RU2842439C2 - Модифицированные вирусные частицы и пути их применения - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Описан рекомбинантный капсидный белок аденоассоциированного вируса (AAV), для доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку, где по меньшей мере 5 аминокислот аминокислотной последовательности капсидного белка AAV характеризуются по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью из по меньшей мере 5 аминокислот капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, где капсидный белок AAV выбран из группы, состоящей из: (a) химерного капсидного белка VP1 AAV, (b) нехимерного капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, которая снижает естественный тропизм капсидного белка AAV и/или создает детектируемую метку, (c) химерного капсидного белка VP2 AAV, (d) нехимерного капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, которая снижает естественный тропизм капсидного белка AAV и/или создает детектируемую метку, (e) химерного капсидного белка VP3 AAV, и (f) нехимерного капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, которая снижает естественный тропизм капсидного белка AAV и/или создает детектируемую метку. Раскрыта рекомбинантная частица AAV для доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку, содержащая описанный капсид AAV. Также описана молекула нуклеиновой кислоты для продуцирования раскрытого рекомбинантного капсидного белка AAV. Раскрыта упаковывающая клетка для продуцирования рекомбинантных частиц AAV. Раскрыт способ получения рекомбинантной частицы AAV. Раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая: описанную рекомбинантную частицу AAV, содержащую рекомбинантный капсидный белок AAV. Описан способ доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку-мишень in vitro или ex vivo. Изобретение предоставляет адаптированный AAV, который может быть перспективной платформой генной терапии для лечения пациента, который нуждается в этом, и может быть особенно применим у пациентов, исключенных из современных методов лечения, включающих современные терапевтические частицы AAV, вследствие высокого титра антител против современных терапевтических частиц AAV. 9 н. и 11 з.п. ф-лы, 18 ил., 1 табл., 13 пр.

Description

[0001] Перечень последовательностей, записанный в файле 10364WO01 ST25.txt, имеет размер 269 килобайт, создан 19 мая 2020 года и настоящим включен посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0002] Настоящее изобретение, раскрытое в данном документе, относится к способам получения и применения рекомбинантных частиц на основе AAV, содержащих капсидные белки AAV животного, не являющегося приматом, и/или отдаленного AAV.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Доставка генов в конкретные клетки-мишени стала одной из важнейших технологий в современной медицине для потенциального лечения множества хронических и генетических заболеваний. До настоящего времени прогресс в клиническом применении генной терапии ограничивало отсутствие идеальных носителей для доставки генов.

[0004] В идеальном варианте носитель для доставки генов способен (1) стабильно вводить генетический материал в необходимые клетки, (2) избегать введения генетического материала в нецелевые клетки и (3) избегать нейтрализации под действием иммунной системой пациента, например, антител пациента. Хотя в настоящее время доступны несколько непатогенных носителей, способность этих носителей осуществлять трансдукцию специфических клеток и оставаться невидимыми для иммунных ответов хозяина остается не слишком идеальной.

[0005] Например, вирусные частицы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), выделенного у приматов, в частности у человека, например AAV, относящийся к серотипам AAV2, AAV4, AAV6, AAV7, AAV8 и AAV9, были в центре внимания многих исследований, поскольку AAV способны осуществлять трансдукцию широкого спектра видов приматов и тканей in vivo без признаков токсичности или патогенности (Muzyczka, et al. (1992) Current Topics in Microbiology and Immunology, I58:97-129). Более того, AAV безопасно осуществляет трансдукцию постмитотических тканей. Хотя вирус иногда может интегрироваться в хромосомы хозяина, он осуществляет это весьма редко, встраиваясь в локус safe-harbor в хромосоме 19 человека, и только когда в транс-положении обеспечены белки репликации (Rep). Геномы AAV быстро замыкаются в кольцо и образуют конкатемеры в инфицированных клетках и существуют в стабильном эписомальном состоянии в инфицированных клетках, обеспечивая долгосрочную стабильную экспрессию своих полезных нагрузок.

[0006] Кроме того, в последние годы добились управления и перенаправления инфицирования AAV приматов на конкретные клетки. Многие достижения в направленной генной терапии с применением вирусных частиц можно кратко описать как нерекомбинационную (негенетическую) или рекомбинационную (генетическую) модификацию вирусной частицы, которая приводит к псевдотипированию, расширению тропизма и/или перенацеливанию естественного тропизма вирусной частицы (обзор в Nicklin and Baker (2002) Curr. Gene Ther. 2:273-93; Verheiji and Rottier (2012) Advances Virol 2012:1-I5).

[0007] При прямом рекомбинационном подходе к нацеливанию нацеливающий лиганд непосредственно вставляется в вирусный капсид или соединяется с ним, то есть гены белков вирусных капсидов модифицируют для экспрессии капсидных белков, содержащих гетерологичный нацеливающий лиганд. Затем нацеливающий лиганд перенаправляет, например, связывает рецептор или маркер, преимущественно или исключительно экспрессируемый на клетке-мишени (Stachler et al. (2006) Gene Ther. 13:926 931; White et al. (2004) Circulation 109:513 519; см. также Park et al., (2007) Frontiers in Bioscience 13:2653-59; Girod et al. (1999) Nature Medicine 5:1052-56; Grifman et al. (2001) Molecular Therapy 3:964 75; Shi et al. (2001) Human Gene Therapy 12:1697-1711; Shi and Bartlett (2003) Molecular Therapy 7:5I5-525).

[0008] При непрямых рекомбинационных подходах вирусный капсид модифицируют с помощью гетерологичного «каркаса», который затем связывается с адаптером, который включает нацеливающий лиганд. Адаптор связывается с каркасом и клеткой-мишенью (Arnold et al. (2006) Mol. Ther. 5:125 132; Ponnazhagen et al. (2002) J. Virol. 76:12900-907; см. также WO 97/05266). Каркасы, такие как (1) Fc-связывающие молекулы (например, Fc-рецепторы, белок А и т.д.), которые связываются с Fc антител-адаптеров, (2) (стрепт)авидин, который связывается с биотинилированными адаптерами, (3) биотин, который связывается с адаптерами, слитыми со (стрепт)авидином, (4) детектируемая метка, которая пригодна для обнаружения и/или выделения вирусных частиц, связанных биспецифическим адаптером, способным нековалентно связывать детектируемую метку и молекулу-мишень, и недавно открытые (5) связывающиеся пары белок:белок, которые образуют изопептидные связи, были описаны для множества вирусных частиц (см., например, Gigout et al. (2005) Molecular Therapy 11:856-865; Stachler et al. (2008) Molecular Therapy 16:I467 I473; Quetglas et al. (2010) Virus Research I53:179 196; Ohno et al. (1997) Nature Biotechnology I5:763-767; Klimstra et al. (2005) Virology 338:9 21).

[0009] Несмотря на достижения, обеспечивающие возможность направлять инфекцию AAV, перенацеленный AAV в качестве носителя для доставки генов остается не слишком идеальным вследствие наличия нейтрализующих антител против капсидов AAV (NAb). Наличие NAb к AAV у детей позволяет предположить, что инфицирование AAV происходит в раннем возрасте (Calcedo et al. (2011) ASGCT; Huser et al. (2017) J. Virol. 91:e02137 16). Было показано, что антитела, образуемые при инфицировании AAV в раннем возрасте, могут поставить под угрозу последующее применение вектора для генной терапии на основе AAV, полученного из AAV, который распознается и нейтрализуется этими предсуществующими антителами (Hurlbut et al. (2010) Mol. Ther. 18:1983-94; Jiang et al. (2006) Blood 108:3321-8; Manno et al. (2006) Nat. Med. 12:342-7; Scallan et al. (2006) Blood 107:1810-7; Wang et al. (2010) Mol. Ther. 18:126-34). Более того, наличие титров нейтрализующих антител против некоторого серотипа AAV является клинически значимым, поскольку пациенты с высокими титрами считаются не подходящими для любого средства лечения, содержащего вирус данного серотипа (Jeune et al. (2013) Hum Gene Ther Methods 24:59-67).

[0010] Таким образом, сохраняется потребность в вирусных системах, которые являются непатогенными, адаптируемыми для целенаправленного переноса представляющих интерес нуклеиновых кислот в различные клетки-мишени, и которые преодолевают препятствия, создаваемые предсуществующими антителами у пациентов, нуждающихся в лечении.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0011] В данном документе описана стратегия, которая может смягчить одновременно несколько проблем, ассоциированных с предыдущими и современными подходами к лечению с помощью частиц на основе аденоассоциированного вируса (AAV). Не желая быть связанными теорией, ожидается, что у большинства людей не будут присутствовать предсуществующие NAb против AAV, с которыми люди ранее взаимодействовали на низком уровне. Однако возможность успешного манипулирования с такими серотипами AAV для применения их в качестве вектора для генной терапии, способного нацеливаться и инфицировать определенные клетки и/или избегать перекрестной реактивности с любыми предсуществующими антителами в человеческой популяции, до сих пор оставалась неизвестной.

[0012] В данном документе показано, что капсидный белок AAV вида животного, не являющегося приматам, можно модифицировать, чтобы обеспечить целенаправленное введение представляющего интерес нуклеотида в клетки млекопитающего другого вида животных. Более того, в данном документе продемонстрировано доказательство того, что модифицированная таким образом частица на основе AAV животного, не являющегося приматом, по-прежнему с меньшей вероятностью распознается и/или обнаруживается предсуществующими антителами, которые встречаются в человеческой популяции, чем существующие терапевтические методы лечения на основе AAV, которые базируются на хорошо изученных серотипах AAV человека. Соответственно, в данном документе описаны рекомбинантные вирусные частицы AAV, которые способны инфицировать выбранную клетку и лучше способны избегать нейтрализации под действием предсуществующих антител.

[0013] В данном документе описаны рекомбинантные вирусные частицы AAV, содержащие (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV,

где по меньшей мере одно из:

a) капсидного белка VP1 AAV,

b) любой части капсидного белка VP1 AAV,

c) капсидного белка VP2 AAV,

d) любой части капсидного белка VP2 AAV,

e) капсидного белка VP3 AAV и

f) любой части капсидного белка VP3 AAV

содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или его части, или отдаленного AAV или его части,

где

I. по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм вирусной частицы AAV,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации, предпочтительно где точечная мутация снижает естественный тропизм вирусной частицы AAV и/или создает детектируемую метку,

(d) химерной аминокислотной последовательности и

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d), и/или

II. последовательность ITR или ее часть содержат последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью ITR второго AAV или его части, где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина.

[0014] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная вирусная частица AAV содержит (i) кап си д AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV,

где по меньшей мере одно из:

a) капсидного белка VP1 AAV,

b) капсид ного белка VP2 AAV и

c) капсидного белка VP3 AAV

содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV,

где

I. по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм вирусной частицы AAV,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации, предпочтительно где точечная мутация снижает естественный тропизм вирусной частицы AAV и/или создает детектируемую метку,

(d) химерной аминокислотной последовательности и

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d), и/или

II. последовательность ITR или ее часть содержат последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью ITR второго AAV или его части, где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина.

[0015] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная вирусная частица AAV содержит (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV,

где по меньшей мере одно из:

a. любой части капсидного белка VP1 AAV,

b. любой части капсидного белка VP2 AAV и

c. любой части капсидного белка VP3 AAV

содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или его части, или отдаленного AAV или его части,

где

I. по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм вирусной частицы AAV,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации, предпочтительно где точечная мутация снижает естественный тропизм вирусной частицы AAV и/или создает детектируемую метку,

(d) химерной аминокислотной последовательности и

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d), и/или

II. последовательность ITR или ее часть содержат последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью ITR второго AAV или его части, где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина.

[0016] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантной вирусной частицы AAV данная рекомбинантная вирусная частица содержит (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV, где по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или его части, и где по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм вирусной частицы AAV,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации, предпочтительно где точечная мутация снижает естественный тропизм вирусной частицы AAV и/или создает детектируемую метку,

(d) химерной аминокислотной последовательности и

(е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d),

где полная последовательность ITR или часть последовательности ITR содержит последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с ITR AAV животного, не являющегося приматом, где необязательно последовательность ITR содержит химерную последовательность нуклеиновой кислоты, и где часть химерной последовательности нуклеиновой кислоты, характеризующаяся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с ITR AAV животного, не являющегося приматом, или его части, функционально связана с частью химерной последовательности нуклеиновой кислоты, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с ITR второго AAV или его части, где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом, и где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина.

[0017] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная вирусная частица AAV содержит (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV, где по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или его части,

где последовательность ITR или ее часть содержат последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью ITR второго AAV или его части, где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом,

где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина, и

где необязательно по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм вирусной частицы AAV,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации, предпочтительно где точечная мутация снижает естественный тропизм вирусной частицы AAV и/или создает детектируемую метку, и

(d) любой комбинации (а)-(с).

[0018] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная вирусная частица AAV содержит (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV, где по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV содержит химерную аминокислотную последовательность, содержащую (А) аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или его части, функционально связанную с (В) аминокислотной последовательностью, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка второго AAV или его части, где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом, где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина, и где необязательно по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV, содержащий химерную аминокислотную последовательность, дополнительно содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) детектируемой метки и

(c) комбинации (а) и (b).

[0019] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантной вирусной частицы AAV данная рекомбинантная вирусная частица содержит (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV, где по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка отдаленного AAV или его части, и где по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм вирусной частицы AAV,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации, предпочтительно где точечная мутация снижает естественный тропизм вирусной частицы AAV и/или создает детектируемую метку,

(d) химерной аминокислотной последовательности и

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d),

где полная последовательность ITR или часть последовательности ITR содержит последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с ITR отдаленного AAV, где необязательно последовательность ITR содержит химерную последовательность нуклеиновой кислоты, и где часть химерной последовательности нуклеиновой кислоты, характеризующаяся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с ITR отделенного AAV или его части, функционально связана с частью химерной последовательности нуклеиновой кислоты, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с ITR второго AAV или его части, где второй AAV отличается от отдаленного AAV, и где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина.

[0020] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная вирусная частица AAV содержит (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV, где по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка от отделенного AAV или его части,

где последовательность ITR или ее часть содержат последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью ITR второго AAV или его части, где второй AAV отличается от отдаленного AAV,

где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина, и

где необязательно по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм вирусной частицы AAV,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации, предпочтительно где точечная мутация снижает естественный тропизм вирусной частицы AAV и/или создает детектируемую метку, и

(d) любой комбинации (а)-(с).

[0021] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная вирусная частица AAV содержит (i) капсид AAV, содержащий капсидные белки VP1, VP2 и VP3 AAV, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV, где по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV содержит химерную аминокислотную последовательность, содержащую (А) аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка отдаленного AAV или его части, функционально связанную с (В) аминокислотной последовательностью, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка второго AAV или его части, где второй AAV отличается от отделенного AAV, где рекомбинантная вирусная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, предпочтительно примата-хозяина, и где необязательно по меньшей мере один из капсидного белка VP1 AAV, любой части капсидного белка VP1 AAV, капсидного белка VP2 AAV, любой части капсидного белка VP2 AAV, капсидного белка VP3 AAV и любой части капсидного белка VP3 AAV, содержащий химерную аминокислотную последовательность, дополнительно содержит модификацию, выбранную из группы, состоящей из:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) детектируемой метки и

(с) комбинации (а) и (b).

[0022] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вирусная частица AAV содержит капсид AAV, где по меньшей мере один капсидный белок AAV (например, капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV) указанного капсида AAV содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности капсидного белка, выбранного из группы, состоящей из капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV и их комбинации, и где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV модифицирован с включением (а) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) детектируемой метки, (с) точечной мутации, (d) химерной аминокислотной последовательности, содержащей часть аминокислотной последовательности капсидного белка другого, например второго, AAV, которая функционально связана с указанной аминокислотной последовательностью капсидного белка, выбранного из группы, состоящей из капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации, и (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вирусная частица AAV содержит капсид AAV, где по меньшей мере один капсидный белок AAV (например, капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV) указанного капсида AAV или его часть характеризуется значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с капсидным белком, выбранным из группы, состоящей из капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, части капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV, части капсидного белка отдаленного AAV и их комбинации, и где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV модифицирован с включением (а) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) детектируемой метки, (с) точечной мутации, (d) химерной аминокислотной последовательности, содержащей часть аминокислотной последовательности капсидного белка другого, например второго, AAV, которая функционально связана с указанной аминокислотной последовательностью капсидного белка, выбранного из группы, состоящей из капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации, и (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вирусная частица AAV содержит капсид AAV, где по меньшей мере один капсидный белок AAV (например, капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV) указанного капсида AAV содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, (например, где по меньшей мере один капсидный белок AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с капсидным белком AAV животного, не являющегося приматом), где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV модифицирован с включением (а) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) детектируемой метки, (с) точечной мутации, (d) химерной аминокислотной последовательности, содержащей часть аминокислотной последовательности капсидного белка другого, например второго, AAV, которая функционально связана с указанной аминокислотной последовательностью капсида AAV животного, не являющегося приматом, и (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

[0023] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вирусная частица AAV содержит капсид AAV, где по меньшей мере один капсидный белок AAV (например, капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV) указанного капсида AAV содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности капсидного белка отдаленного AAV (например, где по меньшей мере один капсидный белок AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с капсидным белком отдаленного AAV), где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV модифицирован с включением (а) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) детектируемой метки, (с) точечной мутации, (d) химерной аминокислотной последовательности, содержащей часть аминокислотной последовательности капсидного белка другого, например второго, AAV, которая функционально связана с указанной аминокислотной последовательностью капсидного белка отдаленного AAV, и (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

[0024] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вирусная частица AAV содержит (А) по меньшей мере один капсидный белок AAV, например капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из (i) аминокислотной последовательности капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, (ii) аминокислотной последовательности капсидного белка AAV отдаленного примата и (iii) аминокислотной последовательности их комбинации, и (В) геном AAV, содержащий представляющий интерес нуклеотид и ITR AAV, содержащий по меньшей мере часть последовательности ITR другого, например второго, AAV, где другой AAV не идентичен AAV животного, не являющегося приматом, и также не идентичен AAV отдаленного примата.

[0025] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вирусная частица AAV содержит (А) по меньшей мере один капсидный белок AAV (например, капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV), содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, и (В) геном AAV, содержащий представляющий интерес нуклеотид и ITR AAV, содержащий по меньшей мере часть последовательности ITR другого AAV, например второго AAV, где другой AAV не идентичен AAV животного, не являющегося приматом.

[0026] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вирусная частица AAV содержит (А) по меньшей мере один капсидный белок AAV (например, капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV), содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка отдаленного AAV, и (В) геном AAV, содержащий представляющий интерес нуклеотид и ITR AAV, содержащий по меньшей мере часть последовательности ITR другого AAV, например второго AAV, где другой AAV не идентичен AAV отдаленного примата.

[0027] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы AAV по настоящему изобретению капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации, модифицирован с включением (а) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок : белок, (b) детектируемой метки, (с) точечной мутации.

[0028] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы AAV по настоящему изобретению капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации, содержит аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации, содержит аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации, содержит аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотной последовательностью капсидного белка VP1 отдаленного AAV.

[0029] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы AAV по настоящему изобретению капсид указанной частицы содержит (i) капсидный белок VP1, который представляет собой один из (а) химерного капсидного белка VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого, например второго, AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, или (b) капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) капсидный белок VP2, который представляет собой один из (а) химерного капсидного белка VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2 другого, например второго, AAV, функционально связанную с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, или (b) капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и (iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления капсид указанной частицы содержит (i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого, например второго, AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) химерный капсидный белок VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2 другого, например второго, AAV, функционально связанную с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и (iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления капсид указанной частицы содержит (i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого, например второго, AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV и (iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления капсид содержит (i) капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV и (iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и где необязательно частица содержит в капсиде геном AAV, содержащий ITR AAV, который содержит по меньшей мере часть последовательности ITR другого, например второго, AAV. В некоторых вариантах осуществления другой AAV не идентичен AAV животного, не являющегося приматом.

[0030] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантной вирусной частицы AAV (i) капсидный белок VP1 содержит одну из (а) химерной аминокислотной последовательности, где необязательно уникальная область VP1 (VP1-u) химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью VP1-u второго AAV, и где общая область VP1/VP2 и область VP3 химерного капсида VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 и области VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или (b) аминокислотной последовательности, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с капсидным белком VP1 AAV животного, не являющегося приматом, (ii) капсидный белок VP2 содержит одну из (а) химерной аминокислотной последовательности, где необязательно общая область VP1/VP2 химерного капсидного белка VP2 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 второго AAV, и где область VP3 химерного капсидного белка VP2 характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или (b) аминокислотной последовательности, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с капсидным белком VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и (iii) капсидный белок VP3 содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с капсидным белком VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления (i) капсидный белок VP1 содержит химерную аминокислотную последовательность, где необязательно уникальная область VP1 (VP1-u) химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью VP1-u второго AAV, и где общая область VP1/VP2 и область VP3 химерного капсида VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 и области VP3 AAV животного, не являющегося приматом, (ii) капсидный белок VP2 содержит химерную аминокислотную последовательность, где необязательно общая область VP1/VP2 химерного капсидного белка VP2 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 второго AAV, и где область VP3 химерного капсидного белка VP2 характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и (iii) капсидный белок VP3 содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с капсидным белком VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления (i) капсидный белок VP1 AAV содержит химерную аминокислотную последовательность, где необязательно уникальная область VP1 (VP1-u) химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью VP1-u второго AAV, и где общая область VP1/VP2 и область VP3 химерного капсида VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 и области VP3 AAV животного, не являющегося приматом, (ii) капсидный белок VP2 содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и (iii) капсидный белок VP3 содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления (i) капсидный белок VP1 содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, (ii) капсидный белок VP2 содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и (iii) капсидный белок VP3 содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и где необязательно частица содержит в капсиде геном AAV, содержащий ITR AAV, который содержит по меньшей мере часть последовательности ITR другого, например второго, AAV. В некоторых вариантах осуществления другой AAV не идентичен AAV животного, не являющегося приматом.

[0031] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы AAV по настоящему изобретению другой, например второй, AAV представляет собой AAV примата или комбинацию AAV приматов. В некоторых вариантах осуществления другой AAV выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13 и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления другой AAV представляет собой AAV2.

[0032] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы AAV по настоящему изобретению AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV животного, не являющегося приматом, приведенный в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV (AAAV), AAV морского льва или AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAAV, и необязательно аминокислотная последовательность капсидного белка AAAV содержит модификацию в положении I444 или I580 капсидного белка VP1 AAAV. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV чешуйчатого пресмыкающегося, например AAV бородатой агамы, и необязательно аминокислотная последовательность AAV бородатой агамы содержит модификацию в положении I573 или I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV млекопитающего, например AAV морского льва, и необязательно аминокислотная последовательность AAV морского льва содержит модификацию в положении, выбранном из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и А565 капсидного белка VP1 AAV морского льва.

[0033] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы AAV по настоящему изобретению связывающаяся пара белок:белок выбрана из SpyTag:SpyCatcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:ramHH С, SnoopTag:SnoopCatcher и SpyTag002:SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит с-тус, содержащую последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка предусматривает эпитоп В1, содержащий аминокислотную последовательность IGTRYLTR (SEQ ID NO:45).

[0034] В некоторых вариантах осуществления частица AAV по настоящему изобретению содержит капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинации, где капсидный белок VP3 модифицирован с включением (а) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из Spy Tag: Spy Catcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:nmiHH C, SnoopTag:SnoopCatcher и SpyTag002:SpyCatcher002, (b) детектируемой метки, где необязательно детектируемая метка содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44, или аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45, (с) точечной мутации или (d) любой комбинации (а), (b) и (с). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинации модифицирован с включением (а) по меньшей мере SpyTag, содержащего аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:43, и/или (b) детектируемой метки, содержащей аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45.

[0035] В некоторых вариантах осуществления частица AAV по настоящему изобретению содержит первый и/или второй линкер, функционально связывающий первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку с капсидным белком капсида указанной частицы AAV. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкер не являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкер являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления длина первого и/или второго линкера составляет 10 аминокислот.

[0036] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы по настоящему изобретению по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3, необязательно по меньшей мере капсидный белок VP3, модифицирован с включением (а) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) детектируемой метки, (с) точечной мутации или (d) любой комбинации (а), (b) и/или (с). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемая метка или точечная мутация помещены в вариабельную область капсидного белка. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок или детектируемая метка фланкированы первым линкером и/или вторым линкером. В некоторых вариантах осуществления длина первого и/или второго линкера составляет 1-10 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкер не являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкер являются идентичными.

[0037] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы капсидный белок VP3 AAAV содержит модификацию, необязательно с включением первого партнера из связывающейся пары белок : белок, где необязательно модификация находится в положении(-ях) I444 (например, G444) и/или I580 (например, K580). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAAV содержит модификацию, необязательно с включением первого партнера из связывающейся пары белок : белок, где необязательно модификация находится в положении(-ях) I444 (например, G444) и/или I580 (например, K580). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV бородатой агамы содержит модификацию, необязательно с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно модификация находится в положении(-ях) I573 (например, Т573) и/или I436 (например, G436). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 вируса морского льва содержит модификацию, необязательно с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно модификация находится в положении, выбранном из группы, состоящей из I429 (например, N429), I430 (например, Р430), I431 (например, Т431), I432 (например, G432), I433 (например, S433), I434 (например, Т434), I436 (например, R436), I437 (например, D437) и I565 (А565).

[0038] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы по настоящему изобретению по меньшей мере один капсидный белок, необязательно по меньшей мере капсидный белок VP3, модифицирован с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит второго когнатного партнера из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления первый и второй партнер из связывающейся пары белок:белок связаны ковалентной связью, например изопептидной связью. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SpyTag, и необязательно второй партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SpyCatcher или KTag. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой KTag, и необязательно второй партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SpyTag. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SnoopTag, и второй партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SnoopCatcher. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой Isopeptag, и второй партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой пилин-С. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SpyTag002, и второй партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления второй партнер из связывающейся пары белок:белок связан с нацеливающим лигандом, например связывающим фрагментом, например антителом или его фрагментом. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий лиганд может быть слит со вторым партнером из связывающейся пары белок:белок, например SpyCatcher, необязательно через линкер на С-конце второго партнера, и линкер слит со SpyCatcher на С-конце линкера. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность GSGESG (SEQ ID NO:49). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок предусматривает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку с-mус.

[0039] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы по настоящему изобретению по меньшей мере один капсидный белок, необязательно по меньшей мере капсидный белок VP3 модифицирован с включением детектируемой метки. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка предусматривает эпитоп B1 AAV, например, аминокислотную последовательность IGTRYLTR (SEQ ID NO:45).

[0040] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы по настоящему изобретению по меньшей мере один капсидный белок, необязательно по меньшей мере капсидный белок VP3 модифицирован с включением:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, содержащей по меньшей мере одного партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из SpyTag: SpyCatcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:nmrHH-C, SnoopTag:SnoopCatcher, SpyTag002:SpyCatcher002 и c-myc:антитело к с-mус,

(b) детектируемой метки, где необязательно детектируемая метка содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44, или аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45,

(c) точечной мутации или

(d) любой комбинации (а), (b) и (с).

[0041] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы по настоящему изобретению по меньшей мере один капсидный белок, необязательно по меньшей мере капсидный белок VP3 модифицирован с включением:

(a) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, содержащего по меньшей мере SpyTag, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:43, и/или

(b) детектируемой метки, содержащей аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45.

[0042] В некоторых вариантах осуществления частица AAV по настоящему изобретению содержит капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (а) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:2, (b) аминокислотной

последовательности, изложенной под SEQ ID NO:4, (с) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:6, (d) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:8, (е) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:10, (f) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:12, (g) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:I4, (h) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:16, (i) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:18, (j) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:20, (k) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:22, (l) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:24, (m) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:26, (n) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:28, (о) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:30, (р) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:32, (q) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:34, (r) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:36, (s) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:53, (t) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:55, (u) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:57, (v) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:59, (w) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:61, (х) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:63, (у) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:65, (z) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:67, (аа) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:69, (bb) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:71, (сс) аминокислотной последовательности, характеризующейся по меньшей мере 95% идентичностью с SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:I4, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:71, и (dd) аминокислотной последовательности любой из частей VP2 и/или VP3 из аминокислотных последовательностей, изложенных в любом из (а)-(сс).

[0043] В некоторых вариантах осуществления вирусной частицы по настоящему изобретению, где по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV содержит модификацию, например с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, вирусная частица дополнительно содержит эталонный капсидный белок, необязательно капсидный белок, соответствующий по меньшей мере одному из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV, за исключением модификации, так что капсид представляет собой мозаичный капсид. В некоторых вариантах осуществления мозаичный капсид содержит капсидный белок VP1, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок : белок, и эталонный капсидный белок VP1. В некоторых вариантах осуществления мозаичный капсид содержит капсидный белок VP2, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный капсидный белок VP2. В некоторых вариантах осуществления мозаичный капсид содержит капсидный белок VP3, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный капсидный белок VP3.

[0044] Также описаны вирусные частицы по настоящему изобретению, содержащие капсидные белки AAV по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения капсидный белок AAV по настоящему изобретению содержит аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, где капсидный белок AAV выбран из группы, состоящей из (а) химерного капсидного белка VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 AAV животного модифицирован с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, (b) нехимерного капсидного белка VP1 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемой метки, (с) химерного капсидного белка VP2, где необязательно химерный капсидный белок VP2 AAV модифицирован с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, (d) нехимерного капсидного белка VP2 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, (е) химерного капсидного белка VP3 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, и (f) нехимерного капсидного белка VP3 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации.

[0045] В некоторых вариантах осуществления капсидного белка AAV по настоящему изобретению первый партнер из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемая метка фланкированы с одной или обеих сторон соответственно первым и/или вторым линкером, который(-ые) соединяет(-ют) первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку с капсидным белком, где длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет по меньшей мере одну аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры не являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными, и их длина составляет 10 аминокислот.

[0046] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок AAV по настоящему изобретению содержит детектируемую метку, где необязательно детектируемая метка содержит эпитоп В1, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка предусматривает с-myc.

[0047] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок AAV по настоящему изобретению содержит одновременно первого партнера и второго когнатного партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно первый и второй партнеры связаны ковалентной связью, необязательно изопептидной связью. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок представляет собой SpyTag, и необязательно второй когнатный партнер представляет собой SpyCatcher или KTag. В некоторых вариантах осуществления первый партнер представляет собой KTag, и второй когнатный партнер представляет собой SpyTag. В некоторых вариантах осуществления первый партнер представляет собой SnoopTag, и второй когнатный партнер представляет собой SnoopCatcher. В некоторых вариантах осуществления первый партнер представляет собой Isopeptag, и второй когнатный партнер представляет собой пилин-С. В некоторых вариантах осуществления первый партнер представляет собой SpyTag002, и второй когнатный партнер представляет собой SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления первый партнер предусматривает детектируемую метку, такую как без ограничения с-myc, при этом ее партнер из связывающейся пары представляет собой антитело к с-myc или его часть. В некоторых вариантах осуществления второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, где необязательно нацеливающий лиганд представляет собой связывающий фрагмент, который необязательно нацеливается на клеточный маркер. В некоторых вариантах осуществления связывающий фрагмент представляет собой антитело или его часть. В некоторых вариантах осуществления связывающий фрагмент функционально связан со вторым партнером из связывающейся пары белок:белок, необязательно с помощью ковалентной связи (такой как, без ограничения изопептидная связь) или линкера. В некоторых вариантах осуществления связывающий фрагмент слит со вторым партнером из связывающейся пары белок:белок с помощью линкера, слитого с С-концом связывающего фрагмента, где линкер слит со вторым партнером посредством С-конца линкера, где необязательно линкер содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO:49 (GSGESG). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок расположен в аминокислотном положении, находящемся в VR I, VR II, VR III, VR IV, VR V, VR VI, VR VII, VR VIII, VR IX или петле HI капсидного белка, необязательно в VR VIII или VR IV капсидного белка.

[0048] В некоторых вариантах осуществления капсидного белка AAV по настоящему изобретению AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV животного, не являющегося приматом, приведенный в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV (AAAV), AAV морского льва или AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAAV, и необязательно аминокислотная последовательность капсидного белка AAAV содержит модификацию, находящуюся в положении I444 или I580 капсидного белка VP1 AAAV. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV чешуйчатого пресмыкающегося, например AAV бородатой агамы, и необязательно аминокислотная последовательность AAV бородатой агамы содержит модификацию, находящуюся в положении I573 или I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV млекопитающего, например AAV морского льва, и необязательно аминокислотная последовательность AAV морского льва содержит модификацию в положении, выбранном из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и А565 капсидного белка VP1 AAV морского льва.

[0049] Капсидные белки VP3 вируса животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению включают капсидные белки VP3 вируса животного, не являющегося приматом, (а) которые инкапсидируют геном другого, например второго, AAV, и/или (b) которые являются мутированными. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося человеком, по настоящему изобретению инкапсидирует геном второго AAV, который не является вирусом животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению может быть функционально связан с первым партнером из связывающейся пары белок:белок (необязательно с помощью первого и/или второго линкера) и/или содержит точечную мутацию, например такую, что естественный тропизм капсидного белка снижен вплоть до устранения, и/или такую, что капсидный белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку, которая предусматривает c-myc (SEQ ID NO:44). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит первого партнера и необязательно второго партнера из связывающейся пары белок:белок, которая образует ковалентную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из (a) SpyTag:SpyCatcher, (b) SpyTag:KTag, (с) Isopeptag:пилин С, (d) SnoopTag: SnoopCatcher и (e) SpyTag002:SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, может содержать (а) эпитоп B1 (SEQ ID NO:45), (b) SpyTag, (с) SpyCatcher или любую комбинацию (а)-(с).

[0050] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, функционально связанного с ним, необязательно с помощью первого или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в вариабельной области (VR) или ее части капсидного белка VP3, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидном VP3 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в VR I, VR II, VR III, VR IV, VR V, VR VI, VR VII, VR VIII, VR IX или петле HI капсидного белка VP3, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидом VP3 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в VR VIII или VR IV капсидного белка VP3, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидом VP3 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, выбранный из AAV животного, не являющегося приматом, приведенного в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP3 птичьего AAV (AAAV). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAAV содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I444 или I580. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP3 AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV бородатой агамы содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I573 или I436. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP3 AAV морского льва. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV морского льва содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и I565, и необязательно по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I436 и I437; необязательно по I432.

[0051] Капсидные белки VP2 вируса животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению включают капсидные белки VP2 вируса животного, не являющегося приматом, (а) которые инкапсидируют геном другого, например второго, AAV, и/или (b) которые являются мутированными. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению инкапсидирует геном другого, например второго, AAV. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению может быть функционально связан с первым партнером из связывающейся пары белок:белок и/или содержит точечную мутацию, например такую, что естественный тропизм капсидного белка снижен вплоть до устранения, и/или такую, что капсидный белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку, содержащую c-myc (SEQ ID NO:44). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит первого партнера и необязательно второго партнера из связывающейся пары белок:белок, которая образует ковалентную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из (а) SpyTag: SpyCatcher, (b) SpyTag:KTag, (с) Isopeptag:nmniH С, (d) SnoopTag: SnoopCatcher и (e) SpyTag002:SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, может содержать (а) эпитоп Bl (SEQ ID NO:45), (b) SpyTag, (с) SpyCatcher или любую комбинацию (а)-(с).

[0052] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, функционально связанного с ним, необязательно с помощью первого и второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP2 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в вариабельной области (VR) или ее части капсидного белка VP2, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидном VP2 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP2 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в VR I, VR II, VR III, VR IV, VR V, VR VI, VR VII, VR VIII, VR IX или петле HI капсидного белка VP2, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидом VP2 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP2 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в VR VIII или VR IV капсидного белка VP2, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидом VP2 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, выбранный из AAV животного, не являющегося приматом, приведенного в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP2 птичьего AAV (AAAV). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAAV содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I444 или I580. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP2 AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV бородатой агамы содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I573 или I436. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP2 AAV морского льва. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 AAV морского льва содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и I565, необязательно по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I436 и I437; необязательно по I431.

[0053] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP2 по настоящему изобретению может представлять собой химерный капсидный белок VP2, который содержит в функциональной связи часть капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и часть капсидного белка VP2 другого, например второго, AAV. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP2 другого, например второго, AAV, функционально связанную с (b) частью капсида VP2 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 может содержать от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность общей области VP1/VP2 другого AAV, функционально связанную с (b) аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления другой AAV представляет собой AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых других вариантах осуществления другой AAV представляет собой AAV примата.

[0054] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 по настоящему изобретению содержит (а) часть капсидного белка VP2 AAV примата, функционально связанную с (b) частью капсида VP2 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 может содержать от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность общей области VP1/VP2 AAV примата, функционально связанную с (b) аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV1. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV2. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV3. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV4. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV5. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV6. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV7. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV8. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV9. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, выбран из группы AAV животных, не являющихся приматом, представленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV, AAV бородатой агамы или AAV морского льва.

[0055] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 по настоящему изобретению содержит (а) часть капсидного белка VP2 AAV2, функционально связанную с (b) частью капсида VP2 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 может содержать от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность общей области VP1/VP2 AAV2, функционально связанную с (b) аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом.

[0056] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAAV по настоящему изобретению содержит (а) часть капсидного белка VP2 AAV2, функционально связанную с (b) частью капсидного белка VP2 птичьего AAV (AAAV), которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAAV. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAAV может содержать от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность общей области VP1/VP2 AAV2, функционально связанную с (b) аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAAV.

[0057] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV морского льва по настоящему изобретению содержит (а) часть капсидного белка VP2 AAV2, функционально связанную с (b) частью капсидного белка VP2 AAV морского льва, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV морского льва. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV морского льва может содержать от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность общей области VP1/VP2 AAV2, функционально связанную с (b) аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV морского льва.

[0058] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV бородатой агамы по настоящему изобретению содержит (а) часть капсидного белка VP2 AAV2, функционально связанную с (b) частью капсидного белка VP2 AAV бородатой агамы, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV бородатой агамы может содержать от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность общей области VP1/VP2 AAV2, функционально связанную с (b) аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV бородатой агамы.

[0059] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 по настоящему изобретению может быть функционально связан с первым партнером из связывающейся пары белок:белок и/или содержит точечную мутацию, например такую, что естественный тропизм капсидного белка снижен вплоть до устранения, и/или такую, что капсидный белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку, которая предусматривает c-myc (SEQ ID NO:44). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит первого партнера и необязательно второго партнера из связывающейся пары белок:белок, которая образует ковалентную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из (а) SpyTag: SpyCatcher, (b) SpyTag:KTag, (с) Isopeptag:nmmH С, (d) SnoopTag: SnoopCatcher и (e) SpyTag002:SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 может содержать (а) эпитоп Bl (SEQ ID NO:45), (b) SpyTag, (с) SpyCatcher или любую комбинацию (а)-(с).

[0060] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению (например, химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAAV, химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV морского льва, химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV бородатой агамы и т.д.) содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, функционально связанного с ним, необязательно с помощью первого или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с химерным капсидным белком VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, (например, химерным капсидным белком VP2 AAV2/AAAV, химерным капсидным белком VP2 AAV2/AAV морского льва, химерным капсидным белком VP2 AAV2/AAV бородатой агамы и т.д.) по аминокислотному положению, находящемуся в вариабельной области (VR) или ее части химерного капсидного белка VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с химерным капсидным белком VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с химерным капсидным белком VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению,находящемуся в VR I, VR II, VR III, VR IV, VR V, VR VI, VR VII, VR VIII, VR IX или петле HI химерного капсидного белка VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидным белком VP2 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с химерным капсидным белком VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, (например, химерным капсидным белком VP2 AAV2/AAAV, химерным капсидным белком VP2 AAV2/AAV морского льва, химерным капсидным белком VP2 AAV2/AAV бородатой агамы и т.д.) по аминокислотному положению, находящемуся в VR VIII или VR IV химерного капсидного белка VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с химерным капсидным белком VP2 вируса примата/животного, не являющегося приматом, с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/ AAAV содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I444 или I580. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV бородатой агамы содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I573 или I436. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAV морского льва содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и I565, необязательно по положению, выбранному из группы, состоящей из I429,I430,I431,I432,I433,I436 и I437; необязательно по I431.

[0061] Капсидные белки VP1 вируса животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению включают капсидные белки VP1 вируса животного, не являющегося приматом, (а) которые инкапсидируют геном другого, например второго, AAV, и/или (b) которые являются мутированными. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению инкапсидирует геном другого, например второго, AAV. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 вируса животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению может быть функционально связан с первым партнером из связывающейся пары белок:белок и/или содержит точечную мутацию, например такую, что естественный тропизм капсидного белка снижен вплоть до устранения, и/или такую, что капсидный белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку, которая предусматривает c-myc (SEQ ID NO:44). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит первого партнера и необязательно второго партнера из связывающейся пары белок:белок, которая образует ковалентную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из (a) SpyTag:SpyCatcher, (b) SpyTag:KTag, (с) Isopeptag:пилин С, (d) SnoopTag: SnoopCatcher и (e) SpyTag002:SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, может содержать (а) эпитоп B1 (SEQ ID NO:45), (b) SpyTag, (с) SpyCatcher или любую комбинацию (а)-(с).

[0062] В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP1 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению по аминокислотному положению, находящемуся в вариабельной области (VR) или ее части капсидного белка VP1, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидом VP1 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP1 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в VR I, VR II, VR III, VR IV, VR V, VR VI, VR VII, VR VIII, VR IX или петле HI капсидного белка VP1, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидом VP1 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP1 AAV животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в VR VIII или VR IV капсидного белка VP1, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с капсидом VP1 с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, выбранного из группы AAV животных, не являющихся приматом, приведенной в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP1 птичьего AAV (AAAV). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAAV содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I444 или I580. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP31 AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAV бородатой агамы содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I573 или I436. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой капсидный белок VP1 AAV морского льва. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP1 AAV морского льва содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок (например, SpyTag), функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и I565, необязательно по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432,I433, I436 и I437; необязательно по I431.

[0063] В некоторых других вариантах осуществления капсидный белок VP1 по настоящему изобретению может представлять собой химерный капсидный белок VP1, который содержит в функциональной связи часть капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, и часть капсидного белка VP1 другого AAV, где другой AAV не представляет собой AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 другого AAV, которая содержит по меньшей мере домен PLA2 другого AAV, и (b) часть капсида VP1 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 другого AAV, которая содержит по меньшей мере домен VP1-u другого AAV, и (b) часть капсида VP1 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность домена VP1-u и общую область VP1/VP2 другого, например второго, AAV и (b) аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления другой AAV представляет собой AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых других вариантах осуществления другой AAV представляет собой AAV примата.

[0064] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV примата, которая содержит по меньшей мере домен PLA2 AAV примата, и (b) часть капсида VP1 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV примата, которая содержит по меньшей мере домен VP1-u AAV примата, и (b) часть капсида VP1 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность домена VP1-u и общую область VP1/VP2 AAV примата и (b) аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV1. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV2. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV3. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV4. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV5. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV6. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV7. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV8. В некоторых вариантах осуществления AAV примата представляет собой AAV9. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, выбран из группы AAV животных, не являющихся приматом, представленных в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV, AAV бородатой агамы или AAV морского льва.

[0065] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен PLA₂ AAV2, и (b) часть капсида VP1 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен VP1-u AAV2, и (b) часть капсида VP1 AAV животного, не являющегося приматом, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 содержит от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность домена VP1-u и общую область VP1/VP2 AAV2 и (b) аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом.

[0066] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен PLA₂ AAV2, и (b) часть капсида VP1 птичьего AAV (AAAV), которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAAV. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен VP1-u AAV2, и (b) часть капсида VP1 AAAV, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAAV. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV содержит от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность домена VP1-u и общую область VP1/VP2 AAV2 и (b) аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAAV. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP 1 AAV2/AAAV содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:2.

[0067] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса морского льва содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен PLA₂ AAV2, и (b) часть капсида VP1 AAV морского льва, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 вируса морского льва. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса морского льва содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен VP1-u AAV2, и (b) часть капсида VP1 вируса морского льва, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 вируса морского льва. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса морского льва содержит от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность домена VP1-u и общую область VP1/VP2 AAV2 и (b) аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 вируса морского льва. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:4.

[0068] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса бородатой агамы содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен PLA₂ AAV2, и (b) часть капсида VP1 вируса бородатой агамы, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 вируса бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса бородатой агамы содержит от N-конца к С-концу: (а) часть капсидного белка VP1 AAV2, которая содержит по меньшей мере домен VP1-u AAV2, и (b) часть капсида VP1 вируса бородатой агамы, которая содержит по меньшей мере аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 вируса бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса бородатой агамы содержит от N-конца к С-концу: (а) аминокислотную последовательность домена VP1-u и общую область VP1/VP2 AAV2 и (b) аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 вируса бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/вируса бородатой агамы содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:6.

[0069] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 может быть функционально связан с первым партнером из связывающейся пары белок:белок и/или содержит точечную мутацию, например такую, что естественный тропизм капсидного белка снижен вплоть до устранения, и/или такую, что капсидный белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку, которая предусматривает c-myc (SEQ ID NO:44). В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит первого партнера и необязательно второго партнера из связывающейся пары белок:белок, которая образует ковалентную связь. В некоторых вариантах осуществления связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из (a) SpyTag:SpyCatcher, (b) SpyTag:KTag, (с) Isopeptag:пилин С, (d) SnoopTag: SnoopCatcher и (e) SpyTag002:SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 может содержать (а) эпитоп B1 (SEQ ID NO:45), (b) SpyTag, (с) SpyCatcher и любую комбинацию (а)-(с).

[0070] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 вируса примата/животного, не являющегося приматом (например, химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV, химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва, химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV бородатой агамы и т.д.) содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, функционально связанного с ним, необязательно с помощью первого или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с химерным капсидным белком VP1 вируса примата/животного, не являющегося приматом, (например, химерным капсидным белком VP1 AAV2/AAAV, химерным капсидным белком VP1 AAV2/AAV морского льва, химерным капсидным белком VP1 AAV2/AAV бородатой агамы и т.д.) по аминокислотному положению, находящемуся в вариабельной области (VR) или ее части химерного капсидного белка VP1 вируса примата/животного, не являющегося приматом, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с химерным капсидным белком VP1 вируса примата/животного, не являющегося приматом, с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с капсидом VP1 из химерного капсидного белка VP1 вируса примата/вируса животного, не являющегося приматом, по аминокислотному положению, находящемуся в VR I, VR II, VR III, VR IV, VR V, VR VI, VR VII, VR VIII, VR IX или петле HI химерного капсидного белка VP1 вируса примата/вируса животного, не являющегося приматом, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с химерным капсидным белком VP1 вируса примата/вируса животного, не являющегося приматом, с помощью первого и/или второго линкера. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок функционально связан с химерным капсидным белком VP1 вируса примата/животного, не являющегося приматом, (например, химерным капсидным белком VP1 AAV2/AAAV, химерным капсидным белком VP1 AAV2/AAV морского льва, химерным капсидным белком VP1 AAV2/AAV бородатой агамы и т.д.) по аминокислотному положению, находящемуся в VR VIII или VR IV химерного капсидного белка VP1 вируса примата/животного, не являющегося приматом, где необязательно первый партнер из связывающейся пары белок:белок связан с химерным капсидным белком VP1 вируса примата/животного, не являющегося приматом, с помощью первого и/или второго линкера.

[0071] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/ AAAV содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I444 или I580. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I444. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:8. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению I580. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:10.

[0072] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, функционально связанного, необязательно с помощью первого или второго линкера, по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и I565, необязательно по положению, выбранному из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I436 и I437; необязательно по I432. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I432. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:12. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I565. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:I4. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I429. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:16. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I430. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:18. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I431. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:20. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I433. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:22. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I434. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:24. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I435. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:26. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I436. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:28. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I437. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:30. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I432. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:32. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:53. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:55. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:57. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:59. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:61. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:63. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:65. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:67. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:69. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV морского льва содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:71.

[0073] В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV бородатой агамы содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, функционально связанного, необязательно с помощью первого и/или второго линкера, по положению I436 или I573. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV бородатой агамы содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I436. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV бородатой агамы содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:34. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV бородатой агамы содержит SpyTag, функционально связанного, необязательно с помощью первой и второй линкерной последовательности, по положению I573. В некоторых вариантах осуществления химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAV бородатой агамы содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:36.

[0074] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок по настоящему изобретению дополнительно содержит первого партнера и второго партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, где необязательно нацеливающий лиганд представляет собой связывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления связывающий фрагмент представляет собой антитело или его часть. В некоторых вариантах осуществления антитело или его часть слиты со вторым партнером, например SpyCatcher. В некоторых вариантах осуществления антитело или его часть слиты на своем С-конце с линкером, необязательно линкером, содержащим последовательность, изложенную под SEQ ID NO:49 (GSGESG), и линкер слит со вторым партнером, например SpyCatcher, на С-конце линкера.

[0075] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок по настоящему изобретению может содержать детектируемую метку, при этом детектируемая метка необязательно может выступать в качестве первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или для обнаружения и/или выделения капсидного белка. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка представляет собой с-myc. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка предусматривает эпитоп B1 AAV, например, аминокислотную последовательность IGTRYLTR (SEQ ID NO:45).

[0076] Капсидный белок AAV по настоящему изобретению может содержать аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (а) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:2, (b) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:4, (с) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:6, (d) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:8, (е) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:10, (f) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:12, (g) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:I4, (h) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:16, (i) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:18, (j) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:20, (к) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:22, (1) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:24, (m) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:26, (n) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:28, (о) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:30, (р) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:32, (q) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:34, (г) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:36, (s) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:53, (t) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:55, (u) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:57, (v) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:59, (w) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:61, (х) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:63, (у) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:65, (z) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:67, (аа) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:69, (bb) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:71, (сс) аминокислотной последовательности, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:I4, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:71, и (dd) аминокислотной последовательности любой из частей VP2 и/или VP3 из аминокислотных последовательностей, изложенных в любом из (а)-(сс).

[0077] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок по настоящему изобретению кодируется молекулой нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. В данном документе также предусмотрены молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие капсидные белки по настоящему изобретению.

[0078] В данном документе описаны молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие ген cap AAV, который кодирует капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и/или капсидный белок VP3 AAV, где ген cap AAV или его часть содержат последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью нуклеиновой кислоты гена cap AAV животного, не являющегося приматом, или его части, или отдаленного AAV или его части, и где ген cap AAV дополнительно модифицирован с включением (а) нуклеотидной последовательности, кодирующей первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку, (с) точечной мутации, (d) химерной нуклеотидной последовательности или (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d). В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты данная нуклеиновая кислота содержит ген rep AAV и ген cap AAV, где полный ген cap AAV содержит первую последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью нуклеиновой кислоты гена cap AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и где ген rep AAV или его часть содержат вторую последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью нуклеиновой кислоты гена rep второго AAV или его части, где AAV животного, не являющегося приматом, не идентичен второму AAV. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит ген cap AAV, который кодирует капсидный белок AAV, где ген cap AAV содержит нуклеотидную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с по меньшей мере частью нуклеотидной последовательности гена cap, выбранного из группы, состоящей из (i) гена cap AAV животного, не являющегося приматом, (ii) гена cap отдаленного AAV или (iii) их комбинации, где указанный ген cap AAV дополнительно модифицирован с включением (а) нуклеотидной последовательности, кодирующей первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку, (с) точечной мутации, (d) химерной нуклеотидной последовательности, содержащей часть нуклеотидной последовательности гена cap другого, например второго, AAV, которая функционально связана с указанной нуклеотидной последовательностью гена cap AAV, выбранного из группы, состоящей из гена cap AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинации, (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

[0079] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит ген cap AAV, который кодирует капсидный белок AAV, где ген cap AAV содержит нуклеотидную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с по меньшей мере частью нуклеотидной последовательности гена cap AAV животного, не являющегося приматом, где указанный ген cap AAV дополнительно модифицирован с включением (а) нуклеотидной последовательности, кодирующей первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку, (с) точечной мутации, (d) химерной нуклеотидной последовательности, содержащей часть нуклеотидной последовательности гена cap другого, например второго, AAV, которая функционально связана с указанной нуклеотидной последовательностью гена cap AAV животного, не являющегося приматом, (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

[0080] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит ген cap AAV, который кодирует капсидный белок AAV, где ген cap AAV содержит нуклеотидную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с по меньшей мере частью нуклеотидной последовательности гена cap отдаленного AAV, где указанный ген cap AAV дополнительно модифицирован с включением (а) нуклеотидной последовательности, кодирующей первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку, (с) точечной мутации, (d) химерной нуклеотидной последовательности, содержащей часть нуклеотидной последовательности другого гена cap AAV, которая функционально связана с указанной нуклеотидной последовательностью гена cap отдаленного AAV, (е) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

[0081] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит ген rep AAV и ген cap AAV, где ген cap AAV содержит первую нуклеотидную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с нуклеотидной последовательностью гена cap, выбранного из группы, состоящей из (i) гена cap AAV животного, не являющегося приматом, (ii) гена cap AAV отдаленного примата и (iv) их комбинации, где ген rep AAV содержит вторую нуклеотидную последовательность гена rep AAV другого, например второго, AAV.

[0082] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит ген rep AAV и ген cap AAV, где ген cap AAV содержит первую нуклеотидную последовательность, причем нуклеотидная последовательность идентична или характеризуется значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с нуклеотидной последовательностью гена cap AAV животного, не являющегося приматом, где ген rep AAV содержит вторую нуклеотидную последовательность, причем нуклеотидная последовательность идентична или характеризуется значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с нуклеотидной последовательностью гена rep AAV другого, например второго, AAV.

[0083] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит ген rep AAV и ген cap AAV, где ген cap AAV содержит нуклеотидную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с первой нуклеотидной последовательностью гена cap AAV отдаленного животного, где ген rep AAV содержит нуклеотидную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, со второй нуклеотидной последовательностью гена rep AAV другого, например второго AAV.

[0084] В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению нуклеотидная последовательность гена cap содержит нуклеотидную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с нуклеотидной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, при этом нуклеотидная последовательность гена cap, идентичная или характеризующаяся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с нуклеотидной последовательностью отдаленного AAV, или их комбинации модифицирована с включением (а) нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, (b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку, и/или (с) нуклеотидной последовательности, кодирующей точечную мутацию.

[0085] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновой кислоты связывающаяся пара белок:белок выбрана из SpyTag: Spy Catcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:nmiHH-C, SnoopTag:SnoopCatcher и SpyTag002:SpyCatcher002. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку, например с-myc, содержащую последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44.

[0086] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновой кислоты нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации модифицирована с включением эпитопа В1, содержащего аминокислотную последовательность IGTRYLTR (SEQ ID NO:45).

[0087] В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP3 или его часть, содержащие аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP2 или его часть, содержащие аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP1 или его часть, содержащие аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотной последовательностью капсидного белка VP1 отдаленного AAV.

[0088] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP3 вируса животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению и капсидный белок VP2 вируса животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению, капсидный белок VP2 по настоящему изобретению и капсидный белок VP1 по настоящему изобретению.

[0089] В некоторых вариантах осуществления ген cap из молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению кодирует (i) капсидный белок VP1, который представляет собой один из (а) химерного капсидного белка VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u), содержащую аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью другого, например второго, AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3, содержащими аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, или (b) капсидного белка VP1, содержащего аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) капсидный белок VP2, который представляет собой один из (а) химерного капсидного белка VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2, содержащую аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью другого, например второго, AAV, функционально связанную с областью VP3, содержащей аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или (b) капсидного белка VP2, содержащего аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и/или (iii) капсидный белок VP3, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

[0090] В некоторых вариантах осуществления ген cap из молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению кодирует (i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u), содержащую аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью другого, например AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3, содержащими аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) химерный капсидный белок VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2, содержащую аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью другого, например AAV, функционально связанную с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и/или (iii) капсидный белок VP3, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95%) идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

[0091] В некоторых вариантах осуществления ген cap из молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению кодирует (i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u), содержащую аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью другого AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3, содержащими аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) капсидный белок VP2, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и (iii) капсидный белок VP3, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

[0092] В некоторых вариантах осуществления ген cap из молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению кодирует (i) капсидный белок VP1, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, (ii) капсидный белок VP2, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и/или (iii) капсидный белок VP3, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную или характеризующуюся значительной идентичностью, например по меньшей мере 95% идентичностью последовательности, с аминокислотной последовательностью AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

[0093] В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению другой, второй AAV представляет собой AAV примата или комбинацию AAV приматов. В некоторых вариантах осуществления другой AAV выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13 и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления другой AAV представляет собой AAV2.

[0094] В некоторых вариантах осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV животного, не являющегося приматом, приведенный в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV (AAAV), AAV морского льва или AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAAV, и необязательно, нуклеотидная последовательность капсидного белка AAAV содержит модификацию в положении I444 или I580 капсидного белка VP1 AAAV. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV чешуйчатого пресмыкающегося, например AAV бородатой агамы, и необязательно нуклеотидная последовательность AAV бородатой агамы содержит модификацию, находящуюся в положении I573 или I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы. В некоторых вариантах осуществления AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV млекопитающего, например AAV морского льва, и необязательно нуклеотидная последовательность AAV морского льва содержит модификацию в положении, выбранном из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и А565 капсидного белка VP1 AAV морского льва.

[0095] Варианты осуществления молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению могут содержать нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из (а) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:l, (b) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:3, (с) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:5, (d) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:7, (е) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:9, (f) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:11, (g) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:13, (h) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:15, (i) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:17, (j) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:19, (k) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:21, (l) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:23, (m) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:25, (n) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:27, (о) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:29, (р) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:31, (q) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:33, (r) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:35, (s) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:52, (t) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:54, (u) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:56, (v) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:58, (w) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:60, (х) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:62, (у) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:64, (z) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:66, (аа) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:68, (bb) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:70, (сс) нуклеотидной последовательности, характеризующейся по меньшей мере 95% идентичностью с нуклеотидной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33,35, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68 или 70, (dd) любой части нуклеотидной последовательности из (а)-(сс), кодирующей капсидный белок VP2 и/или капсидный белок VP3.

[0096] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:1, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:3, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:5, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:7, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:9, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:11, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:13, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:15, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:17, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:19, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:21, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:23, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:25, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:27, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:29, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:31, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:33, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:35, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:52, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:54, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:56, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:58, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:60, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:62, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:64, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:66, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:68, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:70, ее часть, которая кодирует капсидный белок VP2 и/или VP3, и их вырожденные варианты.

[0097] В некоторых вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая капсидный белок VP1 по настоящему изобретению и необязательно капсидный белок VP2 и/или VP3 по настоящему изобретению, функционально связана с промотором. В некоторых вариантах осуществления промотор выбран из вирусного промотора, бактериального промотора, промотора гена млекопитающего (например, человеческого или не являющегося человеческим), промотора гена птицы, промотора гена рыбы, промотора гена насекомого и любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления промотор выбран из р40, SV40, EF, CMV, В19р6 и CAG. В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор р40 AAV. В некоторых вариантах осуществления при этом промотор управляет экспрессией капсидного(-ых) белка(-ов) в упаковывающей клетке.

[0098] В некоторых вариантах осуществления ген cap из молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению функционально связан с промотором. В некоторых вариантах осуществления промотор управляет экспрессией капсидного(-ых) белка(-ов) в упаковывающей клетке. В некоторых вариантах осуществления промотор выбран из р40, SV40, EF, например EF1α CMV, В19р6 и CAG.

[0099] В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению дополнительно содержит вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую один или более белков Rep AAV, где необязательно вторая нуклеотидная последовательность функционально связана с промотором. В некоторых вариантах осуществления один или более белков Rep представляют собой белки Rep AAV примата. В некоторых вариантах осуществления один или более белков Rep представляют собой белки Rep AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления один или более белков Rep выбраны из Rep78, Rep68, Rep52 и Rep40, необязательно один или более белков Rep предусматривают Rep78. В некоторых вариантах осуществления промотор, функционально связанный со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей один или более белков Rep AAV, выбран из вирусного промотора, бактериального промотора, промотора гена млекопитающего (например, человеческого или не являющегося человеческим), промотора гена птицы, промотора гена рыбы, промотора гена насекомого и любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления промотор, функционально связанный со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей один или более белков Rep AAV, выбран из р19, р5, р40, SV40, EF, например EF1α CMV, В19р6 и CAG. В некоторых вариантах осуществления промотор управляет экспрессией капсидного(-ых) белка(-ов) в упаковывающей клетке. В некоторых вариантах осуществления промотор, функционально связанный со второй нуклеотидной последовательностью, кодирующей один или более белков Rep AAV, выбран из р19 и/или р5.

[00100] Композиции и упаковывающие клетки, содержащие капсидные белки, кодируемые молекулами нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, также являются частью настоящего изобретения. Также описаны вирусные частицы, экспрессируемые упаковывающими клетками по настоящему изобретению.

[00101] В некоторых вариантах осуществления композиции и упаковывающие клетки для получения вирусных частиц AAV по настоящему изобретению содержат молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, например содержащую ген cap по настоящему изобретению, кодирующий капсидный белок AAV по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления композиция и/или упаковывающая клетка по настоящему изобретению содержит молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления ген cap содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:l, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:3, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:5, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:7, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:9, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:11, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:13, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:I5, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:17, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:19, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:21, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:23, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:25, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:27, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:29, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:31, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:33, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:35, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:52, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:54, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:56, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:58, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:60, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:62, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:64, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:66, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:68, нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:70, любой части нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68 или 70, кодирующей капсид VP2, любой части нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68 или 70, кодирующей капсид VP3, и любой их комбинации.

[00102] В некоторых вариантах осуществления композиции и упаковывающие клетки дополнительно содержат молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую ген rep, кодирующий один или более белков Rep AAV, где указанный ген rep функционально связан с промотором, где необязательно ген rep и ген cap принадлежат двум разным AAV. В некоторых вариантах осуществления промотор, функционально связанный с геном rep, управляет экспрессией белка(-ов) Rep в упаковывающей клетке, например промотор, выбранный из р5, р19 SV40, EF, CMV, В19р6 и CAG. В некоторых вариантах осуществления один или более белков Rep выбраны из Rep78, Rep68, Rep52 и Rep40, необязательно один или более белков Rep предусматривают Rep78. В некоторых вариантах осуществления один или более белков Rep представляют собой белки Rep AAV примата. В некоторых других вариантах осуществления один или более белков Rep представляют собой белки Rep AAV животного, не являющегося приматом. В некоторых вариантах осуществления один или более белков Rep предусматривают и то, и другое.

[00103] В некоторых вариантах осуществления композиции и упаковывающие клетки по настоящему изобретению дополнительно содержат молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность представляющего интерес нуклеотида, фланкированную с по меньшей мере одной стороны по меньшей мере одним инвертированным концевым повтором (ITR) AAV, который распознается одним или более белками Rep.В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид фланкирован с другой стороны вторым ITR того же AAV, что и по меньшей мере один ITR. В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид фланкирован с другой стороны вторым ITR, при этом второй ITR и по меньшей мере один ITR принадлежат разным AAV.

[00104] В некоторых вариантах осуществления композиция и/или упаковывающая клетка по настоящему изобретению дополнительно содержат молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую представляющий интерес нуклеотид (например, нуклеотидную последовательность трансгена), фланкированный 5'- и 3'-инвертированными концевыми повторами (ITR) AAV, так что представляющие интерес вирусные частицы дополнительно содержат геном, который содержит представляющий интерес нуклеотид, фланкированный 5'- и 3'-ITR AAV.

[00105] В некоторых вариантах осуществления композиция и/или упаковывающая клетка по настоящему изобретению дополнительно содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую эталонный капсидный белок.

[00106] Соответственно, в некоторых вариантах осуществления композиция, упаковывающая клетка и/или вирусная частица по настоящему изобретению дополнительно содержат геном, содержащий от 5'- к 3'-концу: 5'-ITR, представляющий интерес нуклеотид и 3'-ITR. В некоторых вариантах осуществления геном дополнительно содержит промотор, функционально связанный с представляющим интерес нуклеотидом. В некоторых вариантах осуществления 5'- и 3'-ITR происходят из AAV одного и того же вида. В некоторых вариантах осуществления 5'- и 3'-ITR происходят из AAV двух разных видов.

[00107] В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид представляет собой репортерный ген. В некоторых вариантах осуществления репортерный ген кодирует (3-галактозидазу, зеленый флуоресцентный белок (GFP), усиленный зеленый флуоресцентный белок (eGFP), MmGFP, синий флуоресцентный белок (BFP), усиленный синий флуоресцентный белок (eBFP), mPlum, mCherry, tdTomato, mStrawberry, J-Red, DsRed, mOrange, mKO, mCitrine, Venus, YPet, желтый флуоресцентный белок (YFP), усиленный желтый флуоресцентный белок (eYFP), Emerald, CyPet, голубой флуоресцентный белок (CFP), Cerulean, Т-Sapphire, люциферазу, щелочную фосфатазу или их комбинацию.

[00108] В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид кодирует терапевтический белок, суицидный ген, антитело или его фрагмент, систему CRISPR/Cas или ее часть(-и), антисмысловой олигонуклеотид, рибозим, молекулу для RNAi или shRNA.

[00109] В данном документе описан способ получения вирусной частицы AAV по настоящему изобретению, при этом способ предусматривает культивирование упаковывающей клетки в условиях, достаточных для продуцирования вирусных частиц, при этом упаковывающая клетка содержит (1) по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую один или более белков Rep AAV, например ген rep, и (2) первую нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP1 AAV, необязательно вторую нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP2 AAV, и третью нуклеотидную последовательность, кодирующую капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом (например, первую, вторую и третью нуклеотидную молекулу по настоящему изобретению), и необязательно (3) представляющий интерес нуклеотид, фланкированный первым и/или вторым ITR второго AAV, где один или более белков Rep AAV распознают сайт распознавания первого и/или второго ITR второго AAV, где третья нуклеотидная последовательность кодирует капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению, и где необязательно первая нуклеотидная последовательность кодирует капсидный белок VP1 AAV по настоящему изобретению, и/или вторая нуклеотидная последовательность кодирует капсидный белок VP2 AAV по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления один ген cap по настоящему изобретению содержит первую, вторую и третью нуклеотидные последовательности. В некоторых вариантах осуществления отдельная упаковывающая плазмида содержит по меньшей мер одну нуклеотидную последовательность, кодирующую один или более белков Rep AAV, и любую комбинацию первого, второго и третьего нуклеотидов, кодирующих капсидный белок VP1 AAV, капсидный белок VP2 AAV и капсидный белок VP3 соответственно AAV животного, не являющегося приматом.

[00110] В некоторых вариантах осуществления способ предусматривает культивирование упаковывающей клетки по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления способ предусматривает культивирование упаковывающей клетки по настоящему изобретению, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, где упаковывающая клетка необязательно дополнительно содержит плазмиду-помощника и/или плазмиду-переносчика, содержащую представляющий интерес нуклеотид.

[00111] Некоторые варианты осуществления способа дополнительно предусматривают выделение самокомплементарных частиц аденоассоциированного вируса из культурального супернатанта и/или клеточного лизата. Некоторые варианты осуществления способа дополнительно предусматривают осуществление лизиса упаковывающей клетки и выделение частиц на основе однонитевого аденоассоциированного вируса из культурального супернатанта и/или клеточного лизата. Некоторые варианты осуществления дополнительно предусматривают: а. удаление клеточного дебриса, b. обработку супернатанта, содержащего вирусные частицы, бензоназой или ДНКазой I и MgCl2, с. концентрирование вирусных частиц, d. очистку вирусных частиц и е. любую комбинацию a-d.

[00112] В некоторых вариантах осуществления путем трансфекции смесей первого гена cap, кодирующего капсидный белок VP, содержащий первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и по меньшей мере одного эталонного гена cap, кодирующего эталонный капсидный белок VP, в упаковывающие клетки при определенном соотношении получают мозаичные вирусные частицы. В некоторых вариантах осуществления мозаичную вирусную частицу по настоящему изобретению можно получить с помощью смесей, содержащих модифицированный ген сар:эталонный(-ые) ген(-ы) cap.В некоторых вариантах осуществления модифицированный ген cap кодирует по меньшей мере один из капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV, который содержит модификацию, например первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный ген cap кодирует эталонный капсидный белок, соответствующий по меньшей мере одному из модифицированных капсидных белков VP1, VP2 и VP3 AAV, за исключением модификации. В некоторых вариантах осуществления модифицированный ген cap кодирует капсидный белок VP1, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный ген cap кодирует эталонный капсидный белок VP1 без модификации. В некоторых вариантах осуществления модифицированный ген cap кодирует капсидный белок VP2, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный ген cap кодирует эталонный капсидный белок VP2 без модификации. В некоторых вариантах осуществления модифицированный ген cap кодирует капсидный белок VP3, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный ген cap кодирует эталонный капсидный белок VP3 без модификации.

[00113] Как правило, вирусные частицы, описанные в данном документе, содержат вирусный капсид, содержащий вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, включая мозаичные вирусные капсиды, где вирусный капсид инкапсидирует представляющий интерес нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид находится под контролем промотора, выбранного из группы, состоящей из вирусного промотора, бактериального промотора, промотора гена млекопитающего, промотора гена птицы, промотора гена рыбы, промотора гена насекомого и любой их комбинации. В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид находится под контролем промотора, отличного от человеческого. В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой цитомегаловирусный (CMV) промотор. В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор EF, например EF1α. В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор CAG. В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор гена убиквитина С (UbC).

[00114] Как правило, представляющий интерес нуклеотид может представлять собой один или более генов, которые могут кодировать детектируемый маркер, например репортер, или терапевтический полипептид. В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид представляет собой репортерный ген. В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид представляет собой репортерный ген, который кодирует детектируемый маркер, выбранный из группы, состоящей из зеленого флуоресцентного белка, люциферазы, β-галактозидазы и т.д. В некоторых вариантах осуществления детектируемый маркер представляет собой зеленый флуоресцентный белок. В других вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид выбран из группы, состоящей из суицидного гена, нуклеотида, кодирующего антитело или его фрагмент, нуклеотида, кодирующего систему CRISPR/Cas или ее часть(-и), нуклеотида, кодирующего антисмысловую РНК, нуклеотида, кодирующего siRNA, секретируемый фермент, гена, кодирующего терапевтический белок и т.д. В одном варианте осуществления представляющий интерес нуклеотид кодирует полидоменное терапевтическое средство, например белок, который содержит по меньшей мере два домена, обеспечивающие две разные функции.

[00115] Композиции, описанные в данном документе, как правило, содержат вирусную частицу, которая содержит вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, например, содержит капсид, содержащий вирусный капсидный белок (в том числе мозаичный капсид), где капсид инкапсидирует представляющий интерес нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления композиция, описанная в данном документе, содержит (1) вирусную частицу, имеющую капсид, содержащий вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, и (2) фармацевтически приемлемый носитель.

[00116] Также в данном документе описаны способы применения вирусных капсидных белков, вирусных частиц, содержащих их, композиций и т.д. В некоторых вариантах осуществления способы предусматривают приведение клетки-мишени (которая может находиться in vitro (например, ex vivo) или in vivo, например, в человеке) в контакт с вирусной частицей, содержащей вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, где вирусный капсид или вирусная частица содержит нацеливающий лиганд, который специфически связывает белок, экспрессируемый на поверхности клетки-мишени.

[00117] Вирусные частицы, описанные в данном документе, особенно подходят для целенаправленного введения представляющего интерес нуклеотида в конкретную клетку, поскольку вирусный(-ые) капсидный(-ые) белок(белки), описанный(-ые) в данном документе, содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок для его когнатного второго партнера, необязательно связанного с нацеливающим лигандом. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий лиганд функционально связан с белком (вторым партнером), например, слит с белком, необязательно с помощью линкера. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий лиганд может представлять собой связывающий фрагмент, например природный лиганд, антитело, полиспецифическую связывающую молекулу и т.д. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий лиганд представляет собой антитело или его часть. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий лиганд представляет собой антитело, содержащее вариабельный домен, который связывает белок клеточной поверхности на клетке-мишени, и константный домен тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий лиганд представляет собой антитело, содержащее вариабельный домен, который связывает белок клеточной поверхности на клетке-мишени, и константный домен тяжелой цепи IgG. В некоторых вариантах осуществления нацеливающий лиганд представляет собой антитело, содержащее вариабельный домен, который связывает белок клеточной поверхности на клетке-мишени, и константный домен тяжелой цепи IgG, где константный домен тяжелой цепи IgG функционально связан, например посредством линкера, с белком (например, вторым партнером из связывающейся пары белок:белок), который образует изопептидную ковалентную связь с первым партнером. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок, описанный в данном документе, содержит первого партнера, предусматривающего SpyTag, который функционально связан с вирусным капсидным белком и ковалентно связан со SpyTag, второго партнера, предусматривающего SpyCatcher, который связан с нацеливающим лигандом, содержащим вариабельный домен антитела и домен тяжелой цепи IgG, где SpyCatcher и домен тяжелой цепи IgG связаны посредством аминокислотного линкера, например, GSGESG (SEQ ID NO:49). В некоторых вариантах осуществления второй партнер содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO:47, которая содержит часть тяжелой цепи человеческого IgG4, при этом указанная часть IgG4 имеет последовательность, изложенную под SEQ ID NO:51, связанную посредством линкера (SEQ ID NO:49) со SpyCatcher (SEQ ID NO:43).

[00118] Как правило, нацеливающий лиганд специфически связывает молекулу клеточной поверхности, например олигосахарид, рецептор, маркер клеточной поверхности и т.д., экспрессируемую на поверхности эукариотической клетки млекопитающего (например, человека), например клетки-мишени.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[00119] На фиг.1 представлен иллюстративный (без соблюдения масштаба), неограничивающий и типичный вариант осуществления плазмиды для экспрессии Rep-Cap по настоящему изобретению, которую можно использовать для получения химерной вирусной частицы AAV. Последовательности AAV примата показаны в виде незакрашенных прямоугольников, а последовательности AAV животного, не являющегося приматом, показаны как закрашенные прямоугольники. Также только в качестве иллюстрации изображены типичные неограничивающие положения (без соблюдения масштаба) для вставки (1) первого партнера из связывающейся пары белок:белок, предназначенного для направления тропизма собранного капсида, содержащего закодированные белки VP1, VP2 и VP3 (сплошная линия в пределах последовательностей капсида AAV животного, не являющегося приматом), и (2) детектируемой метки для обнаружения закодированных белков VP1, VP2 и VP3 (пунктирная линия в пределах последовательностей капсида AAV животного, не являющегося приматом). Плазмиду экспрессии Rep-Cap, показанную на фиг.1, можно применять для продуцирования вирусных частиц AAV, содержащих представляющий интерес нуклеотид, который фланкирован последовательностями инвертированных 5'- и 3'-концевых повторов (ITR) AAV примата.

[00120] На фиг.2 представлены результаты вестерн-блоттинга с использованием антитела к В1, которое распознает эпитоп В1, сконструированный в химерном гене cap AAV примата/животного, не являющегося приматом (см. фиг.1), для анализа полученного химерного белка VP1 AAV примата/животного, не являющегося приматом, белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом. AAV примата представлял собой AAV2, a AAV животного, не являющегося приматом, представлял собой: (А) птичий AAV, (В) AAV морского льва или (C)AAV бородатой агамы. С помощью вестерн-блоттинга анализировали образцы белка, собранные на различных стадиях очистки частиц AAV посредством аффинной хроматографии, включая вводимый образец, проточную (FT) фракцию и элюируемую фракцию из колонки для аффинной хроматографии.

[00121] На фиг.3А представлена неограничивающая предсказанная ленточная структура VP3 птичьего AAV с выделением K580 и G444 в качестве неограничивающих сайтов вставки для первого партнера из связывающейся пары белок:белок. На фиг.3В представлена количественная оценка вирусного титра методом qPCR на основе неочищенных вирусных препаратов из панели химерных вирусных частиц AAV2/птичьего AAV либо без SpyTag, либо содержащих вставку SpyTag в указанном положении, или мозаичных частиц, состоящих из частиц AAV2/птичьего AAV без SpyTag в смеси с частицами AAV2/птичьего AAV, несущими вставку пептида SpyTag в указанном положении. На фиг.3С представлен результат вестерн-блоттинга с использованием антитела к В1, которое распознает линейный эпитоп, сконструированный в химерных капсидных белках VP1, VP2 и VP3 AAV2/птичьего AAV, выполненного для анализа реакции между антителом к ASGR1, слитым со SpyCatcher «SpyC-mAb к ASGR1», и панелью химерных вирусных частиц AAV2/птичьего AAV, которые либо содержат вставку SpyTag в указанном положении, либо не содержат ее, или мозаичных частиц, содержащих химерные частицы AAV2/птичьего AAV без SpyTag в смеси с химерными частицами AAV2/птичьего AAV, несущими вставку пептида SpyTag в указанном положении.

[00122] На фиг.4А представлена неограничивающая предсказанная ленточная структура VP3 AAV морского льва с выделением А565 и G432 в качестве неограничивающих сайтов вставки для первого партнера из связывающейся пары белок:белок. На фиг.4В представлена количественная оценка вирусного титра методом qPCR на основе неочищенных вирусных препаратов из панели химерных вирусных частиц AAV2/AAV морского льва, либо без SpyTag, либо содержащих вставку SpyTag в указанном положении, или мозаичных частиц, состоящих из частиц AAV2/AAV морского льва без SpyTag в смеси с частицами AAV2/AAV морского льва, несущими вставку пептида SpyTag в указанном положении. На фиг.4С представлен результат вестерн-блоттинга с использованием антитела к В1, которое распознает линейный эпитоп, сконструированный в химерных капсидных белках VP1, VP2 и VP3 AAV2/AAV морского льва, выполненного для анализа реакции между антителом к HER2 (HERCEPTIN®), слитым со SpyCatcher «SpyC-mAb к HER2», и панелью химерных вирусных частиц AAV2/AAV морского льва, которые либо содержат вставку SpyTag в указанном положении, либо не содержат ее, или мозаичных частиц AAV2/AAV морского льва, содержащих химерные частицы AAV2/AAV морского льва без SpyTag в смеси с химерными частицами AAV2/AAV морского льва, несущими вставку пептида SpyTag в указанном положении.

[00123] На фиг.5 представлена (А) количественная оценка вирусного титра методом qPCR на основе неочищенных вирусных препаратов из панели вирусных частиц AAV2/AAV морского льва либо без SpyTag, либо несущих вставку SpyTag в указанном положении, и (В) результат вестерн-блоттинга с использованием антитела к В1, которое распознает линейный эпитоп, сконструированный в химерных капсидных белках VP1, VP2 и VP3 AAV2/AAV морского льва, выполненного для анализа реакции между антителом к HER2 (HERCEPTIN®), слитым со SpyCatcher «SpyC-mAb», и панелью вирусных частиц AAV морского льва либо без SpyTag, либо несущих вставку SpyTag в указанном положении.

[00124] На фиг.6А представлена неограничивающая предсказанная ленточная структура VP3 AAV бородатой агамы с выделением Т573 и G436 в качестве неограничивающих сайтов вставки для первого партнера из связывающейся пары белок:белок. На фиг.6В представлена количественная оценка вирусного титра методом qPCR на основе неочищенных вирусных препаратов из панели химерных вирусных частиц AAV2/AAV бородатой агамы либо без SpyTag, либо содержащих вставку SpyTag в указанном положении, или мозаичных частиц, состоящих из частиц AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag в смеси с частицами AAV2/AAV бородатой агамы, несущими вставку пептида SpyTag в указанном положении. На фиг.6С представлен результат вестерн-блоттинга с использованием антитела к В1, которое распознает линейный эпитоп, сконструированный в химерных капсидных белках VP1, VP2 и VP3 AAV2/AAV бородатой агамы, выполненного для анализа реакции между антителом к HER2 (HERCEPTIN®), слитым со SpyCatcher «SpyC-mAb к HER2», и панелью химерных вирусных частиц AAV2/AAV бородатой агамы, которые либо содержат вставку SpyTag в указанном положении, либо не содержат ее, или мозаичных частиц AAV2/AAV бородатой агамы, содержащих химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag в смеси с химерными частицами AAV2/AAV бородатой агамы, несущими вставку пептида SpyTag в указанном положении.

[00125] На фиг.7А представлены диаграммы рассеяния, полученные по результатам проточной цитометрии, оценивающей экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) НЕР2-положительными (+) клетками 293 hErbB2, инфицированными химерными частицами AAV2/AAAV без SpyTag, химерными частицами AAV2/AAAV G444 линкер-6 SpyTag или химерными частицами AAV2/AAAV K580 линкер-6 SpyTag. Химерные частицы AAV2/AAAV G444 линкер-6 SpyTag и химерные частицы AAV2/AAAV К580 линкер-6 SpyTag конъюгировали с одним из нерелевантного контрольного изотипического антитела против GLP1R или антитела к HER2 (HERCEPTIN®), слитого со SpyCatcher (SEQ ID NO:43), посредством SpyTag (SEQ ID NO:42). Вирусы экспрессируют GFP в качестве маркера трансдукции. На фиг.7 В представлены диаграммы рассеяния, полученные по результатам проточной цитометрии, оценивающей экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) исходными ASGR1-отрицательными (-) клетками 293 или ASGRl-положительными (+) клетками 293 hASGRl, инфицированными химерными частицами AAV2/AAAV без SpyTag или химерными частицами AAV2/AAAV K580 линкер-6 SpyTag. Химерные частицы AAV2/AAAV K580 линкер-6 SpyTag конъюгировали с одним из нерелевантного контрольного изотипического антитела против GLP1R, слитого со SpyCatcher посредством SpyTag, или конъюгировали со слитым со SpyCatcher антителом, которое специфически связывает ASGR1, посредством SpyTag. Вирусы экспрессируют GFP в качестве маркера трансдукции.

[00126] На фиг.8А представлены диаграммы рассеяния, полученные по результатам проточной цитометрии, оценивающей экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) HER2-положительными (+) клетками 293 hErbB2 или HER2-отрицательными (-) исходными клетками 293, инфицированными химерными частицами AAV2/вируса морского льва без SpyTag или химерными частицами AAV2/вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag. Химерные частицы AAV2/вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag конъюгировали с одним из нерелевантного контрольного изотипического антитела против GLP1R, слитого со SpyCatcher посредством SpyTag, или конъюгировали с антителом к HER2 (HERCEPTIN®), слитым со SpyCatcher (SEQ ID NO:43), посредством SpyTag. Вирусы экспрессируют GFP в качестве маркера трансдукции. На фиг.8В представлены диаграммы рассеяния, полученные по результатам проточной цитометрии, оценивающей экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) ASGR1-положительными (+) клетками 293 hASGR1 или ASGR1-отрицательными (-) исходными клетками 293, инфицированными химерными частицами AAV2/вируса морского льва без SpyTag, или клетками, инфицированными химерными частицами AAV2/вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag. Химерные частицы AAV2/вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag конъюгировали с одним из нерелевантного контрольного изотипического антитела против GLP1R, слитого со SpyCatcher посредством SpyTag, или конъюгировали со слитым со SpyCatcher антителом, которое специфически связывает ASGR1, посредством SpyTag. Вирусы экспрессируют GFP в качестве маркера трансдукции.

[00127] На фиг.9 представлены диаграммы рассеяния, полученные по результатам проточной цитометрии, оценивающей экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) HER2-положительными (+) клетками 293, инфицированными панелью химерных вирусных частиц AAV2/AAV морского льва, либо частицами AAV2/AAV морского льва без SpyTag, либо содержащими вставку SpyTag в указанном положении. SpyTag, вставленную в химерные частицы AAV2/вируса морского льва, конъюгировали с антителом к HER2 (HERCEPTIN®), слитым со SpyCatcher (SEQ ID NO:43), посредством SpyTag. Вирусы экспрессируют GFP в качестве маркера трансдукции.

[00128] На фиг.10А представлены диаграммы рассеяния, полученные по результатам проточной цитометрии, оценивающей экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) HER2-положительными (+) клетками 293 hErbB2, либо «неинфицированными», либо инфицированными химерными частицами AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag, химерными мозаичными частицами AAV2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag или химерными мозаичными частицами AAV2/вируса бородатой агамы-0436-линкер-6-SpyTag. Химерные мозаичные частицы AAV2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag и химерные мозаичные частицы AAV2/вируса бородатой агамы G436 линкер-6 SpyTag конъюгировали с антителом к HER2 (HERCEPTIN®), слитым со SpyCatcher (SEQ ID NO:43), посредством SpyTag. Вирусы экспрессируют GFP в качестве маркера трансдукции. На фиг.10 В представлены диаграммы рассеяния, полученные по результатам проточной цитометрии, оценивающей экспрессию зеленого флуоресцентного белка (GFP) ASGR1-положительными (+) клетками 293 hASGR1 или ASGR1-отрицательными (-) исходными клетками 293, инфицированными химерными частицами AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag, химерными частицами AAV2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag или химерными частицами AAV/2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag антитело к ASGR1. Химерные частицы AAV2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag антитело к ASGR1 конъюгировали со слитым со SpyCatcher антителом, которое специфически связывает ASGR1, посредством SpyTag. Вирусы экспрессируют GFP в качестве маркера трансдукции.

[00129] На фиг.11А представлены результаты люциферазного анализа Nanoluc, оценивающего экспрессию репортера Nanoluc клетками, положительными (+) по hASGR1, после инфицирования частицами «AAV2 антитело к ASGR1», химерными частицами AAV2/AAAV антитело к ASGR1 или химерными частицами AAV2/AAV морского льва антитело к ASGR1 в присутствии очищенного человеческого IgG в указанной концентрации. Все частицы конъюгировали со слитым со SpyCatcher антителом, которое специфически связывает ASGR1, посредством SpyTag. Вирусы экспрессируют Nanoluc в качестве маркера трансдукции. На фиг.11 В представлена количественная оценка графиков на фиг.11А, но нормализованных по условию «только PBS». На фиг.11С представлена таблица значений IC50 концентрации IgG, требуемой для нейтрализации указанных вирусов на 50%.

[00130] На фиг.12 представлены (А) люминесцентные фотографии генетически модифицированных мышей, которые экспрессируют ASGR1 человека в клетках печени (мыши, гуманизированные по ASGR1) через 33 дня после внутривенной инъекции фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) или химерных частиц AAV2/AAAV с меткой SpyTag из расчета 5,0×10¹¹ вирусных геномов (вг)/животное, которые несут представляющий интерес нуклеотид люциферазы светлячка и модифицированы посредством (1) S ру Catcher- антитело-к-ASGR1 человека или (2) SpyCatcher-антитело к GLP1R человека (контрольное mAb). Вирусы экспрессируют люциферазу светлячка в качестве маркера трансдукции. Мышей подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и подвергали визуализации через 10 минут с применением системы для визуализации In vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer); (В) количественная оценка средней интенсивности излучения отдельных животных в рамках люминесцентных фотографий, представленных на панели А; и (С) количественная оценка средней интенсивности излучения иссеченных органов (печени и легких) животных, изображенных на панели А.

[00131] На фиг.13 представлены (А) люминесцентные фотографии генетически модифицированных мышей, которые экспрессируют ASGR1 человека в клетках печени (мыши, гуманизированные по ASGR1) через 33 дня после внутривенной инъекции фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) или химерных частиц AAV2/AAV морского льва с меткой SpyTag из расчета 5,0×10¹¹ вирусных геномов (вг)/животное, которые несут представляющий интерес нуклеотид люциферазы светлячка и модифицированы посредством (1) SpyCatcher-антитело-к-ASGR1 человека или (2) SpyCatcher-антитело к GLP1R человека (контрольное mAb). Вирусы экспрессируют люциферазу светлячка в качестве маркера трансдукции. Мышей подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и подвергали визуализации через 10 минут с применением системы для визуализации In vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer); (В) количественная оценка средней интенсивности излучения отдельных животных в рамках люминесцентных фотографий, представленных на панели А; (С) количественная оценка средней интенсивности излучения иссеченных органов (печени и легких) животных, изображенных на панели А.

[00132] На фиг.14 представлено иммунофлуоресцентная фотография культуры эксплантата кортиева органа внутреннего уха новорожденной мыши через 3 дня после инфицирования химерными частицами AAV2/AAV морского льва без SpyTag. Вирус экспрессирует GFP в качестве маркера трансдукции (зеленый), а волосковые клетки помечены антителом, которое обнаруживает Муо7а (красный).

[00133] На фиг.15 А представлено выравнивание 16 С-концевых аминокислот последовательности AAV2 или химерных последовательностей AAV2/вируса морского льва, включающих модификацию эпитопа В1 для его полной замены или только по остатку 730 на гомологичную последовательность AAV морского льва. Проиллюстрирован эпитоп В1 для моноклонального антитела. На фиг.15В представлена количественная оценка вирусного титра методом qPCR на основе очищенных вирусных препаратов химерных частиц AAV2/AAV морского льва без SpyTag или без SpyTag и содержащим модификацию эпитопа В1 для его полной замены или только по остатку 730 на гомологичную последовательность AAV морского льва. На фиг.15С представлено окрашивание белкового геля с использованием SYPRO Ruby для анализа экспрессии капсидных белков VP1, VP2 и VP3 из химерных частиц AAV2/AAV морского льва без SpyTag или без SpyTag и содержащих модификацию эпитопа В1 для его полной замены или только по остатку 730 на гомологичную последовательность AAV морского льва. На фиг.15D представлен график по осям XY, полученный по результатам оценки люминесценции при экспрессии люциферазы NanoLuc в лизатах клеток HEK293T, инфицированных химерными частицами AAV2/AAV морского льва без SpyTag или без SpyTag и содержащих модификации эпитопа В1 для его полной замены или только по остатку 730 на гомологичную последовательность AAV морского льва, при различной множественности заражения (MOI). Вирусы экспрессируют люциферазу NanoLuc в качестве маркера трансдукции.

[00134] На фиг.16 представлена количественная оценка средней интенсивности излучения иссеченных органов мыши через 34 дня после внутривенной инъекции фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) или химерных частиц AAV2/AAV морского льва из расчета 5,0×10¹¹ вирусных геномов (вг)/животное, которые несут представляющий интерес нуклеотид люциферазы светлячка и модифицированы в виде отсутствия SpyTag или отсутствия SpyTag и содержания модификации эпитопа В1 для его полной замены или только по остатку 730 на гомологичную последовательность AAV морского льва. Вирусы экспрессируют люциферазу светлячка в качестве маркера трансдукции. Мышей подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и подвергали визуализации через 10 минут с применением системы для визуализации In Vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer).

[00135] На фиг.17 представлен иллюстративный (без соблюдения масштаба), неограничивающий и типичный вариант осуществления плазмиды для экспрессии Rep-Cap по настоящему изобретению, которую можно использовать для получения химерной вирусной частицы AAV. Последовательности AAV примата показаны в виде незакрашенных прямоугольников, а последовательности AAV морского льва показаны как закрашенные прямоугольники. Также только в качестве иллюстрации изображены типичные неограничивающие положения (без соблюдения масштаба) для (1) альтернативных местоположений границы раздела между последовательностями капсида вируса примата и морского льва (пунктирные черные линии в пределах последовательности капсида AAV животного-примата) и (2) детектируемой метки для обнаружения закодированных белков VP1, VP2 и VP3 (пунктирная линия в пределах последовательностях капсида AAV животного, не являющегося приматом). Плазмиду экспрессии Rep-Cap, показанную на фиг.17, можно применять для продуцирования вирусных частиц AAV, содержащих представляющий интерес нуклеотид, который фланкирован последовательностями инвертированных 5'- и 3'-концевых повторов (ITR) AAV примата.

[00136] На фиг.18А представлена количественная оценка вирусного титра методом qPCR на основе очищенных вирусных препаратов химерных частиц AAV2/AAV морского льва без SpyTag и содержащих альтернативные местоположения границы раздела между последовательностями капсида AAV2 и вируса морского льва. Препараты очищали из клеточного лизата (v2 - v4) или как из клеточного лизата, так и из среды (v5). На фиг.18В и фиг.18С представлены графики по осям XY, полученные по результатам оценки люминесценции при экспрессии люциферазы NanoLuc в лизатах клеток HEK293T, инфицированных частицами AAV2/AAV морского льва без SpyTag и альтернативными местоположениями границы раздела между последовательностями капсида AAV2 и вируса морского льва при различной множественности заражения (MOI). В качестве эталона использовали набор архивных данных для AAV2/AAV морского льва без SpyTag. Вирусы экспрессируют люциферазу NanoLuc в качестве маркера трансдукции. На фиг.18D представлена количественная оценка средней интенсивности излучения иссеченных органов мыши через 56 дней после внутривенной инъекции фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) или частиц AAV2/AAV морского льва из расчета 5,0×10¹¹ вирусных геномов (вг)/животное, которые несут представляющий интерес нуклеотид люциферазы светлячка и модифицированы в виде отсутствия SpyTag или отсутствия SpyTag и полной замены эпитопа В1 на гомологичную последовательность AAV морского льва с альтернативными местоположениями границы раздела между последовательностями капсида AAV2 и вируса морского льва или без них. Вирусы экспрессируют люциферазу светлячка в качестве маркера трансдукции. Мышей подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и подвергали визуализации через 10 минут с применением системы для визуализации In Vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[00137] Хотя рекомбинационные подходы для нацеливания на конкретные клетки с помощью генной терапии на основе AAV в последние годы претерпели улучшение, сохраняется проблема в отношении современных рекомбинационных подходов, применяемые для разработки AAV, которые избегают обнаружения и/или нейтрализации под действием предсуществующих антител, которые предположительно вырабатываются в раннем возрасте. В данном документе описан подход, при котором используются (1) естественные способности AAV животного, не являющего приматом, или отдаленного AAV инфицировать клетки примата, (2) отсутствие у человека NAb к капсидным белкам AAV животного, не являющего приматом, и, если требуется или необходимо, (3) адаптация первого партнера из связывающейся пары белок:белок, сконструированного в капсидных белках AAV, для продуцирования вирусных частиц AAV, применимых для направленной генной терапии, например, введения представляющего интерес нуклеотида в конкретную представляющую интерес клетку. В настоящем документе описана нуклеотидная молекула, которая содержит по меньшей мере ген cap AAV, используемый в соответствии с его требуемой функцией. Нуклеотидная молекула по настоящему изобретению содержит ген cap или его часть от AAV животного, не являющегося приматом, и/или отдаленного AAV (для продуцирования вирусных капсидов, которые не так легко распознаются предсуществующими NAb). Ген cap или его часть от AAV животного, не являющегося приматом, может быть модифицирован с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, с которым второй партнер, содержащий нацеливающий лиганд, может связываться и управлять тропизмом полученных вирусных частиц AAV.

[00138] В случае таких AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, которые не способны инфицировать клетки приматов, ген cap можно конструировать в виде химерного гена cap, который кодирует по меньшей мере домен фосфолипазы А₂ (PLA2) капсидного белка VP1 AAV примата и по меньшей мере часть капсидного белка VP3 AAV примата, не являющегося человеком, или отдаленного AAV. Домен PLA2 содержится в капсидном белке VP1 (более конкретно, в уникальной области VP1 (VP1-u) капсида VP1) и предположительно является важным во время инфицирования AAV, опосредуя перенос вирусного генома из поздних эндосом/лизосом в ядро для запуска репликации (Zadori et al., 2001, Dev Cell, l(2):291-302). Капсидный белок VP3 представляет собой основной поверхностный капсидный белок вирусной частицы AAV, и сам по себе вирусный капсид, содержащий по меньшей мере часть капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV вряд ли будет распознаваться NAb, выработанными против сероваров AAV, выделенных от приматов в ходе инфицирования с помощью AAV примата.

[00139] Неограничивающее иллюстрация молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей ген rep AAV примата и химерный ген cap, представлено на фиг.1. В случае тех AAV примата, не являющегося человеком, или отдаленных AAV, которые способны инфицировать клетки приматов, ген rep AAV примата может быть функционально связан с химерным геном cap, описанным в данном документе, или с геном cap AAV животного, не являющегося приматом. Приведенные в данном документе примеры показывают, что такая молекула нуклеиновой кислоты при экспрессии в линии упаковывающих клеток вместе с плазмидой-помощником и геномом AAV примата, несущим представляющий интерес нуклеотид, способна кодировать соответствующие белки репликации и капсидные белки, которые осуществляют соответственно репликацию генома AAV примата и его инкапсидирование в вирусную частицу, способную инфицировать клетки in vivo. Более того, примеры показывают, что тропизм такой вирусной частицы AAV легко адаптировать путем применения первого и второго партнеров из связывающейся пары белок:белок, и, более того, такая вставка первого и второго партнера из связывающейся пары белок:белок не увеличивает вероятность распознавания со стороны NAb, выработанных против инфицирования AAV примата. Таким образом, в настоящем документе предусмотрены генетически модифицированные вирусные частицы, композиции, содержащие их, и способы их получения и применения.

[00140] Если не указано иное, то все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, как его обычно понимает специалист средней квалификации в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение.

[00141] Формы единственного числа включают определяемые объекты во множественном числе, если из контекста явно не следует иное. Таким образом, например, ссылка на «способ» включает один или более способов и/или стадий, подобных описанным в данном документе, и/или которые станут очевидными специалистам в данной области техники после прочтения данного раскрытия.

[00142] «Процент (%) идентичности» или т.п. можно легко определить для аминокислотных или нуклеотидных последовательностей по всей длине белка или его части. Длина части может составлять по меньшей мере приблизительно 5 аминокислот или 24 нуклеотида соответственно, и может составлять вплоть до приблизительно 700 аминокислот или 2100 нуклеотидов соответственно. Обычно, если речь идет об «идентичности», «гомологии» или «сходстве» между двумя разными аденоассоциированными вирусами, «идентичность», «гомология» или «сходство» определяют с точки зрения «подвергнутых выравниванию» последовательностей. «Подвергнутые выравниванию» последовательности или «выравнивания» относятся к нескольким последовательностям нуклеиновой кислоты или белковым (аминокислотным) последовательностям, зачастую содержащим исправления в виде отсутствующих или дополнительных оснований или аминокислот по сравнению с эталонной последовательностью.

[00143] Выравнивания можно выполнять с использованием любой из множества общедоступных или коммерчески доступных программ для множественного выравнивания последовательностей. Для аминокислотных последовательностей доступны такие программы выравнивания последовательностей, как, например, программы «Clustal X», «МАР», «PIMA», «MSA», «BLOCKMAKER», «МЕМЕ» и «Match-Вох». Обычно любая из данных программ используется с настройками по умолчанию, хотя специалист в данной области техники при необходимости может изменить данные настройки. В качестве альтернативы специалист в данной области техники может использовать другой алгоритм или компьютерную программу, которая обеспечивает по меньшей мере такой же уровень идентичности или выравнивания, который обеспечивают упомянутые алгоритмы и программы. См., например, J. D. Thomson et al, Nucl. Acids. Res., «A comprehensive comparison of multiple sequence alignments)), 27(13):2682-2690 (1999).

[00144] Для последовательностей нуклеиновой кислоты также доступны программы множественного выравнивания последовательностей. Примеры таких программ включают «Clustal W», «САР Sequence Assembly)), «МАР» и «МЕМЕ», которые доступны через веб-серверы в сети Интернет. Другие источники таких программ известны специалистам в данной области техники. В качестве альтернативы также используются утилиты Vector NTI. Кроме того, существует целый ряд известных в данной области техники алгоритмов, которые можно использовать для измерения идентичности нуклеотидных последовательностей, включая алгоритмы, содержащиеся в программах, описанных выше. В качестве другого примера полинуклеотидные последовательности можно сравнить с помощью FASTA™, программы в GCG версии 6.1. Fasta™ обеспечивает выравнивания и расчет процента идентичности последовательности в областях наибольшего перекрывания между запрашиваемой и поисковой последовательностями. Например, процент идентичности последовательностей между последовательностями нуклеиновой кислоты можно определять с использованием FASTA™ с параметрами по умолчанию (размер слова 6 и фактор NOPAM для матрицы замен), как предусмотрено в GCG версии 6.1, включенной в данный документ посредством ссылки.

[00145] Термин «значительная идентичность» охватывает выравнивание аминокислотных последовательностей или последовательностей нуклеиновой кислоты, характеризующиеся идентичностью по меньшей мере 90%, например по меньшей мере 93%, например по меньшей мере 95%, например по меньшей мере 96%, например по меньшей мере 97%, например по меньшей мере 98%, например по меньшей мере 99% или например по меньшей мере 100%.

[00146] Термин «химерный» охватывает функциональный ген или полипептид, содержащие соответственно последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотные последовательности из по меньшей мере двух разных организмов, например, части гена или полипептида по меньшей мере первого и второго AAV, где по меньшей мере первая и вторая части являются функционально связанными. Нуклеотидные последовательности, гены, полипептиды и аминокислоты, если они не указаны как химерные, считаются нехимерными, например, содержащими последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотную последовательность только одного организма, например одного AAV.

[00147] Термин «антитело» включает молекулы иммуноглобулинов, содержащие четыре полипептидные цепи, две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи (V_H) и константную область тяжелой цепи (C_H). Константная область тяжелой цепи содержит по меньшей мере три домена, C_H1, C_H2, C_H3 и необязательно C_H4. Каждая легкая цепь содержит вариабельный домен легкой цепи (V_H) и константную область легкой цепи (C_L). Вариабельные домены легких и тяжелых цепей могут быть дополнительно подразделены на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), чередующиеся с более консервативными областями, называемыми каркасными областями (FR). Каждый вариабельный домен тяжелой и легкой цепей содержит три CDR и четыре FR, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 (CDR тяжелой цепи могут быть сокращены как HCDR1, HCDR2 и HCDR3; CDR легкой цепи могут быть сокращены как LCDR1, LCDR2 и LCDR3). Типичные тетрамерные структуры антитела содержат два идентичных антигенсвязывающих домена, каждый из которых образован за счет ассоциации доменов V_H и V_L, и каждый из которых вместе с соответствующими доменами C_H и C_L образуют Fv-область антитела. Однодоменные антитела содержат один антигенсвязывающий домен, например V_H или V_L. Антиген связывающий домен антитела, например часть антитела, которая распознает и связывается с первым партнером из специфической связывающейся пары антигена, также называется «паратопом». Это небольшая область (от 5 до 10 аминокислот) Fv-области антитела, часть антигенсвязывающего фрагмента (область Fab), и она может содержать части тяжелой и/или легкой цепей антитела. Паратоп специфически связывает первого партнера из специфической связывающейся пары, если паратоп связывает первого партнера из специфической связывающейся пары с высокой аффинностью. Термин «высокоаффинное» антитело относится к антителу, которое характеризуется K_D для его первого партнера-мишени из специфической связывающейся пары, составляющей приблизительно 10^-9 М или меньше (например, приблизительно 1×10^-9 М, 1×10^-10 М, 1×10^-11 М или приблизительно 1×10^-12 М). В одном варианте осуществления K_D измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса, например BIACORE™; в другом варианте осуществления, K_D измеряют с помощью ELISA.

[00148] Фраза «определяющая комплементарность область» или термин «CDR» включают аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты генов иммуноглобулина организма, которая в норме (т.е. у животного дикого типа) находится между двух каркасных областей в вариабельной области легкой или тяжелой цепи молекулы иммуноглобулина (например, антитела или Т-клеточного рецептора). CDR может кодироваться, например, последовательностью зародышевого типа, либо реаранжированной или переаранжированной последовательностью, и, например, непримированной или зрелой В-клеткой или Т-клеткой. CDR может быть подвергшейся соматической мутации (например, отличаться от последовательности, кодируемой зародышевым типом животного), гуманизированной и/или модифицированной с помощью аминокислотных замен, добавлений или делеций. В некоторых случаях (например, в случае CDR3) CDR могут кодироваться двумя или более последовательностями (например, последовательностями зародышевого типа), которые не являются смежными (например, в случае нереаранжированной последовательности нуклеиновой кислоты), но они являются смежными в последовательности нуклеиновой кислоты в В-клетке, например, как результат сплайсинга или соединения последовательностей (например, V-D-J-рекомбинация с образованием CDR3 тяжелой цепи).

[00149] Фраза «легкая цепь» включает последовательность легкой цепи иммуноглобулина из любого организма и, если не указано иное, включает легкие κ- и Х-цепи человека и VpreB, а также суррогатные легкие цепи. Вариабельные домены легкой цепи, как правило, содержат три CDR- и четыре каркасные (FR) области легкой цепи, если не указано иное. В целом, полноразмерная легкая цепь включает в направлении от аминоконца к карбоксильному концу: вариабельный домен, который включает FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, и константный домен легкой цепи. Вариабельный домен легкой цепи кодируется последовательностью гена вариабельной области легкой цепи, который, как правило, содержит генные сегменты V_L и J_L, полученные из репертуара сегментов V и J, присутствующих в зародышевой линии. Последовательности, местоположения и номенклатуру для сегментов V и J легкой цепи у различных организмов можно просмотреть в базе данных IMGT, www.imgt.org. Например, легкие цепи включают такие, которые не обеспечивают селективное связывание одного из первого или второго первого партнера из специфической связывающейся пары, селективно связанной с первым партнером из специфической связывающейся пары-связывающего белка, в которых они находятся. Легкие цепи также включают такие, которые обеспечивают связывание или распознавание или содействуют тяжелой цепи или другой легкой цепи при связывании или распознавании одного или более первых партнеров из специфических связывающихся пар, селективно связанных с первым партнером из специфической связывающейся пары-связывающего белка, в которых они находятся. Традиционные или универсальные легкие цепи включают цепи, полученные из гена Vκ1-39Jκ человека или гена Vκ3-20Jκ человека, и включают их варианты, подвергшиеся соматической мутации (например, созреванию аффинности). Иллюстративные сегменты V_L человека включают генный сегмент Vκ1-39 человека, генный сегмент Vκ3-20 человека, генный сегмент Vλ1-40 человека, генный сегмент Vλ1-44 человека, генный сегмент Vλ2-8 человека, генный сегмент Vλ2-14 человека, а также генный сегмент Vλ3-21 человека и включают их варианты, подвергшиеся соматической мутации (например, созреванию аффинности). Можно получать легкие цепи, которые содержат вариабельный домен от одного организма (например, человека или грызуна, например, крысы или мыши; или птицы, например, курицы) и константную область от того же или другого организма (например, человека или грызуна, например, крысы или мыши; или птицы, например, курицы).

[00150] Термин «приблизительно» или «примерно» включает нахождение в пределах статистически значимого диапазона значения. Такой диапазон может быть в пределах порядка величины, предпочтительно в пределах 50%, более предпочтительно в пределах 20%, еще более предпочтительно в пределах 10% и еще более предпочтительно в пределах 5% от данного значения или диапазона. Допустимое отклонение, охватываемое терминами «приблизительно» или «примерно», зависит от конкретной исследуемой системы и может быть легко оценено специалистом средней квалификации в данной области техники.

[00151] Фраза «тяжелая цепь» или «тяжелая цепь иммуноглобулина» включает последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина, в том числе последовательность константной области тяжелой цепи иммуноглобулина, из любого организма. Вариабельные домены тяжелой цепи содержат три CDR- и четыре FR-области тяжелой цепи, если не указано иное. Фрагменты тяжелых цепей включают CDR, CDR и FR, а также их комбинации. Типичная тяжелая цепь после вариабельного домена содержит (от N-конца к С-концу) домен C_H1, шарнирную область, домен C_H2 и домен C_H3. Функциональный фрагмент тяжелой цепи включает фрагмент, который способен специфически распознавать первого партнера из специфической связывающейся пары (например, распознавать первого партнера из специфической связывающейся пары с K_D в микромолярном, наномолярном или пикомолярном диапазоне), который способен экспрессироваться и секретироваться клеткой и который содержит по меньшей мере одну CDR. Вариабельные домены тяжелой цепи кодируются нуклеотидной последовательностью вариабельной области, которая, как правило, содержит сегменты V_H, D_H и J_H, полученные из репертуара сегментов V_H, D_H и J_H, присутствующих в зародышевой линии. Последовательности, местоположения и номенклатуру сегментов тяжелых цепей V, D и J для различных организмов можно найти в базе данных IMGT, которая доступна через Интернет во всемирной сети (www) по адресу «imgt.org».

[00152] Термин «антитело, содержащее только тяжелую цепь», «антигенсвязывающий белок, содержащий только тяжелую цепь», «однодоменный антиген связывающий белок», «однодоменный связывающий белок» и т.п. относится к мономерной или гомодимерной молекуле иммуноглобулина, содержащей иммуноглобулиноподобную цепь, содержащую вариабельный домен, функционально связанный с константной областью тяжелой цепи, который не может ассоциироваться с легкой цепью, поскольку в константной области тяжелой цепи, как правило, отсутствует функциональный домен C_H1. Соответственно, термин «антитело, содержащее только тяжелую цепь», «антигенсвязывающий белок, содержащий только тяжелую цепь», «однодоменный антигенсвязывающий белок», «однодоменный связывающий белок» и т.п. охватывает как (i) мономерный однодоменный антигенсвязывающий белок, содержащий одну иммуноглобулиноподобную цепь, содержащую вариабельный домен, функционально связанный с константной областью тяжелой цепи, в которой отсутствует функциональный домен C_H1, так и (ii) гомодимерный однодоменный антигенсвязывающий белок, содержащий две иммуноглобулиноподобные цепи, каждая из которых содержит вариабельный домен, функционально связанный с константной областью тяжелой цепи, в которой отсутствует функциональный домен C_H1. В различных аспектах гомодимерный однодоменный антигенсвязывающий белок содержит две идентичные иммуноглобулиноподобные цепи, каждая из которых содержит идентичный вариабельный домен, функционально связанный с идентичной константной областью тяжелой цепи, в которой отсутствует функциональный домен C_H1. Кроме того, каждая иммуноглобулиноподобная цепь однодоменного антигенсвязывающего белка содержит вариабельный домен, который может быть получен из генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи (например, V_H, D_H, J_H), генных сегментов легкой цепи (например, V_L, J_L) или их комбинации, связанный с последовательностью гена константной области тяжелой цепи (Сн), содержащей делецию или инактивирующую мутацию в кодирующей последовательности C_H1 (и необязательно шарнирную область) гена константной области тяжелой цепи, например IgG, IgA, IgE, IgD или их комбинации. Однодоменный антигенсвязывающий белок, содержащий вариабельный домен, полученный из генных сегментов тяжелой цепи, может называться «V_H-однодоменное антитело» или «V_H-однодоменный антигенсвязывающий белою), см., например, патент США №8754287; публикации заявок на патент США №№20140289876; 20150197553; 20150197554; 20150197555; 20150196015; 20150197556 и 20150197557, каждая из которых включена посредством ссылки во всей своей полноте. Однодоменный антигенсвязывающий белок, содержащий вариабельный домен, полученный из генных сегментов легкой цепи, может называться «V_L-однодоменный антигенсвязывающий белою), см., например, публикацию заявки на патент США №20150289489, включенную посредством ссылки во всей своей полноте.

[00153] Фраза «легкая цепь» включает последовательность легкой цепи иммуноглобулина из любого организма и, если не указано иное, включает легкие каппа (κ)- и лямбда (λ)-цепи человека и VpreB, а также суррогатные легкие цепи. Вариабельные домены легкой цепи, как правило, содержат три CDR- и четыре каркасные (FR) области легкой цепи, если не указано иное. В целом, полноразмерная легкая цепь включает в направлении от аминоконца к карбоксильному концу: вариабельный домен, который включает FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, и аминокислотную последовательность константной области легкой цепи. Вариабельные домены легкой цепи кодируются нуклеотидной последовательностью вариабельной области легкой цепи, которая обычно содержит генные сегменты V_L и J_L легкой цепи, полученные из репертуара генных сегментов VL и JL легкой цепи, присутствующих в зародышевой линии. Последовательности, местоположения и номенклатура для генных сегментов легкой цепи V и J для различных организмов можно найти в базе данных IMGT, которая доступна через Интернет во всемирной сети (www) по адресу «imgt.org». Например, легкие цепи включают такие, которые не обеспечивают селективное связывание одного из первого или второго первого партнера из специфической связывающейся пары, селективно связанной с первым партнером из специфической связывающейся пары-связывающего белка, в которых они находятся. Легкие цепи также включают такие, которые обеспечивают связывание или распознавание или содействуют цепи при связывании или распознавании одного или более первых партнеров из специфических связывающихся пар, селективно связанных с первым партнером из специфической связывающейся пары-связывающего белка, в которых они находятся. Легкие цепи также включают такие, которые обеспечивают связывание или распознавание или содействуют цепи при связывании или распознавании одного или более первых партнеров из специфических связывающихся пар, селективно связанных с первым партнером из специфической связывающейся пары-связывающего белка, в которых они находятся. Традиционные или универсальные легкие цепи включают цепи, полученные из гена Vκ1-39Jκ5 человека или гена Vκ3-20Jκ1 человека, и включают их варианты, подвергшиеся соматической мутации (например, созреванию аффинности).

[00154] Используемая в данном документе фраза «функционально связанный» включает физическое наложение (например, в трехмерном пространстве) компонентов или элементов, которые прямо или косвенно взаимодействуют друг с другом или иным образом координируются друг друга для участия в биологическом событии, при этом такое наложение обеспечивает достижение или разрешает такое взаимодействие и/или координацию. В качестве лишь одного примера, говорится, что последовательность контроля (например, последовательность контроля экспрессии) в нуклеиновой кислоте «функционально связана» с кодирующей последовательностью, если она расположена относительно кодирующей последовательности таким образом, что ее присутствие или отсутствие влияет на экспрессию и/или активность кодирующей последовательности. Во многих вариантах осуществления «функциональная связь» подразумевает ковалентную связь соответствующих компонентов или элементов друг с другом. Специалисты в данной области техники легко поймут, что в некоторых вариантах осуществления ковалентная связь не требуется для достижения эффективной функциональной связи. Например, в некоторых вариантах осуществления последовательности контроля нуклеиновой кислоты, которые функционально связаны с кодирующими последовательностями, которые они контролируют, являются смежными с представляющим интерес нуклеотидом. В качестве альтернативы или дополнения в некоторых вариантах осуществления одна или более из таких последовательностей контроля действуют в транс-положении или на расстоянии для осуществления контроля представляющей интерес кодирующей последовательности. В некоторых вариантах осуществления используемый в данном документе термин «последовательность контроля экспрессии» относится к полинуклеотидным последовательностям, которые являются необходимыми и/или достаточными для осуществления экспрессии и процессинга кодирующих последовательностей, с которыми они лигированы. В некоторых вариантах осуществления «последовательности контроля экспрессии» могут представлять собой или включают соответствующие последовательности для инициации и терминации транскрипции, промоторные и/или энхансерные последовательности; сигналы для эффективного процессинга РНК, такие как сигналы сплайсинга и полиаденилирования; последовательности, стабилизирующие цитоплазматическую мРНК; последовательности, повышающие эффективность трансляции (например, консенсусную последовательность Козак); последовательности, повышающие стабильность белка; и/или в некоторых вариантах осуществления последовательности, усиливающие секрецию белка. В некоторых вариантах осуществления одна или более из последовательностей контроля активны предпочтительно или исключительно в конкретной клетке-хозяине или организме или их типе. В качестве лишь одного примера, у прокариот последовательности контроля, как правило, включают промотор, сайт связывания рибосомы и последовательность терминации транскрипции; у эукариот во многих вариантах осуществления последовательности контроля, как правило, включают промоторы, энхансеры и/или последовательности терминации транскрипции. Специалистам средней квалификации в данной области техники должно быть понятно из контекста, что во многих вариантах осуществления термин «последовательности контроля» относится к компонентам, присутствие которых является необходимым для экспрессии и процессинга, и в некоторых вариантах осуществления включает компоненты, присутствие которых является преимущественным для экспрессии (в том числе, например, лидерные последовательности, нацеливающие последовательности и/или последовательности партнеров по слиянию).

[00155] «Перенацеливание» или «перенаправление» может предусматривать сценарий, при котором частица дикого типа нацеливается на несколько клеток в пределах ткани и/или несколько органов в пределах организма, причем общее нацеливание на ткань или органы снижено или устранено за счет введения гетерологичной аминокислоты, и перенацеливание на более конкретную клетку в ткани или конкретный орган в организме достигается с помощью нацеливающего лиганда (например, с помощью нацеливающего лиганда), который связывается с маркером, экспрессируемым конкретной клеткой. Такое перенацеливание или перенаправление может также предусматривать сценарий, при котором частица дикого типа нацеливается на ткань, и нацеливание на ткань снижено вплоть до устранения за счет введения гетерологичной аминокислоты, и при этом перенацеливание на совершенно другую ткань достигается с помощью нацеливающего лиганда.

[00156] «Специфическая связывающаяся пара», «связывающаяся пара белок:белок» и т.п.включает два белка (например, первого партнера (например, первый полипептид) и второго когнатного партнера (например, второй полипептид)), которые взаимодействуют с образованием связи (например, нековалентной связи между первым партнером-эпитопом и вторым партнером-антигенсвязывающей частью антитела, которая распознает эпитоп) или ковалентной изопептидной связи в условиях, которые позволяют или облегчают образование связи. В некоторых вариантах осуществления термин «когнатный» относится к компонентам, которые функционируют совместно. Эпитопы и их когнатные антитела, в частности эпитопы, которые также могут выполнять функцию детектируемой метки (например, с-myc), хорошо известны в данной области техники. Обзор специфических связывающихся пар белок:белок, способных взаимодействовать с образованием ковалентной изопептидной связи, приведен в Veggiani et al. (2014) Trends Biotechnol. 32:506, и они включают связывающиеся пары пептид: пептид, такие как SpyTag: SpyCatcher, SpyTag002:SpyCatcher002; SpyTag:KTag; isopeptag:ramHH С, SnoopTag:SnoopCatcher и т.д. Обычно первый партнер из связывающейся пары белок:белок относится к партнеру из связывающейся пары белок:белок, длина которого обычно составляет менее 30 аминокислот и который образует ковалентную изопептидную связь со вторым когнатным белком, где второй когнатный белок обычно больше, но его длина также может составлять менее 30 аминокислот, например, в системе SpyTag:KTag.

[00157] Термин «изопептидная связь» относится к амидной связи между карбоксильной или карбоксамидной группой и аминогруппой, при этом по меньшей мере одна из этих групп не происходит из основной цепи белка или в качестве альтернативы не является частью остова белка. Изопептидная связь может образовываться в пределах одного белка или может иметь место между двумя пептидами или пептидом и белком. Таким образом, изопептидная связь может образовываться внутримолекулярно в пределах одного белка или межмолекулярно, т.е. между двумя пептидными/белковыми молекулами, например, между двумя пептидными линкерами. Как правило, изопептидная связь может находиться между остатком лизина и остатком аспарагина, аспарагиновой кислоты, глутамина или глутаминовой кислоты или концевой карбоксильной группой белковой или пептидной цепи или может находиться между альфа-аминоконцом белковой или пептидной цепи и аспарагином, аспарагиновой кислотой, глутамином или глутаминовой кислотой. Каждый остаток пары, принимающий участие в изопептидной связи, называется в данном документе реакционноспособным остатком. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения изопептидная связь может образовываться между остатком лизина и остатком аспарагина или между остатком лизина и остатком аспарагиновой кислоты. В частности, изопептидные связи могут находиться между аминогруппой боковой цепи лизина и карбоксамидной группой аспарагина или карбоксильной группой аспартата.

[00158] Система SpyTag: SpyCatcher описана в патенте США №9547003 и Zaveri et al. (2012) PNAS 109:E690-E697, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, и получена из домена CnaB2 фибронектинсвязывающего белка FbaB Streptococcus pyogenes. Путем расщепления домена Zakeri et al. получили пептид «SpyTag», имеющий последовательность AHIVMVDAYKPTK (SEQ ID NO:42), который образует амидную связь с его когнатным белком «SpyCatcher», полипептидом из 112 аминокислот, имеющим аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:43. (Zakeri (2012), выше). Дополнительной специфической связывающейся парой, полученной из домена CnaB2, является система SpyTag:KTag, которая образует изопептидную связь в присутствии SpyLigase. (Fierer (20I4) PNAS 111:Е1176-1181). SpyLigase была сконструирована путем вырезания β-нити из SpyCatcher, которая содержит реакционноспособный лизин, с получением KTag, первого партнера из связывающейся пары белок:белок из 10 остатков, имеющего аминокислотную последовательность ATHIKFSKRD (SEQ ID NO:72). Система SpyTag002:SpyCatcher002 описана в Keeble et al (2017) Angew Chem Int Ed Engl 56:16521-25, включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. SpyTag002 имеет аминокислотную последовательность VPTIVMVDAYKRYK, изложенную под SEQ ID NO:73, и связывает SpyCatcher002.

[00159] Система SnoopTag:SnoopCatcher описана в Veggiani (2016) PNAS 113:1202-07. Ig-подобный домен D4 RrgA, отвечающий за адгезию у Streptococcus pneumoniae, расщепили с образованием SnoopTag (остатки 734-745) и SnoopCatcher (остатки 749-860). Инкубация SnoopTag и SnoopCatcher приводит к спонтанному образованию изопептидной связи, которая является специфической для комплементарных белков. Veggiani (2016)), выше.

[00160] Специфическую связывающуюся пару isopeptag:пилин-C получили из основного белка пилина Spy0128 из Streptococcus pyogenes (Zakeir and Howarth (2010) J. Am. Chem. Soc. 132:4526 27). Isopeptag имеет аминокислотную последовательность TDKDMTITFTNKKDAE, изложенную под SEQ ID NO:75, и связывается с пилином-С (остатки 18-299 из Spy0128). Инкубация SnoopTag и SnoopCatcher приводит к спонтанному образованию изопептидной связи, которая является специфической для комплементарных белков. Zakeir and Howarth (2010), выше.

[00161] Термин «детектируемая метка» включает полипептидную последовательность, которая является партнером из специфической связывающейся пары, например, которая специфически связывается с высокой аффинностью посредством нековалентной связи с другой полипептидной последовательностью, например паратопом антитела. Иллюстративные и неограничивающие детектируемые метки включают гексагистидиновую метку, метку FLAG, метку Strep II, метку на основе стрептавидинсвязывающего пептида (SBP), кальмодулинсвязывающий пептид (СВР), глутатион-S-трансферазу (GST), мальтозосвязывающий белок (МВР), S-метку, НА-метку и c-myc (SEQ ID NO:44) (обзор приведен в Zhao et al. (2013) J. Analytical Meth. Chem. 1-8; включенной в данный документ посредством ссылки). Обычной детектируемой меткой для AAV примата является эпитоп Bl (SEQ ID NO:45). Капсидные белки AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению, которые естественным образом не содержат эпитоп В1, в данном документе могут быть модифицированы с включением эпитопа В1. Обычно капсидные белки AAV животного, не являющегося приматом, могут содержать последовательность, характеризующуюся значительной гомологией с эпитопом В1, в пределах последних 10 аминокислот капсидного белка. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления капсидный белок AAV животного, не являющегося приматом, по настоящему изобретению может быть модифицирован одной, но не более чем пятью точечными мутациями в пределах последних 10 аминокислот капсидного белка, так что капсидный белок AAV содержит эпитоп В1.

[00162] Термин «клетки-мишени» включает любые клетки, в которых экспрессия представляющего интерес нуклеотида является необходимой. Предпочтительно на поверхности клеток-мишеней обнаруживается рецептор, который обеспечивает нацеливание на клетку с помощью нацеливающего лиганда, как описано ниже.

[00163] Термин «трансдукция» или «инфекция» и т.п. относится к введению нуклеиновой кислоты в ядро клетки-мишени с помощью вирусной частицы. Термин «эффективность» в отношении трансдукции или т.п., например, «эффективность трансдукции», относится к доле (например, процентной величине) клеток, экспрессирующих представляющий интерес нуклеотид после инкубации с установленным числом вирусных частиц, содержащих представляющий интерес нуклеотид. Общеизвестные способы определения эффективности трансдукции включают проточную цитометрию трансдуцированных клеток с флуоресцентным репортерным геном, RT-PCR для экспрессии представляющего интерес нуклеотида и т.д.

[00164] Обычно «эталонный» вирусные капсидный белок/капсид/частица идентичны тестируемому вирусному капсид ному белку/капсиду/частице за исключением изменения, в отношении которого следует протестировать эффект. Например, для определения влияния вставки первого партнера из специфической связывающейся пары в исследуемую вирусную частицу, например, на эффективность трансдукции, показатели эффективности трансдукции тестируемой вирусной частицы (в отсутствие или в присутствии соответствующего нацеливающего лиганда) можно сравнить с показателями эффективности трансдукции эталонной вирусной частицы (при необходимости в отсутствие или в присутствии соответствующего нацеливающего лиганда), которая идентична тестируемой вирусной частице по всем параметрам (например, дополнительные точечные мутации, представляющий интерес нуклеотид, число вирусных частиц и клеток-мишеней и т.д.), за исключением присутствия первого партнера из специфической связывающейся пары. В некоторых вариантах осуществления эталонный вирусный капсидный белок представляет собой белок, который способен образовывать капсид со вторым вирусным капсидным белком, модифицированным с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где эталонный вирусный капсидный белок не содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, предпочтительно, где капсид, образованный эталонным вирусным капсидным белком и модифицированным вирусным капсидным белком, представляет собой мозаичный капсид.

[00165] Аденоассоциированные вирусы (AAV)

[00166] «AAV» представляет собой сокращенное название аденоассоциированного вируса и может использоваться для обозначения самого вируса или его производных. AAV являются небольшими безоболочечными вирусами с однонитевой ДНК. Обычно размер генома AAV дикого типа составляет 4,7 т.о., и для него характерны два инвертированных концевых повтора (ITR) и две открытые рамки считывания (ORF), rep и cap.Рамка считывания rep дикого типа кодирует четыре белка с молекулярной массой 78 кДа ("Rep78"), 68 кДа («Rep68»), 52 кДа («Rep52») и 40 кДа («Rep 40»). Rep78 и Rep68 транскрибируются с промотора р5, а Rep52 и Rep40 транскрибируются с промотора р19. Функцией данных белок является в основном регуляция транскрипции и репликации генома AAV. Рамка считывания cap дикого типа кодирует три структурных (капсидных) вирусных белка (VP), имеющих молекулярную массу 83-85 кДа (VP1), 72-73 кДа (VP2) и 61-62 кДа (VP3). Более 80% от всех белков в вирионе (капсиде) AAV составляет VP3; в зрелых вирионах VP1, VP2 и VP3 находятся при относительном содержании, составляющем примерно 1:1:10, хотя сообщалось о соотношении 1:1:8. Padron et al. (2005) J. Virology 79:5047-58.

[00167] В данной области техники известны геномные последовательности различных серотипов AAV, а также последовательности нативных инвертированных концевых повторов (ITR), белков Rep и субъединиц капсида. Такие последовательности можно найти в литературе или в общедоступных базах данных, таких как GenBank. См., например, номера доступа в GenBank NC 002077 (AAV1), AF063497 (AAV1), NC00I401 (AAV-2), AF043303 (AAV2), NC 001729 (AAV3), NC 001829 (AAV4), U89790 (AAV4), NC 006152 (AAV5), AF513851 (AAV7), AF513852 (AAV8) и NC 006261 (AAV8); раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки для иллюстрации последовательностей нуклеиновой кислоты и аминокислотных последовательностей AAV. См. также, например, Srivistava et al. (1983) J. Virology 45:555; Chiorini et al. (1998) J. Virology 71:6823; Chiorini et al. (1999) J. Virology 73: 1309; Bantel-Schaal et al. (1999) J. Virology 73:939; Xiao et al. (1999) J. Virology 73:3994; Muramatsu et al. (1996) Virology 221:208; Shade et al., (1986) J. Virol. 58:921; Gao et al. (2002) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99: 11854; Moris et al. (2004) Virology 33:375-383; публикацию заявки на патент США №20170130245; публикации международных заявок WO 00/28061, WO 99/61601, WO 98/11244 и патент США №6I56303, каждый из которых включен посредством ссылки во всей своей полноте. В таблице 1 представлены последовательности различных AAV животных, не являющихся приматом.

[00168] «AAV» охватывает все подтипы, также как встречающиеся в природе, так и модифицированные формы, за исключением случаев, когда требуется иное. AAV включает AAV примата (например, AAV типа 1 (AAV1), AAV примата типа 2 (AAV2), AAV примата типа 3 (AAV3), AAV примата типа 4 (AAV4), AAV примата типа 5 (AAV5), AAV примата типа 6 (AAV6), AAV примата типа 7 (AAV7), AAV примата типа 8 (AAV8), AAV животного, не являющегося приматом, (например, птичий AAV (AAAV)) и AAV других животных, не являющихся приматом, такие как AAV млекопитающего (например, AAV летучей мыши, AAV морского льва, AAV крупного рогатого скота, AAV собаки, AAV лошади, AAV козы и AAV овцы и т.д.), AAV чешуйчатого пресмыкающегося (например, AAV змеи, AAV бородатой агамы) и т.д., и отдаленный AAV и т.д. «AAV примата» относится к AAV, обычно выделяемому из приматов. Аналогичным образом, «AAV животного, не являющегося приматом» относится к AAV, выделяемому из животных, не являющихся приматом. Используемый в данном документе «отдаленный AAV» включает:

AAV, выделенный из приматов или животных, не являющихся приматами, обычно имеющих ограниченный контакт с популяцией человека в целом,

AAV, выделенный из животных-приматов, например AAV примата, содержащий капсидный белок VP1 дикого типа, который содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся менее 99%, например менее 95%, например менее 90%, например менее 85%) идентичностью аминокислотной последовательности с каждым из следующего: капсидным белком VP1 AAV1, капсидным белком VP1 AAV2, капсидным белком VP1 AAV3, капсидным белком VP1 AAV4, капсидным белком VP1 AAV5, капсидным белком VP1 AAV6, капсидным белком VP1 AAV7, капсидным белком VP1 AAV8, капсидным белком VP1 AAV9, капсидным белком VP1 AAV10, капсидным белком VP1 AAV11, капсидным белком VP1 AAV12 и капсидным белком VP1 AAV13, и/или

AAV, выделенный из животных, не являющихся приматом, например AAV животного, не являющегося приматом, содержащий капсидный белок дикого типа, который содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся менее 99%, например менее 95%, например менее 90%, например менее 85% идентичностью аминокислотной последовательности с каждым из AAV, приведенных в таблице 1.

[00169] Серо позитивность можно оценить с помощью общеизвестных способов. Например, отсутствие или наличие IgG можно определить с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) или других общеизвестных иммунологических анализов. Для обнаружения нейтрализующих антител можно проводить анализ нейтрализации, в котором частицы AAV инкубируются с увеличивающимися количествами (серийные разведения) (i) сыворотки конкретного субъекта или смешанной сыворотки нескольких субъектов, или (ii) очищенных иммуноглобулинов (IVIG или IgG), полученных из отдельного образца или объединенных образцов сыворотки крови (например, от десятков до тысяч доноров, представляющих профиль иммуноглобулинов в данной популяции) с последующим обнаружением инфицирования клеток, например, путем отслеживания экспрессии репортерного гена (например, гена люциферазы, GFP и т.д.). 3атем уровень инфицирования сравнивают с уровнем в контрольном образце, не подвергавшемся воздействию сыворотки крови/IVIG/IgG. См., например, пример 8. Нейтрализующий титр можно определить, например, как концентрацию IVIG/IgG или самый высокую кратность разведения сыворотки крови, которая приводит к 50% или большему подавлению экспрессии репортерного гена по сравнению с контролем. В одном варианте осуществления разведение сыворотки крови, при котором наблюдается более чем 70% снижение числа инфицированных клеток по сравнению с контролем, считается положительным в отношении нейтрализующей активности. Взаимодействия с известными специфическими нейтрализующими антителами можно изучить, например, с помощью иммуноблоттинга.

[00170] Используемое в данном документе выражение «[указанного] AAV» по отношению к гену (например, rep, cap и т.д.), капсидному белку (например, капсидному белку VP1, капсидному белку VP2, капсидному белку VP3 и т.д.), области капсидного белка указанного AAV (например, области PLA2, области VP1-u, общей области VP1/VP2, области VP3), нуклеотидной последовательности (например, последовательности ITR), например гену cap или капсидному белку AAV2 и т.д., охватывает, в дополнение к гену или полипептиду, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотную последовательность соответственно, которые изложены в данном документе для указанного AAV, также варианты гена или полипептида, в том числе варианты, содержащие наименьшее число нуклеотидов или аминокислот, требуемое для поддержания одной или более биологических функций. Используемый в данном документе вариант гена или вариант полипептида включают последовательность нуклеиновой кислоты или аминокислотную последовательность, которая отличается от последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности, изложенной в данном документе для гена или полипептида указанного AAV, где различие(-я) обычно не изменяет(-ют) по меньшей мере одну биологическую функцию гена или полипептида и/или филогенетическую характеристику гена или полипептида, например, если различие(-я) может(могут) быть связано(-ы) с вырожденностью генетического кода, вариациями изолятов, длиной последовательности и т.д. Например, используемые в данном документе ген rep и ген cap могут охватывать гены rep и cap, которые отличаются от гена дикого типа тем, что гены могут кодировать один или более белков Rep и белков Сар соответственно. В некоторых вариантах осуществления ген Rep кодирует по меньшей мере Rep78 и/или Rep68. В некоторых вариантах осуществления ген cap включает такие гены, которые могут отличаться от гена дикого типа тем, что удалены один или более альтернативных стартовых кодонов или последовательностей между одним или более альтернативными стартовыми кодонами, так что ген cap кодирует только один белок Сар, например, где удалены или заменены стартовые кодоны VP2 и/или VP3, так что ген cap кодирует функциональный капсидный белок VP1, но не капсидный белок VP2 или капсидный белок VP3. Соответственно, используемый в данном документе ген rep охватывает любую последовательность, которая кодирует функциональный белок Rep.Ген cap охватывает любую последовательность, которая кодирует по меньшей мере один функциональный ген cap.

[00171] Является общеизвестным, что ген cap дикого типа экспрессирует все три капсидных белка VP1, VP2 и VP3 с одной открытой рамки считывания гена cap под контролем промотора р40, находящегося в ORF rep. Термин «капсидный белою», «белок Сар» и т.п. включает белок, который является частью капсида вируса. В случае аденоассоциированных вирусов капсидные белки обычно обозначаются как VP1, VP2 и/или VP3 и могут кодироваться одним геном cap.В случае AAV три капсидных белка AAV продуцируются в природе перекрывающимся образом из ORF cap с использованием альтернативных стартовых кодонов трансляции, хотя все три белка используют общий стоп-кодон. В ORF гена cap дикого типа в направлении от 5'- к 3'-конца закодированы три альтернативных стартовых кодона: «стартовый кодон VP1», «стартовый кодон VP2» и «стартовый кодон VP3», а также один «общий стоп-кодон». Самый крупный вирусный белок, VP1, обычно закодирован от стартового кодона VP1 до «общего стоп-кодона». VP2 обычно закодирован от стартового кодона VP2 до общего стоп-кодона. VP3 обычно закодирован от стартового кодона VP3 до общего стоп-кодона. Соответственно, на своем N-конце VP1 содержит последовательность, которая не является общей с VP2 или VP3, называемой уникальная область VP1 (VP1-u). Область VP1-u обычно закодирована последовательностью гена cap дикого типа, начиная от стартового кодона VP1 до «стартового кодона VP2». VP1-u содержит домен фосфолипазы А2 (PLA₂), который может иметь важное значение для инфицирования, а также сигналы ядерной локализации, которые могут помогать вирусу в нацеливании на ядро, удалении оболочки и высвобождении генома. Капсидные белки VP1, VP2 и VP3 имеют одинаковую С-концевую последовательность, которая составляет полный VP3, которая в данном документе также может называться областью VP3. Область VP3 кодируется от стартового кодона VP3 до общего стоп-кодона. VP2 имеет дополнительные ~60 аминокислот, которые являются общими с VP1. Эта область называется общей областью VP1/VP2.

[00172] В некоторых вариантах осуществления один или более белков Сар по настоящему изобретению могут быть закодированы одним или более генами cap, имеющими одну или более ORF. В некоторых вариантах осуществления белки VP по настоящему изобретению могут экспрессироваться с более чем одной ORF, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую любую комбинацию VP1, VP2 и/или VP3, с использованием отдельных нуклеотидных последовательностей, функционально связанных с по меньшей мере одной последовательностью контроля экспрессии, для экспрессии в упаковывающей клетке, каждая из которых продуцирует один или более капсидных белков VP1, VP2 и/или VP3 по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления капсидный белок VP по настоящему изобретению может экспрессироваться отдельно с ORF, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую любой из VP1, VP2 или VP3, с использованием отдельных нуклеотидных последовательностей, функционально связанных с одной последовательностью контроля экспрессии, для экспрессии в клетке, предназначенной для репликации вируса, каждая из которых продуцирует только один из капсидных белков VP1, VP2 или VP3. В другом варианте осуществления белки VP могут экспрессироваться с одной ORF, содержащей нуклеотидные последовательности, кодирующие капсидные белки VP1, VP2 и VP3, функционально связанные с по меньшей мере одной последовательностью контроля экспрессии, для экспрессии в клетке, предназначенной для репликации вируса, каждая из которых продуцирует капсидный белок VP1, VP2 и VP3. Соответственно, хотя аминокислотные положения, представленные в данном документе, могут представляться в привязке к капсидному белку VP1 эталонного AAV, квалифицированный специалист сможет соответствующим образом и легко определить положение той же аминокислоты в пределах капсидного белка VP2 и/или VP3 AAV и соответствующее положение аминокислот в различных AAV.

[00173] Фраза «инвертированный концевой повтор» или «ITR» включает симметричные последовательности нуклеиновой кислоты в геноме аденоассоциированных вирусов, необходимые для эффективной репликации. Последовательности ITR расположены на каждом конце ДНК-генома AAV. ITR служат в качестве точек начала репликации для синтеза вирусной ДНК и являются необходимыми цис-компонентами для образования частиц AAV, например, упаковки в частицы AAV.

[00174] ITR AAV содержат сайты распознавания для белков репликации Rep78 или Rep68. «D»-область ITR включает сайт одноцепочечного разрыва ДНК, где происходит инициирование репликации ДНК, и обеспечивает направленность стадии репликации нуклеиновой кислоты. AAV, реплицирующийся в клетке млекопитающего, как правило, содержит две последовательности ITR.

[00175] Одиночный ITR можно конструировать с сайтами связывания Rep на обеих нитях «А»-областей и двумя симметричными D-областями на каждой стороне палиндрома ITR. Такая сконструированная конструкция на матрице двухнитевой кольцевой ДНК позволяет Rep78 или Rep68 инициировать репликацию нуклеиновой кислоты, которая происходит в обоих направлениях. Одиночного ITR достаточно для репликации AAV в виде кольцевой частицы. В способах получения вирусной частицы AAV по настоящему изобретению последовательность, кодирующая rep, кодирует белок Rep или эквивалент белка Rep, которые способны связывать ITR, содержащийся в плазмиде-переносчике.

[00176] При экспрессии с соответствующими белками Rep в упаковывающей клетке белки Сар по настоящему изобретению могут инкапсидировать плазмиду-переносчика, содержащую представляющий интерес нуклеотид и четное число из двух или более последовательностей ITR. В некоторых вариантах осуществления плазмида-переносчик содержит одну последовательность ITR. В некоторых вариантах осуществления плазмида-переносчик содержит две последовательности ITR.

[00177] Rep78 и/или Rep68 связываются с уникальными и известными сайтами в последовательности ITR-шпильки и функционируют с разрушением и раскручиванием шпильковых структур на конце генома AAV, тем самым обеспечивая доступ репликационному аппарату клетки для репликации вируса. Как хорошо известно, белки Rep могут экспрессироваться с более чем одной ORF, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую любую комбинацию Rep78, Rep68, Rep52 и/или Rep40, с использованием отдельных нуклеотидных последовательностей, функционально связанных с по меньшей мере одной последовательностью контроля экспрессию, для экспрессии в клетке, предназначенной для репликации вируса, каждая из которых продуцирует один или более белков Rep - Rep78, Rep68, Rep52 и/или Rep40. В качестве альтернативы белки Rep могут экспрессироваться отдельно с ORF, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую любой из Rep78, Rep68, Rep52 или Rep40, с использованием отдельных нуклеотидных последовательностей, функционально связанных с одной последовательностью, контролирующей экспрессию, для экспрессии в упаковывающей клетке, каждая из которых продуцирует только один из белков Rep - Rep78, Rep68, Rep52 или Rep40. В другом варианте осуществления белки Rep могут экспрессироваться с одной ORF, содержащей нуклеотидные последовательности, кодирующие белки Rep - Rep78 и Rep52, функционально связанные с по меньшей мере одной последовательностью контроля экспрессии, для экспрессии в клетке, предназначенной для репликации вируса, каждая из которых продуцирует белки Rep - Rep78 и Rep52.

[00178] В способе получения вириона AAV, например вирусной частицы, по настоящему изобретению последовательность, кодирующая rep, и ген cap по настоящему изобретению могут обеспечиваться в виде одной упаковывающей плазмиды (см., например, фиг.1). Однако квалифицированный специалист поймет, что такое условие не является необходимым. Такие вирусные частицы могут включать геном или не включать его.

[00179] «Химерный капсидный белок AAV» включает капсидный белок AAV, который содержит аминокислотные последовательности, например части, из двух или более различных AAV, и который способен образовывать и/или образует вирусный капсид/вирусную частицу AAV. Химерный капсидный белок AAV кодируется химерным геном капсида AAV, например химерным нуклеотидом, содержащим совокупность, например по меньшей мере две, последовательности нуклеиновой кислоты, при этом каждая из последовательностей совокупности идентична части гена капсида, кодирующего капсидный белок отличного AAV, и данная совокупность совместно кодирует функциональный химерный капсидный белок AAV. Упоминание химерного капсидного белка в связи с конкретным AAV указывает на то, что капсидный белок содержит одну или более частей из капсидного белка данного AAV и одну или более частей из капсидного белка другого AAV. Например, химерный капсидный белок AAV2 включает капсидный белок, содержащий одну или более частей капсидного белка VP1, VP2 и/или VP3 AAV2 и одну или более частей капсидного белка VP1, VP2 и/или VP3 другого AAV.

[00180] Термин «часть» относится к по меньшей мере 5 аминокислотами или по меньшей мере 15 нуклеотидам, но часть меньше полноразмерной полипептидной молекулы или молекулы нуклеиновой кислоты и характеризуется 100% идентичностью с последовательностью, из которой она получена см. Penzes (2015) J. General Virol. 2769. «Часть» охватывает любой непрерывный сегмент из аминокислот или нуклеотидов, достаточный для определения того, что полипептидная молекула или молекула нуклеиновой кислоты, из которых получена часть, относится к «[указанному] AAV» или характеризуется «значительной идентичностью» с конкретным AAV, например AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 5 аминокислот или 15 нуклеотидов, характеризующихся 100%) идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 10 аминокислот или 30 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 15 аминокислот или 45 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 20 аминокислот или 60 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 25 аминокислот или 75 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 30 аминокислот или 90 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 35 аминокислот или 105 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 40 аминокислот или 120 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 45 аминокислот или 135 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 50 аминокислот или I50 нуклеотидов, характеризующихся 100%о идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 60 аминокислот или 180 нуклеотидов, характеризующихся 100%о идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 70 аминокислот или 210 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 80 аминокислот или 240 нуклеотидов, характеризующихся 100%о идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 90 аминокислот или 270 нуклеотидов, характеризующихся 100%о идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV. В некоторых вариантах осуществления часть содержит по меньшей мере 100 аминокислот или 300 нуклеотидов, характеризующихся 100% идентичностью с последовательностью, ассоциированной с указанным AAV.

[00181] Модифицированные вирусные капсидные белки, вирусные частицы, нуклеиновые кислоты

[00182] В некоторых вариантах осуществления белок Сар по настоящему изобретению, например, капсидный белок VP1, описанный в данном документе, капсидный белок VP2, описанный в данном документе, и/или капсидный белок VP3, описанный в данном документе, модифицирован с включением, например, первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки, точечной мутации и т.д.

[00183] Химеризм представляет собой тип модификации, описанной в данном документе. Обычно модификация гена или полипептида указанного AAV или его вариантов приводит к последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности, которые отличаются от последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности, изложенных в данном документе для указанного AAV, где модификация изменяет, придает или удаляет одну или более биологических функций, но не изменяет филогенетическую характеристику гена или полипептида. Модификация может включать вставку, например, первого партнера из связывающейся пары белок:белок и точечную мутацию, например такую, что естественный тропизм капсидного белка снижен вплоть до устранения, и/или такую, что капсидный белок содержит детектируемую метку. Предпочтительные модификации включают такие, которые не изменяют и предпочтительно уменьшают до низкого уровня или его отсутствия распознавание модифицированного капсида предсуществующими антителами, встречающимися в общей популяции, которые были выработаны в ходе инфицирования другим AAV, например, инфицирования такими серотипами, как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13, AAVDJ, Anc80L65, AAV2G9, AAV-LK03, вирионами на основе таких серотипов, вирионами из современных средств генной терапии на основе AAV или их комбинацией. Другие модификации, описанные в данном документе, включают модификацию капсидного белка, так что он содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемую метку и т.д., причем данные модификации обычно являются результатом модификаций на генетическом уровне, например, посредством модификации гена cap.

[00184] В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, представляет собой мозаичный капсид, например, содержит по меньшей мере два набора белков VP1, VP2 и/или VP3, каждый из которых закодирован отличающимся геном cap. Мозаичный капсид в данном документе обычно относится к мозаичной структуре из первого вирусного капсидного белка, модифицированного с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и второго соответствующего вирусного капсидного белка без первого партнера из связывающейся пары белок:белок. Что касается мозаичного капсида, второй вирусный капсидный белок без первого партнера из связывающейся пары белок:белок, может называться эталонным капсидным белком, кодируемым эталонным геном cap.В некоторых вариантах осуществления мозаичного капсида, предпочтительно если капсидные белки VP1, VP2 и/или VP3, модифицированные с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, не являются химерным капсидным белком, эталонный капсидный белок VP1, VP2 и/или VP3 может содержать аминокислотную последовательность, идентичную последовательности вирусного капсидного белка VP1, VP2 и/или VP3, модифицированного с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, за исключением того, что в эталонном капсидном белке отсутствует первый партнер из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления мозаичного капсида эталонный капсидный белок VP1, VP2 и/или VP3 соответствует вирусному капсидному белку VP1, VP2 и/или VP3, модифицированному с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, за исключением того, что в эталонном капсидном белке отсутствует первый партнер из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления эталонный капсидный белок VP1 соответствует вирусному капсидному белку VP1, модифицированному с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, за исключением того, что в эталонном капсидном белке отсутствует первый партнер из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления эталонный капсидный белок VP2 соответствует вирусному капсидному белку VP2, модифицированному с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, за исключением того, что в эталонном капсидном белке отсутствует первый партнер из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления эталонный капсидный белок VP3 соответствует вирусному капсидному белку VP3, модифицированному с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, за исключением того, что в эталонном капсидном белке отсутствует первый партнер из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления мозаичного капсида, содержащего химерный капсидный белок VP1, VP2 и/или VP3, дополнительно модифицированного с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, эталонным белком может быть соответствующий капсидный белок, части которого образуют часть химерного капсидного белка. В качестве неограничивающего примера в некоторых вариантах осуществления мозаичный капсид, содержащий химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV, модифицированный с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, может дополнительно содержать в качестве эталонного капсидного белка: капсидный белок VP1 AAV2 без первого партнера, капсидный белок VP1 AAAV без первого партнера, химерный капсидный белок VP1 AAV2/AAAV без первого партнера. Аналогичным образом, в некоторых вариантах осуществления мозаичный капсид, содержащий химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAAV, модифицированный с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, может дополнительно содержать в качестве эталонного капсидного белка: капсидный белок VP2 AAV2 без первого партнера, капсидный белок VP1 AAAV без первого партнера, химерный капсидный белок VP2 AAV2/AAAV без первого партнера. В некоторых вариантах осуществления мозаичный капсид, содержащий химерный капсидный белок VP3 AAV2/AAAV, модифицированный с включением первого партнера из связывающейся пары белок:белок, может дополнительно содержать в качестве эталонного капсидного белка: капсидный белок VP2 AAV2 без первого партнера, капсидный белок VP1 AAAV без первого партнера, химерный капсидный белок VP3 AAV2/AAAV без первого партнера. В некоторых вариантах осуществления мозаичного капсида эталонным капсидным белком может быть любой капсидный белок при условии, что в нем отсутствует первый партнер из связывающейся пары белок:белок и он способен формировать капсид с первым капсидным белком, модифицированным с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок.

[00185] Обычно мозаичные частицы могут быть получены путем трансфекции смесей из модифицированного и эталонного генов Сар в продуцирующие клетки при указанных соотношениях. Соотношения белковых субъединиц, например соотношения модифицированный белок УР:немодифицированный белок VP, в частице могут, но не обязательно, стехиометрически отражать соотношения по меньшей мере двух видов гена cap, кодирующего первый капсидный белок, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и одного или более эталонных генов cap, например, модифицированный ген сар:эталонный(-ые) ген(-ы) cap, трансфицированных в упаковывающие клетки. В некоторых вариантах осуществления соотношения белковых субъединиц в частице не отражает стехиометрически соотношение модифицированный ген сар:эталонный(-ые) ген(-ы) cap, трансфицированных в упаковывающие клетки.

[00186] В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц находится в диапазоне от приблизительно 1:59 до приблизительно 59:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 30 модифицированных капсидных белков и приблизительно 30 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:2 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 20 модифицированных капсидных белков и приблизительно 40 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 3:5. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:3 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 15 модифицированных капсидных белков и приблизительно 45 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:4 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 12 модифицированных капсидных белков и 48 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:5 (например, мозаичная вирусная частица содержит 10 модифицированных капсидных белков и 50 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:6. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:7. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:8. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:9 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 6 модифицированных капсидных белков и приблизительно 54 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:10. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:11 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 5 модифицированных капсидных белков и приблизительно 55 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:12. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:13. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:14 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 4 модифицированных капсидных белков и приблизительно 56 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:15. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:19 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 3 модифицированных капсидных белков и приблизительно 57 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:29 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 2 модифицированных капсидных белков и приблизительно 58 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 1:59. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 2:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 40 модифицированных капсидных белков и приблизительно 20 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 5:3. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 3:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 45 модифицированных капсидных белков и приблизительно 15 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 4:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 48 модифицированных капсидных белков и 12 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 5:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит 50 модифицированных капсидных белков и 10 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 6:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 7:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 8:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 9:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 54 модифицированных капсидных белков и приблизительно 6 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 10:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 11:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 55 модифицированных капсидных белков и приблизительно 5 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 12:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 13:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 14:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 56 модифицированных капсидных белков и приблизительно 4 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 15:1. В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 19:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 57 модифицированных капсидных белков и приблизительно 3 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 29:1 (например, мозаичная вирусная частица содержит приблизительно 58 модифицированных капсидных белков и приблизительно 2 эталонных капсидных белков). В некоторых вариантах осуществления мозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц составляет по меньшей мере приблизительно 59:1.

[00187] В некоторых вариантах осуществления немозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц может составлять 1:0, при этом каждый капсидный белок немозаичной вирусной частицы является модифицированным с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления немозаичной вирусной частицы соотношение белковых субъединиц может составлять 0:1, при этом каждый капсидный белок немозаичной вирусной частицы не является модифицированным с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок.

[00188] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок по настоящему изобретению модифицирован с включением детектируемой метки. Многие детектируемые метки известны в данной области техники (см., например: Nilsson et al. (1997) «Affinity fusion strategies for detection, purification, and immobilization of modified proteins» Protein Expression and Purification 11: 1-16, Terpe et al. (2003) «Overview of tag protein fusions: From molecular and biochemical fundamentals to commercial systems» Applied Microbiology and Biotechnology 60:523 533, и ссылки в них). Детектируемые метки включают без ограничения полигистидиновую детектируемую метку (например, His-6, His-8 или His-10), которая связывает иммобилизованные двухвалентные катионы (например, Ni²⁺), биотиновый фрагмент (например, на биотинилированной in vivo полипептидной последовательности), который связывает иммобилизованный авидин, последовательность GST (глутатион-S-трансфераза), которая связывает иммобилизованный глутатион, S-метку, которая связывает иммобилизованный S-белок, антиген, который связывает иммобилизованное антитело или его домен или фрагмент (включая, например, Т7-, myc-, FLAG- и В-метки, которые связывают соответствующие антитела), FLASH-метку (метку с отличными детектируемыми свойствами, которая связывается со специфическими фрагментами на основе мышьяка), рецептор или рецепторный домен, который связывает иммобилизованный лиганд (или наоборот), белок А или его производное (например, Z), который связывает иммобилизованный IgG, мальтозосвязывающий белок (МВР), который связывает иммобилизованную амилозу, альбуминсвязывающий белок, который связывает иммобилизованный альбумин, хитинсвязывающий домен, который связывает иммобилизованный хитин, кальмодулинсвязывающий пептид, который связывает иммобилизованный кальмодулин, и целлюлозосвязывающий домен, который связывает иммобилизованную целлюлозу. Другой иллюстративной детектируемой меткой является SNAP-метка, коммерчески доступная от Covalys (www.covalys.com). В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка, раскрытая в данном документе, включает детектируемую метку, распознаваемую только паратопом антитела. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка, раскрытая в данном документе, включает детектируемую метку, распознаваемую паратопом антитела и другими специфическими связывающимися парами.

[00189] В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка образует связывающуюся пару с константным доменом иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка и/или детектируемая метка образует связывающуюся пару с ионом металла, например Ni²⁺, Со²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe³⁺ и т.д. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка выбрана из группы, состоящей из стрептавидина, Strep II, НА, L14, 4C-RGD, LH и белка А.

[00190] В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка выбрана из группы, состоящей из FLAG, НА и c-myc (EQKLISEEDL; SEQ ID NO:44). В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка представляет собой с-myc (SEQ ID NO:44).

[00191] В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка представляет собой В-клеточный эпитоп, например, длина которого составляет от приблизительно 1 аминокислоты до приблизительно 35 аминокислот и который образует связывающуюся пару с паратопом антитела, например вариабельным доменом иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка предусматривает эпитоп Bl (SEQ ID NO:45). В некоторых вариантах осуществления капсидный белок модифицирован с включением эпитопа В1 в область VP3.

[00192] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок по настоящему изобретению содержит по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок.

[00193] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок по настоящему изобретению содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, содержащего детектируемую метку, которую также можно использовать для обнаружения и/или выделения белка Сар и/или в качестве первого партнера из связывающейся пары белок:белок. В некоторых вариантах осуществления детектируемая метка выступает в качестве первого партнера из связывающейся пары белок:белок для связывания нацеливающего лиганда, содержащего полиспецифический связывающий белок, который может связывать как детектируемую метку, так и мишень, экспрессируемую представляющей интерес клеткой. В некоторых вариантах осуществления белок Сар по настоящему изобретению содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, содержащего c-myc (SEQ ID NO:44). Применение детектируемой метки в качестве первого партнера из связывающейся пары белок:белок описано, например, в WO 2019006043, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

[00194] В некоторых вариантах осуществления капсидный белок содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок образует ковалентную изопептидную связь. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок ковалентно связан посредством изопептидной связи с когнатным вторым партнером из связывающейся пары белок:белок, и где необязательно когнатный второй партнер из связывающейся пары белок:белок слит с нацеливающим лиганд ом, при этом нацеливающий лиганд связывает мишень, экспрессируемую представляющей интерес клеткой. В некоторых вариантах осуществления связывающаяся пара белок:белок может быть выбрана из группы, состоящей из SpyTag: SpyCatcher, SpyTag002:SpyCatcher002, SpyTag:KTag, Isopeptag:nmiHH-C и SnoopTag:SnoopCatcher. В некоторых вариантах осуществления, где первый партнер представляет собой SpyTag (или его биологически активную часть), белок (второй когнатный партнер) представляет собой SpyCatcher (или его биологически активную часть). В некоторых вариантах осуществления, где первый партнер представляет собой SpyTag (или его биологически активную часть), белок (второй когнатный партнер) представляет собой KTag (или его биологически активную часть). В некоторых вариантах осуществления, где первый партнер представляет собой KTag (или его биологически активную часть), белок (второй когнатный партнер) представляет собой SpyTag (или его биологически активную часть). В некоторых вариантах осуществления, где первый партнер представляет собой SnoopTag (или его биологически активную часть), белок (второй когнатный партнер) представляет собой SnoopCatcher (или его биологически активную часть). В некоторых вариантах осуществления, где первый партнер представляет собой Isopeptag (или его биологически активную часть), белок (второй когнатный партнер) представляет собой пилин-С (или его биологически активную часть). В некоторых вариантах осуществления, где первый партнер представляет собой SpyTag002 (или его биологически активную часть), белок (второй когнатный партнер) представляет собой SpyCatcher002 (или его биологически активную часть). В некоторых вариантах осуществления белок Сар по настоящему изобретению содержит SpyTag. Применение первого партнера из связывающейся пары белок:белок описано в WO 2019006046, включенной в данный документ во всей своей полноте.

[00195] В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемая метка функционально связаны (транслируются в рамке считывания с ним, химически присоединены к нему и/или проявляются помощью него) с белком Сар по настоящему изобретению посредством первого или второго линкера, например аминокислотного спейсера, длина которого составляет по меньшей мере одну аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок фланкирован первым и/или вторым линкером, например, первым и/или вторым аминокислотным спейсером, длина каждого из которых составляет по меньшей мере одну аминокислоту.

[00196] В некоторых вариантах осуществления первый и/или второй линкеры не являются идентичными. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну или две аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две или три аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три или четыре аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре или пять аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре или пять аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре, пять или шесть аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре, пять, шесть или семь аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь или восемь аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или больше аминокислот.

[00197] В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по последовательности и/или длине, и длина каждого составляет одну аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет одну аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет две аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет три аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет четыре аминокислоты, например, линкер представляет собой GLSG (SEQ ID NO:37). В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет пять аминокислот. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры идентичны по длине, и длина каждого составляет шесть аминокислот, например, каждый из первого и второго линкеров содержит последовательность GLSGSG (SEQ ID NO:38). В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет семь аминокислот. В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры идентичны по длине, и длина каждого составляет восемь аминокислот, например, каждый из первого и второго линкеров содержит последовательность GLSGLSGS (SEQ ID NO:39). В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет девять аминокислот.В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры идентичны по длине, и длина каждого составляет десять аминокислот, например, каждый из первого и второго линкеров содержит последовательность GLSGLSGLSG (SEQ ID NO:40) или GLSGGSGLSG (SEQ ID NO:41). В некоторых вариантах осуществления первый и второй линкеры являются идентичными по длине, и длина каждого составляет более десяти аминокислот.

[00198] Как правило, длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок, описанной в настоящем документе, например, содержащей первого партнера из специфической связывающейся пары самого по себе или в комбинации с одним или более линкерами, составляет от приблизительно 5 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет по меньшей мере 5 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 6 аминокислот.В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 7 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 8 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 9 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 10 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 11 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 12 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 13 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет I4 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет I5 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 16 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 17 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 18 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 19 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 21 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 22 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 23 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 24 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 26 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 27 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 28 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 29 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 30 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 31 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 32 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 33 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 34 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 36 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 37 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 38 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 39 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 40 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 41 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 42 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 43 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 44 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 45 аминокислот.В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 46 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 47 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 48 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 49 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина аминокислотной последовательности первого партнера из связывающейся пары белок:белок составляет 50 аминокислот.

[00199] Вследствие высокой консервативности по меньшей мере крупных отрезков последовательности и большого числа близкородственных представителей семейства, соответствующие сайты вставки для AAV, отличные от перечисленных AAV, можно идентифицировать путем выполнения аминокислотного выравнивания или сравнения капсидных структур. См., например, Rutledge et al. (1998) J. Virol. 72:309-19; Mietzsch et al. (2019) Viruses 11, 362, 1-34 и патент США №9624274, в которых приведены иллюстративные выравнивания капсидных белков различных AAV, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Например, в Mietzcsh et al. (2019) на фиг.7 представлено наложение ленточных структур различных представителей рода Dependoparvovirus, где изображены вариабельные области от VR I до VR IX. С использованием структурного анализа, описано в данном литературном источнике, и анализа последовательности, квалифицированный специалист может определить, какие аминокислоты в пределах вариабельной области соответствуют аминокислотной последовательности AAV, которая может вмещать вставку первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемой метки.

[00200] Соответственно, в некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемая метка вставлены в капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, после аминокислотного положения, соответствующего аминокислотному положению, выбранному из группы, состоящей из G453 в капсидном белке VP1 AAV2, N587 в капсидном белке VP1 AAV2, G453 в капсидном белке VP1 AAV9 и А589 в капсидном белке VP1 AAV9. В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемая метка вставлены в капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, между аминокислотами, которые соответствуют N587 и R588 в капсиде VP1 AAV2. Дополнительные подходящие сайты вставки в капсидном белке VP1 AAV животного, не являющегося приматом, включают сайты, соответствующие I-1, I-34, I-138, I-139, I-161, I-261, I-266, I-381, I-447, I-448, I-459, I-471, I-520, I-534, I-570, I-573, I-584, I-587, I-588, I-591, I-657, I-664, I-713 и I-716 капсидного белка VP1 AAV2 (Wu et al. (2000) J. Virol. 74:8635-8647). Модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, может представлять собой капсидный белок вируса животного, не являющегося приматом, содержащий первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку, вставленные в положение, соответствующее положению капсидного белка AAV2, выбранному из группы, состоящей из I-1,I-34,I-138, I-139, I-161, I-261, I-266, I-381, I-447, I-448, I-459, I-471, I-520, I-534, I-570, I-573, I-584, I-587, I-588, I-591, I-657, I-664, I-713, I-716 и их комбинации. Дополнительные подходящие сайты вставки в AAV животного, не являющегося приматом, включают сайты, соответствующие I-587 AAV1, I-589 AAV1, I-585 AAV3, I-585 AAV4 и I-585 AAV5. В некоторых вариантах осуществления модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, может представлять собой капсидный белок вируса животного, не являющегося приматом, содержащий первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку, вставленные в положение, соответствующее положению, выбранному из группы, состоящей из I-587 (AAV1), I-589 (AAV1), I-585 (AAV3), I-585 (AAV4), I-585 (AAV5) и их комбинации.

[00201] В некоторых вариантах осуществления первый партнер из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемая метка вставлены в капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, после аминокислотного положения, соответствующего аминокислотному положению, выбранному из группы, состоящей из I444 капсидного белка VP1 птичьего AAV, I580 капсидного белка VP1 птичьего AAV, I573 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы, I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы, I429 капсидного белка VP1 AAV морского льва, I430 капсидного белка VP1 AAV морского льва, I431 капсидного белка VP1 AAV морского льва, I432 капсидного белка VP1 AAV морского льва, I433 капсидного белка VP1 AAV морского льва, I434 капсидного белка VP1 AAV морского льва, I436 капсидного белка VP1 AAV морского льва, I437 капсидного белка VP1 AAV морского льва и I565 капсидного белка VP1 AAV морского льва.

[00202] В данном документе номенклатура I-###, I# и т.п. относится к сайту вставки (I), при этом ### обозначает номер аминокислоты относительно белка VP1 капсидного белка AAV, однако такая вставка может быть расположена непосредственно на N- или С-конце, предпочтительно на С-конце одной аминокислоты в последовательности из 5 аминокислот, находящихся на N- или С-конце данной аминокислоты, предпочтительно 3, более предпочтительно 2, в частности 1 аминокислоте, находящейся на N- или С-конце данной аминокислоты. Кроме того, положения, упоминаемые в данном документе, приведены относительно белка VP1, кодируемого геном капсида AAV, и соответствующие положения (и их точечные мутации) можно легко идентифицировать для капсидных белков VP2 и VP3, кодируемых геном капсида, путем выполнения выравнивания последовательности белков VP1, VP2 и VP3, кодируемых соответствующим геном капсида AAV.

[00203] Соответственно, вставка в соответствующее положение кодирующей нуклеиновой кислоты одного из этих сайтов гена cap приводит к вставке в VP1, VP2 и/или VP3, поскольку капсидные белки кодируются перекрывающимися рамками считывания одного и того же гена с разнесенными стартовыми кодонами. Следовательно, в случае AAV2, например, в соответствии с данной номенклатурой вставки между аминокислотами 1 и 138 приводят к вставке только в VP1, вставки между 138 и 203 приводят к вставке в VP1 и VP2, а вставки между 203 и С-концом приводят к вставке в VP1, VP2 и VP3, что, конечно, также относится и к сайту вставки I-587. Следовательно, настоящее изобретение охватывает структурные гены AAV с соответствующими вставками в белках VP1, VP2 и/или VP3.

[00204] В данном документе также предусмотрены нуклеиновые кислоты, которые кодируют капсидный белок VP3 по настоящему изобретению. Капсидные белки AAV могут, но не обязательно, кодироваться перекрывающимися рамками считывания одного и того же гена с разнесенными стартовыми кодонами. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, которая кодирует капсидный белок VP3 по настоящему изобретению, не кодирует также капсидный белок VP2 или капсидный белок VP1 по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, которая кодирует капсидный белок VP3 по настоящему изобретению, также может кодировать капсидный белок VP2 по настоящему изобретению, но не кодирует также капсид VP1 по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота, которая кодирует капсидный белок VP3 по настоящему изобретению, также может кодировать капсидный белок VP2 по настоящему изобретению и капсид VP1 по настоящему изобретению.

[00205] В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, содержащий первого и второго партнеров из связывающейся пары белок:белок (например, где второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, содержащим полиспецифический связывающий белок, и т.д.), способен инфицировать конкретную клетку, например, характеризуется повышенной способностью нацеливаться и связывать конкретную клетку по сравнению с контрольным вирусным капсидом, который идентичен модифицированному вирусному капсидному белку, кроме отсутствия в нем одного или обоих из первого и второго партнеров из связывающейся пары белок:белок, например, содержит контрольный капсидный белок. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует обнаруживаемую эффективность трансдукции по сравнению с необнаруживаем ой эффективностью трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 10% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 20%о превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 30%о превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 40% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 50% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 60% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 70% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 75% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 80% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 85% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 90% превышает эффективность трансдукции контрольного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 95% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 99% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида.

[00206] В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, содержащий первого и второго партнеров из связывающейся пары белок:белок (например, где второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, содержащим полиспецифический связывающий белок, и т.д.), способен инфицировать конкретную клетку, например, характеризуется повышенной способностью нацеливаться и связывать конкретную клетку по сравнению с контрольным вирусным капсидом, который идентичен модифицированному вирусному капсидному белку, кроме отсутствия в нем одного или обоих из первого и второго партнеров из связывающейся пары белок:белок, например, содержит контрольный капсидный белок. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует обнаруживаемую эффективность трансдукции по сравнению с необнаруживаем ой эффективностью трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 10% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 20% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 30% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 40% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 50% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 60% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 70% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 75% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 80% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 85% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 90% превышает эффективность трансдукции контрольного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 95% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая на 99% превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 1,5 раза превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 2 раза превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 3 раза превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 4 раза превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 5 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 6 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 7 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 8 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 9 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 10 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 20 раз превышает эффективность трансдукции контрольного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с соответствующими первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 30 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 40 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 50 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 60 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 70 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 80 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 90 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусный капсид, содержащий модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе, связанный с первым и вторым партнерами из связывающейся пары белок:белок, присоединенной к нацеливающему лиганду, демонстрирует эффективность трансдукции, которая в по меньшей мере 100 раз превышает эффективность трансдукции контрольного вирусного капсида. В некоторых вариантах осуществления вирусная частица по настоящему изобретению, содержащая вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию и необязательно содержащая первого и второго партнеров из связывающейся пары белок:белок (например, где второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, содержащим полиспецифический связывающий белок и т.д.), лучше способна избегать нейтрализации под действием предсуществующих антител в сыворотке крови, выделенной от пациента-человека, по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, содержащей вирусный капсид серотипа AAV, часть которого включена в вирусный капсид по настоящему изобретению, например, как часть вирусного капсидного белка, содержащая аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию), которая также необязательно содержит первого и второго партнеров из связывающейся пары белок:белок (например, где второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, содержащим полиспецифический связывающий белок и т.д.). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 2 раза больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 2 раза превышает значение для контрольной вирусной частицы).

[00207] В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 3 раза больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 3 раза превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 4 раза больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 4 раза превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 5 раза больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 5 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 6 раза больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 6 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 7 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 7 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 8 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 8 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 9 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 9 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 10 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 10 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 20 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 20 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 30 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 30 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 40 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 40 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 50 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 50 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 60 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 60 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 70 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 70 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 80 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 80 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 90 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 90 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления для нейтрализации вирусной частицы по настоящему изобретению, содержащей вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, требуется в по меньшей мере 100 раз больше общих IVIG или IgG (например, 50% подавления инфицирования или больше) по сравнению с соответствующей контрольной вирусной частицей (например, вирусная частица по настоящему изобретению характеризуется значением IC50, которое в по меньшей мере 100 раз превышает значение для контрольной вирусной частицы). В некоторых вариантах осуществления вирусная частица по настоящему изобретению, содержащая вирусный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинацию, характеризуется необнаруживаем ой IC50 при инкубации с объединенной человеческой сывороткой крови от по меньшей мере 100; 10000; 20000; 30000; 40000; 50000 или более людей-доноров.

[00208] Нацеливающие лиганды

[00209] Описанная в данном документе вирусная частица может дополнительно содержать нацеливающий лиганд.

[00210] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, содержащих детектируемую метку, нацеливающий лиганд содержит полиспецифическую связывающую молекулу, содержащую (i) паратоп антитела, который специфически связывает детектируемую метку, и (ii) второй связывающий домен, который специфически связывает рецептор, который может быть конъюгирован с поверхностью гранулы (например, для очистки) или экспрессирован клеткой-мишенью. Соответственно, полиспецифическая связывающая молекула, содержащая (i) паратоп антитела, который специфически связывает детектируемую метку, и (ii) второй связывающий домен, который специфически связывает рецептор, нацеливает вирусную частицу. Такое «нацеливание» или «направление» может включать сценарий, при котором вирусная частица дикого типа нацеливается на несколько клеток в пределах ткани и/или несколько органов в пределах организма, при этом широкое нацеливание на ткань или органы снижено вплоть до устранения за счет вставки детектируемой метки, и это перенацеливание на более специфические клетки в ткани или более специфический орган в организме достигается с помощью полиспецифической связывающей молекулы. Такое перенацеливание или перенаправление может также включать сценарий, при котором вирусная частица дикого типа нацеливается на ткань, при этом нацеливание на ткань снижено вплоть до устранения за счет вставки детектируемой метки, и это перенацеливания на полностью другую ткань достигается с помощью полиспецифической связывающей молекулы. Паратоп антитела, описанный в данном документе, обычно содержит по меньшей мере определяющую комплементарность область (CDR), которая специфически распознает детектируемую метку, например область CDR3 вариабельного домена тяжелой и/или легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления полиспецифическая связывающая молекула содержит антитело (или его часть), которое содержит паратоп антитела, который специфически связывает детектируемую метку. Например, поли специфическая связывающая молекула может содержать однодоменную вариабельную область тяжелой цепи или однодоменную вариабельную область легкой цепи, где однодоменная вариабельная область тяжелой цепи или однодоменная вариабельная область легкой цепи содержат паратоп антитела, который специфически связывает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления полиспецифическая связывающая молекула может содержать Fv-область, например, полиспецифическая связывающая молекула может содержать scFv, содержащий паратоп антитела, который специфически связывает детектируемую метку. В некоторых вариантах осуществления полиспецифическая связывающая молекула, описанная в данном документе, содержит паратоп антитела, который специфически связывает c-myc (SEQ ID NO:44).

[00211] Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является мультимерная структура, содержащая модифицированный вирусный капсидный белок по настоящему изобретению. Мультимерная структура содержит по меньшей мере 5, предпочтительно по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 30, наиболее предпочтительно по меньшей мере 60 модифицированных вирусных капсидных белков, содержащих первого партнера из специфической связывающейся пары, описанной в данном документе. Они могут образовывать правильные вирусные капсиды (пустые вирусные частицы) или вирусные частицы (капсиды, инкапсидирующие представляющий интерес нуклеотид). Образование вирусных частиц, содержащих вирусный геном, является весьма предпочтительным признаком для применения модифицированных вирусных капсидов, описанных в данном документе.

[00212] Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения является применение по меньшей мере одного модифицированного вирусного капсидного белка и/или кодирующей его нуклеиновой кислоты, предпочтительно по меньшей мере одной мультимерной структуры (например, вирусной частицы) для изготовления и применения при переносе представляющего интерес нуклеотида в клетку-мишень.

[00213] Способы применения и получения

[002I4] Дополнительным вариантом осуществления модифицированных вирусных капсидных белков, описанных в данном документе, является их применение для доставки представляющего интерес нуклеотида, например репортерного гена или терапевтического гена, в клетку-мишень. Обычно представляющим интерес нуклеотидом может быть плазмида-переносчик, которая обычно может содержать последовательности инвертированных 5'- и 3'-концевых повторов (ITR), фланкирующие репортерный(-ые) ген(-ы) или терапевтический(-ие) ген(ы), которые могут находиться под контролем вирусного или невирусного промотора, когда она заключена в частицу AAV. В одном из вариантов осуществления представляющий интерес нуклеотид представляет собой плазмиду-переносчика, содержащую в направлении от 5' к 3': 5'-ITR, промотор, ген (например, репортерный и/или терапевтический ген) и 3'-ITR.

[002I5] Неограничивающие примеры применимых промоторов включают, например, промотор цитомегаловируса (CMV), промотор вируса некроза селезенки (SFFV), промотор фактора элонгации 1 альфа (EF1a) (промотор EF1a 1,2 т.о. или промотор EF1a 0,2 т.о.), химерный промотор EF1 a/IF4 и фосфоглицераткиназный (PGK) промотор. Для увеличения экспрессии представляющего интерес гена в составе вирусной конструкции также может присутствовать внутренний энхансер. Например, можно применять энхансер CMV (Karasuyama et al. 1989. J. Exp. Med. 169:13, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В некоторых вариантах осуществления энхансер CMV можно применять в комбинации с промотором гена (3-актина курицы.

[00216] Разнообразные репортерные гены (или детектируемые фрагменты) можно инкапсидировать в мультимерную структуру, содержащую модифицированные вирусные капсидные белки, описанные в данном документе. Иллюстративные репортерные гены включают, например, β-галактозидазу (кодируемую геном lacZ), зеленый флуоресцентный белок (GFP), усиленный зеленый флуоресцентный белок (eGFP), MmGFP, синий флуоресцентный белок (BFP), усиленный синий флуоресцентный белок (eBFP), mPlum, mCherry, tdTomato, mStrawberry, J-Red, DsRed, mOrange, mKO, mCitrine, Venus, YPet, желтый флуоресцентный белок (YFP), усиленный желтый флуоресцентный белок (eYFP), Emerald, CyPet, голубой флуоресцентный белок (CFP), Cerulean, Т-Sapphire, люциферазу, щелочную фосфатазу или их комбинацию. Способы, описанные в данном документе, демонстрируют конструирование нацеливающих частиц, при котором подразумевается применение репортерного гена, который кодирует зеленый флуоресцентный белок, однако специалисты в данной области техники после прочтении данного раскрытия поймут, что описанные в данном документе вирусные капсиды можно получить в отсутствие репортерного гена или с любым репортерным геном, известным в данной области техники.

[00217] Разнообразные терапевтические гены также можно инкапсидировать в мультимерную структуру, содержащую модифицированные вирусные капсидные белки, описанные в данном документе, например, как часть частицы для переноса. Неограничивающие примеры терапевтического гена включают гены, которые кодируют токсин (например, суицидный ген), терапевтическое антитело или его фрагмент, систему CFJSPR/Cas или ее часть(-и), антисмысловую РНК, siRNA, shRNA и т.д.

[00218] Дополнительным вариантом осуществления настоящего изобретения является способ получения модифицированного капсидного белка, причем способ предусматривает стадии:

a) осуществления экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей модифицированный капсидный белок, в подходящих условиях, и

b) выделение капсидного белка, экспрессированного на стадии а).

[00219] В некоторых вариантах осуществления вирусная частица, описанная в данном документе, содержит мозаичный капсид, например, капсид, содержащий капсидные белки, генетически модифицированные, как описано в данном документе (в отсутствие или в присутствии ковалентной связи с нацеливающим лигандом), при определенном соотношении с эталонными капсидными белками. Способ получения такой мозаичной вирусной частицы предусматривает:

a) осуществление экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей модифицированный капсидный белок, и нуклеотида, кодирующего эталонный капсидный белок, при соотношении (вес/вес), составляющем от по меньшей мере приблизительно 60:1 до приблизительно 1:60, например 2:1, 1:1, 3:5,1:2, 1:3 и т.д. в подходящих условиях и

b) выделение капсидного белка, экспрессированного на стадии а).

[00220] В некоторых вариантах осуществления композиция, описанная в данном документе, содержит или способ, описанный в данном документе, объединяет модифицированный ген cap: эталонный ген cap (или комбинацию эталонных генов cap) при соотношении, которое находится в диапазоне от по меньшей мере приблизительно 1:60 до приблизительно 60:1, например 2:1, 1:1, 3:5, 1:2, 1:3 и т.д. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:2. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:3. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:4. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:5. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:6. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:7. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:8. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:9. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:10. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:11. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:12. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:13. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:14. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:15. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:16. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:17. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:18. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:19. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:20. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:25. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:30. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:35. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:40. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:45. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:50. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:55. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 1:60. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 2:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 3:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 4:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 5:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 6:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 7:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 8:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 9:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 10:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 11:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 12:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 13:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 14:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 15:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 16:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 17:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 18:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 19:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 20:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 25:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 30:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 35:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 40:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 45:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 50:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 55:1. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет по меньшей мере приблизительно 60:1.

[00221] В некоторых вариантах осуществления соотношения белковых субъединиц VP в мозаичной вирусной частице может, но не обязательно, стехиометрически отражать соотношение модифицированный ген cap:эталонный ген cap.В качестве неограничивающего иллюстративного варианта осуществления можно считать, но не обязательно, что мозаичный капсид, образованный в соответствии со способом, характеризуется соотношением модифицированный капсидный белок:эталонный капсидный белок, аналогичным соотношению (вес:вес) кодирующих их нуклеиновых кислот, применяемых для получения мозаичного капсида. В некоторых вариантах осуществления мозаичный капсид содержит соотношение белковых субъединиц, составляющее от приблизительно 1:59 до приблизительно 59:1.

[00222] Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения представляют собой способ изменения тропизма вируса, при этом способ предусматривает стадии (а) осуществления вставки нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность, в последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вирусный капсидный белок, с образованием нуклеотидной последовательности, кодирующей генетически модифицированный капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, и/или (b) культивирования упаковывающей клетки в условиях, достаточных для продуцирования вирусных частиц, где упаковывающая клетка содержит нуклеиновую кислоту. Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ отображения нацеливающего лиганда на поверхности капсидного белка, при этом способ предусматривает стадии (а) осуществления экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей модифицированный вирусный капсидный белок, описанный в данном документе (и необязательно с нуклеотидом, кодирующим эталонный капсидный белок), в подходящих условиях, где нуклеиновая кислота кодирует капсидный белок, содержащий первого партнера из специфической связывающейся пары, (b) выделения капсидного белка, содержащего первого партнера из специфической связывающейся пары, экспрессированного на стадии (а), или содержащего его капсида, и (с) инкубации капсидного белка или капсида со вторым когнатным партнером из специфической связывающейся пары в условиях, подходящих для обеспечения образования изопептидной связи между первым и вторым партнером, где второй когнатный партнер из специфической связывающейся пары слит с нацеливающим лигандом.

[00223] В некоторых вариантах осуществления упаковывающая клетка дополнительно содержит плазмиду-помощника и/или плазмиду-переносчика, содержащую представляющий интерес нуклеотид. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно предусматривают выделение самокомплементарных аденоассоциированных вирусных частиц из культурального супернатанта. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно предусматривают осуществление лизиса упаковывающей клетки и выделение частиц на основе однонитевого аденоассоциированного вируса из клеточного лизата. В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно предусматривают (а) удаление клеточного дебриса, (b) обработку супернатанта, содержащего вирусные частицы, нуклеазами, например ДНКазой I, и MgCl₂, (с) концентрирование вирусных частиц, (d) очистку вирусных частиц и (е) любую комбинацию (a)-(d).

[00224] Упаковывающие клетки, применимые для продуцирования вирусных частиц, описанных в данном документе, включают, например, клетки животных, пермиссивные для вируса, или клетки, модифицированные, чтобы быть пермиссивными для вируса; или предусматривают введение конструкции для упаковывающей клетки, например, с применением трансформирующего средства, такого как фосфат кальция. Неограничивающие примеры линий упаковывающих клеток, применимых для продуцирования вирусных частиц, описанных в данном документе, включают, например, эмбриональные клетки почки человека 293 (HEK-293) (например, под № Американской коллекции типовых культур [АТСС] CRL-I573), клетки HEK-293, которые содержат большой Т-антиген SV40 (HEK-293Т или 293Т), клетки HEK293T/17, линию клеток саркомы человека НТ-1080 (CCL-121), линию лимфобластоподобных клеток Raji (CCL-86), линию эпителиоподобных клеток из глиобластомы-астроцитомы U87-MG (НТВ-I4), линию клеток Т-лимфомы HuT78 (TIB-161), клетки NIH/3T3, клетки яичника китайского хомячка (СНО) (например, под №№ АТСС CRL9618, CCL61, CRL9096), клетки HeLa (например, № АТСС CCL-2), клетки Vero, клетки NIH 3Т3 (например, № АТСС CRL-1658), клетки Huh-7, клетки BHK (например, № АТСС CCL10), клетки PC12 (№ АТСС CRL1721), клетки COS, клетки COS-7 (№ АТСС CRL1651), клетки RATI, мышиные L-клетки (№ АТСС CCLI.3), клетки HLHepG2, клетки САР, клетки САР-Т и т.п.,

[00225] клетки L929, система на основе упаковывающих клеток для вирусов FLY, описанная в Cosset et al. (1995) J. Virol 69, 7430-7436, клетки NSO (мышиная миелома), человеческие амниоциты (например, САР, САР-Т), дрожжевые клетки (в том числе без ограничения S. cerevisiae, Pichia pastoris), растительные клетки (в том числе без ограничения клетки табака NT1, BY-2), клетки насекомых (в том числе без ограничения SF9, S2, SF21, Tni (например, High 5)) или бактериальные клетки (в том числе без ограничения Е. coli).

[00226] Дополнительную информацию об упаковывающих клетках и системах, методиках упаковки и частицах для упаковки генома в виде нуклеиновой кислоты в псевдотипированную вирусную частицу см., например, Polo et al., Proc Natl Acad Sci USA, (1999) 96:4598-4603. Способы упаковки предусматривают применение упаковывающих клеток, которые постоянно экспрессируют вирусные компоненты, или путем временной трансфекции клеток плазмидами.

[00227] Дополнительные варианты осуществления включают способы перенаправления вируса и/или доставки репортерного или терапевтического гена в клетку-мишень, при этом способ предусматривает способ трансдукции клеток п vitro (например, ex vivo) или in vivo, при этом способ предусматривает стадии приведения клетки-мишени в контакт с вирусной частицей, содержащей капсид, описанный в данном документе, где капсид содержит нацеливающий лиганд, который специфически связывает рецептор, экспрессируемый клеткой-мишенью. В некоторых вариантах осуществления клетка-мишень находится в условиях in vitro (например, ex vivo). В других вариантах осуществления клетка-мишень находится in vivo в субъекте, например человеке.

[00228] Клетки-мишени

[00229] На самые разнообразные клетки могут служить мишенью для доставки представляющего интерес нуклеотида с использованием модифицированной вирусной частицы, раскрытой в данном документе. Обычно клетки-мишени будут выбирать, исходя из представляющего интерес нуклеотида и требуемого эффекта.

[00230] В некоторых вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид может доставляться для обеспечения способности клетки-мишени продуцировать белок, который восполняет дефицит в организме, такой как ферментативный дефицит или иммунный дефицит, такой как тяжелый комбинированный иммунодефицит, сцепленный с Х-хромосомой. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления мишенями служат клетки, которые в норме будут продуцировать белок у животного. В других вариантах осуществления мишенями служат клетки в участке тела, в котором белок был бы наиболее полезен.

[00231] В других вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид, такой как ген, кодирующий siRNA, может подавлять экспрессию конкретного гена в клетке-мишени. Например, представляющий интерес нуклеотид может подавлять экспрессию гена, вовлеченного в жизненный цикл патогена. Таким образом, могут служить мишенью клетки, восприимчивые к инфицированию патогеном или инфицированные патогеном. В других вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид может подавлять экспрессию гена, который отвечает за продуцирование токсина в клетке-мишени.

[00232] В других вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид может кодировать токсичный белок, который приводит к гибели клеток, в которых он экспрессируется. В данном случае мишенями могут служить опухолевые клетки или другие нежелательные клетки.

[00233] В еще одних вариантах осуществления представляющий интерес нуклеотид кодирует терапевтический белок.

[00234] После идентификации конкретной популяции клеток-мишеней, в которых требуется экспрессия представляющего интерес нуклеотида, выбирают рецептор-мишень, который специфически экспрессируется на данной популяции клеток-мишеней. Рецептор-мишень может экспрессироваться исключительно на данной популяции клеток или в большей степени на данной популяции клеток по сравнению с другими популяциями клеток. Чем более специфической является экспрессия, тем более специфически доставка может быть направлена в клетки-мишени. В зависимости от контекста требуемый уровень специфичности маркера (и, следовательно, генной доставки) может варьироваться. Например, в случае введения токсичного гена высокая специфичность наиболее предпочтительна, чтобы избежать гибели нецелевых клеток. В случае экспрессии белка для сбора или экспрессии секретируемого продукта, когда требуется глобальное воздействие, может быть необходима меньшая специфичность маркера.

[00235] Как обсуждалось выше, рецептор-мишень может представлять собой любой рецептор, для которого можно идентифицировать или создать нацеливающего лиганда. Предпочтительно рецептор-мишень представляет собой пептид или полипептид, такой как рецептор. Однако в других вариантах осуществления рецептор-мишень может представлять собой углевод или другую молекулу, которую может распознавать партнер по связыванию. Если партнер по связыванию, например лиганд, для рецептора-мишени уже известен, его можно использовать в качестве аффинной молекулы. Однако если связывающая молекула неизвестна, можно получить антитела к рецептору-мишени с применением стандартных процедур. Затем антитела можно применять в качестве нацеливающего лиганда.

[00236] Таким образом, клетки-мишени можно выбрать, исходя из множества факторов, в том числе, например, (1) применения (например, терапия, экспрессия белка, подлежащего сбору, и придание устойчивости к заболеванию) и (2) экспрессии маркера с требуемой величиной специфичности.

[00237] Клетки-мишени никоим образом не ограничены и включают как клетки и линии клеток зародышевой линии, так и соматические клетки и линии клеток. Клетки-мишени могут быть стволовыми клетками любого происхождения. Если клетки-мишени представляют собой клетки зародышевой линии, то клетки-мишени предпочтительно выбирают из группы, состоящей из одноклеточных эмбрионов и эмбриональных стволовых клеток (ES).

[00238] Фармацевтические композиции, лекарственные формы и введение

[00239] Дополнительный вариант осуществления предусматривает лекарственный препарат, содержащий по меньшей мере один модифицированный вирусный капсидный белок и соответствующий нацеливающий лиганд по настоящему изобретению и/или нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению. Предпочтительно такой лекарственный препарат применим в качестве частицы для переноса генов.

[00240] Также в данном документе раскрыты фармацевтические композиции, содержащие вирусные частицы, описанные в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество. Кроме того, в данном документе раскрыты фармацевтические лекарственные формы, содержащие вирусную частицу, описанную в данном документе.

[00241] Как обсуждается в данном документе, вирусные частицы, описанные в данном документе, можно использовать для различных терапевтических вариантов применения (in vivo и ex vivo) и в качестве инструментов для исследования.

[00242] Фармацевтические композиции на основе вирусных частиц, раскрытых в данном документе, могут быть составлены любым общепринятым способом с использованием одного или более физиологически приемлемых носителей и/или вспомогательных веществ. Вирусные частицы могут быть составлены для введения, например, путем инъекции, ингаляции или инсуляции (либо через рот, либо через нос), либо путем перорального, трансбуккального, парентерального или ректального введения, либо путем введения непосредственно в опухоль.

[00243] Фармацевтические композиции могут быть составлены для различных способов введения, в том числе системного, местного или локального введения. Методики и составы можно найти, например, в Remrnington's Pharmaceutical Sciences, Meade Publishing Co., Easton, Pa. Для системного введения предпочтительна инъекция, в том числе внутримышечная, внутривенная, внутрибрюшинная и подкожная. Для целей инъекции фармацевтические композиции могут быть составлены в жидких растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хенка или раствор Рингера. Кроме того, фармацевтические композиции могут быть составлены в твердой форме и повторно растворяться или суспендироваться непосредственно перед применением. Также являются подходящими лиофилизированные формы фармацевтической композиции.

[00244] Для перорального введения фармацевтические композиции могут находиться в форме, например, таблеток или капсул, полученных традиционными способами, с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, такими как связующие средства (например, предварительно желатинизированный маисовый крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция); смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); разрыхлители (например, картофельный крахмал или гликолят крахмала натрия) или смачивающие средства (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки также могут быть покрыты оболочкой с помощью способов, хорошо известных в данной области техники. Жидкие препараты для перорального введения могут находиться в форме, например, растворов, сиропов или суспензий, или они могут быть представлены в виде сухого продукта для разведения водой или другой подходящей средой-носителем перед применением. Такие жидкие препараты можно получать традиционными способами с фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспендирующие средства (например, сорбитовый сироп, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры); эмульгаторы (например, лецитин или аравийская камедь); неводные среды-носители (например, масло, масляные сложные эфиры, этиловый спирт или фракционированные растительные масла) и консерванты (например, метил- или пропил-п-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота). При необходимости препараты также могут содержать буферные соли, ароматизирующие, красящие и подслащивающие средства.

[00245] Фармацевтические композиции могут быть составлены для парентерального введения путем инъекции, например, путем болюсной инъекции или непрерывной инфузии. Составы для инъекций могут быть представлены в виде стандартной лекарственной формы, например, в ампулах или в многодозовых контейнерах с необязательно добавленным консервантом. Фармацевтические композиции могут быть дополнительно составлены в виде суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных средах-носителях и могут содержать другие средства, в том числе суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие средства.

[00246] Кроме того, фармацевтические композиции также могут быть составлены в виде депо-препарата. Данные составы длительного действия можно вводить путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или посредством внутримышечной инъекции. Так, например, соединения могут быть составлены с подходящими полимерными или гидрофобными материалами (например, в виде эмульсии в приемлемом масле) или ионообменными смолами или в виде труднорастворимых производных, например, в виде труднорастворимой соли. Другие подходящие системы доставки включают микросферы, которые обеспечивают возможность локальной неинвазивной доставки лекарственных средств в течение продолжительного периода времени. Данная технология может включать микросферы, имеющие прекапиллярный размер, которые можно вводить через коронарный катетер в любую выбранную часть органа, не вызывая воспаления или ишемии. Введенное терапевтическое средство медленно высвобождается из микросфер и поглощается окружающими клетками, присутствующими в выбранной ткани.

[00247] Системное введение также можно осуществлять трансмукозальным или трансдермальным способами. В случае трансмукозального или трансдермального введения в составе используют проникающие вещества, подходящие для проникновения через барьер, через который требуется проникнуть. Такие проникающие вещества обычно известны в данной области техники и включают, например, в случае трансмукозального введения соли желчных кислот и производные фузидиевой кислоты. Кроме того, для облегчения проникновения можно использовать детергенты. Трансмукозальное введение можно осуществлять с использованием назальных спреев или суппозиториев. В случае местного применения вирусные частицы, описанные в данном документе, можно составлять в виде мазей, бальзамов, гелей или кремов, как в целом известно в данной области техники. Раствор для промывания также можно применять локально для лечения повреждения или воспаления с целью ускорения заживления.

[00248] Фармацевтические формы, подходящие для инъекционного применения, могут включать стерильные водные растворы или дисперсии; составы, включающие кунжутное масло, арахисовое масло или водный раствор пропиленгликоля; и стерильные порошки для получения стерильных инъекционных растворов или дисперсий для немедленного приема. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть текучей. Она должна быть стабильной в условиях изготовления и при определенных параметрах хранения (например, охлаждение и заморозка) и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы.

[00249] Если составы, раскрытые в данном документе, используют в качестве терапевтического средства для усиления иммунного ответа у субъекта, терапевтическое средство можно составить в композиции в нейтральной или солевой форме. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты (образованные с помощью свободных аминогрупп белка), и при этом соли образованы с такими неорганическими кислотами, как, например, хлористоводородная или фосфорная кислоты, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и т.п. Соли, образованные за счет свободных карбоксильных групп, также могут быть получены из таких неорганических оснований, как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и т.п.

[00250] Носителем также может быть растворитель или дисперсионная среда, содержащая, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем применения покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем применения поверхностно-активных веществ. Предотвращения действия микроорганизмов можно достигать с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, известных в данной области техники. Во многих случаях будет предпочтительно включать изотонические средства, например сахара или хлорид натрия. Пролонгированного всасывания инъекционных композиций можно достигать путем применения в композициях средств, задерживающих всасывание, например моностеарата алюминия и желатина.

[00251] Стерильные инъекционные растворы можно получать путем включения активных соединений или конструкций в требуемом количестве в соответствующий растворитель вместе с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, при необходимости с последующей стерилизацией путем фильтрации.

[00252] После составления растворы можно вводить способом, совместимым с лекарственной формой, и в таком количестве, которое является терапевтически эффективным. Составы без труда вводят в таких разнообразных лекарственных формах, как, например, тип инъекционных растворов, описанных выше, однако также можно использовать капсулы или микрочастицы или микросферы с медленным высвобождением и т.п.

[00253] Например, в случае парентерального введения в водном растворе при необходимости данный раствор должен быть надлежащим образом забуферен, и жидкому разбавителю сначала придают изотоничность с помощью достаточного количества физиологического раствора или глюкозы. Данные конкретные водные растворы особенно подходят для внутривенного, внутриопухолевого, внутримышечного, подкожного и внутрибрюшинного введения. В данном контексте стерильные водные среды, которые можно использовать, будут известны специалистам в данной области техники в свете настоящего изобретения. Например, одну дозу можно растворить в 1 мл изотонического раствора NaCl и либо добавить к 1000 мл жидкости для гиподермоклизиса, либо инъецировать в предполагаемое место инфузии.

[00254] Лицо, ответственное за введение, в любом случае будет определять соответствующую дозу для отдельного субъекта. Например, субъекту можно вводить описанные в данном документе вирусные частицы один раз в день или один раз в неделю в течение определенного периода времени или один раз в месяц, два раза в год или один раз в год, в зависимости от необходимости или воздействия патогенного организма или состояния у субъекта (например, рака).

[00255] В дополнение к соединениям, составленным для парентерального введения, такого как внутривенная, внутриопухолевая, внутрикожная или внутримышечная инъекция, другие фармацевтически приемлемые формы включают, например, таблетки или другие твердые вещества для перорального введения; липосомные составы; капсулы с замедленным высвобождением; биоразлагаемую и любую другую форму, применяемую в настоящее время.

[00256] Можно также применять интраназальные или ингаляционные растворы или спреи, аэрозоли или ингаляторы. Назальные растворы могут быть водными растворами, предназначенными для введения в носовые ходы в виде капель или спреев. Назальные растворы могут быть получены таким образом, что они во многом напоминают носовой секрет. Таким образом, водные назальные растворы обычно являются изотоническими и слегка забуференными для поддержания рН от 5,5 до 7,5. Кроме того, при необходимости в состав могут быть включены противомикробные консерванты, подобные тем, которые применяют в офтальмологических препаратах, и соответствующие стабилизаторы лекарственного средства. Известны различные коммерческие назальные препараты, которые могут включать, например, антибиотики и антигистаминные препараты, и они применяются для профилактики астмы.

[00257] Составы для перорального применения могут включать такие вспомогательные вещества, как, например, маннит, лактоза, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлоза, карбонат магния и т.п., характеризующиеся фармацевтической степенью чистоты. Данным композициям придают форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, составов с замедленным высвобождением или порошков. В некоторых определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции для перорального введения будут включать инертный разбавитель или усваиваемый съедобный носитель, или они могут быть заключены в капсулу с твердой или мягкой желатиновой оболочкой, или они могут быть спрессованы в таблетки, или они могут быть включены непосредственно в пищевой продукт, предусмотренный диетой. В случае перорального введения терапевтического средства активные соединения можно объединять со вспомогательными веществами и применять в форме принимаемых внутрь таблеток, буккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п.

[00258] Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и т.п. также могут содержать следующее: связующее вещество, такое как трагакантовая камедь, аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин; вспомогательные вещества, такие как дикальцийфосфат; разрыхлитель, такой как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и т.п.; смазывающее вещество, такое как стеарат магния; и может быть добавлен подсластитель, такой как сахароза, лактоза или сахарин, или ароматизатор, такой как мята перечная, масло грушанки или вишневый ароматизатор. Если стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, то она может содержать, помимо веществ вышеуказанного типа, жидкий носитель. Различные другие вещества могут присутствовать в качестве покрытий или иным образом модифицировать физическую форму лекарственной формы. Например, таблетки, пилюли или капсулы могут быть покрыты шеллаком, сахаром или и тем и другим. Сироп или эликсир может содержать активные соединения, сахарозу в качестве подсластителя, метил- и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель и ароматизатор, такой как вишневый или апельсиновый ароматизатор.

[00259] Другие варианты осуществления, раскрытые в данном документе, могут касаться наборов для применения в соответствии со способами и композициями. Наборы могут также включать подходящий контейнер, например флаконы, пробирки, мини- или микроцентрифужные пробирки, пробирку для испытания, колбу, сосуд, шприц или другой контейнер. Если обеспечивается дополнительный компонент или средство, набор может содержать один или более дополнительных контейнеров, в которые может быть помещено данное средство или компонент. Наборы в данном документе, как правило, также включают средства для помещения вирусных частиц и любые другие контейнеры с реагентами, плотно упакованные для коммерческой продажи. Такие контейнеры могут включать пластиковые контейнеры, полученные литьем под давлением или выдувным формованием, в которые помещены требуемые флаконы. Необязательно, для описанных композиций могут потребоваться одно или более дополнительных активных средств, таких как, например, противовоспалительные средства, противовирусные средства, противогрибковые или антибактериальные средства или противоопухолевые средства.

[00260] Композиции, раскрытые в данном документе, можно вводить любым способом, известным в данной области техники. Например, композиции могут предусматривать введение субъекту внутривенно, внутриопухолево, внутрикожно, внутриартериально, внутрибрюшинно, внутрь повреждения, внутричерепно, внутрисуставно, внутрипростатически, внутриплеврально, внутритрахеально, интраназально, интравитреально, интравагинально, интраректально, местно, внутриопухолево, внутримышечно, интратекально, подкожно, субконъюнктивально, интравезикулярно, мукозально, интраперикардиально, внутрипуповинно, интраокулярно, перорально, локально, с помощью ингаляции, с помощью инъекции, с помощью инфузии, с помощью непрерывной инфузии, с помощью локальной перфузии, через катетер, с помощью промывания, в креме или в липидной композиции.

[00261] Для крупномасштабного продуцирования вирусных частиц, упаковывающих клеток и конструкций частиц, раскрытых в данном документе, можно применять любой способ, известный специалисту в данной области техники. Например, основной и рабочий посевные материалы можно получать в условиях согласно GMP в отвечающих требованиям первичных CEF или другими способами. Упаковывающие клетки можно высевать в колбы с большой площадью поверхности, выращивать практически до достижения конфлюентности и выполнять очистку вирусных частиц. Клетки можно собирать и выделять и очищать вирусные частицы, высвобожденные в культуральную среду, или высвобождать внутриклеточные вирусные частицы путем механического разрушения (клеточный дебрис можно удалять с помощью глубинной фильтрации с крупными порами и расщеплять ДНК клетки-хозяина эндонуклеазой). Впоследствии вирусные частицы могут быть очищены и сконцентрированы путем фильтрации в тангенциальном потоке с последующей диафильтрацией. Полученную концентрированную массу можно составлять путем разбавления буфером, содержащим стабилизаторы, наполнять ею флаконы и лиофилизировать. Композиции и составы могут храниться для последующего применения. Для применения лиофилизированные вирусные частицы можно восстанавливать путем добавления разбавителя.

[00262] Определенные дополнительные средства, применяемые в комбинированных средствах терапии, можно составлять и вводить любым способом, известным в данной области техники.

[00263] Композиции, раскрытые в данном документе, также могут включать адъюванты, такие как соли алюминия и другие минеральные адъюванты, средства, изменяющие поверхностное натяжение, бактериальные компоненты, среды-носители и цитокины. Адъюванты также могут обладать антагонистическими иммуномодулирующими свойствами. Например, адъюванты могут стимулировать Th1- или Th2-зависимый иммунитет.Композиции и способы, раскрытые в данном документе, также могут предусматривать адъювантную терапию.

[00264] Неограничивающие и иллюстративные варианты осуществления приведены ниже.

Вариант осуществления 1. Вирусная частица AAV, содержащая капсид AAV,

где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности капсидного белка, выбранного из группы, состоящей из:

капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом,

капсидного белка отдаленного AAV и

их комбинации, и

где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV модифицирован с включением:

(a) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации,

(d) химерной аминокислотной последовательности, содержащей часть аминокислотной последовательности капсидного белка другого AAV, которая функционально связана с указанной аминокислотной последовательностью капсидного белка, выбранной из группы, состоящей из капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации, и

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

Вариант осуществления 2. Вирусная частица AAV, содержащая капсид AAV,

где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом,

где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV модифицирован с включением:

(а) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации,

(d) химерной аминокислотной последовательности, содержащей часть аминокислотной последовательности капсидного белка другого AAV, которая функционально связана с указанной аминокислотной последовательностью капсида AAV животного, не являющегося приматом, и

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

Вариант осуществления 3. Вирусная частица AAV, содержащая капсид AAV,

где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности капсидного белка отдаленного AAV,

где по меньшей мере один капсидный белок AAV указанного капсида AAV модифицирован с включением:

(a) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации,

(d) химерной аминокислотной последовательности, содержащей часть аминокислотной последовательности капсидного белка другого AAV, которая функционально связана с указанной аминокислотной последовательностью капсидного белка отдаленного AAV, и

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

Вариант осуществления 4. Вирусная частица AAV, содержащая:

(А) по меньшей мере один капсидный белок AAV, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

(i) аминокислотной последовательности капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) аминокислотной последовательности капсидного белка отдаленного AAV и

(iii) аминокислотной последовательности их комбинации, и

(В) геном AAV, содержащий представляющий интерес нуклеотид и ITR AAV, содержащий по меньшей мере часть последовательности ITR другого AAV.

Вариант осуществления 5. Вирусная частица AAV, содержащая:

(A) по меньшей мере один капсидный белок AAV, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, и

(B) геном AAV, содержащий представляющий интерес нуклеотид и ITR AAV, содержащий по меньшей мере часть последовательности ITR другого AAV.

Вариант осуществления 6. Вирусная частица AAV, содержащая:

(A) по меньшей мере один капсидный белок AAV, содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка отдаленного AAV, и

(B) геном AAV, содержащий представляющий интерес нуклеотид и ITR AAV, содержащий по меньшей мере часть последовательности ITR другого AAV.

Вариант осуществления 7. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где указанная аминокислотная последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинация модифицирована с включением:

(a) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) детектируемой метки,

(c) точечной мутации.

Вариант осуществления 8. Частица AAV по варианту осуществления 7,

где связывающаяся пара белок:белок выбрана из SpyTag: SpyCatcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:nmrHH-C, SnoopTag:SnoopCatcher и SpyTag002:SpyCatcher002.

Вариант осуществления 9. Частица AAV по варианту осуществления 7,

где первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит с-тус, содержащую последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44.

Вариант осуществления 10. Частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где детектируемая метка предусматривает эпитоп В1, содержащий аминокислотную последовательность IGTRYLTR (SEQ ID NO:45).

Вариант осуществления 11. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где указанная аминокислотная последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации содержит аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 отдаленного AAV.

Вариант осуществления 12. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где указанная аминокислотная последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации содержит аминокислотную последовательность капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотную последовательность капсидного белка VP2 отдаленного AAV.

Вариант осуществления 13. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где указанная аминокислотная последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, капсидного белка отдаленного AAV или их комбинации содержит аминокислотную последовательность капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотную последовательность капсидного белка VP1 отдаленного AAV.

Вариант осуществления I4. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где капсид указанной частицы содержит:

(i) капсидный белок VP1, который представляет собой один из:

химерного капсидного белка VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или

капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV,

(ii) капсидный белок VP2, который представляет собой один из:

химерного капсидного белка VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2 другого AAV, функционально связанную с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, или

капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления I5. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где капсид указанной частицы содержит:

(i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) химерный капсидный белок VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2 другого AAV, функционально связанную с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления 16. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где капсид указанной частицы содержит:

(i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления 17. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где капсид содержит:

(i) капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV,

(ii) капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления 18. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где указанный другой AAV представляет собой AAV примата или комбинацию AAV примата.

Вариант осуществления 19. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где указанный другой AAV выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 и их комбинации.

Вариант осуществления 20. Вирусная частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, где указанный другой AAV представляет собой AAV2.

Вариант осуществления 21. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5 и 7-20, где указанный AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV животного, не являющегося приматом, приведенный в таблице 1.

Вариант осуществления 22. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5 и 7 21, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV, AAV морского льва или AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 23. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5 и 7-22, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAAV.

Вариант осуществления 24. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5 и 7-23, где модификация находится в положении I444 или I580 капсидного белка VP1 AAAV.

Вариант осуществления 25. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5 и 7-22, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV чешуйчатого пресмыкающегося.

Вариант осуществления 26. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5, 7-22 и 25, где AAV чешуйчатого пресмыкающегося представляет собой AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 27. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1 2, 4 5, 7-22 и 25 26, где модификация находится в положении I573 или I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 28. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5 и 7-22, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV млекопитающего.

Вариант осуществления 29. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-2, 4-5, 7-22 и 28, где AAV млекопитающего представляет собой AAV морского льва.

Вариант осуществления 30. Вирусная частица AAV по любому из вариантов осуществления 1 2, 4 5, 7-22 и 28 29, где модификация находится в положении, выбранном из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и А565 VP1 AAV морского льва.

Вариант осуществления 31. Частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, содержащая капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинации, где капсидный белок VP3 модифицирован с включением:

(a) по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно связывающаяся пара белок:белок выбрана из группы, состоящей из SpyTag: SpyCatcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:nmrHH-C, SnoopTag: SnoopCatcher и SpyTag002: SpyCatcher002,

(b) детектируемой метки, где необязательно детектируемая метка содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44, или аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45,

(c) точечной мутации или

(d) любой комбинации (а), (b) и (с).

Вариант осуществления 32. Частица AAV по варианту осуществления 31, где капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинации модифицирован с включением:

(a) по меньшей мере SpyTag, содержащего аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:42, и/или

(b) детектируемой метки, содержащей аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45.

Вариант осуществления 33. Частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, содержащая первый и/или второй линкер, функционально связывающий первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку с капсидным белком капсида указанной частицы AAV.

Вариант осуществления 34. Частица AAV по варианту осуществления 33, где первый и второй линкер не являются идентичными.

Вариант осуществления 35. Частица AAV по варианту осуществления 33 или варианту осуществления 34, где первый и второй линкер являются идентичными.

Вариант осуществления 36. Частица AAV по любому из вариантов осуществления 33-35, где длина первого и/или второго линкера составляет 10 аминокислот.

Вариант осуществления 37. Частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, содержащая первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку, функционально связанные с вариабельной областью капсидного белка капсида указанной частицы AAV.

Вариант осуществления 38. Частица AAV по варианту осуществления 1 или варианту осуществления 2, содержащая капсидный белок, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

(a) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:2,

(b) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:4,

(c) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:6,

(d) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO :8,

(e) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:10,

(f) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:12,

(g) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:I4,

(h) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:16,

(i) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:18,

(j) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:20,

(k) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:22,

(l) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:24,

(m) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:26,

(n) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:28,

(о) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:30,

(р) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:32,

(q) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:34,

(r) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:36,

(s) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:53,

(t) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:55,

(u) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:57,

(v) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:59,

(w) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:61,

(х) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:63,

(у) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:65,

(z) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:67,

(аа) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:69,

(bb) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:71,

(сс) аминокислотной последовательности, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:I4, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:71, и

(dd) аминокислотной последовательности любой из частей VP2 и/или VP3 из аминокислотных последовательностей, изложенных в любом из (а)-(сс).

Вариант осуществления 39. Частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, дополнительно содержащая эталонный капсидный белок, так что капсид представляет собой мозаичный капсид.

Вариант осуществления 40. Частица AAV по любому из предыдущих вариантов осуществления, содержащая мозаичный капсид, который содержит капсидный белок VP3, модифицированный с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный капсидный белок VP3.

Вариант осуществления 41. Капсидный белок аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий аминокислотную последовательность капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, где капсидный белок AAV выбран из группы, состоящей из:

(a) химерного капсидного белка VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 AAV животного модифицирован с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации,

(b) нехимерного капсидного белка VP1 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемой метки,

(c) химерного капсидного белка VP2, где необязательно химерный капсидный белок VP2 AAV модифицирован с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации,

(d) нехимерного капсидного белка VP2 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации,

(e) химерного капсидного белка VP3 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, и

(f) нехимерного капсидного белка VP3 AAV, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации.

Вариант осуществления 42. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 41, где первый партнер из связывающейся пары белок:белок фланкирован первым и/или вторым линкером, который(-ые) соединяет(-ют) первого партнера из связывающейся пары белок:белок с капсидным белком, и где длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет по меньшей мере одну аминокислоту.

Вариант осуществления 43. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 42, где первый и второй линкеры не являются идентичными.

Вариант осуществления 44. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 42, где первый и второй линкеры являются идентичными, и их длина составляет 10 аминокислот.

Вариант осуществления 45. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-44, где капсидный белок дополнительно содержит второго когнатного партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно первый и второй партнеры связаны ковалентной связью, необязательно изопептидной связью.

Вариант осуществления 46. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-45, где первый партнер из связывающейся пары белок:белок предусматривает SpyTag.

Вариант осуществления 47. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 45 или варианту осуществления 46, где второй когнатный партнер предусматривает SpyCatcher.

Вариант осуществления 48. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 45-47, где второй когнатный партнер предусматривает KTag.

Вариант осуществления 49. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 45, где первый партнер представляет собой KTag, а второй когнатный партнер предусматривает SpyTag.

Вариант осуществления 50. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 45, где первый партнер представляет собой SnoopTag, а второй когнатный партнер предусматривает SnoopCatcher.

Вариант осуществления 51. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 45, где первый партнер представляет собой Isopeptag, а второй когнатный партнер предусматривает пилин-С.

Вариант осуществления 52. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 45, где первый партнер представляет собой SpyTag002, а второй когнатный партнер предусматривает SpyCatcher002.

Вариант осуществления 53. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 45-52, где второй партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, где необязательно нацеливающий лиганд представляет собой связывающий фрагмент.

Вариант осуществления 54. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 53, где связывающий фрагмент представляет собой антитело или его часть.

Вариант осуществления 55. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 54, где антитело или его часть слиты с SpyCatcher.

Вариант осуществления 56. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 54 или варианту осуществления 55, где антитело или его часть слиты с линкером на С-конце, и линкер слит с SpyCatcher на С-конце линкера.

Вариант осуществления 57. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 56, где линкер содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO:49 (GSGESG).

Вариант осуществления 58. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41 57, где детектируемая метка предусматривает эпитоп В1, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO:45.

Вариант осуществления 59. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-58, где указанный AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV животного, не являющегося приматом, приведенный в таблице 1.

Вариант осуществления 60. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41 59, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV, AAV морского льва или AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 61. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41 60, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAAV.

Вариант осуществления 62. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-61, где модификация находится в положении I444 или I580 капсидного белка VP1 AAAV.

Вариант осуществления 63. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-60, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV чешуйчатого пресмыкающегося.

Вариант осуществления 64. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-60 и 63, где AAV чешуйчатого пресмыкающегося представляет собой AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 65. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-60 и 63-64, где модификация находится в положении I573 или I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 66. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41 60, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV млекопитающего.

Вариант осуществления 67. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41 60 и 66, где AAV млекопитающего представляет собой AAV морского льва.

Вариант осуществления 68. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41 60 и 66 67, где модификация находится в положении, выбранном из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437 и А565 VP1 AAV морского льва.

Вариант осуществления 69. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41 68, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

(а) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:2,

(b) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:4,

(c) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:6,

(d) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:8,

(e) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:10,

(f) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:12,

(g) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:I4,

(h) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:16,

(i) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:18,

(j) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:20,

(k) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:22,

(l) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:24,

(m) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:26,

(n) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:28,

(о) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:30,

(р) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:32,

(q) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:34,

(r) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:36,

(s) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:53,

(t) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:55,

(u) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:57,

(v) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:59,

(w) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:61,

(х) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:63,

(у) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:65,

(z) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:67,

(аа) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:69,

(bb) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:71,

(сс) аминокислотной последовательности, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:I4, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:71, и

(dd) аминокислотной последовательности любой из частей VP2 и/или VP3 из аминокислотных последовательностей, изложенных в любом из (а)-(сс).

Вариант осуществления 70. Капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-69, где первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит детектируемую метку.

Вариант осуществления 71. Капсидный белок AAV по варианту осуществления 70, где детектируемая метка предусматривает c-myc (SEQ ID NO:44).

Вариант осуществления 72. Частица AAV, содержащая капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-71.

Вариант осуществления 73. Нуклеиновая кислота, содержащая ген cap, кодирующий капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-71.

Вариант осуществления 74. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая ген cap AAV, который кодирует капсидный белок AAV,

где ген cap AAV содержит по меньшей мере часть нуклеотидной последовательности гена cap, выбранного из группы, состоящей из:

(i) гена cap AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) гена cap отдаленного AAV или

(iii) их комбинации,

где указанный ген cap AAV дополнительно модифицирован с включением:

(a) нуклеотидной последовательности, кодирующей первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку,

(c) точечной мутации,

(d) химерной нуклеотидной последовательности, содержащей часть нуклеотидной последовательности гена cap другого AAV, которая функционально связана с указанной нуклеотидной последовательностью гена cap AAV, выбранного из группы, состоящей из гена cap AAV животного, не являющегося приматом, отдаленного AAV или их комбинации,

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

Вариант осуществления 75. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая ген cap AAV, который кодирует капсидный белок AAV,

где ген cap AAV содержит по меньшей мере часть нуклеотидной последовательности гена cap AAV животного, не являющегося приматом,

где указанный ген cap AAV дополнительно модифицирован с включением:

(a) нуклеотидной последовательности, кодирующей первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку,

(c) точечной мутации,

(d) химерной нуклеотидной последовательности, содержащей часть нуклеотидной последовательности гена cap другого AAV, которая функционально связана с указанной нуклеотидной последовательностью гена cap AAV животного, не являющегося приматом,

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

Вариант осуществления 76. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая ген cap AAV, который кодирует капсидный белок AAV,

где ген cap AAV содержит по меньшей мере часть нуклеотидной последовательности гена cap AAV отдаленного животного,

где указанный ген cap AAV дополнительно модифицирован с включением:

(a) нуклеотидной последовательности, кодирующей первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку,

(c) точечной мутации,

(d) химерной нуклеотидной последовательности, содержащей часть нуклеотидной последовательности гена cap другого AAV, которая функционально связана с указанной нуклеотидной последовательностью гена cap AAV отдаленного животного,

(e) любой комбинации (а), (b), (с) и (d).

Вариант осуществления 77. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая ген rep AAV и ген cap AAV,

где ген cap AAV содержит первую нуклеотидную последовательность гена cap, выбранного из группы, состоящей из:

(i) гена cap AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) гена cap отдаленного AAV и

(iii) их комбинации,

где ген rep AAV содержит вторую нуклеотидную последовательность гена rep AAV другого AAV.

Вариант осуществления 78. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая ген rep AAV и ген cap AAV,

где ген cap AAV содержит первую нуклеотидную последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом,

где ген rep AAV содержит вторую нуклеотидную последовательность гена rep AAV другого AAV.

Вариант осуществления 79. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая ген rep AAV и ген cap AAV,

где ген cap AAV содержит первую нуклеотидную последовательность гена cap AAV отделенного животного,

где ген rep AAV содержит вторую нуклеотидную последовательность гена rep AAV другого AAV.

Вариант осуществления 80. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-79, где ген cap функционально связан с промотором.

Вариант осуществления 81. Молекула нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 80, где указанный промотор управляет экспрессией капсидного(-ых) белка(-ов) в упаковывающей клетке.

Вариант осуществления 82. Молекула нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 80 или варианту осуществления 81, где промотор выбран из р40, SV40, EF, CMV, В19р6 и СAG.

Вариант осуществления 83. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-82, где указанная нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации модифицирована с включением:

(a) нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок,

(b) нуклеотидной последовательности, кодирующей детектируемую метку, и/или

(c) нуклеотидной последовательности, кодирующей точечную мутацию.

Вариант осуществления 84. Молекула нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 83, где связывающаяся пара белок:белок выбрана из SpyTag: SpyCatcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:raMHH-C, SnoopTag:SnoopCatcher и SpyTag002: SpyCatcher002.

Вариант осуществления 85. Молекула нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 83, где первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит с-myc, содержащую последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44.

Вариант осуществления 86. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 83-85, где детектируемая метка предусматривает эпитоп В1, содержащий аминокислотную последовательность IGTRYLTR (SEQ ID NO:45).

Вариант осуществления 87. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-86, где указанная нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотную последовательность капсидного белка VP3 отдаленного AAV.

Вариант осуществления 88. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-87, где указанная нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотную последовательность капсидного белка VP2 отдаленного AAV.

Вариант осуществления 89. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-87, где указанная нуклеотидная последовательность гена cap AAV животного, не являющегося приматом, гена cap отдаленного AAV или их комбинации содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, и/или аминокислотную последовательность капсидного белка VP 1 отдаленного AAV.

Вариант осуществления 90. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-89, где ген cap кодирует:

(i) капсидный белок VP1, который представляет собой один из:

химерного капсидного белка VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или

капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV,

(ii) капсидный белок VP2, который представляет собой один из:

химерного капсидного белка VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2 другого AAV, функционально связанную с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, или

капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и/или

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления 91. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-90, где ген cap кодирует:

(i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) химерный капсидный белок VP2 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP2 содержит общую область VP1/VP2 другого AAV, функционально связанную с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и/или

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления 92. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-90, где ген cap кодирует:

(i) химерный капсидный белок VP1 AAV, где необязательно химерный капсидный белок VP1 содержит уникальную область VP1 (VP1-u) другого AAV, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 и областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления 93. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-90, где ген cap кодирует:

(i) капсидный белок VP1 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV,

(ii) капсидный белок VP2 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV, и/или

(iii) капсидный белок VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или отдаленного AAV.

Вариант осуществления 94. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-93, где указанный другой AAV представляет собой AAV примата или комбинацию AAV примата.

Вариант осуществления 95. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-94, где указанный другой AAV выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 и их комбинации.

Вариант осуществления 96. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-95, где указанный другой AAV представляет собой AAV2.

Вариант осуществления 97. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78 и 80-96, где указанный AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV животного, не являющегося приматом, приведенный в таблице 1.

Вариант осуществления 98. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78 и 80-97, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV, AAV морского льва или AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 99. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78 и 80-98, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAAV.

Вариант осуществления 100. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78 и 80-99, где модификация находится в кодоне, кодирующем положение I444 или I580 капсидного белка VP1 AAAV.

Вариант осуществления 101. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78 и 80-98, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV чешуйчатого пресмыкающегося.

Вариант осуществления 102. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78, 80-98 и 101, где AAV чешуйчатого пресмыкающегося представляет собой AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 103. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 76-77 и 80-98 и 101-102, где модификация находится в кодоне, кодирующем положение I573 или I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы.

Вариант осуществления 104. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 76-77 и 80-98, где AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV млекопитающего.

Вариант осуществления 105. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78, 80-98 и 104, где AAV млекопитающего представляет собой AAV морского льва.

Вариант осуществления 106. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-75, 77-78, 80-98 и 105, где модификация находится в положении, выбранном из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436,I437 и А565 VP1 AAV морского льва.

Вариант осуществления 107. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-106, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

(a) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:l,

(b) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:3,

(c) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:5,

(d) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:7,

(e) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:9,

(f) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:11,

(g) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:13,

(h) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:I5,

(i) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:17,

(j) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:19,

(k) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:21,

(l) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:23,

(m) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:25,

(n) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:27,

(о) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:29,

(р) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:31,

(q) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:33,

(r) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:35,

(s) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:52,

(t) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:54,

(u) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:56,

(у) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:58,

(w) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:60,

(х) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:62,

(у) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:64,

(z) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:66,

(аа) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:68,

(bb) нуклеотидной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:70,

(сс) нуклеотидной последовательности, характеризующейся значительной идентичностью последовательности, например по меньшей мере 95% идентичностью, с нуклеотидной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70 или любой из них, кодирующих капсид VP2,

(dd) любой части нуклеотидной последовательности из (a)-(s), кодирующей капсидный белок VP2 и/или капсидный белок VP3.

Вариант осуществления 108. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 73-107, дополнительно содержащая ген rep AAV, который кодирует один или более белков Rep AAV и функционально связан с промотором.

Вариант осуществления 109. Молекула нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 108, где промотор выбран из группы, состоящей из р5, р19 SV40, EF, CMV, В19р6 и CAG.

Вариант осуществления 110. Молекула нуклеиновой кислоты по варианту осуществления 108 или варианту осуществления 109, где один или более белков Rep выбраны из Rep78, Rep68, Rep52 и Rep40.

Вариант осуществления 111. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 108-110, где один или более белков Rep предусматривают Rep78.

Вариант осуществления 112. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из вариантов осуществления 108-110, где один или более белков Rep представляют собой белки Rep AAV животного-примата.

Вариант осуществления 113. Капсидный белок AAV, содержащий аминокислотную последовательность любой из молекул нуклеиновой кислоты по вариантам осуществления 73-112.

Вариант осуществления 114. Частица AAV, содержащая капсидный белок по варианту осуществления 113.

Вариант осуществления 115. Упаковывающая клетка для продуцирования частиц AAV, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, которая содержит ген cap по любому из вариантов осуществления 73-112.

Вариант осуществления 116. Упаковывающая клетка по варианту осуществления 1I5, дополнительно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую ген rep, кодирующий один или более белков Rep AAV, где указанный ген rep функционально связан с промотором, где необязательно ген rep и ген cap принадлежат двум разным AAV.

Вариант осуществления 117. Упаковывающая клетка по варианту осуществления 116, где промотор, функционально связанный с геном rep, управляет экспрессией капсидного(-ых) белка(-ов) Rep в упаковывающей клетке.

Вариант осуществления 118. Упаковывающая клетка по варианту осуществления 116 или варианту осуществления 117, где промотор выбран из р5, р19 SV40, EF, CMV, В19р6 и С AG.

Вариант осуществления 119. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 116-118, где один или более белков Rep выбраны из Rep78, Rep68, Rep52 nRep40.

Вариант осуществления 120. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 116 119, где один или более белков Rep предусматривают Rep78.

Вариант осуществления 121. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 116-120, где один или более белков Rep представляют собой белки Rep AAV животного-примата.

Вариант осуществления 122. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 116-120, где один или более белков Rep представляют собой белки Rep AAV животного, не являющегося приматом.

Вариант осуществления 123. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 116-122, дополнительно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность представляющего интерес нуклеотида, фланкированную с по меньшей мере одной стороны по меньшей мере одним инвертированным концевым повтором (ITR) AAV, который распознается одним или более белками Rep.

Вариант осуществления 124. Упаковывающая клетка по варианту осуществления 123, где нуклеотид фланкирован с другой стороны вторым ITR того же AAV, что и по меньшей мере один ITR.

Вариант осуществления 125. Упаковывающая клетка по варианту осуществления 124, где нуклеотид фланкирован с другой стороны вторым ITR, где второй ITR и по меньшей мере один ITR принадлежат разным AAV.

Вариант осуществления 126. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 123-125, где представляющий интерес нуклеотид представляет собой репортерный ген.

Вариант осуществления 127. Упаковывающая клетка по варианту осуществления 126, где репортерный ген кодирует β-галактозидазу, зеленый флуоресцентный белок (GFP), усиленный зеленый флуоресцентный белок (eGFP), MmGFP, синий флуоресцентный белок (BFP), усиленный синий флуоресцентный белок (eBFP), mPlum, mCherry, tdTomato, mStrawberry, J-Red, DsRed, mOrange, mKO, mCitrine, Venus, YPet, желтый флуоресцентный белок (YFP), усиленный желтый флуоресцентный белок (eYFP), Emerald, CyPet, голубой флуоресцентный белок (CFP), Cerulean, Т-Sapphire, люциферазу, щелочную фосфатазу или их комбинацию.

Вариант осуществления 128. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 123-125, где представляющий интерес нуклеотид кодирует терапевтический белок, суицидный ген, антитело или его фрагмент, систему CPJSPR/Cas или ее часть(-и), антисмысловой олигонуклеотид, рибозим, молекулу для RNAi или молекулу shRNA.

Вариант осуществления 129. Упаковывающая клетка по любому из вариантов осуществления 115-133, дополнительно содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую эталонный капсидный белок.

Вариант осуществления 130. Способ получения вирусной частицы, предусматривающий культивирование упаковывающей клетки по любому из вариантов осуществления 115-129 в условиях, достаточных для продуцирования вирусных частиц.

Вариант осуществления 131. Способ по варианту осуществления 130, где упаковывающая клетка дополнительно содержит плазмиду-помощника и/или плазмиду-переносчика, содержащую представляющий интерес нуклеотид.

Вариант осуществления 132. Способ по варианту осуществления 130 или варианту осуществления 131, дополнительно предусматривающий одну или более следующих стадий:

a. удаление клеточного дебриса,

b. обработку супернатанта, содержащего вирусные частицы, бензоназой или ДНКазой I и MgCl2,

c. концентрирование вирусных частиц,

d. очистку вирусных частиц и

e. любую комбинацию ad,

где необязательно вирусные частицы представляют собой самокомплементарные аденоассоциированные вирусные частицы и/или выделены из культурального супернатанта.

Вариант осуществления 133. Частица AAV, полученная в соответствии со способом по любому из вариантов осуществления 130-132.

Вариант осуществления 134. Частица AAV по любому из вариантов осуществления 1-40, 72, 114 и 133, дополнительно содержащая представляющий интерес нуклеотид.

Вариант осуществления 135. Частица AAV по варианту осуществления 134, где представляющий интерес нуклеотид представляет собой репортерный ген.

Вариант осуществления 136. Частица AAV по варианту осуществления 135, где репортерный ген кодирует β-галактозидазу, зеленый флуоресцентный белок (GFP), усиленный зеленый флуоресцентный белок (eGFP), MmGFP, синий флуоресцентный белок (BFP), усиленный синий флуоресцентный белок (eBFP), mPlum, mCherry, tdTomato, mStrawberry, J-Red, DsRed, mOrange, mKO, mCitrine, Venus, YPet, желтый флуоресцентный белок (YFP), усиленный желтый флуоресцентный белок (eYFP), Emerald, CyPet, голубой флуоресцентный белок (CFP), Cerulean, Т-Sapphire, люциферазу, щелочную фосфатазу или их комбинацию.

Вариант осуществления 137. Частица AAV по варианту осуществления 134, где представляющий интерес нуклеотид кодирует терапевтический белок, суицидный ген, антитело или его фрагмент, систему CRISPR/Cas или ее часть(-и), антисмысловой олигонуклеотид, рибозим, молекулу для RNAi или молекулу shRNA.

Вариант осуществления 138. Фармацевтическая композиция, содержащая (а) частицу AAV по любому из вариантов осуществления 1-40, 72, 114 и 133, частицу AAV, содержащую капсидный белок AAV по любому из вариантов осуществления 41-71 и 113, или частицу AAV, полученную в соответствии со способом по любому из вариантов осуществления 130-132, и (b) фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.

Вариант осуществления 139. Способ доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку-мишень, предусматривающий приведение клетки-мишени в контакт с (а) частицей AAV по любому из вариантов осуществления 1-40, 72, 114 и 133 или (b) композицией по варианту осуществления 138.

Вариант осуществления 140. Способ по варианту осуществления 139, где капсид частицы AAV содержит нацеливающий лиганд, который специфически связывает белок, экспрессируемый на поверхности клетки-мишени.

Вариант осуществления 141. Способ по варианту осуществления 139 или варианту осуществления 140, где приведение в контакт выполняют ex vivo.

Вариант осуществления 142. Способ по варианту осуществления 139 или варианту осуществления 140, где клетка-мишень находится в субъекте.

Вариант осуществления 143. Способ по варианту осуществления 142, где субъектом является человек.

Вариант осуществления 144. Способ по любому из вариантов осуществления 139-143, где клетка-мишень представляет собой клетку человека.

Вариант осуществления 145. Способ по любому из вариантов осуществления 139-144, где представляющий интерес нуклеотид кодирует терапевтический белок, суицидный ген, антитело или его фрагмент, систему CPJSPR/Cas или ее часть(-и), антисмысловой олигонуклеотид, рибозим, молекулу для RNAi или молекулу shRNA.

ПРИМЕРЫ

[00265] Следующие примеры приведены только в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

[00266] Материалы и методы

[00267] Линии клеток и антитела

[00268] Все линии клеток 293 и 293Т поддерживали в DMEM, дополненной 10% FBS, 1% пенициллина/стрептавидина и 1% L-глутамина. Линии клеток 293 hErbB2 и 293hASGRl/2 получали путем лентивирусной трансдукции исходной линии клеток 293 с помощью частицы, экспрессирующей соответствующую кДНК. Все линии клеток получали из головного центра Regeneron ТС. Антитело к В1 распознает линейный эпитоп, общий для VP1, VP2 и VP3 AAV.

[00269] Конструкции для экспрессии капсидного белка AAV

[00270] GeneBlock, кодирующие необходимые последовательности капсида AAV или праймеры для амплификации требуемых последовательностей капсида AAV с помощью полимеразной цепной реакции, включая вставки SpyTag, фланкирующие линкерные аминокислоты и дополнительные точечные мутации, приобретали в IDT и клонировали в pAAV R2C2 с использованием Gibson Assembly в соответствии с протоколом производителя (NEB).

[00271] Слияние SpyCatcher с антителами

[00272] GeneBlock, кодирующие SpyCatcher, приобретали в IDT и использовали Gibson Assembly для клонирования кодирующей последовательности в рамку считывания в плазмидах для экспрессии тяжелых цепей антитела на С-конце каждой конструкции с отделением с помощью гибкого аминокислотного линкера GSGESG (SEQ ID NO:49).

[00273] Получение вирусных частиц AAV

[00274] Вирус получали путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т с применением PEI Pro или PEI Мах с помощью следующих плазмид: плазмида-помощник pAd, AAV2-ITR-содержащая геномная плазмида, кодирующая репортерный белок, и плазмида pAAV-CAP, кодирующая гены Rep и Cap AAV, либо в присутствии, либо в отсутствие дополнительных плазмид, кодирующих либо scFv, либо тяжелую и легкую цепи антитела. Все конструкции на основе scFv и тяжелой цепи антитела сливали со SpyCatcher на С-конце, как описано выше. Трансфекцию проводили в OptiMEM, и через 8 часов среду заменяли на DMEM, дополненную 10% FBS, 1% пенициллина/стрептавидина и 1% L-глутамата. Альтернативный протокол трансфекции выполняли в I50 мМ NaCl без замены среды после трансфекции.

[00275] Трансфицированные упаковывающие клетки инкубировали в течение 3 дней при 37°С, затем вирус собирали из клеточных лизатов с применением стандартного протокола замораживания-оттаивания. Вкратце, упаковывающие клетки собирали путем соскребания и осаждали центрифугированием. Супернатант удаляли и клетки ресуспендировали в растворе 50 мМ Tris-HCl; 150 мМ NaCl и 2 мМ MgCh [рН 8,0] или 25 мМ Tris-HCl; 100 мМ NaCl; 1 мМ MgCl₂; 2,5 мМ KCl; 0,001% Pluronic F68 [рН 7,4]. Внутриклеточные вирусные частицы высвобождали путем индуцирования лизиса клеток посредством трех последовательных циклов замораживания-оттаивания, состоящих из круговых перемещений суспензии клеток между баней с сухим льдом/этанолом и водяной баней при 37°С при энергичном встряхивании. Вязкость снижали путем обработки лизата с помощью бензоназы от EMD Millipore (50 ед/мл клеточного лизата) в течение 60 мин при 37°С при периодическом перемешивании. Затем дебрис осаждали центрифугированием, и полученный супернатант обрабатывали для получения неочищенного лизата или для дальнейшей очистки в градиенте йодиксанола. Для получения неочищенного лизата супернатант фильтровали через PVDF-фильтр Millex-GV с размером пор 0,22 мкм непосредственно в верхнюю камеру центрифужного фильтрующего блока Amicon Ultra-15 с мембраной Ultracel-100 (MWCO 100 кДа). Фильтрующий блок центрифугировали с интервалами 5-10 минут, пока в верхней камере не был достигнут требуемый объем, затем концентрированный неочищенный вирус пипетированием переносили в пробирку с незначительным связыванием белков и хранили при 4°С. Для очистки в градиенте йодиксанола лизат фильтровали через фильтр PES Nalgene Rapid-Flow с размером пор 0,2 мкм. Среду, содержащую AAV, отдельно концентрировали фильтрацией в тангенциальном потоке и диафильтрацией с 1xPBS, дополненным 0,001% Pluronic F-68. Очищенные лизаты или концентрированную среду загружали в дискретный градиент йодиксанола и центрифугировали при 29600 об/мин в течение 16-18 часов при 10°С с использованием Ti-ротора SW 32. Фракции вируса удаляли с границы раздела между 40- и 60-процентными растворами йодиксанола и проводили замену буфера на lxPBS, дополненный 0,001% Pluronic F-68, с использованием центрифужных фильтров Amicon Ultra с номинальным пределом молекулярной массы 100 кДа. Титр (число векторным геномов на миллилитр, вг/мл) определяли с помощью qPCR с использованием стандартной кривой для вируса с известной концентрацией.

[00276] Инфицирование/трансдукция клеток и анализ посредством проточной цитометрии/люминесценции

[00277] В случае инфицирования клеток вирусные частицы добавляли непосредственно в среду клеток в культуре, и смесь инкубировали на протяжении ночи при 37°С. В случае трансдукции с помощью неочищенного лизата среду в каждой лунке заменяли через 24 часа и клетки инкубировали в течение 3-5 дней. Для оценки экспрессии GFP в день 3, 4 или 5 после инфицирования клетки трипсинизировали, ресуспендировали в PBS с 2% FBS, и процентное значение числа GFP+ клеток получали на проточном цитометре BD FACSCanto и анализировали с использованием программного обеспечения FlowJo. Для оценки экспрессии NanoLuc в день 2 или 3 после инфицирования клетки лизировали в 1х буфере для пассивного лизиса (Promega) и инкубировали с реагентом для люциферазного анализа Nano-Glo. Люминесценцию оценивали с использованием устройства для считывания планшетов SpectraMax.

[00278] Анализ нейтрализации в присутствии IgG

[00279] Вирусные частицы смешивали с возрастающими концентрациями очищенного человеческого IgG, приготовленного в PBS, и смесь вирусных частиц и IgG инкубировали при 37°С в течение 30 минут для обеспечения возможности связывания. Для инфицирования клеток вирусные частицы добавляли непосредственно в среду клеток в культуре, а смесь инкубировали при 37°С в течение 2 дней. В день 2 после инфицирования экспрессию Nanoluc измеряли с использованием люциферазного анализа Nanoglo (Promega) и данные в RLU получали на устройстве для считывания планшетов (PerkinElmer).

[00280] Вестерн-блоттинг анализ

[00281] Реакцию между белками VP1, VP2 и VP3 AAV с меткой SpyTag и антителами или scFv с меткой SpyCatcher контролировали с помощью вестерн-блоттинг анализа. Буфер для образцов Novex® Tris-глицин SDS с восстанавливающим средством добавляли к равным объемам неочищенных вирусных препаратов, и образцы нагревали до 85°С в течение 5 минут, затем охлаждали до комнатной температуры и загружали в предварительно подготовленный 4-12% Tris-глициновый гель (Invitrogen). Белки разделяли с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих условиях и подвергали блоттингу на PVDF с помощью влажного переноса. Мембраны блокировали с помощью 5% молока и вносили зонд, представляющий собой моноклональное мышиное антитело к B1 (ARP American Research Products, Inc.), при разведении 1:100 в TBST на протяжении ночи при 4°С. Блоты промывали в TBST, вносили зонд, представляющий собой антитело к антителу мыши, конъюгированное с HRP, и обнаруживали с использованием хемилюминесцентных реагентов для обнаружения на устройстве для визуализации Bio-Rad ChemiDoc MP.

[00282] Анализ окрашивания белков

[00283] Относительную экспрессию белков VP1, VP2 и VP3 AAV

отслеживали с помощью анализа окрашивания белков в гелях SDS-PAGE. Образцы AAV получали с использованием буфера для образцов LDS NuPAGE и восстанавливающего средства (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Образцы нагревали до 95°С в течение 10 минут, затем охлаждали до комнатной температуры и наносили на предварительно подготовленный 4-12% Bis-Tris гель NuPAGE (Invitrogen). После разделения белков гели фиксировали в 50% метаноле; 7% уксусной кислоте, окрашивали красителем для геля SYPRO Ruby (Invitrogen) и промывали в 10% метаноле; 7% уксусной кислоте. Фотографии геля получали на устройстве для визуализации Bio-Rad ChemiDoc MP.

[00284] Пример 1. Химерные частицы AAV животного, не являющегося приматом, можно получать и очищать с помощью аффинной хроматографии.

[00285] Каждый вирус получали, как описано выше, в одном 15 см планшете путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т с помощью следующих плазмид и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 8

pAAV-UbC-люцифераза светлячка - 4

плазмидная конструкция pRep Сар - 4

при этом плазмидная конструкция Rep Сар включает:

PRep2 Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV;

pRep2 Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва;

pRep2 Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса бородатой агамы.

[00286] Затем неочищенные вирусные препараты очищали с помощью аффинной хроматографии, и капсидные белки, присутствующие во вводимом материале, проточной (FT) и элюированной фракциях, оценивали с помощью вестерн-блоттинга (фиг.2). Капсидные белки от всех трех вирусов присутствовали материале, вводимом в хроматографическую колонку, снизились в проточной фракции и присутствовали в элюированной фракции, что позволяет предположить, что подход аффинной колоночной хроматографии, используемый для очистки капсидов, полученных из вирусов приматов, таких как AAV2, также может быть использован для очистки AAV животного, не являющегося приматом.

[00287] В каждом из следующих примеров плазмида pRep2 Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV, содержащая ген rep AAV2 и химерный ген cap, кодирующий химерный капсидный белок VP1, содержащий область VP1-u AAV2, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 AAAV, капсидный белок VP2 AAAV и капсидный белок VP3 AAAV, обозначена как «pAAV R2Cap AAV2/AAAV». Плазмида pRep2 Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва, содержащая ген rep AAV2 и химерный ген cap, кодирующий химерный капсидный белок VP1, содержащий область VP1-u AAV2, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 AAV морского льва, капсидный белок VP2 вируса морского льва и капсидный белок VP3 вируса морского льва, обозначена как «pAAV R2Cap AAV2/BHpyca морского льва». Плазмида pRep2 Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса бородатой агамы, содержащая ген rep AAV2 и химерный ген cap, кодирующий химерный капсидный белок VP1, содержащий область VP1-u AAV2, функционально связанную с общей областью VP1/VP2 AAV бородатой агамы, капсидный белок VP2 вируса бородатой агамы и капсидный белок VP3 вируса бородатой агамы, обозначена как «pAAV R2Cap AAV2/BHpyca бородатой агамы».

[00288] Пример 2. Пептидные вставки в область VP3 капсидов птичьего AAV вполне допустимы и могут опосредовать ковалентное прикрепление антител к вирусным частицам посредством Spy Catcher-SpyTag.

[00289] Потенциальные сайты пептидной вставки в пределах предполагаемой вариабельной петли IV и вариабельной петли VIII птичьего AAV предсказывали с использованием моделирования PyMol (фиг.3А), и выполняли клонирование соответствующих конструкций для вставки SpyTag. Каждый вирус получали, как описано выше, в одном 15 см планшете путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т с помощью следующих плазмид и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 16

pAAV-CAG-GFP - 8

pAAV R2CapX - 8

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/AAAV без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/AAAV G444 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/AAAV K580 линкер-6 SpyTag;

или

плазмид а-помощник pAd - 16

pAAV-CAG-GFP - 8

pAAV R2Cap AAV2/AAAV без SpyTag - 6,7

ВМЕСТЕ С

pAAV R2Cap AAV2/AAAV G444 линкер-6 SpyTag - 1,3

ИЛИ

pAAV R2Cap AAV2/AAAV K580 линкер-6 SpyTag - 1,3

[00290] Химерные частицы AAV2/AAAV без вставок SpyTag, а также химерные частицы AAV2/AAAV, несущие вставки SpyTag в различных положениях в пределах капсида, как указано выше, упаковывали с геномами AAV, содержащими ITR2. В попытке понять, могут ли химерные капсиды AAV2/AAAV успешно формироваться и упаковываться с геномами, содержащими ITR AAV2, проводили количественную ПЦР для измерения титра (числа геномов на миллилитр или вг/мл) химерных частиц AAV2/AAAV, несущих вставки SpyTag, по сравнению с химерными частицами AAV2/AAAV без вставок SpyTag (фиг.3В). Измеренные титры демонстрируют, что химерные частицы AAV2/AAAV могут быть упакованы с геномами ITR AAV2. Титр химерных частиц AAV2/AAAV был аналогичным у химерных частиц AAV2/AAAV без вставок SpyTag и химерных частиц AAV2/AAAV, несущих вставки SpyTag.

[00291] Следующим шагом инкубировали химерные частицы AAV2/AAAV без вставок SpyTag и химерные частицы AAV2/AAAV, несущие вставки SpyTag, в присутствии антитела, которое связывается с ASGR1, несущего метку SpyCatcher, или без него. Реакцию между химерными белками VP1, VP2 и VP3 AAV2/AAAV с меткой SpyTag и тяжелыми цепями антитела к ASGR1 с меткой SpyCatcher отслеживали с помощью вестерн-блоттинга; при этом капсидные белки с меткой SpyTag, которые прореагировали с антителом с меткой SpyCatcher, демонстрируют увеличение размера при анализе SDS-PAGE. В присутствии mAb к ASGR1 с меткой SpyCatcher химерные капсидные белки AAV2/AAAV с меткой SpyTag-проявляли увеличение видимого размера при вестерн-блоттинг анализе по сравнению с капсидными белками AAAV с меткой SpyTag-отдельно (фиг.3С). Это указывает на то, что химерные частицы AAV2/AAAV с меткой SpyTag-были способны успешно образовывать ковалентную связь с mAb к ASGR1 с меткой SpyCatcher.

[00292] Пример 3. Пептидные вставки в область VP3 капсидов AAV морского льва вполне допустимы и могут опосредовать ковалентное прикрепление антител к вирусным частицам посредством Spy Catcher-SpyTag.

[00293] Потенциальные сайты пептидной вставки в пределах предполагаемой вариабельной петли IV и вариабельной петли VIII AAV морского льва предсказывали с использованием моделирования PyMol (фиг.4А), и выполняли клонирование соответствующих конструкций для вставки SpyTag. Каждый вирус получали, как описано выше, путем трансфекции в одной 15 см чашке упаковывающих клеток 293Т с помощью следующих плазмид и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 8

pAAV-CAG-GFP - 4

pAAV R2CapX - 4

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва N429 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва P430 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва T431 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва S433 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва T434 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва R436 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва D437 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва A565 линкер-6 SpyTag;

или

плазмида-помощник pAd - 8

pAAV-CMV-GFP - 4

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва без SpyTag - 3,3

ВМЕСТЕ С

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag - 0,7

ИЛИ

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва А565 линкер-6 SpyTag - 0,7

[00294] Химерные частицы AAV2/AAV морского льва без вставок SpyTag, а также химерные частицы AAV2/AAV морского льва, несущие вставки SpyTag в различных положениях в пределах капсида, как указано выше, упаковывали с геномами AAV, содержащими ITR2. В попытке понять, могут ли химерные капсиды AAV2/AAV морского льва успешно формироваться и упаковываться с геномами, содержащими ITR AAV2, проводили количественную ПЦР для измерения титра (числа геномов на миллилитр или вг/мл) химерных частиц AAV2/AAV морского льва, несущих вставки SpyTag, по сравнению с химерными частицами AAV2/AAV морского льва без вставок SpyTag (фиг.4В, 5А). Измеренные титры демонстрируют, что химерные частицы AAV2/AAV морского льва без вставок SpyTag могут быть упакованы с геномами ITR AAV2. Титры были аналогичными у химерных частиц AAV2/AAV морского льва без SpyTag и химерных частиц AAV2/AAV морского льва, несущих вставку SpyTag в положениях N429, Р430, Т431, G432, S433, R436 и D437, но вставки SpyTag в положении Т434 или положении А565 не допускались у химерных частиц AAV2/AAV морского льва и приводили к низким титрам.

[00295] Следующим шагом инкубировали химерные частицы AAV2/AAV морского льва без SpyTag и химерные частицы AAV2/AAV морского льва, несущие вставки SpyTag, в присутствии антитела, которое связывается с HER2, несущего метку SpyCatcher, или без него. Реакцию между химерными белками VP1, VP2 и VP3 AAV2/AAV морского льва с меткой SpyTag и тяжелыми цепями антитела к HER2 с меткой SpyCatcher отслеживали с помощью вестерн-блоттинга; при этом капсидные белки с меткой SpyTag, которые прореагировали с антителом с меткой SpyCatcher, демонстрируют увеличение размера при анализе SDS-PAGE. В присутствии mAb к HER2 с меткой SpyCatcher все обнаруживаемые химерные капсидные белки AAV2/AAV морского льва с меткой SpyTag-проявляли увеличение видимого размера при вестерн-блоттинг анализе по сравнению с химерными капсидными белками AAV2/AAV морского льва с меткой SpyTag-отдельно (фиг.4С, 5В). Это указывает на то, что химерные частицы AAV2/AAV морского льва с меткой SpyTag способны успешно образовывать ковалентную связь с mAb к HER2 с меткой SpyCatcher. Химерные частицы AAV2/AAV морского льва с меткой SpyTag-c низкими измеренными титрами (вставки SpyTag в Т434 и А565) не демонстрировали обнаруживаемого белка при вестерн-блоттинг анализе (фиг.4С, 5В).

[00296] Пример 4. Пептидные вставки в область VP3 капсидов AAV бородатой агамы вполне допустимы и могут опосредовать ковалентное прикрепление антител к вирусным частицам посредством Spy Catcher-SpyTag.

[00297] Потенциальные сайты пептидной вставки в пределах предполагаемой вариабельной петли IV и вариабельной петли VIII птичьего AAV предсказывали с использованием моделирования PyMol (фиг.6А), и выполняли клонирование соответствующих конструкций для вставки SpyTag. Каждый вирус получали, как описано выше, путем трансфекции в одной 15 см чашке упаковывающих клеток 293Т с помощью следующих плазмид и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 8

pAAV-CMV-GFP - 4

pAAV R2CapX - 4

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/BHpyca бородатой агамы без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/BHpyca бородатой агамы G436 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/BHpyca бородатой агамы T573 линкер-6 SpyTag;

или

плазмида-помощник pAd - 8

pAAV-CMV-GFP - 4

pAAV R2Cap AAV2/вируса бородатой агамы без SpyTag - 3,3

ВМЕСТЕ С

pAAV R2Cap AAV2/вируса бородатой агамы G436 линкер-6 SpyTag - 0,7

ИЛИ

pAAV R2Cap AAV2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag - 0,7

[00298] Химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag, а также химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы, несущие вставки SpyTag в различных положениях в пределах капсида, как указано выше, упаковывали с геномами AAV, содержащими ITR2. В попытке понять, могут ли химерные капсиды AAV2/вируса бородатой агамы успешно формироваться и упаковываться с геномами, содержащими ITR AAV2, проводили количественную ПЦР для измерения титра (числа геномов на миллилитр или вг/мл) химерных частиц AAV2/AAV бородатой агамы, несущих вставки SpyTag, по сравнению с химерными частицами AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag (фиг.6В). Измеренные титры демонстрируют, что химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы могут быть упакованы с геномами ITR AAV2. Титр химерных частиц AAV2/AAV бородатой агамы, несущих вставки SpyTag, был меньше, чем у химерных частиц AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag.

[00299] Следующим шагом химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag и химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы, несущие вставки SpyTag, инкубировали в присутствии антитела, которое связывается с HER2, несущего метку SpyCatcher, или без него. Реакцию между химерными белками VP1, VP2 и VP3 AAV2/AAV бородатой агамы с меткой SpyTag и тяжелыми цепями антитела к HER2 с меткой SpyCatcher отслеживали с помощью вестерн-блоттинга; при этом капсидные белки с меткой SpyTag, которые прореагировали с антителом с меткой SpyCatcher, демонстрируют увеличение размера при анализе SDS-PAGE. В присутствии mAb к HER2 с меткой SpyCatcher химерные капсидные белки AAV2/AAV бородатой агамы с меткой SpyTag-проявляли увеличение видимого размера при вестерн-блоттинг анализе по сравнению с химерными капсидными белками AAV2/AAV бородатой агамы с меткой SpyTag-отдельно (фиг.6С). Это указывает на то, что химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы с меткой SpyTag способны успешно образовывать ковалентную связь с mAb к HER2 с меткой SpyCatcher.

[00300] Пример 5. Конъюгация антитела с пептидом, вставленным в капсид птичьего AAV по остатку G444 или К580, направляет антигенспецифическое нацеливание in vitro.

[00301] Каждый вирус получали, как описано выше, в одном 15 см планшете путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т с помощью следующих плазмид и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 16

pAAV-CAG-GFP - 8

pAAV R2CapX - 8

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/AAAV без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/AAAV G444 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/AAAV K580 линкер-6 SpyTag;

ВМЕСТЕ С ИЛИ БЕЗ

плазмида с тяжелой цепью Vh антитела, слитой со SpyCatcher - 1,5

плазмид а с легкой цепью Vk антитела - 3

[00302] Химерные частицы AAV2/птичьего AAV без SpyTag, а также химерные частицы AAV2/птичьего AAV, несущие вставки SpyTag в различных положениях в пределах капсида, как указано выше, получали в присутствии или в отсутствие тяжелой и легкой цепей антитела, кодирующих одно из SpyCatcher-антитело к GLP1R, антитела, которое связывает GLP1R и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи, SpyCatcher-герцептин, антитела, которое связывает HER2 и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи, или SpyCatcher-антитело к ASGR1, антитела, которое связывает ASGR1 и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи. Клетки, инфицированные вирусными частицами, описанными выше, оценивали с помощью проточной цитометрии для отслеживания трансдукции. Химерные AAV2/AAAV, конъюгированные с нацеливающимся на HER2 антителом, специфически инфицировали HER2+ клетки (фиг.7А), а химерные AAV2/AAAV, конъюгированные с контрольным ненацеливающимся антителом к GLP1R, проявляли незначительное фоновое инфицирование любых типов клеток (фиг.7А, 7В). Химерные AAV2/AAAV, конъюгированные с нацеливающимся на ASGR1 антителом, специфически инфицировали ASGR1+ клетки и проявляли незначительное фоновое инфицирование ASGR1- клеток (фиг.7В).

[00303] Пример 6. Конъюгация антитела с пептидом, вставленным в капсид AAV морского льва по остатку G432, направляет антигенспецифическое нацеливание in vitro.

[00304] Каждый вирус получали, как описано выше, путем трансфекции в одной 15 см чашке упаковывающих клеток 293Т с помощью следующих плазмид и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 16

pAAV-CAG-GFP - 8

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва без SpyTag - 8

или

плазмида-помощник pAd 16

pAAV-CAG-GFP - 8

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва без SpyTag - 4

ВМЕСТЕ С

pAAV R2CapX - 4

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва N429 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap ААЛ/2/вируса морского льва Р430 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва Т431 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap ААЛ/2/вируса морского льва S433 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва R436 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва D437 линкер-6 SpyTag;

ВМЕСТЕ С ИЛИ БЕЗ

плазмиды с тяжелой цепью V_H антитела, слитой со SpyCatcher - 1,5

плазмиды с легкой цепью Vk антитела - 3

[00305] Химерные частицы AAV2/AAV морского льва без SpyTag, а также химерные частицы AAV2/AAV морского льва, несущие вставку SpyTag в положении G432 в пределах капсида, как указано выше, получали в присутствии или в отсутствие тяжелой и легкой цепей антитела, кодирующих одно из SpyCatcher-антитело к GLP1R, антитела, которое связывает GLP1R и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи, SpyCatcher-герцептин, антитела, которое связывает HER2 и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи, или SpyCatcher-антитело к ASGR1, антитела, которое связывает ASGR1 и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи. Клетки, инфицированные вирусными частицами, описанными выше, оценивали с помощью проточной цитометрии для отслеживания трансдукции. Химерные AAV2/AAV морского льва, несущие SpyTag в G432 и конъюгированные с нацеливающимся на HER2 антителом, специфически инфицировали HER2+ клетки и проявляли незначительное фоновое инфицирование HER2- клеток (фиг.8А), тогда как химерные AAV2/AAAV, конъюгированные с контрольным ненацеливающимся антителом к GLP1R, демонстрировали незначительное фоновое инфицирование любых типов клеток (фиг.8А, 8В). Химерные AAV2/AAV морского льва, несущие SpyTag в G432 и конъюгированные с нацеливающимся на ASGR1 антителом, специфически инфицировали ASGR1+ клетки и демонстрировали незначительное фоновое инфицирование ASGR1- клеток (фиг.8В).

[00306] Химерные частицы AAV2/AAV морского льва без SpyTag, а также панель химерных частиц AAV2/AAV морского льва, несущих вставки SpyTag в различных положениях в пределах предсказанной вариабельной петли 4 капсида, как указано выше, получали в присутствии или в отсутствие тяжелой и легкой цепей антитела, кодирующих SpyCatcher-герцептин, антитело, которое связывает HER2 и которое слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи. Клетки, инфицированные вирусными частицами, описанными выше, оценивали с помощью проточной цитометрии для отслеживания трансдукции. Химерные частицы AAV2/AAV морского льва, несущие вставки SpyTag в нескольких различных положениях в пределах капсида и конъюгированные с нацеливающимся на HER2 антителом, специфически инфицировали HER2+клетки, а химерные частицы AAV2/AAV морского льва без SpyTag демонстрировали незначительное фоновое инфицирование HER2+ клеток (фиг.9). Это свидетельствует о том, что в пределах химерного капсида AAV2/AAV морского льва несколько сайтов поддаются вставке SpyTag и перенацеливанию с использованием подхода с антителом, слитым со SpyCatcher.

[00307] Пример 7. Конъюгация антитела с пептидом, вставленным в капсид AAV бородатой агамы по остатку G436 или Т573, направляет антигенспецифическое нацеливание in vitro.

[00308] Каждый вирус получали, как описано выше, путем трансфекции в одной 15 см чашке упаковывающих клеток 293Т с помощью следующих плазмид и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 8

pAAV-CMV-GFP - 4

pAAV R2CapX - 4

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV/2/вируса бородатой агамы без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/вируса бородатой агамы G436 линкер-6 SpyTag;

pAAV R2Cap AAV/2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag;

или

плазмида-помощник pAd - 8

pAAV-CMV-GFP - 4

pAAV R2Cap AAV2/вируса бородатой агамы без SpyTag - 3,4

ВМЕСТЕ С

pAAV R2Cap AAV2/вируса бородатой агамы G436 линкер-6 SpyTag - 0,6

ИЛИ

pAAV R2Cap AAV2/вируса бородатой агамы Т573 линкер-6 SpyTag - 0,6

ВМЕСТЕ С ИЛИ БЕЗ

плазмиды с тяжелой цепью Vh антитела, слитой со SpyCatcher - 1,5

плазмиды с легкой цепью Vk антитела - 3

[00309] Химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы без SpyTag, а также химерные частицы AAV2/AAV бородатой агамы, несущие вставки SpyTag в различных положениях в пределах капсида, как указано выше, получали в присутствии или в отсутствие тяжелой и легкой цепей антитела, кодирующих одно из SpyCatcher-герцептин, антитела, которое связывает HER2 и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи, или SpyCatcher-антитело к ASGR1, антитела, которое связывает ASGR1 и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи. Клетки, инфицированные вирусными частицами, описанными выше, оценивали с помощью проточной цитометрии для отслеживания трансдукции. Химерные AAV2/AAV бородатой агамы, конъюгированные с нацеливающимся на HER2 антителом, инфицировали HER2+ клетки (фиг.10А). Химерные AAV2/AAV бородатой агамы, конъюгированные с нацеливающимся на ASGR1 антителом, специфически инфицировали ASGR1+ клетки и проявляли незначительное фоновое инфицирование ASGR1- клеток (фиг.10В)

[00310] Пример 8. Птичий AAV и AAV морского льва, конъюгированные с антителами, могут инфицировать клетки в присутствии более высоких уровней очищенных иммуноглобулинов человека, чем AAV2.

[00311] Чтобы исследовать чувствительность химерных частиц AAV2/AAAV и химерных частиц AAV2/AAV морского льва к нейтрализации под действием антител, находящихся в сыворотке крови человека, проводили анализ нейтрализации, в котором частицы AAV инкубировали с возрастающими количествами IgG (hIgG), полученными из объединенных образцов сыворотки крови от десятков до тысяч доноров-людей, и представляющих профиль иммуноглобулинов в человеческой популяции.

[00312] Каждый вирус получали, как описано выше, в 15 см планшетах путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т следующими плазмидами и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 16

pAAV-CMV-Nanoluc - 8

р-антитело к hASGRl SpyCatcher Vh - 3

р-антитело к hASGRl Vk - 6

ВМЕСТЕ С ОДНИМ ИЗ:

pAAV R2C2 N587 МУС - 7,5

pAAV R2C2 G453 линкер-10 SpyTag - 0,5

ИЛИ:

pAAV R2Cap AAV2/AAAV без SpyTag - 5

pAAV R2Cap AAV2/AAAV К580 линкер-6 SpyTag - 3

ИЛИ:

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва без SpyTag - 5

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва G432 линкер-10 SpyTag - 3

[00313] Мозаичные AAV2, мозаичные химерные частицы AAV2/AAAV, несущие вставки SpyTag в пределах капсида, и мозаичные химерные частицы AAV2/AAV морского льва, несущие вставки SpyTag в пределах капсида, как указано выше, получали в присутствии тяжелой и легкой цепей антитела, кодирующих SpyCatcher-антитело к ASGR1, антитело, которое связывает hASGR1 и слито со SpyCatcher на С-конце тяжелой цепи. Затем частицы инкубировали в присутствии возрастающих концентраций hIgG в течение 30 минут при 37°С, после чего смесь вирусных частиц и hlgG добавляли к клеткам, экспрессирующим hASGR1. Клетки, инфицированные вирусными частицами, описанными выше, оценивали с помощью люциферазного анализа Nanoglo для контроля трансдукции.

[003I4] На фиг.11А показана исходные данные по активности люциферазы Nanoluc в ASGR1+клетках, инфицированных указанными вирусными частицами, в присутствии указанных концентраций hlgG. В сравнении с мозаичными частицами AAV2, конъюгированными с антителами к ASGR1, большее количество hlgG требуется для подавления инфицирования мозаичными химерными частицами AAV2/AAAV, конъюгированными с антителами к ASGR1, и еще большее количество hlgG требуется для подавления инфицирования мозаичными химерными частицами AAV2/AAV морского льва, конъюгированными с антителами к ASGR1. На фиг.11В показаны данные люциферазного анализа Nanoluc из фиг.11А, нормализованные по условию «только PBS» (без hIgG) для каждого серотипа AAV, чтобы напрямую сравнить три серотипа AAV друг с другом. Более высокие концентрации hlgG требуются для снижения экспрессии люциферазы Nanoluc как в случае мозаичных химерных частиц AAV2/AAAV, конъюгированных с антителами к ASGR1, так и в случае мозаичных химерных частиц AAV2/AAV морского льва, конъюгированных с антителами к ASGR1. Концентрация hIgG в расчете на лунку, которая требуется для подавления инфицирования на 50% (значения IC50) для двух независимых экспериментов, показана на фиг.11С. Значения IC50 hIgG для мозаичных химерных частиц AAV2/AAAV, конъюгированных с антителами к ASGR1, и значения IC50 hIgG для мозаичных химерных частиц AAV2/AAV морского льва, конъюгированных с антителами к ASGR1, намного выше, чем значения IC50 hIgG для мозаичных частиц AAV2, конъюгированных с антителами к ASGR1. В частности, на мозаичные химерные частицы AAV2/AAV морского льва, по-видимому, не действуют человеческие антитела при все испытанных концентрациях hIgG, кроме самых высоких.

[003I5] Пример 9. Птичий AAV может быть перенацелен на ASGR1 in vivo.

[00316] Чтобы определить, можно ли перенацеливать вирусные частицы, конъюгированные с антителами, специфичными к ASGR1, на клетки печени, экспрессирующие hASGRl in vivo, мышам, подвергнутым генетической модификации, так что их клетки печени экспрессируют hASGR1 на генетическом фоне C57BL/6, внутривенно вводили мозаичные химерные вирусные частицы AAV2/AAAV, несущие репортерный ген люциферазы светлячка и конъюгированные посредством SpyCatcher-SpyTag с одним из антитела, специфичного к hASGR1, или контрольного антитела, нацеливающегося на GLP1R человека. Мышь, которой вводили фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), служила в качестве дополнительного контроля.

[00317] Каждый вирус получали, как описано выше, в 15 см планшетах путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т следующими плазмидами и при следующих количествах, мкг:

Птичий AAV, антитело к GLP1R человека/антитело к ASGR1 человека, люцифераза

плазмида-помощник pAd - 16

pAAV-UbC- люцефераза светлячка - 8

pAAV R2Cap AAV2/AAAV без SpyTag - 5

pAAV R2Cap AAV2/AAAV K580 линкер-6 SpyTag - 3

ВМЕСТЕ С или БЕЗ

р-антитело к hGLP1R или антитело к hASGRl SpyCatcher Vh - 2,5

р-антитело к hGLP1R или антитело к hASGRl Vk - 5

[00318] На фиг.12 показана люминесценция животных через 33 дня после инъекции либо PBS, либо описанных выше мозаичных химерных вирусных частиц AAV2/AAAV, конъюгированных с антителами, нацеливающимися на hASGR1 или hGLP1R в качестве ненацеливающегося контроля. Живых животных подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и визуализировали через 10 минут с применением системы для визуализации in vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer). На фиг.12A показано, что инфицирование с помощью комплексов мозаичного химерного AAV2/AAAV- SpyTag- SpyCatcher-Vh обнаруживали только в печени мышей, экспрессирующих hASGRl, которым вводили перенацеленный на hASGRl мозаичный химерный AAV2/AAAV, и не обнаруживалось в печени мышей, экспрессирующих hASGR1, которым вводили PBS или контрольные ненацеливающийся перенацеленный на hGLP1R мозаичный химерный AAV2/AAAV. Средняя интенсивность излучения сигнала люциферазы светлячка, которую обнаруживали у живых мышей с использованием системы для визуализации in vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer), количественно определена на фиг.12В, а средняя интенсивность излучения отдельных органов, которые визуализировали ex-vivo после иссечения из инфицированных мышей, количественно определена на фиг.12С. На данных фигурах продемонстрировано, что мозаичный химерный AAV2/AAAV специфически трансдуцирует печень мышей, экспрессирующих hASGR1, только при конъюгировании с hASGR1-специфическим антителом.

[00319] Пример 10. AAV морского льва трансдуцирует печень и легкие мышей in vivo.

[00320] Чтобы определить, можно ли перенацеливать вирусные частицы, конъюгированные с антителами, специфичными к ASGR1, на клетки печени, экспрессирующие hASGR1 in vivo, мышам, подвергнутым генетической модификации, так что их клетки печени экспрессируют hASGR1 на генетическом фоне C57BL/6, внутривенно вводили мозаичные химерные вирусные частицы AAV2/AAV морского льва, несущие репортерный ген люциферазы светлячка и конъюгированные посредством SpyCatcher-SpyTag с одним из антитела, специфичного к hASGR1, или контрольного антитела, нацеливающегося на GLP1R человека. Мышь, которой вводили фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), служила в качестве дополнительного контроля.

[00321] Каждый вирус получали, как описано выше, в 15 см планшетах путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т следующими плазмидами и при следующих количествах, мкг:

AAV морского льва, антитело к GLP1R человека/антитело к ASGR1 человека, люцифераза

плазмида-помощник pAd - 16

pAAV-UbC- люцефераза светлячка - 8

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва без SpyTag - 5

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва G432 линкер-10 SpyTag - 3

ВМЕСТЕ С или БЕЗ

р-антитело к hGLP1R или антитело к hASGRl SpyCatcher Vh - 2,5

р-антитело к hGLP1R или антитело к hASGR1 Vk - 5

[00322] На фиг.13 показана люминесценция животных через 33 дня после инъекции либо PBS, либо описанных выше мозаичных химерных вирусных частиц AAV2/AAV морского льва, конъюгированных с антителами, нацеливающимися на hASGR1 или hGLP1R в качестве ненацеливающегося контроля. Живых животных подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и визуализировали через 10 минут с применением системы для визуализации in vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer). На фиг.13A показано, что инфицирование комплексами мозаичного химерного AAV2/AAV морского льва-SpyTag-SpyCatcher-Vh обнаруживалось у мышей, экспрессирующих hASGR1, которым вводили как перенацеленный на hASGR1 химерный AAV2/AAV морского льва, так и контрольный ненацеливающийся перенацеленный на hGLPIR мозаичный химерный AAV2/AAV морского льва. Это свидетельствует о том, что химерный AAV2/AAV морского льва способен естественным образом трансдуцировать печень и другие органы мыши без помощи перенацеливающего антитела. Средняя интенсивность излучения сигнала люциферазы светлячка, которую обнаруживали у живых мышей с использованием системы для визуализации in vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer), количественно определена на фиг.13В, а средняя интенсивность излучения отдельных органов, которые визуализировали ex-vivo после иссечения из инфицированных мышей, количественно определена на фиг.13С. На данных фигурах продемонстрировано, что мозаичный химерный AAV2/AAV морского льва трансдуцирует печень и легкие мышей, экспрессирующих hASGR1, при конъюгировании с hASGR1-специфическим антителом или ненацеливающимся контрольным антителом, специфическим в отношении hGLP1R.

[00323] Пример 11. Химерный AAV2/AAV морского льва проявляет некоторую степень естественного тропизма во внутреннее ухо мыши.

[00324] Каждый вирус получали, как описано выше, в 15 см планшетах путем трансфекции упаковывающих клеток 293Т следующими плазмидами и при следующих количествах, мкг:

плазмида-помощник pAd - 16

pAAV-CAG-GFP - 8

pAAV R2Cap AAV2/вируса морского льва без SpyTag - 8

[00325] Чтобы определить, обладает ли химерный AAV2/AAV морского льва естественным тропизмом в отношении определенных тканей у мыши, кортиев орган иссекали у новорожденной мыши, культивировали ex vivo, затем вирусные частицы AAV2/AAV морского льва применяли для инфицирования культуры. Через три дня после инфицирования волосковые клетки улитки окрашивали в красный цвет с помощью Муо7а, а вирус экспрессировал GFP в качестве маркера трансдукции. Наблюдали устойчивую трансдукцию нескольких типов клеток (фиг.14), что свидетельствуем о том, что химерные частицы AAV2/AAV морского льва способны естественным образом трансдуцировать внутреннее ухо.

[00326] Пример 12. Частичная или полная замена эпитопа В1 химерных капсидов AAV2/AAV морского льва на гомологичную последовательность из AAV морского льва вполне допустима и повышает эффективность трансдукции.

[00327] В пределах эпитопа В1 химерных молекул AAV2/вируса морского льва вносили модификации (фиг.15А) и последовательность эпитопа В1 заменили в Y730 или от 1705 по Н712 на гомологичную последовательность капсида вируса морского льва. Каждый вирус получали, как описано выше, в пяти, десяти или двенадцати 15-см планшетах путем трансфекции упаковывающих клеток НЕК 293Т следующими плазмидами и при следующих количествах из расчета на планшет, мкг:

плазмида-помощник pAd - 12

pAAV-CMV-X - 6

при этом конструкция pAAV-CMV-X включает:

pAAV-CMV- люцифераза NanoLuc;

pAAV-CMV- люцифераза светлячка;

pAAV R2CapX - 10

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag/Y730F;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag/без В1.

[00328] Химерные частицы AAV2/AAV морского льва без вставок SpyTag и содержащие модификацию последовательности эпитопа В1 в пределах капсида, как указано выше, упаковывали с геномами AAV, содержащими ITR2. В попытке понять, могут ли химерные капсиды AAV2/вируса морского льва с модифицированными эпитопами В1 успешно формироваться и упаковываться с геномами, содержащими ITR AAV2, проводили количественную ПЦР для измерения титра (числа векторных геномов на миллилитр или вг/мл) химерных частиц AAV2/AAV морского льва с эпитопом В1 по сравнению с химерными частицами AAV2/AAV морского льва без модификаций эпитопа В1 (фиг.15В). Измеренные титры демонстрируют, что химерные частицы AAV2/AAV морского льва с модификациями эпитопа В1 могут быть упакованы с геномами ITR AAV2. Титр химерных частиц AAV2/вируса морского льва был аналогичным у химерными частицами AAV2/вируса морского льва с модификациями эпитопа В1 или без них.

[00329] Присутствие VP1, VP2 и VP3, собранных в химерные частицы AAV2/AAV морского льва с модифицированными эпитопами В1 отслеживали с помощью SDS-PAGE и окрашивания белков. Результаты показали, что доля экспрессии VP1 относительно VP2 и VP3 была большей в случае вирусных частиц AAV2/AAV морского льва, в которых эпитоп В1 был полностью заменен на гомологичную последовательность капсида AAV морского льва, чем в случае вирусных частиц AAV2/AAV морского льва с эпитопом В1 или мутацией Y730F в эпитопе В1 (фиг.15С). Данное наблюдение коррелировало с увеличением эффективности трансдукции клеток HEK 293Т, как определено по активности люциферазы NanoLuc (фиг.15D).

[00330] Чтобы определить, воспроизводится ли увеличение эффективности трансдукции у частиц AAV2/AAV морского льва с полной заменой эпитопа В1 на последовательность AAV морского льва in vivo, мышам C57BL/6 внутривенно вводили химерные частицы AAV2/вируса морского льва, несущие репортерный ген люциферазы светлячка. Мышь, которой вводили фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), служила в качестве дополнительного контроля.

[00331] На фиг.16 показаны данные люминесценции животных через 34 дня после инъекции либо PBS, либо химерных вирусных частиц AAV/2/вируса морского льва, как описано выше. Живых животных подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и визуализировали через 10 минут с применением системы для визуализации in vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer). Подсчитывали среднюю интенсивность излучения отдельных органов, подвергнутых визуализации ex vivo после иссечения из инфицированных мышей. На фигуре показано, что химерные AAV2/AAV морского льва трансдуцируют печень и легкие. AAV2/AAV морского льва, содержащие модификации эпитопа В1, при которых он полностью заменен на гомологичную последовательность капсида AAV морского льва, обладали увеличенным тропизмом к сердцу и немного усиленной трансдукцией в печень и легкие.

[00332] Пример 13. Корректировка химерной границы раздела между последовательностями капсидов AAV2 и AAV морского льва или применение последовательностей капсида, полностью состоящих из последовательностей капсида AAV морского льва, вполне допускаются.

[00333] Выполняли модификации для корректировки химерной границы раздела между последовательностями капсидов AAV2 и вируса морского льва для создания транскриптов, в которых уникальные последовательности VP1 и VP2 получены либо из AAV2, либо из AAV морского льва, либо из их комбинации (фиг.17). Каждый вирус получали, как описано выше, в пяти, десяти или двенадцати 15-см планшетах путем трансфекции упаковывающих клеток HEK 293Т следующими плазмидами и при следующих количествах из расчета на планшет, мкг:

плазмида-помощник pAd - 12

pAAV-CMV-люцифераза NanoLuc - 6

pAAV R2CapX - 10

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag v2.

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag v3;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag v4;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag v5.

[00334] Химерные частицы AAV2/AAV морского льва с альтернативными

границами раздела между химерными последовательностями капсидов AAV2 и AAV морского льва, как указано выше, упаковывали с геномами AAV, содержащими ITR2. В попытке понять, могут ли данные альтернативные химерные капсиды AAV2/вируса морского льва успешно формироваться и упаковываться с геномами, содержащими ITR AAV2, проводили количественную ПЦР для измерения титра (числа векторных геномов на миллилитр или вг/мл) вирусных частиц, очищенных либо из лизата, либо из супернатанта (фиг.18А). Измеренные титры демонстрируют, что химерные частицы AAV2/AAV морского льва с альтернативными химерными границами раздела могут быть упакованы с геномами ITR AAV2. Титр химерных частиц AAV2/AAV морского льва у химерных частиц AAV/2/вируса морского льва, очищенных из лизата, был аналогичным, за исключением v3. Титр частиц AAV2/AAV вируса морского льва без SpyTag v5, очищенных из среды, был несколько выше, чем титр частиц, очищенных из лизата. Эффективность трансдукции клеток HEK 293Т, определенная с помощью активности люциферазы NanoLuc, для химерных частиц AAV2/AAV морского льва была сопоставима у частиц с альтернативными местоположениями границы раздела (фиг.18В и 18С).

[00335] Последовательность эпитопа В1 модифицировали с включением полностью гомологичной последовательности капсида вируса морского льва в химерных молекулах AAV2/вируса морского льва с альтернативными сайтами границы раздела, чтобы определить, будут ли модификации В1 аналогичным образом усиливать трансдукцию, как в случае AAV2/AAV морского льва без SpyTag. Каждый вирус получали, как описано выше, в пяти, десяти или двенадцати 15-см планшетах путем трансфекции упаковывающих клеток HEK 293Т следующими плазмидами и при следующих количествах из расчета на планшет, мкг:

плазмида-помощник pAd - 12

pAAV-CMV-люцифераза светлячка - 6

pAAV R2CapX - 10

при этом конструкция pAAV R2CapX включает:

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag/без B1 v2.

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag/без B1 v3;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag/без B1 v4;

pAAV R2Cap AAV2/AAV морского льва без SpyTag/без B1 v5.

[00336] Чтобы определить, приводит ли увеличение эффективности трансдукции у альтернативных химерных частиц AAV2/AAV морского льва с полной заменой эпитопа В1 на последовательность AAV морского льва к усиленной трансдукции in vivo, мышам C57BL/6 внутривенно вводили химерные частицы AAV2/вируса морского льва, несущие репортерный ген люциферазы светлячка. Мышь, которой вводили фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), служила в качестве дополнительного контроля.

[00337] На фиг.18D показаны данные люминесценции животных через 46 дней после инъекции либо PBS, либо химерных вирусных частиц AAV2/вируса морского льва, описанных выше. Живых животных подвергали анестезии с использованием изофлурана, вводили инъекцией субстрат люциферин и визуализировали через 10 минут с применением системы для визуализации in vivo IVIS Spectrum (PerkinElmer). Подсчитывали интенсивность излучения отдельных органов, подвергнутых визуализации ex vivo после иссечения из инфицированных мышей. На фигуре показано, что химерные AAV2/AAV морского льва трансдуцируют печень, легкие и сердце. Способность AAV2/AAV морского льва без SpyTag/без B1 v5 (SEQ ID NO:71) трансдуцировать ткани указывает на то, что при добавлении к химерным частицам капсидов AAV2/AAV морского льва частица капсида AAV, полностью состоящая из капсида вируса морского льва (нехимерные капсидные белки), может функционировать в качестве вектора для переноса генов.

[00338] Хотя настоящее изобретение было конкретно показано и описано со ссылкой на ряд вариантов осуществления, специалистам в данной области техники должно быть понятно, что изменения в форме и деталях могут быть внесены в различные варианты осуществления, раскрытые в данном документе, без отступления от сущности и объема настоящего изобретения и что различные варианты осуществления, раскрытые в данном документе, не предназначены для ограничения объема формулы изобретения. Хотя при практическом осуществлении или тестировании настоящего изобретения можно применять любые способы и материалы, аналогичные описанным в данном документе или эквивалентные им, в данном документе описаны лишь некоторые предпочтительные способы и материалы. Все публикации, упомянутые в данном документе, включены в данный документ в полном объеме посредством ссылки. Если не указано иное, то все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, как его обычно понимает специалист средней квалификации в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> РЕДЖЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛС, ИНК.

САБИН, ЛЕА

КИРАЦУС, ХРИСТОС

МОЛЛЕР-ТЕНК, СВЕН

<120> Модифицированные вирусные частицы и пути их применения

<130> 10364WO01

<150> 62/852791

<151> 2019-05-24

<160> 73

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 2190

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV

<400> 1

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggccggg 420

accggggaga agcgtcccga acgcgtcgac gactttttcc cgaaaaagaa gaaggccaag 480

accgagcaag gcaaagcccc tgctcaaacg ggcgaagacc ccggagaagg aacctcttcc 540

aacgctggat caagcgcccc ctctagtgtg ggatcatctg tcatggctga aggaggtggc 600

ggtccaatgg gcgatgcagg ccaaggtgcc gacggagtgg gcaattcctc gggaaattgg 660

cattgcgatt cccaatggct ggacaacgga gtcgttaccc gaaccactcg aacctgggtc 720

ctgcccagct acaacaacca cttgtacaag cggatccaag gaccgggagg aaccgacccc 780

aacaataaat tctttggatt cagcaccccc tgggggtact ttgactacaa ccgattccac 840

tgccacttct ccccccgaga ctggcaacga ctcatcaaca acaactgggg catccgaccc 900

aaagcgatgc gctttagact ctttaacatc caggttaaag aagtcactgt ccaagactcc 960

aacaccacca tcgccaacaa cctcaccagc acggtccaag tctttgcgga caaggactac 1020

cagctgccgt acgtcctcgg atcggctaca gagggcacct tcccgccgtt cccagcggat 1080

atctacacga tcccgcagta tggttactgc acgctaaact acaacaacga ggcggtggat 1140

cgttcggcct tctactgtct agactatttc ccctcagaca tgctgcggac aggaaataac 1200

tttgaattca cttacacgtt cgaggacgtt cctttccata gcatgtttgc tcacaaccag 1260

acgctagacc ggctgatgaa tcctctcgtc gatcagtacc tgtgggcttt cagttccgtc 1320

agccaaacag gctcgtctgg acgggcactc aattattcac gcgcgaccaa aaccaatatg 1380

gcaacccagt acagaaactg gttacctgga cccttcgtcc gggatcagca aatctttacg 1440

ggggctagca acatcaccca aaacaacgtg ttcaacgttt gggataaagg caagcagtgg 1500

gtgatagaca atcggatcaa tatgatgcag cccggccctg cagcagcgac cacctttagc 1560

ggagaacccg accgtcaagc catgcaaaac acgctggcct ttagtcggac ggtctacgac 1620

cagacaacca gtacgaccga tcgtaaccag ttgctcatta ccaacgaaga tgaaatcaga 1680

cccaccaact cggtcggcat cgacacgtgg ggagtagttc ccaacaacaa ccagtccaag 1740

gtgaccgccg gcactcgcgc ggccatcaac aaccaagggg cgcttcccgg gatggtgtgg 1800

caaaacagag acatttacct ccaaggaccc atttgggcca aaatccccga cacagacaat 1860

cacttccatc cgtccccgct tattggcggg tttggctgca agcatccccc tccccagatt 1920

ttcattaaaa acacacccgt cccggccaac ccttcggaaa cgttccagac ggccaaggtg 1980

gcctccttca tcaaccagta ctcgaccgga cagtgcaccg tcgaaatctt ttgggaactc 2040

aagaaggaaa cctccaagcg ctggaacccc gaaatccagt tcacctccaa ctttggcaac 2100

gcggccgaca tccagtttgc tgtctccgac accggatcct attccgaacc tcgtcccatt 2160

ggcaccagat acctgactcg tcctctgtaa 2190

<210> 2

<211> 729

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV

<400> 2

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Gly Thr Gly Glu Lys

130 135 140

Arg Pro Glu Arg Val Asp Asp Phe Phe Pro Lys Lys Lys Lys Ala Lys

145 150 155 160

Thr Glu Gln Gly Lys Ala Pro Ala Gln Thr Gly Glu Asp Pro Gly Glu

165 170 175

Gly Thr Ser Ser Asn Ala Gly Ser Ser Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser

180 185 190

Ser Val Met Ala Glu Gly Gly Gly Gly Pro Met Gly Asp Ala Gly Gln

195 200 205

Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser

210 215 220

Gln Trp Leu Asp Asn Gly Val Val Thr Arg Thr Thr Arg Thr Trp Val

225 230 235 240

Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Ile Gln Gly Pro Gly

245 250 255

Gly Thr Asp Pro Asn Asn Lys Phe Phe Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly

260 265 270

Tyr Phe Asp Tyr Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp

275 280 285

Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Ala Met Arg

290 295 300

Phe Arg Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Val Gln Asp Ser

305 310 315 320

Asn Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ala

325 330 335

Asp Lys Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Thr Glu Gly

340 345 350

Thr Phe Pro Pro Phe Pro Ala Asp Ile Tyr Thr Ile Pro Gln Tyr Gly

355 360 365

Tyr Cys Thr Leu Asn Tyr Asn Asn Glu Ala Val Asp Arg Ser Ala Phe

370 375 380

Tyr Cys Leu Asp Tyr Phe Pro Ser Asp Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

385 390 395 400

Phe Glu Phe Thr Tyr Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Met Phe

405 410 415

Ala His Asn Gln Thr Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Val Asp Gln

420 425 430

Tyr Leu Trp Ala Phe Ser Ser Val Ser Gln Thr Gly Ser Ser Gly Arg

435 440 445

Ala Leu Asn Tyr Ser Arg Ala Thr Lys Thr Asn Met Ala Thr Gln Tyr

450 455 460

Arg Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Val Arg Asp Gln Gln Ile Phe Thr

465 470 475 480

Gly Ala Ser Asn Ile Thr Gln Asn Asn Val Phe Asn Val Trp Asp Lys

485 490 495

Gly Lys Gln Trp Val Ile Asp Asn Arg Ile Asn Met Met Gln Pro Gly

500 505 510

Pro Ala Ala Ala Thr Thr Phe Ser Gly Glu Pro Asp Arg Gln Ala Met

515 520 525

Gln Asn Thr Leu Ala Phe Ser Arg Thr Val Tyr Asp Gln Thr Thr Ser

530 535 540

Thr Thr Asp Arg Asn Gln Leu Leu Ile Thr Asn Glu Asp Glu Ile Arg

545 550 555 560

Pro Thr Asn Ser Val Gly Ile Asp Thr Trp Gly Val Val Pro Asn Asn

565 570 575

Asn Gln Ser Lys Val Thr Ala Gly Thr Arg Ala Ala Ile Asn Asn Gln

580 585 590

Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg Asp Ile Tyr Leu Gln

595 600 605

Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro Asp Thr Asp Asn His Phe His Pro

610 615 620

Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Cys Lys His Pro Pro Pro Gln Ile

625 630 635 640

Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Ser Glu Thr Phe Gln

645 650 655

Thr Ala Lys Val Ala Ser Phe Ile Asn Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Cys

660 665 670

Thr Val Glu Ile Phe Trp Glu Leu Lys Lys Glu Thr Ser Lys Arg Trp

675 680 685

Asn Pro Glu Ile Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Asn Ala Ala Asp Ile

690 695 700

Gln Phe Ala Val Ser Asp Thr Gly Ser Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile

705 710 715 720

Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725

<210> 3

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва

<400> 3

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tgattggcac cagatacctg actcgtatac tataa 2145

<210> 4

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва

<400> 4

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ile Leu

705 710

<210> 5

<211> 2187

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 агамы

<400> 5

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggccgaa 420

aagcgaaaga cacccgaaga gtggttagct caagaaaaga ctccaaccaa acaaaggttc 480

cagataccag ctccaggaca atctggatca gattctcctt ccacctcagg atccggcggt 540

actgcaggct ccagttctag cgcatcaaat acaatggctc aaggaggtgg cggaccaatg 600

gcagacgata accaaggcgc cgagggagtg ggtaatgcct cgggagattg gcattgcgat 660

acccaatggc tgggcgacca cgtcattaca aaatctacca gaacttgggt tctgccctct 720

tacgggaatc atctctactc gcccatcaac tttgatggaa ccacagggaa cggaacccaa 780

gccgcttact gcggatacgc taccccctgg gcctactttg actttaaccg attccactgc 840

cacttttccc cccgagactg gcaaagactc attaacaacc ataccggaat acgaccagtc 900

ggactcaaat tcaagctgtt caacatccag gtcaaggaaa tcacagtaca agattcgacc 960

aaaacgatcg ccaacaatct caccagcacc gtacaggtct ttgcggacac ggagcaccag 1020

ctcccgtacg tattaggaaa tgccacgcag ggcacgtttc ctccctttcc ggctgaagtc 1080

tttcagttgc ctcagtacgg ctactgtacc atccaaggcc ctcagggtaa gtttaccgac 1140

agaagtgcct tctactgctt ggagtacttt ccttccaaga tgctgagaac ggggaataac 1200

tttgaattta cttacaagtt cgagaaggtt cccttccatt ctggctgggc tcaaagccag 1260

tcgttggatc gattgatgaa tcccttgatc ccacagtacc tgttggccga ttatggtacg 1320

accgccagta gtgccataac atactatcgg ccaaacagca cagacttgag ctggtacttt 1380

aaaaactggc tgcctgggcc agtggaaagg cgacagcaaa tcaattctga agactcgacg 1440

aaaaaccatg ccaatttgaa cgggaatgca cacaccaaca aatacagcat ccagcacaga 1500

caaaccaaga tgatgccagg ggtggctctc agtagtaaat acacaggtgc tgctgaagga 1560

acgtcgttac tgaacggggt attgaccttt gataagatcg ccaatgacaa tactaacatc 1620

acggatacaa ataatgtcaa tcggacgatc gaagatgaaa ttcaaggtac caatccttat 1680

ggaaacgacg tacccattac cgtcgctgtc aatacacaaa acgcgaccac ttctcctacc 1740

atgcaaaaca gcagcacgta tgaactatta cctggtgctg tctggtccaa cagagatatt 1800

tacctgcaag gtcccatctg ggctaaaata cccgataccg atggacactt tcacccgtct 1860

ccacaaatgg gtggtttcgg acttaaaaac ccaccaccga tgatcctcat caaaaacaca 1920

cccgttcccg ccgatccacc aacgaccttc aaaccgactc cgatgaacag cttcatcagc 1980

gaatacagta ccggtcaggt gactgtagag atgctgtggg aggtccggaa agaagactcc 2040

aagagatgga acccggaaat ccagtttacc tccaattttg gattgtccga tcctcagatc 2100

gacggtatac cctttggtat taccaaattg ggtaattacg aggaaccacg tcctattggc 2160

accagatacc tgactcgtca tttgtaa 2187

<210> 6

<211> 728

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 агамы

<400> 6

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Glu Lys Arg Lys Thr

130 135 140

Pro Glu Glu Trp Leu Ala Gln Glu Lys Thr Pro Thr Lys Gln Arg Phe

145 150 155 160

Gln Ile Pro Ala Pro Gly Gln Ser Gly Ser Asp Ser Pro Ser Thr Ser

165 170 175

Gly Ser Gly Gly Thr Ala Gly Ser Ser Ser Ser Ala Ser Asn Thr Met

180 185 190

Ala Gln Gly Gly Gly Gly Pro Met Ala Asp Asp Asn Gln Gly Ala Glu

195 200 205

Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Thr Gln Trp Leu

210 215 220

Gly Asp His Val Ile Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser

225 230 235 240

Tyr Gly Asn His Leu Tyr Ser Pro Ile Asn Phe Asp Gly Thr Thr Gly

245 250 255

Asn Gly Thr Gln Ala Ala Tyr Cys Gly Tyr Ala Thr Pro Trp Ala Tyr

260 265 270

Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Asn His Thr Gly Ile Arg Pro Val Gly Leu Lys Phe

290 295 300

Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Ile Thr Val Gln Asp Ser Thr

305 310 315 320

Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ala Asp

325 330 335

Thr Glu His Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Asn Ala Thr Gln Gly Thr

340 345 350

Phe Pro Pro Phe Pro Ala Glu Val Phe Gln Leu Pro Gln Tyr Gly Tyr

355 360 365

Cys Thr Ile Gln Gly Pro Gln Gly Lys Phe Thr Asp Arg Ser Ala Phe

370 375 380

Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

385 390 395 400

Phe Glu Phe Thr Tyr Lys Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser Gly Trp

405 410 415

Ala Gln Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Pro Gln

420 425 430

Tyr Leu Leu Ala Asp Tyr Gly Thr Thr Ala Ser Ser Ala Ile Thr Tyr

435 440 445

Tyr Arg Pro Asn Ser Thr Asp Leu Ser Trp Tyr Phe Lys Asn Trp Leu

450 455 460

Pro Gly Pro Val Glu Arg Arg Gln Gln Ile Asn Ser Glu Asp Ser Thr

465 470 475 480

Lys Asn His Ala Asn Leu Asn Gly Asn Ala His Thr Asn Lys Tyr Ser

485 490 495

Ile Gln His Arg Gln Thr Lys Met Met Pro Gly Val Ala Leu Ser Ser

500 505 510

Lys Tyr Thr Gly Ala Ala Glu Gly Thr Ser Leu Leu Asn Gly Val Leu

515 520 525

Thr Phe Asp Lys Ile Ala Asn Asp Asn Thr Asn Ile Thr Asp Thr Asn

530 535 540

Asn Val Asn Arg Thr Ile Glu Asp Glu Ile Gln Gly Thr Asn Pro Tyr

545 550 555 560

Gly Asn Asp Val Pro Ile Thr Val Ala Val Asn Thr Gln Asn Ala Thr

565 570 575

Thr Ser Pro Thr Met Gln Asn Ser Ser Thr Tyr Glu Leu Leu Pro Gly

580 585 590

Ala Val Trp Ser Asn Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala

595 600 605

Lys Ile Pro Asp Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Gln Met Gly

610 615 620

Gly Phe Gly Leu Lys Asn Pro Pro Pro Met Ile Leu Ile Lys Asn Thr

625 630 635 640

Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Lys Pro Thr Pro Met Asn

645 650 655

Ser Phe Ile Ser Glu Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Glu Met Leu

660 665 670

Trp Glu Val Arg Lys Glu Asp Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln

675 680 685

Phe Thr Ser Asn Phe Gly Leu Ser Asp Pro Gln Ile Asp Gly Ile Pro

690 695 700

Phe Gly Ile Thr Lys Leu Gly Asn Tyr Glu Glu Pro Arg Pro Ile Gly

705 710 715 720

Thr Arg Tyr Leu Thr Arg His Leu

725

<210> 7

<211> 2265

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV G444 линкер-6 SpyTag

<400> 7

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggccggg 420

accggggaga agcgtcccga acgcgtcgac gactttttcc cgaaaaagaa gaaggccaag 480

accgagcaag gcaaagcccc tgctcaaacg ggcgaagacc ccggagaagg aacctcttcc 540

aacgctggat caagcgcccc ctctagtgtg ggatcatctg tcatggctga aggaggtggc 600

ggtccaatgg gcgatgcagg ccaaggtgcc gacggagtgg gcaattcctc gggaaattgg 660

cattgcgatt cccaatggct ggacaacgga gtcgttaccc gaaccactcg aacctgggtc 720

ctgcccagct acaacaacca cttgtacaag cggatccaag gaccgggagg aaccgacccc 780

aacaataaat tctttggatt cagcaccccc tgggggtact ttgactacaa ccgattccac 840

tgccacttct ccccccgaga ctggcaacga ctcatcaaca acaactgggg catccgaccc 900

aaagcgatgc gctttagact ctttaacatc caggttaaag aagtcactgt ccaagactcc 960

aacaccacca tcgccaacaa cctcaccagc acggtccaag tctttgcgga caaggactac 1020

cagctgccgt acgtcctcgg atcggctaca gagggcacct tcccgccgtt cccagcggat 1080

atctacacga tcccgcagta tggttactgc acgctaaact acaacaacga ggcggtggat 1140

cgttcggcct tctactgtct agactatttc ccctcagaca tgctgcggac aggaaataac 1200

tttgaattca cttacacgtt cgaggacgtt cctttccata gcatgtttgc tcacaaccag 1260

acgctagacc ggctgatgaa tcctctcgtc gatcagtacc tgtgggcttt cagttccgtc 1320

agccaaacag gcggcctgag cggcagcggc gcccacatcg tgatggtgga cgcctacaag 1380

ccgacgaagg gcctgagcgg cagcggctcg tctggacggg cactcaatta ttcacgcgcg 1440

accaaaacca atatggcaac ccagtacaga aactggttac ctggaccctt cgtccgggat 1500

cagcaaatct ttacgggggc tagcaacatc acccaaaaca acgtgttcaa cgtttgggat 1560

aaaggcaagc agtgggtgat agacaatcgg atcaatatga tgcagcccgg ccctgcagca 1620

gcgaccacct ttagcggaga acccgaccgt caagccatgc aaaacacgct ggcctttagt 1680

cggacggtct acgaccagac aaccagtacg accgatcgta accagttgct cattaccaac 1740

gaagatgaaa tcagacccac caactcggtc ggcatcgaca cgtggggagt agttcccaac 1800

aacaaccagt ccaaggtgac cgccggcact cgcgcggcca tcaacaacca aggggcgctt 1860

cccgggatgg tgtggcaaaa cagagacatt tacctccaag gacccatttg ggccaaaatc 1920

cccgacacag acaatcactt ccatccgtcc ccgcttattg gcgggtttgg ctgcaagcat 1980

ccccctcccc agattttcat taaaaacaca cccgtcccgg ccaacccttc ggaaacgttc 2040

cagacggcca aggtggcctc cttcatcaac cagtactcga ccggacagtg caccgtcgaa 2100

atcttttggg aactcaagaa ggaaacctcc aagcgctgga accccgaaat ccagttcacc 2160

tccaactttg gcaacgcggc cgacatccag tttgctgtct ccgacaccgg atcctattcc 2220

gaacctcgtc ccattggcac cagatacctg actcgtcctc tgtaa 2265

<210> 8

<211> 754

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV G444 линкер-6 SpyTag

<400> 8

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Gly Thr Gly Glu Lys

130 135 140

Arg Pro Glu Arg Val Asp Asp Phe Phe Pro Lys Lys Lys Lys Ala Lys

145 150 155 160

Thr Glu Gln Gly Lys Ala Pro Ala Gln Thr Gly Glu Asp Pro Gly Glu

165 170 175

Gly Thr Ser Ser Asn Ala Gly Ser Ser Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser

180 185 190

Ser Val Met Ala Glu Gly Gly Gly Gly Pro Met Gly Asp Ala Gly Gln

195 200 205

Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser

210 215 220

Gln Trp Leu Asp Asn Gly Val Val Thr Arg Thr Thr Arg Thr Trp Val

225 230 235 240

Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Ile Gln Gly Pro Gly

245 250 255

Gly Thr Asp Pro Asn Asn Lys Phe Phe Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly

260 265 270

Tyr Phe Asp Tyr Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp

275 280 285

Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Ala Met Arg

290 295 300

Phe Arg Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Val Gln Asp Ser

305 310 315 320

Asn Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ala

325 330 335

Asp Lys Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Thr Glu Gly

340 345 350

Thr Phe Pro Pro Phe Pro Ala Asp Ile Tyr Thr Ile Pro Gln Tyr Gly

355 360 365

Tyr Cys Thr Leu Asn Tyr Asn Asn Glu Ala Val Asp Arg Ser Ala Phe

370 375 380

Tyr Cys Leu Asp Tyr Phe Pro Ser Asp Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

385 390 395 400

Phe Glu Phe Thr Tyr Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Met Phe

405 410 415

Ala His Asn Gln Thr Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Val Asp Gln

420 425 430

Tyr Leu Trp Ala Phe Ser Ser Val Ser Gln Thr Gly Gly Leu Ser Gly

435 440 445

Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly

450 455 460

Leu Ser Gly Ser Gly Ser Ser Gly Arg Ala Leu Asn Tyr Ser Arg Ala

465 470 475 480

Thr Lys Thr Asn Met Ala Thr Gln Tyr Arg Asn Trp Leu Pro Gly Pro

485 490 495

Phe Val Arg Asp Gln Gln Ile Phe Thr Gly Ala Ser Asn Ile Thr Gln

500 505 510

Asn Asn Val Phe Asn Val Trp Asp Lys Gly Lys Gln Trp Val Ile Asp

515 520 525

Asn Arg Ile Asn Met Met Gln Pro Gly Pro Ala Ala Ala Thr Thr Phe

530 535 540

Ser Gly Glu Pro Asp Arg Gln Ala Met Gln Asn Thr Leu Ala Phe Ser

545 550 555 560

Arg Thr Val Tyr Asp Gln Thr Thr Ser Thr Thr Asp Arg Asn Gln Leu

565 570 575

Leu Ile Thr Asn Glu Asp Glu Ile Arg Pro Thr Asn Ser Val Gly Ile

580 585 590

Asp Thr Trp Gly Val Val Pro Asn Asn Asn Gln Ser Lys Val Thr Ala

595 600 605

Gly Thr Arg Ala Ala Ile Asn Asn Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

610 615 620

Trp Gln Asn Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

625 630 635 640

Pro Asp Thr Asp Asn His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe

645 650 655

Gly Cys Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val

660 665 670

Pro Ala Asn Pro Ser Glu Thr Phe Gln Thr Ala Lys Val Ala Ser Phe

675 680 685

Ile Asn Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Cys Thr Val Glu Ile Phe Trp Glu

690 695 700

Leu Lys Lys Glu Thr Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Phe Thr

705 710 715 720

Ser Asn Phe Gly Asn Ala Ala Asp Ile Gln Phe Ala Val Ser Asp Thr

725 730 735

Gly Ser Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

740 745 750

Pro Leu

<210> 9

<211> 2265

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV K580 линкер-6 SpyTag

<400> 9

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggccggg 420

accggggaga agcgtcccga acgcgtcgac gactttttcc cgaaaaagaa gaaggccaag 480

accgagcaag gcaaagcccc tgctcaaacg ggcgaagacc ccggagaagg aacctcttcc 540

aacgctggat caagcgcccc ctctagtgtg ggatcatctg tcatggctga aggaggtggc 600

ggtccaatgg gcgatgcagg ccaaggtgcc gacggagtgg gcaattcctc gggaaattgg 660

cattgcgatt cccaatggct ggacaacgga gtcgttaccc gaaccactcg aacctgggtc 720

ctgcccagct acaacaacca cttgtacaag cggatccaag gaccgggagg aaccgacccc 780

aacaataaat tctttggatt cagcaccccc tgggggtact ttgactacaa ccgattccac 840

tgccacttct ccccccgaga ctggcaacga ctcatcaaca acaactgggg catccgaccc 900

aaagcgatgc gctttagact ctttaacatc caggttaaag aagtcactgt ccaagactcc 960

aacaccacca tcgccaacaa cctcaccagc acggtccaag tctttgcgga caaggactac 1020

cagctgccgt acgtcctcgg atcggctaca gagggcacct tcccgccgtt cccagcggat 1080

atctacacga tcccgcagta tggttactgc acgctaaact acaacaacga ggcggtggat 1140

cgttcggcct tctactgtct agactatttc ccctcagaca tgctgcggac aggaaataac 1200

tttgaattca cttacacgtt cgaggacgtt cctttccata gcatgtttgc tcacaaccag 1260

acgctagacc ggctgatgaa tcctctcgtc gatcagtacc tgtgggcttt cagttccgtc 1320

agccaaacag gctcgtctgg acgggcactc aattattcac gcgcgaccaa aaccaatatg 1380

gcaacccagt acagaaactg gttacctgga cccttcgtcc gggatcagca aatctttacg 1440

ggggctagca acatcaccca aaacaacgtg ttcaacgttt gggataaagg caagcagtgg 1500

gtgatagaca atcggatcaa tatgatgcag cccggccctg cagcagcgac cacctttagc 1560

ggagaacccg accgtcaagc catgcaaaac acgctggcct ttagtcggac ggtctacgac 1620

cagacaacca gtacgaccga tcgtaaccag ttgctcatta ccaacgaaga tgaaatcaga 1680

cccaccaact cggtcggcat cgacacgtgg ggagtagttc ccaacaacaa ccagtccaag 1740

ggcctgagcg gcagcggcgc ccacatcgtg atggtggacg cctacaagcc gacgaagggc 1800

ctgagcggca gcggcgtgac cgccggcact cgcgcggcca tcaacaacca aggggcgctt 1860

cccgggatgg tgtggcaaaa cagagacatt tacctccaag gacccatttg ggccaaaatc 1920

cccgacacag acaatcactt ccatccgtcc ccgcttattg gcgggtttgg ctgcaagcat 1980

ccccctcccc agattttcat taaaaacaca cccgtcccgg ccaacccttc ggaaacgttc 2040

cagacggcca aggtggcctc cttcatcaac cagtactcga ccggacagtg caccgtcgaa 2100

atcttttggg aactcaagaa ggaaacctcc aagcgctgga accccgaaat ccagttcacc 2160

tccaactttg gcaacgcggc cgacatccag tttgctgtct ccgacaccgg atcctattcc 2220

gaacctcgtc ccattggcac cagatacctg actcgtcctc tgtaa 2265

<210> 10

<211> 754

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 AAAV K580 линкер-6 SpyTag

<400> 10

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Gly Thr Gly Glu Lys

130 135 140

Arg Pro Glu Arg Val Asp Asp Phe Phe Pro Lys Lys Lys Lys Ala Lys

145 150 155 160

Thr Glu Gln Gly Lys Ala Pro Ala Gln Thr Gly Glu Asp Pro Gly Glu

165 170 175

Gly Thr Ser Ser Asn Ala Gly Ser Ser Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser

180 185 190

Ser Val Met Ala Glu Gly Gly Gly Gly Pro Met Gly Asp Ala Gly Gln

195 200 205

Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser

210 215 220

Gln Trp Leu Asp Asn Gly Val Val Thr Arg Thr Thr Arg Thr Trp Val

225 230 235 240

Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Ile Gln Gly Pro Gly

245 250 255

Gly Thr Asp Pro Asn Asn Lys Phe Phe Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly

260 265 270

Tyr Phe Asp Tyr Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp

275 280 285

Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Ala Met Arg

290 295 300

Phe Arg Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Val Gln Asp Ser

305 310 315 320

Asn Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ala

325 330 335

Asp Lys Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Thr Glu Gly

340 345 350

Thr Phe Pro Pro Phe Pro Ala Asp Ile Tyr Thr Ile Pro Gln Tyr Gly

355 360 365

Tyr Cys Thr Leu Asn Tyr Asn Asn Glu Ala Val Asp Arg Ser Ala Phe

370 375 380

Tyr Cys Leu Asp Tyr Phe Pro Ser Asp Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

385 390 395 400

Phe Glu Phe Thr Tyr Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Met Phe

405 410 415

Ala His Asn Gln Thr Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Val Asp Gln

420 425 430

Tyr Leu Trp Ala Phe Ser Ser Val Ser Gln Thr Gly Ser Ser Gly Arg

435 440 445

Ala Leu Asn Tyr Ser Arg Ala Thr Lys Thr Asn Met Ala Thr Gln Tyr

450 455 460

Arg Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Val Arg Asp Gln Gln Ile Phe Thr

465 470 475 480

Gly Ala Ser Asn Ile Thr Gln Asn Asn Val Phe Asn Val Trp Asp Lys

485 490 495

Gly Lys Gln Trp Val Ile Asp Asn Arg Ile Asn Met Met Gln Pro Gly

500 505 510

Pro Ala Ala Ala Thr Thr Phe Ser Gly Glu Pro Asp Arg Gln Ala Met

515 520 525

Gln Asn Thr Leu Ala Phe Ser Arg Thr Val Tyr Asp Gln Thr Thr Ser

530 535 540

Thr Thr Asp Arg Asn Gln Leu Leu Ile Thr Asn Glu Asp Glu Ile Arg

545 550 555 560

Pro Thr Asn Ser Val Gly Ile Asp Thr Trp Gly Val Val Pro Asn Asn

565 570 575

Asn Gln Ser Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val

580 585 590

Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Val Thr Ala

595 600 605

Gly Thr Arg Ala Ala Ile Asn Asn Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

610 615 620

Trp Gln Asn Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

625 630 635 640

Pro Asp Thr Asp Asn His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe

645 650 655

Gly Cys Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val

660 665 670

Pro Ala Asn Pro Ser Glu Thr Phe Gln Thr Ala Lys Val Ala Ser Phe

675 680 685

Ile Asn Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Cys Thr Val Glu Ile Phe Trp Glu

690 695 700

Leu Lys Lys Glu Thr Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Phe Thr

705 710 715 720

Ser Asn Phe Gly Asn Ala Ala Asp Ile Gln Phe Ala Val Ser Asp Thr

725 730 735

Gly Ser Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

740 745 750

Pro Leu

<210> 11

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag

<400> 11

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggaggcc tgagcggcag cggcgcccac 1320

atcgtgatgg tggacgccta caagccgacg aagggcctga gcggcagcgg ctcaacaacg 1380

agagacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 12

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва G432 линкер-6 SpyTag

<400> 12

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys

435 440 445

Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 13

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва A565 линкер-6 SpyTag

<400> 13

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaggcct gagcggcagc ggcgcccaca tcgtgatggt ggacgcctac 1740

aagccgacga agggcctgag cggcagcggc acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 14

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва A565 линкер-6 SpyTag

<400> 14

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met

565 570 575

Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 15

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва N429 линкер-6 SpyTag

<400> 15

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacggc ctgagcggca gcggcgccca catcgtgatg 1320

gtggacgcct acaagccgac gaagggcctg agcggcagcg gcccgactgg atcaacaacg 1380

agagacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 16

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва N429 линкер-6 SpyTag

<400> 16

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Gly Leu Ser

420 425 430

Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys

435 440 445

Gly Leu Ser Gly Ser Gly Pro Thr Gly Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 17

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва P430 линкер-6 SpyTag

<400> 17

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg ggcctgagcg gcagcggcgc ccacatcgtg 1320

atggtggacg cctacaagcc gacgaagggc ctgagcggca gcggcactgg atcaacaacg 1380

agagacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 18

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва P430 линкер-6 SpyTag

<400> 18

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Gly Leu

420 425 430

Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr

435 440 445

Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Thr Gly Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 19

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва T431 линкер-6 SpyTag

<400> 19

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggcctga gcggcagcgg cgcccacatc 1320

gtgatggtgg acgcctacaa gccgacgaag ggcctgagcg gcagcggcgg atcaacaacg 1380

agagacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 20

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва T431 линкер-6 SpyTag

<400> 20

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Pro

435 440 445

Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 21

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва S433 линкер-6 SpyTag

<400> 21

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcag gcctgagcgg cagcggcgcc 1320

cacatcgtga tggtggacgc ctacaagccg acgaagggcc tgagcggcag cggcacaacg 1380

agagacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 22

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва S433 линкер-6 SpyTag

<400> 22

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr

435 440 445

Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Thr Thr Arg Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 23

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва T434 линкер-6 SpyTag

<400> 23

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caggcctgag cggcagcggc 1320

gcccacatcg tgatggtgga cgcctacaag ccgacgaagg gcctgagcgg cagcggcacg 1380

agagacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 24

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва T434 линкер-6 SpyTag

<400> 24

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala

435 440 445

Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Thr Arg Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 25

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва T435 линкер-6 SpyTag

<400> 25

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgggcct gagcggcagc 1320

ggcgcccaca tcgtgatggt ggacgcctac aagccgacga agggcctgag cggcagcggc 1380

agagacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 26

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва T435 линкер-6 SpyTag

<400> 26

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp

435 440 445

Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Arg Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 27

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва R436 линкер-6 SpyTag

<400> 27

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagagg cctgagcggc 1320

agcggcgccc acatcgtgat ggtggacgcc tacaagccga cgaagggcct gagcggcagc 1380

ggcgacttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 28

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва R436 линкер-6 SpyTag

<400> 28

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val

435 440 445

Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Asp Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 29

<211> 2220

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва D437 линкер-6 SpyTag

<400> 29

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cggcctgagc 1320

ggcagcggcg cccacatcgt gatggtggac gcctacaagc cgacgaaggg cctgagcggc 1380

agcggcttaa aatttatcaa gaacaaagtt cccaattttg cacattatgg aaaaaattgg 1440

cttcctggac cttttattag acaacagggg tggacaacac aaaatattaa taatagtgtt 1500

gttaatttta atgacatgct gggaaaaaat tcgacattta ctttggacac tagatggagt 1560

tcattagcgc ctggtccgtg tatgggggat gacggacgaa ctccatccac caccaagttc 1620

tcaaatgctc agctcatgtt tggatctgga acacaaccca ccgaaggcgg tgaagatgct 1680

gtacatatta catccgagtc ggaggtcaag gcaaccaacc caactgcaat cgatgaatac 1740

ggacgagtgg ccgataatac gcaaaatgca acaaccgccc caaccacagt gggaaatgct 1800

gcaatggggg ccatgcctgg gatggtgtgg caagataggg atatctatct tcaaggaccc 1860

atctggggaa aaatacccca tacagacgga cattttcatc cgtctcctct catggggggg 1920

tttggataca gaaaaccccc tccgcaaatt tttattaaaa acacccccgt tcctggaaat 1980

ccggcaacta cattttctcc aaatagaata aacaatttca ttactcaata ctcaacggga 2040

caagtgaccg ttactattga ctgggagctg caaaaggaaa actcaaagag atggaaccca 2100

gaagtacaat ttacatcaaa ttttggcacg gtcgattcac taaactgggc accggacaac 2160

gcgggaaact acaaagaacc aagggtgatt ggcaccagat acctgactcg tatactataa 2220

<210> 30

<211> 739

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва D437 линкер-6 SpyTag

<400> 30

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met

435 440 445

Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Leu Lys

450 455 460

Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile

485 490 495

Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr

500 505 510

Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met

515 520 525

Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln

530 535 540

Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala

545 550 555 560

Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala

565 570 575

Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr

580 585 590

Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met

595 600 605

Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys

610 615 620

Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly

625 630 635 640

Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro

645 650 655

Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn

660 665 670

Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp

675 680 685

Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe

690 695 700

Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn

705 710 715 720

Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr

725 730 735

Arg Ile Leu

<210> 31

<211> 2244

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва G432 линкер-10 SpyTag

<400> 31

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggaggcc tggggagcgg cggaggcctg 1320

agcggcgccc acatcgtgat ggtggacgcc tacaagccga cgaagggcct gagcggcggc 1380

agcggcctgg ggggctcaac aacgagagac ttaaaattta tcaagaacaa agttcccaat 1440

tttgcacatt atggaaaaaa ttggcttcct ggacctttta ttagacaaca ggggtggaca 1500

acacaaaata ttaataatag tgttgttaat tttaatgaca tgctgggaaa aaattcgaca 1560

tttactttgg acactagatg gagttcatta gcgcctggtc cgtgtatggg ggatgacgga 1620

cgaactccat ccaccaccaa gttctcaaat gctcagctca tgtttggatc tggaacacaa 1680

cccaccgaag gcggtgaaga tgctgtacat attacatccg agtcggaggt caaggcaacc 1740

aacccaactg caatcgatga atacggacga gtggccgata atacgcaaaa tgcaacaacc 1800

gccccaacca cagtgggaaa tgctgcaatg ggggccatgc ctgggatggt gtggcaagat 1860

agggatatct atcttcaagg acccatctgg ggaaaaatac cccatacaga cggacatttt 1920

catccgtctc ctctcatggg ggggtttgga tacagaaaac cccctccgca aatttttatt 1980

aaaaacaccc ccgttcctgg aaatccggca actacatttt ctccaaatag aataaacaat 2040

ttcattactc aatactcaac gggacaagtg accgttacta ttgactggga gctgcaaaag 2100

gaaaactcaa agagatggaa cccagaagta caatttacat caaattttgg cacggtcgat 2160

tcactaaact gggcaccgga caacgcggga aactacaaag aaccaagggt gattggcacc 2220

agatacctga ctcgtatact ataa 2244

<210> 32

<211> 747

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва G432 линкер-10 SpyTag

<400> 32

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Gly Leu Gly Ser Gly Gly Gly Leu Ser Gly Ala His Ile Val Met Val

435 440 445

Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Gly

450 455 460

Gly Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn

465 470 475 480

Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln

485 490 495

Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn

500 505 510

Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser

515 520 525

Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser

530 535 540

Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln

545 550 555 560

Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu

565 570 575

Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala

580 585 590

Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala

595 600 605

Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr

610 615 620

Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe

625 630 635 640

His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro

645 650 655

Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr

660 665 670

Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly

675 680 685

Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys

690 695 700

Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp

705 710 715 720

Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg

725 730 735

Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ile Leu

740 745

<210> 33

<211> 2262

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 агамы G436 линкер-6 SpyTag

<400> 33

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggccgaa 420

aagcgaaaga cacccgaaga gtggttagct caagaaaaga ctccaaccaa acaaaggttc 480

cagataccag ctccaggaca atctggatca gattctcctt ccacctcagg atccggcggt 540

actgcaggct ccagttctag cgcatcaaat acaatggctc aaggaggtgg cggaccaatg 600

gcagacgata accaaggcgc cgagggagtg ggtaatgcct cgggagattg gcattgcgat 660

acccaatggc tgggcgacca cgtcattaca aaatctacca gaacttgggt tctgccctct 720

tacgggaatc atctctactc gcccatcaac tttgatggaa ccacagggaa cggaacccaa 780

gccgcttact gcggatacgc taccccctgg gcctactttg actttaaccg attccactgc 840

cacttttccc cccgagactg gcaaagactc attaacaacc ataccggaat acgaccagtc 900

ggactcaaat tcaagctgtt caacatccag gtcaaggaaa tcacagtaca agattcgacc 960

aaaacgatcg ccaacaatct caccagcacc gtacaggtct ttgcggacac ggagcaccag 1020

ctcccgtacg tattaggaaa tgccacgcag ggcacgtttc ctccctttcc ggctgaagtc 1080

tttcagttgc ctcagtacgg ctactgtacc atccaaggcc ctcagggtaa gtttaccgac 1140

agaagtgcct tctactgctt ggagtacttt ccttccaaga tgctgagaac ggggaataac 1200

tttgaattta cttacaagtt cgagaaggtt cccttccatt ctggctgggc tcaaagccag 1260

tcgttggatc gattgatgaa tcccttgatc ccacagtacc tgttggccga ttatggtggc 1320

ctgagcggca gcggcgccca catcgtgatg gtggacgcct acaagccgac gaagggcctg 1380

agcggcagcg gcacgaccgc cagtagtgcc ataacatact atcggccaaa cagcacagac 1440

ttgagctggt actttaaaaa ctggctgcct gggccagtgg aaaggcgaca gcaaatcaat 1500

tctgaagact cgacgaaaaa ccatgccaat ttgaacggga atgcacacac caacaaatac 1560

agcatccagc acagacaaac caagatgatg ccaggggtgg ctctcagtag taaatacaca 1620

ggtgctgctg aaggaacgtc gttactgaac ggggtattga cctttgataa gatcgccaat 1680

gacaatacta acatcacgga tacaaataat gtcaatcgga cgatcgaaga tgaaattcaa 1740

ggtaccaatc cttatggaaa cgacgtaccc attaccgtcg ctgtcaatac acaaaacgcg 1800

accacttctc ctaccatgca aaacagcagc acgtatgaac tattacctgg tgctgtctgg 1860

tccaacagag atatttacct gcaaggtccc atctgggcta aaatacccga taccgatgga 1920

cactttcacc cgtctccaca aatgggtggt ttcggactta aaaacccacc accgatgatc 1980

ctcatcaaaa acacacccgt tcccgccgat ccaccaacga ccttcaaacc gactccgatg 2040

aacagcttca tcagcgaata cagtaccggt caggtgactg tagagatgct gtgggaggtc 2100

cggaaagaag actccaagag atggaacccg gaaatccagt ttacctccaa ttttggattg 2160

tccgatcctc agatcgacgg tatacccttt ggtattacca aattgggtaa ttacgaggaa 2220

ccacgtccta ttggcaccag atacctgact cgtcatttgt aa 2262

<210> 34

<211> 753

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 агамы G436 линкер-6 SpyTag

<400> 34

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Glu Lys Arg Lys Thr

130 135 140

Pro Glu Glu Trp Leu Ala Gln Glu Lys Thr Pro Thr Lys Gln Arg Phe

145 150 155 160

Gln Ile Pro Ala Pro Gly Gln Ser Gly Ser Asp Ser Pro Ser Thr Ser

165 170 175

Gly Ser Gly Gly Thr Ala Gly Ser Ser Ser Ser Ala Ser Asn Thr Met

180 185 190

Ala Gln Gly Gly Gly Gly Pro Met Ala Asp Asp Asn Gln Gly Ala Glu

195 200 205

Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Thr Gln Trp Leu

210 215 220

Gly Asp His Val Ile Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser

225 230 235 240

Tyr Gly Asn His Leu Tyr Ser Pro Ile Asn Phe Asp Gly Thr Thr Gly

245 250 255

Asn Gly Thr Gln Ala Ala Tyr Cys Gly Tyr Ala Thr Pro Trp Ala Tyr

260 265 270

Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Asn His Thr Gly Ile Arg Pro Val Gly Leu Lys Phe

290 295 300

Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Ile Thr Val Gln Asp Ser Thr

305 310 315 320

Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ala Asp

325 330 335

Thr Glu His Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Asn Ala Thr Gln Gly Thr

340 345 350

Phe Pro Pro Phe Pro Ala Glu Val Phe Gln Leu Pro Gln Tyr Gly Tyr

355 360 365

Cys Thr Ile Gln Gly Pro Gln Gly Lys Phe Thr Asp Arg Ser Ala Phe

370 375 380

Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

385 390 395 400

Phe Glu Phe Thr Tyr Lys Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser Gly Trp

405 410 415

Ala Gln Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Pro Gln

420 425 430

Tyr Leu Leu Ala Asp Tyr Gly Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile

435 440 445

Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly

450 455 460

Thr Thr Ala Ser Ser Ala Ile Thr Tyr Tyr Arg Pro Asn Ser Thr Asp

465 470 475 480

Leu Ser Trp Tyr Phe Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Val Glu Arg Arg

485 490 495

Gln Gln Ile Asn Ser Glu Asp Ser Thr Lys Asn His Ala Asn Leu Asn

500 505 510

Gly Asn Ala His Thr Asn Lys Tyr Ser Ile Gln His Arg Gln Thr Lys

515 520 525

Met Met Pro Gly Val Ala Leu Ser Ser Lys Tyr Thr Gly Ala Ala Glu

530 535 540

Gly Thr Ser Leu Leu Asn Gly Val Leu Thr Phe Asp Lys Ile Ala Asn

545 550 555 560

Asp Asn Thr Asn Ile Thr Asp Thr Asn Asn Val Asn Arg Thr Ile Glu

565 570 575

Asp Glu Ile Gln Gly Thr Asn Pro Tyr Gly Asn Asp Val Pro Ile Thr

580 585 590

Val Ala Val Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ser Pro Thr Met Gln Asn

595 600 605

Ser Ser Thr Tyr Glu Leu Leu Pro Gly Ala Val Trp Ser Asn Arg Asp

610 615 620

Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro Asp Thr Asp Gly

625 630 635 640

His Phe His Pro Ser Pro Gln Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys Asn Pro

645 650 655

Pro Pro Met Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro

660 665 670

Thr Thr Phe Lys Pro Thr Pro Met Asn Ser Phe Ile Ser Glu Tyr Ser

675 680 685

Thr Gly Gln Val Thr Val Glu Met Leu Trp Glu Val Arg Lys Glu Asp

690 695 700

Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Leu

705 710 715 720

Ser Asp Pro Gln Ile Asp Gly Ile Pro Phe Gly Ile Thr Lys Leu Gly

725 730 735

Asn Tyr Glu Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg His

740 745 750

Leu

<210> 35

<211> 2262

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 агамы T573 линкер-6 SpyTag

<400> 35

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggccgaa 420

aagcgaaaga cacccgaaga gtggttagct caagaaaaga ctccaaccaa acaaaggttc 480

cagataccag ctccaggaca atctggatca gattctcctt ccacctcagg atccggcggt 540

actgcaggct ccagttctag cgcatcaaat acaatggctc aaggaggtgg cggaccaatg 600

gcagacgata accaaggcgc cgagggagtg ggtaatgcct cgggagattg gcattgcgat 660

acccaatggc tgggcgacca cgtcattaca aaatctacca gaacttgggt tctgccctct 720

tacgggaatc atctctactc gcccatcaac tttgatggaa ccacagggaa cggaacccaa 780

gccgcttact gcggatacgc taccccctgg gcctactttg actttaaccg attccactgc 840

cacttttccc cccgagactg gcaaagactc attaacaacc ataccggaat acgaccagtc 900

ggactcaaat tcaagctgtt caacatccag gtcaaggaaa tcacagtaca agattcgacc 960

aaaacgatcg ccaacaatct caccagcacc gtacaggtct ttgcggacac ggagcaccag 1020

ctcccgtacg tattaggaaa tgccacgcag ggcacgtttc ctccctttcc ggctgaagtc 1080

tttcagttgc ctcagtacgg ctactgtacc atccaaggcc ctcagggtaa gtttaccgac 1140

agaagtgcct tctactgctt ggagtacttt ccttccaaga tgctgagaac ggggaataac 1200

tttgaattta cttacaagtt cgagaaggtt cccttccatt ctggctgggc tcaaagccag 1260

tcgttggatc gattgatgaa tcccttgatc ccacagtacc tgttggccga ttatggtacg 1320

accgccagta gtgccataac atactatcgg ccaaacagca cagacttgag ctggtacttt 1380

aaaaactggc tgcctgggcc agtggaaagg cgacagcaaa tcaattctga agactcgacg 1440

aaaaaccatg ccaatttgaa cgggaatgca cacaccaaca aatacagcat ccagcacaga 1500

caaaccaaga tgatgccagg ggtggctctc agtagtaaat acacaggtgc tgctgaagga 1560

acgtcgttac tgaacggggt attgaccttt gataagatcg ccaatgacaa tactaacatc 1620

acggatacaa ataatgtcaa tcggacgatc gaagatgaaa ttcaaggtac caatccttat 1680

ggaaacgacg tacccattac cgtcgctgtc aatacacaaa acgcgaccgg cctgagcggc 1740

agcggcgccc acatcgtgat ggtggacgcc tacaagccga cgaagggcct gagcggcagc 1800

ggcacttctc ctaccatgca aaacagcagc acgtatgaac tattacctgg tgctgtctgg 1860

tccaacagag atatttacct gcaaggtccc atctgggcta aaatacccga taccgatgga 1920

cactttcacc cgtctccaca aatgggtggt ttcggactta aaaacccacc accgatgatc 1980

ctcatcaaaa acacacccgt tcccgccgat ccaccaacga ccttcaaacc gactccgatg 2040

aacagcttca tcagcgaata cagtaccggt caggtgactg tagagatgct gtgggaggtc 2100

cggaaagaag actccaagag atggaacccg gaaatccagt ttacctccaa ttttggattg 2160

tccgatcctc agatcgacgg tatacccttt ggtattacca aattgggtaa ttacgaggaa 2220

ccacgtccta ttggcaccag atacctgact cgtcatttgt aa 2262

<210> 36

<211> 753

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 агамы T573 линкер-6 SpyTag

<400> 36

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Glu Lys Arg Lys Thr

130 135 140

Pro Glu Glu Trp Leu Ala Gln Glu Lys Thr Pro Thr Lys Gln Arg Phe

145 150 155 160

Gln Ile Pro Ala Pro Gly Gln Ser Gly Ser Asp Ser Pro Ser Thr Ser

165 170 175

Gly Ser Gly Gly Thr Ala Gly Ser Ser Ser Ser Ala Ser Asn Thr Met

180 185 190

Ala Gln Gly Gly Gly Gly Pro Met Ala Asp Asp Asn Gln Gly Ala Glu

195 200 205

Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Thr Gln Trp Leu

210 215 220

Gly Asp His Val Ile Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser

225 230 235 240

Tyr Gly Asn His Leu Tyr Ser Pro Ile Asn Phe Asp Gly Thr Thr Gly

245 250 255

Asn Gly Thr Gln Ala Ala Tyr Cys Gly Tyr Ala Thr Pro Trp Ala Tyr

260 265 270

Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln

275 280 285

Arg Leu Ile Asn Asn His Thr Gly Ile Arg Pro Val Gly Leu Lys Phe

290 295 300

Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Ile Thr Val Gln Asp Ser Thr

305 310 315 320

Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ala Asp

325 330 335

Thr Glu His Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Asn Ala Thr Gln Gly Thr

340 345 350

Phe Pro Pro Phe Pro Ala Glu Val Phe Gln Leu Pro Gln Tyr Gly Tyr

355 360 365

Cys Thr Ile Gln Gly Pro Gln Gly Lys Phe Thr Asp Arg Ser Ala Phe

370 375 380

Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

385 390 395 400

Phe Glu Phe Thr Tyr Lys Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser Gly Trp

405 410 415

Ala Gln Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Pro Gln

420 425 430

Tyr Leu Leu Ala Asp Tyr Gly Thr Thr Ala Ser Ser Ala Ile Thr Tyr

435 440 445

Tyr Arg Pro Asn Ser Thr Asp Leu Ser Trp Tyr Phe Lys Asn Trp Leu

450 455 460

Pro Gly Pro Val Glu Arg Arg Gln Gln Ile Asn Ser Glu Asp Ser Thr

465 470 475 480

Lys Asn His Ala Asn Leu Asn Gly Asn Ala His Thr Asn Lys Tyr Ser

485 490 495

Ile Gln His Arg Gln Thr Lys Met Met Pro Gly Val Ala Leu Ser Ser

500 505 510

Lys Tyr Thr Gly Ala Ala Glu Gly Thr Ser Leu Leu Asn Gly Val Leu

515 520 525

Thr Phe Asp Lys Ile Ala Asn Asp Asn Thr Asn Ile Thr Asp Thr Asn

530 535 540

Asn Val Asn Arg Thr Ile Glu Asp Glu Ile Gln Gly Thr Asn Pro Tyr

545 550 555 560

Gly Asn Asp Val Pro Ile Thr Val Ala Val Asn Thr Gln Asn Ala Thr

565 570 575

Gly Leu Ser Gly Ser Gly Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys

580 585 590

Pro Thr Lys Gly Leu Ser Gly Ser Gly Thr Ser Pro Thr Met Gln Asn

595 600 605

Ser Ser Thr Tyr Glu Leu Leu Pro Gly Ala Val Trp Ser Asn Arg Asp

610 615 620

Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro Asp Thr Asp Gly

625 630 635 640

His Phe His Pro Ser Pro Gln Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys Asn Pro

645 650 655

Pro Pro Met Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro

660 665 670

Thr Thr Phe Lys Pro Thr Pro Met Asn Ser Phe Ile Ser Glu Tyr Ser

675 680 685

Thr Gly Gln Val Thr Val Glu Met Leu Trp Glu Val Arg Lys Glu Asp

690 695 700

Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Leu

705 710 715 720

Ser Asp Pro Gln Ile Asp Gly Ile Pro Phe Gly Ile Thr Lys Leu Gly

725 730 735

Asn Tyr Glu Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg His

740 745 750

Leu

<210> 37

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер-4

<400> 37

Gly Leu Ser Gly

1

<210> 38

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер-6

<400> 38

Gly Leu Ser Gly Ser Gly

1 5

<210> 39

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер-8

<400> 39

Gly Leu Ser Gly Leu Ser Gly Ser

1 5

<210> 40

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер-10

<400> 40

Gly Leu Ser Gly Leu Ser Gly Leu Ser Gly

1 5 10

<210> 41

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер-10

<400> 41

Gly Leu Ser Gly Gly Ser Gly Leu Ser Gly

1 5 10

<210> 42

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> SpyTag

<400> 42

Ala His Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Pro Thr Lys

1 5 10

<210> 43

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Spycatcher

<400> 43

Val Asp Thr Leu Ser Gly Leu Ser Ser Glu Gln Gly Gln Ser Gly Asp

1 5 10 15

Met Thr Ile Glu Glu Asp Ser Ala Thr His Ile Lys Phe Ser Lys Arg

20 25 30

Asp Glu Asp Gly Lys Glu Leu Ala Gly Ala Thr Met Glu Leu Arg Asp

35 40 45

Ser Ser Gly Lys Thr Ile Ser Thr Trp Ile Ser Asp Gly Gln Val Lys

50 55 60

Asp Phe Tyr Leu Tyr Pro Gly Lys Tyr Thr Phe Val Glu Thr Ala Ala

65 70 75 80

Pro Asp Gly Tyr Glu Val Ala Thr Ala Ile Thr Phe Thr Val Asn Glu

85 90 95

Gln Gly Gln Val Thr Val Asn Gly Lys Ala Thr Lys Gly Asp Ala His

100 105 110

Ile

<210> 44

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> c-myc

<400> 44

Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 10

<210> 45

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> B1

<400> 45

Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

1 5

<210> 46

<211> 1341

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь IgG4 человека - linker - SpyCatcher

<400> 46

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60

agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240

tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300

aaatatggtc ccccatgccc accctgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360

ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420

tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600

tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660

gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 840

gacggctcct tcttcctcta cagcaggctc accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900

aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagtcc 960

ctctccctgt ctctgggtaa aggaagcggc gaaagcggcg tggataccct gtccggactg 1020

agcagtgagc aaggccagtc cggagatatg acaattgaag aagatagcgc cacccatatt 1080

aaattctcca aaagagatga ggacggcaaa gagctggctg gagcaacaat ggagctgaga 1140

gattcctctg gaaagactat tagtacatgg atctctgatg gccaagtgaa agatttctat 1200

ctgtatccag gaaagtacac atttgtcgaa accgctgcac cagacggata tgaggtggct 1260

acagctatta cctttacagt gaatgagcaa ggacaggtga ctgttaatgg caaagctact 1320

aaaggagacg ctcatattta a 1341

<210> 47

<211> 446

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь IgG4 человека - линкер - SpyCatcher

<400> 47

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly Ser Gly Glu Ser Gly Val Asp Thr

325 330 335

Leu Ser Gly Leu Ser Ser Glu Gln Gly Gln Ser Gly Asp Met Thr Ile

340 345 350

Glu Glu Asp Ser Ala Thr His Ile Lys Phe Ser Lys Arg Asp Glu Asp

355 360 365

Gly Lys Glu Leu Ala Gly Ala Thr Met Glu Leu Arg Asp Ser Ser Gly

370 375 380

Lys Thr Ile Ser Thr Trp Ile Ser Asp Gly Gln Val Lys Asp Phe Tyr

385 390 395 400

Leu Tyr Pro Gly Lys Tyr Thr Phe Val Glu Thr Ala Ala Pro Asp Gly

405 410 415

Tyr Glu Val Ala Thr Ala Ile Thr Phe Thr Val Asn Glu Gln Gly Gln

420 425 430

Val Thr Val Asn Gly Lys Ala Thr Lys Gly Asp Ala His Ile

435 440 445

<210> 48

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер для IgG-SpyCatcher

<400> 48

ggaagcggcg aaagcggc 18

<210> 49

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Линкер для IgG-SpyCatcher

<400> 49

Gly Ser Gly Glu Ser Gly

1 5

<210> 50

<211> 981

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hIgG4

<400> 50

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60

agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc 240

tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagtcc 300

aaatatggtc ccccatgccc accctgccca gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc 360

ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 420

tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat 480

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagttcaa cagcacgtac 540

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 600

tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 660

gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 720

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 780

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 840

gacggctcct tcttcctcta cagcaggctc accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 900

aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagtcc 960

ctctccctgt ctctgggtaa a 981

<210> 51

<211> 327

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hIgG4

<400> 51

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 52

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва Y730F

<400> 52

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tgattggcac cagattcctg actcgtatac tataa 2145

<210> 53

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва Y730F

<400> 53

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Ile Gly Thr Arg Phe Leu Thr Arg Ile Leu

705 710

<210> 54

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва B1 заменен

<400> 54

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aaccctctca gccagattcg 420

tcctcggaca acacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tggtggggtc tcgattcctt acgcatatac tataa 2145

<210> 55

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва B1 заменен

<400> 55

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Ser Gln Pro Asp Ser Ser Ser Asp Asn

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Val Gly Ser Arg Phe Leu Thr His Ile Leu

705 710

<210> 56

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v2

<400> 56

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggctccg 420

ggaaaaaaga ggacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tgattggcac cagatacctg actcgtatac tataa 2145

<210> 57

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v2

<400> 57

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ile Leu

705 710

<210> 58

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v3

<400> 58

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggctccg 420

ggaaaaaaga ggccggtaga gcactctcct gtggagccag actcctcctc gggaaccgga 480

aaggcgggcc agcagcctgc aagaaaaaga ttgaattttg gtcagactat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tgattggcac cagatacctg actcgtatac tataa 2145

<210> 59

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v3

<400> 59

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ile Leu

705 710

<210> 60

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v4

<400> 60

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggctccg 420

ggaaaaaaga ggccggtaga gcactctcct gtggagccag actcctcctc gggaaccgga 480

aaggcgggcc agcagcctgc aagaactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tgattggcac cagatacctg actcgtatac tataa 2145

<210> 61

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v4

<400> 61

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ile Leu

705 710

<210> 62

<211> 2157

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v5

<400> 62

atgtcttctt tgtttaaaga gtacctgcag agtaccggac tggtgggtat ccagtcggga 60

gcgccgaagc caaaggccgg ccagcagaag caggatacag ggtcctttga gtggaaaaag 120

aaggaggaca cagccagagg gctggtcctt cccggttaca agtacctcgg gcccttcaac 180

ggtctagagc ggggcgagcc tgtgaatgcc gcggacgccg cggcccagcg acacgaccga 240

cagtacgatc gtattctaca acaagggggt aatccatacc tcacgtacaa ccacgccgac 300

cgagagttcc aggaggagct ccagtctgac gagtcttttg ggggaaatct tggcaaggct 360

gtgtttcagg ccaagaagcg aatcctagag cccctcggtc tggttgaaga ggatccctct 420

cagccagatt cgtcctcgga caacacggcg ccacccgtga aaaagtcccg tctcgaagaa 480

gcccagccca ttcaaagtcc agacgtttcc agcagcactg gcggaggaat tgccgacgtc 540

atgtctggag atgctgaaat ggctgcagtg ggcgggggag caccgggcgt cgacggccag 600

ggtgccgagg gagtgggtac ttcctcgggt aattggcatt gcgattccca gtggtcagaa 660

ggacacgtca gaaccaccag caccagaacc tgggtgttgc ccagctacaa caaccacctg 720

tataaacggc ttggaagtag cgcacaatcc aatacctaca acggattctc caccccctgg 780

ggatacctcg acttcaatag atggcactgt cacttcagtc ctcggaactg gcaacgtctc 840

atcaacaaca actggggcat cagaccaaaa agacttaatg ttaaattgtt caacatacaa 900

gtcaaagagg tcacgacgga aggggggacg acgaccgtcg ccaataacct taccagcacg 960

attcaggtgt ttgcggacaa cgcgtacgaa ctcccgtatg ttgtcgacgc gggtcacgag 1020

ggggcattgc cgccgttccc aaacgacgtg tttatgattc cccaatacgg atactgcggg 1080

ctggtgtctg gtcaaagtca ggctcagtcg gacttgtgtt cgttttattg cctggagtat 1140

tttccatccc agatgctgag aacaggaaac aattttgaaa tgaatttcag gtttgaagac 1200

gttccatttc actccatgta cgcccacagc cagtctctag acaggctcat gaatccttta 1260

attgatcagt atctgtggag tctaaaacaa acaggaaacc cgactggatc aacaacgaga 1320

gacttaaaat ttatcaagaa caaagttccc aattttgcac attatggaaa aaattggctt 1380

cctggacctt ttattagaca acaggggtgg acaacacaaa atattaataa tagtgttgtt 1440

aattttaatg acatgctggg aaaaaattcg acatttactt tggacactag atggagttca 1500

ttagcgcctg gtccgtgtat gggggatgac ggacgaactc catccaccac caagttctca 1560

aatgctcagc tcatgtttgg atctggaaca caacccaccg aaggcggtga agatgctgta 1620

catattacat ccgagtcgga ggtcaaggca accaacccaa ctgcaatcga tgaatacgga 1680

cgagtggccg ataatacgca aaatgcaaca accgccccaa ccacagtggg aaatgctgca 1740

atgggggcca tgcctgggat ggtgtggcaa gatagggata tctatcttca aggacccatc 1800

tggggaaaaa taccccatac agacggacat tttcatccgt ctcctctcat gggggggttt 1860

ggatacagaa aaccccctcc gcaaattttt attaaaaaca cccccgttcc tggaaatccg 1920

gcaactacat tttctccaaa tagaataaac aatttcatta ctcaatactc aacgggacaa 1980

gtgaccgtta ctattgactg ggagctgcaa aaggaaaact caaagagatg gaacccagaa 2040

gtacaattta catcaaattt tggcacggtc gattcactaa actgggcacc ggacaacgcg 2100

ggaaactaca aagaaccaag ggtgattggc accagatacc tgactcgtat actataa 2157

<210> 63

<211> 718

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v5

<400> 63

Met Ser Ser Leu Phe Lys Glu Tyr Leu Gln Ser Thr Gly Leu Val Gly

1 5 10 15

Ile Gln Ser Gly Ala Pro Lys Pro Lys Ala Gly Gln Gln Lys Gln Asp

20 25 30

Thr Gly Ser Phe Glu Trp Lys Lys Lys Glu Asp Thr Ala Arg Gly Leu

35 40 45

Val Leu Pro Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Glu Arg

50 55 60

Gly Glu Pro Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Gln Arg His Asp Arg

65 70 75 80

Gln Tyr Asp Arg Ile Leu Gln Gln Gly Gly Asn Pro Tyr Leu Thr Tyr

85 90 95

Asn His Ala Asp Arg Glu Phe Gln Glu Glu Leu Gln Ser Asp Glu Ser

100 105 110

Phe Gly Gly Asn Leu Gly Lys Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Ile

115 120 125

Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Glu Asp Pro Ser Gln Pro Asp Ser

130 135 140

Ser Ser Asp Asn Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu

145 150 155 160

Ala Gln Pro Ile Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly

165 170 175

Ile Ala Asp Val Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly

180 185 190

Gly Ala Pro Gly Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser

195 200 205

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg

210 215 220

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu

225 230 235 240

Tyr Lys Arg Leu Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe

245 250 255

Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe

260 265 270

Ser Pro Arg Asn Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg

275 280 285

Pro Lys Arg Leu Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val

290 295 300

Thr Thr Glu Gly Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr

305 310 315 320

Ile Gln Val Phe Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp

325 330 335

Ala Gly His Glu Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met

340 345 350

Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala

355 360 365

Gln Ser Asp Leu Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln

370 375 380

Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp

385 390 395 400

Val Pro Phe His Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu

405 410 415

Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly

420 425 430

Asn Pro Thr Gly Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys

435 440 445

Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe

450 455 460

Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val

465 470 475 480

Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr

485 490 495

Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg

500 505 510

Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser

515 520 525

Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser

530 535 540

Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly

545 550 555 560

Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val

565 570 575

Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg

580 585 590

Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp

595 600 605

Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys

610 615 620

Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro

625 630 635 640

Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr

645 650 655

Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu

660 665 670

Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly

675 680 685

Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys

690 695 700

Glu Pro Arg Val Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ile Leu

705 710 715

<210> 64

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v2 B1 заменен

<400> 64

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggctccg 420

ggaaaaaaga ggacggcgcc acccgtgaaa aagtcccgtc tcgaagaagc ccagcccatt 480

caaagtccag acgtttccag cagcactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tggtggggtc tcgattcctt acgcatatac tataa 2145

<210> 65

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v2 B1 заменен

<400> 65

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu Ala Gln Pro Ile

145 150 155 160

Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Val Gly Ser Arg Phe Leu Thr His Ile Leu

705 710

<210> 66

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v3 B1 заменен

<400> 66

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggctccg 420

ggaaaaaaga ggccggtaga gcactctcct gtggagccag actcctcctc gggaaccgga 480

aaggcgggcc agcagcctgc aagaaaaaga ttgaattttg gtcagactat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tggtggggtc tcgattcctt acgcatatac tataa 2145

<210> 67

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v3 B1 заменен

<400> 67

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Val Gly Ser Arg Phe Leu Thr His Ile Leu

705 710

<210> 68

<211> 2145

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v4 B1 заменен

<400> 68

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaataaga 60

cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccaccaaagc ccgcagagcg gcataaggac 120

gacagcaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240

cggcagctcg acagcggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgcggagttt 300

caggagcgcc ttaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcggacgagc agtcttccag 360

gcgaaaaaga gggttcttga acctctgggc ctggttgagg aacctgttaa gacggctccg 420

ggaaaaaaga ggccggtaga gcactctcct gtggagccag actcctcctc gggaaccgga 480

aaggcgggcc agcagcctgc aagaactggc ggaggaattg ccgacgtcat gtctggagat 540

gctgaaatgg ctgcagtggg cgggggagca ccgggcgtcg acggccaggg tgccgaggga 600

gtgggtactt cctcgggtaa ttggcattgc gattcccagt ggtcagaagg acacgtcaga 660

accaccagca ccagaacctg ggtgttgccc agctacaaca accacctgta taaacggctt 720

ggaagtagcg cacaatccaa tacctacaac ggattctcca ccccctgggg atacctcgac 780

ttcaatagat ggcactgtca cttcagtcct cggaactggc aacgtctcat caacaacaac 840

tggggcatca gaccaaaaag acttaatgtt aaattgttca acatacaagt caaagaggtc 900

acgacggaag gggggacgac gaccgtcgcc aataacctta ccagcacgat tcaggtgttt 960

gcggacaacg cgtacgaact cccgtatgtt gtcgacgcgg gtcacgaggg ggcattgccg 1020

ccgttcccaa acgacgtgtt tatgattccc caatacggat actgcgggct ggtgtctggt 1080

caaagtcagg ctcagtcgga cttgtgttcg ttttattgcc tggagtattt tccatcccag 1140

atgctgagaa caggaaacaa ttttgaaatg aatttcaggt ttgaagacgt tccatttcac 1200

tccatgtacg cccacagcca gtctctagac aggctcatga atcctttaat tgatcagtat 1260

ctgtggagtc taaaacaaac aggaaacccg actggatcaa caacgagaga cttaaaattt 1320

atcaagaaca aagttcccaa ttttgcacat tatggaaaaa attggcttcc tggacctttt 1380

attagacaac aggggtggac aacacaaaat attaataata gtgttgttaa ttttaatgac 1440

atgctgggaa aaaattcgac atttactttg gacactagat ggagttcatt agcgcctggt 1500

ccgtgtatgg gggatgacgg acgaactcca tccaccacca agttctcaaa tgctcagctc 1560

atgtttggat ctggaacaca acccaccgaa ggcggtgaag atgctgtaca tattacatcc 1620

gagtcggagg tcaaggcaac caacccaact gcaatcgatg aatacggacg agtggccgat 1680

aatacgcaaa atgcaacaac cgccccaacc acagtgggaa atgctgcaat gggggccatg 1740

cctgggatgg tgtggcaaga tagggatatc tatcttcaag gacccatctg gggaaaaata 1800

ccccatacag acggacattt tcatccgtct cctctcatgg gggggtttgg atacagaaaa 1860

ccccctccgc aaatttttat taaaaacacc cccgttcctg gaaatccggc aactacattt 1920

tctccaaata gaataaacaa tttcattact caatactcaa cgggacaagt gaccgttact 1980

attgactggg agctgcaaaa ggaaaactca aagagatgga acccagaagt acaatttaca 2040

tcaaattttg gcacggtcga ttcactaaac tgggcaccgg acaacgcggg aaactacaaa 2100

gaaccaaggg tggtggggtc tcgattcctt acgcatatac tataa 2145

<210> 69

<211> 714

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v4 B1 заменен

<400> 69

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Thr Gly Gly Gly Ile Ala Asp Val

165 170 175

Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly Gly Ala Pro Gly

180 185 190

Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser Ser Gly Asn Trp

195 200 205

His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg Thr Thr Ser Thr

210 215 220

Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu

225 230 235 240

Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp

245 250 255

Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe Ser Pro Arg Asn

260 265 270

Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg Pro Lys Arg Leu

275 280 285

Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Glu Gly

290 295 300

Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe

305 310 315 320

Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp Ala Gly His Glu

325 330 335

Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr

340 345 350

Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala Gln Ser Asp Leu

355 360 365

Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr

370 375 380

Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp Val Pro Phe His

385 390 395 400

Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu

405 410 415

Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly Asn Pro Thr Gly

420 425 430

Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys Val Pro Asn Phe

435 440 445

Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe Ile Arg Gln Gln

450 455 460

Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val Asn Phe Asn Asp

465 470 475 480

Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Arg Trp Ser Ser

485 490 495

Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg Thr Pro Ser Thr

500 505 510

Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser Gly Thr Gln Pro

515 520 525

Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser Glu Ser Glu Val

530 535 540

Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly Arg Val Ala Asp

545 550 555 560

Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val Gly Asn Ala Ala

565 570 575

Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Ile Tyr Leu

580 585 590

Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His

595 600 605

Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Pro Pro Gln

610 615 620

Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro Ala Thr Thr Phe

625 630 635 640

Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln

645 650 655

Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg

660 665 670

Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly Thr Val Asp Ser

675 680 685

Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys Glu Pro Arg Val

690 695 700

Val Gly Ser Arg Phe Leu Thr His Ile Leu

705 710

<210> 70

<211> 2157

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v5 B1 заменен

<400> 70

atgtcttctt tgtttaaaga gtacctgcag agtaccggac tggtgggtat ccagtcggga 60

gcgccgaagc caaaggccgg ccagcagaag caggatacag ggtcctttga gtggaaaaag 120

aaggaggaca cagccagagg gctggtcctt cccggttaca agtacctcgg gcccttcaac 180

ggtctagagc ggggcgagcc tgtgaatgcc gcggacgccg cggcccagcg acacgaccga 240

cagtacgatc gtattctaca acaagggggt aatccatacc tcacgtacaa ccacgccgac 300

cgagagttcc aggaggagct ccagtctgac gagtcttttg ggggaaatct tggcaaggct 360

gtgtttcagg ccaagaagcg aatcctagag cccctcggtc tggttgaaga ggatccctct 420

cagccagatt cgtcctcgga caacacggcg ccacccgtga aaaagtcccg tctcgaagaa 480

gcccagccca ttcaaagtcc agacgtttcc agcagcactg gcggaggaat tgccgacgtc 540

atgtctggag atgctgaaat ggctgcagtg ggcgggggag caccgggcgt cgacggccag 600

ggtgccgagg gagtgggtac ttcctcgggt aattggcatt gcgattccca gtggtcagaa 660

ggacacgtca gaaccaccag caccagaacc tgggtgttgc ccagctacaa caaccacctg 720

tataaacggc ttggaagtag cgcacaatcc aatacctaca acggattctc caccccctgg 780

ggatacctcg acttcaatag atggcactgt cacttcagtc ctcggaactg gcaacgtctc 840

atcaacaaca actggggcat cagaccaaaa agacttaatg ttaaattgtt caacatacaa 900

gtcaaagagg tcacgacgga aggggggacg acgaccgtcg ccaataacct taccagcacg 960

attcaggtgt ttgcggacaa cgcgtacgaa ctcccgtatg ttgtcgacgc gggtcacgag 1020

ggggcattgc cgccgttccc aaacgacgtg tttatgattc cccaatacgg atactgcggg 1080

ctggtgtctg gtcaaagtca ggctcagtcg gacttgtgtt cgttttattg cctggagtat 1140

tttccatccc agatgctgag aacaggaaac aattttgaaa tgaatttcag gtttgaagac 1200

gttccatttc actccatgta cgcccacagc cagtctctag acaggctcat gaatccttta 1260

attgatcagt atctgtggag tctaaaacaa acaggaaacc cgactggatc aacaacgaga 1320

gacttaaaat ttatcaagaa caaagttccc aattttgcac attatggaaa aaattggctt 1380

cctggacctt ttattagaca acaggggtgg acaacacaaa atattaataa tagtgttgtt 1440

aattttaatg acatgctggg aaaaaattcg acatttactt tggacactag atggagttca 1500

ttagcgcctg gtccgtgtat gggggatgac ggacgaactc catccaccac caagttctca 1560

aatgctcagc tcatgtttgg atctggaaca caacccaccg aaggcggtga agatgctgta 1620

catattacat ccgagtcgga ggtcaaggca accaacccaa ctgcaatcga tgaatacgga 1680

cgagtggccg ataatacgca aaatgcaaca accgccccaa ccacagtggg aaatgctgca 1740

atgggggcca tgcctgggat ggtgtggcaa gatagggata tctatcttca aggacccatc 1800

tggggaaaaa taccccatac agacggacat tttcatccgt ctcctctcat gggggggttt 1860

ggatacagaa aaccccctcc gcaaattttt attaaaaaca cccccgttcc tggaaatccg 1920

gcaactacat tttctccaaa tagaataaac aatttcatta ctcaatactc aacgggacaa 1980

gtgaccgtta ctattgactg ggagctgcaa aaggaaaact caaagagatg gaacccagaa 2040

gtacaattta catcaaattt tggcacggtc gattcactaa actgggcacc ggacaacgcg 2100

ggaaactaca aagaaccaag ggtggtgggg tctcgattcc ttacgcatat actataa 2157

<210> 71

<211> 718

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cap VP1 AAV2 VP2 VP3 вируса морского льва v5 B1 заменен

<400> 71

Met Ser Ser Leu Phe Lys Glu Tyr Leu Gln Ser Thr Gly Leu Val Gly

1 5 10 15

Ile Gln Ser Gly Ala Pro Lys Pro Lys Ala Gly Gln Gln Lys Gln Asp

20 25 30

Thr Gly Ser Phe Glu Trp Lys Lys Lys Glu Asp Thr Ala Arg Gly Leu

35 40 45

Val Leu Pro Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Glu Arg

50 55 60

Gly Glu Pro Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Gln Arg His Asp Arg

65 70 75 80

Gln Tyr Asp Arg Ile Leu Gln Gln Gly Gly Asn Pro Tyr Leu Thr Tyr

85 90 95

Asn His Ala Asp Arg Glu Phe Gln Glu Glu Leu Gln Ser Asp Glu Ser

100 105 110

Phe Gly Gly Asn Leu Gly Lys Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Ile

115 120 125

Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Glu Asp Pro Ser Gln Pro Asp Ser

130 135 140

Ser Ser Asp Asn Thr Ala Pro Pro Val Lys Lys Ser Arg Leu Glu Glu

145 150 155 160

Ala Gln Pro Ile Gln Ser Pro Asp Val Ser Ser Ser Thr Gly Gly Gly

165 170 175

Ile Ala Asp Val Met Ser Gly Asp Ala Glu Met Ala Ala Val Gly Gly

180 185 190

Gly Ala Pro Gly Val Asp Gly Gln Gly Ala Glu Gly Val Gly Thr Ser

195 200 205

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Ser Glu Gly His Val Arg

210 215 220

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Leu

225 230 235 240

Tyr Lys Arg Leu Gly Ser Ser Ala Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe

245 250 255

Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Leu Asp Phe Asn Arg Trp His Cys His Phe

260 265 270

Ser Pro Arg Asn Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Ile Arg

275 280 285

Pro Lys Arg Leu Asn Val Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val

290 295 300

Thr Thr Glu Gly Gly Thr Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr

305 310 315 320

Ile Gln Val Phe Ala Asp Asn Ala Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Val Asp

325 330 335

Ala Gly His Glu Gly Ala Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met

340 345 350

Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Cys Gly Leu Val Ser Gly Gln Ser Gln Ala

355 360 365

Gln Ser Asp Leu Cys Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln

370 375 380

Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Met Asn Phe Arg Phe Glu Asp

385 390 395 400

Val Pro Phe His Ser Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu

405 410 415

Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Trp Ser Leu Lys Gln Thr Gly

420 425 430

Asn Pro Thr Gly Ser Thr Thr Arg Asp Leu Lys Phe Ile Lys Asn Lys

435 440 445

Val Pro Asn Phe Ala His Tyr Gly Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Phe

450 455 460

Ile Arg Gln Gln Gly Trp Thr Thr Gln Asn Ile Asn Asn Ser Val Val

465 470 475 480

Asn Phe Asn Asp Met Leu Gly Lys Asn Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr

485 490 495

Arg Trp Ser Ser Leu Ala Pro Gly Pro Cys Met Gly Asp Asp Gly Arg

500 505 510

Thr Pro Ser Thr Thr Lys Phe Ser Asn Ala Gln Leu Met Phe Gly Ser

515 520 525

Gly Thr Gln Pro Thr Glu Gly Gly Glu Asp Ala Val His Ile Thr Ser

530 535 540

Glu Ser Glu Val Lys Ala Thr Asn Pro Thr Ala Ile Asp Glu Tyr Gly

545 550 555 560

Arg Val Ala Asp Asn Thr Gln Asn Ala Thr Thr Ala Pro Thr Thr Val

565 570 575

Gly Asn Ala Ala Met Gly Ala Met Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg

580 585 590

Asp Ile Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Gly Lys Ile Pro His Thr Asp

595 600 605

Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Tyr Arg Lys

610 615 620

Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Gly Asn Pro

625 630 635 640

Ala Thr Thr Phe Ser Pro Asn Arg Ile Asn Asn Phe Ile Thr Gln Tyr

645 650 655

Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Thr Ile Asp Trp Glu Leu Gln Lys Glu

660 665 670

Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Phe Gly

675 680 685

Thr Val Asp Ser Leu Asn Trp Ala Pro Asp Asn Ala Gly Asn Tyr Lys

690 695 700

Glu Pro Arg Val Val Gly Ser Arg Phe Leu Thr His Ile Leu

705 710 715

<210> 72

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> KTag

<400> 72

Ala Thr His Ile Lys Phe Ser Lys Arg Asp

1 5 10

<210> 73

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> SpyTag002

<400> 73

Val Pro Thr Ile Val Met Val Asp Ala Tyr Lys Arg Tyr Lys

1 5 10

<---

Claims (100)

1. Рекомбинантный капсидный белок аденоассоциированного вируса (AAV), для доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку, где по меньшей мере 5 аминокислот аминокислотной последовательности капсидного белка AAV характеризуются по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью из по меньшей мере 5 аминокислот капсидного белка AAV животного, не являющегося приматом, где капсидный белок AAV выбран из группы, состоящей из:

(a) химерного капсидного белка VP1 AAV,

(b) нехимерного капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, которая снижает естественный тропизм капсидного белка AAV и/или создает детектируемую метку,

(c) химерного капсидного белка VP2 AAV,

(d) нехимерного капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, которая снижает естественный тропизм капсидного белка AAV и/или создает детектируемую метку,

(e) химерного капсидного белка VP3 AAV, и

(f) нехимерного капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, модифицированного с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, которая снижает естественный тропизм капсидного белка AAV и/или создает детектируемую метку.

2. Рекомбинантный капсидный белок AAV по п.1, где химерный капсидный белок VP1 AAV, химерный капсидный белок VP2 AAV, и/или химерный капсидный белок VP3 AAV модифицирован с включением по меньшей мере первого партнера из связывающейся пары белок:белок, детектируемой метки и/или точечной мутации, которая снижает естественный тропизм капсидного белка AAV и/или создает детектируемую метку.

3. Рекомбинантный капсидный белок AAV по п.1 или 2, где капсидный белок AAV представляет собой химерный капсидный белок AAV, где (A) аминокислотная последовательность, характеризующаяся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью по меньшей мере 5 аминокислот капсидного белка AAV, животного, не являющегося приматом, функционально связана с (B) аминокислотной последовательностью, характеризующейся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью по меньшей мере 5 аминокислот второго капсидного белка AAV, и где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом.

4. Рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из предыдущих пунктов, где:

(a) связывающаяся пара белок:белок выбрана из SpyTag:SpyCatcher, SpyTag:KTag, Isopeptag:пилин C, SnoopTag:SnoopCatcher, и SpyTag002:SpyCatcher002;

(b) первый партнер из связывающейся пары белок:белок содержит c-myc, содержащую последовательность, изложенную под SEQ ID NO:44;

(c) детектируемая метка предусматривает эпитоп B1, содержащий аминокислотную последовательность IGTRYLTR (SEQ ID NO:45);

(d) (i) уникальная область VP1 (VP1-u) химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью VP1-u второго AAV, и где общая область VP1/VP2 и область VP3 химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 и области VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или нехимерный капсидный белок VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с капсидным белком VP1 AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) общая область VP1/VP2 химерного капсидного белка VP2 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 второго AAV, и где VP3 область химерного капсидного белка VP2 AAV характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, или нехимерный капсидный белок VP2 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с капсидным белком VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом;

(e) (i) уникальная область VP1 (VP1-u) химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью VP1-u второго AAV, и где общая область VP1/VP2 и область VP3 химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 и области VP3 AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) общая область VP1/VP2 химерного капсидного белка VP2 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 второго AAV, и где VP3 область химерного капсидного белка VP2 AAV характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с областью VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом;

(f) (i) уникальная область VP1 (VP1-u) химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью VP1-u второго AAV, и где общая область VP1/VP2 и область VP3 химерного капсидного белка VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью общей области VP1/VP2 и области VP3 AAV животного, не являющегося приматом,

(ii) капсидный белок VP2 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и/или

(iii) капсидный белок VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом, и/или

(g) (i) капсидный белок VP1 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP1 AAV животного, не являющегося приматом, и/или

(ii) капсидный белок VP2 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP2 AAV животного, не являющегося приматом, и

(iii) капсидный белок VP3 AAV содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью капсидного белка VP3 AAV животного, не являющегося приматом.

5. Рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из предыдущих пунктов, где

(a) рекомбинантный капсидный белок AAV содержит первый и/или второй линкер, функционально связывающий первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку с рекомбинантным капсидным белком AAV;

(b) рекомбинантный капсидный белок AAV содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок и/или детектируемую метку, функционально связанные с вариабельной областью рекомбинантного капсидного белка AAV;

(c) первый партнер из связывающейся пары белок:белок фланкирован первым и/или вторым линкером, который(-ые) соединяет(-ют) первого партнера из связывающейся пары белок:белок с рекомбинантным капсидным белком AAV,

и где длина каждого из первого и/или второго линкера независимо составляет по меньшей мере одну аминокислоту; и/или

(d) рекомбинантный капсидный белок AAV дополнительно содержит второго когнатного партнера из связывающейся пары белок:белок, где необязательно первый и второй партнеры связаны ковалентной связью, необязательно изопептидной связью; дополнительно, необязательно, где:

(i) первый партнер из связывающейся пары белок:белок предусматривает

SpyTag и/или второй когнатный партнер предусматривает SpyCatcher или KTag;

(ii) первый партнер представляет собой KTag, а второй когнатный партнер предусматривает SpyTag;

(iii) первый партнер представляет собой SnoopTag, а второй когнатный партнер предусматривает SnoopCatcher;

(iv) первый партнер представляет собой Isopeptag, а второй когнатный партнер предусматривает пилин-C; или

(v) первый партнер представляет собой SpyTag002, а второй когнатный партнер предусматривает SpyCatcher002.

6. Рекомбинантный капсидный белок AAV по п.5(d), где второй когнатный партнер функционально связан с нацеливающим лигандом, где необязательно нацеливающий лиганд представляет собой связывающий фрагмент, дополнительно необязательно, где связывающий фрагмент представляет собой антитело или его часть; дополнительно необязательно, где:

(a) антитело или его часть слиты со SpyCatcher; и/или

(b) антитело или его часть слиты с линкером на C-конце, и линкер слит со SpyCatcher на С-конце линкера, необязательно, где линкер содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO:49 (GSGESG).

7. Рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из пп. 3-6, где:

(a) второй AAV представляет собой AAV примата или комбинацию AAV приматов;

(b) второй AAV выбран из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 и их комбинации;

(c) указанный AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой AAV животного, не являющегося приматом, приведенный в таблице 1;

(d) указанный AAV животного, не являющегося приматом, представляет собой птичий AAV (AAAV), AAV морского льва, AAV бородатой агамы, AAV чешуйчатого пресмыкающегося или AAV млекопитающего; необязательно, где:

(i) модификация находится в положении I444 или I580 капсидного белка VP1 AAAV;

(ii) модификация находится в положении I573 или I436 капсидного белка VP1 AAV бородатой агамы; или

(iii) модификация находится в положении, выбранном из группы, состоящей из I429, I430, I431, I432, I433, I434, I436, I437, и A565 капсидного белка VP1 AAV морского льва.

8. Рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из предыдущих пунктов, где рекомбинантный капсидный белок AAV содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

(i) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:2,

(ii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:4,

(iii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:6,

(iv) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:8,

(v) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:10,

(vi) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:12,

(vii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:14,

(viii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:16,

(ix) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:18,

(x) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:20,

(xi) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:22,

(xii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:24,

(xiii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:26,

(xiv) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:28,

(xv) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:30,

(xvi) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:32,

(xvii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:34,

(xviii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:36,

(xix) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:53,

(xx) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:55,

(xxi) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:57,

(xxii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:59,

(xxiii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:61,

(xxiv) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:63,

(xxv) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:65,

(xxvi) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:67,

(xxvii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:69,

(xxviii) аминокислотной последовательности, изложенной под SEQ ID NO:71,

(xxix) аминокислотной последовательности, характеризующейся по меньшей мере 95% идентичностью с SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, или SEQ ID NO:71, и

(xxx) аминокислотной последовательности любой из частей VP2 и/или VP3 из аминокислотных последовательностей, изложенных в любом из (i)-(xxix).

9. Рекомбинантный AAV капсид для доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку, содержащий рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из предыдущих пунктов.

10. Рекомбинантный AAV капсид по п.9, где дополнительно, рекомбинантный AAV капсид содержит эталонный капсидный белок AAV, так что рекомбинантный AAV капсид представляет собой мозаичный капсид AAV;

необязательно, где рекомбинантный капсидный белок AAV содержит модификацию с помощью первого партнера из связывающейся пары белок:белок, и эталонный капсидный белок AAV без первого партнера из связывающейся пары белок:белок.

11. Рекомбинантная частица AAV для доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку, содержащая (i) капсид AAV, содержащий рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из пп. 1-8 или рекомбинантный AAV капсид по п.9 или 10, и (ii) упакованную в капсид AAV последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV, где по меньшей мере 15 нуклеотидов последовательности ITR AAV содержит последовательность нуклеиновой кислоты, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью, с последовательностью ITR второго AAV, где второй AAV отличается от AAV животного, не являющегося приматом, и где рекомбинантная частица AAV способна инфицировать млекопитающего-хозяина, необязательно примата-хозяина.

12. Рекомбинантная частица AAV по п.11, где последовательность ITR AAV содержит химерную последовательность нуклеиновой кислоты, и где по меньшей мере 15 нуклеотидов последовательности нуклеиновой кислоты, характеризующейся по меньшей мере 95% идентичностью с ITR AAV животного, не являющегося приматом, функционально связана с по меньшей мере 15 нуклеотидами последовательности нуклеиновой кислоты, характеризующейся по меньшей мере 95% идентичностью с ITR второго AAV.

13. Рекомбинантная частица AAV по п.11 или 12, где рекомбинантный капсидный белок AAV содержит первого партнера из связывающейся пары белок:белок, где связывающаяся пара белок:белок направляет тропизм частицы AAV.

14. Молекула нуклеиновой кислоты для продуцирования рекомбинантного капсидного белка AAV по любому из пп. 1-8, содержащая ген cap, кодирующий рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из пп. 1-8.

15. Упаковывающая клетка для продуцирования рекомбинантных частиц AAV, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 14.

16. Рекомбинантная частица AAV по любому из пп. 11-13, дополнительно содержащая представляющий интерес нуклеотид.

17. Способ получения рекомбинантной частицы AAV, предусматривающий культивирование упаковывающей клетки по п. 15 в условиях, достаточных для продуцирования частиц AAV.

18. Фармацевтическая композиция, содержащая: (a) (i) рекомбинантную частицу AAV, содержащую рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из пп. 1-8, или рекомбинантный капсид AAV по п. 9 или 10, или (ii) рекомбинантную частицу AAV по любому из пп. 11-13 или 16, или полученную способом по п.17, и (b) фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.

19. Применение рекомбинантной частицы AAV, содержащей рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из пп. 1-8, или рекомбинантный капсид AAV по п. 9 или 10; рекомбинантной частицы AAV по любому из пп. 11-13 или 16, или полученной способом по п.17; или фармацевтической композиции по п.18 для доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку-мишень, предусматривающее приведение клетки-мишени в контакт с указанной рекомбинантной частицей AAV или указанной композицией; необязательно, где:

(a) капсид рекомбинантной частицы AAV содержит нацеливающий лиганд, который специфически связывает белок, экспрессируемый на поверхности клетки-мишени;

(b) клетка-мишень находится в субъекте; необязательно, где субъектом является животное-примат, предпочтительно человек;

(c) клетка-мишень является клеткой человека; и/или

(d) представляющий интерес нуклеотид кодирует терапевтический белок, суицидный ген, антитело или его фрагмент, систему CRISPR/Cas, антисмысловой олигонуклеотид, рибозим, молекулу RNAi или молекулу shRNA.

20. Способ доставки представляющего интерес нуклеотида в клетку-мишень in vitro или ex vivo, включающий приведение клетки-мишени в контакт с: (i) рекомбинантной частицей AAV, содержащей рекомбинантный капсидный белок AAV по любому из пп. 1-8, или рекомбинантный капсид AAV по п. 9 или 10; (ii) рекомбинантной частицей AAV по любому из пп. 11-13 или 16, или полученной способом по п.17; или (iii) фармацевтической композицией по п.18, необязательно, где:

(а) капсид рекомбинантной частицы AAV содержит нацеливающий лиганд, который специфически связывается с белком, экспрессируемым на поверхности клетки-мишени;

(b) приведение в контакт выполняют ex vivo;

(c) клетка-мишень представляет собой клетку человека; и/или

(d) нуклеотид, представляющий интерес, кодирует терапевтический белок, суицидный ген, антитело или его фрагмент, систему CRISPR/Cas, антисмысловой олигонуклеотид, рибозим, молекулу RNAi или молекулу shRNA.