RU2789518C1 - Способ получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, из малых объёмов крови - Google Patents
Способ получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, из малых объёмов крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2789518C1 RU2789518C1 RU2022113042A RU2022113042A RU2789518C1 RU 2789518 C1 RU2789518 C1 RU 2789518C1 RU 2022113042 A RU2022113042 A RU 2022113042A RU 2022113042 A RU2022113042 A RU 2022113042A RU 2789518 C1 RU2789518 C1 RU 2789518C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- platelet
- plasma
- rich plasma
- platelets
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims abstract description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 23
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 5
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 4
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 210000003752 saphenous vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 240000005578 Rivina humilis Species 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной хирургии. Способ получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, из крови животных, выбранных из кошек или собак карликовых пород, включает забор и центрифугирование крови в стерильном инсулиновом шприце объемом 1,0 мл с 0,05 мл 3,8% цитрата натрия, при этом центрифугирование осуществляют в инсулиновом шприце однократного использования, при n, равном 3000 об/мин, в течение 1 мин, затем при n, равном 1000 об/мин, в течение 10 мин. Предложенный способ позволяет выделять плазму, обогащенную тромбоцитами, из малых объемов крови с наименьшей затратой времени. 1 ил., 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной хирургии, и может быть использовано при лечении раневой патологии аутологичной плазмой, обогащенной тромбоцитами, у животных, имеющих маленькую массу тела и, соответственно, малый объем циркулирующей крови.
В настоящее время как в гуманной, так и в ветеринарной медицине активно развиваются такие методы лечения общим названием, для которых является «регенеративная медицина». Смысл этих методов лечения заключается в том, чтобы обеспечить максимально быстрое и максимально полное восстановление утерянных вследствие заболеваний молекулярно-клеточных структурных компонентов тканей или органов пациента путем введения ему его же собственных или близкородственных клеточных композиций, способных замещать и/или активировать процессы регенерации. Одним из наиболее широко распространенных методов регенеративной медицины является метод введения в патологический очаг плазмы крови, обогащенной тромбоцитами.
Для получения такой плазмы предложено множество методов, которые отличаются друг от друга объемом крови, необходимым для процедуры выделения тромбоцитарной плазмы, пробирками, в которых производится забор крови, антикоагулянтом, который используется для стабилизации крови, пробирками, в которых производится выделение плазмы, режимом центрифугирования и т.д.
Однако, следует отметить, что все предложенные на сегодняшний день методы и расходные материалы предназначенные для получения плазмы обогащенной тромбоцитами предполагают использование достаточно больших объемов крови - от 5,0 мл и больше. В то же время среди ветеринарных пациентов есть кошки, собаки мелких пород и другие животные от которых крайне проблематично произвести забор крови в объеме более 1,0 мл.
Известен способ получения аутоплазмы с богатым содержанием тромбоцитов, получивший название Плазмолифтинг™. Данный способ получения аутоплазмы обогащенной тромбоцитами реализуется путем использования специальных пробирок, в качестве антикоагулянта используется гепарин, а в нижней части расположен разделительный гель, который в процессе центрифугирования должен пропускать эритроциты и лейкоциты, но задерживать тромбоциты (Патент РФ на изобретение №2606338). Недостатком этого способа является то, что пробирки такого рода не рассчитаны на выделение плазмы обогащенной тромбоцитами из объема крови 1.0 мл. Так же следует отметить, что в пробирках данного типа разделительный гель, присутствующий в пробирках, при низких оборотах не пропускает через себя эритроциты и лейкоциты. Т.е. не производит ни какого разделения. А при высоких оборотах адсорбирует на своей поверхности тромбоциты, приводя к получению плазмы с их низким содержанием. Пробирки такого типа имеют достаточно высокую стоимость. Кроме того, антикоагулянт гепарин, используемый в пробирках, препятствует последующему приготовлению фибриново-тромбоцитарного геля из полученной плазмы.
Наиболее близким к предложенному является способ получения аутогенной обогащенной тромбоцитами плазмы, включающий забор крови шприцем-пробиркой объемом 9 мл, в котором содержится антикоагулянт крови - цитрат натрия. Отобранную кровь в этой же пробирке центрифугируют в два этапа в лабораторной центрифуге «Heraeus Labofuge 300». В первом этапе центрифугируют в течение 12 минут со скоростью 4000 об/мин. Затем образовавшуюся плазму - надосадочный слой, из первого шприца-пробирки набирают в другой шприц-пробирку без цитрата и центрифугируют в течение 15 минут при скорости 3600 об/мин. После отделения бедной тромбоцитами плазмы - надосадочный слой, получают конечный продукт - обогащенную тромбоцитами плазму в количестве 0,3 мл. (М.Ю. Юрченко, А.В. Шумский «Обзор оборудования и методик получения аутогенной обогащенной тромбоцитами плазмы в стоматологии» // журнал «Новое в стоматологии», 2003 г., №7, с. 46). Недостатком этого метода исследования является то, что он не позволяет получить плазму, обогащенную тромбоцитами из количества крови объемом 1.0 мл. К тому же требует двукратного центрифугирования в разных пробирках.
Техническим результатом изобретения является разработка способа получения аутологичной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов путем одноэтапного центрифугирования из количества крови объемом 1.0 мл. Технический результат изобретения состоит в получении аутологичной, богатой тромбоцитами плазмы, из количества крови, в объеме 1.0 мл, путем центрифугирования непосредственно в инсулиновом шприце, в который предварительно производят забор крови.
Сущность изобретения представлена на чертеже, где на фиг. 1 показан инсулиновый шприц с плазмой, обогащенной тромбоцитами, полученной из крови собаки.
Реализацию способа осуществляют следующим образом:
1. В стерильный инсулиновый шприц объемом 1.0 мл набирают 0.05 мл (50.0 мкл) 3.8% цитрата натрия и при помощи системы «бабочка» из любой доступной поверхностной вены животного, производя забор крови до полного заполнения шприца. Шприц отсоединяют от системы «бабочка», закрывая иглой с защитным колпачком, и, ровно, по линии упора для пальцев, шток обрезают, а затем помещают в стакан центрифуги ОПН-3 (Фиг. 1).
2. Шприц с кровью центрифугируют 1 минуту при 3000 об/мин и сразу без остановки центрифуги - 10 минут при 1000 об/мин, при этом в зависимости от цели лечения извлекают всю плазму, концентрация тромбоцитов, в которой будет составлять, примерно, 160.0±45.0 от концентрации тромбоцитов в цельной крови, или извлекают плазму послойно. В последнем случае, концентрация тромбоцитов в плазме варьирует и составляет примерно 60.0±15.0 тромбоцитов от количества тромбоцитов в цельной крови, взятых из верхней трети столбика плазмы, из средней трети столбика плазмы - примерно 140±25.0, а нижней трети столбика плазмы - примерно 250.0±50.0 (Табл.).
3. После полной остановки центрифуги шприц извлекают, снимают игла с колпачком и другим шприцом через отверстие наконечника, введя туда иглу, производят забор плазмы, объем которой составляет от 0.4% до 0.55% от исходного объема крови, при этом плазму извлекают аккуратно, не захватывая верхний эритроцитарный слой, в котором содержится большое количество лейкоцитов (Фиг. 1).
ПРИМЕР 1.
Кошка с длительно незаживающей раной в области бедра, полученной вследствие травмы. Назначенной лечение введение аутологичной плазмы обогащенной тромбоцитами вокруг и под раневой дефект. Кровь в объеме 1.0 миллилитр взята в инсулиновый шприц из подкожной вены предплечья. Выделение плазмы, обогащенной тромбоцитам проводили по предложенной методике. Из 1.0 миллилитра крови, исходно содержащей тромбоцитов 3748*103 в одном микролитре, получили 0.45 миллилитров плазмы, содержащей 279*106 тромбоцитов (620*103 тромбоцитов в 1.0 микролитре). И не содержащей примеси лейкоцитов и эритроцитов. Концентрация тромбоцитов в верхней трети полученной плазмы составляла, примерно, 243*103 тромбоцитов в микролитре. Концентрация тромбоцитов в средней трети полученной плазмы составляла, примерно, 908*103 тромбоцитов в микролитре. Концентрация тромбоцитов в нижней трети полученной плазмы составляла примерно 1163*103 тромбоцитов в микролитре.
ПРИМЕР 2.
Собака породы йоркширский терьер. Поступила с диагнозом несостоятельность швов после проведенной плановой операцией. Назначенной лечение введение аутологичной плазмы обогащенной тромбоцитами вокруг и под раневой дефект. Кровь в объеме 1.0 миллилитр взята в инсулиновый шприц из подкожной вены предплечья. Выделение плазмы обогащенной тромбоцитам проводили по предложенной методике. Из 1.0 миллилитра крови, исходно содержащей тромбоцитов 240*103 в одном микролитре, получили 0.55 миллилитров плазмы содержащей 322,85*106 тромбоцитов (587*103 тромбоцитов в 1.0 микролитре). И не содержащей примеси лейкоцитов и эритроцитов. Максимальная концентрация тромбоцитов визуализируется в нижней трети столбика плазмы по сильному увеличению ее мутности.
Предлагаемый способ является легко воспроизводимой процедурой при наличии стандартного лабораторного оборудования и стандартных расходных материалов медицинского назначения, что расширяет возможности ее применения при лечении аутологичной плазмы богатой тромбоцитами животных, имеющих маленькую массу, у которых осложнен забор крови, в объеме превышающим 1.0 мл.
Результаты подсчета количества тромбоцитов представлены в таблице:
Claims (1)
- Способ получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, из крови животных, выбранных из кошек и собак карликовых пород, включающий забор и центрифугирование крови в шприце с цитратом натрия, отличающийся тем, что предварительно в стерильный инсулиновый шприц объемом 1,0 мл вводят 0,05 мл 3,8% цитрата натрия и кровь, при этом центрифугирование осуществляют в инсулиновом шприце однократного использования, при n, равном 3000 об/мин, в течение 1 мин, затем при n, равном 1000 об/мин, в течение 10 мин.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2789518C1 true RU2789518C1 (ru) | 2023-02-06 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2077115A1 (en) * | 2006-10-27 | 2009-07-08 | Nipro Corporation | Platelet-rich plasma separator and platelet-rich plasma separation method |
| RU2410127C1 (ru) * | 2009-06-22 | 2011-01-27 | Валерий Петрович Журавлёв | Способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2077115A1 (en) * | 2006-10-27 | 2009-07-08 | Nipro Corporation | Platelet-rich plasma separator and platelet-rich plasma separation method |
| RU2410127C1 (ru) * | 2009-06-22 | 2011-01-27 | Валерий Петрович Журавлёв | Способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| FUKAYA M, et al. A new economic method for preparing platelet-rich plasma/Plast reconstr surg glob open 2014 JUL 9;2(6):E162 DOI: 10.1097/GOX.0000000000000109. * |
| ЮРЧЕНКО М. Ю. Обзор оборудования и методик получения аутогенной обогащенной тромбоцитами плазмы в стоматологии/Новое в стоматологии, 2003 Г., N7, c. 46. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bennett Jr et al. | Studies on the Pathogenesis of Fever: I. The Effect of Injection of Extracts and Suspensions of Uninfected Rabbit Tissues upon the Body Temperature of Normal Rabbits | |
| CN106727700B (zh) | 制备富血小板血浆prp的方法及该富血小板血浆的用途 | |
| AU2016287606B2 (en) | Methods and devices for preparation of enriched biological fluids | |
| Martin-Sole et al. | Effects of platelet-rich plasma (PRP) on a model of renal ischemia-reperfusion in rats | |
| Machado et al. | Turn down-turn up: a simple and low-cost protocol for preparing platelet-rich plasma | |
| Perazzi et al. | Description of a double centrifugation tube method for concentrating canine platelets | |
| Coombs et al. | Haemolytic disease of newborn foals due to iso-immunization of pregnancy | |
| RU2789518C1 (ru) | Способ получения плазмы, обогащенной тромбоцитами, из малых объёмов крови | |
| Catalfamo et al. | [4] Isolation of platelets from laboratory animals | |
| Gans et al. | Problems in hemostasis during open-heart surgery: II. On the hypercoagulability of blood during cardiac bypass | |
| RU2410127C1 (ru) | Способ получения аутогенной активированной обогащенной тромбоцитами плазмы для стоматологии | |
| Knottenbelt et al. | Blood transfusions in the dog and cat Part 2: Indications and safe administration | |
| CN110538196A (zh) | 一种富血小板血浆和提取富血小板血浆的方法 | |
| Hardy | Proteolytic activity during the absorption of [131I] γ‐globulin in the new‐born calf | |
| Malyuk et al. | The effect of transfusion of erythrocyte mass on clinical and haematological indicators of dogs with hemolytic anaemia caused by babesiosis. | |
| US11904144B2 (en) | Devices and methods for making therapeutic fluids | |
| RU2188654C1 (ru) | Препараты крови для трансфузии и способ их получения | |
| Karakas et al. | How can clinically-safe and effective platelet rich plasma (PRP) be obtained in a laboratory? | |
| Mota et al. | Development of a Device to Obtain Platelet-Rich Plasma (PRP) | |
| US20250223557A1 (en) | Method to produce mammal platelet concentrate, mammal platelet concentrate and use thereof | |
| RU2846108C1 (ru) | Способ получения богатой тромбоцитами плазмы крови | |
| US20220273519A1 (en) | Kits and methods for preparing plasma injectate biostimulator | |
| RU2801044C1 (ru) | Способ получения обогащенной тромбоцитами плазмы методом двукратного центрифугирования | |
| Karakas et al. | How can clinically-safe and effective Platelet Rich Plasma | |
| EP3296017A1 (en) | Collection tube and calibrated transparent tube for fractionation in provision of platelets rich plasma |