RU2736590C2

RU2736590C2 - Велдореотид, обладающий плохой растворимостью в физиологических условиях, для применения при лечении акромегалии, акромегалии со злокачественным новообразованием, экспрессирующих sst-r5 опухолей, диабета 2 типа, гипергликемии и опухолей, связанных с гормонами

Info

Publication number: RU2736590C2
Application number: RU2018132631A
Authority: RU
Inventors: Майкл АФАРГАН
Original assignee: Стронгбридж Даблин Лимитед
Priority date: 2016-02-16
Filing date: 2017-02-16
Publication date: 2020-11-18
Also published as: WO2017141106A1; RU2018132631A; CA3014406A1; CN109462982A; JP2019504897A; RU2018132631A3; EP3416666B1; ES2906791T3; JP7030720B2; BR112018016774A2; EP3416666A1; AU2017220728A1

Abstract

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и касается лечения опухолей, экспрессирующих SST-R5. Для этого вводят эффективное количество Фармацевтической композиции, содержащей инкапсулированный в полимерную микросферу велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль, и эксципиент, выбранный из гидроксипропил-β-циклодекстрина (HPBCD) или декстрозы. Введение такой композиции обеспечивает эффективное лечение при снижении побочных эффектов за счет повышения растворимости и биодоступности лекарственного средства. 4 н. и 24 з.п. ф-лы, 26 табл., 7 пр., 29 ил.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[1] Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям и способам применения таких фармацевтических композиций, содержащих пептиды или их фармацевтически приемлемые соли, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в физиологических условиях.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[2] Основная проблема, которая препятствует использованию линейных пептидов качестве лекарственных средств, связана с тем, что такие пептиды существуют в быстром равновесии между многими конформациями в то время как только очень немногие из таких конформаций являются биоактивными. Такая гибкость приводит к плохой селективности, быстрому протеолитическому расщеплению и низкой биодоступности. Одним из лучших способов преодолеть эту проблему является циклизация, которая вводит в пептиды конформационное затруднение.

[3] В природных циклических пептидах циклизация связывает конкретные боковые цепи и/или концевые группы в пептиде. Эти способы циклизации, называемые классическими способами циклизации, сильно ограничены из-за небольшого числа боковых цепей аминокислот и пептидных концов, которые поддаются циклизации. Таким образом, разнообразие возможных затрудненных «классических» циклических аналогов данной последовательности мало.

[4] Циклизация структуры преодолевает эти ограничения (Afargan et al., Novel Long-Acting Somatostain Analog with Endocrine Selectivity: Potent Suppression of Growth Hormone But Not of Insulin, Endocrinology, 142:1 (2001) 477-486). При использовании этого метода циклизация происходит путем ковалентного связывания одного или нескольких атомов α-азота в пептидной цепи друг с другом, или с аминными или карбоксильными концами, или с боковой цепью.

[5] Соматостатин представляет собой циклический тетрадекапептид, обнаруженный как в центральной нервной системе, так и в периферических тканях. Он был первоначально выделен из гипоталамуса млекопитающих и идентифицирован как важный ингибитор секреции гормона роста из передней доли гипофиза. Его разнообразная биологическая активность включает ингибирование секреции глюкагона и инсулина из поджелудочной железы, регулирование большинства гормонов кишечника и регулирование высвобождения других нейромедиаторов, участвующих в двигательной активности и когнитивных процессах во всей центральной нервной системе (см. Lamberts, Endocrine Rev., 9:427, 1988). Кроме того, соматостатин и его аналоги являются потенциально полезными антипролиферативными агентами для лечения различных видов опухолей.

[6] В своем природном виде соматостатин имеет ограниченное применение в качестве терапевтического средства, так как он проявляет два нежелательных свойства: плохую биодоступность и кратковременность действия. По этой причине в течение последних двух десятилетий были предприняты огромные усилия для поиска аналогов соматостатина, которые обладают превосходством в эффективности, биостабильности, продолжительности действия или селективности в отношении ингибирования высвобождения гормона роста, инсулина или глюкагона.

[7] Группа аналогов соматостатина (патенты США №№ 4310518 и 4235886) включает октреотид, первый одобренный клинически доступный аналог соматостатина.

[8] Другим аналогом соматостатина является велдореотид (ранее известный как PTR 3173 или DG3173), конформационно затрудненный, с циклической структурой синтетический пептид, который изображен на фигуре 1 и представляет собой следующее:

-γ-Abu-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-N-карбамоилметил,

где Abu обозначает аминобутирил.

[9] Велдореотид ацетат более часто описывается как цикло(-γ-аминобутирил-L-фенилаланил-L-триптофанил-D-триптофанил-L-лизил-L-треонил-L-фенилаланил-N-карбамоилметил-γ-аминобутирил), ацетатная соль, или цикло(-γ-Abu-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe-N-карбамоилметил-γ-Abu), ацетатная соль.

[10] Октреотид и велдореотид имеют похожую растворимость в дистиллированной воде для инъекций, но имеют очень разную растворимость в физиологических условиях. Как только велдореотид ацетат был предложен для изучения на людях, было обнаружено что, хотя велдореотид ацетат имеет одинаковую аффинность рецептора в отношении ингибирования GH, что и октреотид, для достижения такого же фармакологического действия требуется повышенная доза, когда они оба инъецируются в буфере молочной кислоты. При изучении причины этой проблемы было обнаружено, что велдореотид ацетат плохо растворим в физиологических условиях, что приводит к «флип-флоп» фармакокинетике (скорость поглощения медленнее, чем скорость элиминирования - пер.). Предыдущие исследования с велдореотидом ацетатом показали, что инъекция раствора велдореотида ацетата приводит к неблагоприятным реакциям на месте инъекции и ограниченной биодоступности из-за его относительно низкой растворимости в изотонических растворах. Поэтому необходимы способы повышения растворимости велдореотида ацетата в физиологических (изотонических) растворах.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[11] Настоящее изобретение относится к предоставлению составов, которые повышают растворимость и дисперсионность инъекционных пептидов или их фармацевтически приемлемых солей, улучшают биодоступность и распределение, а также уменьшают побочные реакции на месте инъекции.

[12] Независимо от теорий и механизмов, обсуждаемых в этой публикации, сущность изобретения включает улучшенные физико-химические и фармакокинетические свойства и использование композиций, описанных в настоящем документе, независимо от фактического механизма.

[13] В одном варианте осуществления (вариант осуществления 1) фармацевтическая композиция содержит: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль свободно растворимы в деионизированной воде с растворимостью в деионизированной воде от 100 до 350 мг/мл, но слабо растворимы в физиологических условиях, или, иначе, в растворах с хлорид ионами, с растворимостью 2-3 мг/мл, и пептид или фармацевтически приемлемая соль выпадают в осадок при высаливании при концентрации более чем 3 мг/мл; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель; и эксципиент, где эксципиент представляет собой циклический полисахарид или декстрозу или их комбинацию.

[14] В некоторых вариантах осуществления используются уникальные свойства поверхностной активности велдореотида. Например, велдореотид уменьшает поверхностное натяжение воды более чем на 30%, и его уникальные амфифильные свойства согласуются с его применением в качестве поверхностно-активного вещества. Это уменьшение поверхностного натяжения частично уменьшается добавлением декстрозы или циклического полисахарида.

[15] Таким образом, предложена композиция, содержащая велдореотид и либо декстрозу, либо циклический полисахарид в носителе или разбавителе, где поверхностное натяжение композиции составляет от около 60% до около 80% от поверхностного натяжения только носителя. В других вариантах осуществления поверхностное натяжение композиции составляет от около 40 дин/см до около 60 дин/см, как определено при температуре 5°C.

[16] Изобретение также относится к способу производства полимерных микросфер, включающему стадии:

(i) смешивание эксципиента, содержащего циклический полисахарид или декстрозу или их комбинацию, и пептида или его фармацевтически приемлемой соли в воде с образованием первой водной смеси, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль свободно растворимы в деионизированной воде с растворимостью в деионизированной воде от 100 до 350 мг/мл, но слаборастворимы в физиологических условиях, или, иначе, в растворах с хлорид ионами, с растворимостью 2-3 мг/мл, и пептид или фармацевтически приемлемая соль выпадают в осадок путем высаливания при концентрации более чем 3 мг/мл;

(ii) смешивание полимера в органическом растворителе, таком как дихлорметан, с образованием полимерного раствора;

(iii) смешивание первой водной смеси в полимерном органическом растворе с образованием первой дисперсионной смеси, содержащей первичную эмульсию вода в масле;

(iv) смешивание поливинилового спирта (PVA) в количестве от 0,1 до 3 масс.% в физиологическом растворе с фосфатным буфером или в физиологическом растворе с образованием второй водной смеси;

(v) смешивание первичной эмульсии во второй водной смеси PVA с образованием двойной эмульсии вода-в-масле-в-воде с получением вторичной дисперсионной смеси;

(vi) давая органическому растворителю во вторичной дисперсионной смеси выпариться с образованием твердых полимерных микросфер, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль инкапсулированы в полимерные микросферы;

(vii) промывка и выделение полимерных микросфер; и

(viii) сушка микросфер в контролируемых условиях с добавлением или без добавления смеси поверхностно-активного вещества и маннитола в процессе сушки.

[17] Изобретение также относится к фармацевтическая композициям с пролонгированным высвобождением, полученных способом, указанным выше. В этом варианте осуществления предложена группа полимерных микросфер, содержащих велдореотид, где полимерные микросферы имеют площадь поверхности от около 7 м²/г до около 12 м²/г, как определено, например, методом Брунауэра-Эммета-Теллера (BET). В некоторых вариантах осуществления группа полимерных микросфер имеет средний диаметр от около 10 мкм до около 100 мкм и, более предпочтительно, в диапазоне от около 10 мкм до около 30 мкм. В некоторых вариантах осуществления полимерные микросферы могут содержать очень небольшое количество декстрозы, такое как от около 0,1% масс. до около 1% масс. от общей массы полимерных микросфер. В других вариантах осуществления полимерные микросферы могут содержать циклический полисахарид от около 1% масс. до около 10% масс. от общей массы полимерных микросфер, и, более предпочтительно, от около 2,5% масс. до около 5% масс. В некоторых вариантах осуществления велдореотид содержит от около 10% масс. до около 30% масс. от общей массы полимерных микросфер, и, более предпочтительно, от около 15% масс. до около 20% масс.

[18] Изобретение относится также к композиции для изготовления полимерных микросфер, содержащую: велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль; эксципиент, содержащий циклический полисахарид или декстрозу или их комбинацию; и полимер.

[19] Изобретение также относится к способу лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из акромегалии, акромегалии со злокачественным новообразованием, экспрессирующих SST-R5 опухолей, диабета 2 типа, гипергликемии, карциноидных опухолей, Кушингоидного синдрома и опухолей, связанных с гормонами, включающему стадию введения фармацевтической композиции по любому из пунктов 1-37 пациенту с указанным заболеванием или состоянием.

ОПИСАНИЕ ФИГУР И РИСУНКОВ

[20] Вышеизложенные аспекты и многие из сопутствующих преимуществ этого изобретения легко будет оценить, поскольку они станут более понятными со ссылкой на следующее подробное описание вместе с прилагаемыми рисунками.

[21] На фигуре 1 изображена химическая структура велдореотида.

[22] На фигуре 2 изображена трехмерная структура как велдореотида ацетата, так и октреотида ацетата.

[23] На фигуре 3 показана фотография эмульсионных композиций типа «вода-в-масле» (в/м) велдореотида ацетата, октреотида ацетата и гозерелина в смеси 80:20 хлопковое масло:вода для инъекций (WFI).

[24] На фигуре 4 показан график концентрации велдореотида ацетата в плазме у крыс, инъецированных различными препаратами велдореотида ацетата вместе с или без эксципиентов.

[25] На фигуре 5 показан график, иллюстрирующий влияние IR состава декстроза/физиологический раствор на PK профиль COR005 у крыс при 0,3 мг/кг DEX:PEP с соотношением 5:1.

[26] На фигуре 6 представлен график, иллюстрирующий влияние IR состава декстроза/физиологический раствор на PK профиль COR005 у крыс HPB/физиологический раствор (HPB:PEP 15:1).

[27] На фигуре 7 представлен график, сравнивающий SC составы HPB и DEX на минипигах при 0,4 мг/кг.

[28] На фигуре 8 представлен график, сравнивающий состав HPB с молочной кислотой на минипигах при 0,4 мг/кг.

[29] На фигуре 9 представлен график, показывающий влияние DEX на PK профиль IR состава COR005 ацетата, SC, 0,4 мг/кг, на минипигах.

[30] На фигуре 10 представлен график, показывающий влияние DEX на PK профиль IR состава COR005 ацетата, SC, 0,1 мг/кг, на минипигах.

[31] На фигуре 11 представлен график концентрации COR005 в плазме в группах лечения B9-13.

[32] На фигуре 12 показан график «взрывной» фармакокинетики в группах SC лечения B9-13 для одной SC дозы.

[33] На фигуре 13 показано влияние HPB на взрывное высвобождение COR005 PLGA MS.

[34] На фигуре 14 показано влияние DEX на взрывное высвобождение COR005 PLGA MS.

[35] На рисунке 15 показано влияние DEX:PEP 1:8 на минипигах с PK профилями микросфер PSI13 (B12:DXE:PEP 1:8).

[36] На фигуре 16 показано влияние HPB:PEP 1:2 на минипигах с PK профилями состава микросфер со взрывным высвобождением B13.

[37] На фигуре 17 показано влияние HPB:PEP 1:4 на минипигах с PK профилями взрывного высвобождения из микросфер состава B14.

[38] На фигуре 18 показаны сравнительные IVR профили COR005 из составов микросфер B9-13.

[39] На фигуре 19 показана микрофотография SEM внешней морфологии основного состава микросфер B10.

[40] На фигуре 20 показана микрофотография внутренней морфологии основного состава микросфер B10.

[41] На фигуре 21 показано SEM изображение внешней морфологии состава B12.

[42] На фигуре 22 показано SEM изображение внутренней морфологии состава B12.

[43] На фигуре 23 показано SEM изображение внешней морфологии состава B13.

[44] На фигуре 24 показано SEM изображение внутренней морфологии состава B13.

[45] На фигуре 25 показаны внешние и внутренние морфологии плацебо MS с HPB, но без пептида.

[46] На фигуре 26 показаны внешние и внутренние морфологии плацебо MS с DEX, но без пептида.

[47] На фигуре 27 показаны SEM изображения морфологии внутренних матриц MS составов с различными соотношениями HPB:PEP.

[48] На фигуре 28 показана SEM микрофотография липосом, приготовленных с помощью велдореотида ацетата.

[49] На фигуре 29 показана концентрация в плазме (нг/мл, вертикальная ось) велдореотида с течением времени (часы, горизонтальная ось) у крыс, которым вводили липосомы велдореотида ацетата, по сравнению с крысами, которым вводили велдореотид ацетат в несущей среде молочной кислоты.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[50] Все патенты и публикации, цитируемые в настоящем документе, включены в качестве ссылки во всей их полноте, включая любые цитированные в них ссылки.

[51] «Полимер», как используется в настоящем документе, относится к любому типу полимера, включая, например, гомополимер, сополимер, блок-сополимер, статистический сополимер и тому подобное. Если не указано иное, виды, описанные в настоящем документе, включают все возможные индивидуальные изомеры, например, каждый энантиомер и диастереомер, и смеси изомеров, такие как рацемические или скалемические смеси. Энантиомерные виды могут существовать в различных изомерных или энантиомерных формах. Если не указано иное, энантиомерные виды, обсуждаемые в настоящем документе без ссылки на их изомерную форму, должны включать все различные изомерные формы, а также рацемические смеси изомерных форм. Например, ссылка на молочную кислоту должна включать в настоящем документе L-молочную кислоту, D-молочную кислоту и рацемические смеси L- и D-изомеров молочной кислоты; ссылка на лактид должна включать в настоящем документе L-лактид, D-лактид и DL-лактид (где DL-лактид относится к рацемическим смесям L- и D-изомеров лактида); аналогично, ссылка на поли(лактид) должна включать в себя поли(L-лактид), поли(D-лактид) и поли(DL-лактид); аналогично, ссылка на поли(лактид-ко-гликолид) будет включать в себя поли(L-лактид-ко-гликолид), поли(D-лактид-ко-гликолид) и поли(DL-лактид-ко-гликолид).

[52] Как используется в настоящем документе термин «физиологические условия» относится к условиям, обычно имеющимся в организмах млекопитающих (например, мыши, крысы или человека), таких как раствор, который содержит растворенные вещества (например, соли, содержащие хлорид-ионы) в концентрациях, эквивалентных концентрациям, обнаруживаемым в жидкостях организма млекопитающих. Используемый в настоящем документе термин «изотонический» относится к жидкостям раствора, имеющего такое же осмотическое давление, как и какой-либо другой раствор, особенно в клетке или жидкости организма. В некоторых случаях изотонический раствор имеет такую же концентрацию растворенных веществ, что и кровь, например изотонический солевой раствор.

[53] Как используется в настоящем документе термин «велдореотид» обозначает циклический полимер, известный также как цикло(-γ-аминобутирил-L-фенилаланил-L-триптофанил-D-триптофанил-L-лизил-L-треонил-L-фенилаланил-N-карбамоилметил-γ-аминобутирил). Он известен также как «COR-005», «COR005», используемые в настоящем документе взаимозаменяемо. Он был ранее известен как PTR 3173 или DG3173. Термины «велдореотид ацетат» «COR-005 ацетат», «COR005 ацетат», используемые в настоящем документе взаимозаменяемо, относятся к моноацетатной соли велдореотида.

[54] В настоящем изобретении конформационно затрудненные с циклической структурой синтетические пептидные аналоги объединяют с эксципиентами для повышения растворимости в изотонических растворах, а также для повышения абсорбции и биодоступности для случаев, когда такие пептиды доставляются путем инъекции. В настоящем изобретении описаны также составы с конформационно затрудненными с циклической структурой синтетические пептидные аналоги вместе или без эксципиентов, которые демонстрируют улучшенные фармакокинетические свойства и уменьшенные реакции на месте инъекции.

[55] Композиции по изобретению могут быть использованы в способах по изобретению для лечения различных заболеваний, включая, но этим не ограничиваясь, злокачественное новообразование, диабет 2 типа, акромегалию и опухоли, связанные с гормонами.

[56] Фармацевтическая композиция может содержать пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях, полимер, и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[57] Фармацевтическая композиция может содержать пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях, полимер, образующий микросферы, и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[58] Фармацевтическая композиция может содержать пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях, полимер, образующий микросферы, где полимер представляет собой PLGA, и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[59] Фармацевтическая композиция может содержать пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях, полимер и эксципиент, где фармацевтическая композиция образует гель.

[60] Фармацевтическая композиция может образовывать эмульсию, содержащую пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях, масляную фазу, водную фазу и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту, где фармацевтическая композиция представляет собой эмульсию.

[61] Фармацевтическая композиция может содержать пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях, фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, липосомальный агент, образующий липосомы, и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[62] Пептиды или их фармацевтически приемлемые соли в любом из вариантов осуществлений могут представлять собой циклические пептиды, пептидные амфифилы, ионные водорастворимые поверхностно-активные вещества, аналоги соматостатина, циклические аналоги соматостатина, конформационно затрудненные пептиды с циклической структурой, конформационно затрудненные аналоги соматостатина с циклической структурой, конформационно затрудненные с циклической структурой аналоги соматостатина с одной аминогруппой, велдореотид и его фармацевтически приемлемые соли, например, велдореотид ацетат. Пептид или его фармацевтически приемлемая соль могут действовать в виде эмульгаторов вода в масле и имеют гидрофильный липофильный баланс между 3 и 8.

[63] Фармацевтически приемлемые соли могут представлять собой гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, ацетат, трифторацетат, цитрат, оксалат, малонат, салицилат, п-аминосалицилат, малат, фумарат, сукцинат, аскорбат, малеат, сульфонат, фосфонат, перхлорат, нитрат, формиат, пропионат, глюконат, лактат, тартрат, памоат, гидроксималеат, пируват, фенилацетат, бензоат, п-аминобензоат, п-гидроксибензоат, метансульфонат, этансульфонат, нитрит, гидроксиэтансульфонат, этиленсульфонат, п-толуолсульфонат, нафтилсульфонат, сульфанилат, камфорсульфонат, манделат, о-метилманделат, гидробензосульфонат, пикрат, адипат, D-о-толилтартрат, тартронат, α-толуат, (о, м, п)-толуат, нафтиламинсульфонат, октаноат, пальмитат, стеарат, соль жирной кислоты, соли других минеральных кислот и карбоновых кислот.

[64] Сахар может представлять собой моносахарид, дисахарид, полисахарид, циклический полисахарид, циклодекстрин, β-циклодекстрин, гидроксипропил-β-циклодекстрин или декстрозу. Декстроза может присутствовать в количестве около 2,5% по массе от композиции. Аминокислота может представлять собой любую аминокислоту, включая лизин или аргинин, или их фармацевтически приемлемые соли, такие как гидрохлоридная соль, например, L-лизин гидрохлорид или L аргинин гидрохлорид. Гидрофобные поглотители могут иметь по меньшей мере одну свободную аминогруппу.

[65] Фармацевтически приемлемые носители или разбавители могут включать изотонический ацетатный буфер, молочную кислоту, физиологический раствор и забуференный фосфатом физиологический раствор. Фармацевтически приемлемый носитель может быть в концентрации около 0,45% по массе от композиции, например, 0,45% физиологический раствор.

[66] Полимеры могут включать полимеры, которые образуют матрицу, которые образуют частицы, которые образуют микросферы, которые образуют гель, и которые являются биосовместимыми. Полимер может включать поли(молочно-ко-гликолевую кислоту) (PLGA) или карбоксиметилцеллюлозу. Полимеры, образующие микросферы, могут включать PLGA. PLGA может содержать молочную кислоту и гликолевую кислоту в соотношении 50:50. Полимеры, образующие гель, могут включать целлюлозные смолы и их производные, такие как карбоксиметилцеллюлозу. Полимеры, используемые для образования геля, могут быть охарактеризованы как агенты, модифицирующие вязкость, загустители и желирующие агенты (гелеобразователи). Такие агенты повышают вязкость жидкостей, к которым они добавлены, и могут образовывать гели. Такие полимеры могут иметь среднюю вязкость 1500-3000 сПа в 1%-ном водном растворе. Такие полимеры также могут взаимодействовать с пептидом или его фармацевтически приемлемой солью и циклодекстрином с образованием геля.

[67] Липосомальные агенты, образующие липосомы, могут включать фармацевтически приемлемый липосомальный агент, включая фосфатидилхолин и его производные, такие как 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DMPC), HSPC, холестерин, DSPG, DOPC, DPPG, LIPOVA-E120, LECIVA-S70, LECIVA-S90, яичный PG, MPEG-DSPE, соевое масло, полисорбат-80, яичный сфингомиелин и фосфатидилхолин.

[68] Фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, где полимер образует микросферы, могут иметь повышенную пористость, увеличенную площадь поверхности, увеличенное высвобождение пептида, увеличенное высвобождение пептида в процессе первого 24-часового периода после инъекции фармацевтической композиции пациенту по сравнению с микросферами без эксципиента. Фармацевтические композиции, где полимер образует микросферы, могут также демонстрировать профиль с замедленным высвобождением в течение по меньшей мере одной, двух или четырех недель после инъекции фармацевтической композиции пациенту. Кроме того, полимеры могут инкапсулировать эксципиент, пептид или его фармацевтически приемлемую соль или их обоих, эксципиент и пептид или его фармацевтически приемлемую соль, и пептид или его фармацевтически приемлемая соль и эксципиент могут быть локализованы в полимере. Полимеры по вышеуказанным вариантам осуществлений могут также иметь среднюю молекулярную массу в интервале между около 7 и около 17 килодальтон или 38 и 54 килодальтон.

[69] Фармацевтические композиции могут быть введены иглой малого калибра, равной 27G.

[70] Масляная фаза может содержать хлопковое масло или любое фармацевтически приемлемое масло. Водная фаза по вышеизложенным вариантам осуществлений может содержать воду или какую-либо фармацевтически приемлемую водную несущую среду для лекарственного средства. Фармацевтические композиции могут образовывать эмульсию, которая представляет собой эмульсию вода-в-масле. Соотношение масляной фазы и водной фазы может быть в интервале между 50,1:49,9 и 99,9:0,01. Соотношение масляной фазы и водной фазы может быть 80:20. В фармацевтических композициях, образующих эмульсию, пептид или его фармацевтически приемлемая соль могут действовать как эмульгатор в концентрации около 1% масса/объем.

[71] Фармацевтические композиции, содержащие липосомальный агент, могут проявлять профиль медленного высвобождения пептида или его фармацевтически приемлемой соли в течение по меньшей мере 48 часов. Профиль медленного высвобождения может включать терапевтически эффективную концентрацию пептида или его фармацевтически приемлемой соли в плазме крови в течение по меньшей мере 48 часов.

[72] Следует учесть, что в вариантах осуществлений по настоящему документу может использоваться любая возможная комбинация описанных компонентов. Например, фармацевтическая композиция может включать любую возможную комбинацию пептида или его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя и эксципиента.

[73] В некоторых аспектах способ уменьшения побочных эффектов на месте инъекции пациенту по сравнению с инъекцией с эксципиентом включает составление фармацевтической композиции по вариантам осуществления, представленным в настоящем документе, с эксципиентом и введение фармацевтической композиции указанному пациенту путем инъекции. В некоторых вариантах осуществления способ увеличения биодоступности пептида или его фармацевтически приемлемой соли включает составление фармацевтической композиции по вышеперечисленным вариантам осуществления с эксципиентом и введение фармацевтической композиции указанному пациенту путем инъекции. В таких вариантах осуществления пептид или его фармацевтически приемлемая соль могут быть введены в терапевтически эффективной дозе.

[74] В некоторых аспектах способ составления фармацевтической композиции по вариантам осуществления, представленным в настоящем документе, содержащей полимер, который образует гель, включает смешивание пептида или его фармацевтически приемлемой соли и эксципиента и медленное добавление полимера.

[75] В некоторых аспектах способ лечения заболевания включает введение фармацевтической композиции по вариантам осуществления, представленным в настоящем документе, нуждающемуся в этом пациенту. Заболевание может представлять собой злокачественное новообразование, диабет 2 типа, акромегалию, метаболические нарушения, эндокринные нарушения, экзокринное нарушение или опухоли, связанные с гормонами. Фармацевтические композиции могут быть введены путем инъекции, такой как подкожная или внутривенная инъекция. Кроме того, пептид или его фармацевтически приемлемая соль могут быть введены в терапевтически эффективной дозе.

[76] Примечательным пептидом является велдореотид, и его фармацевтически приемлемой солью является велдореотид ацетат. Хотя изобретение описано в конкретных вариантах осуществления и примерах с учетом велдореотида и/или велдореотида ацетата, композиции, процессы и способы, описанные в этом описании, могут также применяться к другим пептидным или солям пептидов, включая другие аналоги соматостатина.

[77] Велдореотид ацетат имеет улучшенную селективность связывания и уникальный профиль связывания с рецептором SST подтипа SST-R2, SST-R4 и SST-R5 и является кандидатом лекарственного средства с явным терапевтическим потенциалом для лечения карциноидных опухолей, акромегалии и диабетических осложнений, уникальным селективным аналогом рецепторов соматостатина подтипов 2-, 4- и 5-, эффективно уменьшает секрецию GH в аденомах гипофиза человека GH, даже в не реагирующих на октреотид опухолях. Велдореотид ацетат имеет значительные преимущества по сравнению с любым другим аналогом соматостатина, доступным в настоящее время, включая октреотид, в том, что он эквипотентен имеющимся аналогам соматостатина в ингибировании гормона роста без неизбирательного воздействия на инсулин или глюкагон. Таким образом, велдореотид ацетат может улучшить доступность фармакотерапии для эндокринных аномалий, связанных с превышением гормона роста и IGF-1 с лучшей селективностью и лучшим гликемическим контролем этих пациентов.

[78] В соответствии с настоящим изобретением конформационно затрудненные с циклической структурой синтетические пептидные аналоги могут быть объединены с эксципиентами с образованием фармацевтической композиции для введения пациенту. Например, хотя велдореотид ацетат и является водорастворимым веществом, некоторые эксципиенты неожиданно улучшают растворимость велдореотида ацетата в изотонических условиях.

[79] Фармацевтическая композиция, содержащая пептиды или их фармацевтически приемлемые соли, и эксципиенты могут быть объединены с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями для создания композиции для введения пациентам.

[80] Циклический пептид велдореотид состоит из специфической комбинации аминокислотных остатков, которые вносят вклад в его уникальные физико-химические свойства в дополнение к его механизму биологического действия. Комбинация гидрофобных аминокислот в положениях; Phe⁶, Trp⁷, D-Trp⁸, Phe¹¹ напротив двух гидрофильных головных групп заряженного амина Lys⁹ и полярных групп гидроксильных групп Thr¹⁰, создает два характерных гидрофильных и гидрофобных домена. В результате его отличительных гидрофобных и гидрофильных доменов трехмерный бета-изгиб и форма специфической соли одного ацетатного противоиона велдореотида ацетат имеет амфифильный характер, и поэтому считается пептидным амфифилом и обладает свойством поверхностно-активного вещества. На фигуре 2 приведено сравнение трехмерных структур велдореотида ацетата и октреотида ацетата, показывающее, что велдореотид ацетат имеет единственный свободный амин на лизиновом остатке с одним ацетатным противоионом, в то время как октреотид имеет два ацетатных противоиона, один на лизиновом остатке и один на концевом амине.

[81] Принимая во внимание фармацевтическую полезность аналогов соматостатина, в частности, велдореотида ацетата, аналога соматостатина с циклической структурой с повышенными амфифильными свойствами в качестве эмульгатора и гелеобразующего агента, и поверхностно-активного вещества вода-в-масле, такие композиции могут быть использованы для лечения различных заболеваний и расстройства, включая, но этим не ограничиваясь, злокачественное новообразование, диабет типа 2, акромегалию, метаболические нарушения, эндокринные и экзокринные нарушения и опухоли, связанные с гормонами, с улучшенной фармакотерапией, характеризующейся меньшими побочными эффектами и длительным действием лекарственного средства.

[82] Другим преимуществом фармацевтической композиции является то, что композиция велдореотида ацетата с эксципиентами по настоящему изобретению улучшает биодоступность и удивительно снижает неблагоприятные реакции на месте инъекции.

[83] Было обнаружено, что велдореотид ацетат и другие аналоги соматостатина с циклической сктруктурой имеют значительную метаболическую биостабильность против деградации ферментами.

[84] Велдореотид ацетат оказывает значительное ингибирующее действие с длительной продолжительностью на ось гормона роста-IGF-1 с такой же интенсивностью, что и препарат октреотид, но у него отсутствуют недостатки октреотида, такие как ингибирование секреции инсулина. Велдореотид ацетат также оказывает значительно более низкое влияние на высвобождение глюкагона, чем октреотид, поэтому имеет преимущество не вызывать гипергликемии, что делает его очень привлекательным соединением для улучшения гликемического контроля у пациентов с акромегалией и для лечения диабета типа 2.

[85] Велдореотид ацетат демонстрирует значительное ингибирование роста экспрессии клонированного человеческого SST-R5 клеток CHO-клеток, что указывает на потенциальную роль в лечении опухолей SST-R5, экспрессирующих опухоли (например, карциноиды, опухоли гипофиза). Велдореотид ацетат ингибирует высвобождение хромогранина A из карциноидной клеточной линии человека, что указывает на противоопухолевый эффект.

[86] Уникальный фармакокинетический профиль велдореотид ацетата, оцененный на животных, согласуется с его метаболической стабильностью, как оценивается in vitro в отношении различных ферментов и гомогенатов тканей. После подкожного введения крысам велдореотид ацетат имел период циркуляции в крови около 3 часов, значительно превышающий продолжительность действия лекарственного средства октреотида, который имеет период полувыведения в течение всего 40 минут. Этот длительный период полувыведения обусловлен его уникальной «флип-флоп» кинетикой, результатом медленного высвобождения из места инъекции.

[87] Велдореотид ацетат является селективным для рецепторов соматостатина и значительно меньше связывается с другими клонированными рецепторами человека, сопряженными с G-белком, чем октреотид. Эта характеристика является благоприятной, поскольку связывание с не-соматостатиновыми рецепторами может вызвать возможные неблагоприятные эффекты у людей.

[88] Было также обнаружено, что велдореотид ацетат не является митогенным для лимфоцитов человека в анализах пролиферации лимфоцитов периферической крови человека.

[89] Было обнаружено, что велдореотид ацетат имеет относительную высокую растворимость в воде, 5%-ной декстрозе, ацетоне и различных спиртах, включая этанол, глицерин и пропиленгликоль. Было обнаружено, что велдореотид ацетат обладает высокой растворимостью в водных растворах кислот, таких как молочная кислота, уксусная кислота и трифторуксусная кислота. Неожиданно было обнаружено, что растворимость велдореотида ацетата в соляной кислоте зависит от концентрации (повышенная концентрация хлорида приводит к уменьшенной растворимости из-за осаждения/высаливания пептида). Эта несовместимость с хлоридом привела к обнаружению его относительно низкой растворимости в физиологических условиях (то есть 0,9% хлорида натрия, рН 4,5 и фосфатно-буферный солевой раствор, рН 7,2), которая не зависит от рН.

[90] Ограниченная растворимость велдореотида ацетата в физиологических условиях является очень специфическим свойством пептида и ранее была неизвестна. Учитывая его относительно высокую растворимость в воде, велдореотид ацетат считается водорастворимым лекарственным средством. К удивлению и неожиданно было обнаружено, что велдореотид ацетат, растворимый в воде лекарственный препарат, имеет низкую растворимость в физиологических условиях.

[91] Трехмерная структура велдореотида ацетата содержит специфический β-изгиб типа II, конформацию, которая типична для большинства аналогов соматостатина. В результате этой конформации трехмерная гибкость пептида ограничена и приводит к наложению гидрофобных (ароматических) остатков, выступающих снаружи пептидного кольца, обращенных к водной среде.

[92] Другие циклические аналоги соматостатина, то есть октреотид, ланреотид, валпреотид и пасиреотид, содержат две свободные аминогруппы (положительно заряженные головные группы); одна представляет собой амин лизинового остатка и другая амин на аминоконце этих пептидов. Велдореотид ацетат имеет только один свободный амин в качестве полярной головной группы. Его аминоконцом является амид.

[93] Кроме того, в отличие от большинства аналогов соматостатина, которые имеют аминокислоты 1-2 фенилаланина и 1 триптофана, велдореотид ацетат имеет в своей последовательности аминокислоты 2 фенилаланина и 2 триптофана.

[94] Велдореотид является циклической молекулой. Основная роль циклизации заключается в уменьшении или ограничении конформационного пространства или трехмерного (3D) объемного профиля молекулы. Следовательно, как таковая, это конформационно-затрудненная молекула. Однако, хотя пептид ограничен своей циклической структурой, его 3D структура или конформация в различных водных средах может зависеть от меж- и внутримолекулярных взаимодействий H-H связывания. Связывание H-H является доминирующим фактором 3D структуры пептида и полипептида.

[95] Велдореотид ацетат имеет комплект H-доноров и акцепторов: 12 доноров водорода и 10 акцепторов водорода. Другие аналоги циклических соматостатина имеют подобное соотношение доноров водорода и акцепторов водорода. Например, ацетат октреотида имеет 13 доноров водорода и 10 акцепторов водорода.

[96] Поскольку он имеет удвоенное количество гидрофобных аминокислот - 2 Trp и 2 Phe и только один катион/амин, велдореотид имеет соотношение гидрофобных и гидрофильных групп 5:2. Примечательно, что в велдореотиде ацетате гидрофобных групп больше, чем гидрофильных групп. Октреотид ацетат имеет только 1 Trp и 2 Phe, но, что более важно, он имеет два катиона/амина и дополнительный концевой ОН и соотношение гидрофобных и гидрофильных групп 3:5. Это делает октреотид ацетат более водорастворимым и с меньшей поверхностной активностью, чем велдореотид ацетат.

[97] Велдореотидный пептид имеет уникальный состав гидрофобных аминокислот, которые доминируют в гидрофильной части пептида. Этот состав приводит к относительно высокой степени амфифильности. Это амфифильное свойство влияет на распределение пептидов в водных средах. Он имеет тенденцию концентрироваться на поверхности среды, чтобы вывести гидрофобные остатки в воздух для обеспечения термодинамической стабильности. Когда он концентрируется на поверхности воды, он уменьшает поверхностное натяжение раствора.

[98] Поверхностное натяжение является свойством молекул жидкости прилипать друг к другу на границе раздела жидкость/воздух сильнее, чем к молекулам воздуха, и заставляет жидкость вести себя так, как если бы ее поверхность была покрыта натянутой эластичной мембраной. Часто растворенные вещества уменьшают поверхностное натяжение по сравнению с чистым растворителем. Вода и различные изотонические растворы имеют поверхностное натяжение в диапазоне около 65-72 дин/см при 25°C. Пептид с поверхностной активностью уменьшит поверхностное натяжение: чем выше поверхностная активность растворенного вещества, тем ниже будет поверхностное натяжение, и тем больше молекул или объектов могут пройти через поверхность раздела. Велдореотид ацетат уменьшает поверхностное натяжение дважды дистиллированной воды (pH=5,0) до около 45 дин/см (см. таблицу 3).

[99] Когда пептид растворяют в водном растворе, гидрофобные аминокислоты обычно образуют защищенные гидрофобные области, тогда как гидрофильные аминокислоты взаимодействуют с молекулами растворителя и позволяют пептидам образовывать водородные связи с окружающими молекулами воды. Если достаточное количество поверхности пептида является гидрофильным, пептид может быть растворен в воде. Когда концентрация соли увеличивается, например, в физиологических средах, таких как 0,9% NaCl или PBS, некоторые молекулы воды притягиваются солевыми ионами, что уменьшает количество молекул воды, доступных для взаимодействия с заряженной частью пептида посредством водородной связи. В результате повышенного спроса на молекулы растворителя пептид-пептидные взаимодействия являются сильнее взаимодействий растворителя и растворенного вещества; что приводит к десольватации пептида. Молекулы пептидов коагулируют путем образования гидрофобных взаимодействий друг с другом. Этот процесс известен как высаливание.

[100] Основываясь на его амфифильных свойствах велдореотид ацетат оценивали с помощью образования эмульсии. Однако было обнаружено, что велдореотид ацетат не действует как эмульгатор для эмульсии масло-в-воде (м/в). Неожиданно было обнаружено, что велдореотид ацетат является эмульгатором для эмульсии вода-в-масле (в/м). Эмульгирование, проводимое с велдореотидом ацетатом, воды-в-масле приводило к стабильной эмульсии в/м. Таким образом, велдореотид ацетат можно считать в/м ионным поверхностно-активным веществом или гидротропом с гидрофильным липофильным балансом (HLB) равным 6.

[101] Благодаря своему высокому соотношению гидрофобных групп и полярных головных групп (4:1) велдореотид ацетат является более амфифильным и обладает улучшенным поведением поверхностно-активного вещества, что видно из данных таблицы 3.

Составы велдореотида с различными эксципиентами

[102] Эксципиенты могут улучшать растворимость, диспергирование и биодоступность инъекционных пептидов, таких как V велдореотид ацетат. Такие эксципиенты могут включать гидрофобные поглотители, сахара и аминокислоты, такие как гидроксипропил-β-циклодекстрин, L-лизин HCl и декстрозу.

Гидроксипропил-β-циклодекстрин

[103] β-циклодекстрины, такие как гидроксипропил-β-циклодекстрин (HP-β-CD или HPBCD), являются примером класса эксципиентов для использования по настоящему изобретению. HPBCD представляет собой циклические олигосахариды, состоящие из 7 звеньев декстрозы, соединенные через 1-4 связи, он обладает относительно липофильным внутренним строением и относительно гидрофильным внешним строением и имеет тенденцию образовывать комплексы включения (Chang, патент США № 7259153).

[104] Не связываясь с какой-либо конкретной гипотезой, HPBCD может образовывать комплексы включения с гидрофобными частями велдореотида, тем самым уменьшая свою действующую гидрофобность. Соотношения HPBCD:PEP 1:2 или выше (например, 10:1) улучшают растворимость пептида в физиологических условиях. Однако соотношение, используемое для достижения желаемого фармакокинетического профиля и биодоступности (1 HPBCD:4 PEP), не улучшает растворимость высоких концентраций велдореотида в физиологической среде (физиологический раствор или буферированный фосфатом физиологический раствор), но показано, что оно модулирует физические свойства пептида, о чем свидетельствует поверхностное натяжение. Комплекс HPBCD с велдореотидом ацетатом обеспечивал поверхностное натяжение более 50 дин/см по сравнению с 45 дин/см для не связанного в комплекс велдореотида ацетата (см. таблицу 3). Это указывает на то, что комплекс HPBCD:велдореотид ацетат действует меньше на поверхности и больше в объеме раствора. Комплексообразование с циклодекстринами для улучшения растворимости происходит при соотношении циклодекстрина и пептида от 1:1 до 10:1, в точности противоположном наблюдаемому. Улучшенная сольватация велдореотида ацетата с HPBCD обеспечивает меньшее изменение поверхностного натяжения по сравнению с отсутствием HPBCD.

[105] В настоящем изобретении объединены циклические аналоги соматостатинов с HP-β-CD для повышения растворимости в изотонических растворах, а также для увеличения абсорбции и биодоступности, когда такие пептиды доставляются путем инъекции. Кроме того, неожиданно обнаружены уменьшенные побочные эффекты в месте инъекции.

L-лизин HCl

[106] Было обнаружено, что растворимость велдореотида ацетата снижается в растворах, содержащих ионы хлорида. Например, в то время как он растворим в 0,1н HCl, велдореотид ацетат нерастворим в 0,9н HCl. Аналогично, велдореотид ацетат имеет ограниченную растворимость в изотонических растворах, содержащих хлорид, включая 0,9% солевой раствор и забуференный фосфатом физиологический раствор.

[107] Неожиданно было обнаружено, что велдореотид ацетат является высоко растворимым в 20 мМ Tris-HCl, несмотря на содержание хлорида в этом буферном растворе. Однако с увеличением концентрации хлорида растворимость велдореотида ацетата резко снижается. Например, растворимость велдореотида ацетата значительно снижается, если концентрация Tris-HCl увеличивается до 137 мМ или добавляется 117 мМ раствор NaCl.

[108] Как видно из структуры Tris, TRIZMA/Tris буферный фрагмент состоит из свободного амина. Таким образом, предполагается, что амин TRIZMA конкурирует со свободным амином остатка лизина на велдореотиде ацетате за хлорид в растворе. Даже при увеличении концентрации хлорида этот эффект приводит к повышенной растворимости пептида, поскольку он может быть растворен с меньшим количеством хлоридов вокруг свободной аминогруппы. Это подтверждается уменьшенной растворимостью велдореотида ацетата в Tris-HCl, поскольку концентрация хлорида увеличивается.

[109] В связи с растворимостью велдореотида ацетата в Tris-HCl растворимость велдореотида ацетата была испытана в растворах, содержащих L-лизин и L-лизин HCl.

[110] Неожиданно было обнаружено, что L-лизин, несмотря на наличие свободного амина, конкурирующего с амином велдореотида ацетата за хлорид, существенно не улучшает растворимость велдореотида ацетата. Однако более неожиданным было обнаружено, что добавление L-лизина HCl существенно улучшало растворимость велдореотида ацетата в изотонических средах и лимитировало осаждение пептида.

Декстроза

[111] Также неожиданно было обнаружено, что биодоступность велдореотида ацетата в изотонических и физиологических растворах улучшается за счет добавления декстрозы в качестве эксципиента. Было обнаружено, что велдореотид ацетат свободно растворим в 5%-ной декстрозе (USP) с растворимостью около 400 мг/мл. Удивительно, что 5% декстроза не улучшает растворимость высоких концентраций велдореотида в физиологической среде (солевой раствор или забуференный фосфатом физиологический раствор). Это противоречит очень высокой растворимости велдореотида в 5%-ной декстрозе в воде. Улучшенный фармакокинетический профиль LAR и биодоступность достигаются, несмотря на низкое соотношение декстроза:пептид (1:8). Такое низкое соотношение, как ожидается, не улучшит растворимость пептидов в физиологической среде, но оно показывает здесь модулирование физических свойств пептида, о чем свидетельствует поведение поверхностного натяжения.

[112] Не ограничиваясь какой-либо конкретной гипотезой, декстроза улучшает сольватацию воды вокруг полярных групп пептидов. Улучшенная сольватация велдореотида ацетата с декстрозой обеспечивает меньшее изменение поверхностного натяжения по сравнению с отсутствием декстрозы. Комплекс декстрозы с велдореотидом ацетатом обеспечивал поверхностное натяжение более 50 дин/см по сравнению с 45 дин/см для не связанного в комплекс велдореотида ацетата (см. таблицу 3). Это указывает на то, что комплекс декстроза:велдореотид ацетат действует меньше на поверхности и больше в объеме растворе. Это взаимодействие увеличивает гидрофильность велдореотида, и поэтому больше пептида будет сосредоточено в объеме растворе, а не на поверхности. Это улучшает биодоступность велдореотида.

[113] В настоящем изобретении объединены циклические аналоги соматостатинов с декстрозой для увеличения растворимости в изотонических растворах, а также для увеличения абсорбции и биодоступности, когда такие пептиды доставляются путем инъекции. Кроме того, неожиданно обнаружены уменьшенные побочные эффекты в месте инъекции.

[114] Никотинамид является другим эксципиентом, используемым в композициях (см. патент США № 6331520).

Составы с замедленным высвобождением (SR)

Составы микросфер

[115] Учитывая фармакокинетику циклических аналогов соматостатина, часто желательно предоставить составы для замедленного высвобождения in vivo. Для достижения замедленного высвобождения можно использовать ряд способов, включая использование различных составов на основе полимера, таких как использование микросфер PLGA и гидрогелей. Также могут быть полезны эмульсионные и липосомные составы. В то время как композиции с замедленным высвобождением, включая эмульсии, гели, микросферы и липосомы, могут уменьшать реакцию на месте инъекции, улучшать биодоступность и обеспечивать профиль с замедленным высвобождением, на основе результатов с эксципиентами для препаратов с немедленным высвобождением, было исследовано использование таких эксципиентов в препаратах с замедленным высвобождением и, что удивительно, было установлено, что использование таких эксципиентов улучшает фармакокинетику циклических аналогов соматостатина in vivo и уменьшает реакции на месте инъекции.

[116] Циклические аналоги соматостатина могут быть получены в микросферах PLGA с использованием обычных способов, хорошо известных специалистам в данной области, таких как описанные в примере 7. Циклические аналоги соматостатина также могут быть составлены в виде эмульсий и гелей, основываясь на их специфических свойствах.

[117] Без привязки к какой-либо конкретной гипотезе, различие между микросферами может быть связано с тем, как эксципиенты взаимодействуют с 3D структурой велдореотида, что может быть связано с его поверхностной активностью. Как показано в таблице 3, поверхностное натяжение раствора декстроза-велдореотид ацетат аналогично поверхностному натяжению раствора HPBCD-велдореотид ацетат, составляющим 54 и 51 дин/см, соответственно. Тем не менее, микроскопическая структура микросфер, полученных с помощью HPBCD и декстрозы, различна.

[118] HPBCD имеет гораздо более высокую молекулярную массу (MW), чем декстроза, примерно в том же диапазоне MW пептида. HPBCD имеет гидрофобное ядро, которое может взаимодействовать с гидрофобными фрагментами, такими как гидрофобные остатки пептида, создавая один или несколько комплексов включения с гидрофобными частями пептида. Части пептида, захваченные в комплекс (комплексы) включения, могут придать гидрофобному полимеру меньшую подвижность и меньшую возможность для доступа к полимеру при введении гидрофобного полимера. Комплекс с HDPCD приводит к эффективному снижению гидрофобности пептида. В результате поверхностное взаимодействие между пептидом и полимерным раствором менее благоприятно, и комплекс HPBCD с пептидом притягивает воду. Это приведет к меньшему разбавлению/диспергированию HPBCD в полимерном растворе, который создает внутреннюю структуру крупных капелек, и в результате образуется меньшее количество пор, но имеющих больший диаметр и меньшую площадь поверхности по сравнению с микросферами, содержащими декстрозу.

[119] В микросферах, содержащих декстрозу, наблюдалось большее количество пор малого диаметра. В качестве небольшой молекулы декстроза диспергируется/разбавляется гораздо больше в растворе пептида по сравнению с HPBCD. Эта разбавленная декстроза обеспечивает лучшую подвижность пептида. Улучшенная подвижность приведет к лучшему распределению пептида в растворе полимера. Это лучшее распределение/диспергирование пептида обусловлено его гидрофобным свойством. Когда добавляют гидрофобный полимер, гидрофобные части пептида будут притягиваться к гидрофобному полимеру. Таким образом, декстроза влияет на 3D структуру пептида посредством H-H связывания, улучшая его сольватацию и, благодаря своей малой MW, улучшает распределение и диспергирование пептидов в растворе гидрофобного полимера. В результате достигается более высокая плотность пор в микросферах. Изменения внутренней структуры микросфер отражаются на поверхности полимерных микросфер, измеренных соответствующими методами, такими как BET. При добавлении декстрозы или HPBCD в определенных соотношениях, таких как 1:8 (декстроза к велдореотиду) и 1:2 или 1:4 (HPBCD к велдореотиду), к первичному эмульгированию, используемому для образования микросфер, полученные микросферы имеют площадь поверхности от около 7 м²/г до около 12 м²/г. Следует понимать, что в конечном продукте микросфер могут оставаться только следовые количества декстрозы, так что действие декстрозы при образовании микросфер может в значительной степени быть функцией способности декстрозы модифицировать поверхностную активность велдореотида. Этот эффект более подробно обсуждается в примерах, приведенных ниже. Однако представляется, что, когда HPBCD используется в первичных эмульсиях для образования микросфер, большая часть HPBCD сохраняется в конечном продукте микросфер.

[120] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления массовое отношение декстрозы к велдореотиду в первичной эмульсии для образования микросфер составляет от около 1:1 до около 1:16 и, более предпочтительно, от около 1:4 до около 1:8. Таким образом, в некоторых вариантах соотношение масс может составлять около 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15 или 1:16.

[121] В некоторых других вариантах осуществления массовое соотношение HPBCD и велдореотида в первичной эмульсии с образованием микросфер составляет от около 1:1 до около 1:8 и, более предпочтительно, от около 1: 2 до около 1: 4. Таким образом, в некоторых вариантах соотношение масс может составлять около 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 или 1:8.

[122] В других вариантах осуществления первичная эмульсия для образования микросфер может включать как декстрозу, так и HPBCD, при различных массовых соотношениях по отношению к велдореотиду, как указано выше.

Липосомные составы

[123] Было также обнаружено, что велдореотид ацетат может быть включен в липосомы, которые имеют профиль замедленного высвобождения в течение по меньшей мере 48 часов, где концентрация велдореотида ацетата в плазме крови находится на терапевтически эффективном уровне.

[124] Липосомы представляют собой концентрические двуслойные везикулы, в которых водный объем полностью закрыт мембранным липидным бислоем, в основном состоящим из природных или синтетических фосфолипидов. Липосомы образуются, когда тонкие липидные пленки или липидные слои гидратируются, а наборы жидких кристаллических бислоев становятся текучими и разбухают. Во время перемешивания гидратированные липидные пластинки отделяются и самособираются, образуя везикулы, которые препятствуют взаимодействию воды с углеводородным ядром бислоя по краям. Такие липосомы включают в себя многослойные везикулы (MLV), состоящие из одного фосфолипида, который представляет собой фосфатидилхолин, более предпочтительно, 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DMPC).

Эмульсионные и гидрогелевые составы

[125] Как было отмечено ранее, было обнаружено, что велдореотид ацетат действует как поверхностно-активное вещество и может эмульгировать воду в масле. Кроме того, учитывая его амфифильные свойства, велдореотид ацетат также может быть включен в состав гидрогеля. Обе несущие среды могут обеспечить составы с замедленным высвобождением.

[126] Неожиданно было обнаружено, что инъекция велдореотида ацетата в составе эмульсии вода в масле уменьшает и задерживает начало реакций при введении инъекции, и она может быть введена с использованием малой иглы 27G.

[127] Кроме того, было обнаружено, что велдореотид ацетат может образовывать стабильный гидрогель, который задерживает вызывание реакций в месте инъекции, и аналогичным образом вводится с использованием иглы 27G.

[128] Таким образом, было установлено, что эмульсионные и гидрогелевые композиции велдореотида ацетата легче вводятся и дают меньше реакций на месте инъекции, в то же время обеспечивая композицию с замедленным высвобождением для велдореотида ацетата.

ПРИМЕРЫ

[129] Настоящее изобретение продемонстрировано в следующих примерах, при этом учитывается, что они предназначены только для иллюстративных целей, и не предназначены для ограничения изобретения.

[130] Материалы

[131] COR005 ацетат (Lonza, DADR-APJ-001-5AN1R)

[132] Гидроксипропил-β-циклодекстрин - HPB (Merck KGaA, Darmstadt, Germany (Pharma grade) Cyclodextrin HPB Ph.Eur., NF 1.4220.0050)

[133] Декстроза 5% - USP - DEX (Teva Medical Dextrose 5% AWB0064 pH 4,0 252 мОсмоль/л pH 4,0 252 мОсмоль/л)

[134] Стерильная вода для инъекций - WFI (Norbrook laboratories Northern Ireland. B.W. 4364-90)

[135] Маннитол-M200 (Merck KGaA, Darmstadt, Germany (Pharma grade) Parteck M200 Emprove exp Ph Eur, BP, JP, USP, E 421)

[136] Раствор молочной кислоты (90%) - (Sigma Aldrich USP spec. L6661 Batch #MKBR6268V)

[137] Нормальный физиологический раствор 0,9% NaCl, pH 5,0 (Teva Medical AWB1324 lot XP5E035 pH 5,0, 308 мОсмоль/л)

[138] PBS 10 мМ pH 7,4 без кальция и магния (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline Biological Industries REF02023-1A).

[139] Сокращения

[140] NS - Нормальный физиологический раствор (0,9% NaCl), IR - быстрое высвобождение, F - абсолютная биодоступность, рассчитанная против AUC при IV IR несущей среды (крысы или минипиги), MS - микросферы, SC - подкожно, BA - абсолютная биодоступность, Cmax - максимальная концентрация в плазме, MAN - маннитол, HPB - гидроксипропил-β-циклодекстрин, DEX - Декстроза, PEP - пептид-COR005 ацетат, Lys-HCl - лизин гидрохлорид., Est. - оценено с помощью UV-Vis., NT - не исследовалось, NE- не применимо из-за изменчивости

ПРИМЕР 1

[141] Растворимость велдореотида ацетата в водной среде проверяли следующим способом. Фиксированное количество 10 миллиграммов пептида отвешивали и растворяли при температуре окружающей среды за счет увеличенных (возрастающих) объемов исследуемой среды до тех пор, пока не наблюдалась полная растворимость, то есть прозрачный/бесцветный раствор и отсутствие каких-либо осадков (значения конечной точки растворимости были определены в соответствии с руководством USP). По результатам скрининговых исследований было выбрано несколько сред для проверки на основе количественной оценки концентрации пептида с помощью ВЭЖХ (максимальная растворимость). Результаты скринингового исследования показаны в таблице 1, а результаты проверочных исследований включены в таблицу 2. Как следует из данных, велдореотид ацетат демонстрирует высокую растворимость в воде и других водных средах, но имеет ограниченную растворимость в изотонических средах.

ТАБЛИЦА 2: Количественная оценка растворимости велдореотида ацетата

Среда	Растворимость (г/литр) -HPLC
Вода	234,49
20 мМ фосфат*, pH 7,2	211,97
20 мМ HEPES, pH 7,2	211,76
PBS, pH 7,4	3,25
0,9% NaCl, pH 4,5	2,31

*10 мМ Na₂HPO₄+10 мМ NaH₂PO₄

[142] В таблице 3 суммированы значения растворимости COR005 ацетата в различных водных средах, влияние добавок, таких как DEX и HPB, на растворимость пептидов в солевых и физиологических условиях, а также PK профиль составов IR и MS, полученных с этими добавками, в сравнении с COR005 без добавок в качестве контроля.

[143] Растворимость COR005 ацетата в водной среде

[144] Растворимость COR005 ацетата в воде и в изотонической 5%-ной декстрозе (см. ниже) относительно высока (по меньшей мере 300 мг/мл). Вместе с тем, в сравнении с его высокой растворимостью в воде растворимость COR005 ацетата значительно ниже в физиологических (водных) условиях (в пределах 1-2 мг/мл), как это наблюдается в изотоническом PBS, рН 7,4 и в физиологическом растворе. Отмечается, что обе среды (PBS или физиологический раствор) содержат физиологические концентрации хлорида, что указывает на несовместимость и высаливание пептида в присутствии хлорид иона.

[145] Действие добавок

[146] Декстроза: Относительно высокая растворимость COR005 ацетата в 5%-ной декстрозе (в воде), более 500 мг/мл, указывает на улучшенную растворимость пептида в воде с декстрозой. Добавление декстрозы в изотонический солевой раствор приводит к увеличению растворимости пептидов от 2 мг/мл до примерно 6-7 мг/мл в разбавленной 5%-ной декстрозе в нормальном физиологическом растворе, который имеет конечную концентрацию 2,5% декстрозы и 0,45% солевого раствора (NaCl). Отмечается, что эта разбавленная в физиологическом растворе декстроза 1:1 использовалась в качестве несущей среды при исследовании IR COR005 ацетата на крыcах и минипигах (соотношение DEX:PEP составляло 5:1).

Таблица 3

Раствор COR005 ацетат	Добавки	Растворимость COR005 ацетата (мг/мл) при 25°C	PK
Раствор COR005 ацетат	Добавки	Растворимость COR005 ацетата (мг/мл) при 25°C	Крысы Доза мг/кг Cmax (нг/мл) & BA (F%)	Минипиги Доза мг/кг Cmax (нг/мл) & BA (F%)
Вода	Нет	350	NT		Лекарственная форма (SC)
5% Декстроза изотонический	Нет	530
NS - 0,9% NaCl	Нет	2
0,45NS-0,45% NaCl	Нет	3
Изотонический 0,45NS(0,45% NaCl) 2,5D Декстроза 2,5%	DEX:PEP 5:1	≥6,5	3 мг/кг Cmax=544 F=116	0,1 мг/кг Cmax=53 F= 91 0,4 мг/кг Cmax=255 F=85	IR
Молочная кислота буфер pH 4,0 изотонический	Маннитол MAN:PEP 20:1	500 (Est.)	3 мг/кг Cmax=345 F=83	0,1 мг/кг Cmax=29 F=45 0,4 мг/кг Cmax=108 F=69
Физиологический раствор изотонический	HPB:PEP 15:1	10	3 мг/кг Cmax=451 F=85	0,4мг/кг Cmax=238 F=88
Буфер молочной кислоты pH 4,0 изотонический	MAN:PEP 20:1 HPB:PEP 15:1	500 (Est.)	Cmax=350 F=70	NT
Физиологический раствор изотонический	Lys-HCl:PEP 4:1	1,7	1,5 мг/кг Cmax=220 F=82	NT
PBS pH 7,4 изотонический (физиологический)	Нет	2,2	B10; 21,9 мг/кг Cmax=211 F0-28d=NE (>B13)	B10; 2,3 мг/кг Cmax=1,4 F0-7d<1	MS
	HPB:PEP 10:1	10	NT
	HPB:PEP 1:1	4,5	NT
	HPB:PEP 1:2	3	B13; 19,7 мг/кг Cmax=211 F0-28d=87	B13; 2,2 мг/кг Cmax=47 F0-7d=26
	HPB:PEP 1:4	2,5	NT	B14; 1,81 мг/кг Cmax=63 F0-7d>100
	DEX:PEP 5:1	1,6	NT
	DEX:PEP 1:8	2	B12; 20 мг/кг Cmax=133 F0-28d=NE (>B13)	PSI13; 2,9 мг/кг Cmax=12,6 F0-7d=21

[147] PK данные для составов IR, вводимых подкожно крысам и минипигам, показывают, что декстрозная несущая среда увеличивает значения Cmax и абсолютную биодоступность COR005 ацетата по сравнению с другими составами IR (крысы - Cmax COR005 в декстрозе - 544 нг/мл по сравнению с Cmax 345 нг/мл COR005 в буфере молочной кислоты в качестве контроля. Минипиги - Cmax COR005 0,4 мг/кг в декстрозе - 238 нг/мл и BA 88,4 против Cmax 108 нг/мл и BA 69% COR005 0,4 мг/кг в буфере молочной кислоты в качестве контроля, BA COR005 0,1 мг/кг - 91% против 45%, соответственно). Данные PK предоставили возможное обоснование добавления декстрозы к составам MS по двум основным причинам: 1) декстроза может увеличить растворимость и BA пептида после его высвобождения из MS, и 2) декстроза известна как агент порообразования, и она может повысить проницаемость MS, тем самым улучшая высвобождение пептида из матрицы MS.

[148] Неожиданно результаты растворимости по декстрозе в PBS значительно отличались от действия декстрозы на растворимость пептида в физиологическом растворе. Как показано в таблице 3, декстроза не улучшает растворимость пептида в физиологических условиях, как это наблюдается в изотоническом PBS, рН 7,4, при соотношениях DEX:PEP 5:1 и 1:8, где растворимость составляет всего 1,6 мг/мл и 2 мг/мл, соответственно. Возможной причиной слабой (неизменяемой) растворимости пептида с декстрозой в PBS является повышенная ионная сила PBS по сравнению с физиологическим раствором; PBS содержит 0,02% KCl, 0,02% KH₂PO₄, 0,115% Na₂HPO₄ и 0,8% NaCl, в то время как физиологический раствор содержит только 0,9% NaCl.

[149] Соотношение DEX:PEP 1:8 было соотношением, используемым для MS составов B12 или PSI13. Это может указывать на то, что наблюдаемый PK профиль COR005 ацетата в этих составах DEX, который показал Cmax и абсолютную BA выше основного MS состава B10 (без DEX), не обусловлен улучшенной растворимостью пептида в физиологических условиях, так как растворимость COR005 ацетата в PBS с добавлением DEX составляет всего 1-2 мг/мл. Следовательно, по-видимому, имеется действие DEX на пептид в MS составах, которое выходит за рамки действия повышенной растворимости в физиологических условиях.

[150] Механизм, с помощью которого декстроза усиливает высвобождение и BA COR005 из MS, подробно обсуждается при рассмотрении данных поверхностного натяжения в сравнении с данными SEM ниже.

[151] HPB: Как показано в таблице 3, добавка HPB повышает растворимость COR005 ацетата как в физиологическом растворе, так и в PBS зависимым от концентрации образом. Небольшое повышение растворимости наблюдалось при соотношении HPB:PEP 1:2 (MS состав B13, см. ниже), по сравнению с HPB (повышение от 2,2 до 2,5 мг/мл). HPB еще больше улучшает растворимость, когда соотношение HPB:PEP увеличивается до 1:1, 10:1 и 15:1 и выше, наконец, достигая растворимости 10 мг/мл. Отмечается, что растворимость COR005 при отношении HPB:PEP 1:4 (MS состав B14, см. ниже) находится в том же диапазоне слабой растворимости пептида в одном PBS.

[152] Данные PK HPB в качестве добавки к ацетату COR005 в составах IR указывают на увеличение Cmax и BA у крыс и значительное увеличение у минипигов (в обоих случаях это была состав IR со вторым самым высоким Cmax и BA). Крысы - Cmax COR005 в HPB-451 нг/мл по сравнению с Cmax 345 нг/мл COR005 в буфере молочной кислоты в качестве контроля. Минипиги - Cmax COR005 в HPB-255 нг/мл и BA 85,3% против Cmax 108 нг/мл и BA 69% COR005 в буфере молочной кислоты в качестве контроля).

[153] Эти PK результаты обеспечивают аналогичное обоснование для использования HPB в MS составах для достижения такого же эффекта, что и с декстрозой. Как декстроза, так и HPB являются агентами пористости, и их введение в MS может приводить к усилению проницаемости MS и увеличению высвобождения пептида. Более того, в случае HPB авторы изобретения предположили, что он может немного улучшить растворимость пептида в физиологических условиях (особенно в случае отношения HPB:PEP 1:2, как показывают данные растворимости) в дополнение к предполагаемому эффекту пористости.

[154] Однако неожиданно PK данные у грызунов при MS с HPB в качестве добавки показывают два различных действия HPB на взрыв и BA в MS составах B13 и B14. В случае B13, который был одним из двух исследуемых на крысах, для MS состава, полученного при соотношении HPB:PEP 1:2 (это соотношение приводит к небольшому увеличению растворимости пептидов в физиологических условиях), PK у крыс показывает значительное увеличение высвобождения взрыва и абсолютного BA в течение первых 24 часов (BA 0-24 ч) по сравнению с основной составом В10; Cmax COR005-B13 211 нг/мл и BA (0-24 часа) 11% по сравнению с Cmax COR005-B10 30 нг/мл и BA (0-24 часа) 2%.

[155] Эта тенденция наблюдалась и проверялась в PK исследованиях на минипигах. В случае B14, который имеет уменьшенное соотношение HPB:PEP 1:4, ожидаемые результаты заключались в том, что уменьшенная пористость микросфер с более низкой растворимостью для пептида в физиологическом состоянии (как показано в таблице), следовательно, уменьшала бы высвобождение пептида и концентрации в плазме с течением времени.

[156] Удивительно и неожиданно PK данные для B14 на минипигах показывают противоположный эффект: уменьшенное соотношение HPB:PEP приводит к значительному увеличению высвобождения пептидов, причем уровни Cmax, BA и пептида в плазме значительно выше, чем значения, наблюдаемые для B13, B12 и основного MS состава B10.

[157] Отмечается, что B14 (HPB:PEP 1:4), а также B12 и PSI13 (каждый с DEX:PEP 1:8) имеют относительно низкие соотношения HPB и PEP. Эти низкие соотношения не показали улучшенной растворимости пептида в физиологических условиях. Несмотря на низкую растворимость, наблюдалось значительное увеличение высвобождения пептида из B14 MS, что было продемонстрировано высоким уровнем BA и длительными концентрациями в плазме с течением времени COR005 ацетата in vivo по сравнению со значениями для B12 и PSI13. Следовательно, по-видимому, имеется действие HPB на пептид в MS составах, которое выходит за рамки действия повышенной растворимости в физиологических условиях.

[158] Механизм, с помощью которого декстроза усиливает высвобождение и BA COR005 из MS, подробно обсуждается при рассмотрении данных поверхностного натяжения по сравнению с данными SEM ниже.

ПРИМЕР 2

[159] Влияние велдореотида ацетата на плотность, pH и поверхностное натяжение воды анализировали, как показано в таблице 4. Было обнаружено, что велдореотид ацетат ведет себя как пептидный амфифил и уменьшает поверхностное натяжение воды. Однако уменьшение поверхностного натяжения воды не понижалось дозозависимым образом, предполагая, что велдореотид ацетат ведет себя как гидротроп, а не поверхностно-активное вещество.

[160] Tween 80 использовали в качестве контрольного поверхностно-активного вещества для сравнения. Плотность измеряли на 1 мл объема фиксированного образца. Все испытания проводили в трех повторностях при 25°C. Влияние велдореотида ацетата на pH двойной дистиллированной воды (DDW) было одинаковым при всех концентрациях велдореотида ацетата. рН DDW с 5,0 уменьшалось до рН 4,5. Влияние велдореотида ацетата на плотность DDW (начальная плотность DDW составляла 1,003 г/мл) было зависима от концентрации, от 1,4 мг/мл до 21,5 мг/мл при плотности от 0,986 до 0,998 г/мл, соответственно. Однако при концентрациях велдореотида ацетата 45 и 102 мг/мл плотность увеличивалась выше начальной плотности DDW. Эти результаты показывали, что раствор пептида в концентрации выше 45 мг/мл в DDW становится насыщенным. Влияние велдореотида ацетата на поверхностное натяжение DDW (начальное поверхностное натяжение составляло 64,9 дин/см) согласуется с велдореотидом ацетатом, действующим как пептидный амфифил (поверхностно-активное вещество). Поверхностное натяжение DDW было уменьшено с помощью велдореотида ацетата максимум от 64,9 до 45 дин/см. Чтобы выяснить значение этого эффекта, в качестве эталонного поверхностно-активного вещества использовался Tween 80. Другие поверхностно-активные вещества включают Polexamer 188. Уменьшение поверхностного натяжения, вызванного Tween 80, находилось в диапазоне 40% (от 64,9 дин/см до 39 дин/см) по сравнению с 30% для велдореотида ацетата (от 64,9 дин/см до 45 дин/см). Отмечается, что в этих экспериментальных условиях; эффект Tween 80 указывал на связь концентрация-эффект. В то же время влияние велдореотида ацетата на уменьшение поверхностного натяжения было в одном и том же диапазоне для всех испытываемых концентраций.

ТАБЛИЦА 4: Действие велдореотида ацетата на плотность и поверхностное натяжение воды

Исследуемые объекты (температура 25°C)	Плотность (г/мл) отвешенный 1 мл (Mettler AT250)	Поверхностное натяжение (дин/см) капиллярный способ	% изменения в поверхностном натяжении по сравнению с исходным уровнем
Стерильная вода для инъекций (WFI) pH 5,0 (Norbrook)	1,012	70,9
Tap вода pH 6,0	1,014	71,12
Стерильный физиологический раствор (0,9 NaCl) pH 5,0 (Teva Medical)	1,016	65,8
DDW pH 5,0 (Siemens, Labostar, DI 2 Clear, Water System)	1,003	64,9	--
Велдореотид ацетат 1,4 мг/мл в DDW pH 4,5	0,986	45,2	-30
Велдореотид ацетат 12 мг/мл в DDW pH 4,5	0,994	46,9	-28
Велдореотид ацетат 21 мг/мл в DDW pH 4,5	0,998	47,1	-27
Велдореотид ацетат 45 мг/в DDW pH 4,5	1,003	45,97	-29
Велдореотид ацетат 102 мг/мл в DDW pH 4,5	1,015	49,3	-24
Tween 80 28 мг/мл в DDW (Sigma Aldrich)	0,975	38,8	-40
Tween 80 14 мг/мл в DDW (Sigma Aldrich)	0,988	39,35	-39
Tween 80 7 мг/мл в DDW (Sigma Aldrich)	0,9945	39,6	-39
(температура 5°C)
Стерильная вода для инъекций (WFI)	0,977	68,5	--
Велдореотид ацетат 200 мг/мл в WFI	1,03	44	-36
Велдореотид ацетат 200 мг/мл+100 мг/мл HPBCD в WFI	1,12	51	-26
Велдореотид ацетат 200 мг/мл+50 мг/мл HPBCD в WFI	1,04	45	-34
5% Декстроза в WFI	1,01	62,7	--
Велдореотид ацетат 200 мг/мл в 5%-ной декстроза в WFI	1,03	54	-14

[161] В таблице 5 показано сравнительное поверхностное натяжение велдореотида ацетата по сравнению с октреотидом (аналог соматостатина) и гозерелином (аналог LHRH) в воде для инъекций (WFI)

ТАБЛИЦА 5

Действие уменьшенного поверхностного натяжения (%)	Поверхностное натяжение воды (дин/см)	Среда
Исходный уровень (WFI)	52	Вода для инъекций (WFI - USP)
-37%	33	Велдореотид при 10 мг/мл в WFI
-27%	38	Октреотид при 10 мг/мл в WFI
-37%	33	Гозерелин при 10 мг/мл в WFI

[162] Поверхностная активность COR005 ацетата в составах микросфер

[163] Данные таблицы 4 показывают поверхностную активность высоко концентрированного COR005 ацетата (200 мг/мл) с добавками или без добавок в WFI, который копирует условия получения первичной эмульсии микросфер. Результаты исследований 1 и 2 (таблица 4) показывают влияние COR005 ацетата на поверхностное натяжение воды. Когда COR005 ацетат растворяется в воде, поверхностное натяжение уменьшается примерно на 36% от 68,5 дин/см для только воды до 44 дин/см для раствора воды с CR005 ацетатом при 200 мг/мл.

[164] Данные таблицы 5 и фигуры 3 показывают сравнительные свойства эмульгирования COR005 по сравнению с октреотидом и гозерелином, представленными в настоящем документе в качестве контроля амфифильного пептида. Данные показывают уникальную поверхностную активность COR005 по сравнению с контрольными пептидами. COR-005 обладает более высокой поверхностной активностью, чем октреотид, и похожей поверхностной активностью, что и гозерелин (который является более гидрофобным пептидом, чем октреотид).

[165] На фигуре 3 показаны фотографии образцов эмульгирования COR005 по сравнению с октреотидом и гозерелином с 16,6 мас.% хлопкового масла (CSO), 74,2 мас.% воды для инъекций WFI и 9,2 мас.% пептида. Образцы смешивали с использованием шприца 25G и перемешивали при комнатной температуре. Результаты эмульгирования показывают значительное сродство COR005 к поверхности раздела масло/вода, что позволяет получать эмульсию. Октреотид показывает слабую эффективность эмульгирования, и гозерелин показывает наименьший потенциал для образования эмульсии. Эти результаты подтверждают уникальные амфифильные свойства COR005 в качестве поверхностно-активного вещества.

[166] Не ограничиваясь какой-либо конкретной гипотезой, в водной среде COR005, по-видимому, имеет предпочтительное сродство к поверхности раздела между водой и воздухом из-за его гидрофобных аминокислот, как показано на фигуре 2 (2 триптофана, 2 фенилаланина и только один катион аминного тип). Следовательно, падение энтропии воды будет меньше из-за гидрофобности пептида. Термодинамика воды характеризуется максимальной энтропией, неупорядоченностью молекул воды и их динамической водородной связью. Когда гидрофобная часть смешивается с водой, она нарушает природную неупорядоченность молекул воды и создает «ледяные клетки», которые уменьшают энтропию воды, и в результате молекулы воды отталкивают гидрофобную часть на поверхность, чтобы минимизировать потерю энтропии.

[167] В дисперсионных системах, таких как вода и масло или водная среда с гидрофобным полимером, таким как PLGA, COR005 будет иметь высокое сродство к липофильной/гидрофобной поверхности раздела из-за его амфифильных свойств. Предполагаемое действие на первичную эмульсию MS могло бы обусловливать меньшие размеры капель в первичной эмульсии, повышенную стабильность эмульсии из-за пониженного поверхностного натяжения системы с помощью пептида и лучшего взаимодействия, ориентации и диспергирования пептида в полимере PLGA, который представляет собой гидрофобную «поверхность», образующуюся на поверхности раздела.

[168] Наблюдаемый профиль высвобождения in vitro COR005 из основного MS состава B10 показал наименьшую скорость высвобождения. Кроме того, SEM изображения (см. ниже) показали твердую и конденсированную матрицу MS основного состава B10, что коррелирует с профилем высвобождения пептида. Более того, PK данные, полученные на минипигах, демонстрируют слабую концентрацию COR005 в плазме с течением времени для состава B10 (таблица 3).

[169] Действие HPB на поверхностную активность COR005 ацетата при HPB:PEP 1:2

[170] Добавление HPB в соотношении 1:2 HPB:PEP приводит к снижению поверхностной активности пептида. Наблюдаемая поверхностная активность пептида в воде (44 дин/см) без добавок увеличивается в сторону воды (68 дин/см) при добавлении HPB в соотношении 1:2 (52 дин/см). Этот результат показывает, что HPB снижает потенциал пептида в качестве поверхностно-активного вещества за счет увеличения его растворимости в воде. Результатом уменьшенной активности пептида и более высокой растворимости в воде является то, что на поверхности раздела присутствует мало пептида.

[171] Действием этого на первичную эмульсию MS будет относительно более высокое поверхностное натяжение первичной эмульсии (по сравнению с основным составом пептида без HPB) и относительно меньшая концентрация пептида на поверхности раздела воды и полимерного раствора. Кроме того, относительно большее количество воды будет удерживаться внутри матрицы PLGA в процессе осаждения MS из-за высокого сродства воды к HPB.

[172] Наблюдаемый in vitro и in vivo взрыв высвобождения (Cmax) COR005 из B13 (HPB:PEP с соотношением 1:2) был самым высоким среди основного B10 и композиций DEX-B12 и PSI13 MS. Более того, PK данные по B13 на крысах показывают, что большая часть пептида высвобождалась в течение первых 24 часов, «сбрасывая» около 20% от общей AUC (0-28 дней), а затем уровни в плазме были значительно ниже в течение остальных 27 дней.

[173] Действие HPB на поверхностную активность COR005 ацетата при HPB:PEP 1:4

[174] Результаты исследования 4 (таблица 4) показывают влияние снижения соотношения HPB:PEP от 1:2 (состав B13) до 1:4 (состав B14). Результаты поверхностного натяжения показывают, что пониженная концентрация HPB:PEP 1:4 (45 дин/см) обладает той же поверхностной активностью, что и ацетат COR005 в воде (44 дин/см), не проявляя влияния HPB на свойства пептидного поверхностно-активного вещества при этом более низком соотношении.

[175] В этом случае ожидается, что пептид будет иметь более высокую концентрацию на поверхности раздела, чем при HPB:PEP 1:2. Ожидаемым эффектом пониженного соотношения HPB:PEP 1:4 будет уменьшенное высвобождение in vitro и BA, а также PK профиль по сравнению с IVR и PK профилем состава B13. Основное предположение заключалось в том, что уменьшенная концентрация HPB в MS составе при HPB:PEP 1:4 могла бы образовывать микросферу с более плотным сердечником по сравнению с HPB:PEP 1:2, потому что меньшее количество воды было бы притянуто к комплексу пептид/HPB. Более того, ожидается, что проницаемость поверхности MS будет уменьшена (меньше HPB=меньше поры). Все эти возможные эффекты MS при отношении HPB:PEP 1:4 приведут к уменьшенному взрывному высвобождению с последующим более медленным высвобождением с течением времени COR005 из MS по сравнению с PK профилем состава B13 (HPB:PEP 1:2). Другими словами, вместо быстрого высвобождения пептида из МС в течение первых нескольких дней, такого как наблюдаемого с составом B13, состав B14 должен высвобождать такое же количество пептида в течение более длительного периода времени.

[176] Неожиданно, исследования IVR и PK этого соотношения HPB:PEP 1:4 показали противоположный эффект: уменьшение соотношения HPB:PEP приводит к увеличенному IVR (см. IVR серии PSI). Такая же тенденция наблюдалась и в исследованиях PK: PK профиль B14 приводит к более высокому взрыву (Cmax), который больше, чем у состава B13. Кроме того, уровни плазмы в течение времени высвобождаемого COR005 из состава B14, были значительно выше, чем для состава B13, а также выше чем для составов B10 и B12.

[177] Влияние DEX на поверхностную активность COR005 ацетата при DEX:PEP 1:8

[178] Результаты теста 5 (таблица 4) показывают влияние DEX:PEP при добавлении в MS состав в отношении DEX:PEP 1:8. Результаты поверхностного натяжения показывают, что кажущееся поверхностное натяжение раствора DEX:PEP 1:8 (54 дин/см) сравнимо с HPB:PEP 1:2 по испытанию 3 (51 дин/см). Этот эффект предполагает, что больше пептида сосредоточено в объеме раствора, а не на поверхности раздела. Действительно, поверхностная активность пептида при этих соотношениях DEX и HPB к пептиду снижается по сравнению с одним только пептидом (44 дин/см). Добавки, сконцентрированные в воде, могут приводить к увеличению притягивания воды вокруг пептида в первичной эмульсии. Это может привести к повышенной пористости микросфер из-за относительно более высокого содержания воды во внутренней матрице, например, как ожидается, это произойдет с составом B13.

[179] Однако сравнительные PK данные составов B12 (DEX:PEP) и B13 (HPB:PEP) не подтверждают эти предположения. Хотя высвобождение пептида и уровни в плазме состава B13 показали высокое взрывное высвобождение и низкую концентрацию в плазме во времени, взрывное высвобождения из состава B12 снижается, а уровни в плазме с течением времени значительно выше, чем у состава B13. Эти неожиданные результаты показывают, что поверхностное натяжение первичной эмульсии и внешняя пористость конечных MS не являются единственными факторами, влияющими на наблюдаемый PK профиль пептида.

[180] Таким образом, авторы изобретения искали другой фактор, связывающий внешнюю пористость MS и поверхностное натяжение пептида, чтобы поддержать (эмпирически) неожиданное воздействие добавок, наблюдаемых в исследованиях IVR и PK. Этот фактор был идентифицирован после попыток оценить влияние различных условий на внутреннюю (а не внешнюю) морфологию различных MS составов. Кроме того, SEM изображения, рассмотренные ниже, подтверждали гипотезу о том, что измерения поверхностного натяжения идентифицировали условие изменения концентрации пептидов на границе раздела фаз, на которые влияло изменение концентрации добавок HPB и DEX. Действительно, только тогда, когда изображение SEM повторялось с помощью разрезания микросфер, чтобы выявить их внутреннюю текстуру, наблюдались связи между данными поверхностной активности и данными IVR и PK MS составов COR005 (см. ниже).

[181] В таблице 6 суммированы эффекты добавок на профиль поверхностной активности COR005 ацетата в физиологических условиях (37°C), которые подражают высвобождению COR005 в месте инъекции.

ТАБЛИЦА 6

Эффект поверхностного натяжения (% от исходного уровня)	Поверхностное натяжение (дин/см)	Растворимость (мг/мл)	COR005(мг/мл)	Соотношение HPB:PEP	Декстроза (масс.%)	Среда
Исходный уровень (PBS/5%DEX)	57	ND	Нет	Нет	5	PBS pH 7,4
-14% (-18% за 48 час)	49	3,3	10		5
Исходный уровень (PBS)	48	ND	Нет	Нет	Нет
-29%	34	3,6	10	Нет
+4%	50	8,9		10:1
-6%	45	5		1:2
-19%	39	3,9		1:4

[182] Данные, приведенные в таблице 6, показывают, что соотношения обеих добавок DEX или HPB к ацетату COR005 не улучшают растворимость COR005 ацетата в физиологических условиях (в таблицах 3 и 4 показано, что DEX не улучшает растворимость пептида в PBS и что HPB улучшает растворимость пептида в PBS зависимым от концентрации образом). Растворимость пептида с добавками в концентрациях, используемых для MS составов, не подтверждает наблюдаемое увеличение высвобождения и BA пептида из-за растворимости. Поверхностное натяжение COR005 с HPB при высоком соотношении HPB:PEP 10:1 (50 дин/см) подтверждает предположение и наблюдаемый эффект HPB на поверхностную активность пептида: повышенное HPB увеличивает растворимость пептида и уменьшает поверхностную активность пептида, потому что больше пептида будет в объеме раствора, а не на поверхности раздела. В случае уменьшения HPB:PEP от 1:2 до 1:4 поверхностное натяжение раствора также уменьшается. Меньше HPB в системе приводит к большей поверхностной активности пептида, с большим количеством пептида, доступного на поверхности раздела. Эти результаты подтверждают наблюдаемые данные IVR и PK состава B13 по сравнению с составом B14. Когда HPB добавляют к MS, пористость увеличивается, и высвобождение пептида зависит от степени взаимодействия (комплекса включения) между пептидом и HPB в микроокружении внутреннего пространства MS. В случае состава B13, где HPB:PEP является относительно высоким, в MS вырабатывается большее количество пор, и больше пептида находится на внутренней поверхности пор, а не внутри полимерной матрицы. Больше воды будет доступно для внутренней матрицы (из-за большего количества пор во внешней оболочке) и происходит быстрая диффузия воды во внутреннюю матрицу. Во внутренней матрице большая часть пептида доступна для высвобождения из полимера из-за эффекта HPB. Это приводит к относительно быстрому высвобождению пептида, наблюдаемому в IVR и PK состава B13, который показал увеличение взрыва и быстрое высвобождение в течение первых нескольких дней, а затем более низкие концентрации в плазме с течением времени.

[183] Та же тенденция подтверждается эффектом снижения соотношения HPB:PEP 1:4 (состав B14). В таблице 4 показано, что поверхностная активность пептида в этом состоянии (низкого HPB) сходна с поверхностной активностью пептида без добавки, 34 против 39 дин/см, соответственно. В этом случае пористость MS снижается по сравнению с составом B13 (с большим количеством HPB), и поверхностная активность пептида сохраняется, что приводит к большему количеству пептида, ориентированному на поверхности раздела поры. Когда вода диффундирует в MS B14, высвобождение пептида зависит от высвобождения из внутренней полимерной матрицы и из внутреннего пространства пор.

[184] Эти наблюдения и выводы подтверждаются анализом остаточной концентрации HPB в MS составах с HPB. Действительно, аналитические данные (см. ниже) подтверждают, что такое же соотношение HPB:PEP сохранялось в конечной MS с HPB и, следовательно, подтверждало условия и данные таблицы 6.

[185] Что касается результатов DEX, аналитические данные остаточного DEX в конечных MS показали значительно более низкое отношение DEX:PEP, что указывает на то, что большая часть исходного содержимого DEX была вымыта из MS в процессе получения. Поэтому, в отличие от случая с HPB, влияние DEX на поверхностную активность COR005 в месте инъекции представляется незначительным. Действие DEX рассматривается в разделе анализа SEM ниже.

ПРИМЕР 3

[186] Составы велдореотид ацетата с быстрым высвобождением (группы 1M-6M) готовили для инъекций крысам HSD:SPRAGUE DAWLEY^® SD^®, как показано в таблице 8 ниже. Несущую среду из молочной кислоты для использования в составах, как показано в таблице 7 ниже, получали следующим образом:

ТАБЛИЦА 7

Состав	Количество	Доза (чистый пептид/кг)
Расчетный размер партии	~2970 пробирок	0,5 мл на крысу подкожно 2,8 мг/кг
Велдореотид ацетат	6,83 г чистого пептида
D-маннитол 0,5 моль/кг	1707,5 г
Раствор 0,185 моль/кг	683 г
WFI	341,5 г
Гидрокарбонат натрия 0,185 моль/кг	q.s. pH 4,3 +/- 0,1
WFI (European Pharmcopeia)	3466,23 г
Конечная концентрация API	2 мг/мл (1,15 мл на пробирку)

[187] Составы для инъекций крысам готовили, как суммировано в таблице 8.

[188] Субъектам крысам (средний вес около 370 г одного субъекта) вводили в соответствии с указанным выше графиком дозирования в группах лечения по 5 крыс. Исходные образцы крови из хвостовой вены отбирали у крыс за 2 дня до введения дозы. У группы 1М образцы крови отбирали через 5 минут, 10 минут, 30 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 8 часов и 24 часа после дозирования. У групп 2M-6M образцы крови из хвостовой вены отбирали у крыс через 30 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 6 часов, 8 часов, 12 часов и 24 часа после дозирования. Образцы крови составляли приблизительно 300 мкл цельной крови, собранной в коммерческих пробирках K3, покрытых EDTA. Субъекты крысы также наблюдались на реакции на месте инъекции в течение 5-7 дней после введения дозы.

[189] Все подкожные инъекции вызывали реакции на месте инъекции. Оценка реакций на месте инъекции показана в таблице 9.

ТАБЛИЦА 8

Группа	Состав	Количество	Доза (чистый пептид)
1M	Велдореотид ацетат в носителе молочная кислота (таблица 4)	Общий объем - 2,3 мл Общий чистый API - 4,6 мг	0,28 мл на крысу внутривенно 1,5 мг/кг
2M	Велдореотид ацетат в носителе молочной кислоты (таблица 4)	Общий объем - 2,3 мл Общий чистый API - 11,5 мг Всего гидроксипропил-β-циклодекстрина - 150 мг	0,23 мл на крысу s.c. Велдореотид ацетат (чистый пептид) -3 мг/кг Гидроксипропил-β-циклодекстрин 40 мг/кг
	Добавочный велдореотид ацетат (8 мг эквивалентны 6,9 мг чистого пептида)
	Гидроксипропил-β-циклодекстрин	150 мг
	Конечная концентрация гидроксипропил-β-циклодекстрина	65 мг/мл
	Конечная концентрация API	5 мг/мл
3M	Велдореотид ацетат в носителе молочная кислота (таблица 4)	Общий объем - 2,3 мл Общий чистый API - 11,5 мг	0,23 мл на крысу s.c. Велдореотид ацетат (чистый пептид) 3 мг/кг
	Добавочный велдореотид ацетат (8 мг эквивалентны 6,9 мг чистого пептида)	Общий объем - 2,3 мл Общий чистый API - 11,5 мг
	Конечная концентрация API	5 мг/мл
4M	Велдореотид ацетат (8 мг эквивалентны 6,9 мг чистого пептида)	Общий объем - 4,4 мл Общий чистый API - 6,9 мг	0,34 мл на крысу s.c. Велдореотид ацетат (чистый пептид) - 1,5 мг/кг L-Лизин HCl - 6,3 мг/кг
	Физиологический раствор 0,9% NaCl
	L-Лизин HCl
	Конечный L-Лизин HCl	6,8 мг/мл
	Конечная концентрация API	1,6 мг/мл
5M	Велдореотид ацетат (11,6 мг эквивалентны 10 мг чистого пептида)	Общий объем - 2 мл Общий чистый API - 10 мг	0,23 мл на крысу s.c. Велдореотид ацетат (чистый пептид) -3 мг/кг Гидроксипропил-β-циклодекстрин - 47 мг/кг
	Физиологический раствор 0,9% NaCl	Общий объем - 2 мл Общий чистый API - 10 мг
	Гидроксипропил-β-циклодекстрин	150 мг
	Конечная концентрация гидроксипропил-β-циклодекстрина	75 мг/мл
	Конечная концентрация API	5 мг/мл
6M	Велдореотид ацетат (11,6 мг эквивалентны 10 мг чистого пептида)	Общий объем - 2 мл Общий чистый API - 10 мг 150 мг	0,23 мл на крысу s.c. Велдореотид ацетат (чистый пептид) -3 мг/кг Декстроза - 2,5%
	Физиологический раствор 0,9% NaCl - 1 мл
	Декстроза 5% - 1 мл
	Конечная концентрация физиологического раствора	0,45%
	Конечная концентрация декстрозы	2,5%
	Конечная концентрация API	5 мг/мл

ТАБЛИЦА 9

Группа ID	Доза (мг/кг)	Реакция на месте инъекции
2M	Пептид - 3 Гидроксипропил-β-циклодекстрин - 40	Сильная
3M	Пептид - 3	Сильная
4M	Пептид - 3 L-Лизин HCl - 6	Умеренная/слабая
5M	Пептид - 3 Гидроксипропил-β-циклодекстрин - 40	Сильная
6M	Пептид - 3 Декстроза - 15	Умеренная

[190] Сильные реакции на месте инъекции наблюдались при использовании инъекций велдореотида ацетата с использованием молочной кислоты. Однако крысам, которым вводили велдореотид ацетат, приготовленный с L-лизином HCl или декстрозой в физиологическом растворе (группы 4M и 6M, соответственно), демонстрировали относительно слабые реакции на месте инъекции.

[191] Образцы крови выдерживали на льду после сбора до момента центрифугирования. Образцы крови обрабатывали в течение 60 минут после сбора крови. Образцы центрифугировали при 3000 G в течение 15 минут в рефрижераторной центрифуге (5°C). Плазму отбирали из пробирки после центрифугирования и помещали в новые, соответственно помеченные пробирки и хранили при температуре от -65°C до -80°C до передачи.

[192] Образцы плазмы анализировали с помощью ЖХ-МС/МС для определения концентрации велдореотида ацетата в плазме для групп 1М-6М. Стандартный велдореотид ацетат последовательно разбавляли смесью метанол:вода (1:9) и добавляли в контрольную крысиную плазму для получения калибровочных стандартов и образцов QC. Калибровочные образцы хранили при температуре -70°C. Замороженные образцы затем оттаивали до комнатной температуры. Также были приготовлены контрольная плазма и контрольный реагент (вода). В каждую аликвоту по 100 мкл образца, калибратора или образца QC добавляли 25 мкл (~100 нг/мл) внутреннего стандарта (октреотид ацетат) в смеси метанол:вода (1:9) и 600 мкл смеси ацетонитрил:муравьиная кислота (99:1) и образцы подвергали вихревому перемешиванию в течение 30 секунд. Образцы разбавляли смешиванием 20 мкл образца плазмы с 180 мкл контрольной плазмы и разделяли на аликвоты по 100 мкл, затем добавляли внутренний стандарт и растворы ацетонитрил:муравьиная кислота.

[193] Затем образцы центрифугировали в течение 10 минут при 14000 об/мин при температуре 8°C. 450 мкл верхнего (органического) слоя затем переносили в испарительные пробирки и выпаривали в атмосфере азота при температуре около 50°C. Затем образцы восстанавливали в 200 мкл растворителя (вода:ацетонитрил:муравьиная кислота при 70:30:0,2). Затем образцы центрифугировали в течение 10 минут при 4000 об/мин при температуре 8°C. 160 мкл каждого образца отбирали и помещали в пробирку с автоматическим пробоотборником со вставкой из конического стекла и анализировали с помощью ЖХ-МС/МС.

[194] Концентрации велдореотида ацетата в плазме затем наносили на график и анализировали с использованием стандартных фармакокинетических методов. Фармакокинетические параметры, полученные для групп 1M-6M, показаны в таблице 10. График концентрации в плазме (полулогарифмический) относительно времени для групп 2M-6M показан на фигуре 4.

ТАБЛИЦА 10

Параметры PK	1M IV COR005 ацетат 1,5 мг/кг	2M SC COR005 ацетат 3 мг/кг (HPB молочная кислота)	3M SC COR005 ацетат 3 мг/кг (в молочной кислоте)	4M SC COR005 ацетат 1,5 мг/кг (с LysHCl)	5M SC COR005 ацетат 3 мг/кг (HPB в NS)	6M SC COR005 ацетат 3 мг/кг (2,5Dex 0,45NS)
N	4	5	5	5	5	5
Доза (мг/кг)	1,5	3	3	1,5	3	3
Cmax (нг/мл)	3991±664	350±111	345±95	220±54	451±129	544±245
CL (мл/час/кг)	782	(-)	(-)	(-)	(-)	(-)
T_1/2 (h)	0,66	3,3	2,5	2,8	3,3	2,8
AUC (нг-час/мл)	1918±6	2703±347	3179±466	1574±213	3254±609	4458±750
F (%)	100	70	83	82	85	116

[195] Сравнительные полулогарифмические PK профили SC по сравнению с IV для COR005 ацетата показывают, что COR005 ацетат демонстрирует флип-флоп кинетику. Степень наклона кривых при SC смещена вправо по сравнению с кривой элиминирования при IV. Следовательно, кажущаяся скорость поглощения пептида из места SC инъекции значительно медленнее и пролонгирована выше скорости элиминирования. Таким образом, кажущиеся значения полураспада всех SC составов на самом деле представляют собой период полураспада поглощения, который доминирует над эффектом фазы элиминирования фармакокинетического профиля.

[196] На фигуре 5 представлен график, иллюстрирующий влияние IR состава декстроза/физиологический раствор на PK профиль COR005 у крыс при 0,3 мг/кг DEX:PEP в соотношении 5:1 (6m) по сравнению с COR005 в буфере молочной кислоты с рН 4 (3m), используемым в качестве контроля. На фигуре 6 представлен график, иллюстрирующий влияние IR состава декстроза/физиологический раствор на PK профиль COR005 у крыс HPB/физиологический раствор (HPB:PEP 15:1) (5m) по сравнению с COR005 в буфере молочной кислоты с рН4 (3m), используемым в качестве контроля. На фигуре 7 представлен график, сравнивающий sc составы HPB и DEX на минипигах при 0,4 мг/кг по сравнению с COR005 в буфере молочной кислоты с рН 4 (3m), используемым в качестве контроля. На фигуре 8 представлен график, сравнивающий составы HPB на минипигах при 0,4 мг/кг по сравнению с COR005 в буфере молочной кислоты с рН 4 (3m), используемым в качестве контроля. На фигуре 9 представлен график, показывающий влияние DEX на PK профиль IR состава COR005 ацетата, SC, 0,4 мг/кг на минипигах по сравнению с буфером молочной кислоты pH 4, используемым в качестве контроля. На фигуре 10 представлен график, показывающий влияние DEX на PK профиль IR состава COR005 ацетата, SC, 0,1 мг/кг на минипигах по сравнению с буфером молочной кислоты pH 4, используемым в качестве контроля.

[197] Сравнительные PK профили показывают, что либо декстроза, либо HPB повышали Cmax COR005 и его абсолютную биодоступность в плазме выше чем в других несущих средах.

[198] В таблице 11 суммированы фармакокинетические параметры IR составов COR005 ацетата на минипигах (доза 0,4 мг/кг), показывающие влияние HPB и DEX на Cmax COR005 и абсолютное BA, с использованием в качестве контроля буфера молочной кислоты с pH 4. В таблице 12 суммированы фармакокинетические параметры IR составов COR005 ацетата на минипигах (доза 0,1 мг/кг), показывающие влияние DEX на Cmax COR005 и абсолютное BA, с использованием в качестве контроля буфера молочной кислоты с pH 4.

Таблица 11

IR - COR 005 ацетат	Доза (мг/кг)	T_max (часы)	C_max (нг/мл)	AUC_last (часы*нг/мл)	Абсолютный BAF(%)
Буфер молочной кислоты	0,4	1	108	161	69
DEX:PEP 5:1 Физиологический раствор	0,4	0,5	238	205	88,4
HPB:PEP 15:1 Физиологический раствор	0,4	0,25	255	198	85,3

Таблица 12

IR - COR 005 ацетат	Доза (мг/кг)	T_max (часы)	C_max (нг/мл)	AUC_last (часы*нг/мл)	Абсолютный BAF(%)
Буфер молочной кислоты	0,1	0,5	29,3	26	45
DEX:PEP 5:1 Физиологический раствор	0,1	1	43,6	53	91,4

[199] HPB увеличивает период полуабсорбции COR005 (M2 и M5) по сравнению с несущей средой молочной кислотой (M3) и декстрозой (M6). Это указывает на более медленное высвобождение и длительную абсорбцию COR005 из несущей среды с HPB.

[200] В группах 2М-6М через 24 часа также анализировали концентрацию препарата в плазме крови непосредственно перед приемом его очередной дозы, и она показана в таблице 13.

ТАБЛИЦА 13

Группа	Концентрация велдореотида ацетата в плазме (нг/мл) для каждого субъекта
2M	4,44	6,99	7,87	0,00	5,10
3M	60,3	0,00	2,01	8,31	0
4M	0	3,036	0	0	0
5M	7,70	6,235	7,621	3,700	1,65
6M	15,08	2,55	1,25	2,24	4,15

[201] Как можно заметить, внутривенная инъекция велдореотида ацетата подтверждает ожидаемый CL при 13 мл/мин/кг в соответствии с имеющейся литературой (см. Afargan et al., Novel Long-Acting Somatostain Analog with Endocrine Selectivity: Potent Suppression of Growth Hormone But Not of Insulin, Endocrinology, 142:1 (2001) 477-486). Кроме того, добавление эксципиентов улучшает фармакокинетическую эффективность велдореотида ацетата. Например, добавление декстрозы в физиологический раствор (группа 6M) улучшает AUC и дает F-значение, превышающее 100%. Как видно на фигурах 5-11, добавление эксципиентов приводит к улучшению биодоступности велдореотида ацетата. Кроме того, как показано в таблице 13, добавление эксципиентов, таких как гидроксипропил-β-циклодекстрин (группы 2M и 5M) и декстрозы (группа 6M), приводит к измеримой минимальной концентрации велдореотида ацетата через 24 часа. Таким образом, было показано, что добавление эксципиентов не только уменьшает реакции на месте инъекции, но также улучшает фармакокинетику велдореотида с быстрым высвобождением на крысиной модели.

ПРИМЕР 4

[202] Велдореотид ацетат был включен в микросферы PLGA (поли-молочно-ко-гликолевая кислота) в соответствии с составами в таблице 14.

ТАБЛИЦА 14

Композиция	Составы
Композиция	B9	B10	B11	B12	B13
Велдореотид ацетат, мг	200	200	200	200	200
PLGA (7-17 кДа), мг	-	500	-	500	500
PLGA (38-54 кДа), мг	500	-	500	-	-
Декстроза 5% (USP), мг	-	-	25	25	-
Гидроксипропил-β-циклодекстрин, мг	-	-	-	-	100

[203] Составы в таблице 14 вводили крысам путем инъекции с использованием иглы 23G для составов B9 и B10 и иглы 19G для составов B11-B13. Каждому животному вводили точный объем 0,5 мл состава. Образцы крови из хвостовой вены были взяты в различные моменты времени в течение 28 дней для определения фармакокинетики составов велдореотида ацетата и реакции на месте инъекции. Используемые методы аналогичны тем, которые описаны в примере 3.

[204] Фармакокинетический анализ составов PLGA-MS-COR005 ацетат в плазме крыс

[205] Анализ фармакокинетики COR005 проводился с использованием программного обеспечения PK Solutions 2.0 (Summit Research Services, CO. USA). Программное обеспечение вычисляет результаты с использованием методов без учета компартментов (площадь) и кубических (экспоненциальных терминов) методов, не предполагая какой-либо конкретной модели отсечения. Различные дозы и установившиеся параметры автоматически проецируются из результатов одной дозы. Расчет PK параметров основывался на двух стандартных методах анализа: (1) кривая отгонки (или метод остатков) для получения экспоненциальных членов, описывающих кривую уровня крови, и (2) площадь под вычислением кривой. В PK Solutions 2.0 используются оба метода, где это применимо, и одновременно сравниваются результаты.

[206] Анализ PK данных проводили с помощью PK-профилирования каждого животного каждой группы. Сравнительные PK параметры различных обработок были представлены средним значением±STDEV для каждой группы.

[207] На фигуре 11 показан стандартный график концентрации COR005 в плазме в виде кривых зависимости от времени средних значений±STDEV для групп SC обработки составами B9-13 PLGA-MS COR005 ацетата (время от 0 до 28 дней).

[208] На фигуре 12 показан график фармакокинетики «взрыва» как стандартный график концентрации COR005 в плазме в виде кривых зависимости от времени средних значений±STDEV SC обработки составами B9-13 PLGA-MS COR005 ацетата (время от 0 до 24 часов) для одной SC дозы, крысы (n=16).

[209] На фигуре 13 показано влияние HPB на взрывное высвобождение (время 0-24 часа) COR005 из PLGA MS по сравнению с основным составом MS.

[210] В таблице 15 суммированы фармакокинетические параметры взрывного высвобождения COR005 ацетата из составов MS на крысах, что демонстрирует влияние HPB на Cmax и абсолютную BA COR005.

ТАБЛИЦА 15

Составы			Доза (мг/кг)	Cmax «взрывное» (нг/мл)	AUC 0-24 час «взрывное» (нг*ч/ мл)	F% Абсолютный BA взрывного
B10	Исходный MS-PLGA (7-17 кДа)	Среднее±SD (n=4)	22±2,8	30±5	437±80	2%
B13 (HPB:PEP 1:2)	HPB MS - PLGA (7-17 кДа)	Соеднее±SD (n=4)	20±1,3	211±25	2771±313	11%

[211] Фигура 14 представляет собой график, показывающий влияние DEX на взрывное высвобождение (время 0-24 часа) COR005 из PLGA MS по сравнению с основным составом MS.

[212] В таблице 16 суммированы фармакокинетические параметры взрывного высвобождения COR005 ацетата из MS на крысах, показывающих действие DEX на Cmax и абсолютную BA COR005.

ТАБЛИЦА 16

Составы			Доза (мг/кг)	Cmax «взрывное» (нг/мл)	AUC 0-24 час «взрывное» (нг*ч/ мл)	F% Абсолютный BA взрывного
B10	Исходный MS-PLGA 7-17 кДа	Среднее±SD (n=4)	22±2,8	30±5	437±80	2%
B12 (DEX:PEP 1:8)	Декстроза MS-PLGA 7-17 кДа	Среднее±SD (n=4)	20±2,4	113±42	1280±216	5%

[213] В таблице 17 суммированы значения абсолютной и относительной биодоступности полного PK профиля - COR005 MS-PLGA 7-17 кДа - состав B13 на крысах (время 0-28 дней).

ТАБЛИЦА 17

Абсолютная биодоступность (AUC 0-t) COR005 MS - B13 (SC) в сравнении с COR005 IR (IV)
AUC(0-t) нг*ч/мл IR M1 (IV)	AUC(0-t) нг*ч/мл MS-B13 (SC)	Доза COR005 IR - M1 (IV) 1,5мг/кг	F= (1,512747)/(19,71918)*100	F= 51%
1918	12747	Доза COR005 MS- B13 (SC) 19,7мг/кг
Относительная биодоступность (AUC 0-t) COR005 MS - B13 (SC) в сравнении с COR005 IR M5 (SC)
AUC(0-t) нг*ч/мл IR-M5 (SC)	AUC(0-t) нг*ч/мл MS-B13 (SC)	Доза COR005 IR-M5 (SC) 3 мг/кг	F= (312747)/(19,73254)*100	F= 60%
3254	12747	Доза COR005 MS B13 (SC) 19,7мг/кг
Абсолютная биодоступность (AUC 0-_∞) COR005 MS - B13 (SC) в сравнении с COR005 IR M1 (IV)
AUC (0-_∞) нг*ч/мл IR M1 (IV)	AUC (0-_∞) нг*ч/мл MS-B13 (SC)	Доза COR005 IR - M1 (IV) 1,5 мг/кг	F= (1,518487)/(19,71918)*100	F=73%
1918	18487	Доза COR005 MS- B13 (SC) 19,7мг/кг
Относительная биодоступность (AUC 0-_∞) COR005 MS - B13 (SC) в сравнении с COR005 IR M5 (SC)
AUC (0-_∞) нг*ч/мл IR-M5 (SC)	AUC (0-_∞) нг*ч/мл MS-B13 (SC)	Доза COR005 IR-M5 (SC) 3 мг/кг	F= (318487)/(19,73254)*100	F=87%
3254	18487	Доза COR005 MS B13 (SC) 19,7мг/кг

[214] В таблице 18 суммированы эффекты добавок HPB и DEX к составам COR005 ацетата PLGA-MS на минипигах.

Таблица 18

COR005 PLGA- MS Составы	Параметры PK
COR005 PLGA- MS Составы	Доза (мг/кг)	Cmax (нг/мл)	F% BA (AUC 0-7 дней)
B10	2,3	1,4	~1
B13 - HPB:PEP 1:2	2,2	47	26
B14 - HPB:PEP 1:4	1,8	63	~100
B12(PSI13) - DEX:PEP 1:8	2,9	12,6	21

[215] На фигуре 15 показано влияние DEX:PEP 1:8 на минипигах со сравнимыми PK профилями микросфер PSI13 (B12:DXE: PEP 1:8) по сравнению с B10 (основной MS состав) в качестве контроля. На фигуре 16 показано влияние HPB:PEP 1:2 на минипигах на графике сравнимых PK профилей микросферы со взрывным высвобождением состава B13 по сравнению с B10 (основной MS состав) в качестве контроля. На фигуре 17 показано влияние HPB:PEP 1:4 на минипигах в виде графика сравнимых PK профилей взрывного высвобождения из микросфер состава B14 по сравнению с B10 (основной MS состав) в качестве контроля.

[216] В таблицах 19 и 20 суммируются содержание пептидов и эффективность инкапсулирования (EE) выборочных образцов микросфер, измеренных с помощью ВЭЖХ.

ТАБЛИЦА 19

ТАБЛИЦА 20

Теоретическое	PSI-6	PSI-7	PSI-8	PSI-9	PSI-10	PSI-1 (в виде B14)	PSI-13 (в виде B12)
Теоретический пептид, масс%	23,7	24,6	28,6	23,7	27,7	22,9	27,5
HPB Циклодекстрин %(мг)	-	-	-	3,4 (150) 1:8 HPB:объемный пептид	3,2 (150) 1:10 HPB: объемный пептид	6,7 (300) 1:4 HPB: объемный пептид
Декстроза % (мг)	3,4 (150) 1:8 Dex: объемный пептид	-	-				4,0 (187,5) 1:8 Dex: объемный пептид
Результаты
Измеренное содержание пептида, масс %	17,5	17,8	19,5	17,3	17,6	16,4	19,3
Эффективность инкапсуляции, %	74%	72%	68%	73%	64%	72%	70%

[217] Измеряли in vitro высвобождение (IVR) велдореотида ацетата из микросфер PLGA. 50 мл каждой партии микросфер (B9-B13) добавляли к 10 мл фосфатного буфера (10 мМ, pH=7,4, без кальция, магния или хлорида) в стеклянной пробирке 20 мл. Пробирки выдерживали при 37°C на контролируемом по температуре шейкере при 150 об/мин. Образцы собирали в различные моменты времени и анализировали с помощью спектрофотометра NANOVUE^® UV-Vis при 280 нм против стандартной калибровочной кривой. В таблице 21 приведены результаты. На фигуре 18 показаны сравнительные IVR профили COR005 из составов микросфер B9-13.

ТАБЛИЦА 21

	B9	B10	B11	B12	B13
Время (день)	IVR (%)	IVR (%)	IVR (%)	IVR (%)	IVR (%)
0	10,4%	2,6%	12,7%	11,6%	26,4%
0,08	11,4%	3,1%	15,5%	21,9%	37,0%
0,17	12,0%	3,3%	16,3%	22,2%	37,6%
1	13,3%	5,4%	17,7%	24,9%	39,1%
3	12,6%	8,7%	17,4%	29,6%	41,5%
5	14,1%	12,5%	20,7%	33,5%	43,2%
7	14,0%	14,4%	20,7%	35,4%	44,4%
14	13,7%	20,0%	18,6%	40,4%	43,6%

[218] Сравнимые IVR профили COR005 из составов микросфер B9-B13 показаны на рисунке 18 и в таблице 21 выше. Данные показывают существенную разницу между двумя конкретными типами PLGA 50:50, которые использовались для получений микросфер. Накопленное количество высвобожденного пептида и скорость высвобождения были значительно увеличены по сравнению с микросферами, полученными с использованием низкомолекулярного полимера 7-17 кДа (7-17KD) по сравнению с микросферами, полученными с более высокой молекулярной массой 38-54 кДа (38-54KD). Сравнимые профили высвобождения in vitro между HPB или DEX (B13 и B12, соответственно) по сравнению с основным составом B10 (без добавок) показывают, что добавки HPB или DEX увеличивают скорость высвобождения и общий накопленный пептид, высвобождаемый из микросфер выше, чем в основном состава. Профиль высвобождения in vitro COR005 из B13, который был приготовлен с добавкой HPB, показывает самое высокое взрывное высвобождение, около 40%. После взрывного высвобождения следовала очень низкая скорость высвобождения в течение следующих 14 дней, заканчивая общим высвобождением около 45% на 14 день. Отмечается, что профиль IVR B13 коррелирует с его PK профилем, как показывают PK данные на крысах и минипигах. Профиль высвобождения in vitro COR005 из B12, который был приготовлен с добавлением декстрозы, показывает снижение взрывного высвобождения примерно на 20% по сравнению с B13. После взрывного высвобождения из B12 следовало постоянное увеличение скорости высвобождения во время 14-дневного курса, при этом общий выход составил около 40% на 14 день. Этот профиль высвобождения in vitro сравниваемого взрывного высвобождения B12 по сравнению с B13 и B10 коррелирует с PK профилем B12 у крыс и минипигов. Профиль высвобождения in vitro COR005 из основного состава - B10, который не содержит добавок, показывает заметно слабый взрыв, около 5%. После взрывного высвобождения из B10 следовало постоянное увеличение скорости высвобождения во время 14-дневного курса, при этом общий выход составил около 20% на 14 день. Наблюдаемая скорость высвобождения из B10 и общего накопленного пептида, высвобождаемого из этих микросфер, была значительно ниже по сравнению с B12 и B13. Наблюдаемое взрывное высвобождение in vitro из B10 коррелирует с его PK профилем. B10 демонстрирует более слабое взрывное высвобождения in vivo по сравнению с B12 и B13 у крыс и минипигов.

[219] Результаты «взрывной» кинетики (0-24 часа) составов и реакций на месте инъекции в течение 28 дней показаны в таблицах 22 и 23, соответственно. Фармакокинетические профили для различных составов показаны на фигурах с 11 по 18.

ТАБЛИЦА 22

Состав	Средняя доза (мг/кг)	Средняя «взрывная» C_max (нг/мл)	Среднее AUC_0-24h «взрывное» (нг*ч/мл)
B9	19	88	628
B10	22	30	437
B11	17	96	759
B12	20	133	1280
B13	20	211	2771

ТАБЛИЦА 23

Состав	Значение пептида на месте инъекции (мг, расчетные), IVR	ISR «взрывное» 6 часов	ISR «взрывное» 24 часов	ISR 4 дня	ISR 28 дня
B9	0,65	2-3	2	1-2	Восстановление
B10	0,4	2	2	1-2	Восстановление
B11	1	2-3	2	1-2	Восстановление
B12	1	3-4	3-4	1-2	Восстановление
B13	1	5	5	4	1-2

*Реакция на месте инъекции оценивается в баллах от 1 до 5, где с 1=допустимое и 5=худшее (см. таблицу 24)

ТАБЛИЦА 24

Шкала ISR	24 ч	Неделя	Месяц
1	NOEL	NOEL	Восстановление NOEL
2	Слабое набухание	Нет покраснения	Восстановление/корочка
3	Умеренное набухание	Слабая покраснение	Слабая алопеция
4	Набухание	Умеренное покраснение/корочка	Слабая покраснение Алопеция
5	Набухание+отек	Корочка/кровотечение	Покраснение и алопеция

[220] Как показано в таблице 23, оказывается, что у крыс переносимость составляет <0,5 мг на месте инъекции и около 1 мг вызывает реакцию на месте инъекции.

[221] Микросферы PLGA от каждой партии, полученные в этом примере, также были подвергнуты электронной микроскопии (SEM). Поученные изображения показаны на фигурах 19-27.

[222] Как можно видеть из фигур 12 и 13, состав B13 (велдореотид ацетат в низкомолекулярных PLGA-микросферах с гидроксипропил-β-циклодекстрином) показал увеличение «взрывного» высвобождения по сравнению с другими составами велдореотида ацетата в течение первых 24 часов с последующим замедленным высвобождением в течение 28 дней с определенным C_min. Составы B10 и B12 (велдореотид ацетат в низкомолекулярных PLGA-микросферах без и с декстрозой, соответственно) проявляли меньший «взрыв», после чего увеличивали высвобождение от примерно 2 до 4 недель без усиления реакции на месте инъекции, что указывало на замедленное высвобождение с улучшенной переносимостью. B12, в частности, демонстрировал биодоступность (AUC) значительно выше, чем экстраполированная AUC для B13. Однако микросферы PLGA, содержащие велдореотид ацетат, полученные либо с гидроксипропил-β-циклодекстрином, либо с декстрозой, проявляли увеличенное высвобождение в фазе «взрыва» по сравнению с микросферами PLGA без наполнителей. Предполагается, не ограничиваясь теорией, что эти эксципиенты приводят к повышенной пористости и площади поверхности микросфер. В целом B10 был наиболее переносимым составом, приводящим к уровням в плазме крови (C_max) около 30 нг/мл на фазе «взрыва». Примечательно также, что IVR обратно коррелирует с реакцией в месте инъекции и может использоваться для прогнозирования возможной реакции на состав в месте инъекции.

[223] Сравнительные SEM изображения PLGA-MS составов COR005 ацетата, показывающие действие добавок

[224] Первой целью SEM изображений было оценить и сравнить внешнюю морфологию различных MS составов и проверить влияние добавок HPB и DEX на размер капель и поверхностное натяжение. Второй целью было оценить и сравнить внутренние структуры различных матриц MS. Более конкретно, определить возможные различия между различными внутренними матрицами, которые коррелируют с предполагаемыми уникальными взаимодействиями между COR005, добавками (DEX и HPB) и гидрофобными полимерами PLGA (в процессе получения первичной эмульсии и в процессе высвобождения пептида на месте инъекции из конечных MS) и влияние этих взаимодействий на наблюдаемые профили IVR и PK COR005 (с добавками или без них).

[225] На фигуре 19 показана микрофотография SEM внешней морфологии основных микросфер составов B10 COR005 ацетата без добавок. На рисунке 20 показана микрофотография внутренней морфологии основных микросфер составов B10 COR005 ацетата без добавок. На фигуре 20 стрелки указывают на микросферы, которые были вскрыты, чтобы показать внутреннюю морфологию.

[226] На фигурах 19 и 20 показаны внешняя и внутренняя морфологии основного состава B10. Первичная эмульсия этого MS состава была основана на смешивании водного раствора пептида с полимером в метиленхлориде без каких-либо других добавок. Отмечается, что в этих условиях получения COR005 обладает своей максимальной поверхностной активностью (как показано в таблицах 2, 3 и 4). На фигуре 19 показана симметричная форма MS состава B10 и относительно гладкая внешняя поверхность MS с только несколькими небольшими порами. Таким образом еще одна серия SEM была выполнена после нарезки образцов MS с целью оценки влияния этих внешних пор на внутреннюю морфологию MS. SEM изображение на фигуре 20 показывает внутреннюю структуру MS, открытую в результате криорезки. Наблюдаемая внутренняя матрица имеет твердую текстуру с только несколькими порами, которая коррелирует с результатами наблюдений внешней поверхности этого основного состава B10. На основе этих SEM наблюдений, состав B10 лучше всего охарактеризовать как микросферу с относительно низкой проницаемостью. Эти результаты подтверждают предположения о высоком сродстве между COR005 и полимером, приводящим к относительно гладкой внешней поверхности и твердой и конденсированной внутренней матрице. Эта морфология объясняется уникальной поверхностной активностью COR005 в виде вода-в-масле, относительно гидрофобным поверхностно активным веществом и его ориентацией на поверхности раздела с раствором полимера в метиленхлориде как гидрофобной поверхности (фигура 20 и таблицы 3, 4 и 5). Вследствие этого физического (нехимического) взаимодействия пептид:полимер ожидаемое высвобождение пептида из состава B10 должно быть относительно медленным. Действительно, данные IVR показывают, что скорость высвобождения COR005 из состава B10 является замедленной по сравнению с MS составами HPB и DEX. Эта скорость медленного высвобождения коррелирует с PK-профилем B10 in vivo, который имеет самое низкое взрывное высвобождения (Cmax), как это наблюдается у крыс и минипигов, и самые низкие уровни в плазме, наблюдаемые у минипигов, по сравнению с составами B12, B13 и B14 (таблица 3). Отмечается, что PK у крыс указывает на увеличение уровней COR005 в плазме из MS состава B10 выше составов B12 и B13, однако из-за значительной изменчивости, связанной с группой животных B10, результаты были неубедительными. Определяющая корреляция между медленным высвобождением COR005 из состава B10 и низкими уровнями в плазме и низкой BA была подтверждена в исследованиях PK на минипигах, как показано в таблице 3. Скорость высвобождения COR005 из основного состава B10 была слишком медленной, чтобы преодолеть скорость клиренса COR005 у минипигов, и в результате в течение времени были получены низкие уровни в плазме.

[227] Внешняя и внутренняя морфология состава B12 с DEX

[228] На фигуре 21 и 22 показаны изображения SEM внешней и внутренней морфологий состава B12 (PLGA-MS-DEX), соответственно. Изображение, представленное на фигуре 21, показывает характерное MS состава B12 со значительной высокой пористостью внешней поверхности как результат многих пор, видимых на поверхности, по сравнению с очень небольшим количеством пор, наблюдаемых в основном составе B10. На фигуре 22 внутренняя матрица состава B12 подвергается воздействию после криорезки MS. Изображение показывает значительно большое количество число пустот, разделенных относительно тонкими внутренними полимерными границами, которые приводят к высокой плотности малых пустот во внутренней матрице и, таким образом, к увеличенному объему пустот. Первым ожидаемым воздействием этого увеличенного объема является снижение плотности полимера во внутренней матрице. Для данного объема MS больше пустот внутри MS равно меньше полимера из-за внутреннего пространства пустот. Вторым ожидаемым результатом этого высокого объема является снижение содержания пептида в MS. Меньшее количество полимера в матрице может привести к меньшей инкапсуляции пептида внутри MS. Третьим ожидаемым эффектом этого высокого объема пор является быстрое высвобождение инкапсулированного пептида из MS состава B12 с меньшей продолжительностью высвобождения по сравнению с твердой прочной и плотной матрицей состава B10 основных MS.

[229] Однако неожиданно все три планируемых результата не наблюдались для IVR и PK данных IVR и PK COR005. Данные IVR (см. ниже) показывают длительное и постоянное высвобождение COR005 из состава B12 по рецептуре B10, а PK показывает увеличенные уровни плазмы во времени и более высокую абсолютную BA для состава B12 выше чем для состава B10.

[230] Эти результаты указывают на то, что в случае первичной эмульсии COR005 с DEX пептид концентрируется не в матрице PLGA, а на поверхности полимера внутренних пустот. Поскольку COR005 обладает уникальной поверхностной активностью, которая приводит к высокой аффинности пептида к гидрофобному полимеру PLGA, он концентрируется на поверхности раздела полимера и внутренней водной фазы первичной эмульсии. Как следствие, на стадии затвердевания MS с отсутствием добавок большая часть COR005 будет сконцентрирована между полимерными цепями PLGA.

[231] Однако, когда добавляется DEX, многие поры, образовавшиеся внутри матрицы, образуют множество небольших пространств, которые приводят к увеличению площади поверхности внутри MS. В этом случае общая площадь поверхности MS значительно выше чем в случае MS состава B10, который имеет относительно твердую матрицу. Это приводит к значительному пролонгированному высвобождению COR005 из B12, за которым следуют повышенные уровни в плазме в течение длительного периода времени, что можно объяснить высвобождением COR005 из внутренней поверхности пор, а не из твердых полимерных структур. Только когда пептид высвобождается с поверхности, кинетика этого высвобождения коррелирует с PK.

[232] Другим неожиданным действием DEX в PLGA MS является его влияние на диспергирование и распределение COR005 в процессе получения первичной эмульсии и затвердевания MS. Было показано, что декстроза улучшает растворимость COR005 в воде (таблица 3 показывает высокую растворимость в 5% растворе декстрозы, >500 мг/мл). Этот эффект может быть связан с возможной водородной связью между декстрозой и COR005, которая изменяет конформацию пептида до более гидрофильной конформации с менее гидрофобными фрагментами, расположенными снаружи молекулы. Другими словами, высокая способность связываться с водородом и сродство воды к декстрозе могут способствовать солюбилизации пептида. Этот эффект приводит к улучшению диспергирования и объема распределения пептида в MS. Когда первичную эмульсию добавляют во вторичную эмульсию, которая представляет собой водную фазу PVA, большая часть декстрозы перетекает из эмбриональной MS в непрерывную фазу. Пептид снова принимает первоначальную гидрофобную конформацию, которая имеет высокое сродство к PLGA и, таким образом, концентрируется на межфазных поверхностях пор и внутри полимерной матрицы. Это подтверждается очень низким обнаружением декстрозы в конечной MS, лишь около 0,5% декстрозы, обнаруженной в конечной MS из 4%-ной теоретической нагрузки (таблица 25 ниже).

ТАБЛИЦА 25

Исследуемые MS составы	Теоретическое содержание пептидов	Теоретическое содержание добавок (соотношение HPB:PEP или DEX:PEP)		Действительное содержание пептидов	Действительное (остаточное) содержание) добавок в конечном MS (соотношение HPB:PEP или DEX:PEP)
Исследуемые MS составы	COR005 ацетат	HPB	DEX	COR005 ацетат	HPB	DEX
PSI 12 (в виде B14) Партия SOT1542_001-40	26,6%	6,7% (1:4)		16,4%	4,23% (1:3,9)
PSI-13 (в виде B12) Партия Evonik #1459-1	32%		4% (1:8)	19,3%		0,57% (1:34)

[233] Внешняя и внутренняя морфология состава B13 с HPB

[234] На фигурах 23 и 24 показаны SEM изображения внешней и внутренней морфологии MS состава B13. На фигуре 25 показана внешняя и внутренняя морфология плацебо MS, полученного в качестве контроля с тем же количеством HPB, которое использовалось в препарате B13 (где не добавляли COR005 ацетат). Внешняя морфология состава B13, как показано на фигуре 23, поддерживает ожидаемый эффект HPB как агента пористости в PLGA-MS. На поверхности имеется множество пор с широким диапазоном диаметров пор. Однако на фигуре 24 показана внутренняя структура MS состава B13 после разрезания путем криорезания, что указывает на существенное различие между внутренней морфологией состава B13 и состава B12. Внутренняя структура состава B13 демонстрирует значительное увеличение размера пустот по сравнению с размером пустот в составе B12 (фигура 22). Более того, число внутренних более крупных пустот в составе B13 уменьшено по сравнению с высокой плотностью многих небольших пустот, обнаруженных в составе B12. Эти результаты показывают, что в случае состава B13 увеличение общей площади поверхности за счет создания внутренних пустот меньше, чем в случае состава B12.

[235] Поэтому ожидается, что эффективность инкапсулирования COR005 в препарате B13 будет уменьшена по сравнению с составами B10 и B12 из-за внутренней площади поверхности. Однако эффективность инкапсулирования COR005 была одинаковой для этих трех составов MS. Это означает, что COR005 будет концентрироваться с относительно высокой концентрацией вблизи внешней оболочки MS, что может привести к увеличению «взрывного» высвобождения. Более того, взаимодействие между HPB и COR005 как комплексом включения будет приводить к увеличению концентрации гидрофильного комплекса HPB с пептидом. Благодаря этому взаимодействию между HPB и COR005 гидрофильный комплекс будет привлекать больше воды и будет ограничивать эффективность затвердевания PLGA, которое завершится внутренней матрицей с относительно большими отверстиями, как показано на фигурах 23 и 24.

[236] Молекулярная масса HPB значительно выше (примерно такой же уровень COR005) по сравнению с DEX, и поэтому ее подвижность и дисперсия во внутреннем пространстве MS также будут ограничены по сравнению с более высоким объемом распределения DEX. Очевидный больший размер внутренних пустот, обнаруживаемый в препарате B13, и связанный с этим эффект поверхностной активности пептида, связанный с этой внутренней площадью поверхности, коррелируют с уникальным профилем IVR и PK состава B13. Когда вода поступает во внутреннее пространство MS состава B13, быстрое высвобождение пептида происходит из-за высокого присутствия HPB вблизи пептида. Большая часть HPB оставалась в конечной MS, как показано в таблице 25, что приводит к тому же соотношению HPB:PEP, что и теоретическое соотношение HPB:PEP 1:2. Кроме того, поверхностная активность пептида в месте инъекции в этих условиях снижается, как показано в таблице 6. Результатом этих двух эффектов является то, что основная часть пептида будет сконцентрирована в виде гидрофильного комплекса с HPB на поверхности внутреннего пространства больших пустот в MS.

[237] Эти данные также поддерживают быстрое высвобождение большей части пептидной нагрузки на ранней стадии проникновения воды (после инъекции), за которой следует очень слабое высвобождение остального инкапсулированного пептида. Кроме того, для дальнейшего подтверждения взаимодействия COR005:HPB и влияния этого уникального взаимодействия на поверхностную активность инкапсулированного пептида было приготовлено «плацебо» MS состава B13, которое было основано на комбинации HPB и PLGA в виде состава B13, но без пептида COR005. На фигуре 25 показано SEM изображение морфологии «MS» состава B13 без COR005 ацетата. Это изображение ясно показывает, что инкапсулирование HPB без COR005 приводит к образованию полых микрокапсул, а не твердых микросфер. Более конкретно, HPB удерживает воду, поскольку MS затвердевает, что возможно замедляет затвердевание PLGA в эмбриональной MS. Этот эффект привел бы к значительно большему количеству отверстий/пор в матрице PLGA, как это наблюдалось для плацебо, намного больше, чем в составе B13. Эти данные также подтверждают взаимодействие между HPB и COR005, что приводит к уникальной и неожиданной внутренней поверхности в составах PLGA-MS.

[238] На фигуре 26 показана микрофотография SEM аналогичного состава «плацебо» микросферы состава B12 с использованием DEX и эксципиента без пептида COR005. На этих фигурах показана внешняя и внутренняя структура микросфер, приготовленных только с добавкой (без COR005) в тех же входных количествах, что и в составах, содержащих пептид. Внешняя морфология плацебо-микросфер показывает очень мало поверхностных пор. Внутри существует ограниченное количество больших внутренних пустот. Микросферы представляют собой только «оболочку» полимера с полым сердечником. Они иногда называются микрокапсулами. Не будучи связанными какой-либо конкретной гипотезой, когда образуется первичная эмульсия типа «вода-в-масле», поверхностное натяжение только WFI и добавки позволяет более мелким капелькам сливаться. Поливиниловый спирт (PVA) удерживает зародышевые микросферы (первичная эмульсия) в виде дискретных капелек. Процесс испарения растворителя является относительно медленным, позволяя первичной эмульсии образовывать две фазы: внутреннюю водную фазу, содержащую добавку, и фазу внешнего полимерного раствора, состоящую из полимера и метиленхлорида. Поверхность MS имеет несколько пор, которые могли бы быть созданы тонкой дисперсией капелек воды в фазе органического полимера.

[239] На фигурах 23 и 24 виден эффект добавления COR005 вместе с HPB. Изменение поверхностного натяжения во внутренней водной фазе позволяет меньшим количеством капель пептида и HPB сохраняться на протяжении всего процесса испарения растворителя, устанавливая внутреннюю и поверхностную структуру, как показано. Аналогично, комбинация декстрозы и COR005 обеспечивает микросферы большим количеством небольших внутренних пустот (фигура 22).

[240] Пример B14 (PSI12) и улучшенный профиль высвобождения и PK COR005 с HPB

[241] Неожиданные данные состава B13 IVR и его PK-профиля, которые показывают быстрое высвобождение большей части содержимого инкапсулированного пептида, за которым следуют значительно низкие уровни в плазме с течением времени, послужили основой для разработки составов MS с уменьшенными соотношениями HPB:PEP. Противоречивые результаты IVR и PK показывают, что уменьшенное соотношение HPB:PEP от 1:2 до 1:4 и даже до 1:8 приводит к неожиданному увеличению высвобождения пептида из MS. Чтобы исследовать связь между этими результатами IVR и PK с уникальной поверхностной активностью COR005, был проведен подробный SEM-анализ MS с пониженными соотношениями HPB:PEP с целью оценки их внутренней морфологии. На фигуре 27 показаны SEM изображения, сравнивающие морфологию внутренних матриц составов MS COR005 с различными соотношениями HPB:PEP.

[242] Как можно видеть из сравнительных SEM изображений на фигуре 27, приведенное соотношение HPB:PEP от 1:2 (состав B13) до 1:4 (состав B14) и дальнейшее снижение до 1:8 и 1:10 приводит к неожиданному увеличение числа пустот во внутренней матрице этих микросфер. Более того, приведенное соотношение от 1:2 до 1:4 приводит к еще одному противоречивому результату - увеличению распределения пор на внешней поверхности MS, что видно на примере HPB:PEP 1:4 B14 по сравнению с B13. Обратный/неожиданный эффект пониженного отношения HPB:PEP еще больше усиливается в случае минимального отношения HPB:PEP 1:10, как проиллюстрировано на SEM изображении этого соотношения, которое показывает внутреннюю матрицу, которая имеет значительно более плотное распределение меньших пустот.

[243] В заключение, поскольку отношение HPB:PEP уменьшается, COR005 ориентируется на внутренней поверхности MS. Эта уникальная поверхностная активность приводит к увеличению и длительному высвобождению пептида, что главным образом обусловлено высвобождением пептида из увеличенной внутренней площади поверхности, заполненной пустотами. В результате высвобождение пептида будет усиливаться и продлеваться с течением времени, как это наблюдалось в исследованиях IVR и PK в случае состава B14. Отметим, что обратная зависимость между соотношением HPB:PEP, наблюдаемым с помощью SEM-анализа, также коррелирует со сравнительным IVR исследованием этих различных соотношений HPB:PEP.

[244] Площадь поверхности

[245] Площадь поверхности микросфер измеряли с использованием адсорбции газообразного азота на приборе Micromeritics ASAP 2020. 15-25 мг микросфер добавляли в пробирку для автоматического анализа и запечатывали внутри пробирки специальной герметичной фриттой. Анализ проводился в два этапа: дегазация и измерение адсорбции азота. Дегазация представляет собой процесс, в котором используется нагревание и вакуум для удаления влаги и других захваченных газов внутри микросфер. Микросферы дегазировали в вакууме (100 мм рт. ст.) и нагревали при 35°С в течение 150 мин. Затем пробирку с образцом переносили в аналитический клапан прибора. Пробирку с образцом опускают в сосуд с жидким азотом для охлаждения образца до 77°К. Газообразный азот добавляли контролируемым образом, и контролировали давление в трубке, чтобы создать изотерму адсорбции. Из изотермы, применяя теорию Брунауэра-Эмметта-Теллера (BET) рассчитывали площади поверхности на единицу массы. Время анализа составляло приблизительно 4 часа, общее время работы составляло 6,5 часов на образец.

[246] Представление о поверхностном натяжении, влияющем на структуру пор, снова подтверждалось измерением площади поверхности. Результаты этого теста на нескольких различных микросферах, полученных без эксципиента (PSI-7) и с DEX или HPB (PSI-6 и PSI-12), как описано выше, суммированы в таблице 26.

Таблица 26

MS состав	Эксципиент	BET Площадь поверхности (м²/г)
PSI-7	Нет	5,084
PSI-6	3,4% DEX (DEX:PEP=1:8)	9,7437
PSI-12	6,7% HPB (HPB:PEP=1:4)	77,7176

[247] Более высокие уровни площади поверхности указывают на большее количество внутренних пустот в микросферах.

[248] Микросферы, содержащие велдореотид ацетат и либо декстрозу, либо HPB в качестве эксципиентов, имеют площадь поверхности множества полимерных микросфер от около 7 м²/г до около 12 м²/г, например, от около 7 м²/г до около 10 м²/г.

[249] Для сравнения, микросферы, полученные из PLGA и октреотидацетата с 0, 0,2% или 1% глюкозы, имели площадь поверхности 4,4, 4,7 или 4,9 м²/г, соответственно (Biomaterials, 2004, 25, 1919-1927).

ПРИМЕР 5

[250] Велдореотид был приготовлен в виде эмульсии вода в масле с использованием 80% (мас.%) хлопкового масла, 20% (мас.%) воды для инъекций (WFI) и 1% (мас.%) велдореотида ацетата. Конкретно, 10 мг велдореотида ацетата растворяли в 200 мкл WFI в стеклянном флаконе объемом 5 мл, добавляли 800 мг хлопкового масла и полученную смесь перемешивали при магнитном перемешивании при комнатной температуре в течение 15 минут при 1000 об/мин. Эмульсию затем рассматривали в световом микроскопе и хранили при охлаждении. Полученная эмульсия была стабильной и была признана инъекционной через иглу 27G.

[251] Велдореотид ацетат также был составлен в виде гидрогеля с использованием высоковязкой натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы 0,7% (мас./об.) (SIGMA C5013), 37,5% (мас./об.) гидроксипропил-β-циклодекстрина и 0,5% (мас./об.) велдореотида ацетата. Конкретно, 10 мг велдореотида ацетата смешивали с 75 мг гидроксипропил-β-циклодекстрина в 2 мл WFI и перемешивали в стеклянном флаконе объемом 5 мл до прозрачности. Добавляли медленно 14 мг натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы, вливая в смесь при перемешивании магнитной мешалкой при комнатной температуре, затем хранили при охлаждении. Полученный гидрогель также можно было вводить инъекцией через иглу 27G. Неожиданно было обнаружено, что порядок получения состава имеет решающее значение для стабильности геля. Комбинация велдореотида ацетата с гидроксипропил-β-циклодекстрином с последующим добавлением карбоксиметилцеллюлозы приводила к более прочному гидрогелю, чем добавление карбоксиметилцеллюлозы к велдореотид ацетату сначала или одновременному объединению компонентов. Интересно, что комбинация гидроксипропил-β-циклодекстрина с карбоксиметилцеллюлозой сама по себе не приводила к образованию геля. Поэтому считается, не будучи связанными с теорией, что полимер взаимодействует с циклодекстрином и пептидом из-за его уникальных свойств, приводя к образованию стабильного геля.

[252] И эмульсионный состав, и гидрогель вводили крысам в дозе 1 мг на место инъекции с использованием игл 27G, по одному составу с каждого бока крысы. Для каждого состава на месте инъекции не наблюдалось опухания до 48 часов после дозирования. Через 48 часов после дозирования на месте инъекции наблюдалось опухание только для гидрогеля, но не для эмульсии. Через 72 часа после введения препарата в случае гелевого состава наблюдали опухание и небольшую ранку. На местах инъекции эмульсионной композиции не проявлялось какой-либо существенной реакции на месте инъекции, не наблюдалось ни опухания, ни алопеции.

[253] Крыс умерщвляли и вскрывали для оценки подкожной реакции на месте инъекции. В месте инъекции гидрогеля через 72 часа были обнаружены отек и признаки местного воспаления, включая утолщение субдермиса. В месте инъекции эмульсии через 48 часов субдермальная ткань была доброкачественной, без признаков опухания, отека, воспаления или утолщения субдермиса.

ПРИМЕР 6

[254] Велдореотид ацетат был введен в состав липосом (многослойные везикулы) путем объединения велдореотида ацетата и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DMPC) в соотношении 1:10 путем объединения 7 мг велдореотида ацетата и 70 мг DMPC (14:0 PC (DMPC) 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолин 850345 Avanti, 7 мас.%) в 1 мл WFI в стеклянном флаконе объемом 5 мл. Смесь перемешивали при 1000 об/мин в течение 30 минут при комнатной температуре, используя магнитное перемешивание. Этот состав анализировали с использованием SEM изображения, как показано на рисунке 28. Липосомы хранили при охлаждении.

[255] Двум крысам вводили велдореотид ацетат в несущей среде молочной кислоты примера 3. Трем крысам SD® вводили липосомы с велдореотидом ацетатом. Инъекции вводили при около 4,5 мг/кг велдореотида ацетата. Образцы плазмы отбирали в течение 1, 4, 8, 12, 24 и 48 часов и анализировали, как обсуждалось ранее, для определения концентрации велдореотида ацетата в плазме в нг/мл. Данные показаны в графической форме на фигуре 29.

[256] Липосомы продемонстрировали подходящее средство доставки для медленного высвобождения велдореотида ацетата с терапевтическими концентрациями (>1-5 нг/мл) в течение по меньшей мере 48 часов, что может коррелировать с однократной еженедельной лекарственной формой для человека. Понятно, что липосомы могут быть образованы любым способом, известным специалистам в данной области, и что отношение велдореотида ацетата к липосомальному агенту может варьироваться по меньшей мере от 1:5 до 1:20. Кроме того, может быть использован любой фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

ПРИМЕР 7

[257] Были получены микросферы PLGA, содержащие велдореотид ацетат. 500 мг PLGA 50:50 (7-17 кДа) растворяли в 5 мл дихлорметановой масляной фазе). Водный раствор, контактирующий с 50 мг велдореотид ацетата в 1 мл DDW, готовили отдельно (внутренняя водная фаза). Первую водную фазу эмульгировали в масляной фазе (содержащей PLGA) с использованием высокоскоростного гомогенизатора (Polytron) при температуре 2-8°C с использованием разных скоростей и продолжительности времени для образования первичной эмульсии воды в масле. Первичную эмульсию добавляли (по каплям) в 100 мл внешней водной фазы, содержащей 1% раствор PVA в PBS для образования вторичной эмульсии. Основной причиной для растворения PVA в PBS была задача, чтобы свести к минимуму потерю велдореотида ацетата из воды во внешнюю фазу. Затем влажные микросферы перемешивали при 1000 об/мин в течение 2 ч на льду, чтобы допустить выпаривание DCM и затвердевание микросфер. Влажные микросферы собирали центрифугированием после трех промывочных курсов в PBS и затем суспендировали в 6 мл 2% маннитола и сушили вымораживанием. Образец высушенных микросфер растворяли в смеси DDW:ацетон 1:1 и экстрагированное количество пептида оценивали с помощью спектрофотометра naoVue. Окончательная лекарственная нагрузка велдореотида ацетата в микросферах составляла 6 мас.%, и эффективность инкапсуляции (EE) составляла 77%.

[258] Варианты осуществлений фармацевтической композиции включают следующие:

[259] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель; и эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[260] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях, где фармацевтически приемлемая соль выбрана из группы, включающей гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, ацетат, трифторацетат, цитрат, оксалат, малонат, салицилат, п-аминосалицилат, малат, фумарат, сукцинат, аскорбат, малеат, сульфонат, фосфонат, перхлорат, нитрат, формиат, пропионат, глюконат, лактат, тартрат, памоат, гидроксималеат, пируват, фенилацетат, бензоат, п-аминобензоат, п-гидроксибензоат, метансульфонат, этансульфонат, нитрит, гидроксиэтансульфонат, этиленсульфонат, п-толуолсульфонат, нафтилсульфонат, сульфанилат, камфорсульфонат, манделат, о-метилманделат, гидробензосульфонат, пикрат, адипат, D-о-толилтартрат, тартронат, α-толуат, (о, м, п)-толуат, нафтиламинсульфонат, октаноат, пальмитат, стеарат, соль жирных кислот, соль других минеральных кислот и карбоновых кислот; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель; и эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[261] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; полимер; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[262] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; полимер, образующий микросферы; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[263] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; полимер, образующий микросферы; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[264] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; полимер, образующий микросферы, где полимер представляет собой PLGA; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[265] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель; и эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[266] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль, где фармацевтически приемлемая соль выбрана из группы, включающей гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, ацетат, трифторацетат, цитрат, оксалат, малонат, салицилат, п-аминосалицилат, малат, фумарат, сукцинат, аскорбат, малеат, сульфонат, фосфонат, перхлорат, нитрат, формиат, пропионат, глюконат, лактат, тартрат, памоат, гидроксималеат, пируват, фенилацетат, бензоат, п-аминобензоат, п-гидроксибензоат, метансульфонат, этансульфонат, нитрит, гидроксиэтансульфонат, этиленсульфонат, п-толуолсульфонат, нафтилсульфонат, сульфанилат, камфорсульфонат, манделат, о-метилманделат, гидробензосульфонат, пикрат, адипат, D-о-толилтартрат, тартронат, α-толуат, (о, м, п)-толуат, нафтиламинсульфонат, октаноат, пальмитат, стеарат, соль жирных кислот, соль других минеральных кислот и карбоновых кислот; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель; и эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[267] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль; полимер; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[268] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль; полимер, образующий микросферы; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[269] Фармацевтическая композиция, содержащая: велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; полимер, образующий микросферы, где полимер представляет собой PLGA; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[270] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; полимер; и эксципиент; где фармацевтическая композиция представляют собой гель.

[271] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; масляную фазу; водную фазу, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль действуют как эмульгатор; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту; где фармацевтическая композиция образует эмульсию.

[272] Фармацевтическая композиция, содержащая: пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид является водорастворимым, но обладает низкой растворимостью в изотонических условиях; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель; и липосомальный агент, образующий липосомы; и, необязательно, эксципиент, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, сахар или аминокислоту.

[273] Варианты осуществлений любой из вышеперечисленных фармацевтических композиций включают следующие:

[274] Фармацевтическая композиция, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой: циклический пептид; или пептидный амфифил; или аналог соматостатина; или циклический аналог соматостатина; или конформационно затрудненный с циклической структурой пептид; или аналог конформационно затрудненного с циклической структурой соматостатина; или аналог конформационно затрудненного с циклической структурой соматостатина с одним амином; или ионное водорастворимое поверхностно-активное вещество.

[275] Фармацевтическая композиция, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой: ацетат; или выбран из группы, включающей гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, ацетат, трифторацетат, цитрат, оксалат, малонат, салицилат, п-аминосалицилат, малат, фумарат, сукцинат, аскорбат, малеат, сульфонат, фосфонат, перхлорат, нитрат, формиат, пропионат, глюконат, лактат, тартрат, памоат, гидроксималеат, пируват, фенилацетат, бензоат, п-аминобензоат, п-гидроксибензоат, метансульфонат, этансульфонат, нитрит, гидроксиэтансульфонат, этиленсульфонат, п-толуолсульфонат, нафтилсульфонат, сульфанилат, камфорсульфонат, манделат, о-метилманделат, гидробензосульфонат, пикрат, адипат, D-о-толилтартрат, тартронат, α-толуат, (о, м, п)-толуат, нафтиламинсульфонат, октаноат, пальмитат, стеарат, соль жирных кислот, соль других минеральных кислот и карбоновых кислот.

[276] Фармацевтическая композиция, где эксципиент является сахаром, и где сахар представляет собой: сахарид; или выбран из группы, включающей моносахариды, дисахариды и полисахариды; или циклический полисахарид; или циклодекстрин; или β-циклодекстрин; или гидроксипропил-β-циклодекстрин; или моносахарид; или декстрозу; или в концентрации от около 2,5% масс. до около 5,0% масс. в расчете на общую массу композиции.

[277] Фармацевтическая композиция, где эксципиент является аминокислотой и представляет собой природную аминокислоту, и где аминокислота представляет собой лизин или аргинин; или гидрохлоридную соль аминокислоты; или L-лизин гидрохлорид или L-аргинин гидрохлорид.

[278] Фармацевтическая композиция, где эксципиент представляет собой гидрофобный поглотитель, и где гидрофобный поглотитель имеет по меньшей мере одну свободную аминогруппу.

[279] Фармацевтическая композиция, где фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель выбран из группы, включающей изотонический ацетатный буфер, молочную кислоту, физиологический раствор и забуференный фосфатом физиологический раствор; или физиологический раствор; или в концентрации около 0,45% по массе от композиции.

[280] Фармацевтическая композиция, где полимер является биосовместимым; или образует матрицу; или образует частицы; или образует микросферы.

[281] Фармацевтическая композиция, где микросферы: имеют повышенную пористость по сравнению с микросферами, созданными без эксципиента; или имеют увеличенную площадь поверхности по сравнению с микросферами, созданными без эксципиента; или имеют увеличенный уровень высвобождения пептида по сравнению с микросферами, созданными без эксципиента; или имеют увеличенный уровень высвобождения пептида в процессе первого 24-часового периода после инъекции фармацевтической композиции пациенту по сравнению с микросферами, созданными без эксципиента; или демонстрируют профиль с замедленным высвобождением в течение по меньшей мере одной недели после инъекции фармацевтической композиции пациенту; или демонстрируют профиль с замедленным высвобождением в течение по меньшей мере двух недель после инъекции фармацевтической композиции пациенту; или демонстрируют профиль с замедленным высвобождением в течение по меньшей мере четырех недель после инъекции фармацевтической композиции пациенту.

[282] Фармацевтическая композиция, где полимер представляет собой поли(молочно-ко-гликолевую кислоту) (PLGA); или где поли(молочно-ко-гликолевая кислота) (PLGA) содержит молочную кислоту и гликолевую кислоту в соотношении 50:50.

[283] Фармацевтическая композиция, где полимер инкапсулирует: пептид или его фармацевтически приемлемую соль; или эксципиент; или оба, пептид или его фармацевтически приемлемую соль и эксципиент.

[284] Фармацевтическая композиция, где полимер имеет среднюю молекулярную массу в интервале между около 7 и около 17 килодальтон; или имеет молекулярную массу в интервале между около 38 и около 54 килодальтон.

[285] Фармацевтическая композиция, где пептид и эксципиент совместно локализованы в полимере.

[286] Фармацевтическая композиция, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой велдореотид ацетат.

[287] Фармацевтическая композиция, где полимер инкапсулирует велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль; или эксципиент; или оба, пептид или его фармацевтически приемлемую соль и эксципиент; или оба, велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль и эксципиент.

[288] Фармацевтическая композиция, где велдореотид и эксципиент совместно локализованы в полимере.

[289] Фармацевтическая композиция, где микросферы инкапсулируют велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль; или эксципиент; или оба, велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль и эксципиент.

[290] Фармацевтическая композиция, где полимер представляет собой агент, модифицирующий вязкость; или является загустителем; или является желирующим агентом (гелеобразователем); или имеет среднюю вязкость 1500-3000 сПа в 1% водном растворе; или представляет собой камедь целлюлозы или ее производное; или представляет собой карбоксиметилцеллюлозу; или взаимодействует с пептидом или его фармацевтически приемлемой солью; или взаимодействует с пептидом и циклодекстрином с образованием геля.

[291] Фармацевтическая композиция, где фармацевтическая композиция инъектируется иглой малого калибра, равной 27G.

[292] Фармацевтическая композиция, которая представляет собой эмульсию, где масляная фаза содержит фармацевтически приемлемое масло; или хлопковое масло; или где водная фаза содержит воду; или эмульсия представляет собой эмульсию вода-в-масле; или соотношение масляной фазы и водной фазы находится в интервале между от около 60:40 до 99,9:0,1; или между от около 70:30 до 99,9:0,1; или между около 80:20 и 99,9:0,1; или между около 90:10 и 99,9:0,1; или между около 95:5 и 99,9:0,1; или между от около 50,1:49,9 до 90:10; или между от около 50,1:49,9 до 80:20; или между от около 50,1:49,9 до 70:30; или между от около 50,1:49,9 до 60:40; или между около 60:40 и 90:10; или между около 70:30 и 80:20; или около 80:20.

[293] Фармацевтическая композиция, где липосомальный агент представляет собой: фосфатидилхолин или его производное; или DMPC.

[294] Другие варианты осуществлений включают следующие:

[295] Способ снижения побочных эффектов на месте инъекции у пациента по сравнению с инъекцией без эксципиента, включающий: (a) создание фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществлений, описанных выше, с эксципиентом; и (b) введение фармацевтической композиции указанному пациенту путем инъекции.

[296] Способ увеличения биодоступности пептида или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с инъекцией без эксципиента, включающий: (a) создание фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществлений, описанных выше, с эксципиентом; и (b) введение фармацевтической композиции указанному пациенту путем инъекции.

[297] Способ, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль вводят в терапевтически эффективной дозе.

[298] Способ создания фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществлений, описанных выше, включающий: (a) смешивание пептида или его фармацевтически приемлемой соли и эксципиента; и (b) медленное добавление полимера.

[299] Способ лечения заболевания, включающий стадию введения фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществлений, описанных выше, нуждающемуся в этом пациенту.

[300] Способ, где заболевание выбрано из группы, включающей злокачественное новообразование, диабет 2 типа, акромегалию, метаболические нарушения, эндокринные нарушения, экзокринные нарушения и опухоли, связанные с гормонами.

[301] Способ, где фармацевтическую композицию вводят путем инъекции; или подкожной инъекции; или внутривенной инъекции.

[302] Конкретные варианты осуществления фармацевтической композиции по варианту осуществления 1 включают следующее:

[303] 2. Фармацевтическая композиция, где фармацевтически приемлемая соль выбрана из группы, включающей гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, ацетат, трифторацетат, цитрат, оксалат, малонат, салицилат, п-аминосалицилат, малат, фумарат, сукцинат, аскорбат, малеат, сульфонат, фосфонат, перхлорат, нитрат, формиат, пропионат, глюконат, лактат, тартрат, памоат, гидроксималеат, пируват, фенилацетат, бензоат, п-аминобензоат, п-гидроксибензоат, метансульфонат, этансульфонат, нитрит, гидроксиэтансульфонат, этиленсульфонат, п-толуолсульфонат, нафтилсульфонат, сульфанилат, камфорсульфонат, манделат, о-метилманделат, гидробензосульфонат, пикрат, адипат, D-о-толилтартрат, тартронат, α-толуат, (о, м, п)-толуат, нафтиламинсульфонат, октаноат, пальмитат, стеарат, соль жирных кислот, соль других минеральных кислот и карбоновых кислот.

[304] 3. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 1 или 2, где фармацевтически приемлемая соль представляет собой ацетат пептида.

[305] 4. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1-3, где фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель выбран из группы, включающей изотонический ацетатный буфер, физиологический раствор 0,9% NaCl в воде или 0,45% NaCl в воде, воду для инъекций, изотоническую 5% или 2,5% декстрозу, изотоническую молочную кислоту и забуференный фосфатом физиологический раствор.

[306] 5. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1-4, где фармацевтически приемлемый носитель представляет собой физиологический раствор 0,9% NaCl в воде или 0,45% NaCl в воде.

[307] 6. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений от 1 до 5, где фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель представляет собой физиологический раствор (0,9% NaCl в воде).

[308] 7. Композиция по любому из вариантов осуществлений 1-6, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой велдореотид или велдореотид ацетат, соответственно.

[309] 8. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1-7, где пептид представляет собой велдореотид.

[310] 9. Композиция по любому из вариантов осуществлений 1-8, где фармацевтически приемлемая соль пептида представляет собой велдореотид ацетат.

[311] 10. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1-9, где эксципиент представляет собой циклический полисахарид.

[310] 11. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 10, где циклический полисахарид представляет собой гидроксипропил-β-циклодекстрин.

[313] 12. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 11, где массовое отношение гидроксипропил-β-циклодекстрина к пептиду или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до 20:1.

[314] 13. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 12, где массовое отношение гидроксипропил-β-циклодекстрина к пептиду или его фармацевтически приемлемой соли составляет 1:1.

[315] 14. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 12, где массовое отношение гидроксипропил-β- циклодекстрина к пептиду или его фармацевтически приемлемой соли составляет 20:1.

[316] 15. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1-9, где эксципиент представляет собой декстрозу.

[317] 16. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 15, где массовое отношение декстрозы к пептиду или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до около 5:1; предпочтительно, 5:1.

[318] 17. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 16, где массовое отношение декстрозы к пептиду или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5:1.

[319] 18. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1-10 содержащая:

велдореотид ацетат; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, выбранный из группы, включающей изотонический ацетатный буфер, изотоническую молочную кислоту, воду, физиологический раствор 0,9% NaCl в воде или 0,45% NaCl в воде, воду для инъекций, изотоническую декстрозу 5% или 2,5% и забуференный фосфатом физиологический раствор; и гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD).

[320] 19. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 18, где массовое отношение гидроксипропил-β-циклодекстрина к велдореотиду ацетату составляет от 1:1 до 25:1.

[321] 20. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 19, где массовое отношение гидроксипропил-β-циклодекстрина к велдореотиду ацетату составляет 1:1.

[322] 21. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 19, где массовое отношение гидроксипропил-β-циклодекстрина к велдореотиду ацетату составляет 25:1.

[323] 22. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 18-21, где фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель представляет собой физиологический раствор 0,9% NaCl в воде или 0,45% NaCl в воде для инъекций.

[324] 23. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 15, содержащая: велдореотид ацетат; фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, выбранный из группы, включающей изотонический ацетатный буфер, воду для инъекций, физиологический раствор 0,9% NaCl в воде или 0,45% NaCl в воде для инъекций, изотоническую молочную кислоту, изотоническую декстрозу 5% или 2,5% и забуференный фосфатом физиологический раствор; и декстрозу.

[325] 24. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 23, где массовое отношение декстрозы к велдореотиду ацетату составляет от 1:1 до около 5:1.

[326] 25. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 23 или 24, где массовое отношение декстрозы к велдореотиду ацетату составляет 5:1.

[327] 26. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 23-25, где фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель представляет собой физиологический раствор 0,9% NaCl в воде или 0,45% NaCl в воде для инъекций.

[328] 27. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 1-26, содержащая:

пептид или его фармацевтически приемлемую соль, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль свободно растворимы в воде, но имеют слабую растворимость в физиологических условиях; эксципиент, где эксципиент представляет собой циклический полисахарид или декстрозу или их комбинацию; и

полимерную микросферу, где пептид или его фармацевтически приемлемую соль и эксципиент инкапсулированы в полимерную микросферу.

[329] 28. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 27, где полимерная микросфера содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA).

[330] 29. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 27 или 28, где эксципиент представляет собой декстрозу.

[331] 30. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 27-29, где количество декстрозы составляет от около 0,1 масс.% до около 1,0 масс.% в расчете на общую массу полимерной микросферы.

[332] 31. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 27-30, содержащая: велдореотид ацетат; декстрозу; и полимерную микросферу, где полимерная микросфера содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA), и где велдореотид и декстрозу инкапсулированы в полимерную микросферу.

[333] 32. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 27 или 28, где эксципиент представляет собой циклический полисахарид.

[334] 33. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 27, 28 или 32, где циклический полисахарид представляет собой гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD).

[335] 34. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 27, 28, 32 или 33, где количество HPBCD составляет от около 2 масс.% до около 20 масс.% в расчете на всю массу полимера (PLGA) в композиции.

[336] 35. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 27, 28, 32, 33 или 34, содержащая: велдореотид ацетат; гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD); и полимерную микросферу, где полимерная микросфера содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA), и где велдореотид ацетат и HPBCD инкапсулированы в полимерную микросферу.

[337] 36. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 27 или 28, содержащая: велдореотид ацетат; декстрозу и HPBCD; и полимерную микросферу, где полимерная микросфера содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA), и где велдореотид, декстроза и HPBCD инкапсулированы в полимерную микросферу.

[338] 37. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществлений 27-36, где диаметр полимерной микросферы составляет от около 10 микрон до около 100 микрон, более предпочтительно, от около 10 микрон до около 30 микрон.

[339] Вариант осуществления 38. Способ производства полимерных микросфер, включающий следующие стадии:

(i) смешивание эксципиента, содержащего циклический полисахарид или декстрозу или их комбинацию, и пептид или его фармацевтически приемлемую соль в воде с образованием первичной водной смеси, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль свободно растворимы в деионизированной воде с растворимостью в деионизированной воде от 100 до 350 мг/мл, но слаборастворимы в физиологических условиях с растворимостью 2-3 мг/мл, и пептид или фармацевтически приемлемая соль выпадают в осадок при высаливании при концентрации более чем 3 мг/мл;

(iii) смешивание первичной водной смеси в полимерном органическом растворе с образованием первичной дисперсионной смеси, содержащей воду в первичной масляной эмульсии;

(iv) смешивание поливинилового спирта (PVA) в количестве от 0,1 до 3 масс.% в физиологическом растворе с фосфатным буфером или в физиологическом растворе с образованием вторичной водной смеси;

(v) смешивание первичной эмульсии во второй водной смеси PVA с образованием двойной эмульсии вода-в-масле-в-воде с получением второй дисперсионной смеси;

[340] 39. Способ по варианту осуществления 38, где эксципиент представляет собой циклический полисахарид, и где массовое соотношение циклического полисахарида и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от около 1:2 до около 1:20.

[341] 40. Способ по варианту осуществления 39, где циклический полисахарид представляет собой гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD).

[342] 41. Способ по варианту осуществления 39, где массовое соотношение HPBCD и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от около 1:2 до около 1:4.

[343] 42. Способ по варианту осуществления 38, где эксципиент представляет собой декстрозу, и массовое соотношение декстрозы и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:4 до 1:16.

[344] 43. Способ по варианту осуществления 42, где массовое соотношение декстрозы и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:6 до 1:10.

[345] 44. Способ по варианту осуществления 42 или 43, где массовое соотношение декстрозы и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет 1:8.

[346] 45. Способ по любому из вариантов осуществлений 38-44, где пептид или его фармацевтически приемлемая соль представляют собой велдореотид или велдореотид ацетат, соответственно.

[347] 46. Способ по любому из вариантов осуществлений 38-45, где полимерный раствор содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA).

[348] Вариант осуществления 47. Фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением, полученная способом по любому из вариантов осуществлений 38-46.

[349] Вариант осуществления 48. Композиция для изготовления полимерных микросфер, содержащих: велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль; эксципиент, содержащий циклический полисахарид или декстрозу или их комбинацию; и полимерный раствор.

[350] 49. Композиция по варианту осуществления 48, где эксципиент представляет собой циклический полисахарид гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD).

[351] 50. Композиция по варианту осуществления 49, где массовое отношение HPBCD к велдореотиду или его фармацевтически приемлемой соли составляет от около 1:1 до около 1:20; или от около 1:2 до около 1:4; или около 1:4.

[352] 51. Композиция по варианту осуществления 48, где эксципиент представляет собой декстрозу.

[353] 52. Композиция по варианту осуществления 51, где массовое соотношение декстрозы и велдореотида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:4 до 1:16; или от 1:6 до 1:10; или составляет 1:8.

[354] 53. Композиция по любому из вариантов осуществлений 48-52, где полимерный раствор содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA).

[355] Вариант осуществления 54. Способ лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из акромегалии, акромегалии со злокачественным новообразованием, карциноидного злокачественного новообразования, Кушингоидного синдрома, экспрессирующих SST-R5 опухолей, диабета 2 типа, гипергликемии и опухолей, связанных с гормонами, включающий стадию введения фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществлений 1-37 пациенту с указанным заболеванием или состоянием.

[356] 55. Способ по варианту осуществления 54, где фармацевтическую композицию вводят путем инъекции.

[357] 56. Способ по варианту осуществления 54, где фармацевтическую композицию вводят путем подкожной инъекции.

[358] 57. Способ по варианту осуществления 54, где фармацевтическую композицию вводят путем внутримышечной инъекции.

[359] 58. Способ по любому из вариантов осуществлений 54-57, где фармацевтическая композиция диспергирована в фармацевтически приемлемом разбавителе, который состоит из поверхностно-активного вещества и маннитола в изотоническом растворе, готовом для инъекций.

[360] Хотя настоящее изобретение было описано с точки зрения конкретных вариантов осуществления, изменения и модификации могут быть сделаны без отклонения от объема изобретения, который предназначен для определения только объема формулы изобретения.

Claims

1. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения экспрессирующих SST-R5 опухолей, содержащая:

велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль;

эксципиент, выбранный из гидроксипропил-β-циклодекстрина (HPBCD) или декстрозы: и

полимерную микросферу, где велдореотид или его фармацевтически приемлемая соль и эксципиент инкапсулированы в полимерную микросферу; и

где площадь поверхности полимерной микросферы, определенная методом Брунауэра-Эммета-Теллера (BET), составляет от 7 м²/г до 12 м²/г.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, где полимерная микросфера содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA).

3. Фармацевтическая композиция по п.1, где эксципиент представляет собой декстрозу.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, где количество декстрозы составляет от 0,1 мас.% до 1,0 мас.% в расчете на общую массу полимерной микросферы.

5. Фармацевтическая композиция по п.1, где эксципиент представляет собой гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD).

6. Фармацевтическая композиция по п.5, где количество HPBCD составляет от 2,0 мас.% до 10 мас.% в расчете на общую массу полимерной микросферы.

7. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-6, где полимерная микросфера содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA).

8. Фармацевтическая композиция по п.7, где диаметр полимерной микросферы составляет от 10 микрон до 100 микрон.

9. Фармацевтическая композиция по п.1, где диаметр полимерной микросферы составляет от 10 микрон до 20 микрон.

10. Способ производства полимерных микросфер, включающий стадии:

(i) смешивание эксципиента, содержащего циклический полисахарид или декстрозу или их комбинацию, и велдореотида или его фармацевтически приемлемой соли в воде с образованием первичной водной смеси;

(ii) смешивание полимера в органическом растворителе, таком как дихлорметан, с образованием полимерного раствора, где полимер представляет собой поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA);

(iii) смешивание первичной водной смеси в полимерном растворе с образованием первичной дисперсионной смеси, содержащей первичную эмульсию вода-в-масле;

(iv) смешивание поливинилового спирта (PVA) в физиологическом растворе с фосфатным буфером или в физиологическом растворе с образованием вторичной водной смеси;

(v) смешивание первичной эмульсии во вторичной водной смеси PVA с образованием двойной эмульсии вода-в-масле-в-воде, получая таким образом вторую дисперсионную смесь; и

(vi) давая органическому растворителю во вторичной дисперсионной смеси выпариться с образованием твердых полимерных микросфер, содержащих велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль.

11. Способ по п.10, где эксципиент представляет собой циклический полисахарид, и где циклический полисахарид представляет собой гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD).

12. Способ по п.11, где массовое соотношение HPBCD и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до 1:10.

13. Способ по п.11, где массовое соотношение HPBCD и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:2 до 1:4.

14. Способ по п.10, где эксципиент представляет собой декстрозу и массовое соотношение декстрозы и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:4 до 1:16.

15. Способ по п.10, где эксципиент представляет собой декстрозу, и массовое соотношение декстрозы и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:6 до 1:10.

16. Способ по п.10, где эксципиент представляет собой декстрозу, и массовое соотношение декстрозы и пептида или его фармацевтически приемлемой соли составляет 1:8.

17. Способ по любому из пп.10-16, где фармацевтически приемлемая соль велдореотида представляет собой велдореотид ацетат.

18. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения экспрессирующих SST-R5 опухолей, содержащая:

совокупность полимерных микросфер, где совокупность полимерных микросфер содержит велдореотид или его фармацевтически приемлемую соль, и где совокупность полимерных микросфер имеет площадь поверхности, как определено с помощью BET, от 7,00 м²/г до 12,00 м²/г.

19. Фармацевтическая композиция по п.18, где совокупность полимерных микросфер содержит, кроме того, декстрозу.

20. Фармацевтическая композиция по п.19, где декстроза содержит от 0,1 мас.% до 1,0 мас.% от общей массы совокупности микросфер.

21. Фармацевтическая композиция по п.18, где совокупность полимерных микросфер содержит, кроме того, гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD).

22. Фармацевтическая композиция по п.21, где HPBCD составляет от 1 мас.% до 10 мас.% от общей массы совокупности микросфер.

23. Фармацевтическая композиция по п.21, где HPBCD составляет от 2 мас.% до 5 мас.% от общей массы совокупности микросфер.

24. Фармацевтическая композиция по любому из пп.18-23, где совокупность полимерных микросфер содержит поли(молочную-ко-гликолевую кислоту) (PLGA).

25. Способ лечения субъекта с заболеванием или состоянием, представляющим собой экспрессирующие SST-R5 опухоли, включающий стадию введения фармацевтической композиции по любому из пп.1 или 18 субъекту.

26. Способ по п.25, где фармацевтическую композицию вводят путем инъекции.

27. Способ по п.25, где фармацевтическую композицию вводят путем подкожной инъекции.

28. Способ по п.25, где фармацевтическую композицию вводят путем внутримышечной инъекции.