RU2800645C1 - Method of modeling hemostasis disorders in combined lung lesions with bacterial inflammation and pulmonary vascular thrombosis - Google Patents
Method of modeling hemostasis disorders in combined lung lesions with bacterial inflammation and pulmonary vascular thrombosis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2800645C1 RU2800645C1 RU2023100654A RU2023100654A RU2800645C1 RU 2800645 C1 RU2800645 C1 RU 2800645C1 RU 2023100654 A RU2023100654 A RU 2023100654A RU 2023100654 A RU2023100654 A RU 2023100654A RU 2800645 C1 RU2800645 C1 RU 2800645C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemostasis
- bacterial inflammation
- disorders
- modeling
- thrombosis
- Prior art date
Links
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 title abstract description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 title abstract description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 title description 12
- 230000003902 lesion Effects 0.000 title description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 16
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims abstract description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 5
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 claims description 4
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010037437 Pulmonary thrombosis Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 abstract 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 abstract 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 abstract 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 3
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 3
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 3
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 3
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 3
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 3
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000001631 vena cava inferior Anatomy 0.000 description 3
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 2
- 102100022977 Antithrombin-III Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 2
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008817 pulmonary damage Effects 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 2
- 206010003757 Atypical pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 206010048554 Endothelial dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000008694 endothelial dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003111 iliac vein Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 1
- 210000002796 renal vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к области воспроизведения болезней человека в эксперименте, и может быть использовано для моделирования нарушений коагуляционного звена системы гемостаза в условиях бактериального воспаления и тромбоза легких.The invention relates to the field of medicine, namely to the field of reproduction of human diseases in the experiment, and can be used to simulate disorders of the coagulation link of the hemostasis system under conditions of bacterial inflammation and pulmonary thrombosis.
Одним из наиболее распространенных осложнений при воспалениях легких разного генеза является нарушение в системе гемостаза. Так помимо иммунных причин повреждения легких у пациентов с атипичными пневмониями, свой вклад вносит и синдром микрососудистого повреждения, связанный с активацией путей комплемента и ассоциированным прокоагулянтным состоянием [1]. Выявлено, что новая короновирусная инфекция COVID-19 может предрасполагать пациентов к тромботической болезни, как в венозном, так и в артериальном кровообращении, из-за чрезмерного воспаления, активации тромбоцитов, эндотелиальной дисфункции и циркуляторного стаза [3]. Таким образом, наряду с концепцией первичного поражения альвеолярно-бронхиального аппарата, спровоцированного вирусной или бактериальной инфекцией и гипериммунным ответом, весьма перспективной является и гипотеза вторичного легочного повреждения, обусловленного нарушениями микроциркуляторного русла и дисфункцией сосудистого эндотелия.One of the most common complications in pneumonia of various origins is a violation in the hemostasis system. So, in addition to the immune causes of lung damage in patients with atypical pneumonia, the microvascular damage syndrome associated with the activation of complement pathways and the associated procoagulant state also contributes [1]. It has been revealed that the novel coronovirus infection COVID-19 may predispose patients to thrombotic disease, both in the venous and arterial circulation, due to excessive inflammation, platelet activation, endothelial dysfunction and circulatory stasis [3]. Thus, along with the concept of a primary lesion of the alveolar-bronchial apparatus provoked by a viral or bacterial infection and a hyperimmune response, the hypothesis of secondary pulmonary damage caused by microcirculatory disorders and dysfunction of the vascular endothelium is also very promising.
Известен способ моделирования тромбообразования у подопытных животных [Патент РФ №2570162, опубл. 10.12.2015], характеризующийся тем, что для стимуляции тромбообразования у наркотизированного животного выделяют сонную артерию и яремную вену. Затем под сонную артерию помещают изолирующий ее от окружающих тканей материал, а в яремную вену вводят препарат антикоагулянта или контрольного раствора. После этого сонную артерию приводят в соприкосновение с тонкой стальной иглой, которая сообщается с источником постоянного тока с напряжением 3 В. При этом второй электрод размещают подкожно в область бедра животного и пропускают через него ток силой 200-250 микроампер в течение одной минуты. Анализ результатов оценивают по проводимой под микроскопом видеосъемке, посредством компьютерной программы для определения размера образовавшегося тромба.A known method of modeling thrombosis in experimental animals [RF Patent No. 2570162, publ. 12/10/2015], characterized by the fact that to stimulate thrombus formation in an anesthetized animal, the carotid artery and jugular vein are isolated. Then, a material isolating it from the surrounding tissues is placed under the carotid artery, and an anticoagulant preparation or a control solution is injected into the jugular vein. After that, the carotid artery is brought into contact with a thin steel needle, which communicates with a direct current source with a voltage of 3 V. In this case, the second electrode is placed subcutaneously in the thigh of the animal and a current of 200-250 microamperes is passed through it for one minute. Analysis of the results is assessed by video filming under a microscope, using a computer program to determine the size of the formed thrombus.
Недостатком данного способ является то, что он не подходит для моделирования тромбоэмболии легких в условиях их бактериального воспаления. Способ моделирования тромбообразования включает в себя проведение хирургических манипуляций с животными, что предполагает владение определенными навыками и использование дорогостоящего оборудования, что значительно усложняет способ.The disadvantage of this method is that it is not suitable for modeling pulmonary thromboembolism in conditions of bacterial inflammation. The method for simulating thrombus formation includes performing surgical manipulations with animals, which requires the possession of certain skills and the use of expensive equipment, which greatly complicates the method.
Известен способ моделирования, при котором у мышей линии C57BL/6 перекрывают кровоток в нижней полой вене под левой почечной веной путем наложения лигатуры. Перевязывают все боковые и задние притоки нижней полой вены до места слияния подвздошных вен таким образом, что нижняя полая вена оказывается оголенной. Окклюзию сохраняют до 48 часов для достижения тромбоза легочной артерии.A known modeling method in which the blood flow in the inferior vena cava under the left renal vein is blocked in C57BL/6 mice by ligation. All lateral and posterior tributaries of the inferior vena cava are tied up to the confluence of the iliac veins in such a way that the inferior vena cava is exposed. The occlusion is maintained for up to 48 hours to achieve pulmonary thrombosis.
Данный метод предполагает инвазивное хирургическое вмешательство, что требует определенных навыков, а так же моделирует только тромбоэмболии легочной артерии и ее мелких ветвей, наш же способ предполагает нарушение гемостаза при тромбозе легочных сосудов на фоне бактериального воспаления.This method involves invasive surgical intervention, which requires certain skills, and also models only thromboembolism of the pulmonary artery and its small branches, while our method involves a violation of hemostasis in pulmonary thrombosis against the background of bacterial inflammation.
В проанализированной патентной и научно-медицинской литературе адекватного прототипа не обнаружено.In the analyzed patent and scientific-medical literature, an adequate prototype was not found.
Задачей решаемой настоящим изобретением является создание способа моделиривания нарушений гемостаза при сочетанном поражении легких бактериальным воспалением и тромбозом легочных сосудов, позволяющего в дальнейшем использовать данную модель для изучения возможности фармакологической коррекции нарушений свертывающей системы крови.The task solved by the present invention is to create a method for modeling hemostasis disorders in combined lung damage by bacterial inflammation and pulmonary vascular thrombosis, which allows further use of this model to study the possibility of pharmacological correction of disorders of the blood coagulation system.
Поставленная задача решается путем введения самцам и самкам аутбредных крыс следующей комбинации препаратов: интратрахеально липополисахарида E.coli («Sigma-Aldrich» далее ЛПС) в дозе 0,5 мг/кг и после применения ЛПС E.coli через 1 час внутривенным введением 3% раствора тромбопластина («Технология стандарт»). На 7 сутки после введения препаратов осуществляют взятие крови, для анализа показателей активности коагуляционного звена гемостаза и легких для гистологического исследования.The problem is solved by administering the following combination of drugs to male and female outbred rats: intratracheally E.coli lipopolysaccharide (Sigma-Aldrich, hereinafter referred to as LPS) at a dose of 0.5 mg/kg and after applying E.coli LPS after 1 hour, intravenous administration of 3% thromboplastin solution ("Technology standard"). On the 7th day after the administration of the drugs, blood is taken to analyze the activity indicators of the coagulation link of hemostasis and lungs for histological examination.
Новым в предлагаемом изобретении является то, что для постановки модели используется сочетанное введение ЛПС E.coli в дозе 0,5 мг/кг и 3% раствора тромбопластина самцам и самкам аутбредных крыс.What is new in the present invention is that the combined administration of E. coli LPS at a dose of 0.5 mg/kg and 3% thromboplastin solution to males and females of outbred rats is used to set up the model.
Новые признаки проявили в заявляемой совокупности свойства явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено в патентной и научно - медицинской литературе.New features have shown in the claimed set of properties that do not explicitly follow from the prior art in this field and are not obvious to a specialist. An identical set of features was not found in the patent and scientific - medical literature.
Предлагаемый в качестве изобретения способ может быть использован для изучения возможности фармакологической коррекции нарушений свертывающей системы крови, при комплексном влиянии тромбоза легочных сосудов (а также венозных сосудов организма) и бактериального воспаления.The method proposed as an invention can be used to study the possibility of pharmacological correction of disorders of the blood coagulation system, with the complex effect of thrombosis of the pulmonary vessels (as well as venous vessels of the body) and bacterial inflammation.
Исходя из вышеизложенного, следует считать предлагаемое изобретение соответствующим условиям патентоспособности «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».Based on the foregoing, the proposed invention should be considered to meet the conditions of patentability "Novelty", "Inventive step", "Industrial applicability".
Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенных к нему фигур.The invention will become apparent from the following description and the figures appended thereto.
В условиях общей анестезии (внутрибрюшинно: ксилазин 0,3 мл/кг «Interchemiewerken», Нидерланды и золетил 0,2 мл/кг ВИРБАК, Франция) самцам и самкам аутбредных крыс вводят комбинацию препаратов: интратрахеально ЛПС в дозе 0,5 мг/кг и через 1 час после применения ЛПС E.coli внутривенно 3% раствор тромбопластина в объеме 0,3 мл. Затем на 7 сутки осуществляют забор крови для анализа показателей коагуляционного звена гемостаза и легких для гистологического исследования.Under conditions of general anesthesia (intraperitoneally: xylazine 0.3 ml/kg Interchemiewerken, the Netherlands and Zoletil 0.2 ml/kg VIRBAC, France), male and female outbred rats are given a combination of drugs: intratracheally with LPS at a dose of 0.5 mg/kg and 1 hour after the application of LPS E. coli intravenously 3% thromboplastin solution in a volume of 0.3 ml. Then, on the 7th day, blood is taken to analyze the indicators of the coagulation link of hemostasis and lungs for histological examination.
Способ осуществляют следующим образом. В условиях общей анестезии (внутрибрюшинно: ксилазин 0,3 мл/кг и золетил 0,2 мл/кг) самцам и самкам аутбредных крыс вводят комбинацию препаратов ЛПС E.coli и раствора тромбопластина в схеме описанной выше, затем на 7 сутки осуществляют забор крови и легких. Для гистологического исследования, легкие фиксируют в 10% нейтральном забуференном формалине. Гистологические препараты изготавливают по стандартной методике, срезы окрашивают гематоксилином и эозином [2]. Забор крови осуществляют путем пункции сердца, в пластиковые пробирки с добавлением в качестве стабилизатора крови 3,8%-го раствора цитрата натрия в соотношении 9:1. Кровь центрифугируют для получения плазмы в течение 15 минут на 3000 об/мин. Далее осуществляют анализ показателей активности коагуляционного звена - активированное парциальное тромбопластиновое время (АПТВ), протромбиновое время (ПВ), концентрация фибриногена, активность антитромбина III (AT III) на полуавтоматическом коагулометре Helena С-4 (Helena Biosciences Europe, Великобритания) с использованием реактивов производства «Технология-Стандарт» (г. Барнаул, Россия).The method is carried out as follows. Under conditions of general anesthesia (intraperitoneally: xylazine 0.3 ml/kg and zoletil 0.2 ml/kg), male and female outbred rats are given a combination of E. coli LPS preparations and thromboplastin solution in the scheme described above, then blood is taken on the 7th day and lungs. For histological examination, the lungs are fixed in 10% neutral buffered formalin. Histological preparations are made according to the standard method, the sections are stained with hematoxylin and eosin [2]. Blood sampling is carried out by heart puncture, in plastic test tubes with the addition of 3.8% sodium citrate solution as a blood stabilizer in a ratio of 9:1. The blood is centrifuged to obtain plasma for 15 minutes at 3000 rpm. Next, the activity indicators of the coagulation link are analyzed - activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PT), fibrinogen concentration, antithrombin III (AT III) activity on a Helena C-4 semi-automatic coagulometer (Helena Biosciences Europe, UK) using production reagents "Technology-Standard" (Barnaul, Russia).
Достигаемый технический результат заключается в том, что сочетанное введение ЛПС E.coli и раствора тромбопластина приводит к поражению легких, что в свою очередь вызывает значимые изменения в системе гемостаза крови, которые свидетельствуют о сдвиге его параметров в сторону тромбообразования.The technical result achieved is that the combined administration of E. coli LPS and thromboplastin solution leads to lung damage, which in turn causes significant changes in the blood hemostasis system, which indicate a shift in its parameters towards thrombus formation.
ПримерExample
При проведении экспериментов аутбредные крысы были распределены по группам:During the experiments, outbred rats were divided into groups:
1. Контроль самки - аутбредные крысы самки, которым внутривенно вводили физиологический раствор по 0,3 мл.1. Control female - outbred female rats, which were intravenously injected with saline in 0.3 ml.
2. ЛПС+тромбопластин (ЛПС+Т/п) самки - аутбредные крысы самки, которым интратрахеально вводили ЛПС E.coli в дозе 0,5 мг/кг, затем через 1 час внутривенно вводили 3% раствор тромбопластина в объеме 0,3 мл.2. LPS+thromboplastin (LPS+T/p) females - outbred female rats, which were intratracheally injected with E. coli LPS at a dose of 0.5 mg/kg, then after 1 hour 3% thromboplastin solution was injected intravenously in a volume of 0.3 ml .
3. Контроль самцы - аутбредные крысы самцы, которым внутривенно вводили физиологический раствор по 0,3 мл.3. Control males - outbred male rats, which were intravenously injected with a saline solution of 0.3 ml.
4. ЛПС+тромбопластин (ЛПС+Т/п) самцы - аутбредные крысы самцы, которым интратрахеально вводили ЛПС E.coli в дозе 0,5 мг/кг, затем через 1 час внутривенно вводили 3% раствор тромбопластина в объеме 0,3 мл.4. LPS+thromboplastin (LPS+T/p) males - outbred male rats that were intratracheally injected with E. coli LPS at a dose of 0.5 mg/kg, then after 1 hour 3% thromboplastin solution was injected intravenously in a volume of 0.3 ml .
Забор крови для исследования осуществляют в пластиковые пробирки путем пункции сердца. В качестве стабилизатора крови используют 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении 9:1. Кровь центрифугируют для получения плазмы в течение 15 минут на 3000 об/мин.Blood sampling for research is carried out in plastic test tubes by heart puncture. A 3.8% solution of sodium citrate in a ratio of 9:1 is used as a blood stabilizer. The blood is centrifuged to obtain plasma for 15 minutes at 3000 rpm.
Исследование показателей системы коагуляционного гемостаза выполняют на поуавтоматическом коагулометре Helena С-4 (Helena Biosciences Europe, Великобритания) с использованием реактивов «Технология-Стандарт» (г.Барнаул, Россия). Показателями активности коагуляционного звена системы гемостаза являются: активированное парциальное тромбопластиновое время, протромбиновое время, международное нормализованное отношение, концентрация фибриногена.The study of indicators of the coagulation hemostasis system is performed on a Helena C-4 semi-automatic coagulometer (Helena Biosciences Europe, UK) using Technology-Standard reagents (Barnaul, Russia). Indicators of the activity of the coagulation link of the hemostasis system are: activated partial thromboplastin time, prothrombin time, international normalized ratio, fibrinogen concentration.
Статистическую обработку полученных результатов проводят с использованием пакета программ StatPlus версии 7.6.5. Межгрупповые различия оценивают с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия определяют при 0,05% уровне достоверности и отражаются значком *.Statistical processing of the obtained results is carried out using the software package StatPlus version 7.6.5. Intergroup differences are assessed using the non-parametric Mann-Whitney test. Differences are determined at the 0.05% confidence level and indicated by *.
Для гистологического исследования легкие фиксируют в 10% нейтральном забуференном формалине. Гистологические препараты изготавливают по стандартной методике, срезы окрашивают гематоксилином и эозином.For histological examination, the lungs are fixed in 10% neutral buffered formalin. Histological preparations are made according to the standard method, sections are stained with hematoxylin and eosin.
На фигуре 1 изображен срез легкого контрольных животных. На фигуре 2 изображен срез легкого с многочисленными тромбами в сосудах легких, отеком, очаговыми кровоизлияниями и инфильтрацией межальвеолярных прослоек лимфоцитами, макрофагами и нейтрофилами. Гистологическая картина поражения легких у самцов и самок не различалась.The figure 1 shows a section of the lung of control animals. The figure 2 shows a section of the lung with numerous blood clots in the vessels of the lungs, edema, focal hemorrhages and infiltration of the interalveolar layers by lymphocytes, macrophages and neutrophils. The histological picture of lung lesions in males and females did not differ.
В эксперименте на крысах самцах и самках показано, что при применении препаратов в заданной комбинации на 7-е сутки исследования отмечалось снижение протромбинового времени (на 12% и 17% Р<0,05 соответственно), АПТВ (на 16% и 20% Р<0,05 соответственно) и активности ATIII (на 40% и 33% Р<0,05 соответственно), повышение содержания фибриногена (на 88% и 182% Р<0,05 соответственно).In an experiment on male and female rats, it was shown that when using drugs in a given combination on the 7th day of the study, there was a decrease in prothrombin time (by 12% and 17% P<0.05, respectively), APTT (by 16% and 20% P <0.05, respectively) and ATIII activity (by 40% and 33% P<0.05, respectively), an increase in fibrinogen content (by 88% and 182%, P<0.05, respectively).
Способ обеспечивает приближенную к клиническим условиям картину тромбообразования при воспроизведении нарушений системы гемостаза вследствие поражения легких тромбозом легочных сосудов на фоне бактериального воспаления легких, и может быть использовано для моделирования и коррекции патологических состояний системы гемостаза.The method provides a picture of thrombus formation close to clinical conditions when reproducing disorders of the hemostasis system due to damage to the lungs by thrombosis of the pulmonary vessels against the background of bacterial inflammation of the lungs, and can be used to model and correct pathological conditions of the hemostasis system.
Список литературыBibliography
1. Военнов О.В. Механизмы развития легочного повреждения у пациентов с новой коронавирусной инфекцией (обзор литературы)/ Военнов О.В., Загреков В.И., Бояринов Γ.А. и др. // Медицинский альманах. - 2020. - Т. 64. - №3. - С. 15-26.1. Voennov O.V. Mechanisms of the development of pulmonary damage in patients with a new coronavirus infection (literature review) / Voennov O.V., Zagrekov V.I., Boyarinov G.A. etc. // Medical almanac. - 2020. - T. 64. - No. 3. - S. 15-26.
2. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. Медицина, Ленинградское отделение, 1969. 422 с.2. Merkulov G.A. Pathological technique course. Medicine, Leningrad branch, 1969. 422 p.
3. Bikdeli В., Global COVID-19 Thrombosis / Bikdeli В., Madhavan M.V., Jimenez D., et all, Collaborative Group, Endorsed by the ISTH, NATF, ESVM, and the IUA, Supported by the ESC Working Group on Pulmonary Circulation and Right Ventricular Function. J Am Coll Cardiol 2020; 75(23): 2950-2973, https://doi.org/10.1016/i.iacc.2020.04.031.3. Bikdeli B., Global COVID-19 Thrombosis / Bikdeli B., Madhavan M.V., Jimenez D., et all, Collaborative Group, Endorsed by the ISTH, NATF, ESVM, and the IUA, Supported by the ESC Working Group on Pulmonary Circulation and Right Ventricular Function. J Am Coll Cardiol 2020; 75(23): 2950-2973, https://doi.org/10.1016/i.iacc.2020.04.031.
4. Патент РФ №2570162, опубл. 10.12.2015.4. RF patent No. 2570162, publ. 12/10/2015.
5. Патент РФ №2770355, опубл. 15.04.2022.5. RF patent No. 2770355, publ. 04/15/2022.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2800645C1 true RU2800645C1 (en) | 2023-07-25 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2841901C1 (en) * | 2024-12-04 | 2025-06-18 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" | Method for simulating coagulation haemostasis system disorders in lungs |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2285961C2 (en) * | 2004-11-29 | 2006-10-20 | ГУ Научно-исследовательский институт общей реаниматологии РАМН | Method for modeling acute lung injury cases |
| RU2714597C1 (en) * | 2019-03-04 | 2020-02-18 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method of modeling hemostasis system disorders |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2285961C2 (en) * | 2004-11-29 | 2006-10-20 | ГУ Научно-исследовательский институт общей реаниматологии РАМН | Method for modeling acute lung injury cases |
| RU2714597C1 (en) * | 2019-03-04 | 2020-02-18 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method of modeling hemostasis system disorders |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| КАЛАШНИКОВА С.А. и др. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЛИПОПОЛИСАХАРИДА ДЛЯ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ (обзор литературы) / ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ, 2017, т. 24, N 2, стр. 209-219. КОЛЮБАНОВА К.О. и др. ПОКАЗАТЕЛИ СИСТЕМНОЙ ДИСФУНКЦИИ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ ПРИ ОСТРОМ РЕСПИРАТОРНОМ ДИСТРЕСС-СИНДРОМЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ / Актуальные проблемы биомедицины - 2022: Материалы XXVIII Всероссийской конференции молодых учёных с международным участием, Санкт-Петербург, 24-26 марта 2022, стр. 79-80. ПАНТЕЛЕЕВ М.А. и др. ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ДИНАМИКА ГЕМОСТАЗА И ТРОМБОЗА: ТЕОРИЯ И ПРАКТИКА / Тромбоз, гемостаз и реология, 2010, N 4 (44), стр. 48-60. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2841901C1 (en) * | 2024-12-04 | 2025-06-18 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" | Method for simulating coagulation haemostasis system disorders in lungs |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2758953B2 (en) | How to prevent platelet-dependent arterial thrombosis | |
| Purkerson et al. | Pathogenesis of the glomerulopathy associated with renal infarction in rats | |
| Pireaux et al. | Anticoagulation with an inhibitor of factors XIa and XIIa during cardiopulmonary bypass | |
| Singh et al. | Venous stasis-induced fibrinolysis prevents thrombosis in mice: role of α2-antiplasmin | |
| Warkentin et al. | Symmetrical peripheral gangrene in critical illness | |
| WO1998058661A1 (en) | Use of fviia for the treatment of bleedings in patients with a normal blood clotting cascade and normal platelet function | |
| Hung et al. | Multiple thrombotic occlusions of vessels after Russell's viper envenoming | |
| JPH0292363A (en) | Method for preventing formation of blood clot | |
| Bachmann | Disseminated intravascular coagulation | |
| CN114699430A (en) | Mitochondria and its application and application method in pancreatitis | |
| RU2800645C1 (en) | Method of modeling hemostasis disorders in combined lung lesions with bacterial inflammation and pulmonary vascular thrombosis | |
| Wessler et al. | A distinction between the role of precursor and activated forms of clotting factors in the genesis of stasis thrombi | |
| DE3751218T2 (en) | Methods and therapeutic preparations for the treatment of coagulation disorders. | |
| Hellstern et al. | Arterial and venous thrombosis and normal response to streptokinase treatment in a young patient with severe Hageman factor deficiency | |
| WO1997035609A1 (en) | Neovascularization inhibitor containing tissue factor pathway inhibitor | |
| NAKAO et al. | Acute Vascular Lesions Produced by Selected Non-pressor Rental Cortical Extracts | |
| Lai et al. | The establishment and evaluation of a swine model of deinagkistrodon acutus snakebite envenomation | |
| Tandon et al. | Perfusion studies on the formation of mural thrombi with cholesterol-modified and hypercholesterolemic platelets | |
| RU2841901C1 (en) | Method for simulating coagulation haemostasis system disorders in lungs | |
| RU2714597C1 (en) | Method of modeling hemostasis system disorders | |
| Denton et al. | Heparin-induced skin necrosis in a patient with end-stage renal failure and functional protein S deficiency | |
| CN119661696B (en) | Polypeptide PM7 and application thereof in thrombus prevention and treatment | |
| Gu et al. | Protective effects and potential mechanism of tongxinluo on mice with thromboangiitis obliterans induced by sodium laurate | |
| JP7609882B2 (en) | Medicinal Uses of Icaritin | |
| DK175116B1 (en) | Tissue factor protein antagonist for pharmaceutical use, use of tissue factor protein antagonists for the manufacture of a drug for the treatment of hypercoagulative bleeding disorder, and therapeutic dosage form |