RU2847711C1 - Способ диагностики бактериальных и грибковых инфекций кровотока - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для диагностики бактериальных и грибковых инфекций кровотока. У пациента при подозрении на инфекцию кровотока производят забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека. Параллельно производят забор крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые помещают в анализатор до ожидания сигнала роста. При наличии сигнала роста осуществляют высев для идентификации возбудителя и определения его антибиотикочувствительности, а при отсутствии сигнала осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа. В сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана. При положительном результате прокальцитонина и отрицательном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют бактериальный эндотоксин в сыворотке крови, и при его положительном результате констатируют наличие грамотрицательной бактериальной инфекции, а при его отрицательном результате констатируют наличие грамположительной бактериальной инфекции. При отрицательном результате прокальцитонина и положительном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют маннановый антиген Candida в сыворотке крови, и при его положительном результате констатируют наличие дрожжевой инфекции, а при его отрицательном результате назначают дополнительное исследование на наличие иной грибковой инфекции. При положительных результатах прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкане, эндотоксина и маннанового антигена Candida дополнительно осуществляют забор венозной крови во флакон с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов и помещают его в анализатор до ожидания сигнала роста, и при наличии сигнала роста осуществляют высев из этого флакона для идентификации возбудителя и определения его антибиотико- и антимикотикочувствительности, а при отсутствии роста гемокультуры осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа. При положительных результатах прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкане, маннанового антигена Candida и отрицательном эндотоксине диагностируют грамположительную бактериальную и грибковую инфекции, а при положительном эндотоксине диагностируют грамотрицательную бактериальную и грибковую инфекции. При отрицательных результатах прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана проводят повторные исследования в динамике каждые 24 часа. При отсутствии роста гемокультуры, но при положительных результатах прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана, и маннанового антигена Candida рекомендуют повторный посев крови каждые 24 часов, до получения роста культуры. Способ обеспечивает возможность диагностировать бактериальные и грибковые инфекци кровотока за счет определения в крови концентрации прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкана, эндотоксина и маннанового антигена Candida. 6 ил., 7 пр.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано в клинической практике для диагностики бактериальных и грибковых инфекций кровотока.

В этиологии жизнеугрожающих инфекционных осложнений наиболее часто встречаются грамотрицательные и грамположительные бактерии, однако немалую роль играют дрожжевые грибы, в том числе рода Candida (см. Barros N., Rosenblatt R.E., Phipps M.M., Fomin V., Mansour M.K. Invasive fungal infections in liver diseases. Hepatol Commun. 2023; 7(9): e0216. DOI: 10.1097/HC9.0000000000000216; см. Клясова Г.А., Федорова А.В., Фролова И.Н., Хрульнова С.А., Ветохина А.В., Капорская Т.С., и соавт. Антибиотикорезистентность госпитальных штаммов Enterococcus spp., выделенных из гемокультуры больных опухолями системы крови: результаты многоцентрового исследования. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2018; 20 (2): 142-149; см. Klyasova G.A., Malchikova A., Maschan M., Molchanova I., Kutsevalova O., Chernenkaya T., et al. In vitro activity of echinocandins and azoles against Candida spp. isolated from hematological (hem) and non-hematological (non-hem) pacient in 11 center of Russia. Mycoses. 2017; 60; см. Куцевалова О.Ю., Покудина И.О., Розенко Д.А., Мартынов Д.В., Каминский М.Ю. Современные проблемы антибиотикорезистентности грамотрицательных возбудителей нозокомиальных инфекций в Ростовской области. Медицинский вестник Юга России. 2019. Т. 10. № 3. С. 91-96; см. Куцевалова О.Ю., Кит О.И., Панова Н.И., Розенко Д.А., Якубенко С.В. и др. Современные тенденции антибиотикотерапии грамотрицательных возбудителей нозокомиальных инфекций в Ростовской области. Антибиотики и химиотерапия. 2018. Т. 63. № 11-12. С. 24-30).

По-прежнему сложной задачей остается диагностика грибов из-за медленного роста и необходимости специальных знаний. Бактериально- грибковые микст инфекции еще больше усложняют диагностику и продлевают время выдачи результата, что имеет жизненно важное значение для эффективного лечения (см. Ferngren G, Yu D, Unalan-Altintop T, Dinnétz P, Özenci V. Epidemiological patterns of candidaemia: A comprehensive analysis over a decade. Mycoses. 2024 May;67(5):e13729. doi: 10.1111/myc.13729. PMID: 38682399).

Клинические признаки кандидемии неспецифичны и не отличаются от симптомов бактериального сепсиса (см. McCarty TP, White CM, Pappas PG. Candidemia and Invasive Candidiasis. Infect Dis Clin North Am. 2021 Jun;35(2):389-413. doi: 10.1016/j.idc.2021.03.007. PMID: 34016283).

Культуральное исследование крови остается золотым стандартом диагностики, однако сложности культивирования, делают этот метод недостаточно надежным (см. Куцевалова О.Ю., Янковская Г.В., Аствацатурьян Е.И. Характеристика возбудителей инвазивного кандидоза. Проблемы медицинской микологии. 2014. Т. 16. № 2. С. 97; см. Krylov V. B., Solovev, A. S., Puchkin, I. A., Yashunsky, D. V., Antonets, A. V. et. al. Reinvestigation of Carbohydrate Specificity of EBCA-1 Monoclonal Antibody Used for the Detection of Candida Mannan. Journal of Fungi. 2021. Т. 7. №. 7. С. 504-512. DOI: 10.3390/jof7070504; см. Куцевалова О.Ю., Козель Ю.Ю., Алавердян А.И., Гусак Д.А. Анализ этиологической структуры инфекций кровотока с использованием автоматического бактериологического анализатора ЮНОНА® LABSTAR 100. Клиническая лабораторная диагностика. 2022; 67 (2): 101-105. DOI: 10.37489/0235-2990-2022-67-5-6-30-38).

Частота положительных результатов при микробиологическом исследовании крови составляет 21–71% и зависит от профиля пациентов, частоты отбора проб и объема взятой крови (см. Haydour Q., Hage C.A., Carmona E.M., Epelbaum O., Evans S.E., Gabe L.M., et al. Diagnosis of Fungal Infections. A Systematic Review and Meta-Analysis Supporting American Thoracic Society Practice Guideline. Ann Am Thorac Soc. 2019; 16(9):1179-1188. DOI:10.1513/AnnalsATS.201811-766OC).

Необходимы новые методы диагностики, дополняющие традиционные культуральные исследования, в частности, для выявления «недостающих процентов» пациентов с отрицательными результатами посева крови (см. Clancy C.J., Nguyen M.H. Finding the "missing 50%" of invasive candidiasis: how nonculture diagnostics will improve understanding of disease spectrum and transform patient care. Clin Infect Dis. 2013; 56(9):1284-92. DOI:10.1093/cid/cit006).

Использование биомаркеров, оценивающих риск развития инвазии дрожжевых грибов, может способствовать выработке стартовой противогрибковой стратегии. Отрицательные значения биомаркеров также могут быть полезны для исключения инвазивного процесса и прекращения ненужной противогрибковой терапии (см. Lass-Flörl C., Kanj S.S., Govender N.P., Thompson G.R. 3rd, Ostrosky-Zeichner L., Govrins M.A. Invasive candidiasis. Nat Rev Dis Primers. 2024; 10(1):20. DOI: 10.1038/s41572-024-00503-3; см. Fabre V., Sharara S.L., Salinas A.B., Carroll K.C., Desai S., Cosgrove S.E. Does This Patient Need Blood Cultures? A Scoping Review of Indications for Blood Cultures in Adult Nonneutropenic Inpatients. Clin Infect Dis. 2020; 71(5):1339-1347. DOI:10.1093/cid/ciaa039).

В каждом конкретном случае при подозрении на генерализованный инфекционный процесс должен быть выработан индивидуальный алгоритм диагностического поиска, предусматривающий целенаправленное обследование с использованием наиболее информативных в данной ситуации методов (см. Кит О.И., Куцевалова О.Ю., Лысенко И.Б., Дмитриева В.В., Шалашная Е.В., Панова Н.И. Способ определения этиологии лихорадки неясного генеза у онкологических больных. Патент на изобретение RU 2647456 C1, 15.03.2018. Заявка № 2017112212 от 10.04.2017).

Техническим результатом предлагаемого способа является разработка способа, позволяющего диагностировать бактериальные и грибковые инфекци кровотока.

Технический результат достигается тем, что у пациента при подозрении на инфекцию кровотока производят забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека, параллельно производят забор крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые помещают в анализатор до ожидания сигнала роста, и при наличии сигнала роста осуществляют высев для идентификации возбудителя и определения его антибиотикочувствительности, а при отсутствии сигнала осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа, а в сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана, и при положительном результате прокальцитонина и отрицательном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют бактериальный эндотоксин в сыворотке крови и при его положительном результате констатируют наличие грамотрицательной бактериальной инфекции, а при его отрицательном результате констатируют наличие грамположительной бактериальной инфекции; при отрицательном результате прокальцитонина и положительном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют маннановый антиген Candida в сыворотке крови и при его положительном результате констатируют наличие дрожжевой инфекции, а при его отрицательном результате назначают дополнительное исследование на наличие иной грибковой инфекции; при положительных результатах прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкане, эндотоксина и маннанового антигена Candida дополнительно осуществляют забор венозной крови во флакон с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов и помещают его в анализатор до ожидания сигнала роста и при наличии сигнала роста осуществляют высев из этого флакона для идентификации возбудителя и определения его антибиотико- и антимикотикочувствительности; а при отсутствии роста гемокультуры осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа; при положительных результатах прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкане, маннанового антигена Candida и отрицательном эндотоксине констатируют наличие грам-положительной бактериальной и дрожжевой инфекции; при отрицательных результатах прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана проводят повторные иследования в динамике каждые 24 часа, при отсутствии роста гемокультуры, но при положительных результатах прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана, и маннанового антигена Candida рекомендуют повторный посев крови каждые 24 часов, до получения роста культуры.

Новизной способа является то, что применение в определенной последовательности комплекса биомаркеров: прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкана, маннанового антигена Candida и бактериального эндотоксина и флакона с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов позволяет осуществить диагностику бактериальных и грибковых инфекций кровотока в короткие сроки, не дожидаясь стандартных 5 дней культивирования, тем самым назначить раннюю адекватную эмпирическую терапию.

Способ выполнялся на базе лаборатории клинической микробиологии «Национального медицинского исследовательского центра онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону в период с 01.01.2022 по 30.06.2024.

Материалом для исследования послужили образцы венозной крови.

Исследовали кровь пациентов с подозрением на генерализованную инфекцию с помощью автоматического анализатора гемокультур ЮНОНА® Labstar 100 (SCENKER Biological Technology Co., Ltd., Китай).

Изучение биомаркеров проводили на наборах реагентов для определения уровня прокальцитонина (ПКТ) (Вектор-Бест, Россия), мананнового антигена Candida на наборах PLATELIA™ Candida Ag PLUS (Bio-Rad Laboratories, Франция), тест на бактериальный эндотоксин и определение (1-3)-β-D-глюкана (Era Biology Group, Китай).

Способ выполняется следующим образом.

У пациента при подозрении на инфекцию кровотока производят забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека, параллельно проводят посев крови, согласно действующим Методическим указаниям МУ 4.2.2039-05 "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории" (см. Методические указания МУ 4.2.2039-05 "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории" (утв. и введены в действие Главным государственным санитарным врачом РФ 23 декабря 2005 г.) во флаконы с питательной средой с нейтрализаторами антибиотиков для культивирования аэробов и анаэробов ЮНОНА®, которые помещают в анализатор до ожидания сигнала роста и при наличии сигнала роста осуществляют высев для идентификации возбудителя и определения его антибиотикочувствительности, а при отсутствии сигнала осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа, а в сыворотке крови определяют концентрацию ПКТ и (1-3)-β-D-глюкана.

При положительном результате ПКТ и отрицательном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют бактериальный эндотоксин в сыворотке крови и при его положительном результате констатируют наличие грамотрицательной бактериальной инфекции, а при его отрицательном результате констатируют наличие грамположительной бактериальной инфекции; при отрицательном результате ПКТ и положительном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют маннановый антиген Candida в сыворотке крови и при его положительном результате констатируют наличие дрожжевой инфекции, а при его отрицательном результате назначают дополнительное исследование на наличие иной грибковой инфекции.

При положительных результатах ПКТ, (1-3)-β-D-глюкане, эндотоксина и маннанового антигена Candida дополнительно осуществляют забор венозной крови во флакон с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов и помещают его в анализатор до ожидания сигнала роста и при наличии сигнала роста осуществляют высев из этого флакона для идентификации возбудителя и определения его антибиотико- и антимикотикочувствительности; а при отсутствии роста гемокультуры осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа.

При положительных результатах ПКТ, (1-3)-β-D-глюкане, маннанового антигена Candida и отрицательном эндотоксине констатируют наличие грамположительной бактериальной и дрожжевой инфекции; при отрицательных результатах ПКТ и (1-3)-β-D-глюкана проводят повторные исследования в динамике каждые 24 часа.

При отсутствии роста гемокультуры, но при положительных результатах ПКТ и (1-3)-β-D-глюкана, и маннанового антигена Candida рекомендуют повторный посев крови каждые 24 часов, до получения роста культуры.

Приготовление раствора хлорамфеникола (Sigma-Aldrich) для гемокультивирования дрожжевых грибов.

50 мг хлорамфеникола растворить в 2 мл этилового спирта. Тщательно перемешать и асептически разлить по 150 мкл в стерильные конические эппендорфы. Далее, из каждого эппендорфа с помощью шприца перенести (через прокол резиновой пробки) во флакон с питательной средой для культивирования аэробов Юнона®. Приготовленные флаконы с ингибитором проверяют на отсутствие контаминации микроорганизмами путем инкубирования в аэробной атмосфере при 35°C в течение 72 часов (см. Меньшиков В.В., Козлов Р.С., Поляк М.С., Михайлова В.С., Иноземцева Л.О., Шуляк Б.Ф. и соавт. Клинические рекомендации Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований. 2014. URL: https://fedlab.ru/upload/medialibrary/3ca/kochetov-ag.-klin.-rek._-kld_-2014_-vlkk-pitatelnykh-sred.pdf). Оптический датчик на дне флакона позволит судить о стерильности флакона.

Приводим примеры применения способа.

Пример 1. Пациент А., 48 лет, поступила в абдоминальное отделение «НМИЦ онкологии» с диагнозом «Злокачественное новообразование желудка» 3 стадии. После повторной операции по поводу несостоятельность анастомоза переведена в отделение анестезиологии и реанимации. ЧСС >90/мин, ЧД >20/мин, пульс 95 ударов в минуту, артериальное давление пониженное (80/65 мм рт.ст.). Общая слабость, спутанное состояния, лихорадка, температура 38.9°С. Лабораторные показатели общего анализа крови (ОАК): Hb – 76 г/л, ц.п – 0,80, эритроциты 2,89×1012/л, лейкоциты 25×10⁹/л, СОЭ 50 мм/ч.

Пациенту был осуществлен забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека и параллельно для посева крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые поместили в анализатор до ожидания сигнала роста.

Параллельно определили в сыворотке крови прокальцитонин (ПКТ) - концентрация 12,8 нг/мл и (1-3)-β-D-глюкан - концентрация 50,9 пг/мл. Дополнительно, так как положительный ПКТ, выполнен тест на эндотоксин - концентрация 0,62.

Констатировали наличие грамотрицательной инфекции. По результатам концентрации ПКТ и бактериального эндотоксина назначена эмпирическая противобактериальная терапия с учетом грамотрицательного возбудителя.

Через 19 часов получили сигнал роста во флаконе со средой питательной с нейтрализаторами антибиотиков для культивирования аэробов ЮНОНА® (см. Фиг. 1).

Еще через 38 часов получен результат идентификации и антибиотикограмма – полирезистентная P. aeruginosa с продукцией карбапенемаз. Проведена целевая корректировка в антибактериальной терапии.

Было сделано заключение о том, что у больного подтвердилсь грамотрицательный возбудитель инфекции кровотока. Результаты биомаркеров позволили начать незамедлительно адекватную терапию, результат антибиотикограммы скорректировать результат.

Пример 2. Пациент П., 56 лет, поступил в отделение терапии РОКБ 1 с предварительным диагноз «Пневмония, сепсис». При поступлении: ЧСС 96/мин, ЧД 25/мин, пульс 112 ударов в минуту, артериальное давление 75/60 мм рт. ст. Общая слабость, лихорадка, температура тела в пределах 37.8-38.2°С. Одышка и потливость при минимальной физической нагрузке. Лабораторные показатели ОАК: Hb – 110 г/л, ц.п – 0, 82, эритроциты 3,0×10¹²/л, лейкоциты 12×10⁹/л, СОЭ 30 мм/ч.

Пациенту был осуществлен забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека и параллельно для посева крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые поместили в анализатор до ожидания сигнала роста.

Параллельно определили в сыворотке крови ПКТ - концентрация 8 нг/мл, тест на бактериальный эндотоксин - концентрация 0,30, концентрация (1-3)-β-D-глюкана - 45,5 пг/мл.

Констатировали наличие грамположительной инфекции. По результатам положительных ПКТ и отрицательного теста на бактериальный эндотоксин назначена эмпирическая противобактериальная терапия с учетом грамположительного возбудителя.

Через 23 часа получили сигнал роста во флаконе со средой питательной с нейтрализаторами антибиотиков для культивирования аэробов ЮНОНА®. При микроскопии – грамположительные цепочки кокков.

Еще через 38 часов получен окончательный результат S. pneumoniae. Проведена идентификации возбудителя и определение его антибиотикочувствительности. К моменту роста культуры наблюдалась положительная динамика. Результат посева и антибиотикограмма позволили скорректировать терапию.

Пример 3. Пациент М, 21 год. Поступил в хирургическое отделение РОКБ 1 с диагнозом «Острый аппендицит». Через 5 дней после удаления аппендицита пациент пожаловался на боль в животе и тошноту. При осмотре: функциональная кишечная непроходимость, напряжение брюшных мышц, выраженная интоксикация. Состояние тяжелое. ЧСС 95/мин, ЧД 25/мин, пульс 110 ударов в минуту, артериальное давление пониженное (75/60 мм рт.ст.). Лабораторные показатели ОАК: Hb – 95 г/л, ц.п – 0,80, эритроциты 2,80×10¹²/л, лейкоциты 25×10⁹/л, СОЭ 35 мм/ч. Общая слабость, лихорадка, повышенная температура (37.8-38.5°С).

Пациенту был осуществлен забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека и параллельно для посева крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые поместили в анализатор до ожидания сигнала роста.

Параллельно определили в сыворотке крови: концентрацию ПКТ - 0,2 нг/мл, (1-3)-β-D-глюкана - 80 пг/мл. Концентрация маннанового антигена Candida spp. - 350 пг/мл.

Констатировали наличие дрожжевой инфекции. По результатам концентрации ПКТ и (1-3)-β-D-глюкана и маннанового антигена Candida spp. Назначена эмпирическая противогрибковая терапия.

Через 41 час получили сигнал роста во флаконе со средой питательной с нейтрализаторами антибиотиков для культивирования аэробов ЮНОНА®. При микроскопии клетки дрожжевых грибов. Еще через 2 суток рост Candida glabrata. Проведена идентификации возбудителя и определение его антимикотикочувствительности (см. Фиг. 2).

Таким образом, с помощью заявленного способа получили адекватный результат для стартовой терапии раньше более чем на 40 часов. Окончательная терапия была скорректирована с учетом результата микробиологического исследования.

Пример 4. Пациент Ф, 59 лет поступила в абдоминальное отделение «НМИЦ онкологии» с диагнозом «Злокачественное образование толстой кишки». После повторной операции по поводу несостоятельности кишечного анастомоза, переведена в состоянии средней тяжести в отделении анестезиологии и реанимации. ЧСС 92/мин, ЧД 28/мин, пульс 95 ударов в минуту, артериальное давление 70/90 мм рт. ст. Общая слабость, спутанное состояния, лихорадка, температура до 39.2°С. Лабораторные показатели ОАК: Hb – 75 г/л, ц.п – 0,80, эритроциты 2,67×10¹²/л, лейкоциты 19×10⁹/л, СОЭ 32 мм/ч.

Пациенту был осуществлен забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека и параллельно для посева крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые поместили в анализатор до ожидания сигнала роста.

Параллельно определили в сыворотке крови: концентрация ПКТ - 12,8 нг/мл, тест на эндотоксин - концентрация 0,65, концентрация (1-3)-β-D-глюкана - 83 пг/мл. Концентрация маннанового антигена Candida spp. - 500 пг/мл.

Констатировали наличие бактериально-грибковой инфекции. Дополнительно осуществили забор венозной крови во флакон с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов и поместили его в анализатор до ожидания сигнала роста.

Назначена эмпирическая терапия с учетом микст инфекции (возможного грамотрицательного возбудителя и дрожжевых грибов).

Через 12 часов получили сигнал роста во флаконе со средой питательной с нейтрализаторами антибиотиков для культивирования аэробов ЮНОНА®. При микроскопии – грамотрицательные бактерии. Результат идентификации - K.pneumoniae (см. Фиг. 3).

Проведена идентификации возбудителя и определение его антибиотикочувствительности.

Еще через 50 часов во флаконе со средой питательной с нейтрализаторами антибиотиков для культивирования аэробов ЮНОНА® с ингибитором бактериального ростав сигнал роста. Результат идентификации Candida glabrata (см. Фиг. 4).

Проведена идентификации возбудителя и определение его антимикотикочувствительности.

Заявленный алгоритм позволил выявить наиболее проблемную в лечении бактериально-кандидозную ассоциацию и безпромедления по результатам биомаркеров начать своевременную адекватную эмперическую терапию бактериально-грибковой микст инфекции. Дополнительный флагон для грибов в свою очередь позволил получить рост C. glabrata в ассоциации с K.pneumoniae.

Следует учесть, что K.pneumoniae плохо поддается эмперической терапии с учетом высокого уровня резистентности. Грибы C. glabrata так же плохо поддаются лечению, так как обладают природной резистентностью к основным антимикотикам. Дополнительный флакон с ингибитором бактериального роста позволил получить возбудителей при ассоциации, подтвердить кандидозную инфекцию и провести

Пример 5. Пациент М. 30 лет, поступила в хирургическое отделение РостГМУ с диагнозом «Панкреонекроз». При осмотре: жалобы на сильную боль опоясывающего характера, в левую часть живота, поясницу. Температура тела 38.0°С и выше. Интоксакация. Проведена экстренная операция. Через несколько дней повторное оперативное вмешательств на поджелудочной железе по поводу несостоятельности анастомозов и швов. Пациентка переведена в отделение реанимации, состояние средней тяжести. ЧСС 90/мин, ЧД 22/мин, число лейкоцитов в крови 12×10⁹/л. Общая слабость, лихорадка, температура больше 38.0°С. Лабораторные показатели ОАК: Hb – 90 г/л, ц.п – 0,80, эритроциты 2,6×1012/л, лейкоциты 15×10⁹/л, СОЭ 35 мм/ч.

Пациенту был осуществлен забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека и параллельно для посева крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые поместили в анализатор до ожидания сигнала роста.

Параллельно определили в сыворотке крови: концентрация ПКТ - 12,8 нг/мл, тест на эндотоксин - 0,28, (1-3)-β-D-глюкана - 116,8 пг/мл. Концентрация маннанового антигена Candida spp. - 250 пг/мл.

Согласно результатам предложенного алгоритма назначена терапия антибактериальная (с учетом грамположительного возбудителя) и противогрибковая.

Через 14 часов сигнал роста, при микроскопии – грамположительные цепочки кокков (см. Фиг. 5).

Проведена идентификации возбудителя - рост E. faecium, и определение его антибиотикочувствительности. При окончательной идентификации, через 25 часов во флаконе со средой питательной для культивирования аэробов ЮНОНА® с ингибитором бактериального ростав сигнал. При микроскопии клетки дрожжевых грибов. Еще через двое суток окончательный результат - C. albicans (см. Фиг. 6).

Проведена идентификации возбудителя - рост C. albicans, и определение его антимикотикочувствительности.

Констатировали наличие бактериально-грибковой инфекции. Дополнительно осуществили забор венозной крови во флакон с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов и поместили его в анализатор до ожидания сигнала роста.

Результаты биомаркеров позволили начать своевременную адекватную эмперическую терапию бактериально-грибковой микст инфекции. Результат (1-3)-β-D-глюкана и мананновый антиген позволил не пропустить инфекцию, вызванную дрожжевыми грибами и начать раннюю противогрибковую терапию.

С помощью флакона с ингибитором бактериального роста для культивирования дрожжевых грибов была получена культура C. albicans. Проведена идентификация и определение антимикотикограммы. И подтверждена причастность дрожжевых грибов к этиологии инфекционного процесса.

Пример 6. Пациент Е., 47 лет поступил в онкогематологическое отделение «НМИЦ онкологии» с диагнозом «Острый лимфобластный лейкоз». При осмотре пациент жаловался на общую слабость, повышение температуры тела до 37.8°С. ЧСС 92/мин, ЧД -22/мин. Лабораторные показатели ОАК: Hb – 45 г/л, ц.п – 0,80, эритроциты 0,9х10¹²/л, лимфоциты 73,7%, моноциты 15,9%, лейкоциты 20,9×10⁹/л, тромбоциты - 84 тыс., СОЭ 66 мм/ч.

Пациенту был осуществлен забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека и параллельно для посева крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые поместили в анализатор до ожидания сигнала роста.

Параллельно определили в сыворотке крови: концентрация ПКТ - 1,8 нг/мл, концентрация (1-3)-β-D-глюкана - 48,5 пг/мл.

Через 24 – отсутствие роста гемокультуры, учитывая тяжесть состояния, назначены повторные исследования по алгоритму в динамике через 24 часа.

Пример 7. Пациент Е, 17 лет поступила в детское отделение «НМИЦ онкологии» с диагнозом диагнозом острый лимфобластный лейкоз, В-II иммуновариант на плановую химиотерапию на плановую химиотерапию. После очередного этапа химиотерапии пациентка пожаловалась на общую слабость, быструю утомляемость, повышение температуры тела до 37.5-37.8°С.

ЧСС -94/мин, ЧД 26 в мин. Лабораторные показатели ОАК: Hb – 27 г/л, ц.п – 0,80, эритроциты 0,9×10¹²/л, лимфоциты 73,7%, моноциты 15,9%, лейкоциты 20,9×10⁹/л, тромбоциты - 84 тыс., СОЭ 80 мм/ч.

Пациенту был осуществлен забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека и параллельно для посева крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые поместили в анализатор до ожидания сигнала роста.

Параллельно определили в сыворотке крови: концентрацию ПКТ - 38,4 нг/мл, тест на эндотоксин - концентрация 0,28, концентрация (1-3)-β-D-глюкана - 186,3 пг/мл, концентрация маннанового антигена Candida spp. - 250 пг/мл.

Констатировали наличие бактериально-грибковой инфекции.

Дополнительно осуществили забор венозной крови во флакон с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов и поместили его в анализатор до ожидания сигнала роста.

Результат посева крови через 24 часа – отсутствие роста. Были назначены повторные посевы крови каждые 24 часа с целью получить гемокультуру. На эмперической терапии через 3 суток была отмечена положительная динамика. На 5 сутки концентрация ПКТ - 5,8 нг/мл, концентрация (1-3)-β-D-глюкана - 59 пг/мл.

Данны способом был расчитан прогноз 120 пациентам.

Технико-экономическая эффективность способа заключается в том, что применение в определенной последовательности комплекса биомаркеров: прокальцитонина, (1-3) - β-D-глюкана, маннанового антигена Candida и бактериального эндотоксина и флакона с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов позволяет диагностировать бактериальные и грибковые инфекции кровотока.

Claims (1)

1. Способ диагностики бактериальных и грибковых инфекций кровотока, заключающийся в том, что у пациента при подозрении на инфекцию кровотока производят забор крови из локтевой вены в одну пробирку для получения сыворотки крови человека, параллельно производят забор крови в два флакона для гемокультивирования аэробной и анаэробной микрофлоры, которые помещают в анализатор до ожидания сигнала роста, и при наличии сигнала роста осуществляют высев для идентификации возбудителя и определения его антибиотикочувствительности, а при отсутствии сигнала осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа, а в сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана, и при положительном результате прокальцитонина и отрицательном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют бактериальный эндотоксин в сыворотке крови и при его положительном результате констатируют наличие грамотрицательной бактериальной инфекции, а при его отрицательном результате констатируют наличие грамположительной бактериальной инфекции; при отрицательном результате прокальцитонина и положительном (1-3)-β-D-глюкане дополнительно определяют маннановый антиген Candida в сыворотке крови и при его положительном результате констатируют наличие дрожжевой инфекции, а при его отрицательном результате назначают дополнительное исследование на наличие иной грибковой инфекции; при положительных результатах прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкане, эндотоксина и маннанового антигена Candida дополнительно осуществляют забор венозной крови во флакон с ингибитором бактериального роста для гемокультивирования дрожжевых грибов и помещают его в анализатор до ожидания сигнала роста и при наличии сигнала роста осуществляют высев из этого флакона для идентификации возбудителя и определения его антибиотико- и антимикотикочувствительности; а при отсутствии роста гемокультуры осуществляют повторный забор крови каждые 24 часа; при положительных результатах прокальцитонина, (1-3)-β-D-глюкане, маннанового антигена Candida и отрицательном эндотоксине диагностируют грамположительную бактериальную и грибковую инфекции, а при положительном эндотоксине диагностируют грамотрицательную бактериальную и грибковую инфекции; при отрицательных результатах прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана проводят повторные исследования в динамике каждые 24 часа, при отсутствии роста гемокультуры, но при положительных результатах прокальцитонина и (1-3)-β-D-глюкана, и маннанового антигена Candida рекомендуют повторный посев крови каждые 24 часа до получения роста культуры.