав | ||||||
| темп. (C) | A | B | C | Буфер ISF | A | B | C |
| 40 | 1,194 | 0,633 | 0,628 | 0,605 | 0,97355 | 0,04628 | 0,03802 |
| 38 | 1,359 | 0,659 | 0,653 | 0,627 | 1,16746 | 0,05104 | 0,04147 |
| 36 | 1,548 | 0,687 | 0,68 | 0,651 | 1,37788 | 0,0553 | 0,04455 |
| 34 | 1,758 | 0,718 | 0,709 | 0,677 | 1,59675 | 0,06056 | 0,04727 |
| 32 | 1,989 | 0,751 | 0,74 | 0,704 | 1,82528 | 0,06676 | 0,05114 |
| 30 | 2,237 | 0,787 | 0,773 | 0,733 | 2,05184 | 0,07367 | 0,05457 |
| 28 | 2,506 | 0,825 | 0,809 | 0,765 | 2,27582 | 0,07843 | 0,05752 |
| 26 | 2,792 | 0,866 | 0,847 | 0,798 | 2,49875 | 0,08521 | 0,0614 |
| 24 | 3,098 | 0,91 | 0,889 | 0,835 | 2,71018 | 0,08982 | 0,06467 |
| 22 | 3,409 | 0,958 | 0,934 | 0,874 | 2,90046 | 0,09611 | 0,06865 |
| 20 | 3,729 | 1,01 | 0,982 | 0,916 | 3,07096 | 0,10262 | 0,07205 |
| 18 | 4,051 | 1,066 | 1,035 | 0,962 | 3,21102 | 0,10811 | 0,07588 |
| 16 | 4,321 | 1,126 | 1,092 | 1,012 | 3,26976 | 0,11265 | 0,07905 |
| 14 | 4,597 | 1,191 | 1,153 | 1,066 | 3,31238 | 0,11726 | 0,08161 |
| 12 | 4,865 | 1,262 | 1,22 | 1,125 | 3,32444 | 0,12178 | 0,08444 |
| 10 | 5,131 | 1,338 | 1,293 | 1,19 | 3,31176 | 0,12437 | 0,08655 |
| 8 | 5,369 | 1,421 | 1,372 | 1,26 | 3,26111 | 0,12778 | 0,08889 |
| 6 | 5,593 | 1,514 | 1,458 | 1,338 | 3,18012 | 0,13154 | 0,08969 |
| 4 | 5,795 | 1,612 | 1,556 | 1,424 | 3,06952 | 0,13202 | 0,0927 |
Улучшенная вязкость подвергнутых замене буфера моносоставов, содержащих 60 мМ фенола и 0 м-крезола (см. таблицу 3B; фиг. 3C и 3D)
Таблица 3B. Вязкость подвергнутых замене буфера составов 02, 03 и 04
| Динамическая вязкость (сПа) | Удельная вязкость | ||||||
| Состав | Состав | ||||||
| ISF | _02 | _03 | _04 | _02 | _03 | _04 | |
| 3,99 | 1,5447 | 2,7441 | 1,9996 | 1,6278 | 0,77646 | 0,29449 | 0,0538 |
| 6 | 1,4513 | 2,5087 | 1,8529 | 1,5296 | 0,72859 | 0,27672 | 0,05395 |
| 8 | 1,3668 | 2,3492 | 1,7355 | 1,4414 | 0,71876 | 0,26975 | 0,05458 |
| 10 | 1,2917 | 2,2389 | 1,6335 | 1,3615 | 0,7333 | 0,26461 | 0,05404 |
| 12 | 1,2209 | 2,1624 | 1,5448 | 1,2894 | 0,77115 | 0,2653 | 0,05611 |
| 14 | 1,1555 | 2,1078 | 1,4678 | 1,2215 | 0,82415 | 0,27027 | 0,05712 |
| 16 | 1,095 | 2,06 | 1,4063 | 1,1575 | 0,88128 | 0,28429 | 0,05708 |
| 18 | 1,04 | 2,0041 | 1,3516 | 1,0984 | 0,92702 | 0,29962 | 0,05615 |
| 20 | 0,9893 | 1,927 | 1,3014 | 1,043 | 0,94784 | 0,31548 | 0,05428 |
| 22 | 0,9423 | 1,8351 | 1,247 | 0,9916 | 0,94747 | 0,32336 | 0,05232 |
| 24 | 0,8991 | 1,7221 | 1,1941 | 0,9447 | 0,91536 | 0,32811 | 0,05072 |
| 26 | 0,8588 | 1,597 | 1,1404 | 0,9003 | 0,85957 | 0,3279 | 0,04832 |
| 28 | 0,8216 | 1,4748 | 1,085 | 0,8594 | 0,79503 | 0,32059 | 0,04601 |
| 30 | 0,7869 | 1,3608 | 1,0249 | 0,8219 | 0,72932 | 0,30245 | 0,04448 |
| 32 | 0,7544 | 1,2594 | 0,9713 | 0,7867 | 0,66941 | 0,28751 | 0,04282 |
| 34 | 0,7239 | 1,1654 | 0,9215 | 0,754 | 0,60989 | 0,27297 | 0,04158 |
| 36 | 0,7004 | 1,0795 | 0,8749 | 0,7236 | 0,54126 | 0,24914 | 0,03312 |
| 38 | 0,6951 | 1,0027 | 0,8321 | 0,6948 | 0,44253 | 0,19709 | -4,32E-04 |
| 40 | 0,7107 | 0,9345 | 0,7927 | 0,6682 | 0,3149 | 0,11538 | -0,0598 |
Вывод
Данные эксперименты демонстрируют, что вязкость состава при смоделированных условиях в месте инъекции в соответствии с данным способом в высокой степени зависят от содержания цинка таким образом, что уменьшение соотношения цинка приводит к более низкой вязкости.
Пример 2
tmax и t1/2 выведения
tmax представляет собой период времени до достижения максимальной концентрации (максимальное содержание в плазме крови), и t½ представляет собой период полувыведения, в течение которого половина соединения удаляется из плазмы крови после введения.
Измененные биофизические свойства, описанные в примере 1, соответствуют PK-профилю с демонстрацией раннего наступления tmax у свиней (см. таблицу 3). Это указывает на то, что время нахождения соединения 1 в подкожном слое уменьшается при составлении в соответствии с настоящим изобретением, и в отличие от того же соединения, которое предусмотрено в составе в соответствии с уровнем техники.
Неожиданно, пониженный уровень цинкa почти не оказывает влияния на продолжительность действия (т.е. не влияет на t1/2 выведения), что делает состав в соответствии с настоящим изобретением и состав согласно существующему уровню техники в одинаковой степени подходящими для введения один раз в неделю.
Таблица 4
| Состав | Вид | tmax (часы) | t1/2 (часы) |
| Соединение 1, состав A 4,5 цинка/гексамер, 25 мМ фенола, 25 мМ м-крезола |
Свинья | 20 | 47 |
| Человек | 42 | 185 | |
| Соединение 1, состав C 2,2 цинка/гексамер, 60 мМ фенола, 10 мМ м-крезола, 20 мМ NaCl |
Свинья | 8 | 45 |
Вывод
Данные эксперименты демонстрируют, что время нахождения в подкожном слое (tmax) соединения 1 в значительной степени снижено в результате уменьшения содержания Zn++/гексамер. Наблюдение соответствует данным, представленным в примере 1, из которых видно уменьшение размера олигомеров, образовавшихся при смоделированных условиях в месте инъекции.
Таким образом, при составлении в соответствии с настоящим изобретением соединение 1 обеспечивает образование олигомеров меньшего размера в месте инъекции, что приводит к получению профиля PK/PD с более коротким временем нахождения в подкожном слое (сниженное tmax).
Но, неожиданно, несмотря на то, что время нахождения в подкожном слое (tmax) соединения 1 в значительной степени снижено, образования по настоящему изобретению сохраняют тот же период полувыведения (на t1/2 выведения не оказано влияния). Это означает, что составы по настоящему изобретению могут способствовать более быстрому достижению производными инсулина длительного действия максимальной концентрации в кровотоке с сохранением при этом все еще максимальной концентрации на протяжении более длительного периода.
Это неожиданное обнаружение также позволяет ограничивать образования больших олигомеров в месте инъекции с сохранением при этом длительной продолжительности действия, соответствующей профилю введения один раз в неделю. Образование больших олигомеров с высокой вязкостью в месте инъекции может вызывать дискомфорт после инъекции.
Пример 3
Улучшенное конформационное состояние в составе
В присутствии цинка инсулин человека существует в составе в виде гексамеров. Гексамеры инсулина человека могут принимать два различных конформационных состояния в зависимости от конформации мономеров. Восемь N-концевых аминокислотных остатков B-цепи мономера инсулина могут быть либо в растянутой конформации (T-состояние), либо в α-спиральной конформации (R-состояние). В присутствии фенола и NaCl инсулин человека принимает R-конформацию, которая является предпочтительной конформацией в отношении физической и химической устойчивости (Dunn M.F. Zinc-ligand interactions modulate assembly and stability of the insulin hexamer: A review. Biometals 2005; 18; 295-303).
Протокол
Конформационные изменения гексамера инсулина отслеживали по характерной особенности, полученной с помощью CD-спектроскопии при 251 нм (Krüger P, Gilge G, Cabuk Y and Wollmer A; Biol. Chem. Hoppe-Seyler 1990 371 669-673). Образцы измеряли с применением прибора Jasco 815 и с ходом луча 0,02 см. Отнимали фоновые титрования и полученную в результате Δε при 251 нм наносили на график относительно Zn/6 ед. инс. (моль/моль).
Конформационное состояние моносоставов, содержащих 60 мМ фенола/0 м-крезола
Конформационное состояние составов 01-06 показано в таблице 5A и на фигуре 4A.
Таблица 5A. Склонность к конформационному состояния в составах 01-06 с 60 мМ фенола/0 м-крезола
| Состав | 01 | 02 | 03 | 04 | 05 | 06 |
| Склонность к R-состоянию Δε (M-1 см-1) при 251 нм |
-6,15 | -6,65 | -7,63 | -8,12 | -7,98 | -8,19 |
На фиг. 4A показаны конформационные изменения (T-состояние; смешанное TR-состояние; R-состояние) в зависимости от Zn++ на шесть единиц инсулина (моль:моль) для составов 01-06.
Конформационное состояние моносоставов, содержащих 60 мМ фенола и 10 мМ м-крезола
Получали две серии составов. Все составы содержали 4,2 мМ соединения 1, 16 мг/мл (1,6%) глицерина, 20 мМ NaCl с pH 7,4. Составы серии B содержали 60 мМ фенола и 10 мМ м-крезола с уровнем цинка, варьирующем в пределах 1,5 (B1), 2,0 (B2), 2,3 (B3), 2,5 (B4), 3,0 (B5) и 4,0 (B6) на 6 единиц инсулина. Серия D содержала 25 мМ фенола и 25 мМ м-крезола с уровнем цинка, варьирующем в пределах 1,5, 2,0, 2,3, 2,5, 3,0, 4,0 и 4,5 на 6 единиц инсулина. Также получали серии составов инсулина человека с различным уровнем цинка. Конформационное состояние показано в таблице 5B и на фиг. 4B.
Таблица 5B. Склонность к конформационному состоянию в составах B1-B6 с 60 мМ фенола и 10 м-крезола и в составах D1-D7 с 25 мМ фенола и 25 м-крезола
| Склонность к R-состоянию Δε (M-1 см-1) при 251 нм |
Серия B | Серия D |
| Zn/6 ед. инс. | 60/10 фен./крез. | 25/25 фен./крез. |
| *1,5 | -6,83 (B1) | -6,58 (D1) |
| 2,0 | -7,67 (B2) | -7,06 (D2) |
| 2,3 | -7,42 (B3) | -6,88 (D3) |
| 2,5 | -7,23 (B4) | -6,67 (D4) |
| 3,0 | -7,54 (B5) | -6,45 (D5) |
| 4,0 | -6,72 (B6) | -5,58 (D6) |
| 4,5 | н. д. | -5,03 (D7) |
* не включено на фиг. 4B
На фиг. 4B показаны конформационные изменения (T-состояние; смешанное TR-состояние; R-состояние) в зависимости от Zn++ на шесть единиц инсулина (моль:моль) для составов серии B и серии D и составов с инсулином человека.
Вывод
Из данных CD-спектроскопии в близком к УФ спектре видно, что конформация T/R соединения 1 зависела от концентрации цинка. Снижению содержания цинка сопутствовало изменение в конформационном состоянии соединения 1 в составе из смешанного T/R-состояния в R-состояние, которому также сопутствовал более высокий уровень гексамера, образованного в составах (см. пример 4 ниже). R-состояние и уровень гексамера дополнительно возрастали путем изменения соотношения фенол/метакрезол с 25/25 мМ до 60/10 мМ (фиг. 4B).
Из данных составов 01-06 видно, что R-состояние соединения 1 в составах дополнительно обогащалось путем уменьшения содержания Zn с 4,5 до 2,2 Zn ± 0,2 Zn /6 частей соединения 1 и отказа от м-крезола (фиг. 4A).
Пример 4
Улучшенное распределение олигомеров в составе
Протокол
Эксклюзионная хроматография представляет собой чувствительный способ для количественного определения распределения нековалентных олигомеров составов с инсулином. SEC проводили с применением колонки BEH200, 1,7 мкм 4,6×150 мм с подвижным буфером, состоящим из 8,0 мМ фенола, 140 мМ NaCl, 10 мМ Трис-HCl, pH 7,4. Хроматографию проводили при 22 C с применением объема впрыска 2 мкл и потока, составляющего 0,3 мл/мин. В качестве стандартов молекулярной массы применяли альбумин, ковалентный гексамер инсулина и мономерный инсулин. Хроматограммы анализировали путем интеграции с представлением частиц больше гексамера (3,0-3,8 мин), гексамера (3,8-4,3 мин) и частиц меньше гексамера (4,3-5,5 мин). Следует отметить, что точные границы интеграции в случае каждого набора данных будут немного варьироваться по причине вариаций в характеристиках колонки.
Данные малоуглового рентгеновского рассеяния (SAXS) собирали с применением прибора BioSAXS-2000, оснащенного проточной кюветой и детектором Dectris 100K с охватом q-диапазона 0,008-0,661 Å-1. Измерения буфера вычитали из измерений образца для получения профилей рассеяния белка. Данные эталонного образца инсулина человека в гексамерном состоянии с R-конформацией собирали согласно той же процедуре из образца, составляющего 0,6 мМ инсулина человека, 3 Zn++/шесть единиц инсулина, 16 мМ фенола, 20 мМ NaCl и 7 мМ фосфатного буфера, pH 7,4.
Распределение олигомеров для составов, содержащих 60 мМ фенола и 0 м-крезола
Была получена нативная хроматограмма SEC со сравнением составов 01, 02, 03, 04, 05 и 06 (см. таблицу 6 и фиг. 5A).
Таблица 6. Распределение частиц, полученное с помощью нативной SEC путем интеграции хроматограмм
| Направление пика | Состав | ||||||||
| 01 | 02 | 03 | 04 | 05 | 06 | ||||
| % частиц в составе | |||||||||
| (3,0-3,8 мин) | Больше гексамера | 8,8 | 9,4 | 1,1 | 0,6 | 0,7 | 0,2 | ||
| (3,8-4,3 мин) | Гексамер | 34,5 | 48,9 | 95,1 | 98,1 | 95,9 | 98,9 | ||
| (4,3-5,5 мин) | Меньше гексамера | 56,8 | 41,7 | 3,8 | 1,3 | 3,5 | 0,9 | ||
Распределение олигомеров для составов, содержащих 60 мМ фенола и 10 мМ м-крезола
Была получена нативная хроматограмма SEC со сравнением составов B1-B6 и состава А (см. таблицу 6 и фиг. 5В). Площадь под кривой являлась сходной у всех хроматограмм. Хроматограммы анализировали путем интеграции с представлением частиц больше гексамера (3,0-3,8 мин), гексамера (3,8-4,3 мин) и частиц меньше гексамера (4,3-5,5 мин). Следует отметить, что точные границы интеграции в случае каждого набора данных будут немного варьироваться по причине вариаций в характеристиках колонки.
Таблица 7. Распределение олигомеров согласно SEC
| Направление пика | Состав | ||||||
| B1 | B2 | B3 | B4 | B5 | B6 | A | |
| % частиц в составе | |||||||
| Больше гексамера | 0,2 | 0,5 | 0,8 | 0,7 | 2,2 | 4,9 | 18,2 |
| Гексамер | 80,3 | 94,8 | 86,7 | 82,1 | 65,5 | 41,8 | 22,0 |
| Меньше гексамера | 19,5 | 4,8 | 12,5 | 17,2 | 32,3 | 53,3 | 59,8 |
Вывод
Из данных SEC составов 01-06 (таблица 6, фиг. 5A) видно, что распределение олигомеров состава 01 с соединением 1 характеризуется широкими полосами без явно преобладающих частиц олигомеров. Распределение олигомеров соединения 1 в составах 03-06 является более узким по сравнению с составами 01 и 02. Время удерживания основного пика составов 03-06 соответствует гексамеру, и малый пик со временем удерживания 5 минут соответствует мономеру или димеру.
Из данных SEC составов B1-B6 и A (таблица 7, фиг. 5B) также видно, что при 2,0-2,5 цинка/6 единиц инсулина пик гексамера является насыщенным по сравнению с 4,0 или 4,5 Zn.
Следовательно, пик гексамера является насыщенным при низком содержании цинка (например, от 2,0 Zn до 2,5 Zn) по сравнению с высоким содержанием цинка (например, 4,0 или 4,5 Zn). Как при 4,5 Zn, так и при 2,2 Zn гексамер является насыщенным при 60 мМ/0 или 10 мМ фенола/м-крезола относительно 25/25 мМ фенола/м-крезола. При составлении в соответствии с настоящим изобретением содержание гексамера увеличивается, и олигомеризация становится более четко определенной.
Данные SAXS также подтверждают, что характер олигомеризации состава A с соединением 1 с 4,5 Zn++/гексамер не соответствует классическому гексамеру инсулина человека, при этом структура соединения 1 на основе гексамера является преобладающей в составе C (фиг. 6). При составлении в соответствии с настоящим изобретением (состав C) характер олигомеризации становится более четко определенным и соответствующим структуре на основе гексамера, сходной с инсулином человека.
Пример 5
Улучшенные химическая стабильность и физическая стабильность
Из экспериментальных результатов в данном примере видно, что как химическая стабильность, так и физическая стабильность соединения 1 в новых составах улучшена по сравнению с эталонным составом A. В частности, при высоком уровне фенола и низком уровне м-крезола и химическая стабильность, и физическая стабильность соединения 1 повышается, если снижается концентрация цинка.
Протокол
Чистоту определяли с помощью обращенно-фазовой ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии (RP-UHPLC), где образцы анализировали с применением Acquity CSH Fluoro Phenyl, 130Å, 1,7 мкм, колонка 2,1×150 мм, градиентное элюирование с помощью ацетонитрила в мобильной фазе ацетонитрила и фосфорсодержащего буфера в воде с последующим УФ-обнаружением (215 нм) при скорости потока 0,30 мл/мин с объемом впрыска образца 2-3 мкл. Чистоту оценивали как площадь основного пика, деленную на площадь всех пиков, x 100%.
Химическая стабильность состава с соединением 1 с 60 мМ фенола и 10 мМ м-крезола
Стабильность, измеренная как % чистоты общего пептида с помощью RP-UHPLC, демонстрирует в значительной степени повышенную стабильность соединения 1 в составе B и составе C, которые содержали 60 мМ фенола и 10 мМ м-крезола, по сравнению с составом A с соединением 1, который содержал 25 мМ фенола и 25 мМ м-крезола. См. таблицу 8 и фиг. 7A.
Таблица 8. % чистоты соединения 1
| Состав | Время хранения при 30°C (месяцы) | |||
| 0 | 1 | 2 | 3 | |
| A | 95,4 | 93,8 | 93,3 | 91,3 |
| B | 95,3 | 94,3 | 95,0 | 94,3 |
| C | 95,7 | 94,7 | 95,0 | 94,6 |
Химическая стабильность составов с соединением 1 с 60 мМ фенола и 0 м-крезола
Стабильность составов, представленных в таблице 9, измеренная как % чистоты общего пептида с помощью RP-UHPLC, дополнительно подтверждает, что химическая стабильность соединения 1 повышается в зависимости от концентрации цинка в составах с относительно высоким уровнем фенола и низким уровнем м-крезола. Из результатов видна повышенная стабильность соединения 1, если содержание цинка понижалось с 4,5 Zn++/шесть единиц инсулина до 2,4, 2,2 и 2,0 Zn++/шесть единиц инсулина в составах с изменением в системе консервантов с 25/25 мМ фенола/м-крезола на 60 мМ фенола и 0 м-крезола. См. таблицу 9 и фиг. 7B.
Таблица 9. % чистоты соединения 1
| Состав | Время хранения при 37°C (недели) | |||
| 0 | 2 | 4 | 6 | |
| 01 | 97,5 | 96,1 | 94,3 | 92,8 |
| 04 | 97,4 | 96,7 | 96,0 | 95,3 |
| 05 | 97,6 | 96,7 | 96,0 | 95,3 |
| 06 | 97,3 | 96,7 | 96,0 | 95,2 |
Вывод
При составлении в соответствии с настоящим изобретением (см. составы B, C, 04, 05 и 06; таблицы 8 и 9 и фиг. 7A и фиг. 7B) химическая стабильность повышается по сравнению с уровнем техники (составы A и состав 01).
Физическая стабильность
Протокол
Составы с соединением 1 тестировали в 96-луночном микротитрационном планшете с 4 повторностями по 200 мкл. К 1,0 мл каждого состава добавляли ThT (тиофлавин T) до 1 мкМ. Анализ с применением тиофлавина T (ThT) в отношении склонности к образованию амилоидных фибрилл проводили в Thermo Fluoroskan, встряхивание при 960 об/мин, 37°C, в течение 45 часов. Испускание ThT сканировали до и после анализа. Период задержки перед началом испускания флуоресценции ThT представляет собой измерение физической стабильности. Периоды задержки определяли на основе кривых флуоресценции, усредненных для 4 повторностей. Более длительный период задержки свидетельствует о более высокой физической стабильности.
Следует отметить, что результаты с ThT, полученные в результате описанного протокола, могут варьироваться между экспериментами. Следовательно, необходимо, чтобы измерения для данного набора составов сравнивались в рамках одного и того же эксперимента, а не среди экспериментов. В данном примере один и тот же стандартный состав тестировали вместе с различными составами по настоящему изобретению в различных экспериментах. Например, состав A по сравнению с составом C; состав 01 по сравнению с составами 04-06.
Периоды задержки показаны в таблице 10 ниже. Состав A или состав 01 в качестве эталонного состава для сравнения.
Результаты показаны в таблице 10A и таблице 10B.
Физическая стабильность соединения 1 в составах с 60 мМ фенола и 10 м-крезола
Таблица 10A. Периоды задержки Tht (1)
| Состав C | Состав A | |
| Период задержки (ч.) | 11,3 | 10,0 |
Таблица 10B. Периоды задержки Tht (2)
| _01 | _04 | _05 | _06 | |
| Период задержки (ч.) |
9,7 | 29,3 | 13,3 | >45 |
Вывод
Периоды задержки, полученные при анализе с ThT, указывают на то, что физическая стабильность соединения 1 повышена в составах с низким уровнем цинка, высоким уровнем фенола и низким уровнем м-крезола. Из данных видно, что снижение содержания цинка с 4,5 Zn/6 ед. инс. до 2,2±0,2 Zn/6 ед. инс., и сопутствующее повышение содержания фенола с 25 мМ до 60 мМ, и снижение содержания м-крезола с 25 мМ до 10 мМ приводит к получению более длительного периода задержки и, таким образом, повышенной физической стабильности. При удалении м-крезола физическая стабильность соединения 1 дополнительно повышалась в составах с низким уровнем цинка (см. таблицу 10B).
Пример 6
Комбинированные составы и их химическая и физическая стабильность
Соединение 1 может быть совместно составлено вместе с аналогом GLP-1 семаглутидом для применения один раз в неделю для получения комбинации с фиксированным соотношением.
Получали следующие комбинированные составы 1-6 соединения 1 и семаглутида. Также получали моносостав соединения 1 в качестве эталонного моносостава 1. Прогнозируемые целевые значения показаны в таблице 11 ниже.
Таблица 11. Комбинированные составы с соединением 1 и семаглутидом
| Моноэталон 1 | Комбинированный 1 | Комбинированный 2 | Комбинированный 3 | Комбинированный 4 | Комбинированный 5 | Комбинированный 6 | |
| Соединение 1 (мМ) |
4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 |
| Семаглутид (мМ)/(мг/мл) |
н. д. | 0,49/2,0 | 0,4/1,6 | 0,6/2,4 | 0,3/1,25 | 0,49/2,0 | 0,49/2,0 |
| Zn(ацетат)2 (мМ) |
1,54 | 1,54 | 1,54 | 1,54 | 1,54 | 1,4 | 1,75 |
| n Zn/6 единиц инсулина | ~2,2 | ~2,2 | ~2,2 | ~2,2 | ~2,2 | ~2,0 | ~2,5 |
| Среда-носитель (все составы) | 60 мМ фенола 10 мМ м-крезола 1,5% глицерина 20 мМ NaCl pH 7,4 |
||||||
Концентрации соединения 1 и семаглутида в полученных составах измеряли с применением RP-HPLC и эталонных материалов. Эти концентрации указаны в таблице 12A и 12B ниже.
Таблица 12A. Измеренные концентрации соединения 1 и семаглутида
| Моноэталон-1 | Комбинированный 1 | Комбинированный 2 | Комбинированный 3 | Комбинированный 4 | |
| Соединение 1 (мМ) Измеренное |
4,1 | 4,1 | 4,1 | 4,1 | 4,1 |
| Семаглутид (мМ) Измеренный |
н. д. | 0,5 | 0,4 | 0,6 | 0,3 |
Таблица 12B. Измеренные концентрации соединения 1 и семаглутида (отдельная партия из таблицы 12A)
| Моноэталон-1 | Комбинированный 5 | Комбинированный 6 | |
| Соединение 1 (мМ) Измеренное |
4,2 | 4,3 | 4,3 |
| Семаглутид (мМ) Измеренный |
н. д. | 0,49 | 0,49 |
Таким образом, измеренные концентрации отклонялись на менее 3% от прогнозируемых целевых значений.
Также позже получали следующие комбинированные составы I-VI соединения 1 и семаглутида. Получали моносостав соединения 1 в качестве эталонного моносостава 2. Прогнозируемые целевые значения показаны в таблице 13 ниже.
Таблица 13
| Моноэталон 2 | Комбинированный I | Комбинированный II | Комбинированный III | Комбинированный IV | Комбинированный V | Комбинированный VI | |
| Соединение 1 (мМ) |
4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 | 4,2 |
| Семаглутид (мМ)/(мг/мл) |
н. д. | 0,49/2,0 | 0,49/2,0 | 0,3/1,25 | 0,49/2,0 | 0,49/2,0 | 0,3/1,25 |
| Zn(ацетат)2 (мкг/мл) |
101 | 206 | 101 | 101 | 101 | 110 | 110 |
| n Zn/6 единиц инсулина | ~2,2 | ~4,5 | ~2,2 | ~2,2 | ~2,2 | ~2,4 | ~2,4 |
| Фенол | 60 мМ | 25 мМ | 60 мМ | 60 мМ | 25 мМ | 60 мМ | 60 мМ |
| м-крезол | 0 | 25 мМ | 0 | 0 | 25 мМ | 0 | 0 |
| Среда-носитель (все составы) | 1,5 % глицерина 20 мМ NaCl pH 7,4 |
||||||
Физическая стабильность
Протокол
Составы тестировали в 96-луночном микротитрационном планшете с 8 повторностями по 200 мкл. К 1,0 мл каждого состава добавляли ThT (тиофлавин T) до 1 мкМ. Анализ с применением тиофлавина T (ThT) в отношении склонности к образованию амилоидных фибрилл проводили в Thermo Fluoroskan, встряхивание при 960 об/мин, 37°C, в течение 45 часов. Испускание ThT сканировали до и после анализа. Период задержки перед началом испускания флуоресценции ThT (образование амилоидных фибрилл) представляет собой измерение физической стабильности. Периоды задержки определяли на основе кривых флуоресценции, усредненных для 8 повторностей. Периоды задержки тестировали дважды в случае комбинированных составов 1-4 и комбинированных составов 5 и 6 соответственно; и в случае каждого тестировали с моносоставом в качестве эталона, чтобы сделать результаты сравнимыми. Более длительный период задержки свидетельствует о более высокой физической стабильности.
Эталон, представляющий собой моносостав соединением 1, и комбинированные составы тестировали в анализе с применением 96-луночного микротитрационного планшета с тиофлавином T (ThT) в отношении склонности к образованию амилоидных фибрилл.
Периоды задержки показаны в таблицах 14A, 14B, 14C ниже.
Таблица 14A. Периоды задержки для комбинированных составов
| Моно Эталон 1 |
Комбинированный 1 | Комбинированный 2 | Комбинированный 3 | Комбинированный 4 | |
| Период задержки (ч.) |
11,0 | 19,3 | 18,0 | 21,6 | 23 |
Таблица 14B. Периоды задержки для комбинированных составов
| Моноэталон 1 | Комбинированный 5 | Комбинированный 6 | |
| Период задержки (ч.) |
9,9 | 20,6 | 45 |
Таблица 14C. Периоды задержки для комбинированных составов
| Моноэталон 2 | Комбинированный I | Комбинированный II | Комбинированный III | Комбинированный IV | Комбинированный V | Комбинированный VI | |
| Период задержки (ч.) |
29,3 | 44,3 | 45 | 45 | 28,6 | 45 | 45 |
Вывод
Анализ с применением ThT показал, что без повышения уровня цинка комбинированные составы соединения 1 и семаглутида не характеризовались нарушением физической стабильности соединения 1 по сравнению с таковой моносоставов с соединением 1. Действительно, периоды задержки комбинированных составов были намного продолжительнее, чем таковые моносостава с соединением 1, что демонстрирует то, совместное составление соединения 1 с семаглутидом фактически стабилизирует состав в отношении нежелательного образования амилоидных фибрилл. При сравнении с комбинированным составом другого производного инсулина длительного действия и производного GLP-1 (например, деглудека и лираглутида) это наблюдение является неожиданным и удивительным.
Из результатов из таблицы 14C видно, что понижение уровня м-крезола может обеспечивать дополнительное повышение физической стабильности комбинированного состава соединения 1 и семаглутида; и повышение уровня фенола также обеспечивает повышение физической стабильности комбинированного состава соединения 1 и семаглутида.
Из результатов из таблицы 14C также видно, что при совместном составлении соединения 1 с семаглутидом в составе в соответствии с настоящим изобретением физическая стабильность соединения 1 повышается по сравнению с применением состава из существующего уровня техники (состав I) в случае комбинированного состава соединения 1 и семаглутида.
Химическая стабильность
Протокол
Чистоту определяли с помощью обращенно-фазовой ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии (RP-UHPLC), где образцы анализировали с применением Acquity CSH Fluoro Phenyl, 130Å, 1,7 мкм, колонка 2,1×150 мм, градиентное элюирование с помощью ацетонитрила в мобильной фазе ацетонитрила и фосфорсодержащего буфера в воде с последующим УФ-обнаружением (215 нм) при скорости потока 0,30 мл/мин с объемом впрыска образца 2-3 мкл. Чистоту оценивали как площадь основного пика, деленную на площадь всех пиков, x 100%.
Стабильность составов, представленных в таблице 15, измеряли как % чистоты общего соединения 1 с помощью RP-UHPLC.
Результаты подтверждают повышенную химическую стабильность соединения 1 в комбинированных составах, если содержание цинка понижено с 4,5 Zn++/шесть единиц инсулина до 2,4, 2,2 и 2,0 Zn++/шесть единиц инсулина (таблица 15, фиг. 8). Изменение системы консерванты с 25/25 мМ фенола/м-крезола до 60 мМ фенола и 0 м-крезола приводит в результате к дополнительному улучшению химической стабильности соединения 1 в комбинированном составе.
Таблица 15. Чистота соединения 1 в комбинированном составе
| Комбинированный состав | Чистота с течением периода хранения при 37°C (недели) | |||
| 0 | 2 | 4 | 6 | |
| I | 97,5% | 96,1% | 94,4% | 92,9% |
| II | 97,6% | 96,6% | 95,8% | 95,0% |
| III | 97,6% | 96,7% | 95,9% | 95,2% |
| IV | 97,2% | 96,4% | 95,4% | 94,4% |
| V | 97,3% | 96,6% | 95,9% | 95,1% |
| VI | 97,3% | 96,6% | 95,9% | 95,2% |
Вывод
При совместном составлении соединения 1 с семаглутидом в составе в соответствии с настоящим изобретением химическая стабильность соединения 1 повышается по сравнению с применением состава из существующего уровня техники (состав I) в случае комбинированного состава соединения 1 и семаглутида.
Пример 7
PK-свойства совместных составов с семаглутидом на модели свиней LYD для определения PK-свойств
Определяли характеристики эталонного моносостава с соединением 1, и комбинированного состава 1, и комбинированного состава 2 из составов, полученных в примере 6, на модели свиней LYD для определения PK-свойств. Важно, чтобы PK-параметры tmax и t½ соединения 1, а также среднее время нахождения (MRT) соединения 1 не изменялись в значительной степени после совместного составления с семаглутидом.
Проводили перекрестное исследование с использованием 16 животных (n=8 для каждого состава).
Таблица 16. PK-параметры соединения 1
| Моноэталон 1 | Комбинированный 1 | Комбинированный 2 | |
| tmax (ч.) | 13,0±7,0 | 9,0±2,0 | 8,0±2,0 |
| t½ (ч.) | 48,0±4,1 | 48,6±3,2 | 47,9±5,3 |
| MRT (ч.) | 71±6 | 69,0±4,0 | 68,0±4,0 |
Показаны средние значения ± стандартное отклонение.
PK-параметры соединения 1 при совместном составлении с семаглутидом в комбинированный состав 1 и комбинированный состав 2 не изменялись в значительной степени по сравнению с соединением 1, вводимым в виде моносостава. Значения tmax были немного ниже у совместных составов, но со стандартным отклонением в отношении эталона с соединением 1 значения являются перекрывающимися. Значения t½ и MRT являлись очень сходными у соединения 1 в совместных составах по сравнению с эталонным моносоставом. В заключение, совместный состав с семаглутидом в значительной степени не оказывал влияния в отношении PK-свойств соединения 1.
Пример 8
Улучшенный размер олигомеров подвергнутых замене буфера совместных составов 60/0
Олигомеризацию комбинированных составов I-VI, имеющую место при смоделированных условиях в месте инъекции в отношении соединения 1 определяли в соответствии с протоколом, описанным в примере 1. Результаты показаны в таблице 17 и на фиг. 9A и фиг. 9B.
Таблица 17. Размер олигомеров комбинированных составов
| Комбинированный I |
Комбинированный II |
Комбинированный III |
Комбинированный IV | Комбинированный V | Комбинированный VI | |
| Rh(ср.) [нм] | 13,7 | 4,1 | 4,0 | 4,6 | 4,5 | 4,7 |
| S*(ср.) [S] | 8,32 | 4,30 | 4,40 | 4,72 | 4,67 | 4,96 |
Вывод
Эти эксперименты демонстрируют, что размер олигомеров, образовавшихся при смоделированных условиях в месте инъекции, в высокой степени зависит от содержания цинка.
Средний размер олигомеров, образовавшихся при использовании комбинированных составов при смоделированных условиях в месте инъекции, в значительной степени уменьшен в составах с низким уровнем цинка (например, 2,4 и 2,2 Zn++/шесть единиц инсулина) по сравнению с составами с высоким уровнем цинка (например, 4,5 Zn++/шесть единиц инсулина). Повышение уровня фенола и понижение уровня м-крезола обеспечивает дополнительное уменьшение среднего размера олигомеров, образовавшихся при использовании комбинированных составов при смоделированных условиях в месте инъекции.
Claims (19)
1. Фармацевтическая композиция для лечения патологического состояния, связанного с диабетом, содержащая:
4,2 мМ производного инсулина, представляющего собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30;
0,49 мМ семаглутида;
1,5% вес/вес глицерина;
60 мМ фенола;
0 или 10 мМ м-крезола;
2,2±0,2 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина;
20 мМ хлорида натрия,
и имеющая значение pH 7,4.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая
4,2 мМ производного инсулина, представляющего собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nε-эйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30;
0,49 мМ семаглутида;
1,5% вес/вес глицерина;
60 мМ фенола;
10 мМ м-крезола;
2,2 моль ионов цинка на шесть молей указанного производного инсулина;
20 мМ хлорида натрия,
и имеющая значение pH 7,4.
3. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 1, 2 для лечения или облегчения заболевания, расстройства или состояния, связанного с диабетом 1 типа, диабетом 2 типа, нарушением толерантности к глюкозе, гипергликемией, дислипидемией, ожирением или метаболическим синдромом.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16204688.2 | 2016-12-16 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019118696A Division RU2758367C2 (ru) | 2016-12-16 | 2017-12-15 | Фармацевтические композиции, содержащие инсулин |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2832680C1 true RU2832680C1 (ru) | 2024-12-27 |
Family
ID=
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2154494C2 (ru) * | 1995-06-14 | 2000-08-20 | Эли Лилли Энд Компани | Комплекс аналога инсулина и протамина, способ получения, фармацевтическая композиция и способ лечения диабета |
| RU2218935C2 (ru) * | 1998-10-16 | 2003-12-20 | Ново Нордиск А/С | Стабильные концентрированные препаративные формы инсулина для доставки через легкие |
| WO2013153000A2 (en) * | 2012-04-11 | 2013-10-17 | Novo Nordisk A/S | Insulin formulations |
| WO2014118355A1 (en) * | 2013-02-04 | 2014-08-07 | Sanofi | Stabilized pharmaceutical formulations of insulin analogues and/or insulin derivatives |
| US8865647B2 (en) * | 2009-11-02 | 2014-10-21 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical solution of non covalently bound albumin and acylated insulin |
| WO2015052088A1 (en) * | 2013-10-07 | 2015-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel derivative of an insulin analogue |
| WO2016001862A1 (en) * | 2014-07-04 | 2016-01-07 | Wockhardt Limited | Extended release formulations of insulins |
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2154494C2 (ru) * | 1995-06-14 | 2000-08-20 | Эли Лилли Энд Компани | Комплекс аналога инсулина и протамина, способ получения, фармацевтическая композиция и способ лечения диабета |
| RU2218935C2 (ru) * | 1998-10-16 | 2003-12-20 | Ново Нордиск А/С | Стабильные концентрированные препаративные формы инсулина для доставки через легкие |
| US8865647B2 (en) * | 2009-11-02 | 2014-10-21 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical solution of non covalently bound albumin and acylated insulin |
| WO2013153000A2 (en) * | 2012-04-11 | 2013-10-17 | Novo Nordisk A/S | Insulin formulations |
| WO2014118355A1 (en) * | 2013-02-04 | 2014-08-07 | Sanofi | Stabilized pharmaceutical formulations of insulin analogues and/or insulin derivatives |
| WO2015052088A1 (en) * | 2013-10-07 | 2015-04-16 | Novo Nordisk A/S | Novel derivative of an insulin analogue |
| WO2016001862A1 (en) * | 2014-07-04 | 2016-01-07 | Wockhardt Limited | Extended release formulations of insulins |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| /s10534-005-3685-y. * |
| MICHAEL F. DUNN, Zinc-ligand interactions modulate assembly and stability of the insulin hexamer - a review. BioMetals, 2005, 18:295-303. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240424064A1 (en) | Insulin containing pharmaceutical compositions | |
| TWI459962B (zh) | 包含胰島素、菸鹼醯胺及胺基酸的製劑 | |
| RU2832680C1 (ru) | Фармацевтические композиции, содержащие инсулин | |
| HK40043780A (en) | Insulin containing pharmaceutical compositions | |
| HK40043780B (en) | Insulin containing pharmaceutical compositions | |
| HK40008567B (en) | Insulin containing pharmaceutical compositions | |
| HK40008567A (en) | Insulin containing pharmaceutical compositions |