RU2700078C1 - Yarrowia lipolytica arc 49 vkpm y-4348 strain destructor of oil and oil products - Google Patents
Yarrowia lipolytica arc 49 vkpm y-4348 strain destructor of oil and oil products Download PDFInfo
- Publication number
- RU2700078C1 RU2700078C1 RU2018140393A RU2018140393A RU2700078C1 RU 2700078 C1 RU2700078 C1 RU 2700078C1 RU 2018140393 A RU2018140393 A RU 2018140393A RU 2018140393 A RU2018140393 A RU 2018140393A RU 2700078 C1 RU2700078 C1 RU 2700078C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- strain
- yarrowia lipolytica
- vkpm
- arc
- Prior art date
Links
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 title claims abstract description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 19
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 27
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 10
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 5
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- GQEZCXVZFLOKMC-UHFFFAOYSA-N 1-hexadecene Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC=C GQEZCXVZFLOKMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002283 diesel fuel Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- YCOZIPAWZNQLMR-UHFFFAOYSA-N pentadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC YCOZIPAWZNQLMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- BGHCVCJVXZWKCC-UHFFFAOYSA-N tetradecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC BGHCVCJVXZWKCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000670472 Exiguobacterium mexicanum Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001278587 Nocardia coeliaca Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 1
- 241000187562 Rhodococcus sp. Species 0.000 description 1
- 241001622809 Serratia plymuthica Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- UZILCZKGXMQEQR-UHFFFAOYSA-N decyl-Benzene Chemical compound CCCCCCCCCCC1=CC=CC=C1 UZILCZKGXMQEQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 239000000295 fuel oil Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010720 hydraulic oil Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010705 motor oil Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/26—Processes using, or culture media containing, hydrocarbons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION
Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии, экологии, охране окружающей среды и представляет собой новый штамм микроорганизма Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348, обладающий способностью к деструкции нефти и нефтепродуктов. Штамм может быть использован для очистки акваторий водоемов, береговой линии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, при температуре от +20 до -2,5°С и солености 30±10 г/л.The invention relates to the field of biotechnology, microbiology, ecology, environmental protection and is a new strain of the microorganism Yarrowia lipolytica ARC 49 VKPM Y-4348, with the ability to degrade oil and oil products. The strain can be used to clean the waters of water bodies, coastlines contaminated with oil and oil products at temperatures from +20 to -2.5 ° C and salinity of 30 ± 10 g / l.
Уровень техникиState of the art
Известен штамм Rhodococcus sp.- деструктор нефтяных углеводородов (патент РФ №2518349, приоритет 11.04.2013, опубл. 10.06.2014.), который утилизирует нефть, мазут, керосин, нафталин, пентадекан, тетрадекан, гексадецен, фенилдекан, пристан уже на 5 день при 20-30°С. Данный штамм показал высокую степень деструкции углеводородов при температуре +30°С. Однако данный штамм не способен производить утилизацию углеводородов при низких температурах.A known strain of Rhodococcus sp. Is a destructor of petroleum hydrocarbons (RF patent No. 2518349, priority 04/11/2013, publ. 06/10/2014.), Which utilizes oil, fuel oil, kerosene, naphthalene, pentadecane, tetradecane, hexadecene, phenyldecane, prystan already 5 day at 20-30 ° C. This strain showed a high degree of destruction of hydrocarbons at a temperature of + 30 ° C. However, this strain is not capable of producing hydrocarbon utilization at low temperatures.
Известен штамм Bacillus subtilis «Колыма-7/2к» (патент РФ 2446900, приоритет 13.07.2010, опубл. 10.04.2012), который может быть использован в условиях Крайнего Севера. Применение такого микробного препарата позволяет за 3 месяца летнего периода снизить концентрацию нефти до 0,48%. Недостатком данного штамма является то, что он утилизирует углеводороды в условиях почвы.Known strain of Bacillus subtilis "Kolyma-7 / 2k" (RF patent 2446900, priority 13.07.2010, publ. 10.04.2012), which can be used in the Far North. The use of such a microbial preparation allows reducing the oil concentration to 0.48% over 3 months of the summer period. The disadvantage of this strain is that it utilizes hydrocarbons in soil conditions.
Известен штамм Exiguobacterium mexicanum ВКПМ В-11011 (патент РФ №2523584, приоритет 27. 03.2013, опубл. 20.07.2014). Штамм может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, в широком диапазоне температур от +4 до +37°С. Также известен штамм Serratia plymuthica VKM B-2819D (патент РФ №2560272, приоритет 22.09.2014, опубл. 20.08.2015), обладающий способностью быстро утилизировать нефть и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат), может быть использован для очистки почв и водоемов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, в широком диапазоне температур от +4 до +30°С. Недостатком штаммов является то, что они не способны утилизировать нефтезагрязнения при высокой солености воды до 30 г/л.A known strain of Exiguobacterium mexicanum VKPM B-11011 (RF patent No. 2523584, priority 27. 03.2013, publ. 20.07.2014). The strain can be used to clean soils and water bodies contaminated with oil and oil products in a wide temperature range from +4 to + 37 ° С. Also known is a strain of Serratia plymuthica VKM B-2819D (RF patent No. 2560272, priority 09/22/2014, publ. 08/20/2015), which has the ability to quickly dispose of oil and oil products (diesel fuel, motor oil, hydraulic oil, gas condensate), can be used to clean soils and water bodies contaminated with oil and oil products in a wide temperature range from +4 to + 30 ° С. The disadvantage of the strains is that they are not able to utilize oil pollution at high salinity of water up to 30 g / l.
Штамм Rhodococcus erythropolis депонирован под регистрационным номером ВКМ AC-2613D (патент РФ 2553336 приоритет 20.08.2013, опубл. 10.06.2015). Штамм используется для очистки пресноводных, солоноватоводных и морских объектов и донных отложений. Микроорганизм обеспечивает деструкцию нефти в водных объектах при температуре от +2 до +25°С и солености до 2,7%. Недостатком изобретения является то, что штамм утилизирует углеводороды в условиях богатых по питательным веществам (в состав среды входит пептон 5 г/л и сахароза 15 г/л). В реальных условиях утилизации углеводородных загрязнений количество питательных веществ значительно снижены.The strain Rhodococcus erythropolis is deposited under registration number VKM AC-2613D (RF patent 2553336 priority 08/20/2013, publ. 06/10/2015). The strain is used to clean freshwater, brackish and marine objects and bottom sediments. The microorganism ensures the destruction of oil in water bodies at temperatures from +2 to + 25 ° C and salinity up to 2.7%. The disadvantage of the invention is that the strain utilizes hydrocarbons in conditions rich in nutrients (the composition of the medium includes peptone 5 g / l and sucrose 15 g / l). Under real conditions of hydrocarbon pollution utilization, the amount of nutrients is significantly reduced.
Наиболее близким аналогом является штамм Nocardia coeliaca ARC 12 ВКПМ Ас-1990 (патент РФ 0002624067, приоритет 30.06.2017, опубл. 30.06.2017), обладающий способностью к деструкции нефти и нефтепродуктов. Штамм может быть использован для очистки акваторий водоемов, береговой линии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, при температуре от +20 до +4°С и солености 30 г/л, в условиях бедных по питательным веществам. К недостаткам препарата можно отнести тот факт, что заявленный температурный диапазон активности штамма находится в области положительных температур. Также для препарата не указаны пределы солености, в которых он сохраняет активность.The closest analogue is the strain Nocardia coeliaca ARC 12 VKPM Ac-1990 (RF patent 0002624067, priority 06/30/2017, publ. 06/30/2017), which is capable of degradation of oil and oil products. The strain can be used to clean the waters of water bodies, coastlines contaminated with oil and oil products, at temperatures from +20 to + 4 ° C and salinity of 30 g / l, in conditions of nutrient poor. The disadvantages of the drug include the fact that the claimed temperature range of strain activity is in the region of positive temperatures. Also, the limits of salinity in which it remains active are not indicated for the preparation.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Задачей настоящего изобретения является получение штамма микроорганизма, способного осуществлять деструкцию нефти и нефтепродуктов при температуре от +20 до -2,5°С и солености 30±10 г/л в условиях, бедных по питательным веществам.The objective of the present invention is to obtain a strain of a microorganism capable of degrading oil and oil products at temperatures from +20 to -2.5 ° C and salinity of 30 ± 10 g / l under conditions that are poor in nutrients.
Поставленная задача решается тем, что получен штамм Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348, способный осуществлять деструкцию нефти и нефтепродуктов, который может быть использован для очистки акваторий водоемов, береговой линии, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, при температуре от +20 до -2,5°С и солености 30±10 г/л в условиях, бедных по питательным веществам.The problem is solved by the fact that the obtained strain Yarrowia lipolytica ARC 49 VKPM Y-4348, capable of degrading oil and oil products, which can be used to clean the water bodies of water bodies, coastlines contaminated with oil and oil products at temperatures from +20 to -2, 5 ° С and salinity of 30 ± 10 g / l in conditions poor in nutrients.
Штамм выделен из портовой зоны города порта города Мурманска в июне 2015 года. Штамм депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИгенетика (ВКПМ, Москва, 1-й Дорожный пр., д. 1) под регистрационным номером ВКПМ Y-4348.The strain was isolated from the port area of the city of the port of the city of Murmansk in June 2015. The strain was deposited in the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms FSUE GosNIIgenetika (VKPM, Moscow, 1st Dorozhny pr., D. 1) under registration number VKPM Y-4348.
Идентификация штамма была осуществлена на основании изучения его культурально-морфологических и физиолого-биохимических характеристик, а также на основании изучения последовательности гена 16S рРНК.The strain was identified based on a study of its cultural-morphological and physiological-biochemical characteristics, as well as on the basis of a study of the 16S rRNA gene sequence.
Полученный штамм характеризуется следующими признаками.The resulting strain is characterized by the following features.
Культурально-морфологические признаки.Cultural and morphological characters.
Колонии белые, округлые, блестящие, выпуклые, однородной структуры, мягкой консистенции, с ровным краем. Размеры колонии до 2,0 мм. Клетки округлые, размером 2-10 мкм, неподвижные.The colonies are white, rounded, shiny, convex, of a homogeneous structure, soft consistency, with a smooth edge. Colony sizes up to 2.0 mm. The cells are rounded, 2-10 microns in size, motionless.
Физиолого-биохимические признакиPhysiological and biochemical characteristics
Штамм растет при температуре от +20 до -2,5°С, в аэробных условиях. Растет при рН 4,0-8,0. Растет на плотных и жидких питательных средах с содержанием NaCl 30±10 г/л. Способен расти в жидкой среде с углеводородами в качестве единственного источника углерода и энергии.The strain grows at a temperature of +20 to -2.5 ° C, under aerobic conditions. Grows at pH 4.0-8.0. It grows on solid and liquid nutrient media with a NaCl content of 30 ± 10 g / l. Able to grow in a liquid medium with hydrocarbons as the sole source of carbon and energy.
Штамм поддерживается пересевами 1 раз в 14 дней на плотной питательной среде 1 modPCA следующего состава (г/л): K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 0,75; MgSO4 - 1,0; (NH4)2SO4 - 4,0; NaCl - 30; гидролизат казеина - 5,0; дрожжевой экстракт - 2,5; D-глюкоза - 1,0; агар -14; рН 7,0 или жидкой питательной среде №1 следующего состава: K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 0,75; MgSO4 - 1,0; (NH4)2SO4 - 4,0; NaCl - 30; гидролизат казеина - 0,5; дрожжевой экстракт - 0,1; рН 7,0. В жидкой питательной среде в качестве углеводородного субстрата использовали смесь товарной нефти Возейского месторождения (плотность 37,9° API, сернистость 0,66%, характеризуется как тяжелая, вязкая, с высоким содержанием смол и асфальтенов) и дизельного топлива в соотношении 1:1 по объему.The strain is maintained by reseeding 1 time in 14 days on a solid nutrient medium 1 modPCA of the following composition (g / l): K 2 HPO 4 - 1.5; KH 2 PO 4 0.75; MgSO 4 - 1.0; (NH 4 ) 2 SO 4 - 4.0; NaCl - 30; casein hydrolyzate - 5.0; yeast extract - 2.5; D-glucose - 1.0; agar -14; pH 7.0 or liquid nutrient medium No. 1 of the following composition: K 2 HPO 4 - 1.5; KH 2 PO 4 0.75; MgSO 4 - 1.0; (NH 4 ) 2 SO 4 - 4.0; NaCl - 30; casein hydrolyzate - 0.5; yeast extract - 0.1; pH 7.0. In a liquid nutrient medium, a mixture of marketable oil from the Vozeyskoye field (density 37.9 ° API, sulfur content 0.66%, characterized as heavy, viscous, with a high content of resins and asphaltenes) and diesel fuel in a 1: 1 ratio was used as a hydrocarbon substrate volume.
Также штамм может храниться при +6±2°С в лиофилизированном состоянии с использованием сухого обезжиренного молока в качестве защитной среды.Also, the strain can be stored at + 6 ± 2 ° C in a lyophilized state using skimmed milk powder as a protective medium.
Для приготовления препарата к культуре микроорганизмов можно добавить питательный премикс на основе различных органических компонентов в различных соотношениях (таких как сухое обезжиренное молоко, мука различных растительных культур, молочная сыворотка, меласса и т.п.), неорганические вещества, стимулирующие микробный рост - в первую очередь содержащие такие макроэлементы как азот и фосфор, железо и пр. (различные комплексные минеральные удобрения). Кроме того, в сухой форме препарат содержит защитные среды, использующиеся для увеличения выживаемости микроорганизмов при сушке, например растворы сахаров, сложные среды, такие как раствор сухого обезжиренного молока, сухие протеины и другие.For preparation of the drug, a nutrient premix based on various organic components in various proportions (such as skimmed milk powder, flour of various plant cultures, milk whey, molasses, etc.), inorganic substances stimulating microbial growth can be added to the microorganism culture in the first place. the turn containing such macrocells as nitrogen and phosphorus, iron, etc. (various complex mineral fertilizers). In addition, in dry form, the preparation contains protective media used to increase the survival of microorganisms during drying, for example, sugar solutions, complex media, such as skimmed milk powder, dried proteins, and others.
Осуществление изобретенияThe implementation of the invention
Настоящее изобретение поясняется конкретными примерами выполнения, которые не являются единственно возможным, но наглядно демонстрирует возможность достижения требуемого технического результата.The present invention is illustrated by specific examples of execution, which are not the only possible, but clearly demonstrates the possibility of achieving the desired technical result.
Пример 1. Выделение и культивирование штамма Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348.Example 1. Isolation and cultivation of the strain Yarrowia lipolytica ARC 49 VKPM Y-4348.
Штамм выделен из образцов грунта и морской воды береговой линии порта города Мурманска в июне 2015 года. Образец массой 5±2 г вносили в 100 мл питательной среды №1. Культивирование проводили при температуре +4°С, на орбитальном шейкере (130 об/мин). Время культивирования 7 суток. Полученную накопительную культуру вносили в количестве 10 мл в 100 мл питательной среды №1. Было проведено не менее 30 пассажей накопительной культуры. Выделение штамма из накопительной культуры проводили на среде modPCA, полученную чистую культуру далее культивировали на среде №1.The strain was isolated from soil and sea water samples of the coastline of the port of the city of Murmansk in June 2015. A sample weighing 5 ± 2 g was added to 100 ml of nutrient medium No. 1. Cultivation was carried out at a temperature of + 4 ° C, on an orbital shaker (130 rpm). The cultivation time is 7 days. The resulting accumulative culture was made in the amount of 10 ml in 100 ml of nutrient medium No. 1. At least 30 passages of the accumulative culture were carried out. The strain was isolated from the accumulative culture on modPCA medium; the resulting pure culture was further cultivated on medium No. 1.
Пример 2. Исследование нефтеокисляющей активности штамма Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348.Example 2. The study of the oil-oxidizing activity of the strain Yarrowia lipolytica ARC 49 VKPM Y-4348.
Штамм, выращенный на жидкой питательной среде №1, вносили в качестве инокулята в 100 мл питательной среды №1. В качестве контроля была использована питательная среда без добавления культуры. После проведения культивирования при температуре -2,5°С, 130 об./мин в течение 30 суток проводилась экстракция углеводородов гексаном согласно ГОСТ 31953-2012, хроматографическая оценка убыли углеводородов проводилась на хроматографе Кристалл 2000 м (Хроматэк) с капиллярной колонкой DB-1 (Agilent) [длина - 30 м, диаметр - 0,25 мм, толщина слоя -0,25 мкм] с пламенно-ионизационным детектором (ПИД). Температура детектора - 350°С; температура испарителя - 300°С; газ-носитель - гелий; поток газа - 1,0 мл/мин; расход газа - 20,0 мл/мин; расход водорода - 20 мл/мин; расход воздуха - 200 мл/мин. Измерения проводят в условиях температурного градиента от 100 до 300°С со скоростью градиента 15,0°С/мин.The strain grown in liquid nutrient medium No. 1, was introduced as inoculum in 100 ml of nutrient medium No. 1. As a control, a culture medium was used without adding culture. After cultivation at a temperature of -2.5 ° C, 130 rpm for 30 days, hydrocarbons were extracted with hexane according to GOST 31953-2012, a chromatographic assessment of hydrocarbon losses was carried out on a Crystal 2000 m chromatograph (Chromatec) with a DB-1 capillary column (Agilent) [length - 30 m, diameter - 0.25 mm, layer thickness -0.25 μm] with a flame ionization detector (PID). The temperature of the detector is 350 ° C; evaporator temperature - 300 ° С; carrier gas is helium; gas flow - 1.0 ml / min; gas flow rate - 20.0 ml / min; hydrogen consumption - 20 ml / min; air consumption - 200 ml / min. Measurements are carried out under conditions of a temperature gradient from 100 to 300 ° C with a gradient speed of 15.0 ° C / min.
Суммарная убыль для среднекипящей и высококипящей фракции составляла не менее 30% за 30 суток культивирования при -2,5°С и солености среды 30 г/л.The total decrease for the medium-boiling and high-boiling fractions was not less than 30% for 30 days of cultivation at -2.5 ° C and salinity of the medium 30 g / L.
Суммарная убыль для среднекипящей и высококипящей фракции составляла не менее 30% за 30 суток культивирования при -2,5°С и солености среды 40 г/л.The total decrease for the medium-boiling and high-boiling fractions was not less than 30% for 30 days of cultivation at -2.5 ° C and a salinity of 40 g / L.
Пример 3. Способ производства препарата на основе штамма Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348.Example 3. A method of manufacturing a drug based on a strain of Yarrowia lipolytica ARC 49 VKPM Y-4348.
Штамм Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348, выращенный на среде modPCA при температуре +4°С в течение 7 суток, вносят в жидкую питательную среду следующего состава (г/л): K2HPO4 - 1,5; KH2PO4 - 0,75; MgSO4 - 1,0; (NH4)2SO4 - 4,0; NaCl - 30; гидролизат казеина - 5,0; дрожжевой экстракт - 2,5; D-глюкоза - 1,0; рН 7,0. Далее культивируют при температуре +10°С на орбитальном шейкере в течение 3 суток до конечного титра 109 КОЕ/мл. В полученную суспензию клеток в питательной среде вносят защитную среду (сухое обезжиренное молоко в количестве 10%). Далее полученную суспензию замораживают и обезвоживают методом лиофилизации. Полученную сухую биомассу штамма Yarrowia lipolytica ARC 49 ВКПМ Y-4348 смешивают с питательным премиксом (сухое обезжиренное молоко) в соотношении 1:10.The strain Yarrowia lipolytica ARC 49 VKPM Y-4348, grown on modPCA at a temperature of + 4 ° C for 7 days, is introduced into a liquid nutrient medium of the following composition (g / l): K 2 HPO 4 - 1.5; KH 2 PO 4 0.75; MgSO 4 - 1.0; (NH 4 ) 2 SO 4 - 4.0; NaCl - 30; casein hydrolyzate - 5.0; yeast extract - 2.5; D-glucose - 1.0; pH 7.0. Then cultivated at a temperature of + 10 ° C on an orbital shaker for 3 days to a final titer of 10 9 CFU / ml. A protective medium (10% skimmed milk powder) is added to the resulting suspension of cells in a nutrient medium. Next, the resulting suspension is frozen and dehydrated by lyophilization. The obtained dry biomass of the strain Yarrowia lipolytica ARC 49 VKPM Y-4348 is mixed with a nutrient premix (skimmed milk powder) in a ratio of 1:10.
Таким образом, получен штамм, способный осуществлять деструкцию нефти и нефтепродуктов при температуре -2,5°С и солености 30±10 г/л в условиях, бедных по питательным веществам.Thus, a strain is obtained that is capable of degrading oil and oil products at a temperature of -2.5 ° C and salinity of 30 ± 10 g / l under conditions poor in nutrients.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018140393A RU2700078C1 (en) | 2018-11-15 | 2018-11-15 | Yarrowia lipolytica arc 49 vkpm y-4348 strain destructor of oil and oil products |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018140393A RU2700078C1 (en) | 2018-11-15 | 2018-11-15 | Yarrowia lipolytica arc 49 vkpm y-4348 strain destructor of oil and oil products |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2700078C1 true RU2700078C1 (en) | 2019-09-12 |
Family
ID=67989658
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018140393A RU2700078C1 (en) | 2018-11-15 | 2018-11-15 | Yarrowia lipolytica arc 49 vkpm y-4348 strain destructor of oil and oil products |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2700078C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2023686C1 (en) * | 1992-04-13 | 1994-11-30 | Научно-производственное объединение "Биотехинвест" | Consortium of microorganisms rhodococcus sp, rhodococcus maris, rhodococcus erythropolis, pseudomonas stutzeri, candida sp, used for treatment of soil subsaline-water ecosystems from oil products pollution |
| RU2104249C1 (en) * | 1996-09-27 | 1998-02-10 | Борзенков Игорь Анатольевич | Material for biological treatment of ecosystems polluted with oil and petroleum products |
| RU2114071C1 (en) * | 1997-05-22 | 1998-06-27 | Борзенков Игорь Анатольевич | Method of biological preparation-assisted cleaning of soil and natural and waste waters polluted by petroleum and petroleum products |
| RU2624067C2 (en) * | 2015-12-07 | 2017-06-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Strain nocardia coeliaca arc12 vkpm ac-1990 is destructor of oil and oil products |
-
2018
- 2018-11-15 RU RU2018140393A patent/RU2700078C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2023686C1 (en) * | 1992-04-13 | 1994-11-30 | Научно-производственное объединение "Биотехинвест" | Consortium of microorganisms rhodococcus sp, rhodococcus maris, rhodococcus erythropolis, pseudomonas stutzeri, candida sp, used for treatment of soil subsaline-water ecosystems from oil products pollution |
| RU2104249C1 (en) * | 1996-09-27 | 1998-02-10 | Борзенков Игорь Анатольевич | Material for biological treatment of ecosystems polluted with oil and petroleum products |
| RU2114071C1 (en) * | 1997-05-22 | 1998-06-27 | Борзенков Игорь Анатольевич | Method of biological preparation-assisted cleaning of soil and natural and waste waters polluted by petroleum and petroleum products |
| RU2624067C2 (en) * | 2015-12-07 | 2017-06-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Strain nocardia coeliaca arc12 vkpm ac-1990 is destructor of oil and oil products |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2624067C2 (en) | Strain nocardia coeliaca arc12 vkpm ac-1990 is destructor of oil and oil products | |
| RU2699977C1 (en) | Psychrobacter cibarius arc 35 vkpm v-13081 strain destructor of oil and oil products | |
| RU2624055C2 (en) | Strain psychrobacter fozii arc 5 vkpm b-12345 is destructor of oil and oil products | |
| RU2624065C1 (en) | Strain psychrobacter cibarius arc 13 vkpm b-12351 is destructor of oil and oil products | |
| RU2694610C1 (en) | Pseudomonas extremaustralis arc 38 vkpm b-13084 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2624053C2 (en) | Strain psychrobacter maritimus arc 7 vkpm v-12347-destructor of oil and oil products | |
| RU2624054C2 (en) | Strain leucobacter aridicollis arc 6 vkpm as-1992 destructor of oil and oil products | |
| RU2624052C2 (en) | Strain arthrobacter rhombi arc 8 vkpm as-1987-destructor of oil and oil products | |
| RU2691689C1 (en) | Yarrowia lipolytica strain - an oil and oil product destructor | |
| RU2142997C1 (en) | Strain arthrobacter sp for degradation of crude oil and petroleum products | |
| RU2700078C1 (en) | Yarrowia lipolytica arc 49 vkpm y-4348 strain destructor of oil and oil products | |
| RU2699984C1 (en) | Yarrowia lipolytica arc 48 vkpm y-4347 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2699987C1 (en) | Pseudoalteromonas prydzensis arc 46 vkpm v-13104 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2699988C1 (en) | Marinomonas rhizoma arc 45 vkpm-13091 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2699962C1 (en) | Psychrobacter cryohalolis arc 36 vkpm v-13082 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2699990C1 (en) | Arthrobacter psychrochitiniphilus arc 42 vkpm as-2076 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2703142C1 (en) | Pseudoalteromonas arctica strain for decomposition of oil and oil products | |
| RU2697380C1 (en) | Pseudoalteromonas nigrifaciens strain for decomposition of oil and oil products | |
| RU2624051C2 (en) | Strain psychrobacter cibarius arc 9 bkpm b-12348 is destructor of oil and oil products | |
| RU2624058C2 (en) | Strain nocardia coeliaca arc 1 vkpm ac-1991 is destructor of oil and oil products | |
| RU2694194C1 (en) | Shewanella vesiculosa arc 37 vkpm b-13083 strain - an oil and oil products destructor | |
| RU2694199C1 (en) | Strain paeniglutamicibacter antarcticus arc 43 vkpm ac-2077 - destructor of oil and oil products | |
| RU2694612C1 (en) | Pseudomonas deceptionensis arc 44 vkpm b-13090 strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2691691C1 (en) | Pseudomonas extremaustralis strain - destructor of oil and oil products | |
| RU2624059C2 (en) | Strain cobetia marina arc 11 vkpm b-12350 is destructor of oil and oil products |