RU2830413C1 - Method for diagnosing chronic endometritis of various severity in patients with abnormal uterine bleeding, with no history of endometriopathy, by immunohistochemical study of cellular immunity disorder in endometrium - Google Patents
Method for diagnosing chronic endometritis of various severity in patients with abnormal uterine bleeding, with no history of endometriopathy, by immunohistochemical study of cellular immunity disorder in endometrium Download PDFInfo
- Publication number
- RU2830413C1 RU2830413C1 RU2023135865A RU2023135865A RU2830413C1 RU 2830413 C1 RU2830413 C1 RU 2830413C1 RU 2023135865 A RU2023135865 A RU 2023135865A RU 2023135865 A RU2023135865 A RU 2023135865A RU 2830413 C1 RU2830413 C1 RU 2830413C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- points
- cells
- endometrium
- endometrial
- cellular immunity
- Prior art date
Links
- 208000030373 chronic endometritis Diseases 0.000 title claims abstract description 83
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 title claims abstract description 64
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 208000037853 Abnormal uterine bleeding Diseases 0.000 title abstract description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title description 42
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 claims abstract description 63
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 35
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims abstract description 35
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 claims abstract description 31
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 101000874179 Homo sapiens Syndecan-1 Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims abstract description 24
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims abstract description 19
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 claims abstract description 6
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 90
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims description 47
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims description 47
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000012735 histological processing Methods 0.000 claims description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 3
- 208000037093 Menstruation Disturbances Diseases 0.000 abstract description 2
- 231100000544 menstrual irregularity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 33
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 19
- 208000025150 arthrogryposis multiplex congenita Diseases 0.000 description 11
- 208000037748 distal type 1A arthrogryposis Diseases 0.000 description 11
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 10
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 9
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 9
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 8
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 6
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 5
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 4
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 206010065019 Coital bleeding Diseases 0.000 description 3
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 3
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 3
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 2
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 2
- 108010081520 Glycodelin Proteins 0.000 description 2
- 102000004240 Glycodelin Human genes 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 2
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- 101000611023 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100021747 Leukemia inhibitory factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 2
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 2
- 102100033117 Toll-like receptor 9 Human genes 0.000 description 2
- 102100040403 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Human genes 0.000 description 2
- 206010046788 Uterine haemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002346 layers by function Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000035752 proliferative phase Effects 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- YPSXFMHXRZAGTG-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-2-[2-(5-methoxy-2-nitrosophenyl)ethyl]-1-nitrosobenzene Chemical group COC1=CC=C(N=O)C(CCC=2C(=CC=C(OC)C=2)N=O)=C1 YPSXFMHXRZAGTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026445 A-kinase anchor protein 17A Human genes 0.000 description 1
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 101000718019 Homo sapiens A-kinase anchor protein 17A Proteins 0.000 description 1
- 101001042362 Homo sapiens Leukemia inhibitory factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101710142062 Leukemia inhibitory factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 206010062049 Lymphocytic infiltration Diseases 0.000 description 1
- 208000019255 Menstrual disease Diseases 0.000 description 1
- 206010027514 Metrorrhagia Diseases 0.000 description 1
- 102000003705 Syndecan-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000058 Syndecan-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000016117 decidualization Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 230000007778 menstrual function Effects 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008756 pathogenetic mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 description 1
- 230000001023 pro-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002784 sclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Область техникиField of technology
Изобретение относится к области медицины, а именно к патологической анатомии, репродуктологии, акушерству и гинекологии и может быть использовано для диагностики нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности хронического эндометрита (ХЭ) у женщин с аномальным маточным кровотечением, расстройством впоследствии менструального цикла маточного генеза на основании оценки иммуногистохимической реакции (ИГХ) с маркерами: плазматических клеток, натуральных киллерных клеток (NK-клетки), В-лимфоцитов, Т-хелперов, цитотоксических Т-лимфоцитов, а так же соотношения Т-хелперных клеток к цитотоксическим Т-лимфоцитам.The invention relates to the field of medicine, namely to pathological anatomy, reproductive medicine, obstetrics and gynecology, and can be used to diagnose cellular immunity disorders and the severity of chronic endometritis (CE) in women with abnormal uterine bleeding, subsequent menstrual cycle disorder of uterine genesis based on an assessment of the immunohistochemical reaction (IHC) with markers: plasma cells, natural killer cells (NK cells), B lymphocytes, T helpers, cytotoxic T lymphocytes, as well as the ratio of T helper cells to cytotoxic T lymphocytes.
Уровень техникиState of the art
Термин аномальное маточное кровотечение (АМК) характеризует любое маточное кровотечение, не соответствующее нормальной менструации женщины репродуктивного возраста. По данным мировой литературы распространенность АМК достигает более 35% [15, 16, 17].The term abnormal uterine bleeding (AUB) characterizes any uterine bleeding that does not correspond to the normal menstruation of a woman of reproductive age. According to world literature, the prevalence of AUB reaches more than 35% [15, 16, 17].
Одним из факторов аномального АМК является ХЭ. Распространенность ХЭ у женщин репродуктивного периода варьирует в широких пределах [3-5, 15, 16]. Данное заболевание характеризуется латентным течением и скрытой клинической картиной, что вызывает определенные трудности его ранней диагностики [1, 2, 10-14].One of the factors of abnormal AMC is CE. The prevalence of CE in women of reproductive age varies widely [3-5, 15, 16]. This disease is characterized by a latent course and hidden clinical picture, which causes certain difficulties in its early diagnosis [1, 2, 10-14].
ХЭ нарушает децидуализацию, инициирует резистентность к прогестерону, а также приводит к нарушению баланса факторов адгезии эндометрия [6-9]. Аномалии эндометриального компартмента (эндометриопатии) становятся причиной повышенного пролиферативного потенциала при сниженной способности к дифференцировке, асинхронной перистальтики матки, вызывая АМК, а также дальнейшее нарушение менструального цикла. Методы диагностики АМК у пациенток с верифицированным ХЭ далеки от идеала, так как не имеют рационального анализа специфичных маркеров. Вышеизложенное определяет актуальность данной проблемы и свидетельствует о необходимости разработки новых способов диагностики и прогнозирования исходов ХЭ у пациенток, страдающими АМК.CE disrupts decidualization, initiates resistance to progesterone, and leads to an imbalance of endometrial adhesion factors [6-9]. Anomalies of the endometrial compartment (endometriopathy) cause increased proliferative potential with reduced differentiation capacity, asynchronous uterine peristalsis, causing AUB, as well as further disruption of the menstrual cycle. Methods for diagnosing AUB in patients with verified CE are far from ideal, since they do not have a rational analysis of specific markers. The above determines the relevance of this problem and indicates the need to develop new methods for diagnosing and predicting the outcomes of CE in patients suffering from AUB.
Как известно, в основе патогенеза имплантационной несостоятельности эндометрия лежит иммунологический дисбаланс в строме эндометрия у женщин репродуктивного возраста, субстратом которого являются недостаточные концентрации проангиогенных NK-клеток, регуляторных супрессивных Т-хелперов, а также повышение плотности цитотоксического класса NK- клеток и Т-киллеров. Это формирует два ключевых звена - снижение иммунологической толерантности к полуаллогенной бластоцисте и нарушение процессов нормального ангиогенеза в строме эндометрия женщин [18].As is known, the pathogenesis of endometrial implantation failure is based on an immunological imbalance in the endometrial stroma in women of reproductive age, the substrate of which is insufficient concentrations of proangiogenic NK cells, regulatory suppressive T-helpers, as well as an increase in the density of the cytotoxic class of NK cells and T-killers. This forms two key links - a decrease in immunological tolerance to the semi-allogeneic blastocyst and a disruption of normal angiogenesis in the endometrial stroma of women [18].
Существует способ диагностики ХЭ, описанный в патенте РФ 2236013 от 10.09.2004 года, сущность которого заключается в том, что с помощью ИГХ окрашивания срезов эндометриальной ткани определяют показатели местного иммунитета: количество лимфоцитов, экспрессирующих маркеры естественных киллерных клеток, CD56+, CD16+ и маркеры активации HLA-DR(II)+, и тем самым диагностируют различные варианты течения ХЭ.There is a method for diagnosing CE, described in Russian patent 2236013 of September 10, 2004, the essence of which is that using IHC staining of endometrial tissue sections, local immunity indicators are determined: the number of lymphocytes expressing markers of natural killer cells, CD56+, CD16+ and activation markers HLA-DR(II)+, and thus various variants of the course of CE are diagnosed.
Недостатком данного метода является отсутствие комплекса ИГХ оценки нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности ХЭ, а также отсутствие данных об АМК и нарушениях менструального цикла эндометриального генеза.The disadvantage of this method is the lack of a complex of IHC assessment of cellular immunity disorders and the degree of expression of CE, as well as the lack of data on AMC and menstrual cycle disorders of endometrial genesis.
Известен способ диагностики ХЭ у пациенток после прерывания неразвивающейся беременности и с неблагоприятными потерями беременности в анамнезе (патент РФ 2697195 от 18.05.2018 г.). Суть метода заключается в исследовании менструальной крови на содержание в ней эндометриального белка гликоделина. Исследование проводится на 1-2 день менструального цикла. Полученный материал исследуется методом ИФА. Уровень эндометриального гликоделина менее 22,2 мкг/мл свидетельствует о ХЭ.A method for diagnosing endometrial endometriosis in patients after termination of a non-viable pregnancy and with a history of adverse pregnancy losses is known (RU Patent 2697195 of 18.05.2018). The essence of the method is to study menstrual blood for the content of the endometrial protein glycodelin. The study is carried out on the 1-2 day of the menstrual cycle. The obtained material is examined by ELISA. The level of endometrial glycodelin less than 22.2 μg/ml indicates endometrial ...
Недостатком данного метода является отсутствие комплексного определения специфических маркеров, присущих персистирующему воспалительному процессу в эндометрии, а также отсутствие данных об АМК и последующих нарушениях менструального цикла.The disadvantage of this method is the lack of a comprehensive definition of specific markers inherent in the persistent inflammatory process in the endometrium, as well as the lack of data on AMC and subsequent menstrual cycle disorders.
Известен способ диагностики и прогнозирования развития ХЭ у пациенток (патент РФ 2587325 от 20.06.2016 г.). У женщин репродуктивного возраста посредством ИГХ исследования срезов эндометрия, по проценту позитивно окрашенных клеток эндометрия в баллах, определяют показатели локального врожденного иммунитета TLR2, TLR4, TLR9. Полученная ИГХ картина экспрессии TLR2, TLR4, TLR9 совместно с морфологическими данными позволяет диагностировать либо отсутствие ХЭ, либо наличие факторов риска и предрасположенности к его развитию, а также либо наличие и прогрессирование заболевания, либо стадию ремиссии данного состояния; либо наличие длительно персистирующего воспаления эндометрия, течение которого характеризуется развитием склеротических изменений сосудов и фиброзом стромы эндометрия различной степени выраженности.A method for diagnosing and predicting the development of CE in female patients is known (RU Patent 2587325 dated 20.06.2016). In women of reproductive age, using IHC examination of endometrial sections, the percentage of positively stained endometrial cells in points is used to determine the indicators of local innate immunity TLR2, TLR4, TLR9. The obtained IHC expression pattern of TLR2, TLR4, TLR9 together with morphological data allows diagnosing either the absence of CE, or the presence of risk factors and predisposition to its development, as well as either the presence and progression of the disease, or the remission stage of this condition; or the presence of long-term persistent inflammation of the endometrium, the course of which is characterized by the development of sclerotic changes in blood vessels and fibrosis of the endometrial stroma of varying severity.
Недостатком данного метода является отсутствие комплексной ИГХ оценки нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности ХЭ, отсутствие данных об АМК и нарушениях менструального цикла.The disadvantage of this method is the lack of a comprehensive IHC assessment of cellular immunity disorders and the severity of CE, the lack of data on AMC and menstrual cycle disorders.
Существует способ определения стадии клинического течения ХЭ, степени активности воспаления и выраженности фиброза с установлением прогноза имплантации и нарушения рецептивности эндометрия, описанный в патенте РФ 2674155 от 27.09.2017 года. Сущность метода заключается в оценке наличия воспалительной лимфоцитарной инфильтрации и определении выраженности фиброза, по количественной оценке, распространенности и наличию его в основных топографических зонах эндометрия в баллах, по сумме которых определяют индексы активности ХЭ и выраженности фиброза, по величине которых выделяют по три стадии активности и клинического течения ХЭ.There is a method for determining the stage of the clinical course of CE, the degree of inflammation activity and the severity of fibrosis with the establishment of a prognosis for implantation and impaired endometrial receptivity, described in Russian patent 2674155 dated September 27, 2017. The essence of the method lies in assessing the presence of inflammatory lymphocytic infiltration and determining the severity of fibrosis, by quantitative assessment, prevalence and its presence in the main topographic zones of the endometrium in points, by the sum of which the indices of CE activity and fibrosis severity are determined, by the value of which three stages of activity and clinical course of CE are distinguished.
Недостатком данного метода является отсутствие системного определения маркеров, присутствующих при хроническом воспалительном процессе в эндометрии, а также ориентация на наличие одного только фиброза, в отсутствие других надежных маркеров, отсутствие данных об АМК и нарушениях менструального цикла.The disadvantage of this method is the lack of a systematic determination of markers present in the chronic inflammatory process in the endometrium, as well as the focus on the presence of fibrosis alone, in the absence of other reliable markers, the lack of data on AMC and menstrual cycle disorders.
Известен способ оценки рецептивности эндометрия в период "имплантационного окна" (патент РФ 2651762, 23.04.2018 г.). Для достижения этой цели исследователи методом пайпель-биопсии эндометрия на 20-23 день менструального цикла проанализировали на основании метода ИГХ с использованием двухэтапного стрептавидин-биотин-пероксидазного метода с демаскировкой антигена и с применением ключевых биомолекул, отвечающих за имплантацию: стандартный набор моноклональных и поликлональных антител ERa в строме, PR в строме, р53 в железах, bcl2 в строме, CD95 в строме, Ki67 в строме, LIFR в железах, LIF в железах эндометрия. На основании полученных результатов исследования авторы рассчитали прогноз рецептивности эндометрия по формуле: d=-1,3 89x1 + 0,022x2 - 0,044x3 - 0,019x4 + 0,041x5 + 0,006x6 + 0,015x7 - 3,248, где x1 - индекс ER/PR в строме эндометрия (баллы H-score для определения ядерной экспрессии ER и PR), х2 - р53 в железах эндометрия (% окрашенных ядер в поле зрения), х3 - bcl 2 в строме эндометрия (% окрашенных ядер в поле зрения), х4 - CD95+ в строме эндометрия (% окрашенных клеток), х5 - Ki67 в строме эндометрия (% окрашенных ядер в поле зрения), х6 - LIF-R в железах эндометрия (баллы H-score), х7 - LIF в железах эндометрия (баллы H-score). При значениях d>0 эндометрий характеризовали как рецептивный, при d≤0 эндометрий характеризуется как нерецептивный.A method for assessing endometrial receptivity during the "implantation window" is known (RU Patent 2651762, 23.04.2018). To achieve this goal, the researchers analyzed the endometrial pipelle biopsy on days 20-23 of the menstrual cycle using the IHC method using a two-stage streptavidin-biotin-peroxidase method with antigen retrieval and using key biomolecules responsible for implantation: a standard set of monoclonal and polyclonal antibodies ERa in the stroma, PR in the stroma, p53 in the glands, bcl2 in the stroma, CD95 in the stroma, Ki67 in the stroma, LIFR in the glands, LIF in the endometrial glands. Based on the obtained study results, the authors calculated the prognosis of endometrial receptivity using the formula: d=-1.3 89x1 + 0.022x2 - 0.044x3 - 0.019x4 + 0.041x5 + 0.006x6 + 0.015x7 - 3.248, where x1 is the ER/PR index in the endometrial stroma (H-score points for determining the nuclear expression of ER and PR), x2 is p53 in the endometrial glands (% of stained nuclei in the field of view), x3 is bcl 2 in the endometrial stroma (% of stained nuclei in the field of view), x4 is CD95+ in the endometrial stroma (% of stained cells), x5 is Ki67 in the endometrial stroma (% of stained nuclei in the field of view), x6 is LIF-R in the endometrial glands (H-score points). x7 - LIF in endometrial glands (H-score points). At values d>0 the endometrium was characterized as receptive, at d≤0 the endometrium was characterized as non-receptive.
Недостатками данного метода являлось отсутствие данных об АМК и нарушениях менструального цикла.The disadvantages of this method were the lack of data on AMC and menstrual cycle disorders.
Существует способ определения степени выраженности хронического эндометрита у женщин с маточным фактором бесплодия после неудачного экстракорпорального оплодотворения в анамнезе, описанный в патенте РФ 2748191 от 21.01.2021 года. Сущность метода заключается в разработке двух способов, основанных на комплексном патоморфологическом исследовании эндометрия в среднюю стадию фазы пролиферации, включающем в первом способе гистологическую окраску гематоксилином и эозином, ИГХ исследование с антителами к CD138, CD56, а во втором способе - гистологическая окраска гематоксилином и эозином, ИГХ исследование с антителами к CD138, CD56 и гистохимическую окраску по Маллори на определение выраженности фиброза.There is a method for determining the severity of chronic endometritis in women with a uterine factor of infertility after a history of unsuccessful in vitro fertilization, described in Russian patent 2748191 dated 01/21/2021. The essence of the method lies in the development of two methods based on a comprehensive pathomorphological study of the endometrium in the middle stage of the proliferation phase, including in the first method histological staining with hematoxylin and eosin, IHC study with antibodies to CD138, CD56, and in the second method - histological staining with hematoxylin and eosin, IHC study with antibodies to CD138, CD56 and histochemical staining according to Mallory to determine the severity of fibrosis.
Недостатком данного метода является отсутствие данных о связи ХЭ, нарушение клеточного иммунитета и АМК, а также нарушениях менструального цикла.The disadvantage of this method is the lack of data on the relationship between CE, cellular immunity disorders and AMC, as well as menstrual cycle disorders.
Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the essence of the invention
Предлагаемый способ позволяет устранить указанные недостатки: повышение точности патологоанатомической диагностики нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности ХЭ в эндометрии у женщин с АМК и последующими расстройствами менструации.The proposed method allows eliminating the above-mentioned shortcomings: increasing the accuracy of pathological diagnostics of cellular immunity disorders and the degree of expression of endometrial hemorrhage in women with AMC and subsequent menstrual disorders.
Вследствие отсутствия высокоспецифичных и чувствительных способов диагностики нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности ХЭ у пациенток с АМК в анамнезе, последующим нарушением менструального цикла эндометриального генеза, характеризующееся как хроническое маточное кровотечение, мы предлагаем способ, основанный на комплексном патологоанатомическом анализе параметров неполноценности функционального слоя эндометрия, который расширяет возможности диагностики нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности ХЭ в данной когорте пациенток.Due to the lack of highly specific and sensitive methods for diagnosing cellular immunity disorders and the severity of CE in patients with a history of AUB, followed by menstrual cycle disorders of endometrial genesis, characterized as chronic uterine bleeding, we propose a method based on a comprehensive pathological analysis of the parameters of the functional layer of the endometrium, which expands the possibilities for diagnosing cellular immunity disorders and the severity of CE in this cohort of patients.
Сущность предлагаемого способа определения степени выраженности хронического эндометрита (ХЭ) заключается в том, что проводят биопсию эндометрия или гистероскопию, диагностическое выскабливание слизистой полости матки в среднюю стадию фазы пролиферации - на 7-11 дни 28-дневного менструального цикла в спонтанном цикле, осуществляют пайпель-биопсию эндометрия с помощью одноразового аспирационного зонда, полученный материал после гистологической проводки в автоматической гистопроцессоре заливают в парафин, затем на срезах толщиной 4-6 мкм проводят окраску гематоксилином и эозином и гистохимическую окраску по Маллори, проводят иммуногистохимическое окрашивание на депарафинизированных и дегидратированных срезах толщиной 4-6 мкм с использованием авидин-биотинового иммунопероксидазного метода, определяют уровни экспрессии CD138+, CD56+, CD20+, CD4+, CD8+ в эндометрии, производят подсчет процента позитивно окрашенных клеток, при этом проводят оценку иммуногистохимической реакции:The essence of the proposed method for determining the severity of chronic endometritis (CE) is that an endometrial biopsy or hysteroscopy is performed, diagnostic curettage of the uterine mucosa is performed in the middle stage of the proliferation phase - on days 7-11 of the 28-day menstrual cycle in a spontaneous cycle, a pipelle biopsy of the endometrium is performed using a disposable aspiration probe, the obtained material after histological processing in an automatic histoprocessor is embedded in paraffin, then 4-6 μm thick sections are stained with hematoxylin and eosin and histochemical staining according to Mallory, immunohistochemical staining is performed on deparaffinized and dehydrated sections 4-6 μm thick using the avidin-biotin immunoperoxidase method, the expression levels of CD138+, CD56+, CD20+, CD4+, CD8+ are determined in endometrium, the percentage of positively stained cells is calculated, and the immunohistochemical reaction is assessed:
• если число CD138+ клеток равно нулю - 0 баллов; если встречаются единичные позитивно-окрашенные клетки - 1 балл; если 2-3 клетки - 2 балла; если клеток более или равно 4 - 3 балла;• if the number of CD138+ cells is zero - 0 points; if there are single positively stained cells - 1 point; if 2-3 cells - 2 points; if there are more than or equal to 4 cells - 3 points;
• если число CD56+ клеток от 1 до 10-0 баллов; если число клеток от 11 до 20 - 1 балл; если число клеток от 21 до 30 - 2 балла; если число клеток от 31 и более - 3 балла;• if the number of CD56+ cells is from 1 to 10 - 0 points; if the number of cells is from 11 to 20 - 1 point; if the number of cells is from 21 to 30 - 2 points; if the number of cells is 31 or more - 3 points;
• если число CD20+ клеток от 1 до 3 - 0 баллов; если число клеток от 4 до 6 - 1 балл; если число клеток 7 до 9 - 2 балла; если число клеток от 10 и более - 3 балла;• if the number of CD20+ cells is from 1 to 3 - 0 points; if the number of cells is from 4 to 6 - 1 point; if the number of cells is 7 to 9 - 2 points; if the number of cells is 10 or more - 3 points;
• если число CD4+ клеток от 1 до 10 - 0 баллов; если число клеток от 11 до 20 - 1 балл; если число клеток от 21 до 30 - 2 балла; если число клеток от 31 и более - 3 балла;• if the CD4+ cell count is from 1 to 10 - 0 points; if the cell count is from 11 to 20 - 1 point; if the cell count is from 21 to 30 - 2 points; if the cell count is 31 or more - 3 points;
• если число CD8+клеток от 1 до 10 - 0 баллов; если число клеток от 11 до 20 - 1 балл; если число клеток от 21 до 30 - 2 балла; если число клеток от 31 и более - 3 балла;• if the number of CD8+ cells is from 1 to 10 - 0 points; if the number of cells is from 11 to 20 - 1 point; if the number of cells is from 21 to 30 - 2 points; if the number of cells is 31 or more - 3 points;
далее оценивают состоятельность клеточного иммунитета по соотношению маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии и наличию фиброза:Next, the viability of cellular immunity is assessed based on the ratio of CD4+/CD8+ markers in the endometrium and the presence of fibrosis:
• если соотношение уровней экспрессии маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии менее 1,5 - снижение клеточного иммунитета эндометрия - 2 балла; если соотношение более 2,5 - гиперреактивный клеточный иммунитет эндометрия - 1 балл;• if the ratio of expression levels of CD4+/CD8+ markers in the endometrium is less than 1.5 - decreased cellular immunity of the endometrium - 2 points; if the ratio is more than 2.5 - hyperreactive cellular immunity of the endometrium - 1 point;
• оценка на наличие фиброза эндометрия: отсутствие фиброза - 0 баллов; есть фиброз - 1 балл;• assessment for the presence of endometrial fibrosis: no fibrosis - 0 points; fibrosis present - 1 point;
производят подсчет суммы полученных баллов и определяют выраженность ХЭ:They calculate the sum of the points received and determine the severity of the CE:
• при 15 и более баллов - выраженный ХЭ;• 15 points or more – pronounced chronic endometriosis;
• при 9-14 баллов - умеренно выраженный ХЭ;• 9-14 points – moderately expressed HE;
• при 5-8 баллов - слабо выраженный ХЭ• 5-8 points - mild HE
• при 0-4 баллов - ХЭ мало вероятен.• at 0-4 points - HE is unlikely.
Было проведено собственное исследование, в котором продемонстрирована высокая специфичность предлагаемого нами комплексного патологоанатомического метода в диагностике выраженности ХЭ и нарушения клеточного иммунитета с АМК в анамнезе, нарушения менструального цикла эндометриального генеза, основанном на оценке изменений клеточного иммунитета функционального слоя эндометрия. Комплексное изучение состояло из гистологических, гистохимических, иммуногистохимических методов исследований образцов. Полученные результаты позволили достоверно выявить нарушения клеточного иммунитета и определить степень выраженности ХЭ у пациенток с АМК.Our own study was conducted, which demonstrated the high specificity of the proposed comprehensive pathological anatomical method in diagnosing the severity of CE and cellular immunity disorders with AMC in the anamnesis, menstrual cycle disorders of endometrial genesis, based on the assessment of changes in cellular immunity of the functional layer of the endometrium. The comprehensive study consisted of histological, histochemical, immunohistochemical methods of studying samples. The obtained results allowed us to reliably identify cellular immunity disorders and determine the severity of CE in patients with AMC.
Предлагаемый способ является комплекснымThe proposed method is complex.
патологоанатомическим исследованием эндометрия в среднюю стадию фазы пролиферации, включающем гистологическую окраску гематоксилином и эозином, гистохимическую окраску по Маллори и с последующим ИГХ применением моноклональных антител к CD138, CD56, CD20, CD4, CD8 и соотношение CD4+/CD8+ в сочетании с наличием фиброза.pathological examination of the endometrium in the middle stage of the proliferative phase, including histological staining with hematoxylin and eosin, histochemical staining according to Mallory and followed by IHC using monoclonal antibodies to CD138, CD56, CD20, CD4, CD8 and the CD4+/CD8+ ratio in combination with the presence of fibrosis.
Комплекс ИГХ исследований включает анализ уровней экспрессии ключевых маркеров: CD138+ - плазматическая клетка, CD56+ - натуральные киллерные клетки, CD20+ - В-лимфоциты - высокоинформативный биомаркер для ранней диагностики ХЭ [3], CD4+/CD8+ - соотношение Т-хелперных клеток к цитотоксическим Т-лимфоцитам.The complex of IHC studies includes the analysis of expression levels of key markers: CD138+ - plasma cell, CD56+ - natural killer cells, CD20+ - B-lymphocytes - a highly informative biomarker for the early diagnosis of CE [3], CD4+/CD8+ - the ratio of T-helper cells to cytotoxic T-lymphocytes.
CD138+ - трансмембранный гепарансульфат протеогликан, участвующий в регуляции цикличных изменений эндометрия, используется для прогнозирования репродуктивных исходов в качестве специфического и чувствительного антигена плазмоцитов [9, 10].CD138+ is a transmembrane heparan sulfate proteoglycan involved in the regulation of cyclic changes in the endometrium and is used to predict reproductive outcomes as a specific and sensitive plasma cell antigen [9, 10].
CD56+ - маркер натуральных киллерных клеток. В фазу пролиферации доля CD56+ клеток составляет 8% от всех клеток эндометрия, а в секреторную фазу - 60-70%. В норме NK-клетки под воздействием прогестерона мигрируют в эндометрий и конститутивно в нем присутствуют. В эндометрии женщин с нарушением репродуктивной функции увеличение числа CD56+ клеток характеризует высокую интенсивность персистирующего процесса воспаления в ткани и является неблагоприятным фактором, препятствующим нормальной адгезии и имплантации бластоцисты [11].CD56+ is a marker of natural killer cells. In the proliferation phase, the proportion of CD56+ cells is 8% of all endometrial cells, and in the secretory phase - 60-70%. Normally, NK cells migrate to the endometrium under the influence of progesterone and are constitutively present in it. In the endometrium of women with reproductive dysfunction, an increase in the number of CD56+ cells characterizes the high intensity of the persistent inflammatory process in the tissue and is an unfavorable factor that prevents normal adhesion and implantation of the blastocyst [11].
CD4+ - Т-хелперы выступают в качестве стимулятора иммунного ответа, они активируют Т- и В-лимфоциты, моноциты и NK - клетки.CD4+ T-helpers act as a stimulator of the immune response, they activate T- and B-lymphocytes, monocytes and NK cells.
CD8+ - Т-киллеры - обнаруживаются при заражении вирусами или внутриклеточными патогенами, именно CD8+ имеет высокую диагностическую значимость при оценке хронического воспаления в эндометрии. Для иммуносупрессивного состояния характерно снижение CD4+ и повышение CD8+, в тоже время нарушение соотношения CD4+/CD8+ с увеличением количества CD8+ может возникать при различных инфекциях.CD8+ - T-killers - are detected during infection with viruses or intracellular pathogens, it is CD8+ that has high diagnostic significance in assessing chronic inflammation in the endometrium. For an immunosuppressive state, a decrease in CD4+ and an increase in CD8+ are characteristic, while a violation of the CD4+/CD8+ ratio with an increase in the number of CD8+ can occur with various infections.
CD20+ - В-лимфоцитарный антиген - белок, корецептор, расположенный на поверхности В-лимфоцитов. Установленные при ИГХ исследовании количественные особенности CD20+В-лимфоцитов в эндометрии позволяют его использовать как высокочувствительный и значимый маркер ранней диагностики ХЭ.CD20+ - B-lymphocyte antigen - a protein, a coreceptor located on the surface of B-lymphocytes. The quantitative characteristics of CD20+ B-lymphocytes in the endometrium established by IHC research allow it to be used as a highly sensitive and significant marker for early diagnosis of CE.
Таким образом, предлагаемый способ ИГХ диагностики нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности ХЭ у женщин с АМК и нарушением менструального цикла в последствии, без эндометриопатии в анамнезе, основанный на определении патогномоничных маркеров, обусловливающих особенности заболевания и дисфункции иммунного статуса эндометрия, следует рассматривать как дополненный вариант диагностики нарушения клеточного иммунитета и степени выраженности ХЭ.Thus, the proposed method of IHC diagnostics of cellular immunity disorders and the degree of expression of CE in women with AUC and subsequent menstrual cycle disorders, without a history of endometriopathy, based on the determination of pathognomonic markers that determine the characteristics of the disease and dysfunction of the immune status of the endometrium, should be considered as an additional version of the diagnosis of cellular immunity disorders and the degree of expression of CE.
Технический результат, достигаемый с помощью изобретения - повышение чувствительности верификации нарушения клеточного иммунитета и определения степени выраженности ХЭ, позволяющего прогнозировать положительный исход наступления и вынашивания беременности, у пациенток с АМК в анамнезе и с нарушением менструального цикла.The technical result achieved with the aid of the invention is an increase in the sensitivity of verification of cellular immunity disorders and determination of the degree of expression of CE, which makes it possible to predict a positive outcome of the onset and gestation of pregnancy in patients with a history of AMC and with menstrual cycle disorders.
Для осуществления способа необходимо уточнение из анамнестических данных о наличии эндометриопатии, которая могла быть диагностирована при предыдущих диагностических или лечебных выскабливаниях, а также оценена по уменьшению размера М-ЭХО при проведении ультразвукового исследования органов малого таза.To implement the method, it is necessary to clarify from the anamnestic data the presence of endometriopathy, which could have been diagnosed during previous diagnostic or therapeutic curettage, and also assessed by the decrease in the size of the M-ECHO during an ultrasound examination of the pelvic organs.
Данный метод диагностики заключается в том, что в среднюю стадию фазы пролиферации (на 7-11 дни 28-дневного менструального цикла) производят пайпель-биопсию эндометрия или гистероскопию, раздельное диагностическое выскабливание слизистой оболочки полости матки. После в патологоанатомическом отделении проводят стандартную гистологическую проводку операционного материала и подготавливают стеклопрепараты. Полученные гистологические срезы окрашивают гематоксилином и эозином, а также проводят гистохимическую окраску по Маллори, после чего материал исследуют методом ИГХ с применением наборов моноклональных антител к следующим маркерам: CD138, CD56, CD4, CD8, CD20. Трактовка ИГХ реакции проводится следующим способом:This diagnostic method consists of performing a pipelle endometrial biopsy or hysteroscopy, separate diagnostic curettage of the uterine cavity mucosa, in the middle stage of the proliferation phase (on days 7-11 of the 28-day menstrual cycle). Afterwards, the pathological anatomy department performs standard histological processing of the surgical material and prepares glass slides. The resulting histological sections are stained with hematoxylin and eosin, and histochemical staining is performed according to Mallory, after which the material is examined by the IHC method using sets of monoclonal antibodies to the following markers: CD138, CD56, CD4, CD8, CD20. The IHC reaction is interpreted in the following way:
- CD138+ - положительная реакция в виде темно-коричневого окрашивания плазматических клеток с подсчетом среднего числа на одно поле зрения при увеличении 400, и в зависимости от полученного числа разделяются на 4 группы: 0 клеток, 1 клетка, 2-3 клетки, 4 и более клеток.- CD138+ - a positive reaction in the form of dark brown staining of plasma cells with the calculation of the average number per field of view at a magnification of 400, and depending on the number obtained, they are divided into 4 groups: 0 cells, 1 cell, 2-3 cells, 4 or more cells.
- CD56+, CD4+, CD8+, CD20+ - положительная реакция в виде темно-коричневого окрашивания и подсчет числа окрашенных клеток.- CD56+, CD4+, CD8+, CD20+ - positive reaction in the form of dark brown staining and counting the number of stained cells.
- CD4+/CD8+ - соотношение числа положительно окрашенных темно-коричневых клеток CD4+ к числу положительно окрашенных темно-коричневых клеток CD8+.- CD4+/CD8+ - the ratio of the number of positively stained dark brown CD4+ cells to the number of positively stained dark brown CD8+ cells.
ИГХ исследование проводилось с использованием двухэтапного стрептавидин-биотин-пероксидазного метода с демаскировкой антигена. ИГХ окрашивание производилось в иммуностейнере Ventana BenchMark ULTRA IHC/ISH (США) на парафиновых срезах по стандартной методике с использованием антител CD138 - CD138/syndecan-l (В-А38) и CD56 «Cell-Marque» (США); CD20, CD4, CD8 «Ventana» (США) (таблица 1).IHC study was performed using a two-step streptavidin-biotin-peroxidase method with antigen retrieval. IHC staining was performed in a Ventana BenchMark ULTRA IHC/ISH immunostainer (USA) on paraffin sections using a standard technique using CD138 - CD138/syndecan-1 (B-A38) and CD56 antibodies "Cell-Marque" (USA); CD20, CD4, CD8 "Ventana" (USA) (Table 1).
Первый этап. Проводится анализ наличия фиброза и подсчет числа CD138+ плазматических клеток в расчете на 1 поле зрения при увеличении 400. После чего материал разделяют на группы (Таблица 2):Stage 1. An analysis of the presence of fibrosis and a count of the number of CD138+ plasma cells per 1 field of view at a magnification of 400 are performed. After which the material is divided into groups (Table 2):
- ХЭ различной степени выраженности в зависимости от числа плазматических клеток CD138+;- CE of varying severity depending on the number of CD138+ plasma cells;
- без CD138+ клеток - нарушение клеточного иммунитета эндометрия (Таблица 2).- without CD138+ cells - impaired cellular immunity of the endometrium (Table 2).
Второй этап. Анализируется ИГХ реакция и оценивается число CD56+, CD4+, CD8+, CD20+, а также соотношение CD4+/CD8+ (Таблица 2).Second stage. The IHC reaction is analyzed and the number of CD56+, CD4+, CD8+, CD20+, as well as the CD4+/CD8+ ratio are assessed (Table 2).
При ИГХ исследовании биоптатов эндометрия женщин с ХЭ (с АМК в анамнезе и нарушением менструального цикла эндометриального генеза впоследствии), полученных в среднюю стадию фазы пролиферации менструального цикла (на 7-11 дни 28-дневного менструального цикла), CD138+ клетки обнаруживаются в 100%.In an IHC study of endometrial biopsies from women with CE (with a history of AUB and subsequent menstrual cycle disorders of endometrial genesis), obtained in the middle stage of the proliferative phase of the menstrual cycle (on days 7-11 of the 28-day menstrual cycle), CD138+ cells are detected in 100%.
Превышение значений CD56+ - при выраженном ХЭ встречается в 100%, при умеренно-выраженном ХЭ - в 98%), при слабо-выраженном ХЭ - в 100%.Excess CD56+ values - with pronounced CE - occur in 100%, with moderate CE - in 98%, with weak CE - in 100%.
Превышение значений CD20+ - при выраженном ХЭ обнаруживается в 80%, при умеренно-выраженном ХЭ - в 70%, при слабо-выраженном ХЭ в 35%.Excess CD20+ values are detected in 80% of cases of severe CE, in 70% of cases of moderate CE, and in 35% of cases of mild CE.
Превышение значений CD4+ - при выраженном ХЭ встречается в 95%, при умеренно-выраженном ХЭ встречается в 85%, при слабо-выраженном ХЭ - 70%.Excess CD4+ values - with pronounced CE it occurs in 95%, with moderate CE it occurs in 85%, with weak CE - 70%.
Превышение значений CD8+ - при выраженном ХЭ встречается в 100%, при умеренно-выраженном ХЭ - 100%, при слабо-выраженном ХЭ - 100%.Excess CD8+ values - with pronounced CE - occur in 100%, with moderate CE - 100%, with weak CE - 100%.
Фиброз стромы встречается при выраженном ХЭ в 70%, при умеренно-выраженном ХЭ - в 45%, при слабовыраженном ХЭ - в 55%.Stromal fibrosis occurs in 70% of cases of severe CE, in 45% of cases of moderate CE, and in 55% of cases of mild CE.
Соотношение CD4+/CD8+ <1,5 (снижение клеточного иммунитета эндометрия) - при выраженном ХЭ обнаруживается в 60%, при умеренно-выраженном ХЭ - 50%, при слабо-выраженном ХЭ - 55%.The CD4+/CD8+ ratio <1.5 (reduced cellular immunity of the endometrium) is found in 60% of cases of severe CE, 50% of cases of moderate CE, and 55% of cases of mild CE.
При ИГХ исследовании биоптатов эндометрия женщин с АМК в анамнезе и нарушением менструального цикла эндометриального генеза впоследствии, у которых CD138+ клетки не были обнаружены, превышение значений CD56+ встречается в 90%, превышение значений CD20+ - в 9%, превышение значений CD4+ - в 90%, превышение значений CD8+ - в 98%, отклонение соотношения CD4+/CD8+ обнаруживается в 64%, фиброз стромы - 55%. Эти изменения расцениваются как нарушение клеточного иммунитета.In IHC studies of endometrial biopsies from women with a history of AUC and subsequent menstrual irregularities of endometrial genesis, in whom CD138+ cells were not detected, excess CD56+ values were found in 90%, excess CD20+ values in 9%, excess CD4+ values in 90%, excess CD8+ values in 98%, deviation in the CD4+/CD8+ ratio was found in 64%, and stromal fibrosis in 55%. These changes are regarded as a disorder of cellular immunity.
Среди биоптатов эндометрия здоровых женщин единичные CD 138+клетки наблюдаются в 9,5% пациенток, в то время как экспрессии маркеров CD56+, CD20+, CD4+, CD8+, а также значение CD4+/CD8+ находятся в рамках референсных значений (Таблица 3).Among endometrial biopsies of healthy women, single CD 138+ cells are observed in 9.5% of patients, while the expression of markers CD56+, CD20+, CD4+, CD8+, as well as the CD4+/CD8+ value are within the reference values (Table 3).
Таблица 3. Результаты ИГХ и гистохимического исследований в среднюю стадию фазы пролиферации эндометрия женщин с АМК в анамнезе и нарушением менструального цикла эндометриального генеза впоследствии, и здоровых женщин.Table 3. Results of IHC and histochemical studies in the middle stage of the endometrial proliferation phase of women with a history of AUC and subsequent menstrual cycle disorders of endometrial genesis, and healthy women.
Таким образом, по результатам проведенных патоморфологических исследований материала в среднюю стадию фазы пролиферации менструального цикла ХЭ верифицируется по совокупности наличия фиброза эндометрия, плазматических клеток, натуральных киллеров, В-лимфоцитов, Т-лимфоцитов - хелперов, цитотоксических Т лимфоцитов - супрессоров, а также по соотношению Т-лимфоцитов - хелперов к цитотоксическим Т лимфоцитам -супрессорам.Thus, based on the results of the pathomorphological studies of the material in the middle stage of the proliferation phase of the menstrual cycle, CE is verified by the combination of the presence of endometrial fibrosis, plasma cells, natural killers, B-lymphocytes, T-lymphocytes - helpers, cytotoxic T lymphocytes - suppressors, as well as by the ratio of T-lymphocytes - helpers to cytotoxic T lymphocytes - suppressors.
Можно предположить, что эндометриопатия в виде нарушения клеточного иммунитета является принципиально важным звеном для регуляции репродуктивной и менструальной функции, соответственно выявленное изменение местного иммунитета в эндометрии в фазе пролиферации у пациенток с ХЭ может быть одним из ведущих патогенетических механизмов развития функциональной несостоятельности эндометрия.It can be assumed that endometriopathy in the form of a disorder of cellular immunity is a fundamentally important link for the regulation of reproductive and menstrual function, accordingly, the identified change in local immunity in the endometrium in the proliferation phase in patients with CE may be one of the leading pathogenetic mechanisms for the development of functional failure of the endometrium.
В эндометрии в среднюю стадию фазы пролиферации у пациенток с АМК в анамнезе и нарушением менструального цикла эндометриального генеза впоследствии в сравнении с биоптатами эндометрия женщин без АМК в анамнезе, проходившие плановое диспансерное наблюдение, нами были установлены достоверные ИГХ и гистохимические детерминанты. На фоне нарушения клеточного иммунитета определяется повышение экспрессии CD4+ и CD8+, а также изменение соотношения CD4+/CD8+ (Т-лимфоцитов - хелперов к цитотоксическим Т лимфоцитам - супрессорам) в основной группе относительно группы сравнения.In the endometrium in the middle stage of the proliferation phase in patients with AUC in the anamnesis and menstrual cycle disorders of endometrial genesis, subsequently in comparison with endometrial biopsies of women without AUC in the anamnesis, who underwent routine dispensary observation, we established reliable IHC and histochemical determinants. Against the background of impaired cellular immunity, an increase in the expression of CD4+ and CD8+ is determined, as well as a change in the CD4+/CD8+ ratio (T-lymphocytes - helpers to cytotoxic T lymphocytes - suppressors) in the main group relative to the comparison group.
При ИГХ исследовании биоптатов эутопического эндометрия у женщин с АМК в анамнезе и нарушением менструального цикла эндометриального генеза впоследствии, были установлены патогномоничные пределы чувствительности для обнаружения фиброза эндометрия, маркера плазматических клеток (CD138+), натуральных киллерных клеток (CD56+), В-лимфоцитов (CD20+), Т-лимфоцитов -хелперов (CD4+), цитотоксических Т лимфоцитов - супрессоров (CD8+), соотношение Т-лимфоцитов - хелперов к цитотоксическим Т лимфоцитам - супрессорам (CD4+/CD8+) (таблицы 4, 5), а также оценена распространенность снижения клеточного иммунитета эндометрия в подгруппах выраженности ХЭ (таблица 6).In an IHC study of eutopic endometrium biopsies in women with a history of AUB and subsequent menstrual cycle disorders of endometrial genesis, pathognomonic limits of sensitivity were established for the detection of endometrial fibrosis, a marker of plasma cells (CD138+), natural killer cells (CD56+), B lymphocytes (CD20+), T lymphocytes - helpers (CD4+), cytotoxic T lymphocytes - suppressors (CD8+), the ratio of T lymphocytes - helpers to cytotoxic T lymphocytes - suppressors (CD4+/CD8+) (Tables 4, 5), and the prevalence of decreased cellular immunity of the endometrium in subgroups of CE severity was assessed (Table 6).
Способ диагностики осуществляют следующим образом.The diagnostic method is carried out as follows.
Проводится биопсия эндометрия или гистероскопия, раздельное диагностическое выскабливание слизистой полости матки в среднюю стадию фазы пролиферации (на 7-11 дни 28-дневного менструального цикла) в спонтанном цикле, пайпель - биопсия эндометрия проводится с помощью одноразового аспирационного зонда - Rampipella. Полученный материал после гистологической проводки в автоматическом гистопроцессоре Leica ASP 30, заливают в парафин на станции Leica EG 1150 (Германия). На срезах толщиной 4-6 мкм проводят окраску гематоксилином и эозином и гистохимическую окраску по Маллори. ИГХ окрашивание производят в иммуностейнере Ventana BenchMark ULTRA IHC/ISH (США) на депарафинизированных и дегидратированных срезах толщиной 4-6 мкм с использованием авидин -биотинового иммунопероксидазного метода. Оценивают уровни экспрессии CD138+, CD56+, CD20+, CD4+, CD8+ в эндометрии и определяют в соответствие с описанными выше методиками. Производится подсчет процента позитивно-окрашенных клеток. Трактовка ИГХ реакции для описанных маркеров проводится путем сравнения полученных данных со следующими параметрами:Endometrial biopsy or hysteroscopy is performed, separate diagnostic curettage of the uterine cavity mucosa in the middle stage of the proliferation phase (on days 7-11 of the 28-day menstrual cycle) in a spontaneous cycle, Pipelle - endometrial biopsy is performed using a disposable aspiration probe - Rampipella. The obtained material after histological processing in the automatic histoprocessor Leica ASP 30, is embedded in paraffin on the Leica EG 1150 station (Germany). On sections 4-6 μm thick, hematoxylin and eosin staining and histochemical staining according to Mallory are performed. IHC staining is performed in the Ventana BenchMark ULTRA IHC/ISH immunostainer (USA) on deparaffinized and dehydrated sections 4-6 μm thick using the avidin-biotin immunoperoxidase method. The expression levels of CD138+, CD56+, CD20+, CD4+, CD8+ in the endometrium are assessed and determined in accordance with the methods described above. The percentage of positively stained cells is calculated. The interpretation of the IHC reaction for the described markers is carried out by comparing the obtained data with the following parameters:
• если число CD138+клеток равно нулю, то вероятность наличия ХЭ минимальна - 0 баллов, если встречаются единичные позитивно-окрашенные клетки, то ХЭ слабо выражен - 1 балл, если 2-3 - умеренно выражен - 2 балла, если ≥4 - ХЭ выражен - 3 балла;• if the number of CD138+ cells is zero, then the probability of the presence of CE is minimal - 0 points, if there are single positively stained cells, then CE is weakly expressed - 1 point, if 2-3 - moderately expressed - 2 points, if ≥4 - CE is expressed - 3 points;
• если обнаруживается от 1 до 10 CD56+клеток, то вероятность наличия ХЭ минимальна - 0 баллов, если число клеток превышено в интервале от 11 до 20, то ХЭ слабо выражен - 1 балл, если число клеток превышено в интервале от 21 до 30- умеренно выражен -2 балла, если число клеток превышено в интервале от 31 и более - ХЭ выражен - 3 балла;• if 1 to 10 CD56+ cells are detected, then the probability of the presence of CE is minimal - 0 points, if the number of cells is exceeded in the range from 11 to 20, then CE is weakly expressed - 1 point, if the number of cells is exceeded in the range from 21 to 30 - moderately expressed - 2 points, if the number of cells is exceeded in the range from 31 or more - CE is expressed - 3 points;
• если обнаруживается от 1 до 3 CD20+ клеток, то вероятность наличия ХЭ минимальна - 0 баллов, если число клеток превышено в интервале от 4 до 6, то ХЭ слабо выражен - 1 балл, если число клеток превышено в интервале от 7 до 9 - умеренно выражен - 2 балла, если число клеток превышено в интервале от 10 и более - ХЭ выражен - 3 балла;• if 1 to 3 CD20+ cells are detected, then the probability of the presence of CE is minimal - 0 points, if the number of cells is exceeded in the range from 4 to 6, then CE is weakly expressed - 1 point, if the number of cells is exceeded in the range from 7 to 9 - moderately expressed - 2 points, if the number of cells is exceeded in the range of 10 or more - CE is expressed - 3 points;
• если обнаруживается от 1 до 10 CD4+ клеток, то вероятность наличия ХЭ минимальна - 0 баллов, если число клеток превышено в интервале от 11 до 20, то ХЭ слабо выражен - 1 балл, если число клеток превышено в интервале от 21 до 30- умеренно выражен -2 балла, если число клеток превышено в интервале от 31 и более• if 1 to 10 CD4+ cells are detected, then the probability of the presence of CE is minimal - 0 points, if the number of cells is exceeded in the range from 11 to 20, then CE is weakly expressed - 1 point, if the number of cells is exceeded in the range from 21 to 30 - moderately expressed - 2 points, if the number of cells is exceeded in the range from 31 or more
- ХЭ выражен - 3 балла;- HE is expressed - 3 points;
• если обнаруживается от 1 до 10 CD8+ клеток, то вероятность наличия ХЭ минимальна - 0 баллов, если число клеток превышено в интервале от 11 до 20, то ХЭ слабо выражен - 1 балл, если число клеток превышено в интервале от 21 до 30- умеренно выражен -2 балла, если число клеток превышено в интервале от 31 и более - ХЭ выражен - 3 балла;• if 1 to 10 CD8+ cells are detected, then the probability of the presence of CE is minimal - 0 points, if the number of cells is exceeded in the range from 11 to 20, then CE is weakly expressed - 1 point, if the number of cells is exceeded in the range from 21 to 30 - moderately expressed - 2 points, if the number of cells is exceeded in the range from 31 or more - CE is expressed - 3 points;
• если соотношение уровней экспрессии маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии менее 1,5 - наблюдается снижение клеточного иммунитета эндометрия - 2 балла, если соотношение более 2,5 - наблюдается гиперреактивный клеточный иммунитет эндометрия - 1 балл.• if the ratio of expression levels of CD4+/CD8+ markers in the endometrium is less than 1.5, a decrease in cellular immunity of the endometrium is observed - 2 points, if the ratio is more than 2.5, hyperreactive cellular immunity of the endometrium is observed - 1 point.
• Отсутствие фиброза - вероятность наличия ХЭ минимальна, низкий риск нарушения клеточного иммунитета; выраженный фиброз эндометрия - ХЭ выражен, высокий риск нарушения клеточного иммунитета. Оценка на наличие фиброза эндометрия: отсутствие фиброза - 0 баллов; есть фиброз - 1 балл.• Absence of fibrosis - the probability of the presence of endometrial fibrosis is minimal, low risk of impaired cellular immunity; pronounced endometrial fibrosis - endometrial fibrosis is pronounced, high risk of impaired cellular immunity. Assessment for the presence of endometrial fibrosis: no fibrosis - 0 points; fibrosis present - 1 point.
Таким образом, для определения выраженности ХЭ проводят подсчет полученных баллов по маркерам CD138+, CD56+, CD20+, CD4+, CD8+ и CD4+7 CD8+ в эндометрии и делаются следующие заключения:Thus, to determine the severity of CE, the obtained points are calculated for the markers CD138+, CD56+, CD20+, CD4+, CD8+ and CD4+7 CD8+ in the endometrium and the following conclusions are made:
• 15 и более баллов - выраженный ХЭ;• 15 or more points – pronounced HE;
• 9-14 баллов - умеренно выраженный ХЭ;• 9-14 points – moderately expressed HE;
• 5-8 баллов - слабо выраженный ХЭ;• 5-8 points - mild HE;
• 0-4 баллов - ХЭ мало вероятен.• 0-4 points - HE is unlikely.
Далее с целью оценки состоятельности клеточного иммунитета сопоставляется соотношение маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии и наличие фиброза:Next, in order to assess the viability of cellular immunity, the ratio of CD4+/CD8+ markers in the endometrium and the presence of fibrosis are compared:
• соотношение маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии менее 1,5 - снижение клеточного иммунитета эндометрия;• the ratio of CD4+/CD8+ markers in the endometrium is less than 1.5 - decreased cellular immunity of the endometrium;
• соотношение маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии равно 2,5 и более - гиперреактивный клеточный иммунитет эндометрия;• the ratio of CD4+/CD8+ markers in the endometrium is 2.5 or more - hyperreactive cellular immunity of the endometrium;
• фиброза эндометрия нет - низкий риск нарушения клеточного иммунитета эндометрия;• no endometrial fibrosis - low risk of disruption of cellular immunity of the endometrium;
• фиброз эндометрия есть - умеренный и высокий риск нарушения клеточного иммунитета эндометрия;• there is endometrial fibrosis - moderate and high risk of disruption of cellular immunity of the endometrium;
В данном способе под интервалом понимается весь диапазон значений. Например, если обнаруживается от 1 до 10, то имеются в виду все значения, от 1 до 10 включительно.In this method, the interval is understood as the entire range of values. For example, if 1 to 10 is detected, then all values from 1 to 10 inclusive are meant.
Осуществление изобретенияImplementation of the invention
Клинический пример 1.Clinical example 1.
Пациентка С. 23 лет, обратилась с жалобами на межменструальные кровяные выделения до 7 дней в течение 6 месяцев, из анамнеза - эпизод аномального маточного кровотечения 1 год назад. Гарднереллез, уреаплазмоз - пролечен в 2020 г., 2021 г., 2022 г. дважды. Эндометриопатии в анамнезе нет. Беременностей не было. Диагноз: Аномальное маточное кровотечение в анамнезе, нарушение менструального цикла. С целью дифференциальной диагностики был проведен ряд исследований - гормональные исследования крови - в пределах референсных значений, в генетическом исследовании крови на мутации системы гемостаза нарушений не выявлено, по данным УЗИ органов малого таза патологии в полости матки не выявлено. Произведена пайпель-биопсия эндометрия на 8 день 28-дневного менструального цикла.Patient S., 23 years old, complained of intermenstrual bleeding for up to 7 days over 6 months, with a history of abnormal uterine bleeding 1 year ago. Gardnerellosis, ureaplasmosis - treated twice in 2020, 2021, 2022. No history of endometriopathy. No pregnancies. Diagnosis: History of abnormal uterine bleeding, menstrual cycle disorders. For the purpose of differential diagnosis, a number of studies were carried out - hormonal blood tests - within the reference values, no disorders were detected in a genetic blood test for mutations in the hemostasis system, no pathology was detected in the uterine cavity according to ultrasound of the pelvic organs. A Pipelle biopsy of the endometrium was performed on the 8th day of the 28-day menstrual cycle.
На основании проведенного комплексного патологоанатомического исследования, включавшего гистологическую окраску гематоксилином и эозином, окраску по Маллори с последующим ИГХ исследованием, были получены следующие данные: CD138+ = 6 клеток - 3 балла; значение CD56+ составляет 82 клетки - 3 балла, значение CD20+ составляет 55 клеток - 3 балла, значение CD4+ составляет 63 клетки - 3 балла, значение CD8+составляет 76 клеток - 3 балла. Наличие фиброза эндометрия при окрашивании по Маллори определяется - 1 балл. Соотношение уровней экспрессии маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии составляет менее 1,5 - наблюдается снижение клеточного иммунитета эндометрия - 2 балла.Based on the comprehensive pathological examination, including histological staining with hematoxylin and eosin, Mallory staining followed by IHC examination, the following data were obtained: CD138+ = 6 cells - 3 points; CD56+ value is 82 cells - 3 points, CD20+ value is 55 cells - 3 points, CD4+ value is 63 cells - 3 points, CD8+ value is 76 cells - 3 points. The presence of endometrial fibrosis when stained according to Mallory is determined - 1 point. The ratio of CD4+/CD8+ marker expression levels in the endometrium is less than 1.5 - a decrease in cellular immunity of the endometrium is observed - 2 points.
Сумма баллов составила 18, что свидетельствует о выраженном ХЭ.The total score was 18, which indicates pronounced HE.
Клинический пример 2.Clinical example 2.
Пациентка Т. 32 лет, обратилась с жалобами на посткоитальные кровотечения в течение 8 месяцев, ранее в анамнезе аномальное маточное кровотечение в 30 лет. Гинекологические заболевания: эксцизия шейки матки по поводу CIN II 2018 г. Беременностей не было. ВМС в течение 5 лет с целью контрацепции (2017-2022 г.г.). Эндометриопатией ранее не страдала. С целью дифференциальной диагностики был проведен ряд исследований - гормональные исследования крови - в пределах референсных значений, в генетическом исследовании крови на мутации системы гемостаза нарушений не выявлено, по данным УЗИ органов малого таза патологии в полости матки не выявлено. Жидкостная цитология NILM. Произведена пайпель-биопсия эндометрия на 9 день 28-дневного менструального цикла.Patient T., 32 years old, complained of postcoital bleeding for 8 months, with a history of abnormal uterine bleeding at the age of 30. Gynecological diseases: excision of the cervix due to CIN II in 2018. No pregnancies. IUD for 5 years for contraception (2017-2022). No history of endometriopathy. A number of studies were performed for differential diagnostics - hormonal blood tests - within the reference values, no abnormalities were detected in a genetic blood test for mutations in the hemostasis system, no pathology was detected in the uterine cavity according to ultrasound of the pelvic organs. Liquid cytology NILM. A pipelle biopsy of the endometrium was performed on the 9th day of a 28-day menstrual cycle.
На основании проведенного комплексного патологоанатомического исследования, включавшего гистологическую окраску гематоксилином и эозином, окраску по Маллори с последующим ИГХ исследованием, были получены следующие данные: CD138+ = 3 клетки - 2 балла; значение CD56+ составляет 24 клетки - 2 балла, значение CD20+ составляет 9 клеток - 2 балла, значение CD4+ составляет 23 клетки - 2 балла, значение CD8+ составляет 27 клеток - 2 балла. Наличие фиброза эндометрия при окрашивании по Маллори определяется - 1 балл. Соотношение уровней экспрессии маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии менее 1,5 - наблюдается снижение клеточного иммунитета эндометрия - 2 балла.Based on the comprehensive pathological examination, including histological staining with hematoxylin and eosin, Mallory staining followed by IHC examination, the following data were obtained: CD138+ = 3 cells - 2 points; CD56+ value is 24 cells - 2 points, CD20+ value is 9 cells - 2 points, CD4+ value is 23 cells - 2 points, CD8+ value is 27 cells - 2 points. The presence of endometrial fibrosis when stained according to Mallory is determined - 1 point. The ratio of CD4+/CD8+ marker expression levels in the endometrium is less than 1.5 - a decrease in cellular immunity of the endometrium is observed - 2 points.
Сумма баллов составила 13, что свидетельствует об умеренно-выраженном ХЭ.The total score was 13, which indicates moderate HE.
Клинический пример 3.Clinical example 3.
Пациентка Ж., 27 лет, обратилась с жалобами на посткоитальные кровотечения в течение 6 месяцев, ранее в анамнезе аномальное маточное кровотечение в 26 лет. Гинекологические заболевания: Хламидиоз пролечен в 2019 г. Беременностей не было. Эндометриопатии не обнаружено. С целью дифференциальной диагностики был проведен ряд исследований - гормональные исследования крови - в пределах референсных значений, в генетическом исследовании крови на мутации системы гемостаза нарушений не выявлено, по данным УЗИ органов малого таза патологии в полости матки не выявлено. Жидкостная цитология NILM. Произведена пайпель-биопсия эндометрия на 9 день 28-дневного менструального цикла.Patient Zh., 27 years old, complained of postcoital bleeding for 6 months, with a history of abnormal uterine bleeding at the age of 26. Gynecological diseases: Chlamydia was treated in 2019. There were no pregnancies. No endometriopathy was detected. A number of studies were carried out for the purpose of differential diagnosis - hormonal blood tests - within the reference values, no disorders were detected in the genetic blood test for mutations of the hemostasis system, no pathology was detected in the uterine cavity according to the ultrasound of the pelvic organs. Liquid cytology NILM. Pipelle biopsy of the endometrium was performed on the 9th day of the 28-day menstrual cycle.
На основании проведенного комплексного патологоанатомического исследования, включавшего гистологическую окраску гематоксилином и эозином, окраску по Маллори с последующим ИГХ исследованием, были получены следующие данные: CD138+ = 1 клетка - 1 балл; значение CD56+ составляет 15 клеток - 1 балл, значение CD20+ составляет 6 клеток - 1 балл, значение CD4+ составляет 29 клеток - 2 балла, значение CD8+ составляет 11 клеток - 1 балл. Наличие фиброза эндометрия при окрашивании по Маллори определяется - 1 балл. Соотношение уровней экспрессии маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии равно 2,6 - наблюдается гиперреактивный клеточный иммунитет эндометрия - 1 балл.Based on the conducted comprehensive pathological examination, including histological staining with hematoxylin and eosin, Mallory staining followed by IHC study, the following data were obtained: CD138+ = 1 cell - 1 point; the CD56+ value is 15 cells - 1 point, the CD20+ value is 6 cells - 1 point, the CD4+ value is 29 cells - 2 points, the CD8+ value is 11 cells - 1 point. The presence of endometrial fibrosis when stained according to Mallory is determined - 1 point. The ratio of the expression levels of CD4+/CD8+ markers in the endometrium is 2.6 - hyperreactive cellular immunity of the endometrium is observed - 1 point.
Сумма баллов составила 8, что свидетельствует о слабо-выраженном ХЭ.The total score was 8, which indicates a mild form of CE.
Клинический пример 4.Clinical example 4.
Пациентка В., 25 лет, обратилась с жалобами на посткоитальные кровотечения в течение 5 месяцев, ранее в анамнезе аномальное маточное кровотечение в 24 года. Гинекологические заболевания: Уреаплазмоз пролечен в 2017 г., 2018 г. Беременностей не было. Эндометриопатии в анамнезе нет. С целью дифференциальной диагностики был проведен ряд исследований - гормональные исследования крови - в пределах референсных значений, в генетическом исследовании крови на мутации системы гемостаза нарушений не выявлено, по данным УЗИ органов малого таза патологии в полости матки не выявлено. Жидкостная цитология NILM. Произведена пайпель-биопсия эндометрия на 9 день 28-дневного менструального цикла.Patient V., 25 years old, complained of postcoital bleeding for 5 months, with a history of abnormal uterine bleeding at the age of 24. Gynecological diseases: Ureaplasmosis was treated in 2017, 2018. No pregnancies. No history of endometriopathy. A number of studies were performed for the purpose of differential diagnosis - hormonal blood tests - within the reference values, no disorders were detected in the genetic blood test for mutations of the hemostasis system, no pathology was detected in the uterine cavity according to the ultrasound of the pelvic organs. Liquid cytology NILM. Pipelle biopsy of the endometrium was performed on the 9th day of the 28-day menstrual cycle.
На основании проведенного комплексного патологоанатомического исследования, включавшего гистологическую окраску гематоксилином и эозином, окраску по Маллори с последующим ИГХ исследованием, были получены следующие данные: CD138+ = не обнаружено - 0 баллов; значение CD56+ составляет 15 клеток - 1 балл, значение CD20+ составляет 3 клетки - 0 баллов, количество CD4+ составляет 11 клеток - 1 балл, значение CD8+ составляет 9 клеток - 0 баллов. Наличие фиброза эндометрия при окрашивании по Маллори не определяется - 0 баллов. Соотношение уровней экспрессии маркеров CD4+/CD8+ в эндометрии менее 1,5 -наблюдается снижение клеточного иммунитета эндометрия - 2 балла.Based on the comprehensive pathological examination, including histological staining with hematoxylin and eosin, Mallory staining followed by IHC examination, the following data were obtained: CD138+ = not detected - 0 points; CD56+ value is 15 cells - 1 point, CD20+ value is 3 cells - 0 points, CD4+ count is 11 cells - 1 point, CD8+ value is 9 cells - 0 points. Endometrial fibrosis is not detected by Mallory staining - 0 points. The ratio of CD4+/CD8+ marker expression levels in the endometrium is less than 1.5 - there is a decrease in endometrial cellular immunity - 2 points.
Сумма баллов составила 4, ХЭ маловероятен, присутствует нарушение клеточного иммунитета эндометрия.The total score was 4, endometrial endometriosis is unlikely, there is a violation of cellular immunity of the endometrium.
Источники информации:Sources of information:
1. Толибова Г.Х., Траль Т.Г., Клещев М.А. и др. Эндометриальная дисфункция: алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования. Журн. акушерства и женских болезней.- 2015; 64 (4): 69-77.1. Tolibova G.Kh., Tral T.G., Kleshchev M.A., et al. Endometrial dysfunction: algorithm of histological and immunohistochemical study. J. of Obstetrics and Women's Diseases. - 2015; 64 (4): 69-77.
2. Радзинский В.Е., Петров Ю.А., Полина М.Л. Хронический эндометрит: современные аспекты // Кубанский научный медицинский вестник. - 2017; No 24 (5). С.69-74.2. Radzinsky V.E., Petrov Yu.A., Polina M.L. Chronic endometritis: modern aspects // Kuban Scientific Medical Bulletin. - 2017; No. 24 (5). P.69-74.
3. Оразов М.Р., Михалева Л.М, Семенов П.А. Хронический эндометрит: патогенез, диагностика, лечение и его связь с бесплодием//Клиническая и экспериментальная морфология. - 2020; 9 (2): 16-25. DOI: 10.31088/СЕМ2020.9.2.16-25.3. Orazov M.R., Mikhaleva L.M., Semenov P.A. Chronic endometritis: pathogenesis, diagnosis, treatment and its relationship with infertility//Clinical and experimental morphology. - 2020; 9 (2): 16-25. DOI: 10.31088/CEM2020.9.2.16-25.
4. Puente Е, Alonso L, Lagana AS, Ghezzi F, Casarin J, Carugno// J. Chronic endometritis: old problem, novel insights and future challenges. Int JFertil Steril. -2020; 13(4):250-6. DOI: 10.22074/ijfs.2020.5779.4. Puente E, Alonso L, Lagana AS, Ghezzi F, Casarin J, Carugno // J. Chronic endometritis: old problem, novel insights and future challenges. Int J Fertil Steril. -2020; 13(4):250-6. DOI: 10.22074/ijfs.2020.5779.
5. Cherng Sh., Young J., Ma H. // The Journal of AmericanTScience. - 2008; Vol.4 (4). - P. 7-9.5. Cherng Sh., Young J., Ma H. // The Journal of AmericanTScience. - 2008; Vol.4 (4). - P. 7-9.
6. Kimura F, Takebayashi A, Ishida M, et al. Review: Chronic endometritis and its effect on reproduction// J Obstet Gynaecol Res. -2019, May; 45(5):951-960. doi: 10.111 l/jog.13937. Epub 2019 Mar 6.6. Kimura F, Takebayashi A, Ishida M, et al. Review: Chronic endometritis and its effect on reproduction// J Obstet Gynaecol Res. -2019, May; 45(5):951-960. doi: 10.111l/jog.13937. Epub 2019 Mar 6.
7. Creus M., Ordi J. The effect of different hormone therapies on integrin expression and pinopode formation in the human endometrium: a controlled study //Hum. Reprod. - 2003; Vol.18. - P. 683-693.7. Creus M., Ordi J. The effect of different hormone therapies on integrin expression and pinopode formation in the human endometrium: a controlled study // Hum. Reprod. - 2003; Vol.18. - P. 683-693.
8. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M. Identification of new biomarkers of human endometrial receptivity in the natural cycle // Hum. Reprod. - 2009; Vol.24, №1.-P. 198-205.8. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M. Identification of new biomarkers of human endometrial receptivity in the natural cycle // Hum. Reprod. - 2009; Vol.24, No.1.-P. 198-205.
9. Толибова Г.Х., Траль Т.Г., Айламазян Э.К., Коган И.Ю. Молекулярные механизмы циклической трансформации эндометрия// Журн. акушерства и женских болезней. - 2019; 68 (1): 5-12.9. Tolibova G.Kh., Tral T.G., Ailamazyan E.K., Kogan I.Yu. Molecular mechanisms of cyclic transformation of the endometrium// J. of obstetrics and women's diseases. - 2019; 68 (1): 5-12.
10. Song D, Feng X, Zhang Q, et al. Prevalence and confounders of chronic endometritis in premenopausal women with abnormal bleeding or reproductive failure// Reprod Biomed Online.- 2018; 36:78-83. DOI: 10.1016/j.rbmo.2017.09.008.10. Song D, Feng X, Zhang Q, et al. Prevalence and confounders of chronic endometritis in premenopausal women with abnormal bleeding or reproductive failure // Reprod Biomed Online.- 2018; 36:78-83. DOI: 10.1016/j.rbmo.2017.09.008.
11. Zargar M, Ghafourian M Nikbakht R, et al. Evaluating Chronic Endometritis in Women with Recurrent Implantation Failure and Recurrent Pregnancy Loss by Hysteroscopy and Immunohistochemistry// J Minim Invasive Gynecol. - 2020; 27(1):116-121. DOI: 10.1016/j.jmig.2019.02.016.11. Zargar M, Ghafourian M Nikbakht R, et al. Evaluating Chronic Endometritis in Women with Recurrent Implantation Failure and Recurrent Pregnancy Loss by Hysteroscopy and Immunohistochemistry // J Minim Invasive Gynecol. - 2020; 27(1):116-121. DOI: 10.1016/j.jmig.2019.02.016.
12. Kitaya K, Matsubayashi H, Yamaguchi K, Nishiyama R, Takaya Y, Ishikawa T et al. Chronic endometritis: potential cause of infertility and obstetric and neonatal complications// Am J Reprod Immunol. - 2016; 75(1): 13-22. DOI: 10.1111/aji. 12438.12. Kitaya K, Matsubayashi H, Yamaguchi K, Nishiyama R, Takaya Y, Ishikawa T et al. Chronic endometritis: potential cause of infertility and obstetric and neonatal complications // Am J Reprod Immunol. - 2016; 75(1): 13-22. DOI: 10.1111/aji. 12438.
13. Wu D, Kimura F, Zheng L et al. Chronic endometritis modifies decidualization in human endometrial stromal cells// Reprod Biol Endocrinol.- 2017; 15: 16.13. Wu D, Kimura F, Zheng L et al. Chronic endometritis modifies decidualization in human endometrial stromal cells// Reprod Biol Endocrinol.- 2017; 15:16.
14. Fan X, Li X, Li Y, Liao J, Chen H, Li Y, Lu GX, Lin G, Gong F. Endometrial CD 138 count appears to be a negative prognostic indicator for patients who have experienced previous embryo transfer failure// Fertil Steril. - 2019 Dec;l 12(6):1103-1111. DOI: 10.1016/j.fertnstert.2019.08.006.14. Fan X, Li X, Li Y, Liao J, Chen H, Li Y, Lu GX, Lin G, Gong F. Endometrial CD 138 count appears to be a negative prognostic indicator for patients who have experienced previous embryo transfer failure/ / Fertil Steril. - 2019 Dec;l 12(6):1103-1111. DOI: 10.1016/j.fertnstert.2019.08.006.
15. Тамазян Г.В., Серова О.Ф., Лазарев А.П., Болтовская М.Н., Милованов А.П., Седая Л.В., Шутикова Н.В. Оптимизация тактики ведения пациенток в программе экстракорпорального оплодотворения// Эффективная фармакотерапия.- 2014; №38.- С.18-23.15. Tamazyan G.V., Serova O.F., Lazarev A.P., Boltovskaya M.N., Milovanov A.P., Sedaya L.V., Shutikova N.V. Optimization of tactics of patient management in the in vitro fertilization program// Effective pharmacotherapy.- 2014; No. 38.- P. 18-23.
16. Mikhaleva L., Mikhalev S., Boltovskay M., Starosvetskaya N. Evalyation of cyclic glicodelin production in endometrium of patients with chronic endometritis /. //27th European Congress of Pathology, 5-9 September 2015, Sava Centar, Belgrad, Serbia, Virkhows Archiv, European Journal of Pathology. - 2015; Vol.467, Supplement 1. - P.134.16. Mikhaleva L., Mikhalev S., Boltovskay M., Starosvetskaya N. Evalyation of cyclic glycolin production in endometrium of patients with chronic endometritis. //27th European Congress of Pathology, 5-9 September 2015, Sava Centar, Belgrad, Serbia, Virkhows Archiv, European Journal of Pathology. - 2015; Vol.467, Supplement 1. - P.134.
17. Савельева Г.М., Михалев С.А., Коноплянников А.Г., Михалева Л.М., Бабиченко И.И., Болтовская М.Н. Хронический эндометрит - показание для прегравидарной подготовки //Клиническая практика. - 2018; Т.9. - №2. - С.36-41.17. Savelyeva G.M., Mikhalev S.A., Konoplyannikov A.G., Mikhaleva L.M., Babichenko I.I., Boltovskaya M.N. Chronic endometritis - an indication for pre-gravid preparation // Clinical practice. - 2018; Vol.9. - No.2. - P.36-41.
18. Михалева Л.М., Оразов М.Р., Силантьева Е.С., Камилова Д.П., Мидибер К.Ю., Орехов Р.Е. Повторные неудачи имплантации. Патогенез иммунологических нарушений в эндометрии// Gynecology. Vol.21. - 2022. - №1 - - С.22-26. DOI: 10.31550/1727-2378-2022-21-1-21-26.18. Mikhaleva L.M., Orazov M.R., Silantyeva E.S., Kamilova D.P., Midiber K.Yu., Orekhov R.E. Repeated implantation failures. Pathogenesis of immunological disorders in the endometrium// Gynecology. Vol.21. - 2022. - No.1 - - P.22-26. DOI: 10.31550/1727-2378-2022-21-1-21-26.
Claims (14)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2830413C1 true RU2830413C1 (en) | 2024-11-19 |
Family
ID=
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2404433C1 (en) * | 2009-04-20 | 2010-11-20 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of diagnosing chronic endometriasis in women in post-menapausal period |
| RU2477861C1 (en) * | 2011-11-18 | 2013-03-20 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Early diagnostic technique in postpartum endometritis |
| RU2674155C1 (en) * | 2017-09-27 | 2018-12-05 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ВСЕРОССИЙСКИЙ ЦЕНТР ЭКСТРЕННОЙ И РАДИАЦИОННОЙ МЕДИЦИНЫ ИМЕНИ А.М. НИКИФОРОВА" (ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России) | Method for determining stage of a clinical course of chronic endometritis, degree of activity of inflammation and expression of fibrosis with forecast of implantation and endometrium receptivity disorder |
| RU2731413C1 (en) * | 2020-05-17 | 2020-09-02 | Мекан Рахимбердыевич Оразов | Method for diagnosing chronic endometritis in females with endometriosis |
| CN113514645A (en) * | 2021-07-13 | 2021-10-19 | 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院） | Application of CD138 antibody and Mum1 antibody in plasma cell detection |
| US20230108685A1 (en) * | 2014-02-27 | 2023-04-06 | Queen Mary University Of London | Biomarkers For Endometriosis |
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2404433C1 (en) * | 2009-04-20 | 2010-11-20 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of diagnosing chronic endometriasis in women in post-menapausal period |
| RU2477861C1 (en) * | 2011-11-18 | 2013-03-20 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Early diagnostic technique in postpartum endometritis |
| US20230108685A1 (en) * | 2014-02-27 | 2023-04-06 | Queen Mary University Of London | Biomarkers For Endometriosis |
| RU2674155C1 (en) * | 2017-09-27 | 2018-12-05 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ВСЕРОССИЙСКИЙ ЦЕНТР ЭКСТРЕННОЙ И РАДИАЦИОННОЙ МЕДИЦИНЫ ИМЕНИ А.М. НИКИФОРОВА" (ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России) | Method for determining stage of a clinical course of chronic endometritis, degree of activity of inflammation and expression of fibrosis with forecast of implantation and endometrium receptivity disorder |
| RU2731413C1 (en) * | 2020-05-17 | 2020-09-02 | Мекан Рахимбердыевич Оразов | Method for diagnosing chronic endometritis in females with endometriosis |
| CN113514645A (en) * | 2021-07-13 | 2021-10-19 | 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院） | Application of CD138 antibody and Mum1 antibody in plasma cell detection |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Козырева Е.В. и др. Иммуногистохимические особенности хронического эндометрита при бесплодии и невынашивании беременности (обзор литературы). Медицинские науки. Обзор литературы. N 4 (36), 2015, 124-136. Толибова Г.Х., Траль Т.Г. Хронический эндометрит - затянувшаяся дискуссия. Уральский медицинский журнал. 2023; 22(2): 142-152; Yu-qing Chen et al. Analysis of the diagnostic value of CD138 for chronic endometritis, the risk factors for the pathogenesis of chronic endometritis and the effect of chronic endometritis on pregnancy: a cohort study. Chen et al. BMC Women's Health (2016) 16: 60. Suheyla Ekemen et al. Endometrial Staining of CD56 (Uterine Natural Killer), BCL-6, and CD138 (Plasma Cells) Improve Diagnosis and Clinical Pregnancy Outcomes in Unexplained Infertility and Recurrent IVF Failures: Standardization of Diagnosis with Digital Pathology. Diagnostics (Basel). 2023 May; 13(9): 1557. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Diagnosis of chronic endometritis: How many CD138+ cells/HPF in endometrial stroma affect pregnancy outcome of infertile women? | |
| Liu et al. | Comparison of the prevalence of chronic endometritis as determined by means of different diagnostic methods in women with and without reproductive failure | |
| Chen et al. | Analysis of the diagnostic value of CD138 for chronic endometritis, the risk factors for the pathogenesis of chronic endometritis and the effect of chronic endometritis on pregnancy: a cohort study | |
| Morimune et al. | The effects of chronic endometritis on the pregnancy outcomes | |
| Agarwal et al. | Assessing sperm function | |
| RU2651762C1 (en) | Method for evaluating the receptivity of the endometrium during the “implantation window” | |
| Gui et al. | The disturbance of TH17-Treg cell balance in adenomyosis | |
| Nie et al. | Identification of lesional attributes of dysmenorrhea severity and the serum antimüllerian hormone levels in women with ovarian endometriomas | |
| Behram et al. | Maternal serum IL-22 concentrations are significantly upregulated in patients with preterm premature rupture of membranes | |
| RU2617515C1 (en) | Method for endometry receivability prediction based on evaluation of gnrg and gnrgr expression in "implantation window" for women infertility endometry and ivf program failure attempts | |
| Chen et al. | Association between chronic endometritis and uterine natural killer cell density in women with recurrent miscarriage: clinical implications | |
| Goto et al. | The association between chronic deciduitis and recurrent pregnancy loss | |
| Chen et al. | Decreased endometrial vascularity in patients with antiphospholipid antibodies–associated recurrent miscarriage during midluteal phase | |
| RU2724381C1 (en) | Method for assessing endometrial receptiveness in endometriosis-associated infertility | |
| Guo et al. | Chronic poor healing wounds of post cesarean scar diverticulum: altered angiogenesis and immunobiology | |
| RU2830413C1 (en) | Method for diagnosing chronic endometritis of various severity in patients with abnormal uterine bleeding, with no history of endometriopathy, by immunohistochemical study of cellular immunity disorder in endometrium | |
| US5972594A (en) | Method for screening for reproductive tract inflammation and preeclampsia using neutrophil defensins | |
| Dzhumaniyazovna et al. | IMMUNOHISTOCHEMICAL APPROACHES TO THE DIAGNOSIS OF EARLY MISCARRIAGE | |
| Li et al. | The effect of the number of endometrial CD138+ cells on the pregnancy outcomes of infertile patients in the proliferative phase | |
| Delbandi et al. | Increased circulating T helper 17 (TH17) cells and endometrial tissue IL-17-producing cells in patients with endometriosis compared with non-endometriotic subjects | |
| Lapides et al. | When Less Is More–Pipelle Endometrial Sampling for Quantification of Uterine Natural Killer Cells in Patients With Recurrent Implantation Failure or Habitual Abortion | |
| Sisti et al. | Insulin-like growth factor binding protein-1 predicts preterm premature rupture of membranes in twin pregnancies | |
| RU2694882C1 (en) | Method for prediction of recurrent endometrioid ovarian cysts | |
| RU2820619C1 (en) | Method for determining severity of chronic endometritis | |
| RU2828967C1 (en) | Method for determining degree of manifestation of chronic endometritis |