RU2816264C1 - Cultural inactivated emulsion vaccine against o/ea-3 genotype foot-and-mouth disease of o n2241/ethiopia/2011 strain - Google Patents
Cultural inactivated emulsion vaccine against o/ea-3 genotype foot-and-mouth disease of o n2241/ethiopia/2011 strain Download PDFInfo
- Publication number
- RU2816264C1 RU2816264C1 RU2023120224A RU2023120224A RU2816264C1 RU 2816264 C1 RU2816264 C1 RU 2816264C1 RU 2023120224 A RU2023120224 A RU 2023120224A RU 2023120224 A RU2023120224 A RU 2023120224A RU 2816264 C1 RU2816264 C1 RU 2816264C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- foot
- mouth disease
- strain
- ethiopia
- genotype
- Prior art date
Links
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 title claims abstract description 176
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 80
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 60
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 title claims description 28
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 42
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 16
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 6
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 3
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 28
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract description 9
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 57
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 43
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 16
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 2-(aziridin-1-yl)ethanamine Chemical compound NCCN1CC1 LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- -1 polyhexamethylene guanidine hydrochloride Polymers 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 2
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 241001250094 Capra sibirica Species 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 238000010629 Molecular evolutionary genetics analysis Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241001144416 Picornavirales Species 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- 101710140501 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710173681 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100030100 Sulfate anion transporter 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710144481 Sulfate anion transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009351 contact transmission Effects 0.000 description 1
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L disodium;2-hydroxy-3-[4-[4-[(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)amino]-3-methylphenyl]-2-methylanilino]propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC=2)=C1 BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical compound [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011886 postmortem examination Methods 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к разработке вакцины против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241 /Эфиопия/2011» культуральной инактивированной эмульсионной.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, namely to the development of a cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241 /Ethiopia/2011”.
Самым контагиозным заболеванием млекопитающих животных в мире является ящур, который причиняет огромный экономический ущерб для животноводства во многих странах мира [1,2].The most contagious disease of mammals in the world is foot and mouth disease, which causes enormous economic damage to livestock production in many countries of the world [1,2].
В настоящее время выделяют 7 серотипов вируса ящура, а именно, О, А, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3 и Азия-1, при этом вирус серотипа О является распространенным и изученным, что определяет актуальность изготовления вакцин против ящура данного серотипа. Серотипы генетически разделены на топотипы, а иногда на отдельные генетические линии и даже сублинии [3,4].Currently, 7 serotypes of foot-and-mouth disease virus are identified, namely, O, A, C, SAT-1, SAT-2, SAT-3 and Asia-1, while the serotype O virus is widespread and studied, which determines the relevance of producing vaccines against foot and mouth disease of this serotype. Serotypes are genetically divided into topotypes, and sometimes into separate genetic lineages and even sublineages [3,4].
Серотип О вируса ящура разделен на 11 топотипов: EAST AFRICA 1 - 4 (Восточная Африка) (ЕА-1-4), SOUTHEAST ASIA (Юго-Восточная Азия) (SEA), EUROPE-SOUTH AMERICA (Европа-Южная Америка) (EURO-SA), INDONESIA-1 и 2 (Индонезия-1 и 2) (ISA-1 and -2), CATHAY (Китай), MIDDLE EAST-SOUTH ASIA (ME-SA) (Ближний Восток-Южная Азия) и WEST AFRICA (Западная Африка) (WA). Такое высокое генетическое и антигенное разнообразие приводит к проблемам в специфической профилактики ящура при применении культуральных инактивированных противоящурных вакцин. В результате возникает необходимость создания новых средств специфической иммунопрофилактики в отношении вируса ящура серотипа О [5-11].Foot and mouth disease virus serotype O is divided into 11 topotypes: EAST AFRICA 1 - 4 (East Africa) (EA-1-4), SOUTHEAST ASIA (South-East Asia) (SEA), EUROPE-SOUTH AMERICA (Europe-South America) (EURO -SA), INDONESIA-1 and 2 (ISA-1 and -2), CATHAY (China), MIDDLE EAST-SOUTH ASIA (ME-SA) and WEST AFRICA (West Africa) (WA). This high genetic and antigenic diversity leads to problems in the specific prevention of FMD when using culture-inactivated FMD vaccines. As a result, there is a need to create new means of specific immunoprophylaxis against foot-and-mouth disease virus serotype O [5-11].
Разнообразие представителей серотипа О обусловлено высокой степенью изменчивости РНК-содержащих вирусов и активным перемещением данного возбудителя на территории Восточной Африки и сопредельных стран.The diversity of representatives of serotype O is due to the high degree of variability of RNA-containing viruses and the active movement of this pathogen throughout East Africa and neighboring countries.
По причине быстрого распространения возбудителя ящура данное заболевание может приобретать размах эпизоотий [12]. С целью недопущения возникновения болезни в хозяйствах Российской Федерации применяется система мероприятий по борьбе и профилактике ящура, которая направлена на предупреждение заноса вируса в страну, систематическую иммунизацию крупного и мелкого рогатого скота в буферной зоне, а также проведение мониторинга иммунного статуса привитых животных.Due to the rapid spread of the foot-and-mouth disease pathogen, this disease can acquire the scope of an epizootic [12]. In order to prevent the occurrence of the disease, farms in the Russian Federation apply a system of measures to combat and prevent foot-and-mouth disease, which is aimed at preventing the introduction of the virus into the country, systematic immunization of large and small livestock in the buffer zone, as well as monitoring the immune status of vaccinated animals.
Для иммунизации животных должна применяться вакцина, изготовленная из вируса, гомологичного полевым изолятам [6-13]. С целью проведения эффективной кампании по вакцинации нужно наличие эффективной, безопасной вакцины, содержащей в качестве иммуногенной части антиген вируса, соответствующей эпизоотическому распространяющемуся изоляту определенного генотипа [14]. Создание подобных вакцин является актуальной задачей. Достижение данной цели позволит эффективно применять вакцинный препарат в неблагополучном пункте и угрожаемой зоне для формирования иммунитета против конкретного генотипа вируса ящура.To immunize animals, a vaccine made from a virus homologous to field isolates should be used [6-13]. In order to conduct an effective vaccination campaign, it is necessary to have an effective, safe vaccine containing as an immunogenic part a viral antigen corresponding to an epizootic spreading isolate of a certain genotype [14]. The creation of such vaccines is an urgent task. Achieving this goal will make it possible to effectively use the vaccine drug in a disadvantaged area and a threatened area to form immunity against a specific genotype of the foot-and-mouth disease virus.
На территории Восточной Африки, в частности, в Нигерии, Кении, Танзании, Эфиопии вспышки ящура генотипа О/ЕА-3 имеют спорадический характер. Анализируя вспышки, которые регистрировались на территории Африки, обнаружено, что в Эритрее в 2012 и 2019 гг.были выявлены изоляты вируса ящура, которые принадлежат к генотипу О/ЕА-3, в Эфиопии - в 2019, 2020, 2021, 2022 гг.(данных по 2023 г. в настоящее время не предоставили), в Южном Судане - в 2017 и 2018 гг., в Судане - в 2016, 2017 и 2020 гг.Таким образом, в странах Африки эпизоотическая ситуация по ящура генотипа О/ЕА-3 в последние годы является напряженной. Данный генотип значительно отличается от других генотипов, принадлежащих серотипу О. Учитывая наличие торговых взаимоотношений Российской Федерации и стран Африканского континента, требуется проводить исследования штаммов данного генотипа для создания средств диагностики и специфической профилактики ящура генотипа О/ЕА-3.In East Africa, in particular in Nigeria, Kenya, Tanzania, and Ethiopia, outbreaks of foot-and-mouth disease genotype O/EA-3 are sporadic. Analyzing the outbreaks that were recorded in Africa, it was found that in Eritrea in 2012 and 2019, isolates of the foot-and-mouth disease virus were identified that belong to the O/EA-3 genotype, in Ethiopia - in 2019, 2020, 2021, 2022 ( data for 2023 have not yet been provided), in South Sudan - in 2017 and 2018, in Sudan - in 2016, 2017 and 2020. Thus, in African countries there is an epizootic situation for foot-and-mouth disease genotype O/EA-3 in recent years has been tense. This genotype is significantly different from other genotypes belonging to serotype O. Given the existence of trade relations between the Russian Federation and the countries of the African continent, it is necessary to conduct research on strains of this genotype to create diagnostic tools and specific prevention of foot and mouth disease of the O/EA-3 genotype.
Известны производственные штаммы вируса ящура серотипа О, которые применяются для производства средств специфической профилактики ящура:There are known production strains of foot-and-mouth disease virus serotype O, which are used for the production of specific foot-and-mouth disease prevention products:
- штамм «О/Тайвань/1997» (генотип O/CATHAY/CAM 94),- strain “O/Taiwan/1997” (genotype O/CATHAY/CAM 94),
- штамм «О/Приморский/2014» (генотип O/SEA/Mya-98),- strain “O/Primorsky/2014” (genotype O/SEA/Mya-98),
- штамм «О/Приморский/2012» (генотип O/ME-SA/PanAsia),- strain “O/Primorsky/2012” (genotype O/ME-SA/PanAsia),
- штамм «О/Саудовская Аравия/2008» (генотип 0/ME-SA/PanAsia2),- strain “O/Saudi Arabia/2008” (genotype 0/ME-SA/PanAsia2),
- штамм «О/Оренбургский/2021» (генотип O/ME-SA/Ind-2001e).- strain “O/Orenburg/2021” (genotype O/ME-SA/Ind-2001e).
Изолят «О/ЕНТ/2/2011» вируса ящура был выделен от свиньи на территории Федеративной Демократической Республики Эфиопия в населенном пункте Дебре Зейт (Бишофту) в районе Восточная Шева в 2011 году и поступил в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из Всемирной справочной лаборатории института Пирбрайта (the World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease, the Pirbright institute, Великобритания) для проведения научных исследований в 2023 г. Путем адаптации изолята вируса к репродукции в первично-трипсинизированной монослойной клеточной линии почки свиньи СП, в перевиваемых культурах клеток BHK-21/SUSP/ARRIAH, IB-RS-2, ПСГК-30, в организме крупного рогатого скота и свиней был получен штамм «0/2241 /Эфиопия/2011».Isolate “O/ENT/2/2011” of foot and mouth disease virus was isolated from a pig in the territory of the Federal Democratic Republic of Ethiopia in the village of Debre Zeit (Bishoftu) in the East Shewa region in 2011 and was supplied to the Federal State Budgetary Institution “ARRIAH” from the World Reference Laboratory of the Pirbright Institute (the World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease, the Pirbright Institute, UK) for scientific research in 2023. By adapting the virus isolate to reproduction in the primary trypsinized monolayer pig kidney cell line SP, in continuous cultures of BHK- cells 21/SUSP/ARRIAH, IB-RS-2, PSGC-30, strain “0/2241 /Ethiopia/2011” was obtained in the body of cattle and pigs.
По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный изолят принадлежит к генотипу О/ЕА-3 вируса ящура, который значительно отличается от производственных штаммов вируса ящура серотипа О (фиг.1).According to the results of a comparative analysis of nucleotide sequences, the isolated isolate belongs to the O/EA-3 genotype of the foot-and-mouth disease virus, which differs significantly from the production strains of the foot-and-mouth disease virus serotype O (Fig. 1).
Опасность возникновения ящура данного генотипа в Российской Федерации и особое значение приобретает проблема возможной экстренной профилактики данного заболевания для формирования иммунитета у восприимчивых животных, в связи с увеличением торгово-экономических взаимоотношений между Россией и странами Африканского континента. Таким образом, возникла необходимость разработать вакцину против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральную инактивированную сорбированную для обеспечения биологической безопасности территории Российской Федерации и сопредельных государств [15].The danger of foot and mouth disease of this genotype in the Russian Federation and the problem of possible emergency prevention of this disease to build immunity in susceptible animals is of particular importance due to the increase in trade and economic relations between Russia and the countries of the African continent. Thus, there was a need to develop a culture-inactivated, sorbed vaccine against foot-and-mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” to ensure the biological safety of the territory of the Russian Federation and neighboring states [15].
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная эмульсионная против ящура серотипа О (штамм «О №2212/Приморский/2014», генотип О/ЕА-3) [16], содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного культурального антигенного материала из гомологичного возбудителю ящура штамма «О №2212/Приморский/2014», полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде масляного адъюванта Montanide ISA-206 VG («Seppic», Р. Франция): концентрация антигена (инактивированные 146S+75S компоненты вируса ящура) не менее 3,0 мкг/см3, содержание масляного адъюванта Montanide ISA-206 VG - 50% по массе, добавка в виде поддерживающей среды - до 1,0 см3 (прототип).The closest to the proposed invention in terms of the totality of essential features is the inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease serotype O (strain “O No. 2212/Primorsky/2014”, genotype O/EA-3) [16], containing the active substance in the form of avirulent and purified cultural antigenic material from the strain “O No. 2212/Primorsky/2014” homologous to the foot-and-mouth disease pathogen, obtained in a sensitive biological system, and targeted additives in the form of oil adjuvant Montanide ISA-206 VG (“Seppic”, R. France): antigen concentration (inactivated 146S+75S components of the foot and mouth disease virus) not less than 3.0 μg/cm 3 , the content of the oil adjuvant Montanide ISA-206 VG is 50% by weight, the additive in the form of a supporting medium is up to 1.0 cm 3 (prototype).
В качестве чувствительной биологической системы для репродукции вируса ящура в данной вакцине используют перевиваемую клеточную линию почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/2-17, в качестве поддерживающей среды применяют среду Игла DMEM без внесения сыворотки, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого, гидролизата белков крови сухого при рН среды 7,45-7,65.As a sensitive biological system for the reproduction of the foot-and-mouth disease virus, this vaccine uses the continuous cell line of the kidney of a newborn Syrian hamster BNK-21/2-17; Eagle's DMEM medium is used as a supporting medium without adding serum, with the addition of enzymatic hydrolyzate of dry muscle, hydrolyzate of blood proteins dry at a pH of 7.45-7.65.
Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). При изготовлении эмульсионной вакцины в качестве адъюванта служит масляный адъювант Montanide ISA-206 VG («Seppic», P. Франция). Очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей осуществляют с применением полигексаметиленгуанидин гидрохлорида (ПГМГ).Aminoethylethylenimine (AEEI) is used to inactivate the virus. When producing an emulsion vaccine, Montanide ISA-206 VG oil adjuvant (Seppic, P. France) is used as an adjuvant. Purification of the virus-containing suspension from ballast impurities is carried out using polyhexamethylene guanidine hydrochloride (PHMG).
Существенный недостаток вакцины-прототипа состоит в его низкой иммуногенной активности относительно появившихся штаммов/изолятов вируса ящура генотипа О/ЕА-3.A significant drawback of the prototype vaccine is its low immunogenic activity relative to the emerging strains/isolates of foot-and-mouth disease virus genotype O/EA-3.
Для решения указанной проблемы было создано настоящее изобретение, в которое входила разработка вакцины против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241 /Эфиопия/2011» культуральной инактивированной эмульсионной. Данная вакцина предполагает высокое содержание 146S иммуногенного компонента в дозе препарата [17, 18, 19].To solve this problem, the present invention was created, which included the development of a cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241 /Ethiopia/2011”. This vaccine assumes a high content of the 146S immunogenic component in the dose of the drug [17, 18, 19].
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала противоящурных инактивированных культуральных эмульсионных вакцин для защиты животных против изолятов и штаммов вируса ящура серотипа О и, в частности, генотипа О/ЕА-3.The technical result from the use of the proposed invention is to expand the arsenal of anti-foot-and-mouth disease inactivated cultural emulsion vaccines to protect animals against isolates and strains of foot-and-mouth disease virus serotype O and, in particular, genotype O/EA-3.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральной инактивированной эмульсионной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков, отраженных ниже.The specified technical result was achieved by creating a cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”, characterized by the following set of characteristics reflected below.
Разработанная вакцина в 1,0 см3 препарата содержит следующие основные компоненты: 1) активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» (генотип О/ЕА-3) вируса ящура, репродуцированного в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARPJAH, в количестве не менее 4,5 мкг; 2) масляный адъювант Montanide ISА-61 VG с содержанием 60% по массе, обеспечивающий усиление иммунного ответа у животных; 3) поддерживающая среда -до 1,0 см3.The developed vaccine in 1.0 cm 3 of the drug contains the following main components: 1) the active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” (genotype O/EA-3) of the foot-and-mouth disease virus, homologous to the infectious agent, reproduced in the continuous suspension cell line BNK-21/SUSP/ARPJAH, in an amount of at least 4.5 μg; 2) oil adjuvant Montanide ISA-61 VG containing 60% by weight, which enhances the immune response in animals; 3) supporting medium - up to 1.0 cm 3 .
Штамм вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» (генотип О/ЕА-3) депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вирусов ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ», под регистрационным номером: №481 - деп / 23-31 -ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».The foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” (genotype O/EA-3) was deposited in the All-Russian State Collection of Exotic Types of Foot and Mouth Disease Viruses and Other Animal Pathogens (GKSHM) of the Federal State Budgetary Institution “ARRIAH”, under registration number: No. 481 - dep. / 23-31 -GKShM FSBI "ARRIAH".
Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным монослойным клеткам линии свиной почки (СП) и перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (BHK-21/SUSP/ARRIAH), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30).The strain is adapted to primary trypsinized monolayer cells of the porcine kidney (SP) line and continuous cell lines from newborn Syrian hamster kidney (BHK-21/SUSP/ARRIAH), pig kidney (IB-RS-2) and Siberian ibex kidney (PSGK- thirty).
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы предпочтительно используют перевиваемую суспензионную культуру клеток BHK-21/SUSP/ARRIAH, а в качестве поддерживающей среды применяют среду Хэнкса без внесения сыворотки, но с добавлением гидролизата белков крови в количестве 5,0% от общего объема при рН среды 7,45-7,65. Инактивацию вируса проводят с использованием аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) с концентрацией 0,030%) от объема вируссодержащей суспензии. Инактивированный вирус очищают от балластных примесей с помощью полигексаметиленгуанидина (ПГМГ), который вносят в суспензию до концентрации 0,013%) от общего объема.To produce a vaccine, it is preferable to use a continuous suspension culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells as a sensitive biological system, and Hanks’ medium is used as a supporting medium without adding serum, but with the addition of blood protein hydrolysate in an amount of 5.0% of the total volume at pH of the medium is 7.45-7.65. Inactivation of the virus is carried out using aminoethylethylenimine (AEEI) with a concentration of 0.030%) of the volume of the virus-containing suspension. The inactivated virus is purified from ballast impurities using polyhexamethylene guanidine (PHMG), which is added to the suspension to a concentration of 0.013%) of the total volume.
Авирулентный и очищенный антиген штаммаAvirulent and purified strain antigen
«О №2241/Эфиопия/2011», генотипа О/ЕА-3, вируса ящура представляет собой суспензию, содержащую инактивированный 146S иммуногенный компонент вируса ящура. Концентрацию компонента в продукте оценивают с помощью количественного варианта реакции связывания комплемента (РСК) [19, 20].“O No. 2241/Ethiopia/2011”, genotype O/EA-3, foot-and-mouth disease virus is a suspension containing an inactivated 146S immunogenic component of the foot-and-mouth disease virus. The concentration of the component in the product is assessed using a quantitative version of the complement fixation reaction (CRR) [19, 20].
Для создания вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1,0 см3 не менее 4,5 мкг инактивированных иммуногенных 146S частиц вируса ящура. Заявленную концентрацию иммуногенного компонента в вакцинном препарате обеспечивают благодаря концентрированию антигена с помощью установки тангенциальной фильтрации Centramate 500S Pall.To create a vaccine, viral material is used that contains at least 4.5 μg of inactivated immunogenic 146S particles of foot-and-mouth disease virus per 1.0 cm 3 . The declared concentration of the immunogenic component in the vaccine preparation is ensured by concentrating the antigen using a Centramate 500S Pall tangential filtration unit.
Вакцину против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральную инактивированную эмульсионную получают путем смешивания очищенного антигена и масляного адъюванта Montanide ISA-61 VG в соотношении 40% на 60% по массе, соответственно. Полученная вакцина представляет собой стабильную эмульсию белого или бледно-желтого цвета, содержащую инактивированный 146S компонент вируса ящура, который обеспечивают формирование специфического иммунного ответа.A cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” is prepared by mixing the purified antigen and the oil adjuvant Montanide ISA-61 VG in a ratio of 40% to 60% by weight, respectively. The resulting vaccine is a stable white or pale yellow emulsion containing an inactivated 146S component of the foot and mouth disease virus, which ensures the formation of a specific immune response.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана:The proposed invention includes the following set of essential features that ensure obtaining a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1. Вакцина против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральная инактивированная эмульсионная.1. Vaccine against foot and mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”, cultural inactivated emulsion.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю заболевания штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура в эффективном количестве.2. The active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 homologous to the causative agent of the disease in an effective amount.
3. Целевые добавки.3. Targeted supplements.
Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный очищенный антиген штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура в эффективном количестве.The significant distinctive features of the proposed vaccine are that as an active substance it contains an avirulent purified antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus in an effective amount.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The present invention is also characterized by other distinctive features that express specific forms of implementation or special conditions for its use:
1. Авирулентный и очищенный антиген штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура, полученный в суспензионной перевиваемой клеточной линии BHK-21/SUSP/ARRIAH и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в эффективном количестве.1. Avirulent and purified antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus, obtained in the suspension continuous cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH and representing a suspension containing predominantly the 146S immunogenic component of the foot-and-mouth disease virus in an effective amount.
2. Авирулентный и очищенный антиген штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура, полученный в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21/SUSP/ARRIAH и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в количестве не менее 4,5 мкг в 1,0 см3 готового вакцинного препарата.2. Avirulent and purified antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus, obtained in a suspension continuous culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells and representing a suspension containing predominantly the 146S immunogenic component of the foot-and-mouth disease virus in an amount of at least 4.5 mcg per 1.0 cm 3 of the finished vaccine preparation.
3. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-61 VG.3. Among the targeted additives, the vaccine contains the oil adjuvant Montanide ISA-61 VG.
4. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-61 VG в количестве 60% (по массе) в 1,0 см3 готового препарата.4. The vaccine contains the oil adjuvant Montanide ISA-61 VG in an amount of 60% (by weight) per 1.0 cm 3 of the finished product.
5. Авирулентный и очищенный антиген штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура, полученного в перевиваемой суспензионной клеточной линии BHK-21/SUSP/ARRIAH, масляный адъювант Montanide ISA-61 VG, добавка в готовом препарате в виде поддерживающей среды в следующих количествах:5. Avirulent and purified antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus obtained in the continuous suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH, oil adjuvant Montanide ISA-61 VG, additive in the finished product the drug in the form of a maintenance medium in the following quantities:
Авирулентный и очищенный антиген штаммаAvirulent and purified strain antigen
Предлагаемая вакцина против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральная инактивированная эмульсионная обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против изолятов/штаммов вируса ящура генотипа О/ЕА-3.The proposed vaccine against foot-and-mouth disease from the strain "O No. 2241/Ethiopia/2011" genotype O/EA-3, cultural inactivated emulsion, has high immunogenic activity and provides reliable protection against isolates/strains of the foot-and-mouth disease virus genotype O/EA-3.
Достижение технического результата от использования изобретения обеспечивается тем, что в состав предлагаемой противоящурной эмульсионной вакцины в качестве активного вещества введен антиген штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура, обладающий высокой иммуногенной активностью, создающий эффективную защиту восприимчивых животных против изолятов/штаммов вируса ящура представленного генотипа, которые в последние годы вызывают вспышки в мире.Achieving a technical result from the use of the invention is ensured by the fact that the antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus, which has high immunogenic activity, creating effective protection for susceptible animals against foot and mouth disease virus isolates/strains of the presented genotype, which have caused outbreaks in recent years in the world.
Сущность изобретения отражена на графическом изображении:The essence of the invention is reflected in the graphic image:
Фиг.1. - Дендрограмма, отражающая филогенетическое взаимоотношение штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура с эпизоотическими штаммами серологического типа О. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей ID-гена (соответствует белку VP1).Fig.1. - A dendrogram reflecting the phylogenetic relationship of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” with epizootic strains of serological type O. The dendrogram is based on a comparison of the complete nucleotide sequences of the ID gene (corresponding to the VP 1 protein).
Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:The essence of the invention is illustrated by the following sequence lists:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена, кодирующего белок VP1 штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура генотипа О/ЕА-3;SEQ ID NO: 1 represents the nucleotide sequence of the gene encoding the VP 1 protein of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot and mouth disease virus genotype O/EA-3;
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот белка VP1 штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура генотипа О/ЕА-3.SEQ ID NO: 2 represents the amino acid sequence of the VP 1 protein of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot and mouth disease virus genotype O/EA-3.
Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.The foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” is characterized by the following characteristics and properties.
Морфологические признакиMorphological characteristics
Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура серотипа О относится к отряду Picornavirales, семейству Picornaviridae, роду Aphthovirus, виду Foot-and-Mouth Disease virus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона иксаэдрическая, размер 24 нм. Вирион состоит из молекулы одноцепочечной положительно заряженной молекулы РНК и 60 копий полипептида, каждый из которых представлен протеинами VP4, VP2, VP3, VP1.Strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of foot-and-mouth disease virus serotype O belongs to the order Picornavirales, family Picornaviridae, genus Aphthovirus, species Foot-and-Mouth Disease virus and has morphological characteristics characteristic of the causative agent of foot-and-mouth disease: the shape of the virion is ixahedral, size 24 nm . The virion consists of a single-stranded positively charged RNA molecule and 60 copies of a polypeptide, each of which is represented by the proteins VP 4 , VP 2 , VP 3 , VP 1 .
Антигенные свойстваAntigenic properties
По антигенным свойствам штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура относится к серотипу О. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе и реакции микронейтрализации (РМН).According to its antigenic properties, the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus belongs to serotype O. The virus is stably neutralized by a homologous antiserum. In recovered animals, type-specific antibodies are formed in the blood serum, which are detected in an enzyme-linked immunosorbent assay and microneutralization reaction (RMN).
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура 1D-гена штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура принадлежит к генотипу О/ЕА-3 (фиг.1).Using the nucleotide sequencing method, the primary structure of the 1D gene of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” was determined. Comparative analysis of nucleotide sequences showed that the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus belongs to the genotype O/EA-3 (Fig. 1).
Антигенное родство (r1) штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура изучено в РМН, в перекрестном исследовании штамма со специфическими сыворотками, полученными на следующие производственные штаммы вируса ящура:The antigenic affinity (r 1 ) of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus was studied at the Russian Medical Research Institute, in a cross-study of the strain with specific sera obtained for the following production strains of the foot-and-mouth disease virus:
- штамм «О/Тайвань/1997» (генотип O/CATHAY/CAM 94),- strain “O/Taiwan/1997” (genotype O/CATHAY/CAM 94),
- штамм «О/Приморский/2014» (генотип O/SEA/Mya-98),- strain “O/Primorsky/2014” (genotype O/SEA/Mya-98),
- штамм «О/Приморский/2012» (генотип O/ME-SA/PanAsia),- strain “O/Primorsky/2012” (genotype O/ME-SA/PanAsia),
- штамм «О/Саудовская Аравия/2008» (генотип O/ME-SA/PanAsia2),- strain “O/Saudi Arabia/2008” (genotype O/ME-SA/PanAsia2),
- штамм «О/Оренбургский/2021» (генотип O/ME-SA/Ind-2001e).- strain “O/Orenburg/2021” (genotype O/ME-SA/Ind-2001e).
Титр референтных сывороток крови КРС, полученных путем иммунизации животных моновалентными вакцинами из производственных штаммов вируса ящура серотипа О, против 102 ТЦД50 гомологичного и гетерологичного вируса определяли в РМН при перекрестном титровании, рассчитывая значения с использованием уравнения линейной регрессии, и выражали в lg. Значение r1 определяли, как антилогарифм разности lg титров сыворотки против гетерологичного и гомологичного вируса [19].The titer of reference cattle blood sera obtained by immunizing animals with monovalent vaccines from production strains of foot-and-mouth disease virus serotype O against 10 2 TCD 50 of homologous and heterologous virus was determined in the RMN during cross-titration, calculating the values using a linear regression equation, and expressed in lg. The r 1 value was determined as the antilogarithm of the difference in serum lg titers against heterologous and homologous viruses [19].
Значение r1 в РМН интерпретировали следующим образом:The value of r 1 in the RMN was interpreted as follows:
при ≥ 0,3 - исследуемый и производственный штаммы вируса ящура являются родственными;at ≥ 0.3 - the studied and production strains of foot-and-mouth disease virus are related;
при < 0,3 - исследуемый образец штамма вируса ящура значительно отличается от производственного штамма.at <0.3 - the studied sample of the foot-and-mouth disease virus strain differs significantly from the production strain.
Максимальное родство отмечается при значении r1 в РМН, стремящимся к 1,0.Maximum relatedness is observed when the value of r 1 in the RMN tends to 1.0.
Показатели антигенного родства при изучении штамма «О №2241/Эфиопия/2011» составили r1 от 0,05 до 0,19, что свидетельствует об отсутствии явного антигенного родства с производственными штаммами вируса ящура серотипа О, а именно для штамма «О/Тайвань/1997» - 0,05, штамма «О/Приморский/2014» - 0,10, штамма «О/Приморский/2012» - 0,14, штамма «О/Саудовская Аравия/2008» - 0,12, штамма «О/Оренбургский/2021» - 0,19.Indicators of antigenic relatedness when studying the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” amounted to r 1 from 0.05 to 0.19, which indicates the absence of obvious antigenic relatedness with production strains of foot-and-mouth disease virus serotype O, namely for the strain “O/Taiwan” /1997" - 0.05, strain "O/Primorsky/2014" - 0.10, strain "O/Primorsky/2012" - 0.14, strain "O/Saudi Arabia/2008" - 0.12, strain "O/Orenburg/2021" - 0.19.
Полученные данные свидетельствуют об отсутствии антигенного родства с производственными штаммами вируса ящура серотипа О.The data obtained indicate the absence of antigenic relationship with production strains of foot-and-mouth disease virus serotype O.
Гено- и хемотаксономическая характеристикиGeno- and chemotaxonomic characteristics
Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура является РНК(+) -содержащим вирусом с молекулярной массой 8,08×106 Д. Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.Strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of foot-and-mouth disease virus is an RNA(+)-containing virus with a molecular weight of 8.08×10 6 D. Nucleic acid is represented by a single-chain linear molecule with a molecular weight of 2.8×10 6 D. The virion has a protein shell, consisting of four main proteins VP 1 , VP 2 , VP 3 and VP 4 . The lipoprotein membrane is absent.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирусная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса.The main antigenic protein is VP 1 . The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Viral RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, are cleaved to form more stable structural and nonstructural polypeptides of the virus.
Физические свойстваPhysical properties
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Плавучая плотность 1,46 г/см3.The mass of the virion is 8.4×10 -18 g. The buoyant density is 1.46 g/cm 3 .
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура устойчив к эфиру, хлороформу, и ацетону. Наиболее стабилен при рН 7,45-7,70. Сдвиги рН в кислую и сильно щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам (выше 38,4°С).Strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of foot-and-mouth disease virus is resistant to ether, chloroform, and acetone. Most stable at pH 7.45-7.70. Shifts in pH to the acidic and strongly alkaline side lead to inactivation of the virus. Sensitive to formaldehyde, UV irradiation, γ-irradiation, high temperatures (above 38.4°C).
Дополнительные признаки и свойстваAdditional characteristics and properties
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not have reactogenic properties.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных.Pathogenicity - pathogenic for artiodactyl animals.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - virulent for naturally susceptible animals during contact, aerosol and parenteral infection.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемых культурах.Stability - retains the original biological properties when passaging in sensitive biological systems for 5 passages (observation period) on continuous crops.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура репродуцируется в перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомячка (ВНК-21).The foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” is reproduced in continuous cell cultures: Siberian mountain ibex kidneys (PSGK-30), pig kidneys (IB-RS-2), Syrian hamster kidneys (VNK-21).
При испытании было проведено 5 последовательных пассажей штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21, IB-RS-2. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой клеточной линии IB-RS-2 и на естественно восприимчивых животных - крупном рогатом скоте (КРС) и свиньях.During the test, 5 consecutive passages of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus were carried out in continuous cell cultures PSGK-30, VNK-21, IB-RS-2. Biological properties were characterized by determining the infectious activity of the virus of each passage in the continuous cell line IB-RS-2 and in naturally susceptible animals - cattle (cattle) and pigs.
Для снижения эпизоотической опасности возникновения ящура, вызванного генотипом О/ЕА-3, и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки новой безопасной и эффективной вакцины.To reduce the epizootic risk of foot and mouth disease caused by the O/EA-3 genotype and prevent the emergence of new foci of the disease, timely vaccine prevention is important, which requires the development of a new safe and effective vaccine.
Получена безопасная и эффективная вакцина против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральная инактивированная эмульсионная.A safe and effective cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” has been obtained.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the proposed invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Генетическая характеристика штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура по данным ПЦР и нуклеотидного секвенирования.Example 1. Genetic characteristics of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” according to PCR and nucleotide sequencing data.
Проводили анализ первичной структуры гена 1D (белок VP1) (639 н.о.) штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура методом нуклеотидного секвенирования методом Сенгера и определении положения данного штамма на филогенетическом древе вируса ящура серотипа О. Метод основан на определении первичной структуры гена 1D (вирусный белок VP1) испытуемого изолята/штамма с последующим анализом филогенетического родства с другими изолятами/штаммами (22 представителей) вируса ящура серотипа О.The primary structure of the 1D gene (VP 1 protein) (639 nt) of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” was analyzed by nucleotide sequencing using the Sanger method and the position of this strain was determined on the phylogenetic tree of foot-and-mouth disease virus serotype O. The method is based on determining the primary structure of the 1D gene (viral protein VP 1 ) of the tested isolate/strain, followed by analysis of phylogenetic relationship with other isolates/strains (22 representatives) of foot-and-mouth disease virus serotype O.
Было необходимо провести сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей гена 1D, кодирующего белок VP1 вируса ящура вакцинного штамма «О №2241/Эфиопия/2011» с другими изолятами и штаммами. Последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура представлена SEQ ID NO: 1. Последовательность аминокислот ID-гена, кодирующего белок VP1 штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура отражена на SEQ ID NO: 2.It was necessary to conduct a comparative analysis of the nucleotide sequences of the 1D gene encoding the VP 1 protein of the foot-and-mouth disease virus vaccine strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” with other isolates and strains. The nucleotide sequence of the VP 1 protein gene of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus is presented by SEQ ID NO: 1. The amino acid sequence of the ID gene encoding the VP 1 protein of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” "Genotype O/EA-3 of foot and mouth disease virus is reflected in SEQ ID NO: 2.
Осуществлен филогенетический анализ для штамма «О №2241/Эфиопия/2011». Филогенетическое дерево выведено с использованием программы MEGA6 и алгоритма Neighbor-Joining [20, 21]. Процент повторяющихся ветвей, в которых связанные таксоны сгруппированы вместе в тесте начальной загрузки (увеличили со стандартных 100 до 1000 повторов для высокой степени достоверности), показан рядом с ветвями [22, 23]. Эволюционные расстояния были рассчитаны с использованием метода Maximum Composite Likelihood и выражены в единицах количества замен оснований на сайт. Этот анализ включал 19 нуклеотидных последовательностей, в том числе последовательность ID-гена штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура. Все позиции, содержащие пробелы и отсутствующие данные, были удалены (вариант полного удаления). В окончательном наборе данных было всего 639 позиций. Эволюционный анализ проводился в MEGA 6.A phylogenetic analysis was carried out for the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”. The phylogenetic tree was derived using the MEGA6 program and the Neighbor-Joining algorithm [20, 21]. The percentage of replicate branches in which related taxa cluster together in the bootstrap test (increased from the standard 100 to 1000 replicates for high confidence) is shown next to the branches [22, 23]. Evolutionary distances were calculated using the Maximum Composite Likelihood method and expressed in units of the number of base substitutions per site. This analysis included 19 nucleotide sequences, including the sequence of the ID gene of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”. All items containing spaces and missing data were removed (complete deletion option). There were a total of 639 items in the final data set. Evolutionary analysis was carried out in MEGA 6.
В результате проведенной работы по сравнению полных нуклеотидных последовательностей гена 1D (белок VP1) штамма «О №2241/Эфиопия/2011» и других изолятов/штаммов вируса ящура серотипа О определено положение исследуемого штамма на филогенетическом древе (фиг.1).As a result of the work carried out by comparing the complete nucleotide sequences of the 1D gene (VP 1 protein) of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” and other isolates/strains of foot-and-mouth disease virus serotype O, the position of the studied strain on the phylogenetic tree was determined (Fig. 1).
Таким образом, исследуемый штамм «О №2241/Эфиопия/2011» относится к генотипу О/ЕА-3, что подтверждают данные нуклеотидного и аминокислотного анализа.Thus, the studied strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” belongs to the O/EA-3 genotype, which is confirmed by nucleotide and amino acid analysis data.
Пример 2. Адаптация штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 к перевиваемой монослойной культуре клеток почки сибирского горного козерога ПСГК-30.Example 2. Adaptation of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 to a continuous monolayer culture of Siberian mountain ibex kidney cells PSGK-30.
Для заражения перевиваемой монослойной культуры клеток почки сибирского горного козерога ПСГК-30 использовали 10%-ную афтозную суспензию вируса ящура, полученную из афт свиньи (2 пассаж). Посевная концентрация клеток составляла 0,20-0,25 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,001 ТЦД50/кл. По результатам исследования репродукция вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» проходила при специфическом разрушении монослоя на 90-100% за 18-20 ч. В течение 6 последовательных пассажей отмечали рост значений титра инфекционной активности вируса от 6,25±0,10 до 7,45±0,10 lg ТЦД50/см3.To infect a continuous monolayer cell culture of Siberian mountain ibex kidney cells PSGK-30, a 10% aphthous suspension of foot-and-mouth disease virus obtained from pig aphthae (passage 2) was used. The inoculating cell concentration was 0.20-0.25 million cells/cm 3 , the virus infection dose was 0.001 TCD 50 /cell. According to the results of the study, the reproduction of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” took place with a specific destruction of the monolayer by 90-100% in 18-20 hours. Over the course of 6 consecutive passages, an increase in the titer of infectious activity of the virus from 6.25 ± 0 was noted ,10 to 7.45±0.10 lg TCD 50 /cm 3 .
Максимальное значение титра инфекционной активности вируса было достигнуто на этапе 6 пассажа (7,45±0,10 lg ТЦД50/см3). Концентрация 146S частиц с 1 по 6 пассажи изменялась с 0,38±0,02 до 0,82±0,02 мкг/см3. При этом наибольшее количество 146S компонента отмечали на этапе 6 пассажа (0,82±0,02 мкг/см3). Степень достоверности (R2) результатов исследования в количественном варианте ОТ-1ТЦР-РВ колебалась от 98,00 до 99,87%. Таким образом, на протяжении 6-ти последовательных пассажей была успешно проведена адаптация штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура к перевиваемой монослойной клеточной линии ПСГК-30.The maximum titer of infectious activity of the virus was achieved at stage 6 of passage (7.45±0.10 lg TCD 50 /cm 3 ). The concentration of 146S particles from passages 1 to 6 changed from 0.38±0.02 to 0.82±0.02 μg/ cm3 . In this case, the largest amount of the 146S component was noted at stage 6 of passage (0.82±0.02 μg/cm 3 ). The degree of reliability (R 2 ) of the study results in the quantitative version of OT-1TCR-RV ranged from 98.00 to 99.87%. Thus, over the course of 6 consecutive passages, the adaptation of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” to the continuous monolayer cell line PSGK-30 was successfully carried out.
Пример 3. Изучение условий монослойного культивирования вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 в промышленных масштабах.Example 3. Study of the conditions for monolayer cultivation of foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 on an industrial scale.
В процессе промышленного культивирования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура в перевиваемой монослойной культуре клеток ПСГК-30 осуществляли подбор оптимальных условий культивирования вируса по поддерживающей среде, температурному фактору и дозе заражения исследуемым вирусом клеток.In the process of industrial cultivation of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus in a continuous monolayer cell culture PSGK-30, the optimal conditions for cultivating the virus were selected based on the supporting medium, temperature factor and dose of infection of the cells with the test virus.
На первом этапе исследования оценивали влияние состава поддерживающей среды на репродукцию штаммаAt the first stage of the study, the influence of the composition of the supporting medium on the reproduction of the strain was assessed
«О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 в масштабах производства (на этапе с 5-го на 6-ой пассажи). Для сравнения применяли три среды с добавлением 2,0% фетальной сыворотки крови телят: 1) среда Игла DMEM; 2) среда RPMI-1640; 3) раствор Хэнкса. Посевная концентрация клеток составляла 0,20 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,1000-0,0001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли при температурах 35±0,2 - 38±0,2°С до разрушения клеточного монослоя не менее 85%.“O No. 2241/Ethiopia/2011” of foot-and-mouth disease virus in a monolayer cell culture PSGK-30 on a production scale (at the stage from the 5th to the 6th passages). For comparison, three media were used with the addition of 2.0% fetal calf serum: 1) Eagle's medium DMEM; 2) RPMI-1640 environment; 3) Hanks solution. The inoculating cell concentration was 0.20 million cells/cm 3 , the dose of virus infection was 0.1000-0.0001 TCD 50 /cell. Cultivation of the virus was carried out at temperatures of 35±0.2 - 38±0.2°C until the cell monolayer was destroyed by at least 85%.
Результаты репродукции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура с поддерживающими средами разного состава отражены в таблице 1, из которой видно, что при репродукции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 с применением поддерживающих сред разного состава, оптимальной является среда Хэнкса, позволяющая за 17-19 ч достичь специфического разрушения клеточного монослоя на 95-100%) с накоплением в полученной суспензии 146S компонента в количестве 0,82±0,02 мкг/см3 и титром инфекционной активности 7,45±0,10 lg ТЦД50/СМ3. При использовании среды RPMI-1640 и Игла DMEM показатели репродукции вируса были ниже.The results of the reproduction of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” with supporting media of different compositions are reflected in Table 1, from which it can be seen that during the reproduction of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in a monolayer cell culture PSGK-30 using supporting media of different compositions, the optimal one is Hanks's medium, which allows for 17-19 hours to achieve specific destruction of the cell monolayer by 95-100%) with the accumulation of the 146S component in the resulting suspension in an amount of 0.82±0.02 μg/cm 3 and titer of infectious activity 7.45±0.10 lg TCD 50 /CM 3 . Viral reproduction rates were lower when using RPMI-1640 and Eagle DMEM media.
На следующем этапе изучения условий монослойного культивирования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в культуре клеток ПСГК-30 в условиях производства оценивали влияние на процесс репродукции вируса температурного фактора. Для этого культивирование вируса проводили в среде Игла DMEM с 2% сыворотки КРС при следующих температурах: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. Доза заражения культуры клеток вирусом ящура составляла 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли до разрушения клеточного монослоя на 85-100% в течение 17-27 ч (табл.1). По итогам исследования выявили, что для полной репродукции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 оптимальной является температура среды 37,0±0,02°С, при которой за 17-19 ч развитие ЦПД достигало 95-100%) с накоплением 146S частиц, равным 0,82±0,02 мкг/см3 и титром инфекционной активности вируса 7,45±0,10 lg ТЦД50/см3.At the next stage of studying the conditions for monolayer cultivation of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus in the PSGK-30 cell culture under production conditions, the influence of the temperature factor on the virus reproduction process was assessed. To do this, the virus was cultivated in Eagle's medium DMEM with 2% bovine serum at the following temperatures: 35.0±0.2; 36.0±0.2; 37.0±0.2; 38.0±0.2°C. The dose of infection of the cell culture with the foot-and-mouth disease virus was 0.010-0.001 TCD 50 /cell. The virus was cultivated until the cell monolayer was destroyed by 85-100% within 17-27 hours (Table 1). Based on the results of the study, it was revealed that for complete reproduction of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus in a monolayer culture of PSGK-30 cells, the optimal temperature is 37.0 ± 0.02 ° C, at which in 17-19 hours the development The CPE reached 95-100%) with the accumulation of 146S particles equal to 0.82±0.02 μg/cm 3 and the titer of infectious activity of the virus 7.45±0.10 lg TCD 50 /cm 3 .
Оценивали влияние дозы заражения монослоя клеток линии ПСГК-30 штаммом «О №2241/Эфиопия/2011» при культивировании в масштабах производства. Для этого использовали разные дозы вируса: 0,10-0,01; 0,010-0,001; 0,0010-0,0001 ТЦД50/кл. В качестве поддерживающей среды применяли среду Игла MEM с 2% сыворотки крови КРС. Репродукцию вируса проводили при температуре 37,0±0,2°С в течение 17-30 ч до специфического разрушения клеток на 85-100%. По итогам культивирования определяли концентрацию 146S компонента и титр инфекционной активности вируса ящура. Как следует из данных таблицы 1, наибольшее накопление 146S компонента вируса достигалось при дозе заражения 0,01-0,001 ТЦД50/кл. и составило 0,82±0,02 мкг/см3 с титром инфекционной активности вируса 7,45±0,101g ТЦД50/см3.We assessed the effect of the dose of infection of a monolayer of cells of the PSGK-30 line with the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” during cultivation on a production scale. For this, different doses of the virus were used: 0.10-0.01; 0.010-0.001; 0.0010-0.0001 TCD 50 /cl. Eagle's MEM medium with 2% cattle blood serum was used as a supporting medium. Virus reproduction was carried out at a temperature of 37.0±0.2°C for 17-30 hours until specific cell destruction was 85-100%. Based on the results of cultivation, the concentration of the 146S component and the titer of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus were determined. As follows from the data in Table 1, the greatest accumulation of the 146S component of the virus was achieved at an infection dose of 0.01-0.001 TCD 50 /cell. and amounted to 0.82±0.02 μg/cm 3 with a titer of infectious activity of the virus of 7.45±0.101g TCD 50 /cm 3 .
Таким образом, проведено изучение условий монослойного культивирования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в культуре клеток ПСГК-30 в промышленных масштабах. В результате исследования определены следующие оптимальные параметры репродукции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в монослойной клеточной линии ПСГК-30: 1) поддерживающая среда - среда Хэнкса; 2) температурный режим культивирования - 37,0±0,02°С; 3) доза заражения вирусом - 0,01-0,001 ТЦД50/кл.Thus, we studied the conditions for monolayer cultivation of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in PSGK-30 cell culture on an industrial scale. As a result of the study, the following optimal parameters for the reproduction of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in the monolayer cell line PSGK-30 were determined: 1) maintenance medium - Hanks’ medium; 2) cultivation temperature - 37.0±0.02°C; 3) dose of virus infection - 0.01-0.001 TCD 50 / cell.
Пример 4. Изучение условий суспензионного культивирования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура в промышленных масштабах.Example 4. Study of the conditions for suspension cultivation of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus on an industrial scale.
При промышленном культивирования штаммаDuring industrial cultivation of the strain
«О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура в перевиваемой суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH проводили поиск оптимальных параметров для успешной репродукции возбудителя ящура, используя разные концентрации клеток, температурные условия и дозу заражения вирусом.“O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus in a continuous suspension cell culture BHK-21/SUSP/ARRIAH searched for optimal parameters for the successful reproduction of the foot-and-mouth disease pathogen, using different cell concentrations, temperature conditions and the dose of virus infection .
На первом этапе работы определяли влияние посевной концентрации клеток линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в суспензии на репродукцию штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в промышленных масштабах. Для анализа подготовили суспензии со следующими концентрации клеток: 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 млн кл./см3. Концентрацию катионов водорода (рН) поддерживали в диапазоне 7,45-7,65. Температура культивирования вируса составляла 37,0±0,02°С, доза заражения вирусом - 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса проводили до специфической гибели клеток на 95-100%, которая осуществлялась в течение 11-26 ч. Результаты суспензионного культивирования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в суспензии с разными концентрациями клеток представлены в таблице 2.At the first stage of the work, the effect of the seeding concentration of cells of the BHK-21/SUSP/ARRIAH line in suspension on the reproduction of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus on an industrial scale was determined. Suspensions with the following cell concentrations were prepared for analysis: 2.5; 3.0; 3.5; 4.0 million cells/ cm3 . The hydrogen cation concentration (pH) was maintained in the range of 7.45–7.65. The virus cultivation temperature was 37.0±0.02°C, the dose of virus infection was 0.010-0.001 TCD 50 /cell. Virus reproduction was carried out until specific cell death was 95-100%, which was carried out for 11-26 hours. The results of suspension cultivation of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in suspension with different cell concentrations are presented in Table 2.
Как следует из таблицы 2, при культивировании вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH с разными концентрациями клеток, определили, что накопление 146S компонента в суспензии с концентрацией клеток 2,5 млн кл./см3 составило 0,64±0,02 мкг/см3, с концентрацией 3,0 млн кл./см3 - 0,98±0,02 мкг/см3, с концентрацией 3,5 млн кл./см3 - 1,74±0,02 мкг/см3, и с концентрацией 4,0 млн кл./см3 - 1,54±0,02 мкг/см3. Как следует из полученных данных для репродукции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура достаточной является концентрация клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH в суспензии, равная 3,5 млн кл./см3 (при концентрации 4,0 млн кл./см3 концентрация незначительно ниже, а затраты на производство по количеству клеток выше, исходя из этого, экономически целесообразно использовать концентрацию клеток, равную 3,5 млн кл./см3). Значение титра инфекционной активности вируса при этом составило 9,63±0,10 lg ТЦД50/см3.As follows from Table 2, when cultivating the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in the suspension cell line BNK-21/SUSP/ARRIAH with different cell concentrations, it was determined that the accumulation of the 146S component in the suspension with a cell concentration of 2.5 million cells/cm3 was 0.64±0.02 μg/cm3, with a concentration of 3.0 million cells/cm3 - 0.98±0.02 μg/cm3, with a concentration of 3.5 million cells/cm3 - 1.74±0.02 μg/cm3, and with a concentration of 4.0 million cells/cm3 - 1.54±0.02 μg/cm3. As follows from the data obtained, for the reproduction of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus, the concentration of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells in suspension is equal to 3.5 million cells/cm3 (at a concentration of 4.0 million cells/cm3 the concentration is slightly lower, and the production costs for the number of cells are higher; based on this, it is economically feasible to use a cell concentration equal to 3.5 million cells/cm3). The titer of infectious activity of the virus was 9.63±0.10 lg TCD50/cm3.
На следующем этапе работы исследовали влияние температурного фактора на репродукцию штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в суспензионной культуре клеток линии ВНК-21 /SUSP/ ARRI АН в промышленных масштабах. Для этого репродукцию вируса проводили при следующих температурных условиях: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. Доза заражения культуры клеток вирусом составляла 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Водородный показатель рН вирусной суспензии поддерживали в диапазоне 7,45-7,65. Культивирование вируса проводили до ЦПД, равного не менее 85% (приоритет отдавали полной специфической деструкции клеток), в течение 11 -26 ч. По результатам анализа определили, что для полной репродукции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH оптимальной является температура среды 37,0±0,02°С, при которой в течение 11-12 ч наблюдается специфическая гибель клеток на 95-100%) с высоким накоплением 146S компонента (1,74±0,02 мкг/см3) и титром инфекционной активности вируса 9,63±0,10 lg ТЦД50/см3.At the next stage of the work, we studied the influence of the temperature factor on the reproduction of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in a suspension culture of cells of the BHK-21 /SUSP/ARRI AN line on an industrial scale. For this purpose, virus reproduction was carried out under the following temperature conditions: 35.0±0.2; 36.0±0.2; 37.0±0.2; 38.0±0.2°C. The dose of infection of the cell culture with the virus was 0.010-0.001 TCD 50 /cell. The pH value of the viral suspension was maintained in the range of 7.45-7.65. Cultivation of the virus was carried out to a CPE of at least 85% (priority was given to complete specific destruction of cells), for 11 -26 hours. Based on the results of the analysis, it was determined that for complete reproduction of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus in suspension For the BNK-21/SUSP/ARRIAH cell culture, the optimal temperature is 37.0±0.02°C, at which 95-100% specific cell death is observed within 11-12 hours with a high accumulation of the 146S component (1.74 ±0.02 μg/cm 3 ) and the titer of infectious activity of the virus is 9.63 ± 0.10 lg TCD 50 / cm 3 .
В ходе работы по изучению условий суспензионного культивирования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в промышленных масштабах с применением культуры клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH оценивали влияние дозы заражения клеток. Для этого клеточные суспензии заражали вирусом в разных дозах: 0,10-0,01; 0,01-0,001; 0,001-0,0001 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса осуществляли при температуре 37,0±0,2°С в течение 11-22 ч до цитопатического действия, равного не менее 90%. По итогам культивирования определяли концентрацию 146S частиц и титр инфекционной активности вируса ящура. Как видно из данных таблицы 2, наибольшее накопление 146S компонента отмечали при дозе заражения 0,010-0,001 ТЦД50/кл. (1,74±0,02 мкг/см3) с титром инфекционной активности вируса, равным 9,63±0,10 lg ТЦД50/см3.In the course of work to study the conditions for suspension cultivation of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” on an industrial scale using cell culture BHK-21/SUSP/ARRIAH, the effect of the dose of cell infection was assessed. To do this, cell suspensions were infected with the virus in different doses: 0.10-0.01; 0.01-0.001; 0.001-0.0001 TCD 50 /cl. Virus reproduction was carried out at a temperature of 37.0±0.2°C for 11-22 hours until the cytopathic effect was at least 90%. Based on the results of cultivation, the concentration of 146S particles and the titer of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus were determined. As can be seen from the data in Table 2, the greatest accumulation of the 146S component was observed at an infection dose of 0.010-0.001 TCD 50 /cell. (1.74±0.02 μg/cm 3 ) with a titer of infectious activity of the virus equal to 9.63±0.10 lg TCD 50 /cm 3 .
Таким образом, проведено изучение трех параметров суспензионного культивирования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в промышленных масштабах. Выявлены оптимальные условия репродукции штамма «О №2241/Эфиопия/2011» в суспензионной культуре клеток BHK-21/SUSP/ARRIAH: 1) концентрация клеток перед заражением - 3,5 млн кл./см3; 2) температурный режим культивирования -37,0±0,02°С; 3) доза заражения вирусом - 0,010-0,001 ТЦД50/кл.Thus, we studied three parameters of suspension cultivation of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 of foot-and-mouth disease virus in the suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH on an industrial scale. The optimal conditions for the reproduction of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in a suspension culture of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells were identified: 1) cell concentration before infection - 3.5 million cells/cm 3 ; 2) cultivation temperature -37.0±0.02°C; 3) dose of virus infection - 0.010-0.001 TCD 50 / cell.
Пример 5. Инактивация суспензии вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3.Example 5. Inactivation of a suspension of foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3.
По окончании цикла репродукции вируса ящура, не прекращая процесс термостатирования (37,0±0,02°С), в вируссодержащую суспензию добавляли подкисленный раствор аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) с рН, равным 8,2-8,6. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,030%. Инактивацию инфекционной активности вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 проводили в течение 12 часов при температуре 37,0±0,2°С и рН 7,45-7,65 с периодическим перемешиванием.At the end of the reproduction cycle of the foot-and-mouth disease virus, without stopping the thermostatting process (37.0±0.02°C), an acidified solution of aminoethylethylenimine (AEEI) with a pH of 8.2-8.6 was added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be equal to 0.030%. Inactivation of the infectious activity of the foot and mouth disease virus strain "O No. 2241/Ethiopia/2011" genotype O/EA-3 was carried out for 12 hours at a temperature of 37.0±0.2°C and pH 7.45-7.65 with periodic stirring.
Для определения времени полной инактивации после добавления 1,2-АЭЭИ каждый час производили отбор проб. Полученные образцы проверяли на наличие инфекционной активности вируса ящура в первичной культуре клеток почки свиньи СП. Результаты представлены в таблице 3, из данных которой видно, что полная инактивация вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011», репродуцированного в культиваторах, произошла через 6 часов после внесения инактиванта.To determine the time of complete inactivation after the addition of 1,2-AEEI, samples were taken every hour. The obtained samples were tested for the presence of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus in the primary culture of pig kidney cells SP. The results are presented in Table 3, from which it can be seen that complete inactivation of the foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”, reproduced in cultivators, occurred 6 hours after the addition of the inactivant.
Готовые вирусные инактивированные суспензии исследовали в РСК для оценки содержания в них компонентов вируса. Концентрация 146S компонента составила 1,67±0,02 мкг/см3, a 146S+75S компонента -2,29±0,02 мкг/см3.The prepared inactivated viral suspensions were examined at the RSC to assess the content of virus components in them. The concentration of the 146S component was 1.67±0.02 μg/cm 3 , and the 146S+75S component -2.29±0.02 μg/cm 3 .
Пример 6. Подбор условий очистки суспензии вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3.Example 6. Selection of conditions for purification of a suspension of foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3.
Суспензию вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3, полученную при репродукции в суспензионной клеточной линии ВНК-21 /SUSP/ARRIAH, подвергали инактивации и очистке. Для получения очищенного антигена вируса ящура использовали полигексаметиленгуанидин (ПГМГ) с концентрациями 0,010,0,013 и 0,016%. До и после процесса очистки антигена вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» в количественном варианте РСК определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов. Результаты анализа отражены в таблице 4, из которой следует, что в результате очистки антигена вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» с помощью ПГМГ в концентрации 0,010% отмечали снижение концентрации балластного белка на 10%, иммуногенных компонентов - на 1,5%. При использовании ПГМГ в концентрации 0,013% наблюдали снижение количества балластного белка на 29%, 146S компонента - на 3,2%. Применяя ПГМГ в концентрации 0,016% содержание балластного белка уменьшалось на 41%, а иммуногенных компонентов - на 13,4%.A suspension of foot and mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, obtained during reproduction in the suspension cell line BHK-21/SUSP/ARRIAH, was subjected to inactivation and purification. To obtain purified foot-and-mouth disease virus antigen, polyhexamethylene guanidine (PHMG) was used with concentrations of 0.010, 0.013 and 0.016%. Before and after the process of purifying the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” in the quantitative version of the RSC, the concentration of the total viral protein and immunogenic components was determined. The results of the analysis are reflected in Table 4, from which it follows that as a result of purification of the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” using PHMG at a concentration of 0.010%, a decrease in the concentration of ballast protein was noted by 10%, immunogenic components - by 1, 5%. When using PHMG at a concentration of 0.013%, a decrease in the amount of ballast protein by 29% and the 146S component by 3.2% was observed. Using PHMG at a concentration of 0.016%, the content of ballast protein decreased by 41%, and immunogenic components by 13.4%.
Таким образом, исследуя условия очистки антигена штамма «О №2241/Эфиопия/2011», пришли к выводу о том, что, с точки зрения экономической целесообразности, для получения очищенного продукта оптимально использовать ПГМГ с концентрацией 0,013%.Thus, having studied the conditions for purifying the antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”, we came to the conclusion that, from the point of view of economic feasibility, it is optimal to use PHMG with a concentration of 0.013% to obtain a purified product.
Пример 7. Подбор условий концентрирования суспензии антигена штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура генотипа О/ЕА-3.Example 7. Selection of conditions for concentrating an antigen suspension of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus genotype O/EA-3.
Культуральную инактивированною суспензию штамма «О №2241/Эфиопия/2011», полученную с применением суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH, подвергали концентрированию в 5 раз по объему. Для увеличения концентрации иммуногенных компонентов антигена вируса ящура использовали следующие приемы: 1) добавление полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 4 ч; 2) добавление полиэтиленгликоля с молекулярным весом 6000 Да (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 12 ч; 3) концентрирование с помощью установки тангенциальной фильтрации Centramate 500S Pall в течение 4 ч при рабочем давлении на фильтр 2,2-2,3 атм.A cultural inactivated suspension of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”, obtained using the suspension cell line BNK-21/SUSP/ARRIAH, was concentrated 5 times by volume. To increase the concentration of immunogenic components of the foot-and-mouth disease virus antigen, the following methods were used: 1) adding polyethylene glycol (PEG-6000) with a concentration of 50% to the antigen in a ratio of 1:4, with an exposure of 4 hours; 2) adding polyethylene glycol with a molecular weight of 6000 Da (PEG-6000) with a concentration of 50% to the antigen in a ratio of 1:4, with an exposure of 12 hours; 3) concentration using a tangential filtration unit Centramate 500S Pall for 4 hours at an operating pressure on the filter of 2.2-2.3 atm.
До и после процесса концентрирования суспензии антигена вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов в количественном варианте РСК. Результаты исследований представлены в таблице 5, из которой видно, что при концентрировании антигена штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура с помощью ПЭГ-6000 в течение 4 ч отмечали увеличение содержания компонентов по сравнению с исходными значениями (до концентрирования) в 3,0 раз. Используя тот же полимер, но повышая время воздействия до 12 ч, увеличили концентрацию компонентов вируса в 4 раза. Применяя метод концентрирования с помощью тангенциальной фильтрации, удалось увеличить количество иммуногенных компонентов антигена штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в суспензии в 4,8 раз. Таким образом, технология тангенциальной фильтрации позволила получить антиген штамма «О №2241/Эфиопия/2011» с высокой концентрацией структурных вирусных белков.Before and after the process of concentrating the suspension of the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241/Ethiopia/2011,” the concentration of the total viral protein and immunogenic components was determined in the quantitative version of the RSC. The research results are presented in Table 5, from which it can be seen that when concentrating the antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus using PEG-6000 for 4 hours, an increase in the content of components was noted compared to the initial values (before concentration) in 3.0 times. Using the same polymer, but increasing the exposure time to 12 hours, we increased the concentration of virus components by 4 times. Using the concentration method using tangential filtration, it was possible to increase the amount of immunogenic components of the antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of the foot-and-mouth disease virus in suspension by 4.8 times. Thus, tangential filtration technology made it possible to obtain the antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” with a high concentration of structural viral proteins.
Пример 8. Подбор адъюванта и соотношения антиген-адъювант.Example 8. Selection of adjuvant and antigen-adjuvant ratio.
Для изготовления противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины из антигена штамма «О №2241/Эфиопия/2011» в качестве адъюванта была выбран масляный адъювант Montanide ISA-61 VG. При изготовлении данного вакцинного препарата использовали масляный адъювант Montanide ISA-61 VG в количестве 60% по массе.To produce an anti-foot-and-mouth disease monovalent emulsion vaccine from the antigen of the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011,” Montanide ISA-61 VG oil adjuvant was chosen as an adjuvant. In the manufacture of this vaccine preparation, the oil adjuvant Montanide ISA-61 VG was used in an amount of 60% by weight.
Пример 9. Компоновка вакцины против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральной инактивированной эмульсионной.Example 9. Composition of a vaccine against foot and mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, cultural inactivated emulsion.
Из полученного концентрата антигена вируса ящура штамма «О №2241 /Эфиопия/2011» изготовили вакцину против ящура генотипа О/ЕА-3 культуральную инактивированную эмульсионную с применением в качестве адъювантов масляный адъювант Montanide ISA-61 VG. Количество 146S иммуногенного компонента в 1,0 см3 антигена составило 10,56±0,02 мкг/см3 (табл.5).From the resulting concentrate of the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “O No. 2241 / Ethiopia / 2011”, a cultural inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease genotype O/EA-3 was prepared using Montanide ISA-61 VG oil adjuvant as adjuvants. The amount of 146S immunogenic component in 1.0 cm 3 of antigen was 10.56 ± 0.02 μg/cm 3 (Table 5).
Пример 10. Иммунизация животных вакциной против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральной инактивированной эмульсионной.Example 10. Immunization of animals with a vaccine against foot and mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, cultural inactivated emulsion.
Из полученной вакцины против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральной инактивированной эмульсионной (предлагаемое изобретение) был приготовлен ряд разведений для свиней с 5-ти кратным шагом. 15 голов свиней разделили на 3 группы по 5 голов в каждой. Иммунизирующая доза составляла 2,0 см3. Первую группу животных (№№1-5) иммунизировали вакциной без разведения, вторую группу свиней (№№6-10) привили вакциной, разведенной 1/5, третья группа животных (№№11-15) - вакциной, разведенной 1/25. Препарат вводили внутримышечно в среднюю треть шеи. В качестве контроля вируса оставили 2 головы без вакцинации.From the resulting vaccine against foot and mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, a cultural inactivated emulsion (the proposed invention), a series of dilutions were prepared for pigs in 5-fold increments. 15 pigs were divided into 3 groups of 5 pigs each. The immunizing dose was 2.0 cm 3 . The first group of animals (No. 1-5) were immunized with the vaccine without dilution, the second group of pigs (No. 6-10) were vaccinated with the vaccine diluted 1/5, the third group of animals (No. 11-15) with the vaccine diluted 1/25 . The drug was administered intramuscularly into the middle third of the neck. As a control for the virus, 2 heads were left without vaccination.
Пример 11. Исследование сывороток крови вакцинированных животных на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура.Example 11. Study of blood sera of vaccinated animals for the presence of antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus.
Сыворотки крови от свиней, полученные до иммунизации и через 14 суток после иммунизации, исследовали на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура с помощью блокирующего варианта иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с рекомендациями OIE (МЭБ) [3]. Тестирование полученных сывороток проводили с использованием тест-системы для ИФА «Prio CHECK®FMDV NSP ELISA for in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs» (Prionics Lelystad B.V., Нидерланды). Полученные результаты исследований отражены в таблице 6, из которой видно, что сыворотки крови животных не содержали антител к неструктурным белкам вируса ящура (значения PI для сывороток крови свиней 50%).Blood sera from pigs obtained before immunization and 14 days after immunization were examined for the presence of antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus using a blocking enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in accordance with OIE recommendations [3]. The obtained sera were tested using the ELISA test system “Prio CHECK ® FMDV NSP ELISA for in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs” (Prionics Lelystad BV, the Netherlands). The research results obtained are reflected in Table 6, from which it can be seen that the animal blood sera did not contain antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus (PI values for pig blood sera 50%).
Пример 12. Оценка авирулентности и безвредности вакцины против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральной инактивированной эмульсионной (предлагаемое изобретение).Example 12. Assessment of the avirulence and safety of the vaccine against foot-and-mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, cultural inactivated emulsion (the proposed invention).
Для определения авирулентности вакцины для свиней отобранную пробу вакцинного препарата вводили внутрикожно по 0,1 см3. В исследовании использовали свиней массой 30-40 кг. В течение 10 суток наблюдения животные остались клинически здоровыми, и при патологоанатомическом исследовании не было обнаружено изменений, характерных для ящура. Это свидетельствовало об отсутствии вирулентных свойств разработанной вакцины.To determine the avirulence of the vaccine for pigs, a selected sample of the vaccine preparation was injected intradermally at 0.1 cm 3 . The study used pigs weighing 30-40 kg. During 10 days of observation, the animals remained clinically healthy, and the pathological examination did not reveal any changes characteristic of foot-and-mouth disease. This indicated the absence of virulent properties of the developed vaccine.
Контроль безвредности продукта на животных проводили путем внутримышечного введения вакцины в дозе 6,0 см3 (тройная доза по 2,0 см3). Срок наблюдения также составлял 10 суток. Следует отметить, что после иммунизации температура тела животного может повышаться до 41,7°С и удерживаться на этом уровне в течение 1-2 суток, что не выходит за рамки нормы после введения вакцинного препарата.Control of the safety of the product in animals was carried out by intramuscular injection of the vaccine at a dose of 6.0 cm 3 (triple dose of 2.0 cm 3 ). The observation period was also 10 days. It should be noted that after immunization, the animal’s body temperature can rise to 41.7°C and remain at this level for 1-2 days, which does not go beyond the norm after administration of the vaccine preparation.
По результатам исследований вакцина против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральная инактивированная эмульсионная (предлагаемое изобретение) была признана безвредной, все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.According to the research results, the vaccine against foot and mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, cultural inactivated emulsion (the proposed invention) was found to be harmless, all animals during the observation period remained clinically healthy, with pathological analysis of tissue necrosis in situ no vaccine administration was detected.
Пример 13. Изучение иммуногенных свойств вакцины против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральной инактивированной эмульсионной (предлагаемое изобретение) по способности индуцирования вируснейтрализующих антителу естественно восприимчивых животных.Example 13. Study of the immunogenic properties of the vaccine against foot-and-mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 cultural inactivated emulsion (the proposed invention) for the ability to induce virus-neutralizing antibodies in naturally susceptible animals.
На 21 сутки после введения вакцины против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральной инактивированной эмульсионной (предлагаемое изобретение) у свиней отбирали кровь и проводили исследование полученных сывороток крови в реакции микронейтрализации [3]. Выявлено, что у свиней, иммунизированных вакциной в цельной дозе (5 голов), средние значения титра антител составили 7,85±0,22 log2 SN50, с разведением 1/5 (5 голов) - 4,95±0,33 log2 SN50, с разведением 1/25 (5 голов) - 3,35±0,49 log2 SN50 (табл.7). Полученные данные РМН свидетельствуют о том, что после введения вакцины в цельном виде обеспечивается формирование гуморального иммунитета с защитными титрами штаммоспецифических антител (5,5 и более log2 SN50), что соответствует требованиям международных стандартов [3].On the 21st day after the administration of the vaccine against foot and mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, cultural inactivated emulsion (the proposed invention), blood was taken from pigs and the resulting blood sera were studied in a microneutralization reaction [3]. It was revealed that in pigs immunized with the vaccine in a whole dose (5 heads), the average antibody titer was 7.85±0.22 log 2 SN 50 , with a dilution of 1/5 (5 heads) - 4.95±0.33 log 2 SN 50 , with dilution 1/25 (5 heads) - 3.35±0.49 log 2 SN 50 (Table 7). The RMN data obtained indicate that after administration of the vaccine in its entirety, the formation of humoral immunity with protective titers of strain-specific antibodies (5.5 or more log 2 SN 50 ) is ensured, which meets the requirements of international standards [3].
Пример 14. Изучение защитной способности вакцины против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральной инактивированной эмульсионной (предлагаемое изобретение) на естественно восприимчивых видах животных, методом контрольного заражения.Example 14. Study of the protective ability of a vaccine against foot-and-mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3, a cultural inactivated emulsion (the proposed invention) on naturally susceptible animal species, using the challenge method.
Свиньи, иммунизированные в количестве 15 голов, вакциной в цельном виде и в разведениях, заражали контрольным штаммом «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура, адаптированного к этим животным в дозе 104,0 ИД50/0,20 см3 (в две точки по 0,10±0,05 см3). Защищенными от ящура считали животных, у которых на конечностях отсутствовали поражения. Первичные афты не учитывали. Спустя 7 суток после заражения всех животных подвергли эвтаназии и провели патологоанатомический осмотр.Pigs immunized in the amount of 15 heads with the vaccine in whole form and in dilutions were infected with the control strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” of genotype O/EA-3 of the foot-and-mouth disease virus, adapted to these animals at a dose of 10 4.0 ID 50 / 0.20 cm 3 (in two points of 0.10 ± 0.05 cm 3 ). Animals that had no lesions on their limbs were considered protected from foot and mouth disease. Primary aphthae were not taken into account. 7 days after infection, all animals were euthanized and a postmortem examination was performed.
Результаты контрольного заражения представлены в таблице 7, из которой следует, что вакцина против ящура из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 культуральная инактивированная эмульсионная (предлагаемое изобретение) в цельном виде, а также в разведении 1/5, введенная в однократной дозе (2,0 см3) защищает свиней от заражения гомологичным штаммом всех животных (5 из 5 голов). После заражения свиней, инокулированных вакциной в разведении 1/25, из 5 голов заболела 1 (здоровых 4 из 5).The results of the control infection are presented in Table 7, from which it follows that the vaccine against foot and mouth disease from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 is a cultural inactivated emulsion (the proposed invention) in whole form, as well as in dilution 1/ 5, administered in a single dose (2.0 cm 3 ), protects pigs from infection with a homologous strain of all animals (5 out of 5 heads). After infection of pigs inoculated with the vaccine at a dilution of 1/25, 1 out of 5 pigs fell ill (4 out of 5 healthy ones).
По результатам контрольного заражения было установлено, что в прививном объеме данной вакцины содержится 40,52 ПД50 и 0,05 ИмД50 для свиней.Based on the results of the control infection, it was found that the vaccination volume of this vaccine contains 40.52 PD 50 and 0.05 ImD 50 for pigs.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральная инактивированная эмульсионная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена как резервная для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина, изготовленная из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического штамма вируса ящура серотипа О, генотипа О/ЕА-3.Thus, the above information indicates that the cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”, embodying the proposed invention, is intended as a reserve for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology; the possibility of implementing the presented has been confirmed; the vaccine made from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” genotype O/EA-3 in accordance with the invention has high immunogenic activity and is capable of providing effective protection of susceptible animals against the epizootic strain of foot-and-mouth disease virus serotype O, genotype O/EA- 3.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральная инактивированная эмульсионная»:Sources of information taken into account when compiling a description of the invention for the application for a RF patent for the invention “Vaccine against foot-and-mouth disease genotype O/EA-3 from the strain “O No. 2241/Ethiopia/2011”, cultural inactivated emulsion”:
1. Ящур. Меры профилактики. URL: http://89.rospotrebnadzor.ru/directions/epid_nadzor/146902 (Дата обращения: 13.02.2023).1. Foot and mouth disease. Prevention measures. URL: http://89.rospotrebnadzor.ru/directions/epid_nadzor/146902 (Access date: 02/13/2023).
2. Опасность болезни ящура. URL: https://vet.astrobl.ru/press-release/opasnost-bolezni-yashchura (Дата обращения: 01.02.2023).2. The danger of foot and mouth disease. URL: https://vet.astrobl.ru/press-release/opasnost-bolezni-yashchura (Access date: 02/01/2023).
3. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals -24th Ed. - Paris, 2015 - Vol.1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.3. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals -24th Ed. - Paris, 2015 - Vol.1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
4. Бурдов A.H., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.4. Burdov A.N., Dudnikov A.I., Malyarets P.V. and others. Foot and mouth disease. - M.: Agropromizdat, 1990. - 320 p.
5. Пономарев А. П., Узюмов В. Л., Груздев К. Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. - Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с. 5. Ponomarev A.P., Uzyumov V.L., Gruzdev K.N. Foot-and-mouth disease virus: structure, biological and physicochemical properties. - Vladimir: Folio, 2006. - 250 p.
6. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.6. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M./ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
7. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateies: Proc. Jnt. Symp.2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p.13-21.7. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strategies: Proc. Jnt. Symp.2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p.13-21.
8. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J. M. Pachecoa, T. Doel [et.al.] // Vaccine. -December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.8. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J. M. Pachecoa, T. Doel [et.al.] // Vaccine. -December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.
9. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.9. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M./ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
10. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.10. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
11. Официальный сайт The FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm (Дата обращения 04.05.2023).11. Official website of The FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm (Access date 05/04/2023).
12. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - P. 746-754.12. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - P. 746-754.
13. Рахманов A.M. Современная эпизоотическая ситуация в мире по ящуру и меры ее контроля //Ветеринарная медицина м!жвщ. тем. наук. Харюв, 2013.-С.37-38.13. Rakhmanov A.M. Current epizootic situation in the world regarding foot and mouth disease and measures for its control // Veterinary medicine m! topics Sci. Kharyuv, 2013.-P.37-38.
14. Longjam N., Тауо Т. Antigenic variation of Foot and Mouth Disease Virus // Vet. World. - 2011. - Vol.4(10). - P. 475-479.14. Longjam N., Tauo T. Antigenic variation of Foot and Mouth Disease Virus // Vet. World. - 2011. - Vol.4(10). - P. 475-479.
15. Paton D.J., Sumption K.J., Charleston B. Options for control of foot-and-mouth disease: knowledge, capability and policy/ Phil. Trans. R. Soc. В (2009) 364. - P. 2657-2667.15. Paton D.J., Sumption K.J., Charleston B. Options for control of foot-and-mouth disease: knowledge, capability and policy/ Phil. Trans. R. Soc. In (2009) 364. - P. 2657-2667.
16. Патент №2 665 849 Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О / Заявка: 2017144155, 2017.12.15. Опубликовано: 2018.09.04.16. Patent No. 2 665 849 Inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O / Application: 2017144155, 2017.12.15. Published: 2018.09.04.
17. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.17. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
18. Методические рекомендации по определению концентрации 146S, 75S, 12S компонентов вакцинных штаммов культурального вируса ящура в реакции связывания комплемента (РСК) / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Утв. 21.09.17.18. Methodological recommendations for determining the concentration of 146S, 75S, 12S components of vaccine strains of cultural foot-and-mouth disease virus in the complement fixation reaction (FRR) / Federal State Budgetary Institution "ARRIAH". - Approved 09.21.17.
19. Методические указания по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации: утв. Россельхознадзором 13.09.2017 / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир: 2017. - 24 с. 19. Guidelines for determining antigenic correspondence between epizootic isolates and production strains of foot-and-mouth disease virus in a cross-microneutralization reaction: approved. Rosselkhoznadzor 09/13/2017 / FSBI "ARRIAH". - Vladimir: 2017. - 24 p.
20. Saitou N. and Nei М. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution 4:406-42.20. Saitou N. and Nei M. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution 4:406–42.
21. Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap.Evolution 39:783-791.21. Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap. Evolution 39:783-791.
22. Tamura K., Nei M., and Kumar S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 101:11030-11035.22. Tamura K., Nei M., and Kumar S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 101:11030–11035.
23. Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C, and Tamura K. (2018). MEGA 6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution 35:1547-1549.23. Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C., and Tamura K. (2018). MEGA 6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution 35:1547–1549.
--->--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="FMD vaccine strain <ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="FMD vaccine strain
O 2241.xml" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2" O 2241.xml" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2"
productionDate="2023-06-03">productionDate="2023-06-03">
<ApplicationIdentification> <ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-06-03</FilingDate> <FilingDate>2023-06-03</FilingDate>
</ApplicationIdentification> </ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>509</ApplicantFileReference> <ApplicantFileReference>509</ApplicantFileReference>
<EarliestPriorityApplicationIdentification> <EarliestPriorityApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-06-03</FilingDate> <FilingDate>2023-06-03</FilingDate>
</EarliestPriorityApplicationIdentification> </EarliestPriorityApplicationIdentification>
<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ "Федеральный центр охраны <ApplicantName languageCode="ru">FSBI "Federal Security Center"
здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ")</ApplicantName>animal health" (FSBI "ARRIAH")</ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>FGBI "ARRIAH"</ApplicantNameLatin> <ApplicantNameLatin>FGBI "ARRIAH"</ApplicantNameLatin>
<InventorName languageCode="ru">Доронин Максим <InventorName languageCode="ru">Doronin Maxim
Игоревич</InventorName>Igorevich</InventorName>
<InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin> <InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Вакцина против ящура генотипа <InventionTitle languageCode="en">Vaccine against foot and mouth disease genotype
O/EA-3 из штамма «О №2241/Эфиопия/2011» культуральная O/EA-3 from strain “O No. 2241/Ethiopia/2011” cultural
инактивированная эмульсионная</InventionTitle>inactivated emulsion</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity> <SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1"> <SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq> <INSDSeq>
<INSDSeq_length>639</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>639</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature> <INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..639</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..639</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>
<INSDQualifier> <INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q1"> <INSDQualifier id="q1">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>
</INSDFeature> </INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>accacctccccaggcgaatcggccgaccctgtgactgccaccgtcgaaa <INSDSeq_sequence>accacctccccaggcgaatcggccgaccctgtgactgccaccgtcgaaa
actacggcggtgagacacaggcccagaggcgccaacacacggacgtctcgttcattcttgacagatttgtactacggcggtgagacacaggcccagaggcgccaacacacggacgtctcgttcattcttgacagatttgt
gaaggtaacaccaaaagaccaaatcaatgtgctggacttgatgcagacccctgctcacacgctggttggagaaggtaacaccaaaagaccaaatcaatgtgctggacttgatgcagacccctgctcacacgctggttgga
gcgctccttcgcactgccacttactacttcgcagatttagaagtggcggtgaaacacgaggggaacctcagcgctccttcgcactgccacttactacttcgcagatttagaagtggcggtgaaacacgaggggaacctca
catgggtccctaacggagcaccagaatcagctctggacaacaccaccaatccaacagcctaccacaaggccatgggtccctaacggagcaccagaatcagctctggacaacaccaccaatccaacagcctaccacaaggc
accacttactagacttgccttgccctacacggcaccacaccgcgtgttggcaaccgtttacaacggaaacaccacttactagacttgccttgccctacacggcaccacaccgcgtgttggcaaccgtttacaacggaaac
tgcaagtatggtgagacgttggcgtccaacgtgaggggcgatctccaggtgttggcccagaaggcggcgatgcaagtatggtgagacgttggcgtccaacgtgaggggcgatctccaggtgttggcccagaaggcggcga
gaccgctgcccacctctttcaactacggcgccatcaaggctacgcgggtgactgaattgctttaccgcatgaccgctgcccacctctttcaactacggcgccatcaaggctacgcgggtgactgaattgctttaccgcat
gaagagggctgaaacatactgcccacggcccctgttggccgttcacccaagcgaggccaggcacaagcaggaagagggctgaaacatactgcccacggccctgttggccgttcacccaagcgaggccaggcacaagcag
aagatagtggcgcctgtgaagcaactcctg</INSDSeq_sequence>aagatagtggcgcctgtgaagcaactcctg</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq> </INSDSeq>
</SequenceData> </SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="2"> <SequenceData sequenceIDNumber="2">
<INSDSeq> <INSDSeq>
<INSDSeq_length>213</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>213</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature> <INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..213</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..213</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>
<INSDQualifier> <INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2"> <INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>
</INSDFeature> </INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>TTSPGESADPVTATVENYGGETQAQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQIN <INSDSeq_sequence>TTSPGESADPVTATVENYGGETQAQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQIN
VLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPESALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPESALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPY
TAPHRVLATVYNGNCKYGETLASNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRTAPHRVLATVYNGNCKYGETLASNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPR
PLLAVHPSEARHKQKIVAPVKQLL</INSDSeq_sequence>PLLAVHPSEARHKQKIVAPVKQLL</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq> </INSDSeq>
</SequenceData> </SequenceData>
</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>
<---<---
Claims (3)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2816264C1 true RU2816264C1 (en) | 2024-03-28 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2851513C1 (en) * | 2025-03-26 | 2025-11-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | Strain "o/ea-3/tunisia/2019" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype o for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019021305A1 (en) * | 2017-07-24 | 2019-01-31 | Ella Foundation | Vaccine against foot-and-mouth disease |
| RU2772713C1 (en) * | 2021-05-12 | 2022-05-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from strain a 2205/g iv cultural inactivated emulsion |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019021305A1 (en) * | 2017-07-24 | 2019-01-31 | Ella Foundation | Vaccine against foot-and-mouth disease |
| RU2772713C1 (en) * | 2021-05-12 | 2022-05-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from strain a 2205/g iv cultural inactivated emulsion |
| RU2804803C1 (en) * | 2023-05-11 | 2023-10-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated emulsion vaccine against fmd of o/sea/mya-98 genotype from o n2383/primorsky/2019 strain |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| А.А. Сидорчук История создания вакцин и вакцинации. Часть V. Ящур, РВЖ N 2(6)/2020 с.27-30. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2851513C1 (en) * | 2025-03-26 | 2025-11-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | Strain "o/ea-3/tunisia/2019" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype o for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2603003C1 (en) | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 | |
| RU2816264C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against o/ea-3 genotype foot-and-mouth disease of o n2241/ethiopia/2011 strain | |
| RU2815537C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease from o no. 2620/orenburgsky/2021 strain of o/me-sa/ind-2001e genotype | |
| RU2804803C1 (en) | Culture inactivated emulsion vaccine against fmd of o/sea/mya-98 genotype from o n2383/primorsky/2019 strain | |
| RU2817381C1 (en) | Cultural inactivated sorbed vaccine against foot-and-mouth disease from the strain "a/egypt/euro-sa/2022" | |
| RU2810131C1 (en) | CULTURE INACTIVATED SORBED VACCINE AGAINST FOOT AND MOUTH DISEASE OF O/ME-SA/PanAsia2ANT-10 GENOTYPE FROM O N2356/PAKISTAN/2018 STRAIN | |
| RU2804875C1 (en) | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-2/vii genotype from sat-2/eritrea/1998 strain | |
| RU2815536C1 (en) | Culture inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease from a/tanzania/2013 strain of a/africa/g-i genotype | |
| RU2816944C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease serotype o from strain "o/arriah/mya-98" | |
| RU2815534C1 (en) | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-1/i genotype from sat-1/tanzania/2012 strain | |
| RU2815541C1 (en) | Culturally inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease of sat-2/iv genotype | |
| RU2809219C1 (en) | Culturally inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease of sat-1/nwz genotype | |
| RU2802192C1 (en) | Inactivated sorbed vaccine against fmd of o/ea-2 genotype from o/kenya/2017 strain culture | |
| RU2810132C1 (en) | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-1/x genotype from sat-1/nigeria/2015 strain | |
| RU2837673C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease of genotype sat-2/vii/ghb-12 from strain "sat-2/north america/2012" cultural inactivated emulsion | |
| RU2799605C1 (en) | FMD CULTURE INACTIVATED SORBED VACCINE FROM A/Iran/2018 STRAIN OF A/ASIA/Iran-05SIS-13 NEW GENOTYPE | |
| RU2847817C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine for early protection against foot-and-mouth disease genotype sat-1/x | |
| RU2850550C1 (en) | Vaccine against sat-2/iv genotype culture inactivated emulsion | |
| RU2839345C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of sat-3/v genotype from "sat-3/uganda/v" strain | |
| RU2848211C1 (en) | Culture-inactivated emulsion vaccine for early protection against sat-3/v foot-and-mouth disease | |
| RU2824660C1 (en) | Culture inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of sat-2/xiv genotype from sat-2/xiv/2023 strain | |
| RU2847822C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth disease genotype o/ea-2, monovalent, inactivated, emulsion | |
| RU2824662C1 (en) | Culture inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of asia-1/g-v genotype from asia-1/g-v/2006 strain | |
| RU2850549C1 (en) | Vaccine against sat-1/ix genotype culture inactivated emulsion | |
| RU2835906C1 (en) | Inactivated cultural sorbed vaccine against foot-and-mouth disease of genotype sat-2/xiv from strain "sat-2/xiv/2023" |