RU2822455C1 - Lactobacillus salivarius vkshm-g-08pd strain - Google Patents
Lactobacillus salivarius vkshm-g-08pd strain Download PDFInfo
- Publication number
- RU2822455C1 RU2822455C1 RU2024108069A RU2024108069A RU2822455C1 RU 2822455 C1 RU2822455 C1 RU 2822455C1 RU 2024108069 A RU2024108069 A RU 2024108069A RU 2024108069 A RU2024108069 A RU 2024108069A RU 2822455 C1 RU2822455 C1 RU 2822455C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- vkshm
- lactobacillus salivarius
- coli
- strains
- Prior art date
Links
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 title claims abstract description 50
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims abstract description 36
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 241000600503 Escherichia coli O25b:H4-ST131 Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 68
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 37
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 21
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 20
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 18
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 14
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 13
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 13
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 13
- 208000011140 intestinal infectious disease Diseases 0.000 description 12
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 11
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 9
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 8
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 4
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 4
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 4
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 4
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000688 enterotoxigenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 4
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 3
- 241001056120 Klebsiella pneumoniae ATCC 43816 Species 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 3
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 3
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 2
- 206010061126 Escherichia infection Diseases 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001130 anti-lysozyme effect Effects 0.000 description 2
- -1 antilysozyme Proteins 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000020612 escherichia coli infection Diseases 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 229940124307 fluoroquinolone Drugs 0.000 description 2
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 9-fluoro-3-methyl-10-(4-methylpiperazin-1-yl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-[1,4]oxazino[2,3,4-ij]quinoline-6-carboxylic acid Chemical compound FC1=CC(C(C(C(O)=O)=C2)=O)=C3N2C(C)COC3=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010037833 Bacterial Adhesins Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108020004256 Beta-lactamase Proteins 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 208000005141 Otitis Diseases 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 208000026723 Urinary tract disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 208000037815 bloodstream infection Diseases 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229960004682 cefoperazone Drugs 0.000 description 1
- GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N cefoperazone Chemical compound O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2C(C(O)=O)=C(CSC=3N(N=NN=3)C)CS[C@@H]21 GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N 0.000 description 1
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 1
- GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N cefotaxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)/C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N 0.000 description 1
- DKOQGJHPHLTOJR-WHRDSVKCSA-N cefpirome Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C[N+]=3C=4CCCC=4C=CC=3)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 DKOQGJHPHLTOJR-WHRDSVKCSA-N 0.000 description 1
- 229960000466 cefpirome Drugs 0.000 description 1
- 229960000484 ceftazidime Drugs 0.000 description 1
- NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N ceftazidime pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1=CC=CC=C1 NMVPEQXCMGEDNH-TZVUEUGBSA-N 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000019258 ear infection Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 101150015947 fimH gene Proteins 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N nitrogen dioxide Inorganic materials O=[N]=O JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 229960001699 ofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- FHFYDNQZQSQIAI-UHFFFAOYSA-N pefloxacin Chemical compound C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCN(C)CC1 FHFYDNQZQSQIAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004236 pefloxacin Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 239000007259 schaedler broth Substances 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940041007 third-generation cephalosporins Drugs 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, медицинской и ветеринарной промышленности. Получен штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД, обладающий спектром антагонистической активности по отношению к глобально распространившимся зооантропонозным штаммам антибиотикорезистентного клона Escherichia coli ST 131, вызвавшего пандемию внекишечных инфекционных заболеваний у человека и животных, а также к возбудителям кишечных инфекционных заболеваний (энтеропатогенные Escherichia coli, энтеротоксигенные Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni) и нозокомиальных инфекционных заболеваний (Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans). Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД фенотипически апатогенный, имеет высокие показатели адгезии на энтероцитах Caco-2 и НТ-29, а также на перевиваемых клетках НТВ-9 мочевого пузыря и А-498 почки, в опытах in vitro устойчив к желудочному и кишечному стрессам. Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД может быть использован в изготовлении пробиотиков и пробиотических кормовых добавок для профилактики внекишечных заболеваний, вызываемых глобально распространившимися зооантропонозными штаммами антибиотикорезистентного клона Escherichia coli ST 131, а также для профилактики кишечных и нозокомиальных инфекционных заболеваний.The invention relates to biotechnology, medical and veterinary industries. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD was obtained, which has a spectrum of antagonistic activity against globally distributed zooanthroponotic strains of the antibiotic-resistant clone Escherichia coli ST 131, which caused a pandemic of extraintestinal infectious diseases in humans and animals, as well as against pathogens of intestinal infectious diseases (enteropathogenic Escherichia coli, enterotoxigenic Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni ) and nosocomial infectious diseases ( Klebsiella pneumoniae , Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans ). The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD is phenotypically apathogenic, has high rates of adhesion to Caco-2 and NT-29 enterocytes, as well as to transplanted cells NTV-9 of the bladder and A-498 of the kidney, and in in vitro experiments is resistant to gastric and intestinal stress. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD can be used in the production of probiotics and probiotic feed additives for the prevention of extraintestinal diseases caused by globally distributed zooanthroponotic strains of the antibiotic-resistant clone Escherichia coli ST 131, as well as for the prevention of intestinal and nosocomial infectious diseases.
В настоящее время актуальной задачей является разработка новых препаратов пробиотиков и пробиотических кормовых добавок, обладающих антагонистической активностью к антибиотикорезистентным зооантропонозным штаммам Е. coli, персистирующим в кишечнике у человека и животных, вызывающим внекишечные инфекционные заболевания. Пандемия внекишечных инфекционных заболеваний, вызванных антибиотикорезистентными зооантропонозными штаммами Е. coli, персистирующими в кишечнике у человека, была впервые зарегистрирована в 2008 году и продолжает развиваться [Nicolas-Chanoine M., et al., 2008; Cantón R., et al., 2008; Klemm, E. J., et al., 2018; Tchesnokova V., et al., 2019]. Эти штаммы имеют пили типа 1, на конце которых расположены адгезины FimH или UclD, обеспечивающие прикрепление патогена к энтероцитам кишечника или к уроэпителиоцитам мочевыделительной системы. Интенсивно развиваясь в кишечнике у людей различных возрастных групп (дети, взрослые, пожилые), они повышают проницаемость кишечника, проникают в мезентериальные лимфатические узлы и кровь, что сопровождается инфицированием паренхиматозных органов (печень, селезёнка, лёгкие, мозг) с развитием многочисленных экстраинтестинальных инфекций от циститов и пиелонефритов [Russo T.A.,et al., 2003; Kaper J., et al.,2004; Yun K., et al., 2017; Ahn D., et al., 2015; Kocak M., et al., 2016] до опасной для жизни септицемии [Tumbarello M, et al., 2007]. Более 85% первичных пиогенных уропатий, так называемых «бытовых» инфекций, т.е. инфекций мочевыводящей системы, регистрируемых у практически здоровых взрослых, а также детей (чаще у женщин в 14 раз) вне госпитальных условий, связано с антибиотикорезистентными штамами E.coli [Yun et al, et al., 2017]. Транслокация E.coli имеет место также и при массивной антибиотикотерапии, химиотерапии, подавляющей нормальную кишечную микробиоту и способствующей селективной пролиферации штаммов Е. coli с высокой лекарственной резистентностью. Антибиотикорезистентные штаммы Е. coli, персистирующие в кишечнике - источник заболеваемости и смертности, требующий увеличения расходов на здравоохранение. За последнее десятилетие внекишечные инфекционные заболевания, индуцируемые персистирующими в кишечнике антибиотикорезистентными зооантропонозными штаммами Е. coli, стали более частыми [Thelwall S., et al., 2015] и сложными для лечения [Walker E.B., et al., 2016]. Это создает серьезные клинические проблемы из-за постоянного роста устойчивости к противомикробным препаратам, в первую очередь к фторхинолонам и цефалоспоринам расширенного спектра. Быстрый рост антибиотикорезистентности патогенов обусловлен широким применением антибиотиков в медицине и, особенно, в сельском хозяйстве. Более 70% антибиотиков, мирового производства использовались в животноводстве как кормовые добавки, стимулирующие рост молодняка сельскохозяйственных животных. Часть этих антибиотиков оседала в мясе животных и сохранялась в пищевых продуктах питания человека. В результате у животных и человека нарушалась нормальная кишечная микробиота, участвующая в нормальных метаболических процессах организма-хозяина и развивался метаболический синдром, одним из проявлений которого является увеличение массы тела - ожирение и диабет второго типа. Проведенные в России исследования выявили наличие метаболического синдрома у 29,7% (каждый третий) взрослого населения (Бойцов С. и соавт., 2014). Среди антибиотикорезистентных изолятов Е. coli человека и животных наиболее распространённой в мире является клональная группа штаммов ST 131, пандемичный клон, ответственный за развитие внекишечных инфекционных заболеваний [Nicolas-Chanoine M., 2014]. Выделенные у бройлеров патогенные полирезистентные штаммы Е. coli, принадлежащие к клону ST 131, имеют генетическое сходство и общность генов вирулентности с изолятами Е. coli, циркулирующими в кишечнике у человека и вызывающими внекишечные инфекционные заболевания [Kathayat D., et al., 2021]. Устойчивость штаммов Е. coli к противомикробным препаратам опосредована главным образом Бета-Лактамазами Расширенного Спектра (БЛРС) таких классов, как TEM, SHV и CTX-M-15 [Pitout J.D., 2008; Talan D., et al., 2016]. Распространение специфических устойчивых к лекарственным препаратам клональных групп Е. coli во многом объясняет причину возникновения пандемии [Johnson J.R., et al., 2009; Tchesnokova V., et al., 2013]. Основной субклон H30 клона E. coli 131 (ST131- H30), принадлежащий к филогруппе В2, содержащий гены, кодирующие БЛРС класса CTX-M-15 и гены, кодирующие фимбриальные адгезины типа 1 fimH, стал ведущей линией устойчивости к двум ключевым классам противомикробных препаратов для лечения внекишечных инфекционных заболеваний - фторхинолонам и цефалоспоринам расширенного спектра и обусловил быстрое развитие пандемии [Colpan A. , et al.,2013; Tchesnokova V., et al., 2013; Petty N., et al., 2014 ; Stoesser N. et al., 2016].Currently, an urgent task is the development of new probiotic preparations and probiotic feed additives that have antagonistic activity against antibiotic-resistant zooanthroponotic E. coli strains that persist in the intestines of humans and animals and cause extraintestinal infectious diseases. A pandemic of extraintestinal infectious diseases caused by antibiotic-resistant zooanthroponotic strains of E. coli that persist in the human intestine was first registered in 2008 and continues to develop [Nicolas-Chanoine M., et al., 2008; Canton R., et al., 2008; Klemm, E. J., et al., 2018; Tchesnokova V., et al., 2019]. These strains have type 1 pili, at the end of which there are adhesins FimH or UclD, which ensure attachment of the pathogen to intestinal enterocytes or uroepithelial cells of the urinary system. Intensively developing in the intestines of people of different age groups (children, adults, elderly), they increase intestinal permeability, penetrate into the mesenteric lymph nodes and blood, which is accompanied by infection of parenchymal organs (liver, spleen, lungs, brain) with the development of numerous extraintestinal infections from cystitis and pyelonephritis [Russo TA, et al., 2003; Kaper J., et al., 2004; Yun K., et al., 2017; Ahn D., et al., 2015; Kocak M., et al., 2016] to life-threatening septicemia [Tumbarello M, et al., 2007]. More than 85% of primary pyogenic uropathies, so-called “household” infections, i.e. urinary system infections recorded in apparently healthy adults, as well as children (14 times more often in women) outside hospital conditions, are associated with antibiotic-resistant strains of E. coli [Yun et al, et al., 2017]. Translocation of E. coli also occurs during massive antibiotic therapy and chemotherapy, which suppresses normal intestinal microbiota and promotes the selective proliferation of E. coli strains with high drug resistance. Antibiotic-resistant E. coli strains that persist in the intestine are a source of morbidity and mortality, requiring increased healthcare costs. Over the past decade, extraintestinal infectious diseases induced by antibiotic-resistant zooanthroponotic strains of E. coli that persist in the intestine have become more frequent [Thelwall S., et al., 2015] and more difficult to treat [Walker EB, et al., 2016]. This poses serious clinical problems due to the continuous increase in antimicrobial resistance, primarily to fluoroquinolones and extended-spectrum cephalosporins. The rapid growth of antibiotic resistance in pathogens is due to the widespread use of antibiotics in medicine and, especially, in agriculture. More than 70% of antibiotics produced worldwide were used in livestock farming as feed additives that stimulate the growth of young farm animals. Some of these antibiotics settled in animal meat and persisted in human food products. As a result, in animals and humans, the normal intestinal microbiota involved in the normal metabolic processes of the host organism was disrupted and metabolic syndrome developed, one of the manifestations of which is an increase in body weight - obesity and type 2 diabetes. Studies conducted in Russia revealed the presence of metabolic syndrome in 29.7% (every third) of the adult population (Boitsov S. et al., 2014). Among antibiotic-resistant E. coli isolates in humans and animals, the most common in the world is the clonal group of strains ST 131, a pandemic clone responsible for the development of extraintestinal infectious diseases [Nicolas-Chanoine M., 2014]. Pathogenic multidrug-resistant strains of E. coli isolated from broilers, belonging to clone ST 131, have genetic similarity and common virulence genes with E. coli isolates circulating in the human intestine and causing extraintestinal infectious diseases [Kathayat D., et al., 2021] . Resistance of E. coli strains to antimicrobial drugs is mediated mainly by Extended Spectrum Beta-Lactamases (ESBLs) of classes such as TEM, SHV and CTX-M-15 [Pitout JD, 2008; Talan D., et al., 2016]. The spread of specific drug-resistant clonal groups of E. coli largely explains the cause of the pandemic [Johnson JR, et al., 2009; Tchesnokova V., et al., 2013]. The major H30 subclone of E. coli clone 131 (ST131-H30), belonging to phylogroup B2, containing genes encoding CTX-M-15 class ESBLs and genes encoding fimbrial adhesins type 1 fimH, has emerged as a leading lineage of resistance to two key classes of antimicrobials for the treatment of extraintestinal infectious diseases - fluoroquinolones and extended-spectrum cephalosporins and caused the rapid development of the pandemic [Colpan A., et al., 2013; Tchesnokova V., et al., 2013; Petty N., et al., 2014; Stoesser N. et al., 2016].
Известны пробиотические штаммы Lactobacillus salivaris AH102, AH103, AH105, AH109, AH110, обладающие адъювантными свойствами и используемые при вакцинации для усиления иммунного ответа [Патент RU 2302458 C2, дата опубликования заявки 10.07.2007 г. Бюл. №19; PCT WO 03.010298 (06.02.2003)]. Однако сведения об антагонистической активности этого штамма по отношению к антибиотикорезистентным зооантропонозным штаммам E. coli клона ST 131, вызывающим внекишечные инфекции, а также возбудителям кишечных инфекционных заболеваний, включая штаммы Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni и возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний отсутствуют.Known probiotic strains of Lactobacillus salivaris AH102, AH103, AH105, AH109, AH110 have adjuvant properties and are used in vaccination to enhance the immune response [Patent RU 2302458 C2, date of publication of the application 07/10/2007 Bull. No. 19; PCT WO 03.010298 (06.02.2003)]. However, there is no information on the antagonistic activity of this strain against antibiotic-resistant zooanthroponotic strains of E. coli clone ST 131 that cause extraintestinal infections, as well as pathogens of intestinal infectious diseases, including strains of Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni and pathogens of nosocomial infectious diseases.
Известен пробиотический штамм Lactobacillus salivaris 3606, предназначенный для профилакики рака и комплексного лечения раковых заболеваний [Patent PCT WO 2012103785 A1. Дата опубликования 08.09.2012]. Однако сведения об антагонистической активности этого штамма по отношению к антибиотикорезистентным зооантропонозным штаммам E. coli клона ST 131, вызывающим внекишечные инфекции, а также возбудителям кишечных инфекционных заболеваний, включая штаммы Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni и возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний отсутствуют.A known probiotic strain Lactobacillus salivaris 3606 is intended for cancer prevention and complex treatment of cancer [Patent PCT WO 2012103785 A1. Date of publication 09/08/2012]. However, there is no information on the antagonistic activity of this strain against antibiotic-resistant zooanthroponotic strains of E. coli clone ST 131 that cause extraintestinal infections, as well as pathogens of intestinal infectious diseases, including strains of Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni and pathogens of nosocomial infectious diseases.
Известен пробиотический штамм Lactobacillus salivaris ICIS-540, предназначенный для получения ингибитора цитокинов IL-6 и IL-17 [Патент RU 2726653 C2. Дата опубликования 25.02.2020. Бюл. №6]. Однако сведения об антагонистической активности этого штамма по отношению к антибиотикорезистентным зооантропонозным штаммам E. coli клона ST 131, вызывающим внекишечные инфекции, а также возбудителям кишечных инфекционных заболеваний, включая штаммы Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni и возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний отсутствуют.The probiotic strain Lactobacillus salivaris ICIS-540 is known, intended to produce an inhibitor of the cytokines IL-6 and IL-17 [Patent RU 2726653 C2. Date of publication: 02/25/2020. Bull. No. 6]. However, there is no information on the antagonistic activity of this strain against antibiotic-resistant zooanthroponotic strains of E. coli clone ST 131 that cause extraintestinal infections, as well as pathogens of intestinal infectious diseases, including strains of Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni and pathogens of nosocomial infectious diseases.
Известен пробиотический штамм Lactobacillus salivaris, предназначенный для профилактики и комплексного лечения отита [Patent ES 2898876 T3. Дата опубликования 03.09.2022]. Однако сведения об антагонистической активности этого штамма по отношению к антибиотикорезистентным зооантропонозным штаммам E. coli клона ST 131, вызывающим внекишечные инфекции, а также возбудителям кишечных инфекционных заболеваний, включая штаммы Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni и возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний отсутствуют.Known probiotic strain Lactobacillus salivaris,intended for the prevention and complex treatment of otitis [Patent ES 2898876 T3. Date of publication 09/03/2022]. However, information about the antagonistic activity of this strain towards antibiotic-resistant zooanthroponotic strains E. coli clone ST 131, causing extraintestinal infections, as well as pathogens of intestinal infectious diseases, including strains Salmonellaenteritidis, Campylobacter jejuniand pathogens of nosocomial infectious diseases are absent.
Задачей изобретения является расширение номенклатуры пробиотических штаммов, обладающих антагонистической активностью к зооантропонозным патогенным антибиотикорезистентным штаммам E. coli клона ST 131, а также патогенным и условно-патогенным возбудителям кишечных и нозокомиальных инфекционных заболеваний.The objective of the invention is to expand the range of probiotic strains that have antagonistic activity against zooanthroponotic pathogenic antibiotic-resistant strains of E. coli clone ST 131, as well as pathogenic and opportunistic pathogens of intestinal and nosocomial infectious diseases.
Техническим результатом изобретения является высокая антагонистическая активность штамма по отношению к антибиотикорезистентным штаммам Escherichia coli, продуцирующим БЛРС и вызывающим внекишечные инфекционные заболевания человека и животных. Культуральная жидкость штамма обладает антагонизмом к по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний и кишечных заболеваний, вызываемых бактериальными инфекциями.The technical result of the invention is the high antagonistic activity of the strain against antibiotic-resistant Escherichia coli strains that produce ESBLs and cause extraintestinal infectious diseases in humans and animals. The culture liquid of the strain is antagonistic to pathogens of nosocomial infectious diseases and intestinal diseases caused by bacterial infections.
Заявленный технический результат достигается благодаря тому, что полученный штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД отличается высокой антагонистической активностью по отношению к антибиотикорезистентным зооантропонозным штаммам E. coli клона ST 131, индуцировавшего развитие пандемии внекишечных инфекционных заболеваний у человека, а также антагонистической активностью по отношению к возбудителям кишечных инфекционных заболеваний (энтеропатогенные Escherichia coli, энтеротоксигенные Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni) и возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний (Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans). Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД выделен из кишечника бройлера. Принадлежность выделенного штамма лактобацилл к виду Lactobacillus salivarius определена методом секвенирования гена, кодирующего 16S rRNA. Полученный штамм депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов, ФГБУН Федеральный исследовательский центр «Пущинский научный центр биологических исследований» РАН (ФИЦ ПНЦБИ РАН Пущино) под номером BKM B- 2834D.The claimed technical result is achieved due to the fact that the resulting strain of Lactobacillus salivarius VKShM-G-08PD is characterized by high antagonistic activity against antibiotic-resistant zooanthroponotic strains of E. coli clone ST 131, which induced the development of a pandemic of extraintestinal infectious diseases in humans, as well as antagonistic activity against pathogens of intestinal infectious diseases (enteropathogenic Escherichia coli, enterotoxigenic Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Campylobacter jejuni ) and pathogens of nosocomial infectious diseases ( Klebsiella pneumoniae , Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans ). The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD was isolated from the intestines of a broiler. The belonging of the isolated lactobacilli strain to the species Lactobacillus salivarius was determined by sequencing the gene encoding 16S rRNA. The resulting strain was deposited in the All-Russian Collection of Microorganisms, Federal Research Center "Pushchino Scientific Center for Biological Research" of the Russian Academy of Sciences (FRC PSCBI RAS Pushchino) under the number BKM B-2834D.
Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД характеризуется следующими биологическими свойствами. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD is characterized by the following biological properties.
Культурально-морфологические признакиCultural and morphological characteristics
Грамположительные прямые бесспоровые палочки, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек из 2-4 и более клеток или поодиночке. Величина клеток 18-часовой культуры в молоке составляет 10-20 мкм. Клетки равномерно окрашиваются по Граму. При выращивании на агаре с гидролизованным молоком через 48 ч роста штамм образует «локонообразные» колонии на поверхности агара. Диаметр колоний - 1-2 мм. При культивировании на среде МРС-5 в анаэробных или микроаэрофильных условиях через 48 ч штамм образует круглые без четких границ колонии. Физиолого-биохимические признаки.Gram-positive, straight, non-spore-bearing rods, arranged singly or in the form of chains of 2-4 or more cells or singly. The cell size of an 18-hour culture in milk is 10-20 microns. Cells are uniformly Gram stained. When grown on agar with hydrolyzed milk, after 48 hours of growth, the strain forms “curl-like” colonies on the surface of the agar. The diameter of the colonies is 1-2 mm. When cultivated on MPC-5 medium under anaerobic or microaerophilic conditions, after 48 hours the strain forms round colonies without clear boundaries. Physiological and biochemical signs.
Факультативный анаэроб, микроаэрофил; растет в присутствии азота и углекислого газа в атмосфере. Температурный диапазон роста 38±1°С, фаза максимального накопления микробных клеток заканчивается к 24-48 ч. Оптимум рН 7,2-7,5. Ферментирует без образования газа глюкозу, рамнозу, сахарозу, галактозу, лактозу, слабо - сорбит, мальтозу, салицин, магнит. Условия хранения лиофильно высушенной культуры: в герметичной упаковке при температуре 4±2°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 70%. При соблюдении всех норм, срок хранения 12 месяцев. Условия и состав сред для размножения: - плотные среды: МРС-5, Schaedler-arap (48 ч, 38±1°С, анаэробные условия) и агар с гидролизованным молоком (48 часов 38±1°С, анаэробные условия); - Schaedler - бульон (24-48 часов, 38±1°С, анаэробные условия).Facultative anaerobe, microaerophile; grows in the presence of nitrogen and carbon dioxide in the atmosphere. The growth temperature range is 38±1°C, the phase of maximum accumulation of microbial cells ends at 24-48 hours. Optimum pH 7.2-7.5. Ferments glucose, rhamnose, sucrose, galactose, lactose without gas formation, weakly sorbitol, maltose, salicin, magnet. Storage conditions for freeze-dried culture: in sealed packaging at a temperature of 4±2°C in a place protected from direct sunlight at a relative humidity of no more than 70%. If all standards are observed, the shelf life is 12 months. Conditions and composition of media for reproduction: - solid media: MPC-5, Schaedler-arap (48 hours, 38±1°C, anaerobic conditions) and agar with hydrolyzed milk (48 hours 38±1°C, anaerobic conditions); - Schaedler - broth (24-48 hours, 38±1°C, anaerobic conditions).
Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД фенотипически апатогенный. Он не обладает гемолитической, протеолитической, летициназной, гиалуронидазной, антилизоцимной, ДНК-ной и РНК-ной активностью. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD is phenotypically apathogenic. It does not have hemolytic, proteolytic, leticinase, hyaluronidase, antilysozyme, DNA or RNA activity.
Изобретение поясняется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Изучение безвредности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД на лабораторных животныхExample 1. Study of the harmlessness of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD on laboratory animals
Определение безвредности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД проводили в соответствии с ОФС.1.7.2.0001.15 «Безопасность пробиотиков в тестах in vivo». Безвредность штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД изучали на здоровых мышах линии Balb/c и беспородных белых мышах обоего пола массой 15±1 г, полученных из питомника «Столбовая» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России (Московская обл., Чеховский р-н, п. Столбовая). Длительность карантина для животных составляла 14 суток. В течение карантина проводили ежедневный осмотр животных (общее состояние и поведение). Клетки с животными помещали в отдельные комнаты. Световой режим: 12 ч - свет, 12 ч - темнота. Температуру воздуха поддерживали в пределах 19-25°С, относительную влажность - 30-70%. Содержание экспериментальных животных соответствовало действующим санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). Животным давалась стандартная диета в соответствии с действующими нормами. Для обеспечения водой использовались автопоилки. Кормление производилось в фиксированное время. Наряду с подопытными животными из этой же партии в аналогичных условиях содержались контрольные животные. Формирование групп подопытных и контрольных животных проводили методом рандомизации. Безвредность одной дозы штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД оценивали на 10 мышах линии Balb/c и 10 беспородных белых мышах. Исследовали 3 дозы штамма (109 КОЕ/0,5 мл; 1010 КОЕ/0,5 мл; 1011 КОЕ/0,5 мл). Взвешивание животных производили непосредственно перед опытом. Взвесь штамма 2-го или 3-го пассажа в концентрации 109 КОЕ; 1010 КОЕ; 1011 КОЕ в объёме 0.5 мл водили каждой мыши перорально при помощи насадки на шприц вместимостью 1мл. Наблюдение за мышами осуществляли в течение 5 суток.Determination of the harmlessness of a strainLactobacillus salivarius VKShM-G-08PD carried out in accordance with GPM.1.7.2.0001.15 “Safety of probiotics in tests in vivo" Harmlessness of the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD studied on healthy mice of the Balb/c line and outbred white mice of both sexes weighing 15±1 g, obtained from the Stolbovaya nursery of the Federal State Budgetary Institution Scientific Center for Medical Sciences of the Federal Medical and Biological Agency of Russia (Moscow region, Chekhov district, Stolbovaya village). The duration of quarantine for animals was 14 days. During quarantine, animals were examined daily (general condition and behavior). Animal cages were placed in separate rooms. Light mode: 12 hours - light, 12 hours - darkness. The air temperature was maintained within 19-25°C, relative humidity - 30-70%. The maintenance of experimental animals complied with the current sanitary rules for the design, equipment and maintenance of experimental biological clinics (vivariums). The animals were given a standard diet in accordance with current regulations. Drinkers were used to provide water. Feeding was carried out at a fixed time. Along with experimental animals from the same batch, control animals were kept under similar conditions. The formation of groups of experimental and control animals was carried out by randomization. Harmlessness of one dose of the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD were evaluated on 10 Balb/c mice and 10 outbred white mice. We studied 3 doses of the strain (109 CFU/0.5 ml; 1010 CFU/0.5 ml; 10eleven CFU/0.5 ml). Animals were weighed immediately before the experiment. Suspension of the 2nd or 3rd passage strain at a concentration of 109 CFU; 1010 CFU; 10eleven CFU in a volume of 0.5 ml was administered orally to each mouse using a syringe attachment with a capacity of 1 ml. The mice were observed for 5 days.
Учет и интерпретация результатовAccounting and interpretation of results
Препарат считают выдержавшим испытание на безвредность, если в течение всего срока наблюдения:The drug is considered to have passed the safety test if, during the entire observation period:
- отсутствует гибель подопытных животных;- there is no death of experimental animals;
- отсутствует снижение групповой массы тела животных по сравнению с исходной.- there is no decrease in the group body weight of animals compared to the initial one.
Результаты экспериментов представлены в Таблицах 1, 2.The results of the experiments are presented in Tables 1, 2.
Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД при однократном пероральном введении в трех возрастающих концентрациях: 109 КОЕ/0,5 мл, 1010 КОЕ/0,5 мл и 1011 КОЕ/0,5 мл и с последующим наблюдением в течение 5 дней не влиял на среднегрупповую массу тела и не вызывали летальных исходов в опытной группе животных.Strain Lactobacillus salivarius VKShM-G-08PD with a single oral administration in three increasing concentrations: 109 CFU/0.5 ml, 1010 CFU/0.5 ml and 10elevenCFU/0.5 ml and followed up for 5 days did not affect the group average body weight and did not cause deaths in the experimental group of animals.
Таблица 1. Оценка безвредности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД в опытах in vivo на мышах линии Balb/cTable 1. Assessment of the harmlessness of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD in in vivo experiments on Balb/c mice
(М, г)Average group body weight,
(M, g)
salivarius MD IIE 2348 Lactobacillus
salivarius MD IIE 2348
Таблица 2. Оценка безвредности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД в опытах in vivo на нелинейных белых мышах Table 2. Assessment of the harmlessness of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD in in vivo experiments on nonlinear white mice
КОЕ/0,5 млThe administered dose
CFU/0.5 ml
(М, г)Average group body weight,
(M, g)
salivarius MD IIE 2348 Lactobacillus
salivarius MD IIE 2348
Таким образом, из результатов экспериментов, представленных в Таблицах 1 и 2, штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД не оказывает отрицательного влияния на выживаемость и массу тела экспериментальных животных в течение 5 дней после его однократного перорального введения. Вывод: штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД является безвредным, т.к. при однократном пероральном введении в трех возрастающих концентрациях: 109 КОЕ/0,5 мл, 1010 КОЕ/0,5 мл и 1011 КОЕ/0,5 мл и с последующим наблюдением в течение 5 дней, не влияет на среднегрупповую массу тела и не вызывает летальных исходов.Thus, from the experimental results presented in Tables 1 and 2, the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD does not have a negative effect on the survival and body weight of experimental animals within 5 days after its single oral administration. Conclusion: the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD is harmless, because with a single oral administration in three increasing concentrations: 10 9 CFU/0.5 ml, 10 10 CFU/0.5 ml and 10 11 CFU/0.5 ml and followed up for 5 days, does not affect the group average body weight and does not cause death.
Пример 2. Исследование антагонистической активности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к антибиотикорезистентным штаммам Escherichia coli, продуцирующим Бета-Лактамазы Расширенного Спектра (БЛРС) и вызывающим внекишечные инфекционные заболеванияExample 2. Study of the antagonistic activity of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD in relation to antibiotic-resistant Escherichia coli strains producing Extended Spectrum Beta-Lactamase (ESBL) and causing extraintestinal infectious diseases
Антагонистическую активность штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД проводили in vitro методом отсроченного антагонизма на плотной питательной среде (бифидоагар Hi Media, Индия) согласно инструкции, изложенной в работе [Чупринина Р.П. и соавт, 2012]. В опытах использовали 3 тест-штамма E. coli АТСС (E. coli ATCC BAA 198; E. coli ATCC BAA 204; E. coli ATCC BAA 2326), 3 тест-штамма, выделенные у пациентов в клинике, вызвавшие внекишечные инфекционные заболевания, 4 тест-штамма, выделенные у бройлеров, 1 тест-штамм, выделенный у поросёнка, 1 тест-штамм, выделенный у коровы с лактационным маститом. Тест-штамм E. coli ATCC BAA 198 продуцирует молекулярный класс БЛРС TEM-26; тест-штамм E. coli ATCC BAA 204 продуцирует молекулярный класс БЛРС SHV-2; тест-штамм: E. coli ATCC BAA 2326 продуцирует молекулярный класс БЛРС CTX-M-15. Клинический тест-штамм E. coli IIE Hu4326, выделен из мочи больной циститом; клинический тест-штамм E. coli IIE Hu4435, выделен из мочи больной пиелонефритом; клинический тест-штамм E. coli IIE Hu4518, выделен из крови больного с развившимся сепсисом. Тест-штаммы E. coli IIE Br5137; E. coli IIE Br5164; E. coli IIE Br5210, E. coli IIE Br5372 выделены из кишечника бройлеров. Тест-штамм E. coli IIE Pi5528, выделен из кишечника поросёнка. Тест-штамм E. coli IIE Со5679, выделен у коровы, больной маститом. Клинические изоляты (E. coli IIE Hu4326 и E. coli IIE Hu4435), а также все тест-штаммы, выделенные у сельскохозяйственных животных были резистентны к цефалоспоринам третьего поколения (цефотаксим, цефтазидим, цефоперазон) и четвёртого поколения (цефалим, цефпиром). Клинический изолят E. coli IIE Hu4518 был резистентен к цефалоспоринам III-IV поколения, фторхинилонам I поколения (ципрофлоксацин, офлоксацин, пефлоксацин) и II поколения (левофлоксацин). Согласно данным ПЦР все выделенные тест-штаммы содержали в своём геноме гены БЛРС, принадлежащих к одному из молекулярных классов TEM, SHV или СТХ-М. Учёт результатов антагонистической активности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к антибиотикорезистентным штаммам E. coli, продуцирующим БЛРС, проводили через 24-48 часов инкубирования при 37°С в термостате по величине зоны отсутствия роста тест-культуры в мм. Результаты исследований приведены в Таблице 3. Согласно полученным данным штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД проявляет высокую антагонистическую активность по отношению к, выделенным от человека и от сельскохозяйственных животных, антибиотикорезистентным штаммам E. coli, продуцирующим БЛРС и вызывающим внекишечные инфекционные заболевания.Antagonistic activity of the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD was carried out in vitro using the delayed antagonism method on a solid nutrient medium (Hi Media bifidoagar, India) according to the instructions set out in the work [Chuprinina R.P. et al, 2012]. 3 test strains were used in the experiments E. coli ATCC (E. coli ATCC BAA 198; E. coli ATCC BAA 204; E. coli ATCC BAA 2326), 3 test strains isolated from patients in the clinic that caused extraintestinal infectious diseases, 4 test strains isolated in broilers, 1 test strain isolated from a piglet, 1 test strain isolated from a cow with lactation mastitis. Test strain E. coli ATCC BAA 198 produces molecular class ESBL TEM-26; test strain E. coli ATCC BAA 204 produces molecular class ESBL SHV-2; test strain: E. coli ATCC BAA 2326 produces the ESBL molecular class CTX-M-15. Clinical test strain E. coli IIE Hu4326, isolated from the urine of a patient with cystitis; clinical test strain E. coli IIE Hu4435, isolated from the urine of a patient with pyelonephritis; clinical test strain E. coli IIE Hu4518, isolated from the blood of a patient with developed sepsis. Test strains E. coli IIE Br5137; E. coli IIE Br5164; E. coli IIE Br5210, E. coli IIE Br5372 was isolated from the intestines of broilers. Test strain E. coli IIE Pi5528, isolated from piglet intestine. Test strain E. coli IIE Co5679, isolated from a cow with mastitis. Clinical isolates (E. coli IIE Hu4326 and E. coli IIE Hu4435), as well as all test strains isolated from farm animals, were resistant to third generation cephalosporins (cefotaxime, ceftazidime, cefoperazone) and fourth generation (cephalim, cefpirome). Clinical isolate E. coli IIE Hu4518 was resistant to III-IV generation cephalosporins, I generation fluoroquinilone (ciprofloxacin, ofloxacin, pefloxacin) and II generation (levofloxacin). According to PCR data, all isolated test strains contained in their genome ESBL genes belonging to one of the molecular classes TEM, SHV or CTX-M. Accounting for the results of antagonistic activity of the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD in relation to antibiotic-resistant strains E. coliESBL-producing cells were carried out after 24-48 hours of incubation at 37°C in a thermostat according to the size of the zone of no growth of the test culture in mm. The research results are shown in Table 3. According to the data obtained, the strain Lactobacillus salivarius VKShM-G-08PD exhibits high antagonistic activity against antibiotic-resistant strains isolated from humans and farm animals E. coli, producing ESBLs and causing extraintestinal infectious diseases.
Таблица 3. Антагонистическая активность штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к антибиотикорезистентным штаммам Escherichia coli, продуцирующим БЛРС и вызывающим внекишечные инфекционные заболеванияTable 3. Antagonistic activity of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD towards antibiotic-resistant Escherichia coli strains that produce ESBLs and cause extraintestinal infectious diseases
ТЕМ-26Molecular class of ESBL*
TEM-26
* - бета лактамазы расширенного спектра; ** - клинический изолят. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение.Notes:
* - extended spectrum beta lactamase; ** - clinical isolate. Data are presented as mean ± standard deviation.
Пример 3Example 3
Исследование антагонистической активности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к возбудителям кишечных инфекционных заболеванийStudy of the antagonistic activity of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD in relation to pathogens of intestinal infectious diseases
Антагонистическую активность штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к возбудителям кишечных инфекций исследовали методом отсроченного антагонизма согласно инструкции, изложенной в работе [Чупринина Р.П. и соавт, 2012]. В опытах использовали энтеропатогенный тест-штамм E. coli АТСС Е 2448/69; энтеротоксигенный тест-штамм E. coli АТСС 31705; тест-штамм S. Enteritidis АТСС 13076, тест-штамм C. jejuni ATCC 29428. Учёт результатов проводили через 24-48 часов инкубирования при 37°С в термостате по величине зоны отсутствия роста тест-культуры в мм. Результаты исследований приведены в Таблице 4. Согласно полученным данным штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД проявляет антагонистическую активность по отношению к возбудителям кишечных инфекционных заболеваний.Antagonistic activity of the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD in relation to pathogens of intestinal infections was studied using the method of delayed antagonism according to the instructions set out in the work [Chuprinina R.P. et al, 2012]. An enteropathogenic test strain was used in the experiments E. coliATCC E 2448/69; enterotoxigenic test strain E. coliATCC 31705; test strain S.Enteritidis ATCC 13076, test strain C. jejuniATCC 29428. The results were recorded after 24-48 hours of incubation at 37°C in a thermostat according to the size of the zone of no growth of the test culture in mm. The research results are shown in Table 4. According to the data obtained, the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD exhibits antagonistic activity against pathogens of intestinal infectious diseases.
Таблица 4. Антагонистическая активность штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к возбудителям кишечных инфекционных заболеванийTable 4. Antagonistic activity of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD against pathogens of intestinal infectious diseases
Пример 4Example 4
Исследование антагонистической активности штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеванийStudy of the antagonistic activity of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD in relation to pathogens of nosocomial infectious diseases
Антагонистическую активность штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний проводили методом отсроченного антагонизма согласно инструкции, изложенной в работе [Чупринина Р.П. и соавт., 2012]. В опытах использовали тест-штамм K. pneumoniae АТСС 43816; тест-штамм P. aeruginosa АТСС 27853; тест-штамм S. aureus АТСС 25923, тест-штамм C. albicans ATCC 10231. Учёт результатов проводили через 24-48 часов инкубирования при 37°С в термостате по величине зоны отсутствия роста тест-культуры в мм. Результаты исследований приведены в Таблице 5. Согласно полученным данным, штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД проявляет антагонистическую активность по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболевний.Antagonistic activity of the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD in relation to pathogens of nosocomial infectious diseases was carried out using the method of delayed antagonism according to the instructions set out in the work [Chuprinina R.P. et al., 2012]. The test strain was used in the experiments K. pneumoniae ATCC 43816; test strain P. aeruginosa ATCC 27853; test strain S. aureusATCC 25923, test strain C. albicansATCC 10231. The results were recorded after 24-48 hours of incubation at 37°C in a thermostat according to the size of the zone of no growth of the test culture in mm. The research results are shown in Table 5. According to the data obtained, the strain Lactobacillus salivariusVKShM-G-08PD exhibits antagonistic activity against pathogens of nosocomial infectious diseases.
Таблица 5. Антагонистическая активность штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеванийTable 5. Antagonistic activity of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD against pathogens of nosocomial infectious diseases
Пример 5Example 5
Исследование антагонистической активности супернатанта культуральной жидкости, полученного после культивирования штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД, по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеванийStudy of the antagonistic activity of the supernatant of the culture liquid obtained after cultivating the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD in relation to pathogens of nosocomial infectious diseases
Бесклеточные супернатанты культуральной жидкости штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД, выращенного в MRS бульоне в течение 18 ч в микроаэрофильных условиях, вносили в лунки агара, содержащего соответствующие микроорганизмы-возбудители нозокомиальных инфекций, как описано в работах [Magaldi, 2004]. Антагонистическую активность супернатанта культуральной жидкости штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД оценивали по величине задержки роста исследуемых штаммов микроорганизмов в агаре в мм. Результаты исследований приведены в Таблице 6. Согласно полученным данным, супернатант культуральной жидкости штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД проявляет антагонистическую активность по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеваний.Cell-free supernatants of the culture liquid of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD, grown in MRS broth for 18 hours under microaerophilic conditions, were added to the wells of agar containing the corresponding microorganisms that cause nosocomial infections, as described in [Magaldi, 2004]. The antagonistic activity of the supernatant of the culture liquid of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD was assessed by the value of the growth retardation of the studied strains of microorganisms in agar in mm. The research results are presented in Table 6. According to the data obtained, the supernatant of the culture liquid of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD exhibits antagonistic activity against pathogens of nosocomial infectious diseases.
Таблица 6. Антагонистическая активность супернатанта культуральной жидкости, полученного после культивирования штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД, по отношению к возбудителям нозокомиальных инфекционных заболеванийTable 6. Antagonistic activity of the supernatant of the culture liquid obtained after cultivating the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD against pathogens of nosocomial infectious diseases
Пример 6Example 6
Исследование адгезии штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД на перевиваемых энтероцитах тонкой кишки (Caco-2) и перевиваемых энтероцитах толстой кишки (HT-29) человекаStudy of adhesion of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD on transplantable enterocytes of the small intestine (Caco-2) and transplantable enterocytes of the large intestine (HT-29) of humans
Адгезивные свойства штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД исследовали с помощью перевиваемых энтероцитов тонкой кишки (Caco-2) и перевиваемых энтероцитов толстой кишки (HT-29) человека. Энтероциты Caco-2 или HT-29 в концентрации 3.0×105 кл/мл высевали в объёме 2 мл на лунку на среду DMEM, содержащую 10% эмбриональной сыворотки телёнка, в 6-ти луночные планшеты и культивировали 24 ч в СО2 инкубаторе для формирования 70-80% монослоя. Планшеты с монослоем энтероцитов промывали трёхкратно средой DMEM без фетальной сыворотки, затем к монослою энтероцитов добавляли среду DMEM, содержащую L-глутамин и культуру клеток штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД, выращенную на среде MRS, pH=6.5. Перед добавлением к монослою энтероцитов лактобациллы дважды промывали забуференным физиологическим раствором (ЗФР) путём центрифугирования при 5000 об/ мин в течение 15 мин и ресуспендировали в среде DMEM, содержащей L-глутамин. Множественность инфицирования (МОИ) составляла 200 бактерий на один энтероцит. Планшеты, содержащие монослой энтероцитов с внесёнными к ним лактобациллами инкубировали 5 ч при 37°С в СО2 инкубаторе в атмосфере, содержащей 5% СО2, затем лунки планшетов трижды промывали охлаждённым ЗФР для удаления лактобацилл, не связавшихся с монослоем энтероцитов, фиксировали в холодном этаноле (3 мин), окрашивали по Романовскому-Гимзе в теч. 30 мин, промывали охлаждённым ЗФР, высушивали при комнатной температуре и исследовали микроскопически. Определяли активность адгезии- количество энтероцитов из 100 проанализированных под микроскопом, содержащих на своей поверхности лактобациллы, в процентах, а также индекс адгезии штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД представляющий собой средний показатель адгезии, число микробов на поверхности одной клетки - микроб/клетка. Результаты исследований представлены в Таблице 7. Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД является высокоадгезивным для Caco-2 и HT-29 энтероцитов человека.The adhesive properties of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD were studied using transplantable human enterocytes of the small intestine (Caco-2) and transplantable human enterocytes of the large intestine (HT-29). Caco-2 or HT-29 enterocytes at a concentration of 3.0 × 10 5 cells/ml were seeded in a volume of 2 ml per well on DMEM medium containing 10% fetal calf serum in 6-well plates and cultured for 24 hours in a CO 2 incubator for formation of 70-80% monolayer. The plates with a monolayer of enterocytes were washed three times with DMEM medium without fetal serum, then DMEM medium containing L-glutamine and a cell culture of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD grown in MRS medium, pH=6.5, were added to the monolayer of enterocytes. Before adding to the enterocyte monolayer, lactobacilli were washed twice with buffered saline (PBS) by centrifugation at 5000 rpm for 15 min and resuspended in DMEM containing L-glutamine. The multiplicity of infection (MOI) was 200 bacteria per enterocyte. Plates containing a monolayer of enterocytes with lactobacilli added to them were incubated for 5 hours at 37°C in a CO 2 incubator in an atmosphere containing 5% CO 2, then the wells of the plates were washed three times with chilled PBS to remove lactobacilli that were not associated with the monolayer of enterocytes, and fixed in cold ethanol (3 min), stained according to Romanovsky-Giemsa during 30 min, washed with chilled PBS, dried at room temperature and examined microscopically. Adhesion activity was determined - the number of enterocytes out of 100 analyzed under a microscope containing lactobacilli on their surface, as a percentage, as well as the adhesion index of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD, which is the average adhesion indicator, the number of microbes on the surface of one cell - microbe/cell. The research results are presented in Table 7. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD is highly adhesive to Caco-2 and HT-29 human enterocytes.
Таблица 7. Адгезия клеток штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД на перевиваемых энтероцитах тонкой кишки (Caco-2) и перевививаемых энтероцитах толстой кишки (HT-29) человекаTable 7. Adhesion of cells of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD on transplantable enterocytes of the small intestine (Caco-2) and transplantable enterocytes of the large intestine (HT-29) of humans
Пример 7Example 7
Исследование адгезии штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД на перевиваемых клетках НТВ-9 мочевого пузыря и А-498 почки человекаStudy of adhesion of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD on transplantable cells NTV-9 of the bladder and A-498 of the human kidney
Адгезивные свойства штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД исследовали с помощью перевиваемых клеток НТВ-9 мочевого пузыря и А-498 почки человека. Клетки НТВ-9 и клетки А-498 в концентрации 3.0×105 кл/мл высевали в объёме 2 мл на лунку на среду RPMI-1640, содержащую 10% эмбриональной сыворотки телёнка в 6-ти луночные планшеты и культивировали 24 ч в СО2 инкубаторе для формирования 70-80% монослоя. Планшеты с монослоем клеток НТВ-9 или А-498 промывали трёхкратно средой RPMI-1640 без фетальной сыворотки, затем к монослою клеток НТВ-9 или А-498 добавляли культуру клеток Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД выращенную на среде MRS, pH=6.5. Предварительно лактобациллы промывали ЗФР путём центрифугирования при 5000 об/ мин в течение 15 мин и ресуспендировали в среде RPMI-1640. Множественность инфицирования (МОИ) составляла 200 бактерий на одну клетку НТВ-9 или А-498. Планшеты, содержащие монослой клеток НТВ-9 или А-498 с внесёнными к ним лактобациллами инкубировали 5 ч при 37°С в СО2 инкубаторе в атмосфере, содержащей 5% СО2, затем лунки планшетов трижды промывали охлаждённым ЗФР для удаления лактобацилл, не связавшихся с монослоем клеток НТВ-9 или А-498, фиксировали в холодном этаноле (3 мин), окрашивали по Романовскому-Гимзе в теч. 30 мин, промывали охлаждённым ЗФР, высушивали при комнатной температуре и исследовали микроскопически. Определяли активность адгезии- количество клеток НТВ-9 или А-498 из 100 проанализированных под микроскопом, содержащих на своей поверхности лактобациллы, в процентах, а также индекс адгезии штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД. Результаты исследований представлены в Таблице 8. Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД является высокоадгезивным для клеток НТВ-9 и клеток А-498.The adhesive properties of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD were studied using transplantable cells NTV-9 of the bladder and A-498 of the human kidney. NTB-9 cells and A-498 cells at a concentration of 3.0 × 10 5 cells/ml were seeded in a volume of 2 ml per well on RPMI-1640 medium containing 10% fetal calf serum in 6-well plates and cultured for 24 hours in CO 2 incubator to form 70-80% monolayer. Plates with a monolayer of NTV-9 or A-498 cells were washed three times with RPMI-1640 medium without fetal serum, then a culture of Lactobacillus salivarius VKShM-G-08PD cells grown in MRS medium, pH=6.5, was added to the monolayer of NTV-9 or A-498 cells. . Previously, lactobacilli were washed with PBS by centrifugation at 5000 rpm for 15 minutes and resuspended in RPMI-1640 medium. The multiplicity of infection (MOI) was 200 bacteria per NTV-9 or A-498 cell. Plates containing a monolayer of NTV-9 or A-498 cells with lactobacilli added to them were incubated for 5 hours at 37°C in a CO 2 incubator in an atmosphere containing 5% CO 2, then the wells of the plates were washed three times with chilled PBS to remove unbound lactobacilli with a monolayer of NTV-9 or A-498 cells, fixed in cold ethanol (3 min), stained according to Romanovsky-Giemsa for a period. 30 min, washed with chilled PBS, dried at room temperature and examined microscopically. Adhesion activity was determined - the number of NTV-9 or A-498 cells out of 100 analyzed under a microscope containing lactobacilli on their surface, as a percentage, as well as the adhesion index of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD. The research results are presented in Table 8. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD is highly adhesive to NTV-9 cells and A-498 cells.
Таблица 8. Адгезия клеток штамма Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД на перевиваемых клетках НТВ-9 мочевого пузыря и А-498 почки человекаTable 8. Adhesion of cells of the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD on transplantable cells NTV-9 of the bladder and A-498 of the human kidney
Таким образом, заявляемый штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД отличается высокой антагонистической активностью по отношению к глобально распространившимся патогенным штаммам антибиотикорезистентного клона Escherichia coli ST 131. Исследуемый штамм фенотипически апатогенный, т.е. не обладает гемолитической, протеолитической, летициназной, гиалуронидазной, антилизоцимной, ДНК-ной и РНК-ной активностью. Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД имеет высокие показатели адгезии на перевиваемых энтероцитах тонкой кишки (Caco-2), энтероцитах толстой кишки (HT-29), перевиваемых клетках НТВ-9 мочевого пузыря (НТВ-9) и клетках почки (А-498 ) человека. Штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД высокотехнологичен, на искусственных питательных средах быстро накапливает биомассу с высокой концентрацией лактобактерий. Все это позволяет предложить штамм Lactobacillus salivarius ВКШМ-Г-08ПД для использования в производстве пробиотиков, обладающих высокой антагонистической активностью по отношению к глобально распространившимся патогенным штаммам антибиотикорезистентного клона Escherichia coli ST 131, вызвавшего пандемию внекишечных инфекционных заболеваний у человека и животных, а также для использования в производстве кормовых добавок для сельскохозяйственных животных.Thus, the claimed strain of Lactobacillus salivarius VKShM-G-08PD is distinguished by high antagonistic activity towards globally distributed pathogenic strains of the antibiotic-resistant clone Escherichia coli ST 131. The strain under study is phenotypically apathogenic, i.e. does not have hemolytic, proteolytic, leticinase, hyaluronidase, antilysozyme, DNA or RNA activity. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD has high adhesion rates on transplantable enterocytes of the small intestine (Caco-2), enterocytes of the large intestine (HT-29), transplantable cells NTV-9 of the bladder (NTV-9) and kidney cells (A- 498 ) person. The Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD is high-tech and quickly accumulates biomass with a high concentration of lactobacilli on artificial nutrient media. All this allows us to propose the Lactobacillus salivarius strain VKShM-G-08PD for use in the production of probiotics with high antagonistic activity against globally distributed pathogenic strains of the antibiotic-resistant clone Escherichia coli ST 131, which caused a pandemic of extraintestinal infectious diseases in humans and animals, as well as for use in the production of feed additives for farm animals.
Список литературыBibliography
1. Nicolas-Chanoine M-H, Blanco J, Leflon-Guibout V, Demarty R, Alonso MP, Caniça MM, Park Y-J, Lavigne J-P, Pitout J, Johnson JR. 2008. Intercontinental emergence of Escherichia coli clone O25:H4-ST131 producing CTX-M-15. J Antimicrob Chemother 61:273-281. https://doi.org/ 10.1093/jac/dkm464.1. Nicolas-Chanoine M-H, Blanco J, Leflon-Guibout V, Demarty R, Alonso MP, Caniça MM, Park Y-J, Lavigne J-P, Pitout J, Johnson JR. 2008. Intercontinental emergence of Escherichia coli clone O25:H4-ST131 producing CTX-M-15. J Antimicrob Chemother 61:273–281. https://doi.org/10.1093/jac/dkm464.
2. Cantón R, Nordmann P. Dissemination of clonally related Escherichia coli strains expressing extended-spectrum -lactamase CTX-M-15. Emerg. Infect. Dis.2008. 14:195-200. https://doi.org/10.3201/eid1402.070350.2. Cantón R, Nordmann P. Dissemination of clonally related Escherichia coli strains expressing extended-spectrum -lactamase CTX-M-15. Emerg. Infect. Dis.2008. 14:195-200. https://doi.org/10.3201/eid1402.070350.
3.Klemm, E. J., Wong, V. K., and Dougan, G. Emergence of Dominant Multidrug-Resistant Bacterial Clades: Lessons From History and Whole-Genome Sequencing. Proc. Natl. Acad. Sci. 2018. 115 (51), 12872. doi: 10.1073/pnas.17171621153. Klemm, E. J., Wong, V. K., and Dougan, G. Emergence of Dominant Multidrug-Resistant Bacterial Clades: Lessons From History and Whole-Genome Sequencing. Proc. Natl. Acad. Sci. 2018. 115 (51), 12872. doi: 10.1073/pnas.1717162115
4. Tchesnokova V., Rechkina E., Chan D., Haile H., Larson L., Ferrier K., Schroeder D., Solyanik T., Shibuya S., Hansen K., Ralston J., Riddell K., Scholes D., Sokurenko E. Pandemic uropathogenic fluoroquinolone-resistant Escherichia coli have enhanced ability to persist in the gut and cause bacteriuria in healthy women. Clin. Infect. Dis. 2019. https://doi.org/10.1093/cid/ ciz547.4. Tchesnokova V., Rechkina E., Chan D., Haile H., Larson L., Ferrier K., Schroeder D., Solyanik T., Shibuya S., Hansen K., Ralston J., Riddell K., Scholes D., Sokurenko E. Pandemic uropathogenic fluoroquinolone-resistant Escherichia colihave enhanced ability to persist in the gut and cause bacteriuria in healthy women. Clin. Infect. Dis. 2019. https://doi.org/10.1093/cid/ciz547.
5. Russo TA, Johnson JR. 2003. Medical and economic impact of extraintestinal infections due to Escherichia coli: an overlooked epidemic. Microbes Infect 5:449 - 456. http://dx.doi.org/10.1016/S1286 -4579(03)00049-2.5. Russo TA, Johnson JR. 2003. Medical and economic impact of extraintestinal infections due to Escherichia coli: an overlooked epidemic. Microbes Infect 5:449 - 456. http://dx.doi.org/10.1016/S1286 -4579(03)00049-2.
6. Kaper JB, Nataro JP, Mobley HL. 2004. Pathogenic Escherichia coli. Nat Rev Microbiol.2004. 2:123-140. https://doi.org/10.1038/nrmicro818.6. Kaper JB, Nataro JP, Mobley HL. 2004. Pathogenic Escherichia coli. Nat Rev Microbiol.2004. 2:123-140. https://doi.org/10.1038/nrmicro818.
7.Yun K., Lee M., Kim W., Lim I. Uropathogenic Escherichia coli ST 131 in urinary tract infections in children. Korean J. Pediatr.2017. 60 (7): 221-226.https://doi.org/10.3345/kip.2017.60.7.221.7.Yun K., Lee M., Kim W., Lim I. Uropathogenic Escherichia coli ST 131 in urinary tract infections in children. Korean J. Pediatr.2017. 60 (7): 221-226. https://doi.org/10.3345/kip.2017.60.7.221.
8.Ahn D., Kim K., Cho H., Tchah H., Jeon I.,Ryoo E., et al. Febrile urinary tract infections caused by community-acquired extended-spectrum beta-lactamase -producing and -nonproducing bacteria: a comparative study. Pediatr. Infect.Vaccine.2015. 22: 29-35.8.Ahn D., Kim K., Cho H., Tchah H., Jeon I., Ryoo E., et al. Febrile urinary tract infections caused by community-acquired extended-spectrum beta-lactamase -producing and -nonproducing bacteria: a comparative study. Pediatr. Infect.Vaccine.2015. 22: 29-35.
9.Kocak M., Buyukkaragaz B., Celebi Tayfur A., Caltic A., Koksoy A., Cizmeci Z., et al. Causative pathogens and antibiotic resistance in children hospitalized for urinary tract infection. Pediatr. Int. 2016.58:467-471.9.Kocak M., Buyukkaragaz B., Celebi Tayfur A., Caltic A., Koksoy A., Cizmeci Z., et al. Causative pathogens and antibiotic resistance in children hospitalized for urinary tract infection. Pediatr. Int. 2016.58:467-471.
10. Tumbarello M, Sanguinetti M, Montuori E, Trecarichi EM, Posteraro B, Fiori B, Citton R, D’Inzeo T, Fadda G, Cauda R, Spanu T. Predictors of mortality in patients with bloodstream infections caused by extended-spectrum-beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae: importance of inadequate initial antimicrobial treatment. Antimicrob Agents Chemother. 2007 51: 1987-1994. https://doi.org/10.1128/AAC.01509-0610. Tumbarello M, Sanguinetti M, Montuori E, Trecarichi EM, Posteraro B, Fiori B, Citton R, D'Inzeo T, Fadda G, Cauda R, Spanu T. Predictors of mortality in patients with bloodstream infections caused by extended-spectrum -beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae: importance of inadequate initial antimicrobial treatment. Antimicrob Agents Chemother. 2007 51: 1987-1994. https://doi.org/10.1128/AAC.01509-06
11.Thelwall S, Nsonwu O, Wasti S, Elmi M, Gerver S, Davies J, Hope R. 2016. Annual epidemiological commentary: mandatory MRSA, MSSA and E. coli bacteraemia and C. difficile infection data 2015/16, p 33- 42. Public Health England, London, United Kingdom. https://www.researchgate.net/ publication/305392637_Annual_Epidemiological_Commentary_Mandatory _MRSA_MSSA_and_E_coli_bacteraemia_and_C_difficile_infection_data _201516.11.Thelwall S, Nsonwu O, Wasti S, Elmi M, Gerver S, Davies J, Hope R. 2016. Annual epidemiological commentary: mandatory MRSA, MSSA and E. coli bacteraemia and C. difficile infection data 2015/16, p 33 - 42. Public Health England, London, United Kingdom. https://www.researchgate.net/ publication/305392637_Annual_Epidemiological_Commentary_Mandatory _MRSA_MSSA_and_E_coli_bacteraemia_and_C_difficile_infection_data _201516.
12. Walker EB, Lyman A, Gupta K, Mahoney MV, Snyder GM, Hirsch EB. Clinical management of an increasing threat: outpatient urinary tract infections due to multidrug-resistant uropathogens. Clin. Infect. Dis.2016 63: 960 -965. https://doi.org/10.1093/cid/ciw396.12. Walker EB, Lyman A, Gupta K, Mahoney MV, Snyder GM, Hirsch EB. Clinical management of an increasing threat: outpatient urinary tract infections due to multidrug-resistant uropathogens. Clin. Infect. Dis.2016 63: 960 -965. https://doi.org/10.1093/cid/ciw396.
13. Бойцов С., Баланова Ю., Шальнов С. И др. Артериальная гипертония среди лиц 25-64 лет: распространённость, осведомлённость, лечение и контроль. По материалам исследования ЭССЕ. Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2014.13(4):4-14.13. Boytsov S., Balanova Y., Shalnov S. et al. Arterial hypertension among persons 25-64 years old: prevalence, awareness, treatment and control. Based on ESSE research materials. Cardiovascular therapy and prevention. 2014.13(4):4-14.
14. Nicolas-Chanoine MH, Bertrand X, Madec JY. Escherichia coli ST131, an intriguing clonal group. Clin. Microbiol. Rev.2014. 27:543-574. http:// dx.doi.org/10.1128/CMR.00125-13.14. Nicolas-Chanoine MH, Bertrand X, Madec JY. Escherichia coli ST131, an intriguing clonal group. Clin. Microbiol. Rev.2014. 27:543-574. http:// dx.doi.org/10.1128/CMR.00125-13.
15.Kathayat D, Lokesh D, Ranjit S, Rajashekara G Avian pathogenic Escherichia coli (APEC): an overview of virulence and pathogenesis factors, zoonotic potential, and control strategies. Pathogens.2021. 10(4):467. https://doi.org/10.3390/pathogens1004046715.Kathayat D, Lokesh D, Ranjit S, Rajashekara G Avian pathogenic Escherichia coli (APEC): an overview of virulence and pathogenesis factors, zoonotic potential, and control strategies. Pathogens.2021. 10(4):467. https://doi.org/10.3390/pathogens10040467
16. Pitout JD. 2008. Multiresistant Enterobacteriaceae: new threat of an old problem. Expert Rev Anti Infect Ther.2008. 6:657- 669. http://dx.doi.org/ 10.1586/14787210.6.5.657.16. Pitout JD. 2008. Multiresistant Enterobacteriaceae: new threat of an old problem. Expert Rev Anti Infect Ther.2008. 6:657- 669. http://dx.doi.org/10.1586/14787210.6.5.657.
17. Talan DA, Takhar SS, Krishnadasan A, Abrahamian FM, Mower WR, Moran GJ, EMERGEncy ID Net Study Group. Fluoroquinoloneresistant and extended-spectrum -lactamase-producing Escherichia coli infections in patients with pyelonephritis, United States. Emerg. Infect. Dis.2016. 22:160148. http://dx.doi:org/10.3201/eid2209.160148.17. Talan DA, Takhar SS, Krishnadasan A, Abrahamian FM, Mower WR, Moran GJ, EMERGEncy ID Net Study Group. Fluoroquinoloneresistant and extended-spectrum-lactamase-producing Escherichia coli infections in patients with pyelonephritis, United States. Emerg. Infect. Dis.2016. 22:160148. http://dx.doi:org/10.3201/eid2209.160148.
18. Johnson JR, Menard M, Johnston B, Kuskowski MA, Nichol K, Zhanel GG. Epidemic clonal groups of Escherichia coli as a cause of antimicrobial-resistant urinary tract infections in Canada, 2002 to 2004. Antimicrob. Agents Chemother. 2009. 53:2733-2739. http://dx.doi.org/ 10.1128/AAC.00297-09.18. Johnson JR, Menard M, Johnston B, Kuskowski MA, Nichol K, Zhanel GG. Epidemic clonal groups of Escherichia coli as a cause of antimicrobial-resistant urinary tract infections in Canada, 2002 to 2004. Antimicrob. Agents Chemother. 2009. 53:2733-2739. http://dx.doi.org/ 10.1128/AAC.00297-09.
19. Tchesnokova V, Billig M, Chattopadhyay S, Linardopoulou E, Aprikian P, Roberts PL, Skrivankova V, Johnston B, Gileva A, Igusheva I, Toland A, Riddell K, Rogers P, Qin X, Butler-Wu S, Cookson BT, Fang FC, Kahl B, Price LB, Weissman SJ, Limaye A, Scholes D, Johnson JR, Sokurenko EV. Predictive diagnostics for Escherichia coli infections based on the clonal association of antimicrobial resistance and clinical outcome. J Clin Microbiol. 2013. 51:2991-2999. http://dx.doi.org/ 10.1128/JCM.00984-13.19. Tchesnokova V, Billig M, Chattopadhyay S, Linardopoulou E, Aprikian P, Roberts PL, Skrivankova V, Johnston B, Gileva A, Igusheva I, Toland A, Riddell K, Rogers P, Qin X, Butler-Wu S, Cookson BT, Fang FC, Kahl B, Price LB, Weissman SJ, Limaye A, Scholes D, Johnson JR, Sokurenko EV. Predictive diagnostics for Escherichia coli infections based on the clonal association of antimicrobial resistance and clinical outcome. J Clin Microbiol. 2013. 51:2991-2999. http://dx.doi.org/ 10.1128/JCM.00984-13.
20. Colpan A, Johnston B, Porter S, Clabots C, Anway R, Thao L, et al. Escherichia coli sequence type 131 (ST131) subclone H30 as an emergent multidrug-resistant pathogen among US veterans. Clin. Infect. Dis. 2013. 57:1256-65.20. Colpan A, Johnston B, Porter S, Clabots C, Anway R, Thao L, et al. Escherichia coli sequence type 131 (ST131) subclone H30 as an emergent multidrug-resistant pathogen among US veterans. Clin. Infect. Dis. 2013. 57:1256-65.
21. Petty NK, Ben Zakour NL, Stanton-Cook M, Skippington E, Totsika M, Forde BM, Phan MD, Gomes Moriela D, Peters KM, Davies M, Rogers BA, Dougan G, Rodriguez-Baño J, Pascual A, Pitout JD, Upton M, Paterson DL, Walsh TR, Schembri MA, Beatson SA. Global dissemination of a multidrug resistant Escherichia coli clone. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2014. 111:5694 -5699. http://dx.doi.org/10.1073/ pnas.1322678111.21. Petty NK, Ben Zakour NL, Stanton-Cook M, Skippington E, Totsika M, Forde BM, Phan MD, Gomes Moriela D, Peters KM, Davies M, Rogers BA, Dougan G, Rodriguez-Baño J, Pascual A, Pitout JD, Upton M, Paterson DL, Walsh TR, Schembri MA, Beatson SA. Global dissemination of a multidrug resistant Escherichia coli clone. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 2014. 111:5694 -5699. http://dx.doi.org/10.1073/ pnas.1322678111.
22. Hutt P, Shchepetova J, Loivukene K, et al. Antagonistic activity of probiotic lactobacilli and bifidobacteria against entero- and uropathogens. J Appl Microbiol. 2006;100:1324-1332.22. Hutt P, Shchepetova J, Loivukene K, et al. Antagonistic activity of probiotic lactobacilli and bifidobacteria against entero- and uropathogens. J Appl Microbiol. 2006;100:1324-1332.
23.Stoesser N, Sheppard AE, Pankhurst L, de Maio N, Moore C, Sebra R, Turner P, Anson L, Kasarkis A, Batty E, Kos V, Wilson D, Phetsouvanh R, Wyllie D, Sokurenko E, Manges A, Johnson TJ, Price LB, Peto T, Johnson J, Didelot X, Walker AS, Crook D, Modernizing Medical Microbiology Informatics Group (MMMIG). 2016. Evolutionary history of the global emergence of the Escherichia coli epidemic clone ST131. mBio 7(2): e02162-15. https://doi.org/10.1128/mBio.02162-15.23.Stoesser N, Sheppard AE, Pankhurst L, de Maio N, Moore C, Sebra R, Turner P, Anson L, Kasarkis A, Batty E, Kos V, Wilson D, Phetsouvanh R, Wyllie D, Sokurenko E, Manges A , Johnson TJ, Price LB, Peto T, Johnson J, Didelot X, Walker AS, Crook D, Modernizing Medical Microbiology Informatics Group (MMMIG). 2016. Evolutionary history of the global emergence of the Escherichia coli epidemic clone ST131. mBio 7(2): e02162-15. https://doi.org/10.1128/mBio.02162-15.
24. Патент RU 2302458 C2.24. Patent RU 2302458 C2.
25. Patent PCT WO 2012103785 A1.25. Patent PCT WO 2012103785 A1.
26. Патент RU 2726653 C2.26. Patent RU 2726653 C2.
27. Patent ES 2898876 T3.27. Patent ES 2898876 T3.
28. ОФС.1.7.2.0001.15 «Безопасность пробиотиков в тестах in vivo», Минздрав России, http://www.rosminzdrav.ru/docs/mzsr/regulation/81.28. OFS.1.7.2.0001.15 “Safety of probiotics in in vivo tests”, Ministry of Health of Russia, http://www.rosminzdrav.ru/docs/mzsr/regulation/81.
29. Чупринина Р.П., Осипова И.Г., Евлашкина В.Ф., Ладыгина А.В., Терёшкина Н.В. Доклинические исследования препаратов нормофлоры. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств (иммунобиологические лекарственные препараты). Часть вторая / под ред. А.Н. Миронова. -М.: Гриф и К, 2012.-536 с.29. Chuprinina R.P., Osipova I.G., Evlashkina V.F., Ladygina A.V., Tereshkina N.V. Preclinical studies of normal flora preparations. Guidelines for conducting preclinical studies of medicinal products (immunobiological medicinal products). Part two / ed. A.N. Mironov. -M.: Grif i K, 2012.-536 p.
30. Magaldi S., Mata-Essayag S., Hartung de Capriles C., et al. Well diffusion for antifungal susceptibility testing. Int. J. Infect. Dis. 2004.8. 39-45.DOI: 10.1016/j.ijid.2003.03.00230. Magaldi S., Mata-Essayag S., Hartung de Capriles C., et al. Well diffusion for antifungal susceptibility testing. Int. J. Infect. Dis. 2004.8. 39-45.DOI: 10.1016/j.ijid.2003.03.002
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2822455C1 true RU2822455C1 (en) | 2024-07-05 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2528862C1 (en) * | 2013-04-19 | 2014-09-20 | Вячеслав Михайлович Абрамов | STRAIN Lactobacillus fermentum HAVING BROAD SPECTRUM OF ANTAGONISTIC ACTIVITY AND PROBIOTIC LACTOBACTERIUM CONSORTIUM FOR MANUFACTURING BACTERIAL PREPARATIONS |
| RU2694522C1 (en) * | 2018-12-25 | 2019-07-16 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Bacterial strain bacillus pumilus rncim v-13250, having expressed antagonism towards microorganisms escherichia coli, candida albicans, staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2528862C1 (en) * | 2013-04-19 | 2014-09-20 | Вячеслав Михайлович Абрамов | STRAIN Lactobacillus fermentum HAVING BROAD SPECTRUM OF ANTAGONISTIC ACTIVITY AND PROBIOTIC LACTOBACTERIUM CONSORTIUM FOR MANUFACTURING BACTERIAL PREPARATIONS |
| RU2694522C1 (en) * | 2018-12-25 | 2019-07-16 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный университет" | Bacterial strain bacillus pumilus rncim v-13250, having expressed antagonism towards microorganisms escherichia coli, candida albicans, staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KATHAYAT D., LOKESH D. et al. Avian pathogenic Escherichia coli (APEC): an overview of virulence and pathogenesis factors, zoonotic potential, and control strategies. Pathogens., 2021. 10(4):467. https://doi.org/10.3390/pathogens10040467. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Campana et al. | Antagonistic activity of Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 on the growth and adhesion/invasion characteristics of human Campylobacter jejuni | |
| Kaewnopparat et al. | In vitro probiotic properties of Lactobacillus fermentum SK5 isolated from vagina of a healthy woman | |
| Sanders | How do we know when something called “probiotic” is really a probiotic? A guideline for consumers and health care professionals | |
| RU2439145C2 (en) | Strain of microorganism bacillus smithii tbm112 mscl p737 and its application as food or feed additive, or component of probiotic composition, and probiotic composition | |
| Kaur et al. | Effect of the oral intake of probiotic Pediococcus acidilactici BA28 on Helicobacter pylori causing peptic ulcer in C57BL/6 mice models | |
| AU2004267383A1 (en) | Bacterial strains, compositions including same and probiotic use thereof | |
| CN119454720A (en) | Methods for treating and preventing Clostridium difficile infection | |
| Mansour et al. | Inhibition of Clostridium difficile in mice using a mixture of potential probiotic strains Enterococcus faecalis NM815, E. faecalis NM915, and E. faecium NM1015: novel candidates to control C. difficile infection (CDI) | |
| RU2580002C1 (en) | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| Al-Masaudi et al. | In vitro antibacterial activity of honey against multidrug-resistant Shigella sonnei | |
| Abdelhalim et al. | In vitro antibacterial effect of probiotics against Carbapenamase-producing multidrug-resistant Klebsiella pneumoniae clinical isolates, Cairo, Egypt | |
| Pato et al. | Antibiotic resistance and antibacterial activity of dadih originated Lactobacillus casei subsp. casei R-68 against food borne pathogens | |
| RU2203946C1 (en) | Strain of bacterium lactobacillus acidophilus nv ep 317/402-x "balans-narine" used for preparing antigastritis and antiulcerous fermented-milk product | |
| Ahmed | In vitro Screening of Lactobacillus species from Homemade Yoghurt for Antagonistic Effects against Common Bacterial Pathogens. | |
| RU2146454C1 (en) | STRAIN OF BACTERIUM LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS n.v. EP 317/402 "NARINE" AAA USED FOR PREPARING PREPARATIONS, DIETETIC AND CURATIVE-PROPHYLACTIC FOODSTUFFS FOR TREATMENT OF BACTERIOSIS AND ITS RESULTS | |
| RU2822455C1 (en) | Lactobacillus salivarius vkshm-g-08pd strain | |
| EP4001399A1 (en) | Strain bifidobacterium animalis ssp. lactis dsm 33647 for modulating metabolism indicators | |
| SASAKI et al. | Monoassociation with bacteria in the intestines of germfree mice | |
| RU2827608C1 (en) | Lactobacillus plantarum “вкшм-г-06пд” bacteria strain | |
| Dickson et al. | The effect of enterococci on feline Tritrichomonas foetus infection in vitro | |
| Nunes | Probiotics and enzymes in the gastrointestinal tract | |
| Robins-Browne, RM, Jacbos, MR, Koornhof, HJ & Mauff | Yersinia enterocolitica biotype 1 in South Africa | |
| Wang et al. | Probiotic potential and function of a Lactobacillus strain L1 isolated from Silage | |
| Saadatzadeh et al. | In vitro comparison of antimicrobial effect of probiotic extract from Lactobacillus casei with current antibiotics on four strains of pathogenic bacteria. | |
| Garba et al. | Prevalence and antibiogram of Salmonella enterica among patients attending selected hospital in Sokoto metropolis |