RU2815029C1 - N-(guanidinoalkyl) amides of eremomycin and their use for treating bacterial infections - Google Patents
N-(guanidinoalkyl) amides of eremomycin and their use for treating bacterial infections Download PDFInfo
- Publication number
- RU2815029C1 RU2815029C1 RU2022124658A RU2022124658A RU2815029C1 RU 2815029 C1 RU2815029 C1 RU 2815029C1 RU 2022124658 A RU2022124658 A RU 2022124658A RU 2022124658 A RU2022124658 A RU 2022124658A RU 2815029 C1 RU2815029 C1 RU 2815029C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- eremomycin
- amide
- acid
- biofilms
- vancomycin
- Prior art date
Links
- 108010013356 eremomycin Proteins 0.000 title claims abstract description 73
- UECIPBUIMXSXEI-UHFFFAOYSA-N eremomycin Natural products C=1C2=CC=C(O)C=1C1=C(O)C=C(O)C=C1C(C(O)=O)NC(=O)C1NC(=O)C2NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC(C=3OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4OC(C)C(O)C(C)(N)C4)=CC2=CC=3OC(C=C2)=CC=C2C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 UECIPBUIMXSXEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 title claims description 8
- UECIPBUIMXSXEI-BNSVOVDNSA-N eremomycin Chemical compound O([C@@H]1C2=CC=C(C=C2)OC=2C=C3C=C(C=2O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(N)C2)OC2=CC=C(C=C2Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]2C(=O)N[C@@H]1C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 UECIPBUIMXSXEI-BNSVOVDNSA-N 0.000 title abstract description 86
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 title description 6
- -1 eremomycin amide Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims abstract description 4
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 244000000059 gram-positive pathogen Species 0.000 claims abstract description 3
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 3
- 150000002357 guanidines Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 claims description 3
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 11
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 32
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 22
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 21
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 14
- MXDAOHAPVWZSQU-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethyl)guanidine Chemical compound NCCNC(N)=N MXDAOHAPVWZSQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VOZVRYIICBLLOH-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethyl(diaminomethylidene)azanium;chloride Chemical compound Cl.NCCN=C(N)N VOZVRYIICBLLOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 6
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- KYJBBNCBVZZHOA-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethyl)guanidine;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.NCCN=C(N)N KYJBBNCBVZZHOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000032770 biofilm formation Effects 0.000 description 4
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 4
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 2
- SXLTUPBFHKJHDE-UHFFFAOYSA-N 1-(2-aminoethyl)-2-methylguanidine;hydrochloride Chemical compound Cl.CN=C(N)NCCN SXLTUPBFHKJHDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZFMFIPOLMVKFRN-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropyl(carbamimidoyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].NCCC[NH2+]C(N)=N ZFMFIPOLMVKFRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 2
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 2
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLBCFQKAUUKVGC-UHFFFAOYSA-N 1-(2-aminoethyl)-2-methylguanidine Chemical compound CN=C(N)NCCN WLBCFQKAUUKVGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRGLZNWEJGKYHH-UHFFFAOYSA-N 2-(3-aminopropyl)guanidine Chemical compound NCCCNC(N)=N WRGLZNWEJGKYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AAYJGYMODPPAIC-UHFFFAOYSA-N 2-(3-aminopropyl)guanidine;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.NCCCNC(N)=N AAYJGYMODPPAIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001430312 Amycolatopsis orientalis Species 0.000 description 1
- 239000004184 Avoparcin Substances 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000194030 Enterococcus gallinarum Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010056430 Staphylococcal sepsis Diseases 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000005840 aryl radicals Chemical class 0.000 description 1
- 108010053278 avoparcin Proteins 0.000 description 1
- JWFVWARSGMYXRN-HTQQBIQNSA-N avoparcin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@H]2C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C4=CC(O)=CC(O)=C4C=4C(O)=CC=C3C=4)C(O)=O)=O)CC3=C(O[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@H](N)C4)C=C(C(=C3)Cl)OC=3C=C2C=C(C=3O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@H](N)C2)OC2=CC=C1C=C2)C=1C=CC(O)=CC=1)=O)NC(=O)[C@@H](NC)C=1C=CC(O[C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)O)=CC=1)[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O JWFVWARSGMYXRN-HTQQBIQNSA-N 0.000 description 1
- 229950001335 avoparcin Drugs 0.000 description 1
- 235000019377 avoparcin Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N chembl3301825 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)C(O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 229920000912 exopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000286 phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010206 sensitivity analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 230000006098 transglycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000005918 transglycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- HABDXNKVAIZXKJ-XTTLPDOESA-N vancocin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 HABDXNKVAIZXKJ-XTTLPDOESA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Область техникиField of technology
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается структуры новых производных гликопептидного антибиотика эремомицина, содержащих гуанидиновый фрагмент, соединенный алкильным линкером с атомом азота С-концевой амидной группы эремомицина, их действия на планктонные формы и биопленки, грамположительными бактериями, а также их медицинского применения для лечения бактериальных инфекций.The invention relates to the pharmaceutical industry and concerns the structure of new derivatives of the glycopeptide antibiotic eremomycin, containing a guanidine fragment connected by an alkyl linker to the nitrogen atom of the C-terminal amide group of eremomycin, their effect on planktonic forms and biofilms, gram-positive bacteria, as well as their medical use for the treatment of bacterial infections.
Уровень техникиState of the art
Ванкомицин (1) - гликопептидный антибиотик, применяемый как препарат резерва для лечения тяжелых бактериальных инфекций, прежде всего вызванных резистентными к противомикробным средствам грамположительными бактериями, например метициллин-резистентным Staphylococcus aureus (MRSA). Антибактериальная активность ванкомицина, как и других гликопептидных антибиотиков, основана на способности ингибировать стадии транспептидации и трасгликозилирования синтеза муреина бактериальной клеточной стенки [С. Watanakunakorn. J. Antimicrob. Chemother., 1984, 14, 7].Vancomycin (1) is a glycopeptide antibiotic used as a reserve drug for the treatment of severe bacterial infections, primarily caused by antimicrobial-resistant gram-positive bacteria, such as methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). The antibacterial activity of vancomycin, like other glycopeptide antibiotics, is based on the ability to inhibit the transpeptidation and transglycosylation stages of murein synthesis in the bacterial cell wall [C. Watanakunakorn. J. Antimicrob. Chemother., 1984, 14, 7].
Активное распространение резистентных к гликопептидам энтерококков VRE (Vancomycin-Resistant Enterococci) и стафилококков GISA (Glycopeptide-Intermediate S. aureus), вызванное широким применением ванкомицина (в медицине) и авопарцина (в ветеринарии), обуславливает необходимость создания новых гликопетидов, активных в отношении резистентных штаммов бактерий [WHO, Global Priority List of Antibiotic-Resistant Bacteria to Guide Research, Discovery, and Development of New Antibiotics, 2017].The active spread of glycopeptide-resistant enterococci VRE (Vancomycin-Resistant Enterococci) and staphylococci GISA (Glycopeptide-Intermediate S. aureus), caused by the widespread use of vancomycin (in medicine) and avoparcin (in veterinary medicine), necessitates the creation of new glycopetides active against resistant bacterial strains [WHO, Global Priority List of Antibiotic-Resistant Bacteria to Guide Research, Discovery, and Development of New Antibiotics, 2017].
Показано, что химическая модификация гликопептидов, в том числе по С-концевой карбоксильной группе пептидного кора, позволяет преодолеть перекрестную резистентность к природным гликопептидам, а также снизить значительные побочные эффекты природных антибиотиков [D. Kahne et al. Chem. Rev., 2005, 105, 425; E.N. Olsufyeva, A.N. Tevyashova. Curr. Topics in Med. Chem., 2017, 17, 2166].It has been shown that chemical modification of glycopeptides, including the C-terminal carboxyl group of the peptide core, allows one to overcome cross-resistance to natural glycopeptides, as well as reduce significant side effects of natural antibiotics [D. Kahne et al. Chem. Rev., 2005, 105, 425; E.N. Olsufyeva, A.N. Tevyashova. Curr. Topics in Med. Chem., 2017, 17, 2166].
Эремомицин (2) - гликопептидный антибиотик, близкий по структуре к ванкомицину, отличительной особенностью которого является дисахарид, состоящий из β-D-глюкозы и эремозамина, а также эремозамин, присоединенный к 6 аминокислотному остатку [Г.Ф. Гаузе и др. Антибиотики и химиотерапия, 1989, 5, 348].Eremomycin (2) is a glycopeptide antibiotic, similar in structure to vancomycin, the distinctive feature of which is a disaccharide consisting of β-D-glucose and eremosamine, as well as eremosamine attached to the 6th amino acid residue [G.F. Gause et al. Antibiotics and chemotherapy, 1989, 5, 348].
Эремомицин (2) в экспериментах in vitro и in vivo в 3-5 раз более активен, чем ванкомицин в отношении большинства значимых для клиники грамположительных бактерий, включая MRSA, а также обладает менее выраженными побочными эффектами [I.V. Malkova. Antibiot. Chemother., 1989, 34, 52; Патент РФ 2641912; Патент РФ 2661613]. Полусинтетические производные эремомицина также имеют преимущества в биологических свойствах перед аналогичными производными ванкомицина [K.R. Maples ei al. J. Med. Chem., 2007, 50, 3681]. Кроме того, для ряда амидов эремомицина отмечено боле низкое псевдоаллергическое действие по сравнению с эремомицином [Olsufyeva E.N., et al. Drug Design Devel. Ther., 2018, 12, 2875; Патент РФ №2641912].Eremomycin (2) in in vitro and in vivo experiments is 3-5 times more active than vancomycin against most clinically significant gram-positive bacteria, including MRSA, and also has less pronounced side effects [I.V. Malkova. Antibiot. Chemother., 1989, 34, 52; RF Patent 2641912; RF Patent 2661613]. Semi-synthetic derivatives of eremomycin also have advantages in biological properties over similar vancomycin derivatives [K.R. Maples ei al. J. Med. Chem., 2007, 50, 3681]. In addition, a number of eremomycin amides showed a lower pseudoallergic effect compared to eremomycin [Olsufyeva E.N., et al. Drug Design Devel. Ther., 2018, 12, 2875; RF Patent No. 2641912].
Традиционный скрининг разрабатываемых антимикробных средств базируется на определении активности по отношению к свободно живущим микроорганизмам. Однако патогенные бактерии зачастую могут формировать биопленки, как в естественной среде, так и в клинических условиях. В такой форме метаболическая активность и чувствительность патогена к антибиотикам значительно отличается от планктонной формы [Н. Boudarel, J.D. Mathias, B. Blaysat, et al. npj Biofilms Microbiomes. 2018, 4, 17]. Поскольку бактерии в биопленке более устойчивы к действию антибиотиков, при создании эффективных антимикробных средств, необходимо исследовать способность новых соединений разрушать биопленки. Более того, известно, что ванкомицин в субингибирующих концентрациях способен стимулировать формирование биопленок [J.В. Kaplan Int. J. Art. Org., 2011, 34, 737], что также следует учитывать при разработке новых производных гликопептидных антибиотиков. Лишь для некоторых производных ванкомицина продемонстрирована способность к подавлению роста биопленок [I.S. Shchelik, et.al., ACS Med. Chem. Lett., 2021, 12, 1898], однако исследование их влияния в субингибирующих концентрациях на стимуляцию формирования биопленок не проведено.Traditional screening of antimicrobial agents under development is based on determining activity against free-living microorganisms. However, pathogenic bacteria can often form biofilms, both in the natural environment and in clinical settings. In this form, the metabolic activity and sensitivity of the pathogen to antibiotics differs significantly from the planktonic form [N. Boudarel, J.D. Mathias, B. Blaysat, et al. npj Biofilms Microbiomes. 2018, 4, 17]. Since bacteria in biofilms are more resistant to antibiotics, the ability of new compounds to destroy biofilms must be investigated when developing effective antimicrobial agents. Moreover, it is known that vancomycin in subinhibitory concentrations is able to stimulate the formation of biofilms [J.V. Kaplan Int. J. Art. Org., 2011, 34, 737], which should also be taken into account when developing new derivatives of glycopeptide antibiotics. Only some vancomycin derivatives have demonstrated the ability to inhibit biofilm growth [I.S. Shchelik, et.al., ACS Med. Chem. Lett., 2021, 12, 1898], however, a study of their effect in subinhibitory concentrations on stimulating biofilm formation has not been carried out.
Раскрытие изобретенияDisclosure of the Invention
Целью настоящего изобретения ставится создание более эффективных антибактериальных средств на основе эремомицина. Неожиданно было обнаружено, что введение гуанидиноалкильного фрагмент по атому азота С-концевой амидной группы амида эремомицина позволяет получить производные, действующее как на планктонные формы, так и биопленки, формируемые чувствительными и резистентными к гликопептидам штаммами патогенов. Настоящее изобретение включает соединения, соответствующие формуле 3, их фармакологически приемлемые соли, действующие на антибиотикорезистентные формы возбудителей бактериальных инфекций, прежде всего, на штаммы MRSA, GISA и VRE.The purpose of the present invention is to create more effective antibacterial agents based on eremomycin. It was unexpectedly discovered that the introduction of a guanidinoalkyl fragment at the nitrogen atom of the C-terminal amide group of eremomycin amide makes it possible to obtain derivatives that act on both planktonic forms and biofilms formed by pathogen strains sensitive and resistant to glycopeptides. The present invention includes compounds corresponding to formula 3, their pharmacologically acceptable salts, acting on antibiotic-resistant forms of pathogens of bacterial infections, primarily on strains of MRSA, GISA and VRE.
где R - независимо означает водород, алкил или необязательно замещенный арилалкил;where R is independently hydrogen, alkyl or optionally substituted arylalkyl;
m независимо от 2 до 3.m regardless of 2 to 3.
Соединения формулы 3 могут быть получены конденсацией эремомицина (2) или его солей и соответствующего аминоалкилгуанидина или его солей, с использованием методов, хорошо известных из уровня развития техники. Так, для конденсации могут быть использованы конденсирующие агенты (РуВОР, ВОР, TBTU, HBTU, HATU), а также вспомогательные основания или соли, необходимых для поддержания оптимального рН в подходящем инертном апротонном растворителе (Схема 1).The compounds of formula 3 can be prepared by condensation of eremomycin (2) or salts thereof and the corresponding aminoalkylguanidine or salts thereof, using methods well known in the art. Thus, for condensation, condensing agents (PyBOR, BOP, TBTU, HBTU, HATU), as well as auxiliary bases or salts necessary to maintain optimal pH in a suitable inert aprotic solvent (Scheme 1) can be used.
Схема 1Scheme 1
Сравнительное исследование антибактериальных свойств новых производных эремомицина, соответствующих формуле 3, и используемого в клинике ванкомицина (1) на контрольном штамме S. aureus АТСС №29213, а также на панели грамположительных бактерий показали, что новая модификация карбоксильной группы эремомицина повышает его активность в отношении планктонных форм резистентных к гликопептидам бактерий при сохранении активности в отношении чувствительных штаммов. Помимо этого, новые производные способны разрушать биопленки, при полном отсутствии стимулирующего их рост действия. Кроме того, производные формулы 3 существенно превосходит по эффективности ванкомицин (1) на моделях системной бактериальной инфекции in vivo.A comparative study of the antibacterial properties of new eremomycin derivatives corresponding to formula 3 and clinically used vancomycin (1) on the control strain of S. aureus ATCC No. 29213, as well as on a panel of gram-positive bacteria showed that a new modification of the carboxyl group of eremomycin increases its activity against planktonic forms of bacteria resistant to glycopeptides while maintaining activity against sensitive strains. In addition, new derivatives are capable of destroying biofilms, in the complete absence of action stimulating their growth. In addition, derivatives of formula 3 are significantly more effective than vancomycin (1) in in vivo models of systemic bacterial infection.
Таким образом, изобретение также включает способ лечения бактериальных инфекций, вызванных штаммами грамположительных патогенов, такими как Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Clostridium spp., Bacillus spp., в том числе, нечувствительными или малочувствительных к другим антибиотикам, например MRSA (метициллин-резистентный) и VRSA (ванкомицин-резистентный), предусматривающий введение нуждающемуся субъекту терапевтически эффективного количества производного эремомицина, соответствующего формуле 3.Thus, the invention also includes a method for treating bacterial infections caused by strains of gram-positive pathogens, such as Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Clostridium spp., Bacillus spp., including those that are insensitive or insensitive to other antibiotics, for example MRSA (methicillin- resistant) and VRSA (vancomycin-resistant), providing for the administration to a subject in need of a therapeutically effective amount of an eremomycin derivative corresponding to formula 3.
Если не указано иное, термины, используемые в описании заявки и пунктах формулы изобретения, имеют значения, указанные ниже. Следует отметить, что, если не указано иное, используемые в описании и пунктах формулы формы единственного числа включают также формы множественного числа.Unless otherwise specified, terms used in the specification and claims have the meanings given below. It should be noted that, unless otherwise indicated, the singular forms used in the specification and claims also include the plural forms.
"Алкил" означает, одновалентный насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью или циклический радикал, включающий только атомы углерода и водорода и содержащий от 1 до включительно 14 атомов углерода."Alkyl" means a monovalent saturated hydrocarbon radical, straight, branched or cyclic, containing only carbon and hydrogen atoms and containing from 1 to inclusive 14 carbon atoms.
"Арил" означает, необязательно замещенный одновалентный циклический ароматический углеводородный радикал, содержащий один или более конденсированных циклов, из которых, по меньшей мере, один цикл является ароматическим. Примеры арильных радикалов включают, без ограничения перечисленным, фенил, нафтил, бифенил, и т.п."Aryl" means an optionally substituted monovalent cyclic aromatic hydrocarbon radical containing one or more fused rings, at least one of which is aromatic. Examples of aryl radicals include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, biphenyl, and the like.
"Арилалкил" означает, необязательно замещенный арильный радикал, присоединенный через алкильную группу. Примеры арилалкильных радикалов включают, без ограничения перечисленным, бензил, фенилэтил и т.п."Arilalkyl" means an optionally substituted aryl radical attached via an alkyl group. Examples of arylalkyl radicals include, but are not limited to, benzyl, phenylethyl and the like.
"Инертный органический растворитель" означает растворитель, инертный в условиях описываемой в тексте реакции, включающий, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран, N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид, N-метилпирролидон, диметилсульфоксид, сульфолан, хлороформ, дихлорметан, дихлорэтан, этилацетат, ацетон, метилэтилкетон, метанол, этанол, пропанол, изопропанол, трет-бутанол, диоксан, пиридин и т.п. Если не указано иное, растворители, использованные в реакциях по настоящему изобретению, являются инертными растворителями."Inert organic solvent" means a solvent that is inert under the reaction conditions described herein, including, for example, benzene, toluene, acetonitrile, tetrahydrofuran, N,N-dimethylformamide, N,N-dimethylacetamide, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide, sulfolane, chloroform, dichloromethane, dichloroethane, ethyl acetate, acetone, methyl ethyl ketone, methanol, ethanol, propanol, isopropanol, tert-butanol, dioxane, pyridine, etc. Unless otherwise specified, the solvents used in the reactions of the present invention are inert solvents.
"Сольваты" означает сольватированные формы, содержащие стехиометрическое или нестехиометрическое количество растворителя. Некоторые соединения способны удерживать в кристаллической решетке фиксированное количество молекул растворителя, образуя сольват. Гидраты образуются в том случае, если в качестве растворителя используется вода, а алкоголяты образуются в том случае, если растворителем является спирт."Solvates" means solvated forms containing stoichiometric or non-stoichiometric amounts of solvent. Some compounds are capable of holding a fixed number of solvent molecules in the crystal lattice, forming a solvate. Hydrates are formed when water is used as a solvent, and alcoholates are formed when alcohol is used as a solvent.
"Субъект" означает млекопитающих, т.е. любого члена класса млекопитающих, включая, без ограничения перечисленным, человека, приматов, сельскохозяйственных животных, лабораторных животных и т.п., предпочтительно человека. Термин субъект не означает конкретный возраст или пол пациента."Subject" means mammals, i.e. any member of the class mammals, including, but not limited to, humans, primates, farm animals, laboratory animals, and the like, preferably humans. The term subject does not indicate the specific age or gender of the patient.
"Терапевтически эффективное количество" означает количество соединения, которое при введении субъекту (пациенту) для лечения патологического состояния является достаточным для оказания фармакологического действия при лечении патологического состояния субъекта. Терапевтически эффективное количество варьируется в зависимости от типа соединения, патологического состояния подлежащего лечению, тяжести болезни, возраста и относительного состояния здоровья субъекта, от способа и формы введения, от мнения лечащего врача или практикующего ветеринара и других факторов."Therapeutically effective amount" means an amount of a compound that, when administered to a subject (patient) to treat a condition, is sufficient to produce a pharmacological effect in treating the subject's condition. The therapeutically effective amount will vary depending on the type of compound, the pathological condition being treated, the severity of the disease, the age and relative health of the subject, the route and form of administration, the judgment of the attending physician or veterinary practitioner, and other factors.
"Фармакологическое действие" означает термин, используемый в описании заявки, включает результаты воздействия на субъект, при которых достигается предполагаемая цель терапии. Например, фармакологическое действие означает такие результаты воздействия, которые приводят к излечению или замедлению развития, предупреждению рецидива заболевания."Pharmacological action" means the term used in the description of the application, includes the results of exposure to the subject in which the intended goal of therapy is achieved. For example, pharmacological action means such effects that lead to cure or slowdown of development, prevention of relapse of the disease.
"Фармацевтически приемлемый" означает материал, который используют при получении фармацевтической композиции, и который обычно является безопасным, не токсичным, безопасным в биологическом или ином отношении и включает материал, приемлемый как в ветеринарии, так и в фармацевтике."Pharmaceutically acceptable" means a material that is used in the preparation of a pharmaceutical composition and that is generally safe, non-toxic, biologically or otherwise harmless, and includes material that is acceptable in both veterinary and pharmaceutical applications.
"Фармацевтически приемлемые соли" соединений означают соли, которые являются фармацевтически приемлемыми и обладают необходимой фармакологической активностью исходного соединения. Такие соли включают кислотно-аддитивные соли неорганических кислот, таких, как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т.п., или органических кислот, таких, как уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, глутаминовая кислота, гликолевая кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, метансульфоновая кислота, пропионовая кислота, салициловая кислота, янтарная кислота, винная кислота, толуолсульфоновая кислота и т.п. Подразумевается, что фармацевтически приемлемые соли включают сольваты или кристаллические формы (полиморфные образования) указанной кислотно-аддитивной соли. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются соли соляной кислоты, серной кислоты, метансульфоновой кислоты, уксусной кислоты, адипиновой кислоты, янтарной кислоты, фумаровой кислоты, щавелевой кислоты, фосфорной кислоты."Pharmaceutically acceptable salts" of compounds mean salts that are pharmaceutically acceptable and have the necessary pharmacological activity of the parent compound. Such salts include acid addition salts of inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like, or organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, fumaric acid, glutamic acid acid, glycolic acid, lactic acid, maleic acid, malic acid, methanesulfonic acid, propionic acid, salicylic acid, succinic acid, tartaric acid, toluenesulfonic acid, etc. Pharmaceutically acceptable salts are intended to include solvates or crystalline forms (polymorphs) of said acid addition salt. Preferred pharmaceutically acceptable salts are those of hydrochloric acid, sulfuric acid, methanesulfonic acid, acetic acid, adipic acid, succinic acid, fumaric acid, oxalic acid, phosphoric acid.
Исходный эремомицин (2) получен ферментацией Amycolatopsis orientalis, РуВОР, триэтиламин, диметилсульфоксид, растворители и прочие реагенты являются коммерческими химическими соединениями, поставляемыми фирмами, такими, как Merck, Abcr или Acros. Исходные аминоалкилгуанидины можно получить методами, известными специалисту в данной области или описанными в литературе.The original eremomycin (2) is obtained by fermentation of Amycolatopsis orientalis, PyBOP, triethylamine, dimethyl sulfoxide, solvents and other reagents are commercial chemical compounds supplied by companies such as Merck, Abcr or Acros. The starting aminoalkylguanidines can be prepared by methods known to one skilled in the art or described in the literature.
Примеры, показывающие возможность получения новых производных эремомицина, соответствующих формуле 3, являющихся предметом настоящего изобретения, а также их физико-химические свойства, антибактериальная активность и терапевтическая эффективность in vivo, описанные ниже, приводятся лишь для иллюстрации настоящего изобретения, а не для ограничения объема притязаний.Examples showing the possibility of obtaining new eremomycin derivatives corresponding to formula 3, which are the subject of the present invention, as well as their physicochemical properties, antibacterial activity and therapeutic efficacy in vivo, described below, are provided only to illustrate the present invention and not to limit the scope of claims .
Пример 1. Гидрохлорид N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1)Example 1: Eremomycin N-(2-guanidinoethyl)amide hydrochloride (3-1)
При слабом нагревании и интенсивном перемешивании растворяют сульфат эремомицина (0.5 г, 0.29 ммоль) и триэтиламин (0.33 мл, 2.38 ммоль) в безводном диметилсульфоксиде (12.5 мл). К полученному раствору при перемешивании прибавляют дигидрохлорид 1-(2-аминоэтил)гуанидина (0.25 г, 1.45 ммоль) и РуВОР (0.23 г, 0.44 ммоль) и выдерживают 1 ч. К перемешиваемому раствору прибавляют изопропанол (10 мл), ацетон (25 мл) и диэтиловый эфир (15 мл). Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×10 мл), диэтиловым эфиром (2×10 мл) и высушивают в вакууме. Осадок растворяют в воде (2 мл), при перемешивании прибавляют изопропанол (3-4 мл) до помутнения раствора и повторно осаждают продукт смесью ацетона (25 мл) и диэтилового эфира (15 мл). Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×10 мл), диэтиловым эфиром (2×10 мл) и высушивают в вакууме. Технический продукт растворяют в 3-5 мл воды и очищают методом обращенно-фазовой хроматографии (элюент: водный раствор аммиака (0.5%) - ацетонитрил). Фракции, содержащие продукт, объединяют, концентрируют в вакууме до объема ~5 мл. Раствор подкисляют при тщательном перемешивании водным раствором (1%) соляной кислоты до рН~4, упаривают до объема 1-2 мл, после чего осаждают продукт ацетоном (50 мл). Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×10 мл), диэтиловым эфиром (2×10 мл) и сушат в вакууме. Получают 0.36 г (56%) гидрохлорида N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1) в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=6.4, В - MeCN; градиент В 10 → 30% (30 мин): Rt=18.47 мин. HRSM (ESI) вычислено для C76H98ClN14O25[M+H]+: 1641.6511; найдено 1641.6561. Найдено, %: С 48.29, Н 5.90, N 10.53; вычислено для C76H97ClN14O25*4HCl*6H2O, %: С 48.14, Н 6.01, N 10.34.With low heating and vigorous stirring, dissolve eremomycin sulfate (0.5 g, 0.29 mmol) and triethylamine (0.33 ml, 2.38 mmol) in anhydrous dimethyl sulfoxide (12.5 ml). 1-(2-aminoethyl)guanidine dihydrochloride (0.25 g, 1.45 mmol) and RuBOP (0.23 g, 0.44 mmol) are added to the resulting solution with stirring and left for 1 hour. Isopropanol (10 ml) and acetone (25 ml) are added to the stirred solution ) and diethyl ether (15 ml). The precipitate that forms is filtered off, washed with acetone (2×10 ml), diethyl ether (2×10 ml) and dried in vacuum. The precipitate is dissolved in water (2 ml), isopropanol (3-4 ml) is added with stirring until the solution becomes cloudy, and the product is precipitated again with a mixture of acetone (25 ml) and diethyl ether (15 ml). The precipitate that forms is filtered off, washed with acetone (2×10 ml), diethyl ether (2×10 ml) and dried in vacuum. The technical product is dissolved in 3-5 ml of water and purified by reverse phase chromatography (eluent: aqueous ammonia solution (0.5%) - acetonitrile). Fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo to a volume of ~5 ml. The solution is acidified with thorough stirring with an aqueous solution (1%) of hydrochloric acid to pH ~ 4, evaporated to a volume of 1-2 ml, after which the product is precipitated with acetone (50 ml). The precipitate that forms is filtered off, washed with acetone (2×10 ml), diethyl ether (2×10 ml) and dried in vacuum. 0.36 g (56%) of eremomycin N-(2-guanidinoethyl)amide hydrochloride (3-1) is obtained in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=6.4, B - MeCN; gradient B 10 → 30% (30 min ): Rt=18.47 min HRSM (ESI) calculated for C 76 H 98 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1641.6511; found 1641.6561. Found, %: C 48.29, H 5.90, N 10.53; calculated for C 76 H 97 ClN 14 O 25 *4HCl*6H 2 O, %: C 48.14, H 6.01, N 10.34.
Пример 2. Фосфат N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-2)Example 2 Eremomycin N-(2-guanidinoethyl)amide phosphate (3-2)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1 -(2-аминоэтил)гуанидина при использовании ортофосфорной кислоты. Выход фосфата Н-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-2) - 58%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=6.4, В - MeCN; градиент В 10 → 30% (30 мин): Rt=18.32 мин. HRSM (ESI) вычислено для C76H98ClN14O25[M+H]+: 1641.6511; найдено 1641.6504. Найдено, %: С 46.12, Н 5.90, N 10.06; вычислено для C76H97ClN14HO25*2H3PO4*8Н2О, %: С 46.05, Н 6.05, N 9.89.Obtained by a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1 -(2-aminoethyl)guanidine dihydrochloride using orthophosphoric acid. The yield of eremomycin H-(2-guanidinoethyl)amide phosphate (3-2) is 58%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=6.4, B - MeCN; gradient B 10 → 30% (30 min ): Rt=18.32 min HRSM (ESI) calculated for C 76 H 98 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1641.6511; found 1641.6504. Found, %: C 46.12, H 5.90, N 10.06; calculated for C 76 H 97 ClN 14 HO 25 *2H 3 PO 4 *8H 2 O, %: C 46.05, H 6.05, N 9.89.
Пример 3. Адипинат N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-3)Example 3 Eremomycin N-(2-guanidinoethyl)amide adipate (3-3)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)гуанидина при использовании адипиновой кислоты. Выход адипината N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-3) - 48%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=6.4, В - MeCN; градиент В 10 → 30% (30 мин): Rt=18.40 мин. HRSM (ESI) вычислено для C76H98ClN14O25[M+H]+: 1641.6511; найдено 1641.6515.Obtained by a method similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)guanidine dihydrochloride using adipic acid. The yield of N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin adipate (3-3) is 48%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=6.4, B - MeCN; gradient B 10 → 30% (30 min ): Rt=18.40 min HRSM (ESI) calculated for C 76 H 98 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1641.6511; found 1641.6515.
Пример 4. Мезилат N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-4)Example 4 Eremomycin N-(2-guanidinoethyl)amide mesylate (3-4)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)гуанидина при использовании метансульфоновой кислоты. Выход мезилата ТМ-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-4) - 57%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=6.4, В - MeCN; градиент В 10 → 30% (30 мин): Rt=18.46 мин HRSM (ESI) вычислено для C76H98ClN14O25[M+H]+: 1641.6511; найдено 1641.6512. Найдено, %: С 45.92, Н 5.97, N 9.15; вычислено для C76H97ClN14O25*4CH3SO3H*6H2O, %: С 45.01, Н 5.90, N 9.19.It is obtained by a procedure similar to that given in example 1 of eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)guanidine dihydrochloride using methanesulfonic acid. The yield of TM-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin mesylate (3-4) is 57%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=6.4, B - MeCN; gradient B 10 → 30% (30 min ): Rt=18.46 min HRSM (ESI) calculated for C 76 H 98 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1641.6511; found 1641.6512. Found, %: C 45.92, H 5.97, N 9.15; calculated for C 76 H 97 ClN 14 O 25 *4CH 3 SO 3 H*6H 2 O, %: C 45.01, H 5.90, N 9.19.
Пример 5. Гидрохлорид N-(3-гуанидинопропил)амида эремомицина (3-5)Example 5 Eremomycin N-(3-guanidinopropyl)amide hydrochloride (3-5)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(3-аминопропил)гуанидина. Выход гидрохлорида N-(3-гуанидинопропил)амида эремомицина (3-5) - 52%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10 → 40% (30 мин): Rt=9.27 мин. HRSM (ESI) вычислено для C77H100ClN14O25[M+H]+: 1655.6667; найдено 1655.6660.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(3-aminopropyl)guanidine dihydrochloride. The yield of N-(3-guanidinopropyl)amide eremomycin hydrochloride (3-5) is 52%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10 → 40% (30 min ): Rt=9.27 min HRSM (ESI) calculated for C 77 H 100 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1655.6667; found 1655.6660.
Пример 6. Гидрохлорид N-(2-(3-метилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-6)Example 6. Eremomycin N-(2-(3-methylguanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-6)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-метилгуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(3-метиллгуанидино)этил)амида эремомицина (3-6) - 53%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10→40% (30 мин): Rt=9.14 мин. HRSM (ESI) вычислено для C77H100ClN14O25[M+H]+: 1655.6667; найдено 1655.6671.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-methylguanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(3-methylguanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-6) is 53%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10→40% (30 min) : Rt=9.14 min HRSM (ESI) calculated for C 77 H 100 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1655.6667; found 1655.6671.
Пример 7. Гидрохлорид N-(2-(3-бутилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-7)Example 7 Eremomycin N-(2-(3-butylguanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-7)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-бутилгуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(3-бутилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-7) - 52%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10→40% (30 мин): Rt=9.27 мин. HRSM (ESI) вычислено для C80H106ClN14O25[M+H]+: 1697.7137; найдено 1697.7123.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-butylguanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(3-butylguanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-7) is 52%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10→40% (30 min ): Rt=9.27 min HRSM (ESI) calculated for C 80 H 106 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1697.7137; found 1697.7123.
Пример 8. Гидрохлорид N-(2-(3-октилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-8)Example 8 Eremomycin N-(2-(3-octylguanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-8)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-октилгуанидин. Выход гидрохлорида N-(2-(3-октилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-8) - 53%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 20 → 60% (30 мин): Rt=12.59 мин. HRSM (ESI) вычислено для C84H114ClN14O25[M+H]+: 1753.7763; найдено 1753.7793.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-octylguanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(3-octylguanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-8) is 53%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 20 → 60% (30 min ): Rt=12.59 min HRSM (ESI) calculated for C 84 H 114 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1753.7763; found 1753.7793.
Пример 9. Гидрохлорид N-(2-(3-додецилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-9)Example 9. Eremomycin N-(2-(3-dodecylguanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-9)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-додецилгуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(3-додецилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-9) - 57%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10→40% (30 мин): Rt=14.22 мин. HRSM (ESI) вычислено для C88H122ClN14O25[M+H]+: 1809.8389; найдено 1809.8390.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-dodecylguanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(3-dodecylguanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-9) is 57%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10→40% (30 min ): Rt=14.22 min HRSM (ESI) calculated for C 88 H 122 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1809.8389; found 1809.8390.
Пример 10. Гидрохлорид N-(2-(3-тетрадецилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-10)Example 10 Eremomycin N-(2-(3-tetradecylguanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-10)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-тетрадецилгуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(3-тетрадецилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-10) - 57%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10→40% (30 мин): Rt=17.41 мин. HRSM (ESI) вычислено для C90H126ClN14O25[M+H]+: 1837.8702; найдено 1837.8694.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-tetradecylguanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(3-tetradecylguanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-10) is 57%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10→40% (30 min ): Rt=17.41 min HRSM (ESI) calculated for C 90 H 126 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1837.8702; found 1837.8694.
Пример 11. Гидрохлорид N-(2-(3-бензилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-11)Example 11 Eremomycin N-(2-(3-benzylguanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-11)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-бензилгуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(3-бензилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-11) - 53%, в виде кремового порошка ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10→40% (30 мин): Rt=11.07 мин. HRSM (ESI) вычислено для C83H104ClN14O25[M+H]+: 1731.6980; найдено 1731.6975.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-benzylguanidine dihydrochloride. Yield of N-(2-(3-benzylguanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-11) - 53%, in the form of a creamy HPLC powder (Kromasil-100-5-μm C-18 column 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10→40% (30 min): Rt=11.07 min HRSM (ESI) calculated for C 83 H 104 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1731.6980; found 1731.6975.
Пример 12. Гидрохлорид N-(2-(3-(2-фторбензил)гуанидино)этил)амида эремомицина (3-12)Example 12 Eremomycin N-(2-(3-(2-fluorobenzyl)guanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-12)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-(2-фторбензил)гуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(3-(2-фторбензил)гуанидино)этил)амида эремомицина (3-12) - 55%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10→40% (30 мин): Rt=12.76 мин. HRSM (ESI) вычислено для C83H103ClFN14O25[M+H]+: 1749.6886; найдено 1749.6891.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-(2-fluorobenzyl)guanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(3-(2-fluorobenzyl)guanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-12) is 55%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10→40% (30 min ): Rt=12.76 min HRSM (ESI) calculated for C 83 H 103 ClFN 14 O 25 [M+H] + : 1749.6886; found 1749.6891.
Пример 13. Гидрохлорид N-(2-(3-((4'-хлорбифенил-4-ил)метил)гуанидино)этил)амида эремомицина (3-13)Example 13. Eremomycin N-(2-(3-((4'-chlorobiphenyl-4-yl)methyl)guanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-13)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-3-((4'-хлорбифенил-4-ил)метил)гуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(3-((4'-хлоробифенил-4-ил)метил)гуанидино)этил)амида эремомицина (3-13) - 41%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10 → 40% (30 мин): Rt=15.23 мин. HRSM (ESI) вычислено для C89H107Cl2N14O25[М+Н]+: 1841.6903; найдено 1841.6895.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-3-((4'-chlorobiphenyl-4-yl)methyl)guanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(3-((4'-chlorobiphenyl-4-yl)methyl)guanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-13) is 41%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10 → 40% (30 min ): Rt=15.23 min HRSM (ESI) calculated for C 89 H 107 Cl 2 N 14 O 25 [M+H] + : 1841.6903; found 1841.6895.
Пример 14. Гидрохлорид N-(2-(2-нафтилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-14)Example 14 Eremomycin N-(2-(2-naphthylguanidino)ethyl)amide hydrochloride (3-14)
Получают по методике, аналогичной приведенной в примере 1 из эремомицина (2) и дигидрохлорида 1-(2-аминоэтил)-2-нафтилгуанидина. Выход гидрохлорида N-(2-(2-нафтилгуанидино)этил)амида эремомицина (3-14) - 44%, в виде кремового порошка. ВЭЖХ (колонка Kromasil-100-5-мкм С-18 4.6×250 мм, LW=260 нм, элюент: А - HCOONH4 (0.2%) рН=4.5, В - MeCN; градиент В 10→40% (30 мин): Rt=14.01 мин. HRSM (ESI) вычислено для C87H105ClN14O25[M+H]+: 1780.7064; найдено 1780.7060.Prepared according to a procedure similar to that given in example 1 from eremomycin (2) and 1-(2-aminoethyl)-2-naphthylguanidine dihydrochloride. The yield of N-(2-(2-naphthylguanidino)ethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-14) is 44%, in the form of a creamy powder. HPLC (column Kromasil-100-5-μm S-18 4.6×250 mm, LW=260 nm, eluent: A - HCOONH 4 (0.2%) pH=4.5, B - MeCN; gradient B 10→40% (30 min ): Rt=14.01 min HRSM (ESI) calculated for C 87 H 105 ClN 14 O 25 [M+H] + : 1780.7064; found 1780.7060.
Пример 15. Антибактериальная активность новых производных в отношении планктонных форм чувствительных и резистентных штаммов грамположительных бактерийExample 15. Antibacterial activity of new derivatives against planktonic forms of sensitive and resistant strains of gram-positive bacteria
Антимикробная активность N-(гуанидиноалкил)амидов эремомицина, являющихся предметом настоящего изобретения, изучена в сравнении с ванкомицином (1) на панели чувствительных к ванкомицину грамположительных бактерий: S. aureus АТСС 29213, Enteroccus faecium 2и£. faecium 4; и резистентных к ванкомицину грамположительных бактерий: Е. faecium 130, Е. faecium 3576, E.faecalis 583, Е. gallinarum 1308, полученных из музея лаборатории медицинской микробиологии Государственного научного центра по антибиотикам (ГНЦА). Минимальную подавляющую рост микроорганизмов концентрацию (МПК) для тестируемых соединений определяли микрометодом серийных разведений в бульоне, в соответствии с рекомендациями CLSI.The antimicrobial activity of N-(guanidinoalkyl)amides of eremomycin, which are the subject of the present invention, was studied in comparison with vancomycin (1) on a panel of vancomycin-sensitive gram-positive bacteria: S. aureus ATCC 29213, Enteroccus faecium 2 and £. faecium 4; and vancomycin-resistant gram-positive bacteria: E. faecium 130, E. faecium 3576, E. faecalis 583, E. gallinarum 1308, obtained from the museum of the laboratory of medical microbiology of the State Scientific Center for Antibiotics (SSC). The minimum growth inhibitory concentration (MIC) for the test compounds was determined by the micromethod of serial dilutions in broth, in accordance with the recommendations of CLSI.
Полученные результаты, представленные в таблице 1, свидетельствуют, что в отношении чувствительных и резистентных к ванкомицину штаммов в большинстве случаев, по активности in vitro, гуанидин-содержащие амиды эремомицина, являющиеся предметом настоящего изобретения, превосходят препарат сравнения - ванкомицин (1), обладая в 2-64 раза большей активностью, чем препарат сравнения. Наибольшую активность в отношении чувствительных к гликопептидам штаммам показало производное 3-1 (гидрохлорид N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина).The results obtained, presented in Table 1, indicate that in relation to strains sensitive and resistant to vancomycin, in most cases, in terms of activity in vitro, guanidine-containing amides of eremomycin, which are the subject of the present invention, are superior to the reference drug - vancomycin (1), having 2-64 times more active than the reference drug. Derivative 3-1 (N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin hydrochloride) showed the greatest activity against strains sensitive to glycopeptides.
Пример 16. Действие на биопленки чувствительных и резистентных штаммов грамположительных бактерийExample 16. Effect on biofilms of sensitive and resistant strains of gram-positive bacteria
Сравнительное исследования действия новых производных на планктонные формы и биопленки проведено на клинических изолятах Staphylococcus epidermidis штаммы 20637 и 21555, E.faecalis 23 и штамме Е. faecium 3 (VRE), полученных из коллекции ГНЦА.Comparative studies of the effect of new derivatives on planktonic forms and biofilms were carried out on clinical isolates of Staphylococcus epidermidis strains 20637 and 21555, E. faecalis 23 and E. faecium strain 3 (VRE), obtained from the State Research Center of Antiquities collection.
Определение МПК исследуемых антибиотиков в отношении тест-культур осуществляли методом двукратных серийных разведений в триптиказо-соевом бульоне, содержащем 2% глюкозы, т.е. в условиях формирования биопленок. Для анализа чувствительности планктонной культуры в высоком титре плотность инокулята составляла 108 КОЕ/мл. Инкубацию осуществляли 18-20 ч при 36°С.Determination of the MIC of the studied antibiotics in relation to test cultures was carried out by the method of two-fold serial dilutions in trypticase soy broth containing 2% glucose, i.e. under conditions of biofilm formation. For sensitivity analysis of high titer planktonic culture, the inoculum density was 10 8 CFU/ml. Incubation was carried out for 18-20 hours at 36°C.
Активность в отношении биопленок патогенов оценивали по величине минимальной концентрации эрадикации биопленок (МКЭБ) в отношении биопленок низкой плотности (24 ч культивации) и зрелых биопленок (48 ч культивации). Для подготовки биопленок в планшете, инокулят разводили до титра 106 КОЕ/мл в триптиказо-соевом бульоне, содержащем 2% глюкозы и в количестве 100 мкл переносили в лунки, инкубировали в стационарных условиях 24 и 48 ч при 36°С. После 24 ч инкубации удаляли планктон и дважды промывали физиологическим раствором объемом 200 мкл. При культивировании 48 ч - вносили свежий бульон того же состава. Из сформированных биопленок удаляли планктон, промывали физиологическим раствором и вносили N-(2-гуанидиноэтил)амид эремомицина (3-1) в тестируемом диапазоне концентраций. Инкубировали 24 ч при температуре 36°С. Анализ плотности биопленок (CV-тест) осуществляли окраской генцианвиолетом (0.1% раствор) [J. Korenova, J. Lopasovska, Т. Kuchta. J. Food. Nutr. Res., 2008, 47(2), 100]. Плотность окраски измеряли при 580 нм на планшетном ридере Bioscreen с автоматизированной системой ("Labsystems", Финляндия) с программным обеспечением. Анализ жизнеспособности после инкубации с тестируемыми антибиотиками оценивали по метаболической активности бактерий с помощью колориметрического теста с МТТ (бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия, ООО НПП ПанЭко). Оптическую плотность измеряли при 492 нм на планшетном ридере Bioscreen с автоматизированной системой ("Labsystems", Финляндия) с программным обеспечением.Activity against pathogen biofilms was assessed by the minimum biofilm eradication concentration (MBEC) against low-density biofilms (24 h of cultivation) and mature biofilms (48 h of cultivation). To prepare biofilms in a plate, the inoculum was diluted to a titer of 10 6 CFU/ml in trypticase soy broth containing 2% glucose and transferred into wells in an amount of 100 μl and incubated under stationary conditions for 24 and 48 hours at 36°C. After 24 h of incubation, plankton was removed and washed twice with 200 μL saline. When culturing for 48 hours, fresh broth of the same composition was added. Plankton was removed from the formed biofilms, washed with saline, and eremomycin N-(2-guanidinoethyl)amide (3-1) was added in the tested concentration range. Incubated for 24 hours at 36°C. Analysis of biofilm density (CV test) was carried out by staining with gentian violet (0.1% solution) [J. Korenova, J. Lopasovska, T. Kuchta. J.Food. Nutr. Res., 2008, 47(2), 100]. Color density was measured at 580 nm on a Bioscreen plate reader with an automated system (Labsystems, Finland) with software. Viability analysis after incubation with the tested antibiotics was assessed by the metabolic activity of bacteria using a colorimetric test with MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, NPP PanEco LLC). Optical density was measured at 492 nm on a Bioscreen plate reader with an automated system (Labsystems, Finland) with software.
Результаты исследований показывают, что амид 3-1 не только обладает более высокой активностью в отношении планктонной формы энтерококков и коагулазонегативных стафилококков, но и не теряет активность в отношении 24 ч биопленок, тогда как для ванкомицина величина МКЭБ в отношении биопленок низкой плотности увеличивается на 2-4 разведения (Таблица 2). Хотя в отношении биопленок высокой плотности (48 ч инкубации) и наблюдается снижение активности как для ванкомицина, так и для N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1), такой эффект является закономерным ввиду образования экзополимерного матрикса, практически не чувствительного к антибиотикам. Тем не менее, стоит отметить, что активность амида 3-1 в отношении зрелых биопленок, особенно более устойчивых биопленок эпидермального стафилококка, была в среднем в 10 раз выше таковой для ванкомицина.The research results show that amide 3-1 not only has higher activity against planktonic forms of enterococci and coagulase-negative staphylococci, but also does not lose activity against biofilms for 24 hours, while for vancomycin the MCEB value against low-density biofilms increases by 2- 4 dilutions (Table 2). Although in relation to biofilms of high density (48 h of incubation) a decrease in activity is observed for both vancomycin and N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin (3-1), this effect is natural due to the formation of an exopolymer matrix, practically insensitive to antibiotics. However, it is worth noting that the activity of amide 3-1 against mature biofilms, especially the more resistant Staphylococcus epidermidis biofilms, was on average 10 times higher than that of vancomycin.
Исследование стимулирования образования биопленок показало, что ванкомицин (1) стимулирует образование биопленок Enterococcus spp. в субтоксических концентрациях (0.25-1 мкг/мл) на 30-45%, как на стадии формирования биопленок, так и при действии на сформированные биопленки (Таблица 3). В противоположность ванкомицину гидрохлорид N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1, пример 1) не оказывает такого действия (Таблица 3). Полученные результаты были оценены как по плотности биопленки окраской генцианвиолетом, так и по метаболической активности бактерий с помощью колориметрического МТТ-теста, так как биомасса может содержать погибшие клетки или иметь повышенный объем матрикса.A biofilm stimulation study showed that vancomycin (1) stimulates biofilm formation by Enterococcus spp. in subtoxic concentrations (0.25-1 μg/ml) by 30-45%, both at the stage of biofilm formation and when acting on formed biofilms (Table 3). In contrast to vancomycin, eremomycin N-(2-guanidinoethyl)amide hydrochloride (3-1, example 1) does not have such an effect (Table 3). The results obtained were assessed both by biofilm density using gentian violet staining, and by the metabolic activity of bacteria using a colorimetric MTT test, since the biomass may contain dead cells or have an increased volume of the matrix.
Пример 17. Исследование действия на биопленки методом сканирующей ионопроводящей микроскопииExample 17. Study of the effect on biofilms using scanning ion conduction microscopy
Для визуализации эффекта подавления роста биопленок N-(2-гуанидиноэтил)амидом эремомицина (3-1) исследовано его действия на биопленки S. epidermidis 21555 методом сканирующей ионопроводящей микроскопии. Биопленки подготавливали в чашках Петри диаметром 50 мм без дополнительной обработки. После 5 суток инкубации в промытые чашки вносили свежий бульон, содержащий N-(2-гуанидиноэтил)амидом эремомицина (3-1) в концентрации, равной МПК (таблица 2), инкубировали 24 ч при 36°С, перед микроскопией удаляли бульон, вновь промывали и заполняли физиологическим раствором. Сканирование проводили непосредственно после контакта с поверхностью биопленки при удерживании постоянного потенциала, равного 200 мВ и высокочастотной фильтрации сигнала (Bessel) - 4 кГц. По трехмерным изображениям, полученным методом сканирующей ионопроводящей микроскопии, были рассчитаны высоты и вычислены средние значения для каждого плана, в сравнении с контролем.To visualize the effect of suppressing the growth of biofilms by N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin (3-1), its effect on biofilms of S. epidermidis 21555 was studied using scanning ion conduction microscopy. Biofilms were prepared in Petri dishes with a diameter of 50 mm without additional processing. After 5 days of incubation, fresh broth containing N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin (3-1) at a concentration equal to the MIC (Table 2) was added to the washed dishes, incubated for 24 hours at 36°C, the broth was removed before microscopy, and again washed and filled with saline solution. Scanning was carried out immediately after contact with the surface of the biofilm while holding a constant potential of 200 mV and high-frequency filtering of the signal (Bessel) - 4 kHz. From three-dimensional images obtained by scanning ion conduction microscopy, heights were calculated and average values were calculated for each plan, in comparison with the control.
Результаты исследования показали, что гидрохлорид N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1, пример 1) при инкубации в течение 24 ч активно разрушает биопленки высокой плотности в концентрации, соответствующей МПК (Таблица 2), приводя к снижению объема биопленки на 61%. При топографии поверхности биопленки, видны отличия от контрольного варианта (рисунок 1а) - высота агрегатов клеток значительно ниже, расположены они менее плотно (рисунок 1б). При этом средняя высота биопленки после обработки амидом эремомицина 3-1 составляла 8,08 мкм, что составляет 61% высоты биопленки в контрольном образце (13.26 мкм).The results of the study showed that N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-1, example 1), when incubated for 24 hours, actively destroys high-density biofilms at a concentration corresponding to the MIC (Table 2), leading to a decrease in biofilm volume by 61%. In the topography of the biofilm surface, differences from the control variant are visible (Figure 1a) - the height of cell aggregates is much lower, they are located less densely (Figure 1b). Moreover, the average biofilm height after treatment with eremomycin amide 3-1 was 8.08 µm, which is 61% of the biofilm height in the control sample (13.26 µm).
Пример 18. Антибактериальная эффективность in vivoExample 18 Antibacterial efficacy in vivo
Сравнительное исследование эффективности гидрохлорида N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1, пример 1) и ванкомицина (1) проведено на модели стафилококкового сепсиса мышей. В опыте использовали самок мышей SHK, весом 20-22 г. В качестве инфекционного агента использовали S. aureus (штамм 10, клинический изолят), адаптированный к росту в in vivo, путем пятикратного пассирования в организме мышей. Первоначально определялась летальная доза (LD100) стафилококка для данной линии мышей при внутривенном пути заражения. Учет за гибелью мышей проводился ежедневно в течение 10 суток. Летальная доза (LD100) составляла 8×108 КОЕ/мышь. Мышей рассаживали в клетки по 10 голов, заражали внутривенно S. aureus в летальной дозе и определяли эффективность испытуемых препаратов по величине ED50 (т.е. дозы, при которых выживает 50% подопытных животных). Через 30 мин после заражения мышам внутривенно вводили гидрохлорид N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1) в дозах от 0.1 до 2.5 мг/кг или сульфат ванкомицина (1) в дозах от 2.5 до 7.5 мг/кг. В качестве контроля дозы в опыте присутствовала группа нелеченых животных, зараженных летальной дозой S. aureus. Определение ED50 испытуемых препаратов производили в одном опыте при едином контроле, используя метод Беренса (накопления частот). За животными наблюдали в течение 14 суток, ежедневно учитывали гибель. Результаты эксперимента представлены в таблице 4.A comparative study of the effectiveness of N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-1, example 1) and vancomycin (1) was carried out on a model of staphylococcal sepsis in mice. Female SHK mice weighing 20-22 g were used in the experiment. S. aureus (strain 10, clinical isolate), adapted to growth in vivo, was used as an infectious agent, adapted for growth in vivo, by passage five times in the body of mice. Initially, the lethal dose (LD 100 ) of staphylococcus was determined for this line of mice through the intravenous route of infection. The death of mice was recorded daily for 10 days. The lethal dose (LD 100 ) was 8×10 8 CFU/mouse. Mice were placed in cages of 10 animals each, infected intravenously with S. aureus at a lethal dose, and the effectiveness of the tested drugs was determined by the ED 50 value (i.e., the dose at which 50% of the experimental animals survive). 30 min after infection, mice were intravenously injected with N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-1) in doses from 0.1 to 2.5 mg/kg or vancomycin sulfate (1) in doses from 2.5 to 7.5 mg/kg. As a dose control, the experiment included a group of untreated animals infected with a lethal dose of S. aureus. The determination of ED of 50 test drugs was carried out in one experiment with a single control, using the Behrens method (accumulation of frequencies). The animals were observed for 14 days, and deaths were recorded daily. The results of the experiment are presented in Table 4.
На основании экспериментальных данных о выживаемости мышей (таблица 4) были рассчитаны значения показателей эффективности испытуемых препаратов (ED50):Based on experimental data on the survival of mice (Table 4), the values of the effectiveness indicators of the tested drugs (ED 50 ) were calculated:
- Гидрохлорид N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1) ED50=0.29 мг/кг;- N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-1) ED 50 =0.29 mg/kg;
- Ванкомицин ED50=4.1 мг/кг.- Vancomycin ED 50 =4.1 mg/kg.
Полученные результаты, представленные в таблице 3, и величина ED50 свидетельствуют, что по эффективности in vivo гидрохлорид N-(2-гуанидиноэтил)амида эремомицина (3-1), являющийся предметом настоящего изобретения, в 14 раз превосходит по эффективности (ED50) препарат сравнения - ванкомицин (1).The results obtained, presented in table 3, and the ED 50 value indicate that the effectiveness in vivo of N-(2-guanidinoethyl)amide eremomycin hydrochloride (3-1), which is the subject of the present invention, is 14 times higher in effectiveness (ED 50 ) The reference drug is vancomycin (1).
Claims (7)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2815029C1 true RU2815029C1 (en) | 2024-03-11 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006057303A1 (en) * | 2004-11-29 | 2006-06-01 | National University Corporation Nagoya University | Glycopeptide antibiotic monomer derivatives |
| RU2512396C2 (en) * | 2008-12-22 | 2014-04-10 | Кьюбист Фармасьютикалз, Инк. | Novel antibacterial medications for treatment of gram-positive infections |
| RU2641912C1 (en) * | 2016-11-02 | 2018-01-23 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" | New semi-synthetic eremomycine derivative and its application |
| RU2708628C1 (en) * | 2019-01-23 | 2019-12-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" | Novel derivatives of eremomycin and use thereof for treating bacterial infections |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006057303A1 (en) * | 2004-11-29 | 2006-06-01 | National University Corporation Nagoya University | Glycopeptide antibiotic monomer derivatives |
| RU2512396C2 (en) * | 2008-12-22 | 2014-04-10 | Кьюбист Фармасьютикалз, Инк. | Novel antibacterial medications for treatment of gram-positive infections |
| RU2641912C1 (en) * | 2016-11-02 | 2018-01-23 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" | New semi-synthetic eremomycine derivative and its application |
| RU2708628C1 (en) * | 2019-01-23 | 2019-12-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" | Novel derivatives of eremomycin and use thereof for treating bacterial infections |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2263274T3 (en) | NEW ANTIBACTERIAL AGENTS. | |
| EP1031576B1 (en) | Glycopeptide antibiotic derivatives | |
| EP0817797B1 (en) | Glycopeptide antibiotic derivatives | |
| US4643987A (en) | Modified glycopeptides | |
| US10201587B2 (en) | Methods of inhibiting and treating biofilms using glycopeptide antibiotics | |
| JP4555823B2 (en) | Cross-linked glycopeptide-cephalosporin antibiotics | |
| JP6215827B2 (en) | Derivatives of xanthone compounds | |
| KR20110114592A (en) | New antibacterial agents for the treatment of Gram-positive infections | |
| RU2281948C2 (en) | Cephalosporin antibiotics, pharmaceutical composition based on thereof and method for treatment of infection | |
| EP1618106B1 (en) | Carbacephem beta-lactam antibiotics | |
| US20020045574A1 (en) | Glycopeptide antibacterial compounds and methods of using same | |
| RU2815029C1 (en) | N-(guanidinoalkyl) amides of eremomycin and their use for treating bacterial infections | |
| CN103880930B (en) | Vancomycin analog derivative and preparation method thereof and pharmaceutical usage | |
| EP3638681A1 (en) | Ring-fused thiazolino 2-pyridones, methods for preparation thereof and their use in the treatment and/or prevention of a disease involving gram-positive bacteria | |
| US8003602B2 (en) | Antibacterial compounds | |
| US8680087B2 (en) | Macrocyclic amides, pharmaceutical compositions, preparation methods and uses thereof | |
| US10081655B2 (en) | Cationic antibacterial composition | |
| CN113896620A (en) | Bavacrol derivatives, pharmaceutically acceptable salts thereof, and preparation method and application thereof | |
| RU2751334C1 (en) | New derivatives of eremomycin amide and application thereof for treating bacterial infections | |
| RU2708628C1 (en) | Novel derivatives of eremomycin and use thereof for treating bacterial infections | |
| EP1585751A2 (en) | Peptide deformylase activated prodrugs | |
| US10717757B2 (en) | Ketolides having antibacterial activity | |
| CN110698457B (en) | Inhibitor Lo-tert-butyl ester for resisting staphylococcus aureus virulence and biofilm formation and application thereof | |
| CN110845473B (en) | Inhibitor Lo-ethyl acetate for resisting staphylococcus aureus virulence and biofilm formation and application thereof | |
| CN106317206B (en) | Norvancomycin dimer derivative and preparation method and medicinal application thereof |