RU2704256C1 - Method of preparation of autologous two-component fibrin adhesive - Google Patents
Method of preparation of autologous two-component fibrin adhesive Download PDFInfo
- Publication number
- RU2704256C1 RU2704256C1 RU2019104500A RU2019104500A RU2704256C1 RU 2704256 C1 RU2704256 C1 RU 2704256C1 RU 2019104500 A RU2019104500 A RU 2019104500A RU 2019104500 A RU2019104500 A RU 2019104500A RU 2704256 C1 RU2704256 C1 RU 2704256C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- autologous
- component
- plasma
- fibrinogen
- Prior art date
Links
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 17
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims abstract description 9
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 8
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 6
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 claims abstract 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims abstract 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 18
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 10
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 4
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 4
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 4
- 238000004026 adhesive bonding Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 2
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 2
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003634 thrombocyte concentrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000425571 Trepanes Species 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001194 anti-hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003364 biologic glue Substances 0.000 description 1
- 210000004045 bowman membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012492 regenerant Substances 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F9/00—Methods or devices for treatment of the eyes; Devices for putting in contact-lenses; Devices to correct squinting; Apparatus to guide the blind; Protective devices for the eyes, carried on the body or in the hand
- A61F9/007—Methods or devices for eye surgery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/10—Polypeptides; Proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности, к офтальмологии, касается клеящих веществ и позволяет получить двухкомпонентный аутологичный фибриновый клей, состоящий из обогащенной тромбоцитами плазмы объемом 1.0 мл, содержащей фибриноген, факторы свертывания крови в физиологических концентрациях и живые тромбоциты, продуцирующие различные факторы роста и адгезивные молекулы в качестве 1-го компонента, получаемого из собственной плазмы крови пациента и 2-го компонента содержащего от 0.5 до 5.0% раствор хлорида кальция и тромбин в концентрации от 0.5 до 500 ME, рассчитываемой исходя из показателей фибриногена крови пациента и необходимого времени возникновения адгезии, отличающийся простотой в исполнении, безопасностью для пациентов и меньшей стоимостью по сравнению с прототипом. Изобретение обеспечивает получение клея с высокой адгезивностью, биосовместимостью, способностью к биодеградации, а также с противовоспалительным и гемостатическим эффектом.The invention relates to medicine, in particular to ophthalmology, relates to adhesives and allows to obtain a two-component autologous fibrin glue, which consists of 1.0 ml of platelet-rich plasma containing fibrinogen, coagulation factors in physiological concentrations and living platelets that produce various growth factors and adhesive molecules as the 1st component obtained from the patient’s own blood plasma and the 2nd component containing from 0.5 to 5.0% solution of calcium chloride and thrombin in a concentrate from 0.5 to 500 ME, calculated on the basis of the patient’s blood fibrinogen indices and the necessary time for adhesion to occur, which is characterized by simplicity in execution, safety for patients, and lower cost compared to the prototype. The invention provides an adhesive with high adhesiveness, biocompatibility, biodegradability, as well as anti-inflammatory and hemostatic effect.
Известен органоспецифический регенерат GI (Патент РФ №2462255 от 23.06.2011, А61K 35/16, A61L 27/22, A61L 27/44, В82В 3/00), для получения которого используется криопреципитат, полученный из карантинизированной свежезамороженной донорской плазмы; концентрат тромбоцитов, взвешенных в плазме и подвергшихся многократному замораживанию и размораживанию с целью получения плазмы, обедненной тромбоцитами, обогащенной факторами роста (тромболизат); тромбин человеческий (лиофильно высушенный) 5-500 ЕД; 0,9% раствор натрия хлорида; 10% раствор кальция хлорида.The organ-specific regenerate GI is known (RF Patent No. 2462255 of 06.23.2011, A61K 35/16, A61L 27/22, A61L 27/44, B82B 3/00), for which cryoprecipitate obtained from quarantined freshly frozen donor plasma is used; a platelet concentrate suspended in plasma and subjected to repeated freezing and thawing in order to obtain platelet-poor plasma enriched with growth factors (thrombolysate); human thrombin (freeze-dried) 5-500 PIECES; 0.9% sodium chloride solution; 10% solution of calcium chloride.
Тромболизат готовят следующим образом. Полученный из крови концентрат тромбоцитов (в стерильном пластиковом контейнере) подвергается замораживанию на быстрозамораживателе с последующим размораживанием в специальном размораживателе. По истечении трехкратно повторяющихся циклов замораживания - размораживания плазма подвергается центрифугированию. Надосадочная жидкость перемещается в пустой пластиковый контейнер и повторно центрифугируется при тех же условиях. Плазму с уменьшенным содержанием тромбоцитов фильтруют через стерильный однослойный ватно-марлевый фильтр в условиях бокса, затем пропускают через стерильный бумажный фильтр и в заключение - через фильтр (Millipore IRELAND Ltd). Полученный тромболизат хранится при температуре ниже -25°С в течение 36 месяцев.Thrombolysate is prepared as follows. The platelet concentrate obtained from blood (in a sterile plastic container) is subjected to freezing on a quick-freezer, followed by thawing in a special defroster. After three repeated cycles of freezing - thawing, the plasma is centrifuged. The supernatant is transferred to an empty plastic container and centrifuged again under the same conditions. Plasma with a reduced platelet content is filtered through a sterile single-layer cotton-gauze filter under boxing conditions, then passed through a sterile paper filter and finally through a filter (Millipore IRELAND Ltd). The resulting thrombolysate is stored at a temperature below -25 ° C for 36 months.
Для приготовления криопреципитата «Органоспецифического регенеранта GI» используют ультрацентрифугирование, т.е. разделение частиц размером менее 100 нм в течение 15 мин при температуре +2°С+-2°С со скоростью 4200 об/мин. Тем самым добиваются наноструктурирования фибриновой матрицы, благодаря чему она становится более прочной и эластичной. Использование ультрацентрифуги позволяет сократить время центрифугирования и, тем самым, исключить негативное воздействие на качество криопреципитата и увеличить активность VIII фактора до 70 ME. Хранится он при температуре ниже -60°С. Это позволяет материалу длительное время (в течение 36 месяцев) сохранять свои первоначальные свойства.Ultracentrifugation is used to prepare the cryoprecipitate of "Organ-specific regenerant GI" separation of particles with a size of less than 100 nm for 15 min at a temperature of + 2 ° C + -2 ° C at a speed of 4200 rpm Thus, they achieve nanostructuring of the fibrin matrix, so that it becomes more durable and elastic. The use of ultracentrifuges allows to reduce centrifugation time and, thereby, eliminate the negative impact on the quality of cryoprecipitate and increase the activity of factor VIII to 70 ME. It is stored at temperatures below -60 ° C. This allows the material to maintain its original properties for a long time (within 36 months).
Подготовленные компоненты (криопреципитат, тромболизат, раствор тромбина) используются в равных объемах. В первый шприц набирается 1 мл размороженного криопреципитата; во второй шприц - 1 мл тромбина 5-500 ЕД, разведенного в 2 мл 0,9% хлористого натрия с добавлением 1 мл 10% раствора хлористого кальция; в третий шприц набирается 1 мл тромболизата.Prepared components (cryoprecipitate, thrombolysate, thrombin solution) are used in equal volumes. In the first syringe, 1 ml of thawed cryoprecipitate is collected; in the second syringe - 1 ml of thrombin 5-500 IU diluted in 2 ml of 0.9% sodium chloride with the addition of 1 ml of a 10% solution of calcium chloride; 1 ml of thrombolysate is drawn into the third syringe.
Основными недостатками «Органоспецифического регенерата GI» являются его сложная многокомпонентная структура (криопреципит, тромболизат, тромбин), изготовление каждого компонента занимают длительное время и проводится в несколько этапов, длительное время и особые условия центрифугирования, а так же для изготовления необходима карантинизированная свежезамороженная донорская плазма, что полностью не исключает риск аллергической реакции.The main disadvantages of the “Organ-specific GI Regenerate” are its complex multicomponent structure (cryoprecipitate, thrombolysate, thrombin), the production of each component takes a long time and is carried out in several stages, a long time and special conditions of centrifugation, as well as the production of quarantined fresh-frozen donor plasma, which does not completely exclude the risk of an allergic reaction.
Известен способ хирургического лечения сквозных идиопатических макулярных разрывов сетчатки, патент РФ №2652076 от 19.05.2017, A61F 9/007, А61K 35/19, А61Р 27/02. В данном патенте в качестве биологического клея используют аутологичный тромбоцитарный лизат, приготовленный из обогащенной тромбоцитами аутоплазмы, содержащей не менее 1000×103 кл/мл. Получение аутологичного тромбоцитного лизата (pHPL) осуществляют следующим образом: в 6-8 специализированных пробирок с коммерческим названием Plasmolifting, содержащих гепарин и уникальный гель, производят забор крови объемом 9 мл, пробирки помещают в центрифугу и центрифугируют в течение 6-7 минут при 3700-3800 об/мин. В ходе вращения в центрифуге, кровь разделяется на две основные фракции - эритроцитарно-лейкоцитарный сгусток и плазму крови, содержащую тромбоциты (тромбоцитарная аутоплазма). Затем шприцем (10,0-20,0 мл) из пробирок забирают супернатант, содержащий аутоплазму, обогащенную тромбоцитами, находящуюся в верхней части пробирки над разделительным гелем, помещают в одну пробирку объемом 15,0-50,0 мл и производят повторное центрифугирование в течение 12-15 минут при 3500-3600 об/мин. Концентрация тромбоцитов в аутоплазме составляет не менее 1000×103 кл/мл. Из обогащенной тромбоцитами аутоплазмы готовят лизат путем лизиса мембраны тромбоцитов. Тромбоциты аутологичной плазмы лизируют путем двукратного замораживания в жидком азоте (-196°С) и быстрого оттаивания на водяной бане (+37°С). Полученный аутологичный тромбоцитный лизат (pHPL) фильтруют через фильтр (0,22 нм) и хранят до использования при температуре - 20°С.A known method of surgical treatment of end-to-end idiopathic macular retinal ruptures, RF patent No. 2652076 from 05/19/2017, A61F 9/007, A61K 35/19, A61P 27/02. In this patent, an autologous platelet lysate made from platelet-rich autoplasma containing at least 1000 × 10 3 cells / ml is used as a biological glue. Obtaining an autologous platelet lysate (pHPL) is as follows: in 6-8 specialized tubes with the commercial name Plasmolifting containing heparin and a unique gel, a 9 ml blood sample is taken, the tubes are centrifuged and centrifuged for 6-7 minutes at 3700- 3800 rpm During rotation in a centrifuge, blood is divided into two main fractions - an erythrocyte-leukocyte clot and a blood plasma containing platelets (platelet autoplasma). Then, with a syringe (10.0–20.0 ml), the supernatant containing autoplasma enriched with platelets located in the upper part of the tube above the separation gel is taken from the tubes, placed in one tube with a volume of 15.0–50.0 ml, and centrifuged again for 12-15 minutes at 3500-3600 rpm. The platelet concentration in the autoplasma is at least 1000 × 10 3 cells / ml. A platelet-rich lysate is prepared from platelet-rich autoplasma by lysis of the platelet membrane. Autologous plasma platelets are lysed by freezing twice in liquid nitrogen (-196 ° C) and quickly thawing in a water bath (+ 37 ° C). The obtained autologous platelet lysate (pHPL) is filtered through a filter (0.22 nm) and stored until use at a temperature of -20 ° C.
Основными недостатками аутологичного тромбоцитарного лизата является большой объем необходимой крови пациента, несколько обязательных этапов центрифугирования, ограничено минимальное количество концентрации тромбоцитов в аутоплазме, а так же обязательное техническое оснащение лаборатории (наличие жидкого азота).The main disadvantages of an autologous platelet lysate are the large amount of patient blood required, several mandatory centrifugation steps, the minimum amount of platelet concentration in the autoplasma is limited, as well as the mandatory technical equipment of the laboratory (the presence of liquid nitrogen).
Наиболее близким является патент РФ №2520829 от 15.11.2012 «Способ пластики глазных век», A61F 9/007. В данном патенте используется аутологичный фибриновый клей для фиксации кожного лоскута. Фибриновый клей получают следующим способом: Забирают 25-35 мл крови пациента, разводят в отношении 9:1 в 3,8% растворе цитрата натрия и далее центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. Плазму декантируют и далее очищают (фибриноген) глицерином, - осадок обезвоживают MgSO4 и BaSO4 и затем возвращают к исходному объему раствора - 20 мл. Слой фибрина в растворе центрифугируют и отделяют, повторно обрабатывают смесью безводных MgSO4 и BaSO4, отделяют верхний слой и снова возвращают к первоначальному объему (20 мл) 0,055 М раствором цитрата натрия при рН 7,4 и снова осаждают глицерином, очищают и разделяют на необходимые порции.The closest is the patent of the Russian Federation No. 2520829 from 11/15/2012 "Method of plastic eyelids", A61F 9/007. This patent uses autologous fibrin glue to fix a skin flap. Fibrin glue is prepared as follows: 25-35 ml of the patient’s blood is taken, diluted in a 9: 1 ratio in a 3.8% sodium citrate solution and then centrifuged for 10 min at 3000 rpm. The plasma is decanted and then purified (fibrinogen) with glycerol, the precipitate is dehydrated with MgSO 4 and BaSO 4 and then returned to the original volume of the solution - 20 ml. The fibrin layer in the solution is centrifuged and separated, re-treated with a mixture of anhydrous MgSO 4 and BaSO 4 , the upper layer is separated and returned to its original volume (20 ml) with a 0.055 M sodium citrate solution at pH 7.4 and again precipitated with glycerol, purified and separated into necessary servings.
Основными недостатками данного способа получения аутологичного фибринового клея являются сложная методика выделения фибриногена и обработки осадка, отсутствие второго компонента, который позволяет регулировать время застывания и силу адгезии, в качестве способа его получения предлагается дорогостоящая методика с применением мини-лаборатории «CRYOSIL FS».The main disadvantages of this method for producing autologous fibrin glue are the complicated method for isolating fibrinogen and treating the precipitate, the absence of a second component that allows you to adjust the solidification time and adhesion force, an expensive method using the CRYOSIL FS mini-laboratory is proposed as a method for its preparation.
В основу настоящего изобретения положена идея создания простого и быстрого способа приготовления аутологичного двухкомпонентного фибринового клея. Поэтому отличительными чертами предлагаемого нами способа является простота и скорость приготовления компонентов фибринового клея с использованием минимального объема крови пациента, когда не требуется разведение и дополнительное очищение плазмы крови, отсутствует необходимость в очищении фибрина и обработке осадка, а применяемые условия центрифугирования оказываются оптимальными для выделения и сохранения в течение недели жизнеспособности тромбоцитов, которые продуцируют факторы роста, адгезивные молекулы и цитокины, что обеспечивает ускорение репаративных процессов не только за счет снижения воспалительной реакции, но и за счет обеспечения адгезии пролиферирующих клеток, том числе и эпителиальных.The basis of the present invention is the idea of creating a simple and quick way to prepare an autologous two-component fibrin glue. Therefore, the distinguishing features of our proposed method is the simplicity and speed of preparation of the components of fibrin glue using the minimum blood volume of the patient, when dilution and additional purification of blood plasma are not required, there is no need to purify fibrin and treat the precipitate, and the centrifugation conditions used are optimal for isolation and preservation during the week of viability of platelets that produce growth factors, adhesive molecules and cytokines, which ensure Chiva acceleration of reparative processes, not only by reducing the inflammatory response, but also by ensuring the adhesion of proliferating cells, including epithelial cells.
Технический результат достигается тем, что в предлагаемом способе приготовления аутологичного двухкомпонентного фибринового клея, состоящего из аутологичной свежезабранной плазмы крови пациента, содержащей живые тромбоциты, фибриноген и факторы свертывания крови в физиологических концентрациях, заключающимся в заборе крови в стерильные пробирки с цитратом натрия 3.8%, центрифугирование плазмы крови, при котором забор венозной крови осуществляют в стерильную пробирку, позволяющую получить обогащенную тромбоцитами плазму, центрифугировании забранной крови в течение 4 минут при 3500 об/мин, последующем заборе обогащенной тромбоцитами плазмы объемом 1.0 мл, содержащей фибриноген, факторы свертывания крови в физиологических концентрациях и живые тромбоциты, продуцирующие различные факторы роста и адгезивные молекулы, и смешивании со вторым компонентом, содержащим от 0.5 до 5.0% раствор хлорида кальция и тромбин в концентрации от 0.5 до 500 ME, рассчитываемой исходя из показателей фибриногена крови пациента и необходимого времени возникновения адгезии.The technical result is achieved by the fact that in the proposed method for the preparation of an autologous two-component fibrin glue, consisting of autologous freshly collected blood plasma of a patient containing live platelets, fibrinogen and coagulation factors in physiological concentrations, which consists in collecting blood into sterile tubes with sodium citrate 3.8%, centrifugation blood plasma, in which venous blood is taken into a sterile tube, which allows to obtain platelet-rich plasma, centrifuges sampling blood for 4 minutes at 3500 rpm, followed by collection of platelet-rich plasma with a volume of 1.0 ml containing fibrinogen, coagulation factors in physiological concentrations and living platelets producing various growth factors and adhesive molecules, and mixing with a second component containing from 0.5 to 5.0% solution of calcium chloride and thrombin in a concentration of from 0.5 to 500 ME, calculated on the basis of the patient's blood fibrinogen and the necessary time for adhesion to occur.
Использование отличных от прототипа параметров центрифугирования, в частности меньшего времени и в оптимальном соотношении увеличенной скорости, позволяет получить компонент с большей концентрацией живых тромбоцитов, выделяющих факторы роста и адгезивные молекулы, снизив вероятность их повреждения, не снижая необходимую для адгезии концентрацию фибриногена.The use of centrifugation parameters that are different from the prototype, in particular, shorter time and in an optimal ratio of increased speed, allows to obtain a component with a higher concentration of living platelets that secrete growth factors and adhesive molecules, reducing the likelihood of damage, without reducing the concentration of fibrinogen necessary for adhesion.
Объем забираемой крови согласно предлагаемому способу является достаточным для получения 1 мл первого компонента клея в связи с тем, что именно в этом 1 мл после центрифугирования оказывается наибольшая концентрация живых тромбоцитов.The volume of blood drawn according to the proposed method is sufficient to obtain 1 ml of the first component of the adhesive due to the fact that it is in this 1 ml after centrifugation that the highest concentration of living platelets is found.
Способ приготовления аутологичного фибринового клея предусматривает получение готового первого компонента сразу после центрифугирования забранной крови пациента, что не требует выполнение дополнительных манипуляций, в разы ускоряет и упрощает данную процедуру.The method of preparing autologous fibrin glue involves obtaining the finished first component immediately after centrifugation of the patient’s blood, which does not require additional manipulations, several times speeds up and simplifies this procedure.
Конечный объем 1 го компонента кроме фибриногена содержит живые тромбоциты, факторы роста и адгезивные молекулы, которые дополнительно усиливают склеивающие характеристики полученного фибринового клея, обеспечивая прочную и быструю адгезию склеиваемых тканей. Таким образом, отсутствует необходимость в отдельном выделении из всего объема забранной крови фибриногена с целью повышения его концентрации.The final volume of the 1st component, in addition to fibrinogen, contains living platelets, growth factors, and adhesive molecules, which additionally enhance the bonding characteristics of the obtained fibrin glue, providing strong and fast adhesion of the tissues to be glued. Thus, there is no need for a separate isolation of fibrinogen from the entire volume of blood taken in order to increase its concentration.
Использование от 0,5 до 5.0% раствора хлорида кальция и тромбина в концентрации от 0.5 до 500 ME позволяет регулировать время застывания, адгезию.Using from 0.5 to 5.0% solution of calcium chloride and thrombin in a concentration of from 0.5 to 500 ME allows you to adjust the solidification time, adhesion.
Изобретение поясняется с помощью фиг. 1, на которой отражены этапы приготовления двухкомпонентного аутологичного фибринового клея согласно предлагаемому способу. В 4 стерильные пробирки с цитратом натрия 3.8% объемом 5.0 мл производится забор свежей аутологичной плазмы крови пациента, далее вся кровь собирается в 1 стерильный шприц объемом 20.0 мл, после чего перемещается в стерильную пробирку «YCELLBIO-KIT» (фиг. 1а), или иную пробирку, позволяющую получить обогащенную тромбоцитами плазму, далее происходит ее центрифугирование в течение 4 минут при 3500 об/мин (параметры указаны для «YCELLBIO-KIT»), после этого из пробирки производится забор обогащенной тромбоцитами плазмы объемом 1.0 мл (фиг. 1б), содержащей фибриноген, факторы свертывания крови в физиологических концентрациях и живые тромбоциты, продуцирующие различные факторы роста и адгезивные молекулы, таким образом мы получаем первый компонент двухкомпонентного аутофибринового клея без необходимости выделения фибриногена и факторов свертывания, который в последующем смешивается со вторым компонентом, содержащим от 0.5 до 5.0% раствор хлорида кальция и тромбин в концентрации от 0.5 до 500 ME, рассчитываемой исходя из показателей фибриногена крови пациента и необходимого времени возникновения адгезии. В итоге подготовленные компоненты в равных объемах набираются в 2 разных стерильных шприца (фиг. 1в). Активирование клея происходит при смешивании двух его компонентов.The invention is illustrated using FIG. 1, which reflects the stages of preparation of a two-component autologous fibrin glue according to the proposed method. Fresh sterilized autologous blood plasma of the patient is collected in 4 sterile tubes with sodium citrate 3.8%, volume 5.0 ml, then all blood is collected in 1 sterile syringe with a volume of 20.0 ml, and then transferred to a sterile test tube "YCELLBIO-KIT" (Fig. 1a), or another tube, allowing to obtain platelet-rich plasma, then it is centrifuged for 4 minutes at 3500 rpm (parameters are specified for “YCELLBIO-KIT”), after which 1.0-ml platelet-rich plasma is taken from the tube (Fig. 1b) containing fibrinogen coagulation actors in physiological concentrations and living platelets producing various growth factors and adhesive molecules, thus we obtain the first component of a two-component autofibrin glue without the need for isolation of fibrinogen and coagulation factors, which is subsequently mixed with a second component containing from 0.5 to 5.0% solution calcium chloride and thrombin in a concentration of from 0.5 to 500 ME, calculated on the basis of the patient's blood fibrinogen and the necessary time for adhesion to occur. As a result, the prepared components in equal volumes are collected in 2 different sterile syringes (Fig. 1B). Glue activation occurs when two of its components are mixed.
На фиг. 2 показана серия экспериментов in vitro с целью оценки адгезивных свойств. Произведена склейка амниотических мембран зажатых в устройстве для фиксации при помощи фибринового клея, полученного согласно предлагаемому способу (фиг. 2а). Спустя 1 минуту после склейки амниотических мембран при попытке их отрыва друг от друга визуально определяется четкая фиксация мембран между собой и ощущается сопротивление к разрыву (фиг. 2б). После разъединения мембран на одной из них визуализируется край фибриновой пленки (фиг. 2в).In FIG. 2 shows a series of in vitro experiments to evaluate adhesive properties. Made gluing amniotic membranes clamped in the device for fixation using fibrin glue obtained according to the proposed method (Fig. 2A). After 1 minute after gluing the amniotic membranes when trying to tear them apart, a clear fixation of the membranes between themselves is visually determined and resistance to tearing is felt (Fig. 2b). After separation of the membranes, the edge of the fibrin film is visualized on one of them (Fig. 2c).
На фиг. 3 показано апробирование in vivo на кроликах вклейки амниотической мембраны после поверхностной кератэктомии (проведена реконструкция Боуменовой мембраны). Этапы выполнения фиксации амниотической мембраны при помощи двухкомпонентного фибринового клея, полученного согласно предлагаемому способу, следующие. Заранее проводится заготовка 1 го и 2 го компонентов фибринового клея. Трепаном на дозированную глубину в 100-150 мкм выполняется поверхностная кератэктомия. На строму роговицы наносится половина объемов компонентов, смешанных в одном шприце. Сразу после этого производится выкройка амниотической мембраны необходимого диаметра, ее наложение на строму роговицы и экспозиция в течение 1 минуты. Далее на роговичную поверхность наносятся смешанные в одном шприце остаточные объемы компонентов полученного двухкомпонентного фибринового клея.In FIG. Figure 3 shows the in vivo testing of the gluing of the amniotic membrane on rabbits after superficial keratectomy (reconstruction of the Bowman membrane). The stages of the fixation of the amniotic membrane using two-component fibrin glue obtained according to the proposed method are as follows. Preparation of the 1st and 2nd components of fibrin glue is carried out in advance. Trepan to a dosed depth of 100-150 microns performed surface keratectomy. Half the volumes of components mixed in one syringe are applied to the stroma of the cornea. Immediately after this, a pattern of the amniotic membrane of the required diameter is made, applied to the stroma of the cornea and exposed for 1 minute. Next, the residual volumes of the components of the obtained two-component fibrin glue mixed in one syringe are applied to the corneal surface.
Техническим результатом является то, что приготовленный согласно предлагаемому способу (фиг. 1) двухкомпонентный аутофибриновый клей позволяет не только эффективно склеивать поврежденные ткани (фиг. 2, фиг. 3), обеспечивать качественный гемостаз и создавать условия для купирования воспаления в месте его нанесения, но и снизить стоимость приготовления двухкомпонентного фибринового клея и риск аллергической реакции.The technical result is that the two-component autofibrin glue prepared according to the proposed method (Fig. 1) allows not only to effectively glue damaged tissues (Fig. 2, Fig. 3), provide high-quality hemostasis and create conditions for the relief of inflammation at the site of application, but and reduce the cost of preparing two-component fibrin glue and the risk of an allergic reaction.
Данный способ зарекомендовал себя как надежный и простой способ приготовления аутологичного фибринового клея.This method has established itself as a reliable and easy way to prepare autologous fibrin glue.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019104500A RU2704256C1 (en) | 2019-02-18 | 2019-02-18 | Method of preparation of autologous two-component fibrin adhesive |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019104500A RU2704256C1 (en) | 2019-02-18 | 2019-02-18 | Method of preparation of autologous two-component fibrin adhesive |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2704256C1 true RU2704256C1 (en) | 2019-10-25 |
Family
ID=68318356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019104500A RU2704256C1 (en) | 2019-02-18 | 2019-02-18 | Method of preparation of autologous two-component fibrin adhesive |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2704256C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2758260C1 (en) * | 2020-12-24 | 2021-10-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний" (НИИ КПССЗ) | Method for producing autologous fibrin with controlled fibrinogen content without using exogenous thrombin |
| RU2803272C2 (en) * | 2023-05-15 | 2023-09-11 | Оксана Климентиевна Кван | Method of obtaining fibrin glue from donor plasma and its identification |
| WO2025149908A1 (en) * | 2024-01-08 | 2025-07-17 | Hosa Agrara Rajashekar Sowmya | A composition of platelet rich fibrin and platelet rich plasma and a method thereof |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4432347A (en) * | 1982-11-12 | 1984-02-21 | Clavin Harold D | Cosmetic tape and method |
| RU2462255C1 (en) * | 2011-06-23 | 2012-09-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "ЛИОМАТРИКС" | Organ-specific regenerant gi |
| RU2520829C1 (en) * | 2012-11-15 | 2014-06-27 | Сергей Владимирович Свиридов | Blepharoplasty technique |
| RU2638796C1 (en) * | 2016-08-05 | 2017-12-15 | Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" | Method for obtaining of two-component preparation for treatment of joints damage by low-invasive introduction into joint bag and preparation obtained by this method |
-
2019
- 2019-02-18 RU RU2019104500A patent/RU2704256C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4432347A (en) * | 1982-11-12 | 1984-02-21 | Clavin Harold D | Cosmetic tape and method |
| RU2462255C1 (en) * | 2011-06-23 | 2012-09-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "ЛИОМАТРИКС" | Organ-specific regenerant gi |
| RU2520829C1 (en) * | 2012-11-15 | 2014-06-27 | Сергей Владимирович Свиридов | Blepharoplasty technique |
| RU2638796C1 (en) * | 2016-08-05 | 2017-12-15 | Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" | Method for obtaining of two-component preparation for treatment of joints damage by low-invasive introduction into joint bag and preparation obtained by this method |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| SLOMOVIC A.R. Новая методика использования фибринового клея для лечения конъюнктивохалазиса //Новое в офтальмологии. 2009. N 2, c.18-19. * |
| SLOMOVIC A.R. Новая методика использования фибринового клея для лечения конъюнктивохалазиса //Новое в офтальмологии. 2009. N 2, c.18-19. THOMAS C. SPOOR. ATLAS of OCULOPLASTIC and ORBITAL SURGERY. UK 2010 Informa Healthcare p.29-34, p.48-53. * |
| THOMAS C. SPOOR. ATLAS of OCULOPLASTIC and ORBITAL SURGERY. UK 2010 Informa Healthcare p.29-34, p.48-53. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2758260C1 (en) * | 2020-12-24 | 2021-10-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний" (НИИ КПССЗ) | Method for producing autologous fibrin with controlled fibrinogen content without using exogenous thrombin |
| RU2803272C2 (en) * | 2023-05-15 | 2023-09-11 | Оксана Климентиевна Кван | Method of obtaining fibrin glue from donor plasma and its identification |
| RU2807860C1 (en) * | 2023-10-04 | 2023-11-21 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Method of combined fixation of amniotic membrane for treatment of chronic corneaal erosions |
| RU2821131C1 (en) * | 2023-12-12 | 2024-06-17 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Method for surgical management of recurrent pterygium |
| WO2025149908A1 (en) * | 2024-01-08 | 2025-07-17 | Hosa Agrara Rajashekar Sowmya | A composition of platelet rich fibrin and platelet rich plasma and a method thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4828669B2 (en) | Platelet glue wound sealant | |
| US20080267940A1 (en) | Methods of making concentrated fibrinogen containing compositions and associated systems for preparing fibrin glue | |
| JP2014531467A (en) | Tube for producing platelet-rich fibrin | |
| US10456500B2 (en) | Implantable preparations for regeneration of tissues and treatment of wounds, their method of preparation, and method of treatment of patients with said implantable preparations | |
| RU2704256C1 (en) | Method of preparation of autologous two-component fibrin adhesive | |
| ES2428102T3 (en) | Composition of activated leukocytes | |
| CN1113656C (en) | Precipitation of growth-factor-enriched fibrinogen concentrate from platelet rich plasma | |
| RU2746493C1 (en) | Method, device and kit for obtaining prp | |
| AU2022283171A1 (en) | Methods and systems for preparation of mononuclear-platelet rich fibrin matrix, and compounds thereof | |
| RU2713772C1 (en) | Method for producing autologous thrombocyte-rich blood plasma | |
| Yu et al. | Efficacy of Autologous Platelet-Rich Gel Combined with Negative Pressure Drainage in Patients with Diabetic Foot | |
| RU2330684C1 (en) | Method of application of thrombocyte enriched plasma membrane for directed regeneration of modified vascular wall tissue in cases of potential postoperative hemorrhage | |
| TWM605103U (en) | Apparatus and kit for producing platelet rich plasma and platelet rich fibrin | |
| TWI772734B (en) | Method of preparing platelet lysate and use thereof for treating vocal cord disease | |
| UA137267U (en) | METHOD OF OBTAINING PLATELET GEL FOR HEALING WOUNDS AND TISSUES | |
| TWI535446B (en) | Method of preparing growth-factor-platelet-rich fibrin and releasate | |
| SU1153293A1 (en) | Method of determining thrombogenous properties of vascular grafts | |
| Macasaet et al. | Comparative study between fibrin glue prepared from a single human donor and sutures for sealing induced corneal penetrating wounds on porcine eyes | |
| TW202003057A (en) | Apparatus and kit for producing platelet rich plasma and platelet rich fibrin, and method for producing platelet rich plasma and platelet rich fibrin by using the apparatus | |
| BRPI1001911A2 (en) | Process for platelet-rich plasma and growth factors for use in orthopedic surgery |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210219 |